TW201427685A - Ｆｉｘ多肽的應用 - Google Patents

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Haiyan Jiang
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Abstract

本發明提供投與長效因子IX之方法；投與包含因子IX之長效嵌合及雜交多肽之方法；及使用細胞產生此等嵌合及雜交多肽之方法。

Description

FIX多肽的應用
本發明大體上係關於用於止血病症之治療劑的領域。
B型血友病(亦稱為克雷司馬斯病(Christmas disease))為世界上一種最常見的遺傳性出血病症。其導致活體內及活體外血液凝結活性降低且需要在受影響個體之終生期間進行廣泛的醫學監測。在不存在介入下，受折磨個體將遭受自發性關節出血，其產生重度疼痛及衰弱性不活動性；向肌肉中出血會導致血液在彼等組織中累積；若不即刻治療，則自發性咽喉及頸部出血可引起窒息；腎出血；及在手術、微小意外傷害或拔牙之後的嚴重出血亦為普遍的。
正常活體內凝血至少需要絲胺酸蛋白酶因子II(凝血酶原(prothrombin))、VII、IX、X及XI(可溶性血漿蛋白)；輔因子，包括跨膜蛋白質組織因子及血漿蛋白因子V及VIII；纖維蛋白原、轉麩醯胺酶(transglutaminase) 因子XIII、磷脂(包括活化血小板)及鈣。包括胰舒血管素(kallikrein)、高分子量激肽原(kininogen)及因子XII之其他蛋白質為一些活體外凝結測試所需，且可在病理狀況下在活體內起作用。
在血友病中，血液凝結受缺乏某些血漿血液 凝結因子之干擾。B型血友病係由可由因子IX蛋白之合成減少或活性降低之缺陷性分子所致之因子IX缺乏引起。在無有效防治下，復發性關節積血會導致顯現進行性且失能性關節病變且導致生活品質不良(Giangrande P.,Expert Opin Pharmacother.2005；6：1517-24)。藉由用高度富含因子IX之外源性因子濃縮物替換喪失之凝結因子來對血友病進行治療。然而，如下所述，自血液產生該種濃縮物充滿技術困難。
自血漿純化因子IX(血漿源性因子IX； pdFIX)幾乎僅得到活性因子IX。然而，自血漿對因子IX之此純化極其困難，因為因子IX僅以低濃度存在於血漿中(5ug/mL)。Andersson,Thrombosis Research 7：451 459(1975)。此外，自血液進行純化需要移除傳染物(諸如HIV及HCV)或使傳染物不活化。此外，pdFIX之半衰期較短且因此需要頻繁給藥，從而造成對防治性治療之依從性降低。重組因子IX(rFIX)亦為可用的，但與pdFIX一樣遭受較短半衰期及需要頻繁給藥(例如對於防治而言，每週2-3次)。rFIX相較於pdFIX亦具有較低增量回收率(K值)，從而使得必需使用比pdFIX之劑量更高劑量之 rFIX。
死亡率降低、關節損傷得以預防及生活品質 改良已成為歸因於開發血漿源性因子IX及重組因子IX之重要成就。延長保護以免出血將代表在治療B型血友病受試者中之另一關鍵進步。然而，迄今為止，尚未開發出允許長久保護之產品。當前可用FIX產品的相對較短半衰期需要頻繁的靜脈內注射(每週2-3次)，從而使對防治之依從性降低。參見White G.C.等人，Thrombosis and Haemostasis 78：261-5：1997。在兒童中，常需要使用中樞靜脈接入裝置(CVAD)，此進一步使兒童暴露於感染及血栓形成之風險。參見Hacker M.R.等人，Hemophilia,10：134-46(2004)。與rFIX治療相關之一嚴重潛在風險為產生通常在前50個暴露日(ED)內出現之抑制劑(中和抗體)。抑制劑對確立止血造成挑戰且可伴有過敏。參見Chitlur M.等人，Hemophilia,15：1027-31(2009)。因此，對治療因子IX缺乏所致之血友病之比當前療法更可耐受及更有效的改良方法仍然存有需要。
本發明提供一種向有需要之人類受試者投與長效因子IX(FIX)多肽之方法，其包括在約一週或一週以上一次之給藥間隔下向該受試者投與約10IU/kg至約200IU/kg劑量之該長效FIX多肽。在一個實施例中，長效FIX多肽之劑量為約10IU/kg至約50IU/kg、約10IU/kg 至約100IU/kg、約25IU/kg至約50IU/kg、約25IU/kg至約75IU/kg、約25IU/kg至約100IU/kg、約25IU/kg至約125IU/kg、約25IU/kg至約150IU/kg、約50IU/kg至約100IU/kg、約50IU/kg至約150IU/kg、約100IU/kg至約150IU/kg、約150IU/kg至約200IU/kg或其任何組合。在另一實施例中，長效FIX多肽之劑量係用於防治一或多種出血事件。在一個實例中，防治一或多種出血病症之劑量為約50IU/kg。在另一實例中，在投與長效FIX多肽之後的出血事件之年度出血率小於2、小於3、小於4、小於5、小於6、小於7、小於8、小於9或小於10。
在另一實施例中，長效FIX多肽之劑量係用 於個別化間隔防治一或多種出血事件。在一個實例中，長效FIX多肽之劑量為約100IU/kg。在另一實例中，在投與長效FIX多肽之後的出血事件之年度出血率小於1、小於2、小於3、小於4、小於5、小於6、小於7、小於8或小於9。在其他實施例中，長效FIX多肽之劑量係用於按需治療一或多種出血事件。在一個實例中，在投與長效FIX多肽之後的出血事件之年度出血率小於10、小於11、小於12、小於13、小於14、小於15、小於16、小於17、小於18、小於19、小於20、小於21、小於22、小於23、小於24、小於25或小於26。在其他實施例中，長效FIX多肽之劑量係用於圍手術期管理出血病症。
在某些實施例中，在約一週一次至約一個月 一次之給藥頻率下投與劑量。在一個態樣中，給藥頻率為約一週一次、約兩週內一次、約一個月兩次、約三週內一次、約四週內一次或約一個月一次。在另一態樣中，給藥頻率為約一週一次。在其他態樣中，給藥頻率為約兩週內一次或約一個月兩次。
在一些實施例中，給藥間隔為約每5日、約 每6日、約每7日、約每8日、約每9日、約每10日、約每11日、約每12日、約每13日、約每14日、約每15日、約每16日、約每17日、約每18日、約每19日、約每20日或約每21日。在其他實施例中，給藥間隔為每7日至14日。
長效FIX多肽之T1/2β(活性)可為至少約40小 時、至少約50小時、至少約60小時、至少約70小時、至少約80小時、至少約90小時、至少約100小時、至少約110小時、至少約120小時、至少約130小時、至少約140小時、至少約150小時、至少約160小時、至少約170小時、至少約180小時或至少約190小時。在一特定實例中，T1/2β(活性)為約40小時至約193小時。在另一實例中，T1/2β(活性)之平均值為約82小時。
長效FIX多肽之T1/2β(抗原)亦可為至少約60 小時、至少約80小時、至少約100小時、至少約120小時、至少約140小時、至少約160小時、至少約180小時、至少約200小時、至少約220小時、至少約240小時、至少約260小時、至少約280小時、至少約300小 時、至少約320小時、至少約340小時、至少約360小時或至少約370小時。在一特定實施例中，T1/2β(抗原)為約63小時至約372小時。
在一些實施例中，在投藥之後，受試者中之 長效FIX多肽之血漿谷底含量維持在基線以上約1%。在其他實施例中，受試者中之長效FIX多肽之血漿谷底含量維持在基線以上約1%與約5%之間、約1%與約6%之間、約1%與約7%之間、約1%與約8%之間、約1%與約9%之間、約1%與約10%之間、約1%與約11%之間、約1%與約12%之間、約1%與約13%之間、約1%與約14%之間、約1%與約15%之間。
在本發明方法之一個實施例中，劑量為約50 IU/kg，且給藥間隔為約7日。在另一實施例中，劑量為約100IU/kg且給藥間隔為至少約14日。在其他實施例中，劑量為約150IU/kg且給藥間隔為至少約21日。
長效FIX多肽可為包含FIX多肽及FcRn結合 搭配物之嵌合多肽。在一個實施例中，FcRn結合搭配物包含Fc區。在另一實施例中，長效FIX多肽進一步包含第二FcRn結合搭配物。在其他實施例中，第二FcRn結合搭配物包含第二Fc區。在一特定實施例中，長效FIX多肽為FIX單體二聚體雜交物。
在一些實施例中，受試者需要控制或預防出 血或出血事件。在其他實施例中，受試者需要控制或預防以下中之出血：少量失血、關節積血、淺表肌肉失血、軟 組織失血、中度失血、伴隨解剖之肌肉內或軟組織失血、黏膜失血、血尿症、大量失血、咽失血、咽後部失血、腹膜後腔失血、中樞神經系統失血、擦傷、切口、刮傷、關節失血、鼻出血、口腔出血、牙齦出血、顱內出血、腹膜內出血、少量自發性失血、大創傷後出血、中度皮膚擦傷或向關節、肌肉、內部器官或腦中之自發性失血。
在一個實施例中，受試者需要圍手術期管 理。在另一實施例中，受試者需要管理與手術或拔牙相關之出血。在其他實施例中，受試者將經受、正經受或已經受大手術。在一個態樣中，大手術為矯形手術、大面積口腔手術、泌尿手術或疝氣手術。在另一態樣中，矯形手術為置換膝、髖或其他主要關節。
在一些實施例中，受試者需要治療出血病 症，例如關節積血、肌肉出血、口腔出血、失血、向肌肉中失血、口腔失血、創傷、頭部創傷、胃腸出血、顱內失血、腹內失血、胸內失血、骨折、中樞神經系統出血、咽後間隙中出血、腹膜後隙中出血或髂腰肌鞘中出血。在其他實施例中，受試者需要手術防治、圍手術期管理或手術治療，例如手術為小手術、大手術、拔牙、扁桃體切除術、腹股溝疝切開術、滑膜切除術、全膝置換、開顱術、骨縫合術、創傷手術、顱內手術、腹內手術、胸內手術或關節置換手術。
在一些實施例中，劑量係靜脈內或皮下投與。
本發明亦包括一種估計針對患者加以個別化 之rFIXFc給藥資訊之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6之rFIXFc群體藥物動力學(popPK)模型及Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收患者資訊及所要治療結果資訊之至少一者，(b)使用popPK模型、Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統計算個別化rFIXFc給藥資訊，及(c)藉由該基於電腦之系統輸出該個別化給藥資訊。
在一些實施例中，方法亦包括基於(c)之輸出 的個別化給藥資訊選擇給藥方案及根據所選給藥方案向患者投與rFIXFc。
在一些實施例中，所要治療結果資訊為在給 藥之後血漿FIX活性程度之所要升高且輸出資訊為用於急性治療之劑量。
在一些實施例中，所要治療結果資訊為所要給藥間隔且輸出資訊為用於防治之劑量。
在一些實施例中，所要治療結果資訊為所要劑量且輸出資訊為用於防治之間隔。
本發明亦包括一種基於中值popPK估計rFIXFc給藥方案之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6之rFIXFc popPK模型及Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收患者資訊及所要治療結果資訊之至少一者，(b)使用popPK模型、Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統計算中值rFIXFc PK資訊，及(c)藉 由該基於電腦之系統輸出該中值PK資訊。
在一些實施例中，方法亦包括基於(c)之輸出 的中值PK資訊選擇給藥方案及根據所選給藥方案向患者投與rFIXFc。
本發明亦包括一種估計個別患者rFIXFc PK 之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6之rFIXFc群體藥物動力學(popPK)模型及Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收個別rFIXFc PK資訊，(b)使用popPK模型、Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統估計個別化患者rFIXFc PK資訊，及(c)藉由該基於電腦之系統輸出該個別化患者PK資訊。
在一些實施例中，方法亦包括基於(c)之輸出 的個別化患者PK資訊選擇給藥方案，及根據所選方案向患者投與rFIXFc。
在一些實施例中，(a)進一步包括藉由基於電 腦之系統接收患者資訊。
在一些實施例中，患者資訊為年齡或體重。
其他實施例包括一種儲存有當由處理器執行 時會使該處理器執行任何以上方法之指令的電腦可讀儲存媒體。
其他實施例包括一種包括處理器及記憶體之 系統，該記憶體上儲存有當由該處理器執行時會使該處理器執行任何以上方法之指令。
1900‧‧‧電腦系統
1902‧‧‧顯示介面
1904‧‧‧處理器
1906‧‧‧通訊基礎結構
1908‧‧‧主記憶體
1910‧‧‧輔助記憶體
1912‧‧‧硬式磁碟機
1914‧‧‧可移式儲存器驅動機
1916‧‧‧可移式儲存器單元
1920‧‧‧介面
1922‧‧‧可移式儲存器單元
1924‧‧‧網路介面
1926‧‧‧通訊路徑
1930‧‧‧顯示單元
圖1顯示研究設計及CONSORT圖。超出功 效時期收集之功效資料未包括在功效分析中。*PK子組用rFIX給藥，隨後進行PK評估且在rFIXFc給藥之前洗脫(大於或等於5日)以進行PK評估。如下進行rFIX取樣：注射前、自注射開始10(±2)分鐘、1小時(±15分鐘)、3小時(±15分鐘)、6小時(±15分鐘)、24(±2)小時、48(±2)小時、72(±3)小時及96(±3)小時(4日)。如下進行rFIXFc取樣：注射前、自注射開始10(±2)分鐘、1小時(±15分鐘)、3小時(±15分鐘)、6小時(±15分鐘)、24(±2)小時、48(±2)小時、96(±3)小時(4日)、144(±3)小時(6日)、168(±3)小時(7日)、192(±3)小時(8日)及240(±3)小時(10日)。在10分鐘內進行輸注。歷經96小時收集各受試者之血液樣品。亦在第26週對rFIXFc進行重複PK評估。 ED=暴露日；PK=藥物動力學。
圖2顯示隊組1連續給藥及PK取樣之概述。
圖3A顯示分別隊組1、2及3中之受試者之 中值年度出血率(ABR)的圖。分別顯示各隊組之總體、自發性及創傷性出血之條形圖。
圖3B顯示就子組而言之年度出血率之概述。 所有分析皆與初級功效分析一致，顯示所有子組中之出血率皆降低。隊組1為患者數目足以圖解顯示子組分析之唯一隊組。
圖4顯示在連續藥物動力學組(隊組1)中使用 單級凝結分析(對數尺度)獲得之rFIX及rFIXFc治療個體中之基線校正平均FIX活性(IU/dL)隨時間的圖。
圖5顯示用於預測rFIXFc之群體PK之三隔 室模型的圖。CL，清除率；V，分佈體積；Q，隔室間清除率。
圖6顯示基線(第1週)及重複PK(第26週)概 況之清除率(CL)及V1估計值(黑線指示在兩個情形之間不發生大變化之平均值)。
圖7顯示相對於體重(BW)之個別PK參數。
圖8顯示由群體或個別PK模型預測之FIX活 性相較於觀測FIX活性之擬合優度圖。
圖9顯示50IU/kg或100IU/kg劑量之群體 PK模型之視覺預測檢查(VPC)圖。紅線及黑線分別表示模擬(紅色)及觀測(黑色)資料之第10個、第50個及第90個百分位數。
圖10顯示用谷/峰值記錄驗證群體PK模型。 R2=0.9857，P<0.001。
圖11顯示rFIXFc小兒研究設計之圖。
圖12顯示觀測及預測之圍手術期FIX活性之 代表圖。
圖13顯示穩態FIX活性時間概況之群體模擬 (第5-第95個百分位數)。
圖14顯示穩態FIX活性對時間概況之模擬， 其比較第5至第95個百分位數之群體中每週一次50 IU/kg相對於4000IU以及每10日100IU/kg相對於8000IU。
圖15顯示對個別PK評估提議之輸出。
圖16顯示對用於陣發性治療之個別化給藥方案提議之輸出。
圖17顯示對在無個別化PK評估下給藥方案選擇提議之輸出。
圖18顯示對在無個別化PK評估下給藥方案選擇提議之另一輸出。
圖19顯示可用於實施例中之一實例電腦系統。
圖20顯示在1% FIX活性程度下相對於時間繪製預測出血總數之圖。
圖21顯示在5% FIX活性程度下相對於時間繪製預測出血總數之圖。
本發明提供一種使用比用當前已知因子IX產品所可能達成之給藥間隔、給藥頻率及/或藥物動力學參數更長之給藥間隔、更長之給藥頻率及/或改良之藥物動力學參數，用FIX治療FIX缺乏症(例如B型血友病)之方法。本發明亦提供改良之長效FIX多肽、FIX嵌合聚核苷酸及製造方法。
I.定義
術語「約」在本文中用於意謂近似、大致、大約或在...左右。當術語「約」與數值範圍聯合使用時，其藉由使邊界延伸高於及低於所述數值來修飾彼範圍。一般而言，術語「約」在本文中用於以向上或向下(增高或降低)變化10%將數值修飾成高於及低於所述值。
術語「多肽」、「肽」及「蛋白質」可互換使用且係指包含共價連接之胺基酸殘基之聚合化合物。
術語「聚核苷酸」及「核酸」可互換使用且係指包含共價連接之核苷酸殘基之聚合化合物。聚核苷酸可為單股或雙股DNA、cDNA、RNA、載體、質體、噬菌體或病毒。聚核苷酸包括表18中之編碼表19之多肽的聚核苷酸(參見表18)。聚核苷酸亦包括表18之聚核苷酸之片段，例如編碼表19之多肽之片段(諸如因子IX、Fc、信號序列、前肽、6His及表19之多肽之其他片段)的聚核苷酸片段。
如本文所用之術語「投與」意謂經由醫藥學上可接受之途徑向受試者指定或給予本發明之醫藥學上可接受之長效FIX多肽。投藥途徑之實例包括(但不限於)例如經由中樞靜脈接入達成之靜脈內途徑，例如靜脈內注射及靜脈內輸注。其他投藥途徑包括皮下、肌肉內、經口、經鼻及經肺投藥，較佳為皮下投藥。長效FIX多肽(FIX嵌合或雜交蛋白)可作為包含至少一種賦形劑之醫藥組合物之一部分加以投與。本發明之優勢包括：方案順應性改 良；突破出血減少；對預防關節出血之保護增加；關節損傷得以預防；罹病率降低；死亡率降低；對出血之長久防禦；血栓形成事件減少；及生活品質改良。
如本文所用之術語「嵌合多肽」意謂其內包 括至少兩個來自不同來源之多肽(或其部分，諸如子序列或肽)的多肽。嵌合多肽可包括來自不同來源，諸如不同基因、不同cDNA或不同動物或其他物種之兩個、三個、四個、五個、六個、七個或七個以上多肽或其部分。嵌合多肽可包括一或多個接合不同多肽或其部分之連接子。因此，在單一嵌合多肽內，多肽或其部分可直接接合或其可經由連接子間接接合或以直接與間接兩種方式接合。嵌合多肽可包括有助於蛋白質純化或偵測之其他肽(諸如信號序列)及序列(諸如6His及FLAG)。此外，嵌合多肽可在N-末端及/或C-末端具有胺基酸或肽添加物。本發明之示範性嵌合多肽為因子IX-FcRn BP嵌合多肽，例如因子IX-Fc嵌合多肽，諸如圖1中之FIXFc，SEQ ID NO：2(表18)，有或無其信號序列及前肽。
術語「長效」及「持久」在本文中可互換使 用。在一個實施例中，術語「長效」或「持久」指示由投與「長效」FIX多肽所致之FIX活性比野生型FIX(例如BENEFIX®或血漿源性FIX(「pdFIX」))之FIX活性長久。 「較長」FIX活性可藉由此項技術中之任何已知方法，例如aPTT分析、顯色分析、ROTEM、TGA等量測。在一個實施例中，「較長」FIX活性可藉由T1/2β(活性)顯示。在 另一實施例中，「較長」FIX活性可藉由血漿中存在之FIX抗原之含量顯示，例如藉由T1/2β(抗原)顯示。在其他實施例中，相較於野生型FIX多肽(亦即由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽，亦即BENEFIX®或pdFIX)，長效或持久FIX多肽在凝血級聯中更長久地起作用，例如活性時期較長。
以國際單位(IU)表示因子IX凝血活性。一個 IU之因子IX活性近似對應於一毫升正常人類血漿中之因子IX之量。若干分析可用於量測因子IX活性，包括單級凝結分析(活化部分凝血激素時間；aPTT)、凝血酶產生時間(TGA)及旋轉血栓彈力測定術(ROTEM®)。
如本文關聯本發明之調配物所用之術語「凍 乾物(lyophilisate)」(亦可與「凍乾物(lyophilizate)」互換使用)表示藉由此項技術中本身已知之冷凍乾燥法製造之調配物。藉由在真空下昇華之後冷凍並在高溫下解吸殘餘水來移除溶劑(例如水)。在醫藥領域中，凍乾物通常具有約0.1%至5%(w/w)之殘餘水分且以散劑或穩定實體餅形式存在。凍乾物之特徵在於在添加復原介質之後快速溶解。
如本文所用之術語「復原調配物」表示凍乾 且藉由添加稀釋劑再溶解之調配物。稀釋劑可含有(不限於)注射用水(WFI)、制菌注射用水(BWFI)、氯化鈉溶液(例如0.9%(w/v)NaCl)、葡萄糖溶液(例如5%葡萄糖)、含界面活性劑之溶液(例如0.01%聚山梨醇酯20或聚山梨醇 酯80)、pH值緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝溶液)及其組合。
如本文所用之「給藥間隔」意謂在向受試者 投與之多次劑量之間的流逝之時間長度。因此，給藥間隔可指示為範圍。在使用例如嵌合FIX-Fc之嵌合FIX-FcRnBP之本發明方法中，給藥間隔可比為等量(以IU/kg計)無FcRn BP(例如Fc部分)之該因子IX(亦即由該FIX組成之多肽)所需之給藥間隔長至少約1.5至8倍。當投與例如本發明之因子IX-Fc嵌合多肽(或雜交物)時，給藥間隔可比為等量無FcRn BP(例如Fc部分)之該因子IX(亦即由該因子IX組成之多肽)所需之給藥間隔長至少約1.5倍。給藥間隔可比為等量無例如Fc部分之該因子IX(或由該因子IX組成之多肽)所需之給藥間隔長至少約1.5至8倍。
如本文所用之術語「給藥頻率」係指在既定 時間內投與長效FIX多肽之劑量之頻率。給藥頻率可指示為每個既定時間之劑量數，例如一週一次或兩週內一次。
如本文所用之術語「出血事件」係以標準化 定義給出：出血事件自首個出血徵象開始，且在末次治療出血之後72小時結束，在所述72小時內在相同位置處之任何出血症狀或相隔小於或等於72小時之注射皆被視為同一出血事件。參見Blanchette V.(2006)Haemophilia 12：124-7。如本文所用，在前一出血事件之後72小時以上進行的治療出血事件之任何注射皆被視為治療相同位置處之新出血事件之首次注射。同樣，在不同位置處之任何出血皆被視為獨立的出血事件，而無論距離上次注射之時 間如何。
如本文所用之術語「防治一或多種出血事 件」或「防治性治療」意謂歷經一定時程以多次劑量向受試者投與因子IX多肽以增大受試者血漿中之因子IX活性程度。在一個實施例中，「防治一或多種出血事件」指示使用長效FIX多肽來預防或抑制一或多種自發性或不可控制之出血或出血事件的發生，或降低一或多種自發性或不可控制之出血或出血事件之頻率。在另一實施例中，增大之FIX活性程度足以降低自發性出血之發生率或在未預見損傷之情況下預防出血。防治性治療降低或預防出血事件，例如在按需治療下所述之出血事件。如在「給藥間隔」下所論述，防治性治療可加以個別化例如以抵消受試者間可變性。
如本文所用之術語「約一週一次」意謂近似 數值，且「約一週一次」可包括每七日±兩日，亦即每五日至每九日。因此，「一週一次」之給藥頻率可為每五日、每六日、每七日、每八日或每九日。
如本文所用之術語「個別化間隔防治」意謂 以個別化給藥間隔或頻率使用長效FIX多肽以預防或抑制一或多種自發性及/或不可控制出血或出血事件的發生，或降低一或多種自發性及/或不可控制出血或出血事件之頻率。在一個實施例中，「個別化間隔」包括每10日±3日，亦即每7日至每13日。因此，「個別化間隔防治」之給藥頻率可為每7日、每8日、每9日、每10日、每 11日、每12日或每13日。
如本文所用之術語「按需治療」意謂意欲歷 經短時程進行且反應於現存狀況(諸如出血事件或察覺出短期需要，諸如計劃手術)之治療。「按需治療」可與「陣發性(episodic)」治療互換使用。可能需要按需治療之病狀包括出血事件、關節積血、肌肉出血、口腔出血、失血、向肌肉中失血、口腔失血、創傷、頭部創傷、胃腸出血、顱內失血、腹內失血、胸內失血、骨折、中樞神經系統出血、咽後間隙中出血、腹膜後隙中出血或髂腰肌鞘中出血。亦包括除此等病狀以外之出血事件。受試者可需要手術防治、圍手術期管理或手術治療。此等手術包括小手術、大手術、拔牙、扁桃體切除術、其他牙手術/胸面部手術、腹股溝疝切開術、滑膜切除術、全膝置換、其他關節置換、開顱術、骨縫合術、創傷手術、顱內手術、腹內手術、胸內手術。亦包括除此等手術以外之手術。
可能需要按需治療之其他病狀包括少量失 血、關節積血、淺表肌肉失血、軟組織失血、中度失血、伴隨解剖之肌肉內或軟組織失血、黏膜失血、血尿症、大量失血、咽失血、咽後部失血、腹膜後腔失血、中樞神經系統失血、擦傷、切口、刮傷、關節失血、鼻出血、口腔出血、牙齦出血、顱內出血、腹膜內出血、少量自發性失血、大創傷後出血、中度皮膚擦傷或向關節、肌肉、內部器官或腦中之自發性失血。按需治療之其他原因包括需要圍手術期管理手術或拔牙、大手術、大面積口腔手術、泌 尿手術、疝氣手術、矯形手術，諸如置換膝、髖或其他主要關節。
如本文所用之術語「治療」意謂改善或減輕 包括(但不限於)B型血友病之出血疾病或病症之一或多種症狀。在一個實施例中，「治療」出血疾病或病症包括預防出血疾病或病症之一或多種症狀。在由缺乏FIX(例如低基線FIX活性)引起之出血疾病或病症中，術語「治療」意謂FIX替代療法。藉由向受試者投與長效FIX多肽，該受試者可達成及/或維持血漿FIX谷底活性程度處於約1IU/dl或高於1IU/dl。在其他實施例中，「治療」意謂降低出血疾病或病症之一或多種症狀(例如自發性或不可控制之出血事件)之頻率。然而，「治療」無需為治癒。
如本文所用之術語「圍手術期管理」意謂在 例如外科手術之手術程序之前、同時或之後使用長效FIX多肽。「圍手術期管理」一或多種出血事件之用途包括在手術之前(亦即手術前)、期間(亦即手術中)或之後(亦即手術後)進行手術防治以預防一或多種出血或出血事件，或在手術之前、期間及之後降低或抑制自發性及/或不可控制之出血事件。
藥物動力學(PK)參數包括以上術語及以下術 語，除非另外指示，否則其具有其在此項技術中之一般含義。一些術語在實例中加以更詳細地說明。PK參數可基於FIX抗原含量(在本文中常以插句方式表示為「抗原」) 或FIX活性程度(在本文中常以插句方式表示為「活性」)。由於一些受試者之血漿中存在干擾使用針對FIX之抗體量測投與之(亦即外源性)FIX之能力的內源性非活性FIX，所以在文獻中，PK參數常基於FIX活性程度。 然而，當FIX作為含有諸如FcRn BP之異源多肽之融合蛋白或雜交蛋白的一部分投與時，投與之(亦即外源性)FIX抗原可使用針對該異源多肽之抗體準確量測。此外，某些PK參數可基於模型預測資料(在本文中常以插句方式表示為「模型預測的」)或觀測資料(在本文中常以插句方式表示為「觀測的」)，且較佳基於觀測資料。
如本文所用之「基線」為在投與劑量之前受 試者中之最低量測血漿因子IX含量。因子IX血漿含量可在給藥之前兩個時間點；在篩檢就診時及在給藥之前即刻加以量測。或者，(a)治療前FIX活性<1%、不具有可偵測FIX抗原及具有無意義基因型之受試者之基線可定義為0%，(b)治療前FIX活性<1%及具有可偵測FIX抗原之受試者之基線可設定為0.5%，(c)治療前FIX活性在1-2%之間的受試者之基線為Cmin(在整個PK研究期間之最低活性)，及(d)治療前FIX活性2%之受試者之基線可設定為2%。高於給藥前基線之活性可視為先前治療之殘餘藥物，且可在rFIXFc給藥之後衰減至基線並自PK資料減去。
如本文所用之「T1/2β」或「βHL」為與消除期 相關之半衰期，t1/2β=(ln2)/與終末期相關之消除速率常 數。T1/2β可藉由FIX活性或血漿中之FIX抗原含量加以量度。基於活性之T1/2β顯示為T1/2β(活性)，且基於FIX抗原含量之T1/2β可顯示為T1/2β(抗原)。T1/2β(活性)與T1/2β(抗原)兩者均可顯示為範圍或幾何平均值。
如本文所用之「谷底」為在投與一定劑量之 本發明之嵌合多肽或另一因子IX分子之後及在投與下一劑量(若存在)之前所達到的最低血漿因子IX活性程度。 谷底在本文中可與「臨限」互換使用。自量測因子IX含量減去基線因子IX含量以計算谷底含量。
如本文所用之術語「年度出血率」(「ABR」) 係指在外推至1年之規定時期期間，受試者所經歷之出血事件(包括自發性及創傷性出血)之數目。舉例而言，六個月內兩次出血將指示ABR為四。中值ABR提供單一數值來描述全部受試者，從而指示半數受試者之個別ABR小於或等於中值且半數之ABR大於或等於中值。舉例而言，可根據下式計算ABR：
如本文所用之「受試者」意謂人類。如本文 所用之受試者包括已知發生過至少一次不受控制之出血事件、已診斷有與不受控制之出血事件相關之疾病或病症(例如出血疾病或病症，例如B型血友病)、易發生不受控制之出血事件(例如血友病)或其任何組合的個體。受試者 亦可包括在某一活動(例如手術、運動活動或任何劇烈活動)之前處於一或多種不可控制之出血事件之危險中之個體。受試者之基線FIX活性可小於1%、小於0.5%、小於2%、小於2.5%、小於3%或小於4%。受試者亦包括人類小兒。小兒人類受試者之年齡為出生至20歲、較佳為出生至18歲、出生至16歲、出生至15歲、出生至12歲、出生至11歲、出生至6歲、出生至5歲、出生至2歲、及2至11歲。
如本文所用之「治療劑量」、「劑量」、 「有效劑量」或「給藥量」意謂在用長效FIX多肽投與之 受試者中達成至少約1IU/dl或高於1IU/dl之血漿FIX谷底活性程度的劑量。出於本發明之目的，在一個實施例中，「劑量」係指在整個長效FIX多肽投藥期間，血漿FIX谷底活性程度維持至少約1IU/dl或高於1IU/dl、至少約2IU/dl或高於2IU/dl、至少約3IU/dl或高於3IU/dl、至少約4IU/dl或高於4IU/dl、或至少約5IU/dl或高於5IU/dl之劑量。在另一實施例中，「劑量」使出血或出血病症之頻率降低或減小。在其他實施例中，「劑量」使進行中之不可控制的出血或出血事件停止。在其他實施例中，「劑量」在易發生自發性出血或出血事件之受試者中預防此等自發性出血或出血事件。「劑量」或「治療劑量」無需治癒血友病。
如本文所用之「變異體」係指不同於原始聚 核苷酸或多肽，但保留其必需性質(例如因子IX凝血活性 或Fc(FcRn結合)活性)之聚核苷酸或多肽。一般而言，變異體總體密切類似，且在許多區域中與原始聚核苷酸或多肽相同。變異體包括原始多肽之多肽及聚核苷酸片段、缺失、插入及修飾形式。
II.投藥方法
本發明提供向有需要之人類受試者投與長效因子IX(FIX)多肽之方法，其包括在某一給藥間隔下向該受試者投與一定劑量之長效FIX多肽。投與長效FIX多肽為一種藉由向缺乏FIX之受試者添加重組FIX達成之替代療法。投與長效FIX多肽可減少受試者出血或出血事件之數目或預防受試者之出血或出血事件。
