4. 製備方法
根據本發明之實例係如流程1、2或3中所示製備。
流程 1 ： A
為N、CH
Y
為O、CH
2 Hal
為Br或Cl
Hal1
為Cl、F 其中
X
為-B(OH)
2
、-
酸頻哪醇酯
PG
為保護基(例如苄基、1-苯基乙基、1-(4-甲氧基苯基)乙基) 且
R2
及
R3
如上文所定義。
流程 2
：
Hal
為Br或Cl 其中
X
為-B(OH)
2
、-
酸頻哪醇酯
PG
為保護基(例如苄基、1-苯基乙基、1-(4-甲氧基苯基)乙基) 且
R2
及
R3
如上文所定義。
流程 3 Hal
為Br或Cl
PG
為保護基(例如苄基、1-苯基乙基、1-(4-甲氧基苯基)乙基) 且
R2
及
R3
如上文所定義。
4.1. 式 2 、 式 3 、 式 4 、 式 5 及式 6 之起始物質 4.1.1. 根據流程 1 、 2 及 3 合成式 2 化合物
合成針對
實例 1 、 2 、 4 至 12 、 14 、 15 、 17 、 19
之(R)-4-[(R)-1-羥乙基]-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮(
2 . 1
)及針對
實例 13 、 16 、 18 、 20 、 21 、 22
之(R)-4-[(S)-1-羥乙基]-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮(
2 . 2
)
步驟 1
：合成(1'R,3R/S)-1-(1'-(4-甲氧基苯乙基)-5-側氧基-3-吡咯啶甲酸(非對映異構體之混合物)
將100 g (R)-1-(4-甲氧基-苯基)-乙胺及95 g衣康酸(itaconic acid)於0.5 L 1-甲基-2-吡咯啶酮中之懸浮液加熱至80℃後維持1小時。溶液在120℃下再攪拌4小時。將反應混合物冷卻至25℃且倒入1.5 L去礦物質水中。過濾沈澱物，用去礦物質水洗滌且在50℃下乾燥。 產量：195 g (定量產量)呈非對映異構體之混合物形式的固體 分析(方法G)：R
t
：2.6分鐘及2.7分鐘，(M+H)
+
: 264
步驟 2
：合成呈非對映異構體之混合物形式的(R/S)-N-甲氧基-5-側氧基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-3-甲醯胺
在20℃下，將260 g 1,1'-羰基二咪唑(CDI)添加至285 g (1'R,3R/S)-1-(1'-(4-甲氧基苯乙基)-5-側氧基-3-吡咯啶甲酸(非對映異構體之混合物)於1.4 L 2-甲基四氫呋喃中之溶液中。在20℃下攪拌懸浮液80分鐘。添加235 mL乙基二異丙胺(DIPEA)及130 g N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽。在20℃下攪拌懸浮液3小時。在冷卻下，添加850 mL 4 M鹽酸。分離有機相且用500 mL 1 N鹽酸洗滌兩次。用500 mL乙酸乙酯再萃取水相兩次。合併之有機相經硫酸鈉乾燥。過濾之後，在減壓下蒸發溶劑。 產量：271g (理論之82%)呈油狀物之(R/S)-N-甲氧基-5-側氧基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-3-甲醯胺(非對映異構體之混合物)。 分析(方法H)：R
t
：11.1分鐘(41面積%)及13.8分鐘(59面積%)，(M+H)
+
: 307
步驟 3
：合成呈非對映異構體之混合物形式的(R/S)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮
將530 mL溴化甲基鎂於二乙醚中之3 M溶液緩慢添加至271 g (R/S)-N-甲氧基-5-側氧基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-3-甲醯胺(非對映異構體之混合物)於1.4 L 2-甲基四氫呋喃中之冷卻溶液中，使得溫度保持低於0℃。添加完之後，使溫度在0℃下保持75分鐘，隨後溫熱至20℃。在20℃下攪拌懸浮液16小時。在冷卻下，添加650 mL 4 M鹽酸。分離有機相且用500 mL飽和碳酸鈉溶液及500 mL飽和鹽水洗滌。有機相經硫酸鈉乾燥。過濾之後，在減壓下蒸發溶劑。 產量：188 g (理論之81%)呈油狀物之(R/S)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮(非對映異構體之混合物)。 分析(方法H)：R
t
：7.4分鐘及9.6分鐘，(M+H)
+
: 262
步驟 4
：(R)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮在鹼誘導性差向異構條件下結晶
在25℃下，將103 g非對映異構體混合物(R/S)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮溶解於155 mL 1-丁醇中。添加18 mL氫氧化苄基三甲基銨(40%於甲醇中之溶液)。在25℃下攪拌溶液30分鐘。將溶液冷卻至0℃。開始沈澱。在0℃下攪拌懸浮液15分鐘。緩慢添加100 mL正庚烷且在0℃下攪拌懸浮液30分鐘。多份100 mL正庚烷重複添加4次，隨後在0℃下攪拌懸浮液30分鐘。分離沈澱物，用正庚烷洗滌且在50℃下乾燥。 產量：77.1 g米色固體(理論之75%)，其具有約95:5之非對映異構體純度(方法H)。 為了進一步純化，在40℃(溫度＜ 50℃)下將粗產物溶解於310 mL 2-甲基-2-丁醇中。將溶液緩慢冷卻至0℃。開始沈澱。在0℃下，添加385 mL正庚烷且攪拌懸浮液1小時。過濾沈澱物，用正庚烷洗滌且在50℃下乾燥。 產量：68.7 g(理論之67%)無色固體，其具有＞ 99:1之非對映異構體純度。 分析(方法H)：R
t
：6.8分鐘，(M+H)
+
: 262
步驟 4
：(R)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮在鹼誘導性差向異構條件下結晶
在25℃下，將13.2 g非對映異構體混合物(R/S)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮溶解於18 mL 1-丁醇中。將溶液冷卻至3℃且用100 mg (R)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮處理。 所得混合物在3℃下攪拌15分鐘；此時，添加2.3 mL氫氧化苄基三甲基銨(40%於甲醇中之溶液)。在3℃下攪拌溶液30分鐘。在0至3℃下，歷時1小時緩慢添加64 mL正庚烷且在0℃下攪拌懸浮液60分鐘。分離沈澱物，用正庚烷洗滌且在30℃下乾燥。 產量：10.6 g米色固體(理論之80%)，其具有約98:2之非對映異構體純度(方法H)。 分析(方法H)：R
t
：6.8分鐘，(M+H)
+
: 262
步驟 5
：合成(R)-4-[(R)-1-羥乙基]-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮(
2 . 1
)
將94.6 mg二氯(五甲基環戊二烯基)-銥(III)二聚物及105 mg (S,S)-N-(對甲苯磺醯基)-1,2-二苯基伸乙二胺[(R,R)-TsDPEN]溶解於20 mL乙腈中且隨後在25℃下饋入50 g (R)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮及65 g甲酸鈉於500 mL水中之漿液中。將漿液加熱至60℃且在此溫度下攪拌，同時用氮氣鼓泡3小時。在60℃下用500 mL乙酸異丙酯稀釋反應物且隨後冷卻至環境溫度。分離各層且有機部分用300 mL水洗滌兩次。將有機部分濃縮為油狀固體。殘餘物質自乙酸乙酯及己烷中結晶3次，隨後在真空烘箱中在30℃下用氮氣流乾燥。 25.4 g米色固體，其具有＞ 99:1之非對映異構體純度
步驟 5
：合成(R)-4-[(S)-1-羥乙基]-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮(
2 . 2
)
將9.46 mg二氯(五甲基環戊二烯基)-銥(III)二聚物及10.52 mg (R,R)-N-(對甲苯磺醯基)-1,2-二苯基伸乙二胺[(R,R)-TsDPEN]溶解於1 mL乙腈中且隨後在25℃下饋入5 g (R)-4-乙醯基-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮及6.5 g甲酸鈉於50 mL水中之漿液中。將漿液加熱至60℃且在此溫度下攪拌，同時用氮氣鼓泡3小時。在60℃下用50 mL乙酸異丙酯稀釋反應物且隨後冷卻至環境溫度。分離各層且有機部分用20 mL水洗滌。將有機部分濃縮為油狀物。在回流下，將油狀物溶解於8 mL乙酸異丙酯中。將溶液冷卻至環境溫度，其中發生結晶。在環境溫度下用10 mL庚烷逐滴稀釋混合物。攪拌混合物30分鐘。藉由過濾來收集固體，用20 vol%乙酸異丙酯於庚烷中之溶液洗滌且在真空烘箱中在55℃下用氮氣流乾燥。得到3.82 g米色固體，其具有99:1之非對映異構體純度。 分析(方法I)：R
t
：12.9分鐘，(M+H)
+
: 264
合成針對實例 13 、 16 、 18 、 20 、 21 、 22 之 [( 1S )- 1 -[( 3R )- 1 -[( 1S )- 1 -( 4 - 甲氧基苯基 ) 乙基 ]- 5 - 側氧基 - 吡咯啶 - 3 - 基 ] 乙基 ] 4 - 甲基苯磺酸酯 ( 2 . 3 ) 向(R)-4-[(S)-1-羥乙基]-1-[(S)-1-(4-甲氧基苯基)-乙基]-吡咯啶-2-酮
2 . 2
(20.0 g)、對甲苯磺醯氯(21.67 g)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.92 g)之混合物中添加42 mL吡啶及二氯甲烷(42 mL/DCM)。在34℃下在氬氣氛圍下攪拌所得混合物18小時。用乙酸異丙酯稀釋反應混合物且用水及2 M HCL水溶液洗滌。合併之有機相經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物溶解於乙酸異丙酯及正庚烷中。濾出沈澱物，用正庚烷/乙酸異丙酯洗滌，提供呈固體狀之[(1S)-1-[(3R)-1-[(1S)-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-5-側氧基-吡咯啶-3-基]乙基]4-甲基苯磺酸酯(
2 . 3
) (19.83 g)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.680分鐘(方法J)，M+H = 418
合成針對實例 3 之 5 -( 1 - 羥基 - 乙基 )- 3 -( 4 - 甲氧基 - 苄基 )- 噁唑啶 - 2 - 酮 ( 2 . 4 ) 步驟1：將處於冷卻下之三氟乙酸酐(25 mL)添加至(R)-2-羥基-丁二酸(10 g)中且在環境溫度下攪拌混合物。 4小時之後在真空下濃縮溶液，向其中添加苄醇且將混合物攪拌隔夜。 在真空(3 mbar，60℃)下濃縮溶液且殘餘油狀物(28 g)不經進一步純化即用於下一步驟中。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.99分鐘(方法E)，M+H = 225 步驟2：使來自先前步驟之產物(23 g)溶解於甲苯(350 mL)及三乙胺(16 mL)中且添加二苯基磷醯基疊氮化物(24.5 mL)。在回流下攪拌混合物3小時，隨後部分濃縮且用水(250 mL)及EtOAc (250 mL)萃取。分離各相且用EtOAc (100 mL)萃取水相兩次。用飽和NaHCO
3
洗滌合併之有機相，經MgSO
4
乾燥且加以濃縮。經由SiO
2
(環己烷/EtOAc 1:2)純化殘餘物，提供7.4 g白色固體。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.95分鐘(方法E)，M+H = 222 步驟3：向(R)-2-側氧基-噁唑啶-5-甲酸苄酯(1.5 g)之乙腈(20 mL)溶液中添加Cs
2
CO
3
(3.31 g)且10分鐘之後添加1-溴甲基-4-甲氧基-苯(1.86 g)，且在45℃下攪拌混合物14小時。添加水(20 mL)及DCM (60 mL)且攪拌混合物10分鐘。隨後分離各相，濃縮有機相且經由製備型HPLC純化產物，提供呈白色固體狀之(R)-3-(4-甲氧基-苄基)-2-側氧基-噁唑啶-5-甲酸苄酯(349 mg)。 分析： HPLC-MS：R
t
= 0.85分鐘(X018_S03)，M+H = 342 步驟4：向(R)-3-(4-甲氧基-苄基)-2-側氧基-噁唑啶-5-甲酸苄酯(345 mg)於2.5 mL水及二噁烷(2.5 mL)中添加0.485 mL LiOH (2.5N)且在環境溫度攪拌混合物1.5小時。添加乙腈(10 mL)、水(20 mL)及1 M HCL水溶液(1.2 mL)且冷凍乾燥產物，提供白色固體(310 mg)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.52分鐘(X018_S01)，M+H = 252 步驟5：在0℃向(R)-3-(4-甲氧基-苄基)-2-側氧基-噁唑啶-5-甲酸(310 mg)及二甲基羥胺*HCl (210 mg)於DMF (5 mL)中添加羥基苯并三唑(140 mg)、N-甲基嗎啉(300 µL)及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺×HCl (200 mg)且攪拌混合物3.5小時。添加iPrOAc (50 mL)及檸檬酸溶液(10%，20 mL)且分離各相。用iPrOAc (20 mL)萃取水相兩次且用NaHCO
3
水溶液(5%，20 mL)洗合併之有機相。濃縮經乾燥之有機相且經由製備型HPLC純化，提供無色油狀物之(R)-3-(4-甲氧基-苄基)-2-側氧基-噁唑啶-5-甲酸甲氧基-甲基-醯胺(147 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.60分鐘(X018_S03)，M+H = 295 步驟6：在-10℃歷時20分鐘向(R/S)-3-(4-甲氧基-苄基)-2-側氧基-噁唑啶-5-羧酸甲氧基-甲基-醯胺( 145 mg)於2 mL THF中添加於冷卻下之溴化甲基鎂(1.4N，490 µL)且攪拌混合物30分鐘。在-1℃向此混合物中添加1 N KHSO
4
水溶液(160 µL)、NaBH
4
(56 mg)及EtOH(300 µL)且攪拌混合物30分鐘。添加二氯甲烷(20 mL)及水(15 mL)且分離各相，且用DCM萃取水相一次。濃縮合併之有機相且經由製備型HPLC (水/乙腈/NH
3
)純化，提供呈無色油狀物之5-(1-羥基-乙基)-3-(4-甲氧基-苄基)-噁唑啶-2-酮
2 . 4
(90 mg)，其含有同等量之全部4種立體異構體。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.42分鐘(X011_S03)，M+H = 250 對掌性HPLC：Chirlapak AS-H 4.6 × 250 mm，5 µm 4 ml/min，scCO
2
/異丙醇，20mM NH
3
，10分鐘內20% ，150巴。R
t
= 2.577分鐘(產物a)，R
t
= 2.986分鐘(產物b)，R
t
= 3.362分鐘 (產物c)，R
t
= 3.655分鐘(產物d)。
4.1.2. 合成具有式 3 及式 4 之吡唑 4.1.2.1. 合成鹵化吡唑 3 合成 針對實例 3 、 13 、 15 之 4 - 溴 - 1 - 第三丁基 - 吡唑 ( 3 . 1 ) 步驟 1
：合成1-第三丁基-吡唑
在低於50℃下，向34.48 g 1,1,3,3-四甲氧基-丙烷與26.20 g第三丁肼鹽酸鹽於230 mL乙醇中之經攪拌混合物中逐滴添加40.0 mL濃鹽酸，隨後在回流下攪拌混合物2小時。用水稀釋反應混合物。溶劑藉由蒸餾幾乎移除且含水殘餘物用二乙醚萃取。合併之水相用10 N氫氧化鈉溶液鹼化且用二乙醚萃取。合併之有機相用飽和鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮，產生21.90 g呈油狀物之1-第三丁基-吡唑。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.412分鐘(方法A)，M+H = 125
步驟 2
：合成4-溴-1-第三丁基-吡唑
在0與10℃之間，向21.9 g 1-第三丁基-吡唑於150 mL DCM中之混合物中逐份添加31.5 g N-溴代丁二醯亞胺。攪拌所得混合物30分鐘。允許反應混合物達到環境溫度。濾出沈澱物且用DCM洗滌。合併之有機萃取物用水及飽和鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮，產生34.0 g呈油狀物之4-溴-1-第三丁基-吡唑。 分析：HPLC-MS：R
t
= 1.35分鐘(方法B)，M+H = 203 / 205
合成針對實例 14 、 16 之 4 - 溴 - 1 -( 2 , 2 , 5 , 5 - 四甲基 - 四氫呋喃 - 3 - 基 ) - 1H - 吡唑 ( 3 . 2 ) 在室溫下向1-(2,2,5,5-四甲基-四氫呋喃-3-基)-1H-吡唑(900 mg)於15 mL DCM中之混合物中添加N-溴代丁二醯亞胺(830 mg)。攪拌所得混合物2小時。隨後向反應混合物中添加15 mL飽和鹽水。有機相經Na
2
SO
4
乾燥，過濾且真空濃縮，產生1.26 g呈油狀物之
3 . 2
，隨後會對其加以結晶。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.601分鐘(方法 X018_S03)，M+H = 273 / 275
合成針對實例 17 之 2 -( 4 - 溴 - 吡唑 - 1 - 基 )- 2 - 甲基 - 丙腈 ( 3 . 3 ) 步驟1：將酸(4 g)溶解於甲醇(40 mL)中且在10℃下添加亞硫醯氯(4.5 mL)。在室溫下攪拌混合物隔夜，隨後蒸發且溶解於DCM中。用碳酸氫鈉水溶液萃取有機相，經MgSO
4
乾燥且過濾之後在真空中濃縮，產生供用於步驟2之4 g甲酯。 分析：MS：M+H = 247 / 249，R
t
=1.121分鐘(方法 Z001_005) 步驟2：將甲酯(1 g)溶解於含有10% NH
3
之甲醇(4 mL)中。添加0.5 g氯化鈣且在室溫下攪拌混合物20小時。濃縮混合物且在乙酸異丙酯(50 mL)與水(20 mL)之間進行分配。再用乙酸異丙酯(20 mL)萃取水相且乾燥且在真空下濃縮合併之有機相，產生830 mg醯胺。 分析：MS：M+H = 232 / 234，R
t
= 0.705分鐘(方法 Z018_S04) 步驟3：將醯胺(336 mg)溶解於400 µL POCl
3
中且在90℃下攪拌1.5小時。將反應混合物倒入水中且經由添加NaHCO
3
水溶液將pH調整為7到8。用DCM萃取水相3次且真空濃縮有機相，產生284 mg
3 . 3
。 分析：MS：M+H = 214，R
t
=0.58分鐘(方法 X011_S03)
合成針對實例 7 、 22 之 4 - 溴 - 1 -( 3 , 3 - 二氟 - 環戊基 )- 1H - 吡唑 3 . 4 步驟1：將4-溴吡唑(12 g)及2-環戊烯-1-酮(7.1 g)懸浮於乙腈(100 mL)中。添加三氟甲烷磺酸鈧(0.5 g) (略微放熱)且在室溫下攪拌混合物隔夜且在40℃下攪拌2小時。濃縮混合物且經由矽膠(2 kg SiO
2
，環己烷梯度à環己烷:乙酸乙酯7:3)純化黃色油狀物，產生16.8 g酮。 分析：MS：M+H = 229/231，R
t
=0.622分鐘(方法 X018_S03) 步驟2：將酮(5 g)溶解於二氯甲烷(80 mL)中且在30℃下添加數份[雙(2-甲氧乙基)胺基]三氟化硫(45 mL，50%於THF中)。將混合物倒入碳酸氫鈉水溶液中，且用二氯甲烷萃取。用鹽水洗滌有機相，經Na
2
SO
4
乾燥且過濾之後在40 mbar下濃縮，產生3.67 g
3 . 4
。 分析：MS：M+H = 251/253，R
t
=0.848分鐘(方法X018_S03) 以下鹵化物可在市面上購得： · 針對
實例 12
之4-溴-1-(3,3,3-三氟丙基)-1H-吡唑
3 . 5
· 針對
實例 11
之4-氯-1-(2-氟-乙基)-1H-吡唑
3 . 6
· 針對
實例 4
之4-溴-3-第三丁基-1H-吡唑
3 . 7 4.1.3. 合成式 4 化合物 ( 流程 1 及 2 ) 合成針對實例 3 、 13 、 15 之 1 - 第三丁基 - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - 四甲基 - 1 , 3 , 2 - 二氧硼 - 2 - 基 ) 吡唑 ( 4 . 1 ) 在低於-60℃之氬氣氛圍下向4-溴-1-第三丁基-吡唑
3 . 1
(50 g)於230 mL THF中之攪拌混合物中逐滴添加2.5M 正丁基鋰(100 mL，己烷)，隨後在此溫度下攪拌混合物5分鐘，之後在低於-60℃下逐滴添加2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
(52 mL)。允許反應混合物達到環境溫度。用冰浴冷卻混合物且用磷酸鹽緩衝水溶液及水稀釋且用2 M鹽酸水溶液中和。藉由蒸餾移除有機溶劑且用DCM萃取殘餘物。合併之有機萃取物用飽和鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮，產生呈固體狀之1-第三丁基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)吡唑(44.26 g)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.904分鐘(方法 F)，M+H = 251
合成針對實例 4 之 3 - 第三丁基 - 1H - 吡唑 - 4 - 基 - 4 - 酸 ( 4 . 2 ) 步驟1：在室溫下將4-溴-3-第三丁基-1H-吡唑
3 . 7
(580 mg)溶解於二氯甲烷(20 mL)及三乙胺(477 µL)及二碳酸二-第三丁酯(623 mg)中48小時。用水萃取混合物且分離有機相且加以濃縮，產生833 mg無色油狀物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.80分鐘(X012_S01)，M+H = 249 步驟2：將4-溴-3-第三丁基-吡唑-1-甲酸第三丁酯(369 mg)溶解於THF(6 mL)中且冷卻至-78℃。添加n-BuLi (837 µL，1.6 M)且攪拌混合物20分鐘。隨後添加2-甲氧基-4,4,4,4-四甲基-1,3,2-二氧硼
(239 µL)且使混合物升溫至室溫隔夜。將水及DCM添加至反應混合物中且分離有機相。經由製備型HPLC純化水相，提供39 mg
4 . 2
。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.47分鐘(X012_S01)，M+H = 169 以下
酸、
酸酯可在市面上購得： · 針對
實例 6 、 8
之1-(環丙基甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)-1H-吡唑
4 . 4
· 針對
實例 5 、 20
之1-環丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)-1H-吡唑
4 . 5
· 針對
實例 2 、 18
之1-異丙基-1H-吡唑-4-
酸頻哪醇酯
4 . 6
· 針對
實例 1 、 21
之1-環丁基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)-1H-吡唑
4 . 8
· 針對
實例 9 、 10
