TW202035435A - 無菌層析法樹脂及其於製程中之用途 - Google Patents

無菌層析法樹脂及其於製程中之用途 Download PDF

Info

Publication number
TW202035435A
TW202035435A TW108130986A TW108130986A TW202035435A TW 202035435 A TW202035435 A TW 202035435A TW 108130986 A TW108130986 A TW 108130986A TW 108130986 A TW108130986 A TW 108130986A TW 202035435 A TW202035435 A TW 202035435A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
chromatography
resin
column
chromatography resin
bioburden
Prior art date
Application number
TW108130986A
Other languages
English (en)
Inventor
羅翰 帕提爾
查德 瓦爾納
Original Assignee
美商健臻公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商健臻公司 filed Critical 美商健臻公司
Publication of TW202035435A publication Critical patent/TW202035435A/zh

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/02—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using physical phenomena
    • A61L2/08—Radiation
    • A61L2/081—Gamma radiation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/18—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns
    • B01D15/1864—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns using two or more columns
    • B01D15/1885—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns using two or more columns placed in parallel
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
    • B01D15/361—Ion-exchange
    • B01D15/363—Anion-exchange
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G, L chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28014—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their form
    • B01J20/28052—Several layers of identical or different sorbents stacked in a housing, e.g. in a column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3071—Washing or leaching
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J41/00—Anion exchange; Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
    • B01J41/04—Processes using organic exchangers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J41/00—Anion exchange; Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
    • B01J41/08—Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
    • B01J41/12—Macromolecular compounds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J47/00—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor
    • B01J47/014—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor in which the adsorbent properties of the ion-exchanger are involved, e.g. recovery of proteins or other high-molecular compounds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J47/00—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor
    • B01J47/02—Column or bed processes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J49/00—Regeneration or reactivation of ion-exchangers; Apparatus therefor
    • B01J49/60—Cleaning or rinsing ion-exchange beds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2202/00—Aspects relating to methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects
    • A61L2202/20—Targets to be treated
    • A61L2202/21—Pharmaceuticals, e.g. medicaments, artificial body parts
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/52—Sorbents specially adapted for preparative chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本文提供了減少層析樹脂的生物負載的方法，所述方法包括：將包含含有(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物的容器暴露於足以減少所述容器和所述層析樹脂的生物負載的劑量的γ-照射，其中所述至少一種醇的存在量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後/之時結合能力的損失。還提供了包含所述生物負載減少的層析樹脂的生物負載減少的層析柱；包含層析樹脂和含至少一種醇的液體的組合物；使用這些生物負載減少的層析柱中的一個執行生物負載減少的柱層析的方法；以及用於以減少生物負載的方式製備純化的重組蛋白的整合、封閉且連續的方法。

