TW201124532A - Dll4-binding molecules - Google Patents

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TW201124532A TW99133558A TW99133558A TW201124532A TW 201124532 A TW201124532 A TW 201124532A TW 99133558 A TW99133558 A TW 99133558A TW 99133558 A TW99133558 A TW 99133558A TW 201124532 A TW201124532 A TW 201124532A
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Andreas Gschwind
Joachim Boucneau
Tavernier Evelyn De
Joost Kolkman
Pascal Merchiers
Hoorick Diane Van
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Boehringer Ingelheim Int
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Description

201124532 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於人類治療’特定言之癌症治療之領域及適 用於此治療中之藥劑及組合物。 【先前技術】 如US 2008/0014196中所概述，血管生成牽涉包括實體 腫瘤及轉移之大量病症之發病中。 就腫瘤生長而言’血管生成似乎對於自增生轉變為瘤形 成及對於為腫瘤生長及轉移提供營養至關重要（F〇ikman等 人，Nature 339-58 (1989))，此使腫瘤細胞相較於正常細 胞獲得生長優勢。因此，抗血管生成治療已成為若干類型 腫瘤之重要治療選項。此等治療已集中於阻斷VEGF路徑 (Ferrara等人，Nat Rev Drug Discov. 2004年5月；3(5):391- 400)。 洛奇（Notch)信號傳導路徑對細胞與細胞間之通信至關重 要’該路徑涉及控制胚胎發育期間及成人有機體中多個細 胞分化過程之基因調控機制。洛奇信號傳導在許多癌症 中，例如在T細胞急性淋巴母細胞白血病中及在實體腫瘤 中調控異常（Sharma 等人 2007, Cell Cycle 6 (8): 927-30; Shih等人，Cancer Res. 2007年3月 1 日；67(5): 1879-82)。 D114(或Delta樣4或delta樣配位體4)為洛奇配位體之Delta 家族成員。D114之細胞外域由N-末端域、Delta/Serrate/Lag-2(DSL)域、及一串八個表皮生長因子（EGF)樣重複構成。 一般而言，認為EGF域包含胺基酸殘基218-251(EGF-1 ;域 150859.doc 201124532 1)、252-282(EGF-2 ;域 2)、284-322(EGF-3 ;域 3)、324-360(EGF-4 ;域 4)及 362-400(EGF-5 ;域 5)，同時 DSL域在 hD114之約胺基酸殘基173-217處且N-末端域在約胺基酸殘 基 27-172處（WO 2008/076379)。 已報導D114由血管内皮高度選擇性表現，特定言之在動 脈内皮中高度選擇性表現（Shutter等人 （2000) Genes Develop. 14: 1313-1318)。新近於小鼠中之研究已展示D114 由VEGF誘導且為限制血管發芽及分枝之負反饋調控劑。 與此作用一致，缺失或抑制D114會導致血管生成過度 (Scehnet 等人，Blood. 2007 年 6 月 1 日；109 (1 1):4753-60)。 此不受限制之血管生成由於非生產性（non-productive)血管 之形成而反常地減缓腫瘤生長，即使在對抗VEGF治療具 有抗性之腫瘤中亦如此（Thurston等人，Nat Rev Cancer. 2007 年 5 月；7(5):327-31 ； WO 2007/070671 ； Noguera-Troise 等人，Nature. 2006 年 12 月 21 曰；444(7122))。此 外，已證明在多個腫瘤類型之異種移植模型中，相較於單 獨抗VEGF，組合抑制VEGF與D114會提供優越的抗腫瘤活 性（Noguera-Troise 等人，Nature. 