TW201213333A - Crystal forms of tricyclic pyrazolopyrimidine derivative - Google Patents

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201213333 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種具有抑制熱休克蛋白質9〇 ( heat shoek pmtein 90 ; HSP 90 )作用之三環吡唑并嘧啶主鏈 的化合物之鹽酸鹽。 【先前技術】 HSP90係細胞内主要之分子伴侣（chaper〇ne )蛋白 質。分子伴侣蛋白質係指一種蛋白質，其係與各種蛋白 質結合’並辅助結合後蛋白質之折疊（f〇lding )。折疊時 必須HSP90的蛋白質群被統稱為JJSP90受質蛋白質 (HSP90 client protein)。 除了 HSP90以外’輔伴呂（cochaperone)'同伴蛋 白為（partner protein)、及親免素（immun〇phiiin)等之 複數種蛋白質雖被認為參與藉由HSP90之受質蛋白質的 折疊機制’且此等協同作用輔助HSP90受質蛋白質之折 疊（非專利文獻1 )，但其詳細尚未充分被闡明。 HSP90受質蛋白質被認為與HSP90或輔伴侶等形成 複5體’其後引起結構（conformation)變化而成為成熟 型’若藉由HSP90等卻未被正常折疊時，被認為將被予 以泛素化（ubiquitination )並藉由蛋白質酶體而被予以 分解（非專利文獻1〜非專利文獻4 )。 ' 近年來，H S P 9 0抑制劑被期待作為各種疾病（例如： 癌、阿茲海默氏症等之神經病變、心血管疾病、感染症、 自體免疫疾病或細胞凋亡所導致之細胞傷害相關疾病 等）之治療劑之候選（非專利文獻2 )。

-4- 201213333 *尤其’由於包含抗癌劑分子標的之許多癌相 質為HSP90受質番·白暂，私_ c n 白 欠H S P 9 0抑制劑被期待 癌劑之候選。已知例如：Her2、Raf、Akt、端粒酶^ 參與癌之發生或充進之複數種蛋白質為HSP90之受質| 白質（非專利文獻。。此等癌相關蛋白質被認為係藉： 利用HSP90作為分子伴伯蛋白質，分別自未成熟 成熟型蛋白質’而得以作用於細胞之癌化。經報告： 耐90雖係一種非僅癌細胞亦存在於正常細胞之蛋白 虞，但與正常細胞時相較，於癌細胞中，盥 之親和性高，其分子伴㈣所必要之ATp:se=: 予以活化（非專利文獻1〜3)。因此，Hsp9〇抑制劑被 認為得以癌細胞專一性地、同時將複數種癌相關蛋白質 予以去活化，作為強力且具有廣泛抗腫瘤範圍 (spectrum )之抗癌劑之候選而受到期待。 作為HSP90抑制劑，以往已知有：格爾德黴素 (geldanamycin)、除莠黴素（herbimycin)、17 烯丙基 胺基格爾德黴素（17-allylaminogeldanamycin ; 17-AAG ) 等（非專利文獻1〜非專利文獻4 )。此等化合物係藉由 與位於HSP90之N端的ATP結合袋（ATP binding p〇cket ) 結合’抑制HSP90與ATP之結合而抑制HSP90作為分 子伴但蛋白質之機能。又，上述以外，作為抑制S P 9 0 之化合物，亦有各種化合物已業經報告（專利文獻J、 專利文獻2、專利文獻3、非專利文獻5、及非專利文獻 6 )、三環吡唑并嘧啶衍生物亦已經報告（專利文獻4 )。 -5- 201213333 又’針對三環吡唑并嘧啶衍生物、以及同樣具有由 3 雜環所構成之縮合環構造的化合物，關於抗癌相關 等之用途已有複數篇報告（專利文獻5〜9、非專利文獻 7、及非專利文獻8)。 先前技術文獻 專利文獻 專利文獻1 國際公開第2005/28434號小冊； 專利文獻2 國際公開第2008/049 105號小冊； 專利文獻3 國際公開第2008/093075號小冊； 專利文獻4 國際公開第2008/035629號小冊； 專利文獻5 國際公開第2004/047755號小冊； 專利文獻6 國際公開第2006/0 1 5263號小冊； 專利文獻7 國際公開第2005/021568號小冊； 專利文獻8 國際公開第1998/043991號小冊； 專利文獻9 國際公開第2008/100447號小冊。 非專利文獻 非專利文獻 1 Medicinal Research Reviews ( 2006 ) Vol. 26, No. 3, 3 1 0-33 8 ； 非專利文獻 2 Trends in Molecular Medicine ( 2004 ) Vol.l〇, No. 6, 283-290 ； 非專利文獻 3 British Journal of Pharmacology ( 2005 ) 146, 769-780 ； 非專利文獻 4 Trends in Biochemical Sciences ( 2006) Mar, 31 ( 3)，164-1 72 ; s -6- 201213333 非專利文獻 5 Journal of Medicinal Chemistry ( 2005 )

Vol. 48, No. 13, 4212-4215 ； 非專利文獻 6 Journal of Medicinal Chemistry ( 2006 ) Vol. 49, No. 1, 38 1 -3 90 ； 非專利文獻 7 Organic & Biomolecular Chemistry (2003 ) Vol. 1, No. 23, 4166-41 72 ； 非專利文獻 8 Organic & Biomolecular Chemistry (2006 ) Vol. 4, No· 9，1723-1729。 【發明内容】 發明之概要 發明所欲解決之課題 三環。比唑并嘧啶衍生物顯示優異之HSP90抑制活 性’作為醫藥、尤其抗癌劑之利用受到期待。進一步， 若藉由改善此等衍生物之溶解性等之物性而提高吸收 性，從而提升其有效性，或藉由減少投予量而得以降低 其副作用’則醫療上之有用性將進一步提升。 又，用於醫藥品之物質，為得以不發生由於其不純 物所導致之預期外的副作用（例如：毒性等）而特別對 於高純度有所要求。再加上，醫藥原體在保持其品質之 冋時’得以長期間保存係屬重要，故發現可長期間保存 之高安定性的結晶具有工業上之意義。 解決課題之手段 本發月人等為提高三環°比唑并嘧啶衍生物之醫療上 的有用性，前述三環吡唑并嘧啶衍生物係抑制之 ATPase活性，並顯示抗腫瘤活性之新穎化合物，針對得 201213333 以提升溶解性、純度、安定性等之該衍生物的鹽等，包 含其製造戮力進行檢討。其結果發現：相較於三環吡唑 并嘧啶衍生物其本身（游離體），溶解性優異之2鹽酸鹽 及1鹽酸鹽；又非僅溶解性優異，且不純物含量少，進 一步殘留溶媒之含量亦少，再加上安定性亦優異之三環 吡唑并嘧啶衍生物1鹽酸鹽。進一步，分別確立了得以 確實製造該等鹽之方法而完成本發明。 即，本發明係有關以下[1 ]至[1 8]。 [1] 一種下述式（1)所表示之2-{4-胺基-2-[(3-氣 -4-曱氧基-5 -曱吡啶-2-基）甲基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1, 2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺之鹽酸鹽

[2]—種如[1]記載之式（1 )所表示之2- { 4-胺基 -2-[( 3-氣-4-曱氧基-5·甲吡啶-2-基）曱基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2,3，5-四氮雜苯并[〇(1]1-8-基}-：^曱基乙醯胺 之2鹽酸鹽之結晶。 [3 ]如[2]記載之結晶，其中於銅 Κ α射線（波長λ =1.54埃（A ))照射所得之X射線粉末繞射圖中，具有 第1圖所示之X射線繞射圖。 [4]如[2]記載之結晶，其中於銅Κ α射線（波長；I =1. 54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞射角度 2 0 =7.73、24.70、26.01、及 27.29 顯示特徵性波峰。 201213333 [5] 如[2]或[4]記載之結晶，其中於銅Κ α射線（波 長；I =1.54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞射 角度 20 =7.73、9.78、12.58、14.36、15.84、16.7 卜 17.17、 18.40、19.58、21.3 卜 22.85、23.62、24.13、24.70'26.01、 27.29、28.58、29.37 ' 30.65 ' 31.38 ' 33.52、35.25、及 3 6.8 7顯示主要波峰。 [6] —種如[1]記載之式（1)所表示之2- {4-胺基 -2-[ ( 3 -氣-4-甲氧基-5 -甲σ比0定-2-基）曱基]-2，7-二氮 硫雜-1, 2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -Ν-曱基乙醯胺 之1鹽酸鹽之結晶。 [7] 如[6]記載之結晶，其中於銅Κ α射線（波長λ =1.54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，具有第2圖 所示之X射線繞射圖。 [8] 如[6]記載之結晶，其中於銅Κα射線（波長λ =1.54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞射角度 20=9.43、12.70、13.03 > 15.33、16.10、16.84、18.55、 20.21' 20.89、21.32、22.93、24.73、25.10、25.40、26.10 ' 26·53、26.95、27.60、27.88、28.52、29.63、29.95、31.55、 32.13、33.40、34.95、及 38.70 顯示主要波峰。 [9] 如[6]記載之結晶，其中於銅Κ α射線（波長λ =1.54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，具有第3圖 所示之X射線粉末繞射圖。 [1 0]如[6]記載之結晶，其中於銅Κ 射線（波長λ =1. 54 A )照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞射角度 20 =8.07、9.45、13.07、15.39、16.16、16.90、20.83 ' 201213333 24.29、24.80、28.56、28.85 ' 31.26、32.17、32.87 > 及 3 4.1 1顯示主要波峰。 [11] 一種如[1]記載之式（1)所表示之2- {4-胺基 -2-[ ( 3 -氣-4-甲氧基-5-甲0比σ定-2-基）曱基]-2，7 -二鼠-6-硫雜-1, 2, 3，5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -Ν-甲基乙醯胺 之鹽酸鹽之結晶，其係乙醇含量為5000ppm以下。 [1 2]如[1 1 ]記載之結晶，其中鹽酸鹽為1鹽酸鹽。 [1 3 ] —種如[1 ]記載之鹽酸鹽之結晶之製造方法，其 特徵為於如[1]記載之式（1 )所表示之2-{ 4-胺基-2-[( 3-氣-4-曱氧基-5-曱°比。定-2-基）甲基]-2，7 -二氮-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺之溶液或懸 浮液中，逐滴添加氯化氫溶液。 [1 4] 一種如[2]記載之2鹽酸鹽之結晶之製造方法， 其特徵為於如[1]記載之式（1 )所表示之2-{ 4-胺基-2-[( 3-氣-4-曱氧基-5-曱°比。定-2-基）甲基]-2，7 -二氣-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺之溶液或懸 浮液中，逐滴添加2當量以上之氣化氫溶液。 [15]—種如[6]記載之1鹽酸鹽之結晶之製造方法， 其特徵為於如[1]記載之式（1 )所表示之2-{ 4-胺基-2-[( 3-氣-4-甲氧基-5-曱°比0定-2-基）甲基]-2，7 -二鼠-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺之溶液或懸 浮液中，逐滴添加1當量以上5當量以下之氣化氫溶液。

-10- 201213333 [1 6] —種醫藥，其係含有如[1 ]記載之鹽酸鹽作為有 效成分。 [1 7] —種抗腫瘤劑，其係含有如[1 ]記載之鹽酸鹽。 [18]—種醫藥組成物，其係含有如[2]至[12]中任一 記載之結晶。 發明之效果 藉由本發明，提供一種具有抑制 HSP90活性之2-{ 4-胺基-2-[(3-氣-4-曱氧基-5-曱吡啶-2-基）曱基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-甲基 乙醯胺之溶解性更為優異的2鹽酸鹽及1鹽酸鹽。又進 一步亦提供一種不純物含量少，且殘留溶媒量亦少，再 加上安定性亦優異之1鹽酸鹽。本發明之化合物有用於 作為抗腫瘤劑。 【實施方式】 本發明之實施形態 本發明係關於一種下述式（1 )

