TW201825079A - 奈米顆粒調配物及其製造及使用方法 - Google Patents

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威拉德 佛斯
維克特 派克弗
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美商亞伯辛生物科學有限責任公司
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Abstract

本發明提供包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。本發明亦提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。進一步提供其使用方法、醫藥組合物、醫藥及套組。

Description

奈米顆粒調配物及其製造及使用方法
本發明係關於包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。
已研發基於白蛋白之奈米顆粒組合物作為藥物遞送系統用於遞送疏水藥物(例如紫杉烷(taxane))。參見(例如)美國專利第5,916,596號、第6,506,405號、第6,749,868號、第6,537,579號、第7,820,788號及第7,923,536號。Abraxane®係一種白蛋白穩定之太平洋紫杉醇之奈米顆粒調配物，其於2005年在美國且隨後在各個其他國家批准用於治療轉移性乳癌。其最近亦在美國、歐洲及其他全球市場被批准用於治療局部晚期或轉移性非小細胞肺癌及轉移性胰臟癌。 以商標名Avastin®銷售之貝伐珠單抗(bevacizumab)係靶向血管內皮生長因子A (VEGF-A)且有效治療若干癌症之抗血管生成抗體。先前已試圖組合基於白蛋白之奈米顆粒組合物之治療潛能與抗體療法(參見(例如) 美國專利第9,427,477號、美國專利第9,446,148號及PCT申請案第WO 2014/055415號)。但仍需要有效奈米顆粒產生及較高品質之基於白蛋白之含有疏水藥物及免疫治療二者之奈米顆粒。 本文中提及之所有公開案、專利、專利申請案及已公開專利申請案之揭示內容的全文皆以引用方式併入本文中。
本文闡述奈米顆粒，其包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 偶聯至白蛋白之生物活性多肽。在一些實施例中，生物活性多肽係抗體或其片段。在一些實施例中，生物活性多肽偶聯(共價或非共價)至奈米顆粒之白蛋白。在一些實施例中，生物活性多肽包埋於奈米顆粒中。本文進一步闡述製造該等奈米顆粒組合物之方法。 在一態樣中，提供包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 偶聯至白蛋白之生物活性多肽。在一些實施例中，生物活性多肽與白蛋白共價交聯。在一些實施例中，生物活性多肽經由化學交聯劑與白蛋白共價交聯。在一些實施例中，生物活性多肽經由二硫鍵與白蛋白共價交聯。在一些實施例中，生物活性多肽經由非共價交聯劑偶聯至白蛋白。在一些實施例中，生物活性多肽包含非共價交聯劑之第一組分且白蛋白包含非共價交聯劑之第二組分，且其中第一組分特異性結合至第二組分。在一些實施例中，非共價交聯劑包含核酸分子，其中核酸分子之至少一部分互補。 在另一態樣中，提供包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 包含疏水藥物之固體核心，(b) 與奈米顆粒表面締合之白蛋白，及(c) 包埋於奈米顆粒表面或固體核心中之生物活性多肽。在一些實施例中，生物活性多肽包埋於奈米顆粒表面中。在一些實施例中，生物活性多肽包埋於固體核心中。 在上述奈米顆粒之一些實施例中，組合物中至少75%之生物活性多肽與奈米顆粒締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含至少約100種生物活性多肽。 在上述奈米顆粒之一些實施例中，生物活性多肽係抗體或其片段。在一些實施例中，生物活性多肽係貝伐珠單抗、曲妥珠單抗(trastuzumab)、BGB-A317或托珠單抗(tocilizumab)。 在上述奈米顆粒之一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中疏水藥物對生物活性多肽的重量比係約1:1至約100:1。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中白蛋白對生物活性多肽的重量比係約1:1至約1000:1。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中白蛋白對疏水藥物的重量比係約1:1至約20:1。在一些實施例中，疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(HPLC)測定，且生物活性多肽及白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定；或疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(HPLC)測定，白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定，且生物活性多肽之重量係藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定。 在上述奈米顆粒之一些實施例中，組合物進一步包含不與奈米顆粒締合之生物活性多肽。 在一些實施例中，組合物之奈米顆粒部分中至少約40%之白蛋白由二硫鍵交聯。 在一些實施例中，如藉由動態光散射量測之奈米顆粒之平均直徑不大於約200 nm。 在一些實施例中，組合物進一步包含不與奈米顆粒締合之白蛋白。 在一些實施例中，疏水藥物係紫杉烷或利莫司(limus)藥物。在一些實施例中，疏水藥物係太平洋紫杉醇。在一些實施例中，疏水藥物係雷帕黴素(rapamycin)。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：(i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白及生物活性多肽；及(ii)自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成組合物。在一些實施例中，生物活性多肽偶聯至水溶液中之白蛋白。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：(i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；(ii) 向乳液中添加生物活性多肽；及(iii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：(i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；(ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後懸浮液，及(iii) 向蒸發後懸浮液中添加生物活性多肽，藉此形成組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：(i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；(ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分而非全部，以獲得乳液-懸浮液中間體；(iii) 向乳液-懸浮液中間體中添加生物活性多肽；及(iv) 自包含生物活性多肽之乳液-懸浮液中間體移除一或多種有機溶劑之另一部分，藉此形成組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：(i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白經交聯劑部分衍化；(ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後懸浮液，及(iii) 向蒸發後懸浮液中添加生物活性多肽，其中生物活性多肽經交聯劑部分衍化，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含用非衍化白蛋白替代不與奈米顆粒締合之衍化白蛋白。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：(i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分偶聯至生物活性多肽；及(ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含用未偶聯之白蛋白替代不與奈米顆粒締合之生物活性多肽偶聯之白蛋白。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽，該方法包含使生物活性多肽偶聯至包含疏水藥物及白蛋白之奈米顆粒。 在上述方法之一些實施例中，該方法進一步包含無菌過濾該組合物。 在上述方法之一些實施例中，生物活性多肽係抗體或其片段。在一些實施例中，生物活性多肽係貝伐珠單抗、曲妥珠單抗、BGB-A317或托珠單抗。 本文進一步提供藉由上述方法中之任一者之方法獲得之組合物。 本文亦提供包含上述組合物中之任一者及醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組合物。 在另一態樣中，提供治療個體之疾病之方法，其包含向個體投與有效量之上述組合物中之任一者。在一些實施例中，癌症係癌症。在一些實施例中，個體係人類。 自後續詳細說明及隨附申請專利範圍將明瞭本發明之該等及其他態樣及優點。應理解，本文所述各實施例之性質中之一者、一些或全部可組合以形成本發明之其他實施例。
相關申請案交叉參考 本申請案主張於2016年10月10日提出申請之美國臨時專利申請案第62/406,367號之優先權，該案件之全部內容以引用方式併入本文中。 以ASCII文本檔案提交序列表 關於ASCII文本文件之下列提交內容之全部內容以引用方式併入本文中：電腦可讀形式(CRF)之序列表(文件名稱：638772021742SEQLIST.txt，記錄日期：2017年10月9日，大小：6 KB)。 本申請案提供包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽(例如抗體或其片段)。舉例而言，在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白或衍化白蛋白)，及(c) 生物活性多肽(例如抗體，例如治療性抗體)。在一些實施例中，組合物進一步包含另一治療劑。在一些實施例中，組合物進一步包含不與組合物之奈米顆粒部分締合之白蛋白及/或生物活性多肽。 在某些實施例中，生物活性多肽包埋於奈米顆粒中。包埋之生物活性多肽可包埋於奈米顆粒之表面白蛋白中，或可包埋於奈米顆粒之疏水核中。生物活性多肽可藉由在奈米顆粒之一或多個製造階段中包括生物活性多肽而非混合生物活性多肽與預形成之凍乾奈米顆粒組合物(即，混合物)而包埋於奈米顆粒中。如本文中更詳細地描述，在某些實施例中，奈米顆粒懸浮液(其中奈米顆粒含有白蛋白及疏水藥物)之製造包括i) 形成含有疏水藥物之有機溶劑及含有白蛋白之水溶液之乳液(例如，藉由高壓均質化)，及ii) 自乳液移除有機溶劑之至少一部分(例如，藉由蒸發)以形成奈米顆粒懸浮液。在某些實施例中，製造過程可進一步包括調配奈米顆粒懸浮液(例如，藉由添加白蛋白或水)及/或凍乾該懸浮液以形成奈米顆粒組合物。在一些實施例中，將生物活性多肽添加至一或多種奈米顆粒組合物前體中，例如在形成乳液之前添加至含有白蛋白之水溶液中，添加至所形成乳液(在移除有機溶劑之前或期間)中，或在移除有機溶劑後添加至懸浮液(即「蒸發後懸浮液」)中。 在某些實施例中，經由(例如)交聯劑使生物活性多肽偶聯至奈米顆粒，該交聯劑可為共價交聯劑或非共價交聯劑。交聯可將生物活性多肽之區段鏈接至白蛋白之區段，藉此使生物活性多肽與白蛋白締合(且因此，奈米顆粒)。在一些實施例中，交聯劑提供生物活性多肽與白蛋白之間之共價鏈接。亦即，交聯劑共價鏈接至生物活性多肽且共價鏈接至白蛋白，藉此在兩個實體之間提供共價橋。在某些態樣中，交聯劑提供生物活性多肽與白蛋白之間之非共價鏈接。舉例而言，白蛋白可共價偶聯至第一交聯劑組分且生物活性多肽可共價偶聯至第二交聯劑組分，其中第一交聯劑組分及第二交聯劑組分結合在一起(例如，互補核酸分子，例如互補DNA)。 本申請案進一步提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，該方法包含i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白及生物活性多肽；及ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法包含i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 向乳液中添加生物活性多肽；及iii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法包含i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後懸浮液，及iii) 向蒸發後懸浮液中添加生物活性多肽，藉此形成組合物。 在某些實施例中，在奈米顆粒製造過程期間包括於水溶液中之白蛋白之至少一部分偶聯至生物活性多肽。舉例而言，在一些實施例中，該方法包含i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分偶聯至生物活性多肽；及ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成組合物。 在某些實施例中，奈米顆粒製造過程期間包括於水溶液中之白蛋白之至少一部分經衍化(例如藉由白蛋白之硫醇化或使非共價交聯劑之第一區段共價附接至白蛋白)。在一些實施例中，該方法包含i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分經衍化；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後懸浮液；及iii) 向蒸發後懸浮液中添加生物活性多肽。在一些實施例中，生物活性多肽經衍化。舉例而言，在一些實施例中，該方法包含i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分經衍化；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後懸浮液；及iii) 向蒸發後懸浮液中添加衍化生物活性多肽。 在某些實施例中，藉由使生物活性多肽偶聯至預形成之奈米顆粒來製造奈米顆粒，該等預形成之奈米顆粒可經凍乾或於懸浮液(例如，重構懸浮液，其中奈米顆粒先前經凍乾，或於蒸發後奈米顆粒懸浮液中)中。 本文揭示之組合物(例如醫藥組合物)可用於治療各種疾病(例如癌症)。本申請案由此提供包含奈米顆粒之組合物(例如醫藥組合物)，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽，以及提供使用該等組合物治療疾病(包括癌症)之方法。本文進一步提供組合治療，其包含投與有效量之本文所述組合物及有效量之另一治療劑(例如化學治療劑)。亦提供供使用之套組、醫藥、藥劑、組合物、包含本文所述組合物之單位劑型、醫藥組合物(例如凍乾組合物)。 下文提供之章節標題僅用於闡釋性目的且並不意欲限制本發明之範疇。 定義 如本文所用之「治療」(「treatment」或「treating」)係用於獲得有益或期望結果(包括臨床結果)之方法。出於本發明之目的，有益或期望臨床結果包括(但不限於)以下中之一或多者：緩和由疾病導致之一或多種症狀、減輕疾病之程度、穩定疾病(例如預防或延遲疾病惡化)、預防或延遲疾病擴散(例如轉移)、預防或延遲疾病復發、延遲或延緩疾病進展、改善疾病狀態、提供疾病之緩解(部分或全部)、減少治療疾病所需之一或多種其他藥劑的劑量、延遲疾病進展、提高生活品質和/或延長生存。「治療」亦涵蓋疾病(例如癌症)之病理結果的減少。本發明方法涵蓋治療之該等態樣中之任一或多者。 術語「個體」係指哺乳動物且包括(但不限於)人類、牛、馬、貓、犬、齧齒類動物或靈長類動物。在一些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體係雄性。在一些實施例中，個體係雌性。 如本文所用術語「抗體」包括(但不限於)單株抗體、多株、嵌合抗體、CDR移植抗體、人類化抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二硫鍵鏈接之Fv、scFv、單一結構域抗體(dAb)、雙價抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體、抗個體遺傳型抗體、雙特異性抗體、其功能活性表位結合片段、雙功能雜合抗體、單鏈抗體及含有Fc之多肽(例如免疫黏附)。在一些實施例中，抗體可屬任何重鏈同型(例如，IgG、IgA、IgM、IgE或IgD)。在一些實施例中，抗體可屬任何輕鏈同型(例如，κ或γ)。抗體可為非人類(例如，來自小鼠、山羊或任何其他動物)、完全人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係衍化抗體。 如本文所用「處於風險之」個體係處於發生疾病(例如癌症)之風險之個體。「處於風險」之個體可具有或可不具有可檢測之疾病，且在本文所述治療方法之前可展示或可不展示可檢測之疾病。「處於風險」表示個體具有一或多個所謂風險因子，其係與疾病發生相關之本文所述可量測參數。具有該等風險因子中之一或多者之個體較無該(等)風險因子之個體發生疾病之機率高。 「輔助設定」係指其中個體具有病史且通常(但不必)對療法有反應之臨床設定，該療法包括(但不限於)手術(例如手術切除)、放射療法及/或化學療法。然而，由於其病史，該等個體被視為處於發生疾病之風險。「輔助設定」中之治療或投與係指隨後之治療模式。風險程度(例如，在輔助設定中之個體被視為「高風險」或「低風險」時)取決於若干因子，最通常係在首次治療時之疾病程度。 如本文所用之「生物活性多肽」係指包含兩個或更多個由肽(醯胺)鍵鏈接之胺基酸的分子，包含具有與配體或受體之結合相關之活性或與抑制結合配體或受體之另一試劑相關之活性的其部分。生物活性多肽包括(但不限於)寡肽、肽、多肽適配體、蛋白質、多聚體蛋白質、融合蛋白、抗體或其片段。在一些實施例中，生物活性多肽包含用於與白蛋白-疏水藥物奈米顆粒締合之部分。 「前導性設定」係指其中在初次/確定療法之前實施該方法之臨床設定。 如本文所用之「延遲」疾病發生意指推遲、妨礙、減緩、延緩、穩定及/或延期疾病發生。端視病史及/或所治療之個體而定，此延遲可具有不同時間長度。如熟習此項技術者所明瞭，足夠或顯著延遲實際上可涵蓋預防，其中個體不發生疾病。「延遲」疾病發生之方法係在與不使用該方法相比時，在給定時間框內降低疾病發生之機率及/或在給定時間框內減小疾病之程度的方法。該等比較通常係基於使用統計上顯著數目之個體之臨床研究。疾病發生可使用標準方法(包括但不限於電腦軸向斷層攝影(CAT掃描)、磁共振成像(MRI)、腹部超音波、凝血測試、動脈攝影術或生檢)檢測。發生亦可係指可能最初不可檢測之疾病進展且包括出現、復發及發作。 本文所用術語「有效量」係指足以治療指定病症、病況或疾病(例如改善、緩解、減輕及/或延遲其症狀中之一或多者)之化合物或組合物的量。在提及諸如癌症等疾病時，有效量包含足以引起腫瘤收縮及/或減小腫瘤之生長速率(例如抑制腫瘤生長)或預防或延遲癌症中之其他不期望細胞增殖的量。在一些實施例中，有效量係足以延遲癌症發生之量。在一些實施例中，有效量係足以預防或延遲復發之量。有效量可以一或多次投與來投與。在癌症之情形下，藥物或組合物之有效量可：(i) 減少上皮樣細胞數目；(ii) 減小腫瘤大小；(iii) 抑制、延緩、減緩至一定程度且較佳停止癌細胞浸潤至周邊器官中；(iv) 抑制(例如減緩至一定程度且較佳停止)腫瘤轉移；(v) 抑制腫瘤生長；(vi) 預防或延遲腫瘤發生及/或復發；及/或(vii) 將與癌症相關之症狀中之一或多者減輕至一定程度。 如本文所用之「組合療法」意指第一藥劑與另一治療劑結合投與。「與……結合」係指除另一治療方式外亦投與一種治療方式，例如向同一個體除投與另一治療劑外亦投與本文所述奈米顆粒組合物。因此，「與……結合」係指在向個體遞送另一治療方式之前、期間或之後投與一種治療方式。 如本文所用術語「同時投與」意指組合治療中之第一療法及第二療法投與以不超過約15分鐘(例如不超過約10分鐘、5分鐘或1分鐘中之任一者)之時間間隔投與。當第一及第二療法係同時投與時，第一及第二療法可包含於同一組合物中(例如，包含第一及第二療法二者之組合物)或包含於單獨組合物中(例如，第一療法包含於一種組合物中且第二療法包含於另一組合物中)。 如本文所用術語「依序投與」意指組合療法中之第一療法及第二療法係以超過約15分鐘(例如超過約20或更多分鐘、30或更多分鐘、40或更多分鐘、50或更多分鐘、60或更多分鐘、2或更多小時、4或更多小時、6或更多小時、12或更多小時或24或更多小時中之任一者)之時間間隔投與。第一療法或第二療法可首先投與。第一及第二療法包含於單獨組合物中，其可包含於相同或不同包裝或套組中。 如本文所用術語「並行投與」意指組合療法中第一療法之投與及第二療法之投與彼此重疊。 如本文所用術語「nab 」代表白蛋白結合之奈米顆粒。舉例而言，nab -太平洋紫杉醇係太平洋紫杉醇之白蛋白結合之奈米顆粒調配物。 如本文所用術語「乳液」係指具有連續水相中之分散有機相之液體，該分散有機相包含平均直徑為約1微米或更小之液滴。 術語「疏水藥物」係指於約25℃下於pH 7在水中具有約1 mg/mL或更小之溶解度的藥物。 應理解，本文所述之本發明之態樣及實施例包括「由態樣及實施例組成」及/或「基本上由其組成」。 本文中提及「約」一值或參數時包括(且闡述)針對該值或參數本身之變化。舉例而言，提及「約X」之說明包括「X」之說明。另外，在任何系列之數字之前使用「約」包括該系列中所述數字中之「約」任一者。舉例而言，提及「約X、Y或Z」之說明意欲闡述「約X、約Y或約Z」。 除非上下文另外明確規定，否則本文及隨附申請專利範圍中所用單數形式「一(a，an)」及「該」包括複數個指示物。 包含奈米顆粒之組合物 本文所述組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，本文所述組合物進一步包含不與奈米顆粒締合之白蛋白及/或生物活性多肽。在一些實施例中，本文所述組合物進一步包含另一治療劑。在一些實施例中，本文所述組合物進一步包含醫藥上可接受之載劑。 本文所述奈米顆粒包含疏水藥物。在一些實施例中，奈米顆粒包括包含疏水藥物之固體核心。如本文所用之「核」係指奈米顆粒之內部部分，與奈米顆粒締合之實質上所有疏水藥物皆位於其中。在一些實施例中，奈米顆粒包括包含疏水藥物之固體核心。在一些實施例中，奈米顆粒包含疏水藥物之固體核心。 在一些實施例中，奈米顆粒中之疏水藥物佔奈米顆粒之約50重量%、60重量%、70重量%、80重量%、90重量%、95重量%或99重量%以上。在一些實施例中，奈米顆粒具有非聚合基質。在一些實施例中，奈米顆粒包含實質上不含聚合材料(例如聚合基質)之疏水藥物之固體核心。 在一些實施例中，奈米顆粒中之疏水藥物之固體核心進一步包含生物活性多肽之一部分。在一些實施例中，奈米顆粒包括包含疏水藥物及一部分生物活性多肽之固體核心。 如本文所述，奈米顆粒包含白蛋白。本發明內涵蓋白蛋白，包括但不限於人類白蛋白、人類血清白蛋白、重組白蛋白及其衍生物。在一些實施例中，白蛋白係人類白蛋白。在一些實施例中，白蛋白係人類血清白蛋白。在一些實施例中，人類白蛋白係人類血清白蛋白。在一些實施例中，白蛋白係重組白蛋白。在一些實施例中，白蛋白係人類重組白蛋白。在一些實施例中，重組白蛋白係人類重組白蛋白。 白蛋白(例如人類血清白蛋白(HSA))高度可溶於球形蛋白中。舉例而言，人類血清白蛋白由585個胺基酸組成且具有約66 kDa之分子量。HSA係人類血漿中之最豐富蛋白且佔人類血漿之膠體滲透壓之70-80 %。HSA之胺基酸序列含有總共17個二硫橋、一個游離硫醇(Cys 34)及單一色胺酸(Trp 214)。HSA溶液之靜脈內使用已適用於預防及治療低血容量休克(例如，參見Tullis,JAMA ,237 , 355-360, 460-463 (1977)；Houser等人，Surgery ,Gynecology and Obstetrics ,150 , 811-816 (1980))及與交換轉輸結合用於治療新生高膽紅素血症(例如，參見Finlayson,Seminars in Thrombosis and Hemostasis ,6 , 85-120, (1980))。 白蛋白(例如人類血清白蛋白(HSA))具有多個疏水結合位點。HSA對於脂肪酸具有8個結合位點且結合一組不同疏水藥物，例如紫杉烷，包括中性及帶負電之疏水化合物(Goodman等人，The Pharmacological Basis of Therapeutics ，第9版，McGraw-Hill New York (1996))。已在HSA之亞結構域IIA及IIIA中提出兩個高親和力結合位點，其係在用作極性配體特徵之附接點之表面附近具有帶電離胺酸及精胺酸殘基之高度伸長疏水袋(例如，參見Fehske等人，Biochem. Pharmcol. ,30 , 687-92 (198a), Vorum,Dan. Med. Bull. ,46 , 379-99 (1999), Kragh-Hansen,Dan. Med. Bull. ,1441 , 131-40 (1990)，Curry等人，Nat. Struct. Biol. ,5 , 827-35 (1998)，Sugio等人，Protein. Eng. ,12 , 439-46 (1999)，He等人，Nature ,358 , 209-15 (199b)，及Carter等人，Adv. Protein. Chem .,45 , 153-203 (1994))。已顯示太平洋紫杉醇及丙泊酚(propofol)可結合HSA (例如，參見Paal等人，Eur. J. Biochem. ,268(7) , 2187-91 (200a)，Purcell等人，Biochim. Biophys. Acta ,1478(a) , 61-8 (2000)，Altmayer等人，Arzneimittelforschung ,45 , 1053-6 (1995)及Garrido等人，Rev. Esp. Anestestiol. Reanim. ,41 , 308-12 (1994))。另外，已顯示多西他賽(docetaxel)可結合人類血漿蛋白(例如，參見Urien等人，Invest. New Drugs ,14(b) , 147-51 (1996))。 涵蓋其他白蛋白，例如牛血清白蛋白。例如，在非人類哺乳動物(例如家畜(包括家養寵物及農業背景)中使用該等組合物之背景下，使用該等非人類白蛋白可為適當的。 本揭示內容之範疇內亦涵蓋衍化白蛋白。如本文所用之「衍化白蛋白」係在白蛋白表現後經修飾之白蛋白。在一些實施例中，衍化白蛋白係白蛋白與化學交聯劑偶聯。在一些實施例中，衍化白蛋白係白蛋白與對偶聯至生物活性多肽之另一化學交聯劑部分具有反應性(例如特異性反應性)的化學交聯劑部分偶聯。舉例而言，在一些實施例中，衍化白蛋白係與包含炔烴部分之化學交聯劑偶聯，且衍化生物活性多肽與包含疊氮化物部分之化學交聯劑偶聯。在一些實施例中，衍化白蛋白係與包含疊氮化物部分之化學交聯劑偶聯，且衍化生物活性多肽與包含炔烴部分之化學交聯劑偶聯。用於締合白蛋白及生物活性多肽之交聯部分之其他對包括(但不限於)變形炔烴及疊氮化物、變形炔烴及硝酮(例如1,3-硝酮)、變形烯烴及疊氮化物、變形烯烴及四嗪、及變形烯烴及四唑。在一些實施例中，(例如)藉由白蛋白之一或多種胺反應以形成硫氫基(例如，但使胺與2-亞胺基四氫噻吩(喬特試劑(Traut’s reagent))或其他硫醇化試劑反應)使衍化白蛋白硫醇化。在一些實施例中，衍化白蛋白係共價附接至非共價交聯劑之第一組分(例如核酸分子，例如DNA)，其中生物活性多肽可交聯至非共價交聯劑之第二組分，其可特異性結合至交聯劑之第一組分(例如，與交聯劑之第一組分之核酸鏈互補之核酸鏈)。在一些實施例中，衍化白蛋白係衍化人類白蛋白。在一些實施例中，衍化白蛋白係衍化人類血清白蛋白。在一些實施例中，衍化人類白蛋白係衍化人類血清白蛋白。在一些實施例中，衍化白蛋白係衍化重組白蛋白。在一些實施例中，衍化白蛋白係衍化人類重組白蛋白。在一些實施例中，衍化重組白蛋白係衍化人類重組白蛋白。 在一些實施例中，白蛋白具有可形成二硫鍵之硫氫基。在一些實施例中，白蛋白與另一白蛋白形成分子間二硫鍵。在一些實施例中，白蛋白與生物活性多肽形成分子間二硫鍵。在一些實施例中，組合物之奈米顆粒部分中至少約5% (包括例如至少約10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%)之白蛋白交聯(例如經由一或多個二硫鍵交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒部分，其中組合物之奈米顆粒部分中至少約40%、50%、60%、70%或80%之白蛋白藉由二硫鍵交聯。在一些實施例中，組合物之奈米顆粒部分中約40%、50%、60%、70%或80%之白蛋白藉由二硫鍵交聯。在一些實施例中，組合物之奈米顆粒部分中約40%至約80%、約40%至約70%或約50%至約80%之蛋白藉由二硫鍵交聯。 在某些實施例中，藉由將生物活性多肽附接至白蛋白上之硫醇基團(例如，Cys34)使奈米顆粒中之白蛋白偶聯至生物活性多肽。在一些實施例中，包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒較包含疏水藥物及白蛋白且無偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒具有較少游離硫醇。在一些實施例中，與包含疏水藥物及白蛋白且無偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒相比，包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒上的游離硫醇減少約5%或更多(例如約10%、15%、20%、25%、30%、40%、45%或50%或更多)。在一些實施例中，包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒較包含疏水藥物及生物活性多肽未偶聯至白蛋白之白蛋白的奈米顆粒具有較少游離表面硫醇。在一些實施例中，與包含疏水藥物及白蛋白且無偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒相比，包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒之表面上的游離硫醇減少約5%或更多(例如約10%、15%、20%、25%、30%、40%、45%或50%或更多)。在一些實施例中，包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒較包含疏水藥物及白蛋白且無偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒具有較少白蛋白單體(即，未偶聯至另一白蛋白、生物活性多肽或任何其他多肽之白蛋白)。在一些實施例中，和與包含疏水藥物及白蛋白且無偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒締合之白蛋白單體的量相比，與包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽之奈米顆粒締合之白蛋白單體的量減少約5%或更多(例如約10%、15%、20%、25%、30%、40%、45%或50%或更多)。 在一些實施例中，奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽，其中奈米顆粒上之生物活性多肽之生物活性部分保持暴露。舉例而言，在一些實施例中，生物活性多肽位於奈米顆粒上以容許生物活性多肽之一部分結合配體或受體。在一些實施例中，奈米顆粒包含具有治療活性之生物活性多肽。 在一些實施例中，組合物中至少約15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之生物活性多肽與奈米顆粒締合。在一些實施例中，組合物中約15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之生物活性多肽與奈米顆粒締合。在一些實施例中，組合物中約15%至約90%、約20%至約85%、約30%至約80%、約40%至約80%、約50%至約75%、約60%至約85%、約65%至約80%或約70%至約80%之生物活性多肽與奈米顆粒締合。 在一些實施例中，奈米顆粒包含至少約50、100、150、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150或1200種生物活性多肽。在一些實施例中，奈米顆粒包含約50、100、150、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150或1200種生物活性多肽。在一些實施例中，奈米顆粒包含約100至約900、約100至約500、約150至約700、約100至約800、約300至約600、約200至約900、約500至約1000、約500至約800、約600至約800種生物活性多肽。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，其中每個奈米顆粒之生物活性多肽之平均數係至少約50、100、150、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150或1200種生物活性多肽。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，其中每個奈米顆粒之生物活性多肽之平均數係約50、100、150、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150或1200種生物活性多肽。 組合物中之奈米顆粒中疏水藥物對生物活性多肽之重量比可經最佳化用於預期治療用途。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中疏水藥物對生物活性多肽之重量比介於約1:1與200:1之間(例如介於約1:1與約100:1、約1:1與約80:1、約1:1與約60:1、約1:1與約50:1、約2:1與約40:1、約4:1與約30:1或約6:1至約20:1之間)。在一些實施例中，疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(RP-HPLC)測定。在一些實施例中，生物活性多肽之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)或酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定。ELISA容許直接量測與奈米顆粒締合之生物活性多肽，且進一步容許區分功能生物活性多肽與功能(例如，變性)生物活性多肽。 可基於疏水藥物、白蛋白、生物活性多肽、另一治療劑或其組合之存在最佳化組合物中之奈米顆粒中白蛋白對疏水藥物之重量比。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中白蛋白對疏水藥物之重量比係約1:1至約50:1、約1:1至約20:1、約1:1至約18:1、約1:1至約15:1、約1:1至約12:1、約1:1至約10:1、約1:1至約9:1、約1:1至約8:1、約1:1至約7:1、約1:1至約6:1、約1:1至約5:1、約1:1至約4:1、約1:1至約3:1或約1:1至約2:1。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中白蛋白對疏水藥物之重量比小於約18:1、15:1或10:1。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中白蛋白對疏水藥物之重量比係約1:1至約18:1、約2:1至約15:1、約3:1至約13:1、約4:1至約12:1、約5:1至約10:1。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中白蛋白對疏水藥物之重量比係約1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14或1:15。在一些實施例中，白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定。在一些實施例中，疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(RP-HPLC)測定。 可基於疏水藥物、白蛋白、生物活性多肽、另一治療劑或其組合之存在最佳化組合物中之奈米顆粒中生物活性多肽對白蛋白之重量比。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中生物活性多肽對白蛋白之重量比係約1:1至約1:1000、約1:1至約1:800、約1:1至約1:600、約1:1至約1:500、約1:1至約1:400、約1:1至約1:300、約1:1至約1:250、約2:1至約1:200、約2:1至約1:150、約4:1至約1:100或約4:1至約1:50。在一些實施例中，白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定。在一些實施例中，生物活性多肽之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)或藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定。 在一些實施例中，組合物包含平均直徑不大於約1000奈米(nm)、例如不大於約900 nm、800 nm、700 nm、600 nm、500 nm、400 nm、300 nm、200 nm及100 nm中之任一者之奈米顆粒。在一些實施例中，奈米顆粒之平均直徑不大於約200 nm。在一些實施例中，奈米顆粒之平均直徑不大於約150 nm。在一些實施例中，奈米顆粒之平均直徑不大於約100 nm。在一些實施例中，奈米顆粒之平均直徑係約20 nm至約400 nm。在一些實施例中，奈米顆粒之平均直徑係約40 nm至約200 nm。在一些實施例中，奈米顆粒可無菌過濾。奈米顆粒之平均直徑可藉由動態光散射(DLS)量測。 在一些實施例中，本文所述組合物中之奈米顆粒的平均直徑不大於約200 nm，包括例如不大於約190 nm、180 nm、170 nm、160 nm、150 nm、140 nm、130 nm、120 nm、110 nm、100 nm、90 nm、80 nm、70 nm或60 nm中之任一者。在一些實施例中，組合物中至少約50% (例如至少約60%、70%、80%、90%、95%或99%中之任一者)之奈米顆粒的直徑不大於約200 nm，包括例如不大於約190 nm、180 nm、170 nm、160 nm、150 nm、140 nm、130 nm、120 nm、110 nm、100 nm、90 nm、80 nm、70 nm或60 nm中之任一者。在一些實施例中，組合物中至少約50% (例如60%、70%、80%、90%、95%或99%中之至少任一者)之奈米顆粒在約20 nm至約400 nm之範圍內，包括例如約20 nm至約200 nm、約40 nm至約200 nm、約30 nm至約180 nm以及約40 nm至約150、約50 nm至約120 nm及約60 nm至約100 nm中之任一者。 下文進一步詳述含有疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽之奈米顆粒之實例性實施例。該等奈米顆粒可包括包埋於奈米顆粒中(例如包埋於奈米顆粒之表面或核中)之生物活性多肽、或包括偶聯(例如，經由共價或非共價交聯劑)至奈米顆粒中之白蛋白之生物活性多肽的奈米顆粒。奈米顆粒上生物活性多肽與白蛋白之締合可為非共價或共價締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含與白蛋白締合之疏水藥物，其中生物活性多肽與白蛋白非共價締合。在一些實施例中，生物活性多肽包埋於奈米顆粒之表面中。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽與白蛋白非共價締合。在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，白蛋白係衍化白蛋白，其中白蛋白係經非共價結合至生物活性多肽之部分衍化。在一些實施例中，生物活性多肽包含非共價結合至白蛋白之部分。在一些實施例中，生物活性多肽包含非共價結合至衍化白蛋白之部分。針對奈米顆粒之上述特徵可適於下述具體實施例，如熟習此項技術者鑒於本發明所理解。具有包埋之生物活性多肽之奈米顆粒 本發明之範疇內涵蓋包含疏水藥物之奈米顆粒，其中疏水藥物與白蛋白締合(例如經其吸附或塗佈)或其中疏水藥物與白蛋白及生物活性多肽(例如抗體或其片段)締合(例如經其吸附或塗佈)。在某些實施例中，生物活性多肽包括於一或多種奈米顆粒前體中，如下文進一步詳細論述。在製造過程期間，生物活性多肽之至少一部分與奈米顆粒締合，使得生物活性多肽包埋於奈米顆粒之表面或奈米顆粒之疏水核中。 舉例而言，在一些實施例中，奈米顆粒包含與白蛋白締合之疏水藥物。在一些實施例中，奈米顆粒包含與白蛋白締合之疏水藥物之固體核心。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心。在一些實施例中，奈米顆粒包含實質上經白蛋白塗佈之疏水藥物。在一些實施例中，奈米顆粒包含實質上經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心。在一些實施例中，奈米顆粒包經白蛋白塗佈之含疏水藥物及生物活性多肽。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物及生物活性多肽之固體核心。在一些實施例中，奈米顆粒包含疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽與疏水藥物之固體核心之表面締合，且其中疏水藥物之固體核心經白蛋白塗佈。在一些實施例中，奈米顆粒包含疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽之一部分包埋於疏水藥物之固體核心中，且其中疏水藥物之固體核心經白蛋白塗佈。 在一些實施例中，與奈米顆粒締合之約1%或更多(例如約2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%或25%或更多)之生物活性多肽包埋於奈米顆粒之固體核心中。在一些實施例中，約25%或更少(例如約20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%或更少)之生物活性多肽包埋於奈米顆粒之固體核心中。在一些實施例中，介於約1%與約25%之間(例如介於約1%與約2%、約2%與約3%、約3%與約4%、約4%與約5%、約5%與約10%之間、約10%與約15%之間、約15%與約20%之間或約20%與約25%之間)之生物活性多肽包埋於奈米顆粒之固體核心中。 在一些實施例中，奈米顆粒包含與白蛋白締合之疏水藥物，其中生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白締合。如本文所述，生物活性多肽與白蛋白之間之接觸(例如締合)可(例如)在奈米顆粒之外部白蛋白表面、奈米顆粒之白蛋白塗層內、奈米顆粒之內部白蛋白表面(例如疏水藥物之固體核心與白蛋白之塗層之間之界面)或其組合。