TW202128133A

TW202128133A - 重組全人源抗ｔｉｇｉｔ單株抗體製劑及其製備方法和用途

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Publication number: TW202128133A
Application number: TW110101943A
Authority: TW
Inventors: 張海桃; 馬麗強; 汪音爵
Original assignee: 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司
Priority date: 2020-01-21
Filing date: 2021-01-19
Publication date: 2021-08-01
Also published as: CN115052622A; JP2023511356A; EP4094777A4; AU2021211799A1; WO2021147854A1; EP4094777A1; US20230080706A1; CA3168600A1; TWI782397B

Abstract

本發明涉及包含抗TIGIT抗體的製劑，尤其涉及包含抗TIGIT抗體、緩衝劑、穩定劑和表面活性劑的藥物製劑。此外，本發明還涉及這些製劑的疾病治療或預防用途。

Description

重組全人源抗TIGIT單株抗體製劑及其製備方法和用途

本發明涉及抗體製劑領域。更具體而言，本發明涉及包含重組的全人源抗含免疫球蛋白基序和免疫受體酪胺酸抑制基序結構域的T細胞免疫受體的抗體(也稱為抗TIGIT抗體)的藥物製劑，尤其是穩定的液體製劑，以及用於製備該藥物製劑的方法，以及該藥物製劑的治療和/或預防用途。

藥品穩定性是保證藥品有效性和安全性的重要指標之一。獲得良好的製劑處方是保證藥品在貨架期內保持其有效性和安全性的關鍵條件。然而，由於抗體本身及其降解途徑的複雜性，目前尚不可能對優化抗體穩定性所需的製劑條件作出預測。尤其是考慮到，不同抗體通常具有十分不同的CDR序列，而這些序列差異會導致不同抗體在溶液中具有不同的穩定性性質。因此，基於對人用抗體在安全性和有效性上的嚴格要求，有必要針對每個抗體單獨進行最佳製劑配方的優化。

TIGIT(含免疫球蛋白基序和免疫受體酪胺酸抑制基序結構域的T細胞免疫受體，也稱為WUCAM、Vstm3或Vsig9)最初是利用生物信息學比對的方法作為CD28家族成員之一被發現。已經證實，結合人TIGIT的抗體可用於治療癌症。參見例如WO 2006/124667。在小鼠模型中，PD-L1和TIGIT二者的抗體阻斷可以導致協同提高CD8+ T細胞介導的腫瘤排斥。Grogan et al.(2014)J.Immunol.192(1)Suppl.203.15；Johnston et al.(2014)Cancer Cell 26：1-15。在黑色素瘤的動物模型中得到類似結果。Inozume et al.(2014)J.Invest.Dermatol.134：S121-Abstract 693。與TIGIT高特異性結合的抗TIGIT抗體已經描述在例如PCT申請號PCT/CN2019/097665中。

儘管一些抗TIGIT抗體製劑已經被提出，但在本領域中對於含有足夠穩定且適於施用給人受試者的抗TIGIT抗體的新藥物製劑仍存在需要。此外，對於這樣的抗體製劑，尋找製劑處方的簡單和易用性，也是有利的。

本發明藉由提供含有特異結合至TIGIT的抗體的藥物製劑來滿足上述需求。本發明的抗體製劑針對多種穩定性影響因素(諸如溫度、重複凍融、振盪)，均表現出了優良的穩定性。

在一個方面，因此，本發明提供了一種液體抗體製劑，其包含(i)抗TIGIT抗體蛋白；(ii)緩衝劑，(iii)穩定劑，和(iv)表面活性劑。

在一個實施方案中，抗TIGIT抗體包含重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL，其中重鏈可變區包含SEQ ID NO：7的序列或與其具有至少90%同一性的序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8的序列或與其具有至少90%同一性的序列：

(SEQ ID NO：7)；

(SEQ ID NO：8)。

在一個實施方案中，該抗TIGIT抗體包含：

- YTFTEYYMH(SEQ ID NO：1)的重鏈VH CDR1；

- IISPSAGSTKYAQKFQG(SEQ ID NO：2)的重鏈VH CDR2；

- ARDHDIRLAGRLADY(SEQ ID NO：3)的重鏈VH CDR3；

- RASQGISSWLA(SEQ ID NO：4)的輕鏈VL CDR1；

- AASSLQS(SEQ ID NO：5)的輕鏈VL CDR2；和

- QQAVILPIT(SEQ ID NO：6)的輕鏈VL CDR3。

在一個實施方案中，該抗TIGIT抗體是包含重鏈和輕鏈的IgG4型抗體，其中該重鏈包含SEQ ID NO：9的序列或與其具有至少90%同一性的序列，且其中該輕鏈包含SEQ ID NO：10的序列或與其具有至少90%同一性的序列：

(SEQ ID NO：9)

(SEQ ID NO：10)。

較佳地，該抗TIGIT抗體是PCT申請號PCT/CN2019/097665(國際申請日：2019年7月25日)中公開的抗TIGIT單株抗體ADI-30278，該抗體由SEQ ID NO：9的重鏈序列和SEQ ID NO：10的輕鏈序列組成。

在一個實施方案中，該抗TIGIT抗體是在293細胞或CHO細胞中重組表達的抗TIGIT抗體。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的抗TIGIT抗體的濃度為約1-150mg/ml。在另一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的抗TIGIT抗體的濃度為約10-100mg/ml，較佳20-60mg/ml，尤其是約50mg/ml。在其他實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的抗TIGIT抗體的濃度為約10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90或100mg/ml。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的緩衝劑的濃度為約5-50mM。在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的緩衝劑的濃度為約5-30mM，例如，約5、10、15、20、25、30mM。在一個實施方案中，該緩衝劑是組胺酸緩衝劑，較佳地，該緩衝劑由組胺酸和鹽酸組胺酸組成。在一個較佳的實施方案中，該緩衝劑是大約5-30mM組胺酸緩衝劑，例如10-20mM，如大約10mM組胺酸。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的穩定劑的濃度為約50-500mM。在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的穩定劑的濃度為約100-400mM，例如約100、150、200、250、300、350、400mM。

在一個實施方案中，該穩定劑選自多元醇(例如，山梨醇)、糖類(例如，蔗糖)、胺基酸(例如精胺酸或鹽酸精胺酸)、和它們的任意組合。在一個實施方案中，該穩定劑包含約20-80mg/ml的山梨醇，例如20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、80mg/ml山梨醇。又在一個實施方案中，該穩定劑包含約20-60mg/ml的蔗糖，例如，20、30、40、50、60mg/ml蔗糖。在一個較佳實施方案中，該穩定劑還包含精胺酸，例如約25mM-200mM，例如50-150mM，或50mM-120mM，較佳地為約60-100mM，例如，約60、65、70、75、80、85、90mM精胺酸。較佳地，由鹽酸精胺酸提供作為穩定劑的精胺酸。

在一個較佳實施方案中，該穩定劑包含山梨醇和精胺酸的組合；或蔗糖和精胺酸的組合。例如，可以使用約20-40mg/ml的山梨醇和約50-100mM的精胺酸的組合，或約30-60mg/ml的蔗糖和約50-100mM的精胺酸。

在較佳的實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含大約30-60mg/ml(如大約50mg/ml)山梨醇、或大約20-30mg/ml(如大約25mg/ml)山梨醇與80-90mM(大約85mM)精胺酸。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的表面活性劑的濃度為約0.1-1mg/ml。在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的表面活性劑的濃度為約0.2-0.8mg/ml，例如約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mg/ml。

在一個實施方案中，該表面活性劑是非離子型表面活性劑。在一個實施方案中，該表面活性劑選自聚山梨酯類表面活性劑。在一個具體實施方案中，本發明的液體抗體製劑中的表面活性劑是聚山梨酯-80。

在一個實施方案中，該液體製劑的pH值為約5.0-6.0。在一些實施方案中，該液體製劑的pH值為約5.0-6.0中的任意值，例如約5.0、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0。較佳地，該製劑的pH為5.2±0.2或5.5±0.2，較佳地pH為5.2。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(i)約10-100mg/ml的抗TIGIT抗體蛋白，例如10-80mg/ml，例如10、20、30、40、50、60、70或80mg/ml抗體蛋白；

(ii)約5-50mM的組胺酸緩衝劑，例如5-30mM，例如5、10、15、20、25、30mM；

(iii)約50-300mM的山梨醇、蔗糖、或它們的任意組合，例如，50、80、100、120、140、160、180、200、250、300mM；

(iv)約0.1-1mg/ml聚山梨酯80，例如，0.1、0.2.0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mg/ml；和

(v)任選地，約50-120mM的精胺酸，

其中該液體製劑的pH為約5.0-5.5，例如，約5.2。

例如，該液體抗體製劑可以包含

(i)約10-60mg/ml抗TIGIT抗體蛋白，例如20、30、40、50、55、60mg/ml；

(ii)約10mM的組胺酸緩衝劑；

(iii)約10-50mg/ml山梨醇或蔗糖，例如10、15、20、25、30、35、40、45，50mg/ml山梨醇，或例如10，15、20、25、30、35、40、45，50mg/ml蔗糖；

(iv)約0.2-0.8mg/ml，例如0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mg/ml，例如0.3-0.6mg/ml聚山梨酯80；和

(v)約60-100mM，例如60、65、70、75、80、85、90、95、100mM、尤其是約85mM的精胺酸，

其中該液體製劑的pH為約5.0-5.5，例如，約5.2。

在一個較佳方案中，該液體抗體製劑包含：

(i)約50mg/ml的抗TIGIT抗體蛋白，約0.21mg/ml組胺酸，約1.81mg/ml鹽酸組胺酸，約25.00mg/ml山梨醇，約17.91mg/ml鹽酸精胺酸，約0.50mg/ml聚山梨酯80，pH約5.2；或

