JP2003512057A

JP2003512057A - Ｍａｇｅ−ａ１２抗原ペプチド及びその利用

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Publication number: JP2003512057A
Application number: JP2001532203A
Authority: JP
Inventors: ハイデッカー，レオノーラ; デンアインデ，ブノワファン; ブーン−ファルール，ティエリ; ブラスール，フランシス
Original assignee: Ludwig Institute for Cancer Research Ltd
Current assignee: Ludwig Institute for Cancer Research New York
Priority date: 1999-10-19
Filing date: 2000-10-19
Publication date: 2003-04-02
Also published as: KR20020047249A; WO2001029220A2; HK1046925A1; AU1335601A; CN1402782A; CA2386088A1; EP1222274A2; WO2001029220A3

Abstract

(57)【要約】本発明はＭＡＧＥ−Ａ１２ポリペプチドに由来し、HLA分子に提示される抗原性ペプチドを提供する。このペプチドを用いた診断および治療方法も提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明は、メラノーマ、膀胱癌、腎癌、肺癌、食道癌などを含む腫瘍に優先的
に発現しているポリペプチド及びコードされた核酸分子に関する。核酸分子およ
びコードされたポリペプチドは、とりわけ、診断及び治療的状況において有用で
ある。

【０００２】（発明の背景）腫瘍細胞を正常カウンターパート細胞と区別する表現型の変化は、しばしば細
胞のゲノムの１つまたは２つ以上の変化の結果である。腫瘍細胞で発現されてい
るが、正常カウンターパート細胞では発現されてない遺伝子は、「腫瘍関連」遺
伝子と呼ぶことができる。これらの腫瘍関連遺伝子は腫瘍表現型のマーカーであ
る。また、腫瘍関連遺伝子の発現は腫瘍発生過程の必須の出来事となることもあ
る。

【０００３】一般的に、宿主は、正常な非腫瘍形成細胞に発現されていない腫瘍関連遺伝子
を異物と認識する。したがって、腫瘍関連遺伝子の発現は宿主による腫瘍細胞に
対する免疫応答を引き起こすことができる。腫瘍関連遺伝子の発現は、ある種の
組織において、免疫応答を引き起こすことなしに正常細胞に起こることもできる
。このような組織では、遺伝子の発現および／またはタンパク質産生物の、通常
免疫学的に認識可能なフラグメントの細胞表面上への提示は、免疫システムがこ
れらの免疫学的に寛容な組織内の細胞を「見」(see)ないために、免疫応答を生
じない。免疫学的に寛容な組織は、脳および精巣を含む。

【０００４】腫瘍に関連した遺伝子の発現の発見は、細胞を腫瘍細胞と同定する手段を提供
する。診断化合物は腫瘍関連遺伝子に基づくことができ、腫瘍細胞の存在と場所
の決定に用いることができる。さらに、腫瘍関連遺伝子が腫瘍の表現型（例えば
、不規則な成長または転移）の側面に関与している場合、腫瘍関連遺伝子は、こ
の遺伝子の発現を軽減または実質的に阻止し、従って、特定の腫瘍関連遺伝子の
発現に依存する表現型特徴を軽減または実質的に阻止するアンチセンス核酸など
の治療法を提供することに用いることができる。

【０００５】哺乳類の免疫システムが異物または異質物を認識し、それらに反応する方法は
複雑である。このシステムの重要な相は、Ｔ細胞の応答である。この応答には、
Ｔ細胞が、ヒト白血球抗原（「ＨＬＡ」）または主要組織適合複合体（「ＭＨＣ
」）と呼ばれる細胞表面分子複合体、および、ペプチドを認識し、それらと相互
作用する必要がある。ペプチドは、ＨＬＡ／ＭＨＣ分子も提示している細胞によ
って処理されたより大きな分子に由来する。これに関しては、Male et al.、Adv anced Immunology （J.P. Lipincott Company、1987）の、とくに第６〜１０章
を参照されたい。Ｔ細胞とＨＬＡ／ペプチド複合体の相互作用は制限されており
、特定のＨＬＡ分子とペプチドの組み合わせに特異的なＴ細胞を必要とする。特
異的Ｔ細胞が存在しないと、パートナー複合体が存在していてもＴ細胞の応答は
起きない。同様に、Ｔ細胞が存在しているが、特異的複合体が存在しない場合に
も応答はない。この機構は、異物に対する免疫システムの応答、自己免疫病態お
よび細胞異常への応答に関連している。タンパク質がＨＬＡ結合ペプチドに処理
される機構に焦点を当てた研究が多くなされた。この点に関しては、Barinaga、
Science 257: 880、1992; Fremont et al.、Science 257: 919、1992; Matsumur
a et al.、Science 257: 927、1992; Latron et al.、Science 257: 964、1992
を参照のこと。

【０００６】Ｔ細胞が細胞の異常を認識する機構は、癌にも関係している。例えば、１９９
２年５月２２日に提出され、１９９２年１１月２６日に公開され引例として組み
込まれるＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４には、ペプチドに処理された
後、細胞表面に発現し、腫瘍細胞を特異的細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）により溶
解に導くことが出来る遺伝子ファミリーが開示されている。この遺伝子は「腫瘍
拒絶抗原前駆体」または「ＴＲＡＰ」分子をコードしているといわれ、これに由
来するペプチドは「腫瘍拒絶抗原」または「ＴＲＡ」と言われる。この遺伝子フ
ァミリーに関する更なる情報は、Traversari et al.、J. Exp. Med. 176:1453-14
57、1992; van der Bruggen et al.、Science 254: 1643,1991; De Plaen et al.、
Immunogenetics 40:360-369、1994 and U.S. Patent No. 5,342,774を参照。

【０００７】米国特許第５，４０５，９４０号には、引例として開示されているが、ＨＬＡ
‐Ａ１分子により発現されるペプチドについて述べられている。この引例は、特
定のペプチドの特定のＨＬＡ分子に対する既知の特異性が与えられた場合、ある
１つのＨＬＡ分子に結合するが、他のものには結合しない特定のペプチドを予想
できることを教示している。異なる個体は異なるＨＬＡ表現型を所有するために
、このことは重要である。結果として、特異的ＨＬＡ分子のパートナーとしての
特定のペプチドの同定は、診断的および治療的効果があるが、その特定のＨＬＡ
表現型を有する個体に関係するだけである。細胞の異常がある一つの特定のＨＬ
Ａ表現型に制限されておらず、標的とした治療が問題の異常細胞の表現型に関す
る知識を要求するので、この分野でのさらなる研究が必要とされている。

【０００８】米国特許第５，６２９，１６６号には、引例として組込むが、ＭＡＧＥ‐１発
現産物が２次的なＴＲＡに処理されることが開示されている。この２次的ＴＲＡ
はＨＬＡ‐Ｃ^*１６０１としても知られるＨＬＡ−-Ｃｗ１６分子として提示され
る。本開示では、与えられたＴＲＡＰが多数のＴＲＡを産生することが示されて
いる。米国特許第５，４８７，９７４号には、本明細書に引例として組込むが、チロ
シナーゼが腫瘍拒絶抗原前駆体として記載されている。この引例は、いくつかの
正常細胞（例えばメラノサイト）により産生された分子が、腫瘍細胞内で処理さ
れ、腫瘍拒絶抗原となり、ＨＬＡ−Ａ２分子として提示されることを開示してい
る。

【０００９】全体が引例として本明細書に組み込まれる米国特許第５，６２０，８８６号に
は、チロシナーゼに由来しない２次的ＴＲＡが、ＨＬＡ−Ａ２分子に提示されて
いることが述べられている。このＴＲＡはＴＲＡＰに由来するが、公知のＭＡＧ
Ｅ遺伝子でコードされている。この開示は、特定のＨＬＡ分子が、異なったソー
スに由来するＴＲＡを提示することがあることを示している。さらなるＴＲＡＰが米国特許第５，５７１，７１１号、５，６１０，０１３
、５，５８７，２８９号および５，５８９，３３４号、ならびに、ＰＣＴ公
開ＷＯ９６／１０５７７に開示されている。ＴＲＡＰは腫瘍拒絶抗原に処理され
、さまざまなＨＬＡ分子に提示される。

【００１０】患者の腫瘍が既知の抗原ペプチドを発現していないか、または、患者が適切な
ＨＬＡ分子を発現していないために、さらなる抗原ペプチドを含む治療で恩恵を
受ける患者は多く存在する。従って、ＭＨＣクラスＩ分子により提示され、ＣＤ
８^＋リンパ球に認識されるエピトープを含む追加の腫瘍関連抗原の同定が要求さ
れている。

【００１１】（発明の要約）現在、ヒトＭＡＧＥ‐Ａ１２遺伝子（配列番号１）が、ＨＬＡ−Ｃｗ^*０７に
提示される腫瘍拒絶抗原をコードしていることが発見された。ＭＡＧＥ‐Ａ１２
ポリペプチド（配列番号２）に由来するペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子を有す
る抗原提示細胞に提示された場合、細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化および増
殖を有効に誘導する。本発明の一つの側面においては、単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラス
Ｉ結合ペプチドが提供される。本ペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列または
ＨＬＡクラスＩ分子を結合するその機能的変異体を含む。機能的変異体は、ひと
つまたは２つ以上のアミノ酸の追加、置換または欠失を含む。ある態様では、単
離したＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドは、配列番号４、配列番
号５、それらのフラグメント、およびそれらの機能的変異体からなる群から選択
されるアミノ酸配列を含む。

【００１２】本発明の他の側面においては、単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ
結合ペプチドは、ＨＬＡＣｗ^*０７に結合する配列番号２のアミノ酸配列のフラ
グメントまたはその機能的変異体を含む。機能的変異体は１個または２個以上の
アミノ酸の追加、置換または欠失を含む。機能的変異体はＨＬＡＣｗ^*０７に結
合する。好ましい態様は配列番号３、配列番号４、配列番号５および配列番号６
を含む。

【００１３】いくつかの態様では、前述の単離したＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合
ペプチドは加水分解できない。好ましい非水解生ペプチドは、Ｄ‐アミノ酸を含
むペプチド、−ｐｓｉ［ＣＨ_２ＮＨ］−還元アミドペプチド結合を含むペプチド
、−ｐｓｉ［ＣＯＣＨ_２］−ケトメチレンペプチド結合を含むペプチド、−ｐｓ
ｉ［ＣＨ（ＣＮ）ＮＨ］−（シアノメチレン）アミノペプチド結合を含むペプチ
ド、−ｐｓｉ［ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）］−ヒドロキシエチレンペプチド結合を含む
ペプチド、−ｐｓｉ［ＣＨ_２Ｏ］−ペプチド結合を含むペプチド、−ｐｓｉ［Ｃ
Ｈ_２Ｓ］−チオメチレンペプチド結合を含むペプチドからなる群から選択される
。

【００１４】また、本発明の１つの側面においては、前述の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２
ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドおよび非ＭＡＧＥ‐Ａ１２腫瘍抗原の１個または２
個以上の単離したＨＬＡクラスＩまたはクラスＩＩ結合ペプチドを含む組成物も
提供される。好ましくは、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドおよ
び非ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドがポリトープポリペプチドとして組
合わされる。

【００１５】本発明の他の側面においては、前述のペプチドをコードする単離された核酸が
提供される。この核酸はＭＡＧＥ‐Ａ１２の全長をコードしていない。ある態様
では、核酸は、配列番号１のヌクレオチド配列のフラグメントを含む。本発明で
は、発現ベクターも提供される。発現ベクターは、プロモータに実施可能にリン
クしている前述の単離された核酸を含む。ある態様では、発現ベクターはＨＬＡ
Ｃｗ*０７分子をコードする核酸も含む。本発明の他の側面では、前述の核酸を
トランスフェクトまたはトランスフォームした宿主細胞、または、発現ベクター
が提供される。ある態様では、宿主細胞もＨＬＡ-Ｃｗ*０７分子を発現している
。

【００１６】本発明のさらなる他の側面においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチ
ドの特異的Ｔリンパ球を含むＴリンパ球集合体を選択的に濃縮する方法が提供さ
れている。この方法は、Ｔリンパ球集合体を含むＴリンパ球源を、ＭＡＧＥ‐Ａ
１２ＨＬＡ結合ペプチドとＨＬＡ分子の複合体を提示する剤（ａｇｅｎｔ）を
、Ｔリンパ球集合体にＭＡＧＥ‐Ａ１２結合ペプチド特異Ｔリンパ球を選択的に
濃縮するのに充分量接触させることを含む。ある態様では、この剤は、ＭＡＧＥ
‐Ａ１２蛋白またはそのＨＬＡ結合フラグメントに接触した抗原提示細胞である
。他の態様では、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは、（ｉ）配列番号２
のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のアミノ
酸配列を含むペプチド、および、（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチドの
機能的変異体からなる群から選択される。

【００１７】本発明のさらに他の側面においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾
患の診断方法も提供される。この方法は、患者から分離された生物学的サンプル
をＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに特異的な剤と接触させ、剤とＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドとの相互作用を疾患の判定として測定すること
を含む。ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは、（ｉ）配列番号２のアミノ
酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を
含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチドの機能的変異
体からなる群から選択するのが好ましい。

【００１８】本発明の他の側面においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの発現
を特徴とする疾患の診断方法が提供される。この方法は、患者から分離された生
物学的サンプルを複合体に結合する剤と接触させ、複合体と剤との結合を、疾患
の決定因子として定量することを含む。ある態様では、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬ
Ａ結合ペプチドは、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペ
プチド、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）
（ｉ）および（ｉｉ）のペプチドの機能的変異体からなる群から選択される。

【００１９】本発明のさらに他の側面においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾
患を有する患者の治療方法が提供される。この方法は、疾患を改善するのに充分
な量のＭＡＧＥ‐Ａ１２結合ペプチドを患者に投与することを含む。ある態様で
は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配
列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む
ペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチドの機能的変異体か
らなる群から選択する。本発明の他の側面によると、ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾患を有す
る患者の治療方法が提供される。この方法は、単離したＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬ
ＡクラスＩ結合ペプチドおよび非ＭＡＧＥ‐Ａ１２腫瘍抗原の単離されたＨＬＡ
クラスＩまたはクラスＩＩ結合ペプチドを含む組成物を、疾患の改善に充分な量
投与することを含む。

【００２０】本発明のさらなる他の側面においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする
疾患を有する患者の治療方法が提供される。この方法は、患者の体内でＨＬＡ分
子とＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの複合体の存在を選択的に増加させ
る剤を疾患の改善に充分な量、患者に投与することを含む。ある態様では、剤は
ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを含む。好ましい態様においては、ＭＡ
ＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列のフラ
グメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むペプチド
、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチドの機能的変異体からなる群
から選択する。

【００２１】本発明のさらなる他の側面においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする
疾患を有する患者の治療方法が提供される。この方法は、ＨＬＡ分子とＭＡＧＥ
‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの複合体に特異的なＴリンパ球である、自己由来
Ｔリンパ球を疾患の改善に充分な量、患者に投与することを含む。いくつかの態
様においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは、（ｉ）配列番号２の
アミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸
配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチドの機能
的変異体からなる群から選択する。

【００２２】また、本発明の他の側面においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド
の機能的変異体を同定する方法が提供される。この方法は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２
ＨＬＡ結合ペプチド、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドに結合す
るＨＬＡ結合分子、およびＨＬＡ結合分子に提示されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬ
Ａ結合ペプチドにより刺激されるＴ細胞を選択すること；ＭＡＧＥ‐Ａ１２Ｈ
ＬＡ結合ペプチドの第一のアミノ酸残基を変異させペプチド変異体を調整するこ
と；および、ペプチド変異体とＨＬＡ結合分子との結合およびＴ細胞の刺激を測
定することを含み、ペプチド変異体とＨＬＡ結合分子との結合およびＨＬＡ結合
分子により提示されたペプチド変異体によるＴ細胞の刺激は、このペプチド変異
体が機能的変異体であることを示す。ある態様では、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ
結合ペプチドは、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプ
チド、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むペプチドからなる群から選択す
る。他の態様では、この方法は、機能的変異体によるＴ細胞の刺激作用の有効性
を判定するために、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドによるＴ細胞の刺激
と、機能的変異体によるＴ細胞の刺激とを比較する工程を含む。また、この方法
で同定されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの単離された機能的変異体
も提供する。

【００２３】本発明の他の側面においては、前述のＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド
と選択的に結合する単離されたポリペプチドで、この単離されたポリペプチドが
ＨＬＡ分子でないものが提供される。いくつかの態様では、単離されたポリペプ
チドは抗体、好ましくはモノクローナル抗体である。他の態様では、単離された
ポリペプチドは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）_２フラグメントまたはＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに選択的なＣＤＲ３領域を含むフラグメントを
含む群から選択される抗体フラグメントである。

