TW201706600A - 川崎氏症之診斷與治療 - Google Patents

川崎氏症之診斷與治療 Download PDF

Info

Publication number
TW201706600A
TW201706600A TW105135195A TW105135195A TW201706600A TW 201706600 A TW201706600 A TW 201706600A TW 105135195 A TW105135195 A TW 105135195A TW 105135195 A TW105135195 A TW 105135195A TW 201706600 A TW201706600 A TW 201706600A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
sample
amount
individual
biomarker
treatment
Prior art date
Application number
TW105135195A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI655433B (zh
Inventor
陳垣崇
鄔哲源
柯泰名
郭和昌
張正成
Original Assignee
中央研究院
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 中央研究院 filed Critical 中央研究院
Publication of TW201706600A publication Critical patent/TW201706600A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI655433B publication Critical patent/TWI655433B/zh

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/521—Chemokines
    • G01N2333/522—Alpha-chemokines, e.g. NAP-2, ENA-78, GRO-alpha/MGSA/NAP-3, GRO-beta/MIP-2alpha, GRO-gamma/MIP-2beta, IP-10, GCP-2, MIG, PBSF, PF-4 or KC
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5418—IL-7
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/7056—Selectin superfamily, e.g. LAM-1, GlyCAM, ELAM-1, PADGEM
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30 CD40 or CD95
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/328—Vasculitis, i.e. inflammation of blood vessels

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本發明描述一種診斷、治療或監測治療個體之川崎氏症之方法。該方法包括檢測獲自該個體之樣品中的生物標記量，該生物標記係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素(selectin)、IP-10、或IL-33。將該量與截止量進行比較。本發明亦描述一種用於進行該方法之套組。

