TW201138851A - Peptide protection against ultraviolet light toxicity - Google Patents

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201138851 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】

於一種使用本發明肽降低在暴露誘變物（例如1；¥光）後之細 本發明係關於一 言之，本發明係關 性之短肽。例如， 生之皮膚中毒性。 及因此活化某些細 胞/組織毒性程度之方法。 本申請案主張2009年11月19曰申請之美國專利臨時申請 案第61/262,790號之優先權，該案之全文係以引用的方式 併入本文中。 【先前技術】 當將角質細胞暴露至諸如紫外線（UV)照射之DNA損傷元 素（誘變物）時，會使細胞週期檢查點活化，從而阻礙細胞 分裂。在誘變物誘發損傷之後’細胞週期會停滯在G2階 段’讓DNA有時間修復。然而，若檢查點過程被中斷或抑 制，則發生癌症（例如DNA突變）的頻率會降低《此點已經 在活體外及活體内透過在UV照射之前及之後將咖啡因施 用至皮膚上而證實（Lu等人，2008，Cancer Res. 68:2523-2529; Heffernan^ A > 2009, J. Invest. Dermatol. 129:1805-1815)。此現象係根據咖啡因可抑制有絲分裂檢查點途 徑，從而使DNA受損之細胞進行有絲分裂，及隨著其DNA 不能滿足複製過程而經由細胞凋亡死亡。儘管有DNA突變/ 152195.doc 201138851 堂損’但仍可進行細胞週期進程’及藉此出現之凋亡細胞 死亡可防止經誘變物誘發之突變在受影響之組織中固著。 此製程藉以減少原本可能發展成癌前期病變（諸如癌）之遺 傳上改變的細胞數量。 在皮膚護理治療及美容皮膚護理應用中使用此試劑，已 經提升咖啡因減少uv光對皮膚之癌變影響的能力。然 而，由於缺乏特異性，在皮膚護理產品中使用咖啡因遭到 質疑。除了其有益作用外，咖啡因會誘發皮膚中的非所欲 作用（例如血管舒張、乾燥等）。基於此等缺點，已尋求其 他方法用於預防誘變物在皮膚及相關組織中之損傷作用。 使用短肽發展皮膚護理產品之用途已由於其以天然胺基 酸為主之結構、特異性、無毒性及無副作用，而非常受歡 迎。此等品質可使肽作為發展用於補充皮膚護理組合物之 新穎化學預防試劑之適宜起始點。本文中闡述一種具有化 學預防及化學治療特性且可施用於保護皮膚不受太陽光之 損傷作用之肽。 【發明内容】 本發明之一實施例係關於一種減少細胞週期檢查點激酶 的活性之方法。該方法包括使檢查點激酶暴露至長度為五 至九個胺基酸殘基且包括SEQ ID ΝΟ:13之肽。在此實施例 及其他實施例中之細胞週期檢查點激酶可呈活化狀態。可 應用於文令所述之此方法及其他方法中的肽之實例包括 SEQ ID NO:2、3、5、6、8、或 1〇或由其組成。 可用於文中所述方法的肽之其他實例係彼等具有與SEq 152195.doc 201138851 ID ΝΟ:13序列直接鄰接的組胺酸殘基者。其他肽可在其叛 基末端醯胺化。该自篮胺化狀之特定實例係彼等包括沾卩id N〇:2、3、5、6、8、或1〇或由其組成者。 本揭示方法之檢查點激酶標的可包括檢查點激酶 (Chkl)或檢查點激酶-2(Chk2)或由其組成。該檢查點激酶 可因細胞中之DNA受損而活化。該DNA受損可藉由誘變劑 引起。誘變劑之實例係彼等能夠在皮膚中誘發DnA受損者 (例如紫外線照射）^所揭示之方法亦可包括使cdc25(細胞 分裂週期25)磷酸酶暴露至文中所揭示之肽；cdc25c係可作 為本發明標的之cdc25c之實例。 本發明之另一實施例係關於一種處理哺乳動物的皮膚之 方法。該方法包括藉由使檢查點激酶暴露至所揭示的肽， 而減少皮膚中細胞週期檢查點激酶（例如Chk2)之活性。本 發明之另一實施例係關於一種藉由將所揭示之狀施用至皮 膚而處理哺乳動物皮膚之方法。 本發明之另一實施例係關於一種長度為五至九個胺基酸 殘基及包括SEQ ID NO:13之肽。該肽之實例包括SEQ ID N〇:2、3' 5、0、8、或10或由其組成。本發明之肽之其他 實例具有與SEQ ID NO·· 13序列直接鄰接之組胺酸殘基。其 他的肽係在其羧基末端醯胺化。該醯胺化肽之特定實例係 彼等包括SEQ ID NO:2、3、5、6、8、或10或由其組成 者。 本發明之另一實施例係關於一種包括本發明的肽及醫藥 上可接受載劑之組合物。該組合物可呈噴霧劑、乳液、液 152195.doc 201138851 體、洗液、乳膏、漿糊、軟膏、粉末或泡沫之形式。 【實施方式】 本發明肽（例如彼等於表1及圖1中列出者）可包括L-或D-胺基酸對映異構體，其包含具有一種對應異構形式或兩種 形式的組合之殘基。該等肽可如以下非限制性實例中所述 而進一步強化或修飾，只要未改變其一級胺基酸序列即 可；在此方法中，該等肽係由某些胺基酸序列組成，但可 包括某些修飾。該等肽之羧基末端可為酸性（-COOH)或經 醯胺化（例如-CONH2、-CONHR、或-CONR2)。相較於其游 離酸形式而言，羧基末端之醯胺化作用可使本發明肽較不 易受蛋白酶降解之影響及可增加其溶解性，藉此增強治療 效力。該等肽亦可經脂質化，從而可增強皮膚滲透。連接 各肽之胺基酸的一或多個分子鍵可為非肽鍵。該非肽鍵包 括（但不限於）醯亞胺基、酯肼、胺基脲及偶氮鍵。 表1

