TW201822759A - 蛆萃取物、其製備方法及其用於促使人體表皮細胞增生之用途 - Google Patents

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Abstract

本發明係提供一種蛆萃取物及其製備方法，該蛆萃取物係以下列步驟之製備方法取得：(a) 秤取一定量之蛆，並加以清洗；(b) 將清洗後之蛆置於一容器內，加入一緩衝溶液，使蛆浸泡於該緩衝溶液中；(c) 對該容器內之蛆進行超音波震盪，取得一蛆萃取混合液；(d) 將該蛆萃取混合液進行離心分離，取得一上清液；及(e) 將該上清液的水分去除，即取得蛆萃取乾燥粉末。該蛆萃取物之用途，係可促使人體表皮細胞增生。

Description

蛆萃取物、其製備方法及其用於促使人體表皮細胞增生之用途
本發明係關於一種蛆萃取物，尤其是該蛆萃取物能用於促使人體表皮細胞增生。
在醫學美容領域，利用天然物質製成保養品已蔚為流行，例如利用植物萃取物製成臉部乳霜、護手霜，而植物萃取物所製成的保養品在美容保養上亦具有相當效果，然而，目前在台灣市面上仍未見到利用蛆蟲製成的美容保養品。因此，蛆在醫學美容上之運用仍有待研究及開發。
本發明之目的即針對上述問題，提供一種蛆萃取物的製備方法，其包含下列步驟：(a) 秤取一定量之蛆，並加以清洗；(b) 將清洗後之蛆置於一容器內，加入一緩衝溶液，使蛆浸泡於該緩衝溶液中；(c) 對該容器內之蛆進行超音波震盪，取得一蛆萃取混合液；(d) 將該蛆萃取混合液進行離心分離，取得一上清液；及(e) 將該上清液的水分去除，即取得蛆萃取乾燥粉末。
如上所述的製備方法，在(a)步驟中，係以該緩衝溶液清洗。
如上所述的製備方法，該緩衝溶液係為磷酸鹽緩衝生理鹽水。
如上所述的製備方法，超音波震盪的頻率為每秒46000。
如上所述的製備方法，係以12,000 rpm的轉速離心30分鐘。
如上所述的製備方法，該上清液的水分去除係以真空冷凍乾燥法。
為達上述目的及其他目的，本發明係提供以上述製備方法所製得之蛆萃取物。
如上所述之蛆萃取物係用於促使人體表皮細胞增生。
藉由如上所述之製備方法，可以成功地取得蛆萃取物，且藉由如上所述之製備方法所取得的蛆萃取物，可以有效地促使人體表皮細胞增生。
為充分瞭解本發明之目的、特徵及功效，茲藉由下述具體之實施例，並配合所附之圖式，對本發明做一詳細說明，說明如後：
蛆飼養方式： 本發明中的蛆係選用家蠅(Musca domestica )的幼蟲，本發明中的蛆飼養方式詳述如下：準備一產卵箱，使家蠅成蠅產蠅卵於該產卵箱內，再提供一培養料，將該產卵箱內的蠅卵接種於該培養料中，蠅卵在25~35℃溫度下孵化為蛆，孵化後的蛆在該培養料中飼養4至5天，4至5天大的蛆即可取用做為蛆萃取物的原料。
蛆萃取物的製備方式： 蛆萃取物的製備方式如下：準備500-600隻4至5天大的蛆並秤取50至60克的蛆量，以供製備蛆萃取物使用，蛆的培養方式如前所述，上述的蛆以磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS, Phosphate Buffered Saline)洗滌約5分鐘。
將清洗過的蛆放入一容器內，例如25毫升之試管或燒杯(該些蛆亦可放置於離心管或其他容器中)，並加入一緩衝溶液，例如10毫升的磷酸鹽緩衝生理鹽水倒入該試管內，使蛆浸泡於該磷酸鹽緩衝生理鹽水中，但也可以選擇用其他緩衝溶液來浸泡蛆，蛆浸泡於該磷酸鹽緩衝生理鹽水中後，將該試管置於一超音波震盪器中，對該容器內之蛆進行高速超音波震盪4小時，震盪頻率為每秒46000次，透過上述的超音波震盪處理，該試管內的蛆其體表的分泌物便能從蛆的體表分離出來，並溶於該磷酸鹽緩衝生理鹽水中，蛆的分泌物與該磷酸鹽緩衝生理鹽水形成蛆萃取混合液。
將該試管內的蛆萃取混合液倒入一離心管內，再將該離心管置入一高速離心機內，以12,000 rpm的轉速進行離心，該離心管在該高速離心機內離心30分鐘後，自該離心管內分離取出一上清液。此時，可取少量的該上清液，利用布拉德福蛋白質定量法(Bradford protein assay)檢測該上清液中是否含有蛋白質，以確認該上清液內含有蛆的分泌物。
將該上清液的水分去除，製備成乾燥粉末，即可取得蛆萃取物。在本實施例中係以真空冷凍乾燥法取得該蛆萃取物，具體做法如下：將該上清液置入一真空冷凍乾燥機內進行真空冷凍乾燥處理，經過2至3天後，由該真空冷凍乾燥機中，取得乾燥粉末狀的蛆萃取物。
蛆萃取物對人體表皮細胞存活率影響實驗： 蛆萃取物對人體表皮細胞存活率影響的實驗流程詳述如下：取出400毫克的蛆萃取物粉末回溶至5毫升的磷酸鹽緩衝生理鹽水中，蛆萃取物溶液的濃度為80 mg/ml。該蛆萃取物係經由前述之製備方式所製得。
將該蛆萃取物溶液進行無菌過濾(例如以針筒過濾器進行無菌過濾)，並準備一個24孔細胞培養盤，各孔內皆加入大約1毫升的人體表皮細胞培養液樣本，人體表皮細胞培養液樣本所使用的培養液為DMEM培養液(內含濃度為4.5 g/L的葡萄糖、左旋麩醯胺酸、丙酮酸鈉、青黴素/鏈黴素雙抗生素溶液及10%胎牛血清)，培養液中含有人體表皮細胞株，該些人體表皮細胞株係貼附於該細胞培養盤的底部生長。
上述的24個人體表皮細胞培養液樣本，以4個樣本為單位做為1組，由此將該些人體表皮細胞培養液樣本分為6組。第一組的4個樣本不加入蛆萃取物溶液，以做為對照組；第二組的4個樣本中各加入3微升的蛆萃取物溶液；第三組的4個樣本中各加入6微升的蛆萃取物溶液；第四組的4個樣本中各加入9微升的蛆萃取物溶液；第五組的4個樣本中各加入12微升的蛆萃取物溶液；第六組的4個樣本中各加入15微升的蛆萃取物溶液。上述第一至六組中，每一組中4個樣本的蛆萃取物濃度依序分別為0、240、480、720、960及1200μg/ml。
上述第二至六組的樣本都加入蛆萃取物溶液後，接著將上述細胞培養盤放入細胞培養箱中，於37℃、二氧化碳濃度5%的條件下培養24小時。該細胞培養盤在細胞培養箱中放置24小時後取出，並將該細胞培養盤的24個孔中的細胞培養液都抽乾，再於該細胞培養盤的24個孔中各加入200微升的四甲基偶氮唑鹽溶液(MTT, 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)，四甲基偶氮唑鹽溶液濃度為5 mg/ml，該細胞培養盤的24個孔中都加入四甲基偶氮唑鹽溶液後靜置10分鐘，加入該細胞培養盤中的四甲基偶氮唑鹽溶液會形成結晶物沉積於該細胞培養盤的底部，接著將該細胞培養盤的24個孔中的液體抽乾，並在該細胞培養盤的24個孔中加入二甲基亞碸(DMSO, Dimethyl sulfoxide)，利用二甲基亞碸將該細胞培養盤中的結晶物充分溶解，最後將細胞培養盤放入酵素免疫分析測讀儀中測得吸光值，並由酵素免疫分析測讀儀所測得之吸光值數據，計算出各組樣本中的人體表皮細胞存活率。
圖1顯示蛆萃取物對人體表皮細胞存活率影響之實驗結果。由圖1可見，相較於未加入蛆萃取物的樣本，其他加入蛆萃取物之樣本中的人體表皮細胞數量都增長，而且當細胞培養液中蛆萃取物的濃度增加，細胞培養液中人體表皮細胞的增生程度也隨之提升。因此，蛆萃取物可用於促使人體表皮細胞增生。
本發明在上文中已以較佳實施例揭露，然熟習本項技術者應理解的是，該實施例僅用於描繪本發明，而不應解讀為限制本發明之範圍。應注意的是，舉凡與該實施例等效之變化與置換，均應設為涵蓋於本發明之範疇內。因此，本發明之保護範圍當以申請專利範圍所界定者為準。
無
圖1係為本發明蛆萃取物對人體表皮細胞存活率影響之實驗結果圖。
無

