TW201306746A - 新穎縮酚酸肽ｐｆ１４４２物質及其製造法 - Google Patents

Abstract

本發明提供以下式(1)表示之化合物、含其而成之新穎有害生物防除劑、及其製造方法。□

Description

新穎縮酚酸肽PF1442物質及其製造法

本發明係有關新穎抗生物質PF1442物質、含有該物質作為有效成分而成之有害生物防除劑、以及該物質之製造方法。

本發明係基於2010年12月10日提出申請之日本專利申請號2010-275299號而主張優先權者，該先前之專利申請中所有揭示內容均以引用作為本說明書揭示之一部分。

迄今為止雖已發現多種有害生物防除劑，但由於藥劑感受性降低問題、效果持續性、使用時之安全性等，目前仍要求新穎之藥劑。

作為顯示內部寄生蟲防除活性之縮酚酸肽(depsipeptide)已報導有無孢子不完全菌所產生之PF1022物質(專利文獻1)。

又，於WO2004/044214號公報(專利文獻2)中，作為對於雷諾啶(ryanodine)受體之雷諾啶拮抗物質，已報導有產生輪枝孢屬(Verticillium sp)之縮酚酸肽PKI-1033物質，已報導對於已知作為魚餌之豐年蝦(SeaMonkey)(Artemia salina)及土壤棲息線蟲(秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans))之活性。然而，關於對於動物寄生蟲及農園藝上之害蟲等之有害生物之防除效 果並無任何具體報告。且，關於產生FKI-1033物質生產菌之類似物(analogue)亦無報告，故對於其構造及活性具有特別興趣。

於Invert Neurosci 8,107-119,(2008)(非專利文獻1)中，關於雷諾啶受體活化物質或抑制物質雖有殺蟲活性之報告，但關於FKI-1033物質，則完全未記載，亦未教示該物質之有害生物防除活性。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本特開平3-35796號公報

[專利文獻2]WO2004/044214號公報

[非專利文獻]

Invert Neurosci 8,107-119,(2008)

本發明之目的係提供具有有效性優異之有害生物防除活性之新穎有害生物防除劑、作為其有效成分而利用之物質及其製造方法者。

本發明人等，為了發現具有上述該等特性之物質進行積極探討研究之結果，於黴菌之培養液中發現新穎物質，發現該物質具有優異之有害生物防除活性，同時建立該物質之製造方法，因而完成本發明。

亦即，依據本發明之第一樣態，提供一種以下式(1)表示之PF1442物質。

[式中，R₁、R₂及R₃之組合為下表所示之任一種：

又，依據本發明第二樣態，提供一種含有一種以上之以上述式(1)表示之PF1442物質而成之有害生物防除劑。

又，依據本發明之第三樣態，提供一種含有以式(1)表示之PF1442物質或以下述式(2)表示之PF1442A物質而成之動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲防除劑。

又，依據本發明之第四樣態，提供一種含有以式(1)表示之PF1442物質或以上述式(2)表示之PF1442A物質而成之農園藝用殺蟲劑。

又，依據本發明之第五樣態，提供一種輪枝孢屬(Verticillium sp.)PF1442或其變異株。

又，依據本發明之第六樣態，提供一種製造以式(1)表示之PF1442物質或以式(2)表示之PF1442A物質之方法，其包含培養屬於輪枝孢屬之PF1442物質或PF1442A物質之 生產菌，且自該培養物中採集PF1442物質或PF1442A物質而成，於製造PF1442A物質時，前述生產菌為輪枝孢屬PF1442。

本發明之新穎抗生物質PF1442兼具有抗內部寄生蟲活性及殺蟲活性，可使用作為有害生物防除劑之成分。

本發明中，以式(1)表示之PF1442物質，舉例有於上表中表示之PF1442C物質、PF1442D物質、PF1442E物質、PF1442F物質、PF1442G物質、PF1442H物質、PF1442I物質或PF1442J物質(以下亦簡稱為「PF1442C」、「PF1442D」、「PF1442E」、「PF1442F」、「PF1442G」、「PF1442H」、「PF1442I」或「PF1442J」)，較好為PF1442C、PF1442D或PF1442I。

又，以式(1)表示之PF1442物質或以式(2)表示之PF1442A物質(以下亦簡稱為「PF1442A」)可藉由培養該等之生產菌，自該培養物採取該物質並純化而製造。

至於PF1442物質生產菌，舉例有例如本發明人等自日本沖繩縣石垣島之土壤試料分離出之絲狀真菌之屬於輪枝孢屬之輪枝孢屬PF1442株。本菌株之菌學性狀、培養法以及PF1442物質之純化法如下。

又，PF1442物質生產菌不限定於本說明書中記載之特定微生物。若為具有生產PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442H、 PF14421或PF1442J之能力之菌，均可使用作為PF1442物質生產菌。

至於可使用之微生物之例，舉例有PF1442株、其繼代培養物、人工變異株、自然變異株或基因重組株等。

本菌株之菌學性狀、培養法以及以式(1)或式(2)表示之PF1442物質或PF1442A物質之純化法如下。

1. PF1442株之分類學性質

PF1442株之菌學性狀如下。

(a)培養特徵

在25℃培養7天後之PF1442株之生長以及顏色、菌落顏色如下。又，可溶性色素於所有培養基均無辨認到。

(1)在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上，形成直徑52~54mm(25℃，7天)、表面為白色天鵝絨狀之菌落(密實地形成分生孢子)。

(2)在玉米粉瓊脂培養基上形成直徑45~48mm(25℃，7天)、表面為白色粉狀之菌落。背面為白色。

(3)在燕麥粉瓊脂培養基上形成直徑48~50mm(25℃，7天)、表面為白色粉狀之菌落。背面為白色。

(4)在麥芽萃取物瓊脂培養基上形成直徑48~50mm(25℃，7天)、表面為白色天鵝絨狀之菌落。背面為白色。

(b)形態學特徵

在顯微鏡下觀察後，菌絲具有細胞壁，自氣菌絲直接 產生芽體(phialide)或於分生孢子梗之途中及前端產生2~4條輪生。其長度為30~100μm，基部稍微鼓出(2.0~2.5μm)，前端變細為錐形。自芽體之前端產生寬橢圓形之分生孢子(2.0~3.0×4.0~5.0μm)。

由以上之細菌學性狀，認為PF1442株為絲狀真菌，屬於輪枝孢屬之Verticillium sp.。因此，本菌株稱為Verticillium sp.PF1442株。又，本菌株已寄存於日本獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物寄存中心(日本茨城縣筑波市東1丁目1番1號中央第6)寄存編號FERM BP-11417。

2. PF1442物質生產菌之培養

作為營養源，可使用以往黴菌之培養中所利用之公知者。例如，作為碳源，可使用葡萄糖、蔗糖、水飴、糊精、澱粉、甘油、糖蜜、米、麥、玉米渣等穀類等，動植物油等。又，作為氮源，可使用大豆粉、小麥胚芽、玉米浸出液(corn steep liquor)、綿籽粕、肉萃取物、蛋白腖(peptone)、酵母萃取物、硫酸銨、硝酸鈉、尿素等。添加其他視需要之鈉、鉀、鈣、鎂、鈷、氯、磷酸、硫酸及可生成其他離子之無機鹽類為有效。又，可適當添加有機物及無機物以助於菌之發育，並生產PF1442物質類。再者，培養基中依需要亦可適當添加促進該菌之生育或PF1442物質類生產之維他命類等之微量營養素、發育促進物質、前驅物質等。

培養液可以靜置培養、振盪培養或通氣攪拌培養等之需氧條件下進行。較好在液體培養之pH為中性附近進行培養。適於培養之溫度為25~40℃，但多數情況在25~30℃附近培養。PF1442物質類之生產雖依據培養基或培養條件而異，但於靜置培養、振盪培養、槽培養之任一種，通常在2~20天其累積均可達到最高。培養物中之PF1442物質類中，在目的物質之累積達到最高時停止培養。當然該等培養基組成、培養基液性、培養溫度、攪拌速度、通氣量等之培養條件係依據使用之菌株種類或外部條件等以獲得較佳結果之方式進行適當調節、選擇。關於液體培養，有發泡時，可適宜使用矽氧油、植物油、界面活性劑等之消泡劑。如此所得之培養物中所累積之PF1442物質類由於含於菌體內或培養濾液中，故可藉水、醇類、酮類等自培養物萃取。較好利用甲醇水、丙酮水等進行溶劑萃取以採取PF1442物質類較為有利。

3. PF1442物質類之採取及純化

關於自微生物培養物採取及純化本發明之PF1442物質，可適當組合利用其性狀之通常分離方法例如溶劑萃取法、離子交換樹脂法吸附或分配層析法、凝膠過濾法、透析法、沉澱法等而單離及純化。

具體而言，餾除及濃縮上述萃取液之有機溶劑後，以乙酸乙酯或正丁醇萃取該濃縮液，減壓下濃縮該萃取液，將所得濃縮物以甲醇/氯仿、丙酮/己烷、乙酸乙酯/己烷、 甲醇/水、或乙腈/水等之溶劑系反覆進行矽膠層析(例如WAKO Gel C300，和光純藥公司製)或ODS層析(例如Inertsil ODS-2，GL Sciences公司製)等之方法等。且，可依據需要，使用Sephadex LH-20(Amersham Biosciences AB公司製)等之凝膠過濾層析以甲醇、水等溶出之方法單離及純化。