SEQ ID NO: 序列 1 DYHTLYQTHL 2 YHSLYQSHL 3 YHSIYQSHI 4 DFHSLFQSH 5 YHSLYESK 6 FHSIYQSH 7 FKSLYQS 8 HSLYQSH 9 HSLYQS 10 SLYQS 13 S-L/I-Y-Q/E-S 14 SIYQS 15 SLYES 16 SIYES 可對本發明肽進行各種修飾，只要保持其一級胺基酸序 152195.doc 201138851 列即可。某些修飾可用於增加肽之效力，然而其他修飾可 有利於肽處理。通常可經過修飾之肽官能基包括羥基、胺 基、胍鹽、羧基及醯胺基團。通常，此等基團之非限制性 反應包括以下反應：羥基經烷基齒化物之乙醯基化作用； 羧基之酯化作用、醯胺化作用或氫化作用（即還原成醇）； 胺基（例如肽之一級胺基或賴胺酸殘基之胺基）之脫醯胺作 用、醯化作用、烷基化作用、芳基化作用。例如，SEQ出 >1〇:1-10及/或13可在羧基末端（_(：〇]^2)醮胺化。 儘管如上所論述，但本發明肽可在一或多個胺基酸殘基 位置上具有某些胺基酸變化。例如，一個、兩個或三個殘 基可經轉變成保留性殘基或殘基群。胺基酸保留策略係技 藝中眾所周知；例如，吾人皆知賴胺酸、苯丙胺酸、異白 胺酸、蘇胺酸及榖胺酸鹽可在不大幅影響原來的肽之結構 及功能下分別替代組胺酸、酪胺酸、白胺酸、絲胺酸及榖 胺醯胺。視需要’本發明肽可比SEQ ID NO : 1 -1 〇或1 3之 任一者減少一個胺基酸；或減少兩個胺基酸（鄰接或非鄰 接）。本發明肽之變體形式應與SEQ ID NO : 1-10或13之任 一者有至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、 或99%相同性。本發明肽之變體形式應具有SEq id NO : 1-10或13之任一者所具有的至少10%、2〇。/。、30%、40%、 50%、60%、70%、75%、80%、90%、或 95%之活性或功 能。 SEQ ID NO : 1-1〇及13所具有的活性或功能之實例係化 學預防癌症（例如癌瘤、肉瘤、黑色素瘤、皮膚癌）；阻止 152195.doc 201138851 暴露至誘變/致癌劑（例如uv照射）之組織（例如皮膚）發展出 癌變則期細胞群體生長；在細胞（例如皮膚細胞、角質細 胞、黑素細胞或成纖母細胞）暴露至誘變/致癌劑（例如UV 照射）之後阻斷細胞週期阻滯及DNA修復；阻斷Cdc25c藉 由DNA受損修復途徑之活化’如：經由檢查點激酶（例如 檢查點激酶-2[Chk2])之活化；阻斷或減少與暴露至誘變物/ 致癌原（例如UV照射）柏關或由其引起的毒性（諸如皮膚 中）；阻斷或減少誘變物/致癌原對健康皮膚特徵（例如色 調、彈性、含水性、著色、緊實度、光滑度）之負面作 用。化學預防（化學防護）係指使用諸如本發明肽之試劑來 減少出現瘤形成（例如癌症、癌症前期病變、良性過度生 長病變）之風險或延遲其發展或復發。因誘變試劑或任何 其他試劑（例如化療、刺激）引起的皮膚秦性可呈紅斑、充 頭症（掉髮）、光敏感（對太陽光的敏感度增加）、回憶反應 (例如過去曾經照射處理之位點上化療之作用）、痤瘡樣（粉 刺狀）爆發、皮膚壞死、嗜中性外分泌汗腺炎、外分泌腺 鱗狀化生、色素沉著過度、指曱變化、黏膜炎、真皮硬化 反應、血管損傷、乾燥症、水腫（腫脹）、蓴麻疹、皮膚老 化（例如變薄、彈性降低、起皺紋、下垂、色素沉著增加 [斑點、曰光性著色斑、點狀色素減少症]、毛細血管擴 張、血管瘤、紫癜、日光性黑頭粉刺、膠樣粟粒疹、脂漏 性角化症）、起皰、皮炎、贅生/真菌生長節結（凸出的結實 腫塊）、滲出性噬斑、贅生物或具有膿皰之壞死性潰瘍、 傷疤、脂膜炎、潰瘍、疼痛及/或燒傷之形式表現。「減 152l95.doi 201138851 少」、「抑制」、「阻斷」或「防止」在文中係指相較於不施 用本發明肽或包含該肽的組合物的情況而言，本發明肽可 使該病症之發生率、嚴重度、量值、致病率或相關的症狀 減少至少约 7.5%、10%、12.5%、15%、17.5%、20%、 22.50/〇、25%、27.5%、30%、3 5%、40%、45%、50%、 55%、60%、65%、70°/。、75¾、80%、90。/。、或 1〇〇%。 雖然本發明肽可在不添加其他序列的情況下產生，但可 選擇將本發明序列併入更長的序列中。例如，本發明肽可 具有添加至其N-或C-末端或此二者上之額外的胺基酸殘 基其貫例可為標抗原決定部位，諸如Flag，其通常係 用於追蹤蛋白質；例如，技藝中已知之標記抗原決定部位 包括myc、His、HA(血球凝聚素）。因此，本發明涵蓋由本 發明肽組成之肽或包括本發明肽之肽，雖然本發明肽可於 更大序列内（即包含於其中）提供，但本發明肽與其他序列 之組合不應構成由動物細胞（例如人類細胞）自然表現之任 何蛋白質或肽序列。若文中用來闡述由序列「組成」之肽 (諸如肽）之語言雖然限定於某些鄰接胺基酸序列，但仍可 包括（亦即共軛之）非胺基酸部份基團或其他肽/蛋白質（此 等狀/蛋白質會經由非肽鍵與本發明肽共軛）。 本發明之肽可為5、6、7、8、或9個鄰接胺基酸長度及 包括SEQ ID NO:13 (S-L/I-Y-Q/E-S)或由其組成。該等肽之 非限制性實例係SEQ ID NO : 2、3及5-10。該等肽之其他 非限制性實例係包括3£()10>}〇:13的8£()1〇>^〇:2、3及 5-8之片斷。依據5£〇1〇>10:13，本發明之其他肽可為5、 152195.doc -10· 201138851 6、7、8、或9個鄰接胺基酸長度及包括託卩1]：>1^〇:14(8_ I-Y-Q-S)、SEQ ID NO:15 (S-L-Y-E-S)、或 SEQ ID N0.16 (S-I-Y-E-S)或由其組成。本發明之其他肽可包括SEq id NO:13 ’其中組胺酸殘基係與SEq m NO:13序列直接鄰 接；該肽之實例係SEQ ID NO : 2、3、5、6、8及9。包含 SEQ ID NO: 13之短肽係在結構上完全相關，因為白胺酸與 異白胺酸之間（即SEQ ID NO:13之位置2)及縠胺醯胺與榖 胺酸鹽之間（即SEQ ID NO:13之位置4)的結構/化學相類 似。除白胺酸及異白胺酸外之其他胺基酸可佔在SEq ID NO:13之位置2 ,諸如丙胺酸、網胺酸、甘胺酸、或甲硫胺 酸。除縠胺醯胺及榖胺酸鹽外之其他胺基酸可佔在SEq ID NO:13之位置4，諸如天冬醯胺、天冬胺酸鹽、精胺酸、或 賴胺酸。 或者，本發明之肽可為5、6、7、8、或9個鄰接胺基酸 長度及包括SEQ ID NO:10 (S-L-Y-Q-S)或由其組成。該等 肽之非限制性實例係SEQ ID NO : 2及7-9。該等肽之其他 非限制性實例係包括SEQIDNO:10之SEQIDNO:2、7及8 之片斷。本發明之其他肽可包括SEQ ID NO: 10，其中組胺 酸殘基（H)係與SEQ ID NO:1〇序列直接鄰接；該等肽之實 例係 SEQ ID NO : 2、8及 9。 本發明肽之所有實施例皆呈「單離」狀態。例如，「單 離」肽係已經完全或部份純化者。在某些情況下，單離肽 係較大組合物、緩衝劑系統或試劑混合物之一部份。在其 他情況下，單離肽可經純化至均質性。一種組合物所包括 152195.doc 201138851 之肽可占其中亦包含之所有其他大分子物質之至少約50、 80、90、或95%(基於莫耳計）。本發明肽可包括組分之異 種組合。本發明肽之混合物亦可用於操作本發明。 本發明肽可與可溶或不可溶載劑分子共軛，以依需要修 釋其溶解特性及增加肽在目標組織中之局部濃度。可溶性 載劑分子之實例包括聚乙二醇（PEG)與聚乙烯基吡咯啶酮 之聚合物；不可溶聚合物之實例包括矽酸鹽、聚苯乙烯及 纖維素β肽亦可囊封成微球，以增強其在治療應用期間及 之後的穩定性；通常，使用聚酯及PEG微球體囊封並穩定 肽。 可根據欲囊封之肽組合物之親水性或疏水性性質使用不 同方法製備用於囊封肽之微球體。該等方法的方案實例可 發現於 Wang等人（j. Control. Release 17:23, 1991)及美國專 利第4,324,683號，該二者之全文係以引用的方式併入本文 中。可進行活體外肽釋放研究，以測定肽併入微球體後的 相對可用性。微球體（2〇〇 mg)懸浮於2.5 mL磷酸鹽緩衝鹽 水（PBS’ pH 7.2)中及於環境培養箱振盪器（G-24, New

Brunswick Scientific Co” Edison，N.J·)中在 37t 及 100 rpm 攪動。在特定取樣時間（最初4天内每天及此後每隔一天）， 緩衝溶液完全移除’並用新鮮pBS取代。使用Bradf〇rd* 法或通常用於蛋白質分析之其他適宜定量分析法測量pBS 之狀含量。 以下程序及參數係提供用於指引目的且係熟悉此項技術 者習知。所有揭示之肽可於Advanced ChemTech Apex 396 152195.doc -12- 201138851

Multiple Peptide Synthesizer上使用標準Fmoc (9_第基甲氧 基羰基）固相化學法合成。Apex 396裝備有4〇_孔反應槽用 於同時生產0.15 mmol規模多至40種肽。該等肽可使用標 準胺基酸製成醯胺化或游離酸序列。樹脂先用N,N_二甲基 甲醯胺（DMF)洗及預膨脹。Rink醯胺樹脂之膨脹時間係一 小時。使用於DMF中之25%。底唆移除Fmoc保護基歷時25分 鐘’之後該"底咬自該樹脂完全洗掉.。為控制消旋製程， Fmoc胺基酸單體於丨_羥基-苯并三唑（H〇Bt)4丨羥基_7_氮 雜-苯并三唑（HOAt)於0.5 M DMF中之等莫耳溶液中預活 化。醯胺偶合法係使用〇_(7_氮雜苯并三唑-丨-基）-^，^ 四曱基脲鑌六氟磷酸鹽（HATU)PyBop®或2-(1Η-苯并三唑_ 1-基-)-l，l，3,3-四甲基脲鏽六氟磷酸鹽（HBTU)作為活化劑 及2.5-5.0倍莫耳過量的胺基酸在鹼性條件下使用位阻鹼 (一異丙基乙基胺）進行。偶合時間係1至1.5小時，繼而進 行洗及再偶合以完成雙重或三重偶合’然後脫除保護及繼 續加長肽鏈。偶合效率係使用標準Kaiser測試監測。一旦 在樹脂上完成肽合成，則如上述移除最終Fmoc基團，該序 列保留呈游離鹼形式。 使用95 %三氟醋酸（TFA)及水且添加適宜的清除劑來裂 解狀與樹脂的對酸不穩定之連接基。在裂解進行約3 〇分鐘 至一小時之後’將所釋放之肽立即自裂解槽移除，及轉移 至s式管中’以用於在減壓下移除TFA。該等肽隨後即準備 用於純化，及經由高效液相層析（HPLC)使用逆向C18管柱 及質譜法分析。使用LC/MS/MS系統（ABI API2000)確認一 152195.doc • 13- 201138851 級序列及完成製備型純化。 上述一般製程中，該肽可使用熟悉此項技術者所知曉之 任何方法產生，諸如彼等於Merrifield(J Am Chem S〇c. 85:2149，1963) ; Carpino 等人（J Org Chem. 51:3732, 1986); Merrifield 等人（Anal Chem. 38:1905，1966);或 Kent寻人[High Yield Chemical Synthesis Of Biologically

Active Peptides On An Automated Peptide Synthesizer Of Novel Design, in： Peptides 1984 (Ragnarsson, ed.)