(ii)約50mg/ml的抗TIGIT抗體蛋白，約0.21mg/ml組胺酸，約1.81mg/ml鹽酸組胺酸，約25.00mg/ml山梨醇，約17.91mg/ml鹽酸精胺酸，約0.20mg/ml聚山梨酯80，pH約5.2；或

(iii)約0.21mg/ml組胺酸，約1.81mg/ml鹽酸組胺酸，約40.00mg/ml蔗糖，約17.91mg/ml鹽酸精胺酸，約0.20mg/ml聚山梨酯80，pH 5.2。

本發明的液體製劑可以長期穩定儲存，例如至少24個月或更長時間。在一個實施方案中，本發明的液體製劑可以在約-80℃至約45℃，例如-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約5℃、約25℃、約35℃、約38℃、約40℃、約42℃或約45℃的條件下，儲存至少10天、至少20天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月，至少36個月，或更長時間，且是穩定的。

在一個實施方案中，本發明的液體製劑可以穩定儲存至少24個月。在再一實施方案中，本發明的液體製劑在至少40℃是穩定的。在再一實施方案中，本發明的液體製劑在約2℃-8℃保持穩定至少3個月，較佳至少12個月，更佳至少24個月。在一個實施方案中，本發明的液體製劑在室溫或例如約25℃保持穩定至少2個月，較佳至少3個月，更佳至少6個月。在再一實施方案中，本發明的液體製劑在約40℃保持穩定至少2周、較佳至少1個月。

在一個實施方案中，可以藉由檢測製劑的外觀、可見異物、蛋白含量、濁度、純度、和/或電荷變異體的變化，來指示製劑的穩定性。在一個實施方案中，可以在高溫脅迫的強制實驗中，例如在40℃±2℃儲存至少1週、2週或較佳地1個月後，或在加速實驗中，例如在25℃±2℃儲存至少1個月或2個月後，或在長期實驗中，例如在5℃±3℃儲存至少2個月或3個月後，或在振盪實驗中(例如在室溫、避光650r/min條件下振盪5天)，和/或在凍融實驗中(例如，在-30℃/室溫重複凍融6次)，檢測本發明液體製劑的穩定性。在一個實施方案中，相對於初始值，例如儲存第0天的初始值、或振盪或凍融實驗前的初始值，檢測本發明液體製劑的穩定性。

在一個實施方案中，在儲存後，或在振盪實驗後，或在凍融實驗後，藉由目視檢查本發明液體製劑的穩定性，其中本發明液體製劑在外觀上保持為澄明至微乳光，為無色至淡黃色液體，且無異物。在一個實施方案中，在澄明度檢測儀下目視檢查，製劑中無可見異物存在。在一個實施方案中，在儲存後，或在振盪實驗後，或在凍融實驗後，藉由測定蛋白含量變化，檢查本發明液體製劑的穩定性，其中例如藉由紫外分光光度(UV)法，相對於初始值，蛋白含量變化率不超過20%，較佳不超過10%，例如7-8%，更佳不超過5%，2%或1%。在一個實施方案中，在儲存後，或在振盪實驗後，或在凍融實驗後，藉由測定本發明液體製劑的濁度變化，檢查本發明液體製劑的穩定性，其中例如藉由OD_350mm法檢測，相對於初始值，變化值不超過0.06，較佳地不超過0.05，更佳地不超過0.04，不超過0.02。在一個實施方案中，在儲存後，或在振盪實驗後，或在凍融實驗後，藉由測定本發明液體製劑的純度變化，檢查本發明液體製劑的穩定性，其中藉由體積排阻高效液相色譜法(SEC-HPLC)，相對於初始值，單體純度的變化值(或主峰變化值)不超過10%，例如不超過5%、4%、3%、例如變0化值不超過2%，較佳不超過1%。在一個實施方案中，在儲存後，或在振盪實驗後，或在凍融實驗後，藉由測定本發明液體製劑的純度變化，檢查本發明液體製劑的穩定性，其中藉由非還原型十二烷基硫酸鈉毛細管電泳(CE-SDS)法，相對於初始值，單體純度的變化值(或主峰變化值)下降不超過10%，例如不超過5%、4%、3%、2%或1%。在一個實施方案中，在儲存後，或在在振盪實驗後，或在凍融實驗後，藉由陽離子交換高效液相色譜法(CEX-HPLC)，檢測本發明液體製劑的穩定性，其中相對於初始值，抗體的電荷變異體(主成分、酸性組分和鹼性組分)的變化值總和不超過50%，例如不超過40%、30%、20%、10%、5%，和/或主成分的變化值不超過20%、15%、10%、8%、5%。在一個實施方案中，在儲存後，或在振盪實驗後，或在凍融實驗後，藉由直接ELISA法，檢測本發明液體製劑的穩定性，其中相對於初始值，抗體的相對結合活性為70-130%，例如，70、80、90、93、95、98、100、103、105、108、110、115、120、125、130%、較佳90-110%。

在一個實施方案中，本發明液體製劑在儲存後，例如在25℃儲存至少2個月後，或在40℃±2℃儲存1個月後，是穩定的，較佳地具有如下特徵之一或多項：相对於储存第0天的初始值，

(i)藉由SEC-HPLC法測量，主峰變化值小於1%，和/或製劑具有大於96%的純度，較佳大於97%、98%的純度；

(ii)藉由非還原型CE-SDS法測量，主峰變化值小於2%，和/或製劑具有大於96%的純度，較佳大於97%、98%的純度；

(iii)藉由CEX-HPLC法測量，製劑中抗TIGIT抗體蛋白的各組分(主成分、酸性組分和鹼性組分)的變化值總和不超過40%和/或主成分的變化值不超過20%，

例如在40℃±2℃儲存1個月後變化值總和不超過約40%(例如，不超過35%，30%，25%、20%、15%、10%)或主成分變化值不超過20%(例如，不超過15%、12%、10%、8%)，或

例如在25℃儲存2個月後變化值總和不超過約20%(例如，不超過 15%，14%、13%、12%)或主成分變化值不超過約15%(例如，不超過10%，8%、7%、6%、5%)；

(iv)藉由ELISA法測量，製劑中抗TIGIT抗體蛋白的相對結合活性為70%-130%，例如，90、93、95、98、100、103、105、108、110、115、120%，例如90%-110%；

在較佳的實施方案中，本發明液體製劑在振盪和/或重複凍融下是穩定的。

較佳地，該製劑在振盪下或在重複凍融下是穩定的，例如，在室溫避光650r/min條件下振盪5天或在-30℃/室溫重複凍融6次後，具有如下特徵之一或多項：

(i)藉由SEC-HPLC法測量，主峰變化值小於1%，和/或製劑具有大於96%的純度，較佳大於97%、98%、99%的純度；

(ii)藉由非還原型CE-SDS法測量，主峰變化值小於1%，和/或製劑具有大於96%的純度，較佳大於97%、98%的純度；

(iii)藉由CEX-HPLC法測量，製劑中抗TIGIT抗體蛋白的各組分(主成分、酸性組分和鹼性組分)的變化值總和不超過2%；

(iv)藉由ELISA法測量，製劑中抗TIGIT抗體蛋白的相對結合活性為70%-130%，例如，90%-110%；

在一個方面中，本發明的液體製劑為藥物製劑，較佳為注射劑，更佳為皮下注射劑或靜脈內注射劑。在一個實施方案中，該液體製劑為靜脈輸注劑。

另一方面，本發明提供了一種固體抗體製劑，其是藉由將本發明的液體抗體製劑經固化處理而獲得的。該固化處理是藉由例如結晶法、噴霧乾燥法或冷凍乾燥法實施的。在一個較佳的實施方案中，該固體抗體製劑例如是凍乾粉針劑形式。固體抗體製劑可在使用前，藉由重構於適當的溶媒中，形成本發明的重構製劑。該重構製劑也是一種本發明的液體抗體製劑。在一個實施方案中，該適當的溶媒選自注射用水、注射用有機溶劑，包括但不限於注射用油、乙醇、丙二醇等，或其組合。

在一個方面，本發明提供了一種遞送裝置，其包含本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑。在一個實施方案中，本發明的遞送裝置以包含本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑的預填裝注射器形式提供，例如用於靜脈內、皮下、皮內或者肌內注射、靜脈內輸注。

在又一方面，本發明提供向受試者，例如哺乳動物遞送抗TIGIT抗體蛋白的方法，包括給予該受試者本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑的步驟，該遞送是例如藉由使用預填裝注射器的遞送裝置實施的。

在又一方面，本發明提供本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑的用途，用於製備在受試者中阻斷TIGIT與CD155的結合以降低或消除TIGIT的免疫抑制作用的遞送裝置或預填裝注射器或藥物，或用於製備在受試者中治療或預防腫瘤、病原體感染的遞送裝置(如，預填裝注射器)或藥物，該腫瘤為例如癌症，包括但不限於胃腸道癌症，例如結腸癌。

本發明還提供了一種藉由向受試者施用本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑或包含該液體抗體製劑或固體抗體製劑的遞送裝置(如，預填裝注射器)或藥物，在受試者中阻斷TIGIT與CD155的結合以降低或消除TIGIT的免疫抑制作用的方法。

本發明還提供了一種藉由向受試者施用本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑或包含該液體抗體製劑或固體抗體製劑的遞送裝置(如，預填裝注射器)或藥物，治療受試者的疾病，例如上述腫瘤或病原體感染的方法。

本發明的其它實施方案將藉由參閱此後的詳細說明而清楚明瞭。

結合以下圖式一起閱讀時，將更好地理解以下詳細描述的本發明的較佳實施方案。出於說明本發明的目的，圖中顯示了目前較佳的實施方案。然而，應當理解本發明不限於圖中所示實施方案的精確安排和手段。

