KR20190068570A - 나노입자 제제, 및 그의 제조 및 사용 방법 - Google Patents

나노입자 제제, 및 그의 제조 및 사용 방법 Download PDF

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KR20190068570A
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albumin
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nanoparticles
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hydrophobic drug
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KR1020197013054A
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윌라드 포스
빅토르 페이코브
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아브락시스 바이오사이언스, 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 그의 사용 방법, 제약 조성물, 의약 및 키트가 추가로 제공된다.

Description

나노입자 제제, 및 그의 제조 및 사용 방법
관련 출원에 대한 상호-참조
본 출원은 2016년 10월 10일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/406,367을 우선권 주장하며, 상기 가출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일의 서열 목록 제출
ASCII 텍스트 파일의 하기 제출 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF)의 서열 목록 (파일명 638772021740SEQLIST.txt, 기록일: 2017년 10월 9일, 크기: 6 KB).
발명의 분야
본 개시내용은 (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
알부민-기반 나노입자 조성물은 소수성 약물 예컨대 탁산을 전달하기 위한 약물 전달 시스템으로서 개발되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,916,596; 6,506,405; 6,749,868; 6,537,579; 7,820,788; 및 7,923,536을 참조한다. 파클리탁셀의 알부민 안정화된 나노입자 제제인 아브락산(Abraxane)®은 전이성 유방암 치료용으로 2005년에 미국에서 승인된 이후, 다양한 다른 국가에서도 승인되었다. 이는 최근에 또한 국부 진행성 또는 전이성 비소세포 폐암 및 전이성 췌장암 치료용으로 미국, 유럽 및 다른 세계 시장에서 승인되었다.
상표명 아바스틴(Avastin)®으로 판매되는 베바시주맙은 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)를 표적화하며 여러 암의 치료에 효과적인 항혈관신생 항체이다. 알부민-기반 나노입자 조성물의 치료 잠재력을 항체 요법과 조합하려는 시도가 이전에 이루어진 바 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 9,427,477; 미국 특허 번호 9,446,148; 및 PCT 출원 번호 WO 2014/055415 참조). 그러나 효율적인 나노입자 제조법, 및 소수성 약물 및 면역요법제 둘 다를 함유하는 보다 고품질의 알부민-기반 나노입자가 여전히 요구되고 있다.
본원에 언급된 모든 공개, 특허, 특허 출원 및 공개된 특허 출원의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
(a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자가 본원에 기재된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 항체 또는 그의 단편이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자의 알부민에 (공유적으로 또는 비-공유적으로) 접합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자에 매립된다. 이러한 나노입자 조성물을 제조하는 방법이 본원에 추가로 기재된다.
한 측면에서, (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 알부민에 공유적으로 가교된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 화학적 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 가교된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 디술피드 결합을 통해 알부민에 공유적으로 가교된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 비-공유 가교제를 통해 알부민에 접합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 비-공유 가교제의 제1 구성요소를 포함하고 알부민은 비-공유 가교제의 제2 구성요소를 포함하며, 여기서 제1 구성요소는 제2 구성요소에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 비-공유 가교제는 핵산 분자를 포함하며, 여기서 핵산 분자의 적어도 일부는 상보적이다.
또 다른 측면에서, (a) 소수성 약물을 포함하는 고체 코어, (b) 나노입자의 표면과 회합된 알부민, 및 (c) 나노입자의 표면 또는 고체 코어에 매립된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자의 표면에 매립된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 고체 코어에 매립된다.
상기 기재된 나노입자의 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 적어도 75%는 나노입자와 회합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 적어도 약 100의 생물활성 폴리펩티드를 포함한다.
상기 기재된 나노입자의 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 항체 또는 그의 단편이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 베바시주맙, 트라스투주맙, BGB-A317, 또는 토실리주맙이다.
상기 기재된 나노입자의 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 소수성 약물 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비는 약 1:1 내지 약 100:1이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비는 약 1:1 내지 약 1000:1이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 1:1 내지 약 20:1이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물의 중량은 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 결정되고, 생물활성 폴리펩티드 및 알부민의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정되거나; 또는 소수성 약물의 중량은 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 결정되고, 알부민의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정되고, 생물활성 폴리펩티드의 중량은 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정된다.
상기 기재된 나노입자의 일부 실시양태에서, 조성물은 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물의 나노입자 부분 내 알부민의 적어도 약 40%는 디술피드 결합에 의해 가교된다.
일부 실시양태에서, 나노입자의 평균 직경은 동적 광 산란에 의해 측정 시 약 200 nm 이하이다.
일부 실시양태에서, 조성물은 나노입자와 회합되지 않은 알부민을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 소수성 약물은 탁산 또는 리무스 약물이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 라파마이신이다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: (i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 것인 단계; 및 (ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 수성 용액 중에서 알부민에 접합된다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: (i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; (ii) 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계; 및 (iii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: (i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; (ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및 (iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: (i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; (ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 전부가 아닌 적어도 일부를 제거하여 에멀젼-현탁액 중간물질을 수득하는 단계; (iii) 에멀젼-현탁액 중간물질에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계; 및 (iv) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 에멀젼-현탁액 중간물질로부터 1종 이상의 유기 용매의 추가의 분량을 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: (i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민은 가교제 모이어티로 유도체화되는 것인 단계; (ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및 (iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써, 조성물을 형성하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 가교제 모이어티로 유도체화되는 것인 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 나노입자와 회합되지 않은 유도체화된 알부민을 비-유도체화된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: (i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 생물활성 폴리펩티드에 접합되는 것인 단계; 및 (ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드-접합된 알부민을 비접합된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 생물활성 폴리펩티드를 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자에 접합시키는 것을 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다.
상기 기재된 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다.
상기 기재된 방법의 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 항체 또는 그의 단편이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 베바시주맙, 트라스투주맙, BGB-A317, 또는 토실리주맙이다.
상기 기재된 방법 중 어느 하나의 방법에 의해 수득된 조성물이 본원에 추가로 제공된다.
상기 기재된 조성물 중 어느 하나 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 또한 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 상기 기재된 조성물 중 어느 하나의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 질환은 암이다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다.
본 발명의 이들 및 다른 측면 및 이점은 하기 상세한 설명 및 첨부된 청구범위로부터 명백해질 것이다. 본원에 기재된 다양한 실시양태의 특성 중 하나, 일부 또는 전부는 조합되어 본 발명의 다른 실시양태를 형성할 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 생물활성 폴리펩티드 및 알부민을 수성 용액에 포함시킴으로써 본원에 기재된 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법의 한 실시양태를 예시하는 개략도를 제시한다.
도 2는 수성 용액 (알부민 및 물을 포함함) 및 유기 용액 (1종 이상의 유기 용매 및 소수성 약물을 포함함)을 포함하는 조 혼합물에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써 본원에 기재된 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법의 한 실시양태를 예시하는 개략도를 제시한다.
도 3은 수성 용액 (알부민 및 물을 포함함) 및 유기 용액 (1종 이상의 유기 용매 및 소수성 약물을 포함함)을 포함하는 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써 본원에 기재된 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법의 한 실시양태를 예시하는 개략도를 제시한다.
도 4는 나노입자가 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 것인, 증발-후 나노입자 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써 본원에 기재된 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법의 한 실시양태를 제시한다.
도 5는 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 사전-제조된 나노입자에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써 본원에 기재된 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법의 한 실시양태를 예시하는 개략도를 제시한다.
도 6은 나노입자가 유도체화된 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 것인, 나노입자 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써 본원에 기재된 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법의 한 실시양태를 예시하는 개략도를 제시한다. 생물활성 폴리펩티드는 나노입자와 회합된 유도체화된 알부민에 접합된다.
도 7a는 100%의 아바스틴® 완충제 (인산나트륨 완충제 및 α,α-트레할로스를 함유하지만, 폴리소르베이트 20은 제외됨)를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH의 조정 없이 (pH는 6.4인 것으로 측정되었음), 24시간 동안 실온에서 인큐베이션한 후에 광학 현미경검사에 의해 수집된 아브락산®의 영상이다.
도 7b는 20%의 아바스틴® 완충제 (인산나트륨 완충제 및 α,α-트레할로스를 함유하지만, 폴리소르베이트 20은 제외됨) 및 80%의 생리 염수를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH를 5로 조정하고, 24시간 동안 58℃에서 인큐베이션한 후에 광학 현미경검사에 의해 수집된 아브락산®의 영상이다.
도 7c는 100%의 아바스틴® 완충제 (인산나트륨 완충제 및 α,α-트레할로스 및 폴리소르베이트 20을 각각 함유함)를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH의 조정 없이 (pH는 6.8인 것으로 측정되었음), 24시간 동안 실온에서 인큐베이션한 후에 광학 현미경검사에 의해 수집된 아브락산®의 영상이다.
도 8a는 나노입자 제조 공정 동안 다양한 시점에서의 알부민의 부재 하 베바시주맙의 크기 배제 크로마토그래피 측정 결과를 제시한다.
도 8b는 제조 공정의 초기에 첨가된 초기 농도에 대비된, 제조 공정의 각각의 단계 후에 회수된 베바시주맙 (알부민 부재)의 분율을 제시한다.
도 9a는 나노입자 제조 공정 동안 다양한 시점에서의 10% 인간 알부민의 존재 하 베바시주맙의 크기 배제 크로마토그래피 측정 결과를 제시한다.
도 9b는, 베바시주맙이 초기 수성 용액 내에 제공되는 경우에, 제조 공정의 초기에 첨가된 초기 농도에 대비된, 제조 공정의 각각의 단계 후에 회수된 베바시주맙 (0%, 1%, 2.5%, 5% 또는 10% 인간 알부민 존재)의 분율을 제시한다.
도 9c는, 베바시주맙이 초기 수성 용액 내에 제공되는 경우에, 제조 공정의 초기에 첨가된 초기 농도에 대비된, 제조 공정의 각각의 단계 후에 잔류하는 베바시주맙 단량체 (0%, 1%, 2.5%, 5% 또는 10% 인간 알부민 존재)의 분율을 제시한다.
도 10a는, 베바시주맙이 5% 인간 알부민이 함유된 초기 수성 용액 내에 제공되거나 또는 알부민 수성 용액 및 유기 용액의 고압 균질화 후의 에멀젼에 제공되는 경우에, 제공된 베바시주맙의 양에 대비된, 제조 공정의 각각의 단계 후에 회수된 베바시주맙의 분율을 제시한다.
도 10b는, 베바시주맙이 5% 인간 알부민이 함유된 초기 수성 용액 내에 제공되거나 또는 알부민 수성 용액 및 유기 용액의 고압 균질화 후의 에멀젼에 제공되는 경우에, 제공된 베바시주맙의 양에 대비된, 제조 공정의 각각의 단계 후에 잔류하는 베바시주맙 단량체의 분율을 제시한다.
도 11은 상이한 염수 농도에서의 nab-파클리탁셀 ("Abx"), 상이한 비의 베바시주맙 및 nab-파클리탁셀의 혼합물 ("Bev:Abx (8:10)" 및 "Bev:Abx (8:10)"), 상이한 비의 트라스투주맙 및 nab-파클리탁셀의 혼합물 ("Tras:Abx (8:10)" 및 "Tras:Abx (8:10)"), 및 단독의 베바시주맙 ("Bev")에 대한 나노입자 크기 (동적 광 산란에 의해 결정됨)를 제시한다.
도 12는 nab-파클리탁셀 및 베바시주맙의 혼합물 ("AB160"), 동일한 날에 ("BEV12 + ABX30 - 동일한 날") 또는 1일 간격으로 ("BEV12 + ABX30 - 1일 간격") 투여되는 베바시주맙 및 nab-파클리탁셀, 단독의 베바시주맙 ("BEV12"), 단독의 nab-파클리탁셀 ("ABX30") 또는 비히클 대조군 ("비히클")의 투여로부터 7일 후의 종양 부피의 퍼센트 변화를 제시한다.
도 13은 항체 및 유리 인간 혈청 알부민 (HSA)의 접합에 대한 개략도를 제시한다.
도 14a-14c는 트라스투주맙 및 SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙 종의 디콘볼루션된 질량 스펙트럼을 제시한다. 도 14a는 트라스투주맙의 질량 스펙트럼을 제시한다. 도 14b는 1:5의 트라스투주맙:링커 비를 사용하여 SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙의 질량 스펙트럼을 제시한다. 도 14c는 1:10의 트라스투주맙:링커 비를 사용하여 SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙의 질량 스펙트럼을 제시한다.
도 15는 1:1 트라스투주맙-HSA 접합체, 트라스투주맙 및 HSA의 SEC 크로마토그램을 제시한다.
도 16은 트라스투주맙-HSA 접합 생성물의 SDS-PAGE 겔 (4-12%)을 제시한다.
도 17은 트라스투주맙-HSA 접합 및 트라스투주맙 접합 생성물의 네이티브 겔을 제시한다.
도 18은 활성화된 항체 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합에 대한 개략도를 제시한다.
도 19는 활성화된 항체 및 티올화되어 있는 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합에 대한 개략도를 제시한다.
도 20은 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자 또는 nab-파클리탁셀 제제 (ABX) 및 트라스투주맙의 접합 반응으로부터의 샘플의 3-8% 트리스-아세테이트 SDS PAGE 겔을 제시한다.
도 21은 구리-무함유 클릭 화학을 사용하는 항체 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합에 대한 개략도를 제시한다.
도 22는 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 보론산 개질에 대한 개략도를 제시한다.
도 23은 DNA 가교제를 사용하는 활성화된 항체 및 활성화되어 있는 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합에 대한 개략도를 제시한다.
도 24는 니볼루맙 및 활성화된 니볼루맙 종의 LC-MS 분석으로부터의 디콘볼루션된 질량 스펙트럼을 제시한다.
도 25a-25d는 치료 투여 이후 시점에서의 보다 작은 종양 연구의 백분율 종양 부피 변화를 제시한다. 도 25a 및 25b는 제0일의 치료 투여 이후 제7일의 보다 작은 종양 연구의 백분율 종양 부피 변화를 제시한다. 도 23c-d는 제0일 및 제7일의 치료 투여 이후 제14일의 보다 작은 종양 연구의 백분율 종양 부피 변화를 제시한다.
도 26a-26b는 치료 투여 이후 시점에서의 보다 큰 종양 연구의 백분율 종양 부피 변화를 제시한다. 도 26a는 제0일의 치료 투여 이후 제7일의 보다 큰 종양 연구의 백분율 종양 부피 변화를 제시한다. 도 26b는 제0일 및 제7일의 치료 투여 이후 제14일의 보다 큰 종양 연구의 백분율 종양 부피 변화를 제시한다.
도 27a-27b는 치료 투여 이후 시점에서의 BT-474 이종이식 종양에 대한 백분율 종양 부피 변화를 제시한다. 도 27a는 제0일의 치료 투여 이후 제7일의 BT-474 이종이식 종양에 대한 백분율 종양 부피 변화를 제시한다. 도 27b는 제0일 및 제7일의 치료 투여 이후 제14일의 BT-474 이종이식 종양에 대한 백분율 종양 부피 변화를 제시한다.
도 28a-28d는 치료 투여 이후 시점에서의 BT-474 이종이식 종양에 대한 백분율 종양 부피 변화를 제시한다. 도 28a 및 28b는 제0일의 치료 투여 이후 제7일의 BT-474 이종이식 종양에 대한 백분율 종양 부피 변화를 제시한다. 도 28c 및 28d는 제0일 및 제7일의 치료 투여 이후 제14일의 BT-474 이종이식 종양에 대한 백분율 종양 부피 변화를 제시한다.
본 출원은 (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드 (예컨대 항체 또는 그의 단편)를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제공한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산, 예를 들어 파클리탁셀), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민 또는 유도체화된 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드 (예컨대 항체, 예컨대 치료 항체)를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 또 다른 치료제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 조성물의 나노입자 부분과 회합되지 않은 알부민 및/또는 생물활성 폴리펩티드를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자로 매립된다. 매립된 생물활성 폴리펩티드는 나노입자의 표면 알부민으로 매립될 수 있거나 또는 나노입자의 소수성 코어로 매립될 수 있다. 생물활성 폴리펩티드는, 사전-형성된 동결건조 나노입자 조성물과 생물활성 폴리펩티드를 혼합하는 것 (즉, 혼합물)과 달리, 나노입자의 하나 이상의 제조 스테이지에서 생물활성 폴리펩티드를 포함시킴으로써 나노입자로 매립될 수 있다. 본원에 더욱 상세히 기재된 바와 같이, 특정 실시양태에서, 나노입자가 알부민 및 소수성 약물을 함유하는 것인, 나노입자 현탁액의 제조는 하기 단계를 포함한다: i) 소수성 약물을 함유하는 유기 용매 및 알부민을 함유하는 수성 용액의 에멀젼을 형성하는 단계 (예를 들어, 고압 균질화에 의해), 및 ii) 에멀젼으로부터 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 (예를 들어, 증발에 의해) 나노입자 현탁액을 형성하는 단계. 특정 실시양태에서, 제조 방법은 나노입자 현탁액을 제제화하고/거나 (예를 들어, 알부민 또는 물을 첨가함으로써), 현탁액을 동결건조시켜 나노입자 조성물을 형성하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 1종 이상의 나노입자 조성물 전구물질, 예컨대 에멀젼을 형성하기 전의 알부민을 함유하는 수성 용액, 형성된 에멀젼 (유기 용매의 제거 전 또는 제거 동안), 또는 유기 용매의 제거 후의 현탁액 (즉, "증발-후 현탁액")에 첨가된다.
특정 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는, 예를 들어 공유 가교제 또는 비공유 가교제일 수 있는 가교제를 통해 나노입자에 접합된다. 가교는 생물활성 폴리펩티드의 세그먼트를 알부민의 세그먼트에 연결시킴으로써, 생물활성 폴리펩티드를 알부민 (또한 그에 따라 나노입자)에 회합시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 가교제는 생물활성 폴리펩티드와 알부민 사이의 공유 연결을 제공한다. 즉, 가교제는 생물활성 폴리펩티드에 공유적으로 연결되고 알부민에 공유적으로 연결됨으로써, 이들 두 개체 사이의 공유 가교를 제공한다. 특정 측면에서, 가교제는 생물활성 폴리펩티드와 알부민 사이의 비-공유 연결을 제공한다. 예를 들어, 알부민은 제1 가교제 구성요소에 공유적으로 접합될 수 있고, 생물활성 폴리펩티드는 제2 가교제 구성요소에 공유적으로 접합될 수 있으며, 여기서 제1 가교제 구성요소 및 제2 가교제 구성요소는 함께 결합한다 (예를 들어, 상보적 핵산 분자, 예컨대 상보적 DNA).
본 출원은 (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법을 추가로 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 것인 단계; 및 ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계; 및 iii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및 iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써, 조성물을 형성하는 단계를 포함한다.
특정 실시양태에서, 나노입자 제조 공정 동안 수성 용액에 포함된 알부민의 적어도 일부는 생물활성 폴리펩티드에 접합된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 생물활성 폴리펩티드에 접합되는 것인 단계; 및 ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계를 포함한다.
특정 실시양태에서, 나노입자 제조 공정 동안 수성 용액에 포함된 알부민의 적어도 일부는 유도체화된다 (예를 들어 알부민의 티올화에 의해 또는 비공유 가교제의 제1 세그먼트를 알부민에 공유적으로 부착시킴으로써). 일부 실시양태에서, 방법은 i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 유도체화되는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계; 및 iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 유도체화된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 유도체화되는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계; 및 iii) 증발-후 현탁액에 유도체화된 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계를 포함한다.
특정 실시양태에서, 나노입자는, 동결건조된 것일 수 있거나 또는 현탁액 (예를 들어, 나노입자가 이전에 동결건조된 것인 재구성된 현탁액, 또는 증발-후 나노입자 현탁액)으로 존재할 수 있는 사전-형성된 나노입자에 생물활성 폴리펩티드를 접합시킴으로써 제조된다.
본원에 개시된 조성물 (예컨대 제약 조성물)은 다양한 질환, 예컨대 암을 치료하는데 유용하다. 따라서, 본 출원은 (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물 (예컨대 제약 조성물), 뿐만 아니라 암을 포함한 질환의 치료에 이러한 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 본원에 기재된 조성물의 유효량 및 또 다른 치료제 (예컨대 화학요법제)의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 조합 치료가 본원에 추가로 제공된다. 본원에 기재된 조성물을 포함하는 키트, 의약, 약제, 사용을 위한 조성물, 단위 투여 형태, 제약 조성물 (예컨대 동결건조된 조성물)이 또한 제공된다.
하기 제공된 섹션 표제는 단지 구성 목적을 위한 것이며, 본 발명의 범주를 제한하도록 의도되지 않는다.
정의
본원에 사용된 "치료" 또는 "치료하는"은 임상 결과를 포함한 유익하거나 또는 목적하는 결과를 얻기 위한 접근법이다. 본 발명의 목적상, 유익하거나 또는 목적하는 임상 결과는 하기 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 질환에 기인한 1종 이상의 증상을 완화시키는 것, 질환의 정도를 약화시키는 것, 질환을 안정화시키는 것 (예를 들어, 질환의 악화를 예방하거나 또는 지연시키는 것), 질환의 확산 (예를 들어, 전이)을 예방하거나 또는 지연시키는 것, 질환의 재발을 예방하거나 또는 지연시키는 것, 질환의 진행을 지연시키거나 또는 둔화시키는 것, 질환 상태를 호전시키는 것, 질환의 (부분 또는 완전) 관해를 제공하는 것, 질환을 치료하는데 요구되는 1종 이상의 다른 투약 용량을 줄이는 것, 질환의 진행을 지연시키는 것, 삶의 질을 향상시키는 것, 및/또는 생존을 연장시키는 것. 질환 (예컨대 암)의 병리학적 결과의 감소가 또한 "치료"에 포괄된다. 본 발명의 방법은 치료의 이들 측면 중 어느 하나 이상을 고려한다.
용어 "개체"는 포유동물을 지칭하며, 인간, 소, 말, 고양이, 개, 설치류 또는 영장류를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 인간은 남성이다. 일부 실시양태에서, 인간은 여성이다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 모노클로날 항체, 폴리클로날, 키메라 항체, CDR-이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디술피드 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체 (dAb), 디아바디, 다중특이적 항체, 이중 특이적 항체, 항-이디오타입 항체, 이특이적 항체, 그의 기능적 활성 에피토프-결합 단편, 이중기능적 하이브리드 항체, 단일 쇄 항체, 및 Fc-함유 폴리펩티드, 예컨대 면역부착을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 임의의 중쇄 이소형 (예를 들어, IgG, IgA, IgM, IgE 또는 IgD)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 임의의 경쇄 이소형 (예를 들어, 카파 또는 감마)일 수 있다. 항체는 비-인간 (예를 들어, 마우스, 염소 또는 임의의 다른 동물 유래), 완전 인간, 인간화, 또는 키메라 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 유도체화된 항체이다.
본원에 사용된 "위험이 있는" 개체는 질환 (예컨대 암)이 발병할 위험이 있는 개체이다. "위험이 있는" 개체는 검출가능한 질환을 가질 수 있거나 또는 갖지 않을 수 있으며, 검출가능한 질환을 본원에 기재된 치료 방법 전에 나타낸 적이 있을 수 있거나 또는 없을 수 있다. "위험이 있는"이란 개체가 본원에 기재된, 질환의 발병과 상관관계가 있는 측정가능한 파라미터인 하나 이상의 소위 위험 인자를 갖는다는 것을 나타낸다. 이들 위험 인자 중 하나 이상을 갖는 개체는 이들 위험 인자(들)를 갖지 않는 개체보다 더 높은 질환 발병 확률을 갖는다.
"보조 세팅"은, 개체가 질환의 병력이 있었고, 수술 (예를 들어, 외과적 절제), 방사선요법 및/또는 화학요법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 요법에 대해 일반적으로 (그러나 반드시 그러한 것은 아님) 반응성이었던 임상 세팅을 지칭한다. 그러나, 질환의 병력 때문에, 이들 개체는 질환 발병의 위험이 있는 것으로 간주된다. "보조 세팅"에서의 치료 또는 투여는 후속 치료 방식을 지칭한다. 위험의 정도 (예를 들어, 개체가 보조 세팅에서 "고위험" 또는 "저위험"으로 간주되는 경우)는 여러 인자, 가장 통상적으로는 최초 치료 시의 질환의 정도에 좌우된다.
본원에 사용된 "생물활성 폴리펩티드"는 리간드 또는 수용체의 결합과 연관된 활성 또는 또 다른 작용제가 리간드 또는 수용체에 결합하는 것을 억제하는 것과 연관된 활성을 갖는 그의 부분을 포함하는, 펩티드 (아미드) 결합에 의해 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 분자를 지칭한다. 생물활성 폴리펩티드는 올리고펩티드, 펩티드, 폴리펩티드 압타머, 단백질, 다량체 단백질, 융합 단백질, 항체 또는 그의 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 알부민-소수성 약물 나노입자와의 회합을 위한 부분을 포함한다.
"선행 보조 세팅"은, 방법이 1차/결정적 요법 전에 수행되는 임상 세팅을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 질환의 발병을 "지연시키는" 것은 질환의 발병을 유예, 저해, 둔화, 지체, 안정화 및/또는 연기시키는 것을 의미한다. 이러한 지연은 질환의 병력 및/또는 치료될 개체에 따라 시간의 길이가 달라지는 것일 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명한 바와 같이, 충분하거나 또는 유의한 지연은, 사실상, 개체에서 질환이 발병하지 않는다는 점에서 예방을 포괄할 수 있다. 질환의 발병을 "지연시키는" 방법은, 방법을 사용하지 않은 것과 비교하였을 때, 주어진 시간 프레임에서 질환의 발병 확률을 감소시키고/거나 주어진 시간 프레임에서 질환의 정도를 감소시키는 방법이다. 전형적으로 이러한 비교는 통계적으로 유의한 대상체 수를 사용하는 임상 연구에 기초한다. 질환 발병은 컴퓨터 축 단층촬영 (CAT 스캔), 자기 공명 영상화 (MRI), 복부 초음파, 응고 시험, 동맥조영술 또는 생검을 포함하나 이에 제한되지는 않는 표준 방법을 사용하여 검출가능할 수 있다. 발병은 또한 초기에 검출할 수 없는 질환 진행을 지칭할 수 있으며, 발생, 재발 및 개시를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "유효량"은 명시된 장애, 병태 또는 질환을 치료하기에, 예컨대 그의 증상 중 1종 이상을 호전, 완화, 경감 및/또는 지연시키기에 충분한 화합물 또는 조성물의 양을 지칭한다. 질환 예컨대 암과 관련하여, 유효량은 종양 수축을 유발하고/거나 종양의 성장 속도를 줄이거나 (예컨대 종양 성장을 억제함) 또는 암에서의 다른 원치 않는 세포 증식을 예방하거나 또는 지연시키기에 충분한 양을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유효량은 암의 발병을 지연시키기에 충분한 양이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 재발을 예방하거나 또는 지연시키기에 충분한 양이다. 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 암의 경우에, 약물 또는 조성물의 유효량은 (i) 상피양 세포 수를 감소시킬 수 있고/거나; (ii) 종양 크기를 감소시킬 수 있고/거나; (iii) 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제하고, 지체시키고, 어느 정도까지 둔화시키고, 바람직하게는 정지시킬 수 있고/거나; (iv) 종양 전이를 억제할 수 있고/거나 (예를 들어, 어느 정도까지 둔화시키고, 바람직하게는 정지시킴); (v) 종양 성장을 억제할 수 있고/거나; (vi) 종양의 발생 및/또는 재발을 예방하거나 또는 지연시킬 수 있고/거나; (vii) 암과 연관된 증상 중 1종 이상을 어느 정도까지 해소할 수 있다.
본원에 사용된 "조합 요법"은 제1 작용제가 또 다른 치료제와 함께 투여되는 것을 의미한다. "와 함께"는 동일한 개체에게 하나의 치료 양식에 더하여 또 다른 치료 양식을 투여하는 것, 예컨대 본원에 기재된 나노입자 조성물을 투여하는 것에 더하여 또 다른 치료제를 투여하는 것을 지칭한다. 그러므로, "와 함께"는 개체에게 하나의 치료 양식을 다른 치료 양식의 전달 전에, 전달 동안에 또는 전달 후에 투여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "동시 투여"는 조합 치료에서의 제1 요법 및 제2 요법이 약 15분 이하, 예컨대 약 10, 5, 또는 1분 이하 중 어느 하나의 시간 분리로 투여되는 것을 의미한다. 제1 및 제2 요법이 동시에 투여되는 경우에, 제1 및 제2 요법은 동일한 조성물에 (예를 들어, 제1 및 제2 요법 둘 다를 포함하는 조성물) 또는 별개의 조성물에 (예를 들어, 제1 요법이 하나의 조성물에, 제2 요법이 또 다른 조성물에 함유됨) 함유될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "순차적 투여"는 조합 요법에서의 제1 요법 및 제2 요법이 약 15분 초과, 예컨대 약 20분 이상, 30분 이상, 40분 이상, 50분 이상, 60분 이상, 2시간 이상, 4시간 이상, 6시간 이상, 12시간 이상, 또는 24시간 이상 중 어느 하나 초과의 시간 분리로 투여되는 것을 의미한다. 제1 요법 또는 제2 요법이 먼저 투여될 수 있다. 제1 및 제2 요법은 별개의 조성물에 함유되며, 이는 동일하거나 상이한 패키지 또는 키트에 함유될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "공동 투여"는 조합 요법에서의 제1 요법의 투여와 제2 요법의 투여가 서로 중복되는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "nab"는 나노입자 알부민-결합된 것을 나타낸다. 예를 들어, nab-파클리탁셀은 파클리탁셀의 나노입자 알부민-결합된 제제이다.
본원에 사용된 용어 "에멀젼"은 연속 수성 상 중에 약 1 마이크로미터 이하의 평균 직경을 갖는 액적을 포함하는 분산된 유기 상을 갖는 액체를 지칭한다.
용어 "소수성 약물"은 약 25℃에서 pH 7의 물 중에서 약 1 mg/mL 이하의 용해도를 갖는 약물을 지칭한다.
본원에 기재된 본 발명의 측면 및 실시양태는 측면 및 실시양태"로 이루어진" 것 및/또는 "그로 본질적으로 이루어진" 것을 포함하는 것으로 이해된다.
본원에서 값 또는 파라미터에 대해 "약"을 언급하는 것은 그 값 또는 파라미터 자체에 대해 지시되는 편차를 포함한다 (또한 기재함). 예를 들어, "약 X"를 언급하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다. 추가적으로, 임의의 일련의 수치 앞에 "약"의 사용은 그 일련의 열거된 수치 각각이 "약"을 포함하는 것이다. 예를 들어, "약 X, Y, 또는 Z"를 언급하는 기재는 "약 X, 약 Y, 또는 약 Z"를 기재하도록 의도된다.
본원 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는, 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한, 복수 지시대상을 포함한다.
나노입자를 포함하는 조성물
본원에 기재된 조성물은 (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 나노입자와 회합되지 않은 알부민 및/또는 생물활성 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 또 다른 치료제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함한다.
본원에 기재된 나노입자는 소수성 약물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 소수성 약물을 포함하는 고체 코어를 포함한다. 본원에 사용된 "코어"는, 나노입자와 회합된 소수성 약물이 실질적으로 모두 위치하는 나노입자의 내부 부분을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 소수성 약물을 포함하는 고체 코어를 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 소수성 약물의 고체 코어를 포함한다.
일부 실시양태에서, 나노입자 내 소수성 약물은 중량 기준으로 나노입자의 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 초과를 구성한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 비-중합체성 매트릭스를 갖는다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 중합체성 물질 (예컨대 중합체성 매트릭스)을 실질적으로 함유하지 않는, 소수성 약물의 고체 코어를 포함한다.
일부 실시양태에서, 나노입자 내 소수성 약물의 고체 코어는 생물활성 폴리펩티드의 일부를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 소수성 약물 및 생물활성 폴리펩티드의 일부를 포함하는 고체 코어를 포함한다.
본원에 기재된 바와 같이, 나노입자는 알부민을 포함한다. 인간 알부민, 인간 혈청 알부민, 재조합 알부민 및 그의 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 알부민이 본 발명 내에서 고려된다. 일부 실시양태에서, 알부민은 인간 알부민이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 인간 혈청 알부민이다. 일부 실시양태에서, 인간 알부민은 인간 혈청 알부민이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 재조합 알부민이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 인간 재조합 알부민이다. 일부 실시양태에서, 재조합 알부민은 인간 재조합 알부민이다.
알부민, 예컨대 인간 혈청 알부민 (HSA)은 고도로 가용성인 구상 단백질이다. 예를 들어, 인간 혈청 알부민은 585개의 아미노산으로 이루어지며 약 66 kDa의 분자량을 갖는다. HSA는 인간 혈장에서 가장 풍부한 단백질이며, 인간 혈장의 콜로이드 삼투압의 70-80%를 차지한다. HSA의 아미노산 서열은 총 17개의 디술피드 가교, 1개의 유리 티올 (Cys 34), 및 단일 트립토판 (Trp 214)을 함유한다. HSA 용액의 정맥내 사용은 저혈량성 쇼크의 예방 및 치료를 위해 (예를 들어, 문헌 [Tullis, JAMA, 237, 355-360, 460-463 (1977); Houser et al., Surgery, Gynecology and Obstetrics, 150, 811-816 (1980)] 참조) 및 신생아 고빌리루빈혈증의 치료에서 교환 수혈과 함께 (예를 들어, 문헌 [Finlayson, Seminars in Thrombosis and Hemostasis, 6, 85-120, (1980)] 참조) 지시된 바 있다.
알부민, 예컨대 인간 혈청 알부민 (HSA)은 다수의 소수성 결합 부위를 갖는다. HSA는 지방산에 대해 8개의 결합 부위를 가지며, 중성 및 음으로 하전된 소수성 화합물을 포함한 다양한 세트의 소수성 약물, 예를 들어 탁산과 결합한다 (Goodman et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th ed, McGraw-Hill New York (1996)). HSA의 서브도메인 IIA 및 IIIA에 있는 2개의 고친화성 결합 부위가 제안된 바 있으며, 이들은 극성 리간드 특색부를 위한 부착 지점으로서 기능하는 표면 근처의 하전된 리신 및 아르기닌 잔기를 갖는 고도로 신장된 소수성 포켓이다 (예를 들어, 문헌 [Fehske et al., Biochem. Pharmcol., 30, 687-92 (198a), Vorum, Dan. Med. Bull., 46, 379-99 (1999), Kragh-Hansen, Dan. Med. Bull., 1441, 131-40 (1990), Curry et al., Nat. Struct. Biol., 5, 827-35 (1998), Sugio et al., Protein. Eng., 12, 439-46 (1999), He et al., Nature, 358, 209-15 (199b), 및 Carter et al., Adv. Protein. Chem., 45, 153-203 (1994)] 참조). 파클리탁셀 및 프로포폴이 HSA와 결합한다는 것이 제시된 바 있다 (예를 들어, 문헌 [Paal et al., Eur. J. Biochem., 268(7), 2187-91 (200a), Purcell et al., Biochim. Biophys. Acta, 1478(a), 61-8 (2000), Altmayer et al., Arzneimittelforschung, 45, 1053-6 (1995), 및 Garrido et al., Rev. Esp. Anestestiol. Reanim., 41, 308-12 (1994)] 참조). 추가로, 도세탁셀이 인간 혈장 단백질에 결합한다는 것이 제시된 바 있다 (예를 들어, 문헌 [Urien et al., Invest. New Drugs, 14(b), 147-51 (1996)] 참조).
다른 알부민, 예컨대 소 혈청 알부민이 고려된다. 이러한 비-인간 알부민의 사용은, 예를 들어, 비-인간 포유동물, 예컨대 수의학에서 이들 조성물을 사용하는 상황에서 (가정용 애완 동물 및 농업 상황 포함) 적절할 수 있다.
유도체화된 알부민이 또한 본 개시내용의 범주 내에서 고려된다. 본원에 사용된 "유도체화된 알부민"은 알부민의 발현 후에 개질된 바 있는 알부민이다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 화학적 가교제와 접합된 알부민이다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 생물활성 폴리펩티드에 접합된 또 다른 화학적 가교제 모이어티에 대해 반응성 (예컨대 특이적으로 반응성)인 화학적 가교제 모이어티와 접합된 알부민이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 알킨 모이어티를 포함하는 화학적 가교제와 접합되고, 유도체화된 생물활성 폴리펩티드는 아지드 모이어티를 포함하는 화학적 가교제와 접합된다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 아지드 모이어티를 포함하는 화학적 가교제와 접합되고, 유도체화된 생물활성 폴리펩티드는 알킨 모이어티를 포함하는 화학적 가교제와 접합된다. 알부민 및 생물활성 폴리펩티드의 회합에 유용한 다른 가교 모이어티 쌍은 스트레인 적용된 알킨과 아지드, 스트레인 적용된 알킨과 니트론 (예컨대 1,3-니트론), 스트레인 적용된 알켄과 아지드, 스트레인 적용된 알켄과 테트라진, 및 스트레인 적용된 알켄과 테트라졸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은, 예를 들어 술프히드릴 기를 형성하도록 알부민의 1개 이상의 아민을 반응시킴으로써 (예를 들어, 단지 아민을 2-이미노티올란 (트라우트 시약) 또는 다른 티올화 시약과 반응시킴) 티올화된다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 비공유 가교제 (예컨대 핵산 분자, 예컨대 DNA)의 제1 구성요소에 공유적으로 부착되며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 가교제의 제1 구성요소에 특이적으로 결합할 수 있는 비공유 가교제의 제2 구성요소 (예를 들어, 가교제의 제1 구성요소의 핵산 가닥에 상보적인 핵산 가닥)에 가교될 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 유도체화된 인간 알부민이다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 유도체화된 인간 혈청 알부민이다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 인간 알부민은 유도체화된 인간 혈청 알부민이다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 유도체화된 재조합 알부민이다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민은 유도체화된 인간 재조합 알부민이다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 재조합 알부민은 유도체화된 인간 재조합 알부민이다.
일부 실시양태에서, 알부민은 디술피드 결합을 형성할 수 있는 술프히드랄 기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 알부민은 또 다른 알부민과 분자간 디술피드 결합을 형성한다. 일부 실시양태에서, 알부민은 생물활성 폴리펩티드와 분자간 디술피드 결합을 형성한다. 일부 실시양태에서, 조성물의 나노입자 부분 내 알부민의 적어도 약 5% (예컨대 예를 들어 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)는 가교된다 (예를 들어 1개 이상의 디술피드 결합을 통해 가교됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 나노입자 부분을 포함하며, 여기서 조성물의 나노입자 부분 내 알부민의 적어도 약 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%는 디술피드 결합에 의해 가교된다. 일부 실시양태에서, 조성물의 나노입자 부분 내 알부민의 약 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%는 디술피드 결합에 의해 가교된다. 일부 실시양태에서, 조성물의 나노입자 부분 내 알부민의 약 40% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 70%, 또는 약 50% 내지 약 80%는 디술피드 결합에 의해 가교된다.
특정 실시양태에서, 나노입자 내 알부민은, 생물활성 폴리펩티드를 알부민 상의 티올 기 (예를 들어, Cys34)에 부착시킴으로써 생물활성 폴리펩티드에 접합된다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자는 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드 없이 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자보다 더 적은 유리 티올을 갖는다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자 상의 유리 티올은 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드 없이 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자와 비교하여 약 5% 이상 (예컨대 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45% 또는 50% 이상) 줄어든다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자는 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드 없이 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자보다 더 적은 유리 표면 티올을 갖는다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자의 표면 상의 유리 티올은 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드 없이 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자와 비교하여 약 5% 이상 (예컨대 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45% 또는 50% 이상) 줄어든다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자는 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드 없이 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자보다 더 적은 알부민 단량체 (즉, 또 다른 알부민, 생물활성 폴리펩티드 또는 임의의 다른 폴리펩티드에 접합되지 않은 알부민)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자와 회합된 알부민 단량체의 양은 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드 없이 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자와 회합된 알부민 단량체의 양과 비교하여 약 5% 이상 (예컨대 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45% 또는 50% 이상) 줄어든다.
일부 실시양태에서, 나노입자는 (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 나노입자 상의 생물활성 폴리펩티드의 생물학적 활성 부분은 노출된 상태로 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 생물활성 폴리펩티드의 일부의 리간드 또는 수용체와의 결합이 가능하도록 나노입자 상에 배치된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 치료 활성을 갖는 생물활성 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 적어도 약 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%는 나노입자와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 약 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%는 나노입자와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 약 15% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 85%, 약 30% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 75%, 약 60% 내지 약 85%, 약 65% 내지 약 80%, 또는 약 70% 내지 약 80%는 나노입자와 회합된다.
일부 실시양태에서, 나노입자는 적어도 약 50, 100, 150, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150 또는 1200개의 생물활성 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 약 50, 100, 150, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150 또는 1200개의 생물활성 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 약 100 내지 약 900, 약 100 내지 약 500, 약 150 내지 약 700, 약 100 내지 약 800, 약 300 내지 약 600, 약 200 내지 약 900, 약 500 내지 약 1000, 약 500 내지 약 800, 약 600 내지 약 800개의 생물활성 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 나노입자를 포함하며, 여기서 나노입자당 생물활성 폴리펩티드의 평균 수는 적어도 약 50, 100, 150, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150 또는 1200개의 생물활성 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 나노입자를 포함하며, 여기서 나노입자당 생물활성 폴리펩티드의 평균 수는 약 50, 100, 150, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150 또는 1200개의 생물활성 폴리펩티드이다.
조성물 중 나노입자 내 소수성 약물 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비는 의도된 치료 용도에 대해 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 소수성 약물 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비는 약 1:1 내지 200:1 (예컨대 약 1:1 내지 약 100:1, 약 1:1 내지 약 80:1, 약 1:1 내지 약 60:1, 약 1:1 내지 약 50:1, 약 2:1 내지 약 40:1, 약 4:1 내지 약 30:1, 또는 약 6:1 내지 약 20:1)이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물의 중량은 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 또는 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정된다. ELISA는 나노입자와 회합된 생물활성 폴리펩티드의 직접 측정을 가능하게 하며, 추가로 기능적 생물활성 폴리펩티드와 비기능적 (예를 들어, 변성된) 생물활성 폴리펩티드 사이의 구별을 가능하게 한다.
조성물 중 나노입자 내 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 소수성 약물, 알부민, 생물활성 폴리펩티드, 또 다른 치료제 또는 그의 조합의 존재에 기초하여 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 1:1 내지 약 50:1, 약 1:1 내지 약 20:1, 약 1:1 내지 약 18:1, 약 1:1 내지 약 15:1, 약 1:1 내지 약 12:1, 약 1:1 내지 약 10:1, 약 1:1 내지 약 9:1, 약 1:1 내지 약 8:1, 약 1:1 내지 약 7:1, 약 1:1 내지 약 6:1, 약 1:1 내지 약 5:1, 약 1:1 내지 약 4:1, 약 1:1 내지 약 3:1, 또는 약 1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 18:1, 15:1 또는 10:1 미만이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 1:1 내지 약 18:1, 약 2:1 내지 약 15:1, 약 3:1 내지 약 13:1, 약 4:1 내지 약 12:1, 약 5:1 내지 약 10:1이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14 또는 1:15이다. 일부 실시양태에서, 알부민의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물의 중량은 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC)에 의해 결정된다.
