KR20120116926A

KR20120116926A - 자외선 광 독성에 대한 펩티드 보호

Info

Publication number: KR20120116926A
Application number: KR1020127014031A
Authority: KR
Inventors: 리주안 장; 티모시 제이 팔라
Original assignee: 헬릭스 바이오메딕스, 인코포레이티드
Priority date: 2009-11-19
Filing date: 2010-11-18
Publication date: 2012-10-23
Also published as: ZA201203397B; ES2551697T3; CN102791281B; US20120225023A1; EP2512498A4; SMT201500305B; US8597902B2; PL2512498T3; HK1170419A1; WO2011063090A3; CA2779863C; CN102791281A; RU2565535C2; TWI494129B; WO2011063090A2; TW201138851A; EP2512498A2; EP2512498B1; RU2012125260A; KR101764171B1

Abstract

생물학적 및 치료적 활성을 가진 짧은 펩티드가 개시된다. 특히, 개시된 펩티드의 활성은 돌연변이원에 의해 유발된 세포적/조직적 독성을 완화 또는 방지하는 것과 관련이 있다 (즉, 화학 예방). 예를 들어, 개시된 펩티드는 자외선 (UV) 광 노출로부터 발생하는 피부 독성 및/또는 돌연변이원에 대해 보호한다. 개시된 펩티드는 또한 Chk2 같은 세포 주기 조절 단백질의 활성화를 차단한다. 이러한 펩티드의 예는 Ser-Leu-Tyr-Gln-Ser (SEQ ID NO: 10)이다. 개시된 펩티드는 또한 돌연변이원 노출 후에 발생하는 세포적 독성 및 돌연변이 축적에 대해 감소 또는 방지하는 방법에 유용하다. 이러한 한 방법은 UV 광 (예를 들면, 태양광) 노출로부터 얻어진 돌연변이원성 손상을 방지 또는 감소시키기 위해 피부에 펩티드를 적용하는 것으로 묘사된다.

Description

자외선 광 독성에 대한 펩티드 보호 {PEPTIDE PROTECTION AGAINST ULTRAVIOLET LIGHT TOXICITY}

본 출원은 2009년 11월 19일 출원된 미국 가특허출원 제 61/262,790호의 우선권의 이익을 주장하며, 그 전문은 본원에 참고로 포함된다.

기술분야

본 발명은 생물학적 및 치료적 활성을 갖는 펩티드와 관련이 있다. 특히, 본 발명은 돌연변이원에 의해 유발되는 세포적/조직적 독성에 대해 보호하는 짧은 펩티드와 관련된다. 예를 들어, 본 발명의 펩티드는 피부에서 자외선 광 노출 후 발생하는 독성에 대해 보호한다. 본 발명의 펩티드의 한 가지 기능은 인산화를 차단하는 것이고, 따라서 어떤 세포 주기 조절 단백질의 활성을 차단한다. 게다가 본 발명은 돌연변이원 (예를 들어, 자외선 광)에 노출 후 세포적/조직적 독성의 수준을 감소시키기 위해 본 발명의 펩티드를 사용하는 방법과 관련된다.

각질 세포가 자외선 (UV) 광과 같은 DNA 손상 요소 (돌연변이원)에 노출될 때, 세포 주기 체크포인트가 활성화됨으로써 세포 분열이 차단된다. 돌연변이원에 의해 유발되는 손상 후 G2 기에서 세포 주기 어레스트는 DNA 복구를 위한 시간을 허용한다. 그러나, 만약 체크포인트 과정이 방해받거나 억제되면, 그때 암 생성 사건 (예를 들어, DNA 돌연변이)의 빈도가 감소된다. 이것은 자외선 광 전 및 후 피부에 카페인의 적용을 통해 시험관 내 및 생체 내에서 증명되었다 (Lu et al., 2008, Cancer Res. 68: 2523-2529; Heffernan et al, 2009, J. Invest. Dermatol. 129:1805-1815). 이 현상의 근거는 카페인이, DNA 손상된 세포들이 유사분열을 진행하고 그들의 DNA는 만족스러운 복제를 할 수 없기 때문에 아폽토시스을 통해 죽는 것이 허용된, 유사분열 체크포인트 경로를 억제하는 것이다. DNA 돌연변이/손상 및 결과로서 발생하는 아폽토시스성 세포사에도 불구하고 세포 주기 진행의 허용은 영향을 받는 조직에서 돌연변이원에 의해 유발되는 돌연변이의 고정을 방지한다. 따라서, 이 과정은 암종 같은 발암성병변으로 발달할 잠재력을 가진 유전적으로 변화된 세포의 수를 감소시킨다.

피부에 자외선 광의 발암성 효과를 감소시키는 카페인의 능력은 피부 관리 치료 및 화장품 피부 관리 적용에서 이 시약의 사용에 대한 흥미를 상승시켰다. 그러나, 피부 관리 제품에서 카페인의 사용은 특이성 부족의 주어진 문제가 있다. 유익한 효과를 제외하고는, 카페인은 피부에 원하지 않은 효과 (예를 들어, 혈관 확장, 건조 등)를 유발할 수 있다. 주어진 이런 단점들 때문에, 다른 접근들은 피부와 관련된 조직에 돌연변이원의 손상 효과를 방지하는 것이 추구되었다.

피부 관리 제품의 개발에 짧은 펩티드의 사용은 그들의 천연 아미노산에 기초한 구조, 특이성, 독성의 결핍, 및 부작용의 결핍 때문에 아주 대중적이다. 이 성질은 펩티드를 피부 관리 조성물에 보충을 위한 새로운 화학 예방제의 개발에 대한 적합한 출발점이 되게한다. 화학 예방 및 화학적 치료 특성을 가지는 펩티드 및 태양광의 손상 효과로부터 피부 보호에 적용되는 펩티드가 여기에서 설명된다.

본 발명의 개요

본 발명의 구체예는 세포 주기 체크포인트 키나제의 활성을 감소시키는 방법과 관련이 있다. 이러한 방법은 체크포인트 키나제를 길이가 5 내지 9개의 아미노 잔기이고 SEQ ID NO: 13을 포함하는 펩티드에 노출하는 것을 포함할 수 있다. 이 구체예 및 다른 구체예에서 세포 주기 체크포인트 키나제는 활성화된 상태일 수도 있다. 여기에 설명된 이 방법 또는 다른 방법에 적용될 수 있는 펩티드의 예는 SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 8, 또는 10을 포함하거나 이들로 구성된다.

여기에 설명된 방법에서 사용될 수 있는 펩티드의 다른 예는 SEQ ID NO: 13 서열에 직접적으로 인접 히스티딘 잔기를 갖는 것이다. 다른 펩티드는 그것의 카르복시 말단에서 아미드화될 수 있다. 이러한 아미드화된 펩티드의 특정 예는 SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 8, 또는 10을 포함하거나 이들로 구성되는 것이다.

개시된 방법에 의해 표적화된 체크포인트 키나제는 체크포인트 키나제-1 (Chk1) 또는 체크포인트 키나제-2 (Chk2)를 포함하거나 이들로 구성될 수도 있다. 체크포인트 키나제는 세포에서 DNA 손상의 결과로서 활성화될 수도 있다. 이러한 DNA 손상은 돌연변이 유발제에 의해 발생될 수도 있다. 돌연변이 유발제의 예는 피부에서 DNA 손상을 유발할 수 있는 것들 (예를 들어, 자외선 광)이다. 개시된 방법은 또한 cdc25 (세포 분열 주기 25) 포스파타제를 여기에 설명된 펩티드에 노출하는 것을 포함할 수 있다; cdc25c는 본 발명에서 표적화될 수 있는 cdc25c의 예이다.

본 발명에서 다른 구체예는 포유동물의 피부를 치료하는 방법과 관련이 있다. 이러한 방법은 체크포인트 키나제를 개시된 펩티드에 노출함으로써 피부에서 세포 주기 체크포인트 키나제 (예를 들어, Chk2)의 활성을 감소시키는 것을 포함할 수 있다. 본 발명에서 다른 구체예는 피부에 개시된 펩티드를 적용함으로써 포유동물의 피부를 치료하는 것과 관련이 있다.

본 발명의 다른 구체예는 길이가 5 내지 9개의 아미노산 잔기이고 SEQ ID NO: 13을 포함하는 펩티드와 관련이 있다. 이러한 펩티드의 예는 SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 8, 또는 10을 포함하거나 이들로 구성된다. 본 발명의 펩티드의 다른 예는 SEQ ID NO: 13 서열에 직접적으로 인접 히스티딘 잔기를 갖는다. 다른 펩티드는 이들의 카르복시 말단에서 아미드화될 수 있다. 이러한 아미드화된 펩티드의 특정 예는 SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 8, 또는 10을 포함하거나 이들로 구성되는 것들이다.

본 발명의 다른 구체예는 본 발명의 펩티드 및 약학적 담체를 포함하는 조성물과 관련이 있다. 조성물은 에어로졸, 에멀젼, 액체, 로션, 크림, 페이스트 (paste), 연고, 분말, 또는 폼 (foam)의 형태일 수 있다.

도 1은 일정한 본 발명의 펩티드 (SEQ ID NOs: 1 내지 10) (일반적으로 서로 중심 맞춰진 상태로) 및 SEQ ID NO: 11 (사람 티로시나제)의 아미노산 서열을 나타낸다. 어떤 펩티드 (SEQ ID NOs: 1 내지 7)에서 밑줄친 잔기는 SEQ ID NO: 11에 대해 보존적 아미노산 치환이 된다.
도 2는 스타우로스포린 또는 어떤 본 발명의 펩티드에 의한 체크포인트 키나제 2 (Chk2) 활성의 억제를 나타낸다. 대조군 Chk2 활성은 첫 번째 막대기로 나타낸다. 도면에서 보여준 펩티드 (SEQ ID NOs: 2 내지 6 및 8 내지 10)는 카르복시 말단이 아미드화 되어있다 (-CONH₂).
도 3은 사람 Chk2의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 17)을 나타낸다. 이 서열은 접수 번호 AAH04207 하에 미국 국가생물공학센터 (U.S. National Center for Biotechnological Information: NCBI) 웹사이트 (또는 GenBank)에 개시된 것과 같다.
도 4는 사람 Chk1의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 18)을 나타낸다. 이 서열은 접수 번호 AAC51736 하에 NCBI 웹사이트 (또는 GenBank)에 개시된 것과 같다.
도 5는 사람 cdc25c의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 19)을 나타낸다. 이 서열은 접수 번호 AAR32098 하에 NCBI 웹사이트 (또는 GenBank)에 개시된 것과 같다.

본 발명의 펩티드 (예를 들어, 표 1 및 도 1에 나열된 것들)는 하나의 거울상체 형태의 잔기 또는 두 개의 형태의 조합을 포함하는 L- 또는 D- 아미노산 거울상체를 포함할 수 있다. 펩티드는 주요 아미노산 서열이 변하지 않는 한, 다음의 비-제한적 예에서 설명되는 바와 같이 증가되거나 또는 변이될 수도 있다; 이런 방식으로, 펩티드는 일정한 아미노산 서열로 구성되지만, 일정한 변이를 포함할 수도 있다. 펩티드의 카르복시 말단은 산성 (-COOH)일 수 있고 또는, 아미드화 (예를 들어, -CONH₂, -CONHR, 또는 -CONR₂)될 수도 있다. 카르복시 말단의 아미드화는 본 발명의 펩티드를 프로테아제 분해에 덜 민감하게 만들고 그들의 유리산 형태와 비교하여 용해도를 증가시킬 수도 있는데, 따라서 높아진 치료적 효능을 제공한다. 펩티드는 또한 지질화될 수도 있는데, 이것은 향상된 피부 침투를 제공할 수 있다. 각 펩티드의 아미노산을 연결하는 하나 이상의 분자 결합은 비-펩티드 결합일 수도 있다. 이러한 비-펩티드 결합은 이미도, 에스테르 히드라진, 세미카르바조이드 및 아조 결합을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

(표 1)

주요 아미노산 서열이 유지되는 한 본 발명의 펩티드에 다양한 변이가 제공될 수 있다. 일정한 변이는 펩티드의 효능을 증가시키기 위해 사용될 수도 있지만, 다른 변이는 펩티드 조작이 용이하게 할 수도 있다. 전형적으로 변이될 수도 있는 펩티드 기능기는 히드록실, 아미노, 구아니디늄, 카르복실, 및 아미드 기이다. 이 기의 전형적인, 비-제한적 반응은 다음을 포함한다: 알킬 할라이드에 의한 히드록실 기의 아세틸화; 카르복실 기의 에스테르화, 아미드화 또는 수소화 (즉, 알콜로 환원); 아미노 기 (예를 들어 펩티드의 주요 아미노 기 또는 리신 잔기의 아미노 기)의 탈아미드화, 아세틸화, 알킬화, 아릴화. SEQ ID NOs: 1 내지 10 및/또는 13은 예를 들어, 카르복실 말단에서 아미드화될 수 있다 (-CONH₂).