圖1顯示，在實施例1的pH篩選實驗中，藉由CEX-HPLC法檢測，在不同pH條件下，抗體電荷變異體-主成分的變化趨勢圖。【0039】圖2.顯示，在實施例1的pH篩選實驗中，藉由CEX-HPLC法檢測，在不同pH條件下，抗體電荷變異體-酸性組分的變化趨勢圖(CEX-HPLC法)。

圖3.顯示，在實施例2的40℃穩定性確認實驗中，藉由CEX-HPLC法檢測的電荷變異體變化趨勢圖。

圖4.顯示，在實施例2的25℃穩定性確認實驗中，藉由CEX-HPLC法檢測的電荷變異體變化趨勢圖。

在詳細描述本發明之前，應瞭解，本發明不受限於本說明書中的特定方法及實驗條件，因為該方法以及條件是可以改變的。另外，本文所用術語僅是供說明特定實施方案之用，而不意欲為限制性的。

定義

除非另有定義，否則本文中使用的所有技術和科學術語均具有與本領域一般技術人員通常所理解的含義相同的含義。為了本發明的目的，下文定義了以下術語。

術語“約”在與數字數值聯合使用時意為涵蓋具有比指定數字數值小5%的下限和比指定數字數值大5%的上限的範圍內的數字數值。

術語“和/或”當用於連接兩個或多個可選項時，應理解為意指可選項中的任一項或可選項中的任意兩項或多項。

如本文中所用，術語“包含”或“包括”意指包括所述的要素、整數或步驟，但是不排除任意其他要素、整數或步驟。在本文中，當使用術語“包含”或“包括”時，除非另有指明，否則也涵蓋由所述及的要素、整數或步驟組成的情形。例如，當提及“包含”某個具體序列的抗體可變區時，也旨在涵蓋由該具體序列組成的抗體可變區。

在本文中，術語“TIGIT”是指"含Ig和ITIM結構域的T細胞免疫受體"。該表述也包括TIGIT的變體、同種型、同源物、和物種同源物。TIGIT也稱作VSIG9、VSTM3、WUCAM。人和鼠形式的GITR的胺基酸和核酸序列可以參見GenBank登記號NP_776160(人胺基酸序列)和NP_001139797(鼠胺基酸序列)。TIGIT蛋白也可包括TIGIT的片段，諸如包含胞外結構域的片段，例如保持與本發明任何抗體結合能力的片段。

在本文中，術語“抗體”以最廣意義使用，指包含抗原結合位點的蛋白質，涵蓋各種結構的天然抗體和人工抗體，包括但不限於完整抗體和抗體的抗原結合片段。

術語“全抗體”、“全長抗體”、“完全抗體”和“完整抗體”在本文中可互換地用來指包含由二硫鍵相互連接的至少兩條重鏈(H)和兩條輕鏈(L)的糖蛋白。每條重鏈由重鏈可變區(本文中縮寫為VH)和重鏈恆定區組成。重鏈恆定區由3個結構域CH1、CH2和CH3組成。每條輕鏈由輕鏈可變區(本文中縮寫為VL)和輕鏈恆定區組成。輕鏈恆定區由一個結構域CL組成。VH區和VL區可以進一步再劃分為超變區(為互補決定區(CDR)，其間插有較保守的區域(為構架區(FR))。每個VH和VL由三個CDR和4個FR組成，從胺基端到羧基端以如下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。恆定區不直接參與抗體與抗原的結合，但是顯示出多種效應子功能。

術語“人抗體”或“全人源抗體”在本文中可以互換使用，指包括其中構架區和CDR區二者均源自人種系免疫球蛋白序列的可變區的抗體。而且，如果抗體含有恆定區，恆定區也源自人種系免疫球蛋白序列。本發明的人抗體可包括不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸序列(例如，藉由體外隨機或點特異誘變或體內體細胞突變引入的突變)，例如在CDR--尤其在CDR3中。然而，如本文所使用的，術語“人抗體”不包括其中的CDR序列衍生自其他哺乳動物物種(如，小鼠)的種系而移植入人構架序列的抗體。

術語“抗體製劑”指一種製備物，該製備物處於允許作為活性成分的抗體的生物活性可以有效發揮的形式，並且不含有對於待施用該製劑的受試者而言具有不可接受毒性的其它組分。這類抗體製劑通常是無菌的。通常，抗體製劑中包含可藥用賦形劑。“可藥用”賦形劑是可以合理地施用至受試哺乳動物以便製劑中所用活性成分的有效劑量可以遞送至受試者的試劑。賦形劑的濃度與施用模式相適應，例如可以是注射可接受的。

術語“抗TIGIT抗體製劑”在本文中也簡稱為“本發明的抗體製劑”，意指包含抗TIGIT抗體蛋白作為活性成分並包含可藥用賦形劑的製備物。將抗TIGIT抗體蛋白與可藥用賦形劑組合後，作為活性成分的抗TIGIT抗體蛋白適於治療性或預防性施與人類或非人類動物。本發明的抗體製劑可以例如製備成水性形式的液體製劑，例如，即用預填裝式注射器，或者製備成凍幹製劑，在即將使用前藉由溶解和/或懸浮於生理可接受的溶液中進行重構(即，複溶)。在一些實施方案中，抗TIGIT抗體蛋白製劑是液體製劑形式。

“穩定的”抗體製劑是指，製劑中的抗體在儲存於特定條件下之後、或在振盪後、或在重複凍融後保有可接受程度的物理穩定性和/或化學穩定性。儘管抗體製劑中所含的抗體在儲存、振盪或重複凍融之後可能不會100%維持其化學結構，但通常如果維持約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%的抗體結構或功能，則認為抗體製劑是“穩定的”。在一些具體的實施方案中，本發明的抗TIGIT抗體蛋白製劑在製造、製備、運輸和長期儲存過程中表現出低至檢測不到的抗體聚集或降解或化學修飾，從而極少或甚至是沒有抗TIGIT抗體蛋白的生物活性損失，表現出高度穩定性。在一些實施方案中，本發明的抗TIGIT抗體蛋白製劑在儲存、振盪和/或重複凍融後，基本上保留其物理和化學穩定性。較佳地，本發明液體製劑可以在室溫或在40℃穩定至少2周，和/或在25℃穩定至少2個月，和/或在2-8℃穩定至少24個月。較佳地，本發明液體製劑可以在室溫避光650r/min振盪5天後和/或在-30℃/室溫重複凍融1-6次後是穩定的。

本領域已知多種分析技術可以用於測定蛋白質的穩定性，參見例如Peptide and Protein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs(1991)and Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993)。可以在選定的溫度和選定的儲存時間測量穩定性。例如，可以基於預期的製劑貨架期來選擇儲存時間。備選地，可以使用加速穩定性試驗。在一些實施方案中，藉由對抗體製劑進行各種脅迫測試來進行穩定性測試。這些測試可以代表調配的抗體製劑在製造、儲存或運輸期間可能遭遇到的極端條件，也可以代表在非製造、儲存或運輸期間可能使抗體製劑中的抗體的不穩定性加速的條件。例如，可以將經調配的抗TIGIT抗體蛋白製劑充填至玻璃小瓶中以檢驗在高溫脅迫下的抗體穩定性。再例如，可以將經調配的抗TIGIT抗體蛋白製劑充填至玻璃小瓶中並在室溫避光650r/min條件下振盪5天後，檢查抗體的穩定性。再例如，將將經調配的抗TIGIT抗體蛋白製劑充填至玻璃小瓶中並在-30℃/室溫重複凍融1-6次後，檢查抗體的穩定性。在一個實施方案中，在-30℃以下凍存1天後室溫解凍，為一個凍融循環。

經一段儲存時間後、或經振盪一段時間後或經重複凍融多次後，製劑不顯示聚集、沉澱、混濁和/或變性；或顯示非常少的聚集、沉澱、混濁和/或變性，則可以認為抗體在製劑中“保持其物理穩定性”。由於製劑中抗體的聚集可以潛在地導致患者增加的免疫反應，從而導致安全性問題。因此，需要使在製劑中的抗體聚集最小化或防止聚集。光散射法可以用於測定製劑中的可見聚集物。SEC-HPLC可以用於測定製劑中的可溶性聚集物。此外，可以藉由目視檢查製劑的外觀、顏色和/或澄清度、或者藉由OD_350nm法檢測製劑的濁度、或者藉由非還原型CE-SDS法測定製劑的純度，來指示製劑的穩定性。在一個實施方案中，藉由測定在特定溫度下儲存特定時間之後或在振盪後或在重複凍融後製劑中的抗體單體的百分比來測量製劑的穩定性，其中製劑中的抗體單體的百分比越高，則製劑的穩定性越高。

“可接受程度的”物理穩定性可以表示，於特定溫度下儲存特定時間之後，振盪後或重複凍融後，在製劑中檢測到至少約90%的抗TIGIT抗體蛋白單體。在一些實施方案中，在特定溫度儲存至少2週、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久後，可接受程度的物理穩定性表示至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的抗TIGIT抗體蛋白單體。當評估物理穩定性時，藥物製劑儲存的特定溫度可為約-80℃至約45℃的任一溫度，例如儲存於約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃-8℃、約5℃、約25℃、約35℃、約37℃、約40℃、約42℃或約45℃。例如，若儲存於約40℃±2℃1個月或4週之後，檢測到至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的抗TIGIT抗體蛋白單體，則藥物製劑視為是穩定的。若儲存於約25℃ 2個月之後，檢測到至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的抗TIGIT抗體蛋白單體，則藥物製劑視為是穩定的。若儲存於約5℃ 9個月之後，檢測到至少約90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%的抗TIGIT抗體蛋白單體，則藥物製劑視為是穩定的。

