KR20200065025A - 척수성 근위축증의 새로운 치료법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 척수성 근위축증(SMA)의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온, SMA의 치료에 사용될 그의 약학 조성물, 그의 치료 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 척수성 근위축증(SMA)의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온, SMA의 치료에 사용될 그의 약학 조성물, 그의 치료 방법에 관한 것이다.
척수성 근위축증(SMA)은 가장 광의에서 근약화 및 근위축을 야기하는 척수 및 뇌간에서의 진행성 운동 뉴런 손실을 특징으로 하는 일련의 선천성 및 후천성 중추 신경계(CNS) 질환을 말한다. SMA는 근위축을 초래하고 마비를 야기하는 척수 전각으로부터의 알파 운동 뉴런의 퇴화를 특징으로 한다. 따라서 상기 알파 운동 뉴런 퇴화는 실질적으로 환자의 생체 예후를 위태롭게 한다. 건강한 대상자들에서, 상기 뉴런은 뇌로부터 근육으로 메시지를 전달하여, 근육의 수축을 초래한다. 상기와 같은 자극의 부재하에서, 근육은 위축된다. 이어서, 근육 및 보다 특히는 몸통, 상박 및 대퇴 근육의 전신성 약화 및 위축 이외에, 상기 질병들은 심각한 호흡기 문제들을 동반할 수 있다.
유아 SMA는 상기 신경퇴행성 질병의 가장 심각한 형태이다. 증상으로는 근약화, 불량한 근긴장도, 약한 울음, 흐느적거림 또는 주저앉으려는 경향, 흡인 또는 연하 곤란, 폐 또는 인후 내 분비물의 축적, 섭식 곤란, 및 기도 감염에 대한 증가된 민감성이 포함된다. 다리가 팔보다 더 약해지는 경향이 있으며, 머리를 들거나 자리에서 일어나는 것과 같은 발달 단계는 도달될 수 없다. 일반적으로, 증상들이 빨리 나타날수록, 수명은 더 짧아진다. 운동 뉴런 세포가 퇴화될 때, 증상들은 바로 나타난다. 상기 질환의 심각한 형태는 치명적이며 모든 형태들이 알려진 치료법이 없다. SMA의 과정은 운동 뉴런 세포 퇴화의 속도 및 그 결과 야기되는 쇠약의 중증도와 직접 관련된다. 심각한 형태의 SMA를 갖는 유아들은 호흡을 지지하는 근육의 약화로 인해 호흡기 질환에 자주 걸린다. 보다 경미한 형태의 SMA를 갖는 아동들은 훨씬 더 오래 살지만, 이들 아동들, 특히 더 중증 양상의 아동들은 광범위한 의료 지원을 요할 수 있다. SMA 질병의 임상 양상은 하기의 5개 군으로 분류되었다:
1) 0형 SMA(자궁내 SMA)는 상기 질병의 가장 심각한 형태이며 출생전에 시작된다. 통상적으로, 0형 SMA의 첫번째 증상은 임신 30 내지 36 주 사이에 처음 관찰될 수 있는 태아의 감소된 움직임이다. 출생후에, 이들 신생아들은 움직임이 거의 없으며 연하 및 호흡에 어려움이 있다.
2) 1형 SMA(유아 SMA 또는 베르드니히-호프만(Werdnig-Hoffmann)병)는 0 내지 6개월 사이에 증상이 나타나며; SMA의 상기 형태는 매우 심각하다. 환자들은 절대 앉는 능력을 달성할 수 없으며, 사망은 통상적으로 호흡 보조없이 첫 2년 이내에 일어난다.
3) 2형 SMA(중간 SMA)는 7 내지 18 개월에서 발병 연령을 갖는다. 환자들은 도움없이 앉는 능력을 달성하지만, 도움을 받지 않고는 결코 서있거나 걷지 못한다. 이 군에서의 예후는 호흡기 침법 정도에 크게 의존한다.
4) 3형 SMA(청소년 SMA 또는 쿠겔베르그-웰란더(Kugelberg-Welander)병)는 일반적으로 18 개월 이후에 진단된다. 3형 SMA 환자들은 병과중 어느 시점에서는 독립적으로 걸을 수 있으나, 종종 청년기 또는 성인기에 휠체어를 사용하게 된다.
5) 4형 SMA(성인 발병 SMA). 쇠약이 통상적으로 후기 청소년기에 혀, 손 또는 발에서 시작된 후에, 신체의 다른 부위들로 진행된다. 성인 SMA의 과정은 훨씬 더 느리고 기대 수명에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않는다.
척수성 근위축증의 모든 형태는 척수의 전각으로부터의 뉴런의 퇴화에 이은 진행성 근약화 및 근위축을 동반한다. SMA는 현재 유아 사망률의 가장 일반적인 원인 중 하나가 된다. SMA는 전세게 모든 지역들에서 1/6000 내지 1/10000의 유병률로 소녀 또는 소년들에서 동일하게 발병된다.
현재 운동 기능의 안정화 또는 개선을 제공하는, SMA에 대한 승인된 경구 치료제는 없다. 여러 약물 후보들이 현재 비임상 및 임상 환경에서 연구중이며(문헌[Lewelt A, et al, Curr Neurol Neurosci Rep. 2012; 12:42-532]; 문헌[Arnold et al., Muscle Nerve. 2015; 51:157-167]), 최근에 SMN2 프리 mRNA 내 엑손 7의 혼입을 촉진하는 척추강내-투여된 안티센스 올리고뉴클레오티드인 뉴시너센이 미국, 유럽 및 다른 관할구역들에서 승인을 받았다.
SMA의 유전적 기초 및 병리학에 대한 보다 충분한 이해 및 탐구되고 있는 여러 치료 전략에도 불구하고, 어느 것도 임상에서 제한된 부작용을 갖는 경구 치료제로서 성공을 나타내지 못했다. 본 발명은 상기 경구 치료제 요구에 대응하고자 한 것이다. 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 현재 임상 제 2 상에서 연구되고 있다.
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온에 대한 무작위 이중 맹검 위약 대조, 제 2상 연구(NTC02908685 또는 BP39055)가 2 내지 25세 연령의 2형 및 3형 SMA 환자들에게 수행되고 있다.
놀랍게도, FMO3이 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 배출 경로에 관여하여, 상기 약물의 투여량에 영향을 미칠 가능성이 밝혀졌다.
연구 BP39055의 파트 1에서는, 놀랍게도 기저치 대비 151%(49% 내지 251% 범위)의 중앙 SMN 단백질 증가가 12 내지 25세의 SMA 환자들에서 5 mg의 최고 평가 용량에 대해 관찰되었으며, SMN 단백질의 96%(17% 내지 150% 범위) 증가가 2 내지 11세 군에서 0.25 mg/kg의 최고 시험 용량에 대해 나타난 것으로 밝혀졌다.
결과적으로, 놀랍게도 최적 용량이 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 1회 0.25 mg/kg이고 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg인 것으로 밝혀졌다. 그러므로, 선택된 BP39055 파트 2 용량에 대한 예측 평균 노출량(AUC0-24h,ss)은 2 내지 25세 연령의 모든 환자들에 있어서 1690 ng*h/mL[95% CI 1600 - 1780 ng*h/mL]인 것으로 예상된다.
원숭이 연구를 기반으로, 놀랍게도 SMN이 더 증가될 수 있을 것으로 예상할 수 있다 하더라도, 상기 용량은 임의의 망막 변성을 방지하기 위해 남성 및 여성 각각에서 1870/2060 ng*h/mL의 AUC0-24h의 노출량을 초과해서는 안되는 것으로 밝혀졌다.
더욱이, 투여량 상한치는 또한 놀랍게도 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온에 의해 FOX M1 및 MADD의 스플라이싱에 관련된 것으로 밝혀졌다. 상기 상한치 투여량은 망막 변성에 관련된 투여량과 동일하다.
도 1a 및 1b : 생체내 SMN 단백질 발현의 증가.
HET = 이형접합체.
C/C-대립유전자 마우스 및 SMNΔ7 마우스를 RO7034067로 처리하였다. 마지막 투약 1 시간 후에, 뇌 및 대퇴사두근을 수집하고 SMN 단백질의 수준을 HTRF로 평가하였다. A. C/C-대립유전자 마우스의 뇌 내 SMN 단백질. B. SMNΔ7 마우스의 뇌 내 SNM 단백질. C. C/C-대립유전자 마우스의 대퇴사두근 내 SMN 단백질. D. SMNΔ7 마우스의 대퇴사두근 내 SNM 단백질. 데이터는 군 당 5 내지 6 마리 동물들의 평균 ± SEM을 나타내고, 비히클-처리된 대조군 대비 배수 변화도로 나타내었다. * = 미처리 대조군 대비 p<0.05, ** = p<0.01, *** = p<0.001.
도 2a 및 2b : RO7034067은 시험관내에서 SMN mRNA 및 단백질 생성을 증가시킨다.
1형 SMA 환자들로부터의 섬유아세포를 24 시간(A) 또는 48 시간(B) 동안 배양하였다; 1형 SMA 환자 iPSC로부터의 운동 뉴런을 72 시간(C) 동안 배양하고, 건강한 지원자(HV)로부터의 전혈 세포를 4 시간(D) 동안 RO7034067의 존재 또는 부재하에 배양하였다. SMN 스플라이싱을 역전사 폴리머라제 연쇄반응(RT-PCR)으로 평가하였고, SMN 단백질 수준을 섬유아세포 용해물중에서 균질 시분해 형광법(HTRF) 및 운동 뉴런 내 SMN에 대한 면역염색법으로 평가하였다. A. 1형 SMA 섬유아세포에서의 SMN2 스플라이싱. B. 1형 SMA 섬유아세포에서의 SMN 단백질. C. 1형 SMA 운동 뉴런에서의 SMN 단백질. D. HV로부터 수득된 전혈에서 SMN1 및 SMN2 스플라이싱. 데이터는 데이터 포인트 당 3개 평가값들의 평균 ± SEM을 나타내며, 미처리 대조군 대비 배수 변화도로 나타내었다.
도 3 : sdOCT , ERG 및 조직병리학에 의해 망막에서 기록된 효과들과 39-주 연구 기간 동안 및 22 주의 회복기( 조직병리학의 경우 )에 개개 원숭이들에서의 노출량 사이의 연관성.
연구 말기에 개개 동물 노출량(AUC0-24h)을 RO7034067로 장기간 치료한 원숭이에서 sdOCT 및 ERG에 의해 검출된 바와 같은 망막 효과에 대해 도표화하였다. 3개 시점들 중 어느 한 시점에서 최악의 sdOCT/ERG 등급을 취하였다. X-축 상의 숫자들은 연구에서의 개개 동물 수를 나타낸다. + 기호는 조직학에서 망막 소견의 존재를 나타낸다. R: 동물이 여전히 회복 단계에 있음을 의미한다. 그래프에서 검정색 숫자 1, 2, 3은 다음과 같은 치료 단계 종료시 sdOCT에 의한 망막 효과의 중증도 등급을 나타낸다:
1. 경도: 주변부에만 나타나는 망막 변화(층의 붕괴/박층화); 층은 박층화/붕괴될 수 있으나 부재하지는 않는다; 증가 또는 감소된 반사율, 흐릿함이 망막층에서 나타날 수 있다; 과반사점(HRS)이 내망막층 및 내절/외절 접합부(IS/OS)에 나타날 수 있다.
2. 중등도: 황반에 더 근접하여 나타나는 망막 변화(붕괴/박층화); 층들(예를 들어, IS/OS)이 불연속이거나 부재할 수 있다; MMD는 존재할 수 있으나 시신경 머리 측면의 작은 부위에 국한될 수 있다; FAF 상들에서의 반상 주변부; IS/OS가 부재하는 RPE에 HRS가 나타날 수 있다.
3. 중증: 예를 들어, 황반의 어느 한쪽 상에 보다 넓게퍼진 MMD; 내경계막 하부 및 외핵층 내에서의 붕괴, 시각적으로 빈 공간.
그래프에서 적색 숫자 1 및 2는 ERG에 의한 망막 효과를 나타낸다. >300 마리 동물의 조직학 샘플을 기반으로, '1'의 등급은 예상 평균 미만의 1.96 표준 편차(SD)보다 낮지만 2.36* SD 이상인 B-파 진폭에 부여되고, '2'의 등급은 예상 평균으로부터 2.36 SD 미만의 B-파 진폭에 부여된다. 지속적으로 저하된 B-파 진폭을 나타내는 동물들은 치료 단계 종료시 그들의 등급에 포함되었다. 대조군 및 가끔 낮은 B-파를 나타내는 처리 동물들은 배제시켰다.
도 4 : 시험관내에서 FoxM1 의 선택적 스플라이싱.
1형 SMA 환자의 섬유아세포를 RO7034067로 24 시간 동안 처리하고, FoxM1 전장(FL) 및 엑손 9-결여(Δ9) mRNA를 RT-qPCR로 분석하였다. 데이터는 6회 반복의 평균 ± SEM을 나타내고, 미처리 대조군 대비 배수 변화도로 나타내었다.
도 5 : 인간 및 사이노몰거스 ( Cynomolgus ) 원숭이 iPSC 내 FOXM1 mRNA 발현 수준에 대한 RO7034067의 효과.
세포를 RO7034067로 24 시간 동안 처리하고, FOXM1 B/C 전사 변이체들을 RT-PCR로 분석하였다. 데이터는 3회 반복의 평균 ± SEM을 나타내고, 대조군 대비 배수 변화도로 나타내었다. IC50 값을 나타내었다. A) 인간 iPSC. B) 사이노몰거스 원숭이 iPSC.
도 6 : RG7916의 혈장 농도. RG7916의 혈장 농도 대 시간이 용량별로 도표화되어 있다.
도 7 : RG7916의 혈장 농도 대 SMN2 mRNA 수준. RG7916의 시간-매칭 농도 대 (A) SMN2 전장 mRNA 대 SMNΔ7 mRNA의 비, (B) SMN2 전장 mRNA, 또는 (C) SMNΔ7 mRNA가 도표화되어 있다.
도 8 : SMN 단백질 수준. (A) 용량에 따른 혈중 SNM 단백질 농도. 혈중 기저치으로부터의 SMN 단백질 변화의 비가 (B)에 용량별로 도표화되어 있다.
HET = 이형접합체.
C/C-대립유전자 마우스 및 SMNΔ7 마우스를 RO7034067로 처리하였다. 마지막 투약 1 시간 후에, 뇌 및 대퇴사두근을 수집하고 SMN 단백질의 수준을 HTRF로 평가하였다. A. C/C-대립유전자 마우스의 뇌 내 SMN 단백질. B. SMNΔ7 마우스의 뇌 내 SNM 단백질. C. C/C-대립유전자 마우스의 대퇴사두근 내 SMN 단백질. D. SMNΔ7 마우스의 대퇴사두근 내 SNM 단백질. 데이터는 군 당 5 내지 6 마리 동물들의 평균 ± SEM을 나타내고, 비히클-처리된 대조군 대비 배수 변화도로 나타내었다. * = 미처리 대조군 대비 p<0.05, ** = p<0.01, *** = p<0.001.
도 2a 및 2b : RO7034067은 시험관내에서 SMN mRNA 및 단백질 생성을 증가시킨다.
1형 SMA 환자들로부터의 섬유아세포를 24 시간(A) 또는 48 시간(B) 동안 배양하였다; 1형 SMA 환자 iPSC로부터의 운동 뉴런을 72 시간(C) 동안 배양하고, 건강한 지원자(HV)로부터의 전혈 세포를 4 시간(D) 동안 RO7034067의 존재 또는 부재하에 배양하였다. SMN 스플라이싱을 역전사 폴리머라제 연쇄반응(RT-PCR)으로 평가하였고, SMN 단백질 수준을 섬유아세포 용해물중에서 균질 시분해 형광법(HTRF) 및 운동 뉴런 내 SMN에 대한 면역염색법으로 평가하였다. A. 1형 SMA 섬유아세포에서의 SMN2 스플라이싱. B. 1형 SMA 섬유아세포에서의 SMN 단백질. C. 1형 SMA 운동 뉴런에서의 SMN 단백질. D. HV로부터 수득된 전혈에서 SMN1 및 SMN2 스플라이싱. 데이터는 데이터 포인트 당 3개 평가값들의 평균 ± SEM을 나타내며, 미처리 대조군 대비 배수 변화도로 나타내었다.
도 3 : sdOCT , ERG 및 조직병리학에 의해 망막에서 기록된 효과들과 39-주 연구 기간 동안 및 22 주의 회복기( 조직병리학의 경우 )에 개개 원숭이들에서의 노출량 사이의 연관성.