【００２４】本発明のさらに他の側面においては、ＨＬＡ分子とＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ
結合ペプチドの複合体に選択的に結合する単離されたＴリンパ球が提供される。
いくつかの態様では、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択する。

【００２５】本発明のさらなる他の側面においては、ＨＬＡ分子とＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬ
Ａ結合ペプチドを含む単離された抗原提示細胞が提供される。ある態様では、Ｍ
ＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは、（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列のフ
ラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むペプチ
ド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチドの機能的変異体からなる
群から選択する。

【００２６】本発明のさらに他の側面においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド
ミメティックの候補(candidate)の同定方法が提供される。この方法は、ＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを結合するＨＬＡ分子を提供すること、ＨＬＡ
分子を試験分子に接触させること、および、試験分子のＨＬＡ分子への結合を定
量することを含み、ここで、ＨＬＡ分子に結合した試験分子がＭＡＧＥ‐Ａ１２
ＨＬＡ結合ペプチドミメティックの候補である。いくつかの態様では、この方
法は、ＨＬＡ分子とミメティック候補の複合体を形成すること、ＨＬＡ分子とＭ
ＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの複合体に結合するＴ細胞に複合体を接触
させること、および、Ｔ細胞の活性化を定量することを含む。これらの方法のあ
るものでは、Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞によるインターフェロン
γの産生、Ｔ細胞による腫瘍壊死因子の産生、および標的細胞のＴ細胞による細
胞溶解からなる群から選択される特性で示される。

【００２７】本発明のさらなる側面においては、ワクチン組成物が提供される。このワクチ
ン組成物は、前述のＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド、前述のＴリンパ球
、前述の抗原提示細胞、および／または前述の単離された核酸分子を含むことが
できる。ある態様では、前述のワクチン組成物は、アジュバントおよび／または
薬学的に許容される担体を含む。

【００２８】本発明の他の側面においては、１個または２個以上の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ
１２ＨＬＡ結合ペプチド、または、ＨＬＡクラスＩ分子に結合するその機能的
変異体を含むタンパク質マイクロアレイが提供される。機能的変異体は、１個ま
たは２個以上のアミノ酸の付加、置換または欠失を含む。いくつかの態様では、
単離したＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドは配列番号６のアミノ
酸配列を含む。他の態様では、単離したＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合
ペプチドは配列番号４、配列番号５、およびこれらの機能的変異体からなる群か
ら選択したアミノ酸配列を含む。この様なマイクロアレイの診断的適用、とくに
癌の診断への利用も提供される。診断方法は、疾患を有する疑いのある患者から
分離した生物学的サンプルをタンパク質マイクロアレイと接触させること、およ
び、生物学的サンプルの構成要素と分離したＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ
結合ペプチドの結合を測定することを含む。ある態様では、生物学的サンプルの
構成要素は、抗体、Ｔリンパ球、およびＨＬＡ分子からなる群から選択する。好
ましい疾患は癌である。

【００２９】また、本発明は、ここに記載された組成物のいずれか１つまたは２つ以上を含
む医薬製剤を提供する。このような医薬製剤は、薬学的に許容される溶媒担体、
または、賦形剤を含むことができる。また、この様な組成物を医薬品の調整、と
くに癌治療用医薬品の調整に利用することも提供される。前述の方法および組成物において、ＨＬＡ分子は、好ましくはＨＬＡＣｗ^*０
７、そしてより好ましくはＨＬＡＣｗ^*０７０１である。ここで疾患とは、膀胱
癌、メラノーマ、食道癌、肺癌、頭部および頚部の癌、乳癌、結腸直腸癌、骨髄
腫、脳腫瘍、肉腫、前立腺癌および腎癌などの癌を含む。これらおよび本発明の他の目的は、本発明の詳細な説明によって、さらに詳細
に説明される。

【００３０】（図面の簡単な説明）図１は、ＣＴＬ５０１Ｄ／１９による自己由来および異種遺伝子型のＨＬＡ
Ｃｗ^*０７陽性腫瘍株の認識を図解している：（Ａ）溶解、（Ｂ）ＴＮＦの放出
。図２は、ＣＴＬ５０１Ｄ／１９がＭＡＧＥ‐１２によりコードされＨＬＡ-Ｃ
ｗ７により提示された抗原を認識することを示している。図３は、ＣＴＬ５０１Ｄ／１９により認識された抗原ペプチドをコードする
ＭＡＧＥ‐Ａ１２の領域の同定を示している。図４は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ペプチドＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号４）およ
びＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号６）を適用した自己由来細胞株ＬＢ‐８３１‐
ＥＢＶのＣＴＬ５０１Ｄ／１９による溶解を表示している。

【００３１】（発明の詳細な説明）本発明は、いくつかがＨＬＡクラスＩ分子により提示され、ＣＤ８^＋Ｔリンパ
球の増殖および活性化を刺激する、単離したＭＡＧＥ‐Ａ１２ペプチドを提供す
る。このようなペプチドを、ここでは、「ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチ
ド」および「ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチド」および「ＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２ＨＬＡペプチド」と呼ぶ。従って、本発明の１つの側面は、配列番
号６のアミノ酸配列を含む単離されたペプチドである。

【００３２】以下の例はＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドであるペプチドの単離を示
す。これらのペプチド例は、配列番号１の核酸の転写産物を処理したものである
。従って、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドが最終的な提示形態に処理さ
れる転写産物は、ＨＬＡ結合ペプチドを抱合する限り、いかなる長さであっても
、いかなる配列であってもよいと当業者に理解される。ある例では、ＨＬＡ結合
ペプチドは、配列番号４、５または６に記載されたアミノ酸配列を有するＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを含む。以下の例に例証されているように、ア
ミノ酸８個程度の小さなペプチドまたはタンパク質は、適切に処理され、ＨＬＡ
クラスＩ分子に提示され、ＣＤ８^＋Ｔリンパ球を効果的に刺激する。配列番号４
、５または６のペプチドは、いずれか一方の末端または両方の末端に付加された
、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個または１１
個以上のアミノ酸を有してもよい。付加したアミノ酸はＭＡＧＥ‐Ａ１２ポリペ
プチド（配列番号２）に相当することもでき、または、無関係であることもでき
る。当該技術で良く知られているとおり、このようなペプチドの抗原部分は、Ｈ
ＬＡクラスＩ分子による提示のための生理学的条件下で開裂する。

【００３３】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ポリペプチドから由来する追加のＨＬＡ結合ペプチドは、Ｈ
ＬＡ−Ｃｗ*０７分子により提示された場合免疫応答を起こすかもしれない。本
発明は、このようなＭＡＧＥ‐Ａ１２ポリペプチドの免疫原性フラグメントを全
て抱合する。

【００３４】上記したとおり、本発明はＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの機能的変
異体を抱合する。本明細書では、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの「機
能的変異体」または「変異体」は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの最
初のアミノ酸配列の１個または２個以上の修飾を含み、ここに開示したＨＬＡク
ラスＩへの結合特性、ならびにＣＤ８^＋Ｔリンパ球の増殖および／または活性化
を刺激する能力を保っている分子である。ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチ
ドの機能的変異体を創出する修飾は、例えば、１）ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結
合ペプチドの、発現システムでのペプチド安定性またはＨＬＡペプチド結合など
のタンパク質‐タンパク質結合の安定性などの特性の増強；２）ＭＡＧＥ‐Ａ１
２免疫原性ポリプチドに、抗原性エピトープの付加または検出可能部分の付加な
どの新たな活性または特性の提供；または３）同様または類似のＴ細胞刺激特性
を産出する異なるアミノ酸配列の提供のために行なうことができる。ＭＡＧＥ‐
Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの修飾は、ペプチドをコードする核酸で行うことが
でき、欠失、ポイントミューテーション、切断、アミノ酸置換およびアミノ酸の
付加を含むことができる。あるいは、修飾は、開裂、リンカー分子（linker mol
ecule）の付加、ビオチンなどの検出部分の付加、脂肪酸の付加、１つのアミノ
酸の他のアミノ酸への置換、および、それに類似のものなど、ポリペプチドに直
接行うことができる。また、修飾は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドの
アミノ酸配列の全体または一部を含む融合タンパク質を含む。

【００３５】ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドのアミノ酸配列は、天然由来であって
もなくてもよく、つまり、これらが天然のＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチ
ド分子を含んでもよく、または、アミノ酸配列が提示されたときに細胞溶解性Ｔ
細胞を刺激する能力を保ち、および、ＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子などのＨＬＡクラ
スＩ分子への結合特性を保つ限りにおいて修飾された配列を含んでも良い。例え
ば、この状況においては、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドは、ＭＡＧＥ
‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドおよび無関係なアミノ酸配列との融合タンパク、
配列番号４、５および６に示されたアミノ酸配列の合成ペプチド、標識ペプチド
、ＭＡＧＥ‐Ａ１２発現癌の患者から単離したペプチド、ＭＡＧＥ‐Ａ１２を発
現している培養細胞から単離したペプチド、非ペプチド分子に結びついたペプチ
ド（例えばある薬物輸送システムにおいて）、および、配列番号６のアミノ酸配
列を含む他の分子であってもよい。

【００３６】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは非水解性であるのが好ましい。この
ようなペプチドを提供するために、１個または２個以上のＤ‐アミノ酸を含むペ
プチドまたは１個または２個の非水解性ペプチド結合がリンクするアミノ酸を含
むペプチドなどの非水解性ペプチドのライブラリーからＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬ
Ａ結合ペプチドを選択してもよい。あるいは、ＣＤ８^＋Ｔリンパ球の誘導に最適
なペプチドを選択してから、そのようなペプチドをプロテアーゼによる水解性を
低減するのに必要な修飾をおこなってもよい。例えば、タンパク分解性開裂の感
受性を決定するために、ペプチドを標識し、細胞抽出物または精製プロテアーゼ
と培養してから、どのペプチド結合がタンパク分解に対して感受性であるかを、
例えば、ペプチドおよびタンパク分解性フラグメントのシーケンシングにより決
定するために単離してもよい。あるいは、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチ
ドのアミノ酸配列をプロテアーゼパネルの既知の特異開裂部位と比較して感受性
である可能性のあるペプチド結合を同定することができる。このようなアッセイ
の結果に基づき、タンパク分解に感受性のある個々のペプチド結合をペプチドの
ｉｎｖｉｔｒｏでの合成により非水解性のペプチド結合と置換することができ
る。

【００３７】当該技術分野においては、多数の非水解性ペプチド結合が、そのような結合を
含むペプチドの合成手順とともに知られている。非水解性結合は、−ｐｓｉ［Ｃ
Ｈ_２ＮＨ］−還元アミドペプチド結合、−ｐｓｉ［ＣＯＣＨ_２］−ケトメチレン
ペプチド結合、−ｐｓｉ［ＣＨ（ＣＮ）ＮＨ］−（シアノメチレン）アミノペプ
チド結合、−ｐｓｉ［ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）］−ヒドロキシエチレンペプチド結合
、−ｐｓｉ［ＣＨ_２Ｏ］−ペプチド結合、および−ｐｓｉ［ＣＨ_２Ｓ］−チオメ
チレンペプチド結合を含む。

【００３８】ペプチドの非ペプチド類似物、例えば、安定した構造または低い生分解性を提
供するものも考慮される。ペプチドミメティック類似物は、選択したＭＡＧＥ‐
Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを基に１個または２個以上の残基を非ペプチド部分
と交換することで調整することができる。好ましくは、非ペプチド部分は、ペプ
チドがその天然のコンファメーション（confirmation）を保ち、または、好まし
い、例えば生物活性コンファメーションを固定することを可能にする。ペプチド
から非ペプチドミメティック類似物を調整する方法の１つの例がNachman et al.
、Regul. Pept. 57:359-370 (1995)に記載されている。ペプチドミメティックは
、また、合成化合物のライブラリー（例えば有機低分子のコンビナトリアルライ
ブラリー）または天然分子から、そのような分子のＨＬＡ結合特性および／また
はＴ細胞刺激特性に従って選択することもできる。ライブラリーからＭＡＧＥ‐
Ａ１２免疫原性ポリペプチドの類似物を同定するための、結合測定法などのアッ
セイは、当技術分野でよく知られている。ここで用いているペプチドは、前述の
全てのものを抱合する。

【００３９】変異体がＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドのアミノ酸（例えば配列番号
４、５または６）の変化を伴う場合、アミノ酸の同類置換、つまり、荷電、疎水
性、コンフォメーションなどの本来のアミノ酸特性を保った置換を有するＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドの機能性変異体が通常好ましい。アミノ酸の同
類置換の例は、次の群の中のアミノ酸になされた置換を含む：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ
、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（
ｆ）Ｑ、Ｎ；および（ｇ）Ｅ、Ｄ。

【００４０】ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドの機能的変異体を同定する他の方法が
StromingerおよびWucherpfennigの公開されたＰＣＴ出願（ＵＳ／９６／０３１
８２）で提供されている。これらの方法は、潜在的エピトープを比較することが
できるアミノ酸配列モチーフの成長を基にしている。各モチーフは、限定された
セットのアミノ酸配列を記述しており、その各（相対）位置での残基は、（ａ）
１個の残基に限定されるか、（ｂ）限定されたセットの残基の中で変化できるか
、または（ｃ）すべての可能な残基の中で変化できる。例えば、モチーフは、第
一位の残基がバリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニンまたはフェニルアラ
ニンの各残基のいずれかであってもよく；第２位の残基がヒスチジンでなければ
ならず；第３位の残基がいずれのアミノ酸でもよく；第４位の残基がバリン、ロ
イシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプ
トファンの各残基のいずれかであってもよく；第５位の残基がリジンでなければ
ならないことを特定してもよい。

【００４１】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの機能的変異体のための配列モチーフ
は、主要組織適合複合体ＨＬＡ-Ｃｗタンパク質の結合ドメインまたは結合ポケ
ット、および／またはここに開示されたＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチド
のＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）の接触点の分析により開発することができる。Ｈ
ＬＡクラスＩ結合ポケットの形成に関与する残基の詳細な構造分析を提供するこ
とにより、当業者は、ＨＬＡクラスＩタンパク質のいずれかに結合する配列モチ
ーフを予測することができる。

【００４２】これらの配列モチーフを検索、評価または設計の基準として用いることにより
、当業者は特定のＨＬＡ分子に結合し、Ｔ細胞受容体と相互作用し、Ｔ細胞の応
答を誘導することに対する合理的な見込みを有するペプチドのクラス（ここで開
示したＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの機能的変異体）を同定すること
ができる。これらのペプチドはここで記載したとおりに合成し、活性を試験する
ことができる。純粋な配列相同性（抗原的には類似しているが、配列が明らかに
異なる多くのペプチドが除外される）または無制限な「同類(conservative)」置
換を有する配列相同性（臨界高次保存部位で異なる多くのペプチドが許容される
）に対し、これらのモチーフの使用は、当業者が疾病の治療への潜在的な適用の
ためのペプチドを評価できる方法である。

【００４３】 StromingerおよびWucherpfennigのＰＣＴ出願およびそこに引用されている引
例には、全て引例として組込むが、ＨＬＡクラスＩＩおよびＨＬＡクラスＩＩペ
プチドの残基と接触するＴＣＲ結合ポケットが記載されている。同様に、ＨＬＡ
クラスＩおよび／またはＴＣＲ結合ポケット内に結合する可能性が高い、不変ま
たは特定の置換しか許容しない残基を保存することで、ＨＬＡクラスＩおよびＴ
細胞受容体への結合を保つＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの機能的変異
体を調整できる。タンパク質配列中での１個または２個以上の抗原性ペプチドの位置の特定は、
結合ポテンシャルについての確立された法則により行われるＨＬＡペプチド結合
予測により支援することができる（例えばParker et al、J. Immunol. 152:163、1
994; Rammensee et al.、Immunogenetics 41:178‐228、1995）。ＨＬＡ結合予測
は、http://bimas.dcrt.nih.govのNational Institutes of Health World Wide
Web siteからインターネットで入手できるアルゴリズムを用いて都合よく行うこ
とができる。

【００４４】このように、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドの機能的変異体の同定方
法が提供される。一般的に、この方法は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチ
ド、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに結合するＨＬＡクラスＩ結合分子
、およびＨＬＡクラスＩ結合分子により提示されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結
合ペプチドにより刺激されたＴ細胞の選択を含む。好ましい態様では、ＭＡＧＥ
‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドは配列番号６のアミノ酸配列を含む。さらに好ま
しくは、このペプチドは、配列番号４、配列番号５または配列番号６のアミノ酸
配列からなる。ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの第一のアミノ酸残基は
、ペプチド変異体を調整するために変異される。アミノ酸残基は、上述したＨＬ
ＡおよびＴ細胞受容体の接触点の原則に従って変異することができる。ペプチド
変異体の合成、変異核酸分子を用いたペプチド変異体の組換えによる産生、およ
び、それに類したものなど、ペプチド変異体を調整するあらゆる方法を使うこと
ができる。