所表示之2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氯-4-甲氧基-5-曱吡啶 -2-基）曱基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd] 奠-8-基} -N-曱基乙醯胺（以下，於本說明書中，有時 記載作化合物（1 ))之鹽酸鹽及該.鹽酸鹽之結晶。其中， 結晶係指其内部構造係由構成原子（或其集團）以三次 元良好規則重複而成之固體，而與不具有如此良好規則 之内部構造的非晶質固體予以區別。 -11- 201213333 即使為相同化合物之結晶，由於結晶化條件之不 同，雖可能生成具有複數種不同内部構造及物理化學性 質的結晶（同質多形），本發明之結晶亦可為此等同質多 形之任一種，亦可為2種以上之同質多形的混合物。 又，下述所示，作為較佳結晶形態之本案發明之結 晶有：僅包含該結晶形態而成者；含有於與其他結晶之 混合物中者；含有於與非晶質之混合物中者等，其存在 形態不拘。 本發明之結晶可能因放置於大氣中吸收水分而附著 有附著水，或因於一般大氣條件下加熱至2 5至1 5 0 °C而 形成水合物。進一步，本發明之結晶亦可能附著殘留溶 媒，或於溶媒合物中含有結晶化時之溶媒。 本說明書中，雖根據X射線粉末繞射之數據表示本 發明之結晶，但X射線粉末繞射只要係藉由該領域中一 般所使用之手法進行測定、分析即可，可藉由例如：實 施例所記載之方法而進行。又，一般水合物或脱水物由 於結晶水之附著脱去，其晶格常數變化而可能對於X射 線粉末繞射中之繞射角（2 0 )造成變化。又，波峰之強 度亦可能因結晶之成長面等之不同（晶癖；crystal habit ) 等而變化。因此，根據X射線粉末繞射之數據表示本發 明之結晶時，除了. X射線粉末繞射中之波峰之繞射角與 X射線繞射圖一致的結晶之外，得自該等之水合物及脱 水物亦包含於本發明之範圍。 本發明之結晶之1種較佳形態係化合物（1 )之2鹽 酸鹽之結晶。化合物（1 )之2鹽酸鹽之結晶係於銅Κ α -12- 201213333 射線（波長；l = 1 ·54埃（A ))照射所得之X射線 射圖中，具有第1圖所示之X射線繞射圖。又， (1 )之2鹽酸鹽之結晶係於銅Κ α射線（波長λ = 照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞射角 = 7.73、24.70、26.01、及27.29具有特徵性波峰° 「特徵性波峰」意指於X射線粉末繞射圖中，最 強度為1 0 〇時之相對強度5 0以上之波峰。又，本 化合物（1 )之2鹽酸鹽之結晶亦為於銅Κ α射線 λ = 1.54A )照射所得之X射線粉末繞射圖中，於 度 20 =7.73、9.78、12.58、14.36、15.84、16.71、 18.40、19.58、21.3 卜 22.85、23.62、24.13、24刀0、 27.29 ' 28.58 ' 29.37、30.65 > 31.38、33.52 > 35. 3 6.87顯示主要波峰之結晶。其中，「主要波峰」 X射線粉末繞射圖中，最大波峰強度為1 00時之 度1 5以上之波峰。 本發明之結晶之另1種較佳形態係化合物（ 鹽酸鹽之結晶。該化合物（1 )之1鹽酸鹽之結晶 種形態係於銅Κ α射線（波長；I =1 ·54Α )照射所 射線粉末繞射圖中，具有第2圖所示之X射線繞 結晶。又’本形悲之結晶亦為於銅 Κ (2射線（ = 1.54Α)照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞 20=9.43、12.70、13.03、15.33、16.10、16.84、 20.2 卜 20.89、21.32、22.93、24.73、25.10、25.40、 26.53'26.95、27.60' 27.88、28.52、29.63、29.95、 32.13、33.40、34.95、及38.70顯示主要波峰之 粉末繞 化合物 1.54Λ) 度2 Θ 其中， 大波峰 發明之 (波長 繞射角 17.17 、 26.01 > 25、及 意指於 相對強 1 )之1 i中之1 得之X 射圖之 波長λ 射角度 18.55、 26.10 ' 3 1.55 ' 結晶。 -13- 201213333 其中，「主要波峰」意指於x射線粉末繞射圖中，最大波 峰強度為1 0 0時之相對強度3 0以上之波峰。 本發明之化合物（1 )之1鹽酸鹽之結晶之另1種形 態係於銅Κ α射線（波長人=1.5 4 A )照射所得之X射線 粉末繞射圖中，具有第3圖所示之X射線粉末繞射圖之 結晶。又’本形悲之結晶亦為於銅 Κ α射線（波長λ =1.54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞射角度 20 =8.07、9.45 ' 13.07、15.39、16.16、16.90、20.83、 24.29 ' 24.80 ' 28.56 ' 28.85 ' 31.26 > 32.17、32.87、及 3 4.1 1顯示主要波峰之結晶。其中，「主要波峰」意指於 X射線粉末繞射圖中，最大波峰強度為1 00時之相對強 度1 2以上之波峰。 2- { 4-胺基-2- [ ( 3 -氣-4-曱氧基-5-曱°比。定-2-基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1.，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺之鹽酸鹽化，一般係藉由於2- { 4-胺基 -2-[ ( 3-氯-4-曱氧基-5 -曱吡啶-2-基）曱基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺 之溶液或懸浮液中，逐滴添加氣化氫之溶液而進行。 所用溶媒只要某種程度將2- { 4 -胺基-2- [ (3 -氣-4_ 甲氧基-5 -曱°比。定-2-基）曱基]-2，7-二氮-6 -疏雜-1，2，3， 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基丨-N-曱基乙醯胺及氯化氫予以 溶解，且不抑制鹽酸鹽化者並無特別限定。作為如此溶 媒，可列舉例如：戊烧、己烧、庚烧、辛烧、異辛烧、 環己烷、甲基環己烷、苯、甲苯、二曱苯等之烴類；二 氣甲烷、三氯甲烷、1,2-二氣乙烷、氣苯等之鹵化烴類； -14- 201213333 二乙謎、二異丙鍵、二丁謎、四鼠α夫喃、2 -曱基四氮咬 喃、二嘮烷、曱基環戊醚等之醚類；乙酸曱酯、乙酸乙 酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸曱酯、丙酸乙酯等之酯 類；丙酮、甲基乙基酮、環戊酮、環己酮等之酮類；乙 腈、丙腈等之腈類；Ν,Ν-二曱基甲醯胺、Ν，Ν-二曱基乙 醯胺、Ν, Ν ’ -二曱基0米。坐咬、六曱基填酸三胺 (hexamethylphosphoramide )等之酸胺類；二甲亞石風等 之亞颯類；曱醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇 等之醇類、或水、及此等之混合物等，且較佳為酮類、 醇類、水、或此等之混合物，進一步較佳為醇類、水、 或此等之混合物，再進一步較佳為甲醇、乙醇、水、或 此等之混合物。 又’使2- ·{ 4 -胺基-2- [ ( 3 -氮-4-曱氧基-5 -曱。比0定-2_ 基）曱基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd] 奠-8-基} -N-甲基乙醯胺為溶液或懸浮液之際所使用之 溶媒與氯化氫溶液所使用之溶媒亦可相同、亦可不同。 所使用之氣化氫溶液之濃度雖無特別限制，但一般 為大於0.1mol/L之飽和溶液、較佳為大於0.5mol/L之飽 和溶液。 鹽酸鹽化之溫度只要所使用之溶媒不固化雖無特別 限制，但一般為-70°C至70°C，較佳為-20°C至50°C。 製造2鹽酸鹽時所使用之氯化氫的量，一般只要係 用於將2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4 -甲氧基-5 -曱吡啶-2-基） 曱基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1, 2，3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺予以2鹽酸化之必要量以上雖無特別 -15- 201213333 限定，但一般為2當量以上1〇〇去旦 田$以下，敕祛盔 $ 量以上20當量以下，進一步較佳旦 ·、、、备 以下。 田置以上10當量 製造1鹽酸鹽時所使用之氣化 Θ 將2-{ 4-胺基-2-[( 3-氯-4-甲氧基甲的里’只要係用於 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜笨 咬2基）甲基]_2, | 升[cdl 藍 s a 1 基乙醯胺予以1鹽酸化之必要量 』吳_ _基} -N-甲 以下雖無特別限定，但其量依賴：所鹽：鹽不析出之量 類、所使用之溶媒的量、及溫声 U之溶媒的種 當量以下，較佳W當量以上；當：般為1當量以上1〇 為1當量以上3當量以下。 田里从下，進一步較佳 製造2鹽酸鹽時，亦可添加 於添加種晶之時間點雖無特別限制：曰日：：種晶時’對 鹽成為過飽和之氣化氫濃度附但—般係於2鹽酸 亦因溶媒組成而異，作一炉 、加。氯化氫濃度雖 ^ 知必須添加2去番炉总 氣化氣。對於所使用之種晶的量雖^制 上之 o.ooooool當量以上i去昔 …、F制，但一般為

以上0.5當量以下，進：步丄較佳為當量 當量以下。 為0.0〇〇〇1當量以上（M a製造i鹽酸鹽時，亦可添加 添加種晶時’對於 4鹽之種 但一舻尨认1嘛A 之時間點雖無特別限制 奴係於1鹽酸鹽成為過飽和之氣化…制’ 虱化虱濃度雖亦因溶媒 添 1當量程度以上之氣# 、—一般必須添加 工I乳化虱。對於所使 限制，但-般為。._0〇〇1“二：種晶的量雖無 田里以上1當量以下，較佳 201213333 進一步較佳為 為 0.000001當量以上 0.5當量以下 0.00001當量以上0.1當量以下。 製造1鹽酸鹽之結晶且具有第 所示之X射線粉 ' π砂八物， 末繞射圖的結晶及具有第3圖所示之X私姑α 射線粉末繞射圖 的結晶，雖可分別藉由例如：下述實施伽 W 3至5所記載 之方法及實施例6至33所記載之方法而m — 乂以 •订，但並不限 定於此。製造具有第3圖所示之X射線扒士从 瓦扮末繞射圖的結

晶時’較佳為：反應液中，於鹽酸鹽成A 人芍過飽和之氯化 氫濃度附近下，將欲添加之氣化氫量以备 々母次少量，且次 數分成2次至1〇次程度等，階段式將氯化氫濃度予以提 高°具有第3圖所示之X射線粉末繞射圖的結晶之安定 性優異’且結晶中之殘留溶媒量，例如：处a ^ 、''σ aa 丫 < 殘留 乙醇量為低量。結晶中之殘留溶媒量較佳為6〇〇〇ppmw 下’更佳為5000ppm以下。 本發明之其他形態為一種醫藥，1 但适樂其係含有本發明之 鹽酉夂鹽或結晶作為有效成分；一種括 裡抗腫瘤劑，其係含有 本發明之鹽酸鹽或結晶。又 + # ^ ^ 係關於—種醫藥組成物， 其係含有本發明之鹽酸鹽或纟士曰 σ曰白 含有本發明之鹽酸鹽或杜 ^ ^ 日日作為有效成分之醫藥， 車乂佳為如供一種醫藥組成物之 社曰盥1接+、1 7〜、，其係含有本發明之 、·口日日與1種或2種以上之藥皋 m ^ ^ ^ ^ ^ 予上可接受之載體。本發明 之醬樂之投予形態並無特別 φ ΰτ , ^ ^ ^ ^ 制，經口或非經口投予雖 白J ’但較佳為經口投予。 本發明之醫藥組成物， Γ T w _0 至 >。卩分含有作為化合物 (1 )之本發明之鹽酸鹽或站 X '、、》日曰。該醫藥組成物中，作 201213333 為化合物（i )，亦可在太士议, j畀在本發明之結晶以外之晶形。該 醫藥組成物中所含之本率發 杀心明之結晶的比例，相對於該 醫樂組成物中之化合物（I、敫讲，及 口切、丄）整體，係0 〇1重量％〜99.9 重量％之範圍，只要含右你丨4 . Λ Λ n 女3有例如.〇·〇1重量％以上、0.05 重量％以上、0.1重量％以Λ ^ 里0以上、〇.5重量％以上、1重量％ 以上、2重量％以上、3重量％以上、4重量％以上、5重 量％以上、1〇重量％以上、2〇重量％以上、30重量％以 上、4 0重量％以上、5 〇番旦。 重里/〇以上、6〇重量％以上、70 重量％以上、80重詈％以μ ΟΛ - _ 篁/〇以上、90重量％以上、95重量％

以上、9 6重量％以上、9 7番| 〇/ u L 亶里/〇以上、9 8重量％以上、 9 9重量％以上、9 9 5會吾〇/ iv I· ηίΛ 重里/〇以上、99.6重量％以上、99.7 重量％以上、9 9.8重量％以点Q Q 0 i 篁/°以上或99·9重量％以上即可。醫 藥組成物中是否含有本幸私明 纟士 匁令茱^明之結晶，可藉由本說明書 所5己載之儀益分析方法（你丨士 · y a * 女ι例如·x射線粉末繞射、熱分 析、紅外線吸收光譜等）予以確認。 本發明之鹽酸鹽或結晶可使用作為HSP90抑制劑、 HSP90之ATPase活性抑制劑' HSi>9〇與ATp之結合抑 制劑，而含有本發明之鹽酸鹽或結晶之醫藥，特別較佳 為可作為抗癌劑使用。 HSP90之ATP活性，可使用該業者一般所使用之 ATPase分析予以檢查。例如：HSP9〇之ATpase活性可 於試驗化合物存在下或未存在下，使用HSP90重組蛋白 質及ATP予以檢測。或者’ ATPase分析只要實施例如.

Analytical Biochemistry 327，176·1 83 ( 2004 )或 NatUre 425, 407-410 ( 2003)所記載之方法即可。 • 18- 201213333 HSP90表現之抑制，可使用該業者一般所使用之北 方氏轉法潰（Northern blotting)、西方氏轉潰法（Western blotting)或ELISA等予以檢查。例如：自於試驗化合物 存在下或未存在下培養之細胞將mRNA予以回收、進行 北方氏轉潰法，並與試驗化合物未存在下比較，自於試 驗化合物存在下培養之細胞所回收之mRNA中之HSp9〇 mRNA里減少時，則將該試驗化合物鑑定為抑制hsp9〇 表現之化合物。或者’亦可根據例如：Cancer. Res· 65, 6401-6408 ( 2005 )所記載之方法實施西方氏轉潰法，檢 查HSP90蛋白質量。 HSP90與受質蛋白質結合之抑制，可使用例如：該 業者一般所使用之免疫沈殿及西方氏轉潰法予以檢查。 免疫沈殿及西方氏轉潰法只要實施例如·· j Bi〇1 chem. 277, 1 0346-10353 ( 2002 )所記載之方法即可。 抑制H S P 9 0與輔伴侣或親免素類結合之化合物’可 使用例如·該業者一般所使用之免疫沈澱及西方氏轉潰 法予以檢查。貫施例如：Nature 425，407-4 1 0 ( 2003 )所 δ己載之方法，於試驗化合物存在下或未存在下，檢查 HSP90與輔伴侶或親免素類之結合即可。 HSP90與ΑΤΡ結合之抑制’可使用例如：經標記之 ΑΤΡ與HSP90之結合試驗予以檢查。實施例如：j· Bi〇1

Chem.272，1 8608-186 13 ( 1997 )所記載之方法，於試驗 化合物之存在下或未存在下，檢查Hsp9〇與經標記之 ATP的結合即可。 201213333 HSP9〇之立體構开》（conformation)變化之抑制，可 使用例如：利用bis_ANS(l，l，-雙（4-苯胺基-5-萘磺酸）） 之立肢構形分析（conformational assay)予以檢查。立 體構形分析只要實施例如：J. Med. Chem. 47, 3865-3873 (2004)所記載之方法即可。 細胞之增殖抑制活性，可使用該業者一般所使用之 增殖抑制試驗法予以檢查。細胞之增殖抑制活性，可藉 由例如：如下述試驗例1所記載’比較於試驗化合物存 在下或未存在下之細胞（例如：腫瘤細胞）的增殖程度 而實施。增殖程度可使用例如：測定活細胞之試驗系統 予以檢查。作為活細胞之測定方法，可列舉例如：[3 Η ]_ 胸苷（thymidine )攝取（uptake )試驗、溴化去氧尿苷 (Bromodeoxyuridine ； BrdU )法或 MTT 分析等。 又’活體内（i n v i v 〇 )之抗腫瘤活性，可使用該業 者一般所使用之抗腫瘤試驗法予以檢查。可藉由例如： 將各種腫瘤細胞移植於小鼠、大鼠等，確認移植細胞移 入（engraft)後，將本發明之化合物予以經口投予、靜 脈内投予等’並於數日〜數星期後’比較藥劑未投予組 之腫瘤增殖與化合物投予組之腫瘤增殖，而確認本發明 之活體内之抗腫瘤活性。 本發明之鹽酸鹽或結晶，可使用於腫瘤或癌，例如： 肺癌、消化道癌、卵巢癌、子宮癌、乳癌、肝癌、頭頸 部癌、血癌、腎臟癌、睪丸腫瘤、前列腺癌、多發性骨 髓瘤、惡性黑色素·瘤等之皮膚癌、肉瘤等之治療。

