TW201201808A - Treatment method - Google Patents

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201201808 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種治療哺乳動物中眼部血管生成咬血其 滲漏疾病之方法。該等方法包含投與喷咬衍生物、笨并一 氮呼衍生物、及含此等衍生物之醫藥組合物。 【先前技術】 新血管形成（亦稱為血管生成）係形成新血管之過程。新 血管形成發生於正常發育期間’且亦對組織受損後之創面 癒合起重要作用。然而，新血管形成亦被視為多種病理狀 態，包括（例如）癌症、類風濕性關節炎、動脈粥樣硬化' 牛皮癖及眼部疾病之重要誘因。 一種受新血管形成影響之眼部疾病係年齡相關黃斑變性 (AMD)，其係老年人嚴重視力喪失之主要誘因βΑΜβ中之 視力喪失係由脈絡膜新血管形成（CNV)引起。新血管形成 係源自脈絡膜血管並穿透布魯克氏膜（Bruch，s membrane) (一般於多個位點處）生長至視網膜下之色素上皮空間及/或 視網膜（參見（例如）Campochiaro等人（1999) Mol. Vis. 5 : 34)。此等新血管滲漏及流血會導致視力喪失。 【發明内容】 • 於本發明之u巾，為眼部血管生成或血管滲漏病患 治療該病症之方法包括將丨至“ „^適宜抑制劑經口投與至 該病患。 於本發明之另—態樣中，為眼部血管生成或血管渗漏病 —療a玄病症之方法包括將i至50 mg式⑴化合物或其醫藥 153116.doc 201201808 上可接受鹽或其水合物經口投與至該病患：

於本發明之又一態樣中’提供一種以適宜抑制劑於製造 含1至50 mg該適宜抑制劑之藥劑中之用途，該藥劑係用於 治療需求治療之病患的眼部血管生成或血管滲漏疾病。 於本發明之另一態樣中，提供1至50 mg適宜抑制劑，其 係用於治療需求治療之病患之眼部金管生成或血管渗漏疾 病0 【實施方式】 本發明提供一種用於治療眼部血管生成或血管參漏疾病 (如年齡相關黃斑變性）之方法。如本文所使用，「治療」旁、 指使與疾病有關之一或多種症狀朝向有益方向轉變之任何 方法。因此，該術語包括治愈或改善疾病之症狀或副作 用，或減慢疾病之發展速率。 如本文所使用’術s吾「適宜抑制劑」意指抑制以下受體 中之一或多種之抑制劑：VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、 PDGFRa、PDGFRp、c-kit及 / 或 FGFR。 如本文所使用’術語「治療有效量」意指足以治療、預 防及/或改善疾病之一或多個症狀的治療劑之量。 根據本發明之實施例，為眼部血管生成或血管滲漏病患 153116.doc 201201808 治療該病症之方法包括將1至50 mg適宜抑制劑投與至該病 患。 該適宜抑制劑可為抑制以下受體中之一或多種的各種抑 制劑：VEGFR1 、VEGFR2、VEGFR3 、PDGFRa、 PDGFRP、c-kit及/或FGFR，適宜抑制劑包括，但非限 於：式I化合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物、式Γ化合 物或其水合物、式Γ複合物、式II化合物或其醫藥上可接 受鹽、拉帕替尼（apatinib)、蘇尼替尼（sunitinib)、索拉菲 尼（sorafenib)、必伐尼（bivanib)、米哚妥林（midostaurin) (PKC412)(FLT3、c-KIT、VEGFR-2、PDGFR及多種絲胺酸 /蘇胺酸蛋白激酶C(PkC)同功異型物之抑制劑，由Novartis 研發）、E-7050(C-met及VEGFR酪胺酸激酶抑制劑，由 Eisai研發）、XL-184(範圍選擇性激酶抑制劑，抑制Met、 Ret 及 VEGFR2，由 Exelixis 研發）、XL-647(由 Exelixis 研 發，抑制EGFR 、 HER2 、 VEGFR及EphB4之口月艮路胺酉曼激 酶抑制劑）、西迪拉尼（cediranib)、利尼伐尼（linifanib)、 莫特撒尼（motesanib)、RAF-265(以前稱為 CHIR-265，由 Novartis研發之B-Raf及VEGFR激酶抑制劑）、替沃撒尼 (tivozanib)、TAK-593(由 Millennium (Takeda)研發之 VEGFR/PDGFR酪胺酸激酶抑制劑）、ARQ-197(由 ArQule(收講前為 Cyclis Pharmaceuticals)研發之不依賴 ATP 之 c-Met抑制劑）、OSI-930(由 OSI Pharmaceuticals研發之 c-kit及VEGFR-2酪胺酸激酶抑制劑）、DCC-2036(由 Deciphera Pharmaceuticals研發，Bcr-abl抑制劑，亦抑制 153116.doc 201201808 類 Src 激酶 LYN、HCK及 FGR及 TIE2及 KDR激酶）、MGCD-265(由 MethylGene 與 ChemBridge Research Laboratories, CA, the US 合作研發之 c-Met、VEGFR1、VEGFR2、 VEGFR3、Tie-2及Ron路胺酸受體激酶之抑制劑）、卩？-3 3 7210(由 Pfizer 研發之 VEGFR2 抑制劑）、BIBF-1120 (VEGFR-2、PDGF及FGF激酶抑制劑，亦抑制src、lck及 lyn 酷·胺酸激酶，由Boehringer Ingelheim研發）、ENMD-2076(由EntreMed研發，選擇性向aurora激酶A或B之激 酶抑制劑，且亦抑制 Flt3、c-kit、CSF1R及 KDR(VEGFR2) 及 VEGFR3、PDGFRa、FGFR1、FGFR2、EphAl 及 src)、 TG-100-801(由 TargeGen研發之 VEGFR、Src、Yes、Lck、 Lyn 激酶及 PDGFH-β 抑制劑）、BMS-6905 14(由 Bristol-Myers Squibb研發之 EGFR、HER2、ErbB4及 VEGFR1-3 抑 制劑）、SSR-1 06462(由 Sanofi-Aventis研發之 TIE-2抑制劑 及VEGFR-2酪胺酸激酶抑制劑）、BAY-73-4506(由Bayer研 發之 VEGFR、KIT、RET、FGFR及 PDGFR激酶抑制劑）、 普利德辛（plitidepsin)、阿西替尼（axitinib)、凡德替尼 (vandetinib)及尼勒替尼（nilotinib)。適宜抑制劑可呈醫藥 上可接受鹽之形式，及於一些情況中，呈醫藥上可接受溶 劑合物之形式，只要已於相關技術中闡述該等適宜抑制劑 之溶劑合物形式。 於一些實施例中，該適宜抑制劑係帕°坐帕尼（pazopanib) 或其醫藥上可接受溶劑合物，如式（I)化合物或其醫藥上可 接受溶劑合物、式（Γ)化合物或其溶劑合物、或式（Γ)複合 153116.doc -6- 201201808 =於其他實施例中’ it適宜抑制劑係式（11)化合物或其 醫樂上可接受鹽。於另一些實施例中，該適宜抑制劑係索 拉菲尼或其醫藥上可接受鹽，如甲笨磺酸鹽。於其他實施 例中，該適宜抑制劑係蘇尼替尼或其醫藥上可接受鹽，如 馬來酸鹽。 1 根據本發明之實施例，為眼部血f生成或血管渗漏病患 治療該疾病之方法包括將丨至“ mgS⑴化合物或其醫藥上 可接受鹽或水合物經口投與至該病患：

