TW202120123A - 類屈公病毒顆粒疫苗及使用其之方法 - Google Patents

Abstract

本揭露內容係關於經改良之類病毒顆粒(VLP)組合物及疫苗，其用於在個體中誘發針對屈公病毒(CHIKV)感染的免疫反應及/或保護性免疫，例如藉由在投與單次劑量之該組合物或疫苗之後7天內在個體中誘發針對CHIKV之中和抗體反應來進行。

Description

類屈公病毒顆粒疫苗及使用其之方法

相關申請案之交叉參考

本申請案主張2019年10月25日申請之美國臨時申請案第62/926,357號及2020年3月23日申請之美國臨時申請案第62/993,563號的優先權，該等申請案各自之內容以全文引用之方式併入本文中。 以電子方式提交之序列表之參考

與本申請案一起提申的以電子方式提交之ASCII正文檔案序列表(名稱：2479_215PC02_Seqlisting_ST25；大小：44,121個位元組；及創建日期：2020年10月22日)的內容以全文引用之方式併入本文中。

本發明係有關於類屈公病毒顆粒疫苗及使用其之方法。

發明背景

屈公病毒(Chikungunya virus；CHIKV)為披膜病毒科(Togaviridae)中之蚊媒α病毒，最初於1952年在坦尚尼亞(Tanzania)鑑別。對CHIKV之譜系學分析顯示存在三種基因型：亞洲、東/中/南非及西非。受此病毒感染導致特徵為突發發熱、肌肉痛、頭痛、皮疹及關節發炎的人類疾病。儘管發熱通常為短期，但嚴重關節炎症狀可持續數年。發炎病狀之慢性與肌肉骨胳病症，諸如遠端筋膜炎及近端肌腱炎相關，該等病症需要藥理療法及物理療法二者。老年人及患有共病，諸如神經、呼吸道或心血管疾病的個人患較嚴重疾病之風險較高。

自CHIKV於2004年在肯亞(Kenya)再度出現以來，其已感染非洲、歐洲及亞洲的數百萬人。一些報導提出全球人口中高達40%具有CHIKV暴露之風險。在不存在疫苗或抗病毒療法之情況下，該病毒之演化及向新地理區域中的擴散，及疾病嚴重程度帶來嚴重公共衛生威脅。當前不存在批准用於此疾病之特異性治療或疫苗。現有範例主要針對緩解疾病症狀，諸如提供常用藥劑，包括退熱劑、鎮痛劑及液體。

發明概要

本揭露內容之某些態樣係關於組合物或疫苗，其包含：(a)包含衍生自屈公病毒(CHIKV)之衣殼蛋白及套膜蛋白的類病毒顆粒(VLP)；(b)氫氧化鋁佐劑(例如氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®))；(c)糖；(d)緩衝劑及/或pH調節劑；及(e)載劑。

本揭露內容之某些態樣係關於組合物或疫苗，其包含有包含衍生自屈公病毒(CHIKV)之衣殼蛋白及套膜蛋白的類病毒顆粒(VLP)，其中在向個體投與單次劑量之該組合物或疫苗之後7天內，該組合物或疫苗在該個體中誘發針對CHIKV之中和抗體反應。本揭露內容之某些態樣係關於組合物或疫苗，其包含有包含衍生自屈公病毒(CHIKV)之衣殼蛋白及套膜蛋白的類病毒顆粒(VLP)，其中該組合物或疫苗在個體中誘發針對CHIKV之中和抗體反應，其中在單次劑量投與之後，針對CHIKV之中和抗體反應持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。在一些態樣中，該組合物或疫苗進一步包含佐劑，例如氫氧化鋁佐劑(例如氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®))。

在一些態樣中，衣殼蛋白為CHIKV C蛋白。在一些態樣中，套膜蛋白為選自由以下組成之群的CHIKV蛋白：E3、E2、6K、E1及其任何組合。在一些態樣中，VLP包含CHIKV套膜蛋白E2及E1。在一些態樣中，VLP包含CHIKV C、E2及E1蛋白。在一些態樣中，CHIKV C、E2及E1蛋白為組合物或疫苗中VLP蛋白的至少95%。在一些態樣中，VLP不包含CHIKV E3及/或6K。在一些態樣中，衣殼及套膜蛋白為衍生自CHIKV病毒株37997。

在某些態樣中，組合物或疫苗為適合於肌肉內注射之懸浮液。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約6 µg至200 µg VLP或約20 µg至100 µg VLP (例如約40 µg)。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約25 µg/mL至75 µg/mL VLP (例如約50 µg/mL VLP)。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含呈約30 µg至3000 µg或約100 µg至500 µg (例如約300 µg)之量的佐劑，例如氫氧化鋁佐劑(例如氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®))。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約250 µg/mL至625 µg/mL氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®) (例如約375 µg/mL氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約0.5 mL至2 mL或約0.5 mL至1 mL (例如約0.8 mL)之體積。

在某些態樣中，組合物或疫苗包含糖(例如蔗糖、乳糖或其任何組合)。在某些態樣中，組合物或疫苗包含緩衝劑及/或pH調節劑(例如磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、檸檬酸鈉脫水物或其任何組合)。在某些態樣中，組合物或疫苗不包含防腐劑或抗生素。

在某些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含：(a)約6 µg至60 µg VLP及(b)約200 µg至500 µg氫氧化鋁，其中單次劑量體積在約0.5 mL至1.0 mL之間。

在某些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含：(a)約6 µg至60 µg VLP；(b)約200 µg至500 µg氫氧化鋁；(c)約20 mg至80 mg蔗糖；(d)約0.2 mg至1.0 mg磷酸二氫鉀；(e)約0.2 mg至1.5 mg磷酸氫二鉀；(f)約2 mg至10 mg檸檬酸鈉脫水物；及(g)水，其中單次劑量體積在約0.5 mL至1.0 mL之間(例如0.8 mL)。

在某些態樣中，組合物或疫苗包含誘發針對CHIKV之同株或異株之抗體的VLP。在一些態樣中，VLP誘發針對一或多種選自由以下組成之群之CHIKV譜系的抗體：東/中/南非(ECSA)、西非及亞洲。

在某些態樣中，在向個體投與單次劑量之組合物或疫苗之後7天內，組合物或疫苗在個體中誘發針對CHIKV之中和抗體反應。在一些態樣中，在單次劑量投與之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少28天。在一些態樣中，在單次劑量投與之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少六個月。在一些態樣中，在單次劑量投與之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少一年、至少18個月或至少二年。在一些態樣中，在投與單次劑量之組合物或疫苗之後7天內，血清中和抗體效價≥ 30或≥ 40。

本揭露內容之某些態樣係關於包含單次劑量之本文所揭露之組合物或疫苗的預填充注射器。

本揭露內容之某些態樣係關於一種在個體中誘發針對屈公病毒(CHIKV)之免疫反應及/或保護性免疫之方法，其包含向個體投與本文所揭露之組合物或疫苗。

本揭露內容之某些態樣係關於一種在個體中誘發對屈公病毒(CHIKV)之中和抗體反應之方法，其包含向個體投與本文所揭露之組合物或疫苗。

本揭露內容之某些態樣係關於一種用於治療、預防個體之屈公感染或降低個體之屈公感染風險之方法，其包含向個體投與有效量之本文所揭露之組合物或疫苗。

本揭露內容之某些態樣係關於一種針對CHIKV感染對個體進行疫苗接種之方法，其包含向個體投與有效量之本文所揭露之組合物或疫苗。

本揭露內容之某些態樣係關於一種在個體中引發針對屈公病毒(CHIKV)之免疫反應及/或保護性免疫之方法，其包含：向個體投與組合物或疫苗，其包含(a)包含衍生自CHIKV之衣殼蛋白及套膜蛋白的類病毒顆粒(VLP)及(b)佐劑，其中單次劑量之組合物或疫苗包含約6 µg至200 µg VLP，且其中投與單次劑量之組合物或疫苗在投與之7天內在個體中引發CHIKV特異性中和抗體產生。

本揭露內容之某些態樣係關於一種在群體中誘發針對屈公病毒(CHIKV)之保護性免疫之方法，該方法包含：向群體投與組合物或疫苗，其包含(a)包含衍生自CHIKV之衣殼蛋白及套膜蛋白的類病毒顆粒(VLP)及(b)佐劑，其中單次劑量之組合物或疫苗包含約6 µg至200 µg VLP，且其中在投與單次劑量之組合物或疫苗之後7天內群體中至少60%產生針對CHIKV之中和抗體反應。在一些態樣中，在投與單次劑量之組合物或疫苗之後7天內，群體中至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%或至少98%產生≥ 30或≥ 40之血清中和抗體效價。在一些態樣中，在投與單次劑量之組合物或疫苗之後，群體中至少40%、至少50%或至少60%維持≥ 30或≥ 40之血清中和抗體效價至少28天、至少6個月、至少一年或至少二年。

在一些態樣中，中和抗體反應針對CHIKV之多種血清型及/或基因型接種個體。在一些態樣中，在單次劑量投與之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。在一些態樣中，在單次劑量之後至少28天、至少6個月或至少1年向個體投與第二劑量之組合物或疫苗。在一些態樣中，可在單次劑量之後在個體整個生存期中，例如至少28天、至少6個月、至少1年、至少2年、至少5年、至少10年或20年或更多投與一或多個加強劑量之組合物或疫苗。在一些態樣中，在投與第二劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少六個月。在一些態樣中，在投與第二劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少一年。在一些態樣中，在投與第二劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應(例如單次劑量或一或多次劑量之後)維持至少30個月、至少二年、至少3年、至少4年、至少5年、至少10年或20年或更長。在一些態樣中，針對CHIKV之中和抗體反應維持個體之生存期。在一些態樣中，在投與組合物或疫苗之後7天，個體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%產生對CHIKV之中和抗體反應。在一些態樣中，在投與組合物或疫苗之後7天、28天、一年或二年，血清反應(seroresponse)率為至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。在一些態樣中，血清中和抗體效價≥ 30或≥ 40或≥ 50。

在一些態樣中，組合物或疫苗經肌肉內投與。

在一些態樣中，組合物或疫苗以有效量投與。

在一些態樣中，個體為人類。在一些態樣中，在投與組合物或疫苗之前，個體未暴露於CHIKV抗原或CHIKV疫苗。在一些態樣中，在投與組合物或疫苗之前，個體不具有可偵測CHIKV抗體效價。在一些態樣中，在投與組合物或疫苗之前，個體具有≤ 5或≤10之可偵測CHIKV抗體效價。

較佳實施例之詳細說明

本揭露內容係關於經改良之類病毒顆粒(VLP)組合物及疫苗，其用於在個體中誘發針對屈公病毒(CHIKV)感染的免疫反應及/或保護性免疫，例如藉由在投與單次劑量之組合物或疫苗之後7天內在個體中誘發針對CHIKV之中和抗體反應，且/或其中在單次劑量投與之後，針對CHIKV之中和抗體反應持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。定義

除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語具有與一般熟習所描述之方法及組合物相關技術者通常所理解相同的含義。本文所提供之定義用於幫助理解本文頻繁使用之某些術語。

除非明確陳述或自上下文顯而易見，否則如本文所用，術語「或」應理解為包括性的。除非明確陳述或自上下文顯而易見，否則如本文所使用，術語「一(a/an)」及「該」應理解為單數或複數。

在本揭露內容中，「包含(comprises/comprising)」、「含有」及「具有」及其類似者可具有美國專利法中歸屬於其之含義且可意謂「包括(includes/including」及其類似者；「基本上由……組成(consisting essentially of/consists essentially)」同樣地具有美國專利法中所歸屬之含義且該術語為開放式，允許超過所列舉者存在，只要所列舉者之基本或新穎特徵未由超過所列舉者之存在改變即可，但排除先前技術實施例。

除非明確陳述或自上下文顯而易見，否則如本文所用，術語「約」應理解為在此項技術中之正常容限範圍內，例如在平均值之2個標準差內。約可理解為在陳述值之10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%或0.01%內。除非上下文另有明確說明，否則本文所提供之所有數值均藉由術語約修飾。

如本文所用，「藥劑」意謂任何小分子化合物、抗體、核酸分子或多肽或其片段。

如本文所用，術語「佐劑」意欲指代當與特定免疫原在調配物(例如疫苗)中組合使用時，將增強、更改或修改所得免疫反應之化合物。在某些實施例中，佐劑與VLP組合使用。修改免疫反應包括加強抗體及細胞免疫反應中任一者或二者，或拓寬其特異性。修改免疫反應亦可意謂減少或抑制某些抗原特異性免疫反應。在某些態樣中，佐劑為氫氧化鋁佐劑(例如氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®) 2%)。Alhydrogel®為氫氧化鋁(aluminium hydroxide) (被稱作鋁(alum))濕凝膠懸浮液。

如本文所用，「α病毒」意欲指代屬於披膜病毒科病毒之含RNA病毒。例示性披膜病毒包括但不限於EEEV、WEEV、VEEV、SFV、CHIKV、奧-奈氏病毒(O'nyong-nyong virus)、辛得比斯病毒(Sindbis virus)、馬雅羅病毒(Mayaro virus)、羅氏河病毒(Ross River virus)、巴馬森林病毒(Barmah Forest virus)及奧克爾布病毒(Ockelbo virus)。

術語「屈公病毒」及「CHIKV」在本文中可互換使用。

如本文所用，「屈公病毒結構蛋白」意謂與天然存在之屈公病毒衣殼或套膜蛋白具有至少約85%胺基酸序列一致性的多肽或其片段。在一些態樣中，胺基酸序列一致性為至少約90%、95%、98%、99%或更高。

如本文所用，「改善」意謂降低、抑制、減弱、減少、遏止或穩定疾病或其症狀之發展或進展。

如本文參考多肽序列或多核苷酸序列所用，「更改」意謂多肽序列或多核苷酸序列中指定位置處之胺基酸或核苷酸的變化。如本文所用，更改包括在多肽或多核苷酸之指定位置處取代、缺失或插入胺基酸或核苷酸。在一些態樣中，α病毒衣殼蛋白核定位信號之更改包括用不帶電胺基酸(例如丙胺酸或天冬醯胺，或除諸如離胺酸或精胺酸之鹼性帶電胺基酸外的任何胺基酸)取代帶電胺基酸(例如離胺酸或精胺酸)。

如本文參考基因或多肽之表現位準或活性所用，「更改」意謂如藉由標準技術已知方法，諸如本文所描述之方法偵測的基因或多肽之表現位準或活性的變化(提高或降低)。如本文所用，更改包括表現位準之10%、25%、50%、75%、100%或更大變化。更改包括表現位準之10倍、20倍、50倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、500倍、1000倍或更大變化。

如本文所用，「類似物」意謂不相同，但具有類似功能或結構特徵的分子。舉例而言，多肽類似物保留對應天然存在之多肽的生物活性，同時具有相對於天然存在之多肽增強類似物之功能的某些生物化學修飾。此類生物化學修飾可提高類似物之蛋白酶抗性、膜滲透性或延長半衰期，而不會更改例如配位體結合。類似物可包括非天然胺基酸。

如本文所用，「加強(boosting/booster)」劑量或免疫接種係指在較早劑量，例如初次劑量之後再次暴露於免疫抗原。

「偵測」係指鑑別欲偵測分析物之存在、不存在或量。

「疾病」意謂損害或干擾細胞、組織或器官之正常功能的任何病狀或病症。疾病之實例包括病毒感染，包括CHIKV。

如本文所用，組合物或疫苗之「有效量」意謂相對於未經治療之患者，預防CHIKV感染、降低CHIKV感染似然度或改善CHIKV感染症狀所需的組合物或疫苗之量。用於預防CHIKV感染、降低CHIKV感染似然度或治療CHIKV感染的本揭露內容之組合物或疫苗之有效量可視投與方式，個體年齡、體重及總體健康而變化。在某些態樣中，有效量為在7天內提供針對CHIKV之中和抗體反應及/或保護的本揭露內容之組合物或疫苗的量。

如本文所用，「片段」意謂多肽或核酸分子之一部分。此部分含有參考核酸分子或多肽之全長的例如至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。片段可含有10、20、30、40、50、60、70、80、90或100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000個核苷酸或胺基酸。

