TW202136304A - Ｉｌｔ３結合劑及其使用方法 - Google Patents

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哲源 許
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賽司 莫瑪斯喬
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Abstract

本發明提供特異性結合包括人類ILT3在內之ILT3的結合劑，諸如抗體，以及包含該等結合劑之組合物，及其使用方法。本發明亦提供編碼該等結合劑之相關聚核苷酸及載體以及包含該等結合劑之細胞。

Description

ILT3結合劑及其使用方法
本發明總體上係關於結合免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之藥劑，特定而言為結合人類ILT3之抗體，以及包含該等ILT3結合劑之組合物及使用該等藥劑及組合物之方法。
免疫療法之基礎為操縱及/或調節免疫系統，包括先天免疫反應與適應性免疫反應兩者。免疫療法之一般目的為藉由控制對「外來物」(例如病原體或腫瘤細胞)之免疫反應來治療疾病。然而，在一些情況下，免疫療法用於治療可由針對通常存在於體內之蛋白質、分子及/或組織之異常免疫反應引起的自體免疫疾病。免疫療法可包括用於誘導或增強特定免疫反應或用於抑制或降低特定免疫反應之方法。
免疫系統為由包括但不限於T細胞、B細胞、自然殺手細胞、抗原呈遞細胞、樹突細胞、單核球及巨噬細胞之大量細胞類型組成的高度複雜系統。此等細胞具有複雜且細微之系統來控制其相互作用及反應。該等細胞使用活化與抑制機制及反饋環來控制反應且不允許未受控制之免疫反應之消極結果(例如自體免疫疾病或細胞介素風暴)。
免疫系統之一些抑制機制使用來自白血球Ig樣受體(LILR)家族之蛋白質。白血球Ig樣受體亞家族B (LILRB)為一組具有細胞外Ig樣結構域及細胞質免疫受體酪胺酸基抑制基元(ITIM)之I型跨膜醣蛋白。此組含ITIM受體包括5個成員：LILRB1 (亦稱為CD85J、LIR1、ILT2)、LILRB2 (亦稱為CD85D、LIR2、ILT4)、LILRB3 (亦稱為CD85A、LIR3、ILT5)、LILRB4 (亦稱為CD85K、LIR5、ILT3)及LILRB5 (亦稱為CD85C、LIR8)。許多此等LILRB (ILT)之生物功能及臨床重要性仍在研究中。
癌症免疫監視(immunosurveillance)之概念係基於以下理論：免疫系統可識別腫瘤細胞，引起免疫反應，且抑制腫瘤之發展及/或生長。然而，顯然許多癌細胞已發展出機制及/或劫持正常抑制機制而避開免疫系統，此可允許腫瘤生長不受抑制。癌症/腫瘤免疫療法(免疫腫瘤學)集中於研發可活化及/或加強免疫系統以針對癌症/腫瘤細胞達成更有效的攻擊，從而使得對癌症/腫瘤細胞之殺傷作用及/或對癌症/腫瘤生長之抑制作用增加的新的及新穎的藥劑。
本發明提供結合免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之藥劑。雖然在出版物中藉由許多名稱來提及LILRB家族成員，但在本文中將使用術語「ILT3」(LILRB4)。該等藥劑包括但不限於多肽，諸如特異性結合ILT3之抗體。該等藥劑在本文中可稱為「ILT3結合劑」。本發明提供製備及使用ILT3結合劑之方法。在一些實施例中，ILT3結合劑抑制ILT3活性。在一些實施例中，ILT3結合劑增強免疫反應。在一些實施例中，ILT3結合劑逆轉對免疫細胞之阻抑作用。在一些實施例中，ILT3結合劑用於組合療法中。在一些實施例中，ILT3結合劑與至少一種其他治療劑組合使用。
本發明亦提供包含本文所描述之ILT3結合劑的組合物。在一些實施例中，本發明提供包含本文所描述之ILT3結合劑的醫藥組合物。提供編碼ILT3結合劑之聚核苷酸及/或載體。亦提供包含本文所描述之聚核苷酸及/或載體的細胞。提供包含或產生本文所描述之ILT3結合劑的細胞。亦提供製備本文所描述之結合劑的方法。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其結合人類ILT3且抑制人類ILT3與纖連蛋白之結合。在一些情況下，此抗體具有呈任何組合或排列之以下特性中之一或多者(例如1者、2者、3者、4者、5者、6者、7者、8者、9者、10者、11者或12者)：亦結合cyno ILT3；不結合或僅弱結合(相對於ILT3) ILT2、ILT4、ILT5及LILRB5；不結合或僅弱結合(相對於ILT3) LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6；為ILT3拮抗劑；抑制ILT3活性；抑制表現ILT3之細胞中的ILT3信號傳導；抑制ILT3與APOE之結合；抑制ILT3與CNTFR之結合；抑制ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用；抑制ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用；恢復表現ILT3之骨髓細胞中的FcR活化；及恢復表現ILT3之骨髓細胞中的趨化介素產生。在一些情況下，此抗體對人類ILT3具有1 μM至1 pM、1 nM至1 pM或100 nM至1 pM之KD (例如如藉由Biacore所評估)。在一些情況下，此抗體包含人類IgG1恆定區。在一些情況下，此抗體包含人類κ輕鏈恆定區。在一些情況下，此抗體包含人類IgG1恆定區及人類κ輕鏈恆定區。在某些情況下，人類IgG1恆定區包含一或多個降低或消除Fc效應功能之突變。在某些情況下，人類IgG1恆定區包含降低效應功能之N297G突變。在一些情況下，此抗體為結合ILT3之抗體片段。
在一個態樣中，本發明提供結合ILT3之藥劑。在一些實施例中，藥劑結合人類ILT3。在一些實施例中，藥劑結合食蟹猴(「cyno」) ILT3。在一些實施例中，藥劑結合人類ILT3及cyno ILT3。在一些實施例中，藥劑結合SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4及/或SEQ ID NO:5。在一些實施例中，藥劑結合SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9及/或SEQ ID NO:10。在一些實施例中，藥劑為抗體。在一些實施例中，藥劑為結合人類ILT3之抗體。在一些實施例中，藥劑為結合cyno ILT3之抗體。在一些實施例中，藥劑為結合人類ILT3及cyno ILT3之抗體。
在一些實施例中，藥劑結合於ILT3之細胞外結構域內。在一些實施例中，藥劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸22-259內。在一些實施例中，藥劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸27-118內。在一些實施例中，藥劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸124-218內。在一些實施例中，藥劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸27-218內。在一些實施例中，藥劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸124-259內。在一些實施例中，藥劑結合ILT3之細胞外結構域內的構象抗原決定基。在一些實施例中，藥劑結合ILT3之一個Ig樣C2型結構域(例如D1或D2結構域)內的構象抗原決定基。在一些實施例中，藥劑結合ILT3之兩個Ig樣C2型結構域(D1及D2結構域)內的構象抗原決定基。在一些實施例中，藥劑結合ILT3之D2-莖區內的構象抗原決定基。在一些實施例中，藥劑結合於ILT3之定位於D1與D2結構域之間的構象抗原決定基(例如D1與D2結構域之間的接合點)。
在一個態樣中，本發明提供結合人類ILT3且具有以下特性中之至少一者或多者的藥劑：(i)結合cyno ILT3；(ii)結合人類及cyno ILT3；(iii)不結合ILT2、ILT4、ILT5及LILRB5；(iv)不結合LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6；(v)為ILT3拮抗劑；(vi)抑制ILT3活性；(vii)抑制表現ILT3之細胞中的ILT3信號傳導；(viii)抑制ILT3與APOE之結合；(ix)抑制ILT3與纖連蛋白之結合；(x)抑制ILT3與CNTFR之結合；(xi)抑制ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用；(xii)抑制ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用；(xiii)恢復表現ILT3之骨髓細胞中之FcR活性；及(xiv)恢復或增加表現ILT3之骨髓細胞中之趨化介素產生。在一些實施例中，骨髓細胞為單核球。在一些實施例中，骨髓細胞為巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為致耐受性樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為抗原呈遞細胞(APC)。
在一個態樣中，本發明提供特異性結合人類ILT3之藥劑。在一些實施例中，本發明提供一種ILT3結合劑(例如抗體)，其中該結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或具有一個取代(例如在位置5之甲硫胺酸經取代為另一胺基酸(例如酪胺酸))的SEQ ID NO:29之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或具有一個或兩個取代(例如在位置7之天冬胺酸經取代為另一胺基酸(例如麩胺酸)及/或在位置11之天冬醯胺經取代為另一胺基酸(例如絲胺酸))的SEQ ID NO:30之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與SEQ ID NO:27-32實質上一致之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，ILT3結合劑包含：重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與SEQ ID NO:27、28、105、106、31及32實質上一致之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區CDR。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)與SEQ ID NO:111 (5A7)或SEQ ID NO:123 (Hz5A7.v5)具有至少80%序列一致性之重鏈可變區；及/或(b)與SEQ ID NO:112 (5A7)或SEQ ID NO:124 (Hz5A7.v5)具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:111具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:112具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:123具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:124具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:111之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:112之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:111之重鏈可變區及SEQ ID NO:112之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:123之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:124之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:123之重鏈可變區及SEQ ID NO:124之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含來自SEQ ID NO:111之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:112之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自SEQ ID NO:123之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:124之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含具有與來自SEQ ID NO:111之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或具有與來自SEQ ID NO:112之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與來自SEQ ID NO:123之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或具有與來自SEQ ID NO:124之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含含有來自SEQ ID NO:111之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及/或含有來自SEQ ID NO:112之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自SEQ ID NO:123之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及/或含有來自SEQ ID NO:124之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：重鏈可變區，該重鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:111之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:112之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含：重鏈可變區，該重鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:123之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:124之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑為包含SEQ ID NO:126之重鏈及/或SEQ ID NO:128之輕鏈的抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為包含SEQ ID NO:126之重鏈及SEQ ID NO:128之輕鏈的抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為單株抗體，其包含含有SEQ ID NO:126之胺基酸序列的重鏈及含有SEQ ID NO:128之胺基酸序列的輕鏈。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體，該抗體包含具有Hz5A7.v5之VH CDR及與SEQ ID NO:126至少70% (例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%)一致的胺基酸序列之重鏈，及/或具有Hz5A7.v5之VL CDR及與SEQ ID NO:128至少70% (例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%)一致的胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體，該抗體包含具有與SEQ ID NO:126至少70% (例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%)一致的胺基酸序列之重鏈，及具有與SEQ ID NO:128至少70% (例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%)一致的胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑為單株抗體，該單株抗體包含具有與SEQ ID NO:126至少70% (例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%)一致的胺基酸序列之重鏈，及具有與SEQ ID NO:128至少70% (例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%)一致的胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，將如SEQ ID NO:156-160中之任一者中所闡述的Hz48A6之重鏈可變區或如SEQ ID NO:162-163中之任一者中所闡述的Hz45G10之重鏈可變區附加至SEQ ID NO:129上。在某些實施例中，將如SEQ ID NO:156-160中之任一者中所闡述的Hz48A6之重鏈可變區或如SEQ ID NO:162-163中之任一者中所闡述的Hz45G10之重鏈可變區附加至SEQ ID NO:129上，不同之處在於將N297G突變引入SEQ ID NO:129以消除效應功能。
在一些實施例中，將如SEQ ID NO:161中所闡述之Hz48A6之輕鏈可變區或SEQ ID NO:164中闡述之Hz45G10之輕鏈可變區附加至SEQ ID NO:135上。在其他實施例中，將如SEQ ID NO: 161中所闡述之Hz48A6之輕鏈可變區或SEQ ID NO: 164中闡述之Hz45G10之輕鏈可變區附加至SEQ ID NO:136上。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與SEQ ID NO:11-16實質上一致之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區CDR。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:109具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:110具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:109之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:110之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:109之重鏈可變區及SEQ ID NO:110之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自SEQ ID NO:109之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:110之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含具有與來自SEQ ID NO:109之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或具有與來自SEQ ID NO:110之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自SEQ ID NO:109之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及/或含有來自SEQ ID NO:110之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:109之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:110之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與SEQ ID NO:43-48實質上一致之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區CDR。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:113具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:114具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:113之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:114之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:113之重鏈可變區及SEQ ID NO:114之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自SEQ ID NO:113之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:114之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含具有與來自SEQ ID NO:113之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或具有與來自SEQ ID NO:114之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自SEQ ID NO:113之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及/或含有來自SEQ ID NO:114之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:113之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:114之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與SEQ ID NO:43、59、60、61、62及63實質上一致之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區CDR。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:115具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:116具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:115之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:116之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:115之重鏈可變區及SEQ ID NO:116之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自SEQ ID NO:115之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:116之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含具有與來自SEQ ID NO:115之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或具有與來自SEQ ID NO:116之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自SEQ ID NO:115之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及/或含有來自SEQ ID NO:116之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:115之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:116之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與SEQ ID NO:71-76實質上一致之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區CDR。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:117具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:118具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:162具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:164具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:163具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:164具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:117之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:118之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:117之重鏈可變區及SEQ ID NO:118之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:162之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:164之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:162之重鏈可變區及SEQ ID NO:164之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:163之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:164之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:163之重鏈可變區及SEQ ID NO:163之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自SEQ ID NO:117之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:118之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含具有與來自SEQ ID NO:117之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或具有與來自SEQ ID NO:118之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自SEQ ID NO:117之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及/或含有來自SEQ ID NO:118之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:117之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:118之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與SEQ ID NO:27、87、88、89、90及91實質上一致之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區CDR。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:119具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:120具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:156具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:161具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:157具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:161具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:158具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:161具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:159具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:161具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:160具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:161具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:119之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:120之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:119之重鏈可變區及SEQ ID NO:120之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:156之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:156之重鏈可變區及SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:157之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:157之重鏈可變區及SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:158之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:158之重鏈可變區及SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:159之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:159之重鏈可變區及SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:160之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:160之重鏈可變區及SEQ ID NO:161之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自SEQ ID NO:119之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:120之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含具有與來自SEQ ID NO:119之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或具有與來自SEQ ID NO:120之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自SEQ ID NO:119之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及/或含有來自SEQ ID NO:120之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:119之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:120之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含具有與SEQ ID NO:71、99、73、100、75及76實質上一致之胺基酸序列的重鏈及輕鏈可變區CDR。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:121具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之重鏈可變區及/或與SEQ ID NO:122具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%)一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:121之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:122之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含SEQ ID NO:121之重鏈可變區及SEQ ID NO:122之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自SEQ ID NO:121之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:122之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含具有與來自SEQ ID NO:121之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或具有與來自SEQ ID NO:122之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自SEQ ID NO:121之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及/或含有來自SEQ ID NO:122之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:121之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含具有與來自SEQ ID NO:122之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3實質上一致的胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本發明之另一態樣中，本文提供一種與本文所描述之ILT3結合劑中之任一者競爭結合於ILT3的結合劑(例如抗體)。在一些實施例中，本文提供一種與參考抗體競爭結合於ILT3之藥劑，其中參考抗體包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，本文提供一種與參考抗體競爭結合於ILT3之藥劑，其中參考抗體包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3，且其中與參考抗體競爭之藥劑包含：(a)含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及(b)含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在上述態樣及實施例中之每一者的一些實施例以及本文所描述之其他態樣及實施例中，ILT3結合劑為抗體。在一些實施例中，抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗體為人類化抗體。在一些實施例中，抗體為人類抗體。在一些實施例中，抗體為嵌合抗體(亦即，抗體之可變區來自一個物種且抗體之恆定區來自不同物種)。在一些實施例中，抗體為全抗體或完整抗體。在一些實施例中，抗體為雙特異性抗體或多特異性抗體。在一些實施例中，抗體為包含至少一個抗原結合位點之抗體片段。在一些實施例中，抗體或抗體片段為Fab、Fab'、F(ab')2 、Fv、scFv、(scFv)2 、單鏈抗體、雙可變區抗體、單可變區抗體、線性抗體、雙抗體、奈米抗體或V區抗體。在一些實施例中，抗體為IgG抗體。在一些實施例中，抗體為IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體。在一些實施例中，抗體包含κ輕鏈。在一些實施例中，抗體包含λ輕鏈。
在上述態樣及實施例中之每一者之一些實施例以及本文所描述之其他態樣及實施例中，ILT3結合劑(直接或間接)連接至半衰期延長部分。
在上述態樣及實施例中之每一者之一些實施例以及本文所描述之其他態樣及實施例中，本文所描述之ILT3結合劑為ILT3之拮抗劑。在一些實施例中，ILT3結合劑抑制ILT3活性。在一些實施例中，ILT3結合劑為拮抗性抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為抑制ILT3誘導之對免疫細胞之阻抑作用之抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為抑制ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用之抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為再活化致耐受性樹突細胞之抗體。
在另一態樣中，本發明提供包含本文所描述之ILT3結合劑的組合物。在一些實施例中，組合物包含本文所描述之抗ILT3抗體。在一些實施例中，組合物包含本文所描述之單株抗ILT3抗體。在一些實施例中，組合物包含選自由以下組成之群的抗ILT3抗體：3A3、5A7、Hz5A7.v5、12A12、16C5、45G10、48A6、Hz45G10、Hz48A6及53F10。
在另一態樣中，本發明提供包含本文所描述之ILT3結合劑及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所描述之抗ILT3抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所描述之單株抗ILT3抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含選自由以下組成之群的抗ILT3抗體：3A3、5A7、Hz5A7.v5、12A12、16C5、45G10、48A6、Hz45G10、Hz48A6及53F10以及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含抗ILT3抗體，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含選自由以下組成之群的抗ILT3抗體之VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3：3A3、5A7、Hz5A7.v5、12A12、16C5、45G10、48A6、Hz45G10 (實例15中所描述之2種人類化Hz45G10抗體中之任一者)、Hz48A6 (實例15中所描述之5種人類化Hz48A6抗體中之任一者)及53F10；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含選自由以下組成之群的抗ILT3抗體之VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3：3A3、5A7、Hz5A7.v5、12A12、16C5、45G10、48A6、Hz45G10 (實例15中所描述之2種人類化Hz45G10抗體中之任一者)、Hz48A6 (實例15中所描述之5種人類化Hz48A6抗體中之任一者)及53F10；以及醫藥學上可接受之載劑。
在上述態樣中之每一者之一些實施例以及本文中別處所描述之其他態樣及/或實施例中，ILT3結合劑經分離。在一些實施例中，ILT3結合劑為實質上純的。
在另一態樣中，本發明提供包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之一種或多種聚核苷酸的聚核苷酸。在一些實施例中，一種或多種聚核苷酸經分離。在一些實施例中，載體包含編碼本文所描述之ILT3結合劑的一種或多種聚核苷酸。在一些實施例中，經分離之細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑的一種或多種聚核苷酸。在一些實施例中，經分離之細胞包含含有編碼本文所描述之ILT3結合劑之一種或多種聚核苷酸的載體。在一些實施例中，細胞包含本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，細胞產生本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，細胞為單株細胞株。在一些實施例中，細胞為雜交瘤。
在另一態樣中，本發明提供使用本文所描述之ILT3結合劑之方法。在一些實施例中，方法包括使用包含本文所描述之ILT3結合劑的組合物。在一些實施例中，方法包括使用包含本文所描述之ILT3結合劑的醫藥組合物。
在一些實施例中，提供破壞、抑制或阻斷ILT3與配位體及/或結合配偶體之結合的方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與細胞混合物中之纖連蛋白之結合的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與細胞混合物中之APOE之結合的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與細胞混合物中之CNTFR之結合的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸。
在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與個體中之纖連蛋白之結合的方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與個體中之APOE之結合的方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與個體中之CNTFR之結合的方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。
在一些實施例中，提供破壞、抑制或阻斷ILT3活性之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷細胞混合物中纖連蛋白誘導之ILT3活性之方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用的方法使骨髓細胞中之FcR活性恢復。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓活性之阻抑作用的方法使骨髓細胞中趨化介素/細胞介素之產生恢復。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用的方法使細胞增殖活性恢復。在一些實施例中，骨髓細胞為單核球。在一些實施例中，骨髓細胞為巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為致耐受性樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為APC。
在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中纖連蛋白誘導之ILT3活性之方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用的方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用的方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用的方法使骨髓細胞中之FcR活性恢復及/或使骨髓細胞中之趨化介素/細胞介素產生恢復。在一些實施例中，骨髓細胞為單核球。在一些實施例中，骨髓細胞為巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為致耐受性樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為抗原呈遞細胞(APC)。
在一些實施例中，治療個體之癌症之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，投與本文所描述之ILT3結合劑例如藉由阻斷ILT3與纖連蛋白、APOE或CNTFR之間的相互作用來刺激/活化腫瘤相關抑制性骨髓細胞，從而使得諸如抗腫瘤T細胞反應之免疫反應增加，且因此活化個體中針對癌症/腫瘤之免疫反應。在一些實施例中，投與本文所描述之ILT3結合劑阻斷抑制性腫瘤微環境中ILT3與纖連蛋白之間的相互作用，且再程式化/刺激諸如致耐受性樹突細胞之骨髓細胞。因此，此使得骨髓細胞分泌之T細胞招募趨化介素及骨髓細胞誘導腫瘤微環境中T細胞之增殖及細胞介素分泌之能力增加。在一些實施例中，癌症為乳癌、肺癌、頭頸癌、結腸直腸癌、前列腺癌、皮膚癌、黑色素瘤、胃部癌症、胃癌、腸癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腦癌、食管癌、肝癌、腎癌或睾丸癌。在一些實施例中，癌症為胰腺癌。在一些實施例中，癌症為卵巢癌。在一些實施例中，癌症為肉瘤。在一些實施例中，癌症為血液癌症。在一些實施例中，癌症為骨髓性白血病。在一些實施例中，骨髓性癌症為急性骨髓樣白血病(AML)。在一些實施例中，骨髓性癌症為慢性骨髓樣白血病。在一些實施例中，癌症為骨髓發育異常症候群。骨髓發育異常症候群(MDS)為一組癌症，其中骨髓中之不成熟血細胞並不成熟且因此不會變為健康血細胞。在一些實施例中，骨髓發育異常症候群發展成AML。在一些實施例中，癌症或癌症存在之微環境為富含纖連蛋白的。在一些實施例中，癌症或癌症存在之微環境與其非癌對應物相比具有較高之纖連蛋白表現。在一些實施例中，癌症之腫瘤微環境具有增加之纖連蛋白表現水準。在一些實施例中，癌症表現ILT3。在一些實施例中，癌症為某一類型之B細胞白血病或表現ILT3之淋巴瘤。
在一些實施例中，抑制個體中之腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，增加或增強個體中對腫瘤或腫瘤細胞之免疫反應之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，活化或增強個體中對腫瘤或腫瘤細胞之持久或長期免疫反應之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，抑制個體中腫瘤復發或腫瘤再生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，在個體中誘導抑制腫瘤復發或腫瘤再生長之持久或長期免疫性之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，腫瘤為胰腺腫瘤、乳房腫瘤、肺腫瘤、頭頸腫瘤、結腸直腸腫瘤、前列腺腫瘤、皮膚腫瘤、黑色素瘤腫瘤、胃部腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、卵巢腫瘤、子宮頸腫瘤、子宮腫瘤、子宮內膜腫瘤、膀胱腫瘤、腦腫瘤、食管腫瘤、肝腫瘤、腎腫瘤、睾丸腫瘤、肉瘤或血液腫瘤。在一些實施例中，腫瘤產生自骨髓發育異常症候群。在一些實施例中，腫瘤表現ILT3。在一些實施例中，腫瘤為某一類型之B細胞白血病或表現ILT3之淋巴瘤。
在一些實施例中，活化具有腫瘤之個體中例如腫瘤微環境中之骨髓細胞的方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，骨髓細胞為原代樹突細胞或致耐受性樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為單核球或巨噬細胞。在一些實施例中，再活化個體中之致耐受性樹突細胞之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，在腫瘤微環境中發現致耐受性樹突細胞。
在另一態樣中，本發明提供一種治療人類個體之癌症之方法。該方法包括向人類個體投與治療有效量之本文所描述之抗體或醫藥組合物。在一些情況下，癌症或癌症存在之微環境為富含纖連蛋白的。在一些實施例中，癌症或癌症存在之微環境與其非癌對應物相比具有較高之纖連蛋白表現。在一些實施例中，癌症之腫瘤微環境具有增加之纖連蛋白表現水準。在一些實施例中，癌症表現ILT3。在某些情況下，癌症為胰腺癌、乳癌、肺癌、頭頸癌、結腸直腸癌、前列腺癌、皮膚癌、黑色素瘤、胃部癌症、胃癌、腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腦癌、食管癌、肝癌、腎癌、肉瘤或睾丸癌、血液癌症、骨髓性白血病、急性骨髓樣白血病(AML)、慢性骨髓樣白血病或骨髓發育異常症候群。
在本文所描述之方法中之任一者的一些實施例中，向個體投與ILT3結合劑作為組合療法之一部分。在一些實施例中，組合療法包含至少一種其他治療劑。
在另一態樣中，本發明提供一種包含本文所描述之結合劑或抗體及抗PD-1抗體的組合。在另一態樣中，本發明提供一種包含用於抑制人類ILT-3與纖連蛋白之間的相互作用之劑與抗PD-1抗體的組合。用於抑制ILT-3與纖連蛋白之間的相互作用之劑為本文所描述之抗體。
在另一態樣中，本發明提供一種包含本文所描述之抗體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。亦揭示本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)在用於治療癌症之藥劑之製造中的用途。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑之用途係用於治療癌症。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑之用途係用於抑制腫瘤生長。
在另一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含用於抑制人類ILT3與纖連蛋白之間的相互作用之劑；及醫藥學上可接受之載劑。在一些情況下，用於抑制人類ILT3與纖連蛋白之間的相互作用之劑為抗人類ILT3抗體。在某些情況下，抗體包含重鏈可變區之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3及輕鏈可變區之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中重鏈可變區及輕鏈可變區包含分別在以下各項中之胺基酸序列：SEQ ID NO:123及124；SEQ ID NO:156及161；SEQ ID NO:157及161；SEQ ID NO:158及161；SEQ ID NO:159及161；SEQ ID NO:160及161；SEQ ID NO:162及164；或SEQ ID NO:163及164。在一些情況下，抗體包含重鏈可變區之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3及輕鏈可變區之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中重鏈可變區及輕鏈可變區包含分別在以下各項中之胺基酸序列：SEQ ID NO:123及124；SEQ ID NO:156及161；SEQ ID NO:157及161；SEQ ID NO:158及161；SEQ ID NO:159及161；SEQ ID NO:160及161；SEQ ID NO:162及164；或SEQ ID NO:163及164。
在上述態樣及實施例中之每一者之一些實施例以及本文所描述之其他態樣及實施例中，個體為人類。
在根據馬庫西群或其他替代群描述本發明之態樣或實施例的情況下，本發明不僅涵蓋列為整體之整個群，而且個別地涵蓋群之各成員且涵蓋主群之所有可能的亞群以及不存在群成員中之一或多者的主群。本發明亦設想明確排除所主張之發明的任何群成員中之一或多者。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2019年12月19日提出申請之美國臨時申請案第62/950,434號之優先權益，該臨時申請案之內容以全文引用之方式併入本文中。
本發明提供結合免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之新穎藥劑，包括但不限於多肽，諸如抗體。ILT3結合劑包括但不限於多肽、抗體(包括其抗原結合片段)、支架蛋白及異二聚分子。ILT3結合劑包括但不限於ILT3活性之拮抗劑、ILT3活性之抑制劑及/或抑制ILT3阻抑活性之藥劑。亦提供相關多肽、聚核苷酸、載體、包含該等藥劑之組合物、包含相關聚核苷酸或載體之細胞及製備該等藥劑之方法。亦提供使用新穎ILT3結合劑之方法。 I.   定義
為使本申請案可被更透徹地理解，以下闡述若干定義。此等定義意在涵蓋語法等效物。
