TW201914570A - 帶正電的帶電類脂質體的製備方法及帶電類脂質體 - Google Patents

帶正電的帶電類脂質體的製備方法及帶電類脂質體 Download PDF

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Abstract

本發明提供帶正電的帶電類脂質體(noisome)的製備方法及帶電類脂質體，該帶電類脂質體由包含二醯甘油PEG加成物的脂質形成，具有良好的皮膚滲透性和皮膚貯留性。該方法具有如下步驟：將包含二醯甘油PEG加成物的脂質以液體狀態溫度與水溶液混合，脂質自發形成類脂質體而製備類脂質體懸濁液；將選自脂肪族胺、脂肪族或脂肪族醯胺季銨鹽、脂肪族醯胺基胺及醯基胺基酸衍生物，其疏水性部分具有碳原子數為11~21的飽和或不飽和直鏈型烴基的陽離子性表面活性劑與酸性水溶液混合而製備陽離子性表面活性劑水溶液；將類脂質體的懸濁液與陽離子性表面活性劑水溶液混合，陽離子性表面活性劑在親水性部分具有正電荷而修飾類脂質體的表面，由此製備帶電類脂質體的懸濁液。

Description

帶正電的帶電類脂質體的製備方法及帶電類脂質體
本發明涉及對皮膚的滲透性和在皮膚中的貯留性高的類脂質體(niosome)的製備方法。
脂質體(liposome)作為由構成生物膜的磷脂或與其類似的脂質的雙層膜或多層膜形成的數十nm~數百nm的自我封閉膠體粒子而為人所知。特別是使用非離子表面活性劑的脂質製備的自我封閉膠體粒子稱為類脂質體。脂質體、類脂質體在醫藥品、化妝品等領域中廣泛利用於藥物輸送等。
藥劑等目標物質能夠封入到脂質體內的水相中、封入到脂質體膜內或結合於脂質體的表面。在通常的脂質體的製備方法中，包含脂質向有機溶劑的溶解、有機溶劑的除去、超聲波處理或擠出、以及均質化等處理步驟，在與形成脂質體的同時將藥劑等封入的情況下，存在由於其後的處理導致脂質和藥劑易於分解這樣的問題。此外，在通常的製備方法中，存在脂質體的尺寸和數量的不穩定性、在生產規模上的滅菌的困難性以及批次間的品質差異等問題。
為了解決這些問題，專利文獻1提出了以下製備方法，藉由將以二醯甘油聚乙二醇加成物(以下稱為「二醯甘油PEG加成物」)作為主體的脂質與包含目標物質的水溶液進行混合，從而自發地形成脂質體。(狹義上大多將使用了磷脂的自我封閉膠體粒子稱為脂質體，但在專利文獻1中，儘管使用了除 磷脂以外的脂質，也在廣義意義上稱為脂質體。在本說明書中，將以除磷脂以外的脂質作為主體的脂質體稱為「類脂質體」。)
此外，如專利文獻2所記載，已知在脂質體的表面修飾聚乙二醇，由此基於聚乙二醇的水合性和空間位阻，從而脂質體能夠不被捕獲於網狀內皮系統而向生物體內滲透，特別在血液中的貯留性提高。
在專利文獻1中，作為二醯甘油PEG加成物的脂質本身具有PEG鏈，由該脂質形成的脂質體成為其表面被PEG鏈覆蓋的形態。因此，專利文獻1的脂質體與像專利文獻2這種在脂質體的表面修飾了聚乙二醇的脂質體同樣地，向生物體內的滲透性和在血液中的穩定性良好。
現有技術文獻
專利文獻
專利文獻1：日本專利第4497765號公報；專利文獻2：國際公開第2012/161196號。
專利文獻1的脂質體的表面被PEG鏈覆蓋，因此向皮膚的滲透性良好，但在優選長時間停留在皮膚中、特別是角質中的用途、例如化妝品等中，存在貯留時間不充分這樣的問題。
本發明的目的在於提供類脂質體的製備方法，該類脂質體由以二醯甘油PEG加成物為主體的脂質形成，具有良好的皮膚滲透性和在皮膚中的貯留性。此外，本發明目的在於提供這樣的類脂質體。
為了實現上述的目的，本發明提供以下的構成。
．本發明的一個方式為帶正電的帶電類脂質體的製備方法，其特徵在於，具有：藉由將至少包含二醯甘油PEG加成物的脂質以該脂質能夠呈液體狀態的溫度與規定的水溶液混合，該脂質自發地形成類脂質體，從而製備類脂質體的懸濁液的步驟，藉由將陽離子性表面活性劑與酸性水溶液混合，從而製備陽離子性表面活性劑水溶液的步驟，該陽離子性表面活性劑為選自脂肪族胺、脂肪族或脂肪族醯胺季銨鹽、脂肪族醯胺基胺以及醯基胺基酸衍生物中的1種或多種，在其疏水性部分具有碳原子數為11~21的飽和或不飽和的直鏈型烴基，以及藉由將上述類脂質體的懸濁液與上述陽離子性表面活性劑水溶液混合，上述陽離子性表面活性劑在其親水性部分具有正電荷而修飾上述類脂質體的表面，從而製備帶電類脂質體的懸濁液的步驟，上述二醯甘油PEG加成物為選自二油酸甘油酯PEG-12、二肉豆蔻酸甘油酯PEG-12、二棕櫚酸甘油酯PEG-23、二硬脂酸甘油酯PEG-12以及二硬脂酸甘油酯PEG-23中的1種或多種。
．在上述方式中，作為上述陽離子性表面活性劑的脂肪族胺為選自十四胺、棕櫚胺、硬脂胺、油胺(oleylamine)、亞油胺、山崳胺(behenyl amine)、N,N-二甲基十二胺以及N,N-二甲基-正十八胺中的1種或多種，作為上述陽離子性表面活性劑的脂肪族或脂肪族醯胺季銨鹽為選自十四烷基三甲基氯化銨、鯨蠟基三甲基氯化銨、硬脂基三甲基氯化銨、山崳基三甲基氯化銨以及棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨中的1種或多種，作為上述陽離子性表面活性劑的脂肪族醯胺基胺為選自肉豆蔻酸二乙基胺基乙基醯胺、肉豆蔻酸二甲基胺基乙基醯胺、肉豆蔻酸二甲基胺基丙基醯胺、 肉豆蔻酸二乙基胺基丙基醯胺、棕櫚酸二乙基胺基乙基醯胺、棕櫚酸二甲基胺基乙基醯胺、棕櫚酸二甲基胺基丙基醯胺、棕櫚酸二乙基胺基丙基醯胺、硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺、硬脂酸二甲基胺基乙基醯胺、硬脂酸二甲基胺基丙基醯胺、硬脂酸二乙基胺基丙基醯胺、山崳酸二乙基胺基乙基醯胺、山崳酸二甲基胺基乙基醯胺、山崳酸二甲基胺基丙基醯胺以及山崳酸二乙基胺基丙基醯胺中的1種或多種，作為上述陽離子性表面活性劑的醯基胺基酸衍生物為椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA。
．在上述方式中，用於製備上述陽離子性表面活性劑水溶液的酸性水溶液優選pH為4或其以下。
．本發明的另一方式為帶正電的帶電類脂質體，其特徵在於具有：將至少包含二醯甘油PEG加成物的脂質作為構成成分且封入規定的水溶液的類脂質體，該二醯甘油PEG加成物為選自二油酸甘油酯PEG-12、二肉豆蔻酸甘油酯PEG-12、二棕櫚酸甘油酯PEG-23、二硬脂酸甘油酯PEG-12以及二硬脂酸甘油酯PEG-23中的1種或多種，以及在親水性部分具有正電荷而修飾上述類脂質體之表面的陽離子性表面活性劑，上述陽離子性表面活性劑為選自脂肪族胺、脂肪族季銨鹽以及脂肪族醯胺基胺中的1種或多種陽離子性表面活性劑，在其疏水性部分包含碳原子數為13~21的1個飽和或不飽和的直鏈型烴基。此外，包含該方式的帶電類脂質體的含帶電類脂質體產品為潤膚露(lotion)製劑、乳液製劑、凝膠製劑、霜製劑。
根據本發明得到的帶電類脂質體由於帶正電，因此容易吸附於帶負電的皮膚表面，特別是角質層。其結果為，利用帶電類脂質體，從而與不 帶電的類脂質相比，實現了向角質層的良好的滲透性和長時間的貯留性。
1‧‧‧甘油骨架部分
2‧‧‧親水性部分
3‧‧‧疏水性部分
4‧‧‧親水性部分
5‧‧‧疏水性部分
圖1(a)示意性示出第1步驟中使用的作為主要的脂質的二醯甘油PEG加成物的結構，(b1)~(b4)示意性示出第2步驟使用的陽離子性表面活性劑的例子的結構。
圖2為第3步驟中得到的帶電類脂質體的圖像剖面圖。
