TW201934137A - 含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物及其製備方法 - Google Patents

含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物及其製備方法 Download PDF

Info

Publication number
TW201934137A
TW201934137A TW108103672A TW108103672A TW201934137A TW 201934137 A TW201934137 A TW 201934137A TW 108103672 A TW108103672 A TW 108103672A TW 108103672 A TW108103672 A TW 108103672A TW 201934137 A TW201934137 A TW 201934137A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
pharmaceutical composition
composition according
human insulin
insulin
integer
Prior art date
Application number
TW108103672A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI740099B (zh
Inventor
楊曉容
Original Assignee
大陸商江蘇恒瑞醫藥股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商江蘇恒瑞醫藥股份有限公司 filed Critical 大陸商江蘇恒瑞醫藥股份有限公司
Publication of TW201934137A publication Critical patent/TW201934137A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI740099B publication Critical patent/TWI740099B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本發明提供了一種含人胰島素類似物的組合物。具體而言，本發明提供了一種含人胰島素類似物的醯化衍生物的組合物，所述醯化衍生物組合物相較於已有的胰島素類似物及其醯化衍生物組合物更加穩定。

Description

含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物及其製備方法
本申請要求申請日為2018年2月1日的中國專利申請CN201810099660.8的優先權。本申請引用上述中國專利申請的全文。
本發明是關於一種含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物及其製備方法。
人胰島素是治療糖尿病的一種主要藥物，但是人胰島素作用時間較短，使得病人必須頻繁注射，極為不便。因此，人們致力於獲得一些半衰期更長，能夠長時間作用於人體的胰島素類似物及其衍生物。其中，使用醯化基團修飾人胰島素或其類似物，是一種提高胰島素半衰期的有效方法。本申請人的專利申請PCT/CN2017/095377提供了一種B29位被長鏈脂肪酸取代的B30位胺基酸缺失的人胰島素類似物，公開了該人胰島素類似物的結構和生物活性。WO9507931公開了一種B29位連接一個十四醯基側鏈的B30位胺基酸缺失的胰島素 [即Des(30)人胰島素] 類似物及其製劑。WO2005012347公開了一種B29位被一個穀胺酸和長鏈脂肪酸取代的B30位胺基酸缺失的人胰島素類似物，WO2007074133公開了上述胰島素類似物的製劑，該專利中公開LysB29（Nε-十六烷二醯基-γ-穀胺醯基脫（B30））人胰島素（德谷胰島素）製劑中含有氯化鈉，但在FDA公開的資料（https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/nda/2015/203313Orig1s000_203314Orig 1s000PharmR.pdf）中顯示氯化鈉會導致德谷胰島素的系統暴露量降低。為了解決上述問題，在德谷胰島素的上市產品製劑中去除了氯化鈉。
胰島素系統暴露量的降低導致能夠確實發揮作用的胰島素量減少，進而降低其降血糖效果，本發明驚奇地發現對於本發明中的胰島素醯化衍生物，含有氯化鈉的液體製劑不但可以降低高分子聚合物的產生，而且不影響胰島素降低血糖的效果。
本發明提供了一種含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物，所述人胰島素類似物的醯化衍生物具有如以下通式I所示的結構：
S-W-X-Y-Z
（I）
其中S為B鏈第30位蘇胺酸缺失（B鏈缺失如SEQ ID NO.2所示）的人胰島素 [即Des(B30)人胰島素]；-W-X-Y-Z為胰島素類似物的醯化修飾基團；
其中W為具有-OC(CH2 )n CO-的二醯基結構，其中n為2-10之間整數，該結構以其醯基之一和母體胰島素或其類似物的A-鏈（其序列如SEQ ID NO.1所示）或B-鏈N-末端胺基酸殘基的α-胺基或B-鏈上存在的賴胺酸殘基的ε-胺基形成醯胺鍵；
X為含羧酸基團的二胺基化合物，該化合物以其胺基之一與W中的一個醯基連接形成醯胺鍵；
Y為-D(CH2 )m -，其中m為6-32的整數，優選10-16的整數，特別優選12-14的整數，D不存在或為CO-；
Z為-COOH；
還包含選自穩定劑，防腐劑，pH調節劑，滲透壓調節劑的至少一種成分。
優選地，W與B-鏈上存在的賴胺酸殘基的ε-胺基形成醯胺鍵。優選地，n為2～5之間的整數，優選2。
B鏈第30位蘇胺酸缺失的人胰島素，是一種人胰島素類似物，其A、B鏈的胺基酸序列如下所示：
A鏈：GIVEQCCTSICSLYQLENYCN SEQ ID NO.1
B鏈：FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPK SEQ ID NO.2。
X代表的含羧酸基團的二胺基化合物可以為-HN(CH2 )pCH(COOH)NH-，其中p為2-10的整數，優選2-6的整數，特別優選2-4的整數，最優選4。
在本發明特別優選的實施方式中，-W-X-Y-Z具有如下結構：
（IIa），
優選
（IIb）。
本發明中特別優選的人胰島素類似物的醯化衍生物可依習慣命名為Nα -(HOOC(CH2 )14 CO)-Nε -(OCCH2 CH2 CO-(NεB29 -Des(B30)人胰島素))-Lys-OH或者B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素，其具有如下式（Ia）的具體結構，
（Ia）
更優選地，其具有式（Ib）所示的結構。

