JP5701884B2 - 三環性ピラゾロピリミジン誘導体の結晶 - Google Patents

Description

本発明は、熱ショック蛋白質９０（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ９０、ＨＳＰ９０）の作用を阻害する三環性ピラゾロピリミジン骨格を有する化合物の塩酸塩に関する。

ＨＳＰ９０は、細胞内の主要なシャペロン蛋白質である。シャペロン蛋白質とは、種々の蛋白質に結合し、結合した蛋白質のフォールディング（ｆｏｌｄｉｎｇ）を補助する蛋白質である。フォールディングにＨＳＰ９０を必要とする蛋白質群は、総称してＨＳＰ９０クライアント蛋白質（ＨＳＰ９０ ｃｌｉｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）と呼ばれている。

ＨＳＰ９０によるクライアント蛋白質のフォールディング機構には、ＨＳＰ９０以外にも、コシャペロン（ｃｏｃｈａｐｅｒｏｎｅ）、パートナー蛋白質（ｐａｒｔｎｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）およびイムノフィリン（Ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ）等の複数の蛋白質が関与し、これらが協働してＨＳＰ９０クライアント蛋白質のフォールディングを補助すると考えられている（非特許文献１）が、その詳細は未だ十分に解明されていない。

ＨＳＰ９０クライアント蛋白質は、ＨＳＰ９０やコシャペロン等と複合体を形成し、その後コンフォメーション変化を起こし、成熟型になると考えられており、ＨＳＰ９０等によって正常にフォールディングされなかった場合は、ユビキチン化されプロテアソームにより分解されると考えられている（非特許文献１〜非特許文献４）。

近年、ＨＳＰ９０阻害剤は、種々の疾患（例えば、癌、アルツハイマー病等の神経変性疾患、心血管疾患、感染症、自己免疫疾患またはアポトーシスによる細胞傷害が関連する疾患等）の治療剤の候補として期待されている（非特許文献２）。

特に、抗癌剤分子標的を含む癌関連蛋白質の多くがＨＳＰ９０クライアント蛋白質であるので、ＨＳＰ９０阻害剤は、抗癌剤の候補として期待されている。例えば、Ｈｅｒ２、Ｒａｆ、Ａｋｔ、テロメラーゼなど癌の発生や亢進に関与する複数の蛋白質が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質として知られている（非特許文献１）。これらの癌関連蛋白質は、ＨＳＰ９０をシャペロン蛋白質として利用することにより、それぞれ、未成熟型から成熟型の蛋白質となり、細胞の癌化に作用するようになると考えられている。ＨＳＰ９０は、癌細胞のみでなく正常細胞にも存在する蛋白質であるが、正常細胞の場合と比較して、癌細胞において、クライアント蛋白質との親和性が高く、そのシャペロン活性に必要なＡＴＰａｓｅ活性も活性化されていることが報告されている（非特許文献１〜３）。従って、ＨＳＰ９０阻害剤は、癌細胞特異的に、複数の癌関連蛋白質を同時に不活化することができると考えられ、強力かつ広範囲な抗腫瘍スペクトルを有する抗癌剤の候補として期待されている。

ＨＳＰ９０阻害剤として、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、ハービマイシン（ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ）、１７−アリルアミノゲルダナマイシン（１７−ａｌｌｙｌａｍｉｎｏｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ、１７−ＡＡＧ）等が旧来より知られている（非特許文献１〜非特許文献４）。これらの化合物は、ＨＳＰ９０のＮ末端側にあるＡＴＰ結合ポケットに結合し、ＨＳＰ９０とＡＴＰの結合を阻害することによってＨＳＰ９０のシャペロン蛋白質としての機能を阻害する。また、上記以外にもＨＳＰ９０を阻害する化合物として、種々の化合物が報告されており（特許文献１、特許文献２、特許文献３、非特許文献５および非特許文献６）、三環性ピラゾロピリミジン誘導体の報告もなされている（特許文献４）。

また、三環性ピラゾロピリミジン誘導体、および、同様に３つの複素環で構成された縮合環構造を有する化合物については、抗癌関連等の用途に関して複数の報告がなされている（特許文献５〜９、非特許文献７および非特許文献８）。

国際公開第２００５／２８４３４号パンフレット 国際公開第２００８／０４９１０５号パンフレット 国際公開第２００８／０９３０７５号パンフレット 国際公開第２００８／０３５６２９号パンフレット 国際公開第２００４／０４７７５５号パンフレット 国際公開第２００６／０１５２６３号パンフレット 国際公開第２００５／０２１５６８号パンフレット 国際公開第１９９８／０４３９９１号パンフレット 国際公開第２００８／１００４４７号パンフレット

Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００６）Ｖｏｌ．２６、Ｎｏ．３、３１０−３３８ ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００４）Ｖｏｌ．１０、Ｎｏ．６、２８３−２９０ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００５）１４６、７６９−７８０ ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２００６）Ｍａｒ、３１（３）、１６４−１７２ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００５）Ｖｏｌ．４８、Ｎｏ．１３、４２１２−４２１５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００６）Ｖｏｌ．４９、Ｎｏ．１、３８１−３９０ Ｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３）Ｖｏｌ．１、Ｎｏ．２３、４１６６−４１７２ Ｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００６）Ｖｏｌ．４、Ｎｏ．９、１７２３−１７２９

三環性ピラゾロピリミジン誘導体は優れたＨＳＰ９０阻害活性を示し、医薬、特に抗癌剤としての利用が期待される。さらに、これら誘導体の溶解性等の物性を改善して吸収性を高めることにより、その有効性を向上させたり、あるいは投与量を減らすことによってその副作用を低下させることが可能となれば、医療上の有用性はさらに向上する。

また、医薬品に用いられる物質は、その不純物による予期せぬ副作用（例えば、毒性等）が生じないように特に高い純度が求められる。加えて、医薬の原体は、その品質を保持しながら長期間保管できることが重要であり、長期間保管可能な安定性の高い結晶を見出すことは工業的に有意義である。

本発明者らは、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性を阻害し、抗腫瘍活性を示す新規化合物である三環性ピラゾロピリミジン誘導体の医療上の有用性を高めるため、溶解性、純度、安定性等を向上させるべく、該誘導体の塩等についてその製造を含め鋭意検討した。その結果、三環性ピラゾロピリミジン誘導体それ自身（フリー体）より溶解性に優る２塩酸塩および１塩酸塩を、また溶解性に優るだけでなく、不純物含量が少なく、さらに残留溶媒の含量も少なく、加えて安定性にも優れる、三環性ピラゾロピリミジン誘導体の１塩酸塩を見出した。さらに、それらの塩をそれぞれ確実に製造する方法を確立し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は、次の［１］から［１８］に関する。
［１］下記式（１）

で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの塩酸塩。
［２］［１］に記載の式（１）で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの２塩酸塩の結晶。
［３］銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、図１に示すＸ線回折図を有する［２］に記載の結晶。
［４］銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝７．７３、２４．７０、２６．０１および２７．２９に特徴的ピークを示す［２］に記載の結晶。
［５］銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝７．７３、９．７８、１２．５８、１４．３６、１５．８４、１６．７１、１７．１７、１８．４０、１９．５８、２１．３１、２２．８５、２３．６２、２４．１３、２４．７０、２６．０１、２７．２９、２８．５８、２９．３７、３０．６５、３１．３８、３３．５２、３５．２５、および３６．８７に主要ピークを示す［２］または［４］に記載の結晶。
［６］［１］に記載の式（１）で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの１塩酸塩の結晶。
［７］銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、図２に示すＸ線回折図を有する［６］に記載の結晶。
［８］銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝９．４３、１２．７０、１３．０３、１５．３３、１６．１０、１６．８４、１８．５５、２０．２１、２０，８９、２１．３２、２２．９３、２４．７３、２５．１０、２５．４０、２６．１０、２６．５３、２６．９５、２７．６０、２７．８８、２８．５２、２９．６３、２９．９５、３１．５５、３２．１３、３３．４０、３４．９５、および３８．７０に主要ピークを示す［６］に記載の結晶。
［９］銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、図３に示す粉末Ｘ線回折図を有する［６］に記載の結晶。
［１０］銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝８．０７、９．４５、１３．０７、１５．３９、１６．１６、１６．９０、２０．８３、２４．２９、２４．８０、２８．５６、２８．８５、３１．２６、３２．１７、３２．８７、および３４．１１に主要ピークを示す［６］に記載の結晶。
［１１］エタノール含量が５０００ｐｐｍ以下である［１］に記載の式（１）で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの塩酸塩の結晶。
［１２］塩酸塩が１塩酸塩である［１１］に記載の結晶。
［１３］［１］に記載の式（１）で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの溶液または懸濁液に塩化水素の溶液を滴下することを特徴とする［１］に記載の塩酸塩の製造方法。
［１４］請求項１に記載の式（１）で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの溶液または懸濁液に２当量以上の塩化水素の溶液を滴下することを特徴とする［２］に記載の２塩酸塩の結晶の製造方法。
［１５］請求項１に記載の式（１）で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの溶液または懸濁液に１当量以上５当量以下の塩化水素の溶液を滴下することを特徴とする［６］に記載の１塩酸塩の結晶の製造方法。
［１６］［１］に記載の塩酸塩を有効成分として含有する医薬。
［１７］［１］に記載の塩酸塩を含有する抗腫瘍剤。
［１８］［２］から［１２］のいずれか１に記載の結晶を含有する医薬組成物。

本発明によって、ＨＳＰ９０阻害活性を有する、２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの、より溶解性に優る２塩酸塩および１塩酸塩が提供される。またさらに不純物含量が少なく、残留溶媒量も少なく、加えて安定性にも優れる１塩酸塩も提供される。本発明の化合物は、抗腫瘍剤として有用である。