圖3為示出對實施例1和比較例1測定ZETA電位的結果的圖。
圖4(a)(b)為實施例1和比較例1的透射型電子顯微鏡(TEM)照片。
圖5為示出實施例2、比較例2a及2b的經皮吸收試驗的結果的圖。
圖6為示出實施例3及4、比較例3a及4a的經皮吸收試驗的結果的圖。
圖7為示出實施例5、比較例5a、5b及5c的經皮吸收試驗的結果的圖。
圖8為示出實施例6、7、8及9、以及比較例6a及6b的經皮吸收試驗的結果的圖。
圖9(a)為示出實施例10以及比較例10a、10b、10c及10d的經皮吸收試驗的結果的圖。(b)為示出藉由測量實施例10以及比較例10a、10b、10c及10d的細胞的明度從而得到的熊果苷作為美白劑的美白效果試驗結果的圖。
圖10為示出對實施例14進行與圖6的實施例3、4同樣的條件的經皮試驗的結果的圖。
以下參照附圖，對本發明的實施方式進行說明。
術語「類脂質體」通常用於表示基於非離子表面活性劑的囊泡(雙層膜的自 我封閉膠體粒子)，但在本說明書中，不僅包含雙層膜的自我封閉膠體粒子，也包含多層膜的自我封閉膠體粒子。
[1]製備方法的基本方式
根據本發明的製備方法得到的類脂質體為在懸濁液中帶正電的類脂質體(以下稱為「帶電類脂質體」)。以下僅稱為「類脂質體」的情況下，表示非帶電的類脂質體。本發明的帶電類脂質體的製備方法基本包含以下3個步驟。另外，對於第1步驟和第2步驟，在時間序列上可以不是該順序，能夠並行或者以相反的順序進行。第3步驟使用了第1步驟和第2步驟各自的生成物，因此為最後執行的步驟。
．第1步驟：藉由將至少包含二醯甘油PEG加成物的脂質以該脂質能夠呈液體狀態的溫度與規定的水溶液混合，該脂質自發地形成類脂質體，從而製備類脂質體的懸濁液的步驟
．第2步驟：藉由將陽離子性表面活性劑與酸性水溶液混合，從而製備陽離子性表面活性劑水溶液的步驟，該陽離子性表面活性劑為選自脂肪族胺、脂肪族季銨鹽、脂肪族醯胺季銨鹽、脂肪族醯胺基胺以及醯胺基衍生物中的1種或多種，在其疏水性部分具有碳原子數為11~21的飽和或不飽和的直鏈型烴基
．第3步驟：藉由將第1步驟中得到的類脂質體的懸濁液與第2步驟中得到的陽離子性表面活性劑水溶液混合，陽離子性表面活性劑在其親水性部分具有正電荷而修飾類脂質體的表面，從而製備帶電類脂質體的懸濁液的步驟
[2]製備方法的第1步驟
圖1(a)示意性示出第1步驟中使用的作為主要的脂質的二醯甘油PEG加成物的結構。附圖標記1示意性示出甘油骨架部分，附圖標記2示意性示出直鏈型聚乙二醇(PEG)鍵合在3個碳中的1個碳上的親水性部分，符號3示意性示出2個由 脂肪酸形成的醯基分別鍵合在甘油骨架的3個碳中的另外2個碳上的疏水性部分。以下，對於特定的二醯甘油PEG加成物，脂肪酸的種類和PEG鏈的n的數量在基團中表示為「~酸甘油PEG-n」。
作為二醯甘油PEG加成物優選使用選自二油酸甘油酯PEG-12、二肉豆蔻酸甘油酯PEG-12、二棕櫚酸甘油酯PEG-23、二硬脂酸甘油酯PEG-12以及二硬脂酸甘油酯PEG-23中的1種或多種。這些二醯基甘油PEG加成物具有其分子結構僅藉由與水溶液混合就能夠自發地形成類脂質體的這樣的形狀上的、力學上的要件。換言之，具有能夠在水溶液中自發地形成類脂質體的合適的尺寸、硬度、彎曲彈性係數等。
本發明所使用的二醯甘油PEG加成物在通常的製備溫度範圍即0℃與100℃之間具有熔點。二醯甘油PEG加成物能夠藉由在它們能夠呈液體狀態的溫度與規定的水溶液混合，從而自發地形成類脂質體。此外，作為能夠自發地形成類脂質體的條件之一，優選第1步驟中的脂質相對於全部混合液的比例設為2質量%~50質量%左右。但是，並非嚴格限定於該範圍。如果脂質的比例比該範圍高，則容易形成片、六角等類脂質體以外的結構。
關於製備溫度可確認：例如，二油酸甘油酯PEG-12、二肉豆蔻酸甘油酯PEG-12在約20℃~60℃的範圍中、二棕櫚酸甘油酯PEG-23在約37℃~60℃的範圍中、二硬脂酸甘油酯PEG-12和二硬脂酸甘油酯PEG-23在約60℃附近分別僅藉由與規定的水溶液混合即可自發地形成類脂質體(參照專利文獻1)。
第1步驟中自發地形成的類脂質體的穩定性高，此外同樣條件下形成類脂質體的再現性良好。進而，在生產規模上的滅菌性以及批次間的尺寸、數量及品質的均勻性也沒有問題(參照專利文獻1)。
除作為類脂質體的主要構成成分的二醯甘油PEG加成物以外， 還能夠包含其它脂質作為構成成分。對於追加的其它脂質，滿足至少能夠在混合溫度呈液體狀態的條件。作為其它脂質，能夠使用例如膽固醇等固醇或其酯。膽固醇可用於例如提高在體內的類脂質體的穩定性。
第1步驟中的規定的水溶液為封入到類脂質體中的目標物質，即溶解有醫藥、化妝品等的有效成分等的水溶液。規定的水溶液封入到類脂質體的中心的水相中，並且也存在於類脂質體的周圍。在第1步驟中，得到類脂質體分散在規定的水溶液中的懸濁液。
[3]製備方法的第2步驟
接著，作為第2步驟中使用的陽離子性表面活性劑，為選自脂肪族胺、脂肪族或脂肪族醯胺季銨鹽、脂肪族醯胺基胺以及醯基胺基酸衍生物中的1種或多種的陽離子性表面活性劑，在其疏水性部分具有碳原子數為11~21的飽和或不飽和的直鏈型烴基。優選在分子內僅具有一個該直鏈型烴基。
圖1(b1)示出伯胺的結構例作為脂肪族胺的一個例子。
圖1(b2)示出脂肪族或脂肪族醯胺季銨鹽的結構例，左圖示出脂肪族季銨鹽，右圖示出脂肪族醯胺季銨鹽。
圖1(b3)示出仲醯胺的結構例作為脂肪族醯胺基胺的一個例子。
圖1(b4)示出醯基胺基酸衍生物的結構例。在此的醯基胺基酸衍生物表示含有醯基的胺基酸系的陽離子性表面活性劑。圖中示出L-精胺酸乙酯作為胺基酸部分的一個例子。
圖1(b1)~(b4)中，附圖標記4示意性示出水溶液中作為帶有正電荷的離子的親水性部分，附圖標記5示意性示出由飽和或不飽和的直鏈型烴基形成的疏水性部分。
脂肪族胺優選為伯胺、仲胺或叔胺。優選選自例如十四胺、棕 櫚胺、硬脂胺、油胺、亞油胺、山崳胺、N,N-二甲基十二胺以及N,N-二甲基-正十八胺中的1種或多種。
脂肪族或脂肪族醯胺季銨鹽優選為季銨鹽。例如，脂肪族季銨鹽優選選自十四烷基三甲基氯化銨、鯨蠟基三甲基氯化銨、硬脂基三甲基氯化銨、山崳基三甲基氯化銨以及氯化棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨中的1種或多種。
脂肪族醯胺基胺優選為伯醯胺基胺、仲醯胺基胺或叔醯胺基胺。優選選自例如：選自肉豆蔻酸二乙基胺基乙基醯胺、肉豆蔻酸二甲基胺基乙基醯胺、肉豆蔻酸二甲基胺基丙基醯胺、肉豆蔻酸二乙基胺基丙基醯胺、棕櫚酸二乙基胺基乙基醯胺、棕櫚酸二甲基胺基乙基醯胺、棕櫚酸二甲基胺基丙基醯胺、棕櫚酸二乙基胺基丙基醯胺、硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺、硬脂酸二甲基胺基乙基醯胺、硬脂酸二甲基胺基丙基醯胺、硬脂酸二乙基胺基丙基醯胺、山崳酸二乙基胺基乙基醯胺、山崳酸二甲基胺基乙基醯胺、山崳酸二甲基胺基丙基醯胺以及山崳酸二乙基胺基丙基醯胺中的1種或多種。
醯基胺基酸衍生物優選為椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA。在椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA中，圖1(b4)中的R1-CO的醯基部分來自椰子油脂肪酸(月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸等的混合物)、R2-為DL-PCA(dl-吡咯烷酮羧酸)。
