TW201722452A - 醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種能夠解決現有技術缺陷可獲得的高純度柴胡皂苷的醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其包括：準備一柴胡藥材粗粉碎物；以第一醇類溶劑萃取該柴胡藥材粗粉碎物，並經濃縮而得到一柴胡醇類萃取物；將酯類溶劑洗脫該柴胡醇類萃取物，直至該第二醇類濃度在5%以下，並經以乙酸乙酯和石油醚混合液洗脫而獲得一第一柴胡粗萃物以及一第一水層萃取物； 以及以第二醇類溶劑萃取該第一水層萃取物，並經濃縮、離心以獲得一第二柴胡粗萃物以及一第二水層萃取物，再對該第二柴胡粗萃物真空乾燥即得柴胡皂苷成品；其中該第一醇類溶劑、該第二醇類溶劑係分別含有乙醇、丙醇、丁醇中之至少一種所構成的溶液；該酯類溶劑為乙酸乙酯。

Description

醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法

本發明係關於一種可獲得的高純度柴胡皂苷、並能夠解決現有技術缺陷的醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法；特別是關於一種萃取率高、最終柴胡皂苷產品純度高、製程穩定、且適合大規模生產的醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法。

近數十年來，在台灣，隨著人口的老齡化， 罹患癌症或惡性腫瘤已成為國人十大死因之一。醫學上所稱「腫瘤」包括良性與惡性的腫瘤，通常指不正常的細胞增生形成累贅，甚至於侵犯周圍或遠處的細胞組織影響正常生理功能。常見的癌症包括肝癌、直腸癌、大腸癌、食管癌、胃癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、血癌與骨癌等；其中殺傷力最強的是肺癌、胃癌和肝癌，分別約占癌症死亡人數的18%、10%和9%。

各種惡性的腫瘤一般統稱為「癌症」，癌細胞的生長和分裂處於失控狀態，能侵入正常組織並侵犯周圍組織，經由體內循環系統、淋巴系統或腔內轉移至遠離其起源的部位生長，嚴重挑戰人類健康和生命安全。癌症的治療方法大致可分為外科手術、化學治療、放射線治療、導向治療、免疫治療、激素治療、冷凍治療、加溫治療、血管生成抑制劑療法、及中醫療法、中草藥劑治療等。

在各種的癌症治療方法中，手術、放療、化療為目前臨床治療的主要手段，根據病人癌症種類、位置及所處的時期而採用不同的療法。外科切除手術以摘除癌症發病部位之細胞組織為主；而放療、化療在殺傷腫瘤細胞的同時，對人體正常細胞也有損傷，副作用大且患者生活品質差、生存率低。然而，無論是採取外科切除手術、化學治療方法、或放射線治療手段，皆屬破壞人體細胞、組織甚至器官之不可逆方法。

隨著對細胞死亡現象、分子機理的探究成果，人們對於抗癌藥物的篩選已有了全新的認識，因而對癌症患者比較不會造成不可逆二次傷害之方法，例如，利用含有中草藥或其萃取物成分之藥劑，來對腫瘤細胞特定信號途徑或特定的癌細胞靶位點進行治療之手段，越來越受到人們的極大關注。

中藥是中華文明歷經千年流傳下來的寶貴文化遺產，與人工合成藥物相比，中藥具有使用歷史悠久、毒副作用相對較小的優點，且中藥中的天然化合物不僅來源具有生物多樣性，而且代謝產物結構複雜多變，蘊含著無窮無盡的結構多樣性。多年來，民間在運用中草藥治療呆症、健忘方面也已積累了豐富經驗。舉例來說，在此等誘導腫瘤細胞凋亡之藥劑或醫藥組合物之中，添加含有例如由「柴胡」萃取而得的藥學活性有成物「柴胡皂苷」，近年來亦有快速增長的趨勢。

柴胡的別名有：茈胡、地薰《神農本草經》、山菜、茹草《吳普本草》，柴草《品匯精要》。性味：苦，微寒，歸經：歸肝經、膽經。功能：疏散退熱，升陽舒肝。主治：感冒發熱、寒熱往來、瘧疾，肝鬱氣滯，胸肋脹痛，脫肛，子宮脫落，月經不調。

柴胡是大宗常用中藥，屬於宿根草本，一般高40-70釐米，為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd的幹燥根，味苦，微寒，歸肝、膽經，是和解表裡，疏肝，升陽之要藥。柴胡主要用於感冒發熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經不調，子宮脫垂，脫肛等病症的治療。現代藥理研究表明柴胡具有解熱、抗病毒、抗細菌內毒素、抗炎、降血脂、保肝、抗腫瘤、提高免疫力、抗驚厥等多種功效。

柴胡通常從基部分出數莖，莖基部木質化，上部多次分枝葉為寬或窄的披針形，背面具有5-7條明顯突起的縱脈，基生葉和下部的莖生葉有長柄，葉片較大；莖上部的葉小，披針形或線形。傘形花序常有傘幅10-15，傘幅長2-3釐米，形成開展疏散的圓錐花序；總苞片4-6，披針形，長0.5-1釐米，寬1-3毫米，向後反折，頂端漸尖；小總苞片通常5，少數7，長圓狀披針形或披針形，長2-5毫米，寬1-2毫米，亦向後反折；花瓣淡黃色。雙懸果長圓狀橢圓形，油管在每棱槽中通常1條，少數2-3條。花期6-7月，果期7-8月。

