TW201811324A - 吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途 - Google Patents

Abstract

一種吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途，醫藥組合物包含有效劑量之吖啶衍生物。

Description

吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途

本發明係關於一種吖啶衍生物製備治療泌尿道上皮癌醫藥組合物之用途。

泌尿道上皮（urothelium）係指分布在泌尿系統尿液運輸及儲存器官的上皮組織，在組織學上又稱作移行上皮（transitional epithelium）。泌尿道上皮癌（urothelial cancer）就是由病變的泌尿道上皮所衍生而成，因此又稱移行上皮細胞癌（transitional cell carcinoma, TCC）。泌尿道上皮癌是發生於所有泌尿道上皮細胞的惡性腫瘤，包括膀胱癌、尿道癌、輸尿管癌以及腎盂癌，其中膀胱癌約占六成，且復發率相當高。

診斷膀胱癌除了一般的尿液檢查，以確定血尿發生原因外，還包含尿液細胞學檢查、 超音波檢查、 經尿道超音波檢查（TUS）、電腦斷層攝影（CT）、核磁共振攝影檢查（MRI），或進一步的侵入性檢查，其中侵入性檢查包括膀胱鏡檢查、靜脈或腎盂X光攝影或膀胱鏡合併切片檢查。膀胱鏡檢查是將膀胱鏡經由尿道進入膀胱，以內視鏡觀察膀胱內的病變；X光攝影是將顯影劑經由靜脈注射，或利用膀胱鏡插入輸尿管導管再經由導管打入腎盂或輸尿管內，使腎盂、輸尿管與膀胱顯影，藉以檢查尿路系統。

一般治療膀胱癌是採用經尿道膀胱腫瘤切除手術（transurethral resection of bladder tumor, TURBT），利用膀胱內視鏡，經由尿道插入手術切除鏡，以將膀胱腫瘤組織切除。於經尿道膀胱腫瘤切除手術後，一般會合併使用膀胱藥物灌注療法，將化療藥物或卡介苗（bacillus calmette-guerin, BCG）藉由導尿管經尿道灌入膀胱內，留置60分鐘，以殺死未切除到或肉眼未能發現的癌細胞，以期能提高治療率，並降低再復發的機率。

目前在泌尿道上皮癌的治療方面，並未發現一種在確診後的治療或輔助治療泌尿道上皮癌的方法及製備其醫藥組合物的用途。因此，如何能提供一種可在確診後進行即時治療或輔助治療泌尿道上皮癌的方法及製備其醫藥組合物的用途，是一個業界極需努力的課題。

有鑑於上述課題，本發明之目的為提供一種在確診後可輔助或即時治療泌尿道上皮癌的製備醫藥組合物之用途。

為達上述目的，依據本發明之一種吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途，其中醫藥組合物包含有效劑量之吖啶衍生物。

在一實施例中，醫藥組合物於治療時係配合藍光照射。

在一實施例中，吖啶衍生物係為吖啶橙及其鹽類、吖啶黃及其鹽類、吖啶紅及其鹽類、9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶及其鹽類、烷化衍生物、甲基化衍生物、聚合物衍生物、或是上述的組合。

在一實施例中，醫藥組合物的製備方法包含製備一灌注液，該灌注液包含有效劑量之吖啶衍生物以及一酸性緩衝液。

在一實施例中，灌注液中的吖啶衍生物濃度大於1.0μg/mL。

在一實施例中，灌注液之pH值介於pH5~pH8。

在一實施例中，酸性緩衝液為一醋酸鹽緩衝液、一磷酸鹽緩衝液、一檸檬酸鹽緩衝液、一三羥甲基氨基甲烷緩衝液或其組合。

在一實施例中，醫藥組合物於治療時需將灌注液灌注到至少部分的泌尿系統中。

在一實施例中，吖啶衍生物位於泌尿系統之濃度介於1.0μg/mL至5.0mg/mL。

在一實施例中，灌注液灌注到至少部分的泌尿系統，係藉由一導管進行灌注。

在一實施例中，導管係為一內視鏡組之導管，藍光由內視鏡組所發射。

在一實施例中，治療時配合藍光照射係指藉由一外部光源對至少部分的泌尿系統照射。

在一實施例中，藍光之峰值波長介於400 nm至490 nm。

在一實施例中，照射藍光的時間大於25秒。

在一實施例中，照射藍光的時間介於25秒至900秒。

綜上所述，本發明係提供一種吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途，當以吖啶衍生物進行泌尿道上皮癌細胞染色檢測時，若醫護人員於檢測時發現病變細胞/癌細胞，即可馬上進行光動力療法（photodynamic therapy)，對患部照射藍光，以於檢測泌尿道上皮癌細胞的過程中，即時地殺死或減少泌尿道上皮癌細胞的數量。如此一來，即可在檢測到癌細胞的第一時間進行治療，進而簡化患者繁複的檢查及治療過程。

