TW201536919A - 對ｇｆｐ抗原具有專一性之單株抗體、融合瘤細胞株及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明揭露一種抗GFP(Green Flouresence Protein)單株抗體之融合瘤細胞株，寄存編號為BCRC 960476，由上述融合瘤細胞株所產生之單株抗體可辨認GFP綠螢光蛋白。該單株抗體已經由胺基酸序列定序和質譜鑑定方法，定出其胺基酸序列。該單株抗體可應用於酵素結合免疫吸附分析、西方墨點法以及免疫沉澱法等。進一步可延伸出將該抗GFP單株抗體偶合至物理性載體上做為純化GFP融合蛋白質之應用。

Description

對GFP抗原具有專一性之單株抗體、融合瘤細胞株及其用途

本發明係關於一種單株抗體之製備及其相關衍生應用，特別是關於一種對GFP抗原具有專一性之單株抗體、融合瘤細胞株及其用途。

綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein)，簡稱GFP，此一蛋白質是在1962年時，由日本科學家下村脩和美國科學家馬丁查爾菲等人在維多利亞多管發光水母中發現野生型綠色螢光蛋白開始的。其基因所產生之蛋白質，在藍色波長範圍的光線激發下，會發出綠色螢光。此一發光過程需要冷光蛋白質水母酵素(aequorin)與鈣離子(Ca2+)產生交互作用才可發出螢光。而其他生物體發出的螢光，是螢光素(luciferin)經由螢光素酶(luciferase)催化後，螢光素變成一種不穩定的化合物，並以螢光的方式釋放出能量。例如：螢火蟲。

人體中並無GFP的存在。但在細胞生物學與分子生物學領域中，GFP基因常被用作一個報導基因(reporter gene)。一些經過修飾的GFP蛋白質可以作為生物探針，或者可當做一個tag(標籤)與其他小分子構築成所謂之融合蛋白，以作為某些實驗的分析方法或材料。甚或可把GFP蛋白的基因轉殖到魚，以形成高經濟價值的觀賞螢光魚。

自2008年GFP螢光蛋白的發現獲得諾貝爾化學獎後，GFP為目前生物醫學研究中的重要蛋白之一。科學家將相關或未知蛋白的基因序 列與GFP蛋白基因序列構築在一起形成所謂的GFP融合蛋白，藉此以研究該蛋白之相關特性。因此對於以GFP蛋白應用於GFP融合蛋白的純化、GFP融合蛋白免疫沉澱方法，和鍵結至物理性載體上以分離標記細胞等之相關市場需求是相當可觀的。

對於可從E.coli中純化出所表現的GFP蛋白(或其融合蛋白)的產品，目前市面上並無相關的純化試劑套組發售。因此對於純化GFP蛋白(融合蛋白)都必須在該蛋白(融合蛋白)前加上一個標籤tag(eg；His,GST等)。要純化標籤His的GFP蛋白(融合蛋白)就必須購買Nickel Magnetic Agarose Beads，或是要純化標籤GST的蛋白(融合蛋白)就必須購買Glutathione Agarose Beads等。而其所純化出來的蛋白並不是純的GFP蛋白(融合蛋白)。因此必須再加入相關酵素把標籤(tag)蛋白切掉，然後才是沒有tag的GFP蛋白(融合蛋白)。此實驗過程步驟繁雜。再加上把標籤蛋白切掉後所得之GFP蛋白(融合蛋白)回收效率較低，因此會大幅降低GFP蛋白(融合蛋白)之純度和量。

如上所述，現有相關生物科技領域中亟待發展一種具有高度專一性、可有效辨識GFP蛋白之抗體。

據此，本發明之目的在於提供一種融合瘤細胞株，其係源自於BALB/c小鼠脾臟細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合而成，該融合瘤細胞株所產生之單株抗體對於GFP抗原具有高度專一性及親和力，該融合瘤細胞株之寄存編號為BCRC 960476。

本發明之另一目的在於提供一種對GFP抗原具有專一性之 單株抗體，其係由寄存編號為BCRC 960476之融合瘤細胞株所產製。較佳地，該單株抗體之重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO.1、輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.1具有三個互補決定區，分別位於SEQ ID NO.1之第26-32、第52-57、第99-108個胺基酸位置，SEQ ID NO.2具有三個互補決定區，分別位於SEQ ID NO.2之第24-34、第50-56、第89-95個胺基酸位置，且與該上述重鏈或輕鏈上三個互補決定區之胺基酸序列相似度達到98%以上者，亦可被視為是相同之抗體。