術語「抗體」以廣義使用且包括例如完整免疫球蛋白及含有抗原結合部分之抗體片段。傳統抗體結構單位典型地包含四聚體。各四聚體典型地由兩對一致之多肽鏈組成，每對具有一條「輕」鏈(典型地具有約25 kDa之分子量)及一條「重」鏈(典型地具有約50-70 kDa之分子量)。人類輕鏈歸類為κ及λ輕鏈。本發明係關於總體上基於IgG類別之抗體或抗體片段(抗體單體)，其具有若干子類，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。一般而言，IgG1、IgG2及IgG4比IgG3使用更頻繁。應注意，IgG具有不同同種異型。所有IgG同種異型均可用於本發明。舉例而言，IgG1具有在356 (D或E)及358 (L或M)下之多態性。本文所展示之序列使用356E/358M同種異型，然而，本文包括其他同種異型。如熟習此項技術者將瞭解，不同編號系統間互補決定區(CDR)之精確編號及位置可為不同的。然而，應瞭解揭示可變重序列及/或可變輕序列包括揭示相關(固有) CDR。因此，揭示各可變重區(VH)為揭示VHCDR (例如VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3)且揭示各可變輕區(VL)為揭示VLCDR (例如VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3)。
CDR編號之適用比較如下，參見Lafranc等人, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77 (2003)：
   Kabat+ Chothia IMGT Kabat AbM Chothia Contact
vhCDR1 26-35 27-38 31-35 26-35 26-32 30-35
vhCDR2 50-65 56-65 50-65 50-58 52-56 47-58
vhCDR3 95-102 105-117 95-102 95-102 95-102 93-101
vlCDR1 24-34 27-38 24-34 24-34 24-34 30-36
vlCDR2 50-56 56-65 50-56 50-56 50-56 46-55
vlCDR3 89-97 105-117 89-97 89-97 89-97 89-96
關於蛋白質序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」、「序列一致性百分比(%)」或「一致性百分比(%)」定義為在比對序列且必要時引入空隙以達成最大序列一致性百分比之後，候選序列中與特定(親本)序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基的百分比，且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的而進行比對可以此項技術內之各種方式來達成，例如使用公共可獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定用於量測比對之適當參數，包括在所比較之序列之整個長度上達成最大比對所需的任何演算法。一種特定程式為以引用之方式併入本文中的美國公開案第20160244525號段落[0279]至[0280]概述之ALIGN-2程式。用於核酸序列之另一近似比對由Smith及Waterman, Advances in Applied Mathematics, 2:482-489 (1981)之局部同源演算法提供。此演算法可藉由使用由Dayhoff, Atlas of Protein Sequences and Structure, M.O. Dayhoff編, 5增刊3:353-358, National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C., USA開發且由Gribskov, Nucl. Acids Res. 14(6):6745-6763 (1986)正規化之打分矩陣應用於胺基酸序列。
如本文所用之「Fc」或「Fc區」或「Fc結構域」意謂包含排除第一恆定區免疫球蛋白結構域(例如CH1)之抗體恆定區及(在一些情況下)一部分鉸鏈的多肽。對於IgG，Fc結構域包含免疫球蛋白結構域CH2及CH3 (Cγ2及Cγ3)及CH1 (Cγ1)與CH2 (Cγ2)之間的下部鉸鏈區。雖然Fc區之邊界可改變，但人類IgG重鏈Fc區通常經界定包括殘基C226或P230至其羧基端，其中編號係根據如Kabat中之EU索引。因此，在IgG情形中之「CH」結構域如下：「CH1」係指根據如Kabat中之EU索引的位置118-215。「鉸鏈」係指根據如Kabat中之EU索引的位置216-230。「CH2」係指根據如Kabat中之EU索引的位置231-340，且「CH3」係指根據如Kabat中之EU索引的位置341-447。因此，「Fc結構域」包括-CH2-CH3結構域及視情況存在之鉸鏈結構域(鉸鏈-CH2-CH3)。在一些實施例中，如下文更充分描述，對Fc區進行胺基酸修飾，例如以改變與一或多種FcγR受體或FcRn受體之結合。
如本文所用之「骨髓細胞」係指具有骨髓來源之任何細胞，包括但不限於單核球、巨噬細胞及樹突細胞。
如本文關於CDR胺基酸序列所用之「實質上一致」係指CDR序列中之至少1個胺基酸修飾(例如1、2、3、4、5或6個胺基酸修飾)，其中CDR序列之修飾與其餘五個CDR (在五個CDR中之任何一或多者中存在或不存在其他修飾之情況下)的組合與包含六個原始CDR之抗原結合結構域相比不會使所得抗原結合結構域的親和力(在Biacore系統中藉由例如SPR技術量測KD )改變超過50倍。 II.  ILT3結合劑
本文分別以SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:6提供人類ILT3 (UniProtKB編號Q8NHJ6)及食蟹猴(「cyno」) ILT3 (NCBI參考編號XP_015297198)之胺基酸(aa)序列。如本文所用，提及ILT3之胺基酸位置係指包括信號序列之胺基酸序列編號。
ILT3為具有約47 kDa之預測分子量的單次I型跨膜蛋白。已觀測到ILT3主要表現於骨髓抗原呈遞細胞(諸如正常單核球、巨噬細胞及樹突細胞)上。ILT3之特徵為包含兩個Ig樣C2型結構域之細胞外結構域、跨膜結構域及含有3個ITIM結構域之長胞質結構域(參見例如Cella等人, 1997,J. Exp. Med. , 185:1743-1751)。兩個Ig樣C2型結構域在本文中可稱為結構域1 (D1)及結構域2 (D2)。D1位於蛋白質之N端部分且D2之位置最靠近跨膜區。如UniProtKB內所表徵，人類ILT3為448個胺基酸(aa)之蛋白質，信號序列為aa 1-21，細胞外結構域為aa 22-259，跨膜區為aa 260-280，且胞質結構域為aa 281-448。在細胞外結構域內，D1為aa 27-188，D2為aa 124-218，且「莖區」為aa 219-259。在胞質結構域內，ITIM為aa 358-363、410-415及440-445。
在一些實施例中，ILT3結合劑結合ILT3或ILT3之片段。在一些實施例中，ILT3之片段包含細胞外結構域。在一些實施例中，ILT3之片段包含Ig樣C2型結構域中之一者(例如D1或D2)。在一些實施例中，ILT3之片段包含兩個Ig樣C2型結構域(例如D1-D2)。在一些實施例中，ILT3之片段包含兩個Ig樣C2型結構域及莖區(例如D1-D2-莖)。在一些實施例中，ILT3之片段包含一個Ig樣C2型結構域及莖區(例如D1-莖或D2-莖)。在一些實施例中，人類ILT3之細胞外結構域包含SEQ ID NO:1之胺基酸22-259。在一些實施例中，人類ILT3之D1包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-118。在一些實施例中，人類ILT3之D2包含SEQ ID NO:1之胺基酸124-218。在一些實施例中，人類ILT3之D1-D2包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-218。在一些實施例中，人類ILT3之D1-D2-莖包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-259。在一些實施例中，人類ILT3之D2-莖包含SEQ ID NO:1之胺基酸124-259。在一些實施例中，人類ILT3之片段包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT3之片段包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT3之片段包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT3之片段包含SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5之胺基酸序列。在一些實施例中，cyno ILT3之細胞外結構域包含SEQ ID NO:6之胺基酸22-259。在一些實施例中，cyno ILT3之D1包含SEQ ID NO:6之胺基酸27-118。在一些實施例中，cyno ILT3之D2包含SEQ ID NO:6之胺基酸124-218。在一些實施例中，cyno ILT3之D1-D2包含SEQ ID NO:6之胺基酸27-218。在一些實施例中，cyno ILT3之D1-D2-莖包含SEQ ID NO:6之胺基酸27-259。在一些實施例中，cyno ILT3之D2-莖包含SEQ ID NO:6之胺基酸124-259。在一些實施例中，cyno ILT3之片段包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列。在一些實施例中，cyno ILT3之片段包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列。在一些實施例中，cyno ILT3之片段包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，cyno ILT3之片段包含SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10之胺基酸序列。應瞭解，可由熟習此項技術者差別地確定ILT3 (例如人類ILT3或cyno ILT3)之結構域，因此任何ILT3結構域或區域之N端胺基酸及C端胺基酸可相差1、2、3、4、5或更多個胺基酸殘基。
本發明提供結合ILT3之藥劑(例如抗體)。在一些實施例中，ILT3結合劑結合ILT3之片段。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於ILT3之特定區域內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於ILT3之細胞外結構域內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於ILT3之D1結構域內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於ILT3之D2結構域內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於ILT3之D2-莖區域內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於ILT3之D1與D2結構域之間的接合點內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合ILT3上之抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合ILT3上之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑不結合其他人類LILRB蛋白(例如ILT2、ILT4、ILT5或LILRB5)。在一些實施例中，ILT3結合劑不結合人類LILRA蛋白(例如LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5或LILRA6)。
在一些實施例中，ILT3結合劑結合人類ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑結合cyno ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑結合人類ILT3及cyno ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:1。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:2。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸22-259內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸27-118內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸124-218內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸124-259內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:1之胺基酸27-218內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:3。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:4。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:5。在一些實施例中，ILT3結合劑結合ILT3之包含SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5之片段。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:6。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:7。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:6之胺基酸22-259內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:6之胺基酸27-118內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:6之胺基酸124-218內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合於SEQ ID NO:6之胺基酸27-218內。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:8。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:9。在一些實施例中，ILT3結合劑結合SEQ ID NO:10。在一些實施例中，ILT3結合劑結合ILT3之包含SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10之片段。
在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列及SEQ ID NO:5之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列及SEQ ID NO:10之胺基酸序列的多肽。
在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:2內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:3內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:4內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:5內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:7內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:8內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:9內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:10內之胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑結合包含SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10內之胺基酸的抗原決定基。
在一些實施例中，ILT3結合劑結合人類ILT3且具有以下特性中之至少一者或多者：(i)結合cyno ILT3；(ii)結合人類及cyno ILT3；(iii)不結合ILT2、ILT4、ILT5及LILRB5；(iv)不結合LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6；(v)為ILT3拮抗劑；(vi)抑制ILT3活性；(vii)抑制表現ILT3之細胞中的ILT3信號傳導；(viii)抑制ILT3與APOE之結合；(ix)抑制ILT3與纖連蛋白之結合；(x)抑制ILT3與CNTFR之結合；(xi)抑制ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用；(xii)抑制ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用；(xiii)恢復表現ILT3之骨髓細胞中之FcR活性；及(xiv)恢復表現ILT3之骨髓細胞對趨化介素作出反應之能力。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體。在一些實施例中，抗體為重組抗體。在一些實施例中，抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗體為嵌合抗體。在一些實施例中，抗體為人類化抗體。在一些實施例中，抗體為人類抗體。在一些實施例中，抗體為IgG抗體。在一些實施例中，抗體為IgG1抗體。在一些實施例中，抗體為IgG2抗體。在一些實施例中，抗體為IgG3抗體。在一些實施例中，抗體為IgG4抗體。在一些實施例中，抗體包含IgG重鏈。在一些實施例中，抗體包含IgG1重鏈。在一些實施例中，抗體包含IgG2重鏈。在一些實施例中，抗體包含IgG4重鏈。在一些實施例中，抗體包含κ輕鏈。在一些實施例中，抗體包含κ輕鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包含λ輕鏈。在一些實施例中，抗體包含λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，抗體為包含抗原結合位點之抗體片段。在一些實施例中，抗體為scFv。在一些實施例中，抗體為二硫化物鍵聯之scFv。在一些實施例中，抗體為二硫化物鍵聯之sc(Fv)2 。在一些實施例中，抗體為Fab、Fab′或F(ab)2 抗體。在一些實施例中，抗體為雙抗體。在一些實施例中，抗體為奈米抗體。在一些實施例中，抗體為單特異性抗體。在一些實施例中，抗體為雙特異性抗體。在一些實施例中，抗體為多特異性抗體。在一些實施例中，抗體為單價抗體。在一些實施例中，抗體為多價抗體。在一些實施例中，抗體為二價抗體。在一些實施例中，抗體為四價抗體。
在一些實施例中，抗體經分離。在一些實施例中，抗體為實質上純的。
在一些實施例中，ILT3結合劑為多株抗體。多株抗體可藉由熟習此項技術者已知之任何方法來製備。在一些實施例中，藉由使用多次皮下或腹膜內注射用相關抗原(例如純化肽片段、重組蛋白或融合蛋白)對動物(例如兔、大鼠、小鼠、山羊、驢)進行免疫來產生多株抗體。在一些實施例中，抗原結合至載體，諸如鑰孔戚血藍素(KLH)、血清白蛋白、牛類甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑。將抗原(在存在或不存在載體蛋白之情況下)在無菌鹽水中稀釋且通常與佐劑(例如完全或不完全弗氏佐劑)組合以形成穩定乳液。在一段時間之後，自經免疫之動物(例如自血液或腹水)回收多株抗體。在一些實施例中，根據此項技術中之標準方法自血清或腹水純化多株抗體，此項技術中之標準方法包括但不限於親和層析、離子交換層析、凝膠電泳及/或滲析。
在一些實施例中，ILT3結合劑為單株抗體。可藉由熟習此項技術者已知之任何方法來製備單株抗體。在一些實施例中，使用熟習此項技術者已知之雜交瘤法來製備單株抗體。舉例而言，使用雜交瘤法，如上文所描述對小鼠、大鼠、兔、倉鼠或其他適當之宿主動物進行免疫。在一些實施例中，在活體外對淋巴球進行免疫。在一些實施例中，免疫抗原為人類蛋白或其片段。在一些實施例中，免疫抗原為小鼠蛋白或其片段。在一些實施例中，免疫抗原為cyno蛋白或其片段。
在免疫之後，分離淋巴球且使用例如聚乙二醇與適合之骨髓瘤細胞株融合。使用如此項技術中已知之專門的培養基選擇雜交瘤細胞，且未融合之淋巴球及骨髓瘤細胞在選擇過程中不能存活。產生特定地針對所選抗原之單株抗體的雜交瘤可藉由多種方法加以鑑定，包括但不限於免疫沈澱、免疫墨點及活體外結合分析(例如流式細胞術、FACS、ELISA、SPR (例如Biacore)及放射免疫分析)。在鑑定產生具有所需特異性、親和力及/或活性之抗體的雜交瘤細胞後，可藉由有限稀釋技術對純系進行亞選殖。在一些實施例中，使用高通量方法將單細胞雜交瘤細胞分配至板中。可使用標準方法在活體外培養物中或在活體內以動物中之腹水腫瘤之形式使雜交瘤增殖。可根據此項技術中之標準方法，包括但不限於親和層析、離子交換層析、凝膠電泳及滲析自培養基或腹水純化單株抗體。
在一些實施例中，使用如熟習此項技術者已知之重組DNA技術製備單株抗體。舉例而言，諸如藉由RT-PCR使用特定地擴增編碼抗體之重鏈及輕鏈的基因之寡核苷酸引物自成熟B細胞或雜交瘤細胞分離編碼抗體之聚核苷酸，且使用標準技術測定其序列。接著將經分離之編碼重鏈及輕鏈之聚核苷酸選殖至適合之表現載體中，該等適合之表現載體當轉染至宿主細胞(諸如大腸桿菌、猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中時產生單株抗體，該等宿主細胞原本不產生免疫球蛋白。
在一些實施例中，自表現所需物種之可變結構域或CDR的噬菌體展示文庫分離重組單株抗體。噬菌體文庫之篩選可藉由此項技術中已知之各種技術實現。
在一些實施例中，藉由使用重組DNA技術來修飾單株抗體以產生替代抗體。在一些實施例中，小鼠單株抗體之輕鏈及重鏈之恆定結構域取代人類抗體之恆定區以產生嵌合抗體。在一些實施例中，將恆定區截短或移除以產生單株抗體之所需抗體片段。在一些實施例中，使用可變區之定點或高密度誘變來優化單株抗體之特異性及親和力。
在一些實施例中，ILT3結合劑為人類化抗體。用於產生人類化抗體之各種方法為此項技術中已知的。在一些實施例中，人類化抗體包含已自非人類來源引入其中之一或多個胺基酸殘基。在一些實施例中，藉由用一或多個非人類CDR序列替換人類抗體之對應CDR序列來進行人類化。在一些實施例中，藉由用非人類抗體(例如小鼠抗體)之所有六個CDR替換人類抗體之對應CDR來構築人類化抗體。
可基於多種因素且藉由此項技術中已知之多種方法來進行將用於產生人類化抗體之人類重鏈可變區及/或輕鏈可變區的選擇。在一些實施例中，使用「最佳擬合」法，其中針對已知人類可變區序列之整個文庫對非人類(例如囓齒動物)抗體之可變區之序列進行篩選。選擇最類似於非人類(例如囓齒動物)序列之人類序列作為用於人類化抗體之人類可變區構架。在一些實施例中，選擇衍生自具有特定亞組之輕鏈或重鏈之所有人類抗體之共有序列的特定可變區構架作為可變區構架。在一些實施例中，可變區構架序列衍生自最豐富之人類子類之共有序列。在一些實施例中，人類生殖系基因用作可變區構架序列之來源。
用於人類化之其他方法包括但不限於稱為「超人類化(superhumanization)」之方法，其經描述為將CDR直接轉移至人類生殖系構架；稱為人類串內容(Human String Content，HSC)之方法，其係基於「抗體人類性」之度量；基於產生大的人類化變異體文庫(包括噬菌體、核糖體及酵母展示文庫)之方法；及基於構架區改組之方法。
在一些實施例中，ILT3結合劑為人類抗體。可使用此項技術中已知之各種技術製備人類抗體。在一些實施例中，由活體外免疫之永生化人類B淋巴球產生人類抗體。在一些實施例中，由自經免疫個體分離之淋巴球產生人類抗體。在任何情況下，可產生且分離產生針對目標抗原之抗體的細胞。在一些實施例中，自噬菌體文庫選擇人類抗體，其中該噬菌體文庫表現人類抗體。或者，可在活體外使用噬菌體展示技術由來自未經免疫之人類供體之免疫球蛋白可變區基因譜產生人類抗體及抗體片段。用於產生及使用抗體噬菌體文庫之技術為此項技術中熟知的。在鑑定抗體後，可採用此項技術中已知之包括但不限於鏈改組及定點誘變之親和力成熟策略來產生較高親和力之人類抗體。在一些實施例中，在含有人類免疫球蛋白基因座之基因轉殖小鼠中產生人類抗體。在免疫後，此等小鼠能夠在不產生內源性免疫球蛋白之情況下產生完全人類抗體譜。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體片段。如本文所用，術語「抗體片段」係指包含抗體之一部分且通常包含抗原結合位點之除完整抗體外之分子。抗體片段之實例包括但不限於Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、單鏈抗體分子(例如scFv)、二硫化物鍵聯之scFv (dsscFv)、奈米抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、微型抗體、雙可變結構域抗體(DVD)、單可變結構域抗體(例如駱駝抗體)及由抗體片段形成之多特異性抗體。
在一些實施例中，ILT3結合劑為scFv抗體。在一些實施例中，scFv為二硫化物鍵聯之scFv (dsscFv)，其為在scFv之輕鏈可變區與重鏈可變區之間包含工程改造之二硫鍵的scFv。在一些實施例中，二硫鍵增加scFv分子之穩定性。在一些實施例中，二硫鍵增加scFv分子之熱穩定性。
在一些實施例中，ILT3結合劑為Fv。在一些實施例中，ILT3結合劑為Fab。在一些實施例中，ILT3結合劑為F(ab′)2 。在一些實施例中，ILT3結合劑為F(ab′)。
抗體片段可藉由各種技術來製備，包括但不限於完整抗體之蛋白水解消化。本文所描述之抗體片段可使用此項技術中已知之重組技術(例如大腸桿菌或噬菌體表現)來產生。
在一些實施例中，ILT3結合劑為雙特異性抗體。雙特異性抗體能夠識別且結合至少兩種不同抗原或抗原決定基。在一些實施例中，ILT3結合劑為多特異性抗體。多特異性抗體能夠識別且結合至少三種不同抗原或抗原決定基。不同抗原決定基可位於相同分子內(例如ILT3上之兩種或更多種抗原決定基)或不同分子上(例如ILT3上之一種抗原決定基及除ILT3外之一種或多種靶標上之其餘抗原決定基)。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體與個別抗體或與超過一種抗體之組合相比具有增強之效力。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體與個別抗體或與超過一種抗體之組合相比具有降低之毒性。熟習此項技術者已知任何治療劑均可具有獨特藥物動力學(PK) (例如循環半衰期)。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體具有將兩種或更多種活性結合劑之PK協同化之能力，其中兩種或更多種個別結合劑具有不同PK型態。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體具有將兩種或更多種藥劑之作用集中於個體(例如人類)中之共同區域(例如組織)中之能力。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體具有將兩種或更多種藥劑之作用集中於共同靶標(例如特定細胞類型)之能力。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體具有使兩種或更多種藥劑之作用靶向超過一種生物路徑或功能之能力。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體具有靶向兩種或更多種不同細胞且使其靠近之能力。
在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體具有降低之毒性及/或副作用。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體與兩種或更多種個別抗體之混合物或作為單一藥劑之抗體相比具有降低之毒性及/或副作用。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體具有增加之治療指數。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體與兩種或更多種個別抗體之混合物或作為單一藥劑之抗體相比具有增加之治療指數。
用於製備雙特異性或多特異性抗體之許多技術為熟習此項技術者已知的。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體包含在作為兩條重鏈之間的界面之一部分的胺基酸中具有修飾之重鏈恆定區。進行此等修飾以增強異二聚體形成且通常減少或消除均二聚體形成。在一些實施例中，使用杵入臼(KIH)策略產生雙特異性或多特異性抗體。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體包含在一致重鏈之間不能形成二硫鍵之變異體鉸鏈區(例如減少均二聚體形成)。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體包含在胺基酸中具有使得靜電相互作用改變之變化的重鏈。在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體包含在胺基酸中具有使得疏水性/親水性相互作用改變之變化的重鏈。
在一些實施例中，雙特異性或多特異性抗體可為包含抗原結合位點之完整抗體或抗體片段。
在一些實施例中，ILT3結合劑為結合ILT3之抗體。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合人類ILT3。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合cyno ILT3。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合人類ILT3及cyno ILT3。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合ILT3抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合人類ILT3之細胞外結構域內之ILT3抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合cyno ILT3之細胞外結構域內之ILT3抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸22-259內之至少一個胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸22-120內之至少一個胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-118內之至少一個胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸121-259內之至少一個胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸124-218內之至少一個胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸124-259內之至少一個胺基酸的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:3內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:4內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:5內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT3抗體結合包含SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基為構象抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基為線性抗原決定基。
在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於人類ILT3之細胞外結構域內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於cyno ILT3之細胞外結構域內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於SEQ ID NO:1之胺基酸22-259內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於SEQ ID NO:1之胺基酸22-120內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於SEQ ID NO:1之胺基酸27-118內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於SEQ ID NO:1之胺基酸121-259內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於SEQ ID NO:1之胺基酸124-218內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於SEQ ID NO:1之胺基酸124-259內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於胺基酸序列SEQ ID NO:3內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於胺基酸序列SEQ ID NO:4內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於胺基酸序列SEQ ID NO:5內。在一些實施例中，抗ILT3抗體與第二藥劑競爭結合於胺基酸序列SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5內。
在一些實施例中，ILT3結合劑為本文所描述之抗ILT3抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為本文所描述之抗ILT3抗體之變異體。在一些實施例中，ILT3抗體之變異體保留本文所描述之ILT3結合劑的一或多個結合特徵。在一些實施例中，抗ILT3抗體之變異體包含一至三十個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT3抗體之變異體包含一至二十五個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT3抗體之變異體包含一至二十個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT3抗體之變異體包含一至十五個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT3抗體之變異體包含一至十個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT3抗體之變異體包含一至五個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT3抗體之變異體包含一至三個胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代在抗體之CDR中。在一些實施例中，胺基酸取代不在抗體之CDR中。在一些實施例中，胺基酸取代在抗體之構架區中。在一些實施例中，胺基酸取代為保守胺基酸取代。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含本文所描述之抗體之CDR中的一或多個(例如1、2、3、4、5或6個等)胺基酸取代，同時保留本文所描述之ILT3結合劑的一或多個結合特徵。在一些實施例中，胺基酸取代為保守取代。在一些實施例中，CDR包含一個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR包含兩個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR包含三個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR包含四個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR為重鏈可變區CDR1。在一些實施例中，CDR為重鏈可變區CDR2。在一些實施例中，CDR為重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，CDR為輕鏈可變區CDR1。在一些實施例中，CDR為輕鏈可變區CDR2。在一些實施例中，CDR為輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，該六個CDR中之一或多者具有不超過六個胺基酸取代。在一些實施例中，進行取代作為人類化過程之一部分。在一些實施例中，進行取代作為生殖系人類化過程之一部分。在一些實施例中，進行取代作為親和力成熟過程之一部分。在一些實施例中，進行取代作為優化過程之一部分。
由熟習此項技術者使用多種方法/系統確定抗體之CDR。此等系統及/或定義已經多年研發並精修且包括Kabat、Chothia、IMGT、AbM及Contact。Kabat定義係基於序列變異性且為常用的。Chothia定義係基於結構環區之位置。IMGT系統係基於序列變異性及可變結構域結構內之位置。AbM定義為Kabat與Chothia之間的折衷。Contact定義係基於可獲得之抗體晶體結構之分析。例示性系統為Kabat與Chothia之組合。軟體程式(例如abYsis)為可獲得的且為熟習此項技術者已知用於分析抗體序列及確定CDR的。
本文定義之特定CDR序列通常係基於Kabat與Chothia定義(例示性定義)之組合。然而，應瞭解提及特定抗體之一或多個重鏈可變區CDR及/或一或多個輕鏈可變區CDR將涵蓋如熟習此項技術者已知之所有CDR定義。
在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體包含基於Kabat定義之抗體3A3、5A7、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之六個CDR。在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體包含基於Chothia定義之抗體3A3、5A7、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之六個CDR。在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體包含基於AbM定義之抗體3A3、5A7、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之六個CDR。在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體包含基於IMGT定義之抗體3A3、5A7、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之六個CDR。在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體包含基於Contact定義之抗體3A3、5A7、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之六個CDR。在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體包含基於例示性定義之抗體3A3、5A7、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之六個CDR。
在一些實施例中，ILT3結合劑為包含本文所描述之抗體中之任一者的一個、兩個、三個、四個、五個及/或六個CDR的抗ILT3抗體。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表1之重鏈可變區CDR，及/或(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表1之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表2之重鏈可變區CDR，及/或(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表2之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表3之重鏈可變區CDR，及/或(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表3之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表4之重鏈可變區CDR，及/或(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表4之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表5之重鏈可變區CDR，及/或(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表5之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表6之重鏈可變區CDR，及/或(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表6之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表7之重鏈可變區CDR，及/或(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表7之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表8之重鏈可變區CDR，及/或(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含一個、兩個及/或三個來自表8之輕鏈可變區CDR。
在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含三個來自表1之重鏈可變區CDR，及(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含三個來自表1之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含三個來自表2之重鏈可變區CDR，及(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含三個來自表2之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含三個來自表3之重鏈可變區CDR，及(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含三個來自表3之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含三個來自表4之重鏈可變區CDR，及(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含三個來自表4之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含三個來自表5之重鏈可變區CDR，及(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含三個來自表5之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含三個來自表6之重鏈可變區CDR，及(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含三個來自表6之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含三個來自表7之重鏈可變區CDR，及(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含三個來自表7之輕鏈可變區CDR。在一些實施例中，抗ILT3抗體包含(i)重鏈可變區，該重鏈可變區包含三個來自表8之重鏈可變區CDR，及(ii)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含三個來自表8之輕鏈可變區CDR。 表1：抗體3A3序列
   例示性 Chothia AbM Kabat Contact
重鏈可變區CDR1 GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11) GFSLTSY (SEQ ID NO:17) GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11) SYGVH (SEQ ID NO:20) TSYGVH (SEQ ID NO:21)
重鏈可變區CDR2 VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12) WPGGT (SEQ ID NO:18) VIWPGGTIN (SEQ ID NO:19) VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12) WLGVIWPGGTIN (SEQ ID NO:22)
重鏈可變區 CDR3 DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13) DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13) DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13) DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13) ASDKYDGGWFA (SEQ ID NO:23)
輕鏈可變區 CDR1 KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14) KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14) KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14) KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14) RTAVAWY (SEQ ID NO:24)
輕鏈可變區CDR2 LASNRHT (SEQ ID NO:15) LASNRHT (SEQ ID NO:15) LASNRHT (SEQ ID NO:15) LASNRHT (SEQ ID NO:15) ALIYLASNRH (SEQ ID NO:25)
輕鏈可變區CDR3 LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16) LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16) LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16) LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16) LQHLNYPL (SEQ ID NO:26)
3A3重鏈可變區(SEQ ID NO:109) QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQPPGKGLEWLGVIWPGGTINYN SALMSRLSISKDNSKSQVFLKLNSLQTDDTAMYYCASDKYDGGWFAYWGQGTLVTVSA
3A3輕鏈可變區(SEQ ID NO:110) DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSITCKASQNVRTAVAWYQQKPGQSPEALIYLASNRHTGVPD RFTGSGSGTDFSLSISNVQSEDLADYFCLQHLNYPLTFGSGTKLEIK
表2：抗體5A7序列
   例示性 Chothia AbM Kabat Contact
重鏈可變區CDR1 GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27) GFTFSSY (SEQ ID NO:33) GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27) SYGMS (SEQ ID NO:36) SSYGMS (SEQ ID NO:37)
重鏈可變區CDR2 TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28) SGGGSY (SEQ ID NO:34) TISGGGSYTN (SEQ ID NO:35) TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28) WVATISGGGSYTN (SEQ ID NO:38)
重鏈可變區CDR3 REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29) REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29) REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29) REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29) ARREWRMTLYAMD (SEQ ID NO:39)
輕鏈可變區CDR1 RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30) RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30) RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30) RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30) DSYGNSFMHWY (SEQ ID NO:40)
輕鏈可變區 CDR2 LTSNLES (SEQ ID NO:31) LTSNLES (SEQ ID NO:31) LTSNLES (SEQ ID NO:31) LTSNLES (SEQ ID NO:31) LLIYLTSNLE (SEQ ID NO:41)
輕鏈可變區 CDR3 QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32) QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32) QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32) QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32) QQNNEDPF (SEQ ID NO:42)
5A7重鏈可變區(SEQ ID NO:111) EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGSYTNY PDSVKGRLTISRDNAKKNLYLEMSSLRSEDTALYYCARREWRMTLYAMDYWGQGTSVTVSS
5A7輕鏈可變區(SEQ ID NO:112) NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQAPKLLIYLTSNLES GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPFTFGSGTKLEIK
表3：抗體12A12序列
   例示性 Chothia AbM Kabat Contact
重鏈可變區CDR1 GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43) GYTFTDY (SEQ ID NO:49) GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43) DYNMD (SEQ ID NO:52) TDYNMD (SEQ ID NO:53)
重鏈可變區CDR2 YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44) YPNNGG (SEQ ID NO:50) YIYPNNGGTG (SEQ ID NO:51) YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44) WIGYIYPNNGGTG (SEQ ID NO:54)
重鏈可變區 CDR3 SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45) SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45) SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45) SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45) ASSPYYDYVGSYAMD (SEQ ID NO:55)