與上述的陽離子性表面活性劑混合的酸性水溶液為例如乳酸水溶液或檸檬酸水溶液。酸性水溶液優選pH為4或其以下，但並非嚴格限定於該值。藉由將陽離子性表面活性劑溶解於酸性水溶液，從而在水溶液中成為其親水性部分具有正電荷的方式。
[4]製備方法的第3步驟
在第3步驟中，藉由將第1步驟中得到的類脂質體的懸濁液與第2步驟中得到的陽離子性表面活性劑水溶液混合，從而製備帶電類脂質體的懸濁液。具體 而言，使用例如後插入法。在後插入法中，藉由將混合了的液體在規定的溫度利用渦旋或機械而攪拌規定的時間，從而進行混合。
圖2為第3步驟中得到的帶電類脂質體的圖像剖面圖。在此作為一個例子，第1步驟中得到的類脂質體形成了雙層膜。表面存在PEG鏈的親水性部分2。陽離子性表面活性劑的疏水性部分5的末端附著或結合於類脂質體的殼內的疏水性部分3，疏水性部分5的烴鏈從類脂質體的表面突出並延伸，在其頂端存在親水性部分4。親水性部分4在水溶液中離子化而帶正電。
在第3步驟中，得到在將第1步驟中的水溶液與第2步驟中的水溶液混合而成的混合水溶液中分散有帶電類脂質體的懸濁液。在懸濁液中的帶電類脂質體內的水相中，封入了溶解於水溶液中的目標物質。
使用如此進行而製備的帶電類脂質體的懸濁液，可得到醫藥品、化妝品等含帶電類脂質體產品。例如，在第3步驟中，可藉由與潤膚露成分一同混合而得到潤膚露製劑。此外，藉由與上述第1~第3步驟不同的步驟而另外製備的乳液、凝膠或霜混合，從而可得到乳液製劑、凝膠製劑或霜製劑。
實施例
上述的帶電類脂質體的製備方法的實施例、以及製備的帶電類脂質體的表面電荷及皮膚滲透性/貯留性等的試驗結果如下所示。
(1)表面電荷測定
<試樣>
表1對於帶電類脂質體的ZETA電位測定所使用的帶電類脂質體(實施例1)和現有的類脂質體(比較例1)，示出了製備方法的概要和成分比例。另外，實施例1為用於ZETA電位測定的試樣，因此代替規定的水溶液而使用去離子水，但這不會影響作為實施例的結果。
另外，關於表1中的各成分的數值，對於實施例1，為將第3步驟中得到的帶電類脂質體懸濁液設為100的情況下的質量%，對於比較例1，為將第1步驟中得到的類脂質體懸濁液設為100的情況下的質量%(對於以下同樣的表，也將最終步驟的生成物設為100而以質量%示出各步驟的成分比例)。
<製備方法>
．實施例1
第1步驟：在室溫，向2質量%的二肉豆蔻酸甘油酯PEG-12(以下簡稱為「GDM-12」)加入5質量%的去離子水，進行混合(藉由渦旋或機械進行攪拌。其它實施例的第1步驟也同樣)，得到類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的硬脂酸二甲基胺基丙基醯胺(以下簡稱為「SDMAPA」)在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，進行混合(藉由渦旋或機械進行攪拌，其它實施例的第3步驟也同樣)後，加入88質量%的去離子水，進行混合。
．比較例1
在室溫，向2質量%的GDM-12加入98質量%的去離子水，進行混合攪拌，得到類脂質體懸濁液。
<ZETA電位測定結果>
圖3為示出對實施例1和比較例1測定ZETA電位的結果的圖。橫軸為電位。判明實施例1在60mV~80mV出現峰，帶正電。另一方面，比較例1在-10~20mV出現峰。
(2)電子顯微鏡照片
圖4(a)(b)為實施例1和比較例1的透射型電子顯微鏡(TEM)照片。在(a)的實施例1中，負染色的染色劑接觸到表面的電荷，觀察到表面電荷。在(b)的比較例1中，能夠確認以同心圓狀成為多層，無法觀察到表面結構。可以認為實施例1的帶電類脂質體為在比較例1的類脂質體的最外層的表面帶正電荷的結構。
(3)經皮吸收試驗-其1
<試樣>
表2對於封入作為螢光標記物質的鈣黃綠素Na而進行的經皮吸收試驗所使用的帶電類脂質體(實施例2)、現有的類脂質體(比較例2a)以及水溶液(比較例2b)，示出了製備方法的概要和成分比例。
[表2]
<製備方法>
．實施例2
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入5質量%的含鈣黃綠素Na水溶液(0.5質量%的鈣黃綠素Na和4.5質量%的去離子水)，進行混合，得到黃褐色的高黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黃褐色的黏稠的溶液後，加入88質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到黃褐色的帶電類脂質體懸濁液。
．比較例2a
在室溫，向2質量%的GDM-12加入5質量%的含鈣黃綠素Na水溶液(0.5質量%的鈣黃綠素Na和4.5質量%的去離子水)和93質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到類脂質體懸濁液。
．比較例2b
在室溫，混合5質量%的含鈣黃綠素Na水溶液(0.5質量%的鈣黃綠素Na和4.5質量%的去離子水)和95質量%的去離子水，得到含鈣黃綠素Na水溶液。
<結果>
圖5為示出實施例2、比較例2a及2b的經皮吸收試驗的結果的圖。將自應用於皮膚表面起30分鐘後、3小時後以及6小時後的皮膚(角質層)中的鈣黃綠素Na的量(皮膚中量)與穿透皮膚的鈣黃綠素Na的量(皮膚穿透量)之和作為皮膚轉移量而示出。實施例2與比較例2a及2b相比示出良好的皮膚滲透性。
(4)經皮吸收試驗-其2
<試樣>
表3和表4分別對於封入作為螢光標記物質的鈣黃綠素Na而進行的經皮吸收試驗所使用的帶電類脂質體(實施例3、4)、現有的類脂質體(比較例3a、4a)，示出了製備方法的概要和成分比例。
[表4]
<製備方法>
．實施例3
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入5質量%的含鈣黃綠素Na水溶液(0.1質量%的鈣黃綠素Na和4.9質量%的去離子水)，進行混合，得到黃褐色的高黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黃褐色的黏稠的溶液後，加入66質量%的去離子水、7質量%的1,3-丁二醇、15質量%的1,3-丙二醇，溫和地攪拌，得到黃褐色的帶電類脂質體懸濁液。
．比較例3a
在室溫，向2質量%的GDM-12加入5質量%的含鈣黃綠素Na水溶液(0.1質量%的鈣黃綠素Na和4.9質量%的去離子水)以及71質量%的去離子水、7質量%的1,3-丁二醇、15質量%的1,3-丙二醇，溫和地攪拌，得到類脂質體懸濁液。
．實施例4
第1步驟：在室溫，向2.27質量%的GDM-12加入5質量%的含鈣黃綠素Na水 溶液(0.1質量%的鈣黃綠素Na和4.9質量%的去離子水)，進行混合，得到黃褐色的高黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黃褐色的黏稠的溶液後，加入87.73質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到黃褐色的帶電類脂質體懸濁液。
．比較例4a
在室溫，向2.27質量%的GDM-12加入5質量%的含鈣黃綠素Na水溶液(0.1質量%的鈣黃綠素Na和4.9質量%的去離子水)和92.73質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到類脂質體懸濁液。