之4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)-1H-吡唑
4 . 9
· 針對
實例 19
之異丁基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
-2-基)-1H-吡唑
4 . 10 4.1.4. 合成式 5 化合物 合成針對實例 10 之甲苯 - 4 - 磺酸 ( 3R , 3aS , 7aR )-( 六氫 - 呋喃并 [ 3 , 2 - b ] 哌喃 - 3 - 基 ) 酯 ( 5 . 1 ) 將(3R,3aR,7aR)-六氫-呋喃并[3,2-b]哌喃-3-醇(300 mg)溶解於二氯甲烷(3 mL)及吡啶(0.445 g)中。添加對甲苯磺醯氯(0.524 g)及DMAP(15 mg)且在室溫下攪拌混合物68小時。隨後添加水(20 mL)及二氯甲烷(20 mL)且繼續攪拌15分鐘。分離各相且濃縮有機相。經由急驟層析在矽膠上(環己烷à環己烷/乙酸乙酯1:1)達成純化，提供呈無色油狀物之
5 . 1
(0.451 g)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.52分鐘(X012_S01)，M+H = 299 以下甲苯磺酸酯可在市面上購得： · 針對
實例 9
之(S)-2,2-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基 4-甲基苯磺酸酯
5 . 2 4.1.5. 根據流程 1 、 2 及 3 合成雜環 6 合成針對實例 8 至 11 、 13 、 16 至 22 之 6 - 溴 - 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 醇 ( 6 . 1 ) 步驟1：將1-溴-3,5-二氟苯(100 g)溶解於THF (600 mL)中且冷卻至-78℃。歷時20分鐘添加LDA (300 mL，2 N於庚烷/THF/乙苯中)且攪拌混合物1小時。在30分鐘內經由轉移套管將此混合物添加至乙酸酐(250 mL，冷卻至-78℃)中。隨後將混合物升溫至-30℃，真空移除THF且添加二氯甲烷(300 mL)。用飽和碳酸氫鈉溶液鹼化混合物且用二氯甲烷(300 mL)萃取3次。用氯化氨飽和溶液及飽和鹽水洗滌有機相，乾燥且以100 mbar/50℃真空濃縮。以30至10 mbar/70℃至100℃在真空中分餾殘餘物，產生57.8 g與74.7 g (含量80%)所需產物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.974分鐘(Z018_S04)，M+H = 235 步驟2：在環境溫度下向溶解於THF (80 mL)中之1-(4-溴-2,6-二氟-苯基)乙酮(22.05 g)中添加水合肼(10 mL)且攪拌混合物隔夜。添加水(50 mL)及2-Me-THF (70 mL)且乾燥且真空濃縮有機相。在80℃下將粗產物溶解於乙腈(70 mL)中且冷卻至室溫2天。過濾沈澱物並用乙腈洗滌，且在45℃下在真空下乾燥45分鐘，提供15.6 g白色針狀物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.58分鐘(X011_S03)，M+H = 229/231 步驟3：將來自先前步驟之吲唑(32 g)懸浮於二氯甲烷(400 mL)中且添加四氟硼酸三甲基氧鎓(26.75 g)且在室溫下攪拌混合物24小時。添加飽和碳酸氫鈉(150 mL)且用碳酸鈉(10 mL)將混合物鹼化至pH 9。濾出沈澱物，分離各相且用iPrOAc萃取水相。乾燥且真空濃縮合併之有機相，產生33.1 g原料，將其溶解於甲基-第三丁基醚(100 mL)中且加熱至回流且冷卻至室溫。2天後濾出沈澱物，產生呈淡黃色晶體狀之
6 . 1
(22.4 g)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.673分鐘(X018_S02)，M+H = 243/245
合成針對實例 3 、 4 、 15 之 4 , 6 - 二氯 - 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吡唑并 [ 4 , 3 - c ] 吡啶 ( 6 . 2 ) 步驟1：在-78℃下在氮氣氛圍下向2,4,6-三氯-吡啶(5.00 g)於四氫呋喃(無水，50.00 mL)中之溶液中逐滴添加正丁基鋰(2.5M於己烷中) (10.96 ml)。在-78℃下攪拌混合物1小時，且隨後逐滴添加哌啶-1-甲醛(3.04 mL)。在-78℃下攪拌反應物1小時。用飽和NH
4
Cl水溶液(50 ml)淬滅反應混合物。用TBME (3 × 40 mL)萃取混合物且用1 M HCl (75 mL)及飽和碳酸銨(75 mL)依次洗滌有機相。乾燥(Na
2
SO
4
)有機相且加以濃縮且藉由Biotage Isolera FCC (SiO
2
：50 g)純化殘餘物，用10%至50% TBME之環己烷溶液溶離，得到2.94 g呈黃色固體狀之產物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 1.27分鐘(方法P)
1
H NMR (DMSO, 250 MHz) δ 8.07 (1H, s), 10.28 (1H, s) 步驟2：在-78℃下在氮氣氛圍下向2,4,6-三氯-吡啶-3-甲醛(2.20 g)於四氫呋喃(無水，44 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加溴化甲基鎂(3M於乙醚中，3.83 mL)。在-78℃下攪拌反應物30分鐘，且隨後升溫至室溫。 用NH
4
Cl (25 mL)淬滅反應且用1 M HCl中和至pH 7至8。用EtOAc (3 × 50 mL)萃取水相，乾燥(Na
2
SO
4
)合併之有機相且加以濃縮。 藉由Biotage Isolera (SiO
2
；50 g)純化粗物質，在0至100%EtOAc之環己烷溶液中溶離，得到1.39 g (58.7%)無色油狀物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 1.19分鐘(方法 P)，M+H = 226/228
1
H NMR (CDCl
3
, 500 MHz) δ 1.64 (3H, d, J=6.9 Hz), 2.67 (1H, d, J=9.2 Hz), 5.51 (1H, d, J=6.9 Hz), 7.33 (1H, s) 步驟3：向1-(2,4,6-三氯-吡啶-3-基)-乙醇(2.57g)於二氯甲烷(51.4 mL)中之攪拌溶液中添加N-甲基嗎啉-N-氧化物(1.994 g)。在室溫下攪拌反應物10分鐘，其後添加高釕酸四正丙基銨(TPAP) (135.6 mg)且繼續攪拌7天。經由矽藻土過濾混合物且濃縮過濾物且藉由Biotage Isolera FCC (SiO
2
;25 g)純化，用7:1環己烷-EtOAc溶離，得到1.74 g無色油狀物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 1.27分鐘(方法 P)，M+H = 224/226
1
H NMR (CDCl
3
, 500 MHz) δ 2.59 (3H, s), 7.38 (1H, s) 步驟4：向1-(2,4,6-三氯-吡啶-3-基)-乙酮(1.75 g)於無水乙醇(8.75 mL)中之溶液中添加水合肼(0.76 mL)。歷時週末(40小時)在室溫下攪拌反應物。蒸發溶劑且添加水(10 mL)。用DCM(3 × 10 mL)萃取水相，乾燥(Na
2
SO
4
)合併之有機相且加以濃縮。藉由Biotage Isolera FCC (SiO
2
；50 g)純化粗物質，用10%至30% EtOAc之環己烷溶液溶離，得到0.74 g呈灰白色固體狀之產物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 1.15分鐘(方法 P)，M+H = 202/204
1
H NMR (DMSO, 500 MHz) δ 2.64 (3H, s), 7.64 (1H, s) 步驟5：在氮氣氛圍下向4,6-二氯-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(550.00 mg)於二噁烷(11.00 mL)中之溶液中添加四氟硼酸三甲基氧鎓(563.70 mg)。在室溫下攪拌反應物1小時。 添加NaHCO
3
(10 mL)且用DCM (3 × 10 mL)萃取混合物。乾燥(Na
2
SO
4
)經合併之有機相，加以濃縮且藉由Biotage Isolera FCC (SiO
2
；10 g) 50/50 EtOAc/環己烷純化粗殘餘物，得到380 mg呈白色固體狀之
6 . 2
(64.6%)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 1.16分鐘(方法 P)，M+H = 216/218
1
H NMR (CDCl
3
, 500 MHz) δ 2.84 (3H, s), 4.10 (3H, s), 7.39 (1H, s)
合成針對實例 1 、 2 、 5 至 7 、 12 、 14 之 6 - 溴 - 3 - 氟 - 2 - 甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 醇 ( 6 . 3 ) 步驟1：將25 g 6-溴-4-甲氧基-1H-吲唑(可購自JW-Pharmlab)懸浮於400 mL 二氯甲烷中且添加20 g四氟硼酸三甲基氧鎓，且在室溫下攪拌混合物4小時。用水(300 mL)稀釋反應混合物，經由纖維素及矽藻土過濾且用半飽和碳酸氫鈉水溶液萃取有機相。乾燥且真空濃縮有機相，產生24.6 g。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.938分鐘(Z018_S04)，M+H = 241 / 243
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 3.90 (3H, s), 4.10 (3H, s), 6.51 (1H, s), 7.38 (1H, s), 8.37 (1H, s) 步驟2：將來自先前步驟之吲唑(5 g)溶解於70 mL THF中且冷卻至-78℃。緩慢添加LDA (13.5 mL，2 M於THF中)且攪拌混合物30分鐘，其後添加N-氟苯磺醯亞胺(9.16 g)。30分鐘之後，使反應混合物升溫，隨後添加水及二氯甲烷且分離且濃縮有機相。將殘餘物溶解於DMF/水/TFA中且經由製備型HPLC純化而產生2.95 g。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.56分鐘(X012_S01)，M+H = 259 / 261
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 3.90 (3H, s), 3.94 (3H, s), 6.49 (1H, s), 7.26 (1H, s) 步驟3：將來自先前步驟之2-氟基吲唑(2.9 g)溶解於DCM (10 mL)及三溴化硼(3.24 mL)中且在回流下加熱混合物隔夜，其後添加水且用1 N NaOH鹼化混合物。分離水相，用4 N HCl酸化且濾出沈澱物且在60℃下在真空下乾燥2小時，得到
6 . 3
(2.4 g)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.41分鐘(X012_S01)，M+H = 245 / 246
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 3.92 (3H, s), 6.34 (1H, s), 7.08 (1H, s), 10.80 (1H, s)
合成針對實例 13 、 16 、 18 、 20 至 22 之 6 - 溴 - 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 醇 ( 6 . 4 ) 步驟1：將溴-2,6-二氟-苯甲醛(200 g)溶解於1 L 甲醇中且在冷卻下在10℃下添加Cs
2
CO
3
(300 g)且在30℃下繼續攪拌隔夜。用HCl水溶液將混合物酸化至pH 6且過濾所形成之沈澱物。將沈澱物懸浮於EtOH/水3:1 (800 mL)中且在加熱中溶解且冷卻至環境溫度2天。收集沈澱物(91 g)且經由SiO
2
(MPLC，環己烷/乙酸乙酯9:1)純化，得到65.5 g產物。濃縮母液且用DCM萃取且亦經由SiO
2
(MPLC，環己烷/乙酸乙酯9:1)純化，得到29.4 g產物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.987分鐘(Z018_S04)
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 3.91 (3H, s), 7.25-7.33 (2H, m), 10.23 (1H, s) 步驟2：將4-溴-2-氟-6-甲氧基-苯甲醛(65.5 g)溶解於THF (250 mL)中且在0℃下添加溴化甲基鎂(220 mL，1.4 N於甲苯/THF中)且在室溫下攪拌48小時。添加額外溴化甲基鎂(60 mL，1.4 N於甲苯/THF中)且繼續攪拌4小時。濃縮混合物，懸浮於DCM及水(50 mL)中且在冰冷卻下添加HCl (4 N，20 mL)。濾出沈澱物，分離各相且用DCM萃取水相兩次。乾燥且濃縮有機相，得到70 g產物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.950分鐘(Z018_S04)，M+H
+
= 231/233
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1.37-1.38 (3H, d), 3.82 (3H, s), 4.95-4.96 (1H, d), 5.10-5.13 (1H, dt), 7.02-7.06 (2H, m) 步驟3：將1-(4-溴-2-氟-6-甲氧基-苯基)乙醇(90 g)溶解於DCM (500 mL)中並添加高釕酸四丙基銨(0.6 g，TPAP)及N-甲基嗎啉N-氧化物(42 g，NMO)且在室溫下攪拌混合物3小時。添加額外TPAP (0.5 g)及NMO (10 g)且攪拌混合物3小時，其後用DCM及水對其進行稀釋且分離有機相。將2,4,6-三巰基三嗪樹脂(9 g，0.5 mmol/g)添加至有機相中且攪拌30分鐘，經Na
2
SO
4
乾燥，經由纖維素及矽藻土過濾且真空濃縮，產生100 g (含量70%)產物，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.993分鐘(Z018_S04)，M+H
+
= 247/249
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 2.45 (3H, s), 3.87 (3H, s), 7.22-7.23 (2H, m) 步驟4：將來自先前步驟之100 g產物(含量70%)懸浮於伸乙基二醇及水合肼(200 mL)中且在100℃下攪拌混合物4小時，隨後在70℃下攪拌48小時。將混合物倒入冰水中且用DCM萃取3次。乾燥(Na
2
SO
4
)合併之有機相，提供85 g呈黃色固體狀之產物，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.940分鐘(Z018_S04)，M+H
+
= 241/243 步驟5：將來自先前步驟之50 g產物溶解於DCM (200 mL)中且在0℃下添加數份四氟硼酸三甲基氧鎓(30 g)且在室溫下攪拌隔夜。向混合物中添加NaHCO
3
水溶液且用Na
2
CO
3
將pH調整至9。隨後用DCM萃取混合物3次且用乙酸乙酯萃取兩次，乾燥有機相且經由SiO
2
(MPLC，2.5 kg，環己烷/乙酸乙酯4:1)純化殘餘物且合併所需溶離份，得到18 g產物。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.944分鐘(Z018_S04)，M+H
+
= 255/257
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 2.66 (3H, s), 3.89 (3H, s), 3.96 (3H, s), 6.40 (1H, s), 7.26 (1H, s) 步驟6：向6-溴-4-甲氧基-2,3-二甲基-2H-吲唑(2.3 g)之DCM (20 mL)溶液中添加三溴化硼(25 mL，1 M於DCM中)且在40℃下攪拌混合物2小時。濃縮混合物且用水及DCM萃取。收集沈澱物且經乾燥提供1.62 g
6 . 4
。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.761分鐘(Z018_S04)，M+H
+
= 241/243
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 2.67 (3H, s), 3.94 (3H, s), 6.28 (1H, s), 7.08 (1H, s), 10.40 (1H, s)
4.2. 根據流程 1 及 2 合成中間體 7 、 8 及 9 合成針對實例 8 至 11 、 13 、 16 至 22 之 (( R )- 4 -[( R )- 1 -( 6 - 溴 - 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 )- 乙基 ]- 1 -[( S )- 1 -( 4 - 甲氧基 - 苯基 )- 乙基 ]- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 7 . 1 ) 將
6 . 1
(32.8 g)溶解於DMA (400 mL)中，隨後添加
2 . 1
(39 g)且將混合物加熱至80℃。 添加第三丁醇鉀(25 g)且在80℃下攪拌混合物20分鐘且隨後冷卻至室溫。添加NH
4
Cl水溶液(100 mL)及水(200 mL)。隨後用i-PrOAc (300 mL)萃取混合物3次且經Mg
2
SO
4
乾燥合併之有機相且在減壓下蒸發，產生75.1 g (含量88%)產物，將自其中之12 g經由製備型HPLC純化，產生10.0 g
7 . 1
。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.597分鐘(X016_S01)，M+H = 486/484
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1,16 (3H, d, J=6.1 Hz), 1,41 (3H, d, J=7.2 Hz), 2.33-2.39 (1H, m), 2.44 (3H, s), 2.73 (1H, s), 2.78-2.82 (1H, m), 2.89 (1H, s), 3.18 (1H, d, J=5.1 Hz), 3.49 (1H, t, J=9.2 Hz), 3.64 (3H, s), 3.93 (3H, s), 4.60-4.66 (1H, m), 5.18-5.23 (1H, q, J=7.2 Hz), 6.37 (1H, s), 6.57-6.60 (2H, m), 7.09-7.11 (2H, m), 7.21 (1H, d, J=1.2 Hz) 或者，
7 . 1
合成如下：
將6-溴-2,3-二甲基-2H-吲唑-4-醇
6 . 4
(10.5 g)、碳酸鉀(16.8 g)及
2 . 3
(18.6 g)懸浮於無水DMF中且在70℃下攪拌2小時且在50℃下攪拌隔夜。添加額外
2 . 3
(5 g)及碳酸鉀(5 g)且在70℃下攪拌混合物3小時。濃縮混合物，添加水及DCM且用DCM (250 mL)萃取水相3次。用KHSO
4
洗滌有機相且乾燥(Na
2
SO
4
)且濃縮。經由SiO
2
(DCM:MeOH 9:1)純化混合物，得到12.7 g
7 . 1
。 分析：HPLC-MS：R
t
= 1.029分鐘(Z018_S04)，M+H = 486/488
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1,16 (3H, d, J=6.1 Hz), 1,41 (3H, d, J=7.2 Hz), 2.33-2.39 (1H, m), 2.44 (3H, s), 2.73 (1H, s), 2.78-2.82 (1H, m), 2.89 (1H, s), 3.18 (1H, d, J=5.1 Hz), 3.49 (1H, t, J=9.2 Hz), 3.64 (3H, s), 3.93 (3H, s), 4.60-4.66 (1H, m), 5.18-5.23 (1H, q, J=7.2 Hz), 6.37 (1H, s), 6.57-6.60 (2H, m), 7.09-7.11 (2H, m), 7.21 (1H, d, J=1.2 Hz)
合成針對實例 3 、 4 、 15 之 ( R )- 4 -[( R )- 1 -( 6 - 氯 - 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吡唑并 [ 4 , 3 - c ] 吡啶 - 4 - 基氧基 )- 乙基 ]- 1 -[( S )- 1 -( 4 - 甲氧基 - 苯基 )- 乙基 ]- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 7 . 2 ) 將
2 . 1
(3.2 g)溶解於THF (50 mL)中且添加NaH (1.08 g，60%於礦物油中之分散液)且攪拌混合物5分鐘，隨後添加
6 . 2
(2.5 g)且在50℃下繼續攪拌3小時。冷卻後，添加NH
4
Cl水溶液(50 mL)且用iPrOAc萃取混合物2次且乾燥(MgSO
4
)合併之有機相且加以濃縮。經由製備型HPLC純化產物，得到呈白色固體狀之
7 . 2
(3.65 g)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.60分鐘(X012_S01)，M+H = 443
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1.22 (3H, d, J=6.2 Hz), 1.40 (3H, d, J=7.2 Hz), 2.37-2.43 (1H, m), 2.45 (3H, s), 2.51-2.56 (1H, m), 2.64-2.72 (1H, m), 2.76-2.80 (1H, m), 3.53 (1H, t, J=9.3 Hz), 3.62 (3H, s), 3.96 (3H, s), 5.16-5.18 (1H, q, J=7.2 Hz), 5.33-5.35 (1H, m), 6.47-6.49 (2H, m), 7.01-7.03 (3H, m)
合成針對實例 1 、 2 、 5 至 7 、 12 、 14 之 ( 1R , 4R )- 4 -[( R )- 1 -( 6 - 溴 - 3 - 氟 - 2 - 甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 )- 乙基 ]- 1 -[ 1 -( 4 - 甲氧基 - 苯基 )- 乙基 ]- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 7 . 3 ) 將2.4 g
6 . 3
溶解於DMF (20 mL)中，添加碳酸鉀(5.41 g)及
2 . 3
(6.13 g)且在70℃下攪拌混合物隔夜。真空濃縮混合物，添加水且用DCM萃取混合物3次。分離有機相，產生5.5 g (含量80%)產物
7 . 3
，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.61分鐘(X012_S01)，M+H = 490/492
