TW201516030A - 含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法及含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物 - Google Patents

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Abstract

本發明為一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其係包括使用脂肪酶來處理含有含EPA的甘油酯的原料油脂，而得到含有低級醇EPA酯化合物之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物之步驟，前述處理的反應液中的水分含量為0.4質量%以上。

Description

含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法及含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物
本發明關於一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法及含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物。
多價不飽和脂肪酸及其衍生物係具有降低血脂肪等許多種生理活性，過去以來一直被使用作為醫藥品、化妝品、食品等的原料。於是有文獻檢討了高純度且品質良好的多價不飽和脂肪酸及其衍生物的精製方法。
例如在專利文獻1(日本特開昭59-113099號公報)記載了將含有脂肪酸甘油酯的油脂在鹼性條件下進行處理，而得到低級醇脂肪酸酯化合物的方法。
然而，在以鹼性條件處理油脂的情況，會有產生低級醇脂肪酸酯化合物的不飽和鍵異構化而成的異構物的情形。此異構物難以與並未異構化的低級醇脂肪酸酯化合物分離的情形很多。因此目前正需要能夠有效得到異構物的含量少的低級醇脂肪酸酯化合物的方法。
先前技術文獻 專利文獻
專利文獻1：日本特開昭59-113099號公報
本發明提供一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其係能夠以簡便的方法有效得到高純度的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，以及提供一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物。
本發明人發現，藉由使用脂肪酶來處理含有含EPA的甘油酯的原料油脂，而選擇性地得到低級醇EPA酯化合物的方法，不經過鹼性條件下的處理，即可得到高純度的低級醇EPA酯化合物，而完成了本發明。較具體而言，依據本發明所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，不經過鹼性條件下的處理，即可得到異構物少、高純度的低級醇EPA酯化合物。
1.本發明其中一個態樣所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，包括對於含有含EPA的甘油酯的原料油脂使用脂肪酶進行處理，得到含有低級醇EPA酯化合物之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物之步驟，前述處理的反應液中的水分含量為0.4質量%以上。
2.如上述1所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述處理的反應液可進一步含有相對於前述原料油脂9.5質量份為0.1質量份以上2.5質量份以下的低級醇。
3.如上述2所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述處理之中，可將前述低級醇連續或階段性地添加至前述處理的反應液。
4.如上述1至3中任一者所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述處理之中，可使用將前述脂肪酶固定化而成的固定化酵素。
5.如上述1至4中任一者所記載之低級醇脂肪酸酯化合物含有組成物的製造方法，其中前述處理之中，前述固定化酵素可為粒子狀。
6.如上述1至5中任一者所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述脂肪酶可為1,3位特異性脂肪酶。
7.如上述1至6中任一者所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述反應液的酸價可為2以上。
8.如上述1至7中任一者所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述原料油脂係進一步含有含DHA的甘油酯，前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物係進一步含有低級醇DHA酯化合物，前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物所含有的低級醇脂肪酸 酯化合物中的前述低級醇EPA酯化合物相對於前述低級醇DHA酯化合物的莫耳比率A(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)可高於前述原料油脂所含有的構成脂肪酸甘油酯的脂肪酸中的EPA相對於DHA的莫耳比率B(EPA/DHA)。
9.如上述8所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述莫耳比率A及前述莫耳比率B可滿足下述式(1)所表示之關係。
1.5≦A/B．．．．．(1)
10.如上述8或9所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物可含有低級醇脂肪酸酯化合物40質量%以上90質量%以下，前述低級醇脂肪酸酯化合物中的前述低級醇EPA酯化合物相對於前述低級醇DHA酯化合物的莫耳比率(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)可為3.0以上30以下。
11.如上述7至10之任一者所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物可進一步含有低級醇DHA酯化合物，並且可進一步包括蒸餾前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，以使前述低級醇EPA酯化合物及前述低級醇DHA酯化合物的混合物與該混合物以外的成分分離之步驟。
12.如上述11所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之 組成物的製造方法，其中前述混合物的FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比可為0.075以下。
13.如上述11或12所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述混合物可含有低級醇脂肪酸酯化合物90質量%以上，前述低級醇脂肪酸酯化合物可以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30
14.如上述11至13中任一者之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中可進一步包括使前述混合物與銀鹽的水溶液接觸之步驟。
15.如上述14所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中可進一步包括藉由蒸餾與前述銀鹽的水溶液接觸後的前述混合物，以使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物分離，而得到前述低級醇EPA酯化合物之步驟。
16.如上述11至13中任一者所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中可進一步包括藉由蒸餾前述混合物，以使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物分離，而得到前述低級醇EPA酯化合物之步驟。
17.本發明其中一個態樣所關連的含有低級醇脂肪酸 酯化合物之組成物係含有低級醇脂肪酸酯化合物40質量%以上90質量%以下，前述低級醇脂肪酸酯化合物係以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30
18.如上述17所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其中FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比可為0.15以下。
19.本發明其中一個態樣所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，係含有低級醇脂肪酸酯化合物90質量%以上，前述低級醇脂肪酸酯化合物係以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30
20.如上述19所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其中FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比可為0.075以下。
21.如上述17至20之任一者所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其中酸價可為未滿5。
22.本發明其中一個態樣所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，包括蒸餾如上述17所記 載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，以使上述20所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物與前述組成物以外的成分分離之步驟。