Description

川崎氏症之診斷與治療 相關申請案之交叉參考
本發明主張於2014年7月24日申請之美國臨時申請案第62/028,633號之優先權，該發明之內容以全文引用之方式併入本文中。
川崎氏症(KD)(一種於較小兒童中觀測到之多系統炎症)可導致急性血管炎，最為顯著影響冠狀動脈。在沒有治療的情況下，大約20至25%之罹患KD的兒童發展成冠狀動脈畸形(CAA)。靜脈注射用免疫球蛋白(IVIG)治療可將CAA之發病率減低至約5%，然早期檢測係必要的。
KD診斷係困難的，尤其於早期階段。目前，KD診斷係基於臨床症狀，包括發燒持續5天、兩側結膜充血無滲出物、多形性疹、唇及口變化(唇紅斑及皸裂、草莓舌、及口咽黏膜擴散性充血)、四肢變化(手足紅斑及水腫)、及頸部淋巴結病變(直徑1.5cm)。然而，KD與其他病狀間之臨床特徵及實驗室參數的重疊使診斷難以確定，及尚無特定實驗室試驗。
因此，藉由實驗室分析鑑別特異性生物標記以促進KD診斷對於預防嚴重KD後遗症，尤其係CAA具有價值。
本文所述的係一種診斷個體之川崎氏症的方法。該方法包括檢 測來自疑似罹患川崎氏症之個體之樣品中的生物標記量，該生物標記係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素、IP-10、或IL-33；及將該量與截止量進行比較；其中若該量高於或低於該截止量，則該個體確定為罹患川崎氏症。於一實施例中，該生物標記係IP-10及若該量高於該截止量，則該個體確定為罹患川崎氏症。該樣品可係自該個體開始發燒的0至10天(例如，5天)內自該個體獲得。
此外，本文描述一種治療個體之川崎氏症的方法。該方法包括檢測來自疑似罹患川崎氏症之個體之第一樣品中的生物標記第一量，該生物標記係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素、IP-10、或IL-33，其中該第一量高於或低於截止量；及向該個體投與針對川崎氏症之治療。於一實施例中，該生物標記係IP-10及該第一量高於該截止量。該治療係靜脈注射用免疫球蛋白(IVIG)或IVIG及類固醇。第一樣品可自該個體開始發燒的0至10天(例如，5天)內自該個體獲得。該方法可進一步包括在投與該治療之後自該個體獲得第二樣品；檢測於該第二樣品中之生物標記量；及若於該第二樣品中之量高於該截止量，則繼續該治療或投與不同治療。
本文中亦揭示一種監測個體之川崎氏症之治療的方法。該方法包括檢測於該治療之前或期間第一時間點時自該個體獲得的第一樣品中的生物標記第一量，該生物標記係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素、IP-10、或IL-33；檢測在第二時間點時自該個體獲得的第二樣品中的生物標記第二量；將該第一量及與第二量進行比較；及基於該比較制定治療決策。該生物標記可係IP-10及該治療係靜脈注射用免疫球蛋白(IVIG)。
於任一以上方法中，該樣品可係體液樣品(例如，血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿液、或唾液樣品)。免疫測定法可用於檢測該樣品中之生物標記量。例如，該免疫測定法可係ELISA、蛋白質陣列、 流式細胞計數法、建立於磁珠上之多重免疫測定、西方墨點法、點墨法、或酶聯免疫斑點法(ELISPOT)。IP-10之1,318pg/mL的截止血漿量可用於任一以上方法中。於一實施例中，該患者群體係漢族。
本文亦描述一種用於診斷個體之川崎氏症或監測個體之川崎氏症之治療的套組。該套組可包括用於檢測生物標記量的試劑(例如，抗體)或裝置(例如，試驗條、固態載體、晶片或盤)。該生物標記可係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素、IP-10或IL-33。
一或多個實施例之細節係於下列描述中進行闡述。
圖1係一組顯示於川崎氏症(KD)之急性階段期間蛋白質量的圖。於非KD發燒對照(n=20)及KD患者(n=37)中使用Bio-Plex系統測量血漿細胞因子量。發燒對照(n=20)及KD病例(n=37)中之自蛋白質陣列鑑定之血漿E-選擇素、MPIF-1、及IP-10的量係藉由酶聯免疫吸附測定法來確定。IL-17F、IL-33、sCD40L、E-選擇素、MPIF-1、及IP-10之p值分別為1.5×10-2、4.7×10-3、2.8×10-2、8.6×10-3、2.3×10-8、及4.1×10-11。每個點表示自單個個體變化<5%標準偏差下之3次分析的平均值。*，p<0.05、**，p<0.01、***，p<0.001；不成對史都登氏(Student's)t試驗。
圖2係一組顯示自發現及重複研究之發燒對照及KD患者的組合數據及具有IP-10之血漿量之川崎氏症之預測模型的接受者操作特徵(ROC)曲線的圖。於發燒對照(n=57)及KD患者(n=40)中之血漿IP-10量係藉由使用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)來確定。彼等於發燒對照(n=77)及KD病例(n=77)中者係亦使用ELISA測量。***，p<0.001；不成對史都登氏T試驗。每個點表示自單個個體變化<5%(標準偏差/平均值)下之3次測定的平均值。基於該組合數據，於KD患者中之血漿IP-10量的ROC曲線係相對發燒對照繪製。生物標記之最佳截止值係作為 其最大敏感性及特異性之總和來測定。
圖3係顯示於盲法驗證研究中之IP-10的血漿量的圖。於該驗證研究(患者<6歲)中(其包括發燒對照(C-F，n=37)、不完全KD患者(K-1，n=3)、及KD患者(K，n=20))之血漿IP-10量係使用酶聯免疫吸附測定法來確定。誤差線表示三個平行值的標準偏差。
