TW201924684A - Sma之新治療 - Google Patents

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海蒂瑪麗 克雷茲爾
路茲 慕勒
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Abstract

本發明係關於用於治療脊髓性肌萎縮(SMA)之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、用於治療SMA之其醫藥組合物、其治療方法。

Description

SMA之新治療
本發明係關於用於治療脊髓性肌萎縮(SMA)之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、用於治療SMA之其醫藥組合物、其治療方法。
脊髓性肌萎縮(SMA)以其最寬泛含義闡述遺傳及獲得性中樞神經系統(CNS)疾病之集合，該等疾病之特徵在於脊髓及腦幹中之進行性運動神經元損失，從而引起肌肉無力及肌肉萎縮。SMA之特徵在於來自脊髓前角之α運動神經元退化，從而導致肌萎縮且導致癱瘓。因此，此α運動神經元退化實質上損害患者之重要預後。在健康個體中，該等神經元將訊息自腦傳遞至肌肉，從而導致肌肉收縮。在不存在此一刺激之情形下，肌肉萎縮。隨後，除肌肉、且更特定而言軀幹、上臂及大腿之彼等之全身性無力及萎縮以外，該等病症亦可伴隨有嚴重呼吸問題。
幼兒SMA係此神經退化性病症之最嚴重形式。症狀包括肌肉無力、較差肌肉緊張度、微弱哭泣、柔弱或易摔倒、吮吸或吞嚥困難、分泌物於肺或喉中累積、進食困難及對呼吸道感染之易感性增加。腿往往較臂無力且不可達成發育里程碑(例如抬頭或坐直)。一般而言，症狀出現愈早，壽命愈短。隨著運動神經元細胞劣化，其後不久即出現症狀。該疾病之嚴重形式係致命的且所有形式均無已知治癒方法。SMA之病程與運動神經元細胞劣化及所導致無力之嚴重程度直接相關。患有嚴重形式之SMA之嬰兒通常因支持呼吸之肌肉無力而死於呼吸疾病。患有較輕度形式之SMA之兒童存活較長，但其可能需要廣泛醫療支持，尤其處於譜系之更嚴重端之彼等。已將SMA病症之臨床譜系分成以下五組：
1) 0型SMA (子宮內SMA)係該疾病之最嚴重形式且在出生之前開始。通常，0型SMA之首個症狀係胎兒運動減少，此可在懷孕之30週與36週之間首先觀察到。在出生後，該等新生兒極少運動且具有吞嚥及呼吸困難。
2) I型SMA (幼兒SMA或韋德尼希-霍夫曼病(Werdnig-Hoffmann disease))在0個月與6個月之間出現症狀，此形式之SMA極為嚴重。患者從未獲得坐起之能力，且在無輔助呼吸情況下通常在前2年內死亡。
3) II型SMA (中等SMA)之發病年齡為7至18個月。患者獲得未受支撐坐起之能力，但從未未受幫助站立或行走。此組中之預後在很大程度上取決於呼吸受累之程度。
4) III型SMA (青少年SMA或庫格爾貝格-韋蘭德病(Kugelberg-Welander disease))通常在18個月後診斷出。3型SMA個體在其病程期間之某一點能夠獨立地行走，但經常在青年或成年期期間坐輪椅。
5) IV型SMA (成年發作型SMA)。無力通常在青春期晚期於舌、手或足中開始，然後進展至身體之其他區域。成人SMA之病程顯著更慢且對預期壽命之影響極小或無影響。
所有形式之脊髓性肌萎縮均伴隨有在來自脊髓前角之神經元退化之後的進行性肌無力及萎縮。SMA目前係導致嬰兒死亡之最常見原因之一。其以介於1/6000與1/10 000之間的盛行率同樣地影響世界所有地區之女孩或男孩。
目前尚無批准的提供運動功能之穩定化或改良之針對SMA之經口治療。目前在非臨床及臨床環境中有若干種藥物候選物正在進行研究(Lewelt A等人，Curr Neurol Neurosci Rep. 2012; 12:42-532；Arnold等人，Muscle Nerve. 2015;51:157-67)，且最近，努昔那森(nusinersen，即一種鞘內投與之促進外顯子7納入SMN2前mRNA中之反義寡核苷酸)已在US、EU及其他司法管轄區獲得批准。
儘管對SMA之遺傳基礎及病理生理學具有較充分理解且已探索若干種治療策略，但在診所中尚未有策略證實作為具有有限副作用之成功經口治療。本發明意欲響應此經口治療需求。目前在臨床II期中研究7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
正在對2歲至25歲年齡之II型及III型SMA患者實施關於7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(NTC02908685或BP39055)之隨機化、雙盲、安慰劑對照之II期研究。
令人驚訝地已發現，FMO3參與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之消除路徑，此可能對藥物劑量具有效應。
在研究BP39055之部分1中，令人驚訝地發現，在12-25歲之SMA患者中，觀察到最高評估劑量為5 mg者之中值SMN蛋白相對於基線增加151% (範圍49% - 251%)，且在2-11歲組中注意到最高測試劑量為0.25 mg/kg者之SMN蛋白增加96% (範圍17% - 150%)。
因此，令人驚訝地發現，對於體重小於20 kg之患者而言，最佳劑量將為每天一次0.25 mg/kg，且對於體重大於或等於20 kg之患者而言為5 mg。因此，對於2至25歲之所有患者，預期所選BP39055部分2劑量之預計平均暴露(AUC0-24h,ss )為1690 ng•h/mL [95% CI 1600 - 1780 ng•h/mL]。
基於一項猴研究，令人驚訝地發現，即使可期望SMN能進一步增加，但劑量不應超過男性及女性中分別1870 ng∙h/mL及2060 ng∙h/mL之AUC0-24 h暴露，以避免任何視網膜退化。
此外，亦令人驚訝地發現，劑量上限與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮對FOX M1及MADD之剪接相關。該上限劑量與同視網膜退化相關之劑量上限相同。
本文所提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻均係以全文引用的方式併入。
除非另有指示，否則本申請案中所使用之命名法係基於IUPAC系統命名法。
本文中揭示本發明之各種特徵及實施例，然而，熟習相關技術者基於所提供之教示將明瞭本發明之其他特徵、修改及等效形式。所闡述之本發明並不限於所提供之實例及實施例，熟習此項技術者將瞭解各種替代等效形式。除非上下文另外明確指示，否則如本文所使用，單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數。舉例而言，「一(a)」個體亦將包括「一或多個個體」。
除非另有說明，否則說明書及申請專利範圍中所使用之以下術語具有下文給出之含義：
術語「FMO3」係指含有黃素之單氧酶3，亦稱為二甲基苯胺單氧酶[N-氧化物形成] 3及三甲胺單氧酶，其中其酶委員會編號(EC編號)為EC 1.14.13.148，MGI參考為1100496，細胞遺傳學位置：1q24.3且基因體坐標(GRCh38)：1:171,090,872-171,117,818
可互換使用之「個體(individual)」或「個體(subject)」係哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)家養動物(例如，母牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如，人類及非人類靈長類動物，例如猴)、兔及齧齒類動物(例如，小鼠及大鼠)。在某些實施例中，個體(individual或subject)係人類。在本發明之特定實施例中，個體係患有脊髓性肌萎縮(SMA)之人類。在另一具體實施例中，個體係患有SMA之人類，其係由兩種染色體上之SMN1基因中之失活突變或缺失從而導致SMN1基因功能損失而引起。
術語「脊髓性肌萎縮」(或SMA)係指由兩種染色體上之SMN1基因中之失活突變或缺失從而導致SMN1基因功能損失而引起之疾病。SMA之症狀(取決於SMA之類型)包括肌肉無力、較差肌肉緊張度、微弱哭泣、微弱咳嗽、柔弱或易摔倒、吮吸或吞嚥困難、呼吸困難、分泌物於肺或喉中累積、以汗濕手握緊拳頭、舌顫動/振動、頭經常傾斜向一側(即使在躺下時)、腿往往較臂弱、腿通常採取「青蛙腿」姿勢、進食困難、對呼吸道感染之易感性增加、腸/膀胱無力、低於正常重量、在無支撐情況下不能坐起、不能步行、不能爬行及張力減退、反射消失以及與前角細胞損失相關之多種先天性攣縮(關節攣縮)。
術語「治療脊髓性肌萎縮(SMA)」或「脊髓性肌萎縮(SMA)之治療」包括以下效應中之一或多者：(i) 降低或改善SMA之嚴重程度；(ii) 延遲SMA之發作；(iii)抑制SMA之進展；(iv) 減少個體住院；(v) 降低個體住院之時長；(vi) 增加個體之存活；(vii) 改良個體之生活品質；(viii) 減少與SMA相關之症狀之數目；(ix) 降低或改善與SMA相關之一或多種症狀之嚴重程度；(x) 減少與SMA相關之症狀之持續時間；(xi) 預防與SMA相關之症狀之復發；(xii)抑制SMA之症狀之發生或發作；及/或(xiii)抑制與SMA相關之症狀之進展。更特定而言，「治療SMA」表示以下有益效應中之一或多者：(i) 降低肌肉強度損失；(ii) 增加肌肉強度；(iii) 降低肌肉萎縮；(iv) 降低運動功能損失；(v) 增加運動神經元；(vii) 降低運動神經元損失；(viii) 保護SMN缺陷性運動神經元免於退化；(ix) 增加運動功能；(x) 增加肺功能；及/或(xi) 降低肺功能損失。
詳細地，「治療SMA」產生人類嬰兒或人類初學走路的孩子未受幫助坐立或人類嬰兒、人類初學走路的孩子、人類兒童或人類成人未受幫助站立、未受幫助步行、未受幫助跑步、未受幫助呼吸、在睡眠期間未受幫助翻身或未受幫助吞嚥之功能能力或有助於保留該功能能力。
術語「mg/kg」係指每公斤欲治療個體體重所使用之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之劑量(以毫克計)。舉例而言，0.25 mg/kg意指每公斤欲治療患者體重0.25毫克7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之劑量。
術語「患者」係指已診斷為SMA之人類(例如男性或女性)。
術語「活性醫藥成分」(或「API」)表示醫藥組合物中具有特定生物活性之化合物或分子。
術語「醫藥上可接受之賦形劑」、「醫藥上可接受之載劑」及「治療惰性賦形劑」可互換使用且表示醫藥組合物中無治療活性且對所投與個體無毒性之任何醫藥上可接受之成分，例如用於調配醫藥產品之崩解劑、黏合劑、填料、溶劑、緩衝劑、張力劑、穩定劑、抗氧化劑、表面活性劑、載劑、稀釋劑或潤滑劑。
術語「醫藥組合物」係指如下製劑：其所呈之形式容許其中所含活性成分之生物活性有效，且不含對將投與該組合物之個體具有不可接受毒性之額外組分。術語「醫藥上可接受」表示可用於製備醫藥組合物之材料之屬性，該醫藥組合物通常安全、無毒性且既不在生物上亦不在其他方面不合意且對獸醫以及人類醫藥用途而言可接受。
術語「緩衝劑」或「緩衝系統」表示醫藥上可接受之賦形劑或賦形劑混合物，其使醫藥製劑之pH穩定。適宜緩衝劑為業內所熟知且可參見文獻。特定醫藥上可接受之緩衝劑包含檸檬酸緩衝劑、蘋果酸鹽緩衝劑、馬來酸鹽緩衝劑或酒石酸鹽緩衝劑，最特定而言酒石酸鹽緩衝劑。本發明之特定緩衝系統包含有機酸及其所選鹽之組合，例如檸檬酸三鈉及檸檬酸、蘋果酸及蘋果酸鈉、酒石酸鉀鈉及酒石酸或酒石酸二鈉及酒石酸，特定而言酒石酸鉀鈉及酒石酸。或者，有機酸(特定而言酒石酸)可替代酸與相應鹽之組合單獨用作「酸化劑」。獨立於所使用之緩衝劑，可利用業內已知之酸或鹼來調整pH，該等酸或鹼係例如鹽酸、乙酸、磷酸、硫酸及檸檬酸、氫氧化鈉及氫氧化鉀。特定酸化劑係酒石酸。
「醫藥上可接受之載劑」係指醫藥組合物中除活性成分以外對個體無毒之成分。醫藥上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑或酸化劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
術語「抗氧化劑」表示醫藥上可接受之賦形劑，其防止活性醫藥成分之氧化。抗氧化劑包含抗壞血酸、麩胱甘肽、半胱胺酸、甲硫胺酸、檸檬酸、EDTA。
術語「表面活性劑」表示用於保護蛋白質組合物免受如攪動及剪切等機械應力之醫藥上可接受之賦形劑。醫藥上可接受之表面活性劑之實例包括泊洛沙姆(poloxamer)、聚山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚(BRIJ®)、烷基苯基聚氧乙烯醚(TRITON-X®)或十二烷基硫酸鈉(SDS)。
術語「泊洛沙姆」表示側接有兩條聚(環氧乙烷) (PEO)親水鏈之聚(環氧丙烷) (PPO)中心疏水鏈構成之非離子三嵌段共聚物，每一PPO或PEO鏈可具有不同分子量。泊洛沙姆亦以商標名Pluronics而眾所周知。特定泊洛沙姆係泊洛沙姆188，即其中PPO鏈之分子質量為1800 g/mol且PEO含量為80% (w/w)之泊洛沙姆。
術語「聚山梨醇酯」表示通常與環氧乙烷共聚合之山梨醇與其酸酐之油酸酯。特定聚山梨醇酯係聚山梨醇酯 20 (聚(環氧乙烷) (20)去水山梨醇單月桂酸酯，TWEEN 20®)或聚山梨醇酯 80 (聚(環氧乙烷) (80)去水山梨醇單月桂酸酯，TWEEN 80®)。
「親水-親脂性平衡」 (HLB)值表示非離子表面活性劑之親水性程度。HLB值係藉由表面活性劑分子之親水部分之分子質量與其總體分子質量之間的比率來確定，如Griffin W.C.，Journal of the Society of Cosmetic Chemists (1949) 1:311所闡述。
術語「親水性」表示分子或分子部分與極性溶劑、尤其與水或與由氫鍵結、偶極-離子相互作用及/或偶極-偶極相互作用驅動之其他極性部分相互作用之能力。
術語「親脂性」及「疏水性」可互換使用且表示分子或分子部分溶解於非極性環境(例如脂肪、油及由倫敦(London)分散力驅動之非極性溶劑)中之傾向。
術語「Cmax 」 (以pg/mL為單位來表示)意指所觀察到之最大血漿濃度且在本文中係指秋水仙鹼之最大血漿濃度。
術語「Tmax 」 (以小時為單位來表示，或表示為研究群體中Tmax 小時之中位數)意指在藥物投與後所觀察到之達到Cmax 之時間；若其在一個以上時間點發生，則將Tmax 定義為此值之第一時間點。
