TW201138649A - Health-promoting composition and preparation method - Google Patents

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201138649 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於促進健康之產品及其製造方法之領域。 【先前技術】 轉糖鏈球菌讲_似）在齲齒發展中扮演關 鍵作用。該細菌會將可發酵糖轉化為有機酸，並因此產生 酸性微環境。有機酸會去除牙齒琺瑯質之礦物質，並因此 造成或促進齲齒（cariotic)損傷。此外，轉糖鏈球菌會產生 非水/谷性葡t糖基質。此葡聚糖基質會支持牙斑之發展及 黏附以及支持轉糖鏈球菌黏附在牙齒表面上。另外，已顯 示在齲齒損傷中亦經常發現其他細菌，但總是與轉糖鏈球 菌起。因此，目前認為轉糖鏈球菌係發展齲齒損傷所必 須。 不斷需要一種可防止齲齒損傷發展之療法。在本文中， 本發明意欲表明可作用於轉糖鏈球菌上以避免、停止或減 緩齲齒損傷發展之療法。本發明亦意欲表明用於此等療法 之製備方法。 過去，曾測試整個系列療法於控制齲齒損傷，特定言之 避免或至少延緩其出現。熟習此項技術者特定言之知曉用 於控制齲齒及與齲齒相關微生物之習知化學療法，如其等 用於牙膏及/或漱口水及/或其他牙齒保健產品中。然而， 另外亦嘗試藉由其他微生物或其產物控制與齲齒相關微生 物特疋s之已嘗試減少其等在牙齒上或在口腔中之量， 或影響其造成齲齒之性質。此方法例如描述於w〇 151531.doc 201138649 2006/027265 A1中。然而，缺點在於消費者通常不喜歡或 立法者完全禁止口腔保健產品中使用活微生物。此外，活 微生物可能因代謝物而影響含其之產品之口感及/或外 觀；此影響不一定為用於控制齲齒損傷的每一種產品所期 望。此外’旨在控制齲齒損傷之產品使用活微生物之作法 會限制該等產品之儲存壽命。 因此’各種技術領域中非常普遍嘗試改用無代謝活性之 微生物（特定言之凍乾微生物）替代活微生物。然而，現在 的問題係此等微生物在適合該等微生物之條件下（例如當 其進入合適之水性介質中時），可能回復至代謝活性狀 態。因此，無代謝活性微生物之用法會嚴重限制含其之產 品之可行組合物。 因此，已在完全不同技術領域中嘗試改用已破壞之微生 物替代活的或代謝活性微生物製備產品。因此，例如w〇 01/95741 A1顯示一種用於促進腸内平衡之食物，該食物 產品包含無活力之乳酸桿菌（Lact〇bacillus)。藉由熱處 理’例如藉由巴斯德滅菌或殺菌法，使乳酸桿菌失活。然 而，該文獻亦提及由熱處理造成之損失風險，否則應可獲 得微生物的一些健康促進作用。雖然該文獻指示可「選^ 性」去除此等健康促進作用，但實質上該文獻並未教示關 於在熱處理微生物期間如何避免流失所需健康促進特性之 任何内容1此ϋ於該文獻，熟f此項技術者無法以有意 義方式預測或猜測何種健康促進作用會因微生物之熱處理 而喪失及何種不會。特定言之’無法預測或估計是否會因 I51531.doc