本發明方法所針對之受試者包括需要控制或預防出血或出血事件者。受試者在投藥時可正經受以下中之出血，或預期會經受以下中之出血，或可易經受以下中之出血：少量失血、關節積血、淺表肌肉失血、軟組織失血、中度失血、伴隨解剖之肌肉內或軟組織失血、黏膜失血、血尿症、大量失血、咽失血、咽後部失血、腹膜後腔失血、中樞神經系統失血、擦傷、切口、刮傷、關節失血、鼻出血、口腔出血、牙齦出血、顱內出血、腹膜內出血、少量自發性失血、大創傷後出血、中度皮膚擦傷或向關節、肌肉、內部器官或腦中之自發性失血。此等受試者亦包括需要圍手術期管理者，該管理諸如為管理與手術或拔牙相關之出血。在一個實施例中，受試者需要防治一或 多種出血事件。在另一實施例中，受試者需要個別化間隔防治。在其他實施例中，受試者需要按需治療一或多種出血事件。在其他實施例中，受試者需要圍手術期管理一或多種出血事件。
本發明亦鑒別可治療或預防一或多種出血事 件之適當給藥量及給藥間隔。投與適用於給藥間隔之給藥量可在間隔期間在用長效FIX多肽投與之受試者中達成至少約1IU/dl或高於1IU/dl之血漿FIX谷底活性程度。在一個實施例中，本發明包括可在整個間隔期間將血漿FIX谷底活性程度維持為至少約1IU/dl(1%)或高於1IU/dl(1%)、至少約2IU/dl(2%)或高於2IU/dl(2%)、至少約3IU/dl(3%)或高於3IU/dl(3%)、至少約4IU/dl(4%)或高於4IU/dl(4%)、或至少約5IU/dl(5%)或高於5IU/dl(5%)之給藥量(或給藥量範圍)及給藥間隔(或給藥間隔範圍)。在另一實施例中，給藥量(或給藥量範圍)及給藥間隔(或給藥間隔範圍)使出血或出血病症之頻率降低或減小。 在其他實施例中，長效FIX多肽之給藥量(或給藥量範圍)及給藥間隔(或給藥間隔範圍)使經給藥量投藥之受試者的進行中之不可控制的出血或出血事件在給藥間隔期間停止。在其他實施例中，長效FIX多肽之給藥量(或給藥量範圍)及給藥間隔(或給藥間隔範圍)預防易發生自發性出血或出血事件之受試者之此等自發性出血或出血事件。各種給藥量及給藥間隔描述於2011年7月11日申請且在2012年1月12日以WO 2012/006624公開之國際申請案 第PCT/US2011/043569號中，該申請案以全文引用的方式併入本文中。
可用於本發明方法中之劑量為約10IU/kg至 約200IU/kg、約10IU/kg至約180IU/kg、或約25IU/kg至約200IU/kg。在一個實施例中，長效FIX多肽之劑量為約10IU/kg至約50IU/kg、約10IU/kg至約100IU/kg、約25IU/kg至約75IU/kg、約25IU/kg至約100IU/kg、約25IU/kg至約125IU/kg、約25IU/kg至約150IU/kg、約25IU/kg至約50IU/kg、約50IU/kg至約100IU/kg、約50IU/kg至約150IU/kg、約100IU/kg至約150IU/kg、約150IU/kg至約200IU/kg或其任何組合。
在另一實施例中，至少約每五日或五日以上 之長效FIX多肽之劑量如下：約25至約110、約30至約110、約40至約110、約50至約110、約60至約110、約70至約110、約80至約110、約90至約110、及約100至約110；約30至約100、約30至約90、約30至約80、約30至約70、約30至約60、約30至約50、約30至約40IU/kg；約40至約110、約50至約100、約60至約90、及約70至約80IU/kg；約40至約50、約50至約60、約60至約70、約70至約80、約80至約90、約90至約100、及約100至約110IU/kg；約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105或約110IU/kg。
在某些實施例中，長效FIX多肽之劑量為足 以每週防治出血事件之量。舉例而言，每週給藥間隔之劑量包括約10至約50、約20至約60、約20至約70、約20至約80、約20至約90、約30至約40、約30至約50、約30至約60、約30至約70、約30至約80、約30至約90、約40至約50、約40至約60、約50至約70、約40至約80、約40至約90、約50至約60、約50至約70、約50至約80、約50至約90、約60至約70、約60至約80、約60至約90、約70至約80、約70至約90IU/kg。若對既定受試者有效，則劑量可低於20IU/kg，例如約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18或約19IU/kg。
或者，給藥間隔可為基於藥物動力學資料或 關於彼受試者之其他資訊針對各受試者確定之個別化間隔。個別化劑量/給藥間隔組合可與先前段落中之固定間隔方案之劑量/給藥間隔組合相同，或可不同。方案可初始處於固定給藥間隔下，接著其可變為個別化給藥間隔。
在一些實施例中，長效FIX多肽之劑量為足 以個別化間隔防治出血事件之量。在一個實例中，個別化間隔為每9日、每10日、每11日、每12日、每13日、每14日、每15日、每16日、每17日、每18日、每19日或每月兩次。個別化間隔之劑量之實例包括(但不限於)：約50IU/kg至約180IU/kg、約60IU/kg至約180IU/kg、約70IU/kg至約180IU/kg、約80IU/kg至約180 IU/kg、約90IU/kg至約180IU/kg、約100IU/kg至約180IU/kg、約110IU/kg至約180IU/kg、約120IU/kg至約180IU/kg、約130IU/kg至約180IU/kg、約140IU/kg至約180IU/kg、約60IU/kg至約170IU/kg、約60IU/kg至約160IU/kg、約60IU/kg至約150IU/kg、約60IU/kg至約140IU/kg、約70IU/kg至約140IU/kg、約70IU/kg至約130IU/kg、約80IU/kg至約130IU/kg、約80IU/kg至約140IU/kg、約90IU/kg至約140IU/kg、約90IU/kg至約130IU/kg、約90IU/kg至約120IU/kg、約90IU/kg至約110IU/kg、約90IU/kg至約100IU/kg、約100IU/kg至約140IU/kg、約100IU/kg至約130IU/kg、約100IU/kg至約120IU/kg、或約100IU/kg至約110IU/kg。
在其他實施例中，個別化給藥間隔為至少約 兩週內一次、至少約15日、至少約16日、至少約17日、至少約18日、至少約19日、至少約20日、至少約21日、至少約三週內一次、至少約22日、至少約23日、至少約24日、至少約25日、至少約26日、至少約27日、至少約28日、至少約29日、至少約30日或至少約一個月一次。舉例而言，個別化給藥間隔之劑量為約120IU/kg至約200IU/kg、約130IU/kg至約200IU/kg、約140IU/kg至約200IU/kg約150IU/kg至約200IU/kg、約160IU/kg至約200IU/kg、約170IU/kg至約200IU/kg、約180IU/kg至約200IU/kg、約120IU/kg至 約180IU/kg、約130IU/kg至約180IU/kg、約140IU/kg至約180IU/kg、約150IU/kg至約180IU/kg、約160IU/kg至約180IU/kg、約120IU/kg至約170IU/kg、約130IU/kg至約170IU/kg、約140IU/kg至約170IU/kg、約150IU/kg至約170IU/kg、約160IU/kg至約170IU/kg、約120IU/kg至約160IU/kg、約130IU/kg至約160IU/kg、約140IU/kg至約160IU/kg、約150IU/kg至約160IU/kg、約120IU/kg至約150IU/kg、約130IU/kg至約150IU/kg、約140IU/kg至約150IU/kg、約120IU/kg至約140IU/kg、或約130IU/kg至約140IU/kg。在其他實例中，個別化給藥間隔之劑量為約60IU/kg、約70IU/kg、約80IU/kg、約90IU/kg、約95IU/kg、約100IU/kg、約105IU/kg、約110IU/kg、約115IU/kg、約120IU/kg、約125IU/kg、約130IU/kg、約135IU/kg、約140IU/kg、約145IU/kg、約150IU/kg、約155IU/kg、約160IU/kg、約165IU/kg、約170IU/kg、約175IU/kg或約180IU/kg。
在一些實施例中，長效FIX多肽之劑量足以 按需治療一或多種出血事件。按需治療之劑量可視各種因素，例如受試者之基線FIX活性、受試者之體重、受試者經歷出血事件之可能性等而變化。在一個實例中，按需治療之劑量可為約10至約50、約15至約100、約20至約100、約20至約50、約50至約100、約10、約20、約40、約50及約100IU/kg。在另一實例中，按需治療之劑 量可為約20至約50、約20至約100、約20至約180、25至約110、約30至約110、約40至約110、約50至約110、約60至約110、約70至約110、約80至約110、約90至約110、約100至約110、約30至約100、約30至約90、約30至約80、約30至約70、約30至約60、約30至約50、約30至約40IU/kg、約40至約110、約50至約100、約60至約90、約70至約80IU/kg、約40至約50、約50至約60、約60至約70、約70至約80、約80至約90、約90至約100、約100至約110IU/kg、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105及約110IU/kg。在其他實例中，按需治療之劑量可為約90至約180、約100至約180、約110至約180、約120至約180、約130至約180、約140至約180、約150至約180、約160至約180、及約170至約180IU/kg。在其他實例中，按需治療之劑量為約90至約170、約90至約160、約90至約150、約90至約140、約90至約130、約90至約120、約90至約110、及約90至約100IU/kg。在實例中，按需治療之劑量為約100至約170、約110至約160、約120至約150、及約130至約140IU/kg。在其他實例中，按需治療之劑量為約90至約100、約100至約110、約110至約120、約120至約130、約130至約140、約140至約150、約150至約160、及約160至約170IU/kg。按需治療之劑量可為約 115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155、約160、約165、約170、約175及約180IU/kg。
在某些實施例中，用於受試者之給藥量與給 藥間隔組合為每週一次20IU/kg、每週一次40IU/kg、每週一次50IU/kg、每10日100IU/kg及每兩週(或每月兩次)100IU/kg。劑量與劑量間隔之其他組合包括：劑量至少約50IU/kg及給藥間隔至少約7日、劑量至少約100IU/kg及給藥間隔至少約9日、劑量至少約100IU/kg及給藥間隔至少約12日、劑量至少約100IU/kg及給藥間隔至少約13日、劑量至少約100IU/kg及給藥間隔至少約14日、劑量至少約100IU/kg及給藥間隔至少約15日、劑量至少約150IU/kg及給藥間隔至少約14日、20-50或20-100IU/kg且該給藥間隔為每週一次、劑量20-50IU/kg及給藥間隔7日、劑量50-100IU/kg及給藥間隔10-14日、或劑量100-150IU/kg及給藥間隔14-16日。給藥間隔與劑量之組合之非限制性實例亦包括10-50IU/kg 7日、15-100IU/kg 10-13日、50-150IU/kg 14-15日、10-30IU/kg 7日、15-50IU/kg 10日、20-70IU/kg 11日、25-85IU/kg 12日、30至100IU/kg 13日、40至125IU/kg 14日、及50-150IU/kg 15日。
在一個實施例中，給藥間隔為至少約一週一 次、至少約兩週內一次、至少約一個月兩次、至少約三週內一次、至少約四週內一次或至少約一個月一次。在另一 實施例中，長效FIX多肽之給藥間隔為約五日內一次至約兩個月內一次、約五日內一次至約一個月內一次、或約一週一次至約一個月一次。在其他實施例中，給藥間隔為至少約每5日、約每6日、至少約每7日、至少約每8日、至少約每9日、至少約每10日、至少約每11日、至少約每12日、至少約每13日、至少約每14日、至少約每15日、至少約每16日、至少約每17日、至少約每18日、至少約每19日、至少約每20日或至少約每21日。在其他實施例中，給藥間隔為9-18日，例如約9-17、約9-16、約9-15、約9-14、約9-13、約9-12、約9-11、約9-10日、約10-18、約11-18、約12-18、約13-18、約14-18、約15-18、約16-18、約17-18日、約10-11、約11-12、約12-13、約13-14、約14-15、約15-16、及約16-17日、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17或約18日。在其他實施例中，給藥間隔為約10-14日。給藥間隔可長於18日，例如約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39或約40日。
在一個實施例中，長效FIX多肽之給藥頻率 為約每兩週，或每月兩次。在另一實施例中，給藥頻率為每7日25-50IU/kg、每10-13日50-100IU/kg、或每14日100-150IU/kg。確定間隔(或頻率)及劑量以使間隔(或頻率)與劑量之組合將在受試者中產生至少約1-5或至少 約1-3或至少約1、至少約2、至少約3IU/dl之FIX谷底活性程度。劑量及給藥間隔之實例亦可為7日20-50IU/kg、10-14日50-100IU/kg、14-16日100-150IU/kg、7日10-50IU/kg、10-13日15-100IU/kg、或14-15日50-150IU/kg。劑量及給藥間隔之其他實例包括(但不限於)7日10-30IU/kg、10日15-50IU/kg、11日20-70IU/kg、12日25-85IU/kg、13日30至100IU/kg、14日40至125IU/kg、及15日50-150IU/kg。
在一些實施例中，給藥間隔為每週一次20 IU/kg、每10日40IU/kg、每週一次50IU/kg或每兩週(每月兩次)100IU/kg。
在本發明之一些實施例中，出血事件之年度 出血率(ABR)由本發明方法加以控制。舉例而言，可投與給藥量及給藥間隔以使年度出血率降低或減小至某一程度。在一個實施例中，在用於防治出血事件之劑量及給藥間隔下投與長效FIX多肽使得年度出血率小於2、小於2.5、小於3、小於3.5、小於4、小於4.5、小於5、小於5.5、小於6、小於6.5、小於7、小於7.5、小於8、小於8.5、小於9、小於9.5或小於10。舉例而言，每週防治出血事件之ABR可為2.95。在另一實施例中，在用於個別化間隔防治出血事件之劑量及給藥間隔下投與長效FIX多肽使得ABR小於1、小於1.5、小於2、小於2.5、小於3、小於3.5、小於4、小於4.5、小於5、小於5.5、小於6、小於6.5、小於7、小於7.5、小於8、小於8.5或小於 9。舉例而言，個別化間隔防治之ABR可為1.38。在其他實施例中，在用於按需治療(亦即陣發性治療)出血事件之劑量及給藥間隔下投與長效FIX多肽使得ABR小於10、小於11、小於12、小於13、小於14、小於15、小於16、小於17、小於18、小於19、小於20、小於21、小於22、小於23、小於24、小於25或小於26。舉例而言，按需治療之ABR可為17.69。
本發明之長效FIX多肽可提供長於野生型 FIX(亦即由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽；BENEFIX®；或pdFIX)之半衰期，例如T1/2β(活性)或T1/2β(抗原)。在一個實施例中，長效FIX多肽之T1/2β(活性)為至少約40小時、至少約45小時、至少約50小時、至少約55小時、至少約60小時、至少約65小時、至少約70小時、至少約75小時、至少約80小時、至少約85小時、至少約90小時、至少約95小時、至少約100小時、至少約105小時、至少約110小時、至少約115、至少約120、至少約125、至少約130、至少約135、至少約140、至少約145、至少約150、至少約155、至少約160、至少約165、至少約170、至少約175、至少約180、至少約185、至少約190或至少約193。在另一實施例中，長效FIX多肽之T1/2β(活性)為約40小時至約193小時、約35小時至約190小時、約45小時至約193小時、約50小時至約198小時、約55小時至約188小時、約60小時至約200小時、約30小時至約205小時、約 43小時至約210小時。在一特定實施例中，T1/2β(活性)為約40小時至約193小時。
在一些實施例中，以平均值表示長效FIX多 肽之T1/2β(活性)。舉例而言，長效FIX多肽之T1/2β(活性)之平均值為至少約76小時、至少約77小時、至少約78小時、至少約79小時、至少約80小時、至少約81小時、至少約82小時、至少約83小時、至少約84小時、至少約85小時、至少約86小時、至少約87小時、至少約88小時、至少約89小時、至少約90小時、至少約91小時或至少約92小時。在一特定實施例中，長效FIX多肽之T1/2β(活性)之平均值為82小時。
在其他實施例中，長效FIX多肽之T1/2β(活 性)係以與野生型成熟FIX(亦即BENEFIX®)之T1/2β(活性)進行比較之方式加以顯示。在一個實例中，T1/2β(活性)之平均值比野生型成熟FIX(由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽，亦即BENEFIX®；或pdFIX)高至少約2.0倍。在另一實例中，T1/2β(活性)之平均值比野生型成熟FIX(由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽，亦即BENEFIX®；pdFIX)高至少約2.0倍、至少約2.1倍、至少約2.2倍、至少約2.3倍、至少約2.4倍、至少約2.5倍、至少約2.6倍、至少約2.7倍、至少約2.8倍、至少約2.9倍、至少約3.0倍、至少約3.1倍或至少約3.2倍。
在其他實施例中，本發明提供向可展現較長 T1/2β(活性)之受試者投與長效FIX多肽。在一個實施例中，本發明方法包括向展現T1/2β(活性)為至少約80小時、至少約81小時、至少約82小時、至少約83小時、至少約84小時、至少約85小時、至少約86小時、至少約87小時、至少約88小時之受試者投與長效FIX多肽。 在另一實施例中，方法包括向基線FIX活性小於2%、小於1.5%、小於1%或小於0.5%之受試者投與長效FIX多肽，藉此使得T1/2β(活性)高於約80小時、約81小時、約82小時、約83小時、約84小時、約85小時、約86小時、約87小時或約88小時。
在某些實施例中，長效FIX多肽之T1/2β(抗 原)為至少約63小時、至少約70小時、至少約80小時、至少約90小時、至少約100小時、至少約110小時、至少約120小時、至少約130小時、至少約140小時、至少約150小時、至少約160小時、至少約170小時、至少約180小時、至少約190小時、至少約200小時、至少約210、至少約220、至少約230、至少約240、至少約250、至少約260、至少約270、至少約280、至少約290、至少約300、至少約310、至少約320、至少約330、至少約340、至少約350、至少約360或至少約370。在另一實施例中，長效FIX多肽之T1/2β(抗原)為約63小時至約372小時、約50小時至約380小時、約40小時至約390小時、約70小時至約360小時、約80小時至約400小時、約90小時至約410小時、約50小時至約 400小時、約40小時至約380小時。在一特定實施例中，T1/2β(抗原)為約63小時至約372小時。
在一些實施例中，以平均值表示長效FIX多 肽之T1/2β(抗原)。舉例而言，長效FIX多肽之T1/2β(抗原)之平均值為至少約110小時、至少約111小時、至少約112小時、至少約113小時、至少約114小時、至少約115小時、至少約116小時、至少約117小時、至少約118小時、至少約119小時、至少約120小時、至少約121小時、至少約122小時、至少約123小時、至少約124小時、至少約125小時、至少約126小時、至少約127小時、至少約128小時、至少約129小時、至少約130小時或至少約131小時。在一特定實施例中，長效FIX多肽之T1/2β(抗原)之平均值為118小時或126小時。
在其他實施例中，長效FIX多肽之T1/2β(抗 原)係以與野生型成熟FIX(由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽，亦即BENEFIX®或pdFIX)之T1/2β(抗原)進行比較之方式加以顯示。在一個實例中，T1/2β(抗原)之平均值比野生型成熟FIX(由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽，亦即BENEFIX®；或pdFIX)高至少約2.0倍。在另一實例中，T1/2β(抗原)之平均值比野生型成熟FIX(由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽，亦即BENEFIX®；pdFIX)高至少約2.0倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍、至少約11倍、至 少約12倍。
在其他實施例中，本發明提供向可展現較長 T1/2β(抗原)之受試者投與長效FIX多肽。在一個實施例中，本發明方法包括向展現T1/2β(抗原)為至少約115小時、至少約116小時、至少約117小時、至少約118小時、至少約119小時、至少約120小時、至少約121小時、至少約122小時、至少約123小時、至少約124小時、至少約125小時、至少約126小時或至少約127小時之受試者投與長效FIX多肽。在另一實施例中，方法包括向基線FIX活性小於2%、小於1.5%、小於1%或小於0.5%之受試者投與長效FIX多肽，藉此使得T1/2β(活性)高於約115小時、約116小時、約117小時、約118小時、約119小時、約120小時、約121小時、約122小時、約123小時、約124小時、約125小時、約126小時、約127小時、約128小時或約129小時。
在某些實施例中，藉由單級凝結分析量測 T1/2β(活性)。
在其他實施例中，長效FIX多肽之平均滯留 時間(MRT)為至少約50小時、至少約60小時、至少約70小時、至少約80小時、至少約90小時、至少約100小時、至少約110小時、至少約120小時、至少約130小時、至少約140小時、至少約150小時、至少約160小時、至少約170小時、至少約180小時或至少約190小時。在一些實施例中，MRT為約50小時至約200小時、 約60小時至約210小時、約60小時至約183小時、約70小時至約150小時、約70小時至約140小時、約70小時至約130小時、約80小時至約120小時、約80小時至約110小時、或約88小時至約110小時。在一特定實施例中，MRT比由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽或BENEFIX®高至少約2.0倍(例如2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍或3倍)。
在本發明之某些實施例中，本發明方法進一 步包括在初始投與長效FIX多肽之前量測受試者之基線FIX活性。量測基線FIX活性可採用此項技術中之任何已知凝結分析，例如單步aPTT分析、兩步顯色分析、ROTEM、TGA等。
在一些實施例中，本發明方法進一步包括在 投與長效FIX多肽之後量測受試者之長效FIX多肽之T1/2β(活性)或T1/2β(抗原)。
在其他實施例中，在投與一或多個既定劑量 之長效FIX多肽之後，受試者之長效FIX多肽之血漿谷底含量維持在約1IU/dl(1%)或高於1IU/dl(1%)。在其他實施例中，受試者之長效FIX多肽之血漿谷底含量維持在約1IU/dl(1%)與約5IU/dl(5%)之間。在其他實施例中，血漿谷底含量維持在約1%與約5%之間、在約1%與約6%之間、在約1%與約7%之間、在約1%與約8%之間、在約1%與約9%之間、在約1%與約10%之間、在約1%與約 12%之間、在約1%與約14%之間、在約1%與約15%之間、在約1%與約17%之間、在約1%與約19%之間、在約1%與約20%之間、在約1%與約22%之間、在約1%與約24%之間、在約1%與約25%之間、在約1%與約30%之間、在約1%與約35%之間。
在一些實施例中，在投與長效FIX多肽之後 約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13或約14日後，谷底為1-5IU/dl或1-3IU/dl。在一些實施例中，在至少約6日之後受試者之FIX多肽之血漿含量達到至少約1IU/dl之平均谷底，或在至少約6日之後達到至少約1、2、3、4或5IU/dl之谷底。在一些實施例中，該嵌合多肽之血漿含量達到約1-5IU/dl或1-3IU/dl之平均谷底。此谷底或平均谷底可在約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39或約40日之後達到。
III.長效FIX多肽
適用於本發明之長效或持久FIX多肽為包含FIX多肽及FcRn結合搭配物之嵌合多肽。在某些實施例中，rFIXFc為包含在無介入序列下共價連接於免疫球蛋白G1(IgG1)之二聚Fc域之單一人類重組凝血FIX(rFIX) 分子的融合蛋白。除非另外規定，否則本發明之FIX多肽包含發揮其正常凝血作用之功能性因子IX多肽。因此，FIX多肽包括功能性變異多肽及編碼此等功能性變異多肽之聚核苷酸。在一個實施例中，FIX多肽為人類、牛類、豬類、犬類、貓類及鼠類FIX多肽。已知FIX之全長多肽及聚核苷酸序列，亦已知許多功能性變異體，例如片段、突變體及修飾形式。FIX多肽包括全長FIX、減去N-末端處之Met之全長FIX、減去信號序列之全長FIX、成熟FIX(減去信號序列及前肽)、及在N-末端處具有另一Met之成熟FIX。FIX可藉由重組手段製備(「重組因子IX」或「rFIX」)，亦即其不為天然存在的或源於血漿。
已知許多功能性FIX變異體。以全文引用的 方式併入本文中之國際公開案第WO 02/040544 A3號在第4頁第9-30列及第15頁第6-31列揭示展現對由肝素達成之抑制之抗性提高的突變體。以全文引用的方式併入本文中之國際公開案第WO 03/020764 A2號在表2及表3(在第14-24頁)中及在第12頁第1-27列揭示T細胞免疫原性降低之FIX突變體。以全文引用的方式併入本文中之國際公開案第WO 2007/149406 A2號在第4頁第1列至第19頁第11列揭示展現蛋白質穩定性提高、活體內及活體外半衰期增加及對蛋白酶之抗性提高之功能性突變FIX分子。WO 2007/149406 A2亦在第19頁第12列至第20頁第9列揭示嵌合及其他變異FIX分子。以全文引用的方式併入本文中之國際公開案第WO 08/118507 A2號在第5頁 第14列至第6頁第5列揭示展現凝結活性提高之FIX突變體。以全文引用的方式併入本文中之國際公開案第WO 09/051717 A2號在第9頁第11列至第20頁第2列揭示具有導致半衰期及/或回收率增加之增加數目的N-連接及/或O-連接糖基化位點之FIX突變體。以全文引用的方式併入本文中之國際公開案第WO 09/137254 A2號亦在第2頁第[006]段至第5頁第[011]段及第16頁第[044]段至第24頁第[057]段揭示糖基化位點數增加之因子IX突變體。以全文引用的方式併入本文中之國際公開案第WO 09/130198A2號在第4頁第26列至第12頁第6行揭示具有導致半衰期增加之增加數目的糖基化位點之功能性突變FIX分子。以全文引用的方式併入本文中之國際公開案第WO 09/140015 A2號在第11頁第[0043]段至第13頁第[0053]段揭示可用於聚合物(例如PEG)共軛之Cys殘基之數目增加的功能性FIX突變體。2011年7月11日申請且在2012年1月12日以WO 2012/006624公開之國際申請案第PCT/US2011/043569號中所述之FIX多肽亦以全文引用的方式併入本文中。
此外，已在血友病受試者中鑒別出數百種FIX 非功能性突變，其中許多揭示於以全文引用的方式併入本文中之國際公開案第WO 09/137254 A2號之第11-14頁表5中。此等非功能性突變不包括在本發明中，但提供哪些突變更可能或較不可能產生功能性FIX多肽之額外指導。
在一個實施例中，因子IX(或嵌合多肽之因 子IX部分)可與表18A中所示之無信號序列及前肽序列之FIX胺基酸序列(SEQ ID NO：2之胺基酸1至415)、或者具有前肽序列之FIX胺基酸序列、或具有前肽及信號序列之FIX胺基酸序列(全長FIX)至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。
以國際單位(IU)表示因子IX凝血活性。一個 IU之FIX活性近似對應於一毫升正常人類血漿中之FIX之量。若干分析可用於量測因子IX活性，包括單級凝結分析(活化部分凝血激素時間；aPTT)、凝血酶產生時間(TGA)及旋轉血栓彈力測定術(ROTEM®)。參見例如實例3。
除非另外規定，否則FcRn結合搭配物(「FcRn BP」)包含功能性新生兒Fc受體(FcRn)結合搭配物。FcRn結合搭配物為可由FcRn受體特異性結合，隨後由FcRn結合搭配物之FcRn受體主動運輸之任何分子。因此，術語FcRn BP包括IgG Fc之任何功能性變異體。舉例而言，已基於X射線結晶學描述IgG之Fc部分之結合於FcRn受體的區域(Burmeister等人1994,Nature 372：379，其以全文引用的方式併入本文中)。Fc與FcRn之主要接觸區接近CH2域與CH3域之接合點。Fc-FcRn接觸皆在單一Ig重鏈內。FcRn BP包括完整IgG、IgG之Fc片段及IgG之包括FcRn之完整結合區域的其他片段。主要接觸位點包括CH2域之胺基酸殘基248、250-257、 272、285、288、290-291、308-311及314，及CH3域之胺基酸殘基385-387、428及433-436。對免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或區域之胺基酸編號之提及皆基於Kabat等人，1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Public Health,Bethesda；MD，其以全文引用的方式併入本文中。(已自包括人類之若干哺乳動物物種分離出FcRn受體。已知人類FcRn、大鼠FcRn及小鼠FcRn之序列(Story等人，1994,J.Exp.Med.180：2377)，其以全文引用的方式併入本文中)。FcRn BP可包含免疫球蛋白之有或無免疫球蛋白之鉸鏈區的CH2及CH3域。以全文引用的方式併入本文中之WO 2004/101740及WO 2006/074199中提供示範性FcRn BP變異體。