「雜交」意謂互補核鹼基之間的氫鍵結，其可為華特生-克里克(Watson-Crick)、胡斯坦(Hoogsteen)或反向胡斯坦氫鍵結。舉例而言，腺嘌呤及胸腺嘧啶為經由形成氫鍵而配對之互補核鹼基。

如本文所用，「誘發免疫」意欲指代針對抗原產生之任何免疫反應。在一些態樣中，免疫由針對由脊椎動物(例如人類)展現之感染媒介物的抗體介導，該免疫預防或改善感染或減少其至少一種症狀。本揭露內容之VLP可刺激抗體產生，該等抗體例如中和感染媒介物、阻斷感染媒介物進入細胞、阻斷感染媒介物複製及/或保護宿主細胞免於感染及破壞。該術語亦可指針對由脊椎動物(例如人類)展現之感染媒介物，由T淋巴球及/或其他白血球介導之免疫反應，該免疫反應預防或改善感染，例如CHIKV感染，或減少其至少一種症狀。

如本文所用，「中和抗體反應」係指誘發結合至感染性體(例如CHIKV)之抗原的抗體，其中該抗體對感染性體在細胞上之感染性具有中和或抑制效應。在某些態樣中，中和抗體反應可藉由量測血清中和抗體(SNA)效價來測定。在某些態樣中，SNA效價可經由表徵在血清存在下感染性之降低來測定(例如由使用螢光素酶載體之螢光素酶分析得到的NT80血清中和抗體，及/或溶菌斑減少分析)。在一些態樣中，CHIKV中和抗體效價80 (NT80)為與僅病毒對照相比，提供非洲綠猴腎細胞(Vero cell)免於CHIKV-Luc感染之約80%保護或螢光素酶活性之80%降低的血清稀釋度之倒數。在某些態樣中，20、25、30、35、40、45或50或更大之NT80效價指示針對CHIKV之一或多種或所有譜系的保護。

如本文所用，如在「獲得藥劑」中之「獲得」包括合成、採購或以其他方式獲取藥劑。

如本文所用，「醫藥學上可接受」係指在合理醫學判斷之範疇內適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相稱的彼等化合物、物質、組合物及/或劑型。

如本文所用，「群體」係指自其中抽取統計樣本之個體的庫或組。在本揭露內容之一些態樣中，疫苗接種之目標群體可為尚未由屈公病毒預致敏且為未經處理(例如針對CHIKV之一或多種病毒株)的群體。在其他態樣中，目標群體可為先前已暴露屈公感染或疫苗接種(例如針對CHIKV之一或多種病毒株)的群體。群體，例如目標群體可包括任何年齡及種族之個體。

「減少」意謂負向更改至少10%、25%、50%、75%、85%、95%或100%。

「參考」意謂標準或對照條件。

「參考序列」係指用作序列比較之基礎的已確定序列。參考序列可為指定序列中的亞群或全部；例如全長cDNA或基因序列的區段，或完整cDNA或基因序列。對於多肽，參考多肽序列之長度一般將為至少約16個胺基酸、至少約20個胺基酸、至少約25個胺基酸及約35個胺基酸、約50個胺基酸或約100個胺基酸。對於核酸，參考核酸序列之長度一般將為至少約50個核苷酸、至少約60個核苷酸、至少約75個核苷酸及約100個核苷酸或約300個核苷酸或其附近或之間的任何整數。

如本文所用，「特異性結合」可指識別且結合本揭露內容之多肽，但不實質上識別且結合當然包括本揭露內容之多肽的樣品，例如生物樣品中之其他分子的化合物或抗體。

適用於本揭露內容之方法的核酸分子包括編碼本揭露內容之多肽或其片段的任何核酸分子。此類核酸分子不必總與內源性核酸序列100%一致，但通常會展現實質性一致。與內源性序列「實質性一致」的多核苷酸通常能夠與雙股核酸分子中的至少一個股雜交。適用於本揭露內容之方法的核酸分子包括編碼本揭露內容之多肽或其片段的任何核酸分子。此類核酸分子不必與內源性核酸序列100%一致，但通常會展現實質性一致。與內源性序列「實質性一致」的多核苷酸通常能夠與雙股核酸分子中的至少一個股雜交。「雜交」意謂在各種嚴格度條件下，在互補多核苷酸序列(例如本文所描述之基因)或其部分之間配對以形成雙股分子。(參見例如Wahl, G. M.及S. L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152:399；Kimmel, A. R. (1987) Methods Enzymol. 152:507)。

「實質性一致」意謂多肽或核酸分子展現與參考胺基酸序列(例如本文所描述之胺基酸序列中之任一者)或核酸序列(例如本文所描述之核酸序列中之任一者)至少50%一致。在某些態樣中，序列與用於比較之序列在胺基酸層級或核酸上至少60%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%一致。

序列一致性可使用序列分析軟體(例如BLAST、BESTFIT、GAP或PILEUP/PRETTYBOX程式)量測。此類軟體藉由向各種取代、缺失及/或其他修飾分指派同源度而匹配一致或類似序列。守恆取代通常包括以下群組內之取代：甘胺酸、丙胺酸；纈胺酸、異白胺酸、白胺酸；天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸；絲胺酸、蘇胺酸；離胺酸、精胺酸；及苯丙胺酸、酪胺酸。在測定一致程度之例示性方法中，可使用BLAST程式，機率評分在e−3與e−100之間表明緊密相關序列。

「結構聚蛋白」意謂包含促成病毒衣殼或套膜的至少二個可分離多肽之複合胺基酸分子。在一個態樣中，多肽對用病毒酶(例如衣殼自體蛋白酶(autoproteinase)及信號肽酶(signalase))裂解敏感。

「個體」意謂哺乳動物，包括但不限於人類或非人類哺乳動物，諸如牛、馬、犬、綿羊或貓。在某些態樣中，個體為人類。本文中術語「個體(subject)」可與「個體(individual)或「患者」互換使用。個體可罹患或易患疾病或病症，但可能會或可能不會顯示疾病或病症之症狀。

本文所提供之範圍應理解為範圍內所有值之簡寫。舉例而言，1至50之範圍應理解為包括來自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50組成之群的任何數字、數字之組合或子範圍。

如本文所用，術語「治療(treat/treating/treatment)」及其類似術語係指減少或改善病症及/或與其相關之症狀。應瞭解，雖然不排除，但治療病症或病狀並不需要完全消除該病症、病狀或與其相關之症狀。在一些態樣中，本文所揭露之治療可防治性用於預防相關疾病或病狀或降低其風險。

如本文所用，片語「治療有效」意欲限定組合物(例如疫苗)之量，或在組合療法之情況下活性成分之組合量。此量或組合量將達成治療、預防相關疾病或病狀或降低其風險之目標。

如本文所用，術語「疫苗」係指待用於產生免疫反應之組合物。在特定態樣中，本揭露內容之疫苗以一形式含有VLP、DNA或其他基於基因之疫苗載體，該形式能夠向個體投與且誘發保護性免疫反應，其足以誘發免疫以預防及/或改善感染及/或減少感染之至少一種症狀及/或增強另一劑量之VLP或DNA疫苗的功效。通常，疫苗包含醫藥學上可接受之賦形劑，諸如習知生理食鹽水或緩衝水溶液培養基，本揭露內容之組合物懸浮或溶解於其中。在此形式中，本揭露內容之組合物可方便地用於預防、改善或以其他方式治療感染。在引入至宿主中後，疫苗誘發免疫反應，包括但不限於產生抗體及/或細胞介素及/或活化細胞毒性T細胞、抗原呈現細胞、輔助T細胞、樹突狀細胞及/或其他細胞反應。在某些態樣中，疫苗亦可為蛋白質。舉例而言，已藉由對細胞進行基因工程改造以產生一或多種外來基因，外來基因繼而產生充當免疫原之蛋白質來產生重組蛋白。

如本文所用，「類病毒顆粒」(VLP)係指在至少一種屬性中類似病毒，但尚未展現具有感染性的結構。根據本揭露內容之類病毒顆粒不攜帶編碼類病毒顆粒之蛋白質的遺傳資訊。一般而言，類病毒顆粒缺少病毒基因體，且因此為非感染性的。

本文中針對變數或態樣引述一實施例包括該實施例作為任何單一實施例或與本文所揭露之任何其他實施例或其部分組合。

本文所提供之任何組合物或方法可與本文所提供之任何其他組合物及方法中之一或多者組合。類病毒顆粒 (VLP)

本揭露內容之某些態樣係關於類病毒顆粒(VLP)，其包含衍生自屈公病毒(CHIKV)，例如塞內加爾(Senegal)病毒株37997之結構蛋白。CHIKV為α病毒屬(RNA (+)基因體)成員且具有三個譜系：東/中/南非(ECSA)、西非及亞洲。CHIKV基因體包括4種非結構蛋白及5種結構蛋白(圖1 )，且野生型CHIKV病毒粒子(virion)包括C、E1及E2蛋白。

在某些態樣中，CHIKV VLP包括三種重組CHIKV結構蛋白：衣殼/核心(約35 kDa)、套膜1 (E1，約55 kDa)及套膜2 (E2，約50 kDa)。三種結構蛋白可組裝以形成CHIKV VLP。

CHIKV VLP衣殼核心之結構包括圍繞核衣殼之各2重軸之六聚體及在各5重頂點處的五聚體。衣殼核心由約15 Å寬脂膜與E1及E2蛋白分開。膜由表示E1及E2羧基末端區之α螺旋對橫穿。低溫電子顯微法已顯示由三個E1及E2異二聚體構成之個別棘突的三聚外觀。可觀測到E1區域III中之β-股。Sun, S.等人eLife 2013；2:e00435。

申請人已藉由負染色及穿透電子顯微法且藉由低溫電子顯微法分析，分析藉由本揭露內容之方法產生的重組CHIKV VLP。藉由負染色，CHIKV VLP呈現具有規則表面結構之大致球形顆粒，且在某些態樣中，完全形成之成熟VLP為大致65 nm。在一些態樣中，VLP為約60 nm至70 nm。在某些態樣中，VLP大小可藉由顯微法及/或動態光散射(DLS)確認。

在本揭露內容之某些態樣中，CHIKV VLP包含一或多種CHIKV VLP蛋白。在某些態樣中，VLP包含至少三種重組CHIKV結構蛋白，例如衣殼核心蛋白(C)、套膜1蛋白(E1)及套膜2蛋白(E2)。在一些態樣中，VLP可進一步包含套膜3蛋白(E3)及/或6k蛋白(6K)。

在一些態樣中，衣殼蛋白為CHIKV C蛋白。

在一些態樣中，套膜蛋白為選自由以下組成之群的CHIKV蛋白：E3、E2、6K、E1及其任何組合。在一些態樣中，CHIKV套膜蛋白E2及E1。

本揭露內容之一些態樣係關於包含CHIKV C、E2及E1蛋白之VLP。在某些態樣中，VLP不包含CHIKV E3及/或6K。

在某些態樣中，衣殼及套膜蛋白衍生自CHIKV病毒株37997。以下表 1 列舉對應於CHIKV (病毒株37997)結構蛋白C、E3、E2、6K及E1之胺基酸序列及編碼其之核酸序列。表1. CHIKV VLP ( 病毒株37997) 序列

SEQ ID NO	序列	簡短描述
4	MEFIPTQTFYNRRYQPRPWAPRPTIQVIRPRPRPQRQAGQLAQLISAVNKLTMRAVPQQKPRRNRKNKKQRQKKQAPQNDPKQKKQPPQKKPAQKKKKPGRRERMCMKIENDCIFEVKHEGKVMGYACLVGDKVMKPAHVKGTIDNADLAKLAFKRSSKYDLECAQIPVHMKSDASKFTHEKPEGYYNWHHGAVQYSGGRFTIPTGAGKPGDSGRPIFDNKGRVVAIVLGGANEGARTALSVVTWNKDIVTKITPEGAEEW	CHIKV (病毒株37997)衣殼蛋白-胺基酸序列
5	atggagttcatcccgacgcaaactttctataacagaaggtaccaaccccgaccctgggccccacgccctacaattcaagtaattagacctagaccacgtccacagaggcaggctgggcaactcgcccagctgatctccgcagtcaacaaattgaccatgcgcgcggtacctcaacagaagcctcgcagaaatcggaaaaacaagaagcaaaggcagaagaagcaggcgccgcaaaacgacccaaagcaaaagaagcaaccaccacaaaagaagccggctcaaaagaagaagaaaccaggccgtagggagagaatgtgcatgaaaattgaaaatgattgcatcttcgaagtcaagcatgaaggcaaagtgatgggctacgcatgcctggtgggggataaagtaatgaaaccagcacatgtgaagggaactatcgacaatgccgatctggctaaactggcctttaagcggtcgtctaaatacgatcttgaatgtgcacagataccggtgcacatgaagtctgatgcctcgaagtttacccacgagaaacccgaggggtactataactggcatcacggagcagtgcagtattcaggaggccggttcactatcccgacgggtgcaggcaagccgggagacagcggcagaccgatcttcgacaacaaaggacgggtggtggccatcgtcctaggaggggccaacgaaggtgcccgcacggccctctccgtggtgacgtggaacaaagacatcgtcacaaaaattacccctgagggagccgaagagtgg	CHIKV (病毒株37997)衣殼蛋白-核酸序列
6	SLALPVLCLLANTTFPCSQPPCTPCCYEKEPESTLRMLEDNVMRPGYYQLLKASLTCSPHRQRR	CHIKV (病毒株37997)組裝蛋白E3-胺基酸序列
7	agagcctcgccctcccggtcttgtgcctgttggcaaacactacattcccctgctctcagccgccttgcacaccctgctgctacgaaaaggaaccggaaagcaccttgcgcatgcttgaggacaacgtgatgagacccggatactaccagctactaaaagcatcgctgacttgctctccccaccgccaaagacgc	CHIKV (病毒株37997)組裝蛋白質E3-核酸序列
8	STKDNFNVYKATRPYLAHCPDCGEGHSCHSPIALERIRNEATDGTLKIQVSLQIGIKTDDSHDWTKLRYMDSHTPADAERAGLLVRTSAPCTITGTMGHFILARCPKGETLTVGFTDSRKISHTCTHPFHHEPPVIGRERFHSRPQHGKELPCSTYVQSTAATAEEIEVHMPPDTPDRTLMTQQSGNVKITVNGQTVRYKCNCGGSNEGLTTTDKVINNCKIDQCHAAVTNHKNWQYNSPLVPRNAELGDRKGKIHIPFPLANVTCRVPKARNPTVTYGKNQVTMLLYPDHPTLLSYRNMGQEPNYHEEWVTHKKEVTLTVPTEGLEVTWGNNEPYKYWPQMSTNGTAHGHPHEIILYYYELYPTMTVVIVSVASFVLLSMVGTAVGMCVCARRRCITPYELTPGATVPFLLSLLCCVRTTKA	CHIKV (病毒株37997)棘突醣蛋白E2-胺基酸序列
9	agtactaaggacaattttaatgtctataaagccacaagaccatatctagctcattgtcctgactgcggagaagggcattcgtgccacagccctatcgcattggagcgcatcagaaatgaagcaacggacggaacgctgaaaatccaggtctctttgcagatcgggataaagacagatgacagccacgattggaccaagctgcgctatatggatagccatacgccagcggacgcggagcgagccggattgcttgtaaggacttcagcaccgtgcacgatcaccgggaccatgggacactttattctcgcccgatgcccgaaaggagagacgctgacagtgggatttacggacagcagaaagatcagccacacatgcacacacccgttccatcatgaaccacctgtgataggtagggagaggttccactctcgaccacaacatggtaaagagttaccttgcagcacgtacgtgcagagcaccgctgccactgctgaggagatagaggtgcatatgcccccagatactcctgaccgcacgctgatgacgcagcagtctggcaacgtgaagatcacagttaatgggcagacggtgcggtacaagtgcaactgcggtggctcaaacgagggactgacaaccacagacaaagtgatcaataactgcaaaattgatcagtgccatgctgcagtcactaatcacaagaattggcaatacaactcccctttagtcccgcgcaacgctgaactcggggaccgtaaaggaaagatccacatcccattcccattggcaaacgtgacttgcagagtgccaaaagcaagaaaccctacagtaacttacggaaaaaaccaagtcaccatgctgctgtatcctgaccatccgacactcttgtcttaccgtaacatgggacaggaaccaaattaccacgaggagtgggtgacacacaagaaggaggttaccttgaccgtgcctactgagggtctggaggtcacttggggcaacaacgaaccatacaagtactggccgcagatgtctacgaacggtactgctcatggtcacccacatgagataatcttgtactattatgagctgtaccccactatgactgtagtcattgtgtcggtggcctcgttcgtgcttctgtcgatggtgggcacagcagtgggaatgtgtgtgtgcgcacggcgcagatgcattacaccatatgaattaacaccaggagccactgttcccttcctgctcagcctgctatgctgcgtcagaacgaccaaggcg	CHIKV (病毒株37997)棘突醣蛋白E2-核酸序列
10	ATYYEAAAYLWNEQQPLFWLQALIPLAALIVLCNCLKLLPCCCKTLAFLAVMSIGAHTVSA	CHIKV (病毒株37997) 6k蛋白-胺基酸序列
11	gccacatattacgaggctgcggcatatctatggaacgaacagcagcccctgttctggttgcaggctcttatcccgctggccgccttgatcgtcctgtgcaactgtctgaaactcttgccatgctgctgtaagaccctggcttttttagccgtaatgagcatcggtgcccacactgtgagcgcg	CHIKV (病毒株37997) 6k蛋白-核酸序列
12	YEHVTVIPNTVGVPYKTLVNRPGYSPMVLEMELQSVTLEPTLSLDYITCEYKTVIPSPYVKCCGTAECKDKSLPDYSCKVFTGVYPFMWGGAYCFCDAENTQLSEAHVEKSESCKTEFASAYRAHTASASAKLRVLYQGNNITVAAYANGDHAVTVKDAKFVVGPMSSAWTPFDNKIVVYKGDVYNMDYPPFGAGRPGQFGDIQSRTPESKDVYANTQLVLQRPAAGTVHVPYSQAPSGFKYWLKERGASLQHTAPFGCQIATNPVRAVNCAVGNIPISIDIPDAAFTRVVDAPSVTDMSCEVPACTHSSDFGGVAIIKYTASKKGKCAVHSMTNAVTIREADVEVEGNSQLQISFSTALASAEFRVQVCSTQVHCAAACHPPKDHIVNYPASHTTLGVQDISTTAMSWVQKITGGVGLIVAVAALILIVVLCVSFSRH	CHIKV (病毒株37997)棘突醣蛋白E1-胺基酸序列
13	tacgaacacgtaacagtgatcccgaacacggtgggagtaccgtataagactcttgtcaacagaccgggttacagccccatggtgttggagatggagctacaatcagtcaccttggaaccaacactgtcacttgactacatcacgtgcgagtacaaaactgtcatcccctccccgtacgtgaagtgctgtggtacagcagagtgcaaggacaagagcctaccagactacagctgcaaggtctttactggagtctacccatttatgtggggcggcgcctactgcttttgcgacgccgaaaatacgcaattgagcgaggcacatgtagagaaatctgaatcttgcaaaacagagtttgcatcggcctacagagcccacaccgcatcggcgtcggcgaagctccgcgtcctttaccaaggaaacaacattaccgtagctgcctacgctaacggtgaccatgccgtcacagtaaaggacgccaagtttgtcgtgggcccaatgtcctccgcctggacaccttttgacaacaaaatcgtggtgtacaaaggcgacgtctacaacatggactacccaccttttggcgcaggaagaccaggacaatttggtgacattcaaagtcgtacaccggaaagtaaagacgtttatgccaacactcagttggtactacagaggccagcagcaggcacggtacatgtaccatactctcaggcaccatctggcttcaagtattggctgaaggaacgaggagcatcgctacagcacacggcaccgttcggttgccagattgcgacaaacccggtaagagctgtaaattgcgctgtggggaacataccaatttccatcgacataccggatgcggcctttactagggttgtcgatgcaccctctgtaacggacatgtcatgcgaagtaccagcctgcactcactcctccgactttgggggcgtcgccatcatcaaatacacagctagcaagaaaggtaaatgtgcagtacattcgatgaccaacgccgttaccattcgagaagccgacgtagaagtagaggggaactcccagctgcaaatatccttctcaacagccctggcaagcgccgagtttcgcgtgcaagtgtgctccacacaagtacactgcgcagccgcatgccaccctccaaaggaccacatagtcaattacccagcatcacacaccacccttggggtccaggatatatccacaacggcaatgtcttgggtgcagaagattacgggaggagtaggattaattgttgctgttgctgccttaattttaattgtggtgctatgcgtgtcgtttagcaggcac	CHIKV (病毒株37997)棘突醣蛋白E1-核酸序列