經一段儲存時間後、或經振盪一段時間後或經重複凍融多次後，如果製劑中的抗體不顯示顯著的化學改變，則可以認為抗體在製劑中“保持其化學穩定性”。大多數化學不穩定性源自於形成了抗體的共價修飾形式(例如，抗體的電荷變異體)。例如由天冬胺酸異構化、N和C末端修飾，可以形成鹼性變異體；由脫醯胺化、唾液酸化和糖化，可以產生酸性變異體。化學穩定性可以藉由檢測和/或定量抗體的化學改變形式來評估。例如，可以藉由陽離子交換色譜(CEX)或成像毛細管等電聚焦電泳(iCIEF)檢測製劑中抗體的電荷變異體。在一個實施方案中，藉由測定在特定溫度下儲存特定時間之後或經振盪後或重複凍融多次後製劑中抗體的電荷變異體百分比變化值來測量製劑的穩定性，其中該變化值越小，則製劑的穩定性越高。

“可接受程度”的化學穩定性可以表示於特定溫度下儲存特定時間之後、或經振盪一段時間後或經重複凍融多次後，製劑中電荷變異體(例如主成分或酸性組分或鹼性組分)的百分比變化值不超過40%，例如不超過30%、不超過20%；或電荷變異體(主成分、酸性組分和鹼性組分)的百分比變化值總和不超過60%，例如不超過50%、不超過30%。在一些實施方案中，在特定溫度儲存至少2週、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久後，可接受程度的化學穩定性可以表現為主成分電荷變異體的百分比變化值不超過約50%、40%、30%、20%、或15%；或電荷變異體的百分比變化值總和不超過約60%、50%、或30%。當評估化學穩定性時，儲存藥物製劑的溫度可為約-80℃至約45℃的任一溫度，例如儲存於約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃-8℃、約5℃、約25℃或約45℃。例如，若在儲存於5℃ 24個月之後，主成分電荷變異體的百分比變化值少於約25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%，則藥物製劑可被視為是穩定的。若在儲存於25℃ 2個月後，主成分電荷變異體的百分比變化值少於約20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%，則藥物製劑亦可被視為是穩定的。若在儲存於40℃ 1個月之後，主成分電荷變異體的百分比變化值少於約50%、40%、30%、20%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、5%或4%，則藥物製劑亦可被視為是穩定的。

術語“凍乾製劑”是指藉由液體製劑的冷凍乾燥處理得到或能夠得到的組成物。較佳地，其為具有少於5%、較佳少於3%水含量的固體組合物。

術語“重構製劑”是指將固體製劑(例如凍乾製劑)溶解和/或懸浮於生理可接受的溶液中得到的液體製劑。

文中使用的術語“室溫”是指15℃至30℃、較佳20℃至27℃、更較佳25℃的溫度。

“脅迫條件”是指在化學和/或物理上不利於抗體蛋白的環境，該環境可以導致不可接受的抗體蛋白失穩定，例如，高溫、振盪、凍融。“高溫脅迫”是指，將抗體製劑置於室溫或甚至於更高溫度(例如40℃±2℃)儲存一段時間。藉由高溫脅迫加速試驗，可以檢查抗體製劑的穩定性。

如本文所使用，術語“腸胃外施用”意指腸內和局部給藥以外的給藥方式，通常藉由注射或輸注方式，並且包括但不限於，靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下(subcuticular)、關節內、囊下、蛛網膜下、脊管柱內、硬膜外和胸骨內注射以及輸注。在一些實施方案中，本發明的穩定抗TIGIT抗體蛋白製劑腸胃外施用於受試者。在一個實施方案中，本發明的抗TIGIT抗體蛋白製劑以皮下、皮內、肌內或靜脈內注射方式施用於受試者。

I.抗體製劑

本發明提供穩定的液體抗體製劑，其包含(i)抗TIGIT抗體，(ii)緩衝劑，(iii)穩定劑，和(iv)表面活性劑，該抗體製劑的pH為約5.0-6.0。在一個較佳方案中，本發明的液體抗體製劑是注射製劑形式。

(i)抗TIGIT抗體

“抗TIGIT抗體”是指這樣的抗體，該抗體能夠以足夠的親和力結合TIGIT分子，以致該抗體可以用作靶向TIGIT分子的治療劑和/或預防劑。

在一些實施方案中，如藉由生物光干涉法測量，本發明抗體製劑中的抗TIGIT抗體能夠以高親和力，例如以10^-7M或更小、較佳地以10-20 x 10^-10M的K_D特異性結合人TIGIT，並由此介導對TIGIT及其配體CD155結合的高效阻斷作用，減少或消除由TIGIT結合其配體引起的抑制性信號傳導。在一些實施方案中，本發明抗體製劑中的抗TIGIT抗體抑制含有表達人TIGIT的浸潤淋巴細胞的腫瘤(例如胃腸道腫瘤，較佳結腸直腸癌)的生長，且較佳地與抗PD1抗體聯用時，獲得顯著好於單獨一種抗體施用時的抗腫瘤效果。

在一些實施方案中，本發明抗體製劑中的抗TIGIT抗體包含：SEQ ID NO：7或與之具有至少90%同一性的重鏈可變區(VH)；和SEQ ID NO：8或與之具有至少90%同一性的輕鏈可變區(VL)。“可變區”或“可變結構域”是抗體的重鏈或輕鏈中參與抗體與其抗原的結合的結構域。一般，重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)可以進一步再劃分為高變區(HVR，又稱作互補決定區(CDR))，其間插有較保守的區域(即，構架區(FR))。每個VH和VL由三個CDR和4個FR組成，從胺基端到羧基端以如下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

在一些實施方案中，本發明抗體製劑中的抗TIGIT抗體包含SEQ ID NO：7所示重鏈可變區中的VH CDR1、2和3序列和SEQ ID NO：8所示輕鏈可變區中的VL CDR1、2和3序列。“互補決定區”或“CDR區”或“CDR”(在本文中與超變區“HVR”可以互換使用)，是抗體可變區中主要負責與抗原表位結合的胺基酸區域。重鏈和輕鏈的CDR通常被稱作CDR1、CDR2和CDR3，從N-端開始順序編號。位於抗體重鏈可變結構域內的CDR被稱作VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，而位於抗體輕鏈可變結構域內的CDR被稱作VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。本領域公知多種用於在一個給定的VH或VL胺基酸序列中確定其CDR序列的方案。例如，Kabat互補決定區(CDR)是基於序列變異性確定的並且是最常用的(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。而Chothia指的是結構環的位置(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))。AbM HVR是Kabat HVR和Chothia結構環之間的折中，並且由Oxford Molecular的AbM抗體建模軟件使用。“接觸性”(Contact)HVR基於對可獲得的複雜晶體結構的分析。HVR也可以基於與參考CDR序列(例如本文公開的示例性CDR)具有相同的Kabat編號位置而確定。在一個實施方案中，本發明抗TIGIT抗體具有SEQ ID NO：1的VH CDR1，SEQ ID NO：2的VH CDR2，SEQ ID NO：3的VH CDR3；和SEQ ID NO：4的VL CDR1，SEQ ID NO：5的VL CDR2和SEQ ID NO：6的VL CDR3。

在一些實施方案中，本發明抗體製劑中的抗TIGIT抗體可以包含與SEQ ID NO：7具有至少90%、95%、98%或99%或更高同一性的重鏈可變區(VH)；和/或與SEQ ID NO：8具有至少90%、95%、98%或99%或更高同一性的輕鏈可變區(VL)。在本文中，“序列同一性”是指在比較窗中以逐個核苷酸或逐個胺基酸為基礎的序列相同的程度。可以藉由以下方式計算“序列同一性百分比”：將兩條最佳比對的序列在比較窗中進行比較，確定兩條序列中存在相同核酸堿基(例如，A、T、C、G、I)或相同胺基酸殘基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的數目以得到匹配位置的數目，將匹配位置的數目除以比較窗中的總位置數(即，窗大小)，並且將結果乘以100，以產生序列同一性百分比。為了確定序列同一性百分數而進行的最佳比對，可以按本領域已知的多種方式實現，例如，使用可公開獲得的計算機軟件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。本領域技術人員可以確定用於比對序列的適宜參數，包括為實現正在比較的全長序列範圍內或目標序列區域內最大比對所需要的任何算法。

在一些實施方案中，本發明抗體的VH序列與SEQ ID NO：7相比具有不超過10個，較佳地不超過5個、4個或3個不同殘基，較佳地該不同殘基為保守胺基酸替代。在一些實施方案中，本發明抗體的VL序列與SEQ ID NO：8相比具有不超過10個，較佳地不超過5個、4個或3個不同殘基，較佳地該不同殘基為保守胺基酸替代。“保守性取代”是指導致某個胺基酸置換為化學上相似的胺基酸的胺基酸改變。提供功能上相似胺基酸的保守性置換表是本領域熟知的。在本發明任一實施方案中，在一個較佳的方面，保守取代殘基來自以下的保守替代表A，較佳地為表A中所示較佳置換殘基。

在一些實施方案中，本發明抗體製劑中的抗TIGIT抗體是IgG形式的抗體。“IgG形式的抗體”是指抗體的重鏈恆定區所屬於的IgG形式。相同IgG形式的所有抗體的重鏈恆定區都是相同的，不同IgG形式的抗體之間的重鏈恆定區不同。例如，IgG1形式的抗體是指其重鏈恆定區Ig結構域為IgG1的Ig結構域。

在一個較佳的實施方案中，本發明抗體製劑中的抗TIGIT抗體是PCT申請號PCT/CN2019/097665(國際申請日：2019年7月25日)中公開的抗TIGIT單株抗體ADI-30278，其具有SEQ ID NO：9的重鏈和SEQ ID NO：10的輕鏈。在一個實施方案中，該抗TIGIT抗體是由CHO細胞重組表達產生並經純化的IgG4型抗體。較佳地，在本發明液體製劑中的該抗體表現出顯著的抗腫瘤活性。例如，在接種了小鼠MC38細胞的小鼠腫瘤模型中，施用本發明的抗體製劑可以導致顯著的腫瘤抑制效應，尤其是與抗PD-1抗體聯用時。