Claims (8)

  1. 一種蛆萃取物之製備方法，其包含下列步驟： (a) 秤取一定量之蛆，並加以清洗； (b) 將清洗後之蛆置於一容器內，加入一緩衝溶液，使蛆浸泡於該緩衝溶液中； (c) 對該容器內之蛆進行超音波震盪，取得一蛆萃取混合液； (d) 將該蛆萃取混合液進行離心分離，取得一上清液；及 (e) 將該上清液的水分去除，即取得蛆萃取乾燥粉末。
  2. 如請求項1所述的製備方法，在(a)步驟中，係以該緩衝溶液清洗。
  3. 如請求項1或2所述的製備方法，該緩衝溶液係為磷酸鹽緩衝生理鹽水。
  4. 如請求項1所述的製備方法，在(c)步驟中，超音波震盪的頻率為每秒46,000次。
  5. 如請求項1所述的製備方法，在(d)步驟中，係以12,000 rpm的轉速離心30分鐘。
  6. 如請求項1所述的製備方法，在(e)步驟中，該上清液的水分去除係以真空冷凍乾燥法。
  7. 一種蛆萃取物，係以請求項1至6中任一項製備方法所製得。
  8. 一種如請求項7所述的蛆萃取物之用途，係用於促使人體表皮細胞增生。
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