在一些態樣中，VLP可包含CHIKV結構蛋白，其包含本文所揭露之胺基酸序列的功能片段。在一些態樣中，功能片段為CHIKV結構蛋白之全長的至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%，且CHIKV功能片段可用於形成本揭露內容之重組VLP。

在一些態樣中，VLP可包含CHIKV結構蛋白或其片段，其包含與本文所揭露之胺基酸序列至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列。在一些態樣中，CHIKV衣殼(C)蛋白或其功能片段包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列，且可用於形成本揭露內容之重組VLP。在一些態樣中，CHIKV套膜3 (E3)蛋白或其功能片段包含與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列，且可用於形成本揭露內容之重組VLP。在一些態樣中，CHIKV套膜2 (E2)蛋白或其功能片段包含與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列，且可用於形成本揭露內容之重組VLP。在一些態樣中，CHIKV 6K蛋白或其功能片段包含與SEQ ID NO: 10之胺基酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列，且可用於形成本揭露內容之重組VLP。在一些態樣中，CHIKV套膜1 (E1)蛋白或其功能片段包含與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列，且可用於形成本揭露內容之重組VLP。

在一些態樣中，VLP可包含由與本文所揭露之核酸序列至少約85%、90%、95%、98%、99%或100%一致的序列編碼之CHIKV結構蛋白或其片段。在一些態樣中，CHIKV衣殼(C)蛋白或其功能片段由與SEQ ID NO: 5之核酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列編碼，且所編碼之C蛋白可用於形成本揭露內容之重組VLP。在一些態樣中，CHIKV套膜3 (E3)蛋白或其功能片段由與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列編碼，且所編碼之E3蛋白可用於形成本揭露內容之重組VLP。在一些態樣中，CHIKV套膜2 (E2)蛋白或其功能片段由與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列編碼，且所編碼之E2蛋白可用於形成本揭露內容之重組VLP。在一些態樣中，CHIKV 6K蛋白或其功能片段由與SEQ ID NO: 11之核酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列編碼，且所編碼之6K蛋白可用於形成本揭露內容之重組VLP。在一些態樣中，CHIKV套膜1 (E1)蛋白或其功能片段由與SEQ ID NO: 13之核酸序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列編碼，且所編碼之E1蛋白可用於形成本揭露內容之重組VLP。

本揭露內容之某些態樣包括包含一或多種CHIKV多肽之VLP。亦包括包含一或多種CHIKV多肽或其片段的VLP，該等多肽或其片段以增強或不抑制其調節免疫反應之能力的方法修飾。在一些態樣中，CHIKV胺基酸序列或核酸序列包含更改。此類更改可包括某些突變、缺失、插入或轉譯後修飾。在一些態樣中，包括本揭露內容之天然存在之多肽的類似物。類似物可因胺基酸序列差異、轉譯後修飾或二者而不同於天然存在之多肽。本揭露內容之類似物可展現與天然存在之胺基酸序列之全部或部分至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。序列比較之長度可為至少10、13、15個胺基酸殘基、至少25個胺基酸殘基或超過35個胺基酸殘基。

CHIKV多肽之更改可包括但不限於定點、隨機點突變誘發、同源重組(DNA改組)、使用含有尿嘧啶之模板的突變誘發、寡核苷酸定向突變誘發、硫代磷酸酯修飾DNA突變誘發、使用帶間隙的雙螺旋DNA之突變誘發或其類似者。其他適合之方法包括點錯配修復、使用修復缺陷宿主株之突變誘發、限制-選擇及限制-純化、缺失突變誘發、藉由全基因合成之突變誘發、雙股斷裂修復及其類似者。例如涉及嵌合構築體之突變誘發亦包括在本揭露內容中。在某些態樣中，可藉由天然存在之分子或經更改或突變之天然存在之分子的已知資訊，例如序列、序列比較、物理特性、晶體結構或其類似者來引導突變誘發。

在某些態樣中，本揭露內容提供不同於參考多肽之多肽變異體。術語「變異體」係指相對於參考序列，更改一或多個胺基酸之胺基酸序列。變異體可具有「守恆」變化，其中經取代之胺基酸具有類似結構或化學特性，例如用異白胺酸置換白胺酸。或者，變異體可具有「非守恆」變化，例如用色胺酸置換甘胺酸。類似微小變化亦可包括胺基酸缺失或插入或二者。可使用在此項技術中熟知之電腦程式，例如DNASTAR軟體來發現對確定可在不消除生物或免疫活性的情況下取代、插入或缺失哪些胺基酸殘基之導引。理想地，變異體顯示顯著生物活性。在一些態樣中，當向個體投與時，蛋白質變異體形成VLP且引發抗體反應。

除全長多肽之外，本揭露內容亦包括本揭露內容之多肽的功能片段。免疫原性組合物及疫苗

本揭露內容之某些態樣係關於組合物或疫苗，其包含本文所揭露之基於蛋白質的非感染性類CHIKV病毒顆粒(VLP)。在某些態樣中，本文所揭露之組合物或疫苗可包含：類病毒顆粒(VLP)，其包含衍生自屈公病毒(CHIKV)之衣殼蛋白及套膜蛋白，其中在向個體投與單次劑量之組合物或疫苗之後7天內，組合物或疫苗在個體中誘發針對CHIKV之中和抗體反應，且/或在向個體投與單次劑量之後，誘發針對CHIKV之中和抗體反應，其持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。在一些態樣中，血清中和反應包含≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價。在一些態樣中，組合物或疫苗進一步包含佐劑(例如氫氧化鋁佐劑)。

在某些態樣中，本揭露內容之組合物或疫苗包含CHIKV VLP，其包含一或多種CHIKV VLP蛋白。在某些態樣中，組合物或疫苗之VLP包含至少三種重組CHIKV結構蛋白，例如衣殼核心蛋白(C)、套膜1蛋白(E1)及套膜2蛋白(E2)。在一些態樣中，VLP可進一步包含套膜3蛋白(E3)及/或6k蛋白(6K)。在一些態樣中，衣殼蛋白為CHIKV C蛋白。在一些態樣中，套膜蛋白為選自由以下組成之群的CHIKV蛋白：E3、E2、6K、E1及其任何組合。在一些態樣中，CHIKV套膜蛋白E2及E1。一些態樣，組合物或疫苗之VLP包含CHIKV C、E2及E1蛋白。在某些態樣中，組合物或疫苗之VLP不包含CHIKV E3及/或6K。在一些態樣中，組合物或疫苗衣殼及套膜蛋白衍生自CHIKV病毒株37997。在某些態樣中，組合物或疫苗包含CHIKV VLP，其以存在於組合物或疫苗中之總CHIKV蛋白之至少95%、至少96%或至少97%的量包含衣殼、E1及E2蛋白。

在某些態樣中，本揭露內容之組合物或疫苗包含約6 µg至200 µg、約10 µg至200 µg、約20 µg至200 µg、約20 µg至150 µg、約20 µg至100 µg、約20 µg至80 µg、約20 µg至60 µg或約20 µg至50 µg之量的VLP，例如在單次劑量調配物中(例如以在約0.5 mL至1.0 mL之間的體積)。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約6 µg至60 µg之量的VLP (例如約40 µg VLP)。在一些態樣中，組合物或疫苗包含約6 µg至60 µg VLP。在一些態樣中，組合物或疫苗包含約6 µg、約10 µg、約20 µg、約22 µg、約24 µg、約26 µg、約28 µg、約30 µg、約32 µg、約34 µg、約36 µg、約38 µg、約40 µg、約42 µg、約44 µg、約46 µg、約48 µg、約50 µg或約60 µg VLP。在一些態樣中，組合物或疫苗包含約40 µg VLP。在某些態樣中，本揭露內容之組合物或疫苗以約7.5 µg/mL至75 µg/mL、約12.5 µg/mL至75 µg/mL、25 µg/mL至75 µg/mL、37.5 µg/mL至62.5 µg/mL或40 µg/mL至60 µg/mL之劑量包含VLP。在某些實施例中，本揭露內容之組合物或疫苗以約25 µg/mL、約50 µg/mL或約75 µg/mL之劑量包含VLP。在某些實施例中，本揭露內容之組合物或疫苗以約50 µg/mL之劑量包含VLP。在一些態樣中，本揭露內容之VLP可經鋁佐劑，例如氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)佐劑化。在一些態樣中，組合物或疫苗包含每約300 µg氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)約40 µg。

在某些態樣中，佐劑為氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®) (亦稱為鋁)。在一些態樣中，組合物或疫苗可包含呈約30 µg至3000 µg、約50 µg至2500 µg、約100 µg至2000 µg、約100 µg至1000 µg、約100 µg至750 µg、約100 µg至500 µg、約150 µg至500 µg或約200 µg至400 µg之量的氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)，例如在單次劑量調配物中(例如以在約0.5 mL至1.0 mL之間的體積)。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約100 µg至500 µg之量的氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®) (例如約300 µg氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®))。在一些態樣中，單次劑量包含約250 µg/mL至625 µg/mL氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)。在一些態樣中，單次劑量包含約375 µg/mL氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)。在一些態樣中，組合物或疫苗可包含每約40 µg VLP約300 µg氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)。

在某些態樣中，本揭露內容之組合物或疫苗包含糖。在一些態樣中，糖選自由以下組成之群：蔗糖、乳糖及其任何組合。在一些態樣中，糖為蔗糖。在一些態樣中，組合物或疫苗可包含約10 mg至200 mg、約10 mg至150 mg、約10 mg至100 mg、約20 mg至200 mg、約20 mg至150 mg、約20 mg至100 mg、約30 mg至100 mg、約40 mg至100 mg或約40 mg至80 mg之量的糖(例如蔗糖)，例如在單次劑量調配物中(例如以在約0.5 mL至1.0 mL之間的體積)。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約40 mg至80 mg之量的糖(例如蔗糖) (例如50 mg至70 mg糖)。在一些態樣中，組合物或疫苗包含約50 mg、約51 mg、約52 mg、約53 mg、約54 mg、約55 mg、約56 mg、約57 mg、約58 mg、約59 mg、約60 mg、約61 mg、約62 mg、約63 mg或約64 µg VLP。在一些態樣中，組合物或疫苗包含約59 mg至60 mg (例如59.7 mg) VLP。

在某些態樣中，組合物或疫苗進一步包含緩衝劑及/或pH調節劑。在一些態樣中，緩衝劑及/或pH調節劑選自由以下組成之群：磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、檸檬酸鈉脫水物及其任何組合。在一些態樣中，組合物或疫苗可包含約0.2 mg至20 mg、約0.2 mg至15 mg、約0.2 mg至10 mg或約0.4 mg至10 mg之量的緩衝劑及/或pH調節劑，例如在單次劑量調配物中(例如以在約0.5 mL至1.0 mL之間的體積)。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約0.2 mg至20 mg之量的緩衝劑及/或pH調節劑(例如磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀或檸檬酸鈉脫水物中之一或多者) (例如0.2 mg至10 mg緩衝劑及/或pH調節劑)。在某些態樣中，組合物或疫苗包含約0.2 mg至1.0 mg磷酸二氫鉀(例如約0.4 mg磷酸二氫鉀)；約0.2 mg至1.5 mg磷酸氫二鉀(例如約0.9 mg磷酸氫二鉀)；及/或約2 mg至10 mg檸檬酸鈉脫水物(例如約5.9 mg檸檬酸鈉脫水物)。