FcRn BP(或嵌合多肽之FcRn BP部分)可含有 一或多個突變及突變組合。
FcRn BP(或嵌合多肽之FcRn BP部分)可含有 賦予半衰期增加之突變，諸如M252Y、S254T、T256E及其組合，如以全文引用的方式併入本文中之Oganesyan等人，Mol.Immunol.46：1750(2009)中所揭示；H433K、N434F及其組合，如以全文引用的方式併入本文中之Vaccaro等人，Nat.Biotechnol.23：1283(2005)中所揭示；在以全文引用的方式併入本文中之U.S.2009/0264627 A1之第1-2頁第[0012]段以及實例9及10揭示之突變體；及在以全文引用的方式併入本文中之U.S.20090163699 A1 之第2頁第[0014]至[0021]段揭示之突變體。
FcRn BP(或嵌合多肽之FcRn BP部分)亦可包 括以下突變：IgG之Fc區可根據充分認可之程序(諸如定點突變誘發及其類似程序)加以修飾以產生將由FcRn結合之經修飾IgG或其Fc片段或部分。此等修飾包括保持或甚至增強與FcRn之結合的遠離FcRn接觸位點之修飾以及在接觸位點內之修飾。舉例而言，人類IgG1 Fc(Fcy1)中之以下單一胺基酸殘基可經取代而不會顯著損失Fc對FcRn之結合親和力：P238A、S239A、K246A、K248A、D249A、M252A、T256A、E258A、T260A、D265A、S267A、H268A、E269A、D270A、E272A、L274A、N276A、Y278A、D280A、V282A、E283A、H285A、N286A、T289A、K290A、R292A、E293A、E294A、Q295A、Y296F、N297A、S298A、Y300F、R301A、V303A、V305A、T307A、L309A、Q311A、D312A、N315A、K317A、E318A、K320A、K322A、S324A、K326A、A327Q、P329A、A330Q、A330S、P331A、P331S、E333A、K334A、T335A、S337A、K338A、K340A、Q342A、R344A、E345A、Q347A、R355A、E356A、M358A、T359A、K360A、N361A、Q362A、Y373A、S375A、D376A、A378Q、E380A、E382A、S383A、N384A、Q386A、E388A、N389A、N390A、Y391F、K392A、L398A、S400A、D401A、D413A、K414A、R416A、Q418A、Q419A、N421A、V422A、 S424A、E430A、N434A、T437A、Q438A、K439A、S440A、S444A及K447A，其中例如P238A代表在位置編號238處經丙胺酸取代之野生型脯胺酸。除丙胺酸之外，其他胺基酸亦可在以上指定位置處取代野生型胺基酸。突變可逐一引入Fc中，從而產生一百個以上不同於天然Fc之FcRn結合搭配物。另外，兩個、三個或三個以上此等個別突變之組合可一起引入，從而再產生數百個FcRn結合搭配物。此等突變中之某些可對FcRn結合搭配物賦予新功能。舉例而言，一個實施例併有N297A，從而移除高度保守之N-糖基化位點。此突變之作用在於降低免疫原性，藉此增強FcRn結合搭配物之循環半衰期且致使FcRn結合搭配物不能結合於FcyRI、FcyRIIA、FcyRIIB及FcyRIIIA，而不損害對FcRn之親和力(Routledge等人，1995,Transplantation 60：847，其以全文引用的方式併入本文中；Friend等人，1999,Transplantation 68：1632，其以全文引用的方式併入本文中；Shields等人，1995,J.Biol.Chem.276：6591，其以全文引用的方式併入本文中)。另外，至少三種人類Fcγ受體似乎識別IgG上在下鉸鏈區內之結合位點，通常為胺基酸234-237。因此，新功能及潛在降低之免疫原性之另一實例可由於此區域之突變而產生，例如藉由將人類IgG1之胺基酸233-236「ELLG」置換成來自IgG2之相應序列「PVA」(其中有一個胺基酸缺失)來產生。已顯示當已引入此等突變時，介導各種效應功能之FcyRI、FcyRII及FcyRIII將不結合 於IgG1(Ward及Ghetie,1995,Therapeutic Immunology 2：77，其以全文引用的方式併入本文中；及Armour等人，1999,Eur.J.Immunol.29：2613，其以全文引用的方式併入本文中)。作為由上述突變產生之新功能之另一實例，在一些情況下可提高對FcRn之親和力使其超過野生型之親和力。此親和力增大可反映「吸附」速率提高、「脫附」速率降低、或「吸附」速率提高與「脫附」速率降低兩者。咸信賦予對FcRn之親和力增大之突變包括T256A、T307A、E380A及N434A(Shields等人，2001,J.Biol.Chem.276：6591，其以全文引用的方式併入本文中)。
FcRn BP(或嵌合多肽之FcRn BP部分)可與表 18A或表18B中所示之無信號序列之Fc胺基酸序列(SEQ ID NO：2之胺基酸1至227)或者具有信號序列之Fc胺基酸序列至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。
包含FIX多肽及FcRn結合搭配物之嵌合多肽 可包含與因子IX及FcRn BP(例如表18A中所示之無信號序列及前肽序列之Fc胺基酸序列(SEQ ID NO：2之胺基酸1至642)、或者具有前肽序列之Fc胺基酸序列、或者具有信號序列及前肽序列之Fc胺基酸序列)至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致的胺基酸序 列。
長效或持久FIX多肽可為雜交FIX多肽。雜 交FIX多肽意謂FIX嵌合多肽與第二多肽之組合。雜交物中之嵌合多肽與第二多肽可經由非共價蛋白質-蛋白質相互作用(諸如電荷-電荷或疏水性相互作用)彼此締合。雜交物中之嵌合多肽與第二多肽可經由諸如二硫鍵之共價鍵彼此締合。嵌合肽與第二肽可經由一種以上類型之鍵(諸如非共價鍵及二硫鍵)彼此締合。雜交物描述於WO 2004/101740、WO 2005/001025、美國專利第7,404,956號、美國專利第7,348,004號及WO 2006/074199中，該等專利各自以全文引用的方式併入本文中。第二多肽可為同一嵌合多肽之第二複本或其可為不相同的嵌合多肽。在其他實施例中，第二多肽為包含例如Fc之FcRn BP之多肽。在一些實施例中，嵌合多肽為因子IX-FcRn BP，例如因子IX-Fc嵌合多肽，且第二多肽基本上由Fc組成。 參見例如表18(SEQ ID NO：2及4)。參見例如以全文引用的方式併入本文中之US 7404956。
雜交物中之第二多肽可包含以下或基本上由 以下組成：與表18B中所示之無信號序列之胺基酸序列(SEQ ID NO：4之胺基酸1至227)或者具有信號序列之胺基酸序列至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致的序列。
在一些實施例中，長效FIX多肽為FIX單體 二聚體雜交物。單體-二聚體雜交物可包含兩條多肽鏈，一條鏈包含FIX多肽及第一Fc區，且另一條鏈包含第二Fc區、基本上由第二Fc區組成或由第二Fc區組成。在某些態樣中，FIX單體二聚體雜交物基本上由兩條多肽鏈組成或由兩條多肽鏈組成，第一鏈基本上由FIX多肽組成或由FIX多肽組成，且第二鏈基本上由第二Fc區組成或由第二Fc區組成。
長效FIX多肽可由與例如SEQ ID NO：1或3 中之核苷酸編碼序列(個別或一起之因子IX部分、Fc部分)或其互補股、已知突變及重組因子IX或Fc之核苷酸編碼序列(諸如本文引用之公開案及專利中所揭示者)或其互補股、編碼SEQ ID NO：2或4之多肽之核苷酸序列(個別或一起之因子IX部分、Fc部分)及/或任何此等核酸分子之聚核苷酸片段(例如本文所述之彼等片段)至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致的核苷酸序列編碼。亦包括作為變異體之在嚴格雜交條件或較低嚴格度條件下與此等核酸分子雜交之聚核苷酸，亦包括由此等聚核苷酸編碼之多肽，只要其具有功能性即可。
核酸具有與參考核苷酸序列至少例如95%「一致」之核苷酸序列意欲指核酸之核苷酸序列與參考序列一致，例外之處在於對於參考核苷酸序列之每100個核苷酸，核苷酸序列可包括多達五個點突變。換言之，為獲得核苷酸序列與參考核苷酸序列至少95%一致的核酸，參考序列中多達5%之核苷酸可經缺失或經另一核苷酸取 代，或參考序列中總核苷酸之多達5%數目的核苷酸可插入參考序列中。查詢序列可為例如SEQ ID NO：1或3中所示之整個序列、ORF(開放閱讀框)或如本文所述之任何指定片段。
實際上，任何特定核酸分子或多肽是否與本 發明之核苷酸序列或多肽至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致可使用已知電腦程式依照慣例加以確定。一種用於確定查詢序列(參考序列或原始序列)與標的序列之間的最佳總體匹配之較佳方法(亦稱為總體序列比對)可使用基於Brutlag等人(Comp.App.Biosci.(1990)6：237-245)之演算法之FASTDB電腦程式來測定，該文獻以全文引用的方式併入本文中。在序列比對中，查詢序列與標的序列均為DNA序列。RNA序列可藉由使U轉換成T加以比較。該總體序列比對之結果係以一致性百分比形式表示。在FASTDB DNA序列比對中用於計算一致性百分比之較佳參數為：矩陣=單一矩陣，k-元組=4，錯配罰分=1，接合罰分=30，隨機化組長度=0，截斷計分=1，間隙罰分=5，間隙大小罰分0.05，窗口大小=500或標的核苷酸序列之長度，以較短者為準。
若標的序列由於5'或3'缺失而非由於內部缺 失而短於查詢序列，則必須對結果進行手動校正。此係因為FASTDB程式在計算一致性百分比時不考慮標的序列之5'及3'截斷。對於相對於查詢序列在5'或3'末端截斷之標的序列，藉由以查詢序列之總鹼基之百分比形式計算查詢 序列之在標的序列之5'及3'的未匹配/對準之鹼基數來校正一致性百分比。核苷酸是否匹配/對準係由FASTDB序列比對結果確定。接著自藉由使用指定參數之以上FASTDB程式計算之一致性百分比減去此百分比以獲得最終一致性百分比計分。此經過校正之計分為用於本發明之目的之計分。出於手動調整一致性百分比計分之目的，僅計算標的序列之5'及3'鹼基外部之未與查詢序列匹配/對準之鹼基，如藉由FASTDB比對所顯示。
舉例而言，使90個鹼基之標的序列與100個 鹼基之查詢序列比對以確定一致性百分比。缺失存在於標的序列之5'末端，因此FASTDB比對不顯示5'末端處前10個鹼基之匹配/對準。10個未配對鹼基代表10%序列(在5'及3'末端之未匹配鹼基之數目/查詢序列中之鹼基總數)，因此自藉由FASTDB程式計算之一致性百分比計分減去10%。若剩餘90個鹼基完全匹配，則最終一致性百分比將為90%。在另一實例中，將90個鹼基之標的序列與100個鹼基之查詢序列進行比較。此次，缺失為內部缺失，因此在標的序列之5'或3'上不存在未與查詢序列匹配/對準之鹼基。在此情況下，藉由FASTDB計算之一致性百分比不經手動校正。再次，僅手動校正標的序列之未與查詢序列匹配/對準之5'及3'鹼基。出於本發明之目的，將不進行其他手動校正。
多肽具有與本發明之查詢胺基酸序列至少例 如95%「一致」之胺基酸序列意欲指標的多肽之胺基酸序 列與查詢序列一致，例外之處在於對於查詢胺基酸序列之每100個胺基酸，標的多肽序列可包括多達五個胺基酸改變。換言之，為獲得胺基酸序列與查詢胺基酸序列至少95%一致之多肽，標的序列中多達5%胺基酸殘基可經插入、缺失、(插入缺失)或經另一胺基酸取代。參考序列之此等改變可存在於參考胺基酸序列之胺基或羧基末端位置，或彼等末端位置之間的任何地方、個別地分散在參考序列中之殘基之中或以一或多個連續組分散在參考序列內。
實際上，任何特定多肽是否與例如SEQ ID NO：2之胺基酸序列(個別或一起之因子IX部分、Fc部分)或4，或已知因子IX或Fc多肽序列至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致可使用已知電腦程式依照慣例加以確定。一種用於確定查詢序列(參考序列或原始序列)與標的序列之間的最佳總體匹配之較佳方法(亦稱為總體序列比對)可使用基於Brutlag等人，Comp.App.Biosci.6：237-245(1990)之演算法之FASTDB電腦程式來測定，該文獻以全文引用的方式併入本文中。在序列比對中，查詢序列與標的序列均為核苷酸序列或均為胺基酸序列。該總體序列比對之結果以一致性百分比形式表示。在FASTDB胺基酸比對中使用之較佳參數為：矩陣=PAM 0，k-元組=2，錯配罰分=1，接合罰分=20，隨機化組長度=0，截斷計分=1，窗口大小=序列長度，間隙罰分=5，間隙大小罰分=0.05，窗口大小=500或標的胺基酸序列之長 度，以較短者為準。
若標的序列由於N-末端或C-末端缺失而非由 於內部缺失而短於查詢序列，則必須對結果進行手動校正。此係因為FASTDB程式在計算總體一致性百分比時不考慮標的序列之N-末端及C-末端截斷。對於相對於查詢序列在N-末端及C-末端截斷之標的序列，藉由以查詢序列之總鹼基之百分比形式計算查詢序列之在標的序列之N-末端及C-末端的未與相應標的殘基匹配/對準之鹼基之數目來校正一致性百分比。殘基是否匹配/對準係由FASTDB序列比對結果確定。接著自藉由使用指定參數之以上FASTDB程式計算之一致性百分比減去此百分比以獲得最終一致性百分比計分。此最終一致性百分比計分為用於本發明之目的之計分。出於手動調整一致性百分比計分之目的，僅考慮標的序列之未與查詢序列匹配/對準之N-末端及C-末端殘基。亦即僅查詢在標的序列之最遠N-末端及C-末端殘基外部之殘基位置。
舉例而言，使90個胺基酸殘基之標的序列與 100個殘基之查詢序列比對以確定一致性百分比。缺失存在於標的序列之N-末端，因此FASTDB比對不顯示N-末端處前10個殘基之匹配/對準。10個未配對殘基代表10%序列(在N-末端及C-末端之未匹配殘基之數目/查詢序列中之殘基總數)，因此自藉由FASTDB程式計算之一致性百分比計分減去10%。若剩餘90個殘基完全匹配，則最終一致性百分比將為90%。在另一實例中，將90個殘基 之標的序列與100個殘基之查詢序列進行比較。此次，缺失為內部缺失，因此在標的序列之N-末端或C-末端不存在未與查詢序列匹配/對準之殘基。在此情況下，藉由FASTDB計算之一致性百分比不經手動校正。再次，僅手動校正在標的序列之N-末端及C-末端外部之未與查詢序列匹配/對準之殘基位置，如FASTDB比對中所顯示。出於本發明之目的，將不進行其他手動校正。
聚核苷酸變異體可在編碼區、非編碼區或兩 者中含有改變。尤其較佳的是含有產生靜默取代、添加或缺失，但不改變所編碼多肽之性質或活性之改變的聚核苷酸變異體。藉由歸因於遺傳密碼之簡併性之靜默取代產生之核苷酸變異體為較佳的。此外，以任何組合取代、缺失或添加5-10、1-5、或1-2個胺基酸之變異體亦為較佳的。聚核苷酸變異體可出於多種原因，例如為了使特定宿主之密碼子表現最佳化(使人類mRNA中之密碼子變成諸如大腸桿菌(E.coli)之細菌宿主之較佳密碼子)而產生。
天然存在之變異體稱為「對偶基因變異體」 且係指佔據生物體之染色體上既定基因座之基因的若干替代形式之一(Genes II,Lewin,B.編，John Wiley & Sons,New York(1985))。此等對偶基因變異體可在聚核苷酸及/或多肽層面上變化且包括在本發明中。或者，非天然存在之變異體可藉由突變誘發技術或藉由直接合成來產生。
使用蛋白質工程改造及重組DNA技術之已知方法，可產生變異體以改良或改變多肽之特徵。例如，可 自分泌蛋白質之N-末端或C-末端缺失一或多個胺基酸而不實質性損失生物功能。以全文引用的方式併入本文中之Ron等人，J.Biol.Chem.268：2984-2988(1993)之作者報導甚至在缺失3、8或27個胺基-末端胺基酸殘基之後仍具有肝素結合活性之變異KGF蛋白。類似地，在自干擾素γ之羧基末端缺失8-10個胺基酸殘基之後，此蛋白質展現活性增高多達十倍。(Dobeli等人，J.Biotechnology 7：199-216(1988)，其以全文引用的方式併入本文中。)
此外，充足證據顯示變異體常保留與天然存在之蛋白質之生物活性類似的生物活性。舉例而言，Gayle及同事(J.Biol.Chem.268：22105-22111(1993)，其以全文引用的方式併入本文中)對人類細胞激素IL-1a進行了廣泛的突變分析。其使用隨機突變誘發來產生超過3,500種個別IL-1a突變體，每個變異體在分子總長度上具有平均2.5個胺基酸變化。檢查每個可能胺基酸位置處之多個突變。研究者發現「[大多數]分子可在對[結合或生物活性]之影響極小下進行改變」。(參見摘要。)實際上，在檢查之3,500個以上核苷酸序列中，僅23個獨特胺基酸序列產生活性顯著不同於野生型之蛋白質。
如上所述，多肽變異體包括經修飾多肽。修飾包括乙醯化、醯化、ADP-核糖基化、醯胺化、共價連接黃素、共價連接原血紅素(heme)部分、共價連接核苷酸或核苷酸衍生物、共價連接脂質或脂質衍生物、共價連接磷脂醯肌醇、交聯、環化、二硫鍵形成、去甲基、形成共 價交聯、形成半胱胺酸、形成焦麩胺酸、甲醯化、γ-羧化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、碘化、甲基化、肉豆蔻醯化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解處理、磷酸化、異戊烯化、外消旋化、硒化、硫酸化、轉移-RNA介導之向蛋白質添加胺基酸(諸如精胺醯化)及泛素化。
IV.醫藥組合物
長效FIX多肽可調配成醫藥組合物。醫藥組合物可經調配以向人類投與。本發明方法中使用之醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑，包括例如離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(諸如人類血清白蛋白)、緩衝物質(諸如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(諸如硫酸魚精蛋白)、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、纖維素基物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧化丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。本發明之各種調配方法在此項技術中為熟知的。
長效FIX多肽可調配成醫藥組合物或調配物。在本文提供之某些調配物中，將長效FIX多肽調配成供靜脈內(IV)投與之無菌無防腐劑無熱原凍乾白色至灰白色散劑至餅。調配物可於單次使用小瓶中提供。長效FIX多肽之某些示範性調配物亦稱為埃夫曲那科α(eftrenonacog alfa)。
在某些實施例中，長效FIX多肽(例如 rFIXFc)調配物係於單次使用小瓶中提供，該小瓶經製造以在用適量稀釋劑復原之後含有約50IU/ml、約100IU/ml、約200IU/ml、約400IU/ml或約600IU/ml長效FIX多肽。在添加稀釋劑直至最終體積為約5ml之某些實施例中，單次使用小瓶可額定含有約250、約500、約1000、約2000或約3000國際單位(IU)之長效FIX多肽(例如rFIXFc)。
在某些實施例中，rFIXFc多肽包含與SEQ ID NO：2之胺基酸1至642至少90%、95%或100%一致之胺基酸序列。
在某些實施例中，除活性長效FIX多肽(例如 rFIXFc)之外，調配物亦包括：蔗糖(其可充當穩定劑或增積劑)、甘露糖醇(其可充當穩定劑或增積劑)、L-組胺酸(其可充當緩衝劑)及聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80(其可充當穩定劑)。調配物係與包含無菌氯化鈉溶液之稀釋劑一起提供。在某些實施例中，稀釋劑係於預填充注射器中提供。
因此，本文提供一種包含規定量之長效FIX 多肽(例如rFIXFc)(以IU計)以及賦形劑蔗糖、甘露糖醇、L-組胺酸、NaCl及聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的醫藥組合物。本文提供之組合物包含各種濃度之各種賦形劑，且濃度可用各種方式表示。舉例而言，既定賦形劑之濃度可表示為莫耳濃度(例如M或mM)、重量/體積百分 比(例如每100ml稀釋劑之公克數)或每毫升之毫克數(mg/ml)。本文提供之調配物可在一定精確程度下含有規定量之各種賦形劑，該精確程度係在近似範圍內，例如濃度僅表示至一個有效數字(例如約0.1%(w/v))，或更精確地，例如多達2、3、4、5或6個有效數字(例如約3.88mg/ml，其精確度多達三個有效數字)。必要的精確程度可視例如既定管理機構之要求或製造方法而變化。在某些實施例中，醫藥組合物包含復原調配物，其可以凍乾物形式提供，視情況伴有稀釋劑。
在某些實施例中，醫藥組合物包含約25 IU/ml至約1200IU/ml rFIXFc，例如50IU/ml、100IU/ml、200IU/ml、400IU/ml或600IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)。在某些實施例中，醫藥組合物在包含約3.88mg/ml或約25mM L-組胺酸、約23.8mg/ml或約2.4%(w/v)甘露糖醇、約11.9mg/ml或約1.2%(w/v)蔗糖、約0.10mg/ml或約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80及約3.25mg/ml或約55.6mM NaCl之調配物中包含50IU/ml、100IU/ml、200IU/ml或400IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)。
在某些實施例中，醫藥組合物在包含約5.43 mg/ml或約35mM L-組胺酸、約33.3mg/ml或約3.3%(w/v)甘露糖醇、約16.7mg/ml或約1.7%(w/v)蔗糖、約0.14mg/ml或約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80及約3.25mg/ml或約55.6mM NaCl之調配物中包 含600IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)。
在某些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上 可接受量之蔗糖。在某些實施例中，醫藥組合物包含約1%(w/v)至約2%(w/v)蔗糖，例如約1.2%(w/v)蔗糖或約1.7%(w/v)蔗糖。在某些相關實施例中，醫藥組合物包含約10mg/ml至約20mg/ml蔗糖，例如約11.9mg/ml蔗糖或約16.7mg/ml蔗糖。
在某些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上 可接受量之甘露糖醇。在某些實施例中，醫藥組合物包含約2%(w/v)至約4%(w/v)甘露糖醇，例如約2.4%(w/v)甘露糖醇或約3.3%(w/v)甘露糖醇。在某些相關實施例中，醫藥組合物包含約20mg/ml至約40mg/ml甘露糖醇，例如約23.8mg/ml甘露糖醇或約33.3mg/ml甘露糖醇。
在某些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上 可接受量之蔗糖與甘露糖醇兩者。在某些實施例中，醫藥組合物包含約1.0%至約2.0%蔗糖及約2.0%(w/v)至約4.0%(w/v)甘露糖醇，例如約1.2%(w/v)蔗糖及約2.4%(w/v)甘露糖醇或約1.7%(w/v)蔗糖及約3.3%(w/v)甘露糖醇。在某些相關實施例中，醫藥組合物包含約10mg/ml至約20mg/ml蔗糖及約20mg/ml至約40mg/ml甘露糖醇，例如約11.9mg/ml蔗糖及約23.8mg/ml甘露糖醇或約16.7mg/ml蔗糖及約33.3mg/ml甘露糖醇。在某些實施例中，蔗糖及甘露糖醇係作為凍乾物之一部分提供，在用適量稀釋劑復原後，該凍乾物以所要濃度提供蔗糖及甘 露糖醇。
在某些實施例中，醫藥組合物包含約50mM 與約60mM之間的NaCl，例如約55.6mM NaCl。在某些相關實施例中，醫藥組合物包含約3mg/ml與約4mg/ml之間的NaCl，例如約3.25mg/ml NaCl。在某些實施例中，將NaCl在所要濃度下提供於復原包含長效FIX多肽(例如rFIXFc)之凍乾物所處之稀釋劑溶液中。
在某些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上 可接受量之L-組胺酸。在某些實施例中，醫藥組合物包含約20mM與約40mM之間的L-組胺酸，例如約25mM L-組胺酸或約35mM L-組胺酸。在某些相關實施例中，醫藥組合物包含約3mg/ml與約6mg/ml之間的L-組胺酸，例如約3.88mg/ml L-組胺酸或約5.43mg/ml L-組胺酸。在某些實施例中，L-組胺酸係作為凍乾物之一部分提供，在用適量稀釋劑復原後，該凍乾物以所要濃度提供L-組胺酸。
在某些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上 可接受量之聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。在某些相關實施例中，醫藥組合物包含約0.008%(w/v)與約0.020%(w/v)之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，例如約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80或約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。在某些相關實施例中，醫藥組合物包含約0.08mg/ml與約0.2mg/ml之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，例如約0.10% mg/ml聚 山梨醇酯20或聚山梨醇酯80或約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。在某些實施例中，聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80係作為凍乾物之一部分提供，在用適量稀釋劑復原後，該凍乾物以所要濃度提供聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在某些實施例中，醫藥組合物包含：約25 IU/ml與約700IU/ml之間的長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約1%(w/v)與約2%(w/v)之間的蔗糖；約2%(w/v)與約4%(w/v)之間的甘露糖醇；約50mM與約60mM之間的NaCl；約20mM與約40mM之間的L-組胺酸；及約0.008%(w/v)與約0.015%之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。在某些實施例中，以凍乾物及稀釋劑形式提供醫藥組合物。在某些實施例中，凍乾物之量提供約5ml具有所要濃度之所要成分之醫藥組合物。
在某些實施例中，醫藥組合物包含：約25 IU/ml與約700IU/ml之間的長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約10mg/ml與約20mg/ml之間的蔗糖；約20mg/ml與約40mg/ml之間的甘露糖醇；約3mg/ml與約4mg/ml之間的NaCl；約3mg/ml與約6mg/ml之間的L-組胺酸；及約0.08mg/ml與約0.15mg/ml之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。在某些實施例中，以凍乾物及稀釋劑形式提供醫藥組合物。在某些實施例中，凍乾物之量提供約5ml具有所要濃度之所要成分之醫藥組合物。
實例中之表1及表2中提供示範性組合物。
舉例而言，本揭示案提供一種醫藥組合物， 其包含：約50IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約1.2%(w/v)蔗糖；約2.4%(w/v)甘露糖醇；約55.6mM NaCl；約25mM L-組胺酸；及約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包含：約100IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約1.2%(w/v)蔗糖；約2.4%(w/v)甘露糖醇；約55.6mM NaCl；約25mM L-組胺酸；及約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包含：約200IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約1.2%(w/v)蔗糖；約2.4%(w/v)甘露糖醇；約55.6mM NaCl；約25mM L-組胺酸；及約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包含：約400IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約1.2%(w/v)蔗糖；約2.4%(w/v)甘露糖醇；約55.6mM NaCl；約25mM L-組胺酸；及約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包含：約600IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約1.7%(w/v)蔗糖；約3.3%(w/v)甘露糖醇；約55.6mM NaCl；約35mM L-組胺酸；及約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包 含：約50IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約11.9mg/ml蔗糖；約23.8mg/ml甘露糖醇；約3.25mg/ml NaCl；約3.88mg/ml L-組胺酸；及約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包含：約100IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約11.9mg/ml蔗糖；約23.8mg/ml甘露糖醇；約3.25mg/ml NaCl；約3.88mg/ml L-組胺酸；及約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包含：約200IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約11.9mg/ml蔗糖；約23.8mg/ml甘露糖醇；約3.25mg/ml NaCl；約3.88mg/ml L-組胺酸；及約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包含：約400IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約11.9mg/ml蔗糖；約23.8mg/ml甘露糖醇；約3.25mg/ml NaCl；約3.88mg/ml L-組胺酸；及約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。本揭示案進一步提供一種醫藥組合物，其包含：約600IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；約16.7mg/ml蔗糖；約33.3mg/ml甘露糖醇；約3.25mg/ml NaCl；約5.43mg/ml L-組胺酸；及約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
