本申請中所使用之術語
“烷基”
作為基團或基團的一部份，例如在烷氧基或羥基烷基中係指直鏈或側鏈烷基的所有異構體形態。術語“C
1
-C
4
烷基”如上述所定義，係指至少含有1個及最多含有4個碳原子之烷基。作為該種烷基的例子，包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基或第三丁基。作為該種烷氧基的例子，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基及第三丁氧基。 本申請中所使用之術語
“環烷基”
係指單環或雙環，包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、降冰片烯基及金剛烷基等，但並不限於此。 環丙基甲基和環戊基甲基如下： {化學式2}
術語
“鹵素”
係指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)，術語“鹵代”係指鹵素：氟代(-F)、氯代(-Cl)、溴代(-Br)及碘代(-I)。 本申請中所使用之術語
“ 鹵 代烷基”
係指被如上所定義之鹵原子取代之烷基，包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、2,2,2-三氯乙基、3-氟丙基、4-氟丁基、氯甲基、三氯甲基、碘甲基及溴甲基等，但並不限於此。 本申請中所使用之術語
“ 鹵 代烷氧基”
係指鹵代烷基-O-，包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、2-氟乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、2,2,2-三氯乙氧基、3-氟丙氧基、4-氟丁氧基、氯甲氧基、三氯甲氧基、碘甲氧基及溴甲氧基等，但並不限於此。 本申請中所使用之術語
“烷氧基”
係指O-烷基，其中，“烷基”如上所定義。 本申請中所使用之術語
“雜環”
係指包含一種以上的選自氮、氧及硫中之雜原子之飽和3-至16-元環。依據本發明的目的，雜環可以是單環、雙環或三環系，其可包括稠環系、橋環系或螺環系。該種雜環基的例子包括吖啶丁基、1,4-二氧雜環己基、吡咯烷基、呱啶基、哌嗪基、嗎啉基、四氫呋喃基、硫代嗎啉基、四氫噻吩基、2-氧代-吡咯烷基、2-氧代-呱啶基、2-氧代-咪唑烷基、2-氧代-噁唑烷基、奎寧環基、氮雜雙環[3.2.1]辛基、2-氧雜-6-氮雜螺[3.4]辛基及該等的N-氧化物和該等的S-氧化物。 本申請中所使用之術語
“芳基”
係指含碳原子之不飽和及部份飽和的6-至15-元環。 該種不飽和芳基的例子包括苯基、萘基、茚滿基、茚基、1,2,3,4-四氫萘基及1,2-二氫萘基，但並不限於此。 本申請中所使用之術語
“雜芳基”
係指含雜原子芳香族環稠合於非芳香族環例如雜環(heterocyclyl ring)或環烷基環之5-至15-元環，6-至15-元環為較佳，或者，係指芳基環稠合於雜環等含雜原子非芳香族環之5-至15-元環，6-至15-元環為較佳。 亦即，本申請所使用之術語“雜芳基”係指以下； 1)由1至5個選自氮、磷、氧及硫中之雜原子和碳原子所構成之不飽和及部份飽和的5-至15-元環，6-至15-元環為較佳。 2)雜環或環烷基環等非芳香族環稠合於上述定義之雜芳基之不飽及部份飽和的5-至15-元環，6-至15-元環為較佳。 3)芳基環稠合於雜環之不飽及部份飽和的5-至15-元環，6-至15-元環為較佳。 該種雜芳基的例子包括苯硫基、噻唑基、異噁唑基、吡唑基、四唑基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噁唑基、異噻唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并苯硫基、苯并三唑基、吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、呋喃并吡啶基、苯并異噁唑基、咪唑并吡嗪基、咪唑并噠嗪基、咪唑并嘧啶基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、酞嗪基、喹喔啉基、萘啶基、吡啶并嘧啶基及該等的N-氧化物和該等的S-氧化物，但並不限於此。 該種雜芳基的例子還包括包含以下環之雜芳基環基。 {化學式3}
本申請所使用之術語“
C0
”係指直接鍵合。 化學上容許時，本發明的化合物的環上的取代基可以存在於原子上。 本申請所使用之術語
“保護基”
係指選自文獻Protective Groups in Organic Synthesis Forth Edition edited by T. W. Greene et al
.
(John Wiley & Sons, 2006)所記載之典型羥基保護基或氨基保護基中之羥基保護基或氨基保護基。 本申請中所使用之術語
“治療之”
及
“治療”
係指逆轉、緩解、抑制適用上述術語之障礙或病症或前述種障礙或病症的一種以上病狀的進展，或者預防該等之治療、缓解及預防措施。 如果沒有特別提及，本申請中所使用之冠詞
“果”
或
“果”
係指其冠詞所提及之對象的單數形和複數形這兩者。 本說明書中，將符號文字記為相應的英語單詞。例如，α、β及δ分別記為alpha、beta及delta。
“本發明的化合物”
的範疇內包括通式(I)的化合物的所有鹽、溶劑化物、水合物、錯合物、多形體、前體藥物、放射性-標記衍生物、立體異構體及光學異構體。 通式(I)的化合物可形成其酸加成鹽。為了在藥物中使用，可領會通式(I)的化合物的鹽需在藥學上可接受。合適的藥學上可接受的鹽對本領域技術人員來講是周知的，包括如文獻：J. Pharm. Sci, 66, 1-19, 1977中所記載之由無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸或磷酸)及有機酸(例如琥珀酸、馬來酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、富馬酸、檸檬酸、酒石酸、苯甲酸、對甲苯磺酸、甲基磺酸或萘磺酸)形成之酸加成鹽。特定的通式(I)的化合物還可以與1當量以上的該酸形成酸加成鹽。本發明包括其範疇內所有可能的化學計量及非化學計量形態。並且，含有羧基之類的酸性官能基之特定化合物可分離為抗衡離子可選自鈉、鉀、鋰、鈣、鎂等及有機鹼之該等的無機鹼形態。 另外，通式(I)的化合物的所謂“前體藥物”亦包括在本發明的範疇內。因此，其本身可能幾乎或完全不具有藥理活性之通式(I)的化合物的特定衍生物當給藥於體內或體表時，例如可藉由水解性斷裂而轉化為具有目標活性之通式(I)的化合物。該種衍生物以“前體藥物”提及。關於前體藥物用途的追加資訊可在下述文獻中查看：Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and V Stella) and Bioreversible Carriers in Drug Design, Pergamon Press, 1987 (ed. E B Roche, American Pharmaceutical Association)。 本發明的前體藥物例如可藉由將通式(I)的化合物中所存在之適當的官能基用本領域技術人員周知的特定部份，例如文獻：Design of Prodrugs by H Bundgaard(Elsevier，1985)中所記載之“前-部份(pro-moieties)”置換而進行製造。本發明的前體藥物的一部份例子包括以下： (i)當通式(I)的化合物中含有醇官能基(-OH)時，羥基由在體內可轉化為羥基之部份置換之化合物。其中，前述在體內可轉化為羥基之部份係指，例如藉由水解和/或酶例如酯酶在體內可變換為羥基之部份。前述部份的例子包括在體內可容易水解之酯及醚基，但並不限於此。由醯氧基烷基、1-(烷氧基胺甲醯基氧基)烷基、酞基及醯氧基烷氧基胺甲醯基(例如第三戊醯氧基甲氧基胺甲醯基)置換羥基的氫之部份為較佳。 (ii)當通式(I)的化合物中含有胺基時，將藉由與合適的酸性鹵化物或合適的酸酐的反應而製備之胺衍生物作為前體藥物來舉例說明。作為前體藥物，尤為佳的胺衍生物為-NHCO(CH
2
)
2
OCH
3
、-NHCOCH(NH
2
)CH
3
等。 前述例子的置換基的追加例子及其他前體藥物類型的例子可在前述引用文獻中查看。 通式(I)的化合物、其鹽及其前體藥物可製備為晶質或無定形形態，晶質時可任意被水化或溶劑化。本發明的範疇內還包括化學計量水合物或溶劑化物及含有可變數量的水和/或溶劑之化合物。 具有非藥學上可接受的抗衡離子或聯合溶劑的鹽及溶劑化物包括在本發明的範疇內，例如在製備通式(I)的其他化合物及該等的藥學上可接受的鹽時用作中間體。 此外，通式(I)的化合物可以以前體藥物來給藥。本申請中所使用之術語，通式(I)的化合物的“前體藥物”係給藥於患者時終究在體內釋放通式(I)的化合物之化合物功能性衍生物。以前體藥物給藥通式(I)的化合物時，本領域技術人員可實施下列中的一種以上：(a)變更化合物的體內起效時間；(b)變更化合物的體內作用持續時間；(c)變更化合物的體內輸送或分佈；(d)變更化合物的體內溶解度；及(e)克服化合物所面臨之副作用或其他難點。使用於前體藥物的製備之典型的功能性衍生物包括在體內以化學方式或酶的方式裂解之化合物的變體。前述變體包括磷酸鹽、醯胺、酯、硫代酯、碳酸鹽及氨基甲酸鹽的製備，這對本領域技術人員來講是周知的。 特定的通式(I)的化合物中可存在一部份手性碳原子，在該種情況下，通式(I)的化合物作為立體異構體而存在。本發明包括對映異構體、非對映異構體及該等的混合物如外消旋體，還擴展到如通式(I)的化合物的立體異構體形態之類的所有光學異構體。不同的立體異構體形態可藉由習知的方法相互分離或分解，或者任意給定的異構體可藉由習知的立體選擇性或非對稱合成來獲得。 本申請所記載之特定化合物可以以多種互變異構體形態而存在，且理解為本發明包括所有該種互變異構體形態。 並且，雖然本發明還包括同位素-標記化合物，前述同位素-標記化合物與本申請所記載之化合物相同，但其1個以上的原子被具有與在自然中普遍發現之原子質量或原子序數不同的原子質量或質量序數之原子取代。可摻入於本發明的化合物中之同位素的例子包括如
3
H、
11
C、
14
C、
18
F、
123
I及
125
I之類的、氫、碳、氮、氧、磷、氟、碘及氯的同位素。含有前述同位素和/或其他原子的其他同位素之本發明的化合物包括在本發明的範疇內。本發明的同位素-標記化合物，例如摻入了例如
3
H和
14
C之類的放射性同位素之化合物對藥物和/或基質組織分佈分析有用。從製備的容易性及檢測性的觀點考慮，氚(即
3
H)及碳-14(即
14
C)的同位素尤為佳。
11
C及
18
F同位素尤其對PET(正電子發射斷層攝影)有用，
125
I同位素尤其對SPECT(單光子發射計算機斷層攝影)有用，該等均對腦成像法有用。並且，由重氫亦即如
2