2006 年 12 月 21 曰；444 (7122):1032-7 ; Ridgway 等人，Nature. 2006年 12 月 21 日； 444(7122):1083-7)。 歸因於此等結果，D114被視為一種用於癌症治療之有希 望標靶，且已描述處於臨床（前）研發中之若干靶向D114之 生物化合物：REGN-421(=SAR153192 ; Regeneron，Sanofi-Aventis ; WO 2008076379)及 OPM-21M18(OncoMed) (Hoey 150859.doc 201124532 等人，Cell Stem Cell. 2009年 8月 7曰；5(2):168-77)，兩者 均為元全人類D114抗體，YW 152F(Genentech)，一種人類 化 D114抗體（Ridgway 等人，Nature. 2006 年 12 月 21 日；444 (7122): 1 083-7)，Dll4-Fc(Regeneron ’ .Sanofi-Aventis)，一 種由D114細胞外區域及人類IgG 1之Fc區域構成之重組融合 蛋白（Noguera-Troise 等人，Nature. 2006 年 12 月 21 日； 444(7122))。 然而’當前技術狀態之單株抗體（MAb)及融合蛋白鑒於 其治療應用具有若干缺點：為了防止其降解，其必須儲存 在接近凍結溫度下。此外，因為其在消化道中快速消化， 所有其不適於口服投藥。MAb用於癌症治療之另一主要限 制為轉運不良，此導致濃度較低及不能靶向腫瘤中之所有 細胞。 鑒於以上所述，本發明之一目標已在於提供用於人類治 療之改良D114結合分子。 此等D114結合分子或D114拮抗劑適用作預防、治療、減 輕及/或診斷與D114對血管生成之介導效應相關之疾病或病 狀之組合物十的藥理學活性劑。此等疾病之實例為癌症及 眼病’包括年齡相關之黃斑部變性（AMD)及糖尿病性視網 膜病變（DR) ^本發明之另一目標已在於提供預防、治療、 減輕及/或診斷此等疾病、病症或病狀之方法，其涉及使 用及/或投與此等藥劑及組合物。 特定言之，本發明之一目標已在於提供相較於當前使用 及/或此項技術中已知之藥劑、組合物及/或方法可提供某 150859.doc 201124532 些優勢之此等藥理學活性劑、組合物及/或方法。此等優 勢包括尤其相較於如上所述之習知抗D114抗體或其片段， 經改良之治療性質及/或藥理學性質及/或其他例如對於製 造目的而言為有利的性質。 更特定言之，本發明之一目標已在於提供新穎D114結合 刀子及/或含有其之多肽，且特定言之結合哺乳動物且尤 其人類D114之D114結合分子，其中此等分子或多肽適用於 如本文所述之治療及診斷目的。本發明之另一目標已在於 提供特異性結合D114之免疫球蛋白單一可變域。 【發明内容】 根據第一態樣’提供D114結合分子，較佳D114結合免疫 球蛋白單一可變域，如VHH及VH。 在另一態樣中’本發明係關於編碼D114結合分子之核酸 以及含有該專核酸之宿主細胞。 本發明另外係關於一種產物或組合物，其含有或包含至 少一種本發明D114結合分子及視情況可選之此等組合物之 一或多種其他組分。 本發明另外係關於製備或產生本文所述之D114結合分子 的方法、本文所述之核酸、宿主細胞、產物及組合物。 本發明另外係關於本文所述DU4結合分子、核酸、宿主 細胞、產物及組合物之應用及用途，以及預防及/或治療 與D114對jk管生成之介導效應相關之疾病及病症的方法。 本發明之此等及其他態樣、實施例、優勢及應用將由於 下文進一步描述而變得明確。 150859.doc 201124532 定義 除非另有指示或定義，否則所有所用術語皆具有其在此 項技術中之通常含義，該含義將為熟習此項技術者所瞭 解。例如參考標準手冊，諸如Sambrook等人， 「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」（第 2版），第 1_ 34, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) ； Lewin,
Genes IV」，Oxford University Press, New York, (1990)