術語「AUCT0-24h 」 (以pg·h/mL為單位來表示)意指使用梯形法自時間0至24 h計算之血漿時間濃度曲線下之累積面積(AUC)。
術語「sdOCT」係指光譜域光學同調斷層攝影。
術語「NOAEL」係指未觀察到不良效應值。換言之，術語NOAEL係指藉由實驗或觀察所發現的物質之最大濃度或量，其在定義之暴露條件下不會引起患者之形態學、功能能力、生長、發育或壽命發生可檢測之不良改變。
術語「NOEL」係未觀察到效應位準。
術語「ERG」係指視網膜電流圖。視網膜電流圖係藉由量測在光(光線)刺激時角膜電位之變化而產生之波形。通常，將直接及接地電極施加在個體角膜上或附近以記錄電位。
術語「FoxM1」係指叉頭框蛋白M1 (先前稱為HFH11)。FOXM1基因現稱為人類原癌基因。
術語「MADD」係指MAP-激酶活化死亡結構域。
根據本發明之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮係指式(I)化合物
，
其亦稱為RG7916、RO7034067、CAS編號1825352-65-5。該化合物之製備及使用方法闡述於EP3143025 A1中。
醫藥組合物之製備及使用方法闡述於WO2017080967 A1中。
在一個實施例中，本發明提供用於治療SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
在特定實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
在特定實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，對於體重小於20 kg之患者以每天一次0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以每天一次5 mg/kg治療。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA或/及III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA或III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA及III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
最特定而言，用於治療SMA、特定而言II型SMA或/及III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，其中投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，尤其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg經口投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg經口投與。
在特定實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，其中投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，尤其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg經口投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg經口投與。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA或/及III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，其中投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，尤其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg經口投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg經口投與。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA或III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，其中投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，尤其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg經口投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg經口投與。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA及III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，其中投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，尤其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg經口投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg經口投與。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，其中投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，尤其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg經口投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg經口投與。
在更特定之實施例中，本發明提供用於治療患者(尤其有需要之患者)之III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，其中投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，尤其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg經口投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg經口投與。更特定而言，用於治療SMA、特定而言II型SMA或/及III型SMA之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg治療且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg治療。
在一個實施例中，本發明提供治療脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，其包含向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg投與。特定而言，本發明提供治療脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，其包含藉由經口投與向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg投與。
在特定實施例中，本發明提供治療脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，其包含向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。更特定而言，本發明提供治療脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，其包含藉由經口投與向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。最特定而言，本發明提供治療SMA之方法，其中每天投與一次7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一特定實施例中，本發明提供治療II型SMA或/及III型SMA之方法，其包含向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。更特定而言，本發明提供治療II型SMA或/及III型SMA之方法，其包含藉由經口投與向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。
在另一特定實施例中，本發明提供治療II型SMA或III型SMA之方法，其包含向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。更特定而言，本發明提供治療II型SMA或III型SMA之方法，其包含藉由經口投與向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。
在另一特定實施例中，本發明提供治療II型SMA及III型SMA之方法，其包含向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。更特定而言，本發明提供治療II型SMA及III型SMA之方法，其包含藉由經口投與向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。
在另一特定實施例中，本發明提供治療II型SMA之方法，其包含向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。更特定而言，本發明提供治療II型SMA之方法，其包含藉由經口投與向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。
在另一特定實施例中，本發明提供治療III型SMA之方法，其包含向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。更特定而言，本發明提供治療III型SMA之方法，其包含藉由經口投與向患者(尤其有需要之患者)、特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg/天投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg/天投與。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者投與0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者每天投與0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者經口投與0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者每天經口投與0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者投與0.25 mg/公斤體重劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者每天投與0.25 mg/公斤體重劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者經口投與0.25 mg/公斤體重劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者每天經口投與0.25 mg/公斤體重劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者投與0.25 mg/公斤體重劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者每天投與0.25 mg/公斤體重劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者經口投與0.25 mg/公斤體重劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重小於20 kg之患者每天經口投與0.25 mg/公斤體重劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者投與5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者每天投與5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者經口投與5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者每天經口投與5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者投與5 mg劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者每天投與5 mg劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者經口投與5 mg劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者每天經口投與5 mg劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者投與5 mg劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者每天投與5 mg劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者經口投與5 mg劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。特定而言，本發明提供治療患者(尤其有需要之患者)之脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)，該方法包含對體重大於或等於20 kg之患者每天經口投與5 mg劑量之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供治療脊髓性肌萎縮(SMA)之方法，其包含向患者投與7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg投與且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg投與。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其包含0.25 mg/公斤體重之對體重小於20 kg之患者每天投與一次、尤其經口投與之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其包含0.25 mg/公斤體重之對體重小於20 kg之患者每天投與一次、尤其經口投與之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其包含0.25 mg/公斤體重之對體重小於20 kg之患者每天投與一次、尤其經口投與之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其包含5 mg之對體重大於或等於20 kg之患者每天投與一次、尤其經口投與之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其包含5 mg之對體重大於或等於20 kg之患者每天投與一次、尤其經口投與之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其包含5 mg之對體重大於或等於20 kg之患者每天投與一次、尤其經口投與之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。