H的更重的同位素進行之取代可以帶來來源於更大代謝穩定性的特定治療方面的優點，例如增加體內半衰期或減少劑量需要，因此根据情況這可以是優選的。本發明的同位素-標記化合物一般可藉由進行下述反應式和/或實施例所公開之流程，接著代替非同位素-標記試劑而使用可立即利用之同位素-標記試劑來進行製備。 本發明的化合物對TRPM8的效能和效力可藉由在本申請所記載之人克隆受體上進行之化驗報告來測定。通式(I)的化合物利用本申請所記載之功能測定來證實了TRPM8受體中的拮抗活性。 通式(I)的化合物及其藥學上可接受的鹽用於治療由TRPM8受體介導之病症或障礙。尤其，通式(I)的化合物及其藥學上可接受的鹽用於治療廣範圍的疾病、綜合症及障礙，尤其用於治療炎症、疼痛及泌尿系統疾病或障礙，係炎症、疼痛及泌尿系統疾病或障礙的一種以上，其包括：慢性疼痛；包括異常性冷疼痛和糖尿病性神經病變在內之神經病變性疼痛；術後疼痛；骨關節炎；類風濕關節炎疼痛；癌症疼痛；神經痛；神經病變；痛覺；牙本質過敏症；神經損傷；偏頭痛；叢集性及緊張性頭痛；缺血；大腸急躁症；雷諾綜合症；神經退行性變；纖維肌痛；中風；搔癢；包括焦慮症和抑鬱症在內之精神疾病；包括哮喘、慢性阻塞性肺病在內之炎症性疾病；包括COPD、肺動脈高血壓在內之氣道疾病；包括其他應激相關病症在內之焦慮症；包括逼尿肌過度活動症或膀胱過度活動症、尿失禁、神經性逼尿肌過度活動症或逼尿肌反射亢進、突發性逼尿肌過度活動症或逼尿肌不穩定、良性前列腺增生症及下尿路症狀在內之泌尿系統疾病或障礙；以及該等的組合。 通式(I)的化合物對前述的各種疾病、综合症及障礙的活性可以在本領域技術人員周知的合適的模型中加以確認。例如，在異常性冷疼痛及静態異常性疼痛模型之類的慢性壓迫損傷(CCI)-誘發模型中確認了通式(I)的化合物對神經病變性疼痛之活性。 本申請中所使用之術語“治療”理解為包括確定如上定義之病狀之預防及緩輕。 可適當地在環境溫度及大氣壓中藉由混合而製備之本發明的藥物組合物一般適用於口服、非口服或直腸給藥，其本身可以是片劑、膠囊劑、口服用液劑、粉末劑、顆粒劑、錠劑、可複溶(reconstitutable)粉末劑、注射或注入溶液或懸浮液或栓劑的形態。一般口服給藥組合物為較佳。口服給藥用片劑及膠囊劑可以是單位劑量型，亦可以含有：結合劑(例如，預膠化玉米澱粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如，乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；壓片潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石或矽石)；崩解劑(例如，馬鈴薯澱粉或羧基乙酸澱粉鈉)；及可接受的潤濕劑(例如，十二烷基硫酸鈉)之類的習知的賦形劑。片劑可按照標準藥學實踐中的周知方法來塗覆。 口服用液劑例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳液、糖漿或酏劑形態，或者亦可以是在使用前用於由水或其他合適的媒介物進行複溶之乾燥產物形態。該種液劑可含有懸浮劑(例如，山梨醇糖漿、纖維素衍生物或食用氫化油脂)、乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯膠)、非水性媒介物(可含食用油，例如杏仁油、含油酯、乙醇或分餾植物性油)、防腐劑(例如，對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸)、以及根據需要可含有習知的調味劑或著色劑、緩衝鹽以及根據情況可含有甜味劑之類的習知的添加劑。口服給藥用制劑可適當地配製為賦予活性化合物或其藥學上可接受的鹽之經控制之釋放。 為了非口服給藥，利用通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽以及無菌媒介物來製備流體單位劑量型。可以一同使用通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽以及無菌媒介物與任意添加之防腐劑來以單位劑量型例如安瓿瓶或多劑量方式提供注射用劑型。組合物可採取油性或水性媒介物中的懸浮液、溶液或乳液之類的形態，可含有如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑之類的劑型助劑(formulatory agent)。或者，活性成份可以是在使用前溶於合適的媒介物例如無菌無熱原水之粉末形態。根據所使用之媒介物或濃度，化合物可懸浮或溶解於媒介物中。製備溶液時，化合物可被溶解用於注射，並且過濾器在填充及密封於合適的小瓶或安瓿瓶之前滅菌。局部麻醉劑、防腐劑及緩衝劑之類的佐劑溶解於媒介物中為較佳。為了增進穩定性，組合物可以在填充於小瓶後冷凍，而水在真空中去除。化合物懸浮於媒介物而不是溶解於媒介物中且無法藉由過濾來實現滅菌，除此之外，實際上藉由相同的方法來製備非口服用懸浮液。化合物在懸浮於無菌媒介物之前可以暴露在環氧乙烷來滅菌。為了促進化合物的均勻分佈，將表面活性劑或潤濕劑包含於組合物中為較佳。 可用水性或油性基質配製乳液，一般還會含有1種以上的乳化劑、穩定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑或著色劑。還可以用包含1種以上的分散劑、穩定劑、可溶化劑或懸浮劑之水性或非水性基質配製滴劑。該等還可以含有防腐劑。 還可以用栓劑或保留灌腸劑例如，含有可可脂或其他甘油酯之類的習知的栓劑基質之直腸組合物配製通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽。 通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽還可以配製為埋植劑。該種長效劑型可藉由移植(例如，皮下或肌肉內)或藉由肌肉內注射來給藥。因此，例如，通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽可以用合適的高分子或疏水性物質(例如，作為可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂來配製或者可配製為難溶性衍生物例如難溶性鹽。 為了鼻腔內給藥，通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽可以被配製為藉由合適的計量型或單一劑量裝置給藥之溶液，或者，可以用合適的載體配製為粉末混合物用於利用合適的遞送裝置之給藥。因此，通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽可以被配製為用於口服、口腔、非口服、局部(包括眼和鼻)、埋植或直腸給藥或者適於吸入或吹入(通過嘴或鼻)給藥之形態。通式(I)的化合物及其藥學上可接受的鹽可以被配製為用於以軟膏、霜劑、凝膠劑、乳液、陰道栓、氣溶膠或滴劑(例如，眼、耳或鼻滴劑)形態局部給藥。軟膏及霜劑例如使用水性或油性基質，添加合適的增稠劑和/或膠凝劑來配製。用於眼部給藥之軟膏可利用無菌成份以滅菌方式製備。 尤其在治療炎症、疼痛及泌尿系統疾病或障礙時，TRPM8拮抗劑可以與其他藥理活性化合物或2種以上的其他藥理活性化合物有效地組合。例如，可以與選自下述中之1種以上的制劑組合來同時、依次或分別地給藥如上述所定義之TRPM8拮抗劑尤其是通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化物： -阿片類鎮痛藥，例如嗎啡、海洛因、氫嗎啡酮、氧嗎啡酮、羥甲左嗎喃、烯丙左嗎喃、美沙酮、哌替啶、芬太奴、可卡因、可待因、雙氫可待因、羥考酮、氫可酮、丙氧酚、納美芬、納洛芬、納洛酮、納曲酮、丁丙諾菲、布托啡諾、納布啡或戊唑辛； -非甾體類抗炎藥物(NSAID)，例如阿司匹林、雙氯高滅酸、二氟尼柳、依託度酸、芬布芬、非諾洛芬、氟苯沙酸、氟聯苯丙酸、布洛芬、茚甲新、苯酮苯丙酸、酮咯酸、甲氯滅酸、甲滅酸、美洛昔康、萘普酮、萘普生、尼美舒利、硝基氟比洛芬、奧沙拉嗪、噁丙嗪、苯基丁氮酮、吡羅昔康、硫氮磺胺吡啶、舒林酸、托美丁或佐美酸； -巴比妥類鎮靜劑，例如異戊巴比妥、阿普比妥、仲丁巴比妥、布他比妥、甲苯巴比妥、美沙比妥、美索比妥、戊巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥、他布酮、硫戊巴比妥或戊硫代巴比妥； -具有鎮靜作用之苯二氮，例如氯氮卓、氯卓酸鹽、苯甲二氮卓、氟胺安定、蘿拉西泮、奧沙西泮、替馬西泮或三唑侖； -具有鎮靜作用之H1拮抗劑，例如苯海拉明、吡拉明、異丙嗪、氯屈米或氯環嗪； -鎮靜劑，例如格魯米特、甲丙胺酯、安眠酮或氯醛比林； -骨骼肌肉鬆弛劑，例如巴氯芬、卡立普多、氯唑沙宗、環苯紮林、美索巴莫或奧芬那君； -NMDA受體拮抗劑，例如右美沙芬((+)-3-甲氧基-N-甲基嗎啡烷)或其代謝物右啡烷((+)-3-羥基-N-甲基嗎啡烷)、克他命、美金剛、吡咯并喹啉奎寧，順-4-(膦醯基甲基)-2-呱啶羧酸、布地品、EN-3231(MorphiDex(註冊商標)、嗎啡與右美沙芬的組合劑型)、托吡酯、奈拉美生(neramexane)或包括NR2B拮抗劑在內之伯井弗帖(perzinfotel)，例如艾芬地爾、曲索羅地或(-)-(R)-6-(2-[4-(3-氟苯基)-4-羥基-1-呱啶基]-1-羥基乙基)-3,4-二氫-2(1H)-喹啉酮； -alpha-腎上腺素能受體阻斷劑，例如多沙唑嗪、坦舒羅新、氯壓定、胍法新、右美托咪定、莫達非尼或4-氨基-6,7-二甲氧基-2-(5-甲烷磺醯胺基-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基)-5-(2-吡啶基)喹唑啉； -三環抗抑鬱劑，例如地昔帕明、丙咪嗪、阿米替林或去甲替林； -抗驚厥劑，例如卡馬西平、拉莫三嗪、托吡酯或丙戊酸鹽； -速激肽(NK)拮抗劑，具體為NK-3、NK-2或NK-1拮抗劑，例如(alpha R,9R)-7-[3,5-雙(三氟甲基)苄基]-8,9,10,11-四氫-9-甲基-5-(4-甲基苯基)-7H-[1,4]二氮芳辛[2,1-g][1,7]-二氮雜萘-6,13-二酮(TAK-637)、5-[[(2R,3S)-2-[(1R)-1-[3,5-雙(三氟甲基)苯基]乙氧基-3-(4-氟苯基)-4-嗎啉基]甲基]-1,2-二氫-3H-1,2,4-三唑-3-酮(MK-869、阿瑞匹坦)、拉奈匹坦、達匹坦或3-[[2-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]甲基氨基]-2-苯基呱啶(2S,3S)； -毒蕈鹼拮抗劑，例如奧昔布寧、托特羅定、丙哌維林、曲司氯銨、達非那新、索非那新、替米維林和異丙托銨； -COX-2選擇性抑制劑，例如塞來考昔、羅非考昔、帕瑞考昔、伐地考昔、地拉考昔、艾托考昔或羅美昔布； -煤焦油鎮痛劑，具體而為撲熱息痛； -精神抑制藥，例如氟哌利多、氯丙嗪、氟哌啶醇、奮乃靜、甲硫噠嗪、美索達嗪、三氟啦嗪、氟非那嗪、氯氮平、奧氮平、利哌酮、齊拉西酮、喹硫平、施立碟、阿立哌唑、索奈哌唑、布南色林、伊潘立酮、哌羅匹隆、雷氯必利、佐替平、聯苯蘆諾(bifeprunox)、阿莫沙平、鹽酸魯拉西酮、氨磺必利、帕潘立酮、派林多(palindore)、依利色林、奧沙奈坦、利莫那班、美蘭那坦、Miraxion(註冊商標)或沙立佐坦； -辣椒素受體激動劑(例如，樹膠脂毒素)或拮抗劑(例如，抗辣椒鹼)； -瞬態受體電位陽離子通道亞型(V1、V2、V3、V4、M8、M2、A1)激動劑或拮抗劑； -beta-腎上腺素能受體阻斷劑，例如普萘洛爾； -局部麻醉劑，例如美西律； -皮質類固醇，例如地塞米松； -5-HT受體激動劑或拮抗劑，尤其是5-HT1B/1D激動劑，例如依來曲坦、舒馬普坦、那拉曲坦、佐米曲坦或利紮曲坦； -5-HT2A受體拮抗劑，例如R(+)-alpha-(2,3-二甲氧基-苯基)-1-[2-(4-氟苯基乙基)]-4-呱啶甲醇(MDL-100907)； -膽鹼能(煙鹼酸)鎮痛劑，例如伊普尼可林(TC-1734)、(E)-N-甲基-4-(3-吡啶基)-3-丁烯-1-胺(RJR-2403)、(R)-5-(2-氮雜環丁基甲氧基)-2-氯代吡啶(ABT-594)或尼古丁； -Tramadol(註冊商標)； -PDEV抑制劑，例如 5-[2-乙氧基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)磺醯基)苯基]-1-甲基-3-丙基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(昔多芬)、 (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-六氫-2-甲基-6-(3,4-亞甲基二氧基苯基)-吡嗪并[2',1':6,1]-吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-二酮(IC-351或他達拉非)、 2-[2-乙氧基-5-((4-乙基哌嗪-1-基)磺醯基)苯基]-5-甲基-7-丙基咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮(伐地那非)、 5-(5-乙醯基-2-丁氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-乙基-3-氮雜環丁基)-2,6-二氫-7H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、 5-(5-乙醯基-2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-異丙基-3-氮雜環丁基)-2,6-二氫-7H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、 5-[2-乙氧基-5-((4-乙基哌嗪-1-基)磺醯基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-(2-甲氧基乙基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、 