柴胡的有效成分主要為揮發性成分和皂苷類成分，皂苷類成分種類複雜，主要有柴胡皂苷a、c、d、b1、b2、h等，其中柴胡皂苷a、d具有抑制血栓形成、增高糖皮質激素等作用，是柴胡中的主要有效成分，通常以其為主要指標成分。柴胡藥材的品質控制以柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的總量計，不得少於0.3%。

在柴胡傳統使用過程中，柴胡皂苷的次生產物，如柴胡皂苷b1、b2、h，是大量存在的，是柴胡萃取物的重要組成部分，是柴胡、柴胡萃取物和柴胡總皂苷的主要功效成分之一。現代化學研究發現柴胡的主要化學成分為揮發油、柴胡皂苷（saikosapoins a、b、c、d四種）、多糖及黃酮等，現代藥理學研究表明柴胡揮發油和柴胡皂苷均對傷寒、副傷寒疫苗、大腸桿菌液、發酵牛奶、酵母等所致發熱有明顯解熱作用，且能使動物正常體溫下降。

柴胡皂苷為柴胡的主要藥效成分，對整個藥物的療效起著舉足輕重的作用。在柴胡製劑的研究中，只有通過提高柴胡皂苷的萃取率，才能提高藥材的利用度，確保療效。

柴胡皂苷對角叉菜膠、右旋糖酐、5-羥色胺、巴豆油或 醋酸引起的鼠足部浮腫有明顯的抑制作用。在小鼠去除雙 側腎上腺後，柴胡皂苷對腹腔注射醋酸造成的腹腔滲出有明 顯的抑制作用。柴胡皂苷對許多炎症過程包括滲出、毛細血 管通透性、炎症介質釋放、白細胞遊走和結締組織增生等都 有影響。血栓素、白三烯是主要的炎症介質，可引起血小板 聚集。

研究發現：當給小鼠口服柴胡皂苷 0.2～2.0 mg/kg 後發現血清中的促腎上腺皮質激素(ACTH) 明顯增高，而且腺垂體中的 ACTH 前體、下丘腦中的促腎上 腺皮質激素生成激素(CRF)mRNA 的水準也明顯增高，並呈劑 量依賴性，但柴胡皂苷 a 卻沒有這種作用。大鼠腹腔內注 射柴胡皂苷 a、d 後腎上腺重量有所增加，且與柴胡皂苷的 劑量呈正相關。又發現，柴胡皂苷還可提高 糖皮質激素與其受體的親和力，進而增高糖皮質激素的作用。

柴胡皂苷 d 可上調糖皮質激素受體 mRNA 的表達。柴胡皂苷在下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸的每一個環節 都促進了糖皮質激素的作用。另外，研究者還發 現，柴胡皂苷是 Na+ -K+ -ATP 酶的有效抑制劑，可引起血糖、 ACTH、醛固酮、加壓素、皮質素等激素的明顯增高，加強糖、 鹽、水的代謝，同時產生抗炎、抗過敏、抗潰瘍、抗病毒等方 面的效果。

現代醫學研究報告已指出：腫瘤的發生、 發展、 轉移和復發是一個由多種基因參與的多步驟連鎖過程，直接或間接參與血管形成的各種因素在腫瘤的轉移、 復發中起了非常重要的作用。基於新生腫瘤血管與腫瘤轉移顯著相關，經由通過給予荷瘤小鼠小劑量小柴胡湯發現，給藥組較對照組腫瘤血管密度明顯下降，瘤體內血管內皮生長因數表達下降，抑瘤率提高，提示小柴胡湯可通過下調血管內皮生長因數的表達抑制腫瘤血管的生成而發揮抑瘤作用，呈一定的劑量依賴關係。因此，可以確認小柴胡湯和 柴胡皂苷d 對具有破壞間質作用的基質金屬蛋白酶表達有明顯的抑制作用，對基質金屬蛋白酶抑制因數的表達有明顯的促進作用。

另外，經由對於柴胡皂苷誘導腫瘤細胞凋亡的機制初步研究，結果發現柴胡皂苷具有影響細胞增殖，誘導凋亡的機能。例如，柴胡皂苷d 對引起細胞凋亡的受體 Fas 和 Fas 配體的表達均有明顯的促進作用，可引起 G1 期細胞的堆積。柴胡皂苷b2 可抑制黑色素瘤 B16 細胞株的增殖，誘導凋亡是由 G1期細胞的堆積所引起的。

又，柴胡皂苷具有能夠影響基因進而調控細胞凋亡的機能。例如，柴胡皂苷 對人 HepG2 肝癌細胞的細胞毒作用是由於啟動了胱門冬蛋白酶-3、- 7，引起多聚二磷酸腺苷-核糖聚合酶(poly-ADP- ribose-polyme rase , PARP ) 的分裂， 誘導細胞凋亡。柴胡皂苷 可通過多環節、 多位點途徑調節基因，繼而調控細胞的凋亡。柴胡皂苷a 具有抗人肺癌細胞系 MDA-MB-231 和 MCF-7 生存與增殖的作用， 呈劑量依賴關係。MDA-MB-231 細胞的凋亡不依賴 p53 /p21 通路啟動途徑，而是伴隨 Bax / bcl-2 和 c-myc 的增長和 caspase-3 的啟動；相反， MCF-7 細胞的凋亡則須依賴 p53/ p21 途徑，同時伴有 c-myc 蛋白的增高。柴胡皂苷d對其他腫瘤細胞亦有強大的細胞毒作用。柴胡皂苷d 誘導的人 CEM 淋巴細胞凋亡，部分是由於提高 c-myc 和 p53 mRNA 的水準及降低 bcl-2mRNA 的水準所致。柴胡皂苷d 還可上調 HL60 細胞糖皮質激素受體 mRNA 的表 達並誘導細胞凋亡。柴胡皂苷b2誘導細胞凋亡也可能是通過下調蛋白激酶 C 的活性來實現的。