201138649 熱處理而失去抗齲齒形成作用。 【發明内容】 因此’本發明目的係表明用於控制鱗齒損I之療法，特 定言之用於避免或延緩齲齒損傷之發展的療法。特定言 之’期望保證該等療法帶來所需作用。期望其製法簡單並 廉價’且#可行_，應冑免以上所述缺點或將其減至最低 程度》 因此，根據本發明，表明一種製造對轉糖鏈球菌具有特 定結合能力之非存活乳酸桿菌製劑之方法，其包括以下步 驟： _ Ο將對轉糖鏈球菌具有特定結合能力之乳酸桿菌或乳酸 桿菌混合物細胞的懸浮液，依分鐘之溫度變化， 在低於4〇t之起始溫度加熱至75至85t之巴斯德滅菌溫 度，該特定結合性 a) 可抵抗熱處理及/或 b) 可抵抗蛋白酶處理及/或 c) 是鈣-依賴性及/或 d) 發生在介於4.5及8.5間之PH範圍，及/或 e) 在唾液存在下發生， η)將該溫熱懸浮液維持於巴斯德滅菌溫度下2〇至4〇分鐘 之時間， 111)將維持於步驟ii)中之懸浮液依(^至之：/分鐘之溫度 變化冷卻至低於4〇t之最終溫度。 此乳酸桿菌係揭示於W〇 2006/027265 A1中，為本發明 151531.doc 201138649 之揭示内容之目的，其全部内容係以引用之方式併入本文 中〇 令人驚奇的是，已顯示藉由在根據本發明方法之步驟争 所述之溫和條件下的巴斯德滅菌，藉由根據本發明所選擇 之乳酸桿菌可成功製備完全或基本上無活的代謝活性乳酸 桿菌微生物，但仍對轉糖鏈球菌具有特定結合能力之製 劑。因此，根據本發明製備之製劑適用於發揮抗齲齒作 用，並因此適用料防及/或處理鱗齒之療4。在本發明 範圍中交替使用術語「齲齒」及「齲齒損傷」且其等係指 其特徵在於在牙齒上或牙齒中發展之軟化斑塊，並逐漸^ 致牙齒衰亡之慢性感染病。藉由習知方法可診斷鶴齒；孰 習此項技術者可就此目时照（例如）Ang跡Manss。^ ten

Bosch 之論文，Adv· Dent. Res 7 (1993)，7〇 至 79。 就本發明目的而言，術纽「缺 β何。。控制齲齒」或「控制齲齒損 傷」包括齲齒之預防。因此， 巾 0 口腔中不應有轉糖鏈球菌的 人亦可因此而自根據本發明製備之其他組合物受益，口要 此等組合物可隨機結合所進人之轉⑽㈣細胞並以^方 式促進其去除即可。 就本發明之目的而令片 。 術§吾「治療齲齒」亦包括向罹患 鹤齒之病患投與根據本發明劁傲夕&人从 «月I備之組合物’用於減少轉糖 鏈球菌細胞，及若通卷B主田, 田T用於徹底去除來自口中，特定言 之來自包括牙齒及牙齒問六始+杜^ 面间卫隙之整個口腔之轉糖鏈球菌。 至於結合轉糖键玻夕At 圏之把力’根據本發明所選擇之微生 物係高度熱穩定性。此盛x 此舉不會使細胞失去健康促進作用， 151531.doc 201138649 如WO 2006/027265 A1中所描述之活乳酸桿菌細胞反而甚 至在根據本發明之巴斯德滅菌後仍可以維持與轉糖鏈球菌 結合之徤康促進作用。此點特別不尋常，因為原則上會預 期到巴斯德滅菌時’微生物之大量（例如）蛋白質將變性， 及其他細胞成份會溶解或破壞，以致微生物之健康促進作 用通常應在巴斯德滅菌後喪失。事實上，以上所提及W〇 01/95741 A1僅顯示儘管經過巴斯德滅菌，但某些乳酸桿 菌仍可維持對腸菌群之健康促進作用。然而，就結構、含 量及用途而言，口腔完全不同於腸，因此熟習此項技術者 無法將最後提及文件之結果應用於本發明。 因此’根據本發明之其他態樣，指示一種對轉糖鏈球菌 具有特定結合能力之乳酸桿菌組合物，該組合物可藉由根 據本發明之製備方法獲得或得到。此組合物實現根據本發 明之製備方法的以上所述優點’特定言之適用於製備供人 類身體所用之抗齲齒形成產品。 乳酸桿菌細胞較佳選自副乾酪乳酸桿菌（Lact〇baciUus paracasei，）、鼠李糖乳酸桿菌（Lactobacillus rhamnosus)或