상기 논의에도 불구하고, 본 발명의 펩티드는 하나 이상의 아미노산 잔기의 위치에서 일정한 아미노산의 변화를 갖도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 잔기가 보존된 잔기 또는 잔기들로 변화된다. 아미노산 보존 전략은 당업계에 잘 알려져 있다; 예를 들어, 리신, 페닐알라닌, 이소루신, 트레오닌 및 글루타메이트는 원래의 펩티드의 구조 및 기능에 크게 영향을 주지 않고 각각 히스티딘, 티로신, 루신, 세린 및 글루타민으로 치환될 수 있다. 선택적으로, 본 발명의 펩티드는 SEQ ID NOs: 1 내지 10 또는 13 중 어느 하나와 비교하여 하나 적은 아미노산 또는 두 개 적은 아미노산 (인접한 또는 인접하지 않은)을 가질 수도 있다. 본 발명의 펩티드의 다양한 형태는 SEQ ID NOs: 1 내지 10 또는 13 중 어느 하나와 비교하여 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일해야 한다. 본 발명의 펩티드의 다양한 형태는 SEQ ID NOs: 1 내지 10 또는 13 중 어느 하나에 의해 소유된 활성 또는 기능의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 또는 95%를 가져야 한다.

SEQ ID NOs: 1 내지 10 및 13에 의해 소유된 활성 또는 기능의 예는 암 (예를 들어, 암종, 육종, 흑색종, 피부암) 화학 예방, 돌연변이/암 유발제 (예를 들어, 자외선 광)에 노출된 조직 (예를 들어, 피부)에서 전암성 세포군의 발달 방지, 돌연변이/암 유발제 (예를 들어, 자외선 광)에 세포 (예를 들어, 피부 세포, 각질 세포, 멜라닌 세포, 또는 섬유아 세포)의 노출 후 세포 주기 어레스트의 차단 및 DNA 복구, 체크포인트 키나제 [예를 들어, 체크포인트 키나제-2 (Chk2)]를 통해 조직된 것과 같은 DNA 손상 복구 경로에 의한 cdc25c의 활성화 차단, 돌연변이원/발암원 (예를 들어, 자외선 광)에의 노출과 관련이 있거나 그에 의해 유발되는 독성 (피부에서 처럼)의 차단 또는 감소, 건강한 피부의 특징 (예를 들어, 색조, 탄성, 수화, 착색, 단단함, 매끄러움)에 돌연변이원/발암원의 부정적 영향 차단 또는 감소이다. 화학 예방 (chemoprophylaxis)은 신생물 (예를 들어, 암, 전암성 손상, 양성 과성장 병소)의 위험을 감소시키거나 신생물의 발달 또는 재생을 지연시키기 위해 본 발명의 펩티드 같은 시약의 사용을 들 수 있다. 돌연변이 유발제 또는 어떤 다른 시약 (예를 들어, 화학적 치료, 자극물)에 의해서 유발되는 것과 같은 피부에서 독성은 홍반, 탈모증 (alopecia, 탈모), 감광성 (태양광에 증가된 민감도), 리콜 반응 (예를 들어, 이전에 방사선으로 치료된 부위에 화학적 치료의 효과), 여드름성 (여드름 유사) 발진 (acneiform eruption), 피부 괴사, 호중구 에크린 땀샘염 (neutrophilic eccrine hidradenitis), 에크린 상피화생 (eccrine squamous metaplasia), 과색소침착 (hyperpigmentation), 손발톱 변화, 점막염, 경화 피부 반응 (sclerotic dermal reaction), 혈관 손상, 피부건조증 (xerosis), 부종 (edema, 부기), 두드러기 (urticaria), 피부 노화 [예를 들어, 얇아짐, 감소된 탄성, 주름, 늘어짐, 증가된 색소 [예를 들어, 주근깨, 일광흑자 (solar lentigo), 적상 저색소증 (guttate hypomelanosis)], 모세관 확장증 (telangiectase), 혈관종 (angioma), 자반병 (purpura), 일광 면포 (solar comedone), 교양비립종 (colloid milia), 검버섯 (seborrrhoeic keratose)], 수포형성 (blistering), 피부염 (dermatitis), 증식성/버섯모양 결절 (vegetating/fungating nodules, 올라온 단단한 응어리), 삼출 플라크 (exudative plaque), 농포 (pustule)를 갖는 증식성 또는 괴저성 궤양, 흉터, 지방층염 (panniculitis), 궤양, 통증 및/또는 화상의 형태로 나타날 수 있다. 여기에 나타난 바와 같이 "감소", "억제", "차단", 또는 "예방"은, 본 발명의 펩티드가 펩티드 또는 펩티드를 포함한 조성물의 적용 없이 상태가 정상적으로 어떻게 존재하는지와 비교하여 질환의 발생률, 심각성, 강도, 사망률, 또는 관련된 증상을 적어도 약 7.5%, 10%, 12.5%, 15%, 17.5%, 20%, 22.5%, 25%, 27.5%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90%, 또는 100%까지 감소시킨다는 것을 의미한다.

본 발명의 펩티드가 다른 서열의 추가 없이 생산될 수 있긴 하지만, 더 큰 서열 내에서 본 발명의 서열을 포함하도록 하는 선택의 여지가 존재한다. 예를 들어, 본 발명의 펩티드는 N- 및 C-말단 둘 중 하나 또는 둘 다에 추가된 여분의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 예는 플래그 같은 마커 에피토프일 것인데, 보통 단백질을 추적하기 위해 사용된다; 업계에 잘 알려진 마커 에피토프는 예를 들어, myc, His, HA (헤마글루티닌)를 포함한다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 펩티드로 구성되거나 이들을 포함하는 펩티드를 망라한다. 본 발명의 펩티드가 더 많은 서열 내에서 제공될 (즉, 그 안에 포함될) 수도 있지만, 본 발명의 펩티드 서열과 추가적 서열 (들)의 조합은 동물 세포 (예를 들어, 사람 세포)에 의해 자연적으로 발현되는 어떤 단백질 또는 펩티드 서열을 구성해서는 안 된다. 언어가 여기에서 펩티드는 서열로 "구성된다"를 설명하기 위해 사용된 경우, 이러한 펩티드는 일정한 인접 아미노산 서열로 제한되지만, 비-아미노산 부분 또는 다른 펩티드/단백질 (이러한 펩티드/단백질은 비-펩티드 결합을 통해 본 발명의 펩티드와 결합할 것이다)을 포함할 (즉, 결합될) 수도 있다.

본 발명의 펩티드는 길이가 5, 6, 7, 8, 또는 9개의 인접 아미노산일 수도 있고 SEQ ID NO: 13 (S-L/I-Y-Q E-S)를 포함하거나 이들로 구성될 수도 있다. 이러한 펩티드의 비-제한적 예는 SEQ ID NOs: 2, 3 및 5 내지 10이다. 이러한 펩티드의 다른 비-제한적 예는 SEQ ID NO: 13를 포함하는 SEQ ID NOs: 2, 3 및 5 내지 8의 단편이다. SEQ ID NO: 13의 식에 이어서 본 발명의 다른 펩티드는 길이가 5, 6, 7, 8, 또는 9개의 인접 아미노산일 수 있고 SEQ ID NO: 14 (S-I-Y-Q-S), SEQ ID NO: 15 (S-L-Y-E-S), 또는 SEQ ID NO: 16 (S-I-Y-E-S)를 포함하거나 이들로 구성될 수도 있다. 본 발명의 다른 펩티드는 SEQ ID NO: 13를 포함할 수도 있는데, 이때 히스티딘 잔기는 SEQ ID NO: 13 서열에 직접 인접한다. 이러한 펩티드의 예는 SEQ ID NOs: 2, 3, 5, 6, 8 및 9이다. 루신 및 이소루신 (즉, SEQ ID NO: 13의 위치 2) 사이 및 글루타민 및 글루타메이트 (즉, SEQ ID NO: 13의 위치 4) 사이의 구조적/화학적 유사성이 주어진다면, SEQ ID NO: 13를 포함하는 짧은 펩티드는 모두 구조적 수준에 대해 서로와 모두 관련이 있다. 루신 및 이소루신에 비해 알라닌, 발린, 글리신, 또는 메티오닌 같은 다른 아미노산이 SEQ ID NO: 13의 위치 2를 차지할 수도 있다. 글루타민 및 글루타메이트에 비해 아스파라긴, 아스파르트산염, 아르기닌, 또는 리신 같은 다른 아미노산이 SEQ ID NO: 13의 위치 4를 차지할 수도 있다.

대안으로, 본 발명의 펩티드는 길이가 5, 6, 7, 8, 또는 9개의 인접 아미노산이고 SEQ ID NO: 10 (S-L-Y-Q-S)를 포함하거나 이들로 구성될 수도 있다. 이러한 펩티드의 비-제한적 예는 SEQ ID NOs: 2 및 7 내지 9이다. 이러한 펩티드의 다른 비-제한적 예는 SEQ ID NO: 10을 포함하는 SEQ ID NOs: 2, 7 및 8의 단편이다. 본 발명의 다른 펩티드는 SEQ ID NO: 10를 포함할 수 있고, 이때 히스티딘 잔기 (H)는 SEQ ID NO: 10 서열에 직접적으로 인접한다; 이러한 펩티드의 예는 SEQ ID NO: 2, 8 및 9이다

본 발명의 펩티드의 모든 구체예는 "분리된" 상태에 있을 수도 있다. 예를 들어, "분리된" 펩티드는 완전히 또는 부분적으로 정제된 것이다. 어떤 경우에, 분리된 펩티드는 더 큰 조성물, 완충액 시스템 또는 시약 혼합물의 일부일 것이다. 다른 상황에서, 분리된 펩티드는 t 균질성으로 정제된다. 조성물은 여기에 또한 존재하는 모든 다른 고분자 종의 적어도 약 50, 80, 90, 또는 95% (몰 기준) 수준으로 펩티드를 포함할 수도 있다. 본 발명의 펩티드는 성분들의 이종 조합을 포함할 수도 있다. 본 발명 펩티드의 혼합물이 본 발명의 실행에 사용될 수도 있다.

본 발명의 펩티드는 필요에 따라 그들의 용해도 성질을 변형시키기 위해서 및 표적화된 조직에서 펩티드의 부분적 농도를 증가시키기 위해 가용성 또는 불용성 담체 분자와 결합될 수도 있다. 가용성 담체 분자의 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 폴리비닐피롤리딘 폴리머를 포함한다; 불용성 폴리머의 예는 실리케이트, 폴리스티렌 및 셀룰로즈를 포함한다. 펩티드는 또한 치료적 적용 중 및 후에 그들의 안정성을 향상시키기 위해서 미세-캡슐에 넣는다; 전형적으로, 폴리에스테르 및 PEG 미세구체가 펩티드를 캡슐화 및 안정화하기 위해 사용된다.

펩티드 캡슐화를 위한 미세구체의 다양한 제조 방법이 캡슐화될 펩티드 조성물의 친수성 또는 소수성 성질에 의존하여 사용될 수 있다. 이러한 방법에 대한 프로토콜의 예는 Wang et al. (J Control. Release 17: 23, 1991) 및 미국 특허 번호 4,324,683에서 발견되는데, 둘 다 그 전문은 본원에 참고로 포함된다. 시험관 내에서 펩티드 방출 연구는 미세구체 내로 포함 후 펩티드의 상대적 이용가능성을 결정하기 위해 수행될 수도 있다. 미세구체 (200 mg)는 2.5 ml 인산염 완충된 식염수 (PBS, pH 7.2)에 현탁시키고 환경적 인큐베이터 셰이커 (G-24, New Brunswick Scientific Co., Edison, N.J.)에서 37 ℃ 및 100 rpm에서 흔든다. 특정 샘플 채취 시간에 (처음 4일 동안 매일 및 그 후에는 격일) 완충 용액을은 완전히 제거하고 신선한 PBS로 대체한다. PBS의 펩티드 함량을 브래드포드 방법 또는 전형적으로 단백질 분석에 사용되는 다른 적합한 정량 검정을 사용하여 측정한다.