關於柴胡皂苷萃取物製備方法，現有的專利主要涉及柴胡皂苷a、c、d，如中國專利申請第200610099498.7號 “一種柴胡萃取物、其製備方法及其應用”等。為了避免這些柴胡皂苷的次生化，常需要控制嚴格的萃取條件，如溶劑酸鹼性、加熱溫度和時間等，且不能最大限度地避免皂苷的轉變。

雖然對於醫藥業界而言，如上所述含有柴胡萃取物的抗癌劑或組合物之醫療效果已引起人們廣泛的注意，然而對於柴胡皂苷之萃取方法仍然是不能夠令人滿意的，因而需要一種具有理想效果的柴胡皂苷之萃取方法。

本發明的目的在於解決現有技術存在的上述缺陷，提供一種柴胡皂苷的萃取率高且穩定，最終柴胡皂苷的純度高的製備方法，提高了藥材的利用度，工藝穩定，適合規模化生產。

本發明目的在於提供一種醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法；本發明目的還在於提供種方便快捷、原料來源豐富、萃取效率高、分離純化效果明顯、萃取純度高的利用連續逆流萃取聯合溶劑萃取富集純化柴胡皂苷的方法。本發明具有很好的線性、重複性、重現性和回收率，有助於更加全面控制柴胡滴丸的品質，其方法操作簡單，結果可靠準確。

本發明提供一種醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其包括：準備一柴胡藥材粗粉碎物；以第一醇類溶劑萃取該柴胡藥材粗粉碎物，並經濃縮而得到一柴胡醇類萃取物；將酯類溶劑洗脫該柴胡醇類萃取物，直至該第二醇類濃度在5%以下，並經以乙酸乙酯和石油醚混合液洗脫而獲得一第一柴胡粗萃物以及一第一水層萃取物；以及以第二醇類溶劑萃取該第一水層萃取物，並經濃縮、離心以獲得一第二柴胡粗萃物以及一第二水層萃取物，再對該第二柴胡粗萃物真空乾燥即得柴胡皂苷成品；其中該第一醇類溶劑、該第二醇類溶劑係分別含有乙醇、丙醇、丁醇中之至少一種所構成的溶液；該酯類溶劑為乙酸乙酯。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮為減壓濃縮。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮可以是真空減壓濃縮。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡醇類萃取物係固體含量為25 %‑40 %之濃縮液。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡醇類萃取物係固體含量較佳為28 %‑37 %之濃縮液。

此外，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡醇類萃取物係固體含量最佳為30 %‑35 %之濃縮液。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡醇類萃取物係固體含量最佳為32 %‑34 %之濃縮液。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡藥材粗粉碎物的大小為介於10‑60目之範圍。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡藥材粗粉碎物的大小較佳為介於15‑55目之範圍。

再者，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡藥材粗粉碎物的大小更佳為介於20‑50目之範圍。

此外，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡藥材粗粉碎物的大小最佳為介於25‑45目之範圍。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該第一醇類溶劑濃度為在60 %‑95 %之範圍。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該第一醇類溶劑濃度較佳為在65 %‑90 %之範圍。

再者，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該第一醇類溶劑濃度更佳為在65 %‑85 %之範圍。

此外，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該第一醇類溶劑濃度最佳為在70 %‑80 %之範圍。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該該第二醇類溶劑濃度為70%‑95%。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該該第二醇類溶劑濃度較佳為72%‑92%。

再者，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該該第二醇類溶劑濃度更佳為75%‑90%。

此外，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該該第二醇類溶劑濃度最佳為78%‑88%。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該萃取溫度為在70‑100℃之範圍，萃取時間為1‑2小時之範圍，萃取次數為在2‑3次之範圍。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該萃取溫度較佳為在73‑95℃之範圍，萃取時間為1‑2小時之範圍，萃取次數為在2‑3次之範圍。

再者，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該萃取溫度更佳為在75‑90℃之範圍，萃取時間為1‑2小時之範圍，萃取次數為在2‑3次之範圍。

此外，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該萃取溫度最佳為在78‑88℃之範圍，萃取時間為1‑2小時之範圍，萃取次數為在2‑3次之範圍。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮的條件為：溫度50‑65℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮的條件較佳為：溫度52‑62℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa。

再者，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮的條件更佳為：溫度54‑60℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa。

此外，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮的條件最佳為：溫度56‑60℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該萃取為藉由溶劑塔、物料塔、重液塔、輕液塔、殘液塔、萃取塔、流量計、物料泵中之至少一種來進行。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該離心之條件為：轉速4000‑7000r/min下進行10‑20min。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該離心之條件較佳為：轉速4500‑7000r/min下進行10‑20min。

再者，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該離心之條件更佳為：轉速5000‑7000r/min下進行10‑20min。

此外，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該離心之條件最佳為：轉速5500‑7000r/min下進行10‑20min。

根據本發明另一觀點，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該真空乾燥條件為：溫度50‑70℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa，乾燥時間1‑2.5小時。

又，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該真空乾燥條件為：溫度52‑70℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa，乾燥時間1‑2.5小時。