本發明的抗體製劑中所包含的抗體或其抗原結合片段的量可隨著製劑的特定目的特性、特定環境、和使用製劑的特定目的而改變。在一些實施方案中，抗體製劑為液體製劑，其可含有約1-150mg/ml，較佳地約10-100mg/mL，例如約10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90或100mg/ml抗TIGIT抗體。

(ii)緩衝劑

緩衝劑是可以將溶液的pH維持在可接受範圍的試劑。在一些實施方案中，用於本發明製劑中的緩衝劑可以將本發明製劑的pH控制在大約5.0-6.0的pH範圍，例如約5.0-5.5的pH。在一些具體的實施方案中，本發明的抗體製劑具有約5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、或5.8的pH。例如，本發明的抗體製劑具有pH為5.2±0.2或5.5±0.2，較佳地pH為5.2。

在一些實施方案中，本發明製劑包含選自以下的緩衝體系：組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝體系，枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩衝體系，醋酸-醋酸鈉緩衝體系，磷酸鹽緩衝體系，較佳組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝體系。

在一些實施方案中，用於本發明製劑中的緩衝劑為組胺酸緩衝劑，尤其是由組胺酸和鹽酸組胺酸組成的緩衝體系。在一些實施方案中，本發明的組胺酸緩衝劑中組胺酸的濃度為約5-50mM，尤其是約5-30mM，例如，約5、10、15、20、25、30mM。在一個實施方案中，本發明製劑包含約10mM組胺酸。在另一個實施方案中，用於本發明製劑的組胺酸緩衝劑由例如約0.21mg/ml的組胺酸和約1.81mg/ml的鹽酸組胺酸組成。

(iii)穩定劑

用於本發明的合適的穩定劑可以選自糖、多元醇和胺基酸及其組合。對於作為穩定劑的糖包括但不限於蔗糖，海藻糖、麥芽糖及組合。對於作為穩定劑的多元醇包括但不限於山梨醇、甘露醇、或其組合。對於作為穩定劑的胺基酸包括但不限於精胺酸、鹽酸精胺酸、甲硫胺酸、甘胺酸、脯胺酸及組合。

例如，在一些實施方案中，穩定劑包含選自以下之一或多項：

-選自山梨醇、甘露醇、或其組合的多元醇，約10-100mg/ml，較佳地20-40mg/ml，例如25mg/ml；或40-60mg/ml，例如50mg/ml；

-選自蔗糖、海藻糖、麥芽糖、或其組合的糖類，例如約10-100mg/ml，較佳地30-60mg/ml，例如40mg/ml；

-選自鹽酸精胺酸、甲硫胺酸、甘胺酸、脯胺酸及組合的胺基酸，例如，20-200mM、如約50-110mM，例如，70-100mM，尤其是約80-90mM。

在一個實施方案中，本發明液體製劑包含蔗糖作為穩定劑。蔗糖在本發明液體製劑中的量可以是約10-100mg/ml，較佳地30-60mg/ml，例如40mg/ml。

在一個實施方案中，本發明液體製劑包含山梨醇作為穩定劑。山梨醇在本發明液體製劑中的量可以是約10-100mg/ml，較佳地20-40mg/ml，例如25mg/ml；或40-60mg/ml，例如50mg/ml。

在一個實施方案中，本發明液體製劑包含精胺酸作為穩定劑。精胺酸在本發明液體製劑中的量可以是約50-110mM，例如，70-100mM，尤其是約80-90mM，例如約17.91mg/ml鹽酸精胺酸。

在一個實施方案中，本發明液體製劑包含山梨醇作為單一穩定劑。在此實施方案中，山梨醇在本發明液體製劑中的量可以是約30-70mg/ml、例如40-60mg/ml。例如，山梨醇可以以約30、35、40、45、50、55、60、65或70mg/ml的量存在，較佳地以約50mg/ml的量存在。

在一個實施方案中，本發明液體製劑包含山梨醇和精胺酸的組合作為穩定劑。該組合中，山梨醇可以以約10-60mg/ml，較佳地15-40mg/ml、例如20-35mg/ml的量存在，例如可以為大約20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30mg/ml。在該組合中，精胺酸可以以約70-100mM，尤其是約85mM的量存在。較佳地，本發明液體製劑包含約20-30mg/ml的山梨醇和約15-20mg/ml的鹽酸精胺酸。更較佳地，本發明液體製劑包含約25mg/ml的山梨醇和約17.91mg/ml的鹽酸精胺酸。

在一個實施方案中，本發明液體製劑包含蔗糖和精胺酸的組合作為穩定劑。該組合中，蔗糖可以以約10-60mg/ml，較佳地20-50mg/ml，例如30-40mg/ml的量存在，例如可以為大約30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50mg/ml。在該組合中，精胺酸可以以約70-100mM，尤其是約85mM的量存在。較佳地，本發明液體製劑包含約30-50mg/ml的蔗糖和約15-20mg/ml的鹽酸精胺酸。更較佳地，本發明液體製劑包含約40mg/ml的蔗糖和約17.91mg/ml的鹽酸精胺酸。

(iv)表面活性劑

如本文所使用的，術語“表面活性劑”是指具有兩親結構的有機物質；即，它們由相反的溶解性傾向的基團所組成，通常是油溶性的烴鏈和水溶性的離子基團。

在一個實施方案中，本發明的液體製劑中的表面活性劑是非離子型表面活性劑，例如，烷基聚(環氧乙烯)。可包括在本發明製劑中的特定非離子型表面活性劑包括，例如聚山梨酯，諸如聚山梨酯-20、聚山梨酯-80、聚山梨酯-60、或聚山梨酯-40；泊洛沙姆等。在一個較佳實施方案中，本發明的液體製劑中包含聚山梨酯-80作為表面活性劑。

在一些實施方案中，可以用於本發明液體製劑中的表面活性劑包括但不限於，聚山梨酯類表面活性劑(例如聚山梨酯80，聚山梨酯20)、泊洛沙姆和聚乙二醇。

本發明抗體製劑中所含的表面活性劑的量可隨製劑的特定目的特性、特定環境、和使用製劑的特定目的而改變。在較佳的一些實施方案中，製劑可含有約0.01-5mg/ml，較佳地為約0.1-1mg/ml，例如約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mg/ml的表面活性劑，尤其是聚山梨酯-80，較佳地約0.5mg/ml的聚山梨酯-80。

(v)其它賦形劑

本發明的抗體液體製劑中任選地包含其它賦形劑。該其它賦形劑包括，例如，抗微生物劑、抗靜電劑、抗氧化劑、螯合劑、明膠等等。這些和另外已知的藥物賦形劑和/或適用於本發明製劑的添加劑是本領域公知的，例如，列出於“The Handbook of Pharmaceutical Excipients，第4版，Rowe等人編，American Pharmaceuticals Association(2003)；和Remington：the Science and Practice of Pharmacy，第21版，Gennaro編，Lippincott Williams & Wilkins(2005)”。

II.製劑的製備

本發明提供了包含抗TIGIT抗體蛋白的穩定製劑。在本發明製劑中使用的抗TIGIT抗體蛋白可以使用本領域已知的用於生產抗體的技術進行製備。例如，可以重組製備抗體。在一個較佳的實施方案中，本發明的抗體在293細胞或CHO細胞中重組製備。

抗體作為藥物的活性成分的應用現在已經很廣泛。用於將治療性抗體純化至藥用級的技術是本領域公知的。例如，Tugcu等(Maximizing productivity of chromatography steps for purification of monoclonal antibodies,Biotechnology and Bioengineering 99(2008)599-613.)描述在蛋白A捕獲步驟後使用離子交換色譜(陰離子IEX和/或陽離子CEX色譜)的單株抗體三管柱純化方法。Kelley等(Weak partitioning chromatography for anion exchange purification of monoclonal antibodies、Biotechnology and Bioengineering 101(2008)553-566)描述了兩管柱純化法，其中在蛋白A親和色譜後使用弱分配陰離子交換樹脂。

一般，重組產生的單株抗體可以利用常規的純化方法純化，以提供具有足夠的可重複性和適度純度的藥物物質用於抗體製劑的配製。例如，在抗體從重組表達細胞分泌至培養基中後，可以使用商業可得的蛋白濃縮過濾器例如Amicon的超濾裝置，濃縮來自該表達系統的上清液。之後，可以使用例如色譜、透析和親和純化等方式進行抗體的純化。蛋白A適應於作為親和配體用於純化IgG1、IgG2和IgG4型抗體。也可以使用其它抗體純化方法，例如離子交換色譜。在獲得足夠純度的抗體後，可以按照本領域已知的方法，製備包含抗體的製劑。

例如，可以採用如下步驟進行製備：(1)在發酵結束後將發酵液離心澄清去除細胞等雜質以獲得上清；(2)使用親和層析(例如對IgG1、IgG2和IgG4型抗體具有特異親和力的蛋白A管柱)捕獲抗體；(3)進行病毒滅活；(4)精製純化(一般可以採用CEX陽離子交換層析)，以去除蛋白中的雜質；(5)病毒過濾(使病毒滴度降低例如4log10以上)；(6)超濾/滲濾(可以用於將蛋白置換於利於其穩定的製劑緩衝液中並濃縮至合適的濃度供注射用)。參見例如，B.Minow、P.Rogge、K.Thompson、BioProcess International、Vol.10、No.6、2012、pp.48-57。

III.製劑的分析方法

生物製品穩定性研究一般包括實際貯存條件下的實時穩定性研究(長期穩定性研究)、加速穩定性研究和強制條件試驗研究。穩定性研究應根據研究目的和產品自身特性對研究條件進行摸索和優化；針對各種影響因素(如溫度、重複凍融、振動等)，制定長期、加速和/或強制條件試驗等穩定性研究方案。加速和強制條件試驗有利於瞭解產品在短期偏離保存條件和極端情況下產品的穩定性情況，並為有效期和保存條件的確定提供支持性數據。