【００４５】次に、ペプチド変異体のＨＬＡクラスＩ結合分子への結合および／またはＴ細
胞の刺激を標準的な手順により測定する。例えば、以下に例示してあるように、
ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに結合するＨＬＡクラスＩ分子を含む抗
原提示細胞とペプチド変異体を接触させ、ペプチド変異体と抗原提示細胞の複合
体を形成することができる。この複合体は、次に、ＨＬＡクラスＩ結合分子に提
示されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを認識するＴ細胞に接触させる
ことができる。Ｔ細胞は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする条件を有する患
者から得ることができる。Ｔ細胞によるペプチド変異体の認識は、ＴＮＦまたは
ＩＦＮγの産生などのＴ細胞刺激の指標を測定することで決定できる。

【００４６】ペプチド変異体のＨＬＡクラスＩ結合分子への結合および／またはＨＬＡクラ
スＩ結合分子により提示されたペプチド変異体によるＴ細胞の刺激は、そのペプ
チド変異体が機能的変異体であることを示している。この方法は、また、ＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドによるＴ細胞の刺激と、機能的変異体によるＴ
細胞の刺激を、機能的変異体によるＴ細胞の刺激の有効性の判定として比較する
ステップを含むことができる。機能的変異体をＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペ
プチドに比較することで、Ｔ細胞刺激特性の高いペプチドを調整することができ
る。前述のいずれかの方法で調整されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの
変異体は、必要に応じて、アミノ酸配列を決定し、それにより、このような変異
体をコードするヌクレオチド配列を推定するためにシーケンスすることができる
。

【００４７】従って、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチド、または、対立変異体を含む
その変異体をコードするこれらの核酸配列もまた、本発明の一部である。ＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドをコードする核酸のスクリーニングにおいて、
サザンブロットまたはノザンブロットなどの核酸ハイブリダイゼーションを、ス
トリンジェントな条件で、３２Ｐプローブと共に行なってもよい。ここで「スト
リンジェントな条件」とは、当該技術でよく知られているパラメーターのことを
言う。核酸ハイブリダイゼーションのパラメーターは、このような方法をまとめ
た参考書、例えばMolecular Cloning: A Laboratory Manual、J. Sambrook、et al
.、eds.、Second Edition、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Ha
rbor、New York、1989、またはCurrent Protocols in Molecular Biology、F.M. Aus
ubel、et al.、eds.、 John Wiley & Sons、Inc.、New Yorkで見出してもよい。典型
的なストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーションバッファー（３．５ｘ
ＳＳＣ、０．０２％Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％ポリビニルピロリドン、０．０２
％ウシ血清アルブミン、２５ｍＭＮａＨ_２ＰＯ_４（ｐＨ７）、０．５％ＳＤ
Ｓ、２ｍＭＥＤＴＡ）中における６５℃でのハイブリダイゼーションを含む
。ＳＳＣは０．１５Ｍ塩化ナトリウム／０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ
７であり；ＳＤＳはドデシル硫酸ナトリウムであり；ＥＤＴＡはエチレンジアミ
ン四酢酸である。ハイブリダイゼーション後、ＤＮＡがその上にトランスファー
された膜は例えば室温で２ｘＳＳＣにより、次に、６８℃までの室温で０．１‐
０．５ｘＳＳＣ／０．１ｘＳＤＳにより洗浄することができる。ＭＡＧＥ‐Ａ１
２免疫原性ポリペプチドをコードするＤＮＡが最終的にトランスファーされる膜
を洗浄した後、この膜は、放射線信号を検出するためにＸ線フィルムに接して設
置することができる。

【００４８】使用可能で、同様の厳密さの程度を呈する他の条件、試薬などがある。当業者
はそのような条件に精通しており、従って、ここでは述べない。しかし、当業者
は、本発明のＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドをコードする核酸の相同体
および対立体（allele）を明瞭に同定することを可能にするように条件を操作す
ることができると理解される。当業者は、このような分子の発現について細胞お
よびライブラリーをスクリーニングし、このような分子を定法どおり単離した後
、適切な核酸分子を単離し、シーケンスするための方法をよく知っている。

【００４９】本発明は、また、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドの同じアミノ酸残基
をコードする代替コドンを含む核酸配列を用いることも含む。例えば、ここで開
示されているように、ペプチドＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号４）は、ＭＡＧＥ
‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドである。ロイシン残基は、コドンＣＵＡ、ＣＵＣ
、ＣＵＧ、ＣＵＵ、ＵＵＡおよびＵＵＧでコードできる。６個のコドンのそれぞ
れは、ロイシン残基をコードすることに関しては同等である。従って、当業者か
ら見れば、ロイシンをコードするヌクレオチドトリプレットのいずれかを用いて
、タンパク質合成装置を、ｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏで、ロイシン
残基の組込みへ誘導してもよいことは明らかである。同様に、配列番号４のＭＡ
ＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを含む他のアミノ酸残基をコードするヌクレ
オチド配列トリプレットは：ＧＵＡ、ＧＵＣ、ＧＵＧおよびＧＵＵ（バリンコド
ン）；ＧＧＵ、ＧＧＡ、ＧＧＧ、ＧＧＣ（グリシンコドン）；ＵＡＣおよびＵＡ
Ｕ（チロシンコドン）を含む。他のアミノ酸残基も同様に複数のヌクレオチド配
列でコードされてもよい。従って、本発明は、遺伝子コードの縮重により、コド
ン配列において天然のＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドをコードする核酸
とは異なる、縮重した核酸を包含する。

【００５０】ＭＡＧＥ‐Ａ１２をコードする好ましい核酸は、ここで記載したＨＬＡ結合ペ
プチドなどのＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドを好んで発現するものであ
る。本発明のＭＡＧＥ‐Ａ１２核酸は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ポリペプチド全体をコ
ードするのではなく、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドをコードするヌク
レオチド配列を含む。

【００５１】本発明はまた、１個または２個以上のヌクレオチドの付加、置換および欠失を
含む核酸分子の修飾も提供する。好ましい態様では、これらの修飾した核酸分子
および／またはそれがコードするポリペプチドは、抗原性、酵素活性、受容体結
合、ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子によるペプチドの結合による複合体形
成などの、修飾しなかった核酸分子および／またはポリペプチドの少なくとも１
つの活性または機能を保っている。ある態様では、修飾した核酸分子は修飾した
ポリペプチド、好ましくは本発明においてここに別記されたアミノ酸の同類置換
を有するポリペプチドをコードする。修飾した核酸分子は、修飾していない核酸
分子と構造的に関連しており、好ましい態様では、修飾した核酸分子および修飾
していない核酸分子が当業者に知られるストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするように、修飾していない核酸分子と充分に構造的に関連している。

【００５２】例えば、１つのアミノ酸の変化を有するポリペプチドをコードする修飾した核
酸分子を調整することができる（例えば、ＨＬＡ結合のための接触点であるアミ
ノ酸は好ましくない）。これらの核酸分子はそれぞれ、ここに記載されたような
遺伝子コードの縮重に対応するヌクレオチドの変化を除く、１つ、２つまたは３
つのヌクレオチドの置換を有することができる。同様に、２つのアミノ酸の変化
を有するポリペプチドをコードする、たとえば２〜６個のヌクレオチドの変化を
有する修飾核酸分子を調整することができる。例えば、２および３、２および４
、２および５、２および６などのアミノ酸をコードするコドンにおけるヌクレオ
チドの置換を含む非常に多くのこのような修飾核酸分子は、当業者が容易に構想
できる。前述の例において、２つのアミノ酸のそれぞれの組み合わせは、修飾核
酸分子のセット、ならびにアミノ酸置換をコードするヌクレオチド置換に含まれ
る。追加の置換（つまり３個または４個以上）、付加または欠失（例えばストッ
プコドンまたは１個または２個以上のスプライスサイトの導入による）を有する
ポリペプチドをコードする追加の核酸分子もまた調製でき、当業者に容易に構想
できるものとして本発明に包含される。前述のいずれの核酸またはポリペプチド
も、定法どおりの実験により、ここに開示された核酸および／またはポリペプチ
ドとの構造的関係または活性を保持しているか否かを試験することができる。

【００５３】また、本発明は、この配列を発現ベクターにおいて用いること、ならびに、原
核性（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核性（例えば樹状細胞、ＣＨＯ細胞、Ｃ
ＯＳ細胞、酵母発現システム、および昆虫細胞における組換えバキュロウイルス
の発現）発現ベクターである、宿主細胞および宿主細胞株へのトランスフェクシ
ョンを抱合すると考えられる。発現ベクターは、適切な配列、つまりｓｕｐｒａ
と記載されている配列がプロモーターに作動可能にリンクしていることを要求す
る。さらに、ヒトＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子がＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ
結合ペプチドを発現することが見出されたため、発現ベクターはＨＬＡ− Ｃｗ^* ０７分子をコードする核酸配列もまた含んでもよい。（他のクラスＩまたはクラ
スＩＩ結合ペプチドについては、異なるＨＬＡ分子を用いることができる。）ベ
クターが両方のコーディング配列を含む状況では、いずれの配列も正常に発現し
ない細胞へのトランスフェクションに用いることができる。ＭＡＧＥ‐Ａ１２
ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドをコードする配列は、例えば、宿主細胞がすでにＨ
ＬＡ− Ｃｗ^*０７分子を発現している場合に単独で用いてもよい。勿論、２つの
コーディング配列を含むベクターは要すればＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子を発現しな
い宿主細胞中で使用することができるので、使用し得る宿主細胞に特に制限はな
く、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドをコードする核酸はＨＬＡ
− Ｃｗ^*０７分子を発現する抗原提示細胞中で使用することができる。ここで用
いられているように、「ＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子」は、サブタイプであるＨＬＡ
Ｃｗ*０７（０７０１１，０７０１２）、０７０２、０７０３、０７０４、０７
０５、０７０６、０７０７、０７０８、０７０９、０７１０、０７１１、０７１
２、０７１３および０７１４を含む。ＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子は、また、Bodmer
et al.、Tissue Antigens 49:297、1996で見出すことができるサブタイプも含む
。現在同定されているＨＬＡ− Ｃｗ^*０７サブタイプの一覧表は、インターネッ
トのURL http://www.ebi.ac.uk/imgt/hlaにあるＩＭＧＴ／ＨＬＡデータベース
で見出すことができる。

【００５４】また、本発明は、この配列を組換えプラスミド、ファージミド、ウイルスなど
を含む発現ベクターにおいて用いること、ならびに、原核性（例えば、Ｅ．ｃｏ
ｌｉ）または真核性（例えば樹状細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、酵母発現シス
テム、および昆虫細胞における組換えバキュロウイルスの発現）発現ベクターで
ある、宿主細胞および宿主細胞株へのトランスフェクションを抱合すると考えら
れる。発現ベクターは、適切な配列、つまりｓｕｐｒａと記載されている配列が
プロモーターに作動可能にリンクしていることを要求する。ＭＡＧＥ−Ａ１２配
列を含む発現ベクターのｉｎｖｉｖｏおよび／またはｉｎｖｉｔｒｏでの輸
送は、当分野において知られている核酸輸送システムを介して行なうことができ
る（例えば、Eur. J. Immunol. 26(8):1951-1959、1996を参照）。アデノウイル
ス、アデノ関連ウイルス、ワクシニアウイスルおよび、ＮＹＶＡＣなどの弱毒ポ
ックスウイルスを含むポックスウイルス、セムリキ森林熱ウイスル、ベネズエラ
馬脳炎ウイルス、レトロウイルス、シンドビスウイルスおよびＴｙ-ウイルス様
粒子からなる群から選択されるウイルス、プラスミド（たとえば「裸の」ＤＮＡ
）、バクテリア（例えばＢａｃｉｌｌｅＣａｌｍｅｔｔｅＧｕｅｒｉｎバク
テリア、ＢＣＧ）などを含む組換えベクターが、このような輸送、例えば、ワク
チンとしての利用などで用いることができる。他のウイルス、発現ベクターなど
ワクチンの調整に有用なものは、当業者に知られている。ＭＡＧＥ−Ａ１２の輸
送システムは、マウスなどの標準的なシステムモデルで輸送システムの有効性を
試験できる。このシステムは、ヒトにおける治験でも試験することができる。

【００５５】さらに、非ＭＡＧＥ−Ａ１２腫瘍関連ペプチドも、ＨＬＡクラスＩおよびまた
はクラスＩＩを介した免疫応答の増強のために投与することができる。癌細胞が
１つの主要関連遺伝子以上のものを発現できることはよく知られている。当業者
には、特定の対象が追加の腫瘍関連遺伝子を発現しているかどうか決定し、次に
、このような遺伝子の発現産物に由来するＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡ
クラスＩＩ結合ペプチドをＭＡＧＥ−Ａ１２組成物およびワクチンに含めること
は、定法どおりの実験の範囲内である。とりわけ好ましいのは、「ポリトープ」として知られるエピトープのシリーズ
をコードした核酸である。エピトープは、天然の近傍配列を有しまたは有さずに
、連続的にまたはオーバーラップする形で配列していることができ（例えば、Th
omson et al.、Proc. Natl. Acad.Sci. USA 92:5845-5849、1995）を参照）、所望により、無関係なリンカー配列によって分離されていることがで
きる。ポリトープは処理されると個々のエピトープを産出し、これらのエピトー
プが免疫システムに認識され、免疫応答が惹起される。

【００５６】したがって、例えば、配列番号４、５および６などのＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬ
Ａ結合ペプチドで、ＭＨＣ分子により提示され、ＣＴＬ（またはヘルパーＴリン
パ球）により認識されたものは、他の腫瘍拒絶抗原由来のペプチドと組合せ（例
えばハイブリッド核酸またはポリペプチドの調整により）、「ポリトープ」を形
成することができる。免疫応答を誘導または増強するために投与できる典型的な
腫瘍関連ペプチド抗原は、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、
ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ
−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ
１２、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−
５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９、ＢＡＧＥ−１
、ＲＡＧＥ−１、ＬＢ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ、ＭＡＧＥ−Ｘｐ
２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ
４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、チロシナーゼ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、メラン
、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧ
Ｅ−Ｃ５、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ
−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１およびＣＴ−７を含む
腫瘍関連遺伝子およびコードされたタンパク質に由来する。例えば、腫瘍に特徴
的な抗原ペプチドは下表Ｉに列挙したものを含む。

【００５７】表１：代表的抗原

【表１】

【００５８】

【表２】

【００５９】

【表３】

【００６０】他のＨＬＡクラスＩおよびＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドの例は、当業者に知
られているはずであり（例えば、Coulie、Stem Cells 13:393-403、1995を参照）
、ここに開示したものと同様のやり方で本発明に用いることができる。当業者は
、１個または２個以上のＭＡＧＥ−Ａ１２ペプチドおよび１個または２個以上の
前述の腫瘍拒絶ペプチドを含むポリペプチド、またはこのようなポリペプチドを
コードする核酸を、分子生物学の標準的な手順に従って調整することができる。このように、ポリトープは、２つまたは３つ以上の潜在的に抗原性であるまた
は免疫応答を刺激できるペプチドであって、互いに様々な配置で（例えば連鎖、
オーバーラップ）つながっていることができるものである。ポリトープ（または
ポリトープをコードしている核酸）は、ポリトープが免疫応答を刺激、増強およ
び／または惹起する上での有効性を試験するために、標準的な免疫プロトコルで
、たとえば動物に投与することができる。

【００６１】ペプチドは、ポリトープを形成するために互いに直接または近傍配列を介して
つながることができ、ポリトープをワクチンとして用いることは当分野でよく知
られている（例えばThomson et al.、Proc. Natl. Acad. Sci USA 92(13):5845-5
849、1995; Gilbert et al.、Nature Biotechnol. 15(12):1280-1284、1997; Thoms
on et al.、J. Immunol. 157(2):822-826、1996; Tam et al.、J. Exp. Med. 171(1
):299-306、1990を参照）。例えばTamは、ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ結合
エピトープの両方からなるポリトープが、マウスモデルにおいて、首尾よく抗体
を産生させ、保護免疫を引き起こすことを示している。Tamはまた、エピトープ
の「列」を含むポリトープが処理され、個々のエピトープが生じ、ＭＨＣ分子に
より提示されＣＴＬにより認識されることを証明している。したがって、様々な
数および組合せのエピトープを含むポリトープを調整し、ＣＴＬによる認識およ
び免疫応答増加効率について試験することができる。

