TW201601749A - 新穎ｃｔｌ抗原決定部位４連結肽 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種無需HLA型檢查，且不限定於具有特定HLA型之患者，可作為癌胜肽疫苗而對範圍廣泛之癌症患者投予之癌抗原肽。 本發明之CTL抗原決定部位4連結肽係選自報告具有CTL誘導能力之來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽群中之4種CTL抗原決定部位肽經由連結子連結而獲得。

Description

新穎CTL抗原決定部位4連結肽
本發明係關於一種作為癌抗原肽有用之新穎肽。更詳細而言，本發明係關於一種連結4個對HLA-A(human leukocyte antigen-A，人類白血球抗原-A)限制性具有CTL誘導能力之肽而成之新穎癌抗原肽、及利用其之醫藥組合物。
癌症占日本人死亡原因之第1位，每年死亡約35萬人，現在仍然是嚴重之疾病。已確立之癌症治療方法主要有外科切除、抗癌劑治療、及放射療法。然而，該療法存在復發、生活質量(QOL)降低之問題，進而存在於為無法接受先前所述治療方法之進行性癌之情形時並無治療選項等問題。
癌症免疫療法(癌症疫苗療法)長期作為新治療方法而受到期待，自可鑑定人類腫瘤抗原中之抗原決定部位肽之1990年起，全世界開始了癌胜肽疫苗臨床研究。然而，根據肽單獨投予或併用療法中之臨床研究成果之分析結果，1,000例以上之投予例中，客觀反應率(Objective Response Rate)僅為2.7%(非專利文獻1)，被指出難以實用化。
另一方面，在日本亦長期持續進行使用單獨之癌胜肽疫苗之臨床研究，其成果逐漸明瞭。近年來，作為旨在提高治療效果之努力之一，亦開始採用投予複數種癌胜肽而非投予一種癌胜肽之戰略。例如，實施有藉由預先檢查患者之HLA型及特異性免疫應答而選擇複數 種所投予之肽之定製(Tailor-made)型癌胜肽疫苗療法，且安全性及抗腫瘤效果得到確認。具體而言，藉由單獨投予定製型胜肽疫苗或與抗癌劑之併用，於腦腫瘤、子宮頸癌、進而前列腺癌、胰腺癌中達成優異之臨床效果及安全性(非專利文獻2、3、4)。
於癌胜肽疫苗療法中，利用被認為係主要之效應細胞之抗原決定部位特異性細胞毒殺性T淋巴球(以下簡稱為CTL)之細胞性免疫為HLA限制性，僅以具有特定之HLA型、具體而言對象患者數較多之HLA-A2或HLA-A24之患者為對象而實施癌胜肽疫苗之開發。
然而，在日本人中，該等兩種HLA型患病率分別約為40%、60%(非專利文獻5)，存在具有該等兩種以外之HLA型之患者無法受到癌胜肽疫苗之恩惠之問題點。進而，於開始治療前需要進行HLA型檢查，其成為延遲治療之開始時間，增大患者負擔之一個原因。根據以上內容，業界期待無需HLA型檢查、可適應全部癌症患者之癌胜肽疫苗之開發、研究。
又，於癌胜肽疫苗療法中，已知除了作為細胞免疫之CTL之活化以外，藉由誘導產生作為液性免疫之免疫球蛋白，有助於延長壽命效果(非專利文獻6)。
[先前技術文獻] [非專利文獻]
[非專利文獻1]Rosenberg SA et al., Nature Med. 2004, 10(9): 909-15
[非專利文獻2]Terasaki M et al., J Clin Oncol. 2011, 29 (3): 337-44
[非專利文獻3]Noguchi M et al., Cancer lmmunol. lmmunother. 2010, 59 (7): 1001-9
[非專利文獻4]Yanagimoto H et al., Cancer Sci. 2007, 98 (4): 605- 11
[非專利文獻5]Sette A et al., Immunogenetics. 1999, 50 (3-4): 201-12
[非專利文獻6]Noguchi M et al., Cancer Biol. Ther. 2011, 10 (12): 1266-79
本發明之目的在於提供一種不限定於具有特定HLA型之患者，可作為癌胜肽疫苗而對範圍廣泛之癌症患者投予，且可強烈誘導免疫球蛋白之癌抗原肽。
本發明者等人藉由將選自報告有對HLA-A2、HLA-A24、HLA-A26或HLA-A3超型中之任一者、或上述複數種HLA-A限制性具有CTL誘導能力之CTL抗原決定部位肽選擇之4種肽經由連結子進行連結而獲得CTL抗原決定部位4連結肽。對於該CTL抗原決定部位4連結肽，為了解決上述課題而進行銳意研究，結果發現，包含自公知之來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽中選擇之特定之13種肽之CTL抗原決定部位4連結肽無需HLA型檢查，且不限定於具有特定HLA型之患者而可對範圍廣泛之癌症患者投予。進而發現，藉由投予該CTL抗原決定部位4連結肽，除了對構成該肽之CTL抗原決定部位肽特異性之CTL以外，亦強烈誘導免疫球蛋白，從而完成本發明。
即，本發明具有以下特徵。
[1]一種抗原決定部位4連結肽，其係可自由以下之CTL抗原決定部位肽所組成之群中重複選擇之4個肽經由連結子分別連結而成，且可具有包含親水性胺基酸之進而另一肽序列：序列編號1所表示之肽「PEP1」、序列編號2所表示之肽「PEP2」、序列編號4所表示之肽 「PEP4」、序列編號5所表示之肽「PEP5」、序列編號6所表示之肽「PEP6」、序列編號7所表示之肽「PEP7」、序列編號8所表示之肽「PEP8」、序列編號9所表示之肽「PEP9」、序列編號10所表示之肽「PEP10」、序列編號13所表示之肽「PEP13」、序列編號15所表示之肽「PEP15」、序列編號17所表示之肽「PEP17」、序列編號18所表示之肽「PEP18」，且其具有選自以下之(1)~(5)中之任一特徵：(1)C末端為PEP2(其中，N末端為PEP7及PEP8，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序者除外)；(2)C末端為PEP4；(3)C末端為PEP10；(4)C末端為PEP6及PEP5，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序；(5)包含PEP5、PEP6、PEP9、及PEP18。
[2]如[1]之抗原決定部位4連結肽，其係選自PEP1、PEP2、PEP4、PEP5、PEP6、PEP7、PEP8、PEP9、PEP10、PEP13、PEP15、PEP17、及PEP18中之不重複之4個肽經由連結子分別連結而成。
[3]如[1]之抗原決定部位4連結肽，其具有選自以下之(1)~(5)中之任一特徵：(1)包含選自PEP1、PEP7、PEP8及PEP13中之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP2(其中，N末端為PEP7及PEP8，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序者除外)；(2)包含PEP5、PEP6及PEP9之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP4；(3)包含選自PEP1、PEP13、PEP15、PEP17及PEP18中之3種CTL 抗原決定部位肽且C末端為PEP10；(4)包含PEP1及PEP7之2種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP6及PEP5，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序；(5)包含PEP5、PEP6及PEP18之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP9。
[4]如[1]之抗原決定部位4連結肽，其包含選自以下之序列：‧PEP5-(L)-PEP6-(L)-PEP9-(L)-PEP4；‧PEP9-(L)-PEP5-(L)-PEP6-(L)-PEP4；‧PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP9-(L)-PEP4；‧PEP6-(L)-PEP9-(L)-PEP5-(L)-PEP4；‧PEP9-(L)-PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP4；‧PEP5-(L)-PEP9-(L)-PEP6-(L)-PEP4；‧PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP8-(L)-PEP2；‧PEP1-(L)-PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP2；‧PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP8-(L)-PEP2；‧PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP2；‧PEP8-(L)-PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP2；‧PEP7-(L)-PEP13-(L)-PEP8-(L)-PEP2；‧PEP8-(L)-PEP13-(L)-PEP7-(L)-PEP2；‧PEP13-(L)-PEP7-(L)-PEP8-(L)-PEP2；‧PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP13-(L)-PEP2；‧PEP13-(L)-PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP2；‧PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP10；‧PEP13-(L)-PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP18-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP13-(L)-PEP10； ‧PEP18-(L)-PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP10；‧PEP1-(L)-PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP10；‧PEP1-(L)-PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP1-(L)-PEP18-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP1-(L)-PEP10；‧PEP18-(L)-PEP1-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP1-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP17-(L)-PEP13-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP17-(L)-PEP10；‧PEP17-(L)-PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP10；‧PEP17-(L)-PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP13-(L)-PEP17-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP17-(L)-PEP10；‧PEP6-(L)-PEP18-(L)-PEP5-(L)-PEP9；‧PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP18-(L)-PEP9；‧PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP6-(L)-PEP5；或‧PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP6-(L)-PEP5(式中「-(L)-」表示連結子)。
[5]如[1]之抗原決定部位4連結肽，其中連結子為胺基酸連結子。
[6]如[1]之抗原決定部位4連結肽，其中胺基酸連結子為連結有2個或3個精胺酸之精胺酸二聚物或精胺酸三聚物。
[7]如[1]之抗原決定部位4連結肽，其中包含親水性胺基酸之肽序列連結於N末端。
[8]如[1]之抗原決定部位4連結肽，其中包含親水性胺基酸之肽序列包含連結有3個精胺酸之精胺酸三聚物或連結有4個精胺酸之精胺酸 四聚物。
[9]如[1]之抗原決定部位4連結肽，其包含由序列編號22、序列編號23、序列編號24、序列編號25、序列編號26、序列編號27、序列編號28、序列編號29、序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號35、序列編號36、序列編號37、序列編號38、序列編號39、序列編號40、序列編號41、序列編號42、序列編號43、序列編號44、序列編號45、序列編號46、序列編號47、序列編號48、序列編號49、序列編號50、序列編號51、序列編號52、序列編號53、序列編號54、序列編號55、序列編號56、序列編號57、序列編號58、序列編號59、序列編號60、序列編號61、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65、或序列編號66所表示之胺基酸序列。
[10]一種CTL，其係藉由使用如[1]之抗原決定部位4連結肽刺激末梢血液淋巴球而獲得。
[11]一種醫藥組合物，其含有如[1]之抗原決定部位4連結肽、或如[10]所記載之CTL作為有效成分。
[12]一種醫藥組合物，其含有兩種以上之如[1]之抗原決定部位4連結肽。
[13]如[11]或[12]之醫藥組合物，其係免疫療法劑。
本說明書包含作為本案之優先權之基礎的日本專利申請案2013-218524號、2014-155132號之說明書及/或圖式所記載之內容。
根據本發明，可提供一種不限定於具有特定HLA型之患者，可作為癌胜肽疫苗而對範圍廣泛之癌症患者投予，且可強烈誘導免疫球蛋白之癌抗原肽。
本發明之CTL抗原決定部位4連結肽無需HLA型檢查，可對範圍 廣泛之癌症患者，例如HLA-A2陽性患者群、HLA-A24陽性患者群、HLA-A26陽性患者群、HLA-A3超型陽性患者群投予，可對該患者之癌症或由癌症引發之疾病進行治療及/或預防。又，構成本發明之CTL抗原決定部位4連結肽之腫瘤抗原於複數種癌症種類中確認有表現，因此本發明之CTL抗原決定部位4連結肽可用作用以治療及/或預防多種癌症種類之醫藥組合物(更詳細而言為免疫療法劑)。進而，藉由投予本發明之抗原決定部位4連結肽，與將所構成之CTL抗原決定部位肽混合並等量投予之情形時相比，可強烈誘導CTL抗原決定部位肽特異性之CTL及免疫球蛋白，而可更高效地將抗腫瘤免疫活化。
圖1-1表示實施例1所獲得之4連結肽(TPV06、TPV10、TPV12、TPV21、TPV26、TPV30、TPV35、TPV37、TPV39、TPV40、TPV41、TPV43、TPV45)之各HPLC之結果。
圖1-2係圖1-1之續。
圖1-3係圖1-2之續。
圖1-4係圖1-3之續。
圖1-5係圖1-4之續。
圖1-6係圖1-5之續。
圖1-7係圖1-6之續。
圖2-1表示實施例1所獲得之4連結肽(TPV39、TPV40、TPV41、TPV43、TPV45)之MS之結果。
圖2-2係圖2-1之續。
圖2-3係圖2-2之續。
圖3-1表示抗原決定部位4連結肽投予小鼠模型中之抗原決定部位特異性CTL誘導結果(＊：表示未研究)。進而，表示對藉由人類免疫蛋白酶體將抗原決定部位4連結肽切斷後，可否切下所鑑定之PEP2或 PEP1O抗原決定部位肽之C末端進行評價而獲得之結果。
圖3-2係圖3-1之續。
圖3-3係圖3-2之續。
圖3-4表示已投予N末端具有包含精胺酸之肽序列之抗原決定部位4連結肽、或具有精胺酸三聚物作為肽間之連結子之抗原決定部位4連結肽的小鼠模型中之抗原決定部位特異性CTL誘導結果(＊：表示未研究)。進而，表示對藉由人類免疫蛋白酶體將抗原決定部位4連結肽切斷後，可否切下所鑑定之PEP2或PEP1O抗原決定部位肽之C末端進行評價而獲得之結果。
圖4-1表示抗原決定部位4連結肽投予小鼠模型中之血清中抗原決定部位特異性IgG抗體效價之測定結果。
圖4-2係圖4-1之續。
圖4-3表示已投予N末端具有包含精胺酸之肽序列之抗原決定部位4連結肽、或具有精胺酸三聚物作為肽間之連結子之抗原決定部位4連結肽的小鼠模型中之血清中抗原決定部位特異性IgG抗體效價之測定結果。
以下對本發明進行更具體之說明。
1.CTL抗原決定部位4連結肽
本發明之「CTL抗原決定部位4連結肽」意指將選自來自相同及/或不同之腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽之4個肽經由連結子連結為直鏈狀而製成1個分子之肽。
「來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽」係腫瘤抗原於腫瘤細胞內分解所產生之肽，藉由與HLA I類分子結合而呈現於細胞表面上，可被腫瘤特異性之CTL識別，及/或可誘導腫瘤特異性之CTL及/或將其活化。所謂「誘導腫瘤特異性之CTL」意指於試管內(in vitro) 或活體內(in vivo)，使特異性識別來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽之CTL分化及/或增殖。又，所謂「將腫瘤特異性之CTL活化」意指CTL識別藉由HLA I類分子而呈現之抗原，藉此產生干擾素-γ(IFN-γ)，及/或藉由釋放細胞毒殺物質等而呈現出細胞毒殺活性。於本說明書中，有時將「來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽」簡稱為「CTL抗原決定部位肽」。
作為來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽，已知如以下者。
PEP1：KLVERLGAA(序列編號1[WO 2001/011044])；PEP2：ASLDSDPWV(序列編號2[WO 2002/010369])；PEP3：ALVEFEDVL(序列編號3[WO 2002/010369])；PEP4：LLQAEAPRL(序列編號4[WO 2000/12701])；PEP5：DYSARWNEI(序列編號5[日本專利特開平11-318455號])；PEP6：VYDYNCHVDL(序列編號6[WO 2000/12701])；PEP7：LYAWEPSFL(序列編號7[日本專利特開2000-000270號])；PEP8：DYLRSVLEDF(序列編號8[WO 2001/011044])；PEP9：QIRPIFSNR(序列編號9[WO 2008/007711])；PEP10：ILEQSGEWWK(序列編號10[WO 2009/022652])；PEP11：VIQNLERGYR(序列編號11[WO 2009/022652])；PEP12：KLKHYGPGWV(序列編號12[WO 1999/067288])；PEP13：RLQEWCSVI(序列編號13[WO 2002/010369])；PEP14：ILGELREKV(序列編號14[WO 2002/010369])；PEP15：DYVREHKDNI(序列編號15[WO 2005/071075])；PEP16：HYTNASDGL(序列編號16[WO 2001/011044])；PEP17：NYSVRYRPGL(序列編號17[日本專利特開2000-000270號])； PEP18：RYLTQETNKV(序列編號18[日本專利特開2007-145715號])；PEP19：TFDYLRSVL(序列編號19[WO 2001/011044])
此處，PEP1、PEP2、PEP3、PEP4、PEP5、PEP8、PEP10、PEP12、PEP13、PEP14、及PEP15可被HLA-A2限制而誘導CTL及/或將其活化。PEP2、PEP5、PEP6、PEP7、PEP8、PEP12、PEP13、PEP15、PEP16、PEP17、PEP18、及PEP19可被HLA-A24限制而誘導CTL及/或將其活化。PEP1、PEP2、PEP4、PEP5、PEP6、PEP9、PEP10、PEP11、PEP12、PEP13、PEP15、及PEP16可被HLA-A3超型限制而誘導CTL及/或將其活化。以及，PEP2及PEP6可被HLA-A26限制而誘導CTL及/或將其活化。又，編碼該等CTL抗原決定部位肽之基因於複數種癌症種類中確認有表現(Yang D et al.,Cancer Res.1999,59：4056-63、Harashima N et al.,Eur.J.Immunol.2001,31(2),323-32)。
