JP2022553299A - チクングニアウイルス様粒子ワクチンおよびその使用方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、例えば、組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導することによって、対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）感染に対する免疫応答および／または防御免疫を誘導するのに使用するための改善されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）組成物およびワクチンに関する。本開示のある特定の局面は、（ａ）チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）と、（ｂ）水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））と、（ｃ）糖と、（ｄ）バッファーおよび／またはｐＨ調整剤と、（ｅ）担体と、を含む組成物またはワクチンを対象とする。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１０月２５日に出願された米国仮出願第６２／９２６，３５７号および２０２０年３月２３日に出願された米国仮出願第６２／９９３，５６３号の優先権を主張し、各々の内容の全体は、参照により、本明細書に組み入れられる。
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本出願とともに出願されたＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：２４７９＿２１５ＰＣ０２＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５；サイズ：４４，１２１バイト；作成日：２０２０年１０月２２日）中の電子的に提出された配列表の内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

背景
チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）は、蚊によって媒介されるトガウイルス科のアルファウイルスであり、１９５２年にタンザニアで最初に同定された。ＣＨＩＫＶの系統発生分析によって、アジア、東／中央／南アフリカおよび西アフリカという３つの遺伝子型が存在することが示された。このウイルスによる感染は、突然の発熱、筋肉痛、頭痛、発疹、および関節の炎症を特徴とするヒト疾患を引き起こす。発熱は典型的には短期間であるが、重度の関節炎症状は何年にもわたって持続し得る。炎症状態の慢性化は、薬理学的療法と理学療法の両方を必要とする遠位筋膜炎および近位腱炎などの筋骨格障害を伴う。高齢者および神経疾患、呼吸器疾患または心血管疾患などの併存症を有する人は、より重度の疾患のリスクがより高い。

ＣＨＩＫＶは、２００４年にケニヤで再出現して以来、アフリカ、ヨーロッパおよびアジアで数百万人に感染している。いくつかの報告は、世界人口の最大４０％がＣＨＩＫＶ曝露に対するリスクがあることを示唆している。新たな地理的領域へのウイルスの進化および拡散ならびに疾患の重症度が、ワクチンまたは抗ウイルス療法の非存在下で重大な公衆衛生上の脅威を呈する。この疾患に対して現在承認されている具体的な処置やワクチンは存在しない。既存のパラダイムは、主に、解熱剤、鎮痛剤および輸液を含む一般的に使用される薬物を提供することなど、疾患症状を緩和することを対象とする。

簡単な要約
本開示のある特定の局面は、（ａ）チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）と、（ｂ）水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））と、（ｃ）糖と、（ｄ）バッファーおよび／またはｐＨ調整剤と、（ｅ）担体と、を含む組成物またはワクチンを対象とする。

本開示のある特定の局面は、チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む組成物またはワクチンであって、前記組成物またはワクチンは、対象への前記組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に前記対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、組成物またはワクチンを対象とする。本開示のある特定の局面は、チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む組成物またはワクチンであって、前記組成物またはワクチンは、対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導し、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量が投与された後に少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間持続する、組成物またはワクチンを対象とする。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、アジュバント、例えば水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））をさらに含む。

いくつかの局面において、キャプシドタンパク質はＣＨＩＫＶ Ｃタンパク質である。いくつかの局面において、エンベロープタンパク質は、Ｅ３、Ｅ２、６Ｋ、Ｅ１およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＣＨＩＫＶタンパク質である。いくつかの局面において、ＶＬＰはＣＨＩＫＶエンベロープタンパク質Ｅ２およびＥ１を含む。いくつかの局面において、ＶＬＰは、ＣＨＩＫＶ Ｃ、Ｅ２およびＥ１タンパク質を含む。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶ Ｃ、Ｅ２およびＥ１タンパク質は、組成物またはワクチン中のＶＬＰタンパク質の少なくとも９５％である。いくつかの局面において、ＶＬＰはＣＨＩＫＶ Ｅ３および／または６Ｋを含まない。いくつかの局面において、キャプシドおよびエンベロープタンパク質は、ＣＨＩＫＶ株３７９９７に由来する。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、筋肉内注射に適した懸濁剤である。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、約６μｇ～２００μｇのＶＬＰまたは約２０μｇ～１００μｇのＶＬＰ（例えば、約４０μｇ）を含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、約２５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬのＶＬＰ（例えば、約５０μｇ／ｍＬのＶＬＰ）を含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、アジュバント、例えば水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）））を約３０μｇ～３０００μｇまたは約１００μｇ～５００μｇ（例えば、約３００μｇ）の量で含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、約２５０μｇ／ｍＬ～６２５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））（例えば、約３７５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、約０．５ｍＬ～２ｍＬまたは約０．５ｍＬ～１ｍＬ（例えば、約０．８ｍＬ）の体積を含む。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンは糖（例えば、スクロース、ラクトースまたはこれらの任意の組み合わせ）を含む。ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、バッファーおよび／またはｐＨ調整剤（例えば、リン酸二水素カリウム、リン酸一水素カリウム（potassium phosphate dibasic）、クエン酸ナトリウム二水和物（ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）またはこれらの任意の組み合わせ）を含む。ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、防腐剤または抗生物質を含まない。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、（ａ）約６μｇ～６０μｇのＶＬＰと、（ｂ）約２００μｇ～５００μｇの水酸化アルミニウム（a/the aluminum hydroxide）とを含み、単回用量体積は約０．５ｍＬ～１．０ｍＬである。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、（ａ）約６μｇ～６０μｇのＶＬＰと、（ｂ）約２００μｇ～５００μｇの水酸化アルミニウムと、（ｃ）約２０ｍｇ～８０ｍｇのスクロースと、（ｄ）約０．２ｍｇ～１．０ｍｇのリン酸二水素カリウムと、（ｅ）約０．２ｍｇ～１．５ｍｇのリン酸一水素カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｉａｂａｓｉｃ）と、（ｆ）約２ｍｇ～１０ｍｇのクエン酸ナトリウム二水和物と、（ｇ）水とを含み、単回用量体積は約０．５ｍＬ～１．０ｍＬ（例えば、０．８ｍＬ）である。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、ＣＨＩＫＶの同種（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）または異種の株に対する抗体を誘導するＶＬＰを含む。いくつかの局面において、ＶＬＰは、東／中央／南アフリカ（ＥＣＳＡ）、西アフリカおよびアジアからなる群から選択される１またはそれを超えるＣＨＩＫＶ系統に対する抗体を誘導する。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、対象への組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に、対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量が投与された後少なくとも２８日間維持される。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量が投与された後少なくとも６ヶ月間維持される。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量が投与された後、少なくとも１年間、少なくとも１８ヶ月間、または少なくとも２年間維持される。いくつかの局面において、血清中和抗体価は、組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に３０以上または４０以上である。

本開示のある特定の局面は、本明細書に開示される組成物またはワクチンの単回用量を含むプレフィルドシリンジを対象とする。

本開示のある特定の局面は、対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する免疫応答および／または防御免疫を誘導する方法であって、本明細書に開示される組成物またはワクチンを前記対象に投与することを含む、方法を対象とする。

本開示のある特定の局面は、対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する中和抗体応答を誘導する方法であって、本明細書に開示される組成物またはワクチンを対象に投与することを含む、方法を対象とする。

本開示のある特定の局面は、対象におけるチクングニア感染を処置し、予防し、またはチクングニア感染のリスクを低減するための方法であって、有効量の、本明細書に開示の組成物またはワクチンを対象に投与することを含む、方法を対象とする。

本開示のある特定の局面は、ＣＨＩＫＶ感染に対して対象にワクチン接種する方法であって、有効量の、本明細書に開示の組成物またはワクチンを対象に投与することを含む、方法を対象とする。

本開示のある特定の局面は、対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する免疫応答および／または防御免疫を誘発する方法であって、（ａ）ＣＨＩＫＶに由来する、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）と、（ｂ）アジュバントとを含む組成物またはワクチンを対象に投与することを含み、組成物またはワクチンの単回用量が約６μｇ～２００μｇのＶＬＰを含み、組成物またはワクチンの単回用量の投与が、投与の７日以内に対象においてＣＨＩＫＶ特異的中和抗体の産生を誘発する、方法を対象とする。

本開示のある特定の局面は、集団においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する防御免疫を誘導する方法であって、（ａ）ＣＨＩＫＶに由来する、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）と、（ｂ）アジュバントとを含む組成物またはワクチンを集団に投与することを含み、組成物またはワクチンの単回用量が約６μｇ～２００μｇのＶＬＰを含み、集団の少なくとも６０％が、組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内にＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を生じる、方法を対象とする。いくつかの局面において、集団の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、または少なくとも９８％が、組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に３０以上または４０以上の血清中和抗体価を生成する。いくつかの局面において、集団の少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％が、組成物またはワクチンの単回用量の投与後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間、３０以上または４０以上の血清中和抗体価を維持する。

いくつかの局面において、中和抗体応答は、ＣＨＩＫＶの複数の血清型および／または遺伝子型に対して対象にワクチン接種する。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量が投与された後、少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間維持される。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの第２の用量は、単回用量の少なくとも２８日後、少なくとも６ヶ月後、または少なくとも１年後に対象に投与される。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの１またはそれを超える追加免疫用量は、対象の生涯にわたって、例えば単回用量後の少なくとも２８日、少なくとも６ヶ月、少なくとも１年、少なくとも２年、少なくとも５年、少なくとも１０年、または２０年またはそれを超えて投与することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、第２の用量の投与後少なくとも６ヶ月間維持される。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、第２の用量の投与後少なくとも１年間維持される。いくつかの局面において、（例えば、単回投与または１もしくはそれを超える投与後の）ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、第２の用量の投与後少なくとも３０ヶ月間、少なくとも２年間、少なくとも３年間、少なくとも４年間、少なくとも５年間、少なくとも１０年間、または２０年間またはそれを超えて維持される。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、対象の生涯にわたって維持される。いくつかの局面において、対象の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％が、組成物またはワクチンの投与の７日後にＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を生じた。いくつかの局面において、抗体応答率は、組成物またはワクチンの投与後７日、２８日、１年、または２年に、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％である。いくつかの局面において、血清中和抗体価は３０以上または４０以上または５０以上である。

いくつかの局面において、組成物またはワクチンは筋肉内に投与される。

いくつかの局面において、組成物またはワクチンは有効量で投与される。

いくつかの局面において、対象はヒトである。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの投与より前に、対象はＣＨＩＫＶ抗原またはＣＨＩＫＶワクチンに曝露されなかった。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの投与より前に、対象は検出可能なＣＨＩＫＶ抗体価を有さない。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの投与より前に、対象は、５以下または１０以下の検出可能なＣＨＩＫＶ抗体価を有する。

図１は、ＣＨＩＫＶゲノムの概略図を示す。

図２は、還元および変性条件下でのＣＨＩＫＶ ＶＬＰのＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。

図３Ａ～３Ｄは、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析後の（Ｄ）対照ＨＳＰ７０ １Ａと比較した、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰタンパク質（Ａ）キャプシド、（Ｂ）Ｅ２および（Ｃ）Ｅ１からのマススペクトルプロットである。 図３Ａ～３Ｄは、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析後の（Ｄ）対照ＨＳＰ７０ １Ａと比較した、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰタンパク質（Ａ）キャプシド、（Ｂ）Ｅ２および（Ｃ）Ｅ１からのマススペクトルプロットである。 図３Ａ～３Ｄは、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析後の（Ｄ）対照ＨＳＰ７０ １Ａと比較した、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰタンパク質（Ａ）キャプシド、（Ｂ）Ｅ２および（Ｃ）Ｅ１からのマススペクトルプロットである。 図３Ａ～３Ｄは、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析後の（Ｄ）対照ＨＳＰ７０ １Ａと比較した、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰタンパク質（Ａ）キャプシド、（Ｂ）Ｅ２および（Ｃ）Ｅ１からのマススペクトルプロットである。

図４は、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰのＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

図５は、ＲＰ－ＨＰＬＣから単離されたピーク１、２、３のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。

図６Ａ～６Ｂは、（Ａ）ＣＨＩＫＶ ＶＬＰの透過型電子顕微鏡画像および（Ｂ）ＣＨＩＫＶ ＶＬＰの低温電子顕微鏡画像を示す。

図７は、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ濃度の関数としての光学密度プロットを示す。

図８は、Ａｌｕｍのみおよび刺激（challenge）前と比較した、１．２５μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、６μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰのみ、および２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍによるワクチン接種後のカニクイザルにおける血清中和抗体応答を示す。

図９Ａ～９Ｂは、Ａｌｕｍのみと比較した、１．２５μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、６μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰのみ、および２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍを投与された刺激された（challenged）マカクから単離された血清を使用したプラークアッセイの（Ａ）血漿中のピークウイルス血症および（Ｂ）血漿中のＡＵＣ結果を示す。

図１０Ａ～１０Ｂは、（Ａ）アジュバント対ワクチン接種ならびに（Ｂ）刺激を受けたマカクにおける、Ａｌｕｍのみと比較した１．２５μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、６μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰのみ、および２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍに対する、関節病理スコアを示す。

図１１Ａ～１１Ｄは、Ａｌｕｍのみと比較した、１．２５μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、６μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰのみ、および２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍを投与された刺激されたマカクから増幅されたウイルスＲＮＡの量を示す。試料は、（１２Ａ）足首関節毛細血管および軟骨、（１２Ｂ）腱を伴う右大腿四頭筋、（１２Ｃ）後膝関節毛細血管および軟骨、ならびに（１２Ｄ）手関節毛細血管および軟骨から収集した。 図１１Ａ～１１Ｄは、Ａｌｕｍのみと比較した、１．２５μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、６μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍ、２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰのみ、および２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ＋Ａｌｕｍを投与された刺激されたマカクから増幅されたウイルスＲＮＡの量を示す。試料は、（１２Ａ）足首関節毛細血管および軟骨、（１２Ｂ）腱を伴う右大腿四頭筋、（１２Ｃ）後膝関節毛細血管および軟骨、ならびに（１２Ｄ）手関節毛細血管および軟骨から収集した。

図１２は、二用量のＣＨＩＫＶ ＶＬＰを投与されたＣＨＩＫＶ無感作の対象における免疫応答の持続時間を示す。

図１３は、第２相試験ＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチンの用量およびスケジュール設計を示す。ＶＬＰ用量はμｇ単位である；Ａ＝アラム（ａｌｕｍ）；ＰＬＡ＝プラセボ。

図１４は、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチンによるワクチン接種後の群１～８についてのワクチン接種後（日数）の中和抗体の幾何平均力価の定量を示す。

図１５は、群１～９（表７参照）についてのワクチン接種後７６０日目までのチクングニアに対する抗体の平均力価を示す。

図１６は、群１～８（表７参照）についてのワクチン接種後３６５日目までの力価の逆累積分布を示す。

図１７は、群１～８（表７参照）についての７６０日目までの幾何平均力価（ＧＭＴ）データ（表８参照）を示す。

図１８Ａ～１８Ｂは、それぞれ１５以上および４０以上の抗ＣＨＩＫＶ中和力価（ＮＴ８０）を有する群（表７参照）あたりの対象のパーセントを示す。 図１８Ａ～１８Ｂは、それぞれ１５以上および４０以上の抗ＣＨＩＫＶ中和力価（ＮＴ８０）を有する群（表７参照）あたりの対象のパーセントを示す。

詳細な説明
本開示は、例えば、組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導することによって、対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）感染に対する免疫応答および／または防御免疫を誘導するのに使用するための改善されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）組成物およびワクチンであって、および／またはＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量が投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間持続する、改善されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）組成物およびワクチンを対象とする。
定義

別段の定義がなければ、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、記載されている方法および組成物に関する当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書で提供される定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするためのものである。

本明細書で使用される場合、特に明記されない限り、または文脈から明らかでない限り、「または」という用語は包括的（ｉｎｃｌｕｓｉｖｅ）であると理解される。本明細書で使用される場合、特に明記されない限り、または文脈から明らかでない限り、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」という用語は単数または複数であると理解される。