조성물 중 나노입자 내 생물활성 폴리펩티드 대 알부민의 중량비는 소수성 약물, 알부민, 생물활성 폴리펩티드, 또 다른 치료제 또는 그의 조합의 존재에 기초하여 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 생물활성 폴리펩티드 대 알부민의 중량비는 약 1:1 내지 약 1:1000, 약 1:1 내지 약 1:800, 약 1:1 내지 약 1:600, 약 1:1 내지 약 1:500, 약 1:1 내지 약 1:400, 약 1:1 내지 약 1:300, 약 1:1 내지 약 1:250, 약 2:1 내지 약 1:200, 약 2:1 내지 약 1:150, 약 4:1 내지 약 1:100, 또는 약 4:1 내지 약 1:50이다. 일부 실시양태에서, 알부민의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 또는 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, 조성물은 약 1000 나노미터 (nm) 이하, 예컨대 약 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 및 100 nm 이하 중 어느 하나의 평균 직경을 갖는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자의 평균 직경은 약 200 nm 이하이다. 일부 실시양태에서, 나노입자의 평균 직경은 약 150 nm 이하이다. 일부 실시양태에서, 나노입자의 평균 직경은 약 100 nm 이하이다. 일부 실시양태에서, 나노입자의 평균 직경은 약 20 내지 약 400 nm이다. 일부 실시양태에서, 나노입자의 평균 직경은 약 40 내지 약 200 nm이다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 멸균-여과가능하다. 나노입자의 평균 직경은 동적 광 산란 (DLS)에 의해 측정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물 중 나노입자는 약 200 nm 이하, 예컨대 예를 들어 약 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70 또는 60 nm 이하 중 어느 하나의 평균 직경을 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 적어도 약 50% (예를 들어 적어도 약 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 중 어느 하나)는 약 200 nm 이하, 예컨대 예를 들어 약 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70 또는 60 nm 이하 중 어느 하나의 직경을 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 적어도 약 50% (예를 들어 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 중 어느 하나)는 약 20 내지 약 400 nm, 예컨대 예를 들어 약 20 내지 약 200 nm, 약 40 내지 약 200 nm, 약 30 내지 약 180 nm, 및 약 40 내지 약 150, 약 50 내지 약 120, 및 약 60 내지 약 100 nm 중 어느 하나의 범위 내에 있다.
소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 함유하는 나노입자의 예시적 실시양태가 하기에 추가로 상술된다. 이러한 나노입자는 나노입자로 매립된 (예컨대 나노입자의 표면 또는 코어로 매립됨) 생물활성 폴리펩티드를 포함할 수 있거나 또는 나노입자는 나노입자 내 알부민에 접합된 (예를 들어, 공유 또는 비-공유 가교제를 통해) 생물활성 폴리펩티드를 포함한다. 생물활성 폴리펩티드 및 나노입자 상의 알부민의 회합은 비-공유적이거나 또는 공유적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민과 회합된 소수성 약물을 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자의 표면으로 매립된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 알부민은 유도체화된 알부민이며, 여기서 알부민은 생물활성 폴리펩티드에 비-공유적으로 결합하는 모이어티로 유도체화된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 알부민에 비-공유적으로 결합하는 모이어티를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 유도체화된 알부민에 비-공유적으로 결합하는 모이어티를 포함한다. 나노입자에 대해 상기 기재된 특색은 본 개시내용에 비추어 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 하기 기재된 구체적 실시양태에 적용될 수 있다.
매립된 생물활성 폴리펩티드를 갖는 나노입자
소수성 약물을 포함하는 나노입자로서, 여기서 소수성 약물은 알부민과 회합되거나 (예컨대 흡착 또는 코팅됨) 또는 여기서 소수성 약물은 알부민 및 생물활성 폴리펩티드 (예컨대 항체 또는 그의 단편)와 회합되는 (예컨대 흡착 또는 코팅됨) 것인 나노입자가 본 발명의 범주 내에서 고려된다. 특정 실시양태에서, 하기에 더욱 상세히 논의되는 바와 같이, 생물활성 폴리펩티드는 1종 이상의 나노입자 전구물질에 포함된다. 제조 공정 동안, 생물활성 폴리펩티드의 적어도 일부가 나노입자와 회합되어, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자의 표면 또는 나노입자의 소수성 코어에 매립된다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민과 회합된 소수성 약물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민과 회합된 소수성 약물의 고체 코어를 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 실질적으로 코팅된 소수성 약물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 실질적으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민 및 생물활성 폴리펩티드로 코팅된 소수성 약물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민 및 생물활성 폴리펩티드로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함한다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 소수성 약물의 고체 코어의 표면과 회합되고, 여기서 소수성 약물의 고체 코어는 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드의 일부는 소수성 약물의 고체 코어에 매립되고, 여기서 소수성 약물의 고체 코어는 알부민으로 코팅된다.
일부 실시양태에서, 나노입자와 회합된 생물활성 폴리펩티드의 약 1% 이상 (예컨대 약 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20% 또는 25% 이상)은 나노입자의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 약 25% 이하 (예컨대 약 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 이하)는 나노입자의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 약 1% 내지 약 25% (예컨대 약 1% 내지 약 2%, 약 2% 내지 약 3%, 약 3% 내지 약 4%, 약 4% 내지 약 5%, 약 5% 내지 약 10%, 약 10% 내지 약 15%, 약 15% 내지 약 20%, 또는 약 20% 내지 약 25%)는 나노입자의 고체 코어에 매립된다.
일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민과 회합된 소수성 약물을 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 본원에 기재된 바와 같이, 생물활성 폴리펩티드와 알부민 사이의 접촉 (예컨대 회합)은, 예를 들어, 나노입자의 외부 알부민 표면에서, 나노입자의 알부민 코팅 내에서, 나노입자의 내부 알부민 표면에서 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어와 알부민의 코팅 사이의 계면) 또는 그의 조합에서 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물을 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 나노입자 상의 알부민과 회합된다.
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 소수성 약물 및 알부민과 회합된다. 따라서, 예를 들어, 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드의 적어도 일부는 소수성 약물의 고체 코어와 회합되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드의 적어도 일부는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드의 적어도 일부는 소수성 약물의 고체 코어에 매립되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드의 적어도 일부는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드의 적어도 일부는 부분적으로 소수성 약물의 고체 코어에 매립되고 부분적으로 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 적어도 1개의 생물활성 폴리펩티드의 소수성 부분은 소수성 약물의 고체 코어에 매립되고, 여기서 동일한 생물활성 폴리펩티드의 제2 부분은 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드의 소수성 부분은 소수성 약물의 고체 코어에 매립되고, 여기서 동일한 생물활성 폴리펩티드의 친수성 부분은 알부민과 회합된다.
접합된 생물활성 폴리펩티드를 갖는 나노입자
특정 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 (예컨대 항체 또는 그의 단편)는 나노입자 (예를 들어, 나노입자의 알부민 구성요소)에 접합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 및 알부민의 회합은 직접 회합 (예컨대 알부민에 직접적으로 결합하는 생물활성 폴리펩티드)이다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는, 예를 들어 디술피드 결합의 형성을 통해 알부민과 직접적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 접합은 생물활성 폴리펩티드 및 알부민에 공유적으로 결합할 수 있는 가교제를 통해 발생한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 및 알부민의 회합은 공유 회합 (예컨대 생물활성 폴리펩티드 및 알부민을 접합시키는 화학적 링커의 사용)이다. 특정 실시양태에서, 가교제는 알부민에 공유적으로 결합하는 제1 구성요소 및 폴리펩티드에 공유적으로 결합하는 제2 구성요소를 포함하고, 제1 구성요소 및 제2 구성요소는 비-공유 상호작용을 통해 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민과 회합된 소수성 약물을 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 공유적으로 회합된다 (즉, 생물활성 폴리펩티드가 알부민에 접합됨). 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 회합된다.
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 직접 공유 결합을 통해 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 생물활성 폴리펩티드와 알부민 사이의 디술피드 결합의 형성을 통해 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 알부민 상의 유리 티올 (예컨대 Cys34)을 통해 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 생물활성 폴리펩티드와 알부민 상의 유리 티올 (예컨대 Cys34) 사이의 디술피드 결합의 형성을 통해 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 알부민 상의 유리 티올, 예컨대 유리 시스테인 (예를 들어, Cys34)에 공유적으로 결합하는 (디술피드 결합을 통해) 유리 티올, 예컨대 유리 시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민은 유도체화된 알부민이고, 알부민 상의 티올이 유래된다 (예를 들어, 티올화 작용제, 예컨대 2-이미노티올란의 사용을 통해 아민으로부터 유래됨).
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 화학적 가교제 (예컨대 0이 아닌 길이의 가교제 또는 임의의 적합한 길이의 가교제)를 통해 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 가교제는 일관능성 가교제이다. 일부 실시양태에서, 가교제는 이관능성 가교제이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 1개 초과의 화학적 가교제를 통해 나노입자 상의 1개 초과의 알부민과 회합된다. 아미노산 잔기 또는 단백질과 회합된 다른 관능기, 예컨대 글리칸에 대한 공유 부착 또는 복합체의 형성을 통한 2개 이상의 단백질의 회합 (예컨대 공유 접합 또는 복합체의 형성)에 적합한 가교제는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 가교제는 알부민 상의 유리 티올 (예컨대 Cys34 또는 유도체화된 티올)에 부착될 수 있으며, 여기서 가교제의 또 다른 말단 단부는 생물활성 폴리펩티드에 대한 결합에 이용가능하다. 일부 실시양태에서, 가교제는 알부민 상의 유리 티올에 부착될 수 있으며, 여기서 가교제의 또 다른 말단 단부는 생물활성 폴리펩티드에 결합된다. 일부 실시양태에서, 가교제는 알부민 상의 유리 티올 (예컨대 Cys34)에 부착될 수 있으며, 여기서 가교제의 또 다른 말단 단부는 생물활성 폴리펩티드에 부착된 가교제에 대한 결합에 이용가능하거나 또는 그에 결합된다. 일부 실시양태에서, 가교제는 알부민 상의 유리 아민 (예컨대 리신 잔기)에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 가교제는 알부민 상의 유리 리신에 부착될 수 있으며, 여기서 가교제의 또 다른 말단 단부는 생물활성 폴리펩티드에 결합된다. 일부 실시양태에서, 가교제는 알부민 상의 유리 리신에 부착될 수 있으며, 여기서 가교제의 또 다른 말단 단부는 생물활성 폴리펩티드에 부착된 가교제에 대한 결합에 이용가능하다. 일부 실시양태에서, 가교제는 알부민 상의 유리 리신에 부착될 수 있으며, 여기서 가교제의 또 다른 말단 단부는 생물활성 폴리펩티드에 부착된 가교제에 대한 결합에 이용가능하거나 또는 그에 결합된다.
일부 실시양태에서, 가교제는 말레이미드 관능기 (예컨대 말레이미도프로피온산 (MPA) 또는 감마-말레이미드-부티랄아미드 (GMBA))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 가교제는 숙신이미딜 에스테르 기, 예컨대 N-히드록시숙신이미드 (NHS) 에스테르를 포함한다. 일부 실시양태에서, 가교제의 길이는 가교제의 화학적 반응성 기를 가교하는 중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)에 의해 결정된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 가교제는 NHS-(폴리에틸렌 글리콜)n-말레이미드 (SM(PEG)n)이며, 여기서 n은 2 이상이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서 가교제는 (SM(PEG)2), (SM(PEG)4), (SM(PEG)6), (SM(PEG)8), (SM(PEG)12), 또는 (SM(PEG)24)이다. 일부 실시양태에서, 가교제는 숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC)이다.
일부 실시양태에서, 가교제는 붕소 모이어티, 예컨대 보로네이트 에스테르 (이는 보론산으로부터 유래될 수 있음)를 포함한다. 보론산은 탄수화물, 예컨대 글리코실화된 생물활성 단백질 (예컨대 글리코실화된 항체) 상의 글리칸과 반응하여 보로네이트 에스테르를 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 가교제는 보론산 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS) 에스테르를 포함한다. 일부 실시양태에서, 가교제는 보론산 및 NHS 에스테르를 연결하는 화학적 가교를 포함하며, 여기서 가교는 가교제의 길이를 결정한다. 예시적인 가교제는, 예를 들어, 활성화된 에스테르 가교제를 형성하기 위해 DMF 중에서 4-(2-카르복시에틸)벤젠보론산, N-히드록시숙신이미드 (NHS) 및 NN-디시클로헥실카르보디이미드를 조합함으로써 형성될 수 있다. NHS 모이어티는 알부민과 반응할 수 있고, 보론산 모이어티는 생물활성 폴리펩티드 상의 글리칸과 반응할 수 있다.
일부 실시양태에서, 가교제는 클릭 화학 (예를 들어, 구리-무함유 클릭 화학) 가교제이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 가교제는 스트레인-촉진된 알킨 아지드 고리화첨가 반응을 통해 시클로옥텐 유도체 모이어티 (예컨대 디벤조시클로옥틴 (DBCO) 모이어티)를 아지드와 반응시킴으로써 형성될 수 있는 트리아졸 모이어티를 포함한다. 알부민 또는 항체는 시클로옥텐 유도체 모이어티에 가교된 NHS (예를 들어, DBCO-PEGn-NHS, 여기서 n은 2 이상임)와의 반응에 의해 시클로옥텐 유도체 모이어티에 공유적으로 연결될 수 있고, 다른 가교된 개체 (즉, 알부민 또는 항체)는 아지드로 관능화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 가교제는 알부민에 공유적으로 부착되는 제1 구성요소 및 생물활성 폴리펩티드에 공유적으로 부착되는 제2 구성요소를 포함하며, 여기서 제1 구성요소 및 제2 구성요소는 특이적으로 서로에 결합한다. 예를 들어, 제1 구성요소 또는 제2 구성요소는 단일 가닥 폴리뉴클레오티드, 예컨대 DNA, 또는 합성 중합체, 예를 들어, 모르폴리노일 수 있다. 일부 실시양태에서, 가교제는 실질적으로 상보적인 2개의 단일 가닥 폴리뉴클레오티드 가닥을 포함하며, 여기서 하나의 단일 가닥 폴리뉴클레오티드는 생물활성 폴리펩티드에 접합되고, 나머지 다른 단일 가닥 폴리뉴클레오티드는 알부민에 접합된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 제1 구성요소 또는 제2 구성요소는 복수의 "CA" 반복부를 포함하는 단일 가닥 DNA, 예컨대 서열식별번호: 1 (5'-CACACACACACACACACACA-3')에 따른 분자를 포함하고, 나머지 다른 구성요소 (즉, 제1 구성요소 또는 제2 구성요소)는 복수의 "GT" 반복부를 포함하는 단일 가닥 DNA 분자, 예컨대 서열식별번호: 2 (5'-GTGTGTGTGTGTGTG-3')에 따른 DNA 분자를 포함한다. 알부민 및 생물활성 폴리펩티드가 조합되면, DNA 가닥이 특이적으로 결합함으로써, 알부민을 생물활성 폴리펩티드에 접합시킨다.
알부민 및 생물활성 폴리펩티드에 접합될 때 가교제의 길이는 임의의 적합한 길이일 수 있다. 일부 실시양태에서, 가교제의 길이는, 예를 들어, 알부민에 부착된 가교제가 생물활성 폴리펩티드에 부착된 가교제와, 예를 들어, 클릭 화학 또는 상보적 DNA 염기 쌍형성을 통해 회합 또는 접합되는 경우에, 접합되어 있는 2개의 초기에는 별개였던 가교제에 대해 설명한다. 일부 실시양태에서, 가교제의 길이는 약 200 옹스트롬 이하, 예컨대 약 175, 150, 125, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 또는 10 옹스트롬 이하 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 가교제의 길이는 약 10 옹스트롬 이상, 예컨대 약 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200 옹스트롬 이상 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 가교제의 길이는 약 8.3 옹스트롬, 약 17.6 옹스트롬, 약 24.6 옹스트롬, 약 32.5 옹스트롬, 약 39.2 옹스트롬, 약 53.4 옹스트롬 또는 약 95.2 옹스트롬이다.
일부 상기 실시양태에서, 나노입자 상의 알부민은 유도체화된 알부민 (예컨대 화학적 가교제로 유도체화된 알부민)이다. 일부 실시양태에서, 나노입자 상의 유도체화된 알부민의 양은 나노입자 상의 총 알부민의 약 50%, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 미만이다. 일부 실시양태에서, 나노입자 상의 유도체화된 알부민의 양은 나노입자 상의 총 알부민의 약 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이다. 일부 실시양태에서, 나노입자 상의 유도체화된 알부민의 양은 나노입자 상의 총 알부민의 약 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%이다. 일부 실시양태에서, 나노입자 상의 유도체화된 알부민의 양은 나노입자 상의 총 알부민의 약 1% 내지 약 3%, 약 1% 내지 약 5%, 약 1% 내지 약 7%, 약 1% 내지 약 10%, 약 3% 내지 약 7%, 약 3% 내지 약 10%, 또는 약 5% 내지 약 15%이다.
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 1개 이상의 가교제와 접합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 1 내지 20개의 가교제, 예컨대 1 내지 10, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 2 내지 5, 3 내지 5, 및 2 내지 4개의 가교제 중 어느 하나와 접합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 10개 미만의 가교제, 예컨대 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 및 2개 미만의 가교제 중 어느 하나와 접합된다.
일부 실시양태에서, 나노입자 조성물 중 생물활성 폴리펩티드당 가교제의 평균 수는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 가교제이다. 일부 실시양태에서, 나노입자 조성물 중 생물활성 폴리펩티드당 가교제의 평균 수는 약 1 내지 10개의 가교제, 예컨대 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 2 내지 5, 3 내지 5, 및 2 내지 4개의 가교제 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 나노입자 조성물 중 생물활성 폴리펩티드당 가교제의 평균 수는 약 10개 미만의 가교제, 예컨대 약 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 및 2개 미만의 가교제 중 어느 하나이다.
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 1개 이상의 알부민에 접합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 1 내지 10개의 알부민, 예컨대 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 2 내지 4, 및 2 내지 5개의 알부민 중 어느 하나에 접합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 10개 미만의 알부민, 예컨대 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 및 2개 미만의 알부민 중 어느 하나와 접합된다.
일부 실시양태에서, 나노입자 조성물 중 생물활성 폴리펩티드당 접합된 알부민의 평균 수는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개이다. 일부 실시양태에서, 나노입자 조성물 중 생물활성 폴리펩티드당 접합된 알부민의 평균 수는 약 1 내지 10개, 예컨대 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 2 내지 5, 3 내지 5, 및 2 내지 4개 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 나노입자 조성물 중 생물활성 폴리펩티드당 접합된 알부민의 평균 수는 약 10개 미만, 예컨대 약 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 및 2개 미만 중 어느 하나이다.
나노입자 조성물
본원에서, 나노입자를 포함하는 조성물은 본원에 기재된 나노입자의 임의의 조합을 포함할 수 있는 것으로 고려된다. 게다가, 일부 실시양태에서, 나노입자는 본원에 기재된 특색의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 일부 실시양태에서, 조성물은 알부민을 조성물의 나노입자 및 비-나노입자 부분 둘 다에 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 나노입자와 회합되지 않은 알부민을 조성물에 추가로 포함한다. 본원에 기재된 조성물 중 알부민의 양은 조성물 중의 다른 구성요소 (예컨대 소수성 약물 또는 생물활성 폴리펩티드)에 따라 달라질 것이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 수성 현탁액 중의 소수성 약물을, 예를 들어, 안정한 콜로이드성 현탁액 (예컨대 나노입자의 안정한 현탁액)의 형태로 안정화시키기에 충분한 양으로 알부민을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민은 수성 매질 중에서의 소수성 약물의 침강 속도를 감소시키는 양으로 존재한다. 입자-함유 조성물의 경우에, 알부민의 양은 또한 나노입자의 크기 및 밀도에 좌우된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 알부민의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%는 조성물의 비-나노입자 부분에 존재한다.
소수성 약물은, 수성 매질 중에서 연장된 시간 기간 동안, 예컨대 적어도 약 0.1, 0.2, 0.25, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48, 60 또는 72시간 중 어느 하나 동안 현탁된 상태로 있으면 (예컨대 가시적인 침전 또는 침강이 없음), 수성 현탁액 중에서 "안정화된" 것이다. 현탁액은 반드시는 아니지만 일반적으로 개체 (예컨대 인간)에게 투여하기에 적합하다. 현탁액의 안정성은 일반적으로 (반드시 그러한 것은 아님) 저장 온도 (예컨대 실온 (예컨대 20-25℃) 또는 냉장 조건 (예컨대 4℃))에서 평가된다. 예를 들어, 현탁액은, 현탁액의 제조로부터 약 15분 후에 육안으로 또는 400배 배율의 광학 현미경 하에 관찰하였을 때 가시적인 엉김 또는 입자 응집을 나타내지 않으면, 저장 온도에서 안정한 것이다. 안정성은 또한 가속 시험 조건 하에, 예컨대 40℃ 또는 약 40℃ 초과의 온도에서 평가될 수 있다.
조성물의 비-나노입자 부분 내 알부민의 사용은 소수성 약물 및/또는 나노입자를 가용화시키기 위한 독성 용매 (또는 계면활성제)의 사용을 회피할 수 있으며, 이에 의해 개체 (예컨대 인간)에게의 소수성 약물의 투여의 1종 이상의 부작용을 감소시킬 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 계면활성제, 예컨대 크레모포르 (크레모포르(Cremophor) EL® (바스프(BASF)) 포함)를 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 일부 실시양태에서, 조성물은 계면활성제 (예를 들어 폴리소르베이트 예컨대 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80)를 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 조성물은, 조성물 중 크레모포르 또는 계면활성제의 양이 약 0.02% 미만이면, "크레모포르를 실질적으로 함유하지 않는" 것 또는 "계면활성제를 실질적으로 함유하지 않는" 것이다. "크레모포르를 실질적으로 함유하지 않는" 또는 "계면활성제를 실질적으로 함유하지 않는"이란 약 0.01% 미만의 크레모포르 또는 계면활성제를 갖는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 0.005% 미만, 약 0.0001% 미만, 약 0.00005% 미만, 또는 약 0.00001% 미만의 크레모포르 또는 계면활성제를 갖는다.
일부 실시양태에서, 알부민은 수성 현탁액 중의 소수성 약물을 특정 농도에서 안정화시키기에 충분한 양으로 조성물에 존재한다. 예를 들어, 조성물 중 소수성 약물의 농도는 약 0.1 내지 약 100 mg/ml, 예컨대 예를 들어 약 0.1 내지 약 50 mg/ml, 약 0.1 내지 약 20 mg/ml, 약 1 내지 약 10 mg/ml, 약 2 mg/ml 내지 약 8 mg/ml, 약 4 내지 약 6 mg/ml, 약 5 mg/ml 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물의 농도는 적어도 약 1.3 mg/ml, 1.5 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 15 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml 및 50 mg/ml 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 계면활성제 (예컨대 크레모포르, 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80)의 사용을 회피하는 양으로 존재하여, 조성물이 계면활성제 (예컨대 크레모포르, 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80)를 함유하지 않거나 또는 실질적으로 함유하지 않는다.
일부 실시양태에서, 조성물은 인산나트륨을 실질적으로 함유하지 않는다 (또는 함유하지 않음). 본원에 사용된 "인산나트륨을 실질적으로 함유하지 않는"이란 약 0.1 mg/mL 미만의 인산나트륨을 갖는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 0.05 mg/mL 미만, 약 0.01 mg/mL 미만, 약 0.005 mg/mL 미만, 약 0.001 mg/mL 미만, 또는 약 0.0001 mg/mL 미만의 인산나트륨을 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 인산나트륨을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 트레할로스를 실질적으로 함유하지 않는다 (또는 함유하지 않음). 본원에 사용된 "트레할로스를 실질적으로 함유하지 않는"이란 약 1 mg/mL 미만의 트레할로스를 갖는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 0.5 mg/mL 미만, 약 0.1 mg/mL 미만, 약 0.05 mg/mL 미만, 약 0.01 mg/mL 미만, 또는 약 0.001 mg/mL 미만의 트레할로스를 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 트레할로스를 포함한다.
일부 실시양태에서, 액체 형태의 나노입자 조성물은 약 0.1% 내지 약 50% (w/v) (예를 들어 약 0.5% (w/v), 약 5% (w/v), 약 10% (w/v), 약 15% (w/v), 약 20% (w/v), 약 30% (w/v), 약 40% (w/v), 또는 약 50% (w/v))의 알부민을 포함한다. 일부 실시양태에서, 액체 형태의 나노입자 조성물은 약 0.5% 내지 약 10% (w/v)의 알부민을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 소수성 약물을 조성물의 나노입자 및 비-나노입자 부분 둘 다에 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물의 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10% 또는 20% 이하는 조성물의 비-나노입자 부분에 존재한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%는 조성물의 나노입자 부분에 존재한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 생물활성 폴리펩티드를 조성물의 나노입자 및 비-나노입자 부분 둘 다에 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10% 또는 20% 이하는 조성물의 비-나노입자 부분에 존재한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%는 조성물의 나노입자 부분에 존재한다.
조성물 중 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 소수성 약물, 알부민, 생물활성 폴리펩티드, 또 다른 치료제 또는 그의 조합의 존재에 기초하여 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 1:1 내지 약 50:1, 약 1:1 내지 약 20:1, 약 1:1 내지 약 18:1, 약 1:1 내지 약 15:1, 약 1:1 내지 약 12:1, 약 1:1 내지 약 10:1, 약 1:1 내지 약 9:1, 약 1:1 내지 약 8:1, 약 1:1 내지 약 7:1, 약 1:1 내지 약 6:1, 약 1:1 내지 약 5:1, 약 1:1 내지 약 4:1, 약 1:1 내지 약 3:1, 또는 약 1:1 내지 약 2:1이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 18:1, 15:1 또는 10:1 미만이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 1:1 내지 약 18:1, 약 2:1 내지 약 15:1, 약 3:1 내지 약 13:1, 약 4:1 내지 약 12:1, 약 5:1 내지 약 10:1이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 알부민 대 소수성 약물의 중량비는 약 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14 또는 1:15이다. 일부 실시양태에서, 알부민의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물의 중량은 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC)에 의해 결정된다.
조성물 중 소수성 약물 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비는 소수성 약물, 알부민, 생물활성 폴리펩티드, 또 다른 치료제 또는 그의 조합의 존재에 기초하여 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비는 약 1:1 내지 200:1 (예컨대 1:1 내지 약 100:1, 약 1:1 내지 약 80:1, 약 1:1 내지 약 60:1, 약 1:1 내지 약 50:1, 약 2:1 내지 약 40:1, 약 4:1 내지 약 30:1, 또는 약 6:1 내지 약 20:1)이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물의 중량은 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 또는 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정된다.
조성물 중 생물활성 폴리펩티드 대 알부민의 중량비는 소수성 약물, 알부민, 생물활성 폴리펩티드, 또 다른 치료제 또는 그의 조합의 존재에 기초하여 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드 대 알부민의 중량비는 약 1:1 내지 약 1:1000, 약 1:1 내지 약 1:800, 약 1:1 내지 약 1:600, 약 1:1 내지 약 1:500, 약 1:1 내지 약 1:400, 약 1:1 내지 약 1:300, 약 1:1 내지 약 1:250, 약 2:1 내지 약 1:200, 약 2:1 내지 약 1:150, 약 4:1 내지 약 1:100, 또는 약 4:1 내지 약 1:50이다. 일부 실시양태에서, 알부민의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 중량은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 또는 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정된다.
소수성 약물
본원에 기재된 소수성 약물은, 예를 들어, 약 25℃에서 약 1 mg/ml 미만의 물 (pH 7) 중 용해도를 갖는 약물, 예컨대 예를 들어 약 0.5, 0.2, 0.1, 0.05, 0.02 또는 0.01 mg/ml 미만 중 어느 하나의 용해도를 갖는 약물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 항신생물제이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 화학요법제이다. 적합한 소수성 약물은 탁산 (예컨대 파클리탁셀, 도세탁셀, 오르타탁셀 및 다른 탁산), 리무스 약물 (예컨대 시롤리무스), 17-알릴아미노 겔다나마이신 (17-AAG) 또는 티오콜키신 이량체 (예컨대 IDN5404)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 소수성 약물은 탁산이다. 일부 실시양태에서, 탁산은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 파클리탁셀이다.
일부 실시양태에서, 소수성 약물은 라파마이신 (시롤리무스) 및 그의 유사체를 포함하는 리무스 약물이다. 리무스 약물의 예는 템시롤리무스 (CCI-779), 에베롤리무스 (RAD001), 리다포롤리무스 (AP-23573), 데포롤리무스 (MK-8669), 조타롤리무스 (ABT-578), 피메크롤리무스 및 타크롤리무스 (FK-506)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 리무스 약물은 템시롤리무스 (CCI-779), 에베롤리무스 (RAD001), 리다포롤리무스 (AP-23573), 데포롤리무스 (MK-8669), 조타롤리무스 (ABT-578), 피메크롤리무스 및 타크롤리무스 (FK-506)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 라파마이신 (시롤리무스)이다.
따라서, 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 탁산은 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 탁산은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 탁산과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 탁산은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 탁산은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 탁산 및 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 파클리탁셀 및 알부민과 회합된다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 탁산은 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 탁산은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 탁산과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 탁산은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 탁산, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 탁산은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 탁산 및 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 파클리탁셀 및 알부민과 회합된다.
따라서, 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 리무스 약물은 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 리무스 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 리무스 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 리무스 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 리무스 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 리무스 약물 및 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 라파마이신 및 알부민과 회합된다.
따라서, 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 리무스 약물은 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 리무스 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 리무스 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 리무스 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 리무스 약물, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 리무스 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 리무스 약물 및 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 항체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 항체는 라파마이신 및 알부민과 회합된다.
생물활성 폴리펩티드
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 항체 또는 그의 단편이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 항원을 특이적으로 인식하는 항체 또는 그의 단편이다.
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 알렘투주맙, 베바시주맙, 블리나투모맙, 브렌툭시맙, 세툭시맙, 데노수맙, 디누툭시맙, 두르발루맙, 이필리무맙, 니볼루맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 파니투무맙, 펨브롤리주맙, 페르투주맙, 트라스투주맙, 두르발루맙 및 리툭시맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 BGB-A317 (베이진(BeiGene))이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 토실리주맙이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물의 생물활성 폴리펩티드 (예컨대 나노입자 상의 생물활성 폴리펩티드)는 개체 (예컨대 인간)에서 면역학적 반응을 촉발할 수 있다. 본원에 기재된 조성물은 개체에서의 ADCC 및 CDC 효과의 균형을 이루도록 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 개체에서 항체-의존성 세포-매개 (ADCC) 효과를 촉발한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 개체에서 보체 의존성 세포독성 (CDC) 효과를 촉발한다. 일부 실시양태에서, 나노입자를 포함하는 조성물은 개체에서 ADCC 효과를 촉발한다. 일부 실시양태에서, 나노입자를 포함하는 조성물은 개체에서 CDC 효과를 촉발한다. 일부 실시양태에서, 나노입자를 포함하는 조성물은 개체에서 ADCC 및 CDC 효과를 촉발한다.
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 항원을 특이적으로 인식한다 (예컨대 그에 결합함). 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 알파-태아단백질 (AFP), 암배아성 항원 (CEA), 암 항원 125 (CA-125), 뮤신 1 (MUC1), 상피 종양 항원 (ETA), 흑색종-연관 항원 (MAGE), 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 프로그램화된 사멸 리간드 1 (PD-L1), 티로시나제, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), NY-ESO-1, gp100, BCR-ABL, EGFR, PSA, PMSA, HER2/neu, hTERT, MART1, TRP-1, TRP-2, ras, BRAF, BRCA1, BRCA2, Flt-3, IL-6-수용체 또는 Smad4에 특이적으로 결합하는 항체이다. 일부 실시양태에서, 항원은 종양 항원이다. 종양-연관 항원은 암 조직 (예컨대 암 세포) 또는 종양-연관 조직 (예컨대 종양-연관 기질)을 표적화하기 위한 기반으로서 기능할 수 있는 종양 구성요소를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 종양-연관 항원은 알파-태아단백질 (AFP), 암배아성 항원 (CEA), 암 항원 125 (CA-125), 뮤신 1 (MUC1), 상피 종양 항원 (ETA), 흑색종-연관 항원 (MAGE), 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 프로그램화된 사멸 리간드 1 (PD-L1), 티로시나제, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), NY-ESO-1, gp100, BCR-ABL, EGFR, PSA, PMSA, HER2/neu, hTERT, MART1, TRP-1, TRP-2, ras, BRAF, BRCA1, BRCA2, Flt-3 및 Smad4를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 화학적 접합을 위한 부위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 가교제의 회합을 위한 부위, 예컨대 아미노산 잔기 또는 글리칸 구조를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 화학적 링커를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 유도체화된 생물활성 폴리펩티드 (예컨대 화학적 가교제 모이어티를 포함하는 항체)이다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 생물활성 폴리펩티드는 알부민에 접합된 또 다른 화학적 가교제 (또는 그의 부분)에 대해 반응성 (예컨대 특이적으로 반응성)인 화학적 가교제 (또는 그의 부분)와 접합된 생물활성 폴리펩티드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 유도체화된 생물활성 폴리펩티드는 알킨 모이어티를 포함하는 화학적 가교제와 접합되고, 유도체화된 알부민은 아지드 모이어티를 포함하는 화학적 가교제와 접합된다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 생물활성 폴리펩티드는 아지드 모이어티를 포함하는 화학적 가교제와 접합되고, 유도체화된 알부민은 알킨 모이어티를 포함하는 화학적 가교제와 접합된다. 생물활성 폴리펩티드 및 알부민의 회합에 유용한 다른 가교 모이어티 쌍은 스트레인 적용된 알킨과 아지드, 스트레인 적용된 알킨과 니트론 (예컨대 1,3-니트론), 스트레인 적용된 알켄과 아지드, 스트레인 적용된 알켄과 테트라진, 및 스트레인 적용된 알켄과 테트라졸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 조성물 중의 실질적으로 모든 생물활성 폴리펩티드는 화학적 가교제 (또는 그의 부분)로 유도체화된다 (예컨대 그와 접합됨). 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%는 화학적 가교제 (또는 그의 부분)로 유도체화된다 (예컨대 그와 접합됨). 일부 실시양태에서, 유도체화된 생물활성 폴리펩티드는 유도체화된 알부민에 특이적으로 가교됨으로써, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체를 형성한다. 접합 (가교)은, 예를 들어, 유도체화된 알부민을 포함하는 수성 용액 및 유기 용액의 조합 전에 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합은 유도체화된 생물활성 폴리펩티드를 유도체화된 알부민을 포함하는 나노입자와 조합함으로써 발생한다. 일부 실시양태에서, 접합은 유도체화된 생물활성 폴리펩티드를 단리된 나노입자와 조합함으로써 발생한다. 일부 실시양태에서, 접합은 유도체화된 생물활성 폴리펩티드를 유도체화된 알부민을 포함하는 단리된 나노입자와 조합함으로써 발생한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 베바시주맙은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 베바시주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 베바시주맙은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 세툭시맙은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 세툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 세툭시맙은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 이필리무맙은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 이필리무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 이필리무맙은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 니볼루맙은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 니볼루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 니볼루맙은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 파니투무맙은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 파니투무맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 파니투무맙은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 리툭시맙은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 리툭시맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 리툭시맙은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 두르발루맙은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 두르발루맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 두르발루맙은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
따라서, 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 BGB-A317은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) BGB-A317을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 BGB-A317은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
따라서, 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 소수성 약물과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 소수성 약물의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 소수성 약물 (예컨대 탁산 또는 리무스 약물), (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 소수성 약물은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 소수성 약물 (예컨대 소수성 약물의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 파클리탁셀과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 파클리탁셀의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 파클리탁셀의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 파클리탁셀, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 파클리탁셀은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 파클리탁셀 (예컨대 파클리탁셀의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅된다 (예컨대 실질적으로 코팅됨). 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 라파마이신과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 라파마이신의 고체 코어와 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고 (예컨대 실질적으로 코팅됨), 여기서 토실리주맙은 라파마이신의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 (예컨대 디술피드 결합 또는 화학적 가교를 통해) 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (a) 라파마이신, (b) 알부민 (예컨대 인간 알부민), 및 (c) 토실리주맙을 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 라파마이신은 알부민으로 코팅되고, 여기서 토실리주맙은 라파마이신 (예컨대 라파마이신의 고체 코어) 및 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자의 평균 직경은, 동적 광 산란에 의해 측정 시, 약 200 nm 이하이다.
나노입자를 포함하는 조성물 또는 제조 전구물질 중의 다른 구성요소
본원에 기재된 조성물은 본원에 기재된 치료 방법, 투여 방법 및 투여 요법에서의 사용을 위해, 본원에 기재된 조성물을 관련 기술분야에 공지된 제약상 허용되는 담체, 부형제, 안정화제, 벌킹제 및/또는 다른 작용제와 조합함으로써, 제약 조성물 또는 제제로 사용될 수 있다. 제약상 허용되는 작용제는 또한 임의의 제조 전구물질 용액, 예컨대 알부민 또는 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 수성 용액, 또는 제조 공정 동안 다양한 시점에서 조 혼합물, 에멀젼 또는 나노입자 현탁액에 첨가되는 수성 용액에 포함될 수 있다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는" 또는 "약리학상 상용성인"은 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 물질을 지칭하며, 예를 들어 상기 물질은 임의의 유의한 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하지 않으면서 또는 물질이 함유된 조성물의 임의의 다른 구성요소와 유해한 방식으로 상호작용하지 않으면서 환자에게 투여되는 제약 조성물 내로 혼입될 수 있다. 제약상 허용되는 담체 또는 부형제는 바람직하게는 독성학적 시험 및 제조 시험의 요구되는 표준을 충족시키고/거나 미국 식품 의약품국에 의해 작성된 불활성 성분 가이드에 수록되어 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 제약상 허용되는 물질은 부형제, 안정화제, 항미생물제 또는 벌킹제이다.
본원에 기재된 조성물 중 나노입자의 안정성을 증가시키기 위해, 나노입자의 음의 제타 전위를 증가시키는 물질, 예컨대 특정의 음으로 하전된 구성요소가 첨가될 수 있다. 이러한 음으로 하전된 구성요소는 담즙 염, 담즙산, 글리코콜산, 콜산, 케노데옥시콜산, 타우로콜산, 글리코케노데옥시콜산, 타우로케노데옥시콜산, 리토콜산, 우르소데옥시콜산, 데히드로콜산 등; 하기 포스파티딜콜린: 팔미토일올레오일포스파티딜콜린, 팔미토일리놀레오일포스파티딜콜린, 스테아로일리놀레오일포스파티딜콜린, 스테아로일올레오일포스파티딜콜린, 스테아로일아라키도일포스파티딜콜린 및 디팔미토일포스파티딜콜린을 포함하는 레시틴 (난황) 계열 인지질을 포함한 인지질을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다른 인지질은 L-α-디미리스토일포스파티딜콜린 (DMPC), 디올레오일포스파티딜콜린 (DOPC), 디스테아로일포스파티딜콜린 (DSPC), 수소화된 대두 포스파티딜콜린 (HSPC) 및 다른 관련 화합물을 포함한다. 음으로 하전된 계면활성제 또는 유화제, 예를 들어, 나트륨 콜레스테릴 술페이트 등이 또한 첨가제로서 적합하다.
적합한 제약상 허용되는 담체는 멸균수; 염수, 덱스트로스; 물 또는 염수 중 덱스트로스; 피마자 오일의 mol당 약 30 내지 약 35 mol의 에틸렌 옥시드를 조합한 피마자 오일 및 에틸렌 옥시드의 축합 생성물; 액체 산; 저급 알칸올; 유화제 예컨대 지방산의 모노- 또는 디-글리세리드, 또는 포스파티드, 예를 들어, 레시틴 등이 함유된 오일 예컨대 옥수수 오일; 땅콩 오일, 참깨 오일 등; 글리콜; 폴리알킬렌 글리콜; 현탁화제, 예를 들어, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스; 알긴산나트륨; 폴리(비닐피롤리돈)의 존재 하의 수성 매질 등을 단독으로 또는 적합한 분배제 예컨대 레시틴; 폴리옥시에틸렌 스테아레이트 등과 함께 포함한다. 담체는 또한 아주반트 예컨대 보존 안정화제, 습윤제, 유화제 등을 침투 증진제와 함께 함유할 수 있다. 최종 형태는 멸균성일 수 있으며, 또한 주사 장치 예컨대 속이 빈 바늘을 통해 용이하게 통과할 수 있다. 적절한 점도는 용매 또는 부형제의 적절한 선택에 의해 달성되고 유지될 수 있다. 더욱이, 분자 또는 미립자 코팅 예컨대 레시틴의 사용, 분산액 중 입자 크기의 적절한 선택, 또는 계면활성제 특성을 갖는 물질의 사용이 활용될 수 있다.
본원에 기재된 조성물은 조성물의 특성을 개선시키기 위해 다른 작용제, 부형제 또는 안정화제를 포함할 수 있다. 적합한 부형제 및 희석제의 예는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 트레할로스 (α,α-트레할로스 포함), 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 검, 인산칼슘, 알기네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 염수 용액, 시럽, 메틸셀룰로스, 메틸- 및 프로필히드록시벤조에이트, 및 미네랄 오일을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 제제는 윤활제, 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 및 보존제를 추가적으로 포함할 수 있다. 유화제의 예는 토코페롤 에스테르 예컨대 토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 숙시네이트 등, 플루로닉(Pluronic)®, 폴리옥시 에틸렌 화합물을 기재로 하는 유화제, 스팬 80 및 관련 화합물, 및 관련 기술분야에 공지되어 있으며 동물 또는 인간 투여 형태에의 사용이 승인된 다른 유화제를 포함한다. 조성물은 관련 기술분야에 널리 공지된 절차를 이용함으로써, 환자에게 투여 후 활성 성분의 급속, 지속 또는 지연 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물은 약 4.5 내지 약 9.0 범위의 pH, 예컨대 예를 들어 약 5.0 내지 약 8.0, 약 6.5 내지 약 7.5, 및 약 6.5 내지 약 7.0 중 어느 하나의 pH 범위를 갖도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 조성물의 pH는 약 6 이상, 예컨대 예를 들어 약 6.5, 7 또는 8 이상 중 어느 하나 (예를 들어, 약 8)로 제제화된다. 일부 실시양태에서 조성물은 완충제, 예컨대 트리스, 인산염 (예컨대 인산나트륨 또는 인산칼륨), 시트레이트, 숙시네이트, 히스티딘 또는 아세테이트를 추가로 포함한다. 조성물은 또한 적합한 장성 개질제, 예컨대 글리세롤의 첨가에 의해 혈액과 등장성이 되도록 만들어질 수 있다.
일부 실시양태에서, 나노입자 조성물은 인간에게 투여하기에 적합하다. 일부 실시양태에서, 나노입자 조성물은 포유동물 예컨대, 수의학적 상황에서, 가정용 애완 동물 및 농업용 동물에게 투여하기에 적합하다. 조성물의 매우 다양한 적합한 제제가 존재한다 (예를 들어, 참조로 포함되는 미국 특허 번호 5,916,596 및 6,096,331 참조). 하기 제제 및 방법은 단지 예시적이며, 어떠한 방식으로도 제한하는 것이 아니다.
비경구 투여에 적합한 제제는, 항산화제, 완충제, 정박테리아제, 및 제제가 의도된 수용자의 혈액과 상용성이 되도록 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성, 등장성 멸균 주사 용액, 및 현탁화제, 가용화제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액을 포함한다. 제제는 단위-용량 또는 다중-용량 밀봉 용기, 예컨대 앰플 및 바이알 내에 제공될 수 있으며, 사용 직전에 단지 주사용 멸균 액체 부형제, 예를 들어 물의 첨가만을 요구하는 냉동-건조된 (동결건조된) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 이미 기재된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다. 주사가능한 제제가 바람직하다.
일부 실시양태에서, 조성물은 생물활성 폴리펩티드의 제약 제제에서 발견되는 바람직하지 않은 구성요소를 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 예를 들어, 일부 실시양태에서, 조성물은 계면활성제 (예컨대 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80)를 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 일부 실시양태에서, 조성물은 폴리소르베이트 20을 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 일부 실시양태에서, 조성물은 폴리소르베이트 80을 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 일부 실시양태에서, 조성물은 완충제 염을 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 일부 실시양태에서, 조성물은 계면활성제 (예컨대 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 폴리소르베이트 20을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 완충제 염을 포함한다.