本發明之「CTL抗原決定部位4連結肽」係於上述CTL抗原決定部位肽中，將自特定之13種中選擇之4種CTL抗原決定部位肽經由連結子連結為直鏈狀而製成1個分子之各種CTL抗原決定部位4連結肽，可誘導3個以上對各CTL抗原決定部位肽特異性之CTL，及/或將其活化。再者，對於無法直接評價CTL抗原決定部位肽特異性之誘導之肽(PEP2、PEP10)，可藉由利用免疫蛋白酶體之切斷實驗(後述之實施例3)，判斷對該抗原決定部位肽特異性之CTL誘導之有無。已知通常被取入至抗原呈現細胞內之抗原蛋白質係由蛋白酶體、免疫蛋白酶體切斷，且已知其係用以將被取入之抗原蛋白質經由HLA而抗原呈現所必需之路徑(例如，Rock KL,York IA,Goldberg AL,Nat Immunol.2004；5(7)：670-677)。又，該等抗原決定部位肽為了與HLA之口袋(pocket)結合，必須於適當之部位切斷CTL抗原決定部位肽。該等必 須根據利用蛋白酶體、免疫蛋白酶體之切斷決定CTL抗原決定部位肽之C末端胺基酸(Rock KL,York IA,Goldberg AL,Nat Immunol.2004；5(7)：670-677)。因此，於對人類投予抗原決定部位4連結肽時，假定自樹狀細胞呈現CTL抗原決定部位肽，使用於樹狀細胞中高表現之免疫蛋白酶體，於試管內對抗原決定部位4連結肽之切斷圖案進行分析。於因利用免疫蛋白酶體之切斷而出現CTL抗原決定部位肽之情形時，可判斷為已誘導對該抗原決定部位肽特異性之CTL。
於本說明書中，選自特定之13種中之4種CTL抗原決定部位肽係可於序列編號1所表示之肽「PEP1」、序列編號2所表示之肽「PEP2」、序列編號4所表示之肽「PEP4」、序列編號5所表示之肽「PEP5」、序列編號6所表示之肽「PEP6」、序列編號7所表示之肽「PEP7」、序列編號8所表示之肽「PEP8」、序列編號9所表示之肽「PEP9」、序列編號10所表示之肽「PEP10」、序列編號13所表示之肽「PEP13」、序列編號15所表示之肽「PEP15」、序列編號17所表示之肽「PEP17」、序列編號18所表示之肽「PEP18」中重複選擇之4種CTL抗原決定部位肽。
於本發明中，具有於PEP1、PEP2、PEP4、PEP5、PEP6、PEP7、PEP8、PEP9、PEP10、PEP13、PEP15、PEP17、及PEP18之各胺基酸序列中有一個或複數個胺基酸經置換、插入、缺失、及/或加成之胺基酸序列，且具有與原肽同等或其以上之CTL誘導能力、免疫球蛋白產生誘導能力之肽亦可用作「CTL抗原決定部位肽」。此處所謂「複數」為1~3個，較佳為1~2個。作為此種肽，例如可列舉以具有與原胺基酸類似之特性之胺基酸置換而成之(即，藉由保留型胺基酸置換所獲得之)肽。
本發明之CTL抗原決定部位4連結肽係可自PEP1、PEP2、PEP4、PEP5、PEP6、PEP7、PEP8、PEP9、PEP10、PEP13、PEP15、 PEP17、及PEP18中重複選擇之4個抗原決定部位肽經由連結子而分別連結為直鏈狀。
連結子只要為於將CTL抗原決定部位4連結肽投予至活體時被切斷，而可使所連結之CTL抗原決定部位肽各自分離者即可，例如可列舉酯鍵、醚鍵、醯胺鍵、糖鏈連結子、聚乙二醇連結子、胺基酸連結子等。作為可用作胺基酸連結子之胺基酸序列，可例示精胺酸二聚物、精胺酸三聚物、精胺酸四聚物、離胺酸二聚物、離胺酸三聚物、離胺酸四聚物、甘胺酸二聚物、甘胺酸三聚物、甘胺酸四聚物、甘胺酸五聚物、甘胺酸六聚物、丙胺酸-丙胺酸-酪胺酸(AAY)、異白胺酸-白胺酸-丙胺酸(ILA)、精胺酸-纈胺酸-離胺酸-精胺酸(RVKR)等，較佳為精胺酸二聚物或精胺酸三聚物。
所選擇之CTL抗原決定部位肽、及其連結順序可將以特定組合及特定連結順序所合成之抗原決定部位4連結肽投予至人類HLA-A基因轉殖小鼠，對在活體內有無各CTL抗原決定部位肽特異性之CTL誘導進行評價而決定。
本發明之抗原決定部位4連結肽較佳為具有選自以下之(1)~(5)中之一個或複數個特徵：(1)C末端為PEP2(其中，N末端為PEP7及PEP8，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序者除外)；(2)C末端為PEP4；(3)C末端為PEP10；(4)C末端為PEP6及PEP5，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序；(5)含有PEP5、PEP6、PEP9、及PEP18。
本發明之抗原決定部位4連結肽更佳為具有選自以下之(1)~(5)中之任一特徵： (1)包含選自PEP1、PEP7、PEP8及PEP13中之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP2(其中，N末端為PEP7及PEP8，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序者除外)；(2)包含PEP5、PEP6及PEP9之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP4；(3)包含選自PEP1、PEP13、PEP15、PEP17及PEP18中之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP10；(4)包含PEP1及PEP7之2種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP6及PEP5，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序；(5)包含PEP5、PEP6及PEP18之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP9。
本發明之抗原決定部位4連結肽進而較佳為包含選自以下之序列，或由該序列所構成(式中「-(L)-」表示連結子)：‧PEP5-(L)-PEP6-(L)-PEP9-(L)-PEP4(TPV01)；‧PEP9-(L)-PEP5-(L)-PEP6-(L)-PEP4(TPV02)；‧PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP9-(L)-PEP4(TPV03)；‧PEP6-(L)-PEP9-(L)-PEP5-(L)-PEP4(TPV04)；‧PEP9-(L)-PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP4(TPV05)；‧PEP5-(L)-PEP9-(L)-PEP6-(L)-PEP4(TPV06)；‧PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP8-(L)-PEP2(TPV07)；‧PEP1-(L)-PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP2(TPV08)；‧PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP8-(L)-PEP2(TPV09)；‧PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP2(TPV10)；‧PEP8-(L)-PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP2(TPV11)；‧PEP7-(L)-PEP13-(L)-PEP8-(L)-PEP2(TPV12)；‧PEP8-(L)-PEP13-(L)-PEP7-(L)-PEP2(TPV13)； ‧PEP13-(L)-PEP7-(L)-PEP8-(L)-PEP2(TPV14)；‧PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP13-(L)-PEP2(TPV15)；‧PEP13-(L)-PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP2(TPV16)；‧PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP10(TPV17)；‧PEP13-(L)-PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP10(TPV18)；‧PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP18-(L)-PEP10(TPV19)；‧PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP13-(L)-PEP10(TPV20)；‧PEP18-(L)-PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP10(TPV21)；‧PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP10(TPV22)；‧PEP1-(L)-PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP10(TPV23)；‧PEP1-(L)-PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP10(TPV24)；‧PEP15-(L)-PEP1-(L)-PEP18-(L)-PEP10(TPV25)；‧PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP1-(L)-PEP10(TPV26)；‧PEP18-(L)-PEP1-(L)-PEP15-(L)-PEP10(TPV27)；‧PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP1-(L)-PEP10(TPV28)；‧PEP15-(L)-PEP17-(L)-PEP13-(L)-PEP10(TPV29)；‧PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP17-(L)-PEP10(TPV30)；‧PEP17-(L)-PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP10(TPV31)；‧PEP17-(L)-PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP10(TPV32)；‧PEP13-(L)-PEP17-(L)-PEP15-(L)-PEP10(TPV33)；‧PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP17-(L)-PEP10(TPV34)；‧PEP6-(L)-PEP18-(L)-PEP5-(L)-PEP9(TPV35)；‧PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP18-(L)-PEP9(TPV36)；‧PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP6-(L)-PEP5(TPV37)；或‧PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP6-(L)-PEP5(TPV38)；本發明之CTL抗原決定部位4連結肽可進而具有包含親水性胺基 酸之肽序列。該肽序列可加成於CTL抗原決定部位4連結肽之N末端及/或C末端，較佳為加成於N末端。該肽序列可選擇包含選自由精胺酸、組胺酸、離胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、天冬胺酸、及麩胺酸所組成之群中之1~15個、較佳為2~10個、進而較佳為3~5個親水性胺基酸者。例如作為該肽序列，可利用精胺酸三聚物(RRR)或精胺酸四聚物(RRRR)，作為加成有此種肽序列之CTL抗原決定部位4連結肽，可例示：RRR-TPV06、RRRR-TPV06、TPV06-RRR、TPV06-RRRR、RRR-TPV10、RRRR-TPV10、TPV10-RRR、TPV10-RRRR、RRR-TPV12、RRRR-TPV12、TPV12-RRR、TPV12-RRRR、RRR-TPV21、RRRR-TPV21、TPV21-RRR、TPV21-RRRR、RRR-TPV26、RRRR-TPV26、TPV26-RRR、TPV26-RRRR、RRR-TPV30、RRRR-TPV30、TPV30-RRR、TPV30-RRRR、KKK-TPV06、KKKK-TPV06、TPV06-KKK、TPV06-KKKK、KKK-TPV10、KKKK-TPV10、TPV10-KKK、TPV10-KKKK、KKK-TPV12、KKKK-TPV12、TPV12-KKK、TPV12-KKKK、KKK-TPV21、KKKK-TPV21、TPV21-KKK、TPV21-KKKK、KKK-TPV26、KKKK-TPV26、TPV26-KKK、TPV26-KKKK、KKK-TPV30、KKKK-TPV30、TPV30-KKK、TPV30-KKKK、HHH-TPV06、HHHH-TPV06、TPV06-HHH、TPV06-HHHH、HHH-TPV10、HHHH-TPV10、TPV10-HHH、TPV10-HHHH、HHH-TPV12、HHHH-TPV12、TPV12-HHH、TPV12-HHHH、HHH-TPV21、HHHH-TPV21、TPV21-HHH、TPV21-HHHH、HHH-TPV26、HHHH-TPV26、TPV26-HHH、TPV26-HHHH、HHH-TPV30、HHHH-TPV30、TPV30-HHH、TPV30-HHHH、RRKK-TPV12、RKRK-TPV12、RHRH-TPV12、RRHH-TPV12、KKHH-TPV12、KHKH-TPV12等，較佳可列舉KKK-TPV06、KKKK-TPV06、 KKK-TPV10、KKKK-TPV10、KKK-TPV12、KKKK-TPV12、KKK-TPV21、KKKK-TPV21、KKK-TPV26、KKKK-TPV26、KKK-TPV30、KKKK-TPV30、HHH-TPV06、HHHH-TPV06、HHH-TPV10、HHHH-TPV10、HHH-TPV12、HHHH-TPV12、HHH-TPV21、HHHH-TPV21、HHH-TPV26、HHHH-TPV26、HHH-TPV30、HHHH-TPV30、RRKK-TPV12、RKRK-TPV12、RHRH-TPV12、RRHH-TPV12、KKHH-TPV12、KHKH-TPV12，進而較佳可列舉RRR-TPV06、RRRR-TPV06、RRR-TPV10、RRRR-TPV10、RRR-TPV12、RRRR-TPV12、TRRR-TPV21、RRRR-TPV21、RRR-TPV26、RRRR-TPV26、RRR-TPV30、RRRR-TPV30。已知加成有該肽序列之肽於水性溶劑中之溶解度有所提高(Abdelkrim Alileche等，Peptides 38(2012)302-311；日本專利特開2006-188507)。藉由對本發明之CTL抗原決定部位4連結肽加成該肽序列，可提高CTL抗原決定部位4連結肽於水性溶劑中之溶解度。
本發明之抗原決定部位4連結肽中，關於所連結之4種CTL抗原決定部位肽中至少3種以上、較佳為4種CTL抗原決定部位肽，不僅可誘導對各CTL抗原決定部位肽特異性之CTL、及/或將其活化，而且進而亦可誘導對各CTL抗原決定部位肽特異性之免疫球蛋白產生。再者，此處所謂「免疫球蛋白」意指IgG、IgM、IgA、IgD。
本發明之抗原決定部位4連結肽亦可為酸加成鹽或鹼加成鹽。通常用於形成酸加成鹽之酸為鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、草酸、對溴苯基磺酸、羧酸、丁二酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸、三氟乙酸等有機酸。作為鹼加成鹽，可列舉由氫氧化銨或者鹼或鹼土金屬氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等無機鹼所衍生之鹽。
2.CTL抗原決定部位4連結肽之製造
本發明之CTL抗原決定部位4連結肽可藉由慣用之液相合成法、 固相合成法等肽合成法、利用自動肽合成機之肽合成等製造(Kelley et al.,Genetics Engineering Principles and Methods,Setlow,J.K.eds.,Plenum Press NY.(1990)Vol.12,p.1-19；S tewart et al.,Solid-Phase Peptide Synthesis(1989)W.H.Freeman Co.；Houghten,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)82：p.5132，「新生化學實驗講座1 蛋白質IV」(1992)日本生化學會編，東京化學同人)。肽合成係準備保護各胺基酸之欲結合之α-胺基與α-羧基以外之官能基之胺基酸類，於各胺基酸之α-胺基與α-羧基之間進行肽鍵形成反應。通常，預先將位於肽之C末端之胺基酸殘基之羧基經由適當之間隔基或連結子而與固相結合。選擇性去除以上獲得之二肽之胺基末端之保護基，在與下一胺基酸之α-羧基之間形成肽鍵。連續進行此種操作而製造側基經保護之肽，最後將全部保護基去除，並自固相分離。保護基之種類或保護方法、肽結合法之詳細內容於上述文獻中有詳細記載。
或者亦可藉由使用編碼本發明之抗原決定部位4連結肽之核酸之基因重組法或噬菌體呈現法等製造肽。
基因重組法包括將編碼本發明之抗原決定部位4連結肽之DNA插入適當之表現載體中，並將載體導入適當之宿主細胞內，對細胞進行培養，自細胞內或細胞外液中回收目標肽。作為載體，並無特別限定，例如為質體、噬菌體、黏接質體、噬菌體質體(phagemid)、病毒等載體。用以導入載體之宿主細胞為大腸桿菌或枯草桿菌等細菌、酵母細胞、昆蟲細胞、動物細胞(例如，哺乳動物細胞)、植物細胞等，對該等細胞之轉形或轉染包括例如磷酸鈣法、電穿孔法、脂轉染法、粒子槍(particle gun)法、PEG(polyethylene glycol，聚乙二醇)法等。培養轉形細胞之方法係按照用於宿主生物之培養之通常之方法進行。為了使本發明之肽之回收變得容易，較佳為使由表現所生成之肽分泌至細胞外。為此，將編碼實現肽自該細胞之分泌之肽序列之DNA結合 於編碼目標肽之DNA之5'末端側。或亦可將累積於細胞內之目標肽回收。於該情形時，將細胞物理性或化學性破壞，使用蛋白質精製技術將目標肽回收。
所製造之肽可藉由常規方法，例如藉由凝膠過濾層析法、離子交換管柱層析法、親和層析法、逆相管柱層析法、HPLC(high performance liquid chromatography，高效液相層析法)等層析法、硫酸銨份化(ammonium sulphate fractionation)、超過濾、免疫吸附法等進行回收或精製。
3.細胞毒殺性T淋巴球
使用本發明之抗原決定部位4連結肽，可於試管內(in vitro)及/或活體外(ex vivo)獲得對CTL抗原決定部位肽為特異性且毒殺癌症細胞之CTL。使用CTL抗原決定部位肽之CTL之試管內及/或活體外之誘導方法為公知(例如，日本專利特開2006-14637號公報)，本發明亦可利用該等方法。例如，於GM-CSF、IL-4等細胞激素之存在下培養來自健康人或癌症患者之末梢血液單核球(PBMC)中之板黏附細胞而誘導樹狀細胞(DC)。對該樹狀細胞脈衝本發明之抗原決定部位4連結肽後，進行X射線照射，藉此製備抗原呈現細胞(刺激物(stimulator))。於無法使用DC之情形時，亦可使用對來自健康人或同一癌症患者之末梢血液單核(PBMC)脈衝本發明之抗原決定部位4連結肽後進行X射線照射所得者。繼而，加入來自健康人之末梢血液單核球(PBMC)或來自癌症患者之末梢血液單核球(PBMC)或所屬淋巴結淋巴球(responder)，於IL-2、IL-4、IL-7等細胞激素存在下進行培養。其後，進一步加入如上述般脈衝本發明之抗原決定部位4連結肽所獲得之抗原呈現細胞進行再刺激，於IL-2等細胞激素存在下進一步進行培養。