式（I)化合物之化學名為5_[[4-[(2,3_二曱基_2H-吲唑_6_ 基）曱基胺基]-2-°密咬基]胺基]-2-曱基苯續酿胺，且俗名為 帕。坐帕尼。 於一些實施例中，式（I)化合物之鹽係鹽酸鹽。於一特定 實施例中，式（I)化合物之鹽係如式（Γ)所示之單鹽酸_。 式（I)化合物之單鹽酸鹽之化學名為5-[[4-[(2,3-二甲基-2Η. 吲唑-6-基）甲基胺基]-2-嘧啶基]胺基]-2-曱基苯磺醯胺單鹽 酸鹽。 153116.doc 201201808

HC1 (I，) 於其他實施例中，式⑴化合物之鹽係式⑴化合物之單踏 酸單水合物。該式（I)化合物之單鹽酸單水合物之化學名為 5-({4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基）甲基胺基]_2-嘧啶基}胺 基）-2-曱基苯續醢胺單鹽酸單水合物，其係如式（I")所示。

可（例如）根據於2001年12月19日申請且於2002年8月1曰 作為WO 02/059110公開之國際專利申請案第 PCT/US01/49367號，及於2003年6月17日申請且於2003年 12月24日作為WO 03/106416公開之國際專利申請案第 PCT/US〇3/192ll號中之製程，製備式⑴化合物自由鹼、鹽 及水合物》 根據本發明之實施例，為眼部血管生成或血管滲漏病患 治療該病症之方法包括將1至50 mgS(n)化合物或其醫藥 上可接受鹽經口投與至該病患： 153116.doi: 201201808