輕鏈可變區 CDR1 TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46) TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46) TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46) TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46) SSSYLHWY (SEQ ID NO:56)
輕鏈可變區 CDR2 STSNLAS (SEQ ID NO:47) STSNLAS (SEQ ID NO:47) STSNLAS (SEQ ID NO:47) STSNLAS (SEQ ID NO:47) LWIYSTSNLA (SEQ ID NO:57)
輕鏈可變區 CDR3 HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48) HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48) HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48) HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48) HQYHRSPR (SEQ ID NO:58)
12A12重鏈可變區(SEQ ID NO:113) EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGYIYPNNGGTGY NQKFNSKATLTVDKSSSTAYMELHSLTSEDSAVYYCASSPYYDYVGSYAMDYWGQGTSVTVSS
12A12輕鏈可變區(SEQ ID NO:114) QIVLTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVP ARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPRTFGGGTKLEIK
表4：抗體16C5序列
   例示性 Chothia AbM Kabat Contact
重鏈可變區CDR1 GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43) GYTFTDY (SEQ ID NO:49) GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43) DYNMD (SEQ ID NO:52) TDYNMD (SEQ ID NO:53)
重鏈可變區CDR2 YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59) YPSNGG (SEQ ID NO:64) YIYPSNGGTG (SEQ ID NO:65) YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59) WIGYIYPSNGGTG (SEQ ID NO:66)
重鏈可變區CDR3 VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60) VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60) VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60) VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60) ARVPYYDYLYYYAMD (SEQ ID NO:67)
輕鏈可變區CDR1 RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61) RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61) RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61) RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61) SFMHWY (SEQ ID NO:68)
輕鏈可變區 CDR2 ATSNLAS (SEQ ID NO:62) ATSNLAS (SEQ ID NO:62) ATSNLAS (SEQ ID NO:62) ATSNLAS (SEQ ID NO:62) PWIYATSNLA (SEQ ID NO:69)
輕鏈可變區 CDR3 QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63) QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63) QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63) QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63) QQWSTNPYMY (SEQ ID NO:70)
16C5重鏈可變區(SEQ ID NO:115) EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGYIYPSNGGTGY NQKFKSKATLTVDKSSNTAYMELHSLTSEDSAVYYCARVPYYDYLYYYAMDYWGQGTSVTVSS
16C5輕鏈可變區(SEQ ID NO:116) QIVLSQSPAILSASPGEKVTMACRASSSVSFMHWYQQKPGSSPQPWIYATSNLASGVPAR FSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSTNPYMYTFGGGTKLEIK
表5：抗體45G10序列
   例示性 Chothia AbM Kabat Contact
重鏈可變區CDR1 GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71) GFTFSDY (SEQ ID NO:77) GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71) DYGMH (SEQ ID NO:80) SDYGMH (SEQ ID NO:81)
重鏈可變區CDR2 YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72) FSGSST (SEQ ID NO:78) YIFSGSSTIY (SEQ ID NO:79) YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72) WVAYIFSGSSTIY (SEQ ID NO:82)
重鏈可變區 CDR3 ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73) ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73) ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73) ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73) ARADGRGAMD (SEQ ID NO:83)
輕鏈可變區 CDR1 RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74) RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74) RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74) RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74) SKFLNWY (SEQ ID NO:84)
輕鏈可變區 CDR2 YTSRLHS (SEQ ID NO:75) YTSRLHS (SEQ ID NO:75) YTSRLHS (SEQ ID NO:75) YTSRLHS (SEQ ID NO:75) LLIYYTSRLH (SEQ ID NO:85)
輕鏈可變區 CDR3 QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76) QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76) QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76) QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76) QQGNTLPW (SEQ ID NO:86)
45G10重鏈可變區(SEQ ID NO:117) EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYIFSGSSTIYY ADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARADGRGAMDYWGQGTSVTVSS
45G10輕鏈可變區(SEQ ID NO:118) DVQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKFLNWYQQKPDGTVTLLIYYTSRLHSGVPS RFSGSGSGTDYSLTISNLDQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK
表6：抗體48A6序列
   例示性 Chothia AbM Kabat Contact
重鏈可變區CDR1 GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27) GFTFSSY (SEQ ID NO:33) GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27) SYGMS (SEQ ID NO:36) SSYGMS (SEQ ID NO:37)
重鏈可變區CDR2 TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87) SSGGTY (SEQ ID NO:92) TISSGGTYTF (SEQ ID NO:93) TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87) WVATISSGGTYTF (SEQ ID NO:94)
重鏈可變區 CDR3 RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88) RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88) RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88) RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88) ARRGWLLHYYAMD (SEQ ID NO:95)
輕鏈可變區 CDR1 RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89) RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89) RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89) RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89) DSFGNSFMHWF (SEQ ID NO:96)
輕鏈可變區 CDR2 LSSKLES (SEQ ID NO:90) LSSKLES (SEQ ID NO:90) LSSKLES (SEQ ID NO:90) LSSKLES (SEQ ID NO:90) LLIYLSSKLE (SEQ ID NO:97)
輕鏈可變區 CDR3 QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91) QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91) QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91) QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91) QQHNEDPF (SEQ ID NO:98)
48A6重鏈可變區(SEQ ID NO:119) EVQLVESGGDLMKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSGGTYTFY PDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARRGWLLHYYAMDYWGQGTSVTVSS
48A6輕鏈可變區(SEQ ID NO:120) NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRPSESVDSFGNSFMHWFQQKPGQPPKLLIYLSSKLES GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQHNEDPFTFGSGTKLEIK
表7：抗體53F10序列
   例示性 Chothia AbM Kabat Contact
重鏈可變區CDR1 GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71) GFTFSDY (SEQ ID NO:77) GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71) DYGMH (SEQ ID NO:80) SDYGMH (SEQ ID NO:81)
重鏈可變區CDR2 YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99) STGIIT (SEQ ID NO:101) YISTGIITVY (SEQ ID NO:102) YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99) WVAYISTGIITVY (SEQ ID NO:103)
重鏈可變區 CDR3 ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73) ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73) ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73) ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73) ARADGRGAMD (SEQ ID NO:83)
輕鏈可變區 CDR1 RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100) RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100) RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100) RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100) SNFLNWY (SEQ ID NO:104)
輕鏈可變區 CDR2 YTSRLHS (SEQ ID NO:75) YTSRLHS (SEQ ID NO:75) YTSRLHS (SEQ ID NO:75) YTSRLHS (SEQ ID NO:75) LLIYYTSRLH (SEQ ID NO:85)
輕鏈可變區 CDR3 QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76) QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76) QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76) QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76) QQGNTLPW (SEQ ID NO:86)
53F10重鏈可變區(SEQ ID NO:121) EVQVVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYISTGIITVYY ADTVKGRFTMSRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAIYYCARADGRGAMDYWGQGTSVIVSS
53F10輕鏈可變區(SEQ ID NO:122) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNFLNWYQQKPDGTVTLLIYYTSRLHSGVPS RFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK
表8：抗體Hz5A7.v5序列
   例示性 Chothia AbM Kabat Contact
重鏈可變區CDR1 GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27) GFTFSSY (SEQ ID NO:33) GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27) SYGMS (SEQ ID NO:36) SSYGMS (SEQ ID NO:37)
重鏈可變區CDR2 TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28) SGGGSY (SEQ ID NO:34) TISGGGSYTN (SEQ ID NO:35) TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28) WVATISGGGSYTN (SEQ ID NO:38)
重鏈可變區CDR3 REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105) REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105) REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105) REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105) ARREWRYTLYAMD (SEQ ID NO:107)
輕鏈可變區CDR1 RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106) RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106) RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106) RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106) ESYGSSFMHWY (SEQ ID NO:108)
輕鏈可變區 CDR2 LTSNLES (SEQ ID NO:31) LTSNLES (SEQ ID NO:31) LTSNLES (SEQ ID NO:31) LTSNLES (SEQ ID NO:31) LLIYLTSNLE (SEQ ID NO:41)
輕鏈可變區 CDR3 QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32) QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32) QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32) QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32) QQNNEDPF (SEQ ID NO:42)
Hz5A7.v5重鏈可變區(SEQ ID NO:123) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTNY PDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARREWRYTLYAMDYWGQGTTVTVSS
Hz5A7.v5輕鏈可變區(SEQ ID NO:124) DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVESYGSSFMHWYQQKPGKAPKLLIYLTSNLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEDPFTFGQGTKLEIK
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自本文所描述之抗體的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自本文所描述之抗體的重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，該等CDR來自本文所描述之抗體。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自抗體5A7、其人類化型式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體5A7之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3之重鏈可變區。在其他實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體5A7之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3之輕鏈可變區。在某些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體5A7。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體5A7之人類化型式(例如Hz5A7)。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體5A7或人類化5A7之變異體(例如Hz5A7.v5)。在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含來自抗體Hz5A7.v5之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含來自抗體Hz5A7.v5之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在某些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體Hz5A7.v5。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自抗體3A3、其人類化型式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體3A3之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3的重鏈可變區。在其他實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體3A3之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3的輕鏈可變區。在某些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體3A3。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體3A3之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體3A3之變異體。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自抗體12A12、其人類化型式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體12A12之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3的重鏈可變區。在其他實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體12A12之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3之輕鏈可變區。在某些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體12A12。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體12A12之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體12A12之變異體。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自抗體16C5、其人類化型式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體16C5之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3之重鏈可變區。在其他實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體16C5之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3之輕鏈可變區。在某些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體16C5。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體16C5之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體16C5之變異體。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自抗體45G10、其人類化型式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體45G10之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3之重鏈可變區。在其他實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體45G10之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3之輕鏈可變區。在某些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體45G10。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體45G10之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體45G10之變異體。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自抗體48A6、其人類化型式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體48A6之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3之重鏈可變區。在其他實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體48A6之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3之輕鏈可變區。在某些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體48A6。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體48A6之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體48A6之變異體。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含來自抗體53F10、其人類化型式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體53F10之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3之重鏈可變區。在其他實施例中，ILT3結合劑包含含有來自抗體53F10之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3之輕鏈可變區。在某些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體53F10。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體53F10之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體53F10之變異體。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSY (SEQ ID NO:33)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列SGGGSY (SEQ ID NO:34)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTN (SEQ ID NO:35)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列SYGMS (SEQ ID NO:36)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列SSYGMS (SEQ ID NO:37)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WVATISGGGSYTN (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARREWRMTLYAMD (SEQ ID NO:39)或ARREWRYTLYAMD (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列DSYGNSFMHWY (SEQ ID NO:40)或ESYGSSFMHWY (SEQ ID NO:108)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYLTSNLE (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPF (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。
在某些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)或其包含1、2、3、4、5或6個胺基酸取代之變異體之重鏈可變區CDR1；含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)或其包含1、2、3、4、5或6個胺基酸取代之變異體之重鏈可變區CDR2；及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)、REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)或其包含1、2、3、4、5或6個胺基酸取代之變異體之重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)、RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)或其包含1、2、3、4、5或6個胺基酸取代之變異體之輕鏈可變區CDR1；含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)或其包含1、2、3、4、5或6個胺基酸取代之變異體之輕鏈可變區CDR2；及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)或其包含1、2、3、4、5或6個胺基酸取代之變異體之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含已經修飾以減少CDR序列內之去醯胺化之一或多個重鏈可變區CDR或輕鏈可變區CDR。去醯胺化為一種化學反應，其中胺基酸天冬醯胺(Asn或N)或麩醯胺(Gln或Q)之側鏈中之醯胺官能基移除或轉化為另一官能基。通常，天冬醯胺轉化為天冬胺酸或異天冬胺酸，而麩醯胺轉化為麩胺酸或聚麩胺酸。在一些情況下，去醯胺化可改變多肽之結構、功能及/或穩定性，從而潛在地產生降低之生物活性。在一些實施例中，本文所描述之抗體之輕鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少去醯胺化。在一些實施例中，本文所描述之抗體之輕鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少去醯胺化。抗體5A7、3A3、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之重鏈可變區CDR及輕鏈可變區CDR中之任一者可經修飾以減少去醯胺化。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含已經修飾以減少異構化之一或多個重鏈可變區CDR或輕鏈可變區CDR。異構化為一種化學過程，藉由此化學過程化合物轉化為任何其異構形式，亦即，具有相同化學組成但具有不同結構或組態且潛在地具有不同物理及化學特性之形式。研究已表明CDR內之天冬胺酸(Asp或D)異構化可影響抗體結合及/或穩定性。在一些實施例中，本文所描述之抗體之重鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少異構化。在一些實施例中，輕鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少異構化。抗體5A7、3A3、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之重鏈可變區CDR及輕鏈可變區CDR中之任一者可經修飾以減少異構化。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含已經修飾以減少氧化之一或多個重鏈可變區CDR或輕鏈可變區CDR。氧化為一種化學過程，藉由該化學過程將氧添加至原子，舉例而言，甲硫胺酸藉由添加氧至硫原子而轉化為甲硫胺酸亞碸。一或多個胺基酸之氧化可潛在地影響蛋白質之物理及化學特性。研究已表明CDR內甲硫胺酸(Met或M)之氧化具有影響抗體結合及/或穩定性之潛能。在一些實施例中，本文所描述之抗體之重鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少氧化(例如甲硫胺酸氧化)。在一些實施例中，本文所描述之抗體之輕鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少氧化(例如甲硫胺酸氧化)。抗體5A7、3A3、Hz5A7、12A12、16C5、45G10、48A6或53F10之重鏈可變區CDR及輕鏈可變區CDR中之任一者可經修飾以減少甲硫胺酸氧化。
在一些實施例中，抗ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含抗體5A7之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:111之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含抗體5A7之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:112之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。在一些實施例中，抗ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含抗體Hz5A7.v5之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:123之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含抗體Hz5A7.v5之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:124之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含與SEQ ID NO:111之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:112之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:123之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:124之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含含有SEQ ID NO:111之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:112之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:123之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:124之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含與SEQ ID NO:111具有至少80%序列一致性的重鏈可變區及與SEQ ID NO:112具有至少80%序列一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:111具有至少90%序列一致性的重鏈可變區及與SEQ ID NO:112具有至少90%序列一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:111具有至少95%序列一致性的重鏈可變區及與SEQ ID NO:112具有至少95%序列一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:111之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:112之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含與SEQ ID NO:123具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:124具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:123具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:124具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:123具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:124具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:123之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:124之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在某些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2、含有REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈可變區包含與SEQ ID NO:123之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%的一致性，且其中輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:124之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%的一致性。
在某些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含重鏈，該重鏈包含含有GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2、含有REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈，該輕鏈包含含有RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:126之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或100%的一致性，且其中輕鏈包含與SEQ ID NO:128之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或100%的一致性。在某些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈，該重鏈包含含有GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2、含有REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈，該輕鏈包含含有RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:126之序列至少95%的一致性，且其中輕鏈包含與SEQ ID NO:128之序列至少95%的一致性。在某些實施例中，ILT3結合劑包含(a)重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO:126之胺基酸，及(b)輕鏈，該輕鏈包含含有RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3，其中輕鏈包含與SEQ ID NO:128之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或100%的一致性。在某些實施例中，ILT3結合劑包含(a)重鏈，該重鏈包含含有GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2、含有REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:126之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或100%的一致性，及(b)輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO:128之胺基酸序列。在一些實施例中，ILT3結合劑為包含含有SEQ ID NO:126之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO:128之胺基酸序列之輕鏈的抗體。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體5A7。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體Hz5A7.v5。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFSLTSY (SEQ ID NO:17)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WPGGT (SEQ ID NO:18)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTIN (SEQ ID NO:19)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列SYGVH (SEQ ID NO:20)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列TSYGVH (SEQ ID NO:21)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WLGVIWPGGTIN (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ASDKYDGGWFA (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RTAVAWY (SEQ ID NO:24)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ALIYLASNRH (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPL (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:109之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:110之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:109之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:110之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:109具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:110具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:109具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:110具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:109具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:110具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:109之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:110之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體3A3。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體3A3之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體3A3或人類化抗體3A3之變異體。
在某些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDY (SEQ ID NO:49)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YPNNGG (SEQ ID NO:50)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTG (SEQ ID NO:51)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列DYNMD (SEQ ID NO:52)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列TDYNMD (SEQ ID NO:53)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WIGYIYPNNGGTG (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ASSPYYDYVGSYAMD (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列SSSYLHWY (SEQ ID NO:56)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LWIYSTSNLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPR (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:113之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:114之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:113之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:114之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:113具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:114具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:113具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:114具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:113具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:114具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:113之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:114之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體12A12。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體12A12之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體12A12或人類化抗體12A12之變異體。
在某些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDY (SEQ ID NO:49)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YPSNGG (SEQ ID NO:64)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTG (SEQ ID NO:65)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列DYNMD (SEQ ID NO:52)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列TDYNMD (SEQ ID NO:53)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WIGYIYPSNGGTG (SEQ ID NO:66)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARVPYYDYLYYYAMD (SEQ ID NO:67)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列SFMHWY (SEQ ID NO:68)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列PWIYATSNLA (SEQ ID NO:69)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMY (SEQ ID NO:70)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:115之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:116之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:115之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:116之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:115具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:116具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:115具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:116具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:115具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:116具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:115之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:116之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體16C5。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體16C5之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體16C5或人類化抗體16C5之變異體。