該醫藥組合物可用於治療患者、尤其人類(即，男性或女性)之脊髓性肌萎縮(SMA)、尤其II型SMA及III型SMA。
已發現，本發明之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮具有高水溶性。由於SMA患者之所有年齡組具有吞嚥之不利因素，故已發現投與溶液較佳。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含藉由以下調配為口服水溶液之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮：將7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮溶解於小於pH 4、特定而言小於pH 3.8、更特定而言小於pH 3.6、最特定而言pH 3.0至3.2之pH的緩衝系統中以提供足夠高之藥物濃度，該緩衝系統係例如檸檬酸緩衝系統、蘋果酸鹽緩衝系統、馬來酸鹽緩衝系統或酒石酸鹽緩衝系統、最特定而言酒石酸鹽緩衝系統。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含呈用於構成口服溶液之乾粉或顆粒形式之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮。可藉由選擇有機酸及其呈細粉末之鹽(例如檸檬酸三鈉及檸檬酸、蘋果酸二鈉及蘋果酸、酒石酸鉀鈉及酒石酸或酒石酸二鈉及酒石酸，特定而言酒石酸鉀鈉及酒石酸)將緩衝系統併入至乾燥調配物中。或者，有機酸(特定而言酒石酸)可替代酸與相應鹽之組合單獨用作酸化劑。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、稀釋劑(例如山梨醇、異麥芽酮糖醇或特定而言甘露醇)及其組合，其確保粉末摻合物在口服溶液構成期間之快速溶解。視情況，可添加填料以便藉由乾法壓實來製粒以改良流動性且確保穩健之均勻性。
可將用於構成7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之溶劑系統之成分調配為單獨調配物。可在口服溶液之使用期開始時使用已構成溶劑將7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮溶解於瓶中。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含呈粉末形式以用於構成口服溶液之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其填充於具有用於口服分配器之適配器之多劑量瓶中。已發現，此具有用於口服分配器之適配器之多劑量瓶使得能夠實現高度投藥靈活性(例如體重調整投藥)，且提供安全及便捷之劑量投與。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其經由乾法製粒藉由碾壓、之後裝瓶來製備。已發現，此處理對於防止分層係有益的(尤其對於水溶性填料)。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係口服水溶液或適於構成口服水溶液之乾粉。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係口服水溶液，不包括氣溶膠或適於構成口服水溶液之乾粉。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽且不為氣溶膠。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽且不包含諸如鹽(例如氯化鈉)等張力調節劑(tonicifier)。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係口服水溶液或適於構成口服水溶液之乾粉，且其中該口服水溶液具有小於pH 4、特定而言小於pH 3.8、更特定而言小於pH 3.6、最特定而言pH 3.0至3.2之pH。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽及檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽緩衝系統，特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽緩衝系統，最特定而言酒石酸鹽緩衝系統；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；其中該組合物係口服水溶液或適於構成口服水溶液之乾粉。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係口服水溶液。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係於pH為小於pH 4、特定而言小於pH 3.8、更特定而言小於pH 3.6、最特定而言pH 3.0至3.2之緩衝系統中之口服水溶液。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、尤其經口投與之用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係於檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽緩衝系統中、特定而言於蘋果酸鹽或酒石酸鹽緩衝系統中、最特定而言於酒石酸鹽緩衝系統中之口服水溶液；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係適於構成口服水溶液之乾粉。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係乾粉，其包含適於構成口服水溶液之pH為小於pH 4、特定而言小於pH 3.8、更特定而言小於pH 3.6、最特定而言pH 3.0至3.2之緩衝系統。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其中該組合物係乾粉，其包含適於構成口服水溶液之檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽緩衝系統，特定而言於蘋果酸鹽或酒石酸鹽緩衝系統中、最特定而言於酒石酸鹽緩衝系統中；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其視情況進一步包含顆粒外(extragranular)填料，例如乳糖、澱粉、水解澱粉、麥芽糊精、微晶纖維素、甘露醇、山梨醇、蔗糖、右旋糖、磷酸氫鈣、硫酸鈣或其組合。
在本發明之特定實施例中，顆粒外填料係山梨醇、異麥芽酮糖醇、甘露醇或其組合，特定而言甘露醇，更特定而言結晶甘露醇，最特定而言平均直徑為160 μm之結晶甘露醇(Pearlitol® 160C)。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其視情況進一步包含稀釋劑，例如乳糖、澱粉、水解澱粉、麥芽糊精、微晶纖維素、甘露醇、異麥芽酮糖醇(E 953，(2ξ)-6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-D-阿拉伯糖-己醣醇)、山梨醇、蔗糖、右旋糖、磷酸氫鈣、硫酸鈣或其組合。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其視情況進一步包含稀釋劑，例如乳糖、澱粉、水解澱粉、微晶纖維素、甘露醇、山梨醇、蔗糖、右旋糖、磷酸氫鈣、硫酸鈣或其組合。
在本發明之特定實施例中，稀釋劑係甘露醇，特定而言適於直接壓製之D-甘露醇，例如Parteck® M100。
在本發明之特定實施例中，稀釋劑係甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，特定而言D-甘露醇及(2ξ)-6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-D-阿拉伯糖-己醣醇)之混合物。
已發現，異麥芽酮糖醇作為第二稀釋劑改良顆粒性質。
藉由使用諸如維生素A、維生素C、維生素E、維生素E TPGS、棕櫚酸視黃酯、硒、半胱胺酸、甲硫胺酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、依地酸二鈉、丁基羥基甲苯、核黃素、抗壞血酸或其組合等穩定劑及抗氧化劑，於緩衝劑中構成之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之口服溶液可提供超過或等於兩週之使用時間。
藉由使用諸如維生素E TPGS、依地酸二鈉、丁基羥基甲苯、核黃素、抗壞血酸或其組合等穩定劑及抗氧化劑，於緩衝劑中構成之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之口服溶液可提供超過或等於兩週之使用時間。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其視情況進一步包含抗氧化劑及/或穩定劑，例如維生素E TPGS (D-α生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、乙二胺四乙酸二鈉(依地酸二鈉，Na2 EDTA)、丁基羥基甲苯、核黃素、抗壞血酸或其組合。已發現，抗氧化劑及/或穩定劑對於在多劑量容器中延長使用時間或在使用期期間改良溶液中之藥物穩定性可係有益的。
在本發明之特定實施例中，抗氧化劑係抗壞血酸((5R)-[(1S)-1,2-二羥基乙基]-3,4-二羥基呋喃-2(5H)-酮)。
在本發明之特定實施例中，穩定劑係乙二胺四乙酸二鈉(依地酸二鈉，Na2 EDTA)。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其視情況進一步包含潤滑劑。已發現，潤滑劑可用作用於碾壓之處理助劑。此外，潤滑劑可用於水溶性成分(例如PEG)，以確保外觀之可接受性。
在本發明之特定實施例中，潤滑劑係聚(乙二醇)，特定而言數目平均分子量Mn為6,000之聚(乙二醇) (PEG 6000)。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，其視情況進一步包含甜味劑及/或風味劑以改良適口性。
在本發明之特定實施例中，風味劑係草莓風味劑或香草風味劑。
在本發明之特定實施例中，甜味劑係蔗糖素(1,6-二氯-1,6-二去氧-β-D-呋喃果糖基-4-氯-4-去氧-α-D-半乳糖吡喃醣苷，E955)或糖精鈉。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；及
• 緩衝系統，其選自檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；及
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；及
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；及
• 穩定劑，特定而言依地酸二鈉。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇；
• 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；及
• 穩定劑，特定而言依地酸二鈉。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇；
• 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；
• 穩定劑，特定而言依地酸二鈉；及
• 潤滑劑，特定而言PEG6000。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇；
• 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；
• 穩定劑，特定而言依地酸二鈉；
• 潤滑劑，特定而言PEG6000。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇；
• 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；
• 穩定劑，特定而言依地酸二鈉；
• 潤滑劑，特定而言PEG6000；
• 視情況甜味劑，特定而言蔗糖素或糖精鈉，最特定而言蔗糖素；及