可（例如）根據於2001年12月19日申請且於2002年8月1日 作為WO 02/059110公開之國際專利申請案第PCT/US01/ 49367號，及於2003年6月17日申請且於2003年12月24曰作 為WO 03/106416公開之國際專利申請案第PCT/US03/ 19211號中之製程製備式（11)化合物自由鹼及鹽。 如本文所使用，術語「醫藥上可接受鹽」可包含自式（I) 化合物之取代基上之氮衍生之酸加成鹽。典型鹽包括以下 鹽：乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫 鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、依地酸鈣鹽、樟腦磺 酸鹽、碳酸鹽、氣化物、棒酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、 依地酸鹽、乙二磺酸鹽、依託酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸 鹽、葡庚醣酸鹽、葡萄糖酸鹽、榖胺酸鹽、乙醇醯基阿散 酸鹽、己基間苯二酚酸鹽、海車胺、氫溴酸鹽、鹽酸鹽' 羥基萘酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸 鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸 鹽、曱基溴化物、曱基硝酸鹽、曱基硫酸鹽、馬來酸單鉀 鹽、黏液酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、N-甲基葡糖胺、草酸 鹽、雙羥萘酸鹽（恩貝酸鹽）、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/ 磷酸氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽鉀鹽、水揚酸鹽鈉鹽、硬脂酸 鹽、鹼式乙酸鹽 '琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、氣茶酸 153116.doc 201201808 鹽、甲苯磺酸鹽、三乙 化物二甲基銨鹽及戊酸鹽。 於根據本發明之方法之實施例中，眼部血管生成或血管 ^漏疾病可為關於任烟塞性或炎症性視㈣血管疾病之 水腫或新血管生成’如虹膜紅變、新生血管性青光眼、翼 狀裔肉、、血管化青光眼㈣皰、結膜乳頭狀瘤；脈絡膜新 ^管生成’如新血管年齡相關黃斑變性（AMD)、近視、前 葡萄膜炎、創傷或先天.应，在.立 又无天疾病，黃斑水腫，如手術後黃斑水 腫：因葡萄膜炎繼發之黃斑水腫，包括視網膜及/或脈絡 膜人症目糖尿病繼發之黃斑水腫、及因視網膜血管閉塞 疾病（即視網膜分支及中央靜脈閉塞）繼發之黃斑水腫；因 糖尿病導致之視網膜新血管生成，如視網膜靜脈閉塞、葡 萄膜炎源、自y員動脈血管病之眼部缺血症候群、眼或視網 膜動脈血管閉塞、H狀細胞性視賴病變、其他缺血性或 閉塞性新血管視_錢、早產兒視網膜病變或伊爾斯氏 病（Eales Disease);及遺傳性疾病’如馮希伯-林島氏症候 群（VonHippel-Lindau syndrome)。 於一實施例中，新血管年齡相關黃斑變性係濕性年齡相 關κ斑變性。於另一實施例中，該新血管年齡相關黃斑變 性係乾性年齡相關黃斑變性且病患特徵係存在高風險會發 展為濕性年齡相關黃斑變性。 可杈與呈原化學物質形式之適宜抑制劑，然而亦可呈醫 藥組合物形式遞送活性成份。因此，本發明之實施例進一 步提供一種醫藥組合物，其包含治療有效量的適宜抑制 劑、及一或多種醫藥上可接受載劑、稀釋劑或賦形劑。該 J53ll6.doc 201201808 適宜抑制劑係如上所述。於一實施例中，該適宜抑制劑為 式⑴化合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。於另一實施 例中，該適宜抑制劑為式（r)化合物或其水合物。於又一 實施例中，該適宜抑制劑為式（I")複合物。於另—實施例 中，該適宜抑制劑為式（11)化合物或其醫藥上可接受鹽。 於其他實施例中，該適宜抑制劑係索拉菲尼或其醫藥上可 接，鹽，％甲苯續酸鹽。於其他實施例中，該適宜抑制劑 係蘇尼替尼或其醫藥上可接受鹽，如韻果酸鹽。該（等）載 劑、稀釋劑或賦形劑應可接受，其意指其可與調配物中之 其他成份相容且不損害添加其之物質。根據本發明之另一 態樣’亦提供—種製備醫藥調配物之方法，其包括將該適 且抑制劑與一或多種醫藥上可接受載劑、稀釋劑或賦形劑 混合。 ，醫藥調配物可呈每單位劑量含預定量活性成份之單位劑 型存在。於某些實施例中，單位劑型調配物含有呈每日一 -人技與之劑罝’或其分劑量或適宜部份的活性成份。此 外’此等醫藥調配物可藉由醫藥技藝中熟知之任意方法製 備。 此等調配物可藉 ’藉由將活性成 醫藥調配物可經調整以用於經口投與。 由醫藥技藝中已知的任何方法製備，例如 份與載劑或賦形劑締合。 經調整用於經口投與 存在，如膠囊或鍵劑； 中之溶液或懸浮液；食 之醫藥調配物可呈離散單元的形式 粉末或顆粒；於水性或非水性液體 用泡沫或發泡液（Whip);或水包油 153116.doc 201201808 液體乳液或油包水液體乳液。 例如，爲了呈錠劑或膠囊形式經口投與，可將活性藥物 組分與口服無毒性醫藥上可接受惰性載劑（如乙醇、甘 油、水或類似者）組合。粉劑之製法為將化合物研磨至適 度小的尺寸，並與經類似方式研磨之醫藥載劑，如可食性 碳水化合物，如（例如）澱粉或甘露醇混合。亦可包含調味 劑、防腐劑、分散劑及著色劑。 膝囊製法係製備如上述粉末，並填充至已成型之明膠外 A又中。可將諸如膠狀石夕石、滑石、硬脂酸鎮、硬脂酸約或 固體聚乙二醇之助流劑及潤滑劑添加至粉末混合物，然後 實施填充操作《亦可添加諸如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉之崩 解劑或增溶劑’以改良當攝入膠囊時之藥劑利用率。 此外’當需要或必需時’亦可將合適黏結劑、湖滑劑、 崩解劑及著色劑併入至該混合物中。合適黏結劑包括澱 粉、明膠、諸如葡萄糖或乳糖之天然糖類、玉米甜味 劑、諸如阿拉伯膠 '黃蓍膠或藻酸鈉之天然或合成樹膠、 羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟類及類似者。用於此等劑型 之潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯曱酸納、 乙酸納、氣化鈉及類似者。崩解劑包括，但非限於，澱 粉、曱基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠及類似者。錠劑 係（例如）藉由製備粉末混合物、造粒或擊打、添加潤滑劑 及朋解並壓製成旋劑來調配成。粉末混合物係藉由將經 適當研磨之化合物與如上所述之稀釋劑或基質，及視需 要’與諸如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯啶 153116.doc -12- 201201808 酮之黏結劑；諸如石蠟之阻溶劑；諸如四級鹽之吸收促進 劑及/或諸如膨潤土、高嶺土或磷酸氫二鈣之吸附劑混合 來製備。粉劑混合物可藉由利用諸如糖漿、澱粉糊、金合 歡膠漿或纖維素或聚合材料之溶液之黏結劑潤濕並驅使通 過篩網來造粒。就造粒之替代方案而言，可使粉末混合物 通過製錠機並將未完全成型之塊體打碎成顆粒。可藉由添 加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油潤滑該等顆粒以防止 其黏附至形成錠劑之模具，隨後將經潤滑之混合物壓製成 錠劑。亦可將本發明之化合物與自由流動的惰性載劑組合 並直接壓製成錠齊卜而《需經由造/粒或擊打步驟。可提供 透明或不透明之保護塗層，其係由蟲膠密封塗層、糖或聚 合材料塗層及蠟拋光塗層組成。可添加染料至此等塗層以 區分不同的單元劑型。 可將諸如溶液、糖聚及酒劑之σ服流體製成單元劑型， 以使指定量含有預定量的化合物。糖漿可藉由將化合物溶 於經適當調味之水溶液製備，而關_由使用無毒性醇 載劑製備。懸浮液可藉由將化合物分散於無毒性載劑中來 調配。亦可添加諸如乙氧化異硬脂基醇及聚環氧乙院山梨 糖醇喊之增溶劑及乳化齊！、防射卜諸％薄荷油或天然甜 味劑或糖精或其他人造甜味劑之風味添加劑及類似者。 若適宜，可將用於經口投與之單元劑型調配物微囊封。 調配物亦可（例如）藉由塗覆或將顆粒材料嵌埋於聚合物、 堪或類似物中來製備以延長或延緩釋放。 適宜抑制劑可以脂質體遞送系統之形式，如小型單層微 153116.doc 201201808 脂粒、大型單層微脂粒及多層微脂粒之形式投與。脂質體 可係由各種磷脂，如膽固醇、硬脂胺或磷酯醯膽鹼形成。 可藉由將單株抗體用作與化合物分子偶合之特殊載劑來 遞送該適宜抑制劑。亦可將該等化合物與作為可定位藥物 載劑之可溶性聚合物偶合。此等聚合物可包括聚乙烯吡咯 啶酮、哌喃共聚物、聚羥丙基曱基丙烯醯胺苯酚、聚羥乙 基天冬醯胺苯酚或經棕櫚醯殘基取代之聚環氧乙基聚離胺 酉久此外，可使該等化合物與一類可用於使得藥物受控釋 放之生物可降解聚合物偶合，例如，聚乳酸、聚己内酯 (polyepsilon capr〇lactone)、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮 醛聚一氫哌喃、聚氰基丙烯酸酯及交聯或兩性嵌段水凝 膠共聚物。 應理解’除上述特定成份外，該等調配物亦可包含關於 所關注調配物之技術中常用之其他試劑，例如，適宜用於 口技與之彼等物可包含調味劑。 根據本發明之方法，將適宜抑制劑投與或配予病患。所 投與或配予之化合物之量係視多種因素而定，包括（例如） 病患的年齡及體重、需求治療之確切病症、病症之嚴重程 度及調配物屬性。最終，該量係由主治醫師決定。 於本發明之方法的一些實施例中，待以每日之頻率投與 之所投與或配予之適宜抑制劑之總量可為最低1、2、3、 5 6 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 !8、19 或 20 mg 至最高 10、u、12、13、14、15、16、 U、18、19、20、21、22 ' 23、24、25、％、27、28、 153116.doc 201201808 29 ' 30 、 31 、 32 、 33 、 34 、 35 、 36 、 37 、 38 、 39 、 40 、 41、42、43、44、45、46、47、48、49或 50 mg。該適宜 抑制劑係如上所述。於一實施例中，該適宜抑制劑係式⑴ 化合物或其醫藥上可接受鹽或水合物。於另一實施例中， 該適宜抑制劑係式（I，）化合物或其水合物。於又一實施例 中’該適宜抑制劑係式（Γ·)複合物。於另一實施例中，該 適宜抑制劑係式（II)化合物或其醫藥上可接受鹽。於其他 實施例中’該適宜抑制劑係索拉菲尼或其醫藥上可接受 鹽，如曱苯磺酸鹽。於另外其他實施例中，該適宜抑制劑 係蘇尼替尼或其醫藥上可接受鹽，如蘋果酸鹽。 本發明之化合物亦可與其他用以治療眼部*管生成疾病 的方法組合使用。於-些實施例中，本發明之方法包含一 組合療法’其將適宜抑制劑與—或多種其他用以治療血管 生成疾病的治療藥劑組合投與，該等治療藥劑本身可係如 上所述之適宜抑制I於_實施财，用於組合之適宜抑 制劑係式⑴之化合物或其醫藥上可接受鹽或水合物。於另 一實施例中’用於組合之i商眘女± <適且抑制劑係式（Γ)化合物或其 水合物。於又一實施例中，用私知人 知 、 τ用於組合之適宜抑制劑係式 (I")複合物。於另一實施例中，田 "•例中’用於組合之適宜抑制劑係 式（11)化合物或其醫藥上可接受鹽。於另一實施例中，用 於組合之適宜抑制劑係索拉菲尼或其醫藥上 甲苯磺酸鹽。於又一實施例中， ^如 用於組合之適宜抑制劑车 蘇尼替尼或其醫藥上可接受踏，β ~ β m 伐又義，如頻果酸鹽。可用 療法之其他治療藥劑之非 π 1σ 限制性實例包括哌加他尼 153116.doc •15· 201201808 (pegaptanib)、蘭尼單抗（ranibizumab)、貝伐單抗 (bevacizumab)、咪朵妥啉（mid〇staurin)、奈帕芬胺 (nepafenac)、整合素受體拮抗劑（包括玻璃連結蛋白受體促 效劑）及本文中所描述之任何適宜抑制劑。參見（例

