TW202133874A

TW202133874A - 用於化妝品及醫藥之胜肽及組成物

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Publication number: TW202133874A
Application number: TW109142624A
Authority: TW
Inventors: 亞力那果肯皮坦; 希爾維亞帕斯特; 佩翠夏卡如拉; 裘安艾庫德洛
Original assignee: 西班牙商麗保真公司
Priority date: 2019-12-04
Filing date: 2020-12-03
Publication date: 2021-09-16
Also published as: WO2021110608A1; US20220389058A1; JP2023504461A; KR20220110218A; EP3831358A1; CN115175654A; CA3158812A1; AU2020395867A1

Abstract

本發明關於胜肽及其組成物，其能夠調節IL-33之表現且因此有用於預防、減少及/或消除皮膚老化的徵象及/或皮膚瑕疵。

Description

用於化妝品及醫藥之胜肽及組成物

本發明關於分子生物學領域，更確切地關於應用於化妝品及/或醫藥之分子生物學，甚至更確切地關於胜肽及包含該胜肽之組成物，其能夠減少、預防及/或消除皮膚老化徵象，使皮膚回春，及/或減少、預防及/或消除皮膚瑕疵，更確切地在眼睛。本發明更佳地關於胜肽及包含該胜肽之組成物，其有用於眼睛護理及/或治療與眼部有關的狀況。

在過去幾十年以來，人們關於個人美學越來越關心且嘗試延遲皮膚老化徵象的出現或使其減至最少。皮膚為人類的最大器官，且由於其在人體界面中的位置而易感受內在(自然性)老化及外在老化，後者係由環境因子所引起(諸如UV輻射、吸煙、污染或睡眠剝奪)。就此意義而言，一些最常見的皮膚老化徵象係位於臉部(臉部皮膚老化徵象)，更確切地在眼睛周圍，例如眼袋、眼瞼瑕疵、在眼睛周圍的皺紋和黑眼圈(眼眶周圍色素過多)。該等徵象亦為皮膚老化徵象之一，因為該等徵象的存在及/或增加提供更老的外觀，所以在社會上引起更多關心。因此，對所有該等徵象之預防及/或治療有興趣。最重要的眼瞼瑕疵為那些與垂下(droopy)及/或眼瞼鬆垂相關聯的瑕疵。該等瑕疵通常係由於人眼睛周圍的皮膚及肌肉隨著老化而變弱，引起眼瞼鬆垂的事實。暴露於陽光及自然的老化效應可引起人眼睛周圍的皮膚更鬆垂。關於老化，因為皮膚係隨著年齡而變得較沒有彈性及臉部較不豐滿和緊實，結果常使眼睛周圍的皮膚鬆弛或多餘。眼瞼鬆垂可由於不同的原因或潛在的醫學或美容疾患。眼瞼鬆垂通常係由於眼皮鬆弛下垂症(dermatochalasis)、下垂(ptosis)(例如腱膜性下垂(aponeurotic ptosis)和腱膜性眼瞼下垂(aponeurotic blepharoptosis))、瞼外翻和瞼內翻(Wendell Damasceno, R.等人之Eyelid aging: pathophysiology and clinical magement , Arq Bras Oftalmol. 2015; 78(5):328-31)。眼瞼瑕疵(較佳為眼瞼鬆垂)在歸屬基於非發炎性眼瞼鬆垂時通常被認為是美容性狀況；但是若基於發炎性鬆垂的眼瞼瑕疵(例如廣泛的眼瞼鬆垂)，則可能導致視野喪失、眼部或眼瞼刺激及頭痛，因此為醫學狀況。如現有技術中所熟知，大部分的皮膚老化徵象係由於氧化應激及/或發炎而產生或引起，該氧化應激及/或發炎又是由自然性老化(chronological aging)或環境因素(environmental agent)(例如UV輻射或睡眠剝奪)而觸發。介白素-33 (在下文之IL-33)為IL-1家族之成員。其為具有雙重功能之發炎誘導因子，行使其作為基因表現之細胞內調控劑以及細胞外警報媒介體的角色。其為ST2之配體，ST2為孤兒IL-1家族受體之異二聚體膜結合受體。 IL-33係由各種廣泛的細胞類型表現，包括纖維母細胞、肥胖細胞、樹狀細胞、巨噬細胞、造骨細胞、內皮細胞和上皮細胞(諸如角質細胞)(Martin, N.T. and Martin, M.U.之Interleukin 33 is a guardian of barriers and a local alarmin , Nature Immunology (2016) 17, 122-131)。在體內恆定期間，細胞核IL-33在組成上於上皮屏障組織中(諸如肺、皮膚和胃)表現至高水平。在暴露於過敏原或以病毒或寄生蟲感染後，全長生物活性IL-33係在組織損傷及細胞死亡(或細胞應激(cellular stress))後立即自細胞核於細胞外釋放。在釋放後，IL-33係藉由活化各種類型的免疫細胞(包括肥胖細胞)及最重要地活化ILC2 (其分泌大量的IL-5及IL-13)來「提升免疫系統的警報」。在程序性細胞死亡(細胞凋亡)後，IL-33係以凋亡蛋白酶去活化以避免不必要地警示免疫系統。儘管全長IL-33具有活性，但是其可經發炎性蛋白酶(組織蛋白酶G、彈力蛋白酶)處理成較短的「高活性」成熟形式，其可為活體內至關重要的生物活性形式。 IL-33之作用範圍及持續時間係以抑制其結合至ST2之其快速氧化作用來調控。在近年來，IL-33係由於已揭露其參與大量的傳訊過程而受到關注，且因此似乎在許多化妝品及醫學特徵中發揮關鍵作用，例如：皮膚發炎：暴露於UV輻射誘導在角質細胞及真皮纖維母細胞中的IL-33表現(Napier Byrne, S.等人之The immune-modulating cytokine and endogenous alarmin Interleukin-33 is upregulated in skin exposed to inflammatory UVB Radiation . The American Journal of Pathology, 179 (2011), 211-222)。皮膚屏障：IL-33具有皮膚屏障調節效應。IL-33的增加造成絲聚蛋白(filaggrin)的表現降低且干擾皮膚屏障，促成過敏原、細菌及病毒的進入(Seltmann, J.等人之IL33 impacts on the skin barrier by downregulating the expression of filaggrin . J Allergy Clin Immunol, Volume 135, Number 6, pages 1659-1661)。血管分布：IL-33促進血管生成及血管滲透性(Choi, Y.等人之Interleukin-33 induces angiogenesis and vascular permeability through ST2/TRAF6-mediated endothelial nitric oxide production . Blood, 1 October 2009, volume 114, number 14, pages 3117-3126)。色素沉著：IL-33係藉由改善黑色素細胞中的黑色素生物合成而具有促黑色素生成活性(Zhou, J.等人之Enhancement of the p38 MAPK and PKA signaling pathways is associated with the pro-melanogenic activity of Interleukin 33 in primary melanocytes . Journal of Dermatological Science, 73 (2014), 110-116)。因此，IL-33造成角質細胞內聚性降低、色素沉著增加及發炎和血管滲透性增加，且因此與上文提及之所有皮膚徵象有關。睡眠剝奪(亦即比最適化睡眠時間短、完全沒有睡眠期或晝夜節律模式改變)對皮膚亦具有重要影響且為皮膚老化及/或皮膚瑕疵的促進因素。與睡眠不足相關聯的一些皮膚屬性包括粗糙、暗沉和乾燥的皮膚、以及垂下的眼瞼和黑眼圈。該效應不僅限於視覺特徵，而且睡眠剝奪可影響皮膚的健康及生理，諸如加劇皮膚疾患、損害皮膚屏障的完整性、增加發炎性細胞激素(糖皮質素)的生成、以及增加葡萄糖和皮質醇含量及降低褪黑激素含量(Kim, M.A.等人之The effect of sleep deprivation on the biophysical properties of facial skin, Journal of cosmetics, dermatological sciences and application (2017) 7, 34-47；及Guan L., Mehra R., Baron E.之(2017)Sleep and Aging Skin. In: Farage M., Miller K., Maibach H. (eds) Textbook of Aging Skin. Springer, Berlin, Heidelberg)。葡萄糖濃度上升對皮膚的角質細胞以及纖維母細胞增生有負面的影響(Kruse, C.R.等人之The effect of local hyperglucemia on skin cells in vitro and on wound healing in euglycemic rats , Journal of Surgical Research (2016) 206, 418-426)。皮膚纖維母細胞增生的損害導致延遲的傷口癒合(Buranasin, P.之High glucose-induced oxidative stress impairs proliferation and migration of human gingival fibroblasts , PLoS ONE (2018) 13)，類似於老年人的皮膚所觀察到的傷口癒合延遲。亦有證據為增加的葡萄糖濃度導致該等角質細胞之最後分化及形態改變(Spravchikov, N.等人之Glucose effects on skin keratinocytes , Diabetes (2001) 50, 1627-1635)。該等最後分化之細胞喪失其生成新細胞的能力，且通過週期蛋白依賴性激酶抑制劑之調升及細胞週期的陽性媒介體之調降而拘留於最後狀態。時常伴有胰島素缺乏或胰島素抗性之高血糖症亦引起受損的自體調控及增加的微血管滲透性。關於皮質醇，在皮膚中升高的糖皮質素濃度轉譯成表皮中較低的滲透性屏障體內恆定、較少的角質層內聚性、降低的傷口癒合及壓抑的先天免疫性(Altemus, M.之Stress-induced changes in skin barrier function in healthy women , Journal of Investigative dermatology (2001) 117, 309-317)，全部又可能導致皮膚的內因性老化。此外，睡眠剝奪可引起生理應激，其誘導過多的糖皮質素分泌及因此增強皮膚老化。過多的糖皮質素亦抑制脂質合成，引起較少的板層體生產及分泌，其可導致進一步的表皮屏障損傷。皮膚細胞同時表現膜結合及核褪黑激素受體，其容許褪黑激素在多種生命功能中扮演一角色，諸如頭髮生長週期、頭髮色素沉著、黑色素瘤控制、抗氧化劑活性和壓抑紫外線誘導之皮膚細胞損傷(Slominski, A.之On the role of melatonin in skin physiology and pathology , Endocrine (2005) 27, 137-148)。已顯示褪黑激素減少來自氧化應激之老化相關性皮膚變化，且通過免於UV誘導之皮膚老化來預防皮膚的外因性老化。褪黑激素的失調最終對皮膚的完整性具有不利的效應，且阻止褪黑激素對皮膚的天然抗老化效益。這導致同時增加來自UV損傷的皮膚外因性老化以及來自氧化應激之皮膚內因性老化。另外，褪黑激素具有抗氧化劑及清除劑的性質(Reiter, R.J.,Melatonin as an antioxidant: biochemical mechanisms and pathophysiological implications in humans , Acta Biochim Pol (2003) 50, 1129-1146). 褪黑激素亦降低對角質細胞之高血糖症損傷，以降低促發炎細胞激素濃度(Song, R.之Melatonin promotes diabetic wound healing in vitro by regulating keratinocyte activity , Am J Transl Res (2016) 8, 4682-4693)。在近年來，已大幅增加改善皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵之活性成分的數量。此等活性成分的實例為類視色素、維生素或植物萃取物(Bradley E.J., Griffiths C.E.M., Sherratt M.J., Bell M.和Watson R.E.B.之(2015),Over-the-counter anti-ageing topical agents and their ability to protect and repair photoaged skin. Maturitas, 80, 265-272)。在類視色素的例子中，值得注意的是視黃酸，其為現今用於誘導許多ECM分子合成之「黃金標準物(gold-standard)」(例如膠原蛋白、纖維接合素或層黏連蛋白；Varani J., Mitra R.S., Gibbs D., Phan S.H., Dixit V.M., Mitra R., Wang T., Siebert K.J., Nickoloff B.J., Voorhees J.J.之(1990),All-Trans Retinoic Acid Stimulates Growth and Extracellular Matrix Production in Growth-Inhibited Cultured Human Skin Fibroblasts. The Journal of Investigative Dermatology, 94, 717-723)。因此，視黃酸被認為是治療老化徵象最有效的化合物之一，因為其可藉由調升ECM (例如膠原蛋白和纖連蛋白)之蛋白質轉錄及合成而顯著改善臨床的臉部皺紋外觀，及基質金屬蛋白酶(在下文之MMP)之抑制(Varani J., Mitra R.S., Gibbs D., Phan S.H., Dixit V.M., Mitra R., Wang T., Siebert K.J., Nickoloff B.J., Voorhees J.J.之(1990),All-Trans Retinoic Acid Stimulates Growth and Extracellular Matrix Production in Growth-Inhibited Cultured Human Skin Fibroblasts . The Journal of Investigative Dermatology, 94, 717-723)。然而，有許多使用視黃酸的缺點，諸如：視黃酸必須謹慎使用，因為其可容易地造成皮膚刺激，且不建議視黃酸與日曬組合。當使用類視色素時，另一主要的問題為其不穩定性，尤其在氧氣及光的存在下(Sorg O., Antille C., Kaya G.和Saurat J-H.之(2006),Retinoids in cosmeceuticals . Dermatologic Therapy, 19, 289-296)。亦使用抗氧化劑以減少皮膚中的自由基濃度，且因此抵消膠原蛋白的降解。該抗氧化劑的實例為抗壞血酸(亦稱為維生素C)。除了其抗氧化劑效應以外，抗壞血酸亦誘導自ECM (膠原蛋白I和III及彈力蛋白)合成蛋白質，尤其同時促進表皮分化及抑制基質金屬蛋白酶-1 (MMP1)。不幸地，抗壞血酸非常不穩定且接受氧化，尤其在高溫、好氧條件、高pH下及/或暴露於光時 (Manela-Azulay M., Azulay V., Aguinaga F., Issa M.C.之(2017),Vitamins and other Antioxidants . Daily Routine in Cosmetic Dermatology, 1-13)。除了經化學合成之化合物以外，市場上亦發現具有多種應用之各種廣泛的植物萃取物及植物衍生性化合物，諸如包含白藜蘆醇(抗氧化劑)之葡萄萃取物；包含多酚之綠茶；或包含異黃酮之大豆。然而，該等成分之活體內功效及組成物尚未經科學上充分的驗證。玻尿酸亦由於其黏彈性質及其保留水的能力而用於化妝品工業中，以保持含水的皮膚、維持彈性且藉由改善粗糙度來治療皺紋，或甚至用作為真皮填充劑。然而，目前玻尿酸係自許多來源(諸如雞冠或細菌萃取物)獲得，且因此該等產品可含有雜質且需要徹底的特徵描述(Kogan G., Soltés L., Stern R.和Gemeiner P.之(2007),Hyaluronic acid: a natural biopolymer with a broad range of biomedical and industrial applications . Biotechnological Letters 29, 17-25)。另一方面，胜肽亦可併入化妝品配方中以改善皮膚老化的徵象。生物活性胜肽可仿效人體自身的分子且影響諸如膠原蛋白合成的過程，其優點在於具有更好的耐受性及穩定性。另外，可以該等發展出範圍廣泛的活性、化學及適應性(Zhang L.和Falla T.J.之(2009),Cosmeceuticals and peptides . Clinics in dermatology, 27, 485-494)。儘管在本領域中的化合物及/或萃取物種類繁多，但對具有新穎的作用機制之改進的活性劑及組成物仍有需求，其容許預防、減少及/或消除皮膚老化的徵象及/或皮膚瑕疵，更確切地對發現靶向IL-33且提供所欲及所需的化妝品及醫學效應之新分子(較佳為生物分子)有需求。