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物，其中生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白締合。 在一些實施例中，生物活性多肽與疏水藥物及白蛋白締合。因此，例如，在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽之至少一部分與疏水藥物之固體核心締合，且其中生物活性多肽之至少一部分與白蛋白締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽之至少一部分包埋於疏水藥物之固體核心中，且其中生物活性多肽之至少一部分與白蛋白締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽之至少一部分部分包埋於疏水藥物之固體核心中且與白蛋白部分締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心，其中至少一種生物活性多肽之疏水部分包埋於疏水藥物之固體核心中，且其中相同生物活性多肽之第二部分與白蛋白締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽之疏水部分包埋於疏水藥物之固體核心中，且其中相同生物活性多肽之親水部分與白蛋白締合。具有偶聯生物活性多肽之奈米顆粒 在某些實施例中，生物活性多肽(例如抗體或其片段)偶聯至奈米顆粒(例如，奈米顆粒之白蛋白組分)。在一些實施例中，生物活性多肽與白蛋白之締合係直接締合(例如生物活性多肽直接結合至白蛋白)。舉例而言，在某些實施例中，生物活性多肽經由(例如)形成二硫鍵直接結合白蛋白。在一些實施例中，偶聯經由交聯劑發生，該交聯劑可共價鍵結至生物活性多肽及白蛋白。在一些實施例中，生物活性多肽與白蛋白之締合係共價締合(例如使用化學連接體以偶聯生物活性多肽及白蛋白)。在某些實施例中，交聯劑包括共價結合至白蛋白之第一組分及共價結合至多肽之第二組分，且第一組分及第二組分經由非共價相互作用特異性結合。 在一些實施例中，奈米顆粒包含與白蛋白締合之疏水藥物，其中生物活性多肽與白蛋白共價締合(即，生物活性多肽偶聯至白蛋白)。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心，其中生物活性多肽與白蛋白共價締合。在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白共價締合。 在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白經由直接共價結合而締合。舉例而言，在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白經由在生物活性多肽與白蛋白之間形成二硫鍵而締合。在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白經由白蛋白上之游離硫醇(例如Cys34)而締合。在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白經由在生物活性多肽與白蛋白上之游離硫醇(例如Cys34)之間形成二硫鍵而締合。在一些實施例中，生物活性多肽包含游離硫醇(例如游離半胱胺酸)，其共價結合(經由二硫鍵)至游離硫醇(例如白蛋白上之游離半胱胺酸(例如，Cys34))。在一些實施例中，白蛋白係衍化白蛋白，且白蛋白上之硫醇經衍化(例如，經由使用諸如2-亞胺基四氫噻吩等硫醇化試劑衍生自胺)。 在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白經由化學交聯劑(例如非零長度交聯劑或任何適宜長度之交聯劑)而締合。在一些實施例中，交聯劑係單功能交聯劑。在一些實施例中，交聯劑係雙功能交聯劑。在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之超過一種白蛋白經由超過一種化學交聯劑而締合。業內已知經由複合物至與蛋白質(例如聚醣)締合之胺基酸殘基或其他官能基之共價附接或形成適於兩種或更多種蛋白質之締合(例如共價偶聯或形成複合物)的交聯劑。舉例而言，在一些實施例中，交聯劑可附接至白蛋白上之游離硫醇(例如Cys34或衍化硫醇)，其中交聯劑之另一末端可用於結合至生物活性多肽。在一些實施例中，交聯劑可附接至白蛋白上之游離硫醇，其中交聯劑之另一末端結合至生物活性多肽。在一些實施例中，交聯劑可附接至白蛋白上之游離硫醇(例如Cys34)，其中交聯劑之另一末端可用於結合或結合至附接至生物活性多肽之交聯劑。在一些實施例中，交聯劑可附接至白蛋白上之游離胺(例如離胺酸殘基)。在一些實施例中，交聯劑可附接至白蛋白上之游離離胺酸，其中交聯劑之另一末端結合至生物活性多肽。在一些實施例中，交聯劑可附接至白蛋白上之游離離胺酸，其中交聯劑之另一末端可用於結合至附接至生物活性多肽之交聯劑。在一些實施例中，交聯劑可附接至白蛋白上之游離離胺酸，其中交聯劑之另一末端可用於結合或結合至附接至生物活性多肽之交聯劑。 在一些實施例中，交聯劑包含馬來醯亞胺官能基(例如馬來醯亞胺基丙酸(MPA)或γ-馬來醯亞胺-丁醛醯胺(GMBA))。在一些實施例中，交聯劑包含琥珀醯亞胺基酯基團，例如N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酯。在一些實施例中，交聯劑之長度係由聚合物(例如聚乙二醇(PEG)，其橋接交聯劑之化學反應性基團)決定。舉例而言，在一些實施例中，交聯劑係NHS-(聚乙二醇)n -馬來醯亞胺(SM(PEG)n )，其中n 係2或更大。舉例而言，在一些實施例中，交聯劑係(SM(PEG)2 )、(SM(PEG)4 )、(SM(PEG)6 )、(SM(PEG)8 )、(SM(PEG)12 )或(SM(PEG)24 )。在一些實施例中，交聯劑係4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺基酯(SMCC)。 在一些實施例中，交聯劑包含硼部分，例如硼酸酯(其可衍生自酸)。酸可與碳水化合物(例如醣基化生物活性蛋白(例如醣基化抗體)上之聚醣)反應以形成硼酸酯。在一些實施例中，交聯劑包含酸及N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酯。在一些實施例中，交聯劑包含鏈接酸及NHS酯之化學橋，其中該橋決定交聯劑之長度。實例性交聯劑可藉由例如在DMF中組合4-(2-羧基乙基)苯酸、N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)及N,N-二環己基碳二亞胺以形成活化酯交聯劑來形成。NHS部分可與白蛋白反應，且酸部分可與生物活性多肽上之聚醣反應。 在一些實施例中，交聯劑係點擊化學(例如，無銅點擊化學)交聯劑。舉例而言，在一些實施例中，交聯劑包含三唑部分，其可藉由經由應變促進之炔烴疊氮化物環加成反應使環辛烯衍生物部分(例如二苯并環辛炔(DBCO)部分)與疊氮化物反應來形成。白蛋白或抗體可藉由(例如)與橋接至環辛烯衍生物部分之NHS(例如，DBCO-PEGn -NHS，其中n係2或更大)反應共價鏈接至環辛烯衍生物部分，且其他交聯實體(即，白蛋白或抗體)可經疊氮化物官能化。 在一些實施例中，交聯劑包含共價附接至白蛋白之第一組分及共價附接至生物活性多肽之第二組分，其中第一組分及第二組分彼此特異性結合。舉例而言，第一組分或第二組分可為單鏈多核苷酸(例如DNA)或合成聚合物(例如嗎啉基)。在一些實施例中，交聯劑包含兩個實質上互補之單鏈多核苷酸鏈，其中一個單鏈多核苷酸偶聯至生物活性多肽且另一單鏈多核苷酸偶聯至白蛋白。舉例而言，在一些實施例中，第一組分或第二組分包括包含複數個「CA」重複之單鏈DNA (例如SEQ ID NO: 1 (5’-CACACACACACACACACACA-3’)之分子)，且其他組分(即，第一組分或第二組分)包括包含複數個「GT」重複之單鏈DNA分子(例如SEQ ID NO: 2 (5’-GTGTGTGTGTGTGTG-3’)之DNA分子)。一旦合併白蛋白與生物活性多肽，則DNA鏈特異性結合，藉此將白蛋白偶聯至生物活性多肽。 在偶聯至白蛋白及生物活性多肽時之交聯劑長度可為任何適宜長度。在一些實施例中，交聯劑之長度對已偶聯之兩種初始單獨交聯劑作出解釋，例如附接至白蛋白之交聯劑經由(例如)點擊化學或互補DNA鹼基配對與附接至生物活性多肽之交聯劑締合或偶聯。在一些實施例中，交聯劑之長度係約200埃或更小，例如約175埃、150埃、125埃、100埃、90埃、80埃、70埃、60埃、50埃、40埃、30埃、20埃或10埃或更小中之任一者。在一些實施例中，交聯劑之長度係約10埃或更大，例如約20埃、30埃、40埃、50埃、60埃、70埃、80埃、90埃、100埃、125埃、150埃、175埃、200埃或更大中之任一者。在一些實施例中，交聯劑之長度係約8.3埃、約17.6埃、約24.6埃、約32.5埃、約39.2埃、約53.4埃或約95.2埃。 在上述實施例中之一些中，奈米顆粒上之白蛋白係衍化白蛋白(例如經化學交聯劑衍化之白蛋白)。在一些實施例中，奈米顆粒上之衍化白蛋白之量係奈米顆粒之總白蛋白之小於約50%、25%、20%、15%、10%或5%。在一些實施例中，奈米顆粒上之衍化白蛋白之量係奈米顆粒之總白蛋白之小於約5%、4%、3%、2%或1%。在一些實施例中，奈米顆粒上之衍化白蛋白之量係奈米顆粒上之總白蛋白之約25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。在一些實施例中，奈米顆粒上之衍化白蛋白之量係奈米顆粒上之總白蛋白之約1%至約3%、約1%至約5%、約1%至約7%、約1%至約10%、約3%至約7%、約3%至約10%、或約5%至約15%。 在一些實施例中，生物活性多肽與一或多種交聯劑偶聯。在一些實施例中，生物活性多肽與1至20種交聯劑、例如1至10、1至5、1至4、1至3、2至5、3至5及2至4種中之任一者之交聯劑偶聯。在一些實施例中，生物活性多肽與小於10種交聯劑、例如小於9、8、7、6、5、4、3及2種中之任一者之交聯劑偶聯。 在一些實施例中，奈米顆粒組合物中每生物活性多肽之交聯劑之平均數係約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種交聯劑。在一些實施例中，奈米顆粒組合物中每生物活性多肽之交聯劑之平均數係約1至10種交聯劑、例如1至5、1至4、1至3、2至5、3至5及2至4種中之任一者之交聯劑。在一些實施例中，奈米顆粒組合物中每生物活性多肽之交聯劑之平均數係小於約10種交聯劑、例如小於約9、8、7、6、5、4、3及2種中之任一者之交聯劑。 在一些實施例中，生物活性多肽偶聯至一或多種白蛋白。在一些實施例中，生物活性多肽偶聯至1至10種白蛋白、例如1至3、1至4、1至5、1至6、2至4及2至5種中之任一者之白蛋白。在一些實施例中，生物活性多肽與小於10種白蛋白、例如小於9、8、7、6、5、4、3及2種中之任一者之白蛋白偶聯。 在一些實施例中，奈米顆粒組合物中每生物活性多肽之偶聯白蛋白之平均數係約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，奈米顆粒組合物中每生物活性多肽之偶聯白蛋白之平均數係約1至10、例如1至5、1至4、1至3、2至5、3至5及2至4中之任一者。在一些實施例中，奈米顆粒組合物中每生物活性多肽之偶聯白蛋白之平均數小於約10、例如小於約9、8、7、6、5、4、3及2中之任一者。奈米顆粒組合物 預期在本文中，包含奈米顆粒之組合物可包含本文所述奈米顆粒之任一組合。此外，在一些實施例中，奈米顆粒可包含本文所述特徵之任一組合。 如本文所述，在一些實施例中，組合物在組合物之奈米顆粒及非奈米顆粒部分中包含白蛋白。在一些實施例中，本文所述組合物進一步包含不與組合物中之奈米顆粒締合之白蛋白。本文所述組合物中之白蛋白之量將端視組合物中之其他組分(例如疏水藥物或生物活性多肽)而變。在一些實施例中，組合物所包含白蛋白之量足以在水性懸浮液中穩定疏水藥物，例如呈穩定膠體懸浮液(例如奈米顆粒之穩定懸浮液)形式。在一些實施例中，白蛋白呈降低疏水藥物於水性介質中之沉降速率之量。對於含有顆粒之組合物而言，白蛋白之量亦取決於奈米顆粒之大小及密度。在一些實施例中，組合物中至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%之白蛋白係在組合物之非奈米顆粒部分中。 若疏水藥物在水性介質中保持懸浮延長時間段(例如至少約0.1小時、0.2小時、0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、24小時、36小時、48小時、60小時或72小時中之任一者) (例如無可見沈澱或沉降)，則疏水藥物在水性懸浮液中「穩定」。懸浮液通常(但不必)適於投與個體(例如人類)。懸浮液之穩定性通常(但不必)係於儲存溫度(例如室溫(例如20℃至25℃)或冷藏條件(例如4℃))下評估。舉例而言，在製備懸浮液後約15分鐘，若懸浮液不展現肉眼可見或在400倍放大之光學顯微鏡下觀察時可見之絮凝或顆粒附聚，則懸浮液於儲存溫度下穩定。穩定性亦可在加速測試條件下、例如在40℃或高於約40℃之溫度下評估。 組合物之非奈米顆粒部分中白蛋白之使用可避免使用用於增溶疏水藥物及/或奈米顆粒之毒性溶劑(或表面活性劑)，且藉此可減少向個體(例如人類)中投與疏水藥物之一或多種副作用。因此，在一些實施例中，本文所述組合物實質上不含(例如不含)表面活性劑，例如克列莫佛(Cremophor) (包括克列莫佛EL® (BASF))。在一些實施例中，組合物實質上不含(例如不含)表面活性劑(例如聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)。若組合物中克列莫佛或表面活性劑之量小於約0.02%，則組合物「實質上不含克列莫佛」或「實質上不含表面活性劑」。「實質上不含克列莫佛」或「實質上不含表面活性劑」係指具有小於約0.01%克列莫佛或表面活性劑。在一些實施例中，組合物具有小於約0.005%、小於約0.0001%、小於約0.00005%或小於約0.00001%之克列莫佛或表面活性劑。 在一些實施例中，白蛋白係以足以使疏水藥物在水性懸浮液中以某一濃度穩定之量存於組合物中。舉例而言，組合物中疏水藥物之濃度係約0.1 mg/ml至約100 mg/ml，包括例如約0.1 mg/ml至約50 mg/ml、約0.1 mg/ml至約20 mg/ml、約1 mg/ml至約10 mg/ml、約2 mg/ml至約8 mg/ml、約4 mg/ml至約6 mg/ml、約5 mg/ml中之任一者。在一些實施例中，疏水藥物之濃度係至少約1.3 mg/ml、1.5 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml、5 mg/ml、6 mg/ml、7 mg/ml、8 mg/ml、9 mg/ml、10 mg/ml、15 mg/ml、20 mg/ml、25 mg/ml、30 mg/ml、40 mg/ml及50 mg/ml中之任一者。在一些實施例中，白蛋白係以避免使用表面活性劑(例如克列莫佛、聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)之量存在，以使組合物不含或實質上不含表面活性劑(例如克列莫佛、聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)。 在一些實施例中，組合物實質上不含(或不含)磷酸鈉。如本文所用之「實質上不含磷酸鈉」係指具有小於約0.1 mg/mL之磷酸鈉。在一些實施例中，組合物具有小於約0.05 mg/mL、小於約0.01 mg/mL、小於約0.005 mg/mL、小於約0.001 mg/mL或小於約0.0001 mg/mL之磷酸鈉。在一些實施例中，組合物包含磷酸鈉。 在一些實施例中，組合物實質上不含(或不含)海藻糖。如本文所用之「實質上不含海藻糖」係指具有小於約1 mg/mL之海藻糖。在一些實施例中，組合物具有小於約0.5 mg/mL、小於約0.1 mg/mL、小於約0.05 mg/mL、小於約0.01 mg/mL或小於約0.001 mg/mL之海藻糖。在一些實施例中，組合物包含海藻糖。 在一些實施例中，呈液體形式之奈米顆粒組合物包含約0.1%至約50% (w/v) (例如約0.5% (w/v)、約5% (w/v)、約10% (w/v)、約15% (w/v)、約20% (w/v)、約30% (w/v)、約40% (w/v)或約50% (w/v))之白蛋白。在一些實施例中，呈液體形式之奈米顆粒組合物包含約0.5%至約10% (w/v)之白蛋白。 在一些實施例中，組合物在組合物之奈米顆粒及非奈米顆粒部分中包含疏水藥物。在一些實施例中，組合物中不大於1%、2%、3%、4%、5%、10%或20%之疏水藥物係在組合物之非奈米顆粒部分中。在一些實施例中，組合物中至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%之疏水藥物係在組合物之奈米顆粒部分中。 在一些實施例中，組合物在組合物之奈米顆粒及非奈米顆粒部分中包含生物活性多肽。在一些實施例中，組合物進一步包含不與奈米顆粒締合之生物活性多肽。在一些實施例中，組合物中不大於1%、2%、3%、4%、5%、10%或20%之生物活性多肽係在組合物之非奈米顆粒部分中。在一些實施例中，組合物中至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%之生物活性多肽係在組合物之奈米顆粒部分中。 可基於疏水藥物、白蛋白、生物活性多肽、另一治療劑或其組合之存在最佳化組合物中白蛋白對疏水藥物之重量比。在一些實施例中，組合物中白蛋白對疏水藥物之重量比係約1:1至約50:1、約1:1至約20:1、約1:1至約18:1、約1:1至約15:1、約1:1至約12:1、約1:1至約10:1、約1:1至約9:1、約1:1至約8:1、約1:1至約7:1、約1:1至約6:1、約1:1至約5:1、約1:1至約4:1、約1:1至約3:1或約1:1至約2:1。在一些實施例中，組合物中白蛋白對疏水藥物之重量比小於約18:1、15:1或10:1。在一些實施例中，組合物中白蛋白對疏水藥物之重量比係約1:1至約18:1、約2:1至約15:1、約3:1至約13:1、約4:1至約12:1、約5:1至約10:1。在一些實施例中，組合物中白蛋白對疏水藥物之重量比係約1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14或1:15。在一些實施例中，白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定。在一些實施例中，疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(RP-HPLC)測定。 可基於疏水藥物、白蛋白、生物活性多肽、另一治療劑或其組合之存在最佳化組合物中疏水藥物對生物活性多肽之重量比。在一些實施例中，組合物中疏水藥物對生物活性多肽之重量比介於約1:1與200:1之間(例如介於1:1與約100:1、約1:1與約80:1、約1:1與約60:1、約1:1與約50:1、約2:1與約40:1、約4:1與約30:1或約6:1至約20:1之間)。在一些實施例中，疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(RP-HPLC)測定。在一些實施例中，生物活性多肽之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)或酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定。 可基於疏水藥物、白蛋白、生物活性多肽、另一治療劑或其組合之存在最佳化組合物中生物活性多肽對白蛋白之重量比。在一些實施例中，組合物中生物活性多肽對白蛋白之重量比係約1:1至約1:1000、約1:1至約1:800、約1:1至約1:600、約1:1至約1:500、約1:1至約1:400、約1:1至約1:300、約1:1至約1:250、約2:1至約1:200、約2:1至約1:150、約4:1至約1:100或約4:1至約1:50。在一些實施例中，白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定。在一些實施例中，生物活性多肽之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)或藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定。 疏水藥物 本文所述疏水藥物可為(例如)於約25℃下於水(pH 7)中之溶解度小於約1 mg/ml的藥物，包括(例如)溶解度小於約0.5 mg/ml、0.2 mg/ml、0.1 mg/ml、0.05 mg/ml、0.02 mg/ml或0.01 mg/ml中之任一者之藥物。在一些實施例中，疏水藥物係抗瘤劑。在一些實施例中，疏水藥物係化學治療劑。適宜疏水藥物包括(但不限於)紫杉烷(例如太平洋紫杉醇、多西他賽、奧他賽(ortataxel)及其他紫杉烷)、利莫司藥物(例如西羅莫司(sirolimus))、17-丙烯胺基格爾德黴素(geldanamycin) (l7-AAG)或硫代秋水仙鹼二聚體(例如IDN5404)。 在一些實施例中，疏水藥物係紫杉烷。在一些實施例中，紫杉烷係太平洋紫杉醇。在一些實施例中，疏水藥物係太平洋紫杉醇。 在一些實施例中，疏水藥物係利莫司藥物，其包括雷帕黴素(西羅莫司)及其類似物。利莫司藥物之實例包括(但不限於)替西羅莫司(temsirolimus) (CCI-779)、依維莫司(everolimus) (RAD001)、利達莫司(ridaforolimus) (AP-23573)、地伏莫司(deforolimus) (MK-8669)、咗他莫司(zotarolimus) (ABT-578)、吡美莫司(pimecrolimus)及他克莫司(tacrolimus) (FK-506)。在一些實施例中，利莫司藥物係選自由以下組成之群：替西羅莫司(CCI-779)、依維莫司(RAD001)、利達莫司(AP-23573)、地伏莫司(MK-8669)、咗他莫司(ABT-578)、吡美莫司及他克莫司(FK-506)。在一些實施例中，疏水藥物係雷帕黴素(西羅莫司)。 因此，在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中紫杉烷經白蛋白塗佈。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中紫杉烷經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與紫杉烷締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中紫杉烷經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中紫杉烷經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與紫杉烷及白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與太平洋紫杉醇及白蛋白締合。 在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中紫杉烷經白蛋白塗佈。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中紫杉烷經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與紫杉烷締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中紫杉烷經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 紫杉烷，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中紫杉烷經白蛋白塗佈，且其中抗體與紫杉烷及白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中抗體與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中抗體與白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中抗體與太平洋紫杉醇及白蛋白締合。 因此，在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中利莫司藥物經白蛋白塗佈。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中利莫司藥物經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與利莫司藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中利莫司藥物經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中利莫司藥物經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與利莫司藥物及白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 生物活性多肽，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中生物活性多肽與雷帕黴素及白蛋白締合。 因此，在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中利莫司藥物經白蛋白塗佈。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中利莫司藥物經白蛋白塗佈，且其中抗體與利莫司藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中利莫司藥物經白蛋白塗佈，且其中抗體與白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 利莫司藥物，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中利莫司藥物經白蛋白塗佈，且其中抗體與利莫司藥物及白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中抗體與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中抗體與白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 抗體，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中抗體與雷帕黴素及白蛋白締合。 生物活性多肽 在一些實施例中，生物活性多肽係抗體或其片段。在一些實施例中，生物活性多肽係特異性識別抗原之抗體或其片段。 在一些實施例中，生物活性多肽係選自由以下組成之群：阿倫單抗(alemtuzumab)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、布利莫單抗(blinatumomab)、貝倫妥單抗(brentuximab)、西妥昔單抗(cetuximab)、地諾單抗(denosumab)、地妥昔單抗(dinutuximab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、伊匹單抗(ipilimumab)、尼沃魯單抗(nivolumab)、奧妥珠單抗(obinutuzumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、帕尼單抗(panitumumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、曲妥珠單抗及利妥昔單抗(rituximab)。在一些實施例中，生物活性多肽係BGB-A317 (BeiGene)。在一些實施例中，生物活性多肽係托珠單抗。 在一些實施例中，本文所述組合物之生物活性多肽(例如奈米顆粒上之生物活性多肽)能夠觸發個體(例如人類)之免疫反應。本文所述組合物可經最佳化以平衡個體之ADCC及CDC效應。在一些實施例中，生物活性多肽觸發個體之抗體依賴性細胞介導之(ADCC)效應。在一些實施例中，生物活性多肽觸發個體之補體依賴性細胞毒性(CDC)效應。在一些實施例中，包含奈米顆粒之組合物觸發個體之ADCC效應。在一些實施例中，包含奈米顆粒之組合物觸發個體之CDC效應。在一些實施例中，包含奈米顆粒之組合物觸發個體之ADCC及CDC效應。 在一些實施例中，生物活性多肽特異性識別(例如結合至)抗原。在一些實施例中，生物活性多肽係特異性結合至以下各項之抗體：α-胎兒蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、癌症抗原125 (CA-125)、黏蛋白1 (MUC1)、上皮腫瘤抗原(ETA)、黑色素瘤相關之抗原(MAGE)、程式性細胞死亡蛋白1 (PD-1)、程式化死亡配體1 (PD-L1)、酪胺酸酶、表皮生長因子受體(EGFR)、血管內皮生長因子(VEGF)、NY-ESO-1、gp100、BCR-ABL、EGFR、PSA、PMSA、HER2/neu、hTERT、MART1、TRP-1、TRP-2、ras、BRAF、BRCA1、BRCA2、Flt-3、IL-6-受體或Smad4。在一些實施例中，抗原係腫瘤抗原。腫瘤相關之抗原包括(但不限於)用作靶向組織(例如癌細胞)或腫瘤相關之組織(例如腫瘤相關之間質)之基礎之腫瘤組分。舉例而言，腫瘤相關之抗原包括(但不限於) α-胎兒蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、癌症抗原125 (CA-125)、黏蛋白1 (MUC1)、上皮腫瘤抗原(ETA)、黑色素瘤相關之抗原(MAGE)、程式性細胞死亡蛋白1 (PD-1)、程式化死亡配體1 (PD-L1)、酪胺酸酶、表皮生長因子受體(EGFR)、血管內皮生長因子(VEGF)、NY-ESO-1、gp100、BCR-ABL、EGFR、PSA、PMSA、HER2/neu、hTERT、MART1、TRP-1、TRP-2、ras、BRAF、BRCA1、BRCA2、Flt-3及Smad4。 在一些實施例中，生物活性多肽包含用於化學偶聯之位點。在一些實施例中，生物活性多肽包含用於交聯劑締合之位點，例如胺基酸殘基或聚醣結構。在一些實施例中，生物活性多肽進一步包含化學連接體。在一些實施例中，生物活性多肽係衍化生物活性多肽(例如包含化學交聯劑部分之抗體)。在一些實施例中，衍化生物活性多肽係與對偶聯至白蛋白之另一化學交聯劑(或其一部分)具有反應性(例如特異性反應性)之化學交聯劑(或其一部分)偶聯的生物活性多肽。舉例而言，在一些實施例中，衍化生物活性多肽與包含炔烴部分之化學交聯劑偶聯且衍化白蛋白係與包含疊氮化物部分之化學交聯劑偶聯。在一些實施例中，衍化生物活性多肽與包含疊氮化物部分之化學交聯劑偶聯且衍化白蛋白與包含炔烴部分之化學交聯劑偶聯。可用於締合生物活性多肽與白蛋白之交聯部分之其他對包括(但不限於)變形炔烴及疊氮化物、變形炔烴及硝酮(例如1,3-硝酮)、變形烯烴及疊氮化物、變形烯烴及四嗪及變形烯烴及四唑。在一些實施例中，組合物中實質上所有生物活性多肽皆經化學交聯劑(或其一部分)衍化(例如與其偶聯)。在一些實施例中，組合物中至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之生物活性多肽經化學交聯劑(或其一部分)衍化(例如與其偶聯)。在一些實施例中，衍化生物活性多肽與衍化白蛋白特異性交聯，藉此形成生物活性多肽-白蛋白偶聯物。偶聯(交聯)可(例如)在組合包含衍化白蛋白之水溶液與有機溶液之前發生。在一些實施例中，偶聯係藉由組合衍化生物活性多肽與包含衍化白蛋白之奈米顆粒而發生。在一些實施例中，偶聯係藉由組合衍化生物活性多肽與經分離奈米顆粒而發生。在一些實施例中，偶聯係藉由組合衍化生物活性多肽與包含衍化白蛋白之經分離奈米顆粒而發生。 在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與疏水藥物(例如疏水藥物之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗與太平洋紫杉醇之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中貝伐珠單抗包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 貝伐珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中貝伐珠單抗與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與疏水藥物(例如疏水藥物之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗與太平洋紫杉醇之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中西妥昔單抗包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 西妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中西妥昔單抗與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與疏水藥物(例如疏水藥物之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗與太平洋紫杉醇之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中伊匹單抗包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 伊匹單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中伊匹單抗與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與疏水藥物(例如疏水藥物之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗與太平洋紫杉醇之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中尼沃魯單抗包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 尼沃魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中尼沃魯單抗與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與疏水藥物(例如疏水藥物之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗與太平洋紫杉醇之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中帕尼單抗包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 帕尼單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中帕尼單抗與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中利妥昔單抗與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中利妥昔單抗與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 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利妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中利妥昔單抗包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中利妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中利妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中利妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中利妥昔單抗與太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中利妥昔單抗與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中利妥昔單抗與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中利妥昔單抗包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中利妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中利妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中利妥昔單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 利妥昔單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中利妥昔單抗與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與疏水藥物(例如疏水藥物之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗與太平洋紫杉醇之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中德瓦魯單抗包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 德瓦魯單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中德瓦魯單抗與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 因此，在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中BGB-A317與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中BGB-A317與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中BGB-A317包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與疏水藥物(例如疏水藥物之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中BGB-A317與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中BGB-A317與太平洋紫杉醇之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中BGB-A317包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上塗佈)，且其中BGB-A317與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上塗佈)，且其中BGB-A317與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上塗佈)，且其中BGB-A317包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) BGB-A317，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中BGB-A317與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 因此，在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗與疏水藥物締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗與疏水藥物之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物(例如紫杉烷或利莫司藥物)，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中疏水藥物經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與疏水藥物(例如疏水藥物之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗與太平洋紫杉醇締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗與太平洋紫杉醇之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗包埋於太平洋紫杉醇之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 太平洋紫杉醇，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中太平洋紫杉醇經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與太平洋紫杉醇(例如太平洋紫杉醇之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗與雷帕黴素締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗與雷帕黴素之固體核心締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈(例如實質上經其塗佈)，且其中托珠單抗包埋於雷帕黴素之固體核心中。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白非共價締合。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與奈米顆粒上之白蛋白共價締合(例如經由二硫鍵或化學交聯)。在一些實施例中，組合物包含奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 雷帕黴素，(b) 白蛋白(例如人類白蛋白)，及(c) 托珠單抗，其中雷帕黴素經白蛋白塗佈，且其中托珠單抗與雷帕黴素(例如雷帕黴素之固體核心)及奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中奈米顆粒之平均直徑(如藉由動態光散射所量測)不大於約200 nm。 包含奈米顆粒之組合物中之其他組分或製造前體 藉由組合本文所述組合物與醫藥上可接受之載劑、賦形劑、穩定劑、增積劑及/或業內已知用於本文所述治療方法、投與方法及劑量方案中之其他試劑，本文所述組合物可用於醫藥組合物或調配物中。醫藥上可接受之試劑亦可包括於製造前體溶液(包括包含白蛋白或生物活性多肽之水溶液、或在製造過程期間之不同點添加至粗製混合物、乳液、或奈米顆粒懸浮液中之水溶液)中之任一者中。 如本文所用之「醫藥上可接受」或「藥理上相容」係指物質在生物上或在其他方面係期望的，例如，該物質可納入投與患者之醫藥組合物中而不引起任何顯著不期望生物效應或以有害方式與含有其之組合物之其他組分中之任一者相互作用。