TW202031659A - 具抗b型肝炎病毒（hbv）活性之新穎6,7-二氫-4h-吡唑并[1,5-a]吡嗪吲哚-2-羧醯胺 - Google Patents

具抗b型肝炎病毒（hbv）活性之新穎6,7-二氫-4h-吡唑并[1,5-a]吡嗪吲哚-2-羧醯胺 Download PDF

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Abstract

本發明大體上係關於新穎抗病毒劑。具體而言，本發明係關於可抑制由B型肝炎病毒(HBV)編碼之一或多種蛋白質或干擾HBV複製週期之功能之化合物、包含該等化合物之組合物、用於抑制HBV病毒複製之方法、用於治療或預防HBV感染之方法，以及用於製造該等化合物之製程及中間物。

Description

具抗B型肝炎病毒（HBV）活性之新穎6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-A]吡嗪吲哚-2-羧醯胺
本發明大體上係關於新穎抗病毒劑。具體而言，本發明係關於可抑制由B型肝炎病毒(HBV)編碼之一或多種蛋白質或干擾HBV複製週期之功能之化合物、包含該等化合物之組合物、用於抑制HBV病毒複製之方法、用於治療或預防HBV感染之方法，以及用於製造該等化合物之製程。
慢性HBV感染為重大的全球健康問題，影響超過5%的世界人口(全世界超過3.5億人，且美國125萬名個體)。由於在大部分發展中世界中之次佳治療選項及新型感染之持續速率，不管預防性HBV疫苗之可用性如何，慢性HBV感染之負荷仍為顯著未滿足之世界性醫學問題。當前治療不提供治癒且僅限於兩類藥劑(干擾素α及核苷類似物/病毒聚合酶之抑制劑)；耐藥性、低功效及耐受性問題限制其影響。
HBV之低治癒率至少部分地歸因於以下事實：難以用單一抗病毒劑實現病毒產生之完全抑制，且歸因於共價閉合環狀DNA (cccDNA)在經感染肝細胞之細胞核中之存在及存留。然而，HBV DNA之持續性遏制減緩肝病進展且有助於預防肝細胞癌(HCC)。
經HBV感染之患者之當前療法目標係針對將血清HBV DNA降至低水平或不可偵測的水平，且最終減少或預防肝硬化及HCC發展。
HBV為嗜肝DNA病毒(hepadnavirus)科(嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae))之包膜部分雙股DNA (dsDNA)病毒。HBV衣殼蛋白(HBV-CP)在HBV複製中起重要作用。HBV-CP之主要生物功能係充當用衣殼包裹前基因組RNA且形成未成熟衣殼顆粒之結構蛋白，該等顆粒係由細胞質中之衣殼蛋白二聚體之多種複本自發地自裝配。
HBV-CP亦經由其C端磷酸化位點之差別磷酸化狀態調節病毒DNA合成。此外，HBV-CP可能藉助於位於HBV-CP之C端區之富含精胺酸之結構域中的細胞核定位信號來促進病毒鬆環基因組(viral relaxed circular genome)的細胞核易位。
在細胞核中，作為病毒cccDNA微型染色體之組分，HBV-CP可在cccDNA微型染色體之功能性中起結構性及調整性作用。HBV-CP亦與內質網(ER)中之病毒大型包膜蛋白相互作用，且觸發完整病毒顆粒自肝細胞中之釋放。
已報導HBV-CP相關之抗HBV化合物。舉例而言，苯基丙烯醯胺衍生物，包括名為AT-61及AT-130之化合物(Feld J.等人 Antiviral Res. 2007, 76, 168)，及一類來自Valeant之噻唑啶-4-酮(W02006/033995)，已顯示可抑制前基因組RNA (pgRNA)封裝。
F. Hoffmann-La Roche AG已揭示用於HBV療法之一系列3取代之四氫-吡唑并[1,5-a]吡嗪(WO2016/113273、WO2017/198744、WO2018/011162、WO2018/011160、WO2018/011163)。
雜芳基二氫嘧啶(HAP)係發現於基於組織培養之篩選中(Weber等人, Antiviral Res. 2002, 54, 69)。此等HAP類似物充當合成異位活化劑且能夠誘導引起HBV-CP降解之異常衣殼形成(WO 99/54326、WO 00/58302、WO 01/45712、WO 01/6840)。亦已描述另外的HAP類似物(J. Med. Chem. 2016, 59 (16), 7651-7666)。
來自F. Hoffman-La Roche之HAP子類別亦展示抗HBV之活性(WO2014/184328、WO2015/132276及WO2016/146598)。來自Sunshine Lake Pharma之類似子類別亦展示抗HBV之活性(WO2015/144093)。其他HAP亦展示為具有抗HBV之活性(WO2013/102655，Bioorg. Med. Chem. 2017, 25(3) 第1042-1056頁)，且來自Enanta Therapeutics之類似子類別展示類似活性(WO2017/011552)。來自Medshine Discovery之另一子類別展示類似活性(WO2017/076286)。另一子類別(Janssen Pharma)展示類似活性(WO2013/102655)。
子類別之噠嗪酮及三嗪酮(F. Hoffman-La Roche)亦展示抗HBV之活性(WO2016/023877)，子類別之四氫吡啶并吡啶亦如此(WO2016/177655)。來自Roche的子類別之三環4-吡啶酮-3-甲酸衍生物亦展示類似抗HBV活性(WO2017/013046)。
來自Novira Therapeutics (現為Johnson & Johnson Inc.之一部分)之子類別之胺磺醯基-芳基醯胺亦展示抗HBV之活性(W02013/006394、W02013/096744、WO2014/165128、W02014/184365、WO2015/109130、WO2016/089990、WO2016/109663、WO2016/109684、WO2016/109689、WO2017/059059)。類似子類別之硫醚-芳基醯胺(亦來自Novira Therapeutics)展示抗HBV之活性(WO2016/089990)。另外，子類別之芳基-氮雜環庚烷(亦來自Novira Therapeutics)展示抗HBV之活性(WO2015/073774)。來自Enanta Therapeutics之類似子類別之芳基醯胺展示抗HBV之活性(WO2017/015451)。
來自Janssen Pharma之胺磺醯基衍生物亦已展示具有抗HBV之活性(WO2014/033167、WO2014/033170、WO2017/001655，J. Med. Chem, 2018, 61(14) 6247-6260)。
亦來自Janssen Pharma的子類別之乙二醛胺取代之吡咯醯胺衍生物亦已展示具有抗HBV之活性(WO2015/011281)。亦已描述類似類別之乙二醛胺取代之吡咯醯胺(Gilead Sciences)(WO2018/039531)。
來自Enanta Therapeutics的子類別之胺磺醯基-雜聯芳基化合物及草醯基-雜聯芳基化合物亦展示抗HBV之活性(WO2016/161268、WO2016/183266、WO2017/015451、WO2017/136403及US20170253609)。
來自Assembly Biosciences的子類別之苯胺-嘧啶亦展示抗HBV之活性(WO2015/057945、WO2015/172128)。來自Assembly Biosciences的子類別之稠合三環化合物(二苯并-噻氮呯酮、二苯并-二氮呯酮、二苯并-噁氮呯酮)展示抗HBV之活性(WO2015/138895、WO2017/048950)。
一系列環狀磺醯胺已由Assembly Biosciences描述為HBV-CP功能之調節劑(WO2018/160878)。
Arbutus Biopharma已揭示用於HBV療法之一系列苯甲醯胺(WO2018/052967、WO2018/172852)。
亦顯示小分子bis-ANS充當分子「楔」且干擾正常衣殼-蛋白質幾何形狀及衣殼形成(Zlotnick A等人 J. Virol. 2002, 4848)。
HBV直接作用抗病毒劑可能遭遇之問題為毒性、突變誘發性、選擇性缺乏、不良功效、不良生物可用性、低溶解度及合成困難。因此，需要用於治療、改善或預防HBV之額外的抑制劑，其可克服此等缺點中之至少一者或具有諸如增加之效力或增加之安全窗口的額外優點。
以單一療法或與其他HBV治療或輔助治療組合向HBV感染患者投與該等治療劑將導致病毒負荷顯著降低、預後改良、疾病進程減弱及/或血清轉化率增強。
本文提供適用於治療或預防有需要之個體之HBV感染的化合物及適用於其製備的中間物。本發明之主題為式I化合物：
Figure 02_image001
其中 -  R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 -  R5為H或甲基 -  R6係選自包含以下之群：H、D、SO2 -C1-C6烷基、SO2 -C3-C7環烷基、SO2 -C3-C7雜環烷基、SO2 -C2-C6羥基烷基、SO2 -C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、SO2 -C1-C4羧基烷基、SO2 -芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -N(R12)(R13)、C(=O)R8、C(=O)N(R12)(R13)、C(=O)C(=O)N(R12)(R13)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C1-C4羧基烷基、C1-C4醯基磺醯胺基-烷基、C1-C4羧醯胺基烷基、C3-C7雜環烷基、C2-C6胺基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基及醯基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基，其中C3-C7雜環烷基視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：C1-C6烷基或C1-C6烷氧基， -  R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R12及R13係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R12及R13視情況連接以形成C3-C7環烷基環，或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環。
在本發明之一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中 -  R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 -  R5為H或甲基 -  R6係選自包含以下之群：H、D、SO2 -C1-C6烷基、SO2 -C3-C7環烷基、SO2 -C3-C7雜環烷基、SO2 -C2-C6羥基烷基、SO2 -C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、SO2 -C1-C4羧基烷基、SO2 -芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -N(R12)(R13)、C(=O)R8、C(=O)N(R12)(R13)、C(=O)C(=O)N(R12)(R13)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C1-C4羧基烷基、C1-C4醯基磺醯胺基-烷基、C1-C4羧醯胺基烷基、C3-C7雜環烷基、C2-C6胺基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基及醯基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基，其中C3-C7雜環烷基視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：C1-C6烷基或C1-C6烷氧基， -  R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R12及R13係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R12及R13視情況連接以形成C3-C7環烷基環，或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 ，較佳H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et及i-Pr，且最佳H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、CH3 及Et。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R5為H。在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R5為甲基。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R6係選自包含以下之群：H、D、SO2 -C1-C6烷基、SO2 -C3-C7環烷基、SO2 -C3-C7雜環烷基、SO2 -C2-C6羥基烷基、SO2 -C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、SO2 -C1-C4羧基烷基、SO2 -芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -N(R12)(R13)、C(=O)R8、C(=O)N(R12)(R13)、C(=O)C(=O)N(R12)(R13)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C1-C4羧基烷基、C1-C4醯基磺醯胺基-烷基、C1-C4羧醯胺基烷基、C3-C7雜環烷基、C2-C6胺基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基及醯基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基，其中C3-C7雜環烷基視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，較佳H、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C4-C7雜環烷基及C2-C6羥基烷基，其視情況經OH、C1-C6烷氧基、C1-C3-C7環烷基、C6羥基烷基及C3-C7雜環烷基取代。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基、雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R12及R13係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基、雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R12及R13視情況連接以形成C3-C7環烷基環或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環。
本發明之一個實施例為本發明之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療個體之HBV感染。
本發明之一個實施例為一種醫藥組合物，其包含本發明之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，以及醫藥學上可接受之載劑。
本發明之一個實施例為一種治療有需要之個體的HBV感染之方法，其包含向該個體投與治療有效量之本發明之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明之另一實施例為本發明之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療有需要之個體的HBV感染。
Figure 02_image004
其中 -  R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 -  R5為H或甲基 -  R6係選自包含以下之群：H、D、SO2 -C1-C6烷基、SO2 -C3-C7環烷基、SO2 -C3-C7雜環烷基、SO2 -C2-C6羥基烷基、SO2 -C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、SO2 -C1-C4羧基烷基、SO2 -芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -N(R12)(R13)、C(=O)R8、C(=O)N(R12)(R13)、C(=O)C(=O)N(R12)(R13)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C1-C4羧基烷基、C1-C4-醯基磺醯胺基-烷基、C1-C4羧醯胺基烷基、C3-C7雜環烷基、C2-C6胺基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基及醯基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R12及R13係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R12及R13視情況連接以形成C3-C7環烷基環，或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環。
在本發明之一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中 -  R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 -  R5為H或甲基 -  R6係選自包含以下之群：H、D、SO2 -C1-C6烷基、SO2 -C3-C7環烷基、SO2 -C3-C7雜環烷基、SO2 -C2-C6羥基烷基、SO2 -C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、SO2 -C1-C4羧基烷基、SO2 -芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -N(R12)(R13)、C(=O)R8、C(=O)N(R12)(R13)、C(=O)C(=O)N(R12)(R13)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C1-C4羧基烷基、C1-C4-醯基磺醯胺基-烷基、C1-C4羧醯胺基烷基、C3-C7雜環烷基、C2-C6胺基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基及醯基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R12及R13係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R12及R13視情況連接以形成C3-C7環烷基環，或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 ，較佳H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et及i-Pr，且最佳H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、CH3 及Et。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R5選自包含H及甲基之群。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R6係選自包含以下之群：H、D、SO2 -C1-C6烷基、SO2 -C3-C7環烷基、SO2 -C3-C7雜環烷基、SO2 -C2-C6羥基烷基、SO2 -C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、SO2 -C1-C4羧基烷基、SO2 -芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -N(R12)(R13)、C(=O)R8、C(=O)N(R12)(R13)、C(=O)C(=O)N(R12)(R13)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C1-C4羧基烷基、C1-C4-醯基磺醯胺基-烷基、C1-C4羧醯胺基烷基、C3-C7雜環烷基、C2-C6胺基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基及醯基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基，較佳H、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C4-C7雜環烷基及C2-C6羥基烷基，其視情況經OH、C1-C6烷氧基、C1-C3-C7環烷基、C6羥基烷基及C3-C7雜環烷基取代。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基、雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R12及R13係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基、雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
在一個實施例中，本發明之主題為式I化合物，其中R12及R13視情況連接以形成C3-C7環烷基環或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環。
本發明之一個實施例為本發明之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療個體之HBV感染。
本發明之一個實施例為一種醫藥組合物，其包含本發明之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，以及醫藥學上可接受之載劑。
本發明之一個實施例為一種治療有需要之個體的HBV感染之方法，其包含向該個體投與治療有效量之本發明之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明之另一實施例為本發明之式II化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療有需要之個體的HBV感染。
Figure 02_image006
其中 -  R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 -  R5為H或甲基 -  R7係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基、C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
在一個實施例中，本發明之主題為式II化合物，其中R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 ，較佳H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、CH3 及Et。
在一個實施例中，本發明之主題為式II化合物，其中R5選自包含H及甲基之群。
在一個實施例中，本發明之主題為式II化合物，其中R7係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基、C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
本發明之一個實施例為本發明之式II化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療個體之HBV感染。
本發明之一個實施例為一種醫藥組合物，其包含本發明之式II化合物或其醫藥學上可接受之鹽，以及醫藥學上可接受之載劑。
本發明之一個實施例為一種治療有需要之個體的HBV感染之方法，其包含向該個體投與治療有效量之本發明之式II化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明之另一實施例為本發明之式III化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療有需要之個體的HBV感染。
Figure 02_image008
其中 -  R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 -  R5為H或甲基 -  R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基、雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
在一個實施例中，本發明之主題為式III化合物，其中R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 ，較佳H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、CH3 及Et。
在一個實施例中，本發明之主題為式III化合物，其中R5選自包含H及甲基之群。
在一個實施例中，本發明之主題為式III化合物，其中R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
本發明之一個實施例為本發明之式III化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療個體的HBV感染。
本發明之一個實施例為一種醫藥組合物，其包含本發明之式III化合物或其醫藥學上可接受之鹽，以及醫藥學上可接受之載劑。
本發明之一個實施例為一種治療有需要之個體的HBV感染之方法，其包含向該個體投與治療有效量之本發明之式III化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明之另一實施例為本發明之式IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療有需要之個體的HBV感染。
Figure 02_image010
其中 -  R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 -  R5為H或甲基 -  R9、R10及R11係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C5烷基、C1-C5羥基烷基、C1-C5烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C3羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其中C1-C5烷基、C1-C5羥基烷基、C1-C5烷基-O-C1-C6烷基及C1-C3羧基烷基視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 -  R9及R10視情況連接以形成C3-C7環烷基環，或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環。
在一個實施例中，本發明之主題為式IV化合物，其中R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 ，較佳H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、CH3 及Et。
在一個實施例中，本發明之主題為式IV化合物，其中R5選自包含H及甲基之群。
在一個實施例中，本發明之主題為式IV化合物，其中R9、R10及R11係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C5烷基、C1-C5羥基烷基、C1-C5烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C3羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其中C1-C5烷基、C1-C5羥基烷基、C1-C5烷基-O-C1-C6烷基及C1-C3羧基烷基視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基。
在一個實施例中，本發明之主題為式IV化合物，其中R9及R10視情況連接以形成C3-C7環烷基環或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環。
本發明之一個實施例為本發明之式IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於預防或治療個體的HBV感染。
本發明之一個實施例為一種醫藥組合物，其包含本發明之式IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽，以及醫藥學上可接受之載劑。
本發明之一個實施例為一種治療有需要之個體的HBV感染之方法，其包含向該個體投與治療有效量之本發明之式IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，本發明化合物之劑量為約1 mg至約2,500 mg。在一些實施例中，用於本文所描述之組合物中之本發明化合物之劑量小於約10,000 mg，或小於約8,000 mg，或小於約6,000 mg，或小於約5,000 mg，或小於約3,000 mg，或小於約2,000 mg，或小於約1,000 mg，或小於約500 mg，或小於約200 mg，或小於約50 mg。類似地，在一些實施例中，如本文所描述之第二化合物(亦即，用於HBV治療之另一藥物)之劑量小於約1,000 mg，或小於約800 mg，或小於約600 mg，或小於約500 mg，或小於約400 mg，或小於約300 mg，或小於約200 mg，或小於約100 mg，或小於約50 mg，或小於約40 mg，或小於約30 mg，或小於約25 mg，或小於約20 mg，或小於約15 mg，或小於約10 mg，或小於約5 mg，或小於約2 mg，或小於約1 mg，或小於約0.5 mg，且為其任何及所有整體或部分增量。所有之前所提及之劑量係指每位患者之日劑量。
一般而言，預期抗病毒有效每日量將為每公斤體重約0.01至約50 mg或約0.01至約30 mg。在一天內以適當時間間隔以兩次、三次、四次或更多次亞劑量形式投與所需劑量可為適當的。該等亞劑量可調配為單位劑型，例如含有每單位劑型約1至約500 mg、或約1至約300 mg、或約1至約100 mg、或約2至約50 mg活性成分。
本發明化合物可視其結構而定以鹽、溶劑合物或水合物之形式存在。因此本發明亦涵蓋鹽、溶劑合物或水合物及其各別混合物。
本發明化合物可視其結構而定以互變異構或立體異構形式(對映異構體、非對映異構體)存在。因此，本發明亦涵蓋互變異構體、對映異構體或非對映異構體及其各別混合物。立體異構均一組分可以已知方式自對映異構體及/或非對映異構體之此類混合物分離。
定義
下文列舉用於描述本發明之各種術語之定義。此等定義適用於術語，因為其單獨地或作為較大群組的一部分而用於整個本說明書及申請專利範圍中，除非在特定情況下以其他方式加以限制。
除非另外定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語一般具有與一般熟習本發明所屬技術者通常所理解相同之含義。一般而言，本文所使用之命名法及細胞培養、分子遺傳學、有機化學及肽化學中之實驗室程序為此項技術中眾所周知且通常採用之彼等者。
如本文所用，冠詞「一(a/an)」係指該冠詞之一個或多於一個(亦即至少一個)文法對象。舉例而言，「一要素」意謂一個要素或多於一個要素。此外，術語「包括(including)」以及諸如「包括(include)」、「包括(includes)」及「包括(included)」之其他形式之使用不具限制性。
如本文所使用之術語「衣殼裝配調節劑」係指破壞、或加速、或抑制、或阻礙、或延遲、或減少、或修改正常衣殼裝配(例如在成熟期間)或正常衣殼拆卸(例如在感染力期間)或擾動衣殼穩定性，由此誘導異常衣殼形態或異常衣殼功能。在一個實施例中，衣殼裝配調節劑加速衣殼裝配或拆卸，因而誘導異常衣殼形態。在另一實施例中，衣殼裝配調節劑與主要衣殼裝配蛋白(HBV-CP)相互作用(例如在活性位點處結合，在異位位點處結合，或修改及/或阻礙摺疊及其類似者)，因而破壞衣殼裝配或拆卸。在又另一實施例中，衣殼裝配調節劑引起HBV-CP之結構或功能(例如減弱病毒感染力及/或對病毒具有致死性的HBV-CP裝配、拆卸、結合至受質、摺疊成適合構形之能力或其類似者)之擾動。
如本文所用，術語「治療(treatment/treating)」經定義為向患者施加或投與治療劑，亦即本發明化合物(單獨或與另一醫藥劑組合)；或向來自具有HBV感染、HBV感染之症狀或產生HBV感染之可能性之患者的經分離組織或細胞株施加或投與治療劑(例如用於診斷或離體施加)，目的為治癒、癒合、減輕、緩解、改變、醫治、改善、改良或影響HBV感染、HBV感染之症狀或產生HBV感染之可能性。該等治療可基於獲自藥物基因組學領域之知識而經特定調整或修改。
如本文所用，術語「預防(prevent/prevention)」意謂在無病症或疾病出現之情況下無病症或疾病發展，或在已存在病症或疾病發展之情況下無進一步病症或疾病發展。亦考慮吾人預防與病症或疾病相關之一些或所有症狀之能力。
