TW201201820A - Use of lactic acid bacteria to treat or prevent rhinitis - Google Patents

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201201820 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於益生菌且具體而言乳酸菌菌株治療或預防 鼻炎之用途。本發明亦提供使用該等細菌之方法及包含該 等細菌之組合物。 【先前技術】 在 1989年，Strachan(Strachan D. Family size, infection and atopy: the first decade of the "hygiene hypothesis". Thorax 2000 ; 55(增刊1):S2-10)提出，在傳染原中暴露之 減少可闡釋西方國家過敏性疾病之流行性增強。業内將此 稱作衛生假說。 此後，人們嘗試了多種研究來瞭解諸如乳酸桿菌等生物 體在免疫成熟_之作用（〇1丨11£乂卩八1^吕丫 2003;33:1634-40 ; Blumer N、Sel S、Virna S、Patrascan C、Zimmermann S、Herz U 等人，Perinatal maternal application of Lactobacillus rhamnosus GG suppresses allergic airway inflammation in mouse offspring. Clin Exp Allergy 2007 ； 37·.348-57)及益生菌對發生過敏性疾病之效應。 出生前或新生兒投與鼠李糖乳桿菌GG rAa/wwosw·? GG)、嗜酸乳桿菌 LAVRI-A1 acidophilus LAVRI-A1)或洛德乳桿菌 ATCC 55730 (1(2<^〇6<2(^7/1^?^«^?^人1'(1^ 55730)對發生過敏性疾病之效 能與報導不同發現之各種研究衝突。一個研究報導，在 2、4及7歲投與鼠李糖乳桿菌GG可使濕疹頻率減半，但對 154226.doc 201201820 特應性致敏作用無影響（參見Kalliomaki M、Salminen S、 Poussa T、Isolauri E. Probiotics during the first 7 years of life: a cumulative risk reduction of eczema in a randomized, placebo-controlled trial. J Allergy Clin Immunol 2007 ； 1 19:1019-21)。其他研究已發現，嗜酸乳桿菌或鼠李糖乳 桿菌GG對特應性皮炎無影響，且該等研究中之一者發 現，嗜酸乳桿菌補充實際上提高特應性致敏作用之風險 (Taylor A、Dunstan J、Prescott S. Probiotic supplementation for the first 6 months of life fails to reduce the risk of atopic dermatitis and increases the risk of allergen sensitization in high-risk children: a randomized controlled trial. J Allergy Clin Immunol 2007 ; 119:184-91)。已有人 k出，所使用不同生物體及是否進行過出生前干預可影響 不同發現。 此外，儘管當前有多種療法可用於一些過敏性疾病，但 彼等適用於治療或預防鼻炎（包括妊娠期間或幼兒之鼻炎） 者有限且經常效能有限。 業内仍需要可用於治療或預防鼻炎之方法及組合物，且 具體而言該等方法及組合物利用或包含其他乳酸桿菌。 本發明之目的係或多或少有助於達成該等不足中之一或 多者，或至少為公眾提供可用選擇。 【發明内容】 在第‘L樣中’本發明提供治療或預防個體之鼻炎之方 法’該方法包含向有需要之個體投與鼠李糖乳桿菌麵〇1 154226.doc 201201820 (AGAL保存號NM97/09514，保存日期為1997年8月18曰）。 在一實施例中，鼠李糖乳桿iHN〇〇1係以與生理上可接 受之稀釋劑、佐劑、載劑或卿劑之組合物形式來投與。 在-實施例中’該生理上可接受之稀釋劑、佐劑、載劑 或賦形劑係食物。在-實施例中，食物係酸乳、酸乳赂、 乾酪、乳飲料或奶粉。 或者，組合物係醫藥組合物且該賦形劑或稀_係胃藥 上可接受之稀釋劑、佐劑、载劑或賦形劑。 在個體係胎兒個體之實施例中，該方法包含向胎兒個體 之母親投與鼠李糖乳桿@ HNGG1或包含鼠李糖乳㈣麵〇ι 之組合物。在該等實施例中應理解，該對個體之投與可視 為間接投與H施例中，組合物❹婦配方或孕婦補 充劑。在該等實施例中，該方法較佳係關於預防鼻炎。 在個體係新生兒、嬰兒或兒童個體之某些實施例中，該 方法包含向個體投與包含鼠李糖乳㈣麵G1之組合物。 同樣’在該等實施财應理解，該對個體之投與可視為直 接投與。 在其他實施例中，例如倘若個體係母乳餵養之新生兒、 嬰兒或兒童個體，該方法包含向個體之母親投與鼠李糖乳 桿菌腦(H或包含鼠李糖乳桿組合物。在咳等 實施例中應理解，該對個體之投與可視為間接投斑。 組合物可為嬰兒配方、較大嬰兒配方、成長幼兒配方或 膳食產品’包括該等組合物之低過敏原性實施例。 在個體係青少年或成年個體之較佳實施例中，該方法包 154226.doc 201201820 含向個體投與包含鼠李糖乳桿菌HN001之組合物。較佳 地’組合物係補充劑、配方、膳食產品或食物。 在某些實施例中，鼠李糖乳桿菌ΗΝ001呈繁殖活力形 式，較佳具有繁殖活力形式及數量。在其他實施例中，鼠 李糖乳桿菌ΗΝ001已被殺死、裂解、分級分離或減弱。 本文所用鼻炎包括鼻炎結膜炎及花粉熱。 本發明另外提供用於治療或預防鼻炎之鼠李糖乳桿菌 ΗΝ001及用於製造治療或預防鼻炎之組合物之鼠李糖乳桿 菌ΗΝ00卜組合物可為諸如彼等下文所述者等組合物，包 括（例如）食物或藥物。 應理解’本發明亦涵蓋鼠李糖乳桿菌刪Qi在製造本發 明組合物(例如治療或預防個體之鼻炎之組合物)中之用 …施例中’組合物適合經口投與。在其他實施例 。物適。非絰腸投與。在涉及預防胎兒個體之鼻炎 之實施例中’組合物適合在紅娘期間經口投與孕婦。 提：’本發明亦可以本申請案說明書中個別或共同 徵中任…：件及特徵以及該等部分、元件或特 ::任何二者或更多者之任一或所有組合為主，且本文中 兮等Ρ4㉔ 所屬領域中具有已知等效物， '太 物可視為如同個別闡述-般併入本文中。 如本說明書中所用術語「 又甲 組成」》在閣釋本說明書中二:：:〜部分由…… 表述時，亦可存在除該表述;二在内之每個 疋特徵或彼等以該術語開 154226.doc 201201820 始之特徵。欲以相同方式來闡釋諸如「包含（__6及 comprises)」等相關術語。 在本說月書中’在提及專利說明書、其他外部文獻或其 他資訊來源時’此通常係出於為本發明特徵之論述提供背 景之目的。除非另外明確說明，否則在提及該等外部文獻 時:應理解為以任-權限承認該等文獻或該等資訊來源係 先前技術或形成業内常用一般知識之一部分。 【實施方式】 本發明首:欠承認投與乳鼠李糖乳桿g H_i對鼻炎 發病率及嚴重性之有益效應。 ，因此’在第-態樣令’本發明提供治療或預防個體之鼻 炎之方法’該方法包含向有需要之個體投與鼠李糖乳桿菌 職H(AGAL保存號NM9勘14，保存日期為㈣年8月 18曰）或其衍生物。 儘管涵蓋多種投與途徑及方法，但當前經口投與鼠李糖 ，菌—呈適合經口投與之組合物形式)= =，應瞭解，在某些情形下可採用其他投與途徑及方法 =㈣繼响W言，爛非經腸途 f與包含經殺死或減弱之鼠⑽乳㈣麵_ 物之組合物。 τ王 術#「經口投與」包括經口 頌，视腸及胃内投與。 =:經腸投與」包括(但不限於)局部(包括投與至任 肌内投與。 ^4脈内、腹膜腔内及 154226.doc 201201820 個體」係動物、較佳哺乳動物、更佳哺乳動物伴侣動 物或人類。較佳伴侶動物包括貓、狗及馬。在一實施例 中，人類係成人、兒童、嬰兒、新生兒或胎兒。在各實施 例中’人類兒童、嬰兒或新生兒係母乳飯養之兒童、嬰兒 或新生兒。 術語「治療」及其變化形式應闡釋為具有其最廣泛含 義。該術浯不應理解為表示治療個體直至完全康復。因 ^療」在廣義上包括改善及/或預防症狀之發作或 特定病況之嚴重性。 應理解，治療包括預防性治療’例如藉由間接投與本發 明組合物（將組合物投與胎兒個體之母親）來預防性治療胎 兒個體，或在花粉熱增強之流行開始時或流行期間（所謂 「花粉熱季節」）預防性治療個體。 在另一實例中，預防性治療係藉由間接投與本發明組合 物（將組合物投與新生兒、嬰兒或兒童個體之母親）來治療 母乳餵養之新生兒、嬰兒或兒童個體。 另外應瞭解’治療包括治療性治療，例如治療鼻炎或鼻 炎之一或多種症狀，包括（例如）藉由間接投與本發明組合 物（將組合物投與個體之母親）來治療新生兒、嬰兒或兒童 個體。 因此’本發明提供預防胎兒個體之鼻炎之方法，該方法 包含向個體之母親投與鼠李糖乳桿菌ΗΝ001或包含鼠李糖 乳桿菌ΗΝ001之組合物。本發明尤其涵蓋預防胎兒個體之 鼻炎之方法。 154226.doc 201201820 本發明另外提供治療或預防母乳餵養之新生兒、嬰兒或 兒里個體之鼻炎之方法，該方法包含向個體之母親投與鼠 李糖乳桿菌HN001或包含鼠李糖乳桿菌hnOO 1之組合物。 本發明尤其涵蓋預防新生兒、嬰兒或兒童個體之鼻炎之方 法。 本發明亦提供治療或預防新生兒、嬰兒或兒童個體之鼻 炎之方法’該方法包含向個體投與鼠李糖乳桿菌ΗΝ〇01或 包含鼠李糖乳桿菌ΗΝ001之組合物。本發明尤其涵蓋預防 新生兒、嬰兒或兒童個體之鼻炎之方法。 本發明亦涵蓋治療嬰兒或兒童個體之鼻炎之方法，其包 含投與由鼠李糖乳桿菌ΗΝ001組成或基本上由其組成之組 合物。 在某些實施例中’嬰兒或兒童係一歲或更大年齡。 在某些實施例中，嬰兒或兒童係食物致敏之嬰兒或兒 〇 在某些實施例中，嬰兒或兒童因其親生父母中一者或兩 者患有過敏症而視為具有發生鼻炎之風險。 1處奏潜舁斧磨ΗΝ001 如申請者之PCT國際專利申請案PCT/NZ98/00122(以WO 99/10476公開且全文併入本文中）所述，鼠李糖乳桿菌 HN001之冷凍乾燥培養物在1997年8月18日保存在澳大利 亞政府分析實驗室（AGAL)(新南威爾士地方實驗室，i Suakin Street，Pymble，NSW 2073，澳大利亞）且給予保存 號NM97/09514。此布達佩斯條約（Budapest Treaty)承認之 154226.doc 201201820 儲藏所現在不再稱作agal，而係稱作澳大利亞國家量測 研究院（NMIA)。