実施例２で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０、２０、３０、４０）は、回折強度（Ｌｉｎ（Ｃｏｕｎｔｓ））を示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に３、１０、２０、３０、４０）は回折角度２θの値を示す。 実施例３で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０）は、回折強度（Ｌｉｎ（Ｃｏｕｎｔｓ））を示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に３、１０、２０、３０、４０）は回折角度２θの値を示す。 実施例６で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０）は、回折強度（Ｌｉｎ（Ｃｏｕｎｔｓ））を示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に３、１０、２０、３０、４０）は回折角度２θの値を示す。 実施例２で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図にピーク番号を付した図である。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０、２０、３０、４０）は、回折強度（Ｌｉｎ（Ｃｏｕｎｔｓ））示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に３、１０、２０、３０、４０）は回折角度２θの値を示す。 実施例３で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図にピーク番号を付した図である。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０）は、回折強度（Ｌｉｎ（Ｃｏｕｎｔｓ））を示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に３、１０、２０、３０、４０）は回折角度２θの値を示す。 実施例６で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図にピーク番号を付した図である。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０）は、回折強度（Ｌｉｎ（Ｃｏｕｎｔｓ））を示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に３、１０、２０、３０、４０）は回折角度２θの値を示す。 実施例１で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、２００、４００、６００、８００、１０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例４で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、２００、４００、６００、８００、１０００、１２００、１４００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例５で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、２００、４００、６００、８００、１０００、１２００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例７で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例８で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、５００、１０００、１５００、２０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例９で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１０で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１１で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１２で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１３で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１４で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１５で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１６で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１７で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１８で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１９で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２０で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２１で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２２で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２３で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２４で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、２０００、４０００、６０００、８０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２５で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２６で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２７で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２８で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例２９で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例３０で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例３１で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例３２で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例３３で得られた結晶の粉末Ｘ線回折図。図の縦軸（目盛りに付された数値は、下から順に０、１０００、２０００、３０００、４０００）は、回折強度をカウント／秒（ｃｐｓ）単位で示し、横軸（目盛りに付された数値は、左から順に１０．０００、２０．０００、３０．０００）は回折角度２θの値を示す。 実施例１で得られた結晶の示差走査熱量測定図。図の縦軸は、示差走査熱量（ＤＳＣ）（ｍｃａｌ／ｓ）を示し、横軸は温度（℃）を示す。 実施例４で得られた結晶の示差走査熱量測定図。図の縦軸は、示差走査熱量（ＤＳＣ）（ｍｃａｌ／ｓ）を示し、横軸は温度（℃）を示す。 実施例１１で得られた結晶の示差走査熱量測定図。図の縦軸は、示差走査熱量（ＤＳＣ）（ｍｃａｌ／ｓ）を示し、横軸は温度（℃）を示す。

本発明は、下記式（１）

で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（以下、本明細書において、化合物（１）と記載する場合がある。）の塩酸塩および該塩酸塩の結晶に関する。ここで、結晶とは、その内部構造が三次元的に構成原子（又はその集団）の規則正しい繰り返しでできている固体をいい、そのような規則正しい内部構造を持たない無定形固体とは区別される。

同じ化合物の結晶であっても、結晶化の条件によって、複数の異なる内部構造及び物理化学的性質を有する結晶（結晶多形）が生成することがあるが、本発明の結晶は、これら結晶多形のいずれであってもよく、２以上の結晶多形の混合物であってもよい。

また、下記に好適な結晶形態として示す本願発明の結晶は、当該結晶形態のみからなる場合、他の結晶との混合物中に含まれる場合、非晶質との混合物中に含まれる場合等、存在形態は問わない。

本発明の結晶は、大気中に放置しておくことにより、水分を吸収し、付着水が付く場合や通常の大気条件下において２５乃至１５０℃に加熱すること等により、水和物を形成する場合がある。さらには、本発明の結晶は付着残留溶媒または溶媒和物中に、結晶化時の溶媒を含む場合もある。

本明細書において、本発明の結晶を粉末Ｘ線回折のデータに基づき表すことがあるが、粉末Ｘ線回折は、通常、当該分野において用いられる手法により測定・解析を行えばよく、例えば、実施例に記載の方法により行うことができる。また、一般に、水和物や脱水物は結晶水の着脱によって、その格子定数が変化し、粉末Ｘ線回折における回折角（２θ）に変化を与えることがある。また、ピークの強度は、結晶の成長面等の違い（晶癖）等によって変化することもある。従って、本発明の結晶を粉末Ｘ線回折のデータに基づき表した場合、粉末Ｘ線回折におけるピークの回折角およびＸ線回折図が一致する結晶のほか、それらから得られる水和物および脱水物も本発明の範囲に包含される。

本発明の結晶の１つの好適な形態は、化合物（１）の２塩酸塩の結晶である。化合物（１）の２塩酸塩の結晶は、銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、図１に示すＸ線回折図を有する。また、化合物（１）の２塩酸塩の結晶は、銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝７．７３、２４．７０、２６．０１および２７．２９に特徴的ピークを有する。ここで、「特徴的ピーク」とは、粉末Ｘ線回折図において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度５０以上のピークを意味する。また、本発明の化合物（１）の２塩酸塩の結晶は、銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝７．７３、９．７８、１２．５８、１４．３６、１５．８４、１６．７１、１７．１７、１８．４０、１９．５８、２１．３１、２２．８５、２３．６２、２４．１３、２４．７０、２６．０１、２７．２９、２８．５８、２９．３７、３０．６５、３１．３８、３３．５２、３５．２５、および３６．８７に主要ピークを示す結晶でもある。ここで、「主要ピーク」とは、粉末Ｘ線回折図において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度１５以上のピークを意味する。

本発明の結晶の別の１つの好適な形態は、化合物（１）の１塩酸塩の結晶である。当該化合物（１）の１塩酸塩の結晶のうちの１つの形態は、銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、図２に示すＸ線回折図を有する結晶である。また、本形態の結晶は、銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝９．４３、１２．７０、１３．０３、１５．３３、１６．１０、１６．８４、１８．５５、２０．２１、２０，８９、２１．３２、２２．９３、２４．７３、２５．１０、２５．４０、２６．１０、２６．５３、２６．９５、２７．６０、２７．８８、２８．５２、２９．６３、２９．９５、３１．５５、３２．１３、３３．４０、３４．９５、および３８．７０に主要ピークを示す結晶でもある。ここで、「主要ピーク」とは、粉末Ｘ線回折図において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度３０以上のピークを意味する。

本発明の化合物（１）の１塩酸塩の結晶の別の１つの形態は、銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、図３に示す粉末Ｘ線回折図を有する結晶である。また、本形態の結晶は、銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝８．０７、９．４５、１３．０７、１５．３９、１６．１６、１６．９０、２０．８３、２４．２９、２４．８０、２８．５６、２８．８５、３１．２６、３２．１７、３２．８７、および３４．１１に主要ピークを示す結晶でもある。ここで、「主要ピーク」とは、粉末Ｘ線回折図において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度１２以上のピークを意味する。

２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの塩酸塩化は、通常、２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの溶液または懸濁液中に、塩化水素の溶液を滴下することによって行われる。

用いる溶媒は、２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドおよび塩化水素をある程度溶解し、塩酸塩化を阻害しないものであれば特に限定はない。そのような溶媒としては、例えば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、イソオクタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン等の炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン化炭化水素類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、ジオキサン、メチルシクロペンチルエーテル等のエーテル類；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル等のエステル類；アセトン、メチルエチルケトン、シクロペンタノン、シクロヘキサノン等のケトン類；アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ’−ジメチルイミダゾリジノン、ヘキサメチルリン酸トリアミド等のアミド類、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類；メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブチルアルコール等のアルコール類、または水、およびこれらの混合物等が挙げられ、好適にはケトン類、アルコール類、水、またはこれらの混合物であり、より好適にはアルコール類、水、またはこれらの混合物であり、さらに好適には、メタノール、エタノール、水、またはこれらの混合物である。

また、２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドを溶液または懸濁液とする際に使用する溶媒と塩化水素の溶液に使用する溶媒は同一でも異なっていてもよい。

用いる塩化水素の溶液の濃度には特に制限はないが、通常、０．１ｍｏｌ／Ｌから飽和溶液、好適には０．５ｍｏｌ／Ｌから飽和溶液である。

塩酸塩化の温度は、用いる溶媒が固化しなければ特に制限はないが、通常−７０℃から７０℃、好適には−２０℃から５０℃である。

２塩酸塩を製造する場合、用いる塩化水素の量は、通常、２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドを２塩酸化するために必要な量以上であれば特に限定はないが、通常２当量以上１００当量以下、好適には２当量以上２０当量以下、さらに好適には２当量以上１０当量以下である。

１塩酸塩を製造する場合、用いる塩化水素の量は、２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドを１塩酸化するために必要な量かつ２塩酸塩が析出しない量以下であれば特に限定はない。その量は、用いる溶媒の種類、用いる溶媒の量、および温度に依存し、通常１当量以上１０当量以下、好適には１当量以上５当量以下、さらに好適には１当量以上３当量以下である。

２塩酸塩を製造する場合、種晶を添加してもよい。種晶を添加する場合、種晶を添加するタイミングに特に制限は無いが、通常２塩酸塩が過飽和となる塩化水素濃度付近で添加する。塩化水素濃度は溶媒組成によっても異なるが、通常、塩化水素を２当量程度以上添加する必要がある。用いる種晶の量に制限は無いが、通常０．００００００１当量以上１当量以下、好適には０．０００００１当量以上０．５当量以下、さらに好適には０．００００１当量以上０．１当量以下である。

１塩酸塩を製造する場合、取得しようとする１塩酸塩の種晶を添加してもよい。種晶を添加する場合、種晶を添加するタイミングに特に制限は無いが、通常１塩酸塩が過飽和となる塩化水素濃度付近で添加する。塩化水素濃度は溶媒組成によっても異なるが、通常、塩化水素を１当量程度以上添加する必要がある。用いる種晶の量に制限は無いが、通常０．００００００１当量以上１当量以下、好適には０．０００００１当量以上０．５当量以下、さらに好適には０．００００１当量以上０．１当量以下である。

１塩酸塩の結晶において、図２に示す粉末Ｘ線回折図を有する結晶および図３に示す粉末Ｘ線回折図を有する結晶の製造は、例えば、下記実施例３から５に記載の方法および実施例６から３３に記載の方法により、それぞれ行うことができるがこれに限定されない。図３に示す粉末Ｘ線回折図を有する結晶を製造する場合、反応液中、塩酸塩が過飽和となる塩化水素濃度付近で、添加する塩化水素量を少量ずつ２回から１０回程度回数を分けるなどして、段階的に塩化水素濃度を上げていくことが望ましい。図３に示す粉末Ｘ線回折図を有する結晶は、安定性に優れ、結晶中の残留溶媒量、例えば、結晶中の残留エタノール量が低量であった。結晶中の残留溶媒量は、６０００ｐｐｍ以下であることが好ましく、５０００ｐｐｍ以下であることがより好ましい。