此等混合物之菌株細胞中。因此藉由乳酸桿菌菌株，特定 言之副乾路乳酸桿菌或鼠李糖乳酸桿菌之菌株的純培養基 懸浮液’但亦藉由兩種、三種、四種、五種、六種、七種 或更多種菌株之混合物可進行根據本發明之製備方法。根 據本發明之尤佳方法係WO 2006/027265 A1中指定之乳酸 桿菌菌種及菌株’特定言之以下一種DSMZ編號：DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、 151531.doc 201138649 DSMZ 16671、DSMZ 16672 及 DSMZ 16673，其分別於 2004年8月26曰寄存於德國微生物與細胞培養物寄存處 (Deutsche Sammlung fur Mikroorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg lb，Brunswick, Germany)。至於在本發明 範圍中提及之乳酸桿菌，此至少較佳理解為意指剛所提及 菌株及兩種、三種、四種、五種、六種或七種上述所提及 菌株之混合物的細胞。熟習此項技術者咸瞭解，除以上所 提及其中一種菌株之細胞外，根據本發明方法中亦可改用 或另外再使用突變體或衍生細胞系，該突變體或衍生細胞 系保持特定結合轉糖鏈球菌之能力。 乳酸桿菌細胞較佳具有對血清型c(DSMZ 20523)及/或血 清型e(NCTC 10923)及/或血清型F(NCTC 11060)轉糖鏈球 菌之特定結合能力。 一種突變體，特定言之是以上所提一種乳酸桿菌菌株的 突變體具有一或多種永久遺傳修飾，通常為其核酸。此修 飾通常亦涵蓋諸如轉換或顛換之點突變，但亦包括刪除、 插入及添加核酸之一或多個驗基，由此修飾核酸並導致基 因產物發生偏離正常之基因表現及/或轉錄及/或轉譯，或 造成失活。突變可自發性產生或另外藉由諸如（例如）化學 劑之試劑或輻射之作用而觸發。選擇及獲得突變體及衍生 細胞系之方法係（例如）描述於Sambrook， 「Molecular cloning, a laboratory manual」，Cold Spring Harbor Laboratory，NY, (2001)中及 Ausubel，「Current protocols in molecular biology」，Green Publishing Associates and 151531.doc 9 201138649

Wiley Interscience NY, (1989)中。熟悉此相關技藝者可在 WO 2006/027265 A1中發現其他資訊。 就本發明之目的而言，「特定結合性」或「特定結合能 力」係針對轉糖鏈球菌，意指根據本發明所用之乳酸桿菌 細胞，或根據本發明經過巴斯德滅菌的細胞與轉糖鏈球菌 結合，但並不會與通常大量出現在口腔中之大多數或所有 其餘微生物結合。根據本發明所選擇之微生物較佳不會與 唾液鏈球菌（iSVre/iiococrcw·? sa/ivariwi·)、唾液嗜熱鏈球菌 {Streptococcus 、口腔鏈球菌（，

Streptococcus oralis、、敎症連珠窜（Streptococcus mitis、反 I 或血勒胺醇鏈球菌（/SVrepiococcMs sawgM/wb)結合。根據本 發明所用之乳酸桿菌細胞尤佳不會與唾液鏈球菌嗜熱亞種 API 50 CH(Streptococcus salivarius ssp. thermophilus API 50CH，法國Biomerieux)、口腔鏈球菌DSMZ 20066、口腔 鏈球菌DSMZ 20395、口腔鏈球菌DSMZ 20627 '缓症鏈球 菌DSMZ 12643及/或血鞘胺醇鏈球菌DSMZ 20567結合。當 根據本發明所用之乳酸細胞不會與鏈球菌以外之細菌屬結 合時，亦即例如不會與於葡萄球菌屬之細胞結合時，其同 樣較佳。尤佳地，其等不會與表皮葡萄球菌 epz.oferwz.山>)DSMZ 1798及/或表皮葡萄球 菌DSMZ 20044結合。