鼠李糖乳桿菌HN001之基因組序列可在基 因庫（Genebank)以登錄號NZ_ABWJO〇〇〇〇〇〇〇獲得 0 1·1形態學特性 鼠李糖乳桿菌ΗΝ001之形態學特性闡述於下文中。 在MRS肉湯中生長時為短至中等長度之杆，鏈中具有方 頭末端’一般為OjxLblOyOpm。 革蘭氏（Gram)陽性、非活動性、不產生孢子、過氧化氫 酶陰性兼性厭氧桿菌，最適生長溫度為37±1〇c且最適{)11為 6.0-6.5。該等細菌係兼性異型發酵細菌且自葡萄糖不產生 氣體。 1·2發酵特性 使用API 50 CH糖發酵套組來測定鼠李糖乳桿菌ΗΝ〇〇1 之碳水化合物發酵模式，得分為5757177(基於22種主要糖 類之分數-參見PCT/NZ98/00122)。 13其他表徵 可藉由PCT/NZ98/00122中所揭示之功能性屬性（包括其 黏附至人類腸上皮細胞之能力）及藉由因膳食攝入引發或 體外模型系統中之吞噬細胞功能、抗體反應、天然殺傷細 胞活性及淋巴細胞增殖之改良來進一步表徵鼠李糖乳桿菌 菌株ΗΝΟΟ1。應理解，熟習此項技術者已知且可使用眾多 種方法來確認鼠李糖乳桿菌ΗΝ001之身份，其中實例性方 法包括DNA指紋法、基因組分析、測序及相關基因組及蛋 白質組技術。 154226.doc •10· 201201820 本文所述’本發明某些實施例採用活鼠李糖乳桿菌 HN001。在其他實施例中，採用鼠李糖乳桿菌麵〇1衍生 物。 本文所用術語「财物」及其語法等效術語在用於細菌 時\包括用於細菌之特定菌株，例如鼠李糖乳桿菌hn〇〇i) 涵蓋、田菌之大變體及同系物或源自細菌之突變體及同系 物，厶殺死或減弱之細菌’例如(但不限於)經加熱殺死、 裂解“及分離 '加壓殺死、輻照及uv_或光處理之細 菌；及源自細菌之材料，包括（但不限於）細菌細胞壁組合 物：細菌細胞裂解物、；東乾細菌、來自細菌之益生菌因子 及諸如此類，其中衍生物保留益生菌活性。產生該等衍生 物（例如（但不限於）鼠李糖乳桿菌HN〇〇1之一或多種突變體 或-或多種益生菌因子）且具體而言適合投與個體之衍生 物（例如呈組合物形式）之方法為業内所熟知。 應理解，適合鑒定鼠李糖乳桿菌ΗΝ〇〇ι之方法（例如上 述之彼等）同樣適合於鼠李糖乳桿gHN謝之衍生物， 包括（例如）鼠李糖乳桿菌HN001之突變體或同系物，或例 如來自鼠李糖乳桿菌HN001之益生菌因子。 術語「益生菌因子」係指負責介導益生菌活性之細菌分 子，包括(但不限於)細菌DNA基序、表面蛋白、小有機 酸、多醣或細胞壁組份（例如脂磷壁酸及肽多醣）或其任何 二者或更多者之混合物。儘管尚未明確鑒定上述該等分子 且不期望受限於任何理論’但若存在益生菌生物體則該等 分子亦將存在。 154226.doc 201201820 術語益生菌活性」係指某些微生物刺激免疫系統之能 力。對益生菌微生物之活性類型及程度之量測為熟習此項 技術者已知，例如，參見Mercenier等人（2〇〇4)、等 人（2004)或Cunmings等人（2004)。舉例而言，益生菌活性 可藉由PBMC細胞因子分泌分析法來評估。 在提及保留益生菌活性時，意欲指益生菌微生物之衍生 物（例如益生菌微生物之突變體或同系物或經減弱或殺死 之益生菌微生物）仍具有有用之益生菌活性，或包含益生 菌微生物或其衍生物之組合物能支持維持有用益生菌之活 性》儘管尚未明確鑒定負責介導益生菌活性之細菌分子， 但已建議作為可能之候選者之分子包括細菌DNA基序、表 面蛋白、小有機酸、多醣及細胞壁組份（例如脂碟壁酸及 肽多醣）。人們已假設’該等分子與宿主免疫系統中之各 組份相互作用而產生免疫調節性效應。較佳地，所保留活 性係未經處理（即活的或未減弱之）對照組活性之至少約 35% ' 40% ' 45% ' 50% ' 55% ' 60% ' 65% ' 70% > 75% ' 80°/〇、85%、90%、95°/〇、99。/〇或 1〇〇。/0，且可在該等數值中 任一者之間選擇可用範圍（例如約35至約100%、約50至約 100。/。、約60至約100%、約70至約1〇〇%、約80至約1〇〇。/0及 約90至約100%)。 可使用業内熟知之習用固體基質及液體發酵技術，使鼠 李糖乳桿菌ΗΝ001生長至足供本文所涵蓋用途之量。舉例 而言’可使用營養膜或深層培養生長技術大批生產鼠李糖 乳桿菌ΗΝ001以供調配，例如在w〇 99/10476中所述條件下 154226.doc 12 201201820 長簡。之，在適合生物體生長之任一溫度及好氧條件 下實現生長。舉例而言’對於鼠李糖乳桿菌HN001而言，

至40(：之'皿度範圍（較佳係抓）較佳。生長培養基之pH 呈微H較佳係約6·〇至6 5。培育時収以到達穩定生 長期以供分離。 可藉由業内熟知之方法收穫鼠李糖乳桿菌ην謝細胞， 、藉由^用過遽或沉降方法（例如離心）收穫或使用旋風 77離系統乾法收穫°鼠李糖乳桿® HNGG1細胞可根據需要 I7使用或使用標準技術來儲存，較佳在_2〇。〇至6。〇、較 佳-4°C下冷凍乾燥或冷凍。 2組合物 可將本文可用組合物調配為食物、飲料、食物添加劑、 飲料添加劑、膳食補充劑、營養產品、醫用食物、經腸或 非絰腸飼餵產品、代餐、藥用化妝品、營養製劑或醫藥 物。適宜調配物可由熟習此項技術之王作人員根據該技術 及本說明書之教示内容來製備。 ^在一實施例中，本文可用組合物包括能攜載細菌或細菌 〜物之任何可食用消費品。適宜可食用消費品之實例包 粉劑液體、糖果製品（包括巧克力）、朦凍、冰淇淋、 '、尺果‘ 00、零食棒、食物棒、什錦棒（muesli bar)、塗 味、調味料、蘸汁、乳製品（包括酸乳酪及乾酪）、飲料 (匕括乳製及非乳製飲料，例如乳飲料及酸乳飲料）、奶 私、運動補充劑（包括乳製及非乳製運動補充劑）、食物添 加』（例如’蛋白撒劑）、膳食補充劑產品（包括日用補充錠 154226.doc •13· 201201820 劑斷奶食物及酸乳路）、及呈粉劑或液體形式之配方（例 如兒配方、較大嬰兒配方或成長幼兒配方），包括該 等組合物之低過敏原性實施例。在此實施例中，本文可用 較佳組合物可為呈粉劑或液體形式之嬰兒配方、較大嬰兒 配方或成長幼兒配方。本文可用之適宜營養製劑組合物可 以類似形式提供。 呈粉劑或液體形式之諸如嬰兒配方、較大嬰兒配方或成 長幼兒配方等配方之實例包括以下各者。應理解，以下調 配物僅具有指示性’且可根據調配該等產物之已知原則作 出多種改變。舉例而言，可為所列示乳蛋白補充蛋白質之 非乳品來源。同樣’可提供該等產物之低過敏原性實施 例’其中蛋白質來源完全或部分水解。適宜水解產物為業 内已知。本文可用嬰兒配方、較大嬰兒配方或成長幼兒配 方之一實例包含（w/w) 3 0-60%之乳糖 15-35%之植物油 0-40%之脫脂奶粉 0-40%之乳清蛋白，例如WPC或WPI，較佳係80% WPC (WPC80) 0.001-50°/〇之鼠李糖乳桿菌}^001。 本文可用嬰兒配方、較大嬰兒配方或成長幼兒配方之另 一實例包含.(w/w) 40-60%之乳糖 20-30%之植物油 154226.doc -14- 201201820 10-15%之脫脂奶粉 0-8%之乳清蛋白’較佳為WPC80 0.001-10〇/〇之鼠李糖乳桿菌？1]^001。 本文可用嬰兒配方、較大嬰兒配方或成長幼兒配方之另 一實例包含（w/w) 40-60%之乳糖 20-30%之植物油 10-15%之脫脂奶粉 0-8。/。之乳清蛋白’較佳為WPC80 0·001-5%之鼠李糖乳桿菌HN00l。 本文可用嬰兒配方、較大嬰兒配方或成長幼兒配方之另 一實例包含（w/w) 40-60%之乳糖 20-30%之植物油 10-15%之脫脂奶粉 6-8¾之乳清蛋白，較佳為WPC80 0.001-2。/。之鼠李糖乳桿菌ηνοοι。 該等嬰兒配方中之任一者亦可包含〇1 w/w、較佳2-4。/〇 w/w之一或多種維生素預混合物、礦物預混合物、卵磷 月曰 或^種抗氧化劑、一或多種穩定劑或一或多種核苦 酸或其任何二者或更多者之組合。在一些實施例中，該等 嬰兒配方可經調配以提供介於27〇〇 kJ/L與3000 kJ/L之間之 熱量。 本發明可食用消費品諸如乳製飲料（例如乳飲料及酸乳 154226.doc •15- 201201820 飲料）等實例通常可包含蛋白質來源（例如乳蛋白來源）、脂 質來源、碳水化合物來源以及鼠李糖乳桿菌HN001或其衍 生物’或由其組成。亦可包括熟習此項技術者熟知之矯味 劑、著色劑及其他添加劑、载劑或賦形劑。 適用於本發明之可食用消費品之另一實例係PCT國際專 利申凊案 PCT/AU2007/000265(以 WO 2007/098564 公開）及 PCT國際專利申請案PCT/AU2007/001698(以 WO 2008/055296 公開）中所述之 Unistraw™遞送系統（Unistraw Internati〇nal

Limited’ Australia)，該等專利各自係全文併入本文中。熟 習此項技術者應瞭解，可將鼠李糖乳桿菌ΗΝ〇〇1&其衍生 物以及視需要一或多種額外益生菌因子或益生菌劑塗佈至 該等遞送系統中所用基質（例如水溶性珠粒）上。 在替代|·生實施例中，本文可用組合物可經調配以容許藉 由任-所選途徑投與個體’包括(但不限於)經口或非經腸 (包括局部、皮下、肌内及靜脈内）投與。 舉例而言’根據本發明使用之營養製劑組合物可係腾食 補充劑(例如膠囊、小包或錠劑)或食物製品(例如乳汁、汁 液、軟飲料、涼茶包或糖果）。組合物亦可包括其他營 ^例如蛋白質、碳水化合物、維生素、礦物f或胺基 西夂°組合物可呈適合經口使用之形式，例如鍵劑、硬膠囊 或軟膠囊、水性或油性懸浮液或糖毁；或呈適合非經腸使 用之形式，例如水性丙二醇溶液或緩衝水溶液。活性成份 在營養製劑組合物中之量很大程度上取決於個體之 要。如熟習此項技術者所瞭解，該量亦可㈣_ 154226.doc 201201820 能與其他益生菌因子或益生菌劑合用而變。 應理解，在某些實施例中，本發明组合物可經調配以具 有期望生熱内容物，例如遞送期望量之能量或期望百分比 之每日推薦能量攝入。舉例而言，可食用消費品可經調配 以提供約200至約2000 kJ/份、或約5〇〇 kJ至約2〇〇〇 份、或約1000至約2000 kJ/份。 因此，本發明可用醫藥組合物可與根據既定投與途徑及 標準醫藥實踐選擇之醫藥上可接受之適宜載劑（包括賦形 劑、稀釋劑、辅助劑及其組合）一起調配。舉例而古，本 發明可用組合物可以粉劑、液體、錠劑或膠囊形式經口投 ”或、軟膏Μ、乳膏或洗劑局部投與。適宜調配物可根 據需要含有額外試劑，包括乳化劑、抗氧化劑、續味劑或 著色劑且可適合於立即釋放、延遲釋放、改良釋放、持 續釋放、脈衝釋放或控制釋放。 ^藥上可接受之載劑」欲指包括(但不限於)賦形 二卜稀釋劑或辅助劑之載劑，該醫藥上可接受之載劑包括 冷劑π散介質、包衣劑、抗細菌劑及抗真菌劑、以及 吸收延遲劑或其組合’其可作為本文所述組合物之 、且”技與個體且該載劑不會降低組合物之活性，且在足 毒性。調化合物或組合物之劑量下投與時無 了經口、經鼻或非經腸（包括局部、肌内、 腹膜腔内、皮下及靜脈内)投與。 在某些實施你丨& 或醫藥組合物)了 合物(例如本發明營養製劑 物）可以膠囊形絲提供。