연구 말기에 개개 동물 노출량(AUC0-24h)을 RO7034067로 장기간 치료한 원숭이에서 sdOCT 및 ERG에 의해 검출된 바와 같은 망막 효과에 대해 도표화하였다. 3개 시점들 중 어느 한 시점에서 최악의 sdOCT/ERG 등급을 취하였다. X-축 상의 숫자들은 연구에서의 개개 동물 수를 나타낸다. + 기호는 조직학에서 망막 소견의 존재를 나타낸다. R: 동물이 여전히 회복 단계에 있음을 의미한다. 그래프에서 검정색 숫자 1, 2, 3은 다음과 같은 치료 단계 종료시 sdOCT에 의한 망막 효과의 중증도 등급을 나타낸다:
1. 경도: 주변부에만 나타나는 망막 변화(층의 붕괴/박층화); 층은 박층화/붕괴될 수 있으나 부재하지는 않는다; 증가 또는 감소된 반사율, 흐릿함이 망막층에서 나타날 수 있다; 과반사점(HRS)이 내망막층 및 내절/외절 접합부(IS/OS)에 나타날 수 있다.
2. 중등도: 황반에 더 근접하여 나타나는 망막 변화(붕괴/박층화); 층들(예를 들어, IS/OS)이 불연속이거나 부재할 수 있다; MMD는 존재할 수 있으나 시신경 머리 측면의 작은 부위에 국한될 수 있다; FAF 상들에서의 반상 주변부; IS/OS가 부재하는 RPE에 HRS가 나타날 수 있다.
3. 중증: 예를 들어, 황반의 어느 한쪽 상에 보다 넓게퍼진 MMD; 내경계막 하부 및 외핵층 내에서의 붕괴, 시각적으로 빈 공간.
그래프에서 적색 숫자 1 및 2는 ERG에 의한 망막 효과를 나타낸다. >300 마리 동물의 조직학 샘플을 기반으로, '1'의 등급은 예상 평균 미만의 1.96 표준 편차(SD)보다 낮지만 2.36* SD 이상인 B-파 진폭에 부여되고, '2'의 등급은 예상 평균으로부터 2.36 SD 미만의 B-파 진폭에 부여된다. 지속적으로 저하된 B-파 진폭을 나타내는 동물들은 치료 단계 종료시 그들의 등급에 포함되었다. 대조군 및 가끔 낮은 B-파를 나타내는 처리 동물들은 배제시켰다.
도 4 : 시험관내에서 FoxM1 의 선택적 스플라이싱.
1형 SMA 환자의 섬유아세포를 RO7034067로 24 시간 동안 처리하고, FoxM1 전장(FL) 및 엑손 9-결여(Δ9) mRNA를 RT-qPCR로 분석하였다. 데이터는 6회 반복의 평균 ± SEM을 나타내고, 미처리 대조군 대비 배수 변화도로 나타내었다.
도 5 : 인간 및 사이노몰거스 ( Cynomolgus ) 원숭이 iPSC 내 FOXM1 mRNA 발현 수준에 대한 RO7034067의 효과.
세포를 RO7034067로 24 시간 동안 처리하고, FOXM1 B/C 전사 변이체들을 RT-PCR로 분석하였다. 데이터는 3회 반복의 평균 ± SEM을 나타내고, 대조군 대비 배수 변화도로 나타내었다. IC50 값을 나타내었다. A) 인간 iPSC. B) 사이노몰거스 원숭이 iPSC.
도 6 : RG7916의 혈장 농도. RG7916의 혈장 농도 대 시간이 용량별로 도표화되어 있다.
도 7 : RG7916의 혈장 농도 대 SMN2 mRNA 수준. RG7916의 시간-매칭 농도 대 (A) SMN2 전장 mRNA 대 SMNΔ7 mRNA의 비, (B) SMN2 전장 mRNA, 또는 (C) SMNΔ7 mRNA가 도표화되어 있다.
도 8 : SMN 단백질 수준. (A) 용량에 따른 혈중 SNM 단백질 농도. 혈중 기저치으로부터의 SMN 단백질 변화의 비가 (B)에 용량별로 도표화되어 있다.
본원에서 언급된 모든 간행물, 특허출원, 특허 및 기타 참조문헌들은 그 전체가 참고로 인용된다.
본 출원에서 사용된 명명법은 달리 나타내지 않는 한 IPUAC 분류적 명명법에 기반한다.
본 발명의 다양한 특징 및 실시양태들이 본원에 개시되어 있지만, 본 발명의 다른 특징들, 변경 및 등가물들이, 제공된 교지내용을 기반으로, 관련 기술의 숙련가에게 명백할 것이다. 기재된 본 발명은 제공되어 있는 실시예 및 실시양태들로 한정되지 않으며, 다양한 대체 등가물들이 당해 분야의 숙련가들에게 인지될 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 단수형은 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한 복수형을 포함한다. 예를 들어, "개체"는 또한 "개체들"을 포함할 것이다.
달리 언급되지 않는 한, 명세서 및 특허청구범위에 사용된 하기의 용어들은 하기에 나타낸 의미를 갖는다:
용어 "FOM3"은 효소 번호(EC number) EC 1.14.13.148, MGI 참조 1100496, 세포유전학 위치: 1q24.3 및 게놈 좌표(GRCh38): 1:171,090,872-171,117,818을 갖는, 다이메틸아닐린 모노옥시게나제 [N-옥사이드-형성] 3 및 트라이메틸아민 모노옥시게나제로도 알려진 플라빈(Flavin)-함유 모노옥시게나제 3을 말한다.
상호교환적으로 사용되는 "개체" 또는 "대상"은 포유동물이다. 포유동물로는 가축(예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류(예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예를 들면, 원숭이), 토끼 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 대상은 인간이다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 상기 대상은 척수성 근위축증(SMA)을 갖는 인간이다. 또 다른 특정 실시양태에서, 상기 대상은 SMN1 유전자 기능의 손실을 야기하는, 양쪽 염색체상의 SMN1 유전자에서 불활성화 돌연변이 또는 결실에 의해 야기된 SMA를 갖는 인간이다.
용어 "척수성 근위축증"(또는 SMA)는 SMN1 유전자 기능의 손실을 야기하는, 양쪽 염색체상의 SMN1 유전자에서 불활성화 돌연변이 또는 결실에 의해 야기된 질환과 관련된다. SMA의 증상은 -SMA의 유형에 따라서- 근약화, 불량한 근 긴장도, 약한 울음, 약한 기침, 흐느적거림 또는 주저앉는 경향, 흡인 또는 연하 곤란, 호흡 곤란, 폐 또는 인후 내 분비물의 축적, 땀난 손으로 불끈 쥔 주먹, 혀의 낼름거림/떨림, 누웠을 때에도 종종 한쪽으로 기울어진 머리, 팔보다 더 약해지는 경향을 갖는 다리, 빈번히 "개구리 다리" 자세를 취하는 다리, 섭식 곤란, 기도 감염에 대한 증가된 민감성, 장/방광 약화, 정상보다 낮은 체중, 도움없이 앉을 수 없음, 걷지못함, 기지못함, 및 전각 세포 손실과 연관된 근긴장저하, 무반사 및 다발성 선천성 구축(관절만곡증)을 포함한다.
용어 "척수성 근위축증(SMA)을 치료하는" 또는 "척수성 근위축증(SMA)의 치료"는 다음 효과들 중 하나 이상을 포함한다: (i) SMA 중증도의 경감 또는 개선; (ii) SMA 발병의 지연; (iii) SMA 진행의 억제; (iv) 대상의 입원 감소; (v) 대상을 위한 입원 기간의 감소; (vi) 대상의 생존의 증가; (vii) 대상의 삶의 질의 개선; (viii) SMA와 연관된 증상들의 수의 감소; (ix) SMA와 연관된 하나 이상의 증상의 중증도의 경감 또는 개선; (x) SMA와 연관된 증상의 기간 감소; (xi) SMA와 연관된 증상의 재발 방지; (xii) SMA의 증상의 발전 또는 발생의 억제; 및/또는 (xiii) SMA와 연관된 증상의 진행 억제. 보다 특히, "SMA를 치료하는"은 하기의 유리한 효과들 중 하나 이상을 의미한다: (i) 근력 손실의 감소; (ii) 근력의 증가; (iii) 근위축의 경감; (iv) 운동 기능 손실의 감소; (v) 운동 뉴런의 증가; (vii) 운동 뉴런 손실의 감소; (viii) 퇴화로부터 SMN 결핍 운동 뉴런의 보호; (ix) 운동 기능의 증가; (x) 폐기능의 증가; 및/또는 (xi) 폐기능 손실의 감소.
상세하게, "SMA를 치료하는"은 인간 영아 또는 인간 유아가 도움없이 자리에서 일어나는 기능적 능력, 또는 인간 영아, 인간 유아, 인간 아동 또는 인간 성인이 도움없이 일어서거나, 도움없이 걷거나, 도움없이 뛰거나, 도움없이 호흡하거나, 도움없이 수면중 돌아눕거나, 또는 도움없이 삼키는 기능적 능력을 제공하거나 이러한 기능적 능력을 유지하도록 돕는 것이다.
용어 "mg/kg"는 치료될 대상의 체중 킬로그램 당 사용되는 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 밀리그램으로 나타낸 용량을 말한다. 예를 들어, 0.25 mg/kg는 치료될 환자의 체중 킬로그램 당 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 0.25 mg의 용량을 의미한다.
용어 "환자"는 SMA로 진단된 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)을 말한다.
용어 "활성 약학 성분"(또는 "API")은 특정한 생물 활성을 갖는 약학 조성물 중의 화합물 또는 분자를 의미한다.
용어 "약학적으로 허용되는 부형제", "약학적으로 허용되는 담체" 및 "치료 불활성 부형제"는 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 치료 활성을 갖지 않고 투여되는 대상에게 무독성인 약학 조성물중 임의의 약학적으로 허용되는 성분, 예를 들면, 의약품을 제형화하는데 사용되는 붕해제, 결합제, 충전제, 용매, 완충제, 긴장성 조절제, 안정화제, 산화방지제, 계면활성제, 담체, 희석제 또는 윤활제를 의미한다.
용어 "약학 조성물"은 그중에 함유된 활성 성분의 생물 활성이 효과적이 되게 하는 형태이면서, 조성물이 투여될 대상에게 허용될 수 없을 정도로 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 말한다. 용어 "약학적으로 허용되는"은 일반적으로 안전하고 무독성이며 달리 생물학적으로 불쾌하지 않고 척추동물뿐 아니라 인간 약학 용도로 허용되는 약학 조성물을 제조하는데 유용한 물질의 속성을 나타낸다.
용어 "완충제" 또는 "완충제 시스템"은 약학 제제의 pH를 안정화시키는 약학적으로 허용되는 부형제 또는 부형제 혼합물을 의미한다. 적합한 완충제는 당해 분야에 공지되어 있으며 문헌에서 찾을 수 있다. 특정한 약학적으로 허용되는 완충제는 시트르산 완충제, 말레이트 완충제, 말리에이트 완충제 또는 타르트레이트 완충제, 가장 특히는 타르트레이트 완충제를 포함한다. 본 발명의 특정한 완충제 시스템은 유기산과 그의 선택된 염의 조합, 예를 들어, 3염기성 나트륨 시트레이트 및 시트르산, 말산 및 나트륨 말리에이트, 칼륨 나트륨 타르트레이트 및 타르타르산, 또는 이나트륨 타르트레이트 및 타르타르산, 특히 칼륨 나트륨 타르트레이트 및 타르타르산을 포함한다. 또는, 유기산(특히 타르타르산)이 산 및 상응하는 염의 조합 대신에 "산성화제"로서 단독으로 사용될 수 있다. 사용되는 완충제와 무관하게, pH는 당해 분야에 공지되어 있는 산 또는 염기, 예를 들어, 염산, 아세트산, 인산, 황산 및 시트르산, 수산화나트륨 및 수산화칼륨을 사용하여 조정할 수 있다. 특정 산성화제는 타르타르산이다.
"약학적으로 허용되는 담체"는 대상에게 무독성인, 약학 조성물중, 활성 성분 이외의 다른 성분을 말한다. 약학적으로 허용되는 담체로는 완충제 또는 산성화제, 부형제, 안정화제 또는 보존제가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.
용어 "산화방지제"는 활성 약학 성분의 산화를 방지하는 약학적으로 허용되는 부형제를 의미한다. 산화방지제는 아스콜브산, 글루타티온, 시스테인, 메티오닌, 시트르산, EDTA를 포함한다.
용어 "계면활성제"는 교반 및 전단과 같은 기계적 응력에 대해 단백질 조성물을 보호하기 위해 사용되는 약학적으로 허용되는 부형제를 의미한다. 약학적으로 허용되는 계면활성제의 예로는 폴록사머, 폴리솔베이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에터(BRIJ®), 알킬페닐폴리옥시에틸렌 에터(트리톤(TRITON)-X®) 또는 나트륨 도데실 설페이트(SDS)가 포함된다.
용어 "폴록사머"는 폴리(에틸렌 옥사이드)(PEO)의 2개의 친수성 쇄가 측면에 위치한 폴리(프로필렌 옥사이드)(PPO)의 중앙 소수성 쇄로 이루어진 비이온성 3중블록 공중합체를 의미하며, 이때 PPO 또는 PEO 쇄는 각각 상이한 분자량을 가질 수 있다. 폴록사머는 또한 상표명 플루로닉스(Pluronics)로도 알려져 있다. 특정 폴록사머는 PPO 쇄가 1800 g/몰의 분자질량 및 80%(w/w)의 PEO 함량을 갖는 폴록사머인 폴록사머 188이다.
용어 "폴리솔베이트"는 전형적으로 에틸렌 옥사이드와 공중합된, 솔비톨의 올리에이트 에스터 및 그의 무수물을 의미한다. 특정 폴리솔베이트는 폴리솔베이트 20(폴리(에틸렌 옥사이드)(20) 솔비탄 모노라우레이트, 트윈(TWEEN) 20®) 또는 폴리솔베이트 80(폴리(에틸렌 옥사이드)(80) 솔비탄 모노라우레이트, 트윈 80®)이다.
"친수성-친유성 균형"(HLB) 값은 비이온성 계면활성제의 친수성 정도를 의미한다. HLB 값은, 문헌[Griffin W.C., Journal of the Society of Cosmetic Chemists (1949) 1:311]에 기술된 바와 같이, 계면활성제 분자의 친수성 부분의 분자 질량과 그의 전체 분자 질량 사이의 비로 결정된다.
용어 "친수성"은 극성 용매, 특히 물과, 또는 수소 결합, 쌍극자-이온 상호작용 및/또는 쌍극자-쌍극자 상호작용에 의해 유도된 다른 극성 잔기들과 상호작용하는 분자 또는 분자 부분의 능력을 의미한다.
용어 "친유성" 및 "소수성"은 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 런던(London) 분산력에 의해 유도된 지방, 오일 및 비-극성 용매와 같은 비-극성 환경에서 용해되는 분자 또는 분자 부분의 경향을 의미한다.
용어 "Cmax"(pg/mL의 단위로 나타냄)는 최대 관찰 혈장 농도를 의미하고, 본원에서는 콜히친의 최대 관찰 혈장 농도를 말한다.
용어 "Tmax"(시간의 단위로 나타냄, 또는 연구 집단에서 Tmax에 대한 시간들의 중간값으로 나타냄)는 약물 투여후 Cmax에 도달하는, 관찰된 시간을 의미한다; 상기 시간이 하나보다 많은 시점에서 발생하는 경우, Tmax는 상기 값을 갖는 첫번째 시점으로 정의된다.
용어 "AUCT0 -24h"(pg*h/mL의 단위로 나타냄)는 0 시간으로부터 24 시간까지 사다리꼴 방법을 이용하여 산출된 혈장 시간 농도 곡선하의 누적 면적(AUC)을 의미한다.
용어 "sdOCT"는 스펙트럼 영역 광간섭 단층촬영을 말한다.
용어 "NOAEL"은 무독성량(No observed adverse effect level)을 말한다. 즉, 용어 NOAEL은 한정된 노출 조건하에서 환자의 형태, 기능적 능력, 성장, 발달 또는 수명의 검출가능한 불리한 변화를 야기하지 않는, 실험 또는 관찰에 의해 찾은, 물질의 최대 농도 또는 최대량을 말한다.
용어 "NOEL"은 무작용량(no observed effect level)이다.
용어 "ERG"는 망막전위도를 말한다. 망막전위도는 광선(빛) 자극시 각막의 전위 변화를 측정함으로써 생성된 파형이다. 일반적으로, 직류 및 접지 전극을 대상의 각막위에 또는 각막 부근에 적용하여 전위를 기록한다.