又，本發明之上述式(1)所示之PF1442物質亦可依據Organic.Letter,8(24),5601,2006記載之方法製造。

4.用途

式(1)所示之PF1442物質可使用作為有害生物防除劑。有害生物防除劑顯示例如農園藝用殺蟲劑、動物內部寄生蟲防除劑、動物外部寄生蟲防除劑、衛生害蟲防除劑、不適害蟲防除劑、儲穀．儲存食品害蟲防除劑、居家害蟲防除劑等，較好可舉出農園藝用殺蟲劑、動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲防除劑。

含有1種以上之以式(1)所示之PF1442物質所成之有害生物防除劑可顯示防除效果之蟲種並未特別限定，至於農園藝上之害蟲，舉例有鱗翅目害蟲(例如斜紋夜盜(Spodoptera litura)、夜盜蛾(Mamestra brassicae)、黏蟲(Mythimna separata)、青蟲、小菜蛾(Plutella xylostella)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、二化螟蛾(Chilo suppressalis)、稻縱捲葉野螟(Cnaphalocrocis medinalis)、葉捲蛾(Cerace xanthocosma)、蘋果蠹蛾(codling moth)、潛蛾、毒蛾(Artaxa subflava)、地老虎屬害蟲(Agrotis spp)、棉鈴蟲屬害蟲(Helicoverpa spp)、棉花籽夜蛾屬(Heliothis spp)等)，半翅目害蟲(例如煙蚜(Myzus persicae)、野外棉蚜(Aphis gossypii)、豆蚜(Aphisfabae)、菜蚜(Rhopalosiphum maidis)、碗豆蚜(Acyrthosiphon pisum)、茄粗額蚜(Aulacorthum solani Kaltenbach)、黑豆蚜(Aphis craccivora craccivora Koch)、馬鈴薯長管蚜(Macrosiphum euphorbiae)、麥長管蚜(Macrosiphum avenae)、麥無網長管蚜(Methopolophium dirhodum)、稻麥蚜(Rhopalosiphum padi)、麥二叉蚜(Greenbug)、偽菜蚜(Lipaphis erysimi)、菜縊管蚜(Lipaphis erysimi(Kaltebach))、捲葉蚜(Aphis spiraecola Patch)、紅蘋果蚜(rosy apple aphid)、蘋果綿蚜(Eriosoma lanigerum)、橘二叉蚜(Toxoptera aurantii)、橘蚜(Toxoptera citricidus)等之蚜蟲類害蟲(常蚜科(Aphididae)、球蚜科(Adelgidae)、根瘤蚜科(Phylloxeridae))，偽黑尾葉蟬(Nephotettix cincticeps)、茶小綠葉蟬(Tea Green Leafhopper)等之夜蟬類害蟲，斑飛蝨(Laodelphax striatellus)、褐飛蝨(Nilaparvata lugens)、白背飛蝨(Sogatella furcifera)等之飛蝨類害蟲，擬二星蝽(Eysarcoris annamita)、南青龜蟲(Nezara viridula)、赤鬚細綠霞龜(Trigonotylus caelestialium)等之龜蟲類害蟲，煙草粉虱(Bemisia tabaci)、溫室粉虱(Trialeurodes vaporariorum)等之粉虱類害蟲(粉虱科)，康氏粉蚧(Pseudococcus comstocki Kuwana)、臀紋介殼蟲(Planococcus kraunhiae)、桑介殼蟲(Pseudaulacaspis pentagona)、赤圓介殼蟲(Aonidiella aurantii)等之介殼蟲類害蟲(盾介殼蟲科(Diaspididae)、碩介殼蟲科(Margarodidae)、旌介殼蟲科(Ortheziidae)、仁蚧科(Aclerdiae)、紅海蟲科(Dactylopiidae)、膠蚧科(Kerridae)、粉介殼蟲科(Pseudococcidae)、軟介殼蟲科(Coccidae)、絨介殼蟲科(Eriococcidae)、鏈介殼蟲科(Asterolecaniidae)、Beesonidae、球鏈介殼蟲科(Lecanodiaspididae)、壺介殼蟲科(Cerococcidae)等)，鞘翅目害蟲(例如水稻水象鼻蟲(Lissorhoptrus oryzophilus)、綠豆象(Callosobruchus chinensis)、黃粉蟲(Tenebrio molitor Linnaeus)、西方玉米根蟲(Diabrotrica virgifera)、北方玉米根蟲(Diabrotica undecimpunctata)、麗金龜(Anomala cuprea)、紅銅麗金龜(Anomala rufocuprea)、黃條葉蚤(Phyllotreta striolata)、瓜葉蟲(Aulacophora femoralis)、科羅拉多金花蟲(Leptinotarsa decemlineata)、稻負泥蟲(Oulema oryzae)、啃芯蟲類、髮切蟲類等)，蟎目(例如二點葉蟎(Tetranychus urticae)、神澤氏夜蟎(Tetranychus kanzawai Kishida)、柑橘全爪蟎(Panonychus citri)) 等，膜翅目害蟲(例如廣腰亞目類)，直翅目害蟲(例如飛蝗類)，雙翅目類害蟲(例如家蠅(Musca domestica)、斑潛蠅類)，薊馬目害蟲(例如南黃薊馬(Thrips palmi Karny)、西方花薊馬(Frankliniella occidentalis)等)，植物寄生性線蟲(例如北方根瘤線蟲(Meloidogyne incognita)、蝕根線蟲、心枯線蟲(Aphelenchoides besseyi)、葉線蟲(Bursaphelenchus xylophilus)等)等。較好為鱗翅目害蟲、半翅目害蟲、薊馬目害蟲、雙翅目害蟲、鞘翅目害蟲、蟎目害蟲、植物寄生性線蟲，再更好為半翅目害蟲、薊馬目害蟲、蟎目害蟲、植物寄生性線蟲。

至於動物外部寄生蟲，舉例為硬蜱類(例如美洲鈍眼蜱(Amblyomma americanum)、墨西哥灣案硬蜱、寄食姬螫蟎(Cheyletiella parasitovorax)、落磯山脈森林硬蜱、西海岸硬蜱、美洲犬壁蝨、何氏血蜱(Haemaphysalis campanulata)、雞血蜱、長角血蜱(Haemaphysalis longicornis)、巨棘血蜱(Haemaphysalis megaspinosa)、蓖麻硬蜱(Ixodes ricinus)、卵型硬蜱(Ixodes ovatus)、西太平洋硬蜱、全溝硬蜱、蓖麻豆蝨、太平洋硬蜱、硬緣蜱、血紅扇頭蜱)，絨蟎類(例如貓絨蟎、犬絨蟎)、毛囊蟎蟲類(例如犬毛囊蟎蟲、貓毛囊蟎蟲)、搔蟎類(例如兔痒蟎)、疥癬蟲類(例如食皮疥癬蟎、耳疥蟲)、刺蟎類(例如禽刺蟎)、雞刺皮蟎類、鳥刺蟎類(例如雞羽蜱蟲、翅蟎)、恙蟲類(例如輪樣蟎、紅纖樣蟎)、 蚤類(例如貓蚤、人蚤、印鼠客蚤、客蚤)、羽蝨類(例如犬羽蝨、雞羽蝨)、蝨類(例如獸蝨、犬蝨、人體蝨、人蝨、毛蝨、床蝨)、家蠅類、皮蠅類、刺蠅類、馬蠅類、蝶蠅類(例如蠓)、舌蠅、虻類、伊蚊類(例如白線斑蚊、埃及斑蚊)、庫蚊類(例如地下家蚊)、羽斑蚊類、糠蚊類、蚋類、刺龜蟲類、小黃家蚊，至於內部寄生蟲，舉例為線蟲類(例如糞線蟲類、鉤蟲類、圓蟲類(例如捻轉胃線蟲、巴西鉤蟲)、毛樣線蟲類、變圓蟲類(例如豬肺蟲、廣東吸血線蟲、貓肺蟲)、蟯蟲類、盲腸蟲類(例如雞蛔蟲)、蛔蟲類(例如海獸胃線蟲、豬蛔蟲、馬蛔蟲、犬蛔蟲、貓蛔蟲)、旋尾線蟲類(例如錐尾線蟲類、有棘顎口蟲、貓胃蟲、類圓豬胃蟲、大口馬胃蟲、雞胃蟲、爪子鱲蟲)、絲蟲(例如犬絲蟲、淋巴系絲蟲、旋盤尾絲蟲、非洲眼蠕蟲)、腎蟲類、旋毛蟲類(例如犬鞭蟲、旋毛蟲)、吸蟲類(例如日本血吸蟲、肝蛭)、鉤頭蟲類、絛蟲類(例如疑葉類(例如曼森氏裂頭絛蟲)、圓葉類(例如瓜實絛蟲))、原蟲類等。

上述寄生蟲較好為蚤類、內部寄生蟲，更好為蚤類或線蟲類。

又，以式(2)表示之PF1442A物質，尤其可有利地使用作為動物用內部寄生蟲防除劑、動物用外部寄生蟲防除劑或農園藝用殺蟲劑。

含有以式(2)表示之PF1442A物質而成之動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲防除劑，作為顯示防 除效果之動物寄生蟲並無特別限制，但較好為蚤類或線蟲類。

含有以式(2)表示之PF1442A物質而成之農園藝用殺蟲劑，作為顯示防除效果之農園藝上之害蟲並無特別限制，但較好舉例為鱗翅目害蟲、半翅目害蟲、薊馬目害蟲、雙翅目害蟲、鞘翅目害蟲、植物寄生性線蟲，更好舉例為半翅目害蟲、薊馬目害蟲、植物寄生性線蟲，最好為蚜類害蟲、龜蟲類害蟲、葉蟬類害蟲、粉虱類害蟲或薊馬目害蟲。