다음 과정 및 파라미터는 단지 안내 목적을 위해 제공되고 당업자들에 잘 알려져 있다. 모든 개시된 펩티드는 Advanced ChemTech Apex 396 Multiple Peptide Synthesizer에서 표준 Fmoc (9-플루오레닐메톡시카르보닐) 고체상 화학을 사용하여 합성될 수도 있다. Apex 396에 0.15 mmol 스케일로 동시에 40개까지 펩티드를 생산하기 위한 40-웰 반응 블록을 장착한다. 펩티드는 표준 아미노산을 사용하여 아미드화된 또는 유리산 서열로서 제조될 수 있다. 레진을 먼저 세척하고 N,N-디메틸 포름아미드 (DMF)로 사전 팽창시킨다. 팽창 시간은 Rink 아미드 레진에 대해 한 시간이다. Fmoc 보호 기를 25분 동안 DMF 중의 25% 피페리딘으로 제거하고 그 후 피페리딘을 레진으로부터 완전히 씻어낸다. 라세미화 과정을 제어하기 위해, 0.5 M DMF 중의 1-히드록시-벤조트리아졸 (HOBt) 또는 1-히드록시-7-아자-벤조트리아졸 (HOAt)의 등몰용액에서 Fmoc 아미노산 모노머를 사전 활성화시킨다. 아미드 커플링은 활성화제로서 0-(7-아자벤조트리아졸-1-yl)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) PyBop® 또는 2-(1H-벤조트리아졸-1-yl-)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU) 그리고 힌더드 염기(디이소프로필에틸아민)를 사용한 염기성 조건 하에 아미노산의 2.5-5.0배 몰 과량을 사용하여 수행한다. 두 배 또는 세 배의 커플을 성취한 후 커플링 시간은 1-1.5시간이고 이어서 세척 및 재-커플링하여 성장하는 펩티드 사슬을 탈보호하고 계속한다. 커플링 효율은 표준 Kaiser 검사를 사용하여 관찰한다. 레진에서 펩티드 합성이 끝나면, 최종 Fmoc 그룹을 상기와 같이 제거하고 서열은 유리 염기 형태로서 남는다.

펩티드와 레진의 산에 불안정한 결합의 분열은 95% 트리플루오로아세트산 (TFA) 및 적당한 스캐빈저가 추가된 물을 사용하여 이루어진다. 분열이 약 30분에서 한 시간 동안 진행된 후, 감소된 압력 하에 TFA의 제거를 위해 방출된 펩티드는 즉시 분열 블록으로부터 제거하고 튜브로 옮긴다. 그때 펩티드는 역상 C18 칼럼을 이용한 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 및 질량 분석법을 통해 정제 및 분석될 준비가 된다. 주요 서열 확인 및 예비 정제는 LC/MS/MS 시스템 (ABI API2000)을 사용하여 성취된다.

상기 프로토콜에 일반적으로, 펩티드는 Merrifield (J Am Chem Soc. 85:2149, 1963); Carpino et al. (J Org Chem . 51:3732, 1986); Merrifield et al. (Anal Chem. 38:1905, 1966); 또는 Kent et al. [High Yield Chemical Synthesis Of Biologically Active Peptides On An Automated Peptide Synthesizer Of Novel Design, IN: PEPTIDES 1984 (Ragnarsson, ed.) Almqvist and Wiksell Int., Stockholm (Sweden), pp. 185-188]에 개시된 것과 같은 당업자에 알려진 어느 방법을 사용하여도 생산될 수 있고, 그 모든 전문은 본원에 참고로 포함된다. 펩티드는 성장하는 펩티드 사슬에 아미노산의 순차적 추가가 가능한 기계에 의해 생산될 수 있다. 그러나, 펩티드는 또한 표준 용액 단계 방법론을 사용하여 제조될 수도 있는데, 이것은 큰 스케일의 생산 노력을 할 수 있다.

본 발명의 추가적 구체예는 제형에서 또는 치료제로서와 같은 상기 설명된 펩티드를 사용할 방법과 관련이 있다. 이 방법들은 하나의 펩티드, 또는 다수의 펩티드 조합 (즉, 혼합물)의 사용을 수반한다.

어떤 경우에, 본 발명의 조성물은 피부 위에, 내에, 또는 아래에 위치한 장치 내에 배치될 수 있다. 이러한 장치는 경피성 패치, 이식물, 및 주사를 포함하는데, 이것들은 수동적 또는 능동적 배출 메카니즘에 의해 피부 또는 모낭에 인접하는 방식으로 물질을 배출한다. 예를 들어, 물질은 하루에 한 번 또는 두 번 같이 규칙적인 간격, 적합한 비히클 및 효과적 농도로 국부적으로 상피에 적용될 수 있다. 피부에 한 번 이상의 주사는 피부 또는 다른 어느 조직에 본 발명의 펩티드의 투여를 위한 또 다른 루트를 제안한다.

여기에 설명된 방법에서 펩티드를 전달하기 위해 사용된 조성물은 에어로졸, 에멀젼, 액체, 로션, 크림, 페이스트, 연고, 분말, 폼, 또는 다른 약학적 제형일 수 있다. 게다가, 펩티드는 탈이온화/멸균된 물, PBS, 또는 표준 의학 식염수 용액 같은 덜 수반된 제형을 사용하여 전달될 수 있다. 일반적으로, 약학적 제형은 사람의 피부 또는 점막 표면에 사용하기 적합한 담체를 포함할 것이다. 이러한 약학적 담체는 에탄올, 디메틸 술폭시드, 글리세롤, 실리카, 알루미나, 탄수화물, 및 등가 담체 및 희석액을 포함한다. 제형은 선택적으로 화장품의 외관을 갖고, 및/또는 본 발명의 펩티드의 치료 작용을 위해 보조제로서 작용할 수 있는 레티노이드 또는 다른 펩티드와 같은 다른 시약들을 함유할 수도 있다. 항생제는 또한 감염을 막기 위해 제형에 추가될 수 있고, 따라서 최대 치유 과정이 일어나도록 허용된다. 조성물 내에 펩티드의 농도는 약 0.1 μg/mL에서 약 50 μg/mL 또는 0.1 μg/mL에서 약 20μg/mL일 수 있다; 그러나, 사용되는 최대 농도는 이 범위를 벗어나 다양할 수도 있는데, 표적 조직의 성질, 본 발명의 펩티드의 생체 활성 및 향상된 조성물의 흡수율을 얻기 위해 보조제 또는 기술의 사용에 의존적이다. 이러한 결정은 당업계에 사용되는 일반 기술로 익숙하다. 예를 들어, 본 발명의 실행에 사용된 펩티드(들)의 농도는 약 0.1, 1, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 200, 500, 또는 1000 μg/mL일 수 있다.

본 발명의 펩티드 및 관련된 조성물의 투여는 사람 및 동물에게 제공될 수도 있는데, 모든 포유동물 (예를 들어, 돼지, 소, 말, 양, 염소, 마우스, 래트, 고양이, 개, 흰족제비, 영장류)을 포함한다. 적용은 또한 조직 이식편, 조직 배양물, 산소 및 드레싱 같은 전형적 및/또는 실험적 물질을 조합하여 제공될 수도 있다. 일반적으로, 조성물은 표적 조직에 본 발명의 펩티드를 전달하는데 유용하기 위해 국부적으로, 구강을 통해, 피부를 통해, 전신으로, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법에 의해 투여될 수 있다. 조성물은 또한 시험관 내 또는 생체 외의 방식으로 적용될 수도 있는데, 예를 들어, 배양물에서 자라는 세포 또는 환자의 이식편에 적용될 수도 있다.

그것들의 작은 크기 때문에, 펩티드는 스스로 피부를 통해 투과성의 수준을 얻을 수 있을 것으로 예상된다; 하지만, 어떤 기술이 이 이동성을 증폭하기 위해 사용될 수도 있다. 예를 들어, 친유성 (비-극성) 기를 펩티드에 추가하거나, 낮은 상피층으로 위치 변경을 허용하도록 각질층으로 펩티드의 접근성을 향상시키기 위해서 펩티드는 친유성 첨가물에서 피부로 전달될 수 있다. 이러한 친유성 변형은 이 방식으로 프로-드러그 효과를 갖는 것처럼 생각될 수도 있다. 알려진 용매 및 계면활성제 같은 침투 증폭제는 더 좋은 펩티드 흡수율을 허용하기 위해 첨가물에 사용될 수도 있다. 표적화된 조직/손상에 펩티드의 접근성 향상에 유용할 것으로 기대되는 특별한 기술은, 주사 요법, 이온도입법, 전기영동법 및 초음파를 포함한다. 이온도입장치는 전해질 용액에 담긴 두 개의 전극으로 구성되고 피부 상에 위치한다. 전기적 전류가 전극에 가해질 때, 전기장이 펩티드의 전달로 이어지는 각질층에서 생성된다. 전기영동법은 지질이중층을 통해 투과성을 증가시키기 위해 고전압 전기 펄스의 적용을 수반한다. 이것은 이온도입법과는 전류 적용의 지속 및 강도에서 다르다 (이온도입법은 상대적으로 일정한 저전압 전기장을 사용한다). 전기 천공의 고전압 전기 펄스는 높은 정도의 투과 향상을 제공할 수 있는 지질라멜라에서 친수성 구멍의 역형성을 유발한다고 믿어진다. 초음파는 피부에 16 kHz보다 더 큰 주파수를 갖는 음파를 적용하는데, 이것은 음파가 이동하는 조직의 압축 및 확장을 일으킨다. 얻어진 압력의 변화는 펩티드의 투과성을 향상시킬 수도 있는 다수의 과정 (예를 들어, 캐비테이션, 믹싱, 온도 증가)을 일으킨다.

본 발명은 하나 이상의 프로테아제 억제제를 포함할 수 있다. 프로테아제 억제제는 특이적으로 선택된 생체 활성 펩티드를 분해할 것으로 기대되는 프로테아제를 표적화하기 위해서 선택될 수 있다; 이러한 선택은 길이 및/또는 생체 활성 펩티드의 서열에 기초해 결정될 것이다. 그러나, 프로테아제 억제제가 반드시 어느 특별한 방식으로 선택될 필요는 없다; 예를 들어, 두 가지 이상의 억제제를 함유하는 프로테아제 억제제 칵테일은 본 발명에 사용될 수 있다. 본 발명의 어떤 구체예로, 프로테아제 억제제는 바이러스를 억제하는데 특이적인 것이 아니다. 다음 타입의 프로테아제 억제제는 본 발명에 포함될 수 있다: 세린 프로테아제 억제제, 시스테인 프로테아제 억제제, 아스파르트산염 프로테아제 억제제, 메탈로프로티나제 억제제, 티올 프로테아제 억제제 및 트레오닌 프로테아제 억제제.