作為用於CTL之誘導之細胞培養用培養基，使用T淋巴球可生存 之任意培養基即可。例如，可使用於RHAMα培養基(Kawai,K.,Sasaki,T.,Saijo-Kurita,K.,Akaza,H.,Koiso,K.,and Ohno,T.,Cancer Immunol.Immunother.35,225-229,1992中記載之LAK medium)、AIMV培養基(GIBCO BRL,Life Technologies,INC.)、或RPMI1640培養基等中添加有IL-2等各種細胞激素或胎牛血清(FCS)等者。
培養條件按照業者所周知之條件即可。例如，將培養溫度設為33℃~41℃、較佳為37℃。又，可使用包含空氣或適當濃度之氧氣、及用以將培養基之pH值保持為約7.4之適當濃度之二氧化碳(例如5%CO2)之惰性氣體作為氣相。培養較佳為4~10天，更佳為7天或8天。藉由進行此種培養而誘導出之CTL包含針對構成抗原決定部位4連結肽之4種CTL抗原決定部位肽中至少3種、較佳為4種CTL抗原決定部位肽，對各CTL抗原決定部位肽特異性之CTL，可特異性毒殺癌症細胞。
4.醫藥組合物
本發明之抗原決定部位4連結肽可用作癌症之免疫療法所使用之醫藥組合物之有效成分。
於本發明之醫藥組合物中可含有上述抗原決定部位4連結肽中之一種或複數種作為有效成分。藉由含有複數種抗原決定部位4連結肽，可獲得更高之效果，成為不限定於具有特定HLA型之患者、可作為癌胜肽疫苗而投予至更範圍廣泛之癌症患者之通用性更高之醫藥組合物。
編碼本發明之抗原決定部位4連結肽所含之PEP1、PEP2、PEP4、PEP5、PEP6、PEP7、PEP8、PEP9、PEP10、PEP13、PEP15、PEP17、及PEP18之基因於複數種實體癌及血液癌中確認有表現。作為實體癌，例如可列舉：腦腫瘤、肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、食道癌、胃癌、胃腸道間質腫瘤 (GIST)、胰腺癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、腎癌、肝癌、膽道癌、頭頸部癌、膀胱癌、前列腺癌、惡性黑色素瘤、皮膚癌、舌癌、骨肉瘤、軟骨肉瘤、纖維肉瘤、脂肪肉瘤、血管肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤等。作為血液癌，例如可列舉白血病、惡性淋巴瘤、骨髓瘤等。因此，本發明之抗原決定部位4連結肽對該等癌症之治療及/或預防有用。此處所謂「癌症之治療及/或預防」意指預防癌症之產生/復發、抑制癌症之發展/惡化、改善癌症之症狀。
本發明之醫藥組合物可含有作為醫藥上容許之製劑原材料而慣用之各種有機或無機載體物質等。作為可利用之醫藥載體，可例示根據製劑之投予形態所通常使用之穩定劑、殺菌劑、緩衝劑、等張劑、螯合劑、pH值調整劑、界面活性劑、填充劑、增量劑、結合劑、潤濕劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、舒緩劑、稀釋劑或賦形劑等，較佳為製備成藉由常規方法添加有該等之複合劑。
又，本發明之醫藥組合物可含有已知於投予疫苗時使用之佐劑。作為佐劑，可列舉：完全弗氏佐劑(CFA，Complete Freund's adjuvant)、不完全弗氏佐劑(IFA，Incomplete Freund's adjuvant)、明礬、脂質A(Lipid A)、單磷醯脂質A、BCG(Bacillus-Calmette-Guerrin，卡介苗)等細菌製劑、CpG-DNA、dsRNA等核酸、結核菌素等細菌成分製劑、鑰孔戚血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin)或酵母甘露聚糖等天然高分子物質、胞壁醯三肽或胞壁醯二肽或該等之衍生物、明礬(alum)、非離子性嵌段共聚物、介白素2(IL-2)或顆粒球巨噬細胞株刺激因子(GM-CSF，Granulocyte Macrophage colony stimulating Factor)、干擾素-α(IFN-α)、干擾素-β(IFN-β)等細胞激素等，該等可使用一種或組合兩種以上而使用。佐劑可以與本發明之醫藥組合物之混合狀態、或以乳液之形式同時投予而使用。
進而，本發明之醫藥組合物除了上述抗原決定部位4連結肽以 外，可含有一種或組合含有複數種之公知之來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽或含有其之肽、或連結有該等之肽(以下記作「公知之來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽等」)。作為公知之來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽，例如可列舉WT-1 p126-134,modified(M236Y)WT-1 p235-243,NY-ESO-1 p157-165,modified(T210M)gp100 p209-217,survivin-2B p80-88,Her-2/neu p63-71,VEGFR2 p169-177,MART-1 p26-35,Glypican-3 p298-306,SPARC p143-151等，但並不限定於該等。於該情形時，本發明之抗原決定部位4連結肽與公知之來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽等可為一劑型之製劑形態，亦可含有本發明之抗原決定部位4連結肽作為有效成分之製劑與含有公知之來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽等作為有效成分之製劑為分開之製劑形態。
本發明之醫藥組合物可根據投予形態而選擇製劑形態。作為代表性之製劑形態，可製作溶液劑、乳劑、脂質體製劑、脂肪乳劑、環糊精等包藏體、懸浮劑、軟膏劑、乳霜劑、經皮吸收劑、經黏膜吸收劑、片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、粉末劑、顆粒劑、細粒劑、糖漿劑等，但並不限定於該等。該等可進而根據投予路徑而分為經口劑、非經口劑、經鼻劑、經陰道劑、栓劑、舌下劑、吸入劑、滴眼劑、滴耳劑等，分別可按照通常之方法進行調製、成形或製備。又，除了可用作溶液製劑以外，亦可將其冷凍乾燥而製成可保存之狀態後，於使用時以包含水或生理鹽水等之緩衝液等溶解而製成適當之濃度後使用。
又，本發明之醫藥組合物亦可含有使用上述本發明之抗原決定部位4連結肽於試管內及/或活體外所誘導之CTL作為有效成分。此種醫藥組合物較佳為非經口劑之形態。
5.治療方法
本發明之醫藥組合物可對範圍廣泛之癌症患者、例如選自由 HLA-A2、HLA-A24、HLA-A26及HLA-A3超型所組成之群中之HLA型陽性患者群進行投予，於開始治療前可無需HLA型檢查而開始治療。
藉由對癌症患者投予本發明之醫藥組合物，可誘導對構成作為有效成分而含有之抗原決定部位4連結肽之至少3種、較佳為4種CTL抗原決定部位肽特異性之CTL，及/或將其活化，進而，可誘導對該CTL抗原決定部位肽特異性之免疫球蛋白產生。利用投予作為有效成分而含有之抗原決定部位4連結肽之免疫球蛋白產生之誘導，顯著高於在不連結抗原決定部位4連結肽所含之CTL抗原決定部位肽而分別混合投予之情形時所確認到之免疫球蛋白產生之誘導。因此，本發明之抗原決定部位4連結肽可有效地治療及/或預防癌症患者之癌症。
本發明之醫藥組合物可藉由經口投予、靜脈投予、動脈投予、肌內投予、皮下投予、皮內投予、舌下投予、腹腔內投予、直腸內投予、經皮投予、經黏膜投予、經鼻投予、經陰道投予、經眼投予、吸入投予等進行投予。於含有複數種抗原決定部位4連結肽、或公知之來自腫瘤抗原分子之CTL抗原決定部位肽等作為有效成分之製劑，分別製劑成不同之醫藥組合物之情形時，各醫藥組合物可藉由同一投予路徑或不同之投予路徑，同時投予或分別投予。
本發明之醫藥組合物之投予量可根據需要治療之癌症之狀態/嚴重度、各患者之年齡、體重等因素而適當調整，較佳為將以抗原決定部位4連結肽之量計含有0.0001mg~1000mg、較佳為0.001mg~100mg、更佳為0.01mg~50mg之醫藥組合物按照數天、數週或數月1次之方式反覆投予。又，於本發明之醫藥組合物含有使用本發明之抗原決定部位4連結肽於試管內及/或活體外所誘導之CTL作為有效成分之情形時，較佳為按1週~2週之間隔，每1天每1kg體重投予2x106~2x108個CTL。
本發明之醫藥組合物亦可與通常用於癌症化學治療之醫藥品併用而對癌症患者投予。例如可列舉：環磷醯胺、替莫唑胺、苯達莫司汀等烷化劑；替加氟-尿嘧啶複合劑、替加氟-吉美嘧啶-奧替拉西鉀複合劑、甲胺喋呤、吉西他濱等代謝拮抗劑；順鉑、奧沙利鉑等鉑製劑；伊立替康、埃立布林、紫杉醇、歐洲紫杉醇、長春新鹼等植物鹼製劑；多柔比星、博萊黴素、放射菌素D等抗癌性抗生素；伊馬替尼、舒尼替尼、吉米沙星、索拉非尼、依維莫司、曲妥珠單抗、貝伐單抗、利妥昔單抗、西妥昔單抗、帕尼單抗、莫加珠單抗(Mogamulizumab)等分子靶向治療劑；比卡魯胺、雌莫司汀、依西美坦等激素療法製劑；香菇多糖、必醫你舒、克速鎮等免疫活化療法劑等。該等醫藥品可藉由與本發明之醫藥組合物相同或分開之投予路徑，同時或分別投予。
以下藉由實施例對本發明進行具體說明，但本發明並不限定於該等實施例。
[實施例]
實施例1 肽之合成、精製