在廣泛且詳盡的研究後，本發明之發明人驚訝地發現能夠調節IL-33表現(調降)且因此可用於化妝品及醫藥中的胜肽。本發明之胜肽能夠預防、減少及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更佳為臉部皮膚老化，更佳為眼部或其周圍之皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，甚至更佳為眼袋、眼瞼瑕疵、在眼睛周圍的皺紋和黑眼圈(眼眶周圍色素過多)。另外，本發明之胜肽亦驚訝地能夠預防、減少及/或消除由睡眠剝奪所造成的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。如上文所述，本發明之胜肽亦由於其活性而可用於醫藥中。在第一態樣中，本發明係指能夠調節IL-33表現(調降)之胜肽。如上文所述，本發明之胜肽可用於化妝品及醫藥中，以預防、減少及/或治療皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。另外，在第二態樣中，本發明係指包含至少一種本發明之胜肽的組成物。在第三態樣中，本發明係指本發明之胜肽或化妝品組成物作為化妝品之用途。在第四態樣中，本發明係指本發明之胜肽或化妝品組成物之化妝品用途。在第五態樣中，本發明係指用於需要其之個體的美容性治療之方法，其包含使用本發明之胜肽或化妝品組成物。在第六態樣中，本發明係指用作為藥物的本發明之胜肽或醫藥組成物。在第七態樣中，本發明係指本發明之胜肽或醫藥組成物用於製造藥物之用途。在最後的態樣中，本發明係指用於需要其之個體的醫學治療之方法，其包含使用本發明之胜肽或醫藥組成物。如本文所使用之術語「非環脂族基團」及其複數具有現有技術中對該術語給出之常見意義。因此，該等術語係指例如且不限於直鏈或支鏈烷基、烯基和炔基。如本文所使用之術語「烷基」及其複數係指具有介於1與24個之間，較佳為介於1與16個之間，更佳為介於1與14個之間，甚至更佳為介於1與12個之間，且甚至仍更佳為介於1、2、3、4、5或6個碳原子及其以單鍵結合至分子的其餘部分之飽和、直鏈或支鏈基團，包括例如且不限於甲基、乙基、異丙基(異丙基)、正丙基、異丙基、異丁基、三級丁基、正丁基、二級丁基、正戊基、正己基、庚基、辛基、癸基、十二烷基、月桂基、十六烷基、十八烷基、戊基、2-乙基己基、2-甲基丁基、5-甲基己基及類似者。烷基可隨意地經一或多個取代基取代，諸如鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本文所使用之術語「烯基」及其複數係指具有介於2與24個之間，較佳為介於2與16個之間，更佳為介於2與14個之間，甚至更佳為介於2與12個之間，甚至又更佳為2、3、4、5或6個碳原子、具有一或多個碳-碳雙鍵，較佳為具有1、2或3個碳-碳雙鍵、經共軛或未經共軛、其通過單鍵結合至分子的其餘部分之直鏈或支鏈基團，包括例如且不限於乙烯基、油基、亞麻基及類似基團。烯基可隨意地經一或多個取代基取代，諸如鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本文所使用之術語「炔基」及其複數係指具有介於2與24個之間，較佳為介於2與16個之間，更佳為介於2與14個之間，甚至更佳為介於2與12個之間，甚至又更佳為2、3、4、5或6個碳原子、具有一或多個碳-碳參鍵，較佳為具有1、2或3個碳-碳參鍵、經共軛或未經共軛、其通過單鍵結合至分子的其餘部分之直鏈或支鏈基團，包括例如且不限於乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、戊炔基(諸如1-戊炔基)及類似基團。炔基可隨意地經一或多個取代基取代，諸如鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。術語「脂環族基團」及其複數具有現有技術中對該術語給出之常見意義。因此，所使用之該等術語係指例如且不限於環烷基或環烯基或環炔基。如本文所使用之術語「環烷基」及其複數係指具有介於3與24個之間，較佳為介於3與16個之間，更佳為介於3與14個之間，甚至更佳為介於3與12個之間，甚至又更佳為3、4、5或6個碳原子且其通過單鍵結合至分子的其餘部分之飽和單-或多環脂族基團，包括例如且不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、甲基環己基、二甲基環己基、八氫茚、十氫萘、十二氫萉(dodecahydro-phenalene)、金剛烷基及類似基團，且其可隨意地經一或多個基團取代，諸如烷基、鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本文所使用之術語「環烯基」及其複數係指具有介於5與24個之間，較佳為介於5與16個之間，更佳為介於5與14個之間，甚至更佳為介於5與12個之間，甚至又更佳為5或6個碳原子、具有一或多個碳-碳雙鍵，較佳為具有1、2或3個碳-碳雙鍵、經共軛或未經共軛、其通過單鍵結合至分子的其餘部分之非芳族單-或多環脂族基團，包括例如且不限於環戊-1-烯-1-基及類似基團，且其可隨意地經一或多個基團取代，諸如烷基、鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本文所使用之術語「環炔基」及其複數係指具有介於8與24個之間，較佳為介於8與16個之間，更佳為介於8與14個之間，甚至更佳為介於8與12個之間，甚至又更佳為8或9個碳原子、具有一或多個碳-碳參鍵，較佳為具有1、2或3個碳-碳參鍵、經共軛或未經共軛、其通過單鍵結合至分子的其餘部分之非芳族單-或多環脂族基團，包括例如且不限於環辛-2-炔-1-基及類似基團，且其可隨意地經一或多個基團取代，諸如烷基、鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本文所使用之術語「芳基」及其複數係指具有介於6與30個之間，較佳係介於6與18個之間，更佳介於6與10之間，甚至更佳為6或10個碳原子、其包含1、2、3或4個芳族環、藉由碳-碳鍵結合或稠合，且其通過單鍵結合至分子的其餘部分之芳族基團，尤其包括例如且不限於苯基、萘基、二苯基、茚基、菲基或蒽基。芳基可隨意地經一或多個取代基取代，諸如鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本文所使用之術語「芳烷基」及其複數係指經具有介於7與24個碳原子的芳族基團取代之烷基，及包括例如且不限於-(CH₂ )1-6-苯基、-(CH₂ )1-6-(1-萘基)、-(CH₂ )1-6-(2-萘基)、-(CH₂ )1-6-CH(苯基)₂ 及類似者。芳烷基可隨意地經一或多個取代基取代，諸如鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本文所使用之術語「雜環基團」及其複數係指3至10員雜環基或烴環，其中環原子中之一或多者，較佳為環原子中之1、2或3個為不同於碳的元素，諸如氮、氧或硫，且可為飽和及不飽和。出於本發明之目的，雜環基可為環、單環、雙環或三環系統，其可包括稠合環系統；且氮、碳或硫原子可隨意地於雜環基中氧化；氮原子可隨意地四級化；且雜環基可部分或完全飽和或可為芳族。隨著漸增的優先選擇，術語雜環關於5或6員環。雜環基團可隨意地經一或多個取代基取代，諸如鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本文所使用之術語「雜芳基烷基」及其複數係指經取代或未經取代之芳族雜環基取代之烷基，烷基具有1至6個碳原子及芳族雜環基具有介於2至24個碳原子和1至3個除了碳以外的原子，且包括例如且不限於-(CH₂ )1-6-咪唑基、-(CH₂ )1-6-三唑基、-(CH₂ )1-6-噻吩基、-(CH₂ )1-6-呋喃基、-(CH₂ )1-6-吡咯啶基及類似者。雜芳基烷基可隨意地經一或多個取代基取代，諸如鹵基、羥基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、醯基、烷氧基-羰基、胺基、硝基、巰基和烷氧硫基。如本發明文件中所使用之術語「鹵基」或「鹵素」係指氟、氯、溴或碘，且其陰離子被稱為鹵化物。如本文所使用之術語「衍生物」及其複數同時係指化妝品及/或醫藥上可接受的化合物，亦即衍生自可用於製備化妝品或藥物之關注的化合物，及化妝品及/或醫藥上不可接受的衍生物，因為該等可用於製備化妝品及/或醫藥上可接受的衍生物。如本發明文件中所使用之術語「鹽」及其複數係指現有技術中已知的那些任何類型的鹽，例如鹵鹽類、羥酸鹽類(諸如含氧酸鹽類、酸鹽類、鹼鹽類和複鹽類)、羥合鹽類(hydroxo salts)、混合鹽類、含氧鹽類或其他的水合鹽類。該術語同時包含化妝品及/或醫藥上可接受的鹽類及化妝品及/或醫藥上不可接受的鹽類，因為後者可用於製備化妝品及/或醫藥上可接受的鹽類。如本發明文件中所使用之術語「異構物」及其複數係指光學異構物、鏡像異構物、立體異構物或非鏡像異構物。個別的鏡像異構物或非鏡像異構物，以及彼等混合物可以現有技術中已知的慣例技術分離。如本文所使用之術語「溶劑合物」及其複數係指現有技術中已知的任何溶劑合物，諸如極性、非極性或兩性溶劑合物，且包括任何化妝品可接受的溶劑合物，當投予或施予關注之個體時(直接或間接)，其提供關注之化合物(本發明之胜肽或胜肽類)。溶劑合物較佳為水合物、與醇(諸如甲醇、乙醇、丙醇或異丙醇)之溶劑合物、與酯(諸如乙酸乙酯)之溶劑合物、與醚(諸如甲醚、乙醚或THF (四氫呋喃))之溶劑合物或與DMF (二甲基甲醯胺)之溶劑合物，且更佳為水合物或與醇(諸如乙醇)之溶劑合物。另外，如本文所使用之術語「胺基酸」及其複數包括以基因密碼編碼之胺基酸以及未經編碼之胺基酸，不論彼等是否為天然或非天然且不論彼等是否為D-和L-胺基酸。未經編碼之胺基酸的實例尤其為而不限於瓜胺酸、鳥胺酸、肌胺酸、鎖鏈素(desmosine)、正纈胺酸、4-胺基丁酸、2-胺基丁酸、2-胺基異丁酸、6-胺基己酸、1-萘基丙胺酸、2-萘基丙胺酸、2-胺基苯甲酸、4-胺基苯甲酸、4-氯苯基丙胺酸、2,3-二胺基丙酸、2,4-二胺基丁酸、環絲胺酸、肉鹼、半胱胺酸、青黴胺、焦麩胺酸、噻吩基丙胺酸、羥基脯胺酸、別異白胺酸、別蘇胺酸、六氫異煙酸(isonipecotic acid)、異絲胺酸、苯基甘胺酸、司他汀(statin)、β-丙胺酸、正白胺酸、N-甲基胺基酸、α-胺基酸和β-胺基酸，以及彼等之衍生物。不過，在現有技術中已知更多非天然胺基酸(參見例如“Unusual amino acids in peptide synthesis ” by D. C. Roberts and F. Vellaccio、The Peptides、Vol. 5 (1983)、Chapter VI、Gross E. and Meienhofer J.、Eds.、Academic Press、New York、USA)。如本文所使用之關於胜肽、多胜肽及蛋白質之「一致性百分比」具有現有技術中賦予之常見意義，且因此關於在最適化比對該等序列後相比的兩個胺基酸序列之間相同的胺基酸百分比，其中該百分比僅為統計，且兩個胺基酸序列之間的差異係任意地分布於整個序列中。應理解「最適化比對」為得到更大的一致性百分比之胺基酸序列比對。一致性百分比的計算係如下：測定其中胺基酸在兩個相比之序列中相同的相同位置之數目、將相同位置之數目除以比較位置之數目及將結果乘以100以獲得兩個序列之間的一致性百分比。在兩個胺基酸序列之間的序列比較可以人工或利用現有技術中已知的電腦程式(諸如BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)演算法)進行。如本文所使用之「黑眼圈」及「眼眶周圍色素過多」可互換使用且獲得彼等在現有技術中通常具有的意義。簡言之、黑眼圈或眼眶周圍色素過多正常係以眼眶周圍黑色素沉積、眼睛周圍之真皮微血管網的藍色和可見性、及提供皮膚變薄和臉頰垮下之皮下脂肪流失為特徵。如本文所使用之IL33係指編碼蛋白質介白素-33之基因。如本文所使用之IL-33係指蛋白質介白素-33。如上文所述，在第一態樣中，本發明係指包含6個胺基酸之胜肽，其中該胜肽包含至少3個精胺酸。如上文所述，本發明之胜肽調節基因IL33及/或蛋白質介白素-33之表現，更佳地調降基因IL33及/或蛋白質介白素-33之表現。在本發明之範圍內亦包括本發明之胜肽的異構物、鹽類、溶劑合物及/或衍生物及其混合物；更佳地包括本發明之胜肽的化妝品及/或醫藥上可接受的異構物、鹽類、溶劑合物及/或衍生物及其混合物。預期用於或存在於本發明之胜肽中的胺基酸為L-胺基酸、D-胺基酸或其組合。在較佳的實施態樣中，用於或存在於本發明之胜肽中的胺基酸為L-胺基酸。上文提及之異構物較佳為立體異構物。預期該立體異構物為鏡像異構物或非鏡像異構物。因此，在本發明之較佳的實施態樣中，胜肽為消旋性混合物、非鏡像異構物混合物、純鏡像異構物或純非鏡像異構物。在較佳的實施態樣中，在本發明之胜肽中，該6個胺基酸為3個精胺酸、1個麩醯胺酸、1個甲硫胺酸及1個麩胺酸。本發明之胜肽亦較佳地具有依照式(I)之序列： R₁ -AA₁ -AA₂ -AA₃ -AA₄ -AA₅ -AA₆ -R₂ 其中： - R₁ 係選自H、經取代或未經取代之非環脂族、經取代或未經取代之脂環基、經取代或未經取代之雜環基、經取代或未經取代之雜芳基烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之芳烷基和R₅ -CO-，其中R₅ 係選自由下列者所形成之群組：經取代或未經取代之C₁ -C₂₄ 烷基、經取代或未經取代之C₂ -C₂₄ 烯基、經取代或未經取代之C₂ -C₂₄ 炔基、經取代或未經取代之C₃ -C₂₄ 環烷基、經取代或未經取代之C₅ -C₂₄ 環烯基、經取代或未經取代之C₈ -C₂₄ 環炔基、經取代或未經取代之C₆ -C₃₀ 芳基、經取代或未經取代之C₇ -C₂₄ 芳烷基、經取代或未經取代之3至10員的雜環基環及經取代或未經取代之2至24個碳原子與1至3個除了碳以外的原子和1至6個碳原子的烷基鏈之雜芳基烷基；及 - R₂ 係選自H、-NR₃ R₄ -、-OR₃ 和-SR₃ ，其中R₃ 和R₄ 係獨立地選自H、經取代或未經取代之非環脂族基團、經取代或未經取代之脂環基、經取代或未經取代之雜環基、經取代或未經取代之雜芳基烷基、經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之芳烷基。 R₁ 較佳地選自H或R₅ -CO-，其中R₅ 係選自由下列者所形成之群組：經取代或未經取代之C₁ -C₂₄ 烷基、經取代或未經取代之C₂ -C₂₄ 烯基、經取代或未經取代之C₂ -C₂₄ 炔基、經取代或未經取代之C₃ -C₂₄ 環烷基、經取代或未經取代之C₅ -C₂₄ 環烯基、經取代或未經取代之C₈ -C₂₄ 環炔基、經取代或未經取代之C₆ -C₃₀ 芳基、經取代或未經取代之C₇ -C₂₄ 芳烷基、經取代或未經取代之3至10員的雜環基環及經取代或未經取代之2至24個碳原子與1至3個除了碳以外的原子和1至6個碳原子的烷基鏈之雜芳基烷基。R₁ 甚至更佳地選自H、乙醯基(在下文之Ac)、三級丁醯基、己醯基、2-甲基己醯基、環己烷羧基、辛醯基、癸醯基、月桂醯基、肉豆蔻醯基、棕櫚醯基(在下文之Pal)、硬脂醯基、油醯基和亞麻油醯基。R₁ 甚至更佳為Ac。 R₂ 較佳為NH₂ 。因此，R₁ 更佳為Ac，且R₂ 更佳為NH₂ 。本發明之胜肽較佳地包含Arg-Arg、Arg-Glu、Met-Arg或其組合於其序列內。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽包含Arg-Arg、Arg-Glu和Met-Arg於其序列內。在最佳的實施態樣之一中，本發明之胜肽的序列為： R₁ -Arg-Arg-Gln-Met-Arg-Glu-R₂ (R₁ -SEQ ID NO:1-R₂ )； R₁ -Met-Arg-Arg-Glu-Gln-Arg-R₂ (R₁ -SEQ ID NO:2-R₂ )；或 R₁ -Arg-Glu-Gln-Met-Arg-Arg-R₂ (R₁ -SEQ ID NO:3-R₂ )。如上文所述，R₁ 較佳地選自H或R₅ -CO-，其中R₅ 係選自由下列者所形成之群組：經取代或未經取代之C₁ -C₂₄ 烷基、經取代或未經取代之C₂ -C₂₄ 烯基、經取代或未經取代之C₂ -C₂₄ 炔基、經取代或未經取代之C₃ -C₂₄ 環烷基、經取代或未經取代之C₅ -C₂₄ 環烯基、經取代或未經取代之C₈ -C₂₄ 環炔基、經取代或未經取代之C₆ -C₃₀ 芳基、經取代或未經取代之C₇ -C₂₄ 芳烷基、經取代或未經取代之3至10員的雜環基環及經取代或未經取代之2至24個碳原子與1至3個除了碳以外的原子和1至6個碳原子的烷基鏈之雜芳基烷基。R₁ 甚至更佳地選自H、乙醯基(在下文之Ac)、三級丁醯基、己醯基、2-甲基己醯基、環己烷羧基、辛醯基、癸醯基、月桂醯基肉豆蔻醯基、棕櫚醯基(在下文之Pal)、硬脂醯基、油醯基和亞麻油醯基，R₁ 甚至更佳為Ac。亦如上文所述，R₂ 較佳為NH₂ 。因此，在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽的序列為： Ac-Arg-Arg-Gln-Met-Arg-Glu-NH₂ (Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ )； Ac-Met-Arg-Arg-Glu-Gln-Arg-NH₂ (Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ )；或 Ac-Arg-Glu-Gln-Met-Arg-Arg-NH₂ (Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ )。如自下文所包括的實例可直接得出，本發明之胜肽能夠調降基因IL33及蛋白質IL-33之表現。本發明之胜肽亦提供有利的細胞外基質相關基因調控、抑制酪胺酸酶活性及防止蛋白質糖化和脂質過氧化。因此，本發明之胜肽可用於化妝品及藥物中以治療皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更確切地：在給出上文所提出及下文所包括的實例中證明之活性的化妝品中，本發明之胜肽至少可用於治療眼袋、眼瞼瑕疵、皺紋(較佳為眼睛周圍的皺紋)和色素過多(較佳為眼眶周圍色素過多。本發明之胜肽亦能夠預防、減少及/或逆轉在睡眠剝奪之皮膚中的影響，亦即該胜肽能夠治療與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。在給出上文所提出及下文所包括的實例中證明之活性的醫藥中，本發明之胜肽可用於治療與發炎、血管生成及/或色素過多有關的醫學狀況、與脂質過氧化有關的疾病、與蛋白質糖化有關的疾病或其組合。本發明之胜肽最佳地至少可用於治療眼瞼瑕疵，更佳地治療眼皮鬆弛下垂症、下垂(例如腱膜性瞼下垂和腱膜性眼瞼下垂)、瞼外翻和瞼內翻。因此，本發明之胜肽解決存在於現有技術中及上文提及之需求及技術問題。另外，在本發明之範圍內亦包括與上文提及之特異性序列中任一者具有70%之一致性百分比，較佳為80%，更佳為90%，更佳為95%，甚至更佳為99%之一致性百分比的胜肽(亦即R₁ -Arg-Arg-Gln-Met-Arg-Glu-R₂ ；R₁ -Met-Arg-Arg-Glu-Gln-Arg-R₂ ；或R₁ -Arg-Glu-Gln-Met-Arg-Arg-R₂ ，較佳為Ac-Arg-Arg-Gln-Met-Arg-Glu-NH₂ ；Ac-Met-Arg-Arg-Glu-Gln-Arg-NH₂ ；或Ac-Arg-Glu-Gln-Met-Arg-Arg-NH₂ )，且該等胜肽仍顯示本文以本發明之胜肽所述之活性。本發明之胜肽可以現有技術中已知的任何方式合成及生產。例如，其可藉由使該胜肽表現在細胞培養物中的化學合成法(較佳地利用固相胜肽合成法)或利用在植物或動物中以轉基因生產胜肽來合成及生產。另外，本發明之胜肽可以現有技術中已知的任何方式純化。在較佳的實施態樣中，本發明之胜肽為環胜肽。在較佳的實施態樣中，本發明之胜肽適合或適應於藉助電離子透入法施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在進一步較佳的實施態樣中，本發明之胜肽適合或適應於皮下施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在另一較佳的實施態樣中，本發明之胜肽本發明之胜肽適合或適應於局部施予(較佳地呈乳霜形式)，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在第二態樣中，本發明係指包含至少一種依照本發明之胜肽的組成物。預期本發明之組成物包含一種類型的本發明之胜肽或不同的本發明之胜肽的組合或混合物，較佳為一種類型的本發明之胜肽。在較佳的實施態樣中，本發明之組成物為化妝品組成物。因此，在此實施態樣中，本發明之化妝品組成物包含化妝品有效量的至少一種本發明之胜肽，本發明之化妝品組成物更佳地包含0.0001% (以g/100 mL計之重量/體積，在下文之w/v)至0.05% (w/v)的至少一種本發明之胜肽。在最佳的實施態樣中，本發明之化妝品組成物包含0.0001% (w/v)至0.001% (w/v)的至少一種本發明之胜肽，更佳為0.0005% (w/v)。在另一最佳的實施態樣中，本發明之化妝品組成物包含0.05% (w/v)至0.001% (w/v)的至少一種本發明之胜肽。預期本發明之化妝品組成物亦包含至少一種額外的化妝品成分。該額外的化妝品成分可為至少一種賦形劑及/或至少一種額外的化妝品活性成分。額外的化妝品成分包含那些現有技術中經常使用之成分，例如佐劑(諸如穩定劑、增溶劑、維生素、著色劑和香料)、載劑及/或其他的化妝品活性成分。該額外的化妝品成分必須與組成物之其餘組分及尤其與本發明之組成物包含的本發明之胜肽在物理及化學上可相容。同樣地，該額外的化妝品成分之性質不准以不可接受地改變本發明之胜肽及組成物的效益。該額外的化妝品成分可為合成或天然來源，諸如植物萃取物，或其可衍生自生物發酵過程(參見例如第11版CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Eleventh Edition (2006))。預期上文提及之額外的化妝品成分包含那些常用於護理；清潔皮膚及/或頭髮；及/或預防多汗症之除臭劑及/或乳霜之組成物中的成分，諸如尤其為例如抑制黑色素合成之劑、增白劑或去色素劑、抗老化劑、抑制NO-合成酶之劑、抗氧化劑、抗大氣污染劑及/或自由基誘捕劑、抗糖化劑、乳化劑、潤膚劑、有機溶劑、液體推進劑、皮膚調理劑，諸如濕潤劑、保濕物質、α羥酸、保濕劑、維生素、顏料或著色劑、染料、膠凝聚合物、增稠劑、界面活性劑、軟化劑、其他抗皺紋劑、能夠減少或消除眼下的眼袋之劑、剝離劑、抗微生物劑、抗真菌劑、殺菌劑、刺激真皮或表皮巨分子合成及/或能夠預防或抑制彼等降解之劑，諸如刺激膠原蛋白合成之劑、刺激彈力蛋白合成之劑、刺激層黏連蛋白合成之劑、抑制膠原蛋白降解之劑、抑制彈力蛋白降解之劑、刺激纖維母細胞增殖生之劑、刺激角質細胞增生之劑、刺激角質細胞分化之劑、刺激脂質合成和角質層組分(腦醯胺、脂肪酸等)合成之劑、皮膚鬆弛劑(dermorelaxing agent)、刺激糖胺聚多糖合成之劑、DNA修補劑、DNA保護劑、刺激生物體中沈澱(proteosome)活性之劑、抗搔癢劑、治療敏感性皮膚之劑、緊緻劑(reaffirming agent)、收斂劑、皮脂生產調控劑、刺激脂質分解之劑、抗脂肪團劑(anti-cellulite agent)、鎮定劑(calming agent)、抗發炎劑、作用於毛細循環及/或微循環之劑、作用於細胞粒腺體之劑、意欲改善真皮-表皮接合之劑、保存劑、香料、螯合劑、植物萃取物、精油、海藻萃取物、衍生自生物發酵過程之劑、無機鹽、細胞萃取物及/或防曬劑(solar filter)(具有對抗紫外線A和B之活性的有機或無機光保護劑)。在一實施態樣中，額外的化妝品成分中之至少一者為化妝品活性主體或物質，其可發揮與那些上文以本發明之胜肽所揭示者相同、類似、輔助或不同的化妝品活性。