本揭示案亦提供醫藥套組之組分。該種套組 包括一或多個容器及視情況選用之附件。如本文提供之套組有助於向有需要之受試者投與有效量之長效FIX多肽(例如rFIXFc)。在某些實施例中，套組有助於經由靜脈內輸注投與長效FIX多肽(例如rFIXFc)。在某些實施例中， 套組有助於經由靜脈內輸注自投與長效FIX多肽(例如rFIXFc)。
在某些實施例中，本揭示案提供一種醫藥套 組，其包括：包含凍乾散劑或餅之第一容器，其中該散劑或餅包含：(i)長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)蔗糖；(iii)甘露糖醇；(iv)L-組胺酸；及(v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含欲與該第一容器之該凍乾散劑組合之0.325%(w/v)NaCl稀釋劑溶液的第二容器。在某些實施例中，提供足夠稀釋劑以產生約5ml具有如本文揭示之所要性質之長效FIX多肽(例如rFIXFc)調配物。在某些實施例中，第二容器為伴有柱塞之預填充注射器以允許向第一容器中添加稀釋劑，復原第一容器之內含物及往回轉移至注射器中。在某些實施例中，套組進一步提供用於使注射器連接於第一容器之接頭。在某些實施例中，套組進一步提供針及輸注管，其將連接於含有復原長效FIX多肽(例如rFIXFc)調配物之注射器以允許靜脈內輸注調配物。
在某些實施例中，以約200IU至約4000 IU，例如約250IU、約500IU、約1000IU、約2000IU或約3000IU之總量提供長效FIX多肽(例如rFIXFc)。
在一個實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約250IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一 容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約50IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及(vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約500IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約100IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及(vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約1000IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約200 IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及(vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約2000IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約400IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及(vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約3000IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約83.3mg蔗糖；(iii)約167mg甘露糖醇；(iv)約27.2mg L-組胺酸；及(v)約0.7mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約600IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約1.7%(w/v)蔗糖；(iii)約3.3%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl； (v)約35mM L-組胺酸；及(vi)約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約250IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約50IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mt.ml L-組胺酸及(vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約500IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約100IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約1000IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約200IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約2000IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約400IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在另一實施例中，提供一種醫藥套組，其包 括含有凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含：(i)約 3000IU長效FIX多肽(例如rFIXFc)，(ii)約83.3mg蔗糖；(iii)約167mg甘露糖醇；(iv)約27.2mg L-組胺酸；及(v)約0.7mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約600IU/ml長效FIX多肽(例如rFIXFc)；(ii)約16.7mg/ml蔗糖；(iii)約33.3mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約5.43mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
在某些實施例中，本文提供之醫藥套組之第 一容器為包括橡膠塞之玻璃小瓶。在某些實施例中，本文提供之醫藥套組之第二容器為伴有柱塞之注射器主體。在某些實施例中，注射器為含有稀釋劑之預填充注射器。在某些實施例中，本文提供之醫藥套組進一步包括使玻璃小瓶連接於注射器主體之接頭。在某些實施例中，本文提供之醫藥套組進一步包括適於靜脈內輸注之欲連接於注射器之伴有針的輸注管。
在某些實施例中，長效FIX多肽(例如 rFIXFc)之所要劑量可經由使用一種如本文提供之醫藥套組來達成。在某些實施例中，一種以上醫藥套組可用於達成所要劑量。本文提供一種組合或匯合兩種或兩種以上如本文提供之醫藥套組中含有之調配物以達成所要劑量的方法。
在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含短 效FIX多肽。短效FIX多肽可包含野生型FIX或由野生型FIX組成。短效FIX多肽之非限制性實例包括貝賦(BENEFIX)、莫諾尼(MONONINE)或阿法尼(ALPHANINE)。
本發明之醫藥組合物可調配成液體調配物、 凍乾散劑或懸浮液。包含醫藥組合物之容器可為小瓶、藥筒或注射器。在一特定實施例中，包含醫藥組合物之注射器為雙室注射器。
在某些實施例中，本發明之醫藥組合物或凍 乾散劑之復原溶液包含足以提供抗微生物活性之量的防腐劑。在此項技術中為熟知適用於醫藥組合物之醫藥學上可接受之防腐劑。舉例而言，醫藥學上可接受之防腐劑之實例包括(但不限於)苯酚、間甲酚、苯甲醇、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯氧乙醇、任何其他醫藥學上可接受之防腐劑及其任何組合。在一特定實施例中，防腐劑為苯甲醇。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度在0.5%與0.9%之間的苯甲醇。
現已詳細描述本發明，藉由參考以下實例將 更明確地瞭解本發明，該等實例係僅出於說明目的包括於此且不意欲限制本發明。本文中提及之所有專利及公開案皆以引用的方式明確併入本文中。
V.製備方法
可在包含編碼長效FIX多肽之載體之宿主細 胞中製造長效FIX多肽。在一個實施例中，宿主細胞用一或多個包含編碼FIX多肽及第一FcRn多肽之第一核苷酸序列、編碼第二FcRn多肽之第二核苷酸序列、及視情況編碼蛋白質轉化酶(例如PC5)之第三核苷酸序列的載體轉型。如本文所用，表現載體係指含有在引入適當宿主細胞中時，為插入編碼序列之轉錄及轉譯所必需之元件，或在RNA病毒載體之情況下，為複製及轉譯所必需之元件的任何核酸構築體。表現載體可包括質體、噬菌粒、病毒及其衍生物。
如本文所用之基因表現控制序列為有助於其 所可操作地連接之編碼核酸之高效轉錄及轉譯的任何調控核苷酸序列，諸如啟動子序列或啟動子-增強子組合。基因表現控制序列可例如為哺乳動物或病毒啟動子，諸如組成性或誘導性啟動子。組成性哺乳動物啟動子包括(但不限於)以下基因之啟動子：次黃嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HPRT)、腺苷去胺酶、丙酮酸激酶、β-肌動蛋白啟動子及其他組成性啟動子。在真核細胞中組成性起作用之示範性病毒啟動子包括例如來自細胞巨大病毒(CMV)、猿猴病毒(例如SV40)、乳頭狀瘤病毒、腺病毒、人類免疫缺陷病毒(HIV)、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)、細胞巨大病毒、莫洛尼白血病病毒(Moloney leukemia virus)之長末端重複序列(LTR)及其他反轉錄病毒之啟動子、及單純性皰疹病毒之胸苷激酶啟動子。其他組成性啟動子為一般技藝人士所知。適用作本發明之基因表現序列之啟動子亦包 括誘導性啟動子。誘導性啟動子在誘導劑存在下表現。舉例而言，誘導金屬硫蛋白啟動子以促進在某些金屬離子存在下之轉錄及轉譯。其他誘導性啟動子為一般技藝人士所知。
載體之實例包括(但不限於)病毒載體或質體載 體。質體載體已在此項技術中廣泛描述且為熟習此項技術者所熟知。參見例如Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989。在過去數年中，已發現質體載體由於其不能在宿主基因組內複製且整合入宿主基因組中而特別有利於在活體內將基因傳遞至細胞。然而，具有與宿主細胞相容之啟動子之此等質體可自可操作地於質體內編碼之基因表現肽。一些可自商業供應商獲得之常用質體包括pBR322、pUC18、pUC19、各種pcDNA質體、pRC/CMV、各種pCMV質體、pSV40及pBlueScript。特定質體之其他實例包括pcDNA3.1，目錄編號V79020；pcDNA3.1/hygro，目錄編號V87020；pcDNA4/myc-His，目錄編號V86320；及pBudCE4.1，目錄編號V53220，全部來自Invitrogen(Carlsbad,CA.)。其他質體為一般技藝人士所熟知。另外，可使用標準分子生物學技術定製設計質體以移除及/或添加特定DNA片段。
接著將一或多個表現載體轉染或共轉染入將 表現多肽之適合目標細胞中。此項技術中已知之轉染技術包括(但不限於)磷酸鈣沈澱(Wigler等人，(1978)Cell 14：725)、電穿孔(Neumann等人，(1982)EMBO J 1：841)及脂質體基試劑。多種宿主表現載體系統可用於表現本文所述之蛋白質，該等系統包括原核細胞與真核細胞兩者。其包括(但不限於)微生物，諸如用含有適當編碼序列之重組噬菌體DNA或質體DNA表現載體轉型之細菌(例如大腸桿菌)；用含有適當編碼序列之重組酵母或真菌表現載體轉型之酵母或絲狀真菌；用含有適當編碼序列之重組病毒表現載體(例如桿狀病毒)感染之昆蟲細胞系統；用重組病毒表現載體(例如花椰菜花葉病毒(cauliflower mosaic virus)或煙草花葉病毒(tobacco mosaic virus))感染或用含有適當編碼序列之重組質體表現載體(例如Ti質體)轉型之植物細胞系統；或動物細胞系統，包括哺乳動物細胞(例如HEK 293、CHO、Cos、HeLa、HKB11及BHK細胞)。
在一個實施例中，宿主細胞為真核細胞。如 本文所用，真核細胞係指具有胚乳原核之任何動物或植物細胞。動物之真核細胞包括脊椎動物(例如哺乳動物)之細胞，及無脊椎動物(例如昆蟲)之細胞。植物之真核細胞特定言之可包括(不限於)酵母細胞。真核細胞不同於例如細菌之原核細胞。
在某些實施例中，真核細胞為哺乳動物細 胞。哺乳動物細胞為源於哺乳動物之任何細胞。哺乳動物細胞特定言之包括(但不限於)哺乳動物細胞株。在一個實施例中，哺乳動物細胞為人類細胞。在另一實施例中，哺乳動物細胞為HEK 293細胞，其為一種人類胚腎細胞 株。HEK 293細胞可以CRL-1533自Manassas,VA之美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection)及以293-H細胞(目錄編號11631-017)或293-F細胞(目錄編號11625-019)自Invitrogen(Carlsbad,Calif.)獲得。在一些實施例中，哺乳動物細胞為PER.C6®細胞，其為一種源於視網膜之人類細胞株。PER.C6®細胞可自Crucell(Leiden,The Netherlands)獲得。在其他實施例中，哺乳動物細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。CHO細胞可自美國典型培養物保藏中心(Manassas,VA.)獲得(例如CHO-K1；CCL-61)。在其他實施例中，哺乳動物細胞為幼小倉鼠腎(BHK)細胞。BHK細胞可自美國典型培養物保藏中心(Manassas,Va.)獲得(例如CRL-1632)。在一些實施例中，哺乳動物細胞為HKB11細胞，其為HEK293細胞與人類B細胞株之雜交細胞株。Mei等人，Mol.Biotechnol.34(2)：165-78(2006)。
方法可進一步包括純化步驟。在此項技術中 熟知各種已知純化步驟。
VI.用於估計患者個別化給藥資訊、患者個別化PK資訊及患者中值PK資訊之方法、系統及儲存媒體
本發明亦包括一種估計針對患者加以個別化之rFIXFc給藥資訊之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6例如表21之rFIXFc群體藥物動力學(popPK)模型及視情況Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收患者資 訊及所要治療結果資訊之至少一者，(b)使用popPK模型、視情況選用之Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統計算個別化rFIXFc給藥資訊，及(c)藉由該基於電腦之系統輸出該個別化給藥資訊。
在一些實施例中，方法亦包括基於(c)之輸出的個別化給藥資訊選擇給藥方案及根據所選給藥方案向患者投與rFIXFc。
在一些實施例中，所要治療結果資訊為在給藥之後血漿FIX活性程度之所要升高且輸出資訊為用於急性治療之劑量。
在一些實施例中，所要治療結果資訊為所要給藥間隔且輸出資訊為用於防治之劑量。
在一些實施例中，所要治療結果資訊為所要劑量且輸出資訊為用於防治之間隔。
本發明亦包括一種基於中值popPK估計rFIXFc給藥方案之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6例如表21之rFIXFc popPK模型及視情況Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收患者資訊及所要治療結果資訊之至少一者，(b)使用popPK模型、視情況選用之Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統計算中值rFIXFc PK資訊，及(c)藉由該基於電腦之系統輸出該中值PK資訊。
在一些實施例中，方法亦包括基於(c)之輸出的中值PK資訊選擇給藥方案，及根據所選給藥方案向患 者投與rFIXFc。
本發明亦包括一種估計個別患者rFIXFc PK 之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6例如表21之rFIXFc群體藥物動力學(popPK)模型及視情況Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收個別rFIXFc PK資訊，(b)使用popPK模型、視情況選用之Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統估計個別化患者rFIXFc PK資訊，及(c)藉由該基於電腦之系統輸出該個別化患者PK資訊。
在一些實施例中，方法亦包括基於(c)之輸出 的個別化患者PK資訊選擇給藥方案，及根據所選方案向患者投與rFIXFc。
在一些實施例中，(a)進一步包括藉由基於電 腦之系統接收患者資訊。
在一些實施例中，患者資訊為年齡(例如12 歲及12歲以上)或體重。其他患者資訊包括診斷性(基線)FIX含量、PK測定值、PK取樣時間、給藥史(若PK樣本取自多次劑量)、實際劑量、FIX活性程度等。
在一些實施例中，所要治療結果資訊為例如 所要PK或所要方案結果，例如在劑量之後血漿FIX活性程度之所要升高、所要給藥間隔及所要劑量。
在一些實施例中，輸出資訊為例如PK曲線、 PK參數，諸如增量回收率(Cmax/劑)、平均滯留時間、終末t1/2、清除率、Vss、AUC/劑、劑量及相關谷底、以及 間隔及相關谷底。
舉例而言，為了評估個別化患者PK，系統可 推薦使用者輸入2-3個最佳化PK取樣時間點。在此情況下，系統輸出可包括PK曲線及一或多個所選PK參數，例如增量回收率(Cmax/劑)、平均滯留時間、終末t1/2、清除率、Vss、AUC及達到1%或X%之時間等。例如圖15。
作為其他實例，為使用先前段落中論述之輸 出的個別PK參數選擇個別化給藥方案，(i)選擇用於急性治療之劑量可基於使用者輸入的在劑量之後血漿FIX活性程度之所要升高，(ii)選擇用於防治之劑量可基於使用者輸入的所要給藥間隔，或(iii)用於防治之所選間隔可基於使用者輸入的所要劑量。在第一種情況下，系統可輸出基於患者之增量回收率之劑量(IU)。例如圖16。在第二種情況下，系統輸出可為劑量及相關谷底(例如x IU/kg、1%谷底、y IU/kg、2%谷底等)之表。例如圖17上部。在第三種情況下，系統輸出可為間隔及相關谷底(例如x日、1%谷底、y IU/kg、2%谷底等)之表，例如圖17下部。
使用者可能希望在不輸入任何個別化PK資料 下使用系統。在此情況下，給藥輸出將基於群體中值而非針對特定患者進行個別化。例如圖18。以此方式，使用者輸入例如體重及年齡，及(i)在劑量之後血漿FIX活性程度之所要升高，(ii)用於防治之所要劑量間隔，或(iii)用於防治之所要劑量。在第一種情況下，系統可輸出劑量。在 第二種情況下，系統可輸出劑量及相關谷底。例如表16。在第三種情況下，系統可輸出間隔及相關谷底。例如表16。
在一些實施例中，系統遵從患者隱私法律。 在一些實施例中，系統係例如用SSL加密。在一些實施例中，匿名產生輸入患者資訊。
在一些實施例中，系統包括使用者幫助功能。
方法可由例如醫師、護士或另一保健從業者執行。
其他實施例包括一種儲存有當由處理器執行時會使該處理器執行任何以上方法之指令的電腦可讀儲存媒體。
其他實施例包括一種包括處理器及記憶體之系統，該記憶體上儲存有當由該處理器執行時會使該處理器執行任何以上方法之指令。
系統或電腦可讀儲存媒體之使用者可為例如醫師、護士或另一保健從業者。
關於本發明之此等態樣之其他實施例，參見實例5、6及8以及其中論述之圖。
VII.實例計算環境
本文所述之各種模型化技術、劑量計算及估計可藉由軟體、韌體、硬體或其組合來實施。圖19說明 一種實例電腦系統1900，其中實施例或其部分可以電腦可讀碼形式實施。舉例而言，實例5及6之模型化及/或實例8之患者治療模擬可在系統1900中實施。
電腦系統1900包括一或多個處理器，諸如處 理器1904。處理器1904連接於通訊基礎結構1906(例如匯流排或網路)。
電腦系統1900亦包括主記憶體1908，較佳隨 機存取記憶體(RAM)，且亦可包括輔助記憶體1910。根據實作，使用者介面資料可例如且不限於儲存在主記憶體1908中。主記憶體1908可包括例如快取記憶體及/或靜態及/或動態RAM。輔助記憶體1910可包括例如硬式磁碟機及/或可移式儲存器驅動機。可移式儲存器驅動機1914可包括軟式磁碟機、磁帶驅動機、光碟驅動機、快閃記憶體或其類似物。可移式儲存器驅動機1914以熟知方式讀取及/或寫入可移式儲存器單元1916。可移式儲存器單元1916可包括由可移式儲存器驅動機1914讀取及寫入之軟碟、磁帶、光碟等。如將由熟習相關技術者所瞭解，可移式儲存器單元1916包括已儲存有電腦軟體及/或資料之電腦可讀儲存媒體。
電腦系統1900亦可包括顯示介面1902。顯示 介面1902可適合於與顯示單元1930通訊。顯示單元1930可包括用於顯示經由通訊基礎結構1906自主記憶體1908接收之圖形、文本及其他資料之電腦監視器或類似設施。在替代性實作中，輔助記憶體1910可包括用於使 電腦程式或其他指令裝載入電腦系統1900中之其他類似設施。此等設施可包括例如可移式儲存器單元1922及介面1920。此等設施之實例可包括程式盒及盒介面(諸如見於視訊遊戲裝置中者)、可移式記憶體晶片(諸如EPROM或PROM)及相關插座、以及允許軟體及資料自可移式儲存器單元1922轉移至電腦系統1900之其他可移式儲存器單元1922及介面1920。
電腦系統1900亦可包括通訊介面1924。通訊 介面1924允許軟體及資料在電腦系統1900與外部裝置之間轉移。通訊介面1924可包括數據機、網路介面(諸如乙太網路卡)、通訊埠、PCMCIA槽及卡或其類似物。經由通訊介面1924轉移之軟體及資料係呈信號形式，該等信號可為電子信號、電磁信號、光信號或能夠由通訊介面1924接收之其他信號。經由通訊路徑1926向通訊介面1924提供此等信號。通訊路徑1926攜帶信號且可使用電線或電纜、光纖、電話線、行動電話鏈路、RF鏈路或其他通訊通道加以實施。
在本文件中，術語「電腦可讀儲存媒體」通 常用於指代非暫時性儲存媒體，諸如可移式儲存器單元1916、可移式儲存器單元1922及安裝在硬式磁碟機1912中之硬碟。電腦可讀儲存媒體亦可係指一或多種記憶體，諸如主記憶體1908及輔助記憶體1910，其可為記憶體半導體(例如DRAM等)。此等電腦程式產品為用於向電腦系統1900提供軟體之設施。
電腦程式(亦稱為電腦控制邏輯)儲存在主記憶 體1908及/或輔助記憶體1910中。電腦程式亦可經由通訊介面1924接收且儲存在主記憶體1908及/或輔助記憶體1910上。此等電腦程式在執行時使電腦系統1900能夠實施如本文論述之實施例。特定言之，電腦程式在執行時使處理器1904能夠實施本揭示案之方法，諸如以上論述之某些方法。因此，此等電腦程式代表電腦系統1900之控制器。當實施例使用軟體時，軟體可儲存在電腦程式產品中且使用可移式儲存器驅動機1914、介面1920或硬驅動機1912載入電腦系統1900中。
實施例可係有關包含儲存在任何電腦可讀媒 體上之軟體之電腦程式產品。此等軟體在一或多種資料處理裝置中執行時使資料處理裝置如本文所述進行操作。實施例可採用任何電腦可用或可讀的媒體。電腦可讀儲存媒體之實例包括(但不限於)非暫時性主儲存裝置(例如任何類型之隨機存取記憶體)及非暫時性輔助儲存裝置(例如硬驅動機、軟碟、CD ROMS、ZIP磁碟、磁帶、磁儲存裝置及光儲存裝置、MEMS、奈米技術儲存裝置等)。其他電腦可讀媒體包括通訊媒體(例如有線及無線通訊網路、區域網路、廣域網路、內部網路等)。
實例 實例1. 產品描述
rFIXFc為一種由共價連接於人類免疫球蛋白 G1(IgG1)之Fc域之人類凝血因子IX(FIX)組成的長效完全重組融合蛋白。rFIXFc之因子IX部分之一級胺基酸序列與血漿源性因子IX之Thr148對偶基因形式相同且結構及功能特徵與內源性因子IX類似。rFIXFc之Fc域含有IgG1之鉸鏈區、CH2區及CH3區。rFIXFc含有分子量近似為98千道爾頓之869個胺基酸。
rFIXFc係藉由重組DNA技術在已得到廣泛表 徵之人類胚腎(HEK)細胞株中產生。該細胞株將rFIXFc表現至不含有源於動物或人類來源之任何蛋白質之規定細胞培養基中。rFIXFc係藉由不需要使用單株抗體之一系列層析步驟純化。方法包括多個病毒清除步驟，包括15nm病毒截留奈濾。細胞培養、純化及調配過程中不使用人類或動物添加劑。
rFIXFc屬於醫藥治療組：抗出血劑， B02BD04。其以供靜脈內(IV)投與之無菌無防腐劑無熱原凍乾白色至灰白色散劑至餅形式提供於單次使用小瓶中，伴有於預填充注射器中之液體稀釋劑。除rFIXFc之外，醫藥組合物亦在凍乾物中包含蔗糖、L-組胺酸、甘露糖醇及聚山梨醇酯20，且包含於無菌溶劑中之氯化鈉溶液(0.325%)。各單次使用小瓶額定含有250、500、1000、2000或3000國際單位(IU)之rFIXFc。當用提供之稀釋劑復原時，產品含有下表1或表2中所示之濃度之以下賦形劑：蔗糖、氯化鈉、L-組胺酸、甘露糖醇及聚山梨醇酯20。調配醫藥組合物以僅在復原之後供靜脈內投與。
各包裝含有具有塞子(丁基)及翻轉型封蓋(鋁) 之散劑小瓶(1型玻璃)、於具有柱塞(丁基)、尖蓋(丁基)及無菌小瓶接頭復原裝置之預填充注射器(1型玻璃)中之5ml溶劑。
實例2：調配方法
rFIXFc藥品為一種意欲靜脈內投與之注射用 無菌凍乾散劑。其於無菌填充單次使用小瓶中供應，每個小瓶額定含有250、500、1000、2000及3000IU。小瓶為用20mm鐵氟龍(Teflon)塗佈之丁基橡膠凍乾塞及鋁翻轉型壓接封蓋密封之10mL USP/Ph.Eur.1型玻璃小瓶。在凍乾之前，250IU至2000IU小瓶之額定填充體積目標為5mL且3000IU小瓶之額定填充體積目標為7mL。在凍乾之前的調配賦形劑之組成對於所有劑量強度皆相同。用無菌預填充注射器中供應之包含0.325%(w/v)氯化鈉之5mL稀釋劑復原注射用散劑。
將在凍乾之前的藥品溶液之組成呈現於表3 中，且將凍乾散劑之組成呈現於表4中。將在復原之後的藥品之組成呈現於表1或表2中。(實例1)。
可藉由使注射器連接於標準靜脈內輸注管/針 組，且藉由一般技藝人士已知之標準方法靜脈內傳遞rFIXFc來進行投藥。
實例3：投藥劑量及方法/計算初始估計劑量之方法
rFIXFc為指示在患有B型血友病(先天性因子IX缺乏症)之成人及兒童(12歲)中用於例如控制及預防出血事件、常規防治以預防出血事件或降低出血事件頻率、及圍手術期管理(手術防治)之長效抗血友病因子(重組)。
如實例1中所述進行調配之rFIXFc的給藥可如此實例中所述進行估計，但亦可藉由標準測試(諸如在本文中其他地方所述之FIX活性分析)來確定。
預期每公斤體重1IU rFIXFc會使因子IX之循環含量增加1%[IU/dL]。已顯示rFIXFc具有長久之循環半衰期。
通常不需要調整回收劑量。因為受試者之藥 物動力學(例如半衰期、活體內回收率)及對rFIXFc之臨床反應可變化，所以可使用下式估計表示為IU/dL(或正常值之%)之預期活體內因子IX含量峰值增大或所需劑量：IU/dL(或正常值之%)=[總劑量(IU)/體重(kg)]×回收率(每IU/kg之IU/dL)或劑量(IU)=體重(kg)×所要因子IX升高(IU/dL或正常值之%)×回收率之倒數(每IU/dL之IU/kg)
下表(表5)可用於指導出血事件中之給藥：
後續治療劑量及持續時間取決於個別臨床反應、因子IX缺乏症之嚴重性、及出血位置及程度(參見以下實例5中之藥物動力學)。
下表(表6)可用於指導圍手術期管理(手術防 治)之給藥：
對於常規防治，推薦起始方案為：每週一次 50IU/kg或每10-14日一次100IU/kg。任一方案皆可基於受試者反應(參見以下實例5之藥物動力學)加以調整。
rFIXFc被禁忌用於已對產品或其組分顯現嚴 重過敏性反應(包括過敏症)之受試者中。
對rFIXFc之臨床反應可變化。若出血不受推 薦劑量控制，則可測定因子IX之血漿含量，且可投與足夠劑量之rFIXFc以達成滿意的臨床反應。若受試者之血漿因子IX含量未能如所預期得以增大或若在投與rFIXFc之後出血未得到控制，則可測試受試者之血漿中之抑制劑 (例如中和抗體)之存在。可藉由一般技藝人士已知之適當臨床觀測及實驗室測試來監測使用rFIXFc之受試者之因子IX抑制劑的產生。
當臨床指示時，可藉由進行例如單級凝結分 析來監測受試者血漿之因子IX活性程度以確認足夠因子IX含量已經達成且得以維持。可進一步監測受試者血漿之因子IX抑制劑的產生。
實例4. 半衰期延長之重組Fc融合因子IX之3期臨床試驗(「B-LONG」研究)中顯示的安全性、功效及改良藥物動力學 B-LONG研究設計
研究設計為全球開放標籤非隨機化多中心(17國家之50個研究場所)3期研究。
目標在於評價靜脈內注射之重組因子IX Fc融合蛋白(rFIXFc)在患有嚴重B型血友病之個體(先前治療過的受試者(PTP))中在控制及預防出血事件、常規防治及/或圍手術期管理方面之功效、耐受性、藥物動力學(PK)及安全性。圖1顯示研究設計之圖。本實例中揭示之研究為B型血友病之任何治療劑之最大登記試驗，其中進行之PK分析迄今為止最為廣泛。研究持續時間為約72週。