Description

無菌層析法樹脂及其於製程中之用途 【相關申請的交叉引用】
本申請案主張2018年8月31日提交的美國臨時專利申請序列號62/726,043的優先權；其全部內容通過引用併入本文中。
本發明涉及重組蛋白的生物技術和生物製造的方法。
通常使用包括編碼重組蛋白的核酸的哺乳動物細胞來生產治療上或商業上重要的蛋白質。在當前不同產品管線的環境中，生物技術公司越來越多地致力於開發創新的解決方案來高度靈活且成本有效地製造治療性蛋白藥物。有效分離重組蛋白的策略之一是通過包括連續層析(例如，使用封閉系統)的方法進行。連續層析的一個已知限制是系統中存在污染物(例如，增加的生物負載)，這導致系統中產物被污染的、產率降低、以及流速降低(或壓力增加)。例如，系統內增加的生物負載可能導致系統完全停工。
本發明至少部分地基於以下發現：γ-照射層析樹脂降低了層析樹脂的結合能力，並且在至少一種醇存在下照射可以有助於防止這種由γ-照射引起的層析樹脂結合能力的降低。鑑於這個發現，本文提供了減少層析樹脂的生 物負載的方法，所述方法包括：將包含含有(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物的容器暴露於足以減少所述容器和所述層析樹脂的生物負載的劑量的γ-照射，其中至少一種醇的存在量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後/之時結合能力的損失。還提供了含有通過本文所述的任何方法製備的生物負載減少的層析樹脂的生物負載減少的層析柱；包含(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物；使用這些生物負載減少的層析柱中的至少一個執行生物負載減少的柱層析的方法；以及用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉或基本上封閉且連續的方法，所述方法包括使用這些生物負載減少的層析柱中的至少一個。通過本文所述的任何方法生產的任何層析樹脂、通過本文所述的任何方法生產的任何填充層析柱、執行柱層析的任何方法和本文所述的任何方法都可以是滅菌的，絕對滅菌的，無菌的或生物負載減少的。通過本文所述的任何方法生產的任何層析樹脂、通過本文所述的任何方法生產的任何層析柱和本文所述的任何方法都可以是無菌的和滅菌的，絕對滅菌的，無菌的或生物負載減少的。
本文提供了減少層析樹脂的生物負載的方法，所述方法包括：將包含含有(i)層析樹脂和(ii)包含至少一種醇的液體的組合物的容器暴露於足以減少所述容器和所述層析樹脂的生物負載的劑量的γ-照射，其中至少一種醇的存在量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。
在一些實施例中，所述方法還可以包括在暴露之前將組合物佈置於容器中。
在一些實施例中，容器是儲存器皿(vessel)。
在一些實施例中，容器是層析柱。
在一些實施例中，容器是填充層析柱。
在一些實施例中，組合物是沉降的層析樹脂的漿料。
在一些實施例中，組合物是潤濕的固體混合物。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，該至少一種醇係選自：苄醇、環己醇、異丁醇、2-甲基-2-丁醇、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丙-1-醇、丁-1-醇、 戊-1-醇、十六烷-1-醇、2-苯基乙醇、仲苯基乙醇、3-苯基-1-丙醇、1-苯基-1-丙醇、2-苯基-1-丙醇、2-苯基-2-丙醇、1-苯基-2-丁醇、2-苯基-1-丁醇、3-苯基-1-丁醇、4-苯基-2-丁醇、dl-1-苯基-2-戊醇、5-苯基-1-戊醇和4-苯基-1-丁醇。
在一些實施例中，該至少一種醇包括苄醇。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，液體中該一種或多種醇的總和濃度為約0.01v/v%至約10v/v%。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，液體還可以包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑。
在一些實施例中，液體包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑，其量足以改善層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，液體包含至少一種選自以下的抗氧化劑：還原型谷胱甘肽、還原型硫氧還蛋白、還原型半胱胺酸、類胡蘿蔔素、褪黑激素、番茄紅素、生育酚、還原型泛醌、抗壞血酸鹽、膽紅素、尿酸、硫辛酸、類黃酮、酚丙酸(phenolpropanoid acid)、利多卡因(lidocaine)、柚皮素(naringenin)、富勒烯、葡萄糖、甘露糖醇、4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基和二甲基甲氧基色原烷醇(chromanol)。
在一些實施例中，液體包含至少一種選自以下的抗氧化劑：甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
在一些實施例中，液體包含甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，液體包含：(i)75mM與約125mM之間的甘露糖醇；(ii)75mM與約125mM之間的甲硫胺酸；(iii)75mM與約125mM之間的抗壞血酸鈉；(iv)75mM與約125mM之間的組胺酸；(v)30mM與約70mM之間的甲硫胺酸和約30mM與約70mM之間的組胺酸；(vi)約10mM與約50mM之間的甲硫胺酸、約10mM與約50mM之間的組胺酸和約10mM與約50mM之間的抗壞血酸鈉；或(vii)約5mM與約45mM之間的抗壞血酸鈉、約5mM與約45mM之間的甲硫胺酸、約5mM與約45mM之間的甘露糖醇和約5mM與約45mM之間的組胺酸。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，液體是緩衝溶液。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，液體包含至少一種選自以下的螯合劑：乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巰基-1-丙磺酸鈉(DMPS)、二巰基丁二酸(DMSA)、金屬硫蛋白(metallothionin)和去鐵胺(desferroxamine)。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，層析樹脂係選自由下列組成之群組：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
在一些實施例中，組合物包括含有蛋白質配位體的親和層析樹脂。
在一些實施例中，蛋白質配位體是蛋白A。
在一些實施例中，組合物包括陰離子交換層析樹脂。
在一些實施例中，陰離子交換層析樹脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，劑量為約15kGy至約45kGy之間。
在一些實施例中，劑量為約20kGy至約30kGy之間。
在一些實施例中，劑量為約23kGy與約27kGy之間。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，暴露是在如下溫度下執行：約-25℃與約0℃之間，包括端點。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，暴露是在如下溫度下執行：約0℃與約25℃之間，包括端點。
本文提供了通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的層析樹脂。
在一些實施例中，樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-8至約1 x 10-5之間。
在一些實施例中，樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-7至約1 x 10-6之間。
在本文所述的任何樹脂的一些實施例中，其中層析樹脂包括至少一種選自以下組成之群組的樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
在一些實施例中，層析樹脂包括含有蛋白質配位體的親和層析樹脂。
在一些實施例中，蛋白質配位體是蛋白A。
在一些實施例中，層析樹脂包括陰離子交換層析樹脂。
在一些實施例中，陰離子交換層析樹脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團。
本文提供了製備生物負載減少的填充層析柱的方法，所述方法包括：提供本文所述的任何生物負載減少的層析樹脂；和在無菌環境中將層析樹脂填充到生物負載減少的柱中。
本文提供了通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的填充層析柱。
本文提供了通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的填充層析柱。
在一些實施例中，填充樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-8至約1 x 10-5之間。
在一些實施例中，樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-7至約1 x 10-6之間。
在本文所述的任何樹脂的一些實施例中，填充柱中的樹脂包括至少一種選自以下組成之群組的樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
在一些實施例中，樹脂包括含有蛋白質配位體的親和或假親和層析樹脂。
在一些實施例中，配位體是蛋白A。
在一些實施例中，樹脂包括陰離子交換層析樹脂。
在一些實施例中，陰離子交換層析樹脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團。
本文提供了如下組合物，所述組合物包含(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體，其中至少一種醇的存在量足以改善層析樹脂在用足以減少組合物的生物負載的劑量的γ-照射處理時結合能力的損失。
在一些實施例中，組合物是沉降的層析樹脂的漿料。
在一些實施例中，組合物是潤濕的固體混合物。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，該至少一種醇係選自以下組成之群組：苄醇、環己醇、異丁醇、2-甲基-2-丁醇、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丙-1-醇、丁-1-醇、戊-1-醇、十六烷-1-醇、2-苯基乙醇、仲苯基乙醇、3-苯基-1-丙醇、1-苯基-1-丙醇、2-苯基-1-丙醇、2-苯基-2-丙醇、1-苯基-2-丁醇、2-苯基-1-丁醇、3-苯基-1-丁醇、4-苯基-2-丁醇、dl-1-苯基-2-戊醇、5-苯基-1-戊醇和4-苯基-1-丁醇。
在一些實施例中，該至少一種醇包括苄醇。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，液體中該一種或多種醇的總和濃度為約0.01v/v%至約10v/v%。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，液體還包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑。
在一些實施例中，液體還包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑，其量足以改善層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，液體包含至少一種選自以下組成之群組的抗氧化劑：還原型谷胱甘肽、還原型硫氧還蛋白、還原型半胱胺酸、類胡蘿蔔素、褪黑激素、番茄紅素、生育酚、還原型泛醌、抗壞血酸鹽、膽紅素、尿酸、硫辛酸、類黃酮、酚丙酸、利多卡因、柚皮素、富勒烯、葡萄糖、甘露糖醇、4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基和二甲基甲氧基色原烷醇。
在一些實施例中，液體包含至少一種選自以下組成之群組的抗氧化劑：甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
在一些實施例中，液體包含甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，液體包含：(i)75mM與約125mM之間的甘露糖醇；(ii)75mM與約125mM之間的甲硫胺酸；(iii)75mM與約125mM之間的抗壞血酸鈉；(iv)75mM與約125mM之間的組胺酸；(v)30mM與約70mM之間的甲硫胺酸和約30mM與約70mM組之間的胺酸；(vi)約10mM與約50mM之間的甲硫胺酸、約10mM與約50mM之間的組胺酸和約10mM與約50mM之間的抗壞血酸鈉；或(vii)約5mM至約45mM之間的抗壞血酸鈉、約5mM與約45mM之間的甲硫胺酸、約5mM與約45mM之間的甘露糖醇和約5mM與約45mM之間的組胺酸。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，液體是緩衝溶液。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，組合物包含至少一種選自以下的螯合劑：乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巰基-1-丙磺酸鈉(DMPS)、二統基丁二酸(DMSA)、金屬硫蛋白和去鐵胺。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，層析樹脂包括至少一種選自以下組成之群組的樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，樹脂包括含有蛋白質配位體的親和層析樹脂。
在一些實施例中，蛋白質配位體是蛋白A。
本文提供了執行生物負載減少的柱層析的方法，所述方法包括：(a)提供本文所述的任何生物負載減少的填充層析柱；和(b)在封閉系統中使用生物負載減少的填充層析柱和生物負載減少的緩衝液執行柱層析。
在一些實施例中，使用生物負載減少的填充層析柱連續執行生物負載減少的柱層析持續至少4天的時間段。
在一些實施例中，使用生物負載減少的填充層析柱連續執行生物負載減少的柱層析持續至少5天的時間段。
在一些實施例中，使用生物負載減少的填充層析柱連續執行生物負載減少的柱層析持續至少7天的時間段。
在一些實施例中，使用生物負載減少的填充層析柱連續執行生物負載減少的柱層析持續至少14天的時間段。
在一些實施例中，使用生物負載減少的填充層析柱連續執行生物負載減少的柱層析持續至少28天的時間段。
在一些實施例中，與未用γ-照射處理的相同樹脂相比，(a)中生物負載減少的填充層析柱中的樹脂具有約75%與約100%之間的結合能力百分比。
在一些實施例中，生物負載減少的填充層析柱中的樹脂包括至少一種選自以下組成之群組的樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
在一些實施例中，樹脂包括含有蛋白質配位體的親和層析樹脂。
在一些實施例中，蛋白質配位體是蛋白A。
在一些實施例中，樹脂包括陰離子交換層析樹脂。
本文提供了用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉且連續的方法，所述方法包括：(a)提供基本上不含細胞的包含重組蛋白的液體培養基；和(b)將液體培養基連續饋送到包含本文所述的任何生物負載減少的填充層析柱中的至少一個的多柱層析系統(MCCS)中；其中所述方法利用生物負載減少的緩衝液，是整合的，並且從液體培養基連續運行至來自MCCS的洗脫物，所述洗脫物是純化的重組蛋白。
在一些實施例中，MCCS執行至少兩個不同的單元操作。
在一些實施例中，所述方法包括柱切換。
在一些實施例中，MCCS執行捕獲重組蛋白和失活化病毒的單元操作。
在一些實施例中，MCCS執行捕獲和純化重組蛋白的單元操作。
在一些實施例中，MCCS包括至少兩個生物負載減少的填充層析柱。
在一些實施例中，MCCS是週期性逆流層析系統。
在一些實施例中，MCCS包括用於親和或假親和層析、陽離子交換層析、陰離子交換層析或尺寸排阻層析或其任何組合的多個柱。
在一些實施例中，MCCS包括用於親和層析的柱，並且在所述方法中用選自以下的捕獲機制執行親和層析：蛋白A結合捕獲機制、受質結合捕獲機制、抗體或抗體片段結合捕獲機制、適體結合捕獲機制和輔因子結合捕獲機制。
在一些實施例中，在所述方法中用蛋白A結合捕獲機制執行親和層析，並且重組蛋白是抗體或抗體片段。
本文提供了用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉且連續的方法，所述方法包括：(a)提供基本上不含細胞的包含重組蛋白的液體培養基；(b)將液體培養基連續饋送到第一多柱層析系統(MCCS1)中；(c)使用MCCS1捕獲液體培養基中的重組蛋白；(d)從MCCS1產生包含重組蛋白的洗脫物，並將洗脫物連續饋送到第二多柱層析系統(MCCS2)中；(e)將來自洗脫物的重組蛋白連續饋送到MCCS2中，並且隨後洗脫重組蛋白，從而產生純化的重組蛋白，其中：所述方法利用生物負載減少的緩衝液，是整合的，並且從液體培養基連續運行至純化的重組蛋白，並且MCCS1和/或MCCS2中的至少一個柱含有本文所述的任何生物負載減少的填充層析柱。
在一些實施例中，MCCS1和/或MCCS2執行至少兩個不同的單元操作。
在一些實施例中，所述方法涉及柱切換。
在一些實施例中，MCCS1執行捕獲重組治療性蛋白和失活化病毒的單元操作。
在一些實施例中，MCCS2執行純化和精製重組蛋白的單元操作。
在一些實施例中，MCCS1和/或MCCS2包括至少兩個層析柱。
在一些實施例中，MCCS1是第一週期性逆流層析系統(PCCS1)。
在一些實施例中，使用親和層析、陽離子交換層析、陰離子交換層析或尺寸排阻層析或其任何組合執行捕獲。
在一些實施例中，用選自以下的捕獲機制執行親和層析：蛋白A結合捕獲機制、受質結合捕獲機制、抗體或抗體片段結合捕獲機制、適體結合捕獲機制和輔因子結合捕獲機制。
在一些實施例中，用蛋白A結合捕獲機制執行親和層析，並且重組蛋白是抗體或抗體片段。
在一些實施例中，MCCS2是第二週期性逆流(PCCS2)層析系統。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，重組蛋白是治療性重組蛋白。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，所述方法還包括將純化的治療性重組蛋白配製成醫藥組合物。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，連續執行所述方法持續至少4天的時間段。
在一些實施例中，連續執行所述方法持續至少5天的時間段。
在一些實施例中，連續執行所述方法持續至少7天的時間段。
在一些實施例中，連續執行所述方法持續至少14天的時間段。
在一些實施例中，連續執行所述方法持續至少28天的時間段。
如本文所用，名詞前的詞語“一個”表示一個或多個所述特定名詞。例如，短語“生物負載減少的層析柱”表示“一個或多個生物負載減少的層析柱”。
術語“生物負載”是本領域已知的並且是指組合物(例如，固體或液體)和/或一個或多個物品的表面(例如，外部和/或內部表面)上存在的自複製的生物污染物的水平。例如，生物負載可以指存在於含有層析樹脂或填充層析樹脂的組合物中的自複製生物污染物(例如，填充層析柱中填充層析樹脂中存在的自複製生物污染物)。在其他例子中，生物負載可以指層析柱的內表面上和/或層析柱內層析樹脂內的自複製生物污染物(例如，層析柱內表面上的生物污染物和層析柱內填充層析樹脂中的生物污染物)。生物負載還可以指存在於液體(例如，在本文所述的任何方法或過程中使用的緩衝液)中的自複製生物污染物。自複製生物污染物的非限制性例子可以是細菌(例如，革蘭氏陽性或革蘭氏陰性細菌，或細菌孢子)、分枝桿菌、病毒(例如，囊泡狀病毒、卡奇穀病毒(Cache Valley virus)、細小病毒、皰疹病毒和布尼亞病毒(bunyavirus))、寄生蟲、真菌、酵母和原生動物。本文描述了用於測定生物負載的例示性方法。用於測定生物負載的其他方法是業界已知的。
術語“減少生物負載”是本領域已知的，並且是指組合物(例如，固體或液體)和/或一個或多個物品的表面(例如，外部和/或內部表面)上存在的自複製生物污染物水平的降低(例如，可偵檢的降低)。本文描述了用於減少層析樹脂(例如，填充層析樹脂)、緩衝液和/或層析柱(例如填 充層析柱)的生物負載的方法的非限制性例子。用於減少本文所述的任何組合物的生物負載的其他方法是業界已知的。
術語“生物負載減少的層析樹脂”意指如下層析樹脂，其經處理以降低層析樹脂中存在的自複製生物污染物的水平(例如，含有層析樹脂的組合物(例如漿料)中存在的自複製生物污染物水平可偵檢的降低)。例如，生物負載減少的層析樹脂可以是暴露於足以降低層析樹脂中自複製生物污染物的水平的劑量的γ-照射的樹脂(例如，含有層析樹脂的組合物，所述層析樹脂暴露於足以降低層析樹脂中自複製生物污染物的水平的劑量的γ-照射)。例如，生物負載減少的層析樹脂可以是如下樹脂，其暴露於約1kGy至約15kGy之間的γ-照射、約1kGy與約20kGy之間的劑量的γ-照射、約1kGy與約25kGy之間的劑量的γ-照射、約1kGy與約30kGy之間的劑量的γ-照射或約1kGy與約35kGy之間的劑量的γ-照射。本文描述了用於減少層析樹脂的生物負載的例示性方法。用於減少層析樹脂的生物負載的其他方法是業界已知的。
術語“生物負載減少的層析柱”意指如下層析柱(例如，填充層析柱)，其包含經處理的層析樹脂(例如，γ-照射的層析樹脂)，所述層析樹脂具有的自複製生物污染物的水平少於包含未處理的層析樹脂的相同層析柱中存在的自複製生物污染物的水平。例如，生物負載減少的層析柱可以包含滅菌保證水平為至少或約1 x 10-6、1 x 10-7、1 x 10-8、1 x 10-9或1 x 10-10的經處理層析樹脂。
術語“生物負載減少的緩衝液”是本領域已知的，並且意指如下經處理(例如，過濾、高壓處理和/或γ-照射)液體(例如，經處理的緩衝溶液)，其自複製污染物水平少於相同的未處理液體中發現的自複製污染物水平。例如，生物負載減少的緩衝液的滅菌保證水平可以是至少或約1 x 10-6、1 x 10-7、1 x 10-8、1 x 10-9或1 x 10-10。
“絕對滅菌”或“絕對滅菌的”是用於描述完全不含自複製生物污染物的組合物或過程的術語。例如，所述術語可以應用於γ-照射的層析樹脂，層析柱的內表面和內含物(例如，層析樹脂)和/或緩衝液。絕對滅菌的組合物或過程可以是潔淨的(當該術語是業界已知時)。
“滅菌的”或“滅菌”是用於描述滅菌保證水平為約或小於1.0 x 10-6(例如，約或小於1.0 x 10-7，約或小於1.0 x 10-8，約或小於1.0 x 10-9或1 x 10-10)的組合物或過程的術語。可以使用業界已知的許多經驗證生產方法判定組合物或過程是否是滅菌的。例如，滅菌的組合物或過程可以完全不含活的自複製生物污染物(例如，本文所述的任何自複製生物污染物)。滅菌的組合物或過程也可以是潔淨的(如同該術語在業界已知的)。
術語“滅菌”意指用於將組合物滅菌(如本文所定義)的經驗證的方法。可以量測處理過程期間抗性指示物自複製生物污染物(例如，細菌)的失活化率，以判定組合物是否已達到滅菌(如本文所定義)。
術語“滅菌保證水平”或“SAL”是本領域已知的並且意指在一批處理單元內實現絕對滅菌的置信水平。所述概率通常基於驗證期間執行的失活化研究的結果計算，並以1 x 10-n的形式表示。
術語“無菌”用於描述不含引起疾病或引起症狀的自複製生物污染物(例如，本文所述的任何自複製生物污染物)的組合物或過程。無菌組合物或過程也可以是潔淨的(當該術語是業界已知時)。
術語“單元操作”是本領域的術語，並且意指可以在從液體培養基純化重組蛋白的方法中執行的功能步驟。例如，操作單元可以是過濾(例如，從含重組蛋白的流體中去除污染細菌、酵母、病毒和/或分枝桿菌和/或顆粒物質)、捕獲、去除表位標簽、純化、保持或儲存、精製、病毒失活化、調節含重組蛋白的流體的離子濃度和/或pH和去除不需要的鹽。
術語“捕獲”意指執行來從液體培養基或稀釋的液體培養基中存在的一種或多種其他組分(例如培養基蛋白或哺乳動物細胞中存在或從哺乳動物細胞分泌的一種或多種其他組分(例如，DNA、RNA或其他蛋白質))部分純化或分離(例如，按重量計至少或約5%(例如，至少或約10%、15%、20%、25%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或至少或約95%)純)並濃縮重組蛋白(例如，重組治療性蛋白)的步驟。典型地，使用結合重組蛋白的層析樹脂(例如，通過使用親和層析)執行捕獲。本文描述了用於從液體培養基或稀釋的液體培養基捕獲重組蛋白的非限制性方法，並且其他方法是業界已知的。可以使用至少一個 層析柱和/或層析膜(例如，本文所述的任何層析柱和/或層析膜)從液體培養基捕獲重組蛋白。
術語“純化”意指執行來使重組蛋白(例如，重組治療性蛋白)與含重組蛋白的流體中存在的一種或多種其他雜質(例如，主要雜質)或組分(例如液體培養基蛋白或哺乳動物細胞中存在或從哺乳動物細胞分泌的一種或多種其他組分(例如，DNA、RNA或其他蛋白質、內毒素、病毒等))分離的步驟。例如，可以在初始捕獲步驟期間或之後執行純化。可以使用層析樹脂、膜或結合重組蛋白或污染物的任何其他固體支持物(例如，通過使用親和層析、疏水性相互作用層析、陰離子或陽離子交換層析或分子篩層析)執行純化。可以使用至少一個層析柱和/或層析膜(例如，本文所述的任何層析柱或層析膜)從含重組蛋白的流體純化重組蛋白。
術語“精製(polishing)”是本領域的術語，並且意指執行來從接近最終所需純度的含重組蛋白(例如重組治療性蛋白)的流體去除殘留的痕量或少量污染物或雜質的步驟。例如，可以通過使含重組蛋白的流體通過一個或多個層析柱或一個或多個膜吸收器來執行精製，所述層析柱或膜吸收器選擇性地結合含重組蛋白的流體中存在的靶重組蛋白或少量的污染物或雜質。在此種例子中，一個或多個層析柱或一個或多個膜吸收器的洗脫物/濾液包含重組蛋白。
術語“過濾”意指從液體(例如，本文所述的任何方法中的液體培養基或流體)去除至少部分(例如，至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)不期望的生物污染物(例如，哺乳動物細胞、細菌、酵母細胞、病毒或分枝桿菌)和/或顆粒物質(例如，沉澱的蛋白質)。
術語“洗脫物/濾液”是本領域的術語，並且意指從層析柱或層析膜釋放出的流體，所述流體包含可檢量測的重組蛋白(例如重組治療性蛋白)。
術語“整合方法”意指使用結構元件執行的方法，所述結構元件協作地起作用以實現特定結果(例如，從液體培養基純化重組蛋白)。
術語“連續方法”意指將流體連續饋送通過系統的至少一部分的方法。例如，連續方法是將來自生物反應器的包含重組蛋白的液體培養基連續饋送通過MCCS的方法。連續方法的另一個例子是將來自生物反應器的包含重 組蛋白的液體培養基連續饋送通過第一和第二MCCS(MCCS1和MCCS2)的方法。其他例子包括將包含重組蛋白的液體培養基連續饋送通過MCCS的方法、將包含重組蛋白的液體培養基連續饋送通過MCCS1和MCCS2的方法或將含重組蛋白的流體連續饋送通過MCCS2的方法。
術語“封閉方法”是本領域的術語，並且意指如下方法，其經執行以使得方法中與重組蛋白或含重組蛋白的液體接觸的的組分(例如，層析樹脂和/或緩衝液)不故意暴露於污染物很長的時間段(例如，不故意暴露在空氣中很長的時間段)。
術語“治療性蛋白藥物”意指如下重組蛋白(例如，免疫球蛋白、蛋白質片段、工程化蛋白或酶)，其已經從污染性蛋白、脂質和核酸(例如，液體培養基中存在的或來自宿主細胞(例如，來自哺乳動物、酵母或細菌宿主細胞)的污染性蛋白、脂質和核酸)以及生物污染物(例如，病毒和細菌污染物)充分純化或分離，並且可以在不進行任何其他一個或多個實質性純化和/或淨化(decontamination)步驟下被配製成藥劑。
術語“多柱層析系統”或“MCCS”意指具有總共兩個或更多個互連或切換的層析柱和/或層析膜的系統。多柱層析系統的非限制性例子是週期性逆流層析系統(PCC)，其包括總共兩個或更多個互連或切換的層析柱和/或層析膜。本文描述了多柱層析系統的其他例子，並且其是業界已知的。
術語“基本上不含”意指組合物(例如，液體培養基)至少或約90%不含(例如，至少或約95%、96%、97%、98%或者至少或約99%不含，或約100%不含)指定物質(例如，哺乳動物細胞或來自哺乳動物細胞的污染性蛋白、核酸、碳水化合物或脂質)。
術語“哺乳動物細胞”意指來自或源自任何哺乳動物(例如，人、倉鼠、小鼠、綠猴、大鼠、豬、母牛或兔)的任何細胞。例如，哺乳動物細胞可以是永生化細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞是分化細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞是未分化細胞。本文描述了哺乳動物細胞的非限制性例子。哺乳動物細胞的其他例子是業界已知的。
術語“培養”或“細胞培養”意指哺乳動物細胞在受控的一組物理條件下維持或增生。
術語“哺乳動物細胞的培養物”意指包含在受控的一組物理條件下維持或增生的多個哺乳動物細胞的液體培養基。
術語“液體培養基”意指包含足夠營養物以允許細胞(例如，哺乳動物細胞)在體外生長或增生的流體。例如，液體培養基可以包含以下中的一種或多種：胺基酸(例如，20種胺基酸)、嘌呤(例如，次黃嘌呤)、嘧啶(例如，胸苷)、膽鹼、肌醇、硫胺素、葉酸，生物素、鈣、菸醯胺、吡哆醇、核黃素、胸苷、氰鈷胺、丙酮酸鹽、硫辛酸、鎂、葡萄糖、鈉、鉀、鐵、銅、鋅和碳酸氫鈉。在一些實施例中，液體培養基可以包含來自哺乳動物的血清。在一些實施例中，液體培養基不包含來自哺乳動物的血清或另一種提取物(確定成分的液體培養基)。在一些實施例中，液體培養基可以包含痕量金屬、哺乳動物生長激素和/或哺乳動物生長因子。液體培養基的另一個例子是基本培養基(例如，僅包含無機鹽、碳源和水的培養基)。本文描述了液體培養基的非限制性例子。液體培養基的其他例子是本領域已知的並且是可商購的。液體培養基可以包含任何密度的哺乳動物細胞。例如，如本文所用，從生物反應器取出的一定體積的液體培養基可以基本上不含哺乳動物細胞。
術語“無動物源性組分的液體培養基”意指不包含任何源自哺乳動物的組分(例如，蛋白質或血清)的液體培養基。
術語“無血清液體培養基”意指不包含哺乳動物血清的液體培養基。
術語“含血清的液體培養基”意指包含哺乳動物血清的液體培養基。
術語“化學成分確定的液體培養基”是本領域的術語，並且意指其中所有化學組分都是已知的液體培養基。例如，化學成分確定的液體培養基不包括胎牛血清、牛血清白蛋白或人血清白蛋白，因為這些製劑典型地包含白蛋白和脂質的複雜混合物。
術語“無蛋白質的液體培養基”意指不包含任何蛋白質(例如，任何可偵檢的蛋白質)的液體培養基。
術語“免疫球蛋白”意指包括具有至少15個胺基酸(例如，至少20、30、40、50、60、70、80、90或100個胺基酸)的胺基酸序列(例如，可變結構域序列、框架序列和/或恒定結構域序列)的免疫球蛋白的多肽。免疫球蛋 白可以例如包括至少15個胺基酸的輕鏈免疫球蛋白，例如至少15個胺基酸的重鏈免疫球蛋白。免疫球蛋白可以是分離的抗體(例如，IgG、IgE、IgD、IgA或IgM)，例如IgG的亞類(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。免疫球蛋白可以是抗體片段，例如Fab片段、F(ab')2片段或scFv片段。免疫球蛋白還可以是雙特異性抗體或三特異性抗體，或二聚體、三聚體或多聚體抗體，或雙抗體，Affibody®或Nanobody®。免疫球蛋白還可以是包括至少一個免疫球蛋白結構域的經工程化蛋白質(例如融合蛋白)。本文描述了免疫球蛋白的非限制性例子，並且免疫球蛋白的其他例子是業界已知的。
術語“蛋白質片段”或“多肽片段”意指多肽序列的一部分，其長度為至少或約4個胺基酸、至少或約5個胺基酸、至少或約6個胺基酸、至少或約7個胺基酸、至少或約8個胺基酸、至少或約9個胺基酸、至少或約10個胺基酸、至少或約11個胺基酸、至少或約12個胺基酸、至少或約13個胺基酸、至少或約14個胺基酸、至少或約15個胺基酸、至少或約16個胺基酸、至少或約17個胺基酸、至少或約18個胺基酸、至少或約19個胺基酸或至少或約20個胺基酸，或長度為超過20個胺基酸。可以使用本文描述的任何方法生產重組蛋白片段。
術語“工程化蛋白”意指不是由生物體(例如哺乳動物)內存在的內源性核酸天然編碼的多肽。工程化蛋白的例子包括酶(例如，具有一個或多個使工程化酶的穩定性和/或催化活性增加的胺基酸取代、缺失、插入或添加)、融合蛋白、抗體(例如，二價抗體、三價抗體或雙抗體)和包括至少一個重組支架序列的抗原結合蛋白。
術語“分泌的蛋白質”或“分泌的重組蛋白”意指如下蛋白質(例如，重組蛋白)，其在哺乳動物細胞內翻譯時最初包括至少一個分泌信號序列，並且在哺乳動物細胞中至少部分通過酶促切割分泌信號序列而至少部分分泌到細胞外空間(例如，液體培養基)中。熟習此項技術者將理解“分泌的”蛋白質不需要完全從細胞中解離以被認為是分泌的蛋白質。
術語“灌注生物反應器”意指在第一液體培養基中包含多個細胞(例如，哺乳動物細胞)的生物反應器，其中存在於所述生物反應器中的細胞的培養包括週期性或連續去除所述第一液體培養基並且同時或此後不久將 基本上相同體積的第二液體培養基添加至所述生物反應器中。在一些例子中，在培養時間段內經遞增的時間段(例如，約24小時的時間段、約1分鐘與約24小時之間的時間段或大於24小時的時間段)去除和添加的第一液體培養基的體積存在遞增變化(例如，增加或減少)(例如，培養基的每天再饋送速率)。每天去除和更換的培養基分數可以根據培養的特定細胞、初始接種密度和特定時間的細胞密度而變化。“RV”或“反應器體積”意指培養過程開始時存在的培養基的體積(例如，接種後存在的培養基的總體積)。
術語“進料分批生物反應器”是本領域的術語，並且意指在第一液體培養基中包含多個細胞(例如，哺乳動物細胞)的生物反應器，其中存在於所述生物反應器中的細胞的培養包括在不從所述細胞培養物大量或顯著地去除所述第一液體培養基或第二液體培養基的情況下將第二液體培養基週期性或連續添加至所述第一液體培養基中。所述第二液體培養基可以與所述第一液體培養基相同。在進料分批培養的一些例子中，所述第二液體培養基是所述第一液體培養基的濃縮形式。在進料分批培養的一些例子中，將所述第二液體培養基作為乾粉添加。
術語“澄清的液體培養基”意指從細菌或酵母細胞培養物獲得的基本上不含(例如，至少80%、85%、90%、92%、94%、96%、98%或99%不含)細菌或酵母細胞的液體培養基。
除非另外定義，否則本文中使用的所有技術和科學術語都具有與業界熟習此項技術者通常所理解相同的含義。本文描述了用於本發明的方法和材料；也可以使用本領域已知的其他合適的方法和材料。所述材料、方法和例子僅是說明性的而非旨在是限制性的。本文提及的所有出版物、專利申請、專利、序列、數據條目和其他參考文獻都通過引用以其整體併入。在矛盾的情況下，將以包括定義在內的本說明書為准。
從以下具體實施方式和附圖以及申請專利範圍中，本發明的其他特徵和優點將變得清楚。
圖1是顯示MabSelectTM SuReTM(蛋白A層析樹脂)在以下緩衝液之一存在下，在40-49kGy照射後，在多個層析循環中的結合能力百分比(與載有相同物質的未照射層析樹脂相比)的圖：(i)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸和25mM甘露糖醇(“SMM’H”)；(ii)2v/v%苄醇(“2% BA”)；和(iii)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸、25mM甘露糖醇和2v/v%苄醇(“SMM’H+2% BA”)。
圖2是顯示Capto Adhere層析樹脂在以下緩衝液之一存在下，在28-34kGy或40-49kGy照射(如實例2中所述)後，在多個層析循環中的結合能力百分比(與載有相同物質的未照射層析樹脂相比)的圖：(i)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸和25mM甘露糖醇(“SMM’H”)；或(ii)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸、25mM甘露糖醇和2v/v%苄醇(“SMM’H+2% BA”)。
本文提供了減少層析樹脂的生物負載的方法，所述方法包括：將包含含有(i)層析樹脂和(ii)含至少一種(例如，兩種、三種、四種或五種)醇的液體的組合物的容器暴露於足以減少所述容器和所述層析樹脂的生物負載的劑量的γ-照射，其中至少一種醇的存在量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後/之時結合能力的損失。還提供了含有通過本文所述的任何方法製備的生物負載減少的層析樹脂的生物負載減少的層析柱；包含(i)層析樹脂和(ii)含至少一種(例如，兩種、三種、四種或五種)醇的液體的組合物；使用這些生物負載減少的層析柱中的至少一個執行生物負載減少的柱層析的方法；以及用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉或基本上封閉且連續的方法，所述方法包括使用這些生物負載減少的層析柱中的至少一個。下文描述這些方法和過程的非限制性方面。如業界可以理解的，下文描述的各個方面可以以任何組合使用而沒有限制。
含有層析樹脂和至少一種醇的組合物
本文提供了如下組合物，所述組合物包含(i)層析樹脂(例如，本文所述或業界已知的任何層析樹脂)和(ii)含至少一種(例如，兩種、三種、四種或五種)醇(例如，本文所述或業界已知的任何例示性醇)的液體，其中至少一種醇的存在量足以改善層析樹脂在用足以減少組合物的生物負載的劑量的γ-照射處理時結合能力的損失。例如，層析樹脂可以是以下中的至少一種：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和或假親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂，或其任何組合。在一些例子中，層析樹脂是包含蛋白質或肽配位體的樹脂(例如，具有蛋白質或肽配位體的親和層析樹脂，例如，蛋白A或蛋白G層析樹脂)。
組合物例如可以是沉降的層析樹脂的漿料。在一些例子中，組合物可以是潤濕或潮濕的固體混合物。在一些例子中，組合物是填充在液體中的層析樹脂。
在任何組合物的一些例子中，至少一種(例如，兩種、三種、四種或五種)醇可以選自下列之群組：苄醇、環己醇、異丁醇、2-甲基-2-丁醇、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丙-1-醇、丁-1-醇、戊-1-醇、十六烷-1-醇、2-苯基乙醇、仲苯基乙醇、3-苯基-1-丙醇、1-苯基-1-丙醇、2-苯基-1-丙醇、2-苯基-2-丙醇、1-苯基-2-丁醇、2-苯基-1-丁醇、3-苯基-1-丁醇、4-苯基-2-丁醇、dl-1-苯基-2-戊醇、5-苯基-1-戊醇和4-苯基-1-丁醇。在一些例子中，該至少一種醇可以是苄醇。
