TW201609086A - 白血球減少症和血小板減少症之治療方法 - Google Patents

Abstract

本發明係提供例如於癌症化療之場合用於治療、控制或減輕白血球減少症(例如，嗜中性白血球減少症)及/或血小板減少症之方法，該方法包括投予單乙醯基-二醯基-甘油化合物，以及其有用之組成物。

Description

白血球減少症和血小板減少症之治療方法 相關申請案交叉參考

本申請案請求2014年5月15日提出申請之美國專利臨時申請案61/993774、2014年5月15日提出申請之美國專利臨時申請案61/993784、2014年6月27日提出申請之美國專利臨時申請案62/018528、2014年6月27日提出申請之美國專利臨時申請案62/018530、2014年11月24日提出申請之美國專利臨時申請案62/083739及2014年11月24日提出申請之美國專利臨時申請案62/083749之優先權，各該等案之內容均併入本文以資參考。

本揭示內容係有關例如於癌症化療之場合用於治療、控制或減輕白血球減少症及/或血小板減少症之方法，該方法包括投予單乙醯基-二醯基甘油化合物，以及其有用之組成物。

於造血期間，骨髓內之造血幹細胞(HSC)分化為共同淋巴細胞前驅細胞(common lymphocyte progenitor, CLP)與共同骨髓樣前驅細胞(common myeloid precursor,CMP)。CMP分化為骨髓性譜系之細胞，例如紅血球、巨核細胞/血小板、嗜中性白血球、嗜酸性白血球、嗜鹼性白血球、單核細胞、巨噬細胞與樹突細胞；CLP產生淋巴細胞譜系之細胞，例如T細胞、B細胞與NK細胞。

功能性地，血球包含供應氧至組織之紅血球、控制凝血之血小板、及保護對抗傳染病與外來物質之白血球。白血球包括骨髓樣譜系之白血球，例如嗜中性白血球、嗜酸性白血球、嗜鹼性白血球、與單核細胞；以及淋巴細胞，例如T細胞與B細胞。每1μl血液有約4,000至10,000個白血球。該白血球族群通常由50至60%嗜中性白血球、1至6%嗜酸性白血球、小於1%之嗜鹼性白血球、2至10%單核細胞、與20至30%淋巴細胞所組成。然而，視例如身體健康狀況與發炎狀態等因素而定，白血球之量與組成於不同個體間或相同個體內會隨時間廣泛地變化。

若HSC分化為CMP細胞被抑制，則血液中白血球濃度將減少至正常範圍之下，引起白血球減少症。白血球減少症通常可能由細菌或病毒感染引起。然而，白血球減少症亦可能由再生不良性貧血、白血病、骨髓發育不良症候群(MDS)或其他骨髓疾患引起。輕微的白血球減少症雖僅導致免疫反應之微小缺失，惟嚴重之白血球減少症甚至可引起敗血症。

由於嗜中性白血球為最豐富之白血球，白 血球減少症通常亦有嗜中性白血球減少症。嗜中性白血球經由破壞血液中之細菌而作為對抗感染之首要防禦。嗜中性白血球減少症之病患更易受細菌感染，若症狀未控制，則易受潛在致命敗血症之傷害。嗜中性白血球絕對計數(Absolute neutrophil count，ANC)因年齡與性別而不同，成人之正常範圍為每微升(μl)血液1500至8000個細胞，然而健康成人之ANC通常>2500個細胞/μl。ANC<500個細胞/μl被認為是嚴重而非常危險之情況，與高嚴重感染風險相關。嗜中性白血球減少症可能由許多事件引起：例如，損害骨髓之癌症或其他疾病、特徵為骨髓功能低劣之先天性疾病、瓦解骨髓功能之病毒感染、破壞嗜中性白血球或骨髓細胞之自體免疫疾患、較其生產更快地耗盡嗜中性白血球之壓倒性感染(overwhelming infection)、或破壞嗜中性白血球或損害骨髓之藥物。許多抗癌藥物以及癌症之放射療法可能直接引起劑量依賴性之骨髓抑制。其他抗癌藥物可於骨髓腔室內激發源祖細胞(progenitor cell)免疫媒介之破壞，及於若干情況下增加周邊嗜中性白血球之破壞或清除。

多種細胞介素參與造血。顆粒細胞群落刺激因子(G-CSF或GCSF)，亦為所謂群落刺激因子3(CSF 3)，係刺激骨髓中之造血前驅細胞以增殖及分化為成熟顆粒細胞與幹細胞，並將其釋放至血液中之一種醣蛋白。G-CSF亦誘發造血幹細胞(HSCs)從骨髓釋入血液中，惟其並不特別刺激該等細胞。於人類中，G-CSF呈兩種活性形 式存在，其中較大量者為174個胺基酸長，另一者為177個胺基酸長。天然存在之G-CSF之醫藥類似物為具人類174個胺基酸胜肽之重組形式(rhG-CSF)，包括：‧非格司亭(filgrastim)(例如，得自Amgen之Neupogen®)，於大腸桿菌中製造，具有相同活性，惟與天然醣蛋白之不同在於其具有N端甲硫胺酸殘基及缺乏醣基化；‧來格司亭(lenograstim)(例如，得自Chugai之Granocyte®)，於哺乳動物細胞[中國倉鼠卵巢(CHO)細胞]中製造，因此實質上與人類G-CSF難以區分；‧化非格司亭(pegfilgrastim)，非格司亭之聚乙二醇化形式，(例如，得自Amgen之Neulasta®與得自Roche之Neulastim®)，具有共價結合於非格司亭之N端甲硫胺醯基殘基之20kD單甲氧聚乙二醇基團，相較於非格司亭，溶解度與作用持續時間均增加。該等藥物在美國及許多其他國家被批准主要在接受化療之癌症病患中用以治療與減輕嗜中性白血球減少症，例如用於一或多個下述適應症‧如發熱性嗜中性白血球減少症所顯示，於接受與發熱性嗜中性白血球減少症臨床上發生率顯著相關之骨髓抑制性抗癌藥物之非骨髓樣惡性腫瘤病患中，減少感染發生率；‧於誘發或鞏固急性骨髓樣淋巴瘤成人之化療處理後，縮短嗜中性白血球復原時間與發燒持續時間； ‧縮短嗜中性白血球減少症與嗜中性白血球減少症相關臨床後遺症之持續時間，該臨床後遺症係例如，骨髓移植後進行骨髓清除性化療之非骨髓性惡性腫瘤病患中之發熱性嗜中性白血球減少症；‧動員造血源祖細胞進入周邊血液以供經由白血球分離術收集，然後可移植入經骨髓清除性化療後之病患，如此可導致支持性照護需求降低；‧於具有先天性嗜中性白血球減少症、週期性嗜中性白血球減少症、或自發性嗜中性白血球減少症之症狀病患中，降低嗜中性白血球減少症後遺症(例如，發燒、感染、口咽潰瘍)之發生率與持續時間。

Neupogen®通常以4至8mcg/kg/天、高達10mcg/kg/天之劑量投予。已投予高達138mcg/kg/天之較高劑量而無毒性效應，惟日劑量大於10mcg/kg/天以上之劑量反應曲線變為平坦。Neupogen®與其他形式之G-CSF的副作用可包括重複投予後之輕度至中度骨骼疼痛、注射部位之局部皮膚反應、過敏性反應、脾臟擴大或破裂、齒槽出血、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、咳血、及(已存在鐮刀狀細胞疾患病患之)鐮刀狀細胞危象。G-CSF藥物由於可能刺激癌細胞生長，因此通常不投予具慢性骨髓性白血病(CML)或骨髓發育不良症候群之病患。

血小板，亦稱凝血細胞，係幫助血液凝結之無色血球。正常之人類血小板計數範圍為每微升(μl)血液130,000至400,000個血小板。如於嗜中性白血球減少症 之情形下，若HSC分化為CMP被抑制，或如果血小板被破壞，例如由於自體免疫狀況之結果，則血液中之血小板濃度可能下降至正常範圍以下(血小板減少症)。每微升血液之血小板計數<50,000個血小板，被認為係嚴重狀況，而每微升血液<20,000個血小板之計數可能自然發生致命性之內出血。直到血小板計數極低，在由於自發性瘀青、極輕度創傷後之瘀青、瘀斑(由於皮膚與黏膜之微小出血引起皮膚上之紅色或紫色斑點)、及由於小傷口、鼻出血或刷牙之過度流血而證實凝血損傷之前，血小板減少症幾乎沒有症狀。其他症狀可包括不舒服、疲勞與全身無力(伴隨或未伴隨血液流失)。血小板減少症可能由例如，細菌或病毒感染、肝硬化、化學療法或放射療法、急性白血病、再生不良性貧血、或自體免疫疾病所引起，或可能為各種藥物治療之副作用。和嗜中性白血球減少症一樣，血小板減少症為癌症化學療法或放射療法常見之副作用。

多發性骨髓瘤(MM)係生產抗體的漿細胞之癌症。骨髓癌阻止抗體正常製造，使免疫系統變弱，病患易受感染；同時產生可能導致腎臟損害之有缺陷抗體。骨髓癌細胞增殖亦干擾紅血球與白血球之正常製造與功能，且骨髓癌細胞通常產生引起骨骼破壞之物質，導致骨骼疼痛及/或骨折。多發性骨髓瘤特異性地受G-CSF刺激。急性骨髓樣白血病(AML)，亦為所謂急性骨髓性白血病或急性非淋巴球性白血病(ANLL)，為血球類骨髓樣品系之癌症，其特徵在於累積在骨髓中並干擾正常血球製造的不正常白 血球之迅速生長。AML為最常見影響成人之急性白血病。骨髓發育不良症候群(亦稱為MDS或脊髓發育不良)之特徵在於骨髓樣類血球之無效製造(或發育不良)。MDS病患會形成嚴重貧血而需要輸血。於若干情況下，由於進行性骨髓衰竭而導致疾病惡化，病患形成血細胞減少症。慢性骨髓性白血病(CML)為白血病之一種形式，其特徵在於骨髓中骨髓樣細胞顯著增加與紊亂生長及血液中該等細胞之蓄積。CML為同源骨髓幹細胞疾患，其中發現成熟顆粒細胞(嗜中性白血球、嗜酸性白血球與嗜鹼性白血球)及其前驅細胞之增殖。

骨髓惡性腫瘤，例如，MM、AML、MDS與CML，可能被顆粒細胞群落刺激因子(G-CSF)誘發或激發。雖然在少數情形下，G-CSF已於該等類型癌症中被蓄意用以刺激癌細胞之增殖，以增強其對化療劑(通常靶定增殖之細胞)之敏感性；惟重組G-CSF藥物(例如，非格司亭、來格司亭、或化非格司亭)對於從該等類型癌症復原之病患中，治療化療誘發之嗜中性白血球減少症，通常不是良好之選擇。

舉例而言，來那度胺(lenalidomide)(Revlimid®)係用以治療多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群與其他癌症之沙利竇邁(thalidomide)之衍生物。來那度胺已顯著增進骨髓癌(其通常預後低劣)之整體存活，惟該藥物相當毒；導致嚴重嗜中性白血球減少症與血小板減少症之骨髓抑制為主要之劑量限制性毒性(dose limiting toxicity)。

業界對於治療及處理嗜中性白血球減少症與血小板減少症之新穎方法有所需求，舉例而言，特別是針對其嗜中性白血球減少症不能以G-CSF處理之具G-CSF誘發癌症之病患，容許以比目前安全的更高劑量及/或更長持續時間之更積極之化療。