Almqvist and Wiksell Int·，Stockholm (Sweden)，pp· 185_ 188]中揭示者，所有該等案件之全文係以引用的方式併入 本文中。該等肽可藉由能夠將胺基酸依序添加至加長肽鍵 之機器產生。然而，該等肽亦可使用標準溶液相方法製 造，其較適合大規模生產。 本發明之其他實施例係關於使用上述肽之方法，諸如用 於調配物中或作為治療劑。此等方法可包括使用單肽或多 肤組合（即混合物）。 在某些情況下，可將本發明組合物安置於存在於皮膚 上、皮膚中或皮膚下之裝置中。該等裝置包括經皮貼劑、 植入物及注入物，其釋放該等物質之方式可經由被動或主 動釋放機制接觸皮膚或毛囊。該物質可於適宜的媒劑中及 在有效濃度下，（例如）依定期間隔（諸如一天一次或兩次） 施加至表皮。一或兩次注射至皮膚可提供用於將本發明肽 投與至皮膚或任何其他組織之另一路徑。 在本文所述方法中用於遞送肽的組合物可呈喷霧劑、乳 I52195.doc ΊΑ 201138851 液、液體、洗液、乳膏、漿糊、軟膏、粉末、泡沫或其他 醫藥上可接受調配物之形式。此外，該等肽可使用較不複 雜的調配物遞送，諸如去離子/蒸餾水、PBS或標準醫用生 理食鹽溶液。一般而言，醫藥上可接受調配物可包括適用 於人類皮膚或黏膜表面上之任何載劑。該等醫藥上可接受 載劑可包括乙醇、二甲亞砜、甘油、矽石、氧化鋁、澱粉 及等效載劑及稀釋劑。該調配物可視需要具有美容需求， 及/或包含其他製劑，諸如類視黃素或能夠作為本發明肽 治療作用之佐劑的其他肽。亦可添加抗生素至該調配物 中，以抵擋感染，藉此可出現最佳癒合過程。組合物中該 肽之濃度可為約0.1 Hg/mL至約50 pg/mL或約〇」叫劬[至 約20 pg/rnL ;然而，所用之最終濃度可根據目標組織之性 質、本發明肽之生物活性及為了加強組合物吸收所採用之 任何佐劑或技術’而可能超出此等範㈣化1等測定係 一般技術者熟知。例如 約 0.1、1、2、5、1 〇、 ，用於操作本發明之肽的濃度可為 15 、 20 、 25 、 50 、 75 、 1〇〇 、 2〇〇 、 5〇〇、或 1〇〇〇 pg/mL。 可將本發明肽及相關的組合物投與人類及動物，1包括 所有哺乳動物(例如豬、牛、馬、錦羊、山羊、小鼠、大 鼠、貓、狗、雪紹、靈長類亦可與典型及/或試驗材料 組合施用’諸如組織移植物、組織培養產品、氧氣及敷料 劑。-般而言’該組合物可經局部、經口、經皮、全身投 與’或藉由熟悉此項技術者已知用於遞送本發明肽至目標 組織之其他方法投與。例如’纟且合物亦可依活體外或離體 152195.doc -15· 201138851 方式施用至在培養基中生長之細胞或患者移植物。 由於其尺寸小，因此希望該肽本身即具有能夠通過皮膚 之通透性；然而，某些技術可用於增強此運動。例如，可 添加親脂性（非極性）基團至該肽中，或可將該肽呈親脂性 賦形劑遞送至皮膚中，以加強肽接近角質層，移位至較下 面之表皮層。可認為以此方式修飾之親脂性具有前藥作 用。滲透增強劑（諸如已知溶劑及界面活性劑）可用於賦形 劑中，以促進肽吸收。預期可用於增強肽接近目標組織/ 傷口之特殊技術包括注射療程、離子滲入法、電泳法及超 音波。離子滲入裝置係由浸入電解質溶液中之兩個電極組 成，且置於皮膚上。當對電極施加電流時，則會在角質層 上產生電場以遞送肽。電穿孔法包括施加高電壓電脈衝， 以提高通過脂質雙層之滲透性。此點與離子滲入法之不同 處在於施加電流之持續時間及強度（離子滲入法使用相當 恒定電壓電場）。據信電穿孔法之高電壓電脈衝可引起脂 質薄層膜中可逆性形成親水性孔，其可高度增強滲透性。 超音波法係施加大於16 1^112的頻率之音波至皮膚從而引 起聲波所通過之組織的壓縮及膨脹^所造成之壓力變化可 引起能夠增強肽滲透性之許多過程（例如空洞形成、混 合、溫度增加）。 本發明可包括-或多種蛋白酶抑制劑。可針對目標蛋白 酶特定選擇能使所選擇生物活性肽降解之蛋白酶抑制劑； 該選擇可基於該生物活性狀之長度及/或序列而決定。然 而蛋白酶抑制劑不需要依任何特定方式選擇，例如，包 152195.doc -16· 201138851 含-或兩種抑制劑之蛋白酶抑制劑混合劑可用於本發明 二：本發明之某些實施例而言，該蛋白酶抑制劑並不能 特疋抑制病毒。以下類型的蛋白酶抑制劑可併入本發明 絲胺酸蛋白酶抑制劑、半耽胺酸蛋白酶抑制劑、天冬 胺酸鹽蛋白酶抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑 抑 制劑及蘇胺酸蛋白酶抑制劑。 酶抑 蛋白酶抑制㈣技藝中眾所周知。可併人本發明中之蛋 白酶抑制劑之非限制性實例包括乙醯基_胃蛋白酶抑制 劑、AEBSF(4_[2_胺基乙基]苯續醯氣）鹽酸鹽、侃寧· 乙醯基-Leu-Leu_Met)、ALLN(N_ 乙醯基 _Leu Leu Nie_ CHO)、抑胺肽酶素（amastatin)(鏈黴菌（strept〇myces sp.))、ε-胺基-正己酸、胺基肽酶N抑制劑、α〗·抗胰凝乳蛋 白酶、抗痛素（鹽酸鹽或二鹽酸鹽）、α2_抗血Μ、抗凝血 素πι、α1-抗胰蛋白酵素、p-APMSF鹽酸鹽、抑肽酶 (apminin)(例如來自牛肺）、ATBI⑴個殘基肽）、节脒鹽酸 鹽、苯丁抑制素（bestatin)、苯丁抑制素甲基醋、辦蛋白酶 抑制素（Calpastatin)、鈣蛋白酶抑制劑（caipeptin)、羧肽酶 抑制劑、半胱天冬胺酸酶抑制劑、組織蛋白酶 (Cathepsin)B抑制劑„、組織蛋白酶G抑制劑〗、組織蛋白酶 抑制劑II、組織蛋白酶抑制劑ΠΙ、組織蛋白酶抑制劑1、組 織蛋白酶κ抑制劑ί、組織蛋白酶κ抑制劑π、組織蛋白酶κ 抑制劑III、組織蛋白酶L抑制劑ί、組織蛋白酶L抑制劑 II、組織蛋白酶L抑制劑IV、組織蛋白酶L抑制劑V、組織 蛋白酶L抑制劑VI、組織蛋白酶s抑制劑、組織蛋白酶/枯 152195.doc -17· 201138851 草桿菌蛋白酶抑制劑、抑糜酶素（chymostatin)、胰凝乳蛋 白酶抑制劑I、胱抑素（Cystatin)、丹醯基（dansyl)_giu_ gly-arg氣甲基酮二鹽酸鹽、3,4_二氯異香豆素、二異丙基 氟磷酸鹽、二肽基肽酶II抑制劑、二肽基肽酶〖乂抑制劑卜 二肽基肽酶IV抑制劑π、E-64蛋白酶抑制劑、大腸桿菌素 (ecotin)、EDTA二鈉鹽二水合物、EDTA四鈉鹽、egta、 彈性蛋白酶抑制劑Ϊ、彈性蛋白酶抑制劑„、彈性蛋白酶抑 制劑III、彈性蛋白酶抑制劑（eUstatinal)、6_曱脎基·萘 基-4-胍基苯甲酸鹽二甲烷磺酸鹽、ghi_gly_arg_i甲基 酮、2-胍基乙基巯基琥珀酸、十六烷基磺醯氟、&碘乙醯 胺、激肽原、leuhistin、亮抑酶肽半硫酸鹽、巨球蛋 白、DL-2-疏基甲基_3_胍基乙基硫丙酸、胃蛋白酶抑制劑 Α、苯基曱基磺醯氟、磷酸阿米酮二鈉鹽' ppack η三氟醋 酸鹽、PPack二鹽酸鹽、脯胺醯基肽鏈内切酶抑制劑π、 Na-甲苯磺醯基-lys氣甲基酮鹽酸鹽、Na_曱笨磺醯基 氣曱基酮、三肽基肽酶II抑制劑、胰蛋白酶抑制劑（來自玉 米或大豆）、D-val-phe-lys氣甲基酮二鹽酸鹽、丨，3-二_(N- 羧基苯甲醯基-L-亮胺醯基-L-亮胺醯基）胺基丙酮、鄰啡 啉、烏索酸（例如迷迭香（Rosemary)提取物）、凝血酸 (Uanexamic acid)(4_[胺基甲基]環己烷_丨_羧酸）（臨床上在美 國以Cyklokapron售出及在亞洲以Transamin售出）、Fm〇c_