以下將參照相關圖式，說明依本發明較佳實施例吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途，其中相同的元件將以相同的參照符號加以說明。

為讓本文更能明顯易懂，特別針對本文使用的用語予以定義並分述於下：

用語「治療」涵蓋對於哺乳類動物之疾病提供或給予任何治療方法，上述哺乳類動物包括人類。所謂治療及包含抑制疾病、阻止疾病發展、減緩疾病；或刺激沒有效率的生理過程。上述名詞包含得到一種理想的藥理學及或生理學效果，涵蓋對於哺乳類動物中任何的病理情況或疾患的治療，上述哺乳類動物包括人類。上述效果可以是預防性的，亦即能夠完全或部分地防止疾患及或相關症狀；或者可以是治療性地，亦即能夠部分或完全地治癒疾患和/或該疾患所導致之不良影響。因此，本發明提供了治療及預防。其包含（1）防止可能罹患疾病但尚未出現症狀的患者患病或復發；（2）抑制疾患，例如阻止疾患之發展；（3）停止或終止疾患或至少相關之症狀，而使得患者不再受疾患或其症狀所苦；或刺激沒有效率的生理過程；以及（4）減輕、緩和或改善疾患或相關症狀，其中「改善」一詞廣義地係指能夠減輕至少一種參數的強度，例如發炎、疼痛、和/或腫瘤大小。

「個體」或「患者」係指哺乳類動物，較佳為人類。哺乳動物包含飼養動物（farm animal）、突變動物（sport animal）、寵物、靈長類動物（primate）、馬、狗、貓、老鼠與倉鼠。

「組合物」係指一種混合物，其通常含有載體，例如藥學上可接受的載體或習知賦型劑，且適合投予患者，以便進行治療、診斷或預防。其可包括細胞培養物，其中在細胞或培養基中存有多胜肽或聚核苷酸。舉例而言，口服組合物可以是溶液、懸浮液、錠劑、藥丸、膠囊、緩釋性配方、漱口水或粉末。

「藥學上可接受的載體」係指非毒性地固態、半固態或液體、填料、稀釋劑、封裝材料、配方輔劑、或任何習知類型之賦型劑。藥學上可接受的載體在所用的劑量及濃度下，對於患者而言是沒有毒性的，且可和配方中其他成分相容。此等載體包含，惟不限於，食鹽水、緩衝溶液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合物。

「有效劑量」係指當將一數量投予一患者時可在該患者身上達到一所想的效果。舉例而言，本發明之包含有吖啶衍生物的醫藥組合物投予患者之有效劑量為，可防止和/或治療泌尿道上皮癌所需的量。實際的使用量將隨著治療目的而不同，且習知此技術者可利用已知技術確定該數量。相關領域中也已經知道，可能需要針對全身或局部投藥、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食習慣、投藥時間、藥物交互作用、及嚴重性等情形，來調整劑量，且習知此技術者可經由慣常試驗確定該數量。

「吖啶衍生物」泛指可作為螢光染料的吖啶染料，脂溶性且呈微鹼性。舉例而言，作為螢光染料的吖啶染料可為吖啶橙（acridine orange）及其鹽類、吖啶黃（acridine yellow）及其鹽類、吖啶紅（acridine red）及其鹽類、或是9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶（9-amino-6-chloro-2-methoxyacridine, ACMA）及其鹽類、烷化衍生物、甲基化衍生物、聚合物衍生物、或是上述的組合。

吖啶橙，化學式為C₁₇ H₁₉ N₃ ，化學名稱為3,6-二甲胺基吖啶（N,N,N',N'-Tetramethylacridine-3,6-diamine），能與無機酸形成鹽類（例如氯化鹽、氯化鋅鹽）。吖啶橙是一種核酸染劑，且溶於水及酒精，其吸收光譜和發射光譜會依其濃度而有不同，吖啶橙之激發波長（excitation wavelength）大致介於440nm~505nm；發光波長（emission wavelength）則介於520nm~650nm。例如與DNA結合時，其激發波長為502nm，發光波長為525nm（綠色）；與RNA結合時，其激發波長為460nm（藍色），發光波長為650nm（紅色）。吖啶橙的化學結構式如下：