本発明の別の態様は、本発明の塩酸塩または結晶を有効成分として含有する医薬、本発明の塩酸塩または結晶を含有する抗腫瘍剤である。また、本発明の塩酸塩または結晶を含有する医薬組成物に関する。

本願発明の塩酸塩または結晶を有効成分として含む医薬は、好ましくは、本発明の結晶と１種または２種以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物の形態で提供される。本発明の医薬の投与形態は特に制限されず、経口的または非経口的に投与することができるが、好ましくは、経口的に投与される。

本発明の医薬組成物は、化合物（Ｉ）として本発明の塩酸塩または結晶を少なくとも一部含む。当該医薬組成物には、化合物（Ｉ）として本願発明の結晶以外の結晶形が存在していてもよい。当該医薬組成物に含まれる本願発明の結晶の割合は、当該医薬組成物中の化合物（Ｉ）全体に対して、０．０１重量％〜９９．９重量％の範囲、例えば、０．０１重量％以上、０．０５重量％以上、０．１重量％以上、０．５重量％以上、１重量％以上、２重量％以上、３重量％以上、４重量％以上、５重量％以上、１０重量％以上、２０重量％以上、３０重量％以上、４０重量％以上、５０重量％以上、６０重量％以上、７０重量％以上、８０重量％以上、９０重量％以上、９５重量％以上、９６重量％以上、９７重量％以上、９８重量％以上、９９重量％以上、９９．５重量％以上、９９．６重量％以上、９９．７重量％以上、９９．８重量％以上または９９．９重量％以上含まれていればよい。本願発明の結晶が医薬組成物に含まれているかどうかは、本明細書に記載される機器分析方法（例えば、粉末Ｘ線回折、熱分析、赤外吸収スペクトル等）により確認することができる。

本発明の塩酸塩または結晶は、ＨＳＰ９０阻害剤、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性阻害剤、ＨＳＰ９０とＡＴＰの結合阻害剤として用いることができ、本発明の塩酸塩または結晶を含有する医薬、特に好ましくは抗癌剤として用いることができる。

ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性は、当業者に通常用いられるＡＴＰａｓｅアッセイを用いて調べることができる。例えば、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性は、試験化合物の存在下または非存在下で、組換えＨＳＰ９０蛋白質およびＡＴＰを用いて検出することができる。あるいは、ＡＴＰａｓｅアッセイは、例えば、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２７，１７６−１８３（２００４）あるいはＮａｔｕｒｅ ４２５，４０７−４１０（２００３）に記載されている方法を実施すればよい。

ＨＳＰ９０の発現の阻害は、当業者に通常用いられるノーザンブロッティング、ウェスタンブロッティングまたはＥＬＩＳＡ等を用いて調べることができる。例えば、試験化合物の存在下または非存在下で培養した細胞からｍＲＮＡを回収してノーザンブロッティングを行い、試験化合物の非存在下と比較して試験化合物の存在下で培養した細胞から回収したｍＲＮＡにおけるＨＳＰ９０ ｍＲＮＡ量が減少している場合、該試験化合物をＨＳＰ９０の発現を阻害する化合物であると同定する。あるいは、例えば、Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．６５，６４０１−６４０８（２００５）に記載されている方法でウェスタンブロッティングを実施し、ＨＳＰ９０の蛋白質量を調べればよい。

ＨＳＰ９０とクライアント蛋白質の結合の阻害は、例えば、当業者に通常用いられる免疫沈降およびウェスタンブロッティングを用いて調べることができる。免疫沈降およびウェスタンブロッティングは、例えば、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，１０３４６−１０３５３（２００２）に記載されている方法を実施すればよい。

ＨＳＰ９０とコシャペロンやイムノフィリン類の結合を阻害する化合物は、例えば、当業者に通常用いられる免疫沈降およびウェスタンブロッティングを用いて調べることができる。例えば、Ｎａｔｕｒｅ ４２５，４０７−４１０（２００３）に記載されている方法を実施し、試験化合物の存在下または非存在下で、ＨＳＰ９０とコシャペロンやイムノフィリン類の結合を調べればよい。

ＨＳＰ９０とＡＴＰの結合の阻害は、例えば、標識したＡＴＰとＨＳＰ９０との結合試験を用いて調べることができる。例えば、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，１８６０８−１８６１３（１９９７）に記載されている方法を実施し、試験化合物の存在下または非存在下で、ＨＳＰ９０と標識ＡＴＰの結合を調べればよい。

ＨＳＰ９０のコンフォメーション変化の阻害は、例えば、ｂｉｓ−ＡＮＳ（１，１’−ｂｉｓ（４−ａｎｉｌｉｎｏ−５−ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）を利用したコンフォメーショナルアッセイ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ａｓｓａｙ）を用いて調べることができる。コンフォメーショナルアッセイは、例えば、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７，３８６５−３８７３（２００４）に記載されている方法を実施すればよい。

細胞の増殖阻害活性は、当業者に通常用いられる増殖阻害試験法を用いて調べることができる。細胞の増殖阻害活性は、例えば、下記の試験例１に記載されるように、試験化合物の存在下または非存在下における細胞（例えば、腫瘍細胞）の増殖の程度を比較することによって実施することができる。増殖の程度は、例えば、生細胞を測定する試験系を用いて調べることができる。生細胞の測定方法としては、例えば、［^３Ｈ］−チミジンの取り込み試験、ＢｒｄＵ法またはＭＴＴアッセイ等が挙げられる。

また、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗腫瘍活性は、当業者に通常用いられる抗腫瘍試験法を用いて調べることができる。例えば、マウス、ラット等に各種腫瘍細胞を移植し、移植細胞の生着が確認された後に、本発明の化合物を経口投与、静脈内投与等し、数日〜数週間後に、薬剤無投与群における腫瘍増殖と化合物投与群における腫瘍増殖とを比較することにより本発明のｉｎ ｖｉｖｏでの抗腫瘍活性を確認することができる。

本発明の塩酸塩または結晶は、腫瘍または癌、例えば、肺癌、消化器癌、卵巣癌、子宮癌、乳癌、肝癌、頭頚部癌、血液癌、腎癌、睾丸腫瘍、前立腺癌、多発性骨髄腫、悪性黒色腫等の皮膚癌、肉腫等の治療に使用することができる。

本発明の塩酸塩または結晶は、ＨＳＰ９０阻害作用を有するので、ＨＳＰ９０への依存性が上昇している癌の治療に用いることができる。ＨＳＰ９０への依存性が上昇している癌としては、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質が過剰発現している癌、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質の変異がみられる癌等が挙げられ、より具体的には、例えば、Ｈｅｒ２、ｃ−Ｍｅｔ、Ｆｌｔ３等が過剰発現している癌やｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ、Ｒａｆ等の変異がみられる癌が挙げられるがこれらに限定されない。

さらには、ＨＳＰ９０の下流には、癌に関与しているとされる因子群（ＲＡＳ−ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ、テロメレース等）が多く存在し、ＨＳＰ９０を阻害すれば、これら因子へのシグナル伝達が阻害され、結果として上記因子の活性化をも阻害することとなるので、ＨＳＰ９０阻害剤である本発明の塩酸塩または結晶は、当該観点からも様々な癌の治療に好適に用いることができる。

本発明の医薬組成物は、本発明の塩酸塩または結晶と薬学的に許容し得る担体を含み、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射等の各種注射剤として、あるいは、経口投与または経皮投与等の種々の方法によって投与することができる。薬学的に許容し得る担体とは、本発明の塩酸塩または結晶または本発明の塩酸塩または結晶を含む組成物を、ある器官または臓器から他の器官または臓器に輸送することに関与する、薬学的に許容される材料（例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、溶媒等）を意味する。

製剤の調製方法としては投与法に応じ適当な製剤（例えば、経口剤または注射剤）を選択し、通常用いられている各種製剤の調製法にて調製できる。経口剤としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、または油性ないし水性の懸濁液等を例示できる。経口投与の場合では遊離体のままでも、塩の型のいずれでもよい。水性製剤は薬学的に許容される酸と酸付加物を形成させるか、ナトリウム等のアルカリ金属塩とすることで調製できる。注射剤の場合は製剤中に安定剤、防腐剤または溶解補助剤等を使用することもできる。これらの補助剤等を含むこともある溶液を容器に収納後、凍結乾燥等によって固形製剤として用時調製の製剤としてもよい。また、一回投与量を一の容器に収納してもよく、また複数回投与量を一の容器に収納してもよい。

固形製剤としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、またはトローチ剤が挙げられる。これらの固形製剤は、本発明の塩酸塩または結晶とともに薬学的に許容し得る添加物を含んでもよい。添加物としては、例えば、充填剤類、増量剤類、結合剤類、崩壊剤類、溶解促進剤類、湿潤剤類または滑沢剤類が挙げられ、これらを必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。

液体製剤としては、例えば、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、または懸濁剤が挙げられる。これらの液体製剤は、本発明の塩酸塩または結晶とともに薬学的に許容し得る添加物を含んでもよい。添加物としては、例えば、懸濁化剤または乳化剤が挙げられ、これらを必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。

本発明の結晶は他の抗腫瘍剤と併用して用いることができる。例えば、抗腫瘍抗生物質、抗腫瘍性植物成分、ＢＲＭ（生物学的応答性制御物質）、ホルモン、ビタミン、抗腫瘍性抗体、分子標的薬、その他の抗腫瘍剤等が挙げられる。

より具体的に、アルキル化剤としては、例えば、ナイトロジェンマスタード、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシドもしくはクロラムブチル等のアルキル化剤、カルボコンもしくはチオテパ等のアジリジン系アルキル化剤、ディブロモマンニトールもしくはディブロモダルシトール等のエポキシド系アルキル化剤、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ニムスチンハイドロクロライド、ストレプトゾシン、クロロゾトシンもしくはラニムスチン等のニトロソウレア系アルキル化剤、ブスルファン、トシル酸インプロスルファンまたはダカルバジン等が挙げられる。

各種代謝拮抗剤としては、例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグアニンもしくはチオイノシン等のプリン代謝拮抗剤、フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル、カルモフール、ドキシフルリジン、ブロクスウリジン、シタラビン若しくはエノシタビン等のピリミジン代謝拮抗剤、メトトレキサートもしくはトリメトレキサート等の葉酸代謝拮抗剤等が挙げられる。