本發明之又一目的在於提供一種將前述單株抗體用於GFP抗原檢測之用途。較佳地，該GFP抗原檢測之方法包括酵素結合免疫吸附分析法、西方墨點法及免疫沉澱法。

本發明之又一目的在於提供一種可辨識GFP抗原之單株抗體衍生物，其包括前述之單株抗體，且該單株抗體至少偶合於一載體上以形成該單株抗體衍生物。

本發明之又一目的在於提供一種分離具有GFP抗原之標的物之方法，包括使該單株抗體衍生物與該具有GFP抗原之標的物接觸，使該單株抗體衍生物結合於該標的物上，並透過一分離手段將結合有該單株抗體衍生物之標的物予以分離。

透過本發明所提供之技術手段，以前述具高度專一性及親和力之單株抗體及其融合瘤細胞株，未來可應用於酵素結合免疫吸附分析法、西方墨點法以及免疫沉澱法等之生物實驗方法，或者可將此抗GFP單株抗體偶合至物理性載體上的衍生物，作為純化GFP-fusion蛋白質之用。

第1圖係顯示融合瘤細胞株所產生之抗GFP單株抗體(C3C10C10)之序列鑑定結果，其分別顯示出抗GFP單株抗體之重鏈(heavy chain)序列和輕鏈(Light chain)序列。

第2-1、2-2圖係抗GFP單株抗體(C3C10C10)之抗體質譜鑑定結果圖。

第3圖係顯示不同稀釋濃度之抗GFP單株抗體(C3C10C10)的效價。

第4圖係顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)用於西方墨點法的結果。

第5圖係顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)偶合磁珠用於免疫沉澱GFP蛋白之Coomassie blue的檢驗結果。

第6圖係顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)偶合磁珠用於免疫沉澱GFP蛋白時以Western blot測試的結果。

第7-1圖顯示抗GFP抗體(C3C10C10)重鏈上三個CDRs(Complementarity determining regions)的胺基酸序列及其相關位置。

第7-2圖顯示抗GFP抗體(C3C10C10)輕鏈上三個CDRs(Complementarity determining regions)的胺基酸序列及其相關位置。

實施例1：GFP綠色螢光蛋白的製備

利用PCR方法製備GFP蛋白的全長基因片段，並與相關與相同酵素作用後的pET21a質體進行接合反應，以製備GFP螢光蛋白之載體。再將GFP螢光蛋白之載體轉殖到大腸桿菌BL21中，以其為宿主大量表現 GFP螢光蛋白。最後利用超音波震盪器破菌後，再利用親合性管柱分離法及陰陽離子交換法分離出GFP蛋白，獲得純度較高的GFP螢光蛋白。

實施例2：小白鼠的免疫

選擇購自「樂斯科生物科技有限公司」所生產的六週齡BALB/c雌鼠。取用90ug上述純化出的GFP蛋白溶於0.15ml的PBS溶液，和等體積的弗羅恩特氏佐劑(Freund’s Adjuvant)充分混合均勻後，以皮下注射方式打入老鼠體內。每隻老鼠打入0.1ml(含30ug的GFP蛋白)進行免疫。間隔一個月後再進行一次皮下注射。第二次皮下注射後第14天抽取老鼠血清，進行抗GFP綠色螢光蛋白抗體力價測試。待力價上升後，再取30ug GFP綠色螢光蛋白進行老鼠尾巴靜脈注射。三天後取脾臟細胞與老鼠之骨髓瘤細胞株進行細胞融合。之後再進行單株抗體的篩選。