醫藥上可接受之載劑或賦形劑較佳符合毒物學及製造測試之所需標準及/或包括在美國食品藥品管理局(U.S. Food and Drug administration)編製之非活性成分指南(Inactive Ingredient Guide)上。舉例而言，在一些實施例中，醫藥上可接受之物質係賦形劑、穩定劑、抗微生物劑或增積劑。 為增加本文所述組合物中奈米顆粒之穩定性，可添加物質以增加奈米顆粒之負ζ電位，例如某些帶負電荷之組分。該等帶負電荷組分包括(但不限於)膽汁鹽、膽汁酸、甘膽酸、膽酸、鵝去氧膽酸、牛磺膽酸、鵝去氧甘膽酸、牛磺鵝去氧膽酸、石膽酸、熊去氧膽酸、去氫膽酸及其他；磷脂，包括，基於卵磷脂(蛋黃)之磷脂，其包括以下磷酯醯膽鹼：棕櫚醯基油醯基磷酯醯膽鹼、棕櫚醯基亞油醯基磷酯醯膽鹼、硬脂醯基亞油醯基磷酯醯膽鹼、硬脂醯基油醯基磷酯醯膽鹼、硬脂醯基花生四烯醯基磷酯醯膽鹼及二棕櫚醯基磷酯醯膽鹼。其他磷脂，包括L-α-二肉豆蔻醯基磷酯醯膽鹼(DMPC)、二油醯基磷酯醯膽鹼(DOPC)、二硬脂醯基磷酯醯膽鹼(DSPC)、氫化大豆磷酯醯膽鹼(HSPC)及其他有關化合物。帶負電荷表面活性劑或乳化劑亦適用作添加劑，例如，膽固醇基硫酸鈉及諸如此類。 適宜醫藥上可接受之載劑包括無菌水；鹽水、右旋糖；水或鹽水中之右旋糖；蓖麻油與環氧乙烷之縮合產物，每莫耳蓖麻油組合約30至約35莫耳環氧乙烷；液體酸；低碳數烷醇；油，例如玉米油；花生油、芝麻油及諸如此類，其具有乳化劑，例如脂肪酸之甘油單酯或甘油二酯、或磷脂(例如卵磷脂及諸如此類)；二醇；聚伸烷基二醇；在懸浮劑(例如羧甲基纖維素鈉)存在下之水性介質；海藻酸鈉；聚(乙烯基吡咯啶酮)；及諸如此類，單獨或具有適宜分散劑，例如卵磷脂；聚氧乙烯硬脂酸酯；及諸如此類。載劑亦可含有佐劑(例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑及諸如此類)以及滲透促進劑。最終形式可為無菌的且亦可能夠容易地通過注射裝置(例如空心針)。可藉由適當選擇溶劑或賦形劑達成並維持適當黏度。此外，可利用分子或顆粒塗料(例如卵磷脂)之使用、分散液中粒徑之適當選擇或具有表面活性劑性質之物質之使用。 本文所述組合物可包括其他試劑、賦形劑或穩定劑以改良組合物之性質。適宜賦形劑及稀釋劑之實例包括(但不限於)乳糖、右旋糖、蔗糖、海藻糖(包括α,α-海藻糖)、山梨醇、甘露醇、澱粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、海藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯基吡咯啶酮、纖維素、水、鹽水溶液、糖漿、甲基纖維素、甲基-及丙基羥基苯甲酸酯及礦物油。調配物可另外包括潤滑劑、潤濕劑、乳化及懸浮劑及防腐劑。乳化劑之實例包括生育酚酯(例如生育酚聚乙二醇琥珀酸酯及諸如此類)、Pluronic®, 基於聚氧乙烯化合物、Span 80及有關化合物之乳化劑、及業內已知且批准用於動物或人類劑型中之其他乳化劑。組合物可藉由採用業內熟知之程序來調配以在投與患者後提供活性成分之快速、持續或延遲釋放。 在一些實施例中，組合物經調配以具有約4.5至約9.0範圍內之pH，包括(例如)約5 .0至約8.0、約6.5至約7.5及約6.5至約7.0中之任一者之pH範圍。在一些實施例中，組合物之pH經調配以不小於約6，包括(例如)不小於約6.5、7或8中之任一者(例如，約8)。在一些實施例中，組合物進一步包括緩衝液，例如Tris、磷酸鹽(例如磷酸鈉或磷酸鉀)、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、氯苯吡醇胺或乙酸鹽。亦可藉由添加適宜張力調節劑(例如甘油)使組合物與血液等滲。 在一些實施例中，奈米顆粒組合物適於投與人類。在一些實施例中，奈米顆粒組合物適於投與哺乳動物，例如在家畜背景下，家養寵物及農業動物。存在組合物之眾多種適宜調配物(例如，參見美國專利第5,916,596號及第6,096,331號，其以引用方式併入)。以下調配物及方法僅具有實例性且不具有限制性。 適於非經腸投與之調配物包括水性及非水性等滲無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及可使調配物與預期接受者之血液等滲的溶質；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑及防腐劑。調配物可以單位劑量或多劑量密封容器(例如，安瓿及小瓶)呈遞且可儲存於冷凍乾燥(凍乾)條件下，僅需在即將使用前添加無菌液體賦形劑(例如，注射用水)。臨時注射溶液及懸浮液可自先前所述種類之無菌粉劑、顆粒劑及錠劑製備。可注射調配物較佳。 在一些實施例中，組合物實質上不含(例如不含)生物活性多肽之醫藥調配物中發現之不期望組分。舉例而言，在一些實施例中，組合物實質上不含(例如不含)表面活性劑(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)。在一些實施例中，組合物實質上不含(例如不含)聚山梨醇酯20。在一些實施例中，組合物實質上不含(例如不含)聚山梨醇酯80。在一些實施例中，組合物實質上不含(例如不含)緩衝鹽。在一些實施例中，組合物包含表面活性劑(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)。在一些實施例中，組合物包含聚山梨醇酯20。在一些實施例中，組合物包含聚山梨醇酯80。在一些實施例中，組合物包含緩衝鹽。 製造奈米顆粒調配物的方法 本申請案亦提供製造本文所述奈米顆粒組合物之方法。含有疏水藥物及白蛋白之奈米顆粒可在高剪切力條件(例如，超音波處理、高壓均質化或諸如此類)下製備。該等方法揭示於(例如)美國專利第5,916,596號、第6,096,331號、第6,749,868號、第6,537,579號；及PCT申請公開案第WO98/14174號、第WO99/00113號、第WO07/027941號及第WO07/027819號。尤其關於製造奈米顆粒組合物之方法之該等公開案之內容的全文以引用方式併入本文中。該等方法可如本文所述經改良以製備包含疏水藥物、白蛋白(例如衍化白蛋白)及生物活性多肽(例如抗體)之奈米顆粒。在一些實施例中，生物活性多肽之至少一部分偶聯至白蛋白多肽(即，生物活性多肽-白蛋白偶聯物)。在一些實施例中，在製造過程期間之一或多個步驟添加生物活性多肽或生物活性多肽-白蛋白偶聯物。在一些實施例中，生物活性多肽偶聯至含有疏水藥物、白蛋白之預形成奈米顆粒。 在一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白及生物活性多肽；及ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如，藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加生物活性多肽。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在一些實施例中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白及抗體；及ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如，藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在一些實施例中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)，且其中水溶液包含白蛋白及抗體；及ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如，藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：(i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；(ii) 向乳液中添加生物活性多肽；及(iii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法包含防止將生物活性多肽添加至乳液中與起始移除一或多種有機溶劑之間之任何培育時間。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加生物活性多肽。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在一些實施例中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 向乳液中添加抗體；及iii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如，藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法包含防止將生物活性多肽添加至乳液中與起始移除一或多種有機溶劑之間之任何培育時間。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一實施例中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 向乳液中添加抗體；和iii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如，藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法包含防止將生物活性多肽添加至乳液中與起始移除一或多種有機溶劑之間之任何培育時間。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)以獲得蒸發後懸浮液，及iii) 向蒸發後懸浮液中添加生物活性多肽，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加生物活性多肽。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)以獲得蒸發後懸浮液，及iii)向蒸發後懸浮液中添加抗體，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)以獲得蒸發後懸浮液，及iii)向蒸發後懸浮液中添加抗體，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分而非全部(例如藉由蒸發)，以獲得乳液-懸浮液中間體；iii) 向乳液-懸浮液中間體中添加生物活性多肽；及iv) 自包含生物活性多肽之乳液-懸浮液中間體移除一或多種有機溶劑之另一部分(例如藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加生物活性多肽。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分而非全部(例如藉由蒸發)，以獲得乳液-懸浮液中間體；iii) 向乳液-懸浮液中間體中添加生物活性多肽；及iv) 自包含生物活性多肽之乳液-懸浮液中間體移除一或多種有機溶劑之另一部分(例如藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)，且其中水溶液包含白蛋白；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分而非全部(例如藉由蒸發)，以獲得乳液-懸浮液中間體；iii) 向乳液-懸浮液中間體中添加生物活性多肽；及iv) 自包含生物活性多肽之乳液-懸浮液中間體移除一或多種有機溶劑之另一部分(例如藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分偶聯至生物活性多肽；及ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，生物活性多肽(例如)經由二硫鍵或化學交聯劑共價偶聯至白蛋白，例如包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分之交聯劑、SMCC交聯劑、包含硼酸酯或源自點擊化學之部分(例如無銅點擊化學，例如三唑部分)之交聯劑。在一些實施例中，白蛋白及生物活性多肽非共價偶聯。舉例而言，在一些實施例中，交聯劑包含共價附接至白蛋白之第一組分及共價附接至生物活性多肽之第二組分，其中第一組分及第二組分彼此特異性結合(例如互補核酸分子)。在一些實施例中，該方法進一步包含用未偶聯之白蛋白替代不與奈米顆粒締合之生物活性多肽偶聯之白蛋白，其係藉由以下方式達成：例如透析、緩衝液交換(例如切向流過濾)，或藉由離心自不與奈米顆粒締合之生物活性多肽偶聯之白蛋白分離奈米顆粒及利用包含未偶聯之白蛋白之溶液重新懸浮奈米顆粒。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加生物活性多肽。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在一些實施例中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分偶聯至抗體；及ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如，藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，生物活性多肽(例如)經由二硫鍵或化學交聯劑共價偶聯至白蛋白，例如包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分之交聯劑、SMCC交聯劑、包含硼酸酯或源自點擊化學之部分(例如無銅點擊化學，例如三唑部分)之交聯劑。在一些實施例中，白蛋白及生物活性多肽非共價偶聯。舉例而言，在一些實施例中，交聯劑包含共價附接至白蛋白之第一組分及共價附接至生物活性多肽之第二組分，其中第一組分及第二組分彼此特異性結合(例如互補核酸分子)。在一些實施例中，該方法進一步包含用未偶聯之白蛋白替代不與奈米顆粒締合之抗體偶聯之白蛋白，其係藉由以下方式達成：例如透析、緩衝液交換(例如切向流過濾)，或藉由離心自不與奈米顆粒締合之抗體偶聯之白蛋白分離奈米顆粒及利用包含未偶聯之白蛋白之溶液重新懸浮奈米顆粒。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一實施例中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分偶聯至抗體；及ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如，藉由蒸發)，藉此形成組合物。在一些實施例中，生物活性多肽(例如)經由二硫鍵或化學交聯劑共價偶聯至白蛋白，例如包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分之交聯劑、SMCC交聯劑、包含硼酸酯或源自點擊化學之部分(例如無銅點擊化學，例如三唑部分)之交聯劑。在一些實施例中，白蛋白及生物活性多肽非共價偶聯。舉例而言，在一些實施例中，交聯劑包含共價附接至白蛋白之第一組分及共價附接至生物活性多肽之第二組分，其中第一組分及第二組分彼此特異性結合(例如互補核酸分子)。在一些實施例中，該方法進一步包含用未偶聯之白蛋白替代不與奈米顆粒締合之抗體偶聯之白蛋白，其係藉由以下方式達成：例如透析、緩衝液交換(例如切向流過濾)，或藉由離心自不與奈米顆粒締合之抗體偶聯之白蛋白分離奈米顆粒及利用包含未偶聯之白蛋白之溶液重新懸浮奈米顆粒。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分經衍化；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)以獲得蒸發後懸浮液；及iii) 向蒸發後懸浮液中添加生物活性多肽。在一些實施例中，生物活性多肽經衍化。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加生物活性多肽。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分經衍化；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)以獲得包含奈米顆粒之蒸發後懸浮液；iii) 用非衍化白蛋白替代不與奈米顆粒締合之衍化白蛋白；及iv) 向奈米顆粒中添加生物活性多肽。在一些實施例中，生物活性多肽經衍化。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分經衍化；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)以獲得包含奈米顆粒之蒸發後懸浮液；iii) 用非衍化白蛋白替代不與奈米顆粒締合之衍化白蛋白；及iv) 向奈米顆粒中添加抗體。在一些實施例中，抗體經衍化。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 在另一實施例中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)、白蛋白及抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含：i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液，其中有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)，且其中水溶液包含白蛋白，其中白蛋白之至少一部分經衍化；ii) 自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分(例如藉由蒸發)以獲得包含奈米顆粒之蒸發後懸浮液；iii) 用非衍化白蛋白替代不與奈米顆粒締合之衍化白蛋白；及iv) 向奈米顆粒中添加抗體。在一些實施例中，抗體經衍化。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑之前向乳液中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後向組合物中添加白蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含在移除有機溶劑後無菌過濾組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含將組合物填充至一或多個小瓶中。在一些實施例中，該方法進一步包含凍乾該組合物。 將疏水藥物溶解於有機溶劑(或有機溶劑之混合物)中以形成包含疏水藥物之有機溶液。適宜有機溶劑包括例如烷烴、環烷烴、酮、醇、酯、醚、氯化溶劑及業內已知之其他溶劑。在一些實施例中，有機溶液包括水混溶性有機溶劑、水不混溶性有機溶劑或水混溶性有機溶劑與水不混溶性有機溶劑之混合物。在一些實施例中，有機溶液中水混溶性有機溶劑對水不混溶性有機溶劑之比率介於約20:1與約1:20之間(例如，介於約20:1與約15:1、約15:1與約12:1、約12:1與約10:1、約10:1與約8:1、約8:1與約6:1、約6:1與約4:1、約4:1與約2:1、約2:1與約1:1、約1:1與約1:2、約1:2與約1:4、約1:4與約1:6、約1:6與約1:8、約1:8與約1:10、約1:10與約1:12、約1:12與約1:15或約1:15與約1:20之間)。實例性有機溶劑包括例如氯仿、二氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、第三丁醇、甲醇、異丙醇、丙醇、正丁醇、四氫呋喃、環己烷、二噁烷、乙腈、丙酮、二甲亞碸、二甲基甲醯胺、甲基吡咯啶酮。在一些實施例中，疏水藥物係以如下濃度溶解於有機溶劑中：約1 mg/mL至約200 mg/mL (例如約1 mg/mL至約5 mg/mL、約5 mg/mL至約10 mg/mL、約10 mg/mL至約25 mg/mL、約25 mg/mL至約50 mg/mL、約50 mg/mL至約100 mg/mL、約100 mg/mL至約150 mg/mL或約150 mg/mL至約200 mg/mL)。 將包含疏水藥物之有機溶液與水溶液合併。在一些實施例中，水溶液包含溶解於水中之白蛋白(例如重組白蛋白)。白蛋白可為例如人類白蛋白。在一些實施例中，水溶液進一步包含一或多種鹽、緩衝液或穩定劑。在一些實施例中，水溶液實質上不含(例如不含)表面活性劑(例如聚山梨醇酯)。在一些實施例中，水溶液之pH介於約5與約8之間。在一些實施例中，水溶液中白蛋白(包括任何生物活性多肽-白蛋白偶聯物之白蛋白部分)之濃度介於約0.5 mg/mL與約250 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約25 mg/mL之間、介於約25 mg/mL與約50 mg/mL之間、介於約50 mg/mL與約100 mg/mL之間、介於約100 mg/mL與約150 mg/mL之間、介於約150 mg/mL與約200 mg/mL之間或介於約200 mg/mL與約250 mg/mL之間)。在一些實施例中，水溶液包含生物活性多肽或生物活性多肽-白蛋白偶聯物。亦即，水溶液可包含i) 白蛋白，ii) 生物活性多肽，iii) 生物活性多肽-白蛋白偶聯物，或iv) 兩者或更多者之組合。在一些實施例中，例如藉由包括交聯部分(例如胺反應性琥珀醯亞胺基酯或馬來醯亞胺部分)使白蛋白衍化。在一些實施例中，水溶液中生物活性多肽(包括生物活性-白蛋白偶聯物之生物活性多肽部分)之濃度介於約0.5 mg/mL與約30 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約20 mg/mL之間或介於約20 mg/mL與約30 mg/mL之間)。在一些實施例中，水溶液包含約1:1至約20:1之w/w比率(白蛋白: 生物活性多肽)之白蛋白及生物活性多肽。 在一些實施例中，生物活性多肽(或生物活性多肽-白蛋白偶聯物)提供於單獨水溶液(亦即與包含白蛋白之水溶液或包含白蛋白及生物活性多肽之水溶液分開之水溶液)中。單獨水溶液(其可稱作「生物活性多肽溶液」)包含溶解於水中之生物活性多肽(或生物活性多肽-白蛋白偶聯物或其組合)。在一些實施例中，生物活性多肽溶液進一步包含一或多種鹽、緩衝液或穩定劑。在一些實施例中，生物活性多肽溶液實質上不含(例如不含)表面活性劑(例如聚山梨醇酯)。在一些實施例中，生物活性多肽溶液之pH介於約4與約8之間。在一些實施例中，生物活性多肽溶液中生物活性多肽(包括生物活性多肽-白蛋白偶聯物之生物活性多肽部分)之濃度介於約0.5 mg/mL與約30 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約20 mg/mL之間或介於約20 mg/mL與約30 mg/mL之間)。 在一些實施例中，例如使用高剪切混合器(例如轉子-定子混合器)混合有機溶液與水溶液(其可包括或可不包括生物活性多肽或生物活性多肽-白蛋白偶聯物)，以形成粗製混合物。舉例而言，在一些實施例中，合併水溶液及包含疏水藥物之有機溶液，且混合合併之水溶液及有機溶液以形成粗製混合物。在一些實施例中，利用高剪切混合器混合水溶液，並在混合水溶液時向水溶液中添加有機溶液，以形成粗製混合物。在一些實施例中，合併水溶液、生物活性多肽溶液及有機溶液，並混合合併之水溶液、生物活性多肽溶液、有機溶液以形成粗製混合物。在一些實施例中，利用高剪切混合器混合水溶液，並在混合水溶液的同時合併生物活性多肽溶液及有機溶液與水溶液。在一些實施例中，利用高剪切混合器混合生物活性多肽溶液，並在混合生物活性多肽溶液時可合併水溶液及有機溶液與生物活性多肽溶液。 在一些實施例中，可向粗製混合物中添加白蛋白或生物活性多肽(或生物活性多肽-白蛋白偶聯物)。舉例而言，在一些實施例中，例如在完成有機溶液與第一水溶液之混合後，向粗製混合物中添加額外水溶液(包含白蛋白、生物活性多肽及/或生物活性-多肽偶聯物中之一或多者)。在一些實施例中，混合額外水溶液與粗製混合物，此可使用高剪切混合器或低剪切混合器實施。在一些實施例中，合併額外水溶液與粗製混合物以將粗製混合物中白蛋白(包括任何生物活性多肽-白蛋白偶聯物之白蛋白部分)之濃度調節至介於約0.5 mg/mL與約250 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約25 mg/mL之間、介於約25 mg/mL與約50 mg/mL之間、介於約50 mg/mL與約100 mg/mL之間、介於約100 mg/mL與約150 mg/mL之間、介於約150 mg/mL與約200 mg/mL之間或介於約200 mg/mL與約250 mg/mL之間)。在一些實施例中，合併額外水溶液與粗製混合物以將粗製混合物中生物活性多肽(包括任何生物活性多肽-白蛋白偶聯物之生物活性多肽部分)之濃度調節至介於約0.5 mg/mL與約30 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約20 mg/mL之間或介於約20 mg/mL與約30 mg/mL之間)。在一些實施例中，合併額外水溶液與粗製混合物以將白蛋白對生物活性多肽之比率(w/w)調節至介於1:1與約1000:1之間。在一些實施例中，合併額外水溶液與粗製混合物以將白蛋白對疏水藥物之比率(w/w)調節至約2.5:1至約20:1。 使有機溶液與水溶液之粗製混合物(其中粗製混合物可包括或可不包括在形成粗製混合物後添加之額外水溶液)經受高壓均質化以形成乳液。在一些實施例中，使乳液循環穿過高壓均質器約2至約100個循環、例如約5至約50個循環或約8至約20個循環(例如，約8、10、12、14、16、18或20中之任一者個循環)。 在一些實施例中，可向乳液中添加額外白蛋白或生物活性多肽(或生物活性多肽-白蛋白偶聯物)。舉例而言，在一些實施例中，向乳液中添加額外水溶液(包含白蛋白、生物活性多肽及/或生物活性-多肽偶聯物中之一或多者)。在一些實施例中，在通過高壓均質器之間向乳液中添加額外水溶液。在一些實施例中，在完成均質化過程後向乳液中添加額外水溶液。在一些實施例中，混合額外水溶液與乳液，此可使用高剪切混合器或低剪切混合器實施。在一些實施例中，向乳液中添加額外水溶液以將乳液中白蛋白(包括任何生物活性多肽-白蛋白偶聯物白蛋白部分之)之濃度調節至介於約0.5 mg/mL與約250 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約25 mg/mL之間、介於約25 mg/mL與約50 mg/mL之間、介於約50 mg/mL與約100 mg/mL之間、介於約100 mg/mL與約150 mg/mL之間、介於約150 mg/mL與約200 mg/mL之間或介於約200 mg/mL與約250 mg/mL之間)。在一些實施例中，合併額外水溶液與乳液以將乳液中生物活性多肽(包括任何生物活性多肽-白蛋白偶聯物之生物活性多肽部分)之濃度調節至介於約0.5 mg/mL與約30 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約20 mg/mL之間或介於約20 mg/mL與約30 mg/mL之間)。在一些實施例中，合併額外水溶液與乳液以將白蛋白對生物活性多肽之比率(w/w)調節至介於1:1與約1000:1之間。在一些實施例中，合併額外水溶液與乳液以將白蛋白對疏水藥物之比率(w/w)調節至約2.5:1至約50:1。 至少一部分有機溶劑(例如實質上所有有機溶劑)可以藉由利用已知用於此目的之適宜設備(包括但不限於旋轉蒸發器、降膜蒸發器、刮膜蒸發器、噴霧乾燥器及諸如此類)蒸發來移除。有機溶劑之蒸發導致奈米顆粒之形成，如果在蒸發之後留下足夠的水，則奈米顆粒可為奈米顆粒懸浮液之形式(且可稱作「蒸發後懸浮液」)。溶劑可在減壓下(例如約25 mm Hg、30 mm Hg、40 mm Hg、50 mm Hg、100 mm Hg、200 mm Hg或300 mm Hg中之任一者下)移除。可基於調配物之體積調節在減壓下移除溶劑所用之時間量。舉例而言，對於以300 mL規模產生之調配物而言，溶劑可在約1至約300 mm Hg (例如，約5-100 mm Hg、10-50 mm Hg、20-40 mm Hg或25 mm Hg中之任一者)下移除達約5至約60分鐘(例如，約7分鐘、8分鐘、9分鐘、10分鐘、11分鐘、12分鐘、13分鐘、14分鐘、15 16分鐘、18分鐘、20分鐘、25分鐘或30分鐘中之任一者)。 在一些實施例中，可向奈米顆粒(例如蒸發後懸浮液)中添加額外白蛋白及/或生物活性多肽(或生物活性多肽-白蛋白偶聯物)。舉例而言，在一些實施例中，向奈米顆粒中添加額外水溶液(包含白蛋白、生物活性多肽及/或生物活性-多肽偶聯物中之一或多者)。在一些實施例中，向蒸發後懸浮液中添加額外水溶液以將奈米顆粒懸浮液中白蛋白(包括任何生物活性多肽-白蛋白偶聯物白蛋白部分之)之濃度調節至介於約0.5 mg/mL與約250 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約25 mg/mL之間、介於約25 mg/mL與約50 mg/mL之間、介於約50 mg/mL與約100 mg/mL之間、介於約100 mg/mL與約150 mg/mL之間、介於約150 mg/mL與約200 mg/mL之間或介於約200 mg/mL與約250 mg/mL之間)。在一些實施例中，合併額外水溶液與奈米顆粒懸浮液以將奈米顆粒懸浮液中生物活性多肽(包括任何生物活性多肽-白蛋白偶聯物之生物活性多肽部分)之濃度調節至介於約0.5 mg/mL與約30 mg/mL之間(例如介於約0.5 mg/mL與約1 mg/mL之間、介於約1 mg/mL與約5 mg/mL之間、介於約5 mg/mL與約10 mg/mL之間、介於約10 mg/mL與約20 mg/mL之間或介於約20 mg/mL與約30 mg/mL之間)。在一些實施例中，合併額外水溶液與奈米顆粒懸浮液以將白蛋白對生物活性多肽之比率(w/w)調節至介於1:1與約1000:1之間。在一些實施例中，合併額外水溶液與奈米顆粒懸浮液以將白蛋白對疏水藥物之比率(w/w)調節至約2.5:1至約50:1。在一些實施例中，例如藉由向奈米顆粒(例如蒸發後懸浮液)中添加一或多種賦形劑(例如穩定劑、緩衝液、增積劑、抗微生物劑、滲透劑或重構增強劑)調配奈米顆粒用於投與。一或多種賦形劑可與水溶液分開地添加至奈米顆粒中，或可包括於水溶液中。在一些實施例中，將奈米顆粒懸浮液之pH調節至介於約4與約9之間(例如介於約4與約5之間、介於約5與約6之間、介於約6與約7之間、介於約7與約8之間或介於約8與約9之間)。蒸發後懸浮液可與白蛋白或生物活性多肽(或生物活性多肽-白蛋白偶聯物)一起培育期望時間量(例如約15分鐘至約48小時)。在一些實施例中，培育係在約3℃至約30℃下發生。此培育時段容許生物活性多肽(或生物活性多肽-白蛋白偶聯物)與奈米顆粒締合。舉例而言，在一些實施例中，與奈米顆粒締合之白蛋白之一部分經衍化，且培育時段容許衍化白蛋白偶聯至生物活性多肽。 在一些實施例中，白蛋白係偶聯至生物活性多肽以形成生物活性多肽-白蛋白偶聯物。生物活性多肽與白蛋白之偶聯可在製造過程期間之不同點發生。舉例而言，在一些實施例中，在合併水溶液與有機溶液之前，生物活性多肽偶聯至白蛋白。在一些實施例中，在合併生物活性多肽與奈米顆粒懸浮液時，該多肽偶聯至白蛋白。在一些實施例中，白蛋白(或白蛋白之一部分)經衍化，此可使得偶聯至生物活性多肽。在一些實施例中，生物活性多肽經衍化，此可使得偶聯至白蛋白。在一些實施例中，白蛋白(或白蛋白之一部分)及生物活性多肽經衍化以提供偶聯。 可例如使用點擊化學或其他已知交聯劑使生物活性多肽偶聯至白蛋白。舉例而言，在一些實施例中，白蛋白或生物活性多肽經變形烯烴或直鏈炔烴衍化，且白蛋白及生物活性多肽可經由環加成反應偶聯。在一些實施例中，白蛋白或生物活性多肽上之離胺酸殘基經(例如)胺反應性琥珀醯亞胺基酯(例如N-羥基琥珀醯亞胺酯(NHS-酯))、異氰酸酯或異硫氰酸酯衍化。在一些實施例中，白蛋白或生物活性多肽上之半胱胺酸殘基經(例如)馬來醯亞胺或碘乙醯胺衍化。白蛋白之半胱胺酸34係可經衍化之實例性半胱胺酸。其他偶聯方法為業內已知。可將衍化白蛋白與生物活性多肽一起培育，或可將衍化生物活性多肽與白蛋白一起培育，以形成生物活性多肽-白蛋白偶聯物。在向水溶液、粗製混合物、乳液或蒸發後懸浮液中添加生物活性多肽-白蛋白偶聯物之前，可形成生物活性多肽-白蛋白偶聯物。舉例而言，在生物活性多肽-白蛋白偶聯物包括於奈米顆粒製造過程中之前，生物活性多肽-白蛋白偶聯物可與未偶聯之白蛋白或生物活性多肽分開。在形成奈米顆粒後，亦可形成或另一選擇為形成生物活性多肽-白蛋白偶聯物。舉例而言，在一些實施例中，衍化白蛋白包括於水溶液、粗製混合物或乳液中，且向奈米顆粒懸浮液中添加生物活性多肽。與奈米顆粒締合之衍化白蛋白可與生物活性多肽反應，以形成生物活性多肽-白蛋白偶聯物。在一些實施例中，將衍化生物活性多肽添加至包含白蛋白之水溶液、粗製混合物、乳液、蒸發後懸浮液或其他奈米顆粒懸浮液中，並與白蛋白反應以形成生物活性多肽-白蛋白偶聯物。 在一些實施例中，自奈米顆粒懸浮液移除不與奈米顆粒締合之生物活性多肽、生物活性多肽-白蛋白偶聯物或衍化白蛋白(若存在)。在一些實施例中，生物活性多肽-白蛋白偶聯物或衍化白蛋白由非衍化或未偶聯之白蛋白替代。舉例而言，在一些實施例中，離心奈米顆粒懸浮液，移除上清液，並將奈米顆粒懸浮於新鮮水溶液(其可為非衍化或未偶聯之白蛋白)中。在一些實施例中，透析奈米顆粒懸浮液以移除不與奈米顆粒締合之生物活性多肽、生物活性多肽-白蛋白偶聯物或衍化白蛋白(若存在)，其可由非衍化或未偶聯之白蛋白替代。在一些實施例中，藉由緩衝液更換(例如，藉由切向流過濾)移除不與奈米顆粒締合之生物活性多肽、生物活性多肽-白蛋白偶聯物或衍化白蛋白(若存在)，其可由非衍化或未偶聯之白蛋白替代。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽，該方法包含使生物活性多肽偶聯至包含疏水藥物及白蛋白之奈米顆粒。在一些實施例中，方法包含生物活性多肽與白蛋白共價交聯。在一些實施例中，生物活性多肽(例如)經由二硫鍵或化學交聯劑共價偶聯至白蛋白，例如包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分之交聯劑、SMCC交聯劑、包含硼酸酯或源自點擊化學之部分(例如無銅點擊化學，例如三唑部分)之交聯劑。在一些實施例中，該方法包含生物活性多肽與白蛋白非共價交聯，其中白蛋白共價結合至交聯劑之第一組分且生物活性多肽共價結合至交聯劑之第二組分，其中交聯劑之第一組分特異性結合至交聯劑之第二組分(例如至少部分互補之核酸分子)。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含將抗體偶聯至包含疏水藥物及白蛋白之奈米顆粒。在一些實施例中，方法包含抗體與白蛋白共價交聯。在一些實施例中，抗體(例如)經由二硫鍵或化學交聯劑共價偶聯至白蛋白，例如包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分之交聯劑、SMCC交聯劑、包含硼酸酯或源自點擊化學之部分(例如無銅點擊化學，例如三唑部分)之交聯劑。在一些實施例中，該方法包含抗體與白蛋白非共價交聯，其中白蛋白共價結合至交聯劑之第一組分且抗體共價結合至交聯劑之第二組分，其中交聯劑之第一組分特異性結合至交聯劑之第二組分(例如至少部分互補之核酸分子)。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)、白蛋白及偶聯至白蛋白之抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含將抗體偶聯至包含紫杉烷及白蛋白之奈米顆粒。在一些實施例中，方法包含抗體與白蛋白共價交聯。在一些實施例中，抗體(例如)經由二硫鍵或化學交聯劑共價偶聯至白蛋白，例如包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分之交聯劑、SMCC交聯劑、包含硼酸酯或源自點擊化學之部分(例如無銅點擊化學，例如三唑部分)之交聯劑。在一些實施例中，該方法包含抗體與白蛋白非共價交聯，其中白蛋白共價結合至交聯劑之第一組分且抗體共價結合至交聯劑之第二組分，其中交聯劑之第一組分特異性結合至交聯劑之第二組分(例如至少部分互補之核酸分子)。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽，該方法包含i) 利用交聯劑功能化生物活性多肽，及ii) 合併活化之生物活性多肽與包含疏水藥物及白蛋白之奈米顆粒。圖18圖解說明該方法之實例。在一些實施例中，交聯劑包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分、SMCC交聯劑、酸、點擊化學交聯試劑。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含i) 利用交聯劑功能化抗體，及ii) 合併活化之抗體與包含疏水藥物及白蛋白之奈米顆粒。在一些實施例中，交聯劑包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分、SMCC交聯劑、酸、點擊化學交聯試劑。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(例如太平洋紫杉醇)、白蛋白及偶聯至白蛋白之抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含i) 利用交聯劑功能化抗體，及ii) 合併活化之抗體與包含紫杉烷及白蛋白之奈米顆粒。在一些實施例中，交聯劑包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分、SMCC交聯劑、酸、點擊化學交聯試劑。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之生物活性多肽，該方法包含i) 利用交聯劑功能化生物活性多肽，ii) 衍化與包含白蛋白及疏水藥物之奈米顆粒表面締合的白蛋白之至少一部分，及iii) 合併活化之生物活性多肽與包含衍化白蛋白之奈米顆粒。圖19、21及23圖解說明衍化與奈米顆粒表面締合之白蛋白及偶聯功能化生物活性多肽與衍化白蛋白的實例性方法。在一些實施例中，衍化白蛋白包含例如藉由合併包含白蛋白及疏水藥物之奈米顆粒與硫醇化試劑(例如2-亞胺基四氫噻吩)來硫醇化白蛋白。在一些實施例中，交聯劑包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分、SMCC交聯劑、酸、點擊化學交聯試劑。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至白蛋白之抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含i) 利用交聯劑功能化抗體，ii) 衍化與包含白蛋白及疏水藥物之奈米顆粒表面締合的白蛋白之至少一部分，及iii) 合併活化抗體與包含衍化白蛋白之奈米顆粒。在一些實施例中，衍化白蛋白包含例如藉由合併包含白蛋白及疏水藥物之奈米顆粒與硫醇化試劑(例如2-亞胺基四氫噻吩)來硫醇化白蛋白。在一些實施例中，交聯劑包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分、SMCC交聯劑、酸、點擊化學交聯試劑。 在另一態樣中，提供製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含紫杉烷(太平洋紫杉醇)、白蛋白及偶聯至白蛋白之抗體(例如抗VEGF抗體(例如，抗VEGF-A抗體，例如貝伐珠單抗)、抗HER2抗體(例如，曲妥珠單抗)、及抗PD-1抗體(例如BGB-A317)或抗IL-6-受體抗體(例如托珠單抗))，該方法包含i) 利用交聯劑功能化抗體，ii) 衍化與包含白蛋白及紫杉烷之奈米顆粒表面締合的白蛋白之至少一部分，及iii) 合併活化抗體與包含衍化白蛋白之奈米顆粒。在一些實施例中，衍化白蛋白包含例如藉由合併包含白蛋白及疏水藥物之奈米顆粒與硫醇化試劑(例如2-亞胺基四氫噻吩)來硫醇化白蛋白。在一些實施例中，交聯劑包含馬來醯亞胺官能基及/或NHS部分、SMCC交聯劑、酸、點擊化學交聯試劑。 在一些實施例中，經由一或多個過濾器過濾奈米顆粒懸浮液，其可將奈米顆粒懸浮液滅菌(即，無菌過濾)。奈米顆粒懸浮液可經由多個過濾器經連續過濾。 在一些實施例中，將奈米顆粒分配至小瓶中。在一些實施例中，小瓶經密封。在一些實施例中，小瓶係單次使用之小瓶。在一些實施例中，小瓶係多次使用之小瓶。奈米顆粒懸浮液亦可在小瓶內部或外部經凍乾。在一些實施例中，將凍乾之奈米顆粒重構於水溶液(例如水或鹽水)中。在一些實施例中，水溶液包含白蛋白、生物活性多肽及/或生物活性多肽-白蛋白偶聯物中之一或多者。在一些實施例中，可將重構之奈米顆粒在水溶液中培育，可過濾，可移除生物活性多肽或生物活性多肽-白蛋白偶聯物，或可經再凍乾，例如如上述。在一些實施例中，向個體投與重構之奈米顆粒。 以下實施例係用於製造本文所述奈米顆粒之實例性方法且不應認為具有限制性。圖1係圖解說明製造本文所述奈米顆粒之方法之一個實施例的流程圖。將含有溶解於水中之白蛋白及生物活性多肽(例如抗體)之水溶液轉移至容器並在步驟102利用高剪切混合器混合。在利用高剪切混合器混合水溶液的同時在步驟104向含有水溶液之容器中添加含有一或多種有機溶劑(例如水混溶性溶劑及水不混溶性溶劑)及疏水藥物(例如紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有機溶液，藉此形成粗製混合物。在步驟106，藉由使粗製混合物通過高壓均質器均質化粗製混合物，藉此形成乳液。視情況，使乳液通過高壓均質器兩次或更多次。在步驟108，藉由蒸發自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成蒸發後奈米顆粒懸浮液。視情況，在步驟110，例如藉由添加含有白蛋白或一或多種賦形劑之水溶液調配蒸發後奈米顆粒懸浮液。視情況在步驟112無菌過濾經調配奈米顆粒懸浮液，且視情況在步驟114將無菌奈米顆粒懸浮液填充至一或多個小瓶中。視情況，在步驟116，將小瓶凍乾及/或密封。 圖2係圖解說明製造本文所述奈米顆粒之方法之另一實施例的流程圖。將含有溶解於水中之白蛋白之水溶液轉移至容器並在步驟202利用高剪切混合器混合。在利用高剪切混合器混合水溶液的同時在步驟204向含有水溶液之容器中添加含有一或多種有機溶劑(例如水混溶性溶劑及水不混溶性溶劑)及疏水藥物(例如紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有機溶液，藉此形成粗製混合物。在步驟206，向粗製混合物中添加生物活性多肽(其可包含於第二水溶液中)。在步驟208，藉由使粗製混合物通過高壓均質器均質化粗製混合物，藉此形成乳液。視情況，使乳液通過高壓均質器兩次或更多次。在步驟210，藉由蒸發自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成蒸發後奈米顆粒懸浮液。視情況，在步驟212，例如藉由添加含有白蛋白或一或多種賦形劑之水溶液調配蒸發後奈米顆粒懸浮液。視情況在步驟214無菌過濾經調配奈米顆粒懸浮液，且視情況在步驟216將無菌奈米顆粒懸浮液填充至一或多個小瓶中。視情況，在步驟218，將小瓶凍乾及/或密封。 圖3係圖解說明製造本文所述奈米顆粒之方法之另一實施例的流程圖。將含有溶解於水中之白蛋白之水溶液轉移至容器並在步驟302利用高剪切混合器混合。在利用高剪切混合器混合水溶液的同時在步驟304向含有水溶液之容器中添加含有一或多種有機溶劑(例如水混溶性溶劑及水不混溶性溶劑)及疏水藥物(例如紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有機溶液，藉此形成粗製混合物。在步驟306，藉由使粗製混合物通過高壓均質器均質化粗製混合物，藉此形成乳液。視情況，使乳液通過高壓均質器兩次或更多次。在步驟308，向乳液中添加生物活性多肽(其可包含於第二水溶液中)。在步驟310，藉由蒸發自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成蒸發後奈米顆粒懸浮液。視情況，在步驟312，例如藉由添加含有白蛋白或一或多種賦形劑之水溶液調配蒸發後奈米顆粒懸浮液。