抗腫瘍性抗生物質としては、例えば、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ペプロマイシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、ドキソルビシン、ピラルビシン、ＴＨＰ−アドリアマイシン、４ ’−エピドキソルビシンもしくはエピルビシン等のアントラサイクリン系抗生物質抗腫瘍剤、クロモマイシンＡ３またはアクチノマイシンＤ等が挙げられる。

抗腫瘍性植物成分としては、例えば、ビンデシン、ビンクリスチン若しくはビンブラスチン等のビンカアルカロイド類、パクリタキセル、ドセタキセル等のタキサン類、またはエトポシドもしくはテニポシド等のエピポドフィロトキシン類が挙げられる。

ＢＲＭとしては、例えば、腫瘍壊死因子またはインドメタシン等が挙げられる。

ホルモンとしては、例えば、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プラステロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、オキシメトロン、ナンドロロン、メテノロン、ホスフェストロール、エチニルエストラジオール、クロルマジノンまたはメドロキシプロゲステロン等が挙げられる。

ビタミンとしては、例えば、ビタミンＣまたはビタミンＡ等が挙げられる。

抗腫瘍性抗体、分子標的薬としては、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ニモツズマブ、デノスマブ、ベバシズマブ、インフリキシマブ、メシル酸イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、スニチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ等が挙げられる。

その他の抗腫瘍剤としては、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、タモキシフェン、カンプトテシン、イホスファミド、シクロホスファミド、メルファラン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アセクラトン、シゾフィラン、ピシバニール、プロカルバジン、ピポブロマン、ネオカルチノスタチン、ヒドロキシウレア、ウベニメクスまたはクレスチン等が挙げられる。

本発明には、塩酸塩または結晶を投与することを特徴とする癌の予防方法及び／または治療方法も含まれる。

本発明の塩酸塩または結晶を有効成分として含む医薬組成物の投与量は特に限定されず、患者の年齢、体重、症状などの種々の条件に応じて適宜選択することができるが、有効成分を成人１日当たり１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは５ｍｇ〜５００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜３００ｍｇ、さらにより好ましくは、５ｍｇ〜１００ｍｇを、１日当り１回〜数回好ましくは１日当たり１回または２回、症状に応じて投与することが望ましい。

本発明の２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド塩酸塩の原料となる、２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（フリー体）は、例えば以下に述べる参考例１に従って製造することができる。

以下に実施例を示し、本発明を詳細に説明する。

（参考例１） ２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（フリー体）の製造）
（１） １−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−３−ブテン−１−オール

市販の２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−カルボアルデヒド（１．９２ｇ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍｌ）からなる混合物に、インジウム粉末（０．２３ｇ）と亜鉛粉末（１．３１ｇ）を加えた後、室温でヨウ化ナトリウム（０．１５ｇ）とアリルブロミド（１．７３ｍｌ）を加え、３時間撹拌した。反応混合物をセライト濾過し、濾液に酢酸エチルを加え、１Ｎ塩酸、飽和食塩水の順で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、濃縮し、残渣にヘキサンを加え析出物を濾取し、標題化合物（１．７５ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ_６）δ：２．５５−２．６９（２Ｈ，ｍ），４．９５−５．０９（３Ｈ，ｍ），５．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ），５．６７−５．７７（１Ｈ，ｍ），７．４２（２Ｈ，ｓ）．

（２） １−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−２−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）エタン−１−オール

１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−３−ブテン−１−オール（５７．２４ｇ）、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド（１４７．６ｇ）、テトラヒドロフラン（５００ｍｌ）、アセトン（５００ｍｌ）、水（５００ｍｌ）および四酸化オスミウム（６２ｍｇ）からなる混合物を室温で２日間撹拌した。原料消失を確認した後、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（１Ｌ）を加え、反応混合物を減圧下で約１．５Ｌまで濃縮した。残渣に塩化ナトリウムを加えて飽和させ、テトラヒドロフランで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過後、濾液を減圧下で濃縮して溶媒を留去した。得られた残渣にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５００ｍｌ）、２，２−ジメトキシプロパン（２１０ｍｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１８．６１ｇ）を加え、室温にて１４時間撹拌した。反応混合物に飽和重曹水（１Ｌ）と水（１Ｌ）を加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾液を減圧下で約１００ｍｌまで濃縮し、残渣にヘキサンを加え析出物を濾取し、標題化合物（５３．８８ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ_６）δ：１．２２−１．３２（６Ｈ，ｍ），１．７２−２．２３（２Ｈ，ｍ），２．５０（１Ｈ，ｓ），３．５０（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１４．２，６．９Ｈｚ），４．２２−３．９２（２Ｈ，ｍ），５．０６−５．３６（２Ｈ，ｍ），７．４３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：３０８（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（３） １−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−２−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）エタン−１−オン

氷浴冷却下、１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−２−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）エタン−１−オール（７４．７０ｇ）とジメチルスルホキシド（６００ｍｌ）からなる混合物に無水酢酸（１４９ｍｌ）を室温で１５分かけて滴下し、同温で１８時間撹拌した。原料消失を確認した後、反応液を氷水にあけ、析出する固体を濾取し、標題化合物（６８．２６ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３７（３Ｈ，ｓ），１．４２（３Ｈ，ｓ），２．９８−３．０６（１Ｈ，ｍ），３．３２−３．４０（１Ｈ，ｍ），３．６７−３．７２（１Ｈ，ｍ），４．２５−４．３０（１Ｈ，ｍ），４．５７−４．６４（１Ｈ，ｍ），５．７２（２Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：３０６（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（４） ４−クロロ−３−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン

氷浴冷却下、１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−２−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）エタン−１−オン（６１．２３ｇ）、米国特許ＵＳ２００３／１８１９７号に記載の方法により製造した（４−メトキシベンジル）−ヒドラジン 塩酸塩（４１．５０ｇ）およびジクロロメタン（６００ｍｌ）からなる混合物に、トリエチルアミン（８３．６８ｍｌ）を３０分間かけて加えた。徐々に昇温させて１７時間撹拌した後、反応混合物に１０％クエン酸水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して得られた残渣に５％クエン酸水溶液を加え、析出物を濾取、水で洗浄して、標題化合物（７３．８４ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３６（３Ｈ，ｓ），１．４３（３Ｈ，ｓ），３．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．７，８．１Ｈｚ），３．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．７，５．２Ｈｚ），３．７３−３．７８（４Ｈ，ｍ），４．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，６．０Ｈｚ），４．５４−４．６１（１Ｈ，ｍ），４．７７（２Ｈ，ｂｒ ｓ），５．２２（２Ｈ，ｓ），６．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．２４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４０４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（５） ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ｛４−クロロ−３−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝イミドジカーボネート

４−クロロ−３−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン（７２．８３ｇ）とテトラヒドロフラン（７００ｍｌ）からなる混合物に、４−ジメチルアミノピリジン（２．２０ｇ）とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（８６．５９ｇ）を加えた後、室温にて１２時間撹拌した。反応混合物を濾過した後、濾液を減圧下で濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精製することにより、標題化合物（７０．００ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３７（３Ｈ，ｓ），１．４０（３Ｈ，ｓ），１．４４−１．４６（１８Ｈ，ｍ），３．２１−３．２９（１Ｈ，ｍ），３．４８−３．５５（１Ｈ，ｍ），３．７４−３．８１（４Ｈ，ｍ），４．０９−４．１５（１Ｈ，ｍ），４．５８−４．６６（１Ｈ，ｍ），５．４８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．３，１５．１Ｈｚ），６．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．２７−７．３０（２Ｈ，ｍ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：６０４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（６） ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［４−クロロ−３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］イミドジカーボネート

ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ｛４−クロロ−３−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝イミドジカーボネート（５３．８５ｇ）をアセトニトリル（５００ｍｌ）に溶かし、塩化銅（ＩＩ）二水和物（３０．３９ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精製することにより、標題化合物（３７．７０ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．４６（１８Ｈ，ｓ），３．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），３．２３−３．３３（２Ｈ，ｍ），３．６２−３．８２（５Ｈ，ｍ），４．２６−４．３４（１Ｈ，ｍ），５．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２５−７．３０（２Ｈ，ｍ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５６４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（７） ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［８−ヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジル）−２，７，８，９−テトラヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］イミドジカーボネート

氷浴冷却下、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［４−クロロ−３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］イミドジカーボネート（２８．００ｇ）、２，４，６−コリジン（１６．５３ｍｌ）および脱水ジクロロメタン（４００ｍｌ）からなる混合物に、メタンスルホニルクロリド（４．２３ｍｌ）を滴下して加えた後、４℃で１５時間撹拌した。反応混合物に１０％クエン酸水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下濃縮した。得られた残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３００ｍｌ）に溶解させ、氷浴冷却下、硫化水素ナトリウム一水和物（５．５２ｇ）を加えた後、室温で１．５時間撹拌した。反応混合物に炭酸カリウム（１０．２９ｍｇ）を加え、５０℃に加熱してさらに５時間撹拌した。反応混合物に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水の順に洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精製して、標題化合物（２０．５９ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．４５（１８Ｈ，ｓ），２．３９（１Ｈ，ｂｒ ｓ），３．２９−３．５１（４Ｈ，ｍ），４．５８（１Ｈ，ｂｒ ｓ），３．７６（３Ｈ，ｓ），５．４２−５．４９（２Ｈ，ｍ），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．３０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５４４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（８） ４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル アセテート

窒素雰囲気下、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［８−ヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジル）−２，７，８，９−テトラヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］イミドジカーボネート（８．１７ｇ）、ジメチルスルホキシド（７４ｍｌ）およびピリジン（１２ｍｌ）からなる混合物に無水酢酸（１４ｍｌ）を氷冷下で滴下し、３０分間撹拌した後、室温で１５時間撹拌した。原料消失を確認した後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精製して、標題化合物（６．１５ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．４４（１８Ｈ，ｓ），２．２６（３Ｈ，ｓ），３．７７（３Ｈ，ｓ），３．８８（２Ｈ，ｓ），５．５０（２Ｈ，ｓ），６．６８（１Ｈ，ｓ），６．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５８４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（９） ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［２−（４−メトキシベンジル）−８−オキソ−２，７，８，９−テトラヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］イミドジカーボネート

氷浴冷却下、４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル アセテート（６．１５ｇ）、メタノール（２００ｍｌ）および炭酸カリウム（０．７３ｇ）の混合物を１．５時間撹拌した。原料消失を確認した後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下で濃縮して標題化合物（５．７０ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．４６（１８Ｈ，ｓ），３．８４（２Ｈ，ｓ），３．７７（３Ｈ，ｓ），４．２３（２Ｈ，ｓ），５．４８（２Ｈ，ｓ），６．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５４２（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（１０） エチル ｛４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝アセテート

ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［２−（４−メトキシベンジル）−８−オキソ−２，７，８，９−テトラヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］イミドジカーボネート（５．１９ｇ）、エチル（トリフェニルホスファニリデン）アセテート（３．５１ｇ）およびトルエン（３００ｍｌ）からなる混合物を６５℃にて１３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−へキサン）で精製することにより、標題化合物（３．７８ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．２９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６９−１．７７（１Ｈ，ｍ），２．３７−２．４０（１Ｈ，ｍ），２．４６−２．５２（１Ｈ，ｍ），２．６８−２．７１（２Ｈ，ｍ），４．２０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．１０−５．１３（１Ｈ，ｍ），５．２０（２Ｈ，ｂｒ ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：６１２（Ｍ＋Ｈ）^＋

（１１） ２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）−Ｎ−メチルアセタミド トリフルオロ酢酸塩

エチル ｛４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝アセテート（２．２ｇ）を４０％メチルアミン／メタノール溶液（４０ｍｌ）に溶解し、室温で２時間撹拌した。反応完結をＬＣ−ＭＳにて確認し、溶媒を減圧留去した。得られた残渣にアニソール（２ｍｌ）とトリフルオロ酢酸（４０ｍｌ）を加え、６５℃で１５時間撹拌した。反応液を減圧下で濃縮し、残渣にイソプロピルエーテル−エーテル混合液を加え、析出物を濾取し、標題化合物（１．５３ｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２７７（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（１２） ５−クロロ−４−ヒドロキシ−６−メチルニコチニック アシッド

市販の４−ヒドロキシ−６−メチル−ニコチニック アシッド（３００ｍｇ）をアセトニトリル３ｍｌに懸濁し、Ｎ−クロロスクシンイミド（３８０ｍｇ）を加え、室温で３０分間撹拌した後、４５分間加熱還流した。原料消失を確認した後、反応液を氷冷し、析出物を濾取し標題化合物（３２４ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ：２．５６（３Ｈ，ｓ），８．５０（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１８８（Ｍ＋Ｈ）＋

（１３） メチル ４，５−ジクロロ−６−メチルニコチネート

５−クロロ−４−ヒドロキシ−６−メチルニコチニック アシッド（３２０ｍｇ）にオキシ塩化リン（１．１３ｍｌ）を加え、２時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、残渣に氷冷下メタノール（３ｍｌ）を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣に飽和重曹水を氷冷中加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去して標題化合物の粗体（４３６ｍｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２２０（Ｍ＋Ｈ）＋

（１４） メチル ５−クロロ−４−メトキシ−６−メチルニコチネート

粗メチル ４，５−ジクロロ−６−メチルニコチネート（３８０ｍｇ）をメタノール３ｍｌに溶解し、窒素気流下、氷冷にてナトリウムメトキシド（１２０ｍｇ）を加えた。徐々に室温まで昇温し、１８時間撹拌した。原料消失を確認した後、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムにて抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去してシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）にて精製し標題化合物（２１０ｍｇ）を固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．６７（３Ｈ，ｓ），３．９５（４Ｈ，ｓ），４．００（３Ｈ，ｓ），８．７６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２１６（Ｍ＋Ｈ）＋

（１５） （５−クロロ−４−メトキシ−６−メチルピリジン−３−イル）メタノール

メチル ５−クロロ−４−メトキシ−６−メチルニコチネート（１．０ｇ）をメタノール３０ｍｌに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（１．７５ｇ）を加え、１時間加熱還流した。氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムにて３回抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去して標題化合物（０．９２ｇ）を油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．６３（３Ｈ，ｓ），４．００（３Ｈ，ｓ），４．７１（２Ｈ，ｂｒ ｓ），８．３３（１Ｈ，ｓ）
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１８８（Ｍ＋Ｈ）＋

（１６） ３−クロロ−５−（クロロメチル）−４−メトキシ−２−メチルピリジン

（５−クロロ−４−メトキシ−６−メチルピリジン−３−イル）メタノール（５２０ｍｇ，）をクロロホルム２０ｍｌに溶解し、氷冷下、塩化チオニル（０．３８ｍｌ）を加え、同温で３時間撹拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルを加え、飽和重曹水、水、飽和食塩水の順で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去してシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）にて精製し、標題化合物（５５０ｍｇ）を油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．６４（３Ｈ，ｓ），４．０５（３Ｈ，ｓ），４．６１（２Ｈ，ｓ），８．３５（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２０６（Ｍ＋Ｈ）＋

（１７） ３−クロロ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン

３−クロロ−５−（クロロメチル）−４−メトキシ−２−メチルピリジン（５５０ｍｇ）をメタノール１０ｍｌに溶解し、１０％Ｐｄ炭素（５０ｍｇ）を加え、氷冷下、３時間常圧接触水素添加を行った。触媒を濾別し、メタノールを減圧下留去した。クロロホルムにて抽出し、有機層を飽和重曹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去してシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）にて精製し、標題化合物（３６５ｍｇ）を油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２５（３Ｈ，ｓ），２．５９（３Ｈ，ｓ），３．８９（３Ｈ，ｓ），８．１６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１７２（Ｍ＋Ｈ）＋

（１８） ３−クロロ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン １−オキシド

３−クロロ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン（１８１ｍｇ）をジクロロメタン５ｍｌに溶解し、過酸化尿素（１６９ｍｇ）と無水フタル酸（２１９ｍｇ）を加えた。室温で２．５時間撹拌した。氷冷にて飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで希釈し、水層をクロロホルムで２回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去して標題化合物（１８１ｍｇ）を固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２４（３Ｈ，ｓ），２．６２（３Ｈ，ｓ），３．８７（３Ｈ，ｓ），８．０７（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１８８（Ｍ＋Ｈ）＋

（１９） （３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メタノール

３−クロロ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン １−オキシド（５３０ｍｇ）をジクロロメタン１５ｍｌに懸濁し、氷冷にて無水トリフルオロ酢酸（０．３９ｍｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。クロロホルムで希釈し飽和重曹水で洗浄し、水槽をクロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去して標題化合物（５２１ｍｇ）を油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２９（３Ｈ，ｓ），３．９３（３Ｈ，ｓ），４．２９（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．７２−４．７４（２Ｈ，ｍ），８．２６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１８８（Ｍ＋Ｈ）＋

（２０） ３−クロロ−２−（クロロメチル）−４−メトキシ−５−メチルピリジン 塩酸塩

（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メタノール（５３０ｍｇ）をクロロホルム２０ｍｌに溶解し、氷冷下、塩化チオニル（１．０３ｍｌ）を滴下し、室温で３時間撹拌した。反応液を濃縮し、エーテル−へキサンの混合溶媒洗浄により標題化合物（４１０ｍｇ）を固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．４７（３Ｈ，ｓ），４．３２（３Ｈ，ｓ），５．０９（２Ｈ，ｓ），８．５４（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２０６（Ｍ＋Ｈ）＋

（２１） ２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド

２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）−Ｎ−メチルアセタミド トリフルオロ酢酸塩（２８ｍｇ）、３−クロロ−２−（クロロメチル）−４−メトキシ−５−メチルピリジン 塩酸塩（３６ｍｇ）および炭酸カリウム（６９ｍｇ）にジメチルホルムアミド（１ｍｌ）を加え、６０℃で２時間３０分撹拌した。不溶物を濾別後、溶媒を窒素気流下留去した。得られた残渣をジメチルスルホキシド（１ｍｌ）に溶解して分取逆相ＨＰＬＣにて精製し、溶媒を減圧留去することにより標題化合物（２７．０ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２４（４Ｈ，ｓ），２．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），３．２７（２Ｈ，ｓ），３．８０（２Ｈ，ｓ），３．９１（３Ｈ，ｓ），５．２１（２Ｈ，ｓ），５．６５（２Ｈ，ｓ），５．８７（１Ｈ，ｓ），６．７０（１Ｈ，ｓ），８．１６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４４６（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（実施例１）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド ２塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（１．０３４ｇ，２．２４３ｍｍｏｌ）にエタノール（２９．３ｍｌ）、水（０．７４ｍｌ）を加え２５℃にて攪拌した。２Ｍ塩酸／エタノール（６．７３ｍｌ，１３．４６ｍｍｏｌ）を加え３時間４５分攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（５ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１時間乾燥して表題化合物（１．１１８ｇ，２．１５５ｍｍｏｌ）を得た。収率９６％。

（実施例２）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド ２塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（４９３．４８ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）のアセトン（３０ｍＬ）懸濁液に室温で、攪拌しながら３Ｍ塩酸（３６９．６ｍＬ）を滴下し、さらに１２時間攪拌した。得られた結晶をろ別し、アセトンで洗浄後、減圧下、２５℃で３時間乾燥し、表記化合物（５３１．０１ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を得た。収率９２％。

（実施例３）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（５４４６．６ｍｇ、１１．６ｍｍｏｌ）のエタノール（２００ｍｌ）懸濁液に、攪拌しながら、２５℃で３Ｍ塩酸（９．２ｍｌ、２７．８ｍｍｏｌ）を滴下し、３．５間攪拌した。得られた結晶をろ別し、エタノール（５０ｍｌ）で洗浄後、減圧下、４０℃で１４時間乾燥し、表記化合物（５４３６．１ｍｇ、１１６．ｍｍｏｌ）を得た。収率９９％。

（実施例４）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（３．５３ｋｇ、７．７４ｍｏｌ）のエタノール（１２３Ｌ）懸濁液に攪拌しながら、２１から２２℃で、３６．２％濃塩酸（１．７５ｋｇ、１７．４ｍｏｌ）を水（４．５Ｌ）で希釈して調製した３Ｍ塩酸を３０分間かけて滴下し、４時間攪拌した。得られた結晶をろ別し、エタノール（１７．６Ｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１７時間乾燥し表記化合物（３．５０ｋｇ、７．２ｍｏｌ）を得た。収率９３％。

（実施例５）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（３０６ｍｇ、０．６８６ｍｍｏｌ）のエタノール（１０．７ｍｌ）懸濁液に２５℃で、攪拌しながら３Ｍ塩酸（０．５２７ｍｌ、１．５８ｍｍｏｌ）を加え４時間攪拌した。得られた結晶をろ別し、エタノール（１．５ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１時間乾燥し表題化合物（２９５ｍｇ、０．６１２ｍｍｏｌ）を得た。収率８９％。