在某些態樣中，組合物或疫苗進一步包含載劑、稀釋劑或其他賦形劑，例如醫藥學上可接受之載劑。醫藥學上可接受之載劑可包括但不限於水、生理食鹽水、緩衝生理食鹽水、甘油、無菌等張水性緩衝劑及其組合。醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及其他賦形劑之充分論述呈現於Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co. N.J.當前版本)中。在一些態樣中，載劑為水。

在某些態樣中，組合物或疫苗不包含防腐劑或抗生素。

在某些態樣中，本文所揭露之組合物或疫苗可包含：(a)類病毒顆粒(VLP)，其包含衍生自屈公病毒(CHIKV)之衣殼蛋白及套膜蛋白；及(b)佐劑(例如氫氧化鋁佐劑)。在某些態樣中，組合物或疫苗以在約0.5 mL至1.0 mL之間(例如約0.8 mL)的體積包含：(a)約6 µg至60 µg (例如40 µg) VLP；及(b)約200 µg至500 µg (例如300 µg)氫氧化鋁。

在一些態樣中，組合物或疫苗以在約0.5 mL至1.0 mL之間(例如約0.8 mL)的體積包含：(a)約6 µg至60 µg (例如40 µg) VLP；(b)約200 µg至500 µg氫氧化鋁(例如300 µg)；(c)約20 mg至80 mg蔗糖(例如約55 mg至65 mg)；(d)約0.2 mg至1.0 mg磷酸二氫鉀(例如約0.2 mg至0.8 mg)；(e)約0.2 mg至1.5 mg磷酸氫二鉀(例如約0.5至1.5 mg)；(f)約2 mg至10 mg檸檬酸鈉脫水物(例如約5.5 mg至6.5 mg)；及(g)水。

在一些態樣中，組合物或疫苗調配為懸浮液，例如用於肌肉內注射。本揭露內容之組合物或疫苗可為適合於單次劑量肌肉內注射之懸浮液(例如在預填充注射器中之0.8 mL劑量)。在一些態樣中，組合物或疫苗調配為懸浮液且在使用之前在2至8℃(36至46℉)下儲存於小瓶中。在一些態樣中，組合物或疫苗調配為懸浮液且在使用之前在2至8℃(36至46℉)下儲存於預填充注射器中。

在某些態樣中，本揭露內容之組合物或疫苗以有效量投與。在一些態樣中，有效量為在7天內提供針對CHIKV之中和抗體反應及/或保護的本揭露內容之組合物或疫苗的量。

在某些態樣中，本文所揭露之組合物或疫苗在投與，例如單次劑量投與7天內誘發針對CHIKV之中和抗體反應。在一些態樣中，組合物或疫苗誘發針對CHIKV之同株或異株的抗體。在一些態樣中，在投與，例如單次劑量投與之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少21天、至少22天、至少28天、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少一年、至少18個月或至少二年。在一些態樣中，在投與，例如單次劑量投與之後或單次劑量投與及一或多個加強劑量投與之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持個體之生存期。

在某些態樣中，在投與之後7天內本文所揭露之組合物或疫苗誘發≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價，例如在人類血清中藉由CHIKV中和分析(例如藉由螢光素酶分析得到的NT80血清中和抗體(SNA)或溶菌斑分析)量測。在某些態樣中，在投與之後7天內本文所揭露之組合物或疫苗誘發在20至10,000、20至15,000、30至10,000、30至15,000、40至10,000或40至15,000之間的血清中和抗體效價，例如在人類血清中藉由CHIKV中和分析(例如藉由螢光素酶分析得到的NT80血清中和抗體(SNA)或溶菌斑分析)量測。在一些態樣中，≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價維持至少21天、至少22天、至少28天、至少3個月、至少6個月、至少12個月、至少18個月及/或至少2年。在一些態樣中，≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價維持至少30個月、2年、3年、4年、5年、10年或20年或更長。在一些態樣中，在投與，例如單次劑量投與或單次劑量投與及一或多個加強劑量投與之後，≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價維持個體之生存期。在某些態樣中，經本文所揭露之組合物或疫苗疫苗接種之個體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或更多在投與VLP之後7天產生對CHIKV之中和抗體反應。在某些態樣中，在投與本文所揭露之組合物或疫苗之後(例如單次劑量之後或單次劑量投與及一或多個加強劑量投與之後)，群體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%維持≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價至少21天、至少22天、至少28天、至少3個月、至少6個月、至少12個月、至少18個月及/或至少2年。在一些態樣中，第二劑量，例如加強劑量之本文所揭露之組合物或疫苗在第一單次劑量之本文揭露之組合物或疫苗之後至少6個月、至少9個月、至少12個月、至少14個月、至少16個月、至少17個月、至少18個月、至少20個月、至少22個月或至少2年投與。在一些態樣中，可在個體之整個生存期中投與一或多個加強劑量以維持≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之保護性血清中和抗體效價。

在某些態樣中，中和抗體反應在7天內產生，在疫苗接種之後7天內血清反應率為至少60%、至少70%或至少80%。在某些態樣中，在疫苗接種之後反應持續至少2年，血清反應率為至少50%或至少60%。給藥及投與

本揭露內容之某些態樣係關於本文所揭露之組合物或疫苗的給藥及投與。本文所揭露之組合物及疫苗可以單次劑量(例如一次劑量)或多次劑量(例如初次劑量及加強劑量)形式投與。在一些態樣中，組合物或疫苗調配為單次劑量。在一些實施例中，單次劑量之組合物或疫苗投與一次。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗作為一或多個加強劑量(例如至少2個、至少3個、至少4個、至少5個或至少6個劑量)投與。在某些態樣中，第一劑量(例如初次劑量)與任何後續加強劑量可相同或不同(例如每劑量較多或較少VLP)。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗投與一次，且加強劑量在第一單次劑量之本文所揭露之組合物或疫苗之後至少6個月、至少9個月、至少12個月、至少14個月、至少16個月、至少17個月、至少18個月、至少20個月、至少22個月或至少2年投與。在一些態樣中，可在個體之整個生存期中投與一或多個加強劑量以維持保護性血清中和抗體效價。

在一些態樣中，本揭露內容之組合物或疫苗經調配用於肌肉內(IM)或靜脈內(IV)投與。在某些態樣中，投與為肌肉內(IM)。在一些態樣中，單次劑量之本文所揭露之組合物或疫苗肌肉內投與至上臂。

在某些態樣中，本揭露內容之組合物或疫苗以用於一次投與之單次劑量形式調配及/或投與。本揭露內容之此態樣與包括基於鋁鹽之佐劑的商業性基於HPV、HEV及HAV VLP之疫苗形成對比，該等疫苗各自以多次劑量形式投與(參見例如Cimica及Galaza,Clin Immunol. 2017；183: 99-108)。

在某些態樣中，單次劑量(例如一次單次劑量、初次劑量及/或加強劑量)之本揭露內容之VLP包含約6 µg至200 µg、約6 µg至100 µg或約6 µg至60 µg (例如約20 µg至60 µg，例如約40 µg)，例如調配於預填充注射器中，例如對於約0.5 mL至1.0 mL (例如約0.8 mL)之單次劑量體積。在某些態樣中，單次劑量(例如一次單次劑量、初次劑量及/或加強劑量)之本揭露內容之組合物或疫苗以約7.5 µg/mL至75 µg/mL、約12.5 µg/mL至75 µg/mL、25 µg/mL至75 µg/mL、37.5 µg/mL至62.5 µg/mL或40 µg/mL至60 µg/mL之劑量包含VLP。在某些實施例中，單次劑量(例如一次單次劑量、初次劑量及/或加強劑量)之本揭露內容之組合物或疫苗以約25 µg/mL、約50 µg/mL或約75 µg/mL之劑量包含VLP。在某些實施例中，單次劑量(例如一次單次劑量、初次劑量及/或加強劑量)之本揭露內容之組合物或疫苗以約50 µg/mL之劑量包含VLP。在一些態樣中，VLP經鋁佐劑，例如氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)佐劑化。在一些態樣中，氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)呈約100 µg至500 µg之量(例如約300 µg氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®))。在一些態樣中，單次劑量(例如一次單次劑量、初次劑量及/或加強劑量)之本揭露內容之組合物或疫苗包含約250 µg/mL至625 µg/mL氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)。在一些態樣中，單次劑量包含約375 µg/mL氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)。在一些態樣中，劑型為懸浮液，例如用於肌肉內投與。

在某些態樣中，單次劑量(例如一次單次劑量、初次劑量及/或加強劑量)之本文所揭露之組合物或疫苗包含約0.5 mL至5 mL、約0.5 mL至4 mL、約0.5 mL至4 mL、約0.5 mL至2 mL或約0.5 mL至1 mL的體積。在一些態樣中，單次劑量之本文所揭露之組合物或疫苗包含約0.5 mL、約0.6 mL、約0.7 mL、約0.8 mL、約0.9 mL或約1.0 mL的體積。在一些態樣中，單次劑量之組合物或疫苗包含約6 µg至60 µg之量的VLP (例如約20 µg至60 µg VLP)。在一些態樣中，組合物或疫苗包含約40 µg VLP。在一些態樣中，本揭露內容之VLP可經鋁佐劑，例如氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)佐劑化。在一些態樣中，氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)呈約100 µg至500 µg之量(例如約300 µg氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®))。在一些態樣中，單次劑量之本揭露內容之組合物或疫苗包含每約300 µg氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®)約40 µg，其經調配用於包含約0.5 mL至1.0 mL (例如約0.8 mL)之單次投與劑量。

在某些態樣中，各劑量之本文所揭露之組合物或疫苗可包含約6 µg至約60 µg (例如約40 µg) CHIKV VLP、約100 µg至500 µg (例如約300 µg)鋁(例如呈氫氧化鋁佐劑形式)、約20 mg至80 mg (約59.7 mg)蔗糖、約0.2 mg至0.8 mg (例如約0.4 mg)磷酸二氫鉀、約0.5 mg至1.5 mg (例如約0.9 mg)磷酸氫二鉀、約1 mg至10 mg (例如約5.9 mg)檸檬酸鈉二水合物及注射用水。

在某些態樣中，本揭露內容之組合物或疫苗以有效量投與。在一些態樣中，有效量為在7天內提供針對CHIKV之中和抗體反應及/或保護的本揭露內容之組合物或疫苗的量。在一些實施例中，有效量用單次一次劑量達成。在一些實施例中，有效量用單次劑量及一或多個加強劑量達成。

本文所揭露之方法亦包括一次單次劑量以及多種初次-加強方案。在某些態樣中，一或多個初次免疫接種可後接一或多個加強免疫接種。對於各免疫接種，免疫原性組合物或疫苗可相同或不同，且免疫原性組合物或疫苗之劑量、途徑及調配物亦可改變。使用方法

本揭露內容之某些態樣係關於本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型之用途，其用於提供主動免疫接種以在個體或群體中預防由屈公病毒(CHIKV)感染引起之疾病或降低該疾病之風險。在一些態樣中，個體為成人(例如≥12歲)或兒童(例如＜12歲、6個月至＜12歲、1歲至＜12歲)。

本揭露內容之某些態樣提供用於在個體，尤其人類中誘發免疫反應之組合物及方法，該等方法包含向個體投與包含CHIKV多肽或其片段，經調配用於誘發或增強免疫反應之VLP。在一些態樣中，免疫反應保護個體免於CHIKV感染，或其發炎性症狀(例如關節炎)。投與本文所揭露之免疫組合物或疫苗可在治療上用於已經歷CHIKV感染之個體，或可在防治上用於預防CHIKV感染或降低其風險。

在某些態樣中，方法包含以有效量投與本文所揭露之組合物、疫苗或劑型。在一些態樣中，有效量為在7天內提供針對CHIKV之中和抗體反應及/或保護的本揭露內容之組合物或疫苗的量。在一些實施例中，有效量在投與單次一次劑量之情況下達成。在一些實施例中，有效量在投與單次劑量及一或多個加強劑量之情況下達成。在一些態樣中，在投與單次劑量或單次劑量及一或多個加強劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。在一些態樣中，在投與單次劑量或單次劑量及一或多個加強劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應持續至少30個月、至少2年、至少3年、至少4年、至少5年、至少10年或20年或更長。在一些態樣中，在投與單次劑量或單次劑量及一或多個加強劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應持續個體之生存期。在一些態樣中，血清中和反應包含≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價。

在一些態樣中，本揭露內容係關於一種在個體中誘發針對CHIKV之中和抗體反應之方法，其包含向個體投與本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型。在一些態樣中，中和抗體反應係針對CHIKV之E1及/或E2蛋白。

本揭露內容之某些態樣係關於在個體中引發針對CHIKV之免疫反應及/或保護性免疫之方法，其包含向個體投與本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型。在某些態樣中，免疫針對CHIKV之至少一種、多於一種或所有譜系(例如ECSA、亞洲及/或西非中之一或多者)進行保護。

在一些態樣中，本揭露內容係關於一種治療、預防個體之屈公感染或降低個體之屈公感染風險之方法，其包含向有需要之個體投與本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型。在一些態樣中，針對CHIKV疾病之保護藉由引發針對CHIKV之E1及/或E2蛋白的中和抗體來提供。

本揭露內容之某些態樣係關於一種在個體中引發針對屈公病毒(CHIKV)之免疫反應及/或保護性免疫之方法，該方法包含：向個體投與組合物、疫苗及/或劑型，其包含(a)類病毒顆粒(VLP)，其包含衍生自CHIKV之衣殼蛋白及套膜蛋白，其中單次劑量之組合物、疫苗及/或劑型包含約6 µg至60 µg VLP (例如約40 µg)，且其中投與單次劑量之組合物、疫苗及/或劑型在投與7天內在個體中引發CHIKV特異性中和抗體產生，且/或在向個體投與單次劑量之後引發CHIKV特異性中和抗體產生持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。在一些態樣中，CHIKV特異性中和抗體效價包含≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)。在某些態樣中，組合物、疫苗及/或劑型進一步包含佐劑(例如鋁佐劑)。在一些態樣中，CHIKV特異性中和抗體係針對CHIKV之E1及/或E2蛋白。

在一些態樣中，本揭露內容係關於針對CHIKV感染對個體或群體進行疫苗接種，其包含向個體或群體投與本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型。

在某些態樣中，本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型在投與，例如單次劑量投與7天內誘發針對CHIKV之中和抗體反應。在一些態樣中，組合物、疫苗及/或劑型誘發針對CHIKV之同株或異株的抗體。在一些態樣中，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少21天、至少22天、至少28天、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少投與後之年、至少18個月或至少二年，例如單次劑量投與。在一些態樣中，在投與單次劑量或單次劑量及一或多個加強劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應及/或保護性免疫維持至少1年、至少18個月、至少30個月、至少2年、至少3年、至少4年、至少5年、至少10年或20年或更長。在一些態樣中，在投與單次劑量或單次劑量及一或多個加強劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應及/或保護性免疫維持個體之生存期。

在某些態樣中，本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型在投與之後7天內誘發≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價，例如在人類血清中藉由CHIKV中和分析(例如藉由螢光素酶分析得到的NT80血清中和抗體(SNA))量測。在一些態樣中，≥ 40之血清中和抗體效價維持至少21天、至少22天、至少28天、至少3個月、至少6個月、至少12個月、至少18個月及/或至少2年。

在某些態樣中，經本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型疫苗接種之個體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或更多在投與VLP之後7天產生對CHIKV之中和抗體反應。在某些態樣中，在投與本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型疫苗之後(例如單次劑量之後)，經本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型疫苗接種之群體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%維持≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價至少21天、至少22天、至少28天、至少3個月、至少6個月、至少12個月、至少18個月及/或至少2年。在一些態樣中，在單次劑量之後，單次劑量之本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型維持≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價至少1年、至少18個月、至少30個月、至少2年、至少3年、至少4年、至少5年、至少10年、15年或20年或更長。在一些態樣中，第二劑量，例如加強劑量之本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型在第一單次劑量之本文揭露之組合物、疫苗及/或劑型之後至少6個月、至少9個月、至少12個月、至少14個月、至少16個月、至少17個月、至少18個月、至少20個月、至少22個月或至少2年投與。在一些態樣中，第二劑量，例如加強劑量之本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型在第一單次劑量之本文揭露之組合物、疫苗及/或劑型之後至少1年、至少18個月、至少30個月、至少2年、至少3年、至少4年、至少5年、至少10年、至少15年或20年或更長投與。

