TW202131920A - 剪接調節子用於減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療之用途 - Google Patents

Abstract

剪接調節子用於減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療之用途。

Description

剪接調節子用於減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療之用途

本發明關於剪接調節子用於減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療之用途。

杭丁頓氏舞蹈症(HD)係一種遺傳性的、神經退行性的和進展性的障礙，在世界範圍內每10萬人中約有5人患病。它係由杭丁頓氏基因(即編碼杭丁頓氏蛋白的基因)中的CAG重複擴增引起的，並且其特徵係運動、認知、精神和功能能力衰退。CAG三核苷酸重複擴增導致突變的杭丁頓氏蛋白(mHTT)，突變的杭丁頓氏蛋白與神經功能障礙和最終死亡有關。

在健康個體中，HTT基因中CAG重複的數量為6到35(SEQ ID NO：19)。攜帶36至39個CAG重複(SEQ ID NO：20)的個體的疾病外顯率降低，但是具有40個或更多CAG重複(SEQ ID NO：21)的個體幾乎可以肯定會患上這種疾病。如European Journal of Neurology[歐洲神經病學雜誌]，2017,24-34所述，HD的臨床診斷基於：

- 確定的家族病史或陽性基因檢測結果(即確定CAG重複擴增

36(SEQ ID NO：22))；和

- 由統一的杭丁頓氏舞蹈症評分量表(Unified Huntington’s Disease Rating Scale，UHDRS)總運動得分(TMS)診斷的置信度得分(DCS)定義的運動障礙發作，範圍從0(無運動異常提示HD)到4(可能歸因於HD的運動異常

99%)，其中得分4定義了「運動發作」或「顯現的」HD。

通常，發作年齡(即DCS達到4)在30至50歲之間，並且臨床診斷後的平均存活時間為15至20年。目前，發作後，決定疾病分期的是「功能」(即功能能力的評估)而非運動體征(例如，Neurology[神經病學]，1979,29,1-3中或在Neurology[神經病學]，1981,31,1333-1335中)。總功能能力(TFC)量表(例如，在Movement Disorders[運動障礙]，1996,11,136-142中)係UHDRS的組成部分，並且HD患者獨立性水平範圍從0(完全依賴於所有照護)到13(完全獨立)。該量表根據工作能力、處理家庭財務、管理家務、進行日常生活活動以及所需護理水平來評估HD患者之功能狀態。根據UHDRS總功能能力(TFC)，將HD分為疾病進展的1至5期。根據TFC評分(也稱為Shoulson和Fahn期)對HD之分類也被描述為HD的早期(對應於基於TFC評分的1期或2期)，中度HD或中期HD(對應於基於TFC得分的3期)和晚期或後期HD(對應於基於TFC得分的4期或5期)。

目前，僅對症治療可用。因此，迄今為止，尚無可用於減慢HD進展之療法。因此，需要找到用於HD之疾病修飾型療法(即，可以減慢疾病進展之治療選項)。

本發明關於例如如本文定義的剪接調節子之以下用途：

- 在減慢杭丁頓氏舞蹈症進展之治療中；

- 在藉由在HTT mRNA的外顯子49和50之間產生框內終止密碼子來減慢杭丁頓氏舞蹈症進展之治療中；

- 在作為疾病修飾型療法之杭丁頓氏舞蹈症治療中；

- 在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的運動功能衰退之治療中；

- 在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的認知衰退之治療中；

- 在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的精神病學衰退之治療中；

- 在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的功能能力衰退之治療中；或，

- 在減慢杭丁頓氏舞蹈症病理生理學進展之治療中。

[圖1].用佈雷那蘭治療的人成纖維細胞系之RNA-seq分析。FC：倍數變化。RPKM：讀段/千鹼基/百萬映射讀段。

[圖2].2a、2b、2c：HTT轉錄本和蛋白之體外調節。

[圖3].在BacHD小鼠模型中，單次口服劑量的佈雷那蘭提高含有新穎外顯子的腦HTT轉錄本水平。P值：(媒劑8小時相比於50mg/kg，8小時)** P=0.0034，(媒劑24小時相比於50mg/kg，24小時)**** P<0.0001，(媒劑24小時相比於50mg/kg，48小時)** P=0.0020。

[圖4].在BacHD小鼠模型中，單次口服劑量的佈雷那蘭降低了總腦HTT轉錄本水平。

[圖5].在BacHD小鼠模型中，單次口服劑量的佈雷那蘭提高含有新穎外顯子之血液HTT轉錄本水平。

[圖6].在BacHD小鼠模型中，單次口服劑量的佈雷那蘭降低總血液HTT轉錄本水平。

[圖7].在BacHD小鼠模型中重複口服劑量的佈雷那蘭降低紋狀體中的突變杭丁頓氏蛋白。P值：(媒劑相比於12mg/kg，24小時)** P=0.048，(媒劑相比於24mg/kg，72小時)*** P=0.0003，(媒劑相比於24mg/kg，72小時)**** P<0.0001。

[圖8].在BacHD小鼠模型中重複口服劑量的佈雷那蘭降低皮質中之突變HTT蛋白。P值-(媒劑相比於12mg/kg，24小時)** P=，(媒劑相比於24mg/kg，72小時)*** P，(媒劑相比於24mg/kg，72小時)**** P<0.0001。

[圖9].在BacHD小鼠模型中重複口服劑量的佈雷那蘭降低肝臟中之突變HTT蛋白。

[圖10].在BacHD小鼠模型中重複口服劑量的佈雷那蘭降低血液中之總HTT轉錄本。

[圖11].在BacHD小鼠模型中重複口服劑量的佈雷那蘭降低CSF中之HTT突變HTT蛋白。

[圖12].在每週投與佈雷那蘭情況下，SMA 1型嬰兒中在HTT mRNA中包含新穎外顯子情況下血液轉錄本之標準化相對量。

[圖13].在每週投與佈雷那蘭情況下，SMA 1型嬰兒中血HTT mRNA水平從基線之中位數變化。

[圖14].適應性Ph IIb研究設計。TBD=待確定PBO=安慰劑。

[圖15].口服佈雷那蘭投與後33-39個月大的SMA 1型患者血漿中佈雷那蘭濃度的模擬值相比於觀察值(標稱劑量：60mg/m²，3.125mg/kg，如實例1c.1中所述之使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)。

[圖16].口服佈雷那蘭投與後35-44個月大的SMA 1型患者血漿中佈雷那蘭濃度的模擬值相比於觀察值(標稱劑量：60mg/m²，3.125mg/kg，如實例1c.1中所述使用佈雷那蘭首次人概念驗證研究)。

[圖17].口服佈雷那蘭投與後22-29個月大的SMA 1型患者血漿中佈雷那蘭濃度的模擬值相比於觀察值(標稱劑量：60mg/m²，3.125mg/kg，如實例1c.1中所述使用佈雷那蘭首次人概念驗證研究)。

[圖18].重複口服佈雷那蘭投與(12mg/kg和24mg/kg，實例1a)後，突變HTT蛋白在BacHD小鼠腦皮質中之預測分佈。符號：觀察到的mHTT蛋白水平；實線：中位數預測；灰區域；預測90%置信區間(每個帶對應9個帶的10%置信區間)。

[圖19].重複口服佈雷那蘭投與(12mg/kg和24mg/kg，實例1a)後，突變HTT蛋白在BacHD小鼠腦紋狀體中之預測分佈。符號：觀察到的mHTT蛋白水平；實線：中位數預測；灰區域；預測90%置信區間(每個帶對應9個帶的10%置信區間)。

[圖20].重複口服劑量的佈雷那蘭後，BacHD小鼠紋狀體中HTT蛋白降低之時間過程。P值-(媒劑相比於24mg/kg，72小時，3w)，****P<0.0001，(媒劑相比於24mg/kg，168小時，3w)**P=0.0031，(媒劑相比於24mg/kg，240小時，3w)**P=0.0017。

[圖21].重複口服劑量的佈雷那蘭後，BacHD小鼠皮質中HTT蛋白降低之時間過程。P值-(媒劑相比於24mg/kg，72小時)**P=0.0060

已發現剪接調節子(例如佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽)可能是用於減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療之理想候選物，具有治療優勢，例如以下中的一種或多種：

i)它對於在作為疾病修飾型療法的杭丁頓氏舞蹈症治療中有用；

ii)它延遲了杭丁頓氏舞蹈症的發作或與杭丁頓氏舞蹈症相關的症狀的發作；

iii)例如，與安慰劑相比，例如，藉由使用標準量表(例如臨床量表，例如UHDRS運動評估量表)(例如在Movement Disorders[運動障礙]，1996,11,136-142中)進行評估，它降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的運動功能的衰退速率；

iv)例如與安慰劑相比，例如，藉由使用標準量表(例如臨床量表)進行評估[例如藉由以下進行評估：符號數字模態測試(Symbol Digit Modalities Test)、Stroop單詞閱讀測試(Stroop Word Reading Test)、蒙特利爾認知評估(Montreal Cognitive Assessment)或HD認知評估組(HD Cognitive Assessment Battery)(包括符號數字模態測試、連線測試B(Trail Making Test B)、單觸長襪(One Touch Stockings)、節奏輕拍(Paced Tapping)、情緒識別測試(Emotion Recognition Test)、霍普金斯言語學習測試(Hopkins Verbal Learning Test))；例如在Movement Disorders[運動障礙]，2014,29(10),1281-1288中]，它降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的認知衰退速率；

v)與安慰劑相比，例如，使用標準量表(例如臨床量表[例如，冷漠評估量表(Apathy Evaluation Scale)或醫院焦慮和抑鬱量表(Hospital Anxiety and Depression Scale)；例如在Movement Disorders[運動障礙]，2016,31(10),1466-1478,Movement Disorders[運動障礙]，2015,30(14),1954-1960中])進行評估，它降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的精神病學衰退速率；

vi)與安慰劑相比，例如藉由使用標準量表(例如臨床量表，例如UHDRS總功能能力量表(UHDRS Total Functional Capacity)、功能評估和獨立性量表(Functional Assessment and Independence scale)(例如，在Movement Disorders[運動障礙]，1996,11,136-142中)，它降低與杭丁頓氏舞蹈症相關之功能能力衰退速率；

vii)它降低杭丁頓氏舞蹈症病理生理之進展速率[例如降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的腦(例如全腦、尾核、紋狀體或皮質)體積損失速率(例如，相對於基線體積的%)[例如由MRI評估，例如藉由神經影像測量(例如在Lancet Neurol.[柳葉刀神經病學]2013,12(7),637-649)中)]；

viii)例如，與假手術或安慰劑相比，它減少生活品質的下降，例如藉由杭丁頓氏舞蹈症健康相關生活品質調查表(Huntington’s Disease Health-related Quality of Life questionnaire，HDQoL)評估(例如，在Movement Disorders[運動障礙]，2018,33(5),742-749中)

ix)它具有良好的治療譜，例如良好的安全性譜或代謝譜；例如與脫靶效應，精神疾病不良事件，毒性(例如遺傳毒性)或心血管不良事件(例如血壓、心率、心電圖參數)有關的有利譜

下面描述本發明之實施方式：

實施方式(A)：

實施方式1a：一種剪接調節子，其用於在延緩杭丁頓氏舞蹈症進展之治療中使用。

實施方式2a：一種剪接調節子，其用於在作為疾病修飾型療法之杭丁頓氏舞蹈症治療中使用。

實施方式3a：一種剪接調節子，其用於在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的運動功能衰退之治療中使用。

實施方式4a：一種剪接調節子，其用於在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的認知衰退的治療中使用。

實施方式5a：一種剪接調節子，其用於在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的精神病學衰退的治療中使用。

實施方式6a：一種剪接調節子，其用於在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的功能能力衰退的治療中使用。

實施方式7a：一種剪接調節子，其用於在減慢杭丁頓氏舞蹈症病理生理學進展之治療中使用[例如降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的腦(例如全腦、尾核、紋狀體或皮質)體積損失速率(例如，相對於基線體積的%)(例如由MRI評估)]。

實施方式8a：用於根據實施方式3a所述使用的剪接調節子，其中運動功能包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：眼動功能、構音障礙、肌張力障礙(dystonia)、舞蹈症、姿勢穩定性和步態。

實施方式9a：用於根據實施方式4a所述使用的剪接調節子，其中認知衰退包括選自以下群組中的一種或多種的衰退，該群組由以下組成：注意力、處理速度、視覺空間處理、時間選擇，情緒處理、記憶、言語流暢性、精神運動功能和執行功能。

實施方式10a：用於根據實施方式5a所述使用的剪接調節子，其中精神病學衰退包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：冷漠、焦慮、抑鬱、強迫性行為、自殺念頭、易怒和躁動。

實施方式11a：用於根據實施方式6a所述使用的剪接調節子，其中功能能力包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：工作能力、處理財務的能力、管理家務的能力、進行日常生活活動的能力以及所需的護理水平。

實施方式12a：用於根據實施方式1a至11a中任一項所述使用的剪接調節子，其中杭丁頓氏舞蹈症的基因特徵在於在4號染色體上的杭丁頓氏基因中從36到39的CAG重複擴增(SEQ ID NO：20)。

實施方式13a：用於根據實施方式1a至11a中任一項所述使用的剪接調節子，其中杭丁頓氏舞蹈症的基因特徵在於在4號染色體上的杭丁頓氏基因中>39的CAG重複擴增(SEQ ID NO：21)。

實施方式14a：用於根據實施方式1a至13a中任一項所述使用的剪接調節子，其中杭丁頓氏舞蹈症係顯現的杭丁頓氏舞蹈症。

實施方式15a：用於根據實施方式1a至14a中任一項所述使用的剪接調節子，其中杭丁頓氏舞蹈症係青少年杭丁頓氏舞蹈症或兒科杭丁頓氏舞蹈症。

實施方式16a：用於根據實施方式1a至15a中任一項所述使用的剪接調節子，其中杭丁頓氏舞蹈症係杭丁頓氏舞蹈症的早期、杭丁頓氏舞蹈症的中期或杭丁頓氏舞蹈症的晚期；特別是杭丁頓氏舞蹈症的早期。

實施方式17a：用於根據實施方式1a至16a中任一項所述使用的剪接調節子，其中杭丁頓氏舞蹈症係杭丁頓氏舞蹈症的I期、杭丁頓氏舞蹈症的II期、杭丁頓氏舞蹈症的III期、杭丁頓氏舞蹈症的IV期或杭丁頓氏舞蹈症的V期；特別是杭丁頓氏舞蹈症的I期或杭丁頓氏舞蹈症的II期。

實施方式18a：用於根據實施方式1a至13a中任一項所述使用的剪接調節子，其中杭丁頓氏舞蹈症係顯現前杭丁頓氏舞蹈症。

實施方式19a：用於根據實施方式1a至18a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子根據間歇給藥時間表投與。

實施方式20a：用於根據實施方式1a至18a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子每週一次或每週兩次投與。

實施方式21a：用於根據實施方式1a至20a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子口服投與。

實施方式22a：用於根據實施方式1a至21a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子以藥物組成物的形式提供。

實施方式23a：用於根據實施方式1a至21a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子以藥物組合的形式提供。

實施方式24a：用於根據實施方式1a至23a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子在基因療法或用反義化合物治療後投與。

實施方式25a：用於根據實施方式1a至24a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子係佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽。

實施方式26a：用於根據實施方式1a至24a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子係佈雷那蘭鹽酸鹽。

實施方式27a：用於根據實施方式1a至24a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子選自由以下組成的群組：列表4、列表5、列表6、列表7、列表8、列表9、列表10、列表11；列表12和列表13，特別是列表4、列表5、列表6、列表7。

實施方式28a：用於根據實施方式1a至24a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子選自由以下組成的群組：列表1、列表2和列表3。

實施方式29a：用於根據實施方式1a至24a中任一項所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子選自由以下組成的群組：列表14、列表15、列表16、列表17、列表18、列表19、列表20、列表21、列表22、列表23和列表24。

實施方式(B)：

實施方式1b：一種在有需要的受試者中減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療方法，該方法包括向所述受試者投與有效量的剪接調節子。

實施方式2b：一種在有需要的受試者中治療杭丁頓氏舞蹈症之方法，該方法包括向所述受試者投與有效量的作為疾病修飾型療法的剪接調節子。

實施方式3b：一種在有需要的受試者中減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的運動功能衰退的治療方法，該方法包括向所述受試者投與有效量的剪接調節子。

實施方式4b：一種在有需要的受試者中減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的認知衰退的治療方法，該方法包括向所述受試者投與有效量的剪接調節子。

實施方式5b：一種在有需要的受試者中減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的精神病學衰退的治療方法，該方法包括向所述受試者投與有效量的剪接調節子。

實施方式6b：一種在有需要的受試者中減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的功能能力衰退的治療方法，該方法包括向所述受試者投與有效量的剪接調節子。

實施方式7b：一種在有需要的受試者中減慢杭丁頓氏舞蹈症病理生理學進展[例如降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的腦(例如全腦、尾核、紋狀體或皮質)體積損失速率(例如，相對於基線體積的%)(例如由MRI評估)]的治療方法，該方法包括向所述受試者投與有效量的剪接調節子。

實施方式8b：根據實施方式3b所述之方法，其中運動功能包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：眼動功能、構音障礙、肌張力障礙、舞蹈症、姿勢穩定性和步態。