나노입자 제제를 제조하는 방법
본 출원은 또한 본원에 기재된 나노입자 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 소수성 약물 및 알부민을 함유하는 나노입자는 고전단력의 조건 하에 (예를 들어, 초음파처리, 고압 균질화 등) 제조될 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,916,596; 6,096,331; 6,749,868; 6,537,579; 및 PCT 출원 공개 번호 WO98/14174; WO99/00113; WO07/027941; 및 WO07/027819에 개시되어 있다. 이들 공개의 내용은, 특히 나노입자 조성물을 제조하는 방법과 관련하여, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 이들 방법은 소수성 약물, 알부민 (예컨대 유도체화된 알부민), 및 생물활성 폴리펩티드 (예컨대 항체)를 포함하는 나노입자를 제조하기 위해 본원에 기재된 바와 같이 변형될 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 적어도 일부는 알부민 폴리펩티드에 접합된다 (즉, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체). 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체는 제조 공정 동안 하나 이상의 단계에서 첨가된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 소수성 약물 및 알부민을 함유하는 사전-형성된 나노입자에 접합된다.
한 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 것인 단계; 및 ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예를 들어, 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민 및 항체를 포함하는 것인 단계; 및 ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예를 들어, 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 하기 단계를 포함하는, 탁산 (예컨대 파클리탁셀), 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 탁산 (예컨대 파클리탁셀)을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민 및 항체를 포함하는 것인 단계; 및 ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예를 들어, 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계; 및 iii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것과 1종 이상의 유기 용매의 제거를 개시하는 것 사이에 임의의 인큐베이션 시간을 방지하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼에 항체를 첨가하는 단계; 및 iii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것과 1종 이상의 유기 용매의 제거를 개시하는 것 사이에 임의의 인큐베이션 시간을 방지하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 하기 단계를 포함하는, 탁산 (예컨대 파클리탁셀), 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 탁산 (예컨대 파클리탁셀)을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼에 항체를 첨가하는 단계; 및 iii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것과 1종 이상의 유기 용매의 제거를 개시하는 것 사이에 임의의 인큐베이션 시간을 방지하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및 iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써, 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및 iii) 증발-후 현탁액에 항체를 첨가함으로써, 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 탁산 (예컨대 파클리탁셀), 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 탁산 (예컨대 파클리탁셀)을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및 iii) 증발-후 현탁액에 항체를 첨가함으로써, 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 전부가 아닌 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 에멀젼-현탁액 중간물질을 수득하는 단계, iii) 에멀젼-현탁액 중간물질에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계, 및 iv) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 에멀젼-현탁액 중간물질로부터 1종 이상의 유기 용매의 추가의 분량을 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 전부가 아닌 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 에멀젼-현탁액 중간물질을 수득하는 단계, iii) 에멀젼-현탁액 중간물질에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계, 및 iv) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 에멀젼-현탁액 중간물질로부터 1종 이상의 유기 용매의 추가의 분량을 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 탁산 (예컨대 파클리탁셀), 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 탁산 (예컨대 파클리탁셀)을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 전부가 아닌 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 에멀젼-현탁액 중간물질을 수득하는 단계, iii) 에멀젼-현탁액 중간물질에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계, 및 iv) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 에멀젼-현탁액 중간물질로부터 1종 이상의 유기 용매의 추가의 분량을 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 생물활성 폴리펩티드에 접합되는 것인 단계; 및 ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는, 예를 들어 디술피드 결합 또는 화학적 가교제, 예컨대 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티를 포함하는 가교제, SMCC 가교제, 보로네이트 에스테르, 또는 클릭 화학으로부터 유래된 모이어티 (예컨대 구리-무함유 클릭 화학, 예컨대 트리아졸 모이어티)를 포함하는 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 접합된다. 일부 실시양태에서, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드는 비-공유적으로 접합된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서 가교제는 알부민에 공유적으로 부착되는 제1 구성요소 및 생물활성 폴리펩티드에 공유적으로 부착되는 제2 구성요소를 포함하며, 여기서 제1 구성요소 및 제2 구성요소는 특이적으로 서로에 결합한다 (예컨대 상보적 핵산 분자). 일부 실시양태에서, 방법은, 예를 들어 투석, 완충제 교환 (예컨대 접선-흐름 여과)에 의해, 또는 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드-접합된 알부민으로부터 나노입자를 원심분리에 의해 분리하고, 나노입자를 비접합된 알부민을 포함하는 용액으로 재현탁시킴으로써, 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드-접합된 알부민을 비접합된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 항체에 접합되는 것인 단계; 및 ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는, 예를 들어 디술피드 결합 또는 화학적 가교제, 예컨대 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티를 포함하는 가교제, SMCC 가교제, 보로네이트 에스테르, 또는 클릭 화학으로부터 유래된 모이어티 (예컨대 구리-무함유 클릭 화학, 예컨대 트리아졸 모이어티)를 포함하는 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 접합된다. 일부 실시양태에서, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드는 비-공유적으로 접합된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서 가교제는 알부민에 공유적으로 부착되는 제1 구성요소 및 생물활성 폴리펩티드에 공유적으로 부착되는 제2 구성요소를 포함하며, 여기서 제1 구성요소 및 제2 구성요소는 특이적으로 서로에 결합한다 (예컨대 상보적 핵산 분자). 일부 실시양태에서, 방법은, 예를 들어 투석, 완충제 교환 (예컨대 접선-흐름 여과)에 의해, 또는 나노입자와 회합되지 않은 항체-접합된 알부민으로부터 나노입자를 원심분리에 의해 분리하고, 나노입자를 비접합된 알부민을 포함하는 용액으로 재현탁시킴으로써, 나노입자와 회합되지 않은 항체-접합된 알부민을 비접합된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 탁산 (예컨대 파클리탁셀), 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 탁산 (예컨대 파클리탁셀)을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 항체에 접합되는 것인 단계; 및 ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써 (예컨대 증발에 의해), 조성물을 형성하는 단계. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는, 예를 들어 디술피드 결합 또는 화학적 가교제, 예컨대 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티를 포함하는 가교제, SMCC 가교제, 보로네이트 에스테르, 또는 클릭 화학으로부터 유래된 모이어티 (예컨대 구리-무함유 클릭 화학, 예컨대 트리아졸 모이어티)를 포함하는 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 접합된다. 일부 실시양태에서, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드는 비-공유적으로 접합된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서 가교제는 알부민에 공유적으로 부착되는 제1 구성요소 및 생물활성 폴리펩티드에 공유적으로 부착되는 제2 구성요소를 포함하며, 여기서 제1 구성요소 및 제2 구성요소는 특이적으로 서로에 결합한다 (예컨대 상보적 핵산 분자). 일부 실시양태에서, 방법은, 예를 들어 투석, 완충제 교환 (예컨대 접선-흐름 여과)에 의해, 또는 나노입자와 회합되지 않은 항체-접합된 알부민으로부터 나노입자를 원심분리에 의해 분리하고, 나노입자를 비접합된 알부민을 포함하는 용액으로 재현탁시킴으로써, 나노입자와 회합되지 않은 항체-접합된 알부민을 비접합된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 항체를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 유도체화되는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 증발-후 현탁액을 수득하는 단계; 및 iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 유도체화된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 유도체화되는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 나노입자를 포함하는 증발-후 현탁액을 수득하는 단계; iii) 나노입자와 회합되지 않은 유도체화된 알부민을 비-유도체화된 알부민으로 대체하는 단계; 및 iv) 나노입자에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 유도체화된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 유도체화되는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 나노입자를 포함하는 증발-후 현탁액을 수득하는 단계; iii) 나노입자와 회합되지 않은 유도체화된 알부민을 비-유도체화된 알부민으로 대체하는 단계; 및 iv) 나노입자에 항체를 첨가하는 단계. 일부 실시양태에서, 항체는 유도체화된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 탁산 (예컨대 파클리탁셀), 알부민 및 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며, 여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 탁산 (예컨대 파클리탁셀)을 포함하고, 여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 유도체화되는 것인 단계; ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 (예컨대 증발에 의해) 나노입자를 포함하는 증발-후 현탁액을 수득하는 단계; iii) 나노입자와 회합되지 않은 유도체화된 알부민을 비-유도체화된 알부민으로 대체하는 단계; 및 iv) 나노입자에 항체를 첨가하는 단계. 일부 실시양태에서, 항체는 유도체화된다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거하기 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 유기 용매를 제거한 후에 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1개 이상의 바이알에 조성물을 충전하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 조성물을 동결건조시키는 것을 추가로 포함한다.
소수성 약물은 유기 용매 (또는 유기 용매의 혼합물)에 용해되어 소수성 약물을 포함하는 유기 용액을 형성한다. 적합한 유기 용매는, 예를 들어, 알칸, 시클로알칸, 케톤, 알콜, 에스테르, 에테르, 염소화된 용매, 및 관련 기술분야에 공지된 다른 용매를 포함한다. 일부 실시양태에서, 유기 용액은 수혼화성 유기 용매, 수불혼화성 유기 용매, 또는 수혼화성 및 수불혼화성 유기 용매의 혼합물을 포함한다. 일부 실시양태에서 유기 용액 중 수혼화성 유기 용매 대 수불혼화성 유기 용매의 비는 약 20:1 내지 약 1:20 (예를 들어, 약 20:1 내지 약 15:1, 약 15:1 내지 약 12:1, 약 12:1 내지 약 10:1, 약 10:1 내지 약 8:1, 약 8:1 내지 약 6:1, 약 6:1 내지 약 4:1, 약 4:1 내지 약 2:1, 약 2:1 내지 약 1:1, 약 1:1 내지 약 1:2, 약 1:2 내지 약 1:4, 약 1:4 내지 약 1:6, 약 1:6 내지 약 1:8, 약 1:8 내지 약 1:10, 약 1:10 내지 약 1:12, 약 1:12 내지 약 1:15, 또는 약 1:15 내지 약 1:20)이다. 예시적인 유기 용매는, 예를 들어, 클로로포름, 디클로로메탄, 메틸렌 클로라이드, 에틸 아세테이트, 에탄올, t-부탄올, 메탄올, 이소프로판올, 프로판올, n-부탄올, 테트라히드로푸란, 시클로헥산, 디옥산, 아세토니트릴, 아세톤, 디메틸 술폭시드, 디메틸 포름아미드, 메틸 피롤리디논을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/mL (예컨대 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 25 mg/mL, 약 25 mg/mL 내지 약 50 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 또는 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL)의 농도로 유기 용매에 용해된다.
소수성 약물을 포함하는 유기 용액은 수성 용액과 조합된다. 일부 실시양태에서, 수성 용액은 물에 용해된 알부민 (예컨대 재조합 알부민)을 포함한다. 알부민은, 예를 들어, 인간 알부민일 수 있다. 일부 실시양태에서, 수성 용액은 1종 이상의 염, 완충제 또는 안정화제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 수성 용액은 계면활성제 (예컨대 폴리소르베이트)를 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 일부 실시양태에서, 수성 용액의 pH는 약 5 내지 약 8이다. 일부 실시양태에서, 수성 용액 중 알부민의 농도 (임의의 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체의 알부민 분량 포함)는 약 0.5 mg/mL 내지 약 250 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 25 mg/mL, 약 25 mg/mL 내지 약 50 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 또는 약 200 mg/mL 내지 약 250 mg/mL)이다. 일부 실시양태에서, 수성 용액은 생물활성 폴리펩티드 또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체를 포함한다. 즉, 수성 용액은 i) 알부민, ii) 생물활성 폴리펩티드, iii) 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체, 또는 iv) 2종 이상의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 알부민은, 예를 들어 가교 모이어티 (예컨대 아민-반응성 숙신이미딜 에스테르 또는 말레이미드 모이어티)를 포함시킴으로써 유도체화된다. 일부 실시양태에서, 수성 용액 중 생물활성 폴리펩티드의 농도 (생물활성-알부민 접합체의 생물활성 폴리펩티드 분량 포함)는 약 0.5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL, 또는 약 20 mg/mL 내지 약 30 mg/mL)이다. 일부 실시양태에서, 수성 용액은 약 1:1 내지 약 20:1의 w/w 비 (알부민: 생물활성 폴리펩티드)로 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 (또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체)는 별개의 수성 용액 (즉, 알부민을 포함하는 수성 용액 또는 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 수성 용액과 별개의 수성 용액)으로 제공된다. 별개의 수성 용액 (이는 "생물활성 폴리펩티드 용액"으로 지칭될 수 있음)은 물에 용해된 생물활성 폴리펩티드 (또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체 또는 그의 조합)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 용액은 1종 이상의 염, 완충제 또는 안정화제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 용액은 계면활성제 (예컨대 폴리소르베이트)를 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대 함유하지 않음). 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 용액의 pH는 약 4 내지 약 8이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 용액 중 생물활성 폴리펩티드의 농도 (생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체의 생물활성 폴리펩티드 분량 포함)는 약 0.5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL, 또는 약 20 mg/mL 내지 약 30 mg/mL)이다.
일부 실시양태에서, 유기 용액 및 수성 용액 (이는 생물활성 폴리펩티드 또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체를 포함할 수 있거나 또는 포함하지 않을 수 있음)은, 예를 들어 고전단 혼합기 (예컨대 회전자-고정자 혼합기)를 사용하여 혼합되어 조 혼합물을 형성한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 수성 용액 및 소수성 약물을 포함하는 유기 용액이 조합되고, 조합된 수성 용액 및 유기 용액은 혼합되어 조 혼합물을 형성한다. 일부 실시양태에서, 수성 용액이 고전단 혼합기로 혼합되고, 유기 용액은 수성 용액이 혼합되고 있을 때 수성 용액에 첨가되어 조 혼합물을 형성한다. 일부 실시양태에서, 수성 용액, 생물활성 폴리펩티드 용액 및 유기 용액이 조합되고, 조합된 수성 용액, 생물활성 폴리펩티드 용액, 유기 용액은 혼합되어 조 혼합물을 형성한다. 일부 실시양태에서, 수성 용액이 고전단 혼합기로 혼합되고, 생물활성 폴리펩티드 용액 및 유기 용액은 수성 용액이 혼합되고 있는 동안 수성 용액과 조합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 용액이 고전단 혼합기로 혼합되고, 수성 용액 및 유기 용액은 생물활성 폴리펩티드 용액이 혼합되고 있을 때 생물활성 폴리펩티드 용액과 조합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 알부민 또는 생물활성 폴리펩티드 (또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체)가 조 혼합물에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액 (알부민, 생물활성 폴리펩티드 및/또는 생물활성-폴리펩티드 접합체 중 1종 이상을 포함함)이, 예를 들어 유기 용액 및 제1 수성 용액의 혼합의 완료 후에 조 혼합물에 첨가된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액이 조 혼합물과 혼합되며, 이는 고전단 혼합기 또는 저전단 혼합기를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 조 혼합물 중 알부민의 농도 (임의의 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체의 알부민 분량 포함)를 약 0.5 mg/mL 내지 약 250 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 25 mg/mL, 약 25 mg/mL 내지 약 50 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 또는 약 200 mg/mL 내지 약 250 mg/mL)로 조정하도록 조 혼합물과 조합된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 조 혼합물 중 생물활성 폴리펩티드의 농도 (임의의 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체의 생물활성 폴리펩티드 분량 포함)를 약 0.5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL, 또는 약 20 mg/mL 내지 약 30 mg/mL)로 조정하도록 조 혼합물과 조합된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 알부민 대 생물활성 폴리펩티드의 비 (w/w)를 1:1 내지 약 1000:1로 조정하도록 조 혼합물과 조합된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 알부민 대 소수성 약물의 비 (w/w)를 약 2.5:1 내지 약 20:1로 조정하도록 조 혼합물과 조합된다.
유기 용액 및 수성 용액의 조 혼합물 (여기서 조 혼합물은 조 혼합물의 형성 후에 첨가된 추가의 수성 용액을 포함할 수 있거나 또는 포함하지 않을 수 있음)은 고압 균질화에 적용되어 에멀젼을 형성한다. 일부 실시양태에서, 에멀젼은 고압 균질화기를 통해 약 2 내지 약 100회의 사이클, 예컨대 약 5 내지 약 50회의 사이클 또는 약 8 내지 약 20회의 사이클 (예를 들어, 약 8, 10, 12, 14, 16, 18 또는 20회의 사이클 중 어느 하나) 동안 순환된다.
일부 실시양태에서, 추가의 알부민 또는 생물활성 폴리펩티드 (또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체)가 에멀젼에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액 (알부민, 생물활성 폴리펩티드 및/또는 생물활성-폴리펩티드 접합체 중 1종 이상을 포함함)이 에멀젼에 첨가된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은 고압 균질화기를 통한 통과 사이에 에멀젼에 첨가된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은 균질화 공정의 완료 후에 에멀젼에 첨가된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은 에멀젼과 혼합되며, 이는 고전단 혼합기 또는 저전단 혼합기를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 에멀젼 중 알부민의 농도 (임의의 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체의 알부민 분량 포함)를 약 0.5 mg/mL 내지 약 250 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 25 mg/mL, 약 25 mg/mL 내지 약 50 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 또는 약 200 mg/mL 내지 약 250 mg/mL)로 조정하도록 에멀젼에 첨가된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 에멀젼 중 생물활성 폴리펩티드의 농도 (임의의 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체의 생물활성 폴리펩티드 분량 포함)를 약 0.5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL, 또는 약 20 mg/mL 내지 약 30 mg/mL)로 조정하도록 에멀젼과 조합된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 알부민 대 생물활성 폴리펩티드의 비 (w/w)를 1:1 내지 약 1000:1로 조정하도록 에멀젼과 조합된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 알부민 대 소수성 약물의 비 (w/w)를 약 2.5:1 내지 약 50:1로 조정하도록 에멀젼과 조합된다.
유기 용매의 적어도 일부 (예컨대 실질적으로 모든 유기 용매)는 증발에 의해, 이러한 목적으로 공지된 적합한 장비, 예컨대, 비제한적으로, 회전 증발기, 강하막 증발기, 와이프드 필름 증발기, 분무 건조기 등을 활용하여 제거될 수 있다. 유기 용매의 증발은 나노입자의 형성을 초래하며, 이는 충분한 물이 증발 후에 잔류한다면, 나노입자 현탁액 (또한 "증발-후 현탁액"으로 지칭될 수 있음)의 형태로 존재할 수 있다. 용매는 감압 (예컨대 약 25 mm Hg, 30 mm Hg, 40 mm Hg, 50 mm Hg, 100 mm Hg, 200 mm Hg 또는 300 mm Hg 중 어느 하나)에서 제거될 수 있다. 감압 하에 용매를 제거하는데 사용되는 시간량은 제제의 부피에 기초하여 조정될 수 있다. 예를 들어, 300 mL 규모로 제조된 제제의 경우에, 용매는 약 1 내지 약 300 mm Hg (예를 들어, 약 5-100 mm Hg, 10-50 mm Hg, 20-40 mm Hg 또는 25 mm Hg 중 어느 하나)에서 약 5 내지 약 60분 (예를 들어, 약 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 25 또는 30분 중 어느 하나) 동안 제거될 수 있다.
일부 실시양태에서, 추가의 알부민 및/또는 생물활성 폴리펩티드 (또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체)가 나노입자 (예컨대 증발-후 현탁액)에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액 (알부민, 생물활성 폴리펩티드 및/또는 생물활성-폴리펩티드 접합체 중 1종 이상을 포함함)이 나노입자에 첨가된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 나노입자 현탁액 중 알부민의 농도 (임의의 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체의 알부민 분량 포함)를 약 0.5 mg/mL 내지 약 250 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 25 mg/mL, 약 25 mg/mL 내지 약 50 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 또는 약 200 mg/mL 내지 약 250 mg/mL)로 조정하도록 증발-후 현탁액에 첨가된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 나노입자 현탁액 중 생물활성 폴리펩티드의 농도 (임의의 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체의 생물활성 폴리펩티드 분량 포함)를 약 0.5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL (예컨대 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL, 또는 약 20 mg/mL 내지 약 30 mg/mL)로 조정하도록 나노입자 현탁액과 조합된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 알부민 대 생물활성 폴리펩티드의 비 (w/w)를 1:1 내지 약 1000:1로 조정하도록 나노입자 현탁액과 조합된다. 일부 실시양태에서, 추가의 수성 용액은, 알부민 대 소수성 약물의 비 (w/w)를 약 2.5:1 내지 약 50:1로 조정하도록 나노입자 현탁액과 조합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는, 예를 들어 1종 이상의 부형제 (예컨대 안정화제, 완충제, 벌킹제, 항미생물제, 삼투물질, 또는 재구성 증진제)를 나노입자 (예컨대 증발-후 현탁액)에 첨가함으로써 투여용으로 제제화된다. 1종 이상의 부형제는 수성 용액과 별개로 나노입자에 첨가될 수 있거나 또는 수성 용액에 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 나노입자 현탁액의 pH는 약 4 내지 약 9 (예컨대 약 4 내지 약 5, 약 5 내지 약 6, 약 6 내지 약 7, 약 7 내지 약 8, 또는 약 8 내지 약 9)로 조정된다. 증발-후 현탁액은 목적하는 시간량 (예컨대 약 15분 내지 약 48시간) 동안 알부민 또는 생물활성 폴리펩티드 (또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체)와 함께 인큐베이션할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인큐베이션은 약 3℃ 내지 약 30℃에서 발생한다. 이러한 인큐베이션 기간은 생물활성 폴리펩티드 (또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체)가 나노입자와 회합하도록 한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 나노입자와 회합된 알부민의 일부는 유도체화되고, 인큐베이션 기간은 유도체화된 알부민이 생물활성 폴리펩티드에 접합하도록 한다.
일부 실시양태에서, 알부민은 생물활성 폴리펩티드에 접합되어 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체를 형성한다. 생물활성 폴리펩티드의 알부민에 대한 접합은 제조 공정 동안 다양한 시점에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 수성 용액을 유기 용액과 조합하기 전에 알부민에 접합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는, 폴리펩티드가 나노입자 현탁액과 조합될 때, 알부민에 접합된다. 일부 실시양태에서, 알부민 (또는 알부민의 일부)은 유도체화되어, 생물활성 폴리펩티드에 대한 접합을 제공할 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 유도체화되어, 알부민에 대한 접합을 제공할 수 있다. 일부 실시양태에서, 알부민 (또는 알부민의 일부) 및 생물활성 폴리펩티드는 유도체화되어 접합을 제공한다.
생물활성 폴리펩티드는, 예를 들어, 클릭 화학 또는 다른 공지된 가교제를 사용하여 알부민에 접합될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 알부민 또는 생물활성 폴리펩티드는 스트레인 적용된 알켄 또는 스트레인 적용된 알킨으로 유도체화되고, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드는 고리화첨가 반응을 통해 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 알부민 또는 생물활성 폴리펩티드 상의 리신 잔기는, 예를 들어 아민-반응성 숙신이미딜 에스테르 (예컨대 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (NHS-에스테르)), 이소시아네이트 또는 이소티오시아네이트로 유도체화된다. 일부 실시양태에서, 알부민 또는 생물활성 폴리펩티드 상의 시스테인 잔기는, 예를 들어 말레이미드 또는 아이오도아세트아미드로 유도체화된다. 알부민의 시스테인 34가 유도체화될 수 있는 예시적인 시스테인이다. 다른 접합 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 유도체화된 알부민이 생물활성 폴리펩티드와 함께 인큐베이션되거나 또는 유도체화된 생물활성 폴리펩티드가 알부민과 함께 인큐베이션되어, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체를 형성할 수 있다. 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체가 형성된 후에 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체는 수성 용액, 조 혼합물, 에멀젼 또는 증발-후 현탁액에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체가 나노입자 제조 공정에 포함되기 전에, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체는 비-접합된 알부민 또는 생물활성 폴리펩티드와 별개일 수 있다. 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체는 또한 또는 대안적으로 나노입자의 형성 후에 형성될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 유도체화된 알부민이 수성 용액, 조 혼합물 또는 에멀젼에 포함되고, 생물활성 폴리펩티드가 나노입자 현탁액에 첨가된다. 나노입자와 회합되어 있는 유도체화된 알부민은 생물활성 폴리펩티드와 반응하여 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체를 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도체화된 생물활성 폴리펩티드는 알부민을 포함하는 수성 용액, 조 혼합물, 에멀젼, 증발-후 현탁액 또는 다른 나노입자 현탁액에 첨가되고, 알부민과 반응하여 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체를 형성한다.
일부 실시양태에서, 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체 또는 유도체화된 알부민 (존재하는 경우)은 나노입자 현탁액으로부터 제거된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체 또는 유도체화된 알부민은 비-유도체화된 또는 비접합된 알부민에 의해 대체된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 나노입자 현탁액은 원심분리되고, 상청액이 제거되고, 나노입자는 새로운 수성 용액 (이는 비-유도체화된 또는 비접합된 알부민일 수 있음)에 현탁된다. 일부 실시양태에서, 나노입자 현탁액은 투석되어 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체 또는 유도체화된 알부민 (존재하는 경우)이 제거되며, 이는 비-유도체화된 또는 비접합된 알부민에 의해 대체될 수 있다. 일부 실시양태에서, 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드, 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체 또는 유도체화된 알부민 (존재하는 경우)은 완충제 교환 (예를 들어, 접선-흐름 여과)에 의해 제거되며, 이는 비-유도체화된 또는 비접합된 알부민에 의해 대체될 수 있다.
또 다른 측면에서, 생물활성 폴리펩티드를 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자에 접합시키는 것을 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 생물활성 폴리펩티드를 알부민에 공유적으로 가교시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는, 예를 들어 디술피드 결합 또는 화학적 가교제, 예컨대 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티를 포함하는 가교제, SMCC 가교제, 보로네이트 에스테르, 또는 클릭 화학으로부터 유래된 모이어티 (예컨대 구리-무함유 클릭 화학, 예컨대 트리아졸 모이어티)를 포함하는 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 접합된다. 일부 실시양태에서, 방법은 생물활성 폴리펩티드를 알부민에 비-공유적으로 가교시키는 것을 포함하며, 여기서 알부민은 가교제의 제1 구성요소에 공유적으로 결합되고 생물활성 폴리펩티드는 가교제의 제2 구성요소에 공유적으로 결합되며, 여기서 가교제의 제1 구성요소는 가교제의 제2 구성요소에 특이적으로 결합한다 (예컨대 적어도 부분적으로 상보적인 핵산 분자).
또 다른 측면에서, 항체를 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자에 접합시키는 것을 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항체를 알부민에 공유적으로 가교시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 예를 들어 디술피드 결합 또는 화학적 가교제, 예컨대 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티를 포함하는 가교제, SMCC 가교제, 보로네이트 에스테르, 또는 클릭 화학으로부터 유래된 모이어티 (예컨대 구리-무함유 클릭 화학, 예컨대 트리아졸 모이어티)를 포함하는 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 접합된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항체를 알부민에 비-공유적으로 가교시키는 것을 포함하며, 여기서 알부민은 가교제의 제1 구성요소에 공유적으로 결합되고 항체는 가교제의 제2 구성요소에 공유적으로 결합되며, 여기서 가교제의 제1 구성요소는 가교제의 제2 구성요소에 특이적으로 결합한다 (예컨대 적어도 부분적으로 상보적인 핵산 분자).
또 다른 측면에서, 항체를 탁산 및 알부민을 포함하는 나노입자에 접합시키는 것을 포함하는, 탁산 (예컨대 파클리탁셀), 알부민, 및 알부민에 접합된 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항체를 알부민에 공유적으로 가교시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 예를 들어 디술피드 결합 또는 화학적 가교제, 예컨대 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티를 포함하는 가교제, SMCC 가교제, 보로네이트 에스테르, 또는 클릭 화학으로부터 유래된 모이어티 (예컨대 구리-무함유 클릭 화학, 예컨대 트리아졸 모이어티)를 포함하는 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 접합된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항체를 알부민에 비-공유적으로 가교시키는 것을 포함하며, 여기서 알부민은 가교제의 제1 구성요소에 공유적으로 결합되고 항체는 가교제의 제2 구성요소에 공유적으로 결합되며, 여기서 가교제의 제1 구성요소는 가교제의 제2 구성요소에 특이적으로 결합한다 (예컨대 적어도 부분적으로 상보적인 핵산 분자).
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 생물활성 폴리펩티드를 가교제로 관능화시키는 단계, 및 ii) 활성화된 생물활성 폴리펩티드를 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자와 조합하는 단계. 도 18은 이러한 방법의 예를 예시한다. 일부 실시양태에서, 가교제는 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티, SMCC 가교제, 보론산, 클릭 화학 가교 시약을 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 항체를 가교제로 관능화시키는 단계, 및 ii) 활성화된 항체를 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자와 조합하는 단계. 일부 실시양태에서, 가교제는 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티, SMCC 가교제, 보론산, 클릭 화학 가교 시약을 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 탁산 (예컨대 파클리탁셀), 알부민, 및 알부민에 접합된 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 항체를 가교제로 관능화시키는 단계, 및 ii) 활성화된 항체를 탁산 및 알부민을 포함하는 나노입자와 조합하는 단계. 일부 실시양태에서, 가교제는 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티, SMCC 가교제, 보론산, 클릭 화학 가교 시약을 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 생물활성 폴리펩티드를 가교제로 관능화시키는 단계; ii) 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 나노입자의 표면과 회합된 알부민의 적어도 일부를 유도체화시키는 단계, 및 iii) 활성화된 생물활성 폴리펩티드를 유도체화된 알부민을 포함하는 나노입자와 조합하는 단계. 도 19, 21 및 23은 나노입자의 표면과 회합된 알부민을 유도체화시키고, 관능화된 생물활성 폴리펩티드를 유도체화된 알부민과 접합시키는 예시적인 방법을 예시한다. 일부 실시양태에서, 알부민을 유도체화시키는 것은, 예를 들어 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 나노입자를 티올화 작용제 (예컨대 2-이미노티올란)와 조합함으로써 알부민을 티올화시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 가교제는 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티, SMCC 가교제, 보론산, 클릭 화학 가교 시약을 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 항체를 가교제로 관능화시키는 단계; ii) 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 나노입자의 표면과 회합된 알부민의 적어도 일부를 유도체화시키는 단계, 및 iii) 활성화된 항체를 유도체화된 알부민을 포함하는 나노입자와 조합하는 단계. 일부 실시양태에서, 알부민을 유도체화시키는 것은, 예를 들어 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 나노입자를 티올화 작용제 (예컨대 2-이미노티올란)와 조합함으로써 알부민을 티올화시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 가교제는 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티, SMCC 가교제, 보론산, 클릭 화학 가교 시약을 포함한다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 탁산 (파클리탁셀), 알부민, 및 알부민에 접합된 항체 (예컨대 항-VEGF 항체 (예를 들어, 항-VEGF-A 항체, 예컨대 베바시주맙), 항-HER2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙) 및 항-PD-1 항체 (예컨대 BGB-A317) 또는 항-IL-6-수용체 항체 (예컨대 토실리주맙))를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이 제공된다: i) 항체를 가교제로 관능화시키는 단계, ii) 알부민 및 탁산을 포함하는 나노입자의 표면과 회합된 알부민의 적어도 일부를 유도체화시키는 단계, 및 iii) 활성화된 항체를 유도체화된 알부민을 포함하는 나노입자와 조합하는 단계. 일부 실시양태에서, 알부민을 유도체화시키는 것은, 예를 들어 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 나노입자를 티올화 작용제 (예컨대 2-이미노티올란)와 조합함으로써 알부민을 티올화시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 가교제는 말레이미드 관능기 및/또는 NHS 모이어티, SMCC 가교제, 보론산, 클릭 화학 가교 시약을 포함한다.
일부 실시양태에서, 나노입자 현탁액은 나노입자 현탁액을 멸균시킬 수 있는 1개 이상의 필터를 통해 여과된다 (즉, 멸균 여과). 나노입자 현탁액은 다수의 필터를 통해 연속적으로 여과될 수 있다.
일부 실시양태에서, 나노입자는 바이알에 분배된다. 일부 실시양태에서, 바이알은 밀봉된다. 일부 실시양태에서, 바이알은 단회 사용 바이알이다. 일부 실시양태에서, 바이알은 다회 사용 바이알이다. 나노입자 현탁액은 또한 바이알 안에서 또는 밖에서 동결건조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 동결건조된 나노입자는 수성 용액 (예컨대 물 또는 염수) 중에 재구성된다. 일부 실시양태에서, 수성 용액은 알부민, 생물활성 폴리펩티드 및/또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 재구성된 나노입자는 수성 용액 중에서 인큐베이션될 수 있거나, 여과될 수 있거나, 생물활성 폴리펩티드 또는 생물활성 폴리펩티드-알부민 접합체가 제거될 수 있거나, 또는 예를 들어 상기 기재된 바와 같이 재-동결건조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 재구성된 나노입자는 대상체에게 투여된다.
하기 실시양태는 본원에 기재된 나노입자의 예시적인 제조 방법이며, 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 도 1은 본원에 기재된 나노입자를 제조하는 방법의 한 실시양태를 예시하는 흐름도이다. 단계(102)에서, 물에 용해된 알부민 및 생물활성 폴리펩티드 (예컨대 항체)를 함유하는 수성 용액을 용기로 옮겨 고전단 혼합기로 혼합한다. 단계(104)에서, 1종 이상의 유기 용매 (예컨대 수혼화성 용매 및 수불혼화성 용매) 및 소수성 약물 (예컨대 탁산, 예컨대 파클리탁셀)을 함유하는 유기 용액을, 수성 용액이 고전단 혼합기로 혼합되고 있는 동안, 수성 용액을 함유하는 용기에 첨가함으로써, 조 혼합물을 형성한다. 단계(106)에서, 조 혼합물을 고압 균질화기를 통해 통과시킴으로써 조 혼합물을 균질화하며, 이에 의해 에멀젼을 형성한다. 임의적으로, 에멀젼을 2회 이상 고압 균질화기를 통해 통과시킨다. 단계(108)에서, 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 증발에 의해 에멀젼으로부터 제거함으로써, 증발-후 나노입자 현탁액을 형성한다. 임의적으로, 단계(110)에서, 증발-후 나노입자 현탁액을, 예를 들어 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 함유하는 수성 용액을 첨가함으로써 제제화한다. 제제화된 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(112)에서 멸균 여과하고, 멸균 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(114)에서 1개 이상의 바이알에 충전한다. 임의적으로, 단계(116)에서, 바이알을 동결건조시키고/거나 밀봉한다.
도 2는 본원에 기재된 나노입자를 제조하는 방법의 또 다른 실시양태를 예시하는 흐름도이다. 단계(202)에서, 물에 용해된 알부민을 함유하는 수성 용액을 용기로 옮겨 고전단 혼합기로 혼합한다. 단계(204)에서, 1종 이상의 유기 용매 (예컨대 수혼화성 용매 및 수불혼화성 용매) 및 소수성 약물 (예컨대 탁산, 예컨대 파클리탁셀)을 함유하는 유기 용액을, 수성 용액이 고전단 혼합기로 혼합되고 있는 동안, 수성 용액을 함유하는 용기에 첨가함으로써, 조 혼합물을 형성한다. 단계(206)에서, 생물활성 폴리펩티드 (이는 제2 수성 용액에 함유될 수 있음)를 조 혼합물에 첨가한다. 단계(208)에서, 조 혼합물을 고압 균질화기를 통해 통과시킴으로써 조 혼합물을 균질화하며, 이에 의해 에멀젼을 형성한다. 임의적으로, 에멀젼을 2회 이상 고압 균질화기를 통해 통과시킨다. 단계(210)에서, 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 증발에 의해 에멀젼으로부터 제거함으로써, 증발-후 나노입자 현탁액을 형성한다. 임의적으로, 단계(212)에서, 증발-후 나노입자 현탁액을, 예를 들어 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 함유하는 수성 용액을 첨가함으로써 제제화한다. 제제화된 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(214)에서 멸균 여과하고, 멸균 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(216)에서 1개 이상의 바이알에 충전한다. 임의적으로, 단계(218)에서, 바이알을 동결건조시키고/거나 밀봉한다.
도 3은 본원에 기재된 나노입자를 제조하는 방법의 또 다른 실시양태를 예시하는 흐름도이다. 단계(302)에서, 물에 용해된 알부민을 함유하는 수성 용액을 용기로 옮겨 고전단 혼합기로 혼합한다. 단계(304)에서, 1종 이상의 유기 용매 (예컨대 수혼화성 용매 및 수불혼화성 용매) 및 소수성 약물 (예컨대 탁산, 예컨대 파클리탁셀)을 함유하는 유기 용액을, 수성 용액이 고전단 혼합기로 혼합되고 있는 동안, 수성 용액을 함유하는 용기에 첨가함으로써, 조 혼합물을 형성한다. 단계(306)에서, 조 혼합물을 고압 균질화기를 통해 통과시킴으로써 조 혼합물을 균질화하며, 이에 의해 에멀젼을 형성한다. 임의적으로, 에멀젼을 2회 이상 고압 균질화기를 통해 통과시킨다. 단계(308)에서, 생물활성 폴리펩티드 (이는 제2 수성 용액에 함유될 수 있음)를 에멀젼에 첨가한다. 단계(310)에서, 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 증발에 의해 에멀젼으로부터 제거함으로써, 증발-후 나노입자 현탁액을 형성한다. 임의적으로, 단계(312)에서, 증발-후 나노입자 현탁액을, 예를 들어 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 함유하는 수성 용액을 첨가함으로써 제제화한다. 제제화된 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(314)에서 멸균 여과하고, 멸균 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(316)에서 1개 이상의 바이알에 충전한다. 임의적으로, 단계(318)에서, 바이알을 동결건조시키고/거나 밀봉한다.
도 4는 본원에 기재된 나노입자를 제조하는 방법의 또 다른 실시양태를 예시하는 흐름도이다. 단계(402)에서, 물에 용해된 알부민을 함유하는 수성 용액을 용기로 옮겨 고전단 혼합기로 혼합한다. 단계(404)에서, 1종 이상의 유기 용매 (예컨대 수혼화성 용매 및 수불혼화성 용매) 및 소수성 약물 (예컨대 탁산, 예컨대 파클리탁셀)을 함유하는 유기 용액을, 수성 용액이 고전단 혼합기로 혼합되고 있는 동안, 수성 용액을 함유하는 용기에 첨가함으로써, 조 혼합물을 형성한다. 단계(406)에서, 조 혼합물을 고압 균질화기를 통해 통과시킴으로써 조 혼합물을 균질화하며, 이에 의해 에멀젼을 형성한다. 임의적으로, 에멀젼을 2회 이상 고압 균질화기를 통해 통과시킨다. 단계(408)에서, 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 증발에 의해 에멀젼으로부터 제거함으로써, 증발-후 나노입자 현탁액을 형성한다. 단계(410)에서, 생물활성 폴리펩티드 (이는 제2 수성 용액에 함유될 수 있음)를 증발-후 나노입자 현탁액에 첨가한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 및 나노입자 현탁액을 소정의 시간 기간 동안 인큐베이션한다. 임의적으로, 단계(412)에서, 증발-후 나노입자 현탁액을, 예를 들어 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 함유하는 수성 용액을 첨가함으로써 제제화한다. 일부 실시양태에서, 단계(410) 및 단계(412)는 단일 단계로 조합된다. 예를 들어, 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 첨가하는 것과 동시에 생물활성 폴리펩티드를 나노입자 현탁액에 첨가할 수 있다. 생물활성 폴리펩티드, 알부민 또는 부형제는 동일한 수성 용액에 또는 상이한 수성 용액에 조합될 수 있다. 제제화된 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(414)에서 멸균 여과하고, 멸균 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(416)에서 1개 이상의 바이알에 충전한다. 임의적으로, 단계(418)에서, 바이알을 동결건조시키고/거나 밀봉한다.
도 5는 본원에 기재된 나노입자를 제조하는 방법의 또 다른 실시양태를 예시하는 흐름도이다. 단계(502)에서, 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 수성 용액 중)를 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물과 조합한다. 이미 만들어져 있는 나노입자는, 예를 들어, 이전에 제조되어 여과된 나노입자 현탁액 또는 동결건조된 나노입자 조성물 (이는 재구성된 것일 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있음)의 것일 수 있다. 예시적인 이미 만들어져 있는 나노입자는 아브락산® (nab-파클리탁셀)이다. 일부 실시양태에서, 동결건조된 나노입자 조성물을 현탁시키기 위해 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 수성 용액이 사용된다. 임의적으로, 단계(504)에서, 나노입자 현탁액을, 예를 들어 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 함유하는 수성 용액을 첨가함으로써 제제화한다. 일부 실시양태에서, 단계(502) 및 단계(504)는 단일 단계로 조합된다. 예를 들어, 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 첨가하는 것과 동시에 생물활성 폴리펩티드를 나노입자 현탁액에 첨가할 수 있다. 생물활성 폴리펩티드, 알부민 또는 부형제는 동일한 수성 용액에 또는 상이한 수성 용액에 조합될 수 있다. 제제화된 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(506)에서 멸균 여과하고, 멸균 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(508)에서 1개 이상의 바이알에 충전한다. 임의적으로, 단계(510)에서, 바이알을 동결건조시키고/거나 밀봉한다.
도 6은 본원에 기재된 나노입자를 제조하는 방법의 또 다른 실시양태를 예시하는 흐름도이다. 단계(602)에서, 물에 용해된, 유도체화된 알부민을 함유하는 수성 용액을 용기로 옮겨 고전단 혼합기로 혼합한다. 일부 실시양태에서, 수성 용액은 비-유도체화된 알부민을 추가로 포함한다. 단계(604)에서, 1종 이상의 유기 용매 (예컨대 수혼화성 용매 및 수불혼화성 용매) 및 소수성 약물 (예컨대 탁산, 예컨대 파클리탁셀)을 함유하는 유기 용액을, 수성 용액이 고전단 혼합기로 혼합되고 있는 동안, 수성 용액을 함유하는 용기에 첨가함으로써, 조 혼합물을 형성한다. 단계(606)에서, 조 혼합물을 고압 균질화기를 통해 통과시킴으로써 조 혼합물을 균질화하며, 이에 의해 에멀젼을 형성한다. 임의적으로, 에멀젼을 2회 이상 고압 균질화기를 통해 통과시킨다. 단계(608)에서, 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 증발에 의해 에멀젼으로부터 제거함으로써, 증발-후 나노입자 현탁액을 형성한다. 단계(610)에서, 나노입자와 회합되지 않은 유도체화된 알부민을, 예를 들어 투석, 원심분리 및 나노입자의 재현탁, 또는 접선 흐름 여과에 의해 비-유도체화된 알부민으로 대체할 수 있다. 단계(612)에서, 생물활성 폴리펩티드 (이는 제2 수성 용액에 함유될 수 있음)를 나노입자 현탁액에 첨가한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 유도체화된다 (접합 방법에 따라). 임의적으로, 단계(614)에서, 현탁액을, 예를 들어 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 함유하는 수성 용액을 첨가함으로써 제제화한다. 일부 실시양태에서, 단계(610) 및 단계(614), 또는 단계(612) 및 단계(614)는 단일 단계로 조합된다. 예를 들어, 알부민 또는 1종 이상의 부형제를 첨가하는 것과 동시에 생물활성 폴리펩티드를 나노입자 현탁액에 첨가할 수 있다. 생물활성 폴리펩티드, 알부민 또는 부형제는 동일한 수성 용액에 또는 상이한 수성 용액에 조합될 수 있다. 제제화된 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(616)에서 멸균 여과하고, 멸균 나노입자 현탁액을 임의적으로 단계(618)에서 1개 이상의 바이알에 충전한다. 임의적으로, 단계(620)에서, 바이알을 동결건조시키고/거나 밀봉한다.
사용 방법
본원에 기재된 조성물은 세포 증식 또는 과다증식과 연관된 질환, 예컨대 암을 치료하는데 사용될 수 있다.
