TW202120506A

TW202120506A - 作為dna-pk抑制劑的嘧啶并吡咯類化合物

Info

Publication number: TW202120506A
Application number: TW109141226A
Authority: TW
Inventors: 新海陳; 夏尚華; 陳兆國; 郭祖浩; 于衍新; 周凱; 胡伯羽; 張麗; 姜奮; 王晶晶; 胡國平; 健黎; 曙輝陳
Original assignee: 大陸商南京明德新藥研發有限公司
Priority date: 2019-11-25
Filing date: 2020-11-25
Publication date: 2021-06-01
Also published as: JP7383818B2; CN114728969A; CA3159290A1; TWI807228B; AU2020390962B2; KR20220106799A; AU2020390962A1; EP4067359A4; EP4067359A1; CN114728969B; IL293318A; WO2021104277A1; JP2023504021A; US20230026616A1

Abstract

本發明公開了一類DNA-PK抑制劑，具體公開了式（IV）所示化合物或其藥學上可接受的鹽，及其在製備DNA-PK抑制劑相關藥物中的應用。

Description

作為DNA-PK抑制劑的嘧啶并吡咯類化合物

本發明涉及DNA-PK抑制劑，具體涉及式（IV）所示化合物或其藥學上可接受的鹽，及其在製備DNA-PK抑制劑相關藥物中的應用。

本發明主張如下優先權： CN201911164961.5，申請日2019年11月25日； CN202010209352.3，申請日2020年03月23日； CN202010911879.0，申請日2020年09月02日； CN202011269768.0，申請日2020年11月13日。

DNA斷裂尤其是雙鏈斷裂（DSBs）是一種極為嚴重的損傷，會造成遺傳物質的丟失、基因重組，從而導致癌症或細胞死亡。真核細胞進化出了多種機制來應對DNA雙鏈斷裂造成的嚴重威脅，這便是DNA損傷應答機制（DDR），主要包括DNA損傷的檢測、信號傳導以及損傷修復。DNA雙鏈斷裂修復主要包括同源末端連接（HR）修復和非同源末端連接（NHEJ）修復。在高等真核生物中，主要以優先地在早期G1/S期期間使用的NHEJ修復為主要機制。DDR初期損傷因子如MRN等會檢測識別損傷位點，募集膦酯醯肌醇激酶家族成員（ATM、ATR、DNA-PK），磷酸化H2AX促進γH2AX形成，引導下游信號傳導並募集相關蛋白完成受損DNA的修復。

DNA依賴性蛋白激酶催化亞單位(DNA-PK catalytic subunit, DNA-PKcs)，屬於磷酸肌醇-3-激酶相關蛋白(PI3K-related kinase，PIKK)家族，主要針對DNA雙鏈斷裂的非同源末端連接(NHEJ)修復，是DNA損傷修復的重要成員。DNA雙鏈損傷修復時，Ku70/Ku80異源二聚體通過一個預先形成的通道特異性地連接到雙鏈損傷處，識別雙鏈斷裂並與斷裂端分別結合，然後以ATP依賴的方式沿DNA鏈分別向兩端滑動一段距離，形成KU-DNA複合物並招募DNA-PKcs到雙鏈斷裂處與之結合，隨後Ku二聚體向內移動，激活DNA-PKcs並使其自身磷酸化，最後，磷酸化的DNA-PKcs引導損傷信號傳導並招募DNA末端加工相關蛋白如PNKP, XRCC4, XLF, Pol X和DNA連接酶IV等參與完成雙鏈斷裂修復。

目前，腫瘤治療中常用的DNA損傷性化療藥物（如博來黴素，拓撲異構酶II抑制劑如依託泊苷和多柔比星）和放療發揮作用的主要機制就是造成DNA分子的致死性的雙鏈斷裂，進而誘導腫瘤細胞的死亡。研究表明，經過放化療治療的腫瘤組織中均發現DNA-PK的高表達，而DNA-PKcs活性的增加在一定程度上增強了受損DNA的修復，阻止了腫瘤細胞死亡，導致了對放化療產生耐受。此外，放化療治療後腫瘤組織中存活的細胞往往是對治療不敏感的高DNA-PKcs活性細胞，這也是療效不好和預後差的原因。通過與放化療藥物聯用，DNA-PK抑制劑可以抑制DNA-PKcs活性，從而大大減少腫瘤DNA修復，誘導細胞進入凋亡程序，達到更佳的治療效果。

ATM在同源末端鏈接（HR）修復中起到重要作用，當腫瘤細胞因缺陷缺乏ATM時，DNA斷裂修復會更加依賴於DNA-PKcs主導的NHEJ修復以使其存活。因此，DNA-PK抑制劑同樣可以作為單一藥物在具有其他DNA修復途徑缺陷時的腫瘤中發揮治療效果。

本發明旨在發現一種DNA-PK小分子抑制劑，不僅可以作為單一藥物在具有其他DNA修復途徑缺陷時的腫瘤中發揮治療效果。也可以通過與放化療藥物聯用，增強腫瘤組織對放化療的敏感性，克服耐藥問題，增強對多種實體瘤和血液瘤的抑制作用。此類化合物具有良好的活性，並表現出了優異的效果和作用，具有廣闊的前景。

本發明提供了式（IV）所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，結構單元

選自

、

、

、

和

； E₁ 選自單鍵、-O-和-C(R₆ R₇ )-； R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R’和R’’各自獨立地選自H、F和Cl；或者R₁ 與R₂ 連接在一起使結構單元

選自

、

和

；或者R₃ 與R₄ 連接在一起使結構單元

選自

；或者R₁ 與R₄ 連接在一起使結構單元

選自

；或者R₂ 、R’’與它們共同連接的碳原子一起形成C_3-5 環烷基； R₅ 選自F、Cl、Br、I、環丙基和C_1-3 烷基，所述C_1-3 烷基任選被OH或1、2或3個R_a 取代； R₆ 和R₇ 各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I和CN；或者R₆ 、R₇ 與它們共同連接的碳原子一起形成環丙基或4元氧雜環丁基；環A選自C_3-5 環烷基； Y₁ 選自環丙基和C_1-3 烷基，所述C_1-3 烷基任選被1、2、3、4 或5個F取代; R_a 選自H、F、Cl、Br和I。

本發明提供了式（III）所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，結構單元

選自

、

和

選自

、

和

；或者R₃ 與R₄ 連接在一起使結構單元

選自

；或者R₁ 與R₄ 連接在一起使結構單元

選自

；或者R₂ 、R’’與它們共同連接的碳原子一起形成C_3-5 環烷基； R₅ 選自F、Cl、Br、I、環丙基和C_1-3 烷基，所述C_1-3 烷基任選被OH或1、2或3個R_a 取代； R₆ 和R₇ 各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I和CN；或者R₆ 、R₇ 與它們共同連接的碳原子一起形成環丙基或4元氧雜環丁基；環A選自C_3-5 環烷基； R_a 選自H、F、Cl、Br和I。

本發明提供了式（II）所示化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中， E₁ 選自單鍵、-O-和-C(R₆ R₇ )-； R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R’和R’’各自獨立地選自H、F和Cl；或者R₁ 與R₂ 連接在一起使結構單元

選自

、

和

；或者R₃ 與R₄ 連接在一起使結構單元

選自

；或者R₁ 與R₄ 連接在一起使結構單元

選自

；或者R₂ 、R’’與它們共同連接的碳原子一起形成C_3-5 環烷基； R₅ 選自F、Cl、Br、I、環丙基和C_1-3 烷基，所述C_1-3 烷基任選被OH或1、2或3個R_a 取代； R₆ 和R₇ 各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I和CN；或者R₆ 、R₇ 與它們共同連接的碳原子一起形成環丙基或4元氧雜環丁基；環A選自C_3-5 環烷基； R_a 選自H、F、Cl、Br、I。

本發明提供了式（I）所示化合物或其藥學上可接受的鹽

其中， R₁ 、R₂ 、R₃ 和R₄ 各自獨立地選自H、F和Cl；或者R₁ 與R₂ 連接在一起使結構單元

為

；或者R₃ 與R₄ 連接在一起使結構單元

為

； R₅ 選自F、Cl、Br、I、環丙基和C_1-3 烷基，所述C_1-3 烷基任選被OH或1、2或3個R_a 取代； R_a 選自H、F、Cl、Br、I。

本發明的一些方案中，上述化合物選自

和

其中，環B選自C_3-5 環烷基；環C為環丙基或4元氧雜環丁基； n選自0和1；環A、R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₅ 、R₆ 和R₇ 如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述化合物選自

其中，R₅ 如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₁ 與R₂ 連接在一起使結構單元

選自

、

、

和

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₃ 與R₄ 連接在一起使結構單元

選自

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₁ 與R₄ 連接在一起使結構單元

選自

和

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述環A選自

和

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₆ 、R₇ 與它們共同連接的碳原子一起形成

或

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₂ 、R’’與它們共同連接的碳原子一起形成

或

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₁ 與R₂ 連接在一起使結構單元

為

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₃ 與R₄ 連接在一起使結構單元

為

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述結構單元

選自

、

和

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₅ 選自F、Cl、CH₂ OH、CF₃ 和CH₃ ，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₅ 選自F、Cl和CH₃ ，其他變量如本發明所定義。

本發明還有一些方案由上述變量任意組合而來。

本發明還提供了下式化合物或其藥學上可接受的鹽

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

和

。

本發明的一些方案中，上述化合物或其藥學上可接受的鹽在製備DNA-PK抑制劑相關藥物上的應用。

本發明的一些方案中，上述DNA-PK抑制劑相關藥物作為單一藥物在具有其他DNA修復途徑缺陷時的腫瘤中發揮治療效果。

本發明的一些方案中，上述DNA-PK抑制劑相關藥物通過與放化療藥物聯用，增強對實體瘤和血液瘤的抑制作用。

技術效果

本發明化合物作為一類DNA-PK抑制劑，展示了顯著的DNA-PK激酶抑制活性。PK結果顯示，本發明化合物具有較長的半衰期、較低的清除率和較高的藥物暴露量，藥代動力學性質優良，是很好的可開發口服給藥的分子。體內藥效結果顯示，本發明化合物具有顯著的抑瘤作用。

定義和說明

除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。

這裡所採用的術語“藥學上可接受的”，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。

術語“藥學上可接受的鹽”是指本發明化合物的鹽，由本發明發現的具有特定取代基的化合物與相對無毒的酸或鹼製備。當本發明的化合物中含有相對酸性的功能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的鹼與這類化合物接觸的方式獲得鹼加成鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機胺或鎂鹽或類似的鹽。當本發明的化合物中含有相對鹼性的官能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的酸與這類化合物接觸的方式獲得酸加成鹽。藥學上可接受的酸加成鹽的實例包括無機酸鹽，所述無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氫根，磷酸、磷酸一氫根、磷酸二氫根、硫酸、硫酸氫根、氫碘酸、亞磷酸等；以及有機酸鹽，所述有機酸包括如乙酸、丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸和甲磺酸等類似的酸；還包括氨基酸（如精氨酸等）的鹽，以及如葡糖醛酸等有機酸的鹽。本發明的某些特定的化合物含有鹼性和酸性的官能團，從而可以被轉換成任一鹼或酸加成鹽。

本發明的藥學上可接受的鹽可由含有酸根或鹼基的母體化合物通過常規化學方法合成。一般情況下，這樣的鹽的製備方法是：在水或有機溶劑或兩者的混合物中，經由游離酸或鹼形式的這些化合物與化學計量的適當的鹼或酸反應來製備。

本發明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本發明設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)- 和 (+)-對映體、(R )- 和 (S )-對映體、非對映異構體、(D )-異構體、(L )-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬於本發明的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本發明的範圍之內。

除非另有說明，術語“對映異構體”或者“旋光異構體”是指互為鏡像關係的立體異構體。

除非另有說明，術語“順反異構體”或者“幾何異構體”是由因雙鍵或者成環碳原子單鍵不能自由旋轉而引起。

除非另有說明，術語“非對映異構體”是指分子具有兩個或多個手性中心，並且分子間為非鏡像的關係的立體異構體。

除非另有說明，“(+)”表示右旋，“(-)”表示左旋，“(±)”表示外消旋。

除非另有說明，用楔形實線鍵（

）和楔形虛線鍵（

）表示一個立體中心的絕對構型，用直形實線鍵（

）和直形虛線鍵（

）表示立體中心的相對構型，用波浪線（

）表示楔形實線鍵（

）或楔形虛線鍵（

），或用波浪線（

）表示直形實線鍵（

）或直形虛線鍵（

）。

除非另有說明，術語“富含一種異構體”、“異構體富集”、“富含一種對映體”或者“對映體富集”指其中一種異構體或對映體的含量小於100%，並且，該異構體或對映體的含量大於等於60%，或者大於等於70%，或者大於等於80%，或者大於等於90%，或者大於等於95%，或者大於等於96%，或者大於等於97%，或者大於等於98%，或者大於等於99%，或者大於等於99.5%，或者大於等於99.6%，或者大於等於99.7%，或者大於等於99.8%，或者大於等於99.9%。

除非另有說明，術語“異構體過量”或“對映體過量”指兩種異構體或兩種對映體相對百分數之間的差值。例如，其中一種異構體或對映體的含量為90%，另一種異構體或對映體的含量為10%，則異構體或對映體過量（ee值）為80%。