<結果>
圖6為示出實施例3及4、比較例3a及4a的經皮吸收試驗的結果的圖。示出自應用於皮膚表面起24小時後的從皮膚表面向皮膚中的轉移量(皮膚轉移量)、皮膚(角質層)中的含鈣黃綠素Na的量(皮膚中量)、以及穿透皮膚的量(皮膚穿透量)。實施例3、4與比較例3a及4a相比示出良好的皮膚滲透性和皮膚貯留性。實施例3、4的皮膚貯留率為88%、96%，與之相對，比較例3a、4a的皮膚貯留率為51~56%左右。該皮膚貯留率藉由[皮膚中量/皮膚轉移量]×100%的算式算出。
(5)經皮吸收試驗-其3
<試樣>
表5對於封入3-O-乙基抗壞血酸而進行的經皮吸收試驗3所使用的帶電類脂質體(實施例5)、現有的類脂質體(比較例5a)以及無類脂質體的3-O-乙基抗壞血酸水溶液(比較例5b)，示出了製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
．實施例5
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入10質量%的含3-O-乙基抗壞血酸水溶液(5質量%的3-O-乙基抗壞血酸和5質量%的去離子水)，進行混合，得到類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到溶液後，加入73質量%的去離子水、5質量%的甘油、3質量 %的1,3-丁二醇、2質量%的1,2-戊二醇，溫和地攪拌，得到帶電類脂質體懸濁液。
．比較例5a
在室溫，向2質量%的GDM-12加入10質量%的含3-O-乙基抗壞血酸水溶液(5質量%的3-O-乙基抗壞血酸和5質量%的去離子水)、78質量%的去離子水、5質量%的甘油、3質量%的1,3-丁二醇、2質量%的1,2-戊二醇，溫和地攪拌，得到類脂質體懸濁液。
．比較例5b
在室溫，混合10質量%的含3-O-乙基抗壞血酸水溶液(5質量%的3-O-乙基抗壞血酸和5質量%的去離子水)、80質量%的去離子水、5質量%的甘油、3質量%的1,3-丁二醇、2質量%的1,2-戊二醇，得到含3-O-乙基抗壞血酸水溶液。
<結果>
圖7為示出實施例5、比較例5a、5b及5c的經皮吸收試驗的結果的圖。示出皮膚穿透量的時間變化。判明實施例5與比較例相比皮膚滲透性良好。此外，帶電類脂質體的實施例5的皮膚貯留性良好，因此皮膚穿透量長時間持續地增加。
(6)經皮吸收試驗-其4
<試樣>
表6、表7、表8、表9對於封入了熊果苷而進行的經皮吸收試驗4所使用的帶電類脂質體的潤膚露製劑(實施例6)、乳液製劑(實施例7)、凝膠製劑(實施例8)及霜製劑(實施例9)、含熊果苷PBS(-)(比較例6a)、PBS(-)(比較例6b)，示出了製備方法的概要和成分比例。
[表6]
[表7]
[表8]
[表9]
<製備方法>
．實施例6
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入6質量%的含熊果苷水溶液(1質量%的熊果苷和5質量%的去離子水)，進行混合，得到白色的黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黏稠的溶液後，加入76質量%的去離子水、6質量%的甘油、6質量%的二甘油、4質量%的1,3-丁二醇，溫和地攪拌，得到由帶電類脂質體懸濁液形成的潤膚露製劑。
．比較例6a
在室溫，混合1質量%的熊果苷和99質量%的PBS(-)，得到熊果苷PBS(-)水溶液。
．比較例6b
直接使用PBS(-)。
．實施例7
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入6質量%的含熊果苷水溶液(1質量%的熊果苷和5質量%的去離子水)，進行混合，得到白色的黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黏稠的溶液後，加入76質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到帶電類脂質體懸濁液。
第4步驟：在80℃，混合61.5質量%的去離子水、6質量%的甘油、1質量%的二甘油、4重量%的1,3-丁二醇、6質量%的角鯊烷(squalane)、1質量%的鯨蠟醇、0.5質量%的Tinovis(注冊商標)CD(BASF製造)，進行乳化後、冷卻至室溫而得到乳液。
第5步驟：向第4步驟中得到的乳液加入第3步驟中得到的帶電類脂質體懸濁液而得到乳液製劑。
．實施例8
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入6質量%的含熊果苷水溶液(1質量%的熊果苷和5質量%的去離子水)，進行混合，得到白色的黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50% 乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黏稠的溶液後，加入7質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到黏稠的帶電類脂質體懸濁液。
第4步驟：在80℃，混合66質量%的去離子水、6質量%的甘油、1質量%的二甘油、4重量%的1,3-丁二醇、2質量%的鯨蠟醇、1質量%的Tinovis(注冊商標)CD(BASF製造)，進行乳化後、冷卻至室溫而得到黏性高的凝膠。
第5步驟：向第4步驟中得到的凝膠加入第3步驟中得到的帶電類脂質體懸濁液而得到凝膠製劑。
．實施例9
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入6質量%的含熊果苷水溶液(1質量%的熊果苷和5質量%的去離子水)，進行混合，得到白色的黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黏稠的溶液後，加入7質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到黏稠的帶電類脂質體懸濁液。
第4步驟：在80℃，混合47.5質量%的去離子水、6質量%的甘油、1質量%的二甘油、4重量%的1,3-丁二醇、1.4質量%的單硬脂酸聚乙二醇酯、1.6質量%的硬脂酸甘油酯、2.5質量%的鯨蠟醇、16質量%的角鯊烷，進行乳化後、冷卻至室溫而得到白色的霜。
第5步驟：向第4步驟中得到的霜加入第3步驟中得到的帶電類脂質體懸濁液而得到霜製劑。
<結果>
圖8為示出實施例6、7、8及9、以及比較例6a及6b的經皮吸收試驗的結果的圖。示出皮膚中的累積量。判明實施例與比較例相比皮膚滲透性和皮膚貯留性良好。
(7)經皮吸收試驗-其5和美白效果試驗
<試樣>
表10對於封入了熊果苷而進行的經皮吸收試驗5和美白效果試驗所使用的帶電類脂質體的乳化製劑(實施例10)、類脂質體的乳化劑(比較例10a)、無類脂質體的含熊果苷水溶液(比較例10b)、含熊果苷PBS(-)(比較例10c)、PBS(-)(比較例10d)，示出了製備方法的概要和成分比例。
[表10]
<製備方法>
．實施例10
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入6質量%的含熊果苷水溶液(1質量%的熊果苷和5質量%的去離子水)，進行混合，得到白色的黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA在70~80℃完全溶解於0.6質量%的50%乳酸水溶液中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黏稠的溶液後，加入7質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到帶電類脂質體懸濁液。