實施例3：細胞融合反應

已完成免疫之小鼠以無菌解剖用具犧牲。取其脾臟細胞並進行細胞計數。將培養4天的Myeloma cells以無菌滴管沖洗下來匯集後離心(1000rpm,10min)。去除上清液後以free RPMI medium懸浮並離心(1000rpm,10min)，重複此步驟三次。Spleen cells和Fo cells都以free FBS RPMI medium清洗三次後，且計算其數量為spleen cells：Fo cells=2：1。將此比例的spleen cells和Fo cells懸浮後各5ml加置於15ml離心管中離心並去除上清液。再以free FBS RPMI medium清洗一次後離心(1000rpm,10min)備用。spleen cells和Fo cells混合離心的同時，在15ml離心管中加入1ml聚乙二醇(Polyethylene Glycol；PEG-1500)置於37℃水浴槽中預熱。spleen cells 和Fo cells混合離心後將上清液徹底吸乾，慢慢加入1ml預熱之PEG 1500搖勻。再以700rpm離心5min後去掉上清液。再分次加入17ml含有HAT之20% FBS RPMI medium懸浮均勻後，取100μl加入已含有巨噬細胞之96 well盤中，並置於37℃，CO₂(5%)培養箱內培養。培養7~14天後待融合瘤細胞生長至80%群集時，再取細胞懸浮液進行ELISA分析，看融合細胞是否有抗體力價產生。

實施例4：以酵素免疫分析法(ELISA)測試抗血清中免疫球蛋白之isotype

將抗原配製為0.1μg/ml加至96孔分析盤內，置於4℃冰箱至隔天。將盤內液體甩乾後，加入300μl PBST(PBS，0.1% Tween20)於每孔中清洗3次。清洗完後於分析盤中每孔加入300μl填充溶液(blocking buffer：PBST，5%脫脂奶粉)做Blocking步驟，並置於室溫反應2小時。Blocking完成後，將其盤內液體甩乾，加入300μl PBST於每孔中清洗3次，再分別於分析盤內各孔加入100μl之待測抗血清，置於37℃反應0.5小時。之後將其盤內液體甩乾，並加入300μl PBST於每孔中清洗3次。將Isotype Kit(Southern Biotech；Cat.No5300-05)內之clonotyping system-HRP以blocking buffer稀釋1000倍後，分別於每well加入100μl，然後在37℃振盪器上反應30分鐘。之後將其盤內液體甩乾再加入300μl PBST於每孔中清洗3次。最後於分析盤內每孔加入100μl呈色劑，室溫反應10min。反應完成後於分析盤內每孔加入終止液100μl停止反應，並讀取OD450值。

實施例5：極限稀釋

用無菌滴管吸培養瓶內的medium，將具有分泌抗體的 hybridoma cell細胞由培養瓶上沖洗下來，吸取30μl進行細胞計數。得知每ml所含的細胞量後，從懸浮細胞液抽取100μl進行dilution。之後將細胞放入已含有胸腺細胞的96 well plate中。其餘細胞繼續擴大培養凍存。limiting dilution後需每天觀察細胞生長情形與是否為單株細胞，待細胞生長至某數量後，取其medium用ELISA測其活性。若篩選出具有活性單株細胞，則擴大培養後取其medium以Western blotting、ELISA等方法測其活性與isotype。

實施例6：單株抗體的製備及純化

將老鼠(BALB/c)用手固定後以酒精棉消毒，將0.5ml pristane注入腹腔內，經過14天後，將融合瘤細胞(1×10⁵/0.5ml/隻)打入已用pristane處理之老鼠腹腔內。待老鼠身體腫大，即腹水已產生時，可用5ml針筒抽取腹水。把腹水收集於15ml離心管內，放於-20℃冰箱貯存。上述單株抗體的大量細胞培養液可直接利用蛋白質G瓊脂糖(Amersham Pharmacia)管柱來純化。而老鼠產生之腹水需先經由硫酸銨(Ammonium Sulfate)沉澱以及硫酸鈉溶液(20mM Sodium Phosphate,pH=7)透析處理，再利用蛋白質G瓊脂糖管柱來純化單株抗體。

實施例7：利用Western blotting方法測試免疫球蛋白之活性

注入不同濃度分析原(GFP螢光蛋白)至膠孔內。將膠台放入電泳槽以150V進行大約60分鐘。把洋菜瓊脂膠拿下來進行轉漬作用。接著將PVDF膜放入5%脫脂牛奶進行blocking反應，約放置室溫搖晃2小時。再將blocking完的PVDF膜分別加入欲反應之抗體，1^st Ab：Mouse anti-GFP(C3C10C10,1mg/ml,1：10000)，在振盪器上反應60分鐘。置入PBST buffer，在振盪器上清洗，至少清洗3次。再加入2^nd Ab：Goat anti-mouse HRP (0.8mg/ml,1：2000)，在振盪器上反應60分鐘。置入PBST buffer，在振盪器上清洗，至少清洗3次。最終利用DAB呈色。