CTL抗原決定部位肽、及抗原決定部位4連結肽係使用市售之肽合成機Prelude(Protein Technologies,Inc.)，藉由固相合成法(Fmoc法)而合成。即，使保護活性基之胺基酸吸附於Alko-PEG樹脂上，於其中注入解塊液而將保護基去除，注入保護活性基之胺基酸，使兩者反應而合成二肽。藉由重複該操作，而合成具有目標序列之肽。藉由於含有2.5%三異丙基矽烷、2.5%水、95%三氟乙酸之脫保護液中反應2小時而去除肽之保護基，於所獲得之濾液中添加冷醚，藉此可以沈澱之形式將肽回收。藉由YMC-Pack Pro C18管柱(YMC Co.,Ltd.)及HPLC系統(Gilson)，溶劑系使用0.1% TFA(Trifluoroacetic acid，三氟乙酸)水溶液及乙腈，對所獲得之各種合成肽進行精製。藉由LC- MS(liquid chromatography-mass spectrometry，液相色譜-質譜聯用儀)系統(WATERS ACQUITY UPLC system，micromass ZQ)確認最終精製肽之純度及分子量，冷凍乾燥後於低溫避光處保存，供於以下所示之實施例。表1-1~表1-8表示所獲得之4連結肽(TPV01~TPV45)之MS光譜資料。又，將TPV06、TPV10、TPV12、TPV21、TPV26、TPV30、TPV35、TPV37、TPV39、TPV40、TPV41、TPV43、及TPV45之LC資料示於圖1-1~1-7。進而，將TPV39、TPV40、TPV41、TPV43、及TPV45之MS資料示於圖2-1~2-3。
表中「ND」表示未檢測出。
將所合成之CTL抗原決定部位肽之胺基酸序列示於表2，將抗原決定部位4連結肽之胺基酸序列示於表3及表4。表4所記載之抗原決定部位4連結肽係表3所記載之TPV12、TPV06、TPV26中於N末端進一步加成包含精胺酸之肽序列而成者、及肽間之連結子為精胺酸三聚物者。
再者，合成WT1(序列編號20)作為與HLA-A2結合之對照肽，合成Her2(序列編號21)作為與HLA-A24結合之對照肽。
「-RR-」表示精胺酸二聚物。
「-RRR-」表示精胺酸三聚物。
「RRR-」及「RRRR-」為加成於N末端之肽序列，分別表示加成有3個精胺酸殘基、及加成有4個精胺酸殘基。
實施例2 小鼠模型中之抗原決定部位肽特異性CTL之誘導與利用ELISPOT法之CTL之檢測
藉由蒸餾水(大塚製藥工廠)將抗原決定部位4連結肽製備為2mg/mL或4mg/mL，並填充至B Braun Injekt注射器中。於另一注射器中填充等量之不完全弗氏佐劑(IFA)後，藉由GP注射器連接器將兩注射器連接，使抗原決定部位4連結肽溶液與IFA充分混合，藉此製備乳液。將其以每週1次、每次100μL之方式投予至小鼠(HLA-A2.1基因轉殖(transgenic)、HLA-A24 transgenic(Taconic))之尾根部周邊，共計投予2次。最終投予1週後，自小鼠將鼠蹊部淋巴結回收。藉由完全培養基(Complete Medium)(RPMI-1640、10%熱不活化之FBS(Fetal bovine serum，胎牛血清)、100U/mL青黴素(Penicillin)、100μg/mL鏈黴素(Streptomycin)、50μM 2-巰基乙醇)將淋巴結細胞懸濁液製備為5×106cells/mL，分別加入標的CTL抗原決定部位肽(最終濃度10μg/mL)、重組小鼠IL-15(最終濃度100ng/mL)、重組小鼠IL-21(最終濃度100 ng/mL)，按照1mL/well播種於24孔板(24well plate)中後，於37℃下在5%CO2培養箱內培養8天。8天後，將細胞回收，按照1×105cells/well播種於附有小鼠IFN-γ ELISpot(Enzyme-linked immunospot，酶聯免疫斑點檢測)套組(GEN-PROBE)之anti IFN-γ抗體固相化板中。繼而，將由同系小鼠脾臟所製備並經30Gy之X射線照射之脾臟細胞作為抗原呈現細胞，按照1×105cells/well播種於同一孔後，加入標的CTL抗原決定部位肽、或陰性對照肽(最終濃度10μg/mL)，於37℃下在5%CO2培養箱內培養一晚。第二天，按照套組之隨附說明書使IFN-γ產生細胞斑點顯色。藉由ELISPOT分析儀(Immunospot S6,Cellular Technology Ltd.)對IFN-γ產生細胞斑點數進行定量。關於CTL抗原決定部位肽特異性CTL之誘導，於藉由該試驗所獲得之添加標的CTL抗原決定部位肽之孔之IFN-γ產生細胞斑點數顯著高於添加陰性對照肽之孔之IFN-γ產生細胞斑點數(Student's t-test,p<0.05)之情形時，判斷為陽性。再者，作為陰性對照肽，係使用WT1或Her2。進而，為了將CTL誘導強度可視化，於將(添加標的CTL抗原決定部位肽之孔之平均IFN-γ產生細胞斑點數)一(添加陰性對照肽之孔之平均IFN-γ產生細胞斑點數)=△時，將10≦△<100之情形表示為陽性，將100≦△<200之情形表示為中陽性，將200≦△之情形表示為強陽性。
將CTL抗原決定部位肽特異性CTL誘導之研究結果示於圖3-1~圖3-3及圖3-4。如圖3-l~圖3-4所示，於本發明之抗原決定部位4連結肽具有選自以下之<1>~<3>中之任一特徵之情形時，呈現出所連結之4種CTL抗原決定部位肽中至少3種以上之CTL誘導。
<1>C末端為PEP4。
<2>C末端為PEP6及PEP5，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序。
<3>包含PEP5、PEP6、PEP9、及PEP18。
又，如圖3-4所示，即便於在N末端進一步加成有包含精胺酸之肽序列之情形時，以及肽間之連結子為精胺酸三聚物，亦與上述同樣地呈現出良好之CTL誘導。
另一方面，如圖3-1~圖3-3所示，於如CPV01~CPV16之連結順序之4連結體中並未呈現出3種以上之CTL誘導。
即，即便為包含選自特定之13種(PEP1、PEP2、PEP4、PEP5、PEP6、PEP7、PEP8、PEP9、PEP10、PEP13、PEP15、PEP17、及PEP18)中之4種CTL抗原決定部位肽之抗原決定部位4連結肽(CPV14、CPV15、及CPV16)，於所連結之4種CTL抗原決定部位肽中亦未呈現出3種以上之CTL誘導。
實施例3 利用人類20S免疫蛋白酶體(i20S)之肽切斷位置之推定
藉由以下順序製備抗原決定部位4連結肽切斷樣品。即，藉由反應緩衝液(20mM HEPES-KOH，pH值為7.8，2mM MgAc2，2mM二硫蘇糖醇)將抗原決定部位4連結肽稀釋為66.7μg/mL，以成為300μL/管之方式分注於反應管中。於其中添加人類20S免疫蛋白酶體(R&D系統)2μg/管並攪拌後，於振盪條件下，在37℃下培養1、2、4小時。經過培養時間後，加入30μL/管之乙酸，藉此使酶反應停止，並迅速藉由-80℃冷凍器將樣品冷凍保存。
繼而，對於所獲得之抗原決定部位4連結肽切斷樣品，使用LC/MS-MS系統(Acquity UPLC system(waters公司製造)、Synapt G2 HDMS(waters公司製造))，包羅性地對肽片段之分子量進行測定，使用分析軟體(MassLynx,ver4.1,SCN712、waters公司製造)進行分析與肽片段之鑑定。評價係根據利用免疫蛋白酶體之切斷之結果，於出現抗原決定部位肽本身被切斷之肽、抗原決定部位肽之N末端加成有精胺酸之肽、及抗原決定部位肽之N末端加成有精胺酸二聚物之肽中任一者之情形時，判斷為可切下。
如圖3-1~圖3-4所示之使用免疫蛋白酶體之分析之結果顯示，只要PEP2、PEP10之兩種CTL抗原決定部位肽不分別位於抗原決定部位4連結肽之最C末端，則所期待之CTL抗原決定部位肽之C末端胺基酸不被決定。因此，本發明之CTL抗原決定部位4連結肽較佳為於肽之C末端連結PEP2或PEP10。
實施例4 CTL抗原決定部位肽固相化珠粒之製備
按照以下順序將肽固相化為xMAP Multi-Analyte COOH Microspheres(Luminex corporation，以下稱為珠粒)。藉由MES緩衝液(0.1M MES-NaOH，pH值7.0)將珠粒洗淨後，藉由離心分離去除上清液。將該操作重複兩次後，使珠粒懸浮於75μL之MES緩衝液中。於其中加入製備成1mg/mL之CTL抗原決定部位肽溶液100μL，進而加入10mg/mL EDC(1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽)5μL並充分混合後，於30℃下在避光處反應一晚。第二天，藉由離心分離去除上清液後，加入1M Tris-HCl 125μL，於30℃下在避光處培養30分鐘。去除上清液後，藉由洗滌緩衝液(PBS(-)，0.05% Tween20)洗淨兩次後，懸浮於免疫阻斷劑(DS Pharma Biomedical)中，藉此完成CTL抗原決定部位肽之固相化。
實施例5 CTL抗原決定部位特異性IgG抗體效價測定
藉由蒸餾水(大塚製藥工廠)將本發明之抗原決定部位4連結肽製備為2mg/mL，並填充至B Braun Injekt注射器中。於另一注射器中填充等量之IFA後，藉由GP注射器連接器將兩注射器連接，使該抗原決定部位4連結肽溶液與IFA充分混合，藉此製備乳液。將其以每週1次、每次100μL之方式投予至CBF1小鼠(C57BL/6×Balb/c F1)尾根部周邊，共計投予3次。最終投予1週後，自小鼠採血而獲得血清樣品。作為對照組，使用選自PEP1、PEP2、PEP4、PEP5、PEP6、PEP7、PEP8、PEP9、PEP10、PEP13、PEP15、或PEP18中之4種之各肽混合 物(各1mg/mL)製備乳液，按照與抗原決定部位4連結肽相同之排程進行投予(mixture投予組)。
於96孔濾板上分注經免疫阻斷劑稀釋之CTL抗原決定部位肽固相化珠粒並以洗滌緩衝液洗淨後，按照100μL/well添加經免疫阻斷劑稀釋200倍之小鼠血清樣品。將板於30℃培養箱中一面以600rpm攪拌，一面培養90分鐘。藉由洗滌緩衝液洗淨3次後，按照100μL/well添加經免疫阻斷劑稀釋500倍之生物素化抗小鼠IgG(H+L)(Vector Labolatories)，於30℃、600rpm攪拌條件下培養60分鐘。藉由洗滌緩衝液洗淨3次後，按照100μL/well添加經免疫阻斷劑稀釋500倍之卵白素R-藻紅素複合物(Invitrogen)，於30℃、600rpm攪拌條件下培養30分鐘。藉由洗滌緩衝液洗淨3次後，按照100μL/well添加洗滌緩衝液而使珠粒懸浮後，藉由Bio-Plex懸浮陣列系統(BIO-RAD)測定各珠粒特異性結合之PE色素之平均螢光強度。
CTL抗原決定部位特異性IgG抗體效價測定結果如圖4-1~圖4-3所示。再者，圖4-1~圖4-3表示與陰性對照組(以下簡稱為IFA組)之血清中CTL抗原決定部位特異性IgG抗體效價測定結果相比，誘導出幾倍之該IgG抗體之產生，該陰性對照組係製備將IFA與蒸餾水(大塚製藥工廠)等量混合而成之乳液，按照與CTL抗原決定部位肽混合物(mixture)或抗原決定部位4連結肽相同之排程投予至小鼠。