Lys(B〇C)、Fm〇C-Arg(Pmc)、苯甲醯基 _Arg•硝基替苯胺、 本甲醯基-Arg-萘基酿胺、及α_2_巨球蛋白。 用於本發明中之蛋白酶抑制劑可為肽或蛋白質，諸如 152195.doc •18- 201138851 酶忒抑制劑之非限制性實例係絲胺酸蛋白酶抑制劑，其 包括α_1_抗騰蛋白酶、補體1-抑制劑、抗凝金酶、α-1·抗 胰凝乳蛋白酶、血纖維蛋白溶酶原活化劑抑制劑丨、及神經 絲胺酸蛋白酶抑制劑。 通常可併入皮膚護理製劑中之組分係技藝中眾所周知。 除生物活性肽組分外，本發明可包含其他活性劑，諸如菸 驗醢胺植燒二醇、法尼醇（farnesol)、甜沒藥萜醇 (bisabolol)及水楊酸。希望某些另外的活性劑可與生物活 性肽組分出現增效作用，或增強該調配物之保存期限。 因為s玄組合物欲與動物或人類皮膚接觸，因此應選擇適 用於施用至角質組織（即穩定、低毒性、低過敏）之其他組 分。CTFA Cosmetic Ingredient Handbook，Second Edition (1992)闡述適用於本發明組合物之常用於皮膚護理工業中 之許多種非限制性之美容及醫藥成份，該案之全文係以引 用的方式併入本文中。此等成份之實例包括：研磨劑、吸 收劑、美觀組分，諸如香料、顏料、上色/著色劑、香精 油、皮膚感官劑、收斂劑等（例如丁香油、薄荷醇、樟 腦、桉樹油、丁香油酚、乳酸薄荷酯、北美金縷梅餾出 物）、抗粉刺劑（例如間苯二酚、硫磺、水楊酸、苯甲醯基 過氧化物、紅黴素（erythromycin)、鋅）、抗結塊劑、消泡 劑、抗微生物劑（例如丁基胺基甲酸硬丙基酯）、抗氧化 劑、結合劑、生物添加劑、緩衝劑、膨脹劑、螯合劑、化 學添加劑、變性劑、表面止痛劑、聚合物（例如二十碳烯 與乙烯基°比咯啶酮之共聚物）、不透明劑、pH調節劑、推 I52195.doc •19· 201138851 進劑、還原劑、螯合劑、皮膚漂白及增亮劑(例如氫醌、 麴酸、抗壞血酸[維生素c]、抗壞血基磷酸鎂、抗壞血基 葡萄糖胺）、皮膚調理劑（例如保濕劑，其包括混雜性及閉 塞14保濕劑）、皮膚舒緩及/或癒合劑（例如泛醯醇及衍生物 [例如乙基泛醯醇]、蘆薈、泛酸及其衍生物、尿囊素、沒 藥醇、甘草酸二鉀）、增稠劑、微粒材料、結構劑及維生 素。許多此等製劑闡述於美國專利第6,492,326號中，該案 之全文已以引用的方式併入本文中’尤其有關不同成份之 描述。 本發明之組合物可包含微粒材料，諸如金屬氧化物。此 等微粒可經塗佈或未經塗佈、帶電價或未帶電價。用於製 備本發明微粒材料之非限制性實例包括氣氧化鉍、氧化 鐵β母、經硫酸鋇及Ti〇2處理之雲母、石夕石、尼龍、聚 乙烯、滑石、苯乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯酸共聚物、絹 雲母、氧化鋁、矽酮樹脂、硫酸鋇、碳酸鈣、醋酸纖維 素、二氧化欽、聚甲基丙婦酸甲酿及其混合物。無機微粒 材料，諸如Ti〇2、Zn0(氧化辞）或Zr〇2係自許多商品來源 獲得。微粒材料可依〇.〇1重量％至2重量％，或〇 〇5重量％ 至1.5重量％ ’或〇」重量％至1重量所有測量值皆為近似 值）的濃度存在於組合物中。 本發明組合物可包含選自保濕劑、滿潤劑或皮膚調理劑 之調理劑。可使用各種此等材料及其含量分別占該組合物 之約〇·〇!重量。/。至20重量％，或約〇1重量％至1〇重量％，或 、·勺〇.5重里％至7重量。/〇(所有測量值皆為近似值）。此等材料 152195.doc •20- 201138851 包括（但不限於）胍；尿素；乙醇酸及乙醇酸鹽（例如銨及四 級烷基銨鹽）；水楊酸；乳酸及乳酸鹽（例如銨及四級烷基 銨鹽）；呈其各種形式之蘆薈（例如蘆薈凝膠）；多羥基醇， 諸如山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤糠醇、甘油、己三 醇、丁三醇、丙二醇、丁二醇及己二醇；聚乙二醇；糖類 (例如蜜二糖）及澱粉；糖及澱粉衍生物（例如烷基化葡萄 糖、果糖、葡糖胺）；玻尿酸；乳醯胺單乙醇胺；乙醢胺 單乙醇胺；泛醯醇；尿囊素；礦脂；及其混合物。 本發明之組合物可包含結構劑，其可用於製備水包油乳 液。在不受任何理論的限制下，據信該結構劑有助於對組 合物提供流變特性，可促進該組合物之穩定性。例如，結 構劑有助於形成液體結晶凝膠網絡結構。該結構劑亦具有 乳化劑或界面活性劑之功能。本發明包含占該組合物重量 約0.1重量％至20重量％，約(^丨重量^^至…重量❶/^或約^乃 重置。/。至9重量％之一或多種結構劑（所有測量值皆為近似 值卜 可併入本發明中之結構劑係選自硬脂酸、棕櫊酸、硬脂 基醇、鯨蠟基醇、山窬基醇、平均具有約丨至約5個環氧乙 烷單元之硬脂基醇之聚乙二醇醚、平均具有約丨至約5個環 氧乙燒單元之錄織基醇之聚乙二醇峻、及其混合物。可用 於本發明中之其他結構劑係選自硬脂基醇、鯨蠟基醇、山 薔基醇、平均具有約2個環氧乙烷單元之硬脂基醇之聚乙 二醇醚（steareth-2)、平均具有約2個環氡乙烷單元之鯨蠟 基醇之聚乙二醇醚、及其混合物。 152195.doc -21- 201138851 本發明肽之其他特徵、生產模式及用途係闡述於（例如） 美國專利第6,974,799號及第5,492,894號中。該等專利之全 文係以引用的方式併入本文中。 方法 本發明亦係關於一種藉由投與文中所述之狀來抑制或預 防哺乳動物組織中贅生性生長之方法。雖然無任何特定作 用機制，但所揭示肽之抗贅生性活性係與抑制細胞週期檢 查點激酶（諸如檢查點激酶-2(Chk2))活性之能力相關。抑 制Chk蛋白質（其係在細胞受到DNA損傷之後活化）可防止 細胞進入細胞週期阻滯期，以免在此期間發生DNA修復。 雖然DNA修復可將序列還原成其初始狀態（即未突變），作 通常不足以造成大的遺傳性刺激。此後，修復過程時常可 能促成致癌過程（例如致癌基因之活化、腫瘤抑制物或看 家基因之失活）之遺傳變化恒定（永恆不變）^基於通過抑制 Chk蛋白質活性而阻斷或減少細胞週期阻滯期，讓細胞可 繼續進行有絲分裂階段，其間由於分裂過程中某些^^^八損 傷事件（例如DNA雙鏈斷裂）的瓦解作用，會導致細胞;周 亡。DNA損傷亦可稱為遺傳毒性應激壓力。因此，細胞〉周 亡可清除運送有害遺傳變化之細胞；若細胞週期阻滞可進 行完全活化，藉此讓DNA「修復」，則該等細胞有潛力存 活及充當贅生性發展之前驅物。在此方式中，由於DNa損 傷劑之作用’本發明可用於減少組織中突變之積聚。 藉由本發明肽阻止、抑制或治療之贅生性生長可為良 性 '癌變前期或癌變（即惡性）。基於此原因，可認為所揭 152l95.doc •22· 201138851 示肽具有化學預防、化學防護、抗癌、抗贅生、抗致癌物 或化療活性。就預防或抑制組織中贅生性生長或病變而 言，可將一或多種肽投與原本沒有表現明顯（肉眼可見）瘤 形成跡象之組織中。例如，該等肽可在誘變傷害出現之前 (例如在傷害前1、2、〗、^^^^^“、 72、96、或120小時内)(例如在日照之前局部施加至皮 膚），或在受到誘變傷害之後不久（例如在傷害後】、2、3 ' 4、8、12、16、20、24、48、72、96、或12〇小時内）（例如 在曰照之後局部施加至皮膚）投與至建康組織。在皮膚護 理方面，可將該等肽作為防曬劑或曬後製劑施用^該等狀 亦可用於預防或抑制組織中突變增加，無論該組織是否完 全健康或包含少量良性及/或癌變前期病變。該用途可預 防或抑制良性或癌症前期病變轉變成癌症/惡性病變（即預 防或抑制腫瘤發生）’及可因此治療良性或癌變前期病 變。在另-態樣中’本發明可用於預防或抑制皮膚或其他 組織之增生。 在出現時即被本發明預防或抑制，或治療之良性及/或 癌變前期贅生性皮膚病變之實例係皮膚纖維瘤、表皮囊 腫、血管瘤、葡萄酒色痣、淋巴管瘤、化膿性肉芽腫、蜘 蛛痣（蛛狀痣）、瘢痕瘤、角化棘皮瘤、脂肪瘤、疲、、發育 不良癔、角化皮脂漏、皮垂、皮脂腺增生、牛皮癬及光化 性角化病（日光性角化病）。在出現時即被本發明預防及抑 制或/口療之皮膚中的惡性皮膚病變/腫瘤(即皮膚癌)之實例 係基底細胞癌(例如結節型基底細胞癌、囊性基底細胞 152195.doc -23- 201138851 癌、薇痕性基底細胞癌、浸潤性基底細胞癌、小結節型基 底細胞癌、表皮基底細胞癌、有色基底細胞癌、侵蝕性潰 瘍[Jacobi ulcer]、Pinkus之纖維上皮瘤、息肉狀基底細胞 癌、孔狀基底細胞癌、異常基底細胞癌）、鱗狀細胞癌（例 如腺樣鱗狀細胞癌[假腺管型鱗狀細胞癌]、透明細胞鱗狀 細胞癌、紡錘細胞鱗狀細胞癌、印指環狀細胞鱗狀細胞 癌 '基底細胞樣鱗狀細胞癌、疣狀癌、角化棘皮瘤）、黑 色素瘤（例如惡性小痣黑色素瘤、表皮淺散佈型黑色素 瘤、肢端黑色素瘤、黏膜黑色素瘤、結節型黑色素瘤、息 肉狀黑色素瘤、促纖維素增生性黑色素瘤、無色素性黑色 素瘤、軟組織性黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤）、隆突型皮 膚纖維肉瘤、梅克爾（Merkel)細胞癌、卡波西氏（Kaposi's) 肉瘤、角化棘皮瘤、紡錘細胞腫瘤、皮脂腺癌、微囊性附 屬器癌、非典型纖維黃色瘤、肌肉瘤及血管肉瘤。 因此’本發明預防、抑制或治療皮膚中贅生物之發展或 進展’其中該受影響細胞（即產生贅生物之細胞類型）係上 皮細胞、間葉細胞、角質細胞、成纖維細胞、黑素細胞、 皮膚幹細胞或皮膚祖細胞。本發明之目標皮膚組織係表 皮’其包括基底層、棘層、顆粒層、透明層及角質層；真 皮’其包括乳突層及網狀層；及皮下組織，其包括脂肪組 織、結締組織、神經組織及血管。前面提到的所有組織、 層及細胞類型皆為本發明之目標。 在出現時即被本發明預防或抑制，或治療之良性及/或 癌變前期贅生性病變或生長分佈之其他實例係增生、發育 152195.doc -24· 201138851 不良及組織變形。藉由本發明所預防、抑制或治療之癌症 性贅生性病變之其他實例係肺癌、骨癌、胰腺癌、胃癌、 頭或頸癌、子宮癌、印巢癌'婦科癌、直腸癌、胃癌、結 腸癌、乳癌、子宮癌、輸印管癌、子宮内膜癌、子宮頸 癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病淋巴瘤（H〇dgkin,s Disease)、食道癌、小腸癌、結腸癌、内分泌系統癌、甲 狀腺癌、副曱狀腺癌 '腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、 陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白金病、淋巴細胞性淋巴 瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎孟癌、中框神 經系統（CNS)贅生物、初級⑽淋巴瘤、脊椎轴腫瘤、腦 癌、垂體腺瘤、血管瘤、神經膠質瘤或胚細胞瘤。 本發明可作為皮膚之美容品或應用於皮膚之美容治療。 因此，本發明具有保持正常、健康皮膚特徵之作用，諸如 色調、彈性、含水性、著色、穩定及光滑。所有此等品質 會隨皮膚中受損細胞量的增加而下降，該等受損細胞係源 自皮膚中誘變物之作用及/或突變的累積。因此，本發明 具有預防、抑制或治療皮膚老化的作用；其中一項實例為 光老化，其中皮膚老化係部份受到购、射暴露的程度2 影響。例如，本發明所指夕出土 所才曰之先老化之作用係起皺紋、色斑 及/或色素沉著過度、座膚相拉斗、+廿 -皮膚粗糙或皮革狀、下垂/鬆垂、變 頁、乾燥及各種贅生物。 文 本發明之標的皮膚及皮膚之相_驗織。 之相關黏膜組織係組織結構類似皮膚之任何組織，其包人 上皮細胞，及係與皮膚亩垃、击3 庋層直接連接。該等組織之實例係口 152195.doc -25· 201138851 腔、鼻咽、耳、肛門及泌尿生殖器表面，以及眼睛之眼瞼 結膜。本發明之其他標的組織係彼等衍生自外胚層、中胚 層及内胚層者，或包括上皮細胞、間葉細胞（例如成纖維 細胞）、肌肉細胞、或神經細胞（例如神經元）^本發明之其 他^的器官、器g系統及組織係（例如）循環系統（例如心 臟、血液、血管）、消化系統（例如唾腺、食道、胃、肝、 膽囊、胰腺、小腸及大腸、直腸）、内分泌系統（例如下視 丘腦、腦垂體、松果體、甲狀腺、副甲狀腺、腎上腺）、 外皮系統（例如皮膚、毛髮、指曱）、淋巴系統（例如淋巴結 及淋巴管）、免疫系統（例如扁桃體、腺樣物、胸腺、脾）、 肌肉系統（例如心肌、平滑肌、骨骼肌）、神經系統（例如 腦、脊髓、周邊神經、神經）、生殖系統（例如卵巢、輸卵 管、子宮、陰道、乳腺、睪丸、輸精管、貯精囊、前列 腺、陰莖）、呼吸系統（例如咽、喉、氣管、支氣管、肺、 橫膈膜）、骨胳系統（例如骨、軟骨、韌帶、腱）、及排泄系 統（例如腎、輸尿管、膀胱、尿道）。 如用於實施本發明’所揭示之肽可用於減少因暴露於内 生或異位（環境）來源的誘變物所產生的突變累積於組織中 而限制贅瘤形成（例如增生）之發生《該誘變物暴露時間可 為急性或慢性。一般而言，本發明適合阻斷由於暴露異位 誘變物/致癌原而產生之突變累積。文中所論述之異位誘 變物（亦即源自動物外部周圍環境者）之實例係紫外線（uv) 照射（即UV光）(UV-A、UV-B、UV-C)、電離照射（例如X-射 線、γ射線、α粒子）、鹼基類似物（例如5-溴尿嘧啶）、脫胺 152195.doc •26· 201138851 劑（例如亞硝酸[亞硝酸鹽])、硝基胺、嵌入劑（例如溴化乙 錠（ethidium bromide)、原黃素（profiavine)、道諾黴素 (daUnomycin)、小紅莓（d〇x〇rubicin)[亞德里亞黴素 (adriamycin)] ' 沙利竇邁（thalidomide)、放線菌素 D(dactinomycin)、黃麴毒素（afiatoxin)、σ丫咬）、院基化試 劑（例如乙基亞硝基脲）、溴、熱、疊氮化鈉、補骨脂素、 苯、苯并芘、砷、石棉、鎘、鉻、環氧乙烷、鎳、氡、氯 乙烯、鉛及病毒。