可以通過的手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的(R )-和(S )-異構體以及D 和L 異構體。如果想得到本發明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來製備，其中將所得非對映體混合物分離，並且輔助基團裂開以提供純的所需對映異構體。或者，當分子中含有鹼性官能團（如氨基）或酸性官能團（如羧基）時，與適當的光學活性的酸或鹼形成非對映異構體的鹽，然後通過本領域所公知的常規方法進行非對映異構體拆分，然後回收得到純的對映體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法採用手性固定相，並任選地與化學衍生法相結合（例如由胺生成氨基甲酸鹽）。

本發明的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標記化合物，比如氚（³ H），碘-125（¹²⁵ I）或C-14（¹⁴ C）。又例如，可用重氫取代氫形成氘代藥物，氘與碳構成的鍵比普通氫與碳構成的鍵更堅固，相比於未氘化藥物，氘代藥物有降低毒副作用、增加藥物穩定性、增強療效、延長藥物生物半衰期等優勢。本發明的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本發明的範圍之內。

術語“被取代的”是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，可以包括重氫和氫的變體，只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基為氧（即=O）時，意味著兩個氫原子被取代。氧取代不會發生在芳香基上。術語“任選被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的。

當任何變量（例如R）在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。因此，例如，如果一個基團被0-2個R所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R所取代，並且每種情況下的R都有獨立的選項。此外，取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。

當一個連接基團的數量為0時，比如-(CRR)₀ -，表示該連接基團為單鍵。

當一個取代基數量為0時，表示該取代基是不存在的，比如-A-(R)₀ 表示該結構實際上是-A。

當一個取代基為空缺時，表示該取代基是不存在的，比如A-X中X為空缺時表示該結構實際上是A。

當其中一個變量選自單鍵時，表示其連接的兩個基團直接相連，比如A-L-Z中L代表單鍵時表示該結構實際上是A-Z。

當一個取代基的鍵可以交叉連接到一個環上的兩一個以上原子時，這種取代基可以與這個環上的任意原子相鍵合，例如，結構單元

或

表示其取代基R可在環己基或者環己二烯上的任意一個位置發生取代。當所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到被取代的基團上時，這種取代基可以通過其任何原子相鍵合，例如，吡啶基作為取代基可以通過吡啶環上任意一個碳原子連接到被取代的基團上。

當所列舉的連接基團沒有指明其連接方向，其連接方向是任意的，例如，

中連接基團L為-M-W-，此時-M-W-既可以按與從左往右的讀取順序相同的方向連接環A和環B構成

，也可以按照與從左往右的讀取順序相反的方向連接環A和環B構成

。所述連接基團、取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。

除非另有規定，當某一基團具有一個或多個可連接位點時，該基團的任意一個或多個位點可以通過化學鍵與其他基團相連。當該化學鍵的連接方式是不定位的，且可連接位點存在H原子時，則連接化學鍵時，該位點的H原子的個數會隨所連接化學鍵的個數而對應減少變成相應價數的基團。所述位點與其他基團連接的化學鍵可以用直形實線鍵（

）、直形虛線鍵（

）、或波浪線（

）表示。例如-OCH₃ 中的直形實線鍵表示通過該基團中的氧原子與其他基團相連；

中的直形虛線鍵表示通過該基團中的氮原子的兩端與其他基團相連；

中的波浪線表示通過該苯基基團中的1和2位碳原子與其他基團相連；

表示該哌啶基上的任意可連接位點可以通過1個化學鍵與其他基團相連，至少包括

、

、

、

這4種連接方式，即使-N-上畫出了H原子，但是

仍包括

這種連接方式的基團，只是在連接1個化學鍵時，該位點的的H會對應減少1個變成相應的一價哌啶基。

除非另有規定，環上原子的數目通常被定義為環的元數，例如，“5-7元環”是指環繞排列5-7個原子的“環”。

除非另有規定，術語“C_1-3 烷基”用於表示直鏈或支鏈的由1至3個碳原子組成的飽和碳氫基團。所述C_1-3 烷基包括C_1-2 和C_2-3 烷基等；其可以是一價（如甲基）、二價（如亞甲基）或者多價（如次甲基）。C_1-3 烷基的實例包括但不限於甲基 (Me)、乙基 (Et)、丙基 (包括n -丙基和異丙基)等。

除非另有規定，“C_3-5 環烷基”表示由3至5個碳原子組成的飽和環狀碳氫基團，其為單環體系，所述C_3-5 環烷基包括C_3-4 和C_4-5 環烷基等；其可以是一價、二價或者多價。C_3-5 環烷基的實例包括，但不限於，環丙基、環丁基、環戊基等。

除非另有規定，C_n-n+m 或C_n -C_n+m 包括n至n+m個碳的任何一種具體情況，例如C_1-12 包括C₁ 、C₂ 、C₃ 、C₄ 、C₅ 、C₆ 、C₇ 、C₈ 、C₉ 、C₁₀ 、C₁₁ 、和C₁₂ ，也包括n至n+m中的任何一個範圍，例如C_1-12 包括C_1-3 、C_1-6 、C_1-9 、C_3-6 、C_3-9 、C_3-12 、C_6-9 、C_6-12 、和C_9-12 等；同理，n元至n+m元表示環上原子數為n至n+m個，例如3-12元環包括3元環、4元環、5元環、6元環、7元環、8元環、9元環、10元環、11元環、和12元環，也包括n至n+m中的任何一個範圍，例如3-12元環包括3-6元環、3-9元環、5-6元環、5-7元環、6-7元環、6-8元環、和6-10元環等。

本發明的化合物可以通過本領域通常知識者所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。

本發明的化合物可以通過本領域通常知識者所熟知的常規方法來確認結構，如果本發明涉及化合物的絕對構型，則該絕對構型可以通過本領域常規技術手段予以確證。例如單晶X射線衍射法（SXRD），把培養出的單晶用Bruker D8 venture衍射儀收集衍射強度數據，光源為CuKα輻射，掃描方式：φ/　掃描，收集相關數據後，進一步採用直接法(Shelxs97)解析晶體結構，便可以確證絕對構型。

本發明所使用的溶劑可經市售獲得。

本發明採用下述縮略詞：eq代表當量；DMSO代表二甲基亞碸；ATP代表三磷酸腺苷，EDTA代表乙二胺四乙酸； DNA代表脫氧核糖核酸；PEG代表聚乙二醇；Balb/c代表小鼠品系。

化合物依據本領域常規命名原則或者使用ChemDraw®軟件命名，市售化合物採用供應商目錄名稱。

下面通過實施例對本發明進行詳細描述，但並不意味著對本發明任何不利限制。本文已經詳細地描述了本發明，其中也公開了其具體實施例方式，對本領域的通常知識者而言，在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。

實施例1

第一步 0℃下，向化合物1a（2.91 g, 15.0 mmol, 1eq ）的1,4-二氧六環（50 mL）溶液中加入化合物1b（1.84 g, 18.0 mmol, 1.2eq ），加畢於0℃下反應8小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~1:3）純化得化合物1c。MS:m/z . 259.8 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.08 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 3.84-4.06 (m, 4H), 2.93-3.11 (m, 4H)。

第二步向化合物1c（1.1 g, 4.24 mmol, 1eq ）的乙醇（10 mL）和水（10 mL）的混合溶液中依次加入鐵粉 (1.18 g, 21.18 mmol, 5eq ) 和氯化銨(1.13 g, 21.18 mmol, 5eq )，加畢在80℃下反應1 小時。反應完全後，矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得粗品，用水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯萃取（50 mL*2），飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得粗品化合物1d。MS:m/z . 229.9 [M+H]⁺ 。

第三步向化合物1d（0.69 g, 3.0 mmol, 1eq ）的乙腈（15 mL）溶液中加入N,N’ -羰基二咪唑（0.97 g, 6.0 mmol, 1.22 mL, 2eq ），加畢在80℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~4:1）純化得化合物1e。MS:m/z 255.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ: 8.09 (s, 1H), 3.86-3.97 (m, 4H), 3.45-3.65 (m, 4H)。

第四步向化合物1e（1.1 g, 2.15 mmol, 1eq ）的N,N -二甲基甲醯胺（50 mL）溶液中依次加入碳酸銫（3.5 g, 10.76 mmol, 5eq ）和碘甲烷（1.06 g, 7.45 mmol, 465 µL,3eq ），加畢在20℃下反應1小時。反應完全後，加水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL*3）萃取，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~1:1）純化得化合物1f。MS:m/z 269.8 [M+H]⁺ 。

第五步將化合物1f (0.13 g, 500 µmol, 1eq ) ，化合物1g (188.9 mg, 600.00 µmol, 1.2eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (90.6 mg, 100.00 µmol, 0.2eq )和碳酸銫（325.8 mg, 1.00 mmol, 2eq ）的二氧六環 (5 mL)和水（0.5 mL）的溶液置換氮氣三次並於100℃氮氣保護下反應16 小時。反應完全後，矽藻土過濾，減壓濃縮得粗品，經製備高效液相色譜（Welch Xtimate C18 150*25mm*5µm; 流動相: [水(0.225%甲酸)-乙腈]；B（乙腈）%: 8%-38%,8分鐘）純化得化合物1。MS:m/z 382.2 [M+H]。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ )δ ppm 9.81 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 3.96 (t,J =4.6 Hz, 4H), 3.47-3.55 (m, 4H), 3.42 (s, 3H), 2.53 (s, 3H)。

實施例 2

第一步向化合物2a（10.18 g, 40 mmol, 1eq ）的甲苯（80 mL）溶液中加入N,N -二甲基甲醯胺二甲基縮醛（14.30 g, 120 mmol, 15.94 mL, 3eq ），加畢反應液在110℃下反應4小時。反應完全後，反應液經減壓濃縮得到粗品化合物2b。MS:m/z 309.8 [M+H]⁺ 。

第二步向化合物2b（12.38 g, 40 mmol, 1eq ）的甲醇（100 mL）溶液中加入鹽酸羥胺（5.56 g, 80 mmol, 2eq ），加畢反應液在70℃下反應2小時。反應完全後，反應液經減壓濃縮得到粗品化合物2c。MS:m/z 297.7 [M+H]⁺ 。

第三步 0℃下，向化合物2c（11.90 g, 40 mmol, 1eq ）的四氫呋喃（100 mL）溶液中加入三氟乙酸酐（12.60 g, 60 mmol, 8.35 mL, 1.5eq ），加畢反應液於25℃下反應12小時。反應完全後，反應液減壓濃縮除去溶劑，向濃縮後的反應液中加入水（100 mL）稀釋，用乙酸乙酯300 mL (100 mL*3) 萃取，飽和食鹽水30 mL洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚=0:1~ 1:1）純化得化合物2d。MS:m/z 279.7 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 9.55 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.26 (s, 1H)。

第四步將化合物2d (3.91g, 14 mmol, 1eq )，化合物2e (2.79 g, 15.40 mmol, 1.1eq )，三(二亞苄基丙酮)二鈀(641 mg, 700 µmol, 0.05eq ), 4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(810.1 mg, 1.4 mmol, 0.1eq ) 和碳酸銫（9.12 g, 28 mmol, 2eq ）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水N,N -二甲基甲醯胺（30 mL）並在80℃下反應6小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾後減壓濃縮得到粗品。粗品用四氫呋喃（100 mL）溶解，向其中加入3 N鹽酸（20 mL）並於20℃下攪拌0.5小時。反應完全後，向反應液中加入水（100 mL），用乙酸乙酯(100 mL*3) 萃取，棄去有機相；水相加入氨水（30 mL）調節PH至鹼性並再次用乙酸乙酯(100 mL*3) 萃取，有機相用飽和食鹽水50 mL洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚=0:1~1:0）純化得化合物2f。MS:m/z 168.8 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 8.28 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 5.35-5.43 (m, 2H)。

第五步將化合物2f (67.4 mg, 400 µmol, 1eq )，化合物1f(107.8 mg, 400 µmol, 1eq )，三(二亞苄基丙酮)二鈀(36.6 mg, 40 µmol, 0.1eq )，4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(46.3 mg, 80 µmol, 0.2eq )和碳酸銫（195.5 mg, 600 µmol, 1.5eq ）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（8 mL）並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾後減壓濃縮得到粗品，經薄層製備色譜（二氯甲烷：甲醇= 10:1）純化得到化合物2。MS:m/z 401.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 10.24 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 3.96 (t,J =4.69 Hz, 4H), 3.51-3.57 (m, 4H), 3.43 (s, 3H)。

實施例 3

第一步向化合物3a (6.7 g, 35.08 mmol, 1eq )的甲苯（100 mL）溶液加入N,N -二甲基甲醯胺二甲基縮醛（12.54 g, 105.25 mmol, 3eq ），加畢在110℃下反應1.5小時。反應完全後，反應液經減壓濃縮得到粗品化合物3b。

第二步向化合物3b(8.3 g, 33.73 mmol, 1eq )的甲醇（100 mL）溶液加入鹽酸羥胺（4.69 g，67.46 mmol，2eq ），在80℃下反應1小時。反應完全後，反應液經減壓濃縮得到粗品化合物3c。MS:m/z 233.8 [M+H]⁺ 。

第三步 0℃下，向化合物3c (12.9 g, 55.12 mmol, 1eq )的四氫呋喃（100 mL）溶液加入三氟乙酸酐（15.33 mL, 100.24 mmol, 2eq ），加畢在21℃反應21小時。反應完全後，反應液減壓濃縮的粗品，經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~1:2）純化得化合物3d。MS:m/z 217.8 [M+H]+。