如）Takahashi 等人（2003)Invest.Ophthalm〇1.vis Sci· 44 : 409-15 ; Campochiaro 等人（20〇4) lnvest· 0phthalm〇1 Vis. Sci. 45 . 922-31 ; van Wijngaarden 等人（2005) JAMA 293 : 1509-13 ; Callahan等人之美國專利案第6 825 188號 及Manley等人之美國專利案第6 881 736號，各案關於此等 化合物之教示係以引用之方式併入本文。 當採用組合療法時，可一起或分開投與治療藥劑。相同 投與方式可用於組合療法中之一種以上之治療藥劑，或者 可依不同方式投與組合療法中之不同治療藥劑。當分開投 與治療藥劑時，其可同時投與或於相近或較長時間間隔内 依任何次序依次投與。適宜抑制劑及/或其他醫藥活性劑 之量及相隔投與時間係經選擇以獲得所需的組合治療效果。 以下實例僅意欲用於說明且非意欲以任何方式限制本發 明之範圍。 實例 用於此等實例中之帕唑帕尼自由鹼、鹽及水合物可（例 如）根據下列參照案中之製程製得：於2〇〇1年12月Η曰申 請且於2002年8月1日作為W0 〇2/〇5911〇公開之國際專利申 请案第PCT/US01/49367號；及於2003年6月17日申請且於 2003年12月24日作為WO 〇3/1〇6416公開之國際專利申請案 153116.doc •16· 201201808 第 PCT/US03/19211 號。 生物學數據： 試劑 將外用滴眼劑調配成經緩衝之含5 mg/ml帕唑帕尼之7% 環糊精溶液。營光素納（10%w/v)係購自Alcon (Alcon Pharma, Freiburg，Germany)。内皮細胞基本培養液（EBM) 及内皮細胞生長場養液（EGM)係獲自Lonza，Verviers, Belgium。漢克斯（Hank's)平衡鹽溶液（HBSS)及哈姆氏 (Ham's)-FlO係獲自 Invitrogen(Karlsruhe，Germany)。所有 其他化學物質係購自Sigma(Taufkirchen, Germany)之試劑 級產品。 動物及麻醉 於整個研究中採用雄性棕色挪威大鼠（Brown Norway rat)(10至12週齡，重170至360 g之雄性及雌性）。根據關於 將動物用於眼科及視力研究之ARVO說明處理動物，且所 有動物實驗係經位於Leipzig之市政及大學附設醫院動物護 理委員會（municipal and University Hospital animal care committees)檢查及核准。大鼠經腹膜内注射酮胺（100 mg/kg ； Ratiopharm, Ulm, Germany)及甲苯嗟嗪 (BayerVital，Leverkusen, Germany; 10 mg/kg)麻醉。以滴 注方式局部地施用托品醯胺（tropicamide)(5 mg/ml)及苯福 林鹽酸鹽（phenylephrine hydrochloride)(Ankerpharm, Rudolstadt，Germany; 50 mg/ml)以使在雷射光凝法及登光 血管攝影術期間使瞳孔擴大。於雷射傷害14天後，利用過 153116.doc -17- 201201808 量二氧化碳對大鼠實施人道安樂死。 於大鼠中誘發CNV及以帕唑帕尼治療 動物之處理法為：利用連接至裂隙燈（Carl Zeiss，