實施例8：抗GFP單株抗體偶合至磁珠

將上述老鼠抗GFP之單株抗體和一微米之磁珠置於一化學緩衝液中(例如：磷酸鹽緩衝液和2-(N-啉)乙磺酸緩衝液等)，並於旋轉檯旋轉一個半小時致使抗GFP抗體和磁珠偶合完成。之後再加入三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris buffer)緩衝液平息偶合完成的「磁珠-抗體」。再以甘胺酸溶液(glycine)做blocking以避免非特一性抗原的結合。本發明係於室溫下裝置進行偶合，較佳偶合溫度為20℃左右。

實施例9：免疫沉澱法

取用不同量細菌數原核系統GFP蛋白之載體轉殖到大腸桿菌中以表現原核系統之GFP蛋白。或不同量之真核系統GFP蛋白之載體轉殖到哺乳類細胞中表現。將以上之GFP蛋白表現之cell lysate加至「抗GFP單株抗體-磁珠」的產品中，加入PBS在室溫中搖晃1小時。再利用磁座將抗GFP單株抗體偶合磁珠和上清液分離。置入PBST buffer至少清洗3次。最終加入2X sample dye加熱，並用磁座分離出上清液。把上清液注入SDS-PAGE中通電跑膠。最終以Coomassie blue和Westrn blot做確認。Western blot的反應條件為：1^st Ab：Mouse anti-GFP HRP(3D8A1B8,1mg/ml,1：10000)，在振盪器上反應60分鐘。再以PBST buffer，在振盪器上清洗至少清洗3次，最終利用DAB呈色確認。

結果

由上述各實施例所揭露之材料及方法進行相關實驗，其結果 係依序如第1~7圖所示，將依序簡要說明如下。

第1圖係顯示融合瘤細胞株所產生之抗GFP單株抗體(C3C10C10)之序列鑑定結果。圖中分別顯示抗GFP單株抗體之重鏈(heavy chain)序列和輕鏈(Light chain)序列，其重鏈及輕鏈之序列分別編列為如序列表所示之SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2。

第2-1、2-2圖係抗GFP單株抗體(C3C10C10)之抗體質譜鑑定結果圖。其中重鏈(Heavy chain)之序列覆蓋範圍為97.3%，輕鏈(Light chain)之序列覆蓋範圍為88.46%。

第3圖係顯示不同稀釋濃度之抗GFP單株抗體(C3C10C10)的效價。此為酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)的測試結果。其中96孔盤中每孔coating 10ng之Myc-GFP-His抗原。一級抗體使用不同稀釋濃度之老鼠抗GFP單株抗體(C3C10C10,1mg/ml)。二級抗體使用的是山羊抗老鼠冷光劑(0.8mg/ml,1：2000稀釋)抗體。縱軸係表示OD450吸光值。而橫軸係表示抗GFP單株抗體不同的稀釋濃度。

第4圖係顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)用於西方墨點法的結果(同時參閱表1)。其中分別使用2μl、1μl、0.5μl之大腸桿菌表現Myc-GFP-His抗原，和分別使用5x10⁵、2.5x10⁵、1.25x10⁵之哺乳類細胞株(293S)表現Myc-GFP-His抗原，分別與50ng、25ng、12.5ng之Myc-GFP-His抗原之反應結果。最終以DAB呈色來確認所能結合的抗原量。所使用之一級抗體為老鼠抗GFP單株抗體(C3C10C10,1mg/ml,1：10000稀釋)。二級抗體為山羊抗老鼠冷光劑(0.8mg/ml,1：2000稀釋)。結果顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)力價很高，並有高度專一性及親和力。

表2係顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)與磁珠偶合之結合率。其中0.1mg抗GFP單株抗體與10mg羧基磁珠之結合率為96±2%。0.2mg抗GFP單株抗體與10mg羧基磁珠之結合率為83±2%。0.5mg抗GFP單株抗體與10mg羧基磁珠之結合率為74±2%。故以0.1mg抗GFP單株抗體與10mg羧基磁珠之結合率為96±2%為最佳結合率。