第四步向化合物3d (1 g, 4.63 mmol, 1eq ) 的甲苯（50 mL）溶液中依次加入1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦（288.3 mg, 462.94 µmol，0.1eq ），化合物2e（922.9 mg, 5.09 mmol, 1.1eq ），三(二亞苄基丙酮)二鈀（211.9 mg, 231.47 µmol, 0.05eq ），第三丁醇鉀(1.04 g, 9.26 mmol, 2eq ），加畢在110℃反應4小時。反應完全後，反應液減壓濃縮除去溶劑，向濃縮後的反應液中加入水（50 mL）稀釋，用乙酸乙酯(50 mL*2)萃取，飽和食鹽水（100 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到粗品。隨後用乙醇（20 mL）溶解並加入1 N鹽酸（12 mL）攪拌半小時，反應完全後，加氨水調節PH至鹼性，減壓濃縮除去溶劑並經柱層析（甲醇：二氯甲烷= 0:1~1:6）純化得化合物3f。

第五步向化合物3f (132 mg, 489.46 µmol, 1.02eq )和化合物1f (80 mg, 525.87 µmol, 1.1eq )的二氧六環（20 mL）溶液依次加入甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（21.7 mg, 20.93 µmol, 0.05eq ）和碳酸銫（311.5 mg, 956.13 µmol, 2eq ），加畢在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮的粗品，經柱層析（甲醇：二氯甲烷-= 0:1~1:9）純化得化合物3。MS:m/z 386.0 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 10.15 (br d,J =7.03 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.47 (br d,J =9.54 Hz, 1H), 3.96 (br s, 4H), 3.53 (br s, 4H), 3.43 (s, 3 H)。

實施例 4

第一步 0℃下，向化合物4a（2.99 g, 20 mmol, 1eq, 鹽酸鹽）的乙酸（30 mL）和水（9 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（1.52 g, 22 mmol, 1.1eq ）的水（3 mL）溶液，加畢反應液於20℃反應3小時。反應完全後，反應液加入水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯300 mL（100 mL*3）萃取，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~1:1）純化得化合物4b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 5.08 (br d,J =7.03 Hz, 1H), 4.89 (br d,J =6.27 Hz, 1H), 3.77-3.93 (m, 2H), 3.54-3.68 (m, 2H), 2.05-2.22 (m, 3H), 1.78-1.94 (m, 1H)。

第二步 0℃下，向化合物4b（2.56 g, 18 mmol, 1eq ）的甲醇（20 mL）溶液中依次加入鋅粉（4.71 g, 72 mmol, 4eq ）和乙酸（20 mL），加畢反應液在20℃反應4小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾並用乙酸乙酯（200 mL）洗滌，濾液減壓濃縮得粗品化合物4c。

第三步 0℃下，向化合物1a (6.21g, 32 mmol, 2eq )的二氧六環（150 mL）溶液中依次加入化合物4c（3.01 g, 16 mmol, 1eq ，醋酸鹽）和三乙胺（8.10 g, 80 mmol, 5eq ,11.14 mL），加畢反應液於20℃下反應5小時。反應完全後，反應液加入水（100 mL）稀釋，乙酸乙酯300 mL（100 mL*3）萃取，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~1:1）純化得化合物4e。MS:m/z 285.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.29 (br s, 1H), 9.04 (s, 1H), 4.02 (d,J =11.13 Hz, 2H), 3.64 (dd,J =11.32, 1.94 Hz, 2H), 3.48 (br d,J =2.88 Hz, 2H), 2.07-2.21 (m, 4H).

第四步向化合物4e (2.03 g, 6.4 mmol, 1eq )的乙醇（16 mL）和水（4 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（1.79 g, 32 mmol, 5eq ）和氯化銨（1.71 g, 32 mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應3小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫並向其中加入乙酸乙酯（300 mL）稀釋，矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得粗品化合物4f。MS:m/z 256.0 [M+H]⁺ 。

第五步向化合物4f (1.28 g, 5 mmol, 1eq )的乙腈（20 mL）溶液中加入N,N' -羰基二咪唑（1.62 g, 10 mmol, 2eq ），加畢反應液於80℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮的粗品，經柱層析（乙酸乙酯：石油醚=0:1~1:0）與打漿（甲醇/二氯甲烷：2 mL/10 mL，25℃，15分鐘）純化得化合物4g。MS:m/z 281.2 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 11.63 (br s, 1H), 8.09 (s, 1H), 3.76-3.86 (m, 4H), 3.59 (br d,J =8.63 Hz, 2H), 2.27-2.36 (m, 2H), 1.90-1.99 (m, 2H)。

第六步向化合物4g (0.282 g, 1 mmol, 1eq )的N,N -二甲基甲醯胺（10 mL）溶液中依次加入碳酸銫（0.489 g, 1.5 mmol, 1.5eq ）和碘甲烷（0.177 g, 1.25 mmol, 1.25eq ），加畢反應液於21℃下反應4小時。反應完全後，反應液加入水（20 mL）稀釋，乙酸乙酯90 mL（30 mL*3）萃取，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~4:1）純化得化合物4h。MS:m/z 295.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 7.99 (s, 1H), 4.10 (d,J =10.51 Hz, 2H), 3.83-3.91 (m, 2H), 3.68 (dd,J =10.63, 2.00 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H), 2.39-2.47 (m, 2H), 2.12-2.20 (m, 2H)。

第七步將化合物4h (221.8 mg, 0.75 mmol, 1eq )，化合物1g (88.9 mg, 0.6 mmol, 0.8eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (136 mg, 150 µmol, 0.2eq )和碳酸銫（366.6 mg, 1.13 mmol, 1.5eq ）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（20 mL）並在100℃下反應3小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾後減壓濃縮得粗品，隨後經柱層析（甲醇：二氯甲烷= 0:1~1:9）和打漿（二氯甲烷/乙酸乙酯： 3 mL/3 mL，25℃，15分鐘）純化得化合物4。MS:m/z 408.2 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.77 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.15 (d,J =10.54 Hz, 2H), 3.84-3.90 (m, 2H), 3.71 (br d,J =10.54 Hz, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.37-2.46 (m, 2H), 2.09-2.18 (m, 2H)。

實施例 5

第一步 0℃下，向化合物5a（4.49 g, 30 mmol, 1eq, 鹽酸鹽）的乙酸（50 mL）和水（18 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（2.28 g, 33 mmol, 1.1eq ）的水（4.5 mL）溶液，加畢反應液於20℃反應3小時。反應完全後，反應液加入水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯150 mL（50 mL*3）萃取，有機相用飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚=0:1~ 1:1）純化得化合物5b。MS:m/z . 143.0 [M+H]⁺ 。

第二步 0℃下，向化合物5b（3.70 g, 26 mmol, 1eq ）的甲醇（20 mL）溶液中依次加入鋅粉（6.80 g, 104 mmol, 4eq ）和乙酸（20 mL），加畢反應液在20℃反應4小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾並用乙酸乙酯（200 mL）洗滌，濾液減壓濃縮得粗品化合物5c。

第三步 0℃下，向化合物1a (10.09 g, 52 mmol, 2eq ) 的二氧六環（150 mL）溶液中依次加入化合物5c（4.89 g, 26 mmol, 1eq ）和三乙胺（13.15 g, 130 mmol, 5eq ,18.09 mL），加畢反應液於20℃下反應5小時。反應完全後，反應液加入水（100 mL）稀釋，乙酸乙酯300 mL（100 mL*3）萃取，有機相用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~1:1）純化得化合物5e。MS:m/z 285.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.05 (s, 1H), 8.97 (br s, 1H), 4.43 (br dd,J =4.44, 2.06 Hz, 2H), 2.94-3.06 (m, 4H), 2.19-2.28 (m, 2H), 1.90-2.03 (m, 2H)。

第四步向化合物5e (2.43 g, 8.5 mmol, 1eq )的乙醇（120 mL）和水（30 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（2.37 g, 42.5 mmol, 5eq ）和氯化銨（2.27 g, 42.5 mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應3小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫並向其中加入乙酸乙酯（200 mL）稀釋，矽藻土過濾並減壓濃縮得粗品化合物5f。MS:m/z 256.0 [M+H]⁺ 。

第五步向化合物5f (2.17 g, 8.5 mmol, 1eq )的乙腈（30 mL）溶液中加入N,N' -羰基二咪唑（2.76 g, 17 mmol, 2eq ），加畢反應液於80℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚=0:1~1:0）純化得化合物5g。MS:m/z 281.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 11.61 (br s, 1H), 8.12 (s, 1H), 4.38 (br d,J =2.01 Hz, 2H), 3.73 (dd,J =9.91, 1.63 Hz, 2H), 2.81 (d,J =9.54 Hz, 2H), 1.99-2.09 (m, 2H), 1.78-1.87 (m, 2H)。

第六步向化合物5g (1.24 g, 4.4 mmol, 1eq )的N,N -二甲基甲醯胺（40 mL）溶液中依次加入碳酸銫（2.15 g, 6.6 mmol, 1.5eq ）和碘甲烷（780 mg, 5.5 mmol, 1.25eq ），加畢反應液於21℃下反應4小時。反應完全後，反應液加入水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯180 mL（60 mL*3）萃取，有機相用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯：石油醚= 0:1~4:1）純化得化合物5h。MS:m/z 295.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 7.98-8.05 (m, 1H), 4.45 (br d,J =2.25 Hz, 2H), 3.99 (dd,J =9.69, 1.81 Hz, 2H), 3.41 (s, 3H), 2.80 (br d,J =9.51 Hz, 2H), 2.23-2.31 (m, 2H), 1.94-2.04 (m, 2H)。

第七步將化合物5h (502.7 mg, 1.7 mmol, 1eq )，化合物1g(201.5 mg,1.36 mmol, 0.8eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)(231.2 mg, 255µmol, 0.15eq )和碳酸銫（830.8 mg, 2.55 mmol, 1.5eq ）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（30 mL）並在100℃下反應3小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾後減壓濃縮得粗品，隨後經柱層析（甲醇/二氯甲烷：0~10%）和打漿（二氯甲烷/乙酸乙酯：1.5 mL/3 mL，25℃，15分鐘）純化得化合物5。MS:m/z 408.2 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.87 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.48 (br d,J =2.25 Hz, 2H), 4.04 (dd,J =9.76, 1.88 Hz, 2H), 3.40 (s, 3H), 2.85 (d,J =9.51 Hz, 2H), 2.53 (s, 3H) 2.29-2.37 (m, 2H), 2.00-2.10 (m, 2H)。

實施例6

第一步 0℃下，向化合物6a(350 mg, 1.29 mmol, 1eq, 對甲苯磺酸鹽)的乙酸（5 mL）和水（1 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（97.90 mg, 1.42 mmol, 1.1eq ）的水（1 mL）溶液，加畢反應液於20℃反應3小時。反應完全後，反應液加入水（30 mL）稀釋，乙酸乙酯60 mL（20 mL*3）萃取，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物6b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.79-4.87 (m, 1H), 4.68-4.76 (m, 2H), 4.59-4.66 (m, 1H), 4.20 (d,J =15.26 Hz, 1H), 3.61-3.73 (m, 1H), 3.29-3.40 (m, 1H), 1.79 (d,J =9.51 Hz, 1H)。

第二步 0℃下，向化合物6b(625 mg, 4.88 mmol, 1eq )的甲醇（7 mL）溶液中依次加入鋅粉（1.28 g, 19.51 mmol, 4eq ）和乙酸（7 mL），加畢反應液在20℃下反應4小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾並用乙酸乙酯（100 mL）洗滌，濾液減壓濃縮得化合物6c。

第三步 0℃下，向化合物1a (1.72 g, 8.89mmol, 2.5eq ) 的二氧六環（35 mL）溶液中加入化合物6c（1.92 g, 3.56mmol, 1eq ，醋酸鹽），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，反應液加入水(30 mL)稀釋，乙酸乙酯（30 mL*3）萃取，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物6e。MS:m/z 271.9 [M+H]⁺ 。

第四步向化合物6e (228 mg, 839.28µmol, 1eq ) 的乙醇（5 mL）和水（5 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（234.35 mg, 4.2mmol, 5eq ）和氯化銨（224.47 mg, 4.2mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應1小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，用矽藻土過濾並用乙醇（20mL）洗滌，洗滌液減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇（20 mL: 2 mL）混合溶液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮-得化合物6f。

第五步向化合物6f (155 mg, 641.35µmol, 1eq ) 的乙腈（6 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（207.99 mg, 1.28mmol, 2eq ），加畢反應液於80℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，經柱層析（甲醇:二氯甲烷=0:1~1:9）純化得化合物6g。MS:m/z 267.9 [M+H]⁺ ¹ H NMR (400 MHz,CD₃ OD)δ ppm 9.00 (s, 1H), 5.38 (d,J =6.13 Hz, 2H), 4.76 (d,J =10.13 Hz, 2H), 4.04-4.13 (m, 2H), 3.80-3.91 (m, 1H), 3.21 (d,J =8.38 Hz, 1H)。

第六步向化合物6g (105 mg, 392.27µmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（6 mL）溶液中依次加入碳酸銫（255.62 mg, 784.54µmol, 2eq ）和碘甲烷（0.58 g, 4.09mmol, 1.2eq ），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，反應液加入水（10 mL）稀釋，乙酸乙酯(10 mL*3)萃取，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷=0:1~1:9）純化得化合物6h。MS:m/z 281.8 [M+H]⁺ ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 8.38 (s, 1H), 4.54 (d,J =6.13 Hz, 2H), 3.90 (d,J =10.13 Hz, 2H), 3.35 (s, 3 H), 3.23-3.28 (m, 2H), 2.96-3.03 (m, 1H), 2.37 (d,J =8.38 Hz, 1H)。