視情況在步驟314無菌過濾經調配奈米顆粒懸浮液，且視情況在步驟316將無菌奈米顆粒懸浮液填充至一或多個小瓶中。視情況，在步驟318，將小瓶凍乾及/或密封。 圖4係圖解說明製造本文所述奈米顆粒之方法之另一實施例的流程圖。將含有溶解於水中之白蛋白之水溶液轉移至容器並在步驟402利用高剪切混合器混合。在利用高剪切混合器混合水溶液的同時在步驟404向含有水溶液之容器中添加含有一或多種有機溶劑(例如水混溶性溶劑及水不混溶性溶劑)及疏水藥物(例如紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有機溶液，藉此形成粗製混合物。在步驟406，藉由使粗製混合物通過高壓均質器均質化粗製混合物，藉此形成乳液。視情況，使乳液通過高壓均質器兩次或更多次。在步驟408，藉由蒸發自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成蒸發後奈米顆粒懸浮液。在步驟410，向蒸發後奈米顆粒懸浮液中添加生物活性多肽(其可包含於第二水溶液中)。在一些實施例中，將生物活性多肽及奈米顆粒懸浮液培育一段時間。視情況，在步驟412，例如藉由添加含有白蛋白或一或多種賦形劑之水溶液調配蒸發後奈米顆粒懸浮液。在一些實施例中，將步驟410及412合併在單一步驟中。舉例而言，可在添加白蛋白或一或多種賦形劑的同時向奈米顆粒懸浮液中添加生物活性多肽。可將生物活性多肽、白蛋白或賦形劑合併在相同水溶液或不同水溶液中。視情況在步驟414無菌過濾經調配奈米顆粒懸浮液，且視情況在步驟416將無菌奈米顆粒懸浮液填充至一或多個小瓶中。視情況，在步驟418，將小瓶凍乾及/或密封。 圖5係圖解說明製造本文所述奈米顆粒之方法之另一實施例的流程圖。在步驟502，合併生物活性多肽(例如，在水溶液中)與包括包含白蛋白及疏水藥物之奈米顆粒的組合物。預製造的奈米顆粒可(例如)來自較易製造之過濾奈米顆粒懸浮液或凍乾奈米顆粒組合物(其可經重構或可未經重構)。實例性預製造的奈米顆粒係Abraxane® (Nab -太平洋紫杉醇)。在一些實施例中，使用包含生物活性多肽之水溶液以懸浮凍乾之奈米顆粒組合物。視情況，在步驟504，例如藉由添加含有白蛋白或一或多種賦形劑之水溶液調配奈米顆粒懸浮液。在一些實施例中，將步驟502及504合併在單一步驟中。舉例而言，可在添加白蛋白或一或多種賦形劑的同時向奈米顆粒懸浮液中添加生物活性多肽。可將生物活性多肽、白蛋白或賦形劑合併在相同水溶液或不同水溶液中。視情況在步驟506無菌過濾經調配奈米顆粒懸浮液，且視情況在步驟508將無菌奈米顆粒懸浮液填充至一或多個小瓶中。視情況，在步驟510，將小瓶凍乾及/或密封。 圖6係圖解說明製造本文所述奈米顆粒之方法之另一實施例的流程圖。將含有溶解於水中之衍化白蛋白之水溶液轉移至容器並在步驟602利用高剪切混合器混合。在一些實施例中，水溶液進一步包含非衍化白蛋白。在利用高剪切混合器混合水溶液的同時在步驟604向含有水溶液之容器中添加含有一或多種有機溶劑(例如水混溶性溶劑及水不混溶性溶劑)及疏水藥物(例如紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有機溶液，藉此形成粗製混合物。在步驟606，藉由使粗製混合物通過高壓均質器均質化粗製混合物，藉此形成乳液。視情況，使乳液通過高壓均質器兩次或更多次。在步驟608，藉由蒸發自乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成蒸發後奈米顆粒懸浮液。在步驟610可(例如)藉由奈米顆粒之透析、離心及再懸浮或切向流過濾用非衍化白蛋白替代不與奈米顆粒締合之衍化白蛋白。在步驟612，向奈米顆粒懸浮液中添加生物活性多肽(其可包含於第二水溶液中)。在一些實施例中，生物活性多肽經衍化(端視偶聯方法而定)。視情況，在步驟614，例如藉由添加含有白蛋白或一或多種賦形劑之水溶液調配懸浮液。在一些實施例中，將步驟610及614或步驟612及614合併在單一步驟中。舉例而言，可在添加白蛋白或一或多種賦形劑的同時向奈米顆粒懸浮液中添加生物活性多肽。可將生物活性多肽、白蛋白或賦形劑合併在相同水溶液或不同水溶液中。視情況在步驟616無菌過濾經調配奈米顆粒懸浮液，且視情況在步驟618將無菌奈米顆粒懸浮液填充至一或多個小瓶中。視情況，在步驟620，將小瓶凍乾及/或密封。 使用方法 本文所述組合物可用於治療細胞增殖或增殖過度相關之疾病(例如癌症)。 因此，在一些實施例中，提供治療有需要之個體之疾病(例如癌症)之方法，其包含向個體投與有效量之包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心。在一些實施例中，生物活性多肽與疏水藥物之固體核心表面締合。在一些實施例中，生物活性多肽之一部分包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中至少約75%之生物活性多肽與奈米顆粒締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含至少約100種生物活性多肽。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中疏水藥物與生物活性多肽之重量比係約4:1。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中白蛋白與疏水藥物之重量比係小於約1:1至約9:1。在一些實施例中，如藉由動態光散射(DLS)量測之奈米顆粒之平均直徑不大於約200 nm。在一些實施例中，組合物進一步包含不與奈米顆粒締合之生物活性多肽。在一些實施例中，疏水藥物係紫杉烷。在一些實施例中，紫杉烷係太平洋紫杉醇。在一些實施例中，疏水藥物係利莫司藥物。在一些實施例中，利莫司藥物係雷帕黴素。在一些實施例中，生物活性多肽係治療性抗體。在一些實施例中，生物活性多肽選自由以下組成之群：貝伐珠單抗、西妥昔單抗、伊匹單抗、尼沃魯單抗、帕尼單抗及利妥昔單抗。 欲由本文所述組合物治療之癌症包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病。可由本文所述組合物治療之癌症之實例包括(但不限於)鱗狀細胞癌、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及肺鱗狀癌，包括鱗狀NSCLC)、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌(gastric或stomach cancer) (包括胃腸癌)、胰臟癌(例如晚期胰臟癌)、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌(例如肝細胞癌)、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、黑色素瘤、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌(kidney或renal cancer)、肝癌、前列腺癌(例如晚期前列腺癌)、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、頭頸癌、結腸直腸癌、直腸癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、B細胞淋巴瘤(包括低級/濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma，NHL)、小淋巴球性(SL) NHL、中級/濾泡性NHL、中級瀰漫性NHL、高級免疫母細胞NHL、高級淋巴母細胞性NHL、高級非裂解小細胞NHL、巨大疾病NHL、外套細胞淋巴瘤、AIDS有關之淋巴瘤及瓦登斯特隆巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia))、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、骨髓瘤、毛細胞白血病、慢性骨髓母細胞性白血病、及移植後淋巴增殖性病症(PTLD)、以及與母斑細胞病相關之異常血管增殖、水腫(例如與腦瘤相關)及梅格思氏症候群(Meigs’ syndrome)。在一些實施例中，提供治療轉移癌症(亦即已自原發性腫瘤轉移之癌症)之方法。在一些實施例中，提供減輕細胞增殖及/或細胞遷移之方法。在一些實施例中，提供治療增生(例如可引起再狹窄之血管系統增生或可引起動脈或靜脈高血壓之增生)之方法。 在一些實施例中，提供治療處於晚期之癌症之方法。在一些實施例中，提供治療乳癌(其可為HER2陽性或HER2陰性，包括例如晚期乳癌、IV期乳癌、局部晚期乳癌及轉移性乳癌)之方法。在一些實施例中，癌症係肺癌，包括例如非小細胞肺癌(NSCLC，例如晚期NSCLC)、小細胞肺癌(SCLC，例如晚期SCLC)及肺中之晚期實體腫瘤惡性病。在一些實施例中，癌症係卵巢癌、頭頸癌、胃惡性病、黑色素瘤(包括轉移性黑色素瘤)、結腸直腸癌、胰臟癌及實體腫瘤(例如晚期實體腫瘤)。在一些實施例中，癌症係以下中之任一者(且在一些實施例中選自由以下組成之群)：乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、腎細胞癌、前列腺癌、肝癌、胰臟癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、類癌癌瘤、頭頸癌、黑色素瘤、卵巢癌、間皮瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、神經胚細胞瘤及多發性骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係實體腫瘤。 在一些實施例中，欲治療之癌症係乳癌，例如轉移性乳癌。在一些實施例中，欲治療之癌症係肺癌，例如非小細胞肺癌，包括晚期非小細胞肺癌。在一些實施例中，欲治療之癌症係胰臟癌，例如早期胰臟癌或晚期或轉移性胰臟癌。在一些實施例中，欲治療之癌症係黑色素瘤，例如III或IV期黑色素瘤。 在一些實施例中，治療增殖性疾病之個體已鑑別為患有本文所述病況中之一或多者。由熟練醫師鑑別如本文所述病況在業內是常規的(例如經由血液測試、X射線、CT掃描、內視鏡檢法、生檢、血管造影術、CT血管造影術等)，且亦可例如由於腫瘤生長、出血、潰瘍、疼痛、淋巴結腫大、咳嗽、黃疸、腫脹、體重減輕、惡病質、出汗、貧血、副腫瘤現象、血栓形成等引起個體或其他懷疑。在一些實施例中，個體已被鑑別為易感如本文所述病況中之一或多者。個體之易感性可基於熟習此項技術者所瞭解之許多風險因子及/或診斷方法中之任一或多者，包括但不限於基因概況分析、家族史、病歷(例如有關病況之出現)、生活方式或習慣。 在一些實施例中，與治療之前相同個體之相應症狀相比或與未接受該等方法及/或組合物之其他個體之相應症狀相比，本文所用方法及/或組合物將與增殖性疾病(例如，癌症)相關之一或多種症狀之嚴重程度降低至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%中之任一者。 在一些實施例中，本文所述組合物(例如醫藥組合物)與另一投與方式或治療組合使用。 組合治療 本文所述組合物可用作組合治療之組分以治療與細胞增殖或增殖過度相關之疾病(例如癌症)。 因此，在一些實施例中，提供治療有需要之個體之疾病(例如癌症)之方法，其包含向個體投與：(1) 有效量之包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽；及(2) 有效量之一或多種額外治療劑。在一些實施例中，本文所述組合物包含(1) 奈米顆粒，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽；及(2) 一或多種額外治療劑。 在一些實施例中，一或多種額外治療劑係水溶性試劑。在一些實施例中，另一治療劑係化學治療劑。在一些實施例中，另一治療劑係基於鉑之試劑。在一些實施例中，基於鉑之試劑係卡鉑(carboplatin)。在一些實施例中，基於鉑之試劑係順鉑(cisplatin)。在一些實施例中，另一治療劑係抗代謝藥。在一些實施例中，另一治療劑係吉西他濱(gemcitabine)。在一些實施例中，另一治療劑係度伐魯單抗(durvalumab)。在一些實施例中，另一治療劑係卡培他濱(capecitabine)。在一些實施例中，另一治療劑係5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、伊立替康(irinotecan)及/或奧沙利鉑(oxaliplatin)。在一些實施例中，另一治療劑係依帕西普(ipafricept)。在一些實施例中，另一治療劑係凡地土單抗(vantictumab)。在一些實施例中，另一治療劑係PEGPH20。在一些實施例中，另一治療劑係納武單抗(nivolumab)。在一些實施例中，另一治療劑係耐昔妥珠單抗(necitumumab)。 因此，在一些實施例中，提供治療有需要之個體之疾病(例如癌症)之方法，其包含向個體投與：(1) 有效量之包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽；及(2) 有效量之另一治療劑。在一些實施例中，奈米顆粒包含經白蛋白塗佈之疏水藥物之固體核心。在一些實施例中，生物活性多肽與疏水藥物之固體核心表面締合。在一些實施例中，生物活性多肽之一部分包埋於疏水藥物之固體核心中。在一些實施例中，生物活性多肽與奈米顆粒上之白蛋白締合。在一些實施例中，組合物中至少約75%之生物活性多肽與奈米顆粒締合。在一些實施例中，奈米顆粒包含至少約100種生物活性多肽。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中疏水藥物與生物活性多肽之重量比係約4:1。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒中白蛋白與疏水藥物之重量比係小於約1:1至約9:1。在一些實施例中，如藉由動態光散射量測之奈米顆粒之平均直徑不大於約200 nm。在一些實施例中，組合物進一步包含不與奈米顆粒締合之生物活性多肽。在一些實施例中，疏水藥物係紫杉烷。在一些實施例中，紫杉烷係太平洋紫杉醇。在一些實施例中，疏水藥物係利莫司藥物。在一些實施例中，利莫司藥物係雷帕黴素。在一些實施例中，生物活性多肽係治療性抗體。在一些實施例中，生物活性多肽選自由以下組成之群：貝伐珠單抗、西妥昔單抗、伊匹單抗、尼沃魯單抗、帕尼單抗及利妥昔單抗。在一些實施例中，另一治療劑係化學治療劑。在一些實施例中，另一治療劑係基於鉑之試劑。在一些實施例中，基於鉑之試劑係卡鉑。在一些實施例中，基於鉑之試劑係順鉑。在一些實施例中，另一治療劑係吉西他濱。 投與奈米顆粒組合物之劑量及方法 投與個體(例如人類)之組合物之劑量可隨著特定組合物、投與模式及所治療疾病之類型變化。在一些實施例中，奈米顆粒之量可有效引起目標反應(例如部分反應或完全反應)。在一些實施例中，組合物之量足以在個體中引起完全反應。在一些實施例中，組合物之量足以在個體中引起部分反應。在一些實施例中，所投與組合物(例如在單獨投與時)之量足以在經組合物治療之個體群體中產生超過約40%、50%、60%或64%中之任一者之總體反應率。可例如基於RECIST值測定個體對本文所述方法治療之反應。 在一些實施例中，組合物之量足以延長個體之無進展存活。在一些實施例中，組合物之量足以延長個體之整體存活。在一些實施例中，組合物(例如在單獨投與時)之量足以在經組合物治療之個體群體中產生超過約50%、60%、70%或77%中之任一者之臨床益處。 在一些實施例中，組合物、第一療法、第二療法或組合療法之量係與治療之前相同個體之相應腫瘤大小、癌細胞數量、或腫瘤生長速率相比或與未接受腫瘤之其他個體之相應活性相比，足以將腫瘤大小減小、將癌細胞數量減小或將腫瘤生長速率減小至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%中之任一者的量。可使用標準方法以量測此效應之量值，例如利用純化酶之活體外分析、基於細胞之分析、動物模型或人類測試。 在一些實施例中，組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之量低於誘導毒物學效應(即，超過臨床上可接受程度之毒性之效應)之值或係在向個體投與組合物時可控制或耐受潛在副作用的值。 在一些實施例中，組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之量包括於以下範圍中之任一者中：約0.1 mg至約500 mg、約0.1 mg至約2.5 mg、約0.5 mg至約5 mg、約5 mg至約10 mg、約10 mg至約15 mg、約15 mg至約20 mg、約20 mg至約25 mg、約20 mg至約50 mg、約25 mg至約50 mg、約50 mg至約75 mg、約50 mg至約100 mg、約75 mg至約100 mg、約100 mg至約125 mg、約125 mg至約150 mg、約150 mg至約175 mg、約175 mg至約200 mg、約200 mg至約225 mg、約225 mg至約250 mg、約250 mg至約300 mg、約300 mg至約350 mg、約350 mg至約400 mg、約400 mg至約450 mg、或約450 mg至約500 mg。在一些實施例中，有效量之組合物(例如，單位劑型)中之疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之量在約5 mg至約500 mg、例如約30 mg至約300 mg或約50 mg至約200 mg之範圍內。在一些實施例中，組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之濃度係稀的(約0.1 mg/ml)或濃的(約100 mg/ml)，包括(例如)約0.1 mg/ml至約50 mg/ml、約0.1 mg/ml至約20 mg/ml、約1 mg/ml至約10 mg/ml、約2 mg/ml至約8 mg/ml、約4 mg/ml至約6 mg/ml或約5 mg/ml中之任一者。在一些實施例中，疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之濃度係至少約0.5 mg/ml、1.3 mg/ml、1.5 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml、5 mg/ml、6 mg/ml、7 mg/ml、8 mg/ml、9 mg/ml、10 mg/ml、15 mg/ml、20 mg/ml、25 mg/ml、30 mg/ml、40 mg/ml或50 mg/ml中之任一者。 組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之實例性有效量包括(但不限於)至少約25 mg/m2 、30 mg/m2 、50 mg/m2 、60 mg/m2 、75 mg/m2 、80 mg/m2 、90 mg/m2 、100 mg/m2 、120 mg/m2 、125 mg/m2 、150 mg/m2 、160 mg/m2 、175 mg/m2 、180 mg/m2 、200 mg/m2 、210 mg/m2 、220 mg/m2 、250 mg/m2 、260 mg/m2 、300 mg/m2 、350 mg/m2 、400 mg/m2 、500 mg/m2 、540 mg/m2 、750 mg/m2 、1000 mg/m2 或1080 mg/m2 中之任一者之疏水藥物。在各個實施例中，組合物包括小於約350 mg/m2 、300 mg/m2 、250 mg/m2 、200 mg/m2 、150 mg/m2 、120 mg/m2 、100 mg/m2 、90 mg/m2 、50 mg/m2 、或30 mg/m2 中之任一者之疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)。在一些實施例中，每次投與之疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之量小於約25 mg/m2 、22 mg/m2 、20 mg/m2 、18 mg/m2 、15 mg/m2 、14 mg/m2 、13 mg/m2 、12 mg/m2 、11 mg/m2 、10 mg/m2 、9 mg/m2 、8 mg/m2 、7 mg/m2 、6 mg/m2 、5 mg/m2 、4 mg/m2 、3 mg/m2 、2 mg/m2 或1 mg/m2 中之任一者。在一些實施例中，組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有效量包括於以下範圍中之任一者中：約1 mg/m2 至約5 mg/m2 、約5 mg/m2 至約10 mg/m2 、約10 mg/m2 至約25 mg/m2 、約25 mg/m2 至約50 mg/m2 、約50 mg/m2 至約75 mg/m2 、約75 mg/m2 至約100 mg/m2 、約100 mg/m2 至約125 mg/m2 、約125 mg/m2 至約150 mg/m2 、約150 mg/m2 至約175 mg/m2 、約175 mg/m2 至約200 mg/m2 、約200 mg/m2 至約225 mg/m2 、約225 mg/m2 至約250 mg/m2 、約250 mg/m2 至約300 mg/m2 、約300 mg/m2 至約350 mg/m2 、或約350 mg/m2 至約400 mg/m2 。在一些實施例中，組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有效量係約5 mg/m2 至約300 mg/m2 、例如約100 mg/m2 至約150 mg/m2 、約120 mg/m2 、約130 mg/m2 或約140 mg/m2 。 在上述態樣中之任一者之一些實施例中，組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有效量包括至少約1 mg/kg、2.5 mg/kg、3.5 mg/kg、5 mg/kg、6.5 mg/kg、7.5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg、25 mg/kg、30 mg/kg、35 mg/kg、40 mg/kg、45 mg/kg、50 mg/kg、55 mg/kg或60 mg/kg中之任一者。在各個實施例中，組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之有效量包括小於約350 mg/kg、300 mg/kg、250 mg/kg、200 mg/kg、150 mg/kg、100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg、7.5 mg/kg、6.5 mg/kg、5 mg/kg、3.5 mg/kg、2.5 mg/kg或1 mg/kg中之任一者之疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)。 在一些實施例中，組合物中生物活性多肽(例如，治療性抗體)之量包括於以下範圍中之任一者中：約0.1 mg至約500 mg、約0.1 mg至約2.5 mg、約0.5 mg至約5 mg、約5 mg至約10 mg、約10 mg至約15 mg、約15 mg至約20 mg、約20 mg至約25 mg、約20 mg至約50 mg、約25 mg至約50 mg、約50 mg至約75 mg、約50 mg至約100 mg、約75 mg至約100 mg、約100 mg至約125 mg、約125 mg至約150 mg、約150 mg至約175 mg、約175 mg至約200 mg、約200 mg至約225 mg、約225 mg至約250 mg、約250 mg至約300 mg、約300 mg至約350 mg、約350 mg至約400 mg、約400 mg至約450 mg、或約450 mg至約500 mg。在一些實施例中，有效量之組合物(例如，單位劑型)中生物活性多肽(例如，治療性抗體)之量在約5 mg至約500 mg、例如約30 mg至約300 mg或約50 mg至約200 mg之範圍內。在一些實施例中，組合物中生物活性多肽(例如，治療性抗體)之濃度係稀的(約0.1 mg/ml)或濃的(約100 mg/ml)，包括(例如)約0.1至約50 mg/ml、約0.1至約20 mg/ml、約1至約10 mg/ml、約2 mg/ml至約8 mg/ml、約4至約6 mg/ml或約5 mg/ml中之任一者。在一些實施例中，生物活性多肽(例如，治療性抗體)之濃度係至少約0.5 mg/ml、1.3 mg/ml、1.5 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml、5 mg/ml、6 mg/ml、7 mg/ml、8 mg/ml、9 mg/ml、10 mg/ml、15 mg/ml、20 mg/ml、25 mg/ml、30 mg/ml、40 mg/ml或50 mg/ml中之任一者。 組合物中生物活性多肽(例如，治療性抗體)之實例性有效量包括(但不限於)至少約25 mg/m2 、30 mg/m2 、50 mg/m2 、60 mg/m2 、75 mg/m2 、80 mg/m2 、90 mg/m2 、100 mg/m2 、120 mg/m2 、125 mg/m2 、150 mg/m2 、160 mg/m2 、175 mg/m2 、180 mg/m2 、200 mg/m2 、210 mg/m2 、220 mg/m2 、250 mg/m2 、260 mg/m2 、300 mg/m2 、350 mg/m2 、400 mg/m2 、500 mg/m2 、540 mg/m2 、750 mg/m2 、1000 mg/m2 或1080 mg/m2 中之任一者之生物活性多肽。在各個實施例中，組合物包括小於約350 mg/m2 、300 mg/m2 、250 mg/m2 、200 mg/m2 、150 mg/m2 、120 mg/m2 、100 mg/m2 、90 mg/m2 、50 mg/m2 或30 mg/m2 中之任一者之生物活性多肽(例如，治療性抗體)。在一些實施例中，每次投與之生物活性多肽(例如，治療性抗體)之量小於約25 mg/m2 、22 mg/m2 、20 mg/m2 、18 mg/m2 、15 mg/m2 、14 mg/m2 、13 mg/m2 、12 mg/m2 、11 mg/m2 、10 mg/m2 、9 mg/m2 、8 mg/m2 、7 mg/m2 、6 mg/m2 、5 mg/m2 、4 mg/m2 、3 mg/m2 、2 mg/m2 或1 mg/m2 中之任一者。在一些實施例中，組合物中生物活性多肽(例如，治療性抗體)之有效量包括於以下範圍中之任一者中：約1 mg/m2 至約5 mg/m2 、約5 mg/m2 至約10 mg/m2 、約10 mg/m2 至約25 mg/m2 、約25 mg/m2 至約50 mg/m2 、約50 mg/m2 至約75 mg/m2 、約75 mg/m2 至約100 mg/m2 、約100 mg/m2 至約125 mg/m2 、約125 mg/m2 至約150 mg/m2 、約150 mg/m2 至約175 mg/m2 、約175 mg/m2 至約200 mg/m2 、約200 mg/m2 至約225 mg/m2 、約225 mg/m2 至約250 mg/m2 、約250 mg/m2 至約300 mg/m2 、約300 mg/m2 至約350 mg/m2 或約350 mg/m2 至約400 mg/m2 。在一些實施例中，組合物中生物活性多肽(例如，治療性抗體)之有效量係約5 mg/m2 至約300 mg/m2 、例如約100 mg/m2 至約150 mg/m2 、約120 mg/m2 、約130 mg/m2 或約140 mg/m2 。 在上述態樣中之任一者之一些實施例中，組合物中生物活性多肽(例如，治療性抗體)之有效量包括至少約1 mg/kg、2.5 mg/kg、3.5 mg/kg、5 mg/kg、6.5 mg/kg、7.5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg、25 mg/kg、30 mg/kg、35 mg/kg、40 mg/kg、45 mg/kg、50 mg/kg、55 mg/kg或60 mg/kg中之任一者。在各個實施例中，組合物中生物活性多肽(例如，治療性抗體)之有效量包括小於約350 mg/kg、300 mg/kg、250 mg/kg、200 mg/kg、150 mg/kg、100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg、7.5 mg/kg、6.5 mg/kg、5 mg/kg、3.5 mg/kg、2.5 mg/kg或1 mg/kg中之任一者之生物活性多肽。 在一些實施例中，針對疾病(例如癌症)及/或所治療個體最佳化組合物中與組合物之非奈米顆粒部分締合之生物活性多肽的量。在一些實施例中，針對疾病(例如癌症)及/或所治療個體最佳化組合物中與組合物之奈米顆粒部分締合之生物活性多肽的量。 在一些實施例中，針對疾病(例如癌症)及/或所治療個體最佳化組合物中疏水藥物與生物活性多肽之比率。 在一些實施例中，在相同投藥方案後，組合物之量接近組合物之最大耐受劑量(MTD)。在一些實施例中，組合物之量係MTD之約80%、90%、95%或98%中之任一者以上。 本文所述組合物之投與之實例性投藥頻率包括(但不限於)每日、每兩天、每三天、每四天、每五天、每六天、每週不間斷、四週中之三週、每三週一次、每兩週一次或三週中之兩週。在一些實施例中，約每2週一次、每3週一次、每4週一次、每6週一次或每8週一次投與組合物。在一些實施例中，至少約一週1次、2次、3次、4次、5次、6次或7次(即，每日)中之任一者投與組合物。在一些實施例中，每次投與之間之間隔小於約6個月、3個月、1個月、20天、15天、14天、13天、12天、11天、10天、9天、8天、7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天中之任一者。在一些實施例中，每次投與之間之間隔超過約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、8個月或12個月中之任一者。在一些實施例中，投藥時間表中無間斷。在一些實施例中，每次投與之間之間隔不超過約一週。 在一些實施例中，投藥頻率係每2天一次，共一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次及十一次。在一些實施例中，投藥頻率係每2天一次，共五次。在一些實施例中，在至少10天之時段內投與組合物，其中每次投與之間之間隔不超過約2天，且其中每次投與時組合物之劑量係約0.25 mg/m2 至約250 mg/m2 、約0.25 mg/m2 至約150 mg/m2 、約0.25 mg/m2 至約75 mg/m2 、例如約0.25 mg/m2 至約25 mg/m2 、或約25 mg/m2 至約50 mg/m2 ，如藉由組合物中疏水藥物之量所量測。 組合物之投與可在延長時間段(例如約1個月高達至約7年)內延長。在一些實施例中，在至少約2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、18個月、24個月、30個月、36個月、48個月、60個月、72個月或84個月中之任一者之時段內投與組合物。 在一些實施例中，組合物中疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之劑量在以3週時間表給予時可在5-400 mg/m2 之範圍內，或在以每週時間表給予時可在5-250 mg/m2 (例如80-150 mg/m2 ，例如100-120 mg/m2 )之範圍內。舉例而言，疏水藥物(例如，紫杉烷，例如太平洋紫杉醇)之量在3週時間表上係約60至約300 mg/m2 (例如，約260 mg/m2 )。 組合物之投與之其他實例性投藥時間表包括(但不限於) 100 mg/m2 ，每週，無間斷；75 mg/m2 ，每週，4週中之3週；100 mg/m2 ，每週，4週中之3週；125 mg/m2 ，每週，4週中之3週；125 mg/m2 ，每週，3週中之2週；130 mg/m2 ，每週，無間斷；175 mg/m2 ，每2週一次；260 mg/m2 ，每2週一次；260 mg/m2 ，每3週一次；180-300 mg/m2 ，每3週一次；60-175 mg/m2 ，每週，無間斷；20-150 mg/m2 ，一週兩次；及150-250 mg/m2 ，一週兩次，如藉由組合物中疏水藥物之量所量測。 在治療過程中可基於投與醫師之判斷調節奈米顆粒組合物之投藥頻率。 在一些實施例中，將個體治療至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個治療循環中之任一者。 本文所述組合物容許在比約24小時短之輸注時間內向個體輸注組合物。舉例而言，在一些實施例中，在小於約24小時、12小時、8小時、5小時、3小時、2小時、1小時、30分鐘、20分鐘或10分鐘中之任一者之輸注時段內投與組合物。在一些實施例中，在約30分鐘之輸注時段內投與組合物。 組合物中疏水藥物之其他實例性劑量包括(但不限於)約50 mg/m2 、60 mg/m2 、75 mg/m2 、80 mg/m2 、90 mg/m2 、100 mg/m2 、120 mg/m2 、160 mg/m2 、175 mg/m2 、200 mg/m2 、210 mg/m2 、220 mg/m2 、260 mg/m2 及300 mg/m2 中之任一者，如藉由組合物中疏水藥物之量所量測。舉例而言，在一些實施例中，組合物中太平洋紫杉醇之劑量在以3週時間表給予時可在約100-400 mg/m2 之範圍內，或在以每週時間表給予時可在約50-250 mg/m2 之範圍內。 本文所述組合物可經由各種途徑投與個體(例如人類)，該等途徑包括例如靜脈內、動脈內、腹膜內、囊內、皮下、鞘內、肺內、肌內、氣管內、眼內、經皮、真皮內、經口、肝門內、肝內、肝動脈輸注或藉由吸入。在一些實施例中，可使用組合物之持續連續釋放調配物。在一些實施例中，經靜脈內投與組合物。在一些實施例中，經肝門內投與組合物。在一些實施例中，經動脈內投與組合物。在一些實施例中，經腹膜內投與組合物。在一些實施例中，經肝內投與組合物。 組合治療之投與模式 本文所述組合物之投用方案適於單一療法及組合治療設定二者。下文進一步闡述組合治療方法之投與模式。 在一些實施例中，同時投與組合物及另一治療劑(包括本文所述具體化學治療劑)。在藥物同時投與時，組合物中之藥物及另一治療劑可包含於相同組合物(例如，包含奈米顆粒組合物及另一治療劑二者之組合物)或單獨組合物(例如，組合物及另一治療劑包含於單獨組合物中)中。 在一些實施例中，依序投與組合物及另一治療劑。可首先投與組合物或另一治療劑。在一些實施例中，組合物及另一治療劑包含於單獨組合物中，該等單獨組合物可包含於相同或不同包裝中。 在一些實施例中，組合物及另一治療劑之投與係並行的，即組合物之投與時段與另一治療劑之投與時段彼此重疊。在一些實施例中，在投與另一治療劑之前，至少組合物達1個循環(例如，至少2、3或4個循環中之任一者)。在一些實施例中，投與另一治療劑達至少1、2、3或4週中之任一者。在一些實施例中，在約相同時間(例如，在1、2、3、4、5、6或7天中之任一者內)起始組合物及另一治療劑之投與。在一些實施例中，在約相同時間(例如，在1、2、3、4、5、6或7天中之任一者內)終止組合物及另一治療劑之投與。在一些實施例中，在終止投與組合物後，繼續另一治療劑之投與(例如繼續約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月中之任一者)。在一些實施例中，在起始投與組合物後(例如在約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月中之任一者後)起始投與另一治療劑。在一些實施例中，在約相同時間起始及終止投與組合物及另一治療劑。在一些實施例中，在約相同時間起始投與組合物及另一治療劑且在終止投與組合物後繼續投與另一治療劑(例如繼續約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月中之任一者)。在一些實施例中，在約相同時間停止投與組合物及另一治療劑，且在起始投與組合物後(例如在約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月中之任一者後)起始投與另一治療劑。 在一些實施例中，組合物及另一治療劑之投與係不並行的。舉例而言，在一些實施例中，在投與另一治療劑之前終止投與組合物。在一些實施例中，在投與組合物之前終止投與另一治療劑。該兩次非並行投與之間之時間段可在約2週至8週之範圍內，例如約4週。 在治療過程中可基於投與醫師之判斷調節組合物及另一治療劑之投藥頻率。在分開投與時，組合物及另一治療劑可以不同投藥頻率或間隔投與。舉例而言，組合物可每週投與，而另一試劑可更頻繁或更不頻繁地投與。在一些實施例中，可使用組合物及/或另一試劑之持續連續釋放調配物。用於達成持續釋放之各種調配物及裝置為業內已知。亦可使用本文所述投與構形之組合。 組合物及另一治療劑可使用相同投與途徑或不同投與途徑投與。在一些實施例中(對於同時及依序投與二者)，組合物及另一治療劑係以預定比率投與。舉例而言，在一些實施例中，組合物中疏水藥物與另一治療劑之以重量計之比率係約1對1。在一些實施例中，重量比可介於約0.001對約1與約1000對約1之間、或介於約0.01對約1與100對約1之間。在一些實施例中，組合物中疏水藥物與另一治療劑之以重量計之比率小於約100:1、50:1、30:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1及1:1中之任一者。在一些實施例中，組合物中疏水藥物與另一治療劑之以重量計之比率超過約1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、30:1、50:1、100:1中之任一者。涵蓋其他比率。 疏水藥物、生物活性多肽及/或另一治療劑所需之劑量可(但不必)低於在單獨投與每一試劑時或在生物活性多肽並非疏水藥物奈米顆粒組合物之一部分時通常所需之劑量。因此，在一些實施例中，投與亞治療量之組合物中之疏水藥物及/或另一治療劑。「亞治療量」或「亞治療位準」係指小於治療量、亦即小於在組合物中之疏水藥物及/或生物活性多肽及/或另一治療劑單獨投與時通常使用之量的量。減少可在給定投與時投與之量及/或在給定時間段內投與之量之方面來反映(降低之頻率)。 在一些實施例中，投與另一化學治療劑以便容許實現相同治療程度所需之組合物中疏水藥物及/或生物活性多肽之正常劑量減少至少約5%、10%、20%、30%、50%、60%、70%、80%、90%或更多中之任一者。在一些實施例中，投與足夠組合物中之疏水藥物及/或生物活性多肽以便容許實現相同治療程度所需之另一治療劑之正常劑量減少至少約5%、10%、20%、30%、50%、60%、70%、80%、90%或更多中之任一者。 在一些實施例中，組合物中疏水藥物及/或生物活性多肽及另一治療劑之劑量與在單獨投與時每一相應正常劑量相比減少。在一些實施例中，組合物中疏水藥物及/或生物活性多肽及另一治療劑係以亞治療、即減少之位準投與。在一些實施例中，組合物及/或另一治療劑之劑量實質上小於確立最大毒性劑量(MTD)。舉例而言，奈米顆粒組合物及/或另一治療劑之劑量係MTD之小於約50%、40%、30%、20%或10%。 可使用本文所述投與構形之組合。本文所述組合治療方法可單獨實施或與另一療法(例如化學療法、放射療法、手術、激素療法、基因療法、免疫療法、化學免疫療法、基於肝動脈之療法、冷凍療法、超音波療法、肝移植、局部消蝕療法、射頻消蝕療法、光動力療法及諸如此類)結合實施。另外，具有發生疾病(例如癌症)之較大風險之人可接受治療以抑制及/或延遲疾病之發生。 本文所述另一治療劑可經由各種途徑投與個體(例如人類)，該等途徑例如非經腸，包括靜脈內、動脈內、腹膜內、肺內、經口、吸入、囊內、肌內、氣管內、皮下、眼內、鞘內或經皮。在一些實施例中，靜脈內投與另一治療劑。在一些實施例中，經口投與奈米顆粒組合物。 另一治療劑之投藥頻率可與組合物之投藥頻率相同或不同。上文提供實例性頻率。作為又一實例，另一治療劑可每天3次、每天2次、每日、一週6次、一週5次、一週4次、一週3次、一週2次、每週投與。在一些實施例中，另一治療劑每日兩次或每日三次投與。另一治療劑之實例性量包括(但不限於)以下範圍中之任一者：約1 mg至約2000 mg、約500 mg至約1500 mg、約700 mg至約1200 mg、約800 mg至約1000 mg、約0.5 mg至約5 mg、約5 mg至約10 mg、約10 mg至約15 mg、約15 mg至約20 mg、約20 mg至約25 mg、約20 mg至約50 mg、約25 mg至約50 mg、約50 mg至約75 mg、約50 mg至約100 mg、約75 mg至約100 mg、約100 mg至約125 mg、約125 mg至約150 mg、約150 mg至約175 mg、約175 mg至約200 mg、約200 mg至約225 mg、約225 mg至約250 mg、約250 mg至約300 mg、約300 mg至約350 mg、約350 mg至約400 mg、約400 mg至約450 mg或約450至約500 mg。舉例而言，另一治療劑可以約1 mg/kg至約200 mg/kg (包括(例如) 約1 mg/kg至約20 mg/kg、約20 mg/kg至約40 mg/kg、約40 mg/kg至約60 mg/kg、約60 mg/kg至約80 mg/kg、約80 mg/kg至約100 mg/kg、約100 mg/kg至約120 mg/kg、約120 mg/kg至約140 mg/kg、約140 mg/kg至約200 mg/kg)之劑量投與。 在一些實施例中，例如在投與基於鉑之試劑時，另一治療劑係以小於約8、7、6、5、4、3、2、或1個AUC之劑量投與。在一些實施例中，另一治療劑係以約1、2、3、4、5、6、7或8個AUC之劑量投與。在一些實施例中，另一治療劑係以約4個AUC之劑量投與。在一些實施例中，另一治療劑係以約5個AUC之劑量投與。在一些實施例中，另一治療劑係以約6個AUC之劑量投與。在一些實施例中，另一治療劑係以約4至約7個AUC、約5至約6個AUC、約3至約6個AUC、約4至約5個AUC或約5至約7個AUC之劑量投與。 在一些實施例中，另一治療劑之適當劑量近似臨床療法中已經採用之劑量，其中另一治療劑係單獨投與或與另一治療劑組合投與。 醫藥組合物及單位劑量 藉由組合本文所述組合物與醫藥上可接受之載劑、賦形劑、穩定劑及/或業內已知用於本文所述治療方法、投與方法及劑量方案中之其他藥劑，本文所述組合物可用於醫藥組合物或調配物中。進一步提供本文所述組合物之單位劑量。 在一些實施例中，白蛋白容許組合物投與個體(例如人類)而無顯著副作用。在一些實施例中，白蛋白(例如人類血清白蛋白)之量有效減少投與個體(例如人類)疏水藥物或生物活性多肽之一或多種副作用。術語「減少投與之一或多種副作用」係指減少、減輕、消除或避免由藥劑(例如疏水藥物或生物活性多肽)之投與所引起之一或多種不期望效應、以及由用於遞送之遞送媒劑(例如表面活性劑及使得藥劑適於注射之溶劑)所引起之副作用。該等副作用包括例如骨髓抑制、神經毒性、過敏性、發炎、靜脈刺激、靜脈炎、疼痛、皮膚刺激、外周神經病變、嗜中性球減少性發熱、過敏性反應、靜脈血栓形成、外滲及其組合。然而，該等副作用僅為實例性，且可減少與疏水藥物及/或生物活性多肽相關之其他副作用或副作用之組合。 本文所述組合物可存於無水調配物(例如凍乾組合物)中或懸浮於生物相容性介質中。適宜生物相容性介質包括(但不限於)水、緩衝水性介質、鹽水、緩衝鹽水、視情況緩衝之胺基酸溶液、視情況緩衝之蛋白質溶液、視情況緩衝之糖溶液、視情況緩衝之維生素溶液、視情況緩衝之合成聚合物溶液、含有脂質之乳液及諸如此類。 本文所述組合物可存於密封小瓶中。在一些實施例中，密封小瓶用於單次使用。在一些實施例中，密封小瓶用於多次使用。 亦提供包含本文所述組合物及調配物之單位劑型。該等單位劑型可以單一或多個單位劑量儲存於適宜包裝中，且亦可進一步經滅菌及密封。在一些實施例中，組合物(例如醫藥組合物)亦包括一或多種可用於治療癌症之其他化合物(或其醫藥上可接受之鹽)。