용어 "FoxM1"은 포크머리 상자 단백질(Forkhead box protein) M1(이전에 FHF11로 지칭됨)을 말한다. FOXM1 유전자는 현재 인간 원발암유전자로 알려져 있다.
용어 "MADD"는 MAP-키나제 활성화 사멸 영역을 말한다.
본 발명에 따른 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 RG7916, RO7034067, CAS 번호 1825352-65-5로도 알려진 하기 화학식 I의 화합물을 말한다:
[화학식 I]
상기 화합물의 제조 및 사용 방법은 EP3143025 A1 호에 기재되어 있다.
상기 약학 조성물의 제조 및 사용 방법은 WO2017080967 A1 호에 기재되어 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, 환자(특히 그를 필요로 하는 환자)에서 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 1회 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 1회 5 mg로, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 2형 SMA 또는 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 2형 SMA 및 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 2형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
가장 특히, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, SMA, 특히 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 이때 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여, 특히 경구 투여된다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이고, 상기 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여, 특히 경구 투여된다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이고, 상기 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여, 특히 경구 투여된다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 2형 SMA 또는 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이고, 상기 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여, 특히 경구 투여된다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 2형 SMA 및 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이고, 상기 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여, 특히 경구 투여된다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 2형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이고, 상기 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여, 특히 경구 투여된다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이고, 상기 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여, 특히 경구 투여된다. 보다 특히, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, SMA, 특히 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 제공된다.
한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 척수성 근위축증(SMA)의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 경구 투여에 의해 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 척수성 근위축증(SMA)의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 척수성 근위축증(SMA)의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 보다 특히, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 경구 투여에 의해 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 척수성 근위축증(SMA)의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 가장 특히, 본 발명은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 하루에 1회 투여하는, SMA의 치료 방법을 제공한다.
추가의 특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 보다 특히, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 경구 투여에 의해 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 2형 SMA 또는 3형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 보다 특히, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 경구 투여에 의해 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 2형 SMA 또는 3형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 2형 SMA 및 3형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 보다 특히, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 경구 투여에 의해 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 2형 SMA 및 3형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 2형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 보다 특히, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 경구 투여에 의해 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 2형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 3형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 보다 특히, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에게 경구 투여에 의해 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 3형 SMA의 치료 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 체중 킬로그램당 0.25 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 체중 킬로그램당 0.25 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg 투여량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 체중 킬로그램당 0.25 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg 투여량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 체중 킬로그램당 0.25 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 5 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg 투여량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg 투여량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다. 특히, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 하루에 5 mg 용량의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 경구로 투여하는 것을 포함하는, 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서 척수성 근위축증(SMA)을 치료하는 방법을 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명은 환자에게 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg로 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여하는 것을 포함하는, 척수성 근위축증(SMA)의 치료 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 포함하는, SMA(보다 특히, 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 포함하는, SMA(보다 특히, 2형 또는 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 포함하는, SMA(보다 특히, 2형 및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 포함하는, SMA(보다 특히, 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 포함하는, SMA(보다 특히, 2형 또는 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 포함하는, SMA(보다 특히, 2형 및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공한다.
상기 약학 조성물은 환자, 특히 인간(즉, 남성 또는 여성 인간)에서 척수성 근위축증(SMA), 특히 2형 SMA 및 3형 SMA를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 높은 수용해도를 갖는 것으로 밝혀졌다. 모든 연령군의 SMA의 환자의 연하기능의 장애로 인해, 용액의 투여가 바람직한 것으로 밝혀졌다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 충분히 높은 약물 농도를 제공하기 위해 pH 4 미만, 특히 pH 3.8 미만, 보다 특히 pH 3.6 미만, 가장 특히는 pH 3.0 내지 3.2의 완충제 시스템, 예를 들어, 시트르산 완충제 시스템, 말레이트 완충제 시스템, 말리에이트 완충제 시스템 또는 타르트레이트 완충제 시스템, 가장 특히는 타르트레이트 완충제 시스템에 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 용해시킴으로써 경구용 수용액으로 제형화된 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 경구용 용액의 구성을 위한 건조 분말 또는 과립으로서 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 포함한다. 미분으로서 유기산 및 그의 염, 예를 들어, 3염기성 나트륨 시트레이트 및 시트르산, 이나트륨 말레이트 및 말산, 칼륨 나트륨 타르트레이트 및 타르타르산, 또는 이나트륨 타르트레이트 및 타르타르산, 특히 칼륨 나트륨 타르트레이트 및 타르타르산을 선택함으로써 완충제 시스템이 무수 제형내에 혼입될 수 있다. 또는, 유기산(특히 타르타르산)이 산 및 상응하는 염의 혼합물 대신에 산성화제로 단독으로 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온, 경구용 용액의 구성시 분말 블렌드의 신속한 용해를 보장하는 희석제, 예를 들면, 솔비톨, 이소말트 또는 특히 만니톨, 및 그의 혼합물을 포함한다. 선택적으로, 유동성을 개선시키고 강한 균일성을 보장하기 위해 건식 압착에 의해 과립화되도록 충전제가 첨가될 수 있다.
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 위한 용매 시스템의 구성을 위한 성분들은 별도의 제형으로 제형화될 수 있다. 경구용 용액의 사용 기간의 시작시에 병에서 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용해를 위한 구성 용매를 사용할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 경구용 용액의 구성을 위한 분말 형태로 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 경구용 디스펜서의 사용을 위한 유도관을 갖는 다중용량 병에 충전되는 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다. 경구용 디스펜서의 사용을 위한 유도관을 갖는 상기 다중용량 병은 높은 투약 유연성, 예를 들어, 체중에 맞춰 조정된 투약을 가능하게 하며, 안전하고 편리한 용량 투여를 제공하는 것으로 밝혀졌다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 건식 과립화를 거쳐 롤러 압축후 병 충전에 의해 제조된다. 상기 가공은 탈혼합화를 방지하는데 유리한(특히 수용성 충전제의 경우) 것으로 밝혀졌다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 경구용 수용액이거나 또는 경구용 수용액의 구성에 적합한 건조 분말이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 에어로졸을 포함하지 않는 경구용 수용액이거나 또는 경구용 수용액의 구성에 적합한 건조 분말이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 에어로졸이 아니다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 긴장성조절제, 예를 들어, 염화나트륨과 같은 염을 포함하지 않는다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 경구용 수용액이거나 또는 경구용 수용액의 구성에 적합한 건조 분말이고, 상기 경구용 수용액은 pH 4 미만, 특히 pH 3.8 미만, 보다 특히 pH 3.6 미만, 가장 특히는 pH 3.0 내지 3.2의 pH를 갖는다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 및 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트 완충제 시스템, 특히 말레이트 또는 타르트레이트 완충제 시스템, 가장 특히는 타르트레이트 완충제 시스템; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독을 포함하고; 상기 조성물은 경구용 수용액이거나 또는 경구용 수용액의 구성에 적합한 건조 분말이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 경구용 수용액이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 pH 4 미만, 특히 pH 3.8 미만, 보다 특히 pH 3.6 미만, 가장 특히는 pH 3.0 내지 3.2의 pH의 완충제 시스템 중의 경구용 수용액이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트 완충제 시스템, 특히 말레이트 또는 타르트레이트 완충제 시스템, 가장 특히는 타르트레이트 완충제 시스템; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산 중의 경구용 수용액이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 경구용 수용액의 구성에 적합한 건조 분말이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 pH 4 미만, 특히 pH 3.8 미만, 보다 특히 pH 3.6 미만, 가장 특히는 pH 3.0 내지 3.2의 pH의 경구용 수용액의 구성에 적합한 완충제 시스템을 포함하는 건조 분말이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 상기 조성물은 경구용 수용액의 구성에 적합한, 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트 완충제 시스템, 특히 말레이트 또는 타르트레이트 완충제 시스템, 가장 특히는 타르트레이트 완충제 시스템; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산을 포함하는 건조 분말이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 선택적으로 과립외 충전제, 예를 들면, 락토스, 전분, 가수분해 전분, 말토덱스트린, 미정질 셀룰로스, 만니톨, 솔비톨, 슈크로스, 덱스트로스, 2염기성 인산칼슘, 황산칼슘, 또는 그의 혼합물을 추가로 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 과립외 충전제는 솔비톨, 이소말트, 만니톨 또는 그의 혼합물, 특히 만니톨, 보다 특히는 결정성 만니톨, 가장 특히는 160 ㎛의 평균 직경을 갖는 결정성 만니톨(펄리톨(Pearlitol)® 160C)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 선택적으로 희석제, 예를 들면, 락토스, 전분, 가수분해 전분, 말토덱스트린, 미정질 셀룰로스, 만니톨, 이소말트(E953, (2ξ)-6-O-α-D-글루코피라노실-D-아라비노-헥시톨), 솔비톨, 슈크로스, 덱스트로스, 2염기성 인산칼슘, 황산칼슘, 또는 그의 혼합물을 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 선택적으로 희석제, 예를 들면, 락토스, 전분, 가수분해 전분, 미정질 셀룰로스, 만니톨, 솔비톨, 슈크로스, 덱스트로스, 2염기성 인산칼슘, 황산칼슘, 또는 그의 혼합물을 추가로 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 상기 희석제는 만니톨, 특히 직접 압축에 적합한 D-만니톨, 예를 들면, 파르텍(Parteck)® M100이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 희석제는 만니톨 및 이소말트, 특히 D-만니톨 및 (2ξ)-6-O-α-D-글루코피라노실-D-아라비노-헥시톨의 혼합물이다.
제 2의 희석제로서 이소말트는 과립 성질을 개선시키는 것으로 밝혀졌다.
완충제 중의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 구성된 경구용 용액은 안정화제 및 산화방지제, 예를 들면, 비타민 A, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 E TPGS, 레티닐 팔미테이트, 셀레늄, 시스테인, 메티오닌, 시트르산, 나트륨 시트레이트, 메틸 파라벤, 이나트륨 에데테이트, 부틸 하이드록실 톨루올, 리보플라빈, 아스콜브산 또는 그의 혼합물을 사용함으로써 2 주 이상의 사용 기간을 제공할 수 있다.
완충제 중의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 구성된 경구용 용액은 안정화제 및 산화방지제, 예를 들면, 바이타민 E TPGS, 이나트륨 에데테이트, 부틸 하이드록실 톨루올, 리보플라빈, 아스콜브산 또는 그의 혼합물을 사용함으로써 2 주 이상의 사용 기간을 제공할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 선택적으로 산화방지제 및/또는 안정화제, 예를 들면, 비타민 E TPGS(D-알파 토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트), 이나트륨 에틸렌다이아민테트라아세테이트(이나트륨 에데테이트, Na2 EDTA), 부틸 하이드록실 톨루올, 리보플라빈, 아스콜브산 또는 그의 혼합물을 추가로 포함한다. 산화방지제 및/또는 안정화제는 다중용량 용기에서 연장된 사용 시간에 유리할 수 있거나 사용 기간 동안 용액중에서의 약물 안정성을 개선시키는데 유리할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 산화방지제는 아스콜브산((5R)-[(1S)-1,2-다이하이드록시에틸]-3,4-다이하이드록시푸란-2(5H)-온)이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 안정화제는 아니트륨 에틸렌다이아민테트라아세테이트(이나트륨 에데테이트, Na2 EDTA)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 선택적으로 윤활제를 추가로 포함한다. 윤활제는 롤러 압축을 위한 가공 보조제로 사용될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 또한 윤활제는 외관의 기호도를 보장하기 위해 PEG와 같은 수용성 성분들에 사용될 수 있다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 윤활제는 폴리(에틸렌 글리콜), 특히 수평균 분자량 Mn 6,000을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG 6000)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 선택적으로 식미를 개선하기 위해 감미제 및/또는 향료를 추가로 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 상기 향료는 딸기향 또는 바닐라향이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 감미제는 슈크랄로스(1,6-다이클로로-1,6-디데옥시-β-D-프럭토푸라노실-4-클로로-4-데옥시-α-D-갈락토피라노시드, E955) 또는 나트륨 사카린이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염; 및
- 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산; 및
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염; 및
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산; 및
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 선택적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산; 및
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산;
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트; 및
- 윤활제, 특히 PEG6000.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산;
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트;
- 윤활제, 특히 PEG6000; 및
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산;
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트;
- 윤활제, 특히 PEG6000;
- 선택적으로, 감미제, 특히 슈크랄로스 또는 나트륨 사카린, 가장 특히 슈크랄로스; 및
- 선택적으로, 향료, 특히 딸기향 또는 바닐라향.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 1 내지 10 중량%의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 5 내지 15 중량%의 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 40 내지 70 중량%의 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 1 내지 4 중량%의 산화방지제, 특히 아스콜브산;
- 0.5 내지 2 중량%의 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트;
- 0.5 내지 2 중량%의 윤활제, 특히 PEG6000;
- 0 내지 3 중량%의 감미제, 특히 슈크랄로스 또는 나트륨 사카린, 가장 특히 슈크랄로스; 및
- 0 내지 20 중량%의 향료, 특히 딸기향 또는 바닐라향
(이때, 성분들의 총량은 100 중량%를 초과하지 않는다).
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 다음을 포함한다:
- 2 내지 6 중량%의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 9 내지 13 중량%의 타르트레이트 완충제 시스템;
- 45 내지 55 중량%의 제 1 희석제로서의 만니톨 및 8 내지 10 중량%의 제 2 희석제로서의 이소말트;
- 1 내지 3 중량%의 산화방지제로서의 아스콜브산;
- 0.5 내지 2 중량%의 안정화제로서의 이나트륨 에데테이트;
- 0.5 내지 2 중량%의 윤활제로서의 PEG6000;
- 1.5 내지 2 중량%의 감미제로서의 슈크랄로스; 및
- 13 내지 17 중량%의 딸기향
(이때, 성분들의 총량은 100 중량%를 초과하지 않는다).
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물의 제조를 위한 키트를 제공하며, 이때 상기 키트는 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 분말 블렌드, 및
- 구성을 위한 용매로서 물.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물의 제조를 위한 키트를 제공하며, 이때 상기 키트는 다음을 포함한다:
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염,
- 구성을 위한 비히클로서 분말 블렌드, 및
- 선택적으로, 구성을 위한 용매로서 물.
특히, 본원에 기재된 바와 같은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 구성에 적합한 비히클로서 분말 블렌드는 다음을 포함한다:
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산; 및
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨.
특히, 본원에 기재된 바와 같은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 구성에 적합한 비히클로서 분말 블렌드는 다음을 포함한다:
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산;
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트;
- 윤활제, 특히 PEG6000; 및
특히, 본원에 기술된 바와 같은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 구성에 적합한 비히클로서 분말 블렌드는 다음을 포함한다:
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산;
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트;
- 윤활제, 특히 PEG6000;
- 선택적으로, 감미제, 특히 슈크랄로스 또는 나트륨 사카린, 가장 특히 슈크랄로스; 및
- 선택적으로, 향료, 특히 딸기향 또는 바닐라향.
특히, 본원에 기재된 바와 같은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 구성에 적합한 비히클로서 분말 블렌드는 다음을 포함한다:
- 4 내지 15 중량%의 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 40 내지 70 중량%의 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 1 내지 4 중량%의 산화방지제, 특히 아스콜브산;
- 0.2 내지 2 중량%의 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트;
- 0.5 내지 2 중량%의 윤활제, 특히 PEG6000;
- 0 내지 3 중량%의 감미제, 특히 슈크랄로스 또는 나트륨 사카린, 가장 특히 슈크랄로스; 및
- 0 내지 20 중량%의 향료, 특히 딸기향 또는 바닐라향
(이때, 성분들의 총량은 100 중량%를 초과하지 않는다).
특히, 본원에 기술된 바와 같은 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 구성에 적합한 비히클로서 분말 블렌드는 다음을 포함한다:
- 9 내지 13 중량%의 타르트레이트 완충제 시스템 또는 타르타르산;
- 45 내지 55 중량%의 제 1 희석제로서의 만니톨 및 8 내지 10 중량%의 제 2 희석제로서의 이소말트;
- 1 내지 3 중량%의 산화방지제로서의 아스콜브산;
- 0.3 내지 0.9 중량%의 안정화제로서의 이나트륨 에데테이트;
- 0.5 내지 2 중량%의 윤활제로서의 PEG6000;
- 0.8 내지 2.0 중량%의 감미제로서의 슈크랄로스; 및
- 7.5 내지 19 중량%의 딸기향
(이때, 성분들의 총량은 100 중량%를 초과하지 않는다).