合成針對實例 3 之 ( R )- 5 -[( R )- 1 -( 6 - 氯 - 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吡唑并 [ 4 , 3 - c ] 吡啶 - 4 - 基氧基 )- 乙基 ]- 3 -( 4 - 甲氧基 - 苄基 )- 噁唑啶 - 2 - 酮 ( 7 . 4 ) 向
6 . 2
(75 mg)及NaH (32 mg)中添加溶解於二甲基乙醯胺(DMA；2 mL)中之
2 . 4
(90 mg)且攪拌溶液5小時。經由製備型HPLC(水/乙腈/NH
3
)純化混合物，提供呈白色固體狀之
7 . 4
(38 mg)及
7 . 5
(46 mg) (
7 . 4
及
7 . 5
呈對映異構體之混合物)。
7.4 分析
：HPLC-MS：R
t
= 0.83分鐘(X018_S03)，M+H = 431
7.5 分析
：HPLC-MS：R
t
= 0.87分鐘(X018_S03)，M+H = 431
合成針對實例 8 、 13 、 18 、 19 、 20 之 ( R )- 4 -[( R )- 1 -( 6 - 溴 - 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 )- 乙基 ]- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 8 . 1 ) 在80℃下攪拌
7 . 1
(2.3 g)於TFA (40 mL)及苯甲醚(5 mL)中之混合物15小時且在室溫下攪拌8小時。濃縮反應混合物，用乙腈(8 mL)稀釋，用25% NH
3
鹼化且用水稀釋且經由製備型HPLC分離。將黃色油狀物溶解於甲基第三丁基醚中且形成白色沈澱物，3天之後進行收集，得到
8 . 1
(1.35 g)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.45分鐘(X012_S01)，M+H = 352 / 354
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1.28 (3H, d, J=6.1 Hz), 2.15-2.35 (2H, m), 2.63 (3H, s), 2.72-2.82 (1H, m), 3.07-3.11 (1H, m), 3.37 (1H, t, J=8.9 Hz), 3.95 (3H, s), 4.63-4.69 (1H, m), 6.45 (1H, s), 7.23 (1H, d, J=1.0 Hz), 7.55 (1H, s)
合成針對實例 4 、 15 之 ( R )- 4 -[( R )- 1 -( 6 - 氯 - 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吡唑并 [ 4 , 3 - c ] 吡啶 - 4 - 基氧基 )- 乙基 ]- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 8 . 2 ) 在80℃下將
7 . 2
(2.4 g，含量85%)攪拌於TFA (20 mL)中4小時，其後對其加以濃縮。將殘餘物溶解於iPrOAc中且添加飽和NaHCO
3
水溶液(30 mL)及水(20 mL)。收集沈澱物，用水、iPrOAc及石油醚洗滌，提供890 mg白色固體狀之
8 . 2
。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.48分鐘(X012_S02)，M+H = 309
1
H NMR (CDCl
3
, 500 MHz) δ 1.41 (3H, d, J=6.3 Hz), 2.43-2.57 (2H, m), 2.86 (1H, ddd, J=14.1, 8.3, 6.0 Hz), 3.32 (1H, dd, J=9.6, 6.4 Hz), 3.55 (1H, t, J=9.1 Hz), 4.00 (3H, s), 5.59 (1H, m), 5.72 (1H, s), 7.03 (1H, s)
合成針對實例 1 、 2 、 5 、 6 之 ( R )- 4 -[( R )- 1 -( 6 - 溴 - 3 - 氟 - 2 - 甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 )- 乙基 ]- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 8 . 3 ) 在80℃下攪拌
7 . 3
(2.8 g)於10 mL TFA中之混合物2小時。將反應混合物倒入水中，用NaOH (4 N)鹼化且用DCM萃取。濃縮有機相且經由SiO
2
純化且合併所需溶離份，得到
8 . 3
(0.868 g)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.46分鐘(X012_S02)，M+H = 357/359
4.1.6. 根據流程 1 及 2 合成酸及酸酯 9 及 12 合成針對實例 11 、 16 、 17 、 22 之 ( R )- 4 -{( R )- 1 -[ 2 , 3 - 二甲基 - 6 -( 4 , 4 , 5 , 5 - 四甲基 -[ 1 , 3 , 2 ] 二氧硼 - 2 - 基 )- 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 ]- 乙基 }- 1 -[( S )- 1 -( 4 - 甲氧基 - 苯基 )- 乙基 ]- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 9 . 1 ) 將
7 . 1
(50 mg)、雙-(頻哪醇根基)-二硼(31 mg)、肆(三苯基膦)鈀(0) (24 mg)及乙酸鉀(30 mg)懸浮於二噁烷(2 mL)中且在100℃下攪拌混合物1.5小時。用DCM (20 mL)及水(20 mL)稀釋混合物且分離有機相且加以濃縮，產生呈油狀物之
9 . 1
(84 mg，含量50%)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.41 (酸) + 0.61 (酯，
9.1
)分鐘(X016_S01)，M+H = 452及534
合成針對實例 12 、 14 之 ( R )- 4 -{( R )- 1 -[ 3 - 氟 - 2 - 甲基 - 6 -( 4 , 4 , 5 , 5 - 四甲基 -[ 1 , 3 , 2 ] 二氧硼 - 2 - 基 )- 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 ]- 乙基 }- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 12 . 1 ) 將
8 . 3
(400 mg)、雙-(頻哪醇根基)-二硼(342 mg)及乙酸鉀 (330 mg)懸浮於二噁烷(5 mL)中且用氮氣脫氣5分鐘。 添加甲磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II) (95 mg)且在75℃下攪拌混合物隔夜，其後經由使用MeOH作為溶離劑的Agilent StratoSpheres PL-Thiol MP SPE過濾且加以濃縮，產生呈油狀物之
12 . 1
(400 mg)，其不經進一步純化即使用。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.51分鐘 M+H: 404 (方法 X012_S01)。
4.3 經由式 8 至 式 11 中間體合成式 1 之專利實例 合成 ( R )- 4 -{( R )- 1 -[ 6 -( 1 - 環丁基 - 1H - 吡唑 - 4 - 基 )- 3 - 氟 - 2 - 甲基 - 2H - 吲 - 唑 - 4 - 基氧基 ]- 乙基 }- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 實例 1 ) 向
8 . 3
(70 mg)之二噁烷(1 mL)及2M Na
2
CO
3
水溶液(295 µL)之溶液中添加環戊硼烷
4 . 8
(48.7 mg)及1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II) (A)，7.2 mg)且在70℃下攪拌混合物45分鐘。經由使用MeOH作為溶離劑的Agilent StratoSpheres PL-Thiol MP SPE過濾混合物且經由製備型HPLC純化，凍乾之後產生43 mg
實例 1
。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.68分鐘(001_CA02)，M+H = 398
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1.31 (3H, d, J=6.1 Hz), 1.78-1.85 (2H, m), 2.17-2.32 (2H, m), 2.38-2.44 (3H, m), 2.75-2.77 (1H, m), 3.09-3.13 (1H, m), 3.37 (1H, t, J=9.0 Hz), 3.92 (3H, s), 4.73-4.85 (2H, m), 6.66 (1H, s), 7.18 (1H, s), 7.53 (1H, s), 7.96 (1H, s), 8.33 (1H, s) 使用以下鈀催化劑系統以與
實例 1
相類似之方式合成以下實例： A) 1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)或 B)二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]膦[2-(2-胺基苯基)苯基]-甲基磺醯氧基-鈀
或者經由以下合成程序合成實例 13 ： 步驟 1
：在環境溫度下在氬氣下向4-溴-1-(第三丁基)-1H-吡唑(5.0 g，25 mmol)於無水THF (25 mL)中之溶液中饋入異丙基氯化鎂氯化鋰複合物(1.3 M於THF中，28.4 mL，37 mmol)。將無水二噁烷(3.3 g，37 mmol)饋入反應，且在45℃下攪拌反應4小時。將所得混合物冷卻至環境溫度且在-20℃下饋入乙酸酐(7.5 g，73 mmol)於THF (25 mL)中之無水溶液中。將所得混合物升溫至環境溫度且濃縮得到殘餘物。將混合物溶解於甲基第三丁基醚(50 mL)中且用水(25 mL)洗滌。濃縮有機部分，得到呈油狀物之粗1-(1-(第三丁基)-1H-吡唑-4-基)乙-1-酮(7.6 g，36 wt%)及67%產率。甲基第三丁基醚及庚烷之混合物中的結晶提供分析純物質1-(1-(第三丁基)-1H-吡唑-4-基)乙-1-酮。
1
H NMR (500 MHz, CDCl
3
) δ = 7.96 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.55 (s, 9H).
步驟 2
：在環境溫度下在氬氣下向乙酸鈀(51 mg，0.23 mmol)、四氟硼酸三-第三丁基鏻(128 mg，0.44 mmol)、第三丁醇鋰(1.47 g，18 mmol)、3-碘-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-甲酸(1.0 g，3.7 mmol，Organic Letters(2015), 17(12), 2964-2967)及1-(1-第三丁基)-1H-吡唑-4-基)乙-1-酮(0.68 g，4.1 mmol)之混合物中饋入脫氣1,4-二噁烷(10 mL)。歷時大約15分鐘將攪拌混合物加熱至80℃且在此溫度下攪拌30分鐘。將反應冷卻至環境溫度且用三氟乙酸(30 mL)及乙腈(15 mL)稀釋。在78℃下攪拌混合物10小時。將反應冷卻至環境溫度且濃縮得到固體殘餘物。將殘餘物溶解於乙酸異丙酯與水之混合物中。用3 M NaOH將含水層pH調整至約10。分離各層且用水洗滌有機部分兩次。有機部分濃縮為固體(1.92 g)。將固體溶解於熱正丙醇(7 mL)中且冷卻至環境溫度，其中會出現結晶。用水(10 mL)逐滴稀釋混合物且攪拌30分鐘。藉由過濾來收集固體且用20 vol%正丙醇水溶液洗滌。在50℃下在真空烘箱中用氮氣流乾燥固體，提供純度為約94 wt%的呈固體狀之6-(1-(第三丁基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二甲基哌喃并[4,3-c]吡唑-4(2H)-酮(產率49%)。
1
H NMR (CDCl
3
, 400 MHz), δ =7.96 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 3.8 9 (s, 3H), 2.66 (s, 3H), 1.62 (s, 9H).
步驟 3
：在-78℃下在氬氣下向二異丙基醯胺鋰(2.0 M，4.6 mL，9.2 mmol)於THF(15 mL)中之無水漿液中逐滴饋入膦酸甲二甲酯(1.2 g，10 mmol)。攪動50分鐘之後，在-78℃下向以上鋰化膦酸酯溶液中饋入6-(1-(第三丁基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二甲基哌喃并[4,3-c]吡唑-4(2H)-酮(0.89 g，3.11 mmol)於THF(10 mL)中之無水漿液。在-78℃下攪拌反應混合物1小時且歷時1小時升溫至環境溫度。用甲醇(3 mL)淬滅反應且攪拌1小時。向反應中饋入3 M HCl 水溶液(4 mL)，且在環境溫度下攪拌反應物隔夜。用水(15 mL)稀釋反應且真空濃縮以移除有機溶劑。用乙酸異丙酯及水稀釋所得漿液。用3 M HCl將含水層pH調整為3至4。分離各層，且用乙酸異丙酯反萃取含水部分。將合併之有機層真空濃縮成固體。將固體溶解於熱正丙醇(6 mL)中，冷卻至環境溫度且在攪拌下用水(35 mL)逐滴稀釋。在環境溫度下攪拌混合物1小時。藉由過濾來收集固體，用水洗滌，且在50℃下在真空烘箱中用氮氣流乾燥，提供6-(1-(第三丁基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二甲基-2H-吲唑-4-醇(760 mg，84 wt%，產率72%)。
1
H NMR (DMSO-d6, 400 MHz), δ = 9.86 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.6 7(s, 3H), 1.55 (s, 9H).
步驟 4
：在氮氣下在70℃下攪拌碳酸鉀(610 mg，4.4 mmol)、4-甲基苯磺酸(S)-1-((R)-1-((S)-1-(4-甲氧基苯基)乙基)-5-側氧基吡咯啶-3-基)乙酯(810 mg，1.9 mmol)及6-(1-(第三丁基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二甲基-2H-吲唑-4-醇(418 mg，1.5 mmol)於無水二甲基甲醯胺(1.5 mL)中之混合物18小時。向反應中饋入額外4-甲基苯磺酸(S)-1-((R)-1-((S)-1-(4-甲氧基苯基)乙基)-5-側氧基吡咯啶-3-基)乙酯(0.280 mg，0.66 mmol)，且在70℃下攪拌反應物20小時。用乙酸異丙酯及水稀釋反應。分離各層，且洗滌有機部分兩次。將有機部分濃縮為油狀固體。藉由矽膠層析(甲醇之乙酸乙酯溶液)之純化提供純度為大約90%的呈泡沫狀之所需產物(R)-4-((R)-1-((6-(1-(第三丁基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二甲基-2H-吲唑-4-基)氧基)乙基)-1-((S)-1-(4-甲氧基苯基)乙基)吡咯啶-2-酮(
10 . 5
) (769 mg，89%)。
1
H NMR (CDCl
3
, 500 MHz), δ = 7.77 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.15 (d,
J
= 8.74 Hz, 2H), 6.23 (d,
J
= 8.54 Hz, 2H), 6.26 (s, 1H), 5.46 (q,
J
= 7.41 Hz, 1H), 4.50-4.56 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.48 (t,
J
= 9.0 Hz, 1H), 2.93-3.0 (m, 1H), 2.62-2.80 (m, 2H), 2.55-2.62 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 1.64 (s, 9H), 1.50 (d,
J =
7.4 Hz, 3H), 1.31 (d,
J
= 6.3 Hz, 3H).
步驟 5
：在75℃下在氮氣下攪拌(R)-4-((R)-1-((6-(1-(第三丁基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二甲基-2H-吲唑-4-基)氧基)乙基)-1-((S)-1-(4-甲氧基苯基)乙基)吡咯啶-2-酮(585 mg，1.1 mmol)於三氟乙酸(3 mL)及苯甲醚(1.5 mL)中之溶液18小時。將反應冷卻至環境溫度且用乙酸異丙酯及水稀釋。用3 M NaOH水溶液將含水部分pH調整為6。分離各層且將有機部分濃縮為油狀物。藉由矽膠層析(EtOH之EtOAc溶液)之純化提供呈泡沫狀之實例13 (420 mg，94%)。
合成 ( R )- 5 -{( R )- 1 -[ 6 -( 1 - 第三丁基 - 1H - 吡唑 - 4 - 基 )- 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吡唑并 [ 4 , 3 - c ] 吡啶 - 4 - 基氧基 ]- 乙基 }- 噁唑啶 - 2 - 酮 ( 實例 3 ) 步驟1：向
4 . 1
(46 mg)及二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]膦[2-(2-胺基苯基)苯基]-甲基磺醯氧基-鈀(15 mg)中添加
7 . 4
(38 mg)，溶解於二噁烷(1 mL)及MeOH (0.2 mL)及2 M Na
2
CO
3
水溶液(0.175 mL)中，且在90℃下加熱混合物50分鐘。其後，添加MeOH (10 mL)且經由Agilent StratoSpheres PL-Thiol MP SPE過濾混合物且加以濃縮。將殘餘物溶解於DCM (20 mL)中且用水(20 mL)萃取且用DCM (10 mL)萃取水相。乾燥且濃縮合併之有機相，產生
10 . 1
(74 mg)，其不經進一步純化即用於下一步驟。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.86分鐘 (X018_S03)，M+H = 519 步驟2：向
10 . 1
(74 mg)中添加三氟乙酸(2.956 g)且在75℃下攪拌混合物30小時。隨後濃縮且經由製備型HPLC (水/乙腈/NH
3
)純化混合物，提供白色固體，隨後經由對掌性SFC (Knauer Eurocel 01；80% scCO
2
/20% MeOH + 20 mM NH
3
；120巴BPR；40℃)分離，提供呈白色固體狀之
實例 3
(13 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.92分鐘(V011_S01)，M+H = 399
合成 ( R )- 4 -(( R )- 1 -{ 6 -[ 1 -(( R )- 2 , 2 - 二甲基 - 四氫 - 哌喃 - 4 - 基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 基 ]- 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 }- 乙基 )- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 實例 9 ) 步驟1：向
7 . 1
(200 mg)、4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼
-2-基)-1H-吡唑
4 . 9
(120 mg)、二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]膦[2-(2-胺基苯基)苯基]-甲基磺醯氧基-鈀(40 mg)中添加二噁烷(3 mL)及2 M Na
2
CO
3
水溶液(0.7 mL)，且在90℃下攪拌混合物2小時。用DCM (50 mL)及水(30 mL)稀釋混合物。相分離之後用DCM (25 mL)萃取水相2次。乾燥(MgSO
4
)且經由製備型HPLC純化合併之有機相，提供呈黃色油狀之
11 . 1
(137 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.44分鐘(X012_S01)，M+H = 474 步驟2：向
5 . 2
(61 mg)及Cs
2
CO
3
(93 mg)中添加溶解於DMF (1 mL)中之
11 . 1
(68 mg)且將懸浮液加熱至70℃歷時3小時。添加額外
5 . 2
(45 mg)及Cs
2
CO
3
(93 mg)且在70℃下繼續攪拌5小時，隨後進一步添加
5 . 2
(45 mg)及Cs
2
CO
3
(93 mg)且在80℃下繼續攪拌10小時且在環境溫度下攪拌3天。用DCM (20 mL)及水(20 mL)稀釋混合物且分離各相。用DCM (20 mL)萃取水相且乾燥、濃縮且經由製備型HPLC純化合併之有機相，提供呈無色油狀之
10 . 2
(57 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.65分鐘(X012_S01)，M+H = 586 步驟3：向
10 . 2
(57 mg)中添加三氟乙酸(2 mL)且在80℃下攪拌混合物3小時。濃縮且經由製備型HPLC純化混合物，提供
實例 9
(23.7 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.90分鐘(003_CA03)，M+H = 452
合成 4 -( 1 -{ 6 -[( R )-( 3S , 3aR , 7aR )- 1 -( 六氫 - 呋喃并 [ 3 , 2 - b ] 哌喃 - 3 - 基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 基 ]- 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 }- 乙基 )- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 實例 10 ) 步驟1：向
5 . 1
(64 mg)及Cs
2
CO
3
(93 mg)中添加溶解於DMF (1 mL)中之
11 . 1
(68 mg)且將懸浮液加熱至70℃後維持3小時。再添加
5 . 1
(45 mg)及Cs
2
CO
3
(93 mg)且在70℃下繼續攪拌5小時，隨後進一步添加
5 . 1
(45 mg)及Cs
2
CO
3
(93 mg)且在80℃下繼續攪拌10小時且在環境溫度下攪拌3天且在100℃下攪拌3小時。用DCM (20 mL)及水(20 mL)稀釋混合物且分離各相。用DCM (20 mL)萃取水相，且乾燥、濃縮且經由製備型HPLC純化合併之有機相，提供呈無色油狀物之
10 . 3
(42 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.64分鐘(X012_S01)，M+H = 600 步驟2：向
10 . 3
(41 mg)中添加三氟乙酸(2 mL)且在80℃下攪拌混合物3小時。濃縮且經由製備型HPLC純化混合物，提供