實施方式9b：根據實施方式4b所述之方法，其中認知衰退包括選自以下群組中的一種或多種的衰退，該群組由以下組成：注意力、處理速度、視覺空間處理、時間選擇，情緒處理、記憶、言語流暢性、精神運動功能和執行功能。

實施方式10b：根據實施方式5b所述之方法，其中精神病學衰退包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：冷漠、焦慮、抑鬱、強迫性行為、自殺念頭、易怒和躁動。

實施方式11b：根據實施方式6b所述之方法，其中功能能力包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：工作能力、處理財務的能力、管理家務的能力、進行日常生活活動的能力以及所需的護理水平。

實施方式12b：根據實施方式1b至11b中任一項所述之方法，其中杭丁頓氏舞蹈症的基因特徵在於在4號染色體上的杭丁頓氏基因中從36到39的CAG重複擴增(SEQ ID NO：20)。

實施方式13b：根據實施方式1b至11b中任一項所述之方法，其中杭丁頓氏舞蹈症的基因特徵在於在4號染色體上的杭丁頓氏基因中>39的CAG重複擴增(SEQ ID NO：21)。

實施方式14b：根據實施方式1b至13b中任一項所述之方法，其中杭丁頓氏舞蹈症係顯現的杭丁頓氏舞蹈症。

實施方式15b：根據實施方式1b至14b中任一項所述之方法，其中杭丁頓氏舞蹈症係青少年杭丁頓氏舞蹈症或兒科杭丁頓氏舞蹈症。

實施方式16b：根據實施方式1b至15b中任一項所述之方法，其中杭丁頓氏舞蹈症係杭丁頓氏舞蹈症的早期、杭丁頓氏舞蹈症的中期或杭丁頓氏舞蹈症的晚期；特別是杭丁頓氏舞蹈症的早期。

實施方式17b：根據實施方式1b至16b中任一項所述之方法，其中杭丁頓氏舞蹈症係杭丁頓氏舞蹈症的I期、杭丁頓氏舞蹈症的II期、杭丁頓氏舞蹈症的III期、杭丁頓氏舞蹈症的IV期或杭丁頓氏舞蹈症的V期；特別是杭丁頓氏舞蹈症的I期或杭丁頓氏舞蹈症的II期。

實施方式18b：根據實施方式1b至13b中任一項所述之方法，其中杭丁頓氏舞蹈症係顯現前杭丁頓氏舞蹈症。

實施方式19b：根據實施方式1b至18b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子根據間歇給藥時間表投與。

實施方式20b：根據實施方式1b至18b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子每週一次或每週兩次投與。

實施方式21b：根據實施方式1b至20b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子口服投與。

實施方式22b：根據實施方式1b至21b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子以藥物組成物的形式提供。

實施方式23b：根據實施方式1b至21b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子以藥物組合的形式提供。

實施方式24b：根據實施方式1b至23b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子在基因療法或用反義化合物治療後投與。

實施方式25b：根據實施方式1b至24b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子係佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽。

實施方式26b：根據實施方式1b至24b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子係佈雷那蘭鹽酸鹽。

實施方式27b：根據實施方式1b至24b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子選自由以下組成的群組：列表4、列表5、列表6、列表7、列表8、列表9、列表10、列表11，列表12和列表13；特別是列表4、列表5、列表6、列表7。

實施方式28b：根據實施方式1b至24b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子選自由以下組成的群組：列表1、列表2和列表3。

實施方式29b：根據實施方式1b至24b中任一項所述之方法，其中該剪接調節子選自由以下組成的群組：列表14、列表15、列表16、列表17、列表18、列表19、列表20、列表21、列表22、列表23和列表24。

實施方式(C)：

出人意料地發現，佈雷那蘭促進包括新穎115-bp外顯子，其在HTT mRNA的外顯子49和50之間包含框內終止密碼子(從新穎外顯子的3'末端起55bp)，從而降低HTT轉錄本和蛋白質水平。因此，另一方面，本發明關於：

實施方式1c：一種藉由在HTT mRNA的外顯子49和50之間產生框內終止密碼子在有需要的受試者中減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療方法，該方法包括向所述受試者投與有效量的剪接調節子，例如佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽。例如，該剪接調節子選自由以下組成的群組：列表1、列表2、列表3、列表4、列表5、列表6、列表7、列表8、列表9、列表10、列表11、列表12、列表13、列表14、列表15、列表16、列表17、列表18、列表19、列表20、列表21、列表22、列表23和列表24。

實施方式2c：一種剪接調節子，例如佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在藉由在HTT mRNA的外顯子49和50之間產生框內終止密碼子來減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療中使用。例如，該剪接調節子選自由以下組成的群組：列表1、列表2、列表3、列表4、列表5、列表6、列表7、列表8、列表9、列表10、列表11、列表12、列表13、列表14、列表15、列表16、列表17、列表18、列表19、列表20、列表21、列表22、列表23和列表24。

實施方式3c：根據實施方式1c所述之方法，其中該剪接調節子係佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，例如佈雷那蘭鹽酸鹽。

實施方式4c：用於根據實施方式2c所述使用的剪接調節子，其中該剪接調節子係佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，例如佈雷那蘭鹽酸鹽。

通用術語定義

如本文所用，術語「HD」或「杭丁頓氏舞蹈症」係指神經退行性障礙，其特徵在於運動、認知、精神和功能能力衰退，並且由杭丁頓氏基因中的CAG重複擴增引起。

如本文所用之術語「顯現的HD」或「顯現的杭丁頓氏舞蹈症」係指在臨床上已經建立了對HD的診斷{例如，基於如下：確定的家族病史或陽性的基因檢測結果(確定CAG重複擴增

36(SEQ ID NO：22))；以及運動障礙的發作[診斷的置信度得分(DCS)為4，如由統一杭丁頓氏評分量表(UHDRS)總運動得分(TMS)定義]}。在一個實施方式中，如本文所用之術語「顯現的HD」或「顯現的杭丁頓氏舞蹈症」係指患者在臨床上已經建立了對HD的診斷{例如，基於如下：確定的家族病史或陽性的基因檢測結果(確定CAG重複擴增

36(SEQ ID NO：22))；以及運動障礙的發作[診斷的置信度得分(DCS)為4，如由統一杭丁頓氏評分量表(UHDRS)總運動得分(TMS)定義]}。

如本文所用之術語「顯現前HD」或「顯現前杭丁頓氏舞蹈症」係指具有HD的基因診斷{例如，基於如下：在沒有臨床建立的運動障礙發作情況下的陽性基因測試(確定CAG重複擴增

40(SEQ ID NO：21))}，例如，根據標準量表(例如臨床量表[例如基於由統一杭丁頓氏評分量表(UHDRS)總運動得分(TMS)定義的診斷的置信度得分(DCS)<4])進行評估。在一個實施方式中，如本文所用之術語「顯現前HD」或「顯現前杭丁頓氏舞蹈症」係指患者具有HD的基因診斷{例如，基於如下：在沒有臨床建立的運動障礙發作情況下的陽性基因測試(確定CAG重複擴增

40(SEQ ID NO：21))}，例如，根據標準量表(例如臨床量表[例如基於由統一杭丁頓氏評分量表(UHDRS)總運動得分(TMS)定義的診斷的置信度得分(DCS)<4])進行評估。

在一個實施方式中，本文所用之術語「減慢HD之進展」、「減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」、「以減慢HD之進展」或「以減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」指，例如：

-降低杭丁頓氏舞蹈症之進展速率(例如，降低杭丁頓氏舞蹈症各期之間的進展速率)；

-延遲杭丁頓氏舞蹈症的發作；

-延遲與杭丁頓氏舞蹈症相關的症狀的發作；

-降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的症狀(例如一種或多種症狀)之進展速率(例如，降低每年的衰退速率)；或

-降低杭丁頓氏舞蹈症病理生理的進展速率；

(例如，與安慰劑相比或與自然歷史對照組相比；例如，根據標準量表，例如根據本文以上或以下所述之臨床量表，或根據神經影像學測量)。

在一個實施方式中，如本文所用之術語「進展速率」係指例如年變化速率(例如，衰退)或每年變化速率(例如，衰退)，例如，根據標準量表(例如臨床量表)評估，或根據神經影像學測量評估。

如本文所用之術語「降低」係指例如，降低5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%或70%/年治療。

如本文中所使用的，術語「延遲」係指延遲至少例如0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15年。

在一個實施方式中，本文所用之術語「減慢HD之進展」、「減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」、「以減慢HD之進展」或「以減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」係指延遲杭丁頓氏舞蹈症的發作，例如針對如本文所定義的杭丁頓氏舞蹈症發作增加時間。在另一個實施方式中，如評估的，例如與安慰劑相比，根據標準量表，例如臨床量表[例如根據UHDRS總功能能力(TFC)量表(例如，在 Neurology[神經病學]，1979,29,1-3中)]，它係指降低杭丁頓氏舞蹈症各期之間的進展速率，例如降低從HD初始階段到HD更晚期的進展速率。在一個實施方式中，它係指降低從HD的1期到HD的2期之進展速率(例如與安慰劑相比)。在另一個實施方式中，它係指降低從HD的2期到HD的3期之進展速率(例如與安慰劑相比)。在另一個實施方式中，它係指降低從HD的3期到HD的4期之進展速率(例如與安慰劑相比)。在另一個實施方式中，它係指降低從HD的4期到HD的5期之進展速率(例如與安慰劑相比)。在另一個實施方式中，它係指降低從早期HD到中期HD之進展速率(例如與安慰劑相比)。在另一個實施方式中，它係指降低從中期HD進展到晚期HD之進展速率(例如與安慰劑相比)。如本文所用之術語「降低進展速率」係指例如針對HD期的進展增加時間(例如，與安慰劑相比)。

在另一個實施方式中，本文所用之術語「減慢HD之進展」、「減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」、「以減慢HD之進展」或「以減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」係指將杭丁頓氏舞蹈症的發作延遲(例如針對如本文所定義的杭丁頓氏舞蹈症發作增加時間)至少25%(例如25%或更長，例如25%至50%)。

如本文所用之術語「杭丁頓氏舞蹈症的發作」係指如通常所建立的HD的臨床診斷[例如，基於診斷的置信度得分(DCS)為4的運動障礙發作(如統一杭丁頓氏評分量表(UHDRS)總運動得分(TMS)定義)]。

在另一個實施方式中，如本文所用，術語「減慢HD之進展」、「減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」、「以減慢HD之進展」或「以減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」係指延遲與杭丁頓氏舞蹈症相關的症狀的發作，例如針對與杭丁頓氏舞蹈症相關的一種或多種症狀的發作增加時間，該症狀選自如本文所定義的與杭丁頓氏舞蹈症相關的運動功能衰退、與杭丁頓氏舞蹈症相關的認知衰退、與杭丁頓氏舞蹈症相關的精神病學衰退以及與杭丁頓氏舞蹈症相關的功能能力衰退。在另一個實施方式中，它係指降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的一種或多種症狀的 進展速率，該症狀選自如本文所定義的與杭丁頓氏舞蹈症相關的運動功能衰退、與杭丁頓氏舞蹈症相關的認知衰退、與杭丁頓氏舞蹈症相關的精神病學衰退和與杭丁頓氏舞蹈症相關的功能能力衰退。如本文所用之術語「降低......的速率」係指例如針對發作增加時間或針對嚴重程度上升增加時間(例如，與安慰劑相比)。在一個實施方式中，本文所用之術語「減慢HD之進展」、「減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」、「以減慢HD之進展」或「以減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」係指降低顯現前HD到顯現的HD的進展速率[延遲了顯現的HD的發作；例如與安慰劑相比；例如藉由診斷的置信度得分(DCS)為4(如由統一杭丁頓氏評分量表(UHDRS)總運動得分(TMS)定義)評估]。

在另一個實施方式中，本文所用之術語「減慢HD之進展」、「減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」、「以減慢HD之進展」或「以減慢杭丁頓氏舞蹈症之進展」指減慢杭丁頓氏舞蹈症的病理生理學進展。

如本文所用，術語「減慢杭丁頓氏舞蹈症的病理生理學進展」係指降低杭丁頓氏舞蹈症病理生理學的進展速率，例如，如藉由磁共振成像(MRI)[藉由神經影像測量，例如在Lancet Neurol.[柳葉刀神經病學]2013,12(7),637-649中]評估。例如，它係指降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的腦(例如全腦、尾核、紋狀體或皮質)體積損失(例如，相對於基線體積的%)速率(例如降低例如相比於安慰劑之年速率)(例如由MRI評估)。

如本文所用之術語「運動功能」係指HD的運動特徵，其包括例如選自由以下組成的群組中的一種或多種：眼動功能、構音障礙、舞蹈症、姿勢穩定性和步態。

如本文所用之術語「運動功能衰退」係指運動功能衰退(例如，相對於正常運動功能或相對於先前的臨床就診)。可以例如根據標準量表(例如 臨床量表(例如，UHDRS運動評估量表，如藉由UHDRS總運動得分測量；例如在Movement Disorders[運動障礙]，1996,11,136-142中))來評估運動功能衰退。

如本文所用之術語「減慢運動功能衰退」或「以減慢運動功能衰退」係指降低運動功能衰退速率(例如與安慰劑相比；例如，降低運動功能年衰退速率，例如，相比於安慰劑；例如，如藉由UHDRS總運動評分評估)。如本文所用之術語「降低速率」係指標對發作增加時間或針對嚴重程度上升增加時間(例如，與安慰劑相比；例如，相比於安慰劑，降低年衰退速率)。

如本文所用，術語「認知衰退」係指認知能力降低(例如，相對於正常的認知功能或相對於先前的臨床就診)。在一個實施方式中，它包括例如選自以下群組中的一種或多種的衰退，該群組由以下組成：注意力、處理速度、視覺空間處理、時間選擇，情緒處理、記憶、言語流暢性、精神運動功能和執行功能。例如根據標準量表(例如臨床量表)評估認知衰退[例如藉由以下評估：符號數字模態測試(Symbol Digit Modalities Test)，Stroop單詞閱讀測試(Stroop Word Reading Test)，蒙特利爾認知評估(Montreal Cognitive Assessment)或HD認知評估組(HD Cognitive Assessment Battery)(包括符號數字模態測試，連線測試B(Trail Making Test B)，單觸長襪(One Touch Stockings)，節奏輕拍(Paced Tapping)，情緒識別測試(Emotion Recognition Test，)，霍普金斯言語學習測試(Hopkins Verbal Learning Test))；例如在Movement Disorders[運動障礙]，2014,29(10),1281-1288中]。

如本文所用，術語「減慢認知衰退」或「以減慢認知衰退」係指降低認知衰退速率(例如與安慰劑相比；例如，相比於安慰劑，降低認知衰退年速率；例如，藉由符號數字模態測試、Stroop單詞閱讀測試、蒙特利爾認知評估或HD認知評估組評估)。如本文所用之術語「降低速率」係指標對發作增加時 間或針對嚴重程度上升增加時間(例如，與安慰劑相比；例如，相比於安慰劑，降低年衰退速率)。

如本文所用之術語「精神病學衰退」係指精神病學功能衰退(例如，相對於正常的精神病學功能或相對於先前的臨床就診)。在一個實施方式中，它包括例如選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：冷漠、焦慮、抑鬱、強迫性行為、自殺念頭、易怒和躁動。可以根據標準量表(例如臨床量表)來評估精神病學衰退(例如，如藉由冷漠評估量表或醫院焦慮症和抑鬱量表評估；例如在Movement Disorders[運動障礙]，2016,31(10),1466-1478,Movement Disorders[運動障礙]，2015,30(14),1954-1960)。

如本文所用之術語「減慢精神病學衰退」或「以減慢精神病學衰退」係指降低精神病學衰退速率(例如與安慰劑相比；例如，相比於安慰劑，降低精神病學衰退年速率；例如藉由冷漠評估量表或醫院焦慮和抑鬱量表評估)。如本文所用之術語「降低速率」係指標對發作增加時間或針對嚴重程度上升增加時間(例如，與安慰劑相比；例如，相比於安慰劑，降低年衰退速率)。

如本文所用之術語「功能能力」係指例如工作、處理財務、管理家務、執行日常生活活動的能力以及所需護理水平。功能能力包括例如選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：工作能力、處理財務的能力、管理家務的能力、進行日常生活活動的能力以及所需的護理水平。

如本文所用之術語「功能能力衰退」係指功能能力衰退(例如相對於正常功能能力或相對於先前的臨床就診)。可以例如根據標準量表例如臨床量表(例如UHDRS功能評估量表和獨立量表，以及UHDRS總功能能力量表，例如在Movement Disorders[運動障礙]，1996,11,136-142中)來評估功能能力衰退。

如本文所用之術語「減慢功能能力衰退」或「以減慢功能能力衰退」係指降低功能能力衰退速率(例如，與安慰劑相比；例如，相比於安慰劑， 降低功能能力衰退年速率；例如藉由UHDRS功能評估量表和獨立量表或藉由UHDRS總功能能力量表評估)。如本文所用之術語「降低速率」係指標對發作增加時間或針對嚴重程度上升增加時間(例如，與安慰劑相比；例如，相比於安慰劑，降低年衰退速率)。