如本文所用，術語「患者」、「個體(individual)」或「個體(subject)」係指人類或非人類哺乳動物。非人類哺乳動物包括例如家畜及寵物，諸如綿羊科動物、牛科動物、豬科動物、貓科動物及鼠類哺乳動物。患者、個體(subject或individual)較佳為人類。
如本文所用，術語「有效量」、「醫藥學上有效量」及「治療有效量」係指藥劑提供所需生物結果之無毒性但充足之量。彼結果可為疾病之徵兆、症狀或病因之減少及/或減輕或生物系統之任何其他所需改變。在任何個別情況下之適當治療量可由一般熟習此項技術者使用常規實驗來確定。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受」係指諸如載劑或稀釋劑之材料不消除化合物之生物活性或特性且相對無毒，亦即材料可在不產生非所需生物效應或以有害方式與含有其之組合物之組分中之任一者相互作用的情況下向個體投與。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示化合物之衍生物，其中母化合物藉由將現存酸或鹼部分轉化為其鹽形式而受到修飾。醫藥學上可接受之鹽的實例包括但不限於諸如胺之鹼性殘基之礦物酸鹽或有機酸鹽；諸如羧酸之酸性殘基之鹼金屬鹽或有機鹽；及其類似鹽。本發明之醫藥學上可接受之鹽包括例如由無毒無機酸或有機酸形成之母化合物的習知無毒鹽。本發明之醫藥學上可接受之鹽可藉由習知化學方法自含有鹼性或酸性部分之母化合物合成。一般而言，該等鹽可藉由使此等化合物之游離酸或鹼形式與化學計量之適當鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在二者之混合物中反應來製備；一般而言，非水性介質如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈為較佳的。適合鹽之清單見於Remington's Pharmaceutical Sciences 第17版 Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985 第1418頁及Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)中，其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。
如本文所用，術語「組合物」或「醫藥組合物」係指在本發明內有用之至少一種化合物與醫藥學上可接受之載劑之混合物。醫藥組合物有助於向患者或個體投與化合物。存在於此項技術中之投與化合物之多種技術包括但不限於靜脈內、經口、霧劑、經直腸、非經腸、經眼、經肺及局部投與。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之載劑」意謂參與在患者體內攜載或輸送在本發明內有用之化合物或將其攜載或輸送至患者以使其可執行其預期功能的醫藥學上可接受之材料、組合物或載劑，諸如液體或固體填充劑、穩定劑、分散劑、懸浮劑、稀釋劑、賦形劑、增稠劑、溶劑或囊封材料。通常，該等構築體係自身體之一個器官或部分攜載或輸送至身體之另一器官或部分。各載劑必須在與包括在本發明內有用且對患者無害之化合物之調配物的其他成分相容之意義上「可接受」。可充當醫藥學上可接受之載劑之材料的一些實例包括：糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及醋酸纖維素；粉末黃蓍膠；麥芽、明膠、滑石；賦形劑，諸如可可豆油及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如丙三醇、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；表面活性劑；褐藻酸；無熱原質水；等張生理食鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸鹽緩衝溶液及醫藥調配物中所採用的其他無毒相容物質。
如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑」亦包括與在本發明內有用之化合物之活性相容且患者生理學上可接受的任何及所有包衣、抗細菌劑及抗真菌劑及吸收延遲劑及其類似物。亦可將補充活性化合物併入組合物中。「醫藥學上可接受之載劑」可進一步包括在本發明內有用之化合物之醫藥學上可接受之鹽。可包括於用於本發明之實施中之醫藥組合物中的其他額外成分為此項技術中已知的且描述於例如以引用的方式併入本文中之Remington's Pharmaceutical Sciences (Genaro編, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985)中。
如本文所用，術語「經取代」意謂一原子或一組原子已置換氫作為連接至另一基團之取代基。
如本文所用，術語「包含」亦涵蓋選項「由……組成」。
除非另外規定，否則如本文所用的單獨或作為另一取代基之一部分的術語「烷基」意謂具有指定碳原子數之直鏈或分支鏈烴(亦即C1-C6烷基意謂一至六個碳原子)且包括直鏈及分支鏈。實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第三丁基、戊基、新戊基及己基。另外，單獨或作為另一取代基之部分的術語「烷基」亦可意謂經C3-C5碳環取代之C1-C3直鏈烴。實例包括(環丙基)甲基、(環丁基)甲基及(環戊基)甲基。為避免疑問，在兩個烷基部分存在於一基團中之情況下，烷基部分可為相同或不同的。
如本文所用，術語「烯基」指示衍生自含有至少兩個碳原子及具有E或Z立體化學之至少一個碳-碳雙鍵之烴部分之單價基團。雙鍵可為或可不為與另一基團的連接點。烯基(例如C2-C8烯基)包括(但不限於)例如乙烯基、丙烯基、丙-1-烯-2-基、丁烯基、甲基-2-丁烯-1-基、庚烯基及辛烯基。為避免疑問，在兩個烯基部分存在於一基團中之情況下，烷基部分可為相同或不同的。
如本文所用，C2-C6炔基或部分為含有2至6個碳原子之直鏈或分支鏈炔基或部分，例如含有2至4個碳原子之C2-C4炔基或部分。例示性炔基包括-C≡CH或-CH2 -C≡C以及1-丁炔基及2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基及5-己炔基。為避免疑問，在兩個炔基部分存在於一基團中之情況下，其可為相同或不同的。
除非另外規定，否則如本文所用，單獨或作為另一取代基之一部分的術語「鹵基」或「鹵素」意謂氟、氯、溴或碘原子，較佳為氟、氯或溴，更佳為氟或氯。為避免疑問，在兩個鹵基部分存在於一基團中之情況下，其可為相同或不同的。
如本文所用，C1-C6烷氧基或C2-C6烯基氧基通常分別為連接至氧原子之該C1-C6烷基(例如C1-C4烷基)或該C2-C6烯基(例如C2-C4烯基)。
除非另外規定，否則如本文所用之單獨或與其他術語組合採用之術語「芳基」意謂含有一或多個環(通常一個、兩個或三個環)之碳環芳族系統，其中該等環可以側接方式連接在一起，諸如聯苯基；或可稠合，諸如萘。芳基之實例包括苯基、蒽基及萘基。較佳實例為苯基(例如C6芳基)及聯苯基(例如C12芳基)。在一些實施例中，芳基具有六個至十六個碳原子。在一些實施例中，芳基具有六個至十二個碳原子(例如C6-C12芳基)。在一些實施例中，芳基具有六個碳原子(例如C6芳基)。
如本文所用，術語「雜芳基」及「雜芳族」係指含有一或多個環(通常一個、兩個或三個環)之具有芳族特徵之雜環。雜芳基取代基可由碳原子數目定義，例如，Cl-C9雜芳基指示雜芳基中所含有的碳原子數目，而不包括雜原子數目。舉例而言，Cl-C9雜芳基將包括額外一個至四個雜原子。多環雜芳基可包括一或多個部分飽和之環。雜芳基之非限制性實例包括：
Figure 02_image012
Figure 02_image014
。
雜芳基之額外非限制性實例包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基(包括例如2-嘧啶基及4-嘧啶基)、噠嗪基、噻吩基、呋喃基、吡咯基(包括例如2-吡咯基)、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基(包括例如3-吡唑基及5-吡唑基)、異噻唑基、1,2,3-三唑基、l,2,4-三唑基、1,3,4-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基，1,3,4-噻二唑基及1,3,4-噁二唑基。多環雜環及雜芳基之非限制性實例包括吲哚基(包括3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基及7-吲哚基)、吲哚啉基、喹啉基、四氫喹啉基、異喹啉基(包括例如1-異喹啉基及5-異喹啉基)、1,2,3,4-四氫異喹啉基、㖕啉基、喹喏啉基(包括例如2-喹喏啉基及5-喹喏啉基)、喹唑啉基、酞嗪基、1,8-㖠啶基、1,4-苯并二噁烷基、香豆素、二氫香豆素、1,5-㖠啶基、苯并呋喃基(包括例如3-苯并呋喃基、4-苯并呋喃基、5-苯并呋喃基、6-苯并呋喃基及7-苯并呋喃基)、2,3-二氫苯并呋喃基、1,2-苯并異噁唑基、苯并噻吩基(包括例如3-苯并噻吩基、4-苯并噻吩基、5-苯并噻吩基、6-苯并噻吩基及7-苯并噻吩基)、苯并噁唑基、苯并噻唑基(包括例如2-苯并噻唑基及5-苯并噻唑基)、嘌呤基、苯并咪唑基(包括例如2-苯并咪唑基)、苯并三唑基、硫代黃嘌呤基、咔唑基、咔啉基、吖啶基、吡咯聯啶基及喹嗪基。
如本文所用，術語「鹵烷基」通常分別為其中任一或多個碳原子經一或多個如上所定義之該鹵基原子取代的該烷基、烯基、烷氧基或烯氧基。鹵烷基包含單鹵烷基、二鹵烷基及全鹵烷基。術語「鹵烷基」包括但不限於氟甲基、1-氟乙基、二氟甲基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、二氟甲氧基及三氟甲氧基。
如本文所用，C1-C6羥基烷基為經一或多個羥基取代之該C1-C6烷基。其通常經一個、兩個或三個羥基取代。其較佳經單個羥基取代。
如本文所用，C1-C6胺基烷基為經一或多個胺基取代之該C1-C6烷基。其通常經一個、兩個或三個胺基取代。其較佳經單個胺基取代。
如本文所用，C1-C4羧基烷基為經羧基取代之該C1-C4烷基。
如本文所用，C1-C4羧醯胺基烷基為被經取代或未經取代之羧醯胺基取代之該C1-C4烷基。
如本文所用，C1-C4醯基磺醯胺基-烷基為經通式C(=O)NHSO2 CH3 或C(=O)NHSO2 -c-Pr之醯基磺醯胺基取代的該C1-C4烷基。
如本文所用，術語「環烷基」係指單環或多環非芳族基，其中形成環之原子(亦即骨架原子)中之每一者為碳原子。在一個實施例中，環烷基為飽和或部分不飽和的。在另一實施例中，環烷基與芳環稠合。環烷基包括具有3至10個環原子之基團(C3-C10環烷基)、具有3至8個環原子之基團(C3-C8環烷基)、具有3至7個環原子之基團(C3-C7環烷基)及具有3至6個環原子之基團(C3-C6環烷基)。環烷基之說明性實例包括(但不限於)以下部分：
Figure 02_image016
單環環烷基包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基。雙環環烷基包括(但不限於)四氫萘基、二氫茚基及四氫并環戊二烯。多環環烷基包括金剛烷及降冰片烷。術語環烷基包括「不飽和非芳族碳環基」或「非芳族不飽和碳環基」，二者均係指如本文所定義之含有至少一個碳-碳雙鍵或一個碳-碳參鍵之非芳族碳環。
如本文所用，術語「雜環烷基」及「雜環基」係指含有一或多個環(通常一個、兩個或三個環)之雜脂環基，其含有一至四個各自選自氧、硫及氮之環雜原子。在一個實施例中，各雜環基於其環系統中具有3至10個原子，其限制條件為該基團之環不含有兩個鄰接氧或硫原子。在一個實施例中，各雜環基具有於環系統中有3至10個原子之稠合雙環系統，此外其限制條件為該基團之環不含有兩個鄰接氧或硫原子。在一個實施例中，各雜環基具有於環系統中有3至10個原子之橋接雙環系統，此外其限制條件為該基團之環不含有兩個鄰接氧或硫原子。在一個實施例中，各雜環基具有於環系統中有3至10個原子之螺雙環系統，此外其限制條件為該基團之環不含有兩個鄰接氧或硫原子。雜環基取代基可替代地由碳原子數定義，例如C2-C8雜環基指示雜環基中所含之碳原子數而不包括雜原子數。舉例而言，C2-C8雜環基將包括額外一至四個雜原子。在另一實施例中，雜環烷基與芳環稠合。在另一實施例中，雜環烷基與雜芳基環稠合。在一個實施例中，氮及硫雜原子可視情況經氧化，且氮原子可視情況經四級銨化。除非另外規定，否則雜環系統可在提供穩定結構之任何雜原子或碳原子處連接。3員雜環基之實例包括且不限於氮丙啶。4員雜環烷基之實例包括且不限於氮雜環丁烷及β-內醯胺。5員雜環基之實例包括且不限於吡咯啶、噁唑啶及噻唑啶二酮。6員雜環烷基之實例包括且不限於哌啶、嗎啉、哌嗪、N-乙醯基哌嗪及N-乙醯基嗎啉。雜環基之其他非限制性實例為
Figure 02_image018
雜環之實例包括單環基團，諸如氮丙啶、環氧乙烷、環硫乙烷、氮雜環丁烷、氧雜環丁烷、硫雜環丁烷、吡咯啶、吡咯啉、吡唑啶、咪唑啉、二氧雜環戊烷、環丁碸、2,3-二氫呋喃、2,5-二氫呋喃、四氫呋喃、噻吩烷、哌啶、1,2,3,6-四氫吡啶、1,4-二氫吡啶、哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉、哌喃、2,3-二氫哌喃、四氫哌喃、1,4-二噁烷、1,3-二噁烷、1,3-二氧雜環戊烷、高哌嗪、高哌啶、1,3-二氧雜環庚烷、47-二氫-l,3-二氧呯及六甲環氧己烷。術語「C3-C7雜環烷基」包括(但不限於)四氫呋喃-2-基、四氫呋喃-3-基、3-噁雙環[3.1.0]己-6-基、3-氮雜雙環[3.1.0]己-6-基、四氫哌喃-4-基、四氫哌喃-3-基、四氫哌喃-2-基及氮雜環丁-3-基。
如本文所用，術語「芳族」係指具有一或多個多不飽和環且具有芳族特徵(亦即具有其中n為整數之(4n +2)個非定域π(pi)電子)的碳環或雜環。
除非另外規定，否則如本文所用的單獨或與其他術語組合採用之術語「醯基」意欲意謂經由羰基連接之烷基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。
除非另外規定，否則如本文所用的單獨或與其他術語組合採用之術語「胺甲醯基」及「經取代之胺甲醯基」意欲意謂連接至胺基之羰基，其視情況經以下單取代或二取代：氫、烷基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。在一些實施例中，氮取代基將連接以形成如上文所定義之雜環。
除非另外規定，否則如本文所用，單獨或作為另一取代基之一部分之術語「羧基」意謂式C(=O)OH之基團。
除非另外規定，否則如本文所用，單獨或作為另一取代基之一部分之術語「羧酯」意謂式C(=O)OX之基團，其中X選自由以下組成之群：C1-C6烷基、C3-C7環烷基及芳基。
如本文所用，術語「前藥」表示式I或式II或式III或式IV化合物之衍生物，該衍生物係以一旦投與則在活體內代謝成同樣式I或式II或式III或式IV活性代謝物之形式投與。
前藥之各種形式為此項技術中所已知。對於該等前藥之實例，參見：Design of Prodrugs，由H. Bundgaard編輯，(Elsevier，1985)及Methods in Enzymology，第42卷,第309-396頁，由K. Widder等人編輯(Academic Press，1985)；A Textbook of Drug Design and Development，由Krogsgaard-Larsen及H. Bundgaard編輯，第5章，H. Bundgaard之「Design and Application of Prodrugs」第1l3-191頁(1991)；H. Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews 8, 1-38 (1992)；H. Bundgaard,等人, Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988)；及N. Kakeya,等人, Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984)。
前藥之實例包括式I、II、III及IV之化合物之可裂解酯。含有羧基之本發明化合物之活體內可裂解酯為例如在人類或動物身體中裂解以產生母酸之醫藥學上可接受之酯。用於羧基之合適的醫藥學上可接受之酯包括C1-C6烷基酯，例如甲酯或乙酯；C1-C6烷氧基甲酯，例如甲氧基甲酯；C1-C6醯氧基甲酯；酞酯；C3-C8環烷氧基羰基氧基C1-C6烷酯，例如1-環己基羰基氧基乙基；1-3-二氧雜環戊烷-2-基甲酯，例如5-甲基-1,3-二氧雜環戊烷-2-基甲基；C1-C6烷氧基羰基氧基乙酯，例如1-甲氧基羰基氧基乙基；胺基羰基甲酯及其單或二-N-(C1-C6烷基)型式，例如N,N-二甲基胺基羰基甲酯及N-乙基胺基羰基甲酯；且可在本發明化合物中之任何羧基處形成。
含有羥基之本發明化合物之活體內可裂解酯為例如在人類或動物身體中裂解以產生母羥基之醫藥學上可接受之酯。用於羥基之合適的醫藥學上可接受之酯包括C1-C6醯基酯，例如乙醯酯；及苯甲醯酯，其中苯基可經胺基甲基或N取代之單或二-C1-C6烷基胺基甲基取代，例如4-胺基甲基苯甲醯酯及4-N,N-二甲基胺基甲基苯甲醯酯。
本發明之較佳前藥包括乙醯氧基及碳酸酯衍生物。舉例而言，式I、II、III及IV之化合物之羥基可以-O-CORi 或-O-C(O)ORi 形式存在於前藥中，其中Ri 為未經取代或經取代之Cl-C4烷基。烷基上之取代基係如前文所定義。較佳地，Ri 中之烷基為未經取代的，較佳甲基、乙基、異丙基或環丙基。
本發明之其他較佳前藥包括胺基酸衍生物。合適的胺基酸包括經由其C(O)OH基團連接至式I、II、III及IV化合物的α-胺基酸。該等前藥在活體內裂解以產生攜帶羥基之式I化合物。因此，該等胺基酸基團為式I、II、III及IV之較佳採用位置，在該等位置中羥基為最終所需的。因此，本發明之此實施例之例示性前藥為攜帶式-OC(O)-CH(NH2 )Rii 基團之式I化合物，其中Rii 為胺基酸側鏈。較佳胺基酸包括甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸及絲胺酸。胺基酸亦可官能化，例如胺基可烷基化。合適的官能化胺基酸為N,N-二甲基甘胺酸。胺基酸較佳為纈胺酸。
本發明之其他較佳前藥包括胺基磷酸酯衍生物。胺基磷酸酯前藥之各種形式為此項技術中已知的。對於該等前藥之實例，參見Serpi等人, Curr. Protoc. Nucleic Acid Chem. 2013,第15章,第15.5單元及Mehellou等人, ChemMedChem, 2009年4月，第1779-1791頁。合適的胺基磷酸酯包括經由其-OH基團連接至式I化合物之(苯氧基)-α-胺基酸。該等前藥在活體內裂解以產生攜帶羥基之式I化合物。因此，該等胺基磷酸酯基團為式I、II、III及IV之較佳採用位置，在該等位置中羥基為最終所需的。因此，本發明之此實施例之例示性前藥為攜帶式-OP(O)(ORiii )Riv 基團之式I、II、III及IV化合物，其中Riii 為烷基、環烷基、芳基或雜芳基，且Riv 為式-NH-CH(Rv )C(O)ORvi 基團，其中Rv 為胺基酸側鏈且Rvi 為烷基、環烷基、芳基或雜環基。較佳胺基酸包括甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸及絲胺酸。胺基酸較佳為丙胺酸。Rv 較佳為烷基，最佳異丙基。
本發明之主題亦為一種製備本發明化合物之方法。因此，本發明之主題為用於製備本發明之式I化合物之方法，其係藉由以下進行：使式V化合物
Figure 02_image020
其中R1、R2、R3及R4如上文所定義，與式VI化合物反應
Figure 02_image022
其中R5及R6如上文所定義。實例
現參考以下實例描述本發明。僅出於說明之目的提供此等實例，且本發明不限於此等實例，而實際上涵蓋由於本文所提供之教示內容而顯而易見之所有變化形式。
所需經取代之吲哚-2-羧酸可以多種方式來製備；所採用之主要途徑概述於流程1-4中。對於本領域之普通化學技術人員將顯而易見的係，存在亦達成此等中間物之製備之其他方法。
經取代之吲哚-2-羧酸可經由Hemetsberger-Knittel反應(Organic Letters, 2011, 13(8)第2012-2014頁, Journal of the American Chemical Society, 2007,第7500-7501頁,及Monatshefte für Chemie, 103(1), 第194-204頁) (流程1)來製備。
Figure 02_image024
流程 1 ： 來自乙烯基疊氮化合物之吲哚 經取代吲哚亦可使用費雪法(Fischer method)(Berichte der Deutschen Chemischen Gesellschaft. 17 (1): 559-568) (流程2)來製備。
Figure 02_image026
流程 2 ： 費雪吲哚合成 用於製備經取代吲哚之另一方法為鈀催化之炔環合反應(Journal of the American Chemical Society, 1991, 第6690-6692頁) (流程3)。
Figure 02_image028
流程 3 ： 經由炔環合製備吲哚 另外，如流程4中所說明，吲哚可由其他適合地官能化(鹵化)之吲哚(例如經由鈀催化之交叉偶合或親核取代反應)來製備。
Figure 02_image030
流程 4 ： 鹵化吲哚之鈀催化之官能化 本領域之普通化學技術人員應瞭解，可有其他方法用於合成適合地官能化之吲哚-2-羧酸及其活化酯。
HBV核心蛋白調節劑可以多種方式製備。流程5至11說明出於本申請案之目的用於其製備之主要途徑。對於本領域之普通化學技術人員將顯而易見的係，存在亦達成此等中間物及實例之製備之其他方法。
在一較佳實施例中，式I化合物可如以下流程5中所示來製備。
Figure 02_image032
流程 5 ： 式 I 化合物之合成 流程5中描述之化合物1在步驟1中還原胺化(WO2009147188、WO2014152725)以獲得具有通用結構2之化合物。例如用HCl對經繪製為但不限於Boc之氮保護基進行去保護(A. Isidro-Llobet等人, Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)，得到胺3。步驟3中用文獻(A. El-Faham, F. Albericio, Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602)中已知之方法，例如用HATU進行之醯胺偶合產生式I化合物。
在一較佳實施例中，式III化合物可如以下流程6中所示來製備。
Figure 02_image034
流程 6 ： 式 III 化合物之合成 流程6中所描述之化合物1在步驟1中醯化(P.N. Collier等人，J. Med. Chem., 2015, 58, 5684-5688, WO2016046530)以獲得具有通用結構6之化合物。在步驟2中，例如用LiAlH4 (WO2017040757)還原，得到通用結構7之化合物。例如用HCl對經繪製為但不限於Boc之氮保護基進行去保護(A. Isidro-Llobet等人, Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)，得到胺7。步驟3中用文獻(A. El-Faham, F. Albericio, Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602)中已知之方法，例如用HATU進行之醯胺偶合產生式III化合物。
在一較佳實施例中，式IV化合物可如以下流程7中所示來製備。
Figure 02_image036
流程 7 ： 式 IV 化合物之合成 流程7中所描述之化合物1在步驟1中還原胺化(WO2009147188、WO2014152725)以獲得具有通用結構10之化合物。例如用HCl對經繪製為但不限於Boc之氮保護基進行去保護(A. Isidro-Llobet等人, Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)，得到胺11。在步驟3中，用文獻(A. El-Faham, F. Albericio, Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602)中已知之方法，例如用HATU進行之醯胺偶合產生式IV化合物。
在一較佳實施例中，式II化合物可如以下流程8中所示來製備。
Figure 02_image038
流程 8 ： 式 II 化合物之合成 流程8中所描述之化合物1在步驟1中磺醯化(Jimenez-Somarribas等人，J. Med. Chem., 2017, 60, 2305-2325)以獲得具有通用結構13之化合物。例如用HCl對經繪製為但不限於Boc之氮保護基進行去保護(A. Isidro-Llobet等人, Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)，得到胺14。步驟3中用文獻(A. El-Faham, F. Albericio, Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602)中已知之方法，例如用HATU進行之醯胺偶合產生式II化合物。
在一較佳實施例中，式II化合物可如以下流程9中所示來製備。
Figure 02_image040
流程 9 ： 式 II 化合物之合成 在步驟1中，例如用HCl對流程9中所描述之化合物16 (經繪製為但不限於Boc)進行去保護(A. Isidro-Llobet等人, Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)，得到胺17。隨後用文獻(A. El-Faham, F. Albericio, Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602)中已知之方法，例如用HATU對17進行醯胺化，得到化合物18。例如用H2 及鈀/碳對經繪製為但不限於Cbz之氮保護基進行去保護(A. Isidro-Llobet等人，Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)，得到胺19，其可隨後經磺醯化(Jimenez-Somarribas等人，J. Med. Chem., 2017, 60, 2305-2325)以獲得式II化合物。
在一較佳實施例中，式III化合物可如以下流程10中所示來製備。
Figure 02_image042
流程 10 ： 式 III 化合物之合成 在步驟1中，例如用HCl對流程10中所描述之化合物16 (經繪製為但不限於Boc)進行去保護(A. Isidro-Llobet等人, Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)，得到胺17。隨後用文獻(A. El-Faham, F. Albericio, Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602)中已知之方法，例如用HATU對17進行醯胺化，得到化合物18。例如用H2 及鈀/碳經繪製為但不限於Cbz之氮保護基進行去保護(A. Isidro-Llobet等人，Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)得到胺19，其可隨後經醯化(A. El-Faham, F. Albericio, Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602)以獲得式III化合物。
在一較佳實施例中，式I化合物可如以下流程11中所示來製備。
Figure 02_image044
流程 11 ： 式 I 化合物之合成 流程11中所描述之化合物22 (WO2012/170752)在步驟1中胺化(Yang and Buchwald, Journal of Organometallic Chemistry, 1999, 第125-146頁)，得到胺23。隨後用文獻(A. Isidro-Llobet et al., Chem. Rev., 2009, 109, 2455-2504)中已知之方法，例如用HCl對經繪製為但不限於Boc之23進行去保護，得到胺24，其可隨後用文獻(A. El-Faham, F. Albericio, Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602)中已知之方法，例如用HATU醯化，得到式I化合物。
以下實例說明本發明之一些特定化合物之製備及特性。
使用以下縮寫： A—DNA核鹼基腺嘌呤 ACN—乙腈 Ar—氬氣 BODIPY-FL—4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼-3a,4a-二氮-s-二環戊二烯并苯-3-丙酸(螢光染料) Boc—第三丁氧基羰基 BnOH—苯甲醇n -BuLi—正丁基鋰t -BuLi—第三丁基鋰 C—DNA核鹼基胞嘧啶 CC50 —半最大細胞毒性濃度 CO2 —二氧化碳 CuCN—氰化铜(I) DCE—二氯乙烷 DCM—二氯甲烷 戴斯-馬丁高碘烷—1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氢-1,2-苯并碘氧雜環戊-3(1H)-酮 DIPEA—二異丙基乙胺 DIPE—二異丙基醚 DMAP—4-二甲基胺基吡啶 DMF—N,N- 二甲基甲醯胺 DMP—戴斯-馬丁高碘烷 DMSO—二甲亞碸 DNA—去氧核糖核酸 DPPA—二苯基磷醯基疊氮化物 DTT—二硫蘇糖醇 EC50 —半最大有效濃度 EDCI—N-(3-二甲胺基丙基)-N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽 Et2 O—二乙醚 EtOAc—乙酸乙酯 EtOH—乙醇 FL—經螢光素標記之5'端 NEt3 —三乙胺 ELS—蒸發光散射 g—公克 G—DNA核鹼基鳥嘌呤 HBV— B型肝炎病毒 HATU—六氟磷酸2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基
Figure 108139831-A0304-12-01
HCl—鹽酸 HEPES—4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸 HOAt—1-羥基-7-氮雜苯并三唑 HOBt—1-羥基苯并三唑 HPLC—高效液相層析 IC50 —半最大抑制濃度 LC640—用螢光染料LightCycler® Red 640進行之3'端修飾 LC/MS—液相層析/質譜法 LiAlH4 —氫化鋁鋰 LiOH—氫氧化鋰 MeOH—甲醇 MeCN—乙腈 MgSO4 —硫酸鎂 mg—毫克 min—分鐘 mol—莫耳 mmol—毫莫耳 mL—毫升 MTBE—甲基第三丁基醚 N2 —氮氣 Na2 CO3 —碳酸鈉 NaHCO3 —碳酸氫鈉 Na2 SO4 —硫酸鈉 NdeI—限制酶識別CA^TATG位點 NEt3 —三乙胺 NaH—氫化鈉 NaOH—氫氧化鈉 NH3 —氨 NH4 Cl—氯化銨 NMR—核磁共振 PAGE—聚丙烯醯胺凝膠電泳 PCR—聚合酶鏈反應 qPCR—定量PCR Pd/C—鈀/碳 -PH—3'端磷酸鹽修飾 pTSA—4-甲苯-磺酸Rt— 滯留時間 r.t.—室温 sat.—飽和水溶液 SDS—十二烷基硫酸鈉 SI—選擇性指數(= CC50 / EC50 ) STAB—三乙醯氧基硼氫化鈉 T—DNA核鹼基胸腺嘧啶 TBAF—氟化四丁銨 TFA—三氟乙酸 THF—四氫呋喃 TLC—薄層層析法 Tris—參(羥甲基)-胺基甲烷 XhoI—限制酶識別C^TCGAG位點
化合物鑑別 - NMR 對於多種化合物，使用對於質子在400 MHz下操作且對於碳在100 MHz下操作的配備有5 mm反向三重共振探頭之Bruker DPX400光譜儀記錄NMR光譜。氘化溶劑為氯仿-d (氘化氯仿，CDCl3 )或d6-DMSO (氘化DMSO，d6-二甲亞碸)。相對於用作內標物之四甲基矽烷(TMS)而言以百萬分率(ppm)為單位報導化學位移。
化合物鑑別 - HPLC/MS 對於多種化合物，使用以下分析方法記錄LC-MS光譜。
方法 A 管柱—逆相Waters Xselect CSH C18 (50×2.1 mm，3.5微米) 流速—0.8 mL/min，25攝氏度 溶離劑A—95%乙腈 +5% 10 mM碳酸銨水溶液(pH 9) 溶離劑B—10 mM碳酸銨水溶液(pH 9) 線性梯度t=0 min 5% A，t=3.5 min 98% A。t=6  min 98% A
方法 B 管柱—逆相Waters Xselect CSH C18 (50×2.1 mm，3.5微米) 流速—0.8 mL/min，35攝氏度 溶離劑A—含0.1%甲酸之乙腈 溶離劑B—0.1%甲酸水溶液 線性梯度t=0 min 5% A，t=3.5 min 98% A。t=6  min 98% A
方法 C 管柱—逆相Waters Xselect CSH C18 (50×2.1 mm，3.5微米) 流速—1 mL/min，35攝氏度 溶離劑A—含0.1%甲酸之乙腈 溶離劑B—0.1%甲酸水溶液 線性梯度t=0 min 5% A，t=1.6 min 98% A。t=3  min 98% A
方法 D 管柱—Phenomenex Gemini NX C18 (50×2.0 mm，3.0微米) 流速—0.8 mL/min，35攝氏度 溶離劑A—95%乙腈+5% 10 mM碳酸氫銨水溶液 溶離劑B—10 mM碳酸氫銨水溶液pH=9.0 線性梯度t=0 min 5% A，t=3.5 min 98% A。t=6  min 98% A
方法 E 管柱—Phenomenex Gemini NX C18 (50×2.0 mm，3.0微米) 流速—0.8 mL/min，25攝氏度 溶離劑A—95%乙腈+5% 10 mM碳酸氫銨水溶液 溶離劑B—10 mM碳酸氫銨水溶液(pH 9) 線性梯度t=0 min 5% A，t=3.5 min 30% A。t=7  min 98% A，t=10 min 98% A
方法 F 管柱—Waters XSelect HSS C18 (150×4.6 mm，3.5微米) 流速—1.0 mL/min，25攝氏度 溶離劑A含0.1% TFA之乙腈 溶離劑B—0.1% TFA水溶液 線性梯度t=0 min 2% A，t=1 min 2% A，t=15  min 60% A，t=20 min 60% A