内生誘變物之實例係5_甲基胞嘧啶、反 應性氧物質（例如一氧化氮、過氧化物）及轉位子。本發明 亦關於阻斷因施加某些刺激物而引起的突變積聚於組織 中。例如，刺激物可刺激慢性發炎病症，其可導致不同組 織中形成癌。 在本發明實施中其他化學預防及/或抗癌劑可與所揭示 之肽一起投藥。該投藥可包括所揭示肽及另一化學預防劑 一起在同一組合物中，或涉及該肽及該劑在治療/預防療 程期間不同時間點施用之方案。使用所揭示之肽及另一化 學預防劑二者可產生增效化學預防活性。可與本發明聯合 使用之化學預防劑及/或抗癌劑之實例係植物化學物質、 咖啡因、咖啡酸、染料木黃酮（genistein)、白藜蘆醇 (resveratrol)、二烯丙基硫化物、s•烯丙基半胱胺酸、蒜 素、番茄紅素、辣椒素、薑黃素、6_薑酚、鞣花酸、烏索 酸、水飛萄素、@香腦、兒茶酚、大黃素 '萊菔硫烷 (sulforaphane)、丁香酚、異丁香酚、卜胡蘿蔔素、歐蓮素 (oleandarin)、多酚、吲哚（例如二吲哚基甲烷、吲哚甲 152195.doc -27- 201138851 醇）、異硫氰酸鹽（例如苯乙基異硫氰酸鹽）、非類固醇抗炎 劑（NSAIDS)(例如塞來考昔（celecoxib)、布洛芬 (ibuprofen)、奇諾力（sulindac)、阿司匹林（aspirin))、 PPAR-γ激動劑（例如匹格列酮（piogiitazone)、羅西格列酮 (rosiglitazone))、瑞喹莫德（resiquim〇d)、咪喹莫特 (imiquimod)、類視黃素（例如全反式視黃酸、9-順式·或13-順式-視黃酸、4-羥基視黃醯胺）、貝沙羅汀（bexarotene)、 塔拉羅汀（tararotene)、硒、大豆異黃酮、斯達汀類 (statins)(例如阿托伐斯達汀（atorvastatin))、含硫抗氧化劑 及維生素D類似物（例如維生素D2、維生素D3)。 在癌症細胞中使用某些化療劑或其他製劑（例如γ_輻射） 而造成DNA損傷之一目標係誘導癌症細胞經歷細胞凋亡， 藉此引起腫瘤衰退。然而，因DNA損傷而誘發出之細胞週 期阻滯效應可能減少此所希望之結果。因此，本發明之另 一態樣係與DNA損傷製劑組合使用所揭示之肽，以治療癌 症（例如皮膚癌）或任何其他類型的贅生物》此方法之根據 係如下所論述，所揭示肽敏化DNA損傷細胞造成細胞凋亡 之能力（亦即’刺激細胞使其經歷細胞凋亡，而非使癌症 細胞存活之細胞週期阻滯）。可用於操作本發明之DNA損 傷製劑係（例如）院基化試劑、順始（cisplatin)、破始 (carboplatin)、奥沙利翻(oxaliplatin)、氮芥 (mechlorethamine)、環磷醯胺、苯丁酸氮芥、氮芥 (nitrogen mustard)、氮芥（mechlorethamine)、異環磷醯 胺、美法侖（melphalan)、亞硝基脲、鏈脲黴素 152195.doc -28 - 201138851 (streptozocin)、卡莫司汀（carrnustine)(BCNU)、羅莫司丁 (lomustine)、烷基磺酸酯、白消安（busuifan)、苯達莫司汀 (bendamustine)、三嗪類、達卡巴嗪（dacarbazine)(DTIC)、 替莫唑胺（temozolomide)、次乙亞胺、噻替派（thiotepa)、 六甲嘧胺（altretamine)、六甲基三聚氰胺、抗代謝物、6· 额·基嗓吟、達卡巴嘻（dacarbazine)、氣達拉濱 (fludarabine) 、5-氟尿嘧啶（5_FU)、 卡培他濱 (capecitabine)、甲氨蝶吟（methotrexate)、吉西他濱 (gemcitabine) 阿糖胞苷（cytarabine)、培美曲塞 (pemetrexed)、阿糖胞音（arabin〇sylcytosine)、地西他濱 (decitabine)、抗腫瘤抗生素、蒽環類抗生素、道諾黴素 (daunorubicin) 亞德裡亞黴素（doxorubicin)(例如 Adriamycin®)、表柔比星（epirubicin)、伊達比星 (idarubicin)、放射菌素-D、博來黴素（bleomycin)、絲裂黴 素（mitomycin)-C、新製癌菌素（neocarzjn〇statin)、米托策 醌（mitoxantrone)、拓撲異構酶抑制劑、拓撲異構酶！抑制 劑、拓撲替康（topotecan)、伊立替康（irinotecan)、拓撲異 構S# II抑制劑、依託泊；y： (et〇p〇side)、替尼泊苦 (teniposide)、植物鹼、紫杉烷、紫杉醇、紫杉萜、埃坡黴 素（epothilone)、伊沙匹隆（ixabepii〇ne)、長春花生物驗、 長春驗、長春新鹼、長春瑞濱（vin〇relbine)、雌莫司；丁 (estramustine)、照射、γ射線、χ_射線及uv照射。可將其 中一或多種製劑與所揭示之肽組合施用至病變，或者，可 使用一種方案，其中該肽及DNA損傷製劑係在治療療程之 152195.doc -29· 201138851 不同時間點施加。 本發明之一態樣係抑制檢查點激酶（Chk)活性》例如， 本發明係關於抑制哺乳動物細胞（諸如皮膚細胞）中已被 DNA損傷活化之Chk2。該DNA損傷及/或Chk活性可（例如） 在細胞中經由暴露至uv照射或存在於環境中之任何其他 誘變物誘導。經UV光誘導之DNA損傷一般包括環丁烷嘧 啶二聚物及6-4嘧啶·嘧啶酮產物。在不受任何特定理論或 機制的限制下，Chk係受到所揭示肽阻斷或向下調節/向下 調控其抑制激酶活性趨向cdc25(細胞分裂週期25)磷酸酶 (諸如cdc25c)之能力所抑制。在正常的細胞條件（很少或無 DNA損傷）下’ Cdc25c引發級聯信號，從而導致有絲分 裂’但在DNA損傷條件下，經活化之chk會抑制cdc25c。 因此’阻斷Chk活性會增加cdC25c發出有絲分裂信號的機 率’甚至在通常（即當Chk未受抑制時）會向下調節cdc25c之 DNA損傷條件下。假定DNA-損傷與正常有絲分裂過程不 相容，則可進入有絲分裂之DNA-受損細胞隨後係經由細 胞凋亡而清除。因此’本發明之一態樣係關於經由細胞凋 亡誘導清除DNA-受損細胞。本發明之另一態樣係關於抑 制通常因應DNA-損傷而產生之細胞週期阻滞。 本發明標的之Chk酶實例係Chkl及Chk2，其二者皆係技 藝中已知。真核生物中均保留此等絲胺酸/蘇胺酸激酶之 結構及功能，其在人類中的激酶使人類cdc25c磷酸酶在絲 胺酸-216(或等效絲胺酸殘基，其取決於Chk-目標序列是否 係在cdc25c變體[例如剪接變體]内）上磷酸化。使用本發明 152195.doc •30· 201138851 肽抑制Chkl-及/或Chk2-所介導之cdc25c(例如在絲胺酸-2 16位置或等效絲胺酸殘基上）之磷酸化作用之方法係本發 明之一部份。本發明之目標可為Chk蛋白質，因為其天然 存在於活體細胞中。 經活化之Chk酶（諸如其因應DNA損傷而出現）可藉由上 游因子（例如ATM[經毛細血管擴張共濟失調-突變之蛋白 質]、ATR[ATM-RAD3-相關的蛋白質])，在DNA-損傷-感 測路徑中磷酸化或經由自體磷酸化作用而活化。相較於 Chk之活化形式，Chk之未活化形式具有很少或沒有激酶 活性。例如，活化之Chk酶可使cdc25c構酸化。可活化此 酶之Chk2磷酸化作用位點實例係蘇胺酸-26、絲胺酸-50、 蘇胺酸-68、蘇胺酸-383及/或蘇胺酸-387殘基位置（或其 Chk2變體[例如剪接變體]内之等效位置）。可活化此酶之 Chkl磷酸化作用位點實例係絲胺酸-286、絲胺酸-30 1、絲 胺酸-3 1 7及/或絲胺酸-345殘基位置（或其Chkl變體[例如剪 接變體]内之等效位置）。 經人類中CHEK2基因編碼之Chk2具有如圖3中所示之胺 基酸序列（SEQ ID ΝΟ··17)。人類Chk2在技藝中亦係稱為 「CHK2檢查點同系物（S. pombe)」、CDS1、及 Rad53。 SEQ ID NO: 17僅供參考之目的，因為人類Chk2及其他哺 乳動物Chk2蛋白質序列係已知者。例如，美國國家生物技 術資訊中心（NCBI)網站（或GenBank)揭示寄存編號為 AAH04207、BAB1723 1、NP_009125、NP_001005735、 NP 665861 、 096017 、 AAS58460 、 AAD48504 、 152195.doc -31 - 201138851 AAC83693 、EAW59757 、EAW59756 、EAW59754 、 CAX11959 、CAX11958 、CAX11957 、CAX14028 、 CAX14027 、CAX14026 、CAH73823 、CAH73875 、 AAV41895及BAF83443之人類Chk2胺基酸序列，所有該等 案件之全文係以引用的方式併入本文中。就操作本發明之 目的而言，〇11<:2包括與8丑(）10 1^0:17至少約50%、60%、 70% ' 75% ' 80% ' 85% ' 90% > 91% ' 92% > 93% ' 94% ' 95%、96%、97%、98%、或99%相同的胺基酸序列或由其 組成。 由人類中CHEK1基因編碼之Chkl具有如圖4中所示之胺 基酸序列（SEQ ID ΝΟ.·18) ^人類Chkl在相關技藝中亦稱為 「(：^0檢查點同系物（8.卩〇1!^6)」。5£(^10 1^0:18僅供參 考目的，因為人類Chkl及其他哺乳動物Chkl蛋白質序列 係已知者。例如，NCBI網站（或GenBank)揭示寄存編號為 AAC51736 、AAW02681 、AAH04202 、BAF85238 、 BAA84577 、 CAB70558 、 014757 、 AAM58752 、 AAM78553、CAD10662、AAH17575、AAE84492、 CAZ65679 、AAB88852 、ABM83833 、ABM87141 、 AAE67465 、 AAE67917 、AAX36253 、 BAI45672 、 NP_001107594及NP_001265之人類Chkl胺基酸序列，所有 該等案件之全文係以引用的方式併入本文中。就操作本發 明之目的而言，Chkl包括與SEQ ID NO:18至少約50%、 60% ' 70% ' 75% ' 80% ' 85% ' 90% ' 91% ' 92% ' 93% ' 94%、95%、96%、97°/〇、98%、或99%相同的胺基酸序列 152195.doc •32· 201138851 或由其組成。 cdc25c(細胞分裂週期25C)，係一種酪胺酸磷酸酶，係 由人類中CDC25C基因編碼且具有如圖5中所示之胺基酸序 列（SEQ ID NO:19)。人類cdc25c在相關技藝中亦稱為「M-相誘導物磷酸酶3」及「細胞分裂週期25同系物C(S. pombe)」。SEQ ID NO: 19僅供參考之目的，因為人類 cdc25c及其他哺乳動物cdc25c蛋白質序列係已知者。例 如，NCBI網站（或GenBank)揭示寄存編號為AAR32098、 P30307 、 NP_001781 、 AAX36531 、 EAW62145 、 EAW62149 、AAX29802 、AAX29802 、ABP29523 、 EAW62148 、BAG63273 、AAA75741 、AAE74714 、 AAH19089及AAA35666之人類cdc25c胺基酸序列。就操作 本發明之目的而言，〇化25〇包括與8£(^1〇]^0:19至少約 50% ' 60% ' 70% ' 75% ' 80%、85%、90% ' 91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98。/。、或 99%相同之胺基 酸序列或由其組成。 雖然本發明之一態樣係關於阻斷經活化之Chk2對抗 cdc25c之向下調節的活性，但其同樣地係關於阻斷Chk2對 抗其一或多種其他蛋白質目標之活性。例如，其他Chk2蛋 白質目標係E2F-l、p53、cdc25a、BRCA-l、PML、Che-1、Hdmx、Trf2、FoxMl、pRB 或 mdm2。此外，例如，本 發明係關於阻斷Chkl不僅對抗cdc25c，而且對抗p53、 cdc25a、cdc25b、Rad51、聚-A-結合蛋白質、aurora-B、 卷毛樣激酶-1、wee-1或BLM之向下調節的活性。 152195.doc -33- 201138851 所包括之以下實例係闡述本發明之某些實施例。 實例 進行研究以證實短肽可用於預防或減少皮膚中由於暴露 至誘變物或刺激物而引起之毒性。基於先前已知咖啡因對 DNA損傷修復途徑之抑制作用及此抑制作用在表皮中之抗 癌作用，分析某些相關的肽在類似的抑制DNA損傷修復途 徑上之能力。因此，測試肽阻斷DNA損傷修復途徑之 Chk2(檢查點激酶2)-cdc25c(細胞分裂週期25同系物C蛋白 質）支線之能力。 被DNA損傷感知蛋白質活化之Chk2藉由填酸化作用而誘 導細胞週期阻滯’及藉此抑制cdc25c，其係涉及向上調節 週期素依賴性激酶活性之填酸酶，藉此引起有絲分裂。此 等蛋白質在DNA損傷修復途徑中之相互作用及其與以下所 論述的試劑之相互作用係概述於以下反應圖中： 特定肽 丄 DNA損傷+今chk2—I cdc25c 有絲分裂