預期本發明之組成物包含其他的抗皺紋劑或抗老化劑，例如膠原蛋白、彈力蛋白、生長因子、玻尿酸加強劑、屏障功能劑、增亮劑(illuminating agent)、刺激膠原蛋白I、III、IV及/或VI和層黏連蛋白的表現及/或合成之劑、刺激糖胺聚多糖或玻尿酸合成之劑、刺激彈力蛋白和其他彈性纖維相關蛋白質的表現及/或合成之劑、抑制膠原蛋白及/或彈性纖維降解之劑、刺激粒腺體相關蛋白質(例如長壽蛋白(sirtuin)和烏頭酸酶)的表現及/或合成之劑、刺激局部黏附蛋白質的表現及/或合成之劑、刺激角質細胞及/或纖維母細胞增生及/或分化之劑、抗氧化劑、抗大氣污染劑及/或自由基誘捕劑、抗糖化劑、解毒劑、降低自然性老化、環境性老化和發炎性老化之劑、及降低黑色素生產及/或抑制酪胺酸酶之劑、及/或刺激脂質合成和表皮(角蛋白)組分，且更尤其為角質層(角蛋白、腦醯胺、絲聚蛋白、兜甲蛋白(loricrin)和SPRR1B)合成之劑。額外的化妝品成分中之至少一者更佳為Argireline^® (乙醯基六胜肽-8)、Leuphasyl^® (五胜肽-3)、Inyline^® (乙醯基六胜肽-30)、Syn-Ake^® (三胜肽-3)或其組合。另外，本發明之化妝品組成物(或本發明之胜肽)可調配成現有技術中經常使用之任何形式，例如溶液、懸浮液、乳液、漿液、凝膠、乳霜、粉末、噴霧、洗液、油、擦劑、血清、慕斯、軟膏、棒或筆，包括「留置型(leave on)」和「洗淨型(rinse-off)」調配物。本發明之化妝品組成物亦可利用現有技術中已知的技術併入不同類型的固體配件中，諸如濕巾、水凝膠、黏著性(或非黏著性)貼片或面膜，或其可能併入不同的化妝系列產品中，諸如尤其為遮瑕膏(concealer)、化妝基底、洗液或卸妝水。亦預期如本文所揭示的本發明之化妝品組成物或本發明之胜肽二者亦可出於獲得更大的活性成分穿透之目的而併入化妝品持續釋放系統及/或載劑中，諸如脂質體、毫米粒子(milliparticle)、微米粒子和奈米粒子，以及併入海綿、囊泡、微胞、毫米球、微米球、奈米球、脂質球、毫米膠囊、微米膠囊和奈米膠囊中，以及併入微乳液和奈米乳液中。在較佳的實施態樣中，本發明之化妝品組成物適合或適應於藉助電離子透入法施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在進一步較佳的實施態樣中，本發明之化妝品組成物適合或適應於皮下施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在另一較佳的實施態樣中，本發明之化妝品組成物適合或適應於局部施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在另一較佳的實施態樣中，本發明之組成物為醫藥組成物。因此，在此實施態樣中，本發明之醫藥組成物包含醫藥有效量的至少一種本發明之胜肽，本發明之醫藥組成物更佳地包含0.0001% (w/v)至0.05% (w/v)的至少一種本發明之胜肽。在最佳的實施態樣中，本發明之醫藥組成物包含0.0001% (w/v)至0.001% (w/v)的至少一種本發明之胜肽，更佳為0.0005% (w/v)。在另一最佳的實施態樣中，本發明之醫藥組成物包含0.05% (w/v)至0.001% (w/v)的至少一種本發明之胜肽。醫藥組成物可呈現有技術中已知的任何形式，其適合於所選擇的途徑。預期本發明之醫藥組成物適合或適應於現有技術中已知的任何方式及任何途徑投予(例如皮下、肌肉內、靜脈內、局部或經口；在後者的例子中，例如呈鹽水溶液及/或生物可降解的材料(諸如聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸-乙醇酸共聚物、聚己內酯及/或膽固醇之聚合物)的形式。本發明之醫藥組成物更佳地適合或適應於局部投予，甚至更佳地呈乳霜形式。預期本發明之醫藥組成物亦包含至少一種額外的醫藥成分。該額外的醫藥成分可為至少一種賦形劑及/或至少一種額外的醫藥活性成分。如自下文所包括的實例可直接得出，本發明之胜肽能夠調降基因IL33及蛋白質IL-33之表現。本發明之胜肽亦提供有利的細胞外基質相關基因調控、抑制酪胺酸酶活性及防止蛋白質糖化和脂質過氧化。因此，本發明之組成物可用於化妝品及藥物中以治療皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更確切地： - 在給出上文所提出及下文所包括的實例中證明之活性的化妝品中，本發明之胜肽至少可用於治療眼袋、眼瞼瑕疵、皺紋(較佳為眼睛周圍的皺紋)和色素過多(較佳為眼眶周圍色素過多。本發明之胜肽亦能夠預防、減少及/或逆轉在睡眠剝奪之皮膚中的影響，亦即該胜肽能夠治療與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。 - 在給出上文所提出及下文所包括的實例中證明之活性的醫藥中，本發明之胜肽可用於治療與發炎、血管生成及/或色素過多有關的醫學狀況、與脂質過氧化有關的疾病、與蛋白質糖化有關的疾病或其組合。本發明之胜肽最佳地至少可用於治療眼瞼瑕疵，更佳地治療眼皮鬆弛下垂症、下垂(例如腱膜性瞼下垂和腱膜性眼瞼下垂)、瞼外翻和瞼內翻。因此，本發明之組成物解決存在於現有技術中及上文提及之需求及技術問題。如上文已述，在第三態樣中，本發明係指依照本發明之胜肽或化妝品組成物作為化妝品之用途。依照本發明之胜肽或化妝品組成物係如上文所解釋。作為化妝品之用途較佳地用於治療與發炎、血管生成、細胞外基質損傷、氧化應激、真皮細胞接合的改變、細胞凋亡及/或色素過多有關的美容性狀況，較佳為與美容性發炎、美容性血管生成、美容性細胞外基質損傷、美容性氧化應激、美容性真皮細胞接合的改變、美容性細胞凋亡及/或美容性色素過多有關的美容性狀況。作為化妝品之用途更佳地用於治療皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更佳地用於預防、減少及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。很顯然上文提及之皮膚老化徵象為美容性皮膚老化徵象及/或美容性皮膚瑕疵。皮膚老化係由於自然性及/或環境性老化。該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵更佳地由IL-33失調而產生。如上文所述，本發明之胜肽及化妝品組成物調降IL-33 (彼等調降IL33基因之表現及/或介白素33之表現)。在最佳的實施態樣中，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼袋、眼瞼瑕疵、皺紋(較佳為眼睛周圍的皺紋)、色素過多(較佳為眼眶周圍色素過多)或其組合。眼瞼瑕疵較佳為眼瞼鬆垂，更佳為美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性下垂、美容性瞼外翻和美容性瞼內翻，更佳為美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性腱膜性瞼下垂、美容性腱膜性眼瞼下垂、美容性退行性瞼外翻和美容性退行性瞼內翻。因此，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵較佳為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多、眼瞼鬆垂或其組合，更佳為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多、美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性腱膜性瞼下垂、美容性腱膜性眼瞼下垂、美容性退行性瞼外翻和美容性退行性瞼內翻或其組合。在最佳的實施態樣中，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多或其組合。在另一最佳的實施態樣中，作為化妝品之用途較佳地用於治療對睡眠剝奪之皮膚的影響，更佳地預防、減少及/或消除與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵較佳為眼瞼鬆垂(如上文所解釋)、眼眶周圍色素過多、與受損的屏障功能相關聯的徵象或其組合。在較佳的實施態樣中，與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼眶周圍色素過多。在另一較佳的實施態樣中，與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為與受損的屏障功能相關聯的徵象，更佳為改變的皮膚滲透性、皮膚發炎、在皮膚中缺乏細胞內聚性或其組合，甚至更佳為眼袋、皺紋(較佳為眼睛周圍的皺紋)或其組合。同樣地，在較佳的實施態樣中，作為化妝品之用途係用於個體中。個體較佳為哺乳動物，甚至更佳為人類。預期本發明之胜肽或化妝品組成物係藉助於電離子透入法施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。亦預期本發明之胜肽或化妝品組成物係經皮下施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽或化妝品組成物係經局部施予(較佳地呈乳霜形式)，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。另外，在作為本發明之化妝品的用途中，本發明之胜肽或化妝品組成物係以化妝品有效量使用。本發明之胜肽更佳地以0.0001% (w/v)至0.05% (w/v)之濃度使用。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽係以0.0001% (w/v)至0.001% (w/v)，較佳為0.0005% (w/v)之濃度使用。在另一最佳的實施態樣中，本發明之胜肽係以0.05% (w/v)至0.001% (w/v)之濃度使用。在第四態樣中，本發明係指依照本發明之胜肽或化妝品組成物之化妝品用途。依照本發明之胜肽或化妝品組成物係如上文所解釋。化妝品用途較佳地用於治療與發炎、血管生成、細胞外基質損傷、氧化應激、真皮細胞接合的改變、細胞凋亡及/或色素過多有關的美容性狀況，較佳為與美容性發炎、美容性血管生成、美容性細胞外基質損傷、美容性氧化應激、美容性真皮細胞接合的改變、美容性細胞凋亡及/或美容性色素過多有關的美容性狀況。化妝品用途更佳地用於治療皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更佳地用於預防、減少及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。很顯然上文提及之皮膚老化徵象為美容性皮膚老化徵象及/或美容性皮膚瑕疵。皮膚老化係由於自然性及/或環境性老化。該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵更佳地由IL-33失調而產生。如上文所述，本發明之胜肽及化妝品組成物調降IL-33 (彼等調降IL33基因之表現及/或介白素33之表現)。在最佳的實施態樣中，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼袋、眼瞼瑕疵、皺紋(較佳為眼睛周圍的皺紋)、色素過多(較佳為眼眶周圍色素過多)或其組合。眼瞼瑕疵較佳為眼瞼鬆垂，更佳為美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性下垂、美容性瞼外翻和美容性瞼內翻，更佳為美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性腱膜性瞼下垂、美容性腱膜性眼瞼下垂、美容性退行性瞼外翻和美容性退行性瞼內翻。因此，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵較佳為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多、眼瞼鬆垂或其組合，更佳為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多、美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性腱膜性瞼下垂、美容性腱膜性眼瞼下垂、美容性退行性瞼外翻和美容性退行性瞼內翻或其組合。在最佳的實施態樣中，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多或其組合。在另一最佳的實施態樣中，化妝品用途係用於治療對睡眠剝奪之皮膚的影響，更加地用於預防、減少及/或消除與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵較佳為眼瞼鬆垂(如上文所解釋)、眼眶周圍色素過多、與受損的屏障功能相關聯的徵象或其組合。在較佳的實施態樣中，與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼眶周圍色素過多。在另一較佳的實施態樣中，與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為與受損的屏障功能相關聯的徵象，更佳為改變的皮膚滲透性、皮膚發炎、在皮膚中缺乏細胞內聚性或其組合，甚至更佳為眼袋、皺紋(較佳為眼睛周圍的皺紋)或其組合。同樣地，在較佳的實施態樣中，本發明之化妝品用途係用於個體中。個體更佳為哺乳動物，甚至更佳為人類。預期本發明之胜肽或化妝品組成物係藉助於電離子透入法施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。亦預期本發明之胜肽或化妝品組成物係經皮下施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽或化妝品組成物係經局部施予(較佳地呈乳霜形式)，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。另外，在本發明之化妝品用途中，本發明之胜肽或組成物係以化妝品有效量使用。本發明之胜肽更佳地以0.0001% (w/v)至0.05% (w/v)之濃度使用。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽係以0.0001% (w/v)至0.001% (w/v)，更佳為0.0005% (w/v)之濃度使用。在另一最佳的實施態樣中，本發明之胜肽係以0.05% (w/v)至0.001% (w/v)之濃度使用。在第五態樣中，本發明係指用於需要其之個體的美容性治療之方法，其包含在需要其之該個體中使用本發明之胜肽或化妝品組成物。依照本發明之胜肽或化妝品組成物係如上文所解釋。該方法較佳地用於與發炎、血管生成、細胞外基質損傷、氧化應激、真皮細胞接合的改變、細胞凋亡及/或色素過多有關的美容性狀況之美容性治療，較佳為與美容性發炎、美容性血管生成、美容性細胞外基質損傷、美容性氧化應激、美容性真皮細胞接合的改變、美容性細胞凋亡及/或美容性色素過多有關的美容性狀況。該方法更佳地用於皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵之美容性治療，更佳地用於預防、減少及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。很顯然上文提及之皮膚老化徵象為美容性皮膚老化徵象及/或美容性皮膚瑕疵。皮膚老化係由於自然性及/或環境性老化。該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵更佳地由IL-33失調而產生。如上文所述，本發明之胜肽及化妝品組成物調降IL-33 (彼等調降IL33基因之表現及/或介白素33之表現)。在最佳的實施態樣中，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼袋、眼瞼瑕疵、皺紋(較佳為眼睛周圍的皺紋)、色素過多(較佳為眼眶周圍色素過多)或其組合。眼瞼瑕疵較佳為眼瞼鬆垂，更佳為美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性下垂、美容性瞼外翻和美容性瞼內翻，更佳為美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性腱膜性瞼下垂、美容性腱膜性眼瞼下垂、美容性退行性瞼外翻和美容性退行性瞼內翻。因此，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵較佳為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多、眼瞼鬆垂或其組合，更佳為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多、美容性眼皮鬆弛下垂症、美容性腱膜性瞼下垂、美容性腱膜性眼瞼下垂、美容性退行性瞼外翻和美容性退行性瞼內翻或其組合。在最佳的實施態樣中，該皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼袋、在眼睛周圍的皺紋、眼眶周圍色素過多或其組合。在另一最佳的實施態樣中，該方法係用於美容性治療對睡眠剝奪之皮膚的影響，更佳為用於美容性治療與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，甚至更佳為用於美容性預防、減少及/或消除與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵。與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵較佳為眼瞼鬆垂(如上文所解釋)、眼眶周圍色素過多、與受損的屏障功能相關聯的徵象或其組合。在較佳的實施態樣中，與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為眼眶周圍色素過多。在另一較佳的實施態樣中，與睡眠剝奪相關聯的皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵為與受損的屏障功能相關聯的徵象，更佳為改變的皮膚滲透性、皮膚發炎、在皮膚中缺乏細胞內聚性或其組合，甚至更佳為眼袋、皺紋(較佳為眼睛周圍的皺紋)或其組合。同樣地，在較佳的實施態樣中，需要其之個體為哺乳動物，甚至更佳為人類。在本發明用於美容性治療之方法中，本發明之胜肽或化妝品組成物用於需要其之個體較佳地藉助於施予本發明之該胜肽或化妝品組成物至需要其之個體中。預期本發明之胜肽或化妝品組成物係藉助於電離子透入法施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。亦預期本發明之胜肽或化妝品組成物係經皮下施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽或化妝品組成物係經局部施予(較佳地呈乳霜形式)，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。另外，在本發明之美容性方法中，本發明之胜肽或組成物係以化妝品有效量使用。本發明之胜肽更佳地以0.0001% (w/v)至0.05% (w/v)之濃度使用。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽係以0.0001% (w/v)至0.001% (w/v)，更佳為0.0005% (w/v)之濃度使用。在另一最佳的實施態樣中，本發明之胜肽係以0.05% (w/v)至0.001% (w/v)之濃度使用。在第六態樣中，本發明係指用作為藥物的本發明之胜肽或醫藥組成物。依照本發明之胜肽及醫藥組成物係如上文所解釋。本發明之胜肽或組成物較佳地以治療有效量使用。在較佳的實施態樣中，本發明之胜肽及組成物係用於哺乳動物中，更佳為用於人類。本發明之胜肽或醫藥組成物較佳地用於治療與發炎、血管生成、細胞外基質損傷、氧化應激、真皮細胞接合的改變、細胞凋亡及/或色素過多有關的醫學狀況、與脂質過氧化有關的疾病、與蛋白質糖化有關的疾病或其組合。與脂質過氧化有關的疾病為動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、早產兒視網膜病變、邊緣性人格疾患、氣喘、帕金森氏症(Parkinson’s disease)和腎損傷。與蛋白質糖化有關的疾病較佳為糖尿病(更佳為糖尿病血管病變)、腎衰竭和年齡相關的退行性疾病。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽或醫藥組成物係用於治療眼瞼瑕疵，較佳為眼瞼鬆垂，更佳為眼皮鬆弛下垂症、下垂、瞼外翻和瞼內翻，甚至更佳為眼皮鬆弛下垂症、腱膜性瞼下垂、腱膜性眼瞼下垂、退行性瞼外翻和退行性瞼內翻。預期本發明之胜肽或醫藥組成物係藉助於電離子透入法施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。亦預期本發明之胜肽或醫藥組成物係經皮下施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽或醫藥組成物係經局部施予(較佳地呈乳霜形式)，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在第七態樣中，本發明係指本發明之胜肽或醫藥組成物用於製造藥物之用途。依照本發明之胜肽及醫藥組成物係如上文所解釋。本發明之胜肽或組成物較佳地以治療有效量使用。在較佳的實施態樣中，本發明之胜肽及組成物係用於哺乳動物中，更佳地用於人類。該用途較佳地製造用於治療與發炎、血管生成、細胞外基質損傷、氧化應激、真皮細胞接合的改變、細胞凋亡及/或色素過多有關的醫學狀況、與脂質過氧化有關的疾病、與蛋白質糖化有關的疾病或其組合之藥物。與脂質過氧化有關的疾病較佳為動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、早產兒視網膜病變、邊緣性人格疾患、氣喘、帕金森氏症和腎損傷。與蛋白質糖化有關的疾病較佳為糖尿病(更佳為糖尿病血管病變)、腎衰竭和年齡相關的退行性疾病。在最佳的實施態樣中，該用途係製造用於治療眼瞼瑕疵，較佳為眼瞼鬆垂，更佳為眼皮鬆弛下垂症、下垂、瞼外翻和瞼內翻，甚至更佳為眼皮鬆弛下垂症、腱膜性瞼下垂、腱膜性眼瞼下垂、退行性瞼外翻和退行性瞼內翻之藥物。預期本發明之胜肽或醫藥組成物係藉助於電離子透入法施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。亦預期本發明之胜肽或醫藥組成物係經皮下施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽或醫藥組成物係經局部施予(較佳地呈乳霜形式)，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在最後的態樣中，本發明係指用於需要其之個體的醫學治療之方法，其包含使用本發明之胜肽或醫藥組成物。依照本發明之胜肽及醫藥組成物係如上文所解釋。本發明之胜肽或組成物較佳地以治療有效量使用。在較佳的實施態樣中，需要醫學治療之個體為哺乳動物，更佳為人類。在本發明用於美容性治療之方法中，本發明之胜肽或化妝品組成物用於需要其之個體較佳地藉助於施予本發明之該胜肽或化妝品組成物至需要其之個體中。本發明用於醫學治療之方法較佳地用於治療與發炎、血管生成、細胞外基質損傷、氧化應激、真皮細胞接合的改變、細胞凋亡及/或色素過多有關的醫學狀況、與脂質過氧化有關的疾病、與蛋白質糖化有關的疾病或其組合。與脂質過氧化有關的疾病較佳為動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、早產兒視網膜病變、邊緣性人格疾患、氣喘、帕金森氏症和腎損傷。與蛋白質糖化有關的疾病較佳為糖尿病(更佳為糖尿病血管病變)、腎衰竭和年齡相關的退行性疾病。在最佳的實施態樣中，本發明用於醫學治療之方法係用於治療眼瞼瑕疵，較佳為眼瞼鬆垂，更佳為眼皮鬆弛下垂症、下垂、瞼外翻和瞼內翻，甚至更佳為眼皮鬆弛下垂症、腱膜性瞼下垂、腱膜性眼瞼下垂、退行性瞼外翻和退行性瞼內翻。預期本發明之胜肽或醫藥組成物係藉助於電離子透入法施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。亦預期本發明之胜肽或醫藥組成物係經皮下施予，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。在最佳的實施態樣中，本發明之胜肽或醫藥組成物係經局部施予(較佳地呈乳霜形式)，更佳地施予個體(較佳為人類)的臉部，甚至更佳地施予眼睛及/或眼睛周圍。