23.本發明其中一個態樣所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，包括使如上述19或20所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之物與銀鹽的水溶液接觸之步驟。
24.本發明其中一個態樣所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，係包括藉由蒸餾如上述19至21之任一者所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，以使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物分離，而得到低級醇EPA酯化合物之步驟。
25.本發明其中一個態樣所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物係含有低級醇EPA酯化合物96.5質量%以上，且FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.085以下。
26.本發明其中一個態樣所關連的食品組成物的製造方法，包括使用選自藉由如上述11至16及22至24之任一者所記載之製造方法所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物及如上述25所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的至少1種，而得到食品組成物之步驟。
27.本發明其中一個態樣所關連的膠囊劑之製造方 法，包括使用選自藉由如上述11至16及22至24之任一項所記載之製造方法所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物及上述25所記載之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的至少1種，而得到膠囊劑之步驟。
依據上述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，藉由包括對於含有含EPA的甘油酯的原料油脂使用脂肪酶進行處理，而得到含有低級醇EPA酯化合物的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物之步驟，且前述處理的反應液中的水分含量為0.4質量%以上，可有效得到高純度的低級醇EPA酯化合物，且可提高酵素(脂肪酶)的安定性。
較具體而言，酵素的安定性提升的結果，酵素可重覆使用，因此可謀求製造成本的減低及節省資源。另外，不經過鹼性條件下的處理即可得到低級醇EPA酯化合物，因此可減少異構物的產生。此外，藉由前述使用脂肪酶的處理，能夠由多種脂肪酸甘油酯之中使含EPA的甘油酯選擇性地轉換成低級醇EPA酯化合物。
圖1表示本發明其中一個實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法之流程圖。
以下參照圖式對本發明作詳細說明。此外，在本發明中只要沒有特別註明，則「份」意指「質量份」，「%」意指「質量%」。但是，甘油酯中的各種構成脂肪酸的「比率」及「%」、以及低級醇脂肪酸酯化合物中的各種脂肪酸酯化合物的「比率」及「%」，意指各構成脂肪酸的「莫耳比率」及「莫耳%」。
<含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法>
本發明其中一個實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法(以下亦簡稱為「製造方法」)，係包括使用脂肪酶來處理含有EPA(二十碳五烯酸，C20：5)甘油酯的原料油脂，而得到含有低級醇EPA酯化合物之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物(以下亦稱為「本實施形態所關連的組成物」)之步驟，而前述處理的反應液中的水分含量為0.4質量%以上。
<低級醇：定義>
在本發明中，「低級醇」是指碳原子數為1、2或3的醇(甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇)。
<低級醇脂肪酸酯化合物：定義>
另外，在本發明中，「低級醇脂肪酸酯化合物」，是指構成脂肪酸的羧基(-CO2H)被低級醇酯化而成的化合 物。
<低級醇EPA酯化合物>
另外，在本發明中，「低級醇EPA酯化合物」，是指構成EPA(二十碳五烯酸)的羧基(-CO2H)被低級醇酯化而成的化合物。此外，在本發明中，「低級醇DHA酯化合物」，是指構成DHA(二十二碳六烯酸)的羧基被低級醇酯化而成的化合物。
<甘油酯的定義>
另外，在本發明中，「甘油酯」包括單甘油酯、二甘油酯、及三甘油酯的甘油脂肪酸脂的概念。
<含EPA的甘油酯的定義>
此外，在本發明中「含EPA的甘油酯」，是指包括構成單甘油酯、二甘油酯、及三甘油酯的甘油脂肪酸酯化合物的脂肪酸殘基的一部分或全部為EPA的化合物，包括EPA單甘油酯、EPA二甘油酯及EPA三甘油酯的概念。在本發明中「含DHA的甘油酯」是指包括構成單甘油酯、二甘油酯、及三甘油酯的甘油脂肪酸酯化合物的脂肪酸殘基的一部分或全部為DHA的化合物，包括DHA單甘油酯、DHA二甘油酯及DHA三甘油酯的概念。
<圖1的說明>
圖1表示本實施形態所關連的製造方法之流程圖。在本實施形態所關連的製造方法中，首先，對於含有含EPA的甘油酯的原料油脂使用脂肪酶進行處理，(圖1之步驟S1)，而得到含有低級醇EPA酯化合物之本實施形態所關連的組成物。
<酵素處理(使用脂肪酶的處理)>
在本實施形態所關連的製造方法中，以酵素(脂肪酶)來處理含有含EPA的甘油酯的原料油脂。較具體而言，藉由使含有含EPA的甘油酯的原料油脂與脂肪酶及低級醇接觸，使該含EPA的甘油酯與脂肪酶發生作用，而使該含EPA的甘油酯選擇性地轉換成低級醇EPA酯化合物。
<原料油脂>
本實施形態所關連的製造方法所使用的原料油脂，只要是含有含EPA作為構成脂肪酸的甘油脂肪酸脂(含EPA的甘油酯)的油脂即可，以脂肪酸組成中的EPA含量為12質量%以上(通常為20質量%以下)的油脂為佳。此外，在原料油脂中，還可含有含DHA(C22：6)等、EPA以外的脂肪酸作為構成脂肪酸的甘油酯。在原料油脂含有含DHA作為構成脂肪酸的甘油酯的情況，係以脂肪酸組成中的DHA的含量為15質量%以下的油脂為佳。另外，原料油脂所含有的EPA以外的脂肪酸三甘油 酯，亦可為多價不飽和脂肪酸的三甘油酯。多價不飽和脂肪酸，是指碳數16以上且分子內具有2個以上雙鍵的不飽和脂肪酸，除了上述EPA或DHA之外，還可列舉花生油酸(C20：4)、二十二碳五烯酸(C22：5)、硬脂艾杜糖酸(C18：4)、蘇子油酸(C18：3)、亞麻油酸(C18：2)。
<油脂>
「油脂」通常意指三甘油酯，而在本發明中，油脂還可包括二甘油酯、單甘油酯等可與酵素(脂肪酶)發生作用的其他甘油酯。
<原料油脂>
原料油脂可列舉例如魚油、魚油以外的動物油、植物油、藻類、微生物所產生的油、該等的混合油脂、或該等的廢油。
魚油可列舉沙丁魚油(EPA8莫耳%以上20莫耳%以下)、鮪魚油(EPA3莫耳%以上10莫耳%以下)、鰹魚油(EPA5莫耳%以上10莫耳%以下)、鱈魚肝油(EPA5莫耳%以上15莫耳%以下)、鮭魚油(EPA5莫耳%以上15莫耳%以下)、墨魚油(EPA10莫耳%以上18莫耳%以下)、鯡魚油(EPA5莫耳%以上15莫耳%以下)。
此處，各魚油中的EPA的含量，是指在該魚油中，含有作為構成甘油酯的脂肪酸的EPA的比例。植物油通 常不含EPA或DHA，然而可使用例如藉由基因轉殖技術含有EPA或DHA的大豆油、菜種油、棕櫚油、橄欖油等作為原料油脂。來自藻類、微生物的油可列舉例如來自Mortierella alpine、Euglena gracilis等的含花生油酸的油、來自鵝掌菜、黑菜、裙帶菜、羊栖菜、小海帶、褐藻的其中一種的含EPA的油、來自Crypthecodinium cohnii、Vibrio marinus、Thraustochytrium aureum、Shewanella屬細菌等的含DHA的油等，魚油以外的動物油可列舉例如鯨油、羊油、牛油、豬油、乳脂肪、蛋黃油等。另外，原料油脂的酸價通常為0以上2.5以下，可為0以上2以下。
此外，原料油脂亦可含有水分。另外，在本發明中，「廢油」是指使用後的魚油、植物性油脂、或動物性油脂，亦可含有水分。在原料油脂含有EPA及DHA兩者的情況，從較能夠提高所得到的低級醇EPA酯化合物的比例的觀點看來，原料油脂所含有的構成脂肪酸甘油酯的脂肪酸中的EPA與DHA的莫耳比率係以EPA/DHA=0.5以上6以下為佳，1以上3以下為較佳。
<酵素>
本實施形態所關連的製造方法所使用的酵素的性狀可為粗精製，部分精製，精製的任一者。另外，可為游離型或可經過固定化，而從可再利用、酵素處理後的後續處理簡便的觀點看來，以將前述脂肪酶固定化而成的固定化酵 素為佳。
固定化酵素可為將酵素固定化於擔體而成者。藉由將前述酵素處理的反應液的水分含量定在0.4質量%以上，可提升酵素的安定性，結果，酵素可重覆使用，因此使用將脂肪酶固定化而成的固定化酵素的情況，將固定化酵素由反應液中取出，可因應必要以水等洗淨後再度使用。因此，再利用性、操作性、及經濟性優異。
<擔體>
擔體可列舉離子交換樹脂、多孔性樹脂、陶瓷、碳酸鈣、矽藻土、玻璃珠、活性碳等的有機擔體、無機擔體、有機無機複合擔體。若考慮耐久性、與脂肪酶的親和性等，則擔體係以由離子交換樹脂、多孔性樹脂、陶瓷所構成為佳。固定化的方法可列舉包括法、交聯法、物理的吸附法、離子吸附法、共價鍵法、疏水結合法等，而從結合強度高的觀點看來，包括法、交聯法、或共價鍵法為佳。從與原料油脂的接觸面積大，且可在原料油脂中均勻分散的觀點看來，固定化酵素係以粒子狀為佳。或者固定化酵素可固定化於薄膜或膜。
在固定化酵素為粒子狀的情況，可為酵素固定化在粒子狀擔體而成者。此情況下，擔體的粒徑係以0.01mm以上3mm以下為佳，0.05mm以上1.5mm以下為較佳。另外，從與原料油脂、低級醇及水的分散性優異的觀點看來，比重係以0.2以上2.5以下為佳。
<脂肪酶>
從具有催化酯交換反應的作用的觀點看來，酵素係以例如脂肪酶為佳。脂肪酶依照國際酵素分類是表示為「脂肪酶(E.C.3.1.1.3)」，能夠以科學方式鑑定。
<脂肪酶的種類>