프로테아제 억제제는 당업계에 잘 알려져 있다. 본 발명에 포함될 수 있는 프로테아제 억제제의 비-제한적 예는 아세틸-펩스타틴, AEBSF [4-(2-아미노에틸) 벤제네술포닐 플루오라이드) 히드로클로라이드, ALLM (N-아세틸-Leu-Leu-Met), ALLN (N-아세틸-Leu-Leu-Nle-CHO), 아마스타틴 (스트렙토미세스 균주 (streptomyces sp.)], ε-아미노-n-카프로산, 아미노펩티다제 N 억제제, α1-안티키모트립신, 안티페인 (히드로클로라이드) 또는 디히드로클로라이드), α2-안티플라스민, 안티트롬빈 III, α1-안티트립신, p-APMSF 히드로클로라이드, 아프로티닌 (예를 들어, 소의 폐로부터), ATBI (11-잔기 펩티드), 벤자미딘 히드로클로라이드베스타틴, 베스타틴 메틸 에스테르, 칼파스타틴 , 칼펩틴, 카르복시펩티다제 억제제 , 캐스페이즈 억제제, 카텝신 B 억제제 II, 카텝신 G 억제제 I, 카텝신 억제제 II, 카텝신 억제제 III, 카텝신 억제제 I, 카텝신 K 억제제 I, 카텝신 K 억제제 II , 카텝신 K 억제제 III , 카텝신 L 억제제 I, 카텝신 L 억제제 II, 카텝신 L 억제제 IV, 카텝신 L 억제제 V, 카텝신 L 억제제 VI, 카텝신 S 억제제, 카텝신/서브틸리신 억제제, 키모스타틴, 키모트립신 억제제 I, 시스타틴, 1,5-단실-glu-gly-arg 클로로메틸 케톤 디히드로클로라이드, 3,4- 디클로로이소쿠머린, 디이소프로필플루오르인산염, 디펩티딜펩티다제 II 억제제, 디펩디딜펩티다제 IV 억제제 I, 디펩티딜펩티다제 IV 억제제 II, 이-64 프로테아제, 에코틴, EDTA 이나트륨염 디히드레이트, EDTA 삼나트륨염, EGTA, 엘라스타제 억제제 I , 엘라스타제 억제제 II, 엘라스타제 억제제 III, 엘라스타티날, 6-아미디노-2-나프틸-4-구아니디노벤조산염 디메타네술포네이트, glu-glu-arg-클로로메틸 케톤, 2-구아니디노에틸메르캅토숙신산, 헥사데실술포닐 플로라이드, α-요오드아세타미드, 키니노겐, 루히스틴, 루펩틴 헤미술페이트, α2-마크로글로블린, DL-2-메르캅토메틸-3-구아니디노에틸티오프로피온산, 펩스타틴 A, 페닐메틸술포닌 플로라이드, 포스포아미돈 이나트륨염, PPack II 트리플루오르아, PPack 디히드로클로라이드, 프로릴 엔도펩티다제 억제제 II, 나트륨-토실-lys 클로로메틸 케톤 히드로클로라이드), 나트륨-토실-페놀 클로로메틸 케톤 히드로클로라이드, 트리펩티딜펩티다제 II 억제제, 트립신 억제제 (옥수수 또는 콩으로부터), D-val-phe-lys 클로로메틸 케톤 디히드로클로라이드, 1,3-D-(엔-카르복시벤조닐-L-루실-L-루실) 아미노 아세톤, ｏ-페난트롤린, 우르솔릭산 (예를 들어, 로즈마리 추출물), 트라넥사믹산 [4-(아미노메틸)시클로헥산-1-카르복실산] (임상적으로 미국에서 Cyklokapron으로 시판되고 아시아에서 Transamin으로 시판됨), Fmoc-Lys (Boc), Fmoc-Arg (Pmc), 벤조일-Arg-니트로아닐리드, 벤조일-Arg-나프틸아미드, 및 α-2-마크로글로블린이 있다.

본 발명에 사용된 프로테아제 억제제는 효소같은, 펩티드 또는 단백질일 수도 있다. 이러한 억제제의 비-제한적 예는 세르핀인데, 알파-1-안티트립신, 보체 1-억제제, 안티트롬빈, 알파-1-안티키모트립신, 플라스미노겐 활성제 억제제 1, 및 뉴로세르핀이 있다.

전형적으로 피부 관리 준비에 포함되는 성분은 업계에 잘 알려져 있다. 생체활성 펩티드 성분에 비해, 본 발명은 니아신아미드, 피탄트리올, 파르네솔, 비사보롤 및 살리신산 같은 다른 활성제를 함유할 수 있다. 어떤 추가적 활성제가 생체 활성 펩티드 성분과 시너지효과를 내며 작용하거나, 또는 제형의 품질 수명을 향상시킬 것으로 예상된다.

조성물이 동물 또는 사람 피부와 인접한 경우, 추가적 성분은 각질조직으로 적용하기 적합하게 선택되어야 한다 (즉, 안정한, 낮은 독성, 저자극성). CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992)는 본 발명의 조성물을 사용하기 적합한 피부 관리 산업에 보통 사용되는 다양한 비-제한적 화장품 및 약학적 성분에 대해 설명하는데, 그 전문은 본원에 참고로 포함된다. 이 성분들의 예는 다음을 포함한다: 연마재, 흡착제, 향기, 안료, 색소/색료, 에센셜 오일, 피부 감각물, 수렴제, 등 같은 미적 요소 (예를 들어, 클로브 오일, 맨톨, 장뇌, 유칼리 오일, 유게놀, 멘틸 락테이트, 위치 하젤 디스틸레이트), 항-여드름제 (예를 들어, 레조르시놀, 황, 살리실산, 벤조일 퍼옥시드, 에리트로마이신, 아연), 항-고화제, 폼억제제, 항미생물제 (예를 들어, 요오드프로필 부틸카르바메이트), 항산화제, 결합제, 생물학적 첨가물, 완충제, 팽창제, 킬레이트화제, 화학 첨가물 , 변성제, 외용 진통제, 폴리머 (예를 들어, 에이코센 및 비닐 피롤리돈의 코폴리머), 불투명화제, pH 조정제, 압축가스, 환원제, 품질강화제, 피부 표백제 및 미백제 (예를 들어, 히드로퀴논, 코지산, 아스코르브산 (비타민 C), 마그네슘 아스코르빌 인산염, 아스코르빌 글루코사민), 피부 컨디셔닝제 (예를 들어, 다양한 및 폐색을 포함한 보습제), 피부 진정제 및/또는 치유제 [판테놀 및 유도체 (예를 들어, 에틸 판테놀)], 알로에 베라, 판토텐산 및 그 유도체, 알란토인, 비사보롤, 이칼륨 글리시리진산, 증점제, 입상 물질, 구조화제 및 비타민. 이 시약 중 많은 것들이 미국 특허 번호 6,492,326에, 특히 다양한 구성 요소 설명에 관하여, 자세히 설명되는데, 그 전문은 본원에 참고로 포함된다.

본 발명의 조성물은 금속 산화물 같은 입상 물질을 함유할 수도 있다. 이 입자들은 코팅되거나 코팅되지 않은, 충전되거나 충전되지 않을 수 있다. 본 발명의 준비에 유용한 입상 물질의 비-제한적 예는 비스무트 옥시클로라이드 , 철 옥시드, 운모, 화산 바륨 및 Ti0₂처리된 운모, 실리카, 나일론, 폴리에틸렌, 활석, 스티렌, 폴리프로필렌, 에틸렌/아크릴산 코폴리머, 견운모, 알루미늄 옥시드, 실리콘 레진, 황화바륨, 탄산칼슘, 셀룰로즈 아세테이트, 티타늄 디옥시드, 폴리메틸 메타크릴산염, 및 이들의 혼합물이 있다. Ti0₂, ZnO, 또는 ZrO₂ (이산화지르코늄) 같은 무기물 입상 물질은 다수의 공급원으로부터 상업적으로 이용가능하다. 조성물 내에서 입상 물질은 0.01 중량% 내지 2 중량%, 또는 0.05 중량% 내지 1.5 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 1 중량%의 수준으로 존재할 수 있다 (모두 대략 측정한다).

본 발명의 조성물은 보습제, 수분 크림, 또는 피부 컨디셔너로부터 선택된 컨디셔닝제를 함유할 수도 있다. 이 다양한 물질은 사용될 수 있고 각각은 조성물의 대해무게비 0.01 중량% 내지 20 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.5 중량% 내지 7 중량%의 수준에서 존재할 수 있다 (모두 대략 측정한다). 이 물질들은 구아니딘; 요소; 글리콜산 및 글리콜산염 (예를 들어, 암모늄 및 네 개의 알킬 암모늄); 살리실산; 젖산 및 젖산염 (예를 들어, 암모늄 및 네 개의 알킬 암모늄); 다양한 형태 중 어느 것의 알로에 베라 (예를 들어, 알로에 베라 겔); 소르비톨, 마니톨, 자일리톨, 에리트트리올, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 및 헥실렌 글리콜 같은 폴리히드록시 알콜; 폴리에틸렌 글리콜들; 당 (예를 들어, 멜리비오스) 및 탄수화물; 당 및 탄수화물 유도체 (예를 들어, 알콕실화 글루코스, 과당, 글루코사민); 히알루론산; 락타미드 모노에탄올아민; 아세트아미드 모노에탄올아민; 판테놀; 알란토인; 바셀린; 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 제한되지는 않는다.

본 발명의 조성물은 구조화제를 함유할 수 있는데, 수중유 에멀젼의 제조에 사용될 수 있다. 어떤 이론에 의해 제한되지 않고, 구조화제는 조성물의 안정성에 기여하는 조성물에 유동학적 성질의 제공을 돕는다고 생각된다. 예를 들어, 구조화제는 액체 결정 겔 네트워크 구조의 형성을 돕는 성향이 있다. 구조화제는 또한 에멀젼화제 또는 계면활성제로서 작용할 수도 있다. 본 발명은 조성물의 하나 이상의 구조화제의 약 0.1 중량% 내지 20 중량%, 약 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 약 0.5 중량% 내지 9 중량%를 함유할 수도 있다 (모두 대략 측정한다).

본 발명에 포함될 수 있는 구조화제는 스테아르산, 팔미트산 , 스테아릴 알콜, 세틸 알콜, 베헤닐 알콜, 평균 약 1에서 약 5개의 에틸렌 옥시드 유닛을 갖는 스테아릴 알콜의 폴리에틸렌 글리콜 에테르, 평균 약 1에서 약 5개의 에틸렌 옥시드 유닛을 갖는 세틸 알콜의 폴리에틸렌 글리콜 에테르, 및 이들의 혼합물로부터 선택된다. 본 발명에 사용될 수 있는 다른 구조화제는 스테아릴 알콜, 세틸 알콜, 베헤닐 알콜, 평균 약 2개의 에틸렌 옥시드 유닛 (스테아레스-2)을 갖는 스테아릴 알콜의 폴리에틸렌 글리콜 에테르, 평균 약 2개의 에틸렌 옥시드 유닛을 갖는 세틸 알콜의 폴리에틸렌 글리콜 에테르, 및 이들의 혼합물로부터 선택된다.

본 발명의 펩티드의 추가적 특징, 생산 양식 및 사용은, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,974,799 및 5,492,894에 설명된다. 이 특허 둘 다 그 전문은 본원에 참고로 포함된다.