又，以式(2)表示之PF1442A物質之防除對象者為動物內部寄生蟲、動物外部寄生蟲或農園藝用害蟲，不包含WO2004/044214號公報所記載之豐年蝦(Artemia salina)及土壤棲息線蟲(秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans))。因此，依據本發明之一樣態，有害生物、動物內部寄生蟲、動物外部寄生蟲或農園藝上之害蟲為除了豐年蝦及秀麗隱桿線蟲以外者。

以式(1)表示之PF1442物質、含有一種以上以式(1)表示之PF1442物質而成之有害生物防除劑、含有以式(2)表示之PF1442A物質之動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲防除劑、含有以式(2)表示之PF1442A物質而成之農園藝用殺蟲劑可混合其他殺菌劑、殺蟲劑、殺蟎劑、驅蟲劑、除草劑、植物生長調節劑、肥料等。至於可混合使用之藥劑舉例為記載於殺蟲劑手冊(第15版，The British Crop Protection Council發行)或 SHIBUYA INDEX(第14版，2009年SHIBUYA INDEX RESEARCH GROUP發行)者。更具體而言，作為殺蟲劑、驅蟲劑、抗原蟲劑、殺蟎劑或殺線蟲劑，舉例為如歐殺松(acephate)、二氯松(dichlorvos)、EPM、殺螟松(fenitothion)、芬滅松(fenamifos)、普硫松(prothiofos)、佈飛松(profenofos)、白克松(pyraclofos)、甲基陶斯松(chlorpyrifos-methyl)、大利松(diazinon)、倍硫磷亞碸(mesulfenfos)、克線丹(cadusafos)、艾米殺松(imicyafos)、福賽絕(fosthiazate)之有機磷酸酯系化合物，如納乃得(methomyl)、硫敵克(thiodicarb)、得滅克(aldicarb)、歐殺滅(oxamyl)、安丹(propoxur)、加保利(carbaryl)、丁基滅必蝨(fenobucarb)、艾芬克(ethiofencarb)、芬硫克(fenothiocarb)、比加普(pirimicarb)、家保扶(carbofuran)、免扶克(benfuracarb)之胺甲酸酯系化合物，如培丹(cartap)、硫賜安(thiocyclam)之沙蠶毒素(Nereistoxin)衍生物，如大克蟎(dicofol)、得克蟎(tetradifon)之有機氯系化合物，如氯菊酯(permethrin)、七氯菊酯(tefluthrin)、賽滅寧(cypermethrin)、第滅寧(deltamethrin)、賽洛寧(cyhalothrin)、芬化利(fenvalerate)、福化利(fluvalinate)、醚菊酯(ethofenprox)、矽護芬(silafluofen)、氟氯苯酚酯(flumethrin)之擬除蟲菊酯系化合物，如二氟隆( diflubenzuron)、伏蟲隆(teflubenzuron)、氟芬隆(flufenoxuron)、氯芬隆(chlorfluazuron)之苯甲醯脲系化合物，如烯蟲酯(methoprene)之類青春激素化合物，如可芬諾(chromafenozide)之類褪皮激素化合物，如三氯苯達唑(triclabedazole)、芬苯達唑(fenbedazole)之苯并咪唑系化合物，如米倍黴素(milbemycin)、愛獲滅(ivermectin)之阿維菌素(avermectin)系化合物，至於其他化合物，舉例有如布芬淨(buprofezin)、合賽多(hexythiazox)、雙甲脒(amitraz)、殺蟲脒(chlordimeform)、畢達本(pyridaben)、芬普蟎(fenpyroxymate)、畢汰芬(pyrimidifen)、得芬瑞(tebufenpyrad)、脫芬瑞(tolfenpyrad)、嘧蟎酯(fluacrypyrim)、亞醌蟎(acequinocyl)、賽芬蟎(cyflumetofen)、氟蟲醯胺(flubendizmide)、乙蟲清(ethiprole)、芬普尼(fipronil)、(ethoxazole)、益達胺(imidacloprid)、可尼丁(clothianidin)、賽速安(thiamethoxam)、安滅培(acetamiprid)、烯啶蟲胺(nitempyram)、賽果培(thiacloprid)、達特南(dinotefuran)、派滅淨(pymetrozine)、聯苯肼酯(bifenazate)、螺蟎酯(spirodiclofen)、螺甲蟎酯(spiromesifen)、氟尼胺(flonicamid)、凡克洛寧(chlorfenapyr)、百利普芬(pyriproxyfen)、因得克(indoxacarb)、啶蟲丙醚(pyridalyl)或賜諾殺(spinosad)、艾默德斯(emodepside)、吡喹酮(Praziquantel)、 左美索(levamizole)、噻嘧啶(pyrantel)、甲噻吩嘧啶(morantel)、哌嗪(piperazine)、美拉胂鉀(melarsonyl)、碘化噻唑青胺(dithiazanine iodide)、乙胺嗪(diethyl calbamizine)、氟唑蟲清(cyenopyrafen)、賜諾特(spinetoram)、甲基立枯磷(pyrifluquinazon)、氮蟲苯甲醯胺(chlorantraniliprole)、氰蟲醯胺(cyantraniliprole)、賜派滅(spirotetramat)、左吡滅汀(lepimectin)、美氟綜(metaflumizone)、吡拉氟唑(pyrafluprole)、吡利唑(pyriprole)、愛美松(hydramethylnon)、唑蚜威(triazamate)、氟啶蟲胺腈(sulfoxaflor)、DCIP、1,3-二氯丙烯、異硫代氰酸甲酯、胺基甲酸鈉、鹽酸左旋咪唑(levamisol hydrochloride)、奈馬菌素(nemadectin)、有機金屬系化合物、二硝基系化合物、有機硫化合物、脲系化合物、三嗪系化合物、聯胺系化合物般之化合物，以及日本專利第4015182號或日本特開2007-211015號公報中記載之下述式(3)表示之化合物：

[式中，Het表示3-吡啶基，R₁₁表示羥基，R₁₂及R₁₃ 表示環丙基羰氧基，R₁₄表示氫原子或羥基]或其農園藝上可容許之酸加成鹽。

再者，本發明之組成物亦可與BT劑、昆蟲病原病毒劑等之微生物農藥混用或併用。

混用或併用所用之殺菌劑，舉例為例如如亞托敏(azoxystrobin)、克收欣(kresoxym-methyl)、三氟敏(trifloxystrobin)等之甲氧基丙烯酸酯(Strobilurin)系化合物，如滅派林(mepanipyrim)、嘧霉胺(pyrimethanil)、賽普洛(cyprodinil)之苯胺嘧啶系化合物，如三泰芬(triadimefon)、比多農(bitertanol)、賽福座(triflumizole)、乙環唑(etaconazole)、普克利(propiconazole)、平克座(penconazole)、護矽得(flusilazole)、邁克尼(myclobutanil)、環克座(cyproconazole)、得克利(tebuconazole)、菲克利(hexaconazole)、撲克拉(prochloraz)、硅氟唑(simeconazole)之唑系化合物，如灰蟎猛(quinomethionate)之喹噁啉系化合物，如錳乃浦(maneb)、代森鋅(zineb)、代森錳鋅(mancozeb)、聚胺基甲酸酯(polycarbamate)、甲基鋅乃浦(propineb)之二硫代胺基甲酸酯系化合物，如乙霉威(diethofencarb)之苯基胺基甲酸酯系化合物，如四氯異苯(chlorothalonil)、五氯硝基苯(quintozene)之有機氯系化合物，如苯菌靈(benomyl)、甲基多寶淨(thiophanate-methyl)、卡苯達唑(carbendazole)之苯并咪唑系化合物，如滅達樂 (metalaxyl)、歐殺斯(oxadixyl)、呋醯胺(ofurase)、本達樂(benalaxyl)、呋霜靈(furalaxyl)、酯菌胺(cyprofuram)之苯基醯胺矽化合物，如益發靈(dichlofluanid)之次磺酸(sulfenic acid)系化合物，如氫氧化銅(copper hydroxide)、快得寧(oxine-copper)之銅系化合物，如羥基異噁唑(hydroxyisoxazole)之異噁唑系化合物，如福賽得(fosetyl-aluminium)、脫克松(tolclofos-methyl)之有機磷系化合物，如蓋普丹(captan)、四氯丹(captafol)、滅菌丹(folpet)之N-鹵基硫烷基系化合物，如撲滅寧(procymidone)、依普同(iprodione)、免克寧(vinchlozolin)之二羧基醯亞胺系化合物，如福多寧(flutolanil)、滅普寧(rnepronil)之苯并苯胺系化合物，如芬普福(fenpropimorph)、達滅芬(dimethomorph)之嗎啉系化合物，如氫氧化三苯基錫(fenthin hydroxide)、乙酸三苯基錫(fenthin acetate)之有機錫系化合物，如護汰寧(fludioxonil)、拌種咯(fenpiclonil)之氰基吡咯系化合物，其他熱必斯(fthalide)、扶吉胺(fluazinam)、克絕(cymoxanil)、賽福寧(triforine)、比芬諾(pyrifenox)、芬瑞莫(fenarimol)、苯鏽啶(fenpropidin)、賓克隆(pencycuron)、賽座滅(cyazofamid)、丙森鋅(iprovalicarb)或苯噻菌胺(benthiavalicarb-isopropyl)、溴化甲烷(methylbromide)、威百畝(carbam)、邁隆(dazomet)。

含有一種以上以式(1)表示之PF1442物質之有害生 物防除劑除了以式(1)表示之PF1442物質表示之化合物以外，液可依據使用法使用擔體調製。

至於可使用之擔體，舉例有液體擔體、固體擔體、氣體狀擔體、界面活性劑、分散劑、其他製劑用輔助劑等。

至於固體擔體，舉例為例如黏土類(高嶺土黏土、矽藻土、膨潤土、酸性白土等)、合成含水氧化矽、滑石、陶瓷、其他無機礦物(亞硒酸鈉、石英、硫、活性碳、碳酸鈣、水合氧化矽等)等之微粉末或粒狀物，澱粉、乳糖、氯乙烯系聚合物、聚胺基甲酸酯等之合成聚合物。