本實施形態的製造方法所使用的脂肪酶可為1,3位特異性或非特異性。在本實施形態所關連的組成物之中，從可提高低級醇EPA酯的莫耳比率的觀點看來，脂肪酶係以1,3位特異性脂肪酶，亦即僅在三醯基甘油的1,3位發生特異性的作用的酵素，或1,3位比2位較優先發生作用的酵素為佳。
<脂肪酶的具體例>
脂肪酶可列舉例如來自歸類在根粘菌屬(Rhizomucor Miehei)、白黴菌屬(Mucor miehei、Mucor java nicus)、麴菌屬(Aspergillus oryzae、Aspergillus niger)、黑黴菌屬(Rhizopus sp.)、青黴菌屬(Penicillium roqueforti、Penicillium camembertii)、嗜熱真菌屬(Thermomyces lanuginose)等的絲狀菌、歸類在念珠菌屬(Candida Antarctica、Candida Rugosa、Candida Cylindracea)、畢赤酵母菌屬(Pichia)等的酵母菌、歸類在假單胞菌屬(Pseudomonas sp.)、無色桿菌 屬(Acromobacter sp.)、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia sp.)、產鹼桿菌屬(Alcaligenes sp.)、類酵母真菌Pseudozyma屬(Pseudozyma sp.)等的細菌、豬胰臟等的動物的脂肪酶。亦可使用市售的脂肪酶。可列舉例如Rhizopus Delemar的脂肪酶(Ta-lipase：田邊製藥公司製)、Candida Cyiindacea(Lipase OF：名糖產業公司製)及Psendomans屬的脂肪酶(Lipase PS、Lipase AK：天野製藥公司製)，固定化酵素可列舉Rhizomucor Miehei的脂肪酶(Lipozyme IM60：Novonordisk公司製，Lipozyme RMIM：Novonordisk公司製)、Candida Antarctica的脂肪酶(Novozymes 435：Novonordisk公司製)。
<酵素的使用量>
反應所使用的酵素量是依照反應溫度或時間等來決定，因此並無特別規定，在游離型酵素的情況，一般而言，只要在每1g反應液中添加1單位(U)以上~10,000U，宜為5U以上~1,000U即可，可適當地設定。此處的酵素活性的1U，在脂肪酶的情況，是指在橄欖油水解時，1分鐘游離出1μmol的脂肪酸的酵素量。在使用固定化酵素的情況，只要相對於反應液質量添加固定化的酵素0.1質量%以上200質量%以下即可，宜為1質量%以上20質量%以下(質量包括擔體質量)。
<反應條件>
在本實施形態所關連的製造方法中，前述酵素處理的反應液係含有原料油脂及酵素(使用固定化酵素的情況為固定化酵素)。藉由將前述酵素處理的反應液中的水分含量定為0.4質量%以上，可提升酵素的安定性，結果可重覆使用酵素，並且藉由將因為酵素反應而產生的甘油誘導至水中，可防止甘油在油中凝固，以使酵素反應順利進行。前述酵素處理的反應液中的水分含量係以0.5質量%以上為佳，1質量%以上為較佳，2質量%以上為更佳，另外，80質量%以下為佳，50質量%以下為較佳，例如可為0.4質量%以上10質量%以下。
<水分含量>
若前述酵素處理的反應液中的水分含量未滿0.4質量%，則會有酵素的觸媒作用受到反應產生的甘油等所阻礙，以及酵素的安定性降低的情形，另一方面，若超過80質量%，則會有含EPA的三甘油酯與酵素的接觸變少，含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物中之，所得到的低級醇脂肪酸酯化合物的含量變少的情形。此外，水可逐次添加、連續添加，或一整批添加至反應液中。
<低級醇>
從藉由使脂肪酸酯化而得到酯化合物，且與水及油脂兩者混和，可使酵素反應順利進行的觀點看來，前述酵素 處理的反應液可進一步含有相對於前述原料油脂9.5質量份為0.1質量份以上2.5質量份以下的低級醇。
在本實施形態所關連的製造方法中，原料油脂的酵素處理之中，低級醇(碳原子數1、2或3的醇)，可利用作為低級醇EPA酯化合物的酯部位。
從可提高低級醇EPA酯化合物的產率的觀點看來，前述酵素處理的反應液中前述低級醇的含量係以相對於前述原料油脂9.5質量份為0.1質量份以上(宜為0.3質量份以上)為佳。另一方面，若前述酵素處理的反應液中的前述低級醇的含量增加，則酵素容易失活，因此從可維持酵素活性的觀點看來，前述酵素處理的反應液中的前述低級醇的含量係以相對於前述原料油脂9.5質量份為2.5質量份以下(宜為2質量份以下)為佳。
此外，關於前述低級醇，在前述酵素處理之中，可將前述低級醇連續添加、階段性地添加，或一整批添加至前述酵素處理的反應液。在本發明中，「連續添加低級醇」是指持續添加低級醇，「階段性地添加低級醇」是指多次添加低級醇而並非連續添加。
另外，在將前述低級醇階段性添加至反應液的情況，單次添加的前述低級醇的量係以相對於前述原料油脂9.5質量份為0.1質量份以上為佳，(0.3質量份以上為較佳)，另一方面，2.5質量份以下為佳(1質量份以下為較佳)。在將前述低級醇階段性或連續添加至反應液的情況，所添加的前述低級醇的總量係以相對於前述原料油脂 9.5質量份為0.1質量份以上為佳，(0.3質量份以上為較佳)，另一方面，2.5質量份以下為佳(2質量份以下為較佳)。
<低級醇的具體例>
從與水的混和性優異的觀點看來，低級醇係以甲醇及/或乙醇為佳，以乙醇為較佳。
<反應溫度及反應時間>
酵素處理通常可將反應液的溫度定在超過25℃且在80℃以下(宜為28℃以上，較佳為30℃以上，另外，宜為50℃以下，較佳為45℃以下)來進行。酵素處理時的反應液溫度只要依照所使用的酵素的種類決定即可。另外，反應時間通常為2小時以上48小時以下，宜為4小時以上36小時以下。
<酸價>
在前述酵素處理中，從能夠更提高酵素的安定性的觀點看來，該酵素處理的反應液的酸價係以2以上為佳，2.2以上12以下為較佳。
在本發明中，反應液的酸價是藉由以下方法測定及計算所得到的值。前述酵素處理的反應液的酸價為2以上(宜為2.2以上12以下)，意指該反應液中的游離脂肪酸的濃度高。亦即，藉由提高該反應液中的游離脂肪酸的 濃度，如後述<反應路徑>一欄所說明般，在該反應液中游離脂肪酸與脂肪酶結合的比例變高，因此可提高脂肪酶(酵素)的安定性。此外，在本發明中，「游離脂肪酸」是指並非以脂肪酸酯化合物的形式存在的脂肪酸(非酯鍵型脂肪酸)。
<酸價的測定方法>
酸價的值可藉由公益社團法人日本油化學會制定的基準油脂分析測試法(日本油化學會規格測試法委員會編、基準油脂分析測試法(Standard methods for the analysis of fats，oils and related materlals)：日本油化學會制定、2013年版、1.5萃取油的酸價)來測定。
具體而言，首先將試樣(反應結束後的反應液)依照其推測酸價所對應的採取量精確地量取至三角燒瓶，加入乙醇/二乙醚=1/1(w/w)的混合溶劑100mL，使試樣完全溶解。接下來以0.1mol/L的乙醇性氫氧化鉀進行滴定，將添加作為指示劑的酚酞溶液的變色持續30秒鐘以上的時間點定為終點。酸價可藉由下述式(3)來計算。
酸價=5.611×A×F/B．．．．．(3)(式中，A為0.1mol/l的乙醇性氫氧化鉀的使用量(mL)，B為試樣採取量(g)，F為乙醇性氫氧化鉀的因子。)
<反應路徑>
醇與脂肪酸酯化合物的酯交換反應，通常在水含量少的條件下(例如專利文獻1的實施例所記載，水分含量0.1%)使醇與脂肪酸酯化合物發生反應。其理由可列舉為了防止脂肪酸酯化合物的酯鍵會因為水而發生水解。
相對於此，在本實施形態所關連的製造方法中，對含有含EPA的甘油酯的原料油脂實施酵素處理(使用脂肪酶的處理)，而得到含有低級醇EPA酯化合物之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的步驟中，可藉由前述酵素處理的反應液中的水分含量為0.4質量%以上來提高酵素安定性。
較具體而言，藉由將前述酵素處理的反應液中的水分含量定為0.4質量%以上，因為反應液中所含有的水分，原料油脂水解而產生游離脂肪酸，結果，該反應液中的游離脂肪酸的濃度變高(該反應液的酸價變高)，因此可提升酵素安定性。
反應液中的游離脂肪酸的濃度變高(亦即若該反應液的酸價變高)則酵素安定性提高，推測是依照以下的機制。游離脂肪酸一般而言容易與蛋白質結合。這是因為游離脂肪酸的烷基鏈部分的疏水性與羧基部分的親水性部位容易與蛋白質分子內的疏水性部位、親水性部位發生交互作用。因此，反應液中存在游離脂肪酸，本身為蛋白質的脂肪酶會結合於游離脂肪酸，藉此可防止由反應液中的反應基質以外的物質(例如反應液中的低級醇)直接接觸到脂肪酶所引起的脂肪酶失活，推測藉此可提高脂肪酶(酵 素)的安定性。
另一方面，在前述酵素處理的反應液中水分含量未滿0.4質量%的情況，難以維持脂肪酶(酵素)的安定性。其理由可列舉反應液中的水分含量低而未滿0.4質量%，因此原料油脂的水解不易進行，結果不易產生游離脂肪酸。所以，游離脂肪酸與蛋白質的結合不易發生，因此推測無法防止上述游離脂肪酸造成蛋白質(脂肪酶)失活，難以提高脂肪酶的安定性。
<反應生成物>
在本實施形態所關連的製造方法中，藉由使用脂肪酶來處理含有含EPA的甘油酯的原料油脂，可得到含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物，尤其可有效得到低級醇EPA酯化合物。亦即，藉由使用脂肪酶來處理含有含EPA的甘油酯的原料油脂，可將含EPA的甘油酯有效地轉換成低級醇EPA酯化合物。此外，所得到的低級醇脂肪酸酯化合物，可為含有低級醇EPA酯化合物的多價不飽和脂肪酸的酯化合物。
例如在原料油脂含有含EPA的甘油酯及含DHA的甘油酯兩者的情況，藉由使用上述脂肪酶的處理，可使最終所得到的本實施形態所關連的組成物所含有的低級醇脂肪酸酯化合物之中低級醇EPA酯化合物相對於低級醇DHA酯化合物的莫耳比率A(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)高於原料油脂所含有的構成脂肪酸甘油 酯的脂肪酸中的EPA相對於DHA的莫耳比率B(EPA/DHA)。
此情況下，前述莫耳比率A及前述莫耳比率B係以滿足下述式(1)所表示的關係為佳，滿足式(2)所表示的關係為較佳。
1.5≦A/B．．．．．(1)
2.0≦A/B≦25．．．．．(2)
<低級醇脂肪酸酯化合物的含量、及低級醇EPA酯化合物：低級醇DHA酯化合物>