實施例縮寫：用於胺基酸之縮寫係遵照1983 IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature recommendations outlined in Eur. J. Biochem. (1984) 138:937。 Ac，乙醯基；Arg，精胺酸；Boc，三級丁氧基羰基；C-端，羧基端；DCM，二氯甲烷；DIEA，N,N′-二異丙基乙胺；DIPCDI，N,N′-二異丙基碳二醯亞胺；DMF，N,N-二甲基甲醯胺；equiv，當量；ESI-MS，電噴霧離子化質譜法；Fmoc，9-茀基甲氧基羰基；Glu，麩胺酸；Gln，麩醯胺酸；hiPSC，人類誘導性多能幹細胞；HOBt，1-羥基苯并三唑；HPLC，高性能液相層析術；HRP，山葵過氧化酶；INCI，化妝品成分之國際命名；MBHA，對-甲基二苯甲胺；Me，甲基；MeCN，乙睛；MeOH，甲醇；Met，甲硫胺酸；N-端，胺基端；Palm，棕櫚醯基；Pbf，2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基；PFA，三聚甲醛；PMA，佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯；PMSF，苯基甲烷磺醯基；RT，室溫；tBu，三級丁基；TFA，三氟乙酸；TIS，三異丙基矽烷；TMB，四甲基聯苯胺；Trt，三苯基甲基或三苯甲基。關於實施例中包括的化學合成程序，應注意所有的合成方法皆在裝有多孔聚乙烯盤的聚丙烯注射器或裝有多孔盤的Pyrex^® 反應器中進行。所有的試劑及溶劑皆為合成品質，且在沒有任何額外處理下使用。溶劑及可溶性試劑係以抽氣移除。Fmoc基團係以哌啶-DMF (2:8，v/v)(至少1×1 min，2×10 min，5 mL /克樹脂)移除(Lloyd Williams P.等人之Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins , CRC, 1997, Boca Raton (Fla., USA))。在去保護、偶合及再去保護階段之間的清洗係以DMF (3×1 min)及DCM (3×1 min)進行，每次使用10 ml溶劑/克樹脂。偶合反應係以3 ml溶劑/克樹脂執行。偶合控制係藉由進行茚三酮(ninhydrin)試驗來執行(Kaiser E.等人之Anal. Biochem., 1970, 34: 595598)。所有的合成反應及清洗係在RT下進行。實施例 1. 胜肽之合成及製備 -獲得Fmoc-AA₁ -AA₂ -AA₃ -AA₄ -AA₅ -AA₆ -Rink-MBHA-樹脂，其中AA₁ 為L-Arg；AA₂ 為L-Arg；AA₃ 為L-Gln；AA₄ 為L-Met；AA₅ 為L-Arg；及AA₆ 為L-Glu。將重量標準化。將0.52 mmol/g之官能化的4.8 g (2.5 mmol) Fmoc-Rink-MBHA樹脂根據現有技術中已知的所述通用方案以哌啶-DMF處理，以便移除Fmoc基團。將3.19 g Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (7.5 mmol；3當量)在DIPCDI (1.17 mL；7.5 mmol；3當量)及HOBt (1.01 g；7.5 mmol；3當量)的存在下使用DMF作為溶劑經1小時併入去保護之樹脂上。接著將樹脂以現有技術中已知的所述通用方法清洗，且重複Fmoc基團之去保護處理以偶合緊鄰的胺基酸。遵照先前所述之方案，依序偶合4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)；接著2.78 g Fmoc-L-Met-OH (7.5 mmol；3當量)；接著4.58 g Fmoc-L-Gln(Trt)-OH (7.5 mmol；3當量)；接著4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)；及接著4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)，各偶合係在1.01 g HOBt (7.5 mmol；3當量)及1.17 mL DIPCDI (7.5 mmol；3當量)的存在下。如上文已述，在各胺基酸添加步驟之間執行Fmoc基團之去保護處理。在合成後，將胜肽樹脂以DCM清洗(5次，每次3分鐘)且在真空下乾燥。 -獲得Fmoc-AA₁ -AA₂ -AA₃ -AA₄ -AA₅ -AA₆ -Rink-MBHA-樹脂，其中AA₁ 為L-Met；AA₂ 為L-Arg；AA₃ 為L-Arg；AA₄ 為L-Glu；AA₅ 為L-Gln；and AA₆ 為L-Arg。將重量標準化。將0.52 mmol/g之官能化的4.8 g (2.5 mmol) Fmoc-Rink-MBHA樹脂根據現有技術中已知的所述通用方案以哌啶-DMF處理，以便移除Fmoc基團。將4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)在DIPCDI (1.17 mL；7.5 mmol；3當量)及HOBt (1.01 g；7.5 mmol；3當量)的存在下使用DMF作為溶劑經1小時併入去保護之樹脂上。接著將樹脂以現有技術中已知的所述通用方法清洗，且重複Fmoc基團之去保護處理以偶合緊鄰的胺基酸。遵照先前所述之方案，依序偶合4.58 g Fmoc-L-Gln(Trt)-OH (7.5 mmol；3當量)；接著3.19 g Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (7.5 mmol；3當量)；接著4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)；接著4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)；及接著2.78 g Fmoc-L-Met-OH (7.5 mmol；3當量)，各偶合係在1.01 g HOBt (7.5 mmol；3當量)及1.17 mL DIPCDI (7.5 mmol；3當量)的存在下。如上文已述，在各胺基酸添加步驟之間執行Fmoc基團之去保護處理。在合成後，將胜肽樹脂以DCM清洗(5次，每次3分鐘)且在真空下乾燥。 -獲得Fmoc-AA₁ -AA₂ -AA₃ -AA₄ -AA₅ -AA₆ -Rink-MBHA-樹脂，其中AA₁ 為L-Arg；AA₂ 為L-Glu；AA₃ 為L-Gln；AA₄ 為L-Met；AA₅ 為L-Arg；及AA₆ 為L-Arg。將重量標準化。將0.52 mmol/g之官能化的4.8 g (2.5 mmol) Fmoc-Rink-MBHA樹脂根據現有技術中已知的所述通用方案以哌啶-DMF處理，以便移除Fmoc基團。將4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)在DIPCDI (1.17 mL；7.5 mmol；3當量)及HOBt (1.01 g；7.5 mmol；3當量)的存在下使用DMF作為溶劑經1小時併入去保護之樹脂上。接著將樹脂以現有技術中已知的所述通用方法清洗，且重複Fmoc基團之去保護處理以偶合緊鄰的胺基酸。遵照先前所述之方案，依序偶合4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)；接著2.78 g Fmoc-L-Met-OH (7.5 mmol；3當量)；接著4.58 g Fmoc-L-Gln(Trt)-OH (7.5 mmol；3當量)；接著3.19 g Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (7.5 mmol；3當量)；及接著4.86 g Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol；3當量)，各偶合係在1.01 g HOBt (7.5 mmol；3當量)及1.17 mL DIPCDI (7.5 mmol；3當量)的存在下。如上文已述，在各胺基酸添加步驟之間執行Fmoc基團之去保護處理。在合成後，將胜肽樹脂以DCM清洗(5次，每次3分鐘)且在真空下乾燥。實施例 2. 依照實施例1合成之胜肽的Fmoc N端保護基之移除將實施例1獲得的胜肽基樹脂之N端Fmoc基團以DMF (1×1 min+2×10 min)中的20% (體積/體積，在下文之v/v)之哌啶去保護(Lloyd Williams P.等人之(1997)Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins . CRC, Boca Raton (Fla., USA))。將胜肽基樹脂以DMF (5×1 min)、DCM (4×1 min)清洗且在真空下乾燥。實施例 3. 引入R₁ 乙醯基至依照實施例2獲得的胜肽基樹脂上之方法將依照實施例2獲得的1 mmol (1當量)胜肽基樹脂在25當量DIEA的存在下使用5 mL DMF作為溶劑經25當量乙酸酐處理。使彼等處於反應狀態下30分鐘，隨後將胜肽基樹脂以DMF (5×1 min)、DCM (4×1 min)清洗且在真空下乾燥。實施例 4. 自依照實施例2和3獲得的胜肽基樹脂之聚合物載體之裂解方法將重量標準化。將實施例2或3中任一者獲得的200 mg乾燥之胜肽基樹脂在室溫下以5 mL TFA/TIS/H₂ O (90:5:5)攪拌處理2小時。收集過濾物且使用50 mL (8至10倍)冷的二乙醚沉澱。將醚溶液在減壓及室溫下蒸發至乾燥，將沉澱物再溶解於H₂ O中的50% (v/v)之MeCN中且凍乾。實施例 5. 依照實施例4合成及製備之胜肽的特徵依照實施例4獲得的胜肽之HPLC分析係以使用反相管柱(150x4.6 mm，XBridge Peptide BEH C18，3.5 µm，Waters，USA)之Shimadzu設備(Kyoto，Japan)以H₂ O (+0.045% (v/v)之TFA)中的MeCN (+0.036% (v/v)之TFA)梯度在1.25 mL/min之流速下進行，且在220 nm下進行檢測。所有的胜肽顯示超過80%之純度。所獲得的胜肽之鑑定係在Water ZQ 4000檢測器中使用MeOH作為移動相及0.2 mL/min之流速的ESI-MS確定。所獲得的結果證明正確且有效地合成胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 及Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 。實施例 6. 含有Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 之臉部化妝品組成物之製備製備依照以下表1之臉部化妝品組成物。為此目的，將來自A相之組分溶解在適合的容器中且將混合物加熱至70至75℃。將B項之組分在另一容器中混合在一起且將混合物加熱至70至75℃。接下來，將C相(TEGOLON 12-10 (INCI：Nylon-12))緩慢地添加至攪拌下的B相中，直到其完全溶解為止。將混合物加熱至70至75℃。接下來，將A相之溶液添加至渦輪攪拌下的B相與C相之混合物中以形成乳液。接下來，將D相緩慢地添加至混合物中，維持攪拌，直到獲得均勻的溶液為止。最後，將含有化合物Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ (INCI：水(水(Aqua))、甘油、辛醯二醇(Caprylyl Glycol)、Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ )之市售調配物緩慢地添加至約30℃下的混合物中，維持攪拌。