第七步將化合物6h (95 mg, 337.24 µmol, 1eq ) ，化合物1g (44.97 mg, 303.52 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (61.14 mg, 67.45µmol, 0.2eq )和碳酸銫（219.76 mg, 674.48µmol, 2eq ）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（7 mL）並在100℃下反應3小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾後減壓濃縮得粗品，經製備高效液相色譜（Welch Xtimate C18 100*40mm*3µm;流動相: [水0.225%甲酸)-乙腈];B（乙腈）%: 6%-36%,8分鐘）純化得化合物6。 MS:m/z 394.0 [M+H]⁺ ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.85 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.68 (d,J =6.53 Hz, 2H), 4.23 (d,J =9.79 Hz, 2H), 3.45-3.48 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.42-3.44 (m, 1H), 3.19-3.31 (m, 1H), 2.71 (d,J =8.53 Hz, 1H), 2.52 (s, 3H)。

實施例7

第一步 0℃下，向化合物7a（2.3 g, 18.99 mmol, 1eq ）的乙酸（24 mL）和水（8 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（1.31 g, 18.99 mmol, 1eq ）的水（2.4 mL）溶液，加畢，反應液於25℃反應1.5小時。反應完全後，反應液加入水（20 mL）稀釋，乙酸乙酯（30 mL*3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:3）純化得化合物7b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.32-4.36 (m, 2H), 3.84-3.89 (m, 2H), 2.17 (tt,J =12.89, 6.31 Hz, 2H), 1.90 (tt,J =13.05, 6.40 Hz, 2H)。

第二步 0℃下，向化合物7b（1.79 g, 11.92 mmol, 1eq ）的乙酸（10 mL）和甲醇（10 mL）混合溶液中加入鋅粉（3.12 g, 47.69 mmol, 4eq ），加畢，反應液在25℃反應0.5小時。反應完全後，加入乙酸乙酯（40 mL）稀釋，反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物7c。

第三步 0℃下，向化合物1a(7.51 g, 38.74mmol, 2eq ) 的二氧六環（100 mL）溶液中依次加入化合物7c（3.8 g, 19.37mmol, 1eq ，醋酸鹽）的二氧六環（80 mL）溶液和三乙胺（7.84 g, 77.47mmol, 4eq ,10.78 mL），加畢，反應液於25℃下反應1小時。反應完全後，加入水（100 mL）稀釋，乙酸乙酯（100 mL*3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:4）純化得化合物7e。MS:m/z 293.8 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.12 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 3.13 (t,J =5.65 Hz, 4H), 2.20-2.30 (m, 4H)。

第四步向化合物7e (0.5 g, 1.70mmol, 1eq ) 的乙醇（20 mL）和水（5 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（475.47 mg, 8.51mmol, 5eq ）和氯化銨（455.38 mg, 8.51mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應1小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，經矽藻土過濾並減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇（20 mL: 2 mL）混合液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得化合物7f。MS:m/z 263.8 [M+H]⁺ 。

第五步向化合物7f (460 mg, 1.74mmol, 1eq ) 的乙腈（10 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（848.64 mg, 5.23mmol, 3eq ），加畢反應液於80℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物7g。MS:m/z 289.7 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.32 (br s, 1H), 7.99 (s, 1H), 3.53 (br t,J =5.52 Hz, 4H), 2.13-2.25 (m, 4H)。

第六步向化合物7g (539 mg, 1.86 mmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（6 mL）溶液中依次加入碳酸銫（2.43 g, 7.44mmol, 4eq ）和碘甲烷（792.34 mg, 5.58mmol, 3eq ），加畢反應液於25℃下反應1小時。反應完全後，加入水（6 mL）淬滅，反應液減壓濃縮，後用水（6 mL）稀釋，乙酸乙酯（10 mL*3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物7h。MS:m/z 303.8 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.06 (s, 1H), 3.59 (br t,J =5.52 Hz, 4H), 3.46 (s, 3H), 2.24-2.34 (m, 4H)。

第七步將化合物7h (218mg, 717.82 µmol, 1eq ) ，化合物1g (95.72 mg, 646.04 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (130.14 mg, 143.56µmol, 0.2eq )和碳酸銫（350.82 mg, 1.08mmol, 1.5eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（6mL）並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，隨後經柱層析（甲醇:二氯甲烷=0:1~1:9）純化得化合物化合物7。MS:m/z 416.1 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.75 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 3.56-3.66 (m, 4H), 3.43 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.30 (s, 4H)。

實施例8和9

第一步 0℃下，向化合物8a（5 g, 36.88 mmol, 1eq, 鹽酸鹽）的乙酸（50 mL）和水（17 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（2.54 g, 36.88 mmol, 1eq ）的水（5 mL）溶液，加畢反應液於25℃反應18小時。反應完全後，反應液加入水（40 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL*8）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~2:1）純化得化合物8b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 5.47 (s, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.46-3.62 (m, 2H), 2.12 (d,J =10.29 Hz, 1H), 1.96 (dd,J =10.29, 2.26 Hz, 1H)。

第二步 0℃下，向化合物8b（1.93 g, 15.06 mmol, 1eq ）的乙酸（10 mL）和甲醇（10 mL）混合溶液中加入鋅粉（3.94 g, 60.25 mmol, 4eq ），加畢反應液在25℃反應1小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物8c。

第三步 0℃下，向化合物1a (9.80 g, 50.52mmol, 2eq ) 的二氧六環（140 mL）溶液中依次加入化合物8c（4.4 g, 25.26mmol, 1eq ，醋酸鹽）的二氧六環（80 mL）溶液和三乙胺（12.78 g, 126.29mmol, 5eq ,17.58 mL），加畢反應液於25℃下反應1小時。反應完全後，加入水（100 mL）稀釋，乙酸乙酯（100 mL*3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:2）純化得化合物8e。MS:m/z 272.0 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.37 (br s, 1H), 8.99 (s, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.11 (d,J =9.29 Hz, 1H), 3.95 (s, 1H), 3.72 (dd,J =9.16, 1.63 Hz, 1H), 3.39-3.48 (m, 1H), 2.90-2.97 (m, 1H), 2.11 (d,J =10.29 Hz, 1H), 1.81-2.02 (m, 1H)。

第四步向化合物8e (0.5 g, 1.84mmol, 1eq ) 的乙醇（5 mL）和水（5 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（513.97 mg, 9.20mmol, 5eq ）和氯化銨（492.25 mg, 9.20mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應0.5小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，矽藻土過濾並減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇（10 mL: 1 mL）溶液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得化合物8f。MS:m/z 242.0 [M+H]⁺ 。

第五步向化合物8f (380 mg, 1.57mmol, 1eq ) 的乙腈（8 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（509.91 mg, 3.14mmol, 2eq ），加畢反應液於80℃下反應1.5小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:0）純化得化合物8g。MS:m/z 267.8 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.00 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.21 (d,J =7.53 Hz, 1H), 3.76-3.83 (m, 2H), 3.71 (dd,J =7.78, 1.76 Hz, 1H), 3.60 (d,J =10.04 Hz, 1H), 2.73 (d,J =10.04 Hz, 1H), 1.87 (d,J =10.79 Hz, 1H)。

第六步向化合物8g (520 mg, 1.94 mmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（6 mL）溶液中依次加入碳酸銫（2.53 g, 7.77mmol, 4eq ）和碘甲烷（827.22 mg, 5.83mmol, 3eq ），加畢反應液於25℃下反應1小時。反應完全後，加入水（5 mL）淬滅反應，反應液減壓濃縮，後用水（5 mL）稀釋，乙酸乙酯（10 mL*6）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~4:1）純化得化合物8h。MS:m/z 281.8 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.05 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.28 (d,J =7.78 Hz, 1H), 3.82-3.88 (m, 2H), 3.79 (dd,J =7.78, 1.76 Hz, 1H), 3.66 (d,J =9.29 Hz, 1H), 3.47 (s, 3H), 2.81 (d,J =8.53 Hz, 1H), 1.95 (d,J =11.04 Hz, 1H)。

第七步將化合物8h (160mg, 567.98 µmol, 1eq ) ，化合物1g (75.74 mg, 511.18µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (102.98 mg, 113.60µmol, 0.2eq )和碳酸銫（277.59 mg, 851.97µmol, 1.5eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（5 mL）並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷=0:1~1:9）純化得消旋體，隨後經超臨界流體色譜純化（柱子: Phenomenex-Cellulose-2 (250mm*30mm,10µm);流動相: [0.1%氨水-異丙醇];-B（0.1%氨水/異丙醇）%: 55%-55%）得化合物8和9。

化合物8：（保留時間9.25分鐘）MS:m/z 394.1 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.86 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.32 (d,J =8.03 Hz, 1H), 3.99 (d,J =9.79 Hz, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.83 (dd,J =7.78, 1.51 Hz, 1H), 3.70 (d,J =8.78 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 2.75 (d,J =10.29 Hz, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.97 (d,J =10.04 Hz, 1H)。

化合物9：（保留時間11.75分鐘）MS:m/z 394.1 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.86 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.32 (d,J =7.78 Hz, 1H), 3.99 (d,J =9.79 Hz, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.83 (dd,J =7.78, 1.76 Hz, 1H), 3.70 (d,J =9.79 Hz, 1H) 3.45 (s, 3H), 2.75 (d,J =8.53 Hz, 1H), 2.54 (s, 3 H) 1.97 (d,J =10.04 Hz, 1H)。

實施例10

第一步 0℃下，向化合物10a (1 g, 1.29 mmol, 1eq, 鹽酸鹽)的乙酸（12 mL）和水（4 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（507.3 mg, 7.35 mmol, 1.1eq ）的水（1 mL）溶液，加畢反應液於20℃反應4小時。反應完全後，反應液加入水（30 mL）稀釋，乙酸乙酯（30 mL*3）萃取，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物10b。

第二步 0℃下，向化合物10b(860 mg, 6.05 mmol, 1eq )的甲醇（5 mL）溶液中依次加入鋅粉（1.58 g, 24.2 mmol, 4eq ）和乙酸（5 mL），加畢反應液在20℃下反應4小時。反應完全後，反應液加入乙酸乙酯（100 mL）稀釋，矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物10c。

第三步 0℃下，向化合物1a (1.75 g, 9mmol, 2.eq ) 的二氧六環（60 mL）溶液中加入化合物10c（1.41 g, 4.5mmol, 1eq , 醋酸鹽）和三乙胺（910.7 mg, 9 mmol, 2eq ），加畢反應液於20℃下反應5小時。反應完全後，反應液加入水(100 mL)稀釋，乙酸乙酯（100 mL*3）萃取，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物10e。MS:m/z 285.9 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.32 (br s, 1H), 9.07 (s, 1H), 3.90-3.99 (m, 2H), 3.12-3.22 (m, 2H), 3.03 (s, 2H), 0.89-0.97 (m, 2H), 0.64-0.75 (m, 2H)。

第四步向化合物10e (160 mg, 560.05µmol, 1eq ) 的乙醇（8 mL）和水（2 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（156.38 mg, 2.8mmol, 5eq ）和氯化銨（149.79 mg, 2.8mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應3小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，矽藻土過濾並用乙醇（100mL）洗滌，洗滌液減壓濃縮得粗品10f。

第五步向化合物10f (150 mg, 586.62µmol, 1eq ) 的乙腈（4 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（190.24 mg, 1.17mmol, 2eq ），加畢反應液於80℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，粗品經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:0）純化得化合物10g。MS:m/z 281.8 [M+H]⁺ 。

第六步向化合物10g(140 mg, 496.99µmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（6 mL）溶液中依次加入碳酸銫（242.89 mg, 745.48µmol, 1.5eq ）和碘甲烷（88.18 mg, 624.23µmol, 1.25eq ），加畢反應液於21℃下反應4小時。反應完全後，反應液加入水（10 mL）稀釋，乙酸乙酯(10 mL*3)萃取，飽和食鹽水（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:0）純化得化合物10h。MS:m/z 296.0 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.02 (s, 1H), 3.92-4.00 (m, 2H), 3.52-3.64 (m, 2H), 3.39-3.46 (m, 5H), 0.84-0.97 (m, 2H), 0.64-0.71 (m, 2H)。

第七步將化合物10h (59.14mg, 200 µmol, 1eq ) ，化合物1g(26.67mg, 180 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (36.26 mg, 40µmol, 0.2eq )和碳酸銫（97.75 mg, 300µmol, 1.5eq ）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（5 mL）並在100℃下反應3小時。反應完全後，反應液經矽藻土過濾後減壓濃縮得粗品，先經柱層析（甲醇:二氯甲烷= 0:1~1:9）純化，後又經超臨界流體色譜純化(DAICEL CHIRALPAK AD-H(250mm*30mm,5µm);流動相: [0.1%氨水/乙醇];-B（0.1%氨水/乙醇）%: 30%-30%)得化合物10（保留時間1.59分鐘）。MS:m/z 430.0 [M+Na]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.83 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 3.96-4.04 (m, 2H), 3.60-3.69 (m, 2H), 3.44-3.50 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 0.91-1.03 (m, 2H), 0.62-0.76 (m, 2H)。