圖4A係顯示自開始發燒<4天(平均值，3.4±0.90天；範圍，1至4天)或開始發燒>5天(平均值，6.0±1.05天；範圍，5至8天)獲得之KD患者血液中之IP-10血漿量的點陣圖。每個點表示自單個個體變化<5%(標準偏差/平均)下之3次分析的平均值。
圖4B係顯示在IVIG治療之前或一週之後45個KD患者之血漿IP-10量的圖。
圖5係一組顯示於急性KD患者之T細胞中之細胞表面趨化因子受體CXCR3的圖。左圖：開口曲線表示經抗CXCR3抗體染色之CD3+T細胞之螢光活化細胞篩檢器直方圖。患者KD-1至KD-6係KD之急性階段。HD表示健康供體。右圖：彙總自3個健康供體及6個急性KD患者之CD3+T細胞中之CXCR3的平均螢光強度的柱狀圖。**，p<0.01，不成對史都登氏t試驗。
出乎意料地發現罹患KD之個體中之特定生物標記量不同於非KD發燒症狀個體中者。
生物標記包括IL-17F(Genbank寄存編號NP_443104)、IL-33(Genbank寄存編號NP_001186570)、sCD40L(Genbank寄存編號NP_001289682)、CCL23/MPIF-1(Genbank寄存編號NP_665905)、E-選擇素(Genbank寄存編號NP_000441)、及CXCL10/IP-10(Genbank寄存編號NP_001556)。已發現KD患者中之IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素、及IP-10之量高於非KD發燒個體中者。KD患者中之IL-33量低於 非KD發燒個體中者。
因此，可檢測疑似罹患KD之個體(例如顯示KD症狀之個體)之樣品中的一或多種生物標記量，及與其對應預定的截止量進行比較以判定該個體是否罹患KD。例如，若個體中之IP-10量高於對應截止量，則指示該個體罹患KD。本文所述之任何生物標記可用於與其他診斷試驗、生物標記或KD之風險因素組合以診斷KD。
樣品可係體液樣品，例如血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿液、或唾液樣品。樣品中之生物標記量可使用多種方法測定，例如ELISA、蛋白質陣列、流式細胞計數法、建立於磁珠上之多重免疫測定法、西方墨點法、點墨法、或ELISPOT。於一個例示性方法中，將個體之血漿或血液樣品點於濾紙上，其可經乾燥及儲存。然後經乾燥之血液或血漿斑點可用於ELISA中以檢測及量化該樣品中之生物標記量。參見例如Aabye等人，PLoS ONE,7(6)；e39228，2012年6月。特異性識別上述生物標記之抗體係市售或可使用相關技藝中已知方法生產。
生物標記的預定截止量(其表示非KD個體中之相同生物標記量)可基於KD患者及非KD個體組中的生物標記之代表量確定。非KD個體可包括具有與KD之臨床特徵及/或實驗室參數重疊的疾病或症狀(例如，持續發燒、皮疹、幼年型類風濕性關節炎、特定病毒及細菌感染(諸如猩紅熱及毒性休克症候群)，及示於下表2中之症狀)的個體。應用適合統計分析於所獲得之生物標記量以確定區分KD患者與非KD個體(尤其具有臨床上類似KD之症狀的非KD個體)之截止量。
本文所述之生物標記(例如，IP-10)可用於KD之早期診斷。例如，疑似罹患KD之個體中之生物標記量可於該個體開始發燒的0至10天內(例如，小於3天、小於4天、小於5天、或小於10天)檢測。然後將經檢測之生物標記量與對應截止量進行比較以確定該個體是否罹患 KD。如上所述，早期診斷及因此早期介入治療可預防KD之嚴重併發症。
一些KD患者不顯示KD之所有典型症狀。上述方法可用於此等KD病例(即，不完全或非典型KD)之診斷。
使用一或多種上述生物標記確定個體罹患KD之後，可投與針對KD之治療給該個體。早期治療降低個體之冠狀併發症的風險。IVIG已顯示可使患者退燒及降低發展冠狀畸形之風險。此外，可用阿斯匹靈控制發燒。一些患者可能需要第二劑量之IVIG以退燒。一些患者對IVIG無反應。於彼等情況中，可向該個體投與其他治療。此等替代治療包括抗TNF-α抗體(例如，英利昔單抗(Infliximab))及IVIG與類固醇之組合。
任何上述生物標記亦可用於監測KD之治療。經歷KD治療(例如，IVIG)之患者中的KD生物標記量可在多個時間點(例如，在治療之前及在開始治療之後的一週內的一或多個時間點)處測定。在治療期間，生物標記量趨向其對應截止量之變化指示該治療係有效的。例如，於一時間點處之患者的IP-10量比於早期時間點處之量更低指示該治療係有效的。若於後期時間點處之生物標記量等於或不顯著不同於在早期時間點處之量(例如，於開始治療之前或剛好於開始治療之後)，則指示該治療需繼續(例如，等於或高於前劑量之IVIG之另一劑量)或需投與替代治療。換言之，在治療期間之個體中之KD生物標記量可用於制定治療決策(例如，繼續或終止治療，或投與不同治療)。
此外，任何上述生物標記亦可用於評估針對KD之候選化合物或治療之療效。KD生物標記量可於向個體投與該化合物或治療之前、期間、及/或之後測定。
用於診斷或監測KD之治療的套組可包括用於檢測KD生物標記(例如，IP-10)量的試劑或裝置(例如，試驗條、固態載體、或盤)。該 試劑可係特異性針對KD生物標記之抗體。該裝置亦可包括(例如，塗覆)特異性針對KD生物標記之抗體。
下列具體實例僅視為說明，而不絕以任何方式限制本發明剩餘部分。在沒有進一步詳細闡述情況下，據信熟習此項技術者可基於本文之說明，最大限度地利用本發明。本文所引述之所有公開案以全文引用之方式併入本文中。此外，以下所提出之任何機制不以任何方式限制本申請專利範圍之範疇。
實例