實例 10
(17.1 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.88分鐘(003_CA03)，M+H = 466
合成 ( R )- 4 -(( R )- 1 -{ 6 -[ 1 -( 2 - 氟 - 乙基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 基 ]- 2 , 3 - 二甲基 - 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 }- 乙基 )- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 實例 11 ) 在100℃下加熱
9 . 1
(150 mg)、
3 . 6
(35 mg)及二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]膦[2-(2-胺基苯基)苯基]-甲基磺醯氧基-鈀(17 mg)於二噁烷(1 mL)及2M Na
2
CO
3
水溶液(394 µL)中3小時分鐘。添加水且用DCM萃取水相3次且濃縮合併之有機相，將其溶解於MeOH中且經由Agilent StratoSpheres PL-Thiol MP SPE過濾且加以濃縮，提供
10 . 4
，其不經進一步純化即用於下一步驟。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.53分鐘(X011_S03)，M+H = 520 步驟2：向
10 . 4
(107 mg)中添加三氟乙酸(1.5 mL)且在70℃下加熱2.5小時。向混合物中添加水及飽和NaHCO
3
水溶液且用DCM萃取水相2次。濃縮且經由製備型HPLC純化合併之有機相，提供呈白色固體狀之
實例 11
(12 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.41分鐘(X011_S03)，M+H = 386
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1.32 (3H, d, J=6.0 Hz), 2.19-2.37 (2H, m), 2.63 (3H, s), 2.75-2.84 (1H, m), 3.11-3.15 (1H, m), 3.40 (1H, t, J=9.1 Hz), 3.94 (3H, s), 4.40 (1H, t, J=4.7 Hz), 4.47 (1H, t, J=4.7 Hz), 4.73-4.78 (2H, m), 4.86 (1H, t, J=4.7 Hz), 6.56 (1H, s), 7.20 (1H, s), 7.56 (1H, s), 7.96 (1H, s), 8.23 (1H, s) 使用中間體
9 . 1
及以下鈀催化劑系統中之一者以與
實例 11
相類似之方式合成以下
實例
： A)1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)或 B)二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]膦[2-(2-胺基苯基)苯基]-甲基磺醯氧基-鈀
合成 ( R )- 4 -(( R )- 1 -{ 3 - 氟 - 2 - 甲基 - 6 -[ 1 -( 3 , 3 , 3 - 三氟 - 丙基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 基 ]- 2H - 吲唑 - 4 - 基氧基 }- 乙基 )- 吡咯啶 - 2 - 酮 ( 實例 12 )
在45℃下加熱
12 . 1
(40 mg)、
3 . 5
(19 mg)及1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II) (2.9 mg)之二噁烷(1 mL)溶液及2 M Na
2
CO
3
水溶液(119 µL)隔夜。用MeOH稀釋混合物且經由Agilent StratoSpheres PL-Thiol MP SPE過濾、濃縮且經由製備型HPLC純化，提供
實例 12
(8 mg)。 分析：HPLC-MS：R
t
= 0.48分鐘(X011_S03)，M+H = 440
1
H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1.31 (3H, d, J=6.1 Hz), 2.17-2.32 (2H, m), 2.71-2.81 (1H, m), 2.85-2.98 (2H, m), 3.09-3.13 (1H, m), 3.37 (1H, t, J=901 Hz), 3.92 (3H, d, J=1.2 Hz), 4.39 (2H, t, J=6.9 Hz), 4.70-4.76 (1H, m), 6.63 (1H, s), 7.17 (1H, s), 7.53 (1H, s), 8.00 (1H, s), 8.32 (1H, s)
以與實例 12 相 類似之方式合成以下實例 14 4.5 分析方法
根據前述合成流程製備的實例化合物係藉由以下層析方法及/或NMR光譜分析加以表徵。
4.5.1 層析方法 ( HPLC - MS 方法 ) 方法 A 方法 B ： 方法 E ： 方法 F ： 方法 H ：
溶離劑A：己烷 溶離劑B：2-丙醇 時間[分鐘] %A %B 流速[mL/min] 00.00 90 10 1.0 20.00 90 10 1.0 所用固定相為Chiralpak AD-H (Daicel)，5 µm；尺寸：150 × 4.6 mm，(管柱溫度：在10℃下恆定)。偵測DAD 225 nm。
方法 I ：
溶離劑A：己烷 溶離劑B：2-丙醇 時間[分鐘] %A %B 流速[mL/min] 00.00 90 10 1.0 25.00 90 10 1.0 所用固定相為Chiralpak AD-H (Daicel), 5 µm；尺寸: 150 × 4.6 mm, (管柱溫度: 在10℃下恆定)。 偵測DAD 225 nm。
方法 J ： 方法 X018_S03 方法 X018_S01 方法 X011_S03 方法 X012_S01 方法 X012_S02 方法 X016_S01 方法 X017_S01
方法P： 管柱：Supelco Ascentis Express (2.1 × 30 mm，2.7 µm管柱) 流速：1 ml/min 溶劑A：0.1%甲酸/水 溶劑B：0.1%甲酸/乙腈 注入體積：3 µL 管柱溫度：40℃ UV偵測波長：215 nm 溶離劑：0至1.5分鐘，恆定梯度95%溶劑A + 5%溶劑B至100%溶劑B；1.5至1.6分鐘，100%溶劑B；1.60至1.61分鐘，恆定梯度100%溶劑B至95%溶劑A + 5%溶劑B；1.61至2.00分鐘，95%溶劑A + 5%溶劑B。 MS偵測使用Waters LCT Premier, QTof micro, ZQ或Shimadzu LCMS2010EV UV偵測使用Waters 2996光電二極體陣列、Waters 2998光電二極體陣列、Waters 2487 UV或Shimadzu SPD-M20A PDA
方法 001_CA02 方法 003_CA03 方法 003_CA04 方法 Z001_005 方法 Z018_S03 方法 Z018_S04 方法 V011_S01 方法 X018_S02 方法 G ：
溶離劑A：水/ 0.2 % KH
2
PO
4
pH = 3 溶離劑B：乙腈 時間[分鐘] %A %B 流速[mL/min] 0.00 80 20 1.50 5.00 20 80 1.50 8.00 20 80 1.50 所用固定相為Inertsil C8-3 (GL Sciences),5 µm；尺寸：100 × 4.0 mm，(管柱溫度：在30℃下恆定)。偵測UV 220 nm。
4.5.2 NMR 光譜分析 Bruker DRX 500 MHz NMR 之組態
高效數位NMR光譜儀，2通道微艙控制台及運作Topspin 1.3版的Windows XP主機工作站。 其裝備有： · Oxford儀器，磁體11.74特斯拉(Tesla)(500 MHz質子共振頻率) · B-VT 3000溫度控制器 · GRASP II梯度光譜分析附件，用於快速擷取2D脈衝序列 · 氘鎖開關，用於梯度勻場 · 5 mm寬頻逆幾何雙共振探針，具有自動化調諧及匹配(BBI ATMA)。使用
2
H鎖及經屏蔽之z型梯度線圈，對頻率範圍內之核
15
N及
31
P脈衝/去耦進行
1
H觀測。
Bruker DPX 400MHz NMR 之組態
高效單艙Bruker 400 MHz數位雙通道NMR光譜儀控制台及運作XwinNMR 3.5版的Windows XP主機工作站。 其裝備有： · Oxford儀器，磁體9.39特斯拉(400 MHz質子共振頻率) · B-VT 3300變溫控制器單元 · 四核(QNP)可切換探針，以便利用
2
H鎖觀測
1
H、
13
C、
19
F及
31
P
Bruker 500 MHz NMR 之組態
高效數位NMR光譜儀，2通道單艙控制台及運作Topspin 2.1 PL6版的Linux主機工作站。 其裝備有： · Bruker-Biospin AVANCE III 500A磁體11.75特斯拉(500 MHz質子共振頻率) · B-VT 3000溫度控制器 · 5 mm多核寬頻氟觀測(BBFO)探針，其數位調諧覆蓋範圍為
15
N及
31
P以及
19
F (利用
1
H去耦)。
Bruker DPX 400 MHz NMR 之組態
高效數位NMR光譜儀，2通道微艙控制台及運作Topspin 2.1 PL6版的Linux主機工作站。 其裝備有： · Bruker-Biospin AVANCE III DPX400C磁體9.40特斯拉(400 MHz質子共振頻率) · B-VT 3200變溫控制器單元 5 mm多核寬頻氟觀測(BBFO)探針，其數位調諧覆蓋範圍為
15
N及
31
P以及
19
F (利用
1
H去耦)。
5. 實例
以下實例類似於上述合成方法製備。此等化合物適用作SYK抑制劑且在SYK抑制分析中具有與SYK抑制相關之IC
50
值小於10 nMol且在CD63分析中具有小於150 nMol之EC
50
值。 此外，此等化合物展現極佳SYK選擇性，其意謂儘管有效抑制SYK，但其他激酶，諸如極光B (AURB)、FLT3、GSK3β等不會或幾乎不會受到抑制(不會有效抑制之其他激酶為RET、FLT4 RPS6KA3、STK22D及EPHA2)。因而，本發明之此等有效SYK抑制劑的不欲副作用降至最低。 AURB使組蛋白H3上之Ser10及Ser28磷酸化(有絲分裂及細胞增殖中的關鍵事件)。因此，抑制AURB具有阻斷細胞增殖的可能性，且可能損害展現高細胞週轉(turnover)的組織，諸如腸或骨髓。因此，需要避免有效SYK抑制劑發生並行AURB抑制作用，以改良該化合物之總體臨床安全概況。因此，所有實例化合物均顯示與極光B抑制相關之IC
50
值超過10000 nMol且所有實例化合物之IC
50 ( AURB )
/ IC
50 ( SYK )
比均超過10000，較佳甚至超過15000。 FLT3為酪胺酸激酶受體。當FLT3配位體結合至該受體時，該受體之內在酪胺酸激酶活性活化，其使信號轉導分子(諸如SHC)磷酸化及活化，其又使該信號在細胞中傳播。經由FLT3的信號傳導在細胞存活、增殖及分化中起作用且對於淋巴細胞(B細胞及T細胞)發育重要。因此，需要避免有效SYK抑制劑發生並行FLT3抑制作用，以改良該化合物之總體臨床安全概況。因此，本發明之所有實例化合物均顯示與FLT3抑制相關之IC
50
值超過1000 nMol。 肝糖合成酶激酶3β (GSK3β)為針對脯胺酸的絲胺酸-蘇胺酸激酶，其在TGF-β及Wnt細胞內信號傳導路徑中具有顯著作用。GSK3β促進多個細胞內信號傳導路徑，包括活化β-連環蛋白(catenin)複合物。GSK3β在成人中涉及細胞增殖及能量代謝，而在新生兒中涉及神經元細胞發育及體型形成。因此，需要避免有效SYK抑制劑發生並行GSK3β抑制作用，以改良該化合物之總體臨床安全概況。因此，本發明之所有實例化合物均顯示與GSK3β抑制相關之IC
50
值超過5000 nMol，較佳超過10000 nMol。 個別實例物質中之每一者的與SYK抑制相關、與極光B及FLT3抑制相關之IC
50
值展示於下表1中且以實驗方式測定如下：
5 . 1 SYK 激酶抑制測試
重組人類SYK (胺基酸342至635)係以與N末端GST標記形成的融合蛋白形式表現，進行親和力純化且在儲存緩衝液(25 mM HEPES pH7.5；25 mM MgCl
2
；5 mM MnCl
2
；50 mM KCl；0.2% BSA；0.01% CHAPS；100 µM Na
3
VO
4
；0.5 mM DTT，10%甘油)中以約50 µM至100 µM的濃度、在-80℃深度冷凍直至使用。 使用激酶Glo
®
發光激酶測試(Promega；V6712)測定GST-SYK激酶融合蛋白的催化活性。在此均質測試中，藉由利用發光的螢光素-螢光素酶反應量化激酶反應後剩餘的ATP量。所得發光信號與仍存在的ATP量相關且因此與激酶活性逆相關。
方法
測試化合物以10 mM之濃度溶解於100% DMSO中且在DMSO中稀釋至1 mM之濃度。在100% DMSO中進行連續稀釋。該等物質之所有進一步稀釋均使用測試緩衝液(25 mM HEPES pH7.5；25 mM MgCl
2
；5 mM MnCl
2
；50 mM KCl；0.2% HSA；0.01% CHAPS；100 µM Na
3
VO
4
；0.5 mM DTT)進行。根據需要調適稀釋步驟及濃度範圍。將此等稀釋液之7 µl等分試樣轉移至384孔Optiplate (Perkin Elmer，#6007290)中。GST-SYK在測試緩衝液中稀釋至12 nM且激酶測試中使用5 µl此稀釋液(SYK最終濃度= 4 nM，總體積為15 µl)。在室溫下培育15分鐘之後，將750 nM ATP與100 µg/ml聚(L-麩胺酸L-酪胺酸4:1) (Fluka#81357)於緩衝液中之3 µl混合物添加至各孔中且在室溫下繼續培育另外60分鐘。 陽性對照物為不含測試物質的反應混合物；陰性對照物(空白)為不含激酶的反應混合物。 60分鐘之後，向各孔中添加10 µl激酶-Glo
®
溶液(Promega，目錄號V6712)(加熱至室溫)且繼續培育另外15分鐘。用Envision發光讀取器(Perkin-Elmer)讀取培養盤。
資料評估及計算 ：
讀取器之輸出檔案為含有孔編號及所測相對光單位(RLU)的csv檔案。對於資料評估及計算而言，陰性對照物之量測結果設定為100% ctrl且陽性對照物之量測結果設定為0% ctrl。使用Assay Explorer軟體(Accelrys)，根據此等值來計算用於量測各物質濃度的%值。通常，% ctrl計算值在0%與100%值之間，但在個別情況下，根據變化性或化合物特徵，亦可超出此等範圍。使用Assay Explorer軟體，由% ctrl值計算IC
50
值。計算：[y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d] a =低值，d =高值；x = 濃度M；c=IC50 M；b =峰；y = % ctrl。 令人滿意之SYK抑制能力由藉由＜ 10 nMol之此分析量測的IC
50 ( SYK )
值表示。
5 . 2 CD63 分析 ( 針對 SYK 抑制之細胞分析 )
SYK對FcεRI介導之活化及肥大細胞與嗜鹼性血球之脫粒為至關重要的。在此分析中，在全血中培育相對於二硝基苯酚(DNP)升高之IgE，其中其在嗜鹼性血球上結合至FcεRI。隨後添加抗原DNP，其結合至經FcεRI結合之IgE，引起SYK相關性嗜鹼性血球脫粒。CD63通常駐留在嗜鹼性血球內之細胞內顆粒膜上，在脫粒後，其隨後表現在表面上，其可藉由流式細胞測量術在該表面處得到偵測。CD63之表面表現與組織胺自嗜鹼性血球之釋放非常密切相關。CD63分析先前已證實為福他替尼SYK程式中的臨床靶向參與生物標記(Braselmann等人, J. Pharm. Exp. Therap. 319:998-1008, 2006)。
方法：
平緩地混合(渦旋混合器)肝素化全血且將每次測試之100µL等分於96孔培養盤中。用PBS/0.1% HSA以1:100將抗DNP (1 mg/ml)稀釋至10 μg/ml (最終濃度：1 μg/mL)。用洗滌溶液將DNP/BSA (5 mg/ml)預稀釋至60 ng/ml之濃度。 化合物：用100% DMSO製備1 mM；100 μM；10 μM；1 μM及0.1 µM之溶液。用PBS/0.1% HSA以1:100稀釋來產生10 μM；1 μM；0.1 μM；0.01 μM；0.001 µM之濃度(最終濃度：1000；100；10；1；0.1 nM)。 自Basotest®套組提供試劑。 在37℃預溫熱水浴中用100 μl全血培育10 μl 10 μg/ml抗DNP及10 μl化合物。30分鐘之後，將20 μl螢光放射增強緩衝液(STIMULATION BUFFER)添加至全血樣品中且平緩地加以渦旋。在37℃下在水浴中培育樣品10分鐘。每次向全血中添加100 μl DNP/BSA。向另一試管中添加100 μl洗滌溶液(WASHING SOLUTION)作為陰性對照物。將100 μl DNP/BSA (最終30 ng/ml)添加於化合物試管中。再一次混合所有試管。在37℃下在水浴中培育樣品20分鐘。 藉由在冰上培育樣品5分鐘來停止脫粒。向各試管中添加20 μl染色試劑(STAINING REAGENT)。渦旋且在冰浴中培育試管20分鐘，加以遮蓋以防止曝露於光。用2 ml預溫熱(室溫) 1 ×裂解溶液(LYSING SOLUTION)裂解且固定全血樣品。在室溫下渦旋且培育10分鐘。使細胞短暫離心(5分鐘，250 × g，4℃)。丟棄上清液。 向試管中添加3 ml洗滌溶液。離心試管(5分鐘，250 × g，4℃)。抽吸上清液。向細胞集結粒中添加200 μl洗滌溶液，加以渦旋。在分析之前在經遮蓋之冰浴中培育試管。 藉由流式細胞測量術使用藍綠色激發光(488 nm氬離子雷射)分析細胞。藉由使用FL2通道中觸發之螢光(PE)獲得資料以對表現高IgE量之嗜鹼性粒細胞進行門控。 此實時門控會降低資料量且節省記憶體容量。每個樣品獲得至少500個嗜鹼性血球。
資料評估及計算 ：
針對資料評估及計算，陰性對照物(未刺激之血液)之量測結果設定為100% ctrl且陽性對照物(經DNP/抗DNP刺激之血液)之量測結果設定為0% ctrl。根據此等值計算用於量測各物質濃度的%值，使用Windows GraphPad Prism 6.01版擬合濃度效應曲線且計算EC
50
值。使用非線性擬合(log(抑制劑)對響應可變斜率)計算EC
50
值。通常，% ctrl計算值在0%與100%值之間，但在個別情況下，根據變化性或化合物特徵，亦可超出此等範圍。 令人滿意之CD63抑制能力由藉由＜ 150 nMol之此分析量測的EC
50
值表示。
5 . 3 極光 B 激酶測試
重組人類極光B(胺基酸1至344，純系編號DU1773，分子量40.2 kDa，University of Dundee)係以與N末端His標記形成的融合蛋白形式表現，進行親和力純化且在儲存緩衝液(50 mM Tris-HCl pH 8；25 mM Na-ß-甘油磷酸酯；0.1 mM EGTA；150 mM NaCl；0.03% Brij-35；1 mM DTT及10%甘油)中、以約0.25-0.5 mg/mL之濃度、在-80℃深度冷凍直至使用。 使用ADP Glo
®
發光激酶測試(Promega；V9103X)測定極光B激酶蛋白活性。在此均質測試中，藉由利用發光的螢光素-螢光素酶反應量化激酶反應後剩餘的ADP量。所得發光信號與仍存在的ADP量相關且從而與蛋白激酶活性相關。
方法
測試化合物以10 mM之濃度溶解於100% DMSO中且在DMSO中稀釋至5 mM之濃度。在100% DMSO中，依1:10步驟進行連續稀釋。該等物質之所有進一步稀釋均使用測試緩衝液(50 mM Hepes，pH 7.5、10 mM MgCl
2
、1 mM EGTA、60 µM Ultra Pure ATP、0.01% Brij35、0.1% BSA、5 mM β-甘油磷酸酯)進行，直至濃度達到最終測試濃度(化合物最終濃度：50 µM至0.005 nM)的2.5倍。將此等稀釋液之4 µl等分試樣轉移至384孔Optiplate(Perkin Elmer，#6007290)中。His-極光B在測試緩衝液中稀釋至125 nM且激酶測試中使用4 µl此稀釋液(極光B最終濃度= 50 nM，總體積為10 µl)。在室溫下培育15分鐘之後，向各孔中添加2 µl含有250 µM受質([LRRLSLGLRRLSLGLRRLSLGLRRLSLG]；University of Dundee)的測試緩衝液且在室溫下繼續培育另外60分鐘。 陽性對照物為不含測試物質的反應混合物；陰性對照物(空白)為不含激酶的反應混合物。 60分鐘之後，向各孔中添加10 µl ADP-Glo
®
溶液(ADP-Glo試劑#V912B Promega)(加熱至室溫)且繼續培育另外40分鐘。隨後添加20 µl激酶偵測混合液(偵測緩衝液#V913B Promega；激酶偵測受質#V914B Promega)且在室溫下培育40分鐘。用Envision發光讀取器(Perkin-Elmer)讀取培養盤。
資料評估及計算 ：
讀取器之輸出檔案為含有孔編號及所測RLU的csv檔案。對於資料評估及計算而言，陰性對照物之量測結果設定為0% ctrl且陽性對照物之量測結果設定為100% ctrl。可使用Assay Explorer軟體(例如Accelrys)，根據此等值來計算用於量測各物質濃度的%值。通常，% ctrl計算值在0%與100%值之間，但在個別情況下，根據變化性或化合物特徵，亦可超出此等範圍。使用Assay Explorer軟體，由% ctrl值計算IC
50
值。計算：[y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d]， a =低值，d =高值，x =濃度M；c=IC50 M；b =峰；y = % ctrl。 本發明之化合物為SYK抑制劑且不應影響諸如AURB之其他激酶，其通常由較佳＞ 10000 nMol且更佳＞ 15000 nMol、尤其較佳＞20000 nMol之大IC
50 ( AURB )
值及＞ 10000、更佳＞ 15000、尤其較佳＞ 20000之IC
50 ( AURB )
/IC
50 ( SYK )
比反映。
5 . 4 FLT3 激酶測試
重組人類FLT3 (胺基酸564至958，分子量48.6 kDa，Invitrogen #PR4666C)係以組胺酸標記表現，進行親和力純化且在儲存緩衝液(50 mM Tris(pH 7.5)、100 mM NaCl、0.05 mM EDTA、0.05% NP-40、2 mM DTT及50%甘油)中以約0.35 mg/ml的濃度、在-80℃下深度冷凍直至使用。使用ADP Glo
®
發光激酶測試(Promega；V9103X)測定FLT3激酶蛋白活性。在此均質測試中，藉由利用發光的螢光素-螢光素酶反應量化激酶反應後剩餘的ADP量。所得發光信號與仍存在的ADP量相關且從而與蛋白激酶活性相關。
方法
測試化合物以10 mM之濃度溶解於100% DMSO中且在DMSO中稀釋至5 mM之濃度。在100% DMSO中，依1:10步驟進行連續稀釋。該等物質之所有進一步稀釋均使用測試緩衝液(50 mM Hepes，pH 7.5，10 mM MgCl
2
、1 mM EGTA、0.01% Brij35、0.1% BSA)進行，直至濃度達到最終測試濃度(化合物最終濃度：50 µM至0.005 nM)的2.5倍。將此等稀釋液之4 µl等分試樣轉移至384孔Optiplate(Perkin Elmer，#6007290)中。FLT3酶在測試緩衝液中稀釋至5 nM且激酶測試中使用4 µl此稀釋液(FLT3最終濃度= 2 nM，總體積為10 µl)。在室溫下培育60分鐘之後，將2.5 mg/ml受質(聚-麩胺酸/酪胺酸；Sigma #P0275)與2.5 mM超純ATP (Promega #V915B)於緩衝液中之2 µl混合物添加至各孔中且在室溫下繼續培育另外90分鐘。 陽性對照物為不含測試物質的反應混合物；陰性對照物(空白)為不含激酶的反應混合物。 90分鐘之後，向各孔中添加10 µl ADP-Glo