吖啶黃，化學式為C₁₅ H₁₅ N₃ Cl，化學名稱為3,6-二氨基-2,7-二甲基吖啶（3,6-diamine-2,7-dimethylacridine）是一種從煤焦油提取的染料，外觀為棕紅色。吖啶黃溶於酒精，其激發波長為420nm~470nm，發光波長為525nm~550nm。吖啶黃的化學結構式如下：

吖啶紅，化學式為C₁₅ H₁₅ ClN₂ O，化學名稱為二甲基二氨基呫噸基氯（methyl-[6-(methylamino)xanthen-3-ylidene]azanium chloride），其激發波長為455nm~600nm，發光波長為560nm~680nm。吖啶紅的化學結構式如下：

甲基吖啶（acriflavine），化學式為C₁₄ H₁₄ ClN₃ ，化學名稱為氯代3,6-二氨基-10-甲基吖啶（3,6-diamino-10-methylacridinium chloride），其激發波長為452nm，發光波長為510nm。甲基吖啶的化學結構式如下：

9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶（9-amino-6-chloro-2-methoxyacridine, ACMA），化學式為C₁₄ H₁₁ ClN₂ O，其激發波長為412nm~430nm，發光波長為471nm~474nm。ACMA的化學結構式如下：

奎納克林（quiancrine），化學式為C₂₃ H₃₀ ClN₃ O，化學名稱為N4-(6-氯-2-甲氧基-9-吖啶基)-N1,N1-二乙基-1,4-戊二胺（(RS)-N'-(6-Chloro-2-methoxy-acridin-9-yl)-N,N-diethylpentane-1,4-diamine），其激發波長為445nm，發光波長為500nm。奎納克林的化學結構式如下：

細胞自噬作用（autophagy）是一種經由細胞遭遇壓力（如營養缺乏）所引發的一種細胞反應，自噬作用藉由細胞內膜構造的重組以及一連串訊息傳遞而產生前自噬體（preautophagosome），再形成雙層膜構造（isolation membrane/phagophore），藉由此雙層膜結構包覆細胞質成為自噬體（autophagosome）之後，自噬體便與溶酶體（lysosomes）結合為自噬溶酶體（autophagolysosomes），將其包覆之內含物分解。當溶酶體與自噬體融合之後，可以藉由溶酶體內的酵素消化自噬體所包裹的胞器或蛋白質，此時酸性泡內的pH值呈酸性，若由吖啶衍生物染色會呈現螢光色的小顆粒，此即為酸性囊泡胞器（acidic vesicular organelles, AVOs）。吖啶衍生物於酸性胞器（acidic organelles）中的累積量與pH值有關，其能與酸性囊狀胞器相結合，而常被用以作為檢測酸性囊狀胞器的存在，進而判斷細胞是否已死亡。細胞經染色並經藍光激發後，細胞質和核仁會呈現亮綠色或是橙紅色，而溶酶體或自噬溶酶體則呈亮紅色或橙紅色（參考文獻Kanzawa, T., Kondo, Y., Ito, H. et al.: Induction of autophagic cell death in malignant glioma cells by arsenic trioxide. Cancer Res, 63: 2103, 2003. Lin, J. F., Lin, Y. C., Lin, Y. H. et al.: Zoledronic acid induces autophagic cell death in human prostate cancer cells. J Urol, 185: 1490, 2011.）。

光敏劑（photosensitizer），在光化學反應中，有一類分子它們只吸收光子並將能量傳遞給那些不能吸收光子的分子，促其發生化學反應，而本身則不參與化學反應，並會恢復到原先的狀態，這類分子稱為光敏劑。由光敏劑引發的光化學反應稱為光敏反應。通常把有氧分子參與的伴隨生物效應的光敏反應稱為光動力反應（photodynamic reaction），把可引發光動力反應破壞細胞結構的藥物稱為光動力藥物，即光敏藥物。