吾人登記214名具有發燒及KD臨床特徵暗示之兒童。彼等中僅100名經診斷為KD。使用無偏、大規模、定量蛋白質陣列全面分析其血漿樣品之細胞因子、趨化因子、及細胞黏附分子。此研究分3個階段進行：發現、重複、及盲法驗證。於發現階段期間[n(KD)=37，n(對照)=20]，相比於對照，KD患者在急性階段期間的介白素-17F、sCD40L、E-選擇素、CCL23(MPIF-1)、及CXCL10(IP-10)之表現上調。觀察到IP-10量之顯著增加(KD，3,037±226.7pg/mL；對照，672±130.4pg/mL；p=4.1×10-11)。組合之發現及重複數據(n(KD)=77，n(對照)=77)之接受者操作特徵分析顯示，IP-10量具有高曲線下面積值(0.94[95%信賴區間，0.9055-0.9778]；敏感性，100%；及特異性，77%)。在最佳截止值為1,138pg/mL下，盲法驗證研究證實IP-10量係KD之良好預測器。在靜脈注射用免疫球蛋白治療下，IP-10量回到正常。IP-10、CXCR3之下游受體於急性KD患者之T細胞中被活化。
該研究係由中國醫藥大學附設醫院(China Medical University Hospital)、高雄長庚紀念醫院(Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital)、及台灣中央研究院之機構審查委員會(Institutional Review Board)及機構審查委員會的倫理委員會批准。自個體及其家長獲得書面知情同意書。
患者
吾人登記214名具有發燒及KD臨床特徵暗示的漢族兒童。彼等中僅100名經最終診斷為KD。此等KD兒童之人口統計學及臨床特徵顯示於表1。最終診斷為非KD的114名兒童顯示於表2。
參與該研究之兒童係自台灣的不同地理區域的醫療中心招募，長庚紀念醫院系統(包括於台灣南部及北部的四個醫院)及中國醫藥大學附設醫療中心(包括於台灣中部的3個地區醫院)。KD係使用已知臨床診斷標準進行診斷。參見Newburger等人，Pediatrics.2004；114：1708-1733；及Kim及Dedeoglu,Curr Opin Pediatr.2005；17：695-702。100個KD患者中，37個係包含於研究之發現階段，40個包含於重複階段，及23個包含於盲法驗證階段，其包括3個具有不完全KD表現之患者(iKD係定義為存在4種日本標準之主要症狀)。參見Newburger等人，Circulation.2004；110：2747-2771。
所有變量數據表示為平均值±標準偏差(SD)。KD，川崎氏症；FC，發燒對照。
細胞因子、趨化因子、及細胞黏附分子之多重分析及量化
將獲自研究個體之新鮮肝素化血樣以2,000g離心10min。然後將血漿樣品分成等分試樣及儲存於-80℃以供進一步分析。樣品以一式兩份使用Bio-Plex ProTM人類Th-17細胞因子板15-Plex(Bio-Rad,Hercules,CA,USA)運行。將細胞因子之完整清單(IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-31、IL-33、IFN-γ、sCD40L、及腫瘤壞死因子[TNF]-α)以此等分群量化，其檢測限值及再現性提供於產品手冊中。使用15不同組載有對各細胞因子特異之捕捉單株抗體的螢光染色珠粒。使用Bio-Plex蛋白質陣列系統(Bio-Rad)測量及量化信號。使用與Bio-Plex管理軟體版本3.0(Bio-Rad)整合之Bio-Plex蛋白質陣列系統進行分析。使用Bio-Plex校準套組(Bio-Rad)調整報導子共軛物發射波長。使用Bio-Plex驗證套組版本3.0(Bio-Rad)驗證個別珠粒特徵的流體力學性能、一致光學對準、雙黏體(doublet)辨別及鑑定。針對初始篩選，使用人類蛋白質陣列(AAH-CYT-G8-8；Raybiotech Inc.,Norcross,GA,USA)檢測6個KD 患者之血漿，該陣列評估54種趨化因子及CAM以鑑定在KD中顯示表現上調之蛋白質。完全趨化因子/CAM名稱可於raybiotech.com網站中得到。藉由使用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)來進一步量化剩餘KD患者中經鑑定的上調基因，即，IL-9、IP-10、E-選擇素、及MPIF-1。E-選擇素、MPIF-1、及IP-10 ELISA之檢測限度分別係30pg/mL、7pg/mL、及8pg/mL。驗證IP-10之再現性(組內測定法(intra-assay)：CV<10%；組間測定法(inter-assay)：CV<12%)及特異性；此ELISA套組顯示與所試驗之任何細胞因子無交叉反應性。根據製造商說明書(RayBiotech Inc.)，稀釋範圍為1：2至1：20。
流式細胞計數法
周邊血液單核細胞係藉由Ficoll-Isopaque密度梯度分離法(Pharmacia Fine Chemicals,Uppsala,Sweden)自肝素化血液單離。使用識別人類CD3(UCHTI；BD Bioscicnces,San Jose,CA,USA)或CXCR3(IC6/CXCR3；BD Biosciences)之獨特螢光染料共軛單株抗體進行免疫表型分析。在PBMC細胞經稀釋抗體(1：200)於室溫下培養1小時後，其藉由使用FACS Calibur裝置(BD Biosciences)之多色流式細胞計數法檢測。使用CellQuest獲取軟體(BD Biosciences)獲得數據，及針對每個實驗中之分析記錄0.5至2.0×106個結果。
統計分析
使用不成對史都登氏t試驗及Prism4軟體(GraphPad,San Diego,CA,USA)評估統計顯著性。使用SAS軟體，版本9.3(SAS Institute Inc.,Cary,NC,USA)進行接受者操作特徵(ROC)曲線分析。ROC曲線繪製敏感性及1-特異性之圖及提供敏感性及特異性跨連續預測器之一系列截止點的匯總。使用方差分析及邏輯回歸分析測定組間差異。每個候選生物標記之最佳截止值係作為其最大敏感性及特異性之總和來測定。
血漿譜：發現研究