本開示では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法においてそれらに帰属される意味を有することができ、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができる。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」も同様に、米国特許法において帰属される意味を有し、この用語は非限定的であり、列挙されているものの基本的なまたは新規な特徴が列挙されているものより多くの存在によって変化しない限り、列挙されているものより多くの存在を許容するが、但し、先行技術の態様は除外される。

本明細書で使用される場合、特に明記されない限り、または文脈から明らかでない限り、「約」という用語は、当技術分野における通常の許容範囲内、例えば平均の２標準偏差以内であると理解される。約は、記載された値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％または０．０１％以内と理解することができる。文脈から明らかでない限り、本明細書で提供されるすべての数値は、約という用語によって修飾されている。

本明細書で使用される場合、「薬剤（ａｇｅｎｔ）」は、任意の小分子化学化合物、抗体、核酸分子、もしくはポリペプチド、またはこれらの断片を意味する。

本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、製剤（例えば、ワクチン）中の特定の免疫原と組み合わせて使用された場合に、得られる免疫応答を増強、変化または修飾する化合物を指すものとする。ある特定の態様において、アジュバントはＶＬＰと組み合わせて使用される。免疫応答の修飾には、抗体および細胞性免疫応答の一方または両方の特異性の強化または拡大が含まれる。免疫応答の修飾は、ある特定の抗原特異的免疫応答を減少または抑制することも意味することができる。ある特定の局面において、アジュバントは水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））２％）である。Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）は、水酸化アルミニウム（ａｌｕｍと表される）湿潤ゲル懸濁液である。

本明細書で使用される場合、「アルファウイルス」は、トガウイルス科のウイルスに属するＲＮＡ含有ウイルスを指すものとする。例示的なトガウイルスとしては、限定されないが、ＥＥＥＶ、ＷＥＥＶ、ＶＥＥＶ、ＳＦＶ、ＣＨＩＫＶ、オニョンニョンウイルス、シンドビスウイルス、マヤロウイルス、ロスリバーウイルス、バーマフォレストウイルスおよびオッケルボウイルス（Ockelbo virus）が挙げられる。

「チクングニアウイルス」および「ＣＨＩＫＶ」という用語は、本明細書では互換的に使用される。

本明細書で使用される場合、「チクングニアウイルス構造タンパク質」は、天然に存在するチクングニアウイルスキャプシドまたはエンベロープタンパク質と少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を意味する。いくつかの局面において、アミノ酸配列同一性は、少なくとも約９０％、９５％、９８％、９９％であり、またはそれを超える。

本明細書で使用される場合、「改善する」とは、疾患またはその症状の発症または進行を減少させ、抑制し、減弱させ、弱め、停止させ、または安定化させることを意味する。

ポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列に関して本明細書で使用される場合、「改変」は、ポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列中の指定された位置におけるアミノ酸またはヌクレオチドの変化を意味する。本明細書で使用される場合、改変には、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの指定された位置でのアミノ酸またはヌクレオチドの置換、欠失または挿入が含まれる。いくつかの局面において、アルファウイルスキャプシドタンパク質の核局在化シグナルの改変は、非荷電アミノ酸（例えば、アラニンもしくはアスパラギン、またはリジンもしくはアルギニンなどの塩基性荷電アミノ酸を除く任意のアミノ酸）による荷電アミノ酸（例えば、リジンまたはアルギニン）の置換を含む。

遺伝子またはポリペプチドの発現レベルまたは活性に関して本明細書で使用される場合、「改変」は、本明細書に記載されるものなどの本技術分野で公知の標準的な方法によって検出される遺伝子またはポリペプチドの発現レベルまたは活性に対する変化（増加または減少）を意味する。本明細書で使用される場合、改変には、発現レベルの１０％、２５％、５０％、７５％、１００％またはそれを超える変化が含まれる。改変には、発現レベルの１０倍、２０倍、５０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１０００倍またはそれを超える変化が含まれる。

本明細書で使用される場合、「類似体」は、同一ではないが、類似の機能的または構造的特徴を有する分子を意味する。例えば、ポリペプチド類似体は、対応する天然に存在するポリペプチドの生物学的活性を保持するが、天然に存在するポリペプチドと比較して類似体の機能を増強するある特定の生化学的修飾を有する。このような生化学的修飾は、例えばリガンド結合を変化させることなく、類似体のプロテアーゼ耐性、膜透過性または半減期を増加させることができる。類似体は、非天然アミノ酸を含むことができる。

本明細書で使用される場合、「追加免疫する（ｂｏｏｓｔｉｎｇ）」または「追加免疫（ｂｏｏｓｔｅｒ）」用量または免疫は、より早期の用量、例えばプライミング用量後の免疫抗原への再曝露を指す。

「検出する」とは、検出されるべき分析物の存在、非存在または量を同定することを指す。

「疾患」とは、細胞、組織または器官の正常な機能を損なうまたは妨げる任意の状態または障害を意味する。疾患の例としては、ＣＨＩＫＶを含むウイルス感染症が挙げられる。

本明細書で使用される場合、組成物またはワクチンの「有効量」は、処置されていない患者と比較して、ＣＨＩＫＶ感染の症状を予防する、ＣＨＩＫＶ感染の症状の尤度を低減する、またはＣＨＩＫＶ感染の症状を改善するために必要とされる組成物またはワクチンの量を意味する。ＣＨＩＫＶ感染の予防、ＣＨＩＫＶ感染の尤度の低減またはＣＨＩＫＶ感染の処置のために使用される本開示の組成物またはワクチンの有効量は、投与の様式、対象の年齢、体重および全般的な健康状態に応じて変動し得る。ある特定の局面において、有効量は、７日以内に、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答および／または保護を与える本開示の組成物またはワクチンの量である。

本明細書で使用される場合、「断片」は、ポリペプチドまたは核酸分子の一部を意味する。この一部は、例えば、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％を含有する。断片は、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００のヌクレオチドまたはアミノ酸を含有することができる。

「ハイブリダイゼーション」は、相補的核酸塩基間での、ワトソン－クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン水素結合であり得る水素結合を意味する。例えば、アデニンおよびチミンは、水素結合の形成を通じて対になる相補的な核酸塩基である。

本明細書で使用される場合、「免疫を誘導する」は、抗原に対して生成される任意の免疫応答を指すものとする。いくつかの局面において、免疫は、感染を予防もしくは改善するまたはその少なくとも１つの症状を軽減する、脊椎動物（例えば、ヒト）によって呈される、感染因子に対する抗体によって媒介される。本開示のＶＬＰは、例えば、感染因子を中和し、感染因子が細胞の中に入るのを阻止し、感染因子の複製を阻止し、および／または宿主細胞を感染および破壊から保護する抗体の産生を刺激することができる。この用語は、感染、例えばＣＨＩＫＶ感染を予防もしくは改善するまたはその少なくとも１つの症状を軽減する、脊椎動物（例えば、ヒト）によって呈される、感染因子に対するＴリンパ球および／またはその他の白血球によって媒介される免疫応答も指すことができる。

本明細書で使用される場合、「中和抗体応答」は、感染体（例えば、ＣＨＩＫＶ）の抗原に結合する抗体であって、細胞上の感染体の感染力に対して中和または阻害効果を有する抗体の誘導を指す。ある特定の局面において、中和抗体応答は、血清中和抗体（ＳＮＡ）価を測定することによって決定することができる。ある特定の局面において、ＳＮＡ価は、血清の存在下での感染力の低下の特徴付け（例えば、ルシフェラーゼベクターを使用するルシフェラーゼアッセイによるＮＴ８０血清中和抗体、および／またはプラーク減少アッセイ）によって決定することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶ中和抗体価８０（ＮＴ８０）は、ウイルスのみの対照と比較して、ＣＨＩＫＶ－Ｌｕｃ感染からのＶｅｒｏ細胞の約８０％の保護またはルシフェラーゼ活性の８０％の低下をもたらす血清希釈の逆数である。ある特定の局面において、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０またはそれを超えるＮＴ８０力価は、ＣＨＩＫＶの１もしくはそれを超えるまたはすべての系統に対する保護を示す。

本明細書で使用される場合、「薬剤を得ること」におけるような「得ること」は、薬剤を合成すること、購入すること、またはその他取得することを含む。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容され得る」は、合理的な便益／リスク比に相応して過剰な毒性、刺激、アレルギー性応答やその他の問題および合併症なしに、健全な医学的判断の範疇内で、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに適している、化合物、物質、組成物および／または剤形を表す。

本明細書で使用される場合、「集団」は、統計的標本が抽出される個体のプールまたは群を指す。本開示のいくつかの局面において、ワクチン接種のための標的集団は、チクングニアウイルスから初回刺激されたことがなく、（例えば、ＣＨＩＫＶの１またはそれを超える株に対して）感作されていない集団であり得る。他の局面において、標的集団は、チクングニア感染または（例えば、ＣＨＩＫＶの１またはそれを超える株に対する）ワクチン接種に以前に曝露されたことがある集団であり得る。集団、例えば標的集団は、任意の年齢および民族の個体を含むことができる。

「低減する」とは、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、８５％、９５％または１００％の負の変化を意味する。

「参照」とは、標準または対照条件を意味する。

「参照配列」は、配列比較のための基礎として使用される規定の配列を指す。参照配列は、指定された配列のサブセットまたは全体、例えば、完全長ｃＤＮＡもしくは遺伝子配列のセグメント、または完全なｃＤＮＡもしくは遺伝子配列であり得る。ポリペプチドの場合、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に、少なくとも約１６アミノ酸、少なくとも約２０アミノ酸、少なくとも約２５アミノ酸、および約３５アミノ酸、約５０アミノ酸、または約１００アミノ酸である。核酸の場合、参照核酸配列の長さは、一般に、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約６０ヌクレオチド、少なくとも約７５ヌクレオチド、および約１００ヌクレオチドもしくは約３００ヌクレオチド、またはそれらの周辺のもしくはそれらの間の任意の整数である。

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」は、本開示のポリペプチドを認識して結合するが、本開示のポリペプチドを天然に含む試料、例えば生物学的試料中の他の分子を実質的に認識し、結合しない化合物または抗体を指すことができる。

本開示の方法において有用な核酸分子としては、本開示のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子が挙げられる。このような核酸分子は、内因性核酸配列と常に１００％同一である必要はないが、典型的には実質的な同一性を示す。内因性配列と「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも１つの鎖とハイブリッド形成することができる。本開示の方法において有用な核酸分子としては、本開示のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子が挙げられる。このような核酸分子は、内因性核酸配列と１００％同一である必要はないが、典型的には実質的な同一性を示す。内因性配列と「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも１つの鎖とハイブリッド形成することができる。「ハイブリッド形成する」とは、様々なストリンジェンシーの条件下において、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載の遺伝子）またはその一部の間で二本鎖分子を形成する対を意味する。（例えば、Ｗａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄ Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照）。

「実質的に同一」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書中に記載されているアミノ酸配列の任意の１つ）または核酸配列（例えば、本明細書中に記載されている核酸配列の任意の１つ）に対して少なくとも５０％の同一性を示すポリペプチドまたは核酸分子を意味する。ある特定の局面において、配列は、比較のために使用される配列とアミノ酸レベルまたは核酸で少なくとも６０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。

配列同一性は、配列解析ソフトウェア（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰまたはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定することができる。このようなソフトウェアは、様々な置換、欠失および／またはその他の修飾に対して相同性の程度を割り当てることによって、同一または類似の配列をマッチさせる。保存的置換は、典型的には、以下の群内での置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定するための例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを使用することができ、ｅ－３とｅ－１００の間の確率スコアは密接に関連する配列を示す。

「構造ポリタンパク質」とは、ウイルスキャプシドまたはエンベロープに寄与する少なくとも２つの分離可能なポリペプチドを含む複合アミノ酸分子を意味する。一局面において、ポリペプチドはウイルス酵素（例えば、キャプシド自己プロテイナーゼおよびシグナラーゼ）による切断を受けやすい。

「対象」 とは、ヒトまたはウシ、ウマ、イヌ、ヒツジもしくはネコなどの非ヒト哺乳動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物を意味する。ある特定の局面において、対象はヒトである。「対象」という用語は、本明細書において「個体」または「患者」と互換的に使用することができる。対象は、疾患または障害に罹患していることがあり得または罹患しやすいことがあり得るが、疾患または障害の症状を示すことがあり得、または示さないことがあり得る。

本明細書で提供される範囲は、その範囲内の値のすべてに対する省略表現であると理解される。例えば、１から５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むと理解される。

本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置すること」、「処置」などの用語は、それに関連する障害および／または症状を低減または改善することを指す。疾患または状態を処置することは、障害、これと関連する状態または症状を完全に除去することを必要としないが、完全に除去することを除外するものではないことが理解されるであろう。いくつかの局面において、本明細書に開示される処置は、関連する疾患または状態を予防し、またはそのリスクを低減するために予防的に使用することができる。

本明細書で使用される場合、「治療的に有効」という語句は、組成物（例えば、ワクチン）の量、または併用療法の場合には有効成分の組み合わせた量を特定することを意図している。この量または組み合わせた量は、関連する疾患または状態を処置し、予防し、またはそのリスクを低減するという目標を達成する。

本明細書で使用される場合、「ワクチン」という用語は、免疫応答を生成する際に使用されるべき組成物を指す。特定の局面において、本開示のワクチンは、対象に投与することができ、免疫を誘導して感染を予防および／もしくは改善するのに、ならびに／または感染の少なくとも１つの症状を軽減するのに、ならびに／または別の用量のＶＬＰまたはＤＮＡワクチンの有効性を増強するのに十分な防御的免疫応答を誘導する形態で、ＶＬＰ、ＤＮＡまたはその他の遺伝子をベースとするワクチンベクターを含有する。典型的には、ワクチンは、本開示の組成物がその中に懸濁または溶解される従来の食塩水または緩衝水溶液媒体などの薬学的に許容され得る賦形剤を含む。この形態では、本開示の組成物は、感染を予防し、改善し、またはその他処置するために都合よく使用することができる。宿主中に導入すると、ワクチンは、抗体および／もしくはサイトカインの産生ならびに／または細胞傷害性Ｔ細胞、抗原提示細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞および／もしくは他の細胞応答の活性化を含むがこれらに限定されない免疫応答を誘導する。ある特定の局面において、ワクチンはタンパク質であることもできる。例えば、組換えタンパク質は、次いで、免疫原として機能するタンパク質を産生する１またはそれを超える外来遺伝子を産生するように細胞を遺伝子操作することによって産生されてきた。

本明細書で使用される場合、「ウイルス様粒子」（ＶＬＰ）は、少なくとも１つの属性においてウイルスに似ているが、感染性であることは実証されていない構造を指す。本開示によるウイルス様粒子は、ウイルス様粒子のタンパク質をコードする遺伝情報を保有していない。一般に、ウイルス様粒子はウイルスゲノムを欠き、したがって非感染性である。

本明細書における変数または局面についての態様の列挙は、その態様を任意の単一の態様として、または本明細書に開示される任意の他の態様もしくはその一部と組み合わせて含む。

本明細書で提供される任意の組成物または方法は、本明細書で提供される他の組成物および方法の任意の１またはそれより多くと組み合わせることができる。
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）

本開示のある特定の局面は、チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）、例えばセネガル株３７９９７に由来する構造タンパク質から構成されるウイルス様粒子（ＶＬＰ）を対象とする。ＣＨＩＫＶは、アルファウイルス属（ＲＮＡ（＋）ゲノム）のメンバーであり、東／中央／南アフリカ（ＥＣＳＡ）、西アフリカおよびアジアという３つの系統を有する。ＣＨＩＫＶゲノムは、４つの非構造タンパク質および５つの構造タンパク質（図１）を含み、野生型ＣＨＩＫＶビリオンは、Ｃ、Ｅ１およびＥ２タンパク質を含む。

ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、３つの組換えＣＨＩＫＶ構造タンパク質：キャプシド／コア（約３５ｋＤａ）、エンベロープ１（Ｅ１、約５５ｋＤａ）、およびエンベロープ２（Ｅ２、約５０ｋＤａ）を含む。３つの構造タンパク質は集合してＣＨＩＫＶ ＶＬＰを形成することができる。