方法 G 管柱—Zorbax SB-C18 1.8 µm 4.6×15 mm快速分離濾筒(PN 821975-932) 流速—3 mL/min 溶離劑A—含0.1%甲酸之乙腈 溶離劑B—0.1%甲酸水溶液 線性梯度t=0 min 0% A，t=1.8 min 100% A
方法 H 管柱—Waters Xselect CSH C18 (50×2.1 mm，2.5微米) 流速—0.6 mL/min 溶離劑A—含0.1%甲酸之乙腈 溶離劑B—0.1%甲酸水溶液 線性梯度t=0 min 5% A，t=2.0 min 98% A，t=2.7 min 98% A
方法 J 管柱—逆相Waters Xselect CSH C18 (50×2.1 mm，2.5微米) 流速—0.6 mL/min 溶離劑A—100%乙腈 溶離劑B—10 mM碳酸氫銨水溶液(pH 7.9) 線性梯度t=0 min 5% A，t=2.0 min 98% A，t=2.7 min 98% A
製備 4- 氯 -7- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image046
步驟 A ： 使化合物1∙HCl (17.0 g，86.2 mmol)、乙酸鈉(7.10 g，86.6 mmol)及丙酮酸乙酯(10.0 g，86.1 mmol)於乙醇(100 mL)中之混合物回流1h，冷卻至室溫，且用水(100 mL)稀釋。藉由過濾收集沈澱固體且乾燥以獲得呈順式異構體及反式異構體之混合物形式之20.0 g (77.3 mmol，90%)化合物2。
步驟 B ： 使前一步驟中所獲得之化合物2 (20.0 g，77.3 mmol)及BF3 ∙Et2 O (50.0 g，352 mmol)於乙酸(125 mL)中之混合物回流18h且在減壓下蒸發。使殘餘物與水(100 mL)混合且用MTBE (2×50 mL)萃取。將經合併之有機萃取物經Na2 SO4 乾燥且在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，得到3.00 g (12.4 mmol，16%)化合物3。
步驟 C ： 使化合物3 (3.00 g，12.4 mmol)及NaOH (0.500 g，12.5 mmol)於乙醇(30 mL)中之混合物回流30 min且在減壓下蒸發。將殘餘物與水(30 mL)混合且濾出不可溶物質。用濃鹽酸(5 mL)酸化濾液。藉由過濾收集沈澱固體，用水(3 mL)洗滌，且乾燥以獲得2.41 g (11.3 mmol，91%) 4-氯-7-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.24 mins,m/z 212 [M-H]-
製備 7- 氟 -4- 甲基 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image048
步驟 D ： 在-10℃下向甲醇鈉(21.6 g，400 mmol)於甲醇(300 mL)中之溶液逐滴添加化合物4 (26.4 g，183 mmol)及化合物5 (59.0 g，457 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應物質攪拌3 h，保持溫度低於5℃且隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min，過濾，且用水洗滌，得到35.0 g (156 mmol，72%)呈白色固體之化合物6。
步驟 E ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物6 (35.0 g，156 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1 h且隨後在減壓下蒸發。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)再結晶，得到21.0 g (103 mmol，60%)化合物7。
步驟 F ： 向化合物7 (21.0 g，101 mmol)於乙醇(200 mL)中之溶液添加2 N氫氧化鈉水溶液(47 mL)。在60℃下攪拌混合物2h。蒸發溶劑且用鹽酸水溶液酸化殘餘物至pH 5-6。過濾所得沈澱物，用水洗滌，且乾燥以獲得18.0 g (93.2 mmol，92%) 7-氟-4-甲基-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.12 mins,m/z 192 [M-H]-
製備 6,7- 二氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image050
步驟 G ： 使化合物8 (5.00 g，34.7 mmol)、乙酸(1 mL)及丙酮酸乙酯(5.00 g，43.1 mmol)於乙醇(20 mL)中之混合物回流1h，冷卻至室溫，且用水(20 mL)稀釋。藉由過濾收集沈澱固體且乾燥以獲得呈順式異構體及反式異構體之混合物形式之5.50 g (22.7 mmol，66%)化合物9。
步驟 H ： 使前一步驟中所獲得之化合物9 (5.50 g，22.7 mmol)及BF3 ∙Et2 O (10.0 g，70.5 mmol)於乙酸(25 mL)中之混合物回流18h且在減壓下蒸發。將殘餘物與水(30 mL)混合且用MTBE (2×30 mL)萃取。將經合併之有機萃取物經Na2 SO4 乾燥且在減壓下蒸發。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，得到0.460 g (2.04 mmol，9%)化合物10。
步驟 I ： 使化合物10 (0.450 g，2.00 mmol)及NaOH (0.100 g，2.50 mmol)於乙醇(10 mL)中之混合物回流30 min且在減壓下蒸發。將殘餘物與水(10 mL)混合且濾出不可溶物質。用濃鹽酸(1 mL)酸化濾液。藉由過濾收集沈澱固體，用水(3 mL)洗滌，且乾燥以獲得0.38 g (1.93 mmol，95%) 6,7-二氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.10 mins,m/z 196 [M-H]-
製備 4- 氰基 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image052
步驟 J ： 向化合物11 (5.00 g，19.7 mmol)於DMF (50 mL)中之經攪拌溶液添加CuCN (3.00 g，33.5 mmol)。在150℃下攪拌混合物4h。隨後將混合物冷卻至室溫，且添加水(100 mL)。用乙酸乙酯(4×100 mL)萃取所得混合物。將經合併之有機萃取物用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發，得到2.50 g (12.5 mmol，63%)化合物12，其純度足以用於下一步驟。
步驟 K ： 向化合物12 (2.50 g，12.5 mmol)於乙醇(30 mL)中之溶液添加LiOH∙H2 O (0.600 g，13.0 mmol)。使混合物回流10h。在減壓下蒸發溶劑，且用水(50 mL)稀釋殘餘物。用10%鹽酸水溶液將水層酸化至pH 6，且藉由過濾收集沈澱之固體。用水洗滌殘餘物，且在真空下乾燥，得到1.20 g (6.45 mmol，52%)呈白色固體之4-氰基-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.00 mins,m/z 197 [M+H]+
製備 4- 氰基 -7- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image054
步驟 L ： 向化合物13 (5.00 g，18.4 mmol)於DMF (50 mL)中之經攪拌溶液添加CuCN (2.80 g，31.2 mmol)。在150℃下攪拌混合物4h。隨後將混合物冷卻至室溫，且添加水(100 mL)。將所得混合物用乙酸乙酯(4×100 mL)萃取。將經合併之有機萃取物用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發，得到1.50 g (6.87 mmol，37%)化合物14，其純度足以用於下一步驟。
步驟 M ： 向化合物14 (1.50 g，6.87 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液添加LiOH∙H2 O (0.400 g，9.53 mmol)。使混合物回流10h。在減壓下蒸發溶劑且用水(40 mL)稀釋殘餘物。用10%鹽酸水溶液將水層酸化至pH 6.0且藉由過濾收集沈澱物。用水洗滌殘餘物，且在真空下乾燥，得到0.400 g (1.95 mmol，28%)呈白色固體之4-氰基-7-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.02 mins,m/z 203 [M-H]-
製備 4- 氰基 -5- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image056
步驟 N ：向化合物15 (5.00 g，19.4 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液中添加NaHCO3 (1.59 g，18.9 mmol)及碘甲烷(3 mL)。在室溫下將所得混合物攪拌隔夜，隨後用水(50 mL)稀釋且用二乙醚(3×50 mL)萃取。將經合併之有機萃取物經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發，獲得4.90 g (18.0 mmol，90%)呈白色固體之化合物16。
步驟 O ： 向化合物16 (4.80 g，17.6 mmol)於DMF (50 mL)中之經攪拌溶液中添加CuCN (2.70 g，30.1 mmol)。在150℃下攪拌混合物4h。接著將混合物冷卻至室溫，添加水(100 mL)。將所得混合物用乙酸乙酯(4×100 mL)萃取。將經合併之有機萃取物用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發，得到1.40 g (6.42 mmol，36%)化合物17，其純度足以用於下一步驟。
步驟 P ： 向化合物17 (1.40 g，6.42 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液添加LiOH∙H2 O (0.350 g，8.34 mmol)。使混合物回流10h。在減壓下蒸發溶劑且用水(30 mL)稀釋殘餘物。用10%鹽酸水溶液將水層酸化至pH 6.0且藉由過濾收集沈澱物。用水洗滌殘餘物，且在真空下乾燥，得到0.500 g (2.45 mmol，38%)呈白色固體之4-氰基-5-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.10 mins,m/z 203 [M-H]-
製備 4,5,6- 三氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image058
步驟 Q ： 在-10℃下向甲醇鈉(23.0 g，426 mmol)於甲醇(200 mL)中之溶液逐滴添加化合物18 (15.0 g，93.7 mmol)及化合物5 (26.0 g，201 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3h，保持溫度低於5℃且隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min，且藉由過濾來收集沈澱物。用水洗滌固體且乾燥，得到12.0 g (46.7 mmol，72%)呈白色固體之化合物19。
步驟 R ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物19 (12.0 g，46.7 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1h，且隨後在減壓下蒸發。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)再結晶，得到7.00 g (30.5 mmol，65%)化合物20。
步驟 S ： 向化合物20 (7.00 g，30.5 mmol)於乙醇(50 mL)中之溶液添加2 N氫氧化鈉水溶液(18 mL)。在60℃下攪拌混合物2h。蒸發溶劑且用鹽酸水溶液酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集所得沈澱物，用水洗滌，且乾燥以獲得5.00 g (23.2 mmol，76%) 4,5,6-三氟-1H-吲哚-2-羧酸。1 H NMR (400 MHz, d6-dmso) 7.17 (1H, s), 7.22 (1H, dd), 12.3 (1H, br s), 13.3 (1H, br s)
製備 4,6,7- 三氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image060
步驟 T ： 在-10℃下向甲醇鈉(23.0 g，426 mmol)於甲醇(200 mL)中之溶液逐滴添加化合物21 (15.0 g，90.3 mmol)及化合物5 (26.0 g，201 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3h，保持溫度低於5℃且隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥，得到10.0 g (38.0 mmol，42%)呈白色固體之化合物22。
步驟 U ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物22 (10.0 g，38.0 mmol)於二甲苯(200 mL)中之溶液回流1h，且隨後在減壓下濃縮。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)再結晶，得到6.00 g (26.2 mmol，69%)化合物23。
步驟 V ： 向化合物23 (7.00 g，30.5 mmol)於乙醇(40 mL)中之溶液添加2 N氫氧化鈉水溶液(16 mL)。在60℃下攪拌混合物2h。蒸發溶劑且用鹽酸水溶液酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集所得沈澱物，用水洗滌，且乾燥以獲得4.10 g (19.1 mmol，62%) 4,6,7-三氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.16 mins,m/z 214 [M-H]-
製備 4- 氰基 -6- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image062
步驟 W ：在-10℃下向甲醇鈉(65.0 g，1203 mmol)於甲醇(500 mL)中之溶液逐滴添加化合物24 (60.0 g，296 mmol)及化合物5 (85.0 g，658 mmol)於甲醇(200 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3h，保持溫度低於5℃且隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥，得到45.0 g (143 mmol，48%)化合物25。
步驟 X ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物25 (35.0 g，111 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1h且隨後在減壓下蒸發。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)再結晶，得到11.0 g (38.4 mmol，35%)化合物26。
步驟 Y ： 向化合物26 (11.0 g，38.4 mmol)於DMF (20 mL)中之經攪拌溶液添加CuCN (6.60 g，73.7 mmol)。在150℃下攪拌混合物4h。隨後將混合物冷卻至室溫，且添加水(70 mL)。用乙酸乙酯(4×50 mL)萃取混合物。將經合併之有機萃取物用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發，得到2.40 g (10.3 mmol，27%)化合物27，其純度足以用於下一步驟。
步驟 Z ： 向化合物27 (2.40 g，6.42 mmol)於乙醇(30 mL)中之溶液添加LiOH∙H2 O (0.600 g，14.3 mmol)。使混合物回流10h。在減壓下濃縮混合物且用水(50 mL)稀釋殘餘物。用10%鹽酸水溶液將水層酸化至pH 6且藉由過濾收集沈澱物。用水洗滌固體，且在真空下乾燥，得到1.20 g (5.88 mmol，57%)呈白色固體之4-氰基-6-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.06 mins,m/z 203 [M-H]-
製備 4- 乙基 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image064
步驟 AA ： 在0℃下將化合物28 (70.0 g，466 mmol)於無水THF (500 mL)中之溶液用BH3 於THF (53 mL，53.0 mmol BH3 )中之10 M溶液處理。在室溫下攪拌反應物質24h，隨後向其中緩慢添加甲醇(150 mL)。將所得混合物攪拌45 min，且在減壓下蒸發，得到55.0 g (404 mmol，87%)化合物29，其純度足以用於下一步驟。
步驟 AB ： 向化合物29 (55.0 g，404 mmol)於CH2 Cl2 (400 mL)中之經冷卻(0℃)溶液逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(177 g，417 mmol)。在室溫下攪拌1h之後，用Na2 S2 O3 飽和水溶液(300 mL)及NaHCO3 飽和水溶液(500 mL)淬滅反應混合物。用CH2 Cl2 (3×300 mL)萃取混合物。將經合併之有機萃取物用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥且濃縮，得到51.0 g呈黃色固體之粗化合物30。
步驟 AC ： 在-10℃下向甲醇鈉(107 g，1981 mmol)於甲醇(600 mL)中之溶液逐滴添加前一步驟中所獲得之化合物30 (51.0 g)及化合物5 (126 g，976 mmol)於甲醇(300 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌4h，保持溫度低於5℃，隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min，且藉由過濾來收集沈澱物。用水洗滌固體且乾燥，得到35.0 g (151 mmol，經2個步驟37%)化合物31。
步驟 AD ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物31 (35.0 g，151 mmol)於二甲苯(500 mL)中之溶液回流1h，且隨後在減壓下濃縮。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)再結晶，得到21.0 g (103 mmol，68%)化合物32。
步驟 AE ： 向化合物32 (21.0 g，103 mmol)於乙醇(200 mL)中之溶液添加2 N氫氧化鈉水溶液(47 mL)。在60℃下攪拌混合物2h。在減壓下濃縮混合物，且用鹽酸水溶液酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌，且乾燥以獲得19 g (100 mmol，97%) 4-乙基-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.20 mins,m/z 188 [M-H]- 1 H NMR (400 MHz, d6-dmso) δ 1.25 (t, 3H), 2.88 (q, 2H), 6.86 (1H, d), 7.08-7.20 (2H, m), 7.26 (1H, d), 11.7 (1H, br s), 12.9 (1H, br s)
製備 4- 環丙基 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image066
步驟 AF ： 向化合物33 (2.00 g，7.80 mmol)、環丙基硼酸(0.754 g，8.78 mmol)、K3 PO4 (5.02 g，23.6 mmol)、三環己基膦(0.189 g，0.675 mmol)及水(2.0 mL)於甲苯(60.0 mL)中之經脫氣懸浮液添加乙酸鈀(II) (0.076 g，0.340 mmol)。在100℃下攪拌反應混合物4h。藉由用水稀釋反應混合物之等分試樣且用乙酸乙酯萃取來監測反應進程。在分析型矽膠TLC盤上點樣有機層且使用254 nmUV光觀察。反應進展至伴以極斑形成之完成。起始物質及產物之Rf 值分別為0.3及0.2。使反應混合物冷卻至室溫且經由矽藻土墊過濾。在減壓下濃縮濾液，且藉由閃蒸塔使用230-400目矽膠純化粗產物，且用含10%乙酸乙酯之石油醚溶離，得到1.10 g (5.11 mmol，63%)呈棕色液體之化合物34。TLC系統：含5%乙酸乙酯之石油醚。
步驟 AG ： 在60℃下將化合物34 (1.10 g，5.11 mmol)於乙醇(40 mL)及2 N氫氧化鈉水溶液(15 mL)中之混合物攪拌2h。在減壓下濃縮混合物，且用鹽酸水溶液酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌，且乾燥，得到1.01 g (5.02 mmol，92%) 4-環丙基-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.17 mins,m/z 200 [M-H]-
製備 4- 氯 -5- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image068
步驟 AH ： 在-10℃下向甲醇鈉(39.9 g，738 mmol)於甲醇(300 mL)中之溶液逐滴添加化合物36 (28.8 g，182 mmol)及疊氮基乙酸甲酯(52.1 g，404 mmol)於甲醇(150 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3h，保持溫度低於5℃，隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥，得到20.0 g (78.2 mmol，43%)化合物37。
步驟AI ：在氬氣氛圍下使化合物37 (19.4 g，76.0 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1h，且隨後在減壓下濃縮。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯(50:50)再結晶，得到9.00 g (39.5 mmol，52%)化合物38。
步驟 AJ ： 向化合物38 (8.98 g，39.4 mmol)於乙醇(100 mL)中之溶液添加2 N氫氧化鈉水溶液(18 mL)。在60℃下攪拌混合物2h。在減壓下濃縮混合物，且用鹽酸水溶液酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集所得沈澱物，用水洗滌，且乾燥以獲得7.75 g (36.3 mmol，92%) 4-氯-5-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.15 mins,m/z 212 [M-H]- 1 H NMR (400 MHz, d6-dmso) 7.08 (1H, s), 7.28 (1H, dd) 7.42 (1H, dd), 12.2 (1H, br s), 13.2 (1H, br s)
製備 5- 氟 -4-(1- 羥乙基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image070
步驟 AK ： 在-10℃下向甲醇鈉(50.0 g，926 mmol)於甲醇(300 mL)中之溶液逐滴添加化合物39 (45.0 g，222 mmol)及疊氮基乙酸甲酯(59.0 g，457 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3 h，保持溫度低於5℃，隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥，得到35.0 g (133 mmol，60%)呈白色固體之化合物40。
步驟 AL ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物40 (35.0 g，133 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1 h，且隨後在減壓下蒸發。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯(60:40)再結晶，得到21.0 g (77.2 mmol，58%)化合物41。
步驟 AM ： 在氮氣下向化合物41 (4.00 g，14.7 mmol)及三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(5.50 g，15.2 mmol)於甲苯(50 mL)中之經脫氣溶液添加雙(三苯基膦)二氯化鈀(II) (1.16 g，1.65 mmol)。在60℃下攪拌反應混合物20 h。將反應混合物冷卻至室溫且過濾。在減壓下濃縮濾液且藉由矽膠層析來純化殘餘物，得到2.50 g (9.50 mmol，65%)呈淡黃色固體之化合物42。
步驟 AN ： 向化合物42 (2.40 g，9.12 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之溶液添加2M鹽酸(15 mL)。在室溫下攪拌所得混合物30 min。在真空下濃縮混合物且將殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間。將有機萃取物用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。用含5%乙醚之異己烷濕磨殘餘物且乾燥，得到1.80 g (7.65 mmol，84%)呈白色固體之化合物43。
步驟 AO ： 使化合物43 (1.70 g，7.23 mmol)及NaBH4 (2.50 g，66.1 mmol)於乙醇(13 mL)中之懸浮液回流2 h，隨後冷卻至室溫，且過濾。在減壓下濃縮濾液且將殘餘物溶解於乙酸乙酯中。將溶液用1N鹽酸及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發，得到1.60 g (6.74 mmol，93%)呈無色油狀物之化合物44。
步驟 AP ： 向化合物44 (1.50 g，6.32 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液添加2N NaOH水溶液(10 mL)。在60℃下攪拌混合物2 h。在減壓下濃縮混合物，且用10%鹽酸酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水(3×15 mL)洗滌，且乾燥以獲得1.30 g (5.82 mmol，92%) 5-氟-4-(1-羥乙基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.00 mins,m/z 222 [M-H]-
製備 4- 乙基 -5- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image072
步驟 AQ ： 在氮氣下向化合物41 (4.00 g，14.7 mmol)於無水DMF (10 mL)中之經加熱(90℃)溶液添加三-正丁基(乙烯基)錫(3.60 g，11.4 mmol)及Pd(PPh3 )2 Cl2 (0.301 g，0.757 mmol)。在90℃下攪拌所得混合物1 h。隨後將混合物冷卻至室溫且藉由矽膠管柱層析(60-80%乙酸乙酯/己烷)來純化，得到2.20 g (10.0 mmol，68%)呈黃色固體之化合物45。
步驟 AR ： 在室溫下在氫氣氛圍下將化合物45 (1.50 g，6.84 mmol)及Pd/C (0.300 g，10% wt.)於甲醇(20 mL)中之混合物攪拌16 h。過濾混合物，隨後在減壓下濃縮，得到1.45 g化合物46 (6.55 mmol，96%)。
步驟 AS ： 向化合物46 (1.40 g，6.33 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液添加2N NaOH水溶液(10 mL)  在60℃下攪拌混合物2 h。在真空下濃縮混合物，隨後用10%鹽酸酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水(3×15 mL)洗滌，且乾燥以獲得1.20 g (5.79 mmol，91%)目標化合物4-乙基-5-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.33 mins,m/z 206 [M-H]-
製備 4- 乙基 -6- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image074
步驟 AT ： 在-10℃下向甲醇鈉(50.0 g，926 mmol)於甲醇(300 mL)中之溶液逐滴添加化合物47 (45.0 g，202 mmol)及疊氮基乙酸甲酯(59.0 g，457 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3 h，保持溫度低於5℃，隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥，得到38.5 g (128 mmol，63%)呈白色固體之化合物48。
步驟 AU ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物48 (38.5 g，128 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1 h，且隨後在減壓下濃縮。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯(60:40)再結晶，得到18.0 g (67.3 mmol，53%)化合物49。
步驟 AV ： 在氮氣下向化合物49 (4.00 g，14.7 mmol)於無水DMF (10 mL)中之經加熱(90℃)溶液添加三-正丁基(乙烯基)錫(3.60 g，11.4 mmol)及Pd(PPh3 )2 Cl2 (0.301 g，0.757 mmol)。在90℃下攪拌所得混合物1 h。隨後將混合物冷卻至室溫且藉由矽膠管柱層析(60-80%乙酸乙酯/己烷)來純化，得到2.00 g (9.12 mmol，62%)呈黃色固體之化合物50。
步驟 AW ： 在室溫下在氫氣氛圍下將化合物50 (1.50 g，6.84 mmol)及Pd/C (0.300 g，10% wt.)於甲醇(20 mL)中之混合物攪拌16 h。過濾混合物且濃縮，得到1.40 g (6.33 mmol，93%)化合物51。
步驟 AX ： 向化合物51 (1.10 g，4.97 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液添加2N NaOH水溶液(10 mL)。在60℃下攪拌混合物2 h。在減壓下濃縮混合物，隨後用10%鹽酸酸化至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水(3×15 mL)洗滌，且乾燥以獲得0.900 g (4.34 mmol，87%)目標化合物4-乙基-6-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.29 mins,m/z 206 [M-H]-
製備 6- 氟 -4-(1- 羥乙基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image076
步驟 AY ： 在氮氣下向化合物49 (4.00 g，14.7 mmol)及三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(5.50 g，15.2 mmol)於甲苯(50 mL)中之經脫氣溶液添加雙(三苯基膦)二氯化鈀(II) (1.16 g，1.65 mmol)。在60℃下攪拌反應混合物20 h。將反應混合物冷卻至室溫且過濾。在減壓下濃縮濾液且藉由矽膠層析來純化殘餘物，得到2.10 g (7.98 mmol，54%)呈淡黃色固體之化合物52。
步驟 AZ ： 向化合物52 (2.10 g，7.98 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之溶液添加2M鹽酸(15 mL)。在室溫下攪拌所得混合物30 min。在減壓下濃縮混合物，且將殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間。將有機萃取物用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。用含5%乙醚之異己烷濕磨殘餘物且乾燥，得到1.70 g (7.23 mmol，91%)呈白色固體之化合物53。