특정 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와같은 SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 이때 상기 약학 조성물은 하루에 1회 경구 투여된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 SMA, 특히 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료를 위해 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 SMA, 특히 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료를 위해 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서, SMA의 치료를 위해 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서, 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료를 위해 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서, 2형 SMA 또는 3형 SMA의 치료를 위해 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서, 2형 SMA 및 3형 SMA의 치료를 위해 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 SMA, 특히 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서, SMA의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서, 2형 SMA 또는/및 3형 SMA의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서, 2형 SMA 또는 3형 SMA의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자(특히, 그를 필요로 하는 환자)에서, 2형 SMA 및 3형 SMA의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 투여, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온의 용도를 제공하며, 특히 이때 상기 환자는 인간(예를 들면, 남성 또는 여성 인간)이다.
본 발명에 따른 환자는 특히 인간, 보다 특히는 남성 또는 여성 인간이다. 상기 인간은 임의의 인종(예를 들어, 백인 또는 동양인)일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 방법, 용도, 약학 조성물에서, 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온은 하루에 1회 투여된다.
하기의 실시예는 단지 본 발명의 실행을 예시하기 위한 것일 뿐이며 제한하는 것으로 제공되는 것이 아니다.
실시예
1:
연구 BP39055는 2형 및 3형 척수성 근위축증(SMA) 환자에서 RO7034067의 안전성, 내약성, 약동학(PK), 약력학(PD) 및 효능을 조사하기 위한 2-파트 운영상 중단없는 다기관 무작위 위약-대조 이중-맹검 연구이다. 본 연구는 시험적 용량-결정 파트(파트 1) 및 확인 파트(파트 2)로 이루어진다.
파트 1의 주목적은 2형 및 3형(보행가능 또는 보행불능) SMA를 갖는 환자들에서 RO7034067의 안전성, 내약성, PK 및 PD를 평가하고, 연구의 파트 2를 위한 용량을 선택하기 위한 것이다.
파트 1은 2형 및 3형(보행가능 및 보행불능) SMA 환자들에서 이중-맹검 위약-통제 무작위(2:1 RO703467:위약), 시험적 용량-결정 연구였다. 상기 파트 1 후에 연구의 파트 2를 위해 선택된 바와 동일한 용량으로 개방-표지 연장(OLE)이 이어졌다.
본 연구의 파트 1은 2개 연령군의 환자가 등록하였다.
- A 군: 12 내지 25세 연령의 청소년 및 성인 환자
- B 군: 2 내지 11세 연령의 아동
RO7034067 용량 수준은 두 연령군 모두에서 시차를 둔 용량 증가 방식으로 조사하였다.
프로토콜에 따라서, 하기의 단계들을 연구의 파트 1의 실행을 위해 수행하였다:
- 연구에 등록하는 것은 처음에는 RO7034067을 알리지 않고 매일 1회 3 mg씩 투여받은(프로토콜에서 정의된 바와 같은 1차 용량 수준, 700 ng*h/mL의 AUC0-24h,ss 목표) 성인 및 청소년 환자들(코호트 A1)에게 개방되었으며; 12 내지 16세 연령의 10명의 환자들이 코호트 A1에 등록하였다.
- 일단 상기 용량 수준에서 RO7034067이 코호트 A1에 등록된 9명의 환자들에서 최소 4주 동안 안전하고 잘 허용되는 것으로 나타나면(프로토콜에 따라 최소인원은 적극 치료받은 12 내지 17세 연령의 3명의 환자들이었으며, 상기 적극 치료는 최소 6명의 환자 및 2:1의 무작위선정이 보장되었다), 등록을 더 어린 환자들의 코호트(코호트 B1)에게 개방하였다. 700 ng*h/mL의 목표 AUC0-24h,ss에 따른 상기 연령군에 대해 IMC에서 권고받은 용량은 0.02 mg/kg이었으며(부록 1의 2016년 12월 12일자의 IMC 권고 참조); 3 내지 11세 연령의 10명의 환자들이 코호트 B1에 등록하였다.
- 같은 시점에(즉, 일단 코호트 A1의 9명 환자들에서 매일 1회 3 mg로 최소 4주 치료의 검토결과에 기반하여 안전성 및 내약성이 확인되었을 때), 매일 1회 RO7034067 5 mg(부록 1의 2017년 1월 19일자 IMC 권고 참조)를 투여받은 9명의 성인 및 청소년 환자들의 또 다른 코호트(코호트 A2)에 등록을 개방하였다. 프로토콜에 따라서, 노출 한도(Cmax 400 ng/mL; 평균 AUC0-24h,ss 2000 ng*h/mL)를 초과하지 않고 최대 SMN 단백질 증가를 달성하게 하는 더 높은 용량 수준을 측정하였으며; 13 내지 24세 연령의 10명의 환자들이 코호트 A2에 등록하였다.
- 코호트 B1에 등록한 9명의 환자들에서 0.02 mg/kg로 최소 4주의 치료에 대한 검토결과에 기반하여, IMC는 다음의 권고를 하였다: i) 상기 환자들의 용량을 3 mg의 한도 용량을 초과하지 않고 0.05 mg/kg로 증가시킬 것, 및 ii) 2 내지 6세 연령의 최소 5명의 환자를 목표로(부록 1의 2017년 3월 13일자 IMC 권고 참조), 3 mg의 한도 용량을 초과하지 않고 0.05 mg/kg의 용량으로 2 내지 11세 연령의 최소 9명의 추가 환자들을 등록시킬 것(코호트 B2); 2 내지 6세 연령의 11명의 환자들이 상기 추가 코호트(코호트 B2)에 등록하였다.
- 일단 RO7034067이 0.05 mg/kg의 용량에서 코호트 B2에 등록된 9명의 환자들에서 최소 4주 동안 안전하고 잘 허용되는 것으로 나타나면, 코호트 B1 및 B2의 모든 진행중인 환자들에서 용량을 3 mg의 한도 용량을 초과하지 않고 0.15 mg/kg로 증가시키도록 IMC가 권고하였다(부록 1의 2017년 5월 23일자 IMC 권고 참조). 같은 시점에, 노출 한도(Cmax 400 ng/mL; 평균 AUC0-24h,ss 2000 ng*h/mL)를 초과하지 않고, 최대 생존 운동 뉴런(Survival of Motor Neuron, SMN) 단백질 증가를 달성하게 하는 것으로 측정된, 5 mg의 한도 용량을 초과하지 않고 0.25 mg/kg의 용량으로 9명 환자의 또 다른 코호트에 등록을 개방하였다; 2 내지 11세 연령의 10명의 환자들이 코호트 B3에 등록하였다.
- 각 코호트의 최소 9명의 환자들에서 최소 12주의 위약-대조 치료 종료시, IMC는 위약 환자들을 그 각각의 코호트에서 시험된 용량으로 적극 치료로 전환시키도록 결정하기 위해 코호트로부터의 모든 유효 데이터를 검토하였다. 각각의 코호트들에서 위약 환자들을 적극 치료로 전환하기 위한 IMC 결정 일자는 섹션 1.3에 제공되어 있다.
- 파트 1의 마지막 코호트(코호트 B3)의 경우, 9명의 환자들에서 최소 4주 치료의 종료후 모든 유효한 안전성, 내약성, PK 및 PD 데이터(9명 환자들보다 약 1주 후에 등록한 마지막 코호트의 10명 환자에 대한 모든 유효 데이터, 및 모든 이전 코호트들로부터의 모든 유효 데이터 포함)를 IMC가 본 연구의 파트 2에서 투여될 용량을 선택하기 위해 검토하였다. 상기 용량 선택은 동일한 데이터 패키지를 검토한 후 외부 iDMC에 의해 확인받았다. 상기 용량 결정에 기반이 된 데이터는 본 보고서에 요약되어 있다.
- iDMC에 의한 모든 유효한 파트 1 데이터의 검토 및 IMC 용량 선택에 대한 확인시, 파트 2가 시작되고, 파트 1의 모든 환자들은 본 연구의 OLE 단계의 일부로서, 파트 2에 대해 선택된 용량으로 전환될 것이다. 파트 1의 마지막 코호트의 환자들은 OLE에 들어가기 전에 그들 코호트의 12주 치료 기간의 끝까지 치료를 완료해야 할 것이다. RO7034-67 치료의 보다 장기 데이터를 제공하기 위해 환자들은 연구의 OLE 단게의 일부로서 안전성, 내약성 및 효능에 대해 계속 추적조사받을 것이다. 이들 환자들은 연구의 파트 2에서 수행되는 확인 효능 분석에는 기여하지 않을 것이다.
총 51명의 환자가 본 연구의 파트 1에 등록하였다. 환자들은 5개의 상이한 기관들(이탈리아(2개 기관), 독일, 프랑스 및 벨기에)에 걸쳐 등록하였다. 환자들은 1:2의 비로 위약 및 적극 치료의 환자들을 포함한 5개 코호트들에 등록하였다.
상기 프로토콜은, 연구의 파트 2에 대한 용량 선택 기준을, 파트 1의 데이터를 기반으로, 안전하며 잘 허용되는 것으로 보이고; i) 2형 및 3형 SMA 환자들에서 생존 운동 뉴런(SMN) 단백질의 임상적으로 적절한 증가를 야기하는 노출을 달성하고, ii) RO7034067의 평균 AUC0-24h,ss(투약후 0 내지 24 시간의 정상-상태 곡선하면적)이 2000 ng.h/mL의 노출 한도 미만으로 유지해야 하는 것으로 예상되는 용량으로 정의하였다.
연구 프로토콜에서 정의된 바와 같이, 유효 데이터는 SMN 단백질 수준의 100% 증가가 사실상 보다 중증 SMA 표현형이 보다 경미한 형태가 되는 것으로 예상되는 동시에, 추가의 증가는 훨씬 더 큰 이점을 제공하기 쉬울 것임을 시사한다.
실시예
2: (BI §4.1.2.2로부터 취함)
성인 C/C-대립유전자 마우스를 비히클 또는 RO7034067(매일 경구로[PO] 1, 3 또는 10 mg/kg)로 10일 동안 처리하고, PND3 SMNΔ7 마우스를 비히클 또는 RO7034067(매일 복강내로[IP] 0.1, 0.3, 1 또는 3 mg/kg)로 7일 동안 처리하였다. RO7034067은 뇌 및 근육 조직에서 SNM 단백질 수준을 용량-의존적으로 증가시켰으며, 이때 2 내지 3배 증가의 최대 효과가 성체 C/C 대립유전자 마우스에서 10 mg/kg에서 및 갓난 SMNΔ7 마우스에서는 1 내지 3 mg/kg에서 달성되었다(도 1a 및 1b). 따라서, 10 mg/kg 용량으로 C/C-대립유전자 마우스의 근육에서, 달성된 SMN 수준은 이형접합 마우스에서의 상기 수준과 상이하지 않았다. SMNΔ7 마우스에서, SMN 단백질 증가는 뇌 및 근육 둘 다에서, 이형접합 마우스에서의 단백질 수준의 약 43%(뇌) 및 55%(근육)에 이르러, 단지 부분적이었다. 상기 데이터는 RO7034067이 SMA의 유전자전이 마우스 모델의 뇌 및 근육 조직 둘 다에서 SMN 단백질을 증가시키고 중증 SMNΔ7 마우스 모델에서 100%보다 큰 SMN 단백질의 증가가 가능함을 보여준다.
실시예
3:
시험 물질은 위관영양에 의해 경구로 투여하였다. 동물들은 부검일을 포함하여 39주의 기간에 걸쳐 투약받았다. 동물들은 sdOCT 평가일에는 투약받지 않았다. 4군의 동물들(7.5 mg/kg/일 투여)은 시험 물질-관련 임상 징후로 인해 제 13일부터 25일까지는 투약하지 않았다. 7.5 mg/kg/일이 투여된 1마리의 암컷(동물 0114)는 그의 불량한 임상 조건으로 인해 제 12일에는 투약하지 않았다. 회복기 동물들은 제 273일(제 39주) 지나서는 투약하지 않았다.
연구 설계 및 용량 수준
하기의 연구 설계 및 용량 수준들을 선택하였다:
5.5 용량 부피
5 mL/kg의 용량 부피를 사용하였다. 개별적인 용량 부피들은 개별 체중에 기반하였다.
시험 물질 제형
제조
제형들은 매주 제조하였다.
시험 물질은 pH 3에서 10 mM 아스콜브산/0.0064 mg/mL 티오황산나트륨 중의 용액으로 제형화되었다.
저장
제형들은 무산소하에(질소하에) 밀폐 용기내에서 빛으로부터 보호된 상태로 2 내지 8 ℃에서 저장하였다. 상기 제형들은 실온이 되게 한 후 투약하였으며, 동물들 방에 도착시 저어준 다음, 투약내내 계속 저어주었다.
제형 분석
제형들을 그들의 시험 물질 함량에 대해 분석하였다.
안정성
안정성 데이터는 0.025 내지 5 mg/mL 범위의 제형들이 무산소하에(즉, 질소하에) 2 내지 8 ℃에서 저장시 4주까지 동안 안정하였음을 보여주었다.
달성된 농도
투약 단계의 제 1주, 13주, 26주 및 39주 동안 및 제 12일 및 26일에 사용하기 위해(4군에 대한 투약의 중단 및 재시작과 일치하도록) 제조된 샘플들(시험 물질 제형들로부터 3 x 1 mL 분취량; 대조군 약물 제형들로부터 2 x 1 mL 분취량)을 달성 농도의 분석을 위해 취하였다. 균질성 결과들의 평균을 샘플링이 동시에 일어난 달성 농도로 취하였다.
제 9주 동안 사용하기 위해 제조된 제형들로부터는 샘플을 취하지 않았으며, 투약 단계의 제 13주 동안 샘플들을 수집하였다.
시험 시스템
종, 균주 및 공급처
32마리의 목적을 위해 사육된 사이노몰거스 원숭이들(필리핀 원숭이(Macaca fascicularis))을 각 성별로 16마리의 건강한 동물들을 제공하기 위해 노베프림 리미티드(Noveprim Ltd.)(모리셔스(Mauritius))로부터 입수하였다.
명세사항
동물들은 투약 개시때 24 내지 26 개월령이었다.
환경
동물들은, 실험 절차에 달리 지시된 짧은 기간을 제외하고, 하기의 환경에서 유지시켰다. 이들은 최소 15회 환기/시간을 제공하도록 공기 조절된 전용실에 수용되었다. 온도 및 상대습도 범위는 일반적으로 각각 21 내지 25 ℃ 및 40 내지 70%의 특정 범위로 유지시켰다. 형광 조명은 자동으로 12시간 명(600 h 내지 1800 h) 및 12시간 암의 주기를 제공하도록 조절하였다.
동물들은 과학적 목적으로 사육, 공급 또는 사용되는 동물들의 수용 및 관리를 위한 시행 규약(홈 오피스(Home Office), 런던, 2014)에 따른 우리에 수용하였다. 동일 군 및 성별의 동물들을 동일한 우리에 무리로 수용하였다.
사료, 물 및 잠자리
각각의 동물에게 영장류용 공인 랩 사료(랩다이어트(LabDiet) 5048)의 펠릿을 매일 적어도 2회(대략 오전에 6개 펠릿 및 오후에 6개 펠릿) 제공하였으며; 추가의 펠릿을 가끔 오후 건강 점검시 제공하였다. 신선한 과일 또는 야채도 또한 평일에 매일 1회 제공하였으며, 건조된 대체물을 다른 때에 제공하였다.
주된 물은 물병으로 자유롭게 제공하였다. 물은 특정 오염물등에 대해 주기적으로 분석하였다.
잠자리는 깨끗한 사시나무 조각(데이트샌드 리미티드(Datesand Ltd), 영국 맨체스터 소재) 및 리그노셀(Lignocel) 믹스(인터내셔날 프로덕트 서플라이즈 리미티드(International Product Supplies Ltd), 영국 런던)를 사용하여 각각의 우리에 주간 기준으로 제공하였다.
식이 보충제 및 환경 강화
다음을 보상으로 제공하였다: 포도, 블루베리, 해바라기씨, 파스타, 견과, 목모 및 여물 혼합물; 이들은 환경 강화의 한 형태로서 분석을 요하지 않았다.
많은 추가의 항목/전략을 이용하여, 장난감(공, 불활성 나일론 씹는 장난감), 그네 및 사냥물들의 제공과 같이 동물들의 환경 및 복지를 강화하였다.
예비-실험 절차
시험 시스템의 식별
동물들은 전자 이식물로 개별적으로 식별하였다.
안과 검사
표준 안과 검사
모든 동물들에게 투약 개시 전에 및 투약 단계의 제 4주, 13주, 23주 및 36주 동안 조사를 수행하였다.
제 23주 및 36주 동안의 조사는 투약 단계의 제 22주 및 35주에 명시된 프로토콜과 달랐다. 시간 차이는 최소였으며 연구 무결성에는 영향을 미치지 않았다.