另外，最終所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物係含有低級醇脂肪酸酯化合物40質量%以上90質量%以下，在該含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物所含有的低級醇脂肪酸酯化合物中，前述低級醇EPA酯化合物相對於前述低級醇DHA酯化合物的莫耳比率(低級醇EPA酯化合物：低級醇DHA酯化合物)可為3.0以上30以下，較具體而言，以3.0以上20以下為佳，3.0以上15以下為較佳。
較具體而言，酵素處理所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物係含有低級醇脂肪酸酯化合物40質量%以上90質量%以下(較具體而言，50質量%以上80質量%以下)，前述低級醇脂肪酸酯化合物能夠以3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30的莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物 (宜為3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦20，較佳為以3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦15)的莫耳比率。
<分子蒸餾>
接下來，在本實施形態所關連的製造方法中，可進一步包括蒸餾酵素處理(使用脂肪酶的處理)(圖1的步驟S1)所得到的含有低級醇EPA酯化合物之含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物之步驟(所謂的分子蒸餾(一次蒸餾)，圖1的步驟S2)。
分子蒸餾(molecular distillation)是在高真空度下進行的蒸餾。藉由分子蒸餾步驟，可使含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物的低級醇脂肪酸酯化合物的混合物與該混合物以外的成分(低級醇脂肪酸酯化合物以外的脂肪酸單甘油酯、脂肪酸二甘油酯及脂肪酸三甘油酯)分離。此外，藉由利用前述混合物以外的脂肪酸單甘油酯、脂肪酸二甘油酯及脂肪酸三甘油酯，在低級醇的存在下再度酯化，亦可得到低級醇DHA酯化合物。
分子蒸餾通常可在高於後述精密蒸餾的真空度下進行。
例如分子蒸餾的溫度為80℃以上200℃以下(宜為150℃以上200℃以下)，真空度為0.001Torr以上5Torr以下(宜為0.01Torr以上1Torr以下)，較具體而言，溫度140℃以上160℃以下且真空度0.01Torr以上0.1 Torr以下。
分子蒸餾通常是使用能夠使含有前述低級醇EPA酯化合物及前述低級醇DHA酯化合物的低級醇脂肪酸酯化合物的混合物與該混合物以外的成分分離的裝置來進行，較具體而言，可使用一般市售的分子蒸餾裝置來進行，例如可使用離心式分子蒸餾機、短程蒸餾機、落膜式蒸餾機等。尤其以短程蒸餾機為佳。在分子蒸餾裝置中，藉由通過蒸發管使被處理物揮發，然後通過冷凝管內，可分離成液化的低分子成分與並未液化的高分子成分。
另外，分子蒸餾係以在後述精密蒸餾之前進行為佳，進一步以在進行分子蒸餾之後進行後述銀處理為佳。
<峰強度比>
此混合物的FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比係以0.075以下為佳，0.07以下為較佳。
<峰強度比的意義>
前述混合物的FT-IR光譜解析之中，出現在1736cm-1附近的峰，代表低級醇脂肪酸酯化合物所含有的酯鍵。另外，出現在966cm-1附近的峰，代表低級醇脂肪酸酯化合物所含有的低級醇脂肪酸酯化合物的異構物(含有反式雙鍵的異構物)(利用FT-IR的反式脂肪酸定量，SHIMAZU APPLICATION NEWS No.43 OA，島津製作所 股份有限公司)。
因此，此混合物的FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度愈大，則代表低級醇脂肪酸酯化合物中含有愈多異構物(包括脂肪酸所含有的順式雙鍵異構化所產生的反式雙鍵)。所以，該混合物的FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.075以下，代表該混合物所含有的異構物少。
<異構物的定義>
此外，在本發明中，某化合物的「異構物」，是指分子式與某化合物相等，然而分子構造與該化合物相異的化合物(異構物)，將某化合物變成其異構物的現象稱為異構化。
例如構成天然油脂的EPA、DHA等的脂肪酸，其雙鍵全部為順式配位，且該雙鍵具有非共軛的構造。脂肪酸的異構化可列舉例如脂肪酸的雙鍵的至少一部分變化為反式配位、或該雙鍵移動至共軛的位置等。
<混合物的組成>
另外，從能夠更提高後述精密蒸餾所得到的低級醇EPA酯化合物的純度的觀點看來，前述混合物含有低級醇脂肪酸酯化合物90質量%以上，前述低級醇脂肪酸酯化合物以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇 DHA酯化合物為較佳。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30。
較佳為3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦20。
依據本實施形態所關連的製造方法，藉由上述酵素處理，可使含EPA的甘油酯選擇性地轉換為低級醇脂肪酸酯化合物，因此藉由上述分子蒸餾步驟，以一般的分離處理即可輕易使含有前述低級醇EPA酯化合物及前述低級醇DHA酯化合物的低級醇脂肪酸酯化合物與其他成分(低級醇脂肪酸酯化合物以外的脂肪酸甘油酯、甘油)分離。藉此，利用後述精密蒸餾步驟，能夠以簡便的方法有效得到高純度的低級醇EPA酯化合物。
<精密蒸餾>
接下來，在本實施形態所關連的製造方法中，可進一步包括藉由將分子蒸餾(圖1的步驟S2)所得到的含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物的混合物加以蒸餾(精密蒸餾，圖1的步驟S3)，以使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物分離，而得到低級醇EPA酯化合物(宜為純度96.5質量%以上，較佳為98質量%以上約100質量%以下)之步驟。
精密蒸餾(rectification)與上述分子蒸餾相比，可在較低真空度下進行蒸餾，具體而言，是在塔內使液體與 蒸氣以逆向流動的方式接觸，同時進行適當的回流，藉由重覆液體的蒸發與蒸氣的凝結來提高分離程度的連續蒸餾操作，而為液體混合物的分離精製最常使用的蒸餾。藉由精密蒸餾步驟，可由含有多種脂肪酸的酯化合物的低級醇脂肪酸酯化合物分離出任意的低級醇脂肪酸酯化合物。所以，在本實施形態所關連的精密蒸餾步驟中，可由前述分子蒸餾步驟所得到的多種低級醇脂肪酸酯化合物之中選擇性地得到低級醇EPA酯化合物。
精密蒸餾通常可在低於上述分子蒸餾中的真空度下進行。
例如精密蒸餾的溫度為150℃以上250℃以下(宜為160℃以上230℃以下)，真空度為0.01Torr以上10Torr以下(宜為0.1Torr以上5Torr以下)，較具體而言，溫度170℃以上220℃以下且真空度0.5Torr以上3Torr以下。
精密蒸餾通常使用能夠使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物與前述低級醇EPA酯化合物分離的裝置來進行，較具體而言，可使用具有精餾塔的蒸餾裝置或落膜式的蒸餾裝置來進行，精餾塔可採用例如層板式、填充式、或彈簧式等，尤其以使用具有層板構造的層板式或填充式的蒸餾裝置為佳。在具有層板構造的蒸餾裝置中，揮發的物質會上昇，然而滯留的層板會依照物質的種類而有所不同，因此以使目標物質上昇至附有排出口的層板的方式來設置層板。另外，加熱方式係以加熱履 歷較少的降膜式為佳。另外，精密蒸餾的蒸餾法可為批次式或連續式之任一者，而以連續式為佳。此外，精餾塔的理論段數可適當地設定，而以2段以上為佳，宜為5段以上(通常2段以上10以下)。
另外，精密蒸餾的次數及順序並不受限定。亦即可進行精密蒸餾2次以上(通常2次以上4次以下)，另外，在精密蒸餾之後進行銀處理或在進行銀處理之後進行精密蒸餾皆可。此外，在進行精密蒸餾及銀處理之後，亦可再度進行精密蒸餾。
<銀處理>
本實施形態所關連的製造方法可進一步包括銀處理(使本實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物與銀鹽水溶液接觸的處理)。
在本實施形態所關連的製造方法之中，本發明人等發現在前述酵素處理的反應液含有水分的情況(例如前述酵素處理的前述反應液中的水分含量為0.4質量%以上的情況)，該酵素處理之中，會有產生游離脂肪酸的傾向。
依據本實施形態所關連的製造方法，在進行前述酵素處理之藉由後進行銀處理步驟，可降低本實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物中的游離脂肪酸含量。
亦即，藉由該銀處理可減低游離脂肪酸含量，因此可使例如本實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物的 組成物的酸價未滿5(宜為未滿4)。
在本實施形態所關連的製造方法之中，從可減低酵素處理所產生的游離脂肪酸的觀點看來，係以在酵素處理後進行銀處理為佳，例如可對於酵素處理所得到的前述混合物(例如第1組成物)實施銀處理，亦可對於在分子蒸餾之後所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物(例如第2組成物)實施銀處理，或可對於在精密蒸餾之後所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物(例如第2組成物)實施銀處理。
(銀的濃度)
銀處理所使用的銀鹽，只要是可與不飽和脂肪酸中的不飽和鍵形成錯合物的銀鹽，則任一者皆可使用，可列舉例如硝酸銀、過氯酸銀、醋酸銀、三氯醋酸銀、三氟醋酸銀等。使這些銀鹽溶於水，濃度宜為15質量%以上，較佳為20質量%以上，更佳為40質量%以上，而製成銀鹽水溶液。另外，銀鹽水溶液中的銀鹽濃度只要以飽和濃度為上限即可。
另外，在銀處理之中，在將銀鹽水溶液回收再利用之前，亦可使其與吸附劑接觸。上述吸附劑可列舉例如活性碳、活性氧化鋁、活性白土、酸性白土、二氧化矽凝膠、矽藻土、氧化鋁、氧化鎂等，可使用該等之中的1種或2種以上。