再者，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該真空乾燥條件為：溫度55‑70℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa，乾燥時間1‑2.5小時。

此外，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該真空乾燥條件為：溫度58‑70℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa，乾燥時間1‑2.5小時。

依據本發明，在一些特定實施例中，「第一醇類溶劑」係指具有1個至5個碳原子之醇類，更佳為1個至3個碳原子的醇類，其包括，但不限於甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、第二-丁醇、第三-丁醇、戊醇、異戊醇、新戊醇、第三-戊醇、己醇、2-己醇、3-己醇、3-甲基戊醇、庚醇、辛醇。

「第一醇類溶劑」較佳為乙醇、丙醇、丁醇、第二-丁醇、第三-丁醇、戊醇、新戊醇、第三-戊醇、己醇、2-己醇、3-己醇、3-甲基戊醇、庚醇、辛醇；更佳為乙醇、丙醇、戊醇、異戊醇、新戊醇、第三-戊醇、己醇、2-己醇、3-己醇、3-甲基戊醇、庚醇、或辛醇；最佳為乙醇、戊醇、異戊醇、新戊醇、第三-戊醇、己醇、2-己醇、3-己醇、3-甲基戊醇、庚醇、辛醇。

依據本發明，在一些特定實施例中，「第二醇類溶劑」係指一飽和直鏈或含支鏈的單價烴基，具有1個至10個碳原子，其中烷基可是選擇性的經一個或多個選自下述的取代基彼 此互不相關地取代的。烷基包括，但不限於甲醇、乙醇、n-丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、第二-丁醇、第三-丁醇、戊醇、異戊醇、新戊醇、第三-戊醇、己醇、2-己醇、3-己醇、3-甲基戊醇、庚醇、辛醇及類似物。

「第二醇類溶劑」較佳為乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、異戊醇、新戊醇、第三-戊醇、己醇、2-己醇、3-己醇、3-甲基戊醇、庚醇、辛醇；更佳為乙醇、丙醇、戊醇、異戊醇、新戊醇、第三-戊醇、己醇、2-己醇、3-己醇、3-甲基戊醇、庚醇、或辛醇；最佳為乙醇、戊醇、異戊醇、新戊醇、第三-戊醇、己醇、2-己醇、3-己醇、3-甲基戊醇、庚醇、或辛醇。

依據本發明，在一些特定實施例中，藉由該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷成品係含有柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷h中之至少一種以上之混合物。

依據本發明，在一些特定實施例中，該醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法係進一步包括從柴胡皂苷成品分離出柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2、或柴胡皂苷h之步驟。依據本發明之一觀點，在一些特定實施例中，在本發明中所使用的柴胡，按照性狀來區分可包括：北柴胡(Bepleurum chinese DC)、紅柴胡(和南胡) (Bepleurum scorzonerifolium Willd)、長白柴胡(Bepleurum komarovianum Lincz)；黑柴胡(Bepleurum smitii)、其它柴胡變種等。柴胡始載于《神農本草經》，為傘形科植物柴胡或狹葉柴胡的乾燥根，性味苦、微寒，歸肝、膽經、功能解表退熱、疏肝解鬱、升舉陽氣等為我國傳統中藥。

柴胡的化學成分比較複雜，主要成分為柴胡皂苷和揮發油，其中屬柴胡皂苷(Saikosaponin)為主要有效成分，藥理試驗證明柴胡皂苷具有抗炎、抗菌、抗病毒、鎮靜、解熱、保肝、降低膽固醇和調節內分泌等生理活性。目前從柴胡植物中分離的皂苷近100種，其中柴胡皂苷a、d、b1和b2含量比較高，而含有單糖基的柴胡皂苷或苷元比較少，微乎其微。

柴胡中主要含有皂苷、揮發油、多糖等成分，其中皂苷類成分為其主要活性成分。存在於柴胡藥材中的皂苷，為一類在其結構中的C-13、28位之間含有環氧醚鍵的柴胡皂苷，如柴胡皂苷a、c、d等。該類皂苷不穩定，在加熱(如煎煮等)及植物中酸性成分的雙重作用下，易發生結構轉化，生成一系列次生柴胡皂苷，如柴胡皂苷b1、b2、h等。柴胡皂苷a、c、d及次生皂苷b1、b2、h均具有顯著的藥理活性。

研究發現，柴胡皂苷 a 顯著抑制三磷酸腺苷誘發的血小 板聚集，與阿司匹林作用相當，且以劑量依賴抑制內源性花生 四烯酸生成血栓素。

柴胡皂苷a(Saikosaponina)，分子式為C 42H 68O 13，分子量為780.99，熔點為225-232℃；其結構式如下所示：

柴胡皂苷b1(Saikosaponinb1)，分子式為C 42H 68O 13，分子量為780.99；其結構式如下所示：

柴胡皂苷b2(Saikosaponinb2)，分子式為C 42H 68O 13，分子量為780.99；其結構式如下所示：

柴胡皂苷c(Saikosaponinc)，分子式為C 42H 78O 17，分子量為927.12，熔點為202-210℃；其結構式如下所示：

柴胡皂苷d(Saikosaponind)，分子式為C 42H 68O 13，分子量為780.98，熔點為212-218℃；其結構式如下所示：

在小柴胡湯有效成分研究中發現，柴胡皂苷 d 在 10 mg/L 濃度 下完全抑制血小板活化因數 (platelet actvating factor，PAF)的生成，而柴胡皂苷 a、 c 沒有這種作用。柴胡皂苷 a、d 具有類甾環樣結構，目前 認為柴胡皂苷的抗炎作用可能與下丘腦-垂體-腎上腺軸有 一定的關係。