在某些態樣中，截至投與含VLP組合物、疫苗及/或劑型(例如一個單次劑量)之後第7天，經本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型疫苗接種之個體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或更多具有血清轉化。在某些態樣中，截至投與含VLP組合物、疫苗及/或劑型(例如一個單次劑量)之後第7天，經本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型疫苗接種之個體中60%至99%、60%至98%、65%至98%、70%至98%或74%至98%具有血清轉化。在某些態樣中，截至投與含VLP組合物、疫苗及/或劑型(例如一次單次劑量)之後第25天、第26天、第27天、第28天、第29天或第30天，經本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型疫苗接種之個體中至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或更多具有血清轉化。在一些在某些態樣中，免疫反應持續至少6個月、至少9個月、至少12個月、至少18個月或至少24個月。

在某些態樣中，中和抗體反應針對CHIKV之多種血清型、基因型或譜系(ECSA (例如坦尚尼亞1953、印度2000、馬來西亞2008)、亞洲(例如聖馬丁(St. Martin) 2013、印度尼西亞2007)及西非(例如尼日利亞1965、塞內加爾2005、塞內加爾1983))接種個體。在一些態樣中，中和抗體反應為≥ 75% IgG3、≥ 80% IgG3、≥ 85% IgG3或≥ 90% IgG3。

在某些態樣中，在投與單次劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少28天、6個月、一年、18個月或二年。在某些態樣中，在早先單次劑量之後約28天、約3個月、約6個月、約一年、約18個月或約2年，向個體投與第二(加強)劑量之組合物或疫苗。在一些態樣中，由單次劑量提供之中和抗體反應維持至少1年。在一些態樣中，在距接受初始劑量9個月、12個月、18個月、2年、2.5年、3年、3.5年、4年、4.5年、5年或5.5年內不投與第二劑量(加強劑量)。

在某些態樣中，在投與第二劑量之後，針對CHIKV之中和抗體反應維持至少約六個月、至少約1年、至少約18個月或至少約二年。

在某些態樣中，在投與單次劑量之本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型之後7天內，個體產生≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價。在某些態樣中，在投與單次劑量之組合物、疫苗及/或劑型之後，個體維持≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價至少約一年或約二年。在某些態樣中，在投與單次劑量之組合物、疫苗及/或劑型之後，個體維持≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價持續個體之生存期。

在某些態樣中，在投與單次劑量之本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型之後7天內，經疫苗接種之群體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%或至少98%產生≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價。

在某些態樣中，在投與單次劑量之組合物、疫苗及/或劑型之後，經疫苗接種之群體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%或至少98%維持≥ 20、≥ 25、≥ 30、≥ 35、≥ 40、≥ 45或≥ 50 (例如≥ 40)之血清中和抗體效價1年或二年。

在某些態樣中，在投與本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型之後7天、28天、6個月、9個月、一年、18個月或二年內，血清反應率為至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%或至少98%。

在一些態樣中，本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型可作為組合療法之一部分投與。舉例而言，本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型可與其他免疫原性組合物、抗病毒劑及/或抗生素共同投與或一起調配。本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型可與另一免疫原性組合物、抗病毒劑、抗生素或預防或治療屈公感染之任何其他藥劑並行投與、在其之後投與或與其依序投與。CHIKV VLP 疫苗生產

本揭露內容之某些態樣係關於以免疫原性組合物或疫苗形式製備及調配本文所揭露之VLP。

重組構築體可經製備且用於轉染、感染或轉型，且可將病毒蛋白，包括本文所描述之病毒蛋白表現至真核細胞及/或原核細胞中。因此，本揭露內容提供宿主細胞，其包含一種載體(或多種載體)，該等載體含有編碼CHIKV結構基因，包括衣殼、E3、E2、6K及E1或其部分及/或上文所描述之任何嵌合分子的核酸，且准許在允許形成VLP之條件下在該宿主細胞中表現CHIKV結構基因，包括衣殼E3、E2、6K及E1或其部分及/或本文所描述之任何嵌合分子。

在某些態樣中，可藉由用在適合之表現運載體(vehicle)中之多肽編碼核酸分子或其片段轉型或轉染適合之宿主細胞，產生本揭露內容之包含一或多種CHIKV多肽(例如CHIKV C、E1及E2蛋白)的非感染性重組VLP。在某些態樣中，多肽編碼核酸分子可包含與SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO:13或其任何組合具有至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性的序列。

在某些態樣中，藉由用編碼一或多種CHIKV結構蛋白基因(例如C、E3、E2、6K及/或E1基因)之表現質體轉染HEK293細胞或自其衍生之細胞(例如VRC293細胞)，產生本揭露內容之VLP。所表現之蛋白質可自組裝成VLP，隨後自細胞培養基收集且純化該等VLP。在某些態樣中，VLP可藉由超過濾、透濾及陰離子交換層析純化，隨後經無菌過濾。在一些態樣中，可將VLP與適當量之調配物緩衝液混合且隨後吸附於無菌氫氧化鋁佐劑(例如氫氧化鋁凝膠(例如Alhydrogel®) 2%)上。在某些態樣中，所調配之VLP不含防腐劑或抗生素。

VRC293細胞衍生自人類胚胎腎(HEK) 293細胞(例如來自ATCC)。HEK293細胞適於在無動物成分CD293培養基以懸浮培養生長。

在某些態樣中，藉由用編碼CHIKV之結構基因的質體瞬時轉染VRC293細胞產生本文所揭露之VLP。在一些態樣中，在純化之後，可將VLP稀釋至含蔗糖之檸檬酸鹽緩衝液中且填充至單次劑量玻璃小瓶或預填充注射器中，形成最終藥品。

更具體而言，製造製程可分成二個主要階段：上游生產(細胞生長及抗原表現)及下游純化。在第一步驟中，可自工作細胞庫(working cell bank；WCB)擴增VRC293細胞。隨後將細胞用編碼CHIKV VLP結構蛋白(衣殼、E1、E2、E3及6K)之表現質體轉染。在一些態樣中，表現質體包含SEQ ID NO: 1之序列。本揭露內容之某些態樣係關於表現本揭露內容之CHIKV VLP的WCB或穩定細胞株(例如HEK293或HEK293衍生細胞)。

在某些態樣中，CHIKV VLP藥物物質包含三種重組CHIKV結構蛋白：(衣殼/核心) (約35 kDa)、套膜1 (E1) (約55 kDa)及套膜2 (E2) (約50 kDa)。在某些態樣中，三種蛋白質在VRC293細胞中共表現且自組裝以形成帶套膜之VLP，VLP自培養基收集。CHIKV VLP為非感染性及非複製的，但就抗原呈現至免疫系統而言，結構上類似親本病毒。在VRC293細胞中產生之後，CHIKV VLP可自培養基純化，例如藉由管柱層析、超過濾/透濾(UF/DF)及直流式過濾步驟之組合。在某些態樣中，CHIKV VLP以存在於CHIKV VLP中之總CHIKV蛋白之至少95%、至少96%或至少97%的量包含衣殼、E1及E2蛋白。

在一些態樣中，最終CHIKV VLP藥物物質包含可在≤ -60℃下儲存之無菌水溶液。在某些態樣中，產物在-45℃至-10℃下儲存。在一些態樣中，組合物或疫苗調配為懸浮液且在使用之前在2至8℃(36至46℉)下儲存於容器(例如小瓶或預填充注射器)中。在某些態樣中，CHIKV VLP可在室溫下儲存至少或至多約6小時、至少或至多約12小時、至少或至多約18小時、或至少或至多約24小時。在某些態樣中，CHIKV VLP可在2至8℃下儲存至少或至多約12小時、至少或至多約24小時、至少或至多約7天或至少或至多約二週。在某些態樣中，在-45℃至-10℃下儲存，CHIKV VLP可儲存至少或至多約3個月、至少或至多約6個月、至少或至多約9個月、至少或至多約12個月、至少或至多約2年。

在某些態樣中，CHIKV VLP藥物物質之無菌水性緩衝溶液可以40 ± 10 μg/mL填充至單次劑量小瓶中。在一些態樣中，小瓶具有約0.8 mL之標稱填充容積以允許取出約0.5 mL。

在一些態樣中，將藥物物質與佐劑一起調配且填充至預填充注射器(例如第I型玻璃魯爾鎖(luer lock)預填充注射器)中。藥品之製備可以無菌填充-整理製程形式進行。

在某些態樣中，預填充注射器包含本文所揭露之組合物或疫苗，例如包含以下之組合物或疫苗：約6 µg至約60 µg (例如約40 µg) CHIKV VLP、約100 µg至500 µg (例如約300 µg)鋁(例如呈氫氧化鋁佐劑形式)、約20 mg至80 mg (約59.7 mg)蔗糖、約0.2 mg至0.8 mg (例如約0.4 mg)磷酸二氫鉀、約0.5 mg至1.5 mg (例如約0.9 mg)磷酸氫二鉀、約1 mg至10 mg (例如約5.9 mg)檸檬酸鈉二水合物及注射用水。套組

本揭露內容之某些態樣係關於醫藥套組，其包含一或多個填充有本文所揭露之組合物、疫苗或劑型之成分中之一或多者的容器。在一些態樣中，套組包含二個容器，一個包含VLP且另一個包含佐劑。在一些態樣中，套組包含單一容器(例如預填充注射器或小瓶)，其包含VLP及任擇地佐劑。與此類容器相關聯的可為由管理醫藥或生物產品之製造、使用或銷售之政府機構所規定形式之資訊，此注意事項反映由人類投藥之製造、使用或銷售機構之批准。

在某些態樣中，組合物、疫苗及/或劑型(例如一次單次劑量、初次劑量或加強劑量)以呈適用於投與個體(例如肌肉內投與)之濃度的液體，例如懸浮液形式供應。

本揭露內容之某些態樣係關於一種套組，其包含本揭露內容之組合物、疫苗及/或劑型(例如在預填充注射器中)及使用說明書。

在某些態樣中，套組包含第一容器，其包含本文所揭露之含VLP之組合物、疫苗及/或劑型；及第二容器，其包含佐劑(例如鋁佐劑)；及關於合併容器之內含物及向個體投與混合物之說明書。

在某些態樣中，套組包含容器(例如小瓶或預填充注射器)，該容器包含本文所揭露之組合物、疫苗及/或劑型，其包含VLP及佐劑(例如鋁佐劑)；及關於向個體投與組合物、疫苗及/或劑型之說明書。

在某些態樣中，套組包含可在小瓶或單次劑量預填充注射器(包含約0.5至1.5 mL (例如約0.8 mL)容積)中獲得之用於肌肉內投與的無菌懸浮液。在某些態樣中，各劑量包含約6 µg至約60 µg (例如約40 µg) CHIKV VLP、約100 µg至500 µg (例如約300 µg)鋁(例如呈氫氧化鋁佐劑形式)、約20 mg至80 mg (約59.7 mg)蔗糖、約0.2 mg至0.8 mg (例如約0.4 mg)磷酸二氫鉀、約0.5 mg至1.5 mg (例如約0.9 mg)磷酸氫二鉀、約1 mg至10 mg (例如約5.9 mg)檸檬酸鈉二水合物及注射用水。 實例實例 1 ：類屈公病毒顆粒 (VLP) 之製備

製備含有CHIKV結構蛋白(衣殼(C)、E3、E2、6K及E1)之編碼序列的質體。質體由3744鹼基對合成基因(SEQ ID NO: 2)製備，該基因編碼五種CHIKV結構基因：病毒株37997之衣殼(核心)、E3、E2、6K及E1。CHIKV基因以與在CHIKV基因體中相同之方向插入至質體中。合成基因構築為具有XbaI及BamHI限制性核酸內切酶位點。藉由用XbaI及BamHI限制性核酸內切酶消化載體，將此基因插入至表現載體之多重選殖位點中。此載體利用人類巨細胞病毒(CMV)早期即刻啟動子/增強子及來自第1型人類T細胞白血病病毒之5'長末端重複序列的調節性R區，以便在人類細胞中高效且高位準表現感興趣的基因。

藉由用編碼CHIKV結構蛋白基因(C、E3、E2、6K及E1基因)之表現質體轉染VRC293細胞(衍生自人類胚胎腎(HEK) 293細胞)，產生此實例中之VLP。所表現之蛋白質自組裝成VLP，隨後自細胞培養基收集且純化該等VLP。蛋白質在CMV IE啟動子的控制下表現。6K肽以少量併入至α病毒病毒粒子中，但藉由低溫電子顯微法在病毒粒子結構中未鑑別出。藉由西方墨點或其他技術在純化CHIKV VLP中未偵測到6K及E3蛋白。

VLP藉由超過濾、透濾及陰離子交換層析純化，隨後經無菌過濾。簡言之，初始純化步驟為超過濾/透濾(UF/DF)過程，用於濃縮CHIKV VLP且隨後將經濃縮物質透濾至1×SP緩衝液(10 mM磷酸鉀，218 mM蔗糖，pH 7.0)中以便進一步純化，同時自澄清的收集物移除雜質。此過程藉由切向流過濾(TFF)進行。

接下來，將經濃縮及透濾之CHIKV VLP施加至陰離子交換層析管柱。此步驟移除宿主細胞蛋白質及宿主細胞去氧核糖核酸(DNA)。在層析過程期間，存在洗滌步驟以減小產物中殘餘宿主細胞DNA之大小且降低其濃度。藉由用25 mM檸檬酸鈉提高緩衝液之離子強度使CHIKV VLP自管柱溶離。該過程在室溫下進行。

接下來，將自陰離子交換管柱溶離之CHIKV VLP相對於5-7體積之1×SP緩衝液透濾。將經透濾之CHIKV VLP物質在無跨膜壓差(TMP)之情況下再循環3-15分鐘且隨後收集。此步驟用以移除任何剩餘殘餘洗滌溶液且降低其他宿主細胞雜質位準。最後，在透濾之後，將CHIKV VLP產物膜過濾至無菌單次用容器中以形成藥物物質。收集樣品用於釋放測試且將CHIKV VLP藥物物質在≤ -60℃下儲存。實例 2 ：類屈公病毒顆粒 (VLP) 之表徵

使用DLS，亦稱為光子相關譜法(PCS)或準彈性光散射測定根據實例1中之方法製備的CHIKV VLP之大小，DLS為用於量測在次微米級大小範圍內之分子及顆粒之大小的良好確立的技術。DLS所量測之參數為流體動力學半徑，且可被定義為與所量測之顆粒具有相同擴散係數之球形顆粒的半徑。此等研究用Zetasizer Nano (Malvern)進行。此儀器所量測之顆粒的直徑範圍為0.6 nm至6 μm。DLS量測使用拋棄式低容積比色管進行。對於此等研究，將來自六個批次之藥物物質的樣品在不稀釋之情況下直接添加至比色管中。6個批次之平均直徑結果顯示於表 2 中。對應於主峰之平均直徑的z-平均大小為63-67 nm。低PDI指示純化VLP在大小方面相對均勻。藉由DLS獲得之CHIKV VLP大小與藉由對開發批次進行之低溫電子顯微法獲得之值(40-60 nm)及TEM獲得之值(70 nm)一致。此等結果亦與在60-70 nm範圍之α病毒病毒粒子的已知大小一致。

表 2 .藉由DLS對CHIKV VLP顆粒大小進行的評定

直徑(nm)	多分散性指數(PDI)
66.6	0.03
67.7	0.05
67.1	0.03
67.6	0.04
63.9	0.03
63.7	0.04

接下來，在還原及變性條件下進行CHIK VLP之SDS-PAGE分析，且該分析顯示3條主要帶。使用MALDI-TOF質譜法以確認如圖 2 中1、2及3所顯示之3條主要帶分別對應於來自屈公病毒之3種結構蛋白：衣殼、E2及E1。如圖2中帶4所顯示之SDS-PAGE中略微大於E1 (在E1上方行進)之次要污染物確定為HSP70 1A。

獲自胰蛋白酶化衣殼、E1及E2帶之MS波譜學資料顯示於圖 3A-3C 中。另外，針對宿主細胞蛋白(HSP70 1A)獲得之MS波譜學資料顯示於圖 3D 中。藉由將量測質量與預期質量進行匹配來實現針對衣殼、E1及E2結構蛋白獲得之片段的序列指派。