【００６２】腫瘍が腫瘍抗原のセットを発現し、それらのうちのあるサブセットのみがいず
れの患者の腫瘍にも発現され得ることはよく知られている。ポリトープは、特定
の患者に発現している腫瘍拒絶抗原のサブセットを代表するエピトープの異なる
組合せに対応して調整することができる。ポリトープはまた、腫瘍のタイプによ
り発現することが知られている広範なスペクトルの腫瘍拒絶抗原を反映して調整
することもできる。ポリトープは、このような治療を必要とする患者に、ポリペ
プチド構造として、または、当分野で知られている核酸輸送システムを用いて導
入することができる（例えばAllsopp et al.、Eur. J. Immunol. 26(8):1951-195
9、1996を参照）。アデノウイルス、ポックスウイルス、Ｔｙ-ウイルス様粒子、
アデノ関連ウイルス、プラスミド、バクテリアなどをこのような輸送に用いるこ
とができる。ポリトープ輸送システムを、輸送システムの効率を測定するために
マウスモデルで試験することができる。このシステムはまた、ヒトの治験でも試
験することができる。

【００６３】ヒトＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子がＭＡＧＥ−Ａ１２抗原性ポリペプチドを発現す
ることが見出されたので、発現ベクターはまた、ＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子をコー
ドする核酸配列を含んでもよい。ＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子に融合させたＭＡＧＥ
−Ａ１２免疫原性ポリペプチドを含むＨＬＡ／ペプチド可溶複合体の単鎖をコー
ドする核酸は、Lone et al.により記述されているように調整することができる
（J. Immunother. 21:283-294、1998）。ベクターが両方のコーディング配列を含む状況では、それをいずれの配列も正
常に発現していない細胞のトランスフェクションに用いることができる。ＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドをコードする配列は、例えば宿主細胞が既にＨ
ＬＡ− Ｃｗ^*０７分子を発現しているときなどに単独で用いてもよい。勿論、２
つのコーディング配列を含むベクターは要すればＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子を発現
しない宿主細胞中で使用することができるので、使用し得る宿主細胞に特に制限
はなく、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドをコードする核酸はＨ
ＬＡ− Ｃｗ^*０７分子を発現する抗原提示細胞中で使用することができる。

【００６４】ここで、「ベクター」は、異なる遺伝子環境間の輸送または宿主細胞での発現
のために所望する配列を制限と連結により挿入し得る多数の核酸のいずれであっ
てもよい。ベクターは典型的にはＤＮＡで構成されているが、ＲＮＡベクターも
利用可能である。ベクターは、アデノウイルス、ポックスウイルスおよびＢＣＧ
などのここで開示したプラスミド、ファージミド、バクテリアおよび、ウイルス
ゲノムを含むが、これに限定されるわけではない。クローニングベクターは、宿
主細胞内で複製し、または、宿主細胞のゲノムに統合された後に複製されること
ができ、さらに、ベクターが最終的な形で切断してもよい１つまたは２つ以上の
制限酵素認識部位で特徴付けられ、所望のＤＮＡ配列を新たな組換えベクターが
宿主細胞内での複製能力を維持するように連結してもよい。プラスミドのケース
では、所望配列の複製は宿主細菌内でのプラスミドのコピー数が増加するに連れ
て何度も起こるか、あるいは宿主が有糸分裂により再生するまでには１宿主当た
り一度のみ起こる。ファージのケースでは、複製は、溶菌期には積極的に、また
は、溶原期には消極的に起こるかもしれない。発現ベクターは、所望するＤＮＡ
配列が調節配列に作動可能につながるように制限と連結により挿入してもよく、
ＲＮＡ転写物として発現されてもよい。ベクターはさらにベクターによってトラ
ンスフォームまたはトランスフェクトされたまたはされない細胞の同定に用いる
のに好適な１個または２個以上のマーカー配列を含んでもよい。マーカーは、例
えば、抗生物質または他の化合物に対する抵抗性かまたは感受性の一方を増加ま
たは減少させるタンパク質をコードした遺伝子、活性が当分野で知られた標準的
なアッセイで検出できる酵素をコードする遺伝子（例えば、β−ガラクトシダー
ゼ、ルシフェラーゼまたはアルカリフォスファターゼ）、および、トランスフォ
ームまたはトランスフェクトされた細胞、宿主、コロニーまたはプラークの表現
型に明白な影響を及ぼす遺伝子（例えば緑色蛍光タンパク）を含む。好ましいベ
クターは、それらが作動可能につながっているＤＮＡフラグメント中に存在する
構造遺伝子産物の自己複製および発現が可能なものである。

【００６５】ここで、コーディング配列および調節配列が「作動可能」という場合は、それ
らは、コーディング配列の発現または転写を調節配列の影響または制御下におく
ような方法で共有結合している。コーディング配列が機能的タンパク質に翻訳さ
れることを所望する場合、２つのＤＮＡ配列は、調節配列の５’のプロモーター
の誘導がコーディング配列の転写をもたらし、この２つのＤＮＡ配列の結合の性
質が（１）フレームシフト変異の導入をもたらさず、（２）コーディング配列の
転写を導くためのプロモーター領域の能力に干渉せず、または（３）対応するＲ
ＮＡ転写物のタンパク質へ翻訳される能力に干渉しない場合に、作動可能につな
がっているという。従って、プロモーター領域が得られた転写産物が所望するタ
ンパク質またはポリペプチドへ翻訳されるようにこのＤＮＡ配列の転写を行うこ
とが可能な場合、プロモーター領域はコーディング配列に作動可能につながって
いる。上述したように、ある好ましい核酸は、ここに記載されたＨＬＡ結合ペプ
チドを含むＭＡＧＥ‐Ａ１２ポリペプチドのフラグメントしか発現しない。

【００６６】遺伝子発現に必要な調節配列の正確な特性は、種または細胞タイプにより異な
ってもよいが、一般的に、必ず、ＴＡＴＡボックス、キャップ配列、ＣＡＡＴ配
列などの転写および翻訳の開始にそれぞれ関連した５’非転写および５’非翻訳
配列を含まなければならない。とりわけ、このような５’非転写調節配列は作動
可能につながった遺伝子の転写制御のためのプロモーター配列を含むプロモータ
ー領域を含むことができる。また、調節配列は所望により、エンハンサー配列ま
たは上流活性化配列を含んでもよい。本発明のベクターは、任意に５’リーダー
配列またはシグナル配列を含んでもよい。適切なベクターの選択および設計は、
当業者の能力および裁量の範囲で行なう。

【００６７】発現に必要な要素を全て含んだ発現ベクターは商業的に入手可能であり、当業
者に知られている。例えばSambrook et al.、Molecular Cloning: A Laboratory
Manual、Second Edition、Cold Spring Harbor Laboratory Press、1989を参照。細
胞は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドをコードする異種ＤＮＡ（ＲＮＡ
）を細胞内に導入することにより遺伝子工学的に操作されている。この異種ＤＮ
Ａ（ＲＮＡ）は、宿主細胞に異種ＤＮＡを発現させるための転写要素の作動可能
な制御下に置かれる。

【００６８】哺乳類細胞におけるｍＲＮＡ発現のための好ましいシステムは、Ｇ４１８耐性
を与える遺伝子（安定的にトランスフェクトされた細胞株の選択を容易にする）
などの選択的マーカーおよびヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー
‐プロモーター配列を含むｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen、Carlsbad、CAより入手
可能）などである。さらに、霊長類またはイヌ細胞株での発現に好適なのは、プ
ラスミドを多コピー染色体外要素として維持することが容易なエプシュタインバ
ーウイルス（ＥＢＶ）複製起点を含むｐＣＥＰ４ベクター（Invitrogen）である
。他の発現ベクターは、ｉｎｖｉｔｒｏの転写を有効に刺激するポリペプチド
延長因子１αのプロモーターを含むｐＥＦ−ＢＯＳプラスミドである。このプラ
スミドはMishizumaおよびNagata （Nuc. Acids Res. 18:5322、1990）により記述
され、トランスフェクション実験におけるその利用は、例えばDemoulin （Mol.
Cell. Biol. 16:4710-4716、1996）により開示されている。さらに他の好ましい
発現ベクターは、Ｅ１およびＥ３タンパクが欠損している、Stratford-Perricau
detにより記載されたアデノウイルスである（J. Clin. Invest. 90:626-630、199
2）。免疫のためのタンパク発現にアデノウイルスを用いることは、Ｐ１Ａに対
する免疫のためのマウスへの皮内接種において、Warnier et alにより開示され
ている（Int. J. Cancer、67:303-310、1996）。

【００６９】本発明は、また、当業者が所望する１個または２個以上のベクターの発現の調
整を可能にする、いわゆる発現キットも抱合する。このような発現キットは、前
記の少なくとも２つの材料の、少なくとも個々に分割した部分を含む。他の構成
要素は所望により加えてもよい。ここに記載された発明は、多数の用途を有しており、そのうちのいくつかはこ
こに記載されている。第一に、本発明は当業者がＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリ
ペプチドの発現を特徴とする疾患を診断することを可能にする。これらの方法は
、生物学的サンプルにおけるＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド、または、
ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドとＨＬＡクラスＩ分子との複合体の発現
の測定を伴う。ペプチドまたはペプチドとＨＬＡクラスＩ分子との複合体の発現
は、抗体などの、ペプチドまたは複合体の結合パートナーによりアッセイするこ
とで測定できる。腫瘍生検などの生物学的サンプルにおけるＭＡＧＥ‐Ａ１２の
発現は、また、ＭＡＧＥ‐Ａ１２プライマーを用いた標準的なＰＣＲ増幅プロト
コルにより試験することができる。腫瘍での発現の例はここに表示されており、
ＭＡＧＥ‐Ａ１２の増幅のための典型的条件およびプライマーは、US serial no
. 09/018,422で見出すことができる。

【００７０】好ましくは、診断方法は、生物学的サンプルにおけるＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬ
Ａ結合ペプチドの存在を検出するために、対象から分離した生物学的サンプルを
、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの特異的剤と接触させることを伴う。
ここで「接触させる」とは、生物学的サンプルを剤に十分に近接させて、剤と生
物学的サンプル中に存在するＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドとの間に特
異的相互作用が可能なような適切な条件、例えば濃度、温度、時間、イオン強度
の下におくことを意味する。一般的に、剤を生物学的サンプルに接触させる条件
は、当業者に知られた、分子と生物学的サンプル中のその対応物（ｃｏｇｎａｔ
ｅ）（例えば、タンパクとその対応するレセプター、抗体とその対応する抗原タ
ンパク、核酸とその対応する相補配列）の間の特異的相互作用を容易にするため
の条件である。分子とその対応物間の特異的相互作用を容易にするための典型的
条件は、Low et alによる米国特許第５，１０８，９２１号に記載されている。

【００７１】生物学的サンプルはｉｎｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏに位置しているこ
とができる。例えば、生物学的サンプルは、ｉｎｖｉｖｏの組織であることが
でき、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原生ポリペプチドの特異的剤は、このような分子の
組織における存在を検出するために用いることができる。あるいは、生物学的サ
ンプルはｉｎｖｉｔｒｏに位置していることができる（例えば、血液サンプル
、腫瘍生検、組織抽出物）。特に好ましい態様においては、生物学的サンプルは
細胞を含むサンプル、より好ましくは、腫瘍細胞を含むサンプルであることがで
きる。

【００７２】本発明はさらにＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドまたはこのようなペプ
チドをコードする核酸を含む、核酸またはタンパクマイクロアレイを含む。本発
明のこの側面において、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの発現の測定、
および／または、このようなペプチドに結合する生物学的成分の同定のために、
マイクロアレイ技術の標準的技術が用いられる。生物学的サンプルの成分は、抗
体、ＨＬＡ分子、リンパ球（特にＴリンパ球）などを含む。プロテインにチップ
技術および固相タンパクアレイ（solid-phase protein array）技術を含む他の
名称でも知られているマイクロアレイ技術は、当業者によく知られており、固定
された基板上に同定されたペプチドまたはタンパク質のアレイを得ること、標的
分子または生物学的成分をペプチドの結合させること、および、こうした結合を
評価することに基づいているが、それに限定されるものではない。例えば、G. M
acBeath and S.L. Schreiber、“Printing Proteins as Microarrays for High-T
hroughput Function Determination,” Science 289(5485):1760-1763、2000を参
照。また、核酸アレイ、特にＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに結合する
アプタマーのアレイを、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの発現を特徴と
する条件を有する対象の同定などの診断的適用に用いることができる。

【００７３】マイクロアレイの基板は、ガラス、シリカ、アルミノケイ酸塩、ホウケイ酸塩
、アルミナおよび酸化ニッケルなどの金属酸化物、さまざまな粘土、ニトロセル
ロース、またはナイロンを含むが、それらに限定されるものではない。マイクロ
アレイ基板は、基板上のプローブ（ペプチドまたは核酸）の合成を促進する化合
物でコーティングされてもよい。基板上のカップリング剤またはカップリング基
（coupling agents or groups）は、基板の最初のヌクレオチドまたはアミノ酸
を共有結合するために用いることができる。様々なカップリング剤またはカップ
リング基が当業者に知られている。ペプチドまたは核酸プローブは、このように
、基板上の事前に設定したグリッドに直接合成することができる。あるいは、ペ
プチドまたは核酸プローブは基板上にスポットすることができ、このようなケー
スにおいては、プローブの基板への結合を促進する化合物で基板をコーティング
してもよい。これらの態様においては、事前に合成されたプローブは、好ましく
は接触プリント方法、またはインクジェットまたはピエゾ電気分配などの非接触
法によりプローブを基板上に塗布するためのコンピューター制御ロボットを利用
して、事前に設定された正確な容量およびグリッドパターンで基板に塗布される
。プローブは基板に共有結合してもよい。

【００７４】いくつかの態様においては、１個または２個以上の制御ペプチドまたは核酸分
子が基板に付着している。好ましくは、制御核酸分子は、結合特徴、試薬の品質
および効率、ハイブリダイゼーションの成否、および分析スレッシュホールドお
よび分析の成否などの因子の決定を可能にする。本発明はまた、当業者がＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原生ポリペプチドの発現を特徴
とする疾患を有する対象を治療することも可能にする。治療は、対象の中でＭＡ
ＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドとＨＬＡクラスＩ分子との複合体を増加させ
る剤の投与、および、このような複合体に特異的なＣＤ８^＋Ｔリンパ球の投与を
含む。上記の治療に有用な剤は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドおよび
それらの機能的変異体、このようなペプチドとＨＬＡクラスＩ結合分子（例えば
ＨＬＡＣｗ^*０７）との複合体、ＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドとＨＬ
ＡクラスＩ結合分子との複合体を有する抗原提示細胞、ＨＬＡおよびＭＡＧＥ‐
Ａ１２ポリペプチドの可溶シングルチェーンの融合体などを含む。本発明はまた
、当業者が、Ｔリンパ球集合体においてＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド
に特異的なＣＤ８^＋Ｔリンパ球を選択的に富化させることを可能にする。

【００７５】また、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの単離は、ＭＡＧＥ‐Ａ１２Ｈ
ＬＡ結合ペプチドをコードする核酸の単離または設計を可能にする。核酸は、ｉ
ｎｖｉｔｒｏ、または、原核性または真核性の宿主細胞におけるＭＡＧＥ‐Ａ
１２ＨＬＡ結合ペプチドまたはこのようなペプチドを含むタンパクの産生に用
いることができる。単離ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを得るために当
業者によく知られた様々な方法を用いることができる。例えば、ペプチドの産生
を引き起こすために発現ベクターを細胞に導入してもよい。他の方法では、コー
ドされたペプチドの産生を引き起こすために、ｍＲＮＡ転写物を細胞内に微量注
入しても、または、他の方法で導入してもよい。網状赤血球溶解システムなどの
細胞を含まない抽出物におけるｍＲＮＡの転写も、ペプチドを産生するために用
いてもよい。本発明のＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを含むペプチドは
、また、ｉｎｖｉｔｒｏで合成してもよい。当業者は、単離ＭＡＧＥ‐Ａ１２
ＨＬＡ結合ペプチドを得るためにペプチドを分離する公知の方法を容易に使用
することができる。これらは、免疫クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、サイズ排除
クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび免疫アフィニティー
クロマトグラフィーを含むが、これらに限定されるものではない。