為測試結合能力，熟悉此相關技鼓 者可如WO 2006/027265 A1中所述進行處理，將以上所提 及細菌與根據本發明所選擇之乳酸桿菌，或根據本發明經 過巴斯德滅菌的其等剩餘物，依3 : 1之體積比混合，並觀 151531.doc 201138649 察由乳酸桿菌造成之任何凝隹你。、奋—士、+ 疑集物適且方法述於以上所提 及wo技術說明書之實例3中。 因此’較佳係根據本發明之方法，其中在第—步驟中， 由一或多種較佳乳g轉菌菌株，特定言之副乾赂乳酸桿菌 或鼠李糖乳酸桿菌及較佳為如上所述之—或多種菌株 DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、DSMZ 16671、DSMZ 16672 及 DSMZ 16673 且尤佳 至少DSM 16671及/或其一種突變體或衍生細胞系之細胞， 呈懸浮液之形式，依0.5至2〇c之溫度變化，自低於4〇工之 起始溫度加熱至75至85°C之巴斯德滅菌溫度；在第二步驟 中，將其維持於巴斯德滅菌溫度下2〇至4〇分鐘（巴斯德滅 菌時間）且其中在隨後第三步驟中，使懸浮液依〇 5至2<)(：之 溫度變化冷卻至低於40°C之最終溫度。 在步驟i)中之巴斯德溫度較佳係78至8〇〇c，尤佳8(rc。 藉由此巴斯德滅菌溫度，可成功地快速並因此節能又安全 地破壞根據本發明選用之乳酸桿菌細胞，同時相較於活乳 酸桿菌細胞之非巴斯德滅菌培養基，其結合能力之損失很 少。 巴斯德滅菌時間較佳係2 5至3 5分鐘且尤佳為3 〇分鐘。已 顯示特定言之藉由78至80°C (較佳80。(：）之巴斯德滅菌溫 度，可快速破壞根據本發明所選擇之乳酸桿菌細胞，同時 相較於乳酸桿菌細胞之活培養基，其與轉糖鏈球菌之結合 能力損失很少。 當步驟i)或iii)中之溫度變化係0·8至1.2°C/分鐘，較佳 201138649 1 °c /分鐘時，其同樣較佳。以此方式，有利於保持在短時 間内升溫達到巴斯德滅菌溫度，以節省能量，因此沒有破 壞乳酸桿菌細胞之風險或不得不接受與轉糖鏈球菌結合能 力之較大損失。 尤佳亦係一種根據本發明之方法，其中在第一步驟中， 由一或多種較佳乳酸桿菌菌株’特定言之副乾酪乳酸桿菌 或鼠李糖乳酸桿菌及較佳為如上所述之一或多種菌株 DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、DSMZ 16671、DSMZ 16672 及 DSMZ 16673 且尤佳 至少DSM 16671及/或其一種突變體或衍生細胞系之細胞呈 懸浮液之形式，依0.8至1_2。(：，較佳rC之溫度變化，自 40°C以下之起始溫度加熱至78至8〇t ,較佳肋艺之巴斯德 滅菌溫度’在第二步驟中，將其維持於巴斯德滅菌溫度下 25至35分鐘（巴斯德滅菌時間）且其中在隨後第三步驟中， 將該懸浮液依o.auc，較佳汽之溫度變化冷卻至低於 40°C之最終溫度。 細胞較佳係、在後指數生長期中根據本發明進行巴斯德滅 菌。在根據本發明之製備方法之步驟丨）中，尤佳係使用來 自已先達㈣生長’但其中葡萄糖濃度降至不大於i福 葡萄糖之數值的培養基之細胞。此處，較佳使用其葡萄糖 濃度已降至不大於1福葡萄糖之數值為期不超過i h的細 胞，否則根據本發明製備方法(即步驟叫，若適宜為如下 所述之洗務步驟或喷霧乾燥之社 、，σ朱）之產物與轉糖鏈球菌 之特定結合能力將會開始喪失。 151531.doc 201138649 此外’根據本發明之方法較佳包括洗滌步驟’其中使步 驟（iii)獲得之懸浮液離心，以濃縮巴士德滅菌細胞，以水 處理如此得到之濃縮細胞，並再次離心，以再次濃縮細 胞。所得濃縮細胞係以乾物質含量為1〇至3〇重量％，較佳 18至22重量。/。之物質形式存在。 