®
溶液(ADP-Glo試劑#V912B Promega)(加熱至室溫)且繼續培育另外60分鐘。隨後添加20 µl激酶偵測混合液(偵測緩衝液#V913B Promega；激酶偵測受質#V914B Promega)且在室溫下培育40分鐘。用Envision發光讀取器(Perkin-Elmer)讀取培養盤。
資料評估及計算：
讀取器之輸出檔案為含有孔編號及所測RLU的csv檔案。對於資料評估及計算而言，陰性對照物之量測結果設定為0% ctrl且陽性對照物之量測結果設定為100% ctrl。可使用Assay Explorer軟體(例如Accelrys)，根據此等值來計算用於量測各物質濃度的%值。通常，% ctrl計算值在0%與100%值之間，但在個別情況下，根據變化性或化合物特徵，亦可超出此等範圍。使用Assay Explorer軟體，由% ctrl值計算IC
50
值。計算：[y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d]，a =低值，d =高值；x =濃度M；c=IC50 M；b =峰；y = % ctrl。 本發明之化合物為SYK抑制劑且不應影響諸如FLT3之其他激酶，其通常由較佳＞ 1000 nMol之大 IC
50 ( FLT3 )
值反映。
5 . 5 GSK3β 激酶測試
在ADP-Glo激酶分析，定製，#V9103X，Promega中量測GSK3β抑制。 人類GSK3β (自SF21細胞表現且純化)由University Dundee/Scotland (James Hastie博士-生物化學系，51.05 KDa，#899)在50 mM Tris (pH7.5)、150 mM NaCl、0.1 mM EGTA、270 mM Succrose、0.1% ß-巰基乙醇、1 mM苄脒、0.2 mM PMSF中獲得。 將酶稀釋至0.63 mg/ml (12.34 μM)，以等分試樣形式儲存於-80℃中。
方法：
分析緩衝液(50 mM Hepes，pH 7.5、10 mM MgCl
2
、1 mM EGTA、0.01% Brij35、0.1% BSA)係由儲備溶液製備，儲存在4℃下。所有緩衝液及試劑均平衡至室溫。在即將使用之前稀釋酶及ATP。 將測試化合物溶解於DMSO中達到10 mM濃度且儲存在-20℃下。 以6之稀釋因數在DMSO中製備10 mM化合物儲備液之連續稀釋液。以使得最終分析起始濃度呈50 µM之1:2預稀釋或其他適用預稀釋因素將化合物儲備液用於連續稀釋液。最終DMSO濃度為1%。 用1:40之稀釋將連續稀釋液(8濃度)轉移至分析緩衝液。 將4 µl此等化合物之緩衝液稀釋液添加至384孔optiplate (384孔培養盤，optiplate白色，平坦底部，#6007290，Perkin Elmer)中。 陽性對照物及陰性對照物含有亦以1:40稀釋於分析緩衝液中之DMSO，4 µl/孔。 His-GSK3β稀釋於分析緩衝液中，使濃度達到最終濃度(最終= 2 nM)的2.5倍，將4 微升/孔添加至化合物預稀釋液中且達到高值。將不含酶之分析緩衝液添加至陰性對照物中。 由於酶上之自體磷酸化，因此不需要受質。 對Optiplate進行離心(短暫旋轉)、輕微搖晃、用蓋子加以遮蓋且在室溫下培育60分鐘。 ATP (超純ATP，10 mM #V915B，Promega)稀釋於分析緩衝液中，使濃度達到最終濃度(最終= 7 µM)的5倍，將2 微升/孔添加至化合物與酶之混合物中，亦達到高值及低值。 對Optiplate進行離心(短暫旋轉)、輕微搖晃、用蓋子加以遮蓋且在室溫下培育90分鐘。 將10 µl ADP-Glo試劑(ADP-Glo試劑#V912B Promega)添加至所有孔中以除去未使用之ATP。藉由輕微搖晃混合培養盤，培育60分鐘之時間，用蓋子加以遮蓋。 將20 µl激酶偵測試劑(溶解於激酶偵測緩衝液#V913B Promega中之激酶偵測受質#V914B Promega)添加至所有孔中以將ADP轉變成在激酶反應期間產生之ATP。藉由輕微搖晃混合培養盤，培育40分鐘之時間，用頂密封件密封，加以避光。 用Envision發光讀取器(Perkin-Elmer)讀取培養盤。
資料評估及計算 ：
讀取器之輸出檔案為含有孔編號及所測RLU的csv檔案。對於資料評估及計算而言，陰性對照物之量測結果設定為0% ctrl且陽性對照物之量測結果設定為100% ctrl。可使用Assay Explorer軟體(例如Accelrys)，根據此等值來計算用於量測各物質濃度的%值。通常，% ctrl計算值在0%與100%值之間，但在個別情況下，根據變化性或化合物特徵，亦可超出此等範圍。使用Assay Explorer軟體，由% ctrl值計算IC
50
值。計算：[y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d]，a =低值，d =高值；x =濃度M；c=IC50 M；b =峰；y = % ctrl。 本發明之化合物為SYK抑制劑且不應影響諸如GSK3β之其他激酶，其通常由較佳＞ 5000 nMol且更佳＞ 10000 nMol之大IC
50 ( GSK3β )
值反映。
5 . 6 人類肝臟微粒體穩定性測試
此外，需要如上所述之具有足夠SYK特異性之SYK抑制劑具有一定代謝穩定性，其如例如在人類肝臟微粒體存在下對應於Q
h
＜ 23%所量測，其中Q
h
為肝臟血流量百分比(穩定性愈好，Q
h
值愈低)。若所述SYK抑制劑之Q
h
值過高(大於23%)，則其將難以在待治療之患者中達到相應SYK抑制劑之足夠血漿水準。
方法：
特定SYK抑制劑之代謝性降解係在37℃下經由合併的人類肝臟微粒體(人類肝臟微粒體可以「BD UltraPool
TM
」購自Corning Life Sciences, Fogostraat 12, 1060 LJ Amsterdam, The Netherlands)進行。每個時間點之100 µl最終培育體積中含有TRIS緩衝液pH 7.6 (室溫，0.1 M)、氯化鎂(5 mM)、微粒體蛋白(1 mg/ml)及最終濃度為1 μM之測試化合物。 在37℃下短時間預培育之後，藉由添加還原形式之β-菸醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，1 mM)來起始反應，且藉由在不同時間點之後將等分試樣轉移至溶劑中來終止反應。此外，在無NADPH存在之情況下培育時監測不依賴於NADPH之降解，且在最後時間點終止。 隨後藉由離心(10000 g，5 min)使經淬滅(終止)的培育物集結成球粒。 藉由LC-MS/MS分析上清液等分試樣中的母化合物剩餘量。藉由濃度-時間曲線之半對數圖的斜率來測定半衰期(
t1 / 2 活體外
)。
資料評估及計算 ：
藉由考慮蛋白質在培育液中之量來計算內源性清除率(
CL _ 內源性
)：
CL_ 內源性
[微升/分鐘/毫克蛋白質] = (Ln 2 / (
t1/2 活體外
[分鐘] *
蛋白質含量
[mg/ml])) * 1000 使用Sigma Aldrich之「雙金雞納酸套組(Bicinchoninic Acid Kit)」(市購)測定
蛋白質含量
[mg/ml]。 藉由考慮
肝臟重量
[公克肝臟/公斤體重]及
微粒體回收率
[毫克蛋白質/公克肝臟]來計算按比例擴大的內源性清除率(
CL _ UP _ INT
)：
CL_UP_INT
[ml/min/kg] = 0.001 *
CL_ 內源性
*
肝臟重量
*
微粒體回收率
其中
微粒體回收率
= 45毫克蛋白質/公克肝臟 其中
肝臟重量
= 25.7 g公克肝臟/公斤體重 最後藉由考慮人類肝臟血流
Q
[ml/min/kg]來計算肝血流百分比(
% Qh
)：
% Qh
[%] =( (
Q
*
CL_UP_INT
)/(
Q
+
CL_UP_INT
)/
Q
)*100 其中 肝臟血流(
Q
) = 20.7 ml/min/kg。
5 . 7 人類肝細胞穩定性測試
除微粒體穩定性(章節5.6)外，量測本發明之化合物之代謝穩定性的較全面方式為如下文所述之人類肝細胞穩定性測試。在此，所述化合物之代謝性降解在人類肝細胞懸浮液中進行。 在含有5%物種血清之合適緩衝液系統(例如Dulbecco改良eagle培養基加3.5 µg 升糖素/500 mL、2.5 mg胰島素/500 mL及3.75 mg/500 mL氫皮質酮)中培育人類肝細胞(通常冷凍保存)。 在培育箱(37℃，10% CO
2
)中(通常)預培育30分鐘之後，將5 µl待測試之化合物溶液(80 µM；來自2 mM具有培養基以1:25稀釋之DMSO儲備溶液)添加至395 µl肝細胞懸浮液(細胞密度在0.25至5 Mio細胞/毫升範圍內，通常為1 Mio細胞/毫升；所述化合物最終濃度為1 µM，最終DMSO濃度為0.05%)中。 培育細胞六小時(培育箱，迴旋震盪器)，且在0、0.5、1、2、4及6小時時取出樣品(25 µl)。將樣品轉移至乙腈中，且藉由離心(5分鐘)集結。將上清液轉移至新的96深孔培養盤，在氮氣下蒸發且再懸浮。 藉由HPLC-MS/MS分析待測試之化合物的減少。
資料評估及計算 ：
Clint計算如下：CL_內源性 =劑量/ AUC = (C0/CD) / (AUD + clast/k) x 1000/60。 C0：培育中之初始濃度[µM]， CD：活細胞之細胞密度[10
6
個細胞/毫升]， AUD：資料下之面積[µM × h]， clast：最後一個資料點之濃度[µM]， k：所述化合物減少的回歸線之斜率[h-1]。 所計算之活體外肝內源性清除率可按比例擴大為活體內內源性肝清除率，且用於藉由使用肝臟模型(良好攪拌模型)來預測活體內肝血液清除率(CL)： CL_內源性_活體內[ml/min/kg] = (CL_內源性[微升/分鐘/10
6
個細胞] × 肝細胞含量[10
6
個細胞/公克肝臟] × 肝臟因數[公克/千克體重])/1000 CL [ml/min/kg] = CL_內源性_活體內[ml/min/kg]×肝血流量[ml/min/kg] / (CL_內源性_活體內[ml/min/kg]+肝血流量[ml/min/kg]) Q
h
[%] = CL [ml/min/kg] /肝血流量[ml/min/kg]) 肝細胞含量，人類：120 × 10
6
個細胞/公克肝臟 肝臟因數，人類：25.7公克/千克體重 血流量，人類：21 ml/(min × kg) 藉由此分析量測的所述化合物之令人滿意的肝細胞肝細胞穩定性係由＜ 20%之Q
h
表示(其中穩定性愈好，Q
h
值愈低)。
表 1
：實例化合物及其與SYK抑制、SYK選擇性及代謝穩定性相關之特性(如以實驗方式所測定)
表2：結構上最接近之先前技術化合物(如WO 15017610中所揭示)及其與SYK抑制、SYK選擇性及代謝穩定性相關之特性(如以實驗方式所測定)
第1號至第22號本發明之實例化合物(參見表1)已根據第4章合成，且隨後如第5章中所述對該等實例化合物進行不同分析以加以測定。 • SYK抑制能力(低IC
50
值表示良好SYK抑制作用，具體而言，「SYK抑制分析」中的＜ 10 nMol之IC
50
值及「CD63分析」中的＜ 150 nMol之EC
50
值表示令人滿意之SYK抑制性) • SYK選擇性，其意謂對其他激酶抑制作用極低，該等其他激酶諸如 a) 極光B (良好SYK選擇性由與AURB抑制相關之「高」IC
50
值反映； ＞ 10000之IC
50 ( AURB )
或＞ 10000 nMol之IC
50 ( AURB )
/IC
50 ( SYK )
比為所期望的且表示良好SYK選擇性)， b) FLT3(良好SYK選擇性由與FLT3抑制相關之「高」IC
50
值反映，＞ 1000 nMol之IC
50 ( FLT3 )
為所期望的且表示良好SYK選擇性)， • 代謝穩定性，其可例如藉由人類肝細胞中之Q
h
百分比量測(%Q
h
＜ 20表示研發作為藥物之SYK抑制劑之足夠代謝穩定性)。 亦已合成如WO15017610中所揭示的結構上最接近之先前技術化合物且進行如第5章中所述之相同分析以測定此等結構上最接近之先前技術化合物與SYK抑制能力、CD63效能、SYK選擇性及代謝穩定性相關之特性且將其與本發明之實例化合物進行比較。 儘管WO15017610之第506頁之實例5.20、WO15017610之第196頁之實例3A.02、WO15017610之第559頁之實例6.09及WO15017610之第219頁之實例3B.22均具有可接受之IC
50 ( SYK )
值，其中在「SYK抑制分析」中IC
50 ( SYK )
＜ 10 nMol且在「CD63分析」中EC
50
＜ 150 nMol，但此等先前技術化合物均未顯示出與AURB相關之令人滿意的SYK選擇性。此等先前技術化合物之IC
50 ( AURB )
為162 nMol、1692 nMol、37 nMol及771 nMol，明顯小於均具有＞ 10000 nMol之IC
50 ( AURB )
(其中大多數甚至具有＞ 15000 nMol之IC
50 ( AURB )
)的本發明之實例化合物的IC
50 ( AURB )
。對於先前技術實例5.20、3A.02、6.09及3B.22之IC
50 ( AURB )
/ IC
50 ( SYK )
比同樣如此，其呈810、891、370及964，均明顯低於10000。然而，本發明之實例化合物的IC
50 ( AURB )
/ IC
50 ( SYK )
＞10000，甚至極通常＞ 15000。 此外，WO15017610之第506頁之實例5.20、WO15017610之第196頁之實例3A.02、WO15017610之第559頁之實例6.09及WO15017610之第219頁之實例3B.22均未顯示出與FLT3相關之令人滿意的SYK選擇性。 WO15017610之第506頁之實例5.20、WO15017610之第196頁之實例3A.02、WO15017610之第559頁之實例6.09及WO15017610之第219頁之實例3B.22的先前技術化合物之IC
50 ( FLT3 )
為43 nMol、384 nMol、25 nMol及307 nMol，明顯小於均具有＞ 1000 nMol之 IC
50 ( FLT3 )
(其中大多數甚至具有＞ 2000 nMol之IC
50 ( FLT3 )
)的本發明之實例化合物的IC
50 ( FLT3 )
。 相比於IC
50 ( AURB )
＞ 50000 nMol且IC
50 ( FLT - 3 )
= 6677 nMol的WO15017610之第587頁之先前技術化合物6.60至少根據絕對量測結果似乎具有足夠SYK選擇性，然而此先前技術化合物6.60 (WO15017610之第587頁)之SYK抑制能力對於10.3 nMol之IC
50 ( SYK )
(IC
50 ( SYK )
大於10 nMol)及CD63分析中的483 nMol EC
50 ( SYK )
(CD63分析中的EC
50
大於150 nMol)並不足夠。 因此，僅本發明之化合物同時具有 a)極佳SYK抑制能力(IC
50(SYK)
＜ 10 nMol，EC
50
＜ 150 nMol) b)良好SYK選擇性(IC
50(AURB)
＞10000 nMol且IC
50(AURB)
/ IC
50(SYK)
＞ 10000且IC
50(FLT3)
＞1000 nMol))及 c)足夠代謝穩定性(人類肝細胞中%Q
h
＜ 20) 其均為對使用SYK抑制劑作為藥物來治療SYK相關疾病極為重要的特性。
6. 適應症
如已發現，式
1
或式
1 '
化合物藉由其在治療領域中的應用範圍來表徵。特別應提及較佳基於根據本發明之式
1
或式
1 '
化合物作為SYK抑制劑之醫藥活性對其加以使用的彼等應用。實例包括呼吸性疾病、過敏性疾病、骨質疏鬆症、胃腸疾病或不適、免疫或自體免疫疾病、過敏性疾病、發炎疾病(例如關節、皮膚及眼之發炎疾病)及周邊或中樞神經系統之疾病。 特別應提及呼吸道及肺病之預防及治療，該等疾病伴有呼吸道之黏液產生增加、發炎及/或阻塞性疾病。此等疾病之實例包括哮喘、兒科哮喘、ARDS(成人呼吸窘迫症候群)、急性、過敏性或慢性支氣管炎、自體免疫溶血性貧血、慢性阻塞性支氣管炎(COPD)(包括鼻病毒誘發惡化之治療)、咳嗽、過敏性鼻炎或竇炎、過敏性鼻結膜炎、慢性鼻炎或竇炎、肺泡炎、農夫肺、超反應性呼吸道、感染性支氣管炎或肺炎、支氣管擴張症、肺動脈高血壓、肺纖維化、支氣管水腫、肺水腫；各種原因(諸如吸氣、吸入毒性氣體)所觸發之肺炎或間質性肺炎；或心機能不全、輻射、化學療法所觸發之支氣管炎、肺炎或間質性肺炎；囊腫性纖維化或黏液黏稠病、α1-抗胰蛋白酶缺乏症。 根據本發明之化合物亦較佳適用於治療過敏性疾病，諸如過敏性鼻炎、過敏性鼻結膜炎、過敏性結膜炎及接觸性皮炎、風疹/血管性水腫及過敏性皮炎。 亦應提及胃腸道發炎疾病之治療。此等疾病之實例為克羅恩氏病及潰瘍性結腸炎。 根據本發明之化合物亦較佳適用於治療關節、血管及腎臟之發炎疾病或皮膚及眼之發炎疾病。此等疾病之實例為類風濕性關節炎、基於抗體之絲球體腎炎、牛皮癬、川崎症候群、腹腔病(口炎性)、動脈硬化及韋格納氏肉芽腫病、骨關節炎、全身性硬皮病、僵直性脊椎炎。 根據本發明之化合物亦較佳適用於治療自體免疫疾病。此等疾病之實例為肝炎(基於自體免疫)、紅斑狼瘡、狼瘡腎炎、全身性狼瘡、全身性紅斑狼瘡、盤狀狼瘡、皮膚紅斑狼瘡(急性、亞急性、慢性)、抗磷脂症候群、伯格氏疾病、伊文斯氏症候群、免疫溶血性貧血、ITP (特發性血小板減少性紫癜；成人新生兒及兒科)、重症肌無力、休格連氏症候群、硬皮病、大皰性類天疱瘡及尋常天疱瘡。 根據本發明之化合物亦較佳適用於治療B細胞淋巴瘤、類慢性淋巴球性白血病及非霍奇金氏淋巴瘤、華氏巨球蛋白血症(Clinical Cancer Research (2015), 21(11), 2538-2545)或T細胞淋巴瘤。 根據本發明之化合物亦較佳適用於治療移植物抗宿主病。 較佳亦可提及周邊或中樞神經系統疾病之預防及治療。此等疾病之實例為急性及慢性多發性硬化或非家族性側索硬化。 亦應較佳提及全身性硬化症(SSc)之治療。Pamuk Omer Nuri; Can Guray; Ayvaz Suleyman; Karaca Turan; Demirtas Selim; Pamuk Gulsum E; Tsokos George, Clinical and experimental rheumatology (2015); ISSN:0392-856X。 亦應較佳提及感染性疾病之治療。此等疾病之實例為瘧疾(Abstracts, Joint 41st Great Lakes and 46th Central Regional Meeting of the American Chemical Society, GrandRapids, MI, United States, 五月27-30 (2015), JGLCRM-283; WO 2014100113)及登革熱(Journal of Biological Chemistry, 第290卷, 第28期, 第17306至17320頁) 較佳亦可提及骨質疏鬆疾病(諸如疾病相關性骨質減少、骨質疏鬆症及溶骨性疾病)之預防及治療。 本發明尤其較佳係關於式
1
化合物的用途，係用於製備供治療選自以下之疾病的醫藥組合物：哮喘、COPD、過敏性鼻炎、成人呼吸窘迫症候群、支氣管炎、過敏性皮炎、接觸性皮炎、ITP、類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、狼瘡腎炎及過敏性鼻結膜炎。 式
1
化合物最佳可用於治療選自以下之疾病：哮喘、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、狼瘡腎炎、過敏性皮炎及COPD。
7. 組合
式
1
或式
1 '
化合物可獨立地使用或結合根據本發明之其他式
1
或式
1 '
活性物質使用。 式
1
或式
1 '
化合物亦可視情況結合其他藥理學活性物質使用。較佳地，此處所用的活性物質可選自例如β模擬劑、抗膽鹼激導性劑、皮質類固醇、PDE4抑制劑、LTD4拮抗劑、EGFR抑制劑、MRP4抑制劑、多巴胺促效劑、H1抗組織胺、PAF拮抗劑、iNos抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑(抑制素(statin))、PI3激酶抑制劑、CCR3拮抗劑、CCR2拮抗劑、CCR1拮抗劑、IKK2抑制劑、A2a促效劑、α-4-整合素抑制劑、CRTH2拮抗劑、組織胺1、組合之H1/H3拮抗劑、p38激酶抑制劑、甲基黃嘌呤、ENaC抑制劑、CXCR1拮抗劑、CXCR2拮抗劑、ICE抑制劑、LTB4拮抗劑、5-LO拮抗劑、FLAP拮抗劑。LTB4拮抗劑；克莫欣(cromoglycine)、解離糖皮質激素模擬劑、免疫抑制劑、細胞抑制劑(cytostatica)、非類固醇消炎藥(NSAID)、氯奎(chloroquine)、羥基氯奎、抗TNF抗體、抗GM-CSF抗體、抗CD46抗體、抗IL-1抗體、抗IL-2抗體、抗IL-4抗體、抗IL-5抗體、抗IL6抗體、抗IL6受體抗體、抗IL-13抗體、抗IL-18抗體、抗CD30 L抗體、抗Ox40L抗體、抗IL-4/IL-13抗體、抗IL-23 (p19)抗體、抗IL-12/IL-23 (p40 )抗體、抗CD3抗體、抗CD4抗體、抗CD154抗體、CD89抗體、抗IL-2受體/CD25抗體、抗CD22抗體、抗干擾素抗體、抗ICOS抗體、抗CD20抗體、抗CD40抗體、抗BAFF/BLyS抗體、抗CD18抗體、抗CD62L抗體、抗CD147抗體、抗整合素抗體、LFA-1干擾劑、IL-36路徑調節劑、M-CSF/c-fms拮抗劑、CTLA-4融合體、mTor調節劑、Toll樣受體7抑制劑(TLR7抑制劑)、Toll樣受體9抑制劑(TLR9抑制劑)、諸如CTLA-4融合體之T細胞協同刺激調節劑、JAK抑制劑、IRF調節劑、CX3趨化激素受體拮抗劑(CX3CR1拮抗劑)、IRAK抑制劑(尤其IRAK1-抑制劑及IRAK4抑制劑)、神經鞘胺醇-1-磷酸調節劑(S1P路徑調節劑)、對抗PDGFR、FGFR及VEGFR之三重激酶抑制劑(例如，尼達尼布(Nintedanib))或其兩者或三者組合，諸如選自以下之一種、兩種或三種化合物之組合： · 式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑、β模擬劑、皮質類固醇、EGFR抑制劑及PDE4拮抗劑， · 式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑、抗膽鹼激導性劑、β模擬劑、皮質類固醇、EGFR抑制劑及PDE4拮抗劑， · 式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑、PDE4抑制劑、皮質類固醇及EGFR抑制劑， · 式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑、EGFR抑制劑及PDE4抑制劑， · 式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑及EGFR抑制劑， · 式
1