實施例 7. 在HEKa (成人表皮角質細胞)及HDFa (成人真皮纖維母細胞)細胞中的IL33表現調節之分析分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 及Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 對其調節HEKa細胞(全部三種胜肽)及HDFa (僅分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ )中的IL33表現之能力。在此實施例中所使用之胜肽係依照實施例1至5製備。製備在水中的1 mg/mL之胜肽儲備溶液。工作溶液係在相應的補充培養基中自儲備溶液以指定的濃度新鮮製備。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物樣品。執行RNA (核糖核酸)萃取及RT-qPCR (逆轉錄定量聚合酶鏈反應)。簡言之，將HDFa及HEKa細胞一式兩份(n=2)以4 x 10⁵ 個細胞/孔之密度接種在6-孔盤中且維持在標準的培養條件下(以1% (v/v)之LSGS補充之106培養基用於HDFa細胞；以1% (v/v)之EDGS和1% (v/v)之青黴素/鏈黴素補充之Medium Epilife用於HEKa細胞；37°C，95%之室內濕度，5%之CO₂ )歷經24小時。接著將細胞經0.01 mg/mL濃度之胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 或Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 處理24小時。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物。最後將細胞溶解，且將複製物使用Qiagen RNeasy Mini套組遵照製造商的用法說明匯集在一起以進行RNA萃取。使用經純化之RNA產生相應的cDNA (互補去氧核糖核酸)，其係藉由使用適合作為擴增模板之市售套組高容量cDNA逆轉錄套組(Applied Biosystems)之逆轉錄。RT-qPCR係以適合於IL33之TaqMan檢定探針(加上GAPDH-甘油醛3-磷酸脫氫酶-，其被用作為持家基因)及2x gene expression Master Mix使用StepOne加上即時PCR儀器執行。擴增包括以下40次循環：在95℃下15秒(變性)及在60℃下1分鐘(黏合(Annealing)與延展)(Arya, M., Shergill, I.S., Williamson, M., Gommersall, L., Arya, N., Patel, H.R. (2005)Basic principles of real-time quantitative PCR . Expert Rev. Mol. Diagn.; 5(2):209-19；及Jozefczuk, J. and Adjaye, J. (2011)Quantitative real-time PCR-based analysis of gene expression. Methods Enzymol. 500; 99-109)。所獲得的數據係使用ΔΔCt方法分析，該方法提供目標基因表現值作為與未經處理之基礎樣品相比的經處理之樣品的倍數變化。將兩種樣品以持家基因GAPDH (甘油醛3-磷酸脫氫酶)之相對表現標準化。分析步驟包括： 1. 計算各條件的平均Ct 2. 計算ΔCT試驗樣品及ΔCT未經處理之樣品 3. 計算ΔΔCT：ΔΔCT = ΔCT試驗樣品 – ΔCT未經處理之樣品 4. 以2^{- ΔΔCT} 獲得比率在此檢定中，所有測試之胜肽在HEKa細胞中皆觀察到明確調降的IL33基因表現： Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ ：相對於基礎對照物而在經處理之細胞中有-4.58倍變化。 Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ ：相對於基礎對照物而在經處理之細胞中有-3.77倍變化。 Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ ：相對於基礎對照物而在經處理之細胞中有-3.93倍變化。另外，關於胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ ，亦在HDFa細胞中觀察到調降的IL33表現(相對於基礎對照物而在經處理之細胞中有-1.22倍變化)。本發明實施例的結果證明本發明之胜肽對調降IL33表現的有用性，因此，如上文所解釋，提供主要對發炎及另外對皮膚屏障的改善、減少的血管生成及減少的色素沉著。因此，此實施例的結果證明本發明之胜肽對預防、減少及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更佳地對眼袋、眼瞼瑕疵、在眼睛周圍的皺紋和黑眼圈(眼眶周圍色素過多)的有用性。實施例 8. 在HDFa細胞中的蛋白質IL-33生成之分析分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對其調節成人真皮纖維母細胞中的IL33生成之能力。胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 係依照實施例1至5製備。將成人真皮纖維母細胞(HDFa)以1 x10⁵ 個細胞/mL之濃度在其相應的生長培養基中接種在24-孔盤上且在標準的培養條件中培育24小時；在此時，在IL-33誘導刺激物(IFNγ，300 U/mL)存在下添加三種不同濃度(0.005、0.01和0.05 mg/mL)的Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 。亦包括無刺激物的細胞作為基礎群組。陽性對照物群組為經300 U/mL之IFNγ處理，但未經本發明之胜肽處理之細胞。在24小時後，收集經調理之培養基且處理細胞以萃取蛋白質。將細胞溶解物中的IL-33含量以市售ELISA套組(DuoSet ELISA. R&D)分析。以自動化分光光度計盤讀取機測量吸光度。將此實施例所獲得的結果總結陳列於圖1中，其中可看出IFNγ (300 U/mL)誘導在HDFa細胞中增加蛋白質IL-33生成且胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 係以劑量依賴方式降低由暴露於IFNγ (300 U/mL)之HDFa細胞所生成之IL-33蛋白質含量(亦即當胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 的濃度增加時，則觀察到降低更多的IL-33蛋白質含量)。本發明實施例的結果證明本發明之胜肽對通過調降IL-33表現以減少發炎的有用性，因此，如上文所解釋，提供改善的皮膚屏障、減少的血管生成及減少的色素沉著。因此，此實施例的結果證明本發明之胜肽對預防、減少及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更佳地對眼袋、眼瞼瑕疵、在眼睛周圍的皺紋和黑眼圈(眼眶周圍色素過多)的有用性。實施例 9. 在成人表皮角質細胞(在下文之HEKa)中的基因表現調節之分析分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 及Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 對其調節與表皮細胞內聚性有關的基因表現之能力(關於所分析之基因，參見表2)。在此實施例中所使用之胜肽係依照實施例1至5製備。製備在水中的1 mg/mL之胜肽儲備溶液。工作溶液係在相應的補充培養基中自儲備溶液以指定的濃度新鮮製備。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物樣品。執行RNA (核糖核酸)萃取及RT-qPCR (逆轉錄定量聚合酶鏈反應)。簡言之，將HEKa細胞一式兩份(n=2)以4 x 10⁵ 個細胞/孔之密度接種在6-孔盤中且維持在標準的培養條件下(以1% (v/v)之EDGS及1% (v/v)之青黴素/鏈黴素補充之Medium Epilife；37°C，95%之室內濕度，5%之CO₂ )歷經24小時。接著將細胞經0.01 mg/mL濃度之胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 或Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 處理24小時。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物。最後將細胞溶解，且將複製物使用Qiagen RNeasy Mini套組遵照製造商的用法說明匯集在一起以進行RNA萃取。使用經純化之RNA產生相應的cDNA (互補去氧核糖核酸)，其係藉由使用適合作為擴增模板之市售套組高容量cDNA逆轉錄套組(Applied Biosystems)之逆轉錄。RT-qPCR係以適合於表1中所示之基因的TaqMan檢定探針(加上GAPDH-甘油醛3-磷酸脫氫酶-，其被用作為持家基因)及2x gene expression Master Mix使用StepOne加上即時PCR儀器執行。擴增包括以下40次循環：在95℃下15秒(變性)及在60℃下1分鐘(黏合與延展)(Arya, M., Shergill, I.S., Williamson, M., Gommersall, L., Arya, N., Patel, H.R. (2005)Basic principles of real-time quantitative PCR . Expert Rev. Mol. Diagn.; 5(2):209-19；及Jozefczuk, J. and Adjaye, J. (2011)Quantitative real-time PCR-based analysis of gene expression. Methods Enzymol. 500; 99-109)。