如本文所用之術語「衰退」係指例如隨著時間(例如，一年地或每年)病症或病症的特定特徵的惡化，例如根據標準量表(例如臨床量表)評估。

如本文所用，術語「統一杭丁頓氏舞蹈症評分量表」或「UHDRS」係指由杭丁頓氏研究組製定的臨床評分量表(例如在Movement Disorders[運動障礙]，1996,11,136-142中，其藉由引用全部併入本文)，其評估以下領域：HD的臨床表現和能力。它包括運動功能、認知功能和功能能力之評分量表。它產生的得分評估了HD之主要特徵(例如運動和認知)以及該等特徵之整體功能影響。術語「cHDRS」係指綜合的統一杭丁頓氏舞蹈症評分量表，其提供了運動、認知和整體功能的綜合測量(例如，Neurology[神經病學]，2017,89,2495-2502中)。

如本文所用之術語「HD 1期」、「HD I期」、「杭丁頓氏舞蹈症1期」、「杭丁頓氏舞蹈症I期」、「杭丁頓氏舞蹈症的1期」或「杭丁頓氏舞蹈症的I期」係指臨床建立的HD疾病期[例如根據標準量表(例如臨床量表(例如基於UHDRS總功能能力(TFC)量表)評估，其中TFC得分為11到13]。在HD 1期，通常，患者已被臨床診斷為HD，在家庭和工作中具有完整功能，並且在功能能力方面保持獨立性；通常是自杭丁頓氏舞蹈症發作起0至8年。

如本文所用之術語「HD 2期」、「HD II期」、「杭丁頓氏舞蹈症2期」、「杭丁頓氏舞蹈症II期」、「杭丁頓氏舞蹈症的2期」或「杭丁頓氏舞蹈症的II期」係指臨床建立的HD疾病期[例如根據標準量表(例如臨床量表(例如基於UHDRS總功能能力(TFC)量表)評估，其中TFC得分為7到10]。在HD 2期， 通常，患者仍然可以工作，但是能力較低，儘管有一些困難，但通常能夠進行日常活動，並且通常只需要少量幫助；通常是自杭丁頓氏舞蹈症發作起3至13年。

如本文所用之術語「HD3期」、「HD III期」、「杭丁頓氏舞蹈症3期」、「杭丁頓氏舞蹈症III期」、「杭丁頓氏舞蹈症的3期」或「杭丁頓氏舞蹈症的III期」係指臨床建立的HD疾病期[例如根據標準量表(例如臨床量表(例如基於UHDRS總功能能力(TFC)量表)評估，其中TFC得分為4到6]。在HD 3期，通常，患者無法進行工作或管理家務，在日常財務、家庭責任和日常生活中需要提供大量說明；通常是自杭丁頓氏舞蹈症發作起5至16年。

如本文所用之術語「HD 4期」、「HD IV期」、「杭丁頓氏舞蹈症4期」、「杭丁頓氏舞蹈症IV期」、「杭丁頓氏舞蹈症的4期」或「杭丁頓氏舞蹈症的IV期」係指臨床建立的HD疾病期[例如根據標準量表(例如臨床量表(例如基於UHDRS總功能能力(TFC)量表)評估，其中TFC得分為1到3]。在HD 4期，通常，患者係不獨立的，但仍可以在家人或專業人士的幫助下在家中居住，但是，在財務、家務和大多數日常活動中需要大量說明；通常是自杭丁頓氏舞蹈症發作起9至21年。

如本文所用之術語「HD 5期」、「HD V期」、「杭丁頓氏舞蹈症5期」、「杭丁頓氏舞蹈症V期」、「杭丁頓氏舞蹈症的5期」或「杭丁頓氏舞蹈症的V期」係指臨床建立的HD疾病期[例如根據標準量表(例如臨床量表(例如基於UHDRS總功能能力(TFC)量表)評估，其中TFC得分為0]。在HD 5期，通常，患者在日常活動中需要專業護理的全面支持；通常是自杭丁頓氏舞蹈症發作起11至26年。

如本文所用，術語「早期HD」、「早期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的早期」或「杭丁頓氏舞蹈症的早期」係指HD的疾病期，其中患者在很大程度上是正常功能的並且可以繼續獨立地工作和生活，儘管遭受例如選自以下群組 中的一種或多種，該群組由以下組成：輕微的非自主運動、輕微的協調失調和對複雜問題的思考困難。在一個實施方式中，如本文所定義的「早期HD」、「早期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的早期」或「杭丁頓氏舞蹈症的早期」係指「HD 1期」或「HD 2期」。

如本文所用，術語「中期HD」、「中期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的中期」、「杭丁頓氏舞蹈症的中期」、「中間期HD」、「中間期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的中間期」或「杭丁頓氏舞蹈症的中間期」係指HD的疾病期，其中患者在該階段可能無法工作，無法管理自己的財務或無法執行自己的家務，但能夠進食、穿衣和在幫助下照顧個人衛生。通常，在這個期，例如，舞蹈症可能會突出，以及具有吞咽、平衡、跌倒、體重減輕和問題解決方面的問題。在一個實施方式中，如本文所定義，「中期HD」、「中期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的中期」、「杭丁頓氏舞蹈症的中期」、「中間期HD」、「中間期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的中間期」或「杭丁頓氏舞蹈症的中間期」係指「HD 3期」。

如本文所用之術語「晚期HD」、「晚期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的晚期」、「杭丁頓氏舞蹈症的晚期」、「後期HD」或「後期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的後期」或「杭丁頓氏舞蹈症的後期」係指HD的疾病期，其中患者在日常生活的所有活動中都需要幫助。通常，在該期，例如，舞蹈症可能是嚴重的，但更常被僵硬、肌張力障礙和運動遲緩所替代。在一個實施方式中，如本文所定義的術語「晚期HD」、「晚期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的晚期」、「杭丁頓氏舞蹈症的晚期」、「後期HD」或「後期杭丁頓氏舞蹈症」、「HD的後期」或「杭丁頓氏舞蹈症的後期」係指「HD 4期」或「HD 5期」。

如本文所用之術語「青少年HD」或「青少年杭丁頓氏舞蹈症」係指如臨床上建立的HD的診斷{例如，基於如下：確定的家族病史或陽性的基因檢測結果(即確定CAG重複擴增

36(SEQ ID NO：22))；以及在年齡<21歲症 狀發作}。在一個實施方式中，如本文所用之術語「青少年HD」或「青少年杭丁頓氏舞蹈症」係指受HD影響{例如基於如下：確定的家族病史或陽性的基因檢測結果(即確定CAG重複擴增

36(SEQ ID NO：22))}並且在年齡<21歲症狀發作的患者。

如本文所用之術語「兒科HD」或「兒科杭丁頓氏舞蹈症」係指受HD影響{例如基於如下：確定的家族病史或陽性的基因檢測結果(即確定CAG重複擴增

36(SEQ ID NO：22))和臨床診斷}並且年齡<18歲的患者。

如本文所定義的術語「HD患者」、「杭丁頓氏舞蹈症患者」、「有杭丁頓氏舞蹈症的患者」或「有HD的患者」係指HD患者。

如本文所用，術語治療(「treat」、「treating」、「treatment」)或療法(「therapy」)意指獲得有益或所希望的結果，例如臨床結果。有益或期望的結果可以包括但不限於穩定或改善HD的期的進展(例如與安慰劑相比)。治療的一方面係，例如，所述治療應對患者產生最小不良影響，例如，使用的藥劑應具有較高的安全性水平，例如，不會產生不良的副作用。在一個實施方式中，如本文所用之術語「用於治療之方法」係指「用以治療之方法」。

如本文所用之術語「間歇給藥方案」或「間歇給藥時間表」係指給藥方案，其包括投與剪接調節子，例如本文所定義的那些，隨後是靜息期。例如，根據至少兩個週期的間歇給藥時間表來投與剪接調節子，每個週期包括(a)給藥期，然後(b)靜息期。如本文所使用，術語「靜息期」指，尤其是指，不向患者施用剪接調節子的時間段(即，其中停止使用剪接調節子的治療的時間段)。例如本文所定義的那些，例如，如果每天給予剪接調節子，則如果每日投與中斷一段時間(例如持續幾天)或剪接調節子的血漿濃度在亞治療水平上維持一段時間(例如持續幾天)，則會有靜息期。剪接調節子的給藥期和/或劑量在週期之間可以相同或不同。總治療時間(即，治療的週期數)也可以例如基於所治療之 特定患者(例如，HD I期患者)，因患者而異。在一個實施方式中，間歇給藥時間表包括至少兩個週期，每個週期包括(a)給藥期，在此期間給所述患者投與治療有效量的剪接調節子並且然後(b)靜息期。如本文所用之術語「間歇給藥方案」或「間歇給藥時間表」係指用於單獨投與剪接調節子的給藥方案(即單一療法)或用於與至少一種另外的活性成分組合投與剪接調節子的給藥方案(即組合療法)。在一個實施方式中，術語「間歇給藥方案」或「間歇給藥時間表」係指重複的開/關治療，其中該剪接調節子以規則的間隔定期投與，例如每週一次、每3天一次、每4天一次或每週兩次。

在投與藥物的上下文中，術語「一週一次」或「每週一次」或「QW」在本文意指每週投與一個劑量的藥物一次，其中該劑量係例如在一週的同一天投與。在一個實施方式中，如在本文的上文或下文中使用，特別是在實施方式和請求項中，術語投與(administering或administration)每週一次佈雷那蘭係指投與的佈雷那蘭量係例如每週一次50mg至200mg，例如每週一次140mg，每週一次200mg至400mg，例如每週一次280mg，或每週一次400mg至700mg，例如每週一次560mg。

在投與藥物的上下文中，術語「一週兩次」或「每週兩次」或「BIW」在本文意指每週投與一個劑量的藥物兩次，其中每次投與係例如在分開的兩天，例如以規則的間隔，例如間隔72小時。在一個實施方式中，如在本文的上文或下文中使用，特別是在實施方式和請求項中，術語投與每週兩次佈雷那蘭係指投與的佈雷那蘭量係例如每週兩次25mg至100mg、例如每週兩次70mg，每週兩次100mg至200mg，例如每週兩次140mg，或每週兩次200mg至350mg，例如每週兩次280mg。

如本文所用，提及佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽的量(例如，mg、mg/ml、mg/m²、百分比)應理解為係指如下文所述為游離形式的式(I)的化 合物的量，其將相應地適於其藥學上可接受的鹽，例如其鹽酸鹽(例如，佈雷那蘭鹽酸鹽一水合物)。

如本文所用，術語「(一種或多種)游離形式」或「以游離形式」或「以該游離形式」係指非鹽形式(如鹼游離形式)的化合物。

與數值X相關的術語「約」意指例如X±15%，包括該範圍內的所有值。

如本文所用之術語「疾病修飾型療法」或「疾病修飾型治療」係指可修飾或改變病症或障礙或疾病(例如如本文所定義的HD)的過程之藥物(即疾病修飾型藥物)。

如本文所用，術語「受試者」係指哺乳生物，較佳的是人類(男性或女性)。

如本文所用，術語「患者」係指患病並將從治療中受益之受試者。

如本文所使用的，如果此類受試者(患者)會在生物學上、醫學上或生活品質方面從這類治療中獲益，那麼該受試者係對治療「有需要的」。

術語本發明化合物之「治療有效量」或「有效量」係指將引起受試者的生物學或醫學應答的本發明化合物之量。在另一個實施方式中，該術語係指本發明化合物之量，該量當投與於受試者時有效用以至少部分地改善病症、或障礙或疾病。

術語「一個或多個」係指一或大於一的數字(例如2、3、4、5等)。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表1」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2014/028459(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項1至14中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2014/028459的實例的化合物或其藥 學上可接受的鹽，例如實例1-1、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10、1-11、1-12、1-13、1-4、1-5、1-16、1-17、1-8、1-19、1-20、1-21、1-22、2-1、2-2、2-3、3-1、3-2、3-3、3-4、3-5、3-6、3-7、3-8、3-9、3-10、3-11、3-12、4-1、5-1、6-1、7-1、8-1、9-1、10-1、11-1、12-1、13-1、14-1、15-1、16-1、16-1、16-1、16-4、16-5、17-1、17-2、17-3、17-4、17-5、17-6、17-7、17-8、17-9、17-10、17-11、17-12、17-13、18-1、18-2、18-3、18-4、18-5、18-6、18-7、18-8、18-9、18-10、18-11、18-12、18-13、18-14、18-15、18-16、18-17、18-18、19-1、19-2、19-3、19-4、19-5、19-6、19-7、20-1、20-2、20-3、20-4、20-5、20-6、20-7、20-8、20-9、21-1、21-2、22-1、23-1、24-1、24-2、24-3、24-4、-5、24-6、24-7、24-8、24-1、24-2、24-3、24-4、24-5、24-6、24-7、24-8、24-9、24-10、24-11、24-12、25-1、25-2、25-3、25-4、25-5、25-6、26-1、26-2、26-3、26-4、26-5、27-2、27-2、27-3、28-1、29-1、30-1、30-2、31-1、32-1、32-2、32-3、32-4、32-5、32-6、32-7、32-8、32-9、33-1、34-1、34-1、34-2、34-3、34-4、34-5、35-1、35-1、35-2、35-3、35-4、35-5、35-6、36-1、37-1、38-1、39-1、39-2、40-1、40-2、40-3、40-4、40-5、40-6、40-7、40-8、41-1、41-2、41-3、41-4、41-5、41-6、41-7、41-8、41-9、41-10、41-11、41-12、41-13、41-14、41-15、41-16、41-17、41-18、41-19、41-20、42-1、42-2、42-3、42-4、42-5、42-6、42-7、42-8、42-9、42-10、42-11、43-1、43-2、43-3、43-4、43-5、43-6或43-7，其中的每個藉由引用併入本文，或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2014/028459的請求項14的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表2」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2014/116845(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至12中任一項所述之化合物， 其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2014/116845的實例1至12或15至109的化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2014/116845的請求項12的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表3」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2015/017589(其藉由引用併入本文)中揭露之化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至12中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2015/017589的實例的化合物或其藥學上可接受的鹽，例如實例1-1、1-2、1-3、2-1、3-1、3-2、3-3、3-4、3-5、3-6、3-7、4-1、5-1、6-1、6-2、7-1、7-2、7-3、7-4、7-5、7-6、8-1、8-2、9-1、9-2、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、11-1、12-1、13-1、14-1、15-1、15-2、15-3、16-1、17-1、18-1、18-2、18-3、19-1、20-1、20-2、20-3、20-4、20-5、20-6、22-1、23-1、24-1、25-1、26-1、26-2、26-3、26-4、26-5、26-6、26-7、27-1、27-2、27-3、28-1、29-1、29-2、29-3、30-1、31-1、32-1、33-1、34-1、34-2、35-1、35-2、35-3、35-4、36-1、36-2、36-3、36-4、36-5、36-6或37-1，其中的每個藉由引用併入本文，或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2015/017589的請求項12的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表4」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2017/100726(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至9中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中， 它係指WO 2017/100726的化合物1至465中的任一種(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽，在一個實施方式中，它係指WO 2017/100726的化合物26、31、47、258、307、352、424、425、426、427、428、429、430、431、432或433(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2017/100726的化合物44、46、48、51、63、64、170、176、200、212、218、315、318、348、350、393、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422或423(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2017/100726的請求項6的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2017/100726的請求項7的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2017/100726的請求項8的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2017/100726的請求項9的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表5」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2018/226622(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至7中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2018/226622的化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、 86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、714、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227或228,其中的每個藉由引用併入本文，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2018/226622的化合物3、10、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、30、31、32、33、34、35、36、37、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、92、93、94、95、96、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、110、111、112、113、114、115、116、117、118、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、714、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、 217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227或228，其中的每個藉由引用併入本文，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2018/226622的化合物15、17、19、20、21、22、25、26、32、33、34、35、36、37、43、45、46、47、48、49、50、51、52、55、56、57、58、59、62、63、64、66、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、86、87、88、89、90、92、93、95、96、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、110、111、112、113、114、115、117、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、139、140、141、143、144、145、146、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、169、171、172、173、714、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、192、193、195、196、197、199、200、201、202、204、206、207、210、211、215、216、217、218、219、221、223、224、225、226或227，其中的每個藉由引用併入本文，或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2018/226622的請求項6的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2018/226622的請求項7的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表6」[例如在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2019/005980中揭露的化合物，例如請求項及實例的化合物。特別地，它係指WO 2019/005980的實例的化合物(其藉由引用併入本文)，例如實例和請求項的化合物(例如，根據請求項1至9中任一項所述之化合物(其中的每個藉由引用併入本文))，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2019/005980的化合物1至877中的任一種(其中的每個藉由引用併入本文) 或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2019/005980的化合物209、287、302、305、306、413、422、452、480、502、504、516、566、587、653、654、655、656、696、710、711、713、718、719、738、752、753、756、763、791、796、864、869、870、871、872、873、874、875或877(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2019/005980的化合物413、502、516、653、654、696、719、791、796、864、869、870、871、872、875或877(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2019/005980的請求項6的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2019/005980的請求項7的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2019/005980的請求項8的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2019/005980的請求項9的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表7」[例如在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2019/005993中揭露的化合物，例如請求項及實例之化合物。特別地，它係指WO 2019/005993的實例之化合物(其藉由引用併入本文)，例如實例和請求項之化合物(例如，根據請求項1至4中任一項所述之化合物(其中的每個藉由引用併入本文))，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2019/005993的化合物801、802、803、804、805、806、807、808、810、811、812、813、814、815、816、817、818、821、822、827、828、835、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、 907、908、910、911、912、913、914、915、916、917、918、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949、950、951、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963或964，其中的每個藉由引用併入本文，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2019/005993的化合物886至899(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2019/005993的化合物954(其藉由引用併入本文)。在另一個實施方式中，它係指選自WO 2019/005993的請求項4的一種或多種化合物(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表8」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/005873(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至7中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/005873的化合物1至176或其藥學上可接受的鹽中的任何一種，例如一種或多種(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表9」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/005877(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至7中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/005877的化合物1至399或其藥學上可接受的鹽中的任何一種，例如一種或多種(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表10」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/005882(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至6中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/005882的化合物1至226或其藥學上可接受的鹽中的任何一種，例如一種或多種(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表11」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2019/191092(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至9中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2019/191092的化合物1至65或其藥學上可接受的鹽中的任何一種，例如一種或多種(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表12」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2018/0232039(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1所述之化合物(其藉由引用併入本文)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2018/0232039的化合物1至465或其藥學上可接受的鹽中的任何一種，例如一種或多種(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表13」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2019/028440(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例和申請專利範圍中的化合物(例如，根據請求項1至43和170中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其 藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2019/028440的表1A、表1B和表1C中之化合物1至357或其藥學上可接受的鹽中的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表14」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163544(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163544的表3和表5中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163544的表1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H、表1I和表1J中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表15」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163401(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163401的表1A、表1B和表1C中的化合物中的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表16」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163405(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163405的表3、表4、表5、表6和 表7中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163405的表1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H、表1J、表1K、表1L和表1M中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表17」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163409(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163409的表1A、表1B、表1C、表1D、表1E和表1F中的化合物中的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表18」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163323(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163323的表1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H、表1I、表1J、表1K和表1L中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163323的表3、表4和表5中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表19」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163375(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如 實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163375的表1、表2、表3、表4、表5、表6、表7、表8、表9、表10、表11、表12、表13、表14、表15，表16、表17、表18、表19、表20、表21、表22和表23中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163375的表A-10、表A-12和表24中的化合物中的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表20」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163406(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163406的表1中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表21」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163541(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163541的表1A、表1C、表1E、表1G和表1H中的化合物中的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163541的表15中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表22」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163647(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163647的表1、表2和表5中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163647的表B、表C、表A-5和表A-6中的化合物中的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表23」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163248(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163248的表1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H、表1I和表1J中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163248的表3B、表4、表6、表7、表8和表9中的化合物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)，或其藥學上可接受的鹽。