따라서, 일부 실시양태에서, (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물의 유효량을 질환의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환 (예컨대 암)을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 소수성 약물의 고체 코어의 표면과 회합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 일부는 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 적어도 약 75%는 나노입자와 회합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 적어도 약 100의 생물활성 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 소수성 약물 및 생물활성 폴리펩티드의 중량비는 약 4:1이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 및 소수성 약물의 중량비는 약 1:1 내지 약 9:1 미만이다. 일부 실시양태에서, 나노입자의 평균 직경은 동적 광 산란 (DLS)에 의해 측정 시 약 200 nm 이하이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 탁산이다. 일부 실시양태에서, 탁산은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 리무스 약물이다. 일부 실시양태에서, 리무스 약물은 라파마이신이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 치료 항체이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 베바시주맙, 세툭시맙, 이필리무맙, 니볼루맙, 파니투무맙 및 리툭시맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 기재된 조성물에 의해 치료될 암은 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본원에 기재된 조성물에 의해 치료될 수 있는 암의 예는 편평 세포암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포 암종, 예컨대 편평세포 NSCLC 포함), 복막암, 간세포성 암, 위의 암 또는 위암 (위장암 포함), 췌장암 (예컨대 진행성 췌장암), 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암 (예컨대 간세포성 암종), 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 흑색종, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암 또는 신암, 간암, 전립선암 (예컨대 진행성 전립선암), 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 두경부암, 결장직장암, 직장암, 연조직 육종, 카포시 육종, B-세포 림프종 (저등급/여포성 비-호지킨 림프종 (NHL), 소림프구성 (SL) NHL, 중등급/여포성 NHL, 중등급 미만성 NHL, 고등급 면역모세포성 NHL, 고등급 림프모구성 NHL, 고등급 소형 비-분할 세포 NHL, 거대 종양 NHL, 외투 세포 림프종, AIDS-관련 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 포함), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 골수종, 모발상 세포 백혈병, 만성 골수모구성 백혈병 및 이식 후 림프증식성 장애 (PTLD), 뿐만 아니라 모반증과 연관된 비정상적 혈관 증식, 부종 (예컨대 뇌 종양과 연관된 것) 및 메이그스 증후군을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 전이성 암 (즉, 원발성 종양으로부터 전이된 암)을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 세포 증식 및/또는 세포 이동을 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 증식증, 예를 들어 동맥 또는 정맥 고혈압을 초래할 수 있는 재협착 또는 증식증을 초래할 수 있는 혈관계에서의 증식증을 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 진행된 병기(들)에 있는 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 유방암 (이는 HER2 양성 또는 HER2 음성일 수 있음), 예컨대, 예를 들어, 진행성 유방암, IV기 유방암, 국부 진행성 유방암 및 전이성 유방암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암, 예컨대, 예를 들어, 비소세포 폐암 (NSCLC, 예컨대 진행성 NSCLC), 소세포 폐암 (SCLC, 예컨대 진행성 SCLC) 및 폐의 진행성 악성 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 난소암, 두경부암, 위 악성종양, 흑색종 (전이성 흑색종 포함), 결장직장암, 췌장암 및 고형 종양 (예컨대 진행성 고형 종양)이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 결장직장암, 직장암, 비소세포 폐암, 비-호지킨 림프종 (NHL), 신세포암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종, 카포시 육종, 카르시노이드 암종, 두경부암, 흑색종, 난소암, 중피종, 신경교종, 교모세포종, 신경모세포종 및 다발성 골수종 중 어느 하나이다 (또한 일부 실시양태에서는 그로 이루어진 군으로부터 선택됨). 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양이다.
일부 실시양태에서, 치료될 암은 유방암, 예컨대 전이성 유방암이다. 일부 실시양태에서, 치료될 암은 폐암, 예컨대 진행된 병기에 있는 비소세포 폐암을 포함한 비소세포 폐암이다. 일부 실시양태에서, 치료될 암은 췌장암, 예컨대 초기 췌장암, 또는 진행성 또는 전이성 췌장암이다. 일부 실시양태에서, 치료될 암은 흑색종, 예컨대 III 또는 IV기 흑색종이다.
일부 실시양태에서, 증식성 질환에 대해 치료될 개체는 본원에 기재된 병태 중 하나 이상을 갖는 것으로 확인된 바 있다. 숙련의에 의한 본원에 기재된 바와 같은 병태의 확인은 관련 기술분야에서 일상적이며 (예를 들어, 혈액 검사, X선, CT 스캔, 내시경검사, 생검, 혈관조영술, CT-혈관조영술 등을 통해), 또한, 예를 들어, 종양 성장, 출혈, 궤양화, 통증, 림프절 비대, 기침, 황달, 종창, 체중 감소, 악액질, 발한, 빈혈, 부신생물성 현상, 혈전증 등으로 인해 개체 또는 다른 사람에 의해 의심될 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 본원에 기재된 바와 같은 병태 중 하나 이상에 걸리기 쉬운 것으로 확인된 바 있다. 개체의 민감성은 유전자 프로파일링, 가족력, 의료 병력 (예를 들어, 관련 병태의 출현), 생활방식 또는 습관을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 통상의 기술자에 의해 인지되는 많은 위험 인자 및/또는 진단학적 접근법 중 어느 하나 이상에 기반할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 사용된 방법 및/또는 조성물은 증식성 질환 (예를 들어, 암)과 연관된 1종 이상의 증상의 중증도를, 치료 전 동일한 개체에서의 상응하는 증상과 비교하여 또는 방법 및/또는 조성물을 수용하지 않은 다른 개체에서의 상응하는 증상과 비교하여 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 중 어느 하나만큼 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물 (예컨대 제약 조성물)은 또 다른 투여 양식 또는 치료와 조합되어 사용된다.
조합 치료
본원에 기재된 조성물은 세포 증식 또는 과다증식과 연관된 질환, 예컨대 암을 치료하기 위한 조합 치료의 구성요소로서 사용될 수 있다.
따라서, 일부 실시양태에서, (1) (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물의 유효량; 및 (2) 1종 이상의 추가의 치료제의 유효량을 질환의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환 (예컨대 암)을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 (1) (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자; 및 (2) 1종 이상의 추가의 치료제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 치료제는 수용성 작용제이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 화학요법제이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 백금-기반 작용제이다. 일부 실시양태에서, 백금-기반 작용제는 카르보플라틴이다. 일부 실시양태에서, 백금-기반 작용제는 시스플라틴이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 항대사제이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 겜시타빈이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 두르발루맙이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 카페시타빈이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 5-플루오로우라실, 류코보린, 이리노테칸 및/또는 옥살리플라틴이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 이파프리셉트이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 반티크투맙이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 PEGPH20이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 니볼루맙이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 네시투무맙이다.
따라서, 일부 실시양태에서, (1) (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물의 유효량; 및 (2) 또 다른 치료제의 유효량을 질환의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환 (예컨대 암)을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 소수성 약물의 고체 코어의 표면과 회합된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드의 일부는 소수성 약물의 고체 코어에 매립된다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 나노입자 상의 알부민과 회합된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 적어도 약 75%는 나노입자와 회합된다. 일부 실시양태에서, 나노입자는 적어도 약 100의 생물활성 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 소수성 약물 및 생물활성 폴리펩티드의 중량비는 약 4:1이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 및 소수성 약물의 중량비는 약 1:1 내지 약 9:1 미만이다. 일부 실시양태에서, 나노입자의 평균 직경은 동적 광 산란에 의해 측정 시 약 200 nm 이하이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 탁산이다. 일부 실시양태에서, 탁산은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물은 리무스 약물이다. 일부 실시양태에서, 리무스 약물은 라파마이신이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 치료 항체이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드는 베바시주맙, 세툭시맙, 이필리무맙, 니볼루맙, 파니투무맙 및 리툭시맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 화학요법제이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 백금-기반 작용제이다. 일부 실시양태에서, 백금-기반 작용제는 카르보플라틴이다. 일부 실시양태에서, 백금-기반 작용제는 시스플라틴이다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 겜시타빈이다.
나노입자 조성물을 투여하는 용량 및 방법
개체 (예컨대 인간)에게 투여되는 조성물의 용량은 특정한 조성물, 투여 방식, 및 치료될 질환의 유형에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 나노입자의 양은 객관적 반응 (예컨대 부분 반응 또는 완전 반응)을 초래하는데 효과적이다. 일부 실시양태에서, 조성물의 양은 개체에서 완전 반응을 초래하기에 충분하다. 일부 실시양태에서, 조성물의 양은 개체에서 부분 반응을 초래하기에 충분하다. 일부 실시양태에서, 투여되는 조성물의 양 (예를 들어 단독으로 투여되는 경우)은 조성물로 치료되는 개체 집단 중에서 약 40%, 50%, 60% 또는 64% 초과 중 어느 하나의 전체 반응률을 발생시키기에 충분하다. 본원에 기재된 방법의 치료에 대한 개체의 반응은, 예를 들어, RECIST 수준에 기초하여 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물의 양은 개체의 무진행 생존을 연장하기에 충분하다. 일부 실시양태에서, 조성물의 양은 개체의 전체 생존을 연장하기에 충분하다. 일부 실시양태에서, 조성물의 양 (예를 들어 단독으로 투여되는 경우)은 조성물로 치료되는 개체 집단 중에서 약 50%, 60%, 70% 또는 77% 초과 중 어느 하나의 임상 이익을 발생시키기에 충분하다.
일부 실시양태에서, 조성물, 제1 요법, 제2 요법 또는 조합 요법의 양은 치료 전 동일한 대상체에서의 상응하는 종양 크기, 암 세포 수 또는 종양 성장 속도와 비교하여 또는 치료를 수용하지 않은 다른 대상체에서의 상응하는 활동도와 비교하여 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 중 어느 하나만큼 종양의 크기를 줄이거나, 암 세포 수를 줄이거나, 또는 종양의 성장 속도를 줄이기에 충분한 양이다. 표준 방법, 예컨대 정제된 효소를 사용하는 시험관내 검정, 세포-기반 검정, 동물 모델 또는 인간 시험이 이러한 효과의 크기를 측정하는데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 양은 독성학적 효과 (즉, 독성의 임상적으로 허용되는 수준을 초과한 효과)를 유도하는 수준 미만이거나 또는 조성물이 개체에게 투여될 때 잠재적 부작용이 제어되거나 또는 용인될 수 있는 수준이다.
일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 양은 하기 범위 중 어느 하나에 포함된다: 약 0.1 mg 내지 약 500 mg, 약 0.1 mg 내지 약 2.5 mg, 약 0.5 내지 약 5 mg, 약 5 내지 약 10 mg, 약 10 내지 약 15 mg, 약 15 내지 약 20 mg, 약 20 내지 약 25 mg, 약 20 내지 약 50 mg, 약 25 내지 약 50 mg, 약 50 내지 약 75 mg, 약 50 내지 약 100 mg, 약 75 내지 약 100 mg, 약 100 내지 약 125 mg, 약 125 내지 약 150 mg, 약 150 내지 약 175 mg, 약 175 내지 약 200 mg, 약 200 내지 약 225 mg, 약 225 내지 약 250 mg, 약 250 내지 약 300 mg, 약 300 내지 약 350 mg, 약 350 내지 약 400 mg, 약 400 내지 약 450 mg, 또는 약 450 내지 약 500 mg. 일부 실시양태에서, 조성물 (예를 들어, 단위 투여 형태)의 유효량 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 양은 약 5 mg 내지 약 500 mg, 예컨대 약 30 mg 내지 약 300 mg 또는 약 50 mg 내지 약 200 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 농도는 희석 (약 0.1 mg/ml) 또는 농축 (약 100 mg/ml)된 것이며, 예컨대 예를 들어 약 0.1 내지 약 50 mg/ml, 약 0.1 내지 약 20 mg/ml, 약 1 내지 약 10 mg/ml, 약 2 mg/ml 내지 약 8 mg/ml, 약 4 내지 약 6 mg/ml, 또는 약 5 mg/ml 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 농도는 적어도 약 0.5 mg/ml, 1.3 mg/ml, 1.5 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 15 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml 또는 50 mg/ml 중 어느 하나이다.
조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 예시적인 유효량은 적어도 약 25 mg/m2, 30 mg/m2, 50 mg/m2, 60 mg/m2, 75 mg/m2, 80 mg/m2, 90 mg/m2, 100 mg/m2, 120 mg/m2, 125 mg/m2, 150 mg/m2, 160 mg/m2, 175 mg/m2, 180 mg/m2, 200 mg/m2, 210 mg/m2, 220 mg/m2, 250 mg/m2, 260 mg/m2, 300 mg/m2, 350 mg/m2, 400 mg/m2, 500 mg/m2, 540 mg/m2, 750 mg/m2, 1000 mg/m2 또는 1080 mg/m2의 소수성 약물 중 어느 하나를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다양한 실시양태에서, 조성물은 약 350 mg/m2, 300 mg/m2, 250 mg/m2, 200 mg/m2, 150 mg/m2, 120 mg/m2, 100 mg/m2, 90 mg/m2, 50 mg/m2 또는 30 mg/m2 미만의 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀) 중 어느 하나를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여당 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 양은 약 25 mg/m2, 22 mg/m2, 20 mg/m2, 18 mg/m2, 15 mg/m2, 14 mg/m2, 13 mg/m2, 12 mg/m2, 11 mg/m2, 10 mg/m2, 9 mg/m2, 8 mg/m2, 7 mg/m2, 6 mg/m2, 5 mg/m2, 4 mg/m2, 3 mg/m2, 2 mg/m2 또는 1 mg/m2 미만 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 유효량은 하기 범위 중 어느 하나에 포함된다: 약 1 내지 약 5 mg/m2, 약 5 내지 약 10 mg/m2, 약 10 내지 약 25 mg/m2, 약 25 내지 약 50 mg/m2, 약 50 내지 약 75 mg/m2, 약 75 내지 약 100 mg/m2, 약 100 내지 약 125 mg/m2, 약 125 내지 약 150 mg/m2, 약 150 내지 약 175 mg/m2, 약 175 내지 약 200 mg/m2, 약 200 내지 약 225 mg/m2, 약 225 내지 약 250 mg/m2, 약 250 내지 약 300 mg/m2, 약 300 내지 약 350 mg/m2, 또는 약 350 내지 약 400 mg/m2. 일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 유효량은 약 5 내지 약 300 mg/m2, 예컨대 약 100 내지 약 150 mg/m2, 약 120 mg/m2, 약 130 mg/m2 또는 약 140 mg/m2이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 유효량은 적어도 약 1 mg/kg, 2.5 mg/kg, 3.5 mg/kg, 5 mg/kg, 6.5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg 또는 60 mg/kg 중 어느 하나를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 유효량은 약 350 mg/kg, 300 mg/kg, 250 mg/kg, 200 mg/kg, 150 mg/kg, 100 mg/kg, 50 mg/kg, 25 mg/kg, 20 mg/kg, 10 mg/kg, 7.5 mg/kg, 6.5 mg/kg, 5 mg/kg, 3.5 mg/kg, 2.5 mg/kg 또는 1 mg/kg 미만의 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀) 중 어느 하나를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 양은 하기 범위 중 어느 하나에 포함된다: 약 0.1 mg 내지 약 500 mg, 약 0.1 mg 내지 약 2.5 mg, 약 0.5 내지 약 5 mg, 약 5 내지 약 10 mg, 약 10 내지 약 15 mg, 약 15 내지 약 20 mg, 약 20 내지 약 25 mg, 약 20 내지 약 50 mg, 약 25 내지 약 50 mg, 약 50 내지 약 75 mg, 약 50 내지 약 100 mg, 약 75 내지 약 100 mg, 약 100 내지 약 125 mg, 약 125 내지 약 150 mg, 약 150 내지 약 175 mg, 약 175 내지 약 200 mg, 약 200 내지 약 225 mg, 약 225 내지 약 250 mg, 약 250 내지 약 300 mg, 약 300 내지 약 350 mg, 약 350 내지 약 400 mg, 약 400 내지 약 450 mg, 또는 약 450 내지 약 500 mg. 일부 실시양태에서, 조성물 (예를 들어, 단위 투여 형태)의 유효량 중 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 양은 약 5 mg 내지 약 500 mg, 예컨대 약 30 mg 내지 약 300 mg 또는 약 50 mg 내지 약 200 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 농도는 희석 (약 0.1 mg/ml) 또는 농축 (약 100 mg/ml)된 것이며, 예컨대 예를 들어 약 0.1 내지 약 50 mg/ml, 약 0.1 내지 약 20 mg/ml, 약 1 내지 약 10 mg/ml, 약 2 mg/ml 내지 약 8 mg/ml, 약 4 내지 약 6 mg/ml, 또는 약 5 mg/ml 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 농도는 적어도 약 0.5 mg/ml, 1.3 mg/ml, 1.5 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 15 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml 또는 50 mg/ml 중 어느 하나이다.
조성물 중 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 예시적인 유효량은 적어도 약 25 mg/m2, 30 mg/m2, 50 mg/m2, 60 mg/m2, 75 mg/m2, 80 mg/m2, 90 mg/m2, 100 mg/m2, 120 mg/m2, 125 mg/m2, 150 mg/m2, 160 mg/m2, 175 mg/m2, 180 mg/m2, 200 mg/m2, 210 mg/m2, 220 mg/m2, 250 mg/m2, 260 mg/m2, 300 mg/m2, 350 mg/m2, 400 mg/m2, 500 mg/m2, 540 mg/m2, 750 mg/m2, 1000 mg/m2 또는 1080 mg/m2의 생물활성 폴리펩티드 중 어느 하나를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다양한 실시양태에서, 조성물은 약 350 mg/m2, 300 mg/m2, 250 mg/m2, 200 mg/m2, 150 mg/m2, 120 mg/m2, 100 mg/m2, 90 mg/m2, 50 mg/m2 또는 30 mg/m2 미만의 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체) 중 어느 하나를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여당 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 양은 약 25 mg/m2, 22 mg/m2, 20 mg/m2, 18 mg/m2, 15 mg/m2, 14 mg/m2, 13 mg/m2, 12 mg/m2, 11 mg/m2, 10 mg/m2, 9 mg/m2, 8 mg/m2, 7 mg/m2, 6 mg/m2, 5 mg/m2, 4 mg/m2, 3 mg/m2, 2 mg/m2 또는 1 mg/m2 미만 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 유효량은 하기 범위 중 어느 하나에 포함된다: 약 1 내지 약 5 mg/m2, 약 5 내지 약 10 mg/m2, 약 10 내지 약 25 mg/m2, 약 25 내지 약 50 mg/m2, 약 50 내지 약 75 mg/m2, 약 75 내지 약 100 mg/m2, 약 100 내지 약 125 mg/m2, 약 125 내지 약 150 mg/m2, 약 150 내지 약 175 mg/m2, 약 175 내지 약 200 mg/m2, 약 200 내지 약 225 mg/m2, 약 225 내지 약 250 mg/m2, 약 250 내지 약 300 mg/m2, 약 300 내지 약 350 mg/m2, 또는 약 350 내지 약 400 mg/m2. 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 유효량은 약 5 내지 약 300 mg/m2, 예컨대 약 100 내지 약 150 mg/m2, 약 120 mg/m2, 약 130 mg/m2 또는 약 140 mg/m2이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 유효량은 적어도 약 1 mg/kg, 2.5 mg/kg, 3.5 mg/kg, 5 mg/kg, 6.5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg 또는 60 mg/kg 중 어느 하나를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드 (예를 들어, 치료 항체)의 유효량은 약 350 mg/kg, 300 mg/kg, 250 mg/kg, 200 mg/kg, 150 mg/kg, 100 mg/kg, 50 mg/kg, 25 mg/kg, 20 mg/kg, 10 mg/kg, 7.5 mg/kg, 6.5 mg/kg, 5 mg/kg, 3.5 mg/kg, 2.5 mg/kg 또는 1 mg/kg 미만의 생물활성 폴리펩티드 중 어느 하나를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물의 비-나노입자 부분과 회합된, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 양은 치료될 질환 (예컨대 암) 및/또는 개체에 대해 최적화된다. 일부 실시양태에서, 조성물의 나노입자 부분과 회합된, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 양은 치료될 질환 (예컨대 암) 및/또는 개체에 대해 최적화된다.
일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 및 생물활성 폴리펩티드의 비는 치료될 질환 (예컨대 암) 및/또는 개체에 대해 최적화된다.
일부 실시양태에서, 조성물의 양은 동일한 투여 요법에 따른 조성물의 최대 허용 용량 (MTD)에 근접한다. 일부 실시양태에서, 조성물의 양은 MTD의 약 80%, 90%, 95% 또는 98% 초과 중 어느 하나이다.
본원에 기재된 조성물의 투여를 위한 예시적인 투여 빈도는 매일, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 중단 없이 매주, 4주 중 3주, 3주마다 1회, 2주마다 1회, 또는 3주 중 2주를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 6주마다 1회, 또는 8주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 1주에 적어도 약 1x, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 또는 7x (즉, 매일) 중 어느 하나로 투여된다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이의 간격은 약 6개월, 3개월, 1개월, 20일, 15일, 14일, 13일, 12일, 11일, 10일, 9일, 8일, 7일, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일, 또는 1일 미만 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이의 간격은 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 8개월, 또는 12개월 초과 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 투여 스케줄에 중단은 없다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이의 간격은 약 1주 이하이다.
일부 실시양태에서, 투여 빈도는 1차, 2차, 3차, 4차, 5차, 6차, 7차, 8차, 9차, 10차 및 11차 동안 2일마다 1회이다. 일부 실시양태에서, 투여 빈도는 5차 동안 2일마다 1회이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 적어도 10일의 기간에 걸쳐 투여되며, 여기서 각각의 투여 사이의 간격은 약 2일 이하이고, 여기서 각각의 투여에서의 조성물의 용량은, 조성물 중 소수성 약물의 양에 의해 측정 시, 약 0.25 mg/m2 내지 약 250 mg/m2, 약 0.25 mg/m2 내지 약 150 mg/m2, 약 0.25 mg/m2 내지 약 75 mg/m2, 예컨대 약 0.25 mg/m2 내지 약 25 mg/m2, 또는 약 25 mg/m2 내지 약 50 mg/m2이다.
조성물의 투여는 연장된 시간 기간, 예컨대 약 1개월 내지 약 7년에 걸쳐 연장될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 30, 36, 48, 60, 72 또는 84개월 중 어느 하나의 기간에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 조성물 중 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 투여량은 3주 스케줄로 제공될 때 5-400 mg/m2 또는 매주 스케줄로 제공될 때 5-250 mg/m2 (예컨대 80-150 mg/m2, 예를 들어 100-120 mg/m2)의 범위일 수 있다. 예를 들어, 소수성 약물 (예를 들어, 탁산 예컨대 파클리탁셀)의 양은 3주 스케줄로 약 60 내지 약 300 mg/m2 (예를 들어, 약 260 mg/m2)이다.
조성물의 투여를 위한 다른 예시적인 투여 스케줄은, 조성물 중 소수성 약물의 양에 의해 측정 시, 중단 없이 매주 100 mg/m2; 4주 중 3주로 매주 75 mg/m2, 4주 중 3주로 매주 100 mg/m2; 4주 중 3주로 매주 125 mg/m2; 3주 중 2주로 매주 125 mg/m2; 중단 없이 매주 130 mg/m2; 2주마다 1회로 175 mg/m2; 2주마다 1회로 260 mg/m2; 3주마다 1회로 260 mg/m2; 3주마다 180-300 mg/m2; 중단 없이 매주 60-175 mg/m2; 1주 2회로 20-150 mg/m2; 및 1주 2회로 150-250 mg/m2을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
나노입자 조성물의 투여 빈도는 투여하는 의사의 판단에 기초하여 치료 동안 조정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 개체는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회의 치료 사이클 중 어느 하나 동안 치료된다.
본원에 기재된 조성물은 약 24시간보다 짧은 주입 시간에 걸쳐 개체에게 조성물을 주입하는 것을 가능하게 한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 조성물은 약 24시간, 12시간, 8시간, 5시간, 3시간, 2시간, 1시간, 30분, 20분 또는 10분 미만 중 어느 하나의 주입 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 30분의 주입 기간에 걸쳐 투여된다.
조성물 중 소수성 약물의 다른 예시적인 용량은, 조성물 중 소수성 약물의 양에 의해 측정 시, 약 50 mg/m2, 60 mg/m2, 75 mg/m2, 80 mg/m2, 90 mg/m2, 100 mg/m2, 120 mg/m2, 160 mg/m2, 175 mg/m2, 200 mg/m2, 210 mg/m2, 220 mg/m2, 260 mg/m2, 및 300 mg/m2 중 어느 하나를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 조성물 중 파클리탁셀의 투여량은 3주 스케줄로 제공될 때 약 100-400 mg/m2 또는 매주 스케줄로 제공될 때 약 50-250 mg/m2의 범위일 수 있다.
본원에 기재된 조성물은 다양한 경로를 통해, 예컨대, 예를 들어, 정맥내로, 동맥내로, 복강내로, 소포내로, 피하로, 척수강내로, 폐내로, 근육내로, 기관내로, 안구내로, 경피로, 피내로, 경구로, 문맥내로, 간내로, 간 동맥 주입 또는 흡입에 의해 개체 (예컨대 인간)에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물의 지속적인 연속 방출 제제가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 문맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 동맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 복강내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 간내로 투여된다.
조합 치료의 투여 방식
본원에 기재된 조성물의 투여 요법은 단독요법 및 조합 치료 설정 둘 다에 적용된다. 조합 요법 방법을 위한 투여 방식이 하기에 추가로 기재된다.
일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제 (본원에 기재된 특정한 화학요법제 포함)는 동시에 투여된다. 약물이 동시에 투여되는 경우에, 조성물 중의 약물 및 다른 치료제는 동일한 조성물 (예를 들어, 나노입자 조성물 및 다른 치료제 둘 다를 포함하는 조성물)에 또는 별개의 조성물에 (예를 들어, 조성물 및 다른 치료제가 별개의 조성물에 함유됨) 함유될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제는 순차적으로 투여된다. 조성물 또는 다른 치료제가 먼저 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제는 별개의 조성물에 함유되며, 이는 동일하거나 상이한 패키지에 함유될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제의 투여는 공동 투여이며, 즉 조성물의 투여 기간과 다른 치료제의 투여 기간이 서로 중복된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 다른 치료제의 투여 전에 적어도 1회의 사이클 (예를 들어, 적어도 2, 3 또는 4회의 사이클 중 어느 하나) 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 적어도 1, 2, 3 또는 4주 중 어느 하나 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제의 투여는 거의 동시에 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일 중 어느 하나 이내에) 개시된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제의 투여는 거의 동시에 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일 중 어느 하나 이내에) 종료된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제의 투여는 조성물의 투여의 종료 후에 계속된다 (예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 중 어느 하나 동안). 일부 실시양태에서, 다른 치료제의 투여는 조성물의 투여의 개시 후에 (예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 중 어느 하나 후에) 개시된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제의 투여는 거의 동시에 개시되고 종료된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제의 투여는 거의 동시에 개시되고, 다른 치료제의 투여가 조성물의 투여의 종료 후에 계속된다 (예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 중 어느 하나 동안). 일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제의 투여는 거의 동시에 중지되고, 다른 치료제의 투여가 조성물의 투여의 개시 후에 (예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 중 어느 하나 후에) 개시된다.
일부 실시양태에서, 조성물 및 다른 치료제의 투여는 비-공동 투여이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 조성물의 투여는 다른 치료제가 투여되기 전에 종료된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제의 투여는 조성물이 투여되기 전에 종료된다. 이들 두 비-공동 투여 사이의 시간 기간은 약 2 내지 8주의 범위, 예컨대 약 4주일 수 있다.
조성물 및 다른 치료제의 투여 빈도는 투여하는 의사의 판단에 기초하여 치료 동안 조정될 수 있다. 별개로 투여되는 경우에, 조성물 및 다른 치료제는 상이한 투여 빈도 또는 간격으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 매주 투여될 수 있으며, 한편 또 다른 작용제는 보다 더 빈번하게 또는 보다 덜 빈번하게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 및/또는 다른 작용제의 지속적인 연속 방출 제제가 사용될 수 있다. 지속 방출을 달성하기 위한 다양한 제제 및 장치가 관련 기술분야에 공지되어 있다. 본원에 기재된 투여 구성의 조합이 또한 사용될 수 있다.
조성물 및 다른 치료제는 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 사용하여 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서 (동시 및 순차적 투여 둘 다), 조성물 및 다른 치료제는 미리 결정된 비로 투여된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 조성물 중의 소수성 약물 및 다른 치료제의 중량비는 약 1 대 1이다. 일부 실시양태에서, 상기 중량비는 약 0.001 대 약 1 내지 약 1000 대 약 1, 또는 약 0.01 대 약 1 내지 100 대 약 1일 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 중의 소수성 약물 및 다른 치료제의 중량비는 약 100:1, 50:1, 30:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 및 1:1 미만 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 조성물 중의 소수성 약물 및 다른 치료제의 중량비는 약 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 30:1, 50:1, 100:1 초과 중 어느 하나이다. 다른 비도 고려된다.
소수성 약물, 생물활성 폴리펩티드 및/또는 다른 치료제에 대해 요구되는 용량은, 각각의 작용제가 단독으로 투여되는 경우에 또는 생물활성 폴리펩티드가 소수성 약물 나노입자 조성물의 일부가 아닌 경우에 정상적으로 요구되는 것보다 더 적을 수 있다 (반드시 그러한 것은 아님). 따라서, 일부 실시양태에서, 조성물 중의 소수성 약물 및/또는 다른 치료제의 치료량 미만이 투여된다. "치료량 미만" 또는 "치료 수준 미만"은 치료량보다 적은, 즉 조성물 중의 소수성 약물 및/또는 생물활성 폴리펩티드 및/또는 다른 치료제가 단독으로 투여되는 경우에 정상적으로 사용되는 양보다 적은 양을 지칭한다. 감소는 주어진 투여에서 투여되는 양 및/또는 주어진 시간 기간에 걸쳐 투여되는 양의 관점에서 반영될 수 있다 (감소된 빈도).
일부 실시양태에서, 다른 화학요법제는 동일한 치료 정도를 발생시키기 위해 요구되는 조성물 중의 소수성 약물 및/또는 생물활성 폴리펩티드의 정상 용량의 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과 중 어느 하나만큼의 감소가 가능하도록 투여된다. 일부 실시양태에서, 동일한 치료 정도를 발생시키기 위해 요구되는 다른 치료제의 정상 용량의 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과 중 어느 하나만큼의 감소가 가능하도록 하는 조성물 중의 충분한 소수성 약물 및/또는 생물활성 폴리펩티드가 투여된다.
일부 실시양태에서, 조성물 중의 소수성 약물 및/또는 생물활성 폴리펩티드 및 다른 치료제 둘 다의 용량은 단독으로 투여되는 경우의 각각의 상응하는 정상 용량과 비교하여 감소된다. 일부 실시양태에서, 조성물 중의 소수성 약물 및/또는 생물활성 폴리펩티드 및 다른 치료제 둘 다는 치료 수준 미만, 즉 감소된 수준으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및/또는 다른 치료제의 용량은 확립된 최대 독성 용량 (MTD)보다 실질적으로 적다. 예를 들어, 나노입자 조성물 및/또는 다른 치료제의 용량은 MTD의 약 50%, 40%, 30%, 20% 또는 10% 미만이다.
본원에 기재된 투여 구성의 조합이 사용될 수 있다. 본원에 기재된 조합 요법 방법은 단독으로 또는 또 다른 요법, 예컨대 화학요법, 방사선 요법, 수술, 호르몬 요법, 유전자 요법, 면역요법, 화학면역요법, 간 동맥-기반 요법, 동결요법, 초음파 요법, 간 이식, 국부 절제 요법, 고주파 절제 요법, 광역학 요법 등과 함께 수행될 수 있다. 추가적으로, 질환 (예컨대 암)의 보다 큰 발병 위험을 갖는 사람은 질환의 발병을 억제하고/거나 지연시키는 치료를 받을 수 있다.
본원에 기재된 다른 치료제는 다양한 경로를 통해, 예컨대 비경구로, 예컨대 정맥내, 동맥내, 복강내, 폐내, 경구, 흡입, 소포내, 근육내, 기관내, 피하, 안구내, 척수강내, 또는 경피를 통해 개체 (예컨대 인간)에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 나노입자 조성물은 경구로 투여된다.
다른 치료제의 투여 빈도는 조성물의 투여 빈도와 동일하거나 상이할 수 있다. 예시적인 빈도는 상기에 제공되어 있다. 추가의 예로, 다른 치료제는 1일 3회, 1일 2회, 매일, 1주 6회, 1주 5회, 1주 4회, 1주 3회, 1주 2회, 매주 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 1일 2회 또는 1일 3회 투여된다. 다른 치료제의 예시적인 양은 하기 범위 중 어느 하나를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 약 1 내지 약 2000 mg, 약 500 내지 약 1500 mg, 약 700 내지 약 1200 mg, 약 800 내지 약 1000 mg, 약 0.5 내지 약 5 mg, 약 5 내지 약 10 mg, 약 10 내지 약 15 mg, 약 15 내지 약 20 mg, 약 20 내지 약 25 mg, 약 20 내지 약 50 mg, 약 25 내지 약 50 mg, 약 50 내지 약 75 mg, 약 50 내지 약 100 mg, 약 75 내지 약 100 mg, 약 100 내지 약 125 mg, 약 125 내지 약 150 mg, 약 150 내지 약 175 mg, 약 175 내지 약 200 mg, 약 200 내지 약 225 mg, 약 225 내지 약 250 mg, 약 250 내지 약 300 mg, 약 300 내지 약 350 mg, 약 350 내지 약 400 mg, 약 400 내지 약 450 mg, 또는 약 450 내지 약 500 mg. 예를 들어, 다른 치료제는 약 1 mg/kg 내지 약 200 mg/kg (예컨대 예를 들어 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 40 mg/kg 내지 약 60 mg/kg, 약 60 mg/kg 내지 약 80 mg/kg, 약 80 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 약 100 mg/kg 내지 약 120 mg/kg, 약 120 mg/kg 내지 약 140 mg/kg, 약 140 mg/kg 내지 약 200 mg/kg)의 용량으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 백금-기반 작용제가 투여되는 경우에, 다른 치료제는 약 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1 AUC 미만의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 AUC의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 약 4 AUC의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 약 5 AUC의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 약 6 AUC의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 약 4 내지 약 7 AUC, 약 5 내지 약 6 AUC, 약 3 내지 약 6 AUC, 약 4 내지 약 5 AUC, 또는 약 5 내지 약 7 AUC의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 다른 치료제의 적절한 용량은 대략적으로 임상 요법에서 이미 이용된 것들이며, 여기서 다른 치료제는 단독으로 또는 다른 치료제와 조합되어 투여된다.
제약 조성물 및 단위 투여량
본원에 기재된 조성물은 본원에 기재된 치료 방법, 투여 방법 및 투여 요법에서의 사용을 위해, 본원에 기재된 조성물을 관련 기술분야에 공지된 제약상 허용되는 담체, 부형제, 안정화제 및/또는 다른 작용제와 조합함으로써, 제약 조성물 또는 제제로 사용될 수 있다. 본원에 기재된 조성물의 단위 투여량이 추가로 제공된다.
일부 실시양태에서, 알부민은 조성물을 유의한 부작용 없이 개체 (예컨대 인간)에게 투여하는 것을 가능하게 한다. 일부 실시양태에서, 알부민 (예컨대 인간 혈청 알부민)은 개체 (예컨대 인간)에게 소수성 약물 또는 생물활성 폴리펩티드를 투여하는 것의 1종 이상의 부작용을 감소시키기에 효과적인 양으로 존재한다. "투여의 1종 이상의 부작용을 감소시키는"이라는 용어는 작용제, 예컨대 소수성 약물 또는 생물활성 폴리펩티드의 투여에 의해 유발되는 1종 이상의 바람직하지 않은 효과, 뿐만 아니라 전달을 위해 사용된 전달 비히클 (예컨대 작용제를 주사에 적합하게 만드는 계면활성제 및 용매)에 의해 유발되는 부작용의 감소, 완화, 제거 또는 회피를 지칭한다. 이러한 부작용은, 예를 들어, 골수억제, 신경독성, 과민성, 염증, 정맥 자극, 정맥염, 통증, 피부 자극, 말초 신경병증, 호중구감소성 발열, 아나필락시스성 반응, 정맥 혈전증, 혈관외유출 및 그의 조합을 포함한다. 그러나, 이들 부작용은 단지 예시적일 뿐이며, 소수성 약물 및/또는 생물활성 폴리펩티드와 연관된 다른 부작용 또는 부작용의 조합이 감소될 수 있다.
본원에 기재된 조성물은 건조 제제 (예컨대 동결건조된 조성물)로 존재하거나 또는 생체적합성 매질에 현탁될 수 있다. 적합한 생체적합성 매질은 물, 완충된 수성 매질, 염수, 완충된 염수, 임의적으로 완충된 아미노산 용액, 임의적으로 완충된 단백질 용액, 임의적으로 완충된 당 용액, 임의적으로 완충된 비타민 용액, 임의적으로 완충된 합성 중합체 용액, 지질-함유 에멀젼 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 조성물은 밀봉된 바이알에 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 밀봉된 바이알은 단회 사용을 위한 것이다. 일부 실시양태에서, 밀봉된 바이알은 다회 사용을 위한 것이다.
본원에 기재된 조성물 및 제제를 포함하는 단위 투여 형태가 또한 제공된다. 이들 단위 투여 형태는 단일 또는 다중 단위 투여량으로 적합한 패키징에 저장될 수 있으며, 또한 추가로 멸균되고 밀봉될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 (예컨대 제약 조성물)은 또한 암을 치료하는데 유용한 1종 이상의 다른 화합물 (또는 그의 제약상 허용되는 염)을 포함한다. 다양한 변형예에서, 조성물 중 소수성 약물의 양은 하기 범위 중 어느 하나에 포함된다: 약 5 내지 약 50 mg, 약 20 내지 약 50 mg, 약 50 내지 약 100 mg, 약 100 내지 약 125 mg, 약 125 내지 약 150 mg, 약 150 내지 약 175 mg, 약 175 내지 약 200 mg, 약 200 내지 약 225 mg, 약 225 내지 약 250 mg, 약 250 내지 약 300 mg, 약 300 내지 약 350 mg, 약 350 내지 약 400 mg, 약 400 내지 약 450 mg, 또는 약 450 내지 약 500 mg. 일부 실시양태에서, 조성물 (예를 들어, 투여량 또는 단위 투여 형태) 중 소수성 약물의 양은 약 5 mg 내지 약 500 mg, 예컨대 약 30 mg 내지 약 300 mg 또는 약 50 mg 내지 약 200 mg의 유도체의 범위이다. 일부 실시양태에서, 담체는 비경구 투여 (예를 들어, 정맥내 투여)에 적합하다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물 (예컨대 제약 조성물) 중 어느 하나를 포함하는, 암의 치료를 위한 투여 형태 (예를 들어, 단위 투여 형태)가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법, 투여 방법 및 투여 요법에서의 사용을 위한, 적합한 패키징 내의 본원에 기재된 조성물, 제제 및 단위 투여량을 포함하는 제조 물품이 제공된다. 본원에 기재된 조성물을 위한 적합한 패키징은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 바이알 (예컨대 밀봉된 바이알), 용기 (예컨대 밀봉된 용기), 앰플, 병, 통, 가요성 패키징 (예를 들어, 밀봉된 마일라 또는 플라스틱 백) 등을 포함한다. 이들 제조 물품은 추가로 멸균되고/거나 밀봉될 수 있다.
키트, 의약, 약제 및 조성물
본 발명은 또한 본원에 기재된 임의의 방법에 사용하기 위한 키트, 의약, 약제 및 조성물을 제공한다.
본 발명의 키트는 본원에 기재된 조성물 또는 조성물들 (또는 단위 투여 형태 및/또는 제조 물품) 및/또는 또 다른 치료제 (예컨대 본원에 기재된 작용제)를 포함하는 1개 이상의 용기를 포함하며, 일부 실시양태에서 본원에 기재된 임의의 방법에 따른 사용에 대한 지침서를 추가로 포함한다. 키트는 적합한 개체의 선택 또는 치료에 관한 설명을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 키트에 공급된 지침서는 전형적으로 라벨 또는 패키지 삽입물 (예를 들어, 키트에 포함된 인쇄지) 상의 서면 지침서이지만, 기계-판독가능한 지침서 (예를 들어, 자기 또는 광학 저장 디스크 상에 담긴 지침서)가 또한 허용된다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 키트는 하기를 포함한다: (1) (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물; 및 (2) 질환 (예컨대 암)의 치료를 위해 조성물을 투여하는 것에 대한 지침서. 일부 실시양태에서, 키트는 하기를 포함한다: (1) (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물; (2) 또 다른 치료제의 유효량; 및 (3) 질환 (예컨대 암)의 치료를 위해 조성물 및 다른 치료제를 투여하는 것에 대한 지침서. 조성물(들) 및 다른 치료제(들)는 별개의 용기에 또는 단일 용기에 존재할 수 있다.
본 발명의 키트는 적합한 패키징 내에 있다. 적합한 패키징은 바이알, 병, 통, 가요성 패키징 (예를 들어, 밀봉된 마일라 또는 플라스틱 백) 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 키트는 임의적으로 추가의 구성요소 예컨대 완충제 및 해석상의 정보를 제공할 수 있다. 따라서, 본 출원은 또한 바이알 (예컨대 밀봉된 바이알), 병, 통, 가요성 패키징 등을 포함하는 제조 물품을 제공한다.
본원에 기재된 조성물의 사용에 관한 지침서는 일반적으로 의도된 치료를 위한 투여량, 투여 스케줄 및 투여 경로에 대한 정보를 포함한다. 용기는 단위 용량, 벌크 패키지 (예를 들어, 다중-용량 패키지) 또는 단위 용량 미만일 수 있다. 예를 들어, 연장된 기간, 예컨대 1주, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 2주, 3주, 4주, 6주, 8주, 3개월, 4개월, 5개월, 7개월, 8개월, 9개월 또는 그 초과 중 어느 하나 동안 개체의 유효 치료를 제공하기에 충분한 투여량의 본원에 개시된 바와 같은 조성물을 함유하는 키트가 제공될 수 있다. 키트는 또한 본원에 기재된 조성물의 다중 단위 용량 및 사용에 대한 지침서를 포함하며, 약국, 예를 들어, 병원 약국 및 조제 약국에서의 저장 및 사용에 충분한 양으로 패키징될 수 있다.
본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 의약, 약제, 조합 및 조성물이 또한 제공된다. 일부 실시양태에서, (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는, 질환 (예컨대 암)을 치료하는데 사용하기 위한 의약 (또는 조성물)이 제공된다. 일부 실시양태에서, (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는, 질환 (예컨대 암)을 치료하는데 사용하기 위한 의약 (또는 조성물)으로서, 추가로, 또 다른 치료제와 함께 투여되는 의약 (또는 조성물)이 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체의 질환 (예컨대 암)에 대한 약제의 제조에서의, (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물의 용도가 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체의 질환 (예컨대 암)에 대한 약제의 제조에서의, (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물의 용도로서, 여기서 약제는 추가로 또 다른 치료제와 함께 투여되는 것인 용도가 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체의 질환 (예컨대 암)에 대한 약제 조합의 제조에서의, (1) (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물, 및 (2) 또 다른 치료제의 용도가 제공된다. 일부 실시양태에서, 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 질환 (예컨대 암)을 치료하는데 사용하기 위한, (1) (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물, 및 (2) 또 다른 치료제를 포함하는 조합이 제공된다.
관련 기술분야의 통상의 기술자라면 여러 실시양태가 본 발명의 범주 및 취지 내에서 가능하다는 것을 인식할 것이다. 본 발명은 이제 하기 비제한적 실시예를 참조하여 더욱 상세히 기재될 것이다. 하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시하지만, 당연히 어떠한 방식으로도 그의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
예시적 실시양태
하기 예시적 실시양태는 단지 예시 목적을 위한 것이며, 본 발명의 범주를 제한하도록 의도되지 않는다.
실시양태 1. (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 알부민에 접합되는 것인 조성물.
실시양태 3. 실시양태 2에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 알부민에 공유적으로 가교되는 것인 조성물.
실시양태 4. 실시양태 3에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 화학적 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 가교되는 것인 조성물.
실시양태 5. 실시양태 3에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 디술피드 결합을 통해 알부민에 공유적으로 가교되는 것인 조성물.
실시양태 6. 실시양태 2에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 비-공유 가교제를 통해 알부민에 접합되는 것인 조성물.