步驟 BA ： 使化合物53 (1.70 g，7.23 mmol)及NaBH4 (2.50 g，66.1 mmol)於乙醇(13 mL)中之懸浮液回流2 h，冷卻至室溫且過濾。在減壓下濃縮濾液且將殘餘物溶解於乙酸乙酯中。將溶液用1N鹽酸及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮，得到1.60 g (6.74 mmol，93%)呈無色油狀物之化合物54。
步驟 BB ： 向化合物54 (1.40 g，5.90 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液添加2N NaOH水溶液(10 mL)。在60℃下攪拌混合物2 h。濃縮混合物且用10%鹽酸酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水(3×15 mL)洗滌，且乾燥以獲得1.10 g (4.93 mmol，48%)目標化合物6-氟-4-(1-羥乙基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.00 mins,m/z 222 [M-H]-
製備 4- 乙基 -7- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image078
步驟 BC ： 在-10℃下向甲醇鈉(50.0 g，926 mmol)於甲醇(300 mL)中之溶液逐滴添加化合物55 (45.0 g，222 mmol)及疊氮基乙酸甲酯(59.0 g，457 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3 h，保持溫度低於5℃，隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥，得到33.0 g (110 mmol，50%)呈白色固體之化合物56。
步驟 BD ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物56 (33.0 g，110 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1 h，且隨後在減壓下濃縮。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯(60:40)再結晶，得到21.5 g (79.0 mmol，72%)化合物57。
步驟 BE ： 在氮氣下向化合物57 (4.00 g，14.7 mmol)於無水DMF (10 mL)中之經加熱(90℃)溶液添加三-正丁基(乙烯基)錫(3.60 g，11.4 mmol)及Pd(PPh3 )2 Cl2 (0.301 g，0.757 mmol)。在90℃下攪拌所得混合物1 h。使混合物冷卻至室溫且藉由矽膠管柱層析(60-80% EtOAc/己烷)來純化。濃縮產物之經合併產物溶離份，用水(3×100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且濃縮，得到1.80 g (8.21 mmol，56%)呈黃色固體之化合物58。
步驟 BF ： 在室溫下在氫氣氛圍下將化合物58 (1.50 g，6.84 mmol)及Pd/C (0.300 g，10% wt.)於甲醇(20 mL)中之混合物攪拌16 h。過濾混合物且濃縮，得到1.25 g化合物59 (5.65 mmol, 83%)。
步驟 BG ： 向化合物59 (1.40 g，6.33 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液添加2N NaOH水溶液(10 mL)。在60℃下攪拌混合物2 h。在減壓下濃縮混合物，且用10%鹽酸酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水(3×15 mL)洗滌，且乾燥以獲得1.25 g (6.03 mmol，95%)目標化合物4-乙基-7-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.27 mins,m/z 206 [M-H]-
製備 7- 氟 -4-(1- 羥乙基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image080
步驟 BH ： 在氮氣下向化合物57 (4.00 g，14.7 mmol)及三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(5.50 g，15.2 mmol)於甲苯(50 mL)中之經脫氣溶液添加雙(三苯基膦)二氯化鈀(II) (1.16 g，1.65 mmol)。在60℃下攪拌反應混合物20 h。使混合物冷卻至室溫且過濾。在減壓下濃縮濾液並且藉由矽膠層析來純化殘餘物，得到2.70 g (10.3 mmol，70%)呈淡黃色固體之化合物60。
步驟 BI ： 向化合物60 (2.40 g，9.12 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之溶液添加2M鹽酸(15 mL)。在室溫下攪拌混合物30 min。蒸發大部分溶劑，且將殘餘物分配於水與乙酸乙酯之間。將經合併之有機萃取物用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。用含5%乙醚之異己烷濕磨殘餘物且乾燥，得到1.90 g (8.08 mmol，86%)呈白色固體之化合物61。
步驟 BJ ： 使化合物61 (1.70 g，7.23 mmol)及NaBH4 (2.50 g，66.1 mmol)於乙醇(13 mL)中之懸浮液回流2 h，冷卻至室溫且過濾。在減壓下蒸發濾液且將殘餘物溶解於乙酸乙酯中。將溶液用1N鹽酸及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發，得到1.50 g (6.32 mmol，87%)呈無色油狀物之化合物62。
步驟 BK ： 向化合物62 (1.50 g，6.32 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液添加2N NaOH水溶液(10 mL)。在60℃下攪拌混合物2 h。在減壓下濃縮混合物，且用10%鹽酸酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水(3×15 mL)洗滌，且乾燥以獲得1.35 g (6.05 mmol，96%)目標化合物7-氟-4-(1-羥乙基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 0.90 mins,m/z 222 [M-H]-
製備 4-( 羥甲基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image082
步驟 BL ：向化合物33 (10.0 g，39.4 mmol)於二噁烷(200 mL)及水(50 mL)之混合物中之溶液中添加乙烯基三氟硼酸鉀(11.0 g，82.1 mmol)、三乙胺(30 mL，248 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (1.0 g，1.37 mmol)。在80℃下攪拌混合物48h。在真空下濃縮混合物，且將殘餘物溶解於乙酸乙酯中。用水洗滌溶液且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化所獲得之物質，得到2.50 g (12.4 mmol，38%)化合物63。
步驟 BM ： 向化合物63 (2.50 g，12.4 mmol)、丙酮(200 mL)及水(40 mL)之混合物中添加OsO4 (0.100 g，0.393 mmol)及NaIO4 (13.4 g，62.6 mmol)。在室溫下攪拌反應物10 h。蒸餾出丙酮且用二氯甲烷萃取剩餘水溶液。將有機層用NaHCO3 飽和溶液(2×50 mL)及鹽水(2×50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮，獲得1.50 g (7.40 mmol，60%)化合物64。
步驟 BN ： 向化合物64 (1.50 g，7.38 mmol)於THF/甲醇混合物(100 mL)中之經冷卻(0℃)溶液添加NaBH4 (0.491 g，13.0 mmol)。在室溫下攪拌將反應混合物12 h。隨後將混合物冷卻至0℃，用2N鹽酸(40 mL)處理，且濃縮。用乙酸乙酯萃取殘餘物。將有機萃取物用水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮，獲得1.00 g (4.87 mmol，65%)化合物65，其純度足以用於下一步驟。
步驟 BO ：向前一步驟中所獲得之化合物65 (1.00 g，4.87 mmol)於THF(50 mL)中之溶液添加1N LiOH水溶液(9 mL)。在室溫下攪拌所得混合物48 h，接著濃縮且用1N NaHSO4 水溶液(9 mL)稀釋。用乙酸乙酯萃取混合物。將有機萃取物經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮。使殘餘物由MTBE再結晶以獲得0.250 g (1.30 mmol，27%)目標化合物4-(羥甲基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 0.98 mins,m/z 190 [M-H]-
製備 4-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image084
步驟 BP 及 BQ ： 在氬氣下向化合物33 (1.00 g，3.94 mmol)及三丁基-(1-乙氧基乙烯基)錫烷(1.58 g，4.37 mmol)於DMF (25 mL)中之經脫氣溶液添加雙(三苯基膦)二氯化鈀(II) (0.100 g，0.142 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物直至TLC顯示反應完成(約7天)。在減壓下濃縮混合物，且將殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間。使有機層經由矽膠塞過濾，經MgSO4乾燥，且在減壓下濃縮。將所得黑色油狀物溶解於甲醇(100 mL)中，用5N鹽酸(100 mL)處理，且在室溫下攪拌隔夜。濃縮混合物且將殘餘物溶解於乙酸乙酯中。將溶液用水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化粗產物，得到0.500 g (2.30 mmol，58%)化合物67。
步驟 BR ： 向化合物67 (1.00 g，4.60 mmol)於THF (50 mL)中之溶液添加1N LiOH水溶液(7 mL)。在室溫下攪拌所得混合物48 h，接著在減壓下濃縮且用1N NaHSO4水溶液(7 mL)稀釋。用乙酸乙酯萃取混合物。將有機萃取物經MgSO4 乾燥，且在減壓下濃縮。使殘餘物由MTBE再結晶，獲得0.900 g (4.43 mmol，96%)化合物68。
步驟 BS ： 在氬氣下向化合物68 (0.900 g，4.43 mmol)於THF(50 mL)中之經冷卻(0℃)溶液添加1N MeMgCl (16 mL)於己烷中之溶液。在室溫下攪拌所得混合物48 h。謹慎地用1N NaHSO4 淬滅混合物且用乙酸乙酯萃取。將有機萃取物經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮。使殘餘物由MTBE再結晶以獲得0.250 g (1.14 mmol，26%)目標化合物4-(2-羥基丙-2-基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 0.99 mins,m/z 202 [M-H]-
製備 4-(1- 羥乙基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image086
步驟 BS ： 向化合物66 (1.00 g，4.60 mmol)於THF/甲醇混合物(50 mL)中之經冷卻(0℃)溶液中添加NaBH4 (0.385 g，10.2 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物12h。將混合物冷卻至0℃，用2N鹽酸(20 mL)處理，且濃縮。用乙酸乙酯萃取殘餘物。將有機萃取物用水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發，獲得0.800 g (3.65 mmol，79%)化合物69，其純度足以用於下一步驟。
步驟 BT ：向前一步驟中所獲得之化合物69 (0.800 g，3.65 mmol)於THF (50 mL)中之溶液添加1N LiOH水溶液(6 mL)。在室溫下攪拌所得混合物48 h，接著濃縮且用1N NaHSO4 水溶液(6 mL)稀釋。用乙酸乙酯萃取混合物。將有機萃取物經MgSO4 乾燥，且在減壓下濃縮。使殘餘物由MTBE再結晶以獲得0.300 g (1.46 mmol，40%)目標化合物4-(1-羥乙基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 0.82 mins,m/z 204 [M-H]-
製備 4-( 丙 -2- 基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image088
步驟 BU ： 在-10℃下向甲醇鈉(10.0 g，185 mmol)於甲醇(150 mL)中之溶液逐滴添加化合物70 (15.0 g，101 mmol)及疊氮基乙酸甲酯(12.0 g，104 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3 h，保持溫度低於5℃，隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min。隨後藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥，得到7.00 g (23.3 mmol，23%)呈白色固體之化合物71。
步驟 BV ： 在氬氣氛圍下使前一步驟中所獲得之化合物71 (7.00 g，23.3 mmol)於二甲苯(200 mL)中之溶液回流1h，且隨後在減壓下濃縮。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯(60:40)再結晶，得到3.50 g (16.1 mmol，69%)化合物72。
步驟 BW ： 向化合物72 (3.50 g，16.1 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液添加2N NaOH水溶液(40 mL)。在60℃下攪拌混合物2 h。在減壓下濃縮混合物，且隨後用10%鹽酸酸化殘餘物至pH 5-6。藉由過濾收集沈澱物，用水(3×50 mL)洗滌，且乾燥以獲得2.70 g (13.3 mmol，83%)目標化合物4-(丙-2-基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.32 mins,m/z 202 [M-H]-
製備 4- 乙烯基 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image090
步驟 BX ： 向化合物63 (0.900 g，4.47 mmol)於THF (50 mL)中之溶液添加1N LiOH水溶液(8 mL)。在室溫下將所得混合物攪拌48 h，隨後在減壓下濃縮且用1N NaHSO4 水溶液(8 mL)稀釋。用乙酸乙酯萃取混合物。將有機萃取物經MgSO4 乾燥且在減壓下濃縮。使殘餘物由MTBE再結晶以獲得0.500 g (2.67 mmol，59%)目標化合物4-乙烯基-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.14 mins,m/z 186 [M-H]-
製備 4- 乙炔基 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image092
步驟 BY ：在氬氣下向化合物33 (1.00 g，3.94 mmol)於THF (50 mL)中之溶液添加TMS-乙炔(0.68 mL，4.80 mmol)、CuI (0.076 g，0.399 mmol)、三乙胺(2.80 mL，20.0 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (0.100 g，0.137 mmol)。在60℃下攪拌混合物直至TLC顯示反應完成(約5天)。在減壓下濃縮混合物，且將殘餘物溶解於乙酸乙酯中。將溶液用水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，得到0.600 g (2.14 mmol，56%)化合物73。
步驟 BZ ： 向化合物73 (0.840 g，3.10 mmol)於THF (50 mL)中之溶液添加1N LiOH水溶液(7 mL)。在室溫下攪拌所得混合物48 h，接著在減壓下濃縮且用1N NaHSO4 水溶液(7 mL)稀釋。用乙酸乙酯萃取混合物。將有機萃取物經MgSO4 乾燥且在減壓下濃縮。使殘餘物由MTBE再結晶以獲得0.400 g (2.17 mmol，70%)目標化合物4-乙炔基-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.12 mins,m/z 184 [M-H]-
製備 4-(1,1- 二氟乙基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image094
步驟 CA ： 向2-溴苯乙酮(63.0 g，317 mmol)、水(0.5 mL)及二氯甲烷(100 mL)之混合物中添加Morph-DAST (121 mL，992 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物28天。隨後將反應混合物倒入NaHCO3 飽和水溶液(1000 mL)中且用乙酸乙酯(2×500 mL)萃取。將有機層經Na2 SO4 乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，得到16.8 g (76.0 mmol，12%)化合物74。
步驟 CB ： 在Ar下經30 min向化合物74 (16.8 g，76.0 mmol)於THF (300 mL)中之經冷卻(-85℃)溶液中添加2.5 Mn -BuLi於己烷中之溶液(36.5 mL，91.5 mmol)。在-85℃下攪拌所得混合物1 h。隨後添加DMF (8.80 mL，114 mmol)(保持溫度低於-80℃)且再攪拌反應物45 min。將反應物用NH4 Cl飽和水溶液(100 mL)淬滅且用水(600 mL)稀釋。用乙酸乙酯(2×500 mL)萃取所獲得之混合物。將經合併之有機萃取物經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮，獲得12.5 g (73.6 mmol，97%)化合物75 (其純度足以用於下一步驟)。
步驟 CC ： 在Ar下向化合物75 (12.5 g，73.5 mmol)、乙醇(500 mL)及疊氮基乙酸乙酯(28.5 g，221 mmol)之經冷卻(-30℃)混合物中逐份添加新製備之甲醇鈉溶液(藉由混合Na (5.00 g，217 mmol)與甲醇(100 mL)來製備)(保持溫度低於-25℃)。使反應混合物升溫至15℃且攪拌12 h。將所獲得之混合物倒入NH4 Cl飽和水溶液(2500 mL)中且攪拌20 min。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥以獲得10.0 g (35.6 mmol，51%)化合物76。
步驟 CD ： 使化合物76 (10.0 g，35.6 mmol)於二甲苯(500 mL)中之溶液回流直至氣體析出停止(約2 h)，且隨後在減壓下濃縮。用己烷/乙酸乙酯(5:1)濕磨所獲得之橙色油狀物，藉由過濾來收集，且乾燥以獲得1.53 g (6.04 mmol，17%)化合物77。
步驟 CE ： 向化合物77 (1.53 g，6.04 mmol)於THF/水9:1混合物(100 mL)中之溶液添加LiOH∙H2 O (0.590 g，14.1 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。蒸發揮發物且使殘餘物與水(50 mL)及1N鹽酸(10 mL)混合。用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取混合物。將經合併之有機萃取物經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化粗產物，得到0.340 g (1.33 mmol，24%)的4-(1,1-二氟乙基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.16 mins,m/z 224 [M-H]-
製備 4-( 三甲基矽烷基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image096
步驟 CF ： 在Ar下向4-溴-1H-吲哚(5.00 g，25.5 mmol)於THF (100 mL)中之經冷卻(-78℃)溶液添加2.5M n-BuLi於己烷(23 mL，57.5 mmol)中之溶液。將所得混合物攪拌30 min。添加TMSCl (16 mL，126 mmol)且使反應混合物升溫至室溫。在1h之後，將混合物用MTBE (250 mL)稀釋，用水(2×200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，隨後經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮。使殘餘物在甲醇(100 mL)中回流1 h。隨後蒸餾出溶劑以獲得3.60 g (19.0 mmol，74%)化合物78。
步驟 CG ： 在Ar下向化合物78 (1.50 g，7.92 mmol)於THF (50 mL)中之經冷卻(-78℃)溶液添加2.5 M n-BuLi於己烷(3.8 mL，9.5 mmol)中之溶液。將所得混合物攪拌20 min。隨後使CO2 (2 L)鼓泡通過混合物10 min，且使反應混合物升溫至室溫。蒸發揮發物且將殘餘物溶解於THF (50 mL)中。將溶液冷卻至-78℃，且添加1.7M t-BuLi (5.6 mL，9.50 mmol)溶液。使混合物升溫至-30℃，隨後再次冷卻至-78℃。使CO2 (2 L)鼓泡通過溶液10 min。使所獲得之溶液緩慢地升溫至室溫，隨後在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於水(50 mL)中，用MTBE (2×50 mL)洗滌，隨後酸化至pH 4，且用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取。將有機萃取物用水(2×50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下蒸發。用己烷洗滌粗產物且乾燥以獲得1.24 g (5.31 mmol，67%)目標化合物4-(三甲基矽烷基)-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.47 mins,m/z 232 [M-H]-
製備 6- 氯 -5- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image098
步驟 CH ： 向(3-氯-4-氟苯基)肼(80.0 g，498 mmol)於乙醇(200 mL)中之溶中添加丙酮酸乙酯(58.0 g，499 mmol)。使混合物回流1 h，隨後在減壓下濃縮，且用水(300 mL)稀釋。藉由過濾收集固體，隨後乾燥以獲得122 g (472 mmol，95%)化合物79。
步驟 CI ： 使化合物79 (122 g，472 mmol)及pTSA (81.5 g，473 mmol)於甲苯(500 mL)中之懸浮液回流48 h，隨後冷卻至室溫。藉由過濾收集沈澱物且藉由分步結晶法由甲苯純化以獲得4.00 g (16.6 mmol，4%)化合物80。
步驟 CJ ： 向化合物80 (4.00 g，16.6 mmol)於乙醇(30 mL)中之回流溶液添加NaOH (0.660 g，16.5 mmol)。使混合物回流1 h，隨後在減壓下濃縮。用溫水(80℃，50 mL)濕磨殘餘物且用濃鹽酸酸化溶液(pH 2)。藉由過濾收集沈澱物，用水(2×10 mL)洗滌，且乾燥以獲得3.18 g (14.9 mmol，90%)目標化合物6-氯-5-氟-1H-吲哚-2-羧酸。Rt (方法G) 1.23 mins,m/z 212 [M-H]-
製備 4-( 二氟甲基 )-6- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image100
步驟 CK ： 在-10℃下向甲醇鈉(50.0 g，926 mmol)於甲醇(300 mL)中之溶液逐滴添加2-溴-4-氟苯甲醛(222 mmol)及疊氮基乙酸甲酯(59.0 g，457 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3h，保持溫度低於5℃，隨後用冰水淬滅。將所得混合物攪拌10 min，且藉由過濾收集固體。用水洗滌固體，得到呈白色固體之化合物81 (62%產率)。
步驟 CL ： 在氬氣氛圍下使化合物81 (133 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1h，且隨後在減壓下濃縮。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)再結晶，得到化合物82 (58%產率)。
步驟 CM ： 在氮氣下向化合物82 (14.7 mmol)於無水DMF (10 mL)中之經加熱(90℃)溶液中添加三-正丁基(乙烯基)錫(3.60 g，11.4 mmol)及Pd(PPh3)2Cl2 (0.301 g，0.757 mmol)，且在90℃下將所得混合物攪拌1 h。使混合物冷卻至室溫且藉由矽膠管柱層析(60-80%乙酸乙酯/己烷)來純化。使經合併之產物溶離份濃縮，用水(3×100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體之化合物83 (60%產率)。
步驟 CN ： 向化合物83 (12.4 mmol)、丙酮(200 mL)及水(40 mL)之混合物中添加OsO4 (0.100 g，0.393 mmol)及NaIO4 (13.4 g，62.6 mmol)，且在室溫下攪拌反應物10 h。蒸餾出丙酮且用二氯甲烷萃取水溶液。將經合併之有機層用NaHCO3 飽和溶液(2×50 mL)及鹽水(2×50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下濃縮，得到化合物84 (33%產率)。
步驟 CO ： 向化合物84 (11.0 mmol)於二氯甲烷 (50 mL)中之溶液添加Morph-DAST (4.10 mL，33.6 mmol)。攪拌所得混合物直至等分試樣之NMR顯示反應完成(2至5天)。將反應混合物逐滴添加至冷的NaHCO3 飽和溶液(1000 mL)中。用乙酸乙酯萃取所獲得之混合物。將有機層經MgSO4 乾燥且濃縮。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈黃色固體之化合物85 (48%產率)。
步驟 CP ： 向化合物85 (4.50 mmol)於THF(50 mL)中之溶液中添加1N LiOH水溶液(8 mL)。在室溫下將所得混合物攪拌48 h，隨後在減壓下濃縮且用1N NaHSO4 水溶液(8 mL)稀釋。用乙酸乙酯萃取所獲得之混合物。將有機萃取物經MgSO4 乾燥且在減壓下濃縮。使殘餘物由MTBE再結晶，獲得4-(二氟甲基)-6-氟-1H-吲哚-2-羧酸(87%)。Rt (方法G) 1.22 mins,m/z 228 [M-H]-
製備 4-( 二氟甲基 )-7- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image102
如針對4-(二氟甲基)-6-氟-1H-吲哚-2-羧酸所描述進行製備，以2-溴-5-氟苯甲醛為起始物質(2.5%總產率)。Rt (方法G) 1.13 mins,m/z 228 [M-H]-
製備 4-( 二氟甲基 )-1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image104
如針對4-(二氟甲基)-6-氟-1H-吲哚-2-羧酸所描述進行製備，以4-溴-1H-吲哚-2-羧酸為起始物質(11%總產率)。Rt (方法G) 1.17 mins,m/z 210 [M-H]-
製備 4-(1,1- 二氟乙基 )-6- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image106
步驟 CQ ： 在氮氣下向2-溴-5-氟苯甲腈(10.0 g，48.5 mmol)於無水四氫呋喃(100 mL)中之溶液添加甲基溴化鎂(3.2M於乙醚中，19 mL，60.0 mmol)。將所得混合物加熱至回流4 h。隨後使反應混合物冷卻，倒入2N鹽酸(100 mL)中，且用甲醇(100 mL)稀釋。移除有機溶劑且沈澱析出粗產物。將反應混合物用乙酸乙酯萃取，經MgSO4 乾燥且濃縮。藉由管柱層析(庚烷/二氯甲烷)純化殘餘物，得到4.88 g (21.9 mmol，45%)呈粉紅色油狀物之化合物86。
步驟 CR ： 在室溫下向化合物86 (110 mmol)於二氯甲烷(50mL)中之溶液添加Morph-DAST (41 mL，336 mmol)及幾滴水。在室溫下攪拌所得混合物48天；每7天添加額外部分之Morph-DAST (41 mL，336 mmol)。在反應完成之後，將混合物謹慎地逐滴添加至冷的NaHCO3 飽和水溶液中。用乙酸乙酯萃取產物，且將有機萃取物經MgSO4 乾燥並濃縮。藉由管柱層析純化殘餘物，得到呈無色液體之87 (37%產率)。
步驟 CS ： 向化合物87 (21.0 mmol)於THF (150 mL)中之經冷卻(-80℃)溶液緩慢添加2.5M n-BuLi於己烷(10.0 mL，25.0 mmol n-BuLi)中之溶液。攪拌混合物1h，隨後添加DMF (2.62 mL，33.8 mmol)，且再攪拌混合物1h。將反應物用NH4 Cl飽和水溶液(250 mL)淬滅且用Et2 O (3×150 mL)萃取。將有機層經Na2 SO4 乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/己烷1:9)來純化殘餘物，得到化合物88 (52%產率)。
步驟 CT ： 在-10℃下向甲醇鈉(50.0 g，926 mmol)於甲醇(300 mL)中之溶液逐滴添加化合物88 (222 mmol)及疊氮基乙酸甲酯(59.0 g，457 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌3h，保持溫度低於5℃，隨後用冰水淬滅。攪拌所得混合物10 min。藉由過濾收集所獲得之固體，且用水洗滌，得到呈白色固體之化合物89 (66%產率)。
步驟CU ：在氬氣氛圍下使化合物89 (120 mmol)於二甲苯(250 mL)中之溶液回流1 h，且隨後在減壓下濃縮。使殘餘物由己烷-乙酸乙酯再結晶以得到化合物90 (70%產率)。
步驟 CV ：向化合物90 (4.40 mmol)於THF (50 mL)中之溶液添加1N LiOH水溶液(8 mL)。在室溫下將所得混合物攪拌48 h，隨後在減壓下濃縮且用1N NaHSO4 水溶液(8 mL)稀釋。用乙酸乙酯萃取所獲得之殘餘物。將有機萃取物經MgSO4 乾燥且在減壓下濃縮。使殘餘物由MTBE再結晶，獲得目標化合物4-(1,1-二氟乙基)-6-氟-1H-吲哚-2-羧酸(95%產率)。Rt (方法G) 1.26 mins,m/z 242 [M-H]-
製備 4-(1,1- 二氟乙基 )-7- 氟 -1H- 吲哚 -2- 羧酸
Figure 02_image108
如針對4-(1,1-二氟乙基)-6-氟-1H-吲哚-2-羧酸所描述進行製備，以2-溴-4-氟苯乙酮為起始物質(3.6%總產率)。Rt (方法G) 1.23 mins,m/z 242 [M-H]-
製備 2- 胺基 -6- 甲基 -4H,5H,6H,7H- 吡唑并 [1,5-a] 吡嗪 -5- 羧酸第三丁酯
Figure 02_image110
步驟 A ： 向5-[(第三丁氧基)羰基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸(3.64 g，12.9 mmol)、DIPEA (2.01 g，15.6 mmol)及苯甲醇(4.20 g，38.8 mmol)於二噁烷(30 mL)中之經加熱(50℃)混合物逐滴添加DPPA (3.56 g，12.9 mmol)。接著在90℃下攪拌反應混合物3 h。隨後將溶液冷卻至室溫且真空濃縮。將殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間。將有機層用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥且真空蒸發，得到粗物質，其用MTBE濕磨，得到2.60 g (6.73 mmol，52%)的2-{[(苯甲氧基)羰基]胺基}-6-甲基-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-羧酸第三丁酯。