-20- HSP90依賴性上昇 過量表現之癌症、 症等，更具體而言 等過量表現之癌症 之癌症’可列舉：HSP90 可見到HSP90受質蛋白質 ’雖可列舉例如：Her 2、 或可見到c-kit、PDGFR、 201213333 本《明之鹽酸鹽或結晶因具有HSP90抑 用於對於H S P 9 Π价切 90依賴性上昇之癌症的治療 異的癌症，但不限定於此等。 進一步，由於HSP90之下游，存在許多 癌症之因子群（RAs_MApK、ρΐ3κ、端粒起 HSP90予以抑制，則朝向此等因子之訊息傳 制，作為結果，亦將抑制上述因子之活化， 抑制劑之本發明之鹽酸鹽或結晶，就該觀點 以較佳用於各種癌症之治療。 本發明之醫藥組成物，含有本發明之 與藥學上可接受之載體，並可作為靜脈内 庄射、皮下注射等之各種注射劑、或藉由 ^投予等各種方法予以投予。藥學上可接 蕖學上可接丈之材料（例如：賦形劑、稀薄 /合媒等）’其係參與將本發明之鹽酸鹽或結 明之鹽酸鹽或1吉晶之組成#，自g器官或 他器官或臟器。 作為製劑之調製方法，彳因應投予法 劑（例如：口服劑或注射劑），並以—般所 的調製法加以調製。作為口服劑，可例示 散劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、錠劑、溶渴 制作用，可 。作為對於 受質蛋白質 之變異的癌 c-Met、Flt3 Raf等之變 被認為參與 篆等），若將 送將受到抑 故為HSP90 而言，亦得 酸鹽或結晶 射、肌肉内 口投予或經 之載體意指 !、添加劑、 4含有本發 器運送至其 擇適當之製 之各種製劑 如：錠劑、 丨、糖漿劑、 -2 1- 201213333 酿劑、乳劑、或油性至水性之懸浮液等。 ， 理口投予睹， 直接為游離體或鹽之形態之任一種均可。水 藉由與藥學上可接受之酸形成酸加成物製诏可 ^ ^ a 或成為鈉等之 鹼金屬鹽而予以調製。注射劑時，亦可 J y、製劑中使用农 疋劑、防腐劑或助溶劑等。也可將亦可能八 t έ有此荨Μ ba 劑等之〉谷液收納於容器中後，藉由冷凍乾燥等成 固形製劑使用時所調製之製劑。又，亦 、為作為 J將—次投旦 收納於一個容器中、又亦可將複數次投旦 里 1又了里收納於— 容器中。 個 作為固形製劑’可列舉例如：錠劑、散 … 顆救劑、 膠囊劑、丸劑、或錠劑。此等固形製劑亦 』興丰發明 鹽酸鹽或結晶一併含有藥學上可接受之添加物。 * * 加物’可添加例如：填充劑類、增量劑類、 〜 ⑷胡 蝥合劑類、 崩解劑類、溶解促進劑類、溼潤劑類或潤滑劑類，並。 因應必要選擇此等並加以混合而予以製劑化。 可 作為液體製劑’可列舉例如：溶液劑、糖漿 7巧】、跳 劑、乳劑、或懸浮劑。此等液體製劑亦可與本發明之 酸鹽或結晶一併含有藥學上可接受之添加物。作 | 物，可列舉例如：懸浮化劑或乳化劑，並可因應必 ^ 聲選 擇此等並加以混合而予以製劑化。 本發明之結晶可與其他抗腫瘤劑併用。例如：^ 切*腫 瘤抗生素、抗腫瘤性植物成分、生物反應調節物質 (Biological Response Modifier ; BRM)、荷爾蒙、維生 素、抗腫瘤性抗體、分子標靶藥、及其他抗腫瘤劑等。 -22- 201213333 更具體而言，作為烷化劑，可列舉例如：氮芬、氮 芥 N-環氧化物（nitrogen mustard N-oxide)或 I芬苯丁 酸（chlorambucil)等之烷化劑、卡波醌（carboquone) 或沙奥特帕（thiotepa)等之氮丙咬（aziridine)系烧化 劑、二〉臭甘露醇（dibromomannitol )或二漠半乳糖醇 (dibromodulcitol )等之環氧化物系烷化劑、可莫司汀 (carmustine )、環己亞石肖（lomustine )、司莫司汀 (semu stine )、鹽酸尼莫司汀（nimustine hydrochloride)、鍵尿佐菌素（streptozocin)、氣尿菌素 (chlorozotocin )或雷莫司汀（ranimustine )等之亞硝 基尿（nitrosourea )系烷化劑、二甲磺酸丁酯（busulfan )、 曱本確酸英丙舒凡（impr〇sulfan tosilate )或達卡巴仁 (dacarbazine )等。 作為各種代謝拮抗劑，可列舉例如：6 -硫醇嘌呤 (mercaptopurine )、6-硫鳥。票吟（thioguanine )或硫肌 苦（thioinosine )等之嘌呤代謝拮抗劑、氟尿嘧啶 (fluorouracil )、替加氟（tegafui·)、替加氟.尿嘧啶、 可莫氟（carmofur)、5、去氧 _5_ 氟尿苷（doxifluridine)、 溴尿苷（broxuridine)、阿拉伯糖基胞嘧啶（cytarabine) 或依諾他濱（enocitabine )等之嘧啶代謝拮抗劑、胺甲 葉酸（methotrexate )或三甲曲沙醛糖酸鹽（trimetrexate ) 等之葉酸代謝拮抗劑等。 作為抗腫瘤性抗生素，可列舉例如：絲裂黴素C (mitomycin C )、博來黴素（bleomycin )、丙胺博來黴素 (peplomycin )、道 4 黴素（daunorubicin )、阿柔比星 -23- 201213333 (aclarubicin)、艾徽素（doxorubicin)' 畢拉.魯比辛 (pirarubicin)、THP-阿黴素（adriamycin)、4’ -表艾黴 素（4’ -epidoxorubicin)或泛艾黴素（epirubicin)等之 蒽環（anthracycline )系抗生素抗腫瘤劑、色黴素 A3 (chromomycin A3)或放射菌素 D ( actinomycin D)等。 作為抗腫瘤性植物成分，可列舉例如：長春花鹼醢 胺（vindesine)、長春花新驗（vincristine)或長春花驗 (vinblastine)等之長春花生物驗（vinca alkaloid)類； 紫衫醇（paclitaxel)、对癌易（docetaxel)等之紫衫烧 (taxane)類；或依妥普賽（etoposide)或坦尼坡赛 (teniposide )等之差向鬼臼毒素（epipodophy llotoxin ) 類。 作為BRM ’可列舉例如：腫瘤壞死因子或吲哚美洒 辛（i n d 〇 m e t h a c i η )等。 作為荷爾蒙，可列舉例如：氫化皮質酮 (hydrocortisone)、糖皮質素（dexametha so ne )、曱基培 尼皮質醇（methylprednisolone)、培尼皮質醇、去氫差 向雄甾酮（prasterone)、貝皮質醇（betamethasone)、特 安皮質醇（triamcinolone)、康復龍（oxymetholone)、南 諸龍（nandrolone)、美替諾龍（methenolone)、石粦雌酉分 (fosfestrol)、炔雌醇（ethinyl estradiol)、氯地孕酮 (chlormadinone)或美普羅（medroxyprogesterone)等。 作為維生素可列舉例如：維生素C或維生素A等。 作為抗腫瘤性抗體、分子標靶藥，可列舉：賀癌平 (trastuzumab )、莫須瘤（rituximab )、爾必得舒 -24- 201213333 (cetuximab )、尼妥珠（nimotuzumab )、保路麗 (denosumab )、癌思停（bevacizumab )、英利昔 (infliximab)、基利克（imatinib mesylate)、艾瑞莎 (gefitinib)、得舒緩（erlotinib)、纾癌特（sunitinib)、 泰嘉錠（lapatinib)、蕾莎瓦（sorafenib)等。 作為其他抗腫瘤劑，可列舉例如：順韵（cisplatin )、 卡舶定（carboplatin)、益樂# (oxaliplatin)、諾瓦得士 (Tamoxifen )、喜樹驗（camptothecin )、好克癌 (ifosfamide)、環填醯胺（cyclophosphamide)、氮芬苯 丙胺酸（melphalan)、L-天冬醯胺酸酶（L-asparaginase)、 乙酿格雷晒（aceglatone)、西佐D南（sizofiran)、必醫你 舒（Picibanil )、丙卡巴肼（procarbazine )、哌泊漠烧 (pipobroman ) ' 新抑癌素（neocarzinostatin )、羥基尿 素（hydroxyurea )、烏苯美司（ubenimex )或克速鎮 (Krestin )等。 本發明中亦包含一種癌預防方法及/或治療方法，其 特徵為投予鹽酸鹽或結晶。 含有本如明之鹽酸鹽或結晶作為有效成分之醫藥組 成物的投予量並無特別限定，雖可因應病患的年齡、體 重、症狀等之各種條件予以適當選擇，但較佳為：因應 症狀，將有效成分以成人每曰lmg〜1〇〇〇mg，較佳為 〜5〇〇mg，更佳為5mg〜3〇〇mg’進一步更佳為5mg〜 lOOmg，每日投予！次〜數次，較佳為每日丄次或2次。 成為本發明之結晶之原料之2-丨4-胺基-2-[(3_氣_4_ 曱氧基-5-曱吡啶-2-基）曱基]_2,7_二氫_6-硫雜」2 3 -25- 201213333 5-四氮雜笨并[cd]奠_8_基} _N-甲基乙醯胺（游離體）及 其鹽，可根據例如以下所述之參考例予以製造。 以下例示實施例並詳細說明本發明。 實施例 (參考例1 ) 2- { 4-胺基-2_[ ( 3_氯_4_甲氧基·5_甲吡 咬-2-基）甲基]-2, 7-二氫_6·硫雜“，2, 3, 5·四氮雜苯并 [cd]奠-8-基丨-Ν -甲基乙醯胺（游“體）之製造 (1 ) 1- ( 2-胺基-4，6-二氯嘧啶 _5_ 基）·3_ 丁烯 “· 醇

ΝΗ 於包含市售之2-胺基_4,6_二氯嘧啶_5_羧醛（丨92§) 與N，N-二甲基甲醯胺（20ml)而成的混合物中，添加銦 粉（〇·〜）與鋅粉|，於室溫下添加硪化納 (〇_15g)與溴丙烯（i.73ml)並攪拌3小時。將反應混 合物予以石夕蒸土（ c e 1 i t e )過滤，於處液中添加乙酸乙酷， 以1N鹽酸、飽和食鹽水之順序洗淨。以無水硫酸鈉將有 機層乾燥、濃縮，於殘渣中添力己烷並濾取析出物，而 得到作為固體之標題化合物（1.7 5 8 ) ° 'H-NMRC DMSO-D6)5 ·2·55 2-69C2H,m), 4.95-5.09 (3H，m)，5.37( 1H，d，J“.lHZ)’ 5·67_5_77( 1H，m)，7.42 (2H, S). (2) 1- ( 2-胺基-4,6^ 氣唯。定-5-基）.2· ( 2,2-二甲 基·Π，3]雙環氧乙烷-4-基）6炫醇 201213333

將包含1-(2-胺基-4,6-二氯嘧啶-5_基）_3_ 丁烯-卜 醇（ 57.24g)、N-甲基-N-氧化嗎福啉（i47.6g)、四氫呋 喃（500ml)、丙酮（500ml)、水（500mi)、及四氧化锇 (Osmium tetroxide) ( 62mg)而成之混合物於室溫下攪 拌2天。確認原料消失後，添加飽和硫代硫酸鈉水溶液 (1 L ) ’將反應混合物於減壓下濃縮至約1 5 l。於殘渣 中添加氣化鈉並使之飽和，以四氫呋喃萃取。以無水硫 酸鈉將有機層乾燥’過濾後，於減壓下將濾液濃縮並餾 去溶媒。於所得到之殘渣中添加N，N-二曱基曱醯胺 (5〇〇ml)、2，2-二曱氧丙烷（210ml)、及對曱苯磺酸一 水合物（1 8.6 1 g )，於室溫攪拌1 4小時。於反應混合物 中添加飽和小蘇打（碳酸氫鈉）水（1L )與水（1L )後、 以乙酸乙酯萃取。將有機層以水、飽和食鹽水之順序洗 淨，以無水硫酸鈉乾燥。於減壓下將濾液濃縮至約 1 〇〇ml，於殘渣中添加己烷並濾取析出物，而得到作為固 體之標題化合物（ 53.88g)。 'H-NMRC DMSO-D6)5 ： 1.22-1.32( 6H, m), 1.72-2.23 (2H, m) , 2.50 ( 1H, s) , 3.50 ( 1H, td, J=14.2, 6.9Hz) 4-22-3.92 ( 2H, m) , 5.06-5.36 ( 2H, m) , 7.43 ( 2H, d, j=12.8Hz). ESI-MS m/z ： 308 ( M + H ) + . -27- 201213333 (3) 1- ( 2-胺基-4,6-二氯嘧啶-5-基）-2- ( 2,2-二甲 基-[1，3]雙環氧乙烷-4-基）乙烷-1-酮

Cr NT NH2 冰浴冷卻下，於包含1-(2-胺基-4,6-二氯嘧啶-5-基） -2- ( 2,2-二甲基-[1，3]雙環氧乙烷-4-基）乙烷-卜醇 (74.70g)與二甲亞砜（600ml)而成之混合物中，於室 溫下以1 5分鐘將無水乙酸（149mi )逐滴添加，並於同 溫度下攪拌1 8小時。確認原料消失後，將反應液冰鎮於 冰水中，濾取析出之固體’而得到標題化合物（6 8 · 2 6 g )。 H-NMR ( CDC13) (5 : 1.37 ( 3H，s)，l_42 ( 3H，s)， 2.9 8-3.06 ( 1H, m) , 3.32-3.40 ( 1H, m) , 3.67-3.72 ( 1H, m)，4.25-4.30 ( 1H，m)，4.57-4.64 ( 1H, m)，5.72 ( 2H， s ). ESI-MS m/z ： 306 ( M + H ) +. (4) 4 -氣- 3- [ ( 2,2-二曱基-1，3_雙環氧乙烷-4_基） 曱基]-1- (4 -曱氧基苄基）-1H-吡唑并[3,4-d]。密。定_6_胺 0

冰浴冷卻下’於包含1_( 2-胺基-4,6-二氣續D定 •2- ( 2,2-二甲基-[1，3]雙環氧乙烷-4 -基） 方 G 燒 __ 1 (61.23g)，根據美國專利US2003/18197號沐 ' 201213333 法所製造之（4-曱氧基苄基）-肼鹽酸鹽（41.50g)、及二 氣甲烷（600ml )而成之混合物中，以30分鐘添加三乙 胺（83.6 8ml )。緩慢升溫並攪拌17小時後，於反應混合 物中添加1 0 %檸檬酸水溶液、以二氯曱烷萃取。於以無 水硫酸鈉將有機層乾燥，並於減壓下濃縮所得之殘渣中 添加5 %擰檬酸水溶液，濾取析出物、以水洗淨，而得到 作為固體之標題化合物（ 73.84g)。 *H-NMR (CDC13) δ ： 1.36(3H,s),1.43(3H,s), 3.11 ( 1 Η , dd, J =14.7,8.1Hz ) , 3.43 ( 1 Η , dd, J =14.7, 5.2Hz),3.73-3.7 8( 4H,m),4.0 8( lH,dd,J =8.1, 6.0Hz), 4.54-4.61( lH,m) ,4.77(2H,brs) ,5.22(2H,s) ,6.83 (2H, d, J = 8.5Hz ) , 7.24 ( 2H , d, J = 8.5Hz ). ESI-MS m/z : 404 ( M + H ) +. (5 )二-t-丁基{ 4-氯-3-[ ( 2,2-二曱基-1，3-雙環氧 乙烷-4-基）甲基]-1-( 4-曱氧基苄基）-1H 比唑并[3,4-d] 嘧啶-6-基}亞胺基二碳酸酯

於包含4-氣-3-[ ( 2,2-二甲基-1，3-雙環氧乙烷-4-基） 曱基]-1- ( 4-曱氧基苄基）-1 Η 比唑并[3,4-d]嘧啶-6-胺 (72.83g )與四氫呋喃（700ml)而成之混合物中，添加 -29- 201213333 4-二曱基胺基吡啶（2.2〇g)與二-t-丁基二碳酸酯（86 μ 後’於室溫下攪拌1 2小時。藉由將反應混合物過渡後g ) 將於減壓下將濾液濃縮所得到之殘渣以二氡化矽凝膠管 柱色層分析（silica gel column chromatography)(乙酸 乙酯-己烷）純化，而得到作為非晶質之標題化合物 (70.00g) 〇 *H-NMR ( CDC13) (5 · 1.37 ( 3H, s) , 1.40 ( 3H, s), 1.44-1.46( 18Η, m) , 3.21-3.29( 1Η, m) , 3.48-3.55( 1H, m) ,3.74-3.81 (4H,m) ,4.09-4.15 (lH,m) ,4.58-4.66 (lH，m) ,5.48 (2H，dd，J =17.3,15.1 Hz) ,6.81 (2H, d, J = 7.8Hz) , 7.27-7.30 ( 2H, m). ESI-MS m/z : 604 ( M + H) +. (6)二-t-丁基[4-氯-3- (2,3-二羥丙基）-1-( 4-甲 氧基苄基）-1 Η 比唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]亞胺基二碳酸 酯 /