在某些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDY (SEQ ID NO:77)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FSGSST (SEQ ID NO:78)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIY (SEQ ID NO:79)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列DYGMH (SEQ ID NO:80)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列SDYGMH (SEQ ID NO:81)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WVAYIFSGSSTIY (SEQ ID NO:82)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARADGRGAMD (SEQ ID NO:83)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列SKFLNWY (SEQ ID NO:84)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYYTSRLH (SEQ ID NO:85)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPW (SEQ ID NO:86)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:117之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:118之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:117之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:118之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:117具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:118具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:117具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:118具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:117具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:118具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:117之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:118之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與選自SEQ ID NO:162-163之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:164之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有選自SEQ ID NO:162-163之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:164之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與選自SEQ ID NO:162-163之胺基酸序列具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%)序列一致性之重鏈可變區，及與SEQ ID NO:164具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%)序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:162之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:164之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:163之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:164之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體45G10。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體45G10之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體45G10或人類化抗體45G10之變異體。
在某些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSY (SEQ ID NO:33)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列SSGGTY (SEQ ID NO:92)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTF (SEQ ID NO:93)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列SYGMS (SEQ ID NO:36)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列SSYGMS (SEQ ID NO:37)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WVATISSGGTYTF (SEQ ID NO:94)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARRGWLLHYYAMD (SEQ ID NO:95)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列DSFGNSFMHWF (SEQ ID NO:96)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYLSSKLE (SEQ ID NO:97)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPF (SEQ ID NO:98)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:119之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:120之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:119之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:120之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:119具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:120具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:119具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:120具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:119具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:120具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:119之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:120之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與選自SEQ ID NO:156-160之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:161之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有選自SEQ ID NO:156-160之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:161之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與選自SEQ ID NO:156-160之胺基酸序列具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%)序列一致性之重鏈可變區，及與SEQ ID NO:161具有至少80% (例如至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%)序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:156之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:161之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:157之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:161之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:158之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:161之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:159之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:161之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:160之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:161之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體48A6。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體48A6之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體48A6或人類化抗體48A6之變異體。
在某些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDY (SEQ ID NO:77)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STGIIT (SEQ ID NO:101)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列DYGMH (SEQ ID NO:80)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列SDYGMH (SEQ ID NO:81)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WVAYISTGIITVY (SEQ ID NO:103)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARADGRGAMD (SEQ ID NO:83)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列SNFLNWY (SEQ ID NO:104)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYYTSRLH (SEQ ID NO:85)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPW (SEQ ID NO:86)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:121之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:122之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:121之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:122之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:121具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:122具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:121具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:122具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:121具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:122具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:121之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO:122之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體53F10。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體53F10之人類化型式。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體53F10或人類化抗體53F10之變異體。
本文提供與本文所描述之結合劑(例如抗體)中之一或多者競爭結合於ILT3的藥劑。在一些實施例中，藥劑與本文所描述之抗體中之一或多者競爭結合於ILT3。在一些實施例中，與本文所描述之抗體中之一或多者競爭的藥劑為抗體。在一些實施例中，藥劑結合與本文所描述之抗體中之一者相同的抗原決定基。在一些實施例中，藥劑結合與本文所描述之抗體中之一者所結合之抗原決定基重疊的抗原決定基。與本文所描述之抗體競爭或與其結合相同抗原決定基之抗體及抗原結合片段預期顯示類似功能特性。
在一些實施例中，藥劑(例如抗體)與參考抗體競爭結合於人類ILT3，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，藥劑(例如抗體)與參考抗體競爭結合於人類ILT3，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3；且其中競爭藥劑包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，藥劑(例如抗體)與參考抗體競爭結合於人類ILT3，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，藥劑(例如抗體)與參考抗體競爭結合於人類ILT3，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，藥劑(例如抗體)與參考抗體競爭結合於人類ILT3，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，藥劑(例如抗體)與參考抗體競爭結合於人類ILT3，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，藥劑(例如抗體)與參考抗體競爭結合於人類ILT3，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，藥劑(例如抗體)與參考抗體競爭結合於人類ILT3，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑包含抗體，其中抗體之恆定區中之至少一或多者已經修飾或缺失。在一些實施例中，抗體包含對三個重鏈恆定區(CH1、CH2或CH3)中之一或多者及/或對輕鏈恆定區(CL)的一或多個修飾。在一些實施例中，抗體包含對鉸鏈區之一或多個修飾。在一些實施例中，經修飾之抗體之重鏈恆定區包含至少一個人類恆定區。在一些實施例中，經修飾之抗體之重鏈恆定區包含超過一個人類恆定區。在一些實施例中，對恆定區之修飾包含一或多個區中之一或多個胺基酸的添加、缺失或取代。在一些實施例中，一或多個區部分或完全自經修飾之抗體的恆定區缺失。在一些實施例中，整個CH2結構域已自抗體移除(ΔCH2構築體)。在一些實施例中，一或多個區部分或完全自經修飾之抗體的鉸鏈區缺失。在一些實施例中，缺失之恆定區由短胺基酸間隔子置換，該胺基酸間隔子提供典型地由缺少的恆定區賦予之一些分子可撓性。在一些實施例中，缺失之鉸鏈區由短胺基酸間隔子置換，該胺基酸間隔子提供典型地由缺少的鉸鏈區賦予之一些分子可撓性。在一些實施例中，經修飾之抗體包含直接融合至抗體鉸鏈區之CH3結構域。在一些實施例中，經修飾之抗體包含插入鉸鏈區與經修飾之CH2及/或CH3結構域之間的肽間隔子。
此項技術中已知抗體之恆定區介導若干效應功能且此等效應功能可視抗體之同型而改變。舉例而言，補體之C1組分與IgG或IgM抗體(結合於抗原)之Fc區的結合活化補體系統。補體之活化在細胞病原體之調理及溶解中為重要的。補體之活化亦刺激發炎反應且可參與自體免疫超敏性。此外，抗體之Fc區可結合表現Fc受體(FcR)之細胞。存在對不同類別之抗體，包括IgG (γ受體)、IgE (ε受體)、IgA (α受體)及IgM (μ受體)具特異性的許多Fc受體。抗體與細胞表面上之Fc受體結合觸發許多重要且多種多樣之生物反應，包括吞入及破壞抗體包被之粒子、清除免疫複合物、由殺手細胞溶解抗體包被之目標細胞(稱為抗體依賴性細胞毒性或ADCC)、釋放炎性介體、胎盤轉移及控制免疫球蛋白產生。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含變異體Fc區。人類IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之Fc區之胺基酸序列為一般熟習此項技術者已知的(例如代表性人類IgG1區為SEQ ID NO:129)。在一些情況下，已在天然抗體中鑑定具有胺基酸變異之Fc區。在一些實施例中，變異體Fc區經工程改造與天然Fc區相比在特定胺基酸位置處具有取代。變異體Fc區為此項技術中熟知的且包括但不限於SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133及SEQ ID NO:134。
在一些實施例中，經修飾之抗體(例如包含經修飾之Fc區)提供改變之效應功能，改變之效應功能又影響抗體之生物型態。舉例而言，在一些實施例中，恆定區之缺失或失活(通過點突變或其他手段)使經修飾之抗體在其循環時的Fc受體結合減少。在一些實施例中，恆定區修飾使抗體之血清半衰期增加。在一些實施例中，恆定區修飾使抗體之血清半衰期減少。在一些實施例中，恆定區修飾降低或移除抗體之ADCC及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。在一些實施例中，人類IgG1 Fc區中具有對應IgG2或IgG4殘基之特定胺基酸取代使經修飾之抗體中的效應功能(例如ADCC及CDC)降低。在一些實施例中，經修飾之抗體不具有一或多種效應功能。在一些實施例中，經修飾之抗體不具有任何可偵測之效應功能(例如「無效應」抗體)。在一些實施例中，經修飾之抗體不具有ADCC活性及/或CDC活性。在一些實施例中，經修飾之抗體不結合Fc受體及/或補體因子。在一些實施例中，經修飾之抗體不具有效應功能。在一些實施例中，恆定區修飾使抗體之ADCC及/或CDC增加或增強。在一些實施例中，恆定區經修飾以消除二硫鍵或寡醣部分。在一些實施例中，恆定區經修飾以添加/取代一或多個胺基酸以提供一或多個細胞毒素、寡醣或碳水化合物連接位點。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含與SEQ ID NO:126之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之重鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含與SEQ ID NO:128之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:126之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性的重鏈及與SEQ ID NO:128之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性的輕鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:126之胺基酸序列具有至少90%一致性之重鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:128之胺基酸序列具有至少90%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑包含與SEQ ID NO:126之胺基酸序列具有至少90%一致性的重鏈及與SEQ ID NO:128之胺基酸序列具有至少90%一致性的輕鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:126之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:128之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑包含含有SEQ ID NO:126之胺基酸序列的重鏈及含有SEQ ID NO:128之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，ILT3結合劑為包含SEQ ID NO:126之重鏈及/或SEQ ID NO:128之輕鏈的抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為包含SEQ ID NO:126之重鏈的抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為包含SEQ ID NO:128之輕鏈的抗體。在一些實施例中，ILT3結合劑為包含SEQ ID NO:126之重鏈及SEQ ID NO:128之輕鏈的抗體。
可使用熟知生物化學或分子工程改造技術對本文所描述之抗體的恆定區進行修飾。在一些實施例中，藉由將適當之核苷酸變化引入編碼DNA中及/或藉由合成所需抗體或多肽來製備抗體變異體。使用此等工程改造技術來修飾抗體，可能會在實質上維持經修飾抗體之結構、結合活性及其他所需特徵之同時，破壞由特定序列或區域提供之活性或效應功能。
本發明進一步涵蓋與本文所描述之重組、單株、嵌合、人類化及人類抗體或其抗體片段實質上同源之其他變異體及等效物。在一些實施例中，需要改良抗體之結合親和力。在一些實施例中，需要調節抗體之生物特性，包括但不限於特異性、熱穩定性、表現水準、效應功能、糖基化、免疫原性及/或溶解度。熟習此項技術者將瞭解，胺基酸變化可改變抗體之轉譯後過程，諸如改變糖基化位點之數目或位置或改變膜錨定特徵。
變化可為與天然抗體或多肽序列相比產生胺基酸序列變化之編碼抗體或多肽之一或多個核苷酸的取代、缺失或插入。在一些實施例中，胺基酸取代為一個胺基酸用具有類似結構及/或化學特性之另一胺基酸置換(諸如白胺酸用絲胺酸置換，亦即保守胺基酸置換)之結果。在一些實施例中，取代、缺失或插入包括相對於母體分子少於25個胺基酸取代、少於20個胺基酸取代、少於15個胺基酸取代、少於10個胺基酸取代、少於5個胺基酸取代、少於4個胺基酸取代、少於3個胺基酸取代或少於2個胺基酸取代。在一些實施例中，生物學適用及/或相關之胺基酸序列變化藉由在序列中系統地進行插入、缺失或取代且測試所得變異體蛋白質與親本抗體相比之活性來確定。
在一些實施例中，變異體可包括在抗體或多肽之胺基末端及/或羧基末端添加胺基酸殘基。添加之胺基酸殘基之長度可在一個殘基至一百或更多個殘基範圍內。在一些實施例中，變異體包含N端甲硫胺醯基殘基。在一些實施例中，變異體包含另一多肽/蛋白質以形成融合蛋白。在一些實施例中，變異體經工程改造以為可偵測的且可包含可偵測之標記及/或蛋白質(例如螢光標籤、螢光蛋白或酶)。
在一些實施例中，不參與維持適當抗體構象之半胱胺酸殘基經取代或缺失以調節抗體之特徵，例如改良氧化穩定性及/或防止異常二硫化物交聯。相反地，在一些實施例中，添加一或多個半胱胺酸殘基以形成二硫鍵來改良穩定性。
在一些實施例中，本發明之抗體為「去免疫」的。抗體之去免疫通常由引入使得T細胞抗原決定基(已知或預測)移除而不顯著降低抗體之結合親和力或其他所需活性的特定胺基酸突變(例如取代、缺失、添加)組成。
本文所描述之變異體抗體或多肽可使用此項技術中已知之方法產生，包括但不限於定點誘變、丙胺酸掃描誘變及PCR誘變。
在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑經化學修飾。在一些實施例中，ILT3結合劑為藉由糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/阻斷基衍生化、蛋白水解裂解及/或鍵聯至細胞配位體或其他蛋白質進行化學修飾之抗ILT3抗體。可藉由已知技術進行許多化學修飾中之任一者。在一些實施例中，ILT3結合劑為抗體片段(例如scFv、Fv、Fab、F(ab′)2 或F(ab′))，其中該抗體片段連接(直接或間接)至半衰期延長部分，包括但不限於Fc區或其變異體、人類血清白蛋白、免疫球蛋白之CH3結構域、聚乙二醇(PEG)、PEG模擬物、XTEN®、血清白蛋白、聚唾液酸、N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺或右旋糖酐。
本發明涵蓋基於非免疫球蛋白骨架構建之ILT3結合劑，其中該等藥劑結合與本文所揭示之抗ILT3抗體相同之抗原決定基或實質上相同之抗原決定基。在一些實施例中，非免疫球蛋白基結合劑為在競爭性結合分析中與本文所描述之抗ILT3抗體競爭之藥劑。在一些實施例中，替代ILT3結合劑包含支架蛋白。通常，支架蛋白可基於其骨架之架構分配至三個組中之一者：(1)由α-螺旋組成之支架；(2)具有少數二級結構或α-螺旋及β-摺疊之不規則架構的小支架；及(3)主要由β-摺疊組成之支架。支架蛋白包括但不限於抗運載蛋白(anticalin)，其係基於脂質運載蛋白支架；阿德奈汀(adnectin)，其係基於人類纖連蛋白3型之第10結構域；親和體，其係基於金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )蛋白A之Ig結合區中之B-結構域；darpin，其係基於錨蛋白重複結構域蛋白質；菲諾體(fynomer)，其係基於人類Fyn蛋白激酶之SH3結構域；affitin，其係基於來自嗜酸熱硫化葉菌(Sulfolobus acidocaldarius )之Sac7d；affilin，其係基於人類γ-B-晶狀體蛋白或人類泛素；阿維體(avimer)，其係基於膜受體蛋白之A-結構域；打結素(knottin)(半胱胺酸打結微型蛋白)，其係基於穩定30-胺基酸反平行β-股蛋白摺疊；及Kunitz結構域抑制劑支架，其係基於含有三個二硫鍵及三個環之結構。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含表1中所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含含有胺基酸序列GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含來自抗體3A3之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含表2中所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含來自抗體5A7之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含表8中所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含來自抗體Hz5A7.v5之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含表3中所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含來自抗體12A12之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含表4中所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含來自抗體16C5之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含表5中所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含來自抗體45G10之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含表6中所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含來自抗體48A6之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含表7中所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT3結合劑包含經工程改造之支架蛋白，該經工程改造之支架蛋白包含來自抗體53F10之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，組合物包含本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，組合物包含本文所描述之抗ILT3抗體。在一些實施例中，組合物包含本文所描述之單株抗ILT3抗體。
在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所描述之ILT3結合劑及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所描述之抗ILT3抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，組合物包含本文所描述之單株抗ILT3抗體及醫藥學上可接受之載劑。
在一些實施例中，ILT3結合劑經分離。在一些實施例中，ILT3結合劑為實質上純的。
一般說來，抗原-抗體相互作用為非共價且可逆的，藉由氫鍵、疏水相互作用、靜電及范德華力(van der Waals force)之組合形成。當描述抗原-抗體複合物之強度時，常用術語親和力及/或親合力。抗體結合至其抗原為可逆過程，且結合之親和力典型地報告為平衡解離常數(KD )。KD 為抗體解離速率(k解離 ) (其多快自其抗原解離)與抗體締合速率(k締合 ) (其多快結合於其抗原)之比率。在一些實施例中，KD 值藉由量測特異性抗體/抗原相互作用之k締合 及k解離 速率且接著使用此等值之比率計算KD 值來確定。KD 值可用於評估個別抗體/抗原相互作用之強度並對其進行排序。抗體之KD 愈低，抗體對其靶標之親和力愈高。在一些實施例中，在Biacore系統中使用SPR技術量測親和力。親合力給出抗體-抗原複合物之總強度之度量。其取決於三個主要參數：(i)抗體對靶標之親和力，(ii)抗體與抗原兩者之價數，及(iii)相互作用之部分的結構排列。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)以1 μM或更小、100 nM或更小、40 nM或更小、20 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小、0.1 nM或更小、50 pM或更小、10 pM或更小或1 pM或更小之解離常數(KD )結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以約20 nM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以10 nM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以5 nM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以3 nM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以2 nM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以1 nM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以0.5 nM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以0.1 nM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以50 pM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑)以25 pM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以10 pM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以1 pM或更小之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以0.01 nM至2.5 nM之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以0.1 nM至5 nM之KD 結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以1 nM至5 nM之KD 結合ILT3。在一些實施例中，結合劑對ILT3之解離常數為使用固定於Biacore晶片上之ILT3蛋白及在晶片上流過之結合劑測定的解離常數。在一些實施例中，結合劑對ILT3之解離常數為使用由抗人類IgG抗體捕獲於Biacore晶片上之結合劑及在晶片上流過之可溶性ILT3測定的解離常數。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)以1 μM或更小、100 nM或更小、40 nM或更小、20 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小或0.1 nM或更小之半數最大有效濃度(EC50)結合ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以1 μM或更小、100 nM或更小、40 nM或更小、20 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小或0.1 nM或更小之EC50結合人類ILT3。在一些實施例中，ILT3結合劑以40 nM或更小、20 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小或0.1 nM或更小之EC50結合cyno ILT3及/或人類ILT3。在一些實施例中、ILT3結合劑以0.1 nM至約3 nM、0.1 nM至2 nM、0.1 nM至1 nM、0.5 nM至3 nM、0.5 nM至2 nM或0.5 nM至1 nM之EC50結合ILT3。
在一些實施例中，ILT3結合劑結合人類ILT3且具有以下特性中之至少一或多者：(i)結合cyno ILT3；(ii)結合人類及cyno ILT3；(iii)不結合ILT2、ILT4、ILT5及LILRB5；(iv)不結合LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6；(v)為ILT3拮抗劑；(vi)抑制ILT3活性；(vii)抑制表現ILT3之細胞中的ILT3信號傳導；(viii)抑制ILT3與APOE之結合；(ix)抑制ILT3與纖連蛋白之結合；(x)抑制ILT3與CNTFR之結合；(xi)抑制ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用；(xii)抑制ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用；(xiii)恢復表現ILT3之骨髓細胞中的FcR活性；及(xiv)恢復表現ILT3之骨髓細胞對趨化介素作出反應及/或產生趨化介素之能力。
本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)可藉由此項技術中已知之任何適合之方法產生。此等方法在直接蛋白質合成法至構築編碼多肽序列之DNA序列及使彼等序列在適合之宿主中表現範圍內。在一些實施例中，DNA序列係使用重組技術藉由分離或合成編碼相關野生型蛋白質之DNA序列來構築。視情況，可藉由定點誘變對序列進行誘變處理以提供其功能性變異體。在一些實施例中，編碼相關多肽之DNA序列係使用寡核苷酸合成器藉由化學合成來構築。可基於所需多肽之胺基酸序列及選擇在將產生相關重組多肽之宿主細胞中有利之彼等密碼子來設計寡核苷酸。可應用標準方法來合成編碼相關分離多肽之聚核苷酸序列。舉例而言，可使用完整胺基酸序列來構築回譯(back-translated)之基因。另外，可合成含有編碼特定分離多肽之核苷酸序列的DNA寡聚物。舉例而言，可合成編碼所需多肽之部分的若干小寡核苷酸且接著進行連結。個別寡核苷酸典型地含有用於互補組裝之5′或3′短懸端(overhang)。
在組裝(藉由合成、定點誘變或另一方法)後，可將編碼特定相關多肽之聚核苷酸序列插入表現載體中且可操作地連接至適合使蛋白質在所需宿主中表現之表現控制序列。適當組裝可藉由核苷酸測序、限制酶定位及/或生物活性多肽在適合之宿主中之表現來確認。
在一些實施例中，重組表現載體用於擴增及表現編碼本文所描述之ILT3結合劑的DNA。舉例而言，重組表現載體可為可複製DNA構築體，其具有合成或cDNA衍生之編碼ILT3結合劑(諸如抗ILT3抗體或其抗原結合片段)之一或多條多肽鏈且可操作地連接至衍生自哺乳動物、微生物、病毒或昆蟲基因之適合之轉錄及/或轉譯調控元件的DNA片段。轉錄單元通常包含以下各項之組裝物：(1)在基因表現中具有調控作用之基因元件，例如轉錄啟動子或增強子，(2)轉錄至mRNA中及轉譯成蛋白質之結構或編碼序列，及(3)適當之轉錄及轉譯起始及終止序列。調控元件可包括用於控制轉錄之操縱子序列。可另外併入通常由複製起點賦予之在宿主中複製之能力及用於促進轉型體識別之選擇基因。當DNA區域在功能上彼此相關時，其為「可操作地連接」的。舉例而言，若信號肽(分泌前導子)之DNA表現為參與多肽分泌之前驅體，則其可操作地連接至該多肽之DNA；若啟動子控制編碼序列之轉錄，則其可操作地連接至該序列；或若核糖體結合位點經定位以容許轉譯，則其可操作地連接至編碼序列。在一些實施例中，旨在用於酵母表現系統中之結構元件包括實現由宿主細胞細胞外分泌轉譯蛋白質之前導序列。在一些實施例中，在重組蛋白在不存在前導子或轉運序列之情況下表現的情況下，多肽可包括N端甲硫胺酸殘基。此殘基可視情況隨後自所表現之重組蛋白裂解以提供最終產物。
表現控制序列及表現載體之選擇通常視宿主之選擇而定。可採用多種表現宿主/載體組合。適用於真核宿主之表現載體包括例如包含來自SV40、牛乳頭瘤病毒、腺病毒及巨細胞病毒之表現控制序列的載體。適用於細菌宿主之表現載體包括已知細菌質體，諸如來自大腸桿菌之質體(包括pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物)及更廣泛宿主範圍之質體，諸如M13及其他絲狀單股DNA噬菌體。
在一些實施例中，本發明之ILT3結合劑(例如抗體)自一或多種載體表現。在一些實施例中，重鏈可變區由一種載體表現且輕鏈可變區由另一載體表現。在一些實施例中，重鏈可變區及輕鏈可變區由一種載體表現。在一些實施例中，載體編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區。在一些實施例中，載體編碼本文所描述之ILT3結合劑之輕鏈可變區。在一些實施例中，載體編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區。在一些實施例中，重鏈多肽由一種載體表現且輕鏈多肽由另一載體表現。在一些實施例中，重鏈多肽及輕鏈多肽由一種載體表現。在一些實施例中，載體編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈多肽。在一些實施例中，載體編碼本文所描述之ILT3結合劑之輕鏈多肽。在一些實施例中，載體編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈多肽及輕鏈多肽。
適合用於表現ILT3結合劑(例如抗體)或ILT3蛋白或其片段以用作抗原或免疫原之宿主細胞包括在適當啟動子控制下之原核細胞、酵母細胞、昆蟲細胞或高等真核細胞。原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性有機體，例如大腸桿菌(E. coli )或芽孢桿菌屬(Bacillus )。高等真核細胞包括已建立之如本文所描述之哺乳動物來源的細胞株。亦可採用無細胞轉譯系統。適合用於細菌、真菌、酵母及哺乳動物細胞宿主之選殖載體及表現載體以及蛋白質製備(包括抗體製備)之方法為此項技術中熟知的。
各種哺乳動物培養系統均可用於表現重組多肽。重組蛋白在哺乳動物細胞中之表現可為所需的，因為此等蛋白質為總體上恰當摺疊的、適當修飾的且生物學功能性的。適合之哺乳動物宿主細胞株之實例包括但不限於COS-7 (猴腎源性)、L-929 (鼠纖維母細胞源性)、C127 (鼠乳房腫瘤源性)、3T3 (鼠纖維母細胞源性)、CHO (中國倉鼠卵巢源性)、HeLa (人類子宮頸癌源性)、BHK (倉鼠腎纖維母細胞源性)、HEK-293 (人類胚胎腎源性)細胞株及其變異體。哺乳動物表現載體可包含非轉錄元件，諸如複製起點、連接至所要表現之基因的適合之啟動子及增強子，以及其他5′或3′側接非轉錄序列，及5′或3′非轉譯序列，諸如必需核糖體結合位點、聚腺苷酸化位點、剪接供體及受體位點，及轉錄終止序列。
昆蟲細胞培養系統(例如桿狀病毒)中重組蛋白之表現亦提供用於產生恰當摺疊且具生物學功能性之蛋白質的穩健方法。用於在昆蟲細胞中產生異源蛋白質之桿狀病毒系統為熟習此項技術者熟知的。
因此，本發明提供包含本文所描述之ILT3結合劑的細胞。在一些實施例中，細胞產生本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，細胞產生抗體。在一些實施例中，細胞產生結合人類ILT3之抗體。在一些實施例中，細胞產生結合cyno ILT3之抗體。在一些實施例中，細胞產生結合人類ILT3及cyno ILT3之抗體。在一些實施例中，細胞產生指定為5A7之抗體。在一些實施例中，細胞產生抗體5A7之人類化型式，稱為Hz5A7。在一些實施例中，細胞產生Hz5A7之變異體，例如Hz5A7.v5。在一些實施例中，細胞產生指定為3A3之抗體。在一些實施例中，細胞產生指定為12A12之抗體。在一些實施例中，細胞產生指定為16C5之抗體。在一些實施例中，細胞產生指定為45G10之抗體。在一些實施例中，細胞產生抗體45G10之人類化型式，稱為Hz45G10。在一些實施例中，細胞產生指定為48A6之抗體。在一些實施例中，細胞產生抗體48A6之人類化型式，稱為Hz48A6。在一些實施例中，細胞產生指定為53F10之抗體。在一些實施例中，細胞為原核細胞(例如大腸桿菌)。在一些實施例中，細胞為真核細胞。在一些實施例中，細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，細胞為雜交瘤細胞。
由宿主細胞產生之蛋白質可根據任何適合之方法加以純化。標準方法包括層析(例如離子交換層析、親和層析及尺寸管柱層析)、離心、差異溶解度或藉由用於蛋白質純化之任何其他標準技術。可將諸如六聚組胺酸(His6；SEQ ID NO:154)、麥芽糖結合結構域、流感病毒外殼蛋白序列(influenza coat sequence)及麩胱甘肽-S-轉移酶之親和標籤連接至蛋白質以允許容易藉由穿過適當親和柱進行純化。用於純化免疫球蛋白之親和層析法可包括但不限於蛋白質A、蛋白質G及蛋白質L層析。經分離之蛋白質可使用包括但不限於以下之技術進行物理表徵：蛋白水解、尺寸排阻層析(SEC)、質譜法(MS)、核磁共振(NMR)、等電聚焦(IEF)、高效液相層析(HPLC)及x-射線晶體照像術。經分離之蛋白質之純度可使用熟習此項技術者已知之技術來測定，包括但不限於SDS-PAGE、SEC、毛細管凝膠電泳、IEF及毛細管等電聚焦(cIEF)。
在一些實施例中，首先使用市售蛋白質濃縮過濾器(例如Amicon®或Millipore Pellicon®超濾單元)將來自將重組蛋白分泌至培養基中之表現系統的上清液濃縮。在濃縮步驟之後，可將濃縮物應用於適合之純化基質。在一些實施例中，採用陰離子交換樹脂，例如具有側接二乙胺基乙基(DEAE)基團之基質(matrix/substrate)。基質可為丙烯醯胺、瓊脂糖、右旋糖酐、纖維素或通常用於蛋白質純化之其他類型基質。在一些實施例中，採用陽離子交換步驟。適合之陽離子交換劑包括包含磺丙基或羧基甲基之各種不溶性基質。在一些實施例中，採用羥磷灰石介質，包括但不限於陶瓷羥磷灰石(CHT)。在一些實施例中，採用疏水性RP-HPLC介質(例如具有側接甲基或其他脂族基之矽膠)之一或多個逆相HPLC步驟用於進一步純化重組蛋白。在一些實施例中，疏水相互作用層析(HIC)用於基於疏水性分離重組蛋白。HIC為適用於純化蛋白質同時維持生物活性之分離技術，此係歸因於與另外一些技術相比在變性較少之條件下操作之條件及基質的使用。可採用呈各種組合之一些或所有前述純化步驟以提供均質重組蛋白。
可藉由此項技術中已知之各種分析針對物理/化學特性及/或生物活性對本發明之ILT3結合劑(例如抗體)進行分析。在一些實施例中，測試抗ILT3抗體結合ILT3 (例如人類ILT3及/或cyno ILT3)之能力。結合分析包括但不限於SPR (例如Biacore)、ELISA及FACS。在一些實施例中，測試抗ILT3抗體抑制、降低或阻斷與纖連蛋白、APOE及/或CNTFR結合之能力。此外，可針對溶解度、穩定性、熱穩定性、黏度、表現水準、表現品質及/或純化效率對抗體進行評估。
在一些實施例中，基於各個別抗體識別之抗原決定基對針對ILT3產生之單株抗體進行分組，此過程稱為「抗原決定基建倉(epitope binning)」。通常，以成對組合方式測試抗體且彼此競爭之抗體一起分組至倉中。舉例而言，在預混合建倉分析中，將第一抗體固定於表面上且使第二抗體與抗原之預混合溶液在經固定之第一抗體上流過。一前一後地，將抗原固定於表面上且使兩種抗體在經固定之抗原上流過且競爭結合。使用此等技術，可鑑定彼此阻斷之抗體。形成各抗體相對於其他抗體之競爭性阻斷型態。阻斷結果決定各抗體放置於哪個倉中。高通量之抗原決定基建倉方法為此項技術中已知的且允許在短時間內篩選及表徵大量抗體。結合類似抗原決定基之抗體常常擁有類似之功能及/或能力。相反地，結合不同抗原決定基之抗體可能具有不同之功能活性。
在一些實施例中，抗原決定基倉包含至少一種來自由以下組成之群的抗體：3A3、5A7、12A12、16C5、45G10、48A6及53F10。在一些實施例中，抗原決定基倉至少包含抗體5A7及48A6。在一些實施例中，抗原決定基倉至少包含抗體12A12及16C5。在一些實施例中，抗原決定基倉至少包含抗體45G10及53F10。在一些實施例中，抗原決定基倉至少包含抗體12A12及16C5。
抗原決定基定位為鑑定結合位點或目標蛋白質/抗原上抗體(或其他結合劑)結合之抗原決定基的方法。對於定位目標蛋白質上之抗原決定基，多種方法為此項技術中已知的。此等方法包括(i)誘變，包括但不限於獵槍誘變、定點誘變及丙胺酸掃描；(ii)結構域或片段掃描；(iii)肽掃描(例如Pepscan技術)；(iv)展示法，包括但不限於噬菌體展示、微生物展示及核糖體/mRNA展示；(v)涉及蛋白水解及質譜分析之方法；(vi)涉及醯胺氫/氘交換之方法；及(vii)結構測定，包括但不限於x-射線晶體照像術及NMR。
在一些實施例中，藉由包括但不限於以下之分析對經純化之抗ILT3抗體進行表徵：N端測序、胺基酸分析、HPLC、質譜法、差異掃描螢光測定法(DSF)、nanoDSF、毛細管等電聚焦(cIEF)、離子交換層析及木瓜蛋白酶消化。
表徵免疫細胞功能之活體外分析包括但不限於細胞活化分析(例如細胞增殖分析)、細胞毒性T細胞(CTL)分析、混合淋巴球反應(MLR)分析、細胞介素/趨化介素產生分析、FcR結合分析及細胞遷移分析。在一些實施例中，提供用於鑑定影響ILT3活性之抗ILT3抗體的分析。「影響(affect/affecting) ILT3活性」可包括例如抑制、降低、阻斷、拮抗、阻抑及/或干擾ILT3活性。因為ILT3通常充當負調控劑/抑制分子，在一些實施例中，抑制、降低、阻斷、拮抗、阻抑及/或干擾ILT3活性引起ILT3誘導之對生物功能(例如活化信號)之阻抑作用的釋放。如本文所描述，ILT3在諸如單核球、巨噬細胞、樹突細胞(DC)及骨髓APC之骨髓細胞上表現。ILT3在諸如致耐受性樹突細胞(tolDC)及髓源性阻抑細胞(MDSC)之阻抑性骨髓細胞上高度表現。ILT3活性或ILT3信號傳導活性包括但不限於對骨髓細胞之阻抑作用、對骨髓細胞活性之阻抑作用及對腫瘤相關骨髓細胞之阻抑作用。在一些實施例中，抑制、降低、阻斷、拮抗、阻抑及/或干擾ILT3活性引起ILT3誘導之對活化信號之阻抑作用的釋放。在一些實施例中，抗ILT3抗體抑制ILT3信號傳導。在一些實施例中，抗ILT3抗體抑制ILT3信號傳導，由此逆轉ILT3誘導之阻抑效應。在一些實施例中，抗ILT3抗體抑制ILT3誘導之消退信號。
在一些實施例中，抗ILT3抗體破壞ILT3信號傳導路徑。在一些實施例中，抗ILT3抗體破壞ILT3信號傳導路徑且活化骨髓細胞。在一些實施例中，抗ILT3抗體破壞ILT3信號傳導路徑且活化骨髓APC。在一些實施例中，抗ILT3抗體破壞ILT3信號傳導路徑且活化樹突細胞。在一些實施例中，抗ILT3抗體破壞ILT3信號傳導路徑且活化或再活化tolDC。在一些實施例中，抗ILT3抗體破壞ILT3信號傳導路徑且恢復tolDC對刺激(例如LPS)作出反應之能力。在一些實施例中，抗ILT3抗體破壞ILT3信號傳導路徑且活化原代樹突細胞。
在一些實施例中，術語「抑制」、「降低」、「阻斷」、「拮抗」、「阻抑」及「干擾」係相對於不用ILT3結合劑處理情況下之水準及/或活性。在一些實施例中，術語「抑制」、「降低」、「阻斷」、「拮抗」、「阻抑」及「干擾」係相對於用ILT3結合劑處理之前的水準及/或活性。
在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體3A3。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體5A7。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體Hz5A7.v5。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體12A12。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體16C5。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體45G10。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體48A6。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體53F10。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體Hz45G10。在一些實施例中，抑制ILT3活性之抗ILT3抗體為抗體Hz48A6。
