TW201902490A - 一種多醣混合物用於製備高血糖症藥物的用途 - Google Patents

Abstract

在此揭示一種多醣混合物用於製備可治療高血糖症(例如，糖尿病)和/或與高血糖相關異常之藥物的新穎用途。所述多醣混合物之分子量至少500,000且具有約30-50%(重量%)之β(1→3)葡聚醣和 β(1→6)葡聚醣。所述多醣混合物是以約1-1,000毫克/公斤/天的劑量被施用到亟需治療的個體身上，以減輕或減緩與高血糖相關的病徵。

Description

一種多醣混合物用於製備高血糖症藥物的用途

本揭示內容係關於使用一種多醣混合物的用途，其可用來預防和/或治療高血醣相關病症(如，糖尿病)。

糖尿病是指個體身體無法產生足夠的胰島素或是無法恰當地回應胰島素而產生的疾病。胰島素是由胰腺體製造用來促使細胞將葡萄糖轉變成能量以供個體身體使用的荷爾蒙。當胰島素分必不足或是身體無法恰當地回應胰島素時，將造成葡萄糖堆積在血液內而引發各式併發症。已知糖尿病有多種形式，但其中有3種最為人熟知：第I、II型糖尿病和姙娠糖尿病。此外，糖尿病前期(prediabetes)被認定是糖尿病之前的高血糖狀態，其血糖值高於一般正常值，但尚不足以被診斷為糖尿病。

第I型糖尿病或是胰島素依賴型糖尿病(insulin-dependent diabetes mellitus, IDDM)是指因胰臟內可分泌胰島素的貝塔細胞(beta cell)受到破壞而產生的代謝異常，造成胰島素缺乏以及血漿中存在高量葡萄糖。一般來說，第I型糖尿病肇因於自體免疫，但是不明原因造成貝塔細胞被破壞也會引發第I型糖尿病。第I型糖尿病會影響兒童及成人，但一般將之歸類為「青少年型糖尿病」，因為此型糖尿病患者大部分都是兒童。

第II型糖尿病或是非胰島素依賴型糖尿病(non-insulin-dependent diabetes mellitus, NIDDM)患者通常具有易受外界環境因子影響的遺傳特質。第II型糖尿病的病因包括：分泌胰島素的貝塔細胞數量不足，肌肉、脂肪和肝臟細胞對胰島素的反應改變，攝入食物後負責控制碳水化合物及脂肪代謝的調控機制異常。環境因素與行為(主要是久坐不動的生活型態或是肥胖)都會影響身體對胰島素的敏感程度。掌控肌肉與脂肪細胞對胰島素敏感性與否的細胞機制相當複雜且目前尚不十分清楚。一般認為改變胰島素的訊遞路徑，提高細胞內脂肪量和自由脂肪酸量以及其他脂肪組織產物，都會影響身體對胰島素的敏感度。

姙娠糖尿病一般出現在懷孕前從未被診斷有糖尿病但於姙娠期間出現高血糖的懷孕婦女身上。約4%的懷孕婦女會出現姙娠糖尿病且可能進展成第II型糖尿病。

如果未能恰當地控制高血糖狀態或使其穩定將會引發後續各式合併症，包括心血管疾病、視力受損、各式神經病變和認知病變、中風、及周邊血管疾病等。除了改變個人飲食習慣及活動形式外，一般治療糖尿病的方法都是給予降血糖藥物和胰島素。由於糖尿病屬於慢性進展的疾病，目前為止並沒有任何一種治療手段足以逆轉疾病進程，因此，相關領域需要一種可治療與高血糖相關的失調和/或異常的改良藥物。

發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。

本發明與藥物有關，其可單獨使用或與任何一種降血糖藥物併用，以有效地降低高血糖患者體內的血糖含量。本發明因而可用來治療與高血糖相關的異常，其包括，但不限於，第I、II型糖尿病，姙娠糖尿病以及與高血糖相關的其他形式的糖尿病和/或異常。

因此，本發明第一態樣在於提供一種自靈芝菌絲分離出來的多醣混合物的新穎用途，其可用來製造一種可治療第I、II型糖尿病，姙娠糖尿病以及與高血糖相關的其他形式的糖尿病和/或異常的藥物。所述多醣混合物之分子量至少500,000且具有約30-50%(重量%)之β(1→3)葡聚醣和 β(1→6)葡聚醣。

依據本發明較佳實施方式，本發明藥物中的多醣混合物係源自靈芝菌絲。

依據本發明較佳實施方式，本發明藥物包含1-1,000毫克的多醣混合物；較佳是包含10-800毫克的多醣混合物;更佳是包含50-600毫克的多醣混合物。

依據本發明較佳實施方式，本發明藥物適合口服施用。

依據本發明較佳實施方式，本發明藥物可更包含一或多種降血糖藥，其可選自由以下物質組成的群組中：第I型類升糖素肽(glucagon-like peptide 1, GLP-1)受體激動劑、第IV型二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase-4, DDP-4)抑制劑、胰島素、胰島素類似物、雙胍(biquanide)、磺醯尿素(sulfonylurea)、噻唑烷二酮(thiazolidinedione, TZD)、第II型鈉-葡萄糖共傳送子(sodium-glucose co-transporter 2, SGLT2) 抑制劑和α-葡糖苷酶抑制劑。