실시양태 7. 실시양태 6에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 비-공유 가교제의 제1 구성요소를 포함하고 알부민이 비-공유 가교제의 제2 구성요소를 포함하며, 여기서 제1 구성요소는 제2 구성요소에 특이적으로 결합하는 것인 조성물.
실시양태 8. 실시양태 7에 있어서, 비-공유 가교제가 핵산 분자를 포함하며, 여기서 핵산 분자의 적어도 일부는 상보적인 조성물.
실시양태 9. 실시양태 1-8 중 어느 하나에 있어서, 나노입자가 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하는 것인 조성물.
실시양태 10. 실시양태 1 또는 9에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 소수성 약물의 고체 코어의 표면과 회합되는 것인 조성물.
실시양태 11. 실시양태 9 또는 10에 있어서, 생물활성 폴리펩티드의 일부가 소수성 약물의 고체 코어에 매립되는 것인 조성물.
실시양태 12. 실시양태 1-11 중 어느 하나에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 나노입자 상의 알부민과 회합되는 것인 조성물.
실시양태 13. 실시양태 12에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 나노입자의 표면에 매립되는 것인 조성물.
실시양태 14. 실시양태 12 또는 13에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 나노입자 상의 알부민과 비-공유적으로 회합되는 것인 조성물.
실시양태 15. 실시양태 12-14 중 어느 하나에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 나노입자 상의 알부민과 공유적으로 회합되는 것인 조성물.
실시양태 16. 실시양태 1-15 중 어느 하나에 있어서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 적어도 75%가 나노입자와 회합되는 것인 조성물.
실시양태 17. 실시양태 1-16 중 어느 하나에 있어서, 나노입자가 적어도 약 100의 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 것인 조성물.
실시양태 18. 실시양태 1-17 중 어느 하나에 있어서, 조성물 중 나노입자 내 소수성 약물 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비가 약 1:1 내지 약 100:1인 조성물.
실시양태 19. 실시양태 1-18 중 어느 하나에 있어서, 나노입자 내 알부민 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비가 약 1:1 내지 약 1000:1인 조성물.
실시양태 20. 실시양태 18 또는 19에 있어서,
소수성 약물의 중량이 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 결정되고, 생물활성 폴리펩티드 및 알부민의 중량이 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정되거나; 또는
소수성 약물의 중량이 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 결정되고, 알부민의 중량이 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정되고, 생물활성 폴리펩티드의 중량이 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정되는 것인
조성물.
실시양태 21. 실시양태 1-20 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드를 추가로 포함하는 것인 조성물.
실시양태 22. 실시양태 1-21 중 어느 하나에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 항체 또는 그의 단편인 조성물.
실시양태 23. 실시양태 22에 있어서, 항체 또는 그의 단편이 종양-연관 항원과 특이적으로 결합하는 것인 조성물.
실시양태 24. 실시양태 22 또는 23에 있어서, 항체 또는 그의 단편이 전장 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체, CDR-이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디술피드 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체 (dAb), 디아바디, 다중특이적 항체, 이중 특이적 항체, 항-이디오타입 항체, 이특이적 항체, 그의 기능적 활성 에피토프-결합 단편, 이중기능적 하이브리드 항체, 및 단일 쇄 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
실시양태 25. 실시양태 24에 있어서, 항체 또는 그의 단편이 Fc 단편인 조성물.
실시양태 26. 실시양태 1-13 중 어느 하나에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 베바시주맙, 트라스투주맙, BGB-A317, 또는 토실리주맙인 조성물.
실시양태 27. (a) 소수성 약물, 및 (b) 가교제 모이어티로 유도체화된 알부민을 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물.
실시양태 28. 실시양태 27에 있어서, 나노입자가 알부민으로 코팅된 소수성 약물의 고체 코어를 포함하는 것인 조성물.
실시양태 29. 실시양태 1-19 중 어느 하나에 있어서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 소수성 약물의 중량비가 약 1:1 내지 약 20:1인 조성물.
실시양태 30. 실시양태 29에 있어서, 소수성 약물의 중량이 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 결정되고, 알부민의 중량이 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정되는 것인 조성물.
실시양태 31. 실시양태 1-30 중 어느 하나에 있어서, 조성물의 나노입자 부분 내 알부민의 적어도 약 40%가 디술피드 결합에 의해 가교되는 것인 조성물.
실시양태 32. 실시양태 1-31 중 어느 하나에 있어서, 나노입자의 평균 직경이 동적 광 산란에 의해 측정 시 약 200 nm 이하인 조성물.
실시양태 33. 실시양태 1-32 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 나노입자와 회합되지 않은 알부민을 추가로 포함하는 것인 조성물.
실시양태 34. 실시양태 1-33 중 어느 하나에 있어서, 소수성 약물이 탁산인 조성물.
실시양태 35. 실시양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, 소수성 약물이 파클리탁셀인 조성물.
실시양태 36. 실시양태 1-33 중 어느 하나에 있어서, 소수성 약물이 리무스 약물인 조성물.
실시양태 37. 실시양태 1-33 및 36 중 어느 하나에 있어서, 소수성 약물이 라파마이신인 조성물.
실시양태 38. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
여기서 수성 용액은 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 것인 단계; 및
ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
실시양태 39. 실시양태 38에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 수성 용액 중에서 알부민에 접합되는 것인 방법.
실시양태 40. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계;
ii) 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계; 및
iii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
실시양태 41. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계;
ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및
iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
실시양태 42. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계;
ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 전부가 아닌 적어도 일부를 제거하여 에멀젼-현탁액 중간물질을 수득하는 단계;
iii) 에멀젼-현탁액 중간물질에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계; 및
iv) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 에멀젼-현탁액 중간물질로부터 1종 이상의 유기 용매의 추가의 분량을 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
실시양태 43. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민은 가교제 모이어티로 유도체화되는 것인 단계;
ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및
iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써, 조성물을 형성하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 가교제 모이어티로 유도체화되는 것인 단계.
실시양태 44. 실시양태 43에 있어서, 나노입자와 회합되지 않은 유도체화된 알부민을 비-유도체화된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 45. 실시양태 44에 있어서, 대체가 투석에 의한 것인 방법.
실시양태 46. 실시양태 44에 있어서, 대체가 완충제 교환에 의한 것인 방법.
실시양태 47. 실시양태 44에 있어서, 대체가 나노입자와 회합되지 않은 유도체화된 알부민으로부터 원심분리에 의해 나노입자를 분리하고, 나노입자를 비-유도체화된 알부민을 포함하는 용액으로 재현탁시키는 것에 의한 것인 방법.
실시양태 48. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 생물활성 폴리펩티드에 접합되는 것인 단계; 및
ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
실시양태 49. 실시양태 48에 있어서, 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드-접합된 알부민을 비접합된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 50. 실시양태 48에 있어서, 대체가 투석에 의한 것인 방법.
실시양태 51. 실시양태 48에 있어서, 대체가 완충제 교환에 의한 것인 방법.
실시양태 52. 실시양태 48에 있어서, 대체가 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드-접합된 알부민으로부터 원심분리에 의해 나노입자를 분리하고, 나노입자를 비접합된 알부민을 포함하는 용액으로 재현탁시키는 것에 의한 것인 방법.
실시양태 53. 생물활성 폴리펩티드를 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자에 접합시키는 것을 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법.
실시양태 54. 실시양태 38-53 중 어느 하나에 있어서, 유기 용매의 제거 전에 에멀젼에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 55. 실시양태 38-54 중 어느 하나에 있어서, 유기 용매의 제거 후에 조성물에 알부민을 첨가하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 56. 실시양태 38-55 중 어느 하나에 있어서, 유기 용매의 제거 후에 조성물에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 57. 실시양태 38-56 중 어느 하나에 있어서, 유기 용매의 제거 후에 형성된 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 58. 실시양태 38-57 중 어느 하나에 있어서, 소수성 약물이 탁산인 방법.
실시양태 59. 실시양태 38-58 중 어느 하나에 있어서, 소수성 약물이 파클리탁셀인 방법.
실시양태 60. 실시양태 38-59 중 어느 하나에 있어서, 소수성 약물이 리무스 약물인 방법.
실시양태 61. 실시양태 38-57 및 60 중 어느 하나에 있어서, 소수성 약물이 라파마이신인 방법.
실시양태 62. 실시양태 38-61 중 어느 하나에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 항체 또는 그의 단편인 방법.
실시양태 63. 실시양태 62에 있어서, 항체 또는 그의 단편이 종양-연관 항원과 특이적으로 결합하는 것인 방법.
실시양태 64. 실시양태 62 또는 63에 있어서, 항체 또는 그의 단편이 전장 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체, CDR-이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디술피드 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체 (dAb), 디아바디, 다중특이적 항체, 이중 특이적 항체, 항-이디오타입 항체, 이특이적 항체, 그의 기능적 활성 에피토프-결합 단편, 이중기능적 하이브리드 항체, 및 단일 쇄 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
실시양태 65. 실시양태 64에 있어서, 항체 또는 그의 단편이 Fc 단편인 방법.
실시양태 66. 실시양태 38-65 중 어느 하나에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 베바시주맙, 트라스투주맙, BGB-A317, 또는 토실리주맙인 방법.
실시양태 67. 실시양태 37-67 중 어느 하나의 방법에 의해 수득된 조성물.
실시양태 68. 실시양태 1-37 및 67 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 계면활성제를 실질적으로 함유하지 않는 것인 조성물.
실시양태 69. 실시양태 1-37, 67 및 68 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 수성 현탁액인 조성물.
실시양태 70. 실시양태 1-37, 67 및 68 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 건조 조성물인 조성물.
실시양태 71. 실시양태 70에 있어서, 조성물이 동결건조되는 것인 조성물.
실시양태 72. 실시양태 1-37 및 67-71 중 어느 하나에 있어서, 1종 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 조성물.
실시양태 73. 실시양태 1-37 및 67-72 중 어느 하나의 조성물 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
실시양태 74. 실시양태 1-37 및 67-73 중 어느 하나의 조성물을 포함하는 밀봉된 바이알.
실시양태 75. 실시양태 74에 있어서, 밀봉된 바이알이 단회 사용을 위한 것인 밀봉된 바이알.
실시양태 76. 실시양태 74에 있어서, 밀봉된 바이알이 다회 사용을 위한 것인 밀봉된 바이알.
실시양태 77. a) 1종 이상의 유기 용매 및 소수성 약물을 포함하는 나노액적을 포함하는 분산된 유기 상, 및 b) 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 연속 수성 상을 포함하는 에멀젼.
실시양태 78. 실시양태 77에 있어서, 알부민의 적어도 일부가 생물활성 폴리펩티드에 접합되는 것인 에멀젼.
실시양태 79. 실시양태 77 또는 78에 있어서, 에멀젼 중 알부민 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비가 약 1:1 내지 약 1000:1인 에멀젼.
실시양태 80. 실시양태 77-79 중 어느 하나에 있어서, 에멀젼 중 소수성 약물 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비가 약 1:1 내지 약 100:1인 에멀젼.
실시양태 81. a) 1종 이상의 유기 용매 및 소수성 약물을 포함하는 나노액적을 포함하는 분산된 유기 상, 및 b) 가교제 모이어티로 유도체화된 알부민을 포함하는 연속 수성 상을 포함하는 에멀젼.
실시양태 82. 실시양태 77-81 중 어느 하나에 있어서, 에멀젼 중 알부민 대 소수성 약물의 중량비가 약 1:1 내지 약 20:1인 에멀젼.
실시양태 83. a) 1종 이상의 유기 용매 및 소수성 약물을 포함하는 유기 용액, 및 b) 가교제 모이어티로 유도체화된 알부민을 포함하는 연속 수성 상을 포함하는 조 혼합물.
실시양태 84. 실시양태 84에 있어서, 조 혼합물 중 알부민 대 소수성 약물의 중량비가 약 1:1 내지 약 20:1인 조 혼합물.
실시양태 85. 실시양태 1-37 및 67-73 중 어느 하나의 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법.
실시양태 86. 실시양태 85에 있어서, 또 다른 치료제의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 87. 실시양태 85 또는 86에 있어서, 질환이 암인 방법.
실시양태 88. 실시양태 85-87 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 정맥내로 개체에게 투여되는 것인 방법.
실시양태 89. 실시양태 85-88 중 어느 하나에 있어서, 개체가 인간인 방법.
실시예
실시예 1: nab-파클리탁셀 조성물에 대한 아바스틴® 부형제의 효과
아바스틴® (베바시주맙) 내에 함유된 부형제는 인산나트륨 완충제, pH 6.2; α,α-트레할로스; 및 폴리소르베이트 20을 포함한다. 다양한 온도 및 pH에서 이들 부형제의 존재 하에 알부민 및 파클리탁셀을 포함하는 나노입자의 안정성을 동적 광 산란에 의해 입자 크기 분포를 측정하고, 일부 경우에는 0.2 μm 막을 사용하여 여과성을 측정함으로써 결정하였다. 알부민 및 파클리탁셀을 포함하는 사전-제조된 나노입자 (즉, 아브락산®)를 10 mg/mL의 파클리탁셀 농도로 재구성하고, 하기 조건에 적용하였다.
1. 아브락산®을 생리 염수 용액을 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH를 7로 조정하였다. 실온에서의 24시간 후에, 나노입자는 안정적이었다 (동적 광 산란에 의해 결정된 입자 크기 분포에서의 유의한 변경이 없는 것, 뿐만 아니라 미립자, 응집체 및 침강의 육안 및 현미경 관찰에 의한 판단 시).
2. 아브락산®을 생리 염수 용액을 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH를 5로 조정하였다. 실온에서의 24시간 후에, 나노입자는 아마도 대략 5의 알부민 등전점 (pI) 근처에서의 응집 때문에 안정적이지 않았다.
3. 아브락산®을 20%의 아바스틴® 완충제 (폴리소르베이트 20을 제외한, 5.8 mg/mL 인산나트륨 (일염기성, 1수화물), 1.2 mg/mL 인산나트륨 (이염기성, 무수), pH 6.2, 60 mg/mL α,α-트레할로스) 및 80%의 생리 염수를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH를 7로 조정하였다. 실온에서의 24시간 후에, 나노입자는 입자 크기 분포에서의 유의한 변경 없이 안정적이었다. 인산나트륨 및 α,α-트레할로스는 나노입자 안정성에 유의한 영향을 미치지 않는 것으로 결론지었다.
4. 아브락산®을 20%의 아바스틴® 완충제 (인산나트륨 완충제 및 α,α-트레할로스를 함유하지만, 폴리소르베이트 20은 제외됨) 및 80%의 생리 염수를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH를 5로 조정하였다. 실온에서의 24시간 후에, 나노입자는 안정적이지 않았다.
5. 아브락산®을 20%의 아바스틴® 완충제 (인산나트륨 완충제 및 α,α-트레할로스를 함유하지만, 폴리소르베이트 20은 제외됨) 및 80%의 생리 염수를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH를 5로 조정하였다. 58℃에서의 24시간 후에, 나노입자 응집체가 검출되었으므로, 나노입자는 안정적이지 않았다. 도 7b를 참조한다.
6. 아브락산®을 100%의 아바스틴® 완충제 (인산나트륨 완충제 및 α,α-트레할로스를 함유하지만, 폴리소르베이트 20은 제외됨)를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH는 조정하지 않았다 (pH가 6.4인 것으로 측정되었음). 실온에서의 24시간 후에, 나노입자는 입자 크기 분포에서의 유의한 변경 없이 안정적이었다. 도 7a를 참조한다. 인산나트륨 및 α,α-트레할로스는 나노입자 안정성에 유의한 영향을 미치지 않는 것으로 결론지었다.
7. 아브락산®을 100%의 아바스틴® 완충제 (인산나트륨 완충제 및 α,α-트레할로스 및 폴리소르베이트 20을 각각 함유함)를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH는 조정하지 않았다 (pH는 6.8인 것으로 측정되었음). 나노입자는 광학 현미경검사에 의해 관찰하였을 때 즉각적으로 응집되었고 (도 7c), 실온에서 24시간 동안 인큐베이션한 후에 미시적 미립자 및 현탁액의 가시적인 침강을 초래하였다. 따라서, 폴리소르베이트 계면활성제 자체는 아바스틴® 제제에 제공된 농도에서 나노입자 안정성에 영향을 미친다.
8. 아브락산®을 100%의 아바스틴® 완충제 (인산나트륨 완충제 및 α,α-트레할로스 및 폴리소르베이트 20 (0.04%)을 각각 함유함)를 사용하여 10 mg/mL로 재구성하고, pH를 5로 조정하였다. 나노입자는 제조 후 즉각적으로 응집되었고 (평균 입자 크기가 143 nm에서 159 nm로 성장하였음), 실온에서의 24시간 후에 나노입자는 여전히 불안정하였다.
이들 연구는 아바스틴® 완충제에 존재하는 폴리소르베이트 20이 아브락산® 나노입자의 응집을 유발한다는 것을 지시한다. 추가로, pH를 5로 낮추는 것은 아브락산® 입자 응집을 초래한다.
실시예 2: 알부민의 부재 하의 베바시주맙의 안정성에 대한 나노입자 제조 공정 단계의 효과
일부 실시양태에서, 알부민 및 소수성 약물을 포함하는 나노입자는 수성 용액 중 알부민을 1종 이상의 용매 및 소수성 약물을 포함하는 유기 용액과 혼합하여 조 혼합물을 형성하고, 조 혼합물을 고압 균질화하여 에멀젼을 형성하고, 유기 용매를 증발시켜 증발-후 나노입자 현탁액을 형성하고, 나노입자 현탁액을 희석하고, 나노입자 현탁액을 여과하는 것을 포함한다. 알부민 및 폴리소르베이트 20의 부재 하에 베바시주맙이 각각의 이들 제조 단계를 견디는 능력을, 각각의 제조 단계에 베바시주맙을 적용함으로써 결정하였다. 각각의 제조 단계로부터의 샘플을 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 분석하여 잔류하는 베바시주맙의 양 및 그의 응집 상태를 결정하였다 (즉, 고분자량 종으로의 전환을 측정함으로써).
400 mg의 베바시주맙을 이온 교환 크로마토그래피에 의해 아바스틴® (25 mg/mL 베바시주맙, 400 mg/바이알)으로부터 정제하여 폴리소르베이트 20을 제거하였다. 400 mg의 베바시주맙을 85 mL 캅토 S 임팩트 칼럼을 사용하는 정제용 FPLC (ATKA 정제기) 상에 로딩하였다. 칼럼을 5 M 시트르산나트륨, pH 5.0으로 세척하고, 25 mM 시트르산나트륨, pH 5.0, 1 M NaCl로 용리하였다. 정제된 베바시주맙을 5℃에서 1 L의 투석 완충제 (50 mM 인산나트륨 완충제, pH 6.2)에 대해 2회 완충제 교환하였다. 투석된 베바시주맙을 10.059 mL의 트레할로스 스톡 (400 mg/mL α,α-트레할로스 2수화물을 함유하는 50 mM 인산나트륨 완충제, pH 6.2)을 첨가함으로써 제제화하였다. 제제화된 베바시주맙의 최종 조성은 5.98 mg/mL (이론적), 50 mM 인산나트륨, pH 6.2, 60 mg/mL α,α-트레할로스 2수화물이었다. 제제화된 베바시주맙 중 베바시주맙 농도는 1.661의 이론적 흡광 계수를 사용하여 A280에 의해 결정 시 5.966 mg/mL였다.
6.7 mL의 정제된 베바시주맙 스톡 용액 (5.966 mg/mL)을 11.7 mL의 물과 혼합함으로써 18.4 mL의 2.18 mg/mL 베바시주맙 용액을 제조하였다. 베바시주맙 용액을 5400 rpm으로 설정된 고전단 혼합기를 사용하여 혼합하였다. 베바시주맙 용액을 혼합하고 있는 동안, 90% v/v 클로로포름 및 10% v/v 에탄올을 함유하는 1.5 mL의 유기 용액을 첨가하였다. 유기 용액 및 수성 용액을 5분 동안 혼합하여 조 혼합물을 생성하고, 이를 샘플링하여 침강되도록 하며, 침강으로 인한 상청액을 SEC 측정에 사용하였다. 조 혼합물을 고압 균질화기 내의 용기로 옮겼다. 조 혼합물을 고압 균질화기를 사용하여 수회의 통과 동안 균질화함으로써, 에멀젼을 형성하였다. 에멀젼을 샘플링하여 침강되도록 하며, 침강으로 인한 상청액을 SEC 측정에 사용하였다. 대략 18 mL의 고압 균질화된 에멀젼을 2 L 둥근 바닥 증발 플라스크가 장착된 회전 증발기로 옮겼다. 증발 플라스크의 진공 압력을 유지하였고, 증발은 40℃로 설정된 수조에 부분적으로 침지된 상태에서 이루어졌다. 유기 용매 (및 물의 일부)가 에멀젼으로부터 증발되었고, 플라스크 내부에서의 발포는 필요에 따라 플라스크의 회전 속도 및 압력을 변화시킴으로써 제어하였다. 대략 15분의 증발 후에, 생성된 부피는 약 2 mL였다. 증발-후 나노입자 현탁액을 별개의 용기로 옮기고, 3 mL의 물을 첨가하였다. 희석된 증발-후 나노입자 현탁액을 SEC 측정을 위해 샘플링하였다. 대략 0.5 mL의 희석된 증발-후 나노입자 현탁액을 멸균 여과하고, SEC 측정을 위해 샘플링하였다.
크기 배제 크로마토그래피 측정으로부터의 결과가 도 8a에 제시되어 있다. 이들 측정은 프로세싱되지 않은 베바시주맙, 조 혼합물로부터의 상청액, 고압 균질화된 에멀젼으로부터의 상청액, 희석된 증발-후 현탁액 및 여과된 샘플을 포함한다. 용리-후반 피크 (도면의 우측)는 베바시주맙 단량체를 예시하고, 용리-초기 피크는 베바시주맙의 보다 고분자량 종을 나타낸다. 프로세싱이 진행될수록, 베바시주맙 단량체의 양이 줄어들었다. 공정의 초기에 첨가된 베바시주맙의 초기 농도에 대비된, 각각의 단계에서의 베바시주맙 회수 분율이 도 8b에 제시되어 있으며, 이는 대부분의 베바시주맙이 고압 균질화 단계에서 분해되거나 또는 응집된다는 것을 제시한다.
실시예 3: 제조 공정에서의 베바시주맙의 안정성에 대한 알부민의 효과
폴리소르베이트 20은 존재하지 않지만, 다양한 양의 인간 알부민 (HA)이 포함된 베바시주맙이 각각의 제조 단계를 견디는 능력을, 각각의 제조 단계에 베바시주맙을 적용함으로써 결정하였다. 제조 공정을 시작할 때 1%, 2.5%, 5% 또는 10% 인간 알부민을 베바시주맙 제제에 포함시키는 것을 제외하고는, 베바시주맙을 실시예 2에 기재된 바와 같이 제조하였다. 각각의 제조 단계로부터의 샘플을 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 분석하여 잔류하는 베바시주맙의 양 및 그의 응집 상태를 결정하였다 (즉, 고분자량 종으로의 전환을 측정함으로써).
1% HA 함유 제제의 경우에는, 0.945 mL의 20% 인간 알부민, 6.9 mL의 베바시주맙 스톡 용액 (5.966 mg/mL, 실시예 2) 및 11.1 mL의 물을 조합하여 프로세싱을 위한 수성 용액을 만들었다. 2.5% HA 함유 제제의 경우에는, 2.363 mL의 20% 인간 알부민, 6.9 mL의 베바시주맙 스톡 용액 (5.966 mg/mL, 실시예 2) 및 9.6 mL의 물을 조합하여 프로세싱을 위한 수성 용액을 만들었다. 5% HA 함유 제제의 경우에는, 4.85 mL의 20% 인간 알부민, 7 mL의 베바시주맙 스톡 용액 (5.966 mg/mL, 실시예 2) 및 7.55 mL의 물을 조합하여 프로세싱을 위한 수성 용액을 만들었다. 10% HA 함유 제제의 경우에는, 9.45 mL의 20% 인간 알부민, 6.9 mL의 베바시주맙 스톡 용액 (5.966 mg/mL, 실시예 2) 및 2.55 mL의 물을 조합하여 프로세싱을 위한 수성 용액을 만들었다.
베바시주맙 용액을 5400 rpm으로 설정된 고전단 혼합기를 사용하여 혼합하였다. 베바시주맙 용액을 혼합하고 있는 동안, 90% v/v 클로로포름 및 10% v/v 에탄올을 함유하는 1.5 mL의 유기 용액을 첨가하였다. 유기 용액 및 수성 용액을 5분 동안 혼합하여 조 혼합물을 생성하고, 이를 SEC 측정을 위해 샘플링하였다. 조 혼합물을 고압 균질화기 내의 용기로 옮겼다. 조 혼합물을 고압 균질화기를 사용하여 수회의 통과 동안 균질화함으로써, 에멀젼을 형성하였다. 에멀젼을 SEC 측정을 위해 샘플링하였다. 대략 18 mL의 고압 균질화된 에멀젼을 2 L 둥근 바닥 증발 플라스크가 장착된 회전 증발기로 옮겼다. 증발 플라스크의 진공 압력을 유지하였고, 증발은 40℃로 설정된 수조에 부분적으로 침지된 상태에서 이루어졌다. 유기 용매 (및 물의 일부)가 에멀젼으로부터 증발되었고, 플라스크 내부에서의 발포는 필요에 따라 플라스크의 회전 속도 및 압력을 변화시킴으로써 제어하였다. 대략 3-5분의 증발 후에, 생성된 부피를 측정하였다. 이러한 증발-후 나노입자 현탁액을 SEC 측정을 위해 샘플링하였다. 이 현탁액의 일부를 여과하고 SEC 측정을 위해 샘플링하였다.
10% HA 용액의 크기 배제 크로마토그래피 측정으로부터의 결과가 도 9a에 제시되어 있다. 용리-최후 피크 (약 18.3분)는 HA 단량체를 함유하고, 약 17.6분에 용리되는 피크는 베바시주맙 단량체를 함유한다. 용기-초기 피크는 인간 알부민 및/또는 베바시주맙의 보다 고분자량 종을 나타낸다. 각각의 종의 양을 피크하 면적에 의해 정량화하였다.
도 9b는 HA를 함유하지 않는 제제 (실시예 2)를 포함하여, 다양한 HA 농도의 각각의 제제에 대해 공정의 각각의 단계 후에 회수된 베바시주맙의 양을 제시한다. 0% 및 1% HA 함유 제제는 제제에 첨가된 초기 베바시주맙의 대부분이 손실되었다. 2.5%, 5% 및 10% HA 함유 제제 각각의 경우에는 베바시주맙의 대부분이 제조 공정 전체에 걸쳐 유지되었으며, 이는 제제 중 적어도 2.5% HA의 존재가 극심한 분해 및 응집을 통한 베바시주맙의 손실을 보호한다는 것을 지시한다.
도 9c는 단지 베바시주맙 단량체 피크의 적분에 의해, 각각의 제제에 대해 공정의 각각의 단계에서 잔류하는 베바시주맙 단량체의 양을 제시한다. 응집되지 않은 베바시주맙 단량체의 분율의 측정에 의해, 제제 중 HA 농도가 증가할수록 프로세싱 동안 불리하게 분해되지 않은 베바시주맙의 분율에서의 단조로운 증가가 있다 (후반 프로세싱 단계에서의 0% HA를 갖는 제제에 대한 결과는 이러한 샘플에 존재하는 베바시주맙이 소량이어서 결론을 내릴 수 없음). 10% HA에서, 베바시주맙의 대략 100%가 제조 공정 전체에 걸쳐 단량체로서 잔류하며, 이는 상기 농도의 HA가 나노입자 제조 동안 베바시주맙을 분해로부터 완전히 보호할 수 있다는 것을 입증한다.
실시예 4: 제조 공정의 다양한 스테이지에서의 베바시주맙의 첨가
알부민을 함유하는 수성 상 및 유기 용매를 함유하는 유기 상을 포함하는 에멀젼에 베바시주맙을 첨가하는 것의 영향을 나노입자 제조 공정에서 초기에 베바시주맙을 포함시키는 것과 비교하였다. 각각의 제조 단계로부터의 샘플을 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 분석하여 잔류하는 베바시주맙의 양 및 그의 응집 상태를 결정하였다 (즉, 고분자량 종으로의 전환을 측정함으로써).
4.6 mL의 HA 스톡 용액 (20%) 및 13.8 mL의 물을 혼합함으로써 18.4 mL의 5% 인간 알부민 (HA) 용액 (수성 용액)을 제조하였다. 대조군 샘플로, 4.85 mL의 20% 인간 알부민, 7 mL의 베바시주맙 스톡 용액 (5.966 mg/mL, 실시예 2) 및 7.55 mL의 물을 조합하여 수성 용액을 만들었다. 수성 용액을 5400 rpm으로 설정된 고전단 혼합기를 사용하여 혼합하였다. 베바시주맙 용액을 혼합하고 있는 동안, 90% v/v 클로로포름 및 10% v/v 에탄올을 함유하는 1.5 mL의 유기 용액을 첨가하였다. 유기 용액 및 수성 용액을 5분 동안 혼합하여 조 혼합물을 생성하였다. 조 혼합물을 고압 균질화기 내의 용기로 옮겼다. 조 혼합물을 고압 균질화기를 통한 수회의 통과 동안 균질화함으로써, 에멀젼을 형성하였다. 6.0 mL의 베바시주맙 스톡 용액 (5.966 mg/mL, 실시예 2)을 조 에멀젼에 첨가하고, 에멀젼을 SEC 측정을 위해 샘플링하였다. 대략 24 mL의 고압 균질화된 에멀젼을 2 L 둥근 바닥 증발 플라스크가 장착된 회전 증발기로 옮겼다. 증발 플라스크의 진공 압력을 유지하였고, 증발은 40℃로 설정된 수조에 부분적으로 침지된 상태에서 이루어졌다. 유기 용매 (및 물의 일부)가 에멀젼으로부터 증발되었고, 플라스크 내부에서의 발포는 필요에 따라 플라스크의 회전 속도 및 압력을 변화시킴으로써 제어하였다. 대략 6분의 증발 후에, 생성된 부피는 약 3 mL인 것으로 측정되었다. 2 mL의 물을 증발-후 나노입자 현탁액에 첨가하고, 증발-후 나노입자 현탁액을 SEC 측정을 위해 샘플링하였다. 이 현탁액의 일부를 여과하고 SEC 측정을 위해 샘플링하였다.
도 10a는 베바시주맙이 초기 수성 용액에 첨가된 제제 (대조군) 및 에멀젼이 형성된 후에 베바시주맙이 첨가된 제제 둘 다에 대해 공정의 각각의 단계에서 잔류하는 베바시주맙의 양을 제시한다. 도 10b는 단지 베바시주맙 단량체 피크의 적분에 의해, 상기 두 제제에 대해 공정의 각각의 단계에서 잔류하는 베바시주맙 단량체의 양을 제시한다. 초기 수성 용액에 베바시주맙을 첨가함으로써 만들어진 제제 (대조군)에 대한 대략 85%와 비교하여, 에멀젼에 베바시주맙을 첨가함으로써 생성된 제제의 경우에는 베바시주맙 단량체의 96% 초과가 공정이 끝날 때 유지된다. 이러한 결과는 에멀젼의 생성 후에 베바시주맙을 첨가하는 것이 나노입자 제조 동안 베바시주맙을 과도한 분해로부터 보호함과 동시에, 베바시주맙이 입자 형성의 완료 전에 에멀젼 액적 표면과 접촉하며 회합하게 되는 기회를 여전히 제공할 수 있다는 것을 입증한다.
실시예 5: 알부민, 파클리탁셀 및 베바시주맙을 함유하는 나노입자의 제조
90% v/v 클로로포름 및 10% v/v 에탄올을 함유하는 유기 혼합물 중 파클리탁셀의 100 mg/mL 용액 1.6 mL를 제조하였다 ("유기 용액"). 별도로, 5% HA 용액 및 2.2 mg/mL 베바시주맙을 함유하는 18.4 mL의 수성 용액을 4.725 mL의 HA 스톡 용액, 6.9 mL의 베바시주맙 스톡 용액 및 7.275 mL의 물을 혼합함으로써 제조하였다. 수성 용액을 5400 rpm으로 설정된 고전단 혼합기를 사용하여 혼합하였다. 수성 용액을 혼합하는 동안, 1.6 mL의 파클리탁셀 함유 유기 용액을 첨가하였다. 수성 용액 및 유기 용액을 5분 동안 혼합하여 조 혼합물을 생성하였다. 조 혼합물을 SEC 측정을 위해 샘플링할 수 있다. 조 혼합물을 고압 균질화기 내의 용기로 옮겼다. 이어서, 조 혼합물을 고압 균질화기에 의해 수회의 통과 동안 균질화하였다. 대략 24 mL의 에멀젼을 2 L 둥근 바닥 증발 플라스크 및 40℃로 설정된 수조가 장착된 회전 증발기로 옮겼다. 진공 압력을 적용한 다음 유지하고, 회전하는 둥근 바닥 플라스크를 수조에 부분적으로 침지시킴으로써 유기 용매 및 물의 일부가 에멀젼으로부터 증발되었다. 플라스크 내부에서의 발포는 필요에 따라 플라스크의 회전 속도 및 압력을 변화시킴으로써 제어하였다. 대략 5분의 증발 후에, 생성된 부피는 약 4 mL였고, 이를 별개의 용기로 옮겨 여기에 4 mL의 물을 첨가하였다. 이러한 증발된 현탁액을 SEC 측정을 위해 샘플링할 수 있다. 이어서, 이 현탁액의 총 잔류 부피를 멸균 여과하였다. 생성된 입자 현탁액을 동적 광 산란에 의한 입자 크기 및 SEC 측정을 위해 샘플링할 수 있다. 입자를 초원심분리에 의해 회수하였다. 나노입자와 회합된 베바시주맙의 양을 결정할 수 있다.
실시예 6: nab-파클리탁셀 및 베바시주맙의 혼합물 제조
nab-파클리탁셀 및 베바시주맙의 혼합물을 하기 프로토콜에 따라 다양한 베바시주맙 농도로 형성하였다.
배치 1. 1.6 mL의 아바스틴® (베바시주맙 및 부형제, 25 mg/mL) 및 3.4 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스(G-Biosciences))를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 5 mL의 생리 염수를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 10 mg/mL (90 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 베바시주맙의 최종 농도는 4 mg/mL였다.
배치 2. 3.2 mL의 아바스틴® (베바시주맙 및 부형제, 25 mg/mL) 및 1.8 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 5 mL의 생리 염수를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 10 mg/mL (90 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 베바시주맙의 최종 농도는 8 mg/mL였다.
배치 3. 6 mL의 아바스틴® (베바시주맙 및 부형제, 25 mg/mL)을 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 4 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 10 mg/mL (90 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 베바시주맙의 최종 농도는 15 mg/mL였다.
대조군 배치 4. 5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 5 mL의 생리 염수를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 10 mg/mL였다.
각각의 현탁액의 샘플을 하기를 사용하여 10배 희석하였다: (1) 0.9% NaCl 생리 염수, (2) 주사용수 (WFI), (3) 인산염 완충 염수 (PBS) (암레스코(Amresco), 10X PBS로부터 희석됨), (4) 샘플에 WFI를 첨가하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션한 다음, 10X PBS의 스파이크를 첨가함으로써 형성된, WFI 및 10X PBS의 9:1 혼합물, 또는 (5) 샘플에 10X PBS를 첨가하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션한 다음, WFI를 첨가함으로써 형성된, 10X PBS 및 WFI의 1:9 혼합물. 희석 후에 입자 크기 및 입자 크기 분포를 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠(Malvern Instruments))를 사용하여 동적 광 산란 (DLS)에 의해 측정하였다. 결과가 표 1에 제시되어 있다.
표 1: 샘플의 10배 희석 후 DLS에 의한 입자 크기 및 분포
Figure pct00001
n.d. = 결정되지 않음. * = 샘플이 WFI로 불투명해지고 저장 동안 침전됨.
** = 샘플이 WFI로 불투명해지지만, 10X PBS의 첨가로 낮은 탁도로 복구됨.
실시예 7: 혼합 후 베바시주맙의 nab-파클리탁셀과의 회합
6 mL의 아바스틴® (베바시주맙 및 부형제, 25 mg/mL)을 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 4 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 10 mg/mL (90 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 베바시주맙의 최종 농도는 15 mg/mL였다.
샘플을 20℃에서 70분 동안 39,000 RPM (176,351 x g)으로 원심분리하였다 (Ti45 회전자 및 테플론 인서트를 갖는 베크만 옵티마 LE-80 초원심분리기). 상청액이 보유액이었다 (샘플 "S"). 펠릿을 인산염 완충 염수 (PBS)로 5회 세척하였다 (샘플 "W1" 내지 "W5"). 200 프루프 에탄올을 원심분리 튜브에 첨가하고, 펠릿을 초음파처리하여 파클리탁셀을 용해시켰다. 에탄올로 세척된 샘플을 20℃에서 20분 동안 10,000 RPM (14,029.3 x g)으로 원심분리하고, 상청액을 가만히 따라내고, 샘플을 동결건조에 의해 건조시켰다. 동결건조된 펠릿을 PBS에 재현탁시켰다 (샘플 "P").
보유된 샘플을 이뮤노블롯 분석에 적용하였다. 샘플을 4-1% 비스-트리스 SDS-PAGE 겔 상에서 MOPS 완충제로 전개시켰다. 단백질을 니트로셀룰로스 막으로 옮기고, 항-HSA (인간 혈청 알부민, 1:5000 마우스) 및 항-인간 IgG (1:2000 토끼) 1차 항체, 및 IRDye 표지된 항-마우스 (1:20,000) 및 항-토끼 (1:20,000) 2차 항체를 사용하여 염색하였다.
이뮤노블롯은 베바시주맙 및 알부민이 둘 다 파클리탁셀의 추출 후 펠릿에 보유되어 있다는 것을 제시하였다. 이는 아바스틴® 및 nab-파클리탁셀의 혼합 후에 베바시주맙의 nab-파클리탁셀과의 회합을 지시한다.
실시예 8: nab-파클리탁셀 및 트라스투주맙의 혼합물 제조
nab-파클리탁셀 및 트라스투주맙의 혼합물을 하기 프로토콜에 따라 다양한 트라스투주맙 농도로 형성하였다. 헤르셉틴(Herceptin)® (트라스투주맙 및 부형제)을, 바이알에 20 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 첨가하고 내용물이 용해되도록 함으로써 재구성하여 21 mg/mL 용액을 제공하였다. 이어서, 바이알을 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다.
배치 1. 0.476 mL의 재구성된 헤르셉틴® (21 mg/mL) 및 9.524 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 15분 동안 용해되도록 한 후에, 바이알을 완만하게 와류시켜 완전한 용해를 보장하였다. 이어서, 용해된 내용물을 실온에서 1시간 동안 정치해 두었다. 이어서, 10 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 바이알에 첨가하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 5 mg/mL이고, 트라스투주맙의 최종 농도는 0.5 mg/mL였다.
배치 2. 3.808 mL의 재구성된 헤르셉틴® (21 mg/mL) 및 6.192 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 15분 동안 용해되도록 한 후에, 바이알을 완만하게 와류시켜 완전한 용해를 보장하였다. 이어서, 용해된 내용물을 실온에서 1시간 동안 정치해 두었다. 이어서, 10 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 바이알에 첨가하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 5 mg/mL이고, 트라스투주맙의 최종 농도는 4 mg/mL였다.
배치 3. 7.14 mL의 재구성된 헤르셉틴® (21 mg/mL) 및 2.86 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 15분 동안 용해되도록 한 후에, 바이알을 완만하게 와류시켜 완전한 용해를 보장하였다. 이어서, 용해된 내용물을 실온에서 1시간 동안 정치해 두었다. 이어서, 10 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 바이알에 첨가하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 5 mg/mL이고, 트라스투주맙의 최종 농도는 7.5 mg/mL였다.
실시예 9: 베바시주맙 또는 트라스투주맙과 혼합된 nab-파클리탁셀의 이온 강도 영향
nab-파클리탁셀을 실시예 6 및 8에 기재된 프로토콜에 따라 베바시주맙 또는 트라스투주맙과 혼합하였다 (8:10 또는 15:10의 항체 대 nab-파클리탁셀의 비). 나노입자 현탁액을 WFI 또는 다양한 농도의 NaCl 염수로 희석하였다. 희석 후에 입자 크기 (나노미터 단위의 Z-평균 직경)를 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 동적 광 산란 (DLS)에 의해 측정하였다. 결과가 도 11에 제시되어 있다.
단독의 베바시주맙 또는 단독의 nab-파클리탁셀의 낮은 이온 강도 매질로의 10배 희석은 입자 크기 증가를 유발하지 않는다. 그러나, nab-파클리탁셀 및 항체의 혼합물의 낮은 이온 강도 매질로의 10배 희석은 입자 크기에서의 증가를 유발한다. 입자는, 15:10의 트라스투주맙 대 파클리탁셀의 비로 nab-파클리탁셀과 혼합된 트라스투주맙의 경우에는 0.15% (25 mM) 미만의 NaCl 중에서, 또한 8:10의 트라스투주맙 대 파클리탁셀의 비로 nab-파클리탁셀과 혼합된 트라스투주맙의 경우에는 0.075% (12.5 mM) 미만의 NaCl 중에서 크기가 증가한다. nab-파클리탁셀과 혼합된 베바시주맙의 경우에는 (15:10의 베바시주맙 대 파클리탁셀의 비), 입자가 0.05% (9 mM) 미만의 NaCl 중에서 크기가 증가한다. 도 11에 제시된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 낮은 이온 강도 매질 (예를 들어, WFI)은 입자 크기에서의 증가를 유발하고, 보다 높은 이온 강도 매질은 대조군 샘플의 크기에 도달할 때까지 입자 크기를 줄인다. 입자 크기에서의 변화는 아마도 항체의 유리 알부민 또는 nab-파클리탁셀 나노입자 상의 표면 결합된 알부민과의 정전기적 회합 때문일 것이다. 크기 증가는 매질의 이온 강도, 항체의 유형 (예를 들어, 베바시주맙 또는 트라스투주맙), 및 혼합물 중 항체의 농도에 좌우된다. 이온 강도가 증가된다면, 입자 크기에서의 증가는 가역적이다.
실시예 10: 베바시주맙과 혼합된 nab-파클리탁셀을 사용한 A375 마우스 이종이식편의 치료
A375 인간 흑색종 세포를 마우스에 피하로 주사하여 이종이식편 모델을 발생시켰다. 종양이 약 600 mm3까지 성장하도록 한 후에, 하기 프로토콜에 따라 치료하였다. 언급된 경우를 제외하고는, 각각의 프로토콜에 대해 9마리의 마우스를 치료하였다.
코호트 1 - 비히클 대조군 ("비히클"). 멸균 30 mL PETG 용기에서 960 mg의 α,α-트레할로스 탈수화물, 92.8 mg의 인산나트륨 (일염기성, 1수화물), 19.2 mg의 인산나트륨 (이염기성, 무수), 6.4 mg의 폴리소르베이트 20, 및 16 mL의 주사용수 (WFI)를 함께 혼합함으로써 아바스틴® 완충제를 제조하였다. 이어서, 아바스틴® 완충제를 0.2 μm 멸균 필터를 통해 통과시켰다. 96 μL의 아바스틴® 완충제를 270 μL의 200 mg/mL 인간 알부민 용액 및 834 μL의 주사용 0.9% NaCl 염수와 혼합하였다. 비히클 대조군을 실험의 제2일에 120 μL/마우스의 투여량으로 각각의 마우스에 투여하였다.
코호트 2 - 30 mg/kg 파클리탁셀 용량의 nab-파클리탁셀 ("ABX30"). 20 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 사용하여, 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)을 5 mg/mL 파클리탁셀 농도로 재구성하였다. 각각의 마우스의 체중은 대략 0.02 kg이었고, 재구성된 nab-파클리탁셀을 실험의 제2일에 120 μL/마우스의 투여량으로 각각의 마우스에 투여하였다.