在抗體製劑的儲存、振盪或重複凍融過程中，抗體可能會發生聚集、降解或化學修飾，導致抗體異質性(包括大小異質性和電荷異質性)以及聚集物和片段等，從而影響抗體製劑的質量。因此，有必要進行抗體製劑穩定性的監測。

在本領域中已知多種方法可以用於檢測抗體製劑的穩定性。例如，可以藉由還原型CE-SDS、非還原型CE-SDS和SEC-HPLC等方法，分析抗體製劑的純度和評估抗體的聚集水平；可以藉由毛細管等電聚焦電泳(cIEF)、成像毛細管等電聚焦電泳(iCIEF)和離子交換色譜(IEX)等，分析抗體製劑中的電荷變異體。此外，可以藉由目視檢測製劑外觀，快速地判斷製劑的穩定性。也可以使用OD_350nm法檢測製劑的濁度改變，該方法可以給出有關可溶性和不溶性聚集物量的信息。此外，可以使用紫外分光光度法(UV法)檢測製劑中的蛋白質含量變化。

非還原型CE-SDS法是一種以毛細管為分離通道進行的抗體純度測定方法。在CE-SDS中，蛋白遷移由SDS結合引起的表面電荷來驅動，而該表面電荷與蛋白質的分子量成正比。由於所有的SDS-蛋白質複合物都具有相似的質量-電荷比，故可以在毛細管的分子篩凝膠基質中，實現基於分子的大小或流體動力學半徑的電泳分離。該方法已經被廣泛地用於監測變性的完整抗體的純度。一般，在非還原型CE-SDS法中，供試樣品與SDS樣品緩衝液和碘乙醯胺混合。之後，混合物可以於68-72℃孵育約10-15分鐘，冷卻至室溫後離心的上清液用於分析。採用紫外檢測器檢測蛋白的遷移，獲得電泳譜圖。抗體製劑純度可以計算為IgG主峰的峰面積占所有峰面積之和的百分比。關於CE-SDS法的進一步描述，可以參見例如Richard R.等，Application of CE SDS gel in development of biopharmaceutical antibody-based products,Electrophoresis,2008,29,3612-3620。

體積排阻高效液相色譜法，即SEC-HPLC法，是用於抗體標準和質控的另一重要方法。該方法主要依據分子的尺寸大小或流體動力學半徑差異來進行分子的分離。藉由SEC-HPLC，抗體可以分離出三種主要形式：高分子量形式(HMMS)、主峰(主要是抗體單體)、和低分子量形式(LMMS)。抗體純度可以計算為色譜圖上主峰面積占所有峰面積之和的百分比。藉由SEC-HPLC法，可以測量製劑產品中抗體單體的百分數，給出可溶性聚集物和剪切物的含量信息。關於SEC-HPLC法的進一步描述，可以參見例如，J.Pharm.Scien.,83：1645-1650,(1994)；Pharm.Res.,11：485(1994)；J.Pharm.Bio.Anal.,15：1928(1997)；J.Pharm.Bio.Anal.,14：1133-1140(1986)。此外，也可以參見例如，R.Yang等，High resolution separation of recombinant monoclonal antibodies by size exclusion ultra-high performance liquid chromatography(SE-UHPLC),Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis(2015),http：//dx.doi.org/10.1016/j.jpba.2015.02.032；和Alexandre Goyon等,Protocols for the analytical characterization of therapeutic monoclonal antibodies.I- Non-denaturing chromatographic techniques,Journal of Chromatography，http：//dx.doi.org/10.1016/j.jchromb.2017.05.010。

可以藉由陽離子交換高效液相色譜法(CEX-HPLC)測定抗體製劑中抗體的電荷變異體。在該測定法中，以比主峰(或主成分)的保留時間更早從CEX-HPLC管柱沖提出的峰被標記為“酸性峰”(或酸性組分)，而那些以比主峰的保留時間更晚從CEX-HPLC管柱沖提出的峰被標記為“鹼性峰”(或鹼性組分)。

加速穩定性研究可以用於檢查產品的穩定性性質，有利於篩選穩定藥物製劑形式。例如，可以將製劑樣品放置於升高的溫度，例如約40℃±2℃、25℃±2℃條件下進行加速穩定性研究。此外，可以進行振盪實驗或重複凍融實驗來檢測產品的穩定性性質。例如，在室溫避光650r/min振盪1-5天，進行振盪實驗。例如，可以將在-30℃以下凍存產品一天後室溫融化作為一個凍融循環，進行重複凍融實驗，其中可以實施1-6次重複凍融循環。產品穩定性的檢測指標可以包括外觀、可見異物、蛋白含量、濁度、純度(SEC-HPLC法、非還原型CE-SDS法)和電荷變異體(iCIEF法、CEX-HPLC法)。此外，可以檢測抗體的功效或生物活性。例如，可以檢測製劑中抗體與其抗原分子(TIGIT)的結合能力。本領域技術人員已知多種方法可以用於定量抗體與抗原的特異性結合，例如免疫測定試驗，ELISA等。

IV.製劑的用途

本發明的包含抗TIGIT抗體蛋白的本發明抗體製劑具有減少免疫抑制，並能夠用於治療或預防腫瘤、病原體感染等。

在一個實施方案中，本發明製劑可以用於在受試者中阻斷TIGIT與CD155的結合以降低或消除TIGIT的免疫抑制作用。在另一實施方案中，本發明製劑可以用於在受試者中治療或預防腫瘤、病原體感染。該腫瘤例如是胃腸道癌症，例如結腸癌。

在一個實施方案中，本發明製劑可以與第二治療劑，例如抗PD-1抗體組合施用。

本發明也提供了本發明的製劑在製備藥物中的用途，其中該藥物用於向哺乳動物遞送抗TIGIT抗體蛋白。本發明還提供了本發明的製劑用於治療或預防一種或多種上述疾病和病症的方法。較佳地，哺乳動物是人。

可以以多種途徑將本發明的抗體製劑施用於受試者或患者。例如，施用可以藉由輸注或藉由注射器進行。因此，在一個方面，本發明提供了一種遞送裝置(例如注射器)，其包含本發明的抗體製劑(例如，預填裝注射器)。患者將接受有效量的抗TIGIT抗體蛋白作為主要活性成分，即足以治療、改善或預防目的疾病或病症的量。

治療效果可包括減少生理症狀。用於任何特定受試者的抗體的最佳有效量和濃度將取決於多種因素，包括患者的年齡、體重、健康狀況和/或性別、疾病的性質和程度、特定抗體的活性，身體對其清除率，並且也包括與該抗體製劑組合施用的任何可能的其它治療。對於具體的情況，所遞送的有效量可以在臨床醫師的判斷範圍內來確定。

描述以下實施例以輔助對本發明的理解。不意在且不應當以任何方式將實施例解釋成限制本發明的保護範圍。

縮略詞描述

實施例

重組全人源抗TIGIT單株抗體ADI-30278，是信達生物製藥(蘇州)有限公司自主研發的抗體，在PCT申請號PCT/CN2019/097665中公開。該抗體能夠有效地阻斷TIGIT與其配體CD155的結合，解除CD155對下游IL2信號通路的抑制作用，並且在體內施用時抑制腫瘤生長，尤其是在與抗PD-1抗體聯用時，抑瘤效果尤為顯著。

為了開發出適用於該全人源抗體的長期穩定儲存且簡單易用的注射劑製劑處方，藉由40℃強制和25℃加速穩定性實驗，考察了不同 pH值、不同穩定劑及表面活性劑的含量對於該抗體蛋白質量的影響，最終篩選出有利於其穩定的製劑處方。整個研究過程中所用的材料和方法如下：

材料和方法

1.1.本發明的製劑研究中使用的材料

注：N/A表示不適用。

1.2.本發明的製劑研究中使用的儀器設備

1.3.製劑穩定性的檢測項目和檢測方法

整個研究過程中檢測項目主要包括：(1)檢測外觀以及是否存在可見異物；(2)藉由紫外法(UV法)測定製劑中的蛋白質含量；(3)藉由OD350nm法檢測製劑的濁度；(4)藉由體積排阻高效液相色譜法(SEC-HPLC)測定抗體製劑的純度，表示為主峰的面積占所有峰面積之和的百分數；(5)藉由非還原型十二烷基硫酸鈉毛細管電泳(非還原型CE-SDS)測定抗體製劑的純度，表示為主峰的面積占所有峰面積之和的百分數；(6)藉由CEX-HPLC法測定抗體製劑中電荷變異體，表示為主成分、酸性組分和鹼性組分的百分數；(7)藉由直接ELISA法測定抗體製劑中抗TIGIT抗體對TIGIT抗原的相對結合活性。

可見異物檢測

按照國家藥典委員會，中華人民共和國藥典(2015年版，四部通則0904“可見異物檢查法”，北京：中國醫藥科技出版社.2015)中所記載的方法，採用澄明度檢測儀(天津天大天發生產，型號YB-2)和不溶性微粒檢測儀(天津天大天發生產，型號GWJ-8)，檢查樣品中的可見異物。

蛋白含量測定

使用紫外分光光度計(日本島津生產，型號UV-1800)或多通道微量分光光度計(美國Thermo生產，型號Nanodrop 8000)，測定樣品中的蛋白質含量。

濁度測定

使用紫外分光光度計(日本島津生產，型號UV-1800)，測定樣品在350nm的吸光度，確定樣品濁度。

純度(SEC-HPLC法)

使用體積排阻色譜管柱分離，流動相為磷酸鹽緩衝液(稱取3.12g二水合磷酸二氫鈉，8.77g氯化鈉和34.84g精胺酸，超純水溶解後用鹽酸調節pH至6.8並定容至1000ml)，色譜管柱保護液為0.05%(w/v)NaN₃，進樣量50μl，流速0.5ml/分鐘，採集時間30分鐘，管柱溫25℃，檢測波長280nm。取待測樣品用超純水稀釋至2mg/ml，作為供試品溶液。取製劑緩衝液用上述相同處理方式稀釋後做為空白溶液。取空白溶液、供試品溶液各50μl注入液相色譜儀，開始檢測。