將二-t-丁基{4-氯-3-[(2,2-二甲基- i，3-雙環氧乙烷 -4-基）甲基]曱氧基节基）-1Η-°比嗤并[3,4-d]D密 。定_6-基}亞胺基二碳酸酯（53.85g)溶於乙腈（ 500ml) 中，添加氯化銅（Π )二水合物（30_39g )，於室溫下攪

-30- 201213333 拌2小時。於反應液中添加飽和氯化銨水溶液、以乙酸 乙醋萃取。以飽和食鹽水將有機層洗淨後，以無水硫酸 鈉乾煉並於減壓下濃縮。藉由以二氧化矽凝膠管柱色層 分析（乙酸乙酯-己烷）將所得到之殘渣純化，而得到非 晶質之標題化合物（37.7〇g)。 *H-NMR ( CDCI3) d ： 1.46 ( 18H, s) , 3.15 ( 1 H d

J = 3.7Hz)，3.23-3.33 ( 2Η，m)，3.62-3.82 ( 5Η, m) 4-26-4.34(lH，m)，5.49 (2H,t，J= 15.9Hz)，6·82( 2H d，J = 8.1 Hz )，7 ·2 5 -7.3 0 ( 2H, m ). ESI-MS m/z ： 564 ( M + H ) +. (7)二-t-丁基[8-經基- 2-(4 -曱氧基节基）_2，7 8 9 -四氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜苯并[cd]奠-4-基]亞胺基 二碳酸酯 /

N-N

冰浴冷卻下，於包含二-t-丁基[4-氣-3- ( 2, 3-二經丙 基）-卜（4-曱氧基苄基）-1H 比吐并[3,4-d]嘧啶_6·基] 亞胺基二碳酸酯（28_00g)、2, 4, 6-三甲吡啶（i 6 53ml )、 及脱水二氣甲烷（400ml)而成之浪合物中，逐滴添加添 加甲烷磺醯氣（4.23ml)後，於4eC下攪拌Η小時。於 反應混合物中添加1 〇 %檸檬酸水溶液’以二氣曱烧萃 -3 1 - 201213333 取。將有機層以無水硫酸鈉乾燥，於減壓下濃縮。將所 得到之殘渣溶解於N，N_二曱基甲醯胺（3〇〇ιηι),於冰浴 冷部下，添加硫氫化鈉一水合物（5.52g)後，於室溫下 攪拌I.5小時。於反應混合物中添加碳酸鉀（10.29mg)， 於5 0 C下加熱並進一步攪# 5小時。於反應混合物中添 加乙酸U旨，α 1()%擰檬酸水溶液、飽和食鹽水之順序 洗淨後i以無水硫酸鈉乾燥，於減壓下濃縮，以二氧化 石夕凝膠官柱色層分析（乙酸乙酯·己烷）將所得到之殘渣 純化，而得到做為固體之標題化合物（2〇 59g )。 H-NMR ( CDC13) <5 :1.45(l8H，s),2.39(lH，br s)，3.2 9-3.51 ( 4H，m)，4.58 ( 1H，br s)，3.76 ( 3H，s), 5.42-5.49 ( 2H, m) , 6.82 ( 2H, d, J = 8.6Hz) ,7.30 ( 2H, d, J = 8.6Hz). ESI-MS m/z ： 544 ( M + H) +. (8) 4-[雙（t_ 丁氧羰基）胺基]_2_(4曱氧基苄基） -2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠_8_基乙酸 酯

於氮氣氣圍下，於包含二-t-丁基[8_經基_2-(4 -甲氧 基节基）-2，7，8，9 -四氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜苯并[cd] 奠-4-基]亞胺基二碳酸酯（8.17g)、二曱亞砜（74ml)、 201213333 及吡啶（12ml )而成之混合物中將無水乙酸（)於 冰冷下逐滴添加’攪拌3 0分鐘後’於室溫下授掉1 5小 時。確認原料消失後，將反應混合物以乙酸乙g旨稀釋， 以飽和食鹽水洗淨。將有機層以無水硫酸鈉乾燥、於、咸 壓下濃縮。以二氧化矽凝膠管柱色層分析（乙酸乙醋_ 己烷）將所得到之殘渣純化’而得到作為非晶質之標題 化合物（6 · 1 5 g )。 lH-NMR( CDC13) 5 ： 1.44( 18H, s),2.26( 3H, s),3.77 (3H, s) ,3.88 ( 2H, s) ,5.50 ( 2H, s) ,6.68 ( 1H, s) ,6.8 3 (2H, d, J = 8.8Hz) ,7.31 ( 2H, d, J = 8.8Hz) ESI-MS m/z ： 584 ( M + H ) +. (9)二-t-丁基[2- ( 4-甲氧基苄基）-8_側氧·2, 7, 8, 9 -四氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氣雜苯并[cd]奠-4 -基]亞胺基 二碳酸酯

冰浴冷卻下’將4-[雙（t -丁氧羰基）胺基]-2- (4-曱氧基苄基）-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd] 奠-8-基乙酸酯（6.15g)、甲醇（200ml)、及碳酸鉀（〇.73g) 之混合物攪拌1.5小時。確認原料消失後，於反應混合 物中添加飽和氣化錢水溶液，以乙酸乙酯萃取。將有機 層以飽和食鹽水洗淨後，以無水硫酸鈉乾燥，於減壓下 濃縮而得到作為非晶質之標題化合物（5.70g )。 -33- 201213333 'H-NMR (CDC13) δ ： 1.46( 18H,s),3.84(2H,s), 3.77 ( 3H, s ) , 4.23 ( 2H, s) ,5.48( 2H, s ) , 6.83 ( 2H, d, J = 8.6Hz) ,7.32( 2H, d, J = 8.6Hz ). ESI-MS m/z ： 542 ( M + H ) +. (10)乙基{ 4-[雙（t-丁氧羰基）胺基]-2- ( 4-曱氧 基苄基）-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠 -8 -基}乙酸酉旨

將包含二-t-丁基[2-( 4-曱氧基苄基）-8-侧氧-2, 7, 8, 9-四氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-4-基]亞胺基 二碳酸酯（5.1 9g )、乙基（三苯基磷烷）乙酸酯（3.5 lg ) ' 及曱苯（300ml )而成之混合物於65 °C下攪拌13小時。 藉由將反應混合物於減壓下濃縮，將殘渣以二氧化矽凝 膠管柱色層分析（乙酸乙酯-己烷）純化，而得到非晶質 之標題化合物（3.78g)。 'H-NMR( CDC13) 5 ： 1.2 9( 3H, t, J = 7.1Hz), 1.69-1.77 (1H, m) , 2.37-2.40 ( 1H, m) , 2.46-2.52 ( 1H, m), 2.68-2.71 ( 2H, m) , 4.20 ( 2H, q, J = 7.1Hz) , 5.10-5.13 (1H, m) ,5.20( 2H, br s ). ESI-MS m/z : 612 ( M + H) +. -34- 201213333 2- (4·胺基 _2, 7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮 雜苯并[cd]奠_8_基）N-曱基乙醯胺三氟乙酸鹽

將乙基丨4_[雙（N丁氧羰基）胺基]-2-(4-曱氧基苄 基）-2, 7-二 土厂，7-二氫-6_硫雜_1，2,3,5-四氮雜苯并[(^]奠-8_基} 乙酸®1 (2.2§)溶解於40%曱基胺/甲醇溶液（40ml)， 於至溫下授拌2小時。以LC-MS確認反應終結、減壓餾 去溶媒。於所得到之殘渣中添加茴香醚（anisole) ( 2ml) 與二氣乙酸（40ml )，於65°C下攪拌1 5小時。將反應液 於減壓下濃縮’於殘渣中添加異丙醚-醚混合液、濾取析 出物’而得到做為固體之標題化合物（1.5 3 g )。 ESI-MS m/z ： 277 ( M + H) +. (12) 5-氣-4-羥基-6-曱基於酸（nicotinic acid)

將市售之4-羥基-6-曱基-菸酸（300mg )懸浮於乙腈 3ml ’添加N-氣丁二醯亞胺（38〇mg )，於室溫下攪拌30 分鐘後’加熱回流45分鐘。確認原料消失後，將反應液 予以冰冷、濾取析出物而得到作為固體之標題化合物 (324mg)。 *H-NMR( CD3OD) δ ：2.56(3H,s),8.50(1H,s). ESI-MS m/z ：188( M + H) +. (13 ) 4,5-二氯-6-曱基菸酸甲酯 -35- 201213333 泰、

Cl Ο 於5 -氣-4-經基-6-曱基终酸（ 320mg)中添加鱗醢氯 (phosphorus oxychloride)( 1.13ml)，加熱回流 2 小時。 將反應液減壓濃縮，於殘渣中冰冷下逐滴添加曱醇 (3ml )，於室溫下攪拌30分鐘後，予以減壓濃縮。冰冷 下於殘渣中添加飽和小蘇打水，以乙酸乙酯萃取。將有 機層以無水硫酸鈉乾燥後’餾去溶媒而得到做為固體之 標題化合物的粗體（ 436mg)。 ESI-MS m/z ： 220 ( M + H) +. (14) 5-氣-4-曱氧基-6-曱基菸酸曱酯

將粗4,5 -二氣-6-曱基菸酸甲 醇3ml’於氮氣氣流下、於冰冷下添加曱醇鈉（i2〇mg) 緩慢升溫至室溫、攪拌1 8小時。確認原料消失後，木》 下’添加飽和氣化敍水溶液，以氣仿基兩 取’將有機層i 無水硫酸鈉乾燥後，餾去溶媒並以-备& 一礼化矽凝膠營杠， 層分析（乙酸乙酯-己烷）純化而得到做 ^ f 合物（21〇mg)。 ’’固體之標題4 5 3·95 ( 4H, s), 'H-NMR ( CDC13 ) δ ： 2.67 ( 3Η, 4.00 ( 3H, s) , 8.76 ( 1H, s). ESI-MS m/z : 216 ( M + H) +· (15) ( 5 -氣-4-曱氧基-6-甲n比。定发、 )甲醇 -36- 201213333

將5-氣_4_甲氧基-6-曱基菸酸甲酯（1 .〇g )溶解於曱 醇3 0ml中，添加硼氫化鈉（1 ·7 5 g )，加熱回流1小時。 冰冷下’添加飽和氯化銨水溶液、以氣仿萃取3次，將 有機層以無水硫酸鈉乾燥後，餾去溶媒而得到作為油狀 物質之標題化合物（〇.92g)。 H-NMR(CDC13) δ ：2.63(3H, s), 4.00( 3H,s) 4.71 ( 2H , br s) , 8.33 ( 1H, s) ESI-MS m/z ： 188 ( M + H ) +. (16) 3-氣-5-(氯曱基）-4-曱氧基_2-曱吡咬

將（5 -氯-4-曱氧基-6-曱°比咬-3-基）甲醇（52〇mg) 溶解於氣仿2 0 m 1 ’冰冷下，添加亞硫醯氣（〇 3 8 m 1 )，同 溫度下攪拌3小時。將反應液濃縮、添加乙酸乙醋，以 飽和小蘇打水、水、飽和食鹽水之順序洗淨，將有機声 以無水硫酸鈉乾燥後，餾去溶媒並以二氧化石夕凝膠管才主 色層分析（乙酸乙酯-己烷）純化，而得到作為油狀物質 之標題化合物（ 550mg)。 'H-NMR ( CDC13 ) (5 ： 2.64 ( 3H, S) 4 ow 、 5 3Η, s ) 4.61 ( 2Η, s) , 8.35 ( 1Η, s) · ESI-MS m/z ： 206 ( M + H) +. (17) 3 -氣-4 -甲氧基-2,5 -二曱π比咬 -37- 201213333

將3 -氯- 5-(氣曱基）_4_甲氨波 土 ^斗τ乳基·2_曱吡啶（550mg) 溶解於曱醇10ml中，添加1〇%#Λ 、 、 ιυ/°纪妷（50mg)，冰冷下， 進行3小時常壓直接氮化。、、索+ *ro 了 Φ 土且恢虱化^慮去觸媒、減壓下餾去甲醇。 以氣仿萃取’將有機層以飽和小蘇打水洗淨以無水硫 馱鈉乾燥後，餾去溶媒並以二氧化矽凝膠管柱色層分析 (乙酸乙酯-己烷）純化’而得到作為油狀物質之標題化 合物（ 365mg)。 *H-NMR(CDC13) ^ : 2.25(3H,s) ,2.59( 3H,S), 3-89 ( 3H, s) , 8.16 ( 1H, s). ’ ESI-MS m/z · 172 ( M + H) +. (18 ) 3-氯-4-甲氧基-2，5-二甲吡啶卜氧化物

將3-氣-4-甲氧基-2, 5-二甲吡啶（i 8 lmg )溶解於二 氯甲烷5ml中，添加過氧化尿素（169mg)與苯二甲酸 針（219mg)。於室溫下攪拌2.5小時。於冰冷下添加^ 和硫代硫酸鈉水溶液，以氣仿稀釋，將水層以氣仿萃取 2次。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後，餾去溶媒而得到 作為固體之標題化合物（1 8 1 mg )。 'H-NMR( CDC13) (5 ： 2.24 ( 3H, s) , 2.62 ( 3H, s) 3-87 ( 3H, s) , 8.07 ( 1H, s). ESI-MS m/z : 188 ( M + H) +· -38- 201213333 (19) (3-氣-4-甲氧基-5-曱吡啶-2-基）曱醇

將3-氣-4 -曱氧基-2, 5-二甲吡啶1-氧化物（5 3 0mg) 懸浮於二氣曱烷 1 5ml中，於冰冷下添加無水三氟乙酸 (0 · 3 9ml )，於室溫下攪拌3小時。以氯仿稀釋並以飽和 小蘇打水洗淨，將水層以氣仿萃取。將有機層以無水硫 酸鈉乾燥後，餾去溶媒而得到作為油狀物質之標題化合 物（5 2 1 m g )。 'H-NMR (CDC13) δ ：2.29(3H,s),3.93(3H,s), 4.29 ( 1Η, br s ) , 4.72-4.74 ( 2H, m ) , 8.26 ( 1H, s ). ESI-MS m/z : 1 88 ( M + H ) +. (20 ) 3-氣-2 -(氣曱基）-4 -曱氧基-5-曱吼啶鹽酸鹽

將（3-氣-4-甲氧基-5-曱吡啶-2-基）甲醇（ 53 0mg) 溶解於氣仿 20ml中，冰冷下，逐滴添加亞硫醯氣 (1.03ml )，於室溫下攪拌3小時。將反應液濃縮、藉由 醚-己烷之混合溶媒洗淨而得到作為固體之標題化合物 (41Omg)。 'H-NMR (CDC13) δ ：2.47(3H,s),4-32(3H,s), 5.09 ( 2H, s ) , 8.54 ( 1H, s ). ESI-MS m/z ： 206 ( M + H) +. -39- 201213333 (21 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氯-4 -曱氧基-5-甲吡啶-2-基）甲基]-2，7-二氫-6-硫雜-1, 2, 3，5-四氮雜苯并[cd] 奧-8 -基} - N -曱基乙酿胺