【００７６】これらの単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドまたはペプチドと
ＨＬＡ− Ｃｗ*０７０１分子などのＨＬＡクラスＩ分子との複合体は、ＭＡＧＥ
‐Ａ１２免疫原性ポリペプチドの発現を特徴とする疾患の治療に有用なワクチン
の産生のためにアジュバントなどの材料と組合わせてもよい。さらに、ワクチン
は、トランスフェクトされた樹状細胞、トランスフェクトされたＢ細胞、非増殖
性のトランスフェクタントなどのＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド／ＨＬ
Ａ複合体を表面に発現している細胞から調整することができる。細胞がワクチン
として用いられる場合はすべて、これらの細胞は、ＣＤ８^＋リンパ球の刺激に必
要な構成要素の１つまたは両方のコーディング配列をトランスフェクトされた細
胞か、または、トランスフェクションなしで両方の分子をすでに発現している細
胞であることができる。ワクチンは、発現ベクターおよび、ＭＡＧＥ‐Ａ１２
ＨＬＡ結合ペプチド、その前駆体またはその融合タンパクをコードする裸のＤＮ
ＡまたはＲＮＡで、ｉｎｖｉｔｒｏで産生し、注射、粒子衝撃、経鼻吸入およ
びその他の方法で投与してもよいものを包含する。「裸の核酸」型のワクチンは
、裸の核酸によりコードされたペプチドに特異的なＣＴＬの産生を含む免疫応答
を引き起こすことが証明されている（Science 259:1745‐1748、1993）。

【００７７】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド、ならびに、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ
結合ペプチドとＨＬＡ分子の複合体は、また、当分野でよく知られた標準的な技
術を用いた、抗体の産生に用いてもよい。抗体産生の一般的な原則を記述した標
準的な参考文献は、Catty、D.、Antibodies、A Practical Approach、Vol. 1、IRL Pr
ess、Washington DC (1988); Klein、J.、Immunology: The Science of Cell-Non-C ell Discrimination、 John Wiley and Sons、New York (1982); Kennett、R.、et al
.、Monoclonal Antibodies、Hybridoma、A New Dimension In Biological Analyses、 Plenum Press、New York (1980); Campbell、A.、Monoclonal Antibody Technolog y、 in Laboratory Techniques and Biochemistry and Molecular Biology、Vol. 1
3 (Burdon、R. et al. EDS.)、Elsevier Amsterdam (1984); おおび Eisen、H.N.、M icrobiology、 third edition、Davis、B.D. et al. EDS. (Harper & Rowe、Philadel
phia (1980)を含む。

【００７８】本発明の抗体は、したがって、タンパク質、タンパク質のフラグメント、タン
パク質またはそのフラグメントおよび適切なＨＬＡクラスＩ分子を発現している
細胞などをポリクローナル抗体を誘導するために動物に投与することを含む様々
な方法のいずれかにより調整される。

【００７９】当分野でよく知られているように、意義深いことに、抗体分子のわずかな小部
分であるパラトープしか、抗体のそのエピトープへの結合に関与していない（一
般に、Clark、W.R. (1986) The Experimental Foundations of Modern Immunolog y Wiley & Sons、Inc.、New York; Roitt、I. (1991) Essential Immunology、7th E
d.、Blackwell Scientific Publications、Oxfordを参照）。例えば、ｐＦｃ’お
よびＦｃ領域は、補体カスケードのエフェクターであるが、抗原の結合には関与
していない。Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントと呼ばれる、ｐＦｃ’領域を酵素的に
切断した抗体、または、ｐＦｃ’領域がない状態で産生された抗体は、完全な抗
体の両方の抗原結合部位を保持している。同様に、Ｆａｂフラグメントと呼ばれ
る、Ｆｃ領域を酵素的に切断した抗体、または、Ｆｃ領域がない状態で産生され
た抗体は、完全な抗体分子の抗原結合部位の１つを保持している。さらに続ける
と、Ｆａｂフラングメントは、共有結合した抗体ライトチェーン、および、Ｆｄ
で示される抗体のヘビーチェーン部分からなる。Ｆｄフラングメントは、抗体の
特異性の主要な決定要素であり（１つのＦｄフラグメントは、抗体の特異性を損
なうことなく、１０個までの異なるライトチェーンと結合してもよい）、Ｆｄフ
ラグメントは、単離した場合、エピトープ結合能力を保持する。

【００８０】当分野でよく知られているように、抗体の抗原結合部分の中に、抗原のエピト
ープと直接相互作用する相補性決定領域（ＣＤＲ）および、パラトープの三次構
造を維持するフレームワーク領域（ＦＲ）がある（一般に、Clark、1986; Roitt、
1991を参照）。ＩｇＧ免疫グロブリンのヘビーチェーンＦｄフラグメントおよび
ライトチェーンの両方には、４つのフレームワーク領域（ＦＲ１〜ＦＲ４）があ
り、それぞれ３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）で分けられている。
ＣＤＲ、そして特にＣＤＲ３領域、そしてより特別にはＣＤＲ３ヘビーチェーン
は、抗体の特異性に大いに関与している。

【００８１】現在では当分野でよく確立されているが、哺乳類の非ＣＤＲ領域は、本来の抗
体のエピトープ特異性を保持したまま、同種または異種の抗体の類似の領域と交
換してもよい。これは、ヒト以外のＣＤＲがヒトＦＲおよび／またはＦｃ／ｐＦ
ｃ’領域と共有結合し、機能的な抗体を形成する「ヒト化」抗体の開発および使
用に最も明白に表われている。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、第５
，２２５，５３９号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６２号および
第５，８５９，２０５号を参照。このように、例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／０４３８１は、少なく
ともマウスＦＲ領域の一部分がヒト由来のＦＲ領域と置き換わったヒト化マウス
ＲＳＶ抗体の生産および利用について教示している。このような、抗原結合能力
を伴う完全な抗体のフラグメントを含むこのような抗体は、しばしば「キメラ」
抗体と呼ばれる。

【００８２】したがって、当業者に明らかなように、本発明はまたＦ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ
、ＦｖおよびＦｄフラグメント；Ｆｃおよび／またはＦＲおよび／またはＣＤＲ
１および／またはＣＤＲ２および／またはライトチェーンＣＤＲ３領域がヒトま
たはヒト以外の同等物の配列で置き換えられたキメラ抗体；ＦＲおよび／または
ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２および／またはライトチェーンＣＤＲ３領域が
ヒトまたはヒト以外の同等物の配列で置き換えられたキメラＦ（ａｂ’）_２フラ
グメント抗体；ＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２および／ま
たはライトチェーンＣＤＲ３領域がヒトまたはヒト以外の同等物の配列で置き換
えられたキメラＦａｂフラグメント抗体；ＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／
またはＣＤＲ２領域がヒトまたはヒト以外の同等物の配列で置き換えられたキメ
ラＦｄフラングメント抗体を提供する。本発明はまた、いわゆるシングルチェー
ン抗体、および、機能的ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するマウスにより産生
されたものなどの、ヒトモノクローナル抗体も含む。

【００８３】このような抗体は、例えば組織に発現したタンパク質の同定またはタンパク質
の精製に用いてもよい。抗体はイメージング（imaging）のために特殊な標識剤
と結合していてもよく、または、治療目的のために、メトトレキサート、放射性
ヨウ素化した化合物、リシンなどのトキシン、その他の細胞増殖抑制剤または細
胞溶解剤などを含むがそれに限定されない抗腫瘍剤と結合していてもよい。本発
明に従って調整した抗体は、また、好ましくは個々に記載されたペプチド／ＨＬ
Ａ複合体に特異的である。ここで「疾患」または「条件」が用いられている場合、ＭＡＧＥ−Ａ１２免疫
原性ポリペプチドが発現されているいかなる病理学的条件にも関連している。こ
のような疾患は、膀胱癌、メラノーマ、食道癌、肺癌、頭部および頚部の癌、乳
癌、結腸直腸癌、骨髄腫、脳腫瘍、肉腫、前立腺癌および腎癌を含む癌を含む。

【００８４】本開示に基づくいくつかの治療的アプローチは、対象の免疫システムによるＭ
ＡＧＥ−Ａ１２免疫原性ポリペプチド提示細胞への応答を誘導することが前提と
なっている。このようなアプローチの１つは、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペ
プチドとＨＬＡクラスＩ分子の複合体に特異的な自己由来ＣＤ８^＋Ｔ細胞を問題
となっている表現型の異常細胞を持つ対象に投与することである。このようなＣ
Ｄ８^＋Ｔ細胞をｉｎｖｉｔｒｏで産生するのは、当業者の能力の範囲内である
。一般的には、血液細胞などの、対象から採取した細胞サンプルを、複合体を提
示し、ＣＤ８^＋Ｔリンパ球の増殖を引き起こすことができる細胞と接触させる。
標的細胞は、トランスフェクトされたＣＯＳ細胞などのトランスフェクタント、
または、樹状細胞またはＢ細胞などのＨＬＡクラスＩ分子を有するトランスフェ
クトされた抗原提示細胞であることができる。これらのトラスフェクタントは、
その表面に所望する複合体を提示し、対象となるＣＤ８^＋Ｔリンパ球と一緒にし
た場合、その増殖を刺激する。ＣＯＳ細胞は、他の好適な宿主細胞と同様に広く
入手可能である。クローナルに増加した自己由来ＣＤ８^＋Ｔリンパ球は、次に、
対象に投与される。ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、次に、対象の免疫応答を刺激し、それに
より所望する治療目的が達成される。

【００８５】特異的ＣＴＬクローンを検出するために、ＭＨＣクラスＩ分子／ペプチド複合
体の蛍光発生テトラマーを用いた、抗原特異ＣＴＬクローンを選択するための別
の方法が最近報告された（Altman et al.、Science 274:94-96、1996; Dunbar et
al.、Curr. Biol. 8:413-416、1998）。簡潔に述べると、可溶性ＭＨＣクラスＩ分
子が、β_２−ミクログロブリンおよびクラスＩ分子に結合するペプチド抗原の存
在下、ｉｎｖｉｔｒｏでたたまれる。精製後、ＭＨＣ／ペプチド複合体は精製
され、ビオチンで標識される。テトラマーは、ビオチン化ペプチド−ＭＨＣ複合
体を標識されたアビジン（例えばフィコエリスリン）と共に、４：１のモル比で
混和し、形成する。次に、テトラマーを末梢血またはリンパ節などのＣＴＬ源に
接触させる。テトラマーは、ペプチド抗原／ＭＨＣクラスＩ複合体を認識するＣ
ＴＬに結合する。テトラマーが結合した細胞は、反応ＣＴＬを単離するために蛍
光活性化細胞ソーティングによりソートすることができる。単離したＣＴＬは、
次に、ここに記載されたように用いるため、ｉｎｖｉｔｒｏで増やすことがで
きる。

【００８６】細胞移入(adoptive transfer)（Greenberg、J. Immunol. 136(5): 1917、1986;
Riddel et al.、Science 257: 238、1992; Lynch et al、Eur. J. Immunol. 21: 14
03‑1410、1991; Kast et al.、Cell 59: 603‑614、1989）と呼ばれる
治療方法を詳述すると、所望する複合体を提示する細胞をＣＴＬと混合し、その
複合体に特異的なＣＴＬの増殖を導く。増殖したＣＴＬは、次に、特定の複合体
を提示する異常細胞のある種のものによって特徴づけられる細胞異常の対象に投
与される。ＣＴＬは、次に、異常細胞を溶解し、それにより所望する治療目的を
達成する。

【００８７】上述の治療法は、少なくとも対象のいくつかの異常細胞が、関連するＨＬＡ／
ＴＲＡ複合体を提示していることを想定している。これは、当分野において、特
定のＨＬＡ分子を提示している細胞を同定する方法、ならびに、適切な配列、こ
の場合は腫瘍関連遺伝子配列、のＤＮＡを発現している細胞の同定の仕方が極め
てよく知られているために、きわめて簡単に決定できる。関連する複合体を発現
している細胞が上述のスクリーニング方法で一度同定されたならば、それらを患
者からのサンプルに、そのサンプルがＣＴＬを含む場合に混合する。複合体提示
細胞が混合されたＣＴＬサンプルにより溶解した場合は、ＴＲＡ由来の腫瘍関連
遺伝子が存在していると想定することができ、対象はｓｕｐｒａと呼ばれる治療
的アプローチの適切な候補者である。

【００８８】細胞移入は、本発明により可能なただ１つの治療形態ではない。また、ＣＤ８ ^＋Ｔリンパ球も多数のアプローチを用いてｉｎｖｉｖｏで誘導できる。１つの
アプローチは、複合体を発現している非増殖性細胞の利用である。このアプロー
チで用いられる細胞は、複合体を通常発現している細胞であってよく、樹状細胞
または複合体の発現に必要な一方または両方の遺伝子をトランスフェクトされた
細胞であることができる。Chen et al. （Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 110
-114、1991）は、治療法において、ＨＰＶ‐Ｅ７ペプチドを発現しているトラン
スフェクトされた細胞の利用を示して、このアプローチを例証している。様々な
細胞種を用いてもよい。同様に、対象となる遺伝子を一方または両方保有するベ
クターを用いてもよい。発現ベクターは、修飾されていない染色体外核酸、プラ
スミド、または、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドをコードするものなど
の外因性核酸の挿入を可能にするために構築または修飾されたウイルスゲノムで
あってもよい。また、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドはレトロウイルス
ゲノムに挿入されてもよく、それにより標的組織または細胞種のゲノムへの核酸
の組込みが容易になる。これらのシステムにおいては、対象となる遺伝子は、微
生物、例えばワクシニアウイルス、レトロウイルスまたはＢＣＧバクテリア、お
よび、事実上宿主細胞を「感染」する材料により運ばれる。得られた細胞は対象
となる複合体を発現し、自己由来ＣＤ８^＋Ｔ細胞により認識され、次にこの自己
由来ＣＤ８^＋Ｔ細胞が増殖する。

【００８９】類似の効果は、ｉｎｖｉｖｏでＨＬＡクラスＩ提示細胞への取込みを容易に
するために、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドをアジュバントと混合する
ことで達成することができる。ＨＬＡクラスＩ結合部分より大きい場合、ＭＡＧ
Ｅ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドは、必要に応じて、ＨＬＡ分子のパートナーペ
プチドを産生するために処理することができるが、ＴＲＡはさらなる処理の必要
なしに提示される。一般的には、対象は、有効な量のＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性
ポリペプチドの皮内接種を受けることができる。当分野の標準的免疫プロトコル
に従い、初期容量投与後にブースター容量を投与することができる。

【００９０】ある免疫組成物の一環として、１個または２個以上の癌関連抗原またはその刺
激性フラグメントが、免疫応答を誘導するかまたは免疫応答を増強するために１
つまたは２つ以上のアジュバントと共に投与される。アジュバントは、抗原に組
込まれた、または、抗原と共に投与される物質であり、免疫応答を増強する。ア
ジュバントは、抗原の貯蔵体（細胞外またはマクロファージ内）を提供し、マク
ロファージを活性化し、特定のリンパ球のセットを刺激することにより免疫応答
を増強することができる。多くの種類のアジュバントが当分野でよく知られてい
る。アジュバントの具体例は、ＳａｌｍｏｎｅｌｌａｍｉｎｎｅｓｏｔａＲ
ｅ５９５リポ多糖体を精製し、酸加水分解した後に得たコンジナーであるモノ
ホスホリル脂質Ａ（MPL、SmithKline Beecham）、Ｑｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎ
ａｒｉａ抽出物から精製した純粋なＱＡ‐２１サポニンであるＱＳ２１（Smit
hKline Beecham）を含むサポニン；ＰＣＴ出願ＷＯ９６／３３７３９（SmithK
line Beecham）に記載されているＤＱＳ２１；ＱＳ‐７、ＱＳ‐１７、ＱＳ‐
１８，およびＱＳ‐Ｌ１（So et al.、Mol. Cells 7:17‐186、1997）；フロイ
ント不完全アジュバント；フロイント完全アジュバント；モンタニド（montanid
e）；免疫刺激性オリゴ核酸（例えばKreig et al.、Nature 374:546-9、1995によ
り記載されたＣｐＧオリゴ核酸を参照）；およびスクワレンおよび／またはトコ
フェロールなどの生分解性オイルから調整した様々な油中水型エマルジョンを含
む。好ましくは、ペプチドはＤＱＳ２１／ＭＰＬの組合せに混合して投与する。
ＤＱＳ２１のＭＰＬに対する比率は、典型的には、約１：１０〜１０：１、好ま
しくは約１：５〜５：１、より好ましくは約１：１であることができる。通常、
ヒトへの投与では、ＤＱＳ２１およびＭＰＬは、ワクチン製剤中に約１μｇから
約１００μｇの範囲で存在することができる。当分野で知られている他のアジュ
バントも本発明に用いることができる（例えばGoding、Monoclonal Antibodies:
Principles and Practice、2nd Ed.、1986を参照）。ペプチドおよびアジュバント
の混合物またはエマルジョンの調整方法は、ワクチネーションの当業者によく知
られている。