此外，藉由利用本發明所揭示之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷，可以進一步用來製備適合使用於治療各種癌症的醫藥組合物，舉例來說，例如，包括但不限於肝癌、大腸癌、食管癌、胃癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、骨癌、直腸癌、肝癌、乳癌、或血癌。較佳者為適用於治療肝癌、大腸癌、食管癌、胃癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、血癌或骨癌。

含有利用本發明所揭示之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物，可根據眾所接受的藥學製程來製備而成。根據本發明之一實施態樣，含有利用本發明所揭示之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物，可以經由任何適當的給藥途徑來施用。例如，經過口腔服用的膠囊、懸浮液或藥錠，或者是以不經過腸胃道方式來施用，例如，肌肉注射、靜脈血管注射、皮下注射或腹腔內注射等之系統性施用方式。另外，在某些實施方式中，含有利本發明所揭示之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物也可透過穿皮膜方式來施用，例如，局部皮膚塗抹、或者由例如支氣管內、鼻腔內、口腔內吸入、或者以鼻滴劑滴入；也可以是直腸內方式施用。

若以口服方式施用時，含有利用本發明所揭示之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物可與賦形劑一起投與或在無賦形劑的情況下投與。又，也可以將含有利本發明之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物配方成為內含各種輔劑、各種崩解劑、顆粒黏合劑或潤滑劑而形成固態劑型之藥錠。另外，在一實例中，也可以使用乳糖或高分子量聚乙二醇。

此外，視情況需要而定，還可以進一步地用來改善任一藥物活性成分釋放速率的塗層或被覆層，例如腸衣塗層等。在其他的實例中，含有利用本發明之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物也可以是被配方成為微脂體結構或具仿生間質系統結構，或者可被充填在軟或硬明膠膠囊內、或可被封裝在生物可分解之藥包內的顆粒。

又，在本發明中，藥學上可接受的賦型劑係指可和藥學製劑中其他成分相容且與生物體相容者，例如，囊封材料或諸如吸收促進劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝液、包覆劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、補充劑、填充劑、調味劑、保濕劑、潤滑劑、香料、防腐劑、推進劑、釋放劑、殺菌劑、甜味劑、增溶劑、濕潤劑及其混合物等之各種添加劑。

適合於含有利用本發明之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷一起使用的輔劑，舉例來說，例如，可以使用微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸二鈣或甘胺酸。適合於本發明使用之崩解劑，舉例來說，例如，可以使用澱粉、藻酸或特定的矽酸鹽。適合於本發明使用的顆粒黏合劑，舉例來說，例如，可以使用聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明膠、或相思樹膠(acacia)。適合於本發明使用的潤滑劑，舉例來說，例如，可以使用硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉或滑石等。適合於本發明使用的賦形劑，舉例來說，例如，可以使用乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、玉米澱粉、小麥澱粉、稻米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠等。

在某些實施方式中，含有利用本發明之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物是被配方成為適合口服的液體劑型，例如，口服用懸浮液、乳化液、微乳化液、及/或特效藥液(elixirs)。在此液體劑型的情況下，含有利用本發明之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之之醫藥組合物的活性成分可進一步地與各種甜味劑或風味劑、著色劑或染料一起配方，必要時還可加入乳化劑和/或懸浮劑、或者諸如水、酒精、丙二醇、甘油等稀釋劑、或維持pH值的緩衝液。

又，在其他實施方式中，將含有利用本發明之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物的液態配方製作成無菌注射溶液或懸浮液；例如，製作成適合於以靜脈內注射、肌肉內注射、皮下注射或腹膜內注射等方式施用的溶液。

適合使用於上述無菌注射溶液或懸浮液中之稀釋劑，舉例來說，例如，其可以包括但不限於1,3-丁二醇、甘露醇、水、林格氏溶液、等張性氯化鈉溶液；亦可以使用例如油酸等之脂肪酸、甘油酯衍生物、或者是例如橄欖油或菜籽油等之藥學可接受的天然油脂。

再者，在某些實施方式中，也可以更進一步地添加醇類、羧甲基纖維素分散劑、界面活性劑、乳化劑、或其他類似物。

此外，於有些實施方式中，也可以將含有利用本發明之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法所得到的柴胡皂苷之醫藥組合物之液體配方充填在軟膠囊內來使用。

另外，於其他實施方式中，也可以將上述醫藥品或醫藥組合物與惰性載體一起製成多種適用於局部皮膚表面施用的劑型，例如，包括溶液、乳液、乳霜、凝膠、軟膏、噴劑、皮膚貼布等。典型的惰性載體，舉例來說，例如，可以使用水、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙二醇、礦物油、硬脂酸醇、或能夠產生凝膠的物質。

以下，針對本發明的實施態樣列舉不同的具體實施例而更加詳盡地敘述與說明，以便使本發明的精神與內容更為完備而易於瞭解；然而，本項技藝中具有通常知識者應當明瞭本發明當然不受限於此等實例而已，亦可利用其他相同或均等的功能與步驟順序來達成本發明。