如圖4-1~圖4-3所示，於mixture投予組中，CTL抗原決定部位特異性IgG抗體產生誘導強度較低，且頻度亦較低。另一方面，判明於投予抗原決定部位4連結肽之情形時，可觀察到高頻度且較強之CTL抗原決定部位特異性IgG抗體之產生誘導，進而該IgG產生量根據所投予之抗原決定部位4連結肽而被顯著地誘導至IFA組之數十倍至百倍以上。
以上結果顯示，藉由投予抗原決定部位4連結肽，與混合構成該 抗原決定部位4連結肽之CTL抗原決定部位肽並投予之情形相比，抗腫瘤免疫被更強地活化。
接受癌胜肽疫苗治療之癌症患者之CTL抗原決定部位肽特異性之IgG產生之誘導與抗原決定部位肽特異性CTL之誘導一併有助於延長壽命效果。因此，本發明與如包含已知之CTL抗原決定部位肽或其混合物之癌胜肽疫苗療法相比，發揮優異之延長壽命效果。因此，本發明之抗原決定部位4連結肽與如包含已知之CTL抗原決定部位肽或其混合物之癌胜肽疫苗療法相比，可較佳地用作可提高治療效果之癌症或由其引發之疾病之治療劑及/或預防劑、癌胜肽疫苗。
將本說明書所引用之全部刊物、專利及專利申請案直接作為參考而併入本說明書中。
<110> 日本大鵬藥品工業股份有限公司
<120> 新穎CTL抗原決定部位4連結肽
<130> PH-5981TW
<150> JP 2013-218524
<151> 2013-10-21
<150> JP 2014-155132
<151> 2014-07-30
<160> 66
<170> PatentIn第3.5版
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Claims (13)

  1. 一種抗原決定部位4連結肽，其係可自由以下之CTL抗原決定部位肽所組成之群中重複選擇之4個肽經由連結子分別連結而成，且可具有包含親水性胺基酸之進而另一肽序列：序列編號1所表示之肽「PEP1」、序列編號2所表示之肽「PEP2」、序列編號4所表示之肽「PEP4」、序列編號5所表示之肽「PEP5」、序列編號6所表示之肽「PEP6」、序列編號7所表示之肽「PEP7」、序列編號8所表示之肽「PEP8」、序列編號9所表示之肽「PEP9」、序列編號10所表示之肽「PEP10」、序列編號13所表示之肽「PEP13」、序列編號15所表示之肽「PEP15」、序列編號17所表示之肽「PEP17」、序列編號18所表示之肽「PEP18」，且其具有選自以下之(1)~(5)中之任一特徵：(1)C末端為PEP2(其中，N末端為PEP7及PEP8，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序者除外)；(2)C末端為PEP4；(3)C末端為PEP10；(4)C末端為PEP6及PEP5，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序；(5)包含PEP5、PEP6、PEP9、及PEP18。
  2. 如請求項1之抗原決定部位4連結肽，其係選自PEP1、PEP2、PEP4、PEP5、PEP6、PEP7、PEP8、PEP9、PEP10、PEP13、PEP15、PEP17、及PEP18中之不重複之4個肽經由連結子分別連結而成。
  3. 如請求項1之抗原決定部位4連結肽，其具有選自以下之(1)~(5)中之任一特徵： (1)包含選自PEP1、PEP7、PEP8及PEP13中之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP2(其中，N末端為PEP7及PEP8，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序者除外)；(2)包含PEP5、PEP6及PEP9之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP4；(3)包含選自PEP1、PEP13、PEP15、PEP17及PEP18中之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP10；(4)包含PEP1及PEP7之2種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP6及PEP5，且自N末端側起經由連結子鄰接而為該順序；(5)包含PEP5、PEP6及PEP18之3種CTL抗原決定部位肽且C末端為PEP9。
  4. 如請求項1之抗原決定部位4連結肽，其包含選自以下之序列：‧PEP5-(L)-PEP6-(L)-PEP9-(L)-PEP4；‧PEP9-(L)-PEP5-(L)-PEP6-(L)-PEP4；‧PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP9-(L)-PEP4；‧PEP6-(L)-PEP9-(L)-PEP5-(L)-PEP4；‧PEP9-(L)-PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP4；‧PEP5-(L)-PEP9-(L)-PEP6-(L)-PEP4；‧PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP8-(L)-PEP2；‧PEP1-(L)-PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP2；‧PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP8-(L)-PEP2；‧PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP2；‧PEP8-(L)-PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP2；‧PEP7-(L)-PEP13-(L)-PEP8-(L)-PEP2；‧PEP8-(L)-PEP13-(L)-PEP7-(L)-PEP2；‧PEP13-(L)-PEP7-(L)-PEP8-(L)-PEP2； ‧PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP13-(L)-PEP2；‧PEP13-(L)-PEP8-(L)-PEP7-(L)-PEP2；‧PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP10；‧PEP13-(L)-PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP18-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP13-(L)-PEP10；‧PEP18-(L)-PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP10；‧PEP1-(L)-PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP10；‧PEP1-(L)-PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP1-(L)-PEP18-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP18-(L)-PEP1-(L)-PEP10；‧PEP18-(L)-PEP1-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP18-(L)-PEP15-(L)-PEP1-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP17-(L)-PEP13-(L)-PEP10；‧PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP17-(L)-PEP10；‧PEP17-(L)-PEP15-(L)-PEP13-(L)-PEP10；‧PEP17-(L)-PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP13-(L)-PEP17-(L)-PEP15-(L)-PEP10；‧PEP13-(L)-PEP15-(L)-PEP17-(L)-PEP10；‧PEP6-(L)-PEP18-(L)-PEP5-(L)-PEP9；‧PEP6-(L)-PEP5-(L)-PEP18-(L)-PEP9；‧PEP1-(L)-PEP7-(L)-PEP6-(L)-PEP5；或‧PEP7-(L)-PEP1-(L)-PEP6-(L)-PEP5(式中「-(L)-」表示連結子)。
  5. 如請求項1之抗原決定部位4連結肽，其中連結子為胺基酸連結子。
  6. 如請求項1之抗原決定部位4連結肽，其中胺基酸連結子為連結有2個或3個精胺酸之精胺酸二聚物或精胺酸三聚物。
  7. 如請求項1之抗原決定部位4連結肽，其中包含親水性胺基酸之進而另一肽序列係連結於N末端。
  8. 如請求項1之抗原決定部位4連結肽，其中包含親水性胺基酸之進而另一肽序列包含連結有3個精胺酸之精胺酸三聚物或連結有4個精胺酸之精胺酸四聚物。
  9. 如請求項1之抗原決定部位4連結肽，其包含由序列編號22、序列編號23、序列編號24、序列編號25、序列編號26、序列編號27、序列編號28、序列編號29、序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號35、序列編號36、序列編號37、序列編號38、序列編號39、序列編號40、序列編號41、序列編號42、序列編號43、序列編號44、序列編號45、序列編號46、序列編號47、序列編號48、序列編號49、序列編號50、序列編號51、序列編號52、序列編號53、序列編號54、序列編號55、序列編號56、序列編號57、序列編號58、序列編號59、序列編號60、序列編號61、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65、或序列編號66所表示之胺基酸序列。
  10. 一種CTL，其係藉由使用如請求項1之抗原決定部位4連結肽刺激末梢血液淋巴球而獲得。