所獲得的數據係使用ΔΔCt方法分析，該方法提供目標基因表現值作為與未經處理之基礎樣品相比的經處理之樣品的倍數變化。將兩種樣品以持家基因GAPDH (甘油醛3-磷酸脫氫酶)之相對表現標準化。分析步驟包括： 1. 計算各條件的平均Ct 2. 計算ΔCT試驗樣品及ΔCT未經處理之樣品 3. 計算ΔΔCT：ΔΔCT = ΔCT試驗樣品 – ΔCT未經處理之樣品 4. 以2^{- ΔΔCT} 獲得比率將此檢定的結果亦總結陳列於表3至5中。

可自表3至5輕易地得出： - 胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 明確地調升與緊密接合及屏障功能有關的主要基因：JUP、OCLN、DSP、CLDN1、CLDN4、DSC2、CDSN、PCDH1、TJP1、PKP2和PPL。 - 胜肽Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 明確地調升與緊密接合及屏障功能有關的主要基因：OCLN、CLDN4、PCDH1、TJP1和PKP2。 - 胜肽Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 明確地調升與緊密接合及屏障功能有關的主要基因：JUP、OCLN、DSP、CLDN1、DSC1、CLDN4、DSC2、PCDH1、TJP1、PKP2和PPL。因此，本發明之胜肽(如以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 及Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 為例)減少、預防及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更確切地此實施例的結果證明本發明之胜肽對改善角質細胞之間的緊密接合、改善彼等之間的內聚性及因此改善皮膚的緊實性與減少皺紋的有用性。實施例 10. 在成人初代真皮纖維母細胞中的基因表現調節之分析分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 及Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 對其調節與膠原蛋白及細胞外基質生成有關的基因表現之能力(關於所分析之基因，參見表6)。在此實施例中所使用之胜肽係依照實施例1至5製備。製備在水中的1 mg/mL之胜肽儲備溶液。工作溶液係在相應的補充培養基中自儲備溶液以指定的濃度新鮮製備。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物樣品。執行RNA (核糖核酸)萃取及RT-qPCR (逆轉錄定量聚合酶鏈反應)。簡言之，將HDFa細胞一式兩份(n=2)以4 x 10⁵ 個細胞/孔之密度接種在6-孔盤中且維持在標準的培養條件下(以1% (v/v)之LSGS補充之106 Medium；37°C，95%之室內濕度，5%之CO₂ )歷經24小時。接著將細胞經0.01 mg/mL濃度之胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理24及48小時。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物。最後將細胞溶解，且將複製物使用Qiagen RNeasy Mini套組遵照製造商的用法說明匯集在一起以進行RNA萃取。使用經純化之RNA產生相應的cDNA (互補去氧核糖核酸)，其係藉由使用適合作為擴增模板之市售套組高容量cDNA逆轉錄套組(Applied Biosystems)之逆轉錄。RT-qPCR係以適合於表5中所示之基因的TaqMan檢定探針(加上GAPDH-甘油醛3-磷酸脫氫酶-，其被用作為持家基因)及2x gene expression Master Mix使用StepOne加上即時PCR儀器執行。擴增包括以下40次循環：在95℃下15秒(變性)及在60℃下1分鐘(黏合與延展)(Arya、M.、Shergill、I.S.、Williamson、M.、Gommersall、L.、Arya、N.、Patel、H.R. (2005)Basic principles of real-time quantitative PCR . Expert Rev. Mol. Diagn.; 5(2):209-19；及Jozefczuk、J. and Adjaye、J. (2011)Quantitative real-time PCR-based analysis of gene expression. Methods Enzymol. 500; 99-109)。

所獲得的數據係使用ΔΔCt方法分析，該方法提供目標基因表現值作為與未經處理之基礎樣品相比的經處理之樣品的倍數變化。將兩種樣品以持家基因GAPDH (甘油醛3-磷酸脫氫酶)之相對表現標準化。分析步驟包括： 1. 計算各條件的平均Ct 2. 計算ΔCT試驗樣品及ΔCT未經處理之樣品 3. 計算ΔΔCT：ΔΔCT = ΔCT試驗樣品 – ΔCT未經處理之樣品 4. 以2^{- ΔΔCT} 獲得比率將此檢定的結果總結陳列於表7至10中。

關於胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ ，可自表7和8輕易地得出：在24小時：觀察到調升之LAMA1、COL3A1和TIMP2。在48小時：觀察到調降之MMP1和MMP3。關於胜肽Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ ，可自表9輕易地得出：在24小時：觀察到調升之FBN1及調降的MMP1。關於胜肽Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ ，可自表10輕易地得出：在24小時：觀察到調升之FBN1及調降的MMP1和MMP3。因此，本發明之胜肽(如以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 及Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 為例)顯示關於ECM合成及維持之有利的基因調節。因此，本發明之胜肽能夠減少、預防及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更確切地此實施例的結果證明本發明之胜肽對改善皮膚的緊實性與減少皺紋的有用性。實施例 11. 酪胺酸酶活性之合成分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 及Ac-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH₂ (Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ )對其調節酪胺酸酶活性之能力。在此實施例中所使用之胜肽係依照實施例1至5製備。簡言之，將不同濃度的Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ (0.05、0.25、0.5和2.5 mg/mL)、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ (0.05、0.25、0.5和2.5 mg/mL)、Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ (0.05、0.25、0.5和2.5 mg/mL)、及Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ (0.005、0.025、0.05、0.25、0.5和2.5 mg/mL)及陽性對照麴酸(400和800 µM)與重組蘑菇酪胺酸酶培育30分鐘，然後添加L-DOPA (L-3,4-二羥基苯基丙胺酸(dihidroxiphenilalanine)，在PBS中的2.5 mg/mL)。在室溫下反應2小時後，使用微盤讀取機Multiskan FC (Thermo Fisher Scientific、MA、USA)測定各孔在450 nm下的吸光度，其與反應混合物中的多巴色素(dopachrome)之量成正比。吸光度值係以相對於設為100%的未經處理之孔(對照物)標準化，因此獲得所測試之各條件的活性百分比。將此實施例所獲得的結果總結陳列於圖2 (2A至2D)中。可自該圖直接得出，胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ (圖2A)顯示在所有測試之濃度下皆抑制酪胺酸酶，但此效應係自0.25 mg/mL起以劑量依賴性方式增加。在其同一頁上，胜肽Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ (圖2B)顯示自0.05 mg/mL起以劑量依賴性方式抑制酪胺酸酶活性。胜肽Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ (圖2C)顯示在0.25 mg/mL及更高的濃度下以劑量依賴性方式抑制酪胺酸酶活性。在其同一頁上，胜肽Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ (圖2D)(不是本發明之胜肽)在所測試之濃度中任一者皆不抑制酪胺酸酶活性。相反地，其自濃度0.05 mg/mL起以劑量依賴性方式增加酪胺酸酶活性。在現有技術中，已知黑眼圈尤其係由於黑色素沉積而引起，且亦已確立以抑制酪胺酸酶活性來減少黑色素沉積物(MI Ryung Roh, Kee Yang Chung:Infraorbital Dark Circles: Definition, Causes, and Treatment Options , Dermatological Surgery, 35:8:August 2009)。該等結果證明本發明之胜肽(如以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 、Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 及Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 為例)對治療及/或預防色素過多(較佳為眼睛的眼眶周圍色素過多)的有用性，但不類似於反而不抑制酪胺酸酶活性的胜肽(Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ )，其維持或增加該活性。實施例 12. 胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對血管生成的效應分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對其調節試管內血管形成之能力。胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 係依照實施例1至5製備。在此例子中，血管形成檢定係使用人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)執行。簡言之，將40微升geltrex添加至96-孔盤之孔中且讓其經30分鐘固化。然後將8000個細胞與下列者一起施予各孔：完全培養基(基礎對照物)。完全培養基 + 20 µM蘇拉明(血管形成抑制劑)。完全培養基 + 10 ng/mL之IL-33。完全培養基 + 10 ng/mL IL-33 + 不同濃度的胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ (更確切為0.01 mg/mL、0.05 mg/mL或0.1 mg/mL)。在培育16小時後，藉助於顯微鏡得以看見細胞且以10x拍攝每一孔的照片。對每一孔進行網格數目及網格總面積的分析作為血管形成(亦即血管生成)的指標。將結果總結陳述於圖3中。自該圖形可輕易地得出，胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 在所有測試之濃度下能夠逆轉由IL-33誘導之關於網格數目及關於網格總面積兩者的血管形成或血管生成。因此，以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 為例的本發明之胜肽能夠抑制及/或預防血管生成，且因此其可用於治療與血管生成或過度血管形成有關的美容性特質(trait)，較佳為眼袋和眼眶周圍色素過多。實施例 13. 本發明之胜肽防止脂質過氧化之能力的分析藉助於硫巴比妥酸反應物質(在下文之TBARS)檢定來分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對其防止脂質過氧化之能力。胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 係依照實施例1至5製備。簡言之，將Trolox (陽性對照物)、0.01、0.05、0.1和0.5 mg/mL之胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 在蛋黃卵磷脂(EYPC)之單層小微脂粒(脂質過氧化之受質)存在下在37℃下在硫巴比妥酸(TBA)存在下培育2小時。使用螢光方法評估與陰性對照物(僅具有蛋黃卵磷脂之單層小微脂粒的樣品)相比的脂質過氧化%。將此實施例所獲得的結果總結陳述於圖4中。可自該圖形直接地得出，本發明之胜肽在所有測試之濃度下顯示抗氧化活性。因此，以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 為例的本發明之胜肽能夠防止脂質過氧化。防止過氧化之胜肽能力的分析亦與褪黑激素相比，因為褪黑激素亦為潛在的抗氧化劑。試驗、對照物、程序、材料及數據分析係與上文所解釋者相同。圖8顯示與0.1 mg/mL和0.5 mg/mL之褪黑激素相比而獲得的抗過氧化活性之數據的圖形表示。數據顯示本發明之胜肽具有類似於褪黑激素之防止脂質過氧化的效應。如現有技術中已知，脂質過氧化係與由於細胞質膜的改變所致之細胞損傷及死亡有關。因此，以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 為例的本發明之胜肽可用於化妝品中以預防及/或治療老化及可用於醫藥中以預防及/或治療與脂質過氧化有關的疾病，較佳為動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、早產兒視網膜病變、邊緣性人格疾患、氣喘、帕金森氏症和腎損傷。實施例 14. 本發明之胜肽防止糖化之能力的分析分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對其減少晚期糖化終產物(AGE)形成之能力。胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 係依照實施例1至5製備。簡言之，將0.01、0.05、0.1和0.5 mg/mL之胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 與糖化劑及其相應受質混合在一起作用。將樣品在37℃下培育72小時。使用螢光方法評估與陰性對照物(僅具有糖受質的樣品)相比的蛋白質糖化%。將此實施例所獲得的結果總結陳述於圖5中。可自該圖形直接地得出，本發明之胜肽在所有測試之濃度下能夠幾乎完全逆轉由糖化劑產生的糖化作用。因此，以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 為例的本發明之胜肽能夠防止蛋白質糖化。另外，亦於活體外測試本發明之胜肽防止蛋白質糖化之能力。簡言之，將來自40歲女性的人類皮膚外植體在37℃下於5%之CO₂ 氛圍的濕氣下保持存活在BEM培養基中。製備依照實施例6的化妝品組成物，其含有1% (w/v)之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 及不含胜肽(安慰劑)。將該等乳霜在第0天(D0)、第1天、第4天、第6天及第8天以每一外植體計2 μL (2 mg/cm²)為基礎局部施予且使用小抹刀展開。對照外植體不接受任何處理，除了更新培養基以外。為了誘導糖化，將甲基乙二醛(MG)溶液在第4天、第6天及第8天對參與的批組「MG」以500 μM之最後濃度併入BEM培養基中(所有樣品，除了未經處理之對照外植體以外)。在各時間點收集外植體且分成兩部分。一半固定在經緩衝之福馬林溶液中及一半冷凍在-80℃下。在經緩衝之福馬林中固定24小時後，將樣品脫水且浸漬於石蠟中。使用Leica RM 2125 Minot型切片機製作厚度5μm切片且將切片安裝在Superfrost®組織學玻璃載片上。羧甲基離胺酸(CML)免疫染色(CML為由於氧化應激及化學糖化而在蛋白質及脂質上發現的晚期糖化終產物(AGE)且用作為晚期糖化的標誌)係在室溫下以在PBS-BSA 0.3% (w/v)中經1:25稀釋之單株抗CML抗體執行1夜，且以VECTOR^® VIP (Vector Laboratories)(過氧化酶受質)顯露。如圖6中可觀察出，在培養9天後，胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 防止經MG誘導之糖化，顯示與暴露於MG的未經處理之外植體相比時顯著降低的CML信號(-73%)。經安慰劑處理之外植體未顯示顯著降低的CML染色。減少晚期糖化終產物(AGE)形成(防止糖化)之胜肽能力的分析亦與褪黑激素相比，因為褪黑激素亦為能夠防止糖化之潛在的抗氧化劑。試驗、對照物、程序、材料及數據分析係與上文所解釋者相同。圖9顯示與0.1 mg/mL和0.5 mg/mL之褪黑激素相比而獲得的抗糖化活性之數據的圖形表示。數據顯示本發明之胜肽具有類似於褪黑激素之防止糖化的效應。如現有技術中已知，糖化為內源性老化機制之一，其隨時間自然發生，但在糖尿病、腎衰竭及發炎期間亦以病理方式發生。AGE係高度積累在許多與年齡相關的退行性疾病之組織和器官中。該等毒性加成物(糖毒素(glycotoxin))牽涉細胞功能障礙，尤其在糖尿病患者及年長的生物體中。在糖尿病患者中的AGE形成及積累造成血管改變導致，導致糖尿病血管病變。糖化亦與細胞外基質損傷(對膠原蛋白和彈性纖維的損傷)、發炎、氧化應激及細胞凋亡有關，且因此其與老化有關。因此，以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 為例的本發明之胜肽能夠防止蛋白質糖化，且因此可用於化妝品中以預防及/或治療老化及可用於醫藥中以預防及/或治療與糖化有關的疾病，較佳為糖尿病(更佳為糖尿病血管病變)、腎衰竭、發炎和年齡相關性退行性疾病。實施例 15. 活體外樣品中的小纖維蛋白-1之分析分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對其防止真皮細胞外基質結構糖化之能力。胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 係依照實施例1至5製備。簡言之，將來自40歲女性的人類皮膚外植體在37℃下於5%之CO₂ 氛圍的濕氣下保持存活在BEM培養基中。將根據實施例6製備的安慰劑乳霜及含有1%之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 的乳霜在第0天(D0)、第1天、第4天、第6天及第8天以每一外植體計2 μL (2 mg/cm²)為基礎局部施予且使用小抹刀展開。對照外植體不接受任何處理，除了更新培養基以外。為了誘導糖化，將甲基乙二醛(MG)溶液在第4天、第6天及第8天對參與的批組「MG」以500 μM之最後濃度併入BEM培養基中(所有樣品，除了未經處理之對照樣品以外)。在各時間點收集外植體且分成兩部分。一半固定在經緩衝之福馬林溶液中及一半冷凍在-80℃下。小纖維蛋白1免疫染色係以生物素/鏈黴親和素(streptavidin)擴增系統在室溫下以在PBS、BSA 0.3% (w/v)及0.05% (v/v)之Tween 20中經1:500稀釋之單株抗小纖維蛋白1抗體在經冷凍之切片上執行1 h，且以FITC顯露。細胞核係以碘化丙錠(propidium iodide)對比染色。來自圖7的數據顯示在第9天與未經暴露之對照物相比時，以暴露於MG如何誘導顯著減少的真皮中之小纖維蛋白1染色。胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 能夠防止此損傷，顯示與暴露於MG的未經處理之對照物相比時在第9天顯著增加的小纖維蛋白1染色(86%)。如現有技術中已知，小纖維蛋白-1為沿著真皮-表皮接合處發現的嗜氧性纖維(oxytalan fiber)之主要組分，顯露出在維持皮膚的完整性與力學性質方面的基本功能(Oxlund等人之1980. J Anat. 131: 611-620)。在皮膚化妝品研究中，小纖維蛋白-1通常被用作為真皮之細胞外基質的結構狀態之生物標誌。因此，本發明之胜肽(以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 為例)減少、預防及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更確切地此實施例的結果證明本發明之胜肽對維持皮膚的完整性與力學性質及因此改善皮膚的緊實性與減少皺紋的有用性。實施例 16. 與反應睡眠剝奪有關的基因表現之分析分析胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對其調節在HDFa細胞、HEKa細胞及HUVEC中與睡眠剝奪後果有關的基因表現之能力(關於所分析之基因，參見表11)。在此實施例中所使用之胜肽係依照實施例1至5製備。製備在水中的1 mg/mL之胜肽儲備溶液。工作溶液係在相應的補充培養基中自儲備溶液以指定的濃度新鮮製備。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物樣品。執行RNA (核糖核酸)萃取及RT-qPCR (逆轉錄定量聚合酶鏈反應)。簡言之，將HEKa、HDFa或HUVEC細胞一式兩份(n=2)以4 x 10⁵ 個細胞/孔之密度(關於HUVEC細胞，以2 x 10⁵ 個細胞/孔之密度)接種在6-孔盤中且維持在標準的培養條件下(以1% (v/v)之LSGS補充之106 Medium用於HDFa細胞；以1% (v/v)之EDGS及1% (v/v)之青黴素/鏈黴素補充之Medium Epilife用於HEKa細胞；以內皮細胞生長培養基用於HUVEC細胞；37°C，95%之室內濕度，5%之CO₂ )歷經24小時。接著將細胞以0.01 mg/mL之濃度的胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理24小時。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物。最後將細胞溶解，且將複製物使用Qiagen RNeasy Mini套組遵照製造商的用法說明匯集在一起以進行RNA萃取。使用經純化之RNA產生相應的cDNA (互補去氧核糖核酸)，其係藉由使用適合作為擴增模板之市售套組高容量cDNA逆轉錄套組(Applied Biosystems)之逆轉錄。RT-qPCR係以適合於表10中所示之基因的TaqMan檢定探針(加上GAPDH-甘油醛3-磷酸脫氫酶-，其被用作為持家基因)及2x gene expression Master Mix使用StepOne加上即時PCR儀器執行。擴增包括以下40次循環：在95℃下15秒(變性)及在60℃下1分鐘(黏合與延展)(Arya, M., Shergill, I.S., Williamson, M., Gommersall, L., Arya, N., Patel, H.R. (2005) Basic principles of real-time quantitative PCR. Expert Rev. Mol. Diagn.; 5(2):209-19；及Jozefczuk, J. and Adjaye, J. (2011) Quantitative real-time PCR-based analysis of gene expression. Methods Enzymol. 500; 99-109)。