（実施例６）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（５２７．５ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）のエタノール（３０ｍｌ）懸濁液に攪拌しながら、室温で３Ｍ塩酸（０．３９３ｍｌ、１．１８ｍｍｏｌ）を２回に分けて滴下し、その後１時間攪拌した。得られた結晶をろ別し、エタノール（６ｍｌ）で洗浄後、減圧下、４０℃で３０分間乾燥し、表記化合物（５２５．３ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を得た。収率９２％。

（実施例７）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０４４ｇ，４．５８４ｍｍｏｌ）にエタノール（７０ｍｌ）を加え２３℃にて攪拌し、１．５Ｍ塩酸（３．５９ｍｌ，５．３９ｍｍｏｌ）を加え４時間攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１時間乾燥して表題化合物（１．８９３ｇ，３．９２４ｍｍｏｌ）を得た。収率８６％。

（実施例８）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２３℃にて攪拌し、１．８７Ｍ塩酸（０．７２０ｍｌ，１．３４６ｍｍｏｌ）、種晶として２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド１塩酸塩を加え３０分攪拌した。３．２８Ｍ塩酸（０．２７３ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を加え、８分間攪拌し、この操作をさらに８回繰り返した。３．２８Ｍ塩酸（０．１３７ｍｌ，０．４４９ｍｍｏｌ）を加え、４時間攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１時間乾燥して表題化合物（２．０５７ｇ，４．２６４ｍｍｏｌ）を得た。収率９５％。

（実施例９）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２４℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（２．６９１ｍｌ，２．６９１ｍｍｏｌ）、種晶として２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩を加え３０分攪拌した。９Ｍ塩酸（０．１００ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を加え１０分間攪拌し、この操作をさらに８回繰り返し、４時間攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１時間乾燥して表題化合物（２．０４４ｇ，４．２３７ｍｍｏｌ）を得た。収率９５％。

（実施例１０）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２４℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（１．３４６ｍｌ，１．３４６ｍｍｏｌ）、種晶として２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩を加え３０分攪拌した。１Ｍ塩酸（０．８９７ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を加え８分間攪拌し、この操作をさらに３回繰り返した。１Ｍ塩酸（０．４４９ｍｌ，０．４４９ｍｍｏｌ）を加え、２時間３０分攪拌した。９Ｍ塩酸（０．１００ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を加え１時間３０分攪拌し、９Ｍ塩酸（０．０５０ｍｌ，０．４４９ｍｍｏｌ）を加え１時間攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（１．７４２ｇ，３．６１１ｍｍｏｌ）を得た。収率８１％。

（実施例１１）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２０．００ｇ，４４．８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７００ｍｌ）を加え２４℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（１３．４６ｍｌ，１３．４６ｍｍｏｌ）、種晶として２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩を加え３０分攪拌した。１Ｍ塩酸（８．９７ｍｌ，８．９７ｍｍｏｌ）を９分間かけて滴下し、この操作をさらに３回繰り返した。１Ｍ塩酸（４．４９ｍｌ，４．４９ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。９Ｍ塩酸（１．００ｍｌ，８．９７ｍｍｏｌ）を加え１時間５０分攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（１００ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１時間乾燥して表題化合物（１８．９５ｇ，３９．２８ｍｍｏｌ）を得た。収率８８％。

（実施例１２）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（８０．００ｇ，１７３．４８ｍｍｏｌ）にエタノール（２８００ｍｌ）を加え２０℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（５２．０６ｍｌ，５２．０６ｍｍｏｌ）、種晶として２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩を加え３０分攪拌した。１Ｍ塩酸（３４．６９ｍｌ，３４．６９ｍｍｏｌ）を８分間かけて滴下後４分間攪拌し、この操作をさらに３回繰り返した。１Ｍ塩酸（１７．３７ｍｌ，１７．３７ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下後４分間攪拌した。９Ｍ塩酸（３．８７ｍｌ，３４．８３ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下後２時間４０分攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（４００ｍｌ）で洗浄後、減圧下室温にて３０分、４０℃にて２時間３０分乾燥して表題化合物（６８．９ｇ，１４２．８ｍｍｏｌ）を得た。収率８２％。

（実施例１３）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２４℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（１．３４６ｍｌ，１．３４６ｍｍｏｌ）を加え３０分攪拌した。１Ｍ塩酸（０．８９７ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を５分間かけて加えた後５分間攪拌し、この操作をさらに３回繰り返した。１Ｍ塩酸（０．４４９ｍｌ，０．４４９ｍｍｏｌ）を加え、３０分攪拌した。濃塩酸（０．２９９ｍｌ，３．５８８ｍｍｏｌ）を加え４時間攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（１．９４２ｇ，４．０２６ｍｍｏｌ）を得た。収率９０％。

（実施例１４）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２３℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（１．３４６ｍｌ，１．３４６ｍｍｏｌ）を加え２５分攪拌した。１Ｍ塩酸（０．８９７ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を４分間かけて加えた後６分間攪拌し、この操作をさらに３回繰り返した。１Ｍ塩酸（０．４４９ｍｌ，０．４４９ｍｍｏｌ）を加え、３０分攪拌した。濃塩酸（０．２９９ｍｌ，３．５８８ｍｍｏｌ）を加え１時間攪拌した。１時間かけて２℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０１１ｇ，４．１６９ｍｍｏｌ）を得た。収率９３％。

（実施例１５）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）、水（３．０５２ｍｌ）を加え２３℃にて攪拌した。濃塩酸（０．０４５ｍｌ，０．５４ｍｍｏｌ）を２分間かけて加えた後１０分間攪拌し、この操作をさらに９回繰り返した。３０分攪拌後、濃塩酸（０．２９９ｍｌ，３．５８８ｍｍｏｌ）を加え４時間攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０２２ｇ，４．１９２ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例１６）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（３６ｍｌ）、水（３．０５２ｍｌ）を加え２５℃にて攪拌した。濃塩酸（０．０４５ｍｌ，０．５４ｍｍｏｌ）を１分間かけて加えた後９分間攪拌し、この操作をさらに９回繰り返した。３０分攪拌後、濃塩酸（０．２９９ｍｌ，３．５８８ｍｍｏｌ）を加え、エタノール（３６ｍｌ）を４５分かけて加えた後４時間攪拌した。析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０２０ｇ，４．１８７ｍｍｏｌ）を得た。収率９３％。

（実施例１７）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２４℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（１．３４６ｍｌ，１．３４６ｍｍｏｌ）を加え２５分攪拌した。１Ｍ塩酸（０．８９７ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を４分間かけて加えた後７分間攪拌し、この操作をさらに３回繰り返した。濃塩酸（０．０３７ｍｌ，０．４４４ｍｍｏｌ）を加え、３０分攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を８分間かけて加え１時間２０分攪拌した。１時間かけて８℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０２６ｇ，４．２００ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例１８）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２４℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（１．３４６ｍｌ，１．３４６ｍｍｏｌ）を加え２５分攪拌した。１Ｍ塩酸（０．８９７ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を４分間かけて加えた後７分間攪拌し、この操作をさらに２回繰り返した。濃塩酸（０．０３７ｍｌ，０．４４４ｍｍｏｌ）を１分間かけて加えた後９分間攪拌し、この操作をさらに２回繰り返した後、３０分攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。１時間かけて１０℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０４８ｇ，４．２４６ｍｍｏｌ）を得た。収率９５％。

（実施例１９）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２４℃にて攪拌し、１．２Ｍ塩酸（１．３４６ｍｌ，１．６１５ｍｍｏｌ）を加え２５分攪拌した。１．２Ｍ塩酸（０．８９７ｍｌ，１．０７６ｍｍｏｌ）を５分間かけて加えた後５分間攪拌し、この操作をさらに２回繰り返した。濃塩酸（０．０３７ｍｌ，０．４４４ｍｍｏｌ）を１分間かけて加えた後９分間攪拌し、この操作をさらに２回繰り返した後、３０分攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。１時間かけて１０℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０５０ｇ，４．２５０ｍｍｏｌ）を得た。収率９５％。

（実施例２０）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（４１ｍｌ）を加え２３℃にて攪拌し、１．８Ｍ塩酸（０．７４８ｍｌ，１．３４６ｍｍｏｌ）を加え２７分攪拌した。１．８Ｍ塩酸（０．４９８ｍｌ，０．８９６ｍｍｏｌ）を５分間かけて加えた後５分間攪拌し、この操作をさらに３回繰り返した。１．８Ｍ塩酸（０．２４９ｍｌ，０．４４８ｍｍｏｌ）を加え、３０分攪拌した。濃塩酸（０．２９９ｍｌ，３．５８８ｍｍｏｌ）を加え１時間攪拌した。５０分かけて３℃まで冷却し、２時間２０分後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０７０ｇ，４．２９１ｍｍｏｌ）を得た。収率９６％。

（実施例２１）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（５１ｍｌ）を加え２３℃にて攪拌し、１．４Ｍ塩酸（０．９６１ｍｌ，１．３４５ｍｍｏｌ）を加え２６分攪拌した。１．４Ｍ塩酸（０．６４１ｍｌ，０．８９７ｍｍｏｌ）を４分間かけて加えた後６分間攪拌し、この操作をさらに３回繰り返した。１．４Ｍ塩酸（０．３２０ｍｌ，０．４４８ｍｍｏｌ）を加え、３０分攪拌した。濃塩酸（０．２９９ｍｌ，３．５８８ｍｍｏｌ）を加え１時間攪拌した。５０分かけて２℃まで冷却し、２時間３０分後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０４８ｇ，４．２４６ｍｍｏｌ）を得た。収率９５％。