在任何組合物的一些例子中，液體或組合物中一種或多種醇的總和濃度為約0.01v/v%至約20v/v%、約0.01v/v%至約19v/v%、約0.01v/v%至約18v/v%、約0.01v/v%至約17v/v%、約0.01v/v%至約16v/v%、約0.01v/v%至約15v/v%、約0.01v/v%至約14v/v%、約0.01v/v%至約13v/v%、約0.01v/v%至約12v/v%、約0.01v/v%至約11v/v%、約0.01v/v%至約10v/v%、約0.01v/v%至約9v/v%、約0.01v/v%至約8v/v%、約0.01v/v%至約7v/v%、約0.01v/v%至約6v/v%、約0.01v/v%至約5v/v%、約0.01v/v%至約4.5v/v%、約0.01v/v%至約4.0v/v%、約0.01v/v%至約3.5v/v%、約0.01v/v%至約3.0v/v%、 約0.01v/v%至約2.5v/v%、約0.01v/v%至約2.2v/v%、約0.01v/v%至約2.0v/v%、約0.01v/v%至約1.8v/v%、約0.01v/v%至約1.6v/v%、約0.01v/v%至約1.4v/v%、約0.01v/v%至約1.2v/v%、約0.01v/v%至約1.0v/v%、約0.01v/v%至約0.8v/v%、約0.01v/v%至約0.6v/v%、約0.01v/v%至約0.4v/v%、約0.01v/v%至約0.2v/v%、約0.01v/v%至約0.1v/v%、約0.01v/v%至約0.05v/v%、約0.05v/v%至約20v/v%、約0.05v/v%至約19v/v%、約0.05v/v%至約18v/v%、約0.05v/v%至約17v/v%、約0.05v/v%至約16v/v%、約0.05v/v%至約15v/v%、約0.05v/v%至約14v/v%、約0.05v/v%至約13v/v%、約0.05v/v%至約12v/v%、約0.05v/v%至約11v/v%、約0.05v/v%至約10v/v%、約0.05v/v%至約9v/v%、約0.05v/v%至約8v/v%、約0.05v/v%至約7v/v%、約0.05v/v%至約6v/v%、約0.05v/v%至約5v/v%、約0.05v/v%至約4.5v/v%、約0.05v/v%至約4.0v/v%、約0.05v/v%至約3.5v/v%、約0.05v/v%至約3.0v/v%、約0.05v/v%至約2.5v/v%、約0.05v/v%至約2.2v/v%、約0.05v/v%至約2.0v/v%、約0.05v/v%至約1.8v/v%、約0.05v/v%至約1.6v/v%、約0.05v/v%至約1.4v/v%、約0.05v/v%至約1.2v/v%、約0.05v/v%至約1.0v/v%、約0.05v/v%至約0.8v/v%、約0.05v/v%至約0.6v/v%、約0.05v/v%至約0.4v/v%、約0.05v/v%至約0.2v/v%、約0.05v/v%至約0.1v/v%、約0.1v/v%至約20v/v%、約0.1v/v%至約19v/v%、約0.1v/v%至約18v/v%、約0.1v/v%至約17v/v%、約0.1v/v%至約16v/v%、約0.1v/v%至約15v/v%、約0.1v/v%至約14v/v%、約0.1v/v%至約13v/v%、約0.1v/v%至約12v/v%、約0.1v/v%至約11v/v%、約0.1v/v%至約10v/v%、約0.1v/v%至約9v/v%、約0.1v/v%至約8v/v%、約0.1v/v%至約7v/v%、約0.1v/v%至約6v/v%、約0.1v/v%至約5v/v%、約0.1v/v%至約4.5v/v%、約0.1v/v%至約4.0v/v%、約0.1v/v%至約3.5v/v%、約0.1v/v%至約3.0v/v%、約0.1v/v%至約2.5v/v%、約0.1v/v%至約2.2v/v%、約0.1v/v%至約2.0v/v%、約0.1v/v%至約1.8v/v%、約0.1v/v%至約1.6v/v%、約0.1v/v%至約1.4v/v%、約0.1v/v%至約1.2v/v%、約0.1v/v%至約1.0v/v%、約0.1v/v%至約0.8v/v%、約0.1v/v%至約0.6v/v%、約0.1v/v%至約0.4v/v%、約0.1v/v%至約0.2v/v%、約0.2v/v%至約20v/v%、約0.2v/v%至約19v/v%、約0.2v/v%至約18v/v%、約0.2v/v%至約17v/v%、約0.2v/v%至約16v/v%、約0.2v/v%至約15v/v%、約0.2 v/v%至約14v/v%、約0.2v/v%至約13v/v%、約0.2v/v%至約12v/v%、約0.2v/v%至約11v/v%、約0.2v/v%至約10v/v%、約0.2v/v%至約9v/v%、約0.2v/v%至約8v/v%、約0.2v/v%至約7v/v%、約0.2v/v%至約6v/v%、約0.2v/v%至約5v/v%、約0.2v/v%至約4.5v/v%、約0.2v/v%至約4.0v/v%、約0.2v/v%至約3.5v/v%、約0.2v/v%至約3.0v/v%、約0.2v/v%至約2.5v/v%、約0.2v/v%至約2.2v/v%、約0.2v/v%至約2.0v/v%、約0.2v/v%至約1.8v/v%、約0.2v/v%至約1.6v/v%、約0.2v/v%至約1.4v/v%、約0.2v/v%至約1.2v/v%、約0.2v/v%至約1.0v/v%、約0.2v/v%至約0.8v/v%、約0.2v/v%至約0.6v/v%、約0.2v/v%至約0.4v/v%、約0.4v/v%至約20v/v%、約0.4v/v%至約19v/v%、約0.4v/v%至約18v/v%、約0.4v/v%至約17v/v%、約0.4v/v%至約16v/v%、約0.4v/v%至約15v/v%、約0.4v/v%至約14v/v%、約0.4v/v%至約13v/v%、約0.4v/v%至約12v/v%、約0.4v/v%至約11v/v%、約0.4v/v%至約10v/v%、約0.4v/v%至約9v/v%、約0.4v/v%至約8v/v%、約0.4v/v%至約7v/v%、約0.4v/v%至約6v/v%、約0.4v/v%至約5v/v%、約0.4v/v%至約4.5v/v%、約0.4v/v%至約4.0v/v%、約0.4v/v%至約3.5v/v%、約0.4v/v%至約3.0v/v%、約0.4v/v%至約2.5v/v%、約0.4v/v%至約2.2v/v%、約0.4v/v%至約2.0v/v%、約0.4v/v%至約1.8v/v%、約0.4v/v%至約1.6v/v%、約0.4v/v%至約1.4v/v%、約0.4v/v%至約1.2v/v%、約0.4v/v%至約1.0v/v%、約0.4v/v%至約0.8v/v%、約0.4v/v%至約0.6v/v%、約0.6v/v%至約20v/v%、約0.6v/v%至約19v/v%、約0.6v/v%至約18v/v%、約0.6v/v%至約17v/v%、約0.6v/v%至約16v/v%、約0.6v/v%至約15v/v%、約0.6v/v%至約14v/v%、約0.6v/v%至約13v/v%、約0.6v/v%至約12v/v%、約0.6v/v%至約11v/v%、約0.6v/v%至約10v/v%、約0.6v/v%至約9v/v%、約0.6v/v%至約8v/v%、約0.6v/v%至約7v/v%、約0.6v/v%至約6v/v%、約0.6v/v%至約5v/v%、約0.6v/v%至約4.5v/v%、約0.6v/v%至約4.0v/v%、約0.6v/v%至約3.5v/v%、約0.6v/v%至約3.0v/v%、約0.6v/v%至約2.5v/v%、約0.6v/v%至約2.2v/v%、約0.6v/v%至約2.0v/v%、約0.6v/v%至約1.8v/v%、約0.6v/v%至約1.6v/v%、約0.6v/v%至約1.4v/v%、約0.6v/v%至約1.2v/v%、約0.6v/v%至約1.0v/v%、約0.6v/v%至約0.8v/v%、約0.8v/v%至約20v/v%、約0.8v/v%至約19v/v%、約0.8v/v%至約18v/v%、約0.8v/v% 至約17v/v%、約0.8v/v%至約16v/v%、約0.8v/v%至約15v/v%、約0.8v/v%至約14v/v%、約0.8v/v%至約13v/v%、約0.8v/v%至約12v/v%、約0.8v/v%至約11v/v%、約0.8v/v%至約10v/v%、約0.8v/v%至約9v/v%、約0.8v/v%至約8v/v%、約0.8v/v%至約7v/v%、約0.8v/v%至約6v/v%、約0.8v/v%至約5v/v%、約0.8v/v%至約4.5v/v%、約0.8v/v%至約4.0v/v%、約0.8v/v%至約3.5v/v%、約0.8v/v%至約3.0v/v%、約0.8v/v%至約2.5v/v%、約0.8v/v%至約2.2v/v%、約0.8v/v%至約2.0v/v%、約0.8v/v%至約1.8v/v%、約0.8v/v%至約1.6v/v%、約0.8v/v%至約1.4v/v%、約0.8v/v%至約1.2v/v%、約0.8v/v%至約1.0v/v%、約1.0v/v%至約20v/v%、約1.0v/v%至約19v/v%、約1.0v/v%至約18v/v%、約1.0v/v%至約17v/v%、約1.0v/v%至約16v/v%、約1.0v/v%至約15v/v%、約1.0v/v%至約14v/v%、約1.0v/v%至約13v/v%、約1.0v/v%至約12v/v%、約1.0v/v%至約11v/v%、約1.0v/v%至約10v/v%、約1.0v/v%至約9v/v%、約1.0v/v%至約8v/v%、約1.0v/v%至約7v/v%、約1.0v/v%至約6v/v%、約1.0v/v%至約5v/v%、約1.0v/v%至約4.5v/v%、約1.0v/v%至約4.0v/v%、約1.0v/v%至約3.5v/v%、約1.0v/v%至約3.0v/v%、約1.0v/v%至約2.5v/v%、約1.0v/v%至約2.2v/v%、約1.0v/v%至約2.0v/v%、約1.0v/v%至約1.8v/v%、約1.0v/v%至約1.6v/v%、約1.0v/v%至約1.4v/v%、約1.0v/v%至約1.2v/v%、約1.2v/v%至約20v/v%、約1.2v/v%至約19v/v%、約1.2v/v%至約18v/v%、約1.2v/v%至約17v/v%、約1.2v/v%至約16v/v%、約1.2v/v%至約15v/v%、約1.2v/v%至約14v/v%、約1.2v/v%至約13v/v%、約1.2v/v%至約12v/v%、約1.2v/v%至約11v/v%、約1.2v/v%至約10v/v%、約1.2v/v%至約9v/v%、約1.2v/v%至約8v/v%、約1.2v/v%至約7v/v%、約1.2v/v%至約6v/v%、約1.2v/v%至約5v/v%、約1.2v/v%至約4.5v/v%、約1.2v/v%至約4.0v/v%、約1.2v/v%至約3.5v/v%、約1.2v/v%至約3.0v/v%、約1.2v/v%至約2.5v/v%、約1.2v/v%至約2.2v/v%、約1.2v/v%至約2.0v/v%、約1.2v/v%至約1.8v/v%、約1.2v/v%至約1.6v/v%、約1.2v/v%至約1.4v/v%、約1.4v/v%至約20v/v%、約1.4v/v%至約19v/v%、約1.4v/v%至約18v/v%、約1.4v/v%至約17v/v%、約1.4v/v%至約16v/v%、約1.4v/v%至約15v/v%、約1.4v/v%至約14v/v%、約1.4v/v%至約13v/v%、約1.4v/v%至約12v/v%、約1.4v/v% 至約11v/v%、約1.4v/v%至約10v/v%、約1.4v/v%至約9v/v%、約1.4v/v%至約8v/v%、約1.4v/v%至約7v/v%、約1.4v/v%至約6v/v%、約1.4v/v%至約5v/v%、約1.4v/v%至約4.5v/v%、約1.4v/v%至約4.0v/v%、約1.4v/v%至約3.5v/v%、約1.4v/v%至約3.0v/v%、約1.4v/v%至約2.5v/v%、約1.4v/v%至約2.2v/v%、約1.4v/v%至約2.0v/v%、約1.4v/v%至約1.8v/v%、約1.4v/v%至約1.6v/v%、約1.6v/v%至約20v/v%、約1.6v/v%至約19v/v%、約1.6v/v%至約18v/v%、約1.6v/v%至約17v/v%、約1.6v/v%至約16v/v%、約1.6v/v%至約15v/v%、約1.6v/v%至約14v/v%、約1.6v/v%至約13v/v%、約1.6v/v%至約12v/v%、約1.6v/v%至約11v/v%、約1.6v/v%至約10v/v%、約1.6v/v%至約9v/v%、約1.6v/v%至約8v/v%、約1.6v/v%至約7v/v%、約1.6v/v%至約6v/v%、約1.6v/v%至約5v/v%、約1.6v/v%至約4.5v/v%、約1.6v/v%至約4.0v/v%、約1.6v/v%至約3.5v/v%、約1.6v/v%至約3.0v/v%、約1.6v/v%至約2.5v/v%、約1.6v/v%至約2.2v/v%、約1.6v/v%至約2.0v/v%、約1.6v/v%至約1.8v/v%、約1.8v/v%至約20v/v%、約1.8v/v%至約19v/v%、約1.8v/v%至約18v/v%、約1.8v/v%至約17v/v%、約1.8v/v%至約16v/v%、約1.8v/v%至約15v/v%、約1.8v/v%至約14v/v%、約1.8v/v%至約13v/v%、約1.8v/v%至約12v/v%、約1.8v/v%至約11v/v%、約1.8v/v%至約10v/v%、約1.8v/v%至約9v/v%、約1.8v/v%至約8v/v%、約1.8v/v%至約7v/v%、約1.8v/v%至約6v/v%、約1.8v/v%至約5v/v%、約1.8v/v%至約4.5v/v%、約1.8v/v%至約4.0v/v%、約1.8v/v%至約3.5v/v%、約1.8v/v%至約3.0v/v%、約1.8v/v%至約2.5v/v%、約1.8v/v%至約2.2v/v%、約1.8v/v%至約2.0v/v%、約2.0v/v%至約20v/v%、約2.0v/v%至約19v/v%、約2.0v/v%至約18v/v%、約2.0v/v%至約17v/v%、約2.0v/v%至約16v/v%、約2.0v/v%至約15v/v%、約2.0v/v%至約14v/v%、約2.0v/v%至約13v/v%、約2.0v/v%至約12v/v%、約2.0v/v%至約11v/v%、約2.0v/v%至約10v/v%、約2.0v/v%至約9v/v%、約2.0v/v%至約8v/v%、約2.0v/v%至約7v/v%、約2.0v/v%至約6v/v%、約2.0v/v%至約5v/v%、約2.0v/v%至約4.5v/v%、約2.0v/v%至約4.0v/v%、約2.0v/v%至約3.5v/v%、約2.0v/v%至約3.0v/v%、約2.0v/v%至約2.5v/v%、約2.0v/v%至約2.2v/v%、約2.2v/v%至約20v/v%、約2.2v/v%至約19v/v%、約2.2v/v% 至約18v/v%、約2.2v/v%至約17v/v%、約2.2v/v%至約16v/v%、約2.2v/v%至約15v/v%、約2.2v/v%至約14v/v%、約2.2v/v%至約13v/v%、約2.2v/v%至約12v/v%、約2.2v/v%至約11v/v%、約2.2v/v%至約10v/v%、約2.2v/v%至約9v/v%、約2.2v/v%至約8v/v%、約2.2v/v%至約7v/v%、約2.2v/v%至約6v/v%、約2.2v/v%至約5v/v%、約2.2v/v%至約4.5v/v%、約2.2v/v%至約4.0v/v%、約2.2v/v%至約3.5v/v%、約2.2v/v%至約3.0v/v%、約2.2v/v%至約2.5v/v%、約2.5v/v%至約20v/v%、約2.5v/v%至約19v/v%、約2.5v/v%至約18v/v%、約2.5v/v%至約17v/v%、約2.5v/v%至約16v/v%、約2.5v/v%至約15v/v%、約2.5v/v%至約14v/v%、約2.5v/v%至約13v/v%、約2.5v/v%至約12v/v%、約2.5v/v%至約11v/v%、約2.5v/v%至約10v/v%、約2.5v/v%至約9v/v%、約2.5v/v%至約8v/v%、約2.5v/v%至約7v/v%、約2.5v/v%至約6v/v%、約2.5v/v%至約5v/v%、約2.5v/v%至約4.5v/v%、約2.5v/v%至約4.0v/v%、約2.5v/v%至約3.5v/v%、約2.5v/v%至約3.0v/v%、約3.0v/v%至約20v/v%、約3.0v/v%至約19v/v%、約3.0v/v%至約18v/v%、約3.0v/v%至約17v/v%、約3.0v/v%至約16v/v%、約3.0v/v%至約15v/v%、約3.0v/v%至約14v/v%、約3.0v/v%至約13v/v%、約3.0v/v%至約12v/v%、約3.0v/v%至約11v/v%、約3.0v/v%至約10v/v%、約3.0v/v%至約9v/v%、約3.0v/v%至約8v/v%、約3.0v/v%至約7v/v%、約3.0v/v%至約6v/v%、約3.0v/v%至約5v/v%、約3.0v/v%至約4.5v/v%、約3.0v/v%至約4.0v/v%、約3.0v/v%至約3.5v/v%、約3.5v/v%至約20v/v%、約3.5v/v%至約19v/v%、約3.5v/v%至約18v/v%、約3.5v/v%至約17v/v%、約3.5v/v%至約16v/v%、約3.5v/v%至約15v/v%、約3.5v/v%至約14v/v%、約3.5v/v%至約13v/v%、約3.5v/v%至約12v/v%、約3.5v/v%至約11v/v%、約3.5v/v%至約10v/v%、約3.5v/v%至約9v/v%、約3.5v/v%至約8v/v%、約3.5v/v%至約7v/v%、約3.5v/v%至約6v/v%、約3.5v/v%至約5v/v%、約3.5v/v%至約4.5v/v%、約3.5v/v%至約4.0v/v%、約4.0v/v%至約20v/v%、約4.0v/v%至約19v/v%、約4.0v/v%至約18v/v%、約4.0v/v%至約17v/v%、約4.0v/v%至約16v/v%、約4.0v/v%至約15v/v%、約4.0v/v%至約14v/v%、約4.0v/v%至約13v/v%、約4.0v/v%至約12v/v%、約4.0v/v%至約11v/v%、約4.0v/v%至約10v/v%、約4.0v/v% 至約9v/v%、約4.0v/v%至約8v/v%、約4.0v/v%至約7v/v%、約4.0v/v%至約6v/v%、約4.0v/v%至約5v/v%、約4.0v/v%至約4.5v/v%、約4.5v/v%至約20v/v%、約4.5v/v%至約19v/v%、約4.5v/v%至約18v/v%、約4.5v/v%至約17v/v%、約4.5v/v%至約16v/v%、約4.5v/v%至約15v/v%、約4.5v/v%至約14v/v%、約4.5v/v%至約13v/v%、約4.5v/v%至約12v/v%、約4.5v/v%至約11v/v%、約4.5v/v%至約10v/v%、約4.5v/v%至約9v/v%、約4.5v/v%至約8v/v%、約4.5v/v%至約7v/v%、約4.5v/v%至約6v/v%、約4.5v/v%至約5v/v%、約5v/v%至約20v/v%、約5v/v%至約19v/v%、約5v/v%至約18v/v%、約5v/v%至約17v/v%、約5v/v%至約16v/v%、約5v/v%至約15v/v%、約5v/v%至約14v/v%、約5v/v%至約13v/v%、約5v/v%至約12v/v%、約5v/v%至約11v/v%、約5v/v%至約10v/v%、約5v/v%至約9v/v%、約5v/v%至約8v/v%、約5v/v%至約7v/v%、約5v/v%至約6v/v%、約6v/v%至約20v/v%、約6v/v%至約19v/v%、約6v/v%至約18v/v%、約6v/v%至約17v/v%、約6v/v%至約16v/v%、約6v/v%至約15v/v%、約6v/v%至約14v/v%、約6v/v%至約13v/v%、約6v/v%至約12v/v%、約6v/v%至約11v/v%、約6v/v%至約10v/v%、約6v/v%至約9v/v%、約6v/v%至約8v/v%、約6v/v%至約7v/v%、約7v/v%至約20v/v%、約7v/v%至約19v/v%、約7v/v%至約18v/v%、約7v/v%至約17v/v%、約7v/v%至約16v/v%、約7v/v%至約15v/v%、約7v/v%至約14v/v%、約7v/v%至約13v/v%、約7v/v%至約12v/v%、約7v/v%至約11v/v%、約7v/v%至約10v/v%、約7v/v%至約9v/v%、約7v/v%至約8v/v%、約8v/v%至約20v/v%、約8v/v%至約19v/v%、約8v/v%至約18v/v%、約8v/v%至約17v/v%、約8v/v%至約16v/v%、約8v/v%至約15v/v%、約8v/v%至約14v/v%、約8v/v%至約13v/v%、約8v/v%至約12v/v%、約8v/v%至約11v/v%、約8v/v%至約10v/v%、約8v/v%至約9v/v%、約9v/v%至約20v/v%、約9v/v%至約19v/v%、約9v/v%至約18v/v%、約9v/v%至約17v/v%、約9v/v%至約16v/v%、約9v/v%至約15v/v%、約9v/v%至約14v/v%、約9v/v%至約13v/v%、約9v/v%至約12v/v%、約9v/v%至約11v/v%、約9v/v%至約10v/v%、約10v/v%至約20v/v%、約10v/v%至約19v/v%、約10v/v%至約18v/v%、約10v/v%至約17v/v%、約10v/v%至約16v/v%、約10v/v% 至約15v/v%、約10v/v%至約14v/v%、約10v/v%至約13v/v%、約10v/v%至約12v/v%、約10v/v%至約11v/v%、約11v/v%至約20v/v%、約11v/v%至約19v/v%、約11v/v%至約18v/v%、約11v/v%至約17v/v%、約11v/v%至約16v/v%、約11v/v%至約15v/v%、約11v/v%至約14v/v%、約11v/v%至約13v/v%、約11v/v%至約12v/v%、約12v/v%至約20v/v%、約12v/v%至約19v/v%、約12v/v%至約18v/v%、約12v/v%至約17v/v%、約12v/v%至約16v/v%、約12v/v%至約15v/v%、約12v/v%至約14v/v%、約12v/v%至約13v/v%、約13v/v%至約20v/v%、約13v/v%至約19v/v%、約13v/v%至約18v/v%、約13v/v%至約17v/v%、約13v/v%至約16v/v%、約13v/v%至約15v/v%、約13v/v%至約14v/v%、約14v/v%至約20v/v%、約14v/v%至約19v/v%、約14v/v%至約18v/v%、約14v/v%至約17v/v%、約14v/v%至約16v/v%、約14v/v%至約15v/v%、約15v/v%至約20v/v%、約15v/v%至約19v/v%、約15v/v%至約18v/v%、約15v/v%至約17v/v%、約15v/v%至約16v/v%、約16v/v%至約20v/v%、約16v/v%至約19v/v%、約16v/v%至約18v/v%、約16v/v%至約17v/v%、約17v/v%至約20v/v%、約17v/v%至約19v/v%、約17v/v%至約18v/v%、約18v/v%至約20v/v%、約18v/v%至約19v/v%或約19v/v%至約20v/v%。
在本文所述的任何組合物的一些例子中，液體還可以包含至少一種(例如，兩種、三種、四種或五種)抗氧化劑和/或螯合劑。在本文所述的任何組合物的一些例子中，液體還可以包含至少一種(例如，兩種、三種、四種或五種)抗氧化劑和/或螯合劑，其量足以改善層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。
在本文所述的任何組合物的一些例子中，液體可以包含至少一種(例如，兩種、三種、四種或五種)選自以下群組的抗氧化劑：還原型谷胱甘肽、還原型硫氧還蛋白、還原型半胱胺酸、類胡蘿蔔素、褪黑激素、番茄紅素、生育酚、還原型泛醌、抗壞血酸鹽、膽紅素、尿酸、硫辛酸、類黃酮、酚丙酸、利多卡因、柚皮素、富勒烯、葡萄糖、甘露糖醇、4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基和二甲基甲氧基色原烷醇。在本文所述的任何組合物的一些例子中，液體可以包含至少一種(例如，兩種、三種或四種)選自下 列群組的抗氧化劑：甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
在本文所述的任何組合物的一些例子中，液體可以含有至少一種(例如，一種、兩種、三種或四種)甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)、抗壞血酸鈉、組胺酸和甘露糖醇。在本文所述的任何組合物的一些例子中，液體可以含有甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)、抗壞血酸鈉、組胺酸和甘露糖醇。在本文所述的任何組合物的一些例子中，液體可以包含：(i)75mM與約125mM之間(例如，80mM與約120mM之間、約85mM與約115mM之間、約90mM與約110mM之間或約95mM與約105mM之間)的甘露糖醇；(ii)75mM與約125mM之間(例如，約80mM與約120mM之間、約85mM與約115mM之間、約90mM與約110mM之間或約95mM與約105mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)；(iii)75mM與約125mM之間(例如，約80mM與約120mM之間、約85mM與約115mM之間、約90mM與約110mM之間或約95mM與約105mM之間)的抗壞血酸鈉；(iv)75mM與約125mM之間(例如，約80mM與約120mM之間、約85mM與約115mM之間、約90mM與約110mM之間或約95mM與約105mM之間)的組胺酸；(v)約30mM與約70mM之間(例如，約35mM與約65mM之間、約40mM與約60mM之間或約45mM與約55mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)和約30mM與約70mM之間(例如，約35mM與約65mM之間、約40mM與約60mM之間或約45mM與約55mM之間)的組胺酸；(vi)約10mM與約50mM之間(例如，約15mM與約45mM之間、約20mM與約40mM之間或約25mM與約35mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)、約10mM與約50mM之間(例如，約15mM與約45mM之間、約20mM與約40mM之間或約25mM與約35mM之間)的組胺酸和約10mM與約50mM之間(例如，約15mM與約45mM之間、約20mM與約40mM之間或約25mM與約35mM之間)的抗壞血酸鈉；或(vii)約5mM與約45mM之間(例如，約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間或約20mM與約30mM之間)的抗壞血酸鈉、約5mM與約45mM之間(例如，約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間或約20mM與約30mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)、 約5mM與約45mM之間(例如，約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間或約20mM與約30mM之間)的甘露糖醇和約5mM與約45mM之間(例如，約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間或約20mM與約30mM之間)的組胺酸。在本文所述的任何組合物的一些例子中，液體可以是緩衝溶液(例如，磷酸鹽緩衝溶液，例如磷酸鈉緩衝溶液，諸如50mM磷酸鈉，pH 6.0)。
在本文所述的任何組合物的一些實施例中，液體還可以包含至少一種(例如，兩種、三種、四種或五種)螯合劑(例如，至少一種選自以下的螯合劑：乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二驗基-1-丙磺酸鈉(DMPS)、二巰基丁二酸(DMSA)、金屬硫蛋白和去鐵胺)。
本文還提供了包含如下組合物(例如，本文所述的任何例示性組合物)的容器(例如，儲存器皿，例如塑料容器或層析柱)，所述組合物包含(i)層析樹脂(例如，本文所述或業界已知的任何層析樹脂)和(ii)含至少一種醇(例如，本文所述或業界已知的任何例示性醇)的液體，其中至少一種醇的存在量足以改善層析樹脂在用足以減少組合物的生物負載的劑量的γ-照射處理時結合能力的損失。例如，容器(例如，儲存容器，例如塑料容器或層析柱)的內部體積可以是例如至少約1mL、5mL、至少約10mL、至少約20mL、至少約30mL、至少約40mL、至少約50mL、至少約60mL、至少約70mL、至少約80mL、至少約90mL、至少約100mL、至少約110mL、至少約120mL、至少約130mL、至少約140mL、至少約150mL、至少約160mL、至少約170mL、至少約180mL、至少約190mL、至少約200mL、至少約210mL、至少約220mL、至少約230mL、至少約240mL、至少約250mL、至少300mL、至少350mL、至少400mL或至少500mL。例如，容器的內部體積可以是例如約1mL與約500mL之間、約1mL與約50mL之間、約5mL與約500mL之間、約5mL與約400mL之間、約5mL與約350mL之間、約5mL與約300mL之間、約5mL與約250mL之間、約5mL與約200mL之間、約5mL與約150mL之間、約5mL與約100mL之間或約5mL與約50mL之間。在一些例子中，容器中的層析樹脂是沉降的層析樹脂在液體中的漿料。在一些例子中，容器包含填充層析樹脂(例如，填充在液體中)。
在本文提供的任何組合物中，液體還可以含有至少一種(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10種)抗氧化劑和/或至少一種(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10種)螯合劑。可以包含在本文提供的任何組合物中的任何抗氧化劑可以具有淬滅一種或多種以下活性氧和/或氮物質的能力：羥基自由基、碳酸根自由基、超氧陰離子、過氧自由基、過氧亞硝酸鹽、二氧化氮和一氧化氮。可以包含在本文提供的任何組合物中的抗氧化劑的非限制性例子包括：還原型谷胱甘肽、還原型硫氧還蛋白、還原型半胱胺酸、類胡蘿蔔素、褪黑激素、番茄紅素、生育酚、還原型泛醌、抗壞血酸鈉、膽紅素、尿酸、硫辛酸、類黃酮、酚丙酸、利多卡因、柚皮素、富勒烯、葡萄糖、甘露糖醇、4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基和二甲基甲氧基色原烷醇。抗氧化劑的其他非限制性例子包括抗氧化酶(例如，超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽還原酶、過氧化氫酶和硫氧還蛋白還原酶)。可以包含在本文提供的任何組合物中的抗氧化劑的其他例子包括甘露糖醇、抗壞血酸鈉、甲硫胺酸和組胺酸。抗氧化劑的其他例子包括半胱胺酸、牛磺酸、巰基丙醯甘胺酸、N-乙醯半胱胺酸、大蒜油、二烯丙基硫醚、二氫硫辛酸和二烯丙基三硫化物。包含抗氧化醇作為抗氧化劑的一些實施例還可以包括酶的一種或多種受質。可以使用本領域已知的許多方法鑒別抗氧化劑，所述方法包括例如自旋捕獲、氧化還原敏感染料和化學發光測定。
可以包含在本文提供的任何組合物中的一或多種螯合劑中的任一者可以具有以高親和力(例如，約或小於1μM、約或小於800nM、約或小於700nM、約或小於600nM、約或小於500nM、約或小於400nM、約或小於300nM、約或小於250nM、約或小於200nM、約或小於150nM、約或小於100nM、約或小於80nM、約或小於60nM、約或小於40nM、約或小於20nM或約或小於1nm)結合氧化還原活性金屬(例如，Cu2+和Fe2+)的能力。可以包含在本文提供的任何組合物中的一種或多種螯合劑的非限制性例子包括乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二驗基-1-丙磺酸鈉(DMPS)、二巰基琥珀酸(DMSA)、金屬硫蛋白和去鐵胺。
可以包含在本文提供的任何組合物中的一種或多種螯合劑和/或一種或多種抗氧化劑中的每一種的濃度可以是約0.1mM與約150mM之間(例如， 約0.1mM與約150mM之間、約0.1mM與約125mM之間、約0.1mM與約100mM之間、約0.1mM與約80mM之間、約0.1mM與約60mM之間、約0.1mM與約50mM之間、約0.1mM與約40mM之間、約0.1mM與約30mM之間、約0.1mM與約25mM之間、約0.1mM與約20mM之間、約0.1mM與約10mM之間、約0.1mM與約5.0mM之間、約0.5mM與約150mM之間、約0.5mM與約100mM之間、約0.5mM與約50mM之間、約0.5mM與約25mM之間、約0.5mM與約15mM之間、約0.5mM與約10mM之間、約0.5mM與約5mM之間、約1mM與約125mM之間、約1mM與約120mM之間、約1mM與約100mM之間、約1mM與約80mM之間、約1mM與約60mM之間、約1mM與約50mM之間、約1mM與約40mM之間、約1mM與約30mM之間、約1mM與約25mM之間、約5mM與約150mM之間、約5mM與約125mM之間、約5mM與約100mM之間、約5mM與約80mM之間、約5mM與約60mM之間、約5mM與約50mM之間、約5mM與約40mM之間、約5mM與約30mM之間、約5mM與約25mM之間、約10mM與約150mM之間、約10mM與約125mM之間、約1mM與約100mM之間、約10mM與約80mM之間、約10mM與約60mM之間、約10mM與約50mM之間、約10mM與約40mM之間、約10mM與約30mM之間、約10mM與約25mM之間、約20mM與約150mM之間、約20mM與約125mM之間、約20mM與約100mM之間、約20mM與約80mM之間、約20mM與約60mM之間、約20mM與約50mM之間、約20mM與約40mM之間、約20mM與約30mM之間、約30mM與約150mM之間、約30mM與約125mM之間、約30mM與約100mM之間、約30mM與約80mM之間、約30mM與約60mM之間、約30mM與約50mM之間、約30mM與約40mM之間、約40mM與約150mM之間、約40mM與約125mM之間、約40mM與約100mM之間、約40mM與約90mM之間、約40mM與約80mM之間、約40mM與約70mM之間、約40mM與約60mM之間、約50mM與約150mM之間、約50mM與約125mM之間、約50mM與約100mM之間、約50mM與約80mM之間、約50mM與約60mM之間、約80mM與約150mM之間、約80mM與約125mM之間、約80mM與約100mM之間、約100mM與約150mM之間或約100mM與約125mM之間)。
在一些例子中，本文提供的組合物可以含有以下中的一種或多種：5mM至約150mM之間的甘露糖醇(例如，約10mM與約150mM之間、約20mM與約150mM之間、約30mM與約150mM之間、約40mM與約150mM之間、約50mM與約150mM之間、約60mM與約140mM之間、約70mM與約130mM之間、約80mM與約120mM之間、約90mM與約110mM之間、約95mM與約105mM之間、約5mM與約50mM之間、約5mM與約45mM之間、約5mM與約40mM之間、約5mM與約35mM之間、約10mM與約35mM之間、約15mM與約35mM之間或約20mM與約30mM之間的甘露糖醇)；5mM與約150mM之間(例如，約10mM與約150mM之間、約20mM與約150mM之間、約30mM與約150mM之間、約40mM與約150mM之間、約50mM與約150mM之間、約60mM與約140mM之間、約70mM與約130mM之間、約80mM與約120mM之間、約90mM與約110mM之間、約95mM與約105mM之間、約30mM與約70mM之間、約35mM與約65mM之間、約40mM與約60mM之間、約45mM與約55mM之間、約20mM與約50mM之間、約25mM與約45mM之間、約30mM與約40mM之間、約30mM與約35mM之間、約5mM與約45mM之間、約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間、約20mM與約30mM之間或約20mM與約25mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)；5mM與150mM之間的抗壞血酸鈉(例如，約10mM與約150mM之間、約20mM與約150mM之間、約30mM與約150mM之間、約40mM與約150mM之間、約50mM與約150mM之間、約60mM與約140mM之間、約70mM與約130mM之間、約80mM與約120mM之間、約90mM與約110mM之間、約95mM與約105mM之間、約10mM與約50mM之間、約15mM與約45mM之間、約20mM與約40mM之間、約25mM與約35mM之間、約30mM與約35mM之間、約5mM與約45mM之間、約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間、約20mM與約30mM之間、約20mM與約25mM之間的抗壞血酸鈉)；和5mM與約150mM之間(例如，約10mM與約150mM之間、約20mM與約150mM之間、約30mM與約150mM之間、約40mM與約150mM之間、約50mM與約150mM之間、約60mM與約140mM之間、約70mM與約130mM之間、約80mM與約120mM之間、 約90mM與約110mM之間、約95mM與約105mM之間、約30mM與約70mM之間、約35mM與約65mM之間、約40mM與約60mM之間、約45mM與約55mM之間、約20mM與約50mM之間、約25mM與約45mM之間、約30mM與約40mM之間、約30mM與約35mM之間、約5mM與約45mM之間、約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間、約20mM與約30mM之間或約20mM與約25mM之間)的組胺酸。
任何組合物的非限制性例子可以含有(i)約75mM與約125mM之間(例如，約80mM與約120mM之間、約85mM與約115mM之間、約90mM與約110mM之間或約95mM與約105mM之間)的甘露糖醇(例如，在緩衝溶液中，例如磷酸鹽緩衝液，諸如50mM磷酸鈉，pH 6.0)；(ii)約75mM與約125mM之間(例如，約80mM與約120mM之間、約85mM與約115mM之間、約90mM與約110mM之間或約95mM與約105mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)(例如，在緩衝溶液中，例如磷酸鹽緩衝液，諸如50mM磷酸鈉，pH 6.0)；(iii)約75mM與約125mM之間(例如，約80mM與約120mM之間、約85mM與約115mM之間、約90mM與約110mM之間或約95mM與約105mM之間)的抗壞血酸鈉(例如，在緩衝溶液中，例如磷酸鹽緩衝液，諸如50mM磷酸鈉，pH 6.0)；(iv)約75mM與約125mM之間(例如，約80mM與約120mM之間、約85mM與約115mM之間、約90mM與約110mM之間或約95mM與約105mM之間)的組胺酸(例如，在緩衝溶液中，例如磷酸鹽緩衝液，諸如50mM磷酸鈉，pH 6.0)；(v)約30mM與約70mM之間(例如，約35mM與約65mM之間、約40mM與約60mM之間或約45mM與約55mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)和約30mM與約70mM之間(例如，約35mM與約65mM之間、約40mM與約60mM之間或約45mM與約55mM之間)的組胺酸(例如，在緩衝溶液中，例如磷酸鹽緩衝液，諸如50mM磷酸鈉，pH 6.0)；(vi)約10mM與約50mM之間(例如，約15mM與約45mM之間、約20mM與約40mM之間、約25mM與約35mM之間或約30mM與約35mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)、約10mM與約50mM之間(例如，約15mM與約45mM之間、約20mM與約40mM之間、約25mM與約35mM之間 或約30mM與約35mM之間)的組胺酸和約10mM與約50mM之間(例如，約15mM與約45mM之間、約20mM與約40mM之間、約25mM與約35mM之間或約30mM與約35mM之間)的抗壞血酸鈉(例如，在緩衝溶液中，例如磷酸鹽緩衝液，諸如50mM磷酸鈉，pH 6.0)；或(vii)約5mM與約45mM之間(例如，約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間、約20mM與約30mM之間或約23mM與約27mM之間)的抗壞血酸鈉、約5mM與約45mM之間(例如，約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間、約20mM與約30mM之間或約23mM與約27mM之間)的甲硫胺酸(或者可替代地半胱胺酸或谷胱甘肽)、約5mM與約45mM之間(例如，約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間、約20mM與約30mM之間或約23mM與約27mM之間)的甘露糖醇和約5mM與約45mM之間(例如，約10mM與約40mM之間、約15mM與約35mM之間、約20mM與約30mM之間或約23mM與約27mM之間)的組胺酸(例如，在緩衝溶液中，例如磷酸鹽緩衝液，諸如50mM磷酸鈉，pH 6.0)。
足以減少本文提供的任何組合物的生物負載的γ-照射的非限制性劑量如下所述。足以減少本文提供的任何組合物的生物負載的γ-照射的其他劑量是業界已知的。例如，本文所述的任何組合物可以以任何劑量，以任何γ-照射速率和/或在用於執行本文所述的γ-照射的任何溫度下(以任何組合)進行γ-照射。組合物的生物負載可以例如通過如下方法來測定：例如通過洗胃，超聲處理，搖動，渦旋混合，沖洗，摻合或者擦拭從組合物中取出含有組合物中存在的一種或多種自複製生物污染物的樣品，將樣品中存在的一種或多種自複製生物污染物的水平定性或定量(例如，通過將樣品置於允許生物污染物自複製的生長培養基中，例如，將樣品鋪板在皮氏培養皿(petri dish)上，或使樣品運行通過膜)。
可以例如使用實例中描述的方法測定足以改善層析樹脂在用足以減少組合物的生物負載的劑量的γ-照射處理時結合能力的損失的至少一種醇、至少一種抗氧化劑和/或至少一種螯合劑的量。例如，可以將在一定量的至少一種醇存在下(並且任選地，另外在至少一種抗氧化劑和/或螯合劑存在下)用γ-照射處理的層析樹脂的結合能力的降低水平與所述至少一種醇(並且任 選地，至少一種抗氧化劑和/或螯合劑)不存在下用相同劑量的γ-照射處理的層析樹脂的結合能力的降低水平進行比較，其中與在所述至少一種醇(並且任選地，至少一種抗氧化劑和/或螯合劑)不存在下經γ-照射的層析樹脂相比，在所述至少一種醇存在下(並且任選地，另外在至少一種抗氧化劑和/或螯合劑存在下)經γ-照射的層析樹脂結合能力的降低水平降低指示所述至少一種醇(和任選地抗氧化劑和/或螯合劑)的存在量足以改善層析樹脂在用γ-照射處理時結合能力的損失。用於測定層析樹脂的結合能力的例示性方法描述於實例中。用於測定層析樹脂的結合能力的方法的其他例子是業界已知的。
減少層析樹脂生物負載的方法
本文提供了減少層析樹脂的生物負載的方法。這些方法包括如下步驟：將包含含有(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物(例如，本文所述的包含層析樹脂和含至少一種醇的液體的任何例示性組合物)的容器暴露於足以減少所述容器和所述層析樹脂的生物負載的劑量的γ-照射，其中至少一種醇的存在量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後(或時)結合能力的損失。
還提供了減少層析樹脂的生物負載的方法，所述方法包括將包含含有(i)層析樹脂和(ii)含足以改善所述層析樹脂在暴露於γ-照射之後/之時結合能力的損失的量的至少一種醇的液體的組合物(例如，本文所述的包含層析樹脂和含至少一種醇的液體的任何組合物)的容器，以約0.1kGy/小時至約6kGy/小時之間(例如，約0.1kGy/小時至約5.5kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約5.0kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約4.5kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約4.0kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約3.5kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約3.0kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約2.5kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約2.0kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約1.5kGy/小時之間、約0.1kGy/小時至約1.0kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約6kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約5.5kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約5.0kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約4.5kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約4.0 kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約3.5kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約3.0kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約2.5kGy/小時之間、約0.5kGy/小時至約2.0kGy/小時之間)的速率，和/或在約4℃至約25℃之間(例如，約4℃至約20℃之間、約4℃至約15℃之間、約4℃至約10℃之間、約10℃至約25℃之間、約10℃至約20℃之間、約10℃至約15℃之間或約15℃至約25℃之間)的溫度下，暴露於γ-照射劑量足以減少容器和層析樹脂的生物負載的γ-照射。
任何這些方法的一些實施例可以包括，在暴露步驟之前和/或之後，將容器或包含層析樹脂和含至少一種醇的液體的組合物(例如，本文所述的任何容器或包含層析樹脂和含至少一種醇的液體的任何組合物)例如在約4℃至約40℃、約4℃至約35℃、約4℃至約30℃、約4℃至約28℃、約4℃至約26℃、約4℃至約24℃、約4℃至約22℃、約4℃至約20℃、約4℃至約18℃、約4℃至約16℃、約4℃至約14℃、約4℃至約12℃、約4℃至約10℃、約4℃至約8℃、約4℃至約6℃、約6℃至約40℃、約6℃至約35℃、約6℃至約30℃、約6℃至約28℃、約6℃至約26℃、約6℃至約24℃、約6℃至約22℃、約6℃至約20℃、約6℃至約18℃、約6℃至約16℃、約6℃至約14℃、約6℃至約12℃、約6℃至約10℃、約6℃至約8℃、約8℃至約40℃、約8℃至約35℃、約8℃至約30℃、約8℃至約28℃、約8℃至約26℃、約8℃至約24℃、約8℃至約22℃、約8℃至約20℃、約8℃至約18℃、約8℃至約16℃、約8℃至約14℃、約8℃至約12℃、約8℃至約10℃、約10℃至約40℃、約10℃至約35℃、約10℃至約30℃、約10℃至約28℃、約10℃至約26℃、約10℃至約24℃、約10℃至約22℃、約10℃至約20℃、約10℃至約18℃、約10℃至約16℃、約10℃至約14℃、約10℃至約12℃、約12℃至約40℃、約12℃至約35℃、約12℃至約30℃、約12℃至約28℃、約12℃至約26℃、約12℃至約24℃、約12℃至約22℃、約12℃至約20℃、約12℃至約18℃、約12℃至約16℃、約12℃至約14℃、約14℃至約40℃、約14℃至約35℃、約14℃至約30℃、約14℃至約28℃、約14℃至約26℃、約14℃至約24℃、約14℃至約22℃、約14℃至約20℃、約14℃至約18℃、約14℃至約16℃、約16℃至約40℃、約16℃至約35℃、約16℃至約30℃、約16℃至約28℃、約16℃至約26℃、約16℃至約24℃、約16℃ 至約22℃、約16℃至約20℃、約16℃至約18℃、約18℃至約40℃、約18℃至約35℃、約18℃至約30℃、約18℃至約28℃、約18℃至約26℃、約18℃至約24℃、約18℃至約22℃、約18℃至約20℃、約20℃至約40℃、約20℃至約35℃、約20℃至約30℃、約20℃至約28℃、約20℃至約26℃、約20℃至約24℃、約20℃至約22℃、約22℃至約40℃、約22℃至約35℃、約22℃至約30℃、約22℃至約28℃、約22℃至約26℃、約22℃至約24℃、約24℃至約40℃、約24℃至約35℃、約24℃至約30℃、約24℃至約28℃、約24℃至約26℃、約26℃至約40℃、約26℃至約35℃、約26℃至約30℃、約26℃至約28℃、約28℃至約40℃、約28℃至約35℃、約28℃至約30℃、約30℃至約40℃、約30℃至約35℃或約35℃至約40℃的溫度下儲存約1小時至約1年、約1小時至約11個月、約1小時至約10個月、約1小時至約9個月、約1小時至約8個月、約1小時至約7個月、約1小時至約6個月、約1小時至約5個月、約1小時至約4個月、約1小時至約3個月、約1小時至約2個月、約1小時至約1個月、約1小時至約2周、約1小時至約1周、約1小時至約5天、約1小時至約2天、約1小時至約1天、約1小時至約12小時、約1小時至約6小時、約6小時至約1年、約6小時至約11個月、約6小時至約10個月、約6小時至約9個月、約6小時至約8個月、約6小時至約7個月、約6小時至約6個月、約6小時至約5個月、約6小時至約4個月、約6小時至約3個月、約6小時至約2個月、約6小時至約1個月、約6小時至約2周、約6小時至約1周、約6小時至約5天、約6小時至約2天、約6小時至約1天、約6小時至約12小時、約12小時至約1年、約12小時至約11個月、約12小時至約10個月、約12小時至約9個月、約12小時至約8個月、約12小時至約7個月、約12小時至約6個月、約12小時至約5個月、約12小時至約4個月、約12小時至約3個月、約12小時至約2個月、約12小時至約1個月、約12小時至約2周、約12小時至約1周、約12小時至約5天、約12小時至約2天、約12小時至約1天、約1天至約1年、約1天至約11個月、約1天至約10個月、約1天至約9個月、約1天至約8個月、約1天至約7個月、約1天至約6個月、約1天至約5個月、約1天至約4個月、約1天至約3個月、約1天至約2個月、約1天至約1個月、約1天至約2周、約1天至約1周、約1天至約5天、約1天至約2天、約2天至約1年、約2天至約11個月、約2天 至約10個月、約2天至約9個月、約2天至約8個月、約2天至約7個月、約2天至約6個月、約2天至約5個月、約2天至約4個月、約2天至約3個月、約2天至約2個月、約2天至約1個月、約2天至約2周、約2天至約1周、約2天至約5天、約5天至約1年、約5天至約11個月、約5天至約10個月、約5天至約9個月、約5天至約8個月、約5天至約7個月、約5天至約6個月、約5天至約5個月、約5天至約4個月、約5天至約3個月、約5天至約2個月、約5天至約1個月、約5天至約2周、約5天至約1周、約1周至約1年、約1周至約11個月、約1周至約10個月、約1周至約9個月、約1周至約8個月、約1周至約7個月、約1周至約6個月、約1周至約5個月、約1周至約4個月、約1周至約3個月、約1周至約2個月、約1周至約1個月、約1周至約2周、約2周至約1年、約2周至約11個月、約2周至約10個月、約2周至約9個月、約2周至約8個月、約2周至約7個月、約2周至約6個月、約2周至約5個月、約2周至約4個月、約2周至約3個月、約2周至約2個月、約2周至約1個月、約1個月至約1年、約1個月至約11個月、約1個月至約10個月、約1個月至約9個月、約1個月至約8個月、約1個月至約7個月、約1個月至約6個月、約1個月至約5個月、約1個月至約4個月、約1個月至約3個月、約1個月至約2個月、約2個月至約1年、約2個月至約11個月、約2個月至約10個月、約2個月至約9個月、約2個月至約8個月、約2個月至約7個月、約2個月至約6個月、約2個月至約5個月、約2個月至約4個月、約2個月至約3個月、約3個月至約1年、約3個月至約11個月、約3個月至約10個月、約3個月至約9個月、約3個月至約8個月、約3個月至約7個月、約3個月至約6個月、約3個月至約5個月、約3個月至約4個月、約4個月至約1年、約4個月至約11個月、約4個月至約10個月、約4個月至約9個月、約4個月至約8個月、約4個月至約7個月、約4個月至約6個月、約4個月至約5個月、約5個月至約1年、約5個月至約11個月、約5個月至約10個月、約5個月至約9個月、約5個月至約8個月、約5個月至約7個月、約5個月至約6個月、約6個月至約1年、約6個月至約11個月、約6個月至約10個月、約6個月至約9個月、約6個月至約8個月、約6個月至約7個月、約7個月至約1年、約7個月至約11個月、約7個月至約10個月、約7個月至約9個月、約7個月至約8個月、約8個月至約1年、約8個月至約11個月、約8個月至約10個 月、約8個月至約9個月、約9個月至約1年、約9個月至約11個月、約9個月至約10個月、約10個月至約1年、約10個月至約11個月或約11個月至約1年的時間段。