之SYK抑制劑、β模擬劑及抗膽鹼激導性劑， · 式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑、抗膽鹼激導性劑、β模擬劑、皮質類固醇及PDE4抑制劑， · 式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑、抗膽鹼激導性劑、β模擬劑、皮質類固醇、iNOS抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑。 各選自上述化合物類別之一的三種活性物質之組合亦為本發明之一目標。 適合之β模擬劑較佳為選自以下之化合物：阿福莫特羅(arformoterol)、卡莫特羅(carmoterol)、福莫特羅(formoterol)、茚達特羅(indacaterol)、沙美特羅(salmeterol)、阿布特羅(albuterole)、班布特羅(bambuterol)、比托特羅(bitolterol)、溴沙特羅(broxaterol)、卡布特羅(carbuterol) 、克侖特羅(clenbuterol)、非諾特羅(fenoterol)、己烷雙異丙腎上腺素(hexoprenalin)、異丁特羅(ibuterol)、異他林(isoetharin)、異丙基腎上腺素(isoprenalin)、左沙丁胺醇(levosalbutamol)、馬布特羅(mabuterol)、美盧君(meluadrin)、間羥異丙腎上腺素(metaproterenol)、米沃特羅(milveterol)、奧希奈林(orciprenalin)、吡布特羅(pirbuterol)、丙卡特羅(procaterol)、茶丙特羅(reproterol)、利米特羅(rimiterol)、利托君(ritodrin)、沙甲胺醇(salmefamol)、索特瑞醇(soterenol)、沙芬特羅(sulphonterol)、特布他林(terbutalin)、噻拉米特(tiaramide)、妥布特洛(tolubuterol)、淨特羅(zinterol)、6-羥基-8-{1-羥基-2-[2-(4-甲氧基-苯基)-1,1-二甲基-乙胺基]-乙基}-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮、8-{2-[2-(2,4-二氟-苯基)-1,1-二甲基-乙胺基]-1-羥基-乙基}-6-羥基-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮、8-{2-[2-(3,5-二氟-苯基)-1,1-二甲基-乙胺基]-1-羥基-乙基}-6-羥基-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮、8-{2-[2-(4-乙氧基-苯基)-1,1-二甲基-乙胺基]-1-羥基-乙基}-6-羥基-4H-苯并、[1,4]噁嗪-3-酮、8-{2-[2-(4-氟-苯基)-1,1-二甲基-乙胺基]-1-羥基-乙基}-6-羥基-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮、N-(5-{2-[3-(4,4-二乙基-2-側氧基-4H-苯并[d][1,3]噁嗪-1-基)-1,1-二甲基-丙胺基]-1-羥基-乙基}-2-羥基-苯基)-甲烷磺醯胺、N-(5-{2-[3-(4,4-二乙基-6-氟-2-側氧基-4H-苯并[d][1,3]噁嗪、-1-基)-1,1-二甲基-丙胺基]-1-羥基-乙基}-2-羥基-苯基)-甲烷磺醯胺、N-(5-{2-[3-(4,4-二乙基-6-甲氧基-2-側氧基-4H-苯并[d][1,3]噁嗪-1-基)-1,1-二甲基-丙胺基]-1-羥基-乙基}-2-羥基-苯基)-甲烷磺醯胺、N-(5-{2-[1,1-二甲基-3-(2-側氧基-4,4-二丙基-4H-苯并[d][1,3]噁嗪-1-基)-丙胺基]-1-羥基-乙基}-2-羥基-苯基)-甲烷磺醯胺、8-{2-[1,1-二甲基-3-(2-側氧基-2,3-二氫-苯并咪唑-1-基)-丙胺基]-1-羥基-乙基}-6-羥基-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮、8-{2-[1,1-二甲基-3-(6-甲基-2-側氧基-2,3-二氫-苯并咪唑-1-基)-丙胺基]-1-羥基-乙基}-6-羥基-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮、8-{2-[1,1-二甲基-3-(2-側氧基-5-三氟甲基-2,3-二氫-苯并咪唑-1-基)-丙胺基]-1-羥基-乙基}-6-羥基-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮、8-{2-[1,1-二甲基-3-(3-甲基-2-側氧基-2,3-二氫-苯并咪唑-1-基)-丙胺基]-1-羥基-乙基}-6-羥基-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮、 N-[2-羥基-5-((1R)-1-羥基-2-{2-[4-(2-羥基-2-苯基-乙胺基)-苯基]-乙胺基}-乙基)-苯基]-甲醯胺、8-羥基-5-((1R)-1-羥基-2-{2-[4-(6-甲氧基-聯苯-3-基胺基)-苯基]-乙胺基}-乙基)-1H-喹啉-2-酮、8-羥基-5-[(1R)-1-羥基-2-(6-苯乙基胺基-己胺基)-乙基]-1H-喹啉-2-酮、5-[(1R)-2-(2-{4-[4-(2-胺基-2-甲基-丙氧基)-苯胺基]-苯基}-乙胺基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮、[3-(4-{6-[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-3-羥甲基-苯基)-乙胺基]-己氧基}-丁基)-5-甲基-苯基]-脲、4-((1R)-2-{6-[2-(2,6-二氯-苄氧基)-乙氧基]-己胺基}-1-羥基-乙基)-2-羥甲基-酚；3-(4-{6-[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-3-羥甲基-苯基)-乙胺基]-己氧基}-丁基)-苯磺醯胺、3-(3-{7-[(2R)-2-羥基-2-(4-羥基-3-羥甲基-苯基)-乙胺基]-庚氧基}-丙基)-苯磺醯胺、4-((1R)-2-{6-[4-(3-環戊烷磺醯基-苯基)-丁氧基]-己胺基}-1-羥基-乙基)-2-羥甲基-酚、4-(2-{6-[2-(2,6-二氯-苄氧基)-乙氧基]-己胺基}-1-羥基-乙基)-2-羥甲基-酚、威蘭特羅(Vilanterol)、
N
-1-金剛烷基-2-{3-[(2R)-2-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥甲基)苯基]乙基}胺基)丙基]苯基}乙醯胺、2-(3-{2-[2-羥基-3-甲烷磺醯基胺基-苯基)-乙胺基]-丙基}-苯基)-N-[4-(4-羥基-苯基)-2-乙烯基-五-2,4-二烯基]-乙醯胺、(1R)-5-{2-[6-(2,2-二氟-2-苯基-乙氧基)-己胺基-1-羥基-乙基}-8-羥基-1H-喹啉-2-酮、(R,S)-4-(2-{[6-(2,2-二氟-4-苯基丁氧基)己基]胺基}-1-羥基-乙基)-2-(羥甲基)苯酚、(R,S)-4-(2-{[6-(2,2-二氟-2-苯基乙氧基)己基]胺基}-1-羥基-乙基)-2-(羥甲基)苯酚、(R,S)-4-(2-{[4,4-二氟-6-(4-苯基丁氧基)己基]胺基}-1-羥基-乙基)-2-(羥甲基)苯酚、(R,S)-4-(2-{[6-(4,4-二氟-4-苯基丁氧基)己基]胺基}-1-羥基-乙基)-2-(羥甲基)苯酚、(R,S)-5-(2-{[6-(2,2-二氟-2-苯基乙氧基)己基]胺基}-1-羥基-乙基)-8-羥基喹啉-2(1H)-酮、(R,S)-[2-({6-[2,2-二氟-2-(3-甲基苯基)乙氧基]己基}胺基)-1-羥乙基]-2-(羥甲基)苯酚、4-(1R)-2-{[6-(2,2-二氟-2-苯基乙氧基)己基]胺基}-1-羥乙基)-2-(羥甲基)苯酚、(R,S)-2-(羥甲基)-4-(1-羥基-2-{[4,4,5,5-四氟-6-(3-苯基丙氧基)己基]胺基}乙基)苯酚、(R,S)-[5-(2-{[6-(2,2-二氟-2-苯基乙氧基)己基]胺基}-1-羥基-乙基)-2-羥苯基]甲醯胺、(R,S)-4-[2-({6-[2-(3-溴苯基)-2,2-二氟乙氧基]己基}胺基)-1-羥乙基]-2-(羥甲基)苯酚、(R, S)-N-[3-(1,1-二氟-2-{[6-({2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥甲基)苯基]乙基}胺基)己基]氧基}乙基)苯基]-脲、3-[3-(1,1-二氟-2-{[6-({2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥甲基)苯基]乙基}胺基)己基]氧基}乙基)苯基]咪唑啶-2,4-二酮、(R,S)-4-[2-({6-[2,2-二氟-2-(3-甲氧苯基)乙氧基]己基}胺基)-1-羥乙基]-2-(羥甲基)苯酚、5-((1R)-2-{[6-(2,2-二氟-2-苯基乙氧基)己基]胺基}-1-羥乙基)-8-羥基喹啉-2(1H)-酮、4-((1R)-2-{[4,4-二氟-6-(4-苯基丁氧基)己基]胺基}-1-羥基-乙基)-2-(羥甲基)苯酚、(R,S)-4-(2-{[6-(3,3-二氟-3-苯基丙氧基)己基]胺基}-1-羥基-乙基)-2-(羥甲基)苯酚、(R,S)-(2-{[6-(2,2-二氟-2-苯基乙氧基)-4,4-二氟己基]胺基}-1-羥乙基)-2-(羥甲基)苯酚、(R,S)-4-(2-{[6-(2,2-二氟-3-苯基丙氧基)己基]胺基}-1-羥基乙基)-2-(羥甲基)苯酚、3-[2-(3-氯-苯基)-乙氧基]-N-(2-二乙胺基-乙基)-N-{2-[2-(4-羥基-2-側氧基-2,3-二氫-苯并噻唑-7-基)-乙胺基]-乙基}-丙醯胺、N-(2-二乙胺基-乙基)-N-{2-[2-(4-羥基-2-側氧基-2,3-二氫-苯并噻唑-7-基)-乙胺基]-乙基}-3-(2-萘-1-基-乙氧基)-丙醯胺、7-[2-(2-{3-[2-(2-氯-苯基)-乙胺基]-丙基硫基}-乙胺基)-1-羥基-乙基]-4-羥基-3H-苯并噻唑-2-酮，其視情況呈外消旋物、對映異構體、非對映異構體形式且視情況呈其藥理學上可接受之酸加成鹽、溶劑合物或水合物形式。 根據本發明，β模擬劑之酸加成鹽較佳選自鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、甲烷磺酸氫鹽、硝酸氫鹽、順丁烯二酸氫鹽、乙酸氫鹽、檸檬酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽、酒石酸氫鹽、草酸氫鹽、丁二酸氫鹽、苯甲酸氫鹽及對甲苯磺酸氫鹽，較佳為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽及甲烷磺酸氫鹽。在上述酸加成鹽中，根據本發明尤其較佳為鹽酸、甲烷磺酸、苯甲酸及乙酸之鹽。 所用抗膽鹼激導性劑較佳為選自以下之化合物： 噻托銨鹽(tiotropium salt)，尤其溴化鹽、氧托銨鹽(oxitropium salt)，尤其溴化鹽、氟托銨鹽，尤其溴化鹽、異丙托銨鹽，尤其溴化鹽、阿地銨鹽(Aclidinium salt)，尤其溴化鹽、格隆銨鹽(glycopyrronium salt)，尤其溴化鹽、曲司銨鹽(trospium salt)，尤其氯化鹽、托特羅定(tolterodin)，(3R)-1-苯乙基-3-(9H-二苯并哌喃-9-羰氧基)-1-氮鎓雙環并[2.2.2]辛鹽；2,2-二苯基丙酸托品醇酯-甲溴化物；2,2-二苯基丙酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；2-氟-2,2-二苯基乙酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；2-氟-2,2-二苯基乙酸托品醇酯-甲溴化物；3,3',4,4'-四氟二苯基乙醇酸托品醇酯-甲溴化物；3,3',4,4'-四氟二苯基乙醇酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；4,4'-二氟二苯基乙醇酸托品醇酯-甲溴化物；4,4'-二氟二苯基乙醇酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；3,3'-二氟二苯基乙醇酸托品醇酯-甲溴化物；3,3'-二氟二苯基乙醇酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；9-羥基-茀-9-甲酸托品醇酯-甲溴化物；9-氟-茀-9-甲酸托品醇酯-甲溴化物；9-羥基-茀-9-甲酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；9-氟-茀-9-甲酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；9-甲基-茀-9-甲酸托品醇酯-甲溴化物；9-甲基-茀-9-甲酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；二苯基乙醇酸環丙基托品鹼酯-甲溴化物；2,2-二苯基丙酸環丙基托品鹼酯-甲溴化物；9-羥基-二苯并哌喃-9-甲酸環丙基托品鹼酯-甲溴化物；9-甲基-茀-9-甲酸環丙基托品鹼酯-甲溴化物；9-甲基-二苯并哌喃-9-甲酸環丙基托品鹼酯-甲溴化物；9-羥基-茀-9-甲酸環丙基托品鹼酯-甲溴化物；4,4'-二氟二苯基乙醇酸甲酯環丙基托品鹼酯-甲溴化物；9-羥基-二苯并哌喃-9-甲酸托品醇酯-甲溴化物；9-羥基-二苯并哌喃-9-甲酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；9-甲基-二苯并哌喃-9-甲酸托品醇酯-甲溴化物；9-甲基-二苯并哌喃-9-甲酸茛菪品鹼酯-甲溴化物；9-乙基-二苯并哌喃-9-甲酸托品醇酯-甲溴化物；9-二氟甲基-二苯并哌喃-9-甲酸托品醇酯-甲溴化物；9-羥甲基-二苯并哌喃-9-甲酸茛菪品鹼酯-甲溴化物； 3-[2-(3-氯-苯基)-乙氧基]-N-(2-二乙胺基-乙基)-N-{2-[2-(4-羥基-2-側氧基-2,3-二氫-苯并噻唑-7-基)-乙胺基]-乙基}-丙醯胺； N-(2-二乙胺基-乙基)-N-{2-[2-(4-羥基-2-側氧基-2,3-二氫-苯并噻唑-7-基)-乙胺基]-乙基}-3-(2-萘-1-基-乙氧基)-丙醯胺； 7-[2-(2-{3-[2-(2-氯-苯基)-乙胺基]-丙基硫基}-乙胺基)-1-羥基-乙基]-4-羥基-3H-苯并噻唑-2-酮及達托品(Darotropium)； 其視情況呈其溶劑合物或水合物形式。 在上述鹽中，陽離子噻托銨、氧托銨、氟托銨、異丙托銨、格隆銨、阿地銨及曲司銨為藥理學活性成分。作為陰離子，上述鹽較佳可含有氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根、磷酸根、甲烷磺酸根、硝酸根、順丁烯二酸根、乙酸根、檸檬酸根、反丁烯二酸根、酒石酸根、草酸根、丁二酸根、苯甲酸根或對甲苯磺酸根，而氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根、甲烷磺酸根或對甲苯磺酸根較佳為相對離子。在所有鹽中，氯離子、溴離子、碘離子及甲烷磺酸根尤其較佳。 特別重要的為噻托溴銨。在噻托溴銨之情況下，根據本發明之醫藥組合較佳含有自WO 02/30928所知之呈單水合結晶噻托溴銨形式的噻托溴銨。若根據本發明之醫藥組合中使用呈無水形式的噻托溴銨，則較佳使用自WO 03/000265所知的無水結晶噻托溴銨。 此處所用的皮質類固醇較佳為選自以下之化合物： 倍氯米松(beclomethasone)、倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、布替可特(butixocort)、環索奈德(ciclesonide)、地夫可特(deflazacort)、地塞米松(dexamethasone)、艾潑諾(etiprednole)、氟尼縮松(flunisolide)、氟替卡松(fluticasone)、氯替潑諾(loteprednole)、糠酸莫米松(mometasone)、潑尼龍(prednisolone)、潑尼松(prednisone)、羅氟奈德(rofleponide)、曲安西龍(triamcinolone)、替潑尼旦(tipredane)；(6-α,11-β,16-α)-6-氟-11-羥基-16,17-[(1-甲基亞乙基)雙(氧基)]-21-[[4-[(硝氧基)甲基])苯甲醯基]氧基]-孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮(9CI)( Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 6-fluoro-11-hydroxy-16,17-[(1-methylethylidene) bis(oxy)]-21-[[4-[(nitrooxy)methyl]benzoyl]oxy]-, (6-alpha,11-beta,16-alpha)- (9CI))；16,17-亞丁基二氧基-6,9-二氟-11-羥基-17-(甲硫基)雄固-4-烯-3-酮；6,9-二氟-17-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11-羥基-16-甲基-3-側氧基-雄固-1,4-二烯-17-甲硫酮酸(S)-氟甲酯；(S)-氟甲基6,9-二氟-17-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11-羥基-16-甲基-3-側氧基-雄固-1,4-二烯-17-甲硫磺酸酯；6-α,9-α-二氟-11-β-羥基-16α-甲基-3-側氧基-17α-(2,2,3,3-四甲基環丙基羰基)氧基-雄固-1,4-二烯-17β-甲酸氰基甲酯，其各視情況呈其外消旋物、對映異構體或非對映異構體形式且視情況呈其鹽及衍生物、溶劑合物及/或水合物形式。 類固醇尤其較佳選自布地奈德、氟替卡松、糠酸莫米松、環索奈德及(S)-6,9-二氟-17-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11-羥基-16-甲基-3-側氧基-雄固-1,4-二烯-17-甲硫磺酸氟甲酯，其視情況呈其外消旋物、對映異構體或非對映異構體形式且視情況呈其鹽及衍生物、溶劑合物及/或水合物形式。 對類固醇的任何提及均包括提及可存在的其任何鹽或衍生物、水合物或溶劑合物。 類固醇之可能鹽或衍生物之實例可為其鹼金屬鹽(諸如鈉鹽或鉀鹽)、磺基苯甲酸鹽、磷酸鹽、異菸酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、磷酸二氫鹽、棕櫚酸鹽、新戊酸鹽或糠酸鹽。 可使用之PDE4抑制劑較佳為選自以下之化合物：英洛菲林(enprofyllin)、茶鹼(theophyllin)、羅氟司特(roflumilast)、艾利福(ariflo)(西洛司特(cilomilast))、托菲司特(tofimilast)、布馬芬林(pumafentrin)、里拉司特(lirimilast)、阿普司特(apremilast)、阿羅茶鹼(arofyllin)、阿替唑侖(atizoram)、奧利司特(oglemilast)、替托司特(tetomilast)；5-[(N-(2,5-二氯-3-吡啶基)-羧醯胺]-8-甲氧基-喹啉(D-4418)；5-[N-(3,5-二氯-1-氧離子基-4-吡啶基)-羧醯胺]-8-甲氧基-2-(三氟甲基)-喹啉(D-4396 (Sch-351591))；N-(3,5-二氯吡啶-4-基)-[1-(4-氟苯甲基)-5-羥基-吲哚-3-基]乙醛酸醯胺(AWD-12-281 (GW-842470))；9-[(2-氟苯基)甲基]-N-甲基-2-(三氟甲基)-9H-嘌呤-6-胺(NCS-613)；4-[(2R)-2-[3-(環戊氧基)-4-甲氧苯基]-2-苯基乙基]-吡啶(CDP-840)；N-[(3R)-3,4,6,7-四氫-9-甲基-4-側氧基-1-苯基吡咯[3,2,1-jk][1,4]苯并二氮呯-3-基]-4-吡啶甲醯胺(PD-168787)；4-[6,7-二乙氧基-2,3-雙(羥甲基)-1-萘基]-1-(2-甲氧乙基)-2(1H)-吡啶酮(T-440)；2-[4-[6,7-二乙氧基-2,3-雙(羥甲基)-1-萘基]-2-吡啶基]-4-(3-吡啶基)-1(2H)-酞嗪酮(T-2585)；(3-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯甲基)-6-乙胺基-8-異丙基-3H-嘌呤(V-11294A)；β-[3-(環戊氧基)-4-甲氧苯基]-1,3-二氫-1,3-二側氧基-2H-異吲哚-2-丙醯胺(CDC-801)；9-乙基-2-甲氧基-7-甲基-5-丙基-咪唑并[1,5-a]吡啶并[3,2-e]吡嗪-6(5H)-酮(D-22888)；(3S,5S)-5-[3-(環戊氧基)-4-甲氧苯基]-3-[(3-甲基苯基)甲基]-2-哌啶酮(HT-0712)；4-[1-[3,4-雙(二氟甲氧基)苯基]-2-(3-甲基-1-氧離子基-4-吡啶基)乙基]-α,α-雙(三氟甲基)-苯甲醇(L-826141)；N-(3,5-二氯-1-側氧基-吡啶-4-基)-4-二氟甲氧基-3-環丙基甲氧基苯甲醯胺；(-)p-[(4
a
R*,10
b
S*)-9-乙氧基-1,2,3,4,4a,10b-六氫-8-甲氧基-2-甲基苯并[s][1,6]
啶-6-基]-N,N-二異丙基苯甲醯胺；(R)-(+)-1-(4-溴苄基)-4-[(3-環戊氧基)-4-甲氧苯基]-2-吡咯啶酮；3-(環戊氧基-4-甲氧基苯基)-1-(4-N'-[N-2-氰基-S-甲基-異硫脲基]苄基)-2-吡咯啶酮；順[4-氰基-4-(3-環戊氧基-4-甲氧苯基)環己烷-1-甲酸]；2-甲氧羰基-4-氰基-4-(3-環丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環己-1-酮；順[4-氰基-4-(3-環丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環己-1-醇]；(R)-(+)-乙基[4-(3-環戊氧基-4-甲氧苯基)吡咯啶-2-亞基]乙酸；(S)-(-)-乙基[4-(3-環戊氧基-4-甲氧苯基)吡咯啶-2-亞基]乙酸；9-環戊基-5,6-二氫-7-乙基-3-(2-噻吩基)-9
H -
吡唑并[3,4-c]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶；9-環戊基-5,6-二氫-7-乙基-3-(第三丁基)-9
H