於2- ( 4-胺基-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯 并[cd]奠-8-基）-N-曱基乙醯胺三氟乙酸鹽（28mg)、3-氣-2-(氣甲基）-4-甲氧基-5-曱吡啶鹽酸鹽（36mg )、及 碳酸鉀（69mg )中添加二曱基甲醯胺（lml )，於60°C下 攪拌2小時3 0分。濾去不溶物後，於氮氣氣流下將溶媒 餾去。藉由將所得到之殘渣溶解於二甲亞颯（1 ml )中並 以逆相充填（reversed phase packing)高效液相層析 (HPLC )純化、減壓餾去溶媒而得到作為固體之標題化 合物（27.0mg)。 !H-NMR ( CDC13) 5 ： 2.24 ( 4H, s) , 2.82 ( 3H, d, J = 4.9Hz) ,3.27 ( 2H, s ) , 3.80 ( 2H, s) ,3.91 ( 3H, s ), 5.21 ( 2H, s ) ,5.65( 2H, s ) , 5.87 ( 1H, s) , 6.70 ( 1H, s)，8.16 ( 1H, s). ESI-MS m/z ： 446 ( M + H ) +. (實施例1 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氯-4-曱氧基-5-曱吡啶-2-基）.甲 基]-2, 7·二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺2鹽酸鹽 -40- 201213333 胺基- 2·[ ( 3-氯-4 -曱氧基_.5_甲吡啶-2-基） 4- 於2 石泉雜-1，2，3，5_四氮雜苯并[cd]奠 甲基]-2，7-二氫 基} _N-甲基乙酿胺^ mi 收（ 1.034g、2.243mmol)中添加乙醇 (29.3ml )、水（〇 ^ .7 4ml)並於25 °C下攪拌。添加2M鹽 酸 / 乙醇（6.73ml、. 丄3.46mmol )並攪拌3小時45分。過 渡析出結晶，以乙_ / c β 知（5ml )洗淨後，於減壓下4(TC下 乾無 1小時而接 到軚題化合物（1.1 1 8g、2_ 1 55mmol )。 產率96%。 (實施例2 ) 2_ { 4_胺基_2-[ ( 3-氣-4-曱氧基-5-甲吡啶-2-基）曱 基]2, 7_ 一氮_6_硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜笨并[Cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺2鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基_2_[ ( 3_氯_4_曱氧基_5_曱吡啶_2基） 甲基]_2，7_二氫_6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[cd]I-8-基}-N-曱基乙醯胺（49348mg、lllmm〇1)之丙酮（3〇ml) 懸洋液中並於室溫下，攪拌同時逐滴添加3m鹽酸 (3 69.6ml )，進—步攪拌12小時。濾去所得到之結晶， 以丙嗣洗淨後’減壓下，於25〇c下乾燥3小時乾燥，而 仔至·化合物（531.〇lmg、1.02mmol)。產率 92%。 (實施例3 ) 2- { 4-胺基-2- [ ( 3 -氣-4-曱氧基-5-曱。比咬-2-基）曱 基]-2,7-二氫-6-硫雜“，2,3,5-四氮雜苯并|>(1]奠-8-基} •N-曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2- [ (3 -氯-4 -曱氧基-5·甲。比咬-2-基） 甲基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[Cd]奠-8- -4 1- 201213333 基}-N-曱基乙醯胺（5446.6mg、11.6mmol)之乙醇（200ml) 懸浮液中’攪拌同時於25充下逐滴添加3M鹽酸（9.2m卜 2 7 · 8 m m ο 1 )、攪拌3 · 5小時。濾去所得到.之結晶，以乙醇 (5 0ml)洗淨後’減壓下、於4〇〇c下乾燥14小時，而 付到 化合物（ 5436.1mg、116.mmol)。產率 99%。 (實施例4) 2- { 4 -胺基-2- [ ( 3 -氣-4 -甲氧基-5-甲吡啶-2-基）甲 基]_2’ 7-二氫硫雜-1, 2，3，5-四氮雜苯并[Cd]奠_8-基} -N-曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2- [ ( 3·氣-4-甲氧基-5·甲吡咬-2-基） 甲基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2, 3，5-四氮雜苯并[Cd]奠_8_ 基} 甲基乙醯胺（3.53kg、7.74mol)之乙醇（123L ) 懸净液中’攪拌同時於21至22。(：下、以30分鐘逐滴添 加將 36.2%濃鹽酸（1.75kg、17.4mol)以水（4.5L )稀 釋所調製之3M鹽酸、攪拌4小時。濾去所得到之結晶， 以乙醇（1 7.6L )洗淨後，於減壓下40°C下乾燥1 7小時 而得到標題化合物（3.50kg、7.2mol)。產率93%。 (貫施例5) { 4 -胺基-2- [ ( 3 -氣-4 -甲氧基-5-甲。比。定_2-基）曱 基]·2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠_8_基} •N_曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2- [ ( 3 -氯-4-曱氧基-5-曱吡咬·2_基） 甲基]'2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[cd]奠-8_ 基} 甲基乙醯胺（306mg、0.686mmol)之乙醇（7mi) 懸汗液中，於25°C下、攪拌同時添加3M鹽酸（〇 卜

-42- 201213333 1.58mmol )並攪拌4小時。濾去所得到之結晶，以乙醇 (1.5ml)洗淨後，於減壓下4(rc下乾燥i小時而得到標 題化合物（295mg、〇.612mmol )。產率 89〇/〇。 (實施例6) 2- { 4-fe：基-2- [ ( 3 -氣-4-甲氧基_5_甲吡啶_2_基）甲 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2，3, 5-四氮雜苯并） -N -曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4-曱氧基_5_甲吡啶_2_基） 曱基]-2，7-—氫-6-硫雜-1, 2，3，5-四氮雜苯并[cd]奠_8_ 基} -N-甲基乙醯胺（527.5mg、l_18mmol)之乙醇（30ml) 懸浮液中，攪拌同時，於室溫下分2次逐滴添加3M鹽 酸（0.3 93ml、1.18mmol)，其後攪拌！小時。濾去所得 到之結晶，以乙醇（6ml )洗淨後，減壓下、於4(Γ(：下 乾燥30分鐘’而得到標題化合物（525.3mg、l.〇9mmol )。 產率92%。 (實施例7) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4 -甲氧基-5-甲吡啶·2-基）甲 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠_8_基} -N -曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4-甲氧基-5-曱。比啶_2_基） 甲基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜苯并[Cd]奠_8_ 基} -N-曱基乙醢胺（2.〇44g, 4.584mmol)中添加乙醇 (70ml)並於23°C下攪拌，添加ι.5Μ鹽醆（ 3 59ml、 5.39mmol)並攪拌4小時。過濾析出結晶，以乙醇（1〇ml) 洗淨後，於減壓下40°C下乾燥1小時而得到標題化合物 ( 1.893g，3.924mmol)。產率 86%° -43- 201213333 (實施例8 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4_ 基]-2, 7-二氫 _6-硫雜 _ι，2, 3, -N -曱基乙醯胺1鹽酸鹽 甲氧基-5-曱吡啶-2-基）甲 5-四氮雜苯并[Cd]奠-8-基} 於胺基_2_[(3·氣|甲氧基_5_甲。比。定_2·基） 甲基]_2, 7.二氫I硫雜]，2,3, 5-四氮雜苯并M]奠-8_ 基卜N·甲基乙醯胺（2.G68g、4 485mm()i)巾添加乙醇 72ml)並於23 C下搜拌’添力口 i 87M鹽酸（〇 72〇m卜 l‘346mmol)、作為種晶之2_u.胺基_2·[(3氣|甲氧 土甲比疋_2_基）甲基]~2, 7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四 氮雜苯并[ed]真·8·基卜Ν-甲基乙g盛胺丨鹽g变鹽並授掉3〇 分鐘。添加 3.28M 鹽酸（ 0.273mh 〇 897mm〇1)、攪拌 8 分鐘，將此操作進一步重複8次。添加3.28M鹽酸 (〇.137nU、0.449mmol)，攪拌4小時。過濾析出結晶， 以乙醇（10ml)洗淨後，於減壓下4(rc下乾燥}小時而 仔到才尔通化合物（ 2.057g、4.264mmol)。產率95%。 (實施例9) 2- { 4 -胺基-2-[ ( 3 -氣-4-曱氧基-5-甲吡啶-2-基）甲 基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3, 5-四氮雜苯并〇(1]||_8-基} -N_甲基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2-[ ( 3 -氣-4-曱氧基-5-甲吼啶-2-基） 曱基]-2，7-二氩-6-硫雜-1, 2，3，5-四氮雜苯并[cd]莫-8-基} -N-曱基乙醯胺（ 2.068g、4.485mmol)中添加乙醇 (72ml)並於24°C下攪拌，添加1M鹽酸（2.691m卜 2.69lmm〇l )、作為種晶之2_ { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4-甲氧 201213333 基-5 -甲吡啶-2-基）甲其·] 〇 J T 基]-2,7、二氫 _6_硫雜-1，2,3,5-四 氮雜苯并[cd]奠-8_其丨w 土} N-甲基乙醯胺1鹽酸鹽並攪拌3〇 分鐘。添加9M鹽醅ιπλ 皿虹 c 〇.io〇ml、〇 897nm〇i)並攪拌 分鐘’將此操作進一步番 _進/重硬8次，攪拌4小時。過濾 出，乡α晶，以乙醇（1 m丨、、土、rf 1 〇 )洗淨後，於減壓下4(TC下乾焯 1小時而得到標題化合物 " C 2.〇44g ' 4.237mmol ) 〇 產銮 95%。 I + (實施例1 0 ) 2-{4-胺基_2_[(3_氣 # 甲虱基_5·甲吡啶-2-基）甲 巷 J-2，/ -一 氣-6-硫雜-1 2 q c - ^ ， ，3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-其1 -N-甲基乙醯胺i鹽酸鹽 土 } 於2-{4 -胺基- 2- ΓΓ3备 '氣~4~甲氧基-5-曱吡啶-2-基） 甲基]-2，7-二氫-6_硫雜q 2 ) A } N甲其7/ ， ，3, 5_四氮雜苯弁[以]奠_8- 巷i -JN-甲基乙酿胺（2〇6S„ (ηΊ . g、4.485mmol )中添加乙醇 (72ml)並於24它下攪拌 ° m ,,、 視件杰加1M鹽酸（1.346ml、 1.346nrnol)、作為種晶之2 丨4 -月女基- 2- [(3 -虱-4-甲藍 基巧-甲吡啶_2·基）甲基]7__ T氧 备祕岔说Γ」Ί从 —鼠-6-硫雜-1，2，3，5-四 亂雜本开[cd]奠-8-基卜；甲Α， ^ \也 土1以甲基乙醯胺1鹽酸鹽並攪拌30 分在里。添加 1M鹽酸（〇RQ7 , -陝 V U.897mi ' 〇 897mm〇1)並攪 分鐘、將此操作進一步番选·^ A 視许8 重複3 _人。添加1M鹽酸（0.449m卜 〇.449_〇1)’攪拌2小時30分鐘。添加9M鹽酸 (〇.l〇〇nU、〇.897mm〇1)並授掉i小時”分鐘添加州 鹽酸（〇.G5〇mh G.449mmol)並攪拌！小時。過渡析出 結晶，以乙醇（10ml)洗淨後，於減壓下4〇t下乾燥3〇 分鐘而得到標題化合物（K742g、3 611舰〇1)。彦 81%。 干 -45- 201213333 (實施例11 ) 2 - { 4 -胺基 _ 2 _ [ ( 3 / m 产 乳-4-甲氧基-5·甲吡啶_2_基）甲 基]-2，7 -二氫-6-硫雜】 '、_1，2,3，5-四氮雜笨并[(：(1]奠-8-基} -Ν-甲基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- {4 -胺基_2「彳，# L ( 3_虱-4-曱氧基·5_曱吡啶-2-基） 甲基]-2，7 -—氫_6-硫雜]0 Λ , XT m ^ ;,L 雖·I 2, 3, 5-四氮雜苯并[Cd]奠-8- 基} -N-甲基乙醯胺（ 、〇.0〇g、44.85mmol )中添加乙醇 (7 0 0 m 1 )並於2 4 下換灿 r復拌，添加1M鹽酸（13.46ml、