光動力療法（photodynamic therapy, PDT）原稱光輻射療法（photoradiation therapy, PRT）或是光化學療法（photochemical therapy, PCT），是利用光動力反應進行疾病診斷定位和治療的一種新技術。光動力療法的基本過程是，當生物組織中的內源性或外源性光敏物質受到相應波長（可見光、近紅外光或紫外光）光照時，吸收了光子能量，而由基態變成激發態。由於處於激發態的光敏物質不穩定，便會迅速經過物理退激或化學退激過程釋放出能量而返回基態，其物理退激過程可以產生螢光，通過分析螢光光譜能進行疾病的診斷；其化學退激過程則可以生成大量活性氧，其中最主要的是單態氧（singlet oxygen），活性氧能與多種生物大分子相互作用，損傷其細胞結構或影響細胞功能，因而產生治療作用，例如殺死腫瘤細胞/癌細胞。

本發明係提供一種吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途，此用途為用於製備治療或預防泌尿道上皮癌的醫藥組合物。於此，醫藥組合物可用於確診泌尿道上皮癌時，立即進行治療，或與膀胱藥物灌注療法合併使用以進行輔助治療。

治療或預防泌尿道上皮癌的醫藥組合物係提供至一所需治療個體，且配合藍光照射。其中，吖啶衍生物可為一光敏劑（photosensitizer），利用吖啶衍生物染色觀察癌細胞於自噬過程中所形成之酸性囊泡胞器（AVOs），可作為是否罹患癌症的檢查。

治療或預防泌尿道上皮癌的醫藥組合物，可將已知的藥物傳送方式進行投藥，如靜脈注射、塗抹或灌注（infusion）等。

在一實施例中，上述醫藥組合物的製備方法包含：製備一灌注液，灌注液包含有效劑量之吖啶衍生物以及一酸性緩衝液，其中酸性緩衝液可為一醋酸鹽緩衝液、一磷酸鹽緩衝液、一檸檬酸鹽緩衝液、一三羥甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane, Tris）緩衝液或其組合，俾使灌注液之pH值介於pH5~pH8。其中，灌注液中的吖啶衍生物濃度大於1.0μg/mL，吖啶衍生物濃度較佳係介於1.0μg/mL~5.0mg/mL之間。

醫藥組合物可於患者已確認為泌尿道上皮癌後才進行治療，而確診的手段可為習知技術，於此即不再重覆。治療時，醫藥組合物可以膀胱藥物灌注療法來進行，甚至直接混合入已含有膀胱藥物（例如化療藥物、卡介苗等等）的灌注液中來進行輔助治療，也就是醫藥組合物更可包含化療藥物、卡介苗或其他泌尿道上皮癌的治療藥物。以下的實施例，則是以醫藥組合物協助進行泌尿道上皮癌的診斷後，再加以藍光來進行治療為例來作說明，而達到即時治療泌尿道上皮癌的目的。

請參照圖1所示，於泌尿道檢測時，可將含有有效劑量之灌注液，藉由導管灌注到患部，也就是至少部分的泌尿系統（腎臟K、膀胱B、輸尿管Ur及尿道Ua）中，以進行癌細胞的染色。需注意的是，除了吖啶衍生物之外，灌注液中也可具有其他可用於癌細胞檢測之染劑。

以進行膀胱B灌注為例，導管C可為獨立管體或與膀胱內視鏡成組設置。通常進行膀胱灌注時，患者係平躺或採截石臥式（lithotomy position），以一條細軟導管從尿道伸入膀胱內，可藉由導管的孔洞O先導空尿液，再將醫藥組合物（約 30 至 50 毫升）灌注入膀胱內。

於檢測過程中，先利用吖啶衍生物為螢光染劑的特性，並利用導管先吸取出部分已於泌尿系統接觸過的灌注液來觀察，或者是用內視鏡直接觀察，協助確認是否存在病變或癌化的腫瘤細胞。以吖啶橙為例，當檢查時發現有呈橘紅色的AVOs出現時，表示患者已有病變或癌化的腫瘤細胞出現，醫護人員即立即開始進行藍光照射，以進行光動力療法。

藍光照射的目的是讓光敏物質或吖啶衍生物能產生激發態，以放出單態氧。當配合的吖啶衍生物所需之激發波峰波長並非藍光時，則可以其他對應光敏物質或吖啶衍生物的激發波峰波長之輻射光取代，例如紅光、綠光、紫光或紫外光。