동물들을 케타민으로 살짝 진정시키고, 간접 및 세극등 안과 검사에 앞서 동공확산제를 눈에 주입하였다.
망막전위도검사
(ERG)
투약 단계의 제 20주, 26주 및 34주 동안 모든 동물들에게 및 회복 단계의 제 8주, 13주 및 22주 동안 모든 회복기 동물에게 조사를 수행하였다.
ERG 절차 전에 적어도 2 시간 동안 동물들을 굶기고, 암소시(scotopic) 검사전에 적어도 2 시간동안 어둠에 적응시키고, 명소시(photopic) 검사전에 적어도 10 분동안 빛에 적응시켰다.
동물들을 케타민으로 살짝 진정시키고, 검사에 앞서 동공확산제를 눈에 주입하였다.
스펙트럼 영역
광간섭
단층촬영
투약 단계의 제 22주, 27주 및 35주 동안 및 회복 단계의 제 8주, 13주 및 22주 동안 모든 동물에게 스펙트럼 영역 광간섭 단층촬영(sdOCT)을 수행하였다.
검사전에 동물들을 밤새 굶기고, sdOCT 평가일에는 투약하지 않았다.
동물들을 케타민으로 살짝 진정시키고, 검사에 앞서 동공확산제를 눈에 주입하였다.
독성동태학
독성동태학을 위한 혈액 샘플(통상적으로 0.5 mL)을 하기 시점들에서 투약 단계의 제 1일, 12일(제 2주), 26일(4군만), 57일(제 9주), 92일(제 14주), 180일(제 26주) 및 267일(제 39주)에 시험 물질-처리된 모든 동물들로부터 취하였다:
- 투약후 제 0(사전용량), 1, 3, 7 및 24 시간.
제 12일의 투약후 72 시간후에(즉, 제 15일) 4군의 모든 동물들로부터 추가의 샘플을 취하였다.
대조군(1군)으로부터의 샘플은 오염을 방지하기 위해 다른 날들(제 26주 동안은 제외)에 취하였다: 투약 단계의 제 3일, 15일(제 3주), 59일(제 9주), 89일(제 13주), 180일(제 26주) 및 269일(제 39주).
투약 단계의 제 180일(제 26주)에, 3 mg/kg/일을 투여한 1마리 암컷(동물 0111)으로부터 1-시간 샘플을 초기에 6분간 취하였고, 이것은 SOP에 의해 허용된 편차 창의 2분 범위를 넘었다. 상기 시간 편차로 발생된 연구 무결성에 대한 영향은 최소였다.
대퇴부 정맥/동맥으로부터 샘플을 취하였다. 각각의 혈액 샘플을 손으로 약하게 섞은 다음 대략 4 ℃에서 2300g로 10분 동안 원심분리할 때까지 잘게 부순 젖은 얼음 위에 두었다. 수득된 혈장을 분리하고, 2개의 고유하게 표지된 투명한 폴리프로필렌 튜브에 분배하고, < -50 ℃(공칭 -80 ℃)에서 냉동시켰다. 1개의 샘플을 드라이아이스 상에서 냉동시킨 채 분석을 위해 연구 책임자(Principal Investigator)에게로 운반하고, 다른 하나는 코반스(Covance)에서 보유하였다.
방법 및 결과는 부록 13 및 부록 17에 제공되어 있다.
임상 병리학
샘플 및 때
혈액 샘플들(EDTA 항응고제 중에 수집된 공칭 0.5 mL, 삼나트륨 시트레이트 항응고제 중에 수집된 0.5 mL 및 리튬 헤파린 항응고제 중에 수집된 0.6 mL)을 투약 개시전에; 투약 단계의 제 4주, 13주, 26주, 35주 및 39주 동안; 및 회복 단계의 제 13주 및 22주 동안 모든 동물들의 대퇴부 정맥/동맥으로부터 채취하였다. 동물들이 실수로 밤새 금식하지 못한 제 13주 회복 단계 샘플을 제외하고, 샘플들을 금식하에 하룻밤의 기간후에 수집하였다. 이것은 영향이 없었다.
최종 절차
모든 동물들을 부검하였다.
독성동태학
조직 샘플링
눈 -1마리의 동물/성별/군으로부터 왼쪽 눈의 유리액 및 안방수로부터 독성동태학 조사를 위한 샘플을 부검시에 취하고, 표지된 에펜도르프(Eppendorf) 튜브에 분취하고 계량하였다. 절제후에, 망막, 맥락막 및 RPE, 각막, 홍채, 공막 및 수정체를 각각 별도의 프리셀리스(Precellys) 균질화 튜브(2 mL)에 넣었다. 상기 튜브들은 이어서 액체 질소중에서 순간 냉동시키고 공칭 -70 ℃에서 냉동 저장하였다.
전자 현미경검사
주요군 부검시 2마리 동물/성별/군으로부터 및 회복단계 부검시 1마리 동물/성별/군으로부터 취한 왼쪽 눈을 부검시에 포르말린/글루타르알데하이드 혼합물에 고정시켰다. 작은(25 내지 27 게이지) 바늘을 가진 주사기를 사용하여, 눈의 맨윗부분에 4% 완충 글루타르알데하이드 및 10% NBF의 1:1 혼합물을 공막을 통해 유리체내에 긴 후방 모양체 동맥에 수직인 위치에 주사하였다. 눈에 약 0.2 내지 0.3 mL의 정착액을 주입한 다음, 4% 완충 글루타르알데하이드 및 10% NBF의 1:1 혼합물로 충전된 용기내에 36 내지 48 시간 동안 침지시켰다.
데이터 평가
요약표들의 제목에 열거된 동물들의 수는, 각각의 부검 기간에 할당된 동물들의 수를 나타내는 병리학 표들을 제외하고, 각각의 단계 시작시 각 군에 할당된 동물들의 수를 반영한다. 관찰결과에 대한 요약표는, 특정 성질, 중증도, 가역성, 발병률/동물의 수, 또는 조건이 지속된 시간 길이와 무관하게 병태가 관찰된 동물들의 수를 나타낸다.
시험 물질-처리된 동물로부터의 데이터를 대조군 데이터와 비교하였다.
본 보고서에서 일부 표들은 컴퓨터-작성되었다. 이러한 시스템에서, 개별 수치 및 유도된 수치들은 반올림하였다. 이때, 보고서에 나타낸 개별 데이터로부터의 유도된 값들의 재계산은 몇몇 경우에서 미미한 변화를 야기할 것이다.
ERG 데이터에 통계 분석을 수행하였다.
하기에 열거된 망막전위도검사 파라미터들에 대한 A-파(적용가능한 경우) 및 B-파 진폭 및 잠복기를, 모델에서 단일 요인으로서의 처리하에 분산분석(Analysis of Variance(ANOVA; 문헌[Winer et al., 1991])을 이용하여 분석하였다. 유의적인 전체 처리 효과(P<0.05)가 주목된 경우, 군 비교(2, 3 및 4군 대 1군)를 던네트 검정(Dunnett's-test)(문헌[Dunnett, 1955 and 1964])에 의해 평가하였다. 수컷 및 암컷 데이터를 따로따로 분석하였다.
- 암소시 -34 dB 청색 단일 플래시
- 암소시 -8 dB 적색 단일 플래시
- 암소시 0 dB 백색 단일 플래시
- 진동소파전위
- 광소시 0 dB 단일 플래시
- 광소시 0 dB 30.3 Hz 백색
- VEP 4.1 Hz
또한, 레벤 검정(문헌[Levene, 1960])을 이용하여 군들간의 분산 균등성에 대해 검사하였다. 레벤 검정이 유의적인 경우(P<0.01), 등급-변환 데이터(문헌[Draper and Hunter, 1969])를 ANOVA 모델에 사용하였다.
각 동물들의 2개 눈(오른쪽 및 왼쪽) 사이의 평균을 산출하고 분석에 이용하였다.
결과
제형
모든 시험 물질 제형들의 측정된 함량은 공칭 94 내지 103%의 범위여서, 투약을 위해 허용되는 농도가 제조되었음을 입증하였다.
시험 물질은 대조군 샘플들에서는 검출되지 않았다.
생물분석 및
독성동태학
혈장내 결과는 다음을 시사하였다:
대조군으로부터의 샘플들은 어느 것도 정량가능한 혈장 농도의 오류를 함유하지 않았다. 참조 공급원은 발견되지 않았다. 모든 결과는 정량화 하한치 미만이었다(<5.00 ng/mL).
1.5, 3 또는 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 모든 동물들은, 모든 조사일에 전체 샘플링 간격(24 시간)에 걸쳐 완전한 혈장 농도-시간 프로필하에 RO7034067에 노출되었다.
특히 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 군에서 및 상기 군의 2마리 동물들(동물 0112 및 0114; 동물 0112의 경우 독성동태학[TK] 샘플링날에는 관찰되지 않음)에서 높은 빈도하에 투약 직후 역류가 관찰되었다. 제 89일, 90일 및 91일의 3일의 역류 후에, 동물 0114에서 제 92일에 RO7034067에 대한 노출량은 5 mg/kg/일이 투여된 다른 모든 동물들에 비해 명백히 더 낮았다. 이러한 현상은, 역류가 상기 동물에서 또한 관찰된 제 57일(TK 샘플링날)에는 덜 현저하였다. 결과적으로, 동물 0114에서의 노출량은 제 57일 및 92일에 임의의 비 및 통계 계산에서 배제되었다.
전체적으로, AUC(0-24h)의 대략적 용량-비례 증가가 각각의 평가일에 1.5 내지 5 mg/kg/일에서 관찰되었다. 이것은 또한 제 1일 및 12일에 1.5 내지 7.5 mg/kg/일에서도 관찰되었다.
전체적으로, 39-주 투약 단계 동안 어떤 용량 수준에서도 AUC(0-24h) 또는 Cmax에 유의미한 성별에 따른 차이는 관찰되지 않았다.
제 12일 및 267일의 주된 결과(평균값)는 하기 표에 요약되어 있다:
망막전위도검사
(비-GLP)
정성적 평가
국제 임상 시각 전기생리학회(International Society for Clinical Electrophysiology of Vision, ISCEV) 프로토콜하에 유도된 망막전위도검사(ERG) 반응의 육안 검사는 투약단계의 제 20주 동안 현저히 저하된 ERG를 갖는 7.5/5 mg/kg/일 투여된 여러 동물들을 보여주었다. 3 mg/kg/일이 투여된 1마리 수컷(동물 0009) 및 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 2마리 수컷(동물 0013 및 0014)은 저하된 암소시 -34 dB 청색 B-파 진폭을 갖는 것으로 나타났다. 3 mg/kg/일이 투여된 2마리 암컷(동물 0110 및 0111) 및 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 3마리 암컷(동물 0114, 0115 및 0116)도 또한 암소시 -34 dB 청색 조건에서 현저히 저하된 B-파 진폭을 갖는 것으로 나타났다. 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 1마리 수컷(동물 0014) 및 2마리 암컷(동물 0114 및 0115)도 또한 투약 단계의 제 20주 동안 감소된 광소시 0 dB 백색 및 30 Hz 명멸 진폭을 갖는 것으로 나타났다. 투약 단계의 제 26주 동안의 ERG 반응에 대한 정성적 평가는 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 2마리 수컷(동물 0013 및 0014)에서 저하된 암소시 -34 dB 청색 B-파 진폭을 나타내었고, 또한 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 2마리 암컷(동물 0114 및 0115)에서는 저하된 광소시 0 dB 단일 백색 B-파 진폭하에 광소시 침범의 증거가 존재하였다.
투약 단계의 제 34주 동안의 ERG 반응에 대한 정성적 평가는 3마리 수컷(동물 0012, 0014 및 0015) 및 4마리 암컷(동물 0113, 0114, 0115 및 0116)에서 7.5/5 mg/kg/일에서 저하된 암소시 -34 dB 청색 B-파 진폭을 나타내었다. 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 1마리 암컷(동물 0114)은 거의 소멸된 암소시 및 광소시 반응을 갖는 것으로 나타났다. 1.5 mg/kg/일이 투여된 1마리 수컷(동물 0004)은 제 34주 시점 동안 예상된 암소시 -34 dB B-파 진폭보다 더 낮은 진폭을 나타내었다.
망막전위도검사(ERG) 및 VEP는, 대조군 및 7.5/5 mg/kg/일 투여군 둘 다로부터, 2마리 수컷 및 암컷에서 회복 단계의 제 8주, 13주 및 22주 동안 기록되었다. 4마리 대조군 동물들로부터 기록된 ERG는 모두 3개의 회복기 시점들에서 예상된 정상 한계 이내에 들었다. 7.5/5 mg/kg/일이 사전 투여된 1마리 암컷(동물 0114)은 회복 단계의 제 8주 및 13주 동안 계속 감소된 진폭 ERG 반응을 나타내었으나; 회복 단계의 제 22주에 상기 동물에 대한 ERG B-파의 진폭은, 예상된 정상 한계의 바로 미만으로 유지되긴 했지만 이전 시험들에 비해 현저히 증가되었다. 2마리 수컷 4군 동물들은 3개 회복 기간들 각각에서 예상된 정상 한계 이내의 암소시 및 광소시 B-파를 나타내었다.
망막전위도검사
등급평가
각 동물의 -34 dB 암소시 청색 B-파 진폭을 동일한 장치 및 마취하에 시험한 사이노몰구스 원숭이의 거대 샘플(N=320로부터 수득된 값들과 비교함으로써 ERG 등급평가를 반-정량적으로 수행하였다(문헌[Ver Hoeve et al., 2014]). 상기 연구로부터의 거대 샘플 산출결과를 이용하여 1.96* 표준 편차 및 2.36* 표준 편차를 기반으로 더 낮은 신뢰 구간을 계산하였으며, 그에 대한 평균은 187.8이었고 표준 편차는 51.7 마이크로볼트로 각각 0.05 또는 0.01 미만의 확률하의 이탈에 상응한다. 상기 값들을 기반으로, 0의 등급은 1.96 표준 편차내의 B-파 진폭에 부여되었고; 1의 등급은 예상 평균 미만의 1.96 표준 편차보다 낮지만 2.36* 표준 편차 이상인 B-파 진폭에 부여되었고, 2의 등급은 예상 평균으로부터 2.36 표준 편차 미만의 B-파 진폭에 부여되었다.
투약 단계
전술한 등급평가 기준에 기반하여, 7.5/5 mg/kg/일 투여된 5마리 암컷들 중 4마리는 제 20주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내었고; 7.5/5 mg/kg/일 투여된 5마리 암컷들 중 2마리는 제 26주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내었고; 7.5/5 mg/kg/일 투여된 5마리 암컷들 중 4마리는 제 34주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내었다. 7.5/5 mg/kg/일 투여된 5마리 수컷들 중 4마리는 제 20주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내었고; 7.5/5 mg/kg/일 투여된 5마리 수컷들 중 2마리는 제 26주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내었고; 7.5/5 mg/kg/일 투여된 5마리 수컷들 중 5마리는 제 34주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내었다.
상기 등급평가 기준을 이용하여, 3 mg/kg/일 투여된 3마리 암컷 모두 제 22주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내었고; 이들 암컷들중 어느것도 제 27주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내지 않았으며; 3 mg/kg/일 투여된 3마리 암컷들 중 1마리는 투약 단계의 제 35주 동안 저하된 간상체 반응을 나타내었다. 3 mg/kg/일 투여된 수컷들의 경우, 3마리중 1마리는 제 22주 동안 저하된 간상체 반응을 나타낸 반면, 투약 단계의 제 26주 또는 제 35주 동안은 어느것도 나타내지 않았다.
1 mg/kg/일 투여된 2마리 암컷은 투약 단계의 제 34주 동안 상기 기준 미만의 간상체 ERG를 나타내었다. 1 mg/kg/일 투여된 수컷들은 예상 범위 미만의 간상체 반응을 나타내지 않았다.
대조군 동물들 중에서, 1마리 암컷(동물 0102)만이 투약 단계의 제 22주 및 34주 동안 예상 범위 밖의 간상체 반응을 나타내었다. 1마리 대조군 수컷만이 투약 단계의 제 34주 동안 기준 미만의 간상체 반응을 나타내었다.
OCT 및 ERG 결과가 대조군 및 1 mg/kg/일 투여된 군에서는 드물거나 부재하였다. OCT 및 ERG는 3 mg/kg/일 투여된 동물들에서는 비교적 경미한 이상을 나타내었으며, 둘 다 7.5/5 mg/kg/일 투여된 동물들에서는 높은 비율의 이상이 존재하였음을 나타내었다.