第5圖係顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)偶合磁珠用於免疫沉澱GFP蛋白之Coomassie blue的檢驗結果(同時參閱表3)。5ug抗GFP單株抗體偶合磁珠，分別和(1)15μl、10μl、5μl大腸桿菌表現之Myc-GFP-His抗 原(圖5中第1-3欄)、或是和(2)2x10⁶、1x10⁶、5x10⁵之哺乳類細胞株(293S)所表現之Myc-GFP-His抗原(圖5中第4-6欄)，及與(3)3μg、2μg、1μg之Myc-GFP-His抗原在PBS中(圖5中第7-9欄)分別做免疫沉澱法。結果顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)偶合磁珠可沉澱出大腸桿菌和哺乳類細胞株(293S)所表現之Myc-GFP-His抗原，及溶於PBS中之Myc-GFP-His抗原。

第6圖係顯示抗GFP單株抗體(C3C10C10)偶合磁珠用於免疫沉澱GFP蛋白時以Western blot測試的結果(同時參閱表4)。1ug抗GFP單株抗體偶合磁珠，分別和(1)3μl、1.5μl、3.75μl之大腸桿菌表現之Myc-GFP-His抗原，及(2)5x10⁵、2.5x10⁵、1.25x10⁵之哺乳類細胞株(293S)表現的Myc-GFP-His抗原，與(3)500ng、250ng、125ng溶於PBS之Myc-GFP-His抗原分別做免疫沉澱法。接著使用一級抗體之老鼠抗GFP單株抗體冷光劑(3D8A1B8,1mg/ml,1：10000)做確認，最終利用DAB來呈色。結果顯示抗 GFP單株抗體(C3C10C10)可沉澱出GFP抗原，並有高度專一性及親和力。

第7-1圖顯示抗GFP抗體(C3C10C10)重鏈上三個CDRs(Complementarity determining regions)的胺基酸序列及其相關位置。三個CDRs的胺基酸序列分別為：CDR1(GYSFTGH)、CDR2(DPYFGG)和CDR3(LGIDGSHFPY)，其分別位於SEQ ID NO.1之第26-32、第52-57、第99-108個胺基酸位置。

第7-2圖顯示抗GFP抗體(C3C10C10)輕鏈上三個CDRs(Complementarity determining regions)的胺基酸序列及其相關位置。三個CDRs的胺基酸序列分別為：CDR1(KASQDINNYIA)、CDR2(YTSTLQP)和CDR3(LQYANLY)，其分別位於SEQ ID NO.2之第24-34、第50-56、第89-95個胺基酸位置。

結論

綜上所述，本發明提供一種融合瘤細胞株，其係源自於BALB/c小鼠脾臟細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合而成，該融合瘤細胞株所產生之單株抗體對於GFP抗原具有高度專一性及親和力，該融合瘤細胞株之寄存編號為BCRC 960476。

利用上述融合瘤細胞株，可生產一種對GFP抗原具有專一性之單株抗體。較佳地，該單株抗體之重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO.1、輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.1具有三個互補決定區，分別位於SEQ ID NO.1之第26-32、第52-57、第99-108個胺基酸位置，SEQ ID NO.2具有三個互補決定區，分別位於SEQ ID NO.2之第24-34、第50-56、第89-95個胺基酸位置，且與該上述重鏈或輕鏈上三個互補決定區之胺基酸序列相似度達到98%以上者，亦可被視為是相同之抗體。

利用上述單株抗體，可將其作為GFP抗原檢測之用途。較佳地，該GFP抗原檢測之方法包括酵素結合免疫吸附分析法、西方墨點法及免疫沉澱法。

利用上述單株抗體，可應用作為一種可辨識GFP抗原之單株抗體衍生物，其包括前述之單株抗體，且該單株抗體至少偶合於一載體上以形成該單株抗體衍生物。

利用該單株抗體衍生物，可衍生應用作為一種分離具有GFP抗原之標的物之方法，包括使該單株抗體衍生物與該具有GFP抗原之標的物接觸，使該單株抗體衍生物結合於該標的物上，並透過一分離手段將結合有該單株抗體衍生物之標的物予以分離。