冑囊可含有任何醫 154226.doc 17 201201820 藥上可接受之標準材料，例如明膠或纖維素。可根據習用 程序藉由壓製活性成份與固體載劑及潤滑劑之混合物來調 配錠劑。固體載劑之實例包括澱粉及糖膨潤土。活性成份 亦可以含有黏合劑（例如，乳糖或甘露醇）、習用填充劑及 壓錠劑之硬殼錠劑或膠囊形式投與。醫藥組合物亦可藉由 非經腸途徑投與。非經腸劑型之實例包括活性藥劑之水溶 液、等滲鹽水或5%葡萄糖溶液或其他醫藥上可接受之熟 知賦形劑。可利用彼等熟習此項技術者熟知之環糊精或^ 他增溶劑作為遞送治療藥劑之賦形劑。 、 在某些實施例中，本發明組合物包含活鼠李糖乳桿菌 HN001。產生該等組合物之方法為㈣所熟知，且一種該 方法例示於本文之實例中。 在其他實施例中’本發明組合物包含—或多種鼠李糖乳 桿菌HN〇01衍生物。同樣，產生該等組合物之方法為㈣ 所熟知，且可利用標準微生物及醫藥實踐方法。 應理解’該等組合物種可包括眾多種添加劑或載劑，以 ⑼如）提高或保持細菌活力或增強鼠李糖乳桿菌即刪或 -或多種鼠李糖乳桿菌麵Q1衍生物之治療效能。舉例而 :二諸如以下等添加劑：表面活性劑、潤濕劑、保 =點結劑、分散劑、穩定劑、參透劑及可改良細菌細 長、複製及生存性(例如氯化卸、甘油、氣化 芽糊精）之所謂應激添加劑、以及冷康保護劑（例如麥 加劑亦可包括在長期儲存中幫助維持微生物 &物’例如未精製玉米油或在外側含有油盘水之 154226.doc 201201820 混合物且在内側含有水、蒸酸鈉及細菌之「反相」乳液。 在某些實施例中’鼠李糖乳桿菌Η刪4有繁殖活力形 式及數量。 二组合物可包含碳水化合物來源，例如二糖，包括(例如) 庶糖、果糖、葡萄糖或右旋糖。較佳地，碳水化合物來源 係鼠李糖乳桿菌ΗΝ00i在好氧或厭氧條件下能利用者。 在該等實施例中，組合物較佳能支持鼠李糖乳桿菌 HN001之繁殖活力超過約兩週時間，較佳超過約一個月、 約兩個月、約三個月、約四個月、約五個月，更佳超過約 六個月、最佳至少約2年至約3年或更久。 在某些實施例中’口服組合物經調配以容許投與足量鼠 李糖乳桿菌ΗΝ001以在攝取時在個體胃腸道中建立種群。 所建立種群可為暫時性或永久性種群。 在理論上’ 1菌落形成單位(cfu)應足以在個體中建立鼠 李糖乳桿菌麵〇1種群，但在實際情況下，此通常僅需要 最小單位數。因此，掛於仗紹士 X丄 卞於依賴有活力之活益生菌種群之治 療機制而言，投斑個魏> II & &，^ 仅，'個體之早位數通常可影響治療效能。 ^如本文實例中所示，申請者已確定“Μ也鼠李糖乳桿 菌ΗΝ00"天之劑量率足以(但可能不必要)在人類個體胃腸 道中建立種群。因此，在一實例令，經調配用於投與之組 合物將足以提供每天$ ,卜 9 至夕6x10 cfu之鼠李糖乳桿菌 麵〇1。在某些實施例t可期望較高劑量。 疋勝C菌叢（例如鼠李糖乳桿菌刚）在個體胃腸道 中存在種群之方法為業内所熟知，且該等方法之實例闊述 J54226.doc -19- 201201820 於本文中。在某些實施例中，鼠李糖乳桿菌HN001種群之 存在可藉由（例如）分析一或多個得自個體之樣品並測定鼠 李糖乳桿菌HN001在該樣品中之存在或數量來直接確定。 在其他實施例中，鼠李糖乳桿菌HN001種群之存在可藉由 (例如）觀察鼻炎症狀之減少或其他腸道菌叢在得自個體之 樣中之數量之降低來間接確定。亦可設想該等方法之組 合。 ' 可在體外及體内評估本發明可用組合物之效能。例如， 參見以下實例。簡s之，可測試組合物預防或治療鼻炎之 能力。對於體内研究，可將組合物飼餵或注射至動物模型 (例如小鼠）中或投與人類個體（包括孕婦），且隨後評估其 十鼻炎及相關皮膚病況之發病率及嚴重性之效應。根據結 果’可確定適宜劑量範圍及投與途徑。 計算適宜劑量之方法可取決於組合物中活性藥劑之性 質。舉例而言，在組合物包含活鼠李糖乳桿菌HN001時， 可參照所存在活細菌之數量來計算劑量。舉例而言，如本 文實例中所述，可參照每天欲投與之菌落形成單位（cfu)數 來確疋劑量。在組合物包含一或多種鼠李糖乳桿菌ΗΝ〇〇ι 衍生物之實例中，可參照所存在鼠李糖乳桿菌hn〇〇i衍生 物之數量或濃度來計算劑量。舉例而言，對於包含鼠李糖 乳桿菌HNGG1細胞裂解物之組合物，可參照組合物中所存 在鼠李糖乳桿菌HN001細胞裂解物之濃度來計算劑量。 在一般實例中，涵蓋投與約lxl〇6 efu至約1χ1〇12 efu之 鼠李糖乳桿菌HN001/kg體重/天，較佳約1χ1〇6 cfu至約 154226.doc •20· 201201820 1x10 cfu/kg/天、約 lxl〇6 cfu至約 lxl〇io cfu/ky天約 lxl〇6 cfu 至約 lxl〇9 cfu/kg/天、約 lxl〇6 cfu 至約 ΐχΐ〇8 cfu/kg/天、約 lxl〇6 cfu至約 5xl〇7 cfu/kg/天或約 cfu 至約lxl〇7 cfu/kg/天。較佳地，涵蓋投與約5xl〇6 cfu至約 5xl08 cfu/kg體重之鼠李糖乳桿菌HNOOl/天，較佳約5xl〇6 cfu 至約 4xl08 Cfu/kg/天、約 5xl06 cfu 至約 3xl〇8 cfu/kg/ 天、約 5xl〇6 Cfu至約 2χΐ〇8 Cfu/kg/天、約 5χ1〇6 efu至約 lxlO8 cfu/kg/天、約 5χ106 cfu 至約 9xl07 Cfu/kg/天、約 5χ106 cfu 至約 8xl07 cfu/kg/天、約 5xl06 Cfu 至約 7x1〇7 cfu/kg/天、約 5x1 〇6 cfu至約 6x107 cfu/kg/天、約 5x i〇6 cfu 至約 5xl07 cfu/kg/天、約 5xl06 cfu至約 4xl〇7 Cfu/kg/天、 約 5xl06 cfu至約 3χ107 cfu/kg/天、約 5xl06 cfu至約 2xi〇7 cfu/kg/天或約 5χ106 cfu至約 lxl〇7 cfu/kg/天。 在某些實施例中，定期劑量不需要隨個體之體重或其他 特徵而變。在該等實例中，涵蓋投與約i X丨〇6 cfu至約 lxlO13 cfu之鼠李糖乳桿菌HN001/天，較佳約lxl06 cfu至 約 lxlO12 cfu/天、約 lxlO6 cfu至約 1x10" cfu/天、約 ιχ1〇6 cfu至約 lxlO10 cfu/天、約 lxlO6 cfu至約 lxl〇9 cfu/天、約 lxlO6 cfu至約 lxlO8 cfu/天、約 lxl〇6 cfu至約 5xl〇7 cfu/天 或約lxlO6 cfu至約1χ1〇7 cfu/天。較佳地，涵蓋投與約 5xl07 cfu至約5xl01G cfu/kg體重之鼠李糖乳桿菌HN001/ 天，較佳約5xl07 cfu至約4χ1010 cfu/天、約5xl07 cfu至約 3xl01() cfu/天、約 5xl07 cfu至約 2X101。cfu/天、約 5χ107 cfu至約 lxl01Q cfu/天、約 5χ 107 cfu至約 9x109 cfu/天、約 -21· 154226.doc 201201820 5xl〇7 cfu至約 8xl09 cfu/天、約 5xl〇7 cfu至約 7χΐ〇9 efu/ 天、約 5xl〇7 CfU 至約 6x1〇9 cfu/天、約 5χ1〇7 cfu 至約 5x1〇9 Cfu/天、約 5x1〇7 cfu至約 4x1〇9 cfu/天、約 5x1〇7 cfu至約 3xl〇9 Cfu/天、約 5x107 cfu至約 2xl〇9 cfu/天或約 5χΐ〇7 cfu 至約 lxio9 cfu/天。 舉例而言，如本文實例中所示，冷凍乾燥之鼠李糖乳桿 菌HN001之有效劑量確定為6x109 cfu/天。 應理解，組合物較佳經調配以容許投與有效劑量之鼠李 糖乳桿菌ΗΝ001或其一或多種衍生物。多個個體之間所投 與組合物之劑量、投與時間及通用投與方案可根據諸如以 下等變量而有所不同：個體症狀之嚴重性' 欲治療病症之 類型、所選投與模式及個體之年齡、性別及/或總體健康 狀況。此外’如上文所述，適宜劑量可取決於組合物中活 性藥劑之性質及調配方式。舉例而言，在組合物包含活鼠 李糖乳桿菌ΗΝ001時，可參照所存在活細菌之數量來計算 劑量。舉例而言，如本文實例中所述，可參照每天欲投與 之菌落形成單位（cfu)數來確定劑量。在組合物包含一或多 種鼠李糖乳桿菌ΗΝ001衍生物之實例中，可參照每天欲投 與之鼠李糖乳桿菌ΗΝ001衍生物之數量或濃度來計算劑 量°舉例而言’對於包含鼠李糖乳桿菌ΗΝ001細胞裂解物 之組合物’可參照組合物中所存在鼠李糖乳桿菌HN001細 胞裂解物之濃度來計算劑量。 應理解’較佳組合物經調配以提供具有便捷形式及數量 之有效劑量。在某些實施例中，例如（但不限於）在彼等定 154226.doc •22- 201201820 期劑量不需要隨個體之體重或其他特徵而變之實施例中， 將組合物調配為單位劑量。應理解，投與可包括單一曰劑 量或投與可能適宜之多個不連續分次劑量。舉例而言，如 纟文㈣中所* ’可將有效劑量之鼠李糖乳判刪〇1調 配為膠囊以供經口投與。 然而，在一般實例中，本發明者意欲每天投與約】呵至 約1000 mg/kg體重之本文可用組合物’較佳約5〇至約5〇〇 mg/kg/天，或者約150至約41〇 mg/kg/天或約ιι〇至約31〇 mg/kg/天《在一實施例中，本發明者意欲投與約〇 〇5 至 約250 mg/kg體重之本文可用組合物。 嬰兒配方、較大嬰兒配方或成長幼兒配方之實例闡述於 本文中。諸如該等組合物可經調配以使鼠李糖乳桿菌 HN001存於組合物中之濃度容許使用易量測量之組合物來 製備有效劑$。舉例而言，在某些實施例中，例如在組合 物係嬰兒配方之實施例中，以足以供應有效劑量之濃度提 供鼠李糖乳桿菌HN001，當父母或看護者在準備配方以餵 食時能使用（例如）量測勺或嬰兒配方常提供之類似工具容 易地1測配方量。該等組合物中所用鼠李糖乳桿菌HN〇〇 i 之實例性非限制性濃度包括約5χ1〇5 cfu/克配方至約ι〇9 cfu/克配方或約106 cfu/克配方至約1〇8 cfu/克配方。 在一實施例中，本文可用組合物包含至少約0· 1重量％、 〇.2重量％、0.5重量％、i重量％、5重量％ ' 1〇重量％、15 重I %、20重量％、25重量。/。、3〇重量。/。、3 5重量。/〇、40重 ®0/q、45重量。/。、50重量％、55重量％、6〇重量％、65重量 154226.doc •23· 201201820 %、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量 %、95重量％、99重量％、99.5重量％、99·8重量％或99.9重 量％之鼠李糖乳桿菌ΗΝ001或其衍生物，基本上由其組成 或由其組成，且可用範圍可在上述該等數值中任一者之間 選擇（例如約0.1%至約50%、約0.2%至約50%、約0.5%至約 50%、約1°/。