至於液體擔體，舉例為例如醇類(甲醇、乙醇、異丙醇、聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、三丙二醇、甘油等)、酮類(丙酮、甲基乙基酮等)、芳香族烴類(苄醇、苯、甲苯、二甲苯、乙基苯、甲基萘等)、脂肪族烴類(石蠟、正己烷、環己烷、煤油、燈油等)、醚類(二乙二醇單乙醚、二乙二醇單甲醚、二異丙醚、二乙醚、二噁烷、四氫呋喃等)、酯類(碳酸伸丙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、苯甲酸苄酯、棕櫚酸異丙酯、丙二醇之脂肪酸酯等)、腈類(乙腈、異丙腈等)、醯胺類(二甲基甲醯胺、二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮等)、鹵化烴類(二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳等)、大豆油、棉籽油等之動植物油類、二甲基亞碸、矽氧油、高級脂肪酸、甘油縮甲醛、水等。

至於氣體狀擔體，舉例為LPG、空氣、氮氣、二氧化碳、二甲醚等。

至於用以乳化、分散、展附之界面活性劑、分散劑，係使用例如烷基硫酸酯類、烷基(芳基)磺酸鹽類、聚氧伸烷基烷基(芳基)醚類、多元醇酯類、木質磺酸鹽類等。再者，至於用以改善製劑性狀之輔助劑係使用例如羧甲基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、硬脂酸鈣等。

上述擔體、界面活性劑、分散劑及輔助劑各可依據需要單獨使用或組合使用。

含有以式(1)表示之PF1442物質或以式(2)表示之PF1442A物質之農園藝用殺蟲劑，通常係混合適當之固體擔體、液體擔體、氣體狀擔體、界面活性劑、分散劑、其他製劑用輔助劑而以乳劑、液劑、懸浮劑、水合劑、可流動劑、粉劑、粒劑、錠劑、油劑、氣溶膠、煙燻劑等之任意劑型提供。

至於固體擔體，有例如滑石、膨潤土、黏土、高嶺土、矽藻土、蛭石、白碳、碳酸鈣等。

至於液體擔體，舉例為例如甲醇、正己醇、乙二醇等醇類，丙酮、甲基乙基酮、環己酮等酮類，正己烷、煤油、燈油等脂肪族烴類，甲苯、二甲苯、甲基萘等之芳香族烴類，二乙醚、二噁烷、四氫呋喃等醚類，乙酸乙酯等酯類，乙腈、異丁腈等腈類，二甲基甲醯胺、二甲基乙醯胺等醯胺類，大豆油、棉籽油等之植物油類，二甲基亞碸、水等。

又，至於氣體狀擔體，舉例有LPG、空氣、氮氣、二氧化碳、二甲基醚等。

至於用以乳化、分散、展附之界面活性劑、分散劑，係使用例如烷基硫酸酯類、烷基(芳基)磺酸鹽類、聚氧伸烷基烷基(芳基)醚類、多元醇酯類、木質磺酸鹽類等。

又，至於用以改善製劑性狀之輔助劑係使用例如羧甲基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、硬脂酸鈣等。

上述擔體、界面活性劑、分散劑及輔助劑各可依據需要單獨使用或組合使用。

上述製劑中之有效成分含量並未特別限定，但通常於乳劑為1-75重量%，於粉劑為0.3~25重量%，於水合劑為1-90重量%，於粒劑為0.5~10重量%。

以式(1)表示之PF1442物質、含有一種以上以式(1)表示之PF1442物質而成之有害生物防除劑、含有以式(2)表示之PF1442A物質而成之農園藝用殺蟲劑以及該等與其他有害生物防除劑之混合劑可藉由應用於有害昆蟲、植物、植物繁殖體(plant propagation material)(例如種子、植物莖葉部、根部等)、土壤、水面、栽培用資材以及有必要妨礙害蟲侵入之房屋等而加以利用。

本發明之物質、混合物及組成物之處理可在害蟲侵入前及之後進行。

因此，依據本發明之一樣態，係提供有害生物之防除方法，其包含將有效量之以式(1)表示之PF1442物質應用於有害生物或其生育場所。又，依據較佳樣態，上述方法為非治療方法。且，依據本發明之另一樣態，係提供在 有害生物防除劑之製造中使用以式(1)表示之PF1442物質。

又，依據本發明之另一較佳樣態，係提供一種農園藝害蟲之防除方法，係包含對農園藝上之害蟲應用有效量之以式(1)表示之PF1442物質或以式(2)表示之PF1442A物質。又，依據較佳樣態，上述防除方法為非治療方法。且，依據進而另一較佳樣態，係提供在農園藝用殺蟲劑之製造中使用以式(1)表示之PF1442物質或以式(2)表示之PF1442A物質。

以式(1)表示之PF1442物質、含有一種以上以式(1)表示之PF1442物質之有害生物防除劑、含有以式(2)表示之PF1442A物質之農園藝用殺蟲劑以及該等與其他有害生物防除劑之混合劑亦可應用於基因重組農作物。

以式(1)表示之PF1442物質、含有一種以上以式(1)表示之PF1442物質之有害生物防除劑、含有一種以上以式(2)表示之PF1442A物質之動物用內部寄生蟲防除劑以及該等與其他有害生物防除劑之混合劑，可以液劑、乳劑、液化滴劑、噴霧劑、泡沫狀製劑、顆粒劑、細粒劑、粉劑、膠囊劑、錠劑、可咀嚼劑、注射劑、栓劑、乳霜劑、洗髮劑、潤絲劑、樹脂劑、煙燻劑、毒餌劑等提供。對於適用動物經口或注射而於體表全體或部分投予之顆粒劑、細粒劑、粉劑、錠劑、可咀嚼液、注射劑、液劑、液化滴劑最佳。

液劑中，亦可進而調配通常之乳化劑、分散劑、展附 劑、濕潤劑、懸浮劑、保存劑、噴射劑等之製劑用輔助劑等，再者，亦可調配通常之塗膜形成劑。至於用以乳化、分散、展附等之界面活性劑，係使用例如皂類、聚氧伸烷基烷基(芳基)醚類、聚氧伸乙基烷基烯丙醚類、聚氧伸乙基脂肪酸酯、高級醇類、烷基芳基磺酸鹽等。至於分散劑，舉例有例如酪蛋白、明膠、多糖類、木質素衍生物、糖類、合成水溶性高分子等。至於展附．濕潤劑，舉例有例如甘油、聚乙二醇等。至於懸浮劑，舉例有例如酪蛋白、明膠、羥丙基纖維素、阿拉伯膠等，至於安定化劑，舉例有例如酚系抗氧化劑(BHT、BHA等)、胺系抗氧化劑(二苯基胺等)、有機硫系抗氧化劑等。至於保存劑，舉例有例如對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯等。上述擔體、界面活性劑、分散劑及輔助劑依據需要各可單獨使用或組合使用。再者亦可含有香料、促效劑(synergist)等。本發明中之有害生物防除劑中之有效成分之含量，於液劑通常1~75重量%為適當。

用以調製乳霜劑之擔體舉例為例如非揮發性烴類(液體石蠟等)、綿羊脂氫化油脂類、高級脂肪酸、脂肪酸酯、動植物油、矽氧油、水等，再者，亦可依據各單獨或組合使用乳化劑、保濕劑、抗氧化劑、香料、硼砂、紫外線吸收劑。至於乳化劑，舉例有脂肪酸山梨糖醇酐、聚氧乙烯烷基醚、脂肪酸聚氧乙烯等。本發明之有害生物防除劑中之有效成分含量於乳霜劑通常為0.5~70重量%。

膠囊劑、丸劑或錠劑可藉由將本發明之組成物中之有效成分適當細分，與稀釋劑或澱粉、乳糖、滑石等之載體混合，進而添加如硬脂酸鎂等之崩解劑及/或結合劑，並依據需要進行打錠而使用。

用以調製助射劑之擔體，雖有必要調製為無菌溶液，但亦可於其中含有其他物質例如使其溶液與血液等張之足夠鹽或葡萄糖。至於可使用之擔體，舉例有如甘油酯、苯甲酸苄酯、肉豆蔻酸異丙酯及丙二醇之脂肪酸衍生物等之酯、N-甲基吡咯烷酮、甘油-縮甲醛之有機溶劑。本發明之有害生物防除劑中之有效成分之含量於注射劑適當為0.01~10重量%。

至於用以調製樹脂劑之擔體，舉例有例如氯乙烯系聚合物、聚胺基甲酸酯等。該等基材中，依據需要可添加苯二甲酸酯類、己二酸酯類、硬脂酸等之可塑劑。於該基材中混練本有效成分後，利用射出成型、擠出成型、壓製成型等予以成型。進而經過適當成型、裁斷等之步驟亦可作成動物用耳標籤、動物用防蟲頸圈。

至於毒餌劑用擔體，舉例有餌物質及誘引物質(小麥粉、玉米粉等之穀粉，玉米澱粉、馬鈴薯澱粉等之澱粉，細砂糖、麥芽糖、峰蜜等糖類，甘油、洋蔥香料、牛奶香料等之食品香料，蛹粉、魚粉等之動物性粉末，各種費洛蒙等)。本發明之有害生物防除劑之有效成分之含量，於毒餌劑通常適當為0.0001~90重量%。