（Ib）
在本發明特別優選的實施方案中，人胰島素類似物的醯化衍生物與鋅形成複合物，所述的複合物是一種人胰島素類似物的醯化衍生物的6聚體，其中每個6聚體中包含多於4個鋅原子，即6分子醯化胰島素包含多於4個鋅原子；更優選5至8個鋅原子，特別優選5個鋅原子。
本發明優選的實施方案中，所述穩定劑選自但不限於氯化鈉，優選的氯化鈉的濃度為5-20mM，更優選5mM，6mM，7mM，8mM，9mM，10mM，11mM，12mM，13mM，14mM，15mM，20mM，最優選10mM。當本發明中提及氯化鈉的濃度時，所述濃度是指氯化鈉在終產品中的濃度。
本發明的另一個實施方案中，所述防腐劑選自但不限於苯酚和/或間甲酚；所述pH調節劑選自酸和/或鹼，優選但不限於鹽酸和/或氫氧化鈉；所述滲透壓調節劑選自但不限於甘油和/或甘露醇。
本發明的一些實施方案中，所述的鋅可以是任何一種鋅鹽，優選醋酸鋅。
本发明优选的实施方案中，所述的组合物包含：
0.1%-0.5%含量的賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素，優選0.3%-0.4%；
0.05%-0.5%含量的苯酚，優選0.1%-0.2%；
0.05%-0.5%含量間甲酚，優選0.1%-0.2%；
1%-3%含量的甘油，優選1.5%-2%；
0.01%-0.2%的氯化鈉，優選0.05%-0.06%；
每6分子醯化胰島素包含多於4個鋅原子；
pH調節劑和注射用水。
優選的pH值為6-8，更優選的pH值為7.4-7.8，最優選pH值為7.6。
本發明中的含量指以組合物的總體積計算，每種組份佔組合物的總體積的質量（g）體積（100 mL）分數，例如0.05%含量指100 mL溶液中含有0.05g的物質，其他的含量以此類推。
本發明優選的實施方案中，所述的組合物包含：
賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素 3.72mg；
苯酚 1.5mg；
間甲酚 1.72mg；
甘油 19.6mg；
氯化鈉 0.58mg；
醋酸鋅 109.76μg；
氫氧化鈉；鹽酸；用注射用水補足至1 mL。
優選的pH值為6-8，更優選的pH值為7.4-7.8，最優選pH值為7.6。
本發明的一個實施方案中，進一步還含有藥學上可接受的載體。
本發明的一些實施方案中，所述的組合物除含有上述人胰島素類似物的醯化衍生物外，還可以含有速效胰島素。所述速效胰島素，又稱作超短效胰島素，注射後起效時間迅速，皮下注射後10-15分鐘起效，達峰時間為1-2小時，持續時間為4-6小時。本領域常規的速效胰島素如門冬胰島素（例如諾和銳）、賴脯胰島素（例如優泌樂）。
本發明還提供上述的藥物組合物的製備方法，所述方法包含將所述的人胰島素類似物的醯化衍生物與選自穩定劑、防腐劑、pH調節劑、滲透壓調節劑的任意一種或多種混合的步驟。
本發明還提供前述藥物組合物在製備治療糖尿病的藥物中的用途。
本發明中所述藥物組合物的具體給藥劑型不需進行限定。
另外，本發明提供了一種治療糖尿病的方法，所述方法包括對需要治療的患者給予前述的人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物。
本發明中防腐劑與抑菌劑可以表示相同的意義。
通過以下實施例和實驗例進一步詳細說明本發明。這些實施例和實驗例僅用於說明性目的，而並不用於限制本發明的範圍。本發明實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照有利於生產的常規條件或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。
實施例1：賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素的製備
1、Nα -(十六烷脂肪二酸)-Nε -(3-醯基丙酸-OSu)賴胺酸的製備
取X01（150 g，524.5 mmol），室溫下加入乾燥的THF（2.5 L），隨後加入催化量的DMF（1.0 mL），將草醯氯（49 mL）加入到100 mL的恆壓滴液漏斗中，將草醯氯緩慢滴加到反應瓶中，期間有氣體生成，需不斷放氣，約滴加兩小時。滴加完畢後，室溫攪拌1.5h，隨後減壓旋乾THF，向反應瓶中加入DCM（800 mL）和三級丁醇（500 mL），室溫下攪拌過夜。旋乾三級丁醇和二氯甲烷，加入二氯甲烷（1L），過濾，除去不溶固體。濾液旋乾過柱。收集所需成分，旋乾，石油醚重結晶，得54g產品X02，同時回收二三級丁酯產物X03。