鹿茸係傳統之亞洲藥物，利用乾燥未角質化(uncornified)之鹿茸而製備。如於1613年首次出版之韓國醫學書籍Dong-eui Bogam中所述，鹿茸已被稱讚具有各種醫療效果，例如，生長與發育促進效應、促進造血功能、治療精神崩潰、對心功能不全有利、增進五臟六腑之功能。據報導，鹿茸之特定成分，包括得自鹿茸氯仿萃取物之rac-1-棕櫚醯基-2-亞麻醯基-3-乙醯基甘油(PLAG)對造血幹細胞與巨核細胞具生長刺激活性(WO 99/26640)；亦報導，為鹿茸活性成分之單乙醯基-二醯基甘油衍生物對治療自體免疫疾病、敗血症、如膽管癌、腎臟癌或惡性黑色素瘤之癌症等具效力(WO 2005/112912)。

發明簡述

本文敘述之單乙醯基二醯基甘油類，特別是PLAG，已出人意外地被發現經由不同於G-CSF之機制刺激嗜中性白血球生成，增加血小板生成，及減少嗜中性白血球移出血液。因此，該等化合物可用以幫助治療及減輕嗜中性白血球減少症及/或血小板減少症，舉例而言，例如由來那度胺之化療劑引起時，特別是針對罹患可由 G-CSF誘發或惡化的癌症之病患。此外，本文敘述之單乙醯基二醯基甘油類，特別是PLAG，經由減少癌細胞從血液至淋巴結之移動，有助於防止諸如此類血癌之轉移。本文敘述之單乙醯基-醯基甘油類亦可減少補體活性，因此有用於保護對抗例如自體免疫疾病所引起之補體媒介之血小板消減。

本揭示內容顯示，本文敘述之式1之單乙醯基二醯基甘油，特別是式2之PLAG，藉由增加HSC成為CMP之分化與繁殖及抑制補體之活性，而對血小板減少症與白血球減少症(例如嗜中性白血球減少症)之預防與治療具效力： 其中R₁與R₂獨立地為具14至22個碳原子之脂肪酸殘基，舉例而言：

於若干具體例中，本揭示內容提供用於治 療(例如，抑制、減少、控制、減輕、或復原)選自白血球減少症(例如，嗜中性白血球減少症)、及/或血小板減少症之症狀之方法，該方法包括投予有其需要之病患有效量之式1化合物，例如PLAG。

於若干具體例中，本揭示內容提供用於防止或抑制向上調節或活化補體3(C3)之方法，該方法包括投予有其需要之個體(subject)有效量之式1化合物，例如PLAG。

於若干具體例中，本揭示內容提供用於治療、控制或減輕白血球減少症及增強先天性免疫力之方法，該方法包括投予有其需要之個體有效量之式1化合物，例如PLAG，以增加骨髓樣譜系之白血球，如嗜中性白血球、嗜酸性白血球、單核細胞之比例，同時，減少為免疫細胞之淋巴細胞。

於若干具體例中，本揭示內容提供治療癌症之方法，該方法包括投予化療劑連同嗜中性白血球或血小板保護量之式1化合物(例如PLAG)至有其需要之病患，其中該化療劑係以對於未接受式1化合物之病患，將會導致嗜中性白血球減少症及/或血小板減少症之劑量及/或期間投予。

於若干具體例中，本揭示內容提供用於治療、控制或減輕接受化療劑(例如，來那度胺)治療由G-CSF激發之癌症(例如，多發性骨髓瘤、急性骨髓樣白血病、慢性骨髓性白血病或骨髓發育不良症候群)病患中之嗜中性 白血球減少症及/或血小板減少症之方法，該方法包括投予有其需要之病患有效量之式1化合物，例如PLAG。

於若干具體例中，該揭示內容提供治療血癌(例如，選自如多發性骨髓瘤、急性骨髓樣白血病、慢性骨髓性白血病或骨髓發育不良症候群)，例如可能由G-CSF誘發或惡化之血癌之方法，該方法包括(連續或同時)共同投予(co-administering)化療劑(例如，來那度胺)與式1化合物。

於若干具體例中，其揭示內容提供用於治療(包括預防)嗜中性白血球減少症及/或用於動員周邊血液源祖細胞(PBPC)之方法，該方法包括(連續或同時)投予有其需要之病患有效量之(i)式1化合物，例如PLAG，及(ii)例如選自非格司亭、化非格司亭、及來格司亭之G-CSF。

於若干具體例中，其揭示內容提供減輕或治療G-CSF副作用(例如，由G-CSF誘發之血小板減少症及/或骨骼疼痛)之方法，該方法包括連續或同時共同投予有其需要之病患式1化合物，例如PLAG。

此外，本揭示內容提供醫藥組成物，其包括含有用於防止或改善白血球減少症或血小板減少症之式1化合物之功能性保健食品。

其揭示內容進一步提供式1化合物，及含有式1化合物之醫藥組成物，以供如所述方法之用，及供製造如所述方法中使用之藥劑之用。

於一具體例中，其揭示內容提供呈軟明膠 膠囊形式以供口服投予之含250至1000mg，例如，500mg PLAG藥物物質，實質上不含其他三酸甘油酯類，連同作為氧化劑之0.1至3mg(例如，1mg)醫藥上可接受之生育酚化合物(例如，α-生育酚)一起，以500mg至4,000mg之日劑量供每天投予一次或兩次之新穎醫藥單位劑量藥物產品。

從下文中提供之詳細說明與實施例，本發明應用性之進一步領域將顯而易見。應理解的是，所示詳細說明與具體實施例，雖指出本發明之特定較佳具體例，惟僅擬供說明用途，並不擬對本發明之範圍構成侷限。

第1圖描述經PLAG處理之HepG2細胞中STAT1與STAT6轉錄活性之報導基因檢測。

第2圖描述HMC-1細胞中，PLAG對補體3之抑制。

第3A圖證實於WST-1檢測中，PLAG不影響HepG2細胞株之細胞繁殖與死亡；第3B圖顯示投予PLAG，C3之表現係劑量依賴性地減少、第3C圖顯示投予S6I，得到類似結果

第4圖描述小鼠模式中PLAG對三種化療劑之嗜中性白血球保護效應。

第5圖描述小鼠模式中PLAG對三種化療劑之血小板保護效應。

第6圖描述小鼠模式中三種化療劑之補體3 活化效應，及PLAG封鎖該等效應。

第7圖描述PLAG活性對補體3之臨床試驗結果。

第8圖描述臨床試驗中PLAG治療之抑制化療藥物誘發之血小板減少症(CIN)。

第9圖描述臨床試驗中PLAG治療之抑制化療藥物誘發之嗜中性白血球減少症(CIN)。

用於治療血小板減少症及/或白血球減少症之本揭示內容之組成物包含下式1之具有一個乙醯基與兩個醯基之甘油衍生物： 其中R1與R2獨立地為具14至22個碳原子之脂肪酸殘基。

於本揭示內容中，式1之甘油衍生物稱為單乙醯基二醯基甘油類(MDAG)。脂肪酸殘基係指得自脂肪酸與醇反應形成酯鍵之醯基基團。R₁與R₂之非限制性實例因此包括棕櫚醯基、油醯基、亞麻醯基、次亞麻醯基、硬脂醯基、肉豆蔻醯基、花生醯基等。R₁與R₂之較佳組合(R₁/R₂)包括油醯基/棕櫚醯基、棕櫚醯基/油醯基、棕櫚醯基/亞麻醯基、棕櫚醯基/次亞麻醯基、棕櫚醯基/花生醯基、棕櫚醯基/硬脂醯基、棕櫚醯基/棕櫚醯基、油醯基/硬脂醯基、 亞麻醯基/棕櫚醯基、亞麻醯基/硬脂醯基、硬脂醯基/亞麻醯基、硬脂醯基/油醯基、肉豆蔻醯基/亞麻醯基、肉豆蔻醯基/油醯基等。於光學活性上，式1之單乙醯基二醯基甘油衍生物可為(R)-型、(S)-型或消旋混合物，及可包括其立體異構物。當R₁及/或R₂取代基為不飽和脂肪酸殘基時，雙鍵可具順式組態。

於一具體例中，單乙醯基二醯基甘油係具下式2之化合物：

式2化合物係1-棕櫚醯基-2-亞麻醯基-3-乙醯基甘油，於本說明書中有時稱為“PLAG”。式2化合物之R₁與R₂分別為棕櫚醯基與亞麻醯基。甘油基團之第2個碳具掌性。PLAG通常呈消旋物提供，且R-與S-鏡像異構物似乎具相同活性。一般已知，於使用盲腸結紮穿刺之敗血症動物模式實驗中，式2之PLAG增加動物之存活比例，及於GLP(優良實驗室操作規範)毒性測試中顯示無毒性。然而，包括PLAG之單乙醯基二醯基甘油化合物對血小板減少症與白血球減少症(尤其是嗜中性白血球減少症)之效應，及單乙醯基二醯基甘油化合物與G-CSF藥物組合之效應，於先前技藝中仍未知或未揭示。

單乙醯基二醯基甘油化合物可從天然鹿茸分離與萃取，或可利用習知有機合成方法製造。更具體而言，以己烷萃取鹿茸，隨後以氯仿萃取殘留物，移除氯仿，以提供氯仿萃取物。此萃取所用溶劑量剛足夠浸沒鹿茸。一般而言，1公斤鹿茸使用約4至5公升己烷及/或氯仿，惟不受此限。利用此方法所得萃取物使用一系列矽膠管柱層析與TLC方法進一步區分與純化，得到用於本發明之單乙醯基二醯基甘油化合物。用於萃取之溶劑係選自氯仿/甲醇、己烷/乙酸乙酯/乙酸，惟不受此限。

製備單乙醯基二醯基甘油化合物之化學合成法，舉例而言，示於韓國註冊專利案(Korean Registered Patent)No.10-0789323與No.10-1278874中，其內容併入本文以資參考。例如，PLAG可利用甘油之經基與乙醯基、棕櫚醯基與亞麻醯基等官能基進行醯化而合成。該最終產物類似自鹿茸鑑定與單離之天然成分；二者皆為消旋物。

於本發明中，“治療”一詞涵蓋欲處理症狀之預防、減少、改善或排除；舉例而言，藉由本揭示內容醫藥組成物之投予，抑制或延緩血小板減少症與白血球減少症之發作(有時稱為預防)，以及改善血小板減少症與白血球減少症，或改變血小板減少症與白血球減少症之症狀至更有利狀態。

細胞株中之活體外藥理學研究顯示，PLAG能抑制PKC θ/p38/ERK路徑，其牽涉得自HSC之類淋巴源祖細胞之成熟。又，於骨髓衍生之HSC中，顯示於活體外 誘發增加之群落形成。再者，PLAG抑制人類HMC-1細胞中之補體C3表現。活體內PLAG顯示增加移植同源HSC照射小鼠脾臟中之結節形成。於經他莫西芬(tamoxifen)處理之小鼠中，投予PLAG可防止細胞毒性劑誘發之嗜中性白血球減少症，及改善存活率。

單乙醯基二醯基甘油化合物，尤其是PLAG，促進造血幹細胞(HSC)分化為共同骨髓樣前驅細胞(CMP)，其為分化成血小板之巨核細胞，及分化成嗜中性白血球、嗜酸性白血球、嗜鹼性白血球、單核細胞等之骨髓母細胞之前驅細胞；而非分化為共同淋巴細胞前驅細胞(CLP)；以增加例如嗜中性白血球、嗜酸性白血球、單核細胞等巨噬細胞之比例，及減少過度產生之淋巴細胞；可預防及治療白血球減少症，更具體而言，預防、減少或治療嗜中性白血球減少症，以增強先天性免疫力。