開發RP-HPLC分析以測定CHIKV VLP中結構蛋白E1、E2及衣殼之百分比。將100 μL未經稀釋CHIKV VLP之等分試樣負載至Xbridge BEH300 C4 HPLC管柱(3.5 μm，4.6×150 mm)上。將管柱維持在60℃下。HPLC移動相A含有含0.1% TFA之水，且移動相B含有30%乙腈、70%異丙醇及0.03%TFA。以1毫升/分鐘之流動速率歷時60分鐘用0%至100%移動相B之梯度溶離蛋白質。藉由使用螢光偵測器來偵測溶離蛋白質，激發波長為280 nm且發射波長為350 nm。圖 4 顯示100 μL未經稀釋之CHIKV VLP注射的RP-HPLC曲線。藉由RP-HPLC分析獲得之3個主要峰藉由SDSPAGE鑑別為衣殼、E1及E2 (圖 5 )。收集到滯留時間為23.6 (峰1)、40.0 (峰2)及45.2分鐘(峰3)之RP-HPLC峰。

確認三個峰為衣殼、E1及E2，且其構成＞97%之CHIKV蛋白。藉由將對應蛋白質峰面積除以C+E1+E2之總峰面積計算衣殼、E1及E2蛋白中之各者的百分比。針對100 μL未經稀釋之CHIK VLP觀測到的C、E1及E2百分比分別為35%、29%及36%。C、E1及E2百分比計算值自變性條件下各蛋白質組分的螢光信號推導出。此等值接近1:1:1之衣殼、E1及E2的比。

使用負染色電子顯微法來分析純化CHIKV VLP之形態。對於此等研究，藉由將未經稀釋之CHIKV VLP與已知濃度之100 nm膠乳珠粒混合，且將混合物施加至硝化纖維素支撐之400目銅柵格來製備樣品。使樣品附著至柵格，隨後用磷鎢酸溶液(鈉鹽)對柵格進行染色。使用配備有FEI Eagle 4K×4K CCD相機，在120 KeV下操作之FEI Tecnai T12電子顯微鏡，藉由電子顯微法分析柵格。以15,000×(0.71奈米/像素)之標稱放大率拍攝影像。代表＞95%總顆粒之最突出的結構對應於完整CHIKV VLP，其具有類似於屈公病毒之形態(圖 6A )。完整CHIKV VLP形狀為大致球形，具有刷狀緣及實心中心。CHIKV VLP之大小與α病毒之已知大小很好相關，α病毒具有在60-70 nm範圍內之病毒粒子。

在低溫電子顯微法之情況下，在不存在傳統電子顯微法必需的染色劑或固定劑之情況下查看呈水合狀態之樣品。藉由將CHIKV VLP樣品在由400目碳上多洞碳膜支撐之玻璃狀冰中急驟冷凍，且在液氮下儲存直至成像，製備用於低溫電子顯微法之CHIKV VLP樣品。使用將柵格維持在≤ 170℃下之載物台，將玻璃狀冰柵格轉移至電子顯微鏡(FEI Tecnai T12，120 KeV，FEI Eagle 4K×4K CCD相機)。以52,000×(0.21奈米/像素)及21,000×(0.50奈米/像素)之標稱放大率獲取各柵格之影像。藉由低溫電子顯微法分析檢查CHIKV VLP (圖 6B )展現製劑包括類病毒顆粒，其大小及形狀均一，具有刷狀緣，且似乎具有高位準對稱性。顆粒之直徑經估計為40-60 nm，視VLP之結構而定。裸VLP (不具有套膜棘突之VLP)較小，亦即，≈40 nm，且完全形成之成熟VLP≈60 nm。此等顆粒之形態適合於2D平均化及潛在地3D重構。E1及E2醣蛋白組織成240個異二聚體，其繼而組裝成80個醣蛋白棘突。

藉由用2-胺基苯甲醯胺(2AB)衍生N醣苷肽酶裂解之聚醣，且在正相(NP) HPLC上用螢光偵測分離衍生化聚醣，測定CHIK VLP之N-聚醣概況。LC-MS分析鑑別出CHIK VLP中寡甘露糖、雜合及複雜N鍵聯聚醣結構。

開發量測CHIKV VLP結構上中和抗原決定基濃度及/或確認中和抗原決定基的夾心型ELISA用作效力分析。此分析使用二種不同單株抗體用於捕獲及偵測。藉由用純化VLP對小鼠進行免疫接種，及在ELISA中相對於純化VLP篩選融合瘤產生此等抗體，亦即捕獲及偵測。隨後在基於報導基因之中和分析中使用假型化慢病毒載體，分析在藉由ELISA進行之初篩中識別VLP之抗體中和CHIKV VLP的能力。捕獲抗體及偵測抗體均為中和抗體。偵測抗體與HRP綴合。藉由ELISA測定參考標準批次及六個CHIKV VLP樣品之抗原性。使用Spectramax M5讀盤器在450 nm下測定吸光度。繪製隨蛋白質濃度而變之所得光密度，且產生標準曲線。

參考標準批次及二個GMP批次之結果呈現在圖 7 中。當繪製隨CHIKV VLP濃度而變之光密度時，所有批次之稀釋曲線具有類似斜率及觀測到50%反應處的稀釋度。此等資料表明藉由當前製造製程產生之CHIKV VLP就抗原性而言展現良好批次間一致性。

類似地，使用針對參考標準批次產生之劑量-反應曲線來計算CHIKV VLP之四個GMP批次中之各者的效力(CHIKV VLP免疫反應性)值。對於各批次，使用在標準曲線線性範圍內之單一稀釋自標準曲線測定效力(免疫反應性)值。表 3 中呈現此等結果，以及各批次之蛋白質濃度及藉由ELISA測得之效力(CHIKV VLP免疫反應性):藉由BCA™測得之蛋白質濃度的比率。參考標準批次之效力(免疫反應性)指派等效於藉由BCA™量測之蛋白質濃度的值。ELISA值與蛋白質濃度之比率提供對每單位質量之效力(免疫反應性)的量度。

表 3 .CHIKV VLP藥物物質批次之效力(免疫反應性)

批號	藉由 ELISA 測得之效力 ( 免疫反應性 ) (µg/mL)	藉由 BCATM 測得之蛋白質濃度 (µg/mL)	效力 ( 免疫反應性 ) 與蛋白質濃度之比率 (ELISA:BCATM )
1	42.7	55	0.8
2	58.9	51	1.2
3	33.8	41	0.8
4	44.0	51	0.9
5	85.4	74	1.2
6	85.0	76	1.1

實例 3 ： CHIKV VLP 在食蟹獼猴中之功效

使用CHIKV疾病之非人類靈長類動物(NHP)動物模型(經CHIKV病毒株LR2006-OPY1攻擊之食蟹獼猴)來評估CHIKV VLP疫苗，例如免疫原性及功效。簡言之，用三種劑量之CHIKV LR2006-OPY1 (10⁶ 、10⁷ 、10⁸ 個溶菌斑形成單位(PFU))攻擊NHP。在挑戰10天內，所有三種劑量誘發臨床症狀，包括病毒血症、關節痛、發熱及食慾不振。在攻擊之後每天持續7天及在攻擊之後10天安樂死當天，在經感染動物之血漿及組織中藉由溶菌斑分析(用於偵測感染性病毒)及qRT-PCR (用於偵測病毒RNA)二者量測病毒血症。儘管在10天監測時段期間在經攻擊動物中不存在關節痛之外在徵象，但在組織學檢查後關節及周圍組織之發炎明顯。開發評分系統以量測所觀測到之發炎及退化程度(表 4 )。在三種劑量之間不存在所量測疾病參數的顯著差異。基於三種劑量之間病毒血症及關節積液的類似性，及在最高劑量下對支持性護理之提高需求，選擇10⁷ PFU之劑量用於未來研究。

表 4 .用於經CHIKV感染食蟹獼猴中關節及滑膜病理學之評分系統

觀測結果	級別	描述
發炎	1	極小發炎=很少散佈個別發炎細胞或每聚集體少於10個細胞的聚集體
2	輕度發炎=發炎形成每聚集體10-50個細胞的小聚集體
3	中度發炎=發炎細胞形成每聚集體超過50個細胞的聚集體
纖維蛋白	1	對於存在纖維蛋白/壞死添加額外分
嗜中性白血球	1	對於存在嗜中性白血球添加額外分

將食蟹獼猴用經鋁(300 µg)佐劑化之CHIKV VLP (1.25、6或20 µg)、單獨的VLP(20 µg)或單獨的鋁免疫接種二次，接著用CHIKV LR2006-OPY1 (10⁷ PFU)攻擊。

結果顯示所有三種劑量之VLP，包括不含鋁之20 µg誘發免疫反應，如藉由由螢光素酶活性降低定量之感染性抑制分析(CHIKV-Luc)所量測。在單次免疫接種之後觀測到強血清中和抗體(SNA)反應(圖 8 )。與不含鋁之VLP疫苗(20 µg劑量；參見圖 8 )相比，添加鋁提高攻擊前SNA效價。此外，如藉由對來自經攻擊動物之血清進行的溶菌斑分析所量測，疫苗接種保護非人類靈長類動物(NHP)免於病毒血症(圖9A-9B )。在經疫苗接種動物中，在任何時間點處未觀測到感染性病毒。

關節病理學評分展現用VLP疫苗接種以劑量依賴型方式保護NHP免於關節浸潤(圖10A-10B )。藉由RT-PCR分析，4隻對照NHP中之3隻顯示在所分析之所有組織中具有可量測RNA，而經VLP疫苗接種之NHP具有顯著較少病毒RNA (圖 11A-11D 及表 5 )。與疫苗接受者(1.25、6、20 µg CHIKV-VLP+鋁，20 µg CHIKV-VLP)相比，僅接受鋁(0 µg CHIKV-VLP+鋁)之動物中vRNA/公克組織顯著較高。在此NHP研究中，在不同活性CHIKV VLP疫苗組之間未觀測到差異。綜合而言，此等資料表明疫苗接種誘發之SNA保護NHP免於在病毒攻擊之後罹患屈公疾病。

表5 .個別SNA效價關節病理學評分及組織Log vRNA複本/公克

動物 ID	測試組	關節病理學評分	第 56 天效價	關節組織 Log vRNA 複本 / 公克
僅關節囊 / 滑膜	合併 1	後膝關節	踝	腕
47567	僅佐劑	1	1	＜19	2.792	＜ LOQ	3.958
47571	14	23	＜19	5.660	5.830	6.730
47580	8	8	＜19	6.329	5.255	5.215
47590	4	4	＜19	4.873	4.273	5.966
47562	1.25 µg VLP 以及佐劑	0	0	2979.1	＜ LOQ	4.605	4.387
47563	5	6	3356.1	2.752	3.197	3.097
47574	0	0	2163.4	＜ LOQ	3.567	＜ LOQ
47588	0	0	3138.2	＜ LOQ	2.923	＜ LOQ
47589	1	1	6891.4	＜ LOQ	＜ LOQ	＜ LOQ
47560	6 µg VLP 以及佐劑	0	0	5218.5	＜ LOQ	＜ LOQ	＜ LOQ
47577	2	2	12147.2	3.363	＜ LOQ	＜ LOQ
47587	2	2	＞15259	3.317	4.450	3.423
47596	0	0	6283.4	＜ LOQ	＜ LOQ	3.004
47597	2	2	6366	3.374	＜ LOQ	3.812
47570	20 µg ( 無佐劑 )	0	0	1726.4	＜ LOQ	2.946	4.021
47573	0	0	2157.2	5.681	3.095	4.170
47575	0	0	2027.3	4.744	4.326	4.783
47591	0	0	2730.7	3.494	2.926	3.653
47598	2	2	3353.6	＜ LOQ	3.652	3.456
47561	20 µg VLP 以及佐劑	0	0	＞15259	4.299	＜ LOQ	3.127
47564	0	0	5442.8	＜ LOQ	3.092	＜ LOQ
47565	1	1	13454.3	3.692	＜ LOQ	3.145
47579	0	0	7838.9	3.171	＜ LOQ	2.728
47586	0	0	＞15259	4.971	＜ LOQ	2.781
1 包括踝及腕之肌腱；包括後膝關節之肌腱及半月板。

實例 4 ： CHIKV VLP 在人類中之安全性及免疫原性 (2 期 )

開發2期臨床試驗以檢查CHIKV VLP疫苗在人類中之安全性及免疫原性。選擇400名在18與60歲之間的患者。試驗隨機分組、雙盲、安慰劑對照，且各組平行研究。患者為未經CHIKV處理或經CHIKV暴露，且來自加勒比海CHIK地方性區域(波多黎各(Puerto Rico)、多明尼加共和國(Dominican Republic)、海地(Haiti)、馬提尼克(Martinique)及瓜德羅普(Gaudeloupe))。未經CHIKV處理之患者分類為在第0週效價＜15的患者。患者在第0週及第4週肌肉內接受20 µg CHIKV-VLP。主要指標為第8週時之血清轉化，伴隨18個月追蹤(經二個CHIKV季)。

對於此研究，在治療組及安慰劑組中個體之約30%中偵測到基線血清中和抗體(SNA)。在基線處不具有SNA之個體中觀測到高反應率。20 µg CHIKV VLP誘發與對天然抗原之反應相當的抗體反應。第8週時CHIK-VLP組中效價之95% CI與CHIKV暴露中之基線效價範圍重疊。在第8週時，與安慰劑之20.8%反應率相比，經CHIKV-VLP治療之患者具有99.5%反應率，p值＜0.001。陽性免疫反應定義為大於或等於30之SFV-OPY1-GFP EC50值。在第8週時，與42.8 (31.7-57.9)相比，經CHIKV-VLP治療之患者具有2004.5 (1680.1-2391.5) GMT，p值＜0.001。患者維持免疫反應至投與疫苗之後72週(圖12 及表 6 )。在未經CHIKV處理及經CHIKV暴露之間未觀測到明顯安全性差異。表6 .投與CHIKV VLP之未經CHIKV處理之患者的效價。

	投與之後週數
0 ( 第一劑量 )	4 ( 第二劑量 )	8	16	24	32	40	48	56	64	72
N	153	151	151	151	146	147	142	147	142	143	143
效價 ＞=15 之百分比	0	88	100	100	97	98	96	95	96	97	96
幾何平均效價	--	123	1701	431	213	160	121	115	106	105	100

實例 5 ： CHIKV VLP 疫苗穩定性

CHIKV VLP疫苗以無菌水性緩衝溶液形式製備，其以0.8 mL在40+/-10 μg/mL之濃度下的疫苗填充於單次劑量3 mL玻璃小瓶中。調配物緩衝液包括218 mM蔗糖、10 mM磷酸鉀、25 mM檸檬酸鈉及注射用水。小瓶在-45℃至-10℃下儲存於非無霜冷凍器中，且意欲用於肌肉內投與。小瓶僅意欲用於單次使用且不含防腐劑。

來自所進行之穩定性研究的結果顯示疫苗在冷凍溫度及室溫下在注射器中穩定持續8小時(資料未顯示)。

亦獲得來自在-45℃至-10℃下儲存之毒理學批次經6個月的穩定性結果。樣品藉由外觀、pH、蛋白質濃度、SDS-PAGE、西方墨點、ELISA及動態光散射分析，且以3個月間隔直至1年，接著每6個月直至2年，隨後其後每年分析。另外，每年分析容器閉合完整性。至6個月時間點未觀測到產品不穩定性或降解之證據。實例 6 ： CHIKV VLP 疫苗在人類中誘發中和抗體反應

額外2期臨床研究設計成具有1及2劑量方案，使用伴隨及不伴隨鋁之6至40 µg劑量之CHIKV VLP。在此研究中，將415名年齡為18-45歲之患者隨機分入八個治療組。亦包括在血漿清除術及白血球清除術之情況下的第9組(資料未在此處顯示，參見實例8)。