使用細胞因子多重系統及蛋白質陣列，總共分析69個炎症細胞因子。在初始篩選中，測定20個非KD發燒對照及37個KD患者中之15個細胞因子之血漿量。KD患者中之IL-17F及sCD40L的量顯著高於發燒對照。參見圖1。發現僅一個細胞因子IL-33下調。參見圖1。雖然IL-1β在KD小鼠模型中之冠狀病變發展中具關鍵性，於本研究中，急性KD患者中之IL-1β之血漿量沒有顯著提高(數據未顯示)。
針對剩餘54種炎症細胞因子及CAM，使用蛋白質組方法來鑑定於隨機選自發現階段之6個KD患者的急性階段期間所獲得的一組血漿樣品中之候選生物標記。將此等數據與彼等具有非KD發燒及皮疹之對照者進行比較。KD患者中之10種細胞因子或CAM的平均表現量至少高於對照1.3倍。參見表3。於此等10種蛋白質中，KD患者中之IL-9、IP-10、E-選擇素、及MPIF-1的平均表現顯示至少增加2倍，及於所有6個所試驗患者中發現此結果。此外，急性階段KD患者中之PDGF-AA、IL-2R-α、CD14、IGF-II、及Siglec-5基因係下調，此顯示比對照下降至少1.8倍(<60%，數據未顯示)。然後以較大樣品尺寸(20個非KD發燒對照及37個KD患者)進行ELISA以量化候選生物標記(IL-9、IP-10、E-選擇素、及MPIF-1)。針對急性階段KD患者，與蛋白質陣列數據一致，IP-10、MPIF-1、及E-選擇素量存在顯著增加。參見圖1。然而，當樣品尺寸增加時，IL-9量之增加變得不顯著(數據未顯示)。於6個候選KD生物標記(IL-17F、IL-33、sCD40L、E-選擇素、MPIF-1、及IP-10)中，相比於對照(672±130.4pg/mL)，KD患者中之IP-10(3,037±226.7pg/mL)顯示最顯著的增加(KD患者之值相對於非KD發燒對照之值，p值=4.1×10-11)。參見圖1。
表3 自急性階段川崎氏症(KD)患者之血漿的10種所選擇之編碼趨化因子及CAM的候選基因的信號強度
所有測試以一式兩份進行。內部陰性對照用於測定正信號之截止率。使用蛋白質陣列篩選6個KD患者及2個對照(Ctr)個體。Ctr-1係具有非KD發燒之兒童個體。Ctr-2係正常健康個體。僅顯示超過1.3之趨化因子及CAM的KD/Ctr比(KD患者之平均值/對照病例之平均值)。
IP-10量：重複研究及組合研究
為了進一步驗證IP-10的作用，進行包含額外40個KD患者及57個非KD發燒對照之重複研究。如圖2顯示(上左圖)，此研究亦顯示相對於彼等發燒對照中者，KD患者中之IP-10量顯著增加。當將自重複研究之數據與彼等發現研究中者組合時(組合研究)，相比於77個非KD發燒對照(921±106.2pg/mL)，77個KD患者之IP-10量(3,587±210.2pg/mL)顯著增加(KD患者之值相對於非KD發燒對照之值，p值=2.8×10-20)。參見圖2(上右圖)。
為了進一步確認IP-10作為KD診斷中之生物標記的作用，使用自組合研究之IP-10值進行ROC曲線分析。當非KD發燒患者用作對照時，IP-10顯示0.94之極高的曲線下面積(AUC)值(95%信賴區間，0.9055-0.9778)。參見圖2(下圖)。如藉由最大敏感性及特異性之總和所定義，以1,138pg/mL的血漿IP-10量作為最佳截止值，相比於非KD發燒對照，IP-10顯示高敏感性(100%)及特異性(77%)。參見圖2(下圖)。
盲法驗證研究
最後研究階段係使用來自60個疑似罹患KD的兒童的血漿樣品進行。測量以盲法方式示蹤之樣品中之血漿IP-10量，及結果係非盲法及進行分析。使用1,318pg/mL之截止值，29個樣品係IP-10陽性及31個係IP-10陰性。29個IP-10陽性樣品中之22個經成功診斷為KD(包括2個iKD病例)；剩餘7個樣品經診斷為非KD發燒。參見圖3。31個IP-10陰性樣品中30個係來自非KD發燒對照及1個係iKD患者。總言之，1,318pg/mL之IP-10截止值顯示良好區分23個KD患者及37個非KD發燒對照的能力(敏感性，96%[22/23]；特異性，81%[30/37])。
血漿IP-10量與發燒時限及靜脈注射用免疫球蛋白治療的關聯
為了確定增加之IP-10量是否可於KD早期階段檢測到，檢測自開始發燒之4天內(平均值，3.4±0.90天；範圍，1至4天)獲得的37個KD樣品，及將結果與彼等於疾病後期階段(平均值，開始發燒的6.0±1.05天；範圍，5至8天)獲得之46個樣品進行比較。於早期疾病階段之IP-10量顯著增加(3,054±331.0pg/mL)。參見圖4A。使用1,318pg/mL作為最佳截止值，37個KD患者中81%(30個)係於非常早期階段(<4天)經鑑定，同時46個KD患者中96%(44個)係於急性階段(>5天)中經鑑定。
亦於開始IVIG治療之前或一週之後檢測45個患者中的IP-10量。在IVIG治療下，於治療之前的高IP-10量回歸正常(治療之前，3,323±224.9pg/mL；治療之後，348±64.8pg/mL)，除1個抵抗第一輪IVIG治療及需要第二次治療的KD患者之外。參見圖4B。
於T細胞中之細胞表面趨化因子受體CXCR3
IP-10下調於T細胞中之細胞表面趨化因子受體CXCR3。為了確定KD患者之增加的IP-10量的下游效應，分析於6個KD患者之T細胞中之CXCR3的細胞表面表現。測量CD3+T細胞之平均螢光強度(MFI)，及相比於3個健康供體之MFI，急性階段KD患者中之MFI係3.3倍下 降。參見圖5。於恢復階段，CXCR3之表現量係恢復正常(數據未顯示)。
其他實施例
本說明書揭示之所有特徵可以任何組合組合。本說明書揭示之每個特徵可藉由用於相同、相當、或類似目的的替代特徵替代。因此，除非另有明確說明，否則所揭示之每個特徵僅係一系列相當或類似特徵的一實例。
許多實施例已進行描述。然而，應瞭解可在不偏離本發明之精神及範疇下作出多種改良。因此，其他實施例係於下列申請專利範圍之範疇內。