在本段描述的方法中，通過這些方法生產的經γ-照射的層析樹脂的結合能力水平大於以大於6.1kGy/小時的速率中的一個或兩個和/或在大於25℃的溫度下進行γ-照射的層析樹脂的結合能力水平。
可以使用業界已知的方法將層析樹脂暴露於γ-照射。例如，可以使用同位素諸如鈷-60或銫-137作為γ射線的來源。可以在約-25℃與約0℃之間(包括端點)或約0℃與約25℃之間(包括端點)的溫度下使層析樹脂暴露於γ-照射。可以使層析樹脂暴露於以下劑量的γ-照射：約0.1kGy至約100kGy之間、約1kGy至約100kGy之間、約1kGy至約90kGy之間、約1kGy至約80kGy之間、約1kGy至約70kGy之間、約1kGy至約65kGy之間、約5kGy至約65kGy之間、約10kGy至約60kGy之間、約10kGy至約55kGy之間、約10kGy至約50kGy之間、約10kGy至約45kGy之間、約10kGy至約40kGy之間、約10kGy至約35kGy之間、約10kGy至約30kGy之間、約15kGy至約50kGy之間、約15kGy至約45kGy之間、約15kGy至約40kGy之間、約15kGy至約35kGy之間、約20kGy至約30kGy之間或約23kGy至約27kGy之間。可以使層析樹脂暴露於足以使層析樹脂的滅菌保證水平為以下的劑量的γ-照射：約或小於1 x 10-6、約或小於1 x 10-7、約或小於10 x 10-8、約或小於1 x 10-11或約或小於1 x 10-12或約1 x 10-6與約1 x 10-12之間、約1 x 10-6與約1 x 10-11之間、約1 x 10-6與約1 x 10-10之間、約1 x 10-6與約1 x 10-9之間、約1 x 10-6與約1 x 10-8之間、1 x 10-6與約1 x 10-7之間、約1 x 10-7與約1 x 10-12之間、約1 x 10-7與約1 x 10-11之間、約1 x 10-7與約1 x 10-10之間、約1 x 10-7與約1 x 10-9之間、約1 x 10-7與約1 x 10-8之間、約1 x 10-8與約1 x 10-12之間、約1 x 10-8與約1 x 10-11之間、約1 x 10-8與約1 x 10-10之間或約1 x 10-8與約1 x 10-9之間。
可以使用業界已知的方法測定足以減少層析樹脂的生物負載的γ-照射的劑量。例如，可以將用一定劑量的γ-照射處理的層析樹脂的生物負載水平與未處理(例如，對照，非γ-照射)層析樹脂的生物負載水平進行比較，並且與未處理的層析樹脂相比，經γ-照射的層析樹脂中的生物負載水平降低指 示所述劑量的γ-照射足以減少層析樹脂的生物負載。本文描述了用於測定組合物(例如，層析樹脂)中生物負載水平的例示性方法。用於測定組合物(例如層析樹脂)中生物負載水平的其他方法是業界已知的。
這些方法中的任一種中的層析樹脂可以是陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、尺寸排阻層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂或親和層析樹脂，或其任何組合。親和層析樹脂的非限制性例子可以包含蛋白質或肽配位體(例如，約5個胺基酸與約100個胺基酸之間、約5個胺基酸與約90個胺基酸之間、約5個胺基酸與約80個胺基酸之間、約5個胺基酸與約70個胺基酸之間、約5個胺基酸與約60個胺基酸之間、約5個胺基酸與約50個胺基酸之間、約5個胺基酸與約40個胺基酸之間、約5個胺基酸與約30個胺基酸之間、約5個胺基酸與約25個胺基酸之間或約5個胺基酸與約20個胺基酸之間)、酶的小分子受質或輔因子、適體、抑制劑(例如競爭性蛋白質抑制劑)或金屬。在一些實施例中，親和層析樹脂包含蛋白質配位體(例如，蛋白A)。親和層析樹脂的其他例子包含輔因子配位體、受質配位體、金屬配位體、產物配位體或適體配位體。在一些例子中，層析樹脂是雙模態層析樹脂(例如，陰離子交換層析樹脂和疏水性相互作用層析樹脂)。層析樹脂可以是陰離子交換層析樹脂(例如，包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團的陰離子交換層析樹脂)。
包含層析樹脂的容器可以是塑料容器(例如，圓柱形管、密封或夾合式盒或密封袋)。在這些方法中使用的容器的非限制性例子包括儲存器皿或層析柱。例如，包含(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物(例如，本文所述的任何例示性組合物)可以存在於密封容器中(例如，密封容器中的漿料或密封容器(例如，層析柱)中的填充層析樹脂)。用於本文所述方法的容器可以是一次性層析柱。在一些實施例中，本文所述方法中使用的容器是佈置於泡罩包裝中的一次性層析柱。容器(例如，儲存器皿或層析柱)的內部總體積可以為約1mL至約1L之間(例如，約1mL與約900mL之間、約1mL與約800mL之間、約1mL與約700mL之間、約1mL與約600mL之間、約1mL與約500mL之間、約1mL與約450mL之間、約1mL與約400mL之間、約1mL與約350mL之間、約1mL與約300mL之間、約1mL 與約250mL之間、約1mL與約200mL之間、約1mL與約150mL之間、約1mL與約100mL之間、約1mL與約75mL之間、約1mL與約50mL之間、約1mL與約40mL之間、約1mL與約30mL之間或約1mL與約20mL之間)。
容器中包含的含有(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物(例如，本文所述的任何例示性組合物)可以以潤濕或潮濕的固體混合物形式存在。例如，容器可以包含沉降的層析樹脂在液體中的漿料。在一些實施例中，容器可以包含填充層析樹脂。例如，包含含有(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物(例如，本文所述的任何組合物)的容器是填充層析柱(例如，其中樹脂被填充在含至少一種醇的液體中)。一些實施例包括，在暴露之前，將包含(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物(例如，本文所述的任何組合物)佈置於容器中。
本文所述的醇、抗氧化劑和/或螯合劑中的任一者可以使用本文所述的例示性濃度的任何組合以任何組合形式使用。例如，液體可以包含至少一種選自以下群組的醇：苄醇、環己醇、異丁醇、2-甲基-2-丁醇、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丙-1-醇、丁-1-醇、戊-1-醇、十六烷-1-醇、2-苯基乙醇、仲苯基乙醇、3-苯基-1-丙醇、1-苯基-1-丙醇、2-苯基-1-丙醇、2-苯基-2-丙醇、1-苯基-2-丁醇、2-苯基-1-丁醇、3-苯基-1-丁醇、4-苯基-2-丁醇、d1-1-苯基-2-戊醇、5-苯基-1-戊醇和4-苯基-1-丁醇。在一些例子中，液體還可以包含至少一種抗氧化劑(例如，至少一種選自以下的抗氧化劑：還原型谷胱甘肽、還原型硫氧還蛋白、還原型半胱胺酸、類胡蘿蔔素、褪黑激素、番茄紅素、生育酚、還原型泛醌、抗壞血酸鹽、膽紅素、尿酸、硫辛酸、類黃酮、酚丙酸、利多卡因、柚皮素、富勒烯、葡萄糖、甘露糖醇、4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基和二甲基甲氧基色原烷醇)和/或至少一種螯合劑(例如，至少一種選自EDTA、DMPS、DMSA、金屬硫蛋白和去鐵胺的螯合劑)。
本文描述了用於確定/鑒別足以改善層析樹脂在用足以減少組合物的生物負載的劑量的γ-照射處理時結合能力的損失的至少一種醇、至少一種抗氧化劑和/或至少一種螯合劑的一種或多種量的方法。用於確定/鑒別足以改善層析樹脂在用足以減少組合物的生物負載的劑量的γ-照射處理時結合能力 的損失的至少一種抗氧化劑和/或螯合劑的一種或多種量的其他方法是業界已知的。
本文還提供了通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的層析樹脂(例如，在儲存容器，例如密封的儲存容器中提供的生物負載減少的層析樹脂)。使用本文所述的任何方法產生的生物負載減少的層析樹脂的滅菌保證水平可以是約或小於1 x 10-6、約或小於1 x 10-7、約或小於10 x 10-8、約或小於1 x 10-11或約或小於1 x 10-12或約1 x 10-6與約1 x 10-12之間、約1 x 10-6與約1 x 10-11之間、約1 x 10-6與約1 x 10-10之間、約1 x 10-6與約1 x 10-9之間、約1 x 10-6與約1 x 10-8之間、1 x 10-6與約1 x 10-7之間、約1 x 10-7與約1 x 10-12之間、約1 x 10-7與約1 x 10-11之間、約1 x 10-7與約1 x 10-10之間、約1 x 10-7與約1 x 10-9之間、約1 x 10-7與約1 x 10-8之間、約1 x 10-8與約1 x 10-12之間、約1 x 10-8與約1 x 10-11之間、約1 x 10-8與約1 x 10-10之間或約1 x 10-8與約1 x 10-9之間。當使用相同蛋白質測試通過本文所述方法生產的層析樹脂和對照未處理層析樹脂兩者的結合能力時，通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的層析樹脂的結合能力可以是未經處理以減少生物負載(例如，未進行γ-照射)的相同層析樹脂的結合能力的至少74%(例如，至少76%、至少78%、至少80%、至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)，或約74%與95%之間、約74%與約95%之間、約76%與約95%之間、至少約78%與約95%之間、約80%與約95%或約74%與約90%之間、約76%與約90%之間、約78%與約90%之間或約80%與約90%之間。
製備生物負載減少的填充層析柱的方法
本文還提供了製備生物負載減少的填充層析柱的方法，所述方法包括提供通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的層析樹脂，以及在無菌或生物負載減少的環境中將層析樹脂填充到生物負載減少的柱中。在一些實施例中，可以通過以下方法生產生物負載減少的填充層析柱：將包含填充層析樹脂和含至少一種醇的液體(例如，本文所述的任何例示性液體， 例如，所述液體任選地還包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑)的柱暴露於足以減少柱和填充層析樹脂的生物負載的劑量的γ-照射，其中至少一種醇的存在量足以改善填充層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。
還提供了通過本文所述的方法生產的一個或多個生物負載減少的填充層析柱。通過本文所述方法生產的一個或多個生物負載減少的填充層析柱中的任一個的滅菌保證水平可以是約或小於1 x 10-6、約或小於1 x 10-7、約或小於10 x 10-8、約或小於1 x 10-11或約或小於1 x 10-12或約1 x 10-6與約1 x 10-12之間、約1 x 10-6與約1 x 10-11之間、約1 x 10-6與約1 x 10-10之間、約1 x 10-6與約1 x 10-9之間、約1 x 10-6與約1 x 10-8之間、1 x 10-6與約1 x 10-7之間、約1 x 10-7與約1 x 10-12之間、約1 x 10-7與約1 x 10-11之間、約1 x 10-7與約1 x 10-10之間、約1 x 10-7與約1 x 10-9之間、約1 x 10-7與約1 x 10-8之間、約1 x 10-8與約1 x 10-12之間、約1 x 10-8與約1 x 10-11之間、約1 x 10-8與約1 x 10-10之間或約1 x 10-8與約1 x 10-9之間。通過本文所述方法生產的一個或多個生物負載減少的填充層析柱可以含有至少一種選自以下的層析樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂(例如，本文所述或業界已知的任何親和層析樹脂)、親水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。例如，本文所述的任何生物負載減少的填充層析柱可以包含含有蛋白質配位體(例如蛋白A)的親和層析樹脂。本文所述的生物負載減少的填充層析柱可以包含陰離子交換層析樹脂(例如，包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團的陰離子交換層析樹脂)。
執行生物負載減少的層析的方法
本文所述的方法包括使用本文提供的生物負載減少的填充層析柱，並且本文所述的方法包括使用一個或兩個MCCS，所述MCCS包括至少一個本文提供的生物負載減少的填充層析柱。經γ-照射的層析樹脂可以是本文所述的任何類型的樹脂(或本領域已知的任何類型的層析樹脂)。
可以使用本文描述的任何方法製備生物負載減少的填充層析柱。例如，可以通過如下方法生產生物負載減少的填充層析柱：用包含一種或多種層 析樹脂和含至少一種醇的液體的組合物(例如，本文所述的任何此類組合物)填充層析柱，並且使填充柱暴露於γ-照射(例如，使用本文所述的任何暴露和條件)。在其他例子中，可以通過如下方法來生產生物負載減少的填充層析柱：將包含層析樹脂和含至少一種醇的液體(例如，本文所述的任何例示性液體，例如任選地還包含至少一種抗氧化劑和/或至少一種螯合劑)的容器暴露於一定劑量的γ-照射，並且用得到的生物負載減少的層析樹脂填充層析柱，得到生物負載減少的層析樹脂。在此類方法中，層析樹脂(在暴露於γ-照射期間存在於容器中)可以以漿料形式存在於容器中，並且在生物負載減少的櫥中填充層析柱。在其他方法中，可以在容器中將與至少含醇的液體(例如，本文所述的任何液體，例如，所述液體任選地還包含至少一種抗氧化劑和/或至少一種螯合劑)一起存在於容器中的層析樹脂以潤濕或潮濕的固體混合物形式暴露於γ-照射，可以使用生物負載減少的緩衝液製備所得的生物負載減少的層析樹脂的漿料(例如，在生物負載減少的櫥中製備)，並且在生物負載減少的櫥中使用得到的漿料填充層析柱。在這些例子中的一些中，可以在填充之前處理層析柱以減少生物負載(例如，高壓處理、γ-照射或暴露於環氧乙烷)。
用於本文所述的任何方法的生物負載減少的填充層析柱的滅菌保證水平(SAL)可以是約1 x 10-3與約1 x 10-12之間、約1 x 10-4與約1 x 10-12之間、1 x 10-5與約1 x 10-11之間、約1 x 10-5與約1 x 10-10之間、約1 x 10-5與約1 x 10-9之間、約1 x 10-6與約1 x 10-9之間或約1 x 10-6與約1 x 10-8之間(包括端點)。
生物負載減少的緩衝液
可以使用一種或多種生物負載減少的緩衝液執行本文所述的方法和過程。如業界可以理解的，生物負載減少的緩衝液可以是層析循環中使用的任何類型的緩衝液(例如，在層析循環中的任何步驟中或在本文所述的任何單元操作中使用的緩衝液)。用於減少緩衝液的生物負載的例示性方法包括過濾(0.2μm孔徑過濾)、高壓處理和γ-照射。用於減少緩衝液的生物負載的其他方法是業界已知的。生物負載減少的緩衝液的滅菌保證水平可以是約1 x 10-3與約1 x 10-12之間、約1 x 10-4與約1 x 10-12之間、1 x 10-5與約1 x 10-11之間、約1 x 10-5與約1 x 10-10之間、約1 x 10-5與約1 x 10-9之間、約1 x 10-6與約1 x 10-9之間或約1 x 10-6與約1 x 10-8之間(包括端點)。
重組治療性蛋白
如本文所述的重組蛋白可以是重組治療性蛋白。可以通過本文提供的方法生產的重組治療性蛋白的非限制性例子包括免疫球蛋白(包括輕鏈和重鏈免疫球蛋白、抗體或抗體片段(例如，本文所述的任何抗體片段))、酶(例如，半乳糖苷酶(例如，α-半乳糖苷酶)、Myozyme®或Cerezyme®)、蛋白質(例如，人促紅細胞生成素、腫瘤壞死因子(TNF)或干擾素α或β)或免疫原性或抗原性蛋白或蛋白質片段(例如，用於疫苗的蛋白質)。重組治療性蛋白可以是包括至少一種多功能重組蛋白支架的工程化抗原結合多肽，所述多肽(參見，例如，Gebauer等人，Current Opin.Chem.Biol.13：245-255,2009；和美國專利申請公佈號2012/0164066(通過引用以其整體併入本文中)中所述的重組抗原結合蛋白)。作為抗體的重組治療性蛋白的非限制性例子包括：帕尼單抗(panitumumab)、奧馬珠單抗(omalizumab)、阿巴伏單抗(abagovomab)、阿昔單抗(abciximab)、阿克托單抗(actoxumab)、阿達木單抗(adalimumab)、阿德木單抗(adecatumumab)、阿非莫單抗(afelimomab)、阿夫土珠單抗(afutuzumab)、阿拉賽珠單抗(alacizumab)、阿拉賽珠單抗(alacizumab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、阿利庫單抗(alirocumab)、阿妥莫單抗(altumomab)、阿瑪妥昔單抗(amatuximab)、安那莫單抗(anatumomab)、阿泊珠單抗(apolizumab)、阿替努單抗(atinumab)、托珠單抗(tocilizumab)、巴西利單抗(basilizimab)、貝妥莫單抗(bectumomab)、貝利木單抗(belimumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、比西單抗(biciromab)、康納單抗(canakinumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、達克珠單抗(daclizumab)、登蘇單抗(densumab)、依庫珠單抗(eculizumab)、依決洛單抗(edrecolomab)、依法珠單抗(efalizumab)、依芬古單抗(efungumab)、厄馬索單抗(ertumaxomab)、伊瑞西珠單抗(etaracizumab)、戈利木單抗(golimumab)、英夫利昔單抗(infliximab)、那他珠單抗(natalizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、帕尼單抗(panitumumab)、 帕妥珠單抗(pertuzumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)、利妥昔單抗(rituximab)、托珠單抗(tocilizumab)和曲妥珠單抗(trastuzumab)。可通過本文所述方法生產的重組治療性抗體的其他例子是業界已知的。可以通過本發明方法生產/純化的重組治療性蛋白的其他非限制性例子包括：阿糖苷酶α、拉羅尼酶、阿巴西普、加硫酶、促黃體素α、抗血友病因子、半乳糖苷酶β(agalsidase beta)、干擾素β-1a、達貝泊汀α(darbepoetin alfa)、替奈普酶、依那西普(etanercept)、凝血因子IX、促卵泡激素、干擾素β-1a、伊米苷酶、阿法鏈道酶(dornase alfa)、阿法依泊汀(epoetin alfa)和阿替普酶。
可以通過從細胞(例如，哺乳動物細胞)去除或以其他方式物理分離液體培養基，從液體培養基(例如，第一和/或第二液體培養基)回收分泌的可溶性重組治療性蛋白。用於從細胞(例如，哺乳動物細胞)去除液體培養基的多種不同方法是本領域已知的，包括例如離心、過濾、移液和/或抽吸。然後可以使用多種生物化學技術從液體培養基回收分泌的重組治療性蛋白並進一步純化，所述技術包括各種類型的層析(例如，親和層析、分子篩層析、陽離子交換層析、陰離子交換層析或疏水性相互作用層析或其任何組合)和/或過濾(例如，分子量截留過濾)。
層析循環
如業界所熟知的，層析循環中的步驟可以根據層析樹脂、用於執行循環中每個步驟的緩衝液和靶重組蛋白(例如，重組治療性蛋白)的生物物理特徵而不同。例如，親和層析柱可以包括以下步驟：用包含靶重組蛋白的流體裝載親和層析柱，洗滌柱以去除不需要的生物物質(例如，污染性蛋白和/或小分子)，洗脫與柱結合的靶重組蛋白，並使柱再平衡。使用陽離子和/或陰離子交換層析柱進行的層析循環，其中靶重組蛋白在裝載步驟中與層析樹脂結合，可以包括如下步驟：用包含靶蛋白的流體裝載柱，洗滌柱以去除不需要的生物物質，洗脫與柱結合的靶重組蛋白，並使柱再平衡。在其他例子中，使用陽離子和/或陰離子交換層析柱進行的層析循環，其中不需要的生物物質在裝載步驟期間與層析樹脂結合，而靶重組蛋白不結合，可以包括如下步驟：用包含靶蛋白的流體裝載柱，在流過物中收集 靶重組蛋白，並使柱再平衡。如業界所熟知的，層析循環中的任何單個步驟都可以包括單一緩衝液或多種緩衝液(例如，兩種或更多種緩衝液)，並且層析循環中的任何單個步驟中的一個或多個可以包括緩衝液梯度。單個層析循環的各種熟知方面的任何組合可以以任何組合形式用於這些方法中，例如，一種或多種不同層析樹脂、一種或多種流速、一種或多種緩衝液、柱的一種或多種空隙體積、柱的一種或多種床體積、每個步驟中使用的緩衝液的一種或多種體積、包含靶蛋白的流體的一種或多種體積以及每個步驟中使用的一種或多種緩衝液的數量和類型。
執行生物負載減少的柱層析的方法
本文提供了執行生物負載減少的層析的方法。這些方法包括提供使用本文所述的任何方法生產的生物負載減少的填充層析柱，以及使用生物負載減少的填充層析柱執行柱層析。生物負載減少的填充層析柱可以以任何組合形式包含本文所述的任何層析樹脂中的至少一種。例如，存在於生物負載減少的填充層析柱中的層析樹脂可以是包含蛋白質配位體(例如蛋白A)的親和樹脂，或者可以包括陰離子交換層析樹脂。生物負載減少的填充層析柱可以具有本文所述的任何例示性內部體積。生物負載減少的填充層析柱可以具有本文所述或業界已知的任何形狀(例如，圓柱形、近圓柱形或橢圓形)。可以使用這些方法中執行的柱層析純化或分離重組蛋白(例如，本文所述或業界已知的任何重組治療性蛋白)。在一些例子中，生物負載減少的填充層析柱是多柱層析系統(MCCS)的一部分，例如，可以是週期性逆流層析系統(PCGS)的一部分。
所執行的柱層析可以包括本文所述或業界已知的至少一個層析循環。例如，至少一個層析循環可以包括以下步驟：通過將層析樹脂暴露於含重組蛋白的液體來捕獲重組蛋白；通過將層析樹脂暴露於洗滌緩衝液來洗滌層析樹脂，通過將層析樹脂暴露於洗脫緩衝液來洗脫重組蛋白；和通過將層析樹脂暴露于再生緩衝液來使層析樹脂再生。在一些例子中，含重組蛋白的液體是液體培養基(例如，從灌注或分批培養收集的液體培養基)或稀釋的液體培養基(例如，用緩衝液稀釋的培養基)。
可以使用封閉且整合的系統(例如，本文所述或業界已知的任何例示性封閉和整合系統)執行柱層析。例如，可以使用封閉且整合的系統執行柱層析，其中緩衝液是生物負載減少的緩衝液。如業界熟知的，可以使用各種不同的方法(例如，通過過濾，通過高壓處理或熱處理製備)來產生生物負載減少的緩衝液。
柱層析可以包括兩個或更多個(例如，3個或更多個、4個或更多個、5個或更多個、6個或更多個、7個或更多個、8個或更多個、9個或更多個、10個或更多個、11個或更多個、12個或更多個、13個或更多個、14個或更多個、15個或更多個、20個或更多個、25個或更多個、30個或更多個、35個或更多個、40個或更多個、45個或更多個、50個或更多個、55個或更多個、60個或更多個、65個或更多個、70個或更多個、75個或更多個、80個或更多個、85個或更多個、90個或更多個、95個或更多個或100個或更多個)層析循環。在一些例子中，在至少3天(例如，至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天、至少50天、至少55天、至少60天、至少65天、至少70天、至少75天、至少80天、至少85天、至少90天、至少95天或至少100天)的時間段內連續執行柱層析。
在一些實施例中，與未用γ-照射處理的相同樹脂相比(當使用相同蛋白質測試兩種樹脂的結合能力時)，生物負載減少的填充層析柱中的層析樹脂的結合能力百分比為約75%至約100%之間(例如，約76%與約98%之間、約76%與約96%之間、約76%與約94%之間、約76%與約92%之間、約76%與約90%之間、約78%與約100%之間、約78%與約98%之間、約78%與約96%之間、約78%與約94%之間、約78%與約92%之間、約78%與約90%之間、約80%與約100%之間、約80%與約98%之間、約80%與約96%之間、約80%與約94%之間、約80%與約92%之間、約80%與約90%之間、約82%與約100%之間、約82%與約98%之間、約82%與約96%之間、約82%與約94%之間、約82%與約92%之間、約82%與約90%之間、約84%與約100%之間、約84% 與約98%之間、約84%與約96%之間、約84%與約94%之間、約84%與約92%之間、約84%與約90%之間、約86%與約100%之間、約86%與約98%之間、約86%與約96%之間、約86%與約94%之間、約86%與約92%之間、約88%與約100%之間、約88%與約98%之間、約88%與約96%之間、約88%與約94%之間、約90%與約100%之間、約90%與約98%之間、約90%與約96%之間、約92%與約100%之間或約92%與約98%之間)(例如，在暴露於γ-照射之後立即評估)。
用於製造重組蛋白的整合、封閉或基本上閉合且連續的方法
本文提供了用於製造純化的重組蛋白(例如重組治療性蛋白)的整合、封閉或基本上封閉且連續的方法。這些方法包括提供基本上不含細胞的包含重組蛋白(例如重組治療性蛋白)的液體培養基。
一些方法包括將液體培養基連續饋送到多柱層析系統(MCCS)中，所述系統包括至少一個本文提供的生物負載減少的填充層析柱，其中這些方法利用生物負載減少的緩衝液，是整合的，並且從液體培養基連續運行至來自MCCS的洗脫物，所述洗脫物是純化的重組蛋白(例如，治療性蛋白藥物)。
一些方法包括將液體培養基連續饋送到第一MCCS(MCCS1)中，使用MCCS1捕獲來自液體培養基中的重組蛋白，從MCCS1產生包含重組蛋白的洗脫物並將洗脫物連續饋送到第二MCCS(MCCS2)中，並且將來自洗脫物的重組蛋白連續饋送到MCCS2中，並且隨後洗脫重組蛋白，從而產生純化的重組蛋白，其中MCCS1和/或MCCS2中的至少一個柱是本文提供的生物負載減少的填充層析柱，所述方法利用生物負載減少的緩衝液，是整合的，並且從液體培養基連續運行至純化的重組蛋白。
在一些例子中，MCCS、MCCS1和/或MCCS2中使用的每個層析柱是本文提供的生物負載減少的填充層析柱。一些實施例還包括將純化的重組蛋白配製成醫藥組合物的步驟。
本文所述的方法從包含重組蛋白的液體培養基提供連續且時間有效的純化重組蛋白的產生。例如，分別地將包含治療性蛋白的液體培養基饋送 到MCCS或MCCS1中與從MCCS或MCCS2洗脫重組蛋白之間經過的時間可以是例如約4小時與約48小時之間(包括端點)，例如約4小時與約40小時之間、約4小時與約35小時之間、約4小時與約30小時之間、約4小時與約28小時之間、約4小時與約26小時之間、約4小時與約24小時之間、約4小時與約22小時之間、約4小時與約20小時之間、約4小時與約18小時之間、約4小時與約16小時之間、約4小時與約14小時之間、約4小時與約12小時之間、約6小時與約12小時之間、約8小時與約12小時之間、約6小時與約20小時之間、約6小時與約18小時之間、約6小時與約14小時之間、約8小時與約16小時之間、約8小時與約14小時之間、約8小時與約12小時之間、約10小時與20小時之間、約10小時與18小時之間、約10小時與16小時之間、約10小時與14小時之間、約12小時與約14小時之間、約10小時與約40小時之間、約10小時與約35小時之間、約10小時與約30小時之間、約10小時與約25小時之間、約15小時與約40小時之間、約15小時與約35小時之間、約15小時與約30小時之間、約20小時與約40小時之間、約20小時與約35小時之間或約20小時與約30小時之間(包括端點)。在其他例子中，分別地將包含重組蛋白的液體培養基饋送到MCCS或MCCS1中與從MCCS或MCCS2洗脫重組蛋白之間經過的時間是例如大於約4小時與少於約40小時之間(包括端點)，例如大於約4小時與少於約39小時之間、約38小時、約37小時、約36小時、約35小時、約34小時、約33小時、約32小時、約31小時、約30小時、約29小時、約28小時、約27小時、約26小時、約25小時、約24小時、約23小時、約22小時、約21小時、約20小時、約19小時、約18小時、約17小時、約16小時、約15小時、約14小時、約13小時、約12小時、約11小時、約10小時、約9小時、約8小時、約7小時、約6小時、約5小時或約4.5小時(包括端點)。
可以用於這些方法(MCCS、MCCS1和/或MCCS2)的任一種中的MCCS的非限制性方面描述于美國臨時專利申請序列號61/775,060和61/856,390(各自通過引用併入本文中)中。
一些例示性方法不利用保持步驟(例如，在整個方法中不使用儲器(例如，斷流罐))。其他方法可以在整個方法中使用最多1、2、3、4或5個儲器(例如，斷流罐)。本文所述的任何方法可以在整個方法中利用最多1、 2、3、4或5個儲器(例如，一個或多個斷流罐)，其中每個斷流罐僅保持重組蛋白總共例如約5分鐘與少於約6小時之間(包括端點)，例如約5分鐘與約5小時之間、約4小時、約3小時、約2小時、約1小時或約30分鐘(包括端點)的時間段。
一些方法利用一個、兩個、三個、四個、五個或六個儲器(例如，一個或多個斷流罐)，並且容量可以是例如1mL與約300mL之間(包括端點)，例如1mL與約280mL之間、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約20mL或約10mL(包括端點)。(在本文所述的任何方法中)用於在將流體饋送到MCCS或MCCS1之前進行保持的任何一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)的容量可以是例如1mL與MCCS或MCCS1中第一柱裝載量的約100%之間(包括端點)，例如1mL與約90%之間、約80%、約70%、約60%、約50%、約40%、約30%、約20%、約10%或約5%(包括端點)。一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)可以用於在來自MCCS1的洗脫物進入MCCS2之前保持所述洗脫物，並且容量可以是例如1mL與MCCS2中第一柱裝載量的約100%之間(包括端點)，例如1mL與約90%之間、約80%、約70%、約60%、約50%、約40%、約30%、約20%、約10%或約5%(包括端點)。
下文詳細描述了這些方法的各種其他方面，這些方面可以以任何組合形式用於(但不限於)本文提供的方法中。下文描述了所提供方法的例示性方面；然而，業界熟習此項技術者將理解，可以在本文所述的方法中加入其他步驟，並且可以使用其他材料來進行本文所述方法的任何步驟。
液體培養基
基本上不含細胞的包含重組蛋白(例如重組治療性蛋白)的液體培養基可以源自任何來源。例如，可以從重組細胞培養物(例如，重組細菌、酵母或哺乳動物細胞培養物)獲得液體培養基。可以從進料分批細胞(例如，哺乳動物細胞)培養物(例如，包含分泌重組蛋白的哺乳動物細胞的培養物的進料分批生物反應器)或灌注細胞(例如哺乳動物細胞)培養物 (例如，包含分泌重組蛋白的哺乳動物細胞的培養物的灌注生物反應器)獲得液體培養基。液體培養基也可以是來自分泌重組蛋白的細菌或酵母細胞的培養物的澄清液體培養基。
可以將從重組細胞培養物獲得的液體培養基過濾或使其澄清，以獲得基本上不含細胞和/或病毒的液體培養基。用於過濾液體培養基或使其澄清以去除細胞的方法是業界已知的(例如，0.2-μm過濾和使用交替切向流(ATFTM)系統過濾)。還可以通過如下方法來從液體培養基去除重組細胞：使用離心並且取出作為基本上不含細胞的液體培養基的上清液，或者使細胞沉降到包含液體培養基的容器(例如，生物反應器)的重力底部，並且取出遠離沉降的重組細胞的液體培養基(基本上不含細胞的液體培養基)。
可以從產生本文所述或業界已知的任何重組蛋白(例如，重組治療性蛋白)的重組細胞(例如，重組細菌、酵母或哺乳動物細胞)的培養物獲得液體培養基。本文所述的任何方法的一些例子還可以包括培養產生重組蛋白(例如，重組治療性蛋白)的重組細胞(例如，重組細菌、酵母或哺乳動物細胞)的步驟。
液體培養基可以是本文所述或業界已知的任何類型的液體培養基。例如，液體培養基可以選自：無動物源性組分的液體培養基、無血清液體培養基、含血清的液體培養基、化學成分確定的液體培養基和不含蛋白質的液體培養基。在本文所述的任何方法中，可以將從培養物獲得的液體培養基在饋送到MCCS或MCCS1中之前通過添加第二流體(例如，緩衝液)進行稀釋。
在將基本上不含細胞的包含重組蛋白的液體培養基饋送到MCCS或MCCS1中之前，可以儲存所述液體培養基(例如在低於約15℃(例如，低於約10℃、低於約4℃、低於約0℃、低於約-20℃、低於約-50℃、低於約-70℃或低於約-80℃)的溫度下至少1天(例如，至少約2天、至少約5天、至少約10天、至少約15天、至少約20天或至少約30天))。可替代地，在一些例子中，將液體培養基直接從生物反應器饋送到MCCS或MCCS1中(例如，在過濾或澄清步驟之後直接從生物反應器饋送到MCCS或MCCS1中)。
多柱層析系統
本文所述的方法包括使用MCCS或兩個或更多個(例如，兩個、三個、四個、五個或六個)多柱層析系統(MCCS)(例如，MCCS1和MCCS2)。MCCS可以包括兩個或更多個層析柱，兩個或更多個層析膜，或者至少一個層析柱與至少一個層析膜的組合。在非限制性例子中，MCCS(例如，本文任何方法中的MCCS、MCCS1和/或MCCS2)可以包括四個層析柱、三個層析柱和一個層析膜、三個層析柱、兩個層析柱、兩個層析膜以及兩個層析柱和一個層析膜。可以設想將層析柱和/或層析膜的組合的其他例子用於(但不限於)業界熟習此項技術者所述的MCCS(例如，本文所述的任何方法中的MCCS、MCCS1和/或MCCS2)。存在於MCCS中的單個層析柱和/或層析膜可以是相同的(例如，具有相同的形狀、體積、樹脂、捕獲機制和單元操作)，或者可以是不同的(例如，具有不同形狀、體積、樹脂、捕獲機制和/或單元操作中的一個或多個)。存在于MCCS(例如，本文所述的任何方法中的MCCS、MCCS1和/或MCCS2)中的一個或多個單個層析柱和/或層析膜可以執行相同的單元操作(例如，捕獲、純化或精製的單元操作)或不同的單元操作(例如，選自例如捕獲、純化、精製、失活化病毒、調節含重組蛋白的流體的離子濃度和/或pH以及過濾的不同單元操作)。例如，在本文所述方法的例子中，MCCS或MCCS1中至少一個層析柱和/或層析膜執行捕獲重組蛋白的單元操作。
可以存在於MCCS中(例如，存在於MCCS、MCCS1和/或MCCS2中)的一個或多個層析柱的樹脂體積可以是例如約1mL與約2mL之間、約5mL、約10mL、約15mL、約20mL、約25mL、約30mL、約35mL、約40mL、約45mL、約50mL、約55mL、約60mL、約65mL、約70mL、約75mL、約80mL、約85mL、約90mL、約95mL或約100mL(包括端點)。可以存在於MCCS中(例如，存在於MCCS、MCCS1和/或MCCS2中)的一個或多個層析柱的樹脂體積可以是約2mL至約100mL之間、約2mL與約90mL之間、約2mL與約80mL之間、約2mL與約70mL之間、約2mL與約60mL之間、約2mL與約50mL之間、約5mL與約50mL之間、約2mL與約45mL之間、約5mL與約45mL之間、約2mL與約40mL之間、約5mL與約40mL之 間、約2mL與約35mL之間、約5mL與約35mL之間、約2mL與約30mL之間、約5mL與約30mL之間、約2mL與約25mL之間、約5mL與約25mL之間、約15mL與約60mL之間、約10mL與約60mL之間、約10mL與約50mL之間和約15mL與約50mL之間。在本文所述的任何方法中使用的MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)中的一個或多個層析柱可以具有基本上相同的樹脂體積或可以具有不同的樹脂體積。用於MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)中的一個或多個層析柱的流速可以是例如約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘與約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約25.0mL/分鐘之間或約1.0mL/分鐘與約15.0mL/分鐘之間)。
MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)中的一個或多個層析柱可以具有基本上相同的形狀或可以具有基本上不同的形狀。例如，MCCS中(例如，在MCCS、MCCS1和/或MCCS2中)的一個或多個層析柱可以具有基本上圓柱形狀或可以具有基本上相同的橢圓柱形狀。
可以存在於MCCS中(例如，存在於MCCS、MCCS1和/或MCCS2中)的一個或多個層析膜的床體積可以是例如約1mL至約500mL之間(例如，約1mL至約475mL之間、約1mL至約450mL之間、約1mL至約425mL之間、約1mL至約400mL之間、約1mL至約375mL之間、約1mL至約350mL之間、約1mL至約325mL之間、約1mL至約300mL之間、約1mL至約275mL之間、約1mL至約250mL之間、約1mL至約225mL之間、約1mL至約200mL之間、約1mL至約175mL之間、約1mL至約150mL之間、約1mL至約125mL之間、約1mL至約100mL之間、約2mL至約100mL之間、約5mL至約100mL之間、約1mL至約80mL之間、約2mL至約80mL之間、約5mL至約80mL之間、約1mL至約60mL之間、約2mL至約60mL之間、約5mL至約60mL之間、約1mL至約40mL之間、約2mL至約40mL之間、約5mL至約40mL之間、約1mL至約30mL之間、約2mL至約30mL之間、約5mL至約30mL之間、約1mL與約25mL之間、約2mL與約25mL之間、約1mL與約20mL之間、 約2mL與約20mL之間、約1mL與約15mL之間、約2mL與約15mL之間、約1mL與約10mL之間或約2mL與約10mL之間)。
在本文所述的任何方法中使用MCCS、MCCS1和/或MCCS2期間，可以採用一個或多個(例如，三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個、二十個、二十一個、二十二個、二十三個或二十四個)不同類型的生物負載減少的緩衝液。如業界所已知，在本文所述的方法中用於MCCS、MCCS1和/或MCCS2的一種或多種類型的生物負載減少的緩衝液將取決於MCCS、MCCS1和/或MCCS2的層析柱和/或層析膜中存在的樹脂、重組蛋白的生物物理特性，以及由MCCS、MCCS1和/或MCCS2的一個或多個特定層析柱和/或層析膜執行的單元操作(例如，本文所述的任何例示性單元操作)。在本文所述的任何方法中使用MCCS、MCCS1和/或MCCS2期間，所採用的緩衝液的體積和類型也可以由業界熟習此項技術者確定(例如，在下文中更詳細地討論)。例如，可以選擇在本文所述的任何方法中使用MCCS、MCCS1和/或MCCS2期間所採用的緩衝液的體積和一個或多個類型，以優化純化的重組蛋白(例如，重組蛋白藥物產品)中的以下中的一個或多個：重組蛋白的總產量、重組蛋白的活性、重組蛋白的純度水平、以及含重組蛋白的流體(例如液體培養基)中生物污染物的去除(例如，不存在活性病毒、分枝桿菌、酵母菌、細菌或哺乳動物細胞)。
MCCS、MCCS1和/或MCCS2可以是週期性逆流層析系統(PCCS)。PCCS可以例如包括兩個或更多個層析柱(例如，三個柱或四個柱)，將所述層析柱切換以允許從兩個或更多個層析柱連續洗脫重組蛋白。PCCS可包括兩個或更多個層析柱，兩個或更多個層析膜，或者至少一個層析柱與至少一個層析膜。柱操作(循環)通常由裝載、洗滌、洗脫和再生步驟組成。在PCCS中，將多個柱用於以循環方式離散地且連續地運行相同的步驟。由於柱是串聯操作的，因此經過一個柱的流和來自該柱的洗液由另一個柱捕獲。PCCS的該獨特特徵允許樹脂的裝載接近其靜態結合能力而不是動態結合能力，這在分批模式層析過程中是典型的。由於連續循環和洗脫，進入PCCS的流體被連續地處理，並且連續產生包含重組蛋白的洗脫物。
採用柱切換策略在PCCS循環中從一個步驟前進到另一個步驟。可以在PCCS中使用的柱切換的例子如美國臨時專利申請序列號61/775,060和61/856,390中所描述。例如，柱切換方法可以採用每個柱兩個自動切換操作：其中第一個與初始產物通過物有關，而第二個與柱飽和一致。確定應在何時進行柱切換操作可以通過監測來自PCCS中存在的每個層析柱的洗脫物中的重組蛋白濃度(例如，通過UV監測執行的監測)來確定。例如，柱切換可以通過能夠通過反饋控制在線量測重組蛋白濃度的任何PAT工具來確定。PAT工具能夠通過反饋控制實時在線量測重組蛋白濃度。如業界所已知，還可以基於時間或通過MCCS、MCCS1和/或MCCS2中的一個或多個層析柱和/或層析膜的流體(例如，緩衝液)的量來設計柱開關。
在PCCS中，重組蛋白在PCCS中存在的每個層析柱和/或層析膜上的停留時間(RT)可以在不增加柱/膜尺寸的情況下減少，因為可以在PCCS中的另一個柱/膜上捕獲來自第一柱/膜的通過物。可以設計連續處理系統來通過使用以下等式改變柱/膜體積(V)和RT來以任何灌注速率(D)處理液體培養基：V=D * RT。
可以由本發明所述的方法中使用的MCCS或MCC1和/或MCCS2執行的一個或多個單元操作包括，例如，捕獲重組蛋白，失活化含重組蛋白的流體中存在的病毒，純化重組蛋白，精製重組蛋白，保持含重組蛋白的流體(例如，使用本文所述的一個或多個例示性斷流罐中的任一個)，從含重組蛋白的流體中過濾或去除顆粒物質和/或細胞，以及調節含重組蛋白的流體的離子濃度和/或pH。
在一些實施例中，MCCS或MCCS1包括至少一個執行捕獲重組蛋白的單元操作的層析柱和/或層析膜。捕獲的單元操作可以使用至少一種例如利用捕獲機制的層析柱和/或層析樹脂執行。捕獲機制的非限制性例子包括蛋白A結合捕獲機制、抗體或抗體片段結合捕獲機制、受質結合捕獲機制、適體結合捕獲機制、標簽結合捕獲機制(例如，基於poly-His標簽的捕獲機制)和輔因子結合捕獲機制。還可以使用可以用於執行陽離子交換或陰離子交換層析、分子篩層析或疏水性相互作用層析的樹脂執行捕獲。本文描述了 可以用於捕獲重組蛋白的非限制性樹脂。可以用於捕獲重組蛋白的樹脂的其他例子是業界已知的。
可以使用MCCS、MCCS1和/或MCCS2(例如，其包括能夠在約3.0至5.0之間(例如，約3.5至約4.5之間、約3.5至約4.25之間、約3.5至約4.0之間、約3.5至約3.8之間或約3.75)的pH下培育含重組蛋白的流體持續至少30分鐘的時間段(例如約30分鐘至1.5小時之間的時間段、約30分鐘至1.25小時之間的時間段、約0.75小時至1.25小時之間的時間段或約1小時的時間段)的層析柱、層析膜或保持罐)執行失活化含重組蛋白的流體中存在的病毒的單元操作。