實施例11

第一步 0℃下，向化合物11a（1.25 g, 7.27 mmol, 1eq, 半草酸鹽）的乙酸（15 mL）和水（5 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（501.83 mg, 7.27 mmol, 1eq ）的水（1.5 mL）溶液，加畢反應液於25℃反應2小時。反應完全後，加入水（20 mL）稀釋，乙酸乙酯（30 mL*6）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~2:1）純化得化合物11b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.53 (q,J =6.00 Hz, 4H), 4.17-4.22 (m, 2H), 3.74-3.79 (m, 2H), 2.09-2.16 (m, 2H), 1.83-1.90 (m, 2H)。

第二步 0℃下，向化合物11b（343 mg, 2.20 mmol, 1eq ）的乙酸（2 mL）和甲醇（2 mL）混合溶液中加入鋅粉（574.43 mg, 8.78 mmol, 4eq ），加畢反應液在25℃反應6小時。反應完全後，加入乙酸乙酯（30 mL）稀釋，反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物11c。

第三步 0℃下，向化合物1a(724.11 mg, 3.73mmol, 2eq ) 的二氧六環（30 mL）溶液中依次加入化合物11c（755 mg, 1.87mmol, 1eq ，醋酸鹽）的二氧六環（5 mL）溶液和三乙胺（755.48 mg, 7.47mmol, 5eq ,1.04 mL），加畢反應液於25℃下反應1小時。反應完全後，加入水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL*3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物11e。MS:m/z 299.8 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.06 (s, 1H), 9.01 (br s, 1H), 4.48 (s, 4H), 2.89 (t,J =5.14 Hz, 4H), 2.11 (t,J =5.52 Hz, 4H)。

第四步向化合物11e (0.1 g, 333.65µmol, 1eq ) 的乙醇（2 mL）和水（2 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（93.17 mg, 1.67mmol, 5eq ）和氯化銨（89.24 mg, 1.67mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應1小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，矽藻土過濾並減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇（10 mL: 1 mL）溶液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得化合物11f。

第五步向化合物11f (67 mg, 248.40µmol, 1eq ) 的乙腈（2 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（120.83 mg, 745.19µmol, 3eq ），加畢反應液於80℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，經薄層製備色譜（乙酸乙酯:石油醚=1:0）純化得化合物11g。MS:m/z 295.8 [M+H]⁺ 。

第六步向化合物11g (64 mg, 216.42µmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（2 mL）溶液中依次加入碳酸銫（282.05 mg, 865.67µmol, 4eq ）和碘甲烷（92.16 mg, 649.25µmol, 3eq ），加畢反應液於25℃下反應1小時。反應完全後，加入水（3 mL）淬滅，減壓濃縮，後用水（3 mL）稀釋，乙酸乙酯（10 mL*6）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得化合物11h。

第七步將化合物11h (21mg, 67.80 µmol, 1eq ) ，化合物1g (9.04 mg, 61.02 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (12.29 mg, 13.56µmol, 0.2eq )和碳酸銫（33.13 mg, 101.69µmol, 1.5eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（3 mL）並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，隨後經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷= 1:20）純化得化合物11。MS:m/z 422.4 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.69 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.52 (s, 4H), 3.39 (s, 7H) 2.50 (s, 3H), 2.13 (t,J =4.64 Hz, 4H)。

實施例12

第一步 0℃下，向化合物12a（3.55 g, 12.09 mmol, 1eq, 半草酸鹽）的乙酸（35 mL）和水（12 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（834.47 mg, 12.09 mmol, 1eq ）的水（3.5 mL）溶液，加畢反應液於25℃反應16小時。反應完全後，加入水（10 mL）淬滅，減壓濃縮後加入水（15 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL*6）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物12b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.52-4.69 (m, 2H), 4.40-4.50 (m, 2H), 4.09-4.17 (m, 1H), 3.25-3.34 (m, 1H), 2.43-2.54 (m, 2H), 2.24-2.33 (m, 1H), 2.02-2.11 (m, 1H), 1.88-1.99 (m, 1H), 1.61-1.70 (m, 1H)。

第二步 0℃下，向化合物12b（0.95g, 6.08 mmol, 1eq ）的乙酸（5 mL）和甲醇（5 mL）混合溶液中加入鋅粉（1.59 g, 24.33 mmol, 4eq ），加畢反應液在25℃反應2小時。反應完全後，加入乙酸乙酯（50 mL）稀釋，反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物12c。

第三步 0℃下，向化合物1a(2.59 g, 13.35mmol, 2eq ) 的二氧六環（100 mL）溶液中依次加入化合物12c（2.7 g, 6.67mmol, 1eq ，醋酸鹽）的二氧六環（35 mL）溶液和三乙胺（2.70g, 26.70mmol, 4eq ,3.72 mL），加畢反應液於25℃下反應1小時。反應完全後，加入水（50 mL）淬滅，水（25 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL*3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物12e。MS:m/z 299.8 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.05 (s, 2H), 4.55 (t,J =7.78 Hz, 2H), 2.90-3.07 (m, 4H), 2.46 (t,J =7.78 Hz, 2H), 2.13-2.22 (m, 2H), 2.04-2.11 (m, 2H)。

第四步向化合物12e (252 mg, 840.80µmol, 1eq ) 的乙醇（12 mL）和水（4 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（234.79 mg, 4.20mmol, 5eq ）和氯化銨（224.87 mg, 4.20mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應1小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，矽藻土過濾並減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下二氯甲烷/甲醇（10 mL: 1 mL）溶液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得化合物12f。

第五步向化合物12f (100 mg, 370.74µmol, 1eq ) 的乙腈（3 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（180.35 mg, 1.11mmol, 3eq ），加畢反應液於80℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，經薄層製備色譜（乙酸乙酯:石油醚=1:0）純化得化合物12g。MS:m/z 296.0 [M+H]⁺ 。

第六步向化合物12g (132 mg, 446.36µmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（4 mL）溶液中依次加入碳酸銫（581.73 mg, 1.79mmol, 4eq ）和碘甲烷（190.07 mg, 1.34mmol, 3eq ），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，加入水（5 mL）淬滅，減壓濃縮，後用水（5 mL）稀釋，乙酸乙酯（10 mL*6）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得粗品化合物12h。

第七步將化合物12h (55mg, 177.56 µmol, 1eq ) ，化合物1g (23.68 mg, 159.81 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (32.19 mg, 35.51µmol, 0.2eq )和碳酸銫（86.78 mg, 266.34µmol, 1.5eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（3 mL）並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，隨後經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷=1:20）純化得化合物12。MS:m/z 422.2 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.70 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.57 (t,J =7.69 Hz, 2H), 3.58 (br s, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.36 (br s, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.45-2.49 (m, 2H), 2.07-2.23 (m, 4H)。

實施例13

第一步 0℃下，向化合物13a（800 mg, 6.29 mmol, 1eq ）的乙酸（8 mL）和水（3.2 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（477.39 mg, 6.92 mmol, 1.1eq ），加畢反應液於20℃反應3小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物13b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.18-4.23 (m, 2H), 3.86 (s, 1H), 3.78-3.83 (m, 2H), 3.53-3.59 (m, 1H), 2.0-2.12 (m, 3H), 1.63-1.95 (m, 3H)

第二步 0℃下，向化合物13b（895 mg, 5.73 mmol, 1eq ）的乙酸（5 mL）和甲醇（5 mL）混合溶液中加入鋅粉（1.5 g, 22.92 mmol, 4eq ），加畢反應液在20℃反應1小時。反應完全後，加入乙酸乙酯（100 mL）稀釋，反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物13c。

第三步 0℃下，向化合物1a (2.22 g, 11.44mmol, 2eq ) 的二氧六環（50 mL）溶液中依次加入化合物13c（813.37 mg, 5.72mmol, 1eq ，醋酸鹽），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物13e。MS:m/z 299.9 [M+H]⁺ ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.07 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 3.80-3.83 (m, 2H), 2.93-2.98 (m, 4H), 2.08-2.22 (m, 4H), 1.83-1.94 (m, 1H), 1.61-1.74 (m, 1H)。

第四步向化合物13e (140 mg, 467.11µmol, 1eq ) 的乙醇（3 mL）和水（3 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（130.43 mg, 2.34mmol, 5eq ）和氯化銨（124.93 mg, 2.34mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應1小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，用矽藻土過濾並用乙醇（20mL）洗滌，洗滌液減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇（10 mL: 1 mL）溶液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得化合物13f。

第五步向化合物13f (145 mg,537.57 µmol, 1eq ) 的乙腈（4 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（174.33 mg, 1.08mmol, 2eq ），加畢反應液於80℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷= 0:1~1:10）純化得化合物13g。MS:m/z 295.8 [M+H]⁺ 。

第六步向化合物13g (125 mg, 422.69 µmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（2 mL）溶液中依次加入碳酸銫（275.44 mg, 845.38µmol, 2eq ）和碘甲烷（71.9 mg, 507.22 µmol, 1.2eq ），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，加入水（10 mL）淬滅，乙酸乙酯（10 mL*3）萃取，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷= 0:1~1:10）純化得化合物13h。MS:m/z 309.9 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.02 (s, 1H), 3.83-3.84 (m, 2H), 3.40-3.44 (m, 7H), 2.10-2.24 (m, 4H), 1.81-1.90 (m, 1H), 1.56-1.63 (m, 1H)。

第七步將化合物13h (45 mg, 145.28 µmol, 1eq ) ，化合物1g (19.37 mg, 130.75 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (26.34 mg, 29.06µmol, 0.2eq )和碳酸銫（94.67 mg, 290.56µmol, 2eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（2 mL）並在100℃下反應3小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷= 0:1~1:10）純化得化合物13。MS:m/z 422.0 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.84 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 3.83-3.88 (m, 2H), 3.43-3.51 (m, 4H), 3.41 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.18-2.29 (m, 3H), 2.10-2.16 (m, 1H), 1.79-1.94 (m, 1H), 1.59-1.69 (m, 1H)。

實施例14

第一步 0℃下，向化合物14a（1 g, 9.08 mmol, 1eq ）的乙酸（10 mL）和水（4 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（688.97 mg, 9.99 mmol, 1.1eq ），加畢反應液於20℃反應3小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物14b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.31-4.46 (m, 2H), 3.97-4.10 (m, 1H), 3.73-3.85 (m, 1H), 2.99-3.11 (m, 1H), 2.05-2.18 (m, 2H), 1.77-1.91 (m, 2H)。

第二步 0℃下，向化合物14b（998 mg, 7.17 mmol, 1eq ）的乙酸（8 mL）和甲醇（8 mL）混合溶液中加入鋅粉（1.88 g, 28.69 mmol, 4eq ），加畢反應液在20℃反應1小時。反應完全後，加入乙酸乙酯（20 mL）稀釋，反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物14c。

第三步 0℃下，向化合物1a(2.78 g, 14.34mmol, 2eq ) 的二氧六環（26 mL）溶液中依次加入化合物14c（897.48 mg, 7.17mmol, 1eq ，醋酸鹽），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物14e。MS:m/z 282.9 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.11 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 3.10-3.19 (m, 2H), 3.01-3.09 (m, 2H), 2.77-2.86 (m, 1H), 2.09-2.20 (m, 4H)。

第四步向化合物14e (98 mg, 346.67µmol, 1eq )的乙醇（2 mL）和水（2 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（96.80 mg, 1.73mmol, 5eq ）和氯化銨（92.72 mg, 1.73mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應1小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，用矽藻土過濾並用乙醇（20mL）洗滌，洗滌液減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇（10 mL: 1 mL）溶液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得化合物14f。

第五步向化合物14f (73 mg,288.88 µmol, 1eq ) 的乙腈（2 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（93.68mg, 577.75µmol, 2eq ），加畢反應液於80℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷= 0:1~1:10）純化得化合物14g。MS:m/z 278.9 [M+H]⁺ 。

第六步向化合物14g (58 mg, 208.11 µmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（2 mL）溶液中依次加入碳酸銫（135.61 mg, 416.22µmol, 2eq ）和碘甲烷（35.45 mg, 249.73 µmol, 1.2eq ），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，加入水（10 mL）淬滅，乙酸乙酯30 mL（10 mL*3）萃取，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷= 0:1~1:10）純化得化合物14h。MS:m/z 292.9 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.03 (s, 1H), 3.51-3.59 (m, 2H), 3.44-3.50 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 2.61-2.93 (m, 1H), 2.13-2.24 (m, 4H)。

第七步將化合物14h (38 mg, 129.82 µmol, 1eq ) ，化合物1g(17.31 mg, 116.83 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (23.54 mg, 25.96µmol, 0.2eq )和碳酸銫（84.59 mg, 259.63µmol, 2eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（2 mL）並在100℃下反應3小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷= 1:10）純化得化合物14。MS:m/z 405.0 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.75 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 3.52-3.62 (m, 4H), 3.41 (s, 3H), 2.75-2.87 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.16-2.24 (m, 4H)。

實施例15

第一步 0℃下，向化合物15a（3 g, 20.32 mmol, 1eq, 鹽酸鹽）的乙酸（30 mL）和水（10 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（1.40 g, 20.32 mmol, 1eq ）的水（3 mL）溶液，加畢反應液於25℃反應16小時。反應完全後，加入水（10 mL）淬滅，減壓濃縮後加入水（30 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL*3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:2）純化得化合物15b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.43 (dd,J =12.69, 7.82 Hz, 1H), 4.10 (dd,J =12.63, 4.50 Hz, 1H), 3.79 (dd,J =15.20, 8.69 Hz, 1H), 3.42 (dd,J =15.32, 4.69 Hz, 1H), 2.69-2.89 (m, 2H), 1.85-2.00 (m, 2H), 1.61-1.82 (m, 2H), 1.41-1.56 (m, 2H)。