Claims (25)

  1. 一種診斷個體之川崎氏症之方法，該方法包括：檢測疑似罹患川崎氏症之個體之樣品中的生物標記量，該生物標記係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素(selectin)或IL-33；及將該量與截止量進行比較；其中若該量高於或低於該截止量，則該個體確定為罹患川崎氏症。
  2. 如請求項1之方法，其中該樣品係體液樣品。
  3. 如請求項2之方法，其中該樣品係血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿液、或唾液樣品。
  4. 如請求項3之方法，其中該生物標記量係藉由免疫測定法檢測。
  5. 如請求項4之方法，其中該免疫測定法係酶聯免疫吸附測定法(ELISA)、蛋白質陣列、流式細胞計數法、建立於磁珠上之多重(multiplex)免疫測定法、西方墨點法(western blot)、點墨法(dot blot)、或酶聯免疫斑點法(ELISPOT)。
  6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中該樣品係於該個體開始發燒的0至10天內獲得。
  7. 如請求項6之方法，其中該樣品係於該個體開始發燒的5天內獲得。
  8. 如請求項6之方法，其中該川崎氏症係不完全川崎氏症。
  9. 一種川崎氏症治療物之用途，其係用於製造治療個體之川崎氏症之醫藥，其中該個體係經以下方法鑑別：檢測疑似罹患川崎氏症之個體之第一樣品中的生物標記第一量，該生物標記係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素或IL- 33，其中該第一量係高於或低於截止量。
  10. 如請求項9之用途，其中該治療物係免疫球蛋白，其中該免疫球蛋白係經靜脈注射。
  11. 如請求項10之用途，其中該治療物進一步包括類固醇。
  12. 如請求項11之用途，其中該第一樣品係體液樣品。
  13. 如請求項12之用途，其中該第一樣品係血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿液、或唾液樣品。
  14. 如請求項13之用途，其中該生物標記第一量係藉由免疫測定法檢測。
  15. 如請求項14之用途，其中該免疫測定法係ELISA、蛋白質陣列、流式細胞計數法、建立於磁珠上之多重免疫測定法、西方墨點法、點墨法、或ELISPOT。
  16. 如請求項9至15中任一項之用途，其中該第一樣品係於該個體開始發燒的0至10天內獲得。
  17. 如請求項16之用途，其中該第一樣品係於該個體開始發燒的5天內獲得。
  18. 如請求項17之用途，其進一步包括：在投與該治療物之後自該個體獲得第二樣品；檢測該第二樣品中之該生物標記量；及若於該第二樣品中之量高於該截止量，則繼續投與該治療物或投與不同治療。
  19. 一種監測個體之川崎氏症之治療的方法，該方法包括：檢測在該治療之前或期間的第一時間點自該個體獲得的第一樣品中之生物標記第一量，該生物標記係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素或IL-33；檢測在第二時間點自該個體獲得的第二樣品中之該生物標記 第二量；將該第一量與該第二量進行比較；及基於該比較制定治療決策。
  20. 如請求項19之方法，其中該治療係靜脈注射免疫球蛋白(IVIG)。
  21. 如請求項20之方法，其中該第一樣品及該第二樣品係體液樣品。
  22. 如請求項21之方法，其中該體液樣品係血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿液、或唾液樣品。
  23. 如請求項22之方法，其中該第一量及第二量係藉由免疫測定法檢測。
  24. 如請求項23之方法，其中該免疫測定法係ELISA、蛋白質陣列、流式細胞計數法、建立於磁珠上之多重免疫測定法、西方墨點法、點墨法、或ELISPOT。
  25. 一種用於診斷個體之川崎氏症或用於監測個體之川崎氏症之治療的套組，其包括用於檢測生物標記量的試劑或裝置，該生物標記係IL-17F、sCD40L、MPIF-1、E-選擇素或IL-33。
TW105135195A 2014-07-24 2015-07-24 川崎氏症之診斷與治療 TWI655433B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462028633P 2014-07-24 2014-07-24
US62/028,633 2014-07-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201706600A true TW201706600A (zh) 2017-02-16
TWI655433B TWI655433B (zh) 2019-04-01