可以使用一個或多個MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)執行純化重組蛋白的單元操作，所述MCCS包括例如包含例如利用捕獲系統的樹脂的層析柱或層析膜。捕獲機制的非限制性例子包括蛋白A結合捕獲機制、抗體或抗體片段結合捕獲機制、受質結合捕獲機制、適體結合捕獲機制、標簽結合捕獲機制(例如，基於poly-His標簽的捕獲機制)和輔因子結合捕獲機制。還可以使用可以用於執行陽離子交換或陰離子交換層析，分子篩層析或疏水性相互作用層析的樹脂執行純化。本文描述了可以用於純化重組蛋白的非限制性樹脂。可以用於純化重組蛋白的樹脂的其他例子是業界已知的。
可以使用一個或多個MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)執行精製重組蛋白的單元操作，所述MCCS包括例如包含樹脂的層析柱或層析膜，所述樹脂例如可以用於執行陽離子交換、陰離子交換、分子篩層析或疏水性相互作用層析。本文描述了可以用於精製重組蛋白的非限制性樹脂。可以用於精製重組蛋白的樹脂的其他例子是業界已知的。
可以使用MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)執行保持含重組蛋白的流體的單元操作，所述MCCS在MCCS或組合的MCCS1和MCCS2中包括至少一個儲器(例如，斷流罐)或最多1、2、3、4或5個儲器(例如，一個或多個斷流罐)。例如，可以用於實現該單元操作的一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)的體積可以各自為約1mL至約1L之間(例如，約1mL至約800mL之間、約1mL至約600mL之間、約1mL至約500mL之間、 約1mL至約400mL之間、約1mL至約350mL之間、約1mL至約300mL之間、約10mL與約250mL之間、約10mL與約200mL之間、約10mL與約150mL之間或約10mL與約100mL之間)。本文所述的方法中使用的一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)的容量可以是例如1mL與約300mL之間(包括端點)，例如1mL與約280mL之間、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約20mL或約10mL(包括端點)。(本文所述的任何方法中)用於在流體進入MCCS或MCCS1之前保持所述流體的一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)中任一個的容量可以是例如1mL與MCCS或MCCS1中第一柱裝載量的約100%之間(包括端點)，約1mL與約90%之間、約80%、約70%、約60%、約50%、約40%、約30%、約20%、約10%或約5%(包括端點)。用於在來自MCCS1的洗脫物(包含重組蛋白)進入MCCS2之前保持所述洗脫物的一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)中任一個的容量可以是例如1mL與MCCS2中第一柱裝載量的約100%之間(包括端點)，例如約1mL與約90%之間、約80%、約70%、約60%、約50%、約40%、約30%、約20%、約10%或約5%(包括端點)。
一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)可以各自保持含重組蛋白的流體至少10分鐘(例如，至少20分鐘、至少30分鐘、至少1小時、至少2小時、至少4小時或至少6小時)。在其他例子中，一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)僅保持重組蛋白總共例如約5分鐘與少於約6小時之間(包括端點)，例如約5分鐘與約5小時之間、約4小時、約3小時、約2小時、約1小時或約30分鐘(包括端點)的時間段。一個或多個儲器(例如，一個或多個斷流罐)可以用於保持和冷藏(例如，在低於25℃、低於15℃或低於10℃的溫度下)含重組蛋白的流體。儲器可以具有任何形狀，包括圓柱形、橢圓圓柱形或近似矩形的密封且不可滲透袋。
可以使用MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)執行過濾含重組蛋白的流體的單元操作，所述MCCS包括例如過濾器或包含分子篩樹脂的層析柱或層析膜。如業界所已知，業界可獲得各種亞微米過濾器(例如，孔徑為小於1μm、小於0.5μm、小於0.3μm、約0.2μm、小於0.2μm、小於100 mm、小於80nm、小於60nm、小於40nm、小於20nm或小於10nm的過濾器)，所述過濾器能夠去除任何沉澱的物質和/或細胞(例如，沉澱的未折疊蛋白質；沉澱的不需要的宿主細胞蛋白；沉澱的脂質；細菌；酵母細胞；真菌細胞；分枝桿菌；和/或哺乳動物細胞)。已知孔徑為約0.2μm或小於0.2μm的過濾器可有效地從含重組蛋白的流體中去除細菌。如業界所已知，包含分子篩樹脂的層析柱或層析膜也可以用於MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)中來執行過濾含重組蛋白的流體的單元操作。
可以使用MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)來執行調節含重組蛋白的流體的離子濃度和/或pH的單元操作，所述MCCS包括並且利用緩衝液調節儲器(例如，在線緩衝液調節儲器)以將新緩衝溶液添加到含重組蛋白的流體中(例如，在MCCS、MCCS1和/或MCCS2內的柱之間，或在倒數第二個MCCS(例如，MCCS1)中的最後一個柱之後並且在將含重組蛋白的流體饋送到下一個MCCS(例如MCCS2)的第一個柱中之前)。如業界可以理解的，在線緩衝液調節儲器可以具有任何尺寸(例如，大於100mL)，並且可以包含任何緩衝溶液(例如具有以下中的一個或多個的緩衝溶液：與含重組蛋白的流體相比升高或降低的pH；與含重組蛋白的流體相比增加或減少的離子(例如，鹽)濃度；和/或增加或減少的如下試劑的濃度，該試劑與重組蛋白競爭地結合于存在於MCCS(例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2)的至少一個層析柱或至少一個層析膜中的樹脂)。
MCCS、MCCS1和/或MCCS2可以執行兩個或更多個單元操作。例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2各自可以至少執行以下單元操作：捕獲重組蛋白並失活化含重組蛋白的流體中存在的病毒；捕獲重組蛋白，失活化含重組蛋白的流體中存在的病毒，並調節含重組蛋白的液體的離子濃度和/或pH；純化重組蛋白並精製重組蛋白；純化重組蛋白，精製重組蛋白，並過濾含重組蛋白的流體或從含重組蛋白的流體去除沉澱物和/或特定物質；以及純化重組蛋白，精製重組蛋白，過濾含重組蛋白的流體或從含重組蛋白的流體去除沉澱物和/或顆粒物，並調節含重組蛋白的流體的離子濃度和/或pH。
捕獲重組蛋白
本發明方法包括使用MCCS或MCCS1捕獲重組蛋白的步驟。如本領域可以理解的，可以使用各種不同方式將包含重組蛋白的液體培養基連續饋送到MCCS或MCCS1上。例如，可以將液體培養基主動泵入MCCS或MCCS1中，或者可以將液體培養基使用重力饋送到MCCS或MCCS1中。可以將液體培養基在饋送到MCCS或MCCS1中之前儲存在儲器(例如，保持罐)中，或者可以將液體培養基從包含細胞(例如，向培養基中分泌重組蛋白的哺乳動物細胞)培養物的生物反應器主動泵送到MCCS或MCCS1中。
可以將液體培養基以約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘與約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約25.0mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約15.0mL/分鐘之間)的流速饋送(裝載)到MCCS或MCCS1中。包含重組蛋白的液體培養基可以來自本文所述或業界已知的任何例示性來源。
一些例子還包括將液體培養基在饋送到MCCS或MCCS1中之前進行過濾的任選步驟。可以使用本文所述的過濾包含重組蛋白的液體培養基或流體的任何例示性方式或業界已知的任何過濾方式將包含重組蛋白的液體培養基在饋送到MCCS或MCCS1中之前進行過濾。
在本文所述的方法中，使用MCCS或MCCS1從液體培養基捕獲重組蛋白。如業界可以理解的，為了實現重組蛋白的捕獲，MCCS或MCCS1中的至少一個層析柱或至少一個層析膜必須包含利用捕獲機制(例如，本文所述的任何例示性捕獲機制)的樹脂，或包含能夠執行陽離子交換、陰離子交換、分子篩或疏水性相互作用層析的樹脂。例如，如果重組蛋白是抗體或抗體片段，則捕獲系統可以是蛋白A結合捕獲機制或抗原結合捕獲機制(其中捕獲抗原被重組抗體或抗體片段特異性識別)。如果重組蛋白是酶，則捕獲機制可以使用特異性結合酶的抗體或抗體片段來捕獲重組酶，使用酶的受質來捕獲重組酶，使用酶的輔因子來捕獲重組蛋酶，或者，如果重組酶包括標簽，則使用特異性結合重組酶中存在的標簽的蛋白質、金屬螯合物或抗體(或抗體片段)。本文描述了可以用於捕獲重組蛋白的非限制 性樹脂，並且可以用於捕獲重組蛋白的其他樹脂是業界已知的。利用蛋白A結合捕獲機制的樹脂的一個非限制性例子是Mab Select SuReTM樹脂(GE Healthcare,Piscataway,NJ)、JSR LifeSciences Amsphere ProA JWT203(Sunnyvale,CA)和Kaneka KanCapA(Osaka,Japan)。
本文描述了可以用於捕獲重組蛋白的MCCS或MCCS1中存在的一個或多個層析柱或層析膜的例示性非限制性尺寸和形狀。饋送(裝載)到MCCS或MCCS1中的液體培養基可以包含例如約0.05mg/mL至約100mg/mL之間的重組蛋白(例如，約0.1mg/mL至約90mg/mL之間、約0.1mg/mL至約80mg/mL之間、約0.1mg/mL至約70mg/mL之間、約0.1mg/mL至約60mg/mL之間、約0.1mg/mL至約50mg/mL之間、約0.1mg/mL至約40mg/mL之間、約0.1mg/mL至約30mg/mL之間、約0.1mg/mL至約20mg/mL之間、0.5mg/mL至約20mg/mL之間、約0.1mg/mL至約15mg/mL之間、約0.5mg/mL至約15mg/mL之間、約0.1mg/mL至約10mg/mL之間或約0.5mg/mL至約10mg/mL之間的重組蛋白)。重組蛋白與用於執行捕獲的單元操作的樹脂結合所需的平均時間可以是例如約5秒至約10分鐘之間(例如，約10秒至約8分鐘之間、約10秒至約7分鐘之間、約10秒至約6分鐘之間、約10秒至約5分鐘之間、約30秒至約5分鐘之間、約1分鐘至約5分鐘之間、約10秒至約4分鐘之間、約30秒至約4分鐘之間或約1分鐘至約4分鐘之間)。
如業界可以理解的，為了使用MCCS或MCCS1中存在的一個或多個層析柱或層析膜捕獲重組蛋白，必須執行裝載、洗滌、洗脫和再生MCCS或MCCS1中存在的一個或多個層析柱或層析膜的連續層析步驟。為本文所述的每個連續層析步驟分配的例示性流速、緩衝液體積和/或時間長度中的任一個可以用於這些不同連續層析步驟中的一個或多個(例如，裝載、洗滌、洗脫和再生用於捕獲重組蛋白的MCCS或MCCS1中存在的一個或多個層析柱或層析膜的連續層析步驟中的一個或多個)。下文提供為可用於捕獲MCCS或MCCS1(例如，PCCS或PCCS1)中的一個或多個層析柱和/或層析膜的每個連續層析步驟分配的非限制流速、緩衝液體積和/或時間長度。另外，下文描述了可以在MCCS和/或MCCS1中使用的例示性緩衝液。
可以使用上文所述的任何裝載流速(饋送速率)向包括至少一個層析 柱和/或層析膜的MCCS或MCCS1裝載包含重組蛋白的液體培養基，所述層析柱和/或層析膜包含可以執行捕獲的單元操作的樹脂(例如，本文所述的可以用於捕獲的任何例示性樹脂)。在一些例子中，在例如約10分鐘至約90分鐘之間(例如，約15分鐘與約90分鐘之間、約20分鐘與80分鐘之間、約30分鐘與80分鐘之間、約40分鐘與約80分鐘之間、約50分鐘與約80分鐘之間和約60分鐘與80分鐘之間)內裝載包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的單個層析柱或單個層析膜。在一些例子中，其中MCCS或MCCS1包括至少兩個包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的串聯層析柱，裝載兩個串聯層析柱所要的時間為例如約50分鐘至約180分鐘之間(例如，約60分鐘與約180分鐘之間、約70分鐘與約180分鐘之間、約80分鐘與約180分鐘之間、約90分鐘與約180分鐘之間、約100分鐘與約180分鐘之間、約110分鐘與150分鐘之間和約125分鐘與約145分鐘之間)。
在將重組蛋白裝載到MCCS或MCCS1中至少一個包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜上後，用至少一種洗滌緩衝液洗滌所述至少一個層析柱或層析膜。如業界可以理解的，至少一種(例如，兩種、三種或四種)洗滌緩衝液旨在從至少一個層析柱或層析膜洗脫不是重組蛋白的蛋白質中的全部或大多數，而不干擾重組蛋白與樹脂的相互作用。
洗滌緩衝液可以以約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL分鐘與約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約25.0mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約15.0mL/分鐘之間)的流速通過至少一個層析柱或層析膜。使用的洗滌緩衝液的體積(例如，當使用超過一種洗滌緩衝液時使用的洗滌緩衝液的組合總體積)可以是例如約1X柱體積(CV)至約15X CV之間(例如，約1X CV至約14X CV之間、約1X CV至約13X CV、約1X CV至約12X CV、約1X CV至約11X CV、約2X CV至約11X CV、約3X CV至約11X CV、約4X CV至約11X CV、約5X CV至約11X CV或約5X CV至約10X CV)。洗滌的總時間可以是例如例如約2分鐘至約3小時之間(例如，約2分鐘至約2.5小時之間、約2分鐘至約2.0小時之間、約5 分鐘至約1.5小時之間、約10分鐘至約1.5小時之間、約10分鐘至約1.25小時之間、約20分鐘至約1.25小時之間或約30分鐘至約1小時之間)。
在洗滌MCCS或MCCS1中至少一個包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜之後，通過使洗脫緩衝液通過MCCS或MCCS1中至少一個包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜來從至少一個層析柱或層析膜洗脫重組蛋白。洗脫緩衝液可以以約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約6.0mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘至約5.0mL/分鐘之間、約0.5mL分鐘至約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘至約25.0mL/分鐘之間或約1.0mL/分鐘至約15.0mL/分鐘之間)的流速通過至少一個包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜。用於從至少一個包含能夠執行純化的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜中的每一個洗脫重組蛋白的洗脫緩衝液的體積可以是例如約1X柱體積(CV)至約15X CV之間(例如，約1X CV至約14X CV之間、約1X CV至約13X CV、約1X CV至約12X CV、約1X CV至約11X CV、約2X CV至約11X CV、約3X CV至約11X CV、約4X CV至約11X CV、約5X CV至約11X CV或約5X CV至約10X CV)。洗脫的總時間可以是例如約2分鐘至約3小時之間(例如，約2分鐘至約2.5小時之間、約2分鐘至約2.0小時之間、約2分鐘至約1.5小時之間、約2分鐘至約1.5小時之間、約2分鐘至約1.25小時之間、約2分鐘至約1.25小時之間、約2分鐘至約1小時之間、約2分鐘至約40分鐘之間、約10分鐘至約40分鐘之間或約20分鐘至約40分鐘之間)。可以用於這些方法的洗脫緩衝液的非限制性例子取決於捕獲機制和/或重組蛋白。例如，洗脫緩衝液可以包含不同濃度的鹽(例如，增加的鹽濃度)，不同pH(例如，增加或減少的鹽濃度)，或將與重組蛋白競爭結合能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的分子。本文所述的用於每種例示性捕獲機制的此類洗脫緩衝液的例子是業界熟知的。
從MCCS或MCCS1中至少一個包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜洗脫重組蛋白後，並且在可以將下一體積的液體培養基裝 載到至少一個層析柱或層析膜上之前，必須使用再生緩衝液平衡所述至少一個層析柱或層析膜。可以使再生緩衝液以例如約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約6.0mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘至約5.0mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘至約25.0mL/分鐘之間、約5.0mL/分鐘至約15.0mL/分鐘之間或約1.0mL/分鐘至約15.0mL/分鐘之間)的流速通過至少一個包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜。用於平衡至少一個包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜的再生緩衝液的體積可以是例如約1X柱體積(CV)至約15X CV之間(例如，約1X CV至約14X CV之間、約1X CV至約13X CV、約1X CV至約12X CV、約1X CV至約11X CV、約2X CV至約11X CV、約3X CV至約11X CV、約2X CV至約5X CV、約4X CV至約11X CV、約5X CV至約11X CV或約5X CV至約10X CV)。
在本文所述的一些方法中，MCCS或MCCS1包括如下儲器，其在低pH(例如，低於4.6、低於4.4、低於4.2、低於4.0、低於3.8、低於3.6、低於3.4、低於3.2或低於3.0的pH)下保持含重組蛋白的流體例如約1分鐘至1.5小時(例如，約1小時)，並失活化含重組蛋白的流體中存在的病毒。可以用於執行失活化病毒的單元操作的儲器的例子是能夠將含重組蛋白的流體例如在饋送到MCCS2中之前保持例如約1分鐘至1.5小時的攪拌瓶(例如，500-mL攪拌瓶，例如具有程序化攪拌板的500-mL攪拌瓶)。用於執行失活化病毒的單元操作的儲器可以是具有程序化攪拌板(例如，經程序化以例如每4小時一次混合(例如，週期性混合)儲器內的流體的攪拌板)的500-mL攪拌瓶。可以用於執行失活化病毒的單元操作的儲器的另一個例子是能夠將含重組蛋白的流體例如在饋送到MCCS2中之前保持例如約1分鐘至1.5小時的塑料袋(例如，500-mL塑料袋)。在一些例子中，含重組蛋白的流體在饋送到用於執行病毒失活化的單元操作的儲器中時可能已經具有低pH(例如，低於4.6、低於4.4、低於4.2、低於4.0、低於3.8、低於3.6、低於3.4、低於3.2或低於3.0的pH)。如業界熟習此項技術者可以理解的，可以使用各種其他 方式來執行失活化病毒的單元操作。例如，還可以使用含重組蛋白的流體的UV照射來進行失活化病毒的單元操作。本文描述了可以用於執行失活化含重組蛋白的流體中存在的病毒的單元操作的儲器的非限制性例子。
MCCS或MCCS1可以包括具有四個層析柱的PCCS，其中四個層析柱中的至少三個執行從液體培養基捕獲重組蛋白的單元操作(例如，使用包括如下至少一個層析柱中的任一個的MCCS，所述層析柱包含能夠執行捕獲的單元操作的樹脂(例如，本文所述的任何樹脂))。在這些例子中，PCC的第四個柱可以執行失活化含重組蛋白的流體中的病毒的單元操作(例如，本文所述的可以用於實現含重組蛋白的流體的病毒失活化的任何例示性柱)。
在一些例子中，從MCCS1(例如，PCCS1)連續洗脫含重組蛋白的流體，並連續饋送到MCCS2(例如，PCCS2)中。在MCCS或MCCS1(例如，PCCS或PCCS1)的洗脫物中回收的重組蛋白的百分比可以是例如至少70%、至少72%、至少74%、至少76%、至少78%、至少80%、至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%或至少98%。可以使用本領域已知的各種方法(例如使用管)將來自MCCS1(例如，PCCS1)的洗脫物饋送到MCCS2(例如，PCCS2)中。可以將MCCS1(例如，PCCS1)的洗脫物以例如約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約6.0mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘至約5.0mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘至約25.0mL/分鐘之間、約5.0mL/分鐘至約15.0mL/分鐘之間、約15mL/分鐘至約25mL/分鐘之間或約1.0mL/分鐘至約15.0mL/分鐘之間)的流速饋送到MCCS2(例如，PCCS2)中。
本文所述的一些方法還可以包括在將來自MCCS1(例如，PCCS1)的洗脫物饋送到MCCS2(例如，PCCS2)之前調節其離子濃度和/或pH的步驟。如本文所述，可以通過向來自MCCS1(例如，PCCS1)的洗脫物中添加緩衝液(例如，通過使用在線緩衝液調節儲器)來調節所述洗脫物的離子濃 度和/或pH(在將其饋送到MCCS2中之前)。可以將緩衝液以例如約0.1mL/分鐘至約15mL/分鐘之間(例如，約0.1mL/分鐘至約12.5mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約10.0mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約8.0mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約6mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至4mL/分鐘之間或約0.5mL/分鐘至約5mL/分鐘之間)的流速添加至來自MCCS1的洗脫物中。
本文所述的方法還可以包括在將來自MCCS1的洗脫物饋送到MCCS2中之前保持或儲存(並任選地冷藏)所述來自MCCS1的洗脫物的步驟。如本文所述，該保持或儲存步驟可以使用本文所述的任何儲器(例如，備用罐)來執行。
本文所述的方法還可以包括在將來自MCCS1的洗脫物饋送到MCCS2中之前對該洗脫物進行過濾的步驟。可以使用本文所述的例示性過濾器或過濾方法中的任一個將來自MCCS1的洗脫物在饋送到MCCS2中之前過濾。
精製和純化重組蛋白
可以使用MCCS、MCCS1和/或MCCS2來執行純化和精製重組蛋白的單元操作。例如，可以使用MCCS2來執行純化和精製重組蛋白的操作，並且來自MCCS2的洗脫物是蛋白藥物。MCCS、MCCS1和/或MCCS2可以包括至少一個(例如，兩個、三個或四個)可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜和至少一個(例如，兩個、三個或四個)可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜。
至少一個可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜可以包含利用捕獲機制(例如，本文所述或業界已知的任何捕獲機制)的樹脂，或可以用於執行陰離子交換、陽離子交換、分子篩或疏水性相互作用層析的樹脂。至少一個可以用於執行精製重組蛋白的操作單元的層析柱或層析膜可以包含可以用於執行陰離子交換、陽離子交換、分子篩或疏水性相互作用層析的樹脂(例如，用於執行本文所述或業界已知的陰離子交換、陽離子交換、分子篩或疏水性相互作用層析的任何例示性樹脂)。
至少一個可以用於執行純化重組蛋白的操作單元的層析柱或層析膜的 尺寸、形狀和體積和/或至少一個可以用於執行精製重組蛋白的操作單元的層析膜的尺寸和形狀可以是本文所述的層析柱或層析膜的例示性尺寸、形狀和體積的任何組合。如業界熟習此項技術者可以理解的，純化或精製重組蛋白的步驟可以例如包括裝載、洗滌、洗脫和平衡至少一個用於執行純化或精製重組蛋白的操作單元的層析柱或層析膜的步驟。典型地，來自用於執行純化的單元操作的層析柱或層析膜的洗脫緩衝液包含重組蛋白。典型地，來自用於執行精製的單元操作的層析柱或層析膜的裝載和/或洗滌緩衝液包含重組蛋白。
例如，至少一個可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜的尺寸的體積可以是例如約2.0mL至約200mL之間(例如，約2.0mL至約180mL之間、約2.0mL至約160mL之間、約2.0mL至約140mL之間、約2.0mL至約120mL之間、約2.0mL至約100mL之間、約2.0mL至約80mL之間、約2.0mL至約60mL之間、約2.0mL至約40mL之間、約5.0mL至約40mL之間、約2.0mL至約30mL之間、約5.0mL至約30mL之間或約2.0mL至約25mL之間)。含重組蛋白的流體在裝載到可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的至少一個層析柱或至少一個層析膜上時的流速可以是例如約0.1mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.1mL/分鐘至約12.5mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約10.0mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約8.0mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約6mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至4mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約3mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約2mL/分鐘之間或約0.2mL/分鐘至約4mL/分鐘)。裝載到至少一個可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜上的流體中的重組蛋白的濃度可以是例如約0.05mg/mL至約100mg/mL之間的重組蛋白(例如，約0.1mg/mL至約90mg/mL之間、約0.1mg/mL至約80mg/mL之間、約0.1mg/mL至約70mg/mL之間、約0.1mg/mL至約60mg/mL之間、約0.1mg/mL至約50mg/mL之間、約0.1mg/mL至約40mg/mL之間、約0.1mg/mL至約30mg/mL之間、約0.1mg/mL至約20mg/mL之間、0.5mg/mL至約20mg/mL之間、約0.1mg/mL至約15mg/mL之間、約0.5mg/mL至約15mg/mL之間、約0.1mg/mL至約10mg/mL之間或約0.5mg/mL至約10mg/mL之間的重組蛋白)。至少一個用於執行純化的單 元操作的層析柱或層析膜中的樹脂可以是可以用於執行陰離子交換或陽離子交換層析的樹脂。至少一個用於執行純化的單元操作的層析柱或層析膜中的樹脂可以是陽離子交換樹脂(例如，Capto-S樹脂，GE Healthcare Life Sciemces,Piscataway,NJ)。
在將重組蛋白裝載到至少一個可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜上後，用至少一種洗滌緩衝液洗滌至少一個層析柱或層析膜。如業界可以理解的，至少一種(例如，兩種、三種或四種)洗滌緩衝液旨在從至少一個層析柱或層析膜洗脫不是重組蛋白的全部蛋白質，而不干擾重組蛋白與樹脂的相互作用或者洗脫重組蛋白。
洗滌緩衝液可以以約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘與約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約25.0mL/分鐘或約1.0mL/分鐘與約15.0mL/分鐘之間)的流速通過至少一個層析柱或層析膜。使用的洗滌緩衝液的體積(例如，當使用超過一種洗滌緩衝液時使用的洗滌緩衝液的組合總體積)可以是例如約1X柱體積(CV)至約15X CV之間(例如，約1X CV至約14X CV之間、約1X CV至約13X CV、約1X CV至約12X CV、約1X CV至約11X CV、約2X CV至約11X CV、約3X CV至約11X CV、約4X CV至約11X CV、約2.5X CV至約5.0X CV、約5X CV至約11X CV或約5X CV至約10X CV)。洗滌的總時間可以是例如約2分鐘至約3小時之間(例如，約2分鐘至約2.5小時之間、約2分鐘至約2.0小時之間、約5分鐘至約1.5小時之間、約10分鐘至約1.5小時之間、約10分鐘至約1.25小時之間、約20分鐘至約1.25小時之間、約30分鐘至約1小時之間、約2分鐘與10分鐘之間、約2分鐘與15分鐘或約2分鐘與30分鐘之間)。
在洗滌至少一個用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜之後，通過使洗脫緩衝液通過至少一個用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜，從所述至少一個層析柱或層析膜洗脫重組蛋白。洗脫緩衝液可以約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15 mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘與約6.0mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約5.0mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘與約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約25.0mL/分鐘之間或約1.0mL/分鐘與約15.0mL/分鐘之間)的流速通過至少一個可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜。用於從至少一個可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜中的每一個洗脫重組蛋白的洗脫緩衝液的體積可以是例如約1X柱體積(CV)至約25X CV之間(例如，約1X CV至約20X CV之間、約15X CV至約25X CV之間、約1X CV至約14X CV之間、約1X CV至約13X CV、約1X CV至約12X CV、約1X CV至約11X CV、約2X CV至約11X CV、約3X CV至約11X CV、約4X CV至約11X CV、約5X CV至約11X CV或約5X CV至約10X CV)。洗脫的總時間可以是例如約2分鐘至約3小時之間(例如，約2分鐘至約2.5小時之間、約2分鐘至約2.0小時之間、約2分鐘至約1.5小時之間、約2分鐘至約1.5小時之間、約2分鐘至約1.25小時之間、約2分鐘至約1.25小時之間、約2分鐘至約1小時之間、約2分鐘與約40分鐘之間、約10分鐘與約40分鐘之間、約20分鐘與約40分鐘之間或約30分鐘與1.0小時之間)。可以用於這些方法的洗脫緩衝液的非限制性例子取決於重組蛋白的樹脂和/或生物物理特性。例如，洗脫緩衝液可以包括不同濃度的鹽(例如，增加的鹽濃度)、不同pH(例如，增加或減少的鹽濃度)或者將與重組蛋白競爭結合樹脂的分子。用於本文所述的例示性捕獲機制中的每一種的此類洗脫緩衝液的例子是業界熟知的。
從至少一個用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜洗脫重組蛋白後，並且在可以將下一體積的含重組蛋白的流體裝載到至少一個層析柱或層析膜上之前，必須使用再生緩衝液平衡所述至少一個層析柱或層析膜。可以使再生緩衝液以例如約0.2mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約6.0mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘至約5.0mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約14mL/分鐘之 間、約1.0mL/分鐘至約25.0mL/分鐘之間、約5.0mL/分鐘至約15.0mL/分鐘之間或約1.0mL/分鐘至約15.0mL/分鐘之間)的流速通過至少一個用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜。用於平衡至少一個包含可以用於執行純化重組蛋白的單元操作的樹脂的層析柱或層析膜的再生緩衝液的體積可以是例如約1X柱體積(CV)至約15X CV之間(例如，約1X CV至約14X CV之間、約1X CV至約13X CV之間、約1X CV至約12X CV之間、約1X CV至約11X CV之間、約2X CV至約11X CV之間、約3X CV至約11X CV之間、約2X CV至約5X CV之間、約2.5X CV至約7.5X CV、約4X CV至約11X CV之間、約5X CV至約11X CV之間或約5X CV至約10X CV之間)。至少一個用於執行純化重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜的洗脫物中重組蛋白的濃度可以是例如約0.05mg/mL至約100mg/mL之間的重組蛋白(例如，約0.1mg/mL至約90mg/mL之間、約0.1mg/mL至約80mg/mL之間、約0.1mg/mL至約70mg/mL之間、約0.1mg/mL至約60mg/mL之間、約0.1mg/mL至約50mg/mL之間、約0.1mg/mL至約40mg/mL之間、約2.5mg/mL至約7.5mg/mL之間、約0.1mg/mL至約30mg/mL之間、約0.1mg/mL至約20mg/mL之間、0.5mg/mL至約20mg/mL之間、約0.1mg/mL至約15mg/mL之間、約0.5mg/mL至約15mg/mL之間、約0.1mg/mL至約10mg/mL之間或約0.5mg/mL至約10mg/mL之間的重組蛋白)。
至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜可以包含可以用於執行陽離子交換、陰離子交換或分子篩層析的樹脂。如業界可以理解的，使用至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜精製重組蛋白可以包括例如裝載、追蹤和再生至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜的步驟。例如，當使用裝載、追蹤和再生的步驟執行精製時，重組蛋白不與至少一個用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜中的樹脂結合，並且在裝載和追蹤步驟中從至少一個層析柱或層析膜洗脫重組蛋白，並且在可以將其他含重組蛋白的流體裝載到至少一個層析柱或層析膜上之前使用再生步驟從至少一個層析柱或層析膜去除任何雜質。下文描述了在裝載、追蹤和再生步驟中的每一個中使用的例示性流速和緩衝液體積。
至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜的尺寸、形狀和體積和/或至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析膜的尺寸和體積可以是本文所述的層析柱或層析膜的例示性尺寸、形狀和體積的任何組合。例如，至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜的尺寸的體積可以是例如約0.5mL至約200mL之間(例如，約0.5mL至約180mL之間、約0.5mL至約160mL之間、約0.5mL至約140mL之間、約0.5mL至約120mL之間、約0.5mL至約100mL之間、約0.5mL至約80mL之間、約0.5mL至約60mL之間、約0.5mL至約40mL之間、約5.0mL至約40mL之間、約0.5mL至約30mL之間、約5.0mL至約30mL之間、約0.5mL至約25mL之間、約0.2mL至約10mL之間或約0.2mL至約5mL之間)。含重組蛋白的流體在裝載到至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜上時的流速可以是例如約0.1mL/分鐘至約25mL/分鐘之間(例如，約0.1mL/分鐘至約12.5mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約10.0mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約8.0mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約6mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至4mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約3mL/分鐘之間、約2mL/分鐘至約6mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約2mL/分鐘之間或約0.2mL/分鐘至約4mL/分鐘之間)。裝載到至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜上的含重組蛋白的流體的總體積可以是例如約1.0mL至約250mL之間(例如，約1.0mL至約225mL之間、約1.0mL至約200mL之間、約1.0mL至約175mL之間、約1.0mL至約150mL之間、約100mL至約125mL之間、約100mL至約150mL之間、約1.0mL至約150mL之間、約1.0mL至約125mL之間、約1.0mL至約100mL之間、約1.0mL至約75mL之間、約1.0mL至約50mL之間或約1.0mL至約25mL之間)。至少一個用於執行精製的層析柱或層析膜中的樹脂可以是陰離子交換樹脂或陽離子交換樹脂。至少一個用於執行精製的單元操作的層析柱或層析膜中的樹脂可以是陽離子交換樹脂(例如，Sartobind® Q樹脂，Sartorius,Goettingen,Germany)。
在裝載步驟之後，執行追蹤步驟(例如，使追蹤緩衝液通過至少一個層析柱或層析膜以收集基本上不與至少一個層析柱或層析膜結合的重組蛋 白)。在這些例子中，可以使追蹤緩衝液以約0.2mL/分鐘至約50mL/分鐘之間(例如，約1mL/分鐘至約40mL/分鐘之間、約1mL/分鐘至約30mL/分鐘之間、約5mL/分鐘至約45mL/分鐘之間、約10mL/分鐘至約40mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘與約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約25.0mL/分鐘之間或約1.0mL/分鐘與約15.0mL/分鐘之間)的流速通過至少一個層析柱或層析膜。所使用的追蹤緩衝液的體積可以是例如約1X柱體積(CV)至約100X CV之間(例如，約1X CV至約90X CV之間、約1X CV至約80X CV之間、約1X CV至約70X CV之間、約1X CV至約60X CV之間、約1X至約50X CV之間、約1X CV至約40X CV之間、約1X CV至約30X CV之間、約1X CV至約20X CV之間、約1X CV至約15X CV之間、約5X CV至約20X CV之間、約5 X CV至約30X CV之間、約1X CV至約14X CV之間、約1X CV至約13X CV、約1X CV至約12X CV、約1X CV至約11X CV、約2X CV至約11X CV、約3X CV至約11X CV、約4X CV至約11X CV、約2.5X CV至約5.0X CV、約5X CV至約11X CV或約5X CV至約10X CV)。追蹤的總時間可以是例如約1分鐘至約3小時之間(例如，約1分鐘至約2.5小時之間、約1分鐘至約2.0小時之間、約1分鐘至約1.5小時之間、約2分鐘至約1.5小時之間、約1分鐘至約1.25小時之間、約2分鐘至約1.25小時之間、約1分鐘至約5分鐘之間、約1分鐘至約10分鐘之間、約2分鐘至約4分鐘之間、約30分鐘至約1小時之間、約2分鐘至約10分鐘之間、約2分鐘至約15分鐘之間或約2分鐘至約30分鐘之間)。在裝載步驟和追蹤步驟中通過柱的洗脫物中存在的重組蛋白的組合濃度可以是例如約0.1mg/mL至約100mg/mL之間的重組蛋白(例如，約0.1mg/mL至約90mg/mL之間、約0.1mg/mL至約80mg/mL之間、約0.1mg/mL至約70mg/mL之間、約0.1mg/mL至約60mg/mL之間、約0.1mg/mL至約50mg/mL之間、約0.1mg/mL至約40mg/mL之間、約2.5mg/mL至約7.5mg/mL之間、約0.1mg/mL至約30mg/mL之間、約0.1mg/mL至約20mg/mL之間、0.5mg/mL至約20mg/mL之間、約0.1mg/mL至約15mg/mL之間、約0.5mg/mL至約15mg/mL之間、約0.1mg/mL至約10 mg/mL之間、約0.5mg/mL至約10mg/mL之間或約1mg/mL至約5mg/mL之間的重組蛋白)。
在追蹤步驟之後並且在可以將下一體積的含重組蛋白的流體裝載到至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜上之前，至少一個層析柱或層析膜必須使用再生緩衝液再生。可以使再生緩衝液以例如約0.2mL/分鐘至約50mL/分鐘之間(例如，約1mL/分鐘至約40mL/分鐘之間、約1mL/分鐘至約30mL/分鐘之間、約5mL/分鐘至約45mL/分鐘之間、約10mL/分鐘至約40mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約20mL/分鐘之間、約0.2mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約15mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘至約10mL/分鐘之間、約0.5mL/分鐘與約14mL/分鐘之間、約1.0mL/分鐘與約25.0mL/分鐘之間或約1.0mL/分鐘與約15.0mL/分鐘之間)的流速通過至少一個可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析柱或層析膜。用於再生至少一個可以用於執行精製的單元操作的層析柱或層析膜的再生緩衝液的體積可以是例如約1X柱體積(CV)至約500X CV之間(例如，約1X CV至約450X CV之間、約1X CV至約400X CV之間、約1X CV至約350X CV之間、約1X CV至約300X CV之間、約1X CV至約250X CV之間、約1X CV至約200X CV之間、約1X CV至約150X CV之間、約1X CV至約100 X CV之間、約1X CV至約90X CV之間、約1X CV至約80X CV之間、約1X CV至約70X CV之間、約1X CV至約60X CV之間、約1X至約50X CV之間、約1X CV至約40X CV之間、約1X CV至約30X CV之間、約1X CV至約20X CV之間、約1X CV至約15X CV之間、約5X CV至約20X CV之間、約5 X CV至約30X CV之間、約1X CV至約14X CV之間、約1X CV至約13X CV之間、約1X CV至約12X CV之間、約1X CV至約11X CV之間、約2X CV至約11X CV之間、約3X CV至約11X CV之間、約4X CV至約11X CV之間、約2.5X CV至約5.0X CV之間、約5X CV至約11X CV之間或約5X CV至約10X CV之間)。
在其他例子中，一個或多個用於執行精製的單元操作的層析柱和/或層析膜包含選擇性地結合或保留含重組蛋白的流體中存在的雜質的樹脂，並且一旦達到或基本接近達到一個或多個柱和/或膜中樹脂的結合能力，則將 所述一個或多個柱和/或膜替換(例如，用基本上類似的一個或多個柱和/或膜替換)，而不是再生一個或多個柱和/或膜。