藍光照射吖啶衍生物（或醫療組合物）的時機，可以是當灌注液或醫療組合物已進入泌尿系統後，或是灌注液或醫療組合物投藥至患者前。若為灌注液或醫療組合物投藥至患者前，則可以直接以藍光照射灌注液或醫療組合物再進行投藥。於此，係以灌注液或醫療組合物已進入泌尿系統後，再進行藍光照射為例。其中，藍光光源可以LED燈泡所提供，藍光可以藉由外部藍光光源、或是經由其他光源與濾光片的組合以產生藍光，穿過人體的皮膚而間接照射至灌注液或醫療組合物。於此，藍光之峰值波長係介於400 nm至490 nm，當對應的醫藥組合物為吖啶橙時，則較佳地係介於430 nm至450 nm；藍光的照射時間係大於25秒，較佳地係介於25秒至900秒；而藍光照射距離係介於0.1cm至15cm。

需注意的是，藍光也可藉由內視鏡組所攜帶或設置的光源來發射，如此一來，內視鏡組伸入人體後，例如沿尿道伸入膀胱後，配備於內視鏡組上的藍光光源，即可直接照射至含有吖啶衍生物的灌注液或醫療組合物。其中，吖啶衍生物位於泌尿系統中之濃度介於1.0μg/mL至5.0mg/mL。另外，內視鏡組亦可配置有導管，以協助進行灌注的程序。為了讓藥物充分接觸膀胱的黏膜，通常會讓病人依不同姿勢休息，至少60分鐘，較佳為1至3小時，但不以此為限，休息後或尿漲時，再由病人自行排出尿液。

故於進行膀胱鏡檢或其他泌尿系統的檢查時，即可進行灌注含有吖啶衍生物的灌注液，先利用吖啶衍生物為螢光染劑的特性，協助確認是否存在病變或癌化的腫瘤細胞。當檢查時發現有被染色或螢光標記的AVOs出現時，表示患者已有病變或癌化的腫瘤細胞出現，醫護人員即可在短時間內進行藍光照射，以進行光動力療法。此係利用吖啶衍生物為光敏劑的特性，經藍光照射後可產生單態氧，進行殺死或減少病變或癌化的腫瘤細胞。

在參考文獻（Lin, Y. C., Lin, J. F., Wen, S. I. et al.: Inhibition of High Basal Level of Autophagy Induces Apoptosis in Human Bladder Cancer Cells. J Urol, 2015）中已提及，人類的膀胱癌細胞系中，存在著高度活化的自噬作用，而自噬作用又為癌細胞生長所需；且藉由提昇細胞凋亡（apoptotic cell death），可抑制癌細胞的生存前自噬作用（pro-survival autophagy），進而能減少泌尿道上皮癌細胞的存活率。而部分光敏物質則已被報導證實可具有誘發細胞凋亡的功效。

本發明亦提供一種吖啶衍生物用於治療泌尿道上皮癌的方法，治療方法包含：製備一灌注液，灌注液包含有效劑量之吖啶衍生物；以及對灌注液照射藍光。

以下，將以複數實驗例來證明具有吖啶衍生物的醫藥組合物經藍光照射後，可具有治療泌尿道上皮癌細胞的效果。

材料與分析方法

化學品與細胞系：所有的化學品是以標準程序製備為原液（stock solution）。人類永生尿路上皮細胞系（human immortalized urothelial cell line (SV-Huc-1)）、膀胱癌細胞系（RT4、5637和T24）購自新竹市生物資源保存及研究中心（Bioresource Collection and Research Center, BCRC）。

藍光光源：實驗例中使用6個藍光LED燈泡（峰值波長為443.7 nm），焊接到一電路板並放入一鋁箔包覆的紙箱，藉由功率轉換器驅動LED燈泡。紙箱蓋住96孔細胞培養盤或10 cm的培養皿。

細胞的螢光成像（fluorescent imaging）分析，則利用Nikon倒置式顯微鏡Eclipse Ti-E，其配備有130W的螢光光源，並具有465nm~495nm的帶通激光濾光片（band-pass excitation filter）以及590nm的長通屏蔽濾光片（long-pass barrier filter）。

細胞活性分析（cell viability assays）：本實驗例中係參照文獻（Lin, J. F., Tsai, T. F., Liao, P. C. et al.: Benzyl isothiocyanate induces protective autophagy in human prostate cancer cells via inhibition of mTOR signaling. Carcinogenesis, 34: 406, 2013.）的作法，以WST-1 試劑（Roche Diagnostics, Mannheim, Germany）來測定細胞活性，分析過程避免照光。