第4步驟：在80℃，混合58.85質量%的去離子水、6質量%的甘油、1質量%的二甘油、4重量%的1,3-丁二醇、1質量%的1,2-戊二醇、0.3質量%的甘露聚糖、1.4質量%的單硬脂酸聚乙二醇酯、1.6質量%的硬脂酸甘油酯、6質量%的角鯊烷、1.5質量%的鯨蠟醇，進行乳化後、冷卻至室溫而得到乳液。
第5步驟：向第4步驟中得到的乳液加入第3步驟中得到的帶電類脂質體懸濁液而得到乳液製劑。
．比較例10a
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入6質量%的含熊果苷水溶液(1質量%的熊果苷和5質量%的去離子水)和12質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到類脂質體懸濁液。
第2步驟：向按照與實施例10的第4步驟同樣的方法而得到的乳液加入第1步驟中得到的帶電類脂質體懸濁液而得到乳液製劑。
．比較例10b
第1步驟：在室溫，混合6質量%的含熊果苷水溶液(1質量%的熊果苷和5質量%的去離子水)和14質量%的去離子水，得到含熊果苷水溶液。
第2步驟：向按照與實施例10的第4步驟同樣的方法而得到的乳液加入第1步驟中得到的含熊果苷水溶液而得到乳液製劑。
．比較例10c：
在室溫，混合1質量%的熊果苷和99質量%的PBS(-)，得到熊果苷PBS(-)水溶液。
．比較例10d：
直接使用PBS(-)。
<經皮吸收試驗的結果>
圖9(a)為示出實施例10以及比較例10a、10b、10c及10d的經皮吸收試驗的結果的圖。實施例10與各比較例相比皮膚貯留性高。
<美白效果試驗的結果>
圖9(b)為示出藉由測量實施例10以及比較例10a、10b、10c及10d的細胞的明度從而得到的熊果苷作為美白劑的美白效果試驗結果的圖。實施例10與各比較例相比得到最好的美白效果。可以認為這是由於圖9(a)所示的高的皮膚貯留性而引起的。
(8)其它實施例
(8-1)實施例11
表11示出使用硬脂基三甲基氯化銨作為陽離子性表面活性劑的實施例11的製備方法的概要和成分比例。在實施例11中，代替規定的水溶液而使用去離子水，但這不會影響帶電類脂質體的形成。
<製備方法>
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入5質量%的去離子水，進行混合，得到白色的黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的硬脂基三甲基氯化銨、0.2質量%的乙醇、0.1質量 %的檸檬酸在70~80℃完全溶解於4.3質量%的去離子水中後、冷卻至30℃以下的室溫，得到硬脂基三甲基氯化銨水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的硬脂基三甲基氯化銨水溶液，溫和地攪拌，得到黏稠的溶液後，加入88質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-2)實施例12
表12示出使用硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺作為陽離子性表面活性劑的實施例12的製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入5質量%的去離子水，進行混合，得到白色的黏性的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺、0.6質量%的50%乳酸水溶液、4質量%的去離子水在70~80℃完全溶解後、冷卻至30℃以下的室溫，得到硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺水溶液，溫和地攪拌，得到黏稠的溶液後，加入88質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-3)實施例13
表13示出使用二硬脂酸甘油酯PEG-23(以下簡稱為「GDS-23」)和膽固醇酯作為脂質的實施例13的製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
第1步驟：將2質量%的GDS-23、1質量%的澳洲胡桃脂肪酸膽固醇酯(商品名「YOFCO-MAC」：日本精化株式會社製造)在80℃加熱熔解，加入80℃的5質量%的去離子水，進行混合後，冷卻至45~50℃，得到類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA、0.6質量%的50%乳酸水溶液、4質量%的去離子水在70~80℃完全溶解後，冷卻至50℃，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，進行混合後，冷卻至30℃以下的室溫，進一步加入87質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-4)實施例14
表14示出使用GDS-23和膽固醇酯作為脂質的實施例14的製備方法的概要和成分比例。
[表14]
<製備方法>
第1步驟：將1.79質量%的GDS-23、0.7質量%的澳洲胡桃脂肪酸膽固醇酯(商品名「YOFCO-MAC」：日本精化株式會社製造)在80℃加熱熔解，加入80℃的5質量%的含鈣黃綠素Na水溶液(0.1質量%的鈣黃綠素Na和4.9質量%的去離子水)，進行混合，得到黃褐色的黏性高的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA、0.6質量%的50%乳酸水溶液、4質量%的去離子水在70~80℃完全溶解後，冷卻至50℃，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，溫和地攪拌，得到黃褐色的黏稠的溶液後，加入87.51質量%的去離子水，溫和地攪拌，得到帶電類脂質體懸濁液。
<實施例14的經皮吸收試驗結果>
圖10為示出對實施例14進行與圖6的實施例3、4同樣的條件的經皮試驗的結果的圖。判明具有高的皮膚滲透性和皮膚貯留性。
(8-5)實施例15
進行使用二硬脂酸甘油酯PEG-12(以下簡稱為「GDS-12」)作為脂質的實施例15的製備，得到帶電類脂質體懸濁液。除脂質的種類不同以外，成分比例與實施例1相同，因此省略其成分表。關於ZETA電位以及外觀和光學顯微鏡觀察，實施例15的帶電類脂質體與實施例1的帶電類脂質體相同(對於以下的實施例16~54也相同)。
<製備方法>
第1步驟：將2質量%的GDS-12在50~60℃加熱熔解，加入50~60℃的5質量%的去離子水，進行混合後，冷卻至45~50℃，得到類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA、0.6質量%的50%乳酸水溶液、4質量%的去離子水在70~80℃完全溶解後，冷卻至50℃，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，進行混合後，冷卻至30℃以下的室溫，進一步加入88質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-6)實施例16