【００９１】ワクチネーションプロトコルに用いることができるさらなる免疫応答増強化合
物が多数存在する。これらは、タンパクまたは核酸のいずれかの形態で提供され
る共刺激分子を含む。このような共刺激分子は、樹状細胞（ＤＣ）上に発現され
、Ｔ細胞上に発現されているＣＤ２８と相互作用するＢ７‐１およびＢ７‐２（
それぞれＣＤ８０およびＣＤ８６）分子を含む。この相互作用は抗原／ＭＨＣ／
ＴＣＲに刺激された（シグナル１）Ｔ細胞の共刺激（シグナル２）を提供し、Ｔ
細胞の増殖およびエフェクター機能を増加させる。Ｂ７もＴ細胞上のＣＴＬＡ４
（ＣＤ１５２）と相互作用し、ＣＴＬＡ４およびＢ７リガンドに関する研究は、
Ｂ７‐ＣＴＬＡ４相互作用が抗腫瘍免疫およびＣＴＬの増殖を増強することを示
している（Zheng et al.、Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:6284-6289、1998）。

【００９２】Ｂ７は、通常は腫瘍細胞上に発現されておらず、従って、Ｔ細胞にとって有効
な抗原提示細胞（ＡＰＣ）ではない。Ｂ７の発現の誘導により、腫瘍細胞が、よ
り有効にＣＴＬの増殖およびエフェクター機能を刺激することが可能になる。Ｂ
７／ＩＬ‐６／ＩＬ‐１２共刺激の組合せは、Ｔ細胞集団にＩＦＮ‐γおよびＴ
ｈ１サイトカインプロファイルを誘導し、Ｔ細胞活性のさらなる増強を導くこと
が示された（Gajewski et al.、J. Immunol. 154:5637-5648、1995）。腫瘍細胞へ
のＢ７分子のトランスフェクションが、細胞移入免疫治療のためのｉｎｖｉｔ
ｒｏでのＣＴＬの増殖に関してWang et al.により検討されている（J. Immunoth
er. 19:1-8、1996）。Ｂ７分子のためのその他の輸送機構は、核酸（裸のＤＮＡ
）による免疫（Kim et al.、Nature Biotechnol. 15:7:641-646、1997）およびア
デノおよびポックスなどの組換えウイルス（Wendtner et al.、Gene Ther. 4:726
-735、1997）が含まれる。これらのシステムは、全て、Ｂ７と、ここで検討した
抗原または抗原の１個または２個以上のフラグメント（ポリトープを含む）また
はサイトカインなどの選択した他の分子との共発現のための発現カセットの作製
および利用に従う。これらの輸送システムは、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖ
ｉｖｏでのワクチネーション状況における適切な分子の輸送に用いることができ
る。Ｔ細胞をｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで直接刺激するための抗Ｃ
Ｄ２８抗体の利用もまた考慮することができる。同様に、外因性抗原に対するＴ
細胞の応答を誘導する、誘導可能な共刺激分子ＩＣＯＳは、たとえば抗ＩＣＯＳ
抗体の利用により修飾することができる（Hutloff et al.、Nature 397:263&#820
9;266、1999）。

【００９３】リンパ球機能関連抗原３（ＬＦＡ‐３）は、ＡＰＣおよびいくつかの腫瘍細胞
上に発現されており、Ｔ細胞上に発現されたＣＤ２と相互作用する。この相互作
用は、Ｔ細胞によるＩＬ‐２およびＩＦＮ‐γの産生を誘導し、従って、Ｂ７／
ＣＤ２８強刺激相互作用を補完することができるが、置換することは出来ない）
。リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ‐１）は白血球上に発現されており、ＡＰＣ
ｓおよびいくつかの腫瘍細胞上に発現されたＩＣＡＭ‐１と相互作用する。この
相互作用は、Ｔ細胞によるＩＬ‐２およびＩＦＮ‐γの産生を誘導し、従って、
Ｂ７／ＣＤ２８強刺激相互作用を補完することができるが、置換することは出来
ない（Fenton et al.、1998）。ＬＦＡ−１はしたがって、ワクチネーションプロ
トコルにおいて、上記でＢ７について検討した様々な方法で提供することができ
る共刺激分子のさらなる例である。

【００９４】完全なＣＴＬの活性化およびエフェクター機能には、Ｔｈ細胞のＣＤ４０Ｌ（
ＣＤ４０リガンド）分子とＤＣにより発現されているＣＤ４０分子との間の相互
作用を通したＴｈ細胞の補助が必要である（Ridge et al.、Nature 393:474、1998
; Bennett et al.、Nature 393:478、1998; Schoenberger et al.、Nature 393:480
、1998）。この共刺激シグナルのこの機構は、Ｂ７のアップレギュレーションお
よびそれに伴うＤＣ（ＡＰＣ）によるＩＬ‐６／ＩＬ‐１２の産生を伴うと思わ
れる。ＣＤ４０‐ＣＤ４０Ｌ相互作用は、従って、シグナル１（抗原／ＭＨＣ‐
ＴＣＲ）およびシグナル２（Ｂ７‐ＣＤ２８）の相互作用を補完する。

【００９５】ＤＣ細胞を直接刺激するために抗ＣＤ４０抗体を用いることにより、炎症状況
を除いて通常遭遇し、潜在的な（non-professional）ＡＰＣ（腫瘍細胞）により
発現されている腫瘍関連抗原に対する応答を増強すると予想される。これらの状
況では、Ｔｈの補助およびＢ７強刺激シグナルは提供されない。この機構は、抗
原にパルスされたＤＣに基づく治療の状況、または、Ｔｈエピトープが公知の腫
瘍関連抗原前駆体の中に決定されなかった状況で用いてもよい。

【００９６】投与する場合、本発明の治療組成物は、薬学的に許容される製剤で投与する。
このような製剤は、通常とおり、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝剤、保存剤
、適合する担体、アジュバントおよびサイトカインなどの補助的な免疫増強剤お
よびその他の任意の治療剤を含んでもよい。「薬学的に許容される」なる語は、
活性成分の生物学的活性の有効性に干渉しない毒性のない材料を意味する。担体
の特徴は、投与経路に依存することができる。本発明の治療薬は、注射または長時間にわたる緩徐な点滴を含む、従来のいず
れの経路でも投与することができる。投与は、例えば、経口、静脈内、腹腔内、
筋肉内、鼻腔内、空洞内（intracavity）、皮下、皮内または経皮であってもよ
い。

【００９７】非経口的投与用製剤は、滅菌された水性または非水性溶液、懸濁液およびエマ
ルジョンを含む。非水性溶剤の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレ
ングリコール、オリーブ油などの植物油、および、エチルオレエート（ethyl ol
eate）などの注射可能な有機エステルがある。水性担体は、水、食塩水および緩
衝媒体を含む、アルコール／水の溶液、エマルジョンまたは懸濁液を含む。非経
口媒体は、塩化ナトリウム溶液、ブドウ糖リンゲル、ブドウ糖および塩化ナトリ
ウム、乳酸加リンゲルまたは不揮発性油を含む。静脈内媒体は、液体および栄養
素の補充剤、電解質補充剤（ブドウ糖リンゲルに基づくものなど）などを含む。
保存剤およびその他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不
活性ガスなども存在してよい。

【００９８】本発明はまた遺伝子治療も考慮している。Ｅｘｖｉｖｏの遺伝子治療を行な
う方法は、米国特許第５，３９９，３４６号およびその特許のファイルヒストリ
ー（file history）に提示された資料に概説されており、それらは全て公的に入
手可能な資料である。一般的に、不良な遺伝子のコピーを含む対象の１個または
２個以上の細胞内に遺伝子の機能的コピーをｉｎｖｉｔｒｏで導入し、遺伝子
的に操作した１個または２個以上の細胞を対象に戻すことを伴う。遺伝子の機能
的コピーは、調節要素の作動可能な制御下にあり、その遺伝子を遺伝子操作した
１個または２個以上の細胞に発現させることを可能にする。多数のトランスフェ
クションおよびトランスダクション技術、ならびに、適切な発現ベクターが当業
者によく知られており、そのうちのいくつかはＰＣＴ出願ＷＯ９５／００６５４
に記載されている。アデノウイルスなどのベクターを用いたＩｎｖｉｖｏでの
遺伝子治療もまた、本発明で考慮されている。

【００９９】本発明の製剤は有効な量投与される。有効な量とは、医薬製剤が単独、または
、さらなる用量と共に、所望する応答を刺激する量である。癌の治療において、
所望する応答とは、癌の進行を阻害することである。これは、疾患の進行を一時
的に遅延させることだけを伴ってもよいが、より好ましくは、疾患の進行を恒常
的に停止させることを伴う。免疫応答を誘導するケースにおいて、所望する反応
とは、用いた１個または２個以上のＭＡＧＥ‐Ａ１２イムノゲンに特異的な抗体
またはＴリンパ球の増加である。所望した応答は、通常の方法でモニターするこ
とができ、または、ここで検討されている本発明の診断方法に従ってモニターす
ることができる。

【０１００】本発明の治療組成物を用いて免疫応答を刺激することを所望する場合、これは
、血清中の抗体力価の増加、細胞傷害性リンパ球のクローナルな増殖、またはそ
の他のいくつかの望ましい免疫応答を伴う、液性抗体応答の刺激を伴うかも知れ
ない。投与方法にもよるが、１ナノグラム／キログラム〜１００ミリグラム／キ
ログラムの範囲のイムノゲンの用量は有効であると考えられる。好ましい範囲は
、キログラム当たり５００ナノグラム〜５００マイクログラムであると考えられ
る。けくじつな量は、投与のために選択した材料、投与が１回か多数回か、およ
び、年齢、物理学的条件、体格、体重および疾患のステージを含むここの患者の
パラメーターを含む様々な因子に依存している。これらの因子は、当業者によく
知られており、通常の実験を超えない範囲で対応できる。

【０１０１】（例）材料および方法細胞株膀胱癌細胞株ＬＢ８３１‐ＢＬＣは、６５歳のコーカサスの患者ＬＢ８３１（
ＨＬＡ−Ａ^*２４０３、−Ａ３、−Ｂ^*４４０３、−Ｂ^*４９０１、−Ｃｗ^*０４０
１、−Ｃｗ^*０７）の原発性浸潤性膀胱腫瘍（ｐＴ３、Ｇ３）から誘導した。７
回目の継代で行なった細胞株の核型は、染色体数が５６〜１４４の間で変化して
いることを示し、ＬＢ８３１細胞株が腫瘍株であることが確認された。ＭＩ１３
４４３−ＭＥＬはメラノーマ細胞株であり、ＬＥ９２１１−ＲＣＣは腎癌細胞株
である。両方ともＨＬＡ− Ｃｗ７陰性患者から誘導した。ＬＢ３７３‐ＭＥＬ
はＨＬＡ− Ｃｗ７陰性患者に由来するメラノーマ株である。腫瘍細胞は、１０
％のヒト血清または１０％のＦＣＳ（Life Technologies）を含むイスコブ培地
（Life Technologies、Gaithersburg、MD）中で、８％ＣＯ_２インキュベーターで
培養した。リンパが球細胞株ＬＢ‐８３１‐ＥＢＶは、患者ＬＢ８３１のＰＢＬ
、１μｇ／ｍｌのシクロスポリンＡ（Sandoz、Basel、Switzerland）、および、２
０％（ｖ／ｖ）のＥＢＶによりトランスフォームしたＢ９５‐８細胞の上清から
、標準的な技術を用いて誘導した。この細胞株は１０％のＦＣＳを含むＲＰＭＩ
‐１６４０倍地（Life Technologies）中、５％ＣＯ_２インキュベーター内で生
育した。ＰＢＬ‐ＰＨＡ細胞は、ＰＢＬを０．１％（ｖ／ｖ）のＰＨＡ（Difco
）および１００Ｕ／ｍｌのＩＬ‐２（Eurocetus、Amsterdam、Netherlands）で刺
激して調整し、１０％のヒト血清を含むイスコブ培地中、８％ＣＯ_２インキュベ
ーター内で培養した。全ての培地は、Ｌ‐アルギニン（１１６μｇ／ｍｌ）、Ｌ
‐アスパラギン（３６μｇ／ｍｌ）、Ｌ‐グルタミン（２１６μｇ／ｍｌ）、ス
トレプトマイシン（０．１μｇ／ｍｌ）およびペニシリン（２００μｇ／ｍｌ）
が添加されている。

【０１０２】抗腫瘍ＣＴＬクローン患者ＬＢ８３１の血液単核細胞をLymphoprep（Nycomed、Oslo、Norway）密度勾
配遠心分離法により分離し、−８０℃で保存した。照射したＢ７−１トランスフ
ェクトＬＢ８３１−ＢＬＣ細胞を刺激体として、ＣＤ８^＋Ｔリンパ球を応答体と
して混合し、前述（Gueguen et al.、J. Immunology 160:6188-6194、1998）のよ
うに混合自己由来リンパ球−腫瘍細胞培養を行なった。ＣＤ８^＋Ｔリンパ球を抗
ＣＤ８抗体と共有結合した磁気ビーズ（MACS、Miltenyi Biotec GmbH）によりソ
ートした。照射した非ＣＤ８^＋細胞を、最初の刺激の期間、混合培養に加えた。
３日目に、ＩＬ−２（２５Ｕ／ｍｌ）を加えた。１週間後、５ｘ１０^５のリンパ
球を、照射Ｂ７−１トランスフェクト腫瘍細胞および２５Ｕ／ｍｌのＩＬ−２で
再刺激した。２８日目に、培養したリンパ球を、ＩＬ−２（５０Ｕ／ｍｌ）添加
イスコブ倍地中で限界希釈法によりクローニングした。ＣＴＬクローンの長期培
養を記載とおりに行なった（Herin et al.、Int. J. Cancer 39:390-396、1987）
。

【０１０３】細胞傷害アッセイＣＴＬの溶解活性を既述のとおり（Boon et al.、J. Exp. Med. 152:1184-1193
、1980）クロム放出アッセイで試験した。簡潔に述べると、クロム標識した１０
００個の細胞を含む１００μｌを、同量のＣＴＬと、異なるエフェクター対ター
ゲット比で９６穴マイクロプレート内で培養した。クロムの放出を４時間培養し
た後測定した。ペプチドアッセイでは、標識したＬＢ８３１−ＥＢＶ細胞を様々
な濃度のペプチドと３０分間３７℃で培養した。その後ＣＴＬを加え、クロムの
放出を上記のように測定した。

【０１０４】ＣＴＬ刺激アッセイ合計３，０００個のＣＴＬを、１０％のヒト血清および２５Ｕ／ｍｌのＩＬ−
２を添加したイスコブ培地１００μｌ中に１０，０００個の刺激細胞を含むマイ
クロウェルに加えた。２４時間後、上清を回収し、そのＴＮＦ含量をＷＥＨＩ−
６４クローン１３細胞（Espevik and Nissen-Meyer、J. Immunol. Methods 95:99
-105、1986）における細胞傷害効果をＭＴＴ比色アッセイ（Hansen et al.、J. Im
munol. Meth. 119:203-210、1989）で試験することにより測定した。モノクロー
ナル抗体Ｗ６／３２（抗ＨＬＡクラスＩ）、Ｂ１．２３．２（抗ＨＬＡ−Ｂおよ
びＣ）、Ｂ９．４．１（抗ＣＤ８）、１Ｂ８．２（D. Olive、INSERM U119、Marse
ille、Franceの恵与による抗ＣＤ４）、ＧＡＰＡ−３（抗ＨＬＡ−Ａ３）、Ｃ７
７０９Ａ２．６（抗ＨＬＡ−Ａ２４）による阻害を、１／２０〜１／３０希釈の
腹水を試験に添加することにより行なった。

【０１０５】一過性トランスフェクションＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ（登録商標）試薬（Life Technologies）により
一過性トランスフェクションを行なった。簡潔に述べると、５ｘ１０^４個の２９
３−ＥＢＮＡ細胞（ＥＢＶ核抗原ＥＢＮＡ−１を発現している２９３細胞）を平
底９６穴プレート中で、ＭＡＧＥ−Ａ１２ｃＤＮＡまたはｐｃＤＮＡ３（Invitr
ogen、Carlsbad、CA）内にクローニングしたサブジェニックフラグメント（subgen
ic fragments）、ＨＬＡＣｗ*０７０１を含む５０ｎｇのプラスミドｐｃＤＮＡ
３、および１．５μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ（登録商標）によりトラン
スフェクトした。ＬＢ３７３−ＭＥＬ細胞（１０，０００個）を、１５０ｎｇの
ＨＬＡＣｗ７構築物および１μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥでトランスフ
ェクトした。トランスフェクトした細胞を２４時間後にＣＴＬ刺激アッセイで試
験した。