Oberkochen，Germany)之 545 nm 染料雷射器（coherent

Argon Dye Laser #920, Coherent Medical Laser, Palo Alto, CA)，以雷射光凝法誘發布魯克氏膜（Bruch，s membrane)破 裂。使用隱形眼鏡以使在光凝結期間維持角膜透明。設置 分散的雷射點，並採用下列設定參數：50-μιη直徑、0.1秒 持續時間及1 80-mW強度。為使布魯克氏膜破裂，於接近 視神經盤之主要視網膜血管之間施加4至7個雷射點。每日 兩次投與帕唑帕尼（約30 μΐ之5 mg/ml經無菌過渡之溶 液）。對照組動物僅接受載劑。 於CNV實驗中之螢光血管攝影術 為了記錄於CNV早期階段之治療，使用如下處理方案。 如上所述進行雷射光凝法’且自雷射後第6天每日兩次局 部投藥之帕唑帕尼直至雷射後第14天研究終止時。藉由血 管攝影術於雷射後第7天首次記錄經凝結法處理之病灶， 且僅將患眼部CNV之大鼠納入分析中。將螢光素鈉注射至 經麻醉大鼠之尾靜脈中’並藉由眼底照相機（FD_3丨A， Topcon，Tokyo, japan)獲得螢光血管攝影圖。於第丨斗天 時’對大鼠進行第二次血管攝影。將注射後1〇〇至14〇秒之 血管攝影圖轉化成數位影像，且吾等中的兩人（γγ ; ΧΜΥ)利用電腦軟體（NIH image, Research Branch，