將X02（28.5g，83.3mmol）溶於DCM（200 mL）中，室溫下加入N-羥基丁二醯亞胺（5.54 g，48.1 mmol）和二異丙基碳二醯亞胺（7.6 mL），室溫攪拌1天，TLC顯示基本反應完全。過濾，除去不溶固體，減壓旋乾溶劑，柱層析純化，得28.5g X04。
將X04（22g，50.1mmol）溶於乾燥的THF（250 mL）中，室溫攪拌，賴胺酸衍生物（20.5 g，55 mmol）和三乙胺（21 mL）分別加入到反應體系中，室溫攪拌24h。矽藻土過濾，THF洗滌三次，旋乾溶劑，柱層析純化，得31 g產物X11。
將X11（30.6 g，46.3mmol）溶於無水乙醇（200 mL）中，室溫攪拌，加入6.0 g 10% Pd/C，隨後通入氫氣，室溫劇烈攪拌反應過夜。矽藻土抽濾，無水乙醇洗滌三次，濾液旋乾，得24.5g X12粗品，直接用於下一步反應。
將X12（24 g，45.6 mmol）溶於乾燥THF（200 mL）中，加入三乙胺（12.7 mL），隨後降溫至0℃。將丁二酸酐（5.2g，52mmol）分批加入到反應體系中，0℃下繼續攪拌30 min，隨後轉移至室溫攪拌過夜。減壓旋乾THF，剩餘物溶於二氯甲烷（500 mL）中，用5%檸檬酸水溶液（500 mL*2）洗滌2次，飽和食鹽水洗滌1次，無水硫酸鈉乾燥。減壓旋乾溶劑，得29.0g X13粗品，直接用於下一步反應。
將X13（28.5 g，45.5 mmol）溶於DCM（200 mL）中，室溫下加入N-羥基丁二醯亞胺（5.54 g，48.2 mmol）和二異丙基碳二醯亞胺（7.6 mL），室溫攪拌1天，TLC顯示基本反應完全。過濾，除去不溶固體，減壓旋乾溶劑，柱層析純化，得28.5g產品X14。
將X14（3.0 g，4.1 mmol）溶於三氟乙酸（15 mL）中，室溫攪拌45 min，隨後低溫減壓旋乾三氟乙酸，加入無水乙醚，有固體析出，過濾，濾餅用無水乙醚洗滌三次，固體乾燥後，得1.8 g產品X15。
2、賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素的製備
取B鏈第30位蘇胺酸缺失的人胰島素53 mg（8 mg/mL，50mM Tris HCl pH8.5 緩衝液），用1.5 M Na2 CO3 調節pH至約10.75，後用緩衝液（50 mM Tris HCl pH8.5 緩衝液）定容至4 mg/mL。將Nα -(十六烷脂肪二酸)-Nε -(3-醯基丙酸-OSu)賴胺酸（18 mg）懸浮於7 mL乙腈後，每隔15min將1.75 mL本溶液加入到上述B鏈第30位蘇胺酸缺失的人胰島素溶液中開始反應，分4次加完，同時攪拌。加完後開始計時，反應1h後，用乙酸將溶液pH調節至約7.5，終止反應，獲得粗品溶液。採用RP-HPLC對反應過程進行中控。
3、賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素的純化
將上述前體粗品溶液加入水稀釋使有機相含量約15%（v:v），用0.45μm濾膜過濾後採用RP-HPLC對其進行純化得純化液。
4、賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素的超濾及凍乾
將上述純化溶液用超濾膜包系統將樣品置換至注射用水中，進行凍乾獲得凍乾產物26mg。所得分子結構式如下。
式（Ib）
5、賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素結構確證
賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素實測質譜分子量為6203.37Da，與理論分子量6203.21Da一致。
用V8蛋白酶對目標產物進行酶解，並對酶解產物進行LC-MS分析，結果顯示共產生4個肽段，肽段分子量分別為416.23Da（A1-A4）、2968.29Da（A5-A17，B1-B13）、1376.57Da（A18-A21，B14-B21）和1510.84Da（B22-B29），與理論肽段分子量相符，其中肽段B22-B29為脂肪酸鏈修飾的肽段，採用LC-MS/MS法對B22-B29肽段進行二級質譜分析，質譜結果確證了Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基的修飾位點為B29位賴胺酸（詳見下表），另外採用Edman降解法對B鏈胺基酸進行序列測定時，B29位賴胺酸由於被修飾，導致第29個循環不能與標準胺基酸峰對應，該實驗結果與預期相符。上述實驗結果共同確證了修飾位點和預期一致。