如本發明上文和下文所使用的術語「列表24」[在實施方式(A)或(B)中]係指WO 2020/163382(其藉由引用併入本文)中揭露的化合物(例如實例、表和申請專利範圍中之化合物(例如，根據請求項中任一項所述之化合物，其中的每個藉由引用併入本文(例如，按照原樣或以其組合)))或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，它係指WO 2020/163382的表1A和表1B中的化合 物的任何一個，例如一個或多個(其中的每個藉由引用併入本文)或其藥學上可接受的鹽。

如本文所用，如本發明上文和下文所使用的名為佈雷那蘭的化合物係剪接調節子，也稱為式(I)的5-(1H-吡唑-4-基)-2-(6-((2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)氧基)嗒

-3-基)苯酚：

可以如WO 2014/028459(例如實例17-13中)中所述製備佈雷那蘭或其藥用鹽(例如佈雷那蘭鹽酸鹽)，所述文獻藉由引用併入本文。如本文所用，「佈雷那蘭」係指游離形式，並且任何提及「其藥學上可接受的鹽」係指其藥學上可接受的酸加成鹽。如本文所用，術語「佈雷那蘭或其鹽，例如其藥學上可接受的鹽」，除非另有說明，否則在本發明上下文中(特別是在任何實施方式、以上或以下、以及請求項的上下文中)因此應解釋為涵蓋其游離形式及其藥學上可接受的鹽。如本文所用，術語「佈雷那蘭鹽酸鹽」或「佈雷那蘭單鹽酸鹽」係指5-(1H-吡唑-4-基)-2-(6-((2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)氧基)嗒

-3-基)苯酚單鹽酸鹽或其水合物，例如5-(1H-吡唑-4-基)-2-(6-((2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)氧基)嗒

-3-基)苯酚單鹽酸鹽一水合物，也稱為佈雷那蘭鹽酸鹽一水合物。具體地，佈雷那蘭為佈雷那蘭鹽酸鹽的形式。

在一個實施方式中，如本文所用，術語「剪接調節子」係指直接或間接增加靶前mRNA序列與剪接體的締合以增強或減少基因表現的小分子。

在一個實施方式中，如本文所用，術語「剪接調節子」係指改變先質信使RNA(縮寫為前mRNA)的剪接的化合物，例如小分子。示例性的剪接 調節子改變剪接體對剪接位點的識別，例如藉由與剪接機器的元件(例如蛋白質和/或核酸(例如mRNA和/或前mRNA))的相互作用，該相互作用導致靶向的前mRNA的正常剪接的改變。因此，示例性的剪接調節子改變了靶向的前mRNA的成熟RNA產物的序列(或一個或多個序列的相對水平)。示例性的剪接調節子藉由以下來起作用：直接或間接改變例如增加靶前mRNA序列與剪接體的締合來例如增強或減少基因表現。剪接調節子的非限制性實例係小分子(例如佈雷那蘭)和寡核苷酸，例如反義寡核苷酸和剪接切換寡核苷酸(SSO)。剪接調節子的更多實例可以在例如WO 2014/028459、WO 2014/116845和WO 2015/017589(其全部內容藉由引用併入本文)中找到，或在WO 2020/005873、WO 2020/005877、WO 2020/005882和WO 2019/191092(其全部內容藉由引用併入本文)中找到。可以用於改變前mRNA的剪接的某些寡聚化合物和核鹼基序列可在以下中找到：例如美國專利案號6,210,892；美國專利案號5,627,274；美國專利案號5,665,593；5,916,808；美國專利案號5,976,879；US 2006/0172962；US 2007/002390；US 2005/0074801；US 2007/0105807；US 2005/0054836；WO 2007/090073；WO 2007/047913，Hua等人.，PLoS Biol[公共科學圖書館雜誌]5(4)：e73；Vickers等人，J.Immunol.[免疫學雜誌]2006年3月15日；176(6)：3652-61；Hua等人，American J.of Human Genetics[美國人類遺傳學雜誌](2008年4月)82,1-15，出於任何目的將其全部內容藉由引用併入本文。反義化合物也已經用於改變天然存在的替代剪接變體(例如長和短形式的Bcl-X前mRNA)的比例(美國專利案號6,172.216：美國專利案號6,214,986：Taylor等人，Nat.Biotechnol.[自然生物技術]1999,17,1097-1100)或強制跳讀含有過早成熟的終止密碼子的特定外顯子(Wilton等人，Neuromuscul.Disord[神經肌肉障礙]，1999,9,330-338)。美國專利案號5,627,274和WO 94/26887揭露了使用不激活RNA酶H的反義寡核苷酸來對抗包含突變的前mRNA分子中的異常剪接的組成物和方法。

在一個實施方式中，天然存在的替代剪接變體的相對表現水平被改變，例如一個衍生自靶前mRNA的剪接變體比例相對於另一剪接變體或衍生自該前mRNA的剪接變體的整個庫被改變。

在另一個實施方式中，新的剪接變體產生，而天然存在的替代剪接變體的比例可以改變或可以不改變。在一個實施方式中，藉由從以其他方式在無剪接調節子的情況下產生的mRNA中去除一個或多個核酸來產生所述新的剪接變體。這可以例如藉由外顯子跳讀(即其中外顯子被剪接出前mRNA，並且因此不存在於成熟mRNA中)發生。在另一個實施方式中，所述新的剪接變體藉由替代供體位點的激活而產生，其中使用替代的5'剪接連接(供體位點)，從而改變上游外顯子的3'邊界。在另一個實施方式中，所述新的剪接變體藉由激活替代受體位點而產生，其中使用替代性3'剪接連接(受體位點)，從而改變下游外顯子的5'邊界。在一個較佳的實施方式中，例如藉由內含子保留來產生所述新的剪接變體，所述新的剪接變體包括在不存在剪接調節子的情況下在mRNA中不包含的另外的序列，其中將另外的序列例如內含子或其一部分保留在前mRNA中，並且因此包含在成熟的mRNA中。因此，如果保留的序列例如內含子或其部分在編碼區中，則所述內含子的保留可導致產生，

a)剪接變體，其編碼由保留的內含子編碼的另外的胺基酸(例如，在所述內含子不引起移碼且在閱讀框中不引入終止密碼子的情況下)，或在實施方式中，

b)剪接變體，其包含過早的終止密碼子，例如包含另外的序列，例如內含子或其部分，引起移碼和/或引入包含原始終止密碼子上游的框內終止密碼子的序列，因此，與由其中未發生所述內含子保留的剪接變體編碼的蛋白質相比，得到的剪接變體mRNA編碼缺乏(例如在C-末端缺乏)一個或多個胺基酸殘基的蛋白質。在一個較佳的實施方式中，相對於在沒有剪接調節子的情況下由剪接變體 編碼的蛋白的表現水平，在剪接調節子的存在下，編碼的蛋白的表現水平被改變，例如降低。在一個較佳的實施方式中，剪接變體(轉錄本)的表現水平小於沒有內含子保留情況下的剪接變體的表現水平。特別地，所述降低的表現水平至少部分係由於不穩定性(例如降低的半衰期)和/或所得的mRNA或編碼的多肽的降解增加，例如藉由無義介導的衰變機制(在mRNA的情況下)或蛋白質降解增加(在編碼的多肽的情況下)。

如本文所用，術語「剪接變體」係指由特定的前mRNA產生的成熟mRNA種類或由所述成熟mRNA種類編碼的多肽。特定的目的前mRNA種類可能會產生一個或多個剪接變體。

在一個實施方式中，剪接調節子係SMN剪接調節子，例如SMN2剪接調節子。在一個較佳的實施方式中，根據本發明之剪接調節子在HTT基因的外顯子49和50之間進行剪接調節。

術語「SMN剪接調節子」(例如SMN2剪接調節子)係指直接或間接增加SMN2前mRNA序列與剪接體的締合以增強包含SMN2外顯子7並增加SMN表現的化合物(例如小分子)。

如本文所用之術語「以藥物組成物的形式提供剪接調節子」係指包含剪接調節子和至少一種藥學上可接受的賦形劑的藥物組成物。

如本文所用，術語「以藥物組合的形式提供剪接調節子」係指包含剪接調節子和至少一種其他藥物活性成分的藥物組合。

本文所用的「反義化合物」係指與靶核酸雜交(例如，藉由鹼基配對)並調節靶核酸的量、活性和/或功能的化合物(例如，反義寡核苷酸)。例如，在某些情況下，反義化合物導致靶轉錄或翻譯改變。這樣的表現調節可以藉由例如靶RNA降解或基於佔有的抑制來實現。藉由降解來調節RNA靶功能的一個實例係與DNA樣反義化合物雜交後靶RNA的基於RNA酶H的降解。藉由靶 降解來調節基因表現的另一個實例係RNA干擾(RNAi)。RNAi係指藉由利用RNA誘導的緘默複合物(RISC)的機制進行的反義介導的基因緘默。RNA靶功能調節的另一個實例係藉由基於佔有的機制，例如微小RNA天然採用的機制。微小RNA係小的非編碼RNA，其調節編碼蛋白質的RNA之表現。反義化合物與微小RNA的結合阻止了微小RNA與其信使RNA靶的結合，從而干擾了微小RNA的功能。微小RNA模擬物可以增強天然微小RNA功能。某些反義化合物改變前mRNA之剪接。針對杭丁頓氏舞蹈症的反義化合物的實例描述於例如WO 19157531、WO 18022473、WO 17015575、WO 17192664、WO 15107425、WO 14121287、WO 14059356、WO 14059341、WO 13033223、WO 12109395、WO 13022990、WO 12012467、WO 11097643、WO 11097644、WO 11097641、WO 11032045、WO 07089584、WO 07089611，其全部內容藉由引用併入本文。針對杭丁頓氏舞蹈症的反義化合物的其他實例包括RG6042(羅氏公司(Roche))、WVE-120101(波/武田公司(Wave/Takeda))和WVE-120102(波/武田公司)。

如本文所用之術語基因療法指例如在例如WO 2016/102664(其全部內容藉由引用併入本文)中描述的AMT-130。

本文所定義的術語「藥物組成物」係指例如含有至少一種將被投與給受試者以治療受試者的活性成分或治療劑的混合物或溶液，例如本文所定義。本文指定的化合物[例如選自由以下組成的群組的剪接調節子：列表1、列表2、列表3、列表4、列表5、列表6、列表7、列表8、列表9、列表10、列表11、列表12和列表13、例如列表1、列表2、列表3、列表4、列表5、列表6和列表7；例如佈雷那蘭]可以藉由常規途徑投與，特別是口服投與，其可以根據本領域已知的製藥技術來製備(例如，Remington Essentials of Pharmaceutics[雷明頓藥劑學要點]，2013，第1版，Linda Felton編輯，製藥出版社(Pharmaceutical Press)出版2012,ISBN 978 0 85711 105 0；特別是第30章)，其中藥物賦形劑例如如 Handbook of Pharmaceutical Excipients[藥物賦形劑手冊]，2012，第7版，Raymond C.Rowe,Paul J.Sheskey,Walter G.Cook和Marian E.Fenton編輯，ISBN 978 0 85711 027 5所述。

如本文所用，術語「藥學上可接受的賦形劑」包括如熟悉該項技術者所知的任何和所有溶劑、分散介質、包衣、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩散劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料等及其組合(參見，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences[雷明頓醫藥科學]，第22版Mack Printing Company[馬克出版公司]，2013，第1049-1070頁)。除了任何常規載劑與活性成分均不相容的情況外，考慮其在治療或藥物組成物中之用途。

對於上述用途/治療方法，適當的劑量可以根據多種因素(例如年齡、體重、性別、投與途徑或所用的鹽)而變化。

如本文所用，術語「一個」、「一種」、「該(the)」以及在本發明之上下文中(尤其是在實施方式和請求項的上下文中)使用的類似術語應被解釋為涵蓋單數和複數二者，除非本文中另外指示或與上下文明顯相矛盾。

本文提供的任何和所有實例或示例性語言(例如「如」)的使用僅旨在更好地說明本發明，而不對另外要求保護的本發明範圍做出限制。

如本文所用，術語「本發明之化合物」係指如本文所定義的「剪接調節子」，並且應理解為呈游離形式或藥學上可接受的鹽形式。

如本文所用，術語一種或多種「游離形式」係指非鹽形式的化合物，例如相應化合物的鹼游離形式或酸游離形式，例如本文指定的化合物[例如選自由以下組成的群組：表1、列表2、列表3、列表4、列表5、列表6、列表7、列表8、列表9、列表10、列表11、列表12和列表13，尤其是本文定義的列表1、列表2、列表3、列表4、列表5、列表6和列表7]。

如本文所用，術語一種或多種「鹽」或「鹽形式」係指相應化合物的酸加成鹽或鹼加成鹽，例如本文指定的化合物[例如選自由以下組成的群組：表1、列表2、列表3、列表4、列表5、列表6、列表7、列表8、列表9、列表10、列表11、列表12和列表13，尤其是本文定義的列表1、列表2、列表3、列表4、列表5、列表6和列表7]。「鹽」特別地包括「藥學上可接受的鹽」。術語「藥學上可接受的鹽」係指保留化合物的生物有效性和特性的鹽，並且該等鹽典型地不是生物學上或其他方面不希望的。

可以用無機酸和有機酸形成藥學上可接受的酸加成鹽。

可以衍生出鹽的無機酸包括，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以衍生出鹽的有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸等。

可以用無機鹼和有機鹼形成藥學上可接受的鹼加成鹽。

可以衍生出鹽的無機鹼包括，例如銨鹽和來自元素週期表第I至XII列的金屬。在某些實施方式中，鹽衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅和銅；特別合適的鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。

可以衍生出鹽的有機鹼包括例如一級胺、二級胺和三級胺；取代的胺(包括天然存在的取代的胺)；環胺；鹼性離子交換樹脂等。某些有機胺包括異丙胺、苄星、膽鹼鹽、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌

和胺丁三醇。

藥學上可接受的鹽可以藉由常規化學方法由鹼性或酸性部分合成。通常，可以藉由使化合物的游離酸形式與化學計量的適當鹼(例如Na、Ca、Mg或K的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等)反應，或藉由使化合物的游離鹼形式 與化學計量量的適當酸反應來製備該等鹽。這樣的反應典型地在水或有機溶劑或兩者的混合物中進行。通常，在可行的情況下，希望使用非水性介質，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。其他合適的鹽的列表可以參見例如：「Remington's Pharmaceutical Sciences[雷明頓醫藥科學]」，第22版Mack Printing Company[馬克出版公司](2013)；以及Stahl和Wermuth撰寫的「Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use[藥用鹽手冊：性質、選擇和用途]」(Wiley-VCH,Weinheim,2011，第2版)。