• 視情況風味劑，特定而言草莓風味劑或香草風味劑。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 1%wt至10%wt之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；
• 5%wt至15%wt之緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 40%wt至70%wt之稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇；
• 1%wt至4%wt之抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；
• 0.5%wt至2%wt之穩定劑，特定而言依地酸二鈉；
• 0.5%w至2%w之潤滑劑，特定而言PEG6000；
• 0%wt至3%wt之甜味劑，特定而言蔗糖素或糖精鈉，最特定而言蔗糖素；及
• 0%wt至20%wt之風味劑，特定而言草莓風味劑或香草風味劑；
其中成分之總量不超過100%wt。
在另一實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含：
• 2%wt至6%wt之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；
• 9%wt至13%wt之酒石酸鹽緩衝系統；
• 45%wt至55%wt作為第一稀釋劑之甘露醇及8%wt至10%wt作為第二稀釋劑之異麥芽酮糖醇；
• 1%wt至3%wt作為抗氧化劑之抗壞血酸；
• 0.5%wt至2%wt作為穩定劑之依地酸二鈉；
• 0.5%w至2%w作為潤滑劑之PEG6000；
• 1.5%wt至2%wt作為甜味劑之蔗糖素；及
• 13%wt至17%wt之草莓風味劑；
其中成分之總量不超過100%wt。
在另一實施例中，本發明提供用於製備用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物之套組，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該套組包含：
• 粉末摻合物，其包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，及
• 水作為構成用溶劑。
在另一實施例中，本發明提供用於製備用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物之套組，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該套組包含：
• 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，
• 作為構成用媒劑之粉末摻合物，及
• 視情況作為構成用溶劑之水。
特定而言，作為適用於如本文所闡述之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽之構成之媒劑的粉末摻合物，該粉末摻合物包含：
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；及
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇。
特定而言，作為媒劑之粉末摻合物，其適於構成如本文所闡述之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，該粉末摻合物包含：
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇；
• 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；
• 穩定劑，特定而言依地酸二鈉；
• 潤滑劑，特定而言PEG6000；及
特定而言，作為媒劑之粉末摻合物，其適於構成如本文所闡述之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，該粉末摻合物包含：
• 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇；
• 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；
• 穩定劑，特定而言依地酸二鈉；
• 潤滑劑，特定而言PEG6000；
• 視情況甜味劑，特定而言蔗糖素或糖精鈉，最特定而言蔗糖素；及
• 視情況風味劑，特定而言草莓風味劑或香草風味劑。
特定而言，作為媒劑之粉末摻合物，其適於構成如本文所闡述之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，該粉末摻合物包含：
• 4%wt至15%wt之緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；
• 40%wt至70%wt之稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇；
• 1%wt至4%wt之抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；
• 0.2%wt至2%wt之穩定劑，特定而言依地酸二鈉；
• 0.5%w至2%w之潤滑劑，特定而言PEG6000；
• 0%wt至3%wt之甜味劑，特定而言蔗糖素或糖精鈉，最特定而言蔗糖素；及
• 0%wt至20%wt之風味劑，特定而言草莓風味劑或香草風味劑；
其中成分之總量不超過100%wt。
特定而言，作為媒劑之粉末摻合物，其適於構成如本文所闡述之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽，該粉末摻合物包含：
• 9%wt至13%wt之酒石酸鹽緩衝系統或酒石酸；
• 45%wt至55%wt作為第一稀釋劑之甘露醇及8%wt至10%wt作為第二稀釋劑之異麥芽酮糖醇；
• 1%wt至3%wt作為抗氧化劑之抗壞血酸；
• 0.3%wt至0.9%wt作為穩定劑之依地酸二鈉；
• 0.5%w至2%w作為潤滑劑之PEG6000；
• 0.8%wt至2.0%wt作為甜味劑之蔗糖素；及
• 7.5%wt至19%wt之草莓風味劑；
其中成分之總量不超過100%wt。
在特定實施例中，本發明提供用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，如本文所闡述其中該醫藥組合物係每天經口投與一次。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於治療SMA、特定而言II型SMA或/及III型SMA。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於治療SMA、特定而言II型SMA或/及III型SMA。
在特定實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於治療患者(尤其有需要之患者)之SMA，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
在更特定之實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA或/及III型SMA，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
在更特定之實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA或III型SMA，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
在更特定之實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA及III型SMA，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
在另一實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於製備用於治療SMA、特定而言II型SMA或/及III型SMA之藥劑。
在特定實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於製備用於治療患者(尤其有需要之患者)之SMA之藥劑，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
在更特定之實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於製備用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA或/及III型SMA之藥劑，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
在更特定之實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於製備用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA或III型SMA之藥劑，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
在更特定之實施例中，本發明提供每天投與一次、特定而言經口投與之對於體重小於20 kg之患者0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或對於體重大於或等於20 kg之患者5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於製備用於治療患者(尤其有需要之患者)之II型SMA及III型SMA之藥劑，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
根據本發明之患者特定而言係人類，更特定而言男性或女性。人類可為任何種族(例如，高加索人(Caucasian)或東方人(Oriental))。
在本發明之特定實施例、方法、用途、醫藥組合物中，7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮係每天投與一次。
以下實例僅意欲說明本發明之實踐且不以限制方式提供。
實例 1 ：
研究BP39055係研究RO7034067在2型及3型脊髓性肌萎縮(SMA)患者中之安全性、耐受性、藥物動力學(PK)、藥效學(PD)及效能之兩部分操作上無縫、多中心、隨機化、安慰劑對照、雙盲研究。本研究係由探索性劑量探索部分(部分1)及驗證部分(部分2)組成。
部分1之主要目標為評估RO7034067在患有2型及3型(行走或不能行走) SMA之患者中之安全性、耐受性、PK及PD，且選擇用於本研究之部分2之劑量。
部分1係在2型及3型 (行走及不能行走) SMA患者中之雙盲、安慰劑對照、隨機化(2:1 RO7034067:安慰劑)、探索性劑量探索研究。此之後為開放性標籤延伸(OLE)，其劑量與針對本研究之部分2所選擇者相同。
本研究之部分1招募兩個年齡組之患者：
• 組A：12-25歲之青少年及成年患者
• 組B：2-11歲之兒童
在兩個年齡組中以交錯之劑量遞增方式研究RO7034067劑量量。
按照方案，實施以下步驟以進行本研究之部分1：
- 最初向接受每天一次3 mg盲化RO7034067 (如方案中所定義之第一劑量量，以700 ng.h/mL之AUC0-24 h,ss為目標)之成年及青少年患者(同類群組A1)開放本研究之登記；10名12-16歲之患者登記於同類群組A1中。
- 一旦此劑量量之RO7034067在登記於同類群組A1中之9名患者中顯示安全且耐受性良好達至少4週(按照方案，最少3名12-17歲之患者接受積極治療，此確保最少6名患者且以2:1隨機化)，則向更年輕患者之同類群組(同類群組B1)開放登記。根據700 ng.h/mL之目標AUC0-24h,ss，IMC針對此年齡組推薦之劑量為0.02 mg/kg (參見附錄1中2016年12月12日之IMC推薦)；10名3歲至11歲之患者登記於同類群組B1中。
- 在同一時間點(即，在基於對同類群組A1中9名患者每天一次3 mg至少4週之治療之審核，確認安全性及耐受性後)，向接受每天一次5 mg RO7034067 (參見附錄1中2017年1月19日之IMC推薦)之9名成年及青少年患者之另一同類群組(同類群組A2)開放登記。按照方案，確定更高之劑量量以(例如)達成最大SMN蛋白增加，而不超過暴露上限(exposure cap)(Cmax 400 ng/mL；平均AUC0-24h,ss 2000 ng.h/mL)；10名13-24歲之患者登記於同類群組A2中。
- 基於對登記於同類群組B1中之9名患者以0.02 mg/kg治療最少4週之審核，IMC作出以下推薦：i) 將該等患者之劑量增加至0.05 mg/kg，而不超過3 mg之上限劑量，及ii) 招募最少9名2-11歲之其他患者，劑量為0.05 mg/kg，而不超過3 mg之上限劑量(同類群組B2)，針對至少5名2-6歲之患者(參見附錄1中2017年3月13日之IMC推薦)；11名2-6歲之患者登記於此另一同類群組(同類群組B2)中。
- 一旦RO7034067在0.05 mg/kg之劑量下在登記於同類群組B2中之9名患者中顯示安全且耐受性良好達至少4週，則IMC建議將來自同類群組B1及B2之所有正在進行患者之劑量增加至0.15 mg/kg，而不超過3 mg之上限劑量(參見附錄1中2017年5月23日之IMC推薦)。在同一時間點，向劑量為0.25 mg/kg而不超過5 mg之上限劑量之9名患者之另一同類群組(同類群組B3)開放登記，經測定以例如達成最大運動神經元存活(SMN)蛋白質增加，而不超過暴露上限(Cmax 400 ng/mL；平均AUC0-24h,ss 2000 ng.h/mL)；10名2-11歲之患者登記於同類群組B3中。
- 在每一同類群組中最少9名患者完成至少12週之安慰劑對照治療後，IMC對來自同類群組之所有可用數據進行審核，以決定將安慰劑患者轉換為其各別同類群組中測試劑量下之積極治療。部分1.3中提供IMC決定將安慰劑患者轉換為各別同類群組中之積極治療之日期。