4-[(3-氯-4-甲氧基苄基)氨基]-2-[(2S)-2-(羥基甲基)吡咯烷-1-基]-N-(嘧啶-2-基甲基)嘧啶-5-羧醯胺、 3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-N-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]-4-丙氧基苯磺醯胺； -alpha-2-delta配體，例如加巴噴丁、普加巴林、3-甲基加巴噴丁、(3-(氨基甲基)雙環[3.2.0]庚-3-基)乙酸、(3S,5R)-3-(氨基甲基)-5-甲基庚酸、(3S,5R)-3-氨基-5-甲基庚酸、(3S,5R)-3-氨基-5-甲基辛酸、(2S,4S)-4-(3-氯苯氧基)脯胺酸、(2S,4S)-4-(3-氟苄基)脯胺酸、[(1R,5R,6S)-6-(氨基甲基)雙環[3.2.0]庚-6-基]乙酸、3-((1-(氨基甲基)環己基)甲基)-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮、C-[1-((1H-四唑-5-基)甲基)環庚基]甲基胺、(3S,4S)-(1-(氨基甲基)-3,4-二甲基環戊基)乙酸、(3S,5R)-3-(氨基甲基)-5-甲基辛酸、(3S,5R)-3-氨基-5-甲基壬酸、(3S,5R)-3-氨基-5-甲基辛酸、(3R,4R,5R)-3-氨基-4,5-二甲基庚酸及(3R,4R,5R)-3-氨基-4,5-二甲基辛酸； -大麻素； -代謝型麩胺酸亞型1受體(mGluR1)拮抗劑； -血清素再吸收抑制劑，例如舍曲林、舍曲林代謝物去甲基舍曲林、氟西汀、諾氟西汀(氟西汀去甲基代謝物)、氟伏沙明、帕羅西汀、西酞普蘭、西酞普蘭代謝物去甲基西酞普蘭、依他普侖、d,l-氟苯丙胺、苯哌甲氧苯、伊福西汀、氰基度硫平、利托西汀、達泊西汀、奈法唑酮、西克拉明和曲拉唑酮； -去甲腎上腺素再吸收抑制劑，例如馬普替林、洛非帕明、米氮平、羥丙替林、非唑拉明、托莫西汀、米塞林、安非他酮、安非他酮代謝物羥基安非拉酮、諾米芬新和維洛沙嗪(Vivalan(註冊商標))，尤其是選擇性去甲腎上腺素再吸收抑制劑，例如瑞波西汀，具體為(S
,
S)-瑞波西汀； -雙血清素-去甲腎上腺素再吸收抑制劑，例如文拉法辛、文拉法辛代謝物O-去甲基文拉法辛、氯米帕明、氯米帕明代謝物去甲基氯米帕明、度洛西汀、米那普倫和丙咪嗪； -可誘導的一氧化氮合酶(iNOS)抑制劑，例如 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-L-高半胱胺酸、 S-[2-[(1-亞氨基乙基)-氨基]乙基]-4,4-二氧代-L-半胱胺酸、 S-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱胺酸、 (2S,5Z)-2-氨基-2-甲基-7-[(1-亞氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸、 2-[[(1R,3S)-3-氨基-4-羥基-1-(5-噻唑基)-丁基]硫代]-5-氯代-3-吡啶腈； 2-[[(1R,3S)-3-氨基-4-羥基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-4-氯代苯基腈、 (2S,4R)-2-氨基-4-[[2-氯代-5-(三氟甲基)苯基]硫代]-5-噻唑丁醇、 2-[[(1R,3S)-3-氨基-4-羥基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-6-(三氟甲基)-3-吡啶腈、 2-[[(1R,3S)-3-氨基-4-羥基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-5-氯代苯基腈、 N-[4-[2-(3-氯苄基氨基)乙基]苯基]噻吩-2-甲脒(carboxamidine)，或 胍基乙基二硫化物； -乙醯基膽鹼酯酶抑制劑，例如多奈哌齊； -前列腺素E2亞型4(EP4)拮抗劑，例如N-[((2-[4-(2-乙基-4,6-二甲基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)苯基]乙基)氨基)羰基]-4-甲基苯磺醯胺或4-[(1S)-1-(([5-氯-2-(3-氟代苯氧基)吡啶-3-基]羰基)氨基)乙基]苯甲酸； -白三烯B4拮抗劑，例如1-(3-聯苯基-4-基甲基-4-羥基-色滿-7-基)-環戊烷羧酸(CP-105696)、5-[2-(2-羧基乙基)-3-[6-(4-甲氧基苯基)-5E-己烯基]氧苯氧基]-戊酸(ONO-4057)或DPC-11870； -5-脂加氧酶抑制劑，例如棄留通、6-[(3-氟-5-[4-甲氧基-3,4,5,6-四氫-2H-吡喃-4-基])苯氧基甲基]-1-甲基-2-喹諾酮(ZD-2138)或2,3,5-三甲基-6-(3-吡啶基甲基)-1,4-苯醌(CV-6504)； -鈉通道阻斷劑，例如利多卡因； -鈣通道阻斷劑，例如齊考諾肽、唑尼沙胺、米貝拉地爾； -5-HT3拮抗劑，例如昂丹司瓊； -化療劑，例如奧沙利鉑、5-氟脲嘧啶、瘤可維、紫杉酚； -降鈣素基因相關肽(CGRP)拮抗劑； -緩激肽(BK1和BK2)拮抗劑； -電壓門控鈉依賴性通道阻斷劑(Na
v1.3
、Na
v1.7
、Na
v1.8
)； -電壓依賴性鈣通道阻斷劑(N-型、T-型)； -P2X(離子通道型ATP受體)拮抗劑； -酸-敏感離子通道(ASIC1a、ASIC3)拮抗劑； -血管緊張素AT2拮抗劑； -趨化因子CCR2B受體拮抗劑； -組織蛋白酶(B、S、K)抑制劑； -sigma1受體激動劑或拮抗劑；及 -鈣/鎂； -牛車腎氣丸；及 其藥學上可接受的鹽及溶劑化物。 該種組合在療法中提供包括協同活性在內之顯著優點。 根據給藥方法，組合物可含有0.1%～99重量%、含有10%～60重量%為較佳的活性物質。使用於前述障礙的治療中之化合物的劑量通常可以依據紊亂的嚴重程度、患者體重及其他類似因素進行變更。 通式(I)的化合物或其藥物組合物的治療有效量相對於平均(70kg)的人為1天約1次或1日1次以上，例如1天2次、3次或4次的處方時，包含約0.05mg～約3000mg，包含約1mg～約1000mg為較佳，包含約10mg～約500mg更為佳的活性成份的劑量範圍，但本發明的活性化合物的治療有效量根據欲治療之疾病、綜合症、病狀及障礙，會發生變動，這對本領域技術人員來講是顯而易知的。 口服給藥時，以片劑形式提供含有約0.01、約10、約50、約100、約150、約200、約250及約500毫克的本發明的化合物作為活性成份而含有之藥物組合物為較佳。 優選地，可以將1天的劑量1次全部給藥，或者將1天的總劑量以1日2次、3次及4次的分次劑量給藥通式(I)的化合物。 給藥之通式(I)的化合物的最佳劑量可容易決定，根據所使用之特定化合物、給藥方式、制劑強度及疾病、綜合症、病狀或障礙的進展程度，會發生變動。並且，根據包括受治療者的年齡、體重、飲食習慣及給藥時間在內之接受治療之特定受治者相關因素，會產生為實現適當的治療水準而調節劑量之必要性。 因此，上述劑量為平均事例的例示。當然，可能會有更高或更低的劑量範疇更具有效之個別情況，該種情況亦包括在本發明的範疇內。 根據任意上述組合物及給藥方案或者需要通式(I)的化合物之對象每當要求使用該化合物時，可根據在本技術領域內確定之組合及給藥方案來給藥通式(I)的化合物。 作為TRPM8離子通道的拮抗劑，通式(I)的化合物在治療及預防包括動物、哺乳動物及人在內之受治者中受TRPM8受體調節的影響之疾病、綜合症、病狀及障礙的方法中是有用的。該種方法包括對需要該種治療或預防之包括動物、哺乳動物及人在內之受治者給藥治療有效量的通式(I)的化合物、鹽或溶劑化物之步驟，並且前述方法由該種步驟構成且基本上由該種步驟構成。尤其是，通式(I)的化合物在預防或治療疼痛或誘導該種疼痛之疾病、綜合症、病症或障礙、或者肺或血管功能障礙時有用。更具體而言，通式(I)的化合物藉由對需要預防或治療之受治者給藥治療有效量的通式(I)的化合物，而在預防或治療炎症性疼痛、炎症性痛覺過敏、神經病變性疼痛、焦慮症、抑鬱症及包括周圍血管疾病、血管性高血壓、肺動脈高血壓、雷諾病及冠狀動脈疾病在內之因感冒而惡化之心血管疾病時有用。 炎症性疼痛的例子包括疾病、病狀、綜合症、障礙或由疼痛狀態引起之疼痛，其包括炎症性腸病、內臟痛、偏頭痛、術後疼痛、骨關節炎、類風濕關節炎、背痛、下背痛、關節痛、腹痛、胸痛、陣痛、肌肉骨骼疾病、皮膚病、牙痛、胸痛、燒傷、曬傷、蛇咬傷、毒蛇咬傷、蜘蛛咬傷、毒蟲螫傷、神經原性膀胱、間質性膀胱炎、尿路感染、鼻炎、接觸性皮膚炎/過敏症、搔癢、濕疹、咽炎、黏膜炎、腸炎、大腸急躁症、雷諾綜合症、膽囊炎、胰臟炎、乳房切除術後疼痛綜合症、痛經、子宮內膜異位症、鼻竇炎頭痛、緊張性頭痛或蛛網膜炎。 炎症性疼痛的一種類型為炎症性痛覺過敏，其可進一步區分為炎症性軀體痛覺過敏或炎症性內臟痛覺過敏。炎症性軀體痛覺過藉由對熱、機械和/或化學刺激存在過敏性之炎症性痛覺過敏病狀的出現而被表徵。炎症性內臟痛覺過敏亦可以藉由存在增進的內臟應激性的炎症性痛覺過敏病狀的出現而被表徵。 炎症性痛覺過敏的例子包括疾病、綜合症、病狀、障礙或疼痛狀態，其包括炎症、骨關節炎、類風濕關節炎、背痛、關節痛、腹痛、肌肉骨骼疾病、皮膚病、術後疼痛、頭痛、牙痛、燒傷、曬傷、毒蟲螫傷、神經原性膀胱、尿失禁、間質性膀胱炎、尿路感染、咳嗽、哮喘、慢性阻塞性肺病、鼻炎、接觸性皮膚炎/過敏症、搔癢、濕疹、咽炎、腸炎、大腸急躁症、雷諾綜合症、包括克羅恩式病或潰瘍性結腸炎在內之炎症性腸病。 本發明的一種實施形態涉及存在對熱、機械和/或化學刺激的過敏性之炎症性軀體痛覺過敏的治療方法，其包括對需要該種治療之哺乳動物給藥治療有效量的通式(I)的化合物、鹽或溶劑化物之步驟。 本發明的另一實施形態涉及存在增進之內臟應激性的炎症性內臟痛覺過敏的治療方法，其包括對需要該種治療之受治者給藥治療有效量的通式(I)的化合物、鹽或溶劑化物之步驟，且前述方法由該步驟構成和/或基本上由該步驟構成。 本發明的又一實施形態涉及存在對寒冷刺激之過敏性之異常性冷疼痛的治療方法，其包括對需要該種治療之受治者給藥治療有效量的通式(I)的化合物、鹽或溶劑化物之步驟，且前述方法由該種步驟構成且/或基本上由該種步驟構成。 炎症性過敏症的例子包括尿失禁、良性前列腺增生症、咳嗽、哮喘、鼻炎及鼻過敏症、搔癢、接觸性皮膚炎和/或皮膚過敏及慢性阻塞性肺病。 神經病變性疼痛的例子包括疾病、綜合症、病狀、障礙或由疼痛狀態引起之疼痛，其包括癌症、神經系統紊亂、脊柱及周圍神經手術、腦腫瘤、創傷性腦損傷(TBI)、骨髓損傷、慢性疼痛綜合症、纖維肌痛、慢性疲勞綜合症、神經痛(三叉神經痛、舌咽神經痛、帶狀皰疹後神經痛及灼痛)、狼瘡、類肉瘤病、周圍神經病變、兩側性周圍神經病變、糖尿病性神經病變、中樞性疼痛、骨髓相關神經病變、中風、肌萎縮性側束硬化症(ALS)、帕金森氏病、多發性硬化症、坐骨神經痛、下頜關節神經痛、周圍神經炎、多發性神經炎、殘端痛、幻肢痛、骨折、口腔神經病變性疼痛、夏科氏病、複雜性局部痛綜合症I和II(CRPS I/II)、神經根病、格林-巴利綜合症、感應異常性股痛、灼口綜合症、視神經炎、發熱後神經炎、遊走性神經炎、分節性神經炎、Gombault's神經炎、神經元炎、頸臂神經痛、顱神經痛、膝狀神經痛、舌咽神經痛、偏頭痛性神經痛、特發性神經痛、肋間神經痛、乳房神經痛、莫頓氏神經痛、鼻睫神經痛、枕骨神經痛、紅斑性肢痛病(red neuralgia)、Sluder's神經痛、蝶腭神經痛、眶上神經痛、外陰痛或翼管神經痛。 神經病變性疼痛的一種類型為神經病變性異常性冷疼痛，可藉由對寒冷刺激的過敏性的神經病理相關異常性疼痛的出現而被表徵。神經病變性異常性冷疼痛的例子包括疾病、綜合症、病狀、障礙或由疼痛狀態引起之異常性疼痛，其包括神經病變性疼痛或神經痛、脊柱及由周圍神經手術或外傷引起之疼痛、外傷性腦損傷(TBI)、三叉神經痛、帶狀皰疹後神經痛、灼痛、周圍神經病變、糖尿病性神經病變、中樞性疼痛、中風、周圍神經炎、多發性神經炎、複雜性局部痛綜合症I和II(CRPS I/II)及神經根病。 焦慮症的例子包括社交焦慮症、創傷後應激障礙、恐懼症、社交恐懼症、特殊恐懼症、驚恐障礙、妄想強迫失調症、急性應激障礙、分離性焦慮障礙及廣泛性焦慮障礙。 抑鬱症的例子包括重度抑鬱症、雙極性情感障礙、季節性情緒障礙、產後抑鬱症、躁鬱症及雙極性抑鬱症。
一般合成