회복기
2마리 대조군 동물/성별 및 2마리 동물/성별은 회복기 동안 7.5/5 mg/kg/일 투여가 이어졌으며, 회복 단계의 제 8주, 13주 및 22주 동안 시험하였다.
투약 단계의 제 22, 26 및 34주에 상당히 감소된 간상체 반응하에 투약 단계 동안 7.5/5 mg/kg/일이 제공된 2마리 암컷들 중 1마리(동물 0114)는 회복기 제 8주 및 회복기 제 13주에도 저하된채 유지되었다. 회복기 제 22주에, 114번 동물은 회복기 제 8주의 34.1, 33.5(mcV, 오른쪽, 왼쪽 눈)으로부터 회복기 제 22주의 43.4, 52.7 mcV로 B-파 진폭에 큰 증가를 나타내었다. 그러나, 상기 반응은 예상 평균 미만의 2.36 표준편차보다 더 높게 유지되었다. 다른 발병된 4군 암컷, 0115번 동물은 회복기 제 8주 및 13주에 예상 한계 미만으로 아직 덜 발병된 ERG B-파를 나타내었으며, 회복기의 제 22주에 완전 회복되었다. 4군 수컷들은 둘 다 3회의 회복기 시험 각각에서 예상된 정상 한계내의 암소시 및 광소시 b-파를 나타내었다.
정량 평가
투약 단계의 제 34주 동안 수집된 데이터로부터의 ERG A- 및 B-파 피크 잠복기(잠복 시간) 및 진폭에 대한 통계학적 평가가 코반스 통계전문가들에 의해 수행되었다. 암소시 -34 dB 청색 단일 플래시 B-파 진폭은 B-파 잠복기(P<0.0370)가 그러했듯이, 군들 사이에서 상당히 달랐지만(P<0.0047), 대조군과의 개별 군 비교(던네트 검정)는 상기 소규모 N 분석하에서는 유의성에 도달하지 않았다.
암소시 0 dB 백색 A-파의 잠복기는, 7.5/5 mg/kg/일 군과 대조군 사이의 차이에 대한 던네트 검정 유의성(P<0.0095) 하에, 군들 사이에서 상당히 상이하였다(P<0.0116).
마지막으로, 광소시 0 dB 백색 B-파 진폭은 군들 사이에서 상당히 상이하였지만(P<0.0049), 대조군과의 군 비교는 유의성에 도달하지 못하였다.
요약하면, 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 여러 동물들은 투약 단계의 제 20주 동안 현저히 저하된 암소시 및 광소시 ERG를 나타내었다. 망막 기능은 투약 단계의 제 26주 및 34주 동안 상기 동물들에서 저하된 채 유지되었으며, 이때 7.5/5 mg/kg/일 투여된 1마리의 암컷(동물 0114)은 명백하게 진행성 ERG 기능부전의 징후를 나타내었다. 중요하게, 0114번 동물은 회복 단계의 제 22주까지 뚜렷한 회복 징후를 나타내었다. 중간용량 및 저용량 군 동물들(3.0 및 1.5 mg/kg/일)은 일반적으로 투약 단계동안 감소된 ERG 진폭 경향에 대한 증거없이 예상 한계내에서 유지되었다.
발병된 동물들에서, 간상체 광수용체-매개 암소시 -34 dB 청색 단일 플래시의 현저한 저하가 나타났다. 가장 많이 발병된 동물들(7.5/5 mg/kg/일 투여된 3마리 수컷[동물 0012, 0014 및 0015] 및 2마리 암컷[동물 0114 및 0116])에서, 암소시 0 dB 단일 백색(간상체-추상체 복합 자극) A-파는 B-파보다 덜 저하되게 나타났다. 이것은 RO7034067이 광수용체 활성화 자체보다 양극 세포로의 광수용체 전달에 비교적 더 큰 효과가 있음을 시사하였다. 이러한 추론은 양극 세포층이 7.5/5 mg/kg/일 투여된 동물들에서 망막 기능부전의 원발 장소였다는 가능성을 이끌어낸다.
7.5/5 mg/kg/일 투여된 일부 동물들이 정상 ERG를 나타내고 나머지 동물들은 앞에서 보였듯이 저하된 ERG를 나타내면서, RO7034067 투여에 대해 현저한 개별적 차이를 보였음도 또한 주목할만 하였다. 플래시-유발 VEP는 7.5/5 mg/kg/일 투여된 동물들에서조차 존재하며 유지되었다. 이것은 RO7034067 투여가 발병된 망막 반응을 갖는 동물들에서조차 망막 신경절 세포 또는 시각피질로의 그의 축삭 돌기를 크게 손상시키지 않았음을 시사하였다. 이것은, 황반 영역이, 망막의 훨씬 더 큰 비율을 차지하고 주로 전자계 ERG에 관련된 망막 주변에 비해 비교적 보존되어 있는 경우에 일어날 수 있다. sdOCT 및 조직병리학에 의해, 사실상 황반 영역이 임의의 실질적인 망막 손상으로부터 보존된 것으로 나타났다. 1.5 mg/kg/일 또는 대조군 물질(비히클)이 투여된 동물들은 ERG 결함을 나타내지 않았다.
스펙트럼 영역
광간섭
단층촬영(
sdOCT
, 비-GLP)
투약 단계
7.5/5 mg/kg/일 투여된 3마리의 수컷들(동물 0012, 0014 및 0016)은 제 22주에 비해 제 27주 동안 약간 더 악화된 것으로 나타났다. 동물 0014는 미세낭종 황반 변성(MMD) 및 주변부의 ONL에 유체 공간의 증가를 나타낸 반면, 동물 0016은 주변부에 더 많은 박층화 및 붕괴를 나타내었다. MMD 공간은 단지 INL에서만 나타났으며, 주변부의 ONL에서 보인 공간들과 외관상 달랐다. 제 35주 동안, 동물 0014도 또한 MMD의 수 및 주변부의 INL 및 ONL에 유체 공간의 지속된 증가 및 주변부의 망막층의 약간 증가된 박층화 및 붕괴와 함께, 제 27주 동안보다 약간 더 악화된 것으로 나타났다.
제 27주 동안, 7.5/5 mg/kg/일 투여된 1마리 암컷(동물 0113)은 제 22주 동안보다 시신경 머리 및 황반 부근에 더 적은 MMD 공간을 나타냈지만, 주변부의 망막층의 더 많은 붕괴를 나타내었고; 7.5/5 mg/kg/일 투여된 1마리의 암컷(동물 0114)은 제 22주 동안보다 주변부로 연장된 INL 내 낭종 공간과 함께 더 많은 MMD, 및 주변부에 약간 더 많은 붕괴 및 박층화를 나타내었으며; 7.5/5 mg/kg/일 투여된 1마리의 암컷(동물 0116)은 주변부의 INL에 및 시신경 부근에 공간을 나타내었다. 제 35주 동안, 7.5/5 mg/kg/일 투여된 1마리의 암컷(동물 0113)은 여전히 시신경 머리 및 황반 부근에 MMD 공간을 가졌으나; 제 27주 동안보다 망막층의 더 많은 붕괴가 주변부에서 나타났으며 이때 ILM 하부에 시각적으로 빈 공간이 나타났고(오른쪽보다는 왼쪽눈에서 더 많이); 동물 0114는 제 27주 동안보다 제 35주 동안 주변부로 연장된 INL 내 낭종 공간과 함께 더 많은 MMD, 주변부에 더 많은 붕괴 및 박층화, 및 ONL 내 및 ILM 하부에 시각적으로 빈 공간의 증가를 나타내었다. 또한, 제 35주 동안, 동물 0115는 제 27주에 비해 주변부로 연장된 INL 내 MMD 공간의 증가뿐 아니라, ONL에 적은 공간을 나타내었다.
3 mg/kg/일 투여된 수컷들은 sdOCT 기간 전체에 걸쳐(투약 단계의 제 22주, 27주 및 35주) 주변부에서 최소/경미한 망막 붕괴를 나타내었다. 3 mg/kg/일 투여된 2마리의 암컷들(동물 0109 및 0110)은 더 많은 ONL 침윤/반사 반점들 및 내절/외절(IS/OS) 탈락과 함께 제 22주 동안보다 제 27주 동안 약간 더 악화된 것으로 보였다. 제 35주 동안, 3 mg/kg/일 투여된 1마리의 암컷(동물 0109)은 약간 더 큰, IS/OS가 주변부에 부재한 영역을 나타내었다.
대조군 및 1.5 mg/kg/일 투여된 동물들은 정상적인 망막 외관을 유지하였다.
안저 자가형광(FAF) 상들은 대조군 물질(비히클), 1.5 또는 3 mg/kg/일 투여된 군들에서 시간경과에 따라 경미한 변화를 나타내었다. 반상 저형광은 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 가장 많이 발병된 동물들에서만 나타났다. 이러한 짙은 점상 반점들은, 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 일부 동물들에서, 망막 변성이 가장 두드러졌던 보다 먼 주변부에서 더 큰 짙은 부분들로 합체되는 것으로 나타났다. 광범위한 MMD 하에 눈의 FAF 상들에서 중심와 주변에 짙은색 고리가 나타났다. 상기 FAF 결과는 인간 환자들에서의 MMD를 기록한 많은 안과학 학술지 논문에서 보고되었다.
고찰
본 연구에서 주목된 주된 효과는 망막 보전 및 기능에 대한 RO7034067의 용량- 및 발병률-관련 효과였다. 유사한 약리학적 성질의 또 다른 시험 물질을 사용한 만성 원숭이 독성 연구에서 망막 변화의 후속 확인을 위해 투약 단계의 제 20주로부터 ERG 및 sdOCT를 수행하였다. 생존기간 동안 망막 변화를 모니터하기 위해, 투약 단계를 13주에서 39주로 연장하였다. RO7034067을 사용한 치료시, sdOCT 상에서 구조적 이상이 있는 것으로 확인된 동물들과 ERG 상에서 기능적 이상이 있는 것으로 확인된 동물들 사이에 분명한 연관성이 주목되었으며, 이때 sdOCT 상에서의 보다 심각한 이상은 저하된 ERG 파 반응과 연관되었다. 상기 연관성은 투약 단계의 제 20/22주 동안 첫번째 조사에서 존재하였으며 투약 단계 동안 2번의 후속 조사들에서도 지속되었다. 3 mg/kg/일 용량군에서 sdOCT에서 경미한 이상만을 나타낸 몇몇 동물들은 ERG에서는 어떤 기능적 변화도 나타내지 않았다. 또한, 7.5/5 mg/kg/일이 투여된 3마리 동물들(동물 0014, 0114 및 0116)은 sdOCT 등급평가에 따르면 가장 많이 발병된 동물들이었으며 최대 ERG 저하를 나타내었다.
도 3은 연구 기간 말기에 (및 조직병리학을 위해 22-주 회복 단계의 말기에) 개별적 동물 노출량과 함께 sdOCT, ERG 및 조직병리학적 변화에 대한 노출량-효과 상관성을 나타내고 있다. 암컷 및 수컷들에서 각각 평균 1870/2060 ng*h/mL AUC0-24h, 및 개별적으로 2300 ng*h/mL AUC0-24h까지 노출된 동물들은 망막에 효과가 없었다. 망막 결과가 있는 중간-용량의 동물들의 최저 노출량은 11, 109 및 111 번 동물들의 경우 4540/4560/4560 ng*h/mL AUC0-24h였다. 3 mg/kg/일의 용량에서 4880/4850 ng*h/mL(M/F에서 ACU0-24h)의 노출량에서 sdOCT 및 조직학에 의해 효과가 나타났다. INL 내 저하된 ERG 및 미세낭종 공간들은 주로 5880/6470 ng*h/mL(M/F에서 ACU0-24h)의 노출량하의 고용량(5 mg/kg/일)의 동물들에서 나타났다. 노출량은 연구 동안 시간경과에 따라 단지 매우 낮은 가변성을 나타내었다.
≥3 mg/kg/일로 투여된 모든 동물들에서 OCT 결과는 어느 정도 IS/OS의 붕괴 및 박층화, 및 망막 주변에서 ONL의 증가된 반사율 및 박층화를 포함하였다. INL에 미세낭종 공간들의 독특한 패턴을 특징으로 하는 미세낭종 황반 변성(MMD)도 또한 나타났다. 유체가 축적된 것으로 보이는 것이 IML 하부에 및 ONL에서 주목되었다. 상기 효과들은 3 mg/kg/일 투여된 1마리 암컷 및 7.5/5 mg/kg/일 투여된 2마리 동물/성별의 망막의 주변 영역 사이에 변성의 불리한 조직병리학적 결과와 상관되었으며, 광수용체층의 일부 손실; 망막 색소 상피 세포의 다초점 비대; 내핵층의 일부 박층화, 붕괴 및 공포형성; 및 신경절 세포층의 공포형성과 함께, 망막의 외핵 및 광수용체 층의 다초점 붕괴를 특징으로 하였다.
미세낭종 황반 변성(MMD)은 ILM 하부 및 ONL 내의 유체 공간으로부터의 분명한 결과이며; 문헌에서 미세낭종 황반 부종으로 종종 보고되는 바와 같은 MMD는 통상적으로 MS 또는 녹내장과 같은 퇴행성 질환과 연관된다. 그의 병인은 충분히 이해되지는 않고 있지만, 통상적인 외양은, 가끔 주변부에서 더 멀리 연장되지만 항상 INL 내에서 및 항상 ONL 내 또는 ILM 하부의 유체 공간(상기 유체 공간들은 형태가 불규칙하고 그들의 높이보다 더 넓을 수 있다)의 다양한 외관에 비해 미세낭종 공간에 대해 길고 좁고 수직인 외관을 갖는, 부중심와 영역에서의 미세낭종 공간의 독특한 패턴이다. 보다 먼 주변부의 INL의 박층화 특성은 상기 공간의 정확한 형태를 인지하기 어렵게 만들었다; 일부 공간은 전통적인 MMD같이 보이고 황반 부근에 나타난 공간들의 연장부인 것으로 보이지만, 주변부의 INL 내의 다른 공간들은 그렇지 않았다.
망막의 보다 먼 주변부에서, ONL의 일부 박층화 및 광수용체/RPE 층의 일부 붕괴는 정상적이다. 상의 질은 특히 원숭이에서, 부분적으로 그들의 더 작은 눈 및 증가된 곡률로 인해, 보다 먼 주변부쪽으로 저하되어가므로, 망막층 보전에 관한 명확한 결론은 그 위치에서 더 어려웠다. 그러나, 군들 전체에 걸쳐 상을 비교할 때, sdOCT 상에서 용량 반응이 있는 것으로 보였으며, 이때 더 높은 용량군은 보다 많은 붕괴 및 IS/OS의 박층화 및 주변부의 ONL 및 INL 내 및 ILM 하부 및 황반 부군의 MMD 공간에서 유체의 보다 많은 축적을 나타내었다. 또한, 3 또는 7.5/5 mg/kg/일 투여된 암컷들은 상기 군 내 수컷들보다 더 많이 발병된 것으로 보였다.
안저 자가형광(FAF) 영상화는 가장 현저한 퇴행성 변화를 갖는 동물들의 주변부에서만 얼룩이 있는 저형광 및 초형광 영역들을 나타내었으며; 눈에서 자연적으로 발생할 수 있거나 또는 질환 과정의 부산물로서 축적될 수 있고 RPE의 건강이 핵심 역할을 하는 병태에 대한 유용한 정보를 제공할 수 있는 형광을 기록하기 위해 FAF를 이용한다. 초-자가형광은 증가된 리포푸신 축적의 징후일 수 있으며, 상기 축적은 퇴행성 변화 또는 산화성 손상을 나타낼 수 있다. 저-자가형광 영역은 손실되거나 변이된 RPE 세포를 나타낼 수 있다. 본 연구에서 FAF 변화는 망막 주변 및 중심와 부근의 MMD에서의 퇴행성 변화를 시사하였다.
보다 먼 주변부에서 나타난 초-AF 신호를 갖는 선명한 얼룩이 있는 영역은 RPE의 부전에 의해 손상된 퇴행 광수용체 세포에 증가된 리포푸신 생성으로부터 비롯되었을 수 있다. 일반적으로, 저-AF(짙은) 영역은 손실되거나 변이된 RPE 세포를 나타내며, 가장 퇴행성 변화 -광수용체 손실 및 ONL 붕괴-가 나타난 부위이다. 시간경과에 따라, 병든 RPE 세포를 시사하는 초-AF 영역은, RPE의 손실을 시사하는 저-AF 부위가 될 수 있다. 7.5/5 mg/kg/일 투여된 동물들의 보다 먼 주변부에서 나타난 백색 초-AF 반점들의 띠는 전이대로 간주될 수 있었으며, 상기 전이대에서는 세포들이 손상된 기능을 가질 수 있으나; 회복 가능성은 여전히 존재한다. 보다 먼 주변부 내의 전이대는 회복 단계에서 초기에는 동일하게 유지되었으나 회복 단계의 제 22주까지는 희미해지는 것으로 보였다는 사실은 비가역적 손상에 대한 티핑포인트가 상기 영역에서는 도달하지 못했으며 시간경과에 따른 회복이 가능하였음을 나타내었다. OCT 결과 및 ERG 검사는 모든 동물들에서, 특히 회복 단계의 마지막 기간인, 제 22주에서 분명한 개선을 나타내었다. 4마리 중 1마리 동물에서만, ERG가 정상 한계 미만으로 유지되었다.