코호트 3 - 12 mg/kg 용량의 베바시주맙 ("BEV12"). 96 μL의 베바시주맙 (아바스틴®, 25 mg/mL)을 904 μL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 사용하여 2.4 mg/mL 베바시주맙의 최종 농도로 희석하였다. 각각의 마우스의 체중은 대략 0.02 kg이었고, 희석된 아바스틴®을 실험의 제2일에 100 μL/마우스의 투여량으로 각각의 마우스에 투여하였다.
코호트 4 - 동일한 날의 BEV12 및 ABX30 ("BEV12 + ABX30 - 동일한 날"). 코호트 3 ("BEV12")을 위해 제조된 바와 같은 100 μL/마우스의 희석된 아바스틴® 및 코호트 2 ("ABX30")를 위해 제조된 바와 같은 120 μL/마우스의 nab-파클리탁셀을 실험의 제2일에 각각의 마우스에 투여하였다.
코호트 5 - BEV12, 이어서 1일 후의 ABX30 ("BEV12 + ABX30 - 1일 간격"); 8마리의 마우스를 치료하였다. 코호트 3 ("BEV12")을 위해 제조된 바와 같은 100 μL/마우스의 희석된 아바스틴®을 실험의 제1일에 각각의 마우스에 투여하였다. 코호트 2 ("ABX30")를 위해 제조된 바와 같은 120 μL/마우스의 nab-파클리탁셀을 실험의 제2일에 각각의 마우스에 투여하였다.
코호트 6 - 베바시주맙 (12 mg/kg)과 혼합된 nab-파클리탁셀 (30 mg/kg 파클리탁셀) ("AB160"). 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg 파클리탁셀)을 1.6 mL의 베바시주맙 (아바스틴®, 25 mg/mL) 및 3.4 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수로 재구성하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후에, 15 mL의 주사용 0.9% NaCl 염수를 첨가하여, 5 mg/mL 파클리탁셀 및 2 mg/mL 베바시주맙의 최종 농도를 초래하였다. 혼합물을 실험의 제2일에 120 μL/마우스의 투여량으로 각각의 마우스에 투여하였다.
종양 부피를 실험의 제7일에 측정하였고, 각각의 코호트 내 각각의 마우스에 대한 퍼센트 종양 부피 변화가 도 12에 제시되어 있다. nab-파클리탁셀 및 베바시주맙의 혼합물 ("AB160")과 동일한 날의 ("BEV12 + ABX30 - 동일한 날") 또는 1일 간격의 ("BEV12 + ABX30 - 1일 간격") 투여 사이에는 유의한 차이가 확인되지 않았다. 그러나, nab-파클리탁셀 및 베바시주맙의 혼합물 ("AB160")은 단독의 nab-파클리탁셀 ("ABX30"; p = 0.0034), 단독의 베바시주맙 ("BEV12"; p = 0.006), 또는 비히클 대조군 ("비히클"; p < 0.0001)의 투여와 비교하여 종양 성장에 있어서 통계적으로 유의한 감소를 초래하였다. P-값은 독립표본 t-검정을 사용하여 결정되었다.
치료된 마우스의 생존 시간을 또한 기록하였다. 2000 mm3보다 큰 종양을 갖는 마우스는 안락사시켰다. 중앙 생존 시간 및 관련 p-값이 표 2에 제시되어 있다. p-값에 의해 제시된 바와 같이, nab-파클리탁셀 및 베바시주맙의 혼합물 ("AB160")로 치료된 마우스, 및 nab-파클리탁셀 및 베바시주맙이 별개로 투여된 마우스 ("BEV12 + ABX30 - 동일한 날" 또는 "BEV12 + ABX30 - 1일 간격")의 생존에서 유의한 차이는 없다.
표 2: A375 흑색종 이종이식편 모델의 생존 연구
Figure pct00002
N/A = 적용가능하지 않음; N/S = 유의하지 않음.
실시예 11: 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
27.6 mL의 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액 (물 중)을 2.4 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (CHCl3 및 에탄올의 90/10 혼합물)과 혼합하면서 조합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 20-22 kpsi에서 균질화하였다. 추가로 5 mL의 15 mg/mL HSA를 균질화기를 통해 통과시켜 35 mL의 최종 부피를 수집하였다. 혼합물을 균질화기를 통해 수회의 사이클 동안 통과시킨 후에, 추가로 20 mL의 15 mg/mL HSA를 균질화기에 첨가하여 에멀젼이 되도록 하였다. 총 40 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 0.714 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (헤르셉틴®) 및 3.426 mL의 0.9% NaCl을 미세 에멀젼에 첨가한 후에, 미세 에멀젼을 회전 증발에 적용하였다. 9.3 mL의 샘플이 증발-후 현탁액으로서 잔류할 때까지, 액체를 회전 증발기를 사용하여 미세 에멀젼으로부터 제거하였다. 증발-후 현탁액을 섬광 바이알로 옮기고, 회전 증발기를 1.5 mL 분취량의 주사용수 (WFI)로 2회 세척하여, 이를 섬광 바이알에 첨가하였다 (12.3 mL의 최종 부피). 생성된 증발-후 현탁액을 5℃에서 밤새 저장하였다.
증발-후 현탁액을 냉각 저장으로부터 제거하고, 실온으로 평형화하였다. 12 mL의 증발-후 현탁액을 10.84 mL의 200 mg/mL HSA 및 33.82 mL의 0.9% NaCl과 혼합하였다. 이어서, 혼합물을 여과한 후에, 입자 크기 및 파클리탁셀 농도를 측정하였다. 입자 크기 및 분포를, 50 μL의 증발-후 현탁액을 1.5 mL의 0.9% NaCl 염수로 희석함으로써 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 동적 광 산란 (DLS)에 의해 측정하였다. 여과된 현탁액의 Z-평균 직경은 145.5 nm이며, 0.159의 다분산 지수 (PDI)를 가졌다. 여과된 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 6.21 mg/mL인 것으로 측정되었다. 여과된 현탁액을 -80℃에서 밤새 냉동시켰다.
냉동되어 있는, 여과된 현탁액을 냉각 저장으로부터 제거하고, 해동되도록 한 다음, 실온으로 평형화하였다. 0.829 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (헤르셉틴®) 및 10.787 mL의 0.9% NaCl을 48 mL의 여과된 현탁액에 첨가하여, 현탁액의 농도를 5 mg/mL 파클리탁셀 및 0.5 mg/mL 트라스투주맙을 포함하도록 조정하였다. 최종 현탁액을 바이알에 분취하고 (바이알당 3 mL), -80℃에서 저장하였다. 하나의 샘플 분취물은 냉동시키지 않았고, 이를 입자 크기 (145.6 nm의 Z-평균 직경, DLS에 의해), 입자 크기 분포 (0.130의 PDI, DLS에 의해), 파클리탁셀 농도 (5.0 mg/mL, RP-HPLC에 의해), 트라스투주맙 농도 (0.53 mg/mL, SEC-HPLC에 의해) 및 오스몰랄농도 (266 mOSm)에 대해 분석하였다.
실시예 12: 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
매립된 트라스투주맙을 포함하는 nab-파클리탁셀의 4개의 배치를 제조 공정 동안 다양한 시점에서 트라스투주맙을 포함시킴으로써 제조하였다. 트라스투주맙을 (1) 미세 에멀젼에 첨가하고, 10분 인큐베이션한 후에, 회전 증발에 의해 프로세싱하거나, (2) 미세 에멀젼에 첨가하고, 이를 즉각적으로 회전 증발에 의해 프로세싱하거나, (3) 약 3분의 회전 증발 후에 미세 에멀젼에 첨가하거나, 또는 (4) 회전 증발 직후에 증발-후 현탁액에 첨가하였다. 트라스투주맙을 갖지 않는 nab-파클리탁셀의 대조군 배치 (5)를 또한 제조하였다.
배치 1. 27.6 mL의 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액 (물 중)을 2.4 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (CHCl3 및 에탄올의 90/10 혼합물)과 혼합하면서 조합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 20-22 kpsi에서 균질화하였다. 혼합물을 균질화기를 통해 수회의 사이클 동안 통과시킨 후에, 추가로 20 mL의 15 mg/mL HSA를 균질화기에 첨가하여 에멀젼이 되도록 하였다. 2.14 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (0.9% NaCl 염수 중 헤르셉틴®) 및 2.00 mL의 0.9% NaCl 염수를 에멀젼에 첨가하고, 10분 동안 실온에서 인큐베이션한 후에, 에멀젼을 회전 증발에 의해 프로세싱하였다. 에멀젼을 회전 증발에 적용하여 부피를 5.0 mL로 감소시켰다. 이어서, 증발-후 현탁액을 섬광 바이알로 옮겼다. 회전 증발기 플라스크를 2.5 mL의 주사용수 (WFI)로 세척하고, 세척액을 바이알에 첨가하였다. 다시 회전 증발기 플라스크를 2.5 mL의 WFI로 세척하고, 이어서 이를 바이알에 첨가하였다.
배치 2. 27.6 mL의 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액 (물 중)을 2.4 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (CHCl3 및 에탄올의 90/10 혼합물)과 혼합하면서 조합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 20-22 kpsi에서 균질화하였다. 혼합물을 균질화기를 통해 수회의 사이클 동안 통과시킨 후에, 추가로 20 mL의 15 mg/mL HSA를 균질화기에 첨가하여 에멀젼이 되도록 하였다. 2.14 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (0.9% NaCl 염수 중 헤르셉틴®) 및 2.00 mL의 0.9% NaCl 염수를 에멀젼에 첨가하고, 잠시 와류시키고, 즉각적으로 회전 증발에 의해 프로세싱하였다. 에멀젼을 회전 증발에 적용하여 부피를 6.0 mL로 감소시켰다. 이어서, 증발-후 현탁액을 섬광 바이알로 옮겼다. 회전 증발기 플라스크를 2.0 mL의 주사용수 (WFI)로 세척하고, 세척액을 바이알에 첨가하였다. 다시 회전 증발기 플라스크를 2.0 mL의 WFI로 세척하고, 이어서 이를 바이알에 첨가하였다.
배치 3. 27.6 mL의 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액 (물 중)을 2.4 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (CHCl3 및 에탄올의 90/10 혼합물)과 혼합하면서 조합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 20-22 kpsi에서 균질화하였다. 혼합물을 균질화기를 통해 수회의 사이클 동안 통과시킨 후에, 추가로 20 mL의 15 mg/mL HSA를 균질화기에 첨가하여 에멀젼이 되도록 하였다. 에멀젼을 즉각적으로 3분 동안 회전 증발기를 사용하여 프로세싱한 후에, 2.14 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (0.9% NaCl 염수 중 헤르셉틴®) 및 2.00 mL의 0.9% NaCl 염수를 에멀젼에 첨가하였다. 트라스투주맙 및 염수를 에멀젼에 첨가하고 나면, 즉각적으로 회전 증발기를 사용하는 프로세싱을 샘플의 부피가 6.8 mL가 될 때까지 계속하였다. 이어서, 증발-후 현탁액을 섬광 바이알로 옮겼다. 회전 증발기 플라스크를 1.6 mL의 주사용수 (WFI)로 세척하고, 세척액을 바이알에 첨가하였다. 다시 회전 증발기 플라스크를 1.6 mL의 WFI로 세척하고, 이어서 이를 바이알에 첨가하였다.
배치 4. 27.6 mL의 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액 (물 중)을 2.4 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (CHCl3 및 에탄올의 90/10 혼합물)과 혼합하면서 조합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 20-22 kpsi에서 균질화하였다. 혼합물을 균질화기를 통해 수회의 사이클 동안 통과시킨 후에, 추가로 20 mL의 15 mg/mL HSA를 균질화기에 첨가하여 에멀젼이 되도록 하였다. 에멀젼을 즉각적으로 회전 증발기를 사용하여 프로세싱하여 부피를 약 10 mL로 감소시켰다. 2.14 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (0.9% NaCl 염수 중 헤르셉틴®) 및 2.00 mL의 0.9% NaCl 염수를 증발-후 용액에 첨가하고, 이를 추가로 회전 증발기를 사용하여 프로세싱하여 부피를 7.0 mL로 감소시켰다. 이어서, 증발-후 현탁액을 섬광 바이알로 옮겼다. 회전 증발기 플라스크를 1.5 mL 주사용수 (WFI)로 세척하고, 세척액을 바이알에 첨가하였다. 다시 회전 증발기 플라스크를 1.5 mL의 WFI로 세척하고, 이어서 이를 바이알에 첨가하였다.
배치 5 (대조군 nab-파클리탁셀). 27.6 mL의 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액 (물 중)을 2.4 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (CHCl3 및 에탄올의 90/10 혼합물)과 혼합하면서 조합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 20-22 kpsi에서 균질화하였다. 혼합물을 균질화기를 통해 수회의 사이클 동안 통과시킨 후에, 추가로 20 mL의 15 mg/mL HSA를 균질화기에 첨가하여 에멀젼이 되도록 하였다. 4.14 mL의 0.9% NaCl 염수를 에멀젼에 첨가하고, 생성되는 증발-후 현탁액의 부피가 6.4 mL가 될 때까지 에멀젼을 회전 증발에 적용하였다. 이어서, 증발-후 현탁액을 섬광 바이알로 옮겼다. 회전 증발기 플라스크를 1.8 mL의 주사용수 (WFI)로 세척하고, 세척액을 바이알에 첨가하였다. 다시 회전 증발기 플라스크를 1.8 mL의 WFI로 세척하고, 이어서 이를 바이알에 첨가하였다.
각각의 배치의 증발-후 현탁액 (회전 증발기를 세척하고 세척액을 샘플에 첨가한 후)에 대해 평균 입자 직경 및 다분산 지수를 동적 광 산란 (DLS)에 의해 측정하였고, 결과가 표 3에 제시되어 있다. DLS 측정은, 50 μL의 증발-후 현탁액을 1.5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 희석함으로써 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 수행하였다.
표 3: 증발-후 현탁액의 입자 크기 직경 및 다분산 지수
Figure pct00003
최종 배치의 입자 크기 (DLS에 의해 측정됨)는, 항체가 제조 공정에서 초기에 첨가된 배치에 대해 입자 크기가 보다 큰 경향을 제시하였다. 항체가 첨가되지 않은 대조군 배치 (배치 5)와 비교하여, 항체를 함유하는 모든 배치는 보다 큰 입자 크기를 가졌다. 가장 큰 입자 크기는 배치 1 (항체가 에멀젼에 첨가되고, 이어서 실온에서 10분의 인큐베이션 후에, 회전 증발이 시작됨)에 대해 관찰되었으며, 이는 회전 증발에 의해 액적 내 용매가 제거되어 고체 입자를 생성하기 전에 에멀젼 액적이 합체되는 것 때문일 수 있다. 다른 배치 (배치 2, 3, 4)는 회전 증발에 의한 용매 제거 전에 임의의 인큐베이션 시간을 포함하지 않았고, 이들 배치에 대해 대조군 (배치 1)에 비해 보다 적은 입자 크기 증가가 관찰되었다.
증발-후 현탁액 중 파클리탁셀 및 트라스투주맙의 농도를 결정하였다. 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 결정되었고, 트라스투주맙 농도는 SEC-HPLC에 의해 결정되었다. 결과가 표 4에 제시되어 있다.
표 4: 증발-후 현탁액 중 파클리탁셀 및 트라스투주맙 농도
Figure pct00004
2 mL의 증발-후 현탁액을 원심분리하여 입자를 펠릿화하고, 상청액을 제거하여, 결합되어 있지 않은 트라스투주맙을 나노입자로부터 분리하였다. 펠릿을 새로운 2 mL의 인산염 완충 염수 (PBS)에 재현탁시켰다. 재현탁된 나노입자 중 트라스투주맙의 농도를 SEC-HPLC 및 ELISA (트라스투주맙 ELISA 검정 키트, #1G-AA105, 이글 바이오사이언스(Eagle Bioscience))에 의해 측정하였고, 결과가 표 5에 제시되어 있다. 증발-후 현탁액 중 트라스투주맙의 농도 및 세척된 나노입자 현탁액 중 트라스투주맙의 농도에 기초한, 증발-후 현탁액 중 나노입자와 회합된 트라스투주맙의 백분율이 또한 표 5에 제시되어 있다 (SEC-HPLC 및 ELISA 측정의 평균). 증발 직전에 인큐베이션 없이 트라스투주맙을 첨가하는 것이 5.76%의, 현탁액 중 나노입자와 회합된 트라스투주맙의 최고 분량을 초래하였다.
표 5: 세척된 나노입자 현탁액 중 트라스투주맙 농도
Figure pct00005
실시예 13: 균질화 전 수성 용액에 트라스투주맙을 첨가하는 것에 의한 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
트라스투주맙 (헤르셉틴®)을 주사용수 (WFI)로 21 mg/mL의 농도로 재구성하였다. 7.14 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙을 5 mL의 200 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA), 2.86 mL의 물 및 5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수와 혼합하여 50 mg/mL HSA 및 7.5 mg/mL 트라스투주맙의 용액을 형성하였다. 18.4 mL의 HSA/트라스투주맙 용액을 1.6 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (90/10 CHCl3/에탄올에 용해됨)과 혼합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 수회의 사이클 동안 20-22 kpsi에서 균질화하여 미세 에멀젼을 형성하였다. 15 mL의 50 mg/mL HSA 용액을 균질화기에 첨가하여 미세 에멀젼이 되도록 하고, 25.5 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 미세 에멀젼을 즉각적으로 회전 증발기로 옮겨 7.3 mL의 증발-후 부피를 얻었다.
동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. DLS 측정은, 20 μL의 증발-후 현탁액을 1.5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 희석함으로써 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 수행하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경은 147.8 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.131인 것으로 결정되었다.
증발-후 용액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 25.88 mg/mL인 것으로 결정되었다. 총 HSA 농도 및 트라스투주맙 농도는 SEC-HPLC에 의해 각각 117 mg/mL 및 16.2 mg/mL인 것으로 측정되었다.
증발-후 현탁액을 -20℃에서 밤새 냉동시킨 후에, 해동시키고, 실온으로 평형화되도록 하였다. 다시 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여, 희석제로서 0.9% NaCl 생리 염수 또는 WFI를 사용한 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 0.9% NaCl 생리 염수가 희석제로서 사용된 경우에, 평균 입자 직경은 147.8 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.145인 것으로 결정되었다. WFI가 희석제로서 사용된 경우에, 평균 입자 직경은 2354 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.500인 것으로 결정되었다.
해동된 증발-후 현탁액을 2.7 mL의 WFI를 사용하여 10 mL의 최종 부피로 희석하였다. 8 mL (둘로 분할됨)의 희석된 증발-후 현탁액을 20℃에서 70분 동안 Ti45 회전자 및 테플론 인서트를 갖는 베크만 옵티마 LE-80 원심분리기를 사용하여 39,000 RPM으로 원심분리하여 나노입자를 펠릿화하였다. 상단 3 mL의 상청액을 상청액 1로서 취출하였고, 하단 ~1 mL의 상청액을 상청액 2로서 취출하였다. 펠릿을 4.0 mL의 인산염 완충 염수 (PBS)를 사용하여, 세척액 1, 세척액 2 및 세척액 3으로서 3회 세척하였다. 제1 원심분리 튜브 내의 펠릿을 3.0 mL의 에탄올에 재현탁시키고, 와류시키고, 초음파처리하여 펠릿으로부터 파클리탁셀을 추출하였다. 샘플을 다시 원심분리하고, 상청액을 펠릿 1로서 취출하였다. 제2 원심분리 튜브 내의 펠릿을 4.0 mL의 PBS에 재현탁시키고, 와류시키고, 초음파처리하고, 펠릿 2로서 취출하였다. 샘플을 파클리탁셀 함량에 대해 RP-HPLC에 의해, 또한 HSA 또는 트라스투주맙 함량에 대해 SEC-HPLC에 의해 분석하였다. 이들 결과가 표 6에 제시되어 있다.
표 6: 원심분리 분석에 의한, 증발-후 (PE) 현탁액 중 나노입자 (NP)와 회합된 HSA, 트라스투주맙 (Tz) 및 파클리탁셀 (PTX)
Figure pct00006
* = 8 mL의 프로세싱된 샘플을 기준으로 하여, 상청액 1, 상청액 2, 세척액 1, 세척액 2, 세척액 3 및 펠릿 2의 합산으로부터 결정된 총계.
실시예 14: 균질화 후 에멀젼에 트라스투주맙을 첨가하는 것에 의한 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
18.4 mL의 50 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA)을 1.6 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (90/10 CHCl3/에탄올에 용해됨)과 혼합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 수회의 사이클 동안 20-22 kpsi에서 균질화하여 미세 에멀젼을 형성하였다. 15 mL의 50 mg/mL HSA 용액을 균질화기에 첨가하여 미세 에멀젼이 되도록 하고, 22 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 수집된 미세 에멀젼을 즉각적으로 7.15 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (주사용수 (WFI)에 용해된 헤르셉틴®) 및 5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수를 함유하는 둥근 바닥 플라스크로 옮겼다. 둥근 바닥 플라스크를 회전 증발기로 옮기며, 여기서 에멀젼의 부피를 10 mL의 증발-후 현탁액으로 감소시켰다.
동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. DLS 측정은 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 수행하였다. 1 cm 사각 일회용 큐벳에서 1.5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 희석제를 20 μL의 증발-후 현탁액과 혼합하였다. 측정은 기기-선택된 감쇠기 수준 및 1.15 mm의 고정된 측정 위치를 사용하여 173˚의 검출 각도로 2분 평형 후에 25℃에서 실시하였다. 측정은 삼중으로 실시하였으며, 각각의 측정에 대해 60초의 지속기간을 가졌다. 크기 분포는 일반적 분석 모델, 1.465+0i의 입자 굴절률, 0.8872 cP의 분산제 점도 및 1.330+0i의 분산제 굴절률을 사용하여 계산하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경 (Z-평균)은 141.6 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.110인 것으로 결정되었다.
증발-후 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 18.18 mg/mL인 것으로 결정되었다. 총 HSA 농도 및 트라스투주맙 농도는 SEC-HPLC에 의해 각각 76 mg/mL 및 15.6 mg/mL인 것으로 측정되었다.
증발-후 현탁액을 -20℃에서 밤새 냉동시킨 후에, 해동시키고, 실온으로 평형화되도록 하였다. 다시 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여, 희석제로서 0.9% NaCl 생리 염수 또는 WFI를 사용한 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 0.9% NaCl 생리 염수가 희석제로서 사용된 경우에, 평균 입자 직경은 142.2 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.125인 것으로 결정되었다. WFI가 희석제로서 사용된 경우에, 평균 입자 직경은 2295 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.587인 것으로 결정되었다.
해동된 증발-후 현탁액을 2.7 mL의 WFI를 사용하여 10 mL의 최종 부피로 희석하였다. 8 mL (둘로 분할됨)의 희석된 증발-후 현탁액을 20℃에서 70분 동안 Ti45 회전자 및 테플론 인서트를 갖는 베크만 옵티마 LE-80 원심분리기를 사용하여 39,000 RPM으로 원심분리하여 나노입자를 펠릿화하였다. 상단 3 mL의 상청액을 상청액 1로서 취출하였고, 하단 ~1 mL의 상청액을 상청액 2로서 취출하였다. 펠릿을 4.0 mL의 인산염 완충 염수 (PBS)를 사용하여, 세척액 1, 세척액 2 및 세척액 3으로서 3회 세척하였다. 제1 원심분리 튜브로부터의 펠릿을 3.0 mL의 에탄올에 재현탁시키고, 와류시키고, 초음파처리하여 펠릿으로부터 파클리탁셀을 추출하였다. 샘플을 다시 원심분리하고, 상청액을 펠릿 1로서 취출하였다. 제2 원심분리 튜브 내의 펠릿을 4.0 mL의 PBS에 재현탁시키고, 와류시키고, 초음파처리하고, 펠릿 2로서 취출하였다. 샘플을 파클리탁셀 함량에 대해 RP-HPLC에 의해, 또한 HSA 또는 트라스투주맙 함량에 대해 SEC-HPLC에 의해 분석하였다. 이들 결과가 표 7에 제시되어 있다.
표 7: 원심분리 분석에 의한, 증발-후 (PE) 현탁액 중 나노입자 (NP)와 회합된 HSA, 트라스투주맙 (Tz) 및 파클리탁셀 (PTX)
Figure pct00007
* = 8 mL의 프로세싱된 샘플을 기준으로 하여, 상청액 1, 상청액 2, 세척액 1, 세척액 2, 세척액 3 및 펠릿 2의 합산으로부터 결정된 총계.
실시예 15: 증발-후 현탁액에 트라스투주맙을 첨가하는 것에 의한 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
18.4 mL의 50 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA)을 1.6 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (90/10 CHCl3/에탄올에 용해됨)과 혼합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 수회의 사이클 동안 20-22 kpsi에서 균질화하여 미세 에멀젼을 형성하였다. 15 mL의 50 mg/mL HSA 용액을 균질화기에 첨가하여 미세 에멀젼이 되도록 하고, 20 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 수집된 미세 에멀젼을 즉각적으로 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 7.9 mL의 최종 증발-후 현탁액 부피를 얻을 때까지 회전 증발기를 사용하여 프로세싱하였다.
동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. DLS 측정은, 150 μL의 증발-후 현탁액을 1.5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 희석함으로써 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 수행하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경 (Z-평균)은 140.2 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.088인 것으로 결정되었다.
증발-후 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 20.73 mg/mL인 것으로 결정되었다. 증발-후 현탁액의 HSA 농도는 SEC-HPLC에 의해 77.7 mg/mL인 것으로 측정되었다
증발-후 현탁액을 -20℃에서 밤새 냉동시킨 후에, 해동시키고, 실온으로 평형화되도록 하였다. 다시 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 평균 입자 직경은 132.3 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.094인 것으로 결정되었다.
증발-후 현탁액을 다시 -20℃에서 밤새 냉동시킨 후에, 해동시키고, 실온으로 평형화되도록 하였다. 해동 시 현탁액에 유백색이 관찰되었다. 해동된 증발-후 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 20.70 mg/mL인 것으로 결정되었다. 3.47 mL의 200 mg/mL HSA 및 11.37 mL의 21.5 mg/mL 트라스투주맙 (0.9% NaCl 생리 염수 중 헤르셉틴®)을 7.9 mL의 증발-후 현탁액에 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 인큐베이션되도록 하였다. 다시 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 트라스투주맙을 갖는 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 평균 입자 직경은 139.9 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.105인 것으로 결정되었다. 해동된 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 7.2 mg/mL인 것으로 결정되었다.
트라스투주맙을 갖는 현탁액을 1.2 μm 필터를 사용하여 여과하였다. 다시 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 여과된 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 평균 입자 직경은 136.9 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.119인 것으로 결정되었다. 해동된 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 7.1 mg/mL인 것으로 결정되었다. 여과된 현탁액을 4개의 2 mL 분취물로서 버티스 제네시스 EL25 셸프 동결건조기 (뉴욕주 가디너 소재 에스피 인더스트리즈(SP Industries))를 사용하여 동결건조시키고, -80℃에서 저장하였다.
여과된 현탁액의 제1 동결건조된 분취물을 -80℃로부터 제거하고, 실온으로 평형화하고, 2 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 재구성하고, 24시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 트라스투주맙을 갖는 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 평균 입자 직경은 141.4 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.081인 것으로 결정되었다.
여과된 현탁액의 제2 동결건조된 분취물을 -80℃로부터 제거하고, 실온으로 평형화하고, 2 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 재구성하였다. 10-15분 후에, 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 트라스투주맙을 갖는 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 평균 입자 직경은 141.8 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.112인 것으로 결정되었다.
실시예 16: 균질화 전 수성 용액에 트라스투주맙을 첨가하는 것에 의한 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
나노입자 조성물의 제1 배치를, 초기 혼합물의 수성 용액에 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 및 15 mg/mL 트라스투주맙을 함유하는 용액을 포함시킴으로써 제조하였다. 나노입자 조성물의 제2 배치를, 초기 혼합물의 수성 용액에 30 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 및 15 mg/mL 트라스투주맙을 함유하는 용액을 포함시킴으로써 제조하였다. 대조군으로서, 나노입자 조성물의 제3 배치를 트라스투주맙 없이 15 mg/mL HSA를 사용하여 제조하였다.
배치 1. 4.01 mL의 주사용수 (WFI), 1.425 mL의 200 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA), 13.57 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (주사용수 (WFI) 중 헤르셉틴®), 및 87.3 mg의 NaCl을 조합하여 15 mg/mL HSA 및 15 mg/mL 트라스투주맙을 함유하는 19 mL의 용액을 수득하였다. 1.6 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 (90/10 CHCl3/에탄올에 용해됨)을 18.4 mL의 HSA/트라스투주맙 용액에 첨가하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 수회의 사이클 동안 20-22 kpsi에서 균질화하여 미세 에멀젼을 형성하였다. 15 mL의 WFI를 균질화기에 첨가하여 미세 에멀젼이 되도록 하고, 20 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 생성되는 증발-후 현탁액의 부피가 5.6 mL가 될 때까지, 미세 에멀젼을 회전 증발기에 의해 프로세싱하였다. 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. DLS 측정은, 50 μL의 증발-후 현탁액을 1.5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 희석함으로써 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 수행하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경은 134.8 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.084인 것으로 결정되었다.
배치 2. 85.5 mg의 NaCl을 2.85 mL의 주사용수 (WFI)에 용해시켜 3% NaCl 염수 용액을 형성하였다. 2.85 mL의 200 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 및 13.57 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (주사용수 (WFI) 중 헤르셉틴®)을 3% NaCl 염수 용액과 조합하여 30 mg/mL HSA 및 15 mg/mL 트라스투주맙을 함유하는 19 mL의 용액을 수득하였다. 1.6 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 (90/10 CHCl3/에탄올에 용해됨)을 18.4 mL의 HSA/트라스투주맙 용액에 첨가하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 수회의 사이클 동안 20-22 kpsi에서 균질화하여 에멀젼을 형성하였다. 15 mL의 0.045% NaCl 염수를 균질화기에 첨가하여 미세 에멀젼이 되도록 하고, 20 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 생성되는 증발-후 현탁액의 부피가 5.4 mL가 될 때까지, 미세 에멀젼을 회전 증발기에 의해 프로세싱하였다. 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 배치 1에 대해 기재된 바와 같이 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경은 153.8 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.124인 것으로 결정되었다.
배치 3. 18.4 mL의 15 mg/mL HSA를 1.6 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 (90/10 CHCl3/에탄올에 용해됨)과 혼합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 수회의 사이클 동안 20-22 kpsi에서 균질화하여 에멀젼을 형성하였다. 15 mL의 15 mg/mL를 균질화기에 첨가하여 미세 에멀젼이 되도록 하고, 20 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 생성되는 증발-후 현탁액의 부피가 7.2 mL가 될 때까지, 미세 에멀젼을 회전 증발기에 의해 프로세싱하였다. 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 배치 1에 대해 기재된 바와 같이 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경은 142.9 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.133인 것으로 결정되었다.
배치 1, 배치 2 및 배치 3으로부터의 증발-후 현탁액의 파클리탁셀 농도를 RP-HPLC에 의해 측정하였다. 배치 1로부터의 증발-후 현탁액 중 파클리탁셀의 농도는 29.19 mg/mL이고, 배치 2로부터의 농도는 35.59 mg/mL이며, 배치 3으로부터의 농도는 22.77 mg/mL였다. 각각의 배치로부터의 증발-후 현탁액을 0.9% NaCl 생리 염수를 사용하여 7.00 mg/mL의 파클리탁셀 농도에 도달하도록 희석하였다.
각각의 배치로부터의 8 mL의 희석된 증발-후 현탁액을 2개의 원심분리 튜브로 분할하였다. 미사용 분량은 -20℃에서 냉동시켰다. 샘플을 20℃에서 70분 동안 Ti45 회전자 및 테플론 인서트를 갖는 베크만 옵티마 LE-80 원심분리기를 사용하여 39,000 RPM으로 원심분리하여 나노입자를 펠릿화하였다. 상단 3 mL의 상청액을 각각의 샘플로부터 상청액 1로서 취출하였고, 하단 ~1 mL의 상청액을 상청액 2로서 취출하였다. 펠릿을 4.0 mL의 인산염 완충 염수 (PBS)를 사용하여, 세척액 1 및 세척액 2로서 2회 세척하였다. 2개 중 제1 원심분리 튜브로부터의 펠릿을 3.0 mL의 에탄올에 재현탁시키고, 와류시키고, 초음파처리하여 펠릿으로부터 파클리탁셀을 추출하였다. 샘플을 다시 원심분리하고, 상청액을 펠릿 1로서 취출하였다. 2개 중 제2 원심분리 튜브로부터의 펠릿을 4.0 mL의 PBS에 재현탁시키고, 와류시키고, 초음파처리하고, 펠릿 2로서 취출하였다. 샘플을 파클리탁셀 함량에 대해 RP-HPLC에 의해, 또한 HSA 또는 트라스투주맙 함량에 대해 SEC-HPLC에 의해 분석하였다. 이들 결과가 표 8 및 9에 제시되어 있다.
표 8: 배치 1 - 원심분리 분석에 의한, 증발-후 (PE) 현탁액 중 나노입자 (NP)와 회합된 HSA, 트라스투주맙 (Tz) 및 파클리탁셀 (PTX)
Figure pct00008
*8 mL의 프로세싱된 샘플의 7.00 mg/mL 파클리탁셀 기준. ** = 8 mL의 프로세싱된 샘플을 기준으로 하여, 상청액 1, 상청액 2, 세척액 1, 세척액 2 및 펠릿 2의 합산으로부터 결정된 총계.
표 9: 배치 2 - 원심분리 분석에 의한, 증발-후 (PE) 현탁액 중 나노입자 (NP)와 회합된 HSA, 트라스투주맙 (Tz) 및 파클리탁셀 (PTX)
Figure pct00009
*8 mL의 프로세싱된 샘플의 7.00 mg/mL 파클리탁셀 기준. ** = 8 mL의 프로세싱된 샘플을 기준으로 하여, 상청액 1, 상청액 2, 세척액 1, 세척액 2 및 펠릿 2의 합산으로부터 결정된 총계.
실시예 17: 동결건조 전에 트라스투주맙을 첨가하는 것에 의한 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
36.8 mL의 50 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA)을 3.2 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (90/10 CHCl3/에탄올에 용해됨)과 혼합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 수회의 사이클 동안 20-22 kpsi에서 균질화하여 미세 에멀젼을 형성하였다. 20 mL의 50 mg/mL HSA 용액을 균질화기에 첨가하여 미세 에멀젼이 되도록 하고, 43 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 에멀젼을 즉각적으로 회전 증발기로 옮기고, 부피를 11.5 mL의 증발-후 현탁액 부피로 감소시켰다. 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. DLS 측정은, 50 μL의 증발-후 현탁액을 1.5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 희석함으로써 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 수행하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경은 149.1 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.151인 것으로 결정되었다. 증발-후 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 35.79 mg/mL인 것으로 결정되었고, 증발-후 현탁액의 HSA 농도는 SEC-HPLC에 의해 126.0 mg/mL인 것으로 결정되었다. 증발-후 현탁액을 추가로 하기와 같이, 2개의 별개의 배치로 프로세싱하였다.
배치 1. 4.60 mL의 증발-후 현탁액을 0.888 mL의 181.63 mg/mL HSA (주사용수 (WFI) 중) 및 10.98 mL의 2.7 mg/mL NaCl과 혼합하여 1:4.5의 파클리탁셀:알부민 비를 함유하는 16.46 mL의 최종 용액을 형성하였다 (트라스투주맙 무함유).
배치 2. 4.60 mL의 증발-후 현탁액을 0.888 mL의 181.63 mg/mL HSA (WFI 중) 및 10.98 mL의 22.5 mg/mL 트라스투주맙 (2.7 mg/mL NaCl로 재구성된 헤르셉틴®)과 혼합하여 1:4.5:1.5의 파클리탁셀:알부민:트라스투주맙 비를 함유하는 16.46 mL의 최종 용액을 형성하였다.
배치 1 또는 배치 2의 4 mL 분취물을 바이알에 분배하고, 버티스 제네시스 EL25 셸프 동결건조기 (뉴욕주 가디너 소재 에스피 인더스트리즈)를 사용하여 동결건조시켰다.
실시예 18: 동결건조 전에 트라스투주맙을 첨가하는 것에 의한 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
36.8 mL의 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA)을 3.2 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (90/10 CHCl3/에탄올에 용해됨)과 혼합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 수회의 사이클 동안 20-22 kpsi에서 균질화하여 미세 에멀젼을 형성하였다. 20 mL의 15 mg/mL HSA 용액을 균질화기에 첨가하여 미세 에멀젼이 되도록 하고, 약 40 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 에멀젼을 즉각적으로 회전 증발기로 옮기고, 부피를 9.9 mL의 증발-후 현탁액 부피로 감소시켰다. 동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. DLS 측정은, 50 μL의 증발-후 현탁액을 1.5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 희석함으로써 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 수행하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경은 161.8 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.118인 것으로 결정되었다. 증발-후 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 42.43 mg/mL인 것으로 결정되었고, 증발-후 현탁액의 HSA 농도는 SEC-HPLC에 의해 50.33 mg/mL인 것으로 결정되었다. 증발-후 현탁액을 추가로 하기와 같이, 2개의 별개의 배치로 프로세싱하였다.
배치 1. 3.90 mL의 증발-후 현탁액을 1.62 mL의 32.14 mg/mL HSA (주사용수 (WFI) 중) 및 11.03 mL의 2.7 mg/mL NaCl과 혼합하여 1:4.5의 파클리탁셀:알부민 비를 함유하는 16.55 mL의 최종 용액을 형성하였다 (트라스투주맙 무함유).
배치 2. 3.90 mL의 증발-후 현탁액을 1.62 mL의 32.14 mg/mL HSA (WFI 중) 및 11.03 mL의 22.5 mg/mL 트라스투주맙 (2.7 mg/mL NaCl로 재구성된 헤르셉틴®)과 혼합하여 1:1.5:1.5의 파클리탁셀:알부민:트라스투주맙 비를 함유하는 16.55 mL의 최종 용액을 형성하였다.
배치 1 또는 배치 2의 4 mL 분취물을 바이알에 분배하고, 버티스 제네시스 EL25 셸프 동결건조기 (뉴욕주 가디너 소재 에스피 인더스트리즈)를 사용하여 동결건조시켰다.
실시예 19: nab-파클리탁셀 및 트라스투주맙의 타임코스 혼합물과 비교하여, 동결건조 전에 트라스투주맙을 첨가함으로써 제조된 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자
표 10에 기재된 특징을 갖는 동결건조된 나노입자를 본 실시예를 위해 사용하였다.
표 10: 실시예 18을 위한 동결건조된 샘플
Figure pct00010
5.4 mg/mL NaCl에 용해된, 4 mL의 15 mg/mL 트라스투주맙 (헤르셉틴®)을 샘플 1 및 샘플 3으로부터의 바이알에 첨가하였다. 샘플을 10분 동안 인큐베이션한 후에 샘플을 특징화하고 원심분리하거나, 70분 동안 인큐베이션한 후에 샘플을 특징화하고 원심분리하거나, 또는 250분 동안 인큐베이션한 후에 샘플을 특징화하고 원심분리하였다. 4 mL의 7.2 mg/mL NaCl을 샘플 2 및 샘플 4에 첨가하였다. 샘플을 10분 동안 실온에서 인큐베이션한 후에 특징화하고 원심분리하였다. 샘플의 특징화는 동결점 강하 (어드밴스드 마이크로 삼투압계 모델 3300 (어드밴스드 인스트루먼츠, 인크.(Advanced Instruments, Inc.)))에 의한 오스몰랄농도, 동적 광 산란 (제타사이저 나노 ZS, 매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)에 의한 평균 입자 크기 (직경) 및 다분산 지수 (PDI), 파클리탁셀 함량 (RP-HPLC), 및 HSA 및 트라스투주맙 (Tz) 함량 (SEC-HPLC)의 결정을 포함하였다. 입자 크기 (Z-평균 직경), PDI 및 오스몰랄농도가 표 11에 제시되어 있다.
표 11: 재구성된 샘플의 입자 크기, PDI 및 오스몰랄농도
Figure pct00011
원심분리 분석을 위해, 3.6 mL의 샘플을 20℃에서 70분 동안 Ti45 회전자 및 테플론 인서트를 갖는 베크만 옵티마 LE-80 원심분리기를 사용하여 39,000 RPM으로 원심분리하여 나노입자를 펠릿화하였다. 각각의 샘플로부터 상청액을 취출하였다. 펠릿을 4.0 mL의 인산염 완충 염수 (PBS)를 사용하여, 세척액 1 및 세척액 2로서 2회 세척하였다. 펠릿을 3.0 mL의 에탄올에 재현탁시키고, 와류시키고, 초음파처리하여 펠릿으로부터 파클리탁셀을 추출하였다. 샘플을 다시 원심분리하고, 상청액을 펠릿 1로서 취출하였다. 나머지 다른 원심분리 튜브 내의 펠릿을 4.0 mL의 PBS에 재현탁시키고, 와류시키고, 초음파처리하고, 펠릿 2로서 취출하였다. 각각의 분획 내 파클리탁셀의 양을 RP-HPLC에 의해 결정하고, 각각의 분획 내 HSA 및 트라스투주맙 (Tz)의 양을 SEC-HPLC에 의해 결정하였다. 결과가 표 12에 제시되어 있다.
표 12: 원심분리 분석의 각각의 분획 내 파클리탁셀 (PTX), 알부민 (HSA) 및 트라스투주맙
Figure pct00012
Figure pct00013
* = 2회 측정의 평균.
실시예 20: 생체내 투여를 위한, 균질화 후 에멀젼에 트라스투주맙을 첨가하는 것에 의한 매립된 트라스투주맙, 파클리탁셀 및 알부민을 갖는 나노입자의 제조
27.6 mL의 15 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액 (물 중)을 2.4 mL의 200 mg/mL 파클리탁셀 용액 (CHCl3 및 에탄올의 90/10 혼합물)과 혼합하면서 조합하여 혼합물을 형성하였다. 혼합물을 아베스틴 균질화기로 옮기고, 20-22 kpsi에서 균질화하였다. 추가로 5 mL의 15 mg/mL HSA를 사용하여 혼합물을 보유한 용기를 세척하고, 이를 균질화기에 첨가하였다. 혼합물을 균질화기를 통해 수회의 사이클 동안 통과시킨 후에, 추가로 20 mL의 15 mg/mL HSA를 균질화기에 첨가하여 에멀젼이 되도록 하였다. 총 42 mL의 미세 에멀젼을 수집하였다. 1.2 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (0.9% NaCl 염수 중 헤르셉틴®) 및 10 mL의 0.9% NaCl 염수를 미세 에멀젼과 조합한 후에, 미세 에멀젼을 회전 증발에 적용하였다. 증발-후 현탁액의 부피가 약 10 mL로 감소되면, 증발-후 현탁액을 섬광 바이알로 옮겼다. 회전 증발기 플라스크를 1.5 mL 분취량의 주사용수 (WFI)로 2회 세척하고, 이를 섬광 바이알에 첨가하여 12.5 mL의 최종 부피의 증발-후 현탁액을 생성하였다.
동적 광 산란 (DLS)을 사용하여 증발-후 현탁액의 평균 입자 직경 (Z-평균) 및 다분산 지수 (PDI)를 측정하였다. DLS 측정은, 50 μL의 증발-후 현탁액을 1.5 mL의 0.9% NaCl 생리 염수로 희석함으로써 말번 제타사이저 나노 ZS (매사추세츠주 웨스트보러 소재 말번 인스트루먼츠)를 사용하여 수행하였다. 증발-후 현탁액에 대한 평균 입자 직경 (Z-평균)은 149.1 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.133인 것으로 결정되었다. 증발-후 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 28.7 mg/mL인 것으로 결정되었고, 증발-후 현탁액의 HSA 및 트라스투주맙 농도는 SEC-HPLC에 의해 각각 41.61 mg/mL 및 2.07 mg/mL인 것으로 결정되었다. 이어서, 증발-후 현탁액을 5℃에서 밤새 저장하였다.