以式(1)表示之PF1442物質、含有一種以上以式( 1)表示之PF1442物質而成之有害生物防除劑、含有以式(2)表示之PF1442A物質而成之動物用內部寄生蟲防除劑以及該等與其他有害生物防除劑之混合劑，可利用經口或注射對適用動物體內投予，對適用動物之體表全部或部分投予，被覆預測有害蟲侵入、寄生、移動之場所而防除有害生物。

因此，依據本發明之一樣態，提供一種包含將以式(1)表示之PF1442物質或以式(2)表示之PF1442A物質之有效量應用至動物內部寄生蟲或動物外部寄生蟲之動物內部寄生蟲或動物外部寄生蟲之防除方法。又，依據較佳樣態，上述防除方法為非治療方法。且，依據其他樣態，提供一種於動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲之製造中使用以式(1)表示之PF1442物質或以式(2)表示之PF1442A物質。

又，依據進而其他較佳樣態，以式(1)表示之PF1442物質或以式(2)表示之PF1442A物質係作為動物藥使用。

以式(1)表示之PF1442物質、含有一種以上以式(1)表示之PF1442物質而成之有害生物防除劑、含有以式(2)表示之PF1442A物質而成之動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲防除劑以及該等與其他有害生物防除劑之混合劑，雖可直接使用，但亦可依據情況，以水、液狀擔體、市售洗髮精、潤絲精、餌、飼養籠底墊等稀釋而應用。

以下雖例示本發明之實施例及試驗例，但本發明不限定於該等，而包含此處未顯示之所有變化或修飾手段。

[實施例] 製造例 製造例1 培養例

作為種培養基，使用由澱粉(starch)2.0%、葡萄糖(glucose)1.0%、聚蛋白腖0.5%、小麥胚芽0.6%、酵母萃取物0.3%、大豆粕0.2%及碳酸鈣0.2%之組成所成之培養基(殺菌前pH 7.0)。又，作為生產培養基，係使用於充分吸收水之米中添加大豆粕0.3%者。

將分注有上述種培養基20mL之100mL體積三角燒瓶在120℃殺菌20分鐘，於其中接種PF1442株之斜面瓊脂培養之1白金環後，於25℃振盪培養3天。

接著，每100kg之生產培養基培育4kg之315×435×98mm之培養容器(不鏽鋼製)在120℃殺菌20分鐘，於其中每次接種150mL之上述培養液，充分攪拌後，於25℃靜置培養14天。

製造例2 培養例

作為種培養基，使用由澱粉2.0%、葡萄糖1.0%、聚蛋白腖0.5%、小麥胚芽0.6%、酵母萃取物0.3%、大豆粕0.2%及碳酸鈣0.2%之組成所成之培養基(殺菌前pH 7.0)。

又，作為生產培養基，係使用由葡萄糖10.0%、脫脂大豆1.3%、穀胺酸鈉0.3%、小麥胚芽0.8%、氯化鈉0.125%、碳酸鈣0.15%及菸鹼醯胺0.2%之組成所成之培養基(殺菌前pH 7.0)。

將分注有上述種培養基(40mL)之250mL體積三角燒瓶在120℃殺菌15分鐘，於其中接種菌PF1442株之斜面瓊脂培養之1白金環後，於26℃振盪培養3天。接著，於3L之發酵瓶中培養生長培養基(2L)，在122℃蒸汽殺菌30分鐘並冷卻後，於其中於菌地移植上述種培養液33mL，在26℃以攪拌速度250-550rpm、通氣1-2L/分鐘之培養條件下培養8天。

製造例3 PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442H、PF1442I物質之製造

a)於製造例1所得之培養物中，添加66%丙酮水210L，攪拌後，以離心分離機除去米、菌體，以50%丙酮水80L洗淨。減壓下自所得萃取液餾除丙酮獲得濃縮液90L。該濃縮液以氫氧化鈉水溶液調整至pH9.0後，以丁醇100L萃取活性成分，減壓下餾除溶劑，獲得油狀物質200g。將以該油狀物質塗抹矽膠400g(WAKOGEL C300，和光純藥公司製)者裝載至矽膠管柱400g(WAKOGEL C300，和光純藥公司製)，先以氯仿4.0L，再以10%甲醇-氯仿8.0L作為溶劑予以展開。收集該等溶離液並使其乾燥，獲得油狀物150g。

b)將以a)所得之油狀物質塗抹矽膠350g(球狀矽膠C60，NACALAI TESQUE公司製)者裝載至矽膠管柱700g(球狀矽膠C60，NACALAI TESQUE公司製)之上部，以10%丙酮-己烷、20%丙酮-己烷、30%丙酮-己烷、50%丙酮-己烷、丙酮、10%甲醇-氯仿、30%甲醇-氯仿每次各5.0L作為溶劑予以展開。將該等展開溶劑中50%丙酮-己烷、丙酮、10%甲醇-氯仿之溶離部分(fraction)合併者予以濃縮乾燥，獲得油狀物質27.5g。

c)將b)所得之油狀物質裝載於ODS矽膠管柱100g(COSMOSIL 75 C18-OPN，NACALAI TESQUE公司製)之上部，以0.005%三氟乙酸水溶液、10%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、20%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、30%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、40%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、50%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、60%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、80%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、90%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、甲醇每次各500ml作為溶劑予以展開。將該等展開溶劑中80%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液、90%甲醇-0.005%三氟乙酸水溶液之溶離部分合併者予以濃縮乾燥，獲得油狀物質17.8g。

d)將c)所得之油狀物質裝載於SEPHADEX LH-20管柱500g(AMERSHAM BIOSCIENCES．AB公司製)之上部，以甲醇展開，將活性溶離部分濃縮乾燥，獲得油狀物質5.2g。所得油狀物質以逆相矽膠管柱150g(COSMOSIL 75 C18-OPN，NACALAI TESQUE公司製)之 上部，以75%甲醇水1.0L、90%甲醇水500mL作為溶劑展開，濃縮活性成分，獲得2.1g之PF1442A及以下所示之2個溶離部分。(溶離部分1：1.3g，溶離部分2：299mg)。

溶離部分1：1.3g中之1.1g分成5次供於ODS-HPLC(INERTSIL ODS-2， 20mm×250mm，GL SCIENCES公司製)，自60%乙腈水溶液至100%乙腈梯度系溶劑以流速9ml/min，使用PDA檢測器進行展開，將活性成分濃縮乾燥，獲得PF1442D 25.3mg、PF1442E 94.9mg、PF1442F 32.1mg、PF1442G 76.3mg、PF1442H 39.0mg、PF1442I 9.4mg。

溶離部分2：299mg中之200mg供於ODS-HPLC(INERTSIL ODS-2， 20mm×250mm，GL SCIENCES公司製)，自70%乙腈水溶液至100%乙腈梯度系溶劑以流速9ml/min，使用PDA檢測器進行展開，將活性成分濃縮乾燥，獲得PF1442C 18.1mg。

1. PF1442A物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)質譜(ESI-MS)：853(M+H)⁺，875(M+Na)⁺

(3)¹H-NMR光譜(400MHz,D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.83(t,12H),1.28(m,16H),1.40(d,12H),1.40~1.45(m,8H),1.73(m,8H),2.97(s,12H), 5.21(dd,4H),5.29(br-d,4H)

由該等儀器分析數據確定了PF1442A物質與FKI-1033(參考專利文獻2)為相同物質。

2. PF1442C物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)分子式：C₄₆H₈₀N₄O₁₂

(3)質譜(HR-ESI-MS)：實測值881.5851(M+H)⁺，計算值881.5851

(4)比旋光度：[α]_D ²⁴=-41.5°(c=1.0，MeOH)

(5)紫外線吸收光譜λ_maxnm(E^% _cm)

[MeOH]：203(417)

[0.1N HCl-MeOH]：206(269)

[0.1N NaOH-MeOH]：213(1446)

(6)紅外線吸收光譜ν_maxcm^-1(KBr)：3472,2954,2928,2876,2857,1737,1649,1462,1317,1219

(7)¹H-NMR光譜(500MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.81(t,3H),0.83(t,9H),1.19~1.31(m,20H),1.40(d,12H),1.40~1.45(m,8H),1.70~1.76(m,8H),2.96(s,12H),5.21(dd,4H),5.28(br-s,4H)

(8)¹³C-NMR光譜(125MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：173.1 s,173.1 s,173.1 s,173.1 s,172.3 s,172.3 s,172.3 s,172.3 s,73.8 d,73.8 d,73.8 d,73.8 d, 53.9 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,32.9 t,32.5 t,32.5 t,32.5 t,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.6 t,31.6 t,31.6 t,31.6 t,30.3 t,30.2 t,26.2 t,25.9 t,25.9 t,25.9 t,23.7 t,23.5 t,23.5 t,23.5 t,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q,14.4 q

(9)溶解性：於甲醇、氯仿、DMSO中可溶

3. PF1442D物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)分子式：C₄₃H₇₄N₄O₁₂

(3)質譜(HR-ESI-MS)：實測值839.5383(M+H)⁺，計算值839.5381

(4)比旋光度：[α]_D ²⁴=-44.2°(c=1.0，MeOH)

(5)紫外線吸收光譜λ_maxnm(E^% _cm)

[MeOH]：203(360)

[0.1N HCl-MeOH]：206(216)

[0.1N NaOH-MeOH]：212(1424)

(6)紅外線吸收光譜ν_maxcm^-1(KBr)：3458,2955,2928,2871,2857,1739,1649,1490,1467,1419,1328,1218,1081

(7)¹H-NMR光譜(500MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.83(t,9H),0.92(d,6H),1.19~1.31(m,12H),1.40(d,12H),1.40~1.52(m,8H),1.70~1.76(m,7H),2.96(s,12H),5.21(m,4H),5.29(br- s,4H)