（実施例２２）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２５℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（４．０３７ｍｌ，４．０３７ｍｍｏｌ）を１時間かけて加えた。さらに濃塩酸（０．１１１ｍｌ，１．３３２ｍｍｏｌ）を３０分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を６分間かけて加え、１時間攪拌した。１時間かけて５℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０３７ｇ，４．２２３ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例２３）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２６℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（４．０３７ｍｌ，４．０３７ｍｍｏｌ）を１５分かけて加えた。さらに濃塩酸（０．１１１ｍｌ，１．３３２ｍｍｏｌ）を３０分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を７分間かけて加え、１時間攪拌した。１時間かけて５℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０３７ｇ，４．２２３ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例２４）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２６℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（４．０３７ｍｌ，４．０３７ｍｍｏｌ）を１時間かけて加えた。さらに濃塩酸（０．１１１ｍｌ，１．３３２ｍｍｏｌ）を５分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を６分間かけて加え、１時間攪拌した。１時間かけて５℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０４２ｇ，４．２３３ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例２５）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２６℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（４．０３７ｍｌ，４．０３７ｍｍｏｌ）を１時間かけて加えた。さらに濃塩酸（０．１１１ｍｌ，１．３３２ｍｍｏｌ）を３０分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を６分間かけて加え、３０分攪拌した。３０分かけて６℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０４０ｇ，４．２２９ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例２６）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド 塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２６℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（４．０３７ｍｌ，４．０３７ｍｍｏｌ）を１時間かけて加えた。さらに濃塩酸（０．１１１ｍｌ，１．３３２ｍｍｏｌ）を３０分間かけて加えた後、濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を６分間かけて加え、１時間攪拌した。１時間かけて５℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０３９ｇ，４．２２７ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例２７）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（５．２５２ｇ，１１．２１ｍｍｏｌ）にエタノール（１８０ｍｌ）を加え２６℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（１０．０９ｍｌ，１０．０９ｍｍｏｌ）を１時間かけて加えた。さらに濃塩酸（０．２８０ｍｌ，３．３６０ｍｍｏｌ）を３０分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（０．９３４ｍｌ，１１．２１ｍｍｏｌ）を７分間かけて加え、１時間攪拌した。１時間かけて５℃まで冷却し、２０時間後析出結晶を濾過し、エタノール（２５ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１時間乾燥して表題化合物（５．１４５ｇ，１０．６７ｍｍｏｌ）を得た。収率９５％。

（実施例２８）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（１．０７ｋｇ，２．２８ｍｏｌ）にエタノール（３６．７Ｌ）を加え２５℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（２．０６Ｌ，２．０６ｍｏｌ）を５５分かけて加えた。さらに濃塩酸（５７ｍｌ，０．６８ｍｏｌ）を３３分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（１９１ｍｌ，２．２９ｍｏｌ）を１１分間かけて加え、１時間攪拌した。７６分かけて５℃まで冷却し、２２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（５Ｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１８時間乾燥して表題化合物（１．０５ｋｇ，２．１８ｍｏｌ）を得た。収率９５％。

（実施例２９）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（１．０７ｋｇ，２．２８ｍｏｌ）にエタノール（３６．７Ｌ）を加え２４℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（２．０６Ｌ，２．０６ｍｏｌ）を６８分かけて加えた。さらに濃塩酸（５７ｍｌ，０．６８ｍｏｌ）を３４分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（１９１ｍｌ，２．２９ｍｏｌ）を９分間かけて加え、１時間攪拌した。７６分かけて５℃まで冷却し、２２時間３０分後析出結晶を濾過し、エタノール（５Ｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１８時間乾燥して表題化合物（１．０５ｋｇ，２．１８ｍｏｌ）を得た。収率９５％。

（実施例３０）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え３０℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（４．０３７ｍｌ，４．０３７ｍｍｏｌ）を１時間かけて加えた。さらに濃塩酸（０．１１１ｍｌ，１．３３２ｍｍｏｌ）を３０分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を６分間かけて加え、１時間攪拌した。７４分かけて５℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０３１ｇ，４．２１０ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例３１）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（２．０６８ｇ，４．４８５ｍｍｏｌ）にエタノール（７２ｍｌ）を加え２０℃にて攪拌し、１Ｍ塩酸（４．０３７ｍｌ，４．０３７ｍｍｏｌ）を１時間かけて加えた。さらに濃塩酸（０．１１１ｍｌ，１．３３２ｍｍｏｌ）を３０分間かけて加えた後３０分間攪拌した。濃塩酸（０．３７４ｍｌ，４．４８８ｍｍｏｌ）を５分間かけて加え、１時間攪拌した。４６分かけて４℃まで冷却し、２時間後析出結晶を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分乾燥して表題化合物（２．０４３ｇ，４．２３５ｍｍｏｌ）を得た。収率９４％。

（実施例３２）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（３．００ｇ，６．４０ｍｍｏｌ）にエタノール（１００．５ｍｌ）および水（３．９７５ｍｌ）を加え２５℃にて攪拌し、濃塩酸（１．０ｍｌ）をエタノール（１９．０ｍｌ）に希釈して調製した０．５８５Ｍ塩化水素の水‐エタノール溶液（３．２８ｍｌ，１．９２ｍｍｏｌ）を加えた。同温にて種晶（０．３ｍｇ）を加えた後、０．５８５Ｍ塩化水素の水‐エタノール溶液（６．５６ｍｌ，３．８４ｍｍｏｌ）を２時間かけて滴下し、３０分間攪拌した。さらに、濃塩酸（０．６９５ｍｌ，８．３４ｍｍｏｌ）を１時間かけて滴下し、１時間攪拌した。析出した結晶を濾過し、エタノール（１５ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１４時間乾燥して表題化合物（２．８９ｇ，５．９６ｍｍｏｌ）を得た。収率９３％。

（実施例３３）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド（３．００ｇ，６．４０ｍｍｏｌ）にエタノール（１００．５ｍｌ）および水（３．９７５ｍｌ）を加え３０℃にて攪拌し、濃塩酸（１．０ｍｌ）をエタノール（１９．０ｍｌ）に希釈して調製した０．５８５Ｍ塩化水素の水‐エタノール溶液（３．２８ｍｌ，１．９２ｍｍｏｌ）を加えた。同温にて種晶（０．３ｍｇ）を加えた後、０．５８５Ｍ塩化水素の水‐エタノール溶液（６．５６ｍｌ，３．８４ｍｍｏｌ）を２時間かけて滴下し、３０分間攪拌した。さらに、濃塩酸（０．６９５ｍｌ，８．３４ｍｍｏｌ）を１時間かけて滴下し、１時間攪拌した。析出した結晶を濾過し、エタノール（１５ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて１４時間乾燥して表題化合物（２．８６ｇ，５．９３ｍｍｏｌ）を得た。収率９３％。

（実施例３４）
粉末Ｘ線回折の測定１
ＢｒｕｋｅｒＡＸＳ社製 Ｄ８ ＤＩＳＣＯＶＥＲ ｗｉｔｈ ＧＡＤＤＳ ＣＳ型 Ｘ線回折装置を用い、試料をガラス製サンプルホルダーに充填し、下記条件にて測定した。
＜分析条件＞
Ｘ線：Ｃｕ Ｋα１／４０ｋＶ／４０ｍＡ
ゴニオメータ：縦型２軸（θ，θ）
２θ測定範囲：３〜４０°

実施例２で得た２塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図４に示す。図４において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度１５以上のピークを表１に示す。

実施例３で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図５に示す。図５において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度３０以上のピークを表２に示す。

実施例６で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図６に示す。図６において最大ピーク強度を１００とした場合の相対強度１２以上のピークを表３に示す。

（実施例３５）
粉末Ｘ線回折の測定２
リガク社製 ＲＩＮＴ２２００Ｖ型 Ｘ線回折装置を用い、試料をガラス製サンプルホルダに充填し、下記条件にて測定した。
＜分析条件＞
Ｘ線：Ｃｕ Ｋα１／４０ｋＶ／４０ｍＡ
ゴニオメータ：Ｕｌｔｉｍａ＋水平ゴニオメータＩ型
２θ走査範囲：５〜４０°

＜測定結果＞
実施例１で得た２塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図７に示す。

実施例４で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図８に示す。

実施例５で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図９に示す。

実施例７で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１０に示す。

実施例８で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１１に示す。

実施例９で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１２に示す。

実施例１０で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１３に示す。

実施例１１で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１４に示す。

実施例１２で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１５に示す。

実施例１３で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１６に示す。

実施例１４で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１７に示す。

実施例１５で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１８に示す。

実施例１６で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図１９に示す。

実施例１７で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２０に示す。

実施例１８で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２１に示す。

実施例１９で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２２に示す。

実施例２０で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２３に示す。

実施例２１で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２４に示す。

実施例２２で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２５に示す。

実施例２３で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２６に示す。

実施例２４で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２７に示す。

実施例２５で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２８に示す。

実施例２６で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図２９に示す。

実施例２７で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図３０に示す。

実施例２８で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図３１に示す。

実施例２９で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図３２に示す。

実施例３０で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図３３に示す。

実施例３１で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図３４に示す。

実施例３２で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図３５に示す。

実施例３３で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した粉末Ｘ線回折図を図３６に示す。

（実施例３６）
示差走査熱量測定
＜測定方法＞
マック・サイエンス社製 ＤＳＣ３１００型 示差走査熱量測定装置を用い、２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミドの塩酸塩５ｍｇを、測定用アルミ製パンに量り取り、パンをオープンの状態で、室温から２５０℃まで、毎分１０℃の昇温速度で昇温して測定した。
＜測定結果＞
実施例１で得た２塩酸塩の結晶を上記方法で測定した示差走査熱量測定図を図３７に示す。

実施例４で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した示差走査熱量測定図を図３８に示す。

実施例１１で得た１塩酸塩の結晶を上記方法で測定した示差走査熱量測定図を図３９に示す。

（実施例３７）
残留エタノールの分析
以下に示すガスクロマトグラフ法にて分析した。
＜標準溶液の調製＞
１）エタノール５００ｍｇ（＝Ｗ_ＥｔＯＨ［ｍｇ］）を精密に量り、ジメチルスルホキシドで正確に２０ｍｌとし、これを［１］液とした。
２）［１］液４ｍＬを正確に量り、ジメチルスルホキシドで正確に２０ｍｌとし、これを［２］液とした。