ＣＨＩＫＶ ＶＬＰキャプシドコアの構造は、各２回軸の周囲に六量体を含み、核キャプシドの各５倍頂点に五量体を含む。キャプシドコアは、約１５Å幅の脂質膜によってＥ１およびＥ２タンパク質から隔てられている。膜は、Ｅ１およびＥ２カルボキシ末端領域に相当するαヘリックスの対によって横断されている。低温電子顕微鏡法は、Ｅ１およびＥ２の３つのヘテロ二量体から構成される個々のスパイクの三量体の外観を示している。Ｅ１ドメインＩＩＩ中のβストランドを観察することができる。Ｓｕｎ，Ｓ．ら、ｅＬｉｆｅ ２０１３；２：ｅ００４３５。

本出願人は、ネガティブ染色と透過型電子顕微鏡法によって、および低温電子顕微鏡法分析によって、本開示の方法によって産生された組換えＣＨＩＫＶ ＶＬＰを分析した。ネガティブ染色により、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは規則的な表面構造を有する概ね球形の粒子として見え、ある特定の局面において、完全に形成された成熟ＶＬＰは約６５ｎｍである。いくつかの局面において、ＶＬＰは約６０ｎｍ～７０ｎｍである。ある特定の局面において、ＶＬＰサイズは、顕微鏡法および／または動的光散乱（ＤＬＳ）によって確認することができる。

本開示のある特定の局面において、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、１またはそれを超えるＣＨＩＫＶ ＶＬＰタンパク質を含む。ある特定の局面において、ＶＬＰは、少なくとも３つの組換えＣＨＩＫＶ構造タンパク質、例えばキャプシドコアタンパク質（Ｃ）、エンベロープ１タンパク質（Ｅ１）およびエンベロープ２タンパク質（Ｅ２）を含む。いくつかの局面において、ＶＬＰは、エンベロープ３タンパク質（Ｅ３）および／または６ｋタンパク質（６Ｋ）をさらに含むことができる。

いくつかの局面において、キャプシドタンパク質はＣＨＩＫＶ Ｃタンパク質である。

いくつかの局面において、エンベロープタンパク質は、Ｅ３、Ｅ２、６Ｋ、Ｅ１およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＣＨＩＫＶタンパク質である。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶエンベロープタンパク質Ｅ２およびＥ１。

本開示のいくつかの局面は、ＣＨＩＫＶ Ｃ、Ｅ２およびＥ１タンパク質を含むＶＬＰに関する。ある特定の局面において、ＶＬＰはＣＨＩＫＶ Ｅ３および／または６Ｋを含まない。

ある特定の局面において、キャプシドおよびエンベロープタンパク質は、ＣＨＩＫＶ株３７９９７に由来する。ＣＨＩＫＶ（株３７９９７）構造タンパク質Ｃ、Ｅ３、Ｅ２、６ＫおよびＥ１に対応するアミノ酸配列とそれらをコードする核酸配列を以下の表１に列記する。

いくつかの局面において、ＶＬＰは、本明細書に開示されるアミノ酸配列の機能的断片を含むＣＨＩＫＶ構造タンパク質を含むことができる。いくつかの局面において、機能的断片は、ＣＨＩＫＶ構造タンパク質の全長の少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であり、ＣＨＩＫＶ機能的断片は、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。

いくつかの局面において、ＶＬＰは、本明細書に開示されるアミノ酸配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含むＣＨＩＫＶ構造タンパク質またはその断片を含むことができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶキャプシド（Ｃ）タンパク質またはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含み、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶエンベロープ３（Ｅ３）タンパク質またはその機能的断片は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含み、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶエンベロープ２（Ｅ２）タンパク質またはその機能的断片は、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含み、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶ ６Ｋタンパク質またはその機能的断片は、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含み、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶエンベロープ１（Ｅ１）タンパク質またはその機能的断片は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含み、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。

いくつかの局面において、ＶＬＰは、本明細書に開示される核酸配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％同一である配列によってコードされるＣＨＩＫＶ構造タンパク質またはその断片を含むことができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶキャプシド（Ｃ）タンパク質またはその機能的断片は、配列番号５の核酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列によってコードされ、コードされるＣタンパク質は、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶエンベロープ３（Ｅ３）タンパク質またはその機能的断片は、配列番号７の核酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列によってコードされ、コードされるＥ３タンパク質は、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶエンベロープ２（Ｅ２）タンパク質またはその機能的断片は、配列番号９の核酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列によってコードされ、コードされるＥ２タンパク質は、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶ ６Ｋタンパク質またはその機能的断片は、配列番号１１の核酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列によってコードされ、コードされる６Ｋタンパク質は、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶエンベロープ１（Ｅ１）タンパク質またはその機能的断片は、配列番号１３の核酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列によってコードされ、コードされるＥ１タンパク質は、本開示の組換えＶＬＰを形成するために使用することができる。

本開示のある特定の局面は、１またはそれを超えるＣＨＩＫＶポリペプチドを含むＶＬＰを含む。免疫応答をモジュレートする能力を増強するまたは阻害しないように修飾された１またはそれを超えるＣＨＩＫＶポリペプチドまたはその断片を含むＶＬＰも含まれる。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶアミノ酸配列または核酸配列は変化を含む。このような変化には、ある特定の変異、欠失、挿入、または翻訳後修飾が含まれ得る。いくつかの局面において、本開示の天然に存在するポリペプチドの類似体が含まれる。類似体は、アミノ酸配列の相違によって、翻訳後修飾によって、またはその両方によって天然に存在するポリペプチドと異なり得る。本開示の類似体は、天然に存在するアミノ酸配列の全部または一部と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を示し得る。配列比較の長さは、少なくとも１０、１３、１５アミノ酸残基、少なくとも２５アミノ酸残基、または３５を超えるアミノ酸残基であり得る。

ＣＨＩＫＶポリペプチドの変化には、部位特異的、ランダム点変異誘発、相同組換え（ＤＮＡシャッフリング）、ウラシル含有鋳型を用いた変異誘発、オリゴヌクレオチド指定変異誘発、ホスホロチオアート修飾されたＤＮＡ変異誘発、ギャップを有する二重鎖ＤＮＡを用いた変異誘発などが含まれ得るが、これらに限定されない。さらなる適切な方法としては、点ミスマッチ修復、修復欠損宿主株を用いた変異誘発、制限選択および制限精製、欠失変異誘発、全遺伝子合成による変異誘発、二本鎖切断修復などが挙げられる。例えば、キメラ構築物を含む変異誘発も本開示に含まれる。ある特定の局面において、変異誘発は、天然に存在する分子または改変もしくは変異した天然に存在する分子の公知の情報、例えば配列、配列比較、物理的特性、結晶構造などによって誘導され得る。

ある特定の局面において、本開示は、参照ポリペプチドとは異なるポリペプチドバリアントを提供する。「バリアント」という用語は、参照配列に対して１またはそれを超えるアミノ酸が変化したアミノ酸配列を指す。バリアントは「保存的」変化を有することができ、置換されたアミノ酸は類似の構造的または化学的特性、例えばロイシンのイソロイシンによる置き換えを有する。あるいは、バリアントは、「非保存的」変化、例えば、グリシンのトリプトファンによる置き換えを有することができる。同様の軽微な変動には、アミノ酸の欠失もしくは挿入、またはその両方も含まれ得る。生物学的または免疫学的活性を排除することなく、どのアミノ酸残基を置換、挿入または欠失させることができるかを決定する上での指針は、当技術分野で周知のコンピュータプログラム、例えばＤＮＡＳＴＡＲソフトウェアを使用して見出すことができる。望ましくは、バリアントは実質的な生物学的活性を示す。いくつかの局面において、タンパク質バリアントはＶＬＰを形成し、対象に投与された場合に抗体応答を誘発する。

完全長ポリペプチドに加えて、本開示は、本開示のポリペプチドの機能的断片も含む。
免疫原性組成物およびワクチン

本開示のある特定の局面は、本明細書に開示されるタンパク質ベースの非感染性ＣＨＩＫＶウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む組成物またはワクチンを対象とする。ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンは、チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含むことができ、組成物またはワクチンは、対象への組成物もしくはワクチンの単回用量の投与後７日以内に対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、および／または単回用量が対象に投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、もしくは少なくとも２年間持続するＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する。いくつかの局面において、血清中和応答は、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウムアジュバント）をさらに含む。

ある特定の局面において、本開示の組成物またはワクチンは、１またはそれを超えるＣＨＩＫＶ ＶＬＰタンパク質を含むＣＨＩＫＶ ＶＬＰを含む。ある特定の局面において、組成物またはワクチンのＶＬＰは、少なくとも３つの組換えＣＨＩＫＶ構造タンパク質、例えばキャプシドコアタンパク質（Ｃ）、エンベロープ１タンパク質（Ｅ１）およびエンベロープ２タンパク質（Ｅ２）を含む。いくつかの局面において、ＶＬＰは、エンベロープ３タンパク質（Ｅ３）および／または６ｋタンパク質（６Ｋ）をさらに含むことができる。いくつかの局面において、キャプシドタンパク質はＣＨＩＫＶ Ｃタンパク質である。いくつかの局面において、エンベロープタンパク質は、Ｅ３、Ｅ２、６Ｋ、Ｅ１およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＣＨＩＫＶタンパク質である。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶエンベロープタンパク質Ｅ２およびＥ１。組成物またはワクチンのＶＬＰのいくつかの局面は、ＣＨＩＫＶ Ｃ、Ｅ２およびＥ１タンパク質を含む。ある特定の局面において、組成物またはワクチンのＶＬＰは、ＣＨＩＫＶ Ｅ３および／または６Ｋを含まない。いくつかの局面において、組成物またはワクチンのキャプシドおよびエンベロープタンパク質は、ＣＨＩＫＶ株３７９９７に由来する。ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、組成物またはワクチン中に存在する総ＣＨＩＫＶタンパク質の少なくとも９５％、少なくとも９６％、または少なくとも９７％の量で、キャプシド、Ｅ１およびＥ２タンパク質を含むＣＨＩＫＶ ＶＬＰを含む。

ある特定の局面において、本開示の組成物またはワクチンは、例えば単回用量製剤中（例えば、約０．５ｍＬ～１．０ｍＬの体積中）に、約６μｇ～２００μｇ、約１０μｇ～２００μｇ、約２０μｇ～２００μｇ、約２０μｇ～１５０μｇ、約２０μｇ～１００μｇ、約２０μｇ～８０μｇ、約２０μｇ～６０μｇ、または約２０μｇ～５０μｇの量でＶＬＰを含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、約６μｇ～６０μｇ（例えば、約４０μｇのＶＬＰ）の量でＶＬＰを含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約６μｇ～６０μｇのＶＬＰを含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約６μｇ、約１０μｇ、約２０μｇ、約２２μｇ、約２４μｇ、約２６μｇ、約２８μｇ、約３０μｇ、約３２μｇ、約３４μｇ、約３６μｇ、約３８μｇ、約４０μｇ、約４２μｇ、約４４μｇ、約４６μｇ、約４８μｇ、約５０μｇ、または約６０μｇのＶＬＰを含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約４０μｇのＶＬＰを含む。ある特定の局面において、本開示の組成物またはワクチンは、約７．５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬ、約１２．５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬ、３７．５μｇ／ｍＬ～６２．５μｇ／ｍＬ、または４０μｇ／ｍＬ～６０μｇ／ｍＬの投与量でＶＬＰを含む。ある特定の態様において、本開示の組成物またはワクチンは、約２５μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬまたは約７５μｇ／ｍＬの投与量でＶＬＰを含む。ある特定の態様において、本開示の組成物またはワクチンは、約５０μｇ／ｍＬの投与量でＶＬＰを含む。いくつかの局面において、本開示のＶＬＰは、アルミニウムアジュバント、例えば水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））でアジュバント化することができる。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約３００μｇの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））あたり約４０μｇを含む。

ある特定の局面において、アジュバントは、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））（ａｌｕｍとも呼ばれる）である。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、例えば単回用量製剤中（例えば、約０．５ｍＬ～１．０ｍＬの体積中）に、約３０μｇ～３０００μｇ、約５０μｇ～２５００μｇ、約１００μｇ～２０００μｇ、約１００μｇ～１０００μｇ、約１００μｇ～７５０μｇ、約１００μｇ～５００μｇ、約１５０μｇ～５００μｇ、または約２００μｇ～４００μｇの量で水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を含むことができる。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を約１００μｇ～５００μｇ（例えば、約３００μｇの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）））の量で含む。いくつかの局面において、単回用量は、約２５０μｇ／ｍＬ～６２５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を含む。いくつかの局面において、単回用量は、約３７５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約４０μｇのＶＬＰあたり約３００μｇの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を含むことができる。

ある特定の局面において、本開示の組成物またはワクチンは糖を含む。いくつかの局面において、糖は、スクロース、ラクトースおよびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの局面において、糖はスクロースである。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、例えば単回用量製剤中（例えば、約０．５ｍＬ～１．０ｍＬの体積中）に、約１０ｍｇ～２００ｍｇ、約１０ｍｇ～１５０ｍｇ、約１０ｍｇ～１００ｍｇ、約２０ｍｇ～２００ｍｇ、約２０ｍｇ～１５０ｍｇ、約２０ｍｇ～１００ｍｇ、約３０ｍｇ～１００ｍｇ、約４０ｍｇ～１００ｍｇ、または約４０ｍｇ～８０ｍｇの量の糖（例えば、スクロース）を含むことができる。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、約４０ｍｇ～８０ｍｇ（例えば、５０ｍｇ～７０ｍｇの糖）の量で糖（例えば、スクロース）を含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約６１ｍｇ、約６２ｍｇ、約６３ｍｇ、または約６４μｇのＶＬＰを含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約５９ｍｇ～６０ｍｇ（例えば、５９．７ｍｇ）のＶＬＰを含む。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、バッファーおよび／またはｐＨ調整剤をさらに含む。いくつかの局面において、バッファーおよび／またはｐＨ調整剤は、リン酸二水素カリウム、リン酸一水素カリウム、クエン酸ナトリウム二水和物およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、例えば単回用量製剤中（例えば、約０．５ｍＬ～１．０ｍＬの体積中）に、約０．２ｍｇ～２０ｍｇ、約０．２ｍｇ～１５ｍｇ、約０．２ｍｇ～１０ｍｇ、または約０．４ｍｇ～１０ｍｇの量でバッファーおよび／またはｐＨ調整剤を含むことができる。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、約０．２ｍｇ～２０ｍｇの量でバッファーおよび／またはｐＨ調整剤（例えば、リン酸二水素カリウム、リン酸一水素カリウムまたはクエン酸ナトリウム二水和物の１つまたはそれより多く）（例えば、０．２ｍｇ～１０ｍｇのバッファーおよび／またはｐＨ調整剤）を含む。ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、約０．２ｍｇ～１．０ｍｇのリン酸二水素カリウム（例えば、約０．４ｍｇのリン酸二水素カリウム）、約０．２ｍｇ～１．５ｍｇのリン酸一水素カリウム（例えば、約０．９ｍｇのリン酸一水素カリウム）、および／または約２ｍｇ～１０ｍｇのクエン酸ナトリウム二水和物（例えば、約５．９ｍｇのクエン酸ナトリウム二水和物）を含む。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、担体、希釈剤または他の賦形剤、例えば薬学的に許容され得る担体をさらに含む。薬学的に許容され得る担体としては、水、食塩水、緩衝食塩水、グリセロール、無菌等張水性緩衝液およびこれらの組み合わせを挙げることができるが、これらに限定されない。薬学的に許容され得る、担体、希釈剤およびその他の賦形剤の完全な論述は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＭａｃｋＰｕｂ．Ｃｏ．Ｎ．Ｊ．現行版）に提示されている。いくつかの局面において、担体は水である。

ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、防腐剤または抗生物質を含まない。

ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンは、（ａ）チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）と、（ｂ）アジュバント（例えば、水酸化アルミニウムアジュバント）とを含むことができる。ある特定の局面において、組成物またはワクチンは、約０．５ｍＬ～１．０ｍＬ（例えば、約０．８ｍＬ）の体積中に、（ａ）約６μｇ～６０μｇ（例えば、４０μｇ）のＶＬＰと、（ｂ）約２００μｇ～５００μｇ（例えば、３００μｇ）の水酸化アルミニウムとを含む。

いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約０．５ｍＬ～１．０ｍＬ（例えば、約０．８ｍＬ）の体積中に、（ａ）約６μｇ～６０μｇ（例えば、約４０μｇ）のＶＬＰと、（ｂ）約２００μｇ～５００μｇの水酸化アルミニウム（例えば、約３００μｇ）と、（ｃ）約２０ｍｇ～８０ｍｇのスクロース（例えば、約５５ｍｇ～６５ｍｇ）と、（ｄ）約０．２ｍｇ～１．０ｍｇのリン酸二水素カリウム（例えば、約０．２ｍｇ～０．８ｍｇ）と、（ｅ）約０．２ｍｇ～１．５ｍｇのリン酸一水素カリウム（例えば、約０．５～１．５ｍｇ）と、（ｆ）約２ｍｇ～１０ｍｇのクエン酸ナトリウム二水和物（例えば、約５．５ｍｇ～６．５ｍｇ）と、（ｇ）水とを含む。

いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、例えば、筋肉内注射用の懸濁剤として製剤化される。本開示の組成物またはワクチンは、単回用量の筋肉内注射（例えば、プレフィルドシリンジ中の０．８ｍＬ用量）に適した懸濁剤であり得る。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは懸濁剤として製剤化され、使用前に２～８℃（３６～４６°Ｆ）でバイアル中に保存される。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは懸濁剤として製剤化され、使用前に２～８℃（３６～４６°Ｆ）で、プレフィルドシリンジ中に保存される。

ある特定の局面において、本開示の組成物またはワクチンは、有効量で投与される。いくつかの局面において、有効量は、７日以内に、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答および／または保護を与える本開示の組成物またはワクチンの量である。

ある特定の局面において、本明細書中に開示される組成物またはワクチンは、投与、例えば、単回用量投与の７日以内に、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、ＣＨＩＫＶの同種または異種の株に対する抗体を誘導する。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、例えば単回用量投与の投与後少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２８日間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも１８ヶ月間、または少なくとも２年間維持される。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、例えば単回用量投与の投与後、または単回用量投与および１もしくはそれを超える追加免疫用量投与後に対象の生涯にわたって維持される。

ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンは、投与後７日以内に、例えば、ＣＨＩＫＶ中和アッセイによってヒト血清中で測定される、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価（例えば、ルシフェラーゼアッセイまたはプラークアッセイによるＮＴ８０血清中和抗体（ＳＮＡ））を誘導する。ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンは、投与後７日以内に、例えば、ＣＨＩＫＶ中和アッセイによってヒト血清中で測定される、２０～１０，０００、２０～１５，０００、３０～１０，０００、３０～１５，０００、４０～１０，０００、または４０～１５，０００の血清中和抗体価（例えば、ルシフェラーゼアッセイまたはプラークアッセイによるＮＴ８０血清中和抗体（ＳＮＡ））を誘導する。いくつかの局面において、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価が、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２８日間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間および／または少なくとも２年間維持される。いくつかの局面において、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価が、少なくとも３０ヶ月間、２年間、３年間、４年間、５年間、１０年間または２０年間またはそれを超えて維持される。いくつかの局面において、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価が、例えば、単回用量投与または単回用量投与および１またはそれを超える追加免疫用量投与の投与後、対象の生涯にわたって維持される。ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンでワクチン接種された対象の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれより多くが、ＶＬＰの投与の７日後にＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を生じる。ある特定の局面において、集団の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％が、本明細書に開示される組成物またはワクチンの投与後（例えば、単回用量後、または単回用量投与および１またはそれを超える追加免疫用量投与後）少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２８日間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、および／または少なくとも２年間、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を維持する。いくつかの局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンの第２の用量、例えば追加免疫用量は、本明細書に開示される組成物またはワクチンの第１の単回用量の少なくとも６ヶ月後、少なくとも９ヶ月後、少なくとも１２ヶ月後、少なくとも１４ヶ月後、少なくとも１６ヶ月後、少なくとも１７ヶ月後、少なくとも１８ヶ月後、少なくとも２０ヶ月後、少なくとも２２ヶ月後、または少なくとも２年後に投与される。いくつかの局面において、防御的血清中和抗体価を２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）に維持するために、１またはそれを超える追加免疫用量を対象の生涯にわたって投与することができる。

ある特定の局面において、中和抗体応答は、ワクチン接種後７日以内に少なくとも６０％、少なくとも７０％または少なくとも８０％の抗体応答率で、７日以内に生成する。ある特定の局面において、応答は、少なくとも５０％または少なくとも６０％の抗体応答率で、ワクチン接種後少なくとも２年間持続する。
投薬および投与

本開示のある特定の局面は、本明細書に開示される組成物またはワクチンの投薬および投与を対象とする。本明細書に開示される組成物およびワクチンは、単回用量（例えば、１回用量）または複数回用量（例えば、初回刺激用量および追加免疫用量）のいずれかとして投与することができる。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは単回用量として製剤化される。いくつかの態様において、組成物またはワクチンの単回用量は１回投与される。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、１またはそれを超える追加免疫用量（例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも６用量）として投与される。ある特定の局面において、第１の用量（例えば、初回刺激用量）および任意のその後の追加免疫用量は、同じであることができ、または異なる（例えば、用量あたりより多いまたはより少ないＶＬＰ）ことができる。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は１回投与され、追加免疫用量は、本明細書に開示される組成物またはワクチンの第１の単回用量の少なくとも６ヶ月後、少なくとも９ヶ月後、少なくとも１２ヶ月後、少なくとも１４ヶ月後、少なくとも１６ヶ月後、少なくとも１７ヶ月後、少なくとも１８ヶ月後、少なくとも２０ヶ月後、少なくとも２２ヶ月後、または少なくとも２年後に投与される。いくつかの局面において、防御的血清中和抗体価を維持するために、１またはそれを超える追加免疫用量を対象の生涯にわたって投与することができる。

いくつかの局面において、本開示の組成物またはワクチンは、筋肉内（ＩＭ）または静脈内（ＩＶ）投与用に製剤化される。ある特定の局面において、投与は筋肉内（ＩＭ）である。いくつかの局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンの単回用量は、上腕に筋肉内投与される。

ある特定の局面において、本開示の組成物またはワクチンは、１回投与のための単回用量として製剤化および／または投与される。本開示のこの局面は、それぞれ複数回用量として投与されるアルミニウム塩ベースのアジュバントを含む市販のＨＰＶ、ＨＥＶおよびＨＡＶ ＶＬＰベースのワクチンとは対照的である（例えば、Ｃｉｍｉｃａ ａｎｄ Ｇａｌａｚａ，Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７；１８３：９９－１０８を参照）。

ある特定の局面において、本開示のＶＬＰの単回用量（例えば、１回の単回用量、初回刺激用量および／または追加免疫用量）は、例えば、約０．５ｍＬ～１．０ｍＬ（例えば、約０．８ｍＬ）の単回用量体積に対して、例えばプレフィルドシリンジ中に製剤化された約６μｇ～２００μｇ、約６μｇ～１００μｇ、または約６μｇ～６０μｇ（例えば、約２０μｇ～６０μｇ、例えば、約４０μｇ）を含む。ある特定の局面において、本開示の組成物またはワクチンの単回用量（例えば、１回の単回用量、初回刺激用量および／または追加免疫用量）は、約７．５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬ、約１２．５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬ、３７．５μｇ／ｍＬ～６２．５μｇ／ｍＬ、または４０μｇ／ｍＬ～６０μｇ／ｍＬの投与量でＶＬＰを含む。ある特定の態様において、本開示の組成物またはワクチンの単回用量（例えば、１回の単回用量、初回刺激用量および／または追加免疫用量）は、約２５μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬまたは約７５μｇ／ｍＬの投与量でＶＬＰを含む。ある特定の態様において、本開示の組成物またはワクチンの単回用量（例えば、１回の単回用量、初回刺激用量および／または追加免疫用量）は、約５０μｇ／ｍＬの投与量でＶＬＰを含む。いくつかの局面において、ＶＬＰは、アルミニウムアジュバント、例えば水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））でアジュバント化される。いくつかの局面において、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））は、約１００μｇ～５００μｇ（例えば、約３００μｇの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）））の量である。いくつかの局面において、本開示の組成物またはワクチンの単回用量（例えば、１回の単回用量、初回刺激用量および／または追加免疫用量）は、約２５０μｇ／ｍＬ～６２５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を含む。いくつかの局面において、単回用量は、約３７５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を含む。いくつかの局面において、剤形は、例えば筋肉内投与用の懸濁剤である。

ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンの単回用量（例えば、１回の単回用量、初回刺激用量および／または追加免疫用量）は、約０．５ｍＬ～５ｍＬ、約０．５ｍＬ～４ｍＬ、約０．５ｍＬ～４ｍＬ、約０．５ｍＬ～２ｍＬ、または約０．５ｍＬ～１ｍＬの体積を含む。いくつかの局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンの単回用量は、約０．５ｍＬ、約０．６ｍＬ、約０．７ｍＬ、約０．８ｍＬ、約０．９ｍＬまたは約１．０ｍＬの体積を含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンの単回用量は、約６μｇ～６０μｇ（例えば、約２０μｇ～６０μｇのＶＬＰ）の量でＶＬＰを含む。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは、約４０μｇのＶＬＰを含む。いくつかの局面において、本開示のＶＬＰは、アルミニウムアジュバント、例えば水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））でアジュバント化することができる。いくつかの局面において、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））は、約１００μｇ～５００μｇ（例えば、約３００μｇの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）））の量である。いくつかの局面において、本開示の組成物またはワクチンの単回用量は、約０．５ｍＬ～１．０ｍＬ（例えば、約０．８ｍＬ）を含む単回投与用量用に製剤化された約４０μｇ／約３００μｇの水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））を含む。

ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物またはワクチンの各用量は、約６μｇ～約６０μｇ（例えば、約４０μｇ）のＣＨＩＫＶ ＶＬＰと、約１００μｇ～５００μｇ（例えば、約３００μｇ）のアルミニウム（例えば、水酸化アルミニウムアジュバントとして）と、約２０ｍｇ～８０ｍｇ（例えば、約５９．７ｍｇ）のスクロースと、約０．２ｍｇ～０．８ｍｇ（例えば、約０．４ｍｇ）のリン酸二水素カリウムと、約０．５ｍｇ～１．５ｍｇ（例えば、約０．９ｍｇ）のリン酸一水素カリウムと、約１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、約５．９ｍｇ）のクエン酸ナトリウム二水和物（sodium citrate dihydrate）と、注射用水とを含むことができる。

ある特定の局面において、本開示の組成物またはワクチンは、有効量で投与される。いくつかの局面において、有効量は、７日以内に、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答および／または保護を与える本開示の組成物またはワクチンの量である。いくつかの態様において、有効量は、単回１回用量によって達成される。いくつかの態様において、有効量は、単回用量および１またはそれを超える追加免疫用量によって達成される。

本明細書中に開示される方法は、１回の単回用量の他、様々な初回刺激－追加免疫レジメンも含む。ある特定の局面において、１またはそれを超える初回刺激による免疫の後に１またはそれを超える追加免疫による免疫を行うことができる。免疫原性組成物またはワクチンは、各免疫について同一であることまたは異なることができ、免疫原性組成物またはワクチンの投与量、経路および製剤も変化させることができる。
使用の方法

本開示のある特定の局面は、個体または集団におけるチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）感染によって引き起こされる疾患のリスクを予防または低減するための能動免疫を提供するための本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の使用を対象とする。いくつかの局面において、対象は、成人（ａｄｕｌｔ）（例えば、１２歳以上）または小児（例えば、１２歳未満、６ヶ月～１２歳未満、１歳～１２歳未満）である。

本開示のある特定の局面は、対象、特にヒトにおいて免疫学的応答を誘導するための組成物および方法であって、免疫応答を誘導または増強するために製剤化された、ＣＨＩＫＶポリペプチドまたはその断片を含むＶＬＰを対象に投与することを含む、組成物および方法を提供する。いくつかの局面において、免疫応答は、ＣＨＩＫＶ感染またはその炎症症状（例えば、関節炎）から対象を保護する。本明細書に開示される免疫学的組成物またはワクチンの投与は、既にＣＨＩＫＶ感染を経験している対象において治療的に使用することができるか、またはＣＨＩＫＶ感染のリスクを予防または低減するために予防的に使用することができる。

ある特定の局面において、これらの方法は、本明細書に開示される組成物、ワクチンまたは剤形を有効量で投与することを含む。いくつかの局面において、有効量は、７日以内に、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答および／または保護を与える本開示の組成物またはワクチンの量である。いくつかの態様において、有効量は、単回１回用量の投与によって達成される。いくつかの態様において、有効量は、単回用量および１またはそれを超える追加免疫用量の投与によって達成される。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量または単回用量および１もしくはそれを超える追加免疫用量の投与後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間持続する。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量または単回用量および１もしくはそれを超える追加免疫用量の投与後少なくとも３０ヶ月間、少なくとも２年間、少なくとも３年間、少なくとも４年間、少なくとも５年間、少なくとも１０年間、または２０年間またはそれを超えて持続する。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量または単回用量および１もしくはそれを超える追加免疫用量の投与後、対象の生涯にわたって持続する。いくつかの局面において、血清中和応答は、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を含む。

いくつかの局面において、本開示は、対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する方法であって、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形を対象に投与することを含む方法を対象とする。いくつかの局面において、中和抗体応答は、ＣＨＩＫＶのＥ１および／またはＥ２タンパク質に対するものである。

本開示のある特定の局面は、対象においてＣＨＩＫＶに対する免疫応答および／または防御免疫を誘発する方法であって、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形を対象に投与することを含む方法を対象とする。ある特定の局面において、免疫は、ＣＨＩＫＶ（例えば、ＥＣＳＡ、アジアおよび／または西アフリカの１またはそれより多く）の少なくとも１つ、１つより多くまたはすべての系統に対して保護する。

いくつかの局面において、本開示は、対象におけるチクングニア感染を処置し、予防し、またはそのリスクを低減する方法であって、チクングニア感染を処置し、予防し、またはそのリスクを低減することを必要とする対象に、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形を投与することを含む方法を対象とする。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶ疾患に対する保護は、ＣＨＩＫＶのＥ１および／またはＥ２タンパク質に対する中和抗体を誘発することによって提供される。

本開示のある特定の局面は、対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する免疫応答および／または防御免疫を誘発する方法であって、（ａ）ＣＨＩＫＶ由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む組成物、ワクチンおよび／または剤形を対象に投与することを含み、組成物、ワクチンおよび／または剤形の単回用量が約６μｇ～６０μｇのＶＬＰ（例えば、約４０μｇ）を含み、組成物、ワクチンおよび／または剤形の単回用量の投与が、投与の７日以内に対象においてＣＨＩＫＶ特異的中和抗体の産生を誘発し、および／または単回用量が対象に投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間、ＣＨＩＫＶ特異的中和抗体の産生を誘発する方法を対象とする。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶ特異的中和抗体価は、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）を含む。ある特定の局面において、組成物、ワクチンおよび／または剤形は、アジュバント（例えば、アルミニウムアジュバント）をさらに含む。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶ特異的中和抗体は、ＣＨＩＫＶのＥ１および／またはＥ２タンパク質に対するものである。

いくつかの局面において、本開示は、対象または集団に本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形を投与することを含む、ＣＨＩＫＶ感染に対して対象または集団にワクチン接種することを対象とする。

ある特定の局面において、本明細書中に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形は、投与、例えば、単回用量投与の７日以内に、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する。いくつかの局面において、組成物、ワクチンおよび／また剤形は、ＣＨＩＫＶの同種または異種の株に対する抗体を誘導する。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、投与、例えば単回用量投与後に、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２８日間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１（ｏｎ）年間、少なくとも１８ヶ月間、または少なくとも２年間維持される。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答および／または防御免疫は、単回用量または単回用量および１もしくはそれを超える追加免疫用量の投与後少なくとも１年間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも３０ヶ月間、少なくとも２年間、少なくとも３年間、少なくとも４年間、少なくとも５年間、少なくとも１０年間、または２０年間またはそれを超えて維持される。いくつかの局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答および／または防御免疫は、単回用量または単回用量および１もしくはそれを超える追加免疫用量の投与後、対象の生涯にわたって維持される。

ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形は、投与後７日以内に、例えば、ＣＨＩＫＶ中和アッセイによってヒト血清中で測定される、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価（例えば、ルシフェラーゼアッセイによるＮＴ８０血清中和抗体（ＳＮＡ））を誘導する。いくつかの局面において、４０以上の血清中和抗体価が、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２８日間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間および／または少なくとも２年間維持される。

ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形でワクチン接種された対象の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれより多くが、ＶＬＰの投与の７日後にＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を生じる。ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形でワクチン接種された集団の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％が、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の投与後（例えば、単回用量後）少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２８日間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、および／または少なくとも２年間、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を維持する。いくつかの局面において、本明細書中に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の単回用量は、単回用量後少なくとも１年、少なくとも１８ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも１０年、１５年または２０年またはそれを超えて、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を維持する。いくつかの局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の第２の用量、例えば追加免疫用量は、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の第１の単回用量の少なくとも６ヶ月後、少なくとも９ヶ月後、少なくとも１２ヶ月後、少なくとも１４ヶ月後、少なくとも１６ヶ月後、少なくとも１７ヶ月後、少なくとも１８ヶ月後、少なくとも２０ヶ月後、少なくとも２２ヶ月後、または少なくとも２年後に投与される。いくつかの局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の第２の用量、例えば追加免疫用量は、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の最初の単回用量の少なくとも１年後、少なくとも１８ヶ月後、少なくとも３０ヶ月後、少なくとも２年後、少なくとも３年後、少なくとも４年後、少なくとも５年後、少なくとも１０年後、少なくとも１５年後、または２０年後またはそれより後に投与される。

ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形でワクチン接種された対象の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれより多くが、ＶＬＰ含有組成物、ワクチンおよび／または剤形（例えば、１回の単回用量）の投与後７日までに抗体陽転を有する。ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形でワクチン接種された対象の６０％～９９％、６０％～９８％、６５％～９８％、７０％～９８％または７４％～９８％が、ＶＬＰ含有組成物、ワクチンおよび／または剤形（例えば、１回の単回用量）の投与後７日までに抗体陽転を有する。ある特定の局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形でワクチン接種された対象の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれより多くが、ＶＬＰ含有組成物、ワクチンおよび／または剤形（例えば、１回の単回用量）の投与後２５日目、２６日目、２７日目、２８日目、２９日目または３０日目までに抗体陽転を有する。ある特定の局面において、免疫応答は、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、または少なくとも２４ヶ月間持続する。

ある特定の局面において、中和抗体応答は、ＣＨＩＫＶの複数の血清型、遺伝子型または系統（ＥＣＳＡ（例えば、タンザニア１９５３年、インド２０００年、マレーシア２００８年）、アジア（例えば、セントマーチン２０１３年、インドネシア２００７年）、西アフリカ（例えば、ナイジェリア１９６５年、セネガル２００５年、セネガル１９８３年））に対して対象にワクチン接種する。いくつかの局面において、中和抗体応答は、７５％以上ＩｇＧ３、８０％以上ＩｇＧ３、８５％以上ＩｇＧ３または９０％以上ＩｇＧ３である。

ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、単回用量が投与された後、少なくとも２８日間、６ヶ月間、１年間、１８ヶ月間または２年間維持される。ある特定の局面において、組成物またはワクチンの第２の（追加免疫）用量は、以前の単回用量の約２８日後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、約１年後、約１８ヶ月後、または約２年後に対象に投与される。いくつかの局面において、単回用量によって提供される中和抗体応答は、少なくとも１年間維持される。いくつかの局面において、第２の用量（追加免疫用量）は、最初の用量を受けてから９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、または５．５年以内に投与されない。

ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答は、第２の用量の投与後、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約１年間、少なくとも約１８ヶ月間、または少なくとも約２年間維持される。

ある特定の局面において、個体は、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の単回用量の投与後７日以内に、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を生成する。ある特定の局面において、個体は、組成物、ワクチンおよび／または剤形の単回用量の投与後少なくとも約１年間または約２年間、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を維持する。ある特定の局面において、個体は、組成物、ワクチンおよび／または剤形の単回用量の投与後、対象の生涯にわたって、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上、または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を維持する。

ある特定の局面において、ワクチン接種された集団の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、または少なくとも９８％が、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の単回用量の投与後７日以内に、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上、または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を生成する。

ある特定の局面において、ワクチン接種された集団の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、または少なくとも９８％が、組成物、ワクチンおよび／または剤形の単回用量の投与後１年間または２年間、２０以上、２５以上、３０以上、３５以上、４０以上、４５以上、または５０以上（例えば、４０以上）の血清中和抗体価を維持する。

ある特定の局面において、抗体応答率は、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形の投与後７日、２８日、６ヶ月、９ヶ月、１年、１８ヶ月、または２年以内に、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、または少なくとも９８％である。

いくつかの局面において、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形は、併用療法の一部として投与することができる。例えば、本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形は、他の免疫原性組成物、抗ウイルス剤および／または抗生物質とともに共投与する、または製剤化することができる。本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形は、別の免疫原性組成物、抗ウイルス剤、抗生物質、またはチクングニア感染を予防または処置する任意の他の薬剤と併せて、その後に、または順次に投与することができる。
ＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチン生産

本開示のある特定の局面は、免疫原性組成物またはワクチンとして本明細書に開示されるＶＬＰを調製および製剤化することを対象とする。

組換え構築物は、形質移入し、感染させ、または形質転換するために調製および使用することができ、本明細書に記載されるものを含むウイルスタンパク質を真核細胞および／または原核細胞中に発現することができる。したがって、本開示は、キャプシド、Ｅ３、Ｅ２、６ＫおよびＥ１もしくはこれらの一部、および／または上記の任意のキメラ分子を含むＣＨＩＫＶ構造遺伝子をコードする核酸を含有し、ＶＬＰの形成を可能にする条件下で、宿主細胞において、キャプシドＥ３、Ｅ２、６ＫおよびＥ１もしくはこれらの一部、および／または本明細書に記載の任意のキメラ分子を含むＣＨＩＫＶ構造遺伝子の発現を可能にする１つのベクター（または複数のベクター）を含む宿主細胞を提供する。

ある特定の局面において、本開示の１またはそれを超えるＣＨＩＫＶポリペプチド（例えば、ＣＨＩＫＶ Ｃ、Ｅ１およびＥ２タンパク質）を含む非感染性組換えＶＬＰは、適切な発現ビヒクル中の、ポリペプチドをコードする核酸分子またはその断片による適切な宿主細胞の形質転換または形質移入によって産生することができる。ある特定の局面において、ポリペプチドをコードする核酸分子は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、またはこれらの任意の組み合わせに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する配列を含むことができる。

ある特定の局面において、本開示のＶＬＰは、ＨＥＫ２９３細胞またはこれに由来する細胞（例えば、ＶＲＣ２９３細胞）を、１またはそれを超えるＣＨＩＫＶ構造タンパク質遺伝子（例えば、Ｃ、Ｅ３、Ｅ２、６Ｋおよび／またはＥ１遺伝子）をコードする発現プラスミドで形質移入することによって産生される。発現されたタンパク質はＶＬＰに自己集合することができ、次いで、細胞培養培地から採取および精製することができる。ある特定の局面において、ＶＬＰは、限外濾過、透析濾過、および陰イオン交換クロマトグラフィーによって精製され、次いで滅菌濾過され得る。いくつかの局面において、ＶＬＰを適切な量の製剤バッファーと混合し、次いで無菌水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、水酸化アルミニウムゲル（例えば、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標））２％）に吸着させることができる。ある特定の局面において、製剤化されたＶＬＰは、防腐剤または抗生物質を含有しない。

ＶＲＣ２９３細胞は、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣから）に由来する。ＨＥＫ２９３細胞は、動物を含まないＣＤ２９３培地中での懸濁培養において成長するように適合させた。

ある特定の局面において、本明細書に開示されるＶＬＰは、ＣＨＩＫＶの構造遺伝子をコードするＤＮＡプラスミドでのＶＲＣ２９３細胞の一過性形質移入によって産生される。いくつかの局面において、精製後、最終医薬品を形成するために、ＶＬＰをスクロース含有クエン酸緩衝液中に希釈し、単回用量ガラスバイアルまたはプレフィルドシリンジ中に充填することができる。

より具体的には、製造プロセスは、上流での産生（細胞成長および抗原発現）および下流での精製という２つの主要な段階に分けることができる。第１の工程では、ＶＲＣ２９３細胞をワーキング・セル・バンク（ＷＣＢ）から拡大増殖することができる。次いで、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ構造タンパク質（キャプシド、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３および６Ｋ）をコードする発現プラスミドで細胞を形質移入する。いくつかの局面において、発現プラスミドは配列番号１の配列を含む。本開示のある特定の局面は、本開示のＣＨＩＫＶ ＶＬＰを発現するＷＣＢまたは安定細胞系（例えば、ＨＥＫ２９３またはＨＥＫ２９３由来細胞）を対象とする。

ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ原薬は、以下の３つの組換えＣＨＩＫＶ構造タンパク質を含む：（キャプシド／コア）（約３５ｋＤａ）、エンベロープ１（Ｅ１）（約５５ｋＤａ）およびエンベロープ２（Ｅ２）（約５０ｋＤａ）。ある特定の局面において、３つのタンパク質は、ＶＲＣ２９３細胞中で共発現され、自己集合して、エンベロープで包まれたＶＬＰを形成し、それは、培養培地から採取される。ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、非感染性および非複製性であるが、免疫系への抗原提示に関して親ウイルスに構造的に類似している。ＶＲＣ２９３細胞中での産生後、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、例えば、カラムクロマトグラフィー、限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）およびダイレクトフロー濾過工程の組み合わせによって培養培地から精製することができる。ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ中に存在する総ＣＨＩＫＶタンパク質の少なくとも９５％、少なくとも９６％または少なくとも９７％の量で、キャプシド、Ｅ１およびＥ２タンパク質を含む。

いくつかの局面において、最終ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ原薬は、－６０℃以下で保存することができる無菌水溶液を含む。ある特定の局面において、生成物は－４５℃～－１０℃で保存される。いくつかの局面において、組成物またはワクチンは懸濁剤として製剤化され、使用前に２～８℃（３６～４６°Ｆ）で、容器（例えば、バイアルまたはプレフィルドシリンジ）中に保存される。ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、室温で、少なくとももしくは最長約６時間、少なくとももしくは最長約１２時間、少なくとももしくは最長約１８時間、または少なくとももしくは最長約２４時間保存することができる。ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、２～８℃で、少なくとももしくは最長約１２時間、少なくとももしくは最長約２４時間、少なくとももしくは最長約７日間、または少なくとももしくは最長約２週間保存することができる。ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、－４５℃～－１０℃で、少なくともまたは最長約３ヶ月間、少なくともまたは最長約６ヶ月間、少なくともまたは最長約９ヶ月間、少なくともまたは最長約１２ヶ月間、少なくともまたは最長約２年間保存することができる。

ある特定の局面において、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ原薬の無菌水性緩衝溶液を４０±１０μｇ／ｍＬで単回用量バイアル中に充填することができる。いくつかの局面において、バイアルは、約０．５ｍＬの採取（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）を可能にするために約０．８ｍＬの公称充填体積（ｎｏｍｉｎａｌ ｆｉｌｌ ｖｏｌｕｍｅ）を有する。

いくつかの局面において、原薬はアジュバントとともに製剤化され、プレフィルドシリンジ（例えば、Ｉ型ガラスルアーロック式のプレフィルドシリンジ）中に充填される。医薬品の調製は、無菌の充填－仕上げ工程として行うことができる。

ある特定の局面において、プレフィルドシリンジは、本明細書に開示される組成物またはワクチン、例えば、約６μｇ～約６０μｇ（例えば、約４０μｇ）のＣＨＩＫＶ ＶＬＰと、約１００μｇ～５００μｇ（例えば、約３００μｇ）のアルミニウム（例えば、水酸化アルミニウムアジュバントとして）と、約２０ｍｇ～８０ｍｇ（例えば、約５９．７ｍｇ）のスクロースと、約０．２ｍｇ～０．８ｍｇ（例えば、約０．４ｍｇ）のリン酸二水素カリウムと、約０．５ｍｇ～１．５ｍｇ（例えば、約０．９ｍｇ）のリン酸一水素カリウムと、約１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、約５．９ｍｇ）のクエン酸ナトリウム二水和物と、注射用水とを含む組成物またはワクチンを含む。
キット

本開示のある特定の局面は、本明細書に開示される組成物、ワクチンまたは投与用製剤の成分の１またはそれより多くを充填した１またはそれを超える容器を含む医薬キットを対象とする。いくつかの局面において、キットは２つの容器を含み、一方はＶＬＰを含み、他方はアジュバントを含む。いくつかの局面において、キットは、ＶＬＰおよび必要に応じてアジュバントを含む単一の容器（例えば、プレフィルドシリンジまたはバイアル）を含む。このような容器（複数可）は、医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形態での情報を伴うことが可能であり、この通知は、ヒト投与のための製造、使用または販売の機関による承認を反映する。

ある特定の局面において、組成物、ワクチンおよび／または剤形（例えば、１回の単回用量、初回刺激用量または追加免疫用量）は、対象への投与（例えば、筋肉内投与）のための適切な濃度の液体、例えば懸濁剤として供給される。

本開示のある特定の局面は、（例えば、プレフィルドシリンジ中の）本開示の組成物、ワクチンおよび／または剤形と、使用のための指示とを備えるキットを対象とする。

ある特定の局面において、キットは、本明細書に開示される、ＶＬＰを含有する組成物、ワクチンおよび／または剤形を含む第１の容器と、アジュバント（例えば、アルミニウムアジュバント）を含む第２の容器と、これらの容器の内容物を組み合わせ、混合物を対象に投与するための指示とを備える。

ある特定の局面において、キットは、ＶＬＰおよびアジュバント（例えば、アルミニウムアジュバント）を含む本明細書に開示される組成物、ワクチンおよび／または剤形を含む容器（例えば、バイアルまたはプレフィルドシリンジ）と、組成物、ワクチンおよび／または剤形を対象に投与するための指示とを備える。

ある特定の局面において、キットは、（約０．５～１．５ｍＬ（例えば、約０．８ｍＬ）の体積を含むバイアルまたは単回用量のプレフィルドシリンジにおいて利用可能な筋肉内投与用の無菌懸濁剤を含む。ある特定の局面において、各用量は、約６μｇ～約６０μｇ（例えば、約４０μｇ）のＣＨＩＫＶ ＶＬＰと、約１００μｇ～５００μｇ（例えば、約３００μｇ）のアルミニウム（例えば、水酸化アルミニウムアジュバントとして）と、約２０ｍｇ～８０ｍｇ（例えば、約５９．７ｍｇ）のスクロースと、約０．２ｍｇ～０．８ｍｇ（例えば、約０．４ｍｇ）のリン酸二水素カリウムと、約０．５ｍｇ～１．５ｍｇ（例えば、約０．９ｍｇ）のリン酸一水素カリウムと、約１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、約５．９ｍｇ）のクエン酸ナトリウム二水和物と、注射用水とを含む。

実施例１：チクングニアウイルス様粒子（ＶＬＰ）の調製
ＣＨＩＫＶ構造タンパク質（キャプシド（Ｃ）、Ｅ３、Ｅ２、６ＫおよびＥ１）に対するコード配列を含有するプラスミドを調製した。プラスミドは、株３７９９７の５つのＣＨＩＫＶ構造遺伝子：キャプシド（コア）、Ｅ３、Ｅ２、６ＫおよびＥ１をコードする３７４４塩基対の合成遺伝子（配列番号２）から調製した。ＣＨＩＫＶゲノムにおけるのと同じ向きで、ＣＨＩＫＶ遺伝子をプラスミド中に挿入した。ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩ制限エンドヌクレアーゼ部位で合成遺伝子を構築した。ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩ制限エンドヌクレアーゼでベクターを消化することによって、この遺伝子を発現ベクターのマルチクローニング部位中に挿入した。このベクターは、ヒト細胞中での関心対象の遺伝子の効率的かつ高レベルの発現のために、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター／エンハンサーおよびヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の５’末端反復配列からの調節Ｒ領域を利用する。