FAF 영상화에서, 특히 원숭이에서, 방향 및/또는 안구 운동의 경미한 변화에 기인하는 FAF 외관의 미묘한 변화가 존재할 수 있음을 유의해야 한다. 소프트웨어는 최종 상을 생성하는데 평균 100 프레임 이하가 되며, 이에 의해 일부 상 대비 또는 차광 가변성이 야기될 수 있다. 가장 많이 발병된 동물들의 보다 먼 주변부에서 수집된 상들은 보다 현저한 퇴행성 변화들과 상관되는 것으로 보이는 변화들을 나타내었다. 상기 결과의 해석시 주의점은 모든 동물들이 각각의 기간에서 영상화된 것은 아니며 상기와 같은 소규모 샘플 크기에서는 FAF 외관, 용량 반응 및 시간경과에 따른 진행에 관해 명확하게 말하는 것이 어려웠다는 것이다.
OCT 결과는, 주변부의 광수용체 층의 다초점 손실과 함께 망막의 외핵 및 광수용체 층의 붕괴를 특징으로 하는 망막 변성의 병리학 결과들과 상관되었다. 내핵층의 박층화, 붕괴 및 공포형성에 대한 병리학 결과들은 MMD의 OCT 결과와 일치하였으며, 신경절 세포층의 공포형성은 ILM 하부의 시각적으로 빈 공간(유체)의 증가의 OCT 결과와 일치하였다. INL 내 MMD의 OCT 결과는 사실상 초점에 있었으며, 공간들(또는 공포)은 반드시 조직병리학 부분에서만 나타나지는 않는다. 조직병리학적으로, 망막 변성은 회복기동안 가역적이지 않았지만, 내핵층의 공포형성은 더 이상 존재하지 않았다. 망막 변성은 불리한 것으로 간주되었다.
결론
39주 동안 사이노몰거스 원숭이에게 1.5, 3 또는 7.5/5 mg/kg/일 RO7034067의 투여는 주로 7.5/5 mg/kg/일 투여된 동물의 피부에서의 임상 징후와 연관되었으며, 이것은 표피 과형성의 불리하지 않은 현미경검사 결과와 상관되었다. 또한, 발병률의 용량-관련 및 눈에서 중증 기능(ERG로 측정시) 및 형태(불리한 망막 변성) 변화들이 3 또는 7.5/5 mg/kg/일 투여된 동물에서 관찰되었으며, 7.5/5 mg/kg/일 투여된 암컷의 흉선(불리하지 않음)도 또한 시험 물질-관련 조직병리학적 변화 부위로 확인되었다.
3 또는 7.5/5 mg/kg/일 투여된 동물들의 눈에서의 결과 및 1.5 mg/kg/일 투여된 동물들에서 임의의 시험 물질 효과의 부재를 기반으로, 본 연구의 조건하에, 무독성량(NOAEL)은 수컷/암컷에 대해 투약 단계의 제 39주 동안 414/396 ng/mL(Cmax) 및 1870/2060 ng*hr/mL(AUC0 - 24)의 전신 RO7034067 노출량에 상응하는 1.5 mg/kg/일인 것으로 간주된다.
원숭이 39-주 만성 독성 연구(22-주 회복 단계 포함)에서, 망막 주변 변성(광수용체 손실), 과반사성 RPE 및 보다 중심부 MMD(공포)가 4260 ng.h/mL AUC0 -24h의 노출량에서 sdOCT(치료의 제 20주부터 계속 평가됨)에 의해 검출되었다. ERG 데이터의 보완적 획득 결과 저하된 B-파를 나타내었다.
원숭이에서의 만성 39-주 독성 연구로부터의 망막에서 sdOCT로 검출시 원숭이에서 망막 내층의 비대성 RPE 및 미세낭종 공간(공포)과 함께 광수용체 층에 다초점 망막 주변 변성이 나타났다. 이것은 ERG에서 저하된 암소시 (간상체) B-파 및 다소 덜 영향을 받은 광소시 (추상체) B-파와 연관되었다. sdOCT 및 ERG 평가는 제 20주에(상기 분자를 사용한 만성 원숭이 독성 연구의 말기에 RO6885247에 대한 망막 변화에 대한 보고 다음에) 개시되었고 연구의 제 35주까지 계속되었다. 상기 결과들은 조직병리학에 의해 확인하였다. 39주의 치료하에서의 망막 결과에 대한 NOEL은 4880/4850 ng.h/mL(M/F에서 AUC0 -24h)의 노출량에서 sdOCT에 의해서 및 조직학에서 나타난 효과하에 1870/2060 ng.h/mL(M/F에서 AUC0-24h)이었다. INL에서 저하된 ERG 및 미세낭종 공간은 5880/6470 ng.h/mL(M/F에서 AUC0 -24h)의 노출량하에 고용량의 동물에서만 나타났다.
실험적 증거는 망막에 대한 효과가 조직 증식에 대한 효과와 직접 연관되지는 않지만 망막에서 높은 멜라닌 결합 및 조직내 정체의 시험관내 증거와 관련됨을 시사한다. 원숭이에서 높은 조직 축적 및 조직내 정체 및 착색된 래트 RPE/망막에도 불구하고, 착색된 래트에서 26주의 치료후에 임의의 망막 효과가 존재한 증거는 없었으며, 상기 26주 시점에서 망막 변화는 원숭이에서 명확하게 나타났다. 따라서, 멜라닌-결합된 RO7034067은 독성 자체를 부여하지는 않으며, 높은 수준의 멜라닌-결합된 RO7034067의 존재에 대한 추가의 요인들은 원숭이에서 망막 효과에 한 역할을 해야한다. 리소좀 기능의 손상/자가포식소체 축적은 시험관내에서 인간 REP 세포에서 나타났다.
망막 변성의 모든 특징들은 조직병리학으로 확인하였으며, 높은 노출량하의 일부 동물들에서 현저히 저하된 B-파에도 불구하고 동물들의 시력은 손상된 것으로 보이지 않았다(일반적인 행동 및 안과학적 평가에 기반하여). MMD 및 저하된 ERG는 원숭이 연구의 22-주 회복 단계에서 거의 완전히 회복되었지만, 말초 광수용체 손실 및 과반사성/비대성 RPE는 그렇지 않았다. RO7034067의 경우, 15,100 ng.h/mL AUC0-24h 이하의 개별적 노출량하에 2-주 원숭이 독성에 있어 망막 변화는 나타나지 않았다. RO7034067을 사용한 39-주 원숭이 독성 연구의 생존기간에 걸쳐, 저용량은 평가 마지막주(제 35주)까지 sdOCT 및 ERG에서 임의의 시험-물질 관련 변화없이 유지되었다. 1.5 mg/kg/일의 상기 저용량에서, 망막은 또한 수컷/암컷 각각의 경우 제 39주에서 414/396 ng/mL(Cmax) 및 1870/2060 ng.h/mL(AUC0 - 24)의 전신 RO7034067 노출량에 상응하는 임의의 조직병리학적 변화가 없었다.
실시예
4
다른 스플라이싱 조절제 화합물에 의해 선택적으로 스플라이싱된 유전자인 FoxM1은 세포 주기 조절인자를 암호화한다. FoxM1a(FL) 및 FoxM1b /c(D9)에 대한 특정 프라이머들을 사용한 RT-qPCR을 이용하여, RO7034067 치료후 FoxM1의 선택적 스플라이싱의 변형을 확인하였다(FL의 경우 EC50 67 ± 32 nM, D9 mRNA의 경우 139 ± 43 nM; 도 4 참조). 엑손 9가 결여된 FoxM1 이소폼의 감소된 풍부도와 함께, FoxM1A 이소폼의 증가된 풍부도는 스플라이싱 변화가 생물학적으로 유의적인 수준에서 일어나는 경우 세포 주기 진행을 방해하고 억제하는 능력을 갖는다. 따라서, RO7034067은 SMN2 및 FoxM1 스플라이싱 기구에 유사한 방식으로 작용하지만 단백질 기능에 관하여서는 반대의 결과를 나타낸다. 세포자멸 과정에 관여되는 유전자인 MADD도 2차 스플라이스 표적으로 확인되었다.
RO7034067을 사용한 독성학 연구에서 확인된 FoxM1 및 MADD의 조절장애의 기능적 결과(동물 조직에서의 세포 주기 분석 및 RNA 서열분석 조사 포함)를 하기에서 기술한다.
RO7034067을 포함한, 일련의 SMN2 스플라이싱 조절제를 사용하여 수행된 시험관내 연구는 분명한 수의 유전자 전사체가 선택적 스플라이싱에 의해 영향받을 수 있음을 시사하였다(문헌[Palacino J. et al. Nat Chem Biol. 2015; 11:511-517]). 따라서, RO7034067을 사용한 치료에 의해 유발된 독성에 대한 기계론적 이해를 증대시키기 위해, RNA-서열 분석에 이어 스플라이싱된 유전자의 상세한 분석을 RO7030467에 대해 래트 및 원숭이에서 수행된 2-주 용량-범위 결정 반복 용량 독성 연구에 통합시켰다. 2주동안 치료된 래트에서 비장, 십이지장 및 고환에서 유전자 발현 분석을 수행하였다(MADD 유전자). RO7034067-치료된 동물의 유전자 발현 분석은 MADD 유전자 전사체에 대해 7.5 mg/kg/일의 최고 용량에서 및 비장, 십이지장 및 고환에서 스플라이싱 반응을 나타내었다. MADD 전사체의 스플라이싱의 변화는, MADD 유전자 산물이 세포자멸 과정을 방해하는 것으로 보고되었기 때문에 동일 용량에서 관찰된 GI관에서의 세포자멸의 관찰결과와 일치한다.
유사한 조사결과들이 RO7034067을 사용하여 사이노몰거스 원숭이에서 수행된 2-주 용량-범위 결정 독성 연구에 통합되었다. 이러한 목적으로, 0.75, 1.5, 3 및 6 mg/kg/일로 처리된 동물들로부터의 비장, 십이지장 및 고환을 분석하였다. mRNA 이소폼 특이적 qPCR 검정에 의한 분석은 3개 장기 모두에서 MADD 유전자 전사체의 전사체들에 대한 최고 용량에서의 RO7034067 치료에 대한 2차 약리학적 반응을 밝혀내었다. 2차 약리학은 비장에서 검출되었기 때문에, 상기 장기를 RNA-서열분석에 의해 전사체-전체 mRNA 스플라이싱 또는 발현 변화에 대해 더 분석하였다. 상기 분석은, 상기-언급된 스플라이싱된 전사체들과 별개로, 절대 다수의 mRNA가 선택적 스플라이싱의 변화없음 또는 RO7034067 치료시 선택적 스플라이싱의 변화와 관련된 용량-의존성 경향 없음을 나타냄을 밝혀내었다. 더욱이, 경로 발현 변화에 대한 용량-의존성 경향은 감지되지 않았다. 그러므로, RO7034067-매개 선택적 전사체 스플라이싱에서 변화가 거의 없는 것은 시험관내 데이터 및 다른 SMN2 스플라이싱 조절제의 데이터와 일치하는 반면, 이들은 상기 연구 조건하에서의 생물학적 경로 또는 과정에 근본적으로 영향을 미치는 것 같지 않다.
실시예
5
시험 및 대조군 물질
시험 물질
대조군 물질
라파마이신, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich) # R8781, DMSO 중에 3.75 μM로 희석되고 -20 ℃에서 분취되어 저장된, DMSO 중 2 mM 저장액 2.5mg/ml.
유도 만능
줄기 세포의
배양
인간 iPSC(hIPS_Neo_클론_1)를 표준 배지로서 mTeSR1(스템 셀 테크놀로지스(Stem Cell Technologies))에서 배양하고 10 ng/ml 액티빈A(ActivinA) 및 15 ng/ml FGF2가 보충된 MT 배지 중에서 사이노몰거스 원숭이 iPSC(cips_54-1285_cFIB_클론_8)를 배양하였다.
유전자 발현 프로파일링을 위해, 줄기 세포를 어큐타제(Accutase)(스템 셀 테크놀로지스)로 분리하고, 10 μM 록(Rock) 억제제 Y-27632(시그마-알드리치)가 보충된 각각의 표준 배지 중에서 마트리겔(Matrigel)(BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences))로 코팅된 12-웰 플레이트에 두었다. 충분한 RNA를 수득하기 위해, 처리 24 시간 전에 원숭이 줄기 세포를 15000 세포/cm2로 접종하고, 인간 줄기 세포를 40000 세포/cm2로 접종하였다. 그 후에, 줄기 세포를 0.64 nM으로부터 약 10 μM까지의 농도 범위로 새로운 예열된 배지에서 시험 물질의 연속 희석물(1:5)로 24 시간동안 처리하였다. 실험을 중단하기 위해, 세포를 베타-머캅토에탄올 함유 키아겐(QiaGen)의 용해 완충액 RLT에서 용해시켰다.
세포 주기 분석을 위해, 원숭이 줄기 세포를 어큐타제(스템 셀 테크놀로지스)로 분리하고, 10 ng/ml 액티빈A, 15 ng/ml FGF2 및 10 μM 록 억제제가 보충된 MT 배지 중에서 마트리겔(BD 바이오사이언시즈)로 코팅된 6-웰 플레이트에 15000 세포/cm2로 플레이팅하였다. 세포를 1일동안 증식시킨 다음, 보충제 FGF2 및 액티빈A를 함유하지 않는 MT 배지중에서 7 시간동안 굶주리게 하여 동기화시켰다. 유세포분석 전에, 보충제 FGF2 및 액티빈A, 및 80 nM, 400 nM, 및 2000 nM의 시험 물질 또는 양성 대조군으로 30 nM의 라파마이신을 함유하는 신선한 MT 배지와 함께 세포를 24 시간동안 배양하여 G1 단계에서 세포를 억제하였다. 인간 줄기 세포를 어큐타제(스템 셀 테크놀로지스)로 분리하고, 10 μM 록 억제제 Y-27632(시그마-알드리치)가 보충된 mTeSR1 중에서 마트리겔(BD 바이오사이언시즈)로 코팅된 6-웰 플레이트에 40000 세포/cm2로 플레이팅하였다. 매일 배지를 교환해주면서 3 일동안 세포를 증식시켰다. 인간 iPSC가 성장 인자 회수에 의해 굶주림동안 그들의 성질을 상실하기 때문에, 줄기 세포를 200 ng/ml 노코다졸(Nocodazole)(시그마-알드리치)로 5 시간동안 동기화시키고 이어서 mTesR1 배지로 2회 세척하였다. 유세포분석 전에, 80 nM, 400 nM, 및 2000 nM의 시험 물질 또는 양성 대조군으로 30 nM의 라파마이신을 함유하는 신선한 TesR1 배지와 함께 세포를 24 시간동안 배양하여 G1 단계에서 세포를 억제하였다.
유세포
분석 및 DNA 염색
세포 주기 분석을 위해, 인간 iPSC를 PBS로 세척하고, 어큐타제(스템 셀 테크놀로지스)로 분리시키고, 원심분리하여 수집하였다. 세포를 37 ℃에서 600 ㎕의 7AAD/사포닌(Saponin)/RNAse 혼합물(FACS 완충제(PBS, 5% FBS, 10mM Hepes)에 용해된 25 ㎍/ml 7AAD(#559925, BD), 50 ㎍/ml RNase, 및 0.03% 사포닌)로 1 시간동안 염색시켰다. 사이노몰거스 원숭이 iPSC를 PBS로 세척하고, 어큐타제(스템 셀 테크놀로지스)로 분리시키고, 원심분리하여 수집하였다. 37 ℃에서 배지 ml 당 1 ㎕의 바이브란트(Vybrant) 염료 주기 바이올렛 착색제(#V35003, 1000x 저장액, 인비트로겐(Invitrogen))를 함유하는 표준 MT 배지(FGF2 및 액티빈A 함유) 300 ㎕ 중에서 30 분동안 염색시켰다. 추가로 2 ㎕의 7AAD(50 ㎍/ml 7AAD)를 투과화시키지 않고 첨가하여 사멸 세포를 표지화하였으며; 세포를 37 ℃에서 10 분동안 배양하였다. 칸토(Canto) II 유세포분석기(BD 바이오사이언시즈)를 사용하여 유세포 분석을 수행하고 플로우조(FlowJo) 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다.