根據本發明尤佳之方法係其中除了步驟i)及iH)以外（特 定吕之應用於乳酸桿菌菌株DSMZ 16667 DSMZ 16668、 DSMZ 16669 > DSMZ 16670 > DSMZ 16671 ' DSMZ 16672 及DSMZ 16673或上文所噠之突變體或細胞系或副乾酪乳 酸桿菌或鼠李糖乳酸桿菌之菌株中之一種或兩種、三種、 四種、五種、六種或七種之混合物）及若適宜之洗務以 外，尚包括以下步驟： W)處理步驟iii)所獲得之懸浮液，較佳以用於製備喷 乾燥混合物的載劑洗蘇’該載劑選自鹼金屬硫酸鹽及鹼 :屬硫酸鹽’較佳為硫酸鈉、硫酸鉀或硫酸鈣及此等硫 =之兩種或多種之混合物，選擇制之量係使喷霧乾燥 5物之乾燥物質含量合計為10至30重量％，及 v)喷霧乾燥步驟iv)所得到之噴霧乾燥混合物。 ^霧乾祕錢欲錢之㈣減純其料條件幻 選擇之ίΓ如7GC至2GGt之溫度。即使自根據本發明戶 菌細胞中亦無法知道其等是否能承受編 合能=咸可刻條件而不顯著喪失對轉糖鏈球菌之特定為 原本’在根據本發明步驟咐使用高量載劑時， 、 何錢進—步負貴結合轉糖鍵球菌的乳酸桿菌表 15i531.doc • J2·

201138649 面之結構變性或損壞。令人驚奇的是，現已顯示可在所選 擇之條件下噴霧乾燥步驟iH)中所得之懸浮液，而實質上 不會喪失對轉糖鏈球菌之結合能力。 根據本發明之嘴霧乾燥及根據本發明如此製備之喷霧乾 燥組合物的-些優點特別值得注意：相較於簡單之巴斯德 滅菌法’根據本發明之噴霧乾燥可以獲得不沾黏或吸濕之 .、且口物。在本文内容中，其吸濕性意指在加之溫度及 50%之相對濕度下露天儲扣個月時間組合物之重量增 加不超過2%。因此’根據本發明如此製備之組合物特別 適用於在乾燥產品中加工；其將不會因吸收水或特別黏性 而對此等產品性質有不利影響。 此外’根據本發明之製備方法可製備自由流動之根據本 &明組合物。可儲存自由流動之顆粒組合物，並特別容易 加工且其等可併入極多種產品中，同時可以精確量取劑 里。因此，藉由根據本發明喷霧方法獲得之根據本發明組 。物相較於步驟後直接獲得之懸浮液，可依具經濟重 要性之規格併入更多種產品中。 步驟1V)中之尤佳載劑係硫酸鈉。載劑（尤佳硫酸鈉）之量 較佳為步驟出）所採用懸浮液之乾燥物質之倍數。用於步 驟V)喷霧乾燥法的噴霧乾燥混合物在此情況下含有約20重 量°/〇之總乾燥物質。 在步驟V)之噴霧乾燥法較佳係在用於乾燥的喷霧乾燥氣 體之180至25〇t之氣體進口溫度及來自乾燥區段（通常喷 霧¥)之70至100〇c ’較佳85艺之氣體出口溫度下，在反應 15J531.doc •13· 201138649 區丰又中欲乾燥材料之喷霧乾燥氣體的平均滯留時間為⑺至 60私較佳20至40秒下進行。此外，熟習此項技術者可進 步自提供於WO 01/25411 A1中之資訊取得關於喷霧乾燥 之指導。此文獻通常描述適用於製備喷霧乾燥酵素產品之 適宜喷霧乾燥方法。令人驚奇的是，⑨已顯示即使在更高 溫度下（其係根據本發明之較佳溫度），亦可進行喷霧乾 燥’而實質上不會喪失對轉糖鍵球菌之結合能力。此點係 無法由WO (H/25411 A1預期者，敎言之由於該文獻未描 述巴斯德滅菌後操作喷霧乾燥步驟之單一實例且熟習此項 技術者認為該文獻係依其所主張之極多種類別酵素推測其 喷霧乾無的適合性。 因此’根據本發明之尤佳方法係其令： (1)在第一步驟中，由一或多種較佳乳酸桿菌菌株，特定 吕之副乾酪乳酸桿菌或鼠李糖乳酸桿菌及較佳為如上所述 一或多種菌株 DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、DSMZ 16671、DSMZ 16672 及 DSMZ 16673且尤佳至少DSM 16671及/或其一種突變體或 衍生細胞系之細胞，在後指數生長期中，呈懸浮液之形 式’依0.8至1.2°C，較佳1。