在各種變化形式中，組合物中疏水藥物之量包括於以下範圍中之任一者中：約5 mg至約50 mg、約20 mg至約50 mg、約50 mg至約100 mg、約100 mg至約125 mg、約125 mg至約150 mg、約150 mg至約175 mg、約175 mg至約200 mg、約200 mg至約225 mg、約225 mg至約250 mg、約250 mg至約300 mg、約300 mg至約350 mg、約350 mg至約400 mg、約400 mg至約450 mg，或約450 mg至約500 mg。在一些實施例中，組合物中疏水藥物之量(例如劑量或單位劑型)在約5 mg至約500 mg、例如約30 mg至約300 mg或約50 mg至約200 mg範圍內之衍生物。在一些實施例中，載劑適於非經腸投與(例如靜脈內投與)。 在一些實施例中，提供用於治療癌症之劑型(例如，單位劑型)，其包含本文所述組合物(例如醫藥組合物)中之任一者。在一些實施例中，提供包含適宜包裝中之本文所述組合物、調配物及單位劑量之製品，其用於本文所述治療方法、投與方法及劑量方案中。適於本文所述組合物之包裝為業內已知，且包括例如小瓶(例如密封小瓶)、容器(例如密封容器)、安瓿、瓶、罐、撓性包裝(例如，密封Mylar或塑膠袋)及諸如此類。該等製品可進一步經滅菌及/或密封。 套組、醫藥、藥劑及組合物 本發明亦提供用於本文所述方法中之任一者中之套組、醫藥、藥劑及組合物。 本發明之套組包括一或多個容器，其包含本文所述組合物(或單位劑型及/或製品)及/或另一治療劑(例如本文所述試劑)，且在一些實施例中，進一步包含根據本文所述方法中之任一者之使用說明書。套組可進一步包含適於治療之個體之選擇的說明。本發明套組中供應之說明書通常係標記或包裝插頁(例如，套組中包括之紙頁)上之書面說明書，但亦可接受機讀說明書(例如，載於磁性或光學存儲盤上之說明書)。 舉例而言，在一些實施例中，套組包含：(1) 包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽；及(2) 關於投與組合物用於治療疾病(例如癌症)之說明書。在一些實施例中，套組包含：(1) 包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽；(2) 有效量之另一治療劑；及(3) 關於投與組合物及另一治療劑用於治療疾病(例如癌症)之說明書。組合物及另一治療劑可存於單獨容器或單一容器中。 本發明之套組係呈適宜包裝。適宜包裝包括(但不限於)小瓶、瓶、罐、撓性包裝(例如，密封Mylar或塑膠袋)及諸如此類。套組可視情況提供額外組分，例如緩衝液及解釋性資訊。因此，本申請案亦提供製品，其包括小瓶(例如密封小瓶)、瓶、廣口瓶、撓性包裝及諸如此類。 關於本文所述組合物之使用之說明書通常包括關於預期治療之劑量、投藥時間表及投與途徑的資訊。容器可為單位劑量、體包裝(例如，多劑量包裝)或亞單位劑量。舉例而言，可提供含有足夠劑量之如本文揭示之組合物以提供個體之有效治療達延長時段(例如一週、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2週、3週、4週、6週、8週、3個月、4個月、5個月、7個月、8個月、9個月或更長時間中之任一者)達套組。套組亦可包括本文所述化合物之多個單位劑量及使用說明書且以足以在藥房(例如，醫院藥房及從事複方之藥房)中儲存及使用之量包裝。 亦提供用於本文所述方法中之醫藥、藥劑、組合及組合物。在一些實施例中，提供用於治療疾病(例如癌症)之包含奈米顆粒之醫藥(或組合物)，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，提供用於治療疾病(例如癌症)之包含奈米顆粒之醫藥(或組合物)，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽，其中醫藥(或組合物)進一步與另一治療劑一起投與。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物之用途，其用於製造用於個體之疾病(例如癌症)之藥劑，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物之用途，其用於製造用於個體之疾病(例如癌症)之藥劑，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽，其中藥劑進一步與另一治療劑一起投與。在一些實施例中，提供以下之用途：(1) 包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽，及(2) 另一治療劑，其用於製造用於個體之疾病(例如癌症)之藥劑組合。在一些實施例中，提供包含以下之組合：(1) 包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽，及(2) 另一治療劑，其用於治療有需要之個體之疾病(例如癌症)。 熟習此項技術者將認識到，若干實施例可能在本發明之範疇及精神內。現將參照以下非限制性實例更詳細地闡述本發明。以下實例進一步闡釋本發明，但當然不應理解為以任何方式限制本發明之範疇。 實例性實施例 以下實例性實施例僅用於闡釋性目的且並不意欲限制本發明之範疇。 實施例1. 一種包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 生物活性多肽。 實施例2. 如實施例1之組合物，其中該生物活性多肽偶聯至該白蛋白。 實施例3. 如實施例2之組合物，其中該生物活性多肽與該白蛋白共價交聯。 實施例4. 如實施例3之組合物，其中該生物活性多肽經由化學交聯劑與該白蛋白共價交聯。 實施例5. 如實施例3之組合物，其中該生物活性多肽經由二硫鍵與該白蛋白共價交聯。 實施例6. 如實施例2之組合物，其中該生物活性多肽經由非共價交聯劑偶聯至該白蛋白。 實施例7. 如實施例6之組合物，其中該生物活性多肽包含該非共價交聯劑之第一組分且該白蛋白包含該非共價交聯劑之第二組分，且其中該第一組分特異性結合至該第二組分。 實施例8. 如實施例7之組合物，其中該非共價交聯劑包含核酸分子，其中該等核酸分子之至少一部分係互補的。 實施例9. 如實施例1至8中任一項之組合物，其中該等奈米顆粒包含經該白蛋白塗佈之該疏水藥物之固體核心。 實施例10. 如實施例1或9之組合物，其中該生物活性多肽與該疏水藥物之該固體核心之表面締合。 實施例11. 如實施例9或10之組合物，其中該生物活性多肽之一部分包埋於該疏水藥物之該固體核心中。 實施例12. 如實施例1至11中任一項之組合物，其中該生物活性多肽與該等奈米顆粒上之該白蛋白締合。 實施例13. 如實施例12之組合物，其中該生物活性多肽包埋於該等奈米顆粒之表面中。 實施例14. 如實施例12或13之組合物，其中該生物活性多肽與該等奈米顆粒上之該白蛋白非共價締合。 實施例15. 如實施例12至14中任一項之組合物，其中該生物活性多肽與該等奈米顆粒上之該白蛋白共價締合。 實施例16. 如實施例1至15中任一項之組合物，其中該組合物中至少75%之該生物活性多肽與該等奈米顆粒締合。 實施例17. 如實施例1至16中任一項之組合物，其中奈米顆粒包含至少約100種生物活性多肽。 實施例18. 如實施例1至17中任一項之組合物，其中該組合物中之該等奈米顆粒中該疏水藥物對該生物活性多肽的重量比係約1:1至約100:1。 實施例19. 如實施例1至18中任一項之組合物，其中該等奈米顆粒中該白蛋白對該生物活性多肽之重量比係約1:1至約1000:1。 實施例20. 如實施例18或19之組合物，其中： 該疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(HPLC)測定，且該生物活性多肽及該白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定；或 該疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(HPLC)測定，該白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定，且該生物活性多肽之重量係藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定。 實施例21. 如實施例1至20中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含不與該等奈米顆粒締合之生物活性多肽。 實施例22. 如實施例1至21中任一項之組合物，其中該生物活性多肽係抗體或其片段。 實施例23. 如實施例22之組合物，其中該抗體或其片段特異性結合腫瘤相關之抗原。 實施例24. 如任一實施例22或23之組合物，其中該抗體或其片段選自由以下組成之群：全長抗體、單株抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、人類化抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二硫鍵鏈接之Fv、scFv、單一結構域抗體(dAb)、雙價抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體、抗個體遺傳型抗體、雙特異性抗體、其功能活性表位結合片段、雙功能雜合抗體及單鏈抗體。 實施例25. 如實施例24之組合物，其中該抗體或其片段係Fc片段。 實施例26. 如實施例1至13中任一項之組合物，其中該生物活性多肽係貝伐珠單抗、曲妥珠單抗、BGB-A317或托珠單抗。 實施例27. 一種包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，及(b) 經交聯劑部分衍化之白蛋白。 實施例28. 如實施例27之組合物，其中該等奈米顆粒包含經該白蛋白塗佈之該疏水藥物之固體核心。 實施例29. 如實施例1至19中任一項之組合物，其中該組合物中之該等奈米顆粒中該白蛋白對該疏水藥物的重量比係約1:1至約20:1。 實施例30. 如實施例29之組合物，其中該疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(HPLC)測定，且該白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定。 實施例31. 如實施例1至30中任一項之組合物，其中該組合物之該奈米顆粒部分中至少約40%之該白蛋白由二硫鍵交聯。 實施例32. 如實施例1至31中任一項之組合物，其中如藉由動態光散射量測之該等奈米顆粒之平均直徑不大於約200 nm。 實施例33. 如實施例1至32中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含不與該等奈米顆粒締合之白蛋白。 實施例34. 如實施例1至33中任一項之組合物，其中該疏水藥物係紫杉烷。 實施例35. 如實施例1至34中任一項之組合物，其中該疏水藥物係太平洋紫杉醇。 實施例36. 如實施例1至33中任一項之組合物，其中該疏水藥物係利莫司藥物。 實施例37. 如實施例1至33及36中任一項之組合物，其中該疏水藥物係雷帕黴素。 實施例38. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之該疏水藥物，且 其中該水溶液包含該白蛋白及該生物活性多肽；及 ii) 自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成該組合物。 實施例39. 如實施例38之方法，其中該生物活性多肽偶聯至該水溶液中之該白蛋白。 實施例40. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且 其中該水溶液包含該白蛋白； ii) 向該乳液中添加該生物活性多肽；及 iii) 自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成該組合物。 實施例41. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且 其中該水溶液包含該白蛋白； ii) 自該乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後懸浮液，及 iii) 向該蒸發後懸浮液中添加該生物活性多肽，藉此形成該組合物。 實施例42. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且 其中該水溶液包含該白蛋白； ii) 自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分而非全部以獲得乳液-懸浮液中間體； iii) 向該乳液-懸浮液中間體中添加該生物活性多肽；及 iv) 自包含該生物活性多肽之該乳液-懸浮液中間體移除該一或多種有機溶劑之另一部分，藉此形成該組合物。 實施例43. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且 其中該水溶液包含該白蛋白，其中該白蛋白經交聯劑部分衍化； ii) 自該乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後懸浮液，及 iii) 向該蒸發後懸浮液中添加該生物活性多肽，其中該生物活性多肽經交聯劑部分衍化，藉此形成該組合物。 實施例44. 如實施例43之方法，其進一步包含用非衍化白蛋白替代不與該等奈米顆粒締合之該衍化白蛋白。 實施例45. 如實施例44之方法，其中該替代係藉由透析。 實施例46. 如實施例44之方法，其中該替代係藉由緩衝液更換。 實施例47. 如實施例44之方法，其中該替代係藉由藉由離心分離該等奈米顆粒與不和該等奈米顆粒締合之該衍化白蛋白及用包含非衍化白蛋白之溶液再懸浮該等奈米顆粒。 實施例48. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i) 使有機溶液與水溶液之混合物經受高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含溶解於一或多種有機溶劑中之疏水藥物，且 其中該水溶液包含該白蛋白，其中該白蛋白之至少一部分偶聯至該生物活性多肽；及 ii) 自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成該組合物。 實施例49. 如實施例48之方法，其進一步包含用未偶聯之白蛋白替代不與該等奈米顆粒締合之該生物活性多肽偶聯之白蛋白。 實施例50. 如實施例48之方法，其中該替代係藉由透析。 實施例51. 如實施例48之方法，其中該替代係藉由緩衝液更換。 實施例52. 如實施例48之方法，其中該替代係藉由藉由離心分離該等奈米顆粒與不和該等奈米顆粒締合之該生物活性多肽偶聯之白蛋白及用包含未偶聯之白蛋白之溶液再懸浮該等奈米顆粒。 實施例53. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至該白蛋白之生物活性多肽，該方法包含使該生物活性多肽偶聯至包含該疏水藥物及白蛋白之奈米顆粒。 實施例54. 如實施例38至53中任一項之方法，其進一步包含在移除該等有機溶劑之前向該乳液中添加白蛋白。 實施例55. 如實施例38至54中任一項之方法，其進一步包含在移除該等有機溶劑後向該組合物中添加白蛋白。 實施例56. 如實施例38至55中任一項之方法，其進一步包含在移除該等有機溶劑後向該組合物中添加生物活性多肽。 實施例57. 如實施例38至56中任一項之方法，其進一步包含無菌過濾在移除該等有機溶劑後形成之該組合物。 實施例58. 如實施例38至57中任一項之方法，其中該疏水藥物係紫杉烷. 實施例59. 如實施例38至58中任一項之方法，其中該疏水藥物係太平洋紫杉醇。 實施例60. 如實施例38至59中任一項之方法，其中該疏水藥物係利莫司藥物。 實施例61. 如實施例38至57及60中任一項之方法，其中該疏水藥物係雷帕黴素。 實施例62. 如實施例38至61中任一項之方法，其中該生物活性多肽係抗體或其片段。 實施例63. 如實施例62之方法，其中該抗體或其片段特異性結合腫瘤相關之抗原。 實施例64. 如實施例62或63之方法，其中該抗體或其片段選自由以下組成之群：全長抗體、單株抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、人類化抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二硫鍵鏈接之Fv、scFv、單一結構域抗體(dAb)、雙價抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體、抗個體遺傳型抗體、雙特異性抗體、其功能活性表位結合片段、雙功能雜合抗體及單鏈抗體。 實施例65. 如實施例64之方法，其中該抗體或其片段係Fc片段。 實施例66. 如實施例38至65中任一項之方法，其中該生物活性多肽係貝伐珠單抗、曲妥珠單抗、BGB-A317或托珠單抗。 實施例67. 一種組合物，其係藉由如實施例38至66中任一項之方法獲得。 實施例68. 如實施例1至37及67中任一項之組合物，其中該組合物實質上不含表面活性劑。 實施例69. 如實施例1至37、67及68中任一項之組合物，其中該組合物係水性懸浮液。 實施例70. 如實施例1至37、67及68中任一項之組合物，其中該組合物係無水組合物。 實施例71. 如實施例70之組合物，其中該組合物經凍乾。 實施例72. 如實施例1至37及67至71中任一項之組合物，其進一步包含一或多種額外治療劑。 實施例73. 一種醫藥組合物，其包含如實施例1至37及67至72中任一項之組合物及醫藥上可接受之賦形劑。 實施例74. 一種密封小瓶，其包含如實施例1至37及67至73中任一項之組合物。 實施例75. 如實施例74之密封小瓶，其中該密封小瓶用於單次使用。 實施例76. 如實施例74之密封小瓶，其中該密封小瓶用於多次使用。 實施例77. 一種乳液，其包含：a) 包含奈米液滴之分散有機相，該等奈米液滴包含一或多種有機溶劑及疏水藥物，及b) 包含白蛋白及生物活性多肽之連續水相。 實施例78. 如實施例77之乳液，其中該白蛋白之至少一部分偶聯至該生物活性多肽。 實施例79. 如實施例77或78之乳液，其中該乳液中該白蛋白對該生物活性多肽之重量比係約1:1至約1000:1。 實施例80. 如實施例77至79中任一項之乳液，其中該乳液中該疏水藥物對該生物活性多肽之重量比係約1:1至約100:1。 實施例81. 一種乳液，其包含：a) 包含奈米液滴之分散有機相，該等奈米液滴包含該一或多種有機溶劑及疏水藥物中之一或多者，b) 包含經交聯劑部分衍化之白蛋白之連續水相。 實施例82. 如實施例77至81中任一項之乳液，其中該乳液中該白蛋白對該疏水藥物之重量比係約1:1至約20:1。 實施例83. 一種粗製混合物，其包含：a) 包含一或多種有機溶劑及疏水藥物之有機溶液，及b) 包含經交聯劑部分衍化之白蛋白之連續水相。 實施例84. 如實施例84之粗製混合物，其中該粗製混合物中該白蛋白對該疏水藥物之重量比係約1:1至約20:1。 實施例85. 一種治療個體之疾病之方法，其包含向該個體投與有效量之如實施例1至37及67至73中任一項之組合物。 實施例86. 如實施例85之方法，其進一步包含向該個體投與有效量之另一治療劑。 實施例87. 如實施例85或86之方法，其中該疾病係癌症。 實施例88. 如實施例85至87中任一項之方法，其中該組合物係經靜脈內投與該個體。 實施例89. 如實施例85至88中任一項之方法，其中該個體係人類。實例 實例 1 ： Avastin® 賦形劑對 Nab- 太平洋紫杉醇組合物之效應 包含於Avastin® (貝伐珠單抗)內之賦形劑包括磷酸鈉緩衝液，pH 6.2；α,α-海藻糖；及聚山梨醇酯20。藉由動態光散射量測顆粒粒徑分佈且在一些情形下使用0.2 μm膜量測過濾性來測定在該等賦形劑存在下在不同溫度及pH下包含白蛋白及太平洋紫杉醇之奈米顆粒之穩定性。以10 mg/mL之太平洋紫杉醇濃度重構包含白蛋白及太平洋紫杉醇之預製造之奈米顆粒(即，Abraxane®)並使其經受以下條件。 1. 將Abraxane®用生理鹽水溶液重構至10 mg/mL並將pH調節至7。於室溫下24小時後，奈米顆粒穩定(如藉由以下判斷：如藉由動態光散射測定之顆粒粒徑分佈無顯著變化、以及藉由目視及顯微鏡觀察顆粒、聚集物及沉降)。 2. 將Abraxane®用生理鹽水溶液重構至10 mg/mL並將pH調節至5。於室溫下24小時後，奈米顆粒不穩定，此最可能係由於在接近5之白蛋白等電點(pI)附近聚集。 3. 將Abraxane®用20% Avastin®緩衝液(5.8 mg/mL磷酸鈉(單鹼，一水合物)、1.2 mg/mL磷酸鈉(二鹼，無水) pH 6.2、60 mg/mL α,α-t海藻糖)，但排除聚山梨醇酯20)及80%生理鹽水重構至10 mg/mL，並將pH調節至7。於室溫下24小時後，奈米顆粒穩定，且顆粒粒徑分佈無顯著變化。推斷出磷酸鈉及α,α-海藻糖對奈米顆粒穩定性無顯著影響。 4. 將Abraxane®用20% Avastin®緩衝液(含有磷酸鈉緩衝液及α,α-海藻糖，但排除聚山梨醇酯20)及80%生理鹽水重構至10 mg/mL，並將pH調節至5。於室溫下24小時後，奈米顆粒不穩定。 5. 將Abraxane®用20% Avastin®緩衝液(含有磷酸鈉緩衝液及α,α-海藻糖，但排除聚山梨醇酯20)及80%生理鹽水重構至10 mg/mL，並將pH調節至5。於58℃下24小時後，奈米顆粒不穩定，此時檢測到奈米顆粒聚集物。參見圖7B。 6. 將Abraxane®用100% Avastin®緩衝液(含有磷酸鈉緩衝液及α,α-海藻糖，但排除聚山梨醇酯20)重構至10 mg/mL，且不調節pH (pH經量測為6.4)。於室溫下24小時後，奈米顆粒穩定，且顆粒粒徑分佈無顯著變化。參見圖7A。推斷出磷酸鈉及α,α-海藻糖對奈米顆粒穩定性無顯著影響。 7. 將Abraxane®用100% Avastin®緩衝液(含有磷酸鈉緩衝液及α,α-海藻糖及聚山梨醇酯20中之每一者)重構至10 mg/mL，且不調節pH (pH經量測為6.8)。在藉由光學顯微鏡觀看時奈米顆粒立即聚集(圖7C)，且於室溫下培育24小時後產生產生顯微顆粒及懸浮液之可視沉降。因此，Avastin®調配物中提供之濃度下之聚山梨醇酯表面活性劑自身影響奈米顆粒穩定性。 8. 將Abraxane®用100% Avastin®緩衝液(含有磷酸鈉緩衝液及α,α-海藻糖及聚山梨醇酯20 (0.04%)中之每一者)重構至10 mg/mL，並將pH調節至5。奈米顆粒在製備後立即聚集(平均粒逕自143 nm生長至159 nm)，且於室溫下24小時後，奈米顆粒繼續不穩定。 該等研究指示，Avastin®緩衝液中存在之聚山梨醇酯20引起Abraxane®奈米顆粒聚集。此外，將pH降低至5引起Abraxane®顆粒聚集。實例 2 ： 在白蛋白不存在下奈米顆粒製造過程步驟對貝伐珠單抗之穩定性之效應 在一些實施例中，包含白蛋白及疏水藥物之奈米顆粒包括混合水溶液中之白蛋白與包含一或多種溶劑及疏水藥物之有機溶液以形成粗製混合物、高壓均質化粗製混合物以形成乳液、蒸發有機溶劑以形成蒸發後奈米顆粒懸浮液、稀釋奈米顆粒懸浮液及過濾奈米顆粒懸浮液。藉由使貝伐珠單抗經受每一製造步驟測定在白蛋白及聚山梨醇酯20不存在下貝伐珠單抗耐受該等製造步驟中之每一者之能力。藉由粒徑篩析層析(SEC)分析每一製造步驟之試樣以測定剩餘貝伐珠單抗之量及其聚集狀態(即，藉由量測至高分子量物質之轉化)。 藉由離子交換層析以移除聚山梨醇酯20自Avastin®純化400 mg貝伐珠單抗(25 mg/mL貝伐珠單抗，400 mg/小瓶)。將400 mg貝伐珠單抗裝載至具有85 mL Capto S Impact管柱之製備型FPLC (ATKA Purifier)上。將管柱用5 M檸檬酸鈉(pH 5.0)洗滌，並用25 mM檸檬酸鈉(pH 5.0)、1 M NaCl溶析。於5℃下將純化之貝伐珠單抗針對1 L透析緩衝液(50 mM磷酸鈉緩衝液，pH 6.2)緩衝液更換兩次。藉由添加10.059 mL海藻糖原液(50 mM磷酸鈉緩衝液，pH 6.2，含有400 mg/mL α,α-海藻糖二水合物)調配透析之貝伐珠單抗。經調配貝伐珠單抗之最終組成係5.98 mg/mL (理論)、50 mM磷酸鈉(pH 6.2)、60 mg/mL α,α-海藻糖二水合物。經調配貝伐珠單抗中之貝伐珠單抗濃度係5.966 mg/mL，如藉由A280使用1.661之理論消光係數所測定。 藉由混合6.7 mL純化貝伐珠單抗原液(5.966 mg/mL)與11.7 mL水製備18.4 mL 2.18 mg/mL貝伐珠單抗溶液。使用設定於5400 rpm之高剪切混合器混合貝伐珠單抗溶液。在混合貝伐珠單抗溶液時，添加1.5 mL含有90% v/v氯仿及10% v/v乙醇之有機溶液。將有機溶液及水溶液混合5分鐘以產生粗製混合物，對其取樣並使其沉降，且沉降之上清液用於SEC量測。將粗製混合物轉移至高壓均質器中之容器。使用高壓均質器將粗製混合物均質化幾次，藉此形成乳液。對乳液取樣並使其沉降，且沉降之上清液用於SEC量測。將約18 mL高壓均質化乳液轉移至配備有2 L圓底蒸發燒瓶之旋轉蒸發器。維持蒸發燒瓶之真空壓力，並將蒸發部分浸沒於水浴中，將其設定於40℃下。自乳液蒸發有機溶劑(及一部分水)，並藉由改變燒瓶之旋轉速度及壓力(若需要)控制燒瓶內之起泡。蒸發約15分鐘後，所得體積係約2 mL。將蒸發後奈米顆粒懸浮液轉移至單獨容器並添加3 mL水。對稀釋之蒸發後奈米顆粒懸浮液取樣用於SEC量測。將約0.5 mL稀釋之蒸發後奈米顆粒懸浮液無菌過濾並取樣用於SEC量測。 粒徑篩析層析量測之結果示於圖8A中。該等量測包括未經處理之貝伐珠單抗、粗製混合物之上清液、高壓均質化乳液之上清液、稀釋之蒸發後懸浮液及過濾之試樣。後溶析之峰(圖之右側)闡釋貝伐珠單抗單體，且較早溶析之峰代表貝伐珠單抗之較高分子量物質。隨著處理進行，貝伐珠單抗單體之量減少。相對於添加至過程開始之貝伐珠單抗之初始濃度的每一步驟之貝伐珠單抗回收之分數示於圖8B中，此顯示在高壓均質化步驟中大部分貝伐珠單抗降解或聚集。實例 3 ： 白蛋白對製造過程中貝伐珠單抗之穩定性的效應 藉由使貝伐珠單抗經受每一製造步驟測定在不存在聚山梨醇酯20但包括不同量之人類白蛋白(HA)下貝伐珠單抗耐受每一製造步驟之能力。如實例2中所述製備貝伐珠單抗，只是在製造過程開始時在貝伐珠單抗製劑中包括1%、2.5%、5%或10%人類白蛋白。藉由粒徑篩析層析(SEC)分析每一製造步驟之試樣以測定剩餘貝伐珠單抗之量及其聚集狀態(即，藉由量測至高分子量物質之轉化)。 對於含有1% HA之製劑，合併0.945 mL 20%人類白蛋白、6.9 mL貝伐珠單抗原液(5.966 mg/mL，實例2)及11.1 mL水以製備水溶液用於處理。對於含有2.5% HA之製劑，合併2.363 mL 20%人類白蛋白、6.9 mL貝伐珠單抗原液(5.966 mg/mL，實例2)及9.6 mL水以製備水溶液用於處理。對於含有5% HA之製劑，合併4.85 mL 20%人類白蛋白、7 mL貝伐珠單抗原液(5.966 mg/mL，實例2)及7.55 mL水以製備水溶液用於處理。對於含有10% HA之製劑，合併9.45 mL 20%人類白蛋白、6.9 mL貝伐珠單抗原液(5.966 mg/mL，實例2)及2.55 mL水以製備水溶液用於處理。 使用設定於5400 rpm之高剪切混合器混合貝伐珠單抗溶液。在混合貝伐珠單抗溶液時，添加1.5 mL含有90% v/v氯仿及10% v/v乙醇之有機溶液。將有機溶液及水溶液混合5分鐘以產生粗製混合物，對其進行取樣用於SEC量測。將粗製混合物轉移至高壓均質器中之容器。使用高壓均質器將粗製混合物均質化幾次，藉此形成乳液。對乳液取樣用於SEC量測。將約18 mL高壓均質化乳液轉移至配備有2 L圓底蒸發燒瓶之旋轉蒸發器。維持蒸發燒瓶之真空壓力，並將蒸發部分浸沒於水浴中，將其設定於40℃下。自乳液蒸發有機溶劑(及一部分水)，並藉由改變燒瓶之旋轉速度及壓力(若需要)控制燒瓶內之起泡。蒸發約3-5分鐘後，量測所得體積。對此蒸發後奈米顆粒懸浮液取樣用於SEC量測。過濾此懸浮液之一部分並取樣用於SEC量測。 10% HA溶液之粒徑篩析層析量測的結果示於圖9A中。最後溶析之峰(約18.3分鐘)含有HA單體，且約17.6分鐘時溶析之峰含有貝伐珠單抗單體。較早溶析之峰代表人類白蛋白及/或貝伐珠單抗之較高分子量物質。藉由峰下面積量化每一物質之量。 圖9B顯示不同HA濃度下每一調配物(包括不含HA之調配物(實例2))之過程中每一步驟後回收的貝伐珠單抗之量。含有0%及1% HA之調配物損失大比例之添加至調配物中之初始貝伐珠單抗。對於含有2.5%、5%及10% HA之調配物中之每一者，在整個製造過程中保留大多數貝伐珠單抗，此指示調配物中存在至少2.5% HA免於經由嚴重降解及聚集而損失貝伐珠單抗。 圖9C顯示對於每一調配物之過程中每一步驟剩餘之貝伐珠單抗單體的量，其藉由對僅貝伐珠單抗單體峰進行積分達成。藉由量測未聚集貝伐珠單抗單體之分數，隨著增加調配物中之HA濃度，在處理期間不會不利地降解之貝伐珠單抗之分數單調增加(由於彼等試樣中存在較少量之貝伐珠單抗，稍後處理步驟之具有0% HA之調配物的結果不確定)。於10% HA下，約100%貝伐珠單抗在整個製造過程中保持為單體，此展現此濃度之HA可在奈米顆粒製造期間完全保護貝伐珠單抗免於降解。實例 4 ： 製造過程之不同階段時貝伐珠單抗之添加 比較向包含含有白蛋白之水相及含有有機溶劑之有機相之乳液中添加貝伐珠單抗之影響與奈米顆粒製造過程中較早包括貝伐珠單抗的影響。藉由粒徑篩析層析(SEC)分析每一製造步驟之試樣以測定剩餘貝伐珠單抗之量及其聚集狀態(即，藉由量測至高分子量物質之轉化)。 藉由混合4.6 mL HA原液(20%)與13.8 mL水製備18.4 mL 5%人類白蛋白(HA)溶液(水溶液)。在對照試樣中，合併4.85 mL 20%人類白蛋白、7 mL貝伐珠單抗原液(5.966 mg/mL，實例2)及7.55 mL水以製備水溶液。使用設定於5400 rpm之高剪切混合器混合水溶液。在混合貝伐珠單抗溶液時，添加1.5 mL含有90% v/v氯仿及10% v/v乙醇之有機溶液。將有機溶液及水溶液混合5分鐘以產生粗製混合物。將粗製混合物轉移至高壓均質器中之容器。經由高壓均質器將粗製混合物均質化幾次，藉此形成乳液。向粗製乳液中添加6.0 mL貝伐珠單抗原液(5.966 mg/mL，實例2)，並對乳液取樣用於SEC量測。將約24 mL高壓均質化乳液轉移至配備有2 L圓底蒸發燒瓶之旋轉蒸發器。維持蒸發燒瓶之真空壓力，並將蒸發部分浸沒於水浴中，將其設定於40℃下。自乳液蒸發有機溶劑(及一部分水)，並藉由改變燒瓶之旋轉速度及壓力(若需要)控制燒瓶內之起泡。蒸發約6分鐘後，所得體積經量測為約3 mL。向蒸發後奈米顆粒懸浮液中添加2 mL水，並對蒸發後奈米顆粒懸浮液取樣用於SEC量測。過濾此懸浮液之一部分並取樣用於SEC量測。 圖10A顯示對於兩種調配物之過程中每一步驟剩餘之貝伐珠單抗單體的量，其中在初始水溶液中添加貝伐珠單抗(對照)且其中在形成乳液後添加貝伐珠單抗。圖10B顯示對於兩種調配物之過程中每一步驟剩餘之貝伐珠單抗單體的量，其藉由對僅貝伐珠單抗單體峰進行積分達成。對於藉由向乳液中添加貝伐珠單抗產生之調配物而言，在過程結束時保留超過96%之貝伐珠單抗單體，與之相比，藉由在初始水溶液中添加貝伐珠單抗(對照)製得之調配物係約85%。此結果展現，在產生乳液後添加貝伐珠單抗可保護貝伐珠單抗免於在奈米顆粒製造期間過度降解，同時仍為貝伐珠單抗提供在完成顆粒形成之前與乳液液滴表面接觸及締合的機會。實例 5 ：含有白蛋白、太平洋紫杉醇及貝伐珠單抗之奈米顆粒之製造 製備1.6 mL 100 mg/mL太平洋紫杉醇於含有90% v/v氯仿及10% v/v乙醇之有機混合物之溶液(「有機溶液」)。單獨地，藉由混合4.725 mL HA原液、6.9 mL貝伐珠單抗原液及7.275 mL水製備18.4 mL含有5% HA溶液及2.2 mg/mL貝伐珠單抗之水溶液。使用設定於5400 rpm之高剪切混合器混合水溶液。在混合水溶液時，添加1.6 mL含有太平洋紫杉醇之有機溶液。將水溶液及有機溶液混合5分鐘以產生粗製混合物。可對粗製混合物取樣用於SEC量測。將粗製混合物轉移至高壓均質器中之容器。隨後藉由高壓均質器將粗製混合物均質化幾次。將約24 mL乳液轉移至配備有2 L圓底燒瓶及設定於40℃下之水浴的旋轉蒸發器。藉由施加並維持真空壓力及將旋轉圓底燒瓶部分浸沒於水浴中自乳液蒸發有機溶劑及一部分水。藉由改變燒瓶之旋轉速度及壓力(若需要)控制燒瓶內之起泡。蒸發約5分鐘後，所得體積係約4 mL，且將此轉移至單獨容器，其中添加4 mL水。可對此蒸發之懸浮液取樣用於SEC量測。隨後無菌過濾總剩餘體積之此懸浮液。可藉由動態光散射及SEC量測針對粒徑對所得顆粒懸浮液取樣。藉由超速離心回收顆粒。可測與奈米顆粒締合之貝伐珠單抗之量。 實例 6 ： Nab - 太平洋紫杉醇及貝伐珠單抗之混合物製造 根據以下方案在各種貝伐珠單抗濃度下形成nab -太平洋紫杉醇及貝伐珠單抗之混合物。 批料1. 向小瓶中之凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加1.6 mL Avastin® (貝伐珠單抗及賦形劑，25 mg/mL)及3.4 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加5 mL生理鹽水。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係10 mg/mL (具有90 mg/mL白蛋白)，且貝伐珠單抗之最終濃度係4 mg/mL。 批料2. 向小瓶中之凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加3.2 mL Avastin® (貝伐珠單抗及賦形劑，25 mg/mL)及1.8 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加5 mL生理鹽水。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係10 mg/mL (具有90 mg/mL白蛋白)，且貝伐珠單抗之最終濃度係8 mg/mL。 批料3. 向小瓶中之凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加6 mL Avastin® (貝伐珠單抗及賦形劑，25 mg/mL)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加4 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係10 mg/mL (具有90 mg/mL白蛋白)，且貝伐珠單抗之最終濃度係15 mg/mL。 對照批料4. 向小瓶中之凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加5 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加5 mL生理鹽水。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係10 mg/mL。 使用以下物質將每一懸浮液之試樣稀釋10倍：(1) 0.9% NaCl生理鹽水，(2) 注射用水(WFI)，(3) 磷酸鹽緩衝鹽水(PBS) (Amresco，自10× PBS稀釋)，(4) 藉由向試樣中添加WFI、於室溫下培育5分鐘、隨後快速添加大量10× PBS形成之WFI及10× PBS之9:1混合物，或(5)藉由向試樣中添加10× PBS、於室溫下培育5分鐘、隨後添加WFI形成之10× PBS及WFI之1:9混合物。藉由動態光散射(DLS)使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)量測稀釋後之粒徑及粒徑分佈。結果顯示於表1中。 表1：試樣之10倍稀釋後藉由DLS之粒徑及分佈 n.d. = 未測定。* = 試樣在WFI下不透明且在儲存期間沈澱。 ** = 試樣在WFI下不透明，但在添加10× PBS下恢復低濁度。 實例 7 ：在混合後貝伐珠單抗與 Nab - 太平洋紫杉醇締合 向小瓶中之凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加6 mL Avastin® (貝伐珠單抗及賦形劑，25 mg/mL)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加4 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係10 mg/mL (具有90 mg/mL白蛋白)，且貝伐珠單抗之最終濃度係15 mg/mL。 於20℃下將試樣以39,000 RPM (176,351 x g)離心70分鐘(具有Ti45轉子及鐵氟龍插入物之Beckman Optima LE-80超離心機)。上清液保留(試樣「S」)。將沈澱物用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌五次(試樣「W1」至「W5」)。向離心管中添加200度(proof)乙醇並對沈澱物進行超音波處理以溶解太平洋紫杉醇。於20℃下將經乙醇洗滌之試樣以10,000 RPM (14,029.3 x g)離心20分鐘，傾析上清液，並藉由凍乾乾燥試樣。將凍乾之沈澱物再懸浮於PBS中(試樣「P」)。 使保留之試樣經受免疫印跡分析。使試樣在MOPS緩衝液中之4-1% Bis-Tris SDS-PAGE凝膠上運行。將蛋白質轉移至硝化纖維素膜並使用抗HSA (人類血清白蛋白，1:5000小鼠)及抗人類IgG (1:2000兔)一級抗體、及IRDye標記之抗小鼠(1:20,000)及抗兔(1:20,000)二級抗體染色。 免疫印跡顯示在萃取太平洋紫杉醇後，沈澱物中保留貝伐珠單抗及白蛋白二者。此指示在Avastin®與nab -太平洋紫杉醇混合後，貝伐珠單抗與nab -太平洋紫杉醇締合。 實例 8 ： Nab - 太平洋紫杉醇及曲妥珠單抗之混合物製造 根據以下方案在各種曲妥珠單抗濃度下形成nab -太平洋紫杉醇及曲妥珠單抗之混合物。藉由向小瓶中添加20 mL注射用0.9% NaCl鹽水並使內容物溶解以提供21 mg/mL溶液來重構Herceptin® (曲妥珠單抗及賦形劑)。隨後輕柔混合小瓶以確保完全重構。 批料1. 向小瓶中之凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加0.476 mL重構Herceptin® (21 mg/mL)及9.524 mL注射用0.9% NaCl鹽水。使小瓶之內容物溶解15分鐘，之後輕柔旋動小瓶以確保完全溶解。隨後使溶解之內容物於室溫下靜置1小時。隨後向小瓶中添加10 mL注射用0.9% NaCl鹽水。太平洋紫杉醇之最終濃度係5 mg/mL，且曲妥珠單抗之最終濃度係0.5 mg/mL。 批料2. 向小瓶中之凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加3.808 mL重構Herceptin® (21 mg/mL)及6.192 mL注射用0.9% NaCl鹽水。使小瓶之內容物溶解15分鐘，之後輕柔旋動小瓶以確保完全溶解。隨後使溶解之內容物於室溫下靜置1小時。隨後向小瓶中添加10 mL注射用0.9% NaCl鹽水。太平洋紫杉醇之最終濃度係5 mg/mL，且曲妥珠單抗之最終濃度係4 mg/mL。 批料3. 向小瓶中之凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加7.14 mL重構Herceptin® (21 mg/mL)及2.86 mL注射用0.9% NaCl鹽水。使小瓶之內容物溶解15分鐘，之後輕柔旋動小瓶以確保完全溶解。隨後使溶解之內容物於室溫下靜置1小時。隨後向小瓶中添加10 mL注射用0.9% NaCl鹽水。太平洋紫杉醇之最終濃度係5 mg/mL，且曲妥珠單抗之最終濃度係7.5 mg/mL。 實例 9 ：與貝伐珠單抗或曲妥珠單抗混合之 Nab - 太平洋紫杉醇之離子強度影響 根據實例6及8中所述之方案混合Nab -太平洋紫杉醇與貝伐珠單抗或曲妥珠單抗(抗體對nab -太平洋紫杉醇之比率為8:10或15:10)。將奈米顆粒懸浮液用WFI或不同濃度之NaCl鹽水稀釋。藉由動態光散射(DLS)使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)量測稀釋後之粒徑(Z-平均直徑，奈米)。結果顯示於圖11中。 低離子強度介質中之單獨貝伐珠單抗或單獨nab -太平洋紫杉醇之10倍稀釋不引起粒徑增加。然而，低離子強度介質中之nab -太平洋紫杉醇及抗體之混合物之10倍稀釋引起粒徑增加。對於以15:10之曲妥珠單抗對太平洋紫杉醇比率與nab -太平洋紫杉醇混合之曲妥珠單抗而言，顆粒在小於0.15% (25 mM) NaCl中大小增加，且對於以8:10之曲妥珠單抗對太平洋紫杉醇比率與nab -太平洋紫杉醇混合之曲妥珠單抗而言，顆粒在小於0.075% (12.5 mM) NaCl中大小增加。對於與nab -太平洋紫杉醇混合之貝伐珠單抗(貝伐珠單抗對太平洋紫杉醇之比率為15:10)而言，顆粒在小於0.05% (9 mM) NaCl中大小增加。如自圖11中所示之結果可見，低離子強度介質(例如，WFI)引起粒徑增加且較高離子強度介質減小粒徑直至其達到對照試樣之大小為止。粒徑變化可能係由於抗體與nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒上游離白蛋白或表面結合之白蛋白的靜電締合。大小增加取決於介質之離子強度、抗體之類型(例如，貝伐珠單抗或曲妥珠單抗)及混合物中抗體之濃度。若增加離子強度，則粒徑增加係可逆的。 實例 10 ：用與貝伐珠單抗混合之 Nab - 太平洋紫杉醇治療 A375 小鼠異種移植物 向小鼠中皮下注射A375人類黑色素瘤細胞以生成異種移植物模型。在根據以下方案進行治療之前，使腫瘤生長至約600 mm3 。除非說明，否則每一方案治療9隻小鼠。 同類群組1 - 媒劑對照(「媒劑」)。藉由在無菌30 mL PETG容器中一起混合960 mg去水α,α-海藻糖、92.8 mg磷酸鈉(單鹼，一水合物)、19.2 mg磷酸鈉(二鹼，無水)、6.4 mg聚山梨醇酯20及16 mL注射用水(WFI)來製備Avastin®緩衝液。隨後使Avastin®緩衝液通過0.2 μm無菌過濾。混合96 μL Avastin®緩衝液與270 μL 200 mg/mL人類白蛋白溶液及834 μL注射用0.9% NaCl鹽水。在實驗第二天以120 μL/小鼠之劑量向每一小鼠投與媒劑對照。 同類群組2 - 30 mg/kg太平洋紫杉醇劑量之nab -太平洋紫杉醇(「ABX30」)。使用20 mL注射用0.9% NaCl鹽水以將凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)重構至5 mg/mL太平洋紫杉醇之濃度。每一小鼠稱重約0.02 kg，且在實驗第二天以120 μL/小鼠之劑量向每一小鼠投與重構nab -太平洋紫杉醇。 同類群組3 - 12 mg/kg劑量之貝伐珠單抗(「BEV12」)。將96 μL貝伐珠單抗(Avastin®, 25 mg/mL)用904 μL注射用0.9% NaCl鹽水稀釋至2.4 mg/mL貝伐珠單抗之最終濃度。每一小鼠稱重約0.02 kg，且在實驗第二天以100 μL/小鼠之劑量向每一小鼠投與稀釋之Avastin®。 同類群組4 – 同一天之BEV12及ABX30 (「BEV12 + ABX30 – 同一天」)。在實驗第二天向每一小鼠投與100 μL/小鼠之如針對同類群組3 (「BEV12」)製備之稀釋之Avastin®及120 μL/小鼠之如針對同類群組2 (「ABX30」)製備之nab -太平洋紫杉醇。 同類群組5 - BEV12、之後1天後ABX30 (「BEV12 + ABX30 – 間隔1天」)；治療8隻小鼠。在實驗第一天向每一小鼠投與100 μL/小鼠之如針對同類群組3 (「BEV12」)製備之稀釋之Avastin®。在實驗第二天向每一小鼠投與120 μL/小鼠之如針對同類群組2 (「ABX30」)製備之nab -太平洋紫杉醇。 同類群組6 -與貝伐珠單抗(12 mg/kg)混合之Nab -太平洋紫杉醇(30 mg/kg太平洋紫杉醇) (「AB160」)。將凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)用1.6 mL貝伐珠單抗(Avastin®，25 mg/mL)及3.4 mL注射用0.9% NaCl鹽水重構。將混合物於室溫下培育1小時，之後添加15 mL注射用0.9% NaCl鹽水，從而產生5 mg/mL太平洋紫杉醇及2 mg/mL貝伐珠單抗之最終濃度。在實驗第二天以120 μL/小鼠之劑量向每一小鼠投與混合物。 在實驗第7天量測腫瘤體積，且每一同類群組中之每一小鼠之腫瘤體積變化%示於圖12中。同一天(「BEV12 + ABX30 – 同一天」)或間隔一天(「BEV12 + ABX30 - 間隔1天」)投與之nab -太平洋紫杉醇與貝伐珠單抗之混合物(「AB160」)之間未觀察到顯著差異。然而，與單獨nab -太平洋紫杉醇(「ABX30」；p = 0.0034)、單獨貝伐珠單抗(「BEV12」；p = 0.006)或媒劑對照(「媒劑」；p ＜ 0.0001)相比，nab -太平洋紫杉醇與貝伐珠單抗之混合物(「AB160」)引起統計上顯著減少。使用未配對t-測試測定p-值。 亦記錄經治療小鼠之存活時間。將腫瘤大於2000 mm3 之小鼠安樂死。中值存活時間及有關p-值示於表2中。如藉由p-值所示，經nab -太平洋紫杉醇與貝伐珠單抗之混合物(「AB160」)及單獨投與之nab -太平洋紫杉醇及貝伐珠單抗(「BEV12 + ABX30 – 同一天」或「BEV12 + ABX30 – 間隔1天」)治療之小鼠之存活無顯著差異。 表2：A375黑色素瘤異種移植物模型之存活研究 N/A = 不適用；N/S = 不顯著。 實例 11 ：具有 包埋 之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒之製造 在混合的同時合併27.6 mL 15 mg/mL之人類血清白蛋白(HSA)溶液(於水中)與2.4 mL 200 mg/mL之太平洋紫杉醇溶液(CHCl3 及乙醇之90/10混合物)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化。使額外5 mL 15 mg/mL HSA通過均質器以收集35 mL之最終體積。使混合物通過均質器達若干循環，之後向均質器中添加額外20 mL 15 mg/mL HSA以追蹤乳液。收集總共40 mL微細乳液。向微細乳液中添加0.714 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®)及3.426 mL 0.9% NaCl，之後使微細乳液經受旋轉蒸發。使用旋轉蒸發器自微細乳液移除液體，直至9.3 mL試樣保留為蒸發後懸浮液。將蒸發後懸浮液轉移至閃爍小瓶，並將旋轉蒸發器用1.5 mL注射用水(WFI)之等分試樣洗滌兩次，該等等分試樣添加至閃爍小瓶(12.3 mL最終體積)中。將所得蒸發後懸浮液於5℃下儲存過夜。 將蒸發後懸浮液自冷儲存移除並平衡至室溫。將12 mL蒸發後懸浮液與10.84 mL 200 mg/mL HSA及33.82 mL 0.9% NaCl混合。隨後過濾混合物，之後量測粒徑及太平洋紫杉醇濃度。藉由在1.5 mL 0.9% NaCl鹽水中稀釋50 µL蒸發後懸浮液使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)藉由動態光散射(DLS)量測粒徑及分佈。經過濾之懸浮液之Z-平均直徑係145.5 nm，且多分散性指數(PDI)為0.159。經過濾之懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC量測為6.21 mg/mL。將經過濾之懸浮液於-80℃下冷凍過夜。 將冷凍、過濾之懸浮液自冷儲存移除並使其解凍並平衡至室溫。向48 mL經過濾之懸浮液中添加0.829 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®)及10.787 mL 0.9% NaCl以調節懸浮液之濃度以包括5 mg/mL太平洋紫杉醇及0.5 mg/mL曲妥珠單抗。將最終懸浮液等分至小瓶(3 mL/小瓶)中並於-80℃下儲存。一個試樣等分試樣未經冷凍且分析粒徑(Z-平均直徑為145.6 nm，藉由DLS)、粒徑分佈(PDI為0.130，藉由DLS)、太平洋紫杉醇濃度(5.0 mg/mL，藉由RP-HPLC)、曲妥珠單抗濃度(0.53 mg/mL，藉由SEC-HPLC)及滲透壓(266 mOSm)。 實例 12 ：具有 包埋 之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒之製造 藉由在製造過程期間之不同時間點包括曲妥珠單抗製造包括包埋之曲妥珠單抗之nab -太平洋紫杉醇的4個批料。將曲妥珠單抗(1) 添加至微細乳液中並培育10分鐘，之後藉由旋轉蒸發處理，(2) 添加至微細乳液中，藉由旋轉蒸發立刻對其進行處理，(3) 在旋轉蒸發約3分鐘後添加至微細乳液中，或(4) 在旋轉蒸發後立刻添加至蒸發後懸浮液中。亦製造無曲妥珠單抗之nab -太平洋紫杉醇之對照批料(5)。 批料1. 在混合的同時合併27.6 mL 15 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液(於水中)與2.4 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(CHCl3 及乙醇之90/10混合物)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化。使混合物通過均質器達若干循環，之後向均質器中添加額外20 mL 15 mg/mL HSA以追蹤乳液。向乳液中添加2.14 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，於0.9% NaCl鹽水中)及2.00 mL 0.9% NaCl鹽水並於室溫下培育10分鐘，之後藉由旋轉蒸發處理乳液。使乳液經受旋轉蒸發以將體積減少至5.0 mL。隨後將蒸發後懸浮液轉移至閃爍小瓶。將旋轉蒸發器燒瓶用2.5 mL注射用水(WFI)洗滌，並將洗滌物添加至小瓶中。將旋轉蒸發器燒瓶用2.5 mL WFI再次洗滌，隨後將其添加至小瓶中。 批料2. 在混合的同時合併27.6 mL 15 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液(於水中)與2.4 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(CHCl3 及乙醇之90/10 混合物)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化。使混合物通過均質器達若干循環，之後向均質器中添加額外20 mL 15 mg/mL HSA以追蹤乳液。向乳液中添加2.14 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，於0.9% NaCl鹽水中)及2.00 mL 0.9% NaCl鹽水，簡單旋動，並立刻藉由旋轉蒸發處理。使乳液經受旋轉蒸發以將體積減少至6.0 mL。隨後將蒸發後懸浮液轉移至閃爍小瓶。將旋轉蒸發器燒瓶用2.0 mL注射用水(WFI)洗滌，並將洗滌物添加至小瓶中。將旋轉蒸發器燒瓶用2.0 mL WFI再次洗滌，隨後將其添加至小瓶中。 批料3. 在混合的同時合併27.6 mL 15 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液(於水中)與2.4 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(CHCl3 及乙醇之90/10混合物)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化。使混合物通過均質器達若干循環，之後向均質器中添加額外20 mL 15 mg/mL HSA以追蹤乳液。立刻使用旋轉蒸發器將乳液處理3分鐘，之後向乳液中添加2.14 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，於0.9% NaCl鹽水中)及2.00 mL 0.9% NaCl鹽水。在向乳液中添加曲妥珠單抗及鹽水後，立刻繼續使用旋轉蒸發器處理，直至試樣之體積係6.8 mL。隨後將蒸發後懸浮液轉移至閃爍小瓶。將旋轉蒸發器燒瓶用1.6 mL注射用水(WFI)洗滌，並將洗滌物添加至小瓶中。將旋轉蒸發器燒瓶用1.6 mL WFI再次洗滌，隨後將其添加至小瓶中。 批料4. 在混合的同時合併27.6 mL 15 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液(於水中)與2.4 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(CHCl3 及乙醇之90/10混合物)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化。使混合物通過均質器達若干循環，之後向均質器中添加額外20 mL 15 mg/mL HSA以追蹤乳液。立刻使用旋轉蒸發器處理乳液以將體積減少至約10 mL。向蒸發後溶液中添加2.14 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，於0.9% NaCl鹽水中)及2.00 mL 0.9% NaCl鹽水，使用旋轉蒸發器對其進一步處理以將體積減少至7.0 mL。隨後將蒸發後懸浮液轉移至閃爍小瓶。將旋轉蒸發器燒瓶用1.5 mL注射用水(WFI)洗滌，並將洗滌物添加至小瓶中。將旋轉蒸發器燒瓶用1.5 mL WFI再次洗滌，隨後將其添加至小瓶中。 批料5 (對照nab -太平洋紫杉醇). 在混合的同時合併27.6 mL 15 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液(於水中)與2.4 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(CHCl3 及乙醇之90/10混合物)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化。使混合物通過均質器達若干循環，之後向均質器中添加額外20 mL 15 mg/mL HSA以追蹤乳液。向乳液中添加4.14 mL 0.9% NaCl鹽水，並使乳液經受旋轉蒸發，直至所得蒸發後懸浮液之體積係6.4 mL為止。隨後將蒸發後懸浮液轉移至閃爍小瓶。將旋轉蒸發器燒瓶用1.8 mL注射用水(WFI)洗滌，並將洗滌物添加至小瓶中。將旋轉蒸發器燒瓶用1.8 mL WFI再次洗滌，隨後將其添加至小瓶中。 針對每一批料之蒸發後懸浮液(在洗滌旋轉蒸發器及將洗滌物添加至試樣中之後)藉由動態光散射(DLS)量測平均粒徑及多分散性指數，且結果示於表3中。藉由用1.5 mL 0.9% NaCl生理鹽水稀釋50 μL蒸發後懸浮液使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)實施DLS量測。 表3：蒸發後懸浮液之粒徑直徑及多分散性指數 最終批料之粒徑(藉由DLS量測)顯示對於在製造過程中較早添加抗體之批料粒徑較大的趨勢。與未添加抗體之對照批料(批料5)相比，所有含有抗體之批料皆具有較大粒徑。對於批料1 (抗體添加至乳液中，隨後於室溫下培育10分鐘，之後開始旋轉蒸發)觀察到最大粒徑，此可能係由於在旋轉蒸發移除液滴中之溶劑並產生固體顆粒之前乳液液滴聚結。在藉由旋轉蒸發溶劑移除之前，其他批料(批料2、3、4)不包括任何培育時間，且該等批料相對於對照(批料1)觀察到較小粒徑增加。 測定蒸發後懸浮液中之太平洋紫杉醇及曲妥珠單抗之濃度。藉由RP-HPLC測定太平洋紫杉醇濃度，且藉由SEC-HPLC測定曲妥珠單抗濃度。結果顯示於表4中。 表4：蒸發後懸浮液中之太平洋紫杉醇及曲妥珠單抗濃度 對2 mL蒸發後懸浮液進行離心以沈澱顆粒，且移除上清液以自奈米顆粒分離未結合之曲妥珠單抗。將沈澱物再懸浮於2 mL新鮮磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中。藉由SEC-HPLC及ELISA (曲妥珠單抗ELISA分析套組，編號1G-AA105，Eagle Bioscience)量測再懸浮奈米顆粒中之曲妥珠單抗之濃度，且結果示於表5中。基於蒸發後懸浮液中曲妥珠單抗之濃度及經洗滌奈米顆粒懸浮液中曲妥珠單抗之濃度(SEC-HPLC及ELISA量測之平均值)之蒸發後懸浮液中與奈米顆粒締合之曲妥珠單抗之百分比亦顯示於表5中。在即將蒸發前添加曲妥珠單抗且未培育產生懸浮液中與奈米顆粒締合之曲妥珠單抗之最高分數，其為5.76%。 表5：經洗滌奈米顆粒懸浮液中之曲妥珠單抗濃度 實例 13 ：藉由在均質化之前向水溶液中添加曲妥珠單抗製造具有包埋之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒 將曲妥珠單抗(Herceptin®)在注射用水(WFI)中重構至21 mg/mL之濃度。混合7.14 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗與5 mL 200 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)、2.86 mL水及5 mL 0.9% NaCl生理鹽水以形成50 mg/mL HSA及7.5 mg/mL曲妥珠單抗之溶液。混合18.4 mL HSA/曲妥珠單抗溶液與1.6 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(溶解於90/10 CHCl3 /乙醇中)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化若干循環以形成微細乳液。向均質器中添加15 mL 50 mg/mL HSA溶液以追蹤微細乳液，並收集25.5 mL微細乳液。立刻將微細乳液轉移至旋轉蒸發器以獲得7.3 mL之蒸發後體積。 使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。藉由用1.5 mL 0.9% NaCl生理鹽水稀釋20 μL蒸發後懸浮液使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)實施DLS量測。蒸發後懸浮液之平均粒徑經測定為147.8 nm，且PDI經測定為0.131。 蒸發後溶液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC測定為25.88 mg/mL。總HSA濃度及曲妥珠單抗濃度藉由SEC-HPLC分別量測為117 mg/mL及16.2 mg/mL。 將蒸發後懸浮液於-20℃下冷凍過夜，之後解凍並容許其平衡至室溫。使用0.9% NaCl生理鹽水或WFI作為稀釋劑再次使用動態光散射(DLS)以量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。在使用0.9% NaCl生理鹽水作為稀釋劑時，平均粒徑經測定為147.8 nm，且PDI經測定為0.145。在使用WFI作為稀釋劑時，平均粒徑經測定為2354 nm，且PDI經測定為0.500。 將解凍之蒸發後懸浮液用2.7 mL WFI稀釋至10 mL之最終體積。於20℃下使用具有Ti45轉子及鐵氟龍插入物之Beckman Optima LE-80離心機將8 mL (分成兩份)稀釋之蒸發後懸浮液以39,000 RPM離心70分鐘以沈澱奈米顆粒。抽出頂部3 mL上清液作為上清液1，且抽出底部約1 mL上清液作為上清液2。將沈澱物用4.0 mL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌三次，作為洗滌物1、洗滌物2及洗滌物3。將第一離心管中之沈澱物再懸浮於3.0 mL乙醇中，渦旋，並進行超音波處理以自沈澱物萃取太平洋紫杉醇。將試樣再次離心，並抽出上清液作為沈澱物1。將第二離心管中之沈澱物再懸浮於4.0 mL PBS中，渦旋，超音波處理，並抽出作為沈澱物2。藉由RP-HPLC分析試樣之太平洋紫杉醇含量，且藉由SEC-HPLC分析HSA或曲妥珠單抗含量。該等結果顯示於表6中。 表6：藉由離心分析之蒸發後(PE)懸浮液中且與奈米顆粒(NP)締合之HSA、曲妥珠單抗(Tz)及太平洋紫杉醇(PTX) * =自上清液1、上清液2、洗滌物1、洗滌物2、洗滌物3及沈澱物2總和測定之總數，基於8 mL經處理試樣。 實例 14 ：藉由均質化後向乳液中添加曲妥珠單抗製造具有包埋之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒 混合18.4 mL 50 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)與1.6 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(溶解於90/10 CHCl3 /乙醇中)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化若干循環以形成微細乳液。向均質器中添加15 mL 50 mg/mL HSA溶液以追蹤微細乳液，並收集22 mL微細乳液。立刻將收集之微細乳液轉移至含有7.15 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，溶解於注射用水(WFI)中)及5 mL 0.9% NaCl生理鹽水之圓底燒瓶。將圓底燒瓶轉移至旋轉蒸發器，其中乳液之體積減少至10 mL蒸發後懸浮液。 使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)實施DLS量測。在1 cm2 可棄式比色管中混合1.5 mL 0.9% NaCl生理鹽水稀釋劑與20 μL蒸發後懸浮液。在使用儀器選擇之衰減器位準以173˚之檢測角及1.15 mm之固定量測位置平衡2分鐘後於25℃下進行量測。量測一式三份進行，且每一量測60秒持續時間。使用一般分析模型計算粒徑分佈，顆粒折射率為1.465+0i，分散劑黏度為0.8872 cP，且分散劑折射率為1.330+0i。蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)經測定為141.6 nm，且PDI經測定為0.110。 蒸發後懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC測定為18.18 mg/mL。總HSA濃度及曲妥珠單抗濃度藉由SEC-HPLC分別量測為76 mg/mL及15.6 mg/mL。 將蒸發後懸浮液於-20℃下冷凍過夜，之後解凍並容許其平衡至室溫。使用0.9% NaCl生理鹽水或WFI作為稀釋劑再次使用動態光散射(DLS)以量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。在使用0.9% NaCl生理鹽水作為稀釋劑時，平均粒徑經測定為142.2 nm，且PDI經測定為0.125。在使用WFI作為稀釋劑時，平均粒徑經測定為2295 nm，且PDI經測定為0.587。 將解凍之蒸發後懸浮液用2.7 mL WFI稀釋至10 mL之最終體積。於20℃下使用具有Ti45轉子及鐵氟龍插入物之Beckman Optima LE-80離心機將8 mL (分成兩份)稀釋之蒸發後懸浮液以39,000 RPM離心70分鐘以沈澱奈米顆粒。抽出頂部3 mL上清液作為上清液1，且抽出底部約1 mL上清液作為上清液2。將沈澱物用4.0 mL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌三次，作為洗滌物1、洗滌物2及洗滌物3。將第一離心管之沈澱物再懸浮於3.0 mL乙醇中，渦旋，並進行超音波處理以自沈澱物萃取太平洋紫杉醇。將試樣再次離心，並抽出上清液作為沈澱物1。將第二離心管之沈澱物再懸浮於4.0 mL PBS中，渦旋，超音波處理，並抽出作為沈澱物2。藉由RP-HPLC分析試樣之太平洋紫杉醇含量，且藉由SEC-HPLC分析HSA或曲妥珠單抗含量。該等結果顯示於表7中。 表7：藉由離心分析之蒸發後(PE)懸浮液中且與奈米顆粒(NP)締合之HSA、曲妥珠單抗(Tz)及太平洋紫杉醇(PTX) * =自上清液1、上清液2、洗滌物1、洗滌物2、洗滌物3及沈澱物2總和測定之總數，基於8 mL經處理試樣。 實例 15 ：藉由向蒸發後懸浮液中添加曲妥珠單抗製造具有包埋之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒 混合18.4 mL 50 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)與1.6 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(溶解於90/10 CHCl3 /乙醇中)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化若干循環以形成微細乳液。向均質器中添加15 mL 50 mg/mL HSA溶液以追蹤微細乳液，並收集20 mL微細乳液。立刻將收集之微細乳液轉移至圓底燒瓶並使用旋轉蒸發器處理，直至獲得7.9 mL之最終蒸發後懸浮液。 使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。藉由用1.5 mL 0.9% NaCl生理鹽水稀釋150 μL蒸發後懸浮液使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)實施DLS量測。蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)經測定為140.2 nm，且PDI經測定為0.088。 蒸發後懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC測定為20.73 mg/mL。蒸發後懸浮液之HSA濃度藉由SEC-HPLC量測為77.7 mg/mL。 將蒸發後懸浮液於-20℃下冷凍過夜，之後解凍並容許其平衡至室溫。再次使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。平均粒徑經測定為132.3 nm，且PDI經測定為0.094。 再次將蒸發後懸浮液於-20℃下冷凍過夜，之後解凍並容許其平衡至室溫。在解凍後觀察到懸浮液為乳白色。經解凍之蒸發後懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC測定為20.70 mg/mL。向7.9 mL蒸發後懸浮液中添加3.47 mL 200 mg/mL HSA及11.37 mL 21.5 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，於0.9% NaCl生理鹽水中)。在室溫下將混合物培育1小時。再次使用動態光散射(DLS)以量測具有曲妥珠單抗之懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。平均粒徑經測定為139.9 nm，且PDI經測定為0.105。經解凍之懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC測定為7.2 mg/mL。 使用1.2 μm過濾器過濾具有曲妥珠單抗之懸浮液。再次使用動態光散射(DLS)量測經過濾懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。平均粒徑經測定為136.9 nm，且PDI經測定為0.119。經解凍之懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC測定為7.1 mg/mL。使用VirTis Genesis EL25架式凍乾機(SP Industries, Gardiner, NY)將經過濾之懸浮液凍乾成四個2 mL等分試樣並於-80℃下儲存。 將經過濾之懸浮液之第一凍乾之等分試樣自-80℃移除，平衡至室溫並用2 mL 0.9% NaCl生理鹽水重構並於室溫下培育24小時。使用動態光散射(DLS)量測具有曲妥珠單抗之懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。平均粒徑經測定為141.4 nm，且PDI經測定為0.081。 將經過濾之懸浮液之第二凍乾之等分試樣自-80℃移除，平衡至室溫並用2 mL 0.9% NaCl生理鹽水重構。10-15分鐘後，使用動態光散射(DLS)量測具有曲妥珠單抗之懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。平均粒徑經測定為141.8 nm，且PDI經測定為0.112。 實例 16 ：藉由在均質化之前向水溶液中添加曲妥珠單抗製造具有包埋之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒 藉由納入含有15 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)及15 mg/mL曲妥珠單抗於初始混合物水溶液中之溶液製造奈米顆粒組合物之第一批料。藉由納入含有30 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)及15 mg/mL曲妥珠單抗於初始混合物水溶液中之溶液製造奈米顆粒組合物之第二批料。作為對照，使用15 mg/mL HSA及無曲妥珠單抗製造奈米顆粒組合物之第三批料。 批料1. 合併4.01 mL注射用水(WFI)、1.425 mL 200 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)、13.57 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，於注射用水(WFI)中)及87.3 mg NaCl以獲得19 mL含有15 mg/mL HSA及15 mg/mL曲妥珠單抗之溶液。向18.4 mL HSA/曲妥珠單抗溶液中添加1.6 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇(溶解於90/10 CHCl3 /乙醇中)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化若干循環以形成微細乳液。向均質器中添加15 mL WFI以追蹤微細乳液，並收集20 mL微細乳液。藉由旋轉蒸發器處理微細乳液，直至所得蒸發後懸浮液之體積係5.6 mL。使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。藉由用1.5 mL 0.9% NaCl生理鹽水稀釋50 μL蒸發後懸浮液使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)實施DLS量測。蒸發後懸浮液之平均粒徑經測定為134.8 nm，且PDI經測定為0.084。 批料2. 將85.5 mg NaCl溶解於2.85 mL注射用水(WFI)中以形成3% NaCl鹽水溶液。合併2.85 mL 200 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)及13.57 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，於注射用水(WFI)中)與3% NaCl鹽水溶液以獲得19 mL含有30 mg/mL HSA及15 mg/mL曲妥珠單抗之溶液。向18.4 mL HSA/曲妥珠單抗溶液中添加1.6 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇(溶解於90/10 CHCl3 /乙醇中)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化若干循環以形成乳液。向均質器中添加15 mL 0.045% NaCl鹽水以追蹤微細乳液，並收集20 mL微細乳液。藉由旋轉蒸發器處理微細乳液，直至所得蒸發後懸浮液之體積係5.4 mL為止。如針對批料1所述使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。蒸發後懸浮液之平均粒徑經測定為153.8 nm，且PDI經測定為0.124。 批料3. 混合18.4 mL 15 mg/mL HSA與1.6 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇(溶解於90/10 CHCl3 /乙醇中)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化若干循環以形成乳液。向均質器中添加15 mL 15 mg/mL以追蹤微細乳液，並收集20 mL微細乳液。藉由旋轉蒸發器處理微細乳液，直至所得蒸發後懸浮液之體積係7.2 mL為止。如針對批料1所述使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。蒸發後懸浮液之平均粒徑經測定為142.9 nm，且PDI經測定為0.133。 藉由RP-HPLC量測批料1、批料2及批料3之蒸發後懸浮液的太平洋紫杉醇濃度。批料1之蒸發後懸浮液中太平洋紫杉醇之濃度係29.19 mg/mL，批料2係35.59 mg/mL，且批料3係22.77 mg/mL。將每一批料之蒸發後懸浮液用0.9% NaCl生理鹽水稀釋以達到7.00 mg/mL之太平洋紫杉醇濃度。 將每一批料之8 mL經稀釋之蒸發後懸浮液分至兩個離心管中。於-20℃冷凍未使用之部分。於20℃下使用具有Ti45轉子及鐵氟龍插入物之Beckman Optima LE-80離心機將試樣以39,000 RPM離心70分鐘以沈澱奈米顆粒。自每一試樣抽出頂部3 mL上清液作為上清液1，且抽出底部約1 mL上清液作為上清液2。將沈澱物用4.0 mL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌兩次，作為洗滌物1及洗滌物2。將兩個離心管中之第一個之沈澱物再懸浮於3.0 mL乙醇中，渦旋，並進行超音波處理以自沈澱物萃取太平洋紫杉醇。將試樣再次離心，並抽出上清液作為沈澱物1。將兩個離心管中之第二個之沈澱物再懸浮於4.0 mL PBS中，渦旋，超音波處理，並抽出作為沈澱物2。藉由RP-HPLC分析試樣之太平洋紫杉醇含量，且藉由SEC-HPLC分析HSA或曲妥珠單抗含量。該等結果顯示於表8及9中。 表8：批料1-藉由離心分析之蒸發後(PE)懸浮液中且與奈米顆粒(NP)締合之HSA、曲妥珠單抗(Tz)及太平洋紫杉醇(PTX) *對於8 mL經處理之試樣基於7.00 mg/mL太平洋紫杉醇。** =自上清液1、上清液2、洗滌物1、洗滌物2及沈澱物2總和測定之總數，基於8 mL經處理試樣。 表9：批料2-藉由離心分析之蒸發後(PE)懸浮液中且與奈米顆粒(NP)締合之HSA、曲妥珠單抗(Tz)及太平洋紫杉醇(PTX) *對於8 mL經處理之試樣基於7.00 mg/mL太平洋紫杉醇。** =自上清液1、上清液2、洗滌物1、洗滌物2及沈澱物2總和測定之總數，基於8 mL經處理試樣。 實例 17 ：藉由在凍乾之前添加曲妥珠單抗製造具有包埋之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒 混合36.8 mL 50 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)與3.2 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(溶解於90/10 CHCl3 /乙醇中)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化若干循環以形成微細乳液。向均質器中添加20 mL 50 mg/mL HSA溶液以追蹤微細乳液，並收集43 mL微細乳液。立刻將乳液轉移至旋轉蒸發器，且體積減少至11.5 mL之蒸發後懸浮液體積。使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。藉由用1.5 mL 0.9% NaCl生理鹽水稀釋50 μL蒸發後懸浮液使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)實施DLS量測。蒸發後懸浮液之平均粒徑經測定為149.1 nm，且PDI經測定為0.151。蒸發後懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC經測定為35.79 mg/mL且蒸發後懸浮液之HSA濃度藉由SEC-HPLC經測定為126.0 mg/mL。如下在兩個單獨批料中進一步處理蒸發後懸浮液。 批料1. 混合4.60 mL蒸發後懸浮液與0.888 mL 181.63 mg/mL HSA (於注射用水(WFI)中)及10.98 mL 2.7 mg/mL NaCl以形成16.46 mL含有比率為1:4.5之太平洋紫杉醇:白蛋白(且無曲妥珠單抗)的最終溶液。 批料2. 混合4.60 mL蒸發後懸浮液與0.888 mL 181.63 mg/mL HSA (於WFI中)及10.98 mL 22.5 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，重構於2.7 mg/mL NaCl中)以形成16.46 mL含有比率為1:4.5:1.5之太平洋紫杉醇:白蛋白:曲妥珠單抗之最終溶液。 將4 mL批料1或批料2之等分試樣分配至小瓶中並使用VirTis Genesis EL25架式凍乾機(SP Industries, Gardiner, NY)凍乾。 實例 18 ：藉由在凍乾之前添加曲妥珠單抗製造具有包埋之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒 混合36.8 mL 15 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)與3.2 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(溶解於90/10 CHCl3 /乙醇中)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化若干循環以形成微細乳液。向均質器中添加20 mL 15 mg/mL HSA溶液以追蹤微細乳液，並收集約40 mL微細乳液。立刻將乳液轉移至旋轉蒸發器，且體積減少至9.9 mL之蒸發後懸浮液體積。使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。藉由用1.5 mL 0.9% NaCl生理鹽水稀釋50 μL蒸發後懸浮液使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)實施DLS量測。蒸發後懸浮液之平均粒徑經測定為161.8 nm，且PDI經測定為0.118。蒸發後懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC經測定為42.43 mg/mL，且蒸發後懸浮液之HSA濃度藉由SEC-HPLC經測定為50.33 mg/mL。如下在兩個單獨批料中進一步處理蒸發後懸浮液。 批料1. 混合3.90 mL蒸發後懸浮液與1.62 mL 32.14 mg/mL HSA (於注射用水(WFI)中)及11.03 mL 2.7 mg/mL NaCl以形成16.55 mL含有比率為1:4.5之太平洋紫杉醇:白蛋白(且無曲妥珠單抗)之最終溶液。 批料2. 混合3.90 mL蒸發後懸浮液與1.62 mL 32.14 mg/mL HSA (於WFI中)及11.03 mL 22.5 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，重構於2.7 mg/mL NaCl中)以形成16.55 mL含有比率為1:1.5:1.5之太平洋紫杉醇:白蛋白:曲妥珠單抗的最終溶液。 將4 mL批料1或批料2之等分試樣分配至小瓶中並使用VirTis Genesis EL25架式凍乾機(SP Industries, Gardiner, NY)凍乾。 實例 19 ：藉由在凍乾之前添加曲妥珠單抗製造且與 Nab - 太平洋紫杉醇及曲妥珠單抗之時程混合物相比之具有包埋之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白的奈米顆粒 具有表10中所述之特徵之凍乾之奈米顆粒用於此實例。 表10：實例18之凍乾之試樣 試樣1及試樣3之小瓶中添加4 mL溶解於5.4 mg/mL NaCl中之15 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®)。在表徵並離心試樣之前將試樣培育10分鐘，在表徵並離心試樣之前培育70分鐘，或在表徵並離心試樣之前培育250分鐘。向試樣2及試樣4中添加4 mL 7.2 mg/mL NaCl。在表徵並離心之前將試樣於室溫下培育10分鐘。試樣之表徵包括藉由凝固點抑制(Advanced Micro Osmometer型號3300 (Advanced Instruments, Inc.))測定滲透壓、藉由動態光散射(Zetasizer nano ZS, Malvern Instruments, Westborough, MA)測定平均粒徑(直徑)及多分散性指數(PDI)、太平洋紫杉醇含量(RP-HPLC)及HSA及曲妥珠單抗(Tz)含量(SEC-HPLC)。粒徑(Z-平均直徑)、PDI及滲透壓顯示於表11中。 表11：重構試樣之粒徑、PDI及滲透壓 對於離心分析而言，3.6 mL試樣於20℃下使用具有Ti45轉子及鐵氟龍插入物之Beckman Optima LE-80離心機將以39,000 RPM離心70分鐘以沈澱奈米顆粒。自每一試樣抽出上清液。將沈澱物用4.0 mL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌兩次，作為洗滌物1及洗滌物2。將沈澱物再懸浮於3.0 mL乙醇中，渦旋，並超音波處理以自沈澱物萃取太平洋紫杉醇。再次離心試樣，並抽出上清液作為沈澱物1。將其他離心管中之沈澱物再懸浮於4.0 mL PBS，渦旋，超音波處理，並抽出沈澱物2。藉由RP-HPLC測定每一部分中太平洋紫杉醇之量，且藉由SEC-HPLC測定每一部分中HSA及曲妥珠單抗(Tz)之量。結果顯示於表12中。 表12：離心分析之每一部分中之太平洋紫杉醇(PTX)、白蛋白(HSA)及曲妥珠單抗 * = 兩個量測之平均值。 實例 20 ：藉由均質化用於活體內投與後向乳液中添加曲妥珠單抗製造具有包埋之曲妥珠單抗、太平洋紫杉醇及白蛋白的奈米顆粒 在混合的同時合併27.6 mL 15 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液(於水中)與2.4 mL 200 mg/mL太平洋紫杉醇溶液(CHCl3 及乙醇之90/10混合物)以形成混合物。將混合物轉移至Avestin均質器並於20-22 kpsi下均質化。使用額外5 mL 15 mg/mL HSA以洗滌容納混合物之容器，向其中添加均質器。使混合物通過均質器達若干循環，之後向均質器中添加額外20 mL 15 mg/mL HSA以追蹤乳液。收集總共42 mL微細乳液。合併1.2 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®，於0.9% NaCl鹽水中)及10 mL 0.9% NaCl鹽水與微細乳液，之後使微細乳液經受旋轉蒸發。在蒸發後懸浮液之體積減少至約10 mL後，將蒸發後懸浮液轉移至閃爍小瓶。將旋轉蒸發器燒瓶用1.5 mL注射用水(WFI)之等分試樣洗滌兩次，向其中添加閃爍小瓶，從而產生12.5 mL蒸發後懸浮液之最終體積。 使用動態光散射(DLS)量測蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)及多分散性指數(PDI)。藉由用1.5 mL 0.9% NaCl生理鹽水稀釋50 μL蒸發後懸浮液使用Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Westborough, MA)實施DLS量測。蒸發後懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)經測定為149.1 nm，且PDI經測定為0.133。蒸發後懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC經測定為28.7 mg/mL，且蒸發後懸浮液之HSA及曲妥珠單抗濃度藉由SEC-HPLC分別經測定為41.61 mg/mL及2.07 mg/mL。隨後將蒸發後懸浮液於5℃下儲存過夜。 將蒸發後自冷儲存移除並容許其平衡至室溫。混合11.27 ml 200 mg/mL HSA及34.03 mL 0.9% NaCl鹽水與12 mL蒸發後懸浮液，從而產生57.3 mL之體積。使用一系列無菌過濾器過濾經稀釋之懸浮液，從而產生49.7 mL之過濾後體積。經過濾之懸浮液之平均粒徑(Z-平均值)經測定為149.2 nm，且PDI藉由DLS經測定為0.13。經過濾之懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC經測定為5.693 mg/mL。 向49.7 mL經過濾之懸浮液中添加0.32 mL 21 mg/mL曲妥珠單抗(Herceptin®)及6.56 mL 0.9% NaCl鹽水，從而產生56.58 mL含有5 mg/mL太平洋紫杉醇及0.5 mg/mL曲妥珠單抗之懸浮液，並輕柔混合並於室溫下培育10分鐘。再次分析經校正之過濾之懸浮液。平均粒徑(Z-平均值)經測定為149 nm，且PDI藉由DLS經測定為0.13。經過濾之懸浮液之太平洋紫杉醇濃度藉由RP-HPLC經測定為5.4 mg/mL。曲妥珠單抗濃度藉由SEC-HPLC經測定為0.5 mg/mL。滲透壓經測定為288 mOsm。將懸浮液分配成3 mL等分試樣並於-80℃下儲存。 實例 21 ：偶聯調配物表徵方法 除非另外規定，否則根據此實例中詳述之方案執行以下實例中之免疫印跡、SDS-PAGE凝膠及ELISA分析。天然凝膠免疫印跡 此方案中使用之材料包括：試樣緩衝液：Novex™ Tris -甘胺酸天然試樣緩衝液(2X) (目錄號LC2673)；運行緩衝液：Novex™ Tris -甘胺酸天然運行緩衝液(10X) (目錄號LC2672)；蛋白質凝膠：NuPAGE™ 3-8% Tris-乙酸鹽蛋白質凝膠，1.0 mm，10-孔(目錄號EA0375BOX)；及西方印跡套組：Trans-Blot Turbo RTA Mini Nitrocellulose轉移套組(目錄號1704270)。 將試樣用PBS稀釋至0.1-2 mg/μL之濃度範圍。混合1:1 (v/v)經稀釋之試樣與tris-甘胺酸天然試樣緩衝液且隨後簡單渦旋。製備具有一種蛋白質凝膠之凝膠罐(基於試樣之數量可使用兩種蛋白質凝膠)。將試樣裝載至孔中(約16-20 μL/孔)。將凝膠於200 V、120 mA下運行90分鐘。在運行凝膠後，將凝膠自其盒子移除並用水洗滌。 將凝膠中之蛋白質轉移至硝化纖維素膜。將膜用TBST洗滌並於室溫下在20 mL Licor封阻溶液中培育1小時。隨後將膜用TBST洗滌三次並於4℃下與抗HSA (1:5000，小鼠)及抗人類IgG (1:5000，兔)一級抗體一起培育過夜。(視情況，此培育可於室溫下已實施1小時。) 將膜用TBST洗滌三次(每次培育5分鐘)。於室溫下將膜與抗小鼠(1: 20000，680 nm)及抗兔(1:20000，800nm)一起培育45分鐘。 將膜用TBST洗滌三次(每次培育5分鐘)。將膜用去離子水簡單洗滌且隨後利用Licor成像。SDS-PAGE 免疫印跡 此方案中使用之材料包括：SDS運行緩衝液：LDS試樣緩衝液，非還原(4X) (目錄號84788)；凝膠運行緩衝液：Novex™ MOPS SDS運行緩衝液(20X) (目錄號NP0001)；凝膠運行緩衝液：Novex™ Tris-乙酸鹽SDS運行緩衝液(20X) (目錄號LA0041)；蛋白質凝膠：NuPAGE™ 3-8% Tris-乙酸鹽蛋白質凝膠，1.0 mm，10-孔(目錄號EA0375BOX)；蛋白質凝膠：NuPAGE™ 4-12%，1.0 mm，10-孔(目錄號NP0321PK2)；及西方印跡套組：Trans-Blot Turbo RTA Mini Nitrocellulose轉移套組(目錄號1704270)。 