방법

펩티드 투여에 의해 포유동물의 조직에서 신생물 성장을 억제 또는 방지하는 방법으로 묘사된 본 발명이 여기에 설명되었다. 어떤 특정 메카니즘의 작용에 국한되지 않고, 개시된 펩티드의 항-신생물 활성은 체크포인트 키나제-2 (Chk2) 같은 세포 주기 체크포인트 키나제의 활성을 억제하는 능력과 관련이 있다. 세포가 DNA 손상을 겪은 후 활성화된 Chk 단백질의 억제는 DNA 복구가 발생한 시간 동안 세포를 세포 주기 어레스트의 등장으로부터 방지한다. DNA 복구가 원래의 상태로 서열을 되돌릴 수 있지만 (즉, 비-돌연변이), 큰 유전적 손상을 그렇게 하는 것은 보통 불충분하다. 후자의 상황에서, 복구과정은 종종 발암 과정 (예를 들어, 발암 유전자의 활성화, 종양 억제 또는 게이트키퍼 유전자의 비활성화)에 기여할 수 있는 유전적 변이를 고정한다 (영구적으로 만든다). Chk 단백질 활성 억제를 통한 세포 주기 어레스트의 차단 또는 감소에 의해, 세포는 분열 과정에서 어떤 DNA 손상 사건 (예를 들어, DNA 이중-가닥 붕괴)의 파괴 효과 때문에, 아폽토시스가 유발되는 동안, 계속해서 유사분열할 수 있다. DNA 손상은 또한 유전 독성 자극을 나타낸다. 그러므로 아폽토시스는 해로운 유전적 변화를 지니는 세포를 제거한다; 만약 세포 주기 어레스트가 완전히 활성화되도록 허용됨으로써 DNA "복구"가 일어나는 것이 허용된다면 이러한 세포는 잠재적으로 살아남을 것이고 신생물의 발달을 위해 전구체로서 제공할 것이다. 이런 방식으로, 본 발명은 DNA 손상 시약의 효과 때문에 일어난 조직의 돌연변이의 축적을 감소시키기 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 펩티드에 의해 방지, 억제, 또는 치료된 신생물의 성장은 양성, 전암성, 또는 발암성일 수도 있다 (즉, 악성). 이런 이유 때문에 개시된 펩티드는 화학 예방, 화학 예방, 항암, 항신생물, 항발암성, 또는 화학적 치료 활성을 갖는다고 생각될 수도 있다. 조직의 신생물 성장 또는 병변의 방지 또는 억제에 관하여, 하나 이상의 펩티드는 달리 명백한 (거시적인) 신생물의 징후를 보여주지 않는 조직에 투여될 수 있다. 예를 들어, 펩티드는 돌연변이원성 손상의 발생 전 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 48, 72, 96, 또는 120 시간 사전 손상) (예를 들어, 태양 노출 전 피부에 국부적으로 적용된), 또는 돌연변이원성 손상으로 고통받은 직 후 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 48, 72, 96, 또는 120 시간 사후 손상) (예를 들어, 태양 노출 전 피부에 국부적으로 적용된), 건강한 조직에 투여될 수 있다. 피부 관리에 관하여, 펩티드는 자외선 차단제 또는 태양 후 대비에 적용될 수 있다. 펩티드는 또한 조직에서 돌연변이의 증가를 방지 또는 억제를 위해 사용될 수 있는데, 그 조직은 완전히 건강하거나 또는 작은 양성 또는 전암성 병변을 함유할 수도 있다. 이러한 사용은 양성 또는 전암성 병변의 발암성/악성 병변으로의 전이를 방지 또는 억제할 수 있고 (즉, 종양 형성을 방지 또는 억제), 따라서 양성 또는 전암성 병변의 치료하는 것이라고 말할 수 있다. 또 다른 특징에서는, 본 발명은 피부 또는 다른 조직에서 과형성을 방지 또는 억제하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명에 의해 발생이 방지되거나 억제되고, 또는 치료되는 양성 및/또는 전암성 신생 피부 병변의 예는 피부섬유종 (dermatofibromas), 상피낭종 (epidermal cysts), 혈관종 (hemangiomas), 검붉은 모반 (port-wine stains), 림프관종 (lymphangiomas), 화농성 육아종 (pyogenic granulomas), 성망상혈관증 (거미상모반), 켈로이드 (keloids), 각질극 세포종 (keratoacanthomas), 지방종 (lipomas), 기태 (moles), 발육부전모반 (dysplastic nevus), 지루성 각화증 (seborrheic keratoses), 피부 태그 (skin tags), 피지선 증식증 (sebaceous hyperplasia), 건선 (psoriasis) 및 화학선 각화증 (태양광 각화증)이 있다. 본 발명에 의해 발생이 방지되거나 억제되고, 또는 치료되는 피부에 악성 피부 병변/종양 (즉, 피부암)의 예는 기저 세포 암종 (예를 들어, 결절성 기저 세포 암종 (nodular basal cell carcinoma), 낭성 기저 세포 암종 (cystic basal cell carcinoma), 반흔성 기저 세포 암종 (cicatricial basal cell carcinoma), 침윤성 기저 세포 암종 (infiltrative basal cell carcinoma), 미세 결절성 기저 세포 암종 (micronodular basal cell carcinoma), 피상성 기저 세포 암종 (superficial basal cell carcinoma), 색소성 기저 세포 암종 (pigmented basal cell carcinoma), 잠식석 궤양 [rodent ulcer (재코비 궤양)], 섬유상피종 (fibroepithelioma of Pinkus), 폴립양성 기저 세포 암종 (polypoid basal cell carcinoma), 포어-유사 기저 세포 암종 (pore-like basal cell carcinoma), 미임 기저 세포 암종 (aberrant basal cell carcinoraa), 상피 세포 암종 (squamous cell carcinoma) [예를 들어, 선낭 상피 세포 암종 (adenoid squamous cell carcinoma) 가선 상피 세포 암종 (pseudoglandular squamous cell carcinoma), 투명 세포 상피 세포 암종 (clear cell squamous cell carcinoma), 방추 세포 상피 세포 암종 (spindle cell squamous cell carcinoma), 반지 세포 상피 세포 암종 (signet-ring cell squamous cell carcinoma), 기저 상피 세포 암종 (basaloid squamous cell carcinoma), 우상암 (verrucous carcinoma), 각화극 세포종 (keratoacanthoma)], 흑색종 [예를 들어, 악성 흑자 흑색종 (lentigo maligna melanoma), 표재 확장성 흑색종 (superficially spreading melanoma), 선단 흑자성 흑색종 (acral lentiginous melanoma), 점막 흑색종 (mucosal melanoma), 결절 흑색종 (nodular melanoma), 폴립양성 흑색종 (polypoid melanoma), 결합 조직 형성 흑색종 (desmoplastic melanoma), 무색소성 흑색종 (amelanotic melanoma), 연조직 흑색종 (soft-tissue melanoma), 포도막 흑색종 (uveal melanoma)], 융기성 피부 섬유 육종 (dermatofibrosarcoma protuberans), 메르켈 세포 암종 (Merkel cell carcinoma), 카포시 육종 (Kaposi's sarcoma), 각화극 세포종 (keratoacanthoma), 방추 세포 종양 (spindle cell tumors), 피지선암종 (sebaceous carcinomas), 소피낭체 부속성 암종 (microcystic adnexal carcinoma), 비정형 피부 섬유종 (atypical fibroxanthoma), 평활 근육종 (leimyosarcoma), 및 혈관육종 (angiosarcoma)이 있다.

따라서, 본 발명은 영향을 받는 세포 (즉, 신생물을 일으키는 세포 형태)가 상피 세포, 간엽 세포, 각질 세포, 섬유아 세포, 멜라닌 세포, 피부 줄기 세포, 또는 피부 전구 세포인 피부에서 신생물의 발달 및/또는 진행을 방지, 억제, 또는 치료한다. 본 발명의 표적화된 피부의 조직은 기저층, 유극층, 과립층, 투명층 및 각질층을 포함하는 상피; 유두층 및 망상층을 포함하는 내피; 지방 조직, 연결 조직, 신경 조직 및 혈관을 포함하는 피하조직이다. 앞서 상기 조직, 층 및 세포 형태 모두는 본 발명에 의해 표적화되었다.

본 발명에 의해 발생이 방지 또는 억제되거나, 치료되는 양성 및/또는 전암성 신생물 병변 또는 성장 프로필의 다른 예는 과형성, 형성 장애 및 변질 형성이다. 본 발명에 의해 방지, 억제, 또는 치료되는 발암성 신생물 병변의 다른 예는 폐암, 뼈 암, 췌장암, 위장, 두경부암, 자궁암, 난소암, 부인암 , 직장암, 위암 , 결장암, 유방암, 자궁암, 나팔관 암종, 자궁 내막암, 자궁 경부암, 질암, 여성 외부 생식기 암, 악성 림프종, 식도암, 소장암, 결장암, 내분비 계통 암, 갑상선 암, 부갑상선 암, 부신 암, 연조직 육종, 요도암 , 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구성 림프종, 방광암, 신장 또는 요관암, 신장 세포 암종, 신우암, 중추신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 중추신경계 임파선종, 척추 축 종양, 뇌암, 뇌하수체 선종, 혈관종, 신경교종, 또는 아 세포종이 있다.

본 발명은 화장품으로서 또는 피부의 화장품 치료에 실행될 수 있다. 따라서, 본 발명은 색조, 탄성, 수화, 착색, 단단함 및 매끄러움 같은 정상적, 건강한 피부 특성을 유지하기 위해 작용한다. 모든 특징들은 피부에서 손상된 세포 양의 증가와 함께 분해할 수 있는데, 이러한 손상된 세포는 피부에서 돌연변이원의 효과 및/또는 돌연변이의 축적으로부터 얻어진다. 따라서 본 발명은 피부 노화의 효과를 방지, 억제 또는 치료할 수 있다; 광 피부 노화가 한 예인데, UV 광 노출 정도의 기능 때문에 부분적으로 피부가 노화된다. 본 발명에 의해 표적화된 광 피부 노화의 효과는 예를 들어, 주름, 반점 및/또는 색소침착과도, 거칠거나 가죽 같은 피부, 늘어짐/처짐, 황화, 건조 및 다양한 신생물이 있다.

본 발명의 실행에서 표적화될 수 있는 조직은 피부 및 관련된 피부의 점막 조직이다. 상피 세포를 함유하는 피부의 관련된 점막 조직은 피부와 유사한 방식으로 조직된 조직이고, 피부와 함께 직접적으로 연관되어 있다. 이러한 조직의 예는 구강, 비인두, 귀, 항문 및 비뇨 생식기 표면, 뿐만 아니라 눈의 안검결막 (palpebral conjunctiva)이 있다. 본 발명의 실행에서 표적화될 수 있는 다른 조직은 외배엽, 중배엽 및 내배엽으로부터 유도체이거나, 또는 상피 세포, 간엽 세포 (예를 들어, 섬유아 세포), 근육 세포, 또는 신경 세포 (예를 들어, 뉴런)을 포함한다. 본 발명에 의해 표적화된 다른 기관, 기관계 및 조직은 예를 들어, 순환계(예를 들어, 심장, 혈액, 혈관), 소화계 (예를 들어, 침샘, 식도, 위, 간, 담낭, 췌장, 소장 및 대장, 항문), 내분비계 (예를 들어, 시상 하부, 뇌하수체, 송과선, 갑상선, 부갑상선, 부신), 피부계통 (예를 들어, 피부, 머리카락, 손톱), 림프계 (예를 들어, 림프절 및 림프관), 면역계 (예를 들어, 편도선, 아데노이드, 흉선, 비장), 근육계 (예를 들어, 심장근육, 평활근, 골격근), 신경계 (예를 들어, 뇌, 척수, 말초신경, 신경), 생식계 (예를 들어, 난소, 나팔관, 자궁, 질, 유선, 고환, 수정관, 정낭, 전립선, 음경), 호흡계 (예를 들어, 인두, 후두, 기관, 기관지, 폐, 횡경막), 골격계 (예를 들어, 뼈, 연골, 인대, 힘줄), 및 배설계 (예를 들어, 신장, 요관, 방광, 요도)가 있다.

본 발명의 실행에 사용된 바와 같이, 개시된 펩티드는 내인성 또는 이소성 (환경적) 근원의 돌연변이원에 노출로부터 얻어진 조직의 돌연변이 축적을 감소시킴으로써 신생물의 발생 (예를 들어, 과형성)을 제한하는 작용을 할 수 있다. 돌연변이원 노출 시간은 급성 또는 만성일 수도 있다. 일반적으로, 본 발명은 이소성 돌연변이원/발암원 노출의 결과로서 돌연변이 축적을 차단하기 위해 설계될 수 있다.

여기에 논의된 바와 같이 이소성 돌연변이원의 예 (즉, 주위 환경으로부터 동물의 외부에서 발생한 것들은 자외선 (UV) 광 (즉, UV 광) (UV-A, UV-B, UV-C), 이온화 방사선 (예를 들면, X-선, 감마선, 알파 입자), 염기 유사체 (예를 들면, 5-브로모우라실, 탈아미노화제 [예를 들어, 아질산 (아질산염)], 니트로아민, 끼어들기 시약 (예들 들어, 에티듐 브로마이드, 프로플라빈, 다우노마이신, 독소루비신, 아드리아마이신), 탈리도미드, 닥티노마이신, 아플라톡신, 아크리딘), 알킬화제 (예를 들어, 에틸니트로소요소), 브롬, 열, 나트륨 아지드, 소랄렌, 벤젠, 벤조-피렌, 비소, 석면, 카드뮴, 크롬, 에틸렌 옥시드, 니켈, 라돈, 비닐 클로라이드, 납 및 바이러스가 있다. 내인성 돌연변이원의 예는 5-라에틸시토신, 활성 산소종 (예를 들어, 질소 산화물, 과산화물) 및 전위요소가 있다. 본 발명은 또한 어떤 자극물의 적용으로부터 얻을 수 있는 조직에서 돌연변이 축적의 차단과 관련이 있다. 예를 들어, 자극물은 만성 염증질환을 자극할 수 있는데, 다양한 조직에서 암 형성으로 이끌 수 있다.

다른 화학 예방 및/또는 항암제는 본 발명의 실행에서 개시된 펩티드와 함께 투여될 수도 있다. 이러한 투여는 개시된 펩티드 및 또 다른 화학 예방제를 같은 조성물에서 함께 포함할 수도 있고, 펩티드 및 시약이 치료/방지 식이요법 중 다른 시점에 적용되는 방식을 할 수도 있다. 개시된 펩티드 및 다른 화학 예방제 둘 다 사용하는 것은 화학 예방 활성의 상승 효과를 창조할 수 있다. 본 발명에서 함께 사용될 수 있는 화학 예방 및/또는 항암제의 예는 피토케미칼, 카페인, 커피산, 제니스테인, 레스베라트롤, 다이알릴 황화물, S-알릴 시스테인, 알리신, 리코펜, 캡사이신, 커큐민, 6-진저롤, 엘라그산, 우르솔릭산 , 실리마린 , 아네톨, 카테킨, 에모딘, 설포라판, 유게놀, 이소루게놀, 베타-카로틴, 올레안드린, 폴리페놀, 인돌 (예를 들면, 디-인돌릴메탄, 인돌-3-카르비놀), 이소티오시아네이트 (예들 들면, 펜에틸이소티오-시아네이트), 비스테로이드성 항-염증제 (NSAIDS) (예를 들면, 셀레콕시브, 이부프로펜, 설린닥, 아스피린), PPAR-감마 작용제 (예를 들어, 피오글리타존, 로시글리타존), 레시퀘모드, 이미퀴모드, 레티노이드 (예를 들어, 모든-트랜스-레티노산), 9-씨스- 또는 13-씨스-레티노산, 4-히드록시레틴아미드), 벡사로틴, 타라로틴, 셀레늄, 소이 이소플라본, 스타틴 (예를 들어, 아토르바스타틴), 항산화제 및 비타민 D 유사체를 함유한 황 (예를 들어, 에르고칼시페롤, 콜레칼시페롤)이 있다.