依據本發明實施方式，GLP-1受體激動劑是利拉魯肽(liraglutide)，艾塞那肽(exenatide)、阿必魯肽(albiglutide)或LY2189265。

依據本發明實施方式，DDP-4抑制劑是利汀(gliptin)、西他利汀(sitagliptin)、維拉利汀(vildagliptin)、沙格利汀(saxagliptin)、利拉利汀(linagliptin)、吉格利汀(gemigliptin)、阿拉利汀(anagliptin)、特力利汀(teneligliptin)、阿格利汀(alogliptin)、曲格利汀(trelagliptin)、度格利汀(dutogliptin)、奧格利汀(omarigliptin)、黃連素(berberine)和羽扇醇(lupeol)。

依據本發明實施方式，胰島素類似物是甘精胰島素(glargine)、德谷胰島素(degludec)或地特胰島素(detemir)。

依據本發明實施方式，雙胍可以是二甲雙胍(metformin)、苯乙雙胍(phenformin)或丁二胍(burfomin)。

依據本發明實施方式，磺醯尿素是乙磺己脲(glibenclamide)、甲磺吡脲(gliclazide)、格列美脲(glimepiride)或格列吡嗪(glipizide)。

依據本發明實施方式，TZD是吡格列酮 (pioglitazone) 、羅格列酮(rosiglitazone) 、洛貝格列酮(lobeglitazone) 、環格列酮(ciglitazone) 、達格列酮(darglitazone) 、恩格列酮(englitazone) 、奈妥列酮(netoglitazone) 、利格列酮(rivoglitazone) 、或特羅列酮(troglitazone)。

依據本發明實施方式，SGLT2抑制劑是達格列淨(dapagliflozin)、恩格列淨(empagliflozin)、卡格列淨(canagliflozin)、依格列淨(Ipragliflozin)、托格列淨 (tofogliflozin)、血凝素乙酸鈣(sergliflozin etabonate)、依碳酸瑞格列淨(remogliflozin etabonat)或埃格列淨(ertugliflozin)。

依據本發明實施方式，α-葡糖苷酶抑制劑是阿卡波糖(acarbose)、米格列糖(miglitose) 或伏利波糖(voglibose)。

本發明第二態樣在於提供一種治療高血糖(如，第I、II型糖尿病，姙娠糖尿病以及與高血糖相關的其他形式的糖尿病和/或異常)的方法。本發明方法包括對患有與高血糖相關疾病和/或異常的個體投予每公斤體重1-1000毫克之本發明多醣混合物，以減輕或減緩與高血糖相關的病徵。

依據本發明實施方式，所述多醣混合物的分子量至少500,000且具有約30-50%(重量%)之β(1→3)葡聚醣和 β(1→6)葡聚醣。

依據本發明實施方式，所述多醣混合物係源自靈芝菌絲。

依據本發明實施方式，所述多醣混合物乃是適於口服。

依據本發明實施方式，本發明方法更包含對患者投予一或多種降血糖藥，其可選自由以下物質組成的群組中：GLP-1受體激動劑、DDP-4抑制劑、胰島素、胰島素類似物、雙胍、磺醯尿素、TZD、SGLT2 抑制劑和α-葡糖苷酶抑制劑。

依據本發明實施方式，GLP-1受體激動劑是利拉魯肽(liraglutide)，艾塞那肽(exenatide)、阿必魯肽(albiglutide)或LY2189265。

依據本發明實施方式，DDP-4抑制劑是利汀(gliptin)。所述利汀可選自由西他利汀(sitagliptin)、維拉利汀(vildagliptin)、沙格利汀(saxagliptin)、利拉利汀(linagliptin)、吉格利汀(gemigliptin)、阿拉利汀(anagliptin)、特力利汀(teneligliptin)、阿格利汀(alogliptin)、曲格利汀(trelagliptin)、度格利汀(dutogliptin)、奧格利汀(omarigliptin)、黃連素(berberine)和羽扇醇(lupeol)組成的群組中。

依據本發明實施方式，胰島素類似物是甘精胰島素(glargine)、德谷胰島素(degludec)或地特胰島素(detemir)。

依據本發明實施方式，雙胍可以是二甲雙胍(metformin)、苯乙雙胍(phenformin)或丁二胍(burfomin)。依據本發明較佳實施方式，所述藥物包含(R)-(+)-維拉帕米或其藥學上可接受的鹽類及二甲雙胍。

依據本發明實施方式，磺醯尿素是乙磺己脲(glibenclamide)、甲磺吡脲(gliclazide)、格列美脲(glimepiride)或格列吡嗪(glipizide)。

依據本發明實施方式，TZD是吡格列酮 (pioglitazone) 、羅格列酮(rosiglitazone) 、洛貝格列酮(lobeglitazone) 、環格列酮(ciglitazone) 、達格列酮(darglitazone) 、恩格列酮(englitazone) 、奈妥列酮(netoglitazone) 、利格列酮(rivoglitazone) 、或特羅列酮(troglitazone)。