B22-B29肽段的二級質譜b/y離子示意
B22-B29肽段的二級質譜b/y離子表
實施例2：INS-C注射液的製備
實施例中的INS-C代表賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素。
INS-C注射液處方如下：
註：醋酸鋅分子式：C4 H6 O4 Zn•2H2 O
按照處方中的輔料含量分別配製輔料溶液備用。
將輔料與處方量的INS-C原料藥混合，補充注射用水至目標體積的90%，用NaOH溶液或HCl溶液調節pH至7.4-7.8，目標pH為7.6，注射用水加至全量，混勻。
取樣檢驗性狀、pH、INS-C含量、苯酚含量和間甲酚含量。各指標限度如下：性狀：無色的澄明液體；pH為7.4-7.8；INS-C含量：97.0%-103.0%；苯酚含量：1.46-1.55 mg/mL；間甲酚含量：1.67-1.77 mg/mL。
用0.22 μm PVDF膜過濾，濾液按每瓶1.1mL裝量灌裝於2 mL中性硼矽玻璃管制注射劑瓶中，裝量範圍1.05 mL-1.15 mL，加塞，軋蓋。灌裝過程中對裝量進行監測，過濾前後對濾芯進行完整性測試，燈檢，包裝。
實施例3：INS-C注射液中氯化鈉濃度的篩選
實施例中的INS-C代表賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε- 氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素。
處方訊息如下：
評價氯化鈉對組合物穩定性的影響試驗，結果如下。
表1 氯化鈉對組合物穩定性的影響
表1中顯示，氯化鈉可減少高分子聚合物的形成，也可減少其它雜質的形成，提高活性物質的穩定性。
實施例4：INS-C注射液與德谷胰島素注射液穩定性對比
實施例中的INS-C代表賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素。
INS-C注射液與德谷胰島素注射液處方訊息如下：
A、加速試驗
將德谷胰島素注射液與INS-C注射液中試3批樣品，於加速試驗條件25℃±2℃下放置，分別於第0、1、2、3、6個月取樣進行測定，考察各指標。
B、長期試驗
將德谷胰島素注射液與INS-C注射液中試3批樣品，於低溫5℃±3℃條件下長期放置，於第3、6、9、12、18、24、36個月取樣進行測定，定時取樣測定，德谷胰島素注射液的考察起始點是以其出廠時間計算。
表2 德谷胰島素注射液與INS-C注射液起始檢驗結果
備註：外觀均是無色澄明液體。