T 星形孢菌素 所發展之肽係使用以下方法抑制cdc25c之Chk2失活作 用。所有的肽均使用標準Fmoc化學，於Advanced ChemTech (Louisville, KY) Apex 396 Multiple Peptide Synthesizer上合成。在裂解之後，使用逆相c-l 8管柱，經 由HPLC純化肽’及隨後藉由質譜分析法分析。使用 LC/MS/MS系統（ABI API2000)確認一級序列，及完成製備 性純化。此特定實例中所用的所有肽（SEQ ID NO : 2·6及 152195.doc •34- 201138851 8-10)均已於羧基末端醯胺化（-(：〇1^112)。 SEQ ID NO : 2-6及8-10對於〇心25(：的0^2磷酸化作用之 抑制性活性係根據製造商說明書，使用購自Calbiochem/ EMD Biosciences(San Diego，CA)之 K-LISATM檢查點活性 套組測量。此等測試之經活化人類Chk2酶係獲自Sigma(St. Louis，MO)。一般的激酶抑制劑，星形孢菌素（1 0 μΜ最終 濃度）係用作抑制Chk2活性之正對照組。個別測試之肽 (SEQ ID NO : 2-6，8-10)係與 Chk2，在 50 pg/mL的最終濃 度下培養。簡言之，K-LISATM分析法利用一種能夠使第三 個絲胺酸經Chk2磷酸化（亦可經Chkl蛋白質磷酸化）之生物 素基化肽受質（KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR，SEQID NO:12)。此受質可作為cdc25c之替代物，因為SEQ ID NO:12包含用於經Chk2之絲胺酸磷酸化之目標序歹。 該具有或不具有添加製劑（星形孢菌素或SEQ ID NO : 2-6，8-10中之一）之含Chk2的生物素基化受質肽及樣品係在 ATP的存在下，於經抗生物鏈菌素塗佈之96孔板之孔中培 養。培養可使受質被Chk2磷酸化，及以單一步驟捕捉到受 質。繼培養之後，使用抗磷酸絲胺酸初級抗體、與辣根過 氧物酶（HRP)共軛之二級抗體及用於顯色之TMB(四曱基聯 苯胺）受質（該初級及二級抗體，及TMB係於K-LISATM套組 中提供）檢測磷酸化之受質。藉由添加該套組中所提供之 停止反應液來提高分析敏感度。讀取各孔在雙重波長 450/540 nm處之吸收率，而測定相對Chk2活性。 SEQ ID NO : 2、3、5、6、8及10均可抑制Chk2對抗受 152195.doc •35· 201138851 質肽（圖2)之活性。例如，SEQ ID 磷酸化作 用活性減少約48%，其接近由星形孢菌素表現之抑制活性 (約69%)。SEQ ID NO : 5、6及8具有類似的抑制Chk2之能 力。總體而言，此等數據顯示，某些肽可降低“匕趨向其 受質（即cdc25c)之活性，其進一步顯示，降低細胞週期阻 滯程度之能力可在活體内細胞接觸到DNA-損傷製劑時開 始。 本文所揭示及主張之所有組合物及方法不需過度試驗即 可根據本揭示案進行。雖然本發明之組合物及方法已以某 些實施例之形式闡述，但熟悉此項技術者應明瞭，可在不 偏離本發明之概念、主旨及範疇下對該等組合物及/或方 法及文中所述之步驟或方法步驟中之順序做出改變。更特 疋s之’應瞭解某些試劑化學及生理學上皆相關之試劑可 替代文中所述之試劑，但仍可達到相同或相似的結果。熟 悉此項技術者所明瞭之所有該等類似的替代及改變仍在本 發明之範嘴内。 本申請案所指出之所有專利及公開案均以引用的方式併 入本文中。 【圖式簡單說明】 圖1顯示某些通常彼此結合的本發明肽（SEQ ID NOs:l-10)及SEQ ID NO: 11(人類酪胺酸酶）之胺基酸序列。在某些 肽（SEQ ID NOs:l-7)中，下面劃綫的殘基構成SEQ ID NO: 11之保留性胺基酸取代物。 圖2顯示星形孢菌素或某些本發明肽對檢查點激酶 152195.doc •36· 201138851 2(Chk2)活性之抑制。對照組Chk2活性係用第一個長條表 示。圖中所示肽（SEQ ID NOs:2-6及8-10)係於羧基末端醯 胺化（-CONH2)。 圖3顯示人類(：1^2(8丑〇1〇]^0:17)之胺基酸序列。此序 列係與美國國家生物技術資訊中心（NCBI)網站（或 GenBank)中以寄存編號AAH04207所揭示的相同。 圖4顯示人類Chkl(SEQ ID NO:18)之胺基酸序列。此序 列係與NCBI網站（或GenBank)以寄存編號AAC5 1736所揭 示的相同。 圖5顯示人類cdc25c(SEQ ID NO:19)之胺基酸序列。此 序列係與NCBI網站（或GenBank)以寄存編號AAR32098所 揭示的相同。 152195.doc 37- 201138851 序列表 <110〉 美商赫里克斯生物醫療公司 <120> 抗紫外線毒性之肽保護 <130> 11181.0043.00PC00 <140> 099140066 <141> 2010-11-19 <150> 61/262,790 <151> 2009-11-19 <160> 19 <17〇> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> 智人 <400> 1 Asp Tyr His Thr Leu Tyr Gin Thr 1 5