- 對於部分1 (同類群組B3)中之最後一個同類群組，IMC審核在第9名患者完成最少4週治療後之所有可獲得之安全性、耐受性、PK及PD數據(包括在第9名患者後大約1週登記之最後一個同類群組之第10名患者之所有可獲得之數據，及來自所有先前同類群組之所有可獲得之數據)以便選擇在本研究之部分2中欲投與之劑量。在審核相同數據包之後，藉由外部iDMC確認此劑量選擇。此報告中匯總此劑量決定所基於之數據。
- 在iDMC審核所有可獲得之部分1數據並確認IMC劑量選擇後，部分2將開始，且來自部分1之所有患者將轉換為針對部分2所選擇之劑量，作為本研究之OLE階段之一部分。來自部分1之最後一個同類群組之患者將需要在進入OLE之前完成治療直至其同類群組之12週治療期結束。作為本研究之OLE階段之一部分，患者將繼續進行安全性、耐受性及效能之隨訪，以提供RO7034067治療之更長期數據。該等患者將不參與本研究之部分2中進行之驗證效能分析。
總計51名患者登記於本研究之部分1中。患者跨越5個不同中心(意大利[2個中心]、德國、法國及比利時)登記。患者登記於五個同類群組中，其包括1:2比率之安慰劑及積極治療患者

該方案將本研究之部分2之劑量選擇準則定義為基於部分1數據顯示安全且耐受性良好之劑量，且預期：i) 達成使得2型及3型SMA患者之運動神經元存活(SMN)蛋白質之臨床相關增加之暴露及ii) RO7034067之平均AUC0-24h,ss (投藥後介於時間0與與24小時之間的穩態曲線下面積)必須保持低於2000 ng.h/mL之暴露上限。

如本研究方案中所定義，可獲得之數據表明，SMN蛋白含量增加100%確實預期將更嚴重之SMA表型轉變為更溫和之形式，而進一步增加有可能提供甚至更大之益處。
實例 2 ： ( 取自 BI §4.1.2.2)
利用媒劑或RO7034067 (1 mg/kg、3 mg/kg或10 mg/kg經口[PO]，每天)將成年C/C-等位基因小鼠治療10天，且利用媒劑或RO7034067 (0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg或3 mg/kg腹膜內[IP]，每天)將PND3 SMNΔ7小鼠治療7天。RO7034067劑量依賴性地增加腦及肌肉組織中之SMN蛋白含量，其中在成年C/C等位基因小鼠中在10 mg/kg下且在新生SMNΔ7小鼠中在1 - 3 mg/kg下達到2 - 3倍增加之最大效應(圖1a及1b)。因此，在10 mg/kg劑量下之C/C-等位基因小鼠之肌肉中，所達成之SMN含量與異型接合小鼠中之彼等SMN含量並無差異。在SMNΔ7小鼠中，SMN蛋白增加僅在腦及肌肉二者中係部分的，在異型接合小鼠中達到大約43% (腦)及55% (肌肉)之蛋白質含量。該等數據展示，RO7034067增加SMA之轉基因小鼠模型之腦及肌肉組織二者中之SMN蛋白，且在嚴重SMNΔ7小鼠模型中，SMN蛋白之增加超過100%係可能的。
實例 3 ：
藉由胃管灌食經口投與測試項目。經39週時期向動物投藥，包括屍體剖檢當天。在sdOCT評估之各日不對動物投藥。由於測試項目相關之臨床徵象，第4組動物(以7.5 mg/kg/天投與)在第13天至第25天不投藥。投與7.5 mg/kg/天之一隻雌性動物(動物0114)在第12天由於其不良臨床病況而不投藥。在第273天(第39週)之後不對恢復動物投藥。
研究設計及劑量量
選擇以下研究設計及劑量量：


5.5 劑量體積
使用5 mL/kg之劑量體積。個別劑量體積係基於個別體重。
測試項目調配物
製備
每週製備調配物。
將測試項目調配為於pH 3之10 mM抗壞血酸/ 0.0064 mg/mL硫代硫酸鈉中之溶液。
儲存
在氧不存在下(在氮下)將調配物儲存在2℃至8℃下，於密封容器中避光。在投藥之前使其達到室溫且在到達動物室時攪拌，且然後在整個投藥期間連續攪拌。
調配物分析
分析調配物之其測試項目含量。
穩定性
穩定性數據證實，當在不存在氧下(即，在氮下)在2℃至8℃下儲存時，0.025 mg/mL至5 mg/mL範圍內之調配物穩定長達4週。
達成濃度
獲得在投藥期之第1週、第13週、第26週及第39週期間及在第12天及第26天(以與第4組之停止及重新投藥相一致)準備使用之樣品(來自測試項目調配物之3 × 1 mL等分試樣；來自對照項目調配物之2 × 1 mL等分試樣)以分析所達成之濃度。將均質性結果之平均值作為與取樣時間一致之所達成濃度。
不自經製備用於在第9週期間使用之調配物取樣，且在投藥期之第13週期間收集樣品。
測試系統
物種、品種及供應商
自Noveprim Ltd (Mauritius)獲得32隻目的繁殖(purpose-bred)食蟹猴(長尾獼猴(Macaca fascicularis))以提供每一性別16隻健康動物。
規格
在投藥開始時，動物介於24個月大與26個月大之間。
環境
除在實驗程序另外指示情形下之短時期以外，將動物保持在以下環境中。將其圈養在專屬室中，空調開放以提供最少15次換氣/小時。溫度及相對濕度範圍通常分別維持在21℃至25℃及40%至70%之指定範圍內。自動控制螢光照明以給出12小時光(0600 h至1800 h)及12小時暗之循環。
將動物圈養在符合供應或使用用於科學目的之動物飼養住房及照護實踐準則(Code of practice for the housing and care of animals bred, supplied or used for scientific purposes) (Home Office, London, 2014)之畜欄中。將同一組及性別之動物分組圈養在同一畜欄中。
膳食、水及墊料
每天為每一動物提供至少兩次用於靈長類動物之認證實驗室膳食(LabDiet 5048)之顆粒料(上午大約六顆顆粒料且下午六顆顆粒料)；下午健康檢查時偶爾會提供額外顆粒料。平常日亦每天提供一次新鮮水果或蔬菜，在其他情形下提供乾燥之替代品。
隨意地經由水瓶提供自來水。定期分析水之特定污染物。
藉由使用乾淨Aspen木屑(Datesand Ltd, Manchester, UK)及Lignocel混合物(International Product Supplies Ltd, London, UK)每週向每一籠提供墊料。
膳食補充劑及環境富集
提供以下作為獎賞：葡萄、藍莓、葵花籽、麵食、堅果、木毛及草料混合物；該等作為環境富集形式不需要分析。
使用多種其他項目/策略來豐富環境及動物福祉，例如提供玩具(球、惰性耐綸咀嚼物)、秋千及覓食材料。
實驗前程序
測試系統之鑑別
藉由電子植入物個別地鑑別動物。
眼科檢查
標準眼科檢查
在起始投藥之前且在投藥期之第4週、第13週、第23週及第36週期間對所有動物實施研究。
第23週及第36週期間之研究與規定投藥期之第22週及第35週之方案相反。時間差異極小且對研究完整性沒有影響。
利用氯胺酮使動物輕微鎮靜，且在間接及裂隙燈眼科檢查之前將瞳孔放大劑滴注至眼中。
視網膜電測圖 (ERG)
在投藥期之第20週、第26週及第34週期間對所有動物且在恢復期之第8週、第13週及第22週期間對所有恢復動物實施研究。
在ERG程序之前使動物禁食至少2小時，在暗視測試之前暗適應至少2小時，且在明視測試之前適應光至少10分鐘。
利用氯胺酮使動物輕微鎮靜，且在檢查之前將瞳孔放大劑滴注至眼中。
光譜域光學同調斷層攝影
在投藥期之第22週、第27週及第35週及恢復期之第8週、第13週及第22週期間對所有動物實施光譜域光學同調斷層攝影(sdOCT)。
在檢查之前使動物禁食過夜且在sdOCT評估日不投藥。
利用氯胺酮使動物輕微鎮靜，且在檢查之前將瞳孔放大劑滴注至眼中。
毒物動力學
在投藥期之第1天、第12天(第2週)、第26天(僅第4組)、第57天(第9週)、第92天(第14週)、第180天(第26週)及第267天(第39週)之以下時間點自所有經檢品治療之動物取用於毒物動力學之血液樣品(標稱0.5 mL)：
• 0 (投藥前)、投藥後1小時、3小時、7小時及24小時
在第12天投藥後72小時(即第15天)自所有第4組動物取另一樣品。
在不同天(第26週期間除外)取來自對照組(第1組)之樣品以避免污染：投藥期之第3天、第15天(第3週)、第59天(第9週)、第89天(第13週)、第180天(第26週)及第269天(第39週)。
在投藥期(第26週)之第180天，提前6分鐘自投與3 mg/kg/天之一隻雌性(動物0111)取1小時樣品，其在SOP允許之偏差窗之外2分鐘。由於此時間偏差極小，因此對研究完整性無影響。
自股靜脈/動脈取樣。用手輕輕混合每一血液樣品，然後置於壓碎之濕冰上，直至在大約4℃下以2300 g離心10分鐘。將所得血漿分離，分至兩個經獨特標記之透明聚丙烯管中，並在＜-50℃ (標稱-80℃)下冷凍。將一個樣品在乾冰上冷凍運輸至主要研究者以進行分析，且另一樣品保留在Covance。
方法及結果呈現於附錄13及附錄17中。
臨床病理學
樣品及時間
在起始投藥之前、在投藥期之第4週、第13週、第26週、第35週及第39週期間及在恢復期之第13週及第22週期間自所有動物之股靜脈/動脈取出血液樣品(標稱0.5 mL收集至EDTA抗凝劑中，0.5 mL收集至檸檬酸三鈉抗凝劑中且0.6 mL收集至肝素鋰抗凝劑中)。在禁食一整夜後收集樣品，惟錯誤地未使動物禁食過夜之第13週恢復期樣品除外。此不具有影響。
最終程序
所有動物均經受屍體剖檢。
毒物動力學組織取樣
在屍體剖檢時自一隻動物/性別/組之左眼獲取玻璃體液及水狀液之眼部樣品以用於毒物動力學研究，將其等分至經標記之埃彭道夫管(Eppendorf tube)中並稱重。在切除後，將視網膜、脈絡膜及RPE、角膜、虹膜、鞏膜及晶狀體各自置於單獨Precellys均質化管中(2 m：然後將該等管於液氮中快速冷凍且在標稱-70℃下冷凍儲存。
電子顯微術
將主要組屍體剖檢時來自兩隻動物/性別/組之左眼及恢復屍體剖檢時來自一隻動物/性別/組之左眼在屍體剖檢時固定於福馬林/戊二醛混合物中。使用具有小(25至27號)針頭之注射器，經由垂直於長睫狀後動脈之位置處之鞏膜，向眼睛頂部注射4%緩衝戊二醛及10% NBF之1:1混合物。向眼睛注射大約0.2 mL至0.3 mL之固定劑，然後浸沒在填充有4%緩衝戊二醛及10% NBF之1:1 混合物之容器中36小時至48小時。
數據評估
匯總表標題中所列示之動物數量反映每一各別期開始時指配給每一組之動物數量，惟指示指配給每一各別屍體剖檢間隔之動物數量之病理表除外。觀察結果匯總表指示針對其觀察病況之動物數量，而不考慮具體性質、嚴重性、可逆性、發病次數/動物數量或病況持續之時間長度。
將來自檢品治療動物之數據與對照數據進行比較。
此報告中之一些表格係電腦生成的。在此系統中，個別及導出數字係四捨五入的。因此，在一些情況下，對來自報告中所呈現之個別數據之導出值進行重新計算將產生微小變化。
對ERG數據實施統計分析。
使用方差分析(ANOVA；Winer等人，1991)分析以下中所列示之視網膜電測圖參數之A波(若適用)以及B波振幅及潛伏期(latency)，其中將治療作為模型中之單因素。若注意到顯著之總體治療效應(P ＜ 0.05)，則藉由鄧奈特測試(Dunnett’s-test) (Dunnett，1955及1964)來評估組比較(第2組、第3組及第4組對第1組)。分開分析雄性及雌性數據。
•暗視-34 dB藍色單次閃光
•暗視-8 dB紅色單次閃光
•暗視0 dB白色單次閃光
•振盪電位
•明視0 dB單次閃光
•明視0 dB 30.3 Hz白色
• VEP 4.1 Hz
另外，使用列文測試(Levene's 測試)(Levene，1960)來測試各組間之方差齊性。倘若列文測試顯著(P ＜ 0.01)，則在ANOVA模型中使用秩變換數據(Draper及Hunter，1969)。
計算每一動物之兩隻眼睛(右眼及左眼)之間的平均值且用於分析中。
結果
調配物
所有測試項目調配物之經量測含量在標稱之94%與103%之間範圍內，此展示已製備可接受之濃度用於投藥。
在對照樣品中未檢測到測試項目。
生物分析及毒物動力學
血漿中之結果指示以下：
來自對照組之樣品均未含有可量化之RO7034067血漿濃度。所有結果均低於定量下限(＜5.00 ng/mL)。
使投與1.5 mg/kg/天、3 mg/kg/天或7.5/.5 mg/kg/天之所有動物均暴露於RO7034067，在整個取樣間隔(24小時)內在所有研究日均具有完整之血漿濃度-時間輪廓。
觀察到投藥後緊接之逆流，尤其在投與7.5/.5 mg/kg/天之組中，且在此組之兩隻動物中頻率較高(動物0112及0114；對於動物0112不在毒性動力學[TK]取樣日)。在第89天、第90天及第91天逆流3天後，與投與5 mg/kg/天之所有其他動物相比，動物0114中第92天暴露於RO7034067明顯較低。此在第57天(TK取樣日)較不明顯，此時亦觀察到此動物之逆流。因此，動物0114中之暴露自第57天及第92天之任何比率及統計計算排除。
總體而言，在每一評估日，觀察到AUC(0-24h) 之大致劑量成比例增加係介於1.5 mg/kg/天與5 mg/kg/天之間。在第1天及第12天亦觀察到此介於1.5 mg/kg/天及7.5 mg/kg/天之間。
總體而言，在39週投藥期期間，在任何劑量量下均未觀察到AUC(0-24h) 或Cmax 之相關性別差異。
第12天及第267天之主要結果(平均值)匯總於下表中：
視網膜電測圖 ( 非 GLP)
定性評估
根據國際視覺臨床電生理學協會(International Society for Clinical Electrophysiology of Vision，ISCEV)方案所得出之視網膜電測圖(ERG)反應之目視檢查注意到投與7.5/5 mg/kg/天之若干隻動物在第20週投藥期間具有明顯受抑制之ERG。注意到投與3 mg/kg/天之一隻雄性(動物0009)及投與7.5/5 mg/kg/天之兩隻雄性(動物0013及0014)具有受抑制之暗視-34 dB藍色B波振幅。亦注意到投與3 mg/kg/天之兩隻雌性(動物0110及0111)及投與7.5/5 mg/kg/天之三隻雌性(動物0114、0115及0116)在暗視-34 dB藍色條件下具有明顯受抑制之B波振幅。亦觀察到在投藥期之第20週期間投與7.5/5 mg/kg/天之一隻雄性(動物0014)及兩隻雌性(動物0114及0115)具有降低之明視0 dB白色及30 Hz閃爍振幅。
對在投藥期之第26週期間ERG反應之定性評估在投與7.5/5 mg/kg/天之兩隻雄性(動物0013及0014)中指示受抑制之暗視-34 dB藍色B波振幅，且另外有證據表明明視涉及在投與7.5/5 mg/kg/天之兩隻雌性(動物0114及0115)中之受抑制之明視0 dB單一白色B波振幅。
在投藥期之第34週期間對ERG反應之定性評估指示在三隻雄性(動物0012、0014及0015)及四隻雌性(動物0113、0114、0115及0116)中以7.5/5 mg/kg/天之受抑制之暗視-34 dB藍色B波振幅。注意到投與7.5/5 mg/kg/天之一隻雌性(動物0114)具有幾乎消除之暗視及明視反應。投與1.5 mg/kg/天之一隻雄性(動物0004)在第34週時間點期間具有低於預期之暗視-34 dB B波振幅。