術語「藥物」、「活性物質」、「活性成分」、「藥物活性成分」、「活性劑」、「治療劑」或「藥劑」應理解為意指游離形式或藥學上可接受的鹽形式的化合物。

術語「組合」或「藥物組合」係指一種單位劑型的固定組合、非固定組合或用於組合投與的部件套組(kit)，其中本發明化合物和一種或多種組合配偶體(例如另一種藥物，也稱為另外的「藥物活性成分」、「治療劑」或「助劑」)可以同時或在時間間隔內分別獨立投與，尤其是在該等時間間隔允許組合配偶體顯示出合作，例如協同效應的情況下。如本文所用，術語「共同投與」或「組合投與」等意指涵蓋向有需要的單個受試者(例如患者)投與所選擇的組合配偶體，並且旨在包括其中藥劑不一定藉由相同的投與途徑投與或同時投與的治療方案。術語「固定組合」意指活性成分(例如本發明化合物和一種或多種組合配偶體)都以單一實體或劑量的形式同時投與於患者。術語「非固定組合」係指活性成分(例如本發明化合物和一種或多種組合配偶體)均作為分開的實體同時或在沒有特定的時間限制下順序地投與於患者，其中這種投與在患者體內提供了這兩種化合物的治療有效水平。

本發明化合物可以藉由與其他藥劑相同或不同的投與途徑分開投與，或在相同的藥物組成物中一起投與。在本發明之組合療法中，本發明化合 物和其他治療劑可以由相同或不同的製造商生產和/或配製。此外，可以將本發明化合物和另一種治療劑一起形成組合療法：(i)在向醫師發佈組合產品(例如，在包含本發明之化合物和其他治療劑的套組的情況下)之前進行；(ii)在投與前不久由醫師本人(或在醫師指導下)進行；(iii)在患者本身中，例如在順序投與本發明之化合物和其他治療劑期間進行。

縮寫：

h=hr=小時

min=分鐘

sec=秒

msec=毫秒

mg=毫克

Kg=kg=千克

ml=mL=毫升

uL==ul=微升

PCR=聚合酶鏈式反應

rpm=每分鐘轉數

℃=攝氏度

xg=乘以重力(離心力)

HTT=杭丁頓氏

mHTT=突變的杭丁頓氏

tHTT=總杭丁頓氏

HTRF=均勻時間分辨螢光

n=動物的數目

CSF=腦脊液

cP=厘泊，黏度單位

pIC₅₀=-Log(IC₅₀)其中IC₅₀以莫耳或mol/L表示

RT=室溫(25℃±3℃)

56-FAM=5’6-FAM(螢光素)

3IABkFQ=3’Iowa Black®FAM淬滅劑

ZEN=ZEN^TM內部淬滅劑

USA=美利堅合眾國

BacHD=BACH=細菌人工染色體介導的轉基因杭丁頓氏舞蹈症模型

ACAT=高級隔室和轉運

AUC=曲線下面積

BIW=每週兩次

CD=環糊精

CL=從中心隔室消除的清除率

Cmax=最大濃度

Ctrough=最低濃度

F=生體可用率

Fa=吸收分數

IC50=半最大抑制濃度

Imax：最大抑制作用

k12=從隔室1到隔室2的一階速率常數

k21=從隔室2到隔室1的一階速率常數

ka=一階吸收速率常數

kin=突變HTT蛋白的合成速率

kout=突變HTT蛋白合成的降解速率或分數周轉參數

LogP=有機溶液與水溶液之間分配係數的對數

MTD=最大耐受劑量

PBPK=基於生理的藥物動力學(PBPK)

PD=藥效學

Peff=有效滲透率

PK=藥物動力學

pKa=酸解離常數的負對數

Q=隔室間清除率

QW=每週一次

R=給定時間的突變HTT蛋白水平

RO=突變HTT蛋白濃度的基線(例如在腦中)

RSE=以近似標準差量表報告的相對標準誤差(SE/方差)/2

SE=標準差量表

ss=穩定狀態

SMA=脊髓性肌萎縮

Tlag=吸收滯後時間

Tmax=最大濃度時間

V1=2-隔室PK模型的中心容積

V2，Vc=2-隔室PK模型的外周容積

T1/2=表觀終末消除半衰期

實例：

實例1a：佈雷那蘭的臨床前評估

方法

用剪接調節子治療的人細胞的RNA-seq分析

正常人成纖維細胞系(HD1994)用佈雷那蘭和剪接調節子2(WO 2015017589中描述的實例3-2)和剪接調節子3(在Nat Chem Biol.[自然化學與生物學]2015年7月；11(7)：511-7.doi：10.1038/nchembio.1837中描述的NVS-SM3)或DMSO處理24小時。使用了以下化合物劑量：

- 佈雷那蘭以有效劑量(100nM)和細胞毒性劑量(5uM)使用。

- 剪接調節子2以750nM使用。

- 剪接調節子3以5uM使用。

每組有3個生物學重複。

使用凱傑RNeasy微量分離套組(Qiagen RNeasy Mini isolation kit)分離總RNA。使用Illumina TruSeq RNA樣本製備套組v2製備RNA-Seq文庫，並使用Illumina HiSeq 2500平臺定序。

每個樣本在屬於相同流動池的四個不同泳道上定序為長度2 x 76個鹼基對(bp)。藉由在FASTQ檔上運行FastQC(版本0.10.1)來評估生成的讀段的品質。為每個樣本計算了以Phred得分的每鹼基平均品質。讀段的品質非常好(所有鹼基位置的平均Phred得分>28)。使用TopHat(2.0.3)，共有8.47億個76-鹼基對(bp)配對末端讀段被映射到智人基因組(hg19)(人RefSeq(Pruitt等人，2007)轉錄本(版本59，2013年5月3日))。

為了提高檢測外顯子的能力，針對五個條件(DMSO，5uM的佈雷那蘭、100nM的佈雷那蘭、500nM的剪接調節子2和5uM的剪接調節子3)中的每個條件，在用Cufflinks(2.1.1)的轉錄本組裝之前，合併三個比對文檔(bam文檔)。轉錄本組裝後，從轉錄本gtf文件中提取外顯子座標。排除了替代染色體和M染色體上的外顯子，忽略了股資訊。這產生了273866個推定外顯子。不與任何RefSeq外顯子(2013年5月3日，版本59)相交的外顯子被視為事件中未注釋的剪接的候選者。結果有19474個候選者。為了獲得更大的置信度，我們將所有 RefSeq外顯子加上最初的19474個候選者的完整集中的重疊外顯子合併，從而產生了229665個不重疊的外顯子。對於這組外顯子，考慮了每個RefSeq基因內的所有可能的外顯子-外顯子連接。使用R(2.15.2)腳本和bedtool(2.15.0)創建了連接數據庫。然後將每個配對末端讀段的第一配對針對數據庫進行映射。僅保留了由至少一個連接比對支持的未注釋的外顯子。這尤其排除了不與RefSeq基因附接的候選者。剩下10898個最終候選者。使用bedtools從hg19提取該等候選者的序列。為了評估可變性，還計算了每個重複的單獨Cufflinks組裝，並檢查了該組裝中每個候選者的存在。另外，針對連接數據庫的比對用於確定跳過新穎外顯子的連接的數目。該資訊用於估計以分數而言的剪接。此外，使用bedtool在TopHat比對(bam文檔)上確定每個重複的10898個候選者的讀段覆蓋率，並且然後在五個條件中的每個條件中進行合計。將原始fastq文檔用STAR(020201)重新處理，並與人基因組(hg38)比對。使用UCSC基因組流覽器工具用liftOver將10898個候選外顯子轉換至hg38-7個候選外顯子無法轉換。將STAR檢測到的連接映射到其餘10891個候選者，並提供了連接計數的替代來源。

一個落入HTT基因區域(chr4：3213622-3213736)的候選者被檢測，並且似乎被活性化合物調節。用STAR比對重新分析為它提供了支持。此外，3’末端顯示了AGA/GT模體，該模體與活性化合物的作用方式有關。最後，可以如下所述藉由PCR驗證該候選者(包含在本文的稱為含新穎外顯子的HTT轉錄本的剪接變體中)。候選chr4：3213622-3213736引入了框內終止密碼子(TAG)，該密碼子距離外顯子3'末端55個核苷酸，因此可觸發無義介導的衰變。NGS數據顯示，HTT的表現被活性化合物下調了約六倍(圖1)。包含新穎外顯子的HTT轉錄本的部分序列(僅顯示對應於外顯子49、新穎外顯子和外顯子50的部分)在本文中包括為SEQ ID NO：9。帶底線的是新穎外顯子。

SEQ ID NO：9

佈雷那蘭的體外評估

將培養的人神經母細胞瘤(SH-SY5Y細胞系)細胞以5nM-125nM範圍的劑量處理24小時(用於轉錄本評估)或48小時(用於蛋白質評估)。RNA藉由Nanodrop 2000(賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific))進行定量。如下從140-400ng RNA合成cDNA：使用Maxima第一股cDNA合成套組，使用聚dT和無規六聚體(賽默飛世爾科技公司)的混合物，以20uL反應(在25℃下10分鐘，50℃下15分鐘然後85℃下5分鐘)。使用20uL Taqman快速高級母混合物(Taqman Fast Advanced master mix)(賽默飛世爾科技公司)和4uL cDNA反應和針對每個基因特異的引物進行定量PCR。PCR步驟如下：95℃ 20秒，然後95℃ 1秒、55℃ 20秒，40個循環。對於WT人HTT而言，引物的序列，正向，5’-GTCATTTGCACCTTCCTCCT-3’(SEQ ID NO：1)；反向，5’-TGGATCAAATGCCAGGACAG-3’(SEQ ID NO：2)，並且探針序列為56-FAM/TTG TGA AAT/ZEN/TCG TGG TGG CAA CCC/3IABkFQ/(SEQ ID NO：8)，對於HTT新穎外顯子，正向，5’-TCCTGAGAAAGAGAAGGACATTG-3’(SEQ ID NO：3)；反向，5’-CTGTGGGCTCCTGTAGAAATC-3’(SEQ ID NO：4)並且探針序列為/56-FAM/AAT TCG TGG/ZEN/TGG CAA CCC TTG AGA/3IABkFQ/(SEQ ID NO：7)。基因表現的相對定量使用2^-△△CT方法進行。在標準化為作為內源參考的小鼠葡糖醛酸糖苷酶β(Gusb)後，計算了mRNA表現水平的倍數變化(圖2a和2b)。

為了進行蛋白質分析，將細胞在含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑(賽默飛世爾科技公司)的RIPA緩衝液中裂解。藉由在4℃以13,000rpm離心20分鐘獲得上清液。使用BCA蛋白測定法(賽默飛世爾科技公司)定量總蛋白濃度。在還原條件下，將樣本溶解在3%-8%的Tris-醋酸鹽蛋白凝膠中。將蛋白轉移到PVDF膜(密理博公司(Millipore))上，並使用兔抗杭丁頓氏抗體(密理博公司#MAB2166)、小鼠抗肌動蛋白(西格瑪公司(Sigma),#A5316)和小鼠抗黏著斑蛋白(伯樂公司(Bio-Rad),#MCA465)進行西方墨點法分析。蛋白帶藉由Image J定量。

BacHD小鼠

28隻BacHD小鼠(FVB/N-Tg(HTT*97Q)IXwy/J轉基因小鼠-傑克森實驗室(Jackson Laboratories))用於實驗。動物實驗方案已獲得費城兒童動物醫院機構動物護理和使用委員會(Children’s Hospital of Philadelphia Institutional Animal Care and use Committee)的批准。將小鼠以12小時的明/暗週期飼養在溫度受控的環境中。任意提供食物和水。

對於重複給藥研究，將二十八隻BacHD小鼠(FVB/N-Tg(HTT*97Q)IXwy/J轉基因小鼠-傑克森實驗室(Jackson Laboratories))用於實驗。動物實驗方案已獲得費城兒童動物醫院機構動物護理和使用委員會(Children’s Hospital of Philadelphia Institutional Animal Care and use Committee)的批准。將小鼠以12小時的明/暗週期飼養在溫度受控的環境中。任意提供食物和水。

佈雷那蘭治療

藉由口服強飼法投與單劑量的佈雷那蘭或媒劑溶液。將小鼠分為七組(n=4隻小鼠/組)，並用佈雷那蘭(10mg/kg-2個組和50mg/kg-3個組)或作為對照的媒劑(2個組)進行治療。抓住鬆弛的皮膚以固定頭部來牢牢地束 縛小鼠，保持在垂直位置，然後將22-到26-規格的強飼針插入口中。將針沿嘴頂引導至食道，並使其輕輕進入胃內。給每隻小鼠投與的佈雷那蘭或媒劑的量基於治療前記錄的重量。

對於重複給藥研究，佈雷那蘭或媒劑經口服強飼法投與每週3次，連續3週。將小鼠分為4組(n=6隻小鼠/組)，並用佈雷那蘭(12mg/kg-1個組，或24mg/kg-2個組)或作為對照的媒劑(1個組)進行治療。抓住鬆弛的皮膚以固定頭部來牢牢地束縛小鼠，保持在垂直位置，然後將22-到26-規格的強飼針插入口中。將針沿嘴頂引導至食道，並使其輕輕進入胃內。給每隻小鼠投與的佈雷那蘭或媒劑的量基於給藥當天記錄的重量。

血液採集和組織採樣

口服強飼後8小時、24小時(媒劑和佈雷那蘭分別為10mg/kg和50mg/kg)和48小時(佈雷那蘭50mg/kg)，獲得血液和組織樣本用於PK和PD分析。用異氟烷麻醉小鼠，並藉由下頜下靜脈抽血獲得血液，並使用RNA保護性動物血液管(RNAprotect Animal Blood Tube)採集血液用於RNA提取(PD分析)，並使用K₂EDTA塗覆的管進行血漿採集(PK分析)。藉由在4℃以2000 x g離心10分鐘從血漿中去除細胞，並將血漿樣本保存在-80℃。血液採集後，用致死劑量的氯胺酮/甲苯噻

(100mL，10mg：1mg)麻醉小鼠，並灌注與2ml的RNAlater(安比昂公司(Ambion))溶液混合的18ml 0.9%冷鹽水以進行組織採集。將肝、骨骼肌、大腦、和小腦樣本在液氮中快速冷凍，並保存在-80℃。

血液和CSF採集，和組織採樣用於重複劑量研究

在最後一次處理後24小時(媒劑和佈雷那蘭為12mg/Kg和24mg/Kg)和72小時(佈雷那蘭為24mg/Kg)，獲得了血液、CSF和組織樣本用於PK和PD分析。為了收集CSF，將小鼠置於齧齒動物麻醉誘導室中，在此處將小鼠暴露於100%氧載氣中的4%-5%異氟烷。一旦達到適當的麻醉平面，將它 們移至鼻錐，以便在整個手術過程中都能維持異氟烷的濃度(1%-3%)。手術準備其頸和枕骨區的背側，以便在顯微鏡下觀察硬腦膜。將附接於微操作器的玻璃微量移液管通過硬腦膜穿刺到小腦延髓池中的看不到脈管的點，並且允許CSF藉由毛細管作用流入微量移液管。大約15-30分鐘後，將微量移液管從小腦延髓池中取出，將CSF樣本轉移到Eppendorf管中，在液氮中速凍，並保存在-80℃。

收集CSF後，將小鼠繼續保持異氟烷麻醉。藉由下頜下靜脈抽血獲得血液，並使用RNA保護性動物血液管(RNAprotect Animal Blood Tube)採集血液用於RNA提取(PD分析)，並使用K2EDTA塗覆的管進行血漿採集(PK分析)。藉由在4℃以2000 xg離心10分鐘從血漿中去除細胞，並將血漿樣本保存在-80℃。血液採集後，給予小鼠致死劑量的氯胺酮/甲苯噻

(100mL，10mg：1mg)，並灌注與2ml的RNAlater(安比昂公司(Ambion))溶液混合的18ml 0.9%冷鹽水以進行組織採集。將肝、骨骼肌、腦紋狀體、腦皮質、半腦和小腦樣本在液氮中速凍，並儲存在-80℃。

血液和CSF採集，和組織採樣用於重複劑量時程研究

在最後處理(媒劑或24mg/kg佈雷那蘭持續1週或3週)後72小時、168小時、240小時和336小時(佈雷那蘭24mg/kg)後，獲得了血液、CSF和組織樣本以進行PK和PD分析。為了收集CSF，將小鼠置於齧齒動物麻醉誘導室中，在此處將小鼠暴露於100%氧載氣中的4%-5%異氟烷。一旦達到適當的麻醉平面，將它們移至鼻錐，以便在整個手術過程中都能維持異氟烷的濃度(1%-3%)。手術準備其頸和枕骨區的背側，以便在顯微鏡下觀察硬腦膜。將附接於微操作器的玻璃微量移液管通過硬腦膜穿刺到小腦延髓池中的看不到脈管的點，並且允許CSF藉由毛細管作用流入微量移液管。大約15-30分鐘後，將微量移液管從小腦延髓池中取出，將CSF樣本轉移到Eppendorf管中，在液氮中速凍，並保存在-80℃。