第二步 0℃下，向化合物15b（0.81 g, 5.78 mmol, 1eq ）的乙酸（5 mL）和甲醇（5 mL）混合溶液中加入鋅粉（1.51 g, 23.11 mmol, 4eq ），加畢反應液在20℃反應2小時。反應完全後，加入乙酸乙酯（100 mL）稀釋，反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物15c。

第三步 0℃下，向化合物1a(2.71 g, 13.96mmol, 2eq ) 的二氧六環（100 mL）溶液中依次加入化合物15c（2.6 g, 6.98mmol, 1eq ，醋酸鹽）的二氧六環（3 mL）溶液和三乙胺（2.83 g, 27.92mmol, 4eq ,3.89 mL），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，加入水（30 mL）淬滅，減壓濃縮後,水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯（60 mL*4）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:6）純化得化合物15e。MS:m/z 284.0 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.04 (s, 1H), 8.99 (br s, 1H), 3.37 (br t,J =7.94 Hz, 2H), 2.76 (br s, 2H), 2.50-2.59 (m, 2H), 1.65-1.77 (m, 4H), 1.25 (br s, 2H)。

第四步向化合物15e (115 mg, 405.34µmol, 1eq ) 的乙醇（2 mL）和水（2 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（113.19 mg, 2.03mmol, 5eq ）和氯化銨（108.41 mg, 2.03mmol, 5eq ），加畢反應液於75℃下反應1小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，矽藻土過濾並減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇（10 mL: 1 mL）溶液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得化合物15f。

第五步向化合物15f (120 mg, 472.94µmol, 1eq ) 的乙腈（4 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（230.06 mg, 1.42mmol, 3eq ），加畢反應液於80℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，經薄層製備色譜（乙酸乙酯:石油醚=1:0）純化得化合物15g。MS:m/z 280.0 [M+H]⁺ 。

第六步向化合物15g (37 mg, 132.27µmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（1.5 mL）溶液中依次加入碳酸銫（172.39 mg, 529.09µmol, 4eq ）和碘甲烷（56.32 mg, 396.82µmol, 3eq ），加畢反應液於20℃下反應1小時。反應完全後，加入水（3 mL）淬滅，減壓濃縮，後用水（3 mL）稀釋，乙酸乙酯（10 mL*2）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得粗品化合物15h。

第七步將化合物15h (26.5mg, 90.21 µmol, 1eq ) ，化合物1g (12.03 mg, 81.19 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (16.36 mg, 18.04µmol, 0.2eq )和碳酸銫（44.09 mg, 135.32µmol, 1.5eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（2 mL）並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，隨後經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷=1:20）純化得化合物15。MS:m/z 406.2 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.70 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.29 (s, 2H), 2.79 (s, 2H), 2.48 (s, 3H), 1.62-1.89 (m, 6H)。

實施例16

第一步 0℃下，向化合物16a（1 g, 8.36 mmol, 1eq, 鹽酸鹽）的乙酸（10 mL）和水（3.5 mL）混合溶液中緩慢加入亞硝酸鈉（634.66 mg, 9.20 mmol, 1.1eq ）的水（1 mL）溶液，加畢反應液於20℃反應3小時。反應完全後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（200 mL）淬滅，乙酸乙酯（100 mL*2）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:4）純化得化合物16b。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.51 (d,J =12.05 Hz, 1H), 4.31 (dd,J =11.92, 4.14 Hz, 1H), 4.08 (d,J =14.4 Hz, 1H), 3.38 (ddd,J =14.31, 4.64, 1.13 Hz, 1H), 1.57-1.73 (m, 2H), 0.83-0.95 (m, 1H), 0.08-0.20 (m, 1H)。

第二步 0℃下，向化合物16b（0.73 g, 6.51 mmol, 1eq ）的乙酸（3 mL）和甲醇（3 mL）混合溶液中加入鋅粉（1.70 g, 26.04 mmol, 4eq ），加畢反應液在25℃反應1小時。反應完全後，加入乙酸乙酯（50 mL）稀釋，反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得化合物16c。

第三步 0℃下，向化合物1a(4.35 g, 22.42mmol, 1eq ) 的乙醇（30 mL）溶液中依次加入化合物16c（2.2 g, 22.42mmol, 1eq ）和二異丙基乙基胺（14.49 g, 112.08mmol, 5eq ,19.52 mL），加畢反應液於0℃下反應1小時。反應完全後，加入水（100 mL）淬滅，二氯甲烷（100 mL*2）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:9）純化得化合物16e。MS:m/z 255.7 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.03 (s, 1H), 8.99 (br s, 1H), 3.37 (d,J =8.25 Hz, 2H), 3.09 (br d,J =7.88 Hz, 2H),1.55-1.58 (m, 2H), 0.87 (q,J =4.17 Hz, 1H), 0.58-0.68 (m, 1H)。

第四步向化合物16e (100 mg, 391.14µmol, 1eq ) 的乙醇（2 mL）和水（2 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（87.37 mg, 1.56mmol, 4eq ）和氯化銨（83.69 mg, 1.56mmol, 4eq ），加畢反應液於80℃下反應2小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，矽藻土過濾並用乙醇（50 mL）洗滌，濾液減壓濃縮得粗品，粗品在25℃下在二氯甲烷/甲醇（50 mL: 10 mL）溶液中攪拌15分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得化合物16f。

第五步向化合物16f (100 mg, 443.11µmol, 1eq ) 的乙腈（2 mL）溶液中加入N,N '-羰基二咪唑（71.85 mg, 443.11µmol, 1eq ），加畢反應液於80℃下反應1小時。反應完全後，乙酸乙酯（20 mL*2）萃取，水（20 mL*2）洗滌，經薄層製備色譜（乙酸乙酯:石油醚=1:2）純化得化合物16g。MS:m/z 252.0 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 8.12 (s, 1H), 3.73 (d,J =7.03 Hz, 2H), 3.11 (d,J =7.78 Hz, 2H), 1.55-1.61 (m, 2H), 0.73-0.77 (m, 1H), 0.57-0.65 (m, 1H)。

第六步向化合物16g (20 mg, 79.47µmol, 1eq ) 的N,N -二甲基甲醯胺（3 mL）溶液中依次加入碳酸銫（51.78 mg, 158.94µmol, 2eq ）和碘甲烷（11.28 mg, 79.47µmol, 1eq ），加畢反應液於25℃下反應3小時。反應完全後，加水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯（20 mL*2）萃取，飽和食鹽水（100 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得粗品化合物16h。

第七步將化合物16h (28mg, 105.38 µmol, 1eq ) ，化合物1g (14.05 mg, 94.84 µmol, 0.9eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (19.11 mg, 21.08µmol, 0.2eq )和碳酸銫（51.50 mg, 158.07µmol, 1.5eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（3 mL）並在100℃下反應3小時。反應完全後，反應液過濾並用乙酸乙酯（50 mL）洗滌，濾液減壓濃縮，隨後經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷=1:20）純化得化合物16。MS:m/z 378.3 [M+H]⁺ ；¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 9.16 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 3.76 (br d,J =7.03 Hz, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.11 (br d,J =7.78 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.52-1.61 ( m, 2H), 0.70-0.76 (m,1H), 0.53-0.62 (m, 1H)。

實施例17

第一步 15℃下，向化合物17a（5.18 g, 30.0 mmol, 1eq ）的1,4-二氧六環（30 mL）溶液中加入肼一水合物（4.61 g, 120.0 mmol, 4eq ），加畢於15℃下反應8小時。反應完全後，反應液過濾，濾餅用水（50 mL）洗滌並經減壓乾燥得化合物17b。MS:m/z . 168.9 [M+H]⁺ 。

第二步 25℃下向化合物17b（5.04 g, 30 mmol, 1eq ）的二氯甲烷（60 mL）溶液中依次加入原甲酸三甲脂 (12.73 g, 120 mmol, 4eq ) 和三氟乙酸(0.684 g, 6 mmol, 0.2eq )，加畢在25℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷= 0:1~1:9）純化得化合物17c。MS:m/z . 178.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 9.70 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 2.59 (s, 3H)。

第三步向化合物17c (3.92 g, 22 mmol, 1eq )的乙醇（80 mL）和水（20 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（6.14 g, 110 mmol, 5eq ）和氯化銨（5.88 g, 110 mmol, 5eq ），加畢反應液於70℃下反應3小時。反應完全後，反應液過濾並用乙醇（20 mL）洗滌，濾液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷= 0:1~1:9）純化得化合物17d。MS:m/z 148.8 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 8.11 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 5.01 (s, 2H), 2.25 (d,J =0.88 Hz, 3H)。

第四步將化合物17d (29.63 mg, 200 µmol, 1eq )，化合物5h (59.14 mg, 200.00 µmol, 1eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (27.19 mg, 30.00 µmol, 0.15eq )和碳酸銫（97.75 mg, 300 µmol, 1.5eq ）的二氧六環 (2.5 mL)溶液置換氮氣三次並於100℃氮氣保護下反應2小時。反應完全後，矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得粗品，粗品經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷= 1:12）純化得化合物17。MS:m/z 408.2 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.88 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.46-4.54 (m, 2H), 4.05 (dd,J =9.88, 2.13 Hz, 2H), 3.41 (s, 3H), 2.86 (d,J =9.63 Hz, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.29-2.36 (m, 2H), 2.01-2.09 (m, 2H)。

實施例18

將化合物17d (29.63 mg, 200 µmol, 1eq ) ，化合物4h (59.14 mg, 200.00 µmol, 1eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (27.19 mg, 30.00 µmol, 0.15eq )和碳酸銫（97.75 mg, 300 µmol, 1.5eq ）的二氧六環 (2.5 mL)溶液置換氮氣三次並於100℃氮氣保護下反應2小時。反應完全後，矽藻土過濾，減壓濃縮得粗品，粗品經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷= 1:12）純化得化合物18。MS:m/z 408.1 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.77 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.13-4.22 (m, 2H), 3.85-3.94 (m, 2H), 3.69-3.75 (m, 2H), 3.40 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.37-2.46 (m, 2H), 2.09-2.18 (m, 2H)。

實施例19

第一步向化合物19a（1g, 6.53 mmol, 1 eq）的乙醇（10 mL）溶液中加入氯乙醛（1.92 g, 9.80 mmol,1.58 mL, 40% 純度, 1.5 eq），加畢反應液於70℃反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷=0:1~1:9）純化得化合物19b。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 9.95 (s, 1H), 8.34 (d,J =1.50 Hz, 1H), 8.15 (d,J =1.88 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 2.71 (s, 3H)。

第二步向化合物19b (1.2 g, 6.77mmol, 1eq) 的乙醇（6 mL）和水（6 mL）混合溶液中依次加入鐵粉（1.51 g, 27.09mmol, 4eq）和氯化銨（1.45 g, 27.09mmol, 4eq），加畢反應液於80℃下反應1小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得粗品，粗品於25℃下在二氯甲烷：甲醇= 30 mL: 3 mL中超聲5分鐘，過濾，濾液濃縮得化合物19c。MS:m/z 147.9 [M+H]⁺ 。

第三步將化合物5h (50mg, 169.08µmol, 1 eq) ，化合物19c(22.40 mg, 152.17 µmol, 0.9eq)，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (30.65 mg, 33.82µmol, 0.2eq)和碳酸銫（82.63 mg, 253.61µmol, 1.5eq）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（2 mL），加畢在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，殘留物先經柱層析（甲醇:二氯甲烷=0:1~1:9）純化得粗品，再經製備高效液相色譜（中性條件:色譜柱: Phenomenex Gemini-NX 80*30mm*3µm;流動相: [水(10mM 碳酸氫銨)-乙腈];乙腈%: 16%-46%, 9分鐘）純化得化合物19。MS:m/z 407.3 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.46 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.47-4.56 (m, 2H), 4.07-4.15 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.82-2.93 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.26-2.35 (m, 2H), 2.01-2.11 (m, 2H)。

實施例20

第一步將化合物4h (50mg, 169.08µmol, 1 eq) ，化合物19c (22.40 mg, 152.17 µmol, 0.9eq)，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (30.65 mg, 33.82µmol, 0.2eq)和碳酸銫（82.63 mg, 253.61µmol, 1.5eq）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環(2 mL)，加畢在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，先經柱層析（甲醇:二氯甲烷=0:1~1:9）純化得粗品，再經製備高效液相色譜（中性條件:色譜柱: Phenomenex Gemini-NX 80*30mm*3µm;流動相: [水(10mM 碳酸氫銨)-乙腈];乙腈%: 13%-43%, 9分鐘）純化得化合物20。MS:m/z 407.3 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.20 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.07-4.16 (m, 2H), 3.79-3.88 (m, 2H), 3.66-3.75 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 2.35-2.47 (m, 5H), 2.05-2.15 (m, 2H)。