Family

ID=55163743

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW105135195A TWI655433B (zh) 2014-07-24 2015-07-24 川崎氏症之診斷與治療
TW104124138A TWI598586B (zh) 2014-07-24 2015-07-24 川崎氏症之診斷與治療

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW104124138A TWI598586B (zh) 2014-07-24 2015-07-24 川崎氏症之診斷與治療

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10983133B2 (zh)
JP (1) JP6779200B2 (zh)
KR (1) KR102453756B1 (zh)
CN (1) CN106796221B (zh)
CA (1) CA2955214C (zh)
TW (2) TWI655433B (zh)
WO (1) WO2016014761A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109811047A (zh) * 2017-11-21 2019-05-28 长庚医疗财团法人高雄长庚纪念医院 用于检测川崎氏病的方法及套组以及用于治疗川崎氏病的方法

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102056405B1 (ko) * 2018-04-05 2019-12-16 (주)메디젠휴먼케어 Ebf2 유전자 다형성을 이용한 가와사키병 발병 예측 방법
WO2020030609A1 (en) * 2018-08-04 2020-02-13 Imperial College Of Science, Technology And Medicine Method of identifying a subject having kawasaki disease
CN113834939A (zh) * 2021-09-18 2021-12-24 胜亚生物科技(厦门)有限公司 一种用于检测川崎病及疗效评估的试剂、试剂盒及应用
WO2024037387A1 (en) * 2022-08-19 2024-02-22 Tianjin Yunjian Medical Technology Co., Ltd. Blood biomarkers and methods for diagnosis of acute kawasaki disease