關鍵納入準則包括(1)男性，(2)大於12歲(重至少40kg)，(3)已診斷有定義為內源性因子IX活性2%(2IU/dL FIX：C)之嚴重B型血友病，(5)具有以下歷史：100 個用任何當前銷售之FIX產品之先前記錄暴露日(ED)、在招募之前12週期間發生出血事件及/或用FIX治療，或若其已得到陣發性治療則在招募之前52週內發生至少8次出血，(6)將具有與FIX或靜脈內免疫球蛋白相關之抑制劑或過敏症、其他凝血病症、不受控制之HIV感染、腎功能障礙或活動性嚴重肝病之歷史的受試者自研究排除，及(7)亦排除不能或不願意遵守防治方案或日記要求之受試者或在研究之前已接受免疫抑制藥物12個月之受試者。
三個治療隊組為隊組1(固定每週間隔防治)、 隊組2(個別化間隔防治)、隊組3(陣發性[按需方案]治療)、隊組4(圍手術期管理)。
在隊組1中，每週用50IU/kg之初始劑量治 療受試者，隨後基於PK概況調整劑量以維持谷底因子含量足以預防出血以在谷底時維持高於基線1-3IU/dL及/或若受試者連續3個月經歷2次自發性出血則調整劑量。 將顯示隊組1之連續PK子組給藥及PK取樣之圖顯示於圖2中。詳言之，基於在第4、16、26及39週對谷底之監測來對rFIXFc劑量進行調整。若藥物動力學值指示患者之谷底含量高於基線3IU/dl或在當週結束時較高，則降低劑量以達成谷底高於基線1IU/dl至3IU/dl之目標。 若藥物動力學值指示患者之谷底含量將在當週結束時高於基線小於1IU/dl，則增加劑量以達成谷底高於基線1IU/dl至3IU/dl之目標。若不能達成目標範圍，則操作血漿樣品以排除抑制劑之存在。在進行任何劑量調整之後約 1個月達成重複谷底含量且每月重複直至不必進行其他調整為止。在此治療隊組中僅調整rFIXFc之劑量。
在隊組2中，在初始間隔10日下用100 IU/kg治療受試者，隨後調整間隔以維持谷底因子含量足以預防出血(根據受試者之PK概況調整間隔以在谷底時維持活性高於基線1-3IU/dL及/或若受試者連續3個月經歷2次自發性出血則調整間隔)。在第4、16、26及39週進行監測以確保此FIX谷底含量得以維持。在此治療隊組中僅調整rFIXFc之間隔。
對於隊組1或隊組2中經歷過不可接受之出 血、兩次或兩次以上自發性出血連續3個月之任何患者，皆調整劑量(隊組1)或間隔(隊組2)以達成FIX谷底含量高於基線3IU/dl至5IU/dl之目標。若在rFIXFc之目標谷底高於基線3IU/dl至5IU/dl下不發生不可接受之出血，則在研究者之判斷下及在與發起人達成一致之後，可再調整rFIXFc以達成1IU/dl至3IU/dl之目標谷底。
在隊組3中，受試者接受如為出血所需之 rFIXFc陣發性治療(例如20IU/kg至100IU/kg，視出血嚴重性而定)。輕度出血事件用20-30IU/kg治療，中度至重度出血事件用25-50IU/kg治療，且重度至威脅生命之出血事件用50-100IU/kg治療以基於患者之藥物動力學概況分別達成20-30%、25-50%及50-100%之谷底FIX含量之目標。
在隊組4中，在大手術之前及之後投與40-100IU/kg rFIXFc，其中根據手術類型調整劑量；使受試 者直接招募至手術隊組中，接著在手術後移至一個治療隊組(隊組1、隊組2或隊組3)中；或若其在研究期間需要手術，則在圍手術期時期期間自另一隊組移至手術隊組中。
隊組1及隊組3中的接受rFIXFc多達治療之 52±1週且隊組2多達50個暴露日(ED)。處於先前防治方案之受試者僅進入隊組1或隊組2中，而先前使用陣發性治療者可招募至任何治療隊組中。
隊組1中之連續PK子組在基線時接受50 IU/kg rFIX，隨後在首次投與rFIXFc之前洗脫5日。在進行PK評估之rFIX注射後120小時之後，受試者接受50IU/kg rFIXFc且歷經240小時收集血液樣品以進行PK概況分析。連續PK子組在第26週重複rFIXFc PK概況分析。研究中之所有其餘受試者皆亦經受非連續rFIXFc PK評價持續168-336小時(7-14日：隊組1=10；隊組2=14；隊組3=7)。
對於PK評估，所有隊組中之所有受試者皆在 其第一劑rFIXFc之後進行初始PK評估。將來自隊組1之受試者子集分配至方案指定之連續PK子組中以如下比較rFIXFc與重組因子IX(rFIX，BeneFIX®)的PK：在120小時洗脫時期之後，隊組1中之連續藥物動力學子組中之患者接受50IU/kg重組FIX(rFIX，BeneFIX®)之注射且如下經受藥物動力學取樣直至96小時：注射前、自注射開始10(±2)分鐘、1小時(±15分鐘)、3小時(±15分鐘)、6小時(±15分鐘)、24(±2)小時、48(±2)小時、72(±3)小時及96 (±3)小時。各患者必須完成最低可評價之藥物動力學取樣直至72小時的時間點以納入藥物動力學分析組中。
在完成rFIX藥物動力學取樣且自末次rFIX 劑量開始5-日之後，患者接受50IU/kg劑量之rFIX Fc融合蛋白(rFIXFc)，同時歷經240小時進行藥物動力學評估。如下進行rFIXFc取樣：注射前、自注射開始10(±2)分鐘、1小時(±15分鐘)、3小時(±15分鐘)、6小時(±15分鐘)、24(±2)小時、48(±2)小時、96(±3)小時、144(±3)小時、168(±3)小時、192(±3)小時及240(±3)小時。各患者必須完成最低可評價之藥物動力學取樣直至168小時的時間點以納入藥物動力學分析組中。亦在第26週用相同取樣時程對rFIXFc進行重複藥物動力學評估。
在隊組1及2中，功效時期以在藥物動力學 取樣時期完成之後第一防治劑量之日期及時間起始且以如電子病例報告表(eCRF)或電子日記(eDiary)中記錄之末次投與劑量(用於防治出血事件)結束。在隊組1(連續藥物動力學子組)中，功效時期被打斷持續重複藥物動力學時期，且在隊組1及2中，功效時期被打斷持續全部手術/康復時期(對於大手術與小手術兩者而言)。功效時期持續直至重複藥物動力學劑量之前的末次劑量(用於防治或治療出血事件)或直至開始手術/康復時期之前的末次劑量(用於防治或治療出血事件)，接著在藥物動力學或手術/康復時期結束之後的下一防治劑量時恢復。
在隊組3中，功效時期在末個藥物動力學取 樣時間點之後1分鐘開始且以末次接觸之日期或末次記入電子日記之日期結束，以較遲者為準。功效時期在開始手術/康復時期之前1分鐘被打斷且在手術/康復時期結束後之日00：01重新開始。
血漿FIX活性藉由單級(活化部分凝血激素時 間[aPTT])凝結分析量測，該分析對人類血漿樣品中之rFIXFc、BeneFIX®及人類FIX係經過驗證的。使用市售aPTT試劑(例如Trinity Biotech(自動APTT[基於二氧化矽之活化劑及磷脂混合物]))、Precision BioLogic(CRYOCHECKTM因子IX-去除之血漿)及作為校正物之正常參考血漿(Precision BioLogic)(LLOQ 1IU/dl)在MDA 180凝血儀器上量測含檸檬酸鹽之血漿樣品中之FIX活性，該正常參考血漿具有相對於世界衛生組織第3或第4血漿國際標準指定之效力。對於所有三種FIX蛋白，準確度皆在95%至104%內，且分析內及分析間精確度通常在10%內。
如下偵測中和抗體：在篩檢、基線及研究治 療期間之各次就診時進行用以偵測中和抗體之Nijmegen改進Bethesda分析以監測抑制劑之產生。在第一劑rFIXFc之後，在隊組1及2中在各次預定臨床就診時在谷底進行抑制劑測試，其中谷底定義為在預定劑量之間最長間隔之後的點。在隊組3中在洗脫至少72小時(3日)之後進行抑制劑測試。對於進入隊組4之新患者，在篩檢時進行抑制劑測試且之後在預定手術之前4週內，用rFIXFc達成總計至少4個ED。形成抑制劑定義為確認在2-4週內 第二單獨抽取樣品中之中和抗體值0.6個Bethesda單位(BU)/ml。使用克洛珀-皮爾森(Clopper-Pearson)二項式比例精確方法評價抑制劑發生率之置信區間。
關鍵功效結果量度包括(1)隊組1、2及3中之 年度出血率(ABR)(比較2個防治組之各者與陣發性(按需)治療組)(亦即(a)每週防治隊組(隊組1)與陣發性治療隊組(隊組3)進行比較及(b)個別化間隔防治隊組(隊組2)與陣發性治療隊組(隊組3)進行比較)；(2)對出血事件治療之反應，使用四點出血反應量表(亦即(a)每個受試者之消耗量；(b)隊組1之每週劑量；(c)隊組2之給藥間隔；及(d)為阻止出血事件所需之注射次數及每次注射之劑量)；及(3)治療醫師使用4點量表對受試者對用rFIXFc之手術之反應的評估；為在手術時期期間維持止血所需之注射次數及劑量；在手術期間之估計失血量；及為手術所需之輸注次數。針對年度出血率量測。
藥物動力學(PK)結果量度包括以下：(1)藉由 使用者規定之基於血漿FIX活性隨時間衰減且經驗證可用於PK分析中之2-隔間模型評估PK概況，該衰減如藉由中心實驗室中之單級(活化部分凝血激素時間)凝結分析所量測，及(2)rFIXFc及重組因子IX(rFIX，BENEFIX®)之PK及達到高於基線1%之時間。
對於FIX活性藥物動力學分析，基線(內源性 FIX活性)預先定義為在篩檢時、給藥前、給藥後或根據患者之歷史臨床記錄之最低觀測FIX活性。對於最低觀測 FIX活性低於1%之患者，基線FIX活性設為零；對於最低觀測FIX活性在1IU/dl與2IU/dl之間的患者，基線FIX活性設定為實際觀測FIX值。殘餘藥物遵循一級衰減進行衰減，其中衰減速率個別地加以測定。使用使用者規定且驗證之雙隔間模型分析藉由基線及殘餘藥物校正之FIX活性隨時間之概況。使用者規定碼使其他次級藥物動力學參數(例如1%及3%時間)之計算自動化，該等參數不包括在WinNonlin文庫模式(PHOENIX® WinNonlin 6.2.1.51；Pharsight)之次級參數清單中，因此消除對手動處理超出初級分析之資料之需要且使引入人為誤差之風險最小。
關鍵安全性結果量度包括以下：(a)實驗室值 自基線之臨床顯著變化；(b)抑制劑產生之發生率；及(c)超出圍手術期管理隊組(隊組1、2及3而非4)發生之不利事件(AE)之發生率。
統計分析-：報導中值年度出血率(ABR)且使 用考慮過度分散之負二項式模型計算估計ABR以比較隊組1及2(防治方案)與隊組3(陣發性治療)之間的ABR。 使用描述統計學以提供隊組1-3之各者之中值及四分位數範圍(IQR)值。連續PK分析群體包括自注射開始至最少72小時(對於50IU/kg rFIX)及最少168小時(對於50IU/kg rFIXFc)經收集血液樣品之隊組1受試者。使用採用研究治療(rFIX或rFIXFc)及受試者之變數的方差分析模型(ANOVA)且提供各治療之幾何平均值之95%置信區間。基於FDA指導，研究有足夠能力偵測抑制劑之出現之統計顯 著性，該FDA指導為臨床研究中抑制劑之出現可使用產生真實抑制劑發生率(0.05%至10.65%)之2側95% CI之二項式分佈，使用精確克洛珀-皮爾森方法加以充分模型化。所有統計測試皆在雙側5%顯著水準下進行。當已完成預先規定數目之主要手術程序時，在期中分析之後終止研究。
B-LONG結果 受試者
研究中招募總計123名受試者。115名(93.5%)受試者完成研究(3名同意退出；1名失訪；2名因違反方案而退出；且2名而不利事件而中止)。受試者在初始研究給藥之前經受96小時洗脫時期，此時進行PK評估。使招募之受試者進入如上詳述之四個治療隊組之一者中(亦參見圖1)。
- 隊組1(每週防治)，n=63(59名完成)
- 隊組2(個別化間隔防治)，n=29(27名完成)
- 隊組3(陣發性治療)，n=27(26名完成)
- 隊組4(圍手術期管理)，n=12(3名完成)，14個手術(12名受試者中之8名亦參與其他治療隊組(隊組1、2及3))
研究受試者之基線特徵(參見表7)顯示實質上共罹患人類免疫缺陷病毒與C型肝炎病毒感染之不同群體，其反映了一般性B型血友病群體。基因型概況與研究群體中預期之基因型概況一致(55%具有錯義突變)。
在處於先前防治方案之48名受試者中，>80% 每週輸注2次。防治組(隊組1及2)中之受試者在先前方案及出血史方面良好地平衡。在隊組2中存在較少具有目標關節之受試者且在隊組3中存在更多基線FIX活性<1IU/dL之受試者。隊組1、2及3中之中值(最小，最大)治療持續時間分別為51.6(<1,97)、58.3(<1,126)及40.9(28,54)週，且中值(最小，最大)暴露日分別為55.0(1,105)、38.0(1,71)及16.0(4,35)。在此研究期間投與總計5243次rFIXFc注射，對應於5144個ED(117.1個患者暴露年)。80%順應其指定劑量(隊組1)或給藥間隔(隊組2)之受試者中之治療依從性在防治隊組中為總體96.6%(隊組1=95.1%，隊組2=100%)。
對於隊組4中之患者，大手術定義為通常但 未必涉及全身麻醉及/或呼吸輔助之任何手術程序(可選擇的或緊急的)，其中穿透及暴露主要體腔，或對身體或生理功能產生實質性損傷(例如剖腹術、開胸術、開顱術、關節置換或截肢)。
研究就診時程：
對於隊組1至3，研究就診發生在篩檢(8週)、基線、第4週、第16週、第26週、第39週及第52週時。另外，隊組1至3中之患者收到30日隨訪電話，除非其被招募於進行中之延伸研究(NCT01425723)中。隊組4中之患者在篩檢、基線、手術當日、手術之後1週及康復後1週時進行研究就診。
連續藥物動力學子組
rFIX及rFIXFc之取樣時長基於先前報導之半衰期，從而允許衰減時間(通常為先前觀測半衰期之三至五倍)足以準確描述藥物動力學。在120小時洗脫時期之後，隊組1中之連續藥物動力學子組中之患者接受50IU/kg重組FIX(rFIX)之注射且如下經受藥物動力學取樣直至96小時：注射前、自注射開始10(±2)分鐘、1小時(±15分鐘)、3小時(±15分鐘)、6小時(±15分鐘)、24(±2)小時、48(±2)小時、72(±3)小時及96(±3)小時。各患者必須完成最低可評價之藥物動力學取樣直至72小時之時間點以納入藥物動力學分析組中。
在完成rFIX藥物動力學取樣且自末次rFIX劑量開始5日之後，患者接受50IU/kg劑量之rFIX Fc融合蛋白(rFIXFc)，同時歷經240小時進行藥物動力學評估。如下進行rFIXFc取樣：注射前、自注射開始10(±2)分鐘、1小時(±15分鐘)、3小時(±15分鐘)、6小時(±15分鐘)、24(±2)小時、48(±2)小時、96(±3)小時、144(±3)小時、168(±3)小時、192(±3)小時及240(±3)小時。各患者必須完成最低可評價之藥物動力學取樣直至168小時之時間點以納入藥物動力學分析組中。亦在第26週用相同取樣時程對rFIXFc進行重複藥物動力學評估。
功效
總計119名受試者納入功效分析中。測定隊組1、2及3之就第25個百分位數及第75個百分位數(四分位數範圍(IQR))而言之主要受自發性出血推動的中值年度出血率(ABR)，如圖3A、3B及表8中所示且如以下所概述：
- 每週防治隊組(隊組1)：2.95(1.01-4.35)
- 個別化間隔防治隊組(隊組2)：1.38(0-3.43)
- 陣發性治療隊組(隊組3)：17.69(10.77-23.24)
(a)出血事件之防治劑量及間隔滴定以及陣發性治療
在研究之過程期間抽取所有患者之欲量測FIX含量之樣品以估計各患者之藥物動力學參數來指導適當劑量或給藥間隔調整以達FIX含量高於基線1-3IU/dl之目 標谷底。
在隊組1(固定每週間隔)中：此隊組中之所有 患者皆初始每週接受一次rFIXFc 50IU/kg注射。基於在第4、16、26及39週對谷底之監測來對rFIXFc劑量進行調整。若藥物動力學值指示患者之谷底含量高於基線3IU/dl或在當週結束時較高，則降低劑量以達成谷底高於基線1IU/dl至3IU/dl之目標。若藥物動力學值指示患者之谷底含量將在當週結束時高於基線小於1IU/dl，則增大劑量以達成谷底高於基線1IU/dl至3IU/dl之目標。若不能達成目標範圍，則操作血漿樣品以排除抑制劑之存在。在進行任何劑量調整之後約1個月達成重複谷底含量且每月重複直至不必進行其他調整為止。在此治療隊組中僅調整rFIXFc之劑量。
在隊組2(個別化給藥間隔)中，在基於患者之 基線藥物動力學評估之間隔下靜脈內投與每公斤100IU劑量之rFIXFc以達成目標谷底高於基線1IU/dl至3IU/dl。在第4、16、26及39週進行監測以確保此FIX谷底含量得以維持。在此治療隊組中僅調整rFIXFc之間隔。
對於隊組1或隊組2中經歷過不可接受之出 血、兩次或兩次以上自發性出血連續3個月之任何患者，皆調整劑量(隊組1)或間隔(隊組2)以達成FIX谷底含量高於基線3IU/dl至5IU/dl之目標。若在rFIXFc之目標谷底高於基線3IU/dl至5IU/dl下不發生不可接受之出血，則在研究者之判斷下及在與發起人達成一致之後，可再調 整rFIXFc以達成1IU/dl至3IU/dl之目標谷底。
在隊組3(陣發性治療)中，輕度出血事件用 20-30IU/kg治療，中度至重度出血事件用25-50IU/kg治療，且重度至威脅生命之出血事件用50-100IU/kg治療以基於患者之藥物動力學概況分別達成20-30%、25-50%及50-100%之谷底FIX含量之目標。
(b)功效時期
在隊組1及2中，功效時期以在藥物動力學取樣時期完成之後第一防治劑量之日期及時間起始且以如電子病例報告表(eCRF)或電子日記(eDiary)中記錄之末次投與劑量(用於防治出血事件)結束。在隊組1(連續藥物動力學子組)中，功效時期被打斷持續重複藥物動力學時期，且在隊組1及2中，功效時期被打斷持續全部手術/康復時期(對於大手術與小手術兩者而言)。功效時期持續直至重複藥物動力學劑量之前的末次劑量(用於防治或治療出血事件)或直至開始手術/康復時期之前的末次劑量(用於防治或治療出血事件)，接著在藥物動力學或手術/康復時期結束之後的下一防治劑量時恢復。
在隊組3中，功效時期在末個藥物動力學取樣時間點之後1分鐘開始且以末次接觸之日期或末次記入電子日記之日期結束，以較遲者為準。功效時期在開始手術/康復時期之前1分鐘被打斷且在手術/康復時期結束後之日00：01重新開始。
(c)治療順應性
由現場工作人員監測並記錄對治療給藥之順 應性。對於就診之間的投藥，患者自投與rFIXFc且在手持式電子日記中記錄治療，該電子日記係在對患者之定期打電話期間及在各次就診時由研究現場工作人員及臨床監測者查看。
對患者之順應性之分析基於來自eCRF及電子 日記之資料。順應性分析包括患者對指定防治性方案之順應性。對於每週防治，分析包括在80%至125%範圍內每個患者服用之額定劑量之百分比。類似地，對於個別化間隔防治，分析包括在指定間隔之±36小時內每個患者服用之劑量之百分比。若計算順應率為至少80%，則考慮患者為順應的。
(d)分析方法
血漿FIX活性藉由單級(活化部分凝血激素時間[aPTT])凝結分析量測，該分析對人類血漿樣品中之rFIXFc、貝賦及人類FIX係經過驗證的。使用市售aPTT試劑(例如Trinity Biotech(自動APTT[基於二氧化矽之活化劑及磷脂混合物]))、Precision BioLogic(CryocheckTM因子IX去除之血漿)及作為校正物之正常參考血漿(Precision BioLogic)(LLOQ 1IU/dl)在MDA 180凝血儀器上量測含檸檬酸鹽之血漿樣品中之FIX活性，該正常參考血漿具有相對於世界衛生組織第3或第4血漿國際標準指定之效力。對於所有三種FIX蛋白，準確度皆在95%至104%內，且分析內及分析間精確度通常在10%內。
基於負二項式回歸模型之估計值，相較於陣 發性治療，兩個防治隊組之ABR均顯著降低83%及87%(對於隊組1、2及3，分別為3.12、2.40及18.67；P<0.001，表8)。防治隊組中之較低ABR在預定子組分析中之所有基於人口資料及疾病之子組間為一致的(圖3及表2)。此外，在分析限於處於先前陣發性方案之患者之情況下，隊組1及2之ABR分別降低83%及89%係與初級 分析一致。在研究期間就防治而言，無任何出血事件之患者之比例對於隊組1為23.0%且對於隊組2為42.3%。另外，根據類型及位置對出血事件之分析顯示兩個防治性隊組中之ABR均較低(表8)。在研究之最後3個月中，隊組1中之受試者之rFIXFc中值(IQR)每週劑量為40.5IU/kg。在研究之最後6個月期間，個別化間隔防治隊組(隊組2)中約半數研究群體之給藥間隔14日。隊組1及隊組2之中值給藥之概述顯示於表9A及表9B中。
a基於研究中6個月之受試者
IQR=第25個百分位數及第75個百分位數。
IQR，四分位數範圍
†允許藥物動力學推動之給藥(隊組1)或間隔(隊組2)變化以達成谷底含量高於基線1%至3%。若患者在滾動3個月時期中具有兩個突破自發性出血事件，則可調整劑量(隊組1)或間隔(隊組2)以提供更多保護。
‡在處於研究中9個月之患者中
§在處於研究中6個月之患者中
ABR表示年度出血率，CI表示置信區間，IQR表示四分位數範圍(第25個百分位數及第75個百分位數)，rFIXFc表示重組因子IX Fc融合蛋白，SD表示標準偏差。
*優：在初始注射之後約8小時內突然的疼痛減輕及/或出血徵象改良；良：在注射之後約8小時內明確的疼痛減輕及/或出血徵象改良，但可能需要在24至48小時之後進行一次以上注射以達成完全解決；中：在初始注射之後8小時內存在可能或輕微有益的作用且需要一次以上注射；無反應：在初始注射之後約8小時內無改良或病狀惡化。
**優：出血事件對小於或等於常用注射次數之rFIXFc或小於或等於常用劑量之rFIXFc起反應，或在防治期間突破出血率小於或等於通常觀測之突破出血率。有效：大多數出血事件對相同注射次數及劑量起反應，但一些需要更多注射或更高劑量，或突破出血率存在較小提高。部分有效：出血事件最常需要比預期更多注射或更高劑量，或在防治期間達成足夠之突破出血預防需要更頻繁注射及/或更高劑量。無效：常規程序不能控制止血或止血控制需要其他藥劑。
出血之控制：89名受試者中總計636起出血 事件(隊組1=167，隊組2=67，隊組3=402)得到治療，超過90%(90.4%)出血事件藉由單次注射rFIXFc得以控制且97.3%藉由2次注射得以控制。無論類型、順應性 狀態或出血事件之位置如何，為解決出血事件所需之中值注射次數皆為1.0，其中排除隊組2中需要2次注射來解決之兩個內部出血事件。每次注射之中值劑量為46.1IU/kg且出血事件之中值總劑量為47.0IU/kg。對於需要>1次注射來解決之61(9.6%)起出血事件，首次注射與第二次注射之間的中值間隔為45小時。總體而言，在隊組1、2及3中，分別對於76.4%、77.0%及85.4%之注射，受試者對rFIXFc治療反應之評估為優或良。在隊組1、2及3中，分別對於98.8%、99.2%及97.9%，醫師對受試者對其rFIXFc方案之反應的總體評估被評定為優或有效。 出血事件概述於表10中。
當基於每個受試者及針對在症狀發作之後治 療事件8小時以上之受試者，在隊組間檢查時，此功效類似。
隊組2中之受試者之給藥間隔自初始10日增 至53.8%受試者在研究之最後3個月期間達成中值劑量間隔14日。
圍手術期管理：隊組4之終點包括研究者/外 科醫師對受試者對用rFIXFc之手術之反應的評估：在手術時期期間維持止血所需之注射次數及劑量；在手術期間及之後的估計失血量；及為手術所需之輸血次數。總體而言，在12名受試者中進行14個大手術，包括膝關節鏡檢查(n=4)及踝關節鏡檢查(n=1)、膝置換(n=4)及其他手術(n=5)。止血由研究者/外科醫師評定為優(13/14)或良(1/14)。中值估計失血量為在手術期間65.5mL(範圍：0.0-300.0mL)及手術後0.0mL(範圍：0.0-500mL)。在手術期間不需要輸血，但兩名受試者在手術後時期中接受輸血。在85.7%之手術中需要在每次注射90.9IU/kg之中值劑量下單次注射rFIXFc以在手術期間維持止血。在手術前一日，投與1-2次注射且在手術後3日期間投與2-3次注射。在手術當日、手術後第1-3日及手術後第4-14日，中值rFIXFc消耗量(在參考時期期間對所有注射皆加以概述)分別為146.1IU/kg、168.2IU/kg及277.1IU/kg。 總體而言，報導12名受試者中之10(83.3%)名有1起不利事件(AE)且報導3名受試者有6起嚴重AE，該等不利事件皆得以解決且判斷與rFIX治療無關。治療醫師將rFIXFc在100%手術中之止血功效評定為優或良。
一次注射足以解決隊組1中90.4%之出血事 件，其中每次注射之中值劑量為46IU/kg。總體而言， 82.0%之rFIXFc注射由受試者評定為產生優秀或良好反應。對於98.8%之受試者就診，醫師對受試者對rFIXFc之反應的總體評估被評定為優或有效。
隊組1中受試者之每週rFIXFc劑量自初始50 IU/kg降至歷經研究過程加以平均化之中值45IU/kg。隊組2中受試者之初始給藥間隔10日歷經研究過程增至12.5日，其中12名受試者(46%)在最後6個月達成劑量間隔14日，且14名受試者(53.8%)在研究之最後3個月達成劑量間隔14日。
對於在12名受試者中進行之14個大手術之 100%，隊組4中之止血由研究者或外科醫師評定為優或良。大手術之類型包括治療牙膿腫及含毛囊腫以至膝關節成形術或膝置換(n=6)及截指術(n=2)。單次注射rFIXFc足以在85.7%之大手術期間維持止血且14個手術之每次注射之中值平均劑量為91IU/kg。
在手術期間及手術後對給藥之止血反應概述 於表11中。
PK
對於FIX活性藥物動力學分析，將基線(內源性FIX活性)預先定義為在篩檢時、給藥前、給藥後或根據患者之歷史臨床記錄之最低觀測FIX活性。對於最低觀測FIX活性低於1%之患者，基線FIX活性設為零；對於最低觀測FIX活性在1IU/dl與2IU/dl之間的患者，基線FIX活性設定為實際觀測FIX值。殘餘藥物遵循一級衰減加以衰減，其中衰減速率個別地加以測定。使用使用者規定且驗證之雙隔間模型分析藉由基線及殘餘藥物校正之FIX活性隨時間的概況。使用者規定碼使其他次級藥物動力學參數(例如1%及3%時間)之計算自動化，該等參數不 包括在WinNonlin文庫模式(PHOENIX® WinNonlin 6.2.1.51；Pharsight)之次級參數清單中，因此消除對手動處理超出初級分析之資料之需要且使引入人為誤差之風險最小。
rFIXFc之幾何平均終末半衰期為約82小時， 其比96-=小時樣品中之BENEFIX®之幾何平均終末半衰期(約34小時)長2.4倍(亦即2.43倍)(p<0.001)。在48小時取樣時，觀測到半衰期增加4.83倍。相較於rFIX，rFIXFc具有長2.39倍之平均滯留時間(MRT)，從而導致達到高於基線1IU/dL及3IU/dL之時間分別延長2.21倍及2.04倍(P<0.001)。可得到21名受試者在基線時與第26週之rFIXFc比較資料且其顯示任何PK參數皆無統計差異。表12顯示來自隊組1連續PK子組中之22名受試者的rFIXFc相對於rFIX之比較PK資料，其中對於單級凝結分析使用隔間模型。
如表12中所示，在rFIX與rFIXFc之間增量 回收率類似(P=0.713)。當使用96小時取樣時程時，相較於rFIX，在rFIXFc之後，終末FIX半衰期存在2.43倍增加(分別為82.1對33.8；P<0.001；參見表12及圖4)。 使用已用於顯示rFIX之普遍接受半衰期(約18小時)之傳統48小時取樣時程，rFIXFc相較於rFIX顯示半衰期增加4.84倍。相較於rFIX，rFIXFc之平均滯留時間(MRT：41.2對98.6小時；P<0.001)長2.39倍，從而導致達到高於基線1IU/dL之時間延長2.21倍(5.1日對11.2日； P<0.001)。rFIXFc達到1IU/dL(1%)FIX之時間及達到3IU/dL(3%)IU/dL之時間分別為11.2日及5.8日(參見表12及圖4)。個體內rFIXFc PK參數在基線與第26週之間相當，從而指示在歷經26週重複給藥之後，rFIXFc之PK概況為穩定的。
所有受試者皆進行初始PK評估以表徵 rFIXFc在B型血友病受試者之代表性群體中之PK。
在50IU/kg單次劑量之BENEFIX®，繼之以 50IU/kg單次劑量之rFIXFc之後，在基線時在每週防治隊組(隊組1)中之一子集的受試者中進行更廣泛PK取樣。歷經96小時之時期獲取BENEFIX®之血液樣品。接著歷經240小時之時期獲取rFIXFc之血液樣品。在26週重複對rFIXFc之PK評估。
基於1/2期研究之PK結果選擇100-IU/kg劑 量，該等結果顯示此劑量使FIX含量升高至正常值之約100%(Shapiro等人2011)。在用100IU/kg rFIXFc(n=5)之1/2期研究中，達到FIX含量高於基線1%之時間為約11日，且在9至14日之範圍內。基於此等資料，隊組2經設計以測試固定劑量100IU/kg是否可提供預防流血之保護超過一週。
rFIXFc導致中值ABR較低，在每週防治隊組 中為2.95，在個別化間隔防治隊組中為1.38。相反，陣發性治療隊組之ABR為17.69。
在個別化間隔防治隊組中，在研究之最後6 個月期間，中值給藥間隔為14日。
藉由單級凝結分析量測之rFIXFc之終末半衰 期(活性)為約82小時(82.1小時)且BENEFIX®為約34小時(33.8小時)。
總體而言，大於90%之出血事件藉由單次注 射得以控制。在100%之手術(對12名受試者進行之14個大手術)中，rFIXFc用於圍手術期管理之止血功效由治療醫師評定為優或良。
rFIXFc每週防治隊組及個別化間隔隊組之中 值ABR分別為2.95及1.38。
大於90%之出血事件用一次rFIXFc注射得以 解決。
在B-LONG中測定之BENEFIX®之約34小時 的終末半衰期長於BENEFIX®包裝插頁中報導之終末半衰期(約18小時)以及使用48小時取樣持續時間，遵循EMA關於FIX PK評估之指導方針之許多研究(Ewenstein,2002；Kisker等人，2003；Negrier等人，2011)中報導之終末半衰期(13.7小時至19.3小時)。然而，在對BENEFIX®取樣直至給藥後72小時之公開的PK研究中，亦報導較長終末半衰期為21.3小時至33.4小時(Ragni等人，2002，Lambert等人，2007，Chang等人，2007及Martinowitz等人，2012)。
為確定BENEFIX®之終末半衰期差異是否由此 研究中採用之較長96小時PK取樣時程所致，亦使用僅直至給藥後48小時之資料分析BENEFIX® PK資料。此分析產生顯著縮短之BENEFIX®終末半衰期(約17小時)，其與使用48小時取樣持續時間之先前報導一致。將BENEFIX®之比較資料之概述呈現於表12B中。
在B-LONG研究中，在rFIXFc與BENEFIX® 之間進行頭對頭比較，而在1/2期研究中，將rFIXFc之半衰期與BENEFIX®產品插頁(2009)中報導之歷史資料進行比較。根據B-LONG研究的rFIXFC超過BENEFIX®之PK改良之量度更可靠且更準確。
安全性
對rFIXFc的耐受良好且相對於當前照護標準物rFIX具有顯著改良PK。盡可能與治療相關來評估1起嚴重AE(阻塞性尿路病)；將該事件解決且受試者繼續處於研究中。在每週至雙週(每2週)給藥下所見之對出血之良好控制及低ABR表明此療法可實質上改良對急性出血之管理且顯著延長B型血友病中之防治性方案，藉此可能改良受試者依從性及結果。