上述銀鹽水溶液與上述吸附劑的接觸方法並無特別限 定，而可列舉例如在上述銀鹽水溶液中投入上述吸附劑並且攪拌的方法、或使上述銀鹽水溶液通過填充了上述吸附劑的管柱的方法等。另外，在將銀鹽水溶液回收再利用之前，可進行稀釋、濃度調整，或以有機溶劑萃取。回收後的銀鹽水溶液的濃度調整，可藉由減壓．加熱使水蒸發，或測定比重同時適當地加入銀鹽或水來進行。
另外，銀處理之中，藉由在銀處理對象物(例如上述酵素處理所得到的混合物(例如第1組成物)或上述分子蒸餾所得到的組成物(例如第2組成物))中加入銀鹽的水溶液，攪拌時間宜為5分鐘以上4小時以下，較佳為10分鐘以上2小時以下，形成水溶性的銀鹽-游離脂肪酸的錯合物，可使該錯合物選擇性地溶於銀鹽水溶液。藉由除去該銀鹽水溶液，可除去游離脂肪酸。藉此可使含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物的酸價未滿5(宜為未滿4)。
另外，銀處理對象物與銀鹽水溶液的反應溫度的下限只要銀鹽水溶液仍為液體即可，上限可達100℃，然而考慮到含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物的氧化安定性、銀鹽在水中的溶解性、錯合物的生成速度等，係以10℃以上30℃以下的反應溫度為佳。
在銀處理對象物與銀鹽水溶液接觸時，考慮到含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物的氧化安定性、銀鹽的安定性，係以在惰性氣體下，例如氮氣環境下遮光進行為佳。
另外，在與銀處理對象物接觸後的銀鹽水溶液中，可 添加水難溶性的有機溶劑。藉由在添加有機溶劑之後回收有機相，可回收含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物。此情況下，水難溶性的有機溶劑，相對於銀鹽的水溶液100質量%，係以10質量%以上200質量%以下為佳，30質量%以上並且150質量%以下為較佳。
水難溶性的有機溶劑，可列舉例如直鏈狀脂肪族烴(例如正戊烷、正己烷、正庚烷、正己烯、正辛烷、異辛烷等的碳數5以上10以下的直鏈狀脂肪族烴)、環狀脂肪族烴(環己烷、環己烯、甲基環己烯等的碳數5以上10以下的環狀脂肪族烴)、芳香族烴(例如甲苯、苯、乙苯、二甲苯、苯乙烯等的碳數5以上10以下的芳香族烴)等的烴類、或石油醚。此外，前述回收步驟可多次重覆實施。
<低級醇EPA酯化合物的具體例>
低級醇EPA酯化合物可使用作為醫藥品、化妝品、食品等的原料。低級醇EPA酯化合物可列舉例如EPA甲酯、EPA乙酯、EPA正丙酯、EPA異丙酯，而其中EPA乙酯(在本說明書之中亦稱為「EPAEE」)可使用作為例如高血脂症、阻塞性動脈硬化等的循環器系疾病治療藥。所以，低級醇EPA酯化合物可為EPAEE，低級醇DHA酯化合物可為DHA乙酯(在本說明書之中亦稱為「DHAEE」)。
<低級醇EPA酯化合物的用途>
另外，低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物可使用作為補給品等的食品組成物及膠囊劑的原料。
<作用效果-周知的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法>
在說明本實施形態所關連的製造方法的作用效果時，首先針對周知的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法作說明。
<周知的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法>
在周知的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法(記載於專利文獻1)中，首先，將含有低級醇脂肪酸脂部位具有多個脂肪酸的脂肪酸甘油酯的原料油脂在鹼性條件下以醇類進行處理，藉由脂肪酸甘油酯與醇類的酯交換反應，得到低級醇脂肪酸酯化合物。藉由此方法可得到多種低級醇脂肪酸酯化合物的混合物。
<周知的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法-課題>
為了由多種低級醇脂肪酸脂的混合物分離出所希望的低級醇脂肪酸脂，例如必須非常嚴密地控制條件(例如真空度、加熱溫度、加熱方法、加熱時間)進行蒸餾。像這 樣進行條件嚴苛的蒸餾，在製造程序上負擔很大。
例如在使含有含EPA的甘油酯及含DHA的甘油酯的油脂在鹼性條件下進行酯交換反應的情況，由於EPA與DHA的碳數或雙鍵數相近，因此為了將所得到的低級醇EPA酯化合物與低級醇DHA酯化合物與(例如EPAEE與DHAEE)分離，必須在非常精密控制的條件下進行蒸餾，製造程序上負擔非常大。另外，通常難以只將低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物的一者分離，因此會有在蒸餾時損失的傾向。
另外，蒸餾一般而言必須用到大規模裝置的情形很多，會有製造成本增加的傾向。此外，在鹼性條件下進行處理的情況，所使用的鹼性液會變成廢液，因此會有必須處理該廢液的問題。
此外，在上述酯交換反應中，在鹼性條件下，低級醇脂肪酸酯化合物所含有的雙鍵會有發生異構化(反式雙鍵的生成等)的情形。異構化通常容易因為鹼處理或加熱而發生。
低級醇脂肪酸酯化合物的異構物一般而言，難以藉由通常的雜質除去處理(例如蒸餾、層析)與低級醇脂肪酸酯化合物分離。所以，一旦藉由如上述般的鹼條件下的處理(以下亦簡稱為「鹼處理」)或加熱處理生成低級醇脂肪酸酯化合物的異構物(具有反式雙鍵)，則一般而言難以由低級醇脂肪酸酯化合物除去該異構物。亦即，此異構物是降低低級醇脂肪酸酯化合物純度的其中一個原因物 質。
<本實施形態所關連的製造方法的作用效果>
(i)對於這個問題，依據本實施形態所關連的製造方法，第1點，藉由包括對含有含EPA的甘油酯的原料油脂實施酵素處理(使用脂肪酶的處理)，而得到含有低級醇EPA酯化合物之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物之步驟，可有效得到高純度的低級醇EPA酯化合物。
較具體而言，依據本實施形態所關連的製造方法，即使不經過鹼處理，也能夠得到低級醇EPA酯化合物，因此可抑制異構物的發生。所以，可有效得到高純度的低級醇EPA酯化合物。另外，在上述本實施形態所關連的製造方法中，不會像使用鹼的情況這樣發生廢液處理的問題，因此對環境造成的影響少。
(ii)第2點，藉由進行前述酵素處理可提高低級醇EPA酯化合物相對於低級醇DHA酯化合物的莫耳比率(具體而言，3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30，宜為3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦20)。
較具體而言，藉由進行前述酵素處理，可得到以3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30(較佳為3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦20)的莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成 物，並未轉換成低級醇DHA酯化合物的DHA會以含DHA的甘油酯的形式殘存。
低級醇EPA酯化合物與其他成分(主要為含DHA的甘油酯、甘油、游離脂肪酸)及碳數小於EPA的低級醇脂肪酸脂，會有較容易藉由蒸餾或層析等的一般的雜質除去處理而分離的傾向。
所以，在將低級醇EPA酯化合物與並非低級醇脂肪酸酯化合物的其他成分及碳數小於EPA的低級醇脂肪酸脂分離時，在上述鹼處理之後，不須進行通常用來使低級醇EPA酯化合物與其他低級醇脂肪酸酯化合物分離的精密控制的蒸餾，因此可減少蒸餾時的損失。由此可知，依據本實施形態所關連的製造方法，藉由提高低級醇EPA酯化合物相對於低級醇DHA酯化合物的莫耳比率，能夠以簡便的方法有效得到高純度的低級醇EPA酯化合物。
在使用脂肪酶來處理原料油脂的步驟中，推測含有EPA作為脂肪酸脂部位的脂肪酸甘油酯，會比含有DHA作為脂肪酸脂部位的脂肪酸甘油酯較優先發生乙酯化。因此，在後續步驟之中，可提高低級醇EPA酯化合物與低級醇DHA酯化合物的莫耳比率(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)。
所以，本實施形態所關連的製造方法，首先對於含有含EPA的甘油酯的原料油脂實施酵素處理，而得到低級醇EPA酯化合物含有比例提升的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物，然後進行蒸餾處理，能夠輕易且大量分離 出異構物少的低級醇EPA酯化合物，從這點看來為有用的。
(iii)第3點，藉由將前述酵素處理中的水分含量定在0.4質量%以上，酵素反應所產生的甘油會因為反應液中所含有的該水分而被誘導至水中，可防止甘油在油中凝固，以使酵素反應順利進行。另外，原料油脂發生水解而產生游離脂肪酸，結果，該反應液中的游離脂肪酸的濃度變高(該反應液的酸價變高)，因此酵素安定性提升。其結果，酵素可重覆使用，因此可謀求製造成本的減低及省資源化。所以，前述酵素處理，從再利用性、操作性及經濟性優異的觀點看來，不僅適合於小規模的處理，還適合於大規模處理。
<第1組成物>
本發明其中一個實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物(以下亦稱為「第1組成物」)係含有低級醇脂肪酸酯化合物40質量%以上90質量%以下(較具體而言，50質量%以上80質量%以下)，前述低級醇脂肪酸酯化合物係以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物。第1組成物可藉由例如上述酵素處理或上述酵素處理與其後續的銀處理而得到。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30
上述莫耳比率係以下述莫耳比率為佳。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦20
上述莫耳比率係以下述莫耳比率為較佳。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦15