증발-후 현탁액을 냉각 저장으로부터 제거하고, 실온으로 평형화되도록 하였다. 11.27 ml의 200 mg/mL HSA 및 34.03 mL의 0.9% NaCl 염수를 12 mL의 증발-후 현탁액과 혼합하여 57.3 mL의 부피를 생성하였다. 희석된 현탁액을 일련의 멸균 필터를 사용하여 여과하여, 49.7 mL의 여과-후 부피를 생성하였다. DLS에 의해, 여과된 현탁액에 대한 평균 입자 직경 (Z-평균)은 149.2 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.13인 것으로 결정되었다. 여과된 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 5.693 mg/mL인 것으로 결정되었다.
0.32 mL의 21 mg/mL 트라스투주맙 (헤르셉틴®) 및 6.56 mL의 0.9% NaCl 염수를 49.7 mL의 여과된 현탁액에 첨가하여, 5 mg/mL 파클리탁셀 및 0.5 mg/mL 트라스투주맙을 함유하는 56.58 mL의 현탁액을 생성하고, 이를 완만하게 혼합하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 보정된, 여과된 현탁액을 다시 분석하였다. DLS에 의해, 평균 입자 직경 (Z-평균)은 149 nm인 것으로 결정되었고, PDI는 0.13인 것으로 결정되었다. 여과된 현탁액의 파클리탁셀 농도는 RP-HPLC에 의해 5.4 mg/mL인 것으로 결정되었다. 트라스투주맙 농도는 SEC-HPLC에 의해 0.5 mg/mL인 것으로 결정되었다. 오스몰랄농도는 288 mOsm인 것으로 결정되었다. 현탁액을 3 mL 분취량으로 분배하고, -80℃에서 저장하였다.
실시예 21: 접합 제제의 특징화 방법
하기 실시예에서 이뮤노블롯, SDS-PAGE 겔 및 ELISA 검정은, 달리 명시되지 않는 한, 본 실시예에 상술된 프로토콜에 따라 수행된다.
네이티브 겔 이뮤노블롯
이 프로토콜에서 사용되는 물질은 하기를 포함하였다: 샘플 완충제: 노벡스(Novex)™ 트리스-글리신 네이티브 샘플 완충제 (2X) (Cat# LC2673); 전개 완충제: 노벡스™ 트리스-글리신 네이티브 전개 완충제 (10X) (Cat# LC2672); 단백질 겔: 누페이지(NuPAGE)™ 3-8% 트리스-아세테이트 단백질 겔, 1.0 mm, 10-웰 (Cat#EA0375BOX); 및 웨스턴 블롯 키트: 트랜스-블롯 터보 RTA 미니 니트로셀룰로스 트랜스퍼 키트 (Cat#1704270).
샘플을 PBS를 사용하여 0.1-2 mg/μL의 농도 범위로 희석하였다. 희석된 샘플을 트리스-글리신 네이티브 샘플 완충제와 1:1 (v/v) 혼합하고, 이어서 잠시 와류시켰다. 1종의 단백질 겔을 갖는 겔 탱크를 제조하였다 (샘플 수에 기초하여 2종의 단백질 겔이 사용될 수 있음). 샘플을 웰에 로딩하였다 (웰당 약 16-20 μL). 겔을 90분 동안 200 V, 120 mA에서 전개시켰다. 겔을 전개시킨 후, 겔을 그의 케이스로부터 제거하고, 물로 세척하였다.
겔의 단백질을 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 막을 TBST로 세척하고, 실온에서 1시간 동안 20 mL의 리코르 차단 용액 중에서 인큐베이션하였다. 이어서, 막을 TBST로 3회 세척하고, 항-HSA (1:5000, 마우스) 및 항-인간 IgG (1:5000, 토끼) 1차 항체와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. (임의적으로, 이러한 인큐베이션은 실온에서 1시간 동안 수행될 수 있다.)
막을 TBST로 3회 세척하였다 (매회 5분 동안 인큐베이션함). 막을 실온에서 45분 동안 항-마우스 (1:20000, 680 nm) 및 항-토끼 (1:20000, 800nm)와 함께 인큐베이션하였다.
막을 TBST로 3회 세척하였다 (매회 5분 동안 인큐베이션함). 막을 탈이온수로 잠시 세척하고, 이어서 리코르를 사용하여 영상화하였다.
SDS-PAGE 이뮤노블롯
이 프로토콜에서 사용되는 물질은 하기를 포함하였다: SDS 전개 완충제: LDS 샘플 완충제, 비-환원성 (4X) (Cat# 84788); 겔 전개 완충제: 노벡스™ MOPS SDS 전개 완충제 (20X) (Cat# NP0001); 겔 전개 완충제: 노벡스™ 트리스-아세테이트 SDS 전개 완충제 (20X) (Cat# LA0041); 단백질 겔: 누페이지™ 3-8% 트리스-아세테이트 단백질 겔, 1.0 mm, 10-웰 (Cat#EA0375BOX); 단백질 겔: 누페이지™ 4-12%, 1.0 mm, 10-웰 (Cat# NP0321PK2); 및 웨스턴 블롯 키트: 트랜스-블롯 터보 RTA 미니 니트로셀룰로스 트랜스퍼 키트 (Cat#1704270).
샘플을 PBS를 사용하여 1-2 mg/mL의 농도 범위로 희석하였다. 250 mM NEM 용액을 제조하였다 (1 mL의 물 중 31 μg의 NEM). SDS-PAGE (비-환원성) 마스터 믹스를 제조하였다 (60 μL의 1x SDS 전개 완충제 + 100 μL의 4x SDS 로딩 완충제 + 40 μL의 250 mM NEM). 희석된 단백질 샘플을 마스터 믹스와 1:1 (v/v) 혼합하고, 이어서 잠시 와류시켰다. 샘플을 10분 동안 70℃에서 인큐베이션하였다.
1종의 단백질 겔을 갖는 겔 탱크를 제조하였다 (샘플 수에 기초하여 2종의 단백질 겔이 사용될 수 있음). 샘플을 웰에 로딩하였다 (웰당 약 16-20 μL). 겔을 45분 동안 200 V, 120 mA에서 전개시켰다. 겔을 전개시킨 후, 겔을 그의 케이스로부터 제거하고, 물로 세척하였다.
겔의 단백질을 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 막을 TBST로 세척하고, 실온에서 1시간 동안 20 mL의 리코르 차단 용액 중에서 인큐베이션하였다. 이어서, 막을 TBST로 3회 세척하고, 항-HSA (1:5000, 마우스) 및 항-인간 IgG (1:5000, 토끼) 1차 항체와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. (임의적으로, 이러한 인큐베이션은 실온에서 1시간 동안 수행될 수 있다.)
막을 TBST로 3회 세척하였다 (매회 5분 동안 인큐베이션함). 막을 실온에서 45분 동안 항-마우스 (1:20000, 680 nm) 및 항-토끼 (1:20000, 800nm)와 함께 인큐베이션하였다.
막을 TBST로 3회 세척하였다 (매회 5분 동안 인큐베이션함). 막을 탈이온수로 잠시 세척하고, 이어서 리코르를 사용하여 영상화하였다.
ELISA
이 프로토콜에서 사용되는 물질은 하기를 포함하였다: ELISA 검정 키트 (#IG-AA105, 이글 바이오사이언스).
제공된 표준 샘플을 100 ng/mL, 60 ng/mL, 20 ng/mL, 6 ng/mL에서의 표준물 및 블랭크를 생성하도록 희석하였다. Mab-접합된 입자 용액을 희석 완충제에 의해 직접적으로 다양한 샘플 포맷에 따라 1:1000 내지 1:10000으로 희석하였다.
100 μL의 검정 완충제를 사용하려는 각각의 웰에 피펫팅하였다. 100 μL의 표준물 또는 샘플을 마이크로타이터 플레이트의 각각의 웰에 피펫팅하였다. 플레이트를 접착 밀봉제로 덮고, 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다.
접착 밀봉제를 제거하고, 인큐베이션 용액을 가만히 따라내었다. 플레이트를 웰당 3X300 μL의 세척 완충제로 세척하였다. 과량의 용액은 전도된 플레이트를 종이 수건에 대고 가볍게 두드려서 제거하였다. 100 μL의 효소 접합체를 각각의 웰에 피펫팅하였다. 플레이트를 접착 밀봉제로 덮고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다.
접착 밀봉제를 제거하고, 인큐베이션 용액을 가만히 따라내었다. 플레이트를 웰당 3X300 μL의 세척 완충제로 세척하였다. 과량의 용액은 전도된 플레이트를 종이 수건에 대고 가볍게 두드려서 제거하였다. 100 μL의 TMB 기질 용액을 각각의 웰에 피펫팅하였다. 플레이트를 접착 밀봉제로 덮고, 20분 동안 암실에서 인큐베이션하였다.
접착 밀봉제를 제거하고, 100 μL의 정지 용액을 각각의 웰에 피펫팅하였다. 정지 용액을 피펫팅한 후에, 흡광도를 측정하였다 (450 nm).
실시예 22: SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙을 통한 트라스투주맙 및 유리 인간 혈청 알부민의 접합
본 실시예에 기재된, 항체 및 유리 인간 혈청 알부민 (HSA)의 접합에 대한 개략도가 도 13에 제시되어 있다. 1 mL의, 생리 염수 중 21 mg/mL 헤르셉틴®을 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다 (MW 컷오프 30,000 KDa). 스핀 농축기에 100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 충전하고, 35분 동안 3750 rpm으로 원심분리하였다. 스핀 농축기에 인산염 완충제 (pH 6.6)를 1회 더 충전하고, 35분 동안 3750 rpm으로 원심분리하였다. 생성된 트라스투주맙 용액을 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 2 mL의 총 부피로 희석하였다. 트라스투주맙 용액 농도를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정하고, 필요에 따라 10.5 mg/mL로 조정하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃로부터 제거하고, 1시간 동안 실온으로 가온하였다. 122 μL의 디메틸 술폭시드 (DMSO)를 8.3 mg의 SM(PEG)6에 첨가하였다 (112 mM의 최종 농도). 링커가 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다. 1 mL의 트라스투주맙 용액을 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 각각의 튜브에, 3.4 μL의 링커 용액을 천천히 첨가하였다 (링커:트라스투주맙의 화학량론적 비는 5:1임). 여전히 용액을 빛으로부터 보호하면서, 링커/트라스투주맙 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다. 5 mL 탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척하였다 (각각의 원심분리마다 6분 동안 1,000 RCF). 링커/트라스투주맙 용액을 탈염 칼럼을 통해 여과하여 임의의 미반응 링커를 제거하였다. 활성화된 트라스투주맙 용액을 수집하고, 0.8 mL의 분취량을 에펜도르프 튜브에 피펫팅하였다. 200 μL의 200 mg/mL (3 mM) 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 4 mL 스핀 농축기에서 4 mL로 희석하였다 (MW 컷오프 10,000 kDa). 샘플을 제조업체의 지침에 따라 20분 동안 원심분리하였다. 이러한 희석 및 원심분리를 1회 더 반복하였다. 생성된 용액을 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 0.8 mL의 최종 부피로 희석하였다. 후속적으로 0.8 mL의 활성화된 트라스투주맙 용액 (0.07 mM)을 0.8 mL의 HSA 용액 (0.75 mM)에 첨가하였다. 용액을 밤새 인큐베이션하였다.
유사한 프로토콜을 사용하여, 활성화된 트라스투주맙을 다양한 링커 로딩 비 및 링커 반응 조건 (예컨대 접합 반응의 상이한 pH 조건)을 사용하여 추가로 생산하였다. 인산염 완충제 (pH 6.6) 및 10X 링커 로딩을 사용하여 SM(PEG)6과 가교되어 있는 활성화된 트라스투주맙에 대해 SEC 분석을 수행하였다. pH 6.6 및 10X 링커 로딩에서, 트라스투주맙 응집은 총 항체 양의 약 2% 미만이었다. SEC 분석을 또한 PBS 염수 (pH 7.4) 및 20X 링커 로딩을 사용하여 SM(PEG)6과 가교되어 있는 활성화된 트라스투주맙에 대해서도 수행하였다. pH 7.4 및 20X 링커 로딩에서, 트라스투주맙 응집은 총 항체 양의 약 30%였다.
SEC 분석을 수행하여 SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙 및 비접합된 트라스투주맙을 비교하였다. 접합은, SM(PEG)6 및 트라스투주맙이 10:1의 비로 사용된 경우에, 트라스투주맙의 고분자량 (HMW) 종의 양을 유의하게 증가시키지 않았다 (트라스투주맙: 총 항체 중 0.6% HMW; SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙: 총 항체 중 1.7% HMW).
도 14a-14c는 트라스투주맙 (도 14a), 1:5의 트라스투주맙:링커 비를 사용하여 SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙 (도 14b), 및 1:10의 트라스투주맙:링커 비를 사용하여 SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙 (도 14c)의 디콘볼루션된 질량 스펙트럼을 제시한다. SM(PEG)6 접합을 갖지 않는 트라스투주맙을 나타내는 동위원소 클러스터가 나타나 있고 (1:0; 트라스투주맙:SM(PEG)6), 트라스투주맙 상의 N-글리칸은 절단되지 않은 것으로 관찰되었다 (도 14a). 1:5의 트라스투주맙:링커 비를 사용하면, 활성화된 트라스투주맙의 가장 대표적인 종이 1:0, 1:1, 1:2 및 1:3 (트라스투주맙:SM(PEG)6)이다 (도 14b). 1:10의 트라스투주맙:링커 비를 사용하면, 활성화된 트라스투주맙의 가장 대표적인 종은 1:1, 1:2, 1:3 및 1:4 (트라스투주맙:SM(PEG)6)이다 (도 14c).
트라스투주맙 및 HSA의 1:1 SM(PEG)6 접합체를 SEC를 사용하여 단리하였다 (도 15; 접합체, 트라스투주맙 및 HSA의 분리된 피크를 제시함). 접합체의 질량은 질량 분광측정법을 사용하여 215498.52 Da인 것으로 확인되었다.
5:1 및 10:1의 링커:항체 반응 비로부터의 SM(PEG)6 트라스투주맙-HSA 접합체를 SDS-PAGE 겔에 의해 확인하였으며, 이는 1:1의 트라스투주맙:HSA, 및 예를 들어 1:2 및 1:3을 포함한 보다 고차의 접합체의 존재를 제시하였다 (도 16). 트라스투주맙:HSA 접합체를 이뮤노블롯에 의해 확인하였다 (데이터는 제시되지 않음).
SM(PEG)6 접합된 트라스투주맙의 샘플을 분석하는 네이티브 겔을 수행하였다 (도 17). 트라스투주맙의 pI는 8.5이고, 트라스투주맙이 접합되지 않았다면 겔로 이동하지 않을 것이다 (레인 D; 도 17). 레인 A에서, 1:1의 트라스투주맙-HSA 접합체가 화살표에 의해 지시되어 있다 (도 17). 레인 B 및 C는 각각 10:1의 링커:항체 비 및 5:1의 링커:항체 비를 제시한다 (알부민에 대한 접합 부재) (도 17).
실시예 23: SM(PEG)6 활성화된 트라스투주맙을 통한 트라스투주맙 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합
본 실시예에 기재된 바와 같은, 활성화된 항체 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합에 대한 개략도가 도 18에 제시되어 있다. 이 프로토콜에서 사용되는 물질은 하기와 같았다: (a) nab-파클리탁셀 (100 mg의 파클리탁셀 바이알, 로트 # 013397); (b) 헤르셉틴® (트라스투주맙, 440 mg의 바이알, 21 mg/mL, 로트# 3157971); (c) 생리 염수, USP 등급 (알엠바이오(RMBIO) 로트 #20607161); (d) 밀리큐 물, 18.4 MOhms·cm 및 4 ppb TOC; (e) 섬광 바이알 (VWR, 20-mL 일회용 섬광 바이알); (f) 15 mL 폴리프로필렌 원추형 튜브 (팔콘(Falcon), P/N 352097); (g) 제파 스핀 탈염 칼럼 7K MWCO, 5mLs (Cat # 89892, 로트 # SC245087); (h) DMSO (시그마(Sigma), Cat # D2438-50mL, 로트 # RNBG0012); (i) SM(PEG)6 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific), Cat # 22105, 로트 # SD249151); 및 (j) 인산염 완충 염수 정제 (시그마, Cat # P4417-50TAB, 로트# SLBS4223).
nab-파클리탁셀 나노입자를 1개의 바이알의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)로부터 단리하였다. 20 mL의 생리 염수를 바이알에 첨가하여 나노입자로 재구성하고, 1.2 mL의 재구성된 nab-파클리탁셀 제제를 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브를 완만하게 20분 동안 혼합하였다. 1개의 에펜도르프 튜브를 사용하여 RP-HPLC에 의해 파클리탁셀 함량을 결정하고 입자 크기를 측정하였다. 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하였다. 0.6 mL의 생리 염수를 잔류하는 펠릿에 첨가하여 나노입자를 재구성하였다 (10 mg/mL의 파클리탁셀의 최종 농도).
21 mg/mL 헤르셉틴® (트라스투주맙) 용액을 생리 염수를 사용하여 제조하였다. 1.2 mL의 헤르셉틴® 용액을 2개의 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다. 100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 내독소 무함유 물을 사용하여 제조하고, 여과하였다. 스핀 농축기에 pH 6.6 인산염 완충제를 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 이를 1회 반복하였다. 잔류하는 트라스투주맙 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 2.4 mL의 총 부피로 희석하였다. 트라스투주맙 농도를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정하였다. 트라스투주맙 농도는 필요에 따라 10.5 mg/mL로 조정하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃ 냉동기로부터 제거하고, 1시간 동안 실온으로 가온하였다. 2 mL의 멸균 DMSO 용액을 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 이 에펜도르프 튜브로부터, 1.51 mL의 DMSO를 100 mg의 SM(PEG)6을 함유하는 바이알로 옮겼다 (112 mM의 최종 농도). 링커가 DMSO에 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다.
1 mL의 10.5 mg/mL 트라스투주맙 용액을 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 1 mL의 트라스투주맙 용액을 함유하는 각각의 에펜도르프 튜브에, 5.1 μL의 링커 용액을 천천히 첨가하였다 (링커 대 항체의 비는 7.5:1임; 15:1 초과의 비를 사용하면 항체 응집을 유발함). 이러한 절차 동안, 용액을 빛으로부터 보호하였다. 여전히 빛으로부터 보호하면서, 링커/항체 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다. 입자 크기는 동적 광 산란에 의해 157 nm인 것으로 결정되었다.
5 mL 탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척하였다 (각각의 원심분리마다 5분 동안 1000G). 활성화된 항체 용액을 탈염 칼럼을 통해 여과하여 미반응 링커를 제거하였다. 여과물을 수집하고 풀링하였다. 트라스투주맙 및 링커의 비를 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 결정하였다. 600 μL의 활성화된 트라스투주맙을 600 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 이어서, 용액을 밤새 4℃에서 인큐베이션하였다 (진탕 또는 교반은 회피함).
접합 용액을 냉장기로부터 꺼내었다. 용액은 에펜도르프 튜브의 표면 상에 응집체를 갖지 않았다.
접합 용액을 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하고, 각각의 튜브를 PBS 염수로 1회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수 (pH 7.4)로 제조하였다. 800 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 각각의 튜브에 분취하였다. 이어서, 튜브를 20초 동안 초음파처리한 다음, 혼합하였다 (나노입자가 완전히 재현탁될 때까지, 이 단계를 수회 반복함).
파클리탁셀 함량을 RP-HPLC에 의해 측정하였다. 이어서, 생성된 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
이뮤노블롯을 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자 및 트라스투주맙 접합된 입자로부터의 샘플에 대해 수행하여, 1:1의 트라스투주맙-HSA 접합 뿐만 아니라 1:2, 1:3 및 1:4를 포함한 보다 고차의 접합체의 존재를 확인하였다. 이뮤노블롯을 수행하기 전에, 입자 샘플을 먼저 에탄올에 용해시켜 파클리탁셀을 가용화시킨 다음, 10,000 RCF로 원심분리하였다. 생성된 펠릿을 이뮤노블롯 분석을 위해 PBS에 재현탁시켰다.
트라스투주맙에 대한 접합 전후에 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자로부터의 입자의 알부민 이성질체 프로파일 (예를 들어, 알부민 단량체의 양)을 SEC를 사용하여 결정하였다. 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자 및 트라스투주맙과 접합되어 있는 단리된 nab-파클리탁셀 입자에 대한 알부민 단량체 대 총 알부민의 비가 표 13에 제공되어 있다.
표 13: 알부민 단량체 비.
Figure pct00014
단리된 nab-파클리탁셀 나노입자의 분취물 및 입자 단리 없이 nab-파클리탁셀 제제 (ABX)의 분취물에 대한 SM(PEG)6 접합의 비교를 수행하였다. 접합 반응으로부터의 샘플 및 표준물의 SDS-PAGE 겔이 도 20에 제시되어 있으며, 여기서 레인 1, 2 및 3은 트라스투주맙-HSA 접합체의 존재를 제시한다. 레인 3 및 5의 비교는 1:1의 트라스투주맙:HSA 접합체 뿐만 아니라 보다 고차의 접합체를 포함하여, 본원에 기재된 방법을 사용한 트라스투주맙의 HSA 접합의 존재를 제시한다. 이뮤노블롯을 수행하였으며, 보다 고차의 트라스투주맙:HSA 접합체를 포함하여, 트라스투주맙:HSA 접합체의 존재를 확인하였다.
실시예 24: 상이한 스페이서 길이를 갖는 링커를 사용하는 항체 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합
본 실시예는 SM(PEG)6 (32.6 옹스트롬), SM(PEG)2 (17.5 옹스트롬) 및 SMCC (8 옹스트롬) 활성화된 항체를 통한, 항체 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합을 입증한다.
접합된 입자를, 지시된 링커가 사용되는 것을 제외하고는 실질적으로 실시예 23에 기재된 바와 같이 제조하였다. 10 mg/mL 항체-링커 접합체 (5:1의 링커 대 항체 비로 제조됨)를 염수 중 재구성된 10 mg/mL nab-파클리탁셀에 첨가하였다. 원심분리 및 5% HSA 중 재현탁 후에, 항체 농도를 ELISA를 사용하여 측정하였고, 파클리탁셀 함량을 RP-HPLC를 사용하여 측정하였다. 나노입자 제제의 파클리탁셀/트라스투주맙 (Tz) 질량비가 표 14에 기록되어 있다.
nab-파클리탁셀 입자 표면 상의 총 유리 술프히드릴 기는 4.5 mg/mL nab-파클리탁셀 현탁액에 대해 0.66 μM인 것으로 측정되었다. 이는 4% 몰비의 HSA를 나타낸다 (천연 유리 HSA가 40%의 유리 술프히드릴을 함유함).
표 14. 트라스투주맙 농도 및 파클리탁셀/Tz 비
Figure pct00015
실시예 25: 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자의 활성화 및 트라스투주맙의 활성화를 통한 트라스투주맙 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합
본 실시예에 기재된, 활성화된 항체 및 티올화되어 있는 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합에 대한 개략도가 도 19에 제시되어 있다.
nab-파클리탁셀 제제로부터 나노입자를 단리하기 위해, 20 mL의 생리 염수를 1개의 바이알의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)에 첨가하였다. 1.2 mL의 nab-파클리탁셀 제제를 1.5 mL 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브를 완만하게 20분 동안 혼합하였다. 1개의 에펜도르프 튜브를 사용하여 RP-HPLC에 의해 파클리탁셀 함량을 결정하고 입자 크기를 측정하였다. 평균 입자 크기는 147 nm였다. 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하였다. 500 μL의 아세트산나트륨 (pH 8.0) 및 150 mM 염화나트륨을 생성된 펠릿에 첨가하여 나노입자를 재구성하였다 (nab-파클리탁셀 입자 농도는 10 mg/mL의 파클리탁셀이고; 2.5 mg/mL (0.0376 mM)의 HSA를 함유함).
트라우트 시약을 WFI에 2 mg/mL (14.5 mM)의 농도로 용해시켰다. 목적하는 티올화도에 따라, 15 μL 내지 60 μL (각각 10:1 내지 40:1의 링커:HSA 비)의 트라우트 시약을 단리된 나노입자 용액에 천천히 첨가하고, 4℃에서 70분 동안 반응시켰다. 2.4 μL의 500 mM EDTA (pH 8.0)를 첨가하고, 4℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 4℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 튜브를 원심분리기로부터 제거하고, 가만히 따라내고, PBS 염수로 2회 세척하였다. 단리되고 활성화된 nab-파클리탁셀 입자를 500 μL의 PBS 염수에 재현탁시키고, 1분 동안 초음파처리하여 입자를 재현탁시켰다. 입자 크기는 150 nm인 것으로 측정되었다.
단리된 nab-파클리탁셀 입자의 상이한 화학량론의 트라우트 시약을 통한 티올화 후에, 입자를 단백질 티오 형광 검출 키트 (인비트로젠(Invitrogen))에 의해 분석하였다. 4.6 mg/mL의 파클리탁셀 농도를 갖는 나노입자에 대해, 티올 기의 농도를 결정하였다 (표 15).
표 15: 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자의 티올화.
Figure pct00016
21 mg/mL 헤르셉틴® (트라스투주맙) 용액을 생리 염수를 사용하여 제조하였다. 1 mL의 헤르셉틴® 용액을 각각의 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다. 100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 내독소 무함유 물을 사용하여 제조하고, 여과하였다. 스핀 농축기에 pH 6.6 인산염 완충제를 충전하고, 35분 동안 3750 rpm으로 원심분리하였다. 이를 1회 반복하였다. 잔류하는 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 2.4 mL의 총 부피로 희석하였다. 트라스투주맙 농도를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정하였다. 트라스투주맙 농도는 필요에 따라 10.5 mg/mL로 조정하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃ 냉동기로부터 제거하고, 1시간 동안 실온으로 가온하였다. 2 mL의 멸균 DMSO 용액을 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 이 에펜도르프 튜브로부터, 122 μL의 DMSO를 8.3 mg의 SM(PEG)6을 함유하는 바이알로 옮겼다 (112 mM의 최종 농도). 링커가 DMSO에 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다.
1 mL의 트라스투주맙 용액을 각각의 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 3.4 μL의 SM(PEG)6 링커 용액을 1 mL의 트라스투주맙을 함유하는 각각의 튜브에 천천히 첨가하였다. 이러한 절차 동안, 용액을 빛으로부터 보호하였다. 여전히 빛으로부터 보호하면서, 링커/항체 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다.
5 mL 탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척하였다 (각각의 원심분리마다 6분 동안 1000 G). 활성화된 항체 용액을 탈염 칼럼을 통해 여과하여 미반응 링커를 제거하였다. 여과물을 수집하고 풀링하였다. 트라스투주맙 및 링커의 비를 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 결정하였다.
500 μL의 활성화된 트라스투주맙을 500 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 이어서, 용액을 밤새 4℃에서 인큐베이션하였다 (진탕 또는 교반은 회피함).
접합 용액을 4℃로부터 제거하였다. 용액은 에펜도르프 튜브의 표면 상에 응집체를 갖지 않았다. 입자 크기를 측정하였다. 평균 입자 크기는 10:1의 티올화 링커:HSA에 대해서는 159 nm이고, 20:1의 티올화 링커:HSA에 대해서는 166 nm이며, 30:1의 티올화 링커:HSA에 대해서는 215.9 nm이며, 40:1의 티올화 링커:HSA에 대해서는 734.1 nm였다.
접합 용액을 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하고, 각각의 튜브를 PBS 염수로 2회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수로 제조하였다. 800 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 각각의 튜브에 분취하였다. 이어서, 튜브를 20초 동안 초음파처리하고 혼합하였다 (나노입자가 완전히 재현탁될 때까지, 이 단계를 수회 반복함).
파클리탁셀 함량을 RP-HPLC를 사용하여 측정하였다. 이어서, 파클리탁셀 농도를 요구되는 농도에 따라 조정하였다. 최종 제제에 대한 입자 크기 및 파클리탁셀 농도를 측정하였다. 평균 입자 크기는 10:1의 티올화 링커:HSA에 대해서는 159.8 nm이고, 20:1의 티올화 링커:HSA에 대해서는 171.5 nm이며, 30:1의 티올화 링커:HSA에 대해서는 175.8 nm이며, 40:1의 티올화 링커:HSA에 대해서는 196.4 nm였다. 이어서, 생성된 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
최종 접합된 트라스투주맙 (Tz) 농도를 ELISA에 의해 측정하였고, 파클리탁셀 (PTX) 농도를 RP-HPLC에 의해 측정하였다. (표 16).
표 16: 접합된 입자의 농도 측정.
Figure pct00017
실시예 26: 구리-무함유 클릭 화학을 사용하는 트라스투주맙 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합
구리-무함유 클릭 화학을 사용하는 항체 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합에 대한 개략도가 도 21에 제시되어 있다.
nab-파클리탁셀 조성물로부터 나노입자를 단리하기 위해, 20 mL의 생리 염수를 1개의 바이알의 동결건조된 nab-파클리탁셀 (100 mg의 파클리탁셀)에 첨가하였다. 1.2 mL의 nab-파클리탁셀 제제를 16개의 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브를 완만하게 20분 동안 혼합하였다. 1개의 에펜도르프 튜브를 HPLC 검정을 위해 사용하여 RP-HPLC에 의해 파클리탁셀 함량을 결정하였다. 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하였다. 600 μL의 PBS (pH 7.4)를 생성된 펠릿에 첨가하여 나노입자를 재구성하였다 (약 10 mg/mL의 파클리탁셀의 nab-파클리탁셀 농도).
3 mg의 링커 시약을 150 μL의 DMSO에 용해시킴으로써 29 mM 디아릴시클로옥틴 (DBCO)-PEG5-NHS 용액을 만들었다. 15 μL (20:1; 링커:HSA) 또는 30 μL (40:1; 링커:HSA)의 DBCO 용액을 단리된 나노입자의 각각의 분취물에 첨가하고, 현탁액을 실온에서 70분 동안 반응되도록 하였다. 이어서, 샘플을 4℃에서 70분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 샘플을 가만히 따라내어 상청액을 제거하고, PBS 염수로 2회 세척하였다. 500 μL의 PBS 염수를 펠릿화된 나노입자에 첨가한 다음, 샘플을 초음파처리하여 나노입자를 재현탁시켰다.
21 mg/mL 헤르셉틴® (트라스투주맙) 용액을 생리 염수를 사용하여 제조하였다. 6 mL의 항체 용액을 2개의 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다. 스핀 농축기에 100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 이를 1회 반복하였다. 잔류하는 트라스투주맙 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 12 mL의 총 부피로 희석하였다. 트라스투주맙 농도는 필요에 따라 10.5 mg/mL로 조정하였다.
아지도-PEG5-NHS를 -20℃로부터 제거하고, 1시간 동안 실온으로 가온하였다. 4.03 mg의 아지도-PEG5-NHS를 바이알에 칭량하여 넣고, 82 μL의 DMSO를 첨가하였다 (112 mM 용액). 링커가 완전히 용해될 때까지, 용액을 볼텍싱하였다.
1.5 mL의 항체 용액을 별개의 튜브에 분취하였다. 5.1 μL (5:1의 링커:항체 비) 또는 10.2 μL (10:1의 링커:항체 비)를 항체 용액을 함유하는 각각의 튜브에 천천히 첨가하였다. 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응되도록 하였다.
2개의 5 mL 탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척하였다 (각각의 원심분리마다 6분 동안 1000G). 활성화된 항체 용액을 탈염 칼럼을 통해 여과하여 미반응 링커를 제거하였다. 여과물을 수집하고 풀링하였다. 트라스투주맙 및 링커의 비를 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 결정하였다.
500 μL의 활성화된 트라스투주맙을 500 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 용액을 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 다음, 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 접합 용액을 4℃로부터 제거하였다. 용액은 에펜도르프 튜브의 표면 상에 응집체를 갖지 않았다. 입자 크기를 측정하였다.
접합 용액을 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하고, 각각의 튜브를 PBS 염수로 2회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수로 제조하였다. 800 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 각각의 튜브에 분취하였다. 이어서, 튜브를 나노입자가 완전히 재현탁될 때까지 초음파처리하였다. 이어서, 생성된 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
입자 크기는 169 nm인 것으로 결정되었다. 입자와 회합된 최종 파클리탁셀 농도는 5.73 mg/mL (RP-HPLC)인 것으로 결정되었고, 최종 트라스투주맙 농도는 0.11 mg/mL인 것으로 결정되었다.
실시예 27: 보론산-개질된 nab-파클리탁셀
본 실시예에 기재된 바와 같은, 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 보론산 개질에 대한 개략도가 도 22에 제시되어 있다. 활성화된 NHS 에스테르를 제조하기 위해, 4-(2-카르복시에틸)벤젠보론산 (16mg, 82.4 μmol, MW = 193.99), N,N'-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC, 17.04 mg, 82.4 μmol) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS, 9.52 mg, 82.4 μmol)를 1 mL의 DMF에 용해시키고, 2시간 동안 실온에서 섞어주었다.
입자를 600 μL의 PBS 완충제 (pH 7.4)에 재현탁시켜 10 mg/mL 나노입자 현탁액을 만들었다.
활성화된 NHS 에스테르의 3가지 비를 시험하였다 (나노입자 중량의 25%가 알부민에 기인하는 것으로 가정하여, 20:1, 40:1 및 80:1의 NHS 에스테르 대 표면 알부민). 각각의 비 (20:1, 40:1 및 80:1)에 도달하기 위해 요구되는 농도는 각각 0.75 mM, 1.5 mM 및 3 mM이었다. 따라서, 5.5 μL, 11 μL 및 22의 NHS 에스테르를 각각의 에펜도르프 튜브 (600 μL의 나노입자 현탁액을 함유함)에 첨가하여 20:1, 40:1 및 80:1의 비로 만들었다. 반응물을 2시간 동안 실온에서 인큐베이션한 다음, 튜브를 70분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 펠릿을 3회 세척한 후에, 500 μL의 PBS 완충제 (pH 7.4)에 재현탁시켰다.
입자 표면 상의 보론산의 양을, 알리자린 레드 S와 반응시키고 590 nm에서의 형광 신호를 결정함으로써 측정하였다. 농도를 4-(2-카르복시에틸)벤젠보론산 표준물과 비교하였다. 20:1, 40:1 및 80:1의 비에 대해, 5 mg/mL의 nab-파클리탁셀당 보론산의 양은 각각 1.4mM, 2.0mM 및 2.6 mM인 것으로 결정되었다. 20:1 및 40:1 개질된 나노입자와 함께, 개질되지 않은 나노입자는 안정적이었지만, 80:1 나노입자는 응집되기 시작하였다.
실시예 28: 상보적 DNA를 사용하는 트라스투주맙 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합
상보적 DNA를 사용하는 활성화된 항체 및 활성화되어 있는 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합에 대한 개략도가 도 23에 제시되어 있다. 간략하게 설명하면, 제1 가닥은 nab-파클리탁셀 나노입자에 접합되고, 제1 가닥에 상보적인 제2 가닥은 항체에 접합된다. 나노입자 및 항체의 혼합으로 상보적인 가닥의 쌍형성이 가능하며, 이에 의해 항체가 nab-파클리탁셀 나노입자에 접합된다.
단일 가닥 DNA (ssDNA)를 nab-파클리탁셀의 제제로부터 단리된 nab-파클리탁셀 입자에 접합시켰다. 20 mM TCEP 용액을 만들었다. 3 mg의 ssDNA (5티오MC6-CACACACACACACACACACA; 서열식별번호: 1; "CA20")를 칭량하여 1 mL의 ddH2O에 용해시켰다 (ssDNA의 447 μM 용액). 20 mM TCEP 용액을 3:7의 부피비로 447 μM ssDNA 용액에 첨가하고, 혼합하고, 이어서 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 혼합물을 NAP-10 (지이 헬스케어 라이프 사이언스(GE Healthcare Life Science), Cat: #17-0854-01)을 사용하여 정제하였다. 수집된 CA20 ssDNA의 측정 농도는 UV 분광분석법 (260 nm)에 의해 결정 시 216 μM이었다.
6.83 mg의 SM(PEG)6을 칭량하여 0.5 mL의 DMSO에 용해시켰다 (22.4 mM SM(PEG)6 용액). 11 μL의 22.4 mM SM(PEG)6 용액을 1.2 mL의 CA20 ssDNA 용액에 첨가하고, 20분 동안 반응시켰다.
600 μL의 단리된 nab-파클리탁셀 현탁액을 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 600 μL의 CA20-SM(PEG)6을 나노입자 용액의 각각의 분취물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 인큐베이션하였다.
에펜도르프 튜브를 원심분리하여 나노입자를 펠릿화하고, 상청액을 가만히 따라내었다. 펠릿을 PBS로 3회 세척하였다. 500 μL의 PBS를 각각의 튜브에 첨가하고, 펠릿을 초음파처리 (5초 및 입자가 재현탁될 때까지 반복)에 의해 재현탁시켰다. 입자 크기를 동적 광 산란을 사용하여 결정하였다. 제어된 nab-파클리탁셀 제제로부터의 nab-파클리탁셀 표준물의 입자 크기는 152 nm이고, CA20 접합된 nab-파클리탁셀은 152 nm였다.
ssDNA를 헤르셉틴®의 제제로부터의 트라스투주맙에 접합시켰다. 4 mM TCEP 용액을 제조하였다. ssDNA (5티오MC6-GTGTGTGTGTGTGTG; 서열식별번호: 2; "GT15")를 ddH2O에 용해시켜 500 mM ssDNA 용액으로 만들었다. 4 mM TCEP 용액을 1:2의 부피비로 500 μM ssDNA 용액에 첨가하고, 혼합하고, 이어서 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 혼합물을 NAP-10 (지이 헬스케어 라이프 사이언스, Cat: #17-0854-01)을 사용하여 정제하였다.
1 mL의 헤르셉틴® (21 mg/mL, 생리 염수로 재구성됨)을 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다. PBS 완충제 (pH 7.4)를 제조하였다. 스핀 농축기에 PBS 완충제를 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 다시 한번 스핀 농축기에 PBS를 충전하고, 원심분리하였다. 생성된 트라스투주맙 용액을 제거하고, 농도는 필요에 따라 PBS 완충제를 사용하여 10.5 mg/mL로 조정하였다.
6.8 mg의 SM(PEG)6을 칭량하여 100 μL의 DMSO에 용해시켰다 (112 mM SM(PEG)6 용액). 2.3 μL의 112 mM SM(PEG)6 용액을 500 μL의 트라스투주맙 용액에 첨가하고, 1.5시간 동안 반응시켰다. 미반응 링커는 탈염 칼럼을 사용하여 제거하였다.
탈보호된 GT15 용액을 생성된, 활성화된 트라스투주맙에 첨가하고, 2시간 동안 인큐베이션하였다. 혼합물을 스핀 농축기에 첨가하고, 여기에 PBS 완충제 (pH 7.4)를 충전하였다. 혼합물을 원심분리하고, 통과액을 ssDNA의 존재에 대해 분석하였다. 스핀 농축기에 PBS를 재충전하고, 5회 원심분리하여, ssDNA가 통과액에서 검출되지 않도록 하였다.
트라스투주맙-GT15 용액 및 CA20-nab-파클리탁셀 용액을 에펜도르프 튜브에서 혼합하고, 2시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 반응 혼합물을 21,000 RCF로 원심분리하였다. 즉각적으로 튜브를 원심분리기로부터 제거하고, 상청액을 가만히 따라내고, 생성된 펠릿을 PBS로 3회 세척하였다. 펠릿을 PBS 중 4% HSA 용액에 재현탁시키고, 초음파처리하여 입자를 재현탁시켰다. 접합된 입자를 -80℃에서 저장하였다.
실시예 29: 베바시주맙 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합
본 실시예에서 사용되는 물질은 하기를 포함한다: (a) nab-파클리탁셀, 100 mg의 파클리탁셀; (b) 아바스틴® (베바시주맙; 25 mg/mL, 로트# 3039196); (c) 생리 염수 (알엠바이오, USP 등급, 로트 #20607161); (d) 밀리큐 물 (18.4 MOhms·cm 및 4 ppb TOC); (e) 섬광 바이알 (VWR, 20-mL 일회용 섬광 바이알); (f) 15 mL 폴리프로필렌 원추형 튜브 (팔콘, P/N 352097); (g) 제파 스핀 탈염 칼럼 (7K MWCO, 5mLs, Cat # 89892, 로트 # SC245087); (h) DMSO (시그마, Cat # D2438-50mL, 로트 # RNBG0012); (i) SM(PEG)6 (써모 사이언티픽, Cat # 22105, 로트 # SD249151); 및 (j) 인산염 완충 염수 (PBS) 정제 (시그마, Cat # P4417-50TAB, 로트# SLBS4223).
20 mL의 생리 염수를 1개의 바이알의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)에 첨가하였다. 1.2 mL의 분취량의 nab-파클리탁셀 용액을 4개의 에펜도르프 튜브에 첨가하였다. 튜브를 인큐베이션하고, 완만하게 20분 동안 와류시켰다. 1개의 튜브를 사용하여 파클리탁셀 HPLC 검정을 수행함으로써 RP-HPLC에 의해 파클리탁셀 함량을 결정하였다. nab-파클리탁셀 현탁액을 함유하는 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 각각의 튜브를 꺼내어 각각의 튜브의 상청액을 제거하였다. 나노입자의 펠릿을 0.5 mL의 생리 염수를 사용하여 완만하게 재구성하여 12 mg/mL의 파클리탁셀의 최종 나노입자 용액을 만들었다.
1 mL의 아바스틴® (25 mg/mL, WFI로 재구성됨)을 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다. 100mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 제조하였다. 스핀 농축기에 인산염 완충제 (pH 6.6)를 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 스핀 농축기에 인산염 완충제 (pH 6.6)를 1회 더 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 잔류하는 베바시주맙 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 2.5 mL의 총 부피로 희석하였다. 농도를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 사용하여 확인하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃로부터 제거하고, 1시간 동안 실온에서 가온하였다. 6.83 mg의 SM(PEG)6을 100 μL의 DMSO에 용해시켰다 (112mM 링커 용액). 링커가 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다.
0.5 mL의 베바시주맙 용액을 4개의 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브 중 2개에, 1.65 μL 및 3.3 μL의 링커 용액을 천천히 첨가하여 5:1 및 10:1의 링커 대 항체 몰비를 발생시켰다. 혼합물 대조군 튜브는 링커 개질 없이 보존하였다. 이러한 절차 동안, 용액을 빛으로부터 보호하였다. 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다.
탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척함으로써 (각각의 원심분리마다 1000G, 5분) 2개의 5 mL 탈염 칼럼을 준비하였다. 이어서, 활성화된 베바시주맙 용액을 칼럼을 통해 여과하여 임의의 미반응 링커를 제거하였다.
이어서, 각각의 링커 비를 갖는 500 μL의 활성화된 베바시주맙 용액을 500 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 500 μL의 비-활성화된 베바시주맙 용액을 500 μL의 나노입자 용액에 첨가하였다. 이어서, 생성된 용액을 4℃에서 밤새 진탕 또는 교반 없이 인큐베이션하였다.
접합 용액을 4℃ 저장으로부터 제거하고 (용액이 표면 상에 응집체를 갖지 않는 것으로 보임), 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 이어서, 튜브를 즉각적으로 원심분리기로부터 제거하고, 상청액을 제거하였다. 각각의 튜브를 PBS 염수로 3회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수 (pH 7.4)로 제조하였다. 500 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 펠릿화된 나노입자를 함유하는 각각의 튜브에 첨가하였다. 튜브를 20초 동안 초음파처리하고, 혼합하였다. 나노입자가 완전히 재현탁될 때까지, 초음파처리 단계를 수회 반복하였다. 특징화를 위해 샘플을 제거한 이후, 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
샘플의 입자 크기를 측정하였다. 평균 입자 크기는 하기와 같았다: nab-파클리탁셀, 146 nm; 베바시주맙 혼합물 대조군, 148 nm; 5:1 링커:항체 베바시주맙 나노입자, 152 nm; 및 10:1 링커:항체 베바시주맙 나노입자, 153 nm.