在整個本申請中，以下述含義使用下述略語： AcOH：乙酸 aq.：水性 BINAP：2,2'-雙(二苯基膦)-1,1'-聯萘 tBuXPhos：2-二-第三丁基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯 CDI：羰基二咪唑 Cs
2
CO
3
：碳酸銫 DABCO：1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷 DavePhos：2-二環己基膦-2'-(
N,N
-二甲基氨基)聯苯 DBN：1,5-二氮雜雙環[4.3.0]壬碳-5-烯 DBU：1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯 DCM：二氯甲烷 DEAD：偶氮二羧酸二乙酯 DIPEA：二異丙基乙胺 DMF：
N
,
N
-二甲基甲醯胺 DMA：
N
,
N
-二甲基乙醯胺 DME：1,2-二甲氧基乙烷 DMSO：二甲基亞碸 戴斯-馬丁氧化劑：1,1,1-三(乙醯氧基)-1,1-二氫-1,2-苯碘醯-3-(1H)-酮 ESI：電噴霧離子化 Et：乙基 EtOAc：醋酸乙酯 EtOH：乙醇 eq.：當量 FIA：流動注入分析 HPLC：高效液相色譜法 INT：中間體 IPE：異丙醚 K
2
CO
3
：碳酸鉀 K
3
PO
4
：磷酸鉀 KO
t
-Bu：
第三
丁醇鉀 LC：液相色譜法 LDA：二異丙基氨基鋰 LG：離去基 tR：保留時間 Me：甲基 MeCN：乙腈 MeOH：甲醇 min：分鐘 NaHCO
3
：碳酸氫鈉 Na
2
SO
4
：硫酸鈉 Na
2
S
2
O
3
：硫代硫酸鈉 NaO
t
-Bu：
第三
丁醇鈉 MHz：兆赫茲 mp：熔點 MS：質譜分析法 NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮 NMR：核磁共振 Oxone(註冊商標)：過一硫酸氫鉀複合鹽 PG：保護基 Pd
2
(dba)
3
：三(二亞苄基茚丙酮)二鈀(0) Pd(OAc)
2
：乙酸鈀(II) PdCl
2
(dppf)∙CH
2
Cl
2
：[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)、二氯甲烷加合物 PdCl
2
(Amphos)
2
：雙(二-第三丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯化鈀(II) PEPPSI(商標)-IPr：[1,3-雙(2,6-二異丙基苯基)咪唑-2-叉](3-氯吡啶)二氯化鈀(II) Pd(PPh
3
)
4
：四(三苯基膦)鈀(0) POCl
3
：三氯氧化磷(V) quant：定量 rt：室溫 sat.：飽和 TEA：三乙胺 TFA：三氟乙酸 THF：四氟呋喃 THP：2-四氟吡喃 p-TsOH：對甲苯磺酸 XPhos：2-二環己基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯 Xantphos：4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽 術語
“鹼”
對所使用之鹼的性質同樣沒有特別限定，在此可同等地使用在該種類型的反應中通常使用之任意鹼。該種鹼的例子包括：鹼金屬氫氧化物，例如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀及氫氧化鋇；鹼金屬氫化物，例如氫化鋰、氫化鈉及氫化鉀；鹼金屬醇鹽，例如甲醇鈉、乙醇鈉及第三丁醇鉀；鹼金屬碳酸鹽，例如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀及碳酸铯；鹼金屬碳酸氫鹽，例如碳酸氫鋰、碳酸氫鈉及碳酸氫鉀；胺，例如N-甲基嗎琳、三乙胺、三丙胺、三丁胺、二異丙基乙胺、N-甲基呱啶、吡啶、4-吡咯烷吡啶、皮考琳，2,6-二(第三丁基)-4-甲基吡啶、喹啉、N,N-二甲基苯胺、N,N-二乙基苯胺、1,5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷(DABCO)、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、盧剔啶及可力丁；氨基鹼金屬，例如氨基鋰、氨基鈉、氨基鉀、二異丙氨基鋰、二異丙氨基鉀、二異丙氨基鈉、雙(三甲基矽基)氨基鋰及雙(三甲基矽基)氨基鉀。其中，三乙胺、二異丙基乙胺、DBU、DBN、DABCO、吡啶、盧剔啶、可力丁、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、氫氧化鉀、磷酸鉀、氫氧化鋇及碳酸铯為較佳。 反應一般且在惰性溶劑的存在下進行為較佳。只要不對伴隨之反應或試劑帶來壞影響、且溶劑可以將試劑溶解在至少某種程度，則所使用之溶劑性質沒有特別限定。合適的溶劑的例子包括：鹵代烴，例如DCM、氯仿、四氯化碳及二氯乙烷；醚，例如二乙醚、二異丙醚、THF及二噁烷；芳香族烴，例如苯、甲苯及硝基苯；醯胺，例如DMF、DMA及六甲基磷醯三胺；胺，例如N-甲基嗎琳、三乙胺、三丙胺、三丁胺、二異丙基乙胺、N-甲基呱啶、吡啶、4-吡咯烷吡啶、N,N-二甲基苯胺及N,N-二乙基苯胺；醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇及丁醇；腈，例如乙腈及苄腈；亞碸，例如二甲基亞碸(DMSO)及環丁碸；酮，例如丙酮及二乙酮，但並不限於此。在該等溶劑中，包含DMF、DMA、DMSO、THF、二乙醚、二異丙醚、二甲氧基乙烷、乙腈、DCM、二氯乙烷及氯仿為較佳，但並不限於此。 [實施例] 用下述非限定性實施例對本發明進行說明，如沒有特別提及，所有試劑均為市售品，所有操作均在室溫至環境溫度，亦即約18-25℃的範圍內進行；使用旋轉蒸發器在減壓下並在最高約60℃的浴溫度下進行溶劑的蒸發；用薄層色譜法(TLC)監控反應，僅以說明的目的給出反應時間；用以下述技術中的至少一種來確認所有分離化合物的結構和純度：TLC(Merck矽膠60 F
254
預塗之TLC板或Merck NH
2
F
254
預塗之HPTLC板)、質譜分析法或核磁共振(NMR)。藉由Intiator + Sixty Biotage(註冊商標)實施微波反應。僅以說明的目的給出收率。藉由Yamazen的快速柱色譜和Biotage(SP1，Isolera one)執行柱色譜系統。使用Merck矽膠60(230-400 mesh ASTM)、Fuji Silysia Chromatorex(註冊商標)DM2035(氨基類，30-50μm)、Biotage二氧化矽(32-63mm，KP-Sil)、Biotage氨基鍵合之二氧化矽(45-75mm，KP-NH)、Wakogel(註冊商標)C-300HGT、Hi-Flash(註冊商標)色譜柱(YAMAZEN，矽膠，40微米，60埃)、Hi-Flash(註冊商標)色譜柱(YAMAZEN，氨基類，40微米，60埃)實施快速柱色譜。以中間體和實施例為對象，藉由帶ZQ 2000質譜分析儀和2996 PDA檢測器之Waters 2695 Alliance HPLC實施LC-MS分析。分析條件(方法-A、方法-B、方法-C、方法-D、方法-E及方法-F)如下。 (表1)
方法 -A 、方法 -B 及方法 -C 的執行條件：
(表2)
(表3)
(表4)
(表5)
方法 -D 及方法 -E 的執行條件：
(表6)
(表7)
藉由下述裝置和條件進行利用了HPLC(準備好的LC-MS)之化合物的提純。 裝置：Waters MS-trigger AutoPurification(商標)系統 色譜柱：Waters XTerra C18，19×50mm，5微米粒子 條件A：甲醇或乙腈/0.01%(v/v)氨水溶液 條件B：甲醇或乙腈/0.05%(v/v)甲酸水溶液 藉由下述裝置和條件獲得低分辨質譜資料(ESI)：裝置；ZQ或ZMD質譜分析儀和UV檢測器上的Waters Alliance HPLC系統。在帶HPLC(Agilent 1100系列)和自動進樣器(AMR CTC-PAL)之三段四極質譜分析儀(AB SCIEX API4000)中決定LC/MS/MS資料。以百萬分之一(parts per Million)(ppm)作為內部標準，沒有特別提及就可以對四甲基矽烷(TMS)使用氘代氯仿(99.8% D)或二甲基亞碸(99.9% D)來作為溶劑，並以270 MHz(JEOL JNM-LA 270分光儀)、300 MHz(JEOL JNM-LA300)或600 MHz(Bruker Avance 600)決定NMR資料；所使用之習知的略語如下：s=單線、d=雙重線、t=三重線、q=四重線、m=多重線、br=廣域等。化學記號具有它們通常的含義；M(莫耳/升)、L(升)、mL(毫升)、g(克)、mg(毫克)、mol(莫耳)、mmol(毫莫耳)。 分別製備之化合物一般以ChemBioDraw(Ultra，version 12.0，CambridgeSoft)命名。 HPLC保留時間決定條件： 方法：QC1 裝置：帶TUV檢測器和ZQ質譜分析儀之Waters ACQUITY Ultra Performance LC 色譜柱：Waters ACQUITY C18，2.1×100 mm，1.7微米粒子大小 色譜柱溫度：60℃ 流速：0.7mL/min 運行時間：3min UV檢測：210 nm MS檢測：ESI正/負模式 流動相： A1：10mM乙酸銨 B1：乙腈 梯度程序： (表8)
方法：QC2 裝置：帶ZQ2000質譜分析儀和2996 PDA檢測器之Waters 2795 Alliance HPLC 色譜柱：XBridge C18，2.1×50mm，3.5微米粒子大小 色譜柱溫度：45℃ 流速：1.2 mL/min 運行時間：4.5min UV檢測：210-400nm掃描 MS檢測：ESI正/負模式 流動相： A：水 B：MeCN C：1% HCO
2
H水溶液 D：1% NH
3
水溶液 梯度程序： (表9)
通式(I)的所有氮雜螺衍生物可藉由以下示出之一般方法中所記載之流程，或者藉由實施例合成部份和中間體合成部份中所記載之特定方法，或者在該等方法上施加通常變更來進行製備。並且，本發明不僅包括通式(I)的氮雜螺衍生物的該等製備方法的一種以上，而且還包括使用於其中之任意新型中間體。 在下述一般方法中，如果沒有特別提及，關於通式(I)的氮雜螺衍生物之技術術語(descriptor)如前所定義。 反應式-1：通式(I)的化合物基於通式(III)的化合物之合成 {化學式4}
在該反應式-1中，通式(I)的咪唑啉酮化合物可在惰性溶劑中，在鹼的存在下，藉由通式(II)的咪唑啉酮化合物和通式(III)的alpha-鹵代酮化合物的N-烷基化反應進行製備。較佳的鹼例如選自：鹼或鹼土金屬氫氧化物、醇鹽、碳酸鹽、鹵化物或氫化物，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、甲醇鈉、乙醇鈉、
第三
丁醇鉀、碳酸銫、碳酸鈉、碳酸鉀、磷酸鉀、氟化鉀、氫化鈉或氫化鉀；或胺，例如TEA、三丁胺、二異丙基乙胺、2,6-盧剔啶、吡啶或4-二甲基氨基吡啶，但並不限於此。合適的惰性水性或非水性有機溶劑的例子包括以下：醚，例如THF或1,4-二噁烷；丙酮；
N,N
-二甲基甲醯胺；DMSO；鹵化烴，例如DCM、1,2-二氯乙烷或氯仿；及吡啶；或該等的混合物。該反應可在-80℃至200℃範圍的溫度下實施，在-10℃至150℃範圍的溫度下實施為較佳。反應時間一般是10分鐘至4天，10分鐘至24h為較佳。微波爐可以任意用於增加反應率。 反應式-2：通式(I)的化合物基於通式(III)的化合物之合成 {化學式5}
在反應式-2中，通式(IV)的化合物可在惰性溶劑中(例如甲醇)，使用合適的還原劑(例如硼氫化鈉)，從化合物(III)進行製備。接著，通式(V)的化合物可按照反應式-1的一般合成方法所記載之N-烷基化，從化合物(IV)進行製備。最後，通式(I)的化合物可在惰性溶劑中(例如二氯甲烷)，使用合適的氧化劑(例如戴斯-馬丁試劑)，從化合物(V)進行製備。 反應式-3：通式(I-a)的化合物基於通式(VI)的化合物之合成 {化學式6}
在反應式-3中，通式(I-a)的化合物可在合適的過渡金屬催化劑的存在下及鹼的存在下或非存在下，在有機溶劑或水-有機共溶劑混合物中，在偶聯條件下藉由通式(VI)的鹵化物和通式(VII)的硼酸(或硼酸酯)化物的交叉偶聯反應進行製備。在BR'