進行使用二硬脂酸甘油酯PEG-23(以下簡稱為「GDS-23」)作為脂質的實施例16的製備，得到帶電類脂質體懸濁液。除脂質的種類不同以外，成分比例與實施例1相同，因此省略其成分表。
<製備方法>
第1步驟：將2質量%的GDS-23在50~60℃加熱熔解，加入50~60℃的5質量%的去離子水，進行混合後，冷卻至45~50℃，得到類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA、0.6質量%的50%乳酸水溶液、4質量%的去離子水在70~80℃完全溶解後，冷卻至50℃，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的SDMAPA水溶液，進行混合後，冷卻至30℃以下的室溫，進一步加入88質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-7)實施例17~20
表15示出使用GDM-12作為脂質、使用SDMAPA作為陽離子性表面活性劑的實施例17~20的製備方法的概要和成分比例。實施例17~20在第2步驟中分別使用不同的pH調節劑。
<製備方法>
第1步驟：在室溫，向2質量%的GDM-12加入5質量%的去離子水，進行混合，得到類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的SDMAPA和表15中的各質量%的各pH調節劑完全溶解在適宜溫度(對於實施例20為80℃)的各質量%的去離子水中後，冷卻至30℃以下的室溫(對於實施例20為60℃)，得到SDMAPA水溶液。
第3步驟：對於實施例17~19，向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液(對於實施例20是在60℃)，進行混合後，加入88質量%的去離子水而進行混合(對於實施例20是在40~50℃加入而進行混合，冷卻至30℃以下的室溫)，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-8)實施例21~24
表16示出使用GDM-12作為脂質、使用硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺作為陽離子性表面活性劑的實施例21~24的製備方法的概要和成分比例。實施例21~24在第2步驟中分別使用不同的pH調節劑。
[表16]
<製備方法>
第1步驟：與實施例17~19的第1步驟同樣。
第2步驟，使0.4質量%的硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺和表16中的各質量%的各pH調節劑完全溶解於適宜溫度(對於實施例24為80℃)的各質量%的去離子水中後，冷卻至30℃以下的室溫(對於實施例24為60℃)，得到硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺水溶液。
第3步驟：對於實施例21~23，向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液(對於實施例24是在60℃)，進行混合後，加入88質量%的去離子水而進行混合(對於實施例24是在40~50℃加入而進行混合，冷卻至30℃以下的室溫)，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-9)實施例25~28
表17示出使用GDM-12作為脂質、使用椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA作為陽離子性表面活性劑的實施例25~28的製備方法的概要和成分比例。實施例25~28在第2步驟中分別使用不同的pH調節劑。
[表17]
<製備方法>
第1步驟：與實施例17~19的第1步驟同樣。
第2步驟，使1質量%的椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA和表17中的各質量%的各pH調節劑完全溶解於適宜溫度(對於實施例24為80℃)的各質量%的去離子水中後，冷卻至30℃以下的室溫(對於實施例24為60℃)，得到椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA水溶液。
第3步驟：對於實施例25~27，向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液(對於實施例28是在60℃)，進行混合後，加入88質量%的去離子水而進行混合(對於實施例28是在40~50℃加入而進行混合，冷卻至30℃以下的室溫)，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-10)實施例29
表18示出使用GDM-12作為脂質、使用棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨作為陽離子性表面活性劑的實施例29的製備方法的概要和成分比例。
[表18]
<製備方法>
第1步驟：與實施例17~19的第1步驟相同。
第2步驟：使0.9質量%的棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨、1.2質量%的50%乳酸水溶液完全溶解於適宜溫度的2.9質量%的去離子水中後、冷卻至30℃以下的室溫，得到棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入88質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-11)實施例30
表19示出使用GDM-12作為脂質、使用西曲氯銨作為陽離子性表面活性劑的實施例30的製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
第1步驟：與實施例17~19的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的西曲氯銨和0.6質量%的50%乳酸水溶液完全溶解於適宜溫度的4質量%的去離子水中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到西曲氯銨水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入88質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-12)實施例31、32
表20示出使用GDM-12作為脂質、使用西曲氯銨作為陽離子性表面活性劑的實施例31、32的製備方法的概要和成分比例。實施例31、32在第2步驟中分別使用不同的pH調節劑。此外在第2步驟中使用乙醇。
<製備方法>