表3 德谷胰島素注射液與INS-C注射液加速穩定性25℃±2℃考察結果
備註：INS-C注射液正置樣品穩定性考察結果與倒置樣品穩定性考察結果無明顯差異，此處只列出倒置（相對劇烈）條件考察結果。其中，外觀均是無色澄明液體。

表4 德谷胰島素注射液與INS-C注射液長期穩定性（5℃±3℃）考察結果
備註：INS-C注射液正置樣品穩定性考察結果與倒置樣品穩定性考察結果無明顯差異，此處只列出倒置（相對劇烈）條件考察結果。其中，外觀均是無色澄明液體。
實施例5：考察INS-C注射液與德谷胰島素注射液在STZ誘導的I型糖尿病模型上的降血糖作用
實施例中的INS-C代表賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素。
1、供試品
2、供試品配製
供試品避光保存在4℃條件下，劑量為7.5 nmol/kg。使用時藥物恢復至室溫。
3、實驗動物
4、實驗方法
SPF級大鼠實驗室環境飼養7天，均以標準飼料、標準籠餵養，溫度20-25℃，濕度40-60%。造模前一天，大鼠禁食16小時，腹腔快速注射STZ (65 mg/kg)，1小時後，恢復給食。造模後每日給予充足飲水（提供正常的2-3倍的飲水量）、食物，每日換墊料1-2次，保持乾燥。在第五天測量空腹血糖（禁食6小時），挑出血糖值＞16.7 mmol/L的大鼠。根據血糖程度隨機分為5組。動物分組及給藥訊息如下：
給藥前不禁食，單次皮下注射各藥物，對照組用去除INS-C但包含INS-C處方其它成分的溶液，注射相同體積，給藥後全程禁食。給藥後1、2、4、6、8、10、12、24小時測定大鼠血糖值。
所有的數據被錄入到Excel文檔中，並以Mean ± SEM的方式表示。數據統計分析使用SPSS軟體，單因素或雙因素方差分析比較方法，以P ＜0.05作為顯著性差異的判斷標準。
5、結果
對照組基礎血糖值給藥前為26.6 mmol/L，給藥後其血糖值逐步降低，24小時後達到10.1 mmol/L，血糖變化值為15.5 mmol/L。陽性藥德谷胰島素組給藥前後血糖值變化為20.1 mmol/L。陽性藥物德谷胰島素組給藥後1、2、4、6、8、10和12小時時間點，其血糖程度與對照組比較都具有顯著性差異，表明該動物模型及實驗方法的有效性。
與對照組比較，受試藥物INS-C在給藥後24小時內能顯著降低動物的血糖程度，從血糖值來看，受試藥物的血糖值3.9±0.6 mmol/L）低於對照組（10.1±3.3 mmol/L），同時也低於德谷胰島素（6.4±1.4 mmol/L ），這表明INS-C注射劑具有較良好的長效降糖作用。比較了各組在0-24小時內降低血糖的差異性，具體數值如表5所示：
表5 單次給藥對STZ誘導的I型糖尿病大鼠血糖的影響