實施例21

第一步向化合物21a (3 g,12.66 mmol, 1eq) 的二氧六環（20 mL）溶液中加入2,2-二甲氧基苄胺（6.35 g, 37.97 mmol, 5.72 mL, 3eq）和N,N -二異丙基乙基胺（4.91 g, 37.97 mmol, 6.61 mL, 3eq），加畢反應液於110℃下反應16小時。反應完全後，反應液冷卻至室溫，減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:3）純化得化合物21b。MS:m/z 385.0 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 7.84 (s, 1H), 7.16-7.20 (m, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.40-6.48 (m, 2H), 4.78 (s, 1H), 4.31-4.37 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.22 (s, 3H)。

第二步向化合物21b (865 g,2.25 mmol, 1eq) 的二氯甲烷（9 mL）溶液中加入三氟乙酸（6.93 g, 60.78 mmol, 4.5 mL, 27eq），加畢反應液於20℃下反應12小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉（20mL）調節pH為8~9，乙酸乙酯（10 mL*3）萃取，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物21c。MS:m/z 234.9 [M+H]⁺ 。

第三步向化合物21c (375 mg,1.6 mmol, 1eq) 的甲苯（4 mL）溶液中加入N,N -二甲基甲醯胺二甲基縮醛（572.80 mg, 4.81 mmol, 638.58 µL, 3eq），加畢反應液於110℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮得粗品化合物21d。

第四步向化合物21d (620 mg, 2.14 mmol, 1e q) 的甲醇（6mL）溶液中加入鹽酸羥胺（298.04 mg, 4.29 mmol, 2eq ），加畢反應液於70℃下反應1小時。反應完全後，反應液減壓濃縮得化合物21e。

第五步 0℃下，向化合物21e (1.14 g, 4.11 mmol, 1eq ) 的四氫呋喃（12mL）溶液中加入三氟乙酸酐（1.30 g, 6.17 mmol, 858.47 µL, 1.5eq ），加畢反應液於20℃下反應18小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物21f。MS:m/z 259.9 [M+H]⁺ 。

第六步將化合物21f (175 mg, 675.55 µmol, 1eq ) ，二苯甲酮亞胺(134.68 mg, 743.11 µmol, 124.70 µL, 1.1eq )，三(二亞苄基丙酮)二鈀(12.37 mg, 13.51 µmol, 0.02eq )，1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(11.74 mg, 20.29µmol, 0.03eq )和第三丁醇鈉（97.38 mg, 1.01 mmol, 1.5eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水甲苯（3 mL），加畢在90℃下反應3小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，隨後加入四氫呋喃（10 mL）和3 mol/L鹽酸溶液（3 mL），在20℃下攪拌0.5小時，而後加入水（20 mL）稀釋，乙酸乙酯（15 mL*2）萃取，棄去有機相。水相加入適量氨水溶液調節pH為9~11，而後用乙酸乙酯（10 mL*3）萃取，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（甲醇:二氯甲烷=0:1~1:9）純化得化合物21g。MS:m/z 148.9 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.20 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 4.17 (s, 2H), 2.20-2.24 (m, 3H)。

第七步將化合物21g (22.55 mg, 152.17 µmol, 0.9eq ) ，化合物5h (50 mg, 169.08 µmol, 1eq )，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (30.65 mg, 33.82 µmol, 0.2eq )和碳酸銫（110.18 mg, 338.15 µmol, 2eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（2 mL）並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮，經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷= 1:10）純化得化合物21。MS:m/z 408.1 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.03 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 4.46-4.54 (m, 2H), 4.01-4.11 (m, 2H), 3.42 (s, 3H), 2.80-2.91 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.30-2.39 (m, 2H), 2.01-2.08 (m, 2H)。

實施例22

第一步將化合物4h (50 mg, 169.08 µmol, 1eq )，化合物21g (22.55 mg, 152.17 µmol, 0.9eq)，甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (30.65 mg, 33.82 µmol, 0.2eq )和碳酸銫（110.18 mg, 338.15 µmol, 2eq ）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環(3 mL)並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷= 1:10）純化得化合物22。MS:m/z 430.1 [M+Na]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ )δ ppm 8.97 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 4.13-4.19 (m, 2H), 3.87-3.93 (m, 2H), 3.70-3.76 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 2.41-2.49 (m, 5H), 2.14-2.20 (m, 2H)。

實施例23

第一步向化合物23a (4.2 g, 22.34 mmol, 1eq )的乙醇（42 mL）和水（17.5 mL）混合溶液中加入氯乙醛（5.26 g, 26.80 mmol, 670.12 µL, 40% 純度, 1.2eq ），加畢反應液於100℃下反應16小時。反應完全後，反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液（60 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL*3）萃取，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並經柱層析（乙酸乙酯:石油醚=0:1~1:1）純化得化合物23b。MS:m/z 213.8 [M+H+2]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 8.57 (s, 1H), 7.84-7.86 (m, 1H), 7.48-7.50 (m, 1H), 2.79 (s, 3H)。

第二步將化合物23b (1 g, 4.72 mmol, 1eq ) ，二苯甲酮亞胺(940.15 mg, 5.19 mmol, 870.51 µL, 1.1eq )，三(二亞苄基丙酮)二鈀(431.85 mg, 471.59 µmol, 0.1eq )，4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(545.75 mg, 943.19 µmol, 0.2eq )和碳酸銫（3.07 g, 9.43 mmol, 2eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（30 mL）並在120℃下反應3小時。反應完全後，冷卻至室溫，反應液減壓濃縮，隨後加入四氫呋喃（10 mL）和3 mol/L鹽酸溶液（12 mL），並在20℃下攪拌半小時，而後加入水（20 mL）稀釋，乙酸乙酯（20 mL*3）萃取，棄去有機相。水相加入適量氨水溶液調節pH為9~11，隨後該水相直接減壓濃縮並經柱層析（甲醇：二氯甲烷=0:1~1:9）純化得化合物23c。MS:m/z 148.8 [M+H]⁺ 。

第三步將化合物23c (40.08 mg, 270.52 µmol, 2eq ) ，化合物5h (40 mg, 135.26 µmol, 1eq )，三(二亞苄基丙酮)二鈀(12.39 mg, 13.53 µmol, 0.1eq )，4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(15.65 mg, 27.05 µmol, 0.2eq )和碳酸銫（88.14 mg, 270.52 µmol, 2eq ）置於反應瓶並置換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環（2 mL）並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷= 1:10）純化得化合物23。MS:m/z 408.2 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.74 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.48-4.54 (m, 2H), 4.03-4.10 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 2.84-2.90 (m, 2H), 2.74 (s, 3H), 2.25-2.32 (m, 2H), 2.03-2.11 (m, 2H)。

實施例24

第一步將化合物4h (40 mg, 135.26 µmol, 1eq ) ，化合物23c (40.08 mg, 270.52 µmol, 2eq )，三(二亞苄基丙酮)二鈀(12.39 mg, 13.53 µmol, 0.1eq )，4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(15.65 mg, 27.05 µmol, 0.2eq )和碳酸銫（88.14 mg, 270.52 µmol, 2eq ）置於反應瓶並抽換三次氮氣，隨後向混合物中加入無水二氧六環(2 mL)並在100℃下反應2小時。反應完全後，反應液減壓濃縮並經薄層製備色譜（甲醇:二氯甲烷= 1:10）純化得化合物24。MS:m/z 408.1 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 9.60 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.43-7.50 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.06-4.14 (m, 2H), 3.79-3.86 (m, 2H), 3.67-3.75 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.72 (s, 3H), 2.39-2.47 (m, 2H), 2.09-2.18 (m, 2H)。

生物測試數據：

實驗例1：DNA依賴性蛋白激酶（DNA-PK）抑制活性篩選實驗本實驗測試於Eurofins

實驗材料及方法：人源DNA-PK; Mg / ATP; GST-cMyc-p53; EDTA; Ser15抗體; ATP: 10 µM。

實驗方法(Eurofins Pharma Discovery Service)：將DNA-PK（h）在含有50nM GST-cMyc-p53和Mg / ATP（根據需要的濃度）的測定緩衝液中溫育。通過添加Mg / ATP混合物引發反應。在室溫下溫育30分鐘後，加入含有EDTA的終止溶液終止反應。最後，添加檢測緩衝液（含有標記的抗GST單克隆抗體和針對磷酸化p53的銪標記的抗磷酸Ser15抗體）。然後以時間分辨螢光模式讀盤，並根據公式HTRF = 10000×（Em665nm / Em620nm）測定均勻時間分辨螢光（HTRF）信號。

實驗結果：表1：DNA-PK激酶活性測試結果

供試品	DNA-PK激酶抑制IC₅₀ (nM)
化合物1	2
化合物4	1
化合物5	1
化合物6	1
化合物7	2
化合物8	7
化合物9	3
化合物10	2.5
化合物11	5
化合物12	4
化合物13	2
化合物14	5
化合物15	1
化合物16	0.5
化合物17	0.5
化合物18	0.9
化合物19	0.6
化合物20	0.9
化合物21	0.5
化合物22	0.4
化合物23	10
化合物24	68

結論：本發明化合物具有顯著的DNA-PK激酶抑制活性。

實驗例2：藥代動力學評價（一）

1. 實驗方法受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水（化合物1,4,10,17）或20%N,N -二甲基乙醯胺/80%水（化合物5）混合，渦旋並超聲，製備得到0.08 mg/mL（化合物1,4,10,17）或0.50 mg/mL（化合物5）近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取18至20克的Balb/c雄性小鼠，靜脈注射給予候選化合物溶液，劑量為0.4（化合物1,4,10,17）或1 mg/kg（化合物5）。受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水（化合物1,4,10,17）或20%-羥丙基-β-環糊精（化合物5）混合，渦旋並超聲，製備得到0.2 mg/mL（化合物1,4,10,17）或1 mg/mL（化合物5）近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取18至20克的Balb/c雄性小鼠，口服給予候選化合物溶液，劑量為2（化合物1,4,10,17）或5 mg/kg（化合物5）。收集一定時間的全血，製備得到血漿，以LC-MS/MS 方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNonlin 軟件(美國Pharsight公司)計算藥代參數。

各參數定義： IV：靜脈注射；PO：口服；C₀ ：靜脈注射後瞬時的需要濃度；C_max ：給藥後出現的血藥濃度最高值；T_max ：給藥後達到藥峰濃度所需的時間；T_1/2 ：血藥濃度下降一半所需的時間；V_dss ：表觀分佈容積，指藥物在體內達到動態平衡時體內藥量與血藥濃度的比例常數。Cl：清除率，指單位時間從體內清除的藥物表觀分佈容積數；T_last ：最後一個檢測點的時間；AUC_0-last ：藥時曲線下面積，指血藥濃度曲線對時間軸所包圍的面積；F：藥物被吸收進入血液循環的速度和程度的一種量度，是評價藥物吸收程度的重要指標。

測試結果：實驗結果見表2。表2：化合物血漿中的盒式PK測試結果

參數	C₀ (nM)	C_max (nM)	T_max (h)	T_1/2 (h)	V_dss (L/kg)	Cl (mL/min/kg)	T_last (h)	AUC_0-last (nM.h)	F (%)
化合物1	IV(0.4 mg/kg)	959	--	--	0.598	1.51	37.7	4	426	--
PO(2 mg/kg)	--	1425	0.5	0.841	--	--	8	2497	96.4
化合物4	IV(0.4 mg/kg)	919	--	--	0.24	1.08	57	2	286	--
PO(2 mg/kg)	--	1595	0.25	0.609	--	--	4	1736	123
化合物5	IV(1 mg/kg)	3604	--	--	1.28	1.49	24.7	ND	1657	--
PO(5 mg/kg)	--	2170	0.25	3.85	--	--	10	3489	44.5
化合物10	IV(0.4 mg/kg)	1121	--	--	0.591	0.883	25.4	4	640	--
PO(2 mg/kg)	--	2065	0.5	1.22	--	--	8	3832	120
化合物17	IV(0.4 mg/kg)	748	--	--	0.559	1.39	34.7	4	470	--
PO(2 mg/kg)	--	1545	1.0	0.81	--	--	8	3397	144

ND: 未檢測 “--”是指未測試或未獲得數據。

結論：本發明化合物展現了較長的半衰期、較低的清除率和較高的藥物暴露量，具有較優的體內藥物代謝動力學性質。

實驗例3：小鼠藥代動力學評價（二）

實驗方法：受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水混合，渦旋並超聲，製備得到0.4 mg/mL（化合物5）近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取18至20克的Balb/c雄性小鼠，靜脈注射給予候選化合物溶液，劑量為2 mg/kg。受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水混合，渦旋並超聲，製備得到1 mg/mL近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取18至20克的Balb/c雄性小鼠，口服給予候選化合物溶液，劑量10 mg/kg。收集一定時間的全血，製備得到血漿，以LC-MS/MS 方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNonlin 軟件(美國Pharsight公司)計算藥代參數。

測試結果：實驗結果見表3。表3：化合物血漿中的PK測試結果

參數	C₀ (nM)	C_max (nM)	T_max (h)	T_1/2 (h)	V_dss (L/kg)	Cl (mL/min/kg)	T_last (h)	AUC_0-last (nM.h)	F (%)
化合物5	IV (2 mpk)	4742	--	--	0.733	1.07	23.7	8	3454	--
PO (10 mpk)	--	11433	0.50	0.850	--	--	10	23184	134