샘플의 베바시주맙 함량을 ELISA에 의해 측정하고, 샘플의 파클리탁셀 함량을 RP-HPLC에 의해 측정하였다 (표 16).
표 16: 베바시주맙 및 파클리탁셀 농도.
Figure pct00018
샘플의 이뮤노블롯 분석을 수행하였고, 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자의 접합 반응으로부터, 보다 고차의 접합체의 존재를 포함하여, 베바시주맙 및 입자 상의 HSA의 접합을 확인하였다.
실시예 30: 세툭시맙 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합
본 방법에서 사용되는 물질은 하기를 포함한다: (a) nab-파클리탁셀, 100 mg의 파클리탁셀; (b) 에르비툭스(Erbitux)® (세툭시맙, 로트# IMG395); (c) 생리 염수 (알엠바이오, USP 등급, 로트 #20607161); (d) 밀리큐 물 (18.4 MOhms·cm 및 4 ppb TOC); (e) 섬광 바이알 (VWR, 20-mL 일회용 섬광 바이알); (f) 15 mL 폴리프로필렌 원추형 튜브 (팔콘, P/N 352097); (g) 제파 스핀 탈염 칼럼 (7K MWCO, 5mLs, Cat # 89892, 로트 # SC245087); (h) DMSO (시그마, Cat # D2438-50mL, 로트 # RNBG0012); (i) SM(PEG)6 (써모 사이언티픽, Cat # 22105, 로트 # SD249151); 및 (j) 인산염 완충 염수 (PBS) 정제 (시그마, Cat # P4417-50TAB, 로트# SLBS4223).
20 mL의 생리 염수를 1개의 바이알의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물에 첨가하였다. 1.2 mL의 분취량의 nab-파클리탁셀 현탁액을 4개의 에펜도르프 튜브에 첨가하였다. 튜브를 인큐베이션하고, 완만하게 20분 동안 와류시켰다. 1개의 튜브를 사용하여 파클리탁셀 HPLC 검정을 수행함으로써 RP-HPLC에 의해 파클리탁셀 함량을 결정하였다.
nab-파클리탁셀 현탁액을 함유하는 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 각각의 튜브를 꺼내어 각각의 튜브의 상청액을 제거하였다. 나노입자의 펠릿을 0.5 mL의 생리 염수를 사용하여 완만하게 재구성하여 최종 12 mg/mL 나노입자 용액을 만들었다.
1 mL의 에르비툭스 용액 (25 mg/mL, WFI로 재구성됨)을 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다. 100mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 제조하였다. 스핀 농축기에 인산염 완충제 (pH 6.6)를 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 스핀 농축기에 인산염 완충제 (pH 6.6)를 1회 더 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 잔류하는 세툭시맙 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 2.5 mL의 총 부피로 희석하였다. 농도를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 사용하여 확인하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃로부터 제거하고, 1시간 동안 실온에서 가온하였다. 6.83 mg의 SM(PEG)6을 100 μL의 DMSO에 용해시켰다 (112mM 링커 용액). 링커가 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다.
0.5 mL의 세툭시맙 용액을 4개의 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브 중 2개에, 1.65 μL 및 3.3 μL의 링커 용액을 천천히 첨가하여 5:1 및 10:1의 링커 대 항체 몰비를 발생시켰다. 혼합물 대조군 튜브는 링커 개질 없이 보존하였다. 이러한 절차 동안, 용액을 빛으로부터 보호하였다. 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다.
탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척함으로써 (각각의 원심분리마다 1000G, 5분) 2개의 5 mL 탈염 칼럼을 준비하였다. 이어서, 활성화된 세툭시맙 용액을 칼럼을 통해 여과하여 임의의 미반응 링커를 제거하였다.
이어서, 각각의 링커 비를 갖는 500 μL의 활성화된 세툭시맙 용액을 500 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 500 μL의 비-활성화된 세툭시맙 용액을 500 μL의 나노입자 용액에 첨가하였다. 이어서, 생성된 용액을 4℃에서 밤새 진탕 또는 교반 없이 인큐베이션하였다.
접합 용액을 냉장실에서 꺼내어 (용액이 표면 상에 응집체를 갖지 않는 것으로 보임), 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 이어서, 튜브를 즉각적으로 원심분리기로부터 제거하고, 상청액을 제거하였다. 각각의 튜브를 PBS 염수로 3회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수 (pH 7.4)로 제조하였다. 500 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 펠릿화된 나노입자를 함유하는 각각의 튜브에 첨가하였다. 튜브를 20초 동안 초음파처리하고, 혼합하였다. 나노입자가 완전히 재현탁될 때까지, 초음파처리 단계를 수회 반복하였다.
특징화를 위해 샘플을 제거한 이후, 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
샘플의 입자 크기를 측정하였다. 평균 입자 크기는 하기와 같았다: nab-파클리탁셀, 146 nm; 세툭시맙 혼합물 대조군, 148 nm; 5:1 링커:항체 세툭시맙 나노입자, 149 nm; 및 10:1 링커:항체 세툭시맙 나노입자, 147 nm.
샘플의 세툭시맙 함량을 ELISA에 의해 측정하고, 샘플의 파클리탁셀 함량을 RP-HPLC에 의해 측정하였다 (표 17).
표 17: 세툭시맙 및 파클리탁셀 농도.
Figure pct00019
샘플의 이뮤노블롯 분석을 수행하였고, 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자의 접합 반응으로부터, 보다 고차의 접합체의 존재를 포함하여, 세툭시맙 및 입자 상의 HSA의 접합을 확인하였다.
실시예 31: 니볼루맙 및 단리된 nab-파클리탁셀 입자의 접합
본 방법에서 사용되는 물질은 하기를 포함한다: (a) nab-파클리탁셀, 100 mg의 바이알; (b) 옵디보(Opdivo) (니볼루맙, 로트# AAL6305); (c) 생리 염수 (알엠바이오, USP 등급, 로트 #20607161); (d) 밀리큐 물 (18.4 MOhms·cm 및 4 ppb TOC); (e) 섬광 바이알 (VWR, 20-mL 일회용 섬광 바이알); (f) 15 mL 폴리프로필렌 원추형 튜브 (팔콘, P/N 352097); (g) 제파 스핀 탈염 칼럼 (7K MWCO, 5mLs, Cat # 89892, 로트 # SC245087); (h) DMSO (시그마, Cat # D2438-50mL, 로트 # RNBG0012); (i) SM(PEG)6 (써모 사이언티픽, Cat # 22105, 로트 # SD249151); 및 (j) 인산염 완충 염수 (PBS) 정제 (시그마, Cat # P4417-50TAB, 로트# SLBS4223).
20 mL의 생리 염수를 1개의 바이알의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물에 첨가하였다. 1.2 mL의 분취량의 nab-파클리탁셀 현탁액을 4개의 에펜도르프 튜브에 첨가하였다. 튜브를 인큐베이션하고, 완만하게 20분 동안 와류시켰다. 1개의 튜브를 사용하여 RP-HPLC에 의해 파클리탁셀 함량을 측정하였다.
nab-파클리탁셀 현탁액을 함유하는 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 각각의 튜브를 꺼내어 각각의 튜브의 상청액을 제거하였다. 나노입자의 펠릿을 0.5 mL의 생리 염수를 사용하여 완만하게 재구성하여 최종 12 mg/mL 나노입자 용액을 만들었다.
2 mL의 옵디보 (10 mg/mL, WFI로 재구성됨)를 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다. 100mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 제조하였다. 스핀 농축기에 인산염 완충제 (pH 6.6)를 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 스핀 농축기에 인산염 완충제 (pH 6.6)를 1회 더 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 잔류하는 니볼루맙 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 2 ml의 총 부피로 희석하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃로부터 제거하고, 1시간 동안 실온에서 가온하였다. 6.83 mg의 SM(PEG)6을 100 μL의 DMSO에 용해시켰다 (112mM 링커 용액). 링커가 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다.
0.5 mL의 니볼루맙 용액을 4개의 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브 중 3개에, 1.7 μL, 3.4 μL 및 5.1 μL의 링커 용액을 천천히 첨가하여 5:1, 10:1 또는 15:1의 링커 대 항체 몰비를 발생시켰다. 혼합물 대조군 튜브는 링커 개질 없이 보존하였다. 이러한 절차 동안, 용액은 빛으로부터 보호되어야 한다. 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다.
탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척함으로써 (각각의 원심분리마다 1000G, 5분) 3개의 5 mL 탈염 칼럼을 준비하였다. 이어서, 활성화된 니볼루맙 용액을 칼럼을 통해 여과하여 임의의 미반응 링커를 제거하였다.
이어서, 각각의 농도의 500 μL의 활성화된 니볼루맙 용액을 500 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 500 μL의 비-활성화된 니볼루맙 용액을 500 μL의 나노입자 용액에 첨가하였다. 이어서, 생성된 용액을 4℃에서 밤새 진탕 또는 교반 없이 인큐베이션하였다.
접합 용액을 냉장실에서 꺼내어 (용액이 표면 상에 응집체를 갖지 않는 것으로 보임), 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 이어서, 튜브를 즉각적으로 원심분리기로부터 제거하고, 상청액을 제거하였다. 각각의 튜브를 PBS 염수로 3회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수 (pH 7.4)로 제조하였다. 500 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 펠릿화된 나노입자를 함유하는 각각의 튜브에 첨가하였다. 튜브를 20초 동안 초음파처리하고, 혼합하였다. 나노입자가 완전히 재현탁될 때까지, 초음파처리 단계를 수회 반복하였다.
특징화를 위해 샘플을 제거한 이후, 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
샘플의 입자 크기를 측정하였다. 평균 입자 크기는 하기와 같았다: nab-파클리탁셀, 145 nm; 니볼루맙 혼합물 대조군, 145 nm; 5:1 링커:항체 니볼루맙 나노입자, 149 nm; 10:1 링커:항체 니볼루맙 나노입자, 147 nm; 및 15:1 링커:항체 니볼루맙 나노입자, 150 nm.
샘플의 니볼루맙 함량을 ELISA에 의해 측정하고, 샘플의 파클리탁셀 함량을 RP-HPLC에 의해 측정하였다 (표 18).
표 18: 니볼루맙 및 파클리탁셀 농도.
Figure pct00020
샘플의 이뮤노블롯 분석을 수행하였고, 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자의 접합 반응으로부터, 보다 고차의 접합체의 존재를 포함하여, 니볼루맙 및 입자 상의 HSA의 접합을 확인하였다.
도 24는 니볼루맙, 및 5:1, 10:1 및 15:1의 링커:항체 반응 비로 활성화된 니볼루맙의 LC-MS 분석으로부터의 디콘볼루션된 질량 스펙트럼을 제시한다. 항체:접합 링커로서 각각의 동위원소 클러스터 하에 제시된 바와 같이, 링커:항체의 반응 비가 증가할수록 니볼루맙에 접합되는 링커 수가 증가하였다 (도 24).
실시예 32: 시험관내 및 생체내 연구를 위한 혼합된 트라스투주맙-나노입자 제제의 제조
배치 1. 0.39 mL의 헤르셉틴® (트라스투주맙 및 부형제, 21 mg/mL) 및 9.61 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 10 mL의 생리 염수를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 5 mg/mL (45 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 트라스투주맙의 최종 농도는 0.41 mg/mL였다.
배치 2. 0.152 mL의 헤르셉틴® (트라스투주맙 및 부형제, 21 mg/mL) 및 9.848 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 10 mL의 생리 염수를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 5 mg/mL (45 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 트라스투주맙의 최종 농도는 0.16 mg/mL였다.
배치 3. 0.093 mL의 헤르셉틴® (트라스투주맙 및 부형제, 21 mg/mL) 및 9.907 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 10 mL의 생리 염수를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 5 mg/mL (45 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 트라스투주맙의 최종 농도는 0.098 mg/mL였다.
배치 4. 0.051 mL의 헤르셉틴® (트라스투주맙 및 부형제, 21 mg/mL) 및 9.949 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 10 mL의 생리 염수를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 5 mg/mL (45 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 트라스투주맙의 최종 농도는 0.054 mg/mL였다.
배치 5. 0.476 mL의 헤르셉틴® (트라스투주맙 및 부형제, 21 mg/mL) 및 9.524 mL의 0.9% NaCl 생리 염수 (지-바이오사이언시스)를 바이알 내의 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)에 첨가하였다. 바이알의 내용물을 혼합 없이 5분 동안 재구성한 다음, 완만하게 혼합하여 완전한 재구성을 보장하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온 (~20℃)에서 인큐베이션한 후에, 바이알에 10 mL의 생리 염수를 첨가하였다. 혼합물을 완만하게 혼합하여 균질성을 보장하였다. 파클리탁셀의 최종 농도는 5 mg/mL (45 mg/mL 알부민의 존재 하)이고, 트라스투주맙의 최종 농도는 0.5 mg/mL였다.
실시예 33: 시험관내 및 생체내 연구를 위한 접합된 트라스투주맙-나노입자 제제의 제조
nab-파클리탁셀 나노입자를 단리하기 위해, 20 mL의 생리 염수를 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)을 함유하는 1개의 바이알에 첨가하였다. 1.2 mL의 nab-파클리탁셀 현탁액을 16개의 1.5 mL 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브를 완만하게 20분 동안 혼합하였다. 1개의 에펜도르프 튜브를 HPLC 검정을 위해 사용하여 파클리탁셀 함량을 결정하고 입자 크기를 측정하였다. 평균 입자 크기는 147 nm였다. 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하였다. 500 μL의 아세트산나트륨 (pH 8.0) 및 150 mM 염화나트륨을 생성된 펠릿에 첨가하여 나노입자를 재구성하였다 (nab-파클리탁셀 입자 농도는 10 mg/mL의 파클리탁셀임).
트라우트 시약을 WFI에 2 mg/mL (14.5 mM)의 농도로 용해시켰다. 30 μL (20:1의 링커:HSA 비)의 트라우트 시약을 단리된 나노입자 용액에 천천히 첨가하고, 4℃에서 70분 동안 반응시켰다. 2.4 μL의 500 mM EDTA (pH 8.0)를 첨가하고, 4℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 4℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 튜브를 원심분리기로부터 제거하고, 가만히 따라내고, PBS 염수로 2회 세척하였다. 단리되고 활성화된 nab-파클리탁셀 입자를 500 μL의 PBS 염수에 재현탁시키고, 1분 동안 초음파처리하여 입자를 재현탁시켰다.
21 mg/mL 헤르셉틴® (트라스투주맙) 용액을 생리 염수를 사용하여 제조하였다. 6 mL의 헤르셉틴® 용액을 3개의 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다.
100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 내독소 무함유 물을 사용하여 제조하고, 여과하였다. 스핀 농축기에 pH 6.6 인산염 완충제를 충전하고, 35분 동안 3750 rpm으로 원심분리하였다. 이를 1회 반복하였다. 잔류하는 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 12 mL의 총 부피로 희석하였다. 트라스투주맙 농도를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정하였다. 트라스투주맙 농도는 필요에 따라 10.5 mg/mL로 조정하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃ 냉동기로부터 제거하고, 1시간 동안 실온으로 가온하였다. 2 mL의 멸균 DMSO 용액을 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 이 에펜도르프 튜브로부터, 122 μL의 DMSO를 8.3 mg의 SM(PEG)6을 함유하는 바이알로 옮겼다 (112 mM의 최종 농도). 링커가 DMSO에 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다.
2 mL의 트라스투주맙 용액을 6개의 15mL 팔콘 튜브 각각에 분취하였다. 6.8 μL의 SM(PEG)6 링커 용액을 1 mL의 트라스투주맙을 함유하는 각각의 2 mL 튜브에 천천히 첨가하였다. 이러한 절차 동안, 용액을 빛으로부터 보호하였다. 여전히 빛으로부터 보호하면서, 링커/항체 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다.
5 mL 탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척하였다 (각각의 원심분리마다 6분 동안 1000 G). 활성화된 항체 용액을 탈염 칼럼을 통해 여과하여 미반응 링커를 제거하였다. 여과물을 수집하고 풀링하였다. 트라스투주맙 및 링커의 비를 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 결정하였다.
500 μL의 활성화된 트라스투주맙을 500 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 이어서, 용액을 밤새 4℃에서 인큐베이션하였다 (진탕 또는 교반은 회피함).
접합 용액을 4℃로부터 제거하였다. 용액은 에펜도르프 튜브의 표면 상에 응집체를 갖지 않았다. 접합 용액을 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하고, 각각의 튜브를 PBS 염수로 2회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수로 제조하였다. 500 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 각각의 튜브에 분취하였다. 이어서, 튜브를 20초 동안 초음파처리하고, 혼합하였다 (나노입자가 완전히 재현탁될 때까지, 이 단계를 수회 반복함).
파클리탁셀 함량을 RP-HPLC에 의해 측정하고, 이어서 5.33 mg/mL로 조정하였다. 입자 크기를 DLS에 의해 측정하였다. 입자 크기는 175nm였다. 이어서, 생성된 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
최종 접합된 입자의 헤르셉틴 농도를 시험관내 세포 결합 검정에 의해 분석하였다. 농도는 0.43mg/mL이다.
실시예 34: 시험관내 및 생체내 연구를 위한 접합된 트라스투주맙-나노입자 제제의 제조
nab-파클리탁셀 나노입자를 단리하기 위해, 20 mL의 생리 염수를 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)을 함유하는 1개의 바이알에 첨가하였다. 1.2 mL의 nab-파클리탁셀 현탁액을 16개의 1.5 mL 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브를 완만하게 20분 동안 혼합하였다. 1개의 에펜도르프 튜브를 HPLC 검정을 위해 사용하여 파클리탁셀 함량을 결정하고 입자 크기를 측정하였다. 평균 입자 크기는 147 nm였다. 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하였다. 500 μL의 아세트산나트륨 (pH 8.0) 및 150 mM 염화나트륨을 생성된 펠릿에 첨가하여 나노입자를 재구성하였다 (nab-파클리탁셀 입자 농도는 10 mg/mL의 파클리탁셀임).
트라우트 시약을 WFI에 2 mg/mL (14.5 mM)의 농도로 용해시켰다. 15 μL (10:1의 링커:HSA 비)의 트라우트 시약을 단리된 나노입자 용액에 천천히 첨가하고, 4℃에서 70분 동안 반응시켰다. 2.4 μL의 500 mM EDTA (pH 8.0)를 첨가하고, 4℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 4℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 튜브를 원심분리기로부터 제거하고, 가만히 따라내고, PBS 염수로 2회 세척하였다. 단리되고 활성화된 nab-파클리탁셀 입자를 500 μL의 PBS 염수에 재현탁시키고, 1분 동안 초음파처리하여 입자를 재현탁시켰다.
21 mg/mL 헤르셉틴® (트라스투주맙) 용액을 생리 염수를 사용하여 제조하였다. 6 mL의 헤르셉틴® 용액을 3개의 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다.
100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 내독소 무함유 물을 사용하여 제조하고, 여과하였다. 스핀 농축기에 pH 6.6 인산염 완충제를 충전하고, 35분 동안 3750 rpm으로 원심분리하였다. 이를 1회 반복하였다. 잔류하는 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 12 mL의 총 부피로 희석하였다. 트라스투주맙 농도를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정하였다. 트라스투주맙 농도는 필요에 따라 10.5 mg/mL로 조정하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃ 냉동기로부터 제거하고, 1시간 동안 실온으로 가온하였다. 2 mL의 멸균 DMSO 용액을 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 이 에펜도르프 튜브로부터, 122 μL의 DMSO를 8.3 mg의 SM(PEG)6을 함유하는 바이알로 옮겼다 (112 mM의 최종 농도). 링커가 DMSO에 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다.
2 mL의 트라스투주맙 용액을 6개의 15mL 팔콘 튜브에 분취하였다. 6.8 μL의 SM(PEG)6 링커 용액을 1 mL의 트라스투주맙을 함유하는 각각의 튜브에 천천히 첨가하였다. 이러한 절차 동안, 용액을 빛으로부터 보호하였다. 여전히 빛으로부터 보호하면서, 링커/항체 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다.
5 mL 탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척하였다 (각각의 원심분리마다 6분 동안 1000 G). 활성화된 항체 용액을 탈염 칼럼을 통해 여과하여 미반응 링커를 제거하였다. 여과물을 수집하고 풀링하였다. 트라스투주맙 및 링커의 비를 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 결정하였다.
500 μL의 활성화된 트라스투주맙을 500 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 이어서, 용액을 밤새 4℃에서 인큐베이션하였다 (진탕 또는 교반은 회피함).
접합 용액을 4℃로부터 제거하였다. 용액은 에펜도르프 튜브의 표면 상에 응집체를 갖지 않았다. 접합 용액을 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하고, 각각의 튜브를 PBS 염수로 2회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수로 제조하였다. 500 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 각각의 튜브에 분취하였다. 이어서, 튜브를 20초 동안 초음파처리하고, 혼합하였다 (나노입자가 완전히 재현탁될 때까지, 이 단계를 수회 반복함).
파클리탁셀 함량을 RP-HPLC에 의해 측정하고, 이어서 5.56 mg/mL로 조정하였다. 입자 크기를 DLS에 의해 측정하였다. 입자 크기는 164nm였다. 이어서, 생성된 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
최종 접합된 입자의 헤르셉틴 농도를 ELISA에 의해 분석하였다. 농도는 0.18mg/mL이다.
실시예 35: 시험관내 및 생체내 연구를 위한 접합된 트라스투주맙-나노입자 제제의 제조
nab-파클리탁셀 나노입자를 단리하기 위해, 20 mL의 생리 염수를 동결건조된 nab-파클리탁셀 조성물 (100 mg의 파클리탁셀)을 함유하는 1개의 바이알에 첨가하였다. 1.2 mL의 nab-파클리탁셀 현탁액을 25개의 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 에펜도르프 튜브를 완만하게 20분 동안 혼합하였다. 1개의 에펜도르프 튜브를 RP-HPLC 검정을 위해 사용하여 파클리탁셀 함량을 결정하고 입자 크기를 측정하였다. 나머지 에펜도르프 튜브를 20℃에서 80분 동안 21,000 RCF로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하였다. 0.6 mL의 생리 염수를 잔류하는 펠릿에 첨가하여 나노입자를 재구성하였다 (10 mg/mL의 파클리탁셀의 최종 농도). 입자 크기는 149 nm인 것으로 측정되었다.
21 mg/mL 헤르셉틴® (트라스투주맙) 용액을 생리 염수를 사용하여 제조하였다. 8 mL의 헤르셉틴® 용액을 2개의 15 mL 스핀 농축기에 분취하였다. 100 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.6)를 내독소 무함유 물을 사용하여 제조하고, 여과하였다. 스핀 농축기에 pH 6.6 인산염 완충제를 충전하고, 제조업체의 지침에 따라 30분 동안 원심분리하였다. 이를 1회 반복하였다. 잔류하는 트라스투주맙 용액을 15 mL 팔콘 튜브에 피펫팅하고, 2.4 mL의 총 부피로 희석하였다. 트라스투주맙 농도를 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정하였다. 트라스투주맙 농도는 필요에 따라 10.5 mg/mL로 조정하였다.
SM(PEG)6 패키지를 -20℃ 냉동기로부터 제거하고, 1시간 동안 실온으로 가온하였다. 2 mL의 멸균 DMSO 용액을 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 이 에펜도르프 튜브로부터, 1.51 mL의 DMSO를 100 mg의 SM(PEG)6을 함유하는 바이알로 옮겼다 (112 mM의 최종 농도). 링커가 DMSO에 완전히 용해될 때까지, 링커 용액을 볼텍싱하였다.
1 mL의 10.5 mg/mL 트라스투주맙 용액을 16개의 에펜도르프 튜브에 분취하였다. 1 mL의 트라스투주맙 용액을 함유하는 각각의 에펜도르프 튜브에, 5.1 μL의 링커 용액을 천천히 첨가하였다 (링커 대 항체의 비는 7.5:1임). 이러한 절차 동안, 용액을 빛으로부터 보호하였다. 여전히 빛으로부터 보호하면서, 링커/항체 용액을 2시간 동안 진탕기에서 반응시켰다.
5 mL 탈염 칼럼을 인산염 완충제 (pH 6.6)로 4회 세척하였다 (각각의 원심분리마다 5분 동안 1000G). 활성화된 항체 용액을 탈염 칼럼을 통해 여과하여 미반응 링커를 제거하였다. 여과물을 수집하고 풀링하였다. 트라스투주맙 및 링커의 비를 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 결정하였다. 600 μL의 활성화된 트라스투주맙을 600 μL의 나노입자 용액에 천천히 첨가하였다. 이어서, 용액을 밤새 4℃에서 인큐베이션하였다 (진탕 또는 교반은 회피함).
접합 용액을 냉장실에서 꺼내었다. 용액은 에펜도르프 튜브의 표면 상에 응집체를 갖지 않았다. 입자 크기는 164 nm인 것으로 측정되었다.
접합 용액을 80분 동안 21,000 G로 원심분리하였다. 원심분리 후에, 즉각적으로 튜브를 가만히 따라내어 상청액을 제거하고, 각각의 튜브를 PBS 염수로 2회 세척하였다.
40 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 용액을 PBS 염수 (pH 7.4)로 제조하였다. 800 μL의 40 mg/mL HSA 용액을 각각의 튜브에 분취하였다. 이어서, 튜브를 20초 동안 초음파처리한 다음, 혼합하였다 (나노입자가 완전히 재현탁될 때까지, 이 단계를 수회 반복함).
파클리탁셀 함량을 RP-HPLC에 의해 측정하고, 이어서 40mg/mL의 HSA 및 헤르셉틴 용액을 첨가함으로써 최종 5.05 mg/mL의 파클리탁셀 및 0.5 mg/mL의 헤르셉틴으로 조정하였다. 입자 크기는 157 nm인 것으로 결정되었다. 이어서, 생성된 용액을 바이알로 옮기고, -80℃에서 저장하였다.
이뮤노블롯을 단리된 nab-파클리탁셀 나노입자 및 트라스투주맙 접합된 입자에 대해 수행하여 항체 접합을 확인하였다.
실시예 36: 혼합형, 매립형, 및 접합형 트라스투주맙-나노입자 제제의 시험관내 효능
항체-nab-파클리탁셀의 다양한 제제를 시험관내 항증식 효과 및 p(Tyr1248)/토탈 ErbB2 결합의 억제에 대해 시험하였다.
항증식 검정. 시험관내 성장 억제 활성을 항증식 검정을 사용하여 평가하였다. 40 μL/웰의 세포를 그의 최적화된 밀도로 384-웰 플레이트 (코닝(Corning), 3712)에 플레이팅하고, 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 인큐베이션되도록 하였다. 다음 날, 세포를 시험 트라스투주맙-나노입자 제제로 처리하고, 다시 37℃ 및 5% CO2의 인큐베이터에 3일 동안 넣어 두었다. 3일의 처리 후에, 세포 생존율을 20 μL/웰의 셀 타이터-글로 (프로메가(Promega), G7573)의 첨가를 통해 산정하였다. 30분의 인큐베이션 후에, 플레이트를 발광 검출을 위해 퍼킨 엘머 엔비전으로 판독하였다.
포스포(Tyr1248)/토탈 ErbB2 결합 검정. 시험 트라스투주맙-나노입자 제제를 pY1248/토탈 ErbB2 전세포 용해물 검정 키트 (메소스케일 디스커버리(Mesoscale Discovery), K15125D)를 통해 ErbB2 결합에 대해 특징화하였다. 25,000개 세포/웰을 밤새 플레이팅하고, 37℃ 및 5% CO2에서 96-웰 배양 플레이트 (코닝 3704)에 부착되도록 하였다. 다음 날, 세포를 2시간 동안 시험 트라스투주맙-나노입자 제제로 처리하였다. 2시간의 처리 후에, 65 μL/웰의 MSD 용해 완충제를 첨가함으로써 세포를 용해시키고, 1시간 동안 4℃의 흔들리는 진탕기에 넣어 두었다. 이 시간 동안, MSD 포획 플레이트를 MSD 차단 완충제 A로 차단하였다. 1시간 후에, MSD 포획 플레이트를 MSD 세척 완충제로 세척하였다. 이어서, 35 μL/웰의 세포 용해물을 MSD 포획 플레이트로 옮기고, 실온의 흔들리는 진탕기에서 1시간 동안 인큐베이션되도록 하였다. 이어서, 포획된 단백질 양을, 먼저 세포 용해물을 폐기하고, MSD 포획 플레이트를 MSD 세척 완충제로 세척함으로써 그의 Erb2 수준에 대해 산정하였다. 25 μL/웰의, 항체 희석 완충제 중 술포-태그 항-토탈 ErbB2 항체를 첨가한 다음, 실온에서 1시간 동안 흔들리는 진탕기에서 MSD 플레이트로 인큐베이션되도록 하였다. 1시간 후에, MSD 플레이트를 MSD 세척 완충제로 세척하였다. 이어서, 150 μL/웰의 MSD 판독 완충제를 첨가하고, 즉각적으로 플레이트를 MSD 섹터 S600 기기로 판독하였다.
결합 연구로부터의 데이터가 표 19에 제공되어 있으며, 증식 연구로부터의 데이터가 표 20에 제공되어 있다.
표 19: 포스포(Tyr1248)/토탈 ErbB2 결합 검정에서의 IC50
Figure pct00021
표 20: 세포 증식 검정
Figure pct00022
Ex. = 실시예; Tz = 트라스투주맙; Pxt = 파클리탁셀
실시예 37: 혼합형, 매립형, 및 접합형 트라스투주맙-나노입자 제제의 생체내 효능
본 실시예는 BT-474 이종이식편 마우스로 투여된 혼합형, 매립형, 및 접합형 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 제제의 치료 효능을 입증한다.
중증 복합 면역결핍 (SCID) 마우스에게 종양 세포 접종 전날에 (제-1일) 17β-에스트라디올 펠릿 (90일 방출, 0.36 mg/펠릿)을 피하로 이식하였다. 제0일에, 마우스에게 BT-474 세포 (ATCC로부터 공급됨)를 피하로 접종하였다. 보다 작은 종양 연구를 위해, BT-474 세포의 접종으로부터 대략 2주 후에, 종양을 측정하고, 마우스를 연구 그룹에 무작위화하였다. 보다 큰 종양 연구를 위해, BT-474 세포의 접종으로부터 대략 4주 후에, 종양을 측정하고, 마우스를 하기 확인되는 연구 그룹에 무작위화하였다.
보다 작은 종양 연구 (대략 150 mm3 - 180 mm3의 종양 크기)에서, 7-8마리의 SCID 마우스를 하기 연구 그룹 각각에 배정하였고, 마우스는 하기의 투여를 매주-1회 받았다: (1) 비히클; (2) nab-파클리탁셀: 50 mg/kg ("ABX50"); (3) nab-파클리탁셀: 25 mg/kg ("ABX25"); (4) 헤르셉틴®: 5 mg/kg ("Tratsu 5"); (5) 헤르셉틴®: 2.5 mg/kg ("Tratsu 2.5"); (6) nab-파클리탁셀-트라스투주맙 접합체 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/5 mg 트라스투주맙) ("접합체 (50/5)") (실시예 35에 따른 것); (7) nab-파클리탁셀-트라스투주맙 접합체 (kg당 25 mg nab-파클리탁셀/2.5 mg 트라스투주맙) ("접합체 (25/2.5)") (실시예 35에 따른 것); (8) 매립형 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/5 mg 트라스투주맙) ("매립형 (50/5)") (실시예 20에 따른 것); (9) 매립형 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 (kg당 25 mg nab-파클리탁셀/2.5 mg 트라스투주맙) ("매립형 (25/2.5)") (실시예 20에 따른 것); (10) nab-파클리탁셀 및 헤르셉틴®의 혼합물 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀 및 5 mg 헤르셉틴®) ("혼합물 50/5") (실시예 32, 배치 5에 따른 것); 및 (11) nab-파클리탁셀 및 헤르셉틴®의 혼합물 (kg당 25 mg nab-파클리탁셀 및 2.5 mg 헤르셉틴®) ("혼합물 25/2.5") (실시예 32, 배치 5에 따른 것).
보다 큰 종양 연구 (대략 500 mm3 - 750 mm3의 종양 크기)에서, 7마리의 SCID 마우스를 하기 연구 그룹 각각에 배정하였고, 마우스는 하기의 투여를 매주-1회 받았다: (1) 비히클; (2) nab-파클리탁셀: 50 mg/kg; (3) 헤르셉틴®: 5 mg/kg; (4) nab-파클리탁셀-트라스투주맙 접합체 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/5 mg 트라스투주맙) (실시예 35에 따른 것); (5) 매립형 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/5 mg 트라스투주맙) (실시예 20에 따른 것); 및 (6) 아브락산® 및 헤르셉틴®의 혼합물 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀 및 5 mg 헤르셉틴®) (실시예 32, 배치 5에 따른 것).
동물 종양 측정치 및 체중을 1주 2회 측정하였다. 최종 종양 측정은 기원하는 그룹 지정을 맹검 처리하였다.
보다 작은 종양 연구로부터의 퍼센트 종양 부피 변화 결과가 도 25a-25b (치료로부터 7일 후) 및 도 25c-25d (치료로부터 14일 후)에 제시되어 있다. 제14일이 되면, 보다 고용량 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 접합체 그룹 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/5 mg 트라스투주맙)은 단일 작용제 nab-파클리탁셀과 비교하여 유의하게 개선된 항종양 활성을 달성하였다 (도 25c).
보다 큰 종양 연구로부터의 결과가 도 26a (치료로부터 7일 후) 및 도 26b (치료로부터 14일 후)에 제시되어 있다. 제14일이 되면, 매립형 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/5 mg 트라스투주맙)은 단일 작용제 nab-파클리탁셀 또는 단일 작용제 트라스투주맙과 비교하여 유의하게 개선된 항종양 활성을 달성하였다. 추가로, 치료로부터 14일 후에, 접합형 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/5 mg 트라스투주맙)은 단일 작용제 트라스투주맙과 비교하여 유의하게 개선된 항종양 활성을 달성하였다.
실시예 38: 혼합형, 매립형, 및 접합형 트라스투주맙-나노입자 제제의 생체내 효능
본 실시예는 BT-474 이종이식편 마우스 모델에 대한 혼합형, 매립형, 및 접합형 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 제제의 치료 효능을 입증한다.
중증 복합 면역결핍 (SCID) 마우스를 실시예 31에 기재된 바와 같이 준비하였다. BT-474 세포의 접종으로부터 대략 4주 후에, 종양을 측정하였고 (대략 600 mm3), 마우스를 하기 확인되는 연구 그룹에 무작위화하였다.
8마리의 SCID 마우스를 하기 연구 그룹 각각에 배정하였고, 마우스는 하기의 투여를 매주-1회 받았다: (1) 비히클 (5% HSA); (2) nab-파클리탁셀: 50 mg/kg ("ABX 50"); (3) 헤르셉틴®: 4.1 mg/kg ("Tratsu 4.1"); (4) nab-파클리탁셀-트라스투주맙 접합체 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/4.1 mg 트라스투주맙) ("접합체 50/4.1=12:1") (실시예 33에 따른 것); (5) nab-파클리탁셀-트라스투주맙 접합체 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀/0.54 mg 트라스투주맙) ("접합체 50/0.54 = 92.5:1") (실시예 23에 따른 것); (6) nab-파클리탁셀 및 헤르셉틴®의 혼합물 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀 및 4.1 mg 헤르셉틴®) ("혼합물 (50/4.1 = 12:1)") (실시예 36, 배치 1에 따른 것); (7) nab-파클리탁셀 및 헤르셉틴®의 혼합물 (kg당 50 mg nab-파클리탁셀 및 0.54 mg 헤르셉틴®) ("혼합물 (50/0.54 = 92.5:1)") (실시예 36, 배치 4에 따른 것); 및 (8) nab-파클리탁셀 (50 mg/kg) 및 헤르셉틴® (4.1 mg/kg)의 순차적 투여 ("순차적 (50/4.1)").
연구로부터의 퍼센트 종양 부피 변화 결과가 도 27a (제0일의 치료로부터 7일 후) 및 27b (제0일 및 제7일의 치료로부터 14일 후)에 제시되어 있다.
실시예 39: 혼합형, 매립형, 및 접합형 트라스투주맙-나노입자 제제의 생체내 효능
본 실시예는 BT-474 이종이식편 마우스 모델에 대한 매립형 및 접합형 nab-파클리탁셀-트라스투주맙 제제의 치료 효능을 입증한다.
중증 복합 면역결핍 (SCID) 마우스를 실시예 M에 기재된 바와 같이 준비하였다. BT-474 세포의 접종으로부터 대략 4주 후에, 종양을 측정하였고 (대략 600 mm3), 마우스를 하기 확인되는 연구 그룹에 무작위화하였다.
8마리의 SCID 마우스를 1 mg/kg 헤르셉틴® 연구 그룹에서 하기 연구 그룹 각각에 배정하였고, 마우스는 하기의 투여를 매주-1회 받았다: (1) 비히클 (5% HSA); (2) nab-파클리탁셀: 30 mg/kg; (3) 헤르셉틴®: 1 mg/kg; (4) nab-파클리탁셀 (30 mg/kg) 및 헤르셉틴® (1 mg/kg)의 순차적 투여; 및 (5) nab-파클리탁셀-트라스투주맙 접합체 (kg당 30 mg nab-파클리탁셀/1 mg 트라스투주맙) (실시예 34에 따른 것); (6) 헤르셉틴®: 0.6 mg/kg; (7) nab-파클리탁셀 (30 mg/kg) 및 헤르셉틴® (0.6 mg/kg)의 순차적 투여; 및 (8) nab-파클리탁셀-트라스투주맙 접합체 (kg당 30 mg nab-파클리탁셀/0.6 mg 트라스투주맙) (실시예 26에 따른 것).
종양 부피를 제0일의 상기 확인된 치료의 단일 투여 후 제7일에 측정하였다. 제7일의 백분율 종양 부피 변화 결과가 도 28a-28b에 제시되어 있다.
종양 부피를 제0일 및 제7일의 상기 확인된 치료의 2회 투여 후 제14일에 측정하였다. 제14일의 백분율 종양 부피 변화 결과가 도 28c-28d에 제시되어 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Abraxis Bioscience, LLC FOSS, Willard PEYKOV, Viktor <120> NANOPARTICLE FORMULATIONS AND METHODS OF MAKING AND USING THEREOF <130> 638772021740 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> 62/406,367 <151> 2016-10-10 <160> 2 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 cacacacaca cacacacaca 20 <210> 2 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 gtgtgtgtgt gtgtg 15

Claims (43)

  1. (a) 소수성 약물, (b) 알부민, 및 (c) 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 알부민에 공유적으로 가교되는 것인 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 화학적 가교제를 통해 알부민에 공유적으로 가교되는 것인 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 디술피드 결합을 통해 알부민에 공유적으로 가교되는 것인 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 비-공유 가교제를 통해 알부민에 접합되는 것인 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 비-공유 가교제의 제1 구성요소를 포함하고 알부민이 비-공유 가교제의 제2 구성요소를 포함하며, 여기서 제1 구성요소는 제2 구성요소에 특이적으로 결합하는 것인 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 비-공유 가교제가 핵산 분자를 포함하며, 여기서 핵산 분자의 적어도 일부는 상보적인 조성물.
  8. (a) 소수성 약물을 포함하는 고체 코어, (b) 나노입자의 표면과 회합된 알부민, 및 (c) 나노입자의 표면 또는 고체 코어에 매립된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 나노입자의 표면에 매립되는 것인 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 고체 코어에 매립되는 것인 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 중 생물활성 폴리펩티드의 적어도 75%가 나노입자와 회합되는 것인 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 나노입자가 적어도 약 100의 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 것인 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 항체 또는 그의 단편인 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 베바시주맙, 트라스투주맙, BGB-A317, 또는 토실리주맙인 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 중 나노입자 내 소수성 약물 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비가 약 1:1 내지 약 100:1인 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 생물활성 폴리펩티드의 중량비가 약 1:1 내지 약 1000:1인 조성물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 중 나노입자 내 알부민 대 소수성 약물의 중량비가 약 1:1 내지 약 20:1인 조성물.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    소수성 약물의 중량이 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 결정되고, 생물활성 폴리펩티드 및 알부민의 중량이 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정되거나; 또는
    소수성 약물의 중량이 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 결정되고, 알부민의 중량이 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정되고, 생물활성 폴리펩티드의 중량이 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정되는 것인
    조성물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 나노입자 부분 내 알부민의 적어도 약 40%가 디술피드 결합에 의해 가교되는 것인 조성물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 나노입자의 평균 직경이 동적 광 산란에 의해 측정 시 약 200 nm 이하인 조성물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 나노입자와 회합되지 않은 알부민을 추가로 포함하는 것인 조성물.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 소수성 약물이 탁산 또는 리무스 약물인 조성물.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 소수성 약물이 파클리탁셀인 조성물.
  25. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 소수성 약물이 라파마이신인 조성물.
  26. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
    i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
    여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
    여기서 수성 용액은 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 것인 단계; 및
    ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
  27. 제26항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 수성 용액 중에서 알부민에 접합되는 것인 방법.
  28. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
    i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
    여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
    여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계;
    ii) 에멀젼에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계; 및
    iii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
  29. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
    i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
    여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
    여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계;
    ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및
    iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
  30. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
    i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
    여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
    여기서 수성 용액은 알부민을 포함하는 것인 단계;
    ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 전부가 아닌 적어도 일부를 제거하여 에멀젼-현탁액 중간물질을 수득하는 단계;
    iii) 에멀젼-현탁액 중간물질에 생물활성 폴리펩티드를 첨가하는 단계; 및
    iv) 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 에멀젼-현탁액 중간물질로부터 1종 이상의 유기 용매의 추가의 분량을 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
  31. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
    i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
    여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
    여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민은 가교제 모이어티로 유도체화되는 것인 단계;
    ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거하여 증발-후 현탁액을 수득하는 단계, 및
    iii) 증발-후 현탁액에 생물활성 폴리펩티드를 첨가함으로써, 조성물을 형성하며, 여기서 생물활성 폴리펩티드는 가교제 모이어티로 유도체화되는 것인 단계.
  32. 제31항에 있어서, 나노입자와 회합되지 않은 유도체화된 알부민을 비-유도체화된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  33. 하기 단계를 포함하는, 소수성 약물, 알부민 및 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법:
    i) 유기 용액 및 수성 용액의 혼합물을 고압 균질화에 적용함으로써, 에멀젼을 형성하며,
    여기서 유기 용액은 1종 이상의 유기 용매에 용해된 소수성 약물을 포함하고,
    여기서 수성 용액은 알부민을 포함하며, 여기서 알부민의 적어도 일부는 생물활성 폴리펩티드에 접합되는 것인 단계; 및
    ii) 에멀젼으로부터 1종 이상의 유기 용매의 적어도 일부를 제거함으로써, 조성물을 형성하는 단계.
  34. 제33항에 있어서, 나노입자와 회합되지 않은 생물활성 폴리펩티드-접합된 알부민을 비접합된 알부민으로 대체하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  35. 생물활성 폴리펩티드를 소수성 약물 및 알부민을 포함하는 나노입자에 접합시키는 것을 포함하는, 소수성 약물, 알부민, 및 알부민에 접합된 생물활성 폴리펩티드를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 제조하는 방법.
  36. 제26항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물을 멸균 여과하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  37. 제26항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 항체 또는 그의 단편인 방법.
  38. 제26항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 생물활성 폴리펩티드가 베바시주맙, 트라스투주맙, BGB-A317, 또는 토실리주맙인 방법.
  39. 제26항 내지 제38항 중 어느 한 항의 방법에 의해 수득된 조성물.
  40. 제1항 내지 제25항 및 제39항 중 어느 한 항의 조성물 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  41. 제1항 내지 제25항, 제39항 및 제40항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법.
  42. 제41항에 있어서, 질환이 암인 방법.
  43. 제41항 또는 제42항에 있어서, 개체가 인간인 방법.
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