w
，R'係指OH、O-低級烷基或氟，w為2或3，B為硼原子。雖然作為具體的取代基記述了B(OH)
2
、B(O-低級烷基)
2
、B(低級烷基)
2
、三氟硼酸鉀(BF
3 -
)(BF
3
K)，但當為B(O-低級烷基)
2
時，可以在低級烷基之間形成環(cyclic ring)。另外，通式(I-a)的化合物亦可藉由通式(IX)的鹵化物和從通式(VI)的鹵化物轉化之通式(VIII)的硼酸(或硼酸酯)化合物的相同的交叉偶聯反應進行製備。通式(VII)和(VIII)的硼酸(或硼酸酯)化合物在交叉偶聯反應中用作分離試劑(isolated reagents)或現場形成之試劑(reagents generated in
in situ
)。 合適的過渡金屬催化劑的例子包括：四(三苯基膦)鈀(0)、雙(三苯基膦)氯化鈀(II)、銅(0)、乙酸亞銅(I)、溴化亞銅(I)、氯化亞銅(I)、碘化亞銅(I)、氧化亞銅(I)、三氟甲磺酸銅(II)、乙酸銅(II)、溴化銅(II)、氯化銅(II)、碘化銅(II)、氧化銅(II)、乙酸鈀(II)、氯化鈀(II)、雙(乙腈)二氯化鈀(II)、雙(二亞苄基茚丙酮)鈀(0)、三(二亞苄基茚丙酮)二鈀(0)及[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]-二氯化鈀(II)。較佳的催化劑為四(三苯基膦)鈀(0)、雙(三苯基膦)氯化鈀(II)、乙酸鈀(II)、氯化鈀(II)、雙(乙腈)二氯化鈀(0)、雙(二亞苄基茚丙酮)鈀(0)、三(二亞苄基茚丙酮)二鈀(0)及[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)。 用於無水溶劑和水-有機共溶劑混合物之合適的有機溶劑的例子包括：THF；1,4-二噁烷；DME；DMF；乙腈；醇，例如甲醇或乙醇；鹵化烴，例如DCM、1,2-二氯乙烷、氯仿或四氯化碳；及二乙醚。該反應可在鹼例如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鋰、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸鉀及磷酸鉀的存在下或非存在下實施。該反應可在合適的添加劑的存在下實施。該種添加劑的例子包括：三苯基膦、三第三丁基膦、1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵、三-2-呋喃基膦、三鄰甲苯基膦、2-(二氯己基膦)聯苯、三苯砷、四丁基氯化銨、四丁基氟化銨、乙酸鋰、氯化鋰、三乙胺、甲醇鉀或甲醇鈉、氫氧化鈉、碳酸銫、磷酸三鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉和/或碘化鈉。該反應可在0℃至200℃的溫度下進行，在20℃至150℃的溫度下實施為較佳。反應時間一般是5分鐘至96h，30分鐘至24h更為佳。在代替方案中，該反應可在鹼的存在下，在惰性溶劑中藉由微波系統來實施。該反應可在100℃至200℃範圍的溫度下實施，120℃至150℃範圍的溫度下實施為較佳。反應時間一般是10分鐘至3h，15分鐘至1h為較佳。除上述Suzuki-Miyaura交叉偶聯反應以外，還可以適用使用三烷基錫來代替BR'
w
取代基之Still交叉偶聯反應、以及使用鋅-鹵素(其中，作為鹵素，引用氯、溴、碘)來代替BR'
w
取代基之Negishi偶聯反應。 反應式-4：通式(III)的化合物基於通式(X)和(XI)的化合物之合成 {化學式7}
在反應式-4的步驟-1中，通式(III)的alpha-鹵代酮化合物可使用適當的鹵化劑，藉由化合物(X)的alpha-鹵化反應(Hal=Cl、Br、I)進行準備。合適的鹵化劑例如可以利用溴、氯、碘、磺醯氯、溴化氫、N-溴代琥珀醯亞胺(NBS)、溴化銅(II)、5,5-二溴-2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷、苯基三甲基三溴化銨、三甲基苄基三溴化銨及三甲基苄基二氯碘酸銨。合適的有機溶劑例如可以使用乙酸、25%溴化氫-乙酸溶液、48%溴化氫溶液、二硫化碳、二乙醚、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、鹵代烴例如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳。該反應週期為約5分鐘至96h，一般是約30分鐘至24h。反應溫度為約0℃至250℃，一般是約30℃至150℃。此外，在反應式-4的步驟-2中，通式(III)的alpha-鹵代酮化合物亦可以按照
Tetrahedron Letters
, 38,3175,1997所記載之流程，從酯化合物(XI)進行製備。通式(III)的化合物通常可在-78℃下且在碘氯甲烷和二異丙基氨基鋰(LDA)的四氫呋喃(THF)的存在條件下，藉由使酯化合物(XI)反應來進行製備。 反應式-5：通式(XIII)的化合物基於通式(XII)的化合物之合成 {化學式8}
在反應式-5中，通式(XIII)的alpha-鹵代酮化合物可在惰性溶劑中(例如二氯甲烷)，使用氯乙醯氯和合適的路易斯酸(例如氯化鋁)，藉由吡咯化合物(XII)的Friedel-Crafts反應進行製備。 反應式-6：通式(XIV)的化合物基於通式(XVIII)的化合物之合成 {化學式9}
在反應式-6中，通式(XVI)的氨基甲醯胺化合物可依據Synthetic Communications 35(15),2677-2684(2003)，藉由使用存在於甲醇及28%的氨水溶液中的氯化銨及氰化鉀的通式(XIV)的酮化合物的Strecker反應及使用硫酸的通式(XV)的氨基氰化合物的酸水解來進行製備。進而，通式(XVIII)的咪唑啉酮化合物可藉由通式(XVI)的氨基甲醯胺化合物的通常條件下的醯化及通式(XVII)的化合物的酸性條件下的環化來進行製備。 反應式-7：通式(XXII)的化合物基於通式(XIX)及(XXI)的化合物之合成 {化學式10}
在反應式-7中，通式(XXII)的化合物可藉由通式(XIX)的鹵化物和通式(XX)的化合物的反應進行製備(步驟-1)。或者，通式(XXII)的化合物亦可利用鈀偶聯反應、親核取代反應和烏爾曼反應中之選定流程，藉由通式(XXI)的苯酚化合物和通式(IX)的化合物的反應進行製備(步驟-2)。偶聯反應可在有機溶劑或水-有機共溶劑混合物中藉由合適的鈀催化劑、配體及鹼的組合來實施。合適的過渡金屬催化劑的例子包括：乙酸鈀(II)、三(二亞苄基茚丙酮)二鈀(0)及[1,3-雙(2,6-二異丙基苯基)咪唑-2-叉](3-氯吡啶)二氯化鈀(II)。用於無水溶劑和水-有機共溶劑混合物的合適的有機溶劑包括：THF；DME；1,4-二噁烷；DMF；乙腈；及醇，例如甲醇、乙醇及第三丁
醇。
合適的鹼的例子包括：碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、磷酸鉀、第三丁醇鈉及第三丁醇鉀。該反應可在合適的配體劑的存在下實施。該種配體劑的例子包括：2,2'-雙(二苯基膦)-1,1'-聯萘(BINAP)、2-二環己基膦-2'-(N,N-二甲基氨基)聯苯(DavePhos)、4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(Xantphos)及2-二環己基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯(XPhos)。親核取代反應可在鹼的存在下且在偶聯條件下，在有機溶劑或水-有機共溶劑混合物中實施。合適的有機溶劑的例子包括：N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸及N-甲基-2-吡咯烷酮。合適的鹼的例子包括碳酸鉀、碳酸銫、磷酸鉀、氫化鈉、第三丁醇鈉及第三丁醇鉀。另外，烏爾曼反應可在有機溶劑中，在使用合適的銅試劑、配體及鹼之偶聯條件下實施。合適的銅試劑例如可以使用碘化亞銅(I)、溴化亞銅(I)及氯化亞銅(I)。合適的配體及鹼例如使用：配體，例如N,N-二甲基甘胺酸、L-脯胺酸、N,N'-二甲基乙二胺及反式-N,N'-二甲基環己烷-1,2-二胺；及鹼，例如碳酸鈉、碳酸鉀及碳酸銫。合適的有機溶劑包括THF、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸及N-甲基-2-吡咯烷酮。該反應可在20℃至200℃的溫度下實施，在100℃至160℃的溫度下實施更為佳。反應時間一般是5分鐘至96h，30分鐘至24h更為佳。在代替方案中，該反應可在鹼的存在下且在惰性溶劑中，藉由微波系統實施。該應可在100℃至200℃範圍的溫度下實施，在120℃至150℃範圍的溫度下實施為較佳。反應時間一般是10分鐘至3h，15分鐘至1h為較佳。 反應式-8：通式(XXVI)的化合物基於通式(XIX)的化合物之合成 {化學式11}
在反應式-8中，通式(XXVI)的化合物可按照反應式-7所記載之一般合成方法，利用鈀偶聯反應、親核取代反應或Ullmann反應中之選定流程，藉由使通式(XIX)的鹵化物和通式(XXIII)、(XXIV)或(XXV)的化合物反應來進行製備。 中間體的製備 中間體-1-1-A(INT-1-1-A)：2-甲基-1,3-二氮雜螺[4.5]癸烷-1-烯-4-酮 {化學式12}
對甲苯(10mL)混合1-乙醯胺基環己烷甲醯胺(130mg，0.706mmol)和TFA(0.109mL，1.41mmol)的混合物，並對其進行一天共沸回流。使該混合物蒸發而得到微灰色固體狀的標題化合物(113mg，96%的收率)。
1
H-NMR(270MHz, DMSO-d
6
)：delta 2.31 (s,3H),1.72-1.25(m,10H),未觀察到因NH引起之訊號。 MS(ESI)m/z：167.2(M+H)+. 中間體-1-2-A(INT-1-2-A)：8,8-二氟-2-甲基-1,3-二氮雜螺[4.5]癸烷-1-烯-4-酮 {化學式13}
＜步驟-1＞：中間體-1-2-1(INT-1-2-1)：1-氨基-4,4-二氟環己烷甲醯胺 {化學式14}
對用冰冷卻之水浴內的攪拌濃硫酸(5.0g)滴加DCM(15mL)中的1-氨基-4,4-二氟環己烷甲腈(2.50g，15.61mmol)溶液，將其內部溫度維持在低於15℃。在等候溫度下，攪拌1h，並在40℃下再攪拌1h後，用冰水快速冷卻其反應混合物，之後用28%的氨水溶液進行鹼化至pH＞8。將該混合物用EtOAc進行萃取之後，用鹽水清洗，在磺酸鈉上乾燥後進行過濾，接著在真空中將其過濾物進行濃縮而得到淡黃色固體的標題化合物(2265mg，81%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
)：delta 7.45(br.s,1H), 6.99(br.s,1H),2.25-1.70(m,8H)，1.55-1.40(m,2H)。 MS(FIA)m/z：179.1(M+H)
+
。 ＜步驟-2＞：中間體-1-2-2(INT-1-2-2)：1-乙醯胺基-4,4-二氟環己烷甲醯胺 {化學式15}
在室溫下，對DCM(80mL)中的INT-1-2-1(2076mg，11.65mmol)、三乙胺(3.25mL，23.30mmol)的攪拌溶液，用注射器添加乙醯氯(0.911mL，12.82mmol)。在室溫下攪拌15h之後，將混合物用最少量的DCM稀釋，收集沉澱的固體而得到白色固體的標題化合物(1345mg，52%的收率)。
1
H-NMR(270MHz,DMSO-d
6
): delta 7.83(br.s,1H), 7.14(br.s,1H), 6.91(br.s,1H), 2.20-1.75 (m,8H), 1.89(s,3H)。 MS(FIA)m/z：219.3(M-H)
-
。 ＜步驟-3＞：中間體-1-2-A(INT-1-2-A)：2-乙基-8,8-二氟-1,3-二氮雜螺[4.5]癸烷-1-烯-4-酮 將INT-1-2-2(600mg，2.72mmol)混合於TFA(1mL)及AcOH(10mL)，並將其混合物放入微波反應器中，在140℃下照射微波90分鐘。去除溶劑之後，將殘留物溶解於甲醇。對粗產物用DCM-甲醇(1:1)出溶之胺矽膠上藉由柱色譜法進行短時間的提純而得到白色固體的標題化合物(287mg，52%的收率)。
1
H-NMR(270MHz,DMSO-d
6