至約50%、約5%至約50%、約10%至約50%、 約15%至約50%、約20%至約50%、約25%至約50%、約 30%至約50%、約35%至約50%、約40%至約50%、約45% 至約50%、約0.1%至約60%、約0.2%至約60%、約0.5%至 約60%、約1%至約60%、約5%至約60%、約10%至約 60%、約15%至約60%、約20%至約60%、約25%至約 60%、約30%至約60%、約35%至約60%、約40%至約 60%、約45%至約60%、約0.1%至約70%、約0.2%至約 70%、約0.5%至約70%、約1%至約70%、約5%至約70%、 約10%至約70%、約15%至約70%、約20%至約70%、約 25%至約70%、約30%至約70%、約35%至約70%、約40% 至約70%、約45%至約70%、約0.1%至約80%、約0.2%至約 80%、約0.5%至約80%、約1%至約80%、約5%至約80%、 約10%至約80%、約15%至約80%、約20%至約80%、約 25%至約80%、約30%至約80%、約35%至約80%、約40% 至約80%、約45%至約80%、約0.1%至約90%、約0.2%至約 90%、約0.5%至約90%、約1%至約90%、約5°/。至約90%、 約10%至約90%、約15%至約90%、約20%至約90%、約 25%至約90%、約30%至約90%、約35%至約90%、約40% 154226.doc -24- 201201820 至約90%、約45%至約90%、約〇·1 %至約99%、約〇·2%至約 99%、約0.5%至約99%、約1%至約99%、約5%至約99%、 約10%至約99%、約15%至約99%、約20%至約99%、約 25%至約99%、約30%至約99%、約35%至約99%、約40% 至約99%及約45%至約99%) » 在一實施例中，本文可用組合物包含至少約〇 〇(H、 0.01、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18或19克鼠李糖乳桿菌HN〇01或其衍生物，基本上由其組 成或由其組成，且可用範圍可在上述該等數值中任一者之 間選擇（例如約0.01克至約上克、約〇 01克至約1〇克、約 〇.〇1克至約19克、約〇.1克至約！克、約〇1克至約1〇克、約 0.1克至約19克、約1克至約5克、約i克至約1〇克、約 至約19克、約5克至約1〇克及約5克至約19克）。 在一實施例中，本文可用組合物包含鼠李糖乳桿菌 HN001或其衍生物’另外包含約〇【重量％、〇 5重量％、i 重量％、5重量％、10重量％、15重量％、2〇重量％、25重 量％、30重量％、35重量％、4〇重量％、45重量％、5〇重量 %、55重量％、60重量％、65重量％、7〇重量％、乃重量 /〇、80重量/❶、85重量。/。、9〇重量。/。' 95重量％、97重量 /〇、99重量％或99.9重量％之新鮮全乳或乳衍生物，且可用 範圍可在上述該等數值中任一者之間選擇(例如約〇1%至 約50/(» '約〇·2%至約5〇%、約〇 5%至約5〇%、約至約 50/〇約5 /〇至約50%、約1〇%至約5〇%、約15%至約5〇〇/〇、 154226.doc •25- 201201820 約20%至約50%、約25%至約50%、約30%至約50%、約 35%至約50%、約40%至約50%及約45%至約50%) »乳衍生 物較佳選自調製、粉狀或新鮮脫脂乳、調製或復原全乳或 脫脂奶粉、脫脂乳濃縮物、脫脂乳滲餘物、濃縮乳、超濾 乳滲餘物、乳蛋白濃縮物（MPC)、乳蛋白分離物（MPI)、去 辦乳蛋白濃縮物（MPC)、低脂乳、低脂乳蛋白濃縮物 (MPC)、赂蛋白、酪蛋白酸鹽、乳脂、乳油、奶油、印度 酥油 '無水乳脂（AMF)、酪乳、奶油乳清、β乳清、硬質 乳脂部分、軟質乳脂部分、鞘脂部分、乳脂球狀膜部分、 礼脂球狀膜脂質部分、磷脂部分、複合脂質部分、初乳、 初乳部分、初乳蛋白濃縮物（cpc)、初乳乳清、來自初乳 之免疫球蛋白部分、乳清（包括甜乳清、乳酸乳清、礦物 酉文礼清或復原乳清粉）、乳清蛋白分離物（wpi)、乳清蛋白 濃縮物（WPC)、源自任何乳或初乳加工流之組合物、源自 藉由對任何乳或初乳加卫流實施超慮或微渡獲得之渗餘物 A >透物之組合物 '源自藉由對任何乳或初乳加工流實施 層析（包括但不限於離子型及凝膠滲透層析）分離獲得之穿 透或吸附部分之人仏 5物、該等乳衍生物中任一者之提取物 (包括藉由多級分銳、μ八q 卜 糊微分結晶、溶劑分餾、超臨界分餾、 近*界刀冑、蒸餾、離心分餾、或使用改性劑(例如皂化 劑或乳化劑）進行㈣製備之提取物）、 該等衍生物中任一 。裇：產物、水解產物中各部分及該等衍生物中任何二 :或更夕者之任-組合(包括水解及/或非水解部分之组 合）。應理解，_當 A寺何生物之來源可為乳或初乳或其組合。 154226.doc • 26 · 201201820 應瞭解’鼠李糖乳桿菌HNOOl或其一或多種衍生物在經 調配用於投與之組合物中之濃度可小於在經調配用於（例 如）分配或儲存之組合物中之濃度，且經調配用於儲存且 之後調配為適合投與之組合物之組合物的濃度必須足以使 該投與用組合物亦可經充分濃縮，從而能以治療有效劑量 來投與。 本文可用組合物可單獨使用或與一或多種其他治療藥劑 組合使用。治療藥劑可為食物、飲料、食物添加劑、飲料 添加劑、食物組份、飲料組份、膳食補充劑、營養產品、 醫用食物、營養製劑、藥物或醫藥物。治療藥劑可為益生 菌劑或益生菌因子，且較佳可有效治療、預防或減弱鼻炎 或鼻炎之一或多種症狀。 在與另一治療藥劑組合使用時，本文可用組合物及另一 治療藥劑可同時或依序投與。同時投與包括投與包含所有 組份之單一劑型或實質上同時投與各單獨劑型。依序投與 包括根據不同方案進行投與，較佳使得提供本文可用組合 物及另一治療藥劑之時間有重疊部分。 可與本文可用組合物分開、同時或依序投與之適宜藥劑 包括一或多種益生菌劑、一或多種益菌原劑、一或多種磷 脂、一或多種神經節苷脂、業内已知之其他適宜藥劑及其 組合。可用益菌原包括半乳糖寡糖（G〇s)、短鏈G〇s、長 鍵GOS '果糖募糖（f〇S)、短鏈FOS、長鏈FOS、菊糖、半 乳聚糖 '果聚糖、乳果糖及其任何二者或更多者之任何混 合物。Boehm G及M〇r〇 G已研究一些益菌原（Structurai and 154226.doc •27- 201201820

Functional Aspects of Prebiotics Used in Infant Nutrition J· Nutr. (2008) 138(9):1818S-1828S)，其係以引用方式併 入本文中。其他可用製劑可包括膳食纖維，例如完全咬部 分不溶或不消化之膳食纖維。因此，在一實施例中，可八 開、同時或依序投與鼠李糖乳桿菌HN001或其衍生物與— 或多種選自以下之製劑：一或多種益生菌、一或多種益菌 原、一或多種膳食纖維源、一或多種半乳糖寡糖、一或多 種短鏈半乳糖寡糖、一或多種長鏈半乳糖寡糖、一或多種 果糖寡糖、一或多種短鏈半乳糖寡糖、一或多種長鍵半乳 糖寡糖、菊糖、一或多種半乳聚糖、一或多種果聚糖、乳 果糖或其任何二者或更多者之任何混合物。 在一實施例中，本文可用組合物包括諸如以下等乳組份 或與其同時或依序投與：乳清蛋白、乳清蛋白部分（包= 酸性或鹼性乳清蛋白部分或其組合）、糖巨肽、乳鐵蛋 白、鐵-乳鐵蛋白、功能性乳鐵蛋白變體、功能性乳鐵蛋 白片段、維生素D或弼或其組合。含有乳組份之可用組合 物包括諸如食物、飲料、食物添加劑、飲料添加劑、腾： 補充劑、營養產品、醫用食物或營養製劑等組合物。亦； 採用富含該等組份之乳部分。適用之乳鐵蛋白、片段及組 合物闡述於國際專射請案Wo Q3鳩咖及恥聰 中，該等專利皆係全文以引用方式併人本文中。 應理解’在本發明方法中亦可换田l ^ Τ ΛΙ J鉍用上文所列示之其他户 療劑（基於食物及醫藥之製劑），其 ' ° T巧等其他治療劑與本 文可用組合物係分開、同時或依序投與。 、 154226.doc -28- 201201820 在貫細例中，本文可用組合物另外包含醫藥上可接受 之載劑。在另一實施例中，組合物係食物、飲料、食物添 加劑、飲料添加劑、膳食補充劑、營養產品、醫用食物、 經腸飼傲產品、非經腸飼傲產品、代餐、藥用化妝品、營 養製劑、藥物或醫藥物，或調配成為該等形式。在一實施 例中，組合物呈錠劑、膜衣錠、丸劑、硬質或軟質膠囊或 菱形鍵劑形式。在-實施例中，組合物呈扁囊劑、粉劑、 可分散粉劑、顆粒、懸浮液、酏劑、液體或可添加至食物 或飲料（包括例如水、乳汁或果汁）中之任何其他形式。在 一實施例中，組合物另外包含一或多種可防止或減少組合 物在儲存期間或在投與後降解之成份（例如抗氧化劑）。該 等組合物可包括任一能攜載細菌或細菌衍生物之可食用消 費品，該等細菌衍生物包括經加熱殺死、加壓殺死、裂 解、uv-或光處理、輻照、分級分離或以其他方式殺死或 減弱之細菌。適宜可食用消費品之實例包括含水產品烘 烤物品、糖果製品（包括巧克力）、膠凍、冰淇淋、復原水 果製品、零食棒、食物棒、什錦棒、塗味品、調味料、蘸 汁、乳製品（包括酸乳酪及乾酪）、飲料（包括乳製及非乳製 飲料）、乳汁、奶粉、運動補充劑（包括乳製及非乳製運動 補充劑）、果汁、食物添加劑（例如，蛋白撒劑）、膳食補充 劑產品（包括日用補充錠劑、斷奶食物及酸乳酪）、及呈粉 劑或液體形式之配方（例如，嬰兒配方、較大嬰兒配方或 成長幼兒配方）。本文可用適宜營養製劑組合物可以類似 形式來提供。 I54226.doc •29· 201201820 應理解，本發明不同組合物可經調配以供投與特定個體 群。舉例而言，組合物適合投與孕婦（例如用於間接投與 胎兒個體或母乳餵養之新生兒、嬰兒或兒童個體）之調配 物可不同於組合物用於直接投與個體之調配物。亦應瞭 解’組合物欲預防性投與之調配物可不同於組合物經調配 以供在出現鼻炎或鼻炎之一或多種症狀時立即投與之調配 物。 在一實施例中’用於預防性應用之組合物可另外包含諸 如以下等益生菌劑’或鼠李糖乳桿菌ΗΝ001可與其組合使 用：鼠李糖乳桿菌GG、嗜酸乳桿菌（例如嗜酸乳桿菌 (LAVRI-A1))、洛德乳桿菌（例如洛德乳桿菌ATCC 5573〇) 或乳雙歧桿菌（万/此沿）（例如乳雙歧桿菌菌株 ΗΝ019)或其任何二者或更多者之組合。 在一實施例中，用於預防性投與且尤其預防性間接投與 之組合物可另外包含諸如以下等益生菌劑，或鼠李糖乳桿 菌HN001可與其組合使用：&李糖乳桿菌GG、嗜酸乳桿菌 (例如嗜酸乳桿菌（LAVRI-A1))、洛德乳桿菌（例如洛德乳 桿菌ATCC 55730)或乳雙歧桿菌（例如乳雙歧桿菌菌株 HN01 9)或其任何二者或更多者之組合。 應理解，本文所用術語「預防性」及其語法等效術語涵 蓋在鼻炎或鼻炎症狀出現前治療、使用、投與及諸如此 類。 