(：之溫度變化，自低於4〇。(：之起 始溫度加熱至78至80°C之巴斯德滅菌溫度，及隨後， (ii)在巴斯德溫度下將該懸浮液維持25至3 5分鐘，且較 佳30分鐘，及隨後， (in)將該懸浮液依0.8至1.2°C，較佳1。〇之溫度變化冷卻 至低於40°C之最终溫度’隨後如上所述以水洗滌並離心得 151531.doc • 14· 201138649 到10至30重量％，較佳18至22重量❹/。之乾燥物質含量，及 隨後， (b)以用於製備喷霧乾燥混合物之載劑處理該懸浮液， 該載劑係選自硫酸鈉、硫酸鉀及硫酸鈣及其中兩種或多種 之混合物，且尤佳為硫酸鈉，選擇載劑用量，使喷霧乾燥 混5物之乾燥物質含量為10至30重量％，及隨後， (v)由步驟（iv)中得到之含載劑懸浮液進行噴霧乾燥，其 係在用於乾燥的喷霧乾燥氣體之180至250。(：之氣體進口溫 度及來自乾燥區段（通常噴霧塔）之70至1〇〇〇c ,較佳85β(：之 氣體出口溫度下，反應區段中欲乾燥材料之喷霧乾燥氣體 的平均滯留時間為1 〇至60秒，較佳20至40秒下進行。 此方法實現本發明之以上所述優點。 根據本么明之乳酸桿菌組合物具有對轉糖鍵球菌之特定 結合能力，藉由具有步驟i)至出）及視需要選用之w)至v)的 方法獲得或得到之該組合物較佳係併入用於人體中之產 品。當特定言之藉由引入口腔及/或藉由與牙齒接觸用於 人體時，實質上可能使用根據本發明組合物預防齲齒。 根據本發明之產品宜包含其用量足以與轉糖鏈球菌結合 及/或獲得抗齲齒效用之根據本發明組合物。此用量依所 述產品形式及其醫藥型式而定。特定言之，該用量亦依可 能與轉糖鏈球菌結合或可行之抗齲齒效用之特定所需程度 而定。取決於產品，熟習此項技術者可藉由常規實驗輕易 確定滿足所需效用程度、產品性質及醫藥型式之根據本發 明組合物的用量。特定言之，熟習此項技術者將考量塗覆 15153l.doc -15· 201138649 有根據本發明組合物或藉由混合法併入此組合物的產品。 根據本發明之產品較佳選自由包括高檔食物之食品、飲 料產品、半成品、口腔衛生產品、化妝產品及醫藥產品組 成之群。相關產品描述於WO 2006/027265 A1中。 尤佳產品係口香糠、牙膏、漱口水及口含旋。 【實施方式】 以下參照實例描述本發明，但該等實例無意限制專利申 請範圍之保護範圍。 實例1 : 一般製備方法 乳酸桿菌細胞具有對轉糖鏈球菌之特定結合能力，其中 該特定結合性 a) 可抵抗熱處理及/或 b) 可抵抗蛋白酶處理及/或 c) 與鈣具相關性及/或 d) 在介於4.5及8.5間之pH範圍中發生，及/或 e) 在唾液存在下發生， 在37°C下’於適宜水性營養介質中培養。適宜營養介質含 有葡萄糖、酵母萃取物、Tween 80及鹽類。在分批進料操 作中，可呈水性懸浮液培養。 一旦營養介質之葡萄糖含量降至1 mM以下，或此時間 點後至長1小時’則將該懸浮液加熱至75至85〇c，較佳78 至80C之巴斯德滅菌溫度。在本文内容中’以〇.5至1 2°C/ 分鐘’較佳0.8至1.2°C/分鐘之溫度變化加熱該懸浮液。 將該熱懸浮液維持於巴斯德滅菌溫度2〇至4〇分鐘，較佳 -16- 151531.doc e 201138649 25至35分鐘且尤佳30分鐘。 隨後將該懸浮液冷卻至4(TC以下。在本文内容中，溫度 變化為0.5至2C/分鐘’較佳0.8至ι·2 °c/分鐘。 隨後離心冷懸浮液，濃縮至10至3〇重量％之乾燥物質含 量。將如此獲得之濃縮物再次懸浮於水中並藉由離心再次 濃縮至10至30重量％之乾燥物質含量。總共進行高達8次 之再次懸浮與濃縮。最後，獲得乾燥物質含量為丨〇至3〇重 量％的經洗滌之生物質。 