-吡唑并[3,4-c]-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶， 其視情況呈外消旋物、對映異構體或非對映異構體形式且視情況呈其藥理學上可接受之酸加成鹽、溶劑合物及/或水合物形式。 上述PDE4抑制劑可在某一位置與藥理學上可接受之酸形成的酸加成鹽意謂例如選自以下之鹽：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、甲烷磺酸氫鹽、硝酸氫鹽、順丁烯二酸氫鹽、乙酸氫鹽、苯甲酸氫鹽、檸檬酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽、酒石酸氫鹽、草酸氫鹽、丁二酸氫鹽、苯甲酸氫鹽及對甲苯磺酸氫鹽，較佳為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽及甲烷磺酸氫鹽。 可使用之LTD4拮抗劑較佳為選自以下之化合物：孟魯司特(montelukast)、普魯司特(pranlukast)、紮魯司特(zafirlukast)；(E)-8-[2-[4-[4-(4-氟苯基)丁氧基]苯基]乙烯基]-2-(1H-四唑-5-基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(MEN-91507)；4-[6-乙醯基-3-[3-(4-乙醯基-3-羥基-2-丙基苯硫基)丙氧基]-2-丙基苯氧基]-丁酸(MN-001)；1-(((R)-(3-(2-(6,7-二氟-2-喹啉基)乙烯基)苯基)-3-(2-(2-羥基-2-丙基)苯基)硫基)甲基環丙烷-乙酸；1-(((1(R)-3(3-(2-(2,3-二氯噻吩并[3,2-b]吡啶-5-基)-(E)-乙烯基)苯基)-3-(2-(1-羥基-1-甲基乙基)苯基)丙基)硫基)甲基)環丙烷乙酸；[2-[[2-(4-第三丁基-2-噻唑基)-5-苯并呋喃基]氧基甲基]苯基]乙酸， 其視情況呈外消旋物、對映異構體或非對映異構體形式，視情況呈其藥理學上可接受之酸加成鹽形式且視情況呈其鹽及衍生物、溶劑合物及/或水合物形式。 LTD4拮抗劑可能夠與藥理學上可接受之酸形成的酸加成鹽意謂例如選自以下之鹽：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、甲烷磺酸氫鹽、硝酸氫鹽、順丁烯二酸氫鹽、乙酸氫鹽、苯甲酸氫鹽、檸檬酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽、酒石酸氫鹽、草酸氫鹽、丁二酸氫鹽、苯甲酸氫鹽及對甲苯磺酸氫鹽，較佳為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽及甲烷磺酸氫鹽。 LTD4拮抗劑可能夠形成的鹽或衍生物意謂例如鹼金屬鹽，諸如鈉或鉀鹽；鹼土金屬鹽、磺基苯甲酸鹽、磷酸鹽、異菸酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、磷酸二氫鹽、棕櫚酸鹽、特戊酸鹽或糠酸鹽。 所使用之EGFR抑制劑較佳為選自以下之化合物：4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二乙胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二甲胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-{[4-(嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環戊氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{[4-((R)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{[4-((R)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)氧基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{[4-((R)-2-甲氧基甲基-6-側氧基-嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[2-((S)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-乙氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-({4-[N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-胺基]-1-側氧基-2-丁烯-1-基}胺基)-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二甲胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環戊氧基-喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-{[4-(N,N-雙-(2-甲氧基-乙基)-胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-({4-[N-(2-甲氧基-乙基)-N-乙基-胺基]-1-側氧基-2-丁烯-1-基}胺基)-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-({4-[N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-胺基]-1-側氧基-2-丁烯-1-基}胺基)-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-({4-[N-(四氫哌喃-4-基)-N-甲基-胺基]-1-側氧基-2-丁烯-1-基}胺基)-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-({4-[N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-胺基]-1-側氧基-2-丁烯-1-基}胺基)-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-({4-[N-(四氫哌喃-4-基)-N-甲基-胺基]-1-側氧基-2-丁烯-1-基}胺基)-7-環丙基甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二甲胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-((R)-四氫呋喃-3-基氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二甲胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-({4-[N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-胺基]-1-側氧基-2-丁烯-1-基}胺基)-7-環戊氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N-環丙基-N-甲基-胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-環戊氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二甲胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-[(R)-(四氫呋喃-2-基)甲氧基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二甲胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-[(S)-(四氫呋喃-2-基)甲氧基]-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6,7-雙-(2-甲氧基-乙氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-7-[3-(嗎啉-4-基)-丙氧基]-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-(4-羥基-苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、3-氰基-4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二甲胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-乙氧基-喹啉、4-{[3-氯-4-(3-氟-苄氧基)-苯基]胺基}-6-(5-{[(2-甲烷磺醯基-乙基)胺基]甲基}-呋喃-2-基)喹唑啉、4-[(R)-(1-苯基-乙基)胺基]-6-{[4-((R)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-[(四氫呋喃-2-基)甲氧基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-({4-[N,N-雙-(2-甲氧基-乙基)-胺基]-1-側氧基-2-丁烯-1-基}胺基)-7-[(四氫呋喃-2-基)甲氧基]-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-{[4-(5.5-二甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[2-(2.2-二甲基-6-側氧基-嗎啉-4-基)-乙氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[2-(2.2-二甲基-6-側氧基-嗎啉-4-基)-乙氧基]-7-[(R)-(四氫呋喃-2-基)甲氧基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-[2-(2.2-二甲基-6-側氧基-嗎啉-4-基)-乙氧基]-6-[(S)-(四氫呋喃-2-基)甲氧基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{2-[4-(2-側氧基-嗎啉-4-基)-哌啶-1-基]-乙氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[1-(第三-丁氧基羰基)-哌啶-4-基氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(反-4-胺基-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(反-4-甲烷磺醯基胺基-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(四氫哌喃-3-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(嗎啉-4-基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(甲氧基甲基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(哌啶-3-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[1-(2-乙醯胺基-乙基)-哌啶-4-基氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(四氫哌喃-4-基氧基)-7-乙氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)-7-羥基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(四氫哌喃-4-基氧基)-7-(2-甲氧基-乙氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{反-4-[(二甲胺基)磺醯基胺基]-環己烷-1-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{反-4-[(嗎啉-4-基)羰胺基]-環己烷-1-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{反-4-[(嗎啉-4-基)磺醯基胺基]-環己烷-1-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、 4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(四氫哌喃-4-基氧基)-7-(2-乙醯胺基-乙氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(四氫哌喃-4-基氧基)-7-(2-甲烷磺醯基胺基-乙氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(哌啶-1-基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-胺基羰基甲基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、 4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(順-4-{N-[(四氫哌喃-4-基)羰基]-N-甲基-胺基}-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(順-4-{N-[(嗎啉-4-基)羰基]-N-甲基-胺基}-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-{2-[4-(3-氯-4-氟-苯胺基)-7-甲氧基-喹唑啉-6-基氧基]-乙基}-6-甲基-嗎啉-2-酮、4-{4-[4-(3-氯-2-氟-苯胺基)-7-甲氧基-喹唑啉-6-基氧基]-環己基}-1-甲基-哌嗪-2-酮、 4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(順-4-{N-[(嗎啉-4-基)磺醯基]-N-甲基-胺基}-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(反-4-乙烷磺醯基胺基-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-甲烷磺醯基-哌啶-4-基氧基)-7-乙氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-甲烷磺醯基-哌啶-4-基氧基)-7-(2-甲氧基-乙氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[1-(2-甲氧基-乙醯基)-哌啶-4-基氧基]-7-(2-甲氧基-乙氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(順-4-乙醯胺基-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-[1-(第三-丁氧基羰基)-哌啶-4-基氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-(四氫哌喃-4-基氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(順-4-{N-[(哌啶-1-基)羰基]-N-甲基-胺基}-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(順-4-{N-[(4-甲基-哌嗪-1-基)羰基]-N-甲基-胺基}-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{順-4-[(嗎啉-4-基)羰胺基]-環己烷-1-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[2-(2-側氧基吡咯啶-1-基)乙基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(嗎啉-4-基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-(2-甲氧基-乙氧基)-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-(1-乙醯基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-(1-甲烷磺醯基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-7(2-甲氧基-乙氧基)-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-異丙氧羰基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(順-4-甲胺基-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{順-4-[N-(2-甲氧基-乙醯基)-N-甲基-胺基]-環己烷-1-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-(哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-[1-(2-甲氧基-乙醯基)-哌啶-4-基氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-乙炔基-苯基)胺基]-6-{1-[(嗎啉-4-基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(順-2,6-二甲基-嗎啉-4-基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(2-甲基-嗎啉-4-基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(S,S)-(2-氧雜-5-氮雜-雙環[2,2,1]庚-5-基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(N-甲基-N-2-甲氧乙基-胺基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-乙基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(2-甲氧乙基)羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{1-[(3-甲氧基丙基-胺基)-羰基]-哌啶-4-基氧基}-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[順-4-(N-甲烷磺醯基-N-甲基-胺基)-環己烷-1-基氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[順-4-(N-乙醯基-N-甲基-胺基)-環己烷-1-基氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(反-4-甲胺基-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[反-4-(N-甲烷磺醯基-N-甲基-胺基)-環己烷-1-基氧基]-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(反-4-二甲胺基-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(反-4-{N-[(嗎啉-4-基)羰基]-N-甲基-胺基}-環己烷-1-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-[2-(2.2-二甲基-6-側氧基-嗎啉-4-基)-乙氧基]-7-[(S)-(四氫呋喃-2-基)甲氧基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-甲烷磺醯基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-(1-氰基-哌啶-4-基氧基)-7-甲氧基-喹唑啉、3-氰基-4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-6-{[4-(N,N-二甲胺基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-乙氧基-喹啉、[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-6-{[4-(高嗎啉-4-基)-1-側氧基-2-丁烯-1-基]胺基}-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)氧基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-(2-{4-[(S)-(2-側氧基-四氫呋喃-5-基)羰基]-哌嗪-1-基}-乙氧基)-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-[2-((S)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-乙氧基]-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-[4-((R)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-丁氧基]-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-[4-((S)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-丁氧基]-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-(2-{4-[(S)-(2-側氧基-四氫呋喃-5-基)羰基]-哌嗪-1-基}-乙氧基)-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-[2-((S)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-乙氧基]-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-[4-((R)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-丁氧基]-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-[4-((S)-6-甲基-2-側氧基-嗎啉-4-基)-丁氧基]-6-[(乙烯基羰基)胺基]-喹唑啉、西妥昔單抗(cetuximab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、帕尼單抗(panitumumab) (=ABX-EGF)、Mab ICR-62、吉非替尼(gefitinib)、培利替尼(pelitinib)、卡奈替尼(canertinib)及埃羅替尼(erlotinib)，其視情況呈其外消旋物、對映異構體或非對映異構體形式，視情況呈其藥理學上可接受之酸加成鹽、其溶劑合物及/或水合物形式。 EGFR抑制劑可能夠與藥理學上可接受之酸形成的酸加成鹽意謂例如選自以下之鹽：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、甲烷磺酸氫鹽、硝酸氫鹽、順丁烯二酸氫鹽、乙酸氫鹽、苯甲酸氫鹽、檸檬酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽、酒石酸氫鹽、草酸氫鹽、丁二酸氫鹽、苯甲酸氫鹽及對甲苯磺酸氫鹽，較佳為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽及甲烷磺酸氫鹽。 可使用之多巴胺促效劑之實例較佳包括選自以下之化合物：溴麥角環肽(bromocriptine)、卡麥角林(cabergoline)、α-二氫麥角隱亭(alpha-dihydroergocryptine)、麥角乙脲(lisuride)、培高利特(pergolide)、普拉克索(pramipexol)、洛剋星多(roxindol)、羅匹尼羅(ropinirol)、他利克索(talipexol)、特麥角脲(terguride)及維爾松(viozan)。在本發明範疇內，對上述多巴胺促效劑的任何提及均包括提及其可存在的任何藥理學上可接受之酸加成鹽及視情況存在之水合物。可由上述多巴胺促效劑形成之生理學上可接受之酸加成鹽意謂例如醫藥學上可接受之鹽，其係選自鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲烷磺酸、乙酸、反丁烯二酸、丁二酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸及順丁烯二酸之鹽。 