在用於治療患有鼻炎或鼻炎之一或多種症狀之個體之實 施例中，組合可另外包含諸如以下等益生菌劑，或鼠李糖 154226.doc •30- 201201820 乳桿菌HN001可與其組合：鼠李糖乳桿菌GG、嗜酸乳桿菌 (例如嗜酸乳桿菌（LAVRI:A1))、洛德乳桿菌（例如洛^乳 桿菌ATCC 55730)或乳雙歧捍菌（例如乳雙歧桿菌菌株 HN019)或其任何二者或更多者之組合，前提係該等用於直 接投與患有鼻炎或鼻炎之一或多種症狀的一歲或更大年齡 嬰兒或兒里個體之組合物不包含乳雙歧桿菌菌株HN〇丨9。 本文所用術語Γ治療性」及語法等效術語涵蓋在存在鼻 炎或鼻k症狀時治療、使用或投與。 在k及本文所揭示數量範圍（例如1至1 〇)時亦欲涵蓋在 該範圍内所提及之所有合理數量（例如丨、1丨、2、3、 3.9 4、5、6、6.5、7、8、9及10)亦及該範圍内合理數量 之任一範圍（例如2至8、1.5至5.5及3.1至4.7)，且由此在本 文中明確揭示本文所明確揭示之所有範圍的所有子範圍。 該等數量僅為明確期望者之實例，且介於所列舉最低值與 最高值之間之數值的所有可能組合皆視為以類似方式明確 闡述於本申請案中。 3鼻炎 一般認為鼻炎係與因暴露於病毒、細菌或刺激物所致組 胺增加相關之鼻黏膜之慢性或急性炎症。此炎症導致產生 過量黏液，從而引起鼻炎之原發性症狀（即鼻滴涕或「流 鼻涕」）以及鼻充血、鼻炎結膜炎（結膜炎症）及後鼻滴涕。 亦已發現鼻炎與睡眠問題、耳疾及甚至學習問題有關。 一般將鼻炎歸類為三種類型：傳染性鼻炎，包括急性及 陵性細菌或病毒感染；非過敏性（血管運動性）鼻炎，包括 154226.doc -31- 201201820 自主性、激素性、藥物誘導性、萎縮性、味覺性鼻炎及藥 物性鼻炎；及過敏性鼻炎，其一般係由吸入之過敏原誘 發，例如花粉、黴菌、動物毛皮屑及灰塵。 淨#沒# i.鼻炎一般係由病毒或細菌感染所引起，包 括普通感冒（由鼻病毒（Rhinoviruses)及冠狀病毒（Coronaviruses) 引起）或細菌性鼻竇炎。普通感冒之症狀包括鼻漏、咽喉 痛（咽炎）、咳漱、充血及輕度頭痛。 #過敏沒#义係指並非因過敏症所致之流鼻涕，且可細 刀為非炎症性或炎症性非過敏性鼻炎β血管運動性鼻炎係 非炎症性非過敏性鼻炎之常見類型，其係由非過敏性誘發 物引發，例如氣味、煙霧、煙、灰塵及溫度變化。人們認 為該等非過敏性誘發物使鼻襯裏中之血管膨脹，從而引起 腫脹及流涕。血管運動性鼻炎可與過敏性鼻炎共存。 過餃沒#芡：具有敏化免疫系統之個體在諸如花粉或灰 塵等過敏原令之暴露通常誘發產生與肥大細胞結合之抗 體，繼而引起釋放組胺。此引起鼻炎症狀性瘙癢、腫脹及 黏液產生。不同個體之間症狀嚴重性不同，且極敏感個體 可出現與過敏反應有關之其他症狀。季節性鼻炎-通常稱 作化粉熱-尤其在花粉季節期間發生。通常在6歲前不發生 季節性過敏性鼻炎。 過敏性鼻炎之診斷可藉由皮膚測試來實施，其係過敏症 測試之最常用方法。該測試可包括真皮内測試、抓撓測 試、斑貼測試或其他測試。較不常㈣，將可疑過敏原溶 解並滴至下瞼上作為測試過敏症之方式。在一些個體中， 154226.doc -32- 201201820 RAST血液測試可有助於測定特異性過敏原敏感性。 3.1診斷： 鑒於上述，業内已提出眾多種標準來診斷或表徵鼻炎並 不令人驚訝。業内似乎還沒有標準方法得到承認，然而認 可診斷其他過敏性疾病之標準化標準（例如針對濕疹確立 之 SCORAD標準）（例如參見 Williams HC、Burney PGJ、 Hay RJ、Archer CB、Shipley MJ、Hunter JJA等人，The UK Working Party's Diagnostic Criteria for Atopic Dermatitis. Br J Dermatol 1994 ； 131:383-96 ； Williams H. 'So How Do I Define Atopic Eczema? A Practical Manual for Researchers Wanting to Define Atopic Rhinitis' 1996, http://www.nottingham.ac.uk/dermatology/rhinitis/contents/ html ;及 European Task Force on Atopic Dermatitis. Severity Scoring of Atopic Dermatitis: the SCORAD Index. Dermatology 1993; 186:23-3 1)可為鼻炎之一組標準化標準 之製訂提供依據。本文中提及旨在確立鼻炎發作及嚴重性 之一組實例性問題。 3.2當前治療： 由於不存在已知鼻炎治癒方法，故當前治療方案旨在使 過敏原或傳染原暴露最小化及抑制症狀。鹽水喷霧劑、沖 洗劑或蒸汽可有效自黏膜移除灰塵、分泌物及過敏原性分 子，且由此使暴露最小化。當前治療採用常用於治療過敏 性疾病之治療，包括抗組胺、可的松（cortisone)、地塞米 松（dexamethasone)、氫化可的松、腎上腺素（epinephrine) 154226.doc -33- 201201820 (腎上腺素（adrenaline))、茶鹼及色甘酸鈉。諸如孟魯司特 (Montelukast)(順爾寧（Singulair))或紮魯司特（Zafirlukast) (安可來（Accolate))等抗白三烯已經FDA批准可用於治療過 敏性疾病。 諸如曲安西龍（Triamcinolone)或潑尼松（Prednisone)等全 身性糖皮質激素及諸如倍氯米松（beclomethasone)(鼻可靈 (Beconase))、布地奈德（budesonide)(雷諾考特（Rhinocort)，

Noex)、氟尼縮松（flunis〇iide)(森特瑞斯（Syntaris))、莫米 松（mometasone)(内舒拿（Nasonex))、氟替卡松（fluticasone) (丙酸氟替卡松（Flonase)、輔舒良（Fiixonase))及曲安西龍 (拿赛可得AQ (Nasacort AQ))等類固醇鼻喷霧劑可有效降 低鼻部炎症且不使用口服抗組胺亦有效。 指示偽麻黃驗可用於血管運動性鼻炎，且局部解充血劑 亦可有助於降低諸如鼻充血等症狀，但其不應長期使用， 此乃因延長使用可導致反跳性鼻充血，即藥物性鼻炎。 過敏性鼻炎之更嚴重情形需要免疫療法或手術來移除鼻 組織（例如鼻息肉）或竇。 常用抗組胺包括艾克德福（Actifed)(鹽酸偽麻黃鹼；鹽酸 曲普利咬（Triprolidine hydrochloride))、奥樂瑞德c (Allerid C)糖漿（鹽酸西替利嗪（Cetirizine hydr〇chi〇ride))、安撒闌 (Anthisan)乳膏（馬來酸美吡拉敏（Mepyramine ^^以⑷）、

Apo-西替利嗪（鹽酸西替利嗪）、阿斯瑪芬（Asmafen)(酮替 芬（Ketotifen))、抗感明（AvU)緩釋片（馬來酸苯^比丙胺 (Pheniramine maieate))、奥臥明（Av〇mine)(茶氯酸異丙嗪 154226.doc -34- 201201820 (Promethazine theoclate))、苯海拉明複合劑（Benadryl Original)(氣化銨；鹽酸二苯醇胺；檸檬酸鈉）、氣苯那敏 (Chlorpheniramine)注射劑（馬來酸氯苯那敏）、克萊拉麥 (Claramax)(地氣雷他定（Desloratadine))、開瑞坦（Claratyne) (氣雷他定（Loratadine))、開瑞能（Clarinase) 12小時緩釋錠 (氯雷他定；硫酸偽麻黃鹼）、開瑞能24小時緩釋錠（氣雷他 定；硫酸偽麻黃鹼）、考卓爾4流感藥（Codral 4 Flu)(馬來酸 氯苯郭敏；破酸可待因（Codeine phosphate);撲熱息痛 (Paracetamol);鹽酸偽麻黃鹼）、考卓爾日錠/夜錠（磷酸可 待因；撲熱息痛；鹽酸偽麻黃鹼；鹽酸曲普利啶）、曰用 及夜用感冒及流感膠囊（Day & Night Cold & Flu Capsules) (馬來酸氯苯那敏；氫漠酸.右美沙芬（Dextromethorphan hydrobromide);撲熱息痛；鹽酸偽麻黃驗）、戴馬森祛痰 糖漿（Demazin Clear Syrup)(馬來酸氯苯那敏；鹽酸去氧腎 A 腺素（Phenylephrine hydrochloride))、戴馬森曰用 /夜用緩 釋鍵（馬來酸右氣苯那敏（Dexchlorpheniramine maleate); 硫酸偽麻黃鹼）、戴馬森非嗜睡性反覆作用錠劑（氯雷他 定；硫酸偽麻黃鹼）、戴馬森糠漿（馬來酸氣苯那敏；鹽酸 去氧腎上腺素）、戴馬森錠劑（馬來酸右氯苯那敏；硫酸偽 麻黃鹼）、得敏脫感冒鎮咳流感日用及夜用膠囊（Dimetapp Cold，Cough & Flu，Day & Night Caps)(氫溴酸右美沙芬；琥 珀酸多西拉敏（Doxylamine succinate);撲熱息痛；鹽酸偽 麻黃驗）、得敏脫無色酿劑（馬來酸溴苯那敏(Brompheniramine maleate);鹽酸去氧腎上腺素）、得敏脫DM(馬來酸溴苯那 154226.doc -35- 201201820 敏；氫溴酸右美沙芬；鹽酸去氧腎上腺素）、得敏脫酏劑 (馬來酸溴苯那敏；鹽酸去氧腎上腺素）、得敏脫嬰兒滴劑 (馬來酸溴苯那敏；鹽酸去氧腎上腺素）、乘暈寧 (Dramamine)(茶苯海明（Dimenhydrinate))、撲爾敏（Histafen) (馬來酸氣苯那敏）、勞拉培德（LoraPaed)(氣雷他定）、羅拉 敍:劑（Lora-Tabs)(氯雷他定）、苯甲哌嗪（Marzine)(鹽酸塞克 力0秦（Cyclizine hydrochloride))、那素達-A (Naphcon-A)(鹽 酸萘曱。坐琳（Naphazoline hydrochloride);馬來酸苯°比丙 胺）、奥索克西（Orthoxicol)曰用及夜用感冒及流感藥（馬來 酸氯苯那敏；氫溴酸右美沙芬；撲熱息痛；鹽酸偽麻黃 驗）、安清敏錄：（Periactin)(鹽酸賽庚咬（Cyproheptadine hydrochloride))、非那根（Phenergan)(鹽酸異丙嗪（Promethazine hydrochloride))、菲赛德（Phensedyl)無水家用鎮咳糖漿（福爾可 定(Pholcodine);鹽酸異丙嗪；鹽酸偽麻黃鹼）、右氯苯那敏 (Polaramine)(馬來酸右氣苯那敏）、鹽酸異丙嗪注射劑 BP(鹽酸異丙嗪）、雷茲恩（Razene)(鹽酸西替利嗪）、惠菲 寧（Robitussin)兒童夜用緩釋舰劑（馬來酸氣苯那敏；氫溴 酸右美沙芬；鹽酸偽麻黃驗）、敏克靜（Sea-legs)(鹽酸美克 洛嗪（Meclozine hydrochloride))、希拉西德（Serecid)(鹽酸經 口秦（Hydroxyzine hydrochloride))、派德（Sinutab)鼻竇過敏症 及疼痛緩解劑（馬來酸氣苯那敏；撲熱息痛；鹽酸偽麻黃 鹼）、速達菲（Sudafed)鼻竇疼痛與過敏症緩解劑（撲熱息 痛；鹽酸偽麻黃鹼；鹽酸曲普利啶）、太非（Telfast)(鹽酸 非索非那定（Fexofenadine hydrochloride))、太非解充血劑 154226.doc -36- 201201820 (鹽酸非索非那定，鹽酸偽麻黃驗）、替西力克（Tixy lix)止 咳糖漿（福爾可定；鹽酸異丙嗪）、尤尼索安眠劑（Unisom Sleepgels)(鹽酸二苯醇胺）、酒石酸異丁唤阿洛普令 (Vallergan Forte)(酒石酸異丁 °秦（Trimeprazine tartrate))、 威洛依德（Valoid)(AFT)(乳酸塞克力嗪）、威洛依德注射劑 (乳酸塞克力嗪）、紮啶（Zadine)(馬來酸阿紮他定（Azatadine maleate))及仙特敏（Zyrtec)(鹽酸西替利唤）。 