1 3 _46mmol )、作氧括 B ，‘、'種日日之2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4-曱氧 基-5-甲吡啶-2-基）甲Α n ^ 甲基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四 氮雜苯并[〇(1]莫_8-基丨Μ田仗 夂卜Ν-甲基乙醯胺i鹽酸鹽並攪拌3〇 分鐘。以9分鐘诼，¾ % , 、滴添加 1M 鹽酸（8.97nU、8.97mmol)、 將此操作進一步重葙, ， 是3 \。添加1Μ鹽酸（4.49ml、 4.49mmol)，撥採 ι , + 現什1小時。添加 9M鹽酸（i.〇〇ml、 8:97_〇1)並授拌1小時50分鐘。過渡析出結晶，以乙 醇（1〇〇ml )洗淨後，於減壓T 4(TC下乾燥1小時而得 到標題化合物（18.95g、39.28mmol )。產率88%。 (實施例12) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3_氣_4-甲氧基-5_甲吡啶-2_基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜·丨，2, 3, 5_四氮雜苯并[cd]奠-8_基） -N-曱基乙醢胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基-2-[ ( 3_氣_4_甲氧基-5-甲吡啶-2-基） 曱基]-2，7-二氫-6-硫雜q，2，3，5_四氮雜苯并[cd]奠_8· 基} -N-曱基乙醯胺（8〇.〇〇g，1 73_48mmol )中添加乙醇 (2800ml)並於20 °C下攪拌，添加1M鹽酸（ 52.06 ml、 201213333 5 2.06mmol )、作為種晶之2 {4胺基-2[(3氣_4曱氧 基甲0比咬_2_基）甲基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四 氮雜苯并[cd]奠-8-基卜基乙醯@ !鹽酸鹽並攪拌3〇 刀I里。以8分鐘逐滴添加iM鹽酸（34 69m卜34.69mmol ) 後攪拌4分鐘，將此操作進一步重複3次。以5分鐘逐 滴添加1M鹽酸（17.37ml、17.37mmol )後攪拌4分鐘。 以5分知逐滴添加9M鹽酸（3心爪丨、34 83nirn〇l )後攪 摔2小日守40分。過濾析出結晶，以乙醇（400ml )洗淨 後，於減壓下室溫下乾燥30分鐘、40。(：下乾燥2小時 3 〇刀而得到標題化合物（6 8 9 g、ι 42 8 ^ )。產率8 2%。 (實施例1 3 ) 2· { 4-胺基-2-[ ( 3 -氯-4-甲氧基_5_曱吡啶_2_基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜_丨，2, 3, 5_四氮雜苯并[cd]奠基.} -N -甲基乙醯胺1鹽酸鹽 -4-甲氧基-5-曱吡啶-2-基） 3，5-四氮雜苯并[cd]奠-8-、4.485mmol )中添加乙醇 添加 1M鹽酸（ 1.346ml、 於2- { 4-胺基_2-[ ( 3-氯 甲基]-2，7 -二氫-6-硫雜_ι，2 基} -N-甲基乙醯胺（2 〇68g (72ml)並於24°C下授拌， 1.346mmol)並搜拌30公於 、·里。以5分鐘添加1Μ鹽酸 ( 0.897ml、0.897mmol)後德 4丄， )後攪拌5分鐘，將此操作進一 步重複3次。添加1M鹽酸, Λ 孤 M 0.449ml、0.449mmol)、攪 拌30分鐘。添加濃鹽酸（〇2 ，c。。 ，、 、.299ml、3.588mmol)授拌 l 小時。過滤析出結晶’卩乙醇（1〇ml)洗淨後，於減壓 下4(TC下乾燥30分鐘而得到標題化合物（1 942§、 4.026mmol)。產率 90%。 -47- 201213333 (實施例1 4 ) 2-{4-胺基_2_[(3_惫4 α卜 風'4-甲氧基-5-甲吡啶-2-基）甲 基]-2,7 -一虱-6-硫雜_丨2 w * ’ ，、5-四氮雜苯并[cd]f -8-基} -N -曱基乙酿胺1鹽酸鹽 於 2- { 4-胺基 _2_r h 田7 卜 氣·4-甲氧基-5-甲吡啶-2-基） 曱基]_2，7_—虱-6-硫雜-1 2 ，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8_ 基} -N-曱基乙醯胺（2 〇68 (, s ^ _ g、4.485mmol )中添加乙醇 (72ml)並於23。(：下攪掉，本 ^ 添加1M鹽酸（1.346ml、 1.346mm〇l)並攪拌25分护 刀。以4分鐘添加1Μ鹽酸 (0.897ml、0.897mm^ 、— )後攪拌6分鐘，將此操作進一 步重複3次。添加1 μ豳b# , λ , 规自欠(〇.449ml、0.449mmol)、搜 拌3〇分鐘。添加濃鹽酸（〇:299hU、3.5 88mmol)並授拌 1/]'時°卩1小時冷卻至2°C ’ 2小時後過濾、析出結晶， 以乙醇（10ml )洗淨後’於減壓下4〇。〇下乾燥3〇分鐘 而得到標題化合物（2.011g、4 169匪〇1)。產率93%。 (實施例1 5 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氯·4-曱氧基-5-曱吡啶-2-基）甲 基]-2, 7-二氫-6-硫雜_ι, 2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]莫_8-基} -N-甲基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4-月女基-2- [ ( 3 -氣-4-曱氧基-5-甲比咬-2-基） 甲基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5_四氮雜苯并[cd]葜_8- 基} -N -曱基乙醯胺（2.068g、4.485mmol)中添加乙醇 (72ml)、水（3.052ml)並於23X：下攪拌。以2分鐘添 加濃鹽酸（0.045ml、0.54mmol)後攪拌10分鐘，將此 操作進一步重複9次。攪拌3 0分鐘後，添加濃鹽酸 201213333 (0.299mi、3.5 88mmol)並攪拌4小時。過濾析出結晶， 以乙醇（10ml )洗淨後，於減壓下40。(：下乾燥30分鐘 而得到標題化合物（2_022g、4.192mmol )。產率94%。 (實施例1 6 ) 2_ { 4-胺基-2-[ ( 3-氯-4-曱氧基-5-曱吡啶-2-基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2- [ ( 3 -氣-4 -曱氧基-5-曱°比〇定-2-基） 曱基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-甲基乙醢胺（ 2.068g、4.485mmol)中添加乙醇 (3 6ml)、水（3.052ml)並於25°C下攪拌。以1分鐘添 加濃鹽酸（0.045ml、0.54mmol )後授拌9分鐘，將此操 作進一步重複9次。攪拌3 0分鐘後，添加濃鹽酸 ( 0.299ml、3.588mmol)，以 45 分鐘添加乙醇（36ml) 後授拌4小時。過濾析出結晶，以乙醇（1 〇 m 1 )洗淨後， 於減壓下40 °C下乾燥30分鐘而得到標題化合物 (2.020g ' 4.187mmol) ° 產率 93% ° (實施例1 7 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3 -氣-4 -曱氧基·5_曱吡啶-2_基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5_四氮雜苯并[cd]奠_8基} -N-曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4-曱氧基-5_曱吡啶_2_基） 甲基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2，3, 5_四氮雜苯并[cd]f_8 基} -N-甲基乙酿胺（ 2.068g、4 485mm〇1)中添加乙醇 (72ml)並於24。(：下授摔’添加Μ鹽酸（i.346m卜 -49- 201213333 並授拌25分鐘。以4分鐘添加1M鹽酸 (0.897m卜0.897nim〇1)後㈣7分鐘，將此操作進一 y重複3人添加濃鹽酸（0.037ml、0.444mmol )’攪拌 30分鐘。以8分鐘添加濃鹽酸（〇 374〇1卜4似顔⑴ 並授摔1小時20分鐘。以i小時冷卻至8β(：，2小時後 過濾析出結晶’以乙醇（l〇ml)洗淨後，於減壓下40t 下乾燥30分鐘而得到標題化合物（2 〇26g、 4.200mmol)。產率 94%。 (實施例1 8 ) 2- { 4-胺基_2·[ ( 3_氣_4_曱氧基_5_甲吡啶_2基）甲 基]-2, 7-二氫硫雜_丨，2, 3, 5_四氮雜苯并[cd]奠_8_基） -N-曱基乙醯胺i鹽酸鹽 於2- 胺基-2-[ ( 3-氣-4-曱氧基-5 -曱吡啶_2_基） 甲基]-2，7-二氫-6_硫雜2，3，5_四氮雜苯并[cd]奠_8_ 基} N-甲基乙醯胺（2.〇68g、4.485mmol )中添加乙醇 (72ml)並於24»c下攪拌，添加Μ鹽酸（丨346〇1卜 1.346mm〇l)並授拌25分鐘。以4分鐘添加1M鹽酸 (〇‘897nU、〇,897mmol )後攪拌7分鐘，將此操作進一 步重複2次。以}分鐘添加濃鹽酸（〇 〇37π^、〇 444爪爪〇1 ) 後並授拌9分鐘，將此操作進一步重複2次後，搜拌3 〇 分鐘。添加濃鹽酸（〇 374m卜4_488mmol )，授拌i小時。 以1小時冷卻至10。匚，2小時後過濾析出結晶，以乙醇 (10ml )洗淨後，於減壓下4(rc下乾燥3〇分鐘而得到 才不通化合物（2_〇48g、4:246mmol)。產率95%。

-50- 201213333 (實施例1 9 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣_4 -曱氧基-5-曱吡啶-2-基）曱 基]·2’ 7_二氫-6_硫雜_丨，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠_8_基} -N -甲基乙酿胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基·2_[ ( 3_氣_4_曱氧基_5_曱吡啶_2_基） 曱基]-2，7-二氫-6-硫雜q，2，3，5_四氮雜苯并[cd]奠_8_ 基} N甲基乙醢胺（2.〇68g、4.4 8 5 mmol )中添加乙醇 (72ml)並於24C下攪拌，添加12M鹽酸（ 1.346ml、 1.615mm〇l)並搜拌25分鐘。以5分鐘添加1.2M鹽酸 (〇.897ml、l.〇76mmo〇後攪拌5分鐘，將此操作進一 步重複2次。以1分鐘添加濃鹽酸（0_037ml、〇.444mmol ) 後攪拌9分鐘，將此操作進一步重複2次後，攪拌3〇分 鈿。添加濃鹽酸（〇 374ml、4 488mm〇1 )，攪拌i小時。 以1小時冷卻至1(TC，2小時後過濾析出結晶，以乙醇 (10ml )洗淨後，於減壓下4〇t下乾燥3〇分鐘而得到 標題化合物（2.05 0g、4.250mmol)。產率 95%。 (實施例20 ) 2- { 4-胺基·2-[ ( 3-氯-4-甲氧基-5-甲吡啶-2-基）曱 基]-2, 7-一氫-6-硫雜·丨，2, 3, 5_四氮雜苯并[cd]奠-基} -N -甲基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基·2-[ ( 3_氣_4_曱氧基_5•甲吡啶_2_基） 曱基]-2，7-一氫-6-硫雜-2，3，5_四氮雜苯并[cd]奠 基} N曱基乙酿胺（2.〇68g、4.485mmol)中添加乙醇 (41ml)並於23t下攪拌，添加i 8M鹽酸（〇 748m卜 1.346mm0〇並攪拌27分鐘。以5分鐘添加i 8m鹽酸 -51 · 201213333

(0.498ml ' 〇 〇Q^ . N ’ mm〇 )後攪拌5分鐘，將此操作進_ 添加 UM 鹽酸（〇.249nU、〇.448mmol)， 攪拌30分鐘。大* .曲總滅/ 掉 ^m1、3.588^。1)並授 出結晶，以刀鐘冷部至代，2小時20分後過濾析 醇.（1〇ml)洗淨後，於減壓下4(TC下乾燥 3 0分鐘而得到# J ‘蟪化合物（2·〇7〇 4 29 1mm〇 96%。 (實施例2 1 ) {胺基-2-[ ( 3-氣-4-甲氧基_5_甲吡啶_2_基）甲 土]， 氫-6-硫雜-1，2,3,5-四氮雜苯并[(：(1]奠-8-基} N_曱基乙醯胺1鹽酸鹽 5 {4·胺基-2-[ (3 -氯-4 -甲氧基_5_甲。比啶_2_基） 甲土] , 7 一氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[cd]奠_8- 土乙酿胺（2.068g、4_485mmol)中添加乙醇 (51ml)並於 〇 〇 lrt , · 、23 C下攪拌，添加ι.4Μ鹽酸（〇.961m卜 1.345mmol)祐换灿 工棍拌26分鐘。以4分鐘添加1.4M鹽酸 (0·64 1 ml、〇.897mm〇 1 )後攪拌6分鐘，將此操作進— 步重複3次。添加i 4M鹽酸（〇 32〇爪卜〇 448m則1 )、 揽摔3〇分鐘。添加濃鹽酸（〇.299m卜3.5 88mmol)並攪 拌1小時。以50分鐘冷卻至2艽，2小時3〇分後過濾析 出、’σ曰曰以乙醇（10ml )洗淨後，於減壓下4(TC下乾燥 3〇分鐘而得到標題化合物（ 2.048g、4.246mm〇l)。產率 9 5%。 201213333 (實施例2 2 ) 2- { 4 -胺基- 2- [ ( 3 -氯-4-甲氧基-5-甲。比《1 定_2_基）甲 基]-2，7 -二氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜苯并[C(j]奠-8_基} -N-甲基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2- [ ( 3 -氣-4-曱氧基-5-甲呢咬_2_基） 甲基]-2，7-二氫-6-硫雜-1, 2，3，5-四氮雜苯并[cd]莫_8_ 基} -N-甲基乙醯胺（2.068g、4.485mmol )中添加乙醇 (72ml )並於25°C下攪拌’以1小時添加1M鹽酸 (4.037ml、4.03 7mmol )。進一步以30分鐘添加濃鹽酸 (0.111 ml、1 · 3 3 2 mmo 1 )後攪拌3 0分鐘。以6分鐘添加 濃鹽酸（〇 · 3 7 4 m 1、4.4 8 8 m m ο 1 )，搜拌1小時。以i小時 冷卻至5 °C，2小時後過滤析出結晶，以乙醇（丨〇mi )洗 淨後，於減壓下40°C下乾燥30分鐘而得到標題化合物 (2.037g、4.223mmol ) ° 產率 94% 〇 (實施例23 ) 2- { 4 -胺基-2- [ ( 3 -氯-4-曱氧基-5-曱D比。定基）甲 基]-2，7 -二氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜苯并[(^奠-^基} -N-甲基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2- [ ( 3 -氯-4-甲氧基-5-曱η比。定_2_基） 甲基]-2，7 -二虱-6-硫雜-1, 2，3，5 -四氮雜苯并[〇(^]奠_8_ 基} -N-甲基乙醢胺（2.068g、4.485mmol)中添加乙醇 (72ml)並於26°C下攪拌，以15分鐘添加1M鹽酸 (4.037ml、4.037mmol)。進一步以30分鐘添加濃鹽酸 (0.111 ml、1.3 32mmol )後攪拌30分鐘。以7分鐘添加 濃鹽酸（0.3 7 4 m 1、4 · 4 8 8 mm ο 1 )，攪拌1小時。以i小時 -53- 201213333 冷卻至5 °C ’ 2小時後過濾析出結晶，以乙醇（丨〇如）洗 淨後，於減壓下40°C下乾燥30分鐘而得到標題化合物 ( 2.037g、4.223mmol)。產率 94%° (實施例24) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4-曱氧基_5_曱吡啶_2_基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[(：(1]奠_8_基} -N-曱基乙醯胺1 .鹽酸鹽 於2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣-4_甲氧基_5_曱吡啶_2-基） 曱基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3, 5_四氮雜苯并[cd]奠_8_ 基} -N-甲基乙醯胺（2.068g、4.485mm〇1)中添加乙醇 (72ml )並於26°C下授拌，以i小時添加m鹽酸 ( 4.03 7ml，、4.037mmol)。進—步以5分鐘添加濃鹽酸 (〇.111111卜1.332111111〇1)後攪拌3〇分鐘。以6分鐘添加 濃鹽酸（0.374111卜4.488111〇1〇1)，攪拌1小時。以1小時 冷卻至5 °C，2小時後過濾析出結晶，以乙醇（丨〇 m丨）洗 淨後，於減壓下40 C下乾燥30分鐘而得到標題化合物 ( 2.042g、4.233mmol)° 產率 94% 〇 (實施例2 5 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3 -氣-4-甲氧基-5-甲吡啶-2-基）曱 基]-2，7 -二氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基-2-[ ( 3 -氯-4-甲氧基-5-甲吡啶-2-基） 甲基]_2, 7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[Cd]奠_8_ 基} -N-曱基乙醯胺（2.068g、4.485mmol )中添加乙醇 (7 2 m 1 )並於2 6 °C下攪拌，以1小時添加1Μ鹽酸 201213333 ( 4.037ml、4.037mmol)。進一步以 3〇 八从、工 刀隹里添加濃鹽酸 (0.111111卜 1.3 3 2111111〇1)後攪拌30分鐘。|、/<： 以6分鐘添加 以30分 ’以乙醇（10ml ) 濃鹽酸（〇_374ml、4.488mmol )，搜拌 3〇 分鐘 鐘冷卻至6°C，2小時後過濾析出結』 洗淨後’於減壓下40°C下乾燥30分鐘而得到標題化合 物（ 2.040g、4.229mmol)° 產率 94% 〇 (實施例26 ) 2- { 4-胺基- 2- [ ( 3 -氯-4 -曱氧基-5-甲。比。定)甲 基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[cd^n } -N-曱基乙醯胺鹽酸鹽 於2- M-胺基-2-[ ( 3-氯-4-甲氧基-5-甲吡。定_2_基） 甲基]-2，7 -二氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜苯并[cd]奠_8_ 基} -N-曱基乙酿胺（ 2.068g、4.485mm〇l)中添加乙醇 (7 2 m 1 )並於2 6 °C下搜拌，以1小時添加1 μ鹽酸 (4.03 7ml、4.037mmol )。進一步以30分鐘添加濃鹽酸 (〇· 1 1 lml、1.3 3 2mmol )後，以6分鐘添加濃鹽酸 (0,374ml、4.488mmol)，攪拌1小時。以1小時冷卻至 5 °C，2小時後過濾析出結晶，以乙醇（1 〇ml )洗淨後， 於減壓下40 °C下乾燥30分鐘而得到標題化合物 (.2.039g、4.227mmol)° 產率 94% 0 (實施例27 ) 2· { 4-胺基-2- [ ( 3 -氯-4 -甲氧基·5 -曱0比。定-2-基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} 甲基乙醯胺1鹽酸鹽 •55- 201213333 於2- { 4 -胺基- 2- [ ( 3 -氣-4-曱氧基_5_曱。比。定_2_基） 曱基]-2，7 -二氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜苯并[cd]奠-8_ 基} -N-曱基乙醯胺（5.252g、11.2lmin〇i)中添加乙醇 (1 8 0 m 1 )並於2 6 °C下搜拌’以1小時添加1 μ鹽酸 (10.09ml、i〇.〇9mmol)。進一步以3〇分鐘添加濃鹽酸 ( 0.280ml、3.360mmol)後擾拌30分鐘。以7分鐘添加 濃鹽酸（0.934ml、11.21 mmol )，攪拌1小時。以i小時 冷卻至5 C ’ 2 0小時後過遽析出結晶，以乙醇（2 5 m 1 ) 洗淨後，於減壓下40t：下乾燥1小時而得到標題化合物 (5.1 4 5 g > 10.67mmol)。產率 95%。 (實施例2 8 ) 2-H-胺基-2-[(3_氣_4·甲氧基甲吡啶_2_基）甲 基]义了-二氫-卜硫雜义^“氮雜苯并㈣奠冬基} -N -曱基乙醢胺1鹽酸鹽 於2- ί 4-胺基·2·[ ( 3'氣_4_曱氧 平^%-5-甲吡啶-2-基） ^ 虱6硫雜]，2, 3, 5·四氮雜苯并[cd]奠-8- 曱基乙酿胺（1.07kg、2,28m〇1)中添〜乙醇（κι) 並於c下攪拌’ α 55分鐘添加im鹽酸…仏、 2.06mol)。進—牛 |V <3，、“ , y . 3为1里添加濃鹽酸（57m卜〇_68mol) 後攪拌30分鐘。以 1 1刀名里添加濃鹽酸（1 9 1 ml、 2.29mol)，攪拌 1 小 寺 以7 6分鐘冷卻至5 °c，2 2小時 後過遽析出結晶，以