在本文所述的這些方法的一些例子中，MCCS2包括具有三個層析柱和一個層析膜的PCCS，例如，其中PCCS中的三個層析柱執行純化重組蛋白的單元操作(例如，使用一或多個可以用於執行純化蛋白質的操作單元的層析柱中的至少一個)，並且PCCS中的層析膜執行精製重組蛋白的單元操作。在這些例子中，PCCS中可以用於執行精製治療性蛋白的單元操作的層析膜可以是本文所述的可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的任何例示性層析膜。可以使用本文所述的任何柱切換方法來確定何時可以切換PCCS中的所述前三個層析柱和所述層析膜。
該例子的一些實施例還可以包括在將來自PCCS中三個層析柱的洗脫物饋送到PCCS中的層析膜中之前調節洗脫物的離子濃度和/或pH的步驟。如本文所述，可以通過向PCCS中的三個層析柱的洗脫物中添加緩衝液(例如，通過使用在線緩衝液調節儲器)來調節來自PCCS中三個層析柱的洗脫物的離子濃度和/或pH(在該例子中，在將所述洗脫物饋送到PCCS中的層析膜中之前)。可以將緩衝液以例如約0.1mL/分鐘至約15mL/分鐘之間(例如，約0.1mL/分鐘至約12.5mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約10.0mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約8.0mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至約6mL/分鐘之間、約0.1mL/分鐘至4mL/分鐘之間或約0.5mL/分鐘至約5mL/分鐘之間)的流速添加至洗脫物中。
這些例子還可以包括在將來自該例子中的PCCS中三個層析柱的洗脫物饋送到層析膜(可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析膜)中之前保持或儲存洗脫物的步驟。如本文所述，該保持或儲存步驟可以使用本文所述的任何儲器(例如，備用罐)來執行。
這些例子還可以包括過濾來自例示性PCCS系統中的層析膜的洗脫物(可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析膜的洗脫物)的步驟。可以使用本文所述的例示性過濾器或過濾方法中的任一個過濾來自該例示性PCCS中的層析膜的洗脫物(可以用於執行精製重組蛋白的單元操作的層析膜的洗脫物)。
如業界熟習此項技術者可以理解的，可以使用本文所述的任何方法從MCCS或MCCS2週期性洗脫純化的重組蛋白。例如，根據例如MCCS或MCCS1和MCCS2中所用的一個或多個層析柱和/或層析膜，本文所述的任何方法可以以例如，約1分鐘至與約6小時之間(例如，約1分鐘與約5小時之間、約1分鐘與約4小時之間、約1分鐘與約3小時之間、約1分鐘與2小時之間、約1分鐘與1小時之間或約1分鐘與30分鐘之間)的頻率洗脫純化的重組蛋白，持續時間是例如約30秒與約5小時之間(例如，約1分鐘與約4小時之間、約1分鐘與約3小時之間、約1分鐘與約2小時之間、約1分鐘或1.5小時之間、約1分鐘與約1小時之間或約1分鐘與約30分鐘之間)。
培養方法
本文所述的一些方法還包括在包含液體培養基的生物反應器(例如，灌注或進料分批生物反應器)中培養分泌重組蛋白的細胞(例如，重組哺乳動物細胞)的步驟，其中從生物反應器(例如，灌注生物反應器)連續或週期性取出基本上不含細胞(例如，哺乳動物細胞)的液體培養基，並將其饋送到MCCS或MCCS1中。生物反應器的體積可以是例如約1L至約10,000L之間(例如，約1L至約50L之間、約50L至約500L之間、約500L至約1000L之間、500L至約5000L之間、約500L至約10,000L之間、約5000L至約10,000L之間、約1L與約10,000L之間、約1L與約8,000L之間、約1L與約6,000L之間、約1L與約5,000L之間、約100L與約5,000L之間、約10L與約100L之間、約10L與約4,000L之間、約10L與約3,000L之間、約10L與約2,000L之間或約10L與約1,000L之間)。存在於生物反應器中的液體培養基的量可以是例如約0.5L至約5,000L之間(例如，約0.5L至約25L之間、約25L至約250L之間、約250L至約500L之間、250L至約2500L之間、約250L至約5,000L之間、約2500L至約5,000L之間、約0.5L與約5,000L之間、約0.5L與約4,000L之間、約0.5L與約3,000L之間、約0.5L與約2、500L之間、約50L與約2、500L之間、約5L與約50L之間、約5L與約2,000L之間、約5L與約1,500L之間、約5L與約1,000L之間或約5L與約500L之間)。可以例如使用進料分批生物反應器或灌注生物反應器執行培養細胞。下文描 述了培養細胞(例如，培養哺乳動物細胞)的非限制性例子和不同方面，並且其可以以任何組合形式使用。
細胞
在本文所述的一些方法中培養的細胞可以是細菌(例如，革蘭氏陰性細菌)、酵母(例如，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)、多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)或解腺嘌呤阿氏酵母(Arxula adeninivorans))，或哺乳動物細胞。哺乳動物細胞可以是懸浮生長的細胞或貼壁細胞。可以在本文所述的任何方法中培養的哺乳動物細胞的非限制性例子包括：中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(例如，CHO DG44細胞或CHO-K1細胞)、Sp2.0、骨髓瘤細胞(例如NS/0)、B細胞、雜交瘤細胞、T細胞、人胚腎(HEK)細胞(例如，HEK 293E和HEK 293F)、非洲綠猴腎上皮細胞(Vero)細胞和馬丁達比犬(Madin-Darby Canine)(可卡犬(Cocker Spaniel))腎上皮細胞(MDCK)。在培養貼壁細胞的一些例子中，培養物還可以包含多種微載劑(例如，包括一個或多個孔的微載劑)。可以在本文所述的任何方法中培養的其他哺乳動物細胞是業界已知的。
哺乳動物細胞可以包含編碼重組蛋白(例如重組蛋白)的重組核酸(例如，穩定地整合在哺乳動物細胞基因組中的核酸)。編碼例示性重組蛋白的重組核酸的非限制性例子如下所述，所述重組蛋白是可以使用本文所述方法產生的重組蛋白。在一些情況下，在生物反應器(例如，本文所述的任何生物反應器)中培養的哺乳動物細胞來自較大的培養物。
可以使用分子生物學和分子遺傳學中已知的多種方法將編碼重組蛋白的核酸引入哺乳動物細胞中。非限制性例子包括轉染(例如，脂質轉染)、轉導(例如慢病毒、腺病毒或逆轉錄病毒感染)和電穿孔。在一些情況下，編碼重組蛋白的核酸不能穩定地整合到哺乳動物細胞的染色體中(瞬時轉染)，而在其他情況下，核酸是整合的。可替代地或另外，編碼重組蛋白的核酸可以存在於質體和/或哺乳動物人工染色體(例如人人工染色體)中。 可替代地或另外，可以使用病毒載體(例如慢病毒、逆轉錄病毒或腺病毒載體)將核酸引入細胞中。核酸可以與啟動子序列(例如，強啟動子，諸如β-肌動蛋白啟動子和CMV啟動子，或誘導型啟動子)可操作地連接。如果需要，包括核酸的載體還可以包括選擇性標記(例如，賦予哺乳動物細胞潮黴素、嘌呤黴素或新黴素抗性的基因)。
在一些情況下，重組蛋白是分泌型蛋白，並且由哺乳動物細胞釋放到細胞外培養基(例如第一和/或第二液體培養基)中。例如，編碼可溶性重組蛋白的核酸序列可以包括編碼重組蛋白的N或C末端的分泌信號肽的序列，該信號肽被哺乳動物細胞中存在的酶切割，隨後釋放到細胞外培養基(例如，第一和/或第二液體培養基)中。
培養基
液體培養基是業界已知的。液體培養基(例如，第一和/或第二組織培養基)可以補充有哺乳動物血清(例如，胎牛血清和牛血清)和/或生長激素或生長因子(例如，胰島素、轉鐵蛋白和表皮生長因子)。可替代地或另外，液體培養基(例如，第一和/或第二液體培養基)可以是化學成分確定的液體培養基、無動物源性組分的液體培養基、無血清液體培養基或含血清的液體培養基。化學成分確定的液體培養基、無動物源性組分的液體培養基、無血清液體培養基和含血清的液體培養基的非限制性例子是可商購的。
液體培養基典型地包含能源(例如，碳水化合物，諸如葡萄糖)、必需胺基酸(例如，二十種胺基酸加上半胱胺酸的基本集合)、維生素和/或所需的低濃度的其他有機化合物、游離脂肪酸和/或痕量元素。如果需要的話，所述液體培養基(例如，第一和/或第二液體培養基)可以補充有例如哺乳動物激素或生長因子(例如，胰島素、轉鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽和緩衝液(例如，鈣、鎂和磷酸鹽)、核苷和鹼基(例如，腺苷、胸苷和次黃嘌呤)、蛋白質和組織水解產物和/或這些添加劑的任何組合。
可以用於在本文所述的任何方法中培養細胞(例如哺乳動物細胞)的多種不同的液體培養基是業界已知的。也可用于本發明方法的培養基組分 包括但不限於化學成分確定的(CD)水解產物，例如CD蛋白腖、CD多肽(兩種或更多種胺基酸)和CD生長因子。液體組織培養基和培養基組分的其他例子是業界已知的。
熟習此項技術者將理解，本文所述的第一液體培養基和第二液體培養基可以是相同類型的培養基或不同的培養基。
例示性生物反應器的其他特徵
本文所述的任何生物反應器的內表面可以具有至少一個塗層(例如，至少一個明膠、膠原、聚-L-鳥胺酸、聚苯乙烯和層粘連蛋白的塗層)，以及如業界所已知，一個或多個用於將O2、CO2和N2鼓泡到液體培養基中的端口，和用於攪拌液體培養基的攪拌機構。生物反應器可以在受控的潮濕氣氛(例如，在大於20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%或95%的濕度或100%的濕度下)中培育細胞培養物。生物反應器還可以配備能夠從生物反應器中取出一定體積的液體培養基的機械裝置，以及任選的機械裝置內的過濾器，該過濾器在將液體培養基轉移出生物反應器的過程中從液體培養基去除細胞(例如，美國臨時專利申請序列號61/878,502中描述的ATF系統或細胞過濾系統)。
溫度
培養哺乳動物細胞的步驟可以在約31℃至約40℃的溫度下執行。熟習此項技術者將理解，可以在培養步驟期間的一個或多個特定時間點(例如，每小時或每天)改變溫度。例如，溫度可以在用細胞(例如，哺乳動物細胞)初始接種生物反應器之後約一天、兩天、三天、四天、五天、六天、七天、八天、九天、十天、十一天、十二天、十四天、十五天、十六天、十七天、十八天、十九天或約二十天或更長時間改變或移動(例如，提高或降低)。例如，溫度可以上移(例如，改變高達或約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19℃或高達或約20℃)。例如，溫度可以下移(例如，改變高達或約0.1、 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或高達或約20℃)。
CO 2
本文所述的培養步驟還可以包括將生物反應器中的液體培養基暴露於包含至多或約15% CO2的氣氛(例如，至多或約14% CO2、12% CO2、10% CO2、8% CO2、6% CO2、5% CO2、4% CO2、3% CO2、2% CO2或至多或約1% CO2)。
灌注生物反應器
可以使用灌注生物反應器執行本文所述的培養步驟。在灌注生物反應器中培養細胞(例如，哺乳動物細胞)包括從生物反應器取出第一體積的第一液體培養基(例如，包含任何濃度的哺乳動物細胞，例如基本上不含細胞的第一體積的第一液體培養基)，並向第一液體培養基中添加第二體積的第二液體培養基。取出和添加可以同時或依序地執行，或者二者組合地執行。此外，取出和添加可以連續地(例如，以如下速率：經任何給定的時間段(例如，經24小時的時間段、經約1小時至約24小時的遞增時間段或經大於24小時的遞增時間段)取出和替換生物反應器體積或第一液體培養基體積的0.1%至800%之間(例如，1%與700%之間、1%與600%之間、1%與500%之間、1%與400%之間、1%與350%之間、1%與300%之間、1%與250%之間、1%與100%之間、100%與200%之間、5%與150%之間、10%與50%之間、15%與40%之間、8%與80%之間或4%與30%之間的體積)或週期性地(例如，每三天一次、每隔一天一次、每天一次、每天兩次、每天三次、每天四次或每天五次)執行，或其任何組合。在週期性執行的情況下，取出或替換的體積(例如，在約24小時的時間段內、在約1小時至約24小時的遞增時間段內或在大於24小時的遞增時間段內)可以是例如生物反應器體積或第一液體培養基體積的0.1%至800%之間(例如，1%與700%之間、1%與600%之間、1%與500%之間、1%與400%之間、1%與300%之間、1%與200%之間、1%與100%之間、100%與200%之間、5%與150%之間、10%與50%之 間、15%與40%之間、8%與80%之間或4%與30%之間)。在一些情況下，在整個或部分培養時間段內經每24小時的時間段(或者可替代地，約1小時至約24小時的遞增時間段或大於24小時的遞增時間段)取出的第一液體培養基的第一體積和添加的第二液體培養基的第二體積可以保存大約相同。如業界已知的，取出第一體積的第一液體培養基的速率(體積/時間單位)和添加第二體積的第二液體培養基的速率(體積/時間單位)可以變化。取出第一體積的第一液體培養基的速率(體積/時間單位)和添加第二體積的第二液體培養基的速率(體積/時間單位)可以大致相同或者可以不同。
可替代地，在培養時間段內經每24小時的時間段(或者可替代地，1小時與約24小時之間的遞增時間段或大於24小時的遞增時間段)取出和添加的體積可以變化(例如，逐步增加)。例如，在培養時間段內每24小時的時間段(或者可替代地，約1小時與約24小時之間的遞增時間段或大於24小時的遞增時間段)內取出的第一液體培養基的體積和添加的第二液體培養基的體積可以從生物反應器體積或第一液體培養基體積的0.5%與約20%之間的體積增加(例如，逐步地或通過交錯的增量)至生物反應器體積或第一液體培養基體積的約25%至約150%。
熟習此項技術者將理解，第一液體培養基和第二液體培養基可以是相同類型的培養基。在其他情況下，第一液體培養基和第二液體培養基可以不同。
可以例如通過機械系統取出第一體積的第一液體培養基，所述機械系統可以從生物反應器取出第一體積的第一液體培養基(例如，基本上不含來自生物反應器的細胞的第一體積的第一液體培養基)。可替代地或另外，第一體積的第一液體培養基可以通過使第一體積的第一液體培養基通過具有排除所述細胞(例如，哺乳動物細胞)的分子量截留的滅菌膜滲出或重力流動而取出。
第二體積的第二液體培養基可以按自動化方式(例如，通過灌注泵)添加至所述第一液體培養基中。
在一些情況下，取出第一體積的第一液體培養基(例如，基本上不含哺乳動物細胞的第一體積的第一液體培養基)並向第一液體培養基中添加 第二體積的第二液體培養基不會在用哺乳動物細胞接種生物反應器的至少1小時內(例如，2小時內、3小時內、4小時內、5小時內、6小時內、7小時內、8小時內、9小時內、10小時內、12小時內、14小時內、16小時內、18小時內、24小時內、36小時內、48小時內、72小時內、96小時內或96小時後)發生。
進料分批生物反應器
可以使用進料分批生物反應器執行本文所述的培養步驟。在進料分批生物反應器中培養細胞包括經大部分培養時間段向第一液體培養基中添加(例如，週期性或連續添加)第二體積的第二液體培養基。第二液體培養基的添加可以連續地(例如，以如下速率：經任何給定時間段(例如，經24小時的時間段、經約1小時至約24小時的遞增時間段或經大於24小時的遞增時間段)添加生物反應器體積或第一液體培養基體積的0.1%至300%之間(例如，1%與250%之間、1%與100%之間、100%與200%之間、5%與150%之間、10%與50%之間、15%與40%之間、8%與80%之間或4%與30%之間)的體積)或週期性地(例如，每三天一次、每隔一天一次、每天一次、每天兩次、每天三次、每天四次或每天五次)執行，或其任何組合。在週期性執行的情況下，添加的體積(例如，在約24小時的時間段內、在約1小時至約24小時的遞增時間段內或在大於24小時的遞增時間段內)可以是例如生物反應器體積或第一液體培養基體積的0.1%至300%之間(例如，1%與200%之間、1%與100%之間、100%與200%之間、5%與150%之間、10%與50%之間、15%與40%之間、8%與80%之間或4%與30%之間)。在一些情況下，在整個或部分培養時間段內經每24小時的時間段(或者可替代地，約1小時至約24小時的遞增時間段或大於24小時的遞增時間段)添加的第二液體培養基的第二體積可以保存大約相同。如業界所已知，添加第二體積的第二液體培養基的速率(體積/時間單位)可以在整個或部分培養時間段內改變。例如，在培養時間段內經每24小時的時間段(或者可替代地，1小時與約24小時之間的遞增時間段或大於24小時的遞增時間段)添加的第二液體培養基的體積可以改變(例如，逐步增加)。例如，在培養時間段內每24小時 的時間段(或者可替代地，約1小時與約24小時之間的遞增時間段或大於24小時的遞增時間段)內添加的第二液體培養基的體積可以從生物反應器體積或第一液體培養基體積的0.5%至約20%之間的體積增加(例如，逐步地或通過交錯的增量)至生物反應器體積或第一液體培養基體積的約25%至約150%。添加第二體積的第二液體培養基的速率(體積/時間單位)可以在整個或部分培養時間段內大致相同。
熟習此項技術者將理解，第一液體培養基和第二液體培養基可以是相同類型的培養基。在其他情況下，第一液體培養基和第二液體培養基可以不同。第二液體培養基的體積可以按自動化方式(例如，通過灌注泵)添加至第一液體培養基中。
在一些情況下，向第一液體培養基中添加第二體積的第二液體培養基不會在用哺乳動物細胞接種生物反應器的至少1小時內(例如，2小時內、3小時內、4小時內、5小時內、6小時內、7小時內、8小時內、9小時內、10小時內、12小時內、14小時內、16小時內、18小時內、24小時內、36小時內、48小時內、72小時內、96小時內或96小時後)發生。進料分批培養中的細胞培養基典型地在培養時間段結束時收穫並用於本文所述的任何方法中，然而，進料分批培養中的細胞培養基也可以在培養時間段中的一個或多個時間點收穫並用於本文所述的任何方法中。
熟習此項技術者將理解，各種培養參數(例如，容器、體積、更換培養物體積的速度或頻率、攪拌頻率、溫度、培養基和CO2濃度)中的任何一種能以任何組合用於執行這些方法。此外，可以使用本文所述或業界已知的任何哺乳動物細胞產生重組蛋白。
例示性生物製造系統
可用于執行本文所述方法並且包括MCCS或MCCS1和MCCS2的生物製造系統的例子描述于美國臨時專利申請序列號61/775,060和61/856,390(通過引用併入)中。在這些例示性系統中，至少一個(例如，至少兩個、三個、四個、五個或六個)本文提供的生物負載減少的填充層析柱存在於MCCS中或MCCS1和/或MCCS2中。例如，整個系統可以包括總共二、三、四、五、 六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九或二十個本文提供的生物負載減少的填充層析柱。例如，MCCS、MCCS1和/或MCCS2可以包括(或可以各自包括)二、三、四、五、六、七、八、九、十個本文提供的生物負載減少的填充層析柱。
例如，有用的系統可以包括具有入口的MCCS1和具有出口的MCCS2，或具有入口和出口的MCCS。在一些實施例中，MCCS1和MCCS2彼此流體連通。這些系統還被配置為使得流體可以被傳送進入入口，穿過MCCS1和MCCS2，並通過出口離開製造系統。這些系統可以從液體培養基連續且時間有效地生產治療性藥物。例如，將含治療性蛋白的流體(例如，液體培養基)饋送到MCCS1中與從MCCS2的出口洗脫純化的重組蛋白(例如，治療性蛋白藥物)之間經過的時間可以是例如約4小時與約48小時之間(包括端點)。
一些例示性系統不包括斷流罐。在其他情況下，系統可以在整個系統中包括最多1、2、3、4或5個斷流罐(例如，其中每個斷流罐僅保持治療性蛋白總共例如約5分鐘與約6小時之間的時間段(包括端點))。一個或多個斷流罐的容量可以是1mL與約300mL之間(包括端點))。任何一個或多個如下斷流罐的容量可以是1mL與MCCS1或MCCS各自的第一柱的裝載體積的約100%之間(包括端點)，所述斷流罐佈置在系統中以使得流體在進入MCCS1或MCCS之前進入所述一個或多個斷流罐。任何一個或多個如下斷流罐的容量可以是例如1mL與MCCS2的第一柱的裝載體積的約100%之間(包括端點)，所述斷流罐佈置在系統中以使得流體在進入MCCS2之前(並且在離開MCCS1之後)進入所述一個或多個斷流罐。
其他例示性系統結構和特徵
MCCS或MCCS1可以包括入口，流體(例如，基本上不含細胞的液體培養基)可以通過該入口分別進入MCCS或MCCS1。該入口可以是本領域已知的用於此類目的的任何結構。其可以包括，例如，允許插入流體導管的螺紋、肋材或密封件，以使得在將流體導管插到入口中之後，流體將通過入口進入MCCS或MCCS1而沒有大量流體從入口滲出。可以用於本系統 的非限制性入口是業界熟習此項技術者所已知並且將理解的。
MCCS或MCCS1可以包括至少兩個層析柱、至少兩個層析膜或至少一個層析柱和至少一個層析膜以及入口。MCCS或MCCS1可以是本文所述的任何例示性MCCS，或者具有本文所述MCCS的任何例示性特徵(任何組合)中的一種或多種。存在於MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜可以具有任何以下項中的一種或多種：本文所述的例示性形狀、尺寸、體積(床體積)和/或一個或多個單元操作。
存在於MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜可以包含本文所述或業界已知的任何例示性樹脂中的一種或多種。例如，包含在存在於MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜中的樹脂可以是利用捕獲機制(例如，蛋白A結合捕獲機制、蛋白G結合捕獲機制、抗體或抗體片段結合捕獲機制、受質結合捕獲機制、輔因子結合捕獲機制、適體結合捕獲機制和/或標簽結合捕獲機制)的樹脂。包含在MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜中的樹脂可以是陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂、分子篩樹脂或疏水性相互作用樹脂或其任意組合。可以用於純化重組蛋白的樹脂的其他例子是業界已知的，並且可以包含在存在於MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜中。存在於MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜可以包含相同和/或不同的樹脂(例如，本文所述或業界已知用於重組蛋白純化的任何樹脂)。
存在於MCCS或MCCS1中的兩個或更多個層析柱和/或層析樹脂可以執行一個或多個單元操作(例如，捕獲重組蛋白、純化重組蛋白、精製重組蛋白、失活化病毒、調節含重組蛋白的流體的離子濃度和/或pH或過濾含重組蛋白的流體)。在非限制性例子中，MCCS或MCCS1可以執行從流體(例如，液體培養基)捕獲重組蛋白並失活化存在於含重組蛋白的流體中的病毒的單元操作。MCCS或MCCS1可以執行本文所述或業界已知的兩個或更多個單元操作的任何組合。
存在於MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜可以通過切換機制(例如，柱切換機制)相對於彼此連接或移動。MCCS或MCCS1還可以包括一個或多個(例如，兩個、三個、四個或五個)泵(例如，自動， 例如自動蠕動泵)。柱切換事件可以通過偵檢通過UV吸光度偵檢的重組蛋白水平來觸發，所述UV吸光度對應於通過MCCS或MCCS1的流體(例如，MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜中的輸入液和/或洗脫物)中重組蛋白的某個水平、液體(例如，緩衝液)的特定體積或特定的經過時間。柱切換通常意指允許MCCS或MCCS1中的至少兩個不同層析柱和/或層析膜(例如存在於MCCS1或MCCS2中的兩個或更多個不同層析柱和/或層析膜)在方法的至少部分期間基本上同時地通過不同步驟(例如，平衡、裝載、洗脫或洗滌)的機制。
MCCS或MCCS1可以是週期性逆流層析系統(PCCS)。例如，作為MCCS或MCCS1的PCCS(即，分別是PCCS或PCCS1)可以包括四個層析柱，其中前三個柱執行從流體(例如，液體培養基)捕獲重組蛋白的單元操作，並且PCCS的第四柱執行失活化含重組蛋白的流體中的病毒的單元操作。作為MCCS或MCCS1的PCCS可以利用柱切換機制。PCC系統可以利用能夠運行多至例如四個、五個、六個、七個或八個柱、或者更多柱的改良的ÄKTA系統(GE Healthcare,Piscataway,NJ)。
MCCS或MCCS1可以配備有：一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)UV監視器、一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)閥、一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、或十個)pH計和/或一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)電導率計。MCCS或MCCS1還可以配備有利用軟體(例如，基於Unicorn的軟體，GE Healthcare,Piscataway,NJ)來感測何時應進行柱切換(例如，基於UV吸光度、液體體積或經過的時間)並影響(觸發)柱切換事件的操作系統。
MCCS或MCCS1還可以包括一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個、二十個、二十一個、二十二個、二十三個或二十四個)在線緩衝液調節儲器和/或緩衝液儲器。在其他例子中，MCCS或MCCS1可以包括一個或多個(例如，兩個、三個、 四個、五個或六個)斷流罐，所述斷流罐可以保持不能容易地進入MCCS或MCCS1中的一個或多個層析柱和/或層析膜中的流體。本文所述的系統可以在MCCS、MCCS1和/或MCCS2中包括一個或多個斷流罐(例如，本文所述的斷流罐)。本文所述的系統的其他例子在MCCS、MCCS1或MCCS2中包括斷流罐，或不在整個系統中包括斷流罐。本文所述系統的其他例子在整個系統中包括最多一個、兩個、三個、四個或五個斷流罐(例如，本文所述的任何一個或多個斷流罐)。
第二MCCS
例示性系統中的第二MCCS(MCCS2)包括至少兩個層析柱、至少兩個層析膜或者至少一個層析柱和至少一個層析膜以及出口。MCCS2可以是本文所述的任何例示性MCCS，或者可以具有本文所述的MCCS(任何組合)的任何例示性特徵中的一個或多個。存在於MCCS2中的一個或多個層析柱和/或層析膜可以具有以下的一種或多種：本文所述的形狀、尺寸、體積(床體積)和/或單元操作中的任一種。一個或多個層析柱和/或層析膜可以包含本文所述或業界已知的任何例示性樹脂。例如，包含在存在於MCCS2中的一個或多個層析柱和/或層析膜中的樹脂可以是利用捕獲機制(例如，蛋白A結合捕獲機制、蛋白G結合捕獲機制、抗體或抗體片段結合捕獲機制、受質結合捕獲機制、輔因子結合捕獲機制、標簽結合捕獲機制和/或適體結合捕獲機制)的樹脂。有用的樹脂包括，例如，陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂、分子篩樹脂和疏水性相互作用樹脂。樹脂的其他例子是業界已知的。存在於MCCS2中的一個或多個層析柱和/或層析膜可以包含相同和/或不同的樹脂(例如，本文所述或業界已知用於重組蛋白純化的任何樹脂)。
存在於MCCS2中的一個或多個層析柱和/或層析膜可以執行一個或多個單元操作(例如，本文所述的任何單元操作或本文所述的單元操作的任何組合)。在非限制性例子中，MCCS2可以執行從流體純化重組蛋白並且精製含重組蛋白的流體中存在的重組蛋白的單元操作。在其他非限制性例子中，MCCS2可以執行純化流體中存在的重組蛋白、精製流體中存在的重組蛋白和過濾含重組蛋白的流體的單元操作。在另一個例子中，MCCS2可 以執行純化流體中存在的重組蛋白、精製流體中存在的重組蛋白、過濾含重組蛋白的流體以及調節含重組蛋白的流體的離子濃度和/或pH的單元操作。MCCS2可以執行本文所述或業界已知的兩個或更多個單元操作的任何組合。
存在於MCCS2中的一個或多個層析柱和/或層析膜可以通過切換機制(例如，柱切換機制)相對於彼此連接或移動。MCCS2還可以包括一個或多個(例如，兩個、三個、四個或五個)泵(例如，自動，例如自動蠕動泵)。柱切換事件可以通過偵檢通過UV吸光度偵檢的重組蛋白水平來觸發，所述UV吸光度對應於通過MCCS2的流體(例如，MCCS2中的一個或多個層析柱和/或層析膜中的輸入液和/或洗脫物)中重組蛋白的某個水平、液體(例如，緩衝液)的特定體積或特定的經過時間。
MCCS2可以是週期性逆流層析系統(即PCCS2)。例如，PCCS2可包括三個柱，其執行從流體中純化重組蛋白的單元操作，和層析膜，其執行精製流體中存在的重組蛋白的單元操作。例如，執行從流體純化重組蛋白的單元操作的三個柱可以包含例如陽離子交換樹脂，並且執行精製的單元操作的層析膜可以包含陽離子交換樹脂。PCCS2可以利用柱切換機制。PCCS2可以利用能夠運行多至例如四個、五個、六個、七個或八個柱、或者更多柱的改良的ÄKTA系統(GE Healthcare,Piscataway,NJ)。
MCCS2可以配備有：一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)UV監視器、一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)閥、一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、或十個)pH計和/或一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)電導率計。MCCS2還可以配備有利用軟體(例如，基於Unicorn的軟體，GE Healthcare,Piscataway,NJ)來感測何時應進行柱切換事件(例如，基於UV吸光度、液體體積或經過的時間)並影響柱切換事件的操作系統。
MCCS2還可以包括一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五 個、十六個、十七個、十八個、十九個、二十個、二十一個、二十二個、二十三個或二十四個)在線緩衝液調節儲器和/或緩衝液儲器。在其他例子中，MCCS2可以包括一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個或六個)斷流罐(例如，本文所述的任何斷流罐)，所述斷流罐可以保持不能容易地進入MCCS2中的一個或多個層析柱和/或層析膜中的流體。
MCCS2包括出口，治療性蛋白藥物可以通過所述出口離開系統。出口可以包括，例如，允許插入流體導管的螺紋、肋材或密封件，或設計用於保持或儲存純化的重組蛋白(例如，治療性蛋白藥物)的小瓶。出口可以包括可用於將生物負載減少的小瓶或其他此類儲存容器密封到出口上的表面，以允許純化的重組蛋白(例如，治療性蛋白藥物)直接流入生物負載減少的小瓶或儲存容器中。可以用於本發明系統的非限制性出口是業界熟習此項技術者所已知並且將理解的。
本文所述的系統還可以包括佈置在MCCS1與MCCS2之間的流體導管。本文所述的任何流體導管可以是例如由例如聚乙烯、聚碳酸酯或塑料製成的管。佈置在MCCS1與MCCS2之間的流體導管還可以包括以下中任何組合形式的一個或多個：一個或多個在線緩衝液調節儲器，其與流體導管處於流體連通並且被定位為使得儲存在一個或多個在線緩衝液調節儲器中的緩衝液被添加到存在於流體導管中的流體中；斷流罐(例如，本文所述的一個或多個斷流罐中的任一個)，其與流體導管流體連通並且被定位為使得其可以保持存在於流體導管中不能容易地饋送到MCCS2的任何多餘流體；以及一個或多個過濾器，其被佈置於流體導管中使得其能夠過濾(例如，去除細菌)存在於流體導管中的流體。任何在線緩衝液調節儲器可以包含例如體積是約0.5L至50L之間的緩衝液(例如，在25℃、15℃或10℃或低於25℃、15℃或10℃的溫度下)。
本文所述的系統可以任選地包括佈置在MCCS2中的最終層析柱或層析膜與出口之間的流體導管。本文所述的系統還可以包括一個或多個過濾器，其與佈置在MCCS2中的最終層析柱或層析膜與出口之間的流體導管是流體連接的，使得過濾器可以去除例如沉澱材料、顆粒物或者來自存在於流體 導管中的流體中的細菌，該流體導管佈置在MCCS2中的最終層析柱或層析膜與出口之間。
本文提供的系統的一些例子還包括與MCCS或MCCS1的入口為流體連接的生物反應器。本文所述或業界已知的任何例示性生物反應器都可以用於本發明的系統中。
本文提供的系統的一些例子還包括泵系統。泵系統可以包括以下中的一個或多個：一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)泵(例如，本文所述或業界已知的任何泵)，一個或多個(例如，兩個、三個、四個或五個)過濾器(例如，本文所述或業界已知的任何過濾器)，一個或多個(例如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個)UV偵檢器，以及一個或多個(例如，兩個、三個、四個或五個)斷流罐(例如，本文所述的任何斷流罐)。本文提供的系統的一些例子還包括佈置在泵與MCCS或MCCS1的入口之間的流體導管(例如，本文所述或業界已知的任何例示性流體導管)。在一些例子中，該特定流體導管可以包括一個或多個(例如，兩個、三個或四個)泵(例如，本文所述或業界已知的任何泵)和/或一個或多個(例如，兩個、三個或四個)斷流罐(例如，本文所述的任何例示性斷流罐)，其中這些泵和/或斷流罐與存在於流體導管中的流體是流體連接的。
本文所述的系統的一些例子還包括連接到泵與入口之間的流體導管的另一個流體導管，其中另一個流體導管的一端流體連接到生物反應器，並且另一端流體連接到泵與入口之間的流體導管。該另一個流體導管可以包括過濾器，該過濾器能夠從取自生物反應器(例如，ATF細胞保留系統)的液體培養基中去除細胞。
本文提供的系統允許連續產生純化的重組蛋白(例如治療性蛋白藥物)。如業界所已知，所述系統可以提供純化的重組蛋白(例如治療性蛋白藥物物質)的週期性洗脫。本文所述的系統還可以經至少約5天、至少約10天、至少約15天、至少約20天、至少約25天、至少約30天、至少約40天、至少約50天、至少約60天、至少約70天、至少約80天、至少約90天或至少約100天的連續時間段產生純化重組蛋白(例如，治療性蛋白藥物)的如下淨產 量：至少約5克/天、至少約10克/天、至少約15克/天、至少約20克/天、至少約30克/天或至少約40克/天。
減少層析樹脂生物負載的方法，所述方法包括使用基本上乾燥的層析樹脂
本文還提供了減少層析樹脂的生物負載的方法，所述方法包括(a)將包含基本上乾燥的層析樹脂的容器暴露於足以減少所述容器和所述層析樹脂的生物負載的劑量的γ-照射，其中基本上乾燥的層析樹脂包含含至少一種醇的液體，其中至少一種醇的存在量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。這些方法的一些實施例還包括在步驟(a)之前乾燥層析樹脂以基本上從層析樹脂去除液體(但不是所有液體)。可以使用熱處理(例如烘箱)或乾燥器執行層析樹脂的乾燥。用於乾燥層析樹脂的其他方法是業界已知的。
本文所述γ-照射的條件和劑量中的任一種都可以用於這些方法中。例如，γ-照射的劑量可以是約15kGy至約45kGy之間(例如，約20kGy至約30kGy之間)。本文所述的容器、層析樹脂和含至少一種醇的液體中的任一種都可以用於這些方法中。例如，容器可以是儲存器皿或層析柱。這些方法中的層析樹脂可以包含蛋白質配位體(例如，蛋白A或蛋白G)。在一些例子中，層析樹脂可以包括陰離子交換層析樹脂(例如，包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團的層析樹脂)。在一些例子中，層析樹脂共價附接到製品(例如，晶片、膜或盒)的表面。在一些實施例中，基本上乾燥的層析樹脂不含顯著量的抗氧化劑或顯著量的螯合劑。還提供了通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的層析樹脂。
在一些例子中，所生產的生物負載減少的層析樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-8至約1 x 10-5之間(例如，SAL為約1 x 10-7至約1 x 10-6之間)。所生產的生物負載減少的層析樹脂可以包括選自以下的至少一種樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。在一些例子中，所生產的生物負載減少的層析樹脂包括包含蛋白質配位體(例如蛋白A)的親和層析樹脂。在一些例子中，所生產的生物負載減少的層析樹脂包括陰離子交換層析樹 脂(例如，包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團的陰離子交換層析樹脂)。還提供了製備生物負載減少的填充層析柱的方法，所述方法包括提供通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的層析樹脂；和在無菌環境中將層析樹脂填充到生物負載減少的柱中。還提供了通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的層析柱。
本文還提供了用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉且連續的方法，所述方法包括：(a)提供基本上不含細胞的包含重組蛋白的液體培養基；和(b)將液體培養基連續饋送到包含至少一個通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的填充層析柱的多柱層析系統(MCCS)中；其中所述方法利用生物負載減少的緩衝液，是整合的，並且從液體培養基連續運行至來自MCCS的洗脫物，所述洗脫物是純化的重組蛋白。本文還提供了用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉且連續的方法，所述方法包括：(a)提供基本上不含細胞的包含重組蛋白的液體培養基；(b)將液體培養基連續饋送到第一多柱層析系統(MCCS1)中；(c)使用MCCS1捕獲液體培養基中的重組蛋白；(d)從MCCS1產生包含重組蛋白的洗脫物，並將洗脫物連續饋送到第二多柱層析系統(MCCS2)中；(e)將來自洗脫物的重組蛋白連續饋送到MCCS2中，並且隨後洗脫重組蛋白，從而產生純化的重組蛋白，其中：所述方法利用生物負載減少的緩衝液，是整合的，並且從液體培養基連續運行至純化的重組蛋白，並且MCCS1和/或MCCS2中的至少一個柱含有通過本文所述的任何方法生產的生物負載減少的填充層析柱。本文所述的用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉且連續的方法的任何例示性方面可以用於這些方法中。
生產生物負載減少的膜、樹脂、塗布材料、晶片和盒的方法
本文還提供了用於生產生物負載減少的膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒的方法，所述方法包括：將包含含有(i)膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒(例如，纖維素、瓊脂糖或糖基膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒)；和(ii)含至少一種醇(例如，和任選地，至少一種抗氧化劑和/或螯合劑)的液體的組合物的容器暴露於足以減少所述容器和膜、樹脂、塗布材料、晶片或 盒的生物負載的劑量的γ-照射，其中所述至少一種醇的存在量足以改善在暴露於所述劑量的γ-照射之後對所述膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒的損害。在一些例子中，盒是含有樹脂的盒(例如，本文所述或業界已知的任何例示性樹脂)。在一些實施例中，膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒包含共價附接於其表面的至少一個或一部分的蛋白A或蛋白G配位體。在一些實施例中，組合物包含膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒以及含至少醇(例如，和任選地，至少一種抗氧化劑和/或至少一種螯合劑)的液體。本文所述的醇、一種或多種抗氧化劑和/或一種或多種螯合劑的任何例示性組合和濃度均可用於這些方法中的任一種中。本文所述的任何例示性液體均可用於這些方法中的任一種中。在一些實施例中，組合物是潤濕或潮濕的乾燥材料。本文還提供了使用本文所述的任何方法生產的生物負載減少的膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒。在一些例子中，容器是密封的儲存容器或器皿。
本文還提供了用於生產生物負載減少的膜、樹脂、塗布材料、晶片和盒的方法，所述方法包括：將包含基本上乾燥的膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒(例如，纖維素、瓊脂糖或糖基膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒)的容器暴露於足以減少所述容器和膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒的生物負載的劑量的γ-照射。一些例子還包括在暴露步驟之前乾燥膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒的步驟。在一些實施例中，膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒包含共價附接於其表面的蛋白A或蛋白G配位體。在一些例子中，盒是含有樹脂的盒(例如，本文所述或業界已知的任何例示性樹脂)。本文還提供了使用本文所述的任何方法生產的生物負載減少的膜、樹脂、塗布材料、晶片或盒。
在以下實例中進一步描述本發明，所述實例不限制申請專利範圍中所述的本發明的範圍。
實例 實例1.醇對γ-照射的親和層析樹脂的保護作用
在第一組實驗中，將MabSelectTM SuReTM(蛋白A親和層析樹脂)在三種不同緩衝液中以40-49kGy的劑量以標準給予速率照射：
(1)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸、25mM甘露糖醇(40-49kGy照射，給予速率>7.5kGy/小時)；
(2)2v/v%苄醇(40-49kGy照射，給予速率>7.5kGy/小時)；以及
(3)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸、25mM甘露糖醇、2%苄醇(40-49kGy，>7.5kGy/小時的更高給予速率)。
照射後，將層析樹脂填充到單獨的層析柱中，並使用細胞培養物收穫物和6分鐘的停留時間進行循環。記錄經照射樹脂的通過物結合能力，並與初始(未照射)MabSelectTM SuReTM(蛋白A層析)樹脂比較。
該實驗顯示的數據如圖1所示。
圖1中的數據顯示緩衝液(3)提供緩衝液(1)和(2)兩者的組合保持結合能力的累加作用。在這種情況下，緩衝液中的2v/v%苄醇用作防腐劑，並且當與緩衝液(1)組合時，還提供一些保護特性。
表1顯示，所量測的所有產物質量屬性並非十分顯著地基於緩衝液(1)-(3)的使用，並且與初始(未照射)MabSelectTM SuReTM(蛋白A層析樹脂)的預期值類似。
Figure 108130986-A0202-12-0092-3
Figure 108130986-A0202-12-0093-4
該數據顯示，在含醇(例如苄醇)的液體中照射層析樹脂可以保護樹脂免於隨後在多個層析循環中損失結合能力。
實例2.醇對γ-照射的Capto TM Adhere層析樹脂的保護作用
將GE CaptoTM adhere(具有多模態功能性的陰離子交換層析樹脂)在三種不同緩衝液中以28-49kGy的劑量以標準給予速率進行γ-照射：
(A)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸和25mM甘露糖醇(28-34kGy，給予速率是2-3kGy/小時)；
(B)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸、25mM甘露糖醇(40-49kGy，給予速率>7.5kGy/小時)；以及
(C)50mM磷酸鈉緩衝液中的25mM抗壞血酸鈉、25mM甲硫胺酸、25mM組胺酸、25mM甘露糖醇、2v/v%苄醇(40-49kGy，>7.5kGy/小時的更高給予速率)。
照射後，將層析樹脂填充到單獨的層析柱中，並使用細胞培養物收穫物和6分鐘的停留時間進行循環。記錄經照射樹脂的通過物結合能力，並與初始(未照射)GE CaptoTM adhere(具有多模態功能的陰離子交換層析樹脂)比較。
該實驗的數據如圖2所示。圖2中的數據顯示，當在苄醇存在下照射樹 脂時，沒有觀察到結合能力的明顯變化，並且苄醇的存在提供了延長γ照射之前的儲存時間的益處。
下表2顯示在苄醇存在下照射樹脂不會對樹脂在蛋白質純化中的性能的其他質量屬性產生任何明顯的影響。
Figure 108130986-A0202-12-0094-5
其他實施例
應理解，雖然已經結合本發明的具體實施方式描述了本發明，但是前面的描述旨在說明而不是限制本發明的範圍，本發明的範圍由所附申請專利範圍的範圍限定。其他方面、優點和修改在以下申請專利範圍的範圍內。

