TW202005538A - 阿孫鏈黴菌、其代謝產物、其製備方法及其殺蚊子的應用 - Google Patents

阿孫鏈黴菌、其代謝產物、其製備方法及其殺蚊子的應用 Download PDF

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Abstract

本發明係關於一種新穎之阿孫鏈黴菌，另提供一種製備阿孫鏈黴菌之代謝產物與代謝萃取物之方法，本發明另關於利用前述方法得到之該代謝產物與代謝萃取物，兩者皆具殺蚊子的能力，本發明另關於代謝產物與代謝萃取物在殺蚊子的應用，以及將該代謝產物製備成商業可利用之生物製劑，並提升殺蚊子之能力。

Description

阿孫鏈黴菌、其代謝產物、其製備方法及其殺蚊子的應用
本發明係涉及一種新穎菌株，特別是指經分離而得之阿孫鏈黴菌BT00008 (Streptomyces abikoensis BT00008)。本發明另涉及一種製備方法，特別是指製備阿孫鏈黴菌代謝產物與代謝萃取物的方法。本發明另涉及一種代謝產物，特別是指由前述方法所獲得之代謝產物。本發明另涉及一種應用，特別是指前述代謝產物用於殺蚊子的應用。
隨著全球暖化、氣候變遷的加劇，病媒蚊造成的公共衛生問題對於全球人口生命安全與經濟發展一直是嚴苛且迫切的議題，隨之而來的登革熱感染通常造成人類之高死亡率，嚴重打擊經濟與生活水準，因此病媒蚊的活動對於人類的政治經濟和社會秩序息息相關。
在病媒防治上，化學藥劑一直是傳統防治病媒蚊的利器，但化學藥劑長期噴灑對於人體健康、環境都造成傷害，同時也容易導致環境害蟲產生抗藥性，對於防治策略的擬定，造成很嚴重的困擾，因此投入對環境友善的新穎殺蚊藥劑開發，對於未來用藥及病媒蚊的控制，將是一項高度挑戰性的工作。
目前常見防治環境中蚊蟲的方式為降低蚊子幼蟲的族群數，常見的為殺蚊藥為除蟲菊精類型與昆蟲生長調節劑等化學合成藥劑或蘇力菌，施用於水中。前者化學藥劑大量且長期地施用於環境中，極有可能造成害蟲產生抗藥性、對非標的生物的危害以及對環境的污染；後者蘇力菌在常見以色列品系(Bacillus thuringiensis israelensis , Bti)的效果良好，實驗結果發現，其殺蟲結晶蛋白(insecticidal crystal protein, ICP)對蚊子幼蟲毒性高，專一性強，其藥效不會影響水溝內其餘生物生態，但卻可有效撲滅幼蟲。但是，Bti的毒蛋白在陽光下容易失效，使用時最好選擇陰天、傍晚或添加保護劑噴灑。另外，國外曾有研究文獻指出長期以蘇力菌毒蛋白餵養熱帶家蚊(Culex quinquefasciatus )，可能會誘發其抗性的產生。
有鑑於此，為克服病媒蚊之危害，同時又能將環境汙染、對人體的損害降到最低，並能提供專一及環境友善性等特性，現有技術實有改善的必要。
為了克服現有技術之缺點，本發明之目的為提供了一種製備阿孫鏈黴菌BT00008(Streptomyces abikoensis BT00008)代謝產物及代謝萃取物之方法、代謝產物、代謝萃取物及其應用，並建立含有該代謝產物的生物製劑，其具有殺蚊的應用，用於蚊蟲的防治，具有良好的契機應用於環境用生物製劑發展的潛力。
為達到上述目的，本發明提供了一種阿孫鏈黴菌BT00008菌株，所述菌株係寄存於中國典型培養物保藏中心，寄存編號為CCTCC NO.: M2018126。較佳地，本菌株係用於殺蚊子的應用。
本發明另提供一種製備阿孫鏈黴菌代謝萃取物的方法，其特徵在於，所述方法包含以下步驟： 將阿孫鏈黴菌以培養基發酵，獲得一代謝產物；將該代謝產物以乙酸乙酯萃取，獲得一代謝萃取物。
較佳地，所述將阿孫鏈黴菌以培養基發酵步驟中，培養基組成物包含，但不限於酪蛋白、酵母萃取物、酵母粉、麥芽精、右旋葡萄糖、蔗糖、燕麥、磷酸氫二鉀、氯化鈉、硫酸銨、碳酸鈣、可溶性澱粉、七水硫酸鎂、七水硫酸亞鐵、四水氯化錳、L-天冬醯胺、甘油、牛肉萃取物、蛋白腖、檸檬酸鐵銨、硫代硫酸鈉、L-酪胺酸、胰水解蛋白、大豆腖、馬鈴薯萃取物、檸檬酸氫二銨、硫酸錳、乙酸鈉、脫脂牛奶蛋白(Skim Milk Protein, SMP)或其組合；更佳地，所述將阿孫鏈黴菌以培養基發酵步驟中，培養基組成物係選自於由酪蛋白、酵母萃取物、麥芽精、右旋葡萄糖、燕麥、磷酸氫二鉀、氯化鈉、硫酸銨、碳酸鈣、可溶性澱粉、七水硫酸鎂、七水硫酸亞鐵、四水氯化錳、L-天冬醯胺、甘油、牛肉萃取物、蛋白腖、檸檬酸鐵銨、硫代硫酸鈉、L-酪胺酸、胰水解蛋白、大豆腖、馬鈴薯萃取物、檸檬酸氫二銨、硫酸錳、乙酸鈉、脫脂牛奶蛋白(Skim Milk Protein, SMP)或其組合。