統計分析：資料數據以平均值±標準差（mean ± standard deviation）表示，並以student t-test計算是否具有統計意義，並定義P值小於0.05代表具有統計意義。

第一實驗例：吖啶衍生物或藍光對膀胱癌細胞株5637和膀胱癌細胞株T24細胞活性的影響

如圖2A至圖2D所示，為研究吖啶衍生物或藍光照射何者對膀胱癌細胞的細胞活性會有影響，先將膀胱癌細胞株5637和T24殖入96孔細胞培養盤培養24小時後，再分別進行下列不同處理，其中吖啶衍生物以吖啶橙（AO）為例：(A)將培養液換成含0~2.5 μg/ mL AO處理30分鐘，但不照藍光；(B)以藍光照射不同時間0~300秒，但培養液不添加AO；(C)將培養液換成含1 μg/ mL AO處理30分鐘後，照射藍光0~300秒；(D)將培養液換成含0~2 μg/ mL AO處理30分鐘後，照射藍光30秒，本實驗於AO處理過程皆避免照光。

結果如圖2A所示，膀胱癌細胞株5637和T24未照藍光，只經不同AO濃度處理30分鐘後，5637和T24的細胞活性與對照組（AO濃度為0）並無差異。如圖2B所示，未添加吖啶橙的膀胱癌細胞株5637和T24經藍光照射不同時間後，膀胱癌細胞株5637和T24的細胞活性與對照組（無照射藍光）並無差異。因此膀胱癌細胞株5637和T24只有經AO處理或只有藍光照射的組別，對細胞活性並無影響。如圖2C所示，先經AO處理（AO濃度為1μg/mL）的膀胱癌細胞株5637和T24，再經藍光照射30秒後，即可看到5637和T24細胞活性與對照組比較有顯著地減少。如圖2D所示，經藍光照射30秒後，當AO濃度大於等於1μg/mL時，膀胱癌細胞株5637和T24的細胞活性與對照組比較有顯著地減少，且AO濃度愈高，5637和T24細胞活性愈低。

另外，基於第一實驗例的結果，後續AO處理的濃度則選定為1μg/mL，藍光照射時間則為30秒，如此結合吖啶衍生物處理及藍光照射的實驗，則可稱為吖啶衍生物的光動力治療（AO-PDT）。

第二實施例：吖啶衍生物及藍光對正常細胞（人類永生尿路上皮細胞系SV-Huc-1）的影響

如圖3A至圖3C所示，由於前述膀胱癌細胞於經過AO處理及藍光照射後，細胞活性明顯減少，為了解AO及藍光照射的處理，是否只對癌細胞有影響，故本實驗（圖3A及圖3B）係將膀胱癌細胞株5637和T24殖入96孔細胞培養盤分別培養24小時後，再將培養液換成含1μg/mL AO處理30分鐘，然後照射藍光30秒，完成藍光照射後進行培養液（正常含10%血清的培養液）的更換，並分別於培養1小時、4小時及24小時後計算細胞活性（此為處理組，對照組則未進行AO處理也未進行藍光照射）。而圖3C則是顯示將人類永生尿路上皮細胞SV-Huc-1經過與上述處理組的處理條件，並於照射藍光後24小時，與經過同樣處理的膀胱癌細胞T24之結果比較（此為處理組，對照組則未進行AO處理也未進行藍光照射）。

由圖3A及圖3B可知，經過吖啶衍生物光動力治療的膀胱癌細胞株5637和T24，其細胞活性隨著培養時間增長而明顯減少。如圖3C所示，人類永生尿路上皮細胞SV-Huc-1即使培養了24小時，細胞活性仍無減少，顯示AO及藍光對正常細胞活性無影響。