本發明係以下面的實施例予以示範闡明，但本發明不受下述實施例所限制。本發明所用之藥物、生物材料皆市售易於取得，下列僅為示例可取得之管道。

此外，藉由下述具體實施例，可進一步證明本發明可實際應用之範圍，但不意欲以任何形式限制本發明之範圍。

在本文中，對於用以界定本發明範圍的數值與參數，本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差，因而大多是以約略的數量值來表示，然而於具體實施例中則盡可能精確呈現的相關數值。在本文中，「約」通常視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定，一般係指代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，例如，該實際數值為在一特定數值或範圍的±10%、±5%、±1%、或±0.5%以內。

本發明中各種化合物、萃取物之定性、定量可以使用下列之儀器及鑑別方法來進行。

《柴胡皂苷之純度檢測》

柴胡皂苷之純度檢測可以使用用高效液相色譜法檢查純度。例如，儀器可以使用Waters 600高效液相色譜儀，色譜柱可以使用Hypersil-C18色譜柱，250mm×4.6mm，5μm(大連伊利特)。流動相可以使用乙腈-水(30～50：70～50)；流速：1.0～1.2mL/min；柱溫：室溫。

《高效能液相層析分析》

高效能液相層析分析中使用的管柱包括：逆相碳18分離管柱(reversed-phase C18 column，150×4.6 mm i.d.；3 μm分子大小，購自美國Phenomenex公司)、熱生基礎18分離管柱( Thermo BioBasic-18 column，150×2.1 mm i.d.；5 μm分子大小，購自美國Thermo公司)；移動相(A)為0.15%醋酸水、移動相(B)為LC grade甲醇，流速0.55 mL/min，注射體積10微升(μL)，偵測波長280奈米(nm)。

《柴胡皂苷之結構測定》

柴胡皂苷之結構測定可以使用顯微熔點測定儀來測定熔點，紫外(UV)光譜用日本島津UV-260型紫外可見分光光度計；紅外(IR)光譜用Perkin-Elmer 983G型儀器測定，KBr壓片；核磁共振氫譜和碳譜(1HNMR和13HNMR)用MERCURY-400核磁共振儀測定；質譜(MS)用JES-D300型質譜儀測定。

《高效能液相層析電灑游離串聯質譜》

高效能液相層析電灑游離串聯質譜(liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry，LC-ESI-MS)分析中使用的管柱包括：逆相碳18管柱(Thermo BioBasic-18，150×2.1 mm i.d.；5 μm particle size，購自Thermo公司)，樣品注射量為10 μL；分析條件為：鞘氣流速率(sheath gas flow rate)：40 arb、輔助氣流速率(aux gas flow rate)：20 arb，毛細管溫度(capillary temperature)：250℃、毛細管電壓(capillary voltage)：36 V(正離子模式)及-37 V(負離子模式)、管透鏡(tube lens)：75 V(正離子模式)及-121 V(負離子模式)。

經HPLC檢測，洗脫液中柴胡皂苷的萃取率即相對收率為80.96%，柴胡皂苷成品的純度在88.4%。柴胡皂苷的萃取率計算為：萃取物中柴胡皂苷的重量 ÷柴胡藥材的重量×100%即是柴胡皂苷的萃取率。

值得注意的是，本發明之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法中之萃取分離方法並未特別加以限制，例如，可以藉由習知的純化方法從柴胡分離而得，適合使用的萃取方法，一般包括非極性溶劑萃取法、高極性溶劑萃取法、低極性溶劑萃取法、高溫萃取法、低溫萃取法、超臨界萃取法或彼等之組合等。舉例來說，適合於本發明使用的溶劑，通常包括例如水、酒精等。又，適合於本發明使用的萃取溫度，通常並末特別加以限制，例如可以是在0℃以下，也可以是在0℃至40℃之低溫範圍，或者也可以是在50℃以上至150℃以下之高溫範圍內進行。

此外，在實施上述之萃取方法以後，還可以更進一步地實施例如濃縮、分離、純化或彼等之組合的各種分離純化方法；也可以是高於室溫的溫度進行萃取後，接著再對所得到之萃取物進行管柱層析；舉例來說，適合於本發明使用的分離純化方法，通常包括高效率液態層析(HPLC)法、逆相液態層析(Reverse Phase Liquid Chromatograpy)等。另外，還可以對於該柴胡萃取物再進行乾燥處理，直到獲得柴胡活性化合物之乾燥粉末為止。

以下，針對本發明的實施態樣列舉不同的具體實施例而更加詳盡地敘述與說明，以便使本發明的精神與內容更為完備而易於瞭解；然而，本項技藝中具有通常知識者應當明瞭本發明當然不受限於此等實例而已，亦可利用其他相同或均等的功能與步驟順序來達成本發明。

首先，對於本說明書中所使用的特定用語或名詞進行描述性的說明。

除非本說明書另有定義以外，在本文中所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。

《柴胡藥材粗粉碎物之製備》

清水將新鮮的柴胡藥材洗淨，去除表面附著的沙土，接著利用切碎機切片後置於低溫低濕乾燥機內，溫度設定為38℃，乾燥完成之柴胡藥材利用高速粉碎機磨成粉末，真空密封於真空袋中，保存於-18℃冷凍庫備用。

《柴胡醇類萃取物之製備》

秤取由製備例1所製得之柴胡藥材粗粉碎物，置入1公升(L)血清瓶中，加入濃度為95%乙醇，於室溫下搖擺震盪進行萃取，萃取時間共48小時並分成5個時間點，分別為第6、12、24、36以及第48小時，並於每個時間點更換乙醇以及進行下個時間點之萃取；將收集的萃取液以濾紙抽氣過濾，以分別獲得濾液；再將收集之濾液於35℃下以減壓濃縮機(rotary vacuum evaporator，型號為N-1100，購自於日本Rikakikai公司)減壓濃縮至乾，以獲得柴胡醇類萃取物。