【０１０６】ＬＢ８３１−ＢＬＣｋらのＨＬＡ− Ｃｗ７ｃＤＮＡのクローニングは、既述
（Gueguen et al.、1998）のとおりに行なった。その配列は、コーディング配列
の１０８７位がＡであるところがＧであったことが見出されたことを除けば、対
立サブタイプであるＣｗ^*０７０１１と同一であった。この核酸の変化は、当該
分子の細胞内ドメインのスレオニンがアラニンに置換わっていることを伴う。同
様の差異はＣｗ*０７０４とＣｗ*０７１１対立遺伝子との間についても記載され
ている（Baurain and Coulie、Tissue Antigens 53:510-512、1999）。

【０１０７】腫瘍細胞株の永続的なトランスフェクション膀胱細胞癌ＬＢ８３１−ＢＬＣを既述（Traversari et al.、Immunogenetics 3
5:145-152、1992）のリン酸カルシウム沈殿法によりトランスフェクトした。１ｘ
１０^６個の細胞を、ｃＤＮＡＢ７−１を含む２０μｇのプラスミドｐＥＦ−ＢＯ
Ｓｐｕｒｏ−ＰＬ３によりトランスフェクトした。簡潔に説明すると、Ｂ７−
１をセンスプライマー５’ −ＧＧＧＴＣＣＡＡＡＴＴＧＴＴＧＧＣＴＴＴＣＡ
ＣＴ（配列番号７）およびアンチセンスプライマー５’−ＧＡＡＧＡＡＴＧＣ
ＣＴＣＡＴＧＡＴＣＣＣＣＡ（配列番号８）を用い、ＬＢ２３−ＥＢＶ細胞株
のｃＤＮＡをテンプレートとしたＰＣＲ反応により増幅した。ＰＣＲの条件は、
Gueguen et al．、１９９８により記載されたとおりであった。Ｂ７−１インサ
ートを次に、ｐＥＦ−ＢＯＳ（Mishizuma and Nagata、Nucleic Acids Res. 18
:5322、1990）からプロマイシン耐性遺伝子およびポリリンカーの挿入により得た
プラスミドｐＥＦ−ＢＯＳｐｕｒｏ−ＰＬ３中にクローニングした。プロマイ
シン耐性ＬＢ８３１−ＢＬＣ細胞は０．８μｇ／ｍｌのプロマイシン（Sigma、St
. Louis、MO）中で選択してから、限界希釈によりクローニングした。

【０１０８】ＭＡＧＥ−Ａ１２遺伝子のサブジェニックフラグメントのクローニング９４５ｂｐの完全なオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＭＡＧＥ
−Ａ１２ｃＤＮＡをＰＣＲ増幅のテンプレートとして用いた（DePlaen et al.、I
mmunogenetics 40:360-369、1994）。ＭＡＧＥ−Ａ１２ＯＲＦの最初の１９５、
３４２、５２５、５４０、５９１、６５１、６８３および８１６のヌクレオチド
を含む８個のフラグメントを、フォワードプライマー５’−ＣＣＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡ−３’（ＬＨＥ７；配列番号
４６）およびリバースプライマー５’−ＣＣＴＡＡＧＧＡＣＴＧＴＧＧＧＧＡＧＧＡ−３’（ＬＨＥ２；配列番号
４７）、５’−ＣＣＡＡＣＴＡＡＧＣＣＡＴＣＴＴＣＣＴＡ−３’（ＬＨＥ３；配列番号
４８）、５’−ＧＴＧＡＣＡＡＧＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＴＧ−３’（ＬＨＥ４；配列番号
４９）、５’−ＣＣＡＧＴＣＡＧＧＴＧＡＣＡＡＧＧＡＴＧ−３’（ＬＨＥ１０；配列番
号５０）、５’−ＣＣＴＧＴＣＴＡＧＧＧＣＡＣＧＡＴＣＴＧ−３’（ＬＨＥ８；配列番号
５１）、５’−ＣＴＣＣＴＡＡＧＧＧＧＣＡＣＡＧＴＣＧＣ−３’（ＬＨＥ９；配列番号
５２）、５’−ＴＣＡＧＡＴＧＣＣＴＡＣＡＡＣＡＣＡＣＴ−３’（ＬＨＥ５；配列番号
５３）、および５’−ＧＧＡＣＣＣＴＡＣＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＡ−３’（ＬＨＥ６；配
列番号５４）をそれぞれ用いて増幅した。ＴａｑＤＮＡポリメラーゼをＰＣＲに
よる増幅に用いた。最初の変性工程は９４℃で５分間行い、次に、２５サイクル
の増幅を以下のように行なった：すべてのプライマーについて９４℃で１分、プ
ライマーＬＨＥ３、ＬＨＥ４およびＬＨＥ５については６２℃で２分、または、
ＬＨＥ２、ＬＨＥ６、ＬＨＥ８、ＬＨＥ９およびＬＨＥ１０については６４℃で
２分；およびすべてのプライマーについて７２℃で３分。サイクルは、７２℃で
１０分の最後の伸長工程で終了した。ＰＣＲ産物は、双方向真核性ＴＯＰＯＴＡ
クローニングキット（Invitrogen）を用いて、ｐｃＤＮＡ３ベクター中にクロー
ニングした。

【０１０９】ＭＡＧＥ−Ａ１２発現のＰＣＲアッセイ腫瘍組織におけるＭＡＧＥ−Ａ１２の発現を検出するためにＲＴ−ＰＣＲを行
った。総ＲＮＡの精製およびｃＤＮＡの合成は、既述（Weynants et al.、Int. J
. Cancer 56:826-829、1994）のとおりに行なった。２μｇの総ＲＮＡから産生し
たｃＤＮＡの１／４０を、センスプライマー５’−ＣＧＴＴＧＧＡＧＧＴＣＡＧ
ＡＧＡＡＣＡＧ−３’（配列番号５５）およびアンチセンスプライマー５’−Ｇ
ＣＣＣＴＣＣＡＣＴＧＡＴＣＴＴＴＡＧＣＡＡ−３’（配列番号５６）を用いて
増幅した。ＰＣＲは、最初の変性工程を９４℃で４分で行い、次の３２サイクル
の増幅を以下のように行なった：９４℃で１分、６２℃で２分および７２℃で３
分。サイクルは、７２℃で１５分の最終延長工程で終了した。

【０１１０】例１：ＭＡＧＥ−Ａ１２から誘導され、膀胱がん患者のＨＬＡ− Ｃｗ*０７０１
拘束ＣＴｌにより認識される新規な抗原性ペプチドＬＢ８３１−ＢＬＣは、自己由来ＣＴＬにより認識される少なくとも３つの抗
原を発現している細胞株であり；そのうちの１つはすでに記載されている（Gueg
uen et al.、J. Immunology 160:6188-6194、1998）。混合自己由来リンパ球腫瘍
細胞培養（ＭＬＴＣ）を、ヒト血清中で培養した照射Ｂ７−１トランスフェクト
ＬＢ８３１−ＢＬＣ細胞を刺激体として、ＣＤ８^＋Ｔリンパ球を応答体として混
合することにより行なった。ＣＤ８^＋Ｔリンパ球は、抗ＣＤ８抗体を共有結合し
た磁気ビーズによりソートした（magnetic-activated cell sorter、Milteny Bio
tec、Bergisch-Gladbach、Germany）。最初の刺激期間の間、照射した非ＣＤ８^＋
細胞を混合培養に加えた。３日目にＩＬ−２（５０Ｕ／ｍｌ）を加えた。１週間
後、５ｘ１０^５個のリンパ球を、照射Ｂ７−１トランスフェクト腫瘍細胞および
２５Ｕ／ｍｌのＩＬ−２で再刺激した。２８日目に、培養したリンパ球を、ＩＬ
−２（５０Ｕ／ｍｌ）添加イスコブ倍地中で限界希釈によりクローニングした。
ＬＢ８３１特異ＣＴＬクローンが得られ、それらのうちＣＴＬ５０１Ｄ／１９
は自己由来腫瘍株を認識するが、自己由来ＥＢＶトランスフォームＢ細胞を認識
しない（つまり、最初の３つの抗原とは異なる、ＬＢ８３１−Ｄと呼ばれる抗原
を認識する）。

【０１１１】これらのＣＴＬクローンのＭＨＣ拘束性を決定するために、クローン刺激にお
ける抗ＨＬＡモノクローナル抗体の阻害効果を研究した。ＣＴＬクローン５０１
Ｄ／１９は、ＬＢ８３１−ＢＬＣ細胞で刺激したときにＴＮＦを産生したが、こ
の産生は、抗ＨＬＡクラスＩモノクローナル抗体Ｗ６／３２の存在、または、Ｈ
ＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃ分子の共通のデターミナントに対するモノクローナル
抗体の存在により完全に阻止された。ＬＢ８３１のＨＬＡタイピングはＨＬＡ
−Ａ^*２４０３、−Ａ^*３、−Ｂ^*４４０３、−Ｂ^*４９０１、−Ｃｗ^*０４０１お
よび−Ｃｗ^*０７なので、この結果は、標的抗原がＨＬＡ−Ｂ^*４４、Ｂ^*４９、
Ｃｗ^*０４またはＣｗ^*０７のいずれかにより提示されていることを示している。

【０１１２】標準的な４時間のクロム放出アッセイにおいて、さらなる標的細胞が、ＣＴＬ
５０１Ｄ／１９により認識された。図１Ａに示すとおり、ＣＴＬ５０１Ｄ／１
９はまた、メラノーマ株ＭＩ１３４４３−ＭＥＬおよび腎癌株ＬＥ９２１１−Ｒ
ＣＣの２つの同種腫瘍株も溶解した。標的は：ＬＢ８３１−ＢＬＣ（自己由来膀
胱癌株）；ＬＢ８３１−ＥＢＶ（自己由来ＥＢＶトランスフォームＢ細胞）；Ｌ
Ｅ９２１１−ＲＣＣ（同種のＨＬＡＣｗ４およびＨＬＡ− Ｃｗ７陽性腎癌株）
；ＭＩ１３４４３−ＭＥＬ（同種のＨＬＡＣｗ４およびＨＬＡＣｗ７陽性メラ
ノーマ株）；およびＫ５６２（ナチュラルキラー標的）である。同種および自己
由来腫瘍株は、標的として用いる前に、それぞれ１または５日間ＩＦＮγで前処
理した。４時間後にクロムの放出を測定した。

【０１１３】前述のすべての所要細胞はＢ^*４４およびＢ^*４９について陰性だったが、Ｃｗ ^* ０４およびＣｗ_*０７については陽性だった。どのＨＬＡが腫瘍抗原を発現して
いるのか確認するため、メラノーマ細胞株をＣｗ^*０４またはＣｗ^*０７で一過性
にトランスフェクトし、ＣＴＬ５０１Ｄ／１９による認識について試験した。
Ｃｗ^*０７をトランスフェクトしたものだけが、ＣＴＬにより認識された。図１
Ｂに示すとおり、ＬＢ３７３−ＭＥＬ（ＨＬＡ− Ｃｗ７陰性患者から誘導した
メラノーマ細胞株）をＨＬＡＣｗ７プラスミド組成物で一過性にトランスフェ
クトした。３千個のＣＴＬを１０，０００の刺激細胞に加え、ＣＴＬによるＴＮ
Ｆの産生を２４時間後に測定した。ＣＴＬ５０１Ｄ／１９がまた、ＨＬＡ− Ｃ
ｗ^*０７陽性メラノーマ株ＮａＭｅ１６も認識することから、ＬＢ８３１−Ｄ抗
原はＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子により提示されていると結論付けられた。ＬＢ８３
１−ＢＣＬのＣｗ^*０７遺伝子の対立サブタイプが決定され、ＨＬＡ− Ｃｗ^*０
７０１１であることが見出された。

【０１１４】ＣＴＬ５０１Ｄ／９に認識されたＬＢ８３１−Ｄ抗原がすでに知られている遺
伝子によってコードされているか決定するため、２９３−ＥＢＮＡ細胞を、ＨＬ
Ａ− Ｃｗ^*０７０１ｃＤＮＡ、および、中でも、患者ＬＢ８３１の膀胱腫瘍サン
プルに高レベルで発現していることが見出されているＭＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡ
ＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ^{ＮＹ−ＥＳＯ１} ｃＤＮＡを含む一連の遺伝子を含む
発現ベクターでコトランスフェクトした。トランスフェクタントを、ＣＴＬ５
０１Ｄ／１９によるＴＮＦの産生を刺激する能力について試験した。トランスフ
ェクションの２４時間後、この細胞を３０００個のＣＴＬ５０１Ｄ／１９と培
養した。２４時間後、上清中のＴＮＦ量を、ＷＥＨＩ−１６４−１３細胞に対す
る細胞傷害性を調べることで測定した。ＬＢ８３１−ＢＬＣ細胞を陽性対照とし
て用いた。ＴＮＦは、ＣＴＬをＨＬＡＣｗ^*０７および遺伝子ＭＡＧＥ−Ａ１２
をトランスフェクトした２９３−ＥＢＮＡ細胞により刺激したときだけ、ＣＴｌ
により産生された（図２）。ＨＬＡＣｗ７のみ、または、ＨＬＡＣｗ７とその
他の遺伝子の組合せをトランスフェクトした２９３−ＥＢＮＡ細胞では、刺激は
観察されなかった。

【０１１５】ＲＴ‐ＰＣＲにより、ＣＴＬ５０１Ｄ／１９に認識された全ての腫瘍株がＭ
ＡＧＥ‐Ａ１２を発現していることが確実になり、この抗原がこの遺伝子でコー
ドされていることが確かめられた。ＭＬＴＣで創出したその他のＨＬＡＣｗ７
拘束ＣＴＬクローンも検討した。６つのさらなるＣＴＬクローンが、ＭＡＧＥ‐
Ａ１２およびＨＬＡＣｗ７をトランスフェクトした２９３‐ＥＢＮＡ細胞を認
識することが見出された。抗原性ペプチドをコードするＭＡＧＥ‐Ａ１２配列を同定するために、異なる
長さのＭＡＧＥ‐Ａ１２フラグメントをＰＣＲで創出した。これらのサブジェニ
ックフラグメントを、ｐｃＤＮＡ３内にクローニングし、ＨＬＡ− Ｃｗ*０７０
１構築物と共に２９３‐ＥＢＮＡ細胞にトランスフェクトした。ＣＴＬ刺激アッ
セイをトランスフェクタントと共に行なった（図３）。トランスフェクトした細
胞をＣＴＬ５０１Ｄ／１９と共に２４時間培養し、上清中のＴＮＦ産生量をそ
のＷＥＨＩ‐１６４．１３細胞に対する毒性で測定した。ＰＣＲフラグメントの
番号は、コードする領域のヌクレオチドに対応している。

【０１１６】５４０ｂｐまたはそれ以上のフラグメントをトランスフェクトした細胞は、Ｃ
ＴＬ５０１Ｄ／１９を刺激することが可能だったが、より短いフラグメントを
トランスフェクトしたものはそれが不可能だった。これは、抗原性ペプチドをコ
ードする配列の終端がＭＡＧＥ‐Ａ１２ＯＲＦのヌクレオチド５２５と５４０の
間に位置していたことを示している。ヌクレオチド５２５‐５４０に対応するア
ミノ酸配列において、ＥＶＶＲＩＧＨＬＹ（ＭＡＧＥ−Ａ１２のコドン１６８
−１７６；配列番号３）およびＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（ＭＡＧＥ−Ａ１２の
コドン１７０−１７８；配列番号４）の２つのオーバーラップするノナペプチ
ドが見出され、これはＨＬＡＣｗ７ペプチド結合モチーフ、つまりＣ末端のチ
ロシンまたはロイシンに一致していた（Rammensee et al.、Immunogenetics. 41:
178、1995）。デカペプチドＶＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号５）、ノナペプ
チドＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号４）およびオクタペプチドＲＩＧＨＬＹ
ＩＬ（配列番号６）は、自己由来リンパ芽球細胞株ＬＢ‐８３１‐ＥＢＶをＣ
ＴＬ５０１Ｄ／１９による溶解に対して感作した（図４）。自己由来細胞株Ｌ
Ｂ‐８３１‐ＥＢＶにＭＡＧＥ‐Ａ１２ペプチドであるＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（
配列番号４）、ＶＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号５）またはＲＩＧＨＬＹ
ＩＬ（配列番号６）をロードし、ＣＴＬ５０１Ｄ／１９と接触させた。クロ
ム標識細胞を３０分間、指定した濃度のペプチド（ＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列
番号４）またはＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号６））でパルスした。ＣＴＬ
５０１Ｄ／１９を、１０のエフェクター対ターゲット比で加えた。クロムの放出
を４時間後に測定した。また、Ｃ末端のロイシンを欠いたペプチド（例えばＥＶ
ＶＲＩＧＨＬＹ、配列番号３）も試験したが、認識されなかった。最大溶解の
半量が、顕著に低い濃度である１００ｐＭのノナペプチドＶＲＩＧＨＬＹＩＬ
（配列番号４）で得られ、このペプチドが極めて有効にＣＴＬ５０１Ｄ／１９
により認識されることが示された。