本実施例におけるＶＬＰは、ＶＲＣ２９３細胞（ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞由来）に、ＣＨＩＫＶ構造タンパク質遺伝子（Ｃ、Ｅ３、Ｅ２、６ＫおよびＥ１遺伝子）をコードする発現プラスミドを形質移入することによって産生された。発現されたタンパク質はＶＬＰへと自己集合し、次いで、それを、細胞培養培地から採取および精製した。ＣＭＶ ＩＥプロモーターの制御下でこれらのタンパク質を発現させた。６Ｋペプチドはアルファウイルスビリオン中に少量組み込まれたが、低温電子顕微鏡法によってビリオン構造中に同定されなかった。６ＫおよびＥ３タンパク質は、ウエスタンブロットまたはその他の技術によって、精製されたＣＨＩＫＶ ＶＬＰ中に検出されなかった。

限外濾過、透析濾過および陰イオン交換クロマトグラフィーによってＶＬＰを精製し、次いで滅菌濾過した。手短に言えば、最初の精製工程は、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰを濃縮し、次いで、清澄化された採取物から不純物を除去しながら、さらに精製するために、濃縮された材料を１ＸＳＰ緩衝液（１０ｍＭリン酸カリウム、２１８ｍＭスクロース、ｐＨ７．０）中に透析濾過するための限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）プロセスであった。このプロセスは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によって行った。

次に、濃縮および透析濾過されたＣＨＩＫＶ ＶＬＰを陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに適用した。この工程は、宿主細胞タンパク質および宿主細胞デオキシリボ核（ＤＮＡ）を除去した。クロマトグラフィープロセス中に、生成物中の残留宿主細胞ＤＮＡのサイズおよび濃度を低下させるための洗浄工程が存在した。２５ｍＭクエン酸ナトリウムで緩衝液のイオン強度を増加させることによって、カラムからＣＨＩＫＶ ＶＬＰを溶出した。このプロセスは、室温で行った。

次に、陰イオン交換カラムから溶出されたＣＨＩＫＶ ＶＬＰを５～７体積の１ＸＳＰ緩衝液に対して透析濾過した。透析濾過されたＣＨＩＫＶ ＶＬＰ材料を膜間圧力差（ＴＭＰ）なしで３～１５分間再循環させ、次いで収集した。この工程は、残存する残留洗浄溶液を除去し、他の宿主細胞不純物のレベルを低下させる役割を果たした。最後に、透析濾過後、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ生成物を無菌の使い捨て容器中に膜濾過して原薬を形成した。放出試験のために試料を収集し、－６０℃以下でＣＨＩＫＶ ＶＬＰ原薬を保存した。
実施例２：チクングニアウイルス様粒子（ＶＬＰ）の性質決定

サブミクロンサイズ範囲の分子および粒子のサイズを測定するための十分に確立された技術である、光子相関分光法（ＰＣＳ）または準弾性光散乱法とも呼ばれるＤＬＳを使用して、実施例１の方法に従って調製されたＣＨＩＫＶ ＶＬＰのサイズを決定した。ＤＬＳによって測定されるパラメータは流体力学的半径であり、測定されている粒子と同じ拡散係数を有する球状粒子の半径として定義することができる。これらの研究は、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ（Ｍａｌｖｅｒｎ）を用いて行った。この装置によって測定される粒子の直径範囲は、０．６ｎｍ～６μｍである。ＤＬＳ測定は、使い捨ての低容積キュベットを使用して行った。これらの研究のために、６ロットの原薬からの試料を希釈せずにキュベットに直接添加した。６つのロットに対する平均直径の結果を表２に示す。主ピークの平均直径に対応するｚ平均サイズは６３～６７ｎｍであった。低いＰＤＩは、精製されたＶＬＰのサイズが比較的均一であったことを示している。ＤＬＳによって得られたＣＨＩＫＶ ＶＬＰのサイズは、開発ロットに対して行われた低温電子顕微鏡法（４０～６０ｎｍ）およびＴＥＭ（７０ｎｍ）によって得られた値と一致した。これらの結果は、６０～７０ｎｍの範囲内にあるアルファウイルスビリオンの公知のサイズとも一致する。

次に、還元および変性条件下でのＣＨＩＫ ＶＬＰのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を行い、３つの主要なバンドを示した。ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法を使用して、図２において１、２および３として示される３つの主要なバンドが、それぞれ、チクングニアウイルス由来の３つの構造タンパク質：キャプシド、Ｅ２およびＥ１に対応することを確認した。図２中でバンド４として示されるＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて、Ｅ１よりわずかに大きい（Ｅ１の上に泳動している）微量の夾雑物は、ＨＳＰ７０ １Ａであると決定された。

トリプシン処理されたキャプシド、Ｅ１およびＥ２バンドから得られたＭＳ分光法データを図３Ａ～図３Ｃに示す。さらに、宿主細胞タンパク質（ＨＳＰ７０ １Ａ）に対して得られたＭＳ分光法データを図３Ｄに示す。キャプシド、Ｅ１およびＥ２構造タンパク質に対して得られた断片の配列帰属は、測定された質量を予想質量と照合することによって達成された。

ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ中の構造タンパク質Ｅ１、Ｅ２、およびキャプシドのパーセンテージを決定するために、ＲＰ－ＨＰＬＣアッセイを開発した。１００μＬの希釈されていないＣＨＩＫＶ ＶＬＰの一定分量をＸｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ３００ Ｃ４ ＨＰＬＣカラム（３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ）にロードした。カラムを６０℃に維持した。ＨＰＬＣ移動相Ａは０．１％ＴＦＡを含む水を含有し、移動相Ｂは３０％アセトニトリル、７０％イソプロパノールおよび０．０３％ＴＦＡを含有した。１ｍＬ／分の流速で６０分間にわたって０％～１００％の移動相Ｂの勾配でタンパク質を溶出した。２８０ｎｍの励起波長および３５０ｎｍの発光波長を有する蛍光検出器を使用することによって、溶出されたタンパク質を検出した。図４は、希釈されていないＣＨＩＫＶ ＶＬＰの１００μＬ注入のＲＰ－ＨＰＬＣプロファイルを示す。ＲＰ－ＨＰＬＣ分析によって得られた３つの主要なピークは、ＳＤＳＰＡＧＥによってキャプシド、Ｅ１およびＥ２であると同定された（図５）。２３．６（ピーク１）、４０．０（ピーク２）および４５．２分（ピーク３）の保持時間を有するＲＰ－ＨＰＬＣピークを収集した。

３つのピークはキャプシド、Ｅ１およびＥ２であり、ＣＨＩＫＶタンパク質の９７％超を構成することが確認された。キャプシド、Ｅ１およびＥ２タンパク質のそれぞれのパーセンテージは、対応するタンパク質ピーク面積をＣ＋Ｅ１＋Ｅ２の総ピーク面積で割ることによって計算した。１００μＬの希釈されていないＣＨＩＫ ＶＬＰについて観察されたＣ、Ｅ１およびＥ２のパーセンテージは、それぞれ３５％、２９％および３６％であった。算出されたＣ、Ｅ１およびＥ２のパーセンテージは、変性条件下での各タンパク質成分の蛍光シグナルから得た。これらの値は、キャプシド、Ｅ１およびＥ２の１：１：１比に近い。

ネガティブ染色電子顕微鏡法を使用して、精製されたＣＨＩＫＶ ＶＬＰの形態を分析した。これらの研究のために、希釈されていないＣＨＩＫＶ ＶＬＰを既知の濃度の１００ｎｍラテックスビーズと混合し、ニトロセルロースで支持された４００メッシュ銅グリッドに混合物を適用することによって試料を調製した。試料をグリッドに付着させ、次いでリンタングステン酸溶液（ナトリウム塩）で染色した。ＦＥＩ Ｅａｇｌｅ ４Ｋ×４Ｋ ＣＣＤカメラを備えた１２０ＫｅＶで動作するＦＥＩ Ｔｅｃｎａｉ Ｔ１２電子顕微鏡を使用して電子顕微鏡法によってグリッドを分析した。画像は、１５，０００×（０．７１ｎｍ／ピクセル）の公称倍率で撮影した。全粒子の９５％超を占める最も顕著な構造は、チクングニアウイルスに類似した形態を有する無傷のＣＨＩＫＶ ＶＬＰに対応する（図６Ａ）。無傷のＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、ブラシ状の境界および中身の詰まった中心を有するほぼ球形の形状であった。ＣＨＩＫＶ ＶＬＰのサイズは、６０～７０ｎｍの範囲のビリオンを有するアルファウイルスの既知のサイズとよく相関した。

低温電子顕微鏡法を用いて、従来の電子顕微鏡法に必要とされる染色剤または固定剤の非存在下で、水和された状態で試料を観察した。４００メッシュ炭素上のホーリーカーボン薄膜によって支持されたガラス状の氷中でＣＨＩＫＶ ＶＬＰの試料を瞬間凍結させることによって、低温電子顕微鏡検査用にＣＨＩＫＶ ＶＬＰの試料を調製し、画像化まで液体窒素下で保存した。グリッドを－１７０℃以下に維持するステージを使用して、ガラス状の氷グリッドを電子顕微鏡（ＦＥＩ Ｔｅｃｎａｉ Ｔ１２、１２０ＫｅＶ、ＦＥＩ Ｅａｇｌｅ ４Ｋ×４Ｋ ＣＣＤカメラ）に移した。各グリッドの画像は、５２，０００倍（０．２１ｎｍ／ピクセル）および２１，０００倍（０．５０ｎｍ／ピクセル）の公称倍率で取得した。低温電子顕微鏡分析によるＣＨＩＫＶ ＶＬＰの検査（図６Ｂ）は、調製物が、サイズおよびブラシ状の境界を有する形状において均一であり、高レベルの対称性を有するように見えるウイルス様粒子を含むことを実証した。粒子の直径は、ＶＬＰの構造に応じて４０～６０ｎｍと推定された。裸のＶＬＰ（エンベロープスパイクのないＶＬＰ）はより小さく、すなわち約４０ｎｍであり、完全に形成された成熟ＶＬＰは約６０ｎｍであった。これらの粒子の形態は、２Ｄ平均化に適しており、潜在的に３Ｄ再構築に適していた。Ｅ１およびＥ２糖タンパク質は、次いで８０の糖タンパク質スパイクへと集合する２４０のヘテロ二量体へと組織化された。

ＰＮＧａｓｅによって切断されたグリカンを２－アミノベンズアミド（２ＡＢ）で誘導体化し、蛍光検出を伴う順相（ＮＰ）ＨＰＬＣ上で、誘導体化されたグリカンを分離することによって、ＣＨＩＫ ＶＬＰのＮ－グリカンプロフィールを決定した。ＬＣ－ＭＳ分析により、ＣＨＩＫ ＶＬＰ中のオリゴマンノース、ハイブリッドおよび複合Ｎ結合型グリカン構造を同定した。

効力アッセイとして使用するために、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ構造上の中和エピトープの濃度および／または確認（ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ）を測定するサンドイッチ型ＥＬＩＳＡを開発した。このアッセイは、捕捉および検出のために２つの異なるモノクローナル抗体を使用した。これらの抗体、捕捉抗体および検出抗体は、精製されたＶＬＰによるマウスの免疫およびＥＬＩＳＡにおける精製されたＶＬＰに対するハイブリドーマのスクリーニングによってもたらされた。ＥＬＩＳＡによる一次スクリーニングにおいてＶＬＰを認識した抗体を、その後、レポーター遺伝子をベースとする中和アッセイにおいて偽型レンチウイルスベクターを使用して、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰを中和する能力について分析した。捕捉抗体および検出抗体はいずれも、中和抗体である。検出抗体をＨＲＰにコンジュゲートした。参照標準ロットおよび６つのＣＨＩＫＶ ＶＬＰ試料の抗原性をＥＬＩＳＡによって決定した。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ５プレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度を測定した。得られた光学密度をタンパク質濃度の関数としてプロットし、標準曲線を作成した。

参照標準ロットと２つのＧＭＰロットの結果を図７に示す。光学密度をＣＨＩＫＶ ＶＬＰ濃度の関数としてプロットした場合、全てのロットに対する希釈曲線は、同様の傾きおよび５０％の応答が観察される希釈率を有した。これらのデータは、現在の製造プロセスによって生成されたＣＨＩＫＶ ＶＬＰが、抗原性に関して良好なロット間一貫性を示したことを示唆している。

同様に、参照標準ロットに対して作成された用量反応曲線を用いて、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰの４つのＧＭＰロットのそれぞれについて効力（ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ免疫反応性）値を算出した。各ロットについて、標準曲線の直線範囲内に入る単一希釈を用いて、標準曲線から効力（免疫反応性）値を決定した。各ロットのタンパク質濃度およびＥＬＩＳＡによる効力（ＣＨＩＫＶ ＶＬＰ免疫反応性）：ＢＣＡ（商標）によるタンパク質濃度の比とともに、これらの結果が表３に示されている。参照標準ロットの効力（免疫反応性）に、ＢＣＡ（商標）によって測定されたタンパク質濃度と同等の値を割り当てた。ＥＬＩＳＡ値対タンパク質濃度の比は、質量の単位当たりの効力（免疫反応性）の尺度を与える。

実施例３：カニクイザルにおけるＣＨＩＫＶ ＶＬＰの有効性

ＣＨＩＫＶ疾患の非ヒト霊長類（ＮＨＰ）動物モデル（ＣＨＩＫＶ株ＬＲ２００６－ＯＰＹ１で刺激されたカニクイザル）を使用して、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチン、例えば免疫原性および有効性を評価した。要するに、３つの用量のＣＨＩＫＶ ＬＲ２００６－ＯＰＹ１（１０^６、１０^７、１０^８プラーク形成単位（ＰＦＵ））でＮＨＰを刺激した。３つの用量はすべて、刺激の１０日以内にウイルス血症、関節痛、発熱および食欲不振を含む臨床症状を誘発した。刺激後７日間毎日および刺激の１０日後の安楽死の日に、感染した動物の血漿および組織におけるプラークアッセイ（感染ウイルスの検出のため）およびｑＲＴ－ＰＣＲ（ウイルスＲＮＡの検出のため）の両方によって、ウイルス血症を測定した。１０日間のモニタリング期間中、刺激を受けた動物に関節痛の外的徴候は存在しなかったが、組織学的検査の際に関節および周囲組織の炎症が明らかであった。観察された炎症および変性の程度を測定するためにスコアリングシステムを開発した（表４）。３つの用量間で測定された疾患パラメータに有意な差は存在しなかった。３つの用量間でのウイルス血症および関節滲出液の類似性および最高用量での支持療法の必要性の増加に基づいて、１０^７ＰＦＵの用量を将来の研究のために選択した。

ａｌｕｍ（３００μｇ）をアジュバントとして添加したＣＨＩＫＶ ＶＬＰ（１．２５、６、または２０μｇ）、ＶＬＰ単独（２０μｇ）またはａｌｕｍ単独でカニクイザルを２回免疫した後、ＣＨＩＫＶ ＬＲ２００６－ＯＰＹ１（１０^７ＰＦＵ）で刺激した。

結果は、ルシフェラーゼ活性の減少によって定量された感染阻害アッセイ（ＣＨＩＫＶ－Ｌｕｃ）によって測定した場合、ａｌｕｍなしの２０μｇを含むＶＬＰの３つの用量すべてが免疫応答を誘導することを示した。単回の免疫後に、強い血清中和抗体（ＳＮＡ）応答が観察された（図８）。ａｌｕｍの添加は、ａｌｕｍなしのＶＬＰワクチン（２０μｇ用量；図８参照）と比較して刺激前のＳＮＡ価を増加させた。さらに、ワクチン接種は、刺激を受けた動物からの血清に対するプラークアッセイによって測定されたウイルス血症から非ヒト霊長類（ＮＨＰ）を保護した（図９Ａ～９Ｂ）。感染ウイルスは、ワクチン接種された動物中にどの時点でも観察されなかった。