依據本發明實施方式，SGLT2抑制劑是達格列淨(dapagliflozin)、恩格列淨(empagliflozin)、卡格列淨(canagliflozin)、依格列淨(Ipragliflozin)、托格列淨(tofogliflozin)、血凝素乙酸鈣(sergliflozin etabonate)、依碳酸瑞格列淨(remogliflozin etabonat)或埃格列淨(ertugliflozin)。依據本發明實施方式，α-葡糖苷酶抑制劑是阿卡波糖(acarbose)、米格列糖(miglitose) 或伏利波糖(voglibose)。

依據本發明較佳實施方式，所述個體是哺乳動物，較佳是人類。

在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對本發明實施態樣與具體實施例提出說明性的描述；但此並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成與所揭示具體實施例相同或均等的功能與步驟順序。

1. 名詞定義

為方便說明起見，在此統一為說明書、實施例和附隨請求項中所使用的名詞提供定義。除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。

在本文中，「β(1→3)葡聚醣」一詞指具有β(1→3)鍵結以及主鏈以β(1→3)葡糖糖苷形式存在的葡聚醣。類似的，「β(1→6)葡聚醣」一詞係指具有β(1→6)鍵結以及主鏈以β(1→6)葡糖糖苷形式存在的葡聚醣。在本文中，β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣可取自任何適當的原料，例如取自植物、蘑菇和/或真菌。依據本發明較佳實施方式，β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣係取自靈芝菌絲，例如，先將整體靈芝發酵培育物滅菌後，離心移除菌絲，再將發酵液濃縮直到其中固體含量約為10%為止，再將其冷凍乾燥成粉末。所製成的多醣混合物富含β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣。依據本發明較佳實施方式，所製成的多醣混合物分子量至少500,000，且具有約30-50%(重量%)之β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣。

本文中「治療」一詞指達到欲求的藥學和/或生理效果，亦即，降低高血糖患者體內的血糖含量或是抑制糖尿病的進展。此種效果可以是預防性的(例如完全或部分防止疾病或病癥)或是治療性的(完全或部分治癒一疾病和/或由該疾病造成的不良效應。「治療」一詞在此包含，但不限於，對一哺乳動物(特別是人類)的疾病進行預防性的、治癒性的或是減輕症狀的治療手段，其包括(1)對一帶有疾病因子但尚未發病的個體實施預防性、治癒性的或是減輕症狀的治療手段；(2)抑制該疾病生成(例如，促進可分泌胰島素之貝塔細胞增生或抑制該些細胞的凋亡)；或(3)減輕該疾病病癥(如，減少與疾病相關的病癥出現)。

本文中「施用或投予(administered, administering, administeration)」在此可彼此交替使用，並指藥物的遞送模式，包括但不限於，口服、靜脈內、肌肉內、腹膜內、動脈內、顱內、穿黏膜(如，吸入或鼻腔內)或皮下投予本發明多醣混合物。在某些實施方式中，本發明多醣混合物是製成粉末，以便使用前可與適當的載體(如，緩衝溶液)混合成為可供靜脈注射用的注射液。在其他實施方式中，本發明多醣混合物是與適當輔劑配方成適合直接口服的粉末。

「有效量」(effective amount) 在此處係指一藥物的有效劑量足以在必要的時間內對因高血糖引發的疾病(例如，IDDM、NIDDM、姙娠糖尿病等等)產生欲求的療效反應。舉例來說，對胰島素依賴型糖尿病的治療而言，可降低、防止、壓制或停止與胰島素依賴型糖尿病相關的任何症狀之藥劑都屬有效。藥劑的有效量不必然需要達到完全治癒的效果，但必須能對一疾病或異常提供治療效果，包括延遲、阻礙或防止該疾病或異常生成，或是減輕該疾病或異常之症狀。具體的有效量取決於多種因素，如欲治療的特定狀況、患者的生理條件(如，患者體重、年齡或性別)、接受治療的哺乳動物或動物的類型、治療持續時間、目前療法(如果有的話)的本質以及所用的具體配方。可將有效量表示成藥物的總重量(譬如每天所需的克數、毫克數或微克數)。也可將有效量分成一、二或多個劑量並在治療期間分成一、二或多次給藥。

「個體」(subject)或「患者」在本文中可交替使用，並是指適合以本發明化合物治療的哺乳動物(包含人類)。「哺乳動物」一詞在本文中指哺乳類動物全體成員，包括人類、靈長類、家畜和家禽(例如兔子、豬、羊、和牛)、以及動物園動物、競賽動物或寵物，和齧齒類動物(如，小鼠和大鼠)。此外，除非特定指出，否則「個體」一詞同時意指男性及女性，且可以是任何年齡，例如兒童或成人。因此，「個體」或「患者」包含任何一位可能受益於本揭示內容之治療方法的哺乳動物。「個體」或「患者」的實例，包括但不限於，人類、大鼠、小鼠、天竺鼠、猴子、豬、山羊、牛、馬、狗、貓、鳥及雞。依據一較佳實施方式，個體是人類。