在某些實施例中，當前治療方案（包括本文所提及之彼 等）中之任一者適合結合本發明方法及組合物來使用。 現將參照以下實例以非限制性方式闡明本發明之各個態 樣。 實例 為確定益生菌補充在生命早期是否可預防發生鼻炎，對 具有發生過敏性疾病之風險的嬰兒實施雙盲隨機化安慰劑 對照試驗。 材料及方法 在新西蘭之奥克蘭及惠靈頓經由產婦護理機構、產前班 及宣傳招募孕婦進行研究。若該等孕婦或嬰兒的父親具有 經治療哮喘、濕疹或花粉熱病史’則邀請其參與研究。若 婦女們計劃在隨後2年内搬出研究中心、已長期服用益生 菌補充劑或意欲使兒童服用該等益生菌補充劑，則其不適 合該研究。若孕婦在37週妊娠期之前分娩，其在生育前已 有U週未服用研究膠囊，其嬰兒之體重小於同性別及同孕 齡各兒的第二百分位數，或其嬰兒在新生兒病房中度過48 154226.doc •37· 201201820 小時以上或在出生時有嚴重先天性異常，則不能對其繼續 進行研究。若有雙胞胎出生，則研究僅包括較重者。 研究設計 研究係關於益生菌補充對嬰兒發生過敏性疾病之效應之 二中心雙盲隨機化安慰劑對照試驗（澳大利亞_新西蘭臨床 試驗註冊號：ACTRN12607000518460)。分為兩個治療 組’其接受鼠李糖乳桿菌ΗΝ00 1(6X1 09菌落形成單位/天） 或動物雙歧桿菌乳酸亞種ΗΝ019(9Χ109菌落形成單位/ 天）(Fonterra Co-〇perative Group，奥克蘭，新西蘭）。 益生菌補充劑係使用無菌發酵、濃縮及冷凍乾燥來製 造。生長培養基含有脫脂奶粉、酵母提取物及葡萄糖。在 生長後’藉由離心來濃縮HN001及HN019菌株之細胞並用 無菌鹽水洗條兩次。在低過敏原性益生菌補充劑之原型發 展期間’藉由皮膚點刺測試（SPT)在若干個牛乳過敏症患 者中測試單獨成份。此工作確認，在兩次洗滌後，材料在 牛乳過敏症患者中不反應。將最終洗滌細胞與冷凍保護劑 溶液（即麥芽糊精）混合且將此混合物在托盤上冷凍並冷凍 乾燥。所得粉劑之粒徑為2〇〇微米或更小並測試病原體在 其中之存在’之後將其發送至註冊醫藥包裝公司。安慰劑 組接受外觀及氣味相同之膠囊，其含有葡聚糖、鹽及酵母 k取物（Fonterra Co-operative Group)。益生犖及安慰劑中 所用酵母提取物不含活細胞。 每月測試所有批次之膠囊以確保益生菌之活力。控制存 架期以確保維持最低細胞計數。另外，測試自現場返回之 154226.doc -38- 201201820 膠囊的活力。S亥活力南於所需最低值，很少有例外情況。 在第35週妊娠期，每日使孕婦隨機接受益生菌或安慰劑 中之一者，在其哺乳期繼續進行，且在產後持續長達6個 月。嬰兒在出生後第2至16天（中值=6天）始服用膠囊， 持續至2歲。膠囊粉劑未經稀釋即給予嬰兒或與水 '母乳 或配方混合，且經由茶匙或注射器來給予，直到其開始食 用固體食物為止，此後將該粉劑撒在食物上。 由奥克蘭市立醫院之臨床試驗藥劑師對補充劑進行隨機 化及分配，該藥劑師不與參與者接觸。由研究中心將隨機 化刀層並根據電腦生成之隨機化列表在1 5個區中實施隨機 化。在登記時’研究護士分配下次研究數量並向參與者提 供適宜膠囊。所有研究護士及參與者在研究期間皆不瞭解 治療分配》為評估盲測效能，最終問卷要求參與者指出其 過為其處於益生菌組或安慰劑組。 在基線時收集之資訊包括父母過敏性疾病史；性別；種 族劃分；家庭吸煙情況；寵物暴露；及在出生時之身長、 體重及頭圍。在4.5歲之隨訪時評估鼻炎之流行率及嚴重 性。在該等隨訪時亦收集抗生·素使用史。 國家多區域倫理學委員會已授權倫理學聲明，其涵蓋兩 個研究中心。 結果量測 在4歲時根據國際兒童哮喘及過敏症研究組研發之關於 過敏症之一組標準問題使用問卷數據來測定鼻炎之流行 率 °亥問崎組可在 http:y7isaac.auckland.ac.nz/index.html獲 154226.doc •39- 201201820 得。相關問題重現於下文中且 首先澄清 在兒童未患感冒或流感時出現之問題 戶斤述問題係關於 23 24 25 26 您ί孩子在未患感冒或流感時是否----- 問題？ 嘴或流鼻涕或鼻塞之 . 是 否 跳轉至問題24 珧轉至問題28喷嘴 疋 D一~~►跳轉至問題25 否 D一~^跳轉至問題28 在遜:豳方户，此鼻部問題是否伴隨眼晴發癢淚溢^ 是□ 否□ 在過去12月中之哪幾個月中，魏崎勢請勾選出現該問題 Κϊ：何月份。 27 一月 〒月] 三月 四月 □ 五月 八月 十月 □ Η'一月 □ 十g月 28 高？ 一點也不干擾 有點干擾 中等程度 干擾很大 您的孩子是否曾患花粉熱？ 是 -^_ 否 □ □ □ □ □ □ ------ 154226.doc •40· 201201820 糞便樣品收集 在出生後不久及在3個月、12個月及24個月大時自嬰兒 收集糞便樣品。將樣品保存在家庭冰箱内直至運至研究中 心以供在-80°C下儲存。藉由使用先前所述方法自糞便提 取細菌 DNA(Tannock G、Munro K、Harmsen Η、Welling G、Smart J、Gopal P. Analysis of the fecal microflora of human subjects consuming a probiotic containing Lactobacillus rhamnosus DR20. Appl Environ Microbiol 2000 ； 66:2578- 88)。藉由使用靶向轉醛醇酶基因之PCR引物來擴增雙歧桿 菌 DNA(Requena T、Burton J、Matsuki T、Munro K、 Simon M、Tanaka R等人，Identification, detection, and enumeration of human Bifidobacterium species by PCR targeting the transaldolase gene. Appl Environ Microbiol 2002 ; 68:2420-7)，且乳桿菌擴增子係藉由使用靶向16S核 糖體RNA基因之PCR引物來獲得（Walter J、Hertel C、 Tannock G ' Lis C ' Munro K ' Hammes W. Detection of Lactobacillus, Pediococcus, Leuconostic and Weisellall species in human feces by using group-specific PCR primers and denaturing gradient gel electrophoresis. Appl Environ Microbiol 2001 ; 67:2578-85)。藉由使用 Bio-Rad Dcode通 用突變檢測系統（Bio-Rad，Hercules，Calif)來實施變性梯度 凝膠電泳。先前已闡述梯度濃度及電泳條件（Requena T、 Burton J、Matsuki Τ、Munro Κ、Simon Μ、Tanaka R等 人，.Identification，detection, and enumeration of human 154226.doc • 41 · 201201820

Bifidobacterium species by PCR targeting the transaldolase gene. Appl Environ Microbiol 2002 ; 68:2420-7 ; Walter J ' Hertel C ' Tannock G ' Lis C ' Munro K ' Hammes W. Detection of Lactobacillus, Pediococcus, Leuconostic and Weisellall species in human feces by using group-specific PCR primers and denaturing gradient gel electrophoresis. Appl Environ Microbiol 2001 ； 67:2578-85) 〇 在凝膠中使 用自動物雙歧桿菌乳酸亞種ΗΝ019及鼠李糖乳桿菌ΗΝ001 之純培養物提取之DNA所生成之PCR擴增子作為糞便特徵 之標記。目測比較具有菌株標記之糞便特徵，由此使得可 檢測糞便樣品中之動物雙歧桿菌乳酸亞種及鼠李糖乳桿 菌。檢測係在物種層面上，此乃因無法獲得菌株特異性 PCR引物。 順應性 每3個月更換膠囊瓶且由不包括參與者之工作人員中之 成員進行計數。 樣本大小 樣本大小計算係基於對照組中截至2歲時鼻炎之50%累 積流行率。為檢測到因益生菌所致之鼻炎的18%絕對降低 (其中在5%顯著性水準下檢定力為80%)，每個研究組所需 樣本大小為127。為容許因在出生時無資格或隨後退出所 致之25%之損失，每組招募170名母親》 統計學分析 藉由使用 SAS 9.0 版（SAS Institute, Cary, NC)來實施分 154226.doc • 42- 201201820 析。藉自使用Kapian-Meiw線及比例危險模型來歸納各 研究組中鼻炎累積流行率之間之差異。亦使用比例危險模 型來評估各研究組中在2歲時特應症之時點流行率以及依 賴於特應症之變量的差異。將鼠李糖乳桿菌及動物雙歧桿 菌乳酸亞種在研究期間於糞便樣品中之持久性定義為相對 於僅檢測到-次或未檢測到，兩次或更多次檢測到該等細 菌’從而限定來自食物及其他環境來源之後天暴露之影 響。使用勝算比來評估每種細菌在糞便中之持久性與鼻炎 之4歲流行率之間的關係。亦可由研究组在每一時間點分 析每一益生菌物種在糞便樣品中之存在或不存在。所有完 成研究之兒童不管其順應性如何皆包括在意向治療分析 中。使用卡方測試（chi-square test)來比較各組之間之差異 及基線差異，其中P<〇.G5視為統計學上顯著。由於基線差 異較小，故在結果變量分析中不調節該等變量。 將順應性計算為所服用膠囊之數量佔研究週期中之天數 之比例。 結果 自2004年1月至2005年5月招募參與者，平均速率為每週 7名。在接受治療之隨機化參與者中，在安慰劑、鼠李糖 乳桿菌ΗΝ001及動物雙歧桿菌乳酸亞種HN〇丨9組中分別有 87.7°/。