Bethesda，MD)以盲蔽方式計算出強度有如主血管中之強度 153116.doc -18· 201201808 般高的螢光素滲漏面積。藉由下式計算勞光差：第14天時 之螢光素滲漏面積X100°/。/第7天時之螢光素滲漏面積。 組織學及免疫組織化學 於第14天時對大鼠實施安樂死’隨後立即切開眼睛並以 4〇/〇多聚曱醛（分散於PBS中）固定。5分鐘後，於眼球赤道處 使眼睛穿孔並於4°C下於同一溶液中放置過夜。隨後，將 眼睛分割成前後兩部份’並完全移除晶狀體及玻璃體。製 備一系列6-微米切片，並以蘇木精及曙紅（HE)染色或在加 工後用於免疫組織化學分析。利用光學顯微鏡（Axi〇plan 2; Carl Zeiss Meditec，Jena，Germany)及數位彩色照相機 (AxioCam MRc5; Carl Zeiss Meditec)，於 200倍放大率下測 定經HE染色之切片。藉由測定經染色脈絡膜層之外邊界 至CNV複合物頂部之厚度與鄰接病灶的完整經染色脈絡膜 厚度之間的差值，間接地評定CNV複合物之最大面積。測 定來自各CNV膜之3至5個系列切片，保存最高值（表示指 定CNV複合物之頂部）。藉由同步影像分析軟體 (Axi〇visi〇n; Carl Zeiss)分析並測定數位影像。手工圈出各 病灶’並藉由程式計算其面積（μιΏ2)。 此外，以多株山羊抗大鼠VEGF抗體（R&D Systems)使一 些切片染色。簡言之’利用PBS_TE>(PBS/1%二甲亞颯/ 〇·3°/〇 Triton X-100)清洗切片，接著於pBS/〇 3% H2〇2中抑 制内源性過氧化氫酶活性5分鐘，然後於PBS中清洗。隨 後，以PBS-TD/10%兔正常血清於37〇c下封阻各切片i小時 並與抗VEGF(以5 pg/ml，溶於PBS/2% BSA中）一起培養過 153116.doc -19· 201201808 夜。於負對照切片中，以正常山羊免疫球蛋白（Ig)G替代 第一抗體。在以PBS-TD清洗三次後，於室溫下與共軛連 接辣根過氧物之兔抗山羊IgG(Dianova，Hamburg， Germany ;依 1 : 1000稀釋於 pBS/2〇/〇 BSA 中）一起培養2小 時。將經緩衝之3,3 - 一胺基聯苯胺（vect〇r Laboratories, Burlingame，CA)與H2〇2—起用作色元，以檢測過氧化物酶 活性。以Meyer、蘇木精複染切片，以Pbs及水清洗並安 裝。利用配備有數位照相機之Zeiss Axi〇sk〇p顯微鏡檢查 所有切片。 眼組織藥物濃縮製程 於此等研究期間使用雌性挪威棕色大鼠。域係購自 Chades River(Portage，MI)。於兩項獨立研究中挪威掠 色大鼠接受30 μΐ帕口坐帕尼滴眼劑（5 mg/ml，溶於經緩衝之 7〇/。環糊精中）24小時（共3滴，每隔8至12小3寺投與）、每曰 一次持續5天、或每曰兩次持續14天。 採集組織製程 藉由吸入C〇2對大鼠實施安樂死，然後劍出眼球及採 血衆樣品。於收集後立即於乾冰上來藏樣品，且隨後保 於_8〇C下。眼組織經剖開-粉碎-藥物萃取製程處理。根 =步驟對製備經冷康眼睛之切片。大鼠視杯之製法為 精由刀片移除眼睛前部，接著葬 凌之玻_。料杯巾製造矢㈣ 除晶狀體及經'

太媸你 剖面，然後藉由刮刀之I 末炀到除已曝露的鞏膜以採 辛组键p 6， 杲視，.周膜/脈絡膜，直至經^ 色組織已自鞏膜組織完全移除。所收集的組織係於液氮t 153116.doc •20· 201201808 研碎。將經冷凍的組織小心地置於内含液氮之

BioPulverizer(Bi〇spec Products Inc，Bartlesville，OK)中。 於粉碎後，將組織粉末自粉碎器移除並轉移至聚丙烯管 内。將萃取緩衝液（5〇%甲醇/50% 0.5 M HC1)添加至組織粉 末，接著經兩輪超聲波破碎、濃縮及收集上清液循環。混

合組織均質物上清液並於乾冰上冷凍，然後保存於-8(TC 下直至實施藥物分析。爲了計算之目的，假設此方法之萃 取效率為100%。 藥物分析 利用基於蛋白沉澱且隨後進行HPLC/MS/MS分析之經驗 證之分析方法，分析血漿樣品及眼組織萃取物中之帕唑帕 尼。使用50 μΐ之血漿及眼組織萃取物等分試樣，.帕唑帕尼 之疋里下限為.血漿為1 ng/ml及眼組織萃取物為 ng/ml。疋量上限為.血漿為5〇〇 ng/mj及眼組織萃取物為 5000 ng/ml。於此等研究中用於獲得及量化數據之電腦系 統包括Analyst 1.4.1版本及SMS2000 1.6版本。將血激樣品 濃度表示為ng帕唑帕尼/ml。組織濃度係藉由下式確定： 帕唑帕尼ng/g組織=([上清液中之濃度ng/ml*萃取物體積 ml]/組織重g)。 統計學分析 若非另外說明，否則將結果表示為平均值±標準偏差 (SD)。利用ANOVA進行統計學比較及於p< 〇5下判定顯著 性差異以剔除虛無假設。 結果 153116.doc •21 - 201201808 帕哇帕尼抑制CNV大鼠模型之CNV發展 為了判定帕唑帕尼是否於活體内影響實驗性CNV，藉由 使布魯克氏膜經由雷射導致破裂，於大鼠眼睛内誘發新血 管生成。此方法已普遍應用於新血管AMD之實驗研究中， 且容許預測對人類之藥物效能。特定言之，VEGF表現量 上調且VEGFR及PDGFR酪胺酸激酶受體之作用得以準確預 測，此係因為此類拮抗劑抑制CNV ^參見Yi X, 〇gata N， Komada M, Yamamoto C, Takahashi K, Omori K, Uyama M ’ Vascular endothelial growth factor expression in choroidal neovascularization in rats. Graefe's Arch Clin Exp Ophthalmol. 1997;235 ： 313-319 ； Shen WY, Yu MJ, Barry CJ, Constable IJ, Rakoczy PE. Expression of cell adhesion molecules and vascular endothelial growth factor in experimental choroidal neovascularisation in the rat. Br J Ophthalmol. 1998;82 ： 1063-1071 ； Kwak N, Okamoto N,

Wood JM, Campochiaro PA. VEGF is major stimulator in model of choroidal neovascularization. Invest Ophthalmol