His Leu 10 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213>智人 <400> 2

Leu

Tyr His Ser Leu Tyr Gin Ser His 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213>智人 <400> 3 lie

Tyr His Ser lie Tyr Gin Ser His 1 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> 智人 <400> 4 152195·序列表.doc 201138851

Asp Phe His Ser Leu Phe Gin Ser His 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213>智人 <400> 5

Tyr Glu Ser Lys 5

Tyr His Ser Leu 1 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213>智人 <400> 6

Phe His Ser lie Tyr Gin Ser His 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213>智人 <400> 7

Phe Lys Ser Leu Tyr Gin Ser 1 5 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> 智人 <400> 8 His Ser Leu Tyr Gin Ser His 1 5 <210> 9 <211> 6 <212> PRT <213> 智人 <400> 9 152195-序列表.doc 201138851

His Ser Leu Tyr Gin Ser 1 5 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 10 Ser Leu Tyr 1 <210> 11 <211> 529 <212> PRT <213> 智人 <400> 11

Met Leu Leu Ala Val Leu Tyr Cys Leu Leu Trp Ser Phe Gin Thr Ser 15 10 15

Ala Gly His Phe Pro Arg Ala Cys Val Ser Ser Lys Asn Leu Met Glu 20 25 30

Lys Glu Cys Cys Pro Pro Trp Ser Gly Asp Arg Ser Pro Cys Gly Gin 35 40 45

Leu Ser Gly Arg Gly Ser Cys Gin Asn lie Leu Leu Ser Asn Ala Pro 50 55 60

Leu Gly Pro Gin Phe Pro Phe Thr Gly Val Asp Asp Arg Glu Ser Trp 65 70 75 80

Pro Ser Val Phe Tyr Asn Arg Thr Cys Gin Cys Ser Gly Asn Phe Met 85 90 95

Gly Phe Asn Cys Gly Asn Cys Lys Phe Gly Phe Trp Gly Pro Asn Cys 100 105 110

Thr Glu Arg Arg Leu Leu Val Arg Arg Asn lie Phe Asp Leu Ser Ala 115 120 125

Pro Glu Lys Asp Lys Phe Phe Ala Tyr Leu Thr Leu Ala Lys His Thr 130 135 140 lie Ser Ser Asp Tyr Val lie Pro lie Gly Thr Tyr Gly Gin Met Lys 145 150 155 160

Asn Gly Ser Thr Pro Met Phe Asn Asp lie Asn lie Tyr Asp Leu Phe 165 170 175 152195-序列表.doc 201138851

Val Trp Met His Tyr Tyr Val Ser Met Asp Ala Leu Leu Gly Gly Tyr 180 185 190

Glu lie Trp Arg Asp lie Asp Phe Ala His Glu Ala Pro Ala Phe Leu 195 200 205

Pro Trp His Arg Leu Phe Leu Leu Arg Trp Glu Gin Glu lie Gin Lys 210 215 220

Leu Thr Gly Asp Glu Asn Phe Thr lie Pro Tyr Trp Asp Trp Arg Asp 225 230 235 240

Ala Glu Lys Cys Asp lie Cys Thr Asp Glu Tyr Met Gly Gly Gin His 245 250 255

Pro Thr Asn Pro Asn Leu Leu Ser Pro Ala Ser Phe Phe Ser Ser Trp 260 265 270

Gin lie Val Cys Ser Arg Leu Glu Glu Tyr Asn Ser His Gin Ser Leu 275 280 285

Cys Asn Gly Thr Pro Glu Gly Pro Leu Arg Arg Asn Pro Gly Asn His 290 295 300

Asp Lys Ser Arg Thr Pro Arg Leu Pro Ser Ser Ala Asp Val Glu Phe 305 310 315 320

Cys Leu Ser Leu Thr Gin Tyr Glu Ser Gly Ser Met Asp Lys Ala Ala 325 330 335

Asn Phe Ser Phe Arg Asn Thr Leu Glu Gly Phe Ala Ser Pro Leu Thr 340 345 350

Gly lie Ala Asp Ala Ser Gin Ser Ser Met His Asn Ala Leu His lie 355 360 365

Tyr Met Asn Gly Thr Met Ser Gin Val Gin Gly Ser Ala Asn Asp Pro 370 375 380 lie Phe Leu Leu His His Ala Phe Val Asp Ser lie Phe Glu Gin Trp 385 390 395 400

Leu Arg Arg His Arg Pro Leu Gin Glu Val Tyr Pro Glu Ala Asn Ala 405 410 415

Pro 工le Gly His Asn Arg Glu Ser Tyr Met Val Pro Phe lie Pro Leu 420 425 430

Tyr Arg Asn Gly Asp Phe Phe lie Ser Ser Lys Asp Leu Gly Tyr Asp 435 440 445

Tyr Ser Tyr Leu Gin Asp Ser Asp Pro Asp Ser Phe Gin Asp Tyr lie 450 455 460 -4- 152195·序列表.doc 201138851

Lys Ser Tyr Leu Glu Gin Ala Ser Arg lie Trp Ser Trp Leu Leu Gly 4 65 470 475 480

Ala Ala Met Val Gly Ala Val Leu Thr Ala Leu Leu Ala Gly Leu Val 485 490 495

Ser Leu Leu Cys Arg His Lys Arg Lys Gin Leu Pro Glu Glu Lys Gin 500 505 510

Pro Leu Leu Met Glu Lys Glu Asp Tyr His Ser Leu Tyr Gin Ser His

Leu 515 520 525 <21〇> <211> <212> <213> 12 23 PRT 人工序列 <220> <223> 激酶受質 <400> 12

Lys Lys Lys Val Ser Arg Ser Gly Leu Tyr Arg Ser Pro Ser Met Pro 15 10 15

Glu Asn Leu Asn Arg Pro Arg 20 <210> <211> <212> <213> 13 5 PRT 智人 <220> <221> <222> <223> SITE (2)(2) Leu 或 lie <220> <221> <222> <223> SITE ⑷‘·（4) Gin 或 Glu <400> 13

Ser Xaa Tyr Xaa Ser 1 5 <210> 14 152195-序列表.doc 201138851 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 14 Ser lie ϊ Tyr Gin Ser 1 5 <210> 15 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 15 Ser Leu ί Tyr Glu Ser 1 5 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 16 Ser lie 丨Tyr Glu Ser 1 5 <210> 17 <211> 543 <212> PRT <213> 智人 <400> 17 Met Ser Arg Glu Ser Asp Val Glu 1 5 Ala Cys Ser Gin Pro His Gly Ser 20 Ser Gin Ser Gin Gly lie Ser Ser 35 40 Ser Ser Gin Ser Ser His Ser Ser 50 55 Thr Val Ser Thr Gin Glu Leu Tyr 65 70 Glu Asp Gin Glu Pro Glu Glu Pro

Ala Gin Gin Ser His Gly Ser Ser 10 15 Val Thr Gin Ser Gin Gly Ser Ser 25 30 Ser Ser Thr Ser Thr Met Pro Asn 45 Ser Gly Thr Leu Ser Ser Leu Glu 60 Ser lie Pro Glu Asp Gin Glu Pro 75 80 Thr Pro Ala Pro Trp Ala Arg Leu 152195·序列表.doc -6- 201138851 85 90 95

Trp Ala Leu Gin Asp Gly Phe Ala Asn Leu Glu Cys Val Asn Asp Asn 100 105 110

Tyr Trp Phe Gly Arg Asp Lys Ser Cys Glu Tyr Cys Phe Asp Glu Pro 115 120 125

Leu Leu Lys Arg Thr Asp Lys Tyr Arg Thr Tyr Ser Lys Lys His Phe 130 135 140

Arg lie Phe Arg Glu Val Gly Pro Lys Asn Ser Tyr lie Ala Tyr lie 145 150 155 160

Glu Asp His Ser Gly Asn Gly Thr Phe Val Asn Thr Glu Leu Val Gly 165 170 175

Lys Gly Lys Arg Arg Pro Leu Asn Asn Asn Ser Glu lie Ala Leu Ser 180 185 190

Leu Ser Arg Asn Lys Val Phe Val Phe Phe Asp Leu Thr Val Asp Asp 195 200 205

Gin Ser Val Tyr Pro Lys Ala Leu Arg Asp Glu Tyr lie Met Ser Lys 210 215 220

Thr Leu Gly Ser Gly Ala Cys Gly Glu Val Lys Leu Ala Phe Glu Arg 225 230 235 240

Lys Thr Cys Lys Lys Val Ala lie Lys lie lie Ser Lys Arg Lys Phe 245 250 255

Ala He Gly Ser Ala Arg Glu Ala Asp Pro Ala Leu Asn Val Glu Thr 260 265 270

Glu lie Glu lie Leu Lys Lys Leu Asn His Pro Cys lie lie Lys lie 275 280 285

Lys Asn Phe Phe Asp Ala Glu Asp Tyr Tyr lie Val Leu Glu Leu Met 290 295 300

Glu Gly Gly Glu Leu Phe Asp Lys Val Val Gly Asn Lys Arg Leu Lys 305 310 315 320

Glu Ala Thr Cys Lys Leu Tyr Phe Tyr Gin Met Leu Leu Ala Val Gin 325 330 335

Tyr Leu His Glu Asn Gly lie lie His Arg Asp Leu Lys Pro Glu Asn 340 345 350

Val Leu Leu Ser Ser Gin Glu Glu Asp Cys Leu He Lys lie Thr Asp 355 360 365

Phe Gly His Ser Lys lie Leu Gly Glu Thr Ser Leu Met Arg Thr Leu 370 375 380 152195·序列表.doc 201138851

Cys Gly Thr Pro Thr Tyr Leu Ala Pro Glu Val Leu Val Ser Val Gly 385 390 395 400

Thr Ala Gly Tyr Asn Arg Ala Val Asp Cys Trp Ser Leu Gly Val lie 405 410 415

Leu Phe lie Cys Leu Ser Gly Tyr Pro Pro Phe Ser Glu His Arg Thr 420 425 430

Gin Val Ser Leu Lys Asp Gin lie Thr Ser Gly Lys Tyr Asn Phe lie 435 440 445

Pro Glu Val Trp Ala Glu Val Ser Glu Lys Ala Leu Asp Leu Val Lys 450 455 460

Lys Leu Leu Val Val Asp Pro Lys Ala Arg Phe Thr Thr Glu Glu Ala 465 470 475 480

Leu Arg His Pro Trp Leu Gin Asp Glu Asp Met Lys Arg Lys Phe Gin 485 490 495

Asp Leu Leu Ser Glu Glu Asn Glu Ser Thr Ala Leu Pro Gin Val Leu 500 505 510

Ala Gin Pro Ser Thr Ser Arg Lys Arg Pro Arg Glu Gly Glu Ala Glu 515 520 525

Gly Ala Glu Thr Thr Lys Arg Pro Ala Val Cys Ala Ala Val Leu 530 535 540 <210> 18 <211> 476 <212> PRT <213>智人 <400〉 18