“--”是指未測試或未獲得數據。

實驗例4：大鼠藥代動力學及腦部暴露量評價

實驗方法：受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水混合，渦旋並超聲，製備得到0.5 mg/mL（化合物5）或1 mg/mL（化合物17）近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取SD雄性大鼠，靜脈注射給予候選化合物溶液，劑量為1 mg/kg（化合物5）或2 mg/kg（化合物17）。受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水混合，渦旋並超聲，製備得到4 mg/mL均一混懸液（化合物5）或1 mg/mL近似澄清溶液（化合物17）。選取SD雄性大鼠，口服給予候選化合物溶液，劑量40 mg/kg（化合物5）或10 mg/kg（化合物17）。收集一定時間的全血，腦脊液，腦組織，制漿，以LC-MS/MS 方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNonlin 軟件(美國Pharsight公司)計算藥代參數。

測試結果：實驗結果見表4。表4：化合物血漿、腦脊液，腦組織中的PK測試結果

參數	C₀ (nM)	C_max (nM)	T_max (h)	T_1/2 (h)	V_dss (L/kg)	Cl (mL/min/kg)	T_last (h)	AUC_0-last (nM.h)
化合物5	IV (1 mpk)	3043	--	--	1.45	1.41	17.0	8	2382
PO (40 mpk)	血漿	--	10223	2	ND	--	--	8	59896
腦脊液	--	1260	2	ND	--	--	8	7740
腦組織	--	1019^a	4	ND	--	--	8	6369^b
化合物17	IV (2 mpk)	5303	--	--	1.16	1.40	16.9	8	4861
PO (10 mpk)	--	6245	2	2.29	--	--	8	32535

ND: 未檢測。 “--”是指未測試或未獲得數據。 a: 單位 nmol/kg；b: 單位h*nmol/kg。

結論：本發明化合物展現了較長的半衰期、較低的清除率和較高的藥物暴露量，具有較優的體內藥物代謝動力學性質，同時，該化合物具有較好的腦部暴露量。

實驗例5：比格犬藥代動力學評價

實驗方法：受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水混合，渦旋並超聲，製備得到1 mg/mL近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取Beagle雄性犬，靜脈注射給予候選化合物溶液，劑量為1 mg/kg。受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水混合，渦旋並超聲，製備得到1 mg/mL近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取Beagle雄性犬，口服給予候選化合物溶液，劑量5 mg/kg。收集一定時間的全血，製備得到血漿，以LC-MS/MS 方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNonlin 軟件(美國Pharsight公司)計算藥代參數。

測試結果：實驗結果見表5。表5：化合物血漿中的PK測試結果

參數	C₀ (nM)	C_max (nM)	T_max (h)	T_1/2 (h)	V_dss (L/kg)	Cl (mL/min/kg)	T_last (h)	AUC_0-last (nM.h)	F (%)
化合物17	IV (1 mpk)	1450	--	--	5.04	1.58	5.89	24	6817	--
PO (5 mpk)	--	4935	1.50	4.27	--	--	24	31535	92.3
化合物5	IV (1 mpk)	1820	--	--	4.04	1.87	8.26	24	4957	--
PO (5 mpk)	--	9270	1.67	4.27	--	--	24	68263	279

“--”是指未測試或未獲得數據。

實驗例6：食蟹猴藥代動力學評價

實驗方法：受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水混合，渦旋並超聲，製備得到1 mg/mL近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取雄性食蟹猴，靜脈注射給予候選化合物溶液，劑量為1 mg/kg。受試化合物與10%二甲基亞碸/50%聚乙二醇200/40%水混合，渦旋並超聲，製備得到1 mg/mL近似澄清溶液，微孔濾膜過濾後備用。選取雄性食蟹猴，口服給予候選化合物溶液，劑量5 mg/kg。收集一定時間的全血，製備得到血漿，以LC-MS/MS 方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNonlin 軟件(美國Pharsight公司)計算藥代參數。

測試結果：實驗結果見表6。表6：化合物血漿中的PK測試結果

参数	C₀ (nM)	C_max (nM)	T_max (h)	T_1/2 (h)	V_dss (L/kg)	Cl (mL/min/kg)	T_last (h)	AUC_0-last (nM.h)	F (%)
化合物5	IV (1 mpk)	2291	--	--	3.60	1.52	16.8	ND	2440	--
PO (5 mpk)	--	4503	1.17	1.35	--	--	12	14024	115

ND: 未檢測。 “--”是指未測試或未獲得數據。

結論：本發明化合物展現了較長的半衰期、較低的清除率和較高的藥物暴露量，以及較高的口服生物利用度，具有較優的體內藥物代謝動力學性質。

實驗例7：人非小細胞肺癌NCI-H1703細胞皮下異種移植腫瘤BALB/c 裸小鼠模型的體內藥效學研究

實驗目的：研究待測化合物對人小細胞肺癌NCI-H1703細胞皮下異種移植腫瘤BALB/c 裸小鼠模型的體內藥效學

實驗動物: 雌性BALB/c 裸小鼠, 6~8周齡，體重18-22克；供應商：上海西普爾-必凱實驗動物有限公司

實驗方法與步驟:

7.1 細胞培養

人非小細胞肺癌NCI-H1703細胞體外培養，RPMI1640培養基中加10％胎牛血清，100 U/mL青黴素和100μg/mL鏈黴素，37℃ 5%CO₂ 孵箱培養。一周兩次用胰酶-EDTA進行常規消化處理傳代。當細胞飽和度為80%-90%，數量到達要求時，收取細胞，計數，接種。

7.2腫瘤細胞接種(腫瘤接種)

將0.2 ml (5×10⁶ 個) NCI-H1703細胞(加基質膠，體積比為1:1)皮下接種於每只小鼠的右後背，腫瘤平均體積達到約130 mm³ 時開始分組給藥。

7.3受試物的配製:

化合物5配製成3 mg/mL, 6 mg/mL, 9 mg/mL的混懸溶液，化合物17配製成9 mg/mL的混懸液，溶媒為0.5%HPMC+1%Tween 80。

7.4腫瘤測量和實驗指標

每週兩次用遊標卡尺測量腫瘤直徑。腫瘤體積的計算公式為：V = 0.5a ×b ² ，a 和b 分別表示腫瘤的長徑和短徑。

化合物的抑瘤療效用TGI(%)或相對腫瘤增殖率T/C(%)評價。相對腫瘤增殖率T/C (%) = T_RTV / C_RTV × 100%（T_RTV ：治療組RTV平均值；C_RTV ：陰性對照組RTV平均值）。根據腫瘤測量的結果計算出相對腫瘤體積（RTV），計算公式為RTV = V_t / V₀ ，其中V₀ 是分組給藥時（即第0天）測量所得腫瘤體積，V_t 為某一次測量時的腫瘤體積，T_RTV 與C_RTV 取同一天數據。

TGI (%)，反映腫瘤生長抑制率。TGI(%)=[1-(某處理組給藥結束時平均瘤體積－該處理組開始給藥時平均瘤體積)/(溶劑對照組治療結束時平均瘤體積－溶劑對照組開始治療時平均瘤體積)]×100%。在實驗結束後將檢測腫瘤重量，並計算T/重量百分比，T重量和C重量分別表示給藥組和溶媒對照組的瘤重。

7.5統計分析

統計分析基於試驗結束時RTV的數據運用SPSS軟件進行分析。治療組在試驗結束時給藥後第21天表現出最好的治療效果，因此基於此數據進行統計學分析評估組間差異。兩組間比較用T-test 進行分析，三組或多組間比較用one-way ANOVA進行分析，如果方差齊（F值無顯著性差異），應用Tukey‘s 法進行分析；如果方差不齊（F值有顯著性差異），應用Games-Howell法進行檢驗。p ＜ 0.05認為有顯著性差異。

7.6 實驗結論和討論

在本實驗中，化合物5在60 mg/kg和90 mg/kg劑量下（一天兩次給藥），化合物17在90 mg/kg劑量下（一天兩次給藥），與空白對照相比具有顯著抑瘤作用。化合物5在30 mg/kg劑量下（一天兩次給藥）具有一定的抑瘤作用。化合物5的療效均現劑量依賴性，實驗結果見表7。第21天腫瘤重量和腫瘤照片結果見表8和圖1。表7：化合物對人肺癌NCI-H1703異種移植瘤模型的抑瘤效果

組別	腫瘤體積(mm³ )^a	腫瘤體積(mm³ )^a （第21天）	RTV （第21天）	TGI (%)^b （第21天）	T/C (%)^b （第21天）	p ^c
（第0天）
空白對照	131 ± 11	1200 ± 54	9.55 ± 0.69	-	-	-
化合物5 (30 mg/kg)	131 ± 10	979 ± 86	7.57 ± 0.53	20.6	79.3	0.202
化合物5 (60 mg/kg)	131 ± 10	427 ± 64	3.31 ± 0.51	72.3	34.7	＜0.001
化合物5 (90 mg/kg)	130 ± 10	351 ± 64	2.64 ± 0.45	79.4	27.7	＜0.001
化合物17 (90 mg/kg)	130 ± 13	435 ± 94	3.19 ± 0.46	71.6	33.4	＜0.001

注：a. 平均值 ± SEM，n=9（化合物5）或n=6（化合物17）。 b. 腫瘤生長抑制由T/C和 TGI (TGI (%) = [1-(T₂₁ -T₀ )/ (V₂₁ -V₀ )] ×100) 計算。 c.p 值運用one-way ANOVA進行分析腫瘤體積相對值（RTV）所得。表8：各實驗組腫瘤重量及照片

組別	腫瘤重量 (g)^a	T/C_weight ^b	p 值^c	對應照片
（PG-D21）	(%)
空白對照	1.296 ± 0.060	-	-	第一行
化合物5 (30 mg/kg)	1.031 ± 0.095	79.6	0.301	第二行
化合物5 (60 mg/kg)	0.467 ± 0.078	36.0	＜0.001	第三行
化合物5 (90 mg/kg)	0.379 ± 0.069	29.2	＜0.001	第四行
化合物17 (90 mg/kg)	0.466 ± 0.103	35.9	＜0.001	第五行

注: a. 平均值 ± SEM，n=9（化合物5）或n=6（化合物17）。 b. 腫瘤生長抑制由T/C_weight = TW_treatment / TW_溶媒計算。 c.p 值運用one-way ANOVA與溶媒治療組進行分析腫瘤重量所得，F值有顯著性差異，應用Games-Howell法進行分析。

結論：在本實驗中，化合物5在60 mg/kg和90 mg/kg劑量下，化合物17在90 mg/kg劑量下，與對照組相比具有顯著的抑瘤作用，且化合物5的療效呈現劑量依賴性。在本實驗中，荷瘤鼠對化合物均顯示出良好的耐受性，所有治療組無明顯體重下降。

雖然本發明已以實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

無

圖1為人NCI-H1703非小細胞肺癌體內藥效學研究第21天的腫瘤照片。

Claims

一種式（IV）所示化合物或其藥學上可接受的鹽，
其中，結構單元
選自
、
、
、
和
； E₁ 選自單鍵、-O-和-C(R₆ R₇ )-； R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R’和R’’各自獨立地選自H、F和Cl；或者R₁ 與R₂ 連接在一起使結構單元
選自
、
和
；或者R₃ 與R₄ 連接在一起使結構單元
選自
；或者R₁ 與R₄ 連接在一起使結構單元
選自
；或者R₂ 、R’’與它們共同連接的碳原子一起形成C_3-5 環烷基； R₅ 選自F、Cl、Br、I、環丙基和C_1-3 烷基，所述C_1-3 烷基任選被OH或1、2或3個R_a 取代； R₆ 和R₇ 各自獨立地選自H、F、Cl、Br、I和CN；或者R₆ 、R₇ 與它們共同連接的碳原子一起形成環丙基或4元氧雜環丁基；環A選自C_3-5 環烷基； Y₁ 選自環丙基和C_1-3 烷基，所述C_1-3 烷基任選被1、2、3、4 或5個F取代； R_a 選自H、F、Cl、Br和I。
根據請求項1所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其式（IV）所示化合物或其藥學上可接受的鹽選自式（III）所示化合物或其藥學上可接受的鹽，
其中，W、E₁ 、R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₅ 、R’和R’’如請求項1所定義。
根據請求項1或2所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其化合物選自

和
其中，環B選自C_3-5 環烷基；環C為環丙基或4元氧雜環丁基； n選自0和1；環A、R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₅ 、R₆ 和R₇ 如請求項1所定義。
根據請求項1-3任意一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₁ 與R₂ 連接在一起使結構單元
選自
、
、
和
。
根據請求項1-3任意一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₃ 與R₄ 連接在一起使結構單元
選自
。
根據請求項1-3任意一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₁ 與R₄ 連接在一起使結構單元
選自
和
。
根據請求項1-3任意一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，環A選自
和
。
根據請求項1-3任意一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₆ 、R₇ 與它們共同連接的碳原子一起形成
或
。
根據請求項1-3任意一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₂ 、R’’與它們共同連接的碳原子一起形成
或
。
根據請求項1-9任意一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₅ 選自F、Cl、CH₂ OH、CF₃ 和CH₃ 。
一種選自下式所示的化合物或其藥學上可接受的鹽
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
和
。
一種根據請求項1-11任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備DNA-PK抑制劑相關藥物上的用途。
根據請求項12所述的用途，其中，所述DNA-PK抑制劑相關藥物作為單一藥物在具有其他DNA修復途徑缺陷時的腫瘤中發揮治療效果。
根據請求項12所述的用途，其中，所述DNA-PK抑制劑相關藥物通過與放化療藥物聯用，增強對實體瘤和血液瘤的抑制作用。