所獲得的數據係使用ΔΔCt方法分析，該方法提供目標基因表現值作為與未經處理之基礎樣品相比的經處理之樣品的倍數變化。將兩種樣品以持家基因GAPDH (甘油醛3-磷酸脫氫酶)之相對表現標準化。分析步驟包括： 1. 計算各條件的平均Ct 2. 計算ΔCT試驗樣品及ΔCT未經處理之樣品 3. 計算ΔΔCT：ΔΔCT = ΔCT試驗樣品 – ΔCT未經處理之樣品 4. 以2^{- ΔΔCT} 獲得比率將此檢定的結果亦總結陳列於表12至14中。

因此，本發明之胜肽(以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 為例)減少、預防及/或消除與睡眠剝奪有關的皮膚老化徵象及/或消除與睡眠剝奪有關的皮膚瑕疵。之所以如此是因為胜肽Ac-SEQ ID NO：1-NH₂ 除了其對IL-33含量的效應(ELISA)以外，亦能夠藉由誘導IL33受體(IL1RL1)及IL33相關抑制劑(SIGIRR)調降來調節其傳訊。亦觀察到其他發炎相關基因(CXCL8和NFKB1)之調節。除了對發炎的此效應以外，胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 亦能夠調降葡萄糖轉運蛋白SLC2A1之表現及調升褪黑激素受體MNTR1之表現，兩者皆涉及睡眠剝奪的生理反應。實施例 17. 經Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 處理而誘導之基因表現的分析在此實施例中，分析胜肽Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 在HDFa細胞及HEKa細胞中的基因調節(所分析的基因，參見表15)。在此實施例中所使用之胜肽係依照實施例1至5進行所需的修改來製備。製備在水中的1 mg/mL之胜肽儲備溶液。工作溶液係在相應的補充培養基中自儲備溶液以指定的濃度新鮮製備。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物樣品。執行RNA (核糖核酸)萃取及RT-qPCR (逆轉錄定量聚合酶鏈反應)。簡言之，將HEKa或HDFa細胞一式兩份(n=2)以4 x 10⁵ 個細胞/孔之密度接種在6-孔盤中且維持在標準的培養條件下(以1% (v/v)之LSGS補充之106 Medium用於HDFa細胞；以1% (v/v)之EDGS及1% (v/v)之青黴素/鏈黴素補充之Medium Epilife用於HEKa細胞；37°C，95%之室內濕度，5%之CO₂ )歷經24小時。接著將細胞以0.01 mg/mL之濃度的胜肽Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 處理24小時。未經處理之細胞被用作為基礎或陰性對照物。最後將細胞溶解，且將複製物使用Qiagen RNeasy Mini套組遵照製造商的用法說明匯集在一起以進行RNA萃取。使用經純化之RNA產生相應的cDNA (互補去氧核糖核酸)，其係藉由使用適合作為擴增模板之市售套組高容量cDNA逆轉錄套組(Applied Biosystems)之逆轉錄。RT-qPCR係以適合於表10中所示之基因的TaqMan檢定探針(加上GAPDH-甘油醛3-磷酸脫氫酶-，其被用作為持家基因)及2x gene expression Master Mix使用StepOne加上即時PCR儀器執行。擴增包括以下40次循環：在95℃下15秒(變性)及在60℃下1分鐘(黏合與延展)(Arya, M., Shergill, I.S., Williamson, M., Gommersall, L., Arya, N., Patel, H.R. (2005)Basic principles of real-time quantitative PCR . Expert Rev. Mol. Diagn.; 5(2):209-19；及Jozefczuk, J. and Adjaye, J. (2011)Quantitative real-time PCR-based analysis of gene expression. Methods Enzymol. 500; 99-109)。

所獲得的數據係使用ΔΔCt方法分析，該方法提供目標基因表現值作為與未經處理之基礎樣品相比的經處理之樣品的倍數變化。將兩種樣品以持家基因GAPDH (甘油醛3-磷酸脫氫酶)之相對表現標準化。分析步驟包括： 1. 計算各條件的平均Ct 2. 計算ΔCT試驗樣品及ΔCT未經處理之樣品 3. 計算ΔΔCT：ΔΔCT = ΔCT試驗樣品 – ΔCT未經處理之樣品 4. 以2^{- ΔΔCT} 獲得比率將此檢定的結果亦總結陳列於表16和17中。

因此，可自表16和17所包括的結果直接得出，胜肽Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ (其係如上文註明不為本發明之胜肽，但非常類似)未顯示以本發明之胜肽觀察到的有利的基因調控，相反地，其顯示在一基因群組中相反的基因調控及在另一基因群組中缺乏表現效應。因此，與上文本發明之胜肽所證明者相反的Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ ：顯示COL3A1及TIMP2之調降。因此，Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 顯示關於ECM合成及維持之不利的基因調控。因此，與本發明之胜肽相反，Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 不能夠減少、預防及/或消除皮膚老化徵象及/或皮膚瑕疵，更確切地此實施例的結果證明該胜肽不能夠改善皮膚的緊實性與減少皺紋。顯示基因OCLN、CDSN及TJP1 (亦即與緊密接合及屏障功能有關的主要基因)之略微調降或缺乏調控。因此，與本發明之胜肽所證明者相反的Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 不能夠改善在角質細胞之間的緊密接合及因此不可以改善在該等之間的內聚性，且因此其不可以改善皮膚的緊實性與減少皺紋。胜肽Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 亦顯示SIGIRR之調降及SLC2A1之略微調降或缺乏調控。因此，該胜肽不能夠逆轉對睡眠剝奪的反應。最後，胜肽Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 不能夠調控或改變基因IL33及IL1RL1之表現，因此不能夠調節與IL33相關聯及上文所解釋之所有反應。實施例 18. Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對彈性蛋白微纖維界面蛋白-1蛋白質在人類淋巴真皮微細血管內皮細胞(HDLMVEC)上的表現之效應分析在此實施例中對彈性蛋白微纖維界面蛋白-1蛋白質執行免疫螢光檢定，因為其表現可能與更好的淋巴血管分布及清除組織流體有關。將HDLMVEC在微細血管內皮細胞生長(MECG)培養基中以16.000個細胞/cm² 之密度及在37℃下於5%之CO₂ 之濕潤氛圍中於蓋玻片上培養。當細胞融合度為約70至80%時，將細胞以MECG培養基中的0.05 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理24小時。接著將細胞以PBS清洗兩次、以4%之甲醛固定及以Triton 0.2%滲透。接下來，將細胞以PBS/BSA 5%經1小時阻斷，以避免非特異性抗體結合。將彈性蛋白微纖維界面蛋白-1在室溫下於1.5小時期間內以PBS/BSA 1%中的1:50之彈性蛋白微纖維界面蛋白-1抗體染色。在以PBS適當的清洗後，將肌動蛋白在室溫下於1小時期間內以50 µg/mL之毒蠅虎蕈鹼染色。接著將細胞以PBS清洗且在室溫下以5 µg/mL之二次抗體山羊抗兔IgG培育1小時。最後，使用具有染色細胞核之DAPI的Vectashield安裝蓋玻片，且將樣品在4℃下避光保存，直到採集顯微鏡影像為止。使用10x物鏡採集顯微鏡影像。以各條件進行兩次重複染色，且使用相同的設定採集各蓋玻片之10個不同視野的影像。圖10顯示以螢光顯微鏡對基礎細胞(A)及以0.05 mg/ mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理之細胞(B)採集之影像(綠色：彈性蛋白微纖維界面蛋白-1，紅色：毒蠅虎蕈鹼，藍色：細胞核)。以Image J軟體分析影像。立即調整閾值以選擇彈性蛋白微纖維界面蛋白-1染色且測量平均螢光。細胞數目係使用DAPI染色來計數。將彈性蛋白微纖維界面蛋白-1平均螢光強度除以細胞數目。最後，將所有的數據如下標準化以獲得與未經處理之細胞相比的彈性蛋白微纖維界面蛋白-1之%：

統計數據分析係使用司徒頓(Student) t-試驗以比較來自經處理之細胞的螢光相對於未經處理之細胞的螢光來執行，*，p ＜ 0.05；**，p ＜ 0.01；及***，p ＜ 0.001。

結果顯示與未經處理之細胞相比時，Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 在處理24 h後顯著地增加超過70%之彈性蛋白微纖維界面蛋白-1表現。鑑於彈性蛋白微纖維界面蛋白-1在淋巴功能中扮演重要的角色，該等結果表明Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 在清除組織流體與可能的化妝品應用方面之潛在角色。實施例 19. 胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 對整合素α9β1蛋白質在人類淋巴真皮微細血管內皮細胞(HDLMVEC)上的表現之效應分析在此實施例中對整合素α9β1 (Itg9)蛋白質執行免疫螢光檢定，因為其表現係與更好的淋巴血管分布及清除組織流體有關。將HDLMVEC在微細血管內皮細胞生長(MECG)培養基中以16.000個細胞/cm² 之密度及在37℃下於5%之CO₂ 之濕潤氛圍中於蓋玻片上培養。當細胞融合度為約70至80%時，將細胞以MECG培養基中的0.05 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理24小時。接著將細胞以PBS清洗兩次、以4%之甲醛固定及以Triton 0.2%滲透。接下來，將細胞以PBS/BSA 5%經1小時阻斷，以避免非特異性抗體結合。將Itg9在室溫下於1.5小時期間內以PBS/BSA 1%中的1:50之抗Itg9抗體染色。在以PBS適當的清洗後，將肌動蛋白在室溫下於1小時期間內以50 µg/mL之毒蠅虎蕈鹼染色。接著將細胞以PBS清洗且在室溫下以5 µg/mL之二次抗體山羊抗兔IgG培育1小時。最後，使用具有染色細胞核之DAPI的Vectashield安裝蓋玻片，且將樣品在4℃下避光保存，直到採集顯微鏡影像為止。使用10x物鏡採集顯微鏡影像。以各條件執行兩次獨立的實驗，且使用相同的設定採集各蓋玻片之至少13個不同視野的影像。圖11顯示以螢光顯微鏡對基礎細胞(A)及以0.05 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理24 h後在HDLMVEC上的整合素α9β1表現(B)採集之影像(綠色：整合素α9β1，紅色：毒蠅虎蕈鹼，藍色：細胞核)。以Image J軟體分析影像。立即調整閾值以選擇Itg9染色且測量平均螢光。細胞數目係使用DAPI染色來計數。將Itg9平均螢光強度除以細胞數目。數據標準化及統計係如先前的解釋執行。