步驟 B ： 向2-{[(苯甲氧基)羰基]胺基}-6-甲基-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-羧酸第三丁酯(2.60 g，6.73 mmol)於甲醇(30 mL)中之溶液添加Pd/C (358 mg，10% wt.)。在45℃下在氫氣氛圍氛圍下攪拌懸浮液。藉由過濾移除催化劑，且將溶液在減壓下蒸發至乾燥以獲得1.68 g (6.66 mmol，99%)目標化合物2-胺基-6-甲基-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-羧酸第三丁酯。Rt (方法G) 1.07 mins,m/z 253 [M+H]+
實例 1 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-(氧雜戊環-3-基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image112
Rt (方法A) 2.75 mins, m/z 352 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.24 - 7.16 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.94 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.40 - 5.36 (m, 1H), 4.99 - 4.79 (m, 2H), 4.20 - 4.13 (m, 2H), 4.04 - 3.97 (m, 2H), 3.97 - 3.89 (m, 1H), 3.83 - 3.73 (m, 2H), 3.71 - 3.62 (m, 1H), 3.48 (dd, J = 8.7, 4.0 Hz, 1H), 2.14 - 2.00 (m, 1H), 1.81 - 1.67 (m, 1H)。
實例 2 (1r,4r)-4-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}環己-1-醇
Figure 02_image114
Rt (方法A) 2.74 mins, m/z 380 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.77 - 11.58 (m, 1H), 7.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.96 - 6.91 (m, 1H), 5.34 (s, 1H), 4.99 - 4.76 (m, 3H), 4.48 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.19 - 4.12 (m, 2H), 4.01 - 3.95 (m, 2H), 3.44 - 3.37 (m, 1H), 3.13 - 3.00 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 2H), 1.84 - 1.72 (m, 2H), 1.25 - 1.04 (m, 4H)。
實例 3 4-{[5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}環己-1-醇
Figure 02_image116
步驟 1 向4-羥基環己-1-酮(71.9 mg，0.629 mmol)添加2-胺基-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸第三丁酯(100 mg，0.420 mmol)及無水THF (1 mL)。隨後添加乙醇鈦(IV) (0.262 mL，0.839 mmol)且在100℃下加熱混合物2 h。冷卻混合物，且添加氰基硼氫化鈉(52.7 mg，0.839 mmol)。接著在100℃下將混合物再加熱一小時。冷卻反應混合物且倒入2M NH3 (3 mL)中。藉由過濾移除固體且用EtOAc (6 mL)及水(3 mL)洗滌。分離各層，且用EtOAc (3 mL)萃取水性溶離份。將經合併之有機萃取物用鹽水(4 mL)洗滌，經Na2SO4 乾燥且濃縮，接著不經進一步純化即用於下一步驟中。
步驟 2 向步驟1之產物於THF (3 mL)中之經冷卻(0℃)溶液添加1M HCl (3 mL)。在室溫下15 min之後，使反應混合物升溫至60℃且攪拌隔夜。冷卻混合物，且隨後濃縮，得到4-((4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)胺基)環己-1-醇二鹽酸鹽，其不經進一步純化即用於下一步驟。
步驟 3 將(4-((4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)胺基)環己-1-醇二鹽酸鹽(50 mg，0.162 mmol)及DABCO (181 mg，1.617 mmol))溶解於無水N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中。向4-氯-1H-吲哚-2-羧酸(31.6 mg，0.162 mmol)於無水N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液添加HATU (73.8 mg，0.194 mmol)。將混合物攪拌10分鐘，隨後合併且攪拌1h，並接著濃縮。將殘餘物懸浮於DMSO中。過濾懸浮液且用DMSO洗滌濾液，得到約2 mL溶液。藉由逆相管柱層析來純化此殘餘物，得到呈白色固體之4-{[5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}環己-1-醇(31.4 mg，47%產率)。 Rt (方法A) 2.93 / 2.99 mins, m/z 414,1 / 416,1 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.06 (s, 2H), 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.91 (s, 2H), 5.38 - 5.33 (m, 2H), 5.05 - 4.78 (m, 6H), 4.51 - 4.45 (m, 1H), 4.35 - 4.28 (m, 1H), 4.19 - 4.12 (m, 4H), 4.01 - 3.94 (m, 4H), 3.69 - 3.58 (m, 1H), 3.43 - 3.34 (m, 1H), 3.27 - 3.16 (m, 1H), 3.14 - 2.97 (m, 1H), 1.97 - 1.86 (m, 2H), 1.84 - 1.74 (m, 2H), 1.63 - 1.53 (m, 6H), 1.50 - 1.37 (m, 2H), 1.14 (q, J = 24.0, 12.2 Hz, 4H)。
實例 4 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氮雜環丁烷-3-羧醯胺鹽酸鹽
Figure 02_image118
Rt (方法B) 2.16 mins, m/z 365 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.72 - 11.67 (m, 1H), 10.67 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.01 - 6.96 (m, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.12 - 4.91 (m, 2H), 4.27 - 4.12 (m, 4H), 4.10 - 3.99 (m, 4H), 3.80 - 3.69 (m, 1H)。
實例 5 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]環丙烷磺醯胺
Figure 02_image120
Rt (方法A) 2.74 mins, m/z 386 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.00 - 6.95 (m, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.15 - 4.76 (m, 2H), 4.29 - 4.08 (m, 4H), 2.71 - 2.62 (m, 1H), 0.99 - 0.91 (m, 4H)。
實例 6 4-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺甲醯基}哌啶-1-羧酸第三丁酯
Figure 02_image122
Rt (方法A) 3.4 mins, m/z 491 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.38 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 5.19 - 4.85 (m, 2H), 4.30 - 4.10 (m, 4H), 4.04 - 3.87 (m, 2H), 2.88 - 2.61 (m, 2H), 1.75 - 1.66 (m, 2H), 1.50 - 1.36 (m, 11H)。
實例 7 3-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺甲醯基}氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯
Figure 02_image124
Rt (方法A) 3.31 mins, m/z 463 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.54 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.01 - 6.95 (m, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.23 - 4.78 (m, 2H), 4.30 - 4.07 (m, 4H), 4.04 - 3.76 (m, 4H), 3.54 - 3.40 (m, 1H), 1.38 (s, 9H)。
實例 8 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]甲烷磺醯胺
Figure 02_image126
Rt (方法A) 2.44 mins, m/z 360 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.74 - 11.64 (m, 1H), 9.90 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.16 - 4.75 (m, 2H), 4.29 - 4.10 (m, 4H), 3.02 (s, 3H)。
實例 9 5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-6-甲基-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image128
Rt (方法A) 2.99 mins, m/z 330 / 332 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.04 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.26 - 7.10 (m, 2H), 6.91 (s, 1H), 5.37 (s, 1H), 5.25 - 5.07 (m, 2H), 4.75 - 4.43 (m, 3H), 4.12 - 3.96 (m, 1H), 3.92 - 3.76 (m, 1H), 1.26 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
實例 10 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-6-甲基-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image130
Rt (方法A) 2.92 mins, m/z 394 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 10.52 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.11 - 7.04 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.32 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 5.29 - 5.20 (m, 1H), 4.79 - 4.52 (m, 1H), 4.32 - 4.16 (m, 1H), 3.99 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.90 (td, J = 8.2, 4.1 Hz, 1H), 3.80 - 3.72 (m, 1H), 3.72 - 3.63 (m, 2H), 3.15 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.09 - 1.98 (m, 2H), 1.25 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
實例 11 N-[5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-6-甲基-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image132
Rt (方法A) 3.13 mins, m/z 428 / 430 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.06 (s, 1H), 10.52 (s, 1H), 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.31 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 5.27 - 5.16 (m, 1H), 4.92 - 4.48 (m, 1H), 4.36 - 4.14 (m, 1H), 4.00 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.90 (td, J = 8.1, 4.0 Hz, 1H), 3.80 - 3.72 (m, 1H), 3.72 - 3.62 (m, 2H), 3.15 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.08 - 1.98 (m, 2H), 1.29 - 1.21 (m, 3H)。
實例 12 5-(1H-吲哚-2-羰基)-6-甲基-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image134
Rt (方法A) 3.00 mins, m/z 380 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.65 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.40 (s, 1H), 5.33 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.26 - 5.13 (m, 2H), 4.74 - 4.31 (m, 1H), 4.13 - 4.01 (m, 1H), 3.86 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.75 - 3.66 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 3.46 - 3.39 (m, 1H), 3.04 - 2.89 (m, 2H), 2.48 - 2.38 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.60 - 1.49 (m, 1H), 1.27 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。
實例 13 5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-6-甲基-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image136
Rt (方法A) 3.22 mins, m/z 414 / 416 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.04 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 5.34 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.25 - 5.10 (m, 2H), 4.16 - 3.99 (m, 1H), 3.87 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.75 - 3.66 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 3.46 - 3.39 (m, 1H), 3.04 - 2.89 (m, 2H), 2.48 - 2.40 (m, 1H), 1.99 - 1.87 (m, 1H), 1.60 - 1.50 (m, 1H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
實例 14 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]乙醯胺
Figure 02_image138
Rt (方法A) 2.72 mins, m/z 324 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.36 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 7.11 - 7.03 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 5.31 - 4.64 (m, 2H), 4.33 - 4.03 (m, 4H), 1.98 (s, 3H)。
實例 15 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-[(噁烷-4-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image140
Rt (方法A) 2.98 mins, m/z 380 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.78 - 11.57 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.30 - 7.16 (m, 1H), 7.11 - 7.02 (m, 1H), 6.98 - 6.91 (m, 1H), 5.36 (s, 1H), 5.24 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 5.15 - 4.59 (m, 2H), 4.26 - 4.09 (m, 2H), 4.06 - 3.91 (m, 2H), 3.88 - 3.76 (m, 2H), 3.30 - 3.18 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.81 - 1.67 (m, 1H), 1.67 - 1.55 (m, 2H), 1.14 (qd, J = 12.0, 4.4 Hz, 2H)。
實例 16 5-(1H-吲哚-2-羰基)-6-甲基-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image142
Rt (方法A) 2.76 mins, m/z 296 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.65 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 8.3, 1.0 Hz, 1H), 7.30 - 7.15 (m, 1H), 7.15 - 7.00 (m, 1H), 7.00 - 6.89 (m, 1H), 5.36 (s, 1H), 5.28 - 5.11 (m, 2H), 4.61 (s, 3H), 4.05 (dd, J = 12.5, 4.4 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 12.5, 1.4 Hz, 1H), 1.26 (d, J = 6.9 Hz, 3H
實例 17 5-(4-乙基-1H-吲哚-2-羰基)-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image144
Rt (方法A) 3.16 mins, m/z 394 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.62 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.17 - 7.09 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.88 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.42 - 5.28 (m, 2H), 5.10 - 4.70 (m, 2H), 4.25 - 4.10 (m, 2H), 4.07 - 3.93 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 2H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.42 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 1H), 3.03 - 2.85 (m, 4H), 2.48 - 2.39 (m, 1H), 1.98 - 1.86 (m, 1H), 1.60 - 1.49 (m, 1H), 1.28 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。
實例 18 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]噁烷-4-羧醯胺
Figure 02_image146
Rt (方法A) 2.84 mins, m/z 392 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.35 (s, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.11 - 7.03 (m, 1H), 7.01 - 6.95 (m, 1H), 6.43 (s, 1H), 5.23 - 4.78 (m, 2H), 4.27 - 4.09 (m, 4H), 3.92 - 3.83 (m, 2H), 3.32 - 3.24 (m, 2H), 2.65 - 2.54 (m, 1H), 1.68 - 1.54 (m, 4H)。
實例 19 N-[5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image148
步驟 1 向2-胺基-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸第三丁酯(500 mg，2.098 mmol)於二氯甲烷(14 mL)中之經冷卻(0℃)溶液添加DMAP (25.6 mg，0.210 mmol)及TEA (0.379 mL，2.73 mmol)。隨後添加氧雜環戊烷-3-羰醯氯(296 mg，2.203 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液。1h之後，藉由添加NaHCO3 飽和水溶液淬滅反應物。分離各層且用DCM萃取水層。將經合併之有機萃取物乾燥(Na2 SO4 )，濃縮且藉由急驟管柱層析(24 g二氧化矽，50%至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈白色固體之2-(氧雜環戊烷-3-醯胺基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-羧酸第三丁酯(672 mg，87%產率)。
步驟 2 向2-(四氫呋喃-3-羧醯胺基)-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸第三丁酯(180 mg，0.535 mmol)添加含4M HCl之二噁烷(3 mL，12 mmol)。在室溫下攪拌混合物1h。在減壓下濃縮反應混合物且用DCM汽提兩次，接著未經進一步純化即用於下一步驟中。
步驟 3 向4-氯-1H-吲哚-2-羧酸(17.44 mg，0.089 mmol)於N,N-無水二甲基甲醯胺(0.5 mL)中之溶液添加HATU (44.1 mg，0.116 mmol)。在單獨小瓶中，將N-(4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)四氫呋喃-3-羧醯胺鹽酸鹽(24.32 mg，0.089 mmol)懸浮於無水N,N-二甲基甲醯胺(0.5 mL)中，向其添加TEA (0.062 mL，0.446 mmol)。在5 min之後，合併反應混合物且攪拌隔夜。隨後添加幾滴水，且過濾混合物，並接著藉由層析純化，得到呈白色粉末之N-[5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺(25 mg，67%產率)。 Rt (方法A) 3.01 mins, m/z 414 / 416 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.07 (s, 1H), 10.51 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.36 - 4.70 (m, 2H), 4.34 - 4.07 (m, 4H), 3.89 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.80 - 3.71 (m, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 2H), 3.14 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.07 - 1.98 (m, 2H)
實例 20 N-[5-(4-氯-5-氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image150
向4-氯-5-氟-1H-吲哚-2-羧酸(19.05 mg，0.089 mmol)於無水N,N-二甲基甲醯胺(0.5 mL)中之溶液添加HATU (44.1 mg，0.116 mmol)。在單獨小瓶中，將N-(4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)四氫呋喃-3-羧醯胺鹽酸鹽(24.32 mg，0.089 mmol)懸浮於無水N,N-二甲基甲醯胺(0.5 mL)中，向其添加TEA (0.062 mL，0.446 mmol)。在5 min之後，合併反應混合物且攪拌隔夜。添加幾滴水，過濾混合物並接著藉由層析純化，得到呈白色粉末之N-[5-(4-氯-5-氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺(21 mg，54%產率)。 Rt (方法A) 3.05 mins, m/z 432 / 434 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.16 (s, 1H), 10.51 (s, 1H), 7.43 (dd, J = 8.9, 4.0 Hz, 1H), 7.29 - 7.21 (m, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.33 - 4.73 (m, 2H), 4.27 - 4.09 (m, 4H), 3.89 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.80 - 3.71 (m, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 2H), 3.14 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.07 - 1.98 (m, 2H)。
實例 21 N-[5-(4-氯-6-氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image152
Rt (方法A) 3.1 mins, m/z 432 / 434 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.15 (s, 1H), 10.51 (s, 1H), 7.27 - 7.10 (m, 2H), 6.98 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.34 - 4.67 (m, 2H), 4.37 - 4.01 (m, 4H), 3.89 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.75 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 2H), 3.14 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.06 - 1.97 (m, 2H)。
實例 22 N-[5-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image154
Rt (方法A) 2.9 mins, m/z 416 [M+H]+ 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.11 (s, 1H), 10.51 (s, 1H), 7.10 - 7.02 (m, 2H), 6.92 (td, J = 10.4, 2.1 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H), 5.29 - 4.73 (m, 2H), 4.36 - 4.09 (m, 4H), 3.89 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 3.71 - 3.61 (m, 2H), 3.14 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.07 - 1.97 (m, 2H)。
實例 23 N-[5-(4-乙基-6-氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image156
Rt (方法A) 3.15 mins, m/z 426 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.72 (s, 1H), 10.52 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.97 (dd, J = 9.8, 2.2 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 10.8, 2.3 Hz, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.26 - 4.73 (m, 2H), 4.32 - 4.05 (m, 4H), 3.89 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.75 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 2H), 3.14 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.91 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.07 - 1.97 (m, 2H), 1.28 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。
實例 24 N-[5-(4-乙基-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image158
Rt (方法A) 3.08 mins, m/z 408 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.64 (s, 1H), 10.52 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.16 - 7.10 (m, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.88 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.24 - 4.71 (m, 2H), 4.27 - 4.11 (m, 4H), 3.89 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.75 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 2H), 3.14 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 2.91 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.07 - 1.97 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。