收集CSF後，將小鼠繼續保持異氟烷麻醉。藉由下頜下靜脈抽血獲得血液，並使用RNA保護性動物血液管採集血液用於RNA提取(PD分析)，並使用K₂EDTA塗覆的管進行血漿採集(PK分析)。藉由在4℃以2000 x g離心10分鐘從血漿中去除細胞，並將血漿樣本保存在-80℃。血液採集後，給予小鼠致死劑量的氯胺酮/甲苯噻

(100mL，10mg：1mg)，並灌注與2mL的RNAlater(安比昂公司(Ambion))溶液混合的18mL 0.9%冷鹽水以進行組織採集。將肝、骨骼肌、腦紋狀體、腦皮質、半腦和小腦樣本在液氮中速凍，並儲存在-80℃。

佈雷那蘭劑量

在實驗中，如本文所述，佈雷那蘭劑量以佈雷那蘭單鹽酸鹽在甲基纖維素中的溶液(10mg/mL懸浮液)(對於1%溶液中等黏度400cP)，Tween 80(1% v/v)，純淨水懸浮液配製物提供。

RNA提取和即時定量PCR

在Precellys中以6000rpm勻漿40秒後，使用RNeasy Plus套組(凱傑公司(Qiagen))提取來自大腦和小腦的總RNA。使用PAXgene血液RNA套組(凱傑公司)根據生產商方案從血液中提取RNA。RNA藉由Nanodrop 2000(賽默飛世爾科技公司)進行定量。如下從140-400ng RNA合成cDNA：使用Maxima第一股cDNA合成套組，使用聚dT和無規六聚體(賽默飛世爾科技公司)的混合物，以20uL反應(25℃ 10分鐘，50℃ 15分鐘，然後85℃ 5分鐘)。使用20uL Taqman快速高級母混合物(Taqman Fast Advanced master mix)(賽默飛世爾科技公司)和4uL cDNA反應和針對每個基因特異的引物進行定量PCR。PCR步驟如下：95℃ 20秒，然後95℃ 1秒、55℃ 20秒，40個循環。對於WT人HTT而言，引物的序列，正向，5’-GTCATTTGCACCTTCCTCCT-3’(SEQ ID NO：1)；反向，5’-TGGATCAAATGCCAGGACAG-3’(SEQ ID NO： 2)，並且探針序列為56-FAM/TTG TGA AAT/ZEN/TCG TGG TGG CAA CCC/3IABkFQ/(SEQ ID NO：8)，對於HTT新穎外顯子，正向，5’-TCCTGAGAAAGAGAAGGACATTG-3’(SEQ ID NO：3)；反向，5’-CTGTGGGCTCCTGTAGAAATC-3’(SEQ ID NO：4)並且探針序列為/56-FAM/AAT TCG TGG/ZEN/TGG CAA CCC TTG AGA/3IABkFQ/(SEQ ID NO：7)。基因表現的相對定量使用2^-△△CT方法進行。在標準化為作為內源參考的小鼠葡糖醛酸糖苷酶β(Gusb)後，計算了mRNA表現水平的倍數變化。

蛋白質製備和西方墨點法分析

將速凍的小鼠組織樣本在具有蛋白酶和磷酸酶抑制劑(賽默飛世爾科技公司)的RIPA緩衝液中藉由Precellys在6000rpm下勻漿40秒。藉由在4℃以13,000rpm離心20分鐘獲得上清液。使用BCA蛋白測定法(賽默飛世爾科技公司)定量總蛋白濃度。在還原條件下，將樣本溶解在3%-8%的Tris-醋酸鹽蛋白凝膠中。將蛋白轉移到PVDF膜(密理博公司(Millipore))上，並使用兔抗杭丁頓氏抗體(密理博公司#MAB2166)、小鼠抗肌動蛋白(西格瑪公司(Sigma),#A5316)和小鼠抗黏著斑蛋白(伯樂公司(Bio-Rad),#MCA465)進行西方墨點法分析。蛋白帶藉由Image J定量。

CSF樣本的蛋白質分析

在4℃，在離心機中以14,000rpm離心5分鐘後，將CSF樣本澄清。在96孔V型底板上載入2.5-5uL CSF樣本的CSF緩衝液。隨後添加在Erenna測定緩衝液中稀釋的MP-2B7(磁性顆粒抗體軛合懸浮液)HTT抗體。將測定板在室溫下振盪(600rpm)孵育1小時，然後在BioTek-405上進行轉移後洗滌程式。將20ul/孔的MW1檢測抗體添加至測定板。將板在室溫下振盪(以750rpm)孵育1小時。在BioTek-405上洗滌，並在連續緩衝液洗滌後，將測定板置於磁力架上，直到將所有珠子拉到磁體上(約5分鐘)，將來自測定板的10uL樣本 轉移至384孔板。將板在室溫下放置30分鐘，然後在Erenna機器上以60秒的執行時間運行。

結論

佈雷那蘭在人神經母細胞瘤細胞系(SHSY5Y)中的體外評估表明，佈雷那蘭治療在劑量範圍從5nM-125nM導致總杭丁頓氏轉錄本劑量依賴性降低至正常內源性水平的30%-90%，以及含有新穎外顯子的HTT轉錄本的伴隨增加(100-500倍)(圖2a和2b)。此外，西方墨點法分析表明，在相同劑量範圍內，轉錄本的這種減少伴隨著正常杭丁頓氏蛋白的穩健減少(50%-70%)(圖2c)。佈雷那蘭降低HTT轉錄本的EC50在20-25nM範圍內，而針對HTT蛋白降低的EC50在10-25nM範圍內。

為了在體內證實該等發現，使用HD的人源化的小鼠模型BacHD模型(Gray等人，J.Neurosci[神經科學雜誌]2008；28(24)；6182-6195)，該模型包含具有97的CAG擴增(SEQ ID NO：23)的全長突變人HTT基因，並以約1.5 X正常小鼠HTT表現突變蛋白。BacHD小鼠接受了10mg/kg或50mg/kg水平的佈雷那蘭單口服劑量。總HTT轉錄本和含新穎外顯子的HTT轉錄本在8小時和24小時(對於10mg/kg劑量)以及在8小時、24小時和48小時(對於50mg/kg劑量)測量。藉由定量PCR評估腦組織(大腦，圖3和圖4)中由佈雷那蘭治療產生的總HTT和包含新穎外顯子的HTT轉錄本水平的變化。給藥後8小時和24小時，在兩個腦區域中，包含新穎外顯子的HTT形式明顯劑量依賴性增加。給藥後48小時從50mg/kg組收集的樣本顯示有恢復至媒劑水平的趨勢。在給藥後24小時，兩種劑量水平的總HTT轉錄本水平在8小時顯示降低趨勢，而在50mg/kg水平顯示更大程度的降低趨勢。

此外，對來自相同動物的血液樣本的評估表明含有新穎外顯子的HTT轉錄本的穩健調節和總HTT轉錄本的降低(圖5和6)。

為了評估佈雷那蘭對突變HTT蛋白的作用，在相同的小鼠模型中進行了重複給藥研究。BacHD小鼠每週三次接受12mg/kg或24mg/kg的佈雷那蘭劑量，持續三週。西方墨點法分析顯示，在紋狀體(圖7)和皮質(圖8)中以12mg/kg和24mg/kg劑量在給藥後24小時，突變HTT蛋白劑量依賴性顯著降低，其中紋狀體中有更大的HTT明顯降低。對來自相同動物的CSF樣本中突變HTT蛋白的評估顯示以12mg/kg和24mg/kg在最後劑量後24小時的約50%的降低(圖11)。相對於24小時觀察到的，突變HTT蛋白進一步降低的趨勢從給藥後72小時從24mg/kg群組分解看係明顯的。另外，藉由肝臟中的mHTT蛋白(圖9)和血液中的總HTT轉錄物(圖10)的穩健降低，證實了對HTT水平之外周影響。佈雷那蘭的作用對人HTT特異，而對內源性小鼠HTT轉錄本或蛋白質未看到降低作用。

為了表徵HTT蛋白降低和恢復的時間過程並更好地建模PK-PD關係，進行了擴展的時間過程研究。BacHD小鼠每週三次口服劑量的24mg/kg佈雷那蘭，持續三週。在最後劑量後72、168、240或336小時將動物處死並收集組織，另一群組的動物接受24mg/kg劑量，持續一週，在最後劑量後72小時收集組織。西方墨點法分析顯示突變HTT蛋白的時間依賴性下降趨勢係從給藥1週到給藥3週。在使用佈雷那蘭給藥3週後，在72小時觀察到HTT蛋白最大降低約45%(相對於媒劑)，並在72-168小時(皮質，圖21)或72-336小時(紋狀體，圖20)回到基線。

我們的研究結果表明，佈雷那蘭間歇每週給藥導致杭丁頓氏舞蹈症所影響的腦關鍵區域(紋狀體和皮質)中突變HTT蛋白的穩健降低。CNS中觀察到的突變HTT蛋白水平降低與預期基於用其他HTT降低模式情況下的臨床前觀察而提供治療益處(減慢HD進展)的水平一致(Stanek等人，Hum Gen Ther[人類基因療法]2014,25,461-474；Kordasiewicz等人，Neuron[神經元]2012,74(6),1031-1044；Southwell等人，Sci Transl Med[科學轉化醫學]2018,10,1-12)。佈 雷那蘭還降低了外周HTT水平，為解決與杭丁頓氏舞蹈症相關的系統性問題(例如心臟、骨骼或代謝問題)提供了潛在的機會(van der Burg等人，The Lancet(Neurology)[柳葉刀(神經病學)]2009；第8卷，第8期，765-774)。

實例1b：其他剪接調節子的臨床前評估：化合物1至82

Q48 HTT人胚胎幹細胞系的突變HTT和總HTT多重測定

多重測定係在人胚胎幹細胞(hESC)中進行，人胚胎幹細胞已由緝拿生物細胞公司(Genea Biocells)衍生自HD供體的人胚泡。將細胞以10,000個細胞/孔的密度接種到384孔膠原蛋白包被的平板中，並黏附24小時，然後將化合物1至82加入細胞並孵育48小時(37℃，5% CO₂)，然後裂解細胞，將內容物分開進入黑色的384孔板。

黑色板中添加了HTRF標記的單株抗體的組合，該單株抗體識別HTT蛋白的不同區域，2B7-Tb「供體」抗體(0.2ng/孔)識別蛋白N末端的序列，MW1-Alexa488「受體1」抗體(30ng/孔)識別聚Q區中的區域，而MAB2166-d2「受體2」抗體(6ng/孔)識別超出聚Q區域外的序列。該2B7抗體獲得自Coriell公司(CH02024)，MW1抗體獲得自密理博公司(MABN2427)，並且MAB2166抗體獲得自密理博公司(1HU-4C8)。

該等檢測試劑在室溫下與細胞裂解物一起孵育4-6小時，然後在615nm(供體)、535nm和665nm(分別為受體1和受體2)處定量其螢光。該等信號之間的供體/受體比表明mHTT和tHTT蛋白的相對量。如表1所示，其中和表2中所述之化合物1至82具有以下pIC₅₀值。對於mHTT pIC₅₀，低於5的pIC₅₀值由零個星( )表示，5和6之間的pIC₅₀值由單個星(*)表示，6和6.5之間的pIC₅₀值由兩個星(**)表示，6.5和7.0之間的pIC₅₀值由三個星(***)表示，7.0和7.5之間的pIC₅₀值由四個星(****)表示，並且大於7.5的pIC₅₀值由五個星(*****)表示。

[表1]

實例1c：佈雷那蘭臨床評估的劑量選擇

實例1c.1：藥物動力學模型描述

在GastroPlus^TM軟體9.6版(SimulationPlus，蘭卡斯特(Lancaster)，加利福尼亞州，美國)中，使用高級隔室和轉運(ACAT)/基於生理的藥物動力學(PBPK)模型開發了成人受試者的藥物動力學(PK)模型。

建模策略

●在GastroPlus^TM軟體中建立了兒科ACAT/PBPK模型的主要設置，包括理化參數、生理參數和配製因子。ACAT模型與完整的PBPK模型(其中藉由GastroPlus^TM軟體提供的電腦模擬方法估計了組織與血漿的濃度比)聯繫。

●使用佈雷那蘭的血漿濃度估計清除率(CL)，該血漿濃度來自口服佈雷那蘭概念研究的開放式多部分人中首次證明，僅第1部分。這項研究的第1部分的目的是確定每週遞增劑量的安全性和耐受性，並估計口服/腸內佈雷那蘭(實例3中所述之配製物)在患有1型SMA嬰兒中的最大耐受劑量(MTD)。所有患者均具有2個SMN2基因拷貝。每週給患者給予佈雷那蘭一次。在隨後的群組研究中，將佈雷那蘭劑量逐步增加直到確定MTD或PK結果確認由於較高劑量下的潛在藥物動力學暴露平臺而無法達到MTD為止。涉及游離鹼的起始劑量為6mg/m²(等於0.3125mg/kg)。後續劑量為12mg/m²、24mg/m²、48mg/m²和60mg/m²(分別為0.625mg/kg，1.25mg/kg，2.5mg/kg和3.125mg/kg)。第1部分登記了14名患者；13名患者暴露於佈雷那蘭。暴露持續時間在4-33個月的範圍內，有7名患者保持在研究中。7名患者中有六名正在接受60mg/m²，1名患者正在接受48mg/m²。沒有觀察到劑量限制性毒性。

●60mg/m²的佈雷那蘭標稱劑量(3.125mg/kg，如上所述，使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)並且在GastroPlus^TM飲體中優化功能後使用33-39個月大的1型SMA患者中的血漿濃度-時間過程估計佈雷那蘭的體內溶解度和體內溶解。

●60mg/m²的佈雷那蘭標稱劑量(3.125mg/kg，如上所述，使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)並且在GastroPlus^TM軟體中優化功能後使用33-39個月大的1型SMA患者中的濃度-時間過程估計佈雷那蘭的分佈參數。

●藉由比較35-44個月和22-29個月的1型SMA患者(來自如上所述使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)中的模擬血漿濃度-時間過程與觀察到的過程，對兒科ACAT/PBPK模型進行定性。

模型開發

標稱佈雷那蘭劑量60mg/m²(3.125mg/kg，如上所述使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)後的33-39個月大的1型SMA患者中觀察到的佈雷那蘭血漿濃度用於藉由GastroPlus^TM軟體構建兒科ACAT/PBPK。通常，一種或多種藥物代謝酶/運輸蛋白大約在2歲時成熟(Lin W，Yan JH，Heimbach T等人(2018)Pediatric Physiologically Based Pharmacokinetic Model Development：Current Status and Challenges[兒科生理學基礎的藥物動力學模型開發：現狀和挑戰].Curr Pharmacol Rep[當前藥理學報導]；4：491-501)。可以根據體型大小、肝血流量和其他發育生理因素對2歲以上兒童患者進行可靠的CL預測(Lin W等人，2018，參見上文)。假設可以將PK參數轉移到成人群體。

重新評估了佈雷那蘭的體內溶解度參數，以考慮增溶劑環糊精(CD)對佈雷那蘭的溶解度的影響，該增溶劑環糊精(CD)在目前使用的配製物(實例3)中存在。應用GastroPlus^TM軟體中的優化功能以匹配在33-39個月的1型SMA患者中觀察到的全身暴露(標稱劑量：60mg/m²，3.125mg/kg，如上所述使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)並評估在CD存在時佈雷那蘭的體內溶解度。

在口服佈雷那蘭投與後的1型SMA患者中，在所有研究劑量水平下，血漿中佈雷那蘭最大濃度(Tmax)的中位數時間範圍為2.97至4.00h(標稱劑量範圍：6至60mg/m²，如上所述使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)。儘管使用含CD的佈雷那蘭溶液提示吸收迅速，但Tmax值表明吸收延遲。應用GastroPlus^TM軟體中的優化功能以匹配33-39個月大的1型SMA患者中觀察到的佈 雷那蘭血漿濃度-時間譜(標稱劑量：60mg/m²、3.125mg/kg，如上所述使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)，其控釋溶解譜在0.25、1、3.25小時分別產生2%、5%和95%的釋放特性。

將兒科ACAT模型與血漿中的隔室PK模型(GastroPlus^TM軟體)相關聯，以更準確地描述年齡在33-39個月的1型SMA患者中佈雷那蘭的血漿濃度-時間過程(標稱劑量範圍：6至60mg/m²，如上所述使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)。這係藉由GastroPlus^TM軟體中的優化功能執行，從而產生了擬合的分佈參數(k12，從隔室1到隔室2的一階速率常數；k21，從隔室2到隔室1的一階速率常數；Vc，中心隔室的容積)。

結果-兒科ACAT/PBPK模型

成功開發兒科ACAT/PBPK模型。該模型基於標稱佈雷那蘭劑量60mg/m²(3.125mg/kg，如上所述使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)後的33-39個月大的1型SMA患者中觀察到的佈雷那蘭血漿濃度。表3列出了模型的使用和衍生的輸入參數。圖15顯示了33-39個月大的1型SMA患者的佈雷那蘭模擬血漿濃度-時間過程。