為了偵測抑制劑(中和抗體)，在篩檢、基線及研究治療期間之各次就診時進行用以偵測中和抗體之Nijmegen-改進Bethesda分析以監測抑制劑之產生。在第一劑rFIXFc之後，在隊組1及2中在各次預定臨床就診 時在谷底進行抑制劑測試，其中谷底定義為在預定劑量之間最長間隔之後的點。在隊組3中在洗脫至少72小時(3日)之後進行抑制劑測試。對於進入隊組4之新患者，在篩檢時進行抑制劑測試且之後在預定手術之前4週內，用rFIXFc達成總計至少4個ED。形成抑制劑係定義為確認在2-4週內第二單獨抽取樣品中之中和抗體值0.6個Bethesda單位(BU)/ml。使用克洛珀-皮爾森二項式比例精確方法評價抑制劑發生率之置信區間。先前治療的FIX患者之臨床試驗中可接受之抑制劑風險允許50名患者中之1名在研究時經受抑制劑，其中各患者需要歷經50至75個ED進行至少兩個有效之抑制劑測試。
為了偵測非中和抗體(rFIXFc結合抗體)，在 與對抑制劑進行測試相同之時間點對結合於rFIXFc之非中和抗體(NNA)進行監測。採用橋接分析形式以偵測所有可能類別之抗體，其中在MSD儀器上讀取電化學發光讀數。若信號高於統計獲得之分割點且藉由過量rFIXFc產品之抑制作用加以確認，則樣品為陽性的。進一步表徵陽性樣品與rFIX或Fc之結合。對抑制劑陽性對照樣品之測試顯示此分析比Nijmegen-改進Bethesda分析靈敏約100倍。
研究經設計成包括50名ED50之受試者以 偵測抑制劑之風險。美國食品及藥物管理局(US Food and Drug Administration)對於充分證明先前經治療的FIX受試者之臨床試驗中之可接受抑制劑風險的指導允許50名受試者中之1名經受抑制劑，其中各受試者需要50個研究 治療ED。在臨床研究中之抑制劑之出現可使用二項式分佈加以充分模型化之假設下，若觀測到1例抑制劑形成，則50個ED將允許使用精確克洛珀-皮爾森方法獲得真實抑制劑發生率(0.05%-10.65%)之2側95%置信區間。在包括55名ED50之受試者及94名ED25之患者的任何研究受試者中皆未報導有死亡、過敏性反應、血栓形成事件或抑制劑產生。在研究中之任何受試者中皆未偵測到抑制劑(中和抗體)。在基線時在3名受試者中發現非中和抗體(NNA)之低陽性結果，其不影響rFIXFc之PK且全部3名受試者皆在研究期間恢復NNA陰性狀態。一名受試者在研究期間具有邊界陰性結果，且在研究結束時具有邊界陽性結果。rFIXFc清除率不受影響且NNA不與任何出血頻率提高及/或rFIXFc消耗量增高相關。AE之發生率在所有治療隊組間類似，其中報導隊組1中45名受試者(71.4%)、隊組2中23名受試者(79.3%)及隊組3中20名受試者(74.1%)之AE1。大多數AE係由研究者判斷為與治療無關或不太可能與治療相關。報導合併隊組1、2及3中119名受試者中之10名(8.4%)中的AE被判斷為可能與治療相關或與治療相關。在連續PK子組中未偵測到凝血活化標記物(F1+2、D-二聚體、凝血酶-抗凝血酶複合物)之可辨別趨勢，在任何隊組中亦未偵測到總IgG及子類含量之可辨別趨勢。
持久rFIXFc在B型血友病受試者中有效維持 圍手術期止血。由外科醫師及研究者對所進行之所有大手 術之圍手術期止血的高評定表明失血與對無血友病之受試者所預期之失血相當。
對於每週防治與較長間隔持續時間(例如每1- 2週)及/或較高谷底含量之個別化間隔防治兩者，本文揭示之結果顯示rFIXFc均提供對急性出血事件之有效控制且顯示有效防治。值得注意的是，個別化防治組(隊組2)中約50%受試者顯示給藥間隔2週。相較於rFIX，rFIXFc顯示PK概況得以實質上改良，從而允許防治性方案使用對受試者而言繁重性可為較小之較長給藥間隔。 rFIXFc之PK概況隨時間穩定。此等結果顯示rFIXFc在其類別中為第一持久重組因子IX療法，其可提供治療朝向較不頻繁之注射轉移且仍提供對出血之長久防禦，藉此促進對防治之依從性增加及B型血友病受試者中之結果改良。
為確保實驗室分析之一致性，將一個中心實 驗室用於各類型之分析。在LabCorp(Cranford,NJ,USA)進行臨床安全性樣品之分析及中心樣品管理。在LabCorp(Englewood,CO,USA)進行FIX活性及抑制劑分析。在皮基特海峽血液中心止血實驗室(Hemostasis Lab,Puget Sound Blood Center)(Seattle,WA,USA)對樣品之基因型進行確定。ICON Development Solutions(Whitesboro,NY,USA)分析FIX抗原及非中和抗體(NNA)樣品，且Chimera Biotech GmbH(Dortmund,Germany)分析rFIXFc濃縮樣品。
當所有以下預定準則皆滿足時，可早期終結 研究：
1)隊組1中之連續藥物動力學子組中13名患者完成藥物動力學取樣以充分估計貝賦在基線時之終末半衰期及rFIXFc在基線及第26週時之終末半衰期。
2)來自任何治療隊組之53名患者皆完成至少50個rFIXFc ED。
3)來自隊組2之20名患者及來自隊組3之16名患者完成至少26(±1)週研究。
4)來自任何治療隊組之73名患者皆完成至少50個rFIXFc ED且經受抑制劑測試；或53名患者完成至少50個ED且經受抑制劑測試，其中如藉由再測試所確認，至多1名患者具有陽性抑制劑；或34名患者完成至少50個ED且經受抑制劑測試，其中如藉由再測試所確認，無患者具有陽性抑制劑。
5)在至少5名患者中進行約10個大手術且完成手術後隨訪。
當所有此等準則皆已滿足時，所有進行中之患者皆被要求返回診所以完成研究評估。
對生活品質之影響
使用血友病特定生活品質測定儀器HAEM-A-QoL量測生活品質。在防治性治療隊組中之成人(18歲及18歲以上)中進行HAEM-A-QoL。將根據研究前方案合併之防治隊組中之在第26週時自基線的變化概述於表13中。
在研究之最後6個月期間，個別化間隔防治隊組中之中值給藥間隔為14日。
出血之控制：超過90%(90.4%)出血事件藉由單次注射rFIXFc得以控制。
圍手術期管理：治療醫師將rFIXFc在100%手術中之止血功效評定為優或良。
報導用常規防治或陣發性(按需)療法治療之119名受試者中之10名(8.4%)有不利藥物反應(ADR)。不利藥物反應被視為由研究者評估為與rFIXFc治療相關或可能與rFIXFc治療相關之不利事件。將不利藥物反應概 述於表14A及14B中。
不利事件之發生率在全部治療隊組間類似， 其中報導隊組1中45名患者(71.4%)、隊組2中23名患者(79.3%)及隊組3中20名患者(74.1%)有至少一起不利事件。大多數由研究者判斷為與治療無關或不可能與治療相關。在合併隊組1、2及3中119名患者中之10名(8.4%)中報導被判斷為與治療相關或可能與治療相關之不利事件。由研究者判斷為可能與治療相關之一起嚴重不利事件為一例集尿系統阻塞性凝塊，其用水合作用解決且患者繼續研究治療。在研究中不存在對過敏、過敏症或血栓形成事件之報導，且不存在死亡。凝血活化標記物(F1+2、D-二聚體、凝血酶-抗凝血酶複合物)或總IgG及子類含量不存在有臨床意義之變化。
無受試者由於不利藥物反應而退出研究。在研究中，未偵測到抑制劑且未報導過敏事件。
對rFIXFc之耐受性良好，其中無新抗原性跡象，且不利事件與血友病群體中所預期之不利事件一致。值得注意的是，此研究中之高順應率(96.6%)及相應高研究完成率(93.5%)進一步支持rFIXFc之可耐受性。已報導天然B型血友病群體中之抑制劑之風險高達3%。參見Tandra A及Shapiro AD(2010),Lee CA,Berntorp E,Hoots WK編，Textbook of hemophilia，第2版Hoboken,NJ：Wiley-Blackwell；及DiMichele D.(2007)Br J Haematol 138：305-15。患者通常在外源性FIX替代療法之前50個 ED內產生抑制劑(參見Dimichele D.(2002)Haemophilia 8：280-287)，此支持研究準則之結束。B-LONG包括總計5144個ED(117.1個患者暴露年)，其中55名患者具有50個ED，且在任何患者中皆未偵測到抑制劑。在此研究中，在篩檢及基線時在小比例患者(3%)中觀測到低效價NNA，且在rFIXFc治療期間在四個病例中之三者中變成陰性。在此研究中觀測之低效價NNA對rFIXFc藥物動力學或出血率不具有可辨別之影響。
實例5. rFIXFc之群體藥物動力學在B型血友病受試者之常規防治、出血控制及圍手術期管理中之臨床意義
背景：基於經驗實務及臨床結果充分確定因 子IX(FIX)在治療B型血友病中之臨床給藥。因為FIX活性之藥物動力學(PK)為替代性功效標記，所以吾人利用群體PK(popPK)模型化及模擬來評價長效重組FIX Fc融合蛋白(rFIXFc)之給藥方案。藉由3隔間模型最佳地描述12歲受試者(體重(BW)：45-186.7kg)中之來自135個單次劑量及21個重複劑量概況之rFIXFc PK，該模型顯示清除率(CL)之適度受試者間可變性(IIV)17.7%及中心隔間體積(V1)之適度受試者間可變性21.7%。比例殘餘誤差10.6%近似於FIX活性之單級凝結分析之可變性。顯示與rFIXFc PK之微弱關聯之唯一共變數為BW，其佔CL及V1之IIV之約3%，從而表明BW非依賴性rFIXFc平坦給藥可對治療成人B型血友病受試者可行。
目的：為模擬用於B型血友病群體中之常規 防治、出血控制及圍手術期管理之基於BW且平坦的給藥方案。
方法：將包括情形間可變性及作為CL及V1 之共變數之BW的經驗證3隔室popPK模型用於給藥模擬。對於基於BW之給藥方案，模擬1000名受試者之PK概況，其中BW分佈代表3期研究。使用冪函數Z=BW-0.5模擬BW分佈。產生之BW(1000個值)分佈具有中值74.9kg及38.9kg至172.6kg之範圍，此類似於吾人之研究(中值73.3kg；最小及最大，45kg及186.7kg)。對於固定給藥方案，基於低(第10個百分位數)、典型(第10個-第90個百分位數)及高(第90個百分位數)BW對三個 群體(n各自等於1000)分層。將暴露參數之可變性、維持目標Cmax及谷底之群體之百分比、及極端BW組中之中值暴露參數之偏差與基於BW且平坦之給藥方案進行比較。為模擬防治方案中之穩態，將六個劑量用於所有給藥方案(每週一次、每10日或每14日)，其中各給藥間隔被指定為一個情形。為模擬陣發性治療之後的PK概況，應用單次劑量。
結果：與3期研究之觀測結果一致，每週一 次50IU/kg或每10-14日100IU/kg之popPK模擬預測在群體中之大多數中，FIX峰值活性在生理範圍內(Cmax<150%)且谷底1%。所有模擬方案皆預測群體中之大多數將維持谷底活性處於或高於1%(表15)。
將顯示穩態FIX活性相對於時間之群體模擬 之圖顯示於圖13中。表16顯示對以下兩個給藥方案預測之歷經14日之過程的穩態FIX活性：每週50IU/kg及每14日100IU/kg。
此外，基於BW且平坦之給藥產生與相當暴 露參數相當之PK概況，例如每週一次50IU/kg及4000IU預測中值(第5、第95個百分位數)Cmax分別為52.6(32.1,89.3)IU/dL及56.1(36.2,90.9)IU/dL。兩種給藥方案均預測群體中>95%維持Cmax<150%及谷底1%(圖14)。然而，基於BW且平坦之給藥顯示在極端(第10或第90個百分位數)BW群體中，對暴露參數具有差異影響。此表明BW非依賴性平坦給藥可對12歲及12歲以上之患者可行。
將popPK模型用於模擬陣發性治療之給藥方 案。模型預測對於出血事件之控制，50IU/kg或100IU/kg單次劑量之rFIXFc足以將血漿FIX峰值活性程度維持在如由世界血友病聯盟(World Federation of Hemophilia，WFH)指導方針推薦之40IU/dL至80IU/dL(表17)。
對12個大手術及2個小手術之分析發現在圍 手術期時期期間量測之FIX活性基本上與由基於受試者之手術前基線PK之popPK進行之預測一致，從而指示在此等手術中無實質性因子消耗。將觀測及預測之圍手術期FIX活性之代表圖顯示於圖12中。比較在首個rFIXFc手術劑量之後前21日內之模擬FIX活性與觀測之FIX活性(n=14；12個大手術，2個小手術)。在觀測FIX活性資料與由PK模型預測之FIX活性資料之間存在良好關聯(相對預測誤差[95% CI]，0.332%[-2.08%,1.42%])。
結論：popPK提供一種評價潛在給藥方案之 強健且有效的手段。藉由popPK模擬對rFIXFc進行之預測確證3期研究之結果。對rFIXFc之基於BW且平坦之給藥之模擬達成類似PK概況。考慮到因子替代療法之廣泛治療範圍，對rFIXFc及rFIX產品進行平坦給藥可為一 種在成人B型血友病受試者中潛在可行之准許其他臨床研究的方法。此外，在使用群體PK模型下，可行的是產生一般性給藥指導來達成對B型血友病患者之圍手術期管理推薦之目標FIX含量。
實例6.對長效重組因子IX-Fc融合蛋白(rFIXFc)在嚴重B型血友病受試者中之群體藥物動力學分析
背景：產生群體藥物動力學(PK)模型以瞭解劑量需求(共變數)可變性之來源且必要時幫助使給藥方案個別化。使用給藥史及受試者特異性資料以獲得對藥物配置之瞭解以辨別可為PK參數之預測因素之特定人口資料及/或臨床因素。藉由表徵長效FIX-Fc(rFIXFc)在嚴重B型血友病(血漿FIX活性2IU/dL)受試者中之群體PK(popPK)，可建立rFIXFc之估計群體PK參數模型。此模型可幫助希望對PK樣品稀少之個別受試者定製給藥之醫師。
方法：納入來自上述1/2a期研究(n=12)及3期研究(B-LONG，n=123)之男性嚴重B型血友病受試者。受試者之年齡在12歲至76歲之範圍內且體重在45kg至186kg之範圍內。模型化資料集包括在第1週時之135個基線PK概況以及在第26週時之21個重複PK概況，其中有總計1400個量測FIX活性記錄。使用119名受試者之1027個谷底/峰值FIX活性記錄驗證最終群體PK模型。
在popPK分析中，藉由單級(活化部分凝血激素時間)凝結分析量測血漿FIX活性。使用下式計算校正FIX活性：經校正之FIX活性=量測FIX活性-基線-殘餘衰減。
基線FIX活性係定義為在篩檢時、給藥前、給藥後記錄或來自歷史臨床記錄之最低活性程度(LLACT)。當基線等於0時，LLACT小於1%(定量下限)。當基線FIX活性等於LLACT時，LLACT大於或等於1%且小於或等於2%。
研究前殘餘衰減係使用自對個別資料之非隔室分析獲得之終末半衰期，藉由下式來進行：殘餘衰減=(給藥前-基線)×e-衰減速率×時間。
為產生popPK模型，使用第1.0版NONMEM VII(ICON Development Solutions,Ellicott City,Maryland)。將模型化及鑒定步驟呈現於下表20中。
使用用相互作用方法進行之一級條件性估計 (FOCEI)以估計popPK參數。以組合比例誤差與相加誤差之形式對殘餘誤差進行模型化。進行逐步向前添加(p<0.005)及向後消除(p<0.001)共變數模型化。此分析中評估之潛在共變數包括：體重(BW)、年齡、種族、血型、人類免疫缺陷病毒狀態、C型肝炎病毒狀態、血球比容、IgG1及白蛋白濃度、及FIX基因型。
模型鑒定包括拔靴重抽、視覺預測檢查(VPC) 及用谷底/峰值記錄驗證。平均相對預測誤差(準確度之指標)計算為：
結果：rFIXFc配置由三隔室基礎模型加以最 佳描述(圖5)。該模型藉由包括CL及V1在不同情形之受試者內隨機變化(亦即情形間可變性IOV)而進一步改良(圖6)。IOV小於受試者間可變性(IIV)，從而指示個別PK比平均popPK更準確地預測個別PK。
發現體重為rFIXFc配置之有效共變數(圖 7)，但BW之影響有限。舉例而言，CL及V1之BW指數分別為0.436及0.396，且納入BW僅使CL與V1兩者之受試者間可變性(IIV)分別降低3.4%及2.5%。包括年齡、種族、血型或基因型之其他評估共變數皆不為此模型中之有效共變數。
將最終popPK模型概述於下表21中。
對於典型73kg受試者，清除率、中心隔室體 積及穩態分佈體積之預測popPK值分別為2.39dL/h、71.4dL及198dL。擬合優度圖顯示藉由模型產生之預測popPK資料嚴格模擬觀測FIX活性資料(圖8)。
使用觀測FIX活性資料驗證popPK模型之結 果。觀測及預測之FIX活性時間概況的中值及80%間隔幾乎重疊，從而指示最終模型能夠重現觀測FIX活性資料在時間尺度上之集中趨勢及可變性(圖9)。谷底/峰值資料集中之觀測FIX活性與預測FIX活性之間的強關聯表明最終popPK模型具有預測性(圖10)。
最後，總相對預測誤差為-3.23%，其中95% 置信區間為-5.27%至-1.23%。此popPK分析之事後估計值極類似於在下表22中所示之習知PK分析之結果。
結論：三隔室popPK模型預測具有適度受試 者間可變性(IIV)之rFIXFc配置。由三隔室popPK模型產生之個別PK參數類似於由兩隔室習知PK分析產生之個別PK參數，從而指示第3隔室之貢獻有限。對於典型73kg受試者，popPK模型預測清除率為2.39dL/h；中心隔室體積為71.4dL；且穩態分佈體積為198dL。popPK模型中評估之唯一有效共變數為BW，但其對rFIXFc PK可變性之影響有限。
最終popPK模型可用於模擬常規防治、控制及預防出血事件、以及圍手術期管理之給藥方案及間隔。此模型可幫助希望對PK樣品稀少之個別受試者定製給藥之醫師。
實例7.小兒研究 研究設計
描述用以評價rFIXFc控制及預防先前經治療之嚴重B型血友病(內源性FIX活性2IU/dL[2%])兒童 (<12歲)之出血之安全性、PK及功效的3期開放標籤多中心小兒研究。
招募約26名B型血友病兒童。此小兒的先前 經治療受試者(PTP)研究之合格性準則要求兒童對FIX產品之先前記錄暴露日(ED)已50，在同意時重量13kg，且當前不具有FIX產品之抑制劑或不具有FIX產品之抑制劑之歷史。治療方案係用於防治(參見圖11中所示之研究設計)。將在起始用rFIXFc進行防治性治療之前在參與者中對FIX及rFIXFc進行PK分析。
主要及次要結果量度將包括抑制劑產生頻率 (用於主要結果量度)及年度出血事件數目及/或對用rFIXFc治療出血事件之反應(用於次要結果量度)。
亦將評估rFIXFc在先前未治療受試者(PUP) 中之安全性及功效，先前未治療受試者由歐洲藥品管理局(European Medicines Agency)定義為先前未暴露於任何因子產品之受試者。小兒PTP及PUP研究之結果將提供對rFIXFc治療兒童血友病之臨床安全性及止血參數之進一步瞭解。
期中分析
用因子IX(FIX)進行防治為對B型血友病患者之最佳治療；然而，由於當前可用FIX產品之半衰期較短，所以可能需要頻繁注射以預防出血事件。為延長半衰期且降低注射頻率，開發由共價連接於免疫球蛋白G1 (IgG1)之Fc域之一個rFIX分子組成的持久重組FIX Fc融合蛋白(rFIXFc)。在成人及青少年中進行之3期研究中，相較於FIX(BeneFIX®)，rFIXFc之半衰期增加2.43倍且清除率(CL)降低50%(J Thromb Haemost.2013；11[2]：241)。設計孩童B-LONG研究(NCT01440946)以評價在患有B型血友病之先前經治療的小兒受試者中rFIXFc防治之藥物動力學(PK)、安全性及功效。此計劃期中分析之目標在於測定rFIXFc在孩童B-LONG中招募之受試者中之PK參數且將此等參數與其研究前FIX PK參數進行比較。
方法：此多中心開放標籤3期研究當前正招 募患有嚴重B型血友病(2IU/dL內源性FIX)、對FIX產品之暴露日(ED)為至少50且無FIX之抑制劑之年齡<12歲的先前經治療的受試者。將受試者層化成兩個年齡組(<6歲及6歲至<12歲)。向所有受試者皆投與50-60IU/kg rFIXFc之每週防治性方案，其中基於PK資料及出血頻率調整後續劑量及間隔。受試者將繼續治療直至其達成50個ED為止。主要終點為發生抑制劑形成。進行連續PK分析以比較rFIXFc之PK參數與研究前FIX產品之PK參數。研究前FIX之PK取樣發生在第一劑FIX(50IU/kg)之前之基線時及在直至48小時之5個其他時間點。 rFIXFc之PK取樣發生在第一劑50IU/kg rFIXFc之前及在第一劑之後直至168小時之7個其他時間點時；在第一劑研究前FIX與第一劑rFIXFc兩者之前均需要96小時之洗脫時期。使用相對於市售FIX血漿標準物校正之單級凝 結分析量測血漿FIX活性，且使用PK資料分析軟體PHOENIXTM WinNonlin 6.2.1.51，藉由非隔室分析(NCA)來分析FIX活性隨時間之概況。將截止日期為2013年4月23日之資料用於報導此期中分析中之PK資料。
結果：在此期中分析時，招募24名受試者且 其已接受至少一劑研究前FIX及/或rFIXFc。在PK概況可評價之18名受試者中，15名具有研究前FIX(BENEFIX®、HAEMOSOLVEX®或ALPHANINE®)與rFIXFc兩者之完全PK概況。將兩個年齡組之rFIXFc相對於FIX之PK參數比較呈現於表23中。相較於FIX產品，rFIXFc之半衰期延長超過3倍且CL降低超過60%。
結論：相較於當前可用之FIX產品，rFIXFc 在小兒受試者中具有延長之半衰期及降低之CL，此類似於先前在成人及青少年中之觀測結果。對孩童B-LONG研究之最終分析將提供進一步PK資訊且評價rFIXFc在兒童中之安全性及功效。
實例8.使用rFIXFc之群體藥物動力學模型來模擬或估計個別化及中值患者治療資訊
如實例5及6中所論述，已建立rFIXFc之估計群體PK參數之模型，其可幫助希望對例如PK樣品稀少之個別受試者定製給藥之醫師及其他保健從業者。或者，模型可用於基於整個群體之PK資料(中值PK)確定給藥。
因此，可使用Bayesian估計(或類似機器學習演算法)，基於以上實例6中所述之群體藥物動力學(popPK)模型(例如表21)來選擇例如藥物動力學(PK)及給藥方案之個別化患者治療。以此方式，可確定用於圍手術期管理之先前尚未在B-LONG試驗中研究之替代性防治性給藥方案及最佳化給藥方案。或者，所選給藥方案係基於群體PK(中值PK)而非進行個別化選擇。
在一些實施例中，在不採用Bayesian或類似機器學習演算法下使用實例6之rFIXFc popPK模型(例如表21)。
在本發明之此態樣之一些實施例中，在基於 電腦之系統，例如伺服器、台式電腦、膝上電腦、數位板、手持式裝置或智慧型電話上執行方法。在一些實施例中，基於電腦之系統為電腦應用程式。基於電腦之系統包括用於實例6中論述之rFIXFc popPK模型(例如表21之參數)之儲存媒體。在一些實施例中，儲存媒體亦可含有Bayesian估計程式，例如NONMEM或Phoenix NLME。 例如實例6；Kiang等人，Clin.Pharmacokinet 51：515-525(2012)。
在一些實施例中，系統包含兩個或兩個以上 基於電腦之系統。在一些實施例中，使用者可將資訊輸入與第二個基於電腦之系統通訊的第一個基於電腦之系統中，且該第二個基於電腦之系統進行計算且將輸出資訊通訊至該第一個基於電腦之系統。此輸出資訊可包括關於個別化或非個別化給藥方案之推薦。
在一些實施例中，使用者將資訊輸入系統中 且系統計算且輸出一或多種PK或給藥方案。在一些實施例中，系統使用所接收之資訊來計算且輸出個別化或中值PK資訊。在一些實施例中，系統計算個別化給藥或間隔資訊。
可由使用者輸入且由系統接收之資訊包括患 者資訊及所要治療結果資訊。基於所接收之資訊之類型及值，基於電腦之系統基於儲存媒體上之rFIXFc popPK模型及視情況選用之機器學習演算法來計算輸出資訊。
患者資訊包括例如年齡、體重、診斷性(基線) FIX含量、PK測定值、PK取樣時間、給藥史(若PK樣本取自多次劑量)、實際劑量、FIX活性程度等。
所要治療結果資訊包括所要PK或所要方案結 果，例如在劑量之後血漿FIX活性程度之所要升高、所要給藥間隔及所要劑量。
基於輸入且由系統接收之資訊，系統可輸出 各種資訊，例如PK曲線、PK參數，諸如增量回收率(Cmax/劑)、平均滯留時間、終末t1/2、清除率、Vss、AUC/劑、劑量及相關谷底、以及間隔及相關谷底。
舉例而言，對於評估個別化患者PK，系統可 推薦使用者輸入2-3個最佳化PK取樣時間點。在此情況下，系統輸出可包括PK曲線及一或多種所選PK參數，例如增量回收率(Cmax/劑)、平均滯留時間、終末t1/2、清除率、Vss、AUC及達到1%或X%之時間等。例如圖15。
作為其他實例，為使用先前段落中論述之輸 出的個別PK參數選擇個別化給藥方案，(i)選擇用於急性治療之劑量可基於使用者輸入的在劑量之後血漿FIX活性程度之所要升高，(ii)選擇用於防治之劑量可基於使用者輸入的所要給藥間隔，或(iii)選擇用於防治之間隔可基於使用者輸入的所要劑量。在第一種情況下，系統可輸出基於患者之增量回收率之劑量(IU)。例如圖16。在第二種情況下，系統輸出可為劑量及相關谷底(例如x IU/kg、1%谷底、y IU/kg、2%谷底等)之表。例如圖17上部。在第三 種情況下，系統輸出可為間隔及相關谷底(例如x日、1%谷底、y IU/kg、2%谷底等)之表，例如圖17底部。
使用者可能希望在不輸入任何個別化PK資料 下使用系統。在此情況下，給藥輸出將基於群體中值而非針對特定患者進行個別化。例如圖18。以此方式，使用者輸入例如體重及年齡，及(i)在劑量之後血漿FIX活性程度之所要升高，(ii)用於防治之所要劑量間隔，或(iii)用於防治之所要劑量。在第一種情況下，系統可輸出劑量。在第二種情況下，系統可輸出劑量及相關谷底。例如表16。在第三種情況下，系統可輸出間隔及相關谷底。例如表16。
可輸入年齡以確定系統是否適於患者，因為 當前popPK模型版本係針對12歲及12歲以上患者所建立。
在一些實施例中，系統遵從患者隱私法律。 在一些實施例中，系統係例如用SSL加密。在一些實施例中，匿名產生所輸入之患者資訊。
在一些實施例中，系統包括使用者幫助功能。
使用者可為例如醫師、護士或另一保健從業者。
在一些實施例中，方法進一步包括基於系統之輸出資訊選擇給藥方案及根據所選方案向患者投與rFIXFc。
實例9.在用rFIXFc治療之嚴重B型血友病患者中在目標FIX活性程度下出血趨勢與時間之關聯
在血友病患者中用凝血因子替代進行防治性治療之目標已在於使定義為內源性因子活性程度<1%之嚴重血友病轉變成中度(1%至5%)及輕度(5%至40%)疾病。在1% FVIII活性下花費之時間增加可與嚴重A型血友病患者之總出血事件及關節積血增加相關。迄今為止尚未記錄嚴重B型血友病患者之FIX活性之此關聯。吾人在本文中報導近來完成之3期B-LONG研究之相對於FIX活性對出血趨勢的分析。B-LONG研究評價重組FIX Fc融合蛋白(rFIXFc)在嚴重B型血友病患者中之藥物動力學(PK)、安全性及功效。簡言之，B-LONG研究具有4個治療隊組：每週防治、定製防治、陣發性治療及圍手術期管理。前3個治療隊組之相應中值年度出血率分別為2.95、1.38及17.69。
方法：基於來自1/2a期研究之12名受試者及來自B-LONG之123名受試者(>12歲)之歷經52週治療收集之活性-時間概況來產生rFIXFc之3隔室群體PK模型。接著推導個別事後PK參數以構築B-LONG中之受試者之歷經研究過程投與的各劑量之連續FIX活性-時間概況。計算研究中各受試者在目標1%、3%及5% FIX含量下之累積時間且校正以獲得在各別目標FIX含量下之年度時間。使用負二項式回歸模型以評價B-LONG中之所有受 試者在1%、3%及5% FIX活性下之出血事件(總體、自發性、創傷性及關節)數目與年度時間(日)之間的關聯。針對年齡、身體質量指數、基線HIV及HCV狀態、FIX基因型、在進入研究之前12個月中之出血事件數目、及各受試者進行研究之時間來調整模型。
結果：在1% FIX活性下，多變數負二項式回 歸分析估計總體出血事件隨花費時間增加而增加(p<0.001)。然而，關聯基本上由陣發性治療之受試者推動。與分別每週防治或定製防治之受試者之中值0日相反，陣發性治療之受試者在1%下之中值年度時間為171日，因為定製PK推動之給藥方案經設計以維持高於1%之目標谷底。關聯與出血事件之分佈一致，在陣發性治療之受試者中，大部分出血事件發生在處於1%下之預測FIX活性程度下。因為預測FIX谷底含量在防治之受試者中之分佈基本上在1%至5%之範圍內，所以在3%及5%下持續累積時間來重複分析。兩個分析均發現在低於增加之各別FIX活性程度下，預測出血事件隨花費時間而統計上顯著增加(圖20及圖21)。亦觀測到單獨分析之自發性出血、創傷性出血或關節出血在全部3個目標FIX活性程度下之顯著關聯。當在臨限間比較(1%對3%對5%)時，預測之出血率隨谷底提高而顯著降低且預測之無出血可能性隨谷底提高而改良。另外，在各別目標谷底(1%、3%或5%)下，關節出血之幾率隨花費時間增加而顯著增加。
結論：此為證明在用rFIXFc治療之青少年及 成人受試者中，在目標治療性FIX活性程度(1%、3%或5%)下花費之時間增加與出血趨勢增加以及無出血可能性降低之間存在關聯的首個研究。基於FIX活性之群體PK模擬，此等發現確認最小治療臨限1%之重要性且為嚴重B型血友病患者建立防治性給藥方案提供額外支持。
實施例
E1.一種醫藥組合物，其包含：(a)長效因子IX多肽；(b)包含蔗糖及甘露糖醇之碳水化合物混合物；(c)氯化鈉(NaCl)；(d)L-組胺酸；及(e)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E2.如實施例E1之醫藥組合物，其包含約1%(w/v)至約2%(w/v)蔗糖。
E3.如實施例E2之醫藥組合物，其包含約1.2%(w/v)蔗糖。
E4.如實施例E2之醫藥組合物，其包含約1.7%(w/v)蔗糖。
E5.如實施例E1之醫藥組合物，其包含約10mg/ml至約20mg/ml蔗糖。
E6.如實施例E5之醫藥組合物，其包含約11.9mg/ml蔗糖。
E7.如實施例E5之醫藥組合物，其包含約16.7 mg/ml蔗糖。
E8.如實施例E1至E7中任一者之醫藥組合物，其包含約2%(w/v)至約4%(w/v)甘露糖醇。
E9.如實施例E8之醫藥組合物，其包含約2.4%(w/v)甘露糖醇。
E10.如實施例E8之醫藥組合物，其包含約3.3%(w/v)甘露糖醇。
E11.如實施例E1至E7中任一者之醫藥組合物，其包含約20mg/ml至約40mg/ml甘露糖醇。
E12.如實施例E11之醫藥組合物，其包含約23.8mg/ml甘露糖醇。
E13.如實施例E11之醫藥組合物，其包含約33.3mg/ml甘露糖醇。
E14.如實施例E1之醫藥組合物，其包含約1.0%至約2.0%蔗糖及約2.0%(w/v)至約4.0%(w/v)甘露糖醇。
E15.如實施例E14之醫藥組合物，其包含約1.2%(w/v)蔗糖及約2.4%(w/v)甘露糖醇。
E16.如實施例E14之醫藥組合物，其包含約1.7%(w/v)蔗糖及約3.3%(w/v)甘露糖醇。
E17.如實施例E1之醫藥組合物，其包含約10mg/ml至約20mg/ml蔗糖及約20mg/ml至約40mg/ml甘露糖醇。
E18.如實施例E17之醫藥組合物，其包含約 11.9mg/ml蔗糖及約23.8mg/ml甘露糖醇。
E19.如實施例E17之醫藥組合物，其包含約 16.7mg/ml蔗糖及約33.3mg/ml甘露糖醇。
E20.如實施例E1至E19中任一者之醫藥組合 物，其包含約50mM與約60mM之間的NaCl。
E21.如實施例E20之醫藥組合物，其包含約 55.6mM NaCl。
E22.如實施例E1至E19中任一者之醫藥組合 物，其包含約3mg/ml與約4mg/ml之間的NaCl。
E23.如實施例E22之醫藥組合物，其包含約 3.25mg/ml NaCl。