「藥學上可接受的」意指當一分子或一組合物被施用或投予至任一個體(如，人類)身上時，不會對該個體造成不良或不欲求反應(如，毒性或過敏反應)。

「賦形劑(excipient)」在此處係指任何可作為活性藥劑載體的惰性物質(可以是粉末或是液體)。一般來說，賦形劑必須是安全、無毒的物質，且包括藥學領域中用來配製藥學組合物的已知物質，例如充填劑、稀釋劑、凝集劑、黏合劑、潤滑劑、助流劑、安定劑、著色劑、濕潤劑、崩散劑等。

在不和上下文衝突的情況下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比（例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例或反射角）均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。

2. 較佳實施方式的詳細說明

本發明大致係關於發現依據本發明實施方式製備的一種多醣混合物能有效地防止貝塔細胞凋亡。因此，本發明多醣混合物可用來製備一種能治療與高血糖相關疾病和/或異常(如，IDDM、NIDDM、姙娠糖尿病、或與高血糖相關的其他形式之糖尿病和/或異常)之藥物。或者，本發明多醣混合物也可以食物或飲料的方式提供給健康人使用，來預防其產生高血糖。

以下將詳述本發明多醣混合物的製造及使用方式，其分子量至少500,000，且具有約30-50%(重量%)之β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣。本發明多醣混合物可用來製成藥物或健康食品，以預防健康人出現高血糖或治療高血糖個體之高血糖或與高血糖相關的疾病。本研究成果顯示本發明多醣混合物對正常細胞沒有毒性，且能防止貝塔細胞凋亡，降低STZ-誘發糖尿病個體之空腹血糖值，因此能於活體內抑制糖尿病的進展。

據此，本發明第一態樣是有關一種治療罹患與高血糖相關疾病、失調和/或異常(如，IDDM、NIDDM、姙娠糖尿病等)之個體的方法。所述方法包含：對亟需治療的個體施用有效量的本發明多醣混合物以便減輕或減緩與高血糖相關之疾病病癥，所述多醣混合物的分子量至少500,000，且具有約30-50%(重量%)之β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣。

依據本發明某些較佳實施方式，所述多醣混合物具有約30-50%(重量%)之β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣，例如約30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49和50%(重量%)之由β(1→3)葡聚醣和 β(1→6)葡聚醣組成的混合物；較佳是約35-45%(重量%)之β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣，例如約35、36、37、38、39、40、41、42、43、44和45%(重量%)之由β(1→3)葡聚醣和 β(1→6)葡聚醣組成的混合物；更佳是約40%(重量%)之β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣。此外，所述多醣混合物的分子量至少500,000，例如約500,000、600,000、700,000、800,000、900,000、1,000,000、1,100,000、1,200,000、1,300,000、1,400,000、1,500,000、1,600,000、1,700,000、1,800,000、1,900,000、2,000,000、2,100,000、2,200,000、2,300,000、2,400,000、2,500,000、2,600,000、2,700,000、2,800,000、2,900,000、3,000,000、3,100,000、3,200,000、3,300,000、3,400,000和3,500,000。較佳是，所述多醣混合物的分子量至少是2,000,000，更佳是至少2,500,000。

依據某些較佳實施方式，所述多醣混合物是經口服、靜脈注射、或皮下注射方式，以約1-1,000毫克/公斤/天的劑量被施用至有需求的個體；較佳是以約10-800毫克/公斤/天的劑量被施用至有需求的個體；更佳是以約50-600毫克/公斤/天的劑量被施用至有需求的個體。

依據某些較佳實施方式，所述多醣混合物是口服施用。在此方式下，所述多醣混合物是以粉末形式被配方成為適合口服的藥錠或膠囊；或是，以溶液狀態被配方成為可使所述多醣混合物均勻分散其中的懸浮液。

依據非必要的實施方式，所述多醣混合物可與降血糖劑一起施用或投予至亟需治療的個體身上，以減輕或減緩該個體的高血糖狀況。依據某些實施方式，適合與所述多醣混合物一起使用的降血糖劑較佳是選自由以下物質組成的群組中：GLP-1受體激動劑、DDP-4抑制劑、胰島素、胰島素類似物、雙胍、磺醯尿素、TZD、SGLT2 抑制劑和α-葡糖苷酶抑制劑。

適用於本發明方法之GLP-1受體激動劑的實例包括，但不限於，利拉魯肽(liraglutide)，艾塞那肽(exenatide)、阿必魯肽(albiglutide)或LY2189265。

依據某些較佳實施方式，DDP-4抑制劑是利汀(gliptin)。利汀的實例包括，但不限於，西他利汀(sitagliptin)、維拉利汀(vildagliptin)、沙格利汀(saxagliptin)、利拉利汀(linagliptin)、吉格利汀(gemigliptin)、阿拉利汀(anagliptin)、特力利汀(teneligliptin)、阿格利汀(alogliptin)、曲格利汀(trelagliptin)、度格利汀(dutogliptin)、奧格利汀(omarigliptin)、黃連素(berberine)和羽扇醇(lupeol)。