在第1組成物的FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比可為0.15以下(宜為0.13以下)。所以第1組成物中的異構物減少。藉由將此第1組成物供應至上述分子蒸餾，可得到異構物少的第2組成物(低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物的混合物)。另外，第1組成物藉由上述銀處理而使游離脂肪酸含量降低，能夠使酸價未滿5(宜為4未滿)。
<使用第1組成物的分子蒸餾>
本發明其中一個實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，包括藉由蒸餾上述第1組成物，使含有前述低級醇EPA酯化合物及前述低級醇DHA酯化合物的低級醇脂肪酸酯化合物之混合物與該混合物以外的成分分離，而得到後述第2組成物之步驟。
在本實施形態所關連的製造方法之中，蒸餾第1組成物而得到後述第2組成物之步驟相當於上述分子蒸餾步驟。
依據本實施形態所關連的製造方法，藉由包括蒸餾第 1組成物而得到後述第2組成物之步驟，在上述精密蒸餾之中，可選擇性地得到低級醇EPA酯化合物。
<第2組成物>
本發明其中一個實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物(以下亦稱為「第2組成物」)係含有低級醇脂肪酸酯化合物90質量%以上(較具體而言，95質量%以上100質量%以下)，前述低級醇脂肪酸酯化合物係以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物。第2組成物可藉由上述分子蒸餾處理或上述分子蒸餾處理與其後續的銀處理而得到。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30
上述莫耳比率係以下述莫耳比率為較佳。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦20
上述莫耳比率係以下述莫耳比率為更佳。
3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦15
第2組成物在FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比可為0.075以下(宜為0.070以下)。所以，第2組成物中的異構物減少。藉由將此第2組成物供應至上述精密(2次)蒸餾，可得到異構物少的低級醇EPA酯化合物。
另外，第2組成物的游離脂肪酸含量降低，能夠使酸價未滿5(宜為未滿4)。游離脂肪酸含量的降低，可藉由例如上述銀處理來進行。第2組成物可使用作為例如補給品等的食品組成物及膠囊劑的原料。
<使用第2組成物的精密蒸餾>
本發明其中一個實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，包括藉由蒸餾上述第2組成物以使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物分離，而得到低級醇EPA酯化合物(後述第3組成物)之步驟。
在本實施形態所關連的製造方法之中，蒸餾第2組成物而得到低級醇EPA酯化合物之步驟相當於上述精密蒸餾步驟。
依據本實施形態所關連的製造方法，藉由包括蒸餾第2組成物而得到低級醇EPA酯化合物之步驟，可選擇性地得到低級醇EPA酯化合物。高純度的低級醇EPA酯化合物可使用作為例如補給品等的食品組成物及膠囊劑的原料。
<第3組成物>
本發明其中一個實施形態所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物(以下亦稱為「第3組成物」)係含有低級醇EPA酯化合物96.5質量%以上(較佳為98質量% 以上約100質量%以下)，且FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.085以下。
第3組成物可經過上述精密蒸餾步驟而得到。第3組成物中的異構物的含量極少，因此適合使用作為例如補給品等的食品組成物及膠囊劑的原料。
[實施例]
以下藉由實施例對本發明進一步詳細說明，而本發明不受實施例所限定。
[調製例1(固定化酵素的調製)]
使用大川原製作所製的流動層造粒裝置，將疏綿狀嗜熱真菌(Thermomyces lanuginose)400g的溶液(940KLU/mL)噴霧在1kg的矽藻土545(Johns Manville公司，粒徑0.02~0.1mm)上。前述脂肪酶溶液是經由蠕動幫浦(東京理化器械股份有限公司製)來供給。空氣流定為100m3/小時，進氣口的空氣溫度定為57℃，並且固定化產物的溫度定為約40℃。固定化結束後，在流動層中進一步乾燥5分鐘，得到粒子狀固定化酵素(平均粒徑600μm、比重2)。
[實施例1(酵素處理)]
將精製魚油(沙丁魚油，酸價0)1kg加入可分離式 燒瓶(容量3L)，並添加乙醇52.5g。將燒瓶內容物混勻，使乙醇均勻分散在魚油中。接下來，加入水21g(反應液中的水分含量：2質量%)，攪拌以使水分散於魚油-乙醇混合物中，而調製出反應液。接下來，添加實施例1調製出的固定化酵素105g，以氮氣置換樣品瓶中的大氣，然後使用攪拌機，使樣品在150rpm、30℃反應24小時，而得到含有EPAEE及DHAEE的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物(第1組成物)。分別在由開始反應算起0小時、2小時、4小時、6小時、及24小時的時間點採取反應液200μl，進行成分分析(含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物中的低級醇脂肪酸酯化合物的含量(質量%)、低級醇脂肪酸酯化合物中的EPAEE的含量(莫耳%)、低級醇脂肪酸酯化合物中的DHAEE的含量(莫耳%)、EPAEE/DHAEE(莫耳比率))。另外，在由開始反應算起2小時、4小時、6小時的時間點，在反應液中添加乙醇52.5g，且在樣品瓶中進行氮氣置換。另外，將反應24小時定為1循環，重覆進行該反應3循環。在各循環結束後，藉由抽氣過濾由反應液分離出油與固定化酵素，將分離出的固定化酵素移至反應容器，然後，添加必要量的油，在後續循環的反應重覆使用。此外，在由開始反應算起0小時、2小時、4小時、6小時、8小時、24小時(反應結束時)的時間點，採取微量的反應液進行成分分析。
藉由上述實施形態所記載的方法所測得及計算得到的 實施例1(第1循環的反應24小時)的反應液的酸價為5.95，實施例1(第3循環的反應8小時)的反應液的酸價為6.17。
另外，在實施例1(第1循環的反應24小時)的反應液的FT-IR光譜解析(測定裝置：單次反射型全反射測定裝置MIRacleA(ZnSe稜鏡))之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.12。
(實施例2~8(酵素處理))
將所使用的水量定為5.25g(反應液中的水分含量：0.5質量%)、10.5g(反應液中的水分含量：1質量%)、52.5g(反應液中的水分含量15質量%)、105g(反應液中的水分含量：9質量%)、210g(反應液中的水分含量：17質量%)、525g(反應液中的水分含量：33質量%)。1050g(反應液中的水分含量：50質量%)，除此之外進行與實施例1相同的處理，得到含有EPAEE及DHAEE的實施例2至8的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物(第1組成物)。
此外，在實施例3至5之中，與實施例1相同地，將反應24小時定為1循環，重覆進行該反應3循環，在各循環結束後，藉由抽氣過濾由反應液分離出油與固定化酵素，將分離出的固定化酵素移至反應容器，然後，添加必要量的油，在後續循環的反應重覆使用。
藉由上述實施形態所記載的方法測得及計算得到的實施例2至8的反應液的酸價分別在2.2以上12以下的範圍內。
另外，在實施例2至8的反應液的FT-IR光譜解析(測定裝置：單次反射型全反射測定裝置MIRacleA(ZnSe稜鏡))之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比任一者皆為0.15以下。
(比較例1(酵素處理))
將所使用的水量定為0g(反應液中的水分含量：0%)，除此之外進行與實施例1相同的處理，而得到含有EPAEE及DHAEE的比較例1的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物。
(比較例2(酵素處理))
將所使用的水量定為3.15g(反應液中的水分含量：0.3質量%)，除此之外進行與實施例1相同的處理，得到含有EPAEE及DHAEE的比較例2的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物。
藉由上述實施形態所記載的方法測得及計算得到的比較例1的反應液的酸價為1.0，比較例2的反應液的酸價為1.5。
將實施例1至8及比較例1及2的各含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物中所含有的含有低級醇脂肪酸酯化合 物之組成物中的低級醇脂肪酸酯化合物的含量(質量%)、低級醇脂肪酸酯化合物中的EPAEE的含量(莫耳%)、低級醇脂肪酸酯化合物中的DHAEE的含量(莫耳%)、及EPAEE/DHAEE(莫耳比率)揭示於表1。
依據表1可知，在實施例1至8之中，由開始反應算起2小時，低級醇脂肪酸酯化合物中的EPAEE的含量急 劇增加，隨著反應時間增加，會有反應液中的低級醇脂肪酸酯化合物的含量增加，同時低級醇脂肪酸酯化合物中的EPAEE的含量及DHAEE的含量增加的傾向，就結果而言，與反應前原料油脂所含的構成脂肪酸甘油酯的EPA/DHA之值相比，較能夠提高反應液中的EPAEE的含量/DHAEE含量的值。
另外，根據實施例1至8，還可知藉由將前述酵素處理的反應液的水分含量定為0.4質量%以上，酵素的安定性提升，就結果而言，酵素可重覆使用，因此可將固定化酵素由反應液中取出而再度使用。
此外，根據實施例1至8，可知在使用脂肪酶的處理之中，藉由將反應液的水分含量定為0.4質量%以上，可得到低級醇脂肪酸酯化合物的含量為40質量%以上90質量%以下，且前述EPAEE相對於DHAEE的莫耳比率(EPAEE/DHAEE)為3.0以上30以下的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物。