結果顯示與未經處理之細胞相比時，胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 在處理24 h後在人類初代淋巴真皮微細血管內皮細胞上顯著地增加超過50%之Itg9表現。鑑於Itg9在淋巴功能中扮演重要的角色，該等結果表明Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 在清除組織流體與可能的化妝品應用方面之潛在角色。實施例 20 . 胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 及褪黑激素對先天性抗微生物免疫相關基因在自人類皮膚分離之人類初代表皮角質細胞(HEKa)中的表現之效應分析試驗、對照物、程序、材料及數據分析係與實施例16至17中所解釋者相同。胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 及褪黑激素調節涉及人類表皮角質細胞中的病毒免疫反應之基因表現的潛力係以RT-qPCR評估。關於HEKa細胞，結果顯示以0.01 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 胜肽處理6 h能夠誘導HEKa中的主要基因IRF3、DEFB4A、S100A7和MX1/MXA之強力調升。如IRF1、DEFB1、OAS2、ISG15之其他基因在以D18ChAH處理時亦調升。關於褪黑激素在HEKa細胞中的效應，在以0.01 mg/mL處理6 h後，使基因DEFB1、DEFB4A、S100A7、OAS2、MX1調升，但是與Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 之效應相比卻較少(圖12，表20)。圖12顯示在處理6 h後於HEKa細胞中與以0.01 mg/mL之胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 或0.01 mg/mL之褪黑激素的抗微生物先天性免疫反應有關的基因調控。

胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 調節在以0.01 mg/mL處理6 h後於HEKa中的基因表現，導致涉及表皮角質細胞中的先天性抗微生物免疫反應之基因調節。具體地，Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 誘導IRF3、DEFB4A、S100A7和MX1之強力調升。而且，以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理亦調升主要基因IRF1、DEFB1、OAS2和ISG16。以褪黑激素處理HEKa使基因DEFB1、DEFB4A、S100A7、OAS2和MX1調升，但是其程度與胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 之效應相比卻較少。所有該等結果皆強力表明胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 可能為涉及宿主抗微生物及抗病毒先天性免疫反應之基因調節劑，因此能夠增加表皮屏障之免疫保護以對抗侵襲及感染。而且，當胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 達到基因表現調節時，其似乎顯現類似褪黑激素之效應。因此，所有此等使得Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 成為化妝品工業中有興趣的化合物。實施例 21. 眼袋容積之活體內結果包含胜肽之臉部化妝品組成物係與安慰劑組成物以活體內減少的眼袋容積進行比較。此實施例使用與實施例6相同的組成物，但是具有3重量% (g/100 g)之市售胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH2調配物。安慰劑組成物不包含胜肽。圖13顯示以包含胜肽之組成物及安慰劑組成物減少眼袋容積的圖形表示。結果顯示與安慰劑組成物所觀察到的減少容積相比，以包含胜肽之組成物在7天後減少5%及在14天後減少7%之眼袋容積。

為了更好地理解，本發明係參考所揭示之圖形而於下文更詳細地說明，該圖形係以實例方式及參考例證性和非限制性實施例呈現。 [圖1]顯示以胜肽Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理之人類真皮纖維母細胞成年細胞中的IL-33蛋白質含量。結果係以設為100%之陽性對照物(經300 U/mL干擾素-γ處理)相比的百分比顯示。在x軸上從左至右的柱體係指：細胞的基礎狀態、陽性對照物及分別經0.005 mg/mL、0.01 mg/mL或0.05 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理之細胞。經本發明之胜肽處理之樣品亦經300 U/mL之干擾素-γ處理。y軸係指以pg/mL計之IL-33相對於設為100%之陽性對照物的%。**係指p ＜ 0.01；及***係指p ＜ 0.001。 [圖2]顯示以實施例11所獲得的抑制蘑菇酪胺酸酶活性的結果。測定相對於設為100%之對照物(不含胜肽)的酪胺酸酶活性。圖2A係指以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 所獲得的酪胺酸酶活性的結果，且因此在x軸上從左至右的柱體係指：對照孔、及含有400 µM和800 µM麴酸的孔、及分別含有0.05 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和2.5 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 的孔。圖2B係指以Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 所獲得的酪胺酸酶活性的結果，且因此在x軸上從左至右的柱體係指：對照孔、及含有400 µM和800 µM麴酸的孔、及分別含有0.05 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和2.5 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:2-NH₂ 的孔。圖2C係指以Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 所獲得的酪胺酸酶活性的結果，且因此在x軸上從左至右的柱體係指：對照孔、及含有400 µM和800 µM麴酸的孔、及分別含有0.05 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和2.5 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:3-NH₂ 的孔。圖2D係指以Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 所獲得的結果，且因此在x軸上從左至右的柱體係指：對照孔、及分別經0.005 mg/mL、0.025 mg/mL、0.05 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和2.5 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:4-NH₂ 處理的孔。在圖2A、2B、2C和2D中，y軸係指相對於設為100%之對照物的酪胺酸酶活性之酪胺酸酶活性百分比。*係指p ＜ 0.05；**係指p ＜ 0.01；及***係指p ＜ 0.001。 [圖3]顯示在實施例12中經Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理之HUVEC中的血管形成(血管生成)。更確切地，黑色柱體係指與基礎狀態(以基礎狀態設為100%)相比的網格數目百分比；及白色柱體係指與基礎狀態(以基礎狀態設為100%)相比之網格總面積百分比。另外，在x軸上從左至右的兩個柱體(一個黑色及一個白色)之各群組相應於：基礎狀態；陰性對照物(經20 µM蘇拉明(Suramin)處理)；陽性對照物(經10 ng/mL之IL-33處理)；經0.01 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 和10 ng/mL之IL-33處理；經0.05 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 及10 ng/mL之IL-33處理；及經0.1 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 及10 ng/mL之IL-33處理。y軸係指與基礎狀態(設為100%)相比的網格數目百分比(黑色柱體)或網格總面積百分比(白色柱體)(取決於所考慮的柱體)。*係指p ＜ 0.05；**係指p ＜ 0.01；及 ***係指p ＜ 0.001。 [圖4]顯示實施例13的結果，此為與設為100%之陰性對照物相比的脂質之過氧化作用。在x軸上從左至右的柱體相應於：陰性對照物(不含抗氧化劑化合物之脂質受質)、陽性對照物(經250 µg/mL之Trolox (穩定的維生素E類似物)，但是未經本發明之胜肽處理之脂質受質)、及分別經 0.01 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL或0.5 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理。所有的樣品具有脂質受質，且除了陰性對照物以外，所有的樣品亦包含脂質過氧化劑(硫巴比妥酸)。在37℃下進行2小時培育，然後在500 nm激發；在530 nm發射下讀取盤。y軸係指與設為100%之陰性對照物相比的脂質過氧化百分比。*係指p ＜ 0.05；**係指p ＜ 0.01；及***係指p ＜ 0.001。 [圖5]顯示實施例14的結果，此為與設為100%之陰性對照物相比的蛋白質糖化作用。在x軸上從左至右的柱體相應於：陰性對照物(糖受質)、陽性對照物(經690 µg/mL之胺胍(AG，代表性抗糖化化合物)處理之糖受質)、及分別經0.01 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL或0.5 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理。所有的樣品具有糖受質，且除了陰性對照物以外，所有的樣品亦包含糖化劑。在37℃下進行72小時培育，然後在370 nm激發；在440 nm發射下讀取盤。y軸係指與設為100%之陰性對照物相比的蛋白質糖化百分比。*係指p ＜ 0.05；**係指p ＜ 0.01；及***係指p ＜ 0.001。 [圖6]顯示實施例14的活體外結果，此為與設為100%之陰性對照物(未經處理之外植體(explant))相比的Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 在經前甲基乙二醛(front methylglyoxal)(MG)誘導之糖化中的保護效應。在x軸上從左至右的柱體相應於：陰性對照物(未經處理之外植體)、陽性對照物(MG，未經任何乳霜處理)、及分別經安慰劑乳霜或含有1% (w/v)之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 的乳霜處理之MG。y軸係指與設為100%之陰性對照物相比的CML染色(N(ε)-羧甲基基-離胺酸)百分比。 [圖7]顯示實施例15的活體外結果，此為與設為100%之陰性對照物(未經處理之外植體)相比的Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 在經前甲基乙二醛(MG)誘導之小纖維蛋白-1降解中的保護效應。在x軸上從左至右的柱體相應於：陰性對照物(未經處理之外植體)、陽性對照物(MG，未經任何乳霜處理)、及分別經安慰劑乳霜或含有1% (w/v)之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 的乳霜處理之MG。y軸係指與設為100%之陰性對照物相比的小纖維蛋白-1染色百分比。 [圖8]顯示與0.1 mg/mL和0.5 mg/mL之褪黑激素相比而獲得的抗過氧化活性數據的圖形表示。在x軸上從左至右的柱體相應於：陰性對照物(不含抗氧化劑化合物之脂質受質)、陽性對照物(經250 µg/mL之Trolox (穩定的維生素E類似物)，但是未經本發明之胜肽處理之脂質受質)、0.1 mg/mL之褪黑激素、0.5 mg/mL之褪黑激素。 [圖9]顯示與0.1 mg/mL和0.5 mg/mL之褪黑激素相比而獲得的抗糖化活性數據的圖形表示。在x軸上從左至右的柱體相應於：陰性對照物(糖受質)、陽性對照物(經690 µg/mL之胺胍(AG，代表性抗糖化化合物)處理之糖受質)、0.1 mg/mL之褪黑激素、0.5 mg/mL之褪黑激素。 [圖10]顯示以螢光顯微鏡對基礎細胞(A)及經D18ChAH處理24 h後在HDLMVEC上的彈性蛋白微纖維界面蛋白(emilin)-1表現(B)所採集之免疫螢光影像(綠色：彈性蛋白微纖維界面蛋白-1，紅色：毒蠅虎蕈鹼，藍色：細胞核)。 [圖11]顯示以螢光顯微鏡對基礎細胞(A)及以Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 處理24 h後在HDLMVEC上的整合素α9β1表現(B)所採集之免疫螢光影像(綠色：整合素α9β1，紅色：毒蠅虎蕈鹼，藍色：細胞核)。 [圖12]顯示在處理6 h後與HEKa細胞中以0.01 mg/mL之Ac-SEQ ID NO:1-NH₂ 或0.01 mg/mL之褪黑激素的抗微生物先天性免疫反應有關的基因之調控。x軸顯示相對於基礎細胞之倍數變化。 [圖13]顯示以包含胜肽之組成物及安慰劑組成物減少眼袋容積的圖形表示。在x軸上從左至右的柱體相應於：T7天及T14天。

Claims

一種包含6個胺基酸之胜肽，其異構物、鹽類、溶劑合物及/或該鹽類之溶劑合物及其混合物，其特徵在於該胜肽包含至少3個精胺酸。
如請求項1之胜肽，其中該6個胺基酸為3個精胺酸、1個麩醯胺酸、1個甲硫胺酸及1個麩胺酸。
如請求項1或2之胜肽，其中該胜肽具有依照式(I)之序列： R₁ -AA₁ -AA₂ -AA₃ -AA₄ -AA₅ -AA₆ -R₂ 其中： - R₁ 係選自H、經取代或未經取代之非環脂族、經取代或未經取代之脂環基、經取代或未經取代之雜環基、經取代或未經取代之雜芳基烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之芳烷基和R₅ -CO-，其中R₅ 係選自由下列者所形成之群組：經取代或未經取代之C₁ -C₂₄ 烷基、經取代或未經取代之C₂ -C₂₄ 烯基、經取代或未經取代之C₂ -C₂₄ 炔基、經取代或未經取代之C₃ -C₂₄ 環烷基、經取代或未經取代之C₅ -C₂₄ 環烯基、經取代或未經取代之C₈ -C₂₄ 環炔基、經取代或未經取代之C₆ -C₃₀ 芳基、經取代或未經取代之C₇ -C₂₄ 芳烷基、經取代或未經取代之3至10員的雜環基環及經取代或未經取代之2至24個碳原子和1至3個除了碳以外的原子與1至6個碳原子的烷基鏈之雜芳基烷基；且 - R₂ 係選自H、-NR₃ R₄ -、-OR₃ 和-SR₃ ，其中R₃ 和R₄ 係獨立地選自H、經取代或未經取代之非環脂族基團、經取代或未經取代之脂環基、經取代或未經取代之雜環基、經取代或未經取代之雜芳基烷基、經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之芳烷基。
如請求項1至3中任一項之胜肽，其中該胜肽包含在其序列內的Arg-Arg。
如請求項1至4中任一項之胜肽，其中該胜肽包含在其序列內的Arg-Glu。
如請求項1至5中任一項之胜肽，其中該胜肽包含在其序列內的Met-Arg。
如請求項1至6中任一項之胜肽，其中該胜肽之序列為： R₁ -Arg-Arg-Gln-Met-Arg-Glu-R₂ R₁ -Met-Arg-Arg-Glu-Gln-Arg-R₂ R₁ -Arg-Glu-Gln-Met-Arg-Arg-R₂ 。
如請求項1至7中任一項之胜肽，其中該胜肽之序列為： Ac-Arg-Arg-Gln-Met-Arg-Glu-NH₂ Ac-Met-Arg-Arg-Glu-Gln-Arg-NH₂ Ac-Arg-Glu-Gln-Met-Arg-Arg-NH₂ 。
一種組成物，其包含如請求項1至8中任一項之胜肽。
一種如請求項1至8中任一項之胜肽或如請求項9之組成物在需要其之個體中作為化妝品之用途。
如請求項10之作為化妝品之用途，其中作為化妝品之用途係用於治療皮膚老化的徵象及/或皮膚瑕疵。
如請求項11之作為化妝品之用途，其中該皮膚老化的徵象及/或皮膚瑕疵為眼袋、眼瞼瑕疵、在眼睛周圍的皺紋、眼窩色素過多或其組合。
如請求項12之作為化妝品之用途，其中該皮膚老化的徵象及/或皮膚瑕疵係與睡眠剝奪相關聯。
如請求項1至8中任一項之胜肽或如請求項9之組成物，其係用作為藥物。
如請求項1至8中任一項之胜肽或如請求項9之組成物，其係用於治療基於發炎之眼瞼下垂。