註：對照組、德谷胰島素組：N=10，INS-C組：N=9; **P＜0.01 vs對照組
按照同樣的實驗方法，對比不含氯化鈉的INS-C注射液和德谷胰島素注射液對大鼠降糖作用的影響，結果顯示其與上述實驗呈現基本相同的降糖曲線，證明有無氯化鈉對INS-C的暴露量幾乎沒有影響。
實施例6：考察含及不含氯化鈉的製劑及含氯化鈉的製劑室溫放置20小時後在正常大鼠中的藥代動力學特性
實驗動物
1、實驗方法：SD大鼠在動物房環境適應5天，均以標準飼料、標準籠餵養，溫度20-25℃，濕度40-60%。給藥前按體重隨機分為三組，分組訊息如下：
組1和組2：給藥前將不含或含氯化鈉的INS-C製劑（600 nmol/mL）用空白溶媒稀釋至50 nmol/mL；組3：將含氯化鈉的INS-C製劑（600 nmol/mL）在避光、室溫環境下放置20小時後，給藥前再用空白溶媒稀釋至50 nmol/mL，其中含氯化鈉組的氯化鈉濃度為0.58 mg/mL。給藥前不禁食，單次皮下注射各受試藥物。每隻動物在給藥前及給藥後0.5、1、2、4、8、12和24小時經頸靜脈穿刺採血約0.2 mL/時間點，置於含促凝劑的試管中，採集後放置於標記好的離心管中，離心分離血清（離心條件：5000轉/分鐘，10分鐘，2-8℃）。
血清樣品採用LC-MS/MS法測定藥物濃度，計算主要的藥代參數，並採用student t test檢驗統計學差異。
2、實驗結果：以各時間點平均血藥濃度（個體血藥濃度詳見表7）為縱座標、時間點為橫座標作圖，得血藥濃度-時間曲線（圖8）。結果表明，受試藥物在3組動物體內的濃度隨時間變化的趨勢基本一致。各主要藥代參數詳見表6，結果顯示各組間主要藥代參數基本一致，無統計學差異。
實驗結果表明製劑中加入氯化鈉後對其在大鼠體內的藥代性質無明顯影響；室溫放置20小時對受試藥物的藥代性質也無明顯影響。
表6 SD大鼠給藥後主要藥代參數（Mean±SD）

表7 SD大鼠給藥後個體血藥濃度（ng/mL）
雖然以上描述了本發明的具體實施方式，但是本領域的技術人員應當理解，這些僅是舉例說明，在不背離本發明的原理和實質的前提下，可以對這些實施方式做出多種變更或修改。因此，本發明的保護範圍由所附申請專利範圍限定。
無
圖1是德谷胰島素注射液與INS-C注射液加速穩定性25℃±2℃考察結果- RRT1.05雜質。
圖2是德谷胰島素注射液與INS-C注射液加速穩定性25℃±2℃考察結果- 其它總雜質。
圖3是德谷胰島素注射液與INS-C注射液加速穩定性25℃±2℃考察結果- 高分子蛋白質。
圖4是德谷胰島素注射液與INS-C注射液長期穩定性（5℃±3℃）考察結果- RRT1.05雜質。
圖5是德谷胰島素注射液與INS-C注射液長期穩定性（5℃±3℃）考察結果-其它總雜質。
圖6是德谷胰島素注射液與INS-C注射液長期穩定性（5℃±3℃）考察結果- RRT1.05雜質高分子蛋白質。
圖7是顯示0-24小時內STZ 大鼠給藥後血糖值變化曲線。
圖8是顯示SD大鼠給藥後血藥濃度-時間曲線。

Claims (14)