本發明亦提供包含本文所描述之抗ILT3抗體之結合物。在一些實施例中，抗體連接至另一分子。在一些實施例中，抗體結合至細胞毒性劑或部分。在一些實施例中，抗體結合至細胞毒性劑以形成ADC (抗體-藥物結合物)。在一些實施例中，細胞毒性劑為化學治療劑，包括但不限於胺甲喋呤、阿黴素(adriamycin)/多柔比星(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C (mitomycin C)、氮芥苯丁酸、多卡黴素(duocarmycin)、柔紅比星(daunorubicin)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)或其他插入劑。在一些實施例中，細胞毒性劑為微管抑制劑，包括但不限於澳瑞他汀(auristatin)、類美登素(maytansinoid) (例如DM1及DM4)及土布來辛(tubulysin)。在一些實施例中，細胞毒性劑為細菌、真菌、植株或動物來源之酶促活性毒素或其片段，包括但不限於白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈、篦麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、α-八疊球菌素、油桐(Aleurites fordii )蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸(Phytolaca americana )蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia )抑制劑、麻風樹毒素、巴豆毒素、肥皂草(Sapaonaria officinalis )抑制劑、白樹毒素、絲林黴素、侷限麴菌素、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)及新月毒素(tricothecene)。在一些實施例中，抗體結合至一或多個小分子毒素，諸如加利車黴素(calicheamicin)、類美登素、新月毒素及CC1065。可使用此等毒素中之任一者之衍生物，只要衍生物保留母體分子之細胞毒性活性即可。
包含本文所描述之抗ILT3抗體的結合物可使用此項技術中已知之任何適合之方法來製備。在一些實施例中，使用諸如以下之多種雙官能蛋白質偶合劑來製備結合物：N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二巰基)丙酸鹽(SPDP)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、亞胺酸酯之雙官能衍生物(諸如二亞胺代己二酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。
在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體結合至允許抗體用於診斷及/或偵測之可偵測物質或分子。在一些實施例中，經標記之抗ILT3抗體用於監測腫瘤中或腫瘤微環境中之免疫細胞。在一些實施例中，經標記之抗ILT3抗體用於監測治療之後腫瘤中或腫瘤微環境中的免疫細胞。可偵測物質可包括但不限於酶，諸如辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶及乙醯膽鹼酯酶；輔基，諸如生物素及黃素；螢光材料，諸如傘形酮、螢光素、異硫氰酸螢光素(FITC)、羅丹明、四甲基羅丹明異硫氰酸鹽(TRITC)、二氯三嗪基胺螢光素、丹磺醯氯、青色素(Cy3)及藻紅素；生物發光材料，諸如螢光素酶；放射性物質，諸如212 Bi、14 C、57 Co、51 Cr、67 Cu、18 F、68 Ga、67 Ga、153 Gd、159 Gd、68 Ge、3 H、166 Ho、131 I、125 I、123 I、121 I、115 In、113 In、112 In、111 In、140 La、177 Lu、54 Mn、99 Mo、32 P、103 Pd、149 Pm、142 Pr、186 Re、188 Re、105 Rh、97 Ru、35 S、47 Sc、75 Se、153 Sm、113 Sn、117 Sn、85 Sr、99m Tc、201 Ti、133 Xe、90 Y、69 Yb、175 Yb、65 Zn；正電子發射金屬；及磁性金屬離子。
在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體用於免疫分析。免疫分析為熟習此項技術者已知的且包括但不限於ELISA、SPR (例如Biacore)、FACS及免疫組織化學(IHC)。在一些實施例中，本文所描述之抗ILT3抗體用於組織樣品或腫瘤樣品上。
本文所描述之抗ILT3抗體亦可結合至另一抗體以形成抗體雜結合物。
如本文所描述之抗ILT3抗體可連接至固體支撐物。此等固體支撐物包括但不限於玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、耐綸、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。在一些實施例中，經固定之抗ILT3抗體用於免疫分析。在一些實施例中，經固定之抗ILT3抗體用於純化目標抗原。 III 聚核苷酸
在一些實施例中，本發明涵蓋包含編碼本文所描述之多肽(例如ILT3結合劑)之聚核苷酸的聚核苷酸。術語「編碼多肽之聚核苷酸」涵蓋僅包括多肽之編碼序列之聚核苷酸以及包括其他編碼及/或非編碼序列之聚核苷酸。本發明之聚核苷酸可呈RNA形式或呈DNA形式。DNA包括cDNA、基因體DNA及合成DNA；且可為雙股或單股的，且若為單股的，則可為編碼股或非編碼(反義)股。
在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)之重鏈可變區及/或輕鏈可變區的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之輕鏈可變區的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區的聚核苷酸及編碼ILT3結合劑之輕鏈可變區的聚核苷酸。
在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)之重鏈及/或輕鏈的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之輕鏈的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈的聚核苷酸及編碼ILT3結合劑之輕鏈的聚核苷酸。
在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含選自由以下組成之群的胺基酸序列之多肽的聚核苷酸：SEQ ID NO:109-128。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:109之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:110之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:111之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:112之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:113之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:114之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:115之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:117之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:118之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:120之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:121之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:122之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:123之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:124之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:125之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:127之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含SEQ ID NO:128之胺基酸序列之多肽的聚核苷酸。
在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼包含選自由以下組成之群的超過一個胺基酸序列之多肽的聚核苷酸：SEQ ID NO:109-128。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:109之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:110之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:111之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:112之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:113之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:114之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:115之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:116之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:117之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:118之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:120之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:121之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:122之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:123之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:124之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:125之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:127之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼以下各項之聚核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列的多肽及(ii)包含SEQ ID NO:128之胺基酸序列的多肽。
本發明亦提供本文所描述之聚核苷酸之變異體，其中該變異體編碼例如多肽之片段、類似物及/或衍生物。在一些實施例中，本發明提供包含具有與編碼本文所描述之多肽的聚核苷酸至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致且在一些實施例中，至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%一致之核苷酸序列之聚核苷酸的聚核苷酸。
在一些實施例中，聚核苷酸包含具有與編碼選自由以下組成之群的胺基酸序列之聚核苷酸至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致且在一些實施例中，至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列的聚核苷酸：SEQ ID NO:109-128。亦提供聚核苷酸，該聚核苷酸包含雜交至編碼選自由以下組成之群的胺基酸序列之聚核苷酸的聚核苷酸：SEQ ID NO:109-128。在一些實施例中，雜交係在如熟習此項技術者已知之高嚴格條件下。
如本文所用，片語「具有與聚核苷酸序列至少95%一致之核苷酸序列的聚核苷酸」意在指聚核苷酸之核苷酸序列與參考序列一致，除了該聚核苷酸序列可包括每100個參考核苷酸序列核苷酸至多五個點突變。換句話說，為獲得具有與參考核苷酸序列至少95%一致之核苷酸序列的聚核苷酸，參考序列中至多5%之核苷酸可為缺失的或經另一核苷酸取代，或參考序列中總核苷酸至多5%之數目的核苷酸可插入參考序列。熟習此項技術者應瞭解，將對其他「一致性%」陳述(例如90%一致或85%一致)進行適當計算。參考序列之此等突變可發生在參考核苷酸序列之5′或3′末端位置或彼等末端位置之間的任何地方，個別地分散在參考序列中之核苷酸之間或以一或多個連續組分散在參考序列內。
聚核苷酸變異體可在編碼區、非編碼區或兩者中含有改變。在一些實施例中，聚核苷酸變異體含有產生緘默取代、添加或缺失但不改變所編碼多肽之特性或活性的改變。在一些實施例中，聚核苷酸變異體包含不引起對多肽胺基酸序列之改變(歸因於遺傳密碼之簡併)之緘默取代。在一些實施例中，聚核苷酸變異體包含一或多個突變密碼子，其包含對密碼子之改變由彼密碼子編碼之胺基酸的一或多個(例如1、2或3個)取代。用於將一或多個取代引入密碼子中之方法為此項技術中已知的，包括但不限於PCR誘變及定點誘變。可出於各種原因產生聚核苷酸變異體，例如用於針對特定宿主優化密碼子表現(例如將人類mRNA中之密碼子變為諸如大腸桿菌之細菌宿主優選之密碼子)。在一些實施例中，聚核苷酸變異體在序列之非編碼或編碼區中包含至少一個緘默突變。
在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以調節或改變所編碼多肽之表現(或表現水準)。在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以增加所編碼多肽之表現。在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以降低所編碼多肽之表現。在一些實施例中，與親本聚核苷酸序列相比，聚核苷酸變異體具有增加之所編碼多肽之表現。在一些實施例中，與親本聚核苷酸序列相比，聚核苷酸變異體具有降低之所編碼多肽之表現。
在一些實施例中，聚核苷酸包含在相同閱讀框中融合至輔助宿主細胞之多肽表現及分泌之聚核苷酸的多肽(例如抗體)之編碼序列。在一些實施例中，輔助表現及分泌之聚核苷酸為充當分泌序列以控制多肽之轉運的前導序列。在一些實施例中，多肽具有由宿主細胞裂解之前導序列以形成「成熟」形式之多肽。
在一些實施例中，聚核苷酸包含在相同閱讀框中融合至標記物或標籤序列之多肽(例如抗體)之編碼序列。舉例而言，在一些實施例中，標記物序列為六聚組胺酸標籤(HIS-標籤；SEQ ID NO:154)，其允許融合至標記物之多肽的高效純化。在一些實施例中，當使用哺乳動物宿主時，標記物序列為衍生自流感血球凝集素蛋白之血球凝集素(HA)標籤。在一些實施例中，標記物序列為FLAG™標籤。在一些實施例中，標記物可與其他標記物或標籤結合使用。
在一些實施例中，聚核苷酸經分離。在一些實施例中，聚核苷酸為實質上純的。
亦提供包含本文所描述之聚核苷酸中之每一者的載體及細胞。在一些實施例中，載體(例如表現載體)包含編碼本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)的聚核苷酸分子。在一些實施例中，載體包含編碼作為本文所描述之ILT3結合劑之一部分的多肽之聚核苷酸分子。在一些實施例中，細胞包含含有編碼本文所描述之ILT3結合劑之聚核苷酸分子的載體。在一些實施例中，細胞包含含有編碼作為本文所描述之ILT3結合劑之一部分的多肽之聚核苷酸分子的載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之聚核苷酸分子。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之一或多種聚核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之單一聚核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區的第一聚核苷酸及編碼本文所描述之ILT3結合劑之輕鏈可變區的第二聚核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區的聚核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈的第一聚核苷酸及編碼本文所描述之ILT3結合劑之輕鏈的第二聚核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈及輕鏈的聚核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之一或多種載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區的第一載體及編碼本文所描述之ILT3結合劑之輕鏈可變區的第二載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區的單一載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈的第一載體及編碼本文所描述之ILT3結合劑之輕鏈的第二載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈及輕鏈的單一載體。 IV. 製備結合劑之方法
本發明提供用於製備本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)之方法。在一些實施例中，方法包括提供包含ILT3結合劑之重鏈及/或輕鏈的細胞，在容許結合劑表現之條件下培養細胞，及分離結合劑。在一些實施例中，方法進一步包括將結合劑純化。在一些實施例中，方法進一步包括將結合劑調配成醫藥組合物。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區的一或多種載體。在一些實施例中，細胞包含編碼ILT3結合劑之重鏈可變區的第一載體及編碼ILT3結合劑之輕鏈可變區的第二載體。在其他實施例中，細胞包含編碼ILT3結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區的載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之ILT3結合劑之重鏈及輕鏈的一或多種載體。在一些實施例中，細胞包含編碼ILT3結合劑之重鏈的第一載體及編碼ILT3結合劑之輕鏈的第二載體。在其他實施例中，細胞包含編碼ILT3結合劑之重鏈及輕鏈的載體。在一些實施例中，細胞包含編碼ILT3結合劑之重鏈及輕鏈的一或多種聚核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼ILT3結合劑之重鏈的第一聚核苷酸及編碼ILT3結合劑之輕鏈的第二聚核苷酸。在其他實施例中，細胞包含編碼ILT3結合劑之重鏈及輕鏈的聚核苷酸。在一些實施例中，將編碼本文所描述之ILT3結合劑之聚核苷酸瞬時轉染至細胞中。在一些實施例中，將編碼本文所描述之ILT3結合劑之聚核苷酸穩定轉染至細胞中。
在一些實施例中，ILT3結合劑為包含至少一個抗原結合位點之抗體片段，且該方法涉及提供包含抗ILT3抗體之片段的細胞，在容許抗體片段表現之條件下孵育細胞，及分離抗體片段。在某些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之抗體片段的載體。在某些實施例中，細胞包含編碼本文所描述之抗體片段的聚核苷酸。在一些實施例中，該方法包括將抗體片段純化。在某些實施例中，抗體片段為Fab、Fab′、F(ab′)2 、Fv、scFv、(scFv)2 、單鏈抗體、雙可變區抗體、雙抗體或奈米抗體。
在一些實施例中，ILT3結合劑為scFv且該方法涉及提供包含scFv之細胞，在容許scFv表現之條件下孵育細胞，及分離scFv。在某些實施例中，細胞包含編碼scFv之本文所描述之載體。在某些實施例中，細胞包含編碼scFv之本文所描述之聚核苷酸。在一些實施例中，該方法包括將scFv純化。
在一些實施例中，用於製備ILT3結合劑之細胞為細菌細胞(例如大腸桿菌)。在一些實施例中，用於製備ILT3結合劑之細胞為酵母細胞(例如巴斯德畢赤氏酵母(Pichia pastoris ))。在一些實施例中，用於製備ILT3結合劑之細胞為哺乳動物細胞，諸如CHO細胞或HEK-293細胞。
在一些實施例中，使用信號序列(例如藉由使信號序列融合至所要表現之肽)來使本文所描述之ILT3結合劑由細胞表現。任何適合之信號序列均可用於此目的。舉例而言，為表現抗體重鏈及輕鏈，可使IgG κ輕鏈信號肽序列或天然抗體信號肽融合至重鏈及輕鏈序列。 V.  ILT3配位體
本發明提供纖連蛋白作為新鑑定之人類ILT3之配位體。亦發現睫狀神經營養因子受體(CNTFR)為ILT3之結合配偶體。近來，已鑑定若干ILT3之配位體且包括CD166 (亦稱為活化白血球細胞黏附分子；ALCAM)、脂蛋白元E (APOE)及肽酶抑制劑16 (PI16) (Xu等人, 2018,J. Immunol ., 200:1207-1219；Deng等人, 2018,Nature , 562:605-609；國際公開案第WO 2018/089300號)。當前，關於此等蛋白質作為ILT3配位體是否全部為生物學功能性的似乎未達成一致，且正在進行研究以進一步理解此等不同相互作用中之每一者的關聯性。
本文分別以SEQ ID NO:138及SEQ ID NO:148提供人類纖連蛋白(UniProtKB編號P02751)及人類CNTFR-α (UniProKB編號P26992)之胺基酸(aa)序列。存在至少17種不同同種型之人類纖連蛋白，UniProtKB將SEQ ID NO:138列為其規範序列。如本文所用，提及此等蛋白質之胺基酸位置係指包括信號序列之胺基酸序列的編號。
纖連蛋白(FN)通常以由在C端附近藉由一對二硫鍵共價連接之兩個幾乎相同之約250 kDa亞單元組成的二聚體形式存在。各單體包含三種類型之重複單元(稱為FN重複)：I型、II型及III型。FN含有12個I型重複、兩個II型重複及15-17個III型重複，其總共約佔纖連蛋白序列之90%。關於纖連蛋白結構之圖示參見圖8。I型及II型重複因存在結構域內二硫鍵而為穩定的，而III型結構域在結構上較不穩定且經受機械去摺疊。纖連蛋白可以多種形式存在，該多種形式由對單一前體mRNA進行選擇式剪接從而可產生多至20種變異體而產生。
纖連蛋白為由肝臟合成之血漿蛋白，在大多數組織中，其經歷細胞依賴性聚合成織維狀細胞外基質。血漿源性與由存在之基質細胞局部合成兩者均促成構成組織基質之纖連蛋白。
纖連蛋白為至少十幾個整合素受體家族成員之配位體。除通過整合素結合於細胞表面之外，纖連蛋白亦具有多種功能活性。其結合許多其他蛋白質，包括肝素、膠原蛋白/明膠及纖維蛋白。此等相互作用係由纖連蛋白內若干獨特結構及功能結構域及多組纖連蛋白重複介導的。許多其他纖連蛋白結構域之生物作用未經表徵及/或充分理解。
如本文所揭示，纖連蛋白經鑑定為ILT3之配位體。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與纖連蛋白之結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑阻斷ILT3與纖連蛋白之相互作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制ILT3與纖連蛋白之結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑阻斷或抑制ILT3與纖連蛋白之間的功能性相互作用。
在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:138或139之結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與纖連蛋白之N端區域(在不存在信號序列/肽之情況下)的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與纖連蛋白之肝素結合及膠原蛋白結合結構域的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與纖連蛋白之肝素結合結構域的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與纖連蛋白之I型重複1-5的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與纖連蛋白之I型重複1-4的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與纖連蛋白之I型重複1-3的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與纖連蛋白之I型重複1-2的結合。任何結構域之邊界均非準確已知的且本文用於確定FN之結構域及/或重複之胺基酸係基於來自UniProtKB之資訊。因此，任何結構域及/或重複之邊界可不同於本文敍述之彼等結構域及/或重複之邊界。
在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:138之胺基酸32-608的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:138之胺基酸32-280的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:138之胺基酸32-300的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:138之胺基酸32-228的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:138之胺基酸32-182的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:138之胺基酸32-138的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:138之胺基酸32-290的結合。
在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)抑制纖連蛋白誘導之ILT3活性。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3阻抑活性。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3對骨髓細胞的阻抑作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3對骨髓細胞活性的阻抑作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3對APC的阻抑作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3對APC活性的阻抑作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3對樹突細胞的阻抑作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3對樹突細胞活性的阻抑作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3對巨噬細胞的阻抑作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制纖連蛋白誘導之ILT3對巨噬細胞活性的阻抑作用。在一些實施例中，包括但不限於樹突細胞、APC、單核球及巨噬細胞之骨髓細胞為腫瘤相關細胞。在一些實施例中，包括但不限於樹突細胞、APC、單核球及巨噬細胞之骨髓細胞存在於腫瘤微環境中。在一些實施例中，包括但不限於樹突細胞、APC、單核球及巨噬細胞之骨髓細胞存在於腫瘤內。
如本文所揭示，CNTFR-α經鑑定為ILT3之配位體。CNTFR-α為已知結合睫狀神經營養因子之三重CNTFR複合物之一部分。CNTFR-α亞單元為膜結合蛋白且藉由醣苷基-磷脂醯肌醇(GPI)鍵聯錨定至細胞膜。此受體在不存在複合物之共受體組分之情況下不具有信號轉導能力。其他兩種組分為gp130及白血病抑制因子受體(LIFR) β，其提供複合物之信號轉導能力(Stahl等人, 1994,J. Neurobiol ., 25:1454-1466)。ILT3結合於CNTFR之生物關聯性仍在研究中。
在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與CNTFR-α之結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑阻斷ILT3與CNTFR-α之相互作用。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制ILT3與CNTFR-α之結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與CNTFR-α之結合且調節CNTFR複合物信號傳導。
在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與成熟形式之CNTFR-α的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與CNTFR-α之Ig樣C2型結構域的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與CNTFR-α之一個或兩個FN III型結構域(亦即，FN III型結構域1、FN III型結構域2或FN III型結構域1及2)的結合。
在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150之結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:148之胺基酸23-342的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:148之胺基酸23-104的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:148之胺基酸105-205的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:148之胺基酸206-306的結合。在一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑抑制、破壞或阻斷ILT3與SEQ ID NO:148之胺基酸23-306的結合。 VI. 使用方法及醫藥組合物
本發明之ILT3結合劑(例如抗體)適用於多種應用，包括但不限於治療性治療方法，諸如治療癌症。在一些實施例中，治療性治療方法包括針對癌症之免疫療法。在一些實施例中，ILT3結合劑適用於活化、促進、增加及/或增強對癌症或癌細胞之免疫反應。在一些實施例中，ILT3結合劑適用於活化、促進、增加及/或增強對腫瘤或腫瘤細胞之免疫反應。使用方法可為活體外、離體或活體內方法。
本發明提供破壞、抑制或阻斷ILT3與纖連蛋白之結合的方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與纖連蛋白之結合的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與纖連蛋白之結合的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸，其中該方法使得破壞、抑制或阻斷纖連蛋白誘導之ILT3活性。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與纖連蛋白之結合的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸，其中該方法使得破壞、抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓細胞的阻抑作用。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與纖連蛋白之結合的方法包括使細胞與本文所描述之ILT3結合劑接觸，其中該方法使得破壞、抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓細胞活性的阻抑作用。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT3與纖連蛋白之結合的方法：(i)恢復骨髓細胞中之FcR信號傳導活性；(ii)恢復骨髓細胞之趨化介素產生；及/或(iii)恢復免疫細胞(例如T細胞)增殖及/或活性。在一些實施例中，骨髓細胞為單核球。在一些實施例中，骨髓細胞為巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為tolDC。在一些實施例中，骨髓細胞為APC。
本發明提供破壞、抑制或阻斷個體中ILT3與纖連蛋白之結合的方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT3與纖連蛋白之結合的方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中纖連蛋白誘導之ILT3活性之方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT3誘導之對骨髓細胞的阻抑作用之方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用的方法包括向個體投與有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT3誘導之對抗原呈遞細胞活性的阻抑作用之方法(i)恢復骨髓細胞中之FcR活性；(ii)恢復骨髓細胞之趨化介素產生；及/或(iii)恢復免疫細胞(例如T細胞)增殖及/或活性。在一些實施例中，骨髓細胞為單核球。在一些實施例中，骨髓細胞為巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為tolDC。在一些實施例中，骨髓細胞為APC。
本發明提供用於使用本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)活化個體中之免疫反應的方法。在一些實施例中，本發明提供用於使用本文所描述之ILT3結合劑促進個體中之免疫反應的方法。在一些實施例中，本發明提供用於使用本文所描述之ILT3結合劑增加個體中之免疫反應的方法。在一些實施例中，本發明提供用於使用本文所描述之ILT3結合劑增強個體中之免疫反應的方法。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激骨髓細胞。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激單核球。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激巨噬細胞。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激樹突細胞。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激APC。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激tolDC。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括再活化tolDC。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括增加細胞介導之免疫性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括增加效應T細胞活性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括增加CTL活性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括抑制或降低Treg之阻抑活性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括抑制或降低MDSC之阻抑活性。在一些實施例中，免疫反應為抗原刺激之結果。在一些實施例中，抗原刺激為腫瘤細胞。在一些實施例中，抗原刺激為癌症。
本發明亦提供破壞及/或抑制細胞中之ILT3信號傳導之方法，該等方法包括使細胞與有效量之本文所描述之ILT3結合劑接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT3信號傳導之方法包括使細胞與有效量之抗體3A3、抗體5A7、抗體12A12、抗體16C5、抗體45G10、抗體48A6或抗體53F10或其人類化型式接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT3信號傳導之方法包括使細胞與有效量之抗體Hz5A7.v5接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT3信號傳導之方法包括使細胞與有效量之抗體Hz45G10接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT3信號傳導之方法包括使細胞與有效量之抗體Hz48A6接觸。在一些實施例中，本發明提供本文所描述之ILT3結合劑之用途，其用於製造或製備用於破壞及/或抑制細胞中之ILT3信號傳導之藥劑。在某些實施例中，細胞為骨髓細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為單核球。在一些實施例中，骨髓細胞為巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為tolDC。在一些實施例中，骨髓細胞為抗原呈遞細胞。在某些實施例中，該方法為活體內方法，其中使細胞與藥劑接觸之步驟包括向個體投與治療有效量之ILT3結合劑。在一些實施例中，該方法為活體外或離體方法。
本發明亦提供用於使用本文所描述之ILT3結合劑抑制腫瘤生長之方法。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體3A3、抗體5A7、抗體12A12、抗體16C5、抗體45G10、抗體48A6或抗體53F10或其人類化型式。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體Hz5A7.v5。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體Hz45G10。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體Hz48A6。在某些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使細胞混合物與ILT3結合劑在活體外接觸。舉例而言，將與免疫細胞(例如致耐受性樹突細胞)混合之永生化細胞株或癌細胞株在向其中添加結合ILT3之測試藥劑的培養基中培養。在一些實施例中，自患者樣品(諸如組織活檢體、胸膜滲出液或血液樣品)分離腫瘤細胞，與免疫細胞(例如tolDC)混合，且在向其中添加結合ILT3之測試藥劑的培養基中培養。在一些實施例中，本發明提供本文所描述之ILT3結合劑之用途，其用於製造或製備用於抑制腫瘤或腫瘤細胞生長之藥劑。在一些實施例中，ILT3結合劑增加、促進及/或增強效應免疫細胞之活性。在一些實施例中，ILT3結合劑抑制腫瘤細胞生長。
在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使腫瘤及/或腫瘤微環境與本文所描述之ILT3結合劑在活體內接觸。在某些實施例中，使腫瘤及/或腫瘤微環境與ILT3結合劑接觸在動物模型中進行。舉例而言，可向具有腫瘤之小鼠投與測試藥劑。在一些實施例中，ILT3結合劑增加、促進及/或增強小鼠中免疫細胞之活性。在一些實施例中，ILT3結合劑抑制腫瘤生長。在一些實施例中，ILT3結合劑使得腫瘤退化。在一些實施例中，在將腫瘤細胞引入動物中之同時或在其之後不久投與ILT3結合劑以防止腫瘤生長(「預防性模型」)。在一些實施例中，在腫瘤已生長至規定尺寸或已變得「確定」之後投與ILT3結合劑用於治療(「治療性模型」)。在一些實施例中，向表現人類ILT3之基因轉殖動物(例如基因轉殖小鼠)投與ILT3結合劑，其中基因轉殖動物具有源於人類細胞之腫瘤。
在某些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)。在某些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，增加或增強個體中對腫瘤或腫瘤細胞之免疫反應之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，活化或增強個體中對腫瘤或腫瘤細胞之持久或長期免疫反應之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，抑制個體中腫瘤復發或腫瘤再生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，在個體中誘導抑制腫瘤復發或腫瘤再生長之持久或長期免疫性之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在本文所描述之方法之一些實施例中，腫瘤為實體腫瘤。在一些實施例中，腫瘤為胰腺腫瘤、乳房腫瘤、肺腫瘤、頭頸腫瘤、結腸直腸腫瘤、前列腺腫瘤、皮膚腫瘤、黑色素瘤腫瘤、胃部腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、卵巢腫瘤、子宮頸腫瘤、子宮腫瘤、子宮內膜腫瘤、膀胱腫瘤、腦腫瘤、食管腫瘤、肝腫瘤、腎腫瘤或睾丸腫瘤。在一些實施例中，腫瘤為胰腺腫瘤。在一些實施例中，腫瘤為卵巢腫瘤。在一些實施例中，腫瘤為乳房腫瘤。在一些實施例中，腫瘤為子宮腫瘤。在某些實施例中，個體具有腫瘤或個體具有至少部分移除之腫瘤。
在一些實施例中，本發明提供本文所描述之ILT3結合劑之用途，其用於製造或製備用於抑制腫瘤或腫瘤細胞生長之藥劑。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之抗體3A3、抗體5A7、抗體12A12、抗體16C5、抗體45G10、抗體48A6或抗體53F10或其人類化型式。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz5A7.v5。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz48A6。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz45G10。
本發明提供治療癌症之方法。在一些實施例中，治療癌症之方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，ILT3結合劑結合ILT3且抑制或減少癌症之生長。在一些實施例中，ILT3結合劑結合表現人類ILT3之細胞，增強對癌症之免疫反應，且抑制或減少癌症之生長。在一些實施例中，ILT3結合劑結合表現人類ILT3之細胞，再活化tolDC，增強對癌症之免疫反應，且抑制或減少癌症之生長。在某些實施例中，個體為人類。在某些實施例中，個體具有癌性腫瘤。在某些實施例中，個體已至少部分移除腫瘤。
在一些實施例中，本發明提供本文所描述之ILT3結合劑之用途，其用於製造或製備用於治療癌症之藥劑。
在本文所描述之方法之一些實施例中，癌症為胰腺癌、乳癌、肺癌、頭頸癌、結腸直腸癌、前列腺癌、皮膚癌、黑色素瘤、胃部癌症、胃癌、腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腦癌、食管癌、肝癌、腎癌或睾丸癌。在一些實施例中，癌症為肉瘤。在一些實施例中，癌症表現ILT3。
在一些實施例中，癌症為血液癌症。在一些實施例中，癌症為骨髓性白血病。在一些實施例中，骨髓性癌症為急性骨髓樣白血病(AML)。在一些實施例中，骨髓性癌症為慢性骨髓樣白血病。在一些實施例中，癌症為某一類型之B細胞白血病或表現ILT3之淋巴瘤。在一些實施例中，癌症為骨髓發育異常症候群。骨髓發育異常症候群(MDS)為一組癌症，其中骨髓中之不成熟血細胞並不成熟且因此不會變為健康血細胞。在一些實施例中，骨髓發育異常症候群發展成AML。
在一些實施例中，用於治療個體之癌症的方法包括向個體投與治療有效量之抗體3A3、抗體5A7、抗體12A12、抗體16C5、抗體45G10、抗體48A6或抗體53F10或其人類化型式。在一些實施例中，用於治療個體之癌症的方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz5A7.v5。在一些實施例中，用於治療個體之癌症的方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz48A6。在一些實施例中，用於治療個體之癌症的方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz45G10。
在一些實施例中，本發明提供活化腫瘤微環境中之骨髓細胞之方法。在一些實施例中，活化具有腫瘤之個體中腫瘤微環境中之骨髓細胞的方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，骨髓細胞為原代樹突細胞或tolDC。在一些實施例中，骨髓細胞為單核球。在一些實施例中，骨髓細胞為巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞為APC。在一些實施例中，本發明提供一種再活化個體中之tolDC的方法，該方法包括向個體投與治療有效量之本文所描述之ILT3結合劑。在一些實施例中，tolDC發現於腫瘤微環境中。
在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含抗體5A7之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑包含抗體Hz5A7.v5之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a) SEQ ID NO:111之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:112之輕鏈可變區。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a) SEQ ID NO:123之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:124之輕鏈可變區。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:126之重鏈。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:128之輕鏈。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:126之重鏈及SEQ ID NO:128之輕鏈。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為5A7之人類化型式。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為Hz5A7.v5。
在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含抗體3A3或3A3之人類化型式之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LASNRHT (SEQ ID NO:15)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)之輕鏈可變區CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:109之重鏈可變區及SEQ ID NO:110之輕鏈可變區。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:109之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:110之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:109之多肽及SEQ ID NO:110之多肽。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體3A3。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體3A3之人類化型式。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體3A3之變異體或人類化3A3之變異體。
在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含抗體12A12或12A12之人類化型式之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO:47)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)之輕鏈可變區CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:113之重鏈可變區及SEQ ID NO:114之輕鏈可變區。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:113之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:114之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:113之多肽及SEQ ID NO:114之多肽。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體12A12。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體12A12之人類化型式。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體12A12之變異體或人類化12A12之變異體。
在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含抗體16C5或16C5之人類化型式之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列ATSNLAS (SEQ ID NO:62)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)之輕鏈可變區CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:115之重鏈可變區及SEQ ID NO:116之輕鏈可變區。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:115之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:116之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:115之多肽及SEQ ID NO:116之多肽。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體16C5。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體16C5之人類化型式。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體16C5之變異體或人類化16C5之變異體。
在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含抗體45G10或45G10之人類化型式之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:117之重鏈可變區及SEQ ID NO:118之輕鏈可變區。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:117之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:118之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:117之多肽及SEQ ID NO:118之多肽。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體45G10。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體45G10之人類化型式。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體45G10之變異體或人類化45G10之變異體。