、84.7%及88.9%之參與者完成研究（參見圖丨）。在出 生時有資格之參與者中，在安慰劑、鼠李糖乳桿菌HN〇〇1 及動物雙歧桿菌乳酸亞種HN019組中分別有94.3%、91.7% 及96.2%之參與者完成研究（參見圖1}。其中，在安慰劑組 I54226.doc •43· 201201820 中有6名參與者、在鼠李糖乳桿菌HN001組中有17名參與 者、且在動物雙歧桿菌乳酸亞種HN019組中有12名參與者 中斷治療，但繼續對其進行隨訪，直至研究結束為止。安 慰劑組中之一名母親及動物雙歧桿菌乳酸亞種Hn〇 19組中 之3名母親說明了其中斷治療之原因，係由於發現了服用 研究膠囊之副作用或反對服用研究膠囊。所有該等參與者 在每一時間點皆提供結果數據且皆包括在意向治療分析 中。在安慰劑、鼠李糖乳桿菌HN001及動物雙歧桿菌乳酸 亞種HN019組中分別有另外9名、13名及6名參與者完全退 出研究且不能包括在意向治療分析中。該等退出者皆不係 因發現研究治療之副作用而退出。 各組中服用超過75%之研究膠囊的參與者所佔比例之間 無顯著差異。知：照此定義，在安慰劑、鼠李糖乳桿菌 HN001及動物雙歧桿菌乳酸亞種ηΝ019組中順應率分別為 77.3%、73.6%及 78.3%。 各研究組之基線特徵之間無顯著差異（參見下表j)。 154226.doc 201201820 表I在安慰劑組(n=159)、鼠李糖乳桿菌HN001組(n=157)及乳雙歧桿菌HN019組(n=158) 中有資格兒音之研究特徵中之流行率。_ 安慰劑 π(%) 鼠李糖乳桿菌 ΗΝ001 ηί%) 乳雙歧桿菌 HN019 ηί%) Ρ 值* 女性 76 (47.8) 79 (50.3) 73 (46.2) 0.76 種族劃分 毛利人(Maori) 18(11.5)㈣ 15 (9.6) (157) 15 (9.6) (156) 0.83 歐洲人European) 121 (77.1) (157) 129 (S2.2)(157) 124 (79.5) (156) 其他 18 (11.5) (757; 13 (8.3) (157) 17 (10.9) (156) 出生 剖腹產 50(31.5) 46 (29.3) 57(36.1) 0.42 平均(SD)出生體重(kg) 3.48 (0.4) (157) 3.48 (0.4) (157) 3.47 (0.5) (156) 1.00 平均(SD)出生身長(cm) 51.5 {2.0) (156) 5\.Ί {1.9)(157) 51.5 (2.0)(156) 0.63 平均(SD)頭圍(cm) 35.4(1.3) (757; 15.6 {12)(157) 35.5(13)(156) 0.55 母乳銀養 曾經母乳餵養 152 (95.6) 153 (97.5) 154 (97.5) 0.55 平均持續時間(SD)(月） 9.9 (5.7) (147) 9.8 (5.5) (143) 9.6 (6.1) (7切 0.89 環境暴露 · 在妊娠t吸煙 4 (2.5) 5 (3.2) 7 (4.4) 0.57 任何室内或室外吸煙 19 (12.0) 25 (15.9) 18(11.4) 0.61 任何寵物 77 (48.4) 70 (44.6) 83 (52.5) 0.37 家族史 家族鼻炎史** 119(74.8) 114(72.6) 119(75.3) 0.84 母方過敏性疾病史*** 134 (84.3) 132 (84.1) 133 (84.2) 1.00 父方過敏性疾病史*** 104(65.4) 111 (70.7) 107 (67.7) 0.60 研究期間之抗生素使用 129 (86.0) 118(81.9) 129 (84.9) 0.35 若與標題中所示樣本大小不同，則樣本大小以斜體字顯示。 *用於3個研究組之間差異之p值卡方測試 **僅限於彼等接受醫生治療者 ***定義為哮喘、鼻炎或花粉熱，其中至少一種疾病經醫生治療 接受鼠李糖乳桿菌HN001之嬰兒在4歲時發生鼻炎之風 險與安慰劑組嬰兒（54% ;表II)相比顯著降低（45.1%)。在4 歲時，任一益生菌對任一過敏原或食物過敏原獲得陽性皮 膚測試結果之可能性皆無統計學上顯著之影響《相反，在 4歲時動物雙歧桿菌乳酸亞種ΗΝ019對鼻炎流行率無影響 154226.doc •45- 201201820 (表 π)。 表II服用鼠李糖乳桿菌HN001及其雙沒襻邊HN019之嬰兒在4歲時鼻炎症狀之累積 流行率之危險比(95% CI)。 安慰劑 N=159 鼠李糖乳桿菌 HN001 N=157 P值 舁雙攻斧磨HN019N=158 P值 鼻炎 1.00 0.77(0.56-1.07) 0.12 0.93 (0.68-1.26) 0.62 症狀 （54%) (45.1%) (52.9%) 接受鼠李糖乳桿菌HN001之嬰兒亦顯示在4歲時降低之 鼻炎及鼻炎結膜炎流行率（勝算比（OR)分別為0·54 (95% CI 0.31-0.95)及 0.34 (95% Cl 0.15-0.80))。參見下表 III。 表III服用鼠李糖乳桿菌HN001及舁雙攻#邊HN019之嬰兒在4歲時鼻炎、花粉熱及鼻 炎結膜炎之勝算比(95% CI) »_ _ _ 安慰劑 鼠李糖乳桿菌 P值 乳雙歧桿菌 P值 N=159 HN001 N=157 HN019 N=158 曾經出現花粉熱1 1.00 0.52 (0.27-0.98) 0.04 0.54 (0.29-1.01) 0.0519 (21.7%) (12.5%) (13%) 鼻炎持續12個月1 1.00 0.54 (0.31-0.95) 0.03 0.76 (0.45-1.28) 0.3 (29.4%) (18.4%) (24%) 鼻炎結膜炎持續 1.00 0.34 (0.15-0.8) 0.01 0.77 (0.4-1.51) 0.45 12個月 (15.4%) (5.9%) (12.3%) 154226.doc -46- 1 n = 425(基於所有在4歲時獲得問卷數據者） 在安慰劑組及替代性益生菌組嬰兒出生時之糞便中檢測 動物雙歧桿菌乳酸亞種及鼠李糖乳桿菌，從而顯示該等來 自環境來源之細菌在消化道中之後天接種（Ahrne S、 Nobeck S ' Jeppson B ' Adlerberth I ' Wold A ' Molin G.

The normal Lactobacillus flora of healthy human rectal and oral mucosa. J Appl Microbiol 1998 ; 85:88-94 ; Janer C、 Arigoni F、Lee B、Pelaez C、Requena T. Enzymatic ability 201201820 of Bifidobacterium animalis subsp. lactis to hydrolyze milk proteins: identification and characterization to endopeptidase O. Appl Environ Microbiol 2005 ; 71: 8460-5 ; Kim S-Y、

Adachi Y. Biological and genetic classification of canine intestinal lactic acid bacteria and bifidobacteria. Microbiol Immunol 2007 51:919-28 *, Mah K ' Chin V ' Wong W '

Lay C、Tannock G、Shek L等人，Effect of milk formula containing probiotics on the fecal microbiota of Asian infants at risk of atopic diseases. Pediatr Res 2007 ； 62:674-9)(圖2A及B)。然而，在3、12及24個月時投與益生 菌可相對於其他組顯著提高該益生菌在糞便樣品中之檢出 率（PC.0001)。在投與HN019之嬰兒中，動物雙歧桿菌乳酸 亞種在糞便樣品中之檢出隨研究進程自第3個月時之22.6〇/〇 逐漸增加至第24個月時之53.1 °/。（圖2A)。相反，在投與鼠 李糠乳桿菌之嬰兒中’此益生菌之檢出在第3個月時最 大，係71.5%，且在第24個月稍低，係62.3%(圖2B)。 在研究結束時’詢問父母其認為其係處於益生菌組或安 慰劑組。每個研究組中有超過一半之應答者不能作出選 擇，14.7%之安慰劑組參與者認為其接受安慰劑，且23 ·7% 之動物雙歧桿菌乳酸亞種ΗΝ019組及25.7°/。之鼠李糖乳桿 菌ΗΝ001組認為其處於益生菌組。 討論 在此研究中’在生命最初2年使用鼠李糖乳桿菌1 治療與在4歲時鼻炎流行率降低約一半有關’且與在4歲時 154226.doc • 47· 201201820 鼻炎結膜炎流行率降低約三分之二有關。 儘管各研究之間存在一定差異，但有有力證據表明，一 些舁#磨物種在過敏性疾病發病機制中具有保護性作用， 但總的來說很少證據表明此保護性作用係經由對過敏性致 敏作用之效應來介導。Kukkonen等人（Kukkonen K、 Savilahti E > Haahtela T ' Juntunen-Backman K > Korpela R、Poussa T 等人，Probiotics and prebiotics galacto-oligosaccharides in the prevention of allergic disease: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial. J Allergy Clin Immunol 2007 ; 119:192-8)提出，益生菌調節自致敏 作用至臨床疾病之路徑，但本文所述發現並不支持此論 點，本文顯示鼠李糖乳桿菌HN001對敏化及非敏化鼻炎之 效應類似。 已提出有多種免疫學路徑受益生菌影響，其涉及若干種 不同機制。舉例而言，已有人提出，益生菌影響可係局部 的’且可能包括降低抗原之滲透性及全身性透入；改變局 部炎症或耐受性誘導；由類鐸受體（Toll-like receptor)介導 之消炎效應；致耐受性樹突細胞之活化；反應之TH1偏 移；改變T調節功能；及提高局部IgA產生。亦已提出增加 單核細胞之全身性效應及對T細胞、B細胞及幹細胞之效應 (Prescott S ' Bjorksten B. Probiotics for the prevention or treatment of allergic diseases. J Allergy Clin Immunol. 2007 ; 120:25 5-62)。