《第一柴胡粗萃物之製備》

將200 mL的蒸餾水加入上述製備例所獲得之柴胡醇類萃取物，並以超音波震盪機震盪後加入200 mL乙酸乙酯以進行分層萃取，以獲得第一水層萃取物；反覆加入200 mL乙酸乙酯萃取步驟共3次，而後將乙酸乙酯萃取液利用減壓濃縮機濃縮至無溶劑殘留，以獲得乙酸乙酯萃取物；再將所得之乙酸乙酯萃取物，倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥並計算其萃取率，以獲得第一柴胡粗萃物，並將該冷凍乾燥的第一柴胡粗萃物儲存在-18℃備用。

《第二柴胡粗萃物之製備》

將200 mL95%乙醇為加入上述製備例所得柴胡之第一水層萃取物以進行分層萃取，以獲得第二水層萃取物；再反覆利用200 mL95%乙醇萃取步驟3次，而後將收集到的95%乙醇萃取液減壓濃縮至無溶劑殘留，再將所得之柴胡95%乙醇萃取物，倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥並計算其萃取率，以獲得第二柴胡粗萃物，並將該第二柴胡粗萃物儲存在-18℃備用。

《柴胡水層萃取物之製備》

將製備例4所得柴胡之第二水層萃取物歷經減壓濃縮並去除多餘的有機溶劑及水，再倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥並計算其萃取率，以獲得柴胡之第二水層萃取物，並將該柴胡之第二水層萃取物儲存在-18℃備用。 《實施例1》

稱取柴胡原料500kg，粉碎成粗粉後過40目篩，由自動加料機，以50kg/h的速度把柴胡藥材粗粉碎物加入，和75％第一醇類溶劑混合，在40℃下，萃取時間共48小時並分成5個時間點，分別為第6、12、24、36以及第48小時，並於每個時間點更換乙醇以及進行下個時間點之萃取；將收集的萃取液以濾紙抽氣過濾，以分別獲得濾液；再將收集之濾液於35℃下以減壓濃縮機(rotary vacuum evaporator，型號為N-1100，購自於日本Rikakikai公司)減壓濃縮至乾，以獲得柴胡醇類萃取物。柴胡醇類萃取物自流至暫儲槽經由出液泵幫浦，連續打入至濃縮塔中，進行濃縮，得濃縮柴胡醇類萃取物到200L；將200 mL的蒸餾水加入上述製備例所獲得之柴胡醇類萃取物，並以超音波震盪機震盪後加入200 mL乙酸乙酯以進行分層萃取，以獲得第一水層萃取物；反覆加入200 mL乙酸乙酯萃取步驟共3次，而後將乙酸乙酯萃取液利用減壓濃縮機濃縮至無溶劑殘留，以獲得乙酸乙酯萃取物；再將所得之乙酸乙酯萃取物，倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥。

將200 mL95%乙醇為加入上述製備例所得柴胡之第一水層萃取物以進行分層萃取，以獲得第二水層萃取物；再反覆利用200 mL95%乙醇萃取步驟3次，而後將收集到的95%乙醇萃取液減壓濃縮至無溶劑殘留，再將所得之柴胡95%乙醇萃取物，倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥；將製備例4所得柴胡之第二水層萃取物歷經減壓濃縮並去除多餘的有機溶劑及水，再倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥並計算其萃取率，以獲得柴胡之第二水層萃取物，並將該柴胡之第二水層萃取物。各步驟所用溶劑及條件及萃取率，請參考表1。 表1 《實施例2》

稱取柴胡原料1T，粉碎成粗粉後過40目篩，由自動加料機，以50kg/h的速度把柴胡藥材粗粉碎物加入，和85％第一醇類溶劑混合，在40℃下，萃取時間共48小時並分成5個時間點，分別為第6、12、24、36以及第48小時，並於每個時間點更換乙醇以及進行下個時間點之萃取；將收集的萃取液以濾紙抽氣過濾，以分別獲得濾液；再將收集之濾液於35℃下以減壓濃縮機(rotary vacuum evaporator，型號為N-1100，購自於日本Rikakikai公司)減壓濃縮至乾，以獲得柴胡醇類萃取物。柴胡醇類萃取物自流至暫儲槽經由出液泵幫浦，連續打入至濃縮塔中，進行濃縮，得濃縮柴胡醇類萃取物到200L；將200 mL的蒸餾水加入上述製備例所獲得之柴胡醇類萃取物，並以超音波震盪機震盪後加入200 mL乙酸乙酯以進行分層萃取，以獲得第一水層萃取物；反覆加入200 mL乙酸乙酯萃取步驟共3次，而後將乙酸乙酯萃取液利用減壓濃縮機濃縮至無溶劑殘留，以獲得乙酸乙酯萃取物；再將所得之乙酸乙酯萃取物，倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥。

將200 mL95%乙醇為加入上述製備例所得柴胡之第一水層萃取物以進行分層萃取，以獲得第二水層萃取物；再反覆利用200 mL95%乙醇萃取步驟3次，而後將收集到的95%乙醇萃取液減壓濃縮至無溶劑殘留，再將所得之柴胡95%乙醇萃取物，倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥；將製備例4所得柴胡之第二水層萃取物歷經減壓濃縮並去除多餘的有機溶劑及水，再倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥並計算其萃取率，以獲得柴胡之第二水層萃取物，並將該柴胡之第二水層萃取物。各步驟所用溶劑及條件，及萃取率，請參考表2。 表2 《實施例3》