(8)¹³C-NMR光譜(125MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：173.1 s,173.1 s,173.1 s,173.1 s,172.4 s,172.4 s,172.4 s,172.4 s,73.9 d,73.9 d,73.9 d,73.9 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,40.2 t,32.5 t,32.5 t,32.5 t,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.6 t,31.6 t,31.6 t,26.1 d,25.9 t,25.9 t,25.9 t,23.5 t,23.5 t,23.5 t,21.9 q,21.9 q,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q

(9)溶解性：於甲醇、氯仿、DMSO中可溶

4. PF1442E物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)分子式：C₄₄H₇₆N₄O₁₃

(3)質譜(HR-ESI-MS)：實測值869.5498(M+H)⁺，計算值869.5487

(4)比旋光度：[α]_D ²⁴=-39.4°(c=1.0，MeOH)

(5)紫外線吸收光譜λ_maxnm(E^% _cm)

[MeOH]：202(256)

[0.1N HCl-MeOH]：207(115)

[0.1N NaOH-MeOH]：212(1401)

(6)紅外線吸收光譜ν_maxcm^-1(KBr)：3471,2955,2928,2870,1739,1656,1487,1465,1420,1378,1326,1214,1082

(7)¹H-NMR光譜(500MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.84(t,9H),1.04(d,3H),1.23~1.32(m,12H),1.41(d,12H),1.39~1.49(m,10H),1.69~1.80(m,8H),2.97(s,12H),3.66(m,1H),5.22(dd,4H),5.30(br-s,4H)

(8)¹³C-NMR光譜(125MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：173.1 s,173.1 s,173.1 s,173.1 s,172.3 s,172.3 s,172.3 s,172.3 s,73.8 d,73.8 d,73.8 d,73.8 d,68.4 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,39.5 t,32.5 t,32.5 t,32.5 t,32.0 q,32.0 q,32.0 q,32.0 q,31.6 t,31.6 t,31.6 t,31.6 t,25.9 t,25.9 t,25.9 t,23.6 q,23.5 t,23.5 t,23.5 t,22.6 t,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q

(9)溶解性：於甲醇、氯仿、DMSO中可溶

5. PF1442F物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)分子式：C₄₄H₇₄N₄O₁₃

(3)質譜(HR-ESI-MS)：實測值867.5332(M+H)⁺，計算值867.5330

(4)比旋光度：[α]_D ²⁴=-41.8°(c=1.0，MeOH)

(5)紫外線吸收光譜λ_maxnm(E^% _cm)

[MeOH]：202(321)

[0.1N HCl-MeOH]：207(149)

[0.1N NaOH-MeOH]：213(1410)

(6)紅外線吸收光譜ν_maxcm^-1(KBr)：3457,2961,2934,2861,1739,1658,1490,1465,1421,1373,1328,1214,1082

(7)¹H-NMR光譜(500MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.83(t,9H),1.23~1.31(m,12H),1.39(d,12H),1.38~1.42(m,6H),1.60~1.69(m,2H),1.71~1.75(m,10H),2.05(s,3H),2.52(m,2H),2.96(s,9H),2.97(s,3H),5.21(dd,4H),5.30(br-s,4H)

(8)¹³C-NMR光譜(125MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：211.1 s,173.1 s,173.1 s,173.1 s,173.1 s,172.3 s,172.3 s,172.3 s,172.1 s,73.8 d,73.8 d,73.8 d,73.8 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,43.3 t,32.5 t,32.5 t,32.5 t,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.6 t,31.6 t,31.6 t,30.8 t,29.9 q,25.9 t,25.9 t,25.9 t,23.5 t,23.5 t,23.5 t,20.2 t,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q

(9)溶解性：於甲醇、氯仿、DMSO中可溶

6. PF1442G物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)分子式：C₄₃H₇₂N₄O₁₄

(3)質譜(HR-ESI-MS)：實測值869.5150(M+H)⁺，計算值869.5123

(4)比旋光度：[α]_D ²⁴=-46.9°(c=1.0，MeOH)

(5)紫外線吸收光譜λ_maxnm(E^% _cm)

[MeOH]：203(466)

[0.1N HCl-MeOH]：207(89)

[0.1N NaOH-MeOH]：211(1429)

(6)紅外線吸收光譜ν_maxcm^-1(KBr)：3470,2961,2934,2875,2861,1741,1660,1490,1465,1419,1379,1319,1288,1213,1083

(7)¹H-NMR光譜(500MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.83(t,9H),1.23~1.30(m,12H),1.40(d,12H),1.39~1.42(m,6H),1.70~1.76(m,6H),1.97(s,3H),2.08(m,2H),2.97(s,12H),4.12(m,1H),4.22(m,1H),5.22(m,3H),5.29(m,5H)

(8)¹³C-NMR光譜(125MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：173.1 s,173.1 s,173.0 s,172.9 s,172.6 s,172.3 s,172.3 s,172.0 s,171.5 s,73.8 d,73.8 d,73.8 d,70.8 d,61.2 t,53.9 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,32.5 t,32.5 t,32.5 t,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.6 t,31.6 t,31.6 t,31.0 t,25.9 t,25.9 t,25.9 t,23.5 t,23.5 t,23.5 t,20.8 q,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.6 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q

(9)溶解性：於甲醇、氯仿、DMSO中可溶

7. PF1442H物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)分子式：C₄₄H₇₆N₄O₁₃

(3)質譜(HR-ESI-MS)：實測值869.5489(M+H)⁺，計算值869.5487

(4)比旋光度：[α]_D ²⁴=-30.6°(c=1.0，MeOH)

(5)紫外線吸收光譜λ_maxnm(E^% _cm)

[MeOH]：202(319)

[0.1N HCl-MeOH]：206(146)

[0.1N NaOH-MeOH]：212(1480)

(6)紅外線吸收光譜ν_maxcm^-1(KBr)：3438,2954,2933,2861,1739,1656,1484,1466,1420,1378,1329,1294,1215,1082

(7)¹H-NMR光譜(500MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.83(t,12H),1.23~1.30(m,16H),1.40(d,9H),1.39~1.46(m,8H),1.73(m,8H),2.96(s,9H),3.05(s,3H),3.87(dd,1H),3.99(dd,1H),5.21(m,4H),5.27(m,3H),5.32(br-s,1H)

(8)¹³C-NMR光譜(125MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：173.4 s,173.2 s,173.1 s,173.0 s,172.4 s,172.3 s,172.3 s,171.2 s,73.9 d,73.9 d,73.9 d,73.9 d,60.0 d,59.7 t,53.9 d,53.9 d,53.9 d,32.6 q,32.5 t,32.5 t,32.5 t,32.5 t,31.8 q,31.8 q,31.8 q,31.6 t,31.6 t,31.6 t,31.6 t,25.9 t,25.9 t,25.8 t,25.8 t,23.5 t,23.5 t,23.5 t,23.5 t,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q

(9)溶解性：於甲醇、氯仿、DMSO中可溶

8. PF1442I物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)分子式：C₄₂H₇₂N₄O₁₂

(3)質譜(HR-ESI-MS)：實測值825.5231(M+H)⁺，計算值825.5225

(4)比旋光度：[α]_D ²⁴=-58.9°(c=0.19，MeOH)

(5)紫外線吸收光譜λ_maxnm(E^% _cm)

[MeOH]：203(559)

[0.1N HCl-MeOH]：204(379)

[0.1N NaOH-MeOH]：213(1483)

(6)紅外線吸收光譜ν_maxcm^-1(KBr)：3441,2956,2935,2872,2857,1740,1658,1484,1466,1421,1379,1329,1294,1214,1082

(7)¹H-NMR光譜(500MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.83(t,9H),0.96(t,3H),123~1.30(m,12H),1.40(d,12H),1.39~1.47(m,8H),1.69~1.76(m,8H),2.96(s,12H),5.21(m,4H),5.29(br-s,4H)

(8)¹³C-NMR光譜(125MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：173.1 s,173.1 s,173.1 s,173.1 s,172.3 s,172.3 s,172.3 s,172.3 s,73.9 d,73.9 d,73.9 d,73.9 d, 53.9 d,53.9 d,53.9 d,53.9 d,33.7 t,32.5 t,32.5 t,32.5 t,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.9 q,31.6 t,31.6 t,31.6 t,25.9 t,25.9 t,25.9 t,23.5 t,23.5 t,23.5 t,19.6 t,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.7 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q,14.1 q(9)溶解性：於甲醇、氯仿、DMSO中可溶

製造例4 PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442G、PF1442H、PF1442I、P1442J物質之製造

於製造例1所得之培養物中，添加50%丙酮水280L，攪拌後，以離心分離機除去米、菌體，以50%丙酮水80L洗淨。減壓下自所得萃取液餾除丙酮獲得濃縮液160L。該濃縮液以氫氧化鈉水溶液調整至pH9.0後，以丁醇134L萃取活性成分，減壓下餾除溶劑，獲得濃縮液2.5L。將以該油狀物質塗抹矽膠400g(WAKOGEL C300，和光純藥公司製)者裝載至矽膠管柱400g(WAKOGEL C300，和光純藥公司製)，以10%甲醇-氯仿11L作為溶劑予以展開。

將以所得溶離液塗抹矽膠350g(球狀矽膠C60，NACALAI TESQUE公司製)者裝載至矽膠管柱700g(球狀矽膠C60，NACALAI TESQUE公司製)之上部，以10%丙酮-己烷、20%丙酮-己烷、30%丙酮-己烷、50%丙酮-己烷、丙酮、10%甲醇-氯仿、30%甲醇-氯仿每次各5L作為溶劑予以展開。將該等展開溶劑中10%丙酮-己烷、20%丙酮-己烷、30%丙酮-己烷之溶離部分合併者予以濃縮乾燥 ，獲得油狀物質87.0g。