已提出，據顯示一些乳酸桿菌及雙歧 桿菌菌株可調節IL-10產生，由此可增強調節或耐受性誘 154226.doc -48 · 201201820 導機制（Niers L、Timmerman Η、Rijkers G、van Bleek G、van Uden N、Knol E 等人，Identification of strong interleukin-10 inducing lactic acid bacteria which down-regulate T helper type 2 cytokines. Clin Exp Allergy 2005 ; 35··1481-9)。 在此研究中，在益生菌組中臍帶血IFN-γ含量較高且更 常可檢測，但此僅在鼠李糖乳桿菌ΗΝ001組中具有統計學 顯著性（Prescott SL、Wicken Κ、Westcott L、Nieblee J、 Currie Η、Black P等人，Supplementation with rhamnosus or Bifidobacterium lactis probiotics in pregnancy increases cord blood IFN-gamma and breast milk TGF-beta and IgA detection. Clin Exp Allergy 2008 ; 38:771)- 研究雙歧桿菌及乳酸桿菌在參與者糞便中之存在，此乃 因過去很少確認在較長持續時間之試驗中投與時益生菌培 養物是否可通過嬰兒胃腸道並到達結腸（Mah K、Chin V、 Wong W、Lay C、Tannock G、Shek L 等人，Effect of milk formula containing probiotics on the fecal microbiota of Asian infants at risk of atopic diseases. Pediatr Res 2007 ; 62:674-9)。觀察每種益生菌之檢出率在出生與第24個月之 間之不同分佈。 不期望受限於任何理論，此可係因細菌群落組成隨時間 發生特徵性轉變而改變嬰兒腸道内生態系統之結果（Mah K、Chin V、Wong W、Lay C、Tannock G、Shek L等人， 154226.doc -49- 201201820

Effect of milk formula containing probiotics on the fecal microbiota of Asian infants at risk of atopic diseases. Pediatr Res 2007 ; 62:674-9)。在投與之前3個月期間以相 對較低頻率檢測動物雙歧桿菌乳酸亞種。鼠李糖乳桿菌在 糞便中之檢測值因ΗΝ001投與而升高，但即使如此，在減 去此物種之背景暴露後，少於一半之嬰兒在其糞便中具有 此物種之可檢測DNA »來自新加坡之最新報導（Mah K、 Chin V、Wong W、Lay C、Tannock G、Shek L等人，Effect of milk formula containing probiotics on the fecal microbiota of Asian infants at risk of atopic diseases. Pediatr Res 2007 ’ 62:674-9)顯示，長雙歧桿菌 菌株在嬰兒糞便中之峰值檢測值（在減去背景暴露後）出現 在干預開始後第3天（44%之嬰兒），且在益生菌投與後第1 個月及第3個月分別為26〇/〇及丨6〇/〇。在該研究中，在投與後 第3天鼠李糠乳桿菌gG之檢測值為83%，然後在投與後第1 個月及第3個月分別為77〇/〇及69〇/〇。基於整體提取之〇ΝΑ檢 測糞便細菌之分析方法並不會提供關於細菌在腸中活力之 資訊’其中DNA可能源自活性、休眠或死細菌細胞。然 而，此研究之細菌學結果值得注意，此乃因其揭示了雙歧 桿菌及乳酸桿菌通過胃腸道之相對能力。 此研究提供證據表明，鼠李糖乳桿菌HN001在（例如）高 風險兒童中係降低鼻炎流行率之有效干預。此對2種不同 益生菌之比較證實，並非所有益生菌在治療或預防特定病 況時或在獲得任何特定治療結果時並非同等有效。 154226.doc • 50- 201201820 工業適用性 本發明係m生g、尤其鼠李糖乳桿菌腦gi或其衍 生物之用途’且具體而言在治療或預防鼻炎中之用途。亦 提供使用該等細菌及包含該等細菌之組合物之方法。 【圖式簡單說明】 圖1係展不在本文實例1所述試驗中安慰劑、鼠李糖乳桿 菌HN001及動物雙歧桿菌乳酸亞種HN〇19 口仏 subsp HN019)組參與者之流程之示意圖。 圖2展示以下之兩個圖表：（A)每一嬰兒組（投與動物雙 歧桿菌乳酸亞種HN019、鼠李糖乳桿菌HN001或安慰劑）中 在母一時間點（以月計）皆檢測到動物雙歧桿菌乳酸亞種之 個體的百分比；及（B)每一嬰兒組（投與動物雙歧桿菌乳酸 亞種HN019、鼠李糖乳桿菌HN001或安慰劑）中在每一時間 點（以月計）皆檢測到鼠李糖乳桿菌之個體的百分比。 154226.doc •51 -

Claims (1)

1. 201201820 七、申請專利範圍： 1. 一種治療或預防個體之鼻炎之方法，該方法包含向有需 要之個體投與鼠李糖乳桿菌HN001 或其衍生物。 2. —種預防胎兒個體之鼻炎之方法，該方法包含向有需要 之胎兒個體之母親投與鼠李糖乳桿菌HN001或其衍生 物0 3. —種治療或預防母乳餵養之新生兒、嬰兒或兒童個體之 鼻炎之方法，該方法包含向有需要之新生兒、嬰兒或兒 童個體之母親投與鼠李糖乳桿菌HN001或其衍生物。 4，如凊求項1至3中任一項之方法，其中該鼠李糖乳桿菌 HN001或其衍生物係以包含生理上可接受之稀釋劑、佐 劑、载劑或賦形劑之組合物來投與。 5.如請求項4之方法，其中該組合物包含嬰兒配方、較大 嬰兒配方、成長幼兒配方、孕婦配方、孕婦補充劑、膳 食產品或食物。 月求項5之方法，其中該食物包含酸乳、酸乳酪、乾 路、乳飲料或奶粉。 7. 如請求項^ , 法，其中該組合物係醫藥組合物且該賦 Μ或稀釋劑包含醫藥上可接受之稀釋劑、佐劑、载劑 或賦形劑。 8·如請求項1至7Φ权 Ε 中任—項之方法，其中該方法係預防鼻炎 之方法。 9.如請求項1戋3 $ 8占 至8中任一項之方法，其中該個體係新生 154226.doc 201201820 兒、嬰兒或兒童個體。 10.如請求項W4至…壬一項之方法，其中該個體係青少 年或成年個體’該方法包含向該個體投與包含鼠李糖乳 桿菌咖01或其衍生物之組合物。 鼠李糖礼 11 · 士 1求項1至1〇中^ —項之方法，其中該鼠李糖乳桿菌 ΗΝ001或其衍生物呈繁殖活力形式。 如請求項U10中任一項之方法，其中該鼠李糖乳桿菌 HN001或其衍生物經殺死、分級分離或減弱。 13. 如請求項1至12中任-項之方法，纟中該鼻炎係鼻炎結 膜炎。 14. 如凊求項丨至13令任一項之方法其中該鼠李糖乳桿菌 ΗΝ001或其衍生物係與一或多種選自以下之藥劑分開、 同時或依序投與：一或多種益生菌、一或多種益菌原、 一或多種膳食纖維源、一或多種半乳糖募糖、一或多種 短鏈半乳糖寡糖、一或多種長鏈半乳糖寡糖、一或多種 果糖寡糖、一或多種短鏈半乳糖寡糖、一或多種長鏈半 礼糖寡糖、菊糖、一或多種半乳聚糖、一或多種果聚 糖乳果糖或其任何二者或更多者之任何混合物。 15· —種鼠李糖乳桿菌11]^〇〇1或其衍生物之用途，其用於製 造治療或預防鼻炎之組合物。 16· 一種鼠李糖乳桿菌HN001或其衍生物之用途，其用於製 造預防胎兒個體之鼻炎之組合物，其中將該鼠李糖乳样 菌ΗΝ001或其衍生物投與該胎兒個體之母親。 17. 一種鼠李糖乳桿菌HN001或其衍生物之用途，其用於製 154226.doc -2- 201201820 造治療或預防母乳餵養之新生兒、嬰兒或兒童個體之鼻 炎之組合物’其中將該鼠李糠乳桿菌HN001或其衍生物 投與該新生兒 '嬰兒或兒童個體之母親。 18.如請求項15至17中任一項之用途，其中該鼠李糖乳桿菌 ΗΝ001或其衍生物存於包含生理上可接受之稀釋劑、佐 劑、載劑或賦形劑之組合物中。 19·如請求項15至18中任一項之用途，其中該組合物包含嬰 兒配方、較大嬰兒配方、成長幼兒配方、孕婦配方、孕 婦補充劑、腾食產品或食物。 20. 如請求項15至19中任一項之用途，其中該食物包含酸 乳、酸乳酪、乾酪、乳飲料或奶粉。 21. 如請求項15至18中任一項之用途，其中該組合物係醫藥 組合物且該賦形劑或稀釋劑包含醫藥上可接受之稀釋 劑、佐劑、载劑或賦形劑。 22. 如請求項15至21中任一項之用途，其中該用途係預防鼻 炎。 23·如請求項15或17至22中任一項之用途，其中該個體係新 生兒、嬰兒或兒童個體。 24. 如請求項15或17至22中任一項之用途，其中該個體係青 少年或成年個體，將該包含鼠李糠乳桿菌ΗΝ001或其衍 生物之組合物投與該個體。 25. 如請求項15至24中任一項之用途，其中該鼠李糖乳桿菌 HN001或其衍生物呈繁殖活力形式。 26. 如請求項15至24中任一項之用途，其中該鼠李糖乳桿菌 154226.doc 201201820 HN001或其衍生物經殺死、分級分離或減弱。 27.如請求項15至26中任一項之用途’其中該鼻炎係鼻炎結 膜炎。 28_如請求項15至27中任一項之用途，其中該鼠李糖乳桿菌 ΗΝ001或其衍生物係與一或多種選自以下之藥劑分開、 同時或依序投與：一或多種益生菌、一或多種益菌原、 一或多種膳食纖維源、一或多種半乳糖寡糖、一或多種 短鏈半乳糖寡糖、一或多種長鏈半乳糖寡糖、一或多種 果糖寡糖、一或多種短鏈半乳糖寡糖、一或多種長鏈半 乳糖募糖、菊糖、一或多種半乳聚糖、一或多種果聚 糖、乳果糖或其任何二者或更多者之任何混合物。 29. —種鼠李糖乳桿菌ΗΝ001或其衍生物，其用於治療或預 防個體之鼻炎。 30. 如請求項29之鼠李糖乳桿菌ΗΝ001，其中該鼠李糖乳桿 菌ΗΝ001存於包含生理上可接受之稀釋劑、佐劑、載劑 或賦形劑之組合物中。 31. 如請求項30之鼠李糖乳桿菌ΗΝ001，其中該組合物用於 經口投與。 32·如s青求項29至3 1中任一項之鼠李糖乳桿菌ΗΝ〇〇1，其中 該鼠李糖乳桿菌ΗΝ001或其衍生物或組合物係用於在妊 娠期間經口投與孕婦或投與母乳餵養之母親。 33.如請求項29至32中任一項之鼠李糖乳桿菌ΗΝ〇〇1或組合 物，其另外包含一或多種選自以下之藥劑：一或多種益 生菌、一或多種益菌原、一或多種膳食纖維源、一或多 I54226.doc -4- 201201820 種半乳糖寡糖、一或多 次多各祖鲣干孔糖寡糖、一或多種長 鏈半乳梅寡掩、_❹^ 4；^裡果糖养糖、—或多種短鍵半乳 糖寡糖、-或多種長鏈半乳糖寡糖、菊糖、—或多種半 乳聚糖、一或多種果聚糖、乳果糖或其任何二者或更多 者之任何混合物。 如請求項29至33中任一項之鼠李糖乳桿菌HN〇〇1或組合 物，其另外包含嬰兒配方、較大嬰兒配方、成長幼兒配 34. 方、孕婦配方、孕婦補充劑、膳食產品或食物，包括包 含酸乳、酸乳酪、乾酪、乳飲料或奶粉中之一或多者之 食物。 154226.doc