  1. 一種含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物，其中所述含人胰島素類似物的醯化衍生物具有如下通式I如示的結構： S-W-X-Y-Z （I） 其中S為B鏈第30位蘇胺酸缺失的人胰島素；-W-X-Y-Z為胰島素類似物的醯化修飾基團； 其中W為具有-OC(CH2 )n CO-的二醯基結構，其中n為2-10之間整數，該結構以其醯基之一和母體胰島素或其類似物的A-鏈或B-鏈的N-末端胺基酸殘基的α-胺基或B-鏈上存在的賴胺酸殘基的ε-胺基形成醯胺鍵； X為含羧酸基團的二胺基化合物，該化合物以其胺基之一與W中的一個醯基連接形成醯胺鍵； Y為-D(CH2 )m -，其中m為6-32的整數，優選10-16的整數，特別優選12-14的整數，D不存在或為CO-； Z為-COOH； 所述的組合物還包含選自穩定劑、防腐劑、pH調節劑、滲透壓調節劑的至少一種成分。
  2. 如請求項1所述的藥物組合物，其中W與B-鏈上存在的賴胺酸殘基的ε-胺基形成醯胺鍵。
  3. 如請求項1或2所述的藥物組合物，其中n為2-5之間的整數，優選2。
  4. 如請求項1至3中任一項所述的藥物組合物，其中X為-HN(CH2 )p CH(COOH)NH-，p為2-10的整數，優選2-6的整數，特別優選2-4的整數，最優選4。
  5. 如請求項1至4中任一項所述的藥物組合物，其中-W-X-Y-Z具有如下結構：（IIa）， 優選為（IIb）。
  6. 如請求項1至5中任一項所述的藥物組合物，其中所述含人胰島素類似物的醯化衍生物與鋅形成複合物；優選地，其中每6分子醯化胰島素包含多於4個鋅原子。
  7. 如請求項1至6中任一項所述的藥物組合物，其中所述穩定劑選自氯化鈉，優選的氯化鈉的濃度為5-20mM，更優選10mM。
  8. 如請求項1至7中任一項所述的藥物組合物，其中所述防腐劑選自苯酚和/或間甲酚；所述pH調節劑選自酸和/或鹼；所述滲透壓調節劑選自甘油和/或甘露醇。
  9. 如請求項8所述的藥物組合物，包含如下組分： 0.1%-0.5%含量的賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素，優選0.3%-0.4%； 0.05%-0.5%含量的苯酚，優選0.1%-0.2%； 0.05%-0.5%含量間甲酚，優選0.1%-0.2%； 1%-3%含量的甘油，優選1.5%-2%； 0.01%-0.2%的氯化鈉，優選0.05%-0.06%； 每6分子所述胰島素包含多於4個鋅原子； pH調節劑和注射用水，優選的pH值為6-8，更優選的pH值為7.4-7.8。
  10. 如請求項8所述的藥物組合物，其包含如下組分： 賴胺酸B29 (Nε -(Nα -十六烷脂肪二酸-L-賴胺酸-Nε -氧代丁醯基))Des(B30)人胰島素 3.72mg ； 苯酚 1.5mg； 間甲酚 1.72mg； 甘油 19.6mg； 氯化鈉 0.58mg； 醋酸鋅 109.76μg； 氫氧化鈉；鹽酸；用注射用水補足至1ml，優選pH值為6-8，更優選pH值為7.4-7.8，最優選pH值為7.6。
  11. 如請求項1至10中任一項所述的藥物組合物，還含有速效胰島素。
  12. 一種如請求項1至10中任一項所述的藥物組合物的製備方法，所述方法包含將胰島素類似物的醯化衍生物與選自穩定劑、防腐劑、pH調節劑、滲透壓調節劑中任意一種或多種混合的步驟。
  13. 一種如請求項1至11中任一項所述的藥物組合物在製備治療糖尿病的藥物中的用途。
  14. 一種治療糖尿病的方法，所述方法包括對需要治療的患者給予請求項1至11中任一項所述的藥物組合物。
TW108103672A 2018-02-01 2019-01-31 含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物及其製備方法 TWI740099B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810099660 2018-02-01
CN201810099660.8 2018-02-01
??201810099660.8 2018-02-01

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201934137A true TW201934137A (zh) 2019-09-01
TWI740099B TWI740099B (zh) 2021-09-21