E24.如實施例E1至E23中任一者之醫藥組合 物，其包含約20mM與約40mM之間的L-組胺酸。
E25.如實施例E24之醫藥組合物，其包含約 25mM L-組胺酸。
E26.如實施例E24之醫藥組合物，其包含約 35mM L-組胺酸。
E27.如實施例E1至E23中任一者之醫藥組合 物，其包含約3mg/ml與約6mg/ml之間的L-組胺酸。
E28.如實施例E27之醫藥組合物，其包含約 3.88mg/ml L-組胺酸。
E29.如實施例E27之醫藥組合物，其包含約 5.43mg/ml L-組胺酸。
E30.如實施例E1至E29中任一者之醫藥組合 物，其包含約0.008%(w/v)與約0.020%(w/v)之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E31.如實施例E30之醫藥組合物，其包含約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E32.如實施例E30之醫藥組合物，其包含約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E33.如實施例E1至E29中任一者之醫藥組合物，其包含約0.08mg/ml與約0.2mg/ml之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E34.如實施例E33之醫藥組合物，其包含約0.10% mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E35.如實施例E33之醫藥組合物，其包含約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E36.如實施例E1至E35中任一者之醫藥組合物，其中該長效FIX多肽包含與FcRn結合搭配物融合之人類FIX。
E37.如實施例E36之醫藥組合物，其中該長效FIX多肽包含含有與SEQ ID NO：2之胺基酸1至642至少90%、至少95%或100%一致之胺基酸序列的第一次單元、及含有與SEQ ID NO：4之胺基酸1至227至少90%至95%一致之胺基酸序列的第二次單元。
E38.如實施例E1至E37中任一者之醫藥組合物，其包含濃度在約25IU/ml與約1200IU/ml之間的該長效FIX多肽。
E39.如實施例E38之醫藥組合物，其包含50IU/ml、100IU/ml、200IU/ml、400IU/ml或600IU/ml該長效FIX多肽。
E40.如實施例E39之醫藥組合物，其包含50IU/ml、100IU/ml、200IU/ml或400IU/ml該長效FIX多肽。
E41.如實施例E39之醫藥組合物，其包含600IU/ml該長效FIX多肽。
E42.如實施例E1之醫藥組合物，其包含：(a)約25IU/ml與約700IU/ml之間的該長效FIX多肽；(b)約1%(w/v)與約2%(w/v)之間的蔗糖；(c)約2%(w/v)與約4%(w/v)之間的甘露糖醇；(d)約50mM與約60mM之間的NaCl；(e)約20mM與約40mM之間的L-組胺酸；及(f)約0.008%(w/v)與約0.015%之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E43.如實施例E42之醫藥組合物，其包含：(a)約50IU/ml該長效FIX多肽；(b)約1.2%(w/v)蔗糖；(c)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(d)約55.6mM NaCl；(e)約25mM L-組胺酸；及(f)約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E44.如實施例E42之醫藥組合物，其包含：(a)約100IU/ml該長效FIX多肽；(b)約1.2%(w/v)蔗糖；(c)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(d)約55.6mM NaCl；(e)約25mM L-組胺酸；及(f)約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E45.如實施例E42之醫藥組合物，其包含：(a)約200IU/ml該長效FIX多肽；(b)約1.2%(w/v)蔗糖；(c)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(d)約55.6mM NaCl；(e)約25mM L-組胺酸；及(f)約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E46.如實施例E42之醫藥組合物，其包含：(a)約400IU/ml該長效FIX多肽；(b)約1.2%(w/v)蔗糖；(c)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(d)約55.6mM NaCl；(e)約25mM L-組胺酸；及(f)約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E47.如實施例E42之醫藥組合物，其包含：(a)約600IU/ml該長效FIX多肽；(b)約1.7%(w/v)蔗糖； (c)約3.3%(w/v)甘露糖醇；(d)約55.6mM NaCl；(e)約35mM L-組胺酸；及(f)約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E48.如實施例E1之醫藥組合物，其包含：(a)約25IU/ml與約700IU/ml之間的該長效FIX多肽；(b)約10mg/ml與約20mg/ml之間的蔗糖；(c)約20mg/ml與約40mg/ml之間的甘露糖醇；(d)約3mg/ml與約4mg/ml之間的NaCl；(e)約3mg/ml與約6mg/ml之間的L-組胺酸；及(f)約0.08mg/ml與約0.15mg/ml之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E49.如實施例E48之醫藥組合物，其包含：(a)約50IU/ml該長效FIX多肽；(b)約11.9mg/ml蔗糖；(c)約23.8mg/ml甘露糖醇；(d)約3.25mg/ml NaCl；(e)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(f)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E50.如實施例E48之醫藥組合物，其包含：(a)約100IU/ml該長效FIX多肽；(b)約11.9mg/ml蔗糖；(c)約23.8mg/ml甘露糖醇； (d)約3.25mg/ml NaCl；(e)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(f)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E51.如實施例E48之醫藥組合物，其包含：(a)約200IU/ml該長效FIX多肽；(b)約11.9mg/ml蔗糖；(c)約23.8mg/ml甘露糖醇；(d)約3.25mg/ml NaCl；(e)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(f)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E52.如實施例E48之醫藥組合物，其包含：(a)約400IU/ml該長效FIX多肽；(b)約11.9mg/ml蔗糖；(c)約23.8mg/ml甘露糖醇；(d)約3.25mg/ml NaCl；(e)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(f)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E53.如實施例E48之醫藥組合物，其包含：(a)約600IU/ml該長效FIX多肽；(b)約16.7mg/ml蔗糖；(c)約33.3mg/ml甘露糖醇；(d)約3.25mg/ml NaCl；(e)約5.43mg/ml L-組胺酸；及(f)約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E54.一種醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)長效FIX多肽，(ii)蔗糖；(iii)甘露糖醇；(iv)L-組胺酸；及(v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含欲與該第一容器之該凍乾散劑組合之0.325%(w/v)NaCl的第二容器。
E55.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約250IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約50IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及 (vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E56.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約500IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約100IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及(vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E57.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約1000IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及 (b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約200IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及(vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E58.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約2000IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約400IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及 (vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E59.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約3000IU該長效FIX多肽，(ii)約83.3mg蔗糖；(iii)約167mg甘露糖醇；(iv)約27.2mg L-組胺酸；及(v)約0.7mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約600IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約1.7%(w/v)蔗糖；(iii)約3.3%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約35mM L-組胺酸；及(vi)約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E60.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約250IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及 (b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約50IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E61.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約500IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約100IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mg/ml L-組胺酸；及 (vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E62.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約1000IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約200IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E63.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約2000IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及 (b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約400IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E64.如實施例E54之醫藥套組，其包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約3000IU該長效FIX多肽，(ii)約83.3mg蔗糖；(iii)約167mg甘露糖醇；(iv)約27.2mg L-組胺酸；及(v)約0.7mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約600IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約16.7mg/ml蔗糖；(iii)約33.3mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約5.43mg/ml L-組胺酸；及 (vi)約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
E65.如實施例E54至E64中任一者之套組，其中該第一容器為包括橡膠塞之玻璃小瓶。
E66.如實施例E54至E65中任一者之套組，其中該第二容器為注射器主體，且其中該注射器主體伴有柱塞。
E67.如實施例E66之套組，其進一步包含括該玻璃小瓶連接於該注射器主體之接頭。
E68.如實施例E66或實施例E67之套組，其進一步包括適於靜脈內輸注之欲連接於該注射器之伴有針的輸注管。
E69.一種向需要防治之B型血友病受試者投與長效FIX多肽之方法，其包括在每週一次投與之初始劑量約50IU/kg下向該受試者靜脈內投與如實施例E1至E53中任一者之醫藥組合物，其中該投與預防該受試者之出血事件或降低該受試者之出血事件頻率。
E70.一種向需要防治之B型血友病受試者投與長效FIX多肽之方法，其包括在每10至14日一次投與之初始劑量約100IU/kg下向該受試者靜脈內投與如實施例E1至E53中任一者之醫藥組合物，其中該投與預防該受試者之出血事件或降低該受試者之出血事件頻率。
E71.如實施例E69或實施例E70之方法，其中隨後基於該受試者之反應調整該防治劑量或劑量頻率。
E72.一種向需要治療輕度至中度出血事件之B 型血友病受試者投與長效FIX多肽之方法，其包括在初始劑量約30IU/kg至約60IU/kg下向該受試者靜脈內投與如實施例1至53中任一者之醫藥組合物，其中該投與控制、緩和或逆轉該出血事件。
E73.如實施例E72之方法，其進一步包括若該 受試者展現進一步出血跡象，則每48小時投與一或多個額外劑量。
E74.一種向需要治療重度出血事件之B型血友 病受試者投與長效FIX多肽之方法，其包括在初始劑量約100IU/kg下向該受試者靜脈內投與如實施例E1至E53中任一者之醫藥組合物，其中該投與控制、緩和或逆轉該出血事件。
E75.如實施例E74之方法，其進一步包括若該 出血事件繼續，則在約6至10小時之後在約80IU/kg下投與另一劑量之該醫藥組合物。
E76.如實施例E75之方法，其進一步包括若該 出血事件繼續，則持續三日每24小時在80IU/kg下投與一或多個額外劑量之該醫藥組合物。
E77.如實施例E76之方法，其進一步包括每 48小時在80IU/kg下投與一或多個額外劑量之該醫藥組合物直至該出血事件得以控制為止。
E78.一種向需要手術防治之B型血友病受試者 投與長效FIX多肽之方法，其包括在約50IU/kg至80IU/kg之劑量下向正經受小手術之B型血友病受試者靜脈 內投與如實施例E1至E53中任一者之醫藥組合物，其中該投與在手術期間及之後控制該受試者之出血。
E79.如實施例E78之方法，其進一步包括若需 要控制手術後出血，則在手術之後約24至約48小時在約50IU/kg至80IU/kg下投與另一劑量之該醫藥組合物。
E80.一種向需要手術防治之B型血友病受試者 投與長效FIX多肽之方法，其包括在約100IU/kg之劑量下向正經受大手術之B型血友病受試者靜脈內投與如實施例E1至E53中任一者之醫藥組合物，其中該投與在手術期間及之後控制該受試者之出血。
E81.如實施例E80之方法，其進一步包括若需 要控制手術後出血，則在約6至10小時之後在約80IU/kg下投與另一劑量之該醫藥組合物。
E82.如實施例E81之方法，其進一步包括若需 要控制手術後出血，則持續三日每24小時在80IU/kg下投與一或多個額外劑量之該醫藥組合物。
E83.如實施例E82之方法，其進一步包括若需 要控制手術後出血，則每48小時在80IU/kg下投與一或多個額外劑量之該醫藥組合物。
E84.如實施例E69至E82中任一者之方法，其 中該所要劑量之該長效FIX多肽可自如實施例54至68中任一者之單一醫藥套組獲得。
E85.如實施例E69至E82中任一者之方法，其 中該所要劑量之該長效FIX多肽可自如實施例54至68中 任一者之兩個或兩個以上醫藥套組獲得，且其中在投與之前匯合該兩個或兩個以上醫藥套組之內含物。
E86.如實施例E1至E53中任一者之醫藥組合 物，其中在單次靜脈內輸注50IU/kg該長效FIX多肽之後，該長效FIX多肽之平均T1/2β(活性)為約70小時至約95小時。
E87.如實施例E1至E53中任一者之醫藥組合 物，其中該平均T1/2β(活性)為約82小時。
E88.如實施例E86或實施例E87之醫藥組合 物，其中在單次靜脈內輸注50IU/kg BENEFIX®之後，該平均T1/2β(活性)比由全長成熟因子IX組成之多肽(BENEFIX®)高至少約2倍至約3倍。
E89.如實施例E88之醫藥組合物，其中該平均 T1/2β(活性)比由全長成熟因子IX組成之多肽(BENEFIX®)高約2.4倍。
E90.如實施例E1至E53或E86至E89中任一 者之醫藥組合物，其中在單次靜脈內輸注50IU/kg該長效FIX多肽之後，該長效FIX多肽之平均Cmax為約30IU/dL至約50IU/dL。
E91.如實施例E90之醫藥組合物，其中該平均 Cmax為約40.8IU/dL。
E92.如實施例E1至E53或E86至E91中任一 者之醫藥組合物，其中在單次靜脈內輸注50IU/kg該長效FIX多肽之後，該長效FIX多肽之每劑平均曲線下面積 (AUC/劑)為約27IU*h/dL/IU/kg至約35IU*h/dL/IU/kg。
E93.如實施例E92之醫藥組合物，其中該平均AUC/劑為約31.32IU*h/dL/IU/kg。
E94.如實施例E92或實施例E93之醫藥組合物，其中在50IU/kg下單次靜脈內輸注由全長成熟因子IX組成之多肽(BENEFIX®)之後，該平均AUC/劑比由全長成熟因子IX組成之該多肽(BENEFIX®)高至少約1.8倍至約2.1倍。
E95.如實施例E94之醫藥組合物，其中該平均AUC/劑比由全長成熟因子IX組成之多肽(BENEFIX®)高約1.99倍。
E96.一種降低B型血友病受試者之年度出血率之方法，其包括在定期或個別化給藥間隔下防治性投與固定或個別化劑量之如實施例1至53及86至95中任一者之醫藥組合物。
E98.如實施例E96之方法，其中該醫藥組合物係藉由固定劑量在固定給藥間隔下向該受試者投與。
E98.如實施例E97之方法，其中該醫藥組合物之該固定劑量為約50IU/kg，且該固定給藥間隔為約一週。
E99.如實施例E97之方法，其中該醫藥組合物之該固定劑量為約100IU/kg，且該固定給藥間隔在約10日與約14日之間。
E100.如實施例E96之方法，其中該醫藥組合 物係在個別化劑量下在固定給藥間隔下向該受試者投與。
E101.如實施例E100之方法，其中該固定給藥 間隔為約一週。
E102.如實施例E100或實施例E101之方法， 其中調整該個別化劑量以達成在約1IU/dl與約3IU/dl之間的血漿FIX谷底活性程度。
E103.如實施例101至102中任一者之方法， 其中約每週投與一次之該個別化劑量在約30IU/kg與約60IU/kg之間。
E104.如實施例E103之方法，其中約每週投與 一次之該個別化劑量在約32IU/kg與約54IU/kg之間。
E105.如實施例E104之方法，其中約每週投與 一次之平均個別化劑量為約41IU/kg。
E106.如實施例E100至E105中任一者之方 法，其中該受試者之年度出血率比藉由陣發性或按需給藥治療之B型血友病受試者之平均年度出血率降低約70%至約90%。
E107.如實施例E106之方法，其中該受試者之 年度出血率降低約76%至約89%。
E108.如實施例E107之方法，其中該受試者之 年度出血率降低約83%。
E109.如實施例E96之方法，其中該醫藥組合 物係在固定劑量下在個別化給藥間隔下向該受試者投與。
E110.如實施例E109之方法，其中該固定劑量 為約100IU/kg。
E111.如實施例E109或實施例E110之方法， 其中調整該個別化給藥間隔以達成在約1IU/dl與約3IU/dl之間的血漿FIX谷底活性程度。
E112.如實施例E109至E111中任一者之方 法，其中該個別化給藥間隔在約10日至約14日之間。
E113.如實施例E112之方法，其中該個別化給 藥間隔為約13日。
E114.如實施例E109至E113中任一者之方 法，其中該受試者之年度出血率比藉由陣發性或按需給藥治療之B型血友病受試者之平均年度出血率降低約80%至約95%。
E115.如實施例E114之方法，其中該受試者之 年度出血率降低約80%至約92%。
E116.如實施例E115之方法，其中該受試者之 年度出血率降低約87%。
E117.如實施例E1至E53及E86至E95中任 一者之醫藥組合物，其進一步包含短效FIX多肽。
E118.如實施例E117之醫藥組合物，其中該短 效FIX多肽包含野生型FIX或由野生型FIX組成。
E119.如實施例E1至E53、E86至E95、以及 E117及E118中任一者之醫藥組合物，其為液體調配物。
E120.如實施例E1至E53、E86至E95、以及 E117及E118中任一者之醫藥組合物，其為凍乾散劑。
E121.如實施例E1至E53、E86至E95、以及 E117及E118中任一者之醫藥組合物，其為懸浮液。
E122.一種小瓶，其包含如實施例E119至 E121中任一者之醫藥組合物。
E123.一種藥筒，其包含如實施例E119之醫藥 組合物。
E124.一種注射器，其包含如實施例E119或 E120之醫藥組合物。
E125.如實施例E124之注射器，其為雙室注射 器。
E126.如實施例E54至E68中任一者之套組， 其中該第二容器包含足以提供抗微生物活性之量的防腐劑。
E127.如實施例E119之醫藥組合物，其中該液 體調配物進一步包含足以提供抗微生物活性之量的防腐劑。
E128.如實施例E126之套組或如申請專利範圍 第127項之醫藥組合物，其中該防腐劑係選自由以下組成之群：苯酚、間甲酚、苯甲醇、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯氧乙醇、任何其他醫藥學上可接受之防腐劑及其任何組合。
E129.如實施例E126或E128中任一者之套組或如實施例E127或E128之醫藥組合物，其中該防腐劑為苯甲醇。
E130.如實施例E129之套組或醫藥組合物，其中該苯甲醇的濃度係在0.5%與0.9%之間。
E131.一種估計針對患者加以個別化之rFIXFc給藥資訊之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6之rFIXFc群體藥物動力學(popPK)模型及Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收患者資訊及所要治療結果資訊之至少一者，(b)使用該popPK模型、該Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統計算個別化rFIXFc給藥資訊，及(c)藉由該基於電腦之系統輸出該個別化給藥資訊。
E132.如實施例E131之方法，其進一步包括基於(c)之該輸出的個別化給藥資訊選擇給藥方案及根據該所選給藥方案向該患者投與rFIXFc。
E133.一種電腦可讀儲存媒體，其上儲存有當由處理器執行時會使該處理器執行如實施例E131之方法之指令。
E134.一種包括處理器及記憶體之系統，該記憶體上儲存有當由該處理器執行時會使該處理器執行如實施例E131之方法之指令。
E135.一種基於中值popPK估計rFIXFc給藥方案之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6之rFIXFc popPK模型及Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收患者資訊及所要治療結果 資訊之至少一者，(b)使用該popPK模型、該Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統計算中值rFIXFc PK資訊，及(c)藉由該基於電腦之系統輸出該中值PK資訊。
E136.如實施例E135之方法，其進一步包括基於(c)之該輸出的中值PK資訊選擇給藥方案，及根據該所選給藥方案向患者投與rFIXFc。
E137.一種電腦可讀儲存媒體，其上儲存有當由處理器執行時會使該處理器執行如實施例E135之方法之指令。
E138.一種包括處理器及記憶體之系統，該記憶體上儲存有當由該處理器執行時會使該處理器執行如實施例E135之方法之指令。
E139.一種估計個別患者rFIXFc PK之方法，該方法包括：(a)藉由含有實例6之rFIXFc群體藥物動力學(popPK)模型及Bayesian估計程式的基於電腦之系統接收個別rFIXFc PK資訊；(b)使用該popPK模型、該Bayesian估計程式及該接收之資訊，藉由該基於電腦之系統估計個別化患者rFIXFc PK資訊，及(c)藉由該基於電腦之系統輸出該個別化患者PK資訊。
E140.如實施例E139之方法，其進一步包括基於(c)之該輸出的個別化患者PK資訊選擇給藥方案，及根據該所選方案向該患者投與rFIXFc。
E141.一種電腦可讀儲存媒體，其上儲存有當由處理器執行時會使該處理器執行如實施例E139之方法之指令。
E142.一種包括處理器及記憶體之系統，該記憶體上儲存有當由該處理器執行時會使該處理器執行如實施例E139之方法之指令。
E143.如實施例131之方法，其中該所要治療結果資訊為在給藥之後血漿FIX活性程度之所要升高且該輸出資訊為用於急性治療之劑量。
E144.如實施例131之方法，其中該所要治療結果資訊為所要給藥間隔且該輸出資訊為用於防治之劑量。
E145.如實施例131之方法，其中該所要治療結果資訊為所要劑量且該輸出資訊為用於防治之間隔。
E146.如實施例139之方法，其中(a)進一步包括藉由該基於電腦之系統接收其他患者資訊。
E147.如實施例131、135或146中任一者之方法，其中該患者資訊為年齡或體重。
對特定實施例之上文描述將充分揭示發明物之一般性質以使他人可在不脫離本發明之一般概念下，在無過度實驗下，藉由應用此項技術之技能內之知識而易於 針對各種應用對此等特定實施例進行修改及/或改適。因此，基於本文呈現之教示及指導，此等改適及修改意欲在所揭示之實施例之等效物的含義及範圍內。應瞭解，本文之措辭或術語係用於描述而非限制之目的，因此本說明書之術語或措辭應由熟練技術人員根據教示及指導加以解釋。
<110> 拜健艾克麻州股份有限公司 皮爾斯 格林 特魯克斯 珊曼莎 彼得斯 羅伯特 蔣 海燕 布萊德爾 馬克
<120> FIX多肽的應用
<130> 2159.399PC07/EKS/C-K
<140> 102134557
<141> 2013-09-25
<150> 61/705,607
<151> 2012-09-25
<150> 61/759,796
<151> 2013-02-01
<150> 61/800,163
<151> 2013-03-15
<150> 61/811,412
<151> 2013-04-12
<150> 61/829,755
<151> 2013-05-31
<150> 61/839,439
<151> 2013-06-26
<150> 61/863,859
<151> 2013-08-08
<160> 4
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 7583
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FIX-Fc鏈
<400> 1
<210> 2
<211> 642
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FIX-Fc鏈
<400> 2
<210> 3
<211> 741
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Fc部分
<400> 3
<210> 4
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fc部分
<400> 4

Claims (130)

  1. 一種向有需要之人類受試者投與長效因子IX(FIX)之方法，其包括在約一週或一週以上一次之給藥間隔下向該受試者投與約10IU/kg至約200IU/kg劑量之該長效FIX多肽。