): delta 2.20-1.90(m,4H), 2.07(s,3H), 1.85-1.60(m,2H), 1.56-1.40(m,2H)。 MS(FIA)m/z：203.1(M+H)
+
。 中間體-1-3-A(INT-1-3-A)：2-乙基-8,8-二氟-1,3-二氮雜螺[4.5]癸烷-1-烯-4-酮 {化學式16}
＜步驟-1＞：中間體-1-3-1(INT-1-3-1)：4,4-二氟-1-丙醯胺環己烷甲醯胺 {化學式17}
在室溫下，對DCM(80mL)中的INT-1-2-1(2060mg，12.68mmol)、三乙胺(3.54mL，25.4mmol)的攪拌溶液，用注射器添加丙醯氯(1.21mL，13.95mmol)。在室溫下攪拌15h之後，將混合物用最少量的DCM稀釋，收集沉澱的固體而得到白色固體的標題化合物(1609mg，54%的收率)。
1
H-NMR(270MHz,DMSO-d
6
): delta 7.73(br.s,1H), 7.10(br.s,1H), 6.90(br.s,1H), 2.19(q,J=7.9 Hz,2H), 2.15-2.05(m,2H), 2.02-1.80(m,6H), 0.98(t,J=7.9 Hz,3H)。 MS(FIA)m/z：233.2(M-H)
-
。 ＜步驟-2＞：中間體-1-3-A(INT-1-3-A)：8,8-二氟-2-甲基-1,3-二氮雜螺[4.5]癸烷-1-烯-4-酮 將INT-1-3-1(800mg，3.42mmol)混合於TFA(2.4mL)及AcOH(12mL)，並將其混合物放入微波反應器中，在150℃下照射微波60分鐘。去除溶劑之後，將殘留物溶解於甲醇。對粗產物用DCM-甲醇(1:1)出溶之胺矽膠上藉由柱色譜法進行短時間的提純而得到白色固體的標題化合物(617mg，84%的收率，70%的化學純度)。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
):delta2.38(q,J=7.3 Hz,2H),2.30-1.60(m,6H),1.57-1.42 (m,2H),1.13(t,J=7.3 Hz,3H),未觀察到因NH引起之訊號。 MS(FIA)m/z：217.1(M+H)
+
。 中間體-2-1(INT-2-1)：2-氯-1-(4-噠嗪-3-基氧基)苯基)乙酮 {化學式18}
＜步驟-1＞：中間體-2-1-1(INT-2-1-1)：1-(4-噠嗪-3-基氧基)苯基-乙酮 {化學式19}
在140℃下，在微波反應器(Biotage Initiator)中用微波對在DMF(5mL)中混合1-(4-羥基苯基)乙酮(283mg，2.08mmol)、3-氯噠嗪(238mg，2.08mmol)及碳酸鉀(574mg，4.16mmol)的混合物照射60min。冷卻之後，藉由矽藻土墊過濾反應混合物，並用EtOAc清洗濾液。用水稀釋濾液分離有機層。用EtOAc萃取水層後，用鹽水清洗組合有機層，用硫酸鈉乾燥之後在真空中濃縮濾液。藉由柱色譜法(Biotage)在DCM的10-80% EtOAc出溶之矽膠(25g)上提純殘留物而得到白色固體的標題化合物(58mg，13%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
)：delta 9.07(dd,J = 4.6,1.3Hz,1H), 8.06(d,J = 8.5 Hz,2H), 7.84(dd,J = 9.2,4.6 Hz,1H), 7.59-7.55(m,1H), 7.36(d, J = 8.5 Hz, 2H), 2.60(s,3H)。 MS(ESI)m/z：215.1(M+H)
+
。 中間體-2-1(INT-2-1)：2-氯-1-(4-(噠嗪-3-基氧基)苯基)乙酮 在75℃下，在THF(30mL)中混合INT-2-1-1(1.50g，7.00mmol)和苄基三甲基二氯碘酸銨(3.66g，10.5mmol)，將其混合物攪拌4h。將其混合物用EtOAc及水進行稀釋。萃取兩次後，用Na
2
S
2
O
3
水溶液及鹽水清洗10%的組合溶液，用硫酸鈉乾燥後進行過濾。在真空中濃縮濾液而得到粗製產物(深褐色的固體)。對殘留固體，用正己烷中20-60%EtOAc出溶之矽膠(100g)上藉由柱色譜法(Biotage)進行提純而得到黃色固體的標題化合物(1.14g，66%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
): delta 9.08 (dd, J = 4.6,1.3 Hz,1H), 8.08 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.84(dd,J = 8.5,4.6 Hz,1H), 7.61-7.57(m,1H), 7.39(d, J = 8.5 Hz,2H)。 MS(ESI)m/z:249.1 (M+H)+。 中間體-2-2(INT-2-2)：2-溴-1-(4-(2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酮·氫溴酸鹽 {化學式20}
對25%的HBr-AcOH(3mL)中的1-(4-(2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酮(130mg，0.519mmol)攪拌溶液添加溴(83mg,0.519mmol)。其结果，在60℃下，將得到之橙色溶液攪拌1.5h。冷卻後用氮類去除溶劑。用IPE粉碎殘留固體而得到橙色固體的標題化合物(202mg，95%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,CD
3
OD): delta 8.39(d, J = 8.6 Hz,2H),7.86(d, J = 8.6 Hz,2H),7.68-7.58(m,4H),4.78(s,2H),2.79(s,3H)。 MS(ESI)m/z: 331.1(M+H)+。 中間體-2-3(INT-2-3)：2-溴-1-(4-(2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)乙酮·氫溴酸鹽 {化學式21}
＜步驟-1＞：中間體-2-3-1(INT-2-3-1)：1-(4-(2-硝基苯基)氨基)苯基)乙酮 {化學式22}
在100℃下，對在甲苯(30mL)中混合2-氯-3-硝基吡啶(951mg，6.00mmol)、1-(4-氨基苯基)乙酮(811mg，6.00mmol)、碘化鈉(90mg，0.60mmol), 外消旋-BINAP(224mg，0.36mmol)、乙酸鈀(81mg，0.36mmol)及碳酸鉀(1659mg，12.0mmol)的混合物加熱20h。冷卻至室溫之後，用EtOAc和水稀釋混合物，並藉由矽藻土墊過濾。用EtOAc清洗濾餅，用鹽水清洗濾液和清洗液，在硫酸鈉上乾燥，過濾之後在真空中濃縮而得到粗製產物。將3-5%醋酸乙酯的DCM溶液用作洗脫劑，藉由柱色譜法(Biotage)在矽膠(100g)上提純該粗製產物而得到微紅的黃色固體的標題化合物(1273mg，82%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,CDCl
3
)：delta 10.36(br.s,1H),8.62-8.54(m,2H), 8.05-7.96(m,2H), 7.88-7.80(m,2H), 7.00-6.92(m,1H), 2.61(s,3H)。 MS (ESI)m/z：258.1(M+H)
+
。 ＜步驟-2＞：中間體-2-3-2(INT-2-3-2)：1-(4-((2-氨基苯基)氨基)苯基)乙酮 {化學式23}
在回流下，對在EtOH/水(4/1 v/v)(50mL)中混合INT-2-3-1(2.6g，10.11mmol)、鐵(3.39g，60.6mmol)及固體氯化銨(1.62g，30.3mmol)的混合物加熱2.5h。冷卻至室溫之後，藉由矽藻土墊過濾反應混合物，使濾液濃縮。將殘留物在EtOAc和2N NaOH水溶液之間分配。用鹽水清洗有機層，在硫酸鈉上乾燥，過濾之後在真空中濃縮而得到棕色固體的標題化合物(2.22g，97%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
)：delta 8.28 (s,1H),7.85(d,J = 8.5 Hz,2H),7.69(d,J = 8.5 Hz,2H),7.57(dd,J = 4.6,1.3 Hz,1H),6.98(dd, J = 7.9,1.3 Hz,1H),6.75(dd,J = 7.9,4.6 Hz,1H),5.20(s,2H),2.46(s,3H)。 MS(ESI)m/z：228.1(M+H)
+
。 ＜步驟-3＞：中間體-2-3-3(INT-2-3-3)：N-(2-((4-乙醯基苯基)氨基)苯基)乙醯胺 {化學式24}
在室溫下，對在DCM(40mL)中混合INT-2-3-2(2.22g，9.77mmol)、乙酸酐(1.05g，10.26mmol)及三乙胺(2.97g，29.3mmol)的混合物攪拌4h。在真空中使混合物濃縮而得到標題化合物，其沒有進一步提純而使用於接下來的步驟。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
)：delta 9.56(s,1H),8.62(s,1H),8.08(d, J = 3.3 Hz,1H),7.89(d, J = 9.2 Hz,2H),7.76-7.71(m,3H),6.95(dd, J = 4.6，7.3,Hz, 1H),2.50(s,3H),2.12(s,3H)。 MS(ESI)m/z：270.1(M+H)
+
。 ＜步驟-4＞：中間體-2-3-4(INT-2-3-4)：1-(4-(2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)乙酮 {化學式25}
在100℃下，對乙酸(40mL)中的INT-2-3-3(2.63g，9.77mmol)溶液攪拌15h。冷卻之後，在真空中使反應混合物濃縮。用EtOAc稀釋殘餘油，用飽和的NaHCO
3
溶液使混合物鹼化至pH＞8。用鹽水清洗萃取之有機層，在硫酸鈉上乾燥，過濾之後在真空中濃縮
。
將10-100%醋酸乙酯的DCM溶液用作洗脫劑，藉由柱色譜法(Biotage)在矽膠(100g)上提純殘餘固體而得到淡棕色固體的標題化合物(2.32g，95%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz, DMSO-d
6
)：delta 8.25(dd,J = 5.3,1.3 Hz, 1H),8.18(d,J = 8.5 Hz,2H),8.06(dd,J = 7.9,1.3 Hz,1H),7.77(d,J = 8.5 Hz,2H),7.32(dd,J = 7.9,5.3 Hz,1H),2.68(s,3H),2.53(s,3H)。 MS(ESI)m/z：252.1(M+H)
+
。 ＜步驟-5＞：中間體-2-3(INT-2-3)：2-溴-1-(4-(2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)苯基)乙酮·氫溴酸鹽 對25%的HBr-AcOH(5mL)中的INT-2-3-4(250mg，0.995mmol)攪拌水溶液添加溴(159mg，0.995mmol)。在室溫下，將得到之橙色溶液攪拌1h。用氮類去除溶劑之後，用MeOH/IPE(1/1 w/w)進行粉碎而得到黃色固體的標題化合物(462mg，0.939mmol)。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
):delta 8.51(d,J = 3.3 Hz,1H),8.37(d,J = 7.9 Hz,1H),8.30(d,J = 8.5 Hz,2H),7.89(d,J = 8.5 Hz,2H),7.65-7.59(m,1H),5.07(s,2H),2.72(s,3H)。 MS(ESI)m/z：331.9(M+H)
+
。 中間體-2-4(INT-2-4)：2-溴-1-(4-(4-甲基噠嗪-3-基)苯基)乙酮 {化學式26}
＜步驟-1＞：中間體-2-4-1(INT-2-4-1)：1-(4-(4-甲基噠嗪-3-基)苯基)乙酮 {化學式27}
在80℃下，對1,4-二噁烷(15mL)及飽和NaHCO
3
溶液(15mL)混合3-氯-4-甲基噠嗪(1200mg，9.33mmol)、(4-乙醯基苯基)硼酸(1530mg，9.33mmol)、PdCl
2