較佳地，所述將阿孫鏈黴菌以培養基發酵步驟中，培養基包含ISP2[International Streptomyces Project(ISP) medium NO. 2]、ISP5[International Streptomyces Project(ISP) medium NO. 5]或LB(Lysogeny broth)；
較佳地，所述將阿孫鏈黴菌以培養基發酵步驟中，培養基包含1%至5%酪蛋白、0.5%至5%酵母萃取物或其組合。
更佳地，所述將阿孫鏈黴菌以培養基發酵步驟中，培養基包含1.5%至2%酪蛋白、0.5%酵母萃取物或其組合。
較佳地，所述將阿孫鏈黴菌以培養基發酵步驟中，培養基發酵之時間為3至7天；更佳地，所述將阿孫鏈黴菌以培養基發酵步驟中，培養基發酵之時間為5天。
較佳地，所述將該代謝產物以乙酸乙酯萃取步驟中，該代謝產物與乙酸乙酯之比例為3 ：1。
本發明另提供一種阿孫鏈黴菌的代謝產物，由上述方法獲得。
本發明另提供一種上述代謝產物用於殺蚊子的應用。
較佳地，上述蚊子包含蚊科(Culicidae )。
更佳地，上述蚊子包含，但不限於埃及斑蚊(Aedes aegypti )、白線斑蚊(Aedes albopictus )、阿氏斑蚊(Aedes alcasidi )、安氏斑蚊(Aedes annandalei )、帶紋斑蚊(Aedes desmotes )、加氏斑蚊(Aedes gardnerii imitator )、馬氏斑蚊(Aedes malikuli )、巴氏斑蚊(Aedes patriciae )或偽白線斑蚊(Aedes pseudalbopicta )。
本發明另提供一種阿孫鏈黴菌的代謝萃取物，由上述方法所獲得。
本發明另提供一種上述代謝萃取物用於殺蚊子的應用。
本發明另提供一種生物製劑，包含上述的代謝產物以及藥學上可接受之載劑。
較佳地，上述生物製劑為粉劑或液劑。
本發明的優點在於本發明提供一新穎之阿孫鏈黴菌與製備阿孫鏈黴菌之代謝產物與代謝萃取物之方法，將前述黴菌生物發酵以獲得該代謝產物；萃取該代謝產物以獲得該代謝萃取物，兩者皆具殺蚊子的能力，並可用於殺蚊子的應用。將該代謝產物製備成商業可利用之生物製劑，提升殺蚊子之能力，以達成利用微生物之代謝產物殺蚊子之功效。
以下配合圖式及本發明之較佳實施例，進一步闡述本發明為達成預定發明目的所採取的技術手段。
製備例1 新穎阿孫鏈黴菌BT00008 (Streptomyces abikoensis BT00008)菌株鑑定方法
本案新穎菌株為阿孫鏈黴菌BT00008(Streptomyces abikoensis BT00008)，係分離自土壤樣本，再經細胞壁成分比對為Chemotype IC型，係屬於Streptomyces 屬，再依據16S rDNA序列比對結果判定為Streptomyces abikoensis ，寄存於中國典型培養物保藏中心（地址：中國，武漢，武漢大學），寄存編號為CCTCC NO.: M2018126，寄存日期為2018/03/08，以下為菌株之鑑定方法。
1. 細胞壁成分鑑定 以常規之細胞壁鑑定方法鑑定本發明之阿孫鏈黴菌，鑑定方法為本領域之習知技術，於此不再詳述。結果顯示此菌株細胞壁含L-二胺基庚二酸(L-diaminopimelic acid, L-DAP)，全細胞含糖為葡萄糖(Glucose)、甘露糖(Mannose)及核糖(Ribose)，不含特殊糖類，根據Lechevalier等人之分類，屬於Chemotype IC型，由此判斷其為Streptomyces 屬。