在兩隻雄性及雌性恢復期之第8週、第13週及第22週期間記錄來自對照及7.5/5 mg/kg/天組二者之視網膜電測圖(ERG)及VEP。自四隻對照動物記錄之ERG均在三個恢復時間點之預期正常限值內。先前投與7.5/5 mg/kg/天之一隻雌性(動物0114)在恢復期之第8週及第13週期間繼續具有降低之振幅ERG 反應；然而，在恢復期之第22週，與先前測試相比，此動物之ERG B波振幅顯著增加，但其仍恰低於預期正常限值。兩隻雄性第4組動物具有暗視及明視B波，其在三個恢復間隔中之每一者之預期正常限值內。
視網膜電測圖分級
ERG分級係藉由比較每一動物之-34 dB暗視藍色B波振幅與自利用同一設備及麻醉測試之食蟹猴之較大樣本(N = 320)獲得之值半定量地來實施(Ver Hoeve等人，2014)。該研究之大樣本產率用於計算基於1.96 *標準偏差及2.36 *標準偏差之下信賴區間，其平均值為187.8且標準偏差為51.7微伏，其分別對應於小於0.05或0.01概率之偏離。基於該等值，將分級0指配給1.96標準偏差內之B波振幅；將分級1指配給低於預期平均值1.96標準偏差以下但高於或等於2.36 *標準偏差之B波振幅，且將分級2指配給低於預期平均值2.36標準偏差之B波振幅。
投藥期
基於先前所闡述之分級準則，在投藥期之第20週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之5隻雌性中有4隻具有受抑制之視桿細胞反應；在第26週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之5隻雌性中有2隻具有受抑制之視桿細胞反應；且在第34週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之5隻雌性中有4隻具有受抑制之視桿細胞反應。在投藥期之第20週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之5隻雄性中有4隻具有受抑制之視桿細胞反應；在第26週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之5隻雄性中有2隻具有受抑制之視桿細胞反應；且在第34週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之5隻雄性中有5隻具有受抑制之視桿細胞反應。
使用該等分級準則，在投藥期之第22週期間，投與3 mg/kg/天之所有三隻雌性具有受抑制之視桿細胞反應；在第27週期間，該等雌性均不具有受抑制之視桿細胞反應；且在第35週期間，投與3 mg/kg/天之3隻雌性中有1隻具有受抑制之視桿細胞反應。對於投與3 mg/kg/天之雄性而言，在投藥期之第22週期間，3隻中有1隻具有受抑制之視桿細胞反應，而在第26週或第35週期間均不具有受抑制之視桿細胞反應。
在投藥期之第34週期間，投與1 mg/kg/天之兩隻雌性具有低於準則之視桿細胞ERG。投與1 mg/kg/天之雄性均不具有低於預期範圍之視桿細胞反應。
在對照動物中，僅一隻雌性(動物0102)具有在預期範圍以外之視桿細胞反應，其係在投藥期之第22週及第34週期間發生。僅一隻對照雄性具有低於準則之視桿細胞反應，其係在投藥期之第34週期間發生。
OCT及ERG發現在對照組及投與1 mg/kg/天之組中稀少或不存在。OCT及ERG在投與3 mg/kg/天之動物中發現相對輕微之異常，且二者均指示在投與7.5/5 mg/kg/天之動物中存在高百分比之異常。
恢復期
在恢復期間跟蹤投與7.5/5 mg/kg/天之兩隻對照動物/性別及兩隻動物/性別，且在恢復期之第8週、第13週及第22週進行測試。
在投藥期期間給予7.5/5 mg/kg/天且在投藥期之第22週、第26週及第34週具有顯著降低之視桿細胞反應之兩隻雌性中之一隻(動物0114)在恢復第8週及恢復第13週仍受抑制。在恢復第22週時，第114號顯示B波振幅大幅增加，自恢復第8週時之34.1、33.5 (mcV，右眼、左眼)至恢復第22週時之43.4 mcV、52.7 mcV。然而，此反應仍低於預期平均值超過2.36標準偏差。另一名受影響之第4組雌性第0115號具有受影響較小之ERG B波，但在恢復第8週及第13週時仍低於預期限值，在恢復期之第22週完全恢復。在三次恢復測試之每一次時，第4組雄性二者均具有在預期正常限值內之暗視及明視b波。
定量評估
Covance統計員對來自在投藥期之第34週期間收集之數據實施ERG A波及B波峰潛伏期(隱含時間)及振幅之統計評估。
暗視-34 dB藍色單次閃光B波振幅在各組之間具有顯著差異(P ＜ 0.0047)，B波潛伏期亦如此(P ＜ 0.0370)，但利用此小N分析與對照之個別組比較(鄧奈特測試)並未達到顯著性。
暗視0 dB白色A波之潛伏期在各組之間差異顯著(P ＜ 0.0116)，其中7.5/5 mg/kg/天組與對照組之間的鄧奈特測試差異顯著(P ＜ 0.0095)。
最後，明視0 dB白色B波振幅在各組之間差異顯著(P ＜ 0.0449)，但與對照之組比較未能達到顯著性。
總之，注意到在投藥期之第20週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之若干隻動物具有明顯受抑制之暗視及明視ERG。在投藥期之第26週及第34週期間，在該等動物中視網膜功能仍受抑制，其中投與7.5/5 mg/kg/天之一隻雌性(動物0114)明顯顯示進行性ERG功能障礙之徵象。值得注意的是，第0114號至恢復期之第22週顯示出明確之恢復徵象。中等及低劑量組動物(3.0 mg/kg/天及1.5 mg/kg/天)通常保持在預期限值內，沒有證據表明在投藥期期間朝向ERG振幅降低之趨勢。
在受影響動物中，注意到視桿細胞光感受器介導之暗視 - 34 dB藍色單次閃光明顯受抑制。在受影響最大之動物(投與7.5/5 mg/kg/天之三隻雄性[動物0012、0014及0015]及兩隻雌性[動物0114及0116])中，暗視0 dB單一白色(混合視桿-視錐刺激物) A波之抑制似乎小於B波。此表明，RO7034067對光感受器至雙極細胞傳遞之效應相對大於對光感受器活化本身之效應。此推理得出雙極細胞層係投與7.5/5 mg/kg/天之動物之視網膜功能障礙之原發性位點之可能性。
亦值得注意的是，因應投與RO7034067注意到明顯之個體差異，其中投與7.5/5 mg/kg/天之一些動物展現正常之ERG，且其他動物如前所述具有受抑制之ERG。即使在投與7.5/5 mg/kg/天之動物中，閃光誘發之VEP仍存在。此表明RO7034067投與並未顯著損害視網膜神經節細胞或其對視覺皮質之軸突投射，即使在受影響之視網膜反應之動物中亦如此。若黃斑區與佔據視網膜之顯著更大比例且在很大程度上負責全視野ERG之周邊視網膜相比相對無損傷，則可發生此情況。藉由sdOCT且利用組織病理學已顯示，實際上，黃斑區不受任何實質性視網膜損傷影響。
未注意到投與1.5 mg/kg/天或對照項目(媒劑)之動物具有ERG缺陷。
光譜域光學同調斷層攝影 (sdOCT ，非 GLP)
投藥期
投與7.5/5 mg/kg/天之三隻雄性(動物0012、0014及0016)在第27週期間與第22週相比看起來略微變差。動物0014在周邊中之ONL中之微細囊樣黃斑退化(MMD)及流體空間增加，而動物0016在周邊中更薄且結構更紊亂。MMD空間僅在INL中注意到且在外觀上與在周邊中之ONL中所注意到之空間不同。在第35週期間，動物0014亦看起來較第27週期間略微變差，其中周邊中之INL及ONL中之MMD及流體空間數量繼續增加且周邊中之視網膜層之變薄及結構紊亂略微增加。
在第27週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之一隻雌性(動物0113)在視神經頭及黃斑附近之MMD空間少於第22週期間，但周邊中視網膜層之結構紊亂更多；投與7.5/5 mg/kg/天之一隻雌性(動物0114)具有更多之MMD，其中INL中之囊樣空間延伸進入周邊中，且周邊中之結構紊亂及變薄略微多於第22週期間；投與7.5/5 mg/kg/天之一隻雌性(動物0116)在周邊中之INL中及視神經附近具有空間。在第35週期間，投與7.5/5 mg/kg/天之一隻雌性(動物0113)在視神經頭及黃斑附近仍具有MMD空間；然而，在周邊中注意到多於第27週期間之視網膜層之結構紊亂，其中注意到ILM下之光空空間(左眼中多於右眼中)；動物0114在第35週期間之MMD多於第27週期間，其中INL中之囊樣空間延伸至周邊中，周邊中之結構紊亂及變薄更多，且ONL中及ILM下之光空空間增加。同樣在第35週期間，與第27週相比，動物0115在延伸至周邊中之INL中之MMD空間以及ONL中之稀薄空間增加。
在整個sdOCT間隔期間(投藥期之第22週、第27週及第35週)，投與3 mg/kg/天之雄性在周邊中具有最小/輕度之視網膜結構紊亂。投與3 mg/kg/天之兩隻雌性(動物0109及0110)在第27週期間看起來較第22週期間略微差，具有更多之ONL浸潤/反射斑點及內部區段/外部區段(IS/OS)脫落。在第35週期間，投與3 mg/kg/天之一隻雌性(動物0109)顯示更大之區域，其中IS/OS在周邊中不存在。
對照及投與1.5 mg/kg/天之動物保持正常視網膜外觀。
眼底自發螢光(FAF)影像顯示在以1.5 mg/kg/天或3 mg/kg/天投與對照項目(媒劑)之組中隨時間之變化極小。僅在投與7.5/5 mg/kg/天之受影響最大之動物中注意到斑駁的低螢光。在投與7.5/5 mg/kg/天之一些動物中，該等深色點狀斑點似乎在遠端周邊視網膜退化最明顯處聚結成較大深色斑塊。在具有廣泛MMD之眼睛之FAF影像中，在中央窩周圍注意到深色環。此FAF發現已在許多記錄人類患者之MMD之眼科學期刊文章中予以報導。
論述
本研究中所提及之主要效應為RO7034067對視網膜完整性及功能之劑量及發病率有關之效應。自投藥期之第20週實施ERG及sdOCT以隨後用另一具有類似藥理學性質之測試項目鑑別慢性猴毒性研究中之視網膜變化。為監測生命期間之視網膜變化，將投藥期自13週延長至39週。在利用RO7034067治療期間，注意到在sdOCT上鑑別具有結構異常之動物與在ERG上鑑別具有功能異常之動物之間存在明顯關聯，其中sdOCT上更嚴重之異常與受抑制之ERG波反應相關。該關聯在投藥期之第20/22週期間之第一次研究時存在，且在投藥期期間之兩次隨後研究中持續存在。根據ERG，在3 mg/kg/天劑量組中僅具有輕微異常sdOCT之一些動物未展示任何功能變化。另外，根據sdOCT分級，投與7.5/5 mg/kg/天之三隻動物(動物0014、0114及0116)係受影響最大之動物且具有最大之ERG抑制。
圖3展示在研究持續時間結束時(及針對組織病理學之22週恢復期結束時) sdOCT、ERG及組織病理學變化之暴露-效應相關性。分別在雄性及雌性中以平均1870/2060 ng∙h/mL AUC0-24h及個別地高達2300 ng∙h/mL AUC0-24h暴露之動物對視網膜無效應。對於動物第11號、第109號及第111號，具有視網膜發現之中等劑量下之最低動物暴露為4540/4560/4560 ng∙h/mL AUC0-24h。在3 mg/kg/天之劑量下，在4880/4850 ng∙h/mL (M/F中之AUC0-24h)之暴露下藉由sdOCT及組織學觀察到效應。受抑制之ERG及INL中之微囊性空間主要見於高劑量(5 mg/kg/天)下以5880/6470 ng∙h/mL (M/F中之AUC0-24h)暴露之動物。在本研究期間，暴露隨時間僅顯示極低之可變性。
投與³3 mg/kg/天之所有動物中之OCT發現在某種程度上包括IS/OS之結構紊亂及變薄以及視網膜周邊中ONL之增加之反射率及變薄。亦注意到以INL中微細囊樣空間之獨特模式為特徵之微細囊樣黃斑退化(MMD)。在ILM下及ONL中注意到似乎有流體累積。該等效應與投與3 mg/kg/天之一隻雌性及投與7.5/5 mg/kg/天之兩隻動物/性別之視網膜中部至周邊區域之退化之不良組織病理學發現相關，且特徵在於視網膜之外核層及光感受器層之多焦點結構紊亂，其中光感受器層具有一些損失；視網膜色素上皮細胞多病灶肥大；內核層之一些變薄、結構紊亂及空泡形成；及神經節細胞層之空泡形成。
微細囊樣黃斑退化(MMD)係來自ILM下及ONL中流體空間之獨特發現；如在文獻中經常報導為微細囊樣黃斑水腫之MMD通常與退化性疾病(例如MS或青光眼)相關。其病因瞭解甚少，但正常呈現係副中央窩視覺區中微細囊樣空間之獨特模式，該等空間偶爾在周邊延伸更遠，但總是在INL中且與ONL中或ILM下之流體空間之多變外觀(其形狀不規則且可較其高度更寬)相比，總是具有長而窄且垂直之空間外觀。遠端周邊中INL之變薄性質使得難以瞭解空間之確切形狀；一些看起來像經典之MMD，且似乎係黃斑周圍所注意到空間之延伸，但外圍中INL中之其他空間並不如此。
在視網膜之遠端周邊中，ONL之一些變薄及光感受器/RPE層之一些結構紊亂係正常的。影像品質朝著遠端周邊降格，尤其在猴中，部分係由於其眼睛較小且曲率增加，因此在該位置更難以得出關於視網膜層完整性之明確結論。然而，當跨越各組比較影像時，似乎對sdOCT存在劑量反應，其中較高劑量組在IS/OS中顯示更多之結構紊亂及變薄，且在周邊之ONL和INL中及在ILM下以及在黃斑周圍之MMD空間中顯示更多之流體累積。同樣，在該等組中，投與3 mg/kg/天或7.5/5 mg/kg/天之雌性似乎較雄性更受影響。
眼底自發螢光(FAF)成像僅在具有最顯著之退化性變化之動物之周邊中顯示有斑點之低螢光及高螢光區域；FAF用於記錄可在眼睛中天然產生或累積為疾病過程之副產物之螢光，且可提供關於RPE之健康起關鍵作用之條件之有用資訊。高自發螢光可係脂褐質累積增加之跡象，其可指示退化性變化或氧化損傷。低自發螢光區域可指示RPE細胞缺失或改變。當前研究中之FAF變化指出周邊視網膜及中央窩周圍MMD之退化性變化。
在遠端周邊注意到之高AF信號之明亮斑點區域可源於受RPE失效損害之退化光感受器細胞中脂褐質形成之增加。一般而言，低AF (深色)區域指示RPE細胞缺失或改變，且係注意到最大退化性變化(即光感受器損失及ONL結構紊亂)之處。隨時間推移，提示患病RPE細胞之高AF區域可變成低AF之區，此表明RPE損失。在投與7.5/5 mg/kg/天之動物之遠端周邊注意到之白色高AF斑點帶可視為過渡區，其中之細胞可具有受損之功能；然而，仍存在恢復之可能性。遠端周邊中之過渡區在恢復期早期保持相同但在恢復期之第22週似乎消退之事實可指示，該區域中未達到不可逆損害之臨界點，且隨時間之推移，恢復係可能的。OCT發現及ERG測試顯示所有動物中之明顯改良，尤其在最後一個時間間隔、即恢復期之第22週時。僅在4隻中之一隻動物中，ERG保持低於正常限值。