第1組：在標準2劑量時程上在第1天及第29天未經佐劑化20 µg劑量。

第2-7組：在標準或短(第15天及第29天) 2劑量時程上各種佐劑化劑量(6、10及20 µg)之CHIKV VLP。

第8組：在第29天單次佐劑化40 µg劑量。

為維持治療組之間盲性，在短及單次劑量時程上在第1天對個體投與安慰劑，且在標準及單次劑量時程上在第15天對個體投與安慰劑。所有個體在第29天接受CHIKV VLP。研究設計之概述顯示於圖 13 及表 7 中。表 7 .伴隨及不伴隨鋁之CHIK VLP劑量及時程研究設計

組	N	劑量位準 / 微克 VLP	初始劑量方案	最終訪視 ( 中斷組 )	加強劑量
第 1 天	第 15 天	第 29 天	第 547 天
1	53	20	20 µg/unadj.	安慰劑	20 µg/unadj.	--	無
2	52	6	6 µg/adj.	安慰劑	6 µg/adj.	第365天
3	52	10	10 µg/adj.	安慰劑	10 µg/adj.	第365天
4	50	20	20 µg/adj.	安慰劑	20 µg/adj.	--	40 µg/adj.
5	53	6	安慰劑	6 µg/adj.	6 µg/adj.	第365天
6	53	10	安慰劑	10 µg/adj.	10 µg/adj.	第365天
7	51	20	安慰劑	20 µg/adj.	20 µg/adj.	第365天
8	51	40	安慰劑	安慰劑	40 µg/adj.	--	無
9	20	20	20 µg/adj.	--	20 µg/adj.	第182天血球分離術臂

Unadj.=未經佐劑化；Adj.=經300 µg Alhydrogel®佐劑化

對調整意向治療(modified intent-to-treat；mITT)群體(n=412)進行免疫原性分析，該群體包括經治療且具有基線(第1天)可評估免疫原性結果及至少1個研究中樣品的所有隨機分組個體。

使用基於CHIKV-Luc螢光素酶之微量中和分析，在第1、8、15、22、29、36、57、182及365天在所有組中評定血清中和抗體(SNA)。使用80%中和截止值(NT80)測定效價。在各時間點計算幾何平均效價(GMT)，以及展現等於或高於15、40、60、80、100、160及640之臨限之NT80的個體百分比。藉由針對GMT之變異數分析，及針對到達各種臨限定義之個體之類別百分比的費雪精確檢定(Fisher's exact test)，在所有第1天後時間點在第1組與所有其他組之間進行統計比較。

在整個研究中治療具有良好耐受性，且未鑑別出顯著疫苗相關安全問題。疫苗接種後患者之第二期間分析顯示截至第8天(7天內)，高達98%之患者產生針對CHIKV之中和抗體反應(圖 14 )。在一個劑量之後7天內，74%至98%之個體中存在血清轉化。截至最後一個劑量之後28天，在所有個體中觀測到血清轉化。顯示此免疫反應持續至六個月訪視。

亦在疫苗接種後第365天分析血清中和。除第5組中一個個體以外，所有個體具有低於第1天注射之前偵測下限的CHIKV-Luc SNA效價(圖 15 及表 8 )。在第一活性劑注射之後7天(亦即對於第1-4組，第8天；對於第5 -7組，第22天；及對於第8組，第36天)，在所有組中觀測到免疫反應。此等早期時間點處之GMT的範圍為第2組中之34.0至第8組中之157.9。在第1-4組中，第一峰值GMT出現在第22天(第一活性劑注射之後21天)。第2、3及4組具有327.5、1286.7及2123.4之峰值GMT，展現劑量-反應效應。另外，第4組之峰值GMT高於第1組之峰值GMT 696.5 (p＜0.0001)，展現鋁之佐劑效應。在第5-7組中，第22天及第29天處之GMT亦展現劑量-反應。此等GMT結果進一步概述於圖 17 中。單次40 μg劑量(第8組)具有最佳反應持續時間。表 8 .按組及時間點顯示之CHIKV-Luc SNA幾何平均效價

研究日	統計	第 1 組	第 2 組	第 3 組	第 4 組	第 5 組	第 6 組	第 7 組	第 8 組
第1天	N	53	51	51	50	53	53	50	52
	GMT	7.5	7.5	7.5	7.5	7.8	7.5	7.5	7.5
第8天	N	53	50	49	48	52	52	50	51
	GMT	69.1	34.0	66.9	112.3	8.3	7.5	7.5	7.5
第15天	N	53	50	49	48	52	53	50	52
	GMT	391.3	179.2	513.4	895.9	7.7	7.5	7.6	7.5
第22天	N	51	48	49	47	52	53	50	52
	GMT	696.4	327.5	1262.6	2123.6	42.2	60.1	119.7	7.5
第29天	N	50	50	48	50	50	51	49	51
	GMT	403.8	272.8	837.6	1108.6	243.2	314.9	928.9	8.2
第36天	N	50	49	48	49	51	50	48	50
	GMT	2923.2	1579.7	2667.9	3264.0	1290.4	1966.4	3727.3	157.9
第57天	N	49	48	47	49	51	51	49	50
	GMT	1946.0	1084.8	1431.3	1884.4	914.0	1151.0	1613.2	1711.8
第182天	N	48	44	42	46	45	49	49	49
	GMT	340.5	196.1	371.3	454.2	254.3	303.4	408.1	462.5
第365天	N	44	42	39	45	42	46	45	47
	GMT	235.1	129.1	233.8	318.8	195.8	241.7	319.4	449.5
第547天	N	43	-	-	44	-	-	-	41
	GMT	162.4	-	-	239.6	-	-	-	271.6
第760天	N	42	-	-	41	-	-	-	39
	GMT	162.7	-	-	5513.4	-	-	-	254.2

在第二劑量之後，第二峰值GMT出現在第36天，再次展現劑量-反應。在所有2劑量組中，第36天GMT亦高於所有較早GMT，展現對第二劑量之記憶性反應的強度。在第57天，其為對於所有組最後一個活性劑注射之後28天，第1組之GMT為1946.0。佐劑化組之GMT範圍為第5組中之914.0至第4組中之1884.4，第8組具有第二高的GMT，為1711.8。自第57天至第182天，GMT在所有組中下降，此時其範圍為第2組中之191.7至第8組中之462.5。在除第8組外之所有組中，在第365天GMT進一步下降，第8組具有466.2之GMT，高於第1組244.8之GMT (p=0.0058)。對於所有組在第365天處效價之逆累積分佈顯示於圖 16 中。最高效價存在於第8組中。此等結果顯示與各自投與二個獨立劑量之第1至7組及第9組相比，第8組(單次劑量之40 µg/adj.)在365天時段內維持最高效價。

使用40或更大之臨限NT80進行血清反應率(SR)分析。此臨限基於分析比較及流行病學資料而選擇。血清反應結果用CHIK-Luc血清陽性≥ 40 (表9 )、≥ 160 (表10 )及≥640 (表11 )之患者顯示。各組中抗CHIKV中和效價(NT80) ≥15及≥40之個體的百分比計算值分別顯示於圖 18A 及圖 18B 中。表 9 .按組及時間點顯示之血清反應率(NT80≥40)

研究日	統計	第 1 組	第 2 組	第 3 組	第 4 組	第 5 組	第 6 組	第 7 組	第 8 組
第天1	N	53	51	50	50	53	53	50	52
	n (%)	0	0	0	0	1 (1.9)	0	0	0
第天8	N	53	50	49	49	52	52	50	51
	n (%)	32 (60.4)	20 (40.0)	32 (65.3)	38 (77.6)	1 (1.9)	0	0	0
第天15	N	53	50	49	48	52	53	50	52
	n (%)	51 (96.2)	43 (86.0)	49 (100)	47 (97.9)	0	0	0	0
第天22	N	51	48	49	47	52	53	50	52
	n (%)	51 (100)	43 (89.6)	49 (100)	47 (100)	23 (44.2)	31 (58.5)	42 (84.0)	0
第天29	N	50	50	48	50	50	51	49	51
	n (%)	49 (98.0)	46 (92.0)	48 (100)	50 (100)	47 (94.0)	47 (92.2)	48 (98.0)	1 (2.0)
第天36	N	50	49	48	49	51	50	48	50
	n (%)	48 (96.0)	48 (98.0)	48 (100)	49 (100)	51 (100)	48 (96.0)	48 (100)	43 (86.0)
第天57	N	49	48	47	49	51	51	49	50
	n (%)	48 (98.0)	48 (100)	46 (97.9)	49 (100)	51 (100)	51 (100)	49 (100)	50 (100)
第天182	N	48	44	42	46	45	49	49	49
	n (%)	48 (100)	40 (90.9)	41 (97.6)	46 (100)	45 (100)	47 (95.9)	48 (98.0)	47 (95.9)
第天365	N	44	42	39	45	42	46	45	47
	n (%)	40 (90.9)	36 (85.7)	37 (94.9)	43 (95.6)	41 (97.6)	43 (93.5)	43 (95.6)	45 (95.7)
第天547	N	43	-	-	44	-	-	-	41
	n (%)	40 (93.0)	-	-	42 (95.5)	-	-	-	38 (92.7)
第天760	N	42	-	-	41	-	-	-	39
	n (%)	40 (95.2)	-	-	41 (100.0)	-	-	-	35 (89.7)

表10 . CHIKV-Luc血清陽性≥ 160之個體的百分比

研究日	第 1 組	第 2 組	第 3 組	第 4 組	第 5 組	第 6 組	第 7 組	第 8 組
1	0	0	0	0	0	0	0	0
8	34	12	25	39	2	0	0	0
15	77	46	76	92	0	0	0	0
22	84	75	96	100	15	17	40	0
29	78	72	96	96	58	82	94	2
36	96	94	98	100	100	96	98	44
57	98	94	98	100	98	98	98	100
182	75	61	86	89	64	78	86	82
365	66	36	59	87	60	67	80	87
547	54	-	-	73	-	-	-	76
760	50	-	-	100	-	-	-	72

表11 . CHIKV-Luc血清陽性≥ 640之個體的百分比

研究日	第 1 組	第 2 組	第 3 組	第 4 組	第 5 組	第 6 組	第 7 組	第 8 組
1	0	0	0	0	0	0	0	0
8	9	4	4	6	0	0	0	0
15	30	24	43	63	0	0	0	0
22	53	31	71	89	6	4	10	0
29	38	26	60	74	22	29	65	0
36	92	84	96	98	73	88	96	18
57	90	73	92	92	61	82	88	88
182	23	11	26	33	13	25	29	45
365	18	7	18	22	12	17	27	43
547	5	-	-	5	-	-	-	22
760	7	-	-	98	-	-	-	21

在第一活性劑注射之後7天，SR範圍為第2組中之40.0%至第8組中之86.0%。第4組77.6%之SR在數值上高於第1組60.4%之SR，與由GMT結果顯示之佐劑效應一致，但缺少統計顯著性(p=0.0872)。截至第22天，第1組及第4組到達100%之SR。第8組不具有第一注射之後21天的類似時間點用於比較。第8組在一個劑量之後7天具有最高血清轉化。

在第57天，除第1組(98.0%)及第3組(97.9%)外，所有組中SR為100%。截至第182天，SR在一些組中下降，範圍為第2組中之90.9%至第1、4及5組中之100%。第8組中之SR為95.9%。自第182天至第365天，SR在所有組中下降，範圍為第2組中之85.0%至第5組中之97.6%。第8組中之SR為95.6%，略微低於第182天時。

使用較嚴格臨限640，進行對SR之額外分析。第一注射之後7天的SR範圍為第6組中之3.8%至第8組中之18%。在第57天，SR範圍為第5組中之60.8%至第4組中之91.8%。第8組中之SR為88.0%。截至第182天，SR在所有組中下降，範圍為第2組中之11.4%至第8組中之44.9%。截至第365天，SR同樣在所有組中下降，但在第8組中僅最低限度地下降，至44.4%。第8組在第365天具有最高GMT，及自第182天之最小降低。

綜合而言，此等資料顯示免疫反應持續至第365天。在40之臨限下，經疫苗接種組具有高(85%)第365天血清陽性。實例 7 ：用於人類臨床研究 (3 期 ) 之劑型

如實例1中所描述，藉由用編碼CHIKV結構蛋白基因之表現質體轉染HEK293細胞產生CHIKV VLP。簡言之，所表現之蛋白質自組裝成VLP，隨後自細胞培養基收集且純化該等VLP。VLP藉由超過濾、透濾及陰離子交換層析純化，隨後經無菌過濾。將VLP與適當量之調配物緩衝液混合且隨後吸附於無菌氫氧化鋁佐劑(Alhydrogel® 2%)上。

將伴隨氫氧化鋁佐劑之CHIKV VLP調配為可在0.8 mL單次劑量預填充注射器中獲得的用於肌肉內投與之無菌懸浮液。各0.8 mL劑量含有大致40 μg CHIKV-VLP、300 μg鋁(呈氫氧化鋁佐劑形式)、59.7 mg蔗糖、0.4 mg磷酸二氫鉀、0.9 mg磷酸氫二鉀、5.9 mg檸檬酸鈉二水合物及注射用水。疫苗不含防腐劑或抗生素。

對於此研究，疫苗將以單次0.8 mL劑量形式肌肉內投與。疫苗應在上臂之三角肌區中肌肉內投與。

將在隨機分組、多中心、安慰劑對照臨床研究中評估在12至64歲之個體中的有效性，該研究比較1劑量之CHIKV-VLP+鋁疫苗或安慰劑之後的SNA反應。該研究將在美國進行且按年齡分層(12至17歲、18至45歲及46至64歲)。此研究將招收約3150名參與者，其經隨機分組以接受一劑量之CHIKV-VLP+鋁疫苗(n = 2700)或安慰劑(n = 450)。

對於所有年齡組，將自CHIKV NT80血清中和抗體(SNA)之量測值推斷有效性。將藉由將對經CHIKV-VLP+鋁免疫接種之SNA反應與在經安慰劑免疫接種之後的SNA反應進行比較，評定疫苗在個體中之有效性。主要有效性指標可為疫苗接種之後22天的SNA血清反應。在一些態樣中，血清反應可定義為≥ 40之疫苗接種後SNA效價。次要指標包括SNA幾何平均效價(GMT)。實例8 ： 來自經CHIK VLP 疫苗接種之個體的人類IgG 保護食蟹獼猴免於攻擊

自合併血漿純化IgG，所收集之血漿在第42-56天之間自已在第1天及第29天經2劑量伴隨鋁之20 µg CHIK VLP疫苗接種的人類個體(來自如實例6中所描述之2期臨床試驗的第9組)收集。將純化IgG以100、15及5 mg/kg之劑量向食蟹獼猴投與，每劑量組6隻NHP。6隻NHP之對照組投與非特異性純化IgG。在IgG投與之後24小時用CHIKV LR2006-OPY1 (10⁷ PFU)攻擊NHP。攻擊時100、15及5 mg/kg劑量組中平均循環SNA效價分別為1:644、1:101及1:38。

結果顯示來自經CHK VLP疫苗接種之個體的純化IgG保護NHP免於病毒血症，如藉由對來自經攻擊動物之血清進行的溶菌斑分析所量測，因為在此等NHP中在任何時間未觀測到感染性病毒。所有對照動物具有可偵測感染性病毒。關節病理學評分展現與對照動物相比，投與IgG引起關節病理學評分降低。對關節組織之RT-PCR分析顯示投與IgG減少每公克組織vRNA之量。實例9 ： 在食蟹獼猴屈公攻擊中測試之來自經CHIK VLP 疫苗接種之個體的人類IgG

將自收集自已經一個劑量之伴隨鋁之40 µg CHIK VLP疫苗接種之人類個體的合併血漿純化IgG。純化IgG將以各種劑量向食蟹獼猴投與。對照組將投與非特異性純化IgG。在IgG投與之後24小時，將用CHIKV LR2006-OPY1皮下(例如10⁵ PFU)攻擊NHP。將例如藉由對血清/血漿樣品進行溶菌斑分析及/或qPCR針對病毒血症評估NHP。