此外，反應前的原料油脂所含有的構成脂肪酸甘油酯之脂肪酸中的EPA的含量及DHA的含量分別為18莫耳%、12莫耳%(EPA/DHA：3/2)。由此可知，藉由上述處理，可由含有含EPA的甘油酯的原料油脂選擇性地得到EPAEE。
相對於此，依據比較例1及2的結果，使用脂肪酶的處理之中，反應液的水分含量未滿0.4質量%的情況，酵素的安定性低，反應液中的低級醇脂肪酸酯化合物的含量 少於實施例1至8所得到的反應液。
[實施例9(分子蒸餾處理)]
將實施例1所得到的第1組成物使用短程蒸餾機(神鋼環境Solution股份有限公司製)，在真空度0.1Torr以下且溫度在80℃以上200℃以下的條件下進行蒸餾(分子蒸餾(一次蒸餾))，而得到含有低級醇EPA酯化合物(EPAEE)及低級醇DHA酯化合物(DHAEE)之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物(第2組成物)。
在實施例9所得到的第2組成物的FT-IR光譜解析(測定裝置：單次反射型全反射測定裝置MIRacleA(ZnSe稜鏡))之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.069，該第2組成物所含有的低級醇脂肪酸乙酯的含量為大致100質量%，第2組成物的酸價為10.1，並且第2組成物中的EPAEE/DHAEE(莫耳比率)為6.0。
[實施例10(精密蒸餾處理)]
將實施例9所得到的第2組成物使用降膜式精密蒸餾機(旭製作所股份有限公司製)在真空度3Torr以下且溫度在150℃以上250℃以下、理論段數5段的條件下進行蒸餾(精密蒸餾(二次蒸餾))，而得到EPAEE(第3組成物、純度：大致100質量%)。
在實施例10的EPAEE的FT-IR光譜解析(測定裝 置：單次反射型全反射測定裝置MIRacleA(ZnSe稜鏡))之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.081，該第3組成物所含有的脂肪酸乙酯(EPAEE)的含量為大致100質量%，該第3組成物的酸價大致為0。
[比較例3(利用鹼處理進行含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的調製及EPAEE及DHAEE的混合物的調製)]
在2L的共栓三角燒瓶(以鋁箔遮光)中添加與實施例1所使用的相同的精製魚油800g(卡耳-費雪法所測得的水分測定值0.04質量%)。在另一個燒杯加入乙醇240mL，添加氫氧化鈉4.8g，調製出2%(w/w)氫氧化鈉乙醇溶液。將此2%(w/w)氫氧化鈉乙醇溶液添加至前述三角燒瓶，然後對該三角燒瓶內實施氮氣置換。接下來，將該三角燒瓶浸於30℃恆溫水槽，攪拌裝置設定在刻度8，在室溫(25℃)進行攪拌18小時。然後，將反應液移至分液漏斗，添加純水50g，水洗，靜置約20分鐘之後，對於下層相(水相)實施廢棄的洗淨操作。接下來，添加純水50g進行相同的洗淨操作之後，進一步進行相同的洗淨操作4次(所添加的純水量、第1次：50g、第2次：240g、第3次：240g、第4次：240g)。接下來確認油相為中性，然後藉由添加無水硫酸鈉，靜置一晚，在4℃下保管，而得到比較例3的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物。
藉由對於此比較例3的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物實施與實施例9相同的蒸餾處理，而得到EPAEE及DHAEE的混合物。
在比較例3的反應液的FT-IR光譜解析(測定裝置：單次反射型全反射測定裝置MIRacleA(ZnSe稜鏡))之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.095，該反應液所含有的脂肪酸乙酯的含量大致為100質量%。
由此可知，依據本發明所關連的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法(實施例9)，與進行鹼處理的方法(比較例3)相比，較能夠減低含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物所含有的異構物的量。
[調製例2(固定化酵素的調製)]
以通常的方法使二乙烯基苯(DVB)70質量%、甲基丙烯酸縮水甘油基15質量%與DEAE甲基丙烯酸酯15質量%進行共聚合，而得到粒子狀樹脂擔體。此樹脂擔體的平均細孔徑為11.5nm，且細孔容積為0.5cm3/g，平均粒徑為0.5mm，比重為0.2。在所得到的樹脂擔體1kg加入來自Rhizopus sp.的脂肪酶FAP-15(天野Enzyme股份有限公司製155,000u/g)的2質量%水溶液10L，3小時，在25℃下攪拌同時進行固定化。過濾、洗淨後，以真空乾燥器乾燥2小時，而得到固定化酵素。
[實施例11、12、13、14(酵素處理)]
實施例1的酵素處理之中，將所使用的固定化酵素改為調製例2所得到的固定化酵素，並改為表2所記載的酵素量、乙醇量、水分含量，除此之外以與實施例1相同的方法使其反應1個循環，並且進行成分分析。此外，在實施例13中，在開始反應時及由開始反應算起4小時的時間點，分別添加乙醇105g。在實施例14中，開始反應時添加乙醇210g。
藉由上述實施形態所記載的方法測得及計算得到的實施例11的反應液(由開始反應算起24小時的時間點)的酸價為4.6。
依據表2可知，在實施例11至14之中，由開始反應算起2小時，低級醇脂肪酸酯化合物中的EPAEE的含量 急劇增加，隨著反應時間增加，會有反應液中的低級醇脂肪酸酯化合物的含量增加，同時低級醇脂肪酸酯化合物中的EPAEE的含量及DHAEE的含量增加的傾向，就結果而言，與反應前原料油脂所含的構成脂肪酸甘油酯的EPA/DHA之值相比，較能夠提高反應液中的EPAEE的含量/DHAEE含量的值。
另外，依據實施例11至14，藉由將使用脂肪酶的處理之中反應液的水分含量定為0.4質量%以上，可得到低級醇脂肪酸酯化合物的含量為40質量%以上90質量%以下，且前述EPAEE的相對於DHAEE的莫耳比率(EPAEE/DHAEE)為3.0以上15.0以下的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物。
另外，在實施例11至14的反應液的FT-IR光譜解析(測定裝置：單次反射型全反射測定裝置MIRacleA(ZnSe稜鏡))之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比任一者皆為0.15以下。
[實施例15(銀處理)]
藉由將實施例9所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物(第2組成物)10g與銀鹽水溶液(硝酸銀的濃度：50質量%)40g在氮氣環境下、遮光、20℃的條件下混合20分鐘，使該組成物與該銀鹽水溶液接觸(表3的測試編號1)。另外，改變上述銀鹽水溶液的使用量進行 相同的處理(表3的測試編號2、3)。
接觸後，將分離的有機相廢棄，在留下的該銀鹽水溶液中添加甲苯40g，然後在60℃下攪拌1小時，回收含有EPAEE及DHAEE的甲苯層，然後除去甲苯，而得到EPAEE及DHAEE的混合物。
將銀處理前後的酸價及EPAEE的含量/DHAEE含量的值(莫耳比率)揭示於表3。
依據表3可知，藉由本實施例的銀處理，保持EPA乙酯/DHA乙酯的比率，可將含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物(第2組成物)的酸價減低至未滿5。此外，藉由對實施例10所得到的EPAEE實施與本實施例相同的銀處理，亦可除去含量微小的游離脂肪酸。
[實施例16(精密蒸餾處理)]
將實施例15所得到的經過銀處理的第2組成物，使用精密蒸餾機(旭製作所股份有限公司製)，在真空度3 Torr以下，溫度150℃以上200℃以下、理論段數5段的條件下進行蒸餾(精密蒸餾)，而得到EPAEE(第3組成物，純度：大致為100質量莫耳%，酸價：大致為0)。
在實施例16的EPAEE的FT-IR光譜解析(測定裝置：單次反射型全反射測定裝置MIRacleA(ZnSe稜鏡))之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.078，該第3組成物所含有的脂肪酸乙酯的含量大致為100質量%。
[實施例17(酵素處理、分子蒸餾處理及精密蒸餾處理)]
分別以1,000倍、2,000倍及2,000倍的規模進行實施例1的酵素處理、實施例9的分子蒸餾處理及實施例10的精密蒸餾處理。其結果，本實施例的酵素處理所得到的第1組成物的成分(低級醇脂肪酸酯化合物中的低級醇脂肪酸脂的含量(質量%)、低級醇脂肪酸酯化合物中的EPAEE的含量(莫耳%)、低級醇脂肪酸酯化合物中的DHAEE的含量(莫耳%)、EPAEE/DHAEE(莫耳比率))、前述反應液(混合物)的FT-IR光譜解析中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比、以及酸價，係與實施例1所得到的第1組成物相同。
另外，本實施例之分子蒸餾處理所得到的第2組成物所含有的低級醇脂肪酸乙酯的含量以及EPAEE/DHAEE (莫耳比率)，係與實施例9所得到的第2組成物相同。此外，在本實施例的分子蒸餾處理所得到的第2組成物的FT-IR光譜解析中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比、以及酸價，係與實施例9所得到的第2組成物相同。
此外，本實施例的精密蒸餾處理所得到的第3組成物所含有的EPAEE的比例與實施例10所得到的第3組成物相同。而且，本實施例所得到的精密蒸餾處理所得到的第3組成物的FT-IR光譜解析中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比、以及酸價，係與實施例10所得到的第3組成物相同。
[實施例18(食品組成物：餅乾)]
依照下述配方調製出餅乾。將酥油及實施例9所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物的組成物投入攪拌機(Kitchen Aid公司製Kitchen Aid K5SS)，將速度調節桿調整到刻度6，混合1分鐘，製成乳霜狀，加入全蛋粉、砂糖，而進行混合。接下來，徐緩加入清水，將比重調整成0.8g/ml，預先混合之後，添加過篩後的麵粉與焙粉，然後持續攪拌30秒鐘而調製出麵糰。將所得到的麵糰在冰箱醒麵2小時之後，桿成厚度3~5mm左右，並且壓模，在180℃的烘箱烘烤13~15分鐘，而得到餅乾。