應注意，在FAF成像中，特定而言在猴中，由於定向及/或眼睛運動之輕微變化，FAF外觀可會有微妙變化。軟體將多達100圖框進行平均以產生最終影像，且此可產生一些影像反差或陰影可變性。在受影響最大之動物之遠端周邊中收集之影像確實顯示似乎與更顯著之退化性變化相關之變化。在對結果之解釋中需注意的是，並非所有動物在每一間隔均成像，且利用此一小樣本大小難以對FAF外觀、劑量反應及隨時間之進展做出明確陳述。
OCT發現與視網膜退化之病理學發現相關，視網膜退化之特徵在於視網膜之外核層及光感受器層之結構紊亂，以及周邊中光感受器層之多焦點損失。內核層之變薄、結構紊亂及空泡形成之病理學發現與MMD之OCT發現一致，且神經節細胞層之空泡形成與ILM下光空空間(流體)增加之OCT發現一致。INL中MMD之OCT發現本質上係病灶性的，且在組織病理學切片上未必注意到空間(或空泡)。在組織病理學上，視網膜退化在恢復期期間係不可逆的，但內核層之空泡形成不再存在。視網膜退化視為不利的。
總結
向食蟹猴投與1.5 mg/kg/天、3 mg/kg/天或7.5/5 mg/kg/天RO7034067持續39週主要與投與7.5/5 mg/kg/天之動物皮膚之臨床徵象相關，該等臨床徵象與表皮增生之非不良顯微鏡發現相關。另外，在投與3 mg/kg/天或7.5/5 mg/kg/天之動物中觀察到劑量有關發病率及嚴重程度功能(如藉由EGR所量測)以及眼睛中之形態學(不良視網膜退化)變化，且投與7.5/5 mg/kg/天之雌性胸腺(非反向)亦鑑別為與測試項目有關之組織病理學變化之部位。
在本研究之條件下，基於在投與3 mg/kg/天或7.5/5 mg/kg/天之動物眼睛中之發現及在投與1.5 mg/kg/天之動物中不存在任何測試項目效應，認為未觀察到不良效應之劑量(No Observable Adverse Effect Level，NOAEL)係1.5 mg/kg/天，此對應於在對雄性/雌性之投藥期之第39週期間414 / 396 ng/mL (Cmax )及1870 / 2060 ng·hr/mL (AUC0-24 )之全身RO7034067暴露。
在猴39週慢性毒性研究(恢復期為22週)中，在4260 ng.h/mL AUC0-24h 之暴露下藉由sdOCT檢測到周邊視網膜退化(光感受器損失)、高反射性RPE及更多之中心MMD (空泡) (自治療之第20週開始評價)。補充採集之ERG數據顯示受抑制之B波。
在來自猴慢性39週毒性研究之視網膜中注意到，猴中光感受器層中之多焦點周邊視網膜退化以及內部視網膜層之肥大性RPE及微囊性空間(空泡)，如藉由sdOCT所檢測。此與ERG中與受抑制之暗視(視桿細胞) B波及受影響稍少之明視(視錐細胞) B波相關。sdOCT及ERG評估在第20週起始(在利用該分子之慢性猴毒性研究結束時報告RO6885247之視網膜變化之後)，且持續至研究之第35週。該等發現由組織病理學證實。治療39週之視網膜發現之NOEL為1870/2060 ng.h/mL (M/F中之AUC0-24h )，其中效應係藉由sdOCT且在組織學中在4880/4850 ng.h/mL (M/F中之AUC0-24h )之暴露下觀察到。受抑制之ERG及INL中之微囊性空間僅在5880/6470 ng.h/mL (M/F中之AUC0-24h )之暴露之高劑量下的動物中可見。
實驗證據表明，對視網膜之效應不與對組織增殖之效應直接相關，但與視網膜中高黑色素結合及組織保留之活體外證據有關。儘管在猴及有色大鼠RPE/視網膜中之組織累積及組織保留較高，但在有色大鼠治療26週後(此時在猴中清楚地看到視網膜變化)不存在任何視網膜效應之證據。因此，黑色素結合之RO7034067本身不給予毒性，且除存在高含量之黑色素結合RO7034067以外之因素必須在其在猴中之視網膜效應中起作用。在活體外人類RPE細胞中觀察到溶酶體功能/自噬體累積之損害。
視網膜退化之所有特徵均由組織病理學證實，且似乎不損害動物之視力(基於一般行為及眼科評價)，儘管在一些高暴露之動物中B波明顯受抑制。在猴研究之22週恢復期中，MMD及受抑制之ERG幾乎完全恢復，但周邊光感受器損失及高反射性/肥大性RPE則未恢復。對於RO7034067而言，在個別暴露高達15,100 ng.h/mL AUC0-24h 之2週猴毒性研究中未觀察到視網膜變化。在RO7034067之39週猴毒性研究之生命持續時間期間，低劑量在sdOCT及ERG中保持無任何測試項目有關之變化直至評價之最後一週(第35週)。在1.5 mg/kg/天之此低劑量下，視網膜亦沒有對應於在第39週對於雄性/雌性分別為414/396 ng/mL (Cmax )及1870/2060 ng.h/mL (AUC0-24 )之全身RO7034067暴露之任何組織病理學變化。
實例 4
FoxM1 (即一種由其他剪接修飾劑化合物選擇式剪接之基因)編碼細胞週期調節子。使用RT-qPCR及針對FoxM1a (FL)及FoxM1b/c (D9)之特異性引子，證實在RO7034067治療後對FoxM1 之選擇式剪接之修飾(對於FL，EC50 67 ± 32 nM，對於D9 mRNA，139 ± 43 nM；參見圖4)。若剪接變化處於生物學上顯著之程度，則FoxM1A 同種型之豐度增加以及缺少外顯子9之FoxM1 同種型之豐度減少具有擾亂並抑制細胞週期進展之能力。因此，RO7034067關於SMN2 及FoxM1 剪接機制以類似的方式起作用，但在蛋白質功能方面具有相反結果。MADD (即一種參與細胞凋亡過程之基因)亦已鑑別為二級剪接靶標。
下文闡述在RO7034067之毒物學研究中所鑑別之FoxM1 及MADD 失調之功能性結果(包括細胞週期分析及動物組織中之RNA定序研究)。
利用一系列SMN2 剪接修飾劑(其包括RO7034067)進行之活體外研究表明，不同數量之基因轉錄本可受選擇式剪接之影響(Palacino J.等人，Nat Chem Biol, 2015; 11:511-7.)。因此，為增強對利用RO7034067治療所引起毒性之機理理解，將RNA定序分析、之後對剪接基因之詳細分析整合至在大鼠及猴中針對RO7030467所進行之2週劑量範圍發現重複劑量毒性研究中。在治療2週之大鼠之脾、十二指腸及睪丸中實施基因表現分析(MADD 基因)。RO7034067治療動物之基因表現分析揭示對於MADD 基因轉錄本且在脾、十二指腸及睪丸中在7.5 mg/kg/天之最高劑量下之剪接反應。MADD 轉錄本剪接之變化與在相同劑量下所觀察到之GI道中細胞凋亡之觀察結果一致，此乃因據報導MADD 基因產物干擾細胞凋亡過程。
將類似研究整合至在食蟹猴中利用RO7034067進行之2週劑量-範圍發現毒性研究中。出於此目的，對來自經0.75 mg/kg/天、1.5 mg/kg/天、3 mg/kg/天及6 mg/kg/天治療之動物之脾、十二指腸及睪丸進行分析。利用mRNA同種型特異性qPCR分析進行之分析揭示所有三個器官中MADD 基因轉錄本之轉錄本對最高劑量下RO7034067治療之次要藥理學反應。由於在脾中檢測到次要藥理學，因此藉由RNA定序進一步分析此器官之轉錄體範圍之mRNA剪接或表現變化。此分析揭示，除上文所提及之剪接轉錄本以外，絕大多數mRNA在經RO7034067治療時，在選擇式剪接方面不展現變化或在關於選擇式剪接之變化方面無劑量依賴性趨勢。此外，未檢測到路徑表現變化之劑量依賴性趨勢。因此，雖然在RO7034067介導之選擇式轉錄本剪接中之少數變化與活體外數據及其他SMN2 剪接修飾劑之彼等數據一致，但在本研究條件下其似乎不會在根本上影響生物路徑或過程。
實例 5
測試及對照項目
測試項目
對照項目
將於DMSO中之雷帕黴素 (Rapamycin) Sigma-Aldrich編號R8781, 2.5 mg/ml (2.74 mM) 2 mM原液於DMSO中稀釋至3.75 µM，且以等分試樣儲存在-20℃下。
經誘導之多潛能幹細胞之培養
將人類iPSC (hIPS_Neo_Clone_1)培養於作為標準培養基之mTeSR1 (Stem Cell Technologies)中，且將食蟹猴iPSC (cips_54-1285_cFIB_Clone_8)培養於補充有10 ng/ml活化素A及15 ng/ml FGF2之MT培養基中。
對於基因表現譜，利用Accutase (Stem Cell Technologies)使幹細胞分離且於塗覆有Matrigel (BD Biosciences)之12孔板中平鋪於補充有10 µM Rock抑制劑Y-27632 (Sigma-Aldrich)之各別標準培養基中。為獲得足夠之RNA，在處理之前24 h將猴幹細胞以15000個細胞/cm2接種且將人類幹細胞以40000個細胞/cm2接種。此後，利用測試項目於新鮮、預熱之培養基中之連續稀釋液(1:5，濃度範圍為0.64 nM直至約10 µM)將幹細胞處理24 h。為停止實驗，將細胞於含有β-巰基乙醇之QiaGen溶解緩衝液RLT中溶解。
為分析細胞週期，利用Accutase (Stem Cell Technologies)使猴幹細胞分離且於塗覆有Matrigel (BD Biosciences)之6孔板中以15000個細胞/cm2平鋪於補充有10 ng/ml活化素A、15 ng/ml FGF2及10 µM Rock抑制劑之MT培養基中。使細胞擴增1天，且然後藉由於不補充FGF2及活化素A之MT培養基中饑餓7 h來同步。在進行流式細胞術之前，使細胞與含有補充物FGF2及活化素A以及80 nM、400 nM及2000 nM之測試項目或30 nM作為陽性對照之雷帕黴素之新鮮MT培養基一起培育24 h以使細胞停滯在G1期。利用Accutase (Stem Cell Technologies)使人類幹細胞分離且於塗覆有Matrigel (BD Biosciences)之6孔板中以40000個細胞/cm2平鋪於補充有10 µM Rock抑制劑Y-27632 (Sigma-Aldrich)之mTeSR1中。使細胞擴增3天，每天更換培養基。由於人類iPSC在饑餓期間藉由生長因子戒斷而失去其性質，因此幹細胞與200 ng/ml諾考達唑(Nocodazole)(Sigma-Aldrich)同步5 h且隨後用mTesR1培養基洗滌2次。在進行流式細胞術之前，使細胞與含有80 nM、400 nM及2000 nM之測試項目或30 nM作為陽性對照之雷帕黴素之新鮮TesR1培養基一起培育24 h以使細胞停滯在G1期。
流式細胞術及 DNA 染色
對於細胞週期分析，將人類iPSC用PBS洗滌，用Accutase (Stem Cell Technologies)分離且藉由離心收集。利用600 ul 7AAD/皂素/RNAse混合物(溶解於FACS緩衝液(PBS, 5% FBS, 10 mM Hepes)中之25 μg/ml 7AAD (編號559925，BD)、50 μg/ml RNase及0.03%皂素)將細胞在37℃下染色1 h。將食蟹猴iPSC用PBS洗滌，用Accutase (Stem Cell Technologies)分離且藉由離心收集。將細胞於每ml培養基含有1 ul Vybrant Dye Cycle Violet染色劑(編號V35003，1000×原液，Invitrogen)之300 ul標準MT培養基(含有FGF2及活化素A)中在37℃下染色30 min。另外，添加2 ul 7AAD (50 μg/ml 7AAD)而不透化以標記死亡細胞；使細胞在37℃下培育10 min。使用Canto II細胞計數器(BD Biosciences)實施流式細胞術分析，且利用FlowJo軟體分析數據。
定量即時 PCR
人類及食蟹猴mRNA表現係利用來自Roche之客製化引子及經FAM螢光標記之通用探針庫(Universal Probe Library，UPL)探針或來自Microsynth之含有5’ FAM標記及3’末端BlackHole暗淬滅劑1 (BHQ1)之探針來量測。引子及經FAM標記之探針之序列列示如下：
引子/探針之物種特異性：# …人類；* …食蟹猴
對於定量即時PCR，將於12孔板中培養且經Roche化合物處理24 h之細胞溶解於500 ul/孔含有β-巰基乙醇之QiaGen溶解緩衝液RLT中。利用RNeasy Mini套組連同DNase處理在固體載體上提取總RNA。藉由使用Nanodrop吸收光譜及來自Agilent Bioanalyzer 2100之微流體毛細管陣列電泳圖來控制RNA完整性。使用Transcriptor First Strand cDNA合成套組(Roche Applied Science編號04379012001)遵循製造商之推薦方案，利用寡-dT引子及10 ng/uL終濃度之摻加MS2 RNA反轉錄介於300 ng至800 ng之總RNA。使用67.5 ng總RNA衍生之cDNA作為於含有1× LightCycler 480 Probes Master、0.4 μM正向及反向引子以及0.2 μM經FAM標記之水解探針之20 μl混合物中之輸入在LightCycler 480 qPCR機器上實時定量PCR。溫度程式係由以下組成：在95℃下預培育10 min，之後為50個擴增循環(95℃持續10 s，60℃持續30 s，72℃持續5 s)。在不存在cDNA模板之情形下進行陰性對照反應，以確認混合母液中不存在cDNA污染。對每一樣品-mRNA組合實施Ct (循環臨限值)-值之量測。使用2-∆∆Ct方法(Livak KJ 等人，Method. Methods. 2001; 25(4):402-8. )，數據呈現為基因表現正規化為內源性參照基因且相對於未經處理對照之倍數變化。為得到個別∆Ct值，將每一樣品之每一靶標mRNA之Ct值正規化為GAPDH (甘油醛-3-磷酸脫氫酶)之內源性參照mRNA之Ct值。∆Ct值係藉由自每一處理組之各別∆Ct值減去媒劑對照組之∆Ct值來計算。所得表現比率(2-∆∆Ct)反映相對於媒劑對照與處理有關之mRNA表現變化。IC50定義為在最大(頂部)反應與最大受抑制(底部)反應中間引起反應之抑制劑濃度。導出IC50之模型假定劑量反映曲線具有標準斜率，其等於-1.0之希爾斜率(Hill slope)(或斜率因子)。模型方程：Y=底值+ (頂值-底值)/(1+10^((X-LogIC50)))；其中Y為反應數據且X為log10濃度(以µM計)。
結果