Vis Sci. 2000;41 : 3158-3164。 於雷射後7至14天内，當以螢光血管攝影術追蹤血管滲 漏面積時，局部投藥之帕唑帕尼顯著減緩CNV病灶發展。 相反，於藉由載劑治療之對照組眼睛中，CNV病灶渗漏持 續發展（圖1A ’ pc.OOi)。於圖丨八中，圖顯示於雷射創 傷後7天時之光凝法損傷部位之螢光滲漏4雷射後叫 時相較於載劑對照組之眼睛（由圖d及c表示），局部投藥 153116.doc -22- 201201808 之帕唑帕尼會顯著減緩降低CNV滲漏發展（由圖b表示）。雷 射創傷點係以箭頭表示》 具體言之，當藉由該藥物治療眼睛時，螢光滲漏面積無 顯著性變化至111.4lhl.34%(平均值±SD，將第7天時之基 線病灶尺寸標準化為100%)，而對照組眼睛增加至 208.5±51.51%(圖1B)。此等結果說明，每日兩次局部投藥 之帕唑帕尼抑制病灶進一步發展，抑制度>89%。值得注 意的是，於此等研究中，將帕唑帕尼局部施用至另一（對 側）目艮睛，亦顯著抑制病灶尺寸擴大。因此，於另一眼經 帕唑帕尼治療之帶病灶眼中，CNV僅稍增至為基線的 115.24±16.72%(圖 1B)。 此外，於雷射處理後第14天時，利用蘇木精 (hematoxylin)及曙紅染色或進行免疫組織化學法，分析視 網膜組織切片。圖2A及B顯示，於接受載劑治療之眼睛中 之CNV病灶（圖2A，圖b及c)大於彼等接受局部投與帕唑帕 尼治療者。圖2A顯示，自未經雷射處理之眼睛（a)、及自 經雷射處理之眼睛（b-d)(經局部投藥之帕唾帕尼治療⑻或 經局部投藥之載劑治療（d :對照組））獲得脈絡膜/視網膜切 片。注意到當對側眼睛接受治療時，CNV病灶減少（c)。藉 由測定病灶中之CNV膜之相對厚度評估CNV程度，其展現 顯著性差異。接受載劑治療之眼睛中之病灶面積為 27,397.3±7,386·4 μηι2 ’而接受帕料尼治療之眼睛之病灶 面積共計為7,760.3±2,312_() μ"。因此，發現病灶尺寸相 較於載劑對照組具有71.7%之顯著抑制（ρ<⑻1)(圖2Β)。新 153116.doc •23- 201201808 血管生成面積係藉由定量性數位影像分析測^。於另一研 九中，另一眼經局部投與帕唑帕尼治療之大鼠之經雷射處 理之眼睛的病灶尺寸展現〜34%之抑制度（圖2C)。組織學數 據與藉由螢光血管攝影術獲得之數據共同顯示藥物於另一 眼睛中產生之全身性作肖，其說明可獲得類似全身性作用 之低口服劑量應可有效治療CNV，及因此可有效治療諸如 上述之眼部血管生成或血管滲漏疾病。 局。卩投藥之帕唑帕尼使得可於挪威棕色大鼠之血漿中測 得藥物。在投與一滴3〇 μ丨滴眼劑後，於6〇分鐘後測得帕唑 帕尼之濃度峰值，其係於3〇〇 ng/ml範圍内（圖3Α)。血漿濃 度於24小時後下降至不可檢測水準。僅將一滴3〇 μΐ滴眼劑 經局。卩技與至左眼（〇S) ’於24小時内投與3次’使得可於 經處理之眼杯組織（鞏膜、脈絡膜及視網膜）中測得平均5〇3 ng/g帕唑帕尼。有趣的是，亦於另一（〇D)眼中發現可檢得 濃度之帕唑帕尼（平均值=丨59 ng/g)，雖然為統計學較低量 (圖 3B) » 測定帕唑帕尼之眼部組織分佈及全身濃度 對荷蘭黑帶兔（Dutch belted (pigmented) rabbit)之眼睛局 部投藥之帕°坐帕尼，隨後評估放射性物質的眼組織分佈及 全身濃度。依0.3 mg/次投藥（30 μΟί/次投藥）之標的劑量將 一滴60-μ1投與至右眼。自各8個採樣時間點直至24小時， 自一動物收集獲自經投藥及未經投藥（左）眼睛之血液及眼 組織’並分析總放射性。 可於最早採樣時間（0.25小時）至最後採樣時間（24小時） 153116.doc -24· 201201808 測定血液及血漿樣品中之放射性物 最高澶声負晨度其中血液中之 戒间，辰度（11.3 ng eq/g)係於〗小時 最其、Ήηο。 哮觀察到’且血漿中之 最…辰度（12.8 ng eq/g)係於2小時時觀察到。 脈絡膜濃度於2小時時達到4〇 6 運』ϋ·6 ng eq/g，且於8小時時 至1到峰值（60.1 ng eq/g)。類似 視凋膜很度於2小時時 =一，且於4小時時達到峰值⑽ngeq/g)e 此不，於投與滴眼劑之 可達到最高濃产一丰以卜I 於⑽標的組織内 取门/晨度+以上。基於針對小分子於 MU崎匕等式，據估計，於最佳情形下，帕唾帕尼 :於2小時内以局部藥物擴散方式最多擴散至… 运小於兔眼尺寸（約1至2 em)。若益入 '、 擴散盔、去艋猱Μ Λ …王身刀佈，則局部藥物 解釋㈣帕尼到達視網膜及脈絡膜之速度。 =此研究中獲得的結果證明全身遞送路經對於視網膜及 脈絡膜組織濃度產生重要作用 ― 斤再顯不，於未經治 =之眼睛中所觀察到之任何效果主要來自低漠度之經全身 遞送之藥物。 雖然本發明之具體實施例已於本文中詳細說明並描述， 然而本發明不僅限於此4上實施方式心本發明之實例 之方式提供，且不應視為構成對本發明之任何限制。修改 方案係為熟習本技藝者利瞭，且錢離本發㈣神之所 有修改方案意欲包含於隨附之專财請範圍之範圍内。 【圖式簡單說明】 圖1Α顯示於實驗性CNV中’具有由㈣帕尼) 誘發之CNV滲漏變化之代表性螢光素眼部攝影； 153H6.doc -25- 201201808 圖1B顯示接受載劑及帕唑帕尼治療之螢光素滲漏區域之 分析。變化係利用數位圖像分析確定（*** p< 〇〇5); 圖2A顯示於雷射後第14天時，具代表性之包含新血管病 灶（已圈出）之經蘇木精及曙紅染色之區域之光學顯微鏡 圖； 圖2B顯示經載劑或帕㈣尼治療之眼睛的平均病灶面積 ("*ρ<·005，n=6); 圖2C顯示當另-眼經載劑或帕。坐帕尼治療時之眼睛的平 均病灶面積； 圖3 A顯示於棕色挪威大鼠（Β_η n。而丫之單欠 投藥血漿動力學（每點係獲自n=3隻大鼠之複合數據）；及 顯π於24小時内第三次投與滴眼劑後$小時時之血 =眼杯⑽/脈絡膜/視網膜）中之帕㈣尼含量。此經 療之左眼’〇D·未經治療之另—眼(每點獲 ： 153116.doc •26-