  2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該受試者需要治療出血病症。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之方法，其中該長效FIX多肽之該劑量為約10IU/kg至約50IU/kg、約10IU/kg至約100IU/kg、約25IU/kg至約50IU/kg、約25IU/kg至約75IU/kg、約25IU/kg至約100IU/kg、約25IU/kg至約125IU/kg、約25IU/kg至約150IU/kg、約50IU/kg至約100IU/kg、約50IU/kg至約150IU/kg、約100IU/kg至約150IU/kg、約150IU/kg至約200IU/kg或其任何組合。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽之該劑量係用於防治一或多種出血事件。
  5. 如申請專利範圍第4項之方法，其中該劑量為約50IU/kg。
  6. 如申請專利範圍第4或5項之方法，其中該等出血事件之年度出血率小於2、小於3、小於4、小於5、小於6、小於7、小於8、小於9或小於10。
  7. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之方法，其 中該長效FIX多肽之該劑量係用於個別化間隔防治一或多種出血事件。
  8. 如申請專利範圍第7項之方法，其中該長效FIX多肽之該劑量為約100IU/kg。
  9. 如申請專利範圍第7或8項之方法，其中該等出血事件之年度出血率小於1、小於2、小於3、小於4、小於5、小於6、小於7、小於8或小於9。
  10. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽之該劑量係用於按需治療一或多種出血事件。
  11. 如申請專利範圍第10項之方法，其中該出血事件之年度出血率小於10、小於11、小於12、小於13、小於14、小於15、小於16、小於17、小於18、小於19、小於20、小於21、小於22、小於23、小於24、小於25或小於26。
  12. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽之該劑量係用於圍手術期管理出血病症。
  13. 如申請專利範圍第1至12項中任一項之方法，其中在約一週一次至約一個月一次之給藥頻率下投與該劑量。
  14. 如申請專利範圍第13項之方法，其中該給藥頻率為約一週一次、約兩週內一次、約一個月兩次、約三週內一次、約四週內一次或約一個月一次。
  15. 如申請專利範圍第14項之方法，其中該給藥頻率為約一週一次。
  16. 如申請專利範圍第14項之方法，其中該給藥頻率為約兩週內一次或約一個月兩次。
  17. 如申請專利範圍第1至14項中任一項之方法，其中該給藥間隔為約每5日、約每6日、約每7日、約每8日、約每9日、約每10日、約每11日、約每12日、約每13日、約每14日、約每15日、約每16日、約每17日、約每18日、約每19日、約每20日或約每21日。
  18. 如申請專利範圍第17項之方法，其中該給藥間隔為每7日至14日。
  19. 如申請專利範圍第1至18項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽之T1/2β(活性)為至少約40小時、至少約50小時、至少約60小時、至少約70小時、至少約80小時、至少約90小時、至少約100小時、至少約110小時、至少約120小時、至少約130小時、至少約140小時、至少約150小時、至少約160小時、至少約170小時、至少約180小時或至少約190小時。
  20. 如申請專利範圍第19項之方法，其中該T1/2β(活性)為約40小時至約193小時、約50小時至約203小時、約30小時至約183小時、約40小時至約203小時、約40小時至約213小時、約40小時至約223小時、約30小時至約213小時、約30小時至約223小時、約50 小時至約213小時、約50小時至約223小時、約60小時至約203小時、或約60小時至約213小時。
  21. 如申請專利範圍第17或18項之方法，其中該T1/2β(活性)為約40小時至約193小時。
  22. 如申請專利範圍第19至21項中任一項之方法，其中該T1/2β(活性)之平均值為約76小時、約77小時、約78小時、約79小時、約80小時、約81小時、約82小時、約83小時、約84小時、約85小時、約86小時、約87小時、約88小時、約89小時、約90小時、約91小時或約92小時。
  23. 如申請專利範圍第19至22項中任一項之方法，其中該T1/2β(活性)之平均值比由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽或BENEFIX®高至少約2.0倍。
  24. 如申請專利範圍23項中任一項之方法，其中該T1/2β(活性)之平均值比由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽或BENEFIX®高至少約2.0倍、至少約2.1倍、至少約2.2倍、至少約2.3倍、至少約2.4倍、至少約2.5倍、至少約2.6倍、至少約2.7倍、至少約2.8倍、至少約2.9倍、至少約3.0倍、至少約3.1倍或至少約3.2倍。
  25. 如申請專利範圍第1至24項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽之T1/2β(抗原)為至少約60小時、至少約80小時、至少約100小時、至少約120小時、至少約140小時、至少約160小時、至少約180小時、至少約 200小時、至少約220小時、至少約240小時、至少約260小時、至少約280小時、至少約300小時、至少約320小時、至少約340小時、至少約360小時或至少約370小時。
  26. 如申請專利範圍第25項之方法，其中該T1/2β(抗原)為約63小時至約372小時、約63小時至約382小時、約63小時至約392小時、約63小時至約402小時、約63小時至約412小時、約53小時至約372小時、約53小時至約382小時、約53小時至約392小時、約53小時至約402小時、約53小時至約513小時、約70小時至約372小時、約70小時至約382小時、約70小時至約392小時、約70小時至約402小時、或約70小時至約412小時。
  27. 如申請專利範圍第25或26項之方法，其中該T1/2β(抗原)為約63小時至約372小時。
  28. 如申請專利範圍第25至27項中任一項之方法，其中該T1/2β(抗原)之平均值為約115小時、約116小時、約117小時、約118小時、約119小時、約120小時、約121小時、約122小時、約123小時、約124小時、約125小時、約126小時、約127小時、約128小時、約129小時、約130小時或約131小時。
  29. 如申請專利範圍第25至28項中任一項之方法，其中該T1/2β(抗原)之平均值比由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽或BENEFIX®高至少約3.0倍。
  30. 如申請專利範圍39項中任一項之方法，其中該T1/2β(抗原)之平均值比由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽或BENEFIX®高至少約2.0倍、至少約2.5倍、至少約3.0倍、至少約3.5倍、至少約4.0倍、至少約4.5倍、至少約5.0倍。
  31. 如申請專利範圍第1至30項中任一項之方法，其進一步包括在投與該長效FIX多肽之前量測該受試者之基線FIX活性。
  32. 如申請專利範圍第1至31項中任一項之方法，其中在該投藥之後，該受試者中該長效FIX多肽之血漿谷底含量維持在基線以上約1%。
  33. 如申請專利範圍第32項之方法，其中該受試者中該長效FIX多肽之血漿谷底含量維持在基線以上約1%與約5%之間、約1%與約6%之間、約1%與約7%之間、約1%與約8%之間、約1%與約9%之間、約1%與約10%之間、約1%與約11%之間、約1%與約12%之間、約1%與約13%之間、約1%與約14%之間、約1%與約15%之間。
  34. 如申請專利範圍第1至33項中任一項之方法，其中該劑量包含小於25%之呈完全磷酸化狀態之該長效因子IX多肽及小於25%之呈完全硫酸化狀態之該長效因子IX多肽。
  35. 如申請專利範圍第34項之方法，其中該劑量包含小於約10%之呈磷酸化狀態之該長效因子IX多肽及小 於約9%之呈該硫酸化狀態之該長效因子IX多肽。
  36. 如申請專利範圍第1至35項中任一項之方法，其中該劑量為約50IU/kg，且該給藥間隔為約7日。
  37. 如申請專利範圍第1至35項中任一項之方法，其中該劑量為約100IU/kg且該給藥間隔為至少約14日。
  38. 如申請專利範圍第1至35項中任一項之方法，其中該劑量為約150IU/kg且該給藥間隔為至少約21日。
  39. 如申請專利範圍第1至38項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽為包含FIX多肽及FcRn結合搭配物之嵌合多肽。
  40. 如申請專利範圍第39項之方法，其中該FcRn結合搭配物包含Fc區。
  41. 如申請專利範圍第39或40項之方法，其中該長效FIX多肽進一步包含第二FcRn結合搭配物。
  42. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該第二FcRn結合搭配物包含第二Fc區。
  43. 如申請專利範圍第41或42項之方法，其中該FcRn結合搭配物與該第二FcRn結合搭配物締合。
  44. 如申請專利範圍第43項之方法，其中該締合為共價鍵。
  45. 如申請專利範圍第44項之方法，其中該共價鍵為二硫鍵。
  46. 如申請專利範圍第41至45項中任一項之方法，其中該第二FcRn結合搭配物不藉由肽鍵連接於胺基酸序 列。
  47. 如申請專利範圍第1至46項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽為FIX單體二聚體雜交物。
  48. 如申請專利範圍第1至47項中任一項之方法，其中該受試者需要控制或預防出血或出血事件。
  49. 如申請專利範圍第48項之方法，其中該受試者需要控制或預防以下中之出血：少量失血、關節積血、淺表肌肉失血、軟組織失血、中度失血、伴隨解剖之肌肉內或軟組織失血、黏膜失血、血尿症、大量失血、咽失血、咽後部失血、腹膜後腔失血、中樞神經系統失血、擦傷、切口、刮傷、關節失血、鼻出血、口腔出血、牙齦出血、顱內出血、腹膜內出血、少量自發性失血、大創傷後出血、中度皮膚擦傷或向關節、肌肉、內部器官或腦中之自發性失血。
  50. 如申請專利範圍第48或49項之方法，其中該受試者需要圍手術期管理。
  51. 如申請專利範圍第48或49項之方法，其中該受試者需要管理與手術或拔牙相關之出血。
  52. 如申請專利範圍第48或49項之方法，其中該受試者將經受、正經受或已經受大手術。
  53. 如申請專利範圍第52項之方法，其中該大手術為矯形手術、大面積口腔手術、泌尿手術或疝氣手術。
  54. 如申請專利範圍第52項之方法，其中該矯形手術為置換膝、髖或其他主要關節。
  55. 如申請專利範圍第1至54項中任一項之方法，其中該受試者需要防治性治療。
  56. 如申請專利範圍第1至54項中任一項之方法，其中該受試者需要按需治療。
  57. 如申請專利範圍第1至54項中任一項之方法，其中該受試者需要治療出血事件。
  58. 如申請專利範圍第57項之方法，其中該受試者需要治療關節積血、肌肉出血、口腔出血、失血、向肌肉中失血、口腔失血、創傷、頭部創傷、胃腸出血、顱內失血、腹內失血、胸內失血、骨折、中樞神經系統出血、咽後間隙中出血、腹膜後隙中出血或髂腰肌鞘中出血。
  59. 如申請專利範圍第58項之方法，其中該受試者需要手術防治、圍手術期管理或手術治療。
  60. 如申請專利範圍第59項之方法，其中該手術為小手術、大手術、拔牙、扁桃體切除術、腹股溝疝切開術、滑膜切除術、全膝置換、開顱術、骨縫合術、創傷手術、顱內手術、腹內手術、胸內手術或關節置換手術。
  61. 如申請專利範圍第39至60項中任一項之方法，其中該嵌合多肽中之該FIX多肽為人類因子IX。
  62. 如申請專利範圍第39至61項中任一項之方法，其中該嵌合多肽中之該FIX多肽為突變因子IX。
  63. 如申請專利範圍第39至62項中任一項之方法，其中該嵌合多肽中之該FcRn結合搭配物為人類Fc。
  64. 如申請專利範圍第39至63項中任一項之方法， 其中該嵌合多肽中之該FcRn結合搭配物為突變Fc。
  65. 如申請專利範圍第64項之方法，其中該FIX多肽與表8A中所示之無信號序列及前肽之FIX胺基酸序列(SEQ ID NO：2之胺基酸1至415)至少90%或95%一致。
  66. 如申請專利範圍第63項之方法，其中該因子IX與表8A中所示之無信號序列及前肽之因子IX胺基酸序列(SEQ ID NO：2之胺基酸1至415)一致。
  67. 如申請專利範圍第40至66項中任一項之方法，其中該Fc與表8B中所示之無信號序列之Fc胺基酸序列(SEQ ID NO：4之胺基酸1至227)至少90%或95%一致。
  68. 如申請專利範圍第67項之方法，其中該Fc與表8B中所示之無信號序列之Fc胺基酸序列(SEQ ID NO：4之胺基酸1至227)一致。
  69. 如申請專利範圍第41至68項中任一項之方法，其中該嵌合多肽中之該第二FcRn結合搭配物為人類Fc。
  70. 如申請專利範圍第41至68項中任一項之方法，其中該嵌合多肽中之該第二FcRn結合搭配物為突變Fc。
  71. 如申請專利範圍第69或70項之方法，其中該Fc與表8B中所示之無信號序列之Fc胺基酸序列(SEQ ID NO：4之胺基酸1至227)至少90%或95%一致。
  72. 如申請專利範圍第71項之方法，其中該Fc與表6B中所示之無信號序列之Fc胺基酸序列(SEQ ID NO：4之胺基酸1至227)一致。
  73. 如申請專利範圍第40至72項中任一項之方法， 其中該嵌合多肽包含與表8A中所示之無信號序列及前肽之因子IX及Fc胺基酸序列(SEQ ID NO：2之胺基酸1至642)至少90%或95%一致的序列。
  74. 如申請專利範圍第73項之方法，其中該嵌合多肽包含與表8A中所示之無信號序列及前肽之該因子IX及Fc胺基酸序列(SEQ ID NO：2之胺基酸1至642)一致的序列。
  75. 如申請專利範圍第1至74項中任一項之方法，其中該受試者需要長期治療。
  76. 如申請專利範圍第1至75項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽係作為包含至少一種賦形劑之醫藥組合物之一部分加以投與。
  77. 如申請專利範圍第1至76項中任一項之方法，其中該劑量係靜脈內或皮下投與。
  78. 如申請專利範圍第19至77項中任一項之方法，其中該T1/2β(活性)係藉由單級凝結分析量測。
  79. 如申請專利範圍第1至78項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽之平均滯留時間(MRT)為至少約50小時、至少約60小時、至少約70小時、至少約80小時、至少約90小時、至少約100小時、至少約110小時、至少約120小時、至少約130小時、至少約140小時、至少約150小時、至少約160小時、至少約170小時、至少約180小時或至少約190小時。
  80. 如申請專利範圍第79項之方法，其中該MRT為 約50小時至約200小時、約60小時至約210小時、約60小時至約183小時、約70小時至約150小時、約70小時至約140小時、約70小時至約130小時、約80小時至約120小時、約80小時至約110小時、或約88小時至約110小時。
  81. 如申請專利範圍第19至22項中任一項之方法，其中該MRT比由SEQ ID NO：2之胺基酸1至415組成之多肽或BENEFIX®高至少約2.0倍。
  82. 如申請專利範圍第1至81項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽係以包含以下之醫藥組合物形式調配：(a)該長效FIX多肽；(b)包含蔗糖及甘露糖醇之碳水化合物混合物；(c)氯化鈉(NaCl)；(d)L-組胺酸；及(e)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  83. 如申請專利範圍第82項之方法，其中該醫藥組合物包含約1%(w/v)至約2%(w/v)蔗糖。
  84. 如申請專利範圍第83項之方法，其中該醫藥組合物包含約1.2%(w/v)蔗糖或約1.7%(w/v)蔗糖。
  85. 如申請專利範圍第82項之方法，其中該醫藥組合物包含約10mg/ml至約20mg/ml蔗糖。
  86. 如申請專利範圍第85項之方法，其中該醫藥組合物包含約11.9mg/ml蔗糖或約16.7mg/ml蔗糖。
  87. 如申請專利範圍第82至86項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含約2%(w/v)至約4%(w/v)甘露糖醇。
  88. 如申請專利範圍第87項之方法，其中該醫藥組合物包含約2.4%(w/v)甘露糖醇或約3.3%(w/v)甘露糖醇。
  89. 如申請專利範圍第82至86項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含約20mg/ml至約40mg/ml甘露糖醇。
  90. 如申請專利範圍第89項之方法，其中該醫藥組合物包含約23.8mg/ml甘露糖醇或約33.3mg/ml甘露糖醇。
  91. 如申請專利範圍第82項之方法，其中該醫藥組合物包含約1.0%至約2.0%蔗糖及約2.0%(w/v)至約4.0%(w/v)甘露糖醇。
  92. 如申請專利範圍第91項之方法，其中該醫藥組合物包含約1.2%(w/v)蔗糖及約2.4%(w/v)甘露糖醇。
  93. 如申請專利範圍第92項之方法，其中該醫藥組合物包含約1.7%(w/v)蔗糖及約3.3%(w/v)甘露糖醇。
  94. 如申請專利範圍第82項之方法，其中該醫藥組合物包含約10mg/ml至約20mg/ml蔗糖及約20mg/ml至約40mg/ml甘露糖醇。
  95. 如申請專利範圍第94項之方法，其中該醫藥組合物包含(i)約11.9mg/ml蔗糖及約23.8mg/ml甘露糖醇 或(ii)約16.7mg/ml蔗糖及約33.3mg/ml甘露糖醇。
  96. 如申請專利範圍第82至95項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含約50mM與約60mM之間的NaCl。
  97. 如申請專利範圍第96項之方法，其中該醫藥組合物包含約55.6mM NaCl。
  98. 如申請專利範圍第82至95項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含約3mg/ml與約4mg/ml之間的NaCl。
  99. 如申請專利範圍第98項之方法，其中該醫藥組合物包含約3.25mg/ml NaCl。
  100. 如申請專利範圍第82至99項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含約20mM與約40mM之間的L-組胺酸。
  101. 如申請專利範圍第100項之方法，其中該醫藥組合物包含約25mM L-組胺酸或約35mM L-組胺酸。
  102. 如申請專利範圍第82至99項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含約3mg/ml與約6mg/ml之間的L-組胺酸。
  103. 如申請專利範圍第102項之方法，該醫藥組合物包含約3.88mg/ml L-組胺酸或約5.43mg/ml L-組胺酸。
  104. 如申請專利範圍第82至103項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含約0.008%(w/v)與約0.020% (w/v)之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  105. 如申請專利範圍第104項之方法，其中該醫藥組合物包含約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80或約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  106. 如申請專利範圍第82至103項中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含約0.08mg/ml與約0.2mg/ml之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  107. 如申請專利範圍第106項之方法，其中該醫藥組合物包含約0.10% mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80或約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  108. 如申請專利範圍第1至35項中任一項之方法，其中該rFIXFc多肽包含含有與SEQ ID NO：2之胺基酸1至642至少90%或95%一致之胺基酸序列的第一次單元、及含有與SEQ ID NO：4之胺基酸1至227至少90%至95%一致之胺基酸序列的第二次單元。
  109. 如申請專利範圍第108項之方法，其中該rFIXFc多肽包含含有SEQ ID NO：2之胺基酸1至642之第一次單元、及含有SEQ ID NO：4之胺基酸1至227之第二次單元。
  110. 如申請專利範圍第82至109項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽係在約25IU/ml與約1200IU/ml之間的濃度下存在。
  111. 如申請專利範圍第110項之方法，其中該醫藥組合物包含50IU/ml、100IU/ml、200IU/ml、400IU/ml 或600IU/ml該長效FIX多肽。
  112. 如申請專利範圍第111項之方法，其中該醫藥組合物包含50IU/ml、100IU/ml、200IU/ml或400IU/ml該長效FIX多肽。
  113. 如申請專利範圍第111項之方法，其中該醫藥組合物包含600IU/ml該長效FIX多肽。
  114. 如申請專利範圍第82項之方法，其中該醫藥組合物包含：(a)約25IU/ml與約700IU/ml之間的該長效FIX多肽；(b)約1%(w/v)與約2%(w/v)之間的蔗糖；(c)約2%(w/v)與約4%(w/v)之間的甘露糖醇；(d)約50mM與約60mM之間的NaCl；(e)約20mM與約40mM之間的L-組胺酸；及(f)約0.008%(w/v)與約0.015%之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  115. 如申請專利範圍第114項之方法，其中該醫藥組合物包含：(a)約50IU/ml、約100IU/ml、約200IU/ml或400IU/ml該長效FIX多肽；(b)約1.2%(w/v)蔗糖；(c)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(d)約55.6mM NaCl；(e)約25mM L-組胺酸；及 (f)約0.010%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  116. 如申請專利範圍第114項之方法，其中該醫藥組合物包含：(a)約600IU/ml該長效FIX多肽；(b)約1.7%(w/v)蔗糖；(c)約3.3%(w/v)甘露糖醇；(d)約55.6mM NaCl；(e)約35mM L-組胺酸；及(f)約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  117. 如申請專利範圍第82項之方法，其中該醫藥組合物包含：(a)約25IU/ml與約700IU/ml之間的該長效FIX多肽；(b)約10mg/ml與約20mg/ml之間的蔗糖；(c)約20mg/ml與約40mg/ml之間的甘露糖醇；(d)約3mg/ml與約4mg/ml之間的NaCl；(e)約3mg/ml與約6mg/ml之間的L-組胺酸；及(f)約0.08mg/ml與約0.15mg/ml之間的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  118. 如申請專利範圍第117項之方法，其中該醫藥組合物包含：(a)約50IU/ml、約100IU/ml、約200IU/ml或約400IU/ml該長效FIX多肽；(b)約11.9mg/ml蔗糖； (c)約23.8mg/ml甘露糖醇；(d)約3.25mg/ml NaCl；(e)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(f)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  119. 如申請專利範圍第117項之方法，其中該醫藥組合物包含：(a)約600IU/ml該長效FIX多肽；(b)約16.7mg/ml蔗糖；(c)約33.3mg/ml甘露糖醇；(d)約3.25mg/ml NaCl；(e)約5.43mg/ml L-組胺酸；及(f)約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  120. 如申請專利範圍第1至81項中任一項之方法，其中該長效FIX多肽包裝在包括以下之醫藥套組中：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)該長效FIX多肽，(ii)蔗糖；(iii)甘露糖醇；(iv)L-組胺酸；及(v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含欲與該第一容器之該凍乾散劑組合之0.325%(w/v)NaCl的第二容器。
  121. 如申請專利範圍第120項之方法，其中該醫藥套組包括： (a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約250IU、約500IU、約1000IU或約2000IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)分別約50IU/ml、約100IU/ml、約200IU/ml或約400IU/ml的該長效FIX多肽；(ii)約1.2%(w/v)蔗糖；(iii)約2.4%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約25mM L-組胺酸；及(vi)約0.01%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  122. 如申請專利範圍第120項之方法，其中該醫藥套組包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約3000IU該長效FIX多肽，(ii)約83.3mg蔗糖； (iii)約167mg甘露糖醇；(iv)約27.2mg L-組胺酸；及(v)約0.7mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約600IU/ml該長效FIX多肽；(ii)約1.7%(w/v)蔗糖；(iii)約3.3%(w/v)甘露糖醇；(iv)約55.6mM NaCl；(v)約35mM L-組胺酸；及(vi)約0.014%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  123. 如申請專利範圍第120項之方法，其中該醫藥組合物包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約250IU、約500IU、約1000IU或約2000IU該長效FIX多肽，(ii)約59.5mg蔗糖；(iii)約119mg甘露糖醇；(iv)約19.4mg L-組胺酸；及(v)約0.50mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及 (b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)分別約50IU/ml、約100IU/ml、約200IU/ml或約400IU/ml的該長效FIX多肽；(ii)約11.9mg/ml蔗糖；(iii)約23.8mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約3.88mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.10mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  124. 如申請專利範圍第120項之方法，其中該醫藥套組包括：(a)包含凍乾散劑之第一容器，其中該散劑包含(i)約3000IU rFIXFc多肽，(ii)約83.3mg蔗糖；(iii)約167mg甘露糖醇；(iv)約27.2mg L-組胺酸；及(v)約0.7mg聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；及(b)包含在與該第一容器之該凍乾散劑組合時，體積足以產生包含以下之溶液之0.325%(w/v)NaCl的第二容器：(i)約600IU/ml rFIXFc多肽； (ii)約16.7mg/ml蔗糖；(iii)約33.3mg/ml甘露糖醇；(iv)約3.25mg/ml NaCl；(v)約5.43mg/ml L-組胺酸；及(vi)約0.14mg/ml聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  125. 如申請專利範圍第120至124項中任一項之方法，其中該第一容器為包括橡膠塞之玻璃小瓶。
  126. 如申請專利範圍第120至125項中任一項之方法，其中該第二容器為注射器主體，且其中該注射器主體伴有柱塞。
  127. 如申請專利範圍第126項之方法，該醫藥套組進一步包括使該玻璃小瓶連接於該注射器主體之接頭。
  128. 如申請專利範圍第126或127項之方法，其中該醫藥套組進一步包括適於靜脈內輸注之伴有欲連接於該注射器之針的輸注管。
  129. 如申請專利範圍第1至128項中任一項之方法，其中在投與該長效FIX多肽之後，該人類受試者不產生針對FIX之抑制劑。
  130. 如申請專利範圍第129項之方法，其中該抑制劑為針對FIX之中和抗體。
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