稱取柴胡原料1.5T，粉碎成粗粉後過40目篩，由自動加料機，以50kg/h的速度把柴胡藥材粗粉碎物加入，和85％第一醇類溶劑混合，在40℃下，萃取時間共48小時並分成5個時間點，分別為第6、12、24、36以及第48小時，並於每個時間點更換乙醇以及進行下個時間點之萃取；將收集的萃取液以濾紙抽氣過濾，以分別獲得濾液；再將收集之濾液於35℃下以減壓濃縮機(rotary vacuum evaporator，型號為N-1100，購自於日本Rikakikai公司)減壓濃縮至乾，以獲得柴胡醇類萃取物。柴胡醇類萃取物自流至暫儲槽經由出液泵幫浦，連續打入至濃縮塔中，進行濃縮，得濃縮柴胡醇類萃取物到200L；將200 mL的蒸餾水加入上述製備例所獲得之柴胡醇類萃取物，並以超音波震盪機震盪後加入200 mL乙酸乙酯以進行分層萃取，以獲得第一水層萃取物；反覆加入200 mL乙酸乙酯萃取步驟共3次，而後將乙酸乙酯萃取液利用減壓濃縮機濃縮至無溶劑殘留，以獲得乙酸乙酯萃取物；再將所得之乙酸乙酯萃取物，倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥。

將200 mL95%乙醇為加入上述製備例所得柴胡之第一水層萃取物以進行分層萃取，以獲得第二水層萃取物；再反覆利用200 mL95%乙醇萃取步驟3次，而後將收集到的95%乙醇萃取液減壓濃縮至無溶劑殘留，再將所得之柴胡95%乙醇萃取物，倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥；將製備例4所得柴胡之第二水層萃取物歷經減壓濃縮並去除多餘的有機溶劑及水，再倒入50 mL離心管內進行冷凍乾燥並計算其萃取率，以獲得柴胡之第二水層萃取物，並將該柴胡之第二水層萃取物。各步驟所用溶劑及條件，及萃取率，請參考表2。 表2

從而，可以確認：本發明柴胡皂苷的分離效果好，柴胡皂苷的萃取率高，得到的最終產品純度高，提高了藥材的利用度，工藝穩定，適合規模化生產。易言之，本發明提供一種可獲得的高純度柴胡皂苷、並能夠解決現有技術缺陷的醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法；特別是提供了一種萃取率高、最終柴胡皂苷產品純度高、製程穩定、且適合大規模生產的醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法。

以上所述的實施例只是本發明的一種較佳的方案，並非對本發明作任何形式上的限制，在不超出權利要求所記載的技術方案的前提下還有其它的變體及改型。

當可理解上述實施方式與實施例僅為例示，且熟習此技藝者可對齊進行各種修飾。上文提出之說明書、實施例與資料的目的在於使本說明書的結構完備，並作為實作本發明之例示。雖然本揭示內容已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本揭示內容，任何熟習此技藝者，在不脫離本揭示內容之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本揭示內容之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

在本文中引用的包括專利申請、公開、公告之各種專利文獻及非專利文獻，皆以全文引用完整方式納入本文列入參考，且不應該以任何方式解釋為用來限制本發明之創作精神與權利範圍。

無。

Claims (14)

1. 一種醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其包括： 準備一柴胡藥材粗粉碎物； 以第一醇類溶劑萃取該柴胡藥材粗粉碎物，並經濃縮而得到一柴胡醇類萃取物； 將酯類溶劑洗脫該柴胡醇類萃取物，直至該第二醇類濃度在5%以下，並經以乙酸乙酯和石油醚混合液洗脫而獲得一第一柴胡粗萃物以及一第一水層萃取物；以及 以第二醇類溶劑萃取該第一水層萃取物，並經濃縮、離心以獲得一第二柴胡粗萃物以及一第二水層萃取物，再對該第二柴胡粗萃物真空乾燥即得柴胡皂苷成品； 其中該第一醇類溶劑、該第二醇類溶劑係分別含有乙醇、丙醇、丁醇中之至少一種所構成的溶液； 該酯類溶劑為乙酸乙酯。
2. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡醇類萃取物係固體含量為25 %‑40 %之濃縮液。
3. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮為減壓濃縮。
4. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮為真空減壓濃縮。
5. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該柴胡藥材粗粉碎物的大小為介於10‑60目之範圍。
6. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該第一醇類溶劑濃度為在60 %‑95 %之範圍。
7. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該該第二醇類溶劑濃度為70%‑95%。
8. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該萃取溫度為在70‑100℃之範圍，萃取時間為1‑2小時之範圍，萃取次數為在2‑3次之範圍。
9. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該濃縮的條件為：溫度50‑65℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa。
10. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該萃取為藉由溶劑塔、物料塔、重液塔、輕液塔、殘液塔、萃取塔、流量計、物料泵中之至少一種來進行。
11. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該離心之條件為：轉速4000‑7000r/min下進行10‑20min。
12. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中該真空乾燥條件為：溫度50‑70℃，真空度‑0.06~‑0.09Mpa，乾燥時間1‑2.5小時。
13. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其中柴胡皂苷成品係含有柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷h中之至少一種以上之混合物。
14. 如請求項1之醫藥用柴胡皂苷之量產製備方法，其係進一步包括從柴胡皂苷成品分離出柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2、或柴胡皂苷h之步驟。