除了增加群落形成及活化HSC分化成例如嗜中性白血球與巨核細胞之骨髓樣細胞外，單乙醯基二醯基甘油化合物，特別是PLAG，可減少補體活化。就補體依賴性機制於藥物誘發之嗜中性白血球減少症上之角色，及嗜中性白血球於血管發炎與對敗血症反應上之角色所發表之報告暗示，補體活化可能涉及化療誘發之血小板減少症與白血球減少症。未拘泥於任何理論下，一般認為該等化合物經由抑制可能被化療向上調節或活化之STAT6活性而抑制C3。STAT6抑制劑經由IL-4封阻細胞中之STAT6訊息傳遞，從而抑制C3之表現。

因此，使用式1之單乙醯基二醯基甘油化合物，特別是PLAG，選擇性減少補體活性，有助於有效對抗化療誘發之嗜中性白血球減少症與血小板減少症。此外，減少補體活性經由減少補體誘發之嗜中性白血球自循環中離去而增強對嗜中性白血球減少症之治療；亦經由減少補體媒介之血小板破壞(例如於自體免疫性血小板減少症中)而增強對血小板減少症之治療。

式1之單乙醯基二醯基甘油化合物，特別是PLAG，經由不同於G-CSF之機制，刺激嗜中性白血球生成，因此於治療或減輕嗜中性白血球減少症及/或動員周邊血液源祖細胞(PBPC)中，可增強例如非格司亭、化非格司亭、與來格司亭等G-CSF藥物之效應至單獨投予G-CSF無法達到之程度。於若干情況下，單乙醯基二醯基甘油化合物亦可減輕G-CSF之副作用，例如，經由增強血小板生成及減少與G-CSF投予相關之骨骼疼痛。因此，本揭示內容提供用於治療嗜中性白血球減少症及/或動員PBPC之方法，該方法包括同時、連續或與顆粒細胞群落刺激因子(G-CSF)組合投予有其需要之病患單乙醯基二醯基甘油，例如，PLAG。病患，舉例而言，可為接受化療及/或放射療法之癌症病患，或罹患或瀕臨嗜中性白血球減少症風險中之其他病患；及單乙醯基二醯基甘油，例如，PLAG，可於化療及/或放射線治療期間及/或之後投予，以治療所發生之嗜中性白血球減少症，及/或可於之前投予，以幫助減輕此類治療之效應，或動員造血源祖細胞進入周邊血液以供 白血球分離術之收集，及隨後用以搶救採用清髓性化療後之病患。

式1之單乙醯基二醯基甘油類，特別是PLAG，可經由不同於G-CSF之機制，刺激嗜中性白血球生成。由於式1化合物，例如，PLAG，提高血小板量以及嗜中性白血球量，可推測其自G-CSF上游促進增殖與分化。再者，式1化合物，例如，PLAG，減少補體活化、於發炎性刺激後，減少嗜中性白血球離開進入淋巴結中，及減少血小板之破壞，所有該等反應皆與G-CSF不同。

因此，式1化合物，特別是PLAG，可幫助減輕由化療劑，例如來那度胺，導致之嗜中性白血球減少症與血小板減少症，特別是針對不能使用G-CSF之病患，例如，罹患可由G-CSF誘發或惡化之癌症之病患。由於式1化合物，特別是PLAG，非與G-CSF競爭而係增強G-CSF之效應，因此可與G-CSF組合使用，以提供單獨使用G-CSF無法達到之功效程度，或減少達功效所需之G-CSF量，例如，針對曾經歷源自G-CSF副作用之病患。

此外，式1化合物，特別是PLAG，經由減少癌細胞從血液至淋巴結之遷移，有助於防止諸如此類之血癌轉移。如實施例中所述，於以LPS與PLAG處理之小鼠中，PLAG存在或不存在下，以脂多醣(LPS)注射小鼠以引起免疫反應時，相較於僅用LPS之對照組，嗜中性白血球之濃度增加，而淋巴中之嗜中性白血球量降低。此顯示在PLAG提高血液中之嗜中性白血球量之同時，亦抑制至 淋巴結之遷移。

包含單乙醯基二醯基甘油類之醫藥組成物，可由僅有或實質上純之式1單乙醯基二醯基甘油衍生物構成，或可包含活性成分(式1之單乙醯基二醯基甘油衍生物)與習知之醫藥上可接受之載劑、賦形劑、或稀釋劑。醫藥組成物中之單乙醯基二醯基甘油量可廣泛變化而無特定限制，具體而言，相對於組成物總量，為0.0001至100重量%，例如，0.001至50重量%、0.01至20重量%、或95-99重量%。醫藥組成物可調配為供經口或非經口投予之固態、液態、凝膠或懸浮液形式，例如，錠劑、丸劑、粉劑、粒劑、膠囊例如硬或軟明膠膠囊、乳液、懸浮液、糖漿、可乳化之濃縮物、無菌水性溶液、非水性溶液、冷凍乾燥調配劑、栓劑等。調配組成物時，可使用習知之賦形劑或稀釋劑例如填充劑、增積劑、黏合劑、潤濕劑、崩散劑、與界面活性劑。用於經口投予之固態調配劑包括錠劑、丸劑、粉劑、粒劑、膠囊等，該固態調配劑可經由混合一或多種活性成分與例如澱粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖、明膠等之至少一種賦形劑予以製備。除賦形劑外，亦可使用潤滑劑例如硬脂酸鎂與滑石。用於經口投予之液態調配劑包括乳液、懸浮液、糖漿等，及可包含習知稀釋劑例如水與液態石蠟，或可包含各種賦形劑例如潤濕劑、甜味劑、調味劑、與保藏劑。用於非經口投予之調配劑包括無菌水性溶液、非水性溶液、冷凍乾燥調配劑、栓劑等，及用於此類溶液之溶劑可包括丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄欖油、 及用於注射器注射之酯類例如油酸乙酯。栓劑之基材可包括維太素(witepsol)、聚乙二醇、聚山梨醇酯61、可可脂、三月桂酸甘油酯與甘油凝膠(glycerogelatine)。

單乙醯基二醯基甘油化合物可呈醫藥上有效量投予。“醫藥上有效量”一詞係用於意指足夠於藥物治療上達到期望結果之量。“醫藥上有效量”可根據對象類別、年齡、性別、疾病嚴重性與類型、藥物活性、藥物敏感性、投予時間、投予途徑、排出速率等予以決定。

“治療”一詞包括經由投予本發明組成物之血小板減少症及/或白血球減少症症狀之預防、減輕、改善、延緩或減少，以及症狀之一部分或全部排除或預防。本揭示內容之組成物可單獨或與其他藥物連續或同時投予。當本揭示內容之組成物與G-CSF藥物一起投予時，則“治療”一詞包括經由(連續或同時)投予單乙醯基二醯基甘油組合G-CSF藥物之嗜中性白血球減少症及/或G-CSF副作用症狀之預防、減輕、改善、延緩或減少，以及症狀之一部分或全部排除或預防。

本揭示內容組成物之較佳量可根據病患之症狀與重量、疾病嚴重性、藥物調配類型、投予途徑與治療期而改變。每一天之適當投予總量可由醫師決定，通常為約0.05至200mg/kg。從動物活體內實驗及細胞活體外實驗推論，成人每天之較佳總投予量為0.1至100mg/kg。舉例而言，50mg/kg之總量可一天一次投予或可分為一天兩次、三次、或四次之劑量投予。

舉例而言，於一具體例中，本揭示內容提供呈含有250至1000mg(如，500mg)而不含其他三酸甘油酯類之PLAG藥物物質；連同0.1至3mg(如，1mg)醫藥上可接受之生育酚化合物(如，α-生育酚)作為抗氧化劑；以供例如，以500mg至4,000mg之日劑量一天投予一次或兩次(例如，以早上500mg及晚上500mg之分劑量每天投予1000mg)之供經口投予之軟明膠膠囊形式之單位劑型新穎醫藥組成物。

本揭示內容之組成物可投予需要預防或治療血小板減少症與白血球減少症之任何對象。舉例而言，本揭示內容之組成物不僅可投予人類，亦可投予非人類動物(特別是哺乳動物)例如猴子、狗、貓、兔、天竺鼠、大鼠、小鼠、母牛、綿羊、豬、山羊等。本揭示內容之組成物可經由各種習知方法投予，例如，經口或經直腸投予，或經靜脈內(i.v.)、肌內(i.m.)、皮下(s.c.)或腦血管注射投予。由於單乙醯基二醯基甘油類口服有效，因此通常係例如呈明膠膠囊形式，或呈功能性保健食品，亦即，以含有效量式1單乙醯基二醯基甘油之食品形式經口投予。

因此，於一態樣中，本揭示內容提供用於治療(例如，抑制、減少、控制、減輕或復原)選自白血球減少症(例如，嗜中性白血球減少症)及/或血小板減少症之症狀之方法(方法1)，該方法包括投予有其需要之病患有效量(例如，嗜中性白血球或血小板保護量)之式1化合物： 其中R₁與R₂獨立地為具14至22個碳原子之脂肪酸基團，例如，PLAG；舉例而言，

1.1. 方法1，其中R1與R2係獨立地選自包括棕櫚醯基、油醯基、亞麻醯基、次亞麻醯基、硬脂醯基、肉豆蔻醯基、與花生醯基之組群。

1.2. 方法1或1.1，其中R1與R2(R1/R2)係選自油醯基/棕櫚醯基、棕櫚醯基/油醯基、棕櫚醯基/亞麻醯基、棕櫚醯基/次亞麻醯基、棕櫚醯基/花生醯基、棕櫚醯基/硬脂醯基、棕櫚醯基/棕櫚醯基、油醯基/硬脂醯基、亞麻醯基/棕櫚醯基、亞麻醯基/硬脂醯基、硬脂醯基/亞麻醯基、硬脂醯基/油醯基、肉豆蔻醯基/亞麻醯基及肉豆蔻醯基/油醯基所成之組群。

1.3. 前述任一方法，其中該式1化合物係具下式2之化合物(PLAG)：

1.4. 前述任一方法，其中該式2化合物係呈實質上不含其他單乙醯基二醯基甘油類之醫藥組成物投予，例如，於調配物中，至少95%，例如至少99%之總單乙醯基二醯基甘油類為式2者。

1.5. 前述任一方法，其中該式2化合物係呈實質上不含其他單乙醯基二醯基甘油化合物之醫藥組成物投予。

1.6. 前述任一方法，其中該式2化合物係呈實質上不含其他三酸甘油酯化合物之醫藥組成物投予。

1.7. 前述任一方法，其中該式1化合物係從天然鹿茸分離與萃取。

1.8. 前述任一方法，其中該式1化合物係由化學合成法製造。

1.9. 前述任一方法，其中該式1化合物係呈用於經口投予之醫藥組成物形式投予。

1.10.前述任一方法，其中該式1化合物係呈含有組合或聯合醫藥上可接受之稀釋劑或載劑之式1化合物之軟明膠膠囊之醫藥組成物形式投予，舉例而言，其中該醫藥上可接受之稀釋劑或載劑包含食用油，例如，植物油，舉例而言，橄欖油。