純度(非還原型CE-SDS法)

採用毛細管凝膠電泳法檢測。毛細管為無塗層毛細管，內徑50μm，總長30.2cm，有效長度20.2cm。電泳前分別使用0.1mol/L氫氧化鈉、0.1mol/L鹽酸、超純水、電泳膠70psi沖洗毛細管管柱。將待測樣品用適量超純水稀釋至2.0mg/ml，取以上稀釋後的樣品50μl於1.5ml離心管中，分別向其中加入45μl pH 6.5的樣品緩衝液(稱取一水檸檬酸0.32g，十二水合磷酸氫二鈉2.45g，溶於45ml超純水中，定容至50ml，製得檸檬酸-磷酸鹽緩衝液，精密量取該緩衝液200μl，加10%(w/v)十二烷基硫酸鈉溶液80μl，加水至1ml，混勻，即得)、1μl內標(10kDa蛋白質，5mg/mL)(Beckman Coulter，貨號：390953)和5μl 250mmol/L NEM溶液(稱取N-乙基順丁烯二醯亞胺62mg，溶於2ml超純水中)，充分混勻後70±2℃加熱10±2分鐘，冷卻至室溫後轉移至樣品瓶作為供試品溶液。取與供試品相同體積的製劑緩衝液，按上述方法同樣操作，製得空白溶液。樣品進樣條件：-5kV 20秒；分離電壓：-15kV 35分鐘。毛細管管柱溫控制在25℃，檢測波長為220nm。

電荷變異體(CEX-HPLC法)

採用陽離子交換色譜法(CEX-HPLC法)檢測。使用MabPac SCX-10強陽離子交換色譜管柱分離，流動相A為10mmol/L磷酸鹽緩衝液(稱取NaH2PO4．2H2O 0.51g，Na2HPO4．12H2O 2.40g溶解於800ml超純水中，定容到1000ml，使用Φ0.22μm濾膜過濾)，流動相B為10mmol/L磷酸鹽+200mmol/L氯化鈉緩衝液(稱取NaH2PO4．2H2O 0.51g，Na2HPO4．12H2O 2.40g，NaCl 11.69g溶解於800ml超純水中，定容到1000ml，使用Φ0.22μm濾膜過濾)。用超純水將樣品稀釋至2.0mg/ml，作為供試品溶液。取製劑緩衝液用上述相同處理方式稀釋後作為空白溶液。取空白溶液、供試品溶液各50μl注入液相色譜儀，流動相流速1.0ml/min，採集時間35分鐘，管柱溫35℃，檢測波長280nm，樣品盤溫度10℃。進樣分析，根據面積歸一化法，計算主成分、酸性組分及鹼性組分含量。

相對結合活性(直接ELISA法)

用人TIGIT抗原(購自Acrobiosystems，TIT-H52H3)以0.5μg/ml，100μl/孔，4℃過夜包被96孔酶標板。洗板後加封閉液(2% BSA-PBST，300μl/孔)37℃封閉2h。將梯度稀釋的供試品以100μl/孔加入到棄去封閉液的酶標板中，設置陰性對照每孔只加100μl稀釋液(2% BSA-PBST)，37℃恆溫培養箱中孵育60min。洗板後加入以2% BSA-PBST稀釋的HRP綴合山羊抗人IgG-Fc片段(美國BETHYL，貨號A80- 104P)作為二抗(100000倍稀釋，100μl/孔)，37℃反應30min。洗板後每孔加入100μl TMB顯色液，顯色10min後，每孔加入100μl的1mol/L H₂SO₄終止反應。以620nm為對照波長，測450nm處的OD值。以各濃度梯度樣品的濃度值作為橫坐標，各梯度樣品的OD450nm-OD620nm值為縱坐標，應用Prism四參數擬合計算EC₅₀反映抗體與各抗原的結合活性。相對結合活性(%)=(供試品的EC₅₀/對照品的EC₅₀)＊100%，其中該對照品為未經任何脅迫處理的穩定的抗TIGIT抗體。

實施例1. 製備和純化抗TIGIT抗體

根據PCT申請號PCT/CN2019/097665該，獲得特異性結合TIGIT的抗TIGIT抗體ADI-30278。該抗體具有SEQ ID NO：9的重鏈序列和SEQ ID NO：10的輕鏈序列，為全人源抗體。PCT申請號PCT/CN2019/097665在此整體併入本文作為參考。

簡言之，抗體在CHO細胞中重組表達並藉由過濾、層析、病毒滅活、過濾等工藝進行純化。用於以下pH篩選試驗的樣品為經親和層析純化的產品，具有17.0mg/ml的蛋白含量。用於以下處方確定試驗的樣品為經納濾膜過濾純化的產品，具有11.5mg/ml的蛋白含量。

實施例2. pH篩選試驗

2.1 實驗步驟

本實施例考察pH 5.0、5.5、6.0、6.5和7.0的組胺酸緩衝體系對實施例1的經純化的抗TIGIT抗體穩定性的影響，以獲得較優的pH值範圍。

配製10mM組胺酸，5%(w/v)山梨醇緩衝液，用鹽酸將pH分別調節為5.0、5.5、6.0、6.5和7.0，將實施例1的經純化的抗TIGIT抗體超濾置換到上述不同pH值的緩衝液中，調節蛋白含量至約20mg/ml；加入聚山梨酯80至0.20mg/ml；過濾分裝至西林瓶，加塞，軋蓋。將上述樣品於40℃±2℃條件下進行穩定性考察，具體實驗方案見表1。

註：(1)X表示該點取樣。(2)上述時間點取樣後均先放入超低溫冰箱中凍存待檢。

2.2 判斷標準

根據對產品的認識以及儀器和方法的精密度，設定了樣品檢測指標數值與初始值相比質量未發生變化的判斷標準，用以判斷樣品是否發生了變化，判斷標準見表2。

2.3 實驗結果

(1)外觀和可見異物

pH 6.5和pH 7.0樣品在濃縮換液結束後，樣品外觀出現渾濁、有沉澱，故不進行加速穩定性考察。pH 5.0、pH 5.5和pH 6.0樣品在40℃±2℃條件下放置2週，外觀、可見異物均合格。

(2)蛋白含量

蛋白含量檢測結果見表3。結果表明，在40℃±2℃條件下放置2週，pH 5.0、pH 5.5和pH 6.0樣品蛋白含量均未發生顯著變化。

(3)濁度

濁度結果見表4。結果表明，在40℃±2℃條件下放置2週，樣品pH 5.0和pH 5.5濁度未發生變化；樣品pH 6.0的濁度有一定的上升趨勢。

(4)純度

純度(SEC-HPLC法和非還原型CE-SDS法)結果見表5。結果表明，在40℃±2℃條件下放置2週，pH 5.0、pH 5.5和pH 6.0樣品純度均未發生明顯變化。

(5)電荷變異體

電荷變異體(CEX-HPLC法)結果見表6，其變化趨勢見圖1和圖2。結果表明，在40℃±2℃條件下放置2週，pH 5.0、pH 5.5和pH 6.0樣品主成分和酸性組分均發生明顯變化。與0天比較，pH 5.0、pH 5.5和pH 6.0樣品主成分分別下降4.8%、4.4%和7.2%，酸性組分分別上升3.6%、4.3%和7.4%，綜上所述，從電荷變異體檢測結果分析，抗體蛋白在pH 5.0和pH 5.5條件下更為穩定。

綜上所述，pH篩選實驗結果表明，抗體製劑處方組胺酸緩衝體系的pH在5.0~5.5之間較為合適。選定pH 5.2，進行下一輪處方確定實驗。

實施例3. 處方確定實驗

3.1 實驗步驟

根據上述pH篩選實驗結果並結合製劑處方開發平臺經驗，考察不同穩定劑(山梨醇、蔗糖和鹽酸精胺酸)以及聚山梨酯80含量對抗體蛋白穩定性的影響，共設計了3個處方，詳細處方信息見表7。

按照表7配製各個處方的緩衝液，將抗體蛋白超濾置換至各自的處方溶液中。置換完成後，調節各處方蛋白含量至約50mg/ml；加入聚山梨酯80。過濾分裝至西林瓶中，加塞，軋蓋。將上述樣品進行振盪、凍融和不同溫度條件下的穩定性考察。具體方案見表8。

註：“*”表示設置該點考察，但未檢測。

3.2 判斷標準

判斷標準具體參見實施例2中的表2。

3.3 實驗結果

(1)振盪實驗

振盪實驗結果詳見表9。結果表明，在室溫、避光650r/min條件下振盪5天，3組處方樣品外觀、可見異物均合格；蛋白含量、純度、電荷變異體和相對結合活性均未發生明顯變化。

註：N/A表示未設置該項檢測。

(2)凍融實驗

凍融實驗結果詳見表10。重複凍融6次後，3組處方樣品外觀、可見異物均合格；蛋白含量、純度、電荷變異體和相對結合活性均未發生明顯變化。

上述實驗結果表明，在振盪和凍融實驗中處方1、2和3穩定性無明顯差異。

考慮到抗體給藥方式採用靜脈輸注，樣品由生理鹽水稀釋後，聚山梨酯80含量過低會影響蛋白穩定性。另外，鑒於山梨醇和蔗糖對蛋白的保護作用無差異，選擇非還原型的山梨醇，可降低在長期存放過程中輔料之間發生糖化反應的風險，因此選擇處方2在40℃和25℃條件開展穩定性確認實驗。