適用於本發明方法之胰島素類似物的實例包括，但不限於，甘精胰島素(glargine)、德谷胰島素(degludec)或地特胰島素(detemir)。

適用於本發明方法之雙胍的實例包括，但不限於，二甲雙胍(metformin)、苯乙雙胍(phenformin)或丁二胍(burfomin)。

適用於本發明方法之磺醯尿素的實例包括，但不限於，乙磺己脲(glibenclamide)、甲磺吡脲(gliclazide)、格列美脲(glimepiride)或格列吡嗪(glipizide)。

適用於本發明方法之TZD的實例包括，但不限於，吡格列酮 (pioglitazone) 、羅格列酮(rosiglitazone) 、洛貝格列酮(lobeglitazone) 、環格列酮(ciglitazone) 、達格列酮(darglitazone) 、恩格列酮(englitazone) 、奈妥列酮(netoglitazone) 、利格列酮(rivoglitazone) 、或特羅列酮(troglitazone)。

適用於本發明方法之SGLT2抑制劑的實例包括，但不限於，達格列淨(dapagliflozin)、恩格列淨(empagliflozin)、卡格列淨(canagliflozin)、依格列淨(Ipragliflozin)、托格列淨(tofogliflozin)、血凝素乙酸鈣(sergliflozin etabonate)、依碳酸瑞格列淨(remogliflozin etabonat)或埃格列淨(ertugliflozin)。

適用於本發明方法之α-葡糖苷酶抑制劑的實例包括，但不限於，阿卡波糖(acarbose)、米格列糖(miglitose) 或伏利波糖(voglibose)。

本發明的第二態樣是關於提供一種用來治與高血糖相關疾病和/或異常(如，IDDM、NIDDM、姙娠糖尿病、或與高血糖相關的其他形式之糖尿病和/或異常)之藥物。所述藥物包含一有效量之本發明多醣混合物，和一藥學上可接受的賦形劑。

依據某些實施方式，本發明多醣混合物的分子量至少2,500,000，且具有約30-50%(重量%)之β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣;較佳是，具有約40%(重量%)之β(1→3)和/或 β(1→6)葡聚醣。

一般來說，若以本發明藥物總重量當作100%，則本發明藥物至少包含約0.01-99.9%(重量%)的多醣混合物。在某些實施方式中，本發明藥物包含至少約0.1%(重量%)的多醣混合物；在其他實施方式中，本發明藥物包含至少約5%(重量%)的多醣混合物；；在其他實施方式中，本發明藥物包含至少約10%(重量%)的多醣混合物；或是在其他實施方式中，本發明藥物包含至少約25%(重量%)的多醣混合物。

依據本發明實施方式，本發明藥物包含1-1,000毫克的本發明多醣混合物，較佳是包含約10-800毫克的本發明多醣混合物；更佳是包含約50-600毫克之本發明多醣混合物。

依據某些實施方式，本發明藥物更包含一種已知可減輕或減緩高血糖症狀的降血糖劑。適合的降血糖劑實例包括，但不限於，GLP-1受體激動劑、DDP-4抑制劑、胰島素、胰島素類似物、雙胍、磺醯尿素、TZD、SGLT2 抑制劑和α-葡糖苷酶抑制劑。

適用於本發明藥物之GLP-1受體激動劑的實例包括，但不限於，利拉魯肽(liraglutide)，艾塞那肽(exenatide)、阿必魯肽(albiglutide)或LY2189265。

依據某些較佳實施方式，DDP-4抑制劑是利汀(gliptin)。利汀的實例包括，但不限於，西他利汀(sitagliptin)、維拉利汀(vildagliptin)、沙格利汀(saxagliptin)、利拉利汀(linagliptin)、吉格利汀(gemigliptin)、阿拉利汀(anagliptin)、特力利汀(teneligliptin)、阿格利汀(alogliptin)、曲格利汀(trelagliptin)、度格利汀(dutogliptin)、奧格利汀(omarigliptin)、黃連素(berberine)和羽扇醇(lupeol)。

適用於本發明藥物之胰島素類似物的實例包括，但不限於，甘精胰島素(glargine)、德谷胰島素(degludec)或地特胰島素(detemir)。

適用於本發明藥物之雙胍的實例包括，但不限於，二甲雙胍(metformin)、苯乙雙胍(phenformin)或丁二胍(burfomin)。

適用於本發明藥物之磺醯尿素的實例包括，但不限於，乙磺己脲(glibenclamide)、甲磺吡脲(gliclazide)、格列美脲(glimepiride)或格列吡嗪(glipizide)。

適用於本發明藥物之TZD的實例包括，但不限於，吡格列酮 (pioglitazone) 、羅格列酮(rosiglitazone) 、洛貝格列酮(lobeglitazone) 、環格列酮(ciglitazone) 、達格列酮(darglitazone) 、恩格列酮(englitazone) 、奈妥列酮(netoglitazone) 、利格列酮(rivoglitazone) 、或特羅列酮(troglitazone)。

適用於本發明藥物之SGLT2抑制劑的實例包括，但不限於，達格列淨(dapagliflozin)、恩格列淨(empagliflozin)、卡格列淨(canagliflozin)、依格列淨(Ipragliflozin)、托格列淨(tofogliflozin)、血凝素乙酸鈣(sergliflozin etabonate)、依碳酸瑞格列淨(remogliflozin etabonat)或埃格列淨(ertugliflozin)。