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0288088B1 (en) 1987-04-24 1994-03-09 Teijin Limited Detection of tumor necrosis factor; monoclonal antibody and kit
EP2116618A1 (en) 2008-05-09 2009-11-11 Agency for Science, Technology And Research Diagnosis and treatment of Kawasaki disease
WO2010025393A2 (en) 2008-08-28 2010-03-04 The Regents Of The University Of California Protein biomarkers and methods for diagnosing kawasaki disease
WO2012112315A2 (en) 2011-02-20 2012-08-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for diagnosis of kawasaki disease
US9869673B2 (en) 2011-04-15 2018-01-16 The Children's Medical Center Corporation Diagnostic markers and therapeutic targets of kawasaki disease
JP6362587B2 (ja) * 2012-05-22 2018-07-25 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｌ−１７ａ／ｆｉｌ−２３二重特異性抗体およびその使用
US20150247848A1 (en) 2012-09-12 2015-09-03 Indiana University Research & Technology Corporation Material and methods for diagnosing and treating kawasaki disease and kls

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109811047A (zh) * 2017-11-21 2019-05-28 长庚医疗财团法人高雄长庚纪念医院 用于检测川崎氏病的方法及套组以及用于治疗川崎氏病的方法

Also Published As

Publication number Publication date
TWI655433B (zh) 2019-04-01
CA2955214C (en) 2023-03-21
JP2017524933A (ja) 2017-08-31
CA2955214A1 (en) 2016-01-28
CN106796221A (zh) 2017-05-31
TWI598586B (zh) 2017-09-11
US10983133B2 (en) 2021-04-20
WO2016014761A1 (en) 2016-01-28
US20170153250A1 (en) 2017-06-01
CN106796221B (zh) 2019-12-17
JP6779200B2 (ja) 2020-11-04
KR102453756B1 (ko) 2022-10-12
TW201617613A (zh) 2016-05-16
KR20170039139A (ko) 2017-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI598586B (zh) 川崎氏症之診斷與治療
WO2021164713A1 (zh) 与肿瘤免疫治疗效果相关的生物标志物及其应用
Henriquez-Camacho et al. Biomarkers for sepsis
Alex et al. Distinct cytokine patterns identified from multiplex profiles of murine DSS and TNBS-induced colitis
US20110189698A1 (en) Protein Biomarkers and Methods for Diagnosing Kawasaki Disease
JP2013527444A (ja) 抗体を検出するための方法
US20190180846A1 (en) System and method for analysis of biological data
Santa Cruz et al. Post-acute sequelae of COVID-19 is characterized by diminished peripheral CD8+ β7 integrin+ T cells and anti-SARS-CoV-2 IgA response
Tegethoff et al. TNF-related apoptosis-inducing ligand, interferon gamma-induced protein 10, and C-reactive protein in predicting the progression of SARS-CoV-2 infection: a prospective cohort study
EP3077818B1 (en) Methods for predicting post-operative recurrence of crohn&#39;s disease
US20190376969A1 (en) Nasopharyngeal protein biomarkers of acute respiratory virus infection and methods of using same
Sato et al. In-depth serum proteomics by DIA-MS with in silico spectral libraries reveals dynamics during the active phase of systemic juvenile idiopathic arthritis
Bauer et al. Increased peripheral inflammatory responses in myelin oligodendrocyte glycoprotein associated disease and aquaporin-4 antibody positive neuromyelitis optica spectrum disorder
Lee et al. Usefulness of age‐stratified N‐terminal prohormone of brain natriuretic peptide for diagnosing Kawasaki disease
JP2014224759A5 (zh)
Hamsten et al. Elevated levels of FN1 and CCL2 in bronchoalveolar lavage fluid from sarcoidosis patients
EP3407067A1 (en) Method of detecting colitis ulcerosa by detection of autoantibodies
WO2016129631A1 (ja) 川崎病の検査方法およびキット
US10408844B2 (en) Methods and compositions in diagnosis of chronic fatigue syndrome/myalgic encephalomyelitis
Kim et al. Pilot application of magnetic nanoparticle-based biosensor for necrotizing enterocolitis
EP3436828A1 (de) Markersequenzen für rheumatoide arthritis
JP2020502541A (ja) 全身型若年性特発性関節炎および川崎病を診断および識別するための組成物および方法
WO2024037387A1 (en) Blood biomarkers and methods for diagnosis of acute kawasaki disease
WO2021210651A1 (ja) 重症薬疹のタンパク質診断バイオマーカー
CN117529664A (zh) 用于预测脓毒症和脓毒性休克的方法