1.11.前述任一方法，其中該式1化合物以該組成物重量計，係呈含0.0001至100.0重量%，例如50至95%或95至99%之醫藥組成物形式投予。

1.12.前述任一方法，其中該組成物進一步包含醫藥上 可接受之抗氧化劑，例如抗壞血酸(AA，E300)與生育酚(E306)，以及合成之抗氧化劑例如沒食子酸丙酯(PG，E310)、三級丁基氫醌(TBHQ)、丁基化之羥基苯甲醚(BHA，E320)與丁基化之羥基甲苯(BHT，E321)，例如α-生育酚。

1.13.前述任一方法，其中該式1化合物係式2化合物，係呈含有組合或聯合大約50mg醫藥上可接受之稀釋劑或載劑(舉例而言，食用油，例如植物油，如橄欖油)與250mg式2化合物之軟明膠膠囊形式投予。

1.14.前述任一方法，其中該式1化合物係呈功能性食品形式，例如呈適用於人類消費的食品之添加劑或摻和物投予。

1.15.前述任一方法，其中該式1化合物係一天一次(q.d.)或一天兩次(b.i.d.)進行投予。

1.16.前述任一方法，其中該式1化合物之總日劑量為250mg至2000mg/天，舉例而言為500mg至1500mg/天，例如500mg/天、1000mg/天、或1500mg/天。

1.17.前述任一方法，其中該式1化合物係以500mg劑量一天兩次(例如，早上與晚上)進行投予。

1.18.前述任一方法，其中該式1化合物係以500mg劑量一天一次(例如，晚上)進行投予。

1.19.前述方法之任一項，其中該式1化合物係於至少 兩週(例如，至少一個月)期間投予。

1.20.前述任一方法，其中該醫藥組成物可調配為供經口或非經口投予之固態、液態、凝膠或懸浮液形式。

1.21.前述任一方法，其中該式1化合物為式2化合物(PLAG)，係呈含有500mg PLAG藥物物質與1mg作為抗氧化劑之α-生育酚之供經口投予之軟明膠膠囊形式投予，以500mg至4,000mg之總日劑量，每天投予一次或兩次。

1.22.前述任一方法，其中該欲治療之症狀係嗜中性白血球減少症。

1.23.前述任一方法，其中該欲治療之症狀係由一種選自肺炎、耳部感染、口腔牙齦感染、砷中毒、血液透析、化學化合物、蛋白質、抗癌劑及化療與照射療法所成組群之疾病所引起。

1.24.前述任一方法，其中該欲治療之症狀係由一種選自肺炎、耳部感染、口腔牙齦感染、砷中毒、血液透析、化學化合物、蛋白質、抗癌劑、化療及照射療法之組群之疾病所引起。

1.25.前述任一方法，其中該欲治療之症狀係由一種選自阿柏西普(ziv-aflibercept)、貝倫妥單抗維多汀(brentuximab vedotin)、普拉曲沙(pralatrexate)、更昔洛韋(ganciclovir)、纈更昔洛韋(valganciclovir)、羅米地辛(romidepsin)、魯索利替尼(ruxolitinib)、 地西他濱(decitabine)、伊馬替尼(imatinib)、托普迪肯(topotecan)、來那度胺、愛萊諾迪肯(irinotecan)、干擾素類、苯肼、他莫西芬、脂多醣、蒽環類抗生素、吉西他濱(gemcitabine)、環磷醯胺(cytoxan)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、烷化抗癌劑、DNA嵌入劑、拓樸異構酶抑制劑所成組群之化合物及其衍生物或混合物所引起或惡化。

1.26.前述任一方法，其中該欲治療之症狀包括由藥物，例如，選自阿柏西普、貝倫妥單抗維多汀、普拉曲沙、更昔洛韋、纈更昔洛韋、羅米地辛、魯索利替尼、地西他濱、伊馬替尼、托普迪肯、來那度胺、愛萊諾迪肯、干擾素類、苯肼、他莫西芬、脂多醣、蒽環類抗生素[例如，道諾黴素(daunorubicin)、阿黴素(doxorubicin)(=Adriamycin)]、吉西他濱、環磷醯胺、太平洋紫杉醇、烷化抗癌劑、DNA嵌入劑[例如，烷化劑、苯達莫司汀(bendamustin)、芥末]、拓樸異構酶抑制劑、硼替佐米(Bortezomib)、替昔羅莫司(Temsirolimus)、伏立諾他(Vorinostat)、依弗醯胺(Ifosfamide)、易莎平(Lxabepilone)及其衍生物之藥物誘發之血小板減少症。

1.27.前述任一方法，其中該欲治療之症狀包括由藥物，例如選自阿柏西普、貝倫妥單抗維多汀、去鐵酮(Deferiprone)、吉西他濱、普拉曲沙、更昔洛韋、 纈更昔洛韋、沙利竇邁(Thalidomide)、羅米地辛、波西匹韋(Boceprevir)、地西他濱、伊馬替尼、托普迪肯、來那度胺、太平洋紫杉醇、奥氮平(Olanzapine)、愛萊諾迪肯、帕利哌酮(Paliperidone)、干擾素類、脂多醣、他莫西芬、氟卡胺(Flecainide)(1C類之抗心律不整藥物)、苯妥英(Phenytoin)、消炎痛(Indomethacin)、丙基硫脲嘧啶(Propylthiouracil)、卡比馬唑(Carbimazole)、氯丙嗪(Chlorpromazine)、三甲胺嘧啶(Trimethoprim)/磺胺甲異唑(sulfamethoxazole)[復方新諾明(cotrimoxazole)]、氯氮平(Clozapine)、Ticlodipine、與彼等之衍生物、環磷醯胺、甲基二(氯乙基)胺、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、黴法蘭(Melphalan)、卡莫司汀[Carmustine(BCNU)]、洛莫司汀[Lomustine(CCNU)]、丙卡巴肼(Procarbazine)、達卡巴嗪[Dacarbazine(DTIC)]、六甲嘧胺(Altretamine)、順鉑(Cisplatin)、卡鉑(Carboplatin)、放線菌黴素D、滅必治(Etoposide)、托普迪肯、愛萊諾迪肯、阿黴素&道諾黴素、6-硫醇嘌呤、6-硫鳥嘌呤、艾達黴素(Idarubicin)、依匹紅黴素(Epirubicin)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、硫唑嘌呤(Azathioprine)、2-氯去氧腺苷、羥基尿素、胺甲喋呤(Methotrexate)、5-氟脲嘧啶、阿糖胞苷(Cytosine arabinoside)、氮雜胞苷(Azacytidine)、吉西他濱、氟阿腺苷磷酸鹽 (Fludarabine phosphate)、長春新鹼(Vincristine)、長春鹼(Vinblastine)、溫諾平(Vinorelbine)、太平洋紫杉醇、歐洲紫杉醇(Docetaxel)、他莫西芬、培美曲塞(Pemetrexed)、奈米微粒劑型太平洋紫杉醇(Nab-paclitaxel)、達沙替尼(Dasatinib)、普拉曲沙、地西他濱、羅米地辛、伊馬替尼、來那度胺、蘇尼替尼(Sunitinib)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、及沙利竇邁之藥物誘發之白血球減少症，例如，嗜中性白血球減少症。

1.28.前述任一方法，其中該病患係在未以式1化合物治療下，接受或意欲以足以導致嗜中性白血球減少症或血小板減少症之劑量接受化療，或罹患因化療發生之嗜中性白血球減少症或血小板減少症。

1.29.前述任一方法，其中該病患係接受骨髓抑制性化療之癌症病患。

1.30.前述任一方法，其中該病患係接受骨髓抑制性化療之癌症病患，其中該使用式1化合物之治療係在化療給藥前至少24小時至化療給藥後至少24小時之期間中止，例如以減少化療時式1化合物對細胞刺激所致之脆弱性。

1.31.前述任一方法，其中該病患係接受骨髓移植之癌症病患。

1.32.前述任一方法，其中該病患係癌症病患，該式1 化合物係於清髓性(myoablative)化療之前投予，以提高收集供清髓性化療後再引入病患中之周邊血液源祖細胞量，視需要地，於清髓性化療之後亦投予該式1化合物。

1.33.前述任一方法，其中該病患罹患慢性嗜中性白血球減少症，例如，先天性嗜中性白血球減少症、週期性嗜中性白血球減少症或自發性嗜中性白血球減少症。

1.34.前述任一方法，其中該欲治療之症狀包括嗜中性白血球減少症，例如，其中“嗜中性白血球減少症”被認為係每微升血液嗜中性白血球之計數為2000個或更少，例如，1,700個或更少，例如，1500個或更少。

1.35.前述任一方法，其中治療係持續至該病患每微升(μl)血液之嗜中性白血球至少5000個，例如，至少8000個，例如，至少10,000個。

1.36.前述任一方法，其中該嗜中性白血球減少症與發燒有關。

1.37.前述任一方法，其中該式1化合物係以減輕或治療G-CSF副作用，例如，由G-CSF誘發之血小板減少症及/或骨骼疼痛，之有效量投予。

1.38.前述任一方法，其中該病患由於使用選自環磷醯胺、阿黴素、滅必治、依弗醯胺、美司鈉(mesna)、順鉑、吉西他濱、及他莫西芬之一或多種化療劑 治療而罹患或瀕臨嗜中性白血球減少症或血小板減少症之風險。

1.39.前述任一方法，其中該欲治療之症狀包括血小板減少症，例如，其中血小板減少症被認為係每微升血液之血小板低於130,000個，例如，低於100,000個，例如，低於50,000個。

1.40.前述任一方法，其中該病患，例如，由於癌症、病毒感染、再生不良性貧血、免疫性血小板性紫癜(ITP)、栓塞性血小板減少性紫癜病(TTP)或肝病，而罹患慢性血小板減少症。

1.41.前述任一方法，其中所治療之該症狀係由或與選自包括皮下血斑症、胃出血、血尿(尿出血)、月經量過多、中風、失明、自發性血小板減少性紫癲(ITP)、高脾臟活性(hyper-spleen activities)、肝硬化、肝炎(尤其是肝炎C)、慢性肝病、白血病、淋巴瘤、狼瘡、人類免疫缺失症病毒(HIV)感染、化學化合物、抗癌劑、蛋白質、及照射療法所成之組群或與其一致之症狀所引起之血小板減少症。

1.42.前述任一方法，其中治療係持續至該病患每微升血液之血小板至少50,000個，例如，至少100,000個，例如，至少130,000個。

1.43.前述任一方法，其中所治療之該症狀係嗜中性白血球減少症及該病患係接受用於治療可由G-CSF誘發或激發之癌症之化療劑，舉例而言，其中該 化療劑係選自環磷醯胺、阿黴素、滅必治、依弗醯胺、美司鈉、順鉑、吉西他濱、他莫西芬與來那度胺之一或多者；例如，其中該化療劑為來那度胺；舉例而言，其中該癌症係多發性骨髓瘤、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓樣白血病、或骨髓發育不良症候群。

1.44.前述任一方法，其中該式1化合物係於清髓性化療之前投予，以提高收集供清髓性化療後再引入病患中之周邊血液源祖細胞量，視需要地，於清髓性化療之後亦投予該式1化合物。

1.45.前述任一方法，其中該式1化合物誘發造血幹細胞(HSC)之分化以形成共同骨髓樣前驅細胞(CMP)、嗜中性白血球、嗜酸性白血球與單核細胞，及抑制造血幹細胞(HSC)之分化形成產生共同淋巴細胞前驅細胞與淋巴細胞之共同類淋巴前驅細胞(CLP)。