σ 知（5L)洗淨後，於減壓下40°C 下乾燥1 8小時而得到 產率 95%。 化合物（K〇5kg、2.18mol)。 201213333 (實施例29 ) 。比啶-2-基）甲 并[cd]奠-8-基} 2- { 4-胺基_2_[ ( %氯_4_甲氧基_5甲 基]-2, 7-二氫-6-硫雜_丨，2, 3, 5_四氮雜苯 -N -甲基乙酿胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基_2_[ ( 3_氯_4_甲氧基曱吡啶I基） 曱基]_2’ 硫雜+ 2’ 3’ 5_四氮雜苯并[叫奠·8_ 基}-ν-甲基乙醯胺（中添 並於⑽下授掉，以68分鐘添加1M鹽酸（（2胤、） 2.06mol)。進一步以34分鐘添加濃鹽酸（57爪卜 後攪拌30分鐘。以9分鐘添加濃鹽酸（ 2.29m〇l)，攪拌i小時。以76分鐘冷卻至5〇c 30分鐘後過濾析出結晶，以乙醇（5L )洗淨後 下40 °C下乾燥1 8小時而得到標題化合物 0 _ 6 8 mo 1) 191ml 、 ，2 2小時 ，於減壓 1.05kg、 2.1 8mol )。產率 95%。 (實施例30 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氯-4-曱氧基_5_曱吡啶_2•基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[(：(1]奠_8基} -N-甲基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4-胺基-2-[ ( 3·氣-4-甲氧基_5_曱吡啶_2_基） 甲基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[cd]奠_8_ 基} -N-曱基乙醯胺（2_068g、4.485mmol)中添加乙醇 (72ml)並於30°C下攪拌，以i小時添加m鹽酸 (4.037111卜4.037111111〇1)。進一步以3〇分鐘添加濃鹽酸 (0.111ml、1.332mmol)後攪拌3〇分鐘。以6分鐘添加 濃鹽酸（0.374ml、4.488mm〇l)，搜拌1小時。以74分 -57- 201213333 鐘冷卻至5 °C，2小時後過濾析出結晶’以乙醇（丨0ml ) 洗淨後，於減壓下40°C下乾燥30分鐘而得到標題化合 物(2.03 1 g ' 4.210mmol)° 產率 94%° (實施例3 1 ) 2- { 4-胺基-2-[( 3-氯-4 -甲氧基-5 -曱吡啶_2_基）曱 基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2- [ ( 3 -氣-4 -甲氧基-5-甲°比咬_2_基） 曱基]-2，7-二氫-6-硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[cd]萁_8_ 基} -N-曱基乙醯胺（2.068g、4.485mmol )中添加乙醇 (72ml )並於20 °C下攪拌，以1小時添加1M鹽酸 ( 4.037ml、4.037mmol)。進一步以30分鐘添加濃鹽酸 (0· 1 1 1 ml、1.332mmol )後攪拌30分鐘。以5分鐘添加 濃鹽酸（〇.374ml、4.488mmo 1 )，攪拌1小時。以46分 鐘冷卻至4°C，2小時後過濾析出結晶，以乙醇（丨〇ml ) 洗淨後，於減壓下40°C下乾燥30分鐘而得到標題化合 物(2.043g ' 4.235mmol) ° 產率 94% ° (實施例32) 2- { 4-胺基-2- [ ( 3 -氣-4-甲氧基-5-曱°比。定-2-基）甲 基]-2，7 -二鼠-6-硫雜-1，2，3，5-四氣雜本并[cd]奠-8 -基} -N-甲基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2-[ ( 3 -氯-4 -曱氧基-5-甲ϋ比〇定-2-基） 甲基]-2，7 -二氮-6 -硫雜-1，2，3，5-四氮雜苯并[cd]奠 基} -N-曱基乙醯胺（3.00g、6.40mmol )中添加乙醇 (100.5ml)及水（3.975ml)並於25 °C下授拌，添加將 -58- 201213333 濃鹽酸（1.0ml)稀釋於乙醇（i9.0ml)中所調製之〇.585M 氣化氫之水溶液-乙醇溶液（3.28〇1卜1.92mmol)。於同 溫度下添加種晶（〇.3mg )後，以2小時逐滴添加0.585 Μ氣化氫之水溶液-乙醇溶浪（6.56ml、3.84mm〇l )，攪 掉3 0分鐘。進一步，以1小時遂滴添加濃鹽酸（0 · 6 9 5 m 1、 8 · 3 4 m m ο 1 )，擾掉1小時。過j慮析出結晶’以乙醇（1 5 m 1 ) 洗淨後’於減壓下4 0 °C下乾嫖1 4小時而得到標題化合 物（2.89g、5.96mmol)。產率 93%。 (實施例3 3 ) 2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氣_4-甲氧基-5-甲吡啶_2·基）曱 基]-2，7-二氫-6·硫雜-1，2，3，5""四氬雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺1鹽酸鹽 於2- { 4 -胺基-2-[ ( 3 -氯-曱氧基甲吡啶-2 -基） 曱基]-2，7 -二氫-6-硫雜-1，2，3，5 -四氮雜本并[C(j]莫 基} -N-曱基乙醯胺（3.〇〇g、6.4〇mmol )中添加乙醇 (100.5ml)及水（3.975ml) I於3 0。(：下攪拌，添加將 濃鹽酸（1.〇1111)稀釋於乙醇（19.〇爪1)中所調製之〇_5851^ 氣化氫之水溶液-乙醇溶液（3.28ml、1.92mm〇l)。於同 溫度下添加種晶（0.3 m g )後，以2小時逐滴添加〇 5 8 5 Μ氣化氫之水溶液-乙醇溶液（6.56ml、3.84mm〇l)，授 拌3 0分鐘。進一步，以1小時逐滴添加濃鹽酸（〇. 6 9 5 m 1、 8.3 4mmol )，攪拌1小時。過濾析出結晶，以乙醇（1 5ml ) 洗淨後，於減壓下40°C下乾燥1 4小時而得到標題化合 物（2.86g、5.93mmol)。產率 93%。 -59- 201213333 (實施例34) X射線粉末繞射之測定1 使用布魯克 AXS ( BrukerAXS )公司製造之 DISCOVER配備GADDS CS型X射線繞射裝置，將試料 填充於玻璃製樣品座（sample holder )’並以下述條件加 以測定。 <分析條件>

X 射線：銅 Ka l/40kV /40mA 角度計（Goniometer):縱型雙軸（θ，θ ) 2 0測定範圍：3〜40 ° 將實施例2中所得之2鹽酸鹽之結晶以上述方法所 測定之X射線粉末繞射圖示於第4圖。將第4圖中最大 波峰強度為1 00時之相對強度1 5以上的波峰示於表1。 表1 波峰號碼 20 d值 相對強度 波峰號碼 2Θ d值 相對強度 1 7.73 11.44 100 13 24.13 3.69 40 s2 9.78 9.05 25 14 24.70 3.60 55 —3 12.58 7.04 26 15 26.01 3,43 50 —4 14.36 6.17 32 16 27.29 3,27 78 5 15.84 5.59 26 17 28.58 3.12 23 6 16.71 5.31 30 18 29.37 3.04 31 7 17.17 5.17 24 19 30.65 2.92 28 8 18.40 4.82 32 20 31.38 2.85 20 一 9 19.58 4.53 40 21 33.52 2.67 24 10 21,31 4.17 39 22 35.25 2.55 18 —11 22.85 3.89 29 23 36.87 2.44 15 12 23.62 3.77 30 將實施例3中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第5圖。將第5圖中最 大波峰強度為1 00時之相對強度30以上的波峰示於表2。

-60- 201213333 表2 波峰號碼 2Θ d值 相對強度 波锋號瑪 20 d值 相對強度 1 9.43 9.38 58 15 26.10 3.41 54 2 12.70 6.97 42 16 26.53 3.36 71 3 13.03 6.80 63 17 26.95 3.31 35 4 15.33 5.78 100 18 27.60 3.23 39 5 16.10 5.50 65 19 27.88 3.20 44 6 16.84 5.26 88 20 28.52 3.13 37 7 18.55 4.78 45 21 29.63 3.02 39 8 20.21 4.39 50 22 29.95 2.98 49 9 20.89 4.25 50 23 31.55 2.84 30 10 21.32 4.17 42 24 32.13 2.79 30 11 22.93 3.88 74 25 33.40 2.68 34 12 24.73 3.60 47 26 34.95 2.57 35 13 25.10 3.55 46 27 38.70 2.33 30 14 25.40 3.51 54 將實施例6中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第6圖。將第6圖中最 大波峰強度為1 0 0時之相對強度1 2以上的波峰示於表3。 表3 波峰號碼 26» d值 相對強度 波峰號碼 2Θ d值 相對強度 1 8.07 10.96 24 9 24.80 3.59 74 2 9.45 9.36 34 10 28.56 3.13 25 3 13.07 6.78 59 11 28.85 3.09 65 4 15.39 5.76 13 12 31.26 2.86 12 5 16.16 5.48 100 13 32.17 2.78 13 6 16.90 5.25 45 14 32.87 2.73 12 7 20.83 4.26 35 15 34.11 2.63 19 8 24.29 3.66 57 (實施例3 5 ) X射線粉末繞射之測定2 使用理學（Rigaku )公司製造之RINT 2200V型X射 線繞射裝置，將試料填充於玻璃製樣·品座，並以下述條 件加以測定。 <分析條件> X 射線：銅 Ka l/40kV /40mA 角度計：Ultima +水平角度計I型 2 Θ掃瞄範圍：5〜40° -6 1- 201213333 <測定結果> 將實施例1中所得到之2鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第7圖。 將實施例4中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第8圖。 將實施例5中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第9圖。 將實施例7中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 0圖。 將實施例8中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 1圖。 將實施例9中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 2圖。 將實施例1 0中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 3圖。 將實施例11中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第14圖。 將實施例1 2中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 5圖。 將實施例1 3中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 6圖。 將實施例1 4中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 7圖。 將實施例1 5中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 8圖。

-62- 201213333 將實施例1 6中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第1 9圖。 將實施例1 7中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第20圖。 將實施例1 8中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第2 1圖。 將實施例1 9中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第22圖。 將實施例20中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第23圖。 將實施例2 1中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第24圖。 將實施例22中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第25圖。 將實施例23中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第26圖。 將實施例24中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第27圖。 將實施例25中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第2 8圖。 將實施例26中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第29圖。 將實施例27中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第3 0圖。 -63- 201213333 將實施例2 8中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第3 1圖。 將實施例29中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第3 2圖。 將實施例3 0中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第3 3圖。 將實施例3 1中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第3 4圖。 將實施例3 2中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第3 5圖。 將實施例3 3中所得到之1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之X射線粉末繞射圖示於第3 6圖。 (實施例3 6 ) 微差掃描熱量測定 <測定方法> 使用馬克科學（MAC Science)公司製造之DSC3100 型微差掃描熱量測定裝置，量取2- { 4-胺基-2-[ ( 3-氯-4-曱氧基-5-曱吡啶-2-基）曱基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺鹽酸鹽5mg至 測定用鋁製坩鍋，將坩鍋於開放之狀態下，以每分鐘10 °C之升溫速度自室溫升溫至2 5 0 °C而加以測定。 <測定結果> 將實施例1中所得到之2鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之微差掃描熱量測定圖示於第3 7圖。

-64- 201213333 ，將實施例4中所得狀1鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測定之微差掃描熱量測定圖示於第38圖。 將實施例11中所得到之i鹽酸鹽之結晶以上述方法 所測文之微差掃描熱量測定圖示於第3 9圖。 (實施例3 7 ) 殘留乙醇之分析 根據以下所示之氣相層析法加以分析。 <標準溶液之調製> [mg])，以二甲亞 1 )精密秤量乙醇500mg ( =w ; 砜準確成為20nU，將此作為[i]液。 ^準確秤量⑴液4mL、以二甲亞硬準確成為胸 將此作為[2 ]液。 3) 準確秤量[2]液4mL，以二甲亞砜準確成為 將此作為[3]液（乙醇濃度‘ 4) 準確秤量[2]液2mL，以二甲亞砜準確成為 將此作為[4]液（乙醇濃度=w"/1〇〇〇[mg/mi])。 5) 準確秤量[4]液2mL，以二曱亞颯準確成為 將此作為[5]液（乙醇濃度=WM/1〇〇〇()[mg/mi]) <試料溶液之調製> 20ml * 20m卜 20m卜 稍·狁秤量 - L·、J·軋-4- 軋暴-5-曱吡 -2-基.）曱基]_2, 7_二氫_6_硫雜十2, 3, 四氮雜苯并 莫_8-基} _N_f基乙醯胺】鹽酸鹽或2_{4_胺基_2·以 氯·4·甲氧基I甲终2_基）甲基]'7_二氫-6-硫雜] 3, 5·四氮雜苯綱奠I基卜Ν-甲基乙醯胺2鹽酸 5〇mg(=W“[mg])’溶解於二甲亞石風imi，將此作為 料溶液。 *65- 201213333 <分析條件〉 檢測器：氫火焰離子化檢測器（Flame I〇nizati〇n

Detector ) 官柱：DB-624 (0.32mmIDx30m，膜厚 i_8"m，安 捷倫（Agilent)公司製造） 管柱溫度：保持4 0 °C 5分鐘，其後以每分鐘1 5 °C之 比例升溫至2201，並保持3分鐘。 注射口溫度：2 0 0 °C 檢測器溫度：240°C 載運氣體（carrier gas):氦氣 f柱流量：7 0 k p a 分裂比：1 : 20 注射量：1 # L <測定及計算> 1 )注射[3]液1 # L，得到乙醇之波峰面積（=A乙