어떤 화학적 치료 또는 다른 시약 (예를 들어, 감마-광)을 사용하여 암 세포에 DNA 손상을 가하기 위한 한 가지 목적은 암 세포가 아폽토시스를 겪게 함으로써 종양 퇴행 효과를 유발하기 위한 것이다. 그러나, DNA 손상에 반응하는 세포 주기 어레스트의 유발은 이 원하는 결과를 억제할 수 있다. 그러므로, 본 발명의 또 다른 특징은 암 (예를 들어, 피부암)또는 어느 다른 형태의 신생물을 치료하기 위해 DNA 손상제와 조합으로 개시된 펩티드를 사용하는 것이다. 이 방법의 근거는 하기 논의된 바와 같이 DNA 손상된 세포가 아폽토시스 (즉, 암 세포를 살아있게 허용하는, 세포 주기 어레스트 대신 아폽토시스를 경험하도록 세포를 자극함)에 민감하게 만들기 위한 개시된 펩티드의 능력이다. 본 발명의 실행에 사용될 수 있는 DNA 손상제는 예를 들어, 알킬화제, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 메클로에타민, 시클로포스파미드, 클로람부실, 질소 머스타드, 메클로에타민, 이포스프아드, 멜파란, 니트로소요소, 스트렙토조신, 카무스틴 (BCNU), 로무스틴, 알킬 술포네이트, 부설판, 벤다무스틴, 트리아진, 다카르바진 (DTIC), 테모졸로미드 , 에틸렌이민, 티오테파, 알트레타민, 헥사메틸멜라민, 대사 길항 물질, 6-메르캅토퓨린 , 다크라바진, 플루다라빈, 5-플루오르우라실, 카페시타빈, 메토트렉세이트, 젬시타빈, 시타라빈, 페메트렉스드, 아라비노실시토신, 데시타빈, 항-종양 항생제, 안트라시클린, 다우로루비신, 독소루비신 (예를 들어, Adriamycin®), 에피루비신, 이다루비신, 액티노마이신-D, 블레오마이신, 미토마이신-C, 네오카르지노스타틴, 미톡사트론, 토포이소머라제 억제제, 토포이소머라제 I 억제제, 토포테칸, 이리노테칸, 토포이소머라제 II 억제제, 에토포시드, 테니포시드, 식물 알칼로이드, 탁사네스, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에포틸, 익사베필론 , 일일초 알칼로이드, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈오렐빈 , 에스트라무스틴, 광, 감마선, X-선 및 자외선 광가 있다. 이 시약 중 하나 이상은 개시된 펩티드와 조합으로, 또는 대안으로 병변에 적용될 수도 있는데, 펩티드 및 DNA 손상제가 치료 식이요법 중 다른 시점에 적용되는 계획이 실행될 수 있다.

본 발명의 특징은 체크포인트 키나제 (Chk) 활성의 억제이다. 예를 들어, 본 발명은 피부 세포 같은 포유동물 세포에서 DNA 손상에 의해 활성화되는 Chk2의 억제와 관련이 있다. 이러한 DNA 손상 및/또는 Chk 활성은 예를 들어, 환경에서 현재 UV 광 또는 어느 다른 돌연변이원에 노출을 통해 세포에서 유발될 수도 있다. UV 광에 의해 유발된 DNA 손상은 일반적으로 시클로부탄 피리미딘 다이머 및 6-4 피리미딘-피리미돈 산물을 포함한다. 특정한 이론 또는 메카니즘에 국한되지 않고, Chk는 cdc25c 같은 cdc25 (세포 분열 주기 25) 포스파타제에 대한 억제 키나제 활성을 차단 또는 하향조절/하향-조절하는 개시된 펩티드의 능력에 의해 억제된다. 정상적인 세포 조건 하에 (DNA 손상 거의 없거나 전혀 없음), cdc25c는 유사분열로 이끄는 신호 캐스케이드를 설정하지만,DNA 손상 조건 하에, 활성화된 Chk는 cdc25c를 억제한다. 그러므로, Chk 활성의 차단은 정상적으로 (즉, Chk가 억제되지 않음) cdc25c를 하향조절하는 DNA 손상 조건 하에서도 cdc25c가 유사분열을 위한 시그날링이 가능한 기회를 증가시킨다. 유사분열로 입장이 허용된 DNA 손상된 세포는 나중에 아폽토시스에 의해 제거되고, DNA 손상과 정상 유사분열 과정은 양립할 수 없다. 따라서, 본 발명의 특징은 아폽토시스를 통한 DNA 손상된 세포의 제거를 유발하는 것과 관련이 있다. 본 발명의 또 다른 특징은 DNA 손상에 반응하여 정상적으로 발생하는 세포 주기 어레스트의 억제와 관련이 있다.

본 발명에 의해 표적화된 Chk 효소의 예는 Chk1 및 Chk2인데, 둘 다 업계에 잘 알려져 있다. 이 세린/트레오닌 키나제는 구조적으로 및 기능적으로 진핵생물 종에 걸쳐 보존되고, 그것의 사람 버전은 사람 cdc25c 포스파타제를 세린 216 [또는 등가 세린 잔기, Chk-표적화된 서열이 cdc25c 변종 중에 있는 곳에 의존적 (예를 들어, 스플라이스 변종)]에서 인산화한다. Chk1- 및/또는 Chk2- 매개된 cdc25c의 인산화 (예를 들어, 세린-216 위치 또는 등가 세린 잔기에서)를 억제하기 위한 본 발명의 펩티드 사용 방법은 본 발명의 일부이다. 본 발명은 Chk 단백질이 생체 내에서 자연적으로 세포 내에 존재하기 때문에 Chk 단백질을 표적화할 수 있다.

활성화된 Chk 효소 (DNA 손상에 반응하여 존재하는 것 같이)는 DNA 손상에 민감한 경로에서 업스트림 요소 [예를 들어, ATM (아탁시아 텔란기엑타시아-돌연변이된 단백질), ATR (ATM-RAD3-관계된 단백질)]에 의해 인산화됨으로써 또는 자동인산화를 통해서 활성화될 수 있다. Chk의 비-활성화 형태는 활성화된 Chk 형태와 비교해서 키나제 활성이 거의 없거나 전혀 없을 수도 있다. 예를 들어, 활성화된 Chk 효소는 cdc25c를 인산화할 수 있다. 이 효소를 활성화할 수 있는 Chk2 인산화 부위의 예는 트레오닌-26, 세린-50, 트레오닌-68, 트레오닌-383 및/또는 트레오닌-387 잔기 위치 [또는 Chk2 변종 (예를 들어, 스플라이스 변종)에 있는 이들의 등가 위치]가 있다. 이 효소를 활성화할 수 있는 Chk1 인산화 부위의 예는 세린-286, 세린-301, 세린-317 및/또는 세린-345 잔기 위치 [또는 Chk1 변종 (예를 들어, 스플라이스 변종]에 있는 이들의 등가 위치)가 있다.

Chk2는 사람에서 CHEK2 유전자에 의해 암호화되는데, 도 3에서 도시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다 (SEQ ID NO: 17). 사람 Chk2는 또한 업계에서 "CHK2 체크포인트 상동체 (S. Pombe)", CDS1 및 Rad53으로 알려져 있다. 사람 Chk2 및 다른 포유동물 Chk2 단백질 서열이 알려진 이래, SEQ ID NO: 17는 참고 목적으로만 제공된다. 예를 들어, NCBI 웹사이트 (또는 GenBank)는 접수번호 AAH04207, BAB17231, NP_009125, NP_001005735, NP_665861, 096017, AAS58460, AAD48504, AAC83693, EAW59757, EAW59756, EAW59754, CAX11959, CAX11958, CAX11957, CAX14028, CAX14027, CAX14026, CAH73823, CAH73875, AAV41895 및 BAF83443 하에 사람 Chk2 아미노산 서열을 개시하고, 모든 서열은 본원에 참고로 포함된다. 본 발명을 실행하는 목적을 위해, Chk2는 SEQ ID NO: 17와 적어도 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성될 수도 있다.

Chk1은 사람에서 CHEK1 유전자에 의해 암호화되는데, 도 4에서 도시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다 (SEQ ID NO: 18). 사람 Chk1는 또한 업계에서 "CHK1 체크포인트 상동체 (S. Pombe)"로 알려져 있다. 사람 Chk1 및 다른 포유동물 Chk1 단백질 서열이 알려진 이래, SEQ ID NO: 18는 참고 목적으로만 제공된다. 예를 들어, NCBI 웹사이트 (또는 GenBank)는 접수번호 AAC51736, AAW02681, AAH04202, BAF85238, BAA84577, CAB70558, 014757, AAM58752, AAM78553, CAD10662, AAH17575, AAE84492, CAZ65679, AAB88852, ABM83833, ABM87141, AAE67465, AAE67917, AAX36253, BAI45672, NP_001107594 및 NP_001265 하에 사람 Chk1 아미노산 서열을 개시하고, 모든 서열은 본원에 참고로 포함된다. 본 발명을 실행하는 목적을 위해, Chk1는 SEQ ID NO: 18와 적어도 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성될 수도 있다.

cdc25c (세포 분열 주기 25c)는 티로신 포스파타제인데, 사람에서 CDC25C 유전자에 의해 암호화되고 도 5에 도시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다 (SEQ ID NO: 19). 사람 cdc25c는 또한 업계에서 "M-기 유발자 포스파타제 3" 및 "세포 분열 주기 25 상동체 C (S. Pombe)"로 알려져 있다. 사람 cdc25c 및 다른 포유동물 cdc25c 단백질 서열이 알려진 이래, SEQ ID NO: 19는 참고 목적으로만 제공된다. 예를 들어, NCBI 웹사이트 (또는 GenBank)는 접수번호 AAR32098, P30307, NP_001781, AAX36531, EAW62145, EAW62149, AAX29802, AAX29802, ABP29523, EAW62148, BAG63273, AAA75741, AAE74714, AAH19089 및 AAA35666 하에 사람 cdc25c 아미노산 서열을 개시하고, 모든 서열은 본원에 참고로 포함된다. 본 발명을 실행하는 목적을 위해, Chk2는 SEQ ID NO: 19와 적어도 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성될 수도 있다.

본 발명의 특징은 cdc25c에 대해 활성화된 Chk2 활성의 하향조절을 차단하는 것으로 묘사되지만, 유사하게 하나 이상의 다른 단백질 표적에 대해 Chk2의 활성을 차단하는 것으로 묘사되었다. 추가적 Chk2 단백질 표적은 예를 들어, E2F-1, p53, cdc25a, BRCA-1, PML, Che-1, Hdmx, Trf2, FoxMl, pRB 또는 mdm2이다. 게다가, 본 발명은 예를 들어, cdc25c 뿐만 아니라, p53, cdc25a, cdc25b, Rad51, 폴리-A-결합 단백질, 오로라-B, 토즐-유사 키나제-1, 위-1 또는 BLM에 대해서도 Chk1 활성의 하향조절을 차단하는 것으로 묘사되었다.

다음 실시예는 본 발명의 어떤 구체예를 증명하기 위해 포함되었다.

실시예

돌연변이원 또는 자극물에 노출로부터 얻을 수 있는 피부에 독성을 방지 또는 완화하기 위해 적용 가능한 짧은 펩티드를 확인하기 위해 연구를 수행하였다. 사전에 알려진 DNA 손상 복구 경로에서 카페인의 억제 효과 및 상피에서 이 억제의 항암 효과를 감안하여, 어떤 관계된 펩티드의 유사하게 DNA 손상 복구 경로를 억제하는 능력에 대해 검정하였다. 이를 위해, 펩티드가 DNA 손상 복구 경로의 Chk2 (체크포인트 키나제 2)-cdc25c (세포 분열 주기 25 상동체 C 단백질) 가지를 차단하는 능력에 대해 검사하였다.