Family

ID=67479603

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108103672A TWI740099B (zh) 2018-02-01 2019-01-31 含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物及其製備方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20210040171A1 (zh)
EP (1) EP3747896A4 (zh)
JP (1) JP2021512124A (zh)
KR (1) KR20200116130A (zh)
CN (1) CN111315766B (zh)
AU (1) AU2019214159A1 (zh)
BR (1) BR112020015457A2 (zh)
CA (1) CA3090199A1 (zh)
MX (1) MX2020008129A (zh)
TW (1) TWI740099B (zh)
WO (1) WO2019149245A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116583531A (zh) * 2020-11-27 2023-08-11 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种制备胰岛素或其类似物的酰化衍生物的方法
CN115385843A (zh) * 2021-05-24 2022-11-25 广东东阳光药业有限公司 一种新型的酰化胰岛素类似物

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030072737A1 (en) * 2000-12-29 2003-04-17 Michael Brines Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs
CN101389650B (zh) * 2005-12-28 2012-10-10 诺沃-诺迪斯克有限公司 包含酰化胰岛素和锌的组合物以及制备所述组合物的方法
RU2572214C2 (ru) * 2010-05-10 2015-12-27 Ново Нордиск А/С Способ получения цинковых комплексов инсулина
BR112014013483A2 (pt) * 2011-12-15 2019-09-24 Jiangsu Hengrui Medicine Co análogo de insulina humana e derivado acilado do mesmo
US9856292B2 (en) * 2014-11-14 2018-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Immunomodulators
CN106496322A (zh) * 2015-09-07 2017-03-15 江苏恒瑞医药股份有限公司 人胰岛素或其类似物的酰化衍生物的制备方法
JP7432361B2 (ja) * 2016-08-02 2024-02-16 江蘇恒瑞医薬股▲ふん▼有限公司 ヒトインスリンまたはそのアナログのアシル化誘導体

Also Published As

Publication number Publication date
CN111315766A (zh) 2020-06-19
KR20200116130A (ko) 2020-10-08
EP3747896A1 (en) 2020-12-09
CA3090199A1 (en) 2019-08-08
WO2019149245A1 (zh) 2019-08-08
MX2020008129A (es) 2020-09-18
JP2021512124A (ja) 2021-05-13
TWI740099B (zh) 2021-09-21
CN111315766B (zh) 2023-05-12
US20210040171A1 (en) 2021-02-11
AU2019214159A1 (en) 2020-09-03
EP3747896A4 (en) 2021-11-24
BR112020015457A2 (pt) 2020-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI747929B (zh) 一種人胰島素或其類似物的醯化衍生物
JP2606915B2 (ja) 新規インシュリン誘導体
TWI686403B (zh) 新穎胰島素衍生物及其醫療用途
CN102625695A (zh) 长效胰岛素组合物
US10702611B2 (en) Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates
EP2814461A1 (fr) Solution injectable a ph 7 comprenant au moins une insuline basale dont le pi est compris entre 5,8 et 8,5 et un co-polyaminoacide substitue
EP2956172A1 (fr) Solution injectable a ph7 comprenant au moins une insuline basale dont le point isoelectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et un polymere anionique hydrophobise
JP2012532179A (ja) 遅効性インスリン製剤
EP3055325B1 (en) Novel derivative of an insulin analogue
US20230212227A1 (en) Pharmaceutical parenteral composition of dual glp1/2 agonist
TW201934137A (zh) 含人胰島素類似物的醯化衍生物的藥物組合物及其製備方法
CN107952064A (zh) 含有聚乙二醇洛塞那肽的药物制剂及其制备方法
CN115947822A (zh) 一种长效酰化胰岛素衍生物及其药物组合物和应用
CN113121649B (zh) 一种新型两亲性蛋白、其制备方法及用途
TW202327643A (zh) 包含類升糖素肽2(glp-2)類似物之組合物之調配方法
WO2022157747A2 (en) Pharmaceutical peptide compositions and methods of preparation thereof
CN114075265A (zh) 一种多肽酪氨酸酪氨酸类似物以及包含其的缓释制剂
CN117177735A (zh) 药物glp肽组合物及其制备方法