【０１１７】例２：腫瘍サンプル中のＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現腫瘍サンプルおよび／または様々な腫瘍の細胞株におけるＭＡＧＥ‐Ａ１２の
発現をＲＴ‐ＰＣＲで測定した。ＰＣＲによる増幅は、上述のＭＡＧＥ‐Ａ１２
特異プライマーおよび条件で行なった。ＭＡＧＥ‐Ａ１２のＲＴ‐ＰＣＲによる
増幅の結果を表Ｉに示した。

【０１１８】ＲＴ‐ＰＣＲにより検出したＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現

【表４】

【０１１９】均等物当業者は、ここに記載した本発明の特殊な態様の多くの均等物を認識すること
ができ、また、通常の実験を超えない範囲で確認することができる。このような
均等物は、以下の請求項に包含されると思われる。本明細書に開示した文献はそれぞれの全文を引用により組込む。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＣＴＬ５０１Ｄ／１９による自己由来および異種遺伝子型のＨＬＡ− Ｃｗ^*
０７陽性腫瘍株の認識を示したグラフであり、（Ａ）は溶解、（Ｂ）はＴＮＦの
放出を表す。

【図２】ＣＴＬ５０１Ｄ／１９がＭＡＧＥ‐１２によりコードされＨＬＡ-Ｃｗ７によ
り提示された抗原を認識することを示したグラフである。

【図３】ＣＴＬ５０１Ｄ／１９により認識された抗原ペプチドをコードするＭＡＧＥ
‐Ａ１２の領域の同定を示したグラフである。

【図４】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ペプチドＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号４）およびＲＩＧ
ＨＬＹＩＬ（配列番号６）を適用した自己由来細胞株ＬＢ‐８３１‐ＥＢＶの
ＣＴＬ５０１Ｄ／１９による溶解を表示したグラフである。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年１１月１３日（２００１．１１．１３）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００６７】本発明は、また、当業者が所望する１個または２個以上のベクターの発現の調
整を可能にする、いわゆる発現キットも抱合する。このような発現キットは、前
記の少なくとも２つの材料の、少なくとも個々に分割した部分を含む。他の構成
要素は所望により加えてもよい。ここに記載された発明は、多数の用途を有しており、そのうちのいくつかはこ
こに記載されている。第一に、本発明は当業者がＭＡＧＥ‐Ａ１２免疫原性ポリ
ペプチドの発現を特徴とする疾患を診断することを可能にする。これらの方法は
、生物学的サンプルにおけるＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド、または、
ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドとＨＬＡクラスＩ分子との複合体の発現
の測定を伴う。ペプチドまたはペプチドとＨＬＡクラスＩ分子との複合体の発現
は、抗体などの、ペプチドまたは複合体の結合パートナーによりアッセイするこ
とで測定できる。腫瘍生検などの生物学的サンプルにおけるＭＡＧＥ‐Ａ１２の
発現は、また、ＭＡＧＥ‐Ａ１２プライマーを用いた標準的なＰＣＲ増幅プロト
コルにより試験することができる。腫瘍での発現の例はここに表示されており、
ＭＡＧＥ‐Ａ１２の増幅のための典型的条件およびプライマーは、US serial no
. 5,985,571で見出すことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/39 Ａ６１Ｐ 35/00 ４Ｃ０８４ 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 ４Ｃ０８５Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 ４Ｃ０８７Ｃ０７Ｋ 14/47 1/19 ４Ｈ０４５Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/21 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 5/06 33/50 Ｚ 5/10 33/53 ＤＣ１２Ｑ 1/02 ＭＧ０１Ｎ 33/15 33/566 33/50 37/00 １０２ 33/53 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ａ 37/00 １０２Ｅ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＮ，ＪＰ，ＫＲ，ＮＺ (72)発明者ブーン−ファルール，ティエリベルギー王国ビー−1200 ブリュッセル、ヒポクラットアベニュー 7459 (72)発明者ブラスール，フランシスベルギー王国ビー−1200 ブリュッセル、ヒポクラットアベニュー 7459 Ｆターム(参考） 2G045 AA26 AA40 BA11 BB50 DA12 DA13 DA14 DA36 DA78 FB02 4B024 AA01 AA11 BA36 CA01 DA01 DA02 DA05 DA11 EA01 EA02 EA03 EA04 FA02 GA01 GA11 HA01 HA03 HA11 4B063 QA01 QA18 QQ08 QQ79 QR08 QR33 QR48 QR59 QR62 QR74 QR80 QS05 QS36 QX02 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA01 DA14 4B065 AA01X AA57X AA87X AA93Y AB01 AB02 BA01 BA08 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 AA13 AA14 BA01 BA08 BA23 BA35 CA18 CA53 CA56 CA59 NA13 NA14 ZA592 ZA662 ZA812 ZB262 4C085 AA03 BB01 BB11 CC01 CC40 EE01 EE06 GG01 4C087 AA01 AA02 BB43 CA47 DA20 MA66 NA13 NA14 ZA59 ZA66 ZA81 ZB26 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA15 BA17 CA41 DA76 DA86 EA28 EA50 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号６のアミノ酸配列、またはＨＬＡクラスＩ分子に結
合する、１個または２個以上のアミノ酸の付加、置換または欠失を含むその機能
的変異体を含む、単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチド。
【請求項２】単離したペプチドが、配列番号４、配列番号５、そのフラグ
メントおよびその機能的変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチド。
【請求項３】単離したペプチドが、配列番号４、配列番号５、配列番号６
、そのフラグメントおよびその機能的変異体からなる群から選択されるアミノ酸
配列を含む、請求項１に記載の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結
合ペプチド。
【請求項４】ＨＬＡ−Ｃｗ^*０７に結合する配列番号２のアミノ酸配列の
フラグメント、または１個または２個以上のアミノ酸の付加、置換または欠失を
含むその機能的変異体であって、ＨＬＡ−Ｃｗ^*０７に結合する前記機能的変異
体を含む、請求項１に記載の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合
ペプチド。
【請求項５】単離されたペプチドが、非水解性である、請求項１または請
求項４に記載の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチド。
【請求項６】単離されたペプチドが、Ｄ‐アミノ酸を含むペプチド、−ｐ
ｓｉ［ＣＨ_２ＮＨ］−還元アミドペプチド結合を含むペプチド、−ｐｓｉ［ＣＯ
ＣＨ_２］−ケトメチレンペプチド結合を含むペプチド、−ｐｓｉ［ＣＨ（ＣＮ）
ＮＨ］−（シアノメチレン）アミノペプチド結合を含むペプチド、−ｐｓｉ［Ｃ
Ｈ_２ＣＨ（ＯＨ）］−ヒドロキシエチレンペプチド結合を含むペプチド、−ｐｓ
ｉ［ＣＨ_２Ｏ］−ペプチド結合を含むペプチド、−ｐｓｉ［ＣＨ_２Ｓ］−チオメ
チレンペプチド結合を含むペプチドからなる群から選択される、請求項５に記載
の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチド。
【請求項７】請求項１に記載の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラ
スＩ結合ペプチドおよび非ＭＡＧＥ‐Ａ１２腫瘍抗原の単離されたＨＬＡクラス
ＩまたはクラスＩＩ結合ペプチドを含む組成物。
【請求項８】請求項４に記載の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラ
スＩ結合ペプチドおよび非ＭＡＧＥ‐Ａ１２腫瘍抗原の単離されたＨＬＡクラス
ＩまたはクラスＩＩ結合ペプチドを含む組成物。
【請求項９】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドおよび非Ｍ
ＡＧＥ‐Ａ１２腫瘍抗原のＨＬＡクラスＩまたはクラスＩＩ結合ペプチドがポリ
トープポリペプチドとして複合している、請求項７または請求項８に記載の組成
物。
【請求項１０】請求項１〜４のいずれかに記載のペプチドからなる群から
選択されたペプチドをコードする単離された核酸であって、ＭＡＧＥ‐Ａ１２の
全長をコードしない、前記単離された核酸。
【請求項１１】核酸が配列番号１のヌクレオチド配列のフラグメントを含
む、請求項１０に記載の単離された核酸。
【請求項１２】プロモーターに作動可能に結合された請求項１１に記載の
単離された核酸を含む、発現ベクター。
【請求項１３】ＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子をコードする核酸をさらに含む、
請求項１２に記載の発現ベクター。
【請求項１４】請求項１２に記載の発現ベクターおよび請求項１３に記載
の発現ベクターからなる群から選択される発現ベクターでトランスフェクトまた
はトランスフォームされた、宿主細胞。
【請求項１５】請求項１２に記載の発現ベクターでトランスフェクトまた
はトランスフォームされた宿主細胞であって、ＨＬＡ− Ｃｗ^*０７分子を発現す
る、前記宿主細胞
【請求項１６】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに特異的なＴリン
パ球でＴリンパ球集合体を選択的に富化する方法であって、Ｔリンパ球集合体を
含むＴ細胞源を、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに特異的なＴリンパ球
でＴリンパ球集合体を選択的に富化するのに十分な量のＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬ
Ａ結合ペプチドとＨＬＡ分子との複合体を提示する剤と接触させることを含む、
前記方法。
【請求項１７】剤がＭＡＧＥ‐Ａ１２タンパク質またはそのＨＬＡ結合フ
ラグメントと接触させた抗原提示細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾患の診断方法であ
って、対象から単離した生物学的サンプルをＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプ
チドに特異的な剤と接触させること、および剤とＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合
ペプチドとの間の相互作用を、該疾患の決定因子として定量することを含む、前
記診断方法。
【請求項２０】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの発現を特徴とす
る疾患の診断方法であって、対象から単離した生物学的サンプルを複合体を結合
する剤と接触させること、および複合体と剤との間の相互作用を、該疾患の決定
因子として定量することを含む、前記診断方法。
【請求項２２】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾患を有する対象を
治療する方法であって、該疾患を改善するのに十分な量のＭＡＧＥ‐Ａ１２Ｈ
ＬＡ結合ペプチドを対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２４】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾患を有する対象を
治療する方法であって、該疾患を改善するのに十分な量の請求項７または請求項
８に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２６】ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾患を有する対象を
治療する方法であって、該疾患を改善するのに十分な量のＨＬＡ分子とＭＡＧＥ
‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドとの複合体の対象における存在を選択的に富化す
る剤を対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２７】剤が、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドを含む、請
求項２６に記載の方法。
【請求項２８】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択される、請求項２６または請求項２７に記載
の方法。
【請求項２９】ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾患を有する対象を
治療する方法であって、該疾患を改善するのに十分な量の自己由来Ｔリンパ球を
対象に投与することを含み、ここで該Ｔリンパ球はＨＬＡ分子およびＭＡＧＥ‐
Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの複合体に特異的である、前記方法。
【請求項３０】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの機能的変異体を
同定する方法であって、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチド、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合
ペプチドに結合するＨＬＡ結合分子およびＨＬＡ結合分子により提示されたＭＡ
ＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡに刺激されたＴ細胞を選択すること、変異体ペプチドを調整するために、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの第
一のアミノ酸残基を変異させること、ＨＬＡ結合分子への変異体ペプチドの結合、およびＴ細胞の刺激作用を提供する
ことを含み、ここでＨＬＡ結合分子への変異体ペプチド結合およびＨＬＡ結合分
子に提示された変異体ペプチドによるＴ細胞の刺激作用が、変異体ペプチドが機
能的変異体であることを示すものである、前記方法。
【請求項３２】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、および（ｉｉ）配列番号
６のアミノ酸配列を含むペプチドからなる群から選択される、請求項２９に記載
の方法。
【請求項３３】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドによるＴ細胞の刺
激作用と機能的変異体によるＴ細胞の刺激作用とを、機能的変異体によるＴ細胞
の刺激作用の有効性決定因子として比較する工程をさらに含む、請求項３１に記
載の方法。
【請求項３４】請求項１〜４のいずれかに記載のポリペプチドに選択的に
結合する単離されたポリペプチドであって、ＨＬＡ分子ではない、前記単離され
たポリペプチド。
【請求項３５】単離されたポリペプチドが抗体である、請求項３４に記載
の単離されたポリペプチド。
【請求項３６】抗体がモノクローナル抗体である、請求項３５に記載の抗
体。
【請求項３７】単離されたポリペプチドが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａ
ｂ）_２フラグメントまたはＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに特異的なＣ
ＤＲ３領域を含むフラグメントからなる群から選択される、請求項３４に記載の
単離されたポリペプチド。
【請求項３８】ＨＬＡ分子とＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの複
合体に選択的に結合する、単離されたＴリンパ球。
【請求項３９】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択される、請求項３８に記載の単離されたＴリ
ンパ球。
【請求項４０】ＨＬＡ分子とＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドとの
複合体を含む、単離された抗原提示細胞。
【請求項４１】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドが、（ｉ）配列番
号２のアミノ酸配列のフラグメントからなるペプチド、（ｉｉ）配列番号６のア
ミノ酸配列を含むペプチド、および（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のペプチド
の機能的変異体からなる群から選択される、請求項４０に記載の単離された抗原
提示細胞。
【請求項４２】請求項１〜４のいずれかに記載のポリペプチドおよび薬学
的に許容される担体を含む、ワクチン組成物。
【請求項４３】アジュバントをさらに含む、請求項４２に記載のワクチン
組成物。
【請求項４４】請求項３８および３９に記載のＴリンパ球および請求項４
０および４１に記載の抗原提示細胞からなる群から選択される細胞、ならびに薬
学的に許容される担体を含む、ワクチン組成物。
【請求項４５】アジュバントをさらに含む、請求項４４に記載のワクチン
組成物。
【請求項４６】請求項１０に記載の単離した核酸分子および薬学的に許容
される担体を含む、ワクチン。
【請求項４７】アジュバントをさらに含む、請求項４６に記載のワクチン
。
【請求項４８】請求項３１に記載の方法で同定された、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの、単離された機能的変異体。
【請求項４９】ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドミメティックの候
補を同定する方法であって、ＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドに結合するＨＬＡ分子を提供すること、
ＨＬＡ分子を試験分子と接触させること、および試験分子のＨＬＡ分子への結合
を定量することを含み、ここでＨＬＡ分子に結合する試験分子が、ＭＡＧＥ‐Ａ
１２ＨＬＡ結合ペプチドミメティックの候補である、前記方法。
【請求項５０】さらにＨＬＡ分子と候補ミメティックとの複合体を形成し
、該複合体をＨＬＡ分子とＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡ結合ペプチドの複合体に結
合するＴ細胞に接触させ、Ｔ細胞に対する活性化をアッセイすることを含む、請
求項４９に記載の方法。
【請求項５１】Ｔ細胞の活性化が、Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞によるインター
フェロンγの産生、Ｔ細胞による腫瘍壊死因子の産生、およびＴ細胞による標的
細胞の細胞溶解からなる群から選択される特性で示される、請求項５０に記載の
方法。
【請求項５２】単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチ
ド、またはＨＬＡクラスＩ分子に結合する、１個または２個以上のアミノ酸の付
加、置換または欠失を含むその機能的変異体を含む、タンパク質マイクロアレイ
。
【請求項５３】単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチ
ドが、配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項５２に記載のタンパク質マイク
ロアレイ。
【請求項５４】単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチ
ドが、配列番号４、配列番号５、およびその機能的変異体からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載のタンパク質マイクロアレイ。
【請求項５５】ＭＡＧＥ‐Ａ１２の発現を特徴とする疾患の診断方法であ
って、請求項５２に記載されたタンパク質マイクロアレイを、該疾患を有する疑
いのある主体から単離した生物学的サンプルに接触させること、および該生物学
的サンプルの組成物の単離されたＭＡＧＥ‐Ａ１２ＨＬＡクラスＩ結合ペプチ
ドへの結合を定量することを含む、前記方法。
【請求項５６】生物学的サンプルの構成が、抗体、Ｔリンパ球、およびＨ
ＬＡ分子からなる群から選択される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】疾患が癌である、請求項５５に記載の方法。