如實例開始所述，此生物質仍維持對轉糖鏈球菌之特定 結合能力。此生物質本身可併人包括高檔食物食品之食物 食。σ、飲料、半成品、口腔衛生產品、化妝產品或醫藥產 中，使5亥產品具有控制鹤齒之條件或可支持先前業已存 在控制齲齒之能力。 實例2 :製備口腔保健組合物 由根據本發明已界定之對轉糖鏈球菌具有特定結合能力 的副乾酪乳酸桿菌或鼠李糖乳酸桿菌之培養基如實例1所 述培養，經過巴斯德滅菌及洗滌。巴斯德滅菌溫度係 8〇°C。巴斯德滅菌時間係3〇分鐘。溫度變化分別為〇 8至 1.2°C/分鐘。添加水至第一次離心得到之濃縮懸浮液中再 次懸浮，形成乾燥物質含量為5重量％之再次懸浮液。將 如此獲得之再次懸浮液再次離心至乾燥物質含量為2〇重量 %以下。 以水性載劑及矯味劑處理如此獲得之經洗滌及濃縮之生 物質。此得到用於控制齲齒之漱口液。 151531.doc •17· 201138649 以相同方式絲及濃縮由_2祕卜⑽⑽i6668、 DSMZ 16669 ^ DSMZ 16670，DSMZ 16671 . DSMZ 16672 或DSMZ 16673製備之生物f。分別同樣以水性載劑及繞 味劑處理此生物質，以分別得到用於控制齲齒之漱口液。 藉由將各種經絲及濃縮之生物t併人σ香糖基質牙 膏基質及口含錠基質中’並添加所需矯味劑，彳改製造用 於控制鱗齒之口香嫌、5Ρ者《 η人办1 ^ 货裾牙骨及口含劑，替代漱口水。 實例3 : —般喷霧乾燥方法 、藉由製備水性10至30%濃度鹼金屬及/驗土金屬硫酸鹽溶 液而製備基本喷霧乾燥溶液。將如實例丨所述獲得之經洗 條及濃縮之生物質㈣浮細倍4基本㈣乾燥溶液中， ，成噴霧乾燥混合物，以便由⑽單位體積生物質獲得· 單位體積之喷霧乾燥混合物。 將噴霧乾燥混合物引人喷霧乾燥塔中進行錢乾燥。在 該噴霧乾料巾填裝錢乾職體，該噴魏職體進入 =霧乾燥塔之的進口溫度為180至25吖及來自該喷霧乾 ^之出口溫度為70至議。C。該喷霧乾燥混合物在該喷 霧乾燥塔中之平均滯留時間不超過6 〇秒。 ^實例i所述’所獲得之喷霧乾燥物質仍維持對轉糖鍵 球菌之特定結合能力。此所得喷霧乾燥物質本身可併入包 括高槽食品之食品、飲料、半成品、口腔衛生產品、化妝 產品或醫藥產品中’使該產品具有控制齲齒之條件或可以 支持先前業已存在之控制齲齒能力。 實例4 :製備其他口腔保健組合物 15153l.doc

•18- 201138649 由根據本發明已界定對轉糖鏈球菌具有特定結合能力的 副乾酪乳酸桿菌或鼠李糖乳酸桿菌之培養基如實例丨所述 培養經過巴斯德滅菌及洗務。巴斯德滅菌溫度8 〇。巴 斯德滅菌時間30分鐘。其溫度變化分別為〇.8至1 2t>c/分 鐘。添加水至第一次離心得到之濃縮懸浮液中再次懸浮， 形成乾燥物質含量為5重4 %之再次懸浮&。將如此獲得 之再次懸浮液再次離心至乾燥物質含量為2 〇重量％以下。 隨後如實例3所述之喷霧乾燥方法喷霧乾燥該再次懸浮 液。基本喷霧乾燥溶液係20。/。濃度之硫酸鈉水溶液。進入 只喷霧塔中之喷霧乾燥氣體之進口溫度係⑽_25〇。匸。來 自該喷霧塔之喷霧乾燥氣體的出p溫度係7G_im：。該喷 霧塔中之噴霧乾燥混合物之平均滯留時間係1〇秒。 =此得到噴霧乾燥材料。以水性載劑㈣味劑處理喷霧 乾燥物質。由此得到控制齲齒之漱口液。 以相同方式，由 DSMZ 16667、DSMZ 16668、刪2 _9、_Z 16670、DSMZ 16671、〇随 i6672 或 广Z 16673製備喷霧乾燥物質。此材料同樣亦以水性載 劑及矯味劑處理，以分別獲得控韻齒之漱口液。 併藉由將各自材料併人口香糖基質、彳膏基質及口含劑基 質中並添加所需矯味劑’可改製造控制齲齒之口香糖、牙 膏及口含劑，替代漱口液。 15153l.doc •19·