將所得油狀物質裝載於ODS矽膠管柱150g(COSMOSIL 75 C18-OPN，NACALAI TESQUE公司製)之上部，以0.01%三氟乙酸水溶液、20%甲醇水、50%甲醇水溶液、60%甲醇水、80%甲醇水、90%甲醇水、甲醇、50%甲醇-氯仿每次各500ml作為溶劑予以展開。將該等展開溶劑中90%甲醇水、甲醇、50%甲醇-氯仿之溶離部分合併者予以濃縮乾燥，獲得油狀物質81.3g。

將所得油狀物質裝載於SEPHADEX LH-20管柱500g(AMERSHAM BIOSCIENCES．AB公司製)之上部，以甲醇展開，獲得以下所示之2個溶離部分(溶離部分1：12.8g，溶離部分2：44.8g)。

將以所得溶離液2塗抹矽膠25g(球狀矽膠C60，NACALAI TESQUE公司製)者裝載至矽膠管柱180g(球狀矽膠C60，NACALAI TESQUE公司製)之上部，以50%丙酮-己烷、10%丙酮-己烷-1、10%丙酮-己烷-2、20%丙酮-己烷-1、20%丙酮-己烷-2、50%丙酮-己烷、丙酮、30%甲醇-氯仿、甲醇每次各500ml作為溶劑予以展開。將該等展開溶劑中20%丙酮-己烷-1、20%丙酮-己烷-2、50%丙酮-己烷、丙酮、30%甲醇-氯仿之溶離部分合併者予以濃縮乾燥，獲得油狀物質23.9g。

將所得之油狀物質及溶離部分1裝載於逆相矽膠管柱400g(COSMOSIL 75 C18-OPN，NACALAI TESQUE公司製)之上部，以75%甲醇水1.5L、80%甲醇水1.5L、90% 甲醇水800ml、甲醇作為溶劑展開，濃縮活性成分，獲得含PF1442A、D、G、H、I之溶離部分5.5g、溶離部分3：17.9g及溶離部分4：5.23g。

將溶離部分3裝載於SEPHADEX LH-20管柱500g(AMERSHAM BIOSCIENCES．AB公司製)之上部，以甲醇展開，獲得PF1442A 15.0g。

將溶離部分4裝載於SEPHADEX LH-20管柱500g(AMERSHAM BIOSCIENCES．AB公司製)之上部，以甲醇展開，獲得油狀物質2.7g。

將所得油狀物質2.7g分成2次供於ODS-HPLC(INERTSIL ODS-3， 50mm×500mm，GL SCIENCES公司製)，自80%乙腈水溶液至100%乙腈梯度系溶劑以流速50ml/min，使用UV檢測波長210nm進行展開，將活性成分濃縮乾燥，獲得PF1442A 2.1g、PF1442C 331.9mg、PF1442F 179.2mg。

由以上之操作，自100kg之培養物合計獲得17.1g之PF1442A。其與WO2004/044214號公報(專利文獻2)中記載之FKI-1033物質之製造法(自5.7kg之培養物獲得86.5mg)相比，提高10倍以上之生產性。

1. PF1442J物質之物理化學性狀

(1)顏色及性狀：無色粉末

(2)分子式：C₄₃H₇₄N₄O₁₂

(3)質譜(HR-ESI-MS)：實測值839.5368(M+H )⁺，計算值839.5381

(4)比旋光度：[α]_D ²⁴=-58.7°(c=0.42，MeOH)

(5)紫外線吸收光譜λ_maxnm(E^% _cm)

[MeOH]：202(289)

[0.1N HCl-MeOH]：207(144)

[0.1N NaOH-MeOH]：212(1402)

(6)紅外線吸收光譜ν_maxcm^-1(KBr)：3471,3323,2953,2928,2861,1752,1650,1550,1490,1467,1412,1376,1341,1318,1294,1213,1179,1117,1078

(7)¹H-NMR光譜(500MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：0.92(m,12H),1.33~1.40(m,16H),1.45~1.50(m,20H),1.75~1.90(m 8H),3.06(s,6H),3.07(s,3H),4.54(m,1H),4.85(m,1H),5.25~5.40(m,6H)

(8)¹³C-NMR光譜(125MHz，D₂O+0.1mM KSCN)δ(ppm)：174.0 s,173.2 s,173.1 s,173.1 s,172.6 s,172.4 s,172.3 s,172.0 s,76.6 d,73.9 d,73.7 d,73.7 d,54.7 d,54.1 d,53.7 d,49.0 d,32.9 t,32.5 t,32.5 t,32.5 t,32.4 t 31,.9 q,31,.9 q,31,.9 q,31.6 t,31.5 t,31.5 t,26.0 t,26.0 t,25.9 t,25.9 t,23.5 t,23.5 t,23.5 t,23.4 t,17.3 q,14.8 q,14.6 q,14.6 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q,14.3 q

(9)溶解性：於甲醇、氯仿、DMSO中可溶

試驗例 試驗例1 對於棉蚜(Aphis gossypii：蚜類害蟲)之效果

自花盆栽培之胡瓜切取直徑2.0cm之葉盤，放置於5cm之培養皿中之瓊脂膠上。於其中散佈調製為50%丙酮水(加用0.05% Tween20)之特定濃度之藥液。風乾後，於其中放養1齡幼蟲。隨後，將培養皿蓋上，靜置於25℃恆溫室(16小時亮時期-8小時暗時期)中。放養3天後，觀察蟲的生死，依據下述式算出蟲死亡率。試驗以2重複進行。

蟲死亡率(%)={死亡蟲數/(存活蟲數+死亡蟲數)}×100

其結果，由100ppm之莖葉處理，PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442H、PF1442I、PF1442J顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性，由10ppm之莖葉處理，PF1442A、PF1442C、PF1442I、PF1442J顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性，由2.5ppm之莖葉處理，PF1442I顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性。

試驗例2 對桃蚜(Myzus persicae：蚜類害蟲)之效果

自花盆栽培之甘藍切取直徑2.8cm之葉盤，放置於5.0cm之培養皿中之瓊脂膠上。於其中放養4隻桃蚜成蟲。一天後，抓除成蟲同時將葉盤上產下之1齡幼蟲數調整為10隻。於其中散佈調製為50%丙酮水(加用0.05% Tween20)之特定濃度之藥液。風乾後，將培養皿蓋上，靜置於25℃恆溫室(16小時亮時期-8小時暗時期)中。放養3天後，觀察蟲的生死，依據下述式算出蟲死亡率。試驗以2重複進行。

蟲死亡率(%)={死亡蟲數/(存活蟲數+死亡蟲數)}×100

其結果，由2ppm之莖葉蟲體處理，PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442H、PF1442I顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性。

試驗例3 對赤鬚細綠霞龜(Trigonotylus caelestialium：龜蟲類害蟲)之效果

自花盆栽培之播種7天後之水稻苗4株上，散佈調整為50%丙酮水(加用0.05% Tween20)之特定濃度之藥液。風乾後，將花盆上蓋上塑膠圓筒，於圓筒中放養5隻赤鬚細綠霞龜2齡幼蟲。隨後，將圓筒蓋上，靜置於25℃恆溫室(16小時亮時期-8小時暗時期)中。放養2天後，觀察幼蟲的生死，依據下述式算出蟲死亡率。試驗以2重複進行。

蟲死亡率(%)={死亡蟲數/(存活蟲數+死亡蟲數)}×100

其結果，由20ppm之莖葉處理，PF1442A顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性。

試驗例4 對偽黑尾葉蟬(Nephotettix cincticeps：葉蟬類 害蟲)之效果

自花盆栽培之播種7天後之水稻苗4株上，散佈調整為50%丙酮水(加用0.05% Tween20)之特定濃度之藥液。風乾後，將花盆上蓋上塑膠圓筒，於圓筒中放養10隻偽黑尾葉蟬2齡幼蟲，將圓筒蓋上，靜置於25℃恆溫室(16小時亮時期-8小時暗時期)中。處理6天後，觀察幼蟲的生死，依據下述式算出蟲死亡率。試驗以2重複進行。

蟲死亡率(%)={死亡蟲數/(存活蟲數+死亡蟲數)}×100

其結果，由20ppm之莖葉處理，PF1442A顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性。

試驗例5 對西方花薊馬(Frankliniella occidentalis：薊馬類害蟲)之效果

自花盆栽培之菜豆切取直徑2.8cm之葉盤，放置於5.0cm之培養皿中之濕潤脫脂綿上。於其中散佈調製為50%丙酮水(加用0.05% Tween20)之特定濃度之藥液。風乾後，於其中放養1齡幼蟲。隨後，將培養皿蓋上，靜置於25℃恆溫室(16小時亮時期-8小時暗時期)中。放養6天後，觀察蟲的生死，依據下述式算出蟲死亡率。試驗以2重複進行。

蟲死亡率(%)={死亡蟲數/(存活蟲數+死亡蟲數)}×100

其結果，由100ppm之莖葉處理，PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442H、 PF1442I、PF1442J顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性，由50ppm之莖葉處理，PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442I顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性。