在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含抗體48A6或48A6之人類化型式之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LSSKLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:119之重鏈可變區及SEQ ID NO:120之輕鏈可變區。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:119之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:120之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:119之多肽及SEQ ID NO:120之多肽。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體48A6。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體48A6之人類化型式。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體48A6之變異體或人類化48A6之變異體。
在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)包含抗體53F10或53F10之人類化型式之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含：(a)重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)之輕鏈可變區CDR3。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:121之重鏈可變區及SEQ ID NO:122之輕鏈可變區。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:121之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:122之多肽。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體包含SEQ ID NO:121之多肽及SEQ ID NO:122之多肽。
在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體53F10。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體53F10之人類化型式。在本文所描述之方法之一些實施例中，抗ILT3抗體為抗體53F10之變異體或人類化53F10之變異體。
在本文所描述之方法之一些實施例中，方法包括投與本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)與至少一種其他治療劑或治療療法的組合。用兩種或更多種治療劑治療常常使用藉由不同作用機制工作之藥劑，不過不要求如此。使用具有不同作用機制之藥劑的組合療法可產生相加或協同作用。組合療法可允許各藥劑之劑量與單一療法中所用相比更低，由此降低毒性副作用及/或增加藥劑之治療指數。組合療法可降低將發展對藥劑之抗性的可能性。
在所描述之方法之一些實施例中，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)與至少一種其他治療劑之組合產生相加或協同結果。在一些實施例中，組合療法使得ILT3結合劑之治療指數增加。在一些實施例中，組合療法使得其他治療劑之治療指數增加。在一些實施例中，組合療法使得ILT3結合劑之毒性及/或副作用降低。在一些實施例中，組合療法使得其他治療劑之毒性及/或副作用降低。在一些實施例中，組合療法包含影響免疫反應(例如增強或活化該反應)之治療劑及影響(例如抑制或殺死)腫瘤/癌細胞之治療劑。
在本文所描述之方法之一些實施例中，組合治療包含一種其他治療劑或兩種或更多種其他治療劑。
適用類別之治療劑包括但不限於抗微管蛋白劑、澳瑞他汀、DNA小溝結合劑、DNA複製抑制劑、烷基化劑(例如鉑錯合物，諸如順鉑、單(鉑)、雙(鉑)及三核鉑錯合物及卡鉑)、蒽環類、抗生素、抗葉酸劑、抗代謝物、化學療法敏化劑、多卡黴素、依託泊苷(etoposide)、氟化嘧啶、離子載體、萊克西托素(lexitropsin)、亞硝基脲、普拉汀諾(platinol)、嘌呤抗代謝物、嘌呤黴素、輻射敏化劑、類固醇、紫杉烷、拓撲異構酶抑制劑、長春花生物鹼或類似物。在一些實施例中，第二治療劑為烷基化劑、抗代謝物、抗有絲分裂劑、拓撲異構酶抑制劑或血管生成抑制劑。
可與本文所描述之ILT3結合劑組合投與之治療劑包括化學治療劑。因此，在一些實施例中，該方法或治療涉及投與本發明之ILT3結合劑與化學治療劑的組合或與化學治療劑之混合物的組合。
適用於本發明之化學治療劑包括但不限於烷基化劑，諸如噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN)；烷基磺酸鹽，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮雜環丙烷，諸如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥多巴(meturedopa)及烏瑞多巴(uredopa)；伸乙基亞胺及甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三伸乙基蜜胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基蜜胺；氮芥，諸如氮芥苯丁酸、萘氮芥、膽磷醯胺、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖、新恩比興(novembichin)、膽固醇苯乙酸氮芥、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲黴素、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，諸如阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素、安麯黴素(authramycin)、氮雜絲胺酸、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C、加利車黴素、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌黴素、色黴素、更生黴素、柔紅比星、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素、黴酚酸、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素、鏈佐星(streptozocin)、殺結核菌素、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如胺甲喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸、胺甲喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如環胞苷、阿紮胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、雙去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷、5-FU；雄激素，諸如卡普睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸鹽(dromostanolone propionate)、表硫雄醇、美雄酮(mepitiostane)、睾內酯；抗腎上腺劑，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸；乙醯葡醛內酯；醛磷醯胺醣苷；胺基乙醯丙酸；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；多弗醯胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾弗鳥胺酸(elformithine)；依利乙酸鹽(elliptinium acetate)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；尼曲吖啶(nitracrine)；噴司他汀(pentostatin)；蛋氨氮芥；吡柔比星(pirarubicin)；足葉草酸；2-乙肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK；雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofuran)；鍺螺胺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；胺基甲酸酯；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(Ara-C)；類紫杉醇，例如帕西他賽(paclitaxel) (TAXOL)及多西他賽(docetaxel) (TAXOTERE)；氮芥苯丁酸；吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春花鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；絲裂黴素C；米托蒽醌；長春新鹼；長春瑞濱(vinorelbine)；諾維本(navelbine)；雙羥蒽醌；替尼泊苷(teniposide)；道諾黴素(daunomycin)；胺基喋呤；依班膦酸鹽(ibandronate)；CPT 11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸；埃斯培拉黴素(esperamicin)；卡培他濱(capecitabine) (XELODA)；及以上中之任一者的醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。
化學治療劑亦包括起調控或抑制激素對腫瘤之作用的作用之抗激素劑，諸如抗雌激素，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、抑制芳香酶之4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene) (FARESTON)；及抗雄激素，諸如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；及以上中之任一者的醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。
在本文所描述之方法之某些實施例中，化學治療劑為拓撲異構酶抑制劑。拓撲異構酶抑制劑為干擾拓撲異構酶(例如拓撲異構酶I或II)作用之化學治療劑。拓撲異構酶抑制劑包括但不限於多柔比星鹽酸鹽、柔紅比星檸檬酸鹽、米托蒽醌鹽酸鹽、放線菌素D、依託泊苷、拓撲替康鹽酸鹽、替尼泊苷(VM-26)及伊立替康(irinotecan)以及此等物質中之任一者的醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，另一治療劑為伊立替康。
在某些實施例中，化學治療劑為抗代謝物。抗代謝物為結構與正常生化反應所需之代謝產物類似而又足夠不同從而干擾細胞之一或多種正常功能(諸如細胞分裂)的化學品。抗代謝物包括但不限於吉西他濱、氟尿嘧啶、卡培他濱、胺甲喋呤鈉、雷替曲塞(ralitrexed)、培美曲塞(pemetrexed)、替加氟(tegafur)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、硫鳥嘌呤、5-氮雜胞苷、6-巰基嘌呤、氮雜硫嘌呤、6-硫鳥嘌呤、噴司他汀(pentostatin)、氟達拉濱磷酸鹽及克拉屈濱(cladribine)以及此等物質中之任一者的醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。在某些實施例中，另一治療劑為吉西他濱。
在本文所描述之方法之某些實施例中，化學治療劑為抗有絲分裂劑，包括但不限於結合微管蛋白之藥劑。在一些實施例中，該藥劑為紫杉烷。在某些實施例中，該藥劑為帕西他賽或多西他賽，或帕西他賽或多西他賽之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。在某些實施例中，該藥劑為帕西他賽(TAXOL)、多西他賽(TAXOTERE)、白蛋白結合型帕西他賽(nab-帕西他賽；ABRAXANE)、DHA-帕西他賽或PG-帕西他賽。在某些替代實施例中，抗有絲分裂劑包含長春花生物鹼，諸如長春新鹼、長春花鹼、長春瑞濱或長春地辛，或其醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，抗有絲分裂劑為驅動蛋白Eg5之抑制劑或有絲分裂激酶(諸如Aurora A或Plkl)之抑制劑。在某些實施例中，另一治療劑為帕西他賽。在某些實施例中，另一治療劑為nab-帕西他賽。
在本文所描述之方法之一些實施例中，另一治療劑包含諸如小分子之藥劑。舉例而言，治療可涉及本發明之ILT3結合劑與充當針對腫瘤相關抗原(包括但不限於EGFR、HER2 (ErbB2)及/或VEGF)之抑制劑之小分子的組合投與。在一些實施例中，本發明之ILT3結合劑與選自由以下組成之群的蛋白激酶抑制劑組合投與：吉非替尼(gefitinib) (IRESSA)、埃羅替尼(erlotinib) (TARCEVA)、舒尼替尼(sunitinib) (SUTENT)、拉帕替尼(lapatanib)、凡德他尼(vandetanib) (ZACTIMA)、AEE788、CI-1033、西地尼布(cediranib) (RECENTIN)、索拉非尼(sorafenib) (NEXAVAR)及帕唑帕尼(pazopanib) (GW786034B)。在一些實施例中，另一治療劑包含mTOR抑制劑。
在本文所描述之方法之一些實施例中，另一治療劑包含生物分子，諸如抗體。舉例而言，治療可涉及本發明之ILT3結合劑與針對腫瘤相關抗原之抗體(包括但不限於結合EGFR、HER2/ErbB2及/或VEGF之抗體)的組合投與。
在某些實施例中，另一治療劑為作為血管生成抑制劑之抗體(例如抗VEGF或VEGF受體抗體)。在某些實施例中，另一治療劑為貝伐單抗(bevacizumab) (AVASTIN)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab) (HERCEPTIN)、帕妥珠單抗(pertuzumab) (OMNITARG)、帕尼單抗(panitumumab) (VECTIBIX)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、紮魯木單抗(zalutumumab)或西妥昔單抗(cetuximab) (ERBITUX)。
在本文所描述之方法之一些實施例中，另一治療劑為調節免疫反應之抗體。在一些實施例中，另一治療劑為抗PD-1抗體、抗PD-Ll抗體、抗PD-L2抗體、抗CTLA-4抗體或抗TIGIT抗體。
此外，用本文所描述之ILT3結合劑治療可包括與諸如一或多種細胞介素(例如淋巴介質、白介素、腫瘤壞死因子及/或生長因子)之其他生物分子之組合治療，或可伴隨有腫瘤之手術移除、癌細胞之移除或治療醫師認為必需之任何其他療法。在一些實施例中，另一治療劑為免疫治療劑。
在本文所描述之方法之一些實施例中，ILT3結合劑與選自由以下組成之群的生長因子組合：腎上腺髓質素(AM)、血管生成素(Ang)、BMP、BDNF、EGF、紅血球生成素(EPO)、FGF、GDNF、G-CSF、GM-CSF、GDF9、HGF、HDGF、IGF、遷移刺激因子、肌生成抑制素(GDF-8)、NGF、神經營養素、PDGF、促血小板生成素、TGF-a、TGF-β、TNF-a、VEGF、PIGF、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15及IL-18。
在本文所描述之方法之一些實施例中，另一治療劑為免疫治療劑。在一些實施例中，免疫治療劑選自由以下組成之群：顆粒球-巨噬細胞菌落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細胞菌落刺激因子(M-CSF)、顆粒球菌落刺激因子(G-CSF)、白介素3 (IL-3)、白介素12 (IL-12)、白介素1 (IL-1)、白介素2 (IL-2)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、4-1BB配位體、抗CD3抗體、抗CTLA-4抗體、抗TIGIT抗體、抗PD-1抗體、抗PD-Ll抗體、抗LAG-3抗體及抗TIM-3抗體。
在本文所描述之方法之一些實施例中，免疫治療劑選自由以下組成之群：PD-1活性之調節劑、PD-L1活性之調節劑、PD-L2活性之調節劑、CTLA-4活性之調節劑、CD28活性之調節劑、CD80活性之調節劑、CD86活性之調節劑、4-1BB活性之調節劑、OX40活性之調節劑、KIR活性之調節劑、Tim-3活性之調節劑、LAG3活性之調節劑、CD27活性之調節劑、CD40活性之調節劑、GITR活性之調節劑、TIGIT活性之調節劑、CD20活性之調節劑、CD96活性之調節劑、IDO1活性之調節劑、細胞介素、趨化介素、干擾素、白介素、淋巴介質、腫瘤壞死因子(TNF)家族之成員及免疫刺激寡核苷酸。
在本文所描述之方法之一些實施例中，免疫治療劑選自由以下組成之群：PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑、PD-L2拮抗劑、CTLA-4拮抗劑、CD80拮抗劑、CD86拮抗劑、KIR拮抗劑、Tim-3拮抗劑、LAG3拮抗劑、TIGIT拮抗劑、CD20拮抗劑、CD96拮抗劑及/或IDO1拮抗劑。
在本文所描述之方法之一些實施例中，PD-1拮抗劑為特異性結合PD-1之抗體。在一些實施例中，結合PD-1之抗體為派姆單抗(pembrolizumab) (KEYTRUDA，MK-3475)、皮地利珠單抗(pidilizumab) (CT-011)、納武單抗(nivolumab) (OPDIVO，BMS-936558，MDX-1106)、MEDI0680 (AMP-514)、REGN2810、BGB-A317、PDR-001或STI-A1110。在一些實施例中，結合PD-1之抗體描述於PCT公開案WO 2014/179664中，例如鑑定為APE2058、APE1922、APE1923、APE1924、APE 1950或APE1963之抗體，或含有此等抗體中之任一者的CDR區之抗體。在其他實施例中，PD-1拮抗劑為包括PD-L2之融合蛋白，例如AMP-224。在其他實施例中，PD-1拮抗劑為肽抑制劑，例如AU P-12。
在一些實施例中，PD-L1拮抗劑為特異性結合PD-L1之抗體。在一些實施例中，結合PD-L1之抗體為阿特珠單抗(atezolizumab) (TECENTRIQ，RG7446，MPDL3280A)、MEDI4736、BMS-936559 (MDX-1105)、阿維單抗(avelumab) (BAVENCIO，MSB0010718C)、德瓦魯單抗(durvalumab) (IMFINZI)、KD033、KD033之抗體部分或STI-A1014。在一些實施例中，結合PD-L1之抗體描述於PCT公開案WO 2014/055897中，例如Ab-14、Ab-16、Ab-30、Ab-31、Ab-42、Ab-50、Ab-52或Ab-55，或含有此等抗體中之任一者的CDR區之抗體。
在一些實施例中，CTLA-4拮抗劑為特異性結合CTLA-4之抗體。在一些實施例中，結合CTLA-4之抗體為伊匹單抗(ipilimumab) (YERVOY)或曲美木單抗(tremelimumab) (CP-675,206)。在一些實施例中，CTLA-4拮抗劑為CTLA-4融合蛋白，例如KAHR-102。
在一些實施例中，LAG3拮抗劑為特異性結合LAG3之抗體。在一些實施例中，結合LAG3之抗體為IΜΡ701、IMP731、BMS-986016、LAG525及GSK2831781。在一些實施例中，LAG3拮抗劑包括可溶性LAG3受體，例如IMP321。
在一些實施例中，KIR拮抗劑為特異性結合KIR之抗體。在一些實施例中，結合KIR之抗體為利麗單抗(lirilumab)。
在一些實施例中，免疫治療劑選自由以下組成之群：CD28促效劑、4-1BB促效劑、OX40促效劑、CD27促效劑、CD80促效劑、CD86促效劑、CD40促效劑及GITR促效劑。
在一些實施例中，OX40促效劑包括OX40配位體，或其OX40結合部分。舉例而言，OX40促效劑可為MEDI6383。在一些實施例中，OX40促效劑為特異性結合OX40之抗體。在一些實施例中，結合OX40之抗體為MEDI6469、MEDI0562或MOXR0916 (RG7888)。在一些實施例中，OX40促效劑為能夠表現OX40配位體之載體(例如表現載體或病毒，諸如腺病毒)。在一些實施例中，表現OX40之載體為δ-24-RGDOX或DNX2401。
在一些實施例中，4-1BB (CD137)促效劑為結合分子，諸如抗運載蛋白。在一些實施例中，抗運載蛋白為PRS-343。在一些實施例中，4-1BB促效劑為特異性結合4-1BB之抗體。在一些實施例中，結合4-1BB之抗體為PF-2566 (PF-05082566)或烏瑞魯單抗(urelumab) (BMS-663513)。
在一些實施例中，CD27促效劑為特異性結合CD27之抗體。在一些實施例中，結合CD27之抗體為萬利魯單抗(varlilumab) (CDX-1127)。
在一些實施例中，GITR促效劑包含GITR配位體或其GITR結合部分。在一些實施例中，GITR促效劑為特異性結合GITR之抗體。在一些實施例中，結合GITR之抗體為TRX518、MK-4166或INBRX-110。
在一些實施例中，免疫治療劑包括但不限於細胞介素，諸如趨化介素、干擾素、白介素、淋巴介質及腫瘤壞死因子(TNF)家族之成員。在一些實施例中，免疫治療劑包括免疫刺激寡核苷酸，諸如CpG二核苷酸。
在一些實施例中，免疫治療劑包括但不限於抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗PD-L2抗體、抗CTLA-4抗體、抗CD28抗體、抗CD80抗體、抗CD86抗體、抗4-1BB抗體、抗OX40抗體、抗KIR抗體、抗Tim-3抗體、抗LAG3抗體、抗CD27抗體、抗CD40抗體、抗GITR抗體、抗TIGIT抗體、抗CD20抗體、抗CD96抗體或抗IDO1抗體。
在一些實施例中，用ILT3結合劑治療可發生在投與其他治療劑之前、同時或之後。在一些實施例中，組合投與包括以單一醫藥調配物形式或使用單獨調配物共投與或以任一順序連續投與，但通常在一時間段內進行，使得所有活性劑可發揮其生物活性。在一些實施例中，藥劑之製備及/或其他治療劑之給藥時程係根據製造商之說明書或如熟練從業者根據經驗所確定。
在本文所描述之方法之一些實施例中，向個體(例如人類)投與ILT3結合劑(例如抗體)作為組合療法之一部分。
應瞭解，本文所描述之ILT3結合劑(例如抗體)與至少一種其他治療劑之組合可以任何順序或同時投與。在一些實施例中，向先前已經歷用治療劑治療之個體投與ILT3結合劑。在一些實施例中，實質上同時或同時投與ILT3結合劑及第二治療劑。舉例而言，可給予個體ILT3結合劑，同時經歷用第二治療劑(例如化學治療劑)之一系列治療。在一些實施例中，在用第二治療劑治療1年內投與ILT3結合劑。在一些實施例中，在用第二治療劑進行任何治療之10、8、6、4或2個月內投與ILT3結合劑。在一些實施例中，在用第二治療劑進行任何治療之4、3、2或1週內投與ILT3結合劑。在一些實施例中，在用第二治療劑進行任何治療之5、4、3、2或1天內投與ILT3結合劑。應進一步瞭解，兩種(或更多種)藥劑或治療可在約數小時或數分鐘內(亦即，實質上同時)向個體投與。
為治療疾病，本發明之ILT3結合劑(例如抗體)之適當劑量取決於所要治療之病症或疾病、病症或疾病之嚴重程度及病程、病症或疾病之反應性、藥劑係出於治療抑或預防目的而投與、先前療法、患者之臨床病史，諸如此類。ILT3結合劑可一次性投與或歷經持續若干天至若干月之一系列治療，或直至實現治癒或達成疾病狀態之減輕。
本發明提供包含本文所描述之ILT3結合劑之組合物。本發明亦提供包含本文所描述之ILT3結合劑及醫藥學上可接受之媒劑的醫藥組合物。
調配物係藉由將經純化之本發明之抗體或藥劑與醫藥學上可接受之媒劑(例如載劑或賦形劑)組合製備用於儲存及使用。熟習此項技術者通常將醫藥學上可接受之載劑、賦形劑及/或穩定劑視為調配物或醫藥組合物之非活性成分。
適合之醫藥學上可接受之媒劑包括但不限於無毒緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；鹽，諸如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑，諸如十八基二甲基苯甲基氯化銨、氯化六烴四級銨、苯紮氯銨、苄索氯銨、苯酚、丁醇或苯甲醇、對羥基苯甲酸烷基酯(諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯)、兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇及間甲酚；低分子量多肽(例如小於約10個胺基酸殘基)；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；碳水化合物，諸如單醣、二醣、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬複合物，諸如Zn-蛋白質複合物；及非離子表面活性劑，諸如TWEEN或聚乙二醇。(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第 22 版 , 2012, Pharmaceutical Press, London.)。在一些實施例中，調配物呈水溶液形式。在一些實施例中，調配物以凍乾或以替代乾燥形式儲存。
本發明之結合劑可經調配呈任何適合用於遞送至目標細胞/組織之形式。在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)可經調配呈脂質體、微粒、微膠囊、白蛋白微球、微乳液、奈米粒子、奈米膠囊或巨乳液形式。
在一些實施例中，將ILT3結合劑(例如抗體)與脂質體一起調配。用於產生脂質體之方法為熟習此項技術者已知的。舉例而言，一些脂質體可藉由與包含磷脂醯膽鹼、膽固醇及PEG衍生之磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)之脂質組合物一起逆相蒸發而產生。
在一些實施例中，ILT3結合劑(例如抗體)經調配呈持續釋放製劑形式。適合之持續釋放製劑之實例包括含有藥劑之固體疏水性聚合物之半滲透基質，其中基質呈成形物品(例如薄膜或微膠囊)形式。持續釋放基質包括但不限於聚酯、水凝膠(諸如聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯、L-麩胺酸及L-麩胺酸7乙酯之共聚物、不可降解之乙烯-乙酸乙烯酯、可降解之乳酸-乙醇酸共聚物(諸如LUPRON DEPOT™，由乳酸-乙醇酸共聚物及亮丙瑞林乙酸鹽組成之可注射微球)、蔗糖乙酸酯異丁酸酯及聚D-(-)-3-羥丁酸。
本發明之醫藥組合物或調配物可以用於局部或全身治療之任何數目之方式投與。投與可為表面投與，藉由表皮或真皮貼片、軟膏、洗劑、乳霜、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧、液體及粉末；經肺投與，藉由吸入或吹入粉末或氣溶膠，包括藉由噴霧器、氣管內及鼻內；經口投與；或非經腸投與，包括靜脈內、動脈內、瘤內、皮下、腹膜內、肌內(例如注射或輸注)或顱內(例如鞘內或腦室內)。實例 實例1 抗體之產生
使用人類ILT3 (huILT3-ECD)及/或cyno ILT3 (cynoILT3-ECD)之細胞外結構域作為免疫原產生抗ILT3抗體。產生包含人類ILT3之胞外區(SEQ ID NO:1之aa 22-259)或cyno ILT3之胞外區(SEQ ID NO:6之aa 22-259)的重組構築體且在哺乳動物細胞中表現。將小鼠用huILT3-ECD及/或cynoILT3-ECD蛋白免疫且加強免疫若干次以誘導高效價。自經免疫之小鼠抽取血液且藉由ELISA及FACS測定抗體效價。自已經確定具有適當高抗體效價之經免疫小鼠之脾臟及淋巴結獲得淋巴球之單細胞懸浮液。藉由標準方法(例如電融合)使淋巴球與鼠骨髓瘤細胞融合。將細胞於含HAT之選擇培養基中分散至96孔板中。 實例2 抗體之篩選
使用ELISA分析來篩選針對人類ILT3及人類LILRA1,2,4-6之抗體。選擇結合於人類ILT3但不結合於人類LILRA1,2,4-6蛋白之抗體。藉由FACS針對與HEK-293T細胞上表現之人類ILT3及cyno ILT3之結合對此等抗體進行再篩選。選擇結合於人類與cyno ILT3兩者之抗體。藉由FACS針對人類LILRB1-5 (分別為ILT2、ILT4、ILT5、ILT3及LILRB5)、cyno LILRB5及人類LILRA1,2,4-6對此子集之抗體進行篩選。對於FACS篩選，將各抗體與表現人類ILT3、cyno ILT3、LILRA蛋白中之一者或LILRB蛋白中之一者的細胞一起在4℃下孵育30分鐘。洗滌之後，將細胞與經標記之抗小鼠Fc抗體一起在4℃下孵育30分鐘。洗滌之後，在流式細胞儀上分析細胞。代表性抗體之結果顯示於圖1A-1F及2A-2E中。基於結合於人類ILT3、cyno ILT3、不結合或有限結合於其他LILRB蛋白及不結合或有限結合於LILRA蛋白之準則選擇抗體。舉例而言，抗體11A1經觀測結合人類LILRB2、LILRA1、LILRA2、LILRA4及LILRA5且因此不被選擇用於其他研究。 實例3 抗人類ILT3抗體之結合特徵
使用Biacore系統(GE Healthcare LifeSciences)量測抗ILT3抗體對人類ILT3及cyno ILT3之結合親和力。簡單來說，使用胺偶合試劑(GE Healthcare LifeSciences)將抗Fc抗體(Sigma-Aldrich)固定於CM5晶片之所有四個流動池上。將抗體捕獲於流動池2、3及4上，使用流動池1作為參考。在37℃下以50 μL/min之流速注射濃度在3.3-10 nM範圍內之人類或cyno ILT3-ECD。隨時間推移收集動力學數據且使用同時整體擬合方程(simultaneous global fit equation)進行擬合，得到各抗體之親和力常數(KD 值)。
結合數據顯示於表9中。 表9
   人類ILT3 Cyno ILT3
抗體 K締合 [1/Ms] K解離 [s-1 ] KD M K締合 [1/Ms] K解離 [s-1 ] KD M
3A3 3.3 x 105 6.5 x 10-4 2.0 x 10-9 3.4 x 106 2.1 x 10-2 6.3 x 10-9
5A7 3.8 x 106 1.1 x 10-4 2.8 x 10-11 3.3 x 106 2.2 x 10-3 6.6 x 10-10
12A12 1.1 x 105 9.4 x 10-4 8.5 x 10-9 1.5 x 105 2.8 x 10-4 1.9 x 10-9
16C5 1.1 x 105 2.0 x 10-4 1.8 x 10-9 2.9 x 105 9.0 x 10-5 3.1 x 10-10
45G10 3.9 x 105 5.1 x 10-5 1.3 x 10-10 1.5 x 105 7.6 x 10-4 5.0 x 10-9
48A6 7.0 x 106 1.8 x 10-7 ＜100pM 1.4 x 107 2.4 x 10-2 1.7 x 10-9
53F10 3.3 x 105 8.0 x 10-5 2.4 x 10-10 5.9 x 105 5.5 x 10-3 9.4 x 10-9
亦評估人類ILT3之細胞外結構域上的抗ILT3抗體結合位點(數據未顯示)。3A3結合於ILT3之D2結構域內或ILT3之D1及D2結構域之間的接合點內之構象抗原決定基。16C5結合於ILT3之D1結構域內之構象抗原決定基。12A12結合於ILT3之D2結構域內或ILT3之D1及D2結構域之間的接合點內之構象抗原決定基。5A7結合於ILT3之D2結構域內或ILT3之D1及D2結構域之間的接合點內之構象抗原決定基。48A6結合於ILT3之D2結構域內或ILT3之D1及D2結構域之間的接合點內之構象抗原決定基。45G10結合於ILT3之D2結構域內或ILT3之D1及D2結構域之間的接合點內之構象抗原決定基。53F10結合於ILT3之D2結構域內或ILT3之D1及D2結構域之間的接合點內之構象抗原決定基。
亦進行抗ILT3抗體間在人類ILT3之細胞外結構域上的競爭結合。表10表明一些抗ILT3抗體結合於ILT3上重疊或部分重疊之抗原決定基，且一些抗ILT3抗體結合於ILT3上之不同抗原決定基。「是」指示兩種抗體之間競爭結合於ILT3之細胞外結構域。「部分」指示兩種抗體之間部分競爭結合於ILT3之細胞外結構域。「否」指示兩種抗體之間不競爭結合於ILT3之細胞外結構域。「ND」指示數據不可獲得。 表10
5A7 3A3 12A12 16C5 45G10 48A6 53F10
5A7 是                  
3A3 否 是               
12A12 否 否 是            
16C5 否 否 部分 是         
45G10 否 ND ND 否 是      
48A6 是 ND ND 否 否 是   
53F10 否 ND ND 否 是 否 是
實例4 抗ILT3抗體之序列分析
對代表性抗體3A3、5A7、12A12、16C5、45G10、48A6及53F10進行測序且重鏈可變區及輕鏈可變區胺基酸序列揭示於本文中且概括於表11中。 表11
抗體 重鏈可變區 輕鏈可變區
3A3 SEQ ID NO:109 SEQ ID NO:110
5A7 SEQ ID NO:111 SEQ ID NO:112
12A12 SEQ ID NO:113 SEQ ID NO:114
16C5 SEQ ID NO:115 SEQ ID NO:116
45G10 SEQ ID NO:117 SEQ ID NO:118
48A6 SEQ ID NO:119 SEQ ID NO:120
53F10 SEQ ID NO:121 SEQ ID NO:122
個別抗體之重鏈及輕鏈可變區CDR揭示於表1-7中且呈SEQ ID NO:11-104形式。 實例5 ILT3配位體之篩選
在鑑定ILT3之配位體的過程中對約100種細胞株進行篩選。產生包含融合至免疫球蛋白Fc區之ILT3細胞外結構域(SEQ ID NO:1之胺基酸22-259)的構築體(ILT3ECD-Fc)。使用ILT3ECD-Fc構築體來評估與細胞株之結合。先前內部研究已表明CNTFR為ILT3之結合配偶體，且將LX-2包括於細胞株組中以對此早期觀測進行追蹤。LX-2為附著人類肝星狀細胞株，其保留主要生物特徵。以下為使用LX-2作為例示性細胞株之篩選分析的簡潔描述。將LX-2細胞於含有10% FBS及1%青黴素/鏈黴素之DMEM中接種至384孔聚D-離胺酸包被之板(Grenier)中。將TGF-β (Peprotech)以10 ng/mL添加至一部分孔中以活化LX-2細胞。兩天之後，將細胞用含有Mg2+ 及Ca2+ 之漢克氏緩衝鹽水溶液(Hank’s buffered saline solution，HBSS)洗滌三次，每孔留下約10 μL之緩衝液。接著，將細胞(未經處理的及TGF-β處理的)與ILT3ECD-Fc (每孔10 μL，在10 μg/mL之濃度下)一起在DMEM中在室溫下孵育30分鐘。將AlexaFluor 647結合之山羊抗人類Fc抗體(1:500稀釋；Jackson ImmunoResearch Laboratories)及Hoechst染色劑(2.5 μM；ThermoFisher Scientific)添加至孔中。在進行30分鐘孵育之後，將細胞洗滌且用3.7%福爾馬林固定，接著再次洗滌，且在CellInsight儀器(ThermoFisher Scientific)上在10X下成像。
結果表明ILT3ECD-Fc結合於活化之LX-2細胞且不結合於基礎/未經處理之LX-2細胞。在基礎及活化之細胞中細胞之活力為等效的。此等結果表明活化之LX-2細胞表現ILT3之配位體。 實例6 藉由與LX-2細胞之相互作用對報導細胞之活化
為研究ILT3與LX-2細胞之結合是否為功能性相互作用，將LX-2細胞與表現穩定報導系統及相關細胞表面受體之細胞(「報導細胞」)共培養。在此嵌合受體系統中，相關受體(例如ILT3)之細胞外結構域與同銜接蛋白DAP12締合之PILRβ的跨膜/細胞內結構域融合。當嵌合受體藉由結合於配位體而活化時，DAP12變為磷酸化的且活化NFAT反應性啟動子，其驅動GFP表現(參見例如Deng等人, 2014,Blood , 124:924-935)。將LX-2細胞之批量培養物在基礎培養基(如上文所描述之DMEM)中或活化培養基(DMEM加如上文所描述之TGF-β)中培養三天。收穫且洗滌經處理及未經處理之LX-2細胞。將2 x 105 個LX-2細胞與(i)不含受體；(ii)含有B7-H4細胞外結構域；或(iii)含有ILT3細胞外結構域之4 x 105 個報導細胞共培養。將細胞在37℃下在含有10% FBS之RPMI 1640中孵育隔夜。將報導細胞用CellTracker Deep Red (ThermoFisher)預染色以在分析時將其與LX-2細胞區別開。第二天，藉由FACS針對GFP表現對報導細胞進行分析。
如圖3中所示，僅在ILT3於報導細胞之表面上表現且僅在存在經活化之LX-2細胞的情況下誘導GFP之表現。此等結果表明，不僅ILT3結合於經活化之LX-2細胞之細胞表面上之潛在配位體，而且相互作用為生物功能性的。 實例7 作為ILT3配位體之纖連蛋白之鑑定
使用免疫沈澱及質譜法來鑑定ILT3之結合配偶體。簡單來說，將LX-2細胞以150 mm3 組織培養盤中2.5 x 106 個細胞接種於基礎培養基或活化培養基中，且孵育3天。移除培養基且將細胞在100 μl之補充有HALT™蛋白酶及抑制劑混合物(ThermoFisher)之細胞溶解緩衝液(Cell Signaling Technologies)中溶解。藉由在＞16,000 RCF下在4℃下離心10分鐘使溶解產物澄清，且將上清液轉移至新微量離心管。使用二喹啉甲酸(BCA)分析(Pierce Biotechnology)定量澄清溶解產物之蛋白質濃度。
使用蛋白質G dyna珠粒(Invitrogen/ThermoFisher Scientific)根據製造商之說明書進行免疫沈澱。簡單來說，在4℃下使10 μg之ILT3ECD-Fc或對照人類Fc結合於50 μl之磁性Dyna珠粒持續30分鐘。移除上清液且添加來自未經處理或活化之LX-2細胞的蛋白質溶解產物。在各處理條件下，將含有約615 μg之蛋白質之溶解產物添加至Dyna珠粒複合物(ILT3ECD-Fc Dyna珠粒或Fc Dyna珠粒)中且在4℃下在溫和轉動下孵育隔夜。移除蛋白質溶解產物且將Dyna珠粒用200 μl之溶解緩衝液洗滌三次，每次洗滌持續5分鐘。將50 μl之包含比率為15:4:1之蛋白質加載緩衝液、還原劑及溶解緩衝液的溶離緩衝液添加至Dyna珠粒中。將蛋白質在95℃下溶離5分鐘且在聚丙烯醯胺電泳凝膠上運行樣品(10 μl之各蛋白質溶離物)。為鑑定相關條帶，使用PlusOne銀染色套組(GE Healthcare)根據製造商之說明書進行銀染色分析。使用Gel Doc™ EZ系統(Bio-Rad)使凝膠成像。
如圖4中所示，在自ILT3ECD-Fc及活化之LX-2細胞溶解產物之Dyna珠粒複合物溶離的蛋白質樣品中觀測到獨特條帶(在靠近260 MW標記物之框內)。
對剩餘40 μl之溶離物進行凝膠電泳且將凝膠用生物安全考馬斯染色劑(Bio-Safe Coomassie Stain，Bio-Rad)染色。在生物安全室中切割對應於獨特條帶及來自相同尺寸之其他樣品之對照條帶的凝膠條帶且將凝膠碎片切成小片段。將凝膠碎片在50%乙腈及200 mM碳酸氫銨中洗滌，在100%乙腈中孵育10分鐘，且在SpeedVac真空濃縮器中乾燥。藉由依序與25 mM參(2-羧基乙基)膦(TCEP)及50 mM碘乙醯胺一起孵育將凝膠碎片中之蛋白質還原及烷基化。將凝膠碎片洗滌且再次與乙腈一起孵育且在37℃下用胰蛋白酶(20 μg/ml於50 mM碳酸氫銨中，pH 8.0)消化隔夜。
藉由質譜法分析經消化之樣品。簡單來說，經連接至UltiMate™ RSLCnano LC系統(ThermoFisher Scientific)之EASY-Spray™ PepMap C18管柱將肽分離。歷時135分鐘以2%至32%乙腈之梯度將肽自管柱溶離且注入Orbitrap Velos Pro™質譜儀中。使用top10法收集液相層析加串聯質譜法(LC-MS/MS)數據，在200-2000 m/z之60,000解析度下收集MS數據。在基於離子阱實現之動態排除、單同位素前驅體選擇及電荷狀態篩選之情況下收集MS/MS數據。排除單電荷肽。用針對人類蛋白質之數據庫進行檢索的PEAKS X蛋白質組學軟體(Bioinformatics Solutions)對原始文件進行分析。在PEAKS程式中，對蛋白質進行鑑定，-10logp設置為20且假發現率(FDR)不高於1.5%。藉由總肽計數對命中進行排列且篩選在實驗樣品中發現但在對照中未發現之命中。另外針對細胞外及跨膜蛋白對命中進行篩選。意外地，獨特條帶經鑑定為纖連蛋白。與在來自(1) ILT3ECD-Fc及基礎LX-2細胞(其為111)；(2)對照-Fc及活化LX-2細胞(其為15)；及(3)對照-Fc及基礎LX-2細胞(其為1)之樣品中的纖連蛋白之肽相比，在來自ILT3ECD-Fc及活化LX-2細胞之樣品中所鑑定之纖連蛋白之肽的數目為306。此清楚地表明在ILT3ECD-Fc加經活化LX-2細胞樣品中纖連蛋白肽之富集。
其他研究表明無論細胞是否經活化，在纖連蛋白敲出LX-2細胞株中ILT3ECD-Fc結合均為不可偵測的。此等結果進一步支持纖連蛋白為ILT3之配位體的結論。
藉由Biacore評估ILT3與纖連蛋白之結合。使用標準胺偶合化學將人類血漿纖連蛋白固定至CM5感測器晶片表面(流動池2)上。將膠原蛋白IV型固定至流動池3上且用作對照。在37℃下以50 μL/min之流速以不同濃度(125-4000 nM)將人類ILT3ECD-Fc或人類LAIR1ECD-Fc注射於兩個表面上。隨時間推移收集動力學數據且使用同時整體擬合方程進行擬合，得到各抗體之親和力常數(KD 值)。
ILT3以至少5 μM之KD 結合於纖連蛋白且不以可偵測水準結合膠原蛋白IV。相比之下，LAIR1以至少5 μM之KD 結合於膠原蛋白IV且不結合纖連蛋白。 實例8 藉由ILT3與纖連蛋白之相互作用對報導細胞之活化
為研究ILT3與纖連蛋白之結合是否為功能性相互作用，將表現ILT3 ECD之報導細胞與纖連蛋白一起孵育。在室溫下用含5 μg/mL之人類Fc蛋白(R&D Systems)、血漿源性纖連蛋白(Millipore)或重組纖連蛋白(R&D Systems)之PBS包被96孔Maxisorp (Nunc)板持續2 h。用PBS將板洗滌兩次且接著用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。將表現B7-H4細胞外結構域、LAIR1細胞外結構域或ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(如本文實例5中所描述) (1 x 105 個細胞/孔)添加至經包被之孔中且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。
如圖5中所示，如藉由GFP表現所證實，僅與纖連蛋白(血漿源性或重組)一起培養之表現ILT3之細胞能夠活化報導系統。此等結果表明，與纖連蛋白之相互作用對ILT3具特異性，因為不存在因應於與纖連蛋白一起培養之表現B7-H4或LAIR1之細胞的GFP表現。
在追蹤研究中，在室溫下將96孔Maxisorp (Nunc)板用含5 μg/mL血漿源性纖連蛋白(Millipore)之PBS包被1 h。包被之後，以5或20 μg/mL之最終濃度將同型對照抗體、抗ILT3抗體16C5、抗纖連蛋白抗體F14 (來自Abcam之兔單株抗體)或抗纖連蛋白抗體PA5 (來自ThermoFisher Scientific之兔多株抗體)添加至孔中。接著，將表現ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(1 x 105 個細胞/孔)添加至孔中且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。
如圖6中所示，抗ILT3抗體16C5以及抗纖連蛋白抗體F14及PA5使報導細胞中之GFP表現降低。對照抗體在兩種不同濃度下均不抑制由ILT3與纖連蛋白之間的相互作用引起之GFP表現。
使用抗ILT3抗體16C5及ch5A7 (包含小鼠重鏈可變區及輕鏈可變區及人類Fc結構域之嵌合5A7)進行另一研究。如上文所描述，在室溫下用5 μg/mL血漿源性纖連蛋白包被96孔Maxisorp板持續1小時。在包被之後，以在66 nM至.0002 nM範圍內之6倍稀釋液將同型對照抗體、抗ILT3抗體16C5或抗ILT3抗體ch5A7添加至孔中。接著，將表現ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(1 x 105 個細胞/孔)添加至孔中且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。
如圖7中所示，如藉由GFP表現降低所評估，抗ILT3抗體16C5及ch5A7抑制ILT3與纖連蛋白之相互作用。相比之下，對照抗體對GFP表現沒有影響。
此等結果證實，抗ILT3抗體可阻斷ILT3與纖連蛋白之間的相互作用，且重要地，阻斷由彼相互作用引起之生物活性。 實例9 纖連蛋白上之ILT3結合位點的鑑定
人類纖連蛋白之代表圖顯示於圖8中。進行研究以鑑定ILT3在何處結合於纖連蛋白。用5 μg/mL之人類Fc蛋白(R&D Systems)、血漿源性纖連蛋白(Millipore)、重組纖連蛋白(R&D Systems)或以下纖連蛋白片段包被96孔Maxisorp (Nunc)板：70 kDa纖連蛋白片段(Sigma-Aldrich)、30 kDa纖連蛋白片段(Sigma-Aldrich)、45 kDa纖連蛋白片段(Sigma-Aldrich)、片段2 (SEQ ID NO:138之aa 607-1265；R&D Systems)、片段3 (SEQ ID NO:138之aa 1266-1908；R&D Systems)或片段4 (SEQ ID NO:138之aa 1913-2477；R&D Systems)。將板在室溫下孵育2小時。用PBS將板洗滌兩次且接著用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。將表現ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(1 x 105 個細胞/孔)添加至孔中且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。
如圖9中所示，如藉由GFP表現所證實，僅70 kDa及30 kDa纖連蛋白片段(以及全長纖連蛋白)能夠活化表現ILT3之細胞中的報導系統。在等莫耳濃度下與全長纖連蛋白相比片段情況下之活化水準較高。涵蓋肝素/纖維蛋白結合結構域之N端區(30 kDa片段；I型FN模組1-5)引發最高水準之GFP活性。
進行其他研究以觀察是否可更詳細確定纖連蛋白上之ILT3結合位點。製備由以下組成之纖連蛋白片段：(i) I型FN模組1-4 (SEQ ID NO:138之aa 32-228)，(ii) I型FN模組2-5 (SEQ ID NO:138之aa 93-290)，(iii) I型FN模組1-3 (SEQ ID NO:138之aa 32-182)，(iv) I型FN模組2-4 (SEQ ID NO:138之aa 93-228)，(v) I型FN模組3-5 (SEQ ID NO:138之aa 139-290)，(vi) I型FN模組1-2 (SEQ ID NO:138之aa 32-138)，(vii) I型FN模組2-3 (SEQ ID NO:138之aa 93-182)，(viii) I型FN模組3-4 (SEQ ID NO:138之aa 139-228)，(ix) I型FN模組4-5 (SEQ ID NO:138之aa 183-290)、70 kDa片段(SEQ ID NO:138之aa 32-608)、30 kDa片段(SEQ ID NO:138之aa 32-290)及45 kDa片段(SEQ ID NO:138之aa 291-608)。如上文所描述，用40 nM之纖連蛋白片段以及全長纖連蛋白包被96孔Maxisorp (Nunc)板。將板在室溫下孵育2小時。用PBS將板洗滌兩次且接著用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。將表現ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(1 x 105 個細胞/孔)添加至孔中且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。
此等研究表明，I型FN模組1為此報導分析中之活性所必需的(圖10)。吾人相信，I型FN模組1為ILT3與纖連蛋白結合及所得活性所需的，但其他模組亦在ILT3/纖連蛋白相互作用中發揮作用。 實例10 ILT3及纖連蛋白相互作用之活體外分析
THP-1為自急性單核球性白血病細胞建立之人類單核球細胞株且獲自ATCC。此等細胞已用於研究通過Fc受體活化之單核球中由ILT3調節之信號傳導路徑(Lu等人, 2009,JBC , 284:34839-34848)。單核球之活化可藉由細胞表面上FcR之交聯來達成且交聯使得產生細胞介素，例如TNF-α及/或IL-8。研究已表明ILT3為單核球中FcR所介導之細胞介素產生的有效抑制劑。THP-1細胞用作分析之一部分以研究骨髓細胞中ILT3與纖連蛋白之相互作用。除野生型THP-1細胞(THP-1)之外，亦產生ILT3敲出THP-1細胞株(THP-1 ILT3-KO)。
將96孔Maxisorp (Nunc)板用5 μg/mL之纖連蛋白(Millipore)及0、1、5及10 μg/mL之無效應抗KLH抗體共包被。將板在室溫下孵育2小時，用PBS洗滌兩次，且用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。將THP-1或THP-1 ILT3-KO細胞(2 x 105 個細胞/孔)添加至孔中且將板在37℃下孵育隔夜。抗KLH抗體將結合於FcR且活化THP-1及THP-1 ILT3-KO細胞以產生細胞介素。此分析中能夠評估存在或不存在纖連蛋白及其與ILT3之相互作用。收集無細胞培養物上清液且藉由Luminex分析(ProcartaPlex系統；ThermoFisher Scientific)量測IL-8。在一些情況下，針對無FcR刺激情況下之THP-1細胞對IL-8進行正規化。
如圖11中所示，在THP-1細胞與缺乏ILT3之THP-1細胞(THP-1 ILT3-KO細胞)兩者中，抗KLH抗體能夠以劑量依賴性方式活化單核球。相比之下，如藉由IL-8產生所評估之抗KLH抗體對THP-1細胞之活化因纖連蛋白與細胞表面上之ILT3的相互作用而受到抑制。如藉由IL-8產生所評估之抗KLH抗體對THP-1細胞之活化僅在纖連蛋白與ILT3均存在且能夠相互作用時受到抑制(亦即，在THP-1 ILT3-KO細胞及纖連蛋白情況下沒有抑制)。
此等結果證實，ILT3在存在纖連蛋白之情況下誘導骨髓細胞中FcR活化之抑制。
在存在抗ILT3抗體之情況下進行追蹤研究。將96孔Maxisorp (Nunc)板用5 μg/mL之纖連蛋白(Millipore)及5 μg/mL之無效應抗KLH抗體共包被。將板在室溫下孵育2小時，用PBS洗滌兩次，且用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。在存在抗ILT3抗體16C5 (無效應；5 μg/mL)或抗KLH抗體(無效應；5 μg/mL)之情況下將THP-1或THP-1 ILT3KO細胞(2 x 105 個細胞/孔)添加至孔中。將板在37℃下孵育隔夜且收集無細胞培養物上清液且藉由Luminex分析量測IL-8。
如圖12A中所示，ILT3/纖連蛋白誘導之對THP-1細胞之FcR活化的抑制作用受到抗ILT3抗體16C5的阻抑或阻斷。換句話說，抗ILT3抗體能夠逆轉ILT3及纖連蛋白相互作用之抑制。
用原代人類樹突細胞建立類似實驗。使用Miltenyi單核球分離套組根據製造商之說明書藉由負選擇自冷凍保存之外周血單核細胞分離人類單核球。為產生樹突細胞，將單核球以2 x 106 個細胞/mL塗鋪於含有50 ng/mL重組人類GM-CSF及50 ng/mL重組人類IL-4 (兩者均來自Peprotech)之X-VIVO™ 15培養基(Lonza)中且培養5-7天。如上文所描述，將96孔Maxisorp (Nunc)板用5 μg/mL之纖連蛋白(Millipore)及5 μg/mL之無效應抗KLH抗體共包被。將板在室溫下孵育2小時，用PBS洗滌兩次，且用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。在存在抗ILT3抗體16C5 (無效應；5 μg/mL)或抗KLH抗體(無效應；5 μg/mL)之情況下將樹突細胞(2 x 105 個細胞/孔)添加至孔中。將板在37℃下孵育隔夜且收集無細胞培養物上清液且藉由Luminex分析量測TNF-α。
圖12B表明在原代樹突細胞中觀測到ILT3/纖連蛋白誘導之對FcR活化之阻抑作用。重要地，此等結果表明例示性抗ILT3抗體(例如抗體16C5)能夠抑制該阻抑作用。
用抗ILT3抗體16C5及ch5A7進行另一研究。如前一分析中所觀測，抗ILT3抗體16C5及ch5A7逆轉纖連蛋白介導之對由藉由FcR信號傳導活化之樹突細胞的TNF-α產生之阻抑作用(圖12C)。
在含有NFκB-SEAP報導子之THP-1 Dual™ KI-mSTING細胞(InvivoGen)中進行類似研究。在室溫下將Nunc Maxisorp板用人類纖連蛋白及無效應抗KLH抗體(各自在5 μg/mL下)共包被2 h。將板用X-VIVO™ 15培養基(Lonza)封閉30分鐘，然後添加細胞及測試抗體。將X-VIVO™ 15培養基中之THP-1報導細胞(2 x 106 個細胞/mL)與對照抗體、抗ILT3抗體16C5或抗ILT3抗體ch5A7以1:1比率混合。將混合物孵育30分鐘，以100 μL/孔接種至板上，且將板孵育隔夜。如下量測報導子活性：將25 μL之培養物上清液與100 μL之Quanti-Blue SEAP基質(InvivoGen)組合，將樣品在37℃下孵育2小時，且在620 nm下讀取吸光度。
報導子因抗KLH抗體與THP-1細胞表面上之FcR的相互作用而活化，從而引起FcR信號傳導路徑之活化及分泌型胚胎鹼性磷酸酯(SEAP)之產生。當THP-1細胞表面上之ILT3與纖連蛋白相互作用時，FcR信號傳導受到阻抑且SEAP產生有所減少。抗ILT3抗體16C5及ch5A7阻斷ILT3/纖連蛋白相互作用及逆轉阻抑作用(圖13)。