第1步驟：與實施例17~19的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的西曲氯銨和表20中的各質量%的各pH調節劑完全溶解於0.3質量%的乙醇和適宜溫度的各質量%的去離子水中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到西曲氯銨水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入88質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-13)實施例33
表21示出使用GDM-12作為脂質、使用山崳基三甲基氯化銨作為陽離子性表面活性劑的實施例33的製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
第1步驟：與實施例17~19的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的山崳基三甲基氯化銨和0.8質量%的50%乳酸水溶液完全溶解於0.1質量%的乙醇和80℃的3.7質量%的去離子水中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到山崳基三甲基氯化銨水溶液。
第3步驟：在80℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入60~70℃的88質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-14)實施例34
表22示出使用GDM-12作為脂質、使用氯化烷基二甲基苄基銨作為陽離子性表面活性劑的實施例34的製備方法的概要和成分比例。
[表22]
<製備方法>
第1步驟：與實施例17~19的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的氯化烷基二甲基苄基銨和0.6質量%的50%乳酸水溶液完全溶解於適宜溫度的4質量%的去離子水中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到氯化烷基二甲基苄基銨水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入88質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-15)實施例35、36
表23示出使用GDM-12作為脂質、使用乙基硫酸羊毛脂脂肪酸胺基丙基乙基二甲基銨(以下，稱為「季銨鹽-33」)作為陽離子性表面活性劑的實施例35、36的製備方法的概要和成分比例。實施例35、36在第2步驟中分別使用不同的pH調節劑。此外，第2步驟中使用DPG(二丙二醇)。
<製備方法>
第1步驟：與實施例17~19的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的季銨鹽-33和表23中的各質量%的各pH調節劑完全溶解於0.4質量%的DPG和適宜溫度的各質量%的去離子水中後，冷卻至30℃以下的室溫，得到季銨鹽-33水溶液。
第3步驟：向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入88質量%的去離子水，進行混合，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-16)實施例37
表24示出使用GDS-12作為脂質、使用西曲氯銨作為陽離子性表面活性劑的實施例37的製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
第1步驟：使2質量%的GDS-12在45~55℃熔解，加入45~55℃的5質量%的去離子水，進行混合，得到45℃~50℃的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的西曲氯銨和0.8質量%的50%乳酸水溶液、0.3質量%的乙醇完全溶解於適宜溫度的3.5質量%的去離子水中後，加熱至45℃~50℃，得到西曲氯銨水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子 性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-17)實施例38
表25示出使用GDS-12作為脂質、使用季銨鹽-33作為陽離子性表面活性劑的實施例38的製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
第1步驟：與實施例37的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的季銨鹽-33和0.8質量%的50%乳酸水溶液、0.4質量%的DPG完全溶解於適宜溫度的3.4質量%的去離子水中後，加熱至45℃~50℃，得到季銨鹽-3水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-18)實施例39~42
表26示出使用GDS-23作為脂質、使用椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA作為陽離子性表面活性劑的實施例39~42的製備方法的概要和成分比例。實施例39~42在第2步驟中分別使用不同的pH調節劑。
[表26]
<製備方法>
第1步驟：使2質量%的GDS-23在45~55℃熔解，加入45~55℃的5質量%的去離子水，進行混合，得到45℃~50℃的類脂質體懸濁液。
第2步驟：使0.4質量%的椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA和表26中的各質量%的各pH調節劑完全溶解於適宜溫度(對於實施例42為80℃)的各質量%的去離子水中後，調節至45℃~50℃(對於實施例42為冷卻至60℃)，得到椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA水溶液。
第3步驟：在45~50℃(對於實施例42為60℃)向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-19)實施例43~45
表27示出使用GDS-23作為脂質、使用硬脂酸二甲基胺基丙基醯胺(以下，稱為「醯胺基胺MPS」)作為陽離子性表面活性劑的實施例43~45的製備方法的概要和成分比例。實施例43~45在第2步驟中分別使用不同的pH調節劑。
[表27]
<製備方法>
第1步驟：與實施例39~42的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的醯胺基胺MPS和表27中的各質量%的各pH調節劑完全溶解於適宜溫度(對於實施例44為80℃)的各質量%的去離子水中後，調節至45℃~50℃(對於實施例44為冷卻至60℃)，得到醯胺基胺MPS水溶液。
第3步驟：在45~50℃(對於實施例44為60℃)向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-20)實施例46
表28示出使用GDS-23作為脂質、使用棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨作為陽離子性表面活性劑的實施例46的製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