1.46.前述任一方法，其中該病患係人類。

1.47.前述任一方法，其中該病患先前已被診斷出具有癌症。

此外，本揭示內容提供式1化合物，例如，PLAG，(或例如，如本文所述之包含有效量式1化合物，例如，PLAG，之醫藥組成物)，以用於治療(例如，抑制、減少、控制、減輕、或復原)選自白血球減少症(例如，嗜中性白血球減少症)、及/或血小板減少症之症狀，例如， 以供方法1及以下任何方法之用。

此外，本揭示內容提供使用式1化合物，例如，PLAG，製造用於治療(例如，抑制、減少、控制、減輕、或復原)選自白血球減少症(例如，嗜中性白血球減少症)、及/或血小板減少症症狀之藥劑之用途，例如，於方法1及以下任何方法中。

於特定具體例中，本揭示內容提供治療癌症之方法，該方法包括投予有其需要之病患，結合依照方法1及以下任何方法投予之式1化合物之化療劑，其中該化療劑係以於未接受式1化合物之病患中將導致嗜中性白血球減少症及/或血小板減少症之劑量及/或期間投予。

於另一態樣中，本揭示內容提供於接受化療劑(例如，來那度胺)之病患中，用於治療、控制或減輕嗜中性白血球減少症及/或血小板減少症之方法(方法2)，以治療由G-CSF所刺激或惡化之癌症(例如，骨髓惡性腫瘤，舉例而言，多發性骨髓瘤、急性骨髓樣白血病、慢性骨髓性白血病或骨髓發育不良症候群)，該方法包括，例如，依照方法1及以下任何方法，投予有其需要之病患有效量之式1化合物： 其中R₁與R₂獨立地為具14至22個碳原子之脂肪酸基團，例如，PLAG； 舉例而言，

2.1. 方法2，其中R₁與R₂係獨立地選自棕櫚醯基、油醯基、亞麻醯基、次亞麻醯基、硬脂醯基、肉豆蔻醯基及花生醯基所成之組群。

2.2. 方法2或2.1，其中該式1化合物係具下式2之化合物：

2.3. 方法2.2，其中該式2化合物係呈實質上不含其他單乙醯基二醯基甘油類之醫藥組成物投予，例如，其中於調配物中，至少95%，例如至少99%之總單乙醯基二醯基甘油類為式2者。

2.4. 前述任一方法，其中該式1化合物係從天然鹿茸分離或萃取。

2.5. 前述任一方法，其中該式1化合物係由化學合成法製造。

2.6. 前述任一方法，其中該式1化合物係呈用於經口投予之醫藥組成物形式投予。

2.7. 前述任一方法，其中該式1化合物係呈含有組合或聯合醫藥上可接受之稀釋劑或載劑之式1化合物之軟明膠膠囊之醫藥組成物形式投予，舉例而 言，其中該醫藥上可接受之稀釋劑或載劑包含食用油，例如，植物油，舉例而言，橄欖油。

2.8. 前述任一方法，其中該式1化合物以該組成物重量計，係呈含0.0001至100.0重量%，例如50至95%之醫藥組成物形式投予。

2.9. 前述任一方法，其中該式1化合物係式2化合物，係呈含有組合或聯合大約50mg醫藥上可接受之稀釋劑或載劑(舉例而言，食用油，例如植物油，如橄欖油)之250mg式2化合物之軟明膠膠囊形式投予。

2.10.方法2至2.5之任一項，其中該式1化合物係呈功能性食品形式，例如呈適用於人類消費的食品之添加劑或摻和物投予。

2.11.前述任一方法，其中該式1化合物係一天一次(q.d.)或一天兩次(b.i.d.)進行投予。

2.12.前述任一方法，其中該式1化合物之總日劑量為250mg至2000mg/天，舉例而言為500mg至1500mg/天，例如500mg/天、1000mg/天、或1500mg/天。

2.13.前述任一方法，其中該式1化合物係以500mg劑量一天兩次(例如，早上與晚上)進行投予。

2.14.前述任一方法，其中該式1化合物係以500mg劑量一天一次(例如，晚上)進行投予。

2.15.前述任一方法，其中該式1化合物係與食物一起 投予，例如，於晚餐後。

2.16.前述任一方法，其中該式1化合物係於至少兩週(例如，至少一個月)期間投予。

2.17.前述任一方法，其中該式1化合物為式2化合物(PLAG)，係呈含有500mg PLAG藥物物質與1mg作為抗氧化劑之α-生育酚之供經口投予之軟明膠膠囊形式投予，以500mg至4,000mg之總日劑量，每天投予一次或兩次。

2.18.前述任一方法，其中該化療劑係選自環磷醯胺、阿黴素、滅必治、依弗醯胺、美司鈉、順鉑、吉西他濱、他莫西芬與來那度胺之一或多者。

2.19.前述任一方法，其中該化療劑係來那度胺。

2.20.前述任一方法，其中該癌症係多發性骨髓瘤。

2.21.前述任一方法，其中該癌症係慢性骨髓性白血病(CML)。

2.22.前述任一方法，其中該癌症係急性骨髓樣白血病。

2.23.前述任一方法，其中該癌症係骨髓發育不良症候群。

2.24.前述任一方法，其中該病患01.24.1. 於無其他治療下，意欲以足以導致嗜中性白血球減少症之劑量接受化療，或01.24.2. 罹患化療造成之嗜中性白血球減少症。

2.25.前述任一方法，其中該病患係癌症病患，該式1化合物係於清髓性化療之前投予，以提高收集供 清髓性化療後再引入病患中之周邊血液源祖細胞量，視需要地，於清髓性化療之後亦投予該式1化合物。

2.26.前述任一方法，其中“嗜中性白血球減少症”被認為係每微升血液嗜中性白血球之計數為2000個或更少，例如，1,700個或更少，例如，1500個或更少。

2.27.前述任一方法，其中治療係持續至該病患每微升血液之嗜中性白血球至少5000個，例如，至少8000個，例如，至少10,000個。

2.28.前述任一方法，其中該嗜中性白血球減少症與發燒有關。

2.29.前述任一方法，其中該病患由於使用選自環磷醯胺、阿黴素、滅必治、依弗醯胺、美司鈉、順鉑、吉西他濱、及他莫西芬之一或多種化療劑治療而罹患或瀕臨嗜中性白血球減少症或血小板減少症之風險。

2.30.前述任一方法，其中該欲治療之症狀包括血小板減少症，例如，其中血小板減少症被認為係每微升血液之血小板低於130,000個，例如，低於100,000個，例如，低於50,000個。

2.31.前述任一方法，其中該病患，例如，由於癌症、病毒感染、再生不良性貧血、免疫性血小板性紫癜(ITP)、栓塞性血小板減少性紫癜病(TTP)或肝 病，而罹患慢性血小板減少症。

2.32.前述任一方法，其中治療係持續至該病患每微升血液之血小板至少50,000個，例如，至少100,000個，例如，至少130,000個。

2.33.前述任一方法，其中該式1化合物係依照方法1及以下任何方法投予。

此外，本揭示內容提供用於與化療劑(例如，來那度胺)組合使用之式1化合物，例如，PLAG，(或例如，如本文所述之包含有效量式1化合物，例如，PLAG，之醫藥組成物)，例如，以供方法2及以下任何方法之用。

此外，本揭示內容提供使用式1化合物，例如，PLAG，製造與化療劑(例如，來那度胺)組合使用之藥劑之用途，例如，以供方法2及以下任何方法之用。

於另一態樣中，本揭示內容提供用於治療血癌(例如，骨髓惡性腫瘤，舉例而言，可能由G-CSF誘發或惡化之例如選自多發性骨髓瘤、急性骨髓樣白血病、慢性骨髓性白血病與骨髓發育不良症候群之血癌)之方法(方法3)，該方法包括(連續或同時)共同投予有其需要之病患有效量之(i)化療劑(例如，來那度胺)與(ii)式1化合物： 其中R1與R2獨立地為具14至22個碳原子之脂肪酸基團，例如，PLAG； 舉例而言，方法3，其中R₁與R₂係獨立地選自包括棕櫚醯基、油醯基、亞麻醯基、次亞麻醯基、硬脂醯基、肉豆蔻醯基、與花生醯基之組群。

3.1. 方法3或3.1，其中該式1化合物係具下式2之化合物：

3.2. 方法3.2，其中該式2化合物係呈實質上不含其他單乙醯基二醯基甘油類之醫藥組成物投予，例如，其中於調配劑中，總單乙醯基二醯基甘油類之至少95%，舉例而言，至少99%，為式2者。

3.3. 前述任一方法，其中該式1化合物係從天然鹿茸分離或萃取。

3.4. 前述任一方法，其中該式1化合物係由化學合成法製造。

3.5. 前述任一方法，其中該式1化合物係呈用於經口投予之醫藥組成物形式投予。

3.6. 前述任一方法，其中該式1化合物係呈含有組合或聯合醫藥上可接受之稀釋劑或載劑之式1化合物之軟明膠膠囊之醫藥組成物形式投予，舉例而 言，其中該醫藥上可接受之稀釋劑或載劑包含食用油，例如，植物油，舉例而言，橄欖油。

3.7. 前述任一方法，其中該式1化合物以該組成物重量計，係呈含0.0001至100.0重量%，例如50至95%之醫藥組成物形式投予。

3.8. 前述任一方法，其中該式1化合物係式2化合物，係呈含有組合或聯合大約50mg醫藥上可接受之稀釋劑或載劑(舉例而言，食用油，例如植物油，如橄欖油)之250mg式2化合物之軟明膠膠囊形式投予。

3.9. 方法3至3.5之任一項，其中該式1化合物係呈功能性食品形式，例如呈適用於人類消費的食品之添加劑或摻和物投予。

3.10.前述任一方法，其中該式1化合物係一天一次(q.d.)或一天兩次(b.i.d.)進行投予。

3.11.前述任一方法，其中該式1化合物之總日劑量為250mg至2000mg/天，舉例而言為500mg至1500mg/天，例如500mg/天、1000mg/天、或1500mg/天。

3.12.前述任一方法，其中該式1化合物係以500mg劑量一天兩次(例如，早上與晚上)進行投予。

3.13.前述任一方法，其中該式1化合物係以500mg劑量一天一次(例如，晚上)進行投予。

3.14.前述任一方法，其中該式1化合物為式2化合物 (PLAG)，呈含有500mg PLAG藥物物質與1mg作為抗氧化劑之α-生育酚之供經口投予之軟明膠膠囊形式投予，以500mg至4,000mg之總日劑量，每天投予一次或兩次。

3.15.前述任一方法，其中該式1化合物係與食物一起投予，例如，於晚餐後。

3.16.前述任一方法，其中該式1化合物係於至少兩週(例如，至少一個月)期間投予。

3.17.前述任一方法，其中該化療劑係選自環磷醯胺、阿黴素、滅必治、依弗醯胺、美司鈉、順鉑、吉西他濱、他莫西芬與來那度胺之一或多者。

3.18.前述任一方法，其中該化療劑係來那度胺。

3.19.前述任一方法，其中該癌症係多發性骨髓瘤。

3.20.前述任一方法，其中該癌症係慢性骨髓性白血病(CML)。

3.21.前述任一方法，其中該癌症係急性骨髓樣白血病。

3.22.前述任一方法，其中該癌症係骨髓發育不良症候群。

3.23.前述任一方法，其中該病患.23.1.於無其他治療下，意欲以足以導致嗜中性白血球減少症之劑量接受化療，或.23.2.罹患化療造成之嗜中性白血球減少症。

3.24.前述任一方法，其中該病患係癌症病患，該式1化合物係於清髓性化療之前投予，以提高收集供 清髓性化療後再引入病患中之周邊血液源祖細胞量，視需要地，於清髓性化療之後亦投予該式1化合物。