Chk2는 DNA 손상에 민감한 단백질에 의해 활성화되며, 인산화로 인한 cdc25c 억제에 의해 세포 주기 어레스트를 유발하는데, 유사분열로 이끄는 시클린 의존적 키나제 활성의 상향 조절을 수반하는 포스파타제이다. DNA 손상 복구 경로에서 이 단백질들의 상호작용 및 하기 논의된 시약과의 상호작용을 다음 도식에서 요약한다:

다음의 방법론을 사용하여 cdc25c의 탈활성을 억제하기 위해 펩티드를 개발하였다. 모든 펩티드를 Advanced ChemTech (Louisville, KY) Apex 396 Multiple Peptide Synthesizer에서 표준 Fmoc 화학을 사용하여 합성하였다. 분열 후, 펩티드는 역상 C-18 칼럼을 사용하여 HPLC를 통해 정제하였고 그때 질량 분석계로 분석하였다. 주요 서열 확인 및 예비 정제는 LC/MS/MS 시스템 (ABI API2000)을 사용하여 성취하였다. 이 특정 예 (SEQ ID NOs: 2 내지 6 및 8 내지 10)에서 사용된 모든 펩티드는 카르복시 말단 아미드화 되었다 (-CONH₂).

cdc25c의 Chk2 인산화에서 SEQ ID NOs: 2 내지 6 및 8 내지 10의 억제 활성은 Calbiochem EMD Biosciences (San Diego, CA)로부터 이용가능한 K-LISA™ Checkpoint Activity Kit을 사용하여 제조자의 지시대로 측정하였다. 이 검사에서 활성화된 사람 Chk2 효소는 Sigma (St. Louis, MO)에서 얻었다. 일반적 키나제 억제제, 스타우로스포린 (10 μΜ 최종 농도)은 Chk2 활성 억제를 위해 양성 대조군으로서 사용되었다. 개개의 검사 펩티드 (SEQ ID NOs: 2 내지 6 및 8 내지 10)를 최종 농도 50 μg/mL로 Chk2와 함께 배양하였다. 간단히, K-LISA™ 검정은 Chk2에 의해 세 번째 세린에서 인산화될 수 있는 (Chk1 단백질에 의해서 또한 인산화될 수 있는) 비오틴이 부착된 펩티드 기질 (KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR, SEQ ID NO: 12)을 활용하였다. 이 기질은 SEQ ID NO: 12가 Chk2에 의해 세린 인산화의 표적화된 서열을 함유하기 때문에 cdc25c 대신 제공되었다.

추가된 시약 (스타우로스포린 또는 SEQ ID NOs: 2 내지 6 및 8 내지 10 중 하나) 여부에 상관없이 Chk2를 함유하는 비오틴이 부착된 기질 펩티드 및 샘플은 스트렙타비딘 코팅된 96-웰 플레이트의 웰에 ATP를 넣고 배양하였다. Chk2 및 기질에 의한 기질 인산화가 허용된 이 배양은 단일 단계에서 포착된다. 배양 후, 인산화된 기질은 항-포스포세린 1차 항체, 색 발달을 위해 겨자 퍼옥시다제 (HRP)가 결합된 2차 항체 및 TMB (테트라메틸벤지딘) 기질을 사용하여 검출하였다 (1차 및 2차 항체, 및 TMB는 K-LISA™ kit에서 제공되었다). 검정 민감도는 키트에서 제공된 정지 용액을 추가함으로써 증가되었다. 상대적 Chk2 활성은 450/540 nm 이중 파장에서 각 웰의 흡광도를 읽음으로써 결정하였다.

SEQ ID NOs: 2, 3, 5, 6, 8, 및 10 모두는 기질 펩티드에 대해 Chk2의 활성을 억제하였다 (도 2). 예를 들어, SEQ ID NO: 10은 Chk2 인산화 활성을 약 48%까지 감소시켰는데, 스타우로스포린에 의해 나타나는 억제 활성 (약 69%)에 근접한다. SEQ ID NOs: 5, 6 및 8은 Chk2를 억제하는 비슷한 능력을 갖고 있었다. 무엇보다, 이 데이타는 어떤 펩티드가 그것의 기질에 대한 Chk2 활성을 감소시킬 수 있다는 것을 나타내고 (즉, cdc25c), 게다가 세포 손상 시약에 세포의 노출에 대해 생체 내에서 시작될 세포 주기 어레스트의 수준을 감소시키는 능력을 나타낸다.

여기에 개시되고 특허청구된 모든 조성물 또는 방법은 본 개시에 비추어 과도한 실험없이 만들어질 수 있고 수행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법이 어떤 구체예에 관해서 설명되지만, 본 발명의 개념, 사상 및 범위에서 벗어나지 않고 당업자들에게 변형이 조성물 및/또는 방법과 여기에 설명된 방법의 단계에서 또는 단계의 서열에서 적용될 수도 있다는 것은 분명할 것이다. 게다가 특히, 화학적 및 생리학적으로 둘 다 관련된 어떤 시약이 여기에 설명된 시약을 대신할 수도 있지만, 같거나 또는 유사한 결과를 얻을 것은 분명하다. 당업자에게 분명한 이러한 모든 유사한 대체물 및 변형체는 본 발명의 범위 내에 있을 것으로 생각된다.