(dppf)-CH
2
Cl
2
附加物(381mg，0.467mol)的混合物攪拌3h。冷卻至室溫之後，用EtOAc(200mL)和水(20mL)稀釋混合物，並用矽藻土墊進行過濾。用EtOAc清洗濾餅之後用水和鹽水清洗组合溶液，用硫酸鈉乾燥並進行過濾。之後在真空中濃縮濾液而得到粗製產物(暗黃色油)。藉由柱色譜法將粗製產物用己烷中50-100%乙酸乙酯出溶之矽膠(100g)上提純而得到呈黃色固體的標題化合物(1.24g，62%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,CDCl
3
): delta 9.08(d,J = 5.3 Hz,1H),8.11(d,J = 8.6 Hz,2H),7.71(d,J = 8.6 Hz,2H),7.41(d,J = 5.3 Hz,1H),2.68(s,3H),2.39(s,3H)。 MS(ESI)m/z：213.1(M+H)
+
。 ＜步驟-2＞：中間體-2-4(INT-2-4)：2-溴-1-(4-(4-甲基噠嗪-3-基)苯基)乙酮 在室溫下，對在25%的HBr-AcOH(3mL)中混合INT-2-4-1(450mg)的攪拌混合物，用注射器添加溴(0.104mL，2.01mmol)。經過1.5h之後，用氮類去除溶劑得到粗製產物(黃色固體)。用IPE粉碎粗製產物得到呈黃色的標題化合物(789mg，定量收率，80%的化學純度)。
1
H-NMR(270 MHz,CDCl
3
): delta 9.35(d, J = 5.3 Hz,1H),8.19 (d,J = 7.9 Hz, 2H),8.06(d,J = 5.3 Hz,1H),7.91(d,J = 7.9 Hz,1H),5.05(s,2H),2.45(s,3H)。 MS(ESI)m/z：291.0(M+H)
+
。 實施例-1：3-(2-(2,5-二甲基-1-(5-甲基異噁唑-3-基)-1H-吡咯-3-基)-2-氧代乙基)-8,8-二氟-1,3-二氮雜螺[4.5]癸烷-2,4-二酮 {化學式28}
在100℃下，對在DMF(20mL)中混合INT-2-1(442mg,1.78mmol)、INT-1-1-A(395mg,1.96mmol)、碳酸鉀(737mg,5.33mmol)的混合物加熱3h。冷卻至室溫之後，用水(15mL)急冷卻反應混合物，並用EtOAc-甲苯(9:1)萃取(2次)。用水清洗(3次)组合溶液(約200mL)，接著用鹽水清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾之後在真空中濃縮而得到粗製產物(濃褐色固體)。將粗製產物用DCM-MeOH(20:1)出溶之矽膠(100g)上，藉由柱色譜法提純而得到產物(246mg)。將該產物從MeOH-IPE再結晶化而得到呈褐色的固體標題化合物(205.9mg，28%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
): delta 9.12-9.04(m,1H),8.16(d, J = 8.6 Hz,2H),7.90-7.80(m,1H),7.64-7.56(m,1H),7.43(d,J = 8.6 Hz,2H),5.20(s,2H),2.25-2.00(m,4H),2.09(s,3H), 1.92-1.75(m,2H),1.66-1.52(m,2H)。 MS(ESI)m/z:415.1(M+H)
+
。 實施例2：2-甲基-3-(2-(4-(2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-2-氧代乙基)-1,3-二氮雜螺[4.5]癸烷-1-烯-4-酮 {化學式29}
在160℃下，在微波反應器(Biotage Initiator)中用微波對在DMF(1mL)中混合INT-1-1-A(20.3mg，0.122mmol)、INT-2-2(50mg，0.122mmol)及碳酸鉀(50.6mg，0.366mmol)的混合物照射20min。用水稀釋混合物並用DCM萃取。用硫酸鈉乾燥，過濾之後在真空中濃縮。藉由柱色譜法(Biotage)，用DCM溶液中的0-100% EtOAc，接著EtOAc中的20%MeOH的出溶之矽膠(10g)上提純橙黃色的殘留油，產生產物(14mg，褐色油)，並用己烷粉碎而得到褐色固體的標題化合物(11mg，22%的收率)。
1
H-NMR(270 MHz,DMSO-d
6
):delta 8.30(d,J = 8.6 Hz,2H),7.81(d,J = 8.6 Hz,2H),7.70-7.60(m,1H),7.30-7.15(m,3H),5.23(s,2H),2.08(s,3H),1.76-1.30(m,10H),1.24(s,3H)。 MS(ESI)m/z:415.32(M+H)
+
。 按照實施例-1的流程，從中間體(INT-2-1～INT-2-4)及咪唑啉酮衍生物(INT-1-2-A及INT-1-3-A)製備以下實施例(3～6)。藉由準備好的LC-MS系統，以通常的方式進一步實施提純。將藉由HPLC-QC方法觀察到之MS及保留時間記載於表10。 (表10)
(表11)
薄荷醇-誘導之Ca
2+
流入穩定表達人TRPM8之HEK293細胞內之測定 利用穩定表達人TRPM8之HEK293細胞，藉由基於細胞之Ca
2+
流入分析來特定化合物的活性。 使穩定表達人TRPM8之HEK293細胞在5% CO
2
加濕培養器和T175燒瓶中在37℃的溫度下生長至約80%匯合度。培養基組成由達爾伯克氏改良伊格爾培養基(高葡萄糖)、10%胎牛血清(FCS)、100單位/mL的青黴素、100 microg/mL的鏈黴素及600 microg/mL的遺傳黴素構成。進行分析24小時之前，將細胞以每孔30,000細胞的培養基中的密度接種於多聚-D-賴胺酸塗覆之384-孔板(BD FALCON)，在5%CO
2
、37℃下生長一夜。實施分析當天，去除生長之培養基，在室溫下經1小時在細胞中加載溶解於分析用緩衝液(Hank's balanced salt solution(HBSS)、19.4mM HEPES pH7.4，2.5mM Probenecid)中之0.5 microM Fluo4-AM(Molecular Probes)和0.005% Pluronic F-127。用分析用緩衝液清洗之後，將細胞與各種濃度的化合物預培養5分鐘。藉由利用Hamamatsu Photonics Functional Drug Screening System(FDSS)之細胞成像技術來監控由30 microM的薄荷醇的添加而引起之細胞間鈣濃度的變化。藉由11-點劑量反應研究來決定本發明的化合物的IC
50
值。使用複孔的平均作為每個資料點來描繪出曲線。最後，依據由XLfit(ID Business Solutions Ltd.)決定之最佳擬合劑量曲線來計算IC
50
值。 所有被測化合物在上述分析中均對TRPM8顯出小於約3 microM的IC
50
。較佳的化合物在上述分析中對TRPM8顯出小於約500nM之IC
50
。更佳的化合物在上述分析中對TRPM8顯出小於約100nM的IC
50
。最佳的化合物在上述分析中對TRPM8顯出小於約50nM的IC
50
。 對TRPM8具有＜500nM的IC
50
值之化合物係實施例1、實施例2、實施例3、實施例4、實施例5及實施例6之化合物。 對TRPM8具有＜100nM的IC
50
值之化合物係實施例1、實施例2、實施例3、實施例4、實施例5及實施例6之化合物。 對TRPM8具有＜50nM的IC
50
值之化合物係實施例1、實施例2、實施例3、實施例5及實施例6之化合物。 薄荷醇-誘導之Ca
2+
流入人惡性黑色素瘤細胞株中之測定 TRPM8在人惡性黑色素瘤細胞株G-361(Health Science Research Resources Bank，Osaka，Japan)中表達，因此將G-361細胞用於體外功能分析。 使G-361細胞在5% CO
2
加濕培養器和T175燒瓶中在37℃的溫度下生長至約80%匯合度。培養基組成由McCoy's 5A培養基和10% FCS構成。進行分析48小時之前，將細胞以每孔12,000細胞的培養基中的密度接種於多聚-D-賴胺酸塗覆之96-孔板(Corning)，在5% CO
2
、37℃下生長一夜。實施分析當天，去除生長之培養基，在室溫下經1小時在細胞中加載溶解於分析用緩衝液(HBSS，19.4mM HEPES pH7.4，2.5mM Probenecid)中之5 microM Fluo-4AM(Molecular Probes)和0.005% Pluronic F-127。用分析用緩衝液清洗之後，將細胞與各種濃度的化合物預培養5分鐘。藉由利用FDSS之細胞成像技術來監控由300 microM的薄荷醇的添加而引起之細胞間鈣濃度的變化。 藉由點劑量反應研究來決定本發明的化合物的IC
50
值。使用複孔的平均作為每個資料點來描繪出曲線。最後，依據由XLfit(ID Business Solutions Ltd.)決定之最佳擬合劑量曲線來計算IC
50
值。 本發明的化合物顯出良好的IC
50
值，其顯示適合於上述用途。 神經病變性疼痛的慢性壓迫損傷(CCI)-誘導之模型；異常性冷疼痛 從Charles River Japan,Inc.購入雄性Sprague Dawley大鼠(實驗開始時為7週齡，n=7-10/一次治療)進行使用。按照Bennett GJ和Xie YK(Pain 1988,33：87-107)的方法形成CCI狀態。腹膜內注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠。使左側共同坐骨神經以去掉黏附組織之狀態暴露在大腿部的中間，在其周圍利用4-0絲線(Ethicon Inc.)隔著約1mm的間隔鬆散地結紮4道。除了坐骨神經結紮以外藉由相同方式實施假手術。CCI外科手術後經過1-2週後，如Tanimoto-Mori S et al.(Behav Pharmacol.,19 : 85-90, 2008)所記載，使用帶溫度控制器(Mode13300-0,CAL Controls Inc.)之冷卻板(LHP-1700CP，TECA)對異常性冷疼痛進行評價。使動物適應不鏽鋼板(15×33cm)上的由透明壓克力盒(10×12×12cm)構成之裝置。將冷卻板的表面維持為10℃，以0.1℃的精確度連續監控板的溫度。為了進行實驗，將大鼠載置於冷卻板上，以120秒為截止值，前後給藥化合物，測定縮足潛伏期(PWL)。將本發明的化合物或其媒介物口服給藥、皮下給藥或腹膜內給藥。如下計算抑制率。 (數學式1)
本發明的化合物在該模型中顯出較強的活性，其顯示適合於上述用途。 神經病變性疼痛的慢性壓迫損傷(CCI)-誘導之模型；靜態異常性疼痛 從Charles River Japan, Inc.購入雄性Sprague Dawley大鼠(實驗開始時為7週齡，n=7-10/一次治療)進行使用。按照Bennett GJ和Xie YK(Pain 1988,33:87-107)的方法形成CCI狀態。腹膜內注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠。使左側共同坐骨神經以去掉黏附組織之狀態暴露在大腿部的中間，在其周圍利用4-0絲線(Ethicon Inc.)隔著約1mm的間隔鬆散地結紮4道。除了坐骨神經結紮以外藉由相同方式實施假手術。CCI外科手術後經過2-3週時，如Field MJ et al.(Pain 1999,83:303-311)所記載，藉由纖毛機械刺激針(VFHs)對靜態異常性疼痛進行評價。開始實驗之前，使實驗動物適應網格底籠子中。將VFH緊貼後足足底，以逐漸增加力之方式進行實驗(0.16g、0.4g、0.6g、1g、1.4g、2g、4g、6g、8g、10g、15g及26g)。將各VFH按壓於相側足6秒鐘，或者按壓至發生收縮反應。出現一次收縮反應，則以更弱的壓力按壓VFH再次進行實驗，直至不發生收縮反應。將誘發反應所需的最低壓力記為縮足閾值(PWT)。若實驗動物在無害的1.4g VFH以下作出反應，則確定為靜態異常性疼痛。將本發明的化合物或其媒介物口服給藥、皮下給藥或腹膜內給藥。如下計算抑制率。 (數學式2)