3.25.前述任一方法，其中治療係持續至該病患每微升血液之嗜中性白血球至少5000個，例如，至少8000個，例如，至少10,000個。

3.26.前述任一方法，其中該式1化合物係依照方法1及以下任何方法投予。

此外，本揭示內容提供結合有效量化療劑(例如，來那度胺)之(連續或同時)共同投予，用於治療血癌(例如，骨髓惡性腫瘤，舉例而言，可能由G-CSF誘發或惡化之例如選自多發性骨髓瘤、急性骨髓樣白血病、慢性骨髓性白血病與骨髓發育不良症候群之血癌)之式1化合物，例如，PLAG，(或例如，如本文所述，包含有效量式1化合物，例如，PLAG，之醫藥組成物)，例如，以供方法3及以下任何方法之用。

此外，本揭示內容提供使用式1化合物，例如，PLAG，製造結合有效量化療劑(例如，來那度胺)之共同投予(連續或同時)，用於治療血癌(例如，骨髓惡性腫瘤，舉例而言，可能由G-CSF誘發或惡化之例如選自多發性骨髓瘤、急性骨髓樣白血病、慢性骨髓性白血病與骨髓發育不良症候群之血癌)之藥劑之用途，例如，供方法3及以下任何方法之用。

於另一態樣中，本揭示內容提供用於治療 (包括預防)嗜中性白血球減少症及/或動員周邊血液源祖細胞(PBPC)之方法(方法4)，該方法包括(連續或同時)投予有效量之(i)式1化合物： 其中R₁與R₂獨立地為具14至22個碳原子之脂肪酸基團，例如，PLAG，與(ii)G-CSF，例如，選自非格司亭、化非格司亭、與來格司亭，舉例而言，

4.1. 方法4，其中R₁與R₂係獨立地選自包括棕櫚醯基、油醯基、亞麻醯基、次亞麻醯基、硬脂醯基、肉豆蔻醯基、與花生醯基之組群。

4.2. 方法4或4.1，其中該式1化合物係具下式2之化合物：

4.3. 方法4.2，其中該式2化合物係呈實質上不含其他單乙醯基二醯基甘油類之醫藥組成物投予，例如，其中於調配劑中，總單乙醯基二醯基甘油類之至少95%，舉例而言，至少99%，為式2。

4.4. 前述任一方法，其中該式1化合物係從天然鹿茸分離或萃取。

4.5. 前述任一方法，其中該式1化合物係由化學合成法製造。

4.6. 前述任一方法，其中該式1化合物係呈用於經口投予之醫藥組成物形式投予。

4.7. 前述任一方法，其中該式1化合物係呈含有組合或聯合醫藥上可接受之稀釋劑或載劑之式1化合物之軟明膠膠囊之醫藥組成物形式投予，舉例而言，其中該醫藥上可接受之稀釋劑或載劑包含食用油，例如，植物油，舉例而言，橄欖油。

4.8. 前述任一方法，其中該式1化合物以該組成物重量計，係呈含0.0001至100.0重量%，例如50至95%之醫藥組成物形式投予。

4.9. 前述任一方法，其中該式1化合物係式2化合物，係呈含有組合或聯合大約50mg醫藥上可接受之稀釋劑或載劑(舉例而言，食用油，例如植物油，如橄欖油)之250mg式2化合物之軟明膠膠囊形式投予。

4.10.方法4至4.5之任一項，其中該式1化合物係呈功能性食品形式，例如呈適用於人類消費的食品之添加劑或摻和物投予。

4.11.前述任一方法，其中該式1化合物係一天一次(q.d.)或一天兩次(b.i.d.)進行投予。

4.12.前述任一方法，其中該式1化合物之總日劑量為250mg至2000mg/天，舉例而言為500mg至1500mg/ 天，例如500mg/天、1000mg/天、或1500mg/天。

4.13.前述任一方法，其中該式1化合物係以500mg劑量一天兩次(例如，早上與晚上)進行投予。

4.14.前述任一方法，其中該式1化合物係以500mg劑量一天一次(例如，晚上)進行投予。

4.15.前述任一方法，其中該式1化合物為式2化合物(PLAG)，係呈含有500mg PLAG藥物物質與1mg作為抗氧化劑之α-生育酚之供經口投予之軟明膠膠囊形式投予，以500mg至4,000mg之總日劑量，每天投予一次或兩次。

4.16.前述任一方法，其中該式1化合物係與食物一起投予，例如，於晚餐後。

4.17.前述任一方法，其中該式1化合物係於至少兩週(例如，至少一個月)期間投予。

4.18.前述任一方法，其中該G-CSF係選自非格司亭、化非格司亭、與來格司亭，例如，其中該G-CSF係非格司亭。

4.19.前述任一方法，其中該病患01.19.1.於無其他治療下，意欲以足以導致嗜中性白血球減少症之劑量接受化療，或01.19.2.罹患化療造成之嗜中性白血球減少症。

4.20.前述任一方法，其中該病患係接受骨髓抑制性化療之癌症病患。

4.21.前述任一方法，其中該病患係接受骨髓抑制性化 療之癌症病患，其中該使用式1化合物與G-CSF之治療係在化療給藥前至少24小時及化療給藥後至少24小時之期間中止，例如以減少化療時式1化合物與G-CSF對細胞刺激所致之脆弱性。

4.22.前述任一方法，其中該病患係接受骨髓移植之癌症病患。

4.23.前述任一方法，其中該病患係癌症病患，該式1化合物與G-CSF係於清髓性化療之前投予，以提高收集供清髓性化療後再引入病患中之周邊血液源祖細胞量，視需要地，於清髓性化療之後亦投予該式1化合物與G-CSF。

4.24.前述任一方法，其中該病患罹患慢性嗜中性白血球減少症，例如，先天性嗜中性白血球減少症、週期性嗜中性白血球減少症或自發性嗜中性白血球減少症。

4.25.前述任一方法，其中“嗜中性白血球減少症”被認為係每微升血液嗜中性白血球之計數為2000個或更少，例如，1,700個或更少，例如，1500個或更少。

4.26.前述任一方法，其中治療係持續至該病患每微升血液之嗜中性白血球至少5000個，例如，至少8000個，例如，至少10,000個。

4.27.前述任一方法，其中該嗜中性白血球減少症與發燒有關。

4.28.前述任一方法，其中該式1化合物係以減輕或治療G-CSF副作用，例如，由G-CSF誘發之血小板減少症及/或骨骼疼痛，之有效量投予。

4.29.前述任一方法，其中該病患由於使用選自環磷醯胺、阿黴素、滅必治、依弗醯胺、美司鈉、順鉑、吉西他濱、及他莫西芬之一或多種化療劑治療而罹患或瀕臨嗜中性白血球減少症之風險。

4.30.前述任一方法，其中該式1化合物係依照方法1及以下任何方法投予。

此外，本揭示內容提供減輕或治療G-CSF副作用(例如，由G-CSF誘發之血小板減少症及/或骨骼疼痛)之方法(方法5)，該方法包括連續或同時共同投予有其需要之病患式1化合物，例如PLAG，例如，於方法1及以下任何方法中所述之方案中。

此外，本揭示內容提供用於與G-CSF組合使用之式1化合物，例如，PLAG，(或例如，如本文所述之包含有效量式1化合物，例如，PLAG，之醫藥組成物)，例如，以供方法1及以下任何方法、方法4及以下方法、或方法5之用。

此外，本揭示內容提供使用式1化合物，例如，PLAG，製造與G-CSF組合使用之藥劑之用途，例如，以供方法1及以下任何方法、或方法4及以下、或方法5中使用。

如全文中所用，係以速記方式(shorthand)敘 述範圍內之每一數值。範圍內之任何數值皆可被選定作為該範圍之端點。此外，本文所引用之所有參考文獻，其全部內容均併入本文以資參考。於本揭示內容與所引用參考文獻之界定上發生抵觸之情形下，以本揭示內容為準。除非另行指定，否則於本文及說明書中別處所示之百分比與數量應被理解為係指重量百分比。所提供之數量係基於該物質之活性重量(active weight)。

茲提供下述實施例俾便更了解本發明。然而，本揭示內容不受限於該等實施例。

實施例1-於RBL-2H3細胞中PKC θ/p38/ERK活性之活體外抑制

細胞株中之活體外藥理學研究顯示，PLAG能抑制PKC θ/p38 MAPK/ERK路徑，其涉及來自HSC之類淋巴源祖細胞之成熟。分別使用抗磷酸化(anti-phospho)-p38與抗磷酸化-ERK1/2，利用西方墨漬法測定經PLAG處理之RBL-2H3細胞中p38 MAPK與ERK1/2之去磷酸化。為了活化RBL-2H3細胞中之p38與ERK1/2，使細胞連同50ng/mL抗-DNP-IgE一起過夜，予以敏化。以PBS洗滌三次後，添加20ng/ml DNP-HSA。用於西方墨漬法之各細胞溶解物係於經PLAG處理之RBL-2H3細胞中以劑量依賴性方式製備，並培育相同時間(15分鐘)。使用β-肌動蛋白作為內部控制。於IgE-抗原複合物刺激後，立即啟動ERK1/2與p38磷酸化，持續充分活化5分鐘。然而，當IgE-抗原複合物刺激係施加於經PLAG預培育之RBL-2H3細胞 時，ERK1/2與p38之磷酸化向下調節。西方墨漬法顯示，於經IgE-抗原複合物刺激之RBL-2H3細胞中，PLAG對p38 MAP激酶與ERK1/2(MEK1/2)活化之抑制效應。

實施例2-補體活化路徑之活體外抑制

經由抑制C3之生成，達成用於調控補體活性之PLAG活性。C3之生成視STAT6之活性而定。因此，據推測，PLAG抑制STAT6之活性，從而抑制可經由化療而向上調節或活化之C3之生成。

經PLAG處理之細胞中STAT6之去磷酸化：使用於經濃度0.01至10μg/ml PLAG處理之U937、A549、與尤爾卡特(Jurkat)之細胞溶解物中之抗磷酸化之STAT6，檢驗STAT6之去磷酸化。使用10ng/ml IL-4處理以誘發STAT6之磷酸化。檢驗以PLAG(0.01至10μg/ml)處理之U937細胞溶解物中之STAT1之去磷酸化。藉由10ng/ml之IFN-γ處理以誘發STAT1之磷酸化。於經PLAG預處理之細胞中，分別以IFN-γ與IL-4刺激15分鐘後，檢驗STAT1與STAT6之去磷酸化。西方墨漬法分析顯示STAT6與STAT1之活性。STAT6之轉錄活性因STAT6之去磷酸化而減少。於淋巴瘤衍生之細胞株U937、T細胞衍生之尤爾卡特細胞、及肺上皮細胞株A549中，IL-4處理誘發之STAT6磷酸化隨著PLAG濃度增加而受抑制。觀察到PLAG對STAT1之磷酸化沒有影響。