實例 25 3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image160
Rt (方法A) 3.13 mins, m/z 418 / 420 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.15 (s, 1H), 7.42 (dd, J = 8.8, 4.0 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 10.0, 8.9 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.47 - 5.28 (m, 2H), 4.98 - 4.82 (m, 2H), 4.29 - 4.07 (m, 2H), 4.06 - 3.92 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 1H), 3.03 - 2.89 (m, 2H), 2.48 - 2.40 (m, 1H), 1.98 - 1.86 (m, 1H), 1.60 - 1.48 (m, 1H)。
實例 26 5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image162
Rt (方法A) 3.1 mins, m/z 400 / 402 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.06 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.42 - 5.30 (m, 2H), 5.14 - 4.60 (m, 2H), 4.29 - 4.08 (m, 2H), 4.06 - 3.90 (m, 2H), 3.76 - 3.65 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 1H), 3.03 - 2.88 (m, 2H), 2.48 - 2.39 (m, 1H), 1.98 - 1.86 (m, 1H), 1.60 - 1.48 (m, 1H)。
實例 27 5-(4-氯-6-氟-1H-吲哚-2-羰基)-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image164
Rt (方法A) 3.19 mins, m/z 418 / 420 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.14 (s, 1H), 7.20 - 7.15 (m, 2H), 6.94 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.34 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.04 - 4.76 (m, 2H), 4.21 - 4.10 (m, 2H), 4.03 - 3.93 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 1H), 3.03 - 2.89 (m, 2H), 2.48 - 2.39 (m, 1H), 1.98 - 1.86 (m, 1H), 1.60 - 1.48 (m, 1H)。
實例 28 5-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image166
Rt (方法A) 3.06 mins, m/z 402 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.09 (s, 1H), 7.08 - 7.00 (m, 2H), 6.92 (td, J = 10.4, 2.1 Hz, 1H), 5.44 - 5.25 (m, 2H), 5.17 - 4.57 (m, 2H), 4.28 - 4.07 (m, 2H), 4.06 - 3.91 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 1H), 3.03 - 2.88 (m, 2H), 2.48 - 2.39 (m, 1H), 1.98 - 1.86 (m, 1H), 1.60 - 1.48 (m, 1H)。
實例 29 5-(4-乙基-6-氟-1H-吲哚-2-羰基)-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image168
步驟 1 向2-(四氫呋喃-3-羧醯胺基)-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸第三丁酯(345 mg，1.026 mmol)於無水THF (7 mL)中之溶液添加硼烷-THF複合物(1M於THF中之溶液，5.13 mL，5.13 mmol)。將混合物加熱至60℃且攪拌48h。將混合物冷卻至0℃且添加1M HCl水溶液(3 mL)。在室溫下攪拌混合物15分鐘，接著再冷卻至0℃。添加NaHCO3 飽和水溶液直至pH 8為止。添加EtOAc，且分離各層。用EtOAc萃取水性溶離份(兩次)。將經合併之有機萃取物乾燥(Na2 SO4 )，在減壓下濃縮，且藉由急驟層析(二氧化矽，12g 0%至10% MeOH:DCM)純化，得到2-(((四氫呋喃-3-基)甲基)胺基)-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸第三丁酯(279 mg，0.822 mmol，80%產率)。
步驟 2 向2-(((四氫呋喃-3-基)甲基)胺基)-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸第三丁酯(279 mg，0.865 mmol)添加HCl (4M於二噁烷中，3 mL，12 mmol)。攪拌混合物1H，接著在減壓下濃縮且未經進一步純化即直接使用。
步驟 3 向4-乙基-6-氟-1H-吲哚-2-羧酸(25.5 mg，0.123 mmol)於無水N,N-二甲基甲醯胺(0.5 mL)中之溶液添加HATU (60.9 mg，0.160 mmol)。在單獨小瓶中，向N-((四氫呋喃-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺二鹽酸鹽(36.4 mg，0.123 mmol)於無水N,N-二甲基甲醯胺(0.5 mL)中之懸浮液添加TEA (0.086 mL，0.617 mmol)。在5 min之後，合併兩種反應混合物且攪拌48h。添加幾滴水，過濾溶液且隨後藉由層析純化，得到呈白色固體之5-(4-乙基-6-氟-1H-吲哚-2-羰基)-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺(18 mg，35%產率)。 Rt (方法A) 3.23 mins, m/z 412 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.71 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.97 (dd, J = 9.8, 2.3 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 10.8, 2.3 Hz, 1H), 5.44 - 5.29 (m, 2H), 5.09 - 4.70 (m, 2H), 4.28 - 4.07 (m, 2H), 4.04 - 3.91 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 8.5, 5.5 Hz, 1H), 3.03 - 2.86 (m, 4H), 2.48 - 2.40 (m, 1H), 1.98 - 1.86 (m, 1H), 1.60 - 1.49 (m, 1H), 1.28 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。
實例 30 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氧雜環戊烷-3-羧醯胺
Figure 02_image170
Rt (方法A) 2.8 mins, m/z 380 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.50 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 8.1, 1.0 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.11 - 7.04 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.43 (s, 1H), 5.18 - 4.78 (m, 2H), 4.30 - 4.07 (m, 4H), 3.89 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.75 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 2H), 3.20 - 3.09 (m, 1H), 2.09 - 1.97 (m, 2H)。
實例 31 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-[(氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image172
步驟 1 ： 向2-(四氫呋喃-3-羧醯胺基)-6,7-二氫噻唑并[5,4-c]吡啶-5(4H)-羧酸第三丁酯(0.085 g，0.253 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液添加LiAlH4溶液(2.4M於THF中之溶液)。攪拌混合物30分鐘，隨後藉由謹慎添加水來淬滅。用DCM萃取產物，且將經合併之有機萃取物乾燥、濃縮且未經進一步純化即用於下一步驟中。
步驟 2 ： 向步驟1之產物的DCM (1 mL)溶液添加TFA。攪拌混合物1h，接著在真空下濃縮。藉由與額外DCM共蒸發(兩次)來移除過量TFA。產物未經進一步純化即用於下一步驟中。
步驟 3 ： 向吲哚-2-羧酸(0.0203 g, 0.126 mmol)於無水DMF (1.0 mL)中之溶液添加HATU (0.0575 g，0.151 mmol)。攪拌反應混合物5分鐘，隨後添加步驟2之產物(N-((四氫呋喃-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺雙(2,2,2-三氟乙酸酯)，56.7 mg，0.126 mmol)及三乙胺(0.088 ml，0.630 mmol)於無水DMF (1.0 ml)中之溶液。攪拌混合物1h，接著添加幾滴水且藉由逆相HPLC直接純化所得溶液，得到所需產物(0.0210 g，52%產率)。 Rt (方法A) 2.89 mins, m/z 366 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.37 (s, 1H), 5.33 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.00 - 4.77 (m, 2H), 4.24 - 4.09 (m, 2H), 4.06 - 3.93 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 8.4, 5.5 Hz, 1H), 3.03 - 2.89 (m, 2H), 2.48 - 2.39 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.60 - 1.49 (m, 1H)。
實例 32 5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image174
向4-氯-1H-吲哚-2-羧酸(0.0246 g, 0.126 mmol)於無水DMF (0.65 mL)中之溶液添加HATU (0.0575 g，0.151 mmol)。攪拌反應混合物5分鐘，隨後添加4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺二鹽酸鹽(0.0266 g，0.126 mmol)及三乙胺(0.088 ml，0.630 mmol)於無水DMF (0.650 ml)中之溶液。攪拌混合物1h，接著添加幾滴水且藉由逆相HPLC直接純化所得溶液，得到所需產物(0.0210 g，52%產率)。 Rt (方法A) 2.88 mins, m/z 316 / 318 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.06 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.34 (s, 1H), 5.08 - 4.69 (m, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.24 - 4.08 (m, 2H), 4.04 - 3.88 (m, 2H)。
實例 33 5-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image176
向4,6-二氟-1H-吲哚-2-羧酸(0.0248 g，0.126 mmol)於無水DMF (0.65 mL)中之溶液添加HATU (0.0575 g，0.151 mmol)。攪拌反應混合物5分鐘，隨後添加4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺二鹽酸鹽(0.0266 g，0.126 mmol)及三乙胺(0.088 ml，0.630 mmol)於無水DMF (0.650 ml)中之溶液。攪拌混合物1h，接著添加幾滴水且藉由逆相HPLC直接純化所得溶液，得到所需產物(0.0217 g，54%產率)。 Rt (方法A) 2.84 mins, m/z 318 [M+H]+1 H  NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.10 (s, 1H), 7.07 - 7.00 (m, 2H), 6.92 (td, J = 10.4, 2.1 Hz, 1H), 5.34 (s, 1H), 5.05 - 4.75 (m, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.18 - 4.10 (m, 2H), 4.02 - 3.90 (m, 2H)。
實例 34 5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image178
向吲哚-2-羧酸(0.020 g，0.126 mmol)於無水DMF (0.65 ml)中之溶液添加HATU (0.057 g，0.151 mmol)。攪拌混合物5分鐘，隨後添加4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺二鹽酸鹽(0.026 g，0.126 mmol)及三乙胺(0.088 ml，0.63 mmol)於無水DMF (0.650 ml)中之溶液。攪拌混合物1h，添加水直至懸浮液變為溶液為止，且混合物直接藉由逆相HPLC純化，得到所需產物(0.025 g，70%產率)。 Rt (方法A) 2.64 mins, m/z 282 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.33 (s, 1H), 5.08 - 4.70 (m, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.24 - 4.09 (m, 2H), 4.04 - 3.90 (m, 2H)。
實例 35 N-[5-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]環丙烷磺醯胺
Figure 02_image180
Rt (方法A) 2.78 mins, m/z 422 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.11 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 7.08 - 7.02 (m, 2H), 6.97 - 6.89 (m, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.21 - 4.69 (m, 2H), 4.31 - 3.93 (m, 4H), 2.71 - 2.60 (m, 1H), 1.00 - 0.89 (m, 4H)。
實例 36 N-[5-(4-氯-5-氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]環丙烷磺醯胺
Figure 02_image182
Rt (方法A) 2.87 mins, m/z 438 / 440 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.15 (s, 1H), 10.63 - 9.19 (m, 1H), 7.43 (dd, J = 9.1, 3.9 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.16 - 4.83 (m, 2H), 4.24 - 4.12 (m, 4H), 2.71 - 2.61 (m, 1H), 0.99 - 0.91 (m, 4H)。
實例 37 N-[5-(4-氯-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]環丙烷磺醯胺
Figure 02_image184
Rt (方法A) 2.82 mins, m/z 420 / 422 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.07 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.23 - 4.79 (m, 2H), 4.25 - 4.12 (m, 4H), 2.74 - 2.62 (m, 1H), 0.99 - 0.91 (m, 4H)。
實例 38 N-[5-(4-氯-6-氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]環丙烷磺醯胺
Figure 02_image186
Rt (方法A) 2.93 mins, m/z 438 / 440 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.41 - 11.91 (m, 1H), 10.12 - 9.60 (m, 1H), 7.22 - 7.16 (m, 2H), 6.98 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.15 - 4.83 (m, 2H), 4.25 - 4.12 (m, 4H), 2.71 - 2.62 (m, 1H), 0.99 - 0.90 (m, 4H)。
實例 39 N-[5-(4-乙基-6-氟-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]環丙烷磺醯胺
Figure 02_image188
Rt (方法A) 2.99 mins, m/z 432 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.72 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 7.09 - 7.04 (m, 1H), 6.98 (dd, J = 9.6, 1.9 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 10.8, 2.2 Hz, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.12 - 4.87 (m, 2H), 4.26 - 4.12 (m, 4H), 2.91 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 1.29 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.99 - 0.91 (m, 4H)。
實例 40 N-[5-(4-乙基-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]環丙烷磺醯胺
Figure 02_image190
Rt (方法A) 2.91 mins, m/z 414 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.64 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.04 - 7.00 (m, 1H), 6.89 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.09 - 4.90 (m, 2H), 4.26 - 4.13 (m, 4H), 2.91 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.72 - 2.62 (m, 1H), 1.29 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.99 - 0.91 (m, 4H)。
實例 41 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]哌啶-4-羧醯胺鹽酸鹽
Figure 02_image192
Rt (方法A) 2.73 mins, m/z 393 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 1H), 10.50 (s, 1H), 8.96 - 8.75 (m, 1H), 8.66 - 8.46 (m, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.10 - 7.04 (m, 1H), 6.98 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.08 - 4.86 (m, 2H), 4.31 - 4.08 (m, 4H), 3.34 - 3.25 (m, 2H), 2.95 - 2.80 (m, 2H), 2.71 - 2.58 (m, 1H), 2.03 - 1.86 (m, 2H), 1.85 - 1.65 (m, 2H)。
實例 42 1-乙醯基-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image194
Rt (方法A) 2.69 mins, m/z 435 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 10.38 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.11 - 4.86 (m, 2H), 4.40 - 4.32 (m, 1H), 4.26 - 4.07 (m, 4H), 3.87 - 3.79 (m, 1H), 3.07 - 2.97 (m, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.81 - 1.68 (m, 2H), 1.63 - 1.49 (m, 1H), 1.46 - 1.33 (m, 1H)。
實例 43 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-苯基甲烷磺醯胺
Figure 02_image196
Rt (方法B) 3.21 mins, m/z 436 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.70 (s, 1H), 9.97 (s, 1H), 7.65 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 5H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.08 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.02 - 6.97 (m, 1H), 5.90 (s, 1H), 4.98 (m, 2H), 4.46 (s, 2H), 4.30 - 4.15 (m, 4H)。
實例 44 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲基環丙烷-1-磺醯胺
Figure 02_image198
步驟 1 向2-胺基-6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸第三丁酯(1.009 g，4.23 mmol)於二氯甲烷(25 mL)中之經攪拌溶液添加含4M鹽酸之1,4-二噁烷(16 mL，64.0 mmol)。在室溫下攪拌所得懸浮液隔夜。濃縮混合物，得到呈白色固體之4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺二鹽酸鹽，其不經進一步純化即用於下一步驟。
步驟 2 將吲哚-2-羧酸(459 mg，2.85 mmol)及HATU (1.084 g，2.85 mmol)溶解於無水N,N-二甲基甲醯胺(20 mL)中，且攪拌混合物10分鐘。隨後添加4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺二鹽酸鹽(599 mg)及TEA (1.3 mL，9.35 mmol)於無水N,N-二甲基甲醯胺(30 mL)中之懸浮液，且在N2 下於室溫攪拌所得反應混合物1h。濃縮反應混合物，接著分配於EtOAc (100 mL)與水(100 mL)之間。用EtOAc (70 mL)萃取水相。將經合併之有機萃取物連續用NaHCO3 飽和溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，且濃縮。添加固體NaCl至經合併之水性溶離份直至完全飽和，其後用EtOAc (100 mL及80 mL)萃取水相。將經合併之有機相用鹽水(80 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，濃縮，隨後藉由急驟層析(80 g二氧化矽；0.1至10% MeOH/DCM)純化，得到呈淺米色泡沫之5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺(615 mg，81%產率)。
步驟 3 將5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺於吡啶(0.8 mL，0.21M溶液，0.168 mmol)中之溶液添加至1-甲基環丙烷-1-磺醯氯(55 µL，0.252 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液2天。向混合物中添加KHSO4 溶液(0.5M，2 mL)及DCM (2 mL)。劇烈攪拌所得混合物10分鐘，隨後將有機相經相分離器分離且用DCM沖洗。濃縮有機相，且藉由層析純化，得到N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲基環丙烷-1-磺醯胺(5.6 mg, 8%產率)。 Rt (方法A) 2.86 mins, m/z 400 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 9.95 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.07 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.00 - 6.94 (m, 1H), 5.95 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.31 - 4.05 (m, 4H), 1.42 (s, 3H), 1.19 - 1.07 (m, 2H), 0.81 - 0.69 (m, 2H)。
實例 45 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]乙烷-1-磺醯胺
Figure 02_image200
Rt (方法A) 2.55 mins, m/z 374 [M+H]+
實例 46 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,5-二甲基-1,2-噁唑-4-磺醯胺
Figure 02_image202
Rt (方法A) 2.5 mins, m/z 441 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.98 - 6.93 (m, 1H), 5.90 (s, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.26 - 4.04 (m, 4H), 2.57 - 2.52 (m, 3H), 2.32 - 2.25 (m, 3H)。
實例 47 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]丙烷-2-磺醯胺
Figure 02_image204
Rt (方法A) 2.78 mins, m/z 388 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.00 - 6.95 (m, 1H), 5.94 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.31 - 4.06 (m, 4H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 1.25 (d, J = 6.8 Hz, 6H)。
實例 48 -[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1,2-二甲基-1H-咪唑-4-磺醯胺
Figure 02_image206
Rt (方法A) 2.4 mins, m/z 440 [M+H]+
實例 49 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲基-1H-吡唑-4-磺醯胺
Figure 02_image208
Rt (方法A) 2.35 mins, m/z 426 [M+H]+
實例 50 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]吡啶-3-磺醯胺
Figure 02_image210
Rt (方法A) 2.35 mins, m/z 423 [M+H]+
實例 51 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]環己烷磺醯胺
Figure 02_image212
Rt (方法B) 3.23 mins, m/z 428 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.94 (m, 2H), 4.44 - 3.90 (m, 4H), 3.11 - 2.77 (m, 1H), 2.12 - 1.96 (m, 2H), 1.84 - 1.64 (m, 2H), 1.64 - 1.52 (m, 1H), 1.48 - 1.29 (m, 2H), 1.29 - 1.02 (m, 3H)。
實例 52 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-(甲氧基甲基)環丙烷-1-磺醯胺
Figure 02_image214
Rt (方法A) 2.84 mins, m/z 430 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 9.95 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.10 - 7.04 (m, 1H), 7.00 - 6.95 (m, 1H), 5.94 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.29 - 4.05 (m, 4H), 3.66 (s, 2H), 3.20 (s, 3H), 1.25 - 1.13 (m, 2H), 1.00 - 0.88 (m, 2H)。
實例 53 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]噁烷-4-磺醯胺
Figure 02_image216