(3)40℃穩定性確認實驗

40℃穩定性確認實驗結果詳見表11。在40℃條件下放置1個月，樣品外觀、可見異物均合格。蛋白含量、純度和相對結合活性均未發生明顯變化；電荷變異體變化較明顯，主成分下降13.5%，酸性組分上升8.4%，鹼性組分上升5.1%，其變化趨勢見圖3。結合製劑處方開發平臺經驗，此電荷變異體變化在可接受範圍之內。

註：N/A表示未設置該項檢測。

(4)25℃穩定性確認實驗

25℃穩定性確認實驗結果詳見表12。在25℃條件下放置2個月，樣品外觀、可見異物均合格。蛋白含量和純度均未發生明顯變化；電荷變異體變化較明顯，主成分下降6.4%，酸性組分上升3.6%，鹼性組分上升2.9%，其變化趨勢見圖5。結合製劑處方開發平臺經驗，此電荷變異體變化在可接受範圍之內。

根據上述實驗結果及製劑處方開發平臺經驗，最終選定處方2為抗體製劑處方。其組成為：50.0mg/ml重組全人源抗TIGIT抗體、0.21mg/ml組胺酸、1.81mg/ml鹽酸組胺酸、25.00mg/ml山梨醇、17.91mg/ml鹽酸精胺酸、0.50mg/ml聚山梨酯80，pH 5.2。

以上描述了本發明的示例性實施方案，本領域技術人員應當理解的是，這些公開內容僅是示例性的，在本發明的範圍內可以進行各種其它替換、適應和修改。因此，本發明不限於文中列舉的具體實施方案。

Claims

一種液體抗體製劑，包含

(i)抗TIGIT抗體蛋白；

(ii)緩衝劑，

(iii)穩定劑，和

(iv)表面活性劑，

其中該抗TIGIT抗體蛋白包含

- YTFTEYYMH(SEQ ID NO：1)的重鏈VH CDR1；

- IISPSAGSTKYAQKFQG(SEQ ID NO：2)的重鏈VH CDR2；

- ARDHDIRLAGRLADY(SEQ ID NO：3)的重鏈VH CDR3；

- RASQGISSWLA(SEQ ID NO：4)的輕鏈VL CDR1；

- AASSLQS(SEQ ID NO：5)的輕鏈VL CDR2；和

- QQAVILPIT(SEQ ID NO：6)的輕鏈VL CDR3，

較佳地，該液體抗體製劑的pH約為5.0-6.0，例如，pH為5.2±0.2或5.5±0.2，較佳地pH為5.2。
如請求項1所述的液體抗體製劑，其中，該液體抗體製劑中的抗TIGIT抗體蛋白的濃度為約1-100mg/ml，較佳地為約10-70mg/mL，例如約10、15、20、25、30、35、40、50、55、60、70mg/ml。
如請求項1或2所述的液體抗體製劑，其中，

該液體抗體製劑包含選自組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝體系，枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩衝體系，醋酸-醋酸鈉緩衝體系，和磷酸鹽緩衝體系的緩衝劑，

較佳地，該液體抗體製劑中的緩衝劑選自組胺酸、鹽酸組胺酸和它們的組合；

較佳地，該緩衝劑的濃度為約5-50mM，較佳地為約5-30mM，例如，約5、10、15、20、25、30mM。
如請求項1至3中任何一項所述的液體抗體製劑，其中，該穩定劑選自多元醇(例如，山梨醇、甘露醇及其組合)、糖類(例如，蔗糖、海藻糖、麥芽糖及其組合)、胺基酸(例如精胺酸、鹽酸精胺酸、甲硫胺酸、甘胺酸、脯胺酸及組合)、和它們的任意組合，

例如，該穩定劑包含選自以下之一或多項：

-選自山梨醇、甘露醇、或其組合的多元醇；

-選自蔗糖、海藻糖、麥芽糖、或其組合的糖類；

-選自鹽酸精胺酸、甲硫胺酸、甘胺酸、脯胺酸及組合的胺基酸。
如請求項1至4中任何一項所述的液體抗體製劑，其中，該穩定劑選自：

(i)約20-40mg/ml的山梨醇和約50-100mM的精胺酸的組合，或

(ii)約30-60mg/ml的蔗糖和約50-100mM的精胺酸的組合。
如請求項1至4中任何一項所述的液體抗體製劑，其中，該液體抗體製劑中的表面活性劑選自聚山梨酯類表面活性劑、泊洛沙姆、聚乙二醇或其組合，較佳為聚山梨酯-80。
如請求項1至5中任何一項所述的液體抗體製劑，其中，該表面活性劑的濃度為約0.1-1mg/ml，較佳地為約0.2-0.8mg/ml，例如約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mg/ml。
如請求項1至7中任何一項所述的液體抗體製劑，其中，該抗TIGIT抗體包含重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL，其中重鏈可變區包含SEQ ID NO：7的序列或與其具有至少90%、95%、98%或99%同一性的序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8的序列或與其具有至少90%、95%、98%或99%同一性的序列。
如請求項1至8中任何一項所述的液體抗體製劑，其中，該抗TIGIT抗体是IgG型抗體(例如，IgG4亚型抗体)，較佳地包含SEQ ID NO：9或與之具有至少90%、95%、98%或99%同一性的重鏈序列以及SEQ ID NO：10或與之具有至少90%、95%、98%或99%同一性的輕鏈序列。
如請求項1至9中任何一項所述的液體抗體製劑，其中，該抗TIGIT抗體在293細胞或CHO細胞中重組表達。
如請求項1至10中任何一項所述的液體抗體製劑，其中，該液體製劑為注射劑，較佳用於皮下注射或靜脈內注射，或者為輸注劑，例如用於靜脈內輸注。
如請求項1至11中任一項所述的液體抗體製劑，其包含：

(i)約10-100mg/ml的抗TIGIT抗體蛋白；

(ii)約5-50mM的組胺酸緩衝劑；

(iii)約50-300mM的山梨醇或蔗糖；

(iv)約0.1-1mg/ml聚山梨酯80；和

(v)任選地，約50-120mM的精胺酸，

其中該液體製劑的pH為約5.0-5.5，例如，約5.2；

例如，該液體抗體製劑包含

(i)約10-60mg/ml，例如20-50mg/ml的抗TIGIT抗體蛋白；

(ii)約10mM的組胺酸緩衝劑；

(iii)約10-50mg/ml山梨醇或蔗糖，較佳20-30mg/ml山梨醇，或30-50mg/ml蔗糖；

(iv)約0.2-0.8mg/ml，例如0.3-0.6mg/ml聚山梨酯80；和

(v)約60-100mM，例如約85mM的精胺酸，

其中該液體製劑的pH為約5.0-5.5，例如，約5.2；

或者，該液體抗體製劑包含

(i)約50mg/ml的抗TIGIT抗體蛋白，約0.21mg/ml組胺酸，約1.81mg/ml鹽酸組胺酸，約25.00mg/ml山梨醇，約17.91mg/ml鹽酸精胺酸，約0.50mg/ml聚山梨酯80，pH約5.2；或

(ii)約50mg/ml的抗TIGIT抗體蛋白，約0.21mg/ml組胺酸，約1.81mg/ml鹽酸組胺酸，約25.00mg/ml山梨醇，約17.91mg/ml鹽酸精胺酸，約0.20mg/ml聚山梨酯80，pH約5.2；或

(iii)0.21mg/ml組胺酸，1.81mg/ml鹽酸組胺酸，40.00mg/ml蔗糖，17.91mg/ml鹽酸精胺酸，0.20mg/ml聚山梨酯80，pH 5.2。
如請求項1至12中任何一項所述的液體抗體製劑，其其中，該製劑在儲存後，例如在25℃儲存至少2個月後，或在40℃±2℃儲存1個月後，是穩定的，較佳地具有如下特徵之一或多項：

(i)藉由SEC-HPLC法測量，主峰變化值小於1%，和/或製劑具有大於96%的純度，較佳大於97%、98%的純度；

(ii)藉由非還原型CE-SDS法測量，主峰變化值小於2%，和/或製劑具有大於96%的純度，較佳大於97%、98%的純度；

(iii)藉由CEX-HPLC法測量，相對於儲存第0天的初始值，製劑中抗TIGIT抗體蛋白的各組分(主成分、酸性組分和鹼性組分)的變化值總和不超過40%和/或主成分的變化值不超過20%，例如在40℃±2℃儲存1個月後變化值總和不超過約40%(例如不超過30%)或主成分變化值不超過約20%(例如不超過15%)，或在25℃儲存2個月後變化值總和不超過約20%(例如約15%)或主成分變化值不超過約15%(例如不超過約10%)；

(iv)藉由ELISA法測量，相對於儲存第0天的初始值，製劑中抗TIGIT抗體蛋白的相對結合活性為70%-130%，例如，90%-110%；

更佳地，該製劑在振盪和/或重複凍融下是穩定的。
一種固體抗體製劑，其藉由固化如請求項1至13中任何一項所述的液體抗體製劑而獲得，該固體抗體製劑例如是凍乾粉針劑形式。
一種遞送裝置，其包含如請求項1至13中任何一項所述的液體抗體製劑或如請求項14所述的固體抗體製劑。
一種預填裝注射器，其包含如請求項1至13中任何一項所述的液體抗體製劑或如請求項14所述的固體抗體製劑，用於靜脈內注射或者肌內注射。
一種如請求項1至13中任何一項所述的液體抗體製劑或如請求項14所述的固體抗體製劑的用途，用於製備在受試者中阻斷TIGIT與CD155的結合以降低或消除TIGIT的免疫抑制作用的遞送裝置或預填裝注射器或藥物。
一種如請求項1至13中任何一項所述的液體抗體製劑或如請求項14所述的固體抗體製劑的用途，用於製備在受試者中治療或預防腫瘤、病原體感染的遞送裝置或預填裝注射器或藥物，例如，該腫瘤是胃腸道癌症，例如結腸癌。
如請求項17或18所述的用途，其中該抗TIGIT抗體與第二治療劑，例如抗PD-1抗體組合施用。