STAT6之活性：經由使用STAT6抑制劑(S6I)，證實於HepG2細胞(人類肝細胞細胞株)中，補體3 之減少係由STAT6調控。以PLAG處理HepG2細胞時，如由螢光素酶活性研究證實，STAT6之轉錄活性依照PLAG之量逐漸減少；亦證實，PLAG對STAT6比STAT1更具選擇性功效。第1圖呈現顯示PLAG處理之HepG2細胞中STAT1與STAT6之轉錄活性圖。NC係指未經刺激之對照細胞。為了STAT1檢測，以10ng之IFN-γ處理經基因轉染之HepG2(人類肝細胞細胞株)，然後添加經系列稀釋(如所示之0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、與10μg/ml)之PLAG，以了解其於經刺激之細胞中對基因表現之影響。為了STAT6檢測，以10ng之IL-4處理基因轉染之HepG2細胞，然後再添加經系列稀釋(如所示之0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、與10μg/ml)之PLAG，以了解其在刺激細胞中對基因表現之影響。該檢測於培育經處理之細胞12小時後進行。此檢測中，PLAG不影響STAT1表現，惟對STAT6表現具有顯著之劑量依賴性效應。

於人類HMC-1細胞中C3表現之活體外抑制：就補體依賴性機制於藥物誘發之嗜中性白血球減少症上之角色，及嗜中性白血球於血管發炎與對敗血症反應上之角色所發表之報告建議，補體活化可能涉及化療所誘發之血小板減少症與白血球減少症。申請人等已發現PLAG可向下調節C3以減弱補體活化；經PLAG處理之人類單核細胞(HMC-1)與經PLAG處理之肝細胞(HepG2)顯示減少之C3表現。

於37℃、5% CO₂潮濕條件下，培育及維持 血球細胞株，HMC-1(人類肥大細胞，美國菌種保存中心，ATCC，Rockville，MD)。培養基為含10%胎牛血清(FCS，HyClone，Logan，UT)、2mM L-麩胺酸、100μg/ml青黴素、100μg/ml鏈黴素(Life Technologies)之IMDM(Life Technologies，Karlsruhe，Germany)。以0.1與1μg/mL濃度之PLAG預處理所培養之HMC-1細胞(1x10⁶個細胞/ml)，隨後以IL-4(5ng)及/或TNF-α(10ng)處理，以誘發細胞活性。

經由使用RT-PCR(反轉錄酶聚合酶連鎖反應)觀察經表現之C3及其mRNA量之變化。RT-PCR係如下述進行：利用標準實驗流程分離總RNA，使用AccuScript High Fidelity 1st Strand cDNA合成套組(Stratagene)，根據廠商使用說明合成cDNA。二步驟RT-PCR反應係使用寡-dT引子與反轉錄酶、引子對及Taq聚合酶(Takara，Shiga，Japan)進行。將合成之cDNA(1μl)連同0.5U ExTaq DNA聚合酶、1緩衝液與1mM dNTP混合物(Takara)及該引子對用於20μl PCR反應。PCR擴增係使用GeneAmp PCR系統2700(Applied Biosystems，Foster city，CA，USA)，於下述條件下進行；於94℃ 5分鐘，接著於94℃ 45秒、於56℃ 45秒與於72℃ 1分鐘共25至40個循環，及於72℃進行最終延伸反應7分鐘。用於cDNA擴增之PCR引子係以Primer3程式設計，購自Bioneer(Daejeon，KOREA)。使用1.5%洋菜糖凝膠、以溴化乙錠(EtBr)染色、並以Gel Doc 2000 UV施照器(Bio-Rad Laboratories，Hercules，CA，USA)顯現， 分離PCR產物；及使用Quantity One軟體(Bio-Rad Laboratories)分析實驗數據。西方墨漬法顯示，以IL-4與TNF-α處理HMC-1細胞導致C3表現，其被PLAG以濃度依賴性方式抑制，相當於以IL-4與TNF-α處理之細胞，隨後以S6I[轉錄訊息轉導子與活化子6(STAT6)抑制劑，AS1517499，Axon Medchem，Netherlands]處理。STAT6抑制劑在細胞中可經由IL-4封阻STAT6之訊息傳遞，因而抑制C3之表現。該等數據表明PLAG可以類似STAT6抑制劑之方式運作。

HMC-1中經由PLAG之C3抑制：於單獨實驗中，以不同濃度(1、10與100μg/mL)之PLAG處理人類肥大細胞(HMC-1，1 x 10⁵細胞/ml)2小時。以含10% FBS(胎牛血清)之IMDM活化該等細胞72小時。利用ELISA分析所表現之蛋白質，確認C3減少。如第2圖所示，C3之減少與PLAG之濃度成正比(圖中PLAG稱為EC，單位μg/ml)。

從HepG2細胞株之C3排出：37℃、5% CO₂潮濕氛圍下，於DMEM中培育及維持肝臟細胞株HepG2(美國菌種保存中心，ATCC，Rockville，MD)。以PLAG處理已知於培養中產生補體之HepG2細胞時，如mRNA之RT-PCR證實，補體活性有效地減少。於該RT-PCR中，係將5 x 10⁵個HepG2細胞/ml分配至12槽微量盤中，以10% FCS誘發C3，為時12小時。接著添加PLAG，進一步培養2小時。收集細胞，單離mRNA，並以C3之特定引子進行 RT-PCR；使用GAPDH作為內部控制。該RT-PCR顯示，PLAG於1微克/ml時係稍微，而於10微克/ml時則完全抑制C3表現，係相當於用10與100微克/ml S6I所得結果。

以PLAG(1至100μg/ml)處理培育之HepG2細胞株，隨後以IL-4與TNF-α反應1小時，在37℃培育18小時，單離上清液。使用市售可得之單株抗體(mAb，R&D Systems)及廠商之實驗流程，利用ELISA對來自HepG2細胞之細胞培養液(上清液)中的C3量加以定量；其結果呈現於第3圖。於使用添加10% FCS至HepG2細胞培育12小時之活體外培養條件下，C3自然地表現。該等細胞以1至100μg/ml不同劑量之PLAG(圖A、圖B)或10與100μg/ml之S6I(圖C)處理，與IL-4與TNF-α反應1小時，然後於37℃培育18小時。使用WST-1檢測確認細胞生存力(viability)(圖A)。此檢測顯示利用細胞粒線體中之去氧酶使四唑鎓鹽類(WST-1)形成螢光物質，甲(formazan)，藉以測量之細胞生存力。第3圖A確認PLAG不影響細胞之繁殖與死亡。第3圖B顯示C3之表現根據PLAG之投予呈劑量依賴性減少，第3圖C顯示利用S6I投予得到類似結果。

實施例3-於小鼠活體內PLAG對嗜中性白血球減少症、血小板減少症與補體活化之活體內效應

活體內脾臟檢測之群落形成單位(CFU)：為了確定PLAG對回復造血之活體內效應，乃針對大量幅照之小鼠進行CFU檢測。顯微鏡檢查經腹腔注射或經口處理 50mg/kg/d劑量PLAG之小鼠之脾臟，顯現於所有處理動物中，脾結數量及原始源祖細胞(primitive progenitor cell)與巨核細胞數量顯著增加。

小鼠中之活體內功效研究：於動物模式中評估PLAG用於治療化療誘發之嗜中性白血球減少症與血小板減少症(CIN)之效應。每天投予抗癌劑[吉西他濱50mg/kg、環磷醯胺100mg/、或他莫西芬50mg/kg]，為時3週；每天亦投予PLAG 50mg/kg，為時3週。3週後，收集嗜中性白血球，以自動血液分析儀BC-5300進行計數。如第4圖所示，PLAG處理防止化療後嗜中性白血球計數之減少。相較於顯示活性與存活率更快速改善之以PLAG共同處理之組別，只以他莫西芬處理之小鼠顯示急遽減重、脫水、及喪失退避活性(activity to retreat)。以PLAG與吉西他濱處理之小鼠組別，嗜中性白血球得分顯著改善。相較於單獨吉西他濱處理組，接受PLAG共同投予之動物中，儘管吉西他濱最初減少嗜中性白血球計數，惟嗜中性白血球計數回復至正常，並維持於正常水準，且PLAG之持續投予導致存活率之改善。於以PLAG與環磷醯胺處理之小鼠組別中，相較於對照組，嗜中性白血球計數亦顯著改善。

血小板計數之數據述於第5圖，顯示PLAG為血小板提供對抗吉西他濱50mg/kg、環磷醯胺100mg/、或他莫西芬50mg/kg類似之保護效應。

一般認為，此等製劑與其他化療劑之嗜中 性白血球減少症與血小板減少症，至少部分可能係由於特定補體媒介之毒性。由第6圖可看出，所有此等製劑顯著地活化補體3，此活性大部分被PLAG封阻。

實施例4-針對小鼠血小板減少症之活體內保護

為了評估PLAG對血小板濃度之效應，乃以預期導致減少血小板數量之化合物，明確言之為苯肼、他莫西芬或脂多醣，處理小鼠。

以100mg/kg苯肼(PHZ)進行小鼠腹腔注射，以誘發貧血與減少血小板。經口投予小鼠5mg/kg PLAG，並於3及13天後進行血液採樣。此外，為了比較，乃製備未以苯肼處理之正常小鼠作為正常組，及製備以PHZ與橄欖油代替PLAG處理之小鼠作為對照組。以0.5ml EDTA處理從小鼠採取之血液試樣[微量採血管(Minicollect tube)，Greiner bio-one，Austria]，並使用以每毫升血小板數量計(k：1,000)之自動血液試樣分析儀BC-6800(Mindray，Shenzhen，China)測量血小板濃度。結果示於表1。

重複該實驗，使用100mg/kg注射量之抗癌 劑他莫西芬(Tam)，或1mg/kg量之發炎誘發劑脂多醣(LPS)，以誘發血小板減少。於PLAG處理15小時後，測量血小板濃度。為了比較，分別於他莫西芬與脂多醣實驗中使用橄欖油與PBS代替PLAG作為對照。結果示於表2與表3。

正常血小板濃度為400至1600k/μl，可視環境改變。表1至3顯示，當投予該等化合物人工誘發貧血時，血液中之血小板濃度減少；投予該等病患PLAG時，血小板濃度回復。

實施例5-小鼠中PLAG對嗜中性白血球相對於其他白血球量之影響

嗜中性白血球與淋巴細胞：為了觀測Balb/C小鼠血液中嗜中性白血球與淋巴細胞之比例，以1mg/kg 脂多醣(LPS)進行小鼠腹腔注射，以誘發發炎。經口投予小鼠5mg/kg PLAG，並於3及13天後進行血液採樣。此外，為了比較，乃使未以PLAG處理之正常小鼠接受PBS(磷酸鹽緩衝鹽液)與橄欖油。以0.5ml EDTA處理從小鼠採取之血液試樣[微量採血管，Greiner bio-one，Austria]，使用自動血液試樣分析儀BC-6800(Mindray，Shenzhen，China)測量呈總白血球百分比之嗜中性白血球(NEU)與淋巴細胞(LYM)之量。如表4所示，對LPS之反應，嗜中性白血球之相對量增加；對LPS+PLAG之反應增加更多。

單核細胞：除了使用C57BL/6小鼠代替Balb/C小鼠外，以如實施例6之相同方法處理小鼠，測量單核細胞對總白血球之比例(Mono)，結果示於表5。

經他莫西芬與PLAG處理後，嗜中性白血球、淋巴細胞與嗜酸性白血球之比例：使用100mg/kg抗癌劑他莫西芬(Tam)以誘發減少嗜中性白血球，隨後以5mg/kg PLAG處理，然後如先前之實驗，於15小時後測量嗜中性白血球(NEU)、淋巴細胞(LYM)、與嗜酸性白血球(EOS)之比例。結果呈現於表6。