Rt (方法B) 2.89 mins, m/z 430 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 10.05 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.11 - 7.03 (m, 1H), 7.00 - 6.94 (m, 1H), 5.93 (s, 1H), 4.96 (m, 2H), 4.28 - 4.06 (m, 4H), 3.96 - 3.86 (m, 2H), 3.42 - 3.33 (m, 1H), 3.30 - 3.22 (m, 2H), 1.93 - 1.81 (m, 2H), 1.72 - 1.56 (m, 2H)。
實例 54 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-{[1-(甲氧基甲基)環丙基]甲基}-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image218
Rt (方法A) 3.07 mins, m/z 380 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.66 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.96 - 6.91 (m, 1H), 5.37 (s, 1H), 5.05 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.97 - 4.78 (m, 2H), 4.25 - 4.09 (m, 2H), 4.05 - 3.89 (m, 2H), 3.24 - 3.20 (m, 5H), 3.00 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 0.48 - 0.42 (m, 2H), 0.37 - 0.30 (m, 2H)。
實例 55 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-[(噁烷-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image220
Rt (方法A) 2.91 mins, m/z 380 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.23 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 4.99 - 4.75 (m, 2H), 4.21 - 4.10 (m, 2H), 4.04 - 3.93 (m, 2H), 3.86 - 3.77 (m, 1H), 3.75 - 3.66 (m, 1H), 3.29 - 3.23 (m, 1H), 3.10 - 3.00 (m, 1H), 2.89 - 2.81 (m, 2H), 1.83 - 1.71 (m, 2H), 1.62 - 1.50 (m, 1H), 1.49 - 1.36 (m, 1H), 1.26 - 1.12 (m, 1H)。
實例 56 N-苯甲基-5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image222
Rt (方法B) 3.3 mins, m/z 372 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.65 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 4H), 7.24 - 7.16 (m, 2H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 6.93 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.77 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.06 - 4.69 (m, 2H), 4.24 - 4.11 (m, 4H), 4.02 - 3.94 (m, 2H)。
實例 57 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-(吡啶-4-基)哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image224
Rt (方法B) 2.51 mins, m/z 470 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 10.40 (s, 1H), 8.16 - 8.09 (m, 2H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.04 (m, 1H), 7.01 - 6.95 (m, 1H), 6.84 - 6.76 (m, 2H), 6.42 (s, 1H), 5.16 - 4.79 (m, 2H), 4.30 - 4.09 (m, 4H), 4.02 - 3.89 (m, 2H), 2.91 - 2.80 (m, 2H), 2.70 - 2.59 (m, 1H), 1.86 - 1.74 (m, 2H), 1.68 - 1.54 (m, 2H)。
實例 58 4-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺甲醯基}哌啶-1-羧酸甲酯
Figure 02_image226
Rt (方法B) 3.09 mins, m/z 451 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 10.38 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.24 - 7.18 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 5.15 - 4.77 (m, 2H), 4.28 - 4.10 (m, 4H), 4.07 - 3.91 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 2.91 - 2.72 (m, 2H), 2.60 - 2.52 (m, 1H), 1.79 - 1.68 (m, 2H), 1.54 - 1.40 (m, 2H)。
實例 59 3-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}-2,2-二甲基丙-1-醇
Figure 02_image228
Rt (方法A) 2.97 mins, m/z 368 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.09 - 7.02 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.23 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 5.01 - 4.69 (m, 3H), 4.24 - 4.08 (m, 2H), 4.02 - 3.91 (m, 2H), 3.10 (s, 2H), 2.87 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 0.80 (s, 6H)。
實例 60 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-[(1-甲氧基環丁基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image230
Rt (方法B) 3.21 mins, m/z 380 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 5.03 - 4.75 (m, 3H), 4.22 - 4.11 (m, 2H), 4.05 - 3.94 (m, 2H), 3.23 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.06 - 1.94 (m, 2H), 1.94 - 1.83 (m, 2H), 1.74 - 1.48 (m, 2H)。
實例 61 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image232
Rt (方法B) 2.54 mins, m/z 461 [M+H]+
實例 62 1-(2-羥乙基)-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image234
Rt (方法B) 2.39 mins, m/z 437 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 1H), 10.30 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.04 (m, 1H), 7.00 - 6.95 (m, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.14 - 4.76 (m, 2H), 4.46 - 4.30 (m, 1H), 4.30 - 4.07 (m, 4H), 3.51 - 3.43 (m, 2H), 2.95 - 2.80 (m, 2H), 2.40 - 2.33 (m, 2H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.01 - 1.84 (m, 2H), 1.72 - 1.49 (m, 4H)。
實例 63 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image236
Rt (方法B) 2.95 mins, m/z 475 [M+H]+
實例 64 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲烷磺醯基哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image238
Rt (方法B) 3.09 mins, m/z 471 [M+H]+
實例 65 N4-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]哌啶-1,4-二羧醯胺
Figure 02_image240
Rt (方法B) 2.85 mins, m/z 436 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.70 (s, 1H), 10.37 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.11 - 7.04 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.92 (s, 2H), 5.15 - 4.81 (m, 2H), 4.31 - 4.07 (m, 4H), 4.02 - 3.88 (m, 2H), 2.71 - 2.59 (m, 2H), 2.57 - 2.51 (m, 1H), 1.73 - 1.60 (m, 2H), 1.53 - 1.35 (m, 2H)。
實例 66 1-乙醯基-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]氮雜環丁烷-3-羧醯胺
Figure 02_image242
Rt (方法B) 3.18 mins, m/z 407 [M+H]+
實例 67 1-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3-甲基脲
Figure 02_image244
Rt (方法A) 2.69 mins, m/z 339 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 7.11 - 7.04 (m, 1H), 7.00 - 6.93 (m, 1H), 6.74 - 6.57 (m, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.25 - 4.64 (m, 2H), 4.32 - 3.98 (m, 4H), 2.65 (d, J = 4.6 Hz, 3H)。
實例 68 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-5H,6H,7H,8H-咪唑并[1,2-a]吡啶-7-羧醯胺
Figure 02_image246
Rt (方法B) 2.4 mins, m/z 430 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.57 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.11 - 7.04 (m, 1H), 7.02 - 6.95 (m, 2H), 6.81 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.16 - 4.78 (m, 2H), 4.30 - 4.11 (m, 4H), 4.11 - 4.01 (m, 1H), 3.93 - 3.80 (m, 1H), 3.01 - 2.88 (m, 2H), 2.86 - 2.73 (m, 1H), 2.21 - 2.10 (m, 1H), 2.05 - 1.90 (m, 1H)。
實例 69 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-(噁烷-4-基)哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image248
Rt (方法A) 2.81 mins, m/z 477 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 1H), 10.30 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.12 - 7.03 (m, 1H), 7.01 - 6.94 (m, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.25 - 4.74 (m, 2H), 4.31 - 4.07 (m, 4H), 3.94 - 3.81 (m, 2H), 3.27 - 3.20 (m, 2H), 2.98 - 2.83 (m, 2H), 2.46 - 2.36 (m, 1H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.17 - 2.03 (m, 2H), 1.81 - 1.49 (m, 6H), 1.49 - 1.33 (m, 2H)。
實例 70 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲基氮雜環丁烷-3-羧醯胺
Figure 02_image250
Rt (方法B) 2.31 mins, m/z 397 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 10.33 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 7.00 - 6.92 (m, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.17 - 4.79 (m, 2H), 4.31 - 4.03 (m, 4H), 3.46 - 3.38 (m, 1H), 3.31 - 3.20 (m, 2H), 3.09 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H)。
實例 71 1-({[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}甲基)環丁-1-醇
Figure 02_image252
Rt (方法B) 3.19 mins, m/z 366 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.00 - 4.73 (m, 3H), 4.24 - 4.12 (m, 2H), 4.03 - 3.95 (m, 2H), 3.09 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.05 - 1.95 (m, 2H), 1.95 - 1.83 (m, 2H), 1.73 - 1.56 (m, 1H), 1.53 - 1.38 (m, 1H)。
實例 72 3-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}-2-甲基丙-1-醇
Figure 02_image254
Rt (方法A) 2.78 mins, m/z 354 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.66 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.96 - 6.91 (m, 1H), 5.36 (s, 1H), 5.16 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.01 - 4.72 (m, 2H), 4.57 - 4.43 (m, 1H), 4.23 - 4.10 (m, 2H), 4.04 - 3.91 (m, 2H), 3.31 - 3.20 (m, 2H), 3.04 - 2.94 (m, 1H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 1.83 - 1.69 (m, 1H), 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
實例 73 3,3-二氟-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image256
Rt (方法B) 2.28 mins, m/z 429 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 1H), 10.49 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.10 - 7.04 (m, 1H), 7.01 - 6.95 (m, 1H), 6.49 - 6.38 (m, 1H), 5.27 - 4.73 (m, 2H), 4.39 - 4.01 (m, 4H), 3.32 - 3.20 (m, 1H), 3.22 - 3.02 (m, 2H), 2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.80 - 2.68 (m, 1H), 1.93 - 1.80 (m, 1H), 1.80 - 1.69 (m, 1H)。
實例 74 1-環丙基-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image258
Rt (方法B) 2.31 mins, m/z 433.2 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (s, 1H), 10.31 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.27 - 4.09 (m, 5H), 3.01 - 2.89 (m, 2H), 2.37 - 2.28 (m, 1H), 2.18 - 2.07 (m, 3H), 1.71 - 1.62 (m, 2H), 1.60 - 1.45 (m, 3H), 0.43 - 0.34 (m, 2H), 0.31 - 0.25 (m, 2H)。
實例 75 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-[(3-甲基氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image260
Rt (方法A) 2.92 mins, m/z 380.1 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.26 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 5.04 - 4.72 (m, 2H), 4.25 - 4.07 (m, 2H), 4.07 - 3.91 (m, 2H), 3.80 - 3.65 (m, 2H), 3.55 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.26 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.01 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 1.88 - 1.75 (m, 1H), 1.60 - 1.45 (m, 1H), 1.06 (s, 3H)。
實例 76 (1r,3r)-3-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}環丁-1-醇
Figure 02_image262
Rt (方法A) 2.62 mins, m/z 352 [M+H]+
實例 77 (1R,3S)-3-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}環己-1-醇
Figure 02_image264
Rt (方法A) 2.76 mins, m/z 380 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.96 - 6.90 (m, 1H), 5.34 (s, 1H), 4.99 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.95 - 4.78 (m, 2H), 4.53 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.21 - 4.11 (m, 2H), 4.03 - 3.93 (m, 2H), 3.42 - 3.35 (m, 1H), 3.17 - 3.06 (m, 1H), 2.18 - 2.06 (m, 1H), 1.92 - 1.82 (m, 1H), 1.81 - 1.71 (m, 1H), 1.68 - 1.58 (m, 1H), 1.26 - 1.12 (m, 1H), 1.08 - 0.85 (m, 3H)。
實例 78 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-{[1-(丙-2-基氧基)環丁基]甲基}-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image266
Rt (方法A) 3.37 mins, m/z 408 [M+H]+
實例 79 [1-({[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}甲基)環丁基]甲醇
Figure 02_image268
Rt (方法A) 2.99 mins, m/z 380 [M+H]+
實例 80 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-(4-甲氧基環己基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image270
Rt (方法A) 3.04 mins, m/z 394 [M+H]+
實例 81 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲基-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image272
Rt (方法B) 2.51 mins, m/z 457 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.43 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.26 - 4.10 (m, 4H), 2.95 - 2.86 (m, 1H), 2.84 - 2.71 (m, 1H), 2.48 - 2.42 (m, 1H), 2.35 - 2.21 (m, 4H), 1.94 - 1.86 (m, 1H), 1.78 - 1.69 (m, 1H), 1.63 - 1.49 (m, 2H)。
實例 82 N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-5-羧醯胺二鹽酸鹽
Figure 02_image274
Rt (方法B) 2.29 mins, m/z 405 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.72 - 11.64 (m, 1H), 10.56 (s, 1H), 8.84 - 8.65 (m, 1H), 8.48 - 8.32 (m, 1H), 7.64 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.00 - 6.95 (m, 1H), 6.41 (s, 1H), 5.09 - 4.86 (m, 2H), 4.31 - 4.01 (m, 5H), 3.10 - 2.99 (m, 1H), 2.93 - 2.83 (m, 1H), 2.75 - 2.66 (m, 2H), 2.06 - 1.92 (m, 2H), 1.82 - 1.72 (m, 1H), 1.59 - 1.51 (m, 1H), 1.28 - 1.21 (m, 1H)。
實例 83 3,3-二氟-1-({[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}甲基)環丁-1-醇
Figure 02_image276
Rt (方法B) 3 mins, m/z 402 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.68 (s, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.26 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 5.01 - 4.76 (m, 2H), 4.27 - 4.11 (m, 2H), 4.07 - 3.93 (m, 2H), 3.17 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 2.82 - 2.68 (m, 2H), 2.48 - 2.39 (m, 2H)。
實例 84 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-(1-苯基環丙基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image278
Rt (方法B) 3.4 mins, m/z 398 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.63 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.16 (m, 5H), 7.12 - 7.02 (m, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.29 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.23 - 4.08 (m, 2H), 4.05 - 3.91 (m, 2H), 1.19 - 1.07 (m, 4H)。
實例 85 3-氟-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]哌啶-4-羧醯胺三鹽酸鹽
Figure 02_image280
Rt (方法B) 2,29及2,33 mins, m/z 411 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.76 - 11.63 (m, 2H), 10.80 (s, 1H), 10.62 (s, 1H), 9.51 - 8.56 (m, 3H), 7.64 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.22 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.00 - 6.96 (m, 2H), 6.47 - 6.40 (m, 2H), 5.36 (d, J = 46.5 Hz, 1H), 5.16 - 4.77 (m, 4H), 4.40 - 3.99 (m, 8H), 3.67 - 3.56 (m, 3H), 3.32 - 3.07 (m, 4H), 3.06 - 2.85 (m, 4H), 2.22 - 0.74 (m, 6H)。
實例 86 (3R,4R)-3-氟-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]哌啶-4-羧醯胺二鹽酸鹽
Figure 02_image282
Rt (方法B) 2.28 mins, m/z 411 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 9.29 - 8.87 (m, 2H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.01 - 6.95 (m, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.23 - 4.88 (m, 3H), 4.20 (d, J = 24.7 Hz, 4H), 3.63 - 3.52 (m, 2H), 3.20 - 3.12 (m, 1H), 3.05 - 2.86 (m, 2H), 2.12 - 2.03 (m, 1H), 1.93 - 1.75 (m, 1H), 1.31 - 1.13 (m, 1H)。
實例 87 3,3-二氟-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲基哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image284
Rt (方法B) 2.31 mins, m/z 443 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 10.51 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.35 - 4.09 (m, 4H), 3.03 - 2.93 (m, 2H), 2.76 - 2.71 (m, 1H), 2.54 (s, 1H), 2.36 - 2.22 (m, 4H), 2.20 - 2.07 (m, 1H), 2.00 - 1.88 (m, 1H), 1.85 - 1.73 (m, 1H)。
實例 88 3-氟-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲基哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image286
Rt (方法B) 2.21及2.26 mins, m/z 425 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 2H), 10.56 (s, 1H), 10.38 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.07 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 6.98 (s, 2H), 6.49 - 6.39 (m, 2H), 5.13 - 4.88 (m, 5H), 4.85 - 4.63 (m, 1H), 4.29 - 4.08 (m, 8H), 3.17 - 3.08 (m, 1H), 3.08 - 2.99 (m, 1H), 2.83 - 2.69 (m, 2H), 2.62 - 2.56 (m, 1H), 2.26 - 2.06 (m, 7H), 2.02 - 1.77 (m, 6H), 1.62 - 1.53 (m, 2H)。
實例 89 (3R,4R)-3-氟-N-[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-1-甲基哌啶-4-羧醯胺
Figure 02_image288
Rt (方法B) 2.24 mins, m/z 425 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.68 (s, 1H), 10.56 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.10 - 4.86 (m, 2H), 4.84 - 4.61 (m, 1H), 4.19 (d, J = 26.3 Hz, 4H), 3.16 - 3.07 (m, 1H), 2.77 - 2.69 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.95 - 1.74 (m, 3H), 1.66 - 1.48 (m, 1H), 1.42 - 1.10 (m, 1H)。
實例 90 (1-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}環丁基)甲醇