第1步驟：與實施例39~42的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨、0.8質量%的50%乳酸水溶液完全溶解於適宜溫度的3.8質量%的去離子水中後、調節至45℃~50℃，得到棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-21)實施例47~49
表29示出使用GDS-23作為脂質、使用西曲氯銨作為陽離子性表面活性劑的實施例47~49的製備方法的概要和成分比例。實施例47~49在第2步驟中分別使用不同的pH調節劑。此外，在第2步驟中使用乙醇。
<製備方法>
第1步驟：與實施例39~42的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的西曲氯銨和表29中的各質量%的各pH調節劑完全溶解於適宜溫度(對於實施例48為80℃)的各質量%的去離子水中後，調節至45℃~50℃(對於實施例48為冷卻至60℃)，得到西曲氯銨水溶液。
第3步驟：在45~50℃(對於實施例48為60℃)向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-22)實施例50
表30示出使用GDS-23作為脂質、使用硬脂基三甲基氯化銨作為陽離子性表面活性劑的實施例50的製備方法的概要和成分比例。在第2步驟中使用乙醇。
<製備方法>
第1步驟：與實施例39~42的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的硬脂基三甲基氯化銨和0.6質量%的50%乳酸水溶液、0.3質量%的乙醇完全溶解於適宜溫度的3.7質量%的去離子水中後，調節至45℃~50℃，得到硬脂基三甲基氯化銨水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-23)實施例51
表31示出使用GDS-23作為脂質、使用山崳基三甲基氯化銨作為陽離子性表面活性劑的實施例51的製備方法的概要和成分比例。在第2步驟中使用乙醇。
<製備方法>
第1步驟：與實施例39~42的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的山崳基三甲基氯化銨和0.8質量%的50%乳酸水溶液、0.1質量%的乙醇完全溶解於適宜溫度的3.7質量%的去離子水中後，調節至45℃~50℃，得到山崳基三甲基氯化銨水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-24)實施例52
表32示出使用GDS-23作為脂質、使用氯化烷基二甲基苄基銨作為陽離子性表面活性劑的實施例52的製備方法的概要和成分比例。
<製備方法>
第1步驟：與實施例39~42的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的氯化烷基二甲基苄基銨和0.6質量%的50%乳酸水溶液完全溶解於適宜溫度的4質量%的去離子水中後，調節至45℃~50℃，得到氯化烷基二甲基苄基銨水溶液。
第3步驟：在45~50℃向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
(8-25)實施例53、54
表33示出使用GDS-23作為脂質、使用季銨鹽-3作為陽離子性表面活性劑的實施例53、54的製備方法的概要和成分比例。在第2步驟中使用DPG。
<製備方法>
第1步驟：與實施例39~42的第1步驟相同。
第2步驟：使0.4質量%的季銨鹽-3和表33中的各質量%的pH調節劑、0.4質量%的DPG完全溶解於適宜溫度(對於實施例54為80℃)的各質量%的去離子水中後，調節至45℃~50℃(對於實施例54為冷卻至60℃)，得到季銨鹽-3水溶液。
第3步驟：在45~50℃(對於實施例54為60℃)向第1步驟的類脂質體懸濁液加入第2步驟的陽離子性表面活性劑水溶液，進行混合後，加入45~50℃的88質量%的去離子水，進行混合，冷卻至30℃以下的室溫，得到帶電類脂質體懸濁液。
以上，參照實施例說明本發明，但本發明並不限定於這些實施例，本發明也包含根據這些而顯而易見的變形例。

Claims (4)

  1. 一種帶電類脂質體的製備方法，為帶正電的帶電類脂質體(noisome)的製備方法，其特徵在於具有：藉由將至少包含二醯甘油PEG加成物的脂質以該脂質能夠呈液體狀態的溫度與規定的水溶液混合，該脂質自發地形成類脂質體，從而製備類脂質體的懸濁液的步驟，藉由將陽離子性表面活性劑與酸性水溶液混合，從而製備陽離子性表面活性劑水溶液的步驟，該陽離子性表面活性劑為選自脂肪族胺、脂肪族或脂肪族醯胺季銨鹽、脂肪族醯胺基胺以及醯基胺基酸衍生物中的1種或多種，在其疏水性部分具有碳原子數為11~21的飽和或不飽和的直鏈型烴基，以及藉由將上述類脂質體的懸濁液與上述陽離子性表面活性劑水溶液混合，而上述陽離子性表面活性劑在其親水性部分具有正電荷而修飾上述類脂質體的表面，從而製備帶電類脂質體的懸濁液的步驟，上述二醯甘油PEG加成物為選自二油酸甘油酯PEG-12、二肉豆蔻酸甘油酯PEG-12、二棕櫚酸甘油酯PEG-23、二硬脂酸甘油酯PEG-12以及二硬脂酸甘油酯PEG-23中的1種或多種，作為上述陽離子性表面活性劑的脂肪族胺為選自十四胺、棕櫚胺、硬脂胺、油胺(oleylamine)、亞油胺、山崳胺(behenyl amine)、N,N-二甲基十二胺以及N,N-二甲基-正十八胺中的1種或多種，作為上述陽離子性表面活性劑的脂肪族或脂肪族醯胺季銨鹽為選自十四烷基三甲基氯化銨、鯨蠟基三甲基氯化銨、硬脂基三甲基氯化銨、山崳基三甲基氯化銨以及棕櫚醯胺丙基三甲基氯化銨中的1種或多種，作為上述陽離子性表面活性劑的脂肪族醯胺基胺為肉豆蔻酸二乙基胺基乙基醯胺、肉豆蔻酸二甲基胺基乙基醯胺、肉豆蔻酸二甲基胺基丙基醯胺、肉豆 蔻酸二乙基胺基丙基醯胺、棕櫚酸二乙基胺基乙基醯胺、棕櫚酸二甲基胺基乙基醯胺、棕櫚酸二甲基胺基丙基醯胺、棕櫚酸二乙基胺基丙基醯胺、硬脂酸二乙基胺基乙基醯胺、硬脂酸二甲基胺基乙基醯胺、硬脂酸二甲基胺基丙基醯胺、硬脂酸二乙基胺基丙基醯胺、山崳酸二乙基胺基乙基醯胺、山崳酸二甲基胺基乙基醯胺、山崳酸二甲基胺基丙基醯胺以及山崳酸二乙基胺基丙基醯胺中的1種或多種，作為上述陽離子性表面活性劑的醯基胺基酸衍生物為椰油醯精胺酸乙酯鹽PCA。
  2. 根據請求項1所述之帶電類脂質體的製備方法，其用於製備上述陽離子性表面活性劑水溶液的酸性水溶液的pH為4或其以下。
  3. 一種帶電類脂質體，為帶正電的帶電類脂質體，其特徵在於具有：將至少包含二醯甘油PEG加成物的脂質作為構成成分且封入規定的水溶液的類脂質體，該二醯甘油PEG加成物為選自二油酸甘油酯PEG-12、二肉豆蔻酸甘油酯PEG-12、二棕櫚酸甘油酯PEG-23、二硬脂酸甘油酯PEG-12以及二硬脂酸甘油酯PEG-23中的1種或多種，以及在親水性部分具有正電荷而修飾上述類脂質體之表面的陽離子性表面活性劑，上述陽離子性表面活性劑為選自脂肪族胺、脂肪族醯胺基胺以及醯基胺基酸衍生物中的1種或多種陽離子性表面活性劑，在其疏水性部分包含碳原子數為11~21的1個飽和或不飽和的直鏈型烴基。
  4. 一種含帶電類脂質體之產品，為包含請求項3所述的帶電類脂質體的潤膚露(lotion)製劑、乳液製劑、凝膠製劑或霜製劑。
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