第三實施例：吖啶衍生物及藍光對正常細胞（人類永生尿路上皮細胞系SV-Huc-1）的影響

請同時參照圖4A至圖5D，將人類永生尿路上皮細胞系SV-Huc-1、膀胱癌細胞RT4、5637和T24殖入96孔細胞培養盤後培養24小時，將培養液換成含1μg/mL AO處理30分鐘後，照射藍光30秒（此為處理組，對照組則未進行AO處理也未進行藍光照射）；藍光照射後更換培養液（正常含10%血清的培養液），再將培養盤置入Cytation 5盤式偵測儀（Cytation 5 Imaging Reader）中培養細胞，儀器分別於0、6、12、18 及24 小時，由偵測儀內建的軟體（Biotek）自動計算細胞融合度（cell confluence），並以0小時之細胞融合度作為基準（1.00），結果如圖4A至圖4D所示，而自動拍照記錄的細胞形態則如圖5A至圖5D所示。由結果可知，AO處理及藍光照射對SV-Huc-1細胞活性並無影響，但膀胱癌細胞RT4、5637和T24經AO處理及藍光照射後，細胞活性則明顯減少，顯示AO及藍光僅對膀胱癌細胞有影響，對正常細胞沒有影響。

本發明亦提供一種吖啶衍生物用於治療泌尿道上皮癌的方法，治療方法包含：製備一灌注液，灌注液包含有效劑量之吖啶衍生物；以及對灌注液照射藍光。其中，灌注液的製備方法以及藍光的照射方式均已於前述的內容進行說明，於此不再贅述。

綜上所述，本發明係提供一種吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途，當以吖啶衍生物進行泌尿道上皮癌細胞染色檢測時，若醫護人員於檢測時發現病變細胞/癌細胞，即可馬上進行光動力療法，對患部照射藍光，以於檢測泌尿道上皮癌細胞的過程中，即時地殺死或減少泌尿道上皮癌細胞的數量。如此一來，即可在檢測到癌細胞的第一時間進行治療，進而簡化患者繁複的檢查及治療過程。醫藥組合物亦可於患者確診泌尿道上皮癌後，才進行治療，例如與膀胱藥物灌注療法合併使用，尤其可輔助化療藥物或卡介苗治療來泌尿道上皮癌，以提高治療率。

以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。

B‧‧‧膀胱
C‧‧‧導管
K‧‧‧腎臟
O‧‧‧孔洞
Ua‧‧‧尿道
Ur‧‧‧輸尿管

圖1為本發明實驗例中，導管插入膀胱以進行灌注的示意圖。 圖2A至圖2D為吖啶衍生物或藍光對膀胱癌細胞5637和T24細胞活性影響的實驗結果。 圖3A至圖3C為本發明的吖啶衍生物及藍光對正常細胞（人類永生尿路上皮細胞系SV-Huc-1）影響的實驗結果。 圖4A至圖4D為本發明的吖啶衍生物及藍光對正常細胞（人類永生尿路上皮細胞系SV-Huc-1）影響的實驗結果。 圖5A至圖5D為本發明的吖啶衍生物及藍光對正常細胞（人類永生尿路上皮細胞系SV-Huc-1）影響的實驗結果。

Claims (15)

1. 一種吖啶衍生物在製備治療泌尿道上皮癌之醫藥組合物的用途，其中該醫藥組合物包含有效劑量之吖啶衍生物。
2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該醫藥組合物於治療時係配合藍光照射。
3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該吖啶衍生物係為吖啶橙及其鹽類、吖啶黃及其鹽類、吖啶紅及其鹽類、9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶及其鹽類、烷化衍生物、甲基化衍生物、聚合物衍生物、或是上述的組合。
4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該醫藥組合物的製備方法包含：製備一灌注液，該灌注液包含有效劑量之吖啶衍生物以及一酸性緩衝液。
5. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該灌注液中的吖啶衍生物濃度大於1.0μg/mL。
6. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該灌注液之pH值介於pH5~pH8。
7. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該酸性緩衝液為一醋酸鹽緩衝液、一磷酸鹽緩衝液、一檸檬酸鹽緩衝液、一三羥甲基氨基甲烷緩衝液或其組合。
8. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該醫藥組合物於治療時需將該灌注液灌注到至少部分的泌尿系統中。
9. 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中該吖啶衍生物位於該泌尿系統中之濃度介於1.0μg/mL至5.0mg/mL。
10. 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中將該灌注液灌注到至少部分的泌尿系統，係藉由一導管而進行灌注。
11. 如申請專利範圍第10項所述之用途，其中將該導管係為一內視鏡組之導管，該藍光由該內視鏡組所發射。
12. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該治療時配合藍光照射係指藉由一外部光源對至少部分的該泌尿系統照射。
13. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該藍光之峰值波長介於400 nm至490 nm。
14. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中照射該藍光的時間大於25秒。
15. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中照射該藍光的時間介於25秒至900秒。