Claims (102)

  1. 一種減少層析樹脂的生物負載的方法，所述方法包括：
    將包含含有(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體的組合物的容器暴露於足以減少所述容器和所述層析樹脂的生物負載的劑量的γ-照射，其中所述至少一種醇的存在量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。
  2. 如請求項1的方法，所述方法還包括在暴露之前將所述組合物佈置於所述容器中。
  3. 如請求項1的方法，其中所述容器是儲存器皿。
  4. 如請求項1的方法，其中所述容器是層析柱。
  5. 如請求項1的方法，其中所述容器是填充層析柱。
  6. 如請求項1的方法，其中所述組合物是沉降的層析樹脂的漿料。
  7. 如請求項1的方法，其中所述組合物是潤濕的固體混合物。
  8. 如請求項1-7中任一項的方法，其中所述至少一種醇選自：苄醇、環己醇、異丁醇、2-甲基-2-丁醇、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丙-1-醇、丁-1-醇、戊-1-醇、十六烷-1-醇、2-苯基乙醇、仲苯基乙醇、3-苯基-1-丙醇、1-苯基-1-丙醇、2-苯基-1-丙醇、2-苯基-2-丙醇、1-苯基-2-丁醇、2-苯基-1-丁醇、3-苯基-1-丁醇、4-苯基-2-丁醇、dl-1-苯基-2-戊醇、5-苯基-1-戊醇和4-苯基-1-丁醇。
  9. 如請求項8的方法，其中所述至少一種醇包括苄醇。
  10. 如請求項1-9中任一項的方法，其中所述液體中一種或多種醇的總和濃度為約0.01v/v%至約10v/v%。
  11. 如請求項1-10中任一項的方法，其中所述液體還包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑。
  12. 如請求項11的方法，其中所述液體包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑，其量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。
  13. 如請求項11或12的方法，其中所述液體包含至少一種選自以下的抗氧化劑：還原型谷胱甘肽、還原型硫氧還蛋白、還原型半胱胺酸、類胡蘿蔔素、褪黑激素、番茄紅素、生育酚、還原型泛醌、抗壞血酸鹽、膽紅素、尿酸、硫辛酸(lippoic acid)、類黃酮、酚丙酸(phenolpropanoid acid)、利多卡因、柚皮素(naringenin)、富勒烯、葡萄糖、甘露糖醇、4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基和二甲基甲氧基色原烷醇。
  14. 如請求項13的方法，其中所述液體包含至少一種選自以下的抗氧化劑：甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
  15. 如請求項14的方法，其中所述液體包含甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
  16. 如請求項11或12的方法，其中所述液體包含：
    (i)75mM與約125mM之間的甘露糖醇；
    (ii)75mM與約125mM之間的甲硫胺酸；
    (iii)75mM與約125mM之間的抗壞血酸鈉；
    (iv)75mM與約125mM之間的組胺酸；
    (v)30mM與約70mM之間的甲硫胺酸和約30mM與約70mM之間的組胺酸；
    (vi)約10mM與約50mM之間的甲硫胺酸、約10mM與約50mM之間的組胺酸和約10mM與約50mM之間的抗壞血酸鈉；或
    (vii)約5mM與約45mM之間的抗壞血酸鈉、約5mM與約45mM之間的甲硫胺酸、約5mM與約45mM之間的甘露糖醇和約5mM與約45mM之間的組胺酸。
  17. 如請求項1-16中任一項的方法，其中所述液體是緩衝溶液。
  18. 如請求項11或12的方法，其中所述液體包含至少一種選自以下的螯合劑：乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巰基-1-丙磺酸鈉(DMPS)、二巰基丁二酸(DMSA)、金屬硫蛋白和去鐵胺。
  19. 如請求項1-18中任一項的方法，其中所述層析樹脂選自陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
  20. 如請求項19的方法，其中所述組合物包含含有蛋白質配位體的親和層析樹脂。
  21. 如請求項20的方法，其中所述蛋白質配位體是蛋白A。
  22. 如請求項19的方法，其中所述組合物包含陰離子交換層析樹脂。
  23. 如請求項22的方法，其中所述陰離子交換層析樹脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團。
  24. 如請求項1-23中任一項的方法，其中所述劑量為約15kGy與約45kGy之間。
  25. 如請求項24的方法，其中所述劑量為約20kGy與約30kGy之間。
  26. 如請求項25的方法，其中所述劑量為約23kGy與約27kGy之間。
  27. 如請求項1-26中任一項的方法，其中暴露是在如下溫度下執行：約-25℃與約0℃之間，包括端點。
  28. 如請求項1-26中任一項的方法，其中暴露是在如下溫度下執行：約0℃與約25℃之間，包括端點。
  29. 一種生物負載減少的層析樹脂，其通過如請求項3的方法生產。
  30. 如請求項29的生物負載減少的層析樹脂，其中所述樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-8與約1 x 10-5之間。
  31. 如請求項30的生物負載減少的層析樹脂，其中所述樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-7與約1 x 10-6之間。
  32. 如請求項29-31中任一項的生物負載減少的層析樹脂，其中所述層析樹脂包含至少一種選自以下的樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
  33. 如請求項32的生物負載減少的層析樹脂，其中所述層析樹脂包含含有蛋白質配位體的親和層析樹脂。
  34. 如請求項33的生物負載減少的層析樹脂，其中所述蛋白質配位體是蛋白A。
  35. 如請求項32的生物負載減少的層析樹脂，其中所述層析樹脂包含陰離子交換層析樹脂。
  36. 如請求項35的生物負載減少的層析樹脂，其中所述陰離子交換層析樹脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團。
  37. 一種製備生物負載減少的填充層析柱的方法，所述方法包括：
    提供如請求項29的生物負載減少的層析樹脂；和
    在無菌環境中將所述層析樹脂填充到生物負載減少的柱中。
  38. 一種生物負載減少的填充層析柱，其通過如請求項37的方法生產。
  39. 一種生物負載減少的填充層析柱，其通過如請求項5的方法生產。
  40. 如請求項39的生物負載減少的填充層析柱，其中所述填充柱中的樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-8與約1 x 10-5之間。
  41. 如請求項40的生物負載減少的填充層析柱，其中所述樹脂的滅菌保證水平(SAL)為約1 x 10-7與約1 x 10-6之間。
  42. 如請求項39-41中任一項的生物負載減少的填充層析柱，其中所述填充柱中的樹脂包含至少一種選自以下的樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
  43. 如請求項42的生物負載減少的填充層析柱，其中所述樹脂包含含有蛋白質配位體的親和或假親和層析樹脂。
  44. 如請求項43的生物負載減少的填充層析柱，其中所述配位體是蛋白A。
  45. 如請求項42的生物負載減少的填充層析柱，其中所述樹脂包含陰離子交換層析樹脂。
  46. 如請求項45的生物負載減少的填充層析柱，其中所述陰離子交換層析樹脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基團。
  47. 一種組合物，其包含(i)層析樹脂和(ii)含至少一種醇的液體，其中所述至少一種醇的存在量足以改善所述層析樹脂在用足以減少所述組合物的生物負載的劑量的γ-照射處理時結合能力的損失。
  48. 如請求項47的組合物，其中所述組合物是沉降的層析樹脂的漿料。
  49. 如請求項47的組合物，其中所述組合物是潤濕的固體混合物。
  50. 如請求項47-49中任一項的組合物，其中所述至少一種醇選自：苄醇、環己醇、異丁醇、2-甲基-2-丁醇、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丙-1-醇、丁-1-醇、戊-1-醇、十六烷-1-醇、2-苯基乙醇、仲苯基乙醇、3-苯基-1-丙醇、1-苯基-1-丙醇、2-苯基-1-丙醇、2-苯基-2-丙醇、1-苯基-2-丁醇、2-苯基-1-丁醇、3-苯基-1-丁醇、4-苯基-2-丁醇、dl-1-苯基-2-戊醇、5-苯基-1-戊醇和4-苯基-1-丁醇。
  51. 如請求項50的組合物，其中所述至少一種醇包含苄醇。
  52. 如請求項47-51中任一項的組合物，其中所述液體中一種或多種醇的總和濃度為約0.01v/v%至約10v/v%。
  53. 如請求項47-52中任一項的組合物，其中所述液體還包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑。
  54. 如請求項53的組合物，其中所述液體還包含至少一種抗氧化劑和/或螯合劑，其量足以改善所述層析樹脂在暴露於所述劑量的γ-照射之後結合能力的損失。
  55. 如請求項53或54的組合物，其中所述液體包含至少一種選自以下的抗氧化劑：還原型谷胱甘肽、還原型硫氧還蛋白、還原型半胱胺酸、類胡蘿蔔素、褪黑激素、番茄紅素、生育酚、還原型泛醌、抗壞血酸、膽紅素、尿酸、硫辛酸、類黃酮、酚丙酸、利多卡因、柚皮素、富勒烯、葡萄糖、甘露糖醇、4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基和二甲基甲氧基色原烷醇。
  56. 如請求項55的組合物，其中所述液體包含至少一種選自以下的抗氧化劑：甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
  57. 如請求項56的組合物，其中所述液體包含甘露糖醇、抗壞血酸鈉、組胺酸和甲硫胺酸。
  58. 如請求項53或54的組合物，其中所述液體包含：
    (i)75mM與約125mM之間的甘露糖醇；
    (ii)75mM與約125mM之間的甲硫胺酸；
    (iii)75mM與約125mM之間的抗壞血酸鈉；
    (iv)75mM與約125mM之間的組胺酸；
    (v)30mM與約70mM之間的甲硫胺酸和約30mM與約70mM之間的組胺酸；
    (vi)約10mM與約50mM之間的甲硫胺酸、約10mM與約50mM之間的組胺酸和約10mM與約50mM之間的抗壞血酸鈉；或
    (vii)約5mM與約45mM之間的抗壞血酸鈉、約5mM與約45mM之間的甲硫胺酸、約5mM與約45mM之間的甘露糖醇和約5mM與約45mM之間的組胺酸。
  59. 如請求項47-58中任一項的組合物，其中所述液體是緩衝溶液。
  60. 如請求項53或54的組合物，其中所述組合物包含至少一種選自以下的螯合劑：乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巰基-1-丙磺酸鈉(DMPS)、二巰基丁二酸(DMSA)、金屬硫蛋白和去鐵胺。
  61. 如請求項47-60中任一項的組合物，其中所述層析樹脂包含至少一種選自以下的樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
  62. 如請求項61的組合物，其中所述樹脂包含含有蛋白質配位體的親和層析樹脂。
  63. 如請求項62的組合物，其中所述蛋白質配位體是蛋白A。
  64. 一種執行生物負載減少的柱層析的方法，所述方法包括：
    (a)提供如請求項38或39的生物負載減少的填充層析柱；和
    (b)在封閉的系統中使用所述生物負載減少的填充層析柱和生物負載減少的緩衝液進行柱層析。
  65. 如請求項64的方法，其中使用所述生物負載減少的填充層析柱連續執行生物負載減少的柱層析持續至少4天的時間段。
  66. 如請求項65的方法，其中使用所述生物負載減少的填充層析柱連續執行生物負載減少的柱層析持續至少5天的時間段。
  67. 如請求項66的方法，其中使用所述生物負載減少的填充層析柱連續執行所述生物負載減少的柱層析持續至少7天的時間段。
  68. 如請求項67的方法，其中使用所述生物負載減少的填充層析柱連續執行所述生物負載減少的柱層析持續至少14天的時間段。
  69. 如請求項68的方法，其中使用所述生物負載減少的填充層析柱連續執行所述生物負載減少的柱層析持續至少28天的時間段。
  70. 如請求項64的方法，其中與未用γ-照射處理的相同樹脂相比，(a)中所述生物負載減少的填充層析柱中的樹脂具有約75%與約100%之間的結合能力百分比。
  71. 如請求項64的方法，其中所述生物負載減少的填充層析柱中的樹脂包含至少一種選自以下的樹脂：陰離子交換層析樹脂、陽離子交換層析樹脂、親和層析樹脂、疏水性相互作用層析樹脂和尺寸排阻層析樹脂。
  72. 如請求項71的方法，其中所述樹脂包含含有蛋白質配位體的親和層析樹脂。
  73. 如請求項72的方法，其中所述蛋白質配位體是蛋白A。
  74. 如請求項71的方法，其中所述樹脂包含陰離子交換層析樹脂。
  75. 一種用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉且連續的方法，所述方法包括：
    (a)提供基本上不含細胞的包含重組蛋白的液體培養基；和
    (b)將所述液體培養基連續饋送到包含至少一個如請求項38或39的生物負載減少的填充層析柱的多柱層析系統(MCCS)中；
    其中所述方法利用生物負載減少的緩衝液，是整合的，並且從所述液體培養基連續運行至來自所述MCCS的洗脫物，所述洗脫物是所述純化的重組蛋白。
  76. 如請求項75的方法，其中所述MCCS執行至少兩個不同的單元操作。
  77. 如請求項75的方法，其中所述方法包括柱切換。
  78. 如請求項75的方法，其中所述MCCS執行捕獲所述重組蛋白和失活化病毒的單元操作。
  79. 如請求項75的方法，其中所述MCCS執行捕獲和純化所述重組蛋白的單元操作。
  80. 如請求項75的方法，其中所述MCCS包含至少兩個生物負載減少的填充層析柱。
  81. 如請求項75的方法，其中所述MCCS是週期性逆流層析系統。
  82. 如請求項75的方法，其中所述MCCS包括用於親和或假親和層析、陽離子交換層析、陰離子交換層析或尺寸排阻層析或其任何組合的多個柱。
  83. 如請求項82的方法，其中所述MCCS包括用於親和層析的柱，並且在所述方法中用選自以下的捕獲機制執行親和層析：蛋白A結合捕獲機制、受質結合捕獲機制、抗體或抗體片段結合捕獲機制、適體結合捕獲機制和輔因子結合捕獲機制。
  84. 如請求項83的方法，其中在所述方法中用蛋白A結合捕獲機制執行所述親和層析，並且所述重組蛋白是抗體或抗體片段。
  85. 一種用於以減少生物負載的方式製造純化的重組蛋白的整合、封閉且連續的方法，所述方法包括：
    (a)提供基本上不含細胞的包含重組蛋白的液體培養基；
    (b)將所述液體培養基連續饋送到第一多柱層析系統(MCCS1)中；
    (c)使用所述MCCS1捕獲所述液體培養基中的重組蛋白；
    (d)從所述MCCS1產生包含所述重組蛋白的洗脫物，並將所述洗脫物連續饋送到第二多柱層析系統(MCCS2)中；
    (e)將來自所述洗脫物的重組蛋白連續饋送到所述MCCS2中，並且隨後洗脫所述重組蛋白，從而產生所述純化的重組蛋白，其中：
    所述方法利用生物負載減少的緩衝液，是整合的，並且從所述液體培養基連續運行至所述純化的重組蛋白，並且
    所述MCCS1和/或所述MCCS2中的至少一個柱含有如請求項38或39的生物負載減少的填充層析柱。
  86. 如請求項85的方法，其中所述MCCS1和/或所述MCCS2執行至少兩個不同的單元操作。
  87. 如請求項85的方法，其中所述方法涉及柱切換。
  88. 如請求項85的方法，其中所述MCCS1執行捕獲所述重組治療性蛋白和失活化病毒的單元操作。
  89. 如請求項85的方法，其中所述MCCS2執行純化和精製所述重組蛋白的單元操作。
  90. 如請求項85的方法，其中所述MCCS1和/或MCCS2包含至少兩個層析柱。
  91. 如請求項85的方法，其中所述MCCS1是第一週期性逆流層析系統(PCCS1)。
  92. 如請求項85的方法，其中使用親和層析、陽離子交換層析、陰離子交換層析或尺寸排阻層析或其任何組合執行所述捕獲。
  93. 如請求項92的方法，其中用選自以下的捕獲機制執行所述親和層析：蛋白A結合捕獲機制、受質結合捕獲機制、抗體或抗體片段結合捕獲機制、適體結合捕獲機制和輔因子結合捕獲機制。
  94. 如請求項93的方法，其中用蛋白A結合捕獲機制執行所述親和層析，並且所述重組蛋白是抗體或抗體片段。
  95. 如請求項85的方法，其中所述MCCS2是第二週期性逆流(PCCS2)層析系統。
  96. 如請求項75或85的方法，其中所述重組蛋白是治療性重組蛋白。
  97. 如請求項96的方法，所述方法還包括：將所述純化的治療性重組蛋白配製成醫藥組合物。
  98. 如請求項75或85的方法，其中連續執行所述方法持續至少4天的時間段。
  99. 如請求項98的方法，其中連續執行所述方法持續至少5天的時間段。
  100. 如請求項99的方法，其中連續執行所述方法持續至少7天的時間段。
  101. 如請求項100的方法，其中連續執行所述方法持續至少14天的時間段。
  102. 如請求項101的方法，其中連續執行所述方法持續至少28天的時間段。
TW108130986A 2018-08-31 2019-08-29 無菌層析法樹脂及其於製程中之用途 TW202035435A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862726043P 2018-08-31 2018-08-31
US62/726,043 2018-08-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202035435A true TW202035435A (zh) 2020-10-01