関節病理スコアは、ＶＬＰによるワクチン接種がＮＨＰを関節浸潤から用量依存的に保護することを実証している（図１０Ａ～１０Ｂ）。ＲＴ－ＰＣＲ分析により、４匹の対照ＮＨＰのうち３匹は、分析したすべての組織中に測定可能なＲＮＡを有することが示されたのに対して、ＶＬＰをワクチン接種されたＮＨＰは有意により少ないウイルスＲＮＡを有していた（図１１Ａ～１１Ｄおよび表５）。ｖＲＮＡ／ｇ組織は、ワクチンレシピエント（１．２５、６、２０μｇのＣＨＩＫＶ－ＶＬＰ＋ａｌｕｍ、２０μｇのＣＨＩＫＶ－ＶＬＰ）と比較して、ａｌｕｍのみ（０μｇのＣＨＩＫＶ－ＶＬＰ＋ａｌｕｍ）を受けた動物において有意により高かった。このＮＨＰ研究では、異なる活性のＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチン群間に観察される差は存在しなかった。まとめると、これらのデータは、ワクチン接種で誘導されたＳＮＡがＮＨＰをウイルス刺激後にチクングニア疾患の発症から保護することを示唆している。

実施例４：ヒトにおけるＣＨＩＫＶ ＶＬＰの安全性および免疫原性（第２相）

ヒトにおけるＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチンの安全性および免疫原性を調べるために第２相臨床試験を展開した。１８歳～６０歳の４００人の患者を選択した。試験は無作為化、二重盲検、プラセボ対照であり、群は並行して試験した。患者は、ＣＨＩＫＶに感作されていないかまたはＣＨＩＫＶに曝露されたかのいずれかであり、カリブ海のＣＨＩＫ流行地域（プエルトリコ、ドミニカ共和国、ハイチ、マルティニークおよびグアドループ（Ｇａｕｄｅｌｏｕｐｅ））の出身であった。ＣＨＩＫＶに感作されていない患者を、０週目において力価が１５未満である患者として分類した。患者には、０週目および４週目に２０μｇのＣＨＩＫＶ－ＶＬＰを筋肉内に与えた。主要評価項目は、８週目の抗体陽転であり、（２回のＣＨＩＫＶ時期を通じて）１８ヶ月の追跡調査を行った。

本研究では、ベースライン血清中和抗体（ＳＮＡ）が、処置群およびプラセボ群中の対象の約３０％において検出された。ベースラインでＳＮＡを有していなかった対象において高い奏効率が観察された。２０μｇのＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、天然抗原に対する応答に匹敵する抗体応答を誘導した。８週目でのＣＨＩＫ－ＶＬＰ群における力価の９５％ＣＩは、ＣＨＩＫＶ曝露におけるベースライン力価の範囲と重複していた。８週目において、ＣＨＩＫＶ－ＶＬＰで処置された患者は、プラセボの２０．８％奏効率と比較して９９．５％の奏効率を有し、ｐ値＜０．００１であった。陽性免疫応答は、３０を超えるまたは３０に等しいＳＦＶ－ＯＰＹ１－ＧＦＰ ＥＣ５０値として定義した。８週目において、ＣＨＩＫＶ－ＶＬＰで処置された患者は、４２．８（３１．７～５７．９）ＧＭＴと比較して、２００４．５（１６８０．１～２３９１．５）ＧＭＴを有し、ｐ値＜０．００１であった。患者は、ワクチンの投与後７２週間にわたって免疫応答を維持した（図１２および表６）。ＣＨＩＫＶ非感作とＣＨＩＫＶ曝露の間に明らかな安全性の差は観察されなかった。

実施例５：ＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチンの安定性

ＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチンは、４０＋／－１０μｇ／ｍＬの濃度で０．８ｍＬのワクチンを有する単回用量の３ｍＬガラスバイアル中に充填された無菌水性緩衝溶液として調製した。製剤緩衝液は、２１８ｍＭスクロース、１０ｍＭリン酸カリウム、２５ｍＭクエン酸ナトリウムおよび注射用水を含んだ。－４５℃～－１０℃の霜取りなしの冷凍庫中でバイアルを保存し、筋肉内投与を意図した。バイアルは単回使用のみを意図し、防腐剤を含有しなかった。

実施された安定性研究の結果は、ワクチンが、冷蔵温度および室温で８時間、シリンジ中で安定であったことを示している（データは示さず）。

－４５℃～－１０℃で保存された毒物学ロットからの６ヶ月を通じた安定性結果も得られた。外観、ｐＨ、タンパク質濃度、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡおよび動的光散乱によって試料を分析し、１年まで３ヶ月間隔で分析し、その後、２年まで６ヶ月ごとに分析し、その後、毎年分析する。さらに、容器閉鎖の完全性を毎年分析する。６ヶ月の時点を通じて、生成物の不安定性または分解の証拠は観察されなかった。
実施例６：ＣＨＩＫＶ ＶＬＰワクチンはヒトにおいて中和抗体応答を誘導する

ａｌｕｍを含むまたは含まない６μｇ～４０μｇ用量のＣＨＩＫＶ ＶＬＰを使用する１および２用量レジメンを用いて、さらなる第２相臨床試験を設計した。本研究では、１８～４５歳の４１５人の患者を８つの処置群に無作為に割り当てた。血漿交換および白血球除去を有する群９も含まれた（ここに示されていないデータ、実施例８を参照）。

群１：１日目および２９日目での標準的な２用量スケジュールでアジュバントなし（unadjuvanted）２０μｇ用量。

群２～７：標準的なまたは短い（１５日目および２９日目）２用量スケジュールでのＣＨＩＫＶ ＶＬＰの様々なアジュバント添加用量（６、１０および２０μｇ）。

群８：２９日目に、アジュバント添加単回４０μｇ用量。

処置群全体で盲検を維持するために、短期および単回用量スケジュールの対象については１日目に、標準および単回用量スケジュールの対象については１５日目にプラセボを投与した。全ての対象に、ＣＨＩＫＶ ＶＬＰを２９日目に与えた。研究デザインの概要を図１３および表７に示す。

処置され、ベースライン（１日目）および少なくとも１つの研究での試料について評価可能な免疫原性結果を有した全ての無作為化された対象を含む修正治療意図（ｍＩＴＴ）集団（ｎ＝４１２）に対して免疫原性分析を実施した。

ＣＨＩＫＶ－Ｌｕｃルシフェラーゼに基づくマイクロ中和アッセイを使用して、１、８、１５、２２、２９、３６、５７、１８２および３６５日目に、すべての群において血清中和抗体（ＳＮＡ）を評価した。８０％中和（ＮＴ８０）のカットオフを使用して力価を決定した。１５、４０、６０、８０、１００、１６０および６４０の閾値のまたはそれらを上回るＮＴ８０を示す対象のパーセントとともに、各時点で幾何平均力価（ＧＭＴ）を計算した。１日目以降の全ての時点で、ＧＭＴに対する分散分析および様々な閾値定義に到達する対象のカテゴリパーセンテージに対するフィッシャーの直接確率検定によって、群１と他の全ての群との間で統計的比較を行った。

処置は研究全体で十分に忍容され、ワクチンに関連する有意な安全性の懸念は特定されなかった。ワクチン接種後の患者の２回目の中間解析は、患者の最大９８％が８日目までに（７日以内に）ＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を生じたことを示している（図１４）。抗体陽転は、１回の投与後７日以内に対象の７４％～９８％であった。抗体陽転は、最終投与の２８日後までに全ての対象において観察された。この免疫応答は、６ヶ月の来院を通して持続することが示された。

ワクチン接種後３６５日目に血清中和も分析した。群５の１名の対象を除いて、全ての対象は、１日目の注射前に、検出の下限を下回るＣＨＩＫＶ－Ｌｕｃ ＳＮＡ価を有した（図１５および表８）。最初の実薬注射（active injection）の７日後（すなわち、群１～４については８日目、群５～７については２２日目、群８については３６日目）までに、全ての群で免疫応答が観察された。これらの初期時点でのＧＭＴは、群２の３４．０から群８の１５７．９までの範囲であった。群１～４では、最初のピークＧＭＴが２２日目（最初の実薬注射の２１日後）に生じた。群２、３および４は、３２７．５、１２８６．７および２１２３．４のピークＧＭＴを有し、用量反応効果を実証した。さらに、群４のピークＧＭＴは、群１の６９６．５のピークＧＭＴより高く（ｐ＜０．０００１）、ａｌｕｍのアジュバント効果を実証した。群５～７では、２２日目および２９日目でのＧＭＴも用量反応を実証した。これらのＧＭＴ結果を図１７にさらに要約する。単回４０μｇ用量（群８）が最良の反応持続期間を有した。

第２の投与後、第２のピークＧＭＴが３６日目に生じ、同じく用量反応を示した。また、３６日目のＧＭＴは、全ての２回投与群において、全てのより早期のＧＭＴより高く、第２の投与に対する既往性反応の強さを実証した。全ての群において最後の実薬注射の２８日後であった５７日目に、群１のＧＭＴは１９４６．０であった。アジュバント添加群のＧＭＴは、群５の９１４．０から群４の１８８４．４までの範囲であり、群８が２番目に高い１７１１．８のＧＭＴを有していた。ＧＭＴは全ての群において５７日目から１８２日目まで減少し、１８２日目の時点で、ＧＭＴは群２の１９１．７から群８の４６２．５までの範囲であった。ＧＭＴは、群１の２４４．８のＧＭＴより高い４６６．２のＧＭＴを有した（ｐ＝０．００５８）群８を除くすべての群で３６５日目にさらに減少した。全ての群についての３６５日目での力価の逆累積分布を図１６に示す。最高の力価は群８に存在した。これらの結果は、群８（４０μｇ／ａｄｊ．の単回用量）が、それぞれ２回に分けて用量を投与された群１～７および９と比較して、３６５日の期間にわたって最高の力価を維持したことを示す。

４０またはそれを超える閾値ＮＴ８０を用いて、抗体応答率（ＳＲ）の分析を行った。この閾値は、アッセイ比較および疫学データに基づいて選択された。４０以上（表９）、１６０以上（表１０）および６４０以上（表１１）のＣＨＩＫ－Ｌｕｃ血清陽性を有する患者で、抗体応答結果が示されている。１５以上および４０以上の抗ＣＨＩＫＶ中和力価（ＮＴ８０）を有する各群中の対象の計算されたパーセンテージが、それぞれ図１８Ａおよび図１８Ｂに示されている。

最初の実薬注射の７日後に、ＳＲは群２の４０．０％から群８の８６．０％までの範囲であった。７７．６％の群４ＳＲは、６０．４％の群１ＳＲよりも数値的に高く、ＧＭＴ結果によって示されるアジュバント効果と一致したが、統計的有意性はなかった（ｐ＝０．０８７２）。群１および群４は、２２日目までに１００％のＳＲに達した。群８には、比較するための、最初の注射後２１日の同様の時点は存在しなかった。群８は、１回投与の７日後に最も高い抗体陽転を有した。

５７日目に、ＳＲは、群１（９８．０％）および群３（９７．９％）を除く全ての群で１００％であった。１８２日目までに、ＳＲはいくつかの群で低下し、群２の９０．９％から群１、４および５の１００％までの範囲であった。群８のＳＲは９５．９％であった。１８２日目から３６５日目まで、ＳＲは全ての群で低下し、群２の８５．０％から群５の９７．６％までの範囲であった。群８のＳＲは９５．６％であり、１８２日目よりもわずかに低かった。

６４０というより厳格な閾値を使用して、ＳＲのさらなる分析を行った。最初の注射から７日後のＳＲは、群６の３．８％から群８の１８％までの範囲であった。５７日目に、ＳＲは群５の６０．８％から群４の９１．８％の範囲であった。群８のＳＲは８８．０％であった。１８２日目までに、ＳＲは全ての群で低下し、群２の１１．４％から群８の４４．９％までの範囲であった。３６５日目までに、ＳＲは、全ての群で再び減少したが、群８では、４４．４％まで最小限に減少するに留まった。群８は、３６５日目に最も高いＧＭＴを有し、１８２日目からの減少が最も小さい。

まとめると、これらのデータは、免疫応答が３６５日目まで持続したことを示す。ワクチン接種された群は、４０の閾値で高い（８５％）３６５日血清陽性を有していた。
実施例７：ヒト臨床試験（第３相）のための剤形

ＣＨＩＫＶ ＶＬＰは、実施例１に記載されているように、ＣＨＩＫＶ構造タンパク質遺伝子をコードする発現プラスミドでＨＥＫ２９３細胞を形質移入することによって作製した。手短に言えば、発現されたタンパク質はＶＬＰへと自己集合し、次いで、それを、細胞培養培地から採取および精製した。限外濾過、透析濾過および陰イオン交換クロマトグラフィーによってＶＬＰを精製し、次いで滅菌濾過した。ＶＬＰを適切な量の製剤緩衝液と混合し、次いで、無菌水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）２％）に吸着させた。

０．８ｍＬの単回用量のプレフィルドシリンジで利用可能な筋肉内投与用の無菌懸濁剤として、水酸化アルミニウムアジュバントを含むＣＨＩＫＶ ＶＬＰを製剤化した。各０．８ｍＬ用量は、約４０μｇのＣＨＩＫＶ－ＶＬＰ、３００μｇのアルミニウム（水酸化アルミニウムアジュバントとして）と、５９．７ｍｇのスクロースと、０．４ｍｇのリン酸二水素カリウムと、０．９ｍｇのリン酸一水素カリウムと、５．９ｍｇのクエン酸ナトリウム二水和物と、注射用水とを含有する。ワクチンは、防腐剤または抗生物質を含有しない。

本試験では、ワクチンは、単回０．８ｍＬ用量として筋肉内に投与される。ワクチンは上腕の三角筋領域中に筋肉内投与されるべきである。

ＣＨＩＫＶ－ＶＬＰ＋ａｌｕｍワクチンまたはプラセボの１回投与後にＳＮＡ応答を比較する無作為化多施設プラセボ対照臨床試験において、１２歳から６４歳までの対象における有効性を評価する。試験は米国において実施され、年齢によって層別化される（１２歳～１７歳、１８歳～４５歳および４６歳～６４歳）。本試験には約３１５０名の参加者が登録され、参加者はＣＨＩＫＶ－ＶＬＰ＋Ａｌｕｍワクチン（ｎ＝２７００）またはプラセボ（ｎ＝４５０）の投与を受けるように無作為化された。

すべての年齢群について、ＣＨＩＫＶ ＮＴ８０血清中和抗体（ＳＮＡ）の測定値から有効性が推測される。対象におけるワクチンの有効性は、ＣＨＩＫＶ－ＶＬＰ＋Ａｌｕｍによる免疫に対するＳＮＡ応答をプラセボによる免疫後のものと比較することによって評価される。主要な有効性評価項目は、ワクチン接種２２日後のＳＮＡ抗体応答であり得る。いくつかの局面において、抗体応答は、４０以上のワクチン接種後ＳＮＡ価として定義され得る。二次評価項目は、ＳＮＡ幾何平均力価（ＧＭＴ）を含んだ。
実施例８：ＣＨＩＫ ＶＬＰをワクチン接種された対象からのヒトＩｇＧはカニクイザルを刺激から保護する

プールした血漿からＩｇＧを精製した。収集された血漿は、１日および２９日目にａｌｕｍを含む２０μｇのＣＨＩＫ ＶＬＰの２回投与でワクチン接種されたたヒト対象（実施例６に記載の第２相臨床試験の群９）から４２～５６日目の間に収集した。用量群あたり６匹のＮＨＰを用いて、１００、１５および５ｍｇ／ｋｇの用量で、精製されたＩｇＧをカニクイザルに投与した。６匹のＮＨＰの対照群に非特異的な精製されたＩｇＧを投与した。ＩｇＧ投与の２４時間後に、ＣＨＩＫＶ ＬＲ２００６－ＯＰＹ１（１０^７ＰＦＵ）でＮＨＰを刺激した。刺激の時点で、平均循環ＳＮＡ価は、１００、１５および５ｍｇ／ｋｇ用量群でそれぞれ１：６４４、１：１０１および１：３８であった。