即使各種白血球濃度可視對象條件而改變，惟本實驗中，於白血球中嗜中性白血球之比例正常範圍為7至50%，淋巴細胞之比例為42至92%。如於表4與5中所見，以LPS與PLAG處理時，嗜中性白血球與單核細胞比例顯著增加，而淋巴細胞比例減少。表6顯示，PLAG針對他莫西芬挑戰，普遍維持正常比例之嗜中性白血球、淋巴細胞與嗜酸性白血球。

實施例6-PLAG對減少嗜中性白血球移動之功效

於PLAG存在或不存在下，以細菌脂多醣(LPS)注射小鼠以引起發炎反應：

雖然PLAG提高血液中之嗜中性白血球量，惟其抑制移動至淋巴結。

實施例7-於小鼠模式中PLAG與G-CSF組合之功效

小鼠接受環磷醯胺(100mpk，腹腔注射)以及有或無G-CSF(0.25mpk，腹腔注射)或G-CSF(0.25mpk，腹腔注射)加PLAG(25mpk，經口)，為期10天：

此實驗中G-CSF之劑量為有效劑量，G-CSF之效應有上限，無關於劑量以及由於副作用之較高標準(upper level)。於此實驗中，PLAG比單獨G-CSF提供超過60% WBC及超過70%嗜中性白血球之增加。PLAG加G-CSF因而提供比單獨使用G-CSF可達到之更大效益，此為令人 驚異且重要之新穎技術效果。添加PLAG於G-CSF可使白血球與嗜中性白血球之量達到未經處理小鼠之標準，對環磷醯胺所誘發之嗜中性白血球減少症提供實質上完全之保護。

實施例8-臨床研究：PLAG對補體3之活性

臨床研究由27位健康病患於韓國關東大學(Gwandong University)明知醫院(MyungJi Hospital)臨床研究中心進行，以研究PLAG之免疫調節效應。於合法臨床認可下，志願者以經口投予方式(每天500mg PLAG)進行活體內測試30天。使用C3檢測套組計算補體3。分析結果示於第7圖，且經PLAG投予之健康個體之免疫活性變化示於表8(經4週介入後，PLAG增補對周邊血液免疫功能之影響)。如第7圖與表8所示，消費PLAG達一個月之大多數(27位中之26位病患)個體顯示補體3(C3)減少，而以黃豆油處理之對照組則顯示C3增加與減少兩者。於PLAG投予後，血液中C3之平均濃度顯示約10mg/dL之減少，p值<0.001。

實施例9-先導性研究：於接受化療病患中PLAG對血小板減少症與嗜中性白血球減少症之活性

將PLAG投予13位化療後之胰臟癌症病患。此研究之對象為ECOG(美國東岸癌症臨床研究合作組織)體能狀態係“0”或“1”之未動手術胰臟癌症病患，亦即身體健康狀況良好、不很疼痛、可享受幾乎正常生活方式之病患，因此適於抗癌治療至少2個月。該等胰臟癌症病患係腫瘤轉移至胰臟周圍主要血管之“局部晚期”病患或遠處轉移至肝臟、肺臟、骨骼等之“遠處轉移”病患。ECOG體能狀態“0”係指無症狀、充分活躍、能無疼痛及正常生活方式無問題之無限制進行所有疾病前期活動之病患；“1”則係指有症狀惟有輕度疼痛及正常生活稍有問題之能完全地走動之病患。對照組包括5位具“ECOG體能狀態0”之病患與20位具“ECOG體能狀態1”之病患，而PLAG治療組則包括具“ECOG體能狀態1”之病患。抗癌[吉西他濱與得舒緩(Erlotinib)組合治療]療法如下述：注射1,000mg吉西他濱，一週一次，為時3週(第1天、第8天、第15天)，於下一週不注射(第22天)。因此，1個循環抗癌治療需要1個月。每天經口投予100mg得舒緩(Tarceva)一次。從抗癌治療前3天開始直到最後之化療治療，每天亦經口投予1,000mg PLAG一次。PLAG治療組與對照組二者皆完成2個循環之抗癌治療。對照組與PLAG治療組間，抗癌治療之量或進度無差異。

對血小板之影響：於PLAG治療組中，沒有 病患由於血小板數量減少至低於50,000/μl而需要延緩抗癌治療或需要調整劑量。於PLAG治療組中，亦無病患之血小板數量下降至於臨床上意味出血高風險之低於20,000/μl。PLAG治療組之13位病患中，7位病患(53.8%)血小板計數減少>50%，2位病患(15.4%)減少>60%，無一者減少>70%。

對照組中，接受抗癌治療之病患有5位(20%)具出血高風險，血小板數量<50,000，意指抗癌治療需要延緩或劑量需要調整，1位病患(4%)血小板減少至<20,000/μl，呈現嚴重之危急性內出血風險。17位病患(68%)血小板減少超過50%，10位病患(44%)血小板減少超過60%，6位病患(24%)血小板減少超過70%，及4位病患(16%)血小板減少超過75%(參見第8圖)。

對嗜中性白血球之影響：PLAG治療組中，3位病患(23.1%)嗜中性白血球(嗜中性白血球絕對計數：ANC)減少至低於1,500/μl，2位病患(15.4%)嗜中性白血球減少至低於1,000/μl，無一者減少至低於500/μl；3位病患(23.1%)嗜中性白血球數量之減少小於50%，2位病患(15.4%)嗜中性白血球數量之減少小於60%，無一者嗜中性白血球數量之減少小於75%。

對照組中，19位病患(76%)嗜中性白血球減少至低於1,500/μl，12位病患(48%)嗜中性白血球減少至低於1,000/μl，3位病患(12%)嗜中性白血球減少至低於500/μl，因此必須中止對病患之抗癌治療；21位病患(84%) 嗜中性白血球減少超過50%，14位病患(56%)嗜中性白血球減少超過60%，及11位病患(44%)嗜中性白血球減少超過75%(參見第9圖)。於對照組中，發現抗癌治療期間，19位病患(76%)嗜中性白血球數量低於1,500/μl，具高度感染之風險，惟於PLAG治療組中，僅發現3位病患(23.1%)嗜中性白血球數量低於1,500/μl，具高度感染之風險，此證實PLAG之有效性。再者，儘管於對照組中，抗癌治療導致11位病患(44%)嗜中性白血球減少75%，惟於PLAG治療組中，沒有一個病患嗜中性白血球減少75%。

此先導性試驗於治療組與對照組間具有p值<0.05之統計上意義。該等結果顯示，於兩個組別中，化療均降低嗜中性白血球與血小板之量，惟PLAG組則明顯降低較少。PLAG組中之病患不僅瀕臨血小板減少症與嗜中性白血球減少症之風險較低，且因而更能完成其化療，意指被預期具有從癌症存活下來之較佳機會。因此，結果顯示，PLAG對於接受化療癌症病患之血小板減少症與白血球減少症之治療與處理非常有效。

實施例10-單位劑量調配劑

製備含有(i)PLAG與(ii)α-生育酚之用於本文敘述方法中之例示軟明膠膠囊，其具有如下組成：

由於本案的圖為實驗數據，並非本案的代表圖。故本案無指定代表圖。

Claims (22)

1. 一種用於治療選自白血球減少症及/或血小板減少症之症狀之方法，該方法包括投予有效量之具下式1之化合物至有其需要之病患： 其中R1與R2獨立地為具14至22個碳原子之脂肪酸殘基。
2. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中R1與R2係獨立地選自棕櫚醯基、油醯基、亞麻醯基、次亞麻醯基、硬脂醯基、肉豆蔻醯基、與花生醯基所成之組群。
3. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中R1與R2(R1/R2)係選自油醯基/棕櫚醯基、棕櫚醯基/油醯基、棕櫚醯基/亞麻醯基、棕櫚醯基/次亞麻醯基、棕櫚醯基/花生醯基、棕櫚醯基/硬脂醯基、棕櫚醯基/棕櫚醯基、油醯基/硬脂醯基、亞麻醯基/棕櫚醯基、亞麻醯基/硬脂醯基、硬脂醯基/亞麻醯基、硬脂醯基/油醯基、肉豆蔻醯基/亞麻醯基、與肉豆蔻醯基/油醯基所成之組群。
4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之方法，其中該式1化合物係具下式2之化合物：
5. 如申請專利範圍第4項所述之方法，其中該式2化合物係呈實質上不含其他單乙醯基二醯基甘油化合物之醫藥組成物投予。
6. 如申請專利範圍第5項所述之方法，其中該式2化合物係呈實質上不含其他三酸甘油酯化合物之醫藥組成物投予。
7. 如申請專利範圍第1至6項中任一項所述之方法，其中該欲被治療之該症狀係由化療所引起。
8. 如申請專利範圍第1至7項中任一項所述之方法，其中該欲被治療之症狀係嗜中性白血球減少症。
9. 如申請專利範圍第1至8項中任一項所述之方法，其中該欲被治療之症狀係血小板減少症。
10. 如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之方法，其中該病患係接受用於治療可由G-CSF誘發或激發之癌症之化療劑。
11. 如申請專利範圍第1至10項中任一項所述之方法，其中該病患係接受選自環磷醯胺、阿黴素(doxorubicin)、滅必治(Etoposide)、依弗醯胺(Ifosfamide)、美司鈉(mesna)、順鉑(Cisplatin)、吉西他濱(Gemcitabine)、他 莫西芬(tamoxifen)與來那度胺(lenalidomide)之一或多種化療劑。
12. 如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之方法，其中該病患具有多發性骨髓瘤、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓樣白血病、或骨髓發育不良症候群。
13. 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述之方法，其中該式1化合物係於清髓性(myoablative)化療之前投予，以提高收集供清髓性化療後再引入病患中之周邊血液源祖細胞之量，視需要地，該式1化合物亦可於清髓性化療之後投予。
14. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之方法，進一步包括投予該病患G-CSF。
15. 如申請專利範圍第1至14項中任一項所述之方法，其中該使用式1化合物之治療係在化療給藥前至少24小時至化療給藥後至少24小時之期間中止。
16. 一種用於防止或抑制向上調節或活化補體3(C3)之方法，該方法包括投予有效量之式1化合物至有其需要之病患。
17. 一種治療癌症之方法，該方法包括投予化療劑連同嗜中性白血球或血小板保護量之式1化合物至有其需要之病患，其中該化療劑係以將於未接受式1化合物之病患中引起嗜中性白血球減少症及/或血小板減少症之劑量及/或期間投予。
18. 一種用於治療病患之嗜中性白血球減少症及/或血小板 減少症之方法，該病患係接受化療劑以治療由G-CSF激發之癌症，該方法包括投予有效量之式1化合物至有其需要之病患。
19. 一種用於治療可能由G-CSF誘發或惡化之血癌之方法，該方法包括共同(連續或同時)投予化療劑，例如，來那度胺，與式1化合物。
20. 一種用於治療(包括預防)嗜中性白血球減少症及/或用於動員周邊血液源祖細胞(PBPC)之方法，該方法包括(連續或同時)投予有效量之(i)式1化合物、與(ii)G-CSF至有其需要之病患。
21. 一種減輕或治療G-CSF副作用之方法，該方法包括連續或同時共同投予式1化合物至有其需要之病患。
22. 一種呈單位劑型之醫藥組成物，其中該組成物係含250至1000mg式2化合物，實質上不含其他三酸甘油酯類，以及0.1至3mg醫藥上可接受之生育酚化合物之供口服投予之軟明膠膠囊。