發明內容及發明摘要部分可闡述如(諸位)發明人所考慮之本揭露內容的一或多個而非所有例示性實施例，且因此並不意欲以任何方式限制本發明及所附申請專利範圍。

特定實施例之前述描述將充分地揭露本發明之一般性質，使得在不脫離本發明之一般概念的情況下，其他人可藉由應用此項技術之技能範圍內之知識針對各種應用而容易地修改及/或調適此類特定實施例，而無需進行不當實驗。因此，基於本文中所呈現之教示及導引，此類調適及修改意欲在所揭露之實施例之等效者的含義及範圍內。應理解，本文之措辭或術語係出於描述而非限制之目的，使得本說明書之術語或措辭待由熟習此項技術者按照該等教示及導引進行解譯。

本發明之廣度及範疇不應由上文所描述之例示性實施例中之任一者限制，而應根據以下申請專利範圍及其等效者進行界定。

無

圖 1 顯示CHIKV基因體之示意圖。

圖2 顯示在還原及變性條件下CHIKV VLP之SDS-PAGE凝膠。

圖3A-3D 為在MALDI-TOF分析之後，來自CHIKV VLP蛋白(A)衣殼、(B) E2及(C) E1相比於(D)對照HSP70 1A之質譜圖。

圖 4 顯示CHIKV VLP之RP-HPLC層析圖。

圖5 顯示自RP-HPLC分離之峰1、2、3的SDS-PAGE凝膠。

圖6A-6B 顯示(A) CHIKV VLP之穿透電子顯微法影像，及(B) CHIKV VLP之低溫電子顯微法影像。

圖7 顯示隨CHIKV VLP濃度而變之光密度曲線。

圖8 顯示與僅鋁相比，在用1.25 μg CHIKV VLP+鋁、6 μg CHIKV VLP+鋁、僅20 μg CHIKV VLP及20 μg CHIKV VLP+鋁疫苗接種之後及攻擊之前，食蟹獼猴中之血清中和抗體反應。

圖9A-9B 顯示使用與僅鋁相比，自投與1.25 μg CHIKV VLP+鋁、6 μg CHIKV VLP+鋁、僅20 μg CHIKV VLP及20 μg CHIKV VLP+鋁之經攻擊獼猴分離之血清的溶菌斑分析的(A)血漿中之峰值病毒血症，及(B)血漿結果之AUC。

圖10A-10B 顯示在經攻擊獼猴中，(A)佐劑相對於經疫苗接種及(B)與僅鋁相比，1.25 μg CHIKV VLP+鋁、6 μg CHIKV VLP+鋁、僅20 μg CHIKV VLP及20 μg CHIKV VLP+鋁的關節病理學評分。

圖11A-11D 顯示與僅鋁相比，來自投與1.25 μg CHIKV VLP+鋁、6 μg CHIKV VLP+鋁、僅20 μg CHIKV VLP及20 μg CHIKV VLP+鋁之經攻擊獼猴的擴增病毒RNA之量。樣品收集自(12A)踝關節毛細血管及軟骨、(12B)右四頭肌以及肌腱、(12C)後膝關節毛細血管及軟骨及(12D)腕關節毛細血管及軟骨。

圖12 顯示投與二個劑量CHIKV VLP之未經CHIKV處理個體中免疫反應的持續時間。

圖13 顯示2期研究CHIKV VLP疫苗之劑量及時程設計。VLP劑量以μg為單位；A=鋁；PLA=安慰劑。

圖14 顯示用CHIKV VLP疫苗進行疫苗接種後，對第1-8組之疫苗接種後(天數)之中和抗體的幾何平均效價的定量。

圖15 顯示對於第1-9組(參見表7)，至疫苗接種後第760天針對屈公之抗體的平均效價。

圖16 顯示對於第1-8組(參見表7)，至疫苗接種後第365天效價之逆累積分佈。

圖17 顯示對於第1-8組(參見表7)，至第760天之幾何平均效價(GMT)資料(參見表8)。

圖18A-18B 分別顯示抗CHIKV中和效價(NT80)≥15及≥40的每組(參見表7)個體百分比。

Claims (76)

1. 一種組合物或疫苗，其包含：(a)一類病毒顆粒(VLP)，其包含衍生自屈公病毒(CHIKV)之一衣殼蛋白及一套膜蛋白；(b)一氫氧化鋁佐劑；(c)一糖；(d)一緩衝劑及/或pH調節劑；及(e)一載劑。
2. 一種組合物或疫苗，其包含一類病毒顆粒(VLP)，該類病毒顆粒包含衍生自屈公病毒(CHIKV)之一衣殼蛋白及一套膜蛋白，其中該組合物或疫苗(i)在向一個體投與一單次劑量之該組合物或疫苗之後7天內，在該個體中誘發針對CHIKV之一中和抗體反應及/或(ii)在向該個體投與一單次劑量之後，誘發針對CHIKV之一中和抗體反應，該反應持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。
3. 如請求項2之組合物或疫苗，其進一步包含一佐劑。
4. 如請求項3之組合物或疫苗，其中該佐劑係一氫氧化鋁佐劑。
5. 3或4中任一項之組合物或疫苗，其中該佐劑係氫氧化鋁凝膠。
6. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該衣殼蛋白係一CHIKV C蛋白。
7. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該套膜蛋白係選自由以下組成之群之一CHIKV蛋白：E3、E2、6K、E1及其任何組合。
8. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該VLP包含CHIKV套膜蛋白E2及E1。
9. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該VLP包含CHIKV C、E2及E1蛋白。
10. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該等CHIKV C、E2及E1蛋白為該組合物或疫苗中VLP蛋白的至少95%。
11. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該VLP不包含CHIKV E3及/或6K。
12. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該衣殼蛋白及該套膜蛋白係衍生自CHIKV病毒株37997。
13. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其為適合於肌肉內注射之一懸浮液。
14. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中一/該單次劑量之該組合物或疫苗包含約6 µg至200 µg VLP。
15. 如請求項13之組合物或疫苗，其中該單次劑量之該組合物或疫苗包含約20 µg至100 µg VLP。
16. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中一/該單次劑量之該組合物或疫苗包含約25 µg/mL至75 µg/mL VLP。
17. 如請求項14至16中任一項之組合物或疫苗，其中該單次劑量包含約40 µg或約50 µg/mL VLP。
18. 如請求項5至17中任一項之組合物或疫苗，其中一/該單次劑量之該組合物或疫苗包含呈約30 µg至3000 µg之一量的氫氧化鋁凝膠。
19. 如請求項18之組合物或疫苗，其中該單次劑量之該組合物或疫苗包含呈約100 µg至500 µg之一量的氫氧化鋁凝膠。
20. 如請求項18或19之組合物或疫苗，其中該單次劑量包含250 µg/mL至625 µg/mL氫氧化鋁凝膠。
21. 如請求項20之組合物或疫苗，其中該單次劑量包含約300 µg或約375 µg/mL氫氧化鋁凝膠。
22. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中一/該單次劑量之該組合物或疫苗包含約0.5 mL至2 mL之一體積。
23. 如請求項22之組合物或疫苗，其中該單次劑量之該組合物或疫苗包含約0.5 mL至1 mL之一體積。
24. 如請求項2至23中任一項之組合物或疫苗，其進一步包含一糖。
25. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該糖選自由以下組成之群：蔗糖、乳糖及其任何組合。
26. 如請求項25之組合物或疫苗，其中該糖係蔗糖。
27. 如請求項2至26中任一項之組合物或疫苗，其進一步包含一緩衝劑及/或pH調節劑。
28. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該緩衝劑及/或pH調節劑選自由以下組成之群：磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、檸檬酸鈉脫水物及其任何組合。
29. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該組合物或疫苗不包含一防腐劑或抗生素。
30. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中一/該單次劑量之該組合物或疫苗包含：(a)約6 µg至60 µg之該VLP及(b)約200 µg至500 µg之一/該氫氧化鋁，其中該單次劑量體積在約0.5 mL至1.0 mL之間。
31. 如請求項30之組合物或疫苗，其中該單次劑量之該組合物或疫苗包含：(a)約6 µg至60 µg之該VLP；(b)約200 µg至500 µg之該氫氧化鋁；(c)約20 mg至80 mg之蔗糖；(d)約0.2 mg至1.0 mg之磷酸二氫鉀；(e)約0.2 mg至1.5 mg之磷酸氫二鉀；(f)約2 mg至10 mg檸檬酸鈉脫水物；及(g)水，其中該單次劑量體積在約0.5 mL至1.0 mL之間。
32. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中一/該單次劑量之該組合物或疫苗係約0.8 mL之一體積。
33. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該VLP誘發針對CHIKV之同株或異株的抗體。
34. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該VLP誘發針對一或多種選自由以下組成之群之CHIKV譜系的抗體：東/中/南非(ECSA)、西非及亞洲。
35. 如請求項1及5至34之組合物或疫苗，其在向一個體投與一/該單次劑量之該組合物或疫苗之後7天內，在該個體中誘發針對CHIKV之一中和抗體反應。
36. 如請求項2至35中任一項之組合物或疫苗，其中在一/該單次劑量投與之後，針對CHIKV之該中和抗體反應維持至少28天。
37. 如請求項36之組合物或疫苗，其中在該單次劑量投與之後，針對CHIKV之該中和抗體反應維持至少六個月。
38. 如請求項37之組合物或疫苗，其中在該單次劑量投與之後，針對CHIKV之該中和抗體反應維持至少一年、至少18個月或至少2年。
39. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中在投與一/該單次劑量之該組合物或疫苗之後7天內，血清中和抗體效價≥ 30或≥ 40。
40. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中在投與該單次劑量之該組合物之後7天內，該組合物或疫苗在一個體中誘發針對CHIKV之一中和抗體反應。
41. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中在向該個體投與一單次劑量之後，該組合物或疫苗誘發針對CHIKV之一中和抗體反應，該反應持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。
42. 如前述請求項中任一項之組合物或疫苗，其中該組合物或疫苗(i)在向一個體投與一單次劑量之該組合物或疫苗之後7天內，在該個體中誘發針對CHIKV之一中和抗體反應及(ii)在向該個體投與一單次劑量之後，誘發針對CHIKV之一中和抗體反應，該反應持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。
43. 一種預填充注射器，其包含一/該單次劑量之如請求項1至42中任一項之組合物或疫苗。
44. 一種在一個體中誘發針對屈公病毒(CHIKV)之一免疫反應及/或保護性免疫之方法，其包含向該個體投與如請求項1至42中任一項之組合物或疫苗。
45. 一種在一個體中誘發對屈公病毒(CHIKV)之一中和抗體反應之方法，其包含向該個體投與如請求項1至42中任一項之組合物或疫苗。
46. 一種用於治療、預防一個體之一屈公感染或降低一個體之一屈公感染風險之方法，其包含向該個體投與一有效量之如請求項1至42中任一項之組合物或疫苗。
47. 一種針對一CHIKV感染對一個體進行疫苗接種之方法，其包含向該個體投與一有效量之如請求項1至42中任一項之組合物或疫苗。
48. 一種在一個體中引發針對屈公病毒(CHIKV)之一免疫反應及/或保護性免疫之方法，該方法包含：向該個體投與一組合物或疫苗，其包含(a)包含衍生自CHIKV之一衣殼蛋白及一套膜蛋白的類病毒顆粒(VLP)及(b)一佐劑，其中一單次劑量之該組合物或疫苗包含約6 µg至200 µg VLP，且其中投與該單次劑量之該組合物或疫苗(i)在投與之7天內在該個體中引發CHIKV特異性中和抗體產生及/或(ii)在向該個體投與一單次劑量之後，誘發針對CHIKV之一中和抗體反應，該反應持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。
49. 一種在一群體中誘發針對屈公病毒(CHIKV)之保護性免疫之方法，該方法包含：向該群體投與一組合物或疫苗，其包含(a)包含衍生自CHIKV之一衣殼蛋白及一套膜蛋白的類病毒顆粒(VLP)及(b)一佐劑，其中一單次劑量之該組合物或疫苗包含約6 µg至200 µg VLP，且其中該群體中至少60%(i)在投與該單次劑量之該組合物或疫苗之後7天內產生針對CHIKV之一中和抗體反應及/或(ii)在向個體投與一單次劑量之後，產生針對CHIKV之中和抗體，其持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。
50. 如請求項49之方法，其中在投與一單次劑量之該組合物或疫苗之後7天內，該群體中至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%或至少98%產生≥ 30或≥ 40之一血清中和抗體效價。
51. 如請求項49或50之方法，其中在投與一單次劑量之該組合物或疫苗之後，該群體中至少40%、至少50%或至少60%維持≥ 30或≥ 40之一血清中和抗體效價至少28天、至少6個月、至少一年或至少二年。
52. 如請求項44至51中任一項之方法，其中一/該單次劑量包含20 µg至200 µg VLP。
53. 如請求項44至52中任一項之方法，其中一/該單次劑量包含約25 µg/mL至75 µg/mL VLP。
54. 如請求項53之方法，其中該單次劑量包含約40 µg或約50 µg/mL VLP。
55. 如請求項44至54中任一項之方法，其中該組合物或疫苗包含30 µg-3000 µg氫氧化鋁凝膠。
56. 如請求項55之方法，其中該氫氧化鋁凝膠呈約250 µg/mL至625 µg/mL之一量。
57. 如請求項44至56中任一項之方法，其中該組合物或疫苗包含約300 µg或375 µg/mL氫氧化鋁凝膠。
58. 如請求項44至57中任一項之方法，其中該組合物或疫苗包含：(a)約6至40 μg之VLP；(b)約200至500 μg之氫氧化鋁；(c)一糖；(d)一緩衝劑及/或一pH調節劑；及(e)水。
59. 如請求項58之方法，其中該組合物或疫苗包含：(a)約6至40 μg之VLP；(b)約200至500 μg之氫氧化鋁；(c)約20至80 mg之蔗糖；(d)約0.2至1.0 mg之磷酸二氫鉀；(e)約0.2至1.5 mg之磷酸氫二鉀；(f)約2至10 mg檸檬酸鈉脫水物；及(g)水。
60. 如請求項44至59中任一項之方法，其中一/該第一劑量以約0.5 mL至1 mL之一量投與。
61. 如請求項60之方法，其中該第一劑量以約0.8 mL之一量投與。
62. 如請求項44至61中任一項之方法，其中該中和抗體反應針對CHIKV之多種血清型接種該個體。
63. 如請求項44至62中任一項之方法，其中在該單次劑量投與之後，針對CHIKV之該中和抗體反應維持至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。
64. 如請求項44至63中任一項之方法，其中在該單次劑量之後至少28天、至少6個月或至少1年，向該個體投與一第二劑量之該組合物或疫苗。
65. 如請求項64之方法，其中在投與該第二劑量之後，針對CHIKV之該中和抗體反應維持至少六個月。
66. 如請求項65之方法，其中在投與該第二劑量之後，針對CHIKV之該中和抗體反應維持至少一年。
67. 如請求項44至66中任一項之方法，其中在投與該組合物或疫苗之後7天，該等個體中至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%產生對CHIKV之一中和抗體反應。
68. 如請求項44至68中任一項之方法，其中在投與該組合物或疫苗之後7天、28天、一年或二年，血清反應率係至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。
69. 如請求項44至68中任一項之方法，其中該血清中和抗體效價≥ 30或≥ 40。
70. 如請求項44至69中任一項之方法，其中該組合物或疫苗經肌肉內投與。
71. 如請求項44至70中任一項之方法，其中該組合物或疫苗以一有效量投與。
72. 如請求項44至71中任一項之方法，其中該方法在投與之7天內在該個體中引發CHIKV特異性中和抗體產生，且在向該個體投與一單次劑量之後，誘發針對CHIKV之該中和抗體反應，該反應持續至少28天、至少6個月、至少1年或至少2年。
73. 如前述請求項中任一項之組合物、疫苗或方法，其中一/該個體係一人類。
74. 如前述請求項中任一項之組合物、疫苗或方法，其中在投與該組合物或疫苗之前，一/該個體未暴露於一CHIKV抗原或一CHIKV疫苗。
75. 如前述請求項中任一項之組合物、疫苗或方法，其中在投與該組合物或疫苗之前，一/該個體不具有可偵測CHIKV抗體效價。
76. 如前述請求項中任一項之組合物、疫苗或方法，其中在投與該組合物或疫苗之前，一/該個體具有≤ 5之一可偵測CHIKV抗體效價。

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