Family

ID=67841180

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108130986A TW202035435A (zh) 2018-08-31 2019-08-29 無菌層析法樹脂及其於製程中之用途

Country Status (15)

Country Link
US (1) US11369703B2 (zh)
EP (1) EP3843869A1 (zh)
JP (2) JP2021536353A (zh)
KR (1) KR20210049155A (zh)
CN (1) CN112638488A (zh)
AU (1) AU2019332764A1 (zh)
BR (1) BR112021003420A2 (zh)
CA (1) CA3110666A1 (zh)
HK (1) HK40046210A (zh)
IL (1) IL281077A (zh)
MX (1) MX2021002314A (zh)
SG (1) SG11202101860UA (zh)
TW (1) TW202035435A (zh)
WO (1) WO2020046602A1 (zh)
ZA (1) ZA202100649B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI709570B (zh) 2014-01-17 2020-11-11 美商健臻公司 無菌層析法及製法
TWI709569B (zh) 2014-01-17 2020-11-11 美商健臻公司 無菌層析樹脂及其用於製造方法的用途
EP3843869A1 (en) 2018-08-31 2021-07-07 Genzyme Corporation Sterile chromatography resin and use thereof in manufacturing processes

Family Cites Families (92)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4401108A (en) 1980-02-13 1983-08-30 Thomas Jefferson University Radioactive material loading, calibration and injection systems
JPS6075530A (ja) 1983-09-30 1985-04-27 Asahi Chem Ind Co Ltd 金属元素の新しい分離精製方法
US4559175A (en) 1984-04-19 1985-12-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force Halo-substituted diphospha-s-triazines and their derivatives
US4885250A (en) 1987-03-02 1989-12-05 E. I. Du Pont De Nemours And Company Enzyme immobilization and bioaffinity separations with perfluorocarbon polymer-based supports
US5612016A (en) 1988-04-01 1997-03-18 Immunomedics, Inc. Conjugates of antibodies and bifunctional ligands
US5169936A (en) 1989-04-14 1992-12-08 Biogen, Inc. Protein purification on immobilized metal affinity resins effected by elution using a weak ligand
WO1991002049A1 (en) 1989-08-04 1991-02-21 Peter Grandics An integrated cell culture-protein purification system for the automated production and purification of cell culture products
US5244816A (en) 1989-10-11 1993-09-14 Akzo N.V. Method for purifying chelator conjugated compounds
WO1992017403A1 (en) 1991-04-05 1992-10-15 Brigham Young University Support bonded polyalkylene-polyamine-poly(carboxylic acid) and extraction of metal ions therewith
RU2034853C1 (ru) 1992-07-14 1995-05-10 Научно-исследовательский институт строительных материалов при Томской государственной инженерно-строительной академии Способ получения полимерного сорбента для хроматографии
JP2871435B2 (ja) 1993-04-22 1999-03-17 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー 親水性ポリマー被覆パーフルオロカーボンポリマーベースのマトリックスの製造方法
US5478924A (en) 1994-02-16 1995-12-26 Cramer; Steven M. Displacement chromatography of proteins using low molecular weight displacers
US5429746A (en) 1994-02-22 1995-07-04 Smith Kline Beecham Corporation Antibody purification
US5856179A (en) 1994-03-10 1999-01-05 Genentech, Inc. Polypeptide production in animal cell culture
US5423982A (en) 1994-05-31 1995-06-13 Biosepra Inc. Liquid chromatography column adapted for in situ chemical sterilization
US5610285A (en) 1994-08-24 1997-03-11 Bayer Corporation Purification of α-1 proteinase inhibitor using novel chromatographic separation conditions
US6359114B1 (en) 1995-06-07 2002-03-19 Aphton Corp. System for method for the modification and purification of proteins
US5691152A (en) 1995-11-09 1997-11-25 E. R. Squibb & Sons, Inc. Stable avidin composition
AR005035A1 (es) 1995-12-11 1999-04-07 Merck Patent Ges Mit Beschränkter Haftung Procedimiento para preparar proteinas recombinantes en e. coli, mediante fermentacion con gran concentracion de celulas.
SI1897890T1 (sl) 1996-11-27 2010-03-31 Genentech Inc Afinitetno čiščenje polipeptida na proteinskemA matriksu
US6955917B2 (en) 1997-06-20 2005-10-18 Bayer Healthcare Llc Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies
US5886154A (en) 1997-06-20 1999-03-23 Lebing; Wytold R. Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies
US6265542B1 (en) 1997-10-24 2001-07-24 Genentech, Inc. Purification of molecules
US7611831B2 (en) * 1998-01-06 2009-11-03 Cerus Corporation Adsorbing pathogen-inactivating compounds with porous particles immobilized in a matrix
DE69907439T3 (de) 1998-05-06 2014-01-02 Genentech, Inc. Reinigung von proteinen durch ionenaustauschchromatographie
DE19858892A1 (de) 1998-12-19 2000-06-21 Merck Patent Gmbh Kontinuierliches Verfahren zur Trennung von Stoffen nach Molekülgröße
GB9902000D0 (en) 1999-01-30 1999-03-17 Delta Biotechnology Ltd Process
GB0028879D0 (en) 2000-11-27 2001-01-10 Prometic Biosciences Ltd Adsorbents and their use
KR20040052481A (ko) 2001-02-23 2004-06-23 임뮤넥스 코포레이션 재조합 단백질의 수득률을 증가시키는 방법
ITBO20010426A1 (it) 2001-07-06 2003-01-06 Alfa Wassermann Spa Processo per la purificazione di proteine farmacologicamente attive mediante cromatografia in scambio cationico
US7252799B2 (en) * 2001-08-31 2007-08-07 Clearant, Inc. Methods for sterilizing preparations containing albumin
US20030095890A1 (en) 2001-09-24 2003-05-22 Shirley Miekka Methods for sterilizing biological materials containing non-aqueous solvents
AU2002343100A1 (en) 2001-11-27 2003-06-10 Prometic Biosciences Ltd. The use of metal-chelating adsorbents
US6660172B2 (en) 2002-01-31 2003-12-09 Koslow Technologies Corporation Precoat filtration media and methods of making and using
AU2003210802B2 (en) 2002-02-05 2009-09-10 Genentech Inc. Protein purification
HUE025101T2 (en) 2002-04-26 2016-02-29 Genentech Inc Purification of proteins other than affinity purification
US6902909B2 (en) 2002-07-09 2005-06-07 Synthecon, Inc. Methods for efficient production of mammalian recombinant proteins
IL262513B (en) 2002-09-11 2022-09-01 Genentech Inc Cleaning proteins
CN102050865B (zh) 2002-09-13 2014-03-12 拜奥根Idec公司 通过模拟移动床层析纯化多肽的方法
US7157276B2 (en) 2003-06-20 2007-01-02 Biogen Idec Inc. Use of depth filtration in series with continuous centrifugation to clarify mammalian cell cultures
AU2005216847B2 (en) * 2004-02-27 2010-04-01 Cytiva Bioprocess R&D Ab A process for the purification of antibodies
WO2005082937A2 (en) 2004-02-27 2005-09-09 Octapharma Ag A method of providing a purified, virus safe antibody preparation
KR101021203B1 (ko) 2004-06-04 2011-03-11 크셀렉스, 인크. 1회용 바이오리액터 장치 및 방법
US20060004621A1 (en) 2004-06-30 2006-01-05 Malek Kamal M Real-time selection of survey candidates
WO2006026248A1 (en) 2004-08-25 2006-03-09 Sigma-Aldrich Co. Compositions and methods employing zwitterionic detergent combinations
WO2006039588A2 (en) 2004-09-30 2006-04-13 Bayer Healthcare Llc Devices and methods for integrated continuous manufacturing of biological molecules
US7867784B2 (en) 2004-10-21 2011-01-11 Ge Healthcare Bio-Science Ab Chromatography ligand
RU2007118954A (ru) 2004-10-22 2008-11-27 Эмджен Инк. (Us) Способ рефолдинга рекомбинантных антител
CA2590462C (en) 2004-12-22 2017-02-28 Ambrx, Inc. Methods for expression and purification of recombinant human growth hormone
CA2599650A1 (en) 2005-03-07 2006-09-14 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Method of sterilization
CN1923290A (zh) * 2005-04-29 2007-03-07 成都夸常医学工业有限公司 一种病毒灭活方法、其中所用的处理系统以及装置
US8043833B2 (en) 2005-10-31 2011-10-25 Novo Nordisk A/S Expression of soluble therapeutic proteins
EP1963367A4 (en) 2005-12-06 2009-05-13 Amgen Inc POLISHING STEPS IN MULTI-STAGE PROTEIN PURIFICATION TREATMENTS
AU2007237133A1 (en) 2006-02-17 2007-10-18 Novartis Ag Purification of bacterial antigens
US7673757B2 (en) 2006-02-17 2010-03-09 Millipore Corporation Adsorbent filter media for removal of biological contaminants in process liquids
CA2650041A1 (en) 2006-04-21 2007-11-01 Klaus Michael Joeris Systeme and method for in situ measurements
US20080132688A1 (en) 2006-09-22 2008-06-05 Amgen Inc. Methods for Removing Viral Contaminants During Protein Purification
US20080207487A1 (en) 2006-11-02 2008-08-28 Neose Technologies, Inc. Manufacturing process for the production of polypeptides expressed in insect cell-lines
NZ578758A (en) * 2007-02-01 2011-03-31 Avantor Performance Mat Inc Chromatographic media and chromatographic equipment storage solutions comprising benzyl alcohol and ethyl alcohol
US9597610B2 (en) 2007-03-09 2017-03-21 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Packing system and method for chromatography columns
GB0704603D0 (en) 2007-03-09 2007-04-18 Ge Healthcare Bio Sciences Ab Packing system and method for chromatography columns
WO2008127087A1 (en) 2007-04-17 2008-10-23 Xendo Holding B.V. Method and device for continuous membrane adsorption
US9109193B2 (en) 2007-07-30 2015-08-18 Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. Continuous perfusion bioreactor system
KR101241486B1 (ko) 2007-10-30 2013-03-15 제넨테크, 인크. 양이온 교환 크로마토그래피에 의한 항체 정제
SG2013066634A (en) 2007-12-27 2015-04-29 Otsuka Pharma Co Ltd Enzyme associated with equol synthesis
UA100901C2 (ru) 2008-06-24 2013-02-11 Октафарма Аг Способ очищения фактора свертывания крови viii
WO2010141039A1 (en) * 2008-10-20 2010-12-09 Abbott Laboratories Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography
WO2010066734A1 (en) 2008-12-08 2010-06-17 Novo Nordisk A/S Counter current purification of polypeptides
WO2010120514A2 (en) 2009-03-31 2010-10-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Antigen-binding proteins comprising recombinant protein scaffolds
EP2236617A1 (en) 2009-03-31 2010-10-06 Leukocare Ag Methods of terminal sterilization of biofunctional compositions
US8580554B2 (en) 2009-07-31 2013-11-12 Baxter International Inc. Method of producing a polypeptide or virus of interest in a continuous cell culture
CA2776723C (en) 2009-10-29 2018-09-25 Ascendis Pharma As Sterilization of biodegradable hydrogels
WO2011078772A1 (en) 2009-12-22 2011-06-30 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Method for dry packing chromatography columns
GB0922426D0 (en) 2009-12-22 2010-02-03 Ge Healthcare Bio Sciences Ab Containers for chromatography media
JP5932780B2 (ja) 2010-06-03 2016-06-08 ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ クロマトグラフィーカラムモジュールの並列アセンブリ
WO2012049324A2 (en) * 2010-10-15 2012-04-19 Straumann Holding Ag New emd formulation comprising pga
WO2012071135A2 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Biovec Transfusion, Llc Methods for removing pathogens from a platelet preparation
JP2013544524A (ja) 2010-12-06 2013-12-19 ターポン バイオシステムズ，インコーポレイテッド 生物学的生成物の連続プロセス法
CN102321316B (zh) 2011-08-25 2013-04-24 上海恒方大高分子材料科技有限公司 一种适用于γ射线辐照消毒的医用PVC材料及其制备方法
EP2656892A1 (en) 2012-04-23 2013-10-30 Merck Patent GmbH Chromatography method
US20140154270A1 (en) * 2012-05-21 2014-06-05 Chen Wang Purification of non-human antibodies using kosmotropic salt enhanced protein a affinity chromatography
EP2682168A1 (en) 2012-07-02 2014-01-08 Millipore Corporation Purification of biological molecules
CN104411820B (zh) 2012-06-29 2017-05-03 Emd密理博公司 在蛋白纯化过程中灭活病毒的方法
EP2911759A1 (en) 2012-10-24 2015-09-02 Genzyme Corporation Elution of biomolecules from multi-modal resins using mes and mops as mobile phase modifiers
RU2662929C2 (ru) 2013-03-08 2018-07-31 Джензим Корпорейшн Интегрированное непрерывное производство терапевтических белковых лекарственных веществ
CN103223333B (zh) 2013-04-15 2015-01-14 河海大学 一种含双偕胺肟基的改性硅胶吸附剂及其制备方法
US20240100450A9 (en) * 2014-01-17 2024-03-28 Repligen Corporation Sterilizing chromatography columns
TWI709569B (zh) 2014-01-17 2020-11-11 美商健臻公司 無菌層析樹脂及其用於製造方法的用途
TWI709570B (zh) 2014-01-17 2020-11-11 美商健臻公司 無菌層析法及製法
EP3094391A4 (en) * 2014-01-17 2017-09-20 Repligen Corporation Sterilizing chromatography columns
JP7479151B2 (ja) * 2017-01-30 2024-05-08 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド クロマトグラフィーにおけるバイオバーデンを低減するための組成物および方法
EP3843869A1 (en) 2018-08-31 2021-07-07 Genzyme Corporation Sterile chromatography resin and use thereof in manufacturing processes

Also Published As

Publication number Publication date
HK40046210A (zh) 2021-10-29
CA3110666A1 (en) 2020-03-05
MX2021002314A (es) 2021-04-28
US11369703B2 (en) 2022-06-28
JP2024020347A (ja) 2024-02-14
AU2019332764A1 (en) 2021-05-06
US20200069822A1 (en) 2020-03-05
IL281077A (en) 2021-04-29
EP3843869A1 (en) 2021-07-07
WO2020046602A1 (en) 2020-03-05
KR20210049155A (ko) 2021-05-04
BR112021003420A2 (pt) 2021-05-18
JP2021536353A (ja) 2021-12-27
ZA202100649B (en) 2022-08-31
CN112638488A (zh) 2021-04-09
SG11202101860UA (en) 2021-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11839861B2 (en) Sterile chromatography resin and use thereof in manufacturing processes
CN106103464B (zh) 无菌层析和制造工艺
TW202035435A (zh) 無菌層析法樹脂及其於製程中之用途
RU2809157C2 (ru) Стерильная смола для хроматографии и ее применение в способах производства