Figure 02_image290
Rt (方法B) 2.72 mins, m/z 366 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.66 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 5.03 - 4.59 (m, 3H), 4.28 - 4.09 (m, 2H), 4.09 - 3.89 (m, 2H), 3.51 (s, 2H), 2.18 - 2.03 (m, 2H), 2.03 - 1.89 (m, 2H), 1.85 - 1.55 (m, 2H)。
實例 91 (1s,3s)-3-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}環丁-1-醇
Figure 02_image292
Rt (方法B) 2.49 mins, m/z 352 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.10 - 7.02 (m, 1H), 6.96 - 6.91 (m, 1H), 5.36 - 5.28 (m, 2H), 5.01 - 4.78 (m, 3H), 4.20 - 4.10 (m, 2H), 4.03 - 3.93 (m, 2H), 3.82 - 3.70 (m, 1H), 3.30 - 3.21 (m, 1H), 2.59 - 2.51 (m, 2H), 1.67 - 1.56 (m, 2H)。
實例 92 (1-{[5-(1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}環丙基)甲醇
Figure 02_image294
Rt (方法B) 2.58 mins, m/z 352 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 7.11 - 7.04 (m, 1H), 6.95 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 5.13 - 4.73 (m, 2H), 4.59 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.30 - 4.09 (m, 2H), 4.09 - 3.93 (m, 2H), 3.42 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 0.67 - 0.60 (m, 2H), 0.57 - 0.52 (m, 2H)。
實例 93 1-({[5-(4-乙基-1H-吲哚-2-羰基)-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]胺基}甲基)環丁-1-醇
Figure 02_image296
Rt (方法A) 3.08 mins, m/z 394 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.61 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.3, 7.1 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.88 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 5.44 (s, 1H), 5.19 - 5.12 (m, 1H), 4.96 - 4.83 (m, 3H), 4.22 - 4.13 (m, 2H), 4.03 - 3.95 (m, 2H), 3.10 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 2.90 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.04 - 1.95 (m, 2H), 1.95 - 1.84 (m, 2H), 1.68 - 1.57 (m, 1H), 1.52 - 1.38 (m, 1H), 1.29 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。
實例 94 5-(1H-吲哚-2-羰基)-N-[(3-甲氧基氧雜戊環-3-基)甲基]-4H,5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺
Figure 02_image298
Rt (方法B) 2.79 mins, m/z 396 [M+H]+1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.07 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.01 - 4.71 (m, 2H), 4.31 - 4.08 (m, 2H), 4.08 - 3.90 (m, 2H), 3.84 - 3.63 (m, 3H), 3.56 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 3.30 - 3.20 (m, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.05 - 1.94 (m, 1H), 1.88 - 1.77 (m, 1H)。
在衣殼裝配及HBV複製分析中分析所選擇之本發明化合物，如下文所描述，且此等活性化合物之代表性基團示於表1中。
生物化學衣殼裝配分析 針對裝配效應子活性之篩選係基於由Zlotnick等人(2007)所公開之螢光淬滅分析進行。N端裝配結構域之含有149種胺基酸之C端截短核心蛋白在位置150處稠合至獨特之半胱胺酸殘基，且在大腸桿菌(E. coli )中使用pET表現系統(Merck Chemicals, Darmstadt)表現。核心二聚體蛋白之純化係使用一連串尺寸排外層析法步驟來執行。簡言之，在冰上用天然裂解緩衝液(Qproteome細菌蛋白製備型套組；Qiagen, Hilden)處理來自表現選殖NdeI/XhoI成表現質體pET21b之核心蛋白之編碼序列的1 L BL21 (DE3) Rosetta2培養物之細胞集結粒1 h。在離心步驟之後，在於冰上與0.23 g/ml固體硫酸銨一起攪拌2 h期間沈澱上清液。在進一步離心之後，將所得集結粒溶解於緩衝液A (100 mM Tris，pH 7.5；100 mM NaCl；2 mM DTT)中，且隨後裝載至緩衝液A平衡CaptoCore 700管柱(GE HealthCare, Frankfurt)上。用緩衝液N (50 mM NaHCO3 pH 9.6；5 mM DTT)透析含有經裝配HBV衣殼之管柱流過物，隨後添加脲至3M最終濃度以在冰上將衣殼解離成核心二聚體，持續1.5 h。隨後將蛋白溶液裝載至1L Sephacryl S300管柱上。在用緩衝液N溶離之後，藉由SDS-PAGE鑑別含有核心二聚體之溶離份，且隨後彙集並用50 mM HEPES pH 7.5；5 mM DTT透析。為改良經純化核心二聚體之裝配能力，執行第二輪裝配及拆卸，其開始於添加5 M NaCl且包括上文所描述之尺寸排外層析步驟。自最後一個層析步驟，將含有核心二聚體之溶離份彙集且以等分試樣以在1.5與2.0 mg/ml之間的濃度儲存在-80℃下。
即將標記之前，藉由添加新製備之呈20 mM最終濃度之DTT還原核心蛋白。在於冰儲存緩衝器上培育40 min之後，且使用Sephadex G-25管柱(GE HealthCare, Frankfurt)及50 mM HEPES、pH 7.5移除DTT。為進行標記，在4℃及黑暗下用呈1 mM最終濃度之BODIPY-FL順丁烯二醯亞胺(Invitrogen, Karlsruhe)隔夜培育1.6 mg/ml核心蛋白。在標記之後，藉由額外的去鹽步驟使用Sephadex G-25管柱移除游離染料。將經標記核心二聚體以等分試樣儲存在4℃下。在二聚狀態下，經標記核心蛋白之螢光信號較高且在核心二聚體裝配成高分子衣殼結構期間淬滅。在黑色384孔微量滴定盤中以10 µl總分析體積使用50 mM HEPES pH 7.5及1.0至2.0 µM經標記核心蛋白執行篩選分析。使用以100 µM、31.6 µM或10 µM之最終濃度起始之0.5對數單位的連續稀釋液以8種不同濃度添加各篩選化合物。在任何情況下，整個微量滴定盤上之DMSO濃度為0.5%。藉由注射NaCl至300 µM之最終濃度開始裝配反應，該注射誘導裝配過程至最大淬滅信號之約25%。在開始反應之後6 min，使用Clariostar盤式讀取器(BMG Labtech, Ortenberg)在477 nm之激勵及525 nm之發射下量測螢光信號。作為100%及0%裝配對照，使用含有2.5 M及0 M NaCl之HEPES緩衝液。實驗一式三份執行三次。藉由非線性回歸分析，使用Graph Pad Prism 6軟體(GraphPad Software, La Jolla, USA)計算EC50 值。
測定來自 HepAD38 細胞之上清液之 HBV DNA 在穩定經轉染細胞株HepAD38中分析抗HBV活性，已描述該細胞株分泌高含量之HBV病毒粒子顆粒(Ladner等人，1997)。簡言之，將HepAD38細胞在37℃、5% CO2 及95%濕度下在200 µl維持培養基中培養，該維持培養基為達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基/養分混合物F-12 (Gibco, Karlsruhe)、補充有50 µg/ml青黴素/鏈黴素(Gibco, Karlsruhe)之10%胎牛血清(PAN Biotech Aidenbach)、2 mM L-麩醯胺酸(PAN Biotech, Aidenbach)、400 µg/ml G418 (AppliChem, Darmstadt)及0.3 µg/ml四環素。以1:5比率一週一次繼代培養細胞，但通常不繼代超過十代。對於分析，將60,000個細胞接種至96孔盤之各孔中之無任何四環素的維持培養基中，且用連續半對數稀釋之測試化合物處理。為將邊緣效應降至最低，不使用盤之外部36個孔，但填充有分析培養基。在各分析培養盤上，分別配置病毒對照之六個孔(未經處理之HepAD38細胞)及細胞對照之六個孔(經0.3 µg/ml四環素處理之HepAD38細胞)。另外，在各實驗中準備盤套件以及參考抑制劑如BAY 41-4109、因提弗(entecavir)及拉米夫定(lamivudine)而非篩選化合物。一般而言，實驗一式三份執行三次。在第6天，根據製造商之說明書，在MagNa Pure LC儀器上使用MagNA Pure 96 DNA及病毒NA小體積套組(Roche Diagnostics, Mannheim)自動地純化來自100 µl經過濾細胞培養上清液(AcroPrep Advance 96濾板，0.45 μM Supor膜，PALL GmbH, Dreieich)之HBV DNA。由HBV DNA之相對複本數計算EC50值。簡言之，使100 μl含有HBV DNA之溶離液中之5 μl經受PCR LC480探針主套組(Roche)以及1 μM反義引子tgcagaggtgaagcgaagtgcaca、0.5 μM正義引子gacgtcctttgtttacgtcccgtc、0.3 μM雜交探針acggggcgcacctctctttacgcgg-FL及LC640-ctccccgtctgtgccttctcatctgc-PH (TIBMolBiol, Berlin)至12.5 μl之最終體積。PCR係在Light Cycler 480即時系統(Roche Diagnostics, Mannheim)上使用以下方案執行：在95℃下預培育1 min，擴增：40個循環×(在95℃下10 sec，在60℃下50 sec，在70℃下1 sec)，在40℃下冷卻10 sec。使用pCH-9/3091之HBV質體DNA (Nassal等人，1990, Cell 63: 1357-1363)及LightCycler 480 SW 1.5軟體(Roche Diagnostics, Mannheim)對照已知標準定量病毒負荷，且使用非線性回歸，利用GraphPad Prism 6 (GraphPad Software Inc., La Jolla, USA)計算EC50 值。
細胞生存力分析 使用AlamarBlue生存力分析，在0.3 µg/ml四環素之存在下在HepAD38細胞中評估細胞毒性，該四環素阻斷HBV基因組之表現。分析條件及盤佈局類似於抗HBV分析，但使用其他對照。在各分析培養盤上，含有未經處理之HepAD38細胞之六個孔用作100%生存力對照，且僅填充有分析培養基之六個孔用作0%生存力對照。另外，以60 µM最終分析濃度起始之幾何濃度系列之環己醯亞胺用作各實驗中之陽性對照。在六天培育期之後，以1/11稀釋將Alamar Blue Presto細胞生存力試劑(ThermoFisher, Dreieich)添加至分析配培養盤之各孔中。在於37℃下培育30至45 min之後，使用分別具有激發濾波器550 nm及發射濾波器595 nm之Tecan Spectrafluor Plus盤式讀取器讀取與活細胞之數目成比例之螢光信號。將資料標準化成未經處理之對照(100%生存力)及分析培養基(0%生存力)之百分比，隨後使用非線性回歸及GraphPad Prism 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, USA)計算CC50值。平均EC50 及CC50 值用於計算各測試化合物之選擇指數(SI = CC50 /EC50 )。
活體內功效模型 抗病毒劑之HBV研究及臨床前測試受到以下限制：病毒之狹窄的物種及組織向性、可用感染模型之缺乏及由使用黑猩猩(唯一對HBV感染具有充分敏感性的動物)施加之限制。替代性動物模型係基於HBV相關肝炎病毒之使用，且已在經土撥鼠肝炎病毒(WHV)感染之土撥鼠中或在經鴨B型肝炎病毒(DHBV)感染之鴨中或在經絨毛猴HBV (WM-HBV)感染之樹鼩中測試各種抗病毒化合物(Dandri等人, 2017, Best Pract Res Clin Gastroenterol 31, 273-279中之概述)。然而，代替病毒之使用具有若干限制。舉例而言，在最遠相關之DHBV與HBV之間的序列同源性僅為約40%，且此為HAP族之核心蛋白裝配修飾劑對DHBV及WHV呈現為無活性但有效地抑制HBV之原因(Campagna等人, 2013, J. Virol. 87, 6931-6942)。小鼠不具有HBV容許性，但主要努力聚焦於HBV複製及感染之小鼠模型之開發，諸如針對人類HBV轉殖基因之小鼠(HBV tg小鼠)之產生、小鼠中之HBV基因組之流體動力學注射(HDI)、或具有人類化肝及/或人類化免疫系統之小鼠之產生，以及基於含有HBV基因組之腺病毒(Ad-HBV)或腺相關病毒(AAV-HBV)之病毒載體向免疫勝任小鼠中之靜脈內注射(Dandri等人, 2017, Best Pract Res Clin Gastroenterol 31, 273-279中之概述)。使用針對完整HBV基因組轉殖基因之小鼠，可展現鼠類肝細胞產生感染性HBV病毒粒子之能力(Guidotti等人, 1995, J. Virol., 69: 6158-6169)。因為轉殖基因小鼠對病毒蛋白具有免疫耐受性且在產生HBV之小鼠中未觀測到肝損傷，故此等研究證實HBV自身不具有細胞病變性。HBV轉殖基因小鼠已用於測試若干抗HBV劑如聚合酶抑制劑及核心蛋白裝配修飾劑之功效(Weber等人, 2002, Antiviral Research 54 69-78；Julander等人, 2003, Antivir. Res., 59: 155-161)，因此證明HBV轉殖基因小鼠非常適合於多種類型之活體內臨床前抗病毒測試。
如Paulsen等人, 2015, PLOSone, 10: e0144383中所描述，2916/2917位置處攜載讀框轉移突變(GC)之HBV-轉殖基因小鼠(Tg [HBV1.3 fsX- 3'5'])可用於證實活體內核心蛋白裝配修飾劑之抗病毒活性。簡言之，在實驗之前藉由qPCR檢查HBV-轉殖基因小鼠之血清中之HBV特異性DNA (參見「測定來自HepAD38細胞之上清液之HBV DNA」章節)。各處理組由約10週齡之五隻雄性動物及五隻雌性動物組成，效價為107 至108 個病毒粒子/毫升血清。將化合物調配為諸如2% DMSO/98%泰勒纖維素(0.5%甲基纖維素/99.5% PBS)或50% PEG400之適合媒劑中之懸浮液，且一至三次/天經口投與至動物，持續10天時段。媒劑充當陰性對照，而適合媒劑中之1 µg/kg因提弗為陽性對照。藉由使用異氟醚蒸發器進行延髓後血液抽樣來獲得血液。為了收集最後一次處理血液或器官之後六小時的最終心臟穿刺，使小鼠經異氟醚麻醉且隨後藉由CO2 暴露處死。將延髓後(100-150 μl)及心臟穿刺(400-500 μl)血液樣本分別收集至Microvette 300 LH或Microvette 500 LH中，之後經由離心分離血漿(10 min，2000 g，4℃)。採集肝臟組織且速凍於液體N2 中。所有樣本均儲存在-80℃下直至進一步使用。將病毒DNA自50 μl血漿或25 mg肝臟組織中提取，且根據製造商之說明書在50 μl AE緩衝液(血漿)中使用DNeasy 96血液及組織套組(Qiagen, Hilden)或在320 μl AE緩衝液(肝臟組織)中使用DNeasy組織套組(Qiagen, Hilden)進行溶離。根據製造商之說明書使用LightCycler 480探針主PCR套組(Roche, Mannheim)使經溶離病毒DNA經受qPCR以測定HBV複本數。所使用之HBV特異性引子包括正向引子5'-CTG TAC CAA ACC TTC GGA CGG-3'、反向引子5'-AGG AGA AAC GGG CTG AGG C-3'及FAM標記之探針FAM-CCA TCA TCC TGG GCT TTC GGA AAA TT-BBQ。總體積為20 μl之一個PCR反應樣本含有5 μl DNA溶離液及15 μl主混合物(包含0.3 μM正向引子、0.3 μM反向引子、0.15 μM FAM標記之探針)。在Roche LightCycler1480上使用以下方案進行qPCR：在95℃下預培育1 min，擴增：(在95℃下10 sec，在60℃下50 sec，在70℃下1 sec)×45個循環，在40℃下冷卻10 sec。如上文所描述產生標準曲線。所有樣本均一式兩份地測試。分析之偵測極限為約50個HBV DNA複本(使用在250-2.5×107 複本數範圍內之標準)。結果表示為HBV DNA複本數/10 μl血漿或HBV DNA複本數/100 ng總肝DNA(針對陰性對照標準化)。
已在多項研究中顯示，不僅轉殖基因小鼠為證明新型化學實體活體內抗病毒活性之適合模型，小鼠中之HBV基因組之流體動力學注射的使用以及感染HBV陽性患者血清之免疫缺乏人類肝嵌合小鼠的使用亦常用於描繪靶向HBV之藥物(Li等人, 2016, Hepat. Mon. 16: e34420；Qiu等人, 2016, J. Med. Chem. 59: 7651-7666；Lutgehetmann等人, 2011, Gastroenterology, 140: 2074-2083)。另外，亦已藉由接種低劑量之腺病毒載體(Huang等人, 2012, Gastroenterology 142: 1447-1450)或含有HBV基因組之腺相關病毒(AAV)載體(Dion等人, 2013, J Virol. 87: 5554-5563)在免疫勝任小鼠中成功地確立慢性HBV感染。此模型亦可用於證實新穎抗HBV劑之活體內抗病毒活性。表 1 ： 生物化學及抗病毒活性 在表1中，「+++」表示EC50 ＜ 1 µM；「++」表示1 µM ＜ EC50 ＜ 10 µM；「+」表示EC50 ＜ 100 µM (細胞活性分析) 在表1中，「A」表示IC50 ＜ 5 µM；「B」表示5 µM ＜ IC50 ＜ 10 µM；「C」表示IC50 ＜ 100 µM (裝配分析活性)
實例 CC50 (µM) 細胞活性 裝配活性
實例1 ＞ 10 ++ B
實例2 ＞ 10 +++ A
實例3 ＞ 10 +++ A
實例4 ＞ 10 ++ A
實例5 ＞ 10 +++ A
實例6 ＞ 10 +++ A
實例7 ＞ 10 +++ A
實例8 ＞ 10 +++ A
實例9 ＞ 10 +++ A
實例10 ＞ 10 +++ A
實例11 ＞ 10 +++ A
實例12 ＞ 10 +++ A
實例13 ＞ 10 +++ A
實例14 ＞ 10 +++ A
實例15 ＞ 10 +++ B
實例16 ＞ 10 +++ A
實例17 ＞ 10 +++ A
實例18 ＞ 10 +++ A
實例19 ＞ 10 +++ A
實例20 ＞ 10 +++ A
實例21 ＞ 10 +++ A
實例22 ＞ 10 +++ A
實例23 ＞ 10 +++ A
實例24 ＞ 10 +++ A
實例25 ＞ 10 +++ A
實例26 ＞ 10 +++ A
實例27 ＞ 10 +++ A
實例28 ＞ 10 +++ A
實例29 ＞ 10 +++ A
實例30 ＞ 10 +++ B
實例31 ＞ 10 +++ B
實例32 ＞ 10 +++ A
實例33 ＞ 10 +++ A
實例34 ＞ 10 +++ A
實例35 ＞ 10 +++ A
實例36 ＞ 10 +++ A
實例37 ＞ 10 +++ A
實例38 ＞ 10 +++ A
實例39 ＞ 10 +++ A
實例40 ＞ 10 +++ A
實例41 ＞ 10 +++ A
實例42 ＞ 10 +++ A
實例43 ＞ 10 +++ A
實例44 ＞ 10 +++ A
實例45 ＞ 10 +++ A
實例46 ＞ 10 +++ A
實例47 ＞ 10 +++ A
實例48 ＞ 10 ++ A
實例49 ＞ 10 +++ A
實例50 ＞ 10 +++ A
實例51 ＞ 10 +++ A
實例52 ＞ 10 +++ A
實例53 ＞ 10 +++ B
實例54 ＞ 10 +++ A
實例55 ＞ 10 +++ A
實例56 ＞ 10 ++ A
實例57 ＞ 10 +++ A
實例58 ＞ 10 +++ A
實例59 ＞ 10 +++ A
實例60 ＞ 10 +++ A
實例61 ＞ 10 +++ A
實例62 ＞ 10 ++ A
實例63 ＞ 10 +++ A
實例64 ＞ 10 +++ A
實例65 ＞ 10 +++ A
實例66 ＞ 10 +++ A
實例67 ＞ 10 +++ A
實例68 ＞ 10 +++ A
實例69 ＞ 10 +++ A
實例70 ＞ 10 ++ A
實例71 ＞ 10 +++ A
實例72 ＞ 10 +++ A
實例73 ＞ 10 +++ A
實例74 ＞ 10 +++ A
實例75 ＞ 10 +++ A
實例76 ＞ 10 +++ A
實例77 ＞ 10 +++ B
實例78 ＞ 10 +++ B
實例79 ＞ 10 +++ A
實例80 ＞ 10 +++ B
實例81 ＞ 10 +++ A
實例82 ＞ 10 ++ A
實例83 ＞ 10 +++ A
實例84 ＞ 10 +++ A
實例85 ＞ 10 +++ A
實例86 ＞ 10 +++ A
實例87 ＞ 10 +++ A
實例88 ＞ 10 +++ A
實例89 ＞ 10 +++ A
實例90 ＞ 10 +++ A
實例91 ＞ 10 +++ A
實例92 ＞ 10 +++ A
實例93 ＞ 10 +++ A
實例94 ＞ 10 +++ B
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 108139831-A0101-11-0002-1

Claims (11)

  1. 一種式I化合物
    Figure 03_image300
    其中 R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 R5為H或甲基 R6係選自包含以下之群：H、D、SO2 -C1-C6烷基、SO2 -C3-C7環烷基、SO2 -C3-C7雜環烷基、SO2 -C2-C6羥基烷基、SO2 -C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、SO2 -C1-C4羧基烷基、SO2 -芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -N(R12)(R13)、C(=O)R8、C(=O)N(R12)(R13)、C(=O)C(=O)N(R12)(R13)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C1-C4羧基烷基、C1-C4醯基磺醯胺基-烷基、C1-C4羧醯胺基烷基、C3-C7雜環烷基、C2-C6胺基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基及醯基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基，其中C3-C7雜環烷基視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：C1-C6烷基或C1-C6烷氧基 R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 R12及R13係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 R12及R13視情況連接以形成C3-C7環烷基環，或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環 或其醫藥學上可接受之鹽，或式I化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽，或式I化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物。
  2. 如請求項1之式I化合物
    Figure 03_image302
    其中 R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 R5為H或甲基 R6係選自包含以下之群：H、D、SO2 -C1-C6烷基、SO2 -C3-C7環烷基、SO2 -C3-C7雜環烷基、SO2 -C2-C6羥基烷基、SO2 -C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、SO2 -C1-C4-羧基烷基、SO2 -芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -N(R12)(R13)、C(=O)R8、C(=O)N(R12)(R13)、C(=O)C(=O)N(R12)(R13)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C1-C4-羧基烷基、C1-C4醯基磺醯胺基-烷基、C1-C4羧醯胺基烷基、C3-C7雜環烷基、C2-C6胺基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基及醯基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 R12及R13係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 R12及R13視情況連接以形成C3-C7環烷基環，或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環 或其醫藥學上可接受之鹽，或式I化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽，或式I化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物。
  3. 如請求項1或2中任一項之式I化合物，其中SO2 -芳基為SO2 -C6芳基，及/或SO2 -雜芳基為SO2 -C1-C9雜芳基及/或雜芳基為C1-C9雜芳基，且其中雜芳基、SO2 -雜芳基、SO2 -雜環烷基及雜環烷基在環系統中各自具有1至4個雜原子，其各自獨立地選自N、O及S， 或其醫藥學上可接受之鹽，或式I化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽，或式I化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物。
  4. 如請求項1至3中任一項之式I化合物， 或其醫藥學上可接受之鹽，或式I化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽，或式I化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物， 其中該前藥係選自包含以下之群：酯、碳酸酯、乙醯基氧基衍生物、胺基酸衍生物及胺基磷酸酯衍生物。
  5. 如請求項1至4中任一項之式I化合物，其為式II化合物
    Figure 03_image304
    其中 R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 R5為H或甲基 R7係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C2-C6羥基烷基、C2-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 或其醫藥學上可接受之鹽，或式II化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽，或式II化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物。
  6. 如請求項1至4中任一項之式I化合物，其為式III化合物
    Figure 03_image306
    其中 R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 R5為H或甲基 R8係選自包含以下之群：C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C4羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 或其醫藥學上可接受之鹽，或式III化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽，或式III化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物。
  7. 如請求項1至4中任一項之式I化合物，其為式IV化合物
    Figure 03_image308
    其中 R1、R2、R3及R4對於各位置係獨立地選自包含以下之群：H、CF2 H、CF3 、CF2 CH3 、F、Cl、Br、CH3 、Et、i-Pr、c-Pr、D、CH2 OH、CH(CH3 )OH、CH2 F、CH(F)CH3 、I、C=C、C≡C、C≡N、C(CH3 )2 OH、SCH3 、OH及OCH3 R5為H或甲基 R9、R10及R11係獨立地選自包含以下之群：H、C1-C5烷基、C1-C5羥基烷基、C1-C5烷基-O-C1-C6烷基、C3-C7環烷基、C1-C3羧基烷基、C3-C7雜環烷基、C6芳基及雜芳基，其中C1-C5烷基、C1-C5羥基烷基、C1-C5烷基-O-C1-C6烷基及C1-C3羧基烷基視情況經1個、2個或3個各自獨立地選自以下之基團取代：OH、鹵基、NH2 、醯基、SO2 CH3 、SO3 H、羧基、羧酯、胺甲醯基、經取代之胺甲醯基、C6芳基、雜芳基、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C7雜環烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羥基烷基及C2-C6烯基氧基 R9及R10視情況連接以形成C3-C7環烷基環，或含有1或2個氮、硫或氧原子之C4-C7雜環烷基環 或其醫藥學上可接受之鹽，或式IV化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽，或式IV化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物。
  8. 如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、或該化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽、或該化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物，其用於預防或治療個體之HBV感染。
  9. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、或該化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽、或該化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物；以及醫藥學上可接受之載劑。
  10. 一種治療有需要之個體之HBV感染的方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、或該化合物之溶劑合物或水合物或其醫藥學上可接受之鹽、或該化合物之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物或水合物。
  11. 一種用於製備如請求項1至4中任一項之式I化合物之方法，其藉由以下進行：使式V化合物
    Figure 03_image310
    其中R1、R2、R3及R4係如請求項1中所定義，與式VI化合物反應，
    Figure 03_image312
    其中R5及R6係如請求項1至4中任一項所定義。
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