Claims (1)

1. 201201808 七、申請專利範園： 1. 一種以式⑴化合物、或其醫筚上 樂上可接受鹽或其水合物

   於製造用於為眼部血管生成岑士技，么 故 m切漏疾病病患治療該 4病症之口服藥劑上之用途，1 '、T 5亥樂劑包含1至50 mg 該式⑴化合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 2. 如凊求項1之用途，苴中該藥齋丨白人，广， 八Υ 樂劑包含1至20 mg該式（I)化 合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 3. 如請求項1之用途，其中該藥劑包含5至15 mg該式⑴化 合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 4. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該化合物係式（1,)化 合物、或其水合物：

   HC1 (Γ)。 5.如請求項1至3中任一項之用途’其中該化合物係式（I") 化合物： 153116.doc 201201808

   HC1.H20 (I，，、。 6. 一種以式（I)化合物或其醫藥 请樂上可接受鹽或其水合物 HSC - N(

   W於為新Μ生成年齡相關黃斑變性病患治療該 病症之〇服藥劑上之用途，其中該藥劑包含mg該 式⑴化合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 7’如請求項6之用途’其中該藥劑包含1至20叫該式⑴化 合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 8. 如請求項6之用途，其中該藥劑包含5至15叫該式⑴化 合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 9. 如請求項6至8中任-項之用途，其中該新血管生成年齡 相關黃斑變性係濕性年齡相關黃斑變性。 如青长項6至8中任一項之用途’其中該新血管生成年齡 相關黃斑變性係乾性年齡相關黃斑變性，且該病患之特 徵在於存在發展成濕性年齡相關黃斑變性之較高風險。 U.如請求項6至8令任一項之用途，其中該化合物係式（Ι·)化 合物或其水合物·· 153116.doc 201201808

   複合物：

   HC1H20 13 種以式（II)化合物或其醫藥上可接受 (I") 鹽

   於製造用於為眼部血管生成或血管滲漏疾病病患治療該 病症之口服藥劑上之用途，其中該藥劑包含該 式（Π)化合物或其醫藥上可接受鹽。 14. 如請求項13之用途，其中該藥劑包含叫該式⑼ 化合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 15. 如請求項13之用途’其中該藥劑包含5至15 mg該式(II) 化合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 16. —種以式（II)化合物或其醫藥上可接受鹽： 153116.doc I201201808 H3C η3〇~\^Γ^ϊ …

   (Π) 於製造用於為新血管形成年齡相關黃斑變性病患治療該 病症之口服藥劑上之用途，其中該藥劑包含1至50 mg式 (H)化合物或其醫藥上可接受鹽。 17·如明求項16之用途，其中該藥劑包含1至20 mg該式（II) 化合物或其醫藥上可接受鹽或其水合物。 18. 如請求項16之用途，該藥劑包含5至15 mg該如式（II)之 化合物或其醫藥上可接受鹽。 19. 如。月求項16至18中任—項之用途，其中該新血管生成年 齡相關黃斑變性係濕性年齡相關黃斑變性。 20. 如請求項16至18中任一項之用途，其中該新血管生成年 齡相關黃斑變性係乾性年齡相關黃斑變性，且該病患之 特徵在於存在發展成濕性年齡相關黃斑變性之較高風 險。 .-㈣適宜抑制劑或其醫藥上可接受鹽於製造用於為眼 部血管生成或血管滲漏病患治療該病症之口服藥劑上之 用途，其中該藥劑包含mg該適宜抑制劑或其醫藥 上可接受鹽。 索拉菲尼曱苯 22_如請求項21之用途’其中該適宜抑制劑係 磺酸鹽（sorafenib tosylate)。 尼替尼蘋果 23.如請求項21之用途，其中該適宜抑制劑係蘇 153116.doc 201201808 酸鹽（sunitinib malate)。 24.如請求項21至23中任一項之用途，其中該藥劑包含1至 20 mg該適宜抑制劑或其醫藥上可接受鹽。 25.如請求項21至23中任一項之用途，其中該藥劑包含5至 15 mg該適宜抑制劑或其醫藥上可接受鹽。 20.如請求項21至23中任一項之用途，其中該眼部血管生成 或血管滲漏疾病係新血管生成年齡相關黃斑變性。 27_如請求項26之用途，其中該新血管生成年齡相關黃斑變 性係濕性年齡相關黃斑變性。 28. 如請求項26之用途’其中該新*管生成年齡相關黃斑變 性係乾性年齡相關黃斑變性，且該病患之特徵在於存在 發展成濕性年齡相關黃斑變性之較高風險。 、 153116.doc