  11. 一種醫藥組合物，其含有如請求項1之抗原決定部位4連結肽、或如請求項10之CTL作為有效成分。
  12. 一種醫藥組合物，其含有兩種以上之如請求項1之抗原決定部位4連結肽。
  13. 如請求項11之醫藥組合物，其係免疫療法劑。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104926944B (zh) * 2015-05-22 2018-04-13 北京康爱瑞浩生物科技股份有限公司空港分公司 多靶点复合抗原负载cd8+细胞毒性t淋巴细胞的制备方法及其用途
US20200353070A1 (en) * 2018-01-22 2020-11-12 Japan As Represented By The Director-General Of National Institute Of Infectious Diseases Selective cd8-positive t cell-inducing vaccine antigen
JP6716801B2 (ja) * 2018-06-29 2020-07-01 大鵬薬品工業株式会社 抗腫瘍剤及びその評価方法
SG11202104416YA (en) * 2018-11-02 2021-05-28 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Emulsion formulation and method for preparing the same
AU2020411439A1 (en) * 2019-12-26 2022-08-04 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Agent for adjuvant therapy

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9340577B2 (en) * 1992-08-07 2016-05-17 Epimmune Inc. HLA binding motifs and peptides and their uses
US20080286228A1 (en) 1995-10-20 2008-11-20 Tarantolo Stefano R Compositions and methods for enhancing immune responses mediated by antigen-presenting cells
ATE406913T1 (de) 1996-03-10 2008-09-15 Meiji Dairies Corp Auf peptiden basierendes immunotherapeutisches mittel gegen allergien
JP4138073B2 (ja) * 1998-05-08 2008-08-20 株式会社グリーンペプタイド ヒト癌退縮抗原タンパク質
ATE375362T1 (de) 1998-06-25 2007-10-15 Kyogo Itoh Von cyclophilin b abstammende tumorantigen- peptide
KR100660367B1 (ko) 1998-08-28 2006-12-21 교고 이또 신규 종양 항원 단백질 ｓａｒｔ-3 및 그의 종양 항원펩티드
US6667037B1 (en) 1998-10-09 2003-12-23 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated peptides which bind to HLA-B35 molecules, larger peptides which contain these, nucleic acid molecules encoding peptides, and uses thereof
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
ES2340357T3 (es) * 1999-08-05 2010-06-02 Green Peptide Co., Ltd. Antigeno tumoral.
JP2003512057A (ja) 1999-10-19 2003-04-02 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ Ｍａｇｅ−ａ１２抗原ペプチド及びその利用
WO2001041741A1 (en) 1999-12-13 2001-06-14 Epimmune Inc. Hla class i a2 tumor associated antigen peptides and vaccine compositions
AU2000261861A1 (en) * 2000-07-28 2002-02-13 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Gene expression system for mass production of hepatitis c viral rna-dependent rna polymerase and enzyme assay using fusion protein expressed therefrom
EP1306431B1 (en) 2000-07-31 2008-03-19 Green Peptide Co., Ltd. Tumor antigen
JP4097178B2 (ja) * 2000-10-03 2008-06-11 株式会社グリーンペプタイド 腫瘍抗原
WO2003025569A1 (fr) 2001-09-18 2003-03-27 Kyogo Itoh Procede de detection de l'immunite cellulaire et son application sur des medicaments
EP1557466B1 (en) 2002-09-27 2009-09-02 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Tumor antigen protein and utilization thereof
AU2003280688A1 (en) * 2003-10-31 2005-05-19 Kurume University Combination therapy of peptide vaccination and estramustine treatment
JP4579581B2 (ja) * 2003-12-08 2010-11-10 株式会社グリーンペプタイド 副甲状腺ホルモン関連タンパク質のｈｌａ−ａ２４またはｈｌａ−ａ２結合ペプチド
CA2554195C (en) 2004-01-23 2011-02-22 Green Peptide Co., Ltd. Peptide originating in epidermal growth factor receptor (egfr)
US20080014186A1 (en) 2004-05-26 2008-01-17 Green Peptide Co., Ltd. Hla-A24 or Hla-A2 Binding Peptides of Parathyroid Hormone-Related Protein
JP4547197B2 (ja) 2004-06-30 2010-09-22 公正 安元 癌特異的腫瘍抗原
JP2006188507A (ja) 2004-12-10 2006-07-20 Tokyo Univ Of Agriculture & Technology 蛋白質の溶解度向上方法
BRPI0619255B8 (pt) 2005-11-30 2021-05-25 Chugai Seiyaku Kabishiki Kaisha composto de peptídeo, composição farmacêutica, uso do composto e medicamento para imunoterapia de câncer
JP5114403B2 (ja) 2006-07-11 2013-01-09 株式会社グリーンペプタイド Ｈｌａ−ａ３スーパータイプアレル陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン療法に有用なｓａｒｔ３由来ペプチド
JP2008145715A (ja) * 2006-12-08 2008-06-26 Fujifilm Corp ポジ型感光性組成物、パターン形成方法、及び薄膜トランジスタアレイ基板
WO2009022652A1 (ja) * 2007-08-16 2009-02-19 Kurume University HLA-A3スーパータイプアレル陽性癌患者に対する癌ワクチン療法に有用なLck由来ペプチド
GB0717864D0 (en) 2007-09-13 2007-10-24 Peptcell Ltd Peptide sequences and compositions
KR101512885B1 (ko) 2007-09-18 2015-04-16 가부시키가이샤 그린 펩티드 Ｃｔｌ 유도제 조성물
CA2804127A1 (en) 2010-07-07 2012-01-12 Green Peptide Co., Ltd. Cancer peptide vaccine
JP5911098B2 (ja) 2012-04-09 2016-04-27 国立研究開発法人情報通信研究機構 翻訳装置、およびプログラム
JP2014155132A (ja) 2013-02-13 2014-08-25 Murata Mfg Co Ltd 回路基板およびその製造方法
RU2627175C2 (ru) 2013-03-08 2017-08-03 Тайхо Фармасьютикал Ко., Лтд. Новый пептид, имеющий 5 соединенных эпитопов ctl

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