構建兒科ACAT/PBPK模型後，使用衍生自35-44個月和22-29個月大的1型SMA患者的佈雷那蘭血漿濃度-時間過程進一步鑒定(標稱劑量：60mg/m²，3.125mg/kg，如上所述使用佈雷那蘭進行的人中首次概念驗證研究)。圖16和圖17中顯示兩個患者群體的模擬血漿濃度-時間過程。兩個圖均表明，由兒科ACAT/PBPK模型模擬的佈雷那蘭血漿濃度-時間過程與另外的1型SMA患者群體的血漿濃度-時間過程適當匹配，表明恰當的ACAT/PBPK模型開發。

CL：清除率；k12：隔室1和隔室2之間的一階速率常數；k21：隔室2和隔室1之間的一階速率常數；LogP：有機溶液與水溶液之間分配係數的對數；Peff：有效滲透率；pKa：酸解離常數的負對數；Vc：中心隔室的容積；

a：Artursson P，Karlsson J(1991)Correlation betweenoral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial(Caco-2)cells[人口服藥物吸收與人腸上皮(Caco-2)細胞表觀藥物滲透係數之間的相關性].Biochem Biophys Res Comm[生物化學和生物物理研究通訊]；175：880-5。

將兒科ACAT/PBPK模型放大到成人ACAT/PBPK模型

為了將佈雷那蘭兒科ACAT/PBPK模型放大到成人ACAT/PBPK模型，應用從非臨床物種預測的成人CL代替兒科CL，並且使用的體重為70公斤。劑量設定為250mL。將為兒科患者估計的分佈參數輸入成人PK模型。成人)中估計的表觀終末消除半衰期(T1/2)為62小時。表4總結了成人ACAT/PBPK模型中的一般輸入參數。表5顯示了成人單次口服投與佈雷那蘭後佈雷那蘭暴露的模型預測。

CL：清除率；k12：隔室1和隔室2之間的一階速率常數；k21：隔室2和隔室1之間的一階速率常數；LogP：有機溶液與水溶液之間分配係數的對數；Peff：有 效滲透率；pKa：酸解離常數的負對數；T1/2：表觀終末消除半衰期；Vc：中心隔室的容積；

a：Artursson P，Karlsson J(1991)Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial(Caco-2)cells[人口服藥物吸收與人腸上皮(Caco-2)細胞表觀藥物滲透係數之間的相關性].Biochem Biophys Res Comm[生物化學和生物物理研究通訊]；175：880-5。

AUC：曲線下面積；Cmax：最大濃度；Fa：吸收分數；Tmax：最大濃度時間

實例1c.2：藥效/藥物動力學模型描述

使用如實例1c.1所述之成人PBPK模型開發成人受試者的藥效/藥物動力學(PD/PK)模型，並在GastroPlus^TM軟體9.6版(SimulationPlus，蘭卡斯特，加利福尼亞州，美國)中與PD模型偶聯。

建模策略

●在BacHD小鼠模型中建立PK/PD關係(參見實例1a)並開發PK/PD模型。

●開發成人患者PK/PD模型

●估計預期的有效劑量範圍

模型開發

為了建立PK/PD關係並開發小鼠PK/PD模型，考慮來自雄性C57BL/6小鼠(10mg/kg，單劑量)、rasH2小鼠(1、3、4和10mg/kg，重複的每日劑量)和BacHD小鼠(10和50mg/kg，單劑量；12和24mg/kg，每週重複三次劑量)的研究的PK數據，估計小鼠血漿中的PK參數。該數據池的PK參數分析係藉由具有額外血管投與、滯後時間(Tlag)、2-隔室(V1：隔室1的容積；V2隔室2的容積，Q：隔室間清除率，ka：一階吸收速率；CL：清除率)的群體PK模型進行的。群體PK模型由Monolix軟體(版本2018R1，Lixoft)描述和執行。

為了開發PK/PD關係，將BacHD小鼠腦中的突變HTT蛋白的濃度及其在投與佈雷那蘭後的變化用作PD生物標誌物(實例1a)。為了增加數據基數，匯總了突變HTT蛋白的所有濃度。藉由周轉模型(如下所述)，考慮到腦中突變HTT蛋白產生的抑制，研究了血漿中佈雷那蘭濃度與腦中突變HTT蛋白濃度之間的相關性。由於確定了腦皮質和腦紋狀體中的突變HTT蛋白，因此分開地對兩個腦部分執行PK/PD相關性。群體PK/PD模型可以描述血漿中佈雷那蘭的Cmax(給藥後3至6小時之間)與腦中突變HTT蛋白最大降低(給藥後約72h)之間的觀察到的時間延遲。為了執行群體PK/PD模型，固定先前描述的群體PK模型的PK參數(表6中所示)，並計算PD參數。Monolix軟體(版本2018R1，Lixoft)及文庫中描述的其周轉模型(pkpd/oral1_2cpt_SigmoidindirectModelinhibitionKin_TlagkaCIV1QV2R0koutimaxIC50gamma)用於確定小鼠的PD參數。模型的PD部分可用以下等式描述：

突變HTT蛋白隨時間的變化=

kin *(1-Imax*max(Cc,0)^γ/(max(Cc,0)^γ+IC50^γ))-kout*R

kin：突變HTT蛋白的合成速率

kout：突變HTT蛋白的降解速率

Imax：最大抑制作用

IC50：半最大抑制濃度

γ：藥物作用的S形因子(sigmoidicity)

max(Cc,0)：佈雷那蘭血漿濃度

R：由於在BacHD小鼠模型中僅確定了相對於基線的相對變化(實例1a)，因此在給定時間的基線R0時突變HTT蛋白水平為1，

必須指出的是，由於在BacHD小鼠中僅確定了相對於基線的相對變化(實例1a)，所以將最大抑制作用設置為1，並且將突變HTT蛋白基線R0設置為1。因此，比率R0=Kin/Kout(突變HTT蛋白合成速率/突變HTT蛋白降解速率)表示kin和kout相等。

為了在開發成人PK/PD模型，使用成人ACAT/PBPK模型(實例1c.1)來預測口服佈雷那蘭後血漿中佈雷那蘭的濃度-時間過程。根據以下假設，將小鼠中的群體PK/PD模型的PD參數針對腦皮層和腦紋狀體從BacHD小鼠縮放至人：

●腦中的突變HTT基線水平(R0)保持等於1。

●假定藥物效力(IC50)在人中與在BacHD小鼠中相同。該值沒有被血漿蛋白結合校正，因為小鼠和人中的值在小鼠和人中分別為0.741和0.8。

●考慮異速縮放法(基於以下假設：蛋白質、肽和激素的內源性周轉可以跨不同物種進行縮放並且與能量周轉或代謝速率相關)，將突變HTT蛋白合成(kout)的降解速率或分數周轉參數從BacHD小鼠縮放至人(Gabrielsson J，Hjorth S，Quantitative Pharmacology：An Introduction to Integrative Pharmacokinetic-Pharmacodynamic Analysis[定量藥理學：綜合藥物動力學-藥效學分析導論].Swedish Pharmaceutical Press[瑞典製藥出版社]；第1版(2012年5月7日)。經驗上用於縮放速率常數的指數-0.2(Mahmood I等人，1996,Interspecies scaling：predicting clearance of drugs in humans：Three different approaches[物種間縮放：預測人類藥物的清除率：三種不同之方法].Xenobiotica 26：887-895和Mahmood I,2005,Prediction of oral pharmacokinetic parameters in humans,in Interspecies Pharmacokinetic Scaling：Principles and Application of Allometric Scaling[在物種間藥物動力學縮放中人中口服藥物動力學參數的預測：異速縮放的原理和應用]第144-167頁，Pine House Publishers[松家出版公司]，羅克維爾市(Rockville)，馬里蘭州)用於異速縮放，並且等式kout人=kout小鼠*(體重人/體重小鼠)^-0.2用於估計。

為了估計預期的有效劑量範圍，將成人ACAT/PBPK模型(實例1c.1)和成人PD模型偶聯，並藉由GastroPlus^TM軟體9.6版(PD Plus模組，SimulationPlus，蘭卡斯特，加利福尼亞州，美國)執行模擬。在成人中模擬了每週兩次給藥和每週一次給藥方案的幾種劑量水平，以預測相應的PK/PD譜(相比於時間)和PK/PD參數(例如最大濃度，Cmax和曲線下面積AUC；腦內mHTT降低)。模擬的目標係腦中的突變HTT蛋白減少約50%，這被認為對於臨床上有意義減慢疾病進展係必要的(Kaemmerer WF和Grondin RC,2019,The effects of huntingtin-lowering：what do we know so far？[降低杭丁頓氏蛋白的作用：目前我們知道什麼？]，Degenerative Neurological and Neuromuscular Disease[退化性神經病和神經肌肉疾病]，9，第3-17頁)。

結果-基於BacHD小鼠的PK/PD模型

表6列出了PK/PD模型的參數估計。圖18和圖19顯示了三重口服投與佈雷那蘭3週後BacHD小鼠的腦(皮質和紋狀體)中突變HTT蛋白的預測分佈。

CL：從中央隔室消除的清除率；F：生體可用率；IC50：半最大抑制濃度；Imax：最大抑制作用；ka：一階吸收速率常數；kout：突變HTT蛋白的降解速率；Q：隔室間清除率；RO：腦中突變HTT蛋白濃度的基線；RSE：以近似標準差量表報告的相對標準誤差(SE/方差)/2；Tlag：吸收滯後時間；V1：2-隔室PK模型的中心容積；V2：2-隔室PK模型的外周容積

結果-成人患者的PK/PD模型

實例1c.1給出了成人ACAT/PBPK模型的參數估計，並且表7列出了縮放的群體PD數據。

a：基於體重的蛋白質周轉的異速縮放，kout人=kout小鼠x(BW人/BW小鼠)^-0.2；b：突變HTT蛋白T1/2=Ln(2)/kout；c：假定人中的與BacHD小鼠中的IC50相同

IC50：Imax的50%的濃度；Imax：最大抑制作用；kout：突變HTT蛋白的分數周轉參數；RO：腦中突變HTT蛋白濃度的基線；T1/2：半衰期

結果-成人患者中的預期的有效劑量

在成人患者中開發的PK/PD模型用於模擬每週或每週兩次佈雷那蘭口服劑量後佈雷那蘭的血漿濃度-時間過程以及腦(皮質和紋狀體)中突變HTT蛋白的相應減少。模擬的目標係腦中的突變HTT蛋白最大減少約50%，這被認為對於臨床上有意義減慢疾病進展係必要的(Kaemmerer WF和Grondin RC,2019, The effects of huntingtin-lowering：what do we know so far？[降低杭丁頓氏蛋白的作用：目前我們知道什麼？]，Degenerative Neurological and Neuromuscular Disease[退化性神經病和神經肌肉疾病]，9，第3-17頁)。佈雷那蘭的預期有效劑量範圍預計為每週一次140至560mg，以及每週兩次70至280mg。較高劑量被認為導致腦中突變HTT蛋白的更高減少，具有潛在的更高益處。但是，在風險-益處評估中必須平衡不良事件的潛在增加。

表8顯示了在確定的劑量範圍內在穩定狀態下預期的暴露參數以及腦中突變HTT蛋白的預期相應減少。

AUC：曲線下面積；BIW：每週兩次；Cmax：最大濃度；Ctrough：最低濃度QW：每週一次；ss：穩定狀態

實例2：佈雷那蘭的臨床評估

實例2.1：

一項兩部分、安慰劑對照劑量範圍發現研究，用於評估杭丁頓氏舞蹈症受試者每週一次或每週兩次口服劑量投與時佈雷那蘭的安全性、耐受性、藥物動力學和藥效學。

共有64名受試者以適應性方式隨機分配到4個治療組中的1個(圖14)。每個治療組皆為隨機的活性：安慰劑3：1。將前32名受試者隨機分配到兩個治療組之一，而將後32名受試者根據數據監控委員會(DMC)建議隨機分配到劑量方案。在研究的第1部分中，總共計畫進行2個中期分析(IA)。IA-1，在16名受試者完成6週治療後進行，以針對最近2個治療組提供劑量選擇資訊。IA-2，在所有受試者(64)完成12週治療後進行，以針對第2部分提供劑量選擇資訊。

兩個IA均由外部DMC進行。

第1部分：劑量範圍發現

確認資格後，受試者將完成基線評估(約經一天)和以指定的治療方案的多劑量治療期(受試者之間不同)。如評估時間表所述，收集與HD相關的安全性、耐受性、PK/PD和臨床終點。由於研究的性質，在治療的前12週內，贗品收集/研究評估的頻率更高。確認資格後，使患者隨機接受作為每週兩次投與的口服溶液的活性治療或安慰劑治療。在前12週內，總共需要進行7次就診。如果認為合適，則可以由合格的就診醫療保健專業人員在家中進行一些就診。在為期12週的就診中，患者將有機會繼續參與研究。如果受試者選擇保留在研究中，則他們將繼續接受分配的研究治療並以每月為基礎完成臨床就診，直到激活開放標籤擴展。受試者。如果受試者不希望繼續，則結束研究評估。

第2部分：開放標籤擴展

一旦最終受試者(64)完成第1部分中的第12週，DMC就會審查 所有可用數據，以為第2部分提出最終劑量建議。通知網站，並且受試者返回研 究診所開始第2部分。在第一開放標籤劑量之前，如評估時間表中所列出，收集 了一系列評估。每6週進行一次臨床就診，直到受試者達到研究參與的第52週。

群體

這項研究登記了大約62個患有確診的I或II期杭丁頓氏舞蹈症的男性或女性受試者，以允許完成60名受試者(治療12週後)。

納入標準

有資格納入本研究的受試者必需滿足以下所有標準：

1.必須在進行任何評估之前獲得書面知情同意書。

2.必須能夠提供知情同意(根據研究者的意見)

3.篩查時臨床診斷的顯現的杭丁頓氏舞蹈症的UHDRS總功能能力(TFC)>7

4.經過基因證實的杭丁頓氏舞蹈症，其中杭丁頓氏基因中存在

36個CAG重複(SEQ ID NO：22)

5.知情同意書簽署當天，年齡在25至75歲(含)之間的男性和女性受試者

排除標準

符合任何以下標準的受試者不具有納入此研究的資格。

1.任何會干擾腰椎穿刺過程、CSF循環或安全性評估的腦或脊柱疾病的病史。

2.如果在過去6個月內發生自殺意念，請在C-SSRS的自殺意念部分的項目4或5上打「是」，或者，如果該行為發生在過去兩年中，在自殺行為部分的任何項目上打「是」(除了「非自殺式自殘行為」(該行為也包括在自殺行為部分中)之外)。

3.性活躍男性在服用藥物時且在停用佈雷那蘭藥物治療後6個月內在性交期間必須使用安全套且不應在此期間孕育子女。切除輸精管的男性也需要使用避孕套，以防止藥物藉由精液遞送。

4.在登記的5個半衰期內或30天內(以較長者為准)使用其他研究藥物。

5.對任何研究藥物或賦形劑或對類似化學類別的藥物具有超敏反應史。

6.心臟異常或心臟複極化異常，包括以下任何一種：

●在開始研究治療之前的6個月內，有心肌梗塞(MI)、心絞痛或冠狀動脈旁路手術(CABG)的病史。

●臨床上顯著的心律不整(例如室性心動過速)、完全左束支傳導阻滯、高級AV阻滯(例如雙分支阻滯、Mobitz II型和三度AV阻滯)。

7.治療前[篩選和基線]靜息QTcF

450毫秒(男性)或

460毫秒(女性)或無法確定QTcF間隔。

8.服用抑制CYP3A4的藥物的受試者(例如，克拉黴素(clarithromycin)、考尼伐坦(conivaptan)、茚地那韋(conivaptan)、依託康唑(itroconazole)，酮康唑(ketoconazole)、利托那韋(ritonavir)、米貝拉地爾(mibefradil)、奈法唑酮(nefazodone)、奈非那韋(nelfinavir)、泊沙康唑(posaconazole)、沙奎那韋(saquinavir)、特拉匹韋(telaprevir)、泰利黴素(telithromycin)、伏立康唑(voriconazole)等)。

9.在過去5年內(無論是否存在局部復發或轉移的跡象)已治療的或未治療的任何器官系統的惡性病史(局部皮膚基底細胞癌或原位宮頸癌除外)。

10.孕婦或哺乳期(泌乳)婦女。

11.有生育能力的婦女，定義為所有在生理上能夠懷孕的婦女，除非她們在給藥期間以及停止使用研究藥物後6個月內使用高效避孕方法。高效的避孕方法包括：

●完全禁欲(當這符合受試者的較佳的和通常的生活方式時)。週期禁欲(例如按日曆、按排卵期、按體溫、排卵期後方法)和體外射精不是可被接受的避孕法。

●女性絕育(已行雙側卵巢切除術，進行或未進行子宮切除術)，在服用研究藥物前至少六週進行全子宮切除術或輸卵管結紮術。在僅進行卵巢切除術的情況下，僅當女性生殖狀況已藉由後續的激素水平評估確認時。