適用於本發明藥物之α-葡糖苷酶抑制劑的實例包括，但不限於，阿卡波糖(acarbose)、米格列糖(miglitose) 或伏利波糖(voglibose)。

依據一較佳實施方式，本發明多醣混合物是與二甲雙胍(metformin)同時被施用至需要治療的個體身上。

藥學上可接受的賦形劑乃是指與配方中其他成分相容且可被生物體接受的成分。

視所欲施用的途徑，可將本發明多醣混合物與適當類型的賦形劑混合，並配方成適合口服、靜脈注射、皮下注射、動脈內注射、腹膜內注射、病兆內注射、顱內注射、穿黏膜(經由吸入、頰內或鼻腔內)、肌肉內注射、眼內、表皮或適合灌注的藥學配方，例如粉末、軟膏、液體、氣霧等。

本發明藥物的使用劑量可由照護醫師依據患者的身體和生理因素決定出適合的劑量，這些因素包括，但不限於，年齡、性別、體重、所欲治療的疾病嚴重程度、病史、是否並用其他治療藥劑和用藥途徑等。依據非限制的實施方式，本發明藥物每次施用的劑量是每公斤體重約1-1,000毫克，例如約1、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、 110、120、125、130、140、150、160、170、175、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、375、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1,000 毫克的量被投予至亟需治療的個體身上；較佳是，本發明藥物是以每天每公斤體重約10-800毫克的量被投予至亟需治療的個體身上，例如每天約10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、 110、120、125、130、140、150、160、170、175、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、375、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800 毫克的量被投予至亟需治療的個體身上；更佳是，是以每天每公斤體重約50-600毫克的量被投予至亟需治療的個體身上，例如每天約50、60、70、80、90、100、 110、120、125、130、140、150、160、170、175、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、375、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600毫克的量被投予至亟需治療的個體身上。

包含本發明多醣混合物之藥物可被配方成適合口服的劑型，例如可以是藥錠(tablet)、喉片、水性或油性懸浮液、分散式粉末或顆粒、乳化液、硬式或軟式膠囊、糖漿等。可利用常規技術將本發明多醣混合物與一或多種選自、甜味劑、風味劑、著色劑和防腐劑等的賦形劑組合後來製造本發明藥物。適合用來製造口服藥錠的無毒賦形劑實例包括惰性稀釋劑(如，碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉)、造粒和崩散劑(如，玉米澱粉或藻酸)、黏著劑(例如，澱粉、明膠或阿拉伯膠)和潤滑劑(如，硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉等)。

藥錠外還可多加可延緩崩解及促進腸道吸收的塗層，因而可達成長效作用。舉例來說，可使用單硬脂酸甘油酯或雙硬脂酸甘油酯之類可延緩崩解的塗層材料，或是做成具有控制釋放的藥錠。

也可將本發明多醣混合物與惰性固體稀釋物(如，碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或高嶺土)混合而將藥物製成適合口服的硬式膠囊；或是與水溶性溶劑(如，丙二醇、PEG或乙醇)或油性溶劑(如，花生油、液體石蠟或橄欖油)混合而製成軟式膠囊。

或者，可將本發明藥物製成油在水中的乳化劑型，油相可以是植物油(如，橄欖油、花生油)或礦物油(如，液體石蠟)。適當的乳化劑可以是天然的磷脂類，例如黃豆、卵磷脂、衍生自脂肪酸與脫水糖醇的酯類或部分酯類(如，單油酸山梨糖酯)和該部分酯類與環氧乙烷的縮和產物(如，聚氧乙烯單油酸山梨糖酯)。所製成的乳化劑型中也可包含甜味劑和風味劑。也可本發明多醣混合物與甜味劑(如，甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖)一起配方製成糖漿式藥物。這類配方中也可包括防腐劑、風味劑和著色劑。

此外，也可將本發明多醣混合物製注射用之無菌的水性或油性懸浮液。可依據習知方式將活性成分與分散劑、濕潤劑或懸浮劑懸浮在無毒之藥學上可接受的溶劑或載體(如，水或1,3-二丁醇)而製成注射用懸浮液。適合的藥學上可接受的溶劑或載體實例包括，但不限於，水、林格溶液和等張氯化鈉溶液。也可使用諸如乙醇、丙二醇或聚乙二醇之類的共溶劑。

下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，惟不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。

實施例

材料與方法

浸沒式 培養靈芝

依照適當比例將下列組成溶解在水中，而製備出靈芝培養基，其中每公升培養基含有約60克的葡萄糖、15克的蔗糖、3克的蛋白胨、18克的酵母菌抽出物、和0.6克的磷酸二氫鉀(且pH ＜4.5)。

將3公斤的靈芝菌絲加到指定量之上述已滅菌的培養基中，以固定的攪拌速率(100-150+ 10 rpm)攪拌並培育，其中溫度維持在28+ 1℃，且壓力為0.6+ 0.05公斤/平方公分。