2. 培養特性分析 以習知黴菌常用之ISP培養基(ISP medium agar)培養以分析此菌株之特性。在ISP2至ISP5培養基環境下生長，其生長情形、營養菌絲(Substrate mycelia)顏色、氣生菌絲(Aerial mycelia)顏色、產孢情形如表1所示，菌株在ISP4培養基生長及產孢良好，在ISP2及ISP3培養基生長及產孢中等，在ISP5培養基生長中等但不產孢。營養菌絲及氣生菌絲顏色如表1。此菌株在ISPl、ISP6及ISP7均不產生黑色素。
表1 黴菌培養特性分析
Figure 107129524-A0304-0001
3. 細菌菌株16S核醣體RNA (rRNA)鑑定法 萃取獲得該阿孫鏈黴菌BT00008之總DNA，設計一對16S rDNA引子對：正向引子27F: 5’-AgAgTTTgATCMTggCTCAg -3’(F：SEQ ID NO.1)及反向引子1492R: 5’-CggTTACCTTGTTACGACTT -3’(R：SEQ ID NO.2)，進行聚合酶連鎖反應(Poly chain reaction, PCR)，16S rDNA引子對所獲得之產物長度為1514鹼基對(base pair, bp)。增殖後之DNA產物進行核苷酸定序(DNA sequencing)，並以NCBI BLAST之程式進行線上基因庫(GenBank)之查詢與比對，以進行菌屬鑑定。分離萃取的菌株總DNA，以16S rDNA引子對16S rDNA基因進行增幅後，綜合細胞壁成份鑑定與培養特性分析，並參考伯杰氏系統細菌學手冊(Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology)與EzTaxon-e資料庫比對後，可認定此菌株之型態、生理及生化特性最接近阿孫鏈黴菌Streptomyces abikoensis (1514 bp，SEQ ID NO. 3，相似度達100%)。
製備例2 製備阿孫鏈黴菌生長培養基 為進行種菌放大培養與最佳培養基測試，所需之培養基與培養基配方如表2所示，其配製方式為相同領域之人經通常之知識可以獨立完成，因此不再贅述。
表2 培養基與培養配方
ISP 1
Figure 107129524-A0304-0002
ISP 2
Figure 107129524-A0304-0003
ISP 3
Figure 107129524-A0304-0004
ISP 4
Figure 107129524-A0304-0005
ISP 5
Figure 107129524-A0304-0006
ISP 5G
Figure 107129524-A0304-0007
ISP 6
Figure 107129524-A0304-0008
ISP 7
Figure 107129524-A0304-0009
TSB (Tryptic Soy Medium Broth)
Figure 107129524-A0304-0010
TSA(Tryptic Soy Medium Agar)
Figure 107129524-A0304-0011
PDB(Potato Dextrose Broth )
Figure 107129524-A0304-0012
PDA(Potato Dextrose Agar)
Figure 107129524-A0304-0013
MRS
Figure 107129524-A0304-0014
OMB(Oatmeal Broth)
Figure 107129524-A0304-0015
NB (Nutrient Broth)
Figure 107129524-A0304-0016
NA (Nutrient Agar)
Figure 107129524-A0304-0017
NY (Nutrient Yeast Medium)
Figure 107129524-A0304-0018
LB [Miller (Luria-Bertani)]
Figure 107129524-A0304-0019
SMP20YE05
Figure 107129524-A0304-0020
微量鹽溶液1:
Figure 107129524-A0304-0021
微量鹽溶液2：
Figure 107129524-A0304-0022
實施例1 不同培養基之殺蟲效力試驗