將試樣用PBS稀釋至1-2 mg/μL之濃度範圍。製備250 mM NEM溶液(31 μg NEM，於1 mL水中)。製備SDS-PAGE (非還原)混合母液(60 μL 1x SDS運行緩衝液 + 100 μL 4x SDS裝載緩衝液 + 40 μL 250 mM NEM)。1:1 (v/v)混合經稀釋之試樣與混合母液且隨後簡單渦旋。將試樣於70℃下培育10分鐘。 製備具有一種蛋白質凝膠之凝膠罐(基於試樣之數量可使用兩種蛋白質凝膠)。將試樣裝載至孔中(約16-20 μL/孔)。將凝膠於200 V、120 mA下運行45分鐘。在運行凝膠後，將凝膠自其盒子移除並用水洗滌。 將凝膠中之蛋白質轉移至硝化纖維素膜。將膜用TBST洗滌並於室溫下在20 mL Licor封阻溶液中培育1小時。隨後將膜用TBST洗滌三次並於4℃下與抗HSA (1:5000，小鼠)及抗人類IgG (1:5000，兔)一級抗體一起培育過夜。(視情況，此培育可於室溫下已實施1小時。) 將膜用TBST洗滌三次(每次培育5分鐘)。於室溫下將膜與抗小鼠(1: 20000，680 nm)及抗兔(1:20000，800nm)一起培育45分鐘。 將膜用TBST洗滌三次(每次培育5分鐘)。將膜用去離子水簡單洗滌且隨後利用Licor成像。ELISA 此方案中所用之材料包括：ELISA分析套組(編號IG-AA105, Eagle Bioscience)。 稀釋所提供之標準試樣以產生100 ng/mL、60 ng/mL、20 ng/mL、6 ng/mL及空白之標樣。根據試樣之不同格式藉由稀釋緩衝液將Mab-偶聯之顆粒溶液直接稀釋至1:1000至1:10000。 將100 μL分析緩衝液移液至欲使用之每一孔中。將100 μL標樣或試樣移液至微量滴定板之各別孔中。將板用黏著密封件覆蓋並於室溫下培育60分鐘。 移除黏著密封件並傾析培育溶液。將板每孔用3X300 μL洗滌緩衝液洗滌。藉由在紙巾上輕敲倒置板移除過量溶液。將100 μL酶偶聯物移液至每一孔中。將板用黏著密封件覆蓋並於室溫下培育30分鐘。 移除黏著密封件並傾析培育溶液。將板每孔用3X300 μL洗滌緩衝液洗滌。藉由在紙巾上輕敲倒置板移除過量溶液。將100 μL TMB受質溶液移液至每一孔中。將板用黏著密封件覆蓋並在暗中培育20分鐘。 移除黏著密封件並將100 μL停止溶液移液至每一孔中。在移液停止溶液後量測吸光度(450 nm)。 實例 22 ：經由 SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗之曲妥珠單抗及游離人類血清白蛋白的偶聯 此實例中所述之抗體及游離人類血清白蛋白(HSA)之偶聯之示意圖顯示於圖13中。將1 mL 21 mg/mL生理鹽水中之Herceptin®等分至15 mL旋轉濃縮器中(MW截止值30,000 KDa)。向旋轉濃縮器中填充100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)並以3750 rpm離心35分鐘。向旋轉濃縮器中再次填充磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)並以3750 rpm離心35分鐘。將所得曲妥珠單抗溶液移液至Falcon管中並稀釋至2 mL之總體積。藉由粒徑篩析層析(SEC)量測曲妥珠單抗溶液濃度，並視需要調節至10.5 mg/mL。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃移除並於室溫下升溫1小時。將122 μL二甲亞碸(DMSO)添加至8.3 mg SM(PEG)6 中(112 mM最終濃度)。使連接體溶液渦旋直至連接體完全溶解為止。將1 mL曲妥珠單抗溶液等分至埃彭道夫(Eppendorf)管中。向每一管中緩慢添加3.4 μL連接體溶液(連接體:曲妥珠單抗之化學計量比率係5:1)。在仍使溶液避光的同時，使連接體/曲妥珠單抗溶液在振盪器上反應2小時。將5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1,000 RCF達6分鐘)。經由脫鹽管柱過濾連接體/曲妥珠單抗溶液以移除任何未反應之連接體。收集活化之曲妥珠單抗溶液並將0.8 mL等分試樣移液至埃彭道夫管中。在4 mL旋轉濃縮器中將200 μL 200 mg/mL (3 mM)人類血清白蛋白(HSA)溶液稀釋至4 mL (MW 截止值10,000 kDa)。根據製造商說明書將試樣離心20分鐘。再次重複此稀釋及離心。將所得溶液移液至Falcon管中並稀釋至0.8 mL之最終體積。隨後向0.8 mL HSA溶液(0.75 mM)中添加0.8 mL活化之曲妥珠單抗溶液(0.07 mM)。將溶液培育過夜。 使用類似方案，使用各種連接體荷載比及連接體反應條件(例如偶聯反應之不同pH條件)進一步產生活化之曲妥珠單抗。使用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)及10X連接體荷載對與SM(PEG)6 交聯之活化曲妥珠單抗實施SEC分析。於pH 6.6及10X連接體荷載下，曲妥珠單抗聚集小於總抗體量之約2%。亦使用PBS鹽水(pH 7.4)及20X連接體荷載對與SM(PEG)6 交聯之活化曲妥珠單抗實施SEC分析。於pH 7.4及20X連接體荷載下，曲妥珠單抗聚集係總抗體量之約30%。 實施SEC分析以比較SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗及未偶聯之曲妥珠單抗。在以10:1之比率使用SM(PEG)6 及曲妥珠單抗時，偶聯不顯著增加曲妥珠單抗之高分子量(HMW)物質之量(曲妥珠單抗：總抗體之0.6 % HMW；SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗：總抗體之1.7% HMW)。 圖14A-14C顯示曲妥珠單抗(圖14A)、使用1:5之曲妥珠單抗:連接體比率之SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗(圖14B)及使用1:10之曲妥珠單抗:連接體比率之SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗(圖14C)的解卷積質譜。指示代表無SM(PEG)6 偶聯之曲妥珠單抗之同位素簇(1:0；曲妥珠單抗:SM(PEG)6 )，且觀察到曲妥珠單抗上之N-聚醣未裂解(圖14A)。使用1:5之曲妥珠單抗:連接體比率，活化曲妥珠單抗之最具代表性種類係1:0、1:1、1:2及1:3 (曲妥珠單抗:SM(PEG)6 ) (圖14B)。使用1:10之曲妥珠單抗:連接體比率，活化曲妥珠單抗之最具代表性種類係1:1、1:2、1:3及1:4 (曲妥珠單抗:SM(PEG)6 ) (圖14C)。 使用SEC分離曲妥珠單抗及HSA之1:1 SM(PEG)6 偶聯物(圖15；顯示偶聯物、曲妥珠單抗及HSA之分離峰)。使用質譜確認偶聯物之質量為215498.52 Da。 藉由SDS-PAGE凝膠確認5:1及10:1連接體:抗體反應比之SM(PEG)6 曲妥珠單抗-HSA偶聯物，其顯示存在1:1曲妥珠單抗:HSA及更高階偶聯物，包括例如1:2及1:3 (圖16)。藉由免疫印跡確認曲妥珠單抗:HSA偶聯物(數據未顯示)。 進行天然凝膠分析，以分析SM(PEG)6 偶聯曲妥珠單抗之試樣(圖17)。曲妥珠單抗之pI係8.5，且除非偶聯，否則曲妥珠單抗將不遷移至凝膠中(泳道D；圖17)。在泳道A中，藉由箭頭指示1:1曲妥珠單抗-HSA偶聯物(圖17)。泳道B及C分別顯示10:1連接體:抗體比率及5:1連接體:抗體比率(不與白蛋白偶聯) (圖17)。 實例 23 ：經由 SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗之曲妥珠單抗及經分離 Nab - 太平洋紫杉醇顆粒之偶聯 如此實例中所述之活化抗體及經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之偶聯的示意圖顯示於圖18中。此方案中所用之材料係如下：(a)nab -太平洋紫杉醇(100 mg太平洋紫杉醇小瓶，批號013397)；(b) Herceptin® (曲妥珠單抗，440 mg小瓶，21 mg/mL，批號3157971)；(c) 生理鹽水，USP級(RMBIO批號20607161)；(d) MilliQ 水，18.4 MOhms·cm及4 ppb TOC；(e) 閃爍小瓶(VWR，20-mL可棄式閃爍小瓶)；(f) 15 mL聚丙烯圓錐形管(Falcon, P/N 352097)；(g) Zepa旋轉脫鹽管柱7K MWCO，5mL (目錄號89892，批號SC245087)；(h) DMSO (Sigma，目錄號D2438-50mL，批號RNBG0012)；(i) SM(PEG)6 (Thermo Scientific，目錄號22105，批號SD249151)；及(j) 磷酸鹽緩衝鹽水錠劑(Sigma，目錄號P4417-50TAB，批號SLBS4223)。 自經凍乾Nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)之1個小瓶分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒。向小瓶中添加20 mL生理鹽水以重構奈米顆粒，且將1.2 mL重構nab -太平洋紫杉醇調配物等分至埃彭道夫管中。將埃彭道夫管輕柔混合20分鐘。使用RP-HPLC使用一個埃彭道夫管以測定太平洋紫杉醇含量以量測粒徑。於20℃下將其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液。向其餘沈澱物中添加0.6 mL生理鹽水以重構奈米顆粒(最終濃度為10 mg/mL太平洋紫杉醇)。 使用生理鹽水製備21 mg/mL Herceptin® (曲妥珠單抗)溶液。將1.2 mL Herceptin®溶液等分至2個15 mL旋轉濃縮器中。使用無內毒素之水製備100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)並過濾。向旋轉濃縮器中填充pH 6.6磷酸鹽緩衝液並根據製造商之說明書離心30分鐘。將此重複一次。將其餘曲妥珠單抗溶液移液至15 mL Falcon管中並稀釋至2.4 mL之總體積。藉由粒徑篩析層析(SEC)量測曲妥珠單抗濃度。視需要將曲妥珠單抗濃度調節至10.5 mg/mL。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃冷凍器移除並升溫至室溫並保持1小時。將2 mL無菌DMSO溶液等分至埃彭道夫管中。自此埃彭道夫管，將1.51 mL DMSO轉移至含有100 mg SM(PEG)6 (112 mM最終濃度)之小瓶中。使連接體溶液渦旋，直至連接體完全溶解於DMSO中為止。 將1 mL 10.5 mg/mL曲妥珠單抗溶液等分至埃彭道夫管中。向含有1 mL曲妥珠單抗溶液之每一埃彭道夫管中緩慢添加5.1 μL連接體溶液(連接體對抗體之比率係7.5:1；使用高於15:1之比率會也引起了抗體聚集)。在此程序期間，溶液避光。在仍避光的同時，使連接體/抗體溶液在振盪器上反應2小時。粒徑藉由動態光散射經測定為157 nm。 將5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000G達5分鐘)。經由脫鹽管柱過濾活化抗體溶液以移除未反應之連接體。收集並彙集濾液。藉由液相層析-質譜(LC-MS)測定曲妥珠單抗及連接體之比率。向600 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加600 μL活化曲妥珠單抗。隨後將溶液於4℃下培育過夜(避免振盪或攪動)。 自冰箱取出偶聯溶液。該溶液在埃彭道夫管表面上無聚集物。 將偶聯溶液以21,000 G離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液且將每一管用PBS鹽水洗滌一次。 在PBS鹽水(pH 7.4)中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。將800 μL 40 mg/mL HSA溶液等分至每一管中。隨後將管超音波處理20秒且隨後混合(將此步驟重複若干次直至奈米顆粒完全再懸浮為止)。 藉由RP-HPLC量測太平洋紫杉醇含量。隨後將所得溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 對來自經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒及曲妥珠單抗偶聯之顆粒之試樣實施免疫印跡，從而確認存在1:1曲妥珠單抗-HSA偶聯物以及更高階偶聯物，包括1:2、1:3及1:4。在實施免疫印跡之前，首先將顆粒試樣溶解於乙醇中以溶解太平洋紫杉醇且隨後以10,000 RCF離心。將所得沈澱物再懸浮於PBS中用於免疫印跡分析。 使用SEC測定在偶聯至曲妥珠單抗之前及之後經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒之顆粒的白蛋白異構物概況(例如，白蛋白單體之量)。與曲妥珠單抗偶聯之經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒及經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒的白蛋白單體對總白蛋白之比率提供於表13中。 表13：白蛋白單體比率. 實施SM(PEG)6 與經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒之等分試樣及未分離顆粒之nab -太平洋紫杉醇調配物(ABX)之等分試樣之偶聯的比較。偶聯反應及標樣之試樣之SDS-PAGE凝膠顯示於圖20中，其中泳道1、2及3顯示存在曲妥珠單抗-HSA偶聯物。泳道3及5之比較顯示存在使用本文所述方法之曲妥珠單抗之HSA偶聯，包括1:1曲妥珠單抗:HSA偶聯物以及更高階偶聯物。實施免疫印跡且確認存在曲妥珠單抗:HSA偶聯物，包括更高階曲妥珠單抗:HSA偶聯物。 實例 24 ：使用具有不同間隔體長度之連接體之抗體及經分離 Nab - 太平洋紫杉醇顆粒的偶聯 此實例展現經由SM(PEG)6 (32.6埃)、SM(PEG)2 (17.5埃)及SMCC (8埃)活化抗體之抗體及經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒的偶聯。 實質上如實例23中所述製備偶聯之顆粒，只是使用指示之連接體。向10 mg/mL鹽水中之重構nab -太平洋紫杉醇中添加10 mg/mL抗體-連接體偶聯物(以5:1之連接體對抗體比率製備)。在離心及再懸浮於5% HSA中後，使用ELISA量測抗體濃度並使用RP-HPLC量測太平洋紫杉醇含量。奈米顆粒調配物之太平洋紫杉醇/曲妥珠單抗(Tz)質量比報告於表14中。 對於4.5 mg/mLnab -太平洋紫杉醇懸浮液，nab -太平洋紫杉醇顆粒表面上之總游離硫氫基經量測為0.66 μM。此代表HSA之4%莫耳比率(天然游離HSA含有40%游離硫氫基)。 表14. 曲妥珠單抗濃度及太平洋紫杉醇/Tz比率 實例 25 ：經由經分離 Nab - 太平洋紫杉醇奈米顆粒之活化及曲妥珠單抗之活化之曲妥珠單抗及經分離 Nab - 太平洋紫杉醇顆粒的偶聯 此實例中所述活化抗體及硫醇化經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之偶聯的示意圖顯示於圖19中。 為自nab -太平洋紫杉醇調配物分離奈米顆粒，向經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)之1個小瓶中添加20 mL生理鹽水。將1.2 mLnab -太平洋紫杉醇調配物等分至1.5 mL埃彭道夫管中。將埃彭道夫管輕柔混合20分鐘。使用RP-HPLC使用一個埃彭道夫管以測定太平洋紫杉醇含量並量測粒徑。平均粒徑係147 nm。於20℃下將其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液。向所得沈澱物中添加500 μL乙酸鈉(pH 8.0)及150 mM氯化鈉以重構奈米顆粒(nab -太平洋紫杉醇顆粒濃度係10 mg/mL太平洋紫杉醇；含有2.5 mg/mL (0.0376 mM) HSA)。 將喬特試劑(Traut’s reagent)以2 mg/mL (14.5 mM)之濃度溶解於WFI中。根據期望硫醇化程度，將15 μL至60 μL (連接體:HSA比率分別為10:1至40:1)喬特試劑緩慢添加至經分離奈米顆粒溶液中並於4℃下反應70分鐘。添加2.4 μL 500 mM EDTA (pH 8.0)並於4℃下培育10分鐘。於4℃下將試樣以21,000 RCF離心80分鐘。自離心機移除管，傾析，並用PBS鹽水洗滌兩次。將分離之活化nab -太平洋紫杉醇顆粒再懸浮於500 μL PBS鹽水中並超音波處理1分鐘以再懸浮顆粒。粒徑經量測為150 nm。 在經由不同化學計量之喬特試劑硫醇化經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒後，藉由蛋白質硫化螢光檢測套組(Invitrogen)分析顆粒。對於具有4.6 mg/mL之太平洋紫杉醇濃度之奈米顆粒，測定硫醇基團之濃度(表15)。 表15：經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒之硫醇化. 使用生理鹽水製備21 mg/mL Herceptin® (曲妥珠單抗)溶液。將1 mL Herceptin®溶液等分至每一15 mL旋轉濃縮器中。使用無內毒素之水製備100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)並過濾。向旋轉濃縮器中填充pH 6.6磷酸鹽緩衝液並以3750 rpm離心35分鐘。將此重複一次。將其餘溶液移液至15 mL Falcon管中並稀釋至2.4 mL總體積。藉由粒徑篩析層析(SEC)量測曲妥珠單抗濃度。視需要將曲妥珠單抗濃度調節至10.5 mg/mL。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃冷凍器移除並升溫至室溫並保持1小時。將2 mL無菌DMSO溶液等分至埃彭道夫管中。自此埃彭道夫管，將122 μL DMSO轉移至含有8.3 mg SM(PEG)6 (112 mM最終濃度)之小瓶中。使連接體溶液渦旋，直至連接體完全溶解於DMSO中為止。 將1 mL曲妥珠單抗溶液等分至每一埃彭道夫管中。向含有1 mL曲妥珠單抗溶液之每一中緩慢添加3.4 μL SM(PEG)6 連接體溶液。在此程序期間，溶液避光。在仍避光的同時，使連接體/抗體溶液在振盪器上反應2小時。 將5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000G達6分鐘)。經由脫鹽管柱過濾活化抗體溶液以移除未反應之連接體。收集並彙集濾液。藉由液相層析-質譜(LC-MS)測定曲妥珠單抗及連接體之比率。 向500 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加500 μL活化曲妥珠單抗。隨後將溶液於4℃下培育過夜(避免振盪或攪動)。 將偶聯溶液自4℃移除。該溶液在埃彭道夫管表面上無聚集物。量測粒徑。10:1硫醇化連接體:HSA之平均粒徑係159 nm，20:1硫醇化連接體:HSA之平均粒徑係166 nm，30:1硫醇化連接體:HSA之平均粒徑係215.9 nm，且40:1硫醇化連接體:HSA之平均粒徑係734.1 nm。 將偶聯溶液以21,000 G離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液且將每一管用PBS鹽水洗滌兩次。 在PBS鹽水中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。將800 μL 40 mg/mL HSA溶液等分至每一管中。隨後將管超音波處理20秒並混合(將此步驟重複若干次直至奈米顆粒完全再懸浮為止)。 藉由RP-HPLC量測太平洋紫杉醇含量。隨後根據所需濃度調節太平洋紫杉醇濃度。量測最終調配物之粒徑及太平洋紫杉醇濃度。10:1硫醇化連接體:HSA之平均粒徑係159.8 nm，20:1硫醇化連接體:HSA之平均粒徑係171.5 nm，30:1硫醇化連接體:HSA之平均粒徑係175.8 nm，且40:1硫醇化連接體:HSA之平均粒徑係196.4 nm。隨後將所得溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 藉由ELISA量測最終偶聯之曲妥珠單抗(Tz)濃度，且藉由RP-HPLC量測太平洋紫杉醇(PTX)濃度。(表16)。 表16：偶聯之顆粒之濃度量測. 實例 26 ：使用無銅點擊化學之曲妥珠單抗及經分離 Nab - 太平洋紫杉醇顆粒的偶聯 使用無銅點擊化學之抗體及經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之偶聯的示意圖顯示於圖21中。 為自nab -太平洋紫杉醇調配物分離奈米顆粒，向經凍乾之nab -太平洋紫杉醇(100 mg太平洋紫杉醇)之1個小瓶中添加20 mL生理鹽水。將1.2 mLnab -太平洋紫杉醇調配物等分至16個埃彭道夫管中。將埃彭道夫管輕柔混合20分鐘。使用一個埃彭道夫管進行HPLC分析以使用RP-HPLC測定太平洋紫杉醇含量。於20℃下將其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液。向所得沈澱物中添加600 μL PBS (pH 7.4)以重構奈米顆粒(nab -太平洋紫杉醇濃度為約10 mg/mL太平洋紫杉醇)。 藉由將3 mg連接體試劑溶解於150 μL DMSO中製備29 mM二芳基環辛炔(DBCO)-PEG5-NHS溶液。向經分離奈米顆粒之每一等分試樣中添加15 μL (20:1；連接體:HSA)或30 μL (40:1；連接體:HSA) DBCO溶液，並使懸浮液於室溫下反應70分鐘。隨後於4℃下將試樣以21,000 RCF離心70分鐘。離心後，傾析試樣以移除上清液並用PBS鹽水洗滌兩次。向沈澱之奈米顆粒中添加500 μL PBS鹽水且隨後對試樣進行超音波處理以再懸浮奈米顆粒。 使用生理鹽水製備21 mg/mL Herceptin ® (曲妥珠單抗)溶液。將6 mL抗體溶液等分至兩個15 mL旋轉濃縮器中。向旋轉濃縮器中填充100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)並根據製造商之說明書離心30分鐘。將此重複一次。將其餘曲妥珠單抗溶液移液至15 mL Falcon管並稀釋至12 mL之總體積。視需要將曲妥珠單抗濃度調節至10.5 mg/mL。 將疊氮基-PEG5-NHS自-20℃移除並升溫至室溫並保持1小時。在小瓶中稱重4.03 mg疊氮基-PEG5-NHS並添加82 μL DMSO (112 mM溶液)。使溶液渦旋直至連接體完全溶解為止。 將1.5 mL抗體溶液等分至單獨管中。向含有抗體溶液之每一管中緩慢添加5.1 μL (5:1連接體:抗體比率)或10.2 μL (10:1連接體:抗體比率)。使溶液在振盪器上反應2小時。 將兩個5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000G達6分鐘)。經由脫鹽管柱過濾活化抗體溶液以移除未反應之連接體。收集並彙集濾液。藉由液相層析-質譜(LC-MS)測定曲妥珠單抗及連接體之比率。 向500 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加500 μL活化曲妥珠單抗。將溶液於室溫下培育30分鐘且隨後於4℃下培育過夜。將偶聯溶液自4℃移除。該溶液在埃彭道夫管表面上無聚集物。量測粒徑。 將偶聯溶液以21,000 G離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液且將每一管用PBS鹽水洗滌兩次。 在PBS鹽水中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。將800 μL 40 mg/mL HSA溶液等分至每一管中。隨後對管進行超音波處理直至奈米顆粒完全再懸浮為止。隨後將所得溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 粒徑經測定為169 nm。與顆粒締合之最終太平洋紫杉醇濃度經測定為5.73 mg/mL (RP-HPLC)，且最終曲妥珠單抗濃度經測定為0.11 mg/mL。 實例 27 ：酸修飾之 Nab - 太平洋紫杉醇 如此實例中所述之經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之酸修飾的示意圖顯示於圖22中。為製備活化NHS酯，將4-(2-羧基乙基)苯硼酸(16mg, 82.4 μmol, MW = 193.99)、N,N'-二環己基碳二亞胺(DCC, 17.04 mg, 82.4 μmol)及N-羥基琥珀醯亞胺(NHS, 9.52 mg, 82.4 μmol)溶解於1 mL DMF中並於室溫下攪拌2小時。 將顆粒再懸浮於600 μL PBS緩衝液(pH 7.4)中以製備10 mg/mL奈米顆粒懸浮液。 測試三個比率之活化NHS酯(20:1、40:1及80:1之NHS酯對表面白蛋白，假定25%之奈米顆粒重量係由於白蛋白)。達成每一比率(20:1、40:1及80:1)所需之濃度分別係0.75 mM、1.5 mM及3 mM。因此，向每一埃彭道夫管(含有600 μL奈米顆粒懸浮液)中添加5.5 μL、11 μL及22 NHS酯以製得20:1、40:1及80:1之比率。將反應於室溫下培育2小且隨後將管以21,000 RCF離心70分鐘。將沈澱物洗滌三次，之後再懸浮於500 μL PBS緩衝液(pH 7.4)中。 藉由與Alizarin Red S反應並測定590 nm下之螢光信號量測顆粒表面上酸之量。將濃度與4-(2-羧基乙基)苯硼酸標樣進行比較。對於20:1、40:1及80:1比率而言，酸之量分別經測定為每5 mg/mLnab -太平洋紫杉醇1.4mM、2.0mM及2.6 mM。未經修飾之奈米顆粒以及20:1及40:1修飾之奈米顆粒穩定，但80:1奈米顆粒開始聚集。 實例 28 ：使用互補 DNA 之曲妥珠單抗及經分離 Nab - 太平洋紫杉醇顆粒之偶聯 使用互補DNA之活化抗體及活化之經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之偶聯的示意圖顯示於圖23中。簡言之，第一鏈偶聯至nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒且與第一鏈互補之第二鏈偶聯至抗體。奈米顆粒及抗體之混合容許注釋鏈配對，藉此使抗體與nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒偶聯。 使單鏈DNA (ssDNA)與nab -太平洋紫杉醇之調配物之經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒偶聯。製備20 mM TCEP溶液。稱重3 mg ssDNA (5ThioMC6-CACACACACACACACACACA；SEQ ID NO: 1；「CA20」)並溶解於1 mL ddH2 O中(447 μM ssDNA溶液)。將20 mM TCEP溶液以3:7體積比添加至447 μM ssDNA溶液中，且隨後於室溫下反應2小時。使用NAP-10 (GE Healthcare Life Science，目錄號17-0854-01)純化反應混合物。所收集CA20 ssDNA之量測濃度係216 μM，如藉由UV光譜學(260 nm)所測定。 稱重6.83 mg SM(PEG)6 並溶解於0.5 mL DMSO (22.4 mM SM(PEG)6 溶液)中。將11 μL 22.4 mM SM(PEG)6 溶液添加至1.2 mL CA20 ssDNA溶液中並反應20分鐘。 將600 μL經分離nab -太平洋紫杉醇懸浮液等分至埃彭道夫管中。向奈米顆粒溶液之每一等分試樣中添加600 μL CA20-SM(PEG)6 。將反應混合物培育過夜。 離心埃彭道夫管以沈澱奈米顆粒，並傾析上清液。將沈澱物用PBS洗滌三次。向每一管中添加500 μL PBS並藉由超音波處理(5秒並重複直至顆粒再懸浮為止)懸浮沈澱物。使用動態光散射測定粒徑。受控nab -太平洋紫杉醇調配物之nab -太平洋紫杉醇標樣之粒徑係152 nm且CA20偶聯之nab -太平洋紫杉醇之粒徑係152 nm。 使ssDNA與Herceptin®之調配物之曲妥珠單抗偶聯。製備4 mM TCEP溶液。將ssDNA (5ThioMC6-GTGTGTGTGTGTGTG；SEQ ID NO: 2；「GT15」)溶解於ddH2 O中以製備500 mM ssDNA溶液。將4 mM TCEP溶液以1:2體積比添加至500 μM ssDNA溶液中，混合，且隨後於室溫下反應2小時。使用NAP-10 (GE Healthcare Life Science，目錄號17-0854-01)純化反應混合物。 將1 mL Herceptin® (21 mg/mL，重構於生理鹽水中)等分至15 mL旋轉濃縮器中。製備PBS緩衝液(pH 7.4)。向旋轉濃縮器中填充PBS緩衝液並根據製造商說明書離心30分鐘。再次向旋轉濃縮器中填充PBS並離心。移除所得曲妥珠單抗溶液並視需要利用PBS緩衝液將濃度調節至10.5 mg/mL。 稱重6.8 mg SM(PEG)6 並溶解於100 μL DMSO (112 mM SM(PEG)6 溶液)中。將2.3 μL 112 mM SM(PEG)6 溶液添加至500 μL曲妥珠單抗溶液中並反應1.5小時。使用脫鹽管柱移除未反應之連接體。 將去保護之GT15溶液添加至所得活化曲妥珠單抗中並培育2小時。將混合物添加至旋轉濃縮器中並填充PBS緩衝液(pH 7.4)。使混合物離心並分析流過中ssDNA之存在。向旋轉濃縮器再填充PBS並在流過中未檢測到ssDNA之前離心五次。 將曲妥珠單抗-GT15溶液及CA20-nab -太平洋紫杉醇溶液在埃彭道夫管中混合並培育2小時。隨後將反應混合物以21,000 RCF離心。立刻自離心機移除管，傾析上清液，並將所得沈澱物用PBS洗滌三次。將沈澱物再懸浮於PBS中之4% HSA溶液中並超音波處理以再懸浮顆粒。將偶聯之顆粒於-80℃下儲存。 實例 29 ：貝伐珠單抗及經分離 Nab - 太平洋紫杉醇顆粒之偶聯 此實例中所用之材料包括：(a)nab -太平洋紫杉醇、100 mg太平洋紫杉醇；(b) Avastin ® (貝伐珠單抗；25 mg/mL，批號3039196)；(c) 生理鹽水(RMBIO，USP級，批號20607161)；(d) MilliQ水(18.4 MOhms·cm及4 ppb TOC)；(e) 閃爍小瓶(VWR，20-mL可棄式閃爍小瓶)；(f) 15 mL聚丙烯圓錐形管(Falcon, P/N 352097)；(g) Zepa旋轉脫鹽管柱(7K MWCO，5mL，目錄號89892，批號SC245087)；(h) DMSO (Sigma，目錄號D2438-50mL，批號RNBG0012)；(i) SM(PEG)6 (Thermo Scientific，目錄號22105，批號SD249151)；及(j) 磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)錠劑(Sigma，目錄號P4417-50TAB，批號SLBS4223)。 向經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)之一個小瓶中添加20 mL生理鹽水。將1.2 mLnab -太平洋紫杉醇溶液之等分試樣添加至四個埃彭道夫管中。培育管並輕柔旋動20分鐘。使用一個管以執行太平洋紫杉醇HPLC分析以使用RP-HPLC測定太平洋紫杉醇含量。於20℃下將含有nab -太平洋紫杉醇懸浮液之其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻取出每一管並移除每一管之上清液。將奈米顆粒之沈澱物用0.5 mL生理鹽水輕柔重構以製備12 mg/mL太平洋紫杉醇之最終奈米顆粒溶液。 將1 mL Avastin® (25 mg/mL，重構於WFI中)等分至15 mL旋轉濃縮器中。製備100mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)。向旋轉濃縮器中填充磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)並根據製造商之說明書離心30分鐘。再次向旋轉濃縮器中填充磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)並根據製造商之說明書離心30分鐘。將其餘貝伐珠單抗溶液移液至15 mL Falcon管中並稀釋至2.5 mL總體積。使用粒徑篩析層析(SEC)確認濃度。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃移除並於室溫下升溫1小時。將6.83 mg SM(PEG)6 溶解於100 μL DMSO (112mM連接體溶液)中。使連接體溶液渦旋直至連接體完全溶解為止。 將0.5 mL貝伐珠單抗溶液等分至四個埃彭道夫管中。向兩個埃彭道夫管中緩慢添加1.65 μL及3.3 μL連接體溶液以產生5:1及10:1莫耳濃度比之連接體對抗體。保留混合物對照管而未進行連接體修飾。在此程序期間，溶液避光。使溶液在振盪器上反應2小時。 藉由將兩個5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000G，5分鐘)製備脫鹽管柱。隨後經由管柱過濾活化貝伐珠單抗溶液以移除任何未反應之連接體。 隨後向500 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加500 μL每一連接體比率之活化貝伐珠單抗溶液。向500 μL奈米顆粒溶液中添加500 μL非活化貝伐珠單抗溶液。隨後將所得溶液於4℃下培育過夜而不振盪或攪動。 將偶聯溶液自4℃儲存移除(溶液似乎在表面上無聚集物)並以21,000 G離心80分鐘。隨後立刻自離心機移除管並移除上清液。將每一管用PBS鹽水洗滌三次。 在PBS鹽水(pH 7.4)中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。向含有沈澱之奈米顆粒之每一管中添加500 μL 40 mg/mL HSA溶液。將管超音波處理20秒並混合。將超音波處理步驟重複若干次直至奈米顆粒完全再懸浮為止。在移除試樣用於表徵後，將溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 量測試樣之粒徑。平均粒徑係如下：nab -太平洋紫杉醇，146 nm；貝伐珠單抗混合物對照，148 nm；5:1連接體:抗體貝伐珠單抗奈米顆粒，152 nm；及10:1連接體:抗體貝伐珠單抗奈米顆粒，153 nm。 藉由ELISA量測試樣之貝伐珠單抗含量且藉由RP-HPLC量測試樣之太平洋紫杉醇含量(表16)。 表16：貝伐珠單抗及太平洋紫杉醇濃度. 實施試樣之免疫印跡分析並確認顆粒上貝伐珠單抗及HSA之偶聯，包括存在更高階偶聯物，其來自經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒之偶聯反應。 實例 30 ：西妥昔單抗及經分離 Nab - 太平洋紫杉醇顆粒之偶聯 此方法中所用之材料包括：(a)nab -太平洋紫杉醇、100 mg太平洋紫杉醇；(b) Erbitux® (西妥昔單抗，批號IMG395)；(c) 生理鹽水(RMBIO，USP級，批號20607161)；(d) MilliQ水(18.4 MOhms·cm及4 ppb TOC)；(e) 閃爍小瓶(VWR，20-mL可棄式閃爍小瓶)；(f) 15 mL聚丙烯圓錐形管(Falcon, P/N 352097)；(g) Zepa旋轉脫鹽管柱(7K MWCO，5mL，目錄號89892，批號SC245087)；(h) DMSO (Sigma，目錄號D2438-50mL，批號RNBG0012)；(i) SM(PEG)6 (Thermo Scientific，目錄號22105，批號SD249151)；及(j) 磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)錠劑(Sigma，目錄號P4417-50TAB，批號SLBS4223)。 向經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物之一個小瓶中添加20 mL生理鹽水。將1.2 mLnab -太平洋紫杉醇懸浮液之等分試樣添加至四個埃彭道夫管中。培育管並輕柔旋動20分鐘。使用一個管以執行太平洋紫杉醇HPLC分析以使用RP-HPLC測定太平洋紫杉醇含量。 於20℃下將含有nab -太平洋紫杉醇懸浮液之其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻取出每一管並移除每一管之上清液。將奈米顆粒之沈澱物用0.5 mL生理鹽水輕柔重構以製備最終12 mg/mL奈米顆粒溶液。 將1 mL Erbitux溶液(25 mg/mL，重構於WFI中)等分至15 mL旋轉濃縮器中。製備100mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)。向旋轉濃縮器中填充磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)並根據製造商之說明書離心30分鐘。再次向旋轉濃縮器中填充磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)並根據製造商之說明書離心30分鐘。將其餘西妥昔單抗溶液移液至15 mL Falcon管中並稀釋至2.5 mL總體積。使用粒徑篩析層析(SEC)確認濃度。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃移除並於室溫下升溫1小時。將6.83 mg SM(PEG)6 溶解於100 μL DMSO (112mM連接體溶液)中。使連接體溶液渦旋直至連接體完全溶解為止。 將0.5 mL西妥昔單抗溶液等分至四個埃彭道夫管中。向兩個埃彭道夫管中緩慢添加1.65 μL及3.3 μL連接體溶液以產生5:1及10:1莫耳濃度比之連接體對抗體。保留混合物對照管而未進行連接體修飾。在此程序期間，溶液避光。使溶液在振盪器上反應2小時。 藉由將兩個5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000G，5分鐘)製備脫鹽管柱。隨後經由管柱過濾活化西妥昔單抗溶液以移除任何未反應之連接體。 隨後向500 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加500 μL每一連接體比率之活化西妥昔單抗溶液。向500 μL奈米顆粒溶液中添加500 μL非活化西妥昔單抗溶液。隨後將所得溶液於4℃下培育過夜而不振盪或攪動。 將偶聯溶液自冰箱取出(溶液似乎在表面上無聚集物)並以21,000 G離心80分鐘。隨後立刻自離心機移除管並移除上清液。將每一管用PBS鹽水洗滌三次。 在PBS鹽水(pH 7.4)中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。向含有沈澱之奈米顆粒之每一管中添加500 μL 40 mg/mL HSA溶液。將管超音波處理20秒並混合。將超音波處理步驟重複若干次直至奈米顆粒完全再懸浮為止。 在移除試樣用於表徵後，將溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 量測試樣之粒徑。平均粒徑係如下：nab -太平洋紫杉醇，146 nm；西妥昔單抗混合物對照，148 nm；5:1連接體:抗體西妥昔單抗奈米顆粒，149 nm；及10:1連接體:抗體西妥昔單抗奈米顆粒，147 nm。 藉由ELISA量測試樣之西妥昔單抗含量且藉由RP-HPLC量測試樣之太平洋紫杉醇含量(表17)。 表17：西妥昔單抗及太平洋紫杉醇濃度. 實施試樣之免疫印跡分析並確認顆粒上西妥昔單抗及HSA之偶聯，包括存在更高階偶聯物，其來自經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒之偶聯反應。 實例 31 ：尼沃魯單抗及經分離 Nab - 太平洋紫杉醇顆粒之偶聯 此方法中所用之材料包括：(a)nab -太平洋紫杉醇，100 mg小瓶；(b) 歐普迪沃(Opdivo) (尼沃魯單抗，批號AAL6305)；(c) 生理鹽水(RMBIO，USP級，批號20607161)；(d) MilliQ水(18.4 MOhms·cm及4 ppb TOC)；(e) 閃爍小瓶(VWR，20-mL可棄式閃爍小瓶)；(f) 15 mL聚丙烯圓錐形管(Falcon, P/N 352097)；(g) Zepa旋轉脫鹽管柱(7K MWCO，5mL，目錄號89892，批號SC245087)；(h) DMSO (Sigma，目錄號D2438-50mL，批號RNBG0012)；(i) SM(PEG)6 (Thermo Scientific，目錄號22105，批號SD249151)；及(j) 磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)錠劑(Sigma，目錄號P4417-50TAB，批號SLBS4223)。 向經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物之一個小瓶中添加20 mL生理鹽水。將1.2 mLnab -太平洋紫杉醇懸浮液之等分試樣添加至四個埃彭道夫管中。培育管並輕柔旋動20分鐘。使用一個管以使用RP-HPLC量測太平洋紫杉醇含量。 於20℃下將含有nab -太平洋紫杉醇懸浮液之其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻取出每一管並移除每一管之上清液。將奈米顆粒之沈澱物用0.5 mL生理鹽水輕柔重構以製備最終12 mg/mL奈米顆粒溶液。 將2 mL歐普迪沃(10 mg/mL，重構於WFI中)等分至15 mL旋轉濃縮器中。製備100mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)。向旋轉濃縮器中填充磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)並根據製造商之說明書離心30分鐘。再次向旋轉濃縮器中填充磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)並根據製造商之說明書離心30分鐘。將其餘尼沃魯單抗溶液移液至15 mL Falcon管中並稀釋至2 mL總體積。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃移除並於室溫下升溫1小時。將6.83 mg SM(PEG)6 溶解於100 μL DMSO (112mM連接體溶液)中。使連接體溶液渦旋直至連接體完全溶解為止。 將0.5 mL尼沃魯單抗溶液等分至4個埃彭道夫管中。向三個埃彭道夫管中緩慢添加1.7 μL、3.4 μL及5.1 μL連接體溶液以產生5:1、10:1或15:1莫耳濃度比之連接體對抗體。保留混合物對照管而未進行連接體修飾。在此程序期間，溶液應避光。使溶液在振盪器上反應2小時。 藉由將三個5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000G，5分鐘)製備脫鹽管柱。隨後經由管柱過濾活化尼沃魯單抗溶液以移除任何未反應之連接體。 