정량적 실시간
PCR
로슈(Roche)로부터의 주문제작 프라이머 및 FAM 형광-표지된 UPL(Universal Probe Library) 프로브, 또는 5' FAM 표지 및 3' 말단 블랙홀(BlackHole) 다크 소광제(Dark Quencher) 1(BHQ1)을 함유하는 마이크로신트(Microsynth)로부터의 프로브를 사용하여 인간 및 사이노몰거스 원숭이 mRNA 발현을 측정하였다. 상기 프라이머 및 FAM 표지된 프로브들의 서열은 다음과 같이 열거하였다:
정량적 실시간-PCR을 위해, 세포를 12-웰 플레이트에서 배양하고 24 시간동안 로슈 화합물로 처리하고, 베타-머캅토에탄올 함유 키아겐 용해 완충제 RLT 500 ㎕/웰 중에서 용해시켰다. 고체 지지체 상에서 DNase 처리와 함께 RNeasy 미니 키트를 사용하여 전체 RNA를 추출하였다. 나노드롭(Nanodrop) 흡수 분광학 및 에이질런트(Agilent) 생물분석기 2100으로부터의 미세유체 모세관 배열 전기영동 프로필을 이용하여 RNA 통합을 조절하였다. 트랜스크립터 퍼스트 스트랜드(Transcriptor First Strand) cDNA 합성 키트(로슈 어플라이드 사이언스(Roche Applied Science) # 04379012001)를 제조사의 권장 프로토콜에 따라 사용하여 올리고-dT 프라이머 및 10 ng/㎕의 최종 농도의 스파이크 MS2 RNA로 300 내지 800 ng의 전체 RNA를 역전사시켰다. 1x 라이트사이클러(LightCycler) 480 프로브 마스터, 0.4 μM 정방향 및 역방향 프라이머, 및 0.2 μM FAM 표지된 가수분해 프로브를 함유하는 20 ㎕ 혼합물 중에서 투입물로서 67.5 ng의 전체 RNA 유도된 cDNA를 사용하여 라이트사이클러 480 qPCR 기계에서 정량적 PCR을 수행하였다. 온도 프로그램은 95 ℃에서 10 분동안 예비배양후, 50 주기의 증폭(95 ℃ 10초, 60 ℃ 30초, 72 ℃ 5초)으로 이루어졌다. 주 혼합물중 cDNA 오염의 부재를 확인하기 위해 cDNA 주형의 부재하에서 음성 대조군 반응을 수행하였다. Ct(주기 임계)-값을 각 샘플-mRNA 조합에 대해 측정하였다. 2-ΔΔCt 방법(문헌[Livak KJ et al. Method. Methods. 2001; 25(4):402-408])을 이용하여, 데이터를, 내인성 참조 유전자로 표준화되고 미처리 대조군에 대한 유전자 발현의 배수 변화도로서 나타내었다. 개별적 ΔCt 값을 유도하기 위해, 각 샘플의 각각의 표적 mRNA에 대한 Ct 값을 GAPDH(글리세르알데하이드-3-포스페이트 데하이드로게나제)의 내인성 참조 mRNA의 Ct 값으로 표준화시켰다. 각 처리군의 각각의 ΔCt 값에서 비히클-대조군의 ΔCt 값을 감하여 ΔCt 값을 산출하였다. 수득된 발현 비(2-ΔΔCt)는 비히클-대조군에 비해 처리-관련 mRNA 발현 변화를 반영하였다. IC50은 최대(꼭대기) 반응 및 최대로 억제된(바닥) 반응 사이에서 중간 반응을 유발하는 억제제의 농도로서 정의된다. IC50을 유도하기 위한 모델은 용량 반응 곡선이 -1.0의 힐(Hill) 경사(또는 경사 인자)와 같은 표준 경사를 갖는다고 추정한다. 모델 방정식: Y = 바닥 + (꼭대기 - 바닥 + 10^((X-LogIC50))); 이때 Y는 반응 데이터이고 X는 μM로 나타낸 로그10 농도이다.
결과
RO7034067를 시험관내에서 FOXM1 mRNA 변이체(FOXM1B/C)의 발현에 대한 그의 농도-효과 관련성에 대해 시험하였다. FOXM1B/C 전사 변이체의 발현 수준을 24 시간동안 64 nM에서부터 약 10 μM까지 시험 물질로 처리된 인간 및 원숭이 iPSC에서 RT-qPCR에 의해 GAPDH에 대해 측정하였다. RO7034067을 사용한 치료는 인간 및 원숭이 세포에서 FOXM1B/C 전사 변이체의 농도 의존성 하향-조절을 야기하였다(표 1 및 표 2). 인간 및 원숭이 세포에서 RO7034067은 FOXM1B/C의 발현 수준에 영향을 미쳤다. IC50 값은 인간 및 원숭이 세포에서 각각 114 nM 및 155 nM이었다(도 5).
RO7034067을 시험관내에서 iPSC의 세포 주기에 대한 그의 농도-의존성 효과에 대해 시험하였다. 원숭이 iPSC에서, 화합물 RO7034067은 G2 단계에서 농도-의존성 방식으로 세포 주기 정지를 유도하였다. 인간iPSC에서, RO7034067은 S 단계에서 농도-의존성 방식으로 세포 주기 정지를 유도하였다(표 3 및 표 4). 30 nM 라파마이신을 사용한 치료는 예상된 바와 같이 G1 단계에서 인간 및 원숭이 세포의 정지를 야기하였다(문헌[Metcalfe et al. Oncogene 15, 1635-1642]).
| 농도 | 평균 | SD | SEM |
| nM | FOXM1B/C | ||
| 0 | 1.016 | 0.231 | 0.133 |
| 0.64 | 1.115 | 0.084 | 0.048 |
| 3.2 | 1.032 | 0.094 | 0.054 |
| 16 | 0.898 | 0.023 | 0.013 |
| 80 | 0.748 | 0.073 | 0.042 |
| 400 | 0.178 | 0.017 | 0.010 |
| 2000 | 0.185 | 0.020 | 0.011 |
| 10000 | 0.102 | 0.016 | 0.009 |
실시간
PCR
신호는
GAPDH로
표준화시켰고,
mRNA
발현 비(2-
ΔΔCt
)를 인간 iPSC의 대조군 샘플 대비 각각의 처리된 샘플에 대해 계산하였다.
| 농도 | 평균 | SD | SEM |
| nM | FOXM1B/C | ||
| 0 | 1.000 | 0.035 | 0.020 |
| 0.64 | 0.967 | 0.097 | 0.056 |
| 3.2 | 0.990 | 0.129 | 0.075 |
| 16 | 0.963 | 0.120 | 0.069 |
| 80 | 0.704 | 0.049 | 0.028 |
| 400 | 0.176 | 0.024 | 0.014 |
| 2000 | 0.023 | 0.001 | 0.001 |
| 10000 | 0.037 | 0.001 | 0.001 |
실시간
PCR
신호는
GAPDH로
표준화시켰고,
mRNA
발현 비(2-
ΔΔCt
)를
사이노
몰거스 원숭이 iPSC의 대조군 샘플 대비 각각의 처리된 샘플에 대해 계산하였다.
| 평균 | SD | p-값 | |||||||
| G1 | S | G2 | G1 | S | G2 | G1 | S | G2 | |
| 미처리 | 44.7 | 23.9 | 31.4 | 1.9 | 0.3 | 2.2 | |||
| DMSO | 45.7 | 24.3 | 30.1 | 1.9 | 0.8 | 1.7 | |||
| RO7034067 80nM | 44.6 | 26.2 | 29.2 | 1.1 | 1.1 | 2.2 | 4.5E-01 | 7.5E-02 | 6.2E-01 |
| RO7034067 400nM | 40.8 | 27.8 | 31.4 | 3.8 | 1.5 | 5.3 | 1.4E-01 | 3.5E-02 | 7.1E-01 |
| RO7034067 2000nM | 37.6 | 33.1 | 29.3 | 1.5 | 1.0 | 1.3 | 5.2E-03 | 3.8E-04 | 5.5E-01 |
| 라파마이신 30nM | 58.3 | 11.2 | 30.5 | 0.7 | 0.4 | 0.8 | 3.2E-03 | 1.1E-04 | 7.2E-01 |
| 평균 | SD | p-값 | |||||||
| G1 | S | G2 | G1 | S | G2 | G1 | S | G2 | |
| 미처리 | 32.1 | 13.4 | 54.5 | 1.4 | 0.5 | 1.8 | |||
| DMSO | 36.2 | 14.6 | 49.1 | 1.3 | 1.6 | 2.1 | |||
| RO7034067 80nM | 33.8 | 14.0 | 52.2 | 2.2 | 0.7 | 2.9 | 1.90E-01 | 5.90E-01 | 2.10E-01 |
| RO7034067 400nM | 30.3 | 14.0 | 55.8 | 0.8 | 0.3 | 0.7 | 5.20E-03 | 5.60E-01 | 2.30E-02 |
| RO7034067 2000nM | 25.3 | 13.4 | 61.3 | 0.7 | 0.5 | 0.5 | 1.20E-03 | 3.10E-01 | 7.30E-03 |
| 라파마이신 30nM | 41.7 | 12.7 | 45.6 | 2.2 | 0.5 | 1.8 | 3.00E-02 | 1.70E-01 | 8.90E-02 |
결론
FOXM1 마커 mRNA 발현 및 세포 주기에 대한 RO7034067 스플라이싱 조절제의 효과를 평가하기 위해, 인간 및 사이노몰거스 원숭이로부터의 유도 만능 줄기 세포를 사용하여 농도-효과 관계에 대한 시험관내 시험을 수행하였다. 24 시간동안 0.64 nM으로부터 약 10 μM까지 RO7034067로 처리시, 상기 화합물은 FOXM1B/C 전사 변이체의 농도 의존성 하향-조절을 나타내었다. 농도-반응 곡선으로부터 유도된 IC50 값은 인간과 사이노몰거스 원숭이 세포 사이에서 필적하여 약리학적 반응에서 높은 종 유사성을 입증하였다. 사이노몰거스 원숭이 세포에서 유사분열 정지를 유도하는 농도-의존성 효과가 RO7034067에서 검출되었다. 인간 IPSC의 세포 주기 분석은 RO7034067로 세포 주기를 변화시키는 농도-의존성 효과를 밝혀내었다. FOXM1B/C의 하향-조절은 인간 및 사이노몰거스 원숭이 세포 둘 다에서 세포 주기 관련 결과와 연관되는 것으로 보이며, 이것은 세포 주기 전이를 매개하는데 FOXM1의 결정적 역할과 일치하였다. 상기 하향-조절은 세포 주기의 유의적 변화와 연관되기 위해 약 80% 이상의 발현의 감소하에 뚜렷해야 한다.
SEQUENCE LISTING
<110> F. Hoffmann-La Roche AG
<120> New treatment of SMA
<130> P34471
<140> PCT/EP2018/076577
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<150> EP 17194520.7
<151> 2017-10-03
<160> 9
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 17
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
cccccaaggt gctgcta 17
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
tgaactggaa gcaaaggaga a 21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 3
ctttcttctg caggaccagg 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 4
gaaggtgaag gtcggagtca 20
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 5
aaccatgtag ttgaggtcaa tgaa 24
<210> 6
<211> 8
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 6
ttgatggc 8
<210> 7
<211> 17
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 7
cccccaaggt gctgcta 17
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
tgaactggaa gcaaaggaca c 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 9
cttccttctg cagggccagg 20
Claims (22)
- 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 척수성 근위축증(SMA)의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온.
- 제 1 항에 있어서,
특히 환자가 인간, 예를 들면, 남성 또는 여성 인간인, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로, 환자, 특히 SMA의 치료가 필요한 환자에서, SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 경구 투여되는, SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온. - 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
환자가 인간, 예를 들면, 남성 또는 여성 인간이고, 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 투여되며, 특히 경구 투여되는, SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온. - 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
SMA가 2형 SMA인, SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온. - 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 하루에 1회 투여되는, SMA의 치료에 사용하기 위한 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온. - 특히 환자가 인간, 예를 들면, 남성 또는 여성 인간인, 환자, 특히 SMA의 치료가 필요한 환자에게, 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 0.25 mg/kg 및 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg로 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온을 투여하는 것을 포함하는, 척수성 근위축증(SMA)의 치료 방법.
- 제 7 항에 있어서,
투여되는 용량이 하루에 대한 것인 방법. - 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서,
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 하루에 1회 투여되는 방법. - 제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 경구 투여되는 방법. - 제 7 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 1회 투여되는 방법. - 20 kg 미만의 체중을 갖는 환자의 경우 체중 킬로그램당 0.25 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 20 kg 이상의 체중을 갖는 환자의 경우 5 mg의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온이 투여되며, 특히 하루에 1회 경구 투여되는, SMA(보다 특히 2형 또는/및 3형 SMA)의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물로서,
충분히 높은 약물 농도를 제공하기 위해 pH 4 미만, 특히 pH 3.8 미만, 보다 특히 pH 3.6 미만, 가장 특히는 pH 3.0 내지 3.2의 pH에서 완충제 시스템, 예를 들어, 시트르산 완충제 시스템, 말레이트 완충제 시스템, 말리에이트 완충제 시스템 또는 타르트레이트 완충제 시스템, 가장 특히는 타르트레이트 완충제 시스템에 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 용해시킴으로써 경구용 수용액으로 제형화된 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 약학 조성물. - 제 12 항에 있어서,
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 경구용 용액의 구성을 위한 건조 분말 또는 과립으로서 포함하는 약학 조성물. - 제 12 항 또는 제 13 항에 있어서,
완충제 시스템이, 미분으로서 유기산 및 그의 염, 예를 들어, 3염기성 나트륨 시트레이트 및 시트르산, 이나트륨 말레이트 및 말산, 칼륨 나트륨 타르트레이트 및 타르타르산, 또는 이나트륨 타르트레이트 및 타르타르산, 특히 칼륨 나트륨 타르트레이트 및 타르타르산을 선택함으로써 무수 제형내에 혼입될 수 있는 약학 조성물. - 제 12 항 또는 제 13 항에 있어서,
7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 경구용 용액의 구성시 분말 블렌드의 신속한 용해를 보장하는 희석제, 예를 들면, 솔비톨, 이소말트 또는 특히 만니톨 및 그의 혼합물을 포함하고, 선택적으로, 유동성을 개선하고 강한 균일성을 보장하기 위해 건식 압착에 의해 과립화되도록 충전제가 첨가될 수 있는 약학 조성물. - 제 12 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염; 및
- 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산
을 포함하는 약학 조성물. - 제 12 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산; 및
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨
을 포함하는 약학 조성물. - 제 12 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염; 및
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨
을 포함하는 약학 조성물. - 제 12 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산; 및
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트
를 포함하는 약학 조성물. - 제 12 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
- 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 산화방지제, 특히 아스콜브산; 및
- 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트
를 포함하는 약학 조성물. - 제 12 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
- 1 내지 10 중량%의 7-(4,7-다이아자스피로[2.5]옥탄-7-일)-2-(2,8-다이메틸이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 또는 그의 약학적으로 허용되는 염;
- 5 내지 15 중량%의 완충제 시스템, 특히 시트레이트, 말레이트, 말리에이트 또는 타르트레이트로부터 선택된 완충제 시스템, 보다 특히 말레이트 또는 타르트레이트, 가장 특히는 타르트레이트; 또는 택일적으로 산성화제로서 완충제 시스템의 상응하는 산 단독, 특히 타르타르산;
- 40 내지 70 중량%의 희석제, 특히 만니톨 또는 만니톨과 이소말트의 혼합물, 보다 특히 만니톨;
- 1 내지 4 중량%의 산화방지제, 특히 아스콜브산;
- 0.5 내지 2 중량%의 안정화제, 특히 이나트륨 에데테이트;
- 0.5 내지 2 중량%의 윤활제, 특히 PEG6000;
- 0 내지 3 중량%의 감미제, 특히 슈크랄로스 또는 나트륨 사카린, 가장 특히 슈크랄로스; 및
- 0 내지 20 중량%의 향료, 특히 딸기향 또는 바닐라향
을 포함하는 약학 조성물로서, 이때, 상기 성분들의 총량이 100 중량%를 초과하지 않는, 약학 조성물. - 전술한 바와 같은 본 발명.
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