透過本發明所提供之技術手段，以前述具高度專一性及親和 力之單株抗體及其融合瘤細胞株，未來可應用於酵素結合免疫吸附分析法、西方墨點法以及免疫沉澱法等之生物實驗方法，或者可將此抗GFP單株抗體偶合至物理性載體上的衍生物，作為純化GFP-fusion蛋白質之用。據此原理欲發展出一種實體產品時，可將上述單株抗體結合於磁珠、Sepharose、Resin等載體，使之產生一個「偶合物理性載體-單株抗體」的產品。此一產品即可解決習知純化GFP蛋白(融合蛋白)的問題。此產品不但可以直接從E.coli中純化出GFP蛋白(融合蛋白)，也能用於在真核細胞中進行GFP蛋白免疫沉澱和磁性標記細胞的分離。大幅增加科學界對於利用GFP蛋白(融合蛋白)和純化GFP蛋白(融合蛋白)的專一性、方便性和有效性。

由以上實施例可知，本發明所提供之對GFP抗原具有專一性之單株抗體、融合瘤細胞株及其用途確具產業上之利用價值，惟以上之敘述僅為本發明之較佳實施例說明，凡精於此項技藝者當可依據上述之說明而作其它種種之改良，惟這些改變仍屬於本發明之精神及以下所界定之專利範圍中。

【生物材料寄存】

寄存機構：財團法人食品工業發展研究所

寄存日期：民國103年3月4日

寄存編號：BCRC 960476

<110> 抗體王生物科技股份有限公司 姚振文

<120> 對GFP抗原具有專一性之單株抗體，融合瘤細胞株及其用途

<130> 103B0117

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 108

<212> PRT

<213> Mus musculus

<220>

<221> CDRs

<222> (26)..(32)

<223> CDRs

<220>

<221> CDRs

<222> (52)..(57)

<223> CDRs

<220>

<221> CDRs

<222> (99)..(108)

<223> CDRs

<400> 1

<210> 2

<211> 95

<212> PRT

<213> Mus musculus

<220>

<221> CDRs

<222> (24)..(34)

<223> CDRs

<220>

<221> CDRs

<222> (50)..(56)

<223> CDRs

<220>

<221> CDRs

<222> (89)..(95)

<223> CDRs

<400> 2

Claims (9)

1. 一種融合瘤細胞株，其係源自於BALB/c小鼠脾臟細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合而成，該融合瘤細胞株所產生之單株抗體對於GFP抗原具有高度專一性及親和力，該融合瘤細胞株之寄存編號為BCRC 960476。
2. 一種對GFP抗原具有專一性之單株抗體，其係由寄存編號為BCRC 960476之融合瘤細胞株所產製。
3. 如申請專利範圍第2項所述之單株抗體，其中該單株抗體之重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO.1、輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.1具有三個互補決定區(CDRs)，分別位於SEQ ID NO.1之第26-32、第52-57、第99-108個胺基酸位置，SEQ ID NO.2具有三個互補決定區(CDRs)，分別位於SEQ ID NO.2之第24-34、第50-56、第89-95個胺基酸位置。
4. 如申請專利範圍第3項所述之單株抗體，其中該單株抗體之重鏈胺基酸序列與SEQ ID NO.1之三個互補決定區之相似度達到98%以上。
5. 如申請專利範圍第3項所述之單株抗體，其中該單株抗體之輕鏈胺基酸序列與SEQ ID NO.2之三個互補決定區之相似度達到98%以上。
6. 一種如申請專利範圍第2、3、4或5項所述之單株抗體於GFP抗原檢測之用途。
7. 一種如申請專利範圍第6項所述之單株抗體於GFP抗原檢測之用途，其中該GFP抗原檢測之方法包括酵素結合免疫吸附分析法、西方墨點法及免疫沉澱法。
8. 一種可辨識GFP抗原之單株抗體衍生物，其包括如申請專利範圍第2、3、4或5項所述之單株抗體，且該單株抗體至少偶合於一載體上以形成該單株抗體衍生物。
9. 一種分離具有GFP抗原之標的物之方法，包括利用如申請專利範圍第8項所述之單株抗體衍生物與該具有GFP抗原之標的物接觸，使該單株抗體衍生物結合於該標的物上，並透過一分離手段將結合有該單株抗體衍生物之標的物予以分離。