Claims (1)

1. 201138649 七、申請專利範圍： 1 . 一種方法’其係用以製造對轉糖鍵球菌（SiyepiococcMJ mwia/w)具有特疋結合能力的非存活乳酸桿菌（Lact〇bacillus) 組合物，該方法包括以下步驟： 0將對轉糖鏈球菌具有特定結合能力之乳酸桿菌或乳 酸桿菌混合物細胞之懸浮液以0.5至2°C /分鐘之溫度變化 範圍’從低於40°C之起始溫度加熱至75至85。〇的巴斯德 滅菌溫度，其中該特定結合性 a) 可抵抗熱處理及/或 b) 可抵抗蛋白酶處理及/或 c) 是鈣·依賴性及/或 d) 發生在介於4.5及8_5間之pH範圍，及/或 e) 在唾液存在下發生， ii)將該溫熱懸浮液維持於巴斯德滅菌溫度下歷經2〇至 40分鐘之時間， ui)將維持於步驟ii)之懸浮液以〇.5至2。〇 /分鐘之溫度 變化冷卻至低於4〇°C之最終溫度。 2. 如請求項1之方法，其中該乳酸桿菌細胞係選自副乾酪 乳西文才干菌、氣李糖乳酸桿 r/mwwoswj)或此等混合物之菌株細胞。 3. 如請求項2之方法，其中該乳酸桿菌細胞係選自副乾酪 乳酸桿菌或鼠李糖乳酸桿菌，較佳具有DSMZ號DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670 ' DSMZ 16671、DSMZ 16672及DSMZ 16673其中一者，或 151531.doc 201138649 其一種突變體或衍生細胞系，該突變體或衍生細胞系仍 保有對轉糖鏈球菌之特定結合能力。 4·如凊求項1至3中任一項之方法，其中該乳酸桿菌細胞具 有對血，月型c(DSMZ 20523)及/或血清se(NCTC 1〇923) 及/或血清型F(NCTC 11060)轉糖鏈球菌之特定結合能 力。 5. 如凊求項1至3中任一項之方法，其中步驟丨）之巴斯德滅 菌溫度係78至80°C。 6. 如明求項1至3中任一項之方法，其中步驟〇及/或之溫 度變化係0.8至1.2°C/分鐘。 7. 如印求項1至3中任一項之方法，其中步驟丨）之懸浮液之 介質包括不超過10 mmol葡萄糖/公升。 8. 如咕求項1至3中任一項之方法，其進一步包括以下步 驟： (lv)以一載劑處理步驟iH)所獲得之懸浮液以製備喷霧 乾燥混合物，該載劑係選自鹼金屬硫酸鹽及鹼土金屬硫 西欠鹽，所選擇載劑之用量是使該喷霧乾燥混合物之乾燥 物質含量為10至30重量〇/〇， (v)喷霧乾燥步驟iv)所獲得之喷霧乾燥混合物。 9. 如請求項8之方法，其中該喷霧乾燥法係在用於乾燥噴 霧乾燥氣體之180至250t之氣體進口溫度及來自乾燥區 段（通常喷霧塔）之70至l〇(TC (較佳85。〇之氣體出口溫度 下，及反應區段中欲乾燥材料之喷霧乾燥氣體的平均滯 留時間為10至6 0秒（較佳2 0至4 0秒）下進行。 151531.doc , S 201138649 ιο· —種對轉糖鏈球菌具有特人 付疋，，·= C7迠力之乳酸捍菌組合 物’其係藉由如請求項1至 i ^尹任一項之方法獲得或得 到。 裡用於人體之產 /、歹孩產品包括如請求項10之乳 酸桿讀組合物。 12.2f項11之產品，其選自由包括高㈣物之食品、飲 組成之群。 i化肤產品及醫藥產品 13. 一種以如請求項1〇之乳酸桿菌組合 抗齲齒產品的用途。 物於製備用 於人體之 14. 至12之產品於 類口腔中移除 一種以如請求項1 〇之組合物及如請求 j告 m 於預防齲齒之組合物及/或用於自 轉糖鏈埭菌之用途。 151531.doc 201138649 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無） 151531.doc