<配方>
[實施例19(軟膠囊)]
使用實施例10所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，而製作出內容物為下述配方的軟膠囊。
<配方比例>

Claims (27)

  1. 一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其係包括使用脂肪酶來處理含有含EPA的甘油酯的原料油脂，而得到含有低級醇EPA酯化合物之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物之步驟，前述處理的反應液中的水分含量為0.4質量%以上。
  2. 如申請專利範圍第1項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述處理的反應液進一步含有相對於前述原料油脂9.5質量份為0.1質量份以上2.5質量份以下的低級醇。
  3. 如申請專利範圍第2項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述處理之中，將前述低級醇連續或階段性地添加至前述處理的反應液。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述處理之中使用了將前述脂肪酶固定化而成的固定化酵素。
  5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述處理之中，前述固定化酵素為粒子狀。
  6. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述脂肪酶為1,3位特異性脂肪酶。
  7. 如申請專利範圍第1至6項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述反應液的 酸價為2以上。
  8. 如申請專利範圍第1至7項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述原料油脂係進一步含有含DHA的甘油酯，前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物係進一步含有低級醇DHA酯化合物，前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物所含有的低級醇脂肪酸酯化合物中，前述低級醇EPA酯化合物相對於前述低級醇DHA酯化合物的莫耳比率A(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)高於前述原料油脂所含有的構成脂肪酸甘油酯的脂肪酸中的EPA相對於DHA的莫耳比率B(EPA/DHA)。
  9. 如申請專利範圍第8項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述莫耳比率A及前述莫耳比率B滿足下述式(1)所表示之關係，1.5≦A/B．．．．．(1)。
  10. 如申請專利範圍第8或9項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物係含有低級醇脂肪酸酯化合物40質量%以上90質量%以下，前述低級醇脂肪酸酯化合物中的前述低級醇EPA酯化合物相對於前述低級醇DHA酯化合物的莫耳比率(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)為3.0以上30以下。
  11. 如申請專利範圍第7至10項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物係進一步含有低級醇DHA酯化合物，並且進一步包括蒸餾前述含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，以使含有前述低級醇EPA酯化合物及前述低級醇DHA酯化合物的低級醇脂肪酸酯化合物之混合物與該混合物以外的成分分離之步驟。
  12. 如申請專利範圍第11項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述混合物的FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.075以下。
  13. 如申請專利範圍第11或12項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中前述混合物含有低級醇脂肪酸酯化合物90質量%以上，前述低級醇脂肪酸酯化合物係以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物，3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30。
  14. 如申請專利範圍第11至13項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中包括使前述混合物與銀鹽的水溶液接觸之步驟。
  15. 如申請專利範圍第14項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中進一步包括藉由蒸餾與前 述銀鹽的水溶液接觸後的前述混合物，以使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物分離，而得到前述低級醇EPA酯化合物之步驟。
  16. 如申請專利範圍第11至13項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其中進一步包括藉由蒸餾前述混合物，以使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物分離，而得到前述低級醇EPA酯化合物之步驟。
  17. 一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其係含有低級醇脂肪酸酯化合物40質量%以上90質量%以下，前述低級醇脂肪酸酯化合物係以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物，3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合物)≦30。
  18. 如申請專利範圍第17項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其中FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.15以下。
  19. 一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其係含有低級醇脂肪酸酯化合物90質量%以上，前述低級醇脂肪酸酯化合物係以下述莫耳比率含有低級醇EPA酯化合物及低級醇DHA酯化合物，3.0≦(低級醇EPA酯化合物/低級醇DHA酯化合 物)≦30。
  20. 如申請專利範圍第19項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其中FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.075以下。
  21. 如申請專利範圍第17至20項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其中酸價未滿5。
  22. 一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其係包括蒸餾如申請專利範圍第17項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，以使如申請專利範圍第20項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物與前述組成物以外的成分分離之步驟。
  23. 一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其係包括使如申請專利範圍第19或20項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之物與銀鹽的水溶液接觸之步驟。
  24. 一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的製造方法，其係包括藉由蒸餾如申請專利範圍第19至21項中任一項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，以使前述低級醇EPA酯化合物以外的低級醇脂肪酸酯化合物分離，而得到前述低級醇EPA酯化合物之步驟。
  25. 一種含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物，其係含有低級醇EPA酯化合物96.5質量%以上，且FT-IR光譜解析之中，出現在966cm-1附近的峰強度相對於出現在1736cm-1附近的峰強度之比為0.085以下。
  26. 一種食品組成物的製造方法，其係包括使用選自藉由如申請專利範圍第11至16及22至24項中任一項之製造方法所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物、及如申請專利範圍第25項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的至少1種，而得到食品組成物之步驟。
  27. 一種膠囊劑之製造方法，其係包括使用選自藉由如申請專利範圍第11至16及22至24項中任一項之製造方法所得到的含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物、及如申請專利範圍第25項之含有低級醇脂肪酸酯化合物之組成物的至少1種，而得到膠囊劑之步驟。
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