多醣含量分析

在室溫下將多醣混合物分散在氫氧化鈉(0.5M)中，直到完全溶解為止。接著，以苯酚-硫酸法來測定其中的多醣量，並以葡萄糖當作標準物。

多醣組成分析

真空下，將本發明多醣混合物(1-5毫克)與1毫升無水氯化氫(2M)和無水甲醇混合後密封在管中，並在80℃下反應12小時。接著，將反應試劑揮發，進一步在100℃下以三氟醋酸(TFA, 2M)分析所產生的甲基糖苷約1.5小時。真空移除TFA後，以配備脈衝式安培偵測器的高效能離子交換色層層析(HPAEC-PAD)來分析水解後的糖成分。

細胞

本發明所用細胞株為胰島貝塔細胞株NIT-1 (Belgian Ceramic Research Center, BCRC)。將NIT-1細胞培養在Ham’s F12K培養基中，其中包含2mM L-穀胺酸、碳酸氫鈉(1.5克/公升)、熱失活胎牛血清(10%)、盤尼西林G (100單位/毫升)、鏈黴素(100單位/毫升)，及1%非必要胺基酸(NEAA)，pH7.4，並維持在37℃、5%CO₂ /95%空氣的環境下。

動物

本發明實驗使用Balb/c小鼠(7周大，每隻體重約20-25克)(購自國家動物中心，台北台灣)，其係養在無病菌、控溫(20-24℃)、控濕(50-80%)及12小時光照/12小時黑暗的動物設施中，並可自由取用食物及飲水。相關動物實驗均在符合AAALAC-規範的動物設施(Eurofins Panlabs Taiwan, Ltd)中，依照第8版實驗動物照護和使用準則(“Guide for the care and use of laboratory animals: Eighth Edition, National Academies Press, Washington, D.C., 2011)規範的流程進行。 【00100】以 STZ 誘發細胞凋亡及其治療 【00101】 以每個培養孔約1x10⁵ 細胞的密度，將NIT-1細胞種植在96-孔培養盤中，並培育隔夜。第二天，在培養基中添加鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)(8μM)和本發明之多醣混合物(本文中以「FPA」代替，100μg/mL)後，繼續培育24小時，接著以MTT分析來決定細胞存活率。 【00102】MTT 分析 【00103】 MTT分析是一種比色分析，其可量測酵素（即，還原酶）在活細胞內將黃色的四唑化合物—溴化3-(4,5-二甲噻唑)-2,5-二苯四銼（3-[4,5-dimethylthiazol]-2,5-diphenyltetrazolium bromide，簡稱MTT）還原成甲䐶（formazane）的活性。只有在細胞存活時，才能進行這種還原作用；因此通常會利用MTT分析來評估細胞存活的能力。簡言之，使細胞和試驗化合物(如，STZ或FPA)接觸一段時間後加入MTT染料(500 μg/ml)，並讓還原反應進行3小時；而後加入500 μl的異丙醇以終止還原反應。利用分光光度計測量樣本在570 nm之波長下的吸光度。 【00104】以 STZ 誘發產生糖尿病及其治療 【00105】 先對野生型balb/c小鼠(7週大)餵食本發明多醣混合物(600毫克/公斤/天)9天，之後再分別對其腹膜注射兩劑鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)以誘發產生糖尿病，第10天注射第一劑，劑量為每公斤體重150毫克，第17天注射第二劑，劑量為每公斤體重200毫克)。第18天時，再由尾靜脈注射螢光標誌物(Annexcin-Vivo^TM 750, Perkin Elmer)(100 μl/小鼠)，接著用FMT 4000來觀察活體中的螢光影像。之後，將動物犧牲後取出胰臟組織並以蘇木素與伊紅素(H&E)進行染色。 【00106】 控制組動物則是給予蒸餾水，而非本發明多醣混合物，作為治療，並分別在第1及25天測量空腹血糖值。 【00107】H&E 染色 【00108】 H&E染色是用來顯示相較於控制組小鼠和以本發明多醣混合物治療的高血糖小鼠小鼠而言，未治療的高血糖小鼠其胰臟組織凋亡的程度。在實驗結束後收集相關動物的胰臟組織後再依據標準流程進行染色。 【00109】實施例 1 本發明多醣混合物的製備與分析 【00110】1.1 浸沒式 培育靈芝菌絲 【00111】 依據「材料與方法」段落中所述步驟，將靈芝依序培養在50、500和5000公升已滅菌的培養基內各3、3和12-14天。接著，將整個培育物滅菌後，離心移除菌絲，收集發酵液後濃縮，直到固含量為10%為止，再將之冷凍乾燥，可得約90公斤的多醣混合物粉末。 【00112】1.2 分析實施例 1.1 之多醣混合物 【00113】 依據「材料與方法」段落中所述步驟，分析實施例1.1之多醣混合物的多醣含量和組成。結果顯示實施例1.1之多醣混合物分子量至少為2,500,000，且具有約40%(重量%)之β(1→3)葡聚醣和 β(1→6)葡聚醣。 【00114】實施例 2 實施例 1.1 之多醣混合物對糖尿高血糖的效果 【00115】2.1 STZ 誘發 NIT-1 細胞凋亡 【00116】 NIT-1細胞乃是從會自發性產生貝塔細胞肉瘤之轉基因鼠的胰臟組織發展出來的胰臟細胞株，因其不會對生理範圍下的葡萄糖產生反應，故適合用來進行高血糖研究。先前研究顯示低劑量的STZ會造成貝塔細胞凋亡，因此，透過MTT分析來研究本發明實施例1之多醣混合物，是否對STZ誘發的NIT-1細胞凋亡具有保護效果。結果繪示於第1圖。 【00117】 如第1圖所示， STZ(8μM)處理會造成大部分(約60%)的NIT-1細胞死亡，但是，如果在STZ(8μM)處理前，先對NIT-1細胞投予本發明的多醣混合物(100μg/mL，簡稱FPA)，則可提高殘存的NIT-1細胞數目，顯示本發明的多醣混合物可保護NIT-1細胞對抗STZ誘發細胞凋亡現象。 【00118】2.2 STZ 誘發糖尿病鼠 【00119】 依據「材料與方法」段落中所述步驟，以STZ來誘發小鼠產生糖尿病，結果繪示於第2-4圖。 【00120】 依據第2圖的螢光數據顯示，STZ明顯會造成胰臟細胞死亡，且此STZ誘發的細胞凋亡會因為預先對動物施以本發明的多醣混合物(FPA，600毫克/公斤)而受到抑制。 【00121】 上述結果也可由實驗結束後，自實驗動物身上取下的4-6微米的胰臟組織切片獲得證實。以H&E對這些組織染色後可確認殘存的蘭氏島數量，在控制組和經過本發明多醣混合物處理的小鼠組織上，均可觀察到殘存的蘭氏島，但STZ處理的小鼠則沒有(數據未示出)。 【00122】 同樣的胰臟組織再經顯微鏡觀察，並計算殘存的蘭氏島數目，結果示於第3圖。如第3圖所示，經過STZ處理後，其蘭氏島數目大幅下降，但此一下降可被本發明多醣混合物抑制。 【00123】2.3 血糖值 【00124】 上述第3圖結果與先前第1、2圖結果一致，即本發明多醣混合物可抑制胰臟細胞凋亡。在本實施方式中，則是探討本發明多醣混合物對空腹血糖值的影響。 【00125】 簡言之，在測定血糖前，先讓小鼠空腹約16-18小時。實驗當天採集的血液樣本為時間0之血液樣本，之後讓每一隻實驗小鼠口服葡萄糖溶液(1克/公斤)，接著分別在第30分鐘與第150分鐘時採集血液樣本。結果繪示於第4圖。 【00126】 如預期，控制組小鼠的血糖值最低，STZ處理小鼠則表現出極高的血糖值，而本發明多醣混合物則可有效地降低STZ處理小鼠的血糖值，使其接近控制組動物的血糖值。 【00127】 雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。