Detroit 551細胞株由自正常胎兒組織建立之人類皮膚纖維母細胞組成。此等細胞具有結合於其表面上之受體的內源產生之纖連蛋白。Detroit 551細胞允許活體外分析，其中纖連蛋白天然地位於細胞表面上且不附著至分析板。將Detroit 551細胞以6 x 103 個細胞/孔塗鋪至聚D-離胺酸包被之384孔板(Greiner)上且孵育兩天。將單層用含有Mg2+ 及Ca2+ 之HBSS沖洗，每孔留下約10 μL。在存在抗ILT3抗體16C5、抗ILT3抗體ch5A7或對照抗KLH抗體之情況下將ILT3-ECD-Fc添加至孔中(最終濃度為1 μg/mL)。將抗體在含有ILT3-ECD-Fc之培養基中連續稀釋3倍(範圍為66 nM至0.27 nM)。將細胞在室溫下孵育1 h且接著用HBSS洗滌三次且用3.7%福爾馬林固定10 min。將單層用PBS沖洗且用含1% BSA之PBS封閉，然後用Hoechst染色劑(2.5 μM)及市售多株抗ILT3抗體(R&D Systems)染色。添加AlexaFluor 647結合之兔抗山羊Fc二級抗體(Jackson ImmunoResearch Labs)，使細胞成像，且使用CellInsight成像系統定量螢光水準。
如圖14中所示，抗ILT3抗體阻斷ILT3-ECD與表現纖連蛋白之細胞的結合。 實例11 抗ILT3抗體對樹突細胞產生趨化介素之影響
使用Miltenyi單核球分離套組根據製造商之說明書藉由負選擇自冷凍保存之外周血單核細胞分離原代人類單核球。為使巨噬細胞分化，將單核球以2 x 106 個細胞/mL塗鋪於含有100 ng/mL重組人類M-CSF (Peprotech)之X-VIVO™ 15培養基(Lonza)中。2-3天之後，將新鮮M-CSF添加至培養基中。再2-3天之後，將巨噬細胞洗滌且藉由刮擦來收穫。
如下製備樹突細胞條件培養基(用作趨化物)。為產生樹突細胞，將人類單核球以2 x 106 個細胞/mL塗鋪於含有50 ng/mL重組人類GM-CSF及50 ng/mL重組人類IL-4 (兩者均來自Peprotech)之X-VIVO™ 15培養基(Lonza)中且培養5-7天。收穫此等單核球源性樹突細胞且在存在抗KLH抗體或抗ILT3抗體(10 μg/mL)之情況下以1 x 106 個細胞/mL塗鋪至纖連蛋白包被之Maxisorp板上(10 μg/mL)且孵育2天。收穫條件培養基且用於本文所描述之遷移分析。
使用Incucyte® Zoom活細胞分析系統(Sartorius)進行巨噬細胞遷移分析。在37℃下將Incucyte視界清晰96孔趨化性板(Sartorius)之膜用50 μg/mL之Matrigel® (在含10% FBS之X-VIVO™ 15培養基中稀釋)預包被30分鐘，隨後在室溫下持續30分鐘。將巨噬細胞(5 x 103 個細胞/孔)添加至趨化性板之頂部腔室中，且用衍生自樹突細胞之條件培養基(如本文所描述)填充底部腔室。每小時捕獲一次相位對比圖像持續24小時且使用Incucyte分析軟體分析數據。
如圖15中所示，巨噬細胞不因應於來自纖連蛋白處理之樹突細胞的條件培養基發生遷移。相比之下，在存在抗ILT3抗體之情況下，高百分比之巨噬細胞因應於來自用纖連蛋白處理之樹突細胞之條件培養基發生遷移。
此等結果表明，由抗ILT3抗體引起之樹突細胞上纖連蛋白/ILT3相互作用之抑制或阻斷使樹突細胞產生趨化介素/趨化物有所增加。趨化介素產量增加使得巨噬細胞遷移增加。此表明藉由幫助增加巨噬細胞及其他免疫細胞向免疫反應位點之招募，抗ILT3抗體可有效增強免疫反應。 實例12 同種異體混合淋巴球反應(MLR)分析
如本文所描述產生致耐受性DC且以4 x 105 個細胞/mL再懸浮。簡單來說，為產生致耐受性DC (tolDC)，將單核球用GM-CSF及IL-4處理5天，且接著藉由用10 nM地塞米松(dexamethasone)及100 nM維生素D3 (1α,25-二羥基維生素D3) (兩者均來自Sigma-Aldrich)再處理2天使其耐受。在37℃下將LX-2細胞(野生型或纖連蛋白敲除)用25 μg/mL絲裂黴素C (Sigma-Aldrich)處理1小時，洗滌，且以1 x 105 個細胞/mL再懸浮。使用Miltenyi T細胞分離套組藉由負選擇自外周血單核球純化同種異體T細胞且以2 x 106 個細胞/mL再懸浮。將抗ILT3抗體16C5、抗ILT3抗體ch5A7或對照抗體(50 μL)添加至96孔圓底板之孔中。藉由添加50 μL之各細胞類型(T細胞、tolDC及LX-2細胞)達至T細胞:tolDC:LX-2細胞比為20:2:1來建立混合淋巴球反應(MLR)分析。將板孵育5天且接著收穫無細胞培養物上清液。使用Luminex分析(ProcartaPlex系統；ThermoFisher Scientific)測定細胞介素水準。將培養基用含有濃度為1 μCi/mL之氚化胸腺嘧啶(3 H-胸苷；Perkin-Elmer)的新鮮培養基替換。再孵育18 h之後，使用Tomtec細胞收集器將細胞收穫至過濾器上且基於MicroBeta2微板讀數器計算3 H-胸苷併入。
在此分析中，絲裂黴素C處理之LX-2細胞充當纖連蛋白之來源且不能增殖。在不存在LX-2細胞(亦即，沒有纖連蛋白)之情況下，T細胞由樹突細胞活化且增殖。在存在LX-2細胞之情況下，T細胞之活化受到阻抑且增殖減少或消除。
如圖16A及16B中所示，抗ILT3抗體16C5及ch5A7以劑量依賴性方式逆轉纖連蛋白介導之對同種異體MLR之阻抑作用。抗ILT3抗體之活性取決於纖連蛋白之存在，亦即，若纖連蛋白不存在，則在存在抗ILT3抗體之情況下對MLR活性之阻抑作用不發生逆轉(數據未顯示)。 實例13 抗ILT3抗體對樹突細胞之效應
如本文所描述產生樹突細胞。用纖連蛋白(5 μg/mL)包被96孔Maxisorp板(Nunc)，在室溫下孵育1小時，用PBS洗滌，且用X-VIVO™ 15培養基(Lonza)封閉30分鐘。在存在抗ILT3抗體ch5A7、抗ILT3抗體Hz5A7.v5、抗ILT3抗體45G10或對照抗體之情況下以2 x 105 個細胞/孔塗鋪樹突細胞且孵育隔夜。將抗體濃度自10 μg/mL 5倍稀釋至0.128 ng/mL。在48小時之後收穫培養基用於藉由Luminex分析(ProcartaPlex系統；ThermoFisher Scientific)測定MIP-1α。
如圖17A中所示，抗ILT3抗體ch5A7及Hz5A7.v5增加樹突細胞產生MIP-1α之水準。圖17B顯示在包括抗體45G10之情況下的類似結果。
如本文所描述產生樹突細胞。藉由用20 ng/mL重組人類IL-10 (Peprotech)處理使樹突細胞耐受。將細胞於含有IL-10及LPS (2 μg/mL；Sigma-Aldrich)且亦存在抗ILT3抗體16C5、抗ILT3抗體ch5A7、抗ILT3抗體45G10或對照抗KLH抗體之培養基中以2 x 105 個細胞/孔塗鋪至96孔平底板中且孵育48小時。將抗體濃度自5 μg/mL 5倍稀釋至1.6 ng/mL。收穫培養基用於藉由Luminex分析(ProcartaPlex系統；ThermoFisher Scientific)量測TNF-α。
如圖18A中所示，如藉由TNF-α之產生所評估，抗ILT3抗體16C5及ch5A7能夠恢復IL-10耐受之樹突細胞對LPS作出反應之能力。此等結果表明抗體ch5A7可能為比16C5更有效之抗體。圖18B顯示使用抗ILT3抗體ch5A7及45G10之類似研究之結果。其他研究表明，抗ILT3抗體ch5A7亦能夠恢復IL-10耐受之樹突細胞對另一刺激分子CD40L作出反應之能力(數據未顯示)。 實例14 存在抗ILT3抗體與抗PD-1抗體之組合的情況下之同種異體MLR
如本文所描述自外周血單核球產生單核球源性樹突細胞。收穫此等細胞且在存在抗KLH抗體或抗ILT3抗體之情況下用重組人類IL-10 (50 ng/mL)使其耐受48小時。使用Miltenyi T細胞分離套組藉由負選擇自外周血單核球純化同種異體T細胞。在MLR分析中，在存在抗KLH抗體、抗ILT3抗體ch5A7、抗PD-1抗體(派姆單抗)或抗ILT3抗體ch5A7與抗PD-1之組合的情況下(所有抗體各自在1 μg/mL下)，以T細胞與lDC比率為5:1將T細胞與耐受之樹突細胞混合。5天之後收穫培養基用於藉由Luminex分析(ProcartaPlex系統；ThermoFisher Scientific)量測IFN-γ。
如圖19中所示，如由T細胞中IFN-γ產量增加所證實，抗ILT3抗體ch5A7逆轉對IL-10耐受之樹突細胞中之反應的阻抑作用。當抗ILT3抗體與抗PD-1抗體組合使用時，此效應增加超過2倍。 實例15 人類化抗體之產生
基於本文所描述之抗體表徵數據以及其他研究，選擇抗體5A7、48A6、45G10用於人類化。藉由熟習此項技術者已知之方法將抗體人類化且在本文中將人類化抗體稱為Hz5A7、Hz48A6及Hz45G10。
抗體5A7在重鏈可變區CDR3，REWRM TLYAMDY (SEQ ID NO:29)中具有不希望之甲硫胺酸。在人類化過程期間，將重鏈可變區CDR3再工程改造以移除甲硫胺酸且插入酪胺酸，從而產生包含REWRY TLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3。此外，發現抗體5A7具有輕鏈可變區之CDR1 (RASESVDS YGNSFMH，SEQ ID NO:30)中的潛在異構化位點以及輕鏈可變區之CDR1 (RASESVDSYGNS FMH，SEQ ID NO:30)中的潛在去醯胺化位點。在人類化過程期間，將輕鏈可變區CDR1再工程改造以移除異構化位點及去醯胺化位點，從而產生包含RASESVES YGSS FMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1。包含所有此等修飾之此Hz5A7變異體稱為Hz5A7.v5。Hz5A7.v5之重鏈可變序列包含胺基酸序列SEQ ID NO:123且Hz5A7.v5之輕鏈可變序列包含胺基酸序列SEQ ID NO:124；CDR揭示於表8中。
抗體Hz5A7.v5之重鏈序列在恆定區中包含消除Fc效應功能之N297G突變。抗體Hz5A7.v5之重鏈序列闡述為SEQ ID NO:125及SEQ ID NO:126 (分別具有及不具有信號序列)，且抗體Hz5A7.v5之輕鏈序列闡述為SEQ ID NO:127及SEQ ID NO:128 (分別具有及不具有信號序列)。
產生48A6之若干人類化變異體。此等變異體包括B0/C2、B1/C2、C0/C2、C1/C2及C2/C2 Hz48A6抗體。抗體Hz48A6 B0/C2包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:156之重鏈可變區(B0)，及具有胺基酸序列SEQ ID NO:161之輕鏈可變區(C2)；抗體Hz48A6 B1/C2包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:157之重鏈可變區(B1)，及具有胺基酸序列SEQ ID NO:161之輕鏈可變區(C2)；抗體Hz48A6 C0/C2包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:158之重鏈可變區(C0)，及具有胺基酸序列SEQ ID NO:161之輕鏈可變區(C2)；抗體Hz48A6 C1/C2包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:159之重鏈可變區(C1)，及具有胺基酸序列SEQ ID NO:161之輕鏈可變區(C2)；且抗體Hz48A6 C2/C2包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:160之重鏈可變區(C2)，及具有胺基酸序列SEQ ID NO:161之輕鏈可變區(C2)。抗體Hz48A6之CDR與48A6之六個CDR相同且其顯示於表6中。
產生45G10之兩種人類化變異體。此等變異體包括A2/A4及B1/A4 Hz45G10抗體。抗體Hz45G10 A2/A4包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:162之重鏈可變區(A2)，及具有胺基酸序列SEQ ID NO:164之輕鏈可變區(A4)；且抗體Hz45G10 B1/A4包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:163之重鏈可變區(B1)，及具有胺基酸序列SEQ ID NO:164之輕鏈可變區(A4)。抗體Hz45G10之CDR與45G10之六個CDR相同且其顯示於表5中。 實例16 人類化抗體之表徵
如本文所描述使用Biacore系統測定Hz5A7.v5對人類ILT3及cyno ILT3之結合親和力，且與親本嵌合5A7 (ch5A7)抗體及沒有任何CDR修飾之人類化5A7 (Hz5A7.v1)之結合親和力相比較(參見表12)。 表12
抗體 人類ILT3 Cyno ILT3
   K締合 [1/Ms] K解離 [s-1 ] KD M K締合 [1/Ms] K解離 [s-1 ] KD M
ch5A7 2.9 x 106 1.7 x 10-3 5.7 x 10-10 7.5 x 106 1.8 x 10-2 2.4 x 10-9
Hz5A7.v1 2.5 x 106 1.2 x 10-3 4.8 x 10-10 1.2 x 107 7.7 x 10-3 6.5 x 10-10
Hz5A7.v5 2.8 x 106 8.1 x 10-4 2.8 x 10-10 1.1 x 107 7.1 x 10-3 7.0 x 10-10
與親本抗體ch5A7 5.7 x 10-10 M之結合親和力相比，在37℃下抗體Hz5A7.v5對人類ILT3具有2.8 x 10-10 M之結合親和力。此外，與親本抗體ch5A7 2.4 x 10-9 M之結合親和力相比，在37℃下抗體Hz5A7.v5對cyno ILT3具有7.0 x 10-10 M之結合親和力。
此等結果證實，對抗體5A7之人類化過程以及重鏈可變區之CDR3內甲硫胺酸之移除、輕鏈可變區之CDR1內的潛在異構化位點之移除及輕鏈可變區之CDR1內的潛在去醯胺化位點之移除對於對人類ILT3或cyno ILT3之結合親和力不具有顯著影響。
亦使用如本文所描述之Biacore系統測定各種Hz48A6及Hz45G10抗體對人類ILT3及cyno ILT3之結合親和力。測試包含重鏈可變區及輕鏈可變區與人類Fc結構域之各種組合之人類化抗體，且與親本嵌合抗體(包含小鼠48A6重鏈可變區及輕鏈可變區及人類Fc結構域之48A6嵌合體，或包含小鼠45G10重鏈可變區及輕鏈可變區及人類Fc結構域之45G10嵌合體)之結合親和力相比較。
包含選自B0 (SEQ ID NO:156)、B1 (SEQ ID NO:157)、C0 (SEQ ID NO:158)、C1 (SEQ ID NO:159)及C2 (SEQ ID NO:160)之重鏈可變區以及輕鏈可變區C2 (SEQ ID NO:161)之人類化48A6 (Hz48A6)抗體的結合親和力顯示於表13中。 表13
抗體 人類ILT3 Cyno ILT3
   K締合 [1/Ms] K解離 [s-1 ] KD M K締合 [1/Ms] K解離 [s-1 ] KD M
48A6嵌合體 1.31 x 107 8.68 x 10-4 0.66 x 10-10 1.99 x 106 11 x 10-2 54 x 10-9
B0-C2 2.80 x 106 7.84 x 10-4 2.8 x 10-10 2.13 x 105 9.7 x 10-2 455 x 10--9
B1-C2 3.05 x 106 7.64 x 10-4 2.5 x 10-10 1.74 x 105 9.2 x 10-2 531 x 10-9
C0-C2 3.45 x 106 5.41 x 10-4 1.6 x 10-10 3.27 x 105 5.8 x 10-2 177 x 10-9
C1-C2 2.72 x 106 7.05 x 10-4 2.6 x 10-10 1.14 x 105 8.8 x 10-2 770 x 10-9
C2-C2 3.06 x 106 7.52 x 10-4 2.4 x 10-10 2.17 x 105 8.2 x 10-2 377 x 10-9
包含選自A2 (SEQ ID NO: 162)及B1 (SEQ ID NO: 163)之重鏈可變區以及輕鏈可變區A4 (SEQ ID NO: 164)之人類化45G10 (Hz45G10)抗體的結合親和力顯示於表14中。 表14
抗體 人類ILT3 Cyno ILT3
   K締合 [1/Ms] K解離 [s-1 ] KD M K締合 [1/Ms] K解離 [s-1 ] KD M
45G10嵌合體 2.3 x 106 3.4 x 10-4 1.4 x 10-10 4.1 x 105 1.5 x 10-2 37 x 10-9
A2-A4 1.4 x 106 2.8 x 10-4 2 x 10-10 1.9 x 105 2 x 10-2 113 x 10--9
B1-A4 1.3 x 106 2.6 x 10-4 2 x 10-10 1.2 x 106 9 x 10-2 76 x 10-9
實例17 抗ILT3抗體對巨噬細胞之效應
自原代人類單核球產生巨噬細胞且如所描述進行極化。在室溫下將Maxisorp板(Nunc)用抗KLH及人類纖連蛋白(FC0101，Millipore) (各自在5 μg/mL下)包被1小時，接著用PBS洗滌且用X-Vivo 15培養基封閉30分鐘。為分析抗ILT3抗體對巨噬細胞之效應，將細胞洗滌，再懸浮於X-Vivo 15培養基中，且與指定抗體在室溫下一起孵育20分鐘，接著塗鋪於經包被之孔(7 x 104 個細胞/孔，於100 μL體積中)上且孵育隔夜。24小時之後收穫培養基用於藉由Luminex分析(ProcartaPlex系統；ThermoFisher Scientific)評估細胞介素分泌。
如圖20A及20B中所示，未極化(M0)巨噬細胞經由Fc受體(FcR)經抗KLH刺激且分泌TNF-α。在存在纖連蛋白之情況下，巨噬細胞分泌TNF-α受到抑制。巨噬細胞中纖連蛋白誘導之TNF-α產生之抑制因抗ILT3抗體(例如Hz5A7.v5)而阻斷，該抗ILT3抗體阻斷ILT3與纖連蛋白之間的相互作用且恢復TNF-α分泌。因此，本文所描述之抗ILT3抗體阻斷巨噬細胞中纖連蛋白介導之對FcR信號傳導之抑制作用，且在存在纖連蛋白之情況下使FcR驅動之由巨噬細胞產生細胞介素有所增加。
如圖21A及21B中所示，IL-10極化(M2c)巨噬細胞經由Fc受體(FcR)經抗KLH刺激且幾乎不分泌IL-6。在存在纖連蛋白之情況下，巨噬細胞分泌IL-6有所增加。巨噬細胞中纖連蛋白誘導之IL-6產生的增加因抗ILT3抗體(例如Hz5A7.v5)而阻斷，該抗ILT3抗體阻斷ILT3與纖連蛋白之間的相互作用，且抑制IL-6產生。因此，本文所描述之抗ILT3抗體阻斷巨噬細胞中纖連蛋白介導之對FcR信號傳導之抑制作用。 實例18 抗ILT3抗體對表現食蟹猴ILT3之細胞的效應
產生報導細胞株以表現食蟹猴ILT3。使用THP-1 Dual KI-mSTING報導細胞(Invivogen)，人類ILT3經由基於CRISPR/Cas9之基因編輯自其中缺失。接著將細胞用在pBABEpuro載體中含有食蟹猴ILT3之逆轉錄病毒穩定感染。在室溫下將Nunc Maxisorp板用人類纖連蛋白及抗KLH抗體共包被2小時，接著在室溫下用X-Vivo 15培養基封閉30分鐘。將表現食蟹猴ILT3之報導細胞再懸浮於X-Vivo 15培養基中(1.5 x 106 個細胞/mL)且與含有對照抗體或抗ILT3抗體ch5A7之連續稀釋液的培養基以1:1比率混合。將混合物孵育30分鐘，然後以每孔100 μL接種至板上。接著將混合物在板上孵育隔夜，然後自細胞量測NF-kB報導子活性。為量測報導子活性，將25 μL之培養物上清液與100 μL之Quanti-Blue SEAP基質組合且在37℃下孵育2小時。在620 nm下讀取吸光度。
如圖22中所示，抗ILT3抗體(例如Hz5A7.v5)藉由阻斷cyno ILT3與纖連蛋白之間的相互作用逆轉THP-1中纖連蛋白介導之對NF-kB報導子活性之抑制作用。 實例19 抗ILT3抗體對原代食蟹猴樹突細胞之效應
使用非人類靈長類動物CD14微珠粒(Miltenyi Biotec)藉由正選擇自冷凍保存之食蟹猴PBMC分離單核球，且如針對人類單核球源性DC所描述，藉由用人類GM-CSF及IL-4處理5天分化成單核球源性樹突細胞(DC)。在室溫下將Maxisorp板(Nunc)用PBS或纖連蛋白(5 μg/mL)包被1小時，接著用PBS洗滌且在室溫下用X-Vivo 15培養基(Lonza)封閉30分鐘。在存在2 μg/mL抗KLH (對照抗體)或抗ILT3抗體ch5A7之情況下以2 x 105 個細胞/孔塗鋪樹突細胞且培養隔夜。24小時之後收穫細胞培養基，且使用ProcartaPlex系統(ThermoFisher Scientific)藉由Luminex分析測定MIP-1α濃度。如圖23中所示，纖連蛋白使食蟹猴單核球源性DC中之MIP-1α分泌減少，且此減少因阻斷cyno ILT3與纖連蛋白之間的相互作用之ch5A7而得到挽救。
在一單獨實驗中，如本文所描述自原代食蟹猴單核球產生DC。在室溫下將Maxisorp板(Nunc)用抗KLH及人類纖連蛋白(FC0101，Millipore) (各自在5 μg/mL下)包被1小時，接著用PBS洗滌且用X-Vivo 15培養基封閉30分鐘。將DC再懸浮於X-Vivo 15培養基中，在室溫下與抗KLH或抗ILT3 ch5A7一起孵育20分鐘，且接著塗鋪於經包被之孔(7 x 104 個細胞/孔，於100 μL體積中)上以便培養隔夜。培養24小時之後，收穫培養物上清液用於使用Luminex分析(ProcartaPlex系統；ThermoFisher Scientific)評估DC之IL-8分泌。如圖24中所示，纖連蛋白使食蟹猴單核球源性DC之IL-8分泌減少，且此減少因阻斷cyno ILT3與纖連蛋白之間的相互作用之ch5A7而得到挽救。 實例20 人類化小鼠模型中抗ILT3抗體之抗腫瘤活性
所有動物程序根據機構動物護理及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee，IACUC)批准之動物使用方案(NGM-27-2017)進行。使NCI-H2009肺腺癌細胞(ATCC)在含有10% FBS及1%青黴素/鏈黴素之RPMI 1640中生長。為NSG小鼠在左側皮下注射3 x 106 個NCI-H2009腫瘤細胞。在植入腫瘤細胞之後七至10天時，經由尾部靜脈為各小鼠注射4 x 106 個原代人類PBMC。使用卡尺每週兩次量測腫瘤生長。在腫瘤達至約50 mm3 之體積後，藉由腹膜內注射(總計3個劑量)每週兩次用10 mg/kg對照抗KLH抗體或抗ILT3抗體48A6處理小鼠。監測腫瘤且每週量測兩次。在腫瘤達至約2000 mm3 之體積後，將小鼠處死。
如圖25中所示，在此小鼠模型中抗ILT3抗體48A6顯著抑制腫瘤生長。
雖然已出於清楚理解之目的通過說明及實例較為詳細地描述了前述本發明，但該等描述及實例不應被視為限制本發明之範疇。本文所描述之本發明之實施例旨在僅為例示性的，且熟習此項技術者將認可本文所描述之特定程序的許多等效形式。所有此等等效形式均視為在本發明範疇內且由該等實施例涵蓋。
本文所引用之所有公開案、專利、專利申請案、因特網站點及登錄號/數據庫序列(包括聚核苷酸與多肽序列兩者)出於所有目的以全文引用之方式併入本文中，其所達到之程度如同各個別公開案、專利、專利申請案、因特網站點或登錄號/數據庫序列特定地且個別地被指示如此以引用之方式併入一般。
本申請案中揭示以下序列。CDR序列列於表1-4中。 具有加下劃線之預測之信號序列的人類ILT3胺基酸序列(SEQ ID NO:1)MIPTFTALLCLGLSLGPRTHM QAGPLPKPTLWAEPGSVISWGNSVTIWCQGTLEAREYRLDKEESPAPWDRQNPLEPKNKARFSIPSMTEDYAGRYRCYYRSPVGWSQPSDPLELVMTGAYSKPTLSALPSPLVTSGKSVTLLCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGAQQHQAEFPMSPVTSVHGGTYRCFSSHGFSHYLLSHPSDPLELIVSGSLEDPRPSPTRSVSTAAGPEDQPLMPTGSVPHSGLRRHWEVLIGVLVVSILLLSLLLFLLLQHWRQGKHRTLAQRQADFQRPPGAAEPEPKDGGLQRRSSPAADVQGENFCAAVKNTQPEDGVEMDTRQSPHDEDPQAVTYAKVKHSRPRREMASPPSPLSGEFLDTKDRQAEEDRQMDTEAAASEAPQDVTYAQLHSFTLRQKATEPPPSQEGASPAEPSVYATLAIH 不具有預測之信號序列的人類ILT3胺基酸序列 (SEQ ID NO:2) QAGPLPKPTLWAEPGSVISWGNSVTIWCQGTLEAREYRLDKEESPAPWDRQNPLEPKNKARFSIPSMTEDYAGRYRCYYRSPVGWSQPSDPLELVMTGAYSKPTLSALPSPLVTSGKSVTLLCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGAQQHQAEFPMSPVTSVHGGTYRCFSSHGFSHYLLSHPSDPLELIVSGSLEDPRPSPTRSVSTAAGPEDQPLMPTGSVPHSGLRRHWEVLIGVLVVSILLLSLLLFLLLQHWRQGKHRTLAQRQADFQRPPGAAEPEPKDGGLQRRSSPAADVQGENFCAAVKNTQPEDGVEMDTRQSPHDEDPQAVTYAKVKHSRPRREMASPPSPLSGEFLDTKDRQAEEDRQMDTEAAASEAPQDVTYAQLHSFTLRQKATEPPPSQEGASPAEPSVYATLAIH 人類ILT3細胞外結構域(aa 22-259) (SEQ ID NO:3) QAGPLPKPTLWAEPGSVISWGNSVTIWCQGTLEAREYRLDKEESPAPWDRQNPLEPKNKARFSIPSMTEDYAGRYRCYYRSPVGWSQPSDPLELVMTGAYSKPTLSALPSPLVTSGKSVTLLCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGAQQHQAEFPMSPVTSVHGGTYRCFSSHGFSHYLLSHPSDPLELIVSGSLEDPRPSPTRSVSTAAGPEDQPLMPTGSVPHSGLRRHWE 不具有N端結構域之人類ILT3 Ig樣C2型結構域1胺基酸序列(aa 27-118) (SEQ ID NO:4) PKPTLWAEPGSVISWGNSVTIWCQGTLEAREYRLDKEESPAPWDRQNPLEPKNKARFSIPSMTEDYAGRYRCYYRSPVGWSQPSDPLELVMT 人類ILT3 Ig樣C2型結構域2胺基酸序列(aa 124-218) (SEQ ID NO:5) PTLSALPSPLVTSGKSVTLLCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGAQQHQAEFPMSPVTSVHGGTYRCFSSHGFSHYLLSHPSDPLELIVS 具有加下劃線之預測之信號序列的cyno ILT3胺基酸序列(SEQ ID NO:6)mtppltvlfclglslgprtcv qagplpkptvwaepgsviswgspvtiwcqgtldaqeyhldkegspapwdtqnpleprnkakfsipsmtqhyagryrcyyhshpdwsedsdpldlvmtgayskpilsvlpsplvtsgesvtllcqsqspmdtfllfkegaahplprlrsqhgaqlhwaefpmgpvtsvhggtyrcissrsfshyllsrpsdpveltvlgslespspsptrsisaaagpedqslmptgsdpqsglrrhwevligvlvvsilllslvfflllqhwrqgkhrtsaqrqadfqrppgaaepepkdgglqrrsrpaadvqgenpnaamkdtqpedgveldsrqrphdedpqavtyarvkhsgprremasppsplseefldtkdtqaeedrqmdtqaatseapqdvtyaqlqsltlrreateppppqkrepsaepsvyatlaiH 不具有預測之信號序列的cyno ILT3胺基酸序列(SEQ ID NO:7) qagplpkptvwaepgsviswgspvtiwcqgtldaqeyhldkegspapwdtqnpleprnkakfsipsmtqhyagryrcyyhshpdwsedsdpldlvmtgayskpilsvlpsplvtsgesvtllcqsqspmdtfllfkegaahplprlrsqhgaqlhwaefpmgpvtsvhggtyrcissrsfshyllsrpsdpveltvlgslespspsptrsisaaagpedqslmptgsdpqsglrrhwevligvlvvsilllslvfflllqhwrqgkhrtsaqrqadfqrppgaaepepkdgglqrrsrpaadvqgenpnaamkdtqpedgveldsrqrphdedpqavtyarvkhsgprremasppsplseefldtkdtqaeedrqmdtqaatseapqdvtyaqlqsltlrreateppppqkrepsaepsvyatlaiH cyno ILT3細胞外結構域(aa 22-259) (SEQ ID NO:8) qagplpkptvwaepgsviswgspvtiwcqgtldaqeyhldkegspapwdtqnpleprnkakfsipsmtqhyagryrcyyhshpdwsedsdpldlvmtgayskpilsvlpsplvtsgesvtllcqsqspmdtfllfkegaahplprlrsqhgaqlhwaefpmgpvtsvhggtyrcissrsfshyllsrpsdpveltvlgslespspsptrsisaaagpedqslmptgsdpqsglrrhwe 不具有N端結構域之cyno ILT3 Ig樣C2型結構域1胺基酸序列(aa 27-118) (SEQ ID NO:9) pkptvwaepgsviswgspvtiwcqgtldaqeyhldkegspapwdtqnpleprnkakfsipsmtqhyagryrcyyhshpdwsedsdpldlvmt 不具有N端結構域之cyno ILT3 Ig樣C2型結構域2胺基酸序列(aa 124-218) (SEQ ID NO:10) pilsvlpsplvtsgesvtllcqsqspmdtfllfkegaahplprlrsqhgaqlhwaefpmgpvtsvhggtyrcissrsfshyllsrpsdpveltvl 3A3重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:109) QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQPPGKGLEWLGVIWPGGTINYNSALMSRLSISKDNSKSQVFLKLNSLQTDDTAMYYCASDKYDGGWFAYWGQGTLVTVSA 3A3輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:110) DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSITCKASQNVRTAVAWYQQKPGQSPEALIYLASNRHTGVPDRFTGSGSGTDFSLSISNVQSEDLADYFCLQHLNYPLTFGSGTKLEIK 5A7重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:111) EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGSYTNYPDSVKGRLTISRDNAKKNLYLEMSSLRSEDTALYYCARREWRMTLYAMDYWGQGTSVTVSS 5A7輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:112) NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQAPKLLIYLTSNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPFTFGSGTKLEIK 12A12重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:113) EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGYIYPNNGGTGYNQKFNSKATLTVDKSSSTAYMELHSLTSEDSAVYYCASSPYYDYVGSYAMDYWGQGTSVTVSS 12A12輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:114) QIVLTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPRTFGGGTKLEIK 16C5重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:115) EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGYIYPSNGGTGYNQKFKSKATLTVDKSSNTAYMELHSLTSEDSAVYYCARVPYYDYLYYYAMDYWGQGTSVTVSS 16C5輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:116) QIVLSQSPAILSASPGEKVTMACRASSSVSFMHWYQQKPGSSPQPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSTNPYMYTFGGGTKLEIK 45G10重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:117) EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYIFSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARADGRGAMDYWGQGTSVTVSS 45G10輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:118) DVQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKFLNWYQQKPDGTVTLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLDQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK 48A6重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:119) EVQLVESGGDLMKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSGGTYTFYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARRGWLLHYYAMDYWGQGTSVTVSS 48A6輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:120) NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRPSESVDSFGNSFMHWFQQKPGQPPKLLIYLSSKLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQHNEDPFTFGSGTKLEIK 53F10重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:121) EVQVVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYISTGIITVYYADTVKGRFTMSRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAIYYCARADGRGAMDYWGQGTSVIVSS 53F10輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:122) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNFLNWYQQKPDGTVTLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK Hz5A7.v5重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:123) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTNYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARREWRYTLYAMDYWGQGTTVTVSS Hz5A7.v5輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:124) DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVESYGSSFMHWYQQKPGKAPKLLIYLTSNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEDPFTFGQGTKLEIK 具有加下劃線之信號序列的Hz5A7.v5重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:125)mdmrvpaqllgllllwlrgarc EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTNYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARREWRYTLYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 不具有信號序列之Hz5A7.v5重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:126) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTNYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARREWRYTLYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有加下劃線之信號序列的Hz5A7.v5輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:127)mdmrvpaqllgllllwlrgarc DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVESYGSSFMHWYQQKPGKAPKLLIYLTSNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEDPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 不具有信號序列之Hz5A7.v5輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:128) DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVESYGSSFMHWYQQKPGKAPKLLIYLTSNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEDPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 人類IgG1恆定區(SEQ ID NO:129) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 人類IgG1恆定區E233A/L235A (SEQ ID NO:130) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPALAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 人類IgG1恆定區L234A/L235A (SEQ ID NO:131) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 人類IgG1恆定區L234A/L235A/P329G (SEQ ID NO:132) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 人類IgG1恆定區N297G (SEQ ID NO:133) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 人類IgG1恆定區N297G/H310A (SEQ ID NO:134) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLAQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 人類κ輕鏈恆定區(SEQ ID NO:135) RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 人類λ輕鏈恆定區(SEQ ID NO:136) GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 不具有N端結構域之人類ILT3 Ig樣C2型D1及D2胺基酸序列(aa 27-218) (SEQ ID NO:137) QAGPLPKPTLWAEPGSVISWGNSVTIWCQGTLEAREYRLDKEESPAPWDRQNPLEPKNKARFSIPSMTEDYAGRYRCYYRSPVGWSQPSDPLELVMTGAYSKPTLSALPSPLVTSGKSVTLLCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGAQQHQAEFPMSPVTSVHGGTYRCFSSHGFSHYLLSHPSDPLELIVS 具有加下劃線之預測之信號序列的人類纖連蛋白(SEQ ID NO:138)MLRGPGPGLLLLAVQCLGTAVPSTGASKSKR 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具有預測之信號序列的人類纖連蛋白(SEQ ID NO:139) QAQQMVQPQSPVAVSQSKPGCYDNGKHYQINQQWERTYLGNALVCTCYGGSRGFNCESKPEAEETCFDKYTGNTYRVGDTYERPKDSMIWDCTCIGAGRGRISCTIANRCHEGGQSYKIGDTWRRPHETGGYMLECVCLGNGKGEWTCKPIAEKCFDHAAGTSYVVGETWEKPYQGWMMVDCTCLGEGSGRITCTSRNRCNDQDTRTSYRIGDTWSKKDNRGNLLQCICTGNGRGEWKCERHTSVQTTSSGSGPFTDVRAAVYQPQPHPQPPPYGHCVTDSGVVYSVGMQWLKTQGNKQMLCTCLGNGVSCQETAVTQTYGGNSNGEPCVLPFTYNGRTFYSCTTEGRQDGHLWCSTTSNYEQDQKYSFCTDHTVLVQTRGGNSNGALCHFPFLYNNHNYTDCTSEGRRDNMKWCGTTQNYDADQKFGFCPMAAHEEICTTNEGVMYRIGDQWDKQHDMGHMMRCTCVGNGRGEWTCIAYSQLRDQCIVDDITYNVNDTFHKRHEEGHMLNCTCFGQGRGRWKCDPVDQCQDSETGTFYQIGDSWEKYVHGVRYQCYCYGRGIGEWHCQPLQTYPSSSGPVEVFITETPSQPNSHPIQWNAPQPSHISKYILRWRPKNSVGRWKEATIPGHLNSYTIKGLKPGVVYEGQLISIQQYGHQEVTRFDFTTTSTSTPVTSNTVTGETTPFSPLVATSESVTEITASSFVVSWVSASDTVSGFRVEYELSEEGDEPQYLDLPSTATSVNIPDLLPGRKYIVNVYQISEDGEQSLILSTSQTTAPDAPPDTTVDQVDDTSIVVRWSRPQAPITGYRIVYSPSVEGSSTELNLPETANSVTLSDLQPGVQYNITIYAVEENQESTPVVIQQETTGTPRSDTVPSPRDLQFVEVTDVKVTIMWTPPESAVTGYRVDVIPVNLPGEHGQRLPISRNTFAEVTGLSPGVTYYFKVFAVSHGRESKPLTAQQTTKLDAPTNLQFVNETDSTVLVRWTPPRAQITGYRLTVGLTRRGQPRQYNVGPSVSKYPLRNLQPASEYTVSLVAIKGNQESPKATGVFTTLQPGSSIPPYNTEVTETTIVITWTPAPRIGFKLGVRPSQGGEAPREVTSDSGSIVVSGLTPGVEYVYTIQVLRDGQERDAPIVNKVVTPLSPPTNLHLEANPDTGVLTVSWERSTTPDITGYRITTTPTNGQQGNSLEEVVHADQSSCTFDNLSPGLEYNVSVYTVKDDKESVPISDTIIPEVPQLTDLSFVDITDSSIGLRWTPLNSSTIIGYRITVVAAGEGIPIFEDFVDSSVGYYTVTGLEPGIDYDISVITLINGGESAPTTLTQQTAVPPPTDLRFTNIGPDTMRVTWAPPPSIDLTNFLVRYSPVKNEEDVAELSISPSDNAVVLTNLLPGTEYVVSVSSVYEQHESTPLRGRQKTGLDSPTGIDFSDITANSFTVHWIAPRATITGYRIRHHPEHFSGRPREDRVPHSRNSITLTNLTPGTEYVVSIVALNGREESPLLIGQQSTVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITVYAVTGRGDSPASSKPISINYRTEIDKPSQMQVTDVQDNSISVKWLPSSSPVTGYRVTTTPKNGPGPTKTKTAGPDQTEMTIEGLQPTVEYVVSVYAQNPSGESQPLVQTAVTNIDRPKGLAFTDVDVDSIKIAWESPQGQVSRYRVTYSSPEDGIHELFPAPDGEEDTAELQGLRPGSEYTVSVVALHDDMESQPLIGTQSTAIPAPTDLKFTQVTPTSLSAQWTPPNVQLTGYRVRVTPKEKTGPMKEINLAPDSSSVVVSGLMVATKYEVSVYALKDTLTSRPAQGVVTTLENVSPPRRARVTDATETTITISWRTKTETITGFQVDAVPANGQTPIQRTIKPDVRSYTITGLQPGTDYKIYLYTLNDNARSSPVVIDASTAIDAPSNLRFLATTPNSLLVSWQPPRARITGYIIKYEKPGSPPREVVPRPRPGVTEATITGLEPGTEYTIYVIALKNNQKSEPLIGRKKTDELPQLVTLPHPNLHGPEILDVPSTVQKTPFVTHPGYDTGNGIQLPGTSGQQPSVGQQMIFEEHGFRRTTPPTTATPIRHRPRPYPPNVGEEIQIGHIPREDVDYHLYPHGPGLNPNASTGQEALSQTTISWAPFQDTSEYIISCHPVGTDEEPLQFRVPGTSTSATLTGLTRGATYNVIVEALKDQQRHKVREEVVTVGNSVNEGLNQPTDDSCFDPYTVSHYAVGDEWERMSESGFKLLCQCLGFGSGHFRCDSSRWCHDNGVNYKIGEKWDRQGENGQMMSCTCLGNGKGEFKCDPHEATCYDDGKTYHVGEQWQKEYLGAICSCTCFGGQRGWRCDNCRRPGGEPSPEGTTGQSYNQYSQRYHQRTNTNVNCPIECFMPLDVQADREDSRE 含有肝素結合及膠原蛋白結合結構域之人類纖連蛋白片段(約70 kDa片段) (SEQ ID NO:140) QAQQMVQPQSPVAVSQSKPGCYDNGKHYQINQQWERTYLGNALVCTCYGGSRGFNCESKPEAEETCFDKYTGNTYRVGDTYERPKDSMIWDCTCIGAGRGRISCTIANRCHEGGQSYKIGDTWRRPHETGGYMLECVCLGNGKGEWTCKPIAEKCFDHAAGTSYVVGETWEKPYQGWMMVDCTCLGEGSGRITCTSRNRCNDQDTRTSYRIGDTWSKKDNRGNLLQCICTGNGRGEWKCERHTSVQTTSSGSGPFTDVRAAVYQPQPHPQPPPYGHCVTDSGVVYSVGMQWLKTQGNKQMLCTCLGNGVSCQETAVTQTYGGNSNGEPCVLPFTYNGRTFYSCTTEGRQDGHLWCSTTSNYEQDQKYSFCTDHTVLVQTRGGNSNGALCHFPFLYNNHNYTDCTSEGRRDNMKWCGTTQNYDADQKFGFCPMAAHEEICTTNEGVMYRIGDQWDKQHDMGHMMRCTCVGNGRGEWTCIAYSQLRDQCIVDDITYNVNDTFHKRHEEGHMLNCTCFGQGRGRWKCDPVDQCQDSETGTFYQIGDSWEKYVHGVRYQCYCYGRGIGEWHCQPLQTYPSS 含有肝素結合結構域之人類纖連蛋白片段(約30 kDa片段) (SEQ ID NO:141) QAQQMVQPQSPVAVSQSKPGCYDNGKHYQINQQWERTYLGNALVCTCYGGSRGFNCESKPEAEETCFDKYTGNTYRVGDTYERPKDSMIWDCTCIGAGRGRISCTIANRCHEGGQSYKIGDTWRRPHETGGYMLECVCLGNGKGEWTCKPIAEKCFDHAAGTSYVVGETWEKPYQGWMMVDCTCLGEGSGRITCTSRNRCNDQDTRTSYRIGDTWSKKDNRGNLLQCICTGNGRGEWKCER 含有膠原蛋白結合結構域之人類纖連蛋白片段(約45 kDa片段) (SEQ ID NO:142) 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QRHSPQEAPHVQYERLGSDVTLPCGTANWDAAVTWRVNGTDLAPDLLNGSQLVLHGLELGHSGLYACFHRDSWHLRHQVLLHVGLPPREPVLSCRSNTYPKGFYCSWHLPTPTYIPNTFNVTVLHGSKIMVCEKDPALKNRCHIRYMHLFSTIKYKVSISVSNALGHNATAITFDEFTIVKPDPPENVVARPVPSNPRRLEVTWQTPSTWPDPESFPLKFFLRYRPLILDQWQHVELSDGTAHTITDAYAGKEYIIQVAAKDNEIGTWSDWSVAAHATPWTEEPRHLTTEAQAAETTTSTTSSLAPPPTTKICDPGELGS 含有Ig樣C2型結構域之人類CNTFR-α片段(SEQ ID NO:151) QRHSPQEAPHVQYERLGSDVTLPCGTANWDAAVTWRVNGTDLAPDLLNGSQLVLHGLELGHSGLYACFHRDSWHLRHQVLLH 含有FN III型結構域1之人類CNTFR-α片段(SEQ ID NO:152) PPREPVLSCRSNTYPKGFYCSWHLPTPTYIPNTFNVTVLHGSKIMVCEKDPALKNRCHIRYMHLFSTIKYKVSISVSNALGHNATAITFDEFTIVKPDPPENVVARPVPSNPRRLEVT 含有FN III型結構域2之人類CNTFR-α片段(SEQ ID NO:153) WQTPSTWPDPESFPLKFFLRYRPLILDQWQHVELSDGTAHTITDAYAGKEYIIQVAAKDNEIGTWSDWSVAAHATPWTEEP 六聚組胺酸肽標籤(SEQ ID NO:154) HHHHHH 具有莖胺基酸序列之人類ILT3結構域2 (aa 124-259) (SEQ ID NO:155) PTLSALPSPLVTSGKSVTLLCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGAQQHQAEFPMSPVTSVHGGTYRCFSSHGFSHYLLSHPSDPLELIVSGSLEDPRPSPTRSVSTAAGPEDQPLMPTGSVPHSGLRRHWE Hz48A6重鏈可變區胺基酸序列 HC-B0 (SEQ ID NO:156) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGTYTFYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGWLLHYYAMDYWGQGTSVTVSS HC-B1 (SEQ ID NO:157) EVQLVESGGGLMQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGTYTFYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGWLLHYYAMDYWGQGTSVTVSS HC-C0 (SEQ ID NO:158) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVGTISSGGTYTFYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGWLLHYYAMDYWGQGTLVTVSS HC-C1 (SEQ ID NO:159) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGTYTFYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGWLLHYYAMDYWGQGTLVTVSSHC-C2 (SEQ ID NO:160) EVQLVESGGGLMQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGTYTFYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGWLLHYYAMDYWGQGTLVTVSS Hz48A6輕鏈可變區胺基酸序列 LC-C2 (SEQ ID NO: 161) DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRPSESVDSFGNSFMHWFQQKPGKAPKLLIYLSSKLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEDPFTFGQGTKVEIK Hz45G10重鏈可變區胺基酸序列 HC-A2 (SEQ ID NO: 162) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYIFSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARADGRGAMDYWGQGTTVTVSS HC-B1 (SEQ ID NO: 163) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYIFSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARADGRGAMDYWGQGTLVTVSS Hz45G10輕鏈可變區胺基酸序列 LC-A4 (SEQ ID NO: 164) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISKFLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK
圖1A-1F. 抗ILT3抗體及表現LILRB之細胞情況下的FACS篩選之代表性結果。 圖2A-2E. 抗ILT3抗體及表現LILRA之細胞情況下的FACS篩選之代表性結果。 圖3. 報導細胞分析- ILT3及LX-2細胞相互作用。將LX-2細胞之批量培養物在基礎培養基中或在活化培養基中培養三天。收穫且洗滌經處理及未經處理之LX-2細胞。將2 x 105 個LX-2細胞與4 x 105 個報導細胞共培養，該等報導細胞含有(i)不含受體之報導細胞；(ii)具有B7-H4細胞外結構域之報導細胞；或(iii)具有ILT3細胞外結構域之報導細胞。將細胞在37℃下在含有10% FBS之RPMI 1640中孵育隔夜。將報導細胞用CellTracker Deep Red預染色以在分析後將其與LX-2細胞區別開。第二天，藉由FACS針對GFP表現對報導細胞進行分析。 圖4. 使用免疫沈澱及凝膠電泳鑑定ILT3配位體。使用蛋白質G dyna珠粒根據製造商之說明書進行免疫沈澱。在4℃下使10 μg之ILT3ECD-Fc或對照人類Fc結合於50 μl之磁性Dyna珠粒持續30分鐘。移除上清液且添加來自未經處理或活化之LX-2細胞的蛋白質溶解產物。在各處理條件下，將含有約615 μg蛋白質之溶解產物添加至Dyna珠粒複合物中且在4℃下在溫和轉動下孵育隔夜。移除蛋白質溶解產物且將Dyna珠粒用200 μl之溶解緩衝液洗滌三次，每次洗滌持續5分鐘。將50 μl之包含比率為15:4:1之蛋白質加載緩衝液、還原劑及溶解緩衝液的溶離緩衝液添加至Dyna珠粒中。將蛋白質在95℃下溶離5分鐘且在聚丙烯醯胺電泳凝膠上運行樣品(10 μl之各蛋白質溶離物)。為鑑定相關條帶，使用PlusOne銀染色套組(GE Healthcare)根據製造商之說明書進行銀染色分析。使用Gel Doc™ EZ系統(Bio-Rad)使凝膠成像。 圖5. 報導細胞分析- ILT3及纖連蛋白相互作用。在室溫下用含5 μg/mL之人類Fc蛋白(R&D Systems)、血漿源性纖連蛋白(Millipore)或重組纖連蛋白(R&D Systems)之PBS包被96孔Maxisorp (Nunc)板持續2 h。用PBS將板洗滌兩次且接著用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。將表現B7-H4細胞外結構域、LAIR1細胞外結構域或ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(如本文實例5中所描述) (1 x 105 個細胞/孔)添加至經包被之孔中，且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。 圖6. 抗體對ILT3及纖連蛋白相互作用之抑制。在室溫下用含5 μg/mL血漿源性纖連蛋白之PBS包被96孔Maxisorp板持續1 h。在包被之後，以5或20 μg/mL之最終濃度將同型對照抗體、抗ILT3抗體16C5、抗纖連蛋白抗體F14 (兔單株抗體)或抗纖連蛋白抗體PA5 (兔多株抗體)添加至孔中。將表現ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(1 x 105 個細胞/孔)添加至孔中，且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。 圖7. 抗體對ILT3及纖連蛋白相互作用之抑制。在室溫下用5 μg/mL血漿源性纖連蛋白包被96孔Maxisorp板持續1小時。在包被之後，以在66 nM至.0002 nM範圍內之6倍稀釋液將同型對照抗體、抗ILT3抗體16C5或抗ILT3抗體ch5A7添加至孔中。接著，將表現ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(1 x 105 個細胞/孔)添加至孔中，且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。 圖8. 纖連蛋白結構之代表圖。 圖9. 用於鑑定纖連蛋白上之ILT3結合位點的報導細胞分析。用全長纖連蛋白或纖連蛋白片段包被96孔Maxisorp板。將板在室溫下孵育2小時。用PBS將板洗滌兩次且接著用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。將表現ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(1 x 105 個細胞/孔)添加至孔中，且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。 圖10. 用於鑑定纖連蛋白上之ILT3結合位點的報導細胞分析。製備纖連蛋白片段以及全長纖連蛋白且包被至96孔Maxisorp板上。將板在室溫下孵育2小時。用PBS將板洗滌兩次且接著用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。將表現ILT3細胞外結構域之NFAT-GFP報導細胞(1 x 105 個細胞/孔)添加至孔中，且將板在37℃下孵育隔夜。藉由FACS針對GFP表現對細胞進行分析且與未活化之報導細胞相比較。 圖11. THP-1細胞中FcR誘導之活化。將96孔Maxisorp板用5 μg/mL之纖連蛋白及0、1、5及10 μg/mL之抗KLH抗體共包被。將板在室溫下孵育2小時，用PBS洗滌兩次，且用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。將THP-1或THP-1 ILT3-KO細胞(2 x 105 個細胞/孔)添加至孔中，且將板在37℃下孵育隔夜。收集無細胞培養物上清液且藉由Luminex分析量測IL-8。針對無FcR刺激情況下之THP-1細胞對IL-8進行正規化。 圖12A-12C. THP-1細胞中FcR誘導之活化。12A. 將96孔Maxisorp板用纖連蛋白及抗KLH抗體共包被。將板在室溫下孵育2小時，洗滌，且用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。在存在抗ILT3抗體16C5 (5 μg/mL)或抗KLH抗體之情況下將THP-1或THP-1 ILT3-KO細胞(2 x 105 個細胞/孔)添加至孔中。將板在37℃下孵育隔夜，收集無細胞培養物上清液，且藉由Luminex分析量測IL-8。12B. 自冷凍保存之外周血單核細胞分離人類單核球。為產生樹突細胞，於含有人類GM-CSF及人類IL-4之X-VIVO™ 15培養基中以2 x 106 個細胞/mL塗鋪單核球且培養5-7天。將96孔Maxisorp板用纖連蛋白及抗KLH抗體共包被。將板在室溫下孵育2小時，洗滌，且用含有10% FBS之RPMI 1640封閉。在存在抗ILT3抗體16C5或抗KLH抗體之情況下將樹突細胞(2 x 105 個細胞/孔)添加至孔中。將板在37℃下孵育隔夜且收集無細胞培養物上清液，且藉由Luminex分析量測TNF-α。12C. 用纖連蛋白及抗KLH抗體包被96孔Maxisorp板。將板在室溫下孵育1小時，用PBS洗滌，且用X-VIVO™ 15培養基封閉30分鐘。洗滌樹突細胞，再懸浮於X-VIVO™ 15培養基中，且與抗ILT3抗體16C5、抗ILT3抗體ch5A7或對照抗KLH抗體在室溫下一起孵育20分鐘。將細胞塗鋪至經包被之孔(7 x 104 個細胞/孔)中且孵育隔夜。在24小時之後收穫培養基用於藉由Luminex分析測定TNFα產量。 圖13. THP-1細胞中FcR誘導之活化。在室溫下將Nunc Maxisorp板用人類纖連蛋白及抗KLH抗體共包被2 h。在添加細胞及測試抗體之前將板用X-VIVO™ 15培養基封閉30分鐘。將含THP-1 Dual™ KI-mSTING報導細胞之X-VIVO™ 15培養基(2 x 106 個細胞/mL)與對照抗體、抗ILT3抗體16C5或抗ILT3抗體ch5A7以1:1比率混合。將混合物孵育30分鐘，以100 μL/孔接種至板上，且將板孵育隔夜。藉由將25 μL之培養物上清液與100 μL之Quanti-Blue SEAP基質組合，將樣品在37℃下孵育2小時，且在620 nm下讀取吸光度來量測報導子活性。 圖14. ILT3與內源表現之纖連蛋白之結合。將Detroit 551細胞以6 x 103 個細胞/孔塗鋪至聚D-離胺酸包被之384孔板上且孵育兩天。將單層用含有Mg2+ 及Ca2+ 之HBSS沖洗。在存在抗ILT3抗體16C5、抗ILT3抗體ch5A7或對照抗KLH抗體之情況下將ILT3-ECD-Fc添加至孔中。將抗體在含有ILT3-ECD-Fc之培養基中連續稀釋3倍(範圍為66 nM至0.27 nM)。將細胞在室溫下孵育1 h且接著用HBSS洗滌三次，且用3.7%福爾馬林(formalin)固定10 min。將單層用PBS沖洗且用含1% BSA之PBS封閉，然後用Hoechst染色劑及市售多株抗ILT3抗體進行染色。添加AlexaFluor 647結合之兔抗山羊Fc二級抗體，使細胞成像，且使用CellInsight成像系統定量螢光水準。 圖15. 抗ILT3抗體對樹突細胞產生趨化介素之效應。使用Incucyte® Zoom活細胞分析系統進行巨噬細胞遷移分析。在37℃下將Incucyte視界清晰96孔趨化性板(Sartorius)之膜用50 μg/mL之Matrigel® (在含10% FBS之X-VIVO™ 15培養基中稀釋)預包被30分鐘，隨後在室溫下持續30分鐘。將巨噬細胞(5 x 103 個細胞/孔)添加至趨化性板之頂部腔室中，且用衍生自樹突細胞之條件培養基填充底部腔室。每小時捕獲一次相位對比圖像持續24小時且使用Incucyte分析軟體分析數據。 圖16A-16B. 同種異體MLR分析。 圖17A-17B. 抗ILT3抗體對樹突細胞產生細胞介素之效應。 圖18A-18B. 抗ILT3抗體對耐受之樹突細胞的效應。 圖19. 抗ILT3抗體與抗PD-1抗體組合情況下之同種異體MLR分析。 圖20A-20B顯示抗ILT3抗體逆轉原代巨噬細胞中纖連蛋白介導之對FcR信號傳導及TNF-α產生的抑制作用。 圖21A-21B顯示抗ILT3抗體逆轉IL-10極化巨噬細胞中纖連蛋白介導之對FcR信號傳導及IL-6產生的抑制作用。 圖22顯示抗ILT3抗體逆轉表現食蟹猴ILT3之THP-1細胞中纖連蛋白介導之對FcR信號傳導(NF-kB報導子活性)的抑制作用。 圖23顯示抗ILT3抗體逆轉食蟹猴單核球源性樹突細胞中纖連蛋白(FN)介導之對MIP-1α產生的抑制作用。*指示P＜0.001。 圖24顯示抗ILT3抗體逆轉食蟹猴單核球源性樹突細胞中纖連蛋白(FN)介導之對FcR信號傳導及IL-8產生的抑制作用。*指示P＜0.01。 圖25. 人類化小鼠模型中抗ILT3抗體之抗腫瘤活性。
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Claims (131)

  1. 一種特異性結合人類免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之結合劑，其包含： (a) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有與GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、含有與TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2及含有與REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)或REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3，及 (b) 輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有與RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)或RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、含有與LTSNLES (SEQ ID NO:31)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及含有與QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3。
  2. 如請求項1之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)之重鏈可變區CDR3，且 (b) 該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。
  3. 如請求項1至2中任一項之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:111具有至少80%序列一致性。
  4. 如請求項1至3中任一項之結合劑，其中該輕鏈可變區與SEQ ID NO:112具有至少80%序列一致性。
  5. 如請求項1至4中任一項之結合劑，其中： 該重鏈可變區與SEQ ID NO:111具有至少80%序列一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:112具有至少80%序列一致性。
  6. 如請求項1至5中任一項之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:111具有至少90%序列一致性。
  7. 如請求項1至6中任一項之結合劑，其中該輕鏈可變區與SEQ ID NO:112具有至少90%序列一致性。
  8. 如請求項1至7中任一項之結合劑，其中： 該重鏈可變區與SEQ ID NO:111具有至少90%序列一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:112具有至少90%序列一致性。
  9. 如請求項1至8中任一項之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:111之胺基酸序列。
  10. 如請求項1至9中任一項之結合劑，其中該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:112之胺基酸序列。
  11. 如請求項1至10中任一項之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:111之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:112之胺基酸序列。
  12. 如請求項1之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含含有胺基酸序列GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REWRYTLYAMDY (SEQ ID NO:105)之重鏈可變區CDR3，且 (b) 該輕鏈可變區包含含有胺基酸序列RASESVESYGSSFMH (SEQ ID NO:106)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LTSNLES (SEQ ID NO:31)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)之輕鏈可變區CDR3。
  13. 如請求項1或12之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:123具有至少80%序列一致性。
  14. 12及13中任一項之結合劑，其中輕鏈可變區與SEQ ID NO:124具有至少80%序列一致性。
  15. 如請求項1及12至14中任一項之結合劑，其中： 該重鏈可變區與SEQ ID NO:123具有至少80%序列一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:124具有至少80%序列一致性。
  16. 如請求項1及11至15中任一項之結合劑，其中重鏈可變區與SEQ ID NO:123具有至少90%序列一致性。
  17. 如請求項1及11至16中任一項之結合劑，其中該輕鏈可變區與SEQ ID NO:124具有至少90%序列一致性。
  18. 如請求項1及11至17中任一項之結合劑，其中： 該重鏈可變區與SEQ ID NO:123具有至少90%序列一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:124具有至少90%序列一致性。
  19. 如請求項1及11至18中任一項之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:123之胺基酸序列。
  20. 如請求項1及11至19中任一項之結合劑，其中該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:124之胺基酸序列。
  21. 如請求項1及11至20中任一項之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:123之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:124之胺基酸序列。
  22. 一種特異性結合人類ILT3之結合劑，其中該結合劑包含含有來自SEQ ID NO:111之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的重鏈可變區，及含有來自SEQ ID NO:112之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3的輕鏈可變區。
  23. 一種特異性結合人類ILT3之結合劑，其中該結合劑包含含有來自SEQ ID NO:123之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的重鏈可變區，及含有來自具有SEQ ID NO:124之胺基酸序列的輕鏈可變區之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3的輕鏈可變區。
  24. 如請求項1至23中任一項之結合劑，其為抗體。
  25. 如請求項1至24中任一項之結合劑，其為單株抗體。
  26. 如請求項1至25中任一項之結合劑，其為嵌合抗體。
  27. 如請求項1至25中任一項之結合劑，其為人類化抗體。
  28. 如請求項1至27中任一項之結合劑，其為雙特異性抗體或多特異性抗體。
  29. 如請求項1至23中任一項之結合劑，其為包含至少一個抗原結合位點之抗體片段。
  30. 如請求項29之結合劑，其中該抗體片段為Fab、Fab′、F(ab′)2 、Fv、scFv、(scFv)2 、單鏈抗體、雙可變區抗體、雙抗體或奈米抗體。
  31. 如請求項1至28中任一項之結合劑，其為IgG1抗體，視情況為人類IgG1抗體，且進一步視情況為具有降低之效應功能或沒有效應功能之人類IgG1抗體。
  32. 如請求項1至28中任一項之結合劑，其為IgG2抗體，視情況為人類IgG2抗體。
  33. 如請求項1至28中任一項之結合劑，其為IgG4抗體，視情況為人類IgG4抗體。
  34. 如請求項1至28或31至33中任一項之結合劑，其包含κ輕鏈恆定區，視情況為人類κ輕鏈恆定區。
  35. 如請求項1至28或31至33中任一項之結合劑，其包含λ輕鏈恆定區，視情況為人類λ輕鏈恆定區。
  36. 一種特異性結合人類ILT3之抗體，其包含含有SEQ ID NO:126之胺基酸序列的重鏈及含有SEQ ID NO:128之胺基酸序列的輕鏈。
  37. 一種特異性結合人類免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之結合劑，其包含： (a) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有與GFSLTSYGVH (SEQ ID NO:11)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、含有與VIWPGGTINYNSALMS (SEQ ID NO:12)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2及含有與DKYDGGWFAY (SEQ ID NO:13)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3，及 (b) 輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有與KASQNVRTAVA (SEQ ID NO:14)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、含有與LASNRHT (SEQ ID NO:15)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及含有與LQHLNYPLT (SEQ ID NO:16)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3。
  38. 如請求項37之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:109具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:110具有至少80%一致性。
  39. 如請求項38之結合劑，其中該重鏈可變區具有SEQ ID NO:109之胺基酸序列且該輕鏈可變區具有胺基酸序列SEQ ID NO:110。
  40. 一種特異性結合ILT3之結合劑，其包含含有來自SEQ ID NO:109之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的重鏈可變區，及含有來自SEQ ID NO:110之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3的輕鏈可變區。
  41. 一種特異性結合人類免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之結合劑，其包含： (a) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有與GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、含有與YIYPNNGGTGYNQKFNS (SEQ ID NO:44)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2及含有與SPYYDYVGSYAMDY (SEQ ID NO:45)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3，及 (b) 輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有與TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO:46)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、含有與STSNLAS (SEQ ID NO:47)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及含有與HQYHRSPRT (SEQ ID NO:48)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3。
  42. 如請求項41之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:113具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:114具有至少80%一致性。
  43. 如請求項42之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:113之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO:114。
  44. 一種特異性結合ILT3之結合劑，其包含含有來自SEQ ID NO:113之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的重鏈可變區，及含有來自SEQ ID NO:114之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3的輕鏈可變區。
  45. 一種特異性結合人類免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之結合劑，其包含： (a) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有與GYTFTDYNMD (SEQ ID NO:43)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、含有與YIYPSNGGTGYNQKFKS (SEQ ID NO:59)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2及含有與VPYYDYLYYYAMDY (SEQ ID NO:60)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3，及 (b) 輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有與RASSSVSFMH (SEQ ID NO:61)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、含有與ATSNLAS (SEQ ID NO:62)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及含有與QQWSTNPYMYT (SEQ ID NO:63)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3。
  46. 如請求項45之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:115具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:116具有至少80%一致性。
  47. 如請求項46之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:115之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO:116。
  48. 一種特異性結合人類ILT3之結合劑，其包含含有來自SEQ ID NO:115之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的重鏈可變區，及含有來自SEQ ID NO:116之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3的輕鏈可變區。
  49. 一種特異性結合人類免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之結合劑，其包含： (a) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有與GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、含有與YIFSGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO:72)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2及含有與ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3，及 (b) 輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有與RASQDISKFLN (SEQ ID NO:74)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、含有與YTSRLHS (SEQ ID NO:75)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及含有與QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3。
  50. 如請求項49之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:117具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:118具有至少80%一致性，該重鏈可變區與SEQ ID NO:162具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:164具有至少80%一致性，或該重鏈可變區與SEQ ID NO:163具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:164具有至少80%一致性。
  51. 如請求項50之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:117之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO:118；該重鏈可變區包含SEQ ID NO:162之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO:164；或該重鏈可變區包含SEQ ID NO:163之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO:164。
  52. 一種特異性結合人類ILT3之結合劑，其包含含有來自SEQ ID NO:117之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的重鏈可變區，及含有來自SEQ ID NO:118之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3的輕鏈可變區。
  53. 一種特異性結合人類免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之結合劑，其包含： (a) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有與GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、含有與TISSGGTYTFYPDSVKG (SEQ ID NO:87)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2及含有與RGWLLHYYAMDY (SEQ ID NO:88)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3，及 (b) 輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有與RPSESVDSFGNSFMH (SEQ ID NO:89)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、含有與LSSKLES (SEQ ID NO:90)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及含有與QQHNEDPFT (SEQ ID NO:91)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3。
  54. 如請求項53之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:119具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:120具有至少80%一致性；該重鏈可變區與SEQ ID NO:156具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:161具有至少80%一致性；該重鏈可變區與SEQ ID NO:157具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:161具有至少80%一致性；該重鏈可變區與SEQ ID NO:158具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:161具有至少80%一致性；該重鏈可變區與SEQ ID NO:159具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:161具有至少80%一致性；或該重鏈可變區與SEQ ID NO:160具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:161具有至少80%一致性。
  55. 如請求項54之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:119之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO:120；該重鏈可變區包含SEQ ID NO:156之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:161之胺基酸序列；該重鏈可變區包含SEQ ID NO:157之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:161之胺基酸序列；該重鏈可變區包含SEQ ID NO:158之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:161之胺基酸序列；該重鏈可變區包含SEQ ID NO:159之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:161之胺基酸序列；或該重鏈可變區包含SEQ ID NO:160之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:161之胺基酸序列。
  56. 一種特異性結合人類ILT3之結合劑，其包含含有來自SEQ ID NO:119之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的重鏈可變區，及含有來自SEQ ID NO:120之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3的輕鏈可變區。
  57. 一種特異性結合人類免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之結合劑，其包含： (a) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有與GFTFSDYGMH (SEQ ID NO:71)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、含有與YISTGIITVYYADTVKG (SEQ ID NO:99)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2及含有與ADGRGAMDY (SEQ ID NO:73)一致或實質上一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3，及 (b) 輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有與RASQDISNFLN (SEQ ID NO:100)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、含有與YTSRLHS (SEQ ID NO:75)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及含有與QQGNTLPWT (SEQ ID NO:76)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3。
  58. 如請求項57之結合劑，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO:121具有至少80%一致性且該輕鏈可變區與SEQ ID NO:122具有至少80%一致性。
  59. 如請求項58之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:121之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO:122。
  60. 一種特異性結合人類ILT3之結合劑，其包含含有來自SEQ ID NO:121之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的重鏈可變區，及含有來自SEQ ID NO:122之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3的輕鏈可變區。
  61. 如請求項37至60中任一項之結合劑，其為抗體。
  62. 如請求項37至61中任一項之結合劑，其為單株抗體。
  63. 如請求項37至62中任一項之結合劑，其為嵌合抗體。
  64. 如請求項37至62中任一項之結合劑，其為人類化抗體。
  65. 如請求項37至64中任一項之結合劑，其為雙特異性抗體或多特異性抗體。
  66. 如請求項37至60中任一項之結合劑，其為包含至少一個抗原結合位點之抗體片段。
  67. 如請求項66之結合劑，其中該抗體片段為Fab、Fab′、F(ab′)2 、Fv、scFv、(scFv)2 、單鏈抗體、雙可變區抗體、雙抗體或奈米抗體。
  68. 如請求項37至65中任一項之結合劑，其為IgG1抗體，視情況為人類IgG1抗體，且進一步視情況為具有降低之效應功能或沒有效應功能之人類IgG1抗體。
  69. 如請求項37至65中任一項之結合劑，其為IgG2抗體，視情況為人類IgG2抗體。
  70. 如請求項37至65中任一項之結合劑，其為IgG4抗體，視情況為人類IgG4抗體。
  71. 如請求項37至65或68至70中任一項之結合劑，其包含κ輕鏈恆定區，視情況為人類κ輕鏈恆定區。
  72. 如請求項37至65或68至70中任一項之結合劑，其包含λ輕鏈恆定區，視情況為人類λ輕鏈恆定區。
  73. 如請求項1至72中任一項之結合劑或抗體，其結合人類ILT3之細胞外結構域。
  74. 如請求項1至72中任一項之結合劑或抗體，其結合人類ILT3之D2結構域或D1結構域與D2結構域之接合點。
  75. 如請求項1至74中任一項之結合劑或抗體，其具有以下特性中之一或多者： (i)     結合cyno ILT3； (ii)    結合人類及cyno ILT3； (iii)   不結合ILT2、ILT4、ILT5及LILRB5； (iv)   不結合LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6； (v)    為ILT3拮抗劑； (vi)   抑制ILT3活性； (vii)  抑制表現ILT3之細胞中的ILT3信號傳導； (viii) 抑制ILT3與APOE之結合； (ix)   抑制ILT3與纖連蛋白之結合； (x)    抑制ILT3與CNTFR之結合； (xi)   抑制ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用； (xii)  抑制ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用； (xiii) 恢復表現ILT3之骨髓細胞中的FcR活化；及 (xiv) 恢復表現ILT3之骨髓細胞中的趨化介素產生。
  76. 如請求項1至75中任一項之結合劑或抗體，其中該結合劑連接至半衰期延長部分。
  77. 一種抗體，其與如請求項1至76中任一項之結合劑競爭結合於人類ILT3。
  78. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體及醫藥學上可接受之載劑。
  79. 一種醫藥組合物，其包含如請求項36之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
  80. 一或多種經分離之聚核苷酸，其編碼如請求項1至76中任一項之結合劑。
  81. 一或多種經分離之聚核苷酸，其編碼如請求項36之抗體。
  82. 一或多種載體，其包含如請求項80或請求項81之一或多種聚核苷酸。
  83. 一種經分離之細胞，其包含如請求項80或請求項81之聚核苷酸。
  84. 一種經分離之細胞，其包含如請求項82之一或多種載體。
  85. 一種經分離之細胞，其產生如請求項1至76中任一項之結合劑。
  86. 一種特異性結合人類免疫球蛋白樣轉錄物3 (ILT3)之抗體，其中該抗體包含： (a) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有與GFTFSSYGMS (SEQ ID NO:27)一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、含有與TISGGGSYTNYPDSVKG (SEQ ID NO:28)一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2及含有除具有1個胺基酸取代外與REWRMTLYAMDY (SEQ ID NO:29)一致之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3，視情況其中該取代為在SEQ ID NO:29之位置5的甲硫胺酸之取代；及 (b) 輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有除具有1或2個胺基酸取代外與RASESVDSYGNSFMH (SEQ ID NO:30)一致或實質上一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、含有與LTSNLES (SEQ ID NO:31)一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及含有與QQNNEDPFT (SEQ ID NO:32)一致之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3，視情況其中該等取代為在SEQ ID NO:30之位置7的天冬胺酸及/或在位置11的天冬醯胺之取代。
  87. 抑制或阻斷細胞混合物中ILT3與纖連蛋白之結合的方法，該方法包括使該等細胞與如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體接觸。
  88. 抑制或阻斷細胞混合物中纖連蛋白誘導之ILT3活性之方法，該方法包括使該等細胞與如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體接觸。
  89. 抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用的方法，該方法包括使該等骨髓細胞與如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體接觸。
  90. 抑制或阻斷ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用的方法，該方法包括使該等骨髓細胞與如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體接觸。
  91. 如請求項90之方法，其 (i) 恢復表現ILT3之該等骨髓細胞中的FcR活性； (ii) 恢復表現ILT3之該等骨髓細胞的趨化介素產生；及/或 (iii) 恢復免疫細胞(例如T細胞)增殖及/或活性。
  92. 抑制或阻斷個體中ILT3與纖連蛋白之結合的方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  93. 抑制或阻斷個體中纖連蛋白誘導之ILT3活性之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  94. 抑制或阻斷個體中ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用的方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  95. 抑制或阻斷個體中ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用的方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  96. 如請求項95之方法，其： (i) 恢復表現ILT3之該等骨髓細胞中的FcR活性，及/或 (ii) 恢復表現ILT3之該等骨髓細胞中的趨化介素/細胞介素產生。
  97. 一種治療個體之癌症之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  98. 如請求項97之方法，其中該癌症為胰腺癌、乳癌、肺癌、頭頸癌、結腸直腸癌、前列腺癌、皮膚癌、黑色素瘤、胃部癌症、胃癌、腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腦癌、食管癌、肝癌、腎癌、肉瘤或睾丸癌。
  99. 如請求項97之方法，其中該癌症為血液癌症。
  100. 如請求項97之方法，其中該癌症為骨髓性白血病、急性骨髓樣白血病(AML)、慢性骨髓樣白血病或骨髓發育異常症候群。
  101. 一種抑制個體中之腫瘤生長之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  102. 一種增加或增強個體中對腫瘤或腫瘤細胞之免疫反應之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  103. 一種活化或增強個體中對腫瘤或腫瘤細胞之持久或長期免疫反應之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  104. 一種抑制個體中之腫瘤復發或腫瘤再生長之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  105. 一種在個體中誘導抑制腫瘤復發或腫瘤再生長之持久或長期免疫性之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  106. 如請求項101至105中任一項之方法，其中該腫瘤為胰腺腫瘤、乳房腫瘤、肺腫瘤、頭頸腫瘤、結腸直腸腫瘤、前列腺腫瘤、皮膚腫瘤、黑色素瘤腫瘤、胃部腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、卵巢腫瘤、子宮頸腫瘤、子宮腫瘤、子宮內膜腫瘤、膀胱腫瘤、腦腫瘤、食管腫瘤、肝腫瘤、腎腫瘤、肉瘤或睾丸腫瘤。
  107. 一種活化具有腫瘤之個體中的腫瘤微環境中之骨髓細胞的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  108. 如請求項107之方法，其中該等骨髓細胞為原代樹突細胞或致耐受性樹突細胞。
  109. 如請求項107之方法，其中該等骨髓細胞為單核球或巨噬細胞。
  110. 一種再活化個體中之致耐受性樹突細胞之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體。
  111. 如請求項110之方法，其中該等致耐受性樹突細胞發現於腫瘤微環境中。
  112. 如請求項92至111中任一項之方法，其中該結合劑或抗體係作為組合療法之一部分而投與，視情況其中該組合療法包含抗PD-1抗體。
  113. 如請求項112之方法，其中該組合療法包含至少一種其他治療劑。
  114. 如請求項92至113中任一項之方法，其中該個體為人類。
  115. 一種如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體之用途，其用於治療癌症。
  116. 一種如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體之用途，其用於製造用於治療癌症之藥劑。
  117. 一種製備如請求項1至77中任一項之結合劑或抗體之方法，該方法包括： (a) 培養如請求項83至86中任一項之細胞，及 (b) 分離該結合劑或抗體。
  118. 如請求項117之方法，其進一步包括純化該結合劑或抗體。
  119. 如請求項117或請求項118之方法，其進一步包括將該結合劑或抗體調配成醫藥組合物。
  120. 一種結合人類ILT3且抑制人類ILT3與纖連蛋白之結合的抗體，視情況其中該抗體具有以下特性中之一或多者： (i)    亦結合cyno ILT3； (ii)   不結合或僅弱結合(相對於ILT3) ILT2、ILT4、ILT5及LILRB5； (iii)  不結合或僅弱結合(相對於ILT3) LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6； (iv)   為ILT3拮抗劑； (v)    抑制ILT3活性； (vi)   抑制表現ILT3之細胞中的ILT3信號傳導； (vii)  抑制ILT3與APOE之結合； (viii) 抑制ILT3與CNTFR之結合； (ix)   抑制ILT3誘導之對骨髓細胞之阻抑作用； (x)    抑制ILT3誘導之對骨髓細胞活性之阻抑作用； (xi)   恢復表現ILT3之骨髓細胞中的FcR活化；及 (xii)  恢復表現ILT3之骨髓細胞中的趨化介素產生。
  121. 如請求項120之抗體，其如藉由Biacore所評估對人類ILT3具有1 μM至1 pM之KD 。
  122. 如請求項120之抗體，其包含人類IgG1恆定區及人類κ輕鏈恆定區。
  123. 如請求項122之抗體，其中該人類IgG1恆定區包含降低或消除效應功能之一或多個突變。
  124. 一種醫藥組合物，其包含如請求項120至123中任一項之抗體，及醫藥學上可接受之載劑。
  125. 一種治療人類個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項120至123中任一項之抗體或如請求項124之醫藥組合物，視情況其中該癌症為：表現高水準之纖連蛋白之癌症、表現ILT3之癌症、胰腺癌、乳癌、肺癌、頭頸癌、結腸直腸癌、前列腺癌、皮膚癌、黑色素瘤、胃部癌症、胃癌、腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腦癌、食管癌、肝癌、腎癌、肉瘤或睾丸癌、血液癌症、骨髓性白血病、急性骨髓樣白血病(AML)、慢性骨髓樣白血病或骨髓發育異常症候群。
  126. 一種醫藥組合物，其包含 (a) 用於抑制人類ILT3與纖連蛋白之間的相互作用之劑；及 (b) 醫藥學上可接受之載劑。
  127. 如請求項126之醫藥組合物，其中該用於抑制人類ILT3與纖連蛋白之間的相互作用之劑為抗人類ILT3抗體。
  128. 如請求項127之醫藥組合物，其中該抗體包含重鏈可變區之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3及輕鏈可變區之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區分別包含在以下中之胺基酸序列： (i) SEQ ID NO:123及124； (ii) SEQ ID NO:156及161； (iii) SEQ ID NO:157及161； (iv) SEQ ID NO:158及161； (v) SEQ ID NO:159及161； (vi) SEQ ID NO:160及161； (vii) SEQ ID NO:162及164；或 (vii) SEQ ID NO:163及164。
  129. 如請求項128之醫藥組合物，其中該抗體包含分別含有以下中之胺基酸序列之重鏈可變區及輕鏈可變區： (i) SEQ ID NO:123及124； (ii) SEQ ID NO:156及161； (iii) SEQ ID NO:157及161； (iv) SEQ ID NO:158及161； (v) SEQ ID NO:159及161； (vi) SEQ ID NO:160及161； (vii) SEQ ID NO:162及164；或 (vii) SEQ ID NO:163及164。
  130. 一種組合，其包含如請求項1至77或120至123中任一項之結合劑或抗體及抗PD-1抗體。
  131. 一種組合，其包含用於抑制人類ILT3與纖連蛋白之間的相互作用之劑及抗PD-1抗體。
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