３）［２］液４ｍＬを正確に量り、ジメチルスルホキシドで正確に２０ｍｌとし、これを［３］液とした（エタノール濃度＝Ｗ_ＥｔＯＨ／５００［ｍｇ／ｍｌ］）。

４）［２］液２ｍＬを正確に量り、ジメチルスルホキシドで正確に２０ｍｌとし、これを［４］液とした（エタノール濃度＝Ｗ_ＥｔＯＨ／１０００［ｍｇ／ｍｌ］）。

５）［４］液２ｍＬを正確に量り、ジメチルスルホキシドで正確に２０ｍｌとし、これを［５］液とした（エタノール濃度＝Ｗ_ＥｔＯＨ／１００００［ｍｇ／ｍｌ］）。
＜試料溶液の調製＞
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド１塩酸塩 あるいは２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド２塩酸塩 ５０ｍｇ（＝Ｗ_{ｓａｍｐｌｅ}［ｍｇ］）を精密に量り、ジメチルスルホキシド１ｍｌに溶解し、これを試料溶液とした。
＜分析条件＞
検出器：水素炎イオン化検出器
カラム：ＤＢ−６２４（０．３２ｍｍＩＤ×３０ｍ，膜厚１．８μｍ，Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム温度：４０℃を５分間保持し、その後毎分１５℃の割合で２２０℃まで昇温し、３分間保持した。
注入口温度：２００℃
検出器温度：２４０℃
キャリヤーガス：ヘリウム
カラム流量：７０ｋｐａ
スプリット比：１：２０
注入量：１μＬ
＜測定および計算＞
１）［３］液を１μＬ注入し、エタノールのピーク面積（＝Ａ_{ＥｔＯＨ［３］}）を得た。
２）［４］液を１μＬ注入し、エタノールのピーク面積（＝Ａ_{ＥｔＯＨ［４］}）を得た。
３）［５］液を１μＬ注入し、エタノールのピーク面積（＝Ａ_{ＥｔＯＨ［５］}）を得た。

４）エタノール濃度をｙ、エタノールピーク面積をｘとして、［３］液（ｘ＝Ａ_{ＥｔＯＨ［３］}，ｙ＝Ｗ_ＥｔＯＨ／５００）、［４］液（ｘ＝Ａ_{ＥｔＯＨ［４］}，ｙ＝Ｗ_ＥｔＯＨ／１０００）、［５］液（ｘ＝Ａ_{ＥｔＯＨ［５］}，ｙ＝Ｗ_ＥｔＯＨ／１００００）の各数値から一次関数の回帰式を作成した。

５）試料溶液を１μＬ注入し、エタノールのピーク面積（＝Ａ_{ｓａｍｐｌｅ}）を得た。これを上記回帰式のｘに代入し、ｙとして試料溶液のエタノール濃度（＝Ｃ_{ｓａｍｐｌｅ}［ｍｇ／ｍｌ］）を得た。
６）残留エタノール量［ｐｐｍ］＝１００００００×Ｃ_{ｓａｍｐｌｅ}［ｍｇ／ｍｌ］×１［ｍｌ］÷Ｗ_{ｓａｍｐｌｅ}［ｍｇ］として計算した。
＜測定結果＞
実施例１、４、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２および３３で得られた各結晶中の残留エタノール量を上記方法で測定した結果を表４に示す。

（実施例３８）
純度試験および安定性試験
＜虐待試験条件＞
条件１：４０℃、湿度７５％
条件２：６０℃（湿度管理なし）
上記虐待試験条件の試料を以下に示す高速液体クロマトグラフ法にて測定した。
＜２０ｍＭ リン酸２水素カリウム水溶液の調製＞
リン酸２水素カリウム、２．７２ｇを水、１０００ｍｌに溶かし、２０ｍＭ リン酸２水素カリウム水溶液とした。
＜２０ｍＭ リン酸水素２カリウム水溶液の調製＞
リン酸水素２カリウム、３．４８ｇを水、１０００ｍｌに溶かし、２０ｍＭ リン酸水素２カリウム水溶液とした。
＜２０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝６．５）の調製＞
２０ｍＭ リン酸２水素カリウム水溶液に２０ｍＭ リン酸水素２カリウム水溶液を加えていき、ｐＨ＝６．５に調整し、２０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝６．５）とした。
＜２０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）の調製＞
２０ｍＭ リン酸２水素カリウム水溶液に２０ｍＭ リン酸水素２カリウム水溶液を加えていき、ｐＨ＝７．０に調整し、２０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）とした。
＜移動層＞
移動層Ａ：２０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝６．５）／アセトニトリル＝９／１（Ｖ／Ｖ）
移動層Ｂ：２０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝６．５）／アセトニトリル＝３／７（Ｖ／Ｖ）
＜試料溶解液＞
２０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）／アセトニトリル＝３／７を試料溶解液とした。
＜試料溶液の調整＞
虐待試験検体を試料溶解液に溶かし、約０．５ｇ／Ｌの溶液とした。
＜分析条件＞
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８ＲＳ、３．０ｍｍ ＩＤ ｘ １５０ｍｍ、粒子径 ３μｍ
カラム温度：約４０℃
グラディエント条件： ０〜５分、移動層Ａ：１００→７５／移動層Ｂ：０→２５
５〜１５分、移動層Ａ：７５／移動層Ｂ：２５
１５〜４５分、移動層Ａ：７５→０／移動層Ｂ：２５→１００
４５〜５５分、移動層Ａ：０／移動層Ｂ：１００
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
測定範囲：０〜５５分
検出波長：２４０ｎｍ
試料溶液注入量：５μｌ
＜計算＞
１）試料溶液を注入し、個々の類縁物質のピーク面積（Ａ）と化合物（１）のピーク面積（Ｔ）を得た。
２）試料溶解液注入し、個々のブランクのピーク面積（Ｂ）を得た
３）個々の類縁物質の量［％］＝１００×（Ａ−Ｂ）÷Ｔ
として算出した。
＜測定結果＞
実施例４で得た１塩酸塩の結晶、実施例１２で得た１塩酸塩の結晶、および実施例２８で得た１塩酸塩の結晶の虐待試験結果を表５に示す。

^＊ｒｒｔは化合物（１）の保持時間を１とした時の当該不純物の相対保持時間を示す。

（試験例１ 抗細胞試験）
２種類の細胞（ヒト乳癌由来細胞株ＳＫ−ＢＲ−３、ヒト肺癌由来細胞株ＮＣＩ−Ｈ４６０）を用いて抗細胞試験を実施した。

各細胞を、それぞれ培地に懸濁し、９６ウェルのマルチウェルプレートにＳＫ−ＢＲ−３は２０００細胞／１５０μＬ／ウェル、ＮＣＩ−Ｈ４６０は５００細胞／１５０μＬ／ウェルで播種した。化合物（１）をＤＭＳＯに溶解後、培地で希釈して検体溶液とした（ＤＭＳＯ濃度 ０．５％以下）。播種の翌日、試験化合物を添加していないＤＭＳＯ入り培地（以下、ＤＭＳＯ希釈液と称する。ＤＭＳＯ濃度 ０．５％以下）または検体溶液を、５０μＬずつさらに添加した。検体溶液またはＤＭＳＯ希釈液を細胞に添加した直後と７２時間後に、ＭＴＴアッセイを実施した。ＭＴＴアッセイは以下のように実施した。

５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）溶液を各ウェルに２０μＬずつ添加した。その後、プレートを３７℃、５％ ＣＯ_２下で４時間培養した。プレートを１２００ｒｐｍで５分間遠心した後、培養上清をディスペンサーにて吸引除去した。ＤＭＳＯを各ウェルに１５０μＬずつ添加し、生成されたフォルマザンを溶解した。プレートミキサーを用いてプレートを攪拌することにより、各ウェルの発色を均一にした。各ウェルの吸光度をＯＤ ５４０ｎｍ、ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ６６０ｎｍの条件下、プレートリーダーを用いて測定した。

検体溶液添加の直後に測定したＯＤ値をＳとし、検体溶液添加の７２時間後に測定したＯＤ値をＴとし、ＤＭＳＯ希釈液添加の７２時間後に測定したＯＤ値をＣとし、下記の計算式より各濃度におけるＴ／Ｃ（％）を求めて用量反応曲線を描き、５０％増殖抑制濃度（ＧＩ_５０値）を算出した。
Ｔ／Ｃ（％）＝（Ｔ−Ｓ）／（Ｃ−Ｓ）×１００
化合物（１）は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞に対して１３（ｎＭ）、ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞に対して２６（ｎＭ）のＧＩ_５０値を示した。

（製剤例１）＜カプセル剤＞
実施例２、３または６で得られた結晶５ｇ、乳糖１１５ｇ、トウモロコシデンプン５８ｇおよびステアリン酸マグネシウム２ｇをＶ型混合機を用いて混合した後、３号カプセルに１８０ｍｇずつ充填するとカプセル剤が得られる。
（製剤例２）＜錠剤＞
実施例２、３または６で得られた結晶５ｇ、乳糖９０ｇ、トウモロコシデンプン３４ｇ、結晶セルロース２０ｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｇをＶ型混合機を用いて混合した後、１錠当り１５０ｍｇの質量で錠剤機で打錠すると錠剤が得られる。
（製剤例３）＜懸濁剤＞
メチルセルロースを精製水に分散、溶解させた分散媒を調製し、実施例２、３または６で得られた結晶を乳鉢に量りとり、前述した分散媒を少量ずつ加えながらよく練り合わせ、精製水を加えて懸濁液１００ｇを調製する。

Claims (6)

1. 銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝７．７３、９．７８、１２．５８、１４．３６、１５．８４、１６．７１、１７．１７、１８．４０、１９．５８、２１．３１、２２．８５、２３．６２、２４．１３、２４．７０、２６．０１、２７．２９、２８．５８、２９．３７、３０．６５、３１．３８、３３．５２、３５．２５、および３６．８７に主要ピークを示す下記式（１）
   
   で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド２塩酸塩の結晶。
2. 銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝９．４３、１２．７０、１３．０３、１５．３３、１６．１０、１６．８４、１８．５５、２０．２１、２０．８９、２１．３２、２２．９３、２４．７３、２５．１０、２５．４０、２６．１０、２６．５３、２６．９５、２７．６０、２７．８８、２８．５２、２９．６３、２９．９５、３１．５５、３２．１３、３３．４０、３４．９５、および３８．７０に主要ピークを示す
   下記式（１）
   
   で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド１塩酸塩の結晶。
3. 銅のＫα線（波長λ＝１．５４オングストローム）の照射で得られる粉末Ｘ線回折図において、回折角度２θ＝８．０７、９．４５、１３．０７、１５．３９、１６．１６、１６．９０、２０．８３、２４．２９、２４．８０、２８．５６、２８．８５、３１．２６、３２．１７、３２．８７、および３４．１１に主要ピークを示す
   下記式（１）
   
   で表される２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド１塩酸塩の結晶。
4. 請求項１から３のいずれか１項に記載の結晶を有効成分として含有する医薬。
5. 請求項１から３のいずれか１項に記載の結晶を含有する抗腫瘍剤。
6. 請求項１から３のいずれか１項に記載の結晶を含有する医薬組成物。