이 출원에서 확인된 모든 특허 및 출판물은 본원에 참고로 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> Falla, Timothy J. Zhang, Lijuan <120> PEPTIDE PROTECTION AGAINST ULTRAVIOLET LIGHT TOXICITY <130> 11181.0043.00PC00 <150> US Provisional 61/262,790 <151> 2009-11-19 <160> 19 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 1 Asp Tyr His Thr Leu Tyr Gln Thr His Leu 1 5 10 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Tyr His Ser Leu Tyr Gln Ser His Leu 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 3 Tyr His Ser Ile Tyr Gln Ser His Ile 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Asp Phe His Ser Leu Phe Gln Ser His 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Tyr His Ser Leu Tyr Glu Ser Lys 1 5 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Phe His Ser Ile Tyr Gln Ser His 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Phe Lys Ser Leu Tyr Gln Ser 1 5 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 His Ser Leu Tyr Gln Ser His 1 5 <210> 9 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 His Ser Leu Tyr Gln Ser 1 5 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Ser Leu Tyr Gln Ser 1 5 <210> 11 <211> 529 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Met Leu Leu Ala Val Leu Tyr Cys Leu Leu Trp Ser Phe Gln Thr Ser 1 5 10 15 Ala Gly His Phe Pro Arg Ala Cys Val Ser Ser Lys Asn Leu Met Glu 20 25 30 Lys Glu Cys Cys Pro Pro Trp Ser Gly Asp Arg Ser Pro Cys Gly Gln 35 40 45 Leu Ser Gly Arg Gly Ser Cys Gln Asn Ile Leu Leu Ser Asn Ala Pro 50 55 60 Leu Gly Pro Gln Phe Pro Phe Thr Gly Val Asp Asp Arg Glu Ser Trp 65 70 75 80 Pro Ser Val Phe Tyr Asn Arg Thr Cys Gln Cys Ser Gly Asn Phe Met 85 90 95 Gly Phe Asn Cys Gly Asn Cys Lys Phe Gly Phe Trp Gly Pro Asn Cys 100 105 110 Thr Glu Arg Arg Leu Leu Val Arg Arg Asn Ile Phe Asp Leu Ser Ala 115 120 125 Pro Glu Lys Asp Lys Phe Phe Ala Tyr Leu Thr Leu Ala Lys His Thr 130 135 140 Ile Ser Ser Asp Tyr Val Ile Pro Ile Gly Thr Tyr Gly Gln Met Lys 145 150 155 160 Asn Gly Ser Thr Pro Met Phe Asn Asp Ile Asn Ile Tyr Asp Leu Phe 165 170 175 Val Trp Met His Tyr Tyr Val Ser Met Asp Ala Leu Leu Gly Gly Tyr 180 185 190 Glu Ile Trp Arg Asp Ile Asp Phe Ala His Glu Ala Pro Ala Phe Leu 195 200 205 Pro Trp His Arg Leu Phe Leu Leu Arg Trp Glu Gln Glu Ile Gln Lys 210 215 220 Leu Thr Gly Asp Glu Asn Phe Thr Ile Pro Tyr Trp Asp Trp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Glu Lys Cys Asp Ile Cys Thr Asp Glu Tyr Met Gly Gly Gln His 245 250 255 Pro Thr Asn Pro Asn Leu Leu Ser Pro Ala Ser Phe Phe Ser Ser Trp 260 265 270 Gln Ile Val Cys Ser Arg Leu Glu Glu Tyr Asn Ser His Gln Ser Leu 275 280 285 Cys Asn Gly Thr Pro Glu Gly Pro Leu Arg Arg Asn Pro Gly Asn His 290 295 300 Asp Lys Ser Arg Thr Pro Arg Leu Pro Ser Ser Ala Asp Val Glu Phe 305 310 315 320 Cys Leu Ser Leu Thr Gln Tyr Glu Ser Gly Ser Met Asp Lys Ala Ala 325 330 335 Asn Phe Ser Phe Arg Asn Thr Leu Glu Gly Phe Ala Ser Pro Leu Thr 340 345 350 Gly Ile Ala Asp Ala Ser Gln Ser Ser Met His Asn Ala Leu His Ile 355 360 365 Tyr Met Asn Gly Thr Met Ser Gln Val Gln Gly Ser Ala Asn Asp Pro 370 375 380 Ile Phe Leu Leu His His Ala Phe Val Asp Ser Ile Phe Glu Gln Trp 385 390 395 400 Leu Arg Arg His Arg Pro Leu Gln Glu Val Tyr Pro Glu Ala Asn Ala 405 410 415 Pro Ile Gly His Asn Arg Glu Ser Tyr Met Val Pro Phe Ile Pro Leu 420 425 430 Tyr Arg Asn Gly Asp Phe Phe Ile Ser Ser Lys Asp Leu Gly Tyr Asp 435 440 445 Tyr Ser Tyr Leu Gln Asp Ser Asp Pro Asp Ser Phe Gln Asp Tyr Ile 450 455 460 Lys Ser Tyr Leu Glu Gln Ala Ser Arg Ile Trp Ser Trp Leu Leu Gly 465 470 475 480 Ala Ala Met Val Gly Ala Val Leu Thr Ala Leu Leu Ala Gly Leu Val 485 490 495 Ser Leu Leu Cys Arg His Lys Arg Lys Gln Leu Pro Glu Glu Lys Gln 500 505 510 Pro Leu Leu Met Glu Lys Glu Asp Tyr His Ser Leu Tyr Gln Ser His 515 520 525 Leu <210> 12 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> kinase substrate <400> 12 Lys Lys Lys Val Ser Arg Ser Gly Leu Tyr Arg Ser Pro Ser Met Pro 1 5 10 15 Glu Asn Leu Asn Arg Pro Arg 20 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Homo Sapiens <220> <221> SITE <222> (2)..(2) <223> Leu or Ile <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> Gln or Glu <400> 13 Ser Xaa Tyr Xaa Ser 1 5 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Ser Ile Tyr Gln Ser 1 5 <210> 15 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Ser Leu Tyr Glu Ser 1 5 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Ser Ile Tyr Glu Ser 1 5 <210> 17 <211> 543 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Met Ser Arg Glu Ser Asp Val Glu Ala Gln Gln Ser His Gly Ser Ser 1 5 10 15 Ala Cys Ser Gln Pro His Gly Ser Val Thr Gln Ser Gln Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Gln Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser Ser Thr Ser Thr Met Pro Asn 35 40 45 Ser Ser Gln Ser Ser His Ser Ser Ser Gly Thr Leu Ser Ser Leu Glu 50 55 60 Thr Val Ser Thr Gln Glu Leu Tyr Ser Ile Pro Glu Asp Gln Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Gln Glu Pro Glu Glu Pro Thr Pro Ala Pro Trp Ala Arg Leu 85 90 95 Trp Ala Leu Gln Asp Gly Phe Ala Asn Leu Glu Cys Val Asn Asp Asn 100 105 110 Tyr Trp Phe Gly Arg Asp Lys Ser Cys Glu Tyr Cys Phe Asp Glu Pro 115 120 125 Leu Leu Lys Arg Thr Asp Lys Tyr Arg Thr Tyr Ser Lys Lys His Phe 130 135 140 Arg Ile Phe Arg Glu Val Gly Pro Lys Asn Ser Tyr Ile Ala Tyr Ile 145 150 155 160 Glu Asp His Ser Gly Asn Gly Thr Phe Val Asn Thr Glu Leu Val Gly 165 170 175 Lys Gly Lys Arg Arg Pro Leu Asn Asn Asn Ser Glu Ile Ala Leu Ser 180 185 190 Leu Ser Arg Asn Lys Val Phe Val Phe Phe Asp Leu Thr Val Asp Asp 195 200 205 Gln Ser Val Tyr Pro Lys Ala Leu Arg Asp Glu Tyr Ile Met Ser Lys 210 215 220 Thr Leu Gly Ser Gly Ala Cys Gly Glu Val Lys Leu Ala Phe Glu Arg 225 230 235 240 Lys Thr Cys Lys Lys Val Ala Ile Lys Ile Ile Ser Lys Arg Lys Phe 245 250 255 Ala Ile Gly Ser Ala Arg Glu Ala Asp Pro Ala Leu Asn Val Glu Thr 260 265 270 Glu Ile Glu Ile Leu Lys Lys Leu Asn His Pro Cys Ile Ile Lys Ile 275 280 285 Lys Asn Phe Phe Asp Ala Glu Asp Tyr Tyr Ile Val Leu Glu Leu Met 290 295 300 Glu Gly Gly Glu Leu Phe Asp Lys Val Val Gly Asn Lys Arg Leu Lys 305 310 315 320 Glu Ala Thr Cys Lys Leu Tyr Phe Tyr Gln Met Leu Leu Ala Val Gln 325 330 335 Tyr Leu His Glu Asn Gly Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Glu Asn 340 345 350 Val Leu Leu Ser Ser Gln Glu Glu Asp Cys Leu Ile Lys Ile Thr Asp 355 360 365 Phe Gly His Ser Lys Ile Leu Gly Glu Thr Ser Leu Met Arg Thr Leu 370 375 380 Cys Gly Thr Pro Thr Tyr Leu Ala Pro Glu Val Leu Val Ser Val Gly 385 390 395 400 Thr Ala Gly Tyr Asn Arg Ala Val Asp Cys Trp Ser Leu Gly Val Ile 405 410 415 Leu Phe Ile Cys Leu Ser Gly Tyr Pro Pro Phe Ser Glu His Arg Thr 420 425 430 Gln Val Ser Leu Lys Asp Gln Ile Thr Ser Gly Lys Tyr Asn Phe Ile 435 440 445 Pro Glu Val Trp Ala Glu Val Ser Glu Lys Ala Leu Asp Leu Val Lys 450 455 460 Lys Leu Leu Val Val Asp Pro Lys Ala Arg Phe Thr Thr Glu Glu Ala 465 470 475 480 Leu Arg His Pro Trp Leu Gln Asp Glu Asp Met Lys Arg Lys Phe Gln 485 490 495 Asp Leu Leu Ser Glu Glu Asn Glu Ser Thr Ala Leu Pro Gln Val Leu 500 505 510 Ala Gln Pro Ser Thr Ser Arg Lys Arg Pro Arg Glu Gly Glu Ala Glu 515 520 525 Gly Ala Glu Thr Thr Lys Arg Pro Ala Val Cys Ala Ala Val Leu 530 535 540 <210> 18 <211> 476 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Met Ala Val Pro Phe Val Glu Asp Trp Asp Leu Val Gln Thr Leu Gly 1 5 10 15 Glu Gly Ala Tyr Gly Glu Val Gln Leu Ala Val Asn Arg Val Thr Glu 20 25 30 Glu Ala Val Ala Val Lys Ile Val Asp Met Lys Arg Ala Val Asp Cys 35 40 45 Pro Glu Asn Ile Lys Lys Glu Ile Cys Ile Asn Lys Met Leu Asn His 50 55 60 Glu Asn Val Val Lys Phe Tyr Gly His Arg Arg Glu Gly Asn Ile Gln 65 70 75 80 Tyr Leu Phe Leu Glu Tyr Cys Ser Gly Gly Glu Leu Phe Asp Arg Ile 85 90 95 Glu Pro Asp Ile Gly Met Pro Glu Pro Asp Ala Gln Arg Phe Phe His 100 105 110 Gln Leu Met Ala Gly Val Val Tyr Leu His Gly Ile Gly Ile Thr His 115 120 125 Arg Asp Ile Lys Pro Glu Asn Leu Leu Leu Asp Glu Arg Asp Asn Leu 130 135 140 Lys Ile Ser Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Phe Arg Tyr Asn Asn Arg 145 150 155 160 Glu Arg Leu Leu Asn Lys Met Cys Gly Thr Leu Pro Tyr Val Ala Pro 165 170 175 Glu Leu Leu Lys Arg Arg Glu Phe His Ala Glu Pro Val Asp Val Trp 180 185 190 Ser Cys Gly Ile Val Leu Thr Ala Met Leu Ala Gly Glu Leu Pro Trp 195 200 205 Asp Gln Pro Ser Asp Ser Cys Gln Glu Tyr Ser Asp Trp Lys Glu Lys 210 215 220 Lys Thr Tyr Leu Asn Pro Trp Lys Lys Ile Asp Ser Ala Pro Leu Ala 225 230 235 240 Leu Leu His Lys Ile Leu Val Glu Asn Pro Ser Ala Arg Ile Thr Ile 245 250 255 Pro Asp Ile Lys Lys Asp Arg Trp Tyr Asn Lys Pro Leu Lys Lys Gly 260 265 270 Ala Lys Arg Pro Arg Val Thr Ser Gly Gly Val Ser Glu Ser Pro Ser 275 280 285 Gly Phe Ser Lys His Ile Gln Ser Asn Leu Asp Phe Ser Pro Val Asn 290 295 300 Ser Ala Ser Ser Glu Glu Asn Val Lys Tyr Ser Ser Ser Gln Pro Glu 305 310 315 320 Pro Arg Thr Gly Leu Ser Leu Trp Asp Thr Ser Pro Ser Tyr Ile Asp 325 330 335 Lys Leu Val Gln Gly Ile Ser Phe Ser Gln Pro Thr Cys Pro Asp His 340 345 350 Met Leu Leu Asn Ser Gln Leu Leu Gly Thr Pro Gly Ser Ser Gln Asn 355 360 365 Pro Trp Gln Arg Leu Val Lys Arg Met Thr Arg Phe Phe Thr Lys Leu 370 375 380 Asp Ala Asp Lys Ser Tyr Gln Cys Leu Lys Glu Thr Cys Glu Lys Leu 385 390 395 400 Gly Tyr Gln Trp Lys Lys Ser Cys Met Asn Gln Val Thr Ile Ser Thr 405 410 415 Thr Asp Arg Arg Asn Asn Lys Leu Ile Phe Lys Val Asn Leu Leu Glu 420 425 430 Met Asp Asp Lys Ile Leu Val Asp Phe Arg Leu Ser Lys Gly Asp Gly 435 440 445 Leu Glu Phe Lys Arg His Phe Leu Lys Ile Lys Gly Lys Leu Ile Asp 450 455 460 Ile Val Ser Ser Gln Lys Val Trp Leu Pro Ala Thr 465 470 475 <210> 19 <211> 473 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Met Ser Thr Glu Leu Phe Ser Ser Thr Arg Glu Glu Gly Ser Ser Gly 1 5 10 15 Ser Gly Pro Ser Phe Arg Ser Asn Gln Arg Lys Met Leu Asn Leu Leu 20 25 30 Leu Glu Arg Asp Thr Ser Phe Thr Val Cys Pro Asp Val Pro Arg Thr 35 40 45 Pro Val Gly Lys Phe Leu Gly Asp Ser Ala Asn Leu Ser Ile Leu Ser 50 55 60 Gly Gly Thr Pro Lys Arg Cys Leu Asp Leu Ser Asn Leu Ser Ser Gly 65 70 75 80 Glu Ile Thr Ala Thr Gln Leu Thr Thr Ser Ala Asp Leu Asp Glu Thr 85 90 95 Gly His Leu Asp Ser Ser Gly Leu Gln Glu Val His Leu Ala Gly Met 100 105 110 Asn His Asp Gln His Leu Met Lys Cys Ser Pro Ala Gln Leu Leu Cys 115 120 125 Ser Thr Pro Asn Gly Leu Asp Arg Gly His Arg Lys Arg Asp Ala Met 130 135 140 Cys Ser Ser Ser Ala Asn Lys Glu Asn Asp Asn Gly Asn Leu Val Asp 145 150 155 160 Ser Glu Met Lys Tyr Leu Gly Ser Pro Ile Thr Thr Val Pro Lys Leu 165 170 175 Asp Lys Asn Pro Asn Leu Gly Glu Asp Gln Ala Glu Glu Ile Ser Asp 180 185 190 Glu Leu Met Glu Phe Ser Leu Lys Asp Gln Glu Ala Lys Val Ser Arg 195 200 205 Ser Gly Leu Tyr Arg Ser Pro Ser Met Pro Glu Asn Leu Asn Arg Pro 210 215 220 Arg Leu Lys Gln Val Glu Lys Phe Lys Asp Asn Thr Ile Pro Asp Lys 225 230 235 240 Val Lys Lys Lys Tyr Phe Ser Gly Gln Gly Lys Leu Arg Lys Gly Leu 245 250 255 Cys Leu Lys Lys Thr Val Ser Leu Cys Asp Ile Thr Ile Thr Gln Met 260 265 270 Leu Glu Glu Asp Ser Asn Gln Gly His Leu Ile Gly Asp Phe Ser Lys 275 280 285 Val Cys Ala Leu Pro Thr Val Ser Gly Lys His Gln Asp Leu Lys Tyr 290 295 300 Val Asn Pro Glu Thr Val Ala Ala Leu Leu Ser Gly Lys Phe Gln Gly 305 310 315 320 Leu Ile Glu Lys Phe Tyr Val Ile Asp Cys Arg Tyr Pro Tyr Glu Tyr 325 330 335 Leu Gly Gly His Ile Gln Gly Ala Leu Asn Leu Tyr Ser Gln Glu Glu 340 345 350 Leu Phe Asn Phe Phe Leu Lys Lys Pro Ile Val Pro Leu Asp Thr Gln 355 360 365 Lys Arg Ile Ile Ile Val Phe His Cys Glu Phe Ser Ser Glu Arg Gly 370 375 380 Pro Arg Met Cys Arg Cys Leu Arg Glu Glu Asp Arg Ser Leu Asn Gln 385 390 395 400 Tyr Pro Ala Leu Tyr Tyr Pro Glu Leu Tyr Ile Leu Lys Gly Gly Tyr 405 410 415 Arg Asp Phe Phe Pro Glu Tyr Met Glu Leu Cys Glu Pro Gln Ser Tyr 420 425 430 Cys Pro Met His His Gln Asp His Lys Thr Glu Leu Leu Arg Cys Arg 435 440 445 Ser Gln Ser Lys Val Gln Glu Gly Glu Arg Gln Leu Arg Glu Gln Ile 450 455 460 Ala Leu Leu Val Lys Asp Met Ser Pro 465 470

Claims

활성화된 세포 주기 체크포인트 키나제의 활성을 감소시키는 방법으로써, 상기 방법은 펩티드에 상기 체크포인티 키나제를 노출하는 단계를 포함하고, 상기 펩티드는 길이가 5 내지 9개의 아미노산 잔기이고 상기 펩티드 서열은 SEQ ID NO: 13인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 10을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 10인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 또는 8인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 히스티딘 잔기는 SEQ ID NO: 13 서열에 직접 인접하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 그것의 카르복시 말단에서 아미드화되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 체크포인트 키나제는 체크포인트 키나제-2 (Chk2)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 체크포인트 키나제는 자외선 광에 의해 발생된 DNA 손상의 결과로서 활성화되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 체크포인트 키나제는 사람의 피부에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
포유동물의 피부 치료 방법으로써 상기 방법은 펩티드를 상기 피부에 적용하는 단계를 포함하고, 상기 펩티드는 길이가 5 내지 9개의 아미노산 잔기이고 상기 펩티드 서열은 SEQ ID NO: 13인 것을 특징으로 하는 방법.
상기 펩티드는 길이가 5 내지 9개의 아미노산 잔기이고 SEQ ID NO: 13을 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 11항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 10를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 11항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 10인 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 11항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 또는 8인 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 11항에 있어서, 히스티딘 잔기는 SEQ ID NO: 13 서열에 직접 인접하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 11항에 있어서, 상기 펩티드는 그것의 카르복시 말단에서 아미드화되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 16항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 10인 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 16항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 2, 3, 5, 6, 또는 8인 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 11항에 따르면 펩티드 및 약학적 담체를 포함하는 조성물.
제 19항에 있어서, 조성물은 에어로졸, 에멀젼, 액체, 로션, 크림, 페이스트 (paste), 연고, 분말, 또는 폼 (foam)의 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.