隨後向500 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加500 μL每一濃度之活化尼沃魯單抗溶液。向500 μL奈米顆粒溶液中添加500 μL非活化尼沃魯單抗溶液。隨後將所得溶液於4℃下培育過夜而不振盪或攪動。 將偶聯溶液自冰箱取出(溶液似乎在表面上無聚集物)並以21,000 G離心80分鐘。隨後立刻自離心機移除管並移除上清液。將每一管用PBS鹽水洗滌三次。 在PBS鹽水(pH 7.4)中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。向含有沈澱之奈米顆粒之每一管中添加500 μL 40 mg/mL HSA溶液。將管超音波處理20秒並混合。將超音波處理步驟重複若干次直至奈米顆粒完全再懸浮為止。 在移除試樣用於表徵後，將溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 量測試樣之粒徑。平均粒徑係如下：nab -太平洋紫杉醇，145 nm；尼沃魯單抗混合物對照，145 nm；5:1 連接體:抗體尼沃魯單抗奈米顆粒，149 nm；10:1連接體:抗體尼沃魯單抗奈米顆粒，147 nm；及15:1連接體:抗體尼沃魯單抗奈米顆粒，150 nm。 藉由ELISA量測試樣之尼沃魯單抗含量且藉由RP-HPLC量測試樣之太平洋紫杉醇含量(表18)。 表18：尼沃魯單抗及太平洋紫杉醇濃度. 實施試樣之免疫印跡分析並確認顆粒上尼沃魯單抗及HSA之偶聯，包括存在更高階偶聯物，其來自經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒之偶聯反應。 圖24顯示連接體:抗體反應比率為5:1、10:1及15:1之尼沃魯單抗及活化尼沃魯單抗之LC-MS分析的解卷積質譜。增加連接體:抗體之反應比率會增加如每同位素簇下顯示為抗體:偶聯之連接體的偶聯至尼沃魯單抗之連接體之數量(圖24)。 實例 32 ：用於活體外及活體內研究之混合曲妥珠單抗 - 奈米顆粒調配物之製備 批料1. 向小瓶中之經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加0.39 mL Herceptin® (曲妥珠單抗及賦形劑，21 mg/mL)及9.61 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加10 mL生理鹽水。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係5 mg/mL (具有45 mg/mL白蛋白)，且曲妥珠單抗之最終濃度係0.41 mg/mL。 批料2. 向小瓶中之經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加0.152 mL Herceptin® (曲妥珠單抗及賦形劑，21 mg/mL)及9.848 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加10 mL生理鹽水。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係5 mg/mL (具有45 mg/mL白蛋白)，且曲妥珠單抗之最終濃度係0.16 mg/mL。 批料3. 向小瓶中之經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加0.093 mL Herceptin® (曲妥珠單抗及賦形劑，21 mg/mL)及9.907 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加10 mL生理鹽水。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係5 mg/mL (具有45 mg/mL白蛋白)，且曲妥珠單抗之最終濃度係0.098 mg/mL。 批料4. 向小瓶中之經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加0.051 mL Herceptin® (曲妥珠單抗及賦形劑，21 mg/mL)及9.949 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加10 mL生理鹽水。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係5 mg/mL (具有45 mg/mL白蛋白)，且曲妥珠單抗之最終濃度係0.054 mg/mL。 批料5. 向小瓶中之經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)中添加0.476 mL Herceptin® (曲妥珠單抗及賦形劑，21 mg/mL)及9.524 mL 0.9% NaCl生理鹽水(G-Biosciences)。在不混合情況下將小瓶之內容物重構5分鐘，之後輕柔混合以確保完全重構。將混合物於室溫(約20℃)下培育1小時，之後向小瓶中添加10 mL生理鹽水。輕柔混合混合物以確保均質性。太平洋紫杉醇之最終濃度係5 mg/mL (具有45 mg/mL白蛋白)，且曲妥珠單抗之最終濃度係0.5 mg/mL。 實例 33 ：用於活體外及活體內研究之偶聯之曲妥珠單抗 - 奈米顆粒調配物的製備 為分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒，向含有經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)之1個小瓶中添加20 mL生理鹽水。將1.2 mLnab -太平洋紫杉醇懸浮液等分至16個1.5 mL埃彭道夫管中。將埃彭道夫管輕柔混合20分鐘。使用一個埃彭道夫管進行HPLC分析以測定太平洋紫杉醇含量並量測粒徑。平均粒徑係147 nm。於20℃下將其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液。向所得沈澱物中添加500 μL乙酸鈉(pH 8.0)及150 mM氯化鈉以重構奈米顆粒(nab -太平洋紫杉醇顆粒濃度係10 mg/mL太平洋紫杉醇)。 將喬特試劑以2 mg/mL (14.5 mM)之濃度溶解於WFI中。將30 μL (連接體:HSA比率為20:1)喬特試劑緩慢添加至經分離奈米顆粒溶液中並於4℃下反應70分鐘。添加2.4 μL 500 mM EDTA (pH 8.0)並於4℃下培育10分鐘。於4℃下將試樣以21,000 RCF離心80分鐘。自離心機移除管，傾析，並用PBS鹽水洗滌兩次。將分離之活化nab -太平洋紫杉醇顆粒再懸浮於500 μL PBS鹽水中並超音波處理1分鐘以再懸浮顆粒。 使用生理鹽水製備21 mg/mL Herceptin® (曲妥珠單抗)溶液。將6 mL Herceptin®溶液等分至3個15 mL旋轉濃縮器中。 使用無內毒素之水製備100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)並過濾。向旋轉濃縮器中填充pH 6.6磷酸鹽緩衝液並以3750 rpm離心35分鐘。將此重複一次。將其餘溶液移液至15 mL Falcon管中並稀釋至12 mL總體積。藉由粒徑篩析層析(SEC)量測曲妥珠單抗濃度。視需要將曲妥珠單抗濃度調節至10.5 mg/mL。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃冷凍器移除並升溫至室溫並保持1小時。將2 mL無菌DMSO溶液等分至埃彭道夫管中。自此埃彭道夫管，將122 μL DMSO轉移至含有8.3 mg SM(PEG)6 (112 mM最終濃度)之小瓶中。使連接體溶液渦旋，直至連接體完全溶解於DMSO中為止。 將2 mL曲妥珠單抗溶液等分至6個15mL Falcon管中之每一者中。向含有1 mL曲妥珠單抗之每一2 mL管中緩慢添加6.8 μL SM(PEG)6 連接體溶液。在此程序期間，溶液避光。在仍避光的同時，使連接體/抗體溶液在振盪器上反應2小時。 將5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000G達6分鐘)。經由脫鹽管柱過濾活化抗體溶液以移除未反應之連接體。收集並彙集濾液。藉由液相層析-質譜(LC-MS)測定曲妥珠單抗及連接體之比率。 向500 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加500 μL活化曲妥珠單抗。隨後將溶液於4℃下培育過夜(避免振盪或攪動)。 將偶聯溶液自4℃移除。該溶液在埃彭道夫管表面上無聚集物。將偶聯溶液以21,000 G離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液且將每一管用PBS鹽水洗滌兩次。 在PBS鹽水中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。將500 μL 40 mg/mL HSA溶液等分至每一管中。隨後將管超音波處理20秒並混合(將此步驟重複若干次直至奈米顆粒完全再懸浮為止)。 藉由RP-HPLC量測太平洋紫杉醇含量且隨後調節至5.33 mg/mL。藉由DLS量測粒徑。粒徑係175nm。隨後將所得溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 藉由活體外細胞結合分析來分析最終偶聯之顆粒之Herceptin濃度。濃度係0.43mg/mL。 實例 34 ：用於活體外及活體內研究之偶聯之曲妥珠單抗 - 奈米顆粒調配物的製備 為分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒，向含有經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)之1個小瓶中添加20 mL生理鹽水。將1.2 mLnab -太平洋紫杉醇懸浮液等分至16個1.5 mL埃彭道夫管中。將埃彭道夫管輕柔混合20分鐘。使用一個埃彭道夫管進行HPLC分析以測定太平洋紫杉醇含量並量測粒徑。平均粒徑係147 nm。於20℃下將其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液。向所得沈澱物中添加500 μL乙酸鈉(pH 8.0)及150 mM氯化鈉以重構奈米顆粒(nab -太平洋紫杉醇顆粒濃度係10 mg/mL太平洋紫杉醇)。 將喬特試劑以2 mg/mL (14.5 mM)之濃度溶解於WFI中。將15 μL (連接體:HSA比率為10:1)喬特試劑緩慢添加至經分離奈米顆粒溶液中並於4℃下反應70分鐘。添加2.4 μL 500 mM EDTA (pH 8.0)並於4℃下培育10分鐘。於4℃下將試樣以21,000 RCF離心80分鐘。自離心機移除管，傾析，並用PBS鹽水洗滌兩次。將分離之活化nab -太平洋紫杉醇顆粒再懸浮於500 μL PBS鹽水中並超音波處理1分鐘以再懸浮顆粒。 使用生理鹽水製備21 mg/mL Herceptin® (曲妥珠單抗)溶液。將6 mL Herceptin®溶液等分至3個15 mL旋轉濃縮器中。 使用無內毒素之水製備100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)並過濾。向旋轉濃縮器中填充pH 6.6磷酸鹽緩衝液並以3750 rpm離心35分鐘。將此重複一次。將其餘溶液移液至15 mL Falcon管中並稀釋至12 mL總體積。藉由粒徑篩析層析(SEC)量測曲妥珠單抗濃度。視需要將曲妥珠單抗濃度調節至10.5 mg/mL。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃冷凍器移除並升溫至室溫並保持1小時。將2 mL無菌DMSO溶液等分至埃彭道夫管中。自此埃彭道夫管，將122 μL DMSO轉移至含有8.3 mg SM(PEG)6 (112 mM最終濃度)之小瓶中。使連接體溶液渦旋，直至連接體完全溶解於DMSO中為止。 將2 mL曲妥珠單抗溶液等分至6個15mL Falcon管中。向含有1 mL曲妥珠單抗之每一管中緩慢添加6.8 μL SM(PEG)6 連接體溶液。在此程序期間，溶液避光。在仍避光的同時，使連接體/抗體溶液在振盪器上反應2小時。 將5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000 G達6分鐘)。經由脫鹽管柱過濾活化抗體溶液以移除未反應之連接體。收集並彙集濾液。藉由液相層析-質譜(LC-MS)測定曲妥珠單抗及連接體之比率。 向500 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加500 μL活化曲妥珠單抗。隨後將溶液於4℃下培育過夜(避免振盪或攪動)。 將偶聯溶液自4℃移除。該溶液在埃彭道夫管表面上無聚集物。將偶聯溶液以21,000 G離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液且將每一管用PBS鹽水洗滌兩次。 在PBS鹽水中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。將500 μL 40 mg/mL HSA溶液等分至每一管中。隨後將管超音波處理20秒並混合(將此步驟重複若干次直至奈米顆粒完全再懸浮為止)。 藉由RP-HPLC量測太平洋紫杉醇含量且隨後調節至5.56 mg/mL。藉由DLS量測粒徑。粒徑係164nm。隨後將所得溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 藉由ELISA分析最終偶聯之顆粒之Herceptin濃度。濃度係0.18mg/mL. 實例 35 ：用於活體外及活體內研究之偶聯之曲妥珠單抗 - 奈米顆粒調配物的製備 為分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒，向含有經凍乾之nab -太平洋紫杉醇組合物(100 mg太平洋紫杉醇)之1個小瓶中添加20 mL生理鹽水。將1.2 mLnab -太平洋紫杉醇懸浮液等分至25個埃彭道夫管中。將埃彭道夫管輕柔混合20分鐘。使用一個埃彭道夫管進行RP-HPLC分析以測定太平洋紫杉醇含量並量測粒徑。於20℃下將其餘埃彭道夫管以21,000 RCF離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液。向其餘沈澱物中添加0.6 mL生理鹽水以重構奈米顆粒(最終濃度為10 mg/mL太平洋紫杉醇)。粒徑經量測為149 nm。 使用生理鹽水製備21 mg/mL Herceptin® (曲妥珠單抗)溶液。將8 mL Herceptin®溶液等分至2個15 mL旋轉濃縮器中。使用無內毒素之水製備100 mM磷酸鉀緩衝液(pH 6.6)並過濾。向旋轉濃縮器中填充pH 6.6磷酸鹽緩衝液並根據製造商之說明書離心30分鐘。將此重複一次。將其餘曲妥珠單抗溶液移液至15 mL Falcon管中並稀釋至2.4 mL之總體積。藉由粒徑篩析層析(SEC)量測曲妥珠單抗濃度。視需要將曲妥珠單抗濃度調節至10.5 mg/mL。 將SM(PEG)6 包裝自-20℃冷凍器移除並升溫至室溫並保持1小時。將2 mL無菌DMSO溶液等分至埃彭道夫管中。自此埃彭道夫管，將1.51 mL DMSO轉移至含有100 mg SM(PEG)6 (112 mM最終濃度)之小瓶中。使連接體溶液渦旋，直至連接體完全溶解於DMSO中為止。 將1 mL 10.5 mg/mL曲妥珠單抗溶液等分至16個埃彭道夫管中。向含有1 mL曲妥珠單抗溶液之每一埃彭道夫管中緩慢添加5.1 μL連接體溶液(連接體對抗體之比率係7.5:1)。在此程序期間，溶液避光。在仍避光的同時，使連接體/抗體溶液在振盪器上反應2小時。 將5 mL脫鹽管柱用磷酸鹽緩衝液(pH 6.6)洗滌4次(對於每一離心，1000G達5分鐘)。經由脫鹽管柱過濾活化抗體溶液以移除未反應之連接體。收集並彙集濾液。藉由液相層析-質譜(LC-MS)測定曲妥珠單抗及連接體之比率。向600 μL奈米顆粒溶液中緩慢添加600 μL活化曲妥珠單抗。隨後將溶液於4℃下培育過夜(避免振盪或攪動)。 將偶聯溶液自冰箱取出。該溶液在埃彭道夫管表面上無聚集物。粒徑經量測為164 nm。 將偶聯溶液以21,000 G離心80分鐘。離心後，立刻將管傾析以移除上清液且將每一管用PBS鹽水洗滌兩次。 在PBS鹽水(pH 7.4)中製備40 mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液。將800 μL 40 mg/mL HSA溶液等分至每一管中。隨後將管超音波處理20秒且隨後混合(將此步驟重複若干次直至奈米顆粒完全再懸浮為止)。 藉由RP-HPLC量測太平洋紫杉醇含量且隨後藉由添加40mg/mL HSA及Herceptin之溶液調節至最終5.05 mg/mL太平洋紫杉醇及0.5 mg/mL Herceptin。粒徑經測定為157 nm。隨後將所得溶液轉移至小瓶並於-80℃下儲存。 對經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒及曲妥珠單抗偶聯之顆粒實施免疫印跡以確認抗體偶聯。 實例 36 ： 混合、包埋且偶聯之曲妥珠單抗 - 奈米顆粒調配物之活體外效能 測試抗體-nab -太平洋紫杉醇之各種調配物的活體外抗增殖效應及p(Tyr1248)/總ErbB2結合之抑制。 抗增殖分析. 使用抗增殖分析評估活體外生長抑制活性。將40 µL/孔之細胞以其最佳化密度平鋪至384-孔板(Corning, 3712)中並使其於37℃及5% CO2 下培育過夜。次日，將細胞用測試曲妥珠單抗-奈米顆粒調配物處理並於37℃及5% CO2 下放置回培育器中3天。3天處理後，經由添加20 µL/孔之細胞Titer-Glo (Promega, G7573)評價細胞存活率。30分鐘培育後，在Perkin Elmer Envision上對板進行讀數用於發光檢測。 磷酸化(Tyr1248)/總ErbB2結合分析. 經由pY1248/總ErbB2全細胞溶解物分析套組(Mesoscale Discovery, K15125D)表徵測試曲妥珠單抗-奈米顆粒調配物之ErbB2結合。將25,000個細胞/孔平鋪過夜並於37℃及5% CO2 下使其附著至96-孔培養板(Corning 3704)。次日，將細胞用測試曲妥珠單抗-奈米顆粒調配物處理2小時。處理2小時後，藉由添加65 µL/孔之MSD溶解緩衝液使細胞溶解並於4℃下在振動振盪器上放置1小時。在此時間期間，將MSD捕獲板用MSD封阻緩衝液A封阻。1小時後，將MSD捕獲板用MSD洗滌緩衝液洗滌。隨後將35 µL/孔之細胞溶解物轉移至MSD捕獲板並使其於室溫下在振動振盪器上培育1小時。隨後藉由首先棄去細胞溶解物及用MSD洗滌緩衝液洗滌MSD捕獲板針對其Erb2含量評價捕獲之蛋白量。添加25 µL/孔之抗體稀釋緩衝液中之SULFO-TAG抗總ErbB2抗體且隨後使其於室溫下在振動振盪器上與MSD板一起培育1小時。1小時後，將MSD板用MSD洗滌緩衝液洗滌。隨後添加150 µL/孔之MSD讀取緩衝液並立刻在MSD Sector S600儀器上對板進行讀數。 結合研究之數據提供於表19中，且增殖研究之數據提供於表20中。 表19：磷酸化(Tyr1248)/總ErbB2結合分析之IC50 表20：細胞增殖分析 Ex. = 實例；Tz = 曲妥珠單抗；Pxt = 太平洋紫杉醇 實例 37 ： 混合、包埋且偶聯之曲妥珠單抗 - 奈米顆粒調配物之活體內效能 此實例展現BT-474異種移植物小鼠中投與之混合、包埋且偶聯之nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗調配物的治療效能。 在腫瘤細胞接種前一天(天：-1)向嚴重合併性免疫缺失病(SCID)小鼠皮下植入17β-雌二醇丸粒(90天釋放，0.36 mg/丸粒)。在第0天，向小鼠皮下接種BT-474細胞(源自ATCC)。對於較小腫瘤研究而言，在接種BT-474細胞後約2週，量測腫瘤並將小鼠隨機化至研究組中。對於較大腫瘤研究而言，在接種BT-474細胞後約4週，量測腫瘤並將小鼠隨機化至下文鑑別之研究組中。 對於較小腫瘤研究(腫瘤大小為約150 mm3 - 180 mm3 )而言，將7-8隻SCID小鼠分配至以下研究組中之每一者且其接受每週一次以下物質之投與：(1) 媒劑；(2)nab -太平洋紫杉醇：50 mg/kg (「ABX50」)；(3)nab -太平洋紫杉醇：25 mg/kg (「ABX25」)；(4) Herceptin®：5 mg/kg (「Tratsu 5」)；(5) Herceptin®：2.5 mg/kg (「Tratsu 2.5」)；(6)nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗偶聯物(50 mgnab -太平洋紫杉醇/5 mg曲妥珠單抗/kg) (「偶聯物(50/5)」) (根據實例35)；(7)nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗偶聯物(25 mgnab -太平洋紫杉醇/2.5 mg曲妥珠單抗/kg) (「偶聯物(25/2.5)」) (根據實例35)；(8) 包埋之nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗(50 mg nab-太平洋紫杉醇/5 mg曲妥珠單抗/kg) (「包埋(50/5)」) (根據實例20)；(9) 包埋之nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗(25 mg nab-太平洋紫杉醇/2.5 mg曲妥珠單抗/kg) (「包埋(25/2.5)」) (根據實例20)；(10)nab -太平洋紫杉醇與Herceptin®之混合物(50 mg nab-太平洋紫杉醇及5 mg Herceptin®/kg) (「混合物50/5」) (根據實例32，批料5)；及(11)nab -太平洋紫杉醇與Herceptin®之混合物(25 mg nab-太平洋紫杉醇及2.5 mg Herceptin®/kg) (「混合物25/2.5」) (根據實例32，批料5)。 對於較大腫瘤研究(腫瘤大小為約500 mm3 - 750 mm3 )而言，將7隻SCID小鼠分配至以下研究組中之每一者且其接受每週一次以下物質之投與：(1) 媒劑；(2)nab -太平洋紫杉醇：50 mg/kg；(3) Herceptin®：5 mg/kg；(4)nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗偶聯物(50 mg nab-太平洋紫杉醇/5 mg曲妥珠單抗/kg) (根據實例35)；(5) 包埋之nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗(50 mg nab-太平洋紫杉醇/5 mg曲妥珠單抗/kg) (根據實例20)；及(6) Abraxane®與Herceptin®之混合物(50 mg nab-太平洋紫杉醇及5 mg Herceptin®/kg) (根據實例32，批料5)。 一週兩次量測動物腫瘤量測及體重。將最後腫瘤量測與起始組名稱盲化。 較小腫瘤研究之腫瘤體積變化%結果顯示於圖25A-25B (治療後7天)及圖25C-25D (治療後14天)中。截至第14天，與單一試劑nab -太平洋紫杉醇相比，較高劑量nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗偶聯物組(50 mg nab-太平洋紫杉醇/5 mg曲妥珠單抗/kg)達成顯著改良之抗腫瘤活性(圖25C)。 較大腫瘤研究之結果顯示於圖26A (治療後7天)及圖26B (治療後14天)中。截至第14天，與單一試劑nab -太平洋紫杉醇或單一試劑曲妥珠單抗相比，包埋之nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗(50 mg nab-太平洋紫杉醇/5 mg曲妥珠單抗/kg)達成顯著改良之抗腫瘤活性。此外，處理後14天，與單一試劑曲妥珠單抗相比，偶聯之nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗(50 mgnab -太平洋紫杉醇/5 mg曲妥珠單抗/kg)達成顯著改良之抗腫瘤活性。 實例 38 ： 混合、包埋且偶聯之曲妥珠單抗 - 奈米顆粒調配物之活體內效能 此實例展現中混合、包埋且偶聯之nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗調配物對BT-474異種移植物小鼠模型的治療效能。 如實例31中所述製備嚴重合併性免疫缺失病(SCID)小鼠。接種BT-474細胞後約4週，量測腫瘤(約600 mm3 )並將小鼠隨機化至下文鑑別之研究組中。 將8隻SCID小鼠分配至以下研究組中之每一者且其接受每週一次以下物質之投與：(1) 媒劑(5% HSA)；(2)nab -太平洋紫杉醇：50 mg/kg (「ABX 50」)；(3) Herceptin®：4.1 mg/kg (「Tratsu 4.1」)；(4)nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗偶聯物(50 mg nab-太平洋紫杉醇/4.1 mg曲妥珠單抗/kg) (「偶聯物50/4.1=12:1」) (根據實例33)；(5)nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗偶聯物(50 mg nab-太平洋紫杉醇/0.54 mg曲妥珠單抗/kg) (「偶聯物50/0.54 = 92.5:1)」) (根據實例23)；(6)nab -太平洋紫杉醇及Herceptin®之混合物(50 mgnab -太平洋紫杉醇及4.1 mg Herceptin®/kg) (「混合物(50/4.1 = 12:1)」) (根據實例36，批料1)；(7)nab -太平洋紫杉醇及Herceptin®之混合物(50 mg nab-太平洋紫杉醇及0.54 mg Herceptin®/kg) (「混合物(50/0.54 = 92.5:1)」) (根據實例36，批料4)；及(8) 依序投與nab -太平洋紫杉醇(50 mg/kg)及Herceptin® (4.1 mg/kg) (「依序(50/4.1)」)。 研究之腫瘤體積變化%結果顯示於圖27A (在第0天治療後7天)及27B (在第0及7天治療後14天)中。 實例 39 ： 混合、包埋且偶聯之曲妥珠單抗 - 奈米顆粒調配物之活體內效能 此實例展現中包埋且偶聯之nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗調配物對BT-474異種移植物小鼠模型的治療效能。 如實例M中所述製備嚴重合併性免疫缺失病(SCID)小鼠。接種BT-474細胞後約4週，量測腫瘤(約600 mm3 )並將小鼠隨機化至下文鑑別之研究組中。 將8隻SCID小鼠分配至1 mg/kg Herceptin®研究組中之以下研究組中之每一者且其接受每週一次以下物質之投與：(1) 媒劑(5% HSA)；(2)nab -太平洋紫杉醇：30 mg/kg；(3) Herceptin®：1 mg/kg；(4) 依序投與nab -太平洋紫杉醇(30 mg/kg)及Herceptin® (1 mg/kg)；及(5)nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗偶聯物(30 mg nab-太平洋紫杉醇/1 mg 曲妥珠單抗/kg) (根據實例34)；(6) Herceptin®：0.6 mg/kg；(7) 依序投與nab -太平洋紫杉醇(30 mg/kg)及Herceptin® (0.6 mg/kg)；及(8)nab -太平洋紫杉醇-曲妥珠單抗偶聯物(30 mg nab-太平洋紫杉醇/0.6 mg曲妥珠單抗/kg) (根據實例26)。 在第0天上文鑑別之治療之單一劑量後第7天量測腫瘤體積。第7天之腫瘤體積變化%之結果顯示於圖28A-28B中。 在第0及7天上文鑑別之治療之兩個劑量後第14天量測腫瘤體積。第14天之腫瘤體積變化%之結果顯示於圖28C-28D中。
圖1顯示圖解說明藉由將生物活性多肽及白蛋白包括於水溶液中製造本文所述包含奈米顆粒之組合物之方法的一個實施例之示意圖。 圖2顯示圖解說明藉由向包含水溶液(包含白蛋白及水)及有機溶液(包含一或多種有機溶劑及疏水藥物)之粗製混合物中添加生物活性多肽製造本文所述包含奈米顆粒之組合物之方法的一個實施例之示意圖。 圖3顯示圖解說明藉由向包含水溶液(包含白蛋白及水)及有機溶液(包含一或多種有機溶劑及疏水藥物)之乳液中添加生物活性多肽製造本文所述包含奈米顆粒之組合物之方法的一個實施例之示意圖。 圖4顯示藉由向蒸發後奈米顆粒懸浮液中添加生物活性多肽製造本文所述包含奈米顆粒之組合物之方法的一個實施例，其中奈米顆粒包含白蛋白及疏水藥物。 圖5顯示圖解說明藉由向包含白蛋白及疏水藥物之預製造之奈米顆粒中添加添加生物活性多肽製造本文所述包含奈米顆粒之組合物之方法的一個實施例之示意圖。 圖6顯示圖解說明藉由向奈米顆粒懸浮液中添加生物活性多肽製造本文所述包含奈米顆粒之組合物之方法的一個實施例之示意圖，其中奈米顆粒包含衍化白蛋白及疏水藥物。生物活性多肽偶聯至與奈米顆粒締合之衍化白蛋白。 圖7A係藉由光學顯微鏡獲取之利用100% Avastin®緩衝液(含有磷酸鈉緩衝液及α,α-海藻糖，但排除聚山梨醇酯20)重構至10 mg/mL之Abraxane®的影像，且在室溫下培育24小時後未調節pH (pH量測為6.4)。 圖7B係藉由光學顯微鏡獲取之藉由利用20% Avastin®緩衝液(含有磷酸鈉緩衝液及α,α-海藻糖，但排除聚山梨醇酯20)及80%生理鹽水重構至10 mg/mL之Abraxane®的影像，且於58℃下培育24小時後將pH調節至5。 圖7C係藉由光學顯微鏡獲取之利用100% Avastin®緩衝液(含有磷酸鈉緩衝液及α,α-海藻糖中之每一者及聚山梨醇酯20)重構至10 mg/mL之Abraxane®的影像，且在室溫下培育24小時後未調節pH (pH量測為6.8)。 圖8A顯示在奈米顆粒製造過程期間之不同點無白蛋白之貝伐珠單抗之粒徑篩析層析量測的結果。 圖8B顯示相對於在製造過程開始添加之初始濃度在製造過程之每一步驟後回收之貝伐珠單抗(無白蛋白)的分數。 圖9A顯示在奈米顆粒製造過程期間之不同點具有10%人類白蛋白之貝伐珠單抗之粒徑篩析層析量測的結果。 圖9B顯示相對於在製造過程開始添加之初始濃度在製造過程之每一步驟後回收之貝伐珠單抗(具有0%、1%、2.5%、5%或10%人類白蛋白)的分數，此時貝伐珠單抗提供於初始水溶液中。 圖9C顯示相對於在製造過程開始添加之初始濃度在製造過程之每一步驟後剩餘之貝伐珠單抗單體(具有0%、1%、2.5%、5%或10%人類白蛋白)的分數，此時貝伐珠單抗提供於初始水溶液中。 圖10A顯示相對於所提供貝伐珠單抗之量在製造過程之每一步驟後回收之貝伐珠單抗的分數，此時貝伐珠單抗提供於具有5%人類白蛋白之初始水溶液中或在白蛋白水溶液及有機溶液之高壓均質化後提供至乳液。 圖10B顯示相對於所提供貝伐珠單抗之量在製造過程之每一步驟後剩餘之貝伐珠單抗單體的分數，此時貝伐珠單抗提供於具有5%人類白蛋白之初始水溶液中或在白蛋白水溶液及有機溶液之高壓均質化後提供至乳液。 圖11顯示不同鹽水濃度下nab -太平洋紫杉醇(「Abx」)、貝伐珠單抗與nab -太平洋紫杉醇以不同比率之混合物(「Bev:Abx (8:10)」及「Bev:Abx (8:10)」)、曲妥珠單抗與nab -太平洋紫杉醇以不同比率之混合物(「Tras:Abx (8:10)」及「Tras:Abx (8:10)」)及單獨貝伐珠單抗(「Bev」)的奈米顆粒大小(藉由動態光散射測定)。 圖12顯示在投與nab -太平洋紫杉醇與貝伐珠單抗之混合物(「AB160」)、在同一天投與之貝伐珠單抗與nab -太平洋紫杉醇(「BEV12 + ABX30 - 同一天」)或隔一天投與之貝伐珠單抗與nab -太平洋紫杉醇(「BEV12 + ABX30 - 隔1天」)、單獨貝伐珠單抗(「BEV12」)、單獨nab -太平洋紫杉醇(「ABX30」)或媒劑對照(「媒劑」) 7天後腫瘤體積之變化%。 圖13顯示抗體及游離人類血清白蛋白(HSA)之偶聯之示意圖。 圖14A-14C顯示曲妥珠單抗及SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗物質之解卷積質譜。圖14A顯示曲妥珠單抗之質譜。圖14B顯示使用1:5之曲妥珠單抗:連接體比率之SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗之質譜。圖14C顯示使用1:10之曲妥珠單抗:連接體比率之SM(PEG)6 活化之曲妥珠單抗之質譜。 圖15顯示1:1曲妥珠單抗-HSA偶聯物、曲妥珠單抗及HSA之SEC層析圖。 圖16顯示曲妥珠單抗-HSA偶聯產物之SDS-PAGE凝膠(4-12%)。 圖17顯示曲妥珠單抗-HSA偶聯及曲妥珠單抗偶聯產物之天然凝膠。 圖18顯示活化抗體及經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之偶聯的示意圖。 圖19顯示活化抗體及硫醇化之經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之偶聯的示意圖。 圖20顯示來自經分離nab -太平洋紫杉醇奈米顆粒或nab -太平洋紫杉醇調配物(ABX)及曲妥珠單抗之偶聯反應之試樣的3-8% Tris-乙酸鹽SDS PAGE凝膠。 圖21顯示使用無銅點擊化學之抗體及經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之偶聯的示意圖。 圖22顯示經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之酸修飾的示意圖。 圖23顯示使用DNA交聯劑之活化抗體及活化經分離nab -太平洋紫杉醇顆粒之偶聯的示意圖。 圖24顯示來自尼沃魯單抗及活化尼沃魯單抗之物質之LC-MS分析的解卷積質譜。 圖25A-25D顯示在治療投與後之時間點較小腫瘤研究的腫瘤體積變化%。圖25A及25B顯示在第0天治療投與後第7天較小腫瘤研究之腫瘤體積變化%。圖23C-D顯示在第0及7天治療投與後第14天較小腫瘤研究之腫瘤體積變化%。 圖26A-26B顯示在治療投與後之時間點較大腫瘤研究的腫瘤體積變化%。圖26A顯示在第0天治療投與後第7天較大腫瘤研究之腫瘤體積變化%。圖26B顯示在第0及7天治療投與後第14天較大腫瘤研究之腫瘤體積變化%。 圖27A-27B顯示在治療投與後之時間點BT-474異種移植物腫瘤的腫瘤體積變化%。圖27A顯示在第0天治療投與後第7天BT-474異種移植物腫瘤之腫瘤體積變化%。圖27B顯示在第0及7天治療投與後第14天BT-474異種移植物腫瘤之腫瘤體積變化%。 圖28A-28D顯示在治療投與後之時間點BT-474異種移植物腫瘤的腫瘤體積變化%。圖28A及28B顯示在第0天治療投與後第7天BT-474異種移植物腫瘤之腫瘤體積變化%。圖28C及28D顯示在第0及7天治療投與後第14天BT-474異種移植物腫瘤之腫瘤體積變化%。

Claims (43)

  1. 一種包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 疏水藥物，(b) 白蛋白，及(c) 偶聯至該白蛋白之生物活性多肽。
  2. 如請求項1之組合物，其中該生物活性多肽與該白蛋白共價交聯。
  3. 如請求項2之組合物，其中該生物活性多肽經由化學交聯劑與該白蛋白共價交聯。
  4. 如請求項2之組合物，其中該生物活性多肽經由二硫鍵與該白蛋白共價交聯。
  5. 如請求項1之組合物，其中該生物活性多肽經由非共價交聯劑偶聯至該白蛋白。
  6. 如請求項5之組合物，其中該生物活性多肽包含該非共價交聯劑之第一組分且該白蛋白包含該非共價交聯劑之第二組分，且其中該第一組分特異性結合至該第二組分。
  7. 如請求項6之組合物，其中該非共價交聯劑包含核酸分子，其中該等核酸分子之至少一部分係互補的。
  8. 一種包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含(a) 包含疏水藥物之固體核心，(b) 與該奈米顆粒表面締合之白蛋白，及(c) 包埋於該奈米顆粒表面或該固體核心中之生物活性多肽。
  9. 如請求項8之組合物，其中該生物活性多肽包埋於該等奈米顆粒之表面中。
  10. 如請求項8之組合物，其中該生物活性多肽包埋於該固體核心中。
  11. 如請求項1至10中任一項之組合物，其中該組合物中至少75%之該生物活性多肽與該等奈米顆粒締合。
  12. 如請求項1至11中任一項之組合物，其中該等奈米顆粒包含至少約100種生物活性多肽。
  13. 如請求項1至12中任一項之組合物，其中該生物活性多肽係抗體或其片段。
  14. 如請求項1至13中任一項之組合物，其中該生物活性多肽係貝伐珠單抗(bevacizumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、BGB-A317或托珠單抗(tocilizumab)。
  15. 如請求項1至14中任一項之組合物，其中該組合物中之奈米顆粒中該疏水藥物對該生物活性多肽的重量比係約1:1至約100:1。
  16. 如請求項1至15中任一項之組合物，其中該組合物中之奈米顆粒中該白蛋白對該生物活性多肽的重量比係約1:1至約1000:1。
  17. 如請求項1至16中任一項之組合物，其中該組合物中之奈米顆粒中該白蛋白對該疏水藥物的重量比係約1:1至約20:1。
  18. 如請求項15至17中任一項之組合物，其中： 該疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(HPLC)測定，且該生物活性多肽及該白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定；或 該疏水藥物之重量係藉由反相高效液相層析(HPLC)測定，該白蛋白之重量係藉由粒徑篩析層析(SEC)測定，且該生物活性多肽之重量係藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定。
  19. 如請求項1至18中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含不與該等奈米顆粒締合之生物活性多肽。
  20. 如請求項1至19中任一項之組合物，其中該組合物之奈米顆粒部分中至少約40%之白蛋白由二硫鍵交聯。
  21. 如請求項1至20中任一項之組合物，其中藉由動態光散射量測之奈米顆粒之平均直徑不大於約200 nm。
  22. 如請求項1至21中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含不與奈米顆粒締合之白蛋白。
  23. 如請求項1至22中任一項之組合物，其中該疏水藥物係紫杉烷(taxane)或利莫司(limus)藥物。
  24. 如請求項1至23中任一項之組合物，其中該疏水藥物係太平洋紫杉醇(paclitaxel)。
  25. 如請求項1至23中任一項之組合物，其中該疏水藥物係雷帕黴素(rapamycin)。
  26. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i)使有機溶液與水溶液之混合物經高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含該疏水藥物溶解於一或多種有機溶劑中，且 其中該水溶液包含該白蛋白及該生物活性多肽；及 ii)自該乳液移除一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成該組合物。
  27. 如請求項26之方法，其中該生物活性多肽偶聯至該水溶液中之白蛋白。
  28. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i)使有機溶液與水溶液之混合物經高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含疏水藥物溶解於一或多種有機溶劑中，且 其中該水溶液包含該白蛋白； ii)向該乳液中添加該生物活性多肽；及 iii)自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成該組合物。
  29. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i)使有機溶液與水溶液之混合物經高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含疏水藥物溶解於一或多種有機溶劑中，且 其中該水溶液包含該白蛋白； ii)自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後之懸浮液，及 iii)向該蒸發後之懸浮液中添加該生物活性多肽，藉此形成該組合物。
  30. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i)使有機溶液與水溶液之混合物經高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含疏水藥物溶解於一或多種有機溶劑中，且 其中該水溶液包含該白蛋白； ii)自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分而非全部以獲得乳液-懸浮液中間體； iii)向該乳液-懸浮液中間體中添加該生物活性多肽；及 iv)自包含該生物活性多肽之乳液-懸浮液中間體移除該一或多種有機溶劑之另一部分，藉此形成該組合物。
  31. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i)使有機溶液與水溶液之混合物經高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含疏水藥物溶解於一或多種有機溶劑中，且 其中該水溶液包含該白蛋白，其中該白蛋白經交聯劑部分衍化； ii)自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分以獲得蒸發後之懸浮液，及 iii)向該蒸發後之懸浮液中添加該生物活性多肽，其中該生物活性多肽經交聯劑部分衍化，藉此形成該組合物。
  32. 如請求項31之方法，其進一步包含用非衍化白蛋白替代不與該等奈米顆粒締合之該衍化白蛋白。
  33. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及生物活性多肽，該方法包含： i)使有機溶液與水溶液之混合物經高壓均質化，藉此形成乳液， 其中該有機溶液包含疏水藥物溶解於一或多種有機溶劑中，且 其中該水溶液包含該白蛋白，其中該白蛋白之至少一部分偶聯至該生物活性多肽；及 ii)自該乳液移除該一或多種有機溶劑之至少一部分，藉此形成該組合物。
  34. 如請求項33之方法，其進一步包含用未偶聯之白蛋白替代不與該等奈米顆粒締合之該生物活性多肽偶聯之白蛋白。
  35. 一種製造包含奈米顆粒之組合物之方法，該等奈米顆粒包含疏水藥物、白蛋白及偶聯至該白蛋白之生物活性多肽，該方法包含使該生物活性多肽偶聯至包含該疏水藥物及白蛋白之奈米顆粒。
  36. 如請求項26至35中任一項之方法，其進一步包含無菌過濾該組合物。
  37. 如請求項26至36中任一項之方法，其中該生物活性多肽係抗體或其片段。
  38. 如請求項26至37中任一項之方法，其中該生物活性多肽係貝伐珠單抗、曲妥珠單抗、BGB-A317或托珠單抗。
  39. 一種組合物，其係由如請求項26至38中任一項之方法獲得。
  40. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至25及39中任一項之組合物及醫藥上可接受之賦形劑。
  41. 一種治療個體之疾病之方法，其包含向該個體投與有效量之如請求項1至25、39及40中任一項之組合物。
  42. 如請求項41之方法，其中該疾病係癌症。
  43. 如請求項41或42之方法，其中該個體係人類。
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