為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下： 第1圖為依據本發明一實施方式所繪示之柱狀圖，顯示本發明多醣混合物對STZ處理後的NIT-1細胞存活率的影響； 第2圖為依據本發明一實施方式所繪示之柱狀圖，顯示本發明多醣混合物對以STZ誘發產生糖尿病之病鼠胰臟組織細胞凋亡的影響； 第3圖為依據本發明一實施方式所繪示之柱狀圖，顯示本發明多醣混合物對以STZ誘發產生糖尿病之病鼠蘭氏小島數目的影響；和 第4圖為依據本發明一實施方式所繪示之折線圖，顯示本發明多醣混合物對以STZ誘發產生糖尿病之病鼠空腹血糖值的影響。

Claims (10)

1. 一種多醣混合物的用途，其係可用於製備一種可預防和/或治療與高血糖相關疾病和/或異常之藥物，其中該多醣混合物之分子量至少500,000且具有約30-50%(重量%)之β(1→3)葡聚醣和 β(1→6)葡聚醣。
2. 如請求項1所述之用途，其中該多醣混合物是源自靈芝菌絲。
3. 如請求項1所述之用途，其中該與高血糖相關之疾病和/或異常為糖尿病。
4. 如請求項3所述之用途，其中該糖尿病為第I糖尿病、第II型糖尿病或姙娠糖尿病。
5. 如請求項1所述之用途，其中該藥物更包含一種降血糖藥。
6. 如請求項5所述之用途，其中該降血糖藥係選自由以下物質組成的群組中：GLP-1受體激動劑、DDP-4抑制劑、胰島素、胰島素類似物、雙胍、磺醯尿素、TZD、SGLT2 抑制劑和α-葡糖苷酶抑制劑。
7. 如請求項1所述之用途，其中該藥物適合經口、靜脈內、肌肉內、皮下、穿黏膜或直腸內施用。
8. 如請求項7所述之用途，其中該藥物是適合口服的藥錠、藥丸、顆粒、粉末、溶液、懸浮液、糖漿或膠囊。
9. 如請求項8所述之用途，其中該藥物的施用量是每天每公斤體重1-1,000毫克。
10. 如請求項9所述之用途，其中該藥物的施用量是每天每公斤體重10-800毫克。