これらのＮＨＰではいずれの時点においても感染ウイルスは観察されなかったので、刺激された動物由来の血清に対するプラークアッセイによって測定されたところによると、結果は、ＣＨＫ ＶＬＰでワクチン接種された対象由来の精製されたＩｇＧが、ウイルス血症からＮＨＰを保護したことを示した。全ての対照動物は、検出可能な感染ウイルスを有していた。関節病変スコアは、対照動物と比較して、ＩｇＧの投与が関節病変スコアの低下を引き起こすことを実証している。関節組織のＲＴ－ＰＣＲ分析は、ＩｇＧの投与がｖＲＮＡ／ｇ組織の量を低下させることを示す。
実施例９：カニクイザルチクングニア刺激において試験されたＣＨＩＫ ＶＬＰワクチン接種された対象由来のヒトＩｇＧ

ＩｇＧは、ａｌｕｍを含む４０μｇのＣＨＩＫ ＶＬＰの１回用量でワクチン接種されたヒト対象から収集されたプールされた血漿から精製される。精製されたＩｇＧを様々な用量でカニクイザルに投与する。対照群には、非特異的な精製されたＩｇＧを投与する。ＩｇＧ投与の２４時間後に、ＣＨＩＫＶ ＬＲ２００６－ＯＰＹ１で皮下にＮＨＰを刺激する（例えば、１０^５ＰＦＵ）。例えば血清／血漿試料のプラークアッセイおよび／またはｑＰＣＲによって、ウイルス血症についてＮＨＰを評価する。

概要および要約のセクションは、本発明者（単数または複数）によって企図される本開示の１またはそれを超えるがすべてではない例示的な態様を記載することができ、したがって、本発明および添付の特許請求の範囲を決して限定することを意図するものではない。

特定の態様の前述の記載は、本発明の一般的な性質を完全に明らかにするので、他の者は、本技術分野の範囲内である知識を適用することによって、本発明の一般的な概念から逸脱することなく、過度の実験を行わずにそのような特定の態様を様々な用途のために容易に修正および／または適合させることができる。したがって、このような適合および修正は、本明細書に提示された教示および指針に基づいて、開示された態様の均等物の意義および範囲内にあることが意図されている。本明細書の表現または用語は、限定ではなく説明を目的とするものであり、本明細書の用語または表現は当業者によって前記教示および指針に照らして解釈されるべきことを理解されたい。

本発明の幅および範囲は、上記の例示的な態様のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲およびそれらの均等物に従って定義されるべきである。

Claims (76)

1. （ａ）チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）と、（ｂ）水酸化アルミニウムアジュバントと、（ｃ）糖と、（ｄ）バッファーおよび／またはｐＨ調整剤と、（ｅ）担体と、を含む組成物またはワクチン。
2. チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）由来の、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む組成物またはワクチンであって、前記組成物またはワクチンは、（ｉ）対象への前記組成物もしくはワクチンの単回用量の投与後７日以内に前記対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、および／または（ｉｉ）単回用量が前記対象に投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、もしくは少なくとも２年間持続するＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、組成物またはワクチン。
3. アジュバントをさらに含む、請求項２に記載の組成物またはワクチン。
4. 前記アジュバントが水酸化アルミニウムアジュバントである、請求項３に記載の組成物またはワクチン。
5. 前記アジュバントが水酸化アルミニウムゲルである、請求項１、３または４のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
6. 前記キャプシドタンパク質がＣＨＩＫＶ Ｃタンパク質である、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
7. 前記エンベロープタンパク質が、Ｅ３、Ｅ２、６Ｋ、Ｅ１およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＣＨＩＫＶタンパク質である、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
8. 前記ＶＬＰがＣＨＩＫＶエンベロープタンパク質Ｅ２およびＥ１を含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
9. 前記ＶＬＰが、ＣＨＩＫＶ Ｃ、Ｅ２およびＥ１タンパク質を含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
10. 前記ＣＨＩＫＶ Ｃ、Ｅ２およびＥ１タンパク質が、前記組成物またはワクチン中の前記ＶＬＰタンパク質の少なくとも９５％である、請求項９に記載の組成物またはワクチン。
11. 前記ＶＬＰがＣＨＩＫＶ Ｅ３および／または６Ｋを含まない、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
12. 前記キャプシドおよびエンベロープタンパク質が、ＣＨＩＫＶ株３７９９７に由来する、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
13. 筋肉内注射に適した懸濁剤である、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
14. 前記組成物またはワクチンの単回用量が約６μｇ～２００μｇのＶＬＰを含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
15. 前記組成物またはワクチンの前記単回用量が約２０μｇ～１００μｇのＶＬＰを含む、請求項１４に記載の組成物またはワクチン。
16. 前記組成物またはワクチンの単回用量が、約２５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬのＶＬＰを含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
17. 前記単回用量が約４０μｇまたは約５０μｇ／ｍＬのＶＬＰを含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の組成物またはワクチン。
18. 前記組成物またはワクチンの単回用量が、水酸化アルミニウムゲルを約３０μｇ～３０００μｇの量で含む、請求項５～１７のいずれか一項に記載の組成物またはワクチン。
19. 前記組成物またはワクチンの前記単回用量が、水酸化アルミニウムゲルを約１００μｇ～５００μｇの量で含む、請求項１８に記載の組成物またはワクチン。
20. 前記単回用量が２５０μｇ／ｍＬ～６２５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲルを含む、請求項１８または１９に記載の組成物またはワクチン。
21. 前記単回用量が、約３００μｇまたは約３７５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲルを含む、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の組成物またはワクチン。
22. 前記組成物またはワクチンの単回用量が約０．５ｍＬ～２ｍＬの体積を含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
23. 前記組成物またはワクチンの前記単回用量が約０．５ｍＬ～１ｍＬの体積を含む、請求項２２に記載の組成物またはワクチン。
24. 糖をさらに含む、請求項２～２３のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
25. 前記糖が、スクロース、ラクトースおよびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項２４に記載の組成物またはワクチン。
26. 前記糖がスクロースである、請求項２５に記載の組成物またはワクチン。
27. バッファーおよび／またはｐＨ調整剤をさらに含む、請求項２～２６のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
28. 前記バッファーおよび／またはｐＨ調整剤が、リン酸二水素カリウム、リン酸一水素カリウム、クエン酸ナトリウム二水和物およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項２７に記載の組成物またはワクチン。
29. 前記組成物またはワクチンが防腐剤または抗生物質を含まない、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
30. 前記組成物またはワクチンの単回用量が、（ａ）約６μｇ～６０μｇの前記ＶＬＰと、（ｂ）約２００μｇ～５００μｇの水酸化アルミニウムとを含み、前記単回用量体積が約０．５ｍＬ～１．０ｍＬである、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
31. 前記組成物またはワクチンの前記単回用量が、（ａ）約６μｇ～６０μｇの前記ＶＬＰと、（ｂ）約２００μｇ～５００μｇの前記水酸化アルミニウムと、（ｃ）約２０ｍｇ～８０ｍｇのスクロースと、（ｄ）約０．２ｍｇ～１．０ｍｇのリン酸二水素カリウムと、（ｅ）約０．２ｍｇ～１．５ｍｇのリン酸一水素カリウムと、（ｆ）約２ｍｇ～１０ｍｇのクエン酸ナトリウム二水和物と、（ｇ）水とを含み、前記単回用量体積が約０．５ｍＬ～１．０ｍＬである、請求項３０に記載の組成物またはワクチン。
32. 前記組成物またはワクチンの単回用量が約０．８ｍＬの体積である、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
33. 前記ＶＬＰがＣＨＩＫＶの同種または異種の株に対する抗体を誘導する、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
34. 前記ＶＬＰが、東／中央／南アフリカ（ＥＣＳＡ）、西アフリカおよびアジアからなる群から選択される１またはそれを超えるＣＨＩＫＶ系統に対する抗体を誘導する、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
35. 対象への前記組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に、前記対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、請求項１および５～３４に記載の組成物またはワクチン。
36. ＣＨＩＫＶに対する前記中和抗体応答が、単回用量が投与された後少なくとも２８日間維持される、請求項２～３５のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
37. ＣＨＩＫＶに対する前記中和抗体応答が、前記単回用量が投与された後少なくとも６ヶ月間維持される、請求項３６に記載の組成物またはワクチン。
38. ＣＨＩＫＶに対する前記中和抗体応答が、前記単回用量が投与された後、少なくとも１年間、少なくとも１８ヶ月間、または少なくとも２年間維持される、請求項３７に記載の組成物またはワクチン。
39. 血清中和抗体価が、前記組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に３０以上または４０以上である、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
40. 前記組成物またはワクチンが、前記組成物の前記単回用量の投与後７日以内に、対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
41. 前記組成物またはワクチンが、単回用量が前記対象に投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間持続するＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
42. 前記組成物またはワクチンが、（ｉ）対象への前記組成物もしくはワクチンの単回用量の投与後７日以内に前記対象においてＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、および（ｉｉ）単回用量が前記対象に投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、もしくは少なくとも２年間持続するＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、前記請求項のいずれかに記載の組成物またはワクチン。
43. 請求項１～４２のいずれか一項に記載の組成物またはワクチンの単回用量を含むプレフィルドシリンジ。
44. 対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する免疫応答および／または防御免疫を誘導する方法であって、請求項１～４２のいずれか一項に記載の組成物またはワクチンを前記対象に投与することを含む、方法。
45. 対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する中和抗体応答を誘導する方法であって、請求項１～４２のいずれか一項に記載の組成物またはワクチンを前記対象に投与することを含む、方法。
46. 対象におけるチクングニア感染を処置し、予防し、またはチクングニア感染のリスクを低減するための方法であって、有効量の、請求項１～４２のいずれか一項に記載の組成物またはワクチンを前記対象に投与することを含む、方法。
47. ＣＨＩＫＶ感染に対して対象にワクチン接種する方法であって、有効量の、請求項１～４２のいずれか一項に記載の組成物またはワクチンを前記対象に投与することを含む、方法。
48. 対象においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する免疫応答および／または防御免疫を誘発する方法であって、（ａ）ＣＨＩＫＶに由来する、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）と、（ｂ）アジュバントとを含む組成物またはワクチンを前記対象に投与することを含み、前記組成物またはワクチンの単回用量が約６μｇ～２００μｇのＶＬＰを含み、前記組成物またはワクチンの前記単回用量の投与が、（ｉ）投与の７日以内に前記対象においてＣＨＩＫＶ特異的中和抗体の産生を誘発し、および／または（ｉｉ）単回用量が前記対象に投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間持続するＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を誘導する、方法。
49. 集団においてチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に対する防御免疫を誘導する方法であって、（ａ）ＣＨＩＫＶに由来する、キャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）と、（ｂ）アジュバントとを含む組成物またはワクチンを前記集団に投与することを含み、前記組成物またはワクチンの単回用量が約６μｇ～２００μｇのＶＬＰを含み、前記集団の少なくとも６０％が、（ｉ）前記組成物もしくはワクチンの前記単回用量の投与後７日以内にＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を生じる、および／または（ｉｉ）単回用量が前記対象に投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間持続するＣＨＩＫＶに対する中和抗体を産生する、方法。
50. 前記集団の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、または少なくとも９８％が、前記組成物またはワクチンの単回用量の投与後７日以内に３０以上または４０以上の血清中和抗体価を生成する、請求項４９に記載の方法。
51. 前記集団の少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％が、前記組成物またはワクチンの単回用量の投与後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間、３０以上または４０以上の血清中和抗体価を維持する、請求項４９または５０に記載の方法。
52. 単回用量が２０μｇ～２００μｇのＶＬＰを含む、請求項４４～５１のいずれか一項に記載の方法。
53. 単回用量が約２５μｇ／ｍＬ～７５μｇ／ｍＬのＶＬＰを含む、請求項４４～５２のいずれかに記載の方法。
54. 前記単回用量が約４０μｇまたは約５０μｇ／ｍＬのＶＬＰを含む、請求項５３に記載の方法。
55. 前記組成物またはワクチンが、３０μｇ～３０００μｇの水酸化アルミニウムゲルを含む、請求項４４～５４のいずれか一項に記載の方法。
56. 前記水酸化アルミニウムゲルが約２５０μｇ／ｍＬ～６２５μｇ／ｍＬの量である、請求項５５に記載の方法。
57. 前記組成物またはワクチンが、約３００μｇまたは３７５μｇ／ｍＬの水酸化アルミニウムゲルを含む、請求項４４～５６のいずれか一項に記載の方法。
58. 前記組成物またはワクチンが、（ａ）約６～４０μｇのＶＬＰと、（ｂ）約２００～５００μｇの水酸化アルミニウムと、（ｃ）糖と、（ｄ）バッファーおよび／またはｐＨ調整剤と、（ｅ）水とを含む、請求項４４～５７のいずれか一項に記載の方法。
59. 前記組成物またはワクチンが、（ａ）約６～４０μｇのＶＬＰと、（ｂ）約２００～５００μｇの水酸化アルミニウムと、（ｃ）約２０～８０ｍｇのスクロースと、（ｄ）約０．２～１．０ｍｇのリン酸二水素カリウムと、（ｅ）約０．２～１．５ｍｇのリン酸一水素カリウムと、（ｆ）約２～１０ｍｇのクエン酸ナトリウム二水和物と、（ｇ）水とを含む、請求項５８に記載の方法。
60. 第１の用量が約０．５ｍＬ～１ｍＬの量で投与される、請求項４４～５９のいずれか一項に記載の方法。
61. 前記第１の用量が約０．８ｍＬの量で投与される、請求項６０に記載の方法。
62. 前記中和抗体応答が、ＣＨＩＫＶの複数の血清型に対して前記対象にワクチン接種する、請求項４４～６１のいずれか一項に記載の方法。
63. ＣＨＩＫＶに対する前記中和抗体応答が、前記単回用量が投与された後、少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間、または少なくとも２年間維持される、請求項４４～６２のいずれか一項に記載の方法。
64. 前記組成物またはワクチンの第２の用量が、前記単回用量の少なくとも２８日後、少なくとも６ヶ月後、または少なくとも１年後に前記対象に投与される、請求項４４～６３のいずれか一項に記載の方法。
65. ＣＨＩＫＶに対する前記中和抗体応答が、前記第２の用量の投与後少なくとも６ヶ月間維持される、請求項６４に記載の方法。
66. ＣＨＩＫＶに対する前記中和抗体応答が、前記第２の用量の投与後少なくとも１年間維持される、請求項６５に記載の方法。
67. 前記対象の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％が、前記組成物またはワクチンの投与の７日後にＣＨＩＫＶに対する中和抗体応答を生じた、請求項４４～６６のいずれか一項に記載の方法。
68. 抗体応答率が、前記組成物またはワクチンの投与後７日、２８日、１年、または２年に、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％である、請求項４４～６７のいずれか一項に記載の方法。
69. 前記血清中和抗体価が３０以上または４０以上である、請求項４４～６８のいずれか一項に記載の方法。
70. 前記組成物またはワクチンが筋肉内に投与される、請求項４４～６９のいずれか一項に記載の方法。
71. 前記組成物またはワクチンが有効量で投与される、請求項４４～７０のいずれか一項に記載の方法。
72. 前記方法が、投与の７日以内に前記対象においてＣＨＩＫＶ特異的中和抗体の産生を誘発し、単回用量が前記対象に投与された後少なくとも２８日間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１年間または少なくとも２年間持続するＣＨＩＫＶに対する前記中和抗体応答を誘導する、請求項４４～７１のいずれか一項に記載の方法。
73. 対象がヒトである、前記請求項のいずれかに記載の組成物、ワクチンまたは方法。
74. 前記組成物またはワクチンの投与より前に、対象がＣＨＩＫＶ抗原またはＣＨＩＫＶワクチンに曝露されなかった、前記請求項のいずれかに記載の組成物、ワクチンまたは方法。
75. 前記組成物またはワクチンの投与より前に、対象が検出可能なＣＨＩＫＶ抗体価を有さない、前記請求項のいずれかに記載の組成物、ワクチンまたは方法。
76. 前記組成物またはワクチンの投与より前に、対象が、５以下の検出可能なＣＨＩＫＶ抗体価を有する、前記請求項のいずれかに記載の組成物、ワクチンまたは方法。

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