阿孫鏈黴菌菌株活化後，取其分生孢子懸浮液，經定量以1%的接種源濃度製備於100 mL的不同培養基中，於30ºC，200 RPM進行培養，分別培養120小時後測試培養基之殺蟲效果。試驗之蚊子為埃及斑蚊品系，分別採卵、飼育幼蟲、採蛹與飼育成蟲，以提供試驗之蟲體。實驗時，取5 mL之一待測液體加入含有30隻三齡幼蟲(孵化後三天)之45 mL曝氣逆滲透水中，控制組則加入該待測液體之培養基5 mL於上述含有30隻三齡幼蟲(孵化後三天)之45 mL曝氣逆滲透水中，以保鮮膜封口後於特定時間觀察各試驗組之死亡蟲數。
結果如圖1所示，圖1為10倍稀釋之經阿孫鏈黴菌發酵5天之培養基，於24小時、48小時與72小時觀察其殺孑孓之能力，從13種培養基(從左到右依序為ISP1、ISP2、ISP3、ISP4、ISP5、ISP5G、LB、NB、NY、MRS、OMB、PDB、TSB)中挑選殺蟲活性較佳的3種培養基，分別為LB、ISP2與ISP5，將此三種培養基以相同條件進行不同時間(3天、5天、7天)培養比較不同稀釋濃度(5倍或10倍)下殺蚊的效果，結果如圖2A-2B，圖2A所示，阿孫鏈黴菌於ISP2培養至第5天其殺蚊效果約為95%，培養時間延長至7天後，其殺蚊效果為70%。而如圖2B所示，ISP5在5倍稀釋下三種培養時間(3天、5天、7天)後的殺蚊效果皆約為90%左右，稀釋至10倍後殺蚊效力約80%。
最後，以如圖2C所示，LB培養基進行發酵以5倍稀釋進行測試，殺蚊效力皆為90%左右，儘管稀釋至10倍，比較3天、5天、7天之發酵時間，皆維持90%以上的殺蚊效果，顯示以此培養基之配方可能可以提供相對穩定之鏈黴菌殺蚊的作用機制。
接著，將製備例1之阿孫鏈黴菌加入LB培養基進行發酵，發酵方法如上所述，獲得一LB發酵液，將該LB發酵液進行埃及斑蚊成蟲與幼蟲之致死效果試驗，經試驗得知LB發酵液對於孑孓的半數致死濃度(LC50 )濃度應為原液稀釋2,879.2倍。
實施例2 阿孫鏈黴菌之代謝產物萃取與殺蚊功效 取製備例1所獲得之阿孫鏈黴菌菌株BT00008，以LB培養基(表2)於5 L發酵槽中進行發酵，設定攪拌速度200 rpm、進氣速率 1 vvm、槽壓 0.5 kg/cm2 、溫度30ºC，發酵時間120小時，獲得一代謝產物。
阿孫鏈黴菌之代謝萃取物 取阿孫鏈黴菌之該代謝產物以真空濃縮機進行濃縮，每次濃縮時取300mL該發酵液濃縮至10mL。將濃縮液加入一百倍體積甲醇萃取過濾雜質，再以減壓濃縮乾燥，獲得一代謝產物甲醇萃取物，甲醇萃取物以十倍體積溶於水中，以等水體積之乙酸乙酯萃取，收集水層減壓濃縮乾燥，獲得一代謝產物水層萃取物；收集乙酸乙酯層減壓濃縮乾燥，獲得一代謝產物乙酸乙酯萃取物，以進行殺蚊主成分分析。
亦將空白之LB培養基以乙酸乙酯萃取，收集水層獲得一LB培養基水層萃取物、收集乙酸乙酯層獲得一LB培養基乙酸乙酯萃取物。如圖3與圖4所示，圖3為比較LB培養基水層萃取物與該代謝產物水層萃取物之殺蚊功效，從結果可得知在該代謝產物水層萃取物濃度為100 ppm時，施予蚊蟲72小時有25%之殺蚊功效，相同濃度之LB培養基水層萃取物接近20%；圖4為比較LB培養基乙酸乙酯萃取物與該代謝產物乙酸乙酯萃取物之殺蚊功效，從結果可得知在該代謝產物乙酸乙酯萃取物濃度為100 ppm時，有50%之殺蚊功效，相同濃度之LB培養基乙酸乙酯萃取物接近20%，綜以上述，有機層與水層皆存在殺蟲物質。將有機層與水層以HPLC分離並以UV圖譜分析。如圖5與圖6所示，於圖5之LB培養基水層萃取物與該代謝產物水層萃取物兩者圖譜之間相似，但於圖6之該代謝產物乙酸乙酯萃取物相對於LB培養基乙酸乙酯萃取物之圖譜有所差異。
實施例3 最適化培養基之調整 在生物活性的測試過程中發現，LB培養基具有影響阿孫鏈黴菌代謝產物活性的能力。因此，希望除去LB培養基本身之干擾，而找出最適化殺蚊與最佳化培養基之平衡點。LB培養基中的組成成分為胰水解蛋白、酵母萃取物與氯化鈉，試驗設計以LB培養基為基底，額外添加等量各組成成分，或加入氮源(硫酸銨、磷酸氫二銨以及硝酸銨)以測試其經實施例2之方法將阿孫鏈黴菌BT00008發酵後之本實施例發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲的死亡率。