㈠注射⑴液L ’得到乙醇之波峰面積（=八乙

面積為X，由[3]液（x = A (X==A 乙鮮[4],y=W 乙»/1〇〇〇)、 /ΙΟΟΟΟ)之各數值作成一次函 201213333 5 )注射試料溶液1 μ L，得到乙醇之波峰面積（' =A 樣品）。將此代入上述回歸式之X，得到作為y之試料溶液 的乙醇濃度（=C樣品[mg/ml])。 6)將作為殘留乙醇量[ppm] = 1000000xC樣品[mg/ml] X 1 [ m 1 ] + W樣品[m g ]加以計算。 <測定結果> 將實施例 1、4、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26、 27、28、29、30、31、32、及33所得之各結晶中之殘留 乙醇量以上述方法所測定之結果示於表4。 表4 實施例號碼 鹽形態 乙醇殘留量 (ppm) 實施例號碼 鹽形態 乙醇殘留量 (ppm) 實施例1 2鹽酸鹽 6150 實施例20 1鹽酸鹽 3480 實施例4 1鹽酸鹽 10980 實施例21 1鹽酸鹽 3680 實施例7 1鹽酸鹽 4730 實施例22 1鹽酸鹽 2370 實施例8 1鹽酸鹽 4790 實施例23 1鹽酸鹽 2670 實施例9 1鹽酸鹽 3830 實施例24 1鹽酸鹽 2650 實施例10 1鹽酸鹽 2060 實施例25 1鹽酸鹽 2360 實施例11 1鹽酸鹽 1910 實施例26 1鹽酸鹽 2460 實施例12 1鹽酸鹽 2150 實施例27 1鹽酸鹽 2380 實施例13 1鹽酸鹽 2120 實施例28 1鹽酸鹽 3190 實施例14 1鹽酸鹽 2420 實施例29 1鹽酸鹽 3140 實施例15 1鹽酸鹽 3620 實施例30 1鹽酸鹽 3010 實施例16 1鹽酸鹽 2550 實施例31 1鹽酸鹽 2820 實施例17 1鹽酸鹽 2430 實施例32 1鹽酸鹽 2465 實施例18 1鹽酸鹽 2520 實施例33 1鹽酸鹽 2064 實施例19 1鹽酸鹽 2990 (實施例3 8 ) 純度試驗及安定性試驗 <嚴苛試驗條件> 條件1 : 40°C、溼度75% 條件2 : 60°C (無溼度管理） -6 7- 201213333 將上i嚴苛試驗條件之試料根據以下所示之高速液 體層析法加以測定。 < 2〇mM磷酸二氫鉀水溶液之調製〉 將填酸二氫鉀2.72g溶於水1000ml中，使之成為 20mM磷酸二氫鉀水溶液。 < 2〇mM磷酸氫二鉀水溶液之調製〉 將磷酸氫二鉀3.48g溶於水1000ml作為20mM磷酸 二氮钟水〉容液。 <20mM磷酸鉀緩衝液（pH =6.5)之調製〉 於2〇mM磷酸二氫鉀水溶液中添加20mM磷酸氫二 鉀水溶液’調整為pH =6.5以作為2〇mM磷酸鉀緩衝液 (pH =6 · 5 ) 〇 <20mM磷酸鉀緩衝液（pH =7.0)之調製〉 於20mM磷酸二氫鉀水溶液中添加2〇mM磷酸氫二 鉀水溶液’調整為pH =7_〇以作為2〇mM填酸奸緩衝液 (pH =7.0 )。 <移動層> 移動層A : 20mM磷酸鉀緩衝液（ρΗ = 6·5 ) /乙腈=9/1 (V/V ) ， 移動層B : 20mM磷酸鉀缓衝液（ρΗ = 6.5 ) /乙腈= 3/7 (V/V) <試料溶解液> 將20mM磷酸鉀緩衝液（ρΗ==7·〇) /乙腈=3/7作為試 料溶解液。

-68- 201213333 <試料溶液之調整> 將嚴苛試驗檢體溶於試料溶解液，作為約0 5g/ L之 溶液。 <分析條件> 管柱：YMC-Pack Pro C18RS、3.0mm ID X 15〇mm、 粒徑3 /z m

管柱溫度：約40°C 梯度條件：〇〜5分、移動層A : 100— 7 5/移動層B : 0—25 5〜15分、移動層A: 75/移動層B: 25 15〜45分、移動層A: 75— 0/移動層B . 25—100 45〜55分、移動層a : 0/移動層B : 1()Q 流速：〇.7ml/min 測定範圍：〇〜55分鐘 檢測波長：240nm 試料溶液注射量：5 # 1 <計算> U注射試料溶液，得到各個類似物之波峰面積 與化合物（1)之波峰面積（τ)。 2)=射試料溶解液，得到各個空白之波峰面積（B ) 3 )算出作為各個類似物之量[%] = l〇〇x ( A-B )上丁 <測定結果> ° f實施例4中所得到之1鹽酸鹽之結晶、實施例12 中斤'导j之1鹽酸鹽之結晶、及實施例2 8中所得到 鹽酸鹽之結晶的嚴苛試驗結果示於表5。 -69- 201213333

1小時之該不 rrt係表示化合物（1 )之保持時間為 純物的相對保持時間。 (試驗例1抗細胞試驗） 使用2種類細胞（源自人類乳癌之細胞株sk_br_3、 源自人類肺癌細胞株NCI_H46〇)實施抗細胞試驗。 將各細胞分別懸浮於培養基，於96孔之多孔盤中以 2000 細胞/150//L/孔接種 SK_BR_3、以 5〇〇 細胞/15〇^ L/孔接種NCI-H460。將化合物（1)溶解於dms〇後， 以培養基予以稀釋而作為檢體溶液（DMs〇 ”。接種翌日，進一步分別添加5。“未添加；驗：： 物之已添加DMSO的培養基（以下，稱為DMS〇稀釋液。 DMSO濃度0_5。/。以下）或檢體溶液。於檢體溶液或 稀釋液添加至細胞後馬上與於72小時後，實施Μττ分 析。如下實施MTT分析。 於各孔分別添加20 μ L之5mg/mL MTT ( 3- ( 4,5- 二曱基噻唑-2 -基）-2,5 -二苯基四溴四氮唑）溶液。其後， 將多孔盤於37。(：、5% C〇2下培養4小時。將多孔盤以 1200rpm離心 5分鐘後，以分注器（dispenser)吸引去 除培養上清液。於各孔分別添加DMSO 1 50私L，溶解所 生成之甲臢（formazan )。藉由使用多孔盤混合器將多孔 -70- 201213333 盤予以授拌，使各 540nm、參考波長 加以測定。 將添加檢體溶 加檢體溶液72小 DMSO稀釋液72 / 述算式求得各濃度 鼻出5 0 %增殖抑制 T/C ( 〇/〇)=( 化合物（1 ) 3 於NCI-H460細胞 (製劑例1 ) <膠 若使用V型混 '乳糖ll5g、玉 後’並分別填充於 (製劑例2)〈錠 若使用V型混 5g、乳糖9〇g、玉 酸鎂1 g予以混合； 里予以打趁即可得 (製劑例3) <懸 調製將甲纖維 取實施例2、3或6 則述分散媒之同時 懸浮液l〇〇g。 .孔均勻發色。將各孔之吸光度於OD 66〇nm之條件下，使用多孔盤計數器 液後馬上戶斤測定之0D幻乍& s;將添 時後所測定之〇D值作為τ;將添加 卜時後所測定之0D值作為c，根據下 中之T/C ( % )並描繪用量反應曲線， 濃度（GI5G值）。 T_s ) / ( C-S) χίοο 汁於SK-BR-3細胞顯示i 3 ( nM )、對 顯示26 ( nM)之GI μ值。 囊劑> 合機將貫施例2、3或6中所得之結晶 米殿粉5 8 g、及硬脂酸鎂2 g予以混合 3號膠囊180mg即可得膠囊劑。 劑〉 合機將貫施例2、3或6中所得之結晶 米；殿粉3 4 g、結晶纖維素2 〇 g、及硬脂 ’以錠劑機並以每1錠i 5〇mg之質 到錠劑。 浮劑> 素分散、溶解於純化水之分散媒，量 中所得之結晶至乳鉢，分別少量添加 予以良好混練，並添加純化水而調製 -7 1- 201213333 【圖式簡單說明】 ' 第1圖實施例2所得之結晶的X射線粉末繞射圖， 圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、橫 軸係表示繞射角度2 0之值。 第2圖實施例3所得之結晶的X射線粉末繞射圖， 圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、橫 軸係表示繞射角度2 0之值。 第3圖實施例6所得之結晶的X射線粉末繞射圖， 圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、橫 軸係表示繞射角度2 0之值。 第4圖 實施例2所得之結晶的X射線粉末繞射圖 中，附上波峰號碼之圖，縱軸係以計數/秒（cps )為單 位表示繞射強度、橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第5圖實施例3所得之結晶的X射線粉末繞射圖 中，附上波峰號碼之圖，縱軸係以計數/秒（cps )為單 位表示繞射強度、橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第6圖實施例6所得之結晶的X射線粉末繞射圖 中，附上波峰號碼之圖，縱軸係以計數/秒（cps )為單 位表示繞射強度、橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第7圖實施例1所得之結晶的X射線粉末繞射圖， 圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、橫 軸係表示繞射角度2 0之值。 第8圖貫施例4所得之結晶的X射線粉末繞射圖’ 圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、橫 軸係表示繞射角度2 0之值。 -72- 201213333 第9圖實施例5所得之結晶的X射線粉末繞射圖， 圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、橫 車由係表示繞射角度2 61之值。 第10圖實施例7所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第1 1圖實施例8所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 (9之值。 第12圖實施例9所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（C p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 Θ之值。 第13圖實施例10所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第14圖實施例11所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱轴係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第15圖_實施例12所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（C p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第16圖實施例13所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 -73- 201213333 第1 7圖實施例14所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第1 8圖實施例15所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第19圖實施例16所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 β之值。 第2 0圖實施例17所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第21圖實施例18所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第22圖實施例19所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第23圖實施例20所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第24圖實施例21所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 -74- 201213333 第2 5圖實施例2 2所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 β之值。 第26圖實施例23所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第27圖實施例24所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第2 8圖實施例2 5所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第29圖實施例26所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（c p S )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第3 0圖實施例2 7所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸俦表示繞射角度2 0之值。 第3 1圖實施例2 8所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 β之值。 第3 2圖實施例29所得之結晶的X射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫轴係表示繞射角度2 0之值。 -75- 201213333 第3 3圖實施例3〇所得之結晶的χ射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 β之值。 人 第34圖實施例31所得之結晶的χ射線粉末繞射 圖，圖之缏軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第3 5圖實施例3 2所得之結晶的χ射線粉末繞射 圖，圖之縱軸係以計數/秒（cps )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 β之值。 第36圖實施例33所得之結晶的χ射線粉末繞射 圖’圖之縱軸係以計數/秒（c p s )為單位表示繞射強度、 橫軸係表示繞射角度2 0之值。 第3 7圖實施例1所得之結晶的微差掃描熱量測定 (Differential scanning calorimetry)圖，圖之縱軸係表 不微差掃描熱量（DSC )( mcal/s )、橫軸係表示溫度（。〇)。 第3 8圖實施例4所得之結晶的微差掃描熱量測定 圖’圖之縱轴係表示微差掃描熱量（DSC) ( mcal/s)、横 軸係表示溫度（)。 第3 9圖實施例11所得之結晶的微差掃描熱量測定 圖/圖之縱輪係表示微差掃描熱量（DSC ) ( meai/s)、横 軸係表示溫度（t )。

Claims (1)

1. 201213333 七、申請專利範圍： 1. 一種下述式（1)所表示之2- {4-胺基-2-[ (3-氣-4 -甲 氧基-5-曱吡啶-2-基）甲基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-甲基乙醯胺之鹽酸鹽

   2. —種如申請專利範圍第1項之式（1)所表示之2-{4-胺基-2-[( 3-氯-4-曱氧基-5 -甲吡啶-2-基）甲基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱 基乙醯胺之2鹽酸鹽之結晶。 3 .如申請專利範圍第2項之結晶，其中於銅Κ α射線（波 長；I = 1 . 54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，具有 第1圖所示之X射線繞射圖。 4. 如申請專利範圍第2項之結晶，其中於銅Κ α射線（波 長；I =1.54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞 射角度2 0 =7.73、24.70、26.01及27.29顯示特徵性波 tl^r 〇 5. 如申請專利範圍第2或4項之結晶，其中於銅Κ α射 線（波長；I =1.54Α )照射所得之X射線粉末繞射圖中， 於繞射角度 2Θ=7·73、9.78、12.58、14.36、15.84、 16.71、17.17、18.40、19.58、21.31、22.85、23.62、 24.13 ' 24.70 ' 26.01 ' 27.29 ' 28.58 ' 29.37 ' 30.65 ' 31.38、33.52、35.25、及 36.87 顯示主要波峰。 -77- 201213333 6. —種如申請專利範圍第1項之式（1 )所表示之2- { 4-胺基-2-[ (3-氣-4-曱氧基-5-曱吡啶-2-基）曱基]-2，7-二氫-6-硫雜-1, 2，3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱 基乙醯胺之1鹽酸鹽之結晶。 7. 如申請專利範圍第6項之結晶，其中於銅Κ α射線（波 長λ =1 .54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，具有 第2圖所示之X射線繞射圖。 8. 如申請專利範圍第6項之結晶，其中於銅Κ α射線（波 長；I =1.54人）照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞 射角度 20 =9.43、12.70、13.03、15.33、16.10、16·84、 18.55 ' 20.21、20.89 ' 21.32、22.93、24.73 ' 25.10、 25.40 ' 26.10 ' 26.53 ' 26.95、27.60 ' 27.88、28.52 ' 29.63 ' 29.95、31.55、32.13、33.40、34.95、及 38.70 顯示主要波峰。 9. 如申請專利範圍第6項之結晶，其中於銅Κ α射線（波 長；I = 1 . 54 A )照射所得之X射線粉末繞射圖中，具有 第3圖所示之X射線粉末繞射圖。 1 〇.如申請專利範圍第6項之結晶，其中於銅Κ α射線（波 長；I =1.54Α )照射所得之X射線粉末繞射圖中，於繞 射角度 20 =8.07、9.45、13.07 > 15.39、16.16、16.90、 20.83、24.29、24.80、28.56、28.85、31.26、32.17、 32.87、及34.11顯示主要波峰。 1 1 · 一種如申請專利範圍第1項之式（1 )所表示之2- { 4-胺基-2-[ ( 3 -氣-4 -曱乳基-5-甲0比。定-2-基）甲基]-2，7_ 二鼠-6-硫雜-1，2，3，5 -四氣雜苯弁[cd]奥-8-基} -Ν -甲

   -78- 201213333 基乙醯胺之鹽酸鹽之結晶，其係乙醇含量為 5000ppm 以下。 12.如申請專利範圍第1 1項之結晶，其中鹽酸鹽為1鹽 酸鹽。 1 3 . —種如申請專利範圍第1項之鹽酸鹽之製造方法，其 特徵為於如申請專利範圍第1項之式（1 )所表示之2-{ 4 -胺基-2- [( 3 -氮-4-甲乳基-5-曱。比σ定-2-基）甲基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜笨并[cd]奠-8-基丨-Ν-甲基乙醯胺之溶液或懸浮液中逐滴添加氣化氫之溶 液。 1 4. 一種如申請專利範圍第2項之2鹽酸鹽之結晶之製造 方法，其特徵為於如申請專利範圍第1項之式（1 )所 表不之2 - { 4 -胺基-2- [( 3 -氮-4-甲氧基-5 -甲。比。定-2 -基） 甲基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1，2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]奠-8-基} -N-曱基乙醯胺之溶液或懸浮液中逐滴添加2當量 以上之氯化氫之溶液。 1 5. —種如申請專利範圍第6項之1鹽酸鹽之結晶之製造 方法，其特徵為於如申請專利範圍第1項之式（1 )所 表示之2- { 4-胺基-2-[( 3-氯-4-曱氧基-5-曱吡啶-2-基） 曱基]-2, 7-二氫-6-硫雜-1, 2, 3, 5-四氮雜苯并[cd]莫-8-基} -N-曱基乙醯胺之溶液或懸浮液中逐滴添加1當量 以上5當量以下之氣化氫之溶液。 1 6. —種醫藥，其係將如申請專利範圍第1項之鹽酸鹽作 為有效成分。 -79- 201213333 1 7. —種抗腫瘤劑，其係含有如申請專利範圍第1項之鹽 酸鹽。 1 8 . —種醫藥組成物，其係含有如申請專利範圍第2至1 2 項中任一項之結晶。 -80-