Met Ala Val Pro Phe Val Glu Asp Trp Asp Leu Val Gin Thr Leu Gly 15 10 15

Glu Gly Ala Tyr Gly Glu Val Gin Leu Ala Val Asn Arg Val Thr Glu 20 25 30

Glu Ala Val Ala Val Lys lie Val Asp Met Lys Arg Ala Val Asp Cys 35 40 45

Pro Glu Asn lie Lys Lys Glu lie Cys lie Asn Lys Met Leu Asn His 50 55 60

Glu Asn Val Val Lys Phe Tyr Gly His Arg Arg Glu Gly Asn lie Gin 65 70 75 80

Tyr Leu Phe Leu Glu Tyr Cys Ser Gly Gly Glu Leu Phe Asp Arg lie 85 90 95 152195-序列表.doc 201138851

Glu Pro Asp lie Gly Met Pro Glu Pro Asp Ala Gin Arg Phe Phe His 100 105 110

Gin Leu Met Ala Gly Val Val Tyr Leu His Gly He Gly He Thr His 115 120 125

Arg Asp lie Lys Pro Glu Asn Leu Leu Leu Asp Glu Arg Asp Asn Leu 130 135 140

Lys lie Ser Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Phe Arg Tyr Asn Asn Arg 145 150 155 160

Glu Arg Leu Leu Asn Lys Met Cys Gly Thr Leu Pro Tyr Val Ala Pro 165 170 175

Glu Leu Leu Lys Arg Arg Glu Phe His Ala Glu Pro Val Asp Val Trp 180 185 190

Ser Cys Gly lie Val Leu Thr Ala Met Leu Ala Gly Glu Leu Pro Trp 195 200 205

Asp Gin Pro Ser Asp Ser Cys Gin Glu Tyr Ser Asp Trp Lys Glu Lys 210 215 220

Lys Thr Tyr Leu Asn Pro Trp Lys Lys lie Asp Ser Ala Pro Leu Ala 225 230 235 240

Leu Leu His Lys lie Leu Val Glu Asn Pro Ser Ala Arg lie Thr lie 245 250 255

Pro Asp lie Lys Lys Asp Arg Trp Tyr Asn Lys Pro Leu Lys Lys Gly 260 265 270

Ala Lys Arg Pro Arg Val Thr Ser Gly Gly Val Ser Glu Ser Pro Ser 275 280 285

Gly Phe Ser Lys His lie Gin Ser Asn Leu Asp Phe Ser Pro Val Asn 290 295 300

Ser Ala Ser Ser Glu Glu Asn Val Lys Tyr Ser Ser Ser Gin Pro Glu 305 310 315 320

Pro Arg Thr Gly Leu Ser Leu Trp Asp Thr Ser Pro Ser Tyr lie Asp 325 330 335

Lys Leu Val Gin Gly lie Ser Phe Ser Gin Pro Thr Cys Pro Asp His 340 345 350

Met Leu Leu Asn Ser Gin Leu Leu Gly Thr Pro Gly Ser Ser Gin Asn 355 360 365

Pro Trp Gin Arg Leu Val Lys Arg Met Thr Arg Phe Phe Thr Lys Leu 370 375 380 152195·序列表.doc 201138851

Asp Ala Asp Lys Ser Tyr Gin Cys Leu Lys Glu Thr Cys Glu Lys Leu 385 390 395 400

Gly Tyr Gin Trp Lys Lys Ser Cys Met Asn Gin Val Thr 工le Ser Thr 405 410 415

Thr Asp Arg Arg Asn Asn Lys Leu lie Phe Lys Val Asn Leu Leu Glu 420 425 430

Met Asp Asp Lys lie Leu Val Asp Phe Arg Leu Ser Lys Gly Asp Gly 435 440 445

Leu Glu Phe Lys Arg His Phe Leu Lys lie Lys Gly Lys Leu lie Asp 450 455 460 工le Val Ser Ser Gin Lys Val Trp Leu Pro Ala Thr 465 470 475 <210> 19 <211> 473 <212> PRT <213>智人 <400> 19

Met Ser Thr Glu Leu Phe Ser Ser Thr Arg Glu Glu Gly Ser Ser Gly 15 10 15

Ser Gly Pro Ser Phe Arg Ser Asn Gin Arg Lys Met Leu Asn Leu Leu 20 25 30

Leu Glu Arg Asp Thr Ser Phe Thr Val Cys Pro Asp Val Pro Arg Thr 35 40 45

Pro Val Gly Lys Phe Leu Gly Asp Ser Ala Asn Leu Ser lie Leu Ser 50 55 60

Gly Gly Thr Pro Lys Arg Cys Leu Asp Leu Ser Asn Leu Ser Ser Gly 65 70 75 80

Glu lie Thr Ala Thr Gin Leu Thr Thr Ser Ala Asp Leu Asp Glu Thr 85 90 95

Gly His Leu Asp Ser Ser Gly Leu Gin Glu Val His Leu Ala Gly Met 100 105 110

Asn His Asp Gin His Leu Met Lys Cys Ser Pro Ala Gin Leu Leu Cys 115 120 125

Ser Thr Pro Asn Gly Leu Asp Arg Gly His Arg Lys Arg Asp Ala Met 130 135 140

Cys Ser Ser Ser Ala Asn Lys Glu Asn Asp Asn Gly Asn Leu Val Asp 145 150 155 160 10- 152195-序列表.doc 201138851

Ser Glu Met Lys Tyr Leu 165 Gly Ser Pro lie Thr Thr Val Pro Lys Leu 170 175 Asp Lys Asn Pro Asn Leu 180 Gly Glu Asp Gin Ala Glu Glu lie Ser Asp 185 190 Glu Leu Met Glu Phe Ser 195 Leu Lys Asp Gin Glu Ala Lys Val Ser Arg 200 205 Ser Gly Leu Tyr Arg Ser 210 Pro Ser Met Pro Glu Asn Leu Asn Arg Pro 215 220 Arg Leu Lys Gin Val Glu 225 230 Lys Phe Lys Asp Asn Thr lie Pro Asp Lys 235 240 Val Lys Lys Lys Tyr Phe 245 Ser Gly Gin Gly Lys Leu Arg Lys Gly Leu 250 255 Cys Leu Lys Lys Thr Val 260 Ser Leu Cys Asp lie Thr lie Thr Gin Met 265 270 Leu Glu Glu Asp Ser Asn 275 Gin Gly His Leu lie Gly Asp Phe Ser Lys 280 285

Val Cys Ala Leu Pro Thr Val Ser Gly Lys His Gin Asp Leu Lys Tyr 290 295 300 Val Asn Pro Glu Thr Val 305 310 Ala Ala Leu Leu Ser Gly Lys Phe Gin Gly 315 320 Leu lie Glu Lys Phe Tyr 325 Val lie Asp Cys Arg Tyr Pro Tyr Glu Tyr 330 335 Leu Gly Gly His lie Gin 340 Gly Ala Leu Asn Leu Tyr Ser Gin Glu Glu 345 350 Leu Phe Asn Phe Phe Leu 355 Lys Lys Pro lie Val Pro Leu Asp Thr Gin 360 365 Lys Arg lie lie lie Val 370 Phe His Cys Glu Phe Ser Ser Glu Arg Gly 375 380 Pro Arg Met Cys Arg Cys 385 390 Leu Arg Glu Glu Asp Arg Ser Leu Asn Gin 395 · 400 Tyr Pro Ala Leu Tyr Tyr 405 Pro Glu Leu Tyr lie Leu Lys Gly Gly Tyr 410 415 Arg Asp Phe Phe Pro Glu 420 Tyr Met Glu Leu Cys Glu Pro Gin Ser Tyr 425 430

Cys Pro Met His His Gin Asp His Lys Thr Glu Leu Leu Arg Cys Arg 435 440 445 11 152195·序列表.doc 201138851

Ser Ala 4 65

Gin Ser Lys Val Gin Glu Gly Glu Arg Gin Leu Arg Glu Gin lie 450 455 460

Leu Leu Val Lys Asp Met Ser Pro 470 •12- 152195-序列表-doc

Claims (1)

1. 201138851 七、申請專利範圍： 1 · 一種降低活化細胞週期檢查點激酶活性之方法，其中該 方法包含使該檢查點激酶暴露於肽，其中該肽係五至九 個胺基酸殘基長度且包含SEQ ID NO:13。 2.如請求項1之方法，其中該肽包含犯卩id NO:10。 ' 3·如請求項1之方法，其中該肽係SEQ ID ΝΟ:10。 4*如請求項1之方法，其中該肽係SEQ ID ΝΟ:2、3、5、 6、或 8。 5. 如請求項1之方法，其中組胺酸殘基與SEq id NO: 13序 列直接鄰接。 6. 如請求項1之方法，其中該肽在羧基端醯胺化。 7·如請求項1之方法，其中該檢查點激酶係檢查點激酶_ 2(Chk2)。 8·如請求項1之方法，其中該檢查點激酶係由於紫外線照 射引起DNA受損而活化。 9·如請求項1之方法’其中該檢查點激酶存在於人類皮膚 中。 1 〇 · —種治療哺乳動物皮膚之方法’其中該方法包含將肽施 用於皮膚，其中該肽係五至九個胺基酸殘基長度且包含 SEQ ID n〇:13。 11· 一種狀’其中該肽係五至九個胺基酸殘基長度且包含 SEQ ID n〇:13。 12·如請求項η之肽，其中該肽包含犯口 ID n〇:10。 13.如請求項π之肽，其中該肽係SEQ ID N〇:1〇。 152195.doc 201138851 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 如”月求項11之肽，其中該肽係SEQ ID NO:2、3、5、6、 或8。 如°青求項11之肽，其中組胺酸殘基與Seq ID NO: 13序列 直接鄰接。 如叫求項11之肽’其中該肽在羧基端醯胺化。 如明求項16之肽，其中該肽係SEq ID n〇:i〇 〇 如5月求項16之肽’其中該肽係seQ ID NO:2、3、5、6、 或8 〇 一種包含如請求項11之肽及醫藥上可接受載劑之組合 物0 如清求項19之組合物，其中該組合物係呈噴霧劑、乳 液、夜體、洗液（lotion)、乳膏、糊、軟膏、粉末或泡沫 之形式。 152195.doc 2·