試驗結果如表3所示，LB培養基在去除氯化鈉時，埃及斑蚊三齡幼蟲的死亡率與原培養基相似，其他試驗組三齡幼蟲死亡率均下降，根據試驗結果推測，LB培養基成分中的氯化鈉濃度會影響對三齡幼蟲的殺蟲效果，後續培養基將根據此結果設計並調整培養基成分，以降低培養基本身毒殺效果之干擾。
表3 修改LB培養基之本實施例發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲死亡率之影響：
Figure 107129524-A0304-0023
如表4所示，在LB培養基中添加0.5%碳源，測試本實施例發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲的死亡率。試驗結果顯示，若添加0.5%葡萄糖或0.5%甘油於LB培養基中，所得本實施例發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲的死亡率結果相似。添加0.5%麥芽精或0.5%蔗糖，所得本實施例發酵液則有次佳之埃及斑蚊三齡幼蟲死亡率。
此外，若加入0.5%表4之其他碳源如糊精、乳糖及澱粉，則本實施例發酵液與LB培養基發酵液相較之下，失去生物活性並呈現顯著差異。綜合以上結果，推測添加的十種碳源配方對於阿孫鏈黴菌BT00008菌種發酵後所獲得之代謝產物較無顯著提升殺蚊效果。
表4 添加單一碳源培養基之本實施例發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲死亡率之影響：
Figure 107129524-A0304-0024
如表5所示，在LB培養基中添加0.5%氮源，測試本實施例發酵液對對埃及斑蚊三齡幼蟲的死亡率。試驗結果顯示，若添加0.5%蛋白腖、脫脂牛奶蛋白(skim milk protein, SMP)或酵母粉於LB培養基中，所得本實施例發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲的死亡率之結果相似；若加入0.5%天冬醯胺、酪蛋白或是黃豆蛋白(soybean protein, SP)，則其發酵液與LB培養基發酵液相較之下，失去對埃及斑蚊三齡幼蟲的殺蟲效果且呈現顯著差異。
表5 添加單一氮源培養基之本實施例發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲死亡率之影響：
Figure 107129524-A0304-0025
比較表4及表5，添加0.5%碳源或氮源，如提供氮源的蛋白腖、脫脂牛奶蛋白或酵母粉、以及提供碳源的葡萄糖與甘油添加於LB培養基中，其發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲死亡率具有效果，對於發酵培養基成分的選擇，再次設計不同組合之培養基配方，以期能提高發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲之殺蟲能力，培養基修改配方與觀察數據整理如表6。
如表6所示，11種修改配方在第48小時殺蚊能力明顯不同，LB培養基添加不同比例甘油，其發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲之死亡率隨甘油濃度於培養基中比例提升而上升；酪蛋白＋酵母萃取物或脫脂牛奶蛋白(SMP)＋酵母萃取物對蚊蟲死亡率亦有提升效果。第72小時觀察結果更具顯著差異性。上述觀察結果發現至少有七種培養基具有更好之殺蟲效果。
表6、LB添加配方之本實施例發酵液對埃及斑蚊三齡幼蟲死亡率之影響：
Figure 107129524-A0304-0026
以上所述僅是本發明的較佳實施例而已，並非對本發明做任何形式上的限制，雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然而並非用以限定本發明，任何熟悉本專業的技術人員，在不脫離本發明技術方案的範圍內，當可利用上述揭示的技術內容作出些許更動或修飾為等同變化的等效實施例，但凡是未脫離本發明技術方案的內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬於本發明技術方案的範圍內。