●男性絕育(篩選前至少6個月)。對於研究中的女性受試者，經輸精管切除術的男性伴侶應為該受試者的唯一伴侶。

●使用口服(雌性激素和黃體酮)、注射或植入的荷爾蒙的避孕方法或放置宮內節育器(IUD)或宮內節育系統(IUS)或其他具有類似功效(失敗率<1%)的激素避孕方法，例如激素陰道環或透皮激素避孕。

如果使用口服避孕藥，則在服用研究藥物之前，婦女應已在同一藥上穩定至少3個月。

如果當地法規與上述避孕方法不同，則適用當地法規，並在知情同意書(ICF)中進行說明。

婦女在其12個月自然(自發)閉經且具有適當的臨床概況(例如年齡適當、血管舒縮症狀史)或在至少六週之前進行了外科雙側卵巢切除術(進行或不進行子宮切除術)、全子宮切除術或輸卵管結紮時被認為係停經後且不能生育的。在僅進行卵巢切除術的情況下，僅當婦女的生殖狀況已藉由後續的激素水平評估確認時，她被認為沒有生育潛能。

12.任何會干擾完成方案指定評估的能力的病史或病情。例如，植入的分流器、排除MRI掃描的病症等。

13.如研究者評估，處於自殺、重大抑鬱發作、精神病、精神混亂狀態或暴力行為的重大風險中。

15.抗抑鬱藥或苯二氮卓的使用，除非篩選前至少12週穩定劑量且研究期間預計不會改變劑量方案。

16.需要系統性抗病毒或抗微生物療法的活動性感染，在首次研究藥物投與(第1天)之前至少3天不能完成。

17.基因療法或細胞移植或任何其他實驗性腦手術的任何歷史。

18.無法表示同意的受試者，依賴於發起人、研究者或工作地點的人員，以及已經藉由官方或司法命令被送到機構的人員。

19.乙型或丙型肝炎病史或活動性病毒性肝炎的血清學證據(HBsAg和HCVab測試)。

20.在參與研究的情況下可能使受試者面臨危險的任何手術或醫學狀況。研究者應在考慮到受試者的病史和/或任何以下情況的臨床或實驗室證據的情況下來做出此決定：

●脂肪酶和/或澱粉酶不得超過正常上限(ULN)的1.5 x

●異常肝功能檢查表明存在肝疾病或肝損傷。將檢查ALT(SGPT)、AST(SGOT)、γ-GT、鹼性磷酸酶和血清膽紅素。

● 血清中ALT、AST、γ-GT、鹼性磷酸酶或膽紅素中的任何單一參數 不得超過正常上限(ULN)的1.5 x。

●ALT、AST、γ-GT、鹼性磷酸酶或血清膽紅素中 多於一個參數 高於ULN的 任何 升高將排除受試者參與該研究。

●腎損傷/腎疾病史或存在腎功能受損，如肌酐或BUN和/或尿素值高於ULN的任何升高或存在尿液成分異常(例如蛋白尿)所指示。

●篩選時存在尿路梗阻或排尿困難的證據。

21.免疫缺陷病史，包括HIV陽性(ELISA和西方墨點法)檢測結果。

22.藥物或酒精濫用史，或藉由在篩選期間進行的實驗室檢測所表明的這種濫用的證據。

23.在初次給藥前兩(2)週內未消退的重大疾病。

25.篩選之前和在登記時持續至少12週的穩定的醫學、精神病和神經病學狀況。

26.無法或不願意完成方案中的所有評估。

27.藉由超音波評估，睾丸異常的臨床重要體征。

28.臨床上顯著的視網膜異常。

實例2.2：評估佈雷那蘭對I型脊髓性肌萎縮症嬰兒杭丁頓氏(HTT)mRNA表現水平的影響

方法

口服佈雷那蘭的開放標籤多部分人中首次概念驗證研究

在I型脊髓性肌萎縮症嬰兒中評估了佈雷那蘭對杭丁頓氏(HTT)mRNA表現水平的影響，該等嬰兒參加了口服佈雷那蘭的開放標籤多部分人中首次概念驗證研究。

這項研究的第一部分的目的是確定每週遞增劑量的安全性和耐受性，並估計口服/腸內佈雷那蘭(參見實例3)在患有1型SMA嬰兒中的最大耐受劑量(MTD)。所有患者精確具有SMN2基因的2個拷貝，例如藉由定量即時PCR或液滴數位PCR確定。

每週給患者給予佈雷那蘭一次。在隨後的群組研究中，將佈雷那蘭劑量逐步增加直到確定MTD或PK結果確認由於較高劑量下的潛在藥物動力學暴露平臺而無法達到MTD為止。

起始劑量為6mg/m²(大約0.3125mg/kg)。後續劑量為12mg/m²、24mg/m²、48mg/m²和60mg/m²(分別為大約0.625mg/kg、1.25mg/kg、2.5mg/kg和3.125mg/kg)。每個群組具有2-3名患者。所有劑量均為佈雷那蘭(游離形式)。第1部分登記了14名患者；13名患者暴露於佈雷那蘭。暴露持續時間在4-33個月的範圍內，有7名患者保持在研究中。7名患者中有六名正在接受60mg/m²，1名患者正在接受48mg/m²。沒有觀察到劑量限制性毒性。

本研究第二部分的目的是評估在1型SMA患者中每週投與2個劑量的佈雷那蘭持續52週的長期安全性和耐受性。該研究的第2部分登記患者進入2個群組：群組1的劑量為0.625mg/kg並且群組2的劑量為2.5mg/kg。選擇的0.625mg/kg和2.5mg/kg劑量水平係基於來自第1部分的所有安全性數據以及來自第2部分開始時可獲得的慢性青少年毒性研究的所有數據。計畫將大 約10名患者登記入群組1和群組2。共登記二十五名患者，並且全部接受了至少一次治療，到目前為止，有22名患者仍在接受6到18個月治療。

血液採集

從治療前的基線以及使用佈雷那蘭治療的幾個時間點(第85天，然後每91天)收集第1部分和第2部分研究中登記的患者的全血樣本。所有經檢查的參與者的父母均提供了書面知情同意書，以進行另外的生物學研究。

用一個Multivette® 600乙二胺四乙酸鉀(Sarstedt)收集0.6mL血液樣本。輕輕混合後，將血液直接轉移到PAXgene血液RNA管(貝克頓-迪金遜公司(Becton Dickinson))的溶液中。立即將樣本輕輕倒置8到10次以防止凝結，並在室溫下直立放置2到3個小時。孵育後，將PAXgene血液RNA管保存在-20℃。

RNA提取和定量PCR

使用PAXgene血液RNA套組(凱傑公司)提取總RNA。使用隨機六聚體和iScript高級cDNA合成套組(伯樂公司)將總^TMRNA反轉錄為cDNA。cDNA的合成係按照生產商的說明進行，使用100ng的總RNA作為20μl cDNA反應的輸入，以生成濃度為5ng/μl(總RNA當量)的初始cDNA。最後，隨後用無核酸酶的水將cDNA 1/1稀釋，以產生濃度為2.5ng/μl(總RNA當量)的最終cDNA。所有準備工作均在冰上進行。cDNA合成在C1000熱循環儀(反應模組96W快速(Reaction Module 96W Fast)(伯樂公司))上進行，使用以下條件：25℃ 5分鐘，46℃ 20分鐘，95℃ 1分鐘並保持在4℃。cDNA樣本儲存在-20℃。

然後使用伯樂QX200液滴數位PCR系統藉由聚合酶鏈式反應(PCR)定量HTT mRNA的水平和包括新穎外顯子的HTT mRNA的水平。應用 標準反應和循環條件(95℃ 10分鐘；94℃ 30秒和60℃ 60秒，40個循環；和98℃ 10分鐘；保持在4℃)和20ng cDNA輸入(總RNA當量)。

對於HTT mRNA水平，進行了兩個獨立的預先設計的定量PCR分析(測定Hs.PT.58.14833829，其使用正向引物5’-GAGACTCATCCAGTACCATCAG-3’(SEQ ID NO：10)，反向引物5’-GATGTCAGCTATCTGTCGAGAC-3’(SEQ ID NO：11)和探針5’-56-FAM/CGCTTCCAC/ZEN/TTGTCTTCATTCTCCTTGT/3IABkFQ-3’(SEQ ID NO：12)以及測定Hs.PT.58.25550542，其使用正向引物5’-GTAGAACTTCAGACCCTAATCCTG-3’(SEQ ID NO：13)，反向引物5’-CACCACTCTGGCTTCACAA-3’(SEQ ID NO：14)和探針5’-56-FAM/CCCGACAGC/ZEN/GAGTCAGTGATTGTT/3IABkFQ-3’(SEQ ID NO：15)，購自集成DNA技術公司(Integrated DNA Technologies,Inc))。應用定制的定量PCR測定(其使用正向引物5’-TCCTGAGAAAGAGAAGGACATTG-3’(SEQ ID NO：3)，反向引物5’-CTGTGGGCTCCTGTAGAAATC-3’(SEQ ID NO：4)和探針5’-56-FAM/AATTCGTGG/ZEN/TGGCAACCCTTGAGA/3IABkFQ-3’(SEQ ID NO：7))來定量HTT mRNA中新穎外顯子的包含量。

將所有基因表現值標準化為葡糖醛酸糖苷酶β(GUSB)mRNA水平。預先設計的定量PCR測定(測定Hs.PT.39a.22214857，其使用正向引物5’-TCACTGAAGAGTACCAGAAAAGTC-3’(SEQ ID NO：16)，反向引物5’-TTTTATTCCCCAGCACTCTCG-3’(SEQ ID NO：17)和探針5’-HEX/ACGCAGAAA/ZEN/ATACGTGGTTGGAGAGC/3IABkFQ-3’(SEQ ID NO：18)，購自集成DNA技術公司)用以評估GUSB mRNA水平。

結論

在I型脊髓性肌萎縮症嬰兒中評估了佈雷那蘭對杭丁頓氏(HTT)mRNA表現水平的影響，該等嬰兒參加了口服佈雷那蘭的開放標籤多部分人中首次概念驗證研究。每週給患者給予佈雷那蘭一次。血液樣本的縱向基因表現分析表明，在第一每週劑量的佈雷那蘭後誘導新穎外顯子包含進入HTT mRNA中，並在1450個研究日期間持續保持恒定水平(圖12)。此外，在904個研究日期間，血液HTT mRNA水平較基線下降了多達50%(圖13)。此後，如根據臨床研究的進展僅對1-5名長期接受治療的受試者進行的評估，在研究的第904天至1450天之間，HTT mRNA水平恢復至基線水平附近的值(圖13)。我們的研究結果表明，使用佈雷那蘭治療I型脊髓性肌萎縮症的嬰兒誘導血液HTT mRNA中包含新穎外顯子，並且與基線相比將血液HTT mRNA的水平降低多達50%。該等結果表明，可以藉由間歇給藥佈雷那蘭來將HTT持續降低至目標治療水平。

圖12：每週口服劑量的佈雷那蘭誘導和升高SMA 1型嬰兒中的包含需要外顯子的血液HTT轉錄本水平。取決於研究中各個受試者的進展，從研究日358到1450的縱向數據僅可從1-5名受試者獲得。誤差條代表標準誤差。

圖13：每週口服劑量的佈雷那蘭降低SMA 1型嬰兒中血液HTT轉錄本水平。取決於研究中各個受試者的進展，從研究日358到1450的縱向數據僅可從1-5名受試者獲得。誤差條代表標準誤差。

實例3：佈雷那蘭的口服配製物

程序

將所需量的2-羥丙基-β-環糊精溶解於80%體積(即最終預期體積)的目標水中並攪拌30分鐘。然後在室溫下將所需量的佈雷那蘭單鹽酸鹽在攪拌下添加到所述溶液中。添加完成後，將溶液攪拌45分鐘或更長的時間直到獲得無(即，肉眼可見的)顆粒的溶液。使用NaOH 0.1M或HCl 0.1M進行初始pH調節以達到預期的pH(±0.25)。將所需體積的水添加到溶液中以達到最終預期體積， 並在添加完成後在25℃±3℃下攪拌至少10分鐘。使用NaOH 0.1M或HCL 0.1M進行最終的pH調節以達到預期的pH。

<110> 瑞士商諾華公司(NOVARTIS AG)

<120> 剪接調節子用於減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療之用途

<130> PAT058724-TW-NP

<140>

<141>

<150> 63/027,124

<151> 2020-05-19

<150> 62/963,836

<151> 2020-01-21

<150> 62/949,698

<151> 2019-12-18

<150> 62/930,776

<151> 2019-11-05

<150> 62/929,582

<151> 2019-11-01

<160> 23

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 1

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 2

<210> 3

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 3

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 4

<210> 5

<400> 5 000

<210> 6

<400> 6 000

<210> 7

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 探針

<400> 7

<210> 8

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 探針

<400> 8

<210> 9

<211> 439

<212> DNA

<213> 智人

<400> 9

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 10

<210> 11

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 11

<210> 12

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 探針

<400> 12

<210> 13

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 13

<210> 14

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 14

<210> 15

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 探針

<400> 15

<210> 16

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 16

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 引物

<400> 17

<210> 18

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：合成的 探針

<400> 18

<210> 19

<211> 105

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1)..(105)

<223> 該序列可以包含6-35個"CAG" 重複單元

<400> 19

<210> 20

<211> 117

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1)..(117)

<223> 該序列可以包含36-39個"CAG" 重複單元

<400> 20

<210> 21

<211> 120

<212> DNA

<213> 智人

<220> 參見如針對替代和較佳的實施方式的詳細說明所提交的說明書

<400> 21

<210> 22

<211> 108

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<223> 參見如針對替代和較佳的實施方式的詳細說明所提交的說明書

<400> 22

<210> 23

<211> 291

<212> DNA

<213> 智人

<400> 23

Claims (25)

1. 佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療中使用。
2. 佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在作為疾病修飾型療法的杭丁頓氏舞蹈症治療中使用。
3. 佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的運動功能衰退的治療中使用。
4. 佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的認知衰退的治療中使用。
5. 佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的精神病學衰退的治療中使用。
6. 佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在減慢與杭丁頓氏舞蹈症相關的功能能力衰退的治療中使用。
7. 佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在減慢杭丁頓氏舞蹈症病理生理學進展[例如，降低與杭丁頓氏舞蹈症相關的腦(例如全腦、尾核、紋狀體或皮質)體積損失速率(例如，相對於基線體積的%)(例如由MRI評估)]的治療中使用。
8. 用於根據請求項3所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中運動功能包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：眼動功能、構音障礙、肌張力障礙、舞蹈症、姿勢穩定性和步態。
9. 用於根據請求項4所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中認知衰退包括選自以下群組中的一種或多種的衰退，該群組由以下組成：注 意力、處理速度、視覺空間處理、時間選擇，情緒處理、記憶、言語流暢性、精神運動功能和執行功能。
10. 用於根據請求項5所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中精神病學衰退包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：冷漠、焦慮、抑鬱、強迫性行為、自殺念頭、易怒和躁動。
11. 用於根據請求項6所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中功能能力包括選自以下群組中的一種或多種，該群組由以下組成：工作能力、處理財務的能力、管理家務的能力、進行日常生活活動的能力以及所需的護理水平。
12. 用於根據請求項1至11中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中杭丁頓氏舞蹈症的基因特徵在於在4號染色體上的杭丁頓氏基因中從36到39的CAG重複擴增(SEQ ID NO：20)。
13. 用於根據請求項1至11中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中杭丁頓氏舞蹈症的基因特徵在於在4號染色體上的杭丁頓氏基因中>39的CAG重複擴增(SEQ ID NO：21)。
14. 用於根據請求項1至13中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中杭丁頓氏舞蹈症係顯現的杭丁頓氏舞蹈症。
15. 用於根據請求項1至14中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中杭丁頓氏舞蹈症係青少年杭丁頓氏舞蹈症或兒科杭丁頓氏舞蹈症。
16. 用於根據請求項1至15中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中杭丁頓氏舞蹈症係杭丁頓氏舞蹈症的早期、杭丁頓氏舞蹈症的中期或杭丁頓氏舞蹈症的晚期；特別是杭丁頓氏舞蹈症的早期。
17. 用於根據請求項1至16中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中杭丁頓氏舞蹈症係杭丁頓氏舞蹈症的I期、杭丁頓氏舞蹈症的II期、杭丁頓氏舞蹈症的III期、杭丁頓氏舞蹈症的IV期或杭丁頓氏舞蹈症的V期；特別是杭丁頓氏舞蹈症的I期或杭丁頓氏舞蹈症的II期。
18. 用於根據請求項1至13中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中杭丁頓氏舞蹈症係顯現前杭丁頓氏舞蹈症。
19. 用於根據請求項1至18中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中將佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽根據間歇給藥時間表投與。
20. 用於根據請求項1至18中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中將佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽每週一次或每週兩次投與。
21. 用於根據請求項1至20中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中將佈雷那蘭以佈雷那蘭鹽酸鹽的形式投與。
22. 用於根據請求項1至20中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中將佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽以藥物組成物的形式投與。
23. 用於根據請求項1至20中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中將佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽以藥物組合的形式投與。
24. 用於根據請求項1至23中任一項所述使用的佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，其中將佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽在基因療法或用反義化合物治療後投與。
25. 佈雷那蘭或其藥學上可接受的鹽，用於在藉由在HTT mRNA的外顯子49和50之間產生框內終止密碼子來減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療中使用。

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