H1抗組織胺之實例較佳包括選自以下之化合物：依匹斯汀(epinastine)、西替利嗪(cetirizine)、氮拉斯汀(azelastine)、菲索芬那定(fexofenadine)、左卡巴司汀(levocabastine)、洛拉他定(loratadine)、咪唑司汀(mizolastine)、酮替芬(ketotifen)、依美斯汀(emedastine)、撲爾敏(dimetinden)、氯馬斯汀(clemastine)、巴米品(bamipin)、右氯苯拉敏(cexchlorpheniramine)、苯吡胺(pheniramine)、苯吡拉明(doxylamine)、氯苯沙明(chlorophenoxamine)、茶苯海明(dimenhydrinate)、苯海拉明(diphenhydramine)、普魯米近(promethazine)、依巴司汀(ebastine)、奧洛他定(olopatadine)、地氯雷他定(desloratidine)及美克洛嗪(meclozine)。在本發明範疇內，對上述H1抗組織胺的任何提及均包括提及可存在的任何藥理學上可接受之酸加成鹽。 PAF拮抗劑之實例較佳包括選自以下之化合物：來昔帕泛(lexipafant)、4-(2-氯苯基)-9-甲基-2-[3(4-嗎啉基)-3-丙酮-1-基]-6H-噻吩并-[3,2-f]-[1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮呯、6-(2-氯苯基)-8,9-二氫-1-甲基-8-[(4-嗎啉基)羰基]-4H,7H-環戊并[4,5]噻吩并-[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮呯。在本發明範疇內，對上述PAF拮抗劑的任何提及均包括提及其可存在的任何藥理學上可接受之酸加成鹽。 非類固醇消炎藥(NSAID)之實例較佳包括選自以下之化合物：醋氯芬酸(Aceclofenac)、阿西美辛(Acemetacin)、乙醯水楊酸(Acetylsalicylsäure)、阿氯芬酸(Alclofenac)、阿明洛芬(Alminoprofen)、胺芬酸(Amfenac)、安吡昔康(Ampiroxicam)、安妥汀哌(Antolmetinguacil)、阿尼羅酸(Anirolac)、安曲芬寧(Antrafenin)、氮丙腙(Azapropazon)、苯力拉特(Benorilat)、柏莫洛芬(Bermoprofen)、賓達利(Bindarit)、溴芬酸(Bromfenac)、布剋星(Bucloxinsäure)、布考龍(Bucolom)、丁苯羥酸(Bufexamac)、布瑪迪腙(Bumadizon)、布替布芬(Butibufen)、布替西拉(Butixirat)、卡巴拉鈣(Carbasalatcalcium)、卡洛芬(Carprofen)、膽鹼三水楊酸鎂(Cholin Magnesium Trisalicylat)、塞內昔布(Celecoxib)、桂美辛(Cinmetacin)、辛西康(Cinnoxicam)、環氯茚酸(Clidanac)、氯丁紮利(Clobuzarit)、地波沙美(Deboxamet)、右布洛芬(Dexibuprofen)、右酮洛芬(Dexketoprofen)、雙氯芬酸(Diclofenac)、二氟尼柳(Diflunisal)、屈噁昔康(Droxicam)、依爾替酸(Eltenac)、恩芬胺(Enfenaminsäure)、艾特薩拉(Etersalat)、依託度酸(Etodolac)、艾妥芬嗎(Etofenamat)、依他昔布(Etoricoxib)、非羅布腙(Feclobuzon)、聯苯乙酸(Felbinac)、芬布芬(Fenbufen)、芬氯酸(Fenclofenac)、非諾洛芬(Fenoprofen)、芬替酸(Fentiazac)、非普地醇(Fepradinol)、非普拉腙(Feprazon)、氟羅布芬(Flobufen)、氟羅芬寧(Floctafenin)、氟芬胺(Flufenaminsäure)、氟苯柳(Flufenisal)、氟諾洛芬(Flunoxaprofen)、氟比洛芬(Flurbiprofen)、氟比普芬(Flurbiprofenaxetil)、呋羅芬酸(Furofenac)、氟普芬(Furprofen)、葡美辛(Glucametacin)、異丁芬酸(Ibufenac)、布洛芬(Ibuprofen)、吲哚布芬(Indobufen)、吲哚美辛(Indometacin)、吲哚美辛法尼酯(Indometacinfarnesil)、吲哚洛芬(Indoprofen)、伊索克酸(Isoxepac)、伊索昔康(Isoxicam)、酮基布洛芬(Ketoprofen)、酮咯酸(Ketorolac)、氯苯紮利(Lobenzarit)、氯那唑酸(Lonazolac)、氯諾昔康(Lornoxicam)、洛索洛芬(Loxoprofen)、盧米羅可(Lumiracoxib)、米羅芬胺(Meclofenaminsäure)、米羅芬(Meclofen)、美芬胺(Mefenaminsäure)、美洛昔康(Meloxicam)、美沙嗪(Mesalazin)、咪洛芬(Miroprofen)、莫苯唑酸(Mofezolac)、萘丁美酮(Nabumeton)、萘普生(Naproxen)、尼氟敏(Nifluminsäure)、奧薩拉嗪(Olsalazin)、奧沙普嗪(Oxaprozin)、奧西平(Oxipinac)、氧芬布腙(Oxyphenbutazon)、帕瑞昔布(Parecoxib)、苯丁腙(Phenylbutazon)、哌魯雙芬(Pelubiprofen)、皮美普芬(Pimeprofen)、吡拉唑酸(Pirazolac)、皮羅西康(Priroxicam)、吡洛芬(Pirprofen)、普拉洛芬(Pranoprofen)、皮非龍(Prifelon)、皮諾莫(Prinomod)、丙谷美辛(Proglumetacin)、普羅誇腙(Proquazon)、普羅嗪寧(Protizininsäure)、羅非考昔(Rofecoxib)、氯馬紮利(Romazarit)、水楊醯胺(Salicylamid)、水楊酸(Salicylsäure)、沙米斯坦(Salmistein)、沙那西定(Salnacedin)、沙沙那(Salsalat)、舒林酸(Sulindac)、舒多昔康(Sudoxicam)、舒洛芬(Suprofen)、他尼氟嗎(Talniflumat)、替尼達普(Tenidap)、替諾柳(Tenosal)、替諾昔康(Tenoxicam)、替泊沙林(Tepoxalin)、替普芬(Tiaprofensäure)、他拉米(Taramid)、替羅普芬(Tilnoprofenarbamel)、替米加啶(Timegadin)、替諾啶(Tinoridin)、硫平酸(Tiopinac)、托芬胺(Tolfenaminsäure)、托美丁(Tolmetin)、烏芬嗎(Ufenamat)、伐地考昔(Valdecoxib)、西莫普芬(Ximoprofen)、紮托洛芬(Zaltoprofen)及唑利洛芬(Zoliprofen)。 所用MRP4抑制劑較佳為選自以下的化合物：
N
-乙醯基-二硝基苯基-半胱胺酸、cGMP、膽酸鹽、雙氯芬酸(diclofenac)、脫氫表雄酮3-葡萄糖苷酸、脫氫表雄酮3-硫酸酯、地拉齊普(dilazep)、二硝基苯基-
s
-麩胱甘肽、雌二醇17-β-葡萄糖苷酸、雌二醇3,17-二硫酸酯、雌二醇3-葡萄糖苷酸、雌二醇3-硫酸酯、雌酮3-硫酸酯、氟比洛芬(flurbiprofen)、葉酸鹽、N5-甲醯基-四氫葉酸酯、甘膽酸鹽、葡糖石膽酸硫酸酯、布洛芬、吲哚美辛、吲哚洛芬、酮基布洛芬、石膽酸硫酸酯、甲胺喋呤(methotrexate)、((
E
)-3-[[[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-[[3-二甲胺基)-3-側氧基丙基]硫基]甲基]硫基]-丙酸)、α-萘基-β-D-葡萄糖苷酸、硝基苯甲基巰基嘌呤核苷、丙磺舒(probenecid)、西地那非(sildenafil)、苯磺唑酮(sulfinpyrazone)、牛磺鵝去氧膽酸酯(taurochenodeoxycholate)、牛磺膽酸酯(taurocholate)、牛磺去氧膽酸酯、牛磺石膽酸酯、牛磺石膽酸硫酸酯、拓朴替康(topotecan)、曲喹辛(trequinsin)及紮普司特(zaprinast)、雙嘧達莫(dipyridamole)，其視情況呈其外消旋物、對映異構體、非對映異構體及藥理學上可接受之酸加成鹽及水合物形式。 JAK抑制劑之實例較佳包括選自托法替尼(Tofacitinib)及蘆可替尼(Ruxolitinib)之化合物。 免疫抑制劑之實例較佳包括選自黴酚酸嗎啉乙酯(mycophenolate mofetil)、黴酚酸(mycophenolic acid)、硫唑嘌呤(azathioprine)、環孢靈(cyclosporine)、他克莫司(tacrolimus)、吡美莫司(pimecrolimus)、阿貝莫司(abetimus)、胍立莫司(gusperimus)及來氟米特(leflunomide)之化合物。 細胞抑制劑實例為環磷醯胺。 本發明更佳係關於製備MRP4抑制劑的用途，其係用於製備供治療呼吸性不適之醫藥組合物，其含有根據本發明之式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑及MRP4抑制劑，該等MRP4抑制劑較佳選自脫氫表雄酮3-硫酸酯、雌二醇3,17-二硫酸酯、氟比洛芬、吲哚美辛、吲哚洛芬、牛磺膽酸酯，其視情況呈其外消旋物、對映異構體、非對映異構體及藥理學上可接受之酸加成鹽及水合物形式。自外消旋物分離對映異構體可使用此項技術中已知的方法(例如對掌性相層析等)進行。 與藥理學上可接受之酸形成的酸加成鹽意謂例如選自以下之鹽：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、甲烷硫酸氫鹽、硝酸氫鹽、順丁烯二酸氫鹽、乙酸氫鹽、苯甲酸氫鹽、檸檬酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽、酒石酸氫鹽、草酸氫鹽、丁二酸氫鹽、苯甲酸氫鹽及對甲苯磺酸氫鹽，較佳為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸氫鹽、反丁烯二酸氫鹽及甲烷硫酸氫鹽。 本發明進一步係關於含有根據本發明之以下三重組合的醫藥製劑：式
1
或式
1 '
之SYK抑制劑、MRP4抑制劑及另一種活性物質，諸如抗膽鹼激導性劑、PDE4抑制劑、類固醇、LTD4拮抗劑或β模擬劑；及其製備；及其用於治療呼吸性不適的用途。 可作為iNOS抑制劑使用的化合物為選自以下之化合物：S-(2-胺基乙基)異硫脲、胺基胍、2-胺基甲基吡啶、5,6-二氫-6-甲基-4H-1,3-噻嗪-2-胺(=AMT)、L-刀豆胺酸、2-亞胺基哌啶、S-異丙基異硫脲、S-甲基異硫脲、S-乙基異硫脲、S-甲基硫瓜胺酸、S-乙基硫瓜胺酸、L-NA (N
ω
-硝基-L-精胺酸)、L-NAME (N
ω
-硝基-L-精胺酸甲酯)、L-NMMA (N
G
-單甲基-L-精胺酸)、L-NIO (N
ω
-亞胺基乙基-L-鳥胺酸)、L-NIL (N
ω
-亞胺基乙基-離胺酸)、(S)-6-乙醯胺基胺基-2-胺基-己酸(1
H
-四唑-5-基)-醯胺(SC-51) (
J. Med. Chem.
2002,
45
, 1686-1689)、N-[[3-(胺甲基)苯基]甲基]-乙脒(=1400W)、(S)-4-(2-乙醯胺基胺基-乙基硫基)-2-胺基-丁酸(GW274150) (
Bioorg. Med. Chem. Lett.
2000,
10
, 597-600)、2-[2-(4-甲氧基-吡啶-2-基)-乙基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(BYK191023) (
Mol. Pharmacol.
2006,
69
, 328-337)、2-((R)-3-胺基-1-苯基-丙氧基)-4-氯-5-氟苄腈(WO 01/62704)、2-((1R,3S)-3-胺基-4-羥基-1-噻唑-5-基-丁基硫基)-6-三氟甲基-菸鹼腈(WO 2004/041794)、2-((1R,3S)-3-胺基-4-羥基-1-噻唑-5-基-丁基硫基)-4-氯-苯甲腈(WO 2004/041794)、2-((1R,3S)-3-胺基-4-羥基-1-噻唑-5-基-丁基硫基)-5-氯-苄腈(WO 2004/041794)、(2S,4R)-2-胺基-4-(2-氯-5-三氟甲基-苯基硫基)-4-噻唑-5-基-丁-1-醇(WO 2004/041794)、2-((1R,3S)-3-胺基-4-羥基-1-噻唑-5-基-丁基硫基)-5-氯-菸鹼腈(WO 2004/041794)、4-((S)-3-胺基-4-羥基-1-苯基-丁基硫基)-6-甲氧基-菸鹼腈(WO 02/090332)、經取代之3-苯基-3,4-二氫-1-異喹啉胺(諸如(1S,5S,6R)-7-氯-5-甲基-2-氮雜-雙環[4.1.0]庚-2-烯-3-基胺(ONO-1714)(
Biochem. Biophys. Res. Commun
. 2000,
270
, 663-667)、(4R,5R)-5-乙基-4-甲基-噻唑啶-2-亞基胺(
Bioorg. Med. Chem.
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12
, 4101)、(4R,5R)-5-乙基-4-甲基-硒氮-2-亞基胺(
Bioorg. Med. Chem. Lett.
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15
, 1361)、4-胺基四氫生物蝶呤(
Curr. Drug Metabol.
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3
, 119-121)、(E)-3-(4-氯-苯基)-
N
-(1-{2-側氧基-2-[4-(6-三氟甲基-嘧啶-4-基氧基)-哌啶-1-基]-乙基胺甲醯基}-2-吡啶-2-基-乙基)-丙烯醯胺(FR260330) (
Eur. J. Pharmacol.
2005,
509
, 71-76)、3-(2,4-二氟-苯基)-6-[2-(4-咪唑-1-基甲基-苯氧基)-乙氧基]-2-苯基-吡啶(PPA250) (
J. Pharmaco Exp. Ther.
2002,
303
, 52-57)、3-{[(苯并[1,3]二氧雜環戊烯-5-基甲基)-胺甲醯基]-甲基}-4-(2-咪唑-1-基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸酯(BBS-1) (
Drugs Future
2004,
29
, 45-52)、(R)-1-(2-咪唑-1-基-6-甲基-嘧啶-4-基)-吡咯啶-2-甲酸 (2-苯并[1,3]二氧雜環戊烯-5-基-乙基)-醯胺(BBS-2) (
Drugs Future
2004,
29
, 45-52)及其醫藥鹽、前藥或溶劑合物。 在本發明範疇內，iNOS抑制劑之實例亦可包括反義寡核苷酸，尤其結合編碼iNOS之核酸的彼等反義寡核苷酸。 舉例而言，WO 01/52902描述反義寡核苷酸，尤其結合編碼iNOS之核酸的反義寡核苷酸，用於調節iNOS之表現。如WO 01/52902中特定描述的iNOS反義寡核苷酸由於其與iNOS抑制劑的類似作用，因此亦可與本發明之PDE4抑制劑組合。 較佳可與式1化合物雙重或三重組合使用的適合HMG-CoA還原酶抑制劑(亦稱為抑制素)係選自阿托伐他汀(Atorvastatin)、西立伐他汀(Cerivastatin)、氟伐他汀(Flurvastatin)、洛伐他汀(Lovastatin)、匹伐他汀(Pitavastatin)、普伐他汀(Pravastatin)、羅素他汀(Rosuvastatin)、辛伐他汀(Simvastatin)，其視情況呈其醫藥學上可獲得之酸加成鹽、前藥、溶劑合物或水合物形式。
8. 調配物
根據本發明之式
1
或式
1 '
化合物亦具有製造適合醫藥劑型所需之特性。此等特性包括例如與活性成分之足夠生物可用性相關之特性，尤其其足夠高之可溶性，諸如在pH 6.8之水溶液中所量測的＞ 2 µg/ml之可溶性。 適用於投藥的形式為例如錠劑、膠囊、溶液、糖漿、乳液或可吸入粉末或噴霧劑。在各情況下，醫藥學上有效化合物之含量應在總組合物之0.1至90 wt%範圍內，較佳在0.5至50 wt%範圍內，亦即呈足以達成下文中指定之劑量範圍的量。 製劑可以錠劑、粉末、膠囊(例如硬明膠膠囊)中之粉末、溶液或懸浮液形式經口投與。藉由吸入投與時，活性物質組合可以粉末、水溶液或乙醇水溶液形式或使用推進劑氣體調配物來給予。 因此，醫藥調配物較佳藉由根據上述較佳實施例之一或多種式
1
或式
1 '
化合物之含量來表徵。 式
1
或式
1 '
化合物經口投與尤其較佳，且其一天投與一次或兩次亦尤其較佳。適合錠劑可如下獲得：例如將活性物質與已知賦形劑(例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、磷酸鈣或乳糖；崩解劑，諸如玉米澱粉或海藻酸；黏合劑，諸如澱粉或明膠；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或滑石；及/或用於延遲釋放之藥劑，諸如羧甲基纖維素、鄰苯二甲酸乙酸纖維素或聚乙酸乙烯酯)混合。錠劑亦可包含若干層。 因此，包衣錠劑可藉由用通常用於錠劑包衣之物質(例如可力酮(collidone)或蟲膠、阿拉伯膠、滑石、二氧化鈦或糖)包覆類似於錠劑所產生之核心來製備。為達成延遲釋放或防止不相容性，核心亦可由多個層組成。類似地，可使用上文針對錠劑所提及之賦形劑，錠劑包衣可由多個層組成以達成延遲釋放。 根據本發明，含有活性物質或其組合之糖漿可額外含有甜味劑，諸如糖精、賽克拉美(cyclamate)、甘油或糖；及風味增強劑，例如，諸如香草精或橙子萃取物之調味劑。其亦可含有懸浮佐劑或增稠劑，諸如羧甲基纖維素鈉；濕潤劑，諸如脂肪醇與環氧乙烷之縮合產物；或防腐劑，諸如對羥基苯甲酸酯。 含有一或多種活性物質或活性物質組合之膠囊可例如藉由混合活性物質與諸如乳糖或山梨醇之惰性載劑且將其填充入明膠膠囊製備。適合栓劑可例如藉由與出於此目的而提供之載劑(諸如中性脂肪或聚乙二醇或其衍生物)混合來製造。 可使用之賦形劑包括例如水；醫藥學上可接受之有機溶劑，諸如石蠟(例如石油餾分)、植物油(例如花生油或芝麻油)、單官能性或多官能性醇(例如乙醇或甘油)；載劑，諸如天然礦物粉末(例如高嶺土、黏土、滑石、白堊)、合成礦物粉末(例如高度分散性矽酸及矽酸鹽)、糖(例如蔗糖、乳糖及葡萄糖)、乳化劑(例如木質素、廢亞硫酸液體、甲基纖維素、澱粉及聚乙烯吡咯啶酮)及潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石、硬脂酸及月桂基硫酸鈉)。 當然，經口投與時，除上述載劑之外，錠劑亦可含有諸如檸檬酸鈉、碳酸鈣及磷酸二鈣之添加劑，以及諸如澱粉(較佳馬鈴薯澱粉)、明膠及其類似物之各種添加劑。此外，在製錠製程中，可同時使用諸如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉及滑石之潤滑劑。在含水懸浮液之情況下，活性物質可與除上述賦形劑外之各種風味增強劑或著色劑組合。 若式
1
或式
1 '
化合物藉由吸入投與，則亦較佳；若其一天投與一次或兩次，則尤其較佳。出於此目的，式
1
或式
1 '
化合物須以適於吸入的形式利用。可吸入製劑包括可吸入粉末、含推進劑定量噴霧劑或無推進劑的可吸入溶液，其視情況與生理學上可接受之習知賦形劑混合存在。 在本發明範疇內，術語無推進劑的可吸入溶液亦包括濃縮物或即用型無菌可吸入溶液。可根據本發明使用之製劑更詳細地描述於本說明書之後續部分中。
可吸入粉末
若式
1
或式
1 '
之活性物質與生理學上可接受之賦形劑混合存在，則可使用以下生理學上可接受之賦形劑來製備根據本發明之可吸入粉末：單醣(例如葡萄糖或阿拉伯糖)、雙醣(例如乳糖、蔗糖、麥芽糖)、寡醣及多醣(例如葡聚糖)、多元醇(例如山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇)、鹽(例如，氯化鈉、碳酸鈣)或此等賦形劑彼此之混合物。較佳使用單醣或雙醣，而較佳使用特定而言(但非排他地)呈水合物形式的乳糖或葡萄糖。出於本發明之目的，乳糖為尤其較佳之賦形劑，而單水合乳糖尤其最佳。藉由研磨及微尺寸化以及最後將各組分混合在一起來製備根據本發明之可吸入粉末的方法自先前技術已知。
含推進劑的可吸入噴霧劑
可根據本發明使用的含推進劑之可吸入噴霧劑可含有溶解於推進劑氣體中或呈分散形式的式
1
或式
1 '
化合物。可用於製備根據本發明之吸入性噴霧劑的推進劑氣體自先前技術已知。適合推進劑氣體係選自烴類，諸如正丙烷、正丁烷或異丁烷；及鹵烴類，諸如甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、環丙烷或環丁烷之較佳氟化衍生物。上述推進劑氣體可獨立地或以其混合物使用。尤其較佳之推進劑氣體為氟化烷衍生物，其選自TG134a (1,1,1,2-四氟乙烷)、TG227 (1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)及其混合物。在根據本發明之用途範疇內使用的推進劑驅動性吸入性噴霧劑亦可含有其他成分，諸如共溶劑、穩定劑、界面活性劑、抗氧化劑、潤滑劑及pH調節劑。所有此等成分在此項技術中已知。
無推進劑的可吸入溶液
根據本發明之式
1
或式
1 '
化合物較佳用於製備無推進劑的可吸入溶液及可吸入懸浮液。用於此目的之溶劑包括水溶液或醇溶液，較佳為乙醇溶液。溶劑可為水本身或水與乙醇之混合物。使用適合酸將溶液或懸浮液調整至pH 2至7，較佳pH 2至5。可使用選自無機酸或有機酸之酸調整pH。特別適合之無機酸之實例包括鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸及/或磷酸。特別適合之有機酸之實例包括抗壞血酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、順丁烯二酸、丁二酸、反丁烯二酸、乙酸、甲酸及/或丙酸等。較佳無機酸為鹽酸及硫酸。亦可使用已與活性物質之一形成酸加成鹽的酸。在有機酸中，抗壞血酸、反丁烯二酸及檸檬酸較佳。若需要，亦可使用上述酸之混合物，尤其在酸具有除其酸化品質外之其他特性的情況下，例如作為調味劑、抗氧化劑或錯合劑，諸如檸檬酸或抗壞血酸。根據本發明，使用鹽酸調整pH尤其較佳。 可將共溶劑及/或其他賦形劑添加至用於根據本發明目的之無推進劑的可吸入溶液中。較佳共溶劑為含有羥基或其他極性基團的彼等共溶劑，例如醇，尤其異丙醇；二醇，尤其丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、醇醚、甘油、聚氧乙烯醇及聚氧乙烯脂肪酸酯。在此上下文中，術語賦形劑及添加劑表示藥理學上可接受之任何物質，其不為活性物質，但其可與活性物質一起於藥理學上適合溶劑中調配以便改良活性物質調配物之定性特性。 較佳地，此等物質不具有藥理學作用，或對於所需療法而言，無明顯的或至少無不合需要的藥理學作用。 賦形劑及添加劑包括例如界面活性劑，諸如大豆卵磷脂、油酸、脫水山梨糖醇酯(諸如聚山梨醇酯)、聚乙烯吡咯啶酮、其他穩定劑、錯合劑、抗氧化劑及/或防腐劑，從而保證或延長成品醫藥調配物、調味劑、維生素及/或此項技術中已知之其他添加劑的存放期。添加劑亦包括藥理學上可接受之鹽(諸如氯化鈉)作為等張劑。較佳賦形劑包括抗氧化劑，諸如抗壞血酸(限制條件為其已不用於調整pH)、維生素A、維生素E、生育酚及存在於人體中的類似維生素或維生素原。防腐劑可用於保護調配物以防病原體污染。適合防腐劑為此項技術中已知的彼等防腐劑，尤其氯化鯨蠟基吡錠、苯紮氯銨(benzalkonium chloride)或苯甲酸或苯甲酸鹽，諸如苯甲酸鈉，其濃度自先前技術已知。 對於上述治療形式而言，提供用於治療呼吸性不適的即用型藥包，該藥包含有包括例如詞語呼吸性疾病、COPD或哮喘的所附說明書，以及式
1
或式
1 '
之咪唑基-嘧啶及選自上述彼等物之一或多種組合搭配物。