試驗例6 對溫室白粉虱(Trialeurodes vaporariorum：粉虱類害蟲)之效果

於籠中，於花盆栽培之菜豆上放養溫室白粉虱成蟲並使其產卵。1天後抓除成蟲，將菜豆盆栽在25℃恆溫室(16小時亮時期-8小時暗時期)中栽培。於產卵後7天確認大部分卵已孵化，自菜豆之雙葉切取直徑2.8cm之葉盤，放置於5cm之培養皿中之濕潤脫脂綿上。於其中散佈調整為50%丙酮水(加用0.05% Tween20)之特定濃度之PF1442A之稀釋液。風乾後，將培養皿蓋上，靜置於25℃恆溫室(16小時亮時期-8小時暗時期)中。放養8天後，觀察蟲的生死，依據下述式算出蟲死亡率。試驗以2重複進行。

蟲死亡率(%)={死亡蟲數/(存活蟲數+死亡蟲數)}×100

其結果，由2.5ppm之莖葉蟲體處理，PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442H、PF1442I、PF1442J顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性，由1ppm之莖葉蟲體處理，PF1442A顯示蟲死亡率80%以上之高殺蟲活性。

試驗例7 對番茄刺皮癭蟎(Aculops lycopersici：刺皮癭蟎類害蟲)之效果

使番茄刺皮癭蟎寄生於花盆栽培之番茄上。於其中散佈調整為50%丙酮水(加用0.05% Tween20)之特定濃度之PF1442A之稀釋液。風乾後，將番茄盆栽於25℃恆溫室(16小時亮時期-8小時暗時期)中栽培。處理2天後，採集2小葉觀察葉上之蟲的生死，依據下述式算出蟲死亡率。試驗以2重複進行。

蟲死亡率(%)={死亡蟲數/(存活蟲數+死亡蟲數)}×100

其結果，由100ppm之莖葉蟲體處理，PF1442A顯示蟲死亡率100%以上之高殺蟲活性。

試驗例8 對松木線蟲(植物寄生性線蟲)之效果

為試驗松木線蟲增殖抑制效果，使用早已悉知之綿球試驗法。以昆蟲針固定脫脂綿綿球(直徑5mm)，以微滴管注入以甲醇溶解之PF1442物質25μg。於乾燥器中減壓約30分鐘，蒸發去除溶劑，作為供試綿球。檢測菌的灰色黴在包含馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基之培養皿上於22℃培養4天。將供試綿球置於該培養皿中央，於其中注入1500隻松木線蟲。該培養皿在26℃培養5天，由松木線蟲對灰色黴之攝食度，評價PF1442A物質之活性。

其結果，顯示PF1442A、PF1442E之攝食20%以下，PF1442F之攝食為40%以下之高驅蟲活性。

試驗例9 對雞蛔蟲(Ascaridiidae galli：線蟲類)之成蟲之效果(試驗管內試驗)

由雞蛔蟲(A.galli)之成蟲運動性變化評價PF1442物質之活性。將PF1442物質溶解於二甲基亞碸後，以使PF1442物質濃度成為50ppm之方式添加於以林格式液(Ringer’s solution)溶解之雞蛔蟲培養液中。每一培養液放入各6隻雞蛔蟲成蟲，在41℃培養。培養開始後24小時，觀察雞蛔蟲成蟲之運動性，評價PF1442物質活性。

其結果，PF1442A、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442H、PF1442I、PF1442J顯示自動運動停止蟲體數4隻以上之高驅蟲活性。

試驗例10 對犬絲蟲(線蟲類)之效果

由犬絲蟲之微絲蚴之運動性變化評價活性。將PF1442物質之濃度成為0.1ppm之方式溶解於RPMI 1640液體培養基中之後，每一培養液放入各20隻犬絲蟲之微絲蚴，在37℃培養。培養開始後48小時，觀察犬絲蟲之微絲蚴之運動性，評價活性。

其結果，PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442F、PF1442G、PF1442H、PF1442I顯示2/3以上之蟲體死亡之高驅蟲活性。

試驗例11 對雞蛔蟲(Ascaridiidae galli：線蟲類)之成蟲之試驗(雞之驅蟲試驗)

以使PF1442物質成為15mg/kg之方式填充於明膠膠囊中，對由糞便檢查確認已感染雞蛔蟲之雞蛔蟲人工感染雞，使用胃管一次經口投予。投予後，計算7天內各雞排出之蟲體數。投予7天後進行解剖，計算腸內殘存之蟲體數並由下數式算出排蟲率。

排蟲率(%)={7天內之排出蟲體數÷(7天內排出蟲體數+殘存蟲體數)}×100

其結果，PF1442A、PF1442D、PF1442I顯示50%以上之高驅蟲活性。

試驗例12 對巴西鼠鉤蟲(Nippostrongylus brasiliensis：線蟲類)成熟幼蟲之效果(對於小鼠之驅蟲試驗)

於巴西鼠鉤蟲(N.brasiliensis)人工感染之小鼠，使用胃管一次經口投予以使PF1442物質成為50mg/kg之濃度之方式懸浮於0.05%羧甲基纖維素(CMC)溶液。投予3天後進行解剖計算寄生於小腸內之巴西鼠鉤蟲數，以未投藥感染小鼠作為對照組，以下述式算出驅蟲率(%)。一投予區小鼠設為3隻，驅蟲率以每一投予區之平均值表示。試驗期間小鼠死亡之情況將死亡小鼠除外，求得驅蟲率。

驅蟲率(%)={(對照小鼠寄生蟲體數-投藥感染小鼠寄生蟲體數)÷對照小鼠寄生蟲體數}×100

其結果，PF1442A、PF1442C、PF1442D、PF1442E、PF1442I顯示50%以上之高驅蟲活性。

試驗例13 對小鼠之急性經口毒性

以使PF1442A物質成為300mg/kg之濃度之方式懸浮於芝麻油中，使用胃管對Jcl：ICR系雄小鼠之胃內1次經口投予。觀察期間設為14天，於投予日進行頻回觀察。投予後10天後，於14天後進行觀察及體重測定。一投予區小鼠設為3隻。

觀察期間，未見到小鼠異常，亦無死亡個體。於體重推移顯示順暢增加。

試驗例14 對貓蚤(蚤類)之效果

為試驗對於貓蚤之殺蟲效果，使用早已知悉之濾紙接觸試驗法。將使PF1442A物質成為50μg/cm²之方式調整之丙酮稀釋溶液滴加於濾紙(直徑3.8cm)上，在室溫使丙酮風乾。將經藥劑處理之濾紙以無間隙地裝入200mL安瓿瓶之蓋(直徑3.7cm)中。於200mL體積安瓿中放養25隻自羽化3天後隻貓蚤成蟲，以嵌入有經藥劑處理之濾紙之安瓿蓋蓋住。將安瓿以使貓蚤接觸濾紙之方式倒立並靜置。放養3天後觀察生死，依據下述式算出蟲死亡率。試驗以3重複進行。暴露72小時後觀察貓蚤生死，依據下述式算出蟲死亡率。

死亡率(%)={蟲死亡數/(生存蟲數+死亡蟲數)}×100

其結果，PF1442A顯示50%以上之高殺蟲活性。

PF1442物質由於對蚜類害蟲、薊馬類害蟲、粉虱類 害蟲、葉蟬類害蟲、龜蟲類害蟲、刺皮癭蟎類害蟲、植物寄生性線蟲、蚤類、線蟲類具有死蟲效果及對於線蟲類具有驅蟲效果，故確認對於有害生物之防除有較大貢獻者。

寄存編號：FERM BP-11417

Claims (15)

1. 一種以下式(1)表示之PF1442物質， [式中，R₁、R₂及R₃之組合為下表所示之任一種：
2. 一種有害生物防除劑，其含有一種以上之如申請專利範圍第1項之物質。
3. 一種動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲防除劑，其含有如申請專利範圍第1項之PF1442物質或以下式(2)表示之PF1442A物質而成：
4. 如申請專利範圍第3項之防除劑，其係使用作為動物用藥。
5. 如申請專利範圍第3或4項之動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲防除劑，其中前述寄生蟲為蚤目類或線蟲類。
6. 一種農園藝用殺蟲劑，其包含如申請專利範圍第1項之PF1442物質或如申請專利範圍第3項之PF1442A物質而成。
7. 如申請專利範圍第6項之農園藝用殺蟲劑，其係使用於防除自半翅目害蟲、纓翅目害蟲、蜱蟎目及植物寄生性線蟲所成組群選出之害蟲。
8. 一種輪枝孢屬(Verticillium sp.)PF1442或其變異 株。
9. 一種製造如申請專利範圍第1項之PF1442物質或如申請專利範圍第3項之PF1442A物質之方法，其包含培養屬於輪枝孢屬之PF1442物質或PF1442A物質之生產菌，且自該培養物中採集PF1442物質或PF1442A物質而成，於製造PF1442A物質時，前述生產菌為輪枝孢屬(Verticillium sp.)PF1442。
10. 一種有害生物之防除方法，其包含對有害生物或其生育場所施用有效量之如申請專利範圍第1項之PF1442物質而成。
11. 一種動物內部寄生蟲或動物外部寄生蟲之防除方法，其包含對動物內部寄生蟲或動物外部寄生蟲施用有效量之如申請專利範圍第1項之PF1442物質或如申請專利範圍第3項之PF1442A物質而成。
12. 一種農園藝害蟲之防除方法，其包含對農園藝上之害蟲施用有效量之如申請專利範圍第1項之PF1442物質或如申請專利範圍第3項之PF1442A物質。
13. 一種如申請專利範圍第1項之PF1442物質之用途，其係用以製造有害生物防除劑。
14. 一種如申請專利範圍第1項之PF1442物質或如申請專利範圍第3項之PF1442A物質之用途，其係用以製造動物用內部寄生蟲防除劑或動物用外部寄生蟲防除劑。
15. 一種如申請專利範圍第1項之PF1442物質或如申 請專利範圍第3項之PF1442A物質之用途，其係用以製造農園藝用殺蟲劑。