本發明的化合物在該模型中顯出較強的活性，其顯示適合於上述用途。 神經病變性疼痛的奧沙利鉑-誘導之模型；異常性冷疼痛及靜態異常性疼痛 從Charles River Japan, Inc.購入雄性Sprague Dawley大鼠(實驗開始時為7週齡，n=7-10/一次治療)進行使用。按照Gauchan P et al.(NeuroSci Lett,2009,458,93-95)的方法進行本研究。將奧沙利鉑(Yakult Co.,Ltd.)溶解於5%葡萄糖中。在2週期間，以1週2次的頻率以腹腔內給藥的方式注射奧沙利鉑(4mg/kg)。如Tanimoto-Mori S et al.(Behav Pharmacol.,19： 85-90,2008)所記載，使用帶溫度控制器(Mode13300-0, CAL Controls Inc.)之冷卻板(LHP-1700CP,TECA)對異常性冷疼痛進行評價。使動物適應不鏽鋼板(15×33cm)上的由透明亞克力盒(10×12×12cm)構成之裝置。將冷卻板的表面維持為10℃，以0.1℃的精確度連續監控板的溫度。為了進行實驗，將大鼠載置於冷卻板上，以120秒為截止值，前後給藥化合物，測定PWL。利用VFH對靜態異常性疼痛進行評價。開始實驗之前，使實驗動物適應網格或網眼底籠子。將VFH緊貼後足足底側面，以逐漸增加力之方式進行實驗(0.16g、0.4g、0.6g、1g、1.4g、2g、4g、6g、8g、10g、15g及26g)。若出現一次收縮反應，則以更弱的壓力按壓VFH來再次進行實驗，直至不發生收縮反應。將誘發反應所需的最低壓力記為縮足閾值(PWT)。為了進行實驗，給藥化合物前後測定PWT。將本發明的化合物或其媒介物口服給藥、皮下給藥或腹膜內給藥。如下計算抑制率。 本發明的化合物在模型中顯出較強的活性，其顯示適合於上述用途。 神經病變性疼痛的奧沙利鉑-誘導之模型；冷痛覺過敏/異常性冷疼痛 從Charles River Japan, Inc購入雄性Sprague Dawley大鼠(實驗開始時為7週齡，n=8-10/一次治療)進行使用。將奧沙利鉑(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.)以注射用途溶解於5%葡萄糖中，製造4mg/mL溶液。在2週期間，以1週2次的頻率(第1天、第2天、第8天、第9天)，以1mL/kg的容積腹膜內給藥奧沙利鉑(4mg/kg)。將治療第一天定義為第1天。藉由丙酮試驗對冷痛覺過敏/異常性冷疼痛進行評價。開始實驗之前，使實驗動物適應網格或網眼底籠子。將丙酮(50mL)塗佈於後足足底。塗佈之後，將傷害性反應如下計分：0；無反應、1；跺足和/或抬足、2；一次舔足/咬足或縮足、3；反覆舔足/咬足和/或縮足。將丙酮反覆塗佈於左側及右側後足(各個足2次，總計塗佈4次)，因此總分最高12分，最低0分。為了進行實驗，給藥化合物前後測定總分。將本發明的化合物或其溶劑口服給藥、皮下給藥或腹膜內給藥。 本發明的化合物在該模型中顯出較強的活性，其顯示適合於上述用途。 伊西林-誘導之大鼠濕狗樣抖動 利用雄性Sprague Dawley大鼠(6-7週齡，Charles River Japan, Inc.，n=5-8/一次治療)，用於評價本發明的化合物所具有之伊西林誘導之自發的濕狗樣抖動(WDS)行為的阻斷效果。注射伊西林之前，使大鼠習慣於觀察用箱子(21.5×26.5×25.0 cm)至少20分鐘。將溶解於PEG400中之伊西林(Sigma)以0.5、1.0或2.5mg/kg腹膜內給藥，注射伊西林之後，計數30min自發的WDS。在注射伊西林之前，將本發明的化合物或其媒介物口服給藥、皮下給藥或腹膜內給藥。如下計算抑制率。 (數學式3) 抑制率(%)；[1-{化合物WDS計數/媒介物WDS計數)]數S射伊西 本發明的化合物在該模型中顯出較強的活性，其顯示適合於上述用途。 豚鼠的體外排尿頻率的測定 用氨基甲酸乙酯麻醉雌性豚鼠(300-450g)。實施中線腹部切開(midline abdominal incision)手術，使尿管兩側均暴露並進行結扎，將導尿管移植於膀胱極(bladder pole)之後閉合腹部。為了給藥化合物而使頸靜脈暴露，插入導尿管。進行該手術之後，通過t型導管將膀胱的導尿管和輸液泵及壓力感測器連接。輸注生理鹽水，並記錄膀胱內壓。經過1小時平衡時間，一定的排尿週期成立時，將薄荷醇(0.2-0.6mM)添加到輸注生理鹽水中。在該時刻，將媒介物(對照組)或TRPM8拮抗劑以靜脈內注射方式大量給藥。計算對排尿間隔(因膀胱的容量而不同)及排尿壓力之治療效果，並在媒介物-治療組與化合物-治療組之間進行比較。 本發明的化合物在該模型中顯出較強的活性，其顯示適合於上述用途。 麻醉之膀胱炎患者大鼠中之膀胱活性的測定 使用雌性Sprague-Dawley大鼠(7-8週齡，Japan SLC)。將溶解於生理鹽水(Otsuka)中之環磷醯胺(Wako)以200mg/kg腹膜內給藥。第二天，給藥0.9mg/kg的氨基甲酸乙酯，麻醉大鼠。藉由中線切開手術來打開腹部，通過膀胱頂(dome)移植聚乙烯導尿管。藉由T型導管將膀胱的導尿管連接於壓力感測器及微量注射泵。在室溫下，以3mL/hour的速度將生理鹽水輸注於膀胱。在給藥被測化合物之前，經約1小時將膀胱內壓連續記錄在圖表筆式記錄儀(chart pen recorder)中。 將溶解於含有WellSolve (Celeste)之PBS中之被測化合物以1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg或10mg/kg靜脈內給藥。 在給藥被測化合物之後，根據60分鐘的排尿間隔計算排尿頻率，並由膀胱內壓測定資料進行分析。利用Dunnett'方法，與媒介物組作對比來評價由被測化合物介導之頻率抑制率。將小於5%的概率水平視為顯著差異。藉由平均標準誤差法，由8-12只大鼠分析資料。 所有被測化合物均對麻醉之患者大鼠中的膀胱異常活動帶來顯著影響。 人多非利特結合分析 準備人HERG轉染HEK293S細胞，在內部(in-house)使其生長。使收集之細胞懸浮於50mM 3-HCl(4℃下，pH為7.4)之後，利用設定為總功率之便攜式Polytron PT 1200粉碎機，在冰上均質化20sec。在4℃下，將該均質液以48,000×g離心分離20min。接著，使顆粒再次重懸、均質化之後，以相同的方式離心分離1次以上。使最終顆粒重懸於適當容積的50mM 3-HCl、10mM KCl、1mM MgCl
2
(4℃下，pH為7.4)中，均質化、等分，在-80℃下保存至進行使用為止。在利用BCA蛋白質分析試劑盒(PIERCE)及ARVOsx平板讀取器(Wallac)之蛋白質濃度測定中，使用膜等分的等份量。結合分析係在384-孔板中30 microL的總容積中進行。活性係利用螢光偏振技術以PHERAstar(BMG LABTECH)進行測定。在室溫下，將測試化合物(10 microL)與10 microL的螢光配體(6nM Cy3B-標記多非利特衍生物)及10 microL的膜均質液(6微克的蛋白質)培養120分鐘。在最終濃度下以10 microM E4031決定非特異性結合。 與上述記載之TRPM8功能分析中的IC
50
值相比，本發明的所有被測化合物在人多非利特結合中顯出更高的IC
50
值。 代謝穩定性分析： 人肝微粒體(HLM)中的半衰期 在96-深孔板上，在37℃下培養測試化合物(1 microM)和100mM磷酸鉀緩衝液(pH7.4)中的1mM MgCl
2
及0.78mg/mL HLM(HL101)或0.74mg/mL HLM(Gentest UltraPool 150)或0.61mg/mL HLM(Xeno Tech XTreme 200)。根據需要，將反應混合物分為兩個組，亦即非-P450及P450組。NADPH僅添加到P450組的反應混合物中。(並且還使用NADPH生成系統來代替NADPH)在0、10、30及60min時刻收集P450組樣品的等份量，其中，0分鐘時刻係顯示將NADPH添加到P450組的反應混合物時之時間。在-10及65分鐘時刻收集非-P450組樣品的等份量。用含有內標物之乙腈溶液萃取收集之等份量。使沉澱之蛋白質在離心分離器(2000rpm，15min)中旋轉。上清液中的化合物濃度係藉由LC/MS/MS系統進行測定。 半衰期值係繪製時間對比化合物/內標物的峰值面積比的自然對數來獲得。代謝速度(k)係由通過點之最佳擬合線條的傾斜計算出。其利用下述公式換算為半衰期值： (數學式4) 半衰期=ln 2/k 本發明的化合物顯出較佳的穩定性，其顯示適合上述用途。 WO2014/130582的實施例2-121所記載之接近化合物在HLM中具有小於5分鐘的半衰期，固有清除率(CL
int
)超過215mL/min/kg。相對於此，本發明的化合物在代謝穩定性評價中HLM中的半衰期小於5分鐘，CL
int
為＜100mL/min/kg，這會呈現良好的藥物動力學特性。 藥物-藥物相互作用分析 該方法主要包括對各化合物3 microM或0.4-50 microM，由探針(對CYP1A2為他克林2 microM或非那西汀50 microM，對CYP2B6為安非拉酮3 microM，對CYP2C8為阿莫地喹2 microM，對CYP2C9為雙氯高滅酸5或10 microM，對CYP2C19為S-美芬妥因40 microM，對CYP2D6為右美沙芬5 microM或丁呋洛爾5 microM，對CYP3A4為咪達唑侖2 microM或2.5 microM)決定代謝物質生成抑制率。 更具體而言，該分析如下進行。將包含0.1mg蛋白質/mL或0.05mg蛋白質/mL的人肝微粒體、100mM磷酸鉀緩衝液(pH7.4)、1mM MgCl
2
或3.3mM MgCl
2
及探針之170 microL混合物作為基質，將化合物(60 microM，10micro L)預培養合適的時間(5min或30min)。添加20 microL的10mM NADPH或10 microL的13microM NADPH來開始進行反應。在37℃下培養分析板。在合適的時刻(例如8min或10min)將乙腈或甲醇添加到培養溶液中。 藉由LC/MS/MS系統測定上清液中的代謝產物濃度。在測試化合物存在或不存在下，依據代謝產物的生成率(%)或者由基於測試化合物濃度的代謝產物的生成率(%)計算的IC
50
值來解釋藥物之間的相互作用程度。 本發明的化合物顯出較佳的結果，其顯示適合於上述用途。 血漿蛋白質結合分析 利用96-孔板類型裝置，藉由平衡透析方法測定測試化合物(1 microM)的血漿蛋白質結合。將HTD96a(註冊商標)、再生維生素膜(分子量截止值12,000-14,000，22mm×120mm)徹夜浸泡在蒸餾水中之後，浸泡在30%乙醇中15分鐘，最後浸泡在透析緩衝液(達爾伯克氏磷酸鹽緩衝生理鹽水，去除CaCl
2
和MgCl
2
)中20分鐘。使用人、Sprague-Dawley大鼠及比格犬的冷凍血漿。組裝透析裝置，將150 microL的化合物-加強血漿(compound-fortified plasma)添加到各孔的一側，並將150 microL的透析緩衝液添加到各孔的另一側。在37℃下，以150 rpm培養4小時之後，採樣血漿及緩衝液的等份量。用300 microL的含有分析用內標化合物之乙腈或乙腈/甲醇(1:1)萃取血漿及緩衝液中的化合物。藉由LC/MS/MS系統決定化合物濃度。 依據下述式(A)或(B)計算未結合化合物的比率： (數學式5) (A)fu=1-(([血漿]
eq
-[緩衝液]
eq
)/([血漿]
eq
)) 上述式中，[血漿]
eq
及[緩衝液]
eq
分別是血漿及緩衝液中化合物的濃度。 (數學式6)
上述式中，Cp是血漿樣品內化合物的峰值面積； Cis
,
p是血漿樣品內內標物的峰值面積； Cb是緩衝液樣品內化合物的峰值面積； Cis
,
b是緩衝液樣品內內標物的峰值面積；且 4及4/3分別是血漿及緩衝液中的稀釋率的倒數。 本發明的化合物顯出較佳的血漿蛋白質結合，其顯示適合於上述用途。 平衡水溶性研究 將各化合物的DMSO溶液(2 microL，30mM)分配到96-孔玻璃底板的各孔中。將磷酸鉀緩衝溶液(50mM，198 microL，pH6.5)添加到各孔中，在37℃下將混合物旋轉振蕩的同時培養24小時。在2000g下離心分離5分鐘之後，藉由Isopore膜過濾上清液。藉由一般的梯度HPLC方法(J. Pharm. Sci., 95, 2115-2122， 2006)決定樣品的濃度。 本申請中所引用之包括已交付專利、專利申請及期刊論文(但未限於此)之所有公開出版物全部作為參照而分別引用於本申請中。雖然將公開之形態作為參照而在上述中對本發明進行了說明，但如果是本領域技術人員就可以認識到詳細記述之具體實驗只不過是本發明的一例。應理解為只要不脫離本發明宗旨就可以進行多種變形。因此，本發明僅受下述申請專利範圍的限制。