在活體外測試RO7034067之其對FOXM1 mRNA變體(FOXM1B/C)表現之濃度-效應關係。藉由RT-qPCR在經0.64 nM直至約10 µM之測試項目處理24 h之人類及猴iPSC中量測FOXM1B/C轉錄本變體相對於GAPDH之表現程度。利用RO7034067處理使得人類及猴細胞中FOXM1B/C轉錄本變體濃度依賴性下調(表1及表2)。在人類及猴細胞中，RO7034067影響FOXM1B/C之表現程度，人類及猴細胞中之IC50值分別為114 nM及155 nM (圖5)。
在活體外測試RO7034067之其對iPSC細胞週期之濃度依賴性效應。在猴iPSC中，化合物RO7034067以濃度依賴性方式誘導G2期細胞週期停滯。在人類iPSC中，RO7034067以濃度依賴性方式誘導S期細胞週期停滯(表3及表4)。如所預期，利用30 nM雷帕黴素處理使得人類及猴細胞停滯在G1期(Metcalfe等人，Oncogene 15, 1635-1642)。
表 1 RO7034067 對人類 iPSC 之相對 mRNA 表現數據
將即時 PCR 信號正規化為 GAPDH ，且計算每一經處理樣品相對於人類 iPSC 之對照樣品之 mRNA 表現比率 (2-∆∆Ct ) 。
表 2 食蟹猴 iPSC 中之相對 mRNA 表現
將即時 PCR 信號正規化為 GAPDH ，且計算每一經處理樣品相對於食蟹猴 iPSC 之對照樣品之 mRNA 表現比率 (2-∆∆Ct) 。
表 3 細胞週期人類數據：細胞週期 G1 期、 S 期及 G2 期中之事件百分比
表 4 細胞週期食蟹猴數據：細胞週期 G1 期、 S 期及 G2 期中之事件百分比
總結
為評價RO7034067剪接修飾劑對FOXM1標記物mRNA表現及細胞週期之效應，利用來自人類及食蟹猴之經誘導之多潛能幹細胞進行濃度-效應關係之活體外測試。在利用0.64 nM直至約10 µM之RO7034067處理24 h後，該化合物顯示FOXM1B/C轉錄本變體之濃度依賴性下調。源自濃度-反應曲線之IC50值在人類與食蟹猴細胞之間相當，此展示藥理學反應中之高物種相似性。檢測到RO7034067在食蟹猴細胞中誘導有絲分裂停滯之濃度依賴性效應。對人類IPSC之細胞週期分析揭示利用RO7034067改變細胞週期之濃度依賴性效應。FOXM1B/C之下調似乎與人類及食蟹猴細胞二者中之細胞週期有關發現相關，此將與FOXM1在介導細胞週期過渡中之關鍵作用一致。此下調必須顯著(使表現降低約80%或更多)以與細胞週期之顯著改變相關。
圖 1a 及 1b 活體內 SMN 蛋白表現之增加
HET =異型接合。
利用RO7034067治療C/C-等位基因小鼠及SMND7小鼠。最後劑量後1小時，收集腦及四頭肌且藉由HTRF評價SMN蛋白之含量。A. C/C-等位基因小鼠之腦中之SMN蛋白。B. SMND7小鼠之腦中之SMN蛋白。C. C/C-等位基因小鼠之四頭肌中之SMN蛋白。D. SMND7小鼠之四頭肌中之SMN蛋白。數據代表5-6隻動物/組之平均值± SEM且表示為相對於媒劑治療對照之倍數變化。相對於未經治療之對照，* = p＜0.05，** = p＜0.01，*** = p＜0.001。
圖 2a 及 2b ： RO7034067 增加活體外 SMN mRNA 及蛋白質產生；
在RO7034067存在或不存在下，將來自1型SMA患者之纖維母細胞培養24小時(A)或48小時(B)；將來自1型SMA患者iPSC之運動神經元培養72小時(C)及將來自健康志願者(HV)之全血細胞培養4小時(D)。藉由反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)來評價SMN剪接，且藉由纖維母細胞溶解物中之均相時間解析螢光(HTRF)及藉由神經元中SMN之免疫染色來評價SMN蛋白含量。A. 1型SMA纖維母細胞中之SMN2剪接。B. 1型SMA纖維母細胞中之SMN蛋白。C. 1型SMA運動神經元中之SMN蛋白。D. 源自HV之全血中之SMN1及SMN2剪接。數據代表每個數據點3次評估之平均值± SEM且表示為相對於未經治療之對照之倍數變化。
圖 3 ：在 39 週研究持續時間內及 22 週恢復期間，藉由 sdOCT 、 ERG 及組織病理學在視網膜中記錄之效應與個別猴中之暴露之間的關聯 ( 針對組織病理學 ) 。
研究結束時之個別動物暴露(AUC0-24h)對如藉由在長期經RO7034067治療之猴中之sdOCT及ERG所檢測之視網膜效應作圖。
在三個時間點中之任一者處進行最差sdOCT/ERG分級。
X軸上之數值係指本研究中之個別動物數量。+符號指示在組織學中存在視網膜發現。R：表示動物仍處於恢復期。
圖表中之黑色數值1、2、3係指如下在治療期結束時根據sdOCT之視網膜效應之嚴重程度分級：
1. 輕度：僅在周邊中可見之視網膜變化(層之結構紊亂/變薄)；層可能會變薄/結構紊亂但不會不存在；反射率增加或降低，視網膜層中可見渾濁；在內部視網膜層中及內部區段/外部區段連接(IS/OS)處可見高反射斑點(HRS)。
2. 中度：觀察到視網膜變化(結構紊亂/變薄)更接近黃斑；多個層(例如，IS/OS)可不連續或不存在；可存在MMD，但侷限於顳至視神經頭之小區域；FAF影像中之斑點狀周邊；在不存在IS/OS之RPE中可看到HRS。
3. 明顯：MMD更加廣泛，例如在黃斑之任一側上；破壞，內部界膜下及外核層中之光空空間。
圖表中之紅色數值1及2係指根據ERG之視網膜效應。基於＞ 300隻動物之歷史樣本，將分級「1」指配給低於預期平均值1.96標準偏差(SD)以下但高於或等於2.36* SD之B波振幅，且將分級「2」指配給低於預期平均值2.36 SD之B波振幅。將在治療期結束時具有持續受抑制之B波振幅之動物包括在其分級中。排除具有偶爾低B波之對照及治療動物。
圖 4 活體外 FoxM1 之選擇式剪接
利用RO7034067將1型SMA患者纖維母細胞處理24小時，且藉由RT-qPCR分析FoxM1 全長(FL) mRNA及缺少外顯子9 (D9)之mRNA。數據代表6次重複之平均值± SEM，且表示為相對於未經處理之對照之倍數變化。
圖 5 RO7034067 對人類及食蟹猴 iPSC 中 FOXM1 mRNA 表現程度之效應
利用RO7034067將細胞處理24小時，且藉由RT-PCR分析FOXM1 B/C轉錄本變體。數據代表3次重複之平均值± SEM，且表示為相對於對照之倍數變化。指示IC50值。A) 人類iPSC。B) 食蟹猴iPSC
圖 6 RG7916 之血漿濃度。 按劑量對RG7916之血漿濃度與時間作圖。
圖 7 RG7916 之血漿濃度與 SMN2 mRNA 含量。 繪製RG7916之時間匹配濃度與(A) SMN2全長mRNA對SMNΔ7 mRNA之比率，(B) SMN2全長mRNA或(C) SMNΔ7 mRNA。
圖 8 SMN 蛋白含量。 (A) 根據劑量，血液中SMN蛋白之濃度。在(B)中根據劑量對血液中自基線之SMN蛋白變化比率作圖。

Claims (18)

  1. 一種7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮之用途，其用於製造用於治療SMA之藥劑，其中該7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/kg使用且對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg使用。
  2. 如請求項1之用途，其中該7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮係用於患者(尤其有需要之患者)，特定而言其中該患者係人類(例如男性或女性)。
  3. 如請求項2之用途，其中該劑量係每天投與。
  4. 如請求項1至3中任一項之用途，其中7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮係經口投與。
  5. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該患者係人類(例如男性或女性)，其中7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮係用於投與、特定而言經口投與。
  6. 如請求項1至3中任一項之用途，其中SMA係II型SMA。
  7. 如請求項1至3中任一項之用途，其中7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮係每天投與一次。
  8. 如請求項1至3中任一項之用途，其中7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮係投與一次。
  9. 一種用於治療SMA (更特定而言II型或/及III型SMA)之醫藥組合物，其對於體重小於20 kg之患者以0.25 mg/公斤體重之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與或對於體重大於或等於20 kg之患者以5 mg之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮投與、特定而言每天一次經口投與，其中該醫藥組合物包含藉由以下方式調配為口服水溶液之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽：將7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽溶解於pH值小於pH 4、特定而言小於pH 3.8、更特定而言小於pH 3.6、最特定而言pH 3.0至3.2的緩衝系統中以提供足夠高之藥物濃度，該緩衝系統係例如檸檬酸緩衝系統、蘋果酸鹽緩衝系統、馬來酸鹽緩衝系統或酒石酸鹽緩衝系統、最特定而言酒石酸鹽緩衝系統。
  10. 如請求項9之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含作為乾粉或顆粒用於構成口服溶液之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽。
  11. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中可藉由選擇呈細粉末形式之有機酸及其鹽將緩衝系統併入至乾燥調配物中，該有機酸及其鹽係例如檸檬酸三鈉及檸檬酸、蘋果酸二鈉及蘋果酸、酒石酸鉀鈉及酒石酸或酒石酸二鈉及酒石酸，特定而言酒石酸鉀鈉及酒石酸。
  12. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽、諸如山梨醇、異麥芽酮糖醇或特定而言甘露醇等稀釋劑及其組合，其確保粉末摻合物在構成該口服溶液期間快速溶解，且視情況可添加填料以便藉由乾法壓實來製粒以改良流動性且確保穩健之均勻性。
  13. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含： 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；及 緩衝系統，其選自檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸。
  14. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含： 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽； 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸；及 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇。
  15. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含： 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽；及 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇。
  16. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含： 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽； 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸； 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；及 穩定劑，特定而言依地酸二鈉(disodium edetate)。
  17. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含： 7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽； 緩衝系統，特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸； 稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇； 抗氧化劑，特定而言抗壞血酸；及 穩定劑，特定而言依地酸二鈉。
  18. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含： 1%wt至10%wt之7-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮或其醫藥上可接受之鹽； 5%wt至15%wt之緩衝系統、特定而言選自以下之緩衝系統：檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，更特定而言蘋果酸鹽或酒石酸鹽，最特定而言酒石酸鹽；或替代地緩衝系統之相應酸單獨作為酸化劑，特定而言酒石酸； 40%wt至70%wt之稀釋劑，特定而言甘露醇或甘露醇及異麥芽酮糖醇之混合物，更特定而言甘露醇； 1%wt至4%wt之抗氧化劑，特定而言抗壞血酸； 0.5%wt至2%wt之穩定劑，特定而言依地酸二鈉； 0.5%w至2%w之潤滑劑，特定而言PEG6000； 0%wt至3%wt之甜味劑，特定而言蔗糖素或糖精鈉，最特定而言蔗糖素；及 0%wt至20%wt之風味劑，特定而言草莓風味劑或香草風味劑； 其中成分之總量不超過100%wt。
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