(無)
圖1為不同培養基經阿孫鏈黴菌發酵後之殺蚊能力柱狀圖； 圖2為ISP2、ISP5及LB不同培養基於不同時間之殺蚊能力柱狀圖；圖2A為ISP2培養基，圖2B為ISP5培養基，圖2C為LB培養基； 圖3為LB培養基水層萃取物與該代謝產物水層萃取物之殺蚊能力柱狀圖； 圖4為LB培養基乙酸乙酯萃取物與該代謝產物乙酸乙酯萃取物之殺蚊能力柱狀圖； 圖5為不同萃取物UV圖譜分析；圖5A為LB培養基水層萃取物之UV圖譜，圖5B為該代謝產物水層萃取物之UV圖譜； 圖6為不同萃取物UV圖譜分析；圖6A為LB培養基乙酸乙酯萃取物之UV圖譜，圖6B為該代謝產物乙酸乙酯萃取物之UV圖譜。
CN中國大陸；中國典型培養物保藏中心；2018/03/08；CCTCC NO.:M2018126
＜110＞ 百泰生物科技股份有限公司 ＜120＞ 阿孫鏈黴菌、其代謝產物、其製備方法及其殺蚊子的應用 ＜130＞ P120793 ＜150＞CN 201810749226.X ＜151＞2018-07-10 ＜160＞ 3 ＜170＞ PatentIn 第3.5版 ＜210＞ 1 ＜211＞ 25 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 16S rDNA正向引子 ＜400＞ 1 agtttgatcc tggctcagga cgaac 25 ＜210＞ 2 ＜211＞ 25 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 16S rDNA反向引子 ＜400＞ 2 aaggaggtga tccagccgca ccttc 25 ＜210＞ 3 ＜211＞ 1514 ＜212＞ DNA ＜213＞ 阿孫鏈黴菌( Streptomyces abikoensis) ＜220＞ ＜221＞ misc_feature ＜222＞ (164)..(186) ＜223＞ y是c或t；k是g或t；s是c或g；r是a或g且m是a或c ＜400＞ 3 agtttgatcc tggctcagga cgaacgctgg cggcgtgctt aacacatgca agtcgaacga 60 tgaagccctt cggggtggat tagtggcgaa cgggtgagta acacgtgggc aatctgccct 120 gcactctggg acaagccctg gaaacggggt ctaataccgg ataygaccks ysrmygcats 180 kykgskggtg gaaagctccg gcggtgcagg atgagcccgc ggcctatcag cttgttggtg 240 gggtgatggc ctaccaaggc gacgacgggt agccggcctg agagggcgac cggccacact 300 gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg 360 gcgaaagcct gatgcagcga cgccgcgtga gggatgacgg ccttcgggtt gtaaacctct 420 ttcagcaggg aagaagcgaa agtgacggta cctgcagaag aagcgccggc taactacgtg 480 ccagcagccg cggtaatacg tagggcgcaa gcgttgtccg gaattattgg gcgtaaagag 540 ctcgtaggcg gcttgtcgcg tcggatgtga aagcccgggg cttaaccccg ggtctgcatt 600 cgatacgggc aggctagagt tcggtagggg agatcggaat tcctggtgta gcggtgaaat 660 gcgcagatat caggaggaac accggtggcg aaggcggatc tctgggccga tactgacgct 720 gaggagcgaa agcgtgggga gcgaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac 780 gttgggaact aggtgtgggc gacattccac gtcgtccgtg ccgcagctaa cgcattaagt 840 tccccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct aaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca 900 caagcagcgg agcatgtggc ttaattcgac gcaacgcgaa gaaccttacc aaggcttgac 960 atacaccgga aacggccaga gatggtcgcc cccttgtggt cggtgtacag gtggtgcatg 1020 gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg 1080 tcctgtgttg ccagcatgcc cttcggggtg atggggactc acaggagact gccggggtca 1140 actcggagga aggtggggac gacgtcaagt catcatgccc cttatgtctt gggctgcaca 1200 cgtgctacaa tggccggtac aatgagctgc gatgccgtga ggtggagcga atctcaaaaa 1260 gccggtctca gttcggattg gggtctgcaa ctcgacccca tgaagttgga gttgctagta 1320 atcgcagatc agcattgctg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1380 cgtcacgaaa gtcggtaaca cccgaagccg gtggcccaac ccttgtggag ggagccgtcg 1440 aaggtgggac tggcgattgg gacgaagtcg taacaaggta gccgtaccgg aaggtgcggc 1500 tggatcacct cctt 1514

Claims (12)

  1. 一種阿孫鏈黴菌菌株，其特徵在於，所述菌株係寄存於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO.: M2018126。
  2. 一種如請求項1所述之阿孫鏈黴菌菌株用於殺蚊子的應用。
  3. 一種製備阿孫鏈黴菌之代謝萃取物的方法，其特徵在於，所述方法包含以下步驟： 將阿孫鏈黴菌菌株以培養基發酵，獲得一代謝產物； 將該代謝產物以乙酸乙酯萃取，獲得一代謝萃取物。
  4. 如請求項3所述之方法，其特徵在於，所述培養基包含酪蛋白、酵母萃取物、酵母粉、麥芽精、右旋葡萄糖、蔗糖、燕麥、磷酸氫二鉀、氯化鈉、硫酸銨、碳酸鈣、可溶性澱粉、七水硫酸鎂、七水硫酸亞鐵、四水氯化錳、L-天冬醯胺、甘油、牛肉萃取物、蛋白腖、檸檬酸鐵銨、硫代硫酸鈉、L-酪胺酸、胰水解蛋白、大豆腖、馬鈴薯萃取物、檸檬酸氫二銨、硫酸錳、乙酸鈉、脫脂牛奶蛋白或其組合。
  5. 如請求項4所述之方法，其特徵在於，所述方法中以培養基發酵之時間為3至7天。
  6. 如請求項5所述之方法，其特徵在於，所述培養基係選自LB、甘油、脫脂牛奶蛋白、1%至5%酪蛋白、0.5%至5%酵母萃取物及其組合。
  7. 一種阿孫鏈黴菌的代謝產物，其特徵在於，所述代謝產物由如請求項1中的阿孫鏈黴菌菌株以培養基發酵所獲得。
  8. 一種如請求項7所述的代謝產物用於殺蚊子的應用。
  9. 一種阿孫鏈黴菌的代謝萃取物，其特徵在於，所述代謝萃取物由如請求項3中所述之方法所獲得。
  10. 一種如請求項9所述的代謝萃取物用於殺蚊子的應用。
  11. 一種生物製劑，其特徵在於，所述生物製劑包含如請求項7所述的代謝產物以及藥學上可接受之載劑。
  12. 如請求項11所述之生物製劑，其特徵在於，所述生物製劑為粉劑或液劑。
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