及 Roitt等人 ’ 「Immun〇1〇gy」（第 2版），G〇wer Medical Publishing，London，New York (1989)，以及本文中引用之 一般先前技術；此外，除非另有指示，否則未特定詳述之 所有方法、步驟、技術及操作皆可且已以本身已知之方式 加以執仃，該方式將為熟習此項技術者所瞭解。此外例如 參考標準手冊、以上提及之_般先前技術及其中引用之其 他參考文獻。 、 示非另有私不’否則術語「免疫球蛋白」在本文中無論 用於指f鏈犮邀或指黧知^鐽犮邀皆以一般術語加以使用 以包括完全尺寸抗體、其個別鏈、以及其所有部分、域或 '、另有扎示否則術語「D114結合分子」包括抗D114 抗體、抗Dll4抗體片段、「抗麗抗體樣分子」及與任何 此等者之接合物。枋髀4 ^ , ▲ 刃抗體包括（但不限於）單株抗體及嵌合單 ^術°°抗體」涵蓋藉由於宿主細胞中重組表現產 &兀王免疫球蛋白(如單株抗體）、卩及則4結合抗體片 或抗體樣分子」.，包括單鏈抗體及線抗體，所謂例如
S 150859.doc 201124532 描述於WO 02/056910中之「SMIP」（「小模組免疫藥 劑」）。抗D114抗體樣分子包括如本文定義之免疫球蛋白單 一可變域。抗體樣分子之其他實例為免疫球蛋白超家族抗 體（IgSF)或CDR接枝分子。 如本文（例如在如「免疫球蛋白序列」、「（單一）可變域 序列」、「VHH序列」或「蛋白質序列」之術語中）所用 之術語「序列」一般應理解為包括相關胺基酸序列以及編 碼該相關胺基酸序列之核酸序列或核苷酸序列兩者，除非 上下文需要更加限定之解釋。 兩個謹結合分子序列之間的「斤m指示序列 之間相同胺基酸的百分比。其可如wo 08/〇2〇〇79第49及5〇 頁段落〇中所述加以計算或測定。（「序列類似性」指示相 同或表現保守胺基酸取代之胺基酸的百分比。） 如本文所用之術語（多肽或蛋白質之）「域」係指槽疊蛋 白質結構’其㈣獨立於蛋白質之其餘部分維持其三級結 構。一般而言，域負責蛋白質之個別功能性質且在許多情 況下可添加、移除或轉移至其他蛋白質而不損失蛋白質之 其餘部分及/或域的功能。 如本文所用之術語「切破…」係指抗體鏈(諸 。鏈抗體之鏈或重鏈抗體之鏈)之球形區域或係指本 上由此類球形區域組成之容 其維持抗體分子之免疫球° i球蛋白域之特徵在 疋免疫球蛋白摺疊特徵，盆 p片令視情況經由保守雙炉 在兩 峰一h)組成。屬疋之约7個反怖股之2 150859,doc 201124532 如本文所用之術語「笼疫廣白酽變域」意謂本質上由 此項技術及下文中分別稱為「構架區；「構 架區2」或「FR2」；「構架區3」或r FR3」；及「構架 區4」或「FR4」之四個「構架區」組成的免疫球蛋白域: 該等構架區由此項技術及下文中分別稱為「互補決定區 1」或「CDR1」；「互補決定區2」或「CDR2」；及「互 補決定區3」或「CDR3」之三個「互補決定區」或
「CDR」中斷。因Λ ’免疫球蛋白可變域之—般結構或序 列可如下表示為：FR1_CDR1_FR2_CDR2 FR3 cdr3 FR4。免疫球蛋白可變域正是因具有抗原結合位點而賦予 抗體對抗原之特異性。 如本文所用之術語「以廣·蛋冷#一 {變域」意謂能夠 在不與另一免疫球蛋白可變域配對情況下特異性結合抗原 之抗原決定基的免疫球蛋白可變_。本發明纟義中之免疫 球蛋白單一可變域之實例為免疫球蛋白單一可變域及 VL及（VH域及VL* )及如下文定義之駱駝科的「叹好韓」 (或簡稱為「VHH」）。 」 鑒於以上定義，習知4鏈抗體（諸如此項技術中已知之 砂IgM、IgA、IgD或lgE分子）或源自此習知4鏈抗體之 Fab片段、F(abi)2片段、Fv片段（諸如二硫鍵連接之π或 scFv片段）、或微型雙功能抗體（皆為此項技術中已知）的抗 原結合域將通常不視為免疫球蛋白單一可變域，因為通常 不經由一個（單一）免疫球蛋白域而經由共同結合各別抗原 之抗原決定基的一對（締合）免疫球蛋白域（諸如輕鏈及重鏈 150859.doc 201124532 可變域），亦即經由免疫球蛋白域之VH-VL對結合抗原之 各別抗原決定基。 「VHH域」，亦稱為VHH、VhH域、VHH抗體片段、及 VHH抗體，已最初描述為「重鏈抗體」（亦即「缺乏輕鏈 之抗體」 ；Hamers-Casterman C, Atarhouch T, Muyldermans S, Robinson G, Hamers C, Songa EB, Bendahman N, Hamers R.: 「Naturally occurring antibodies devoid of light chains」；Nature 363, 446-448 (1993))之抗原結合免疫球蛋白（可變）域。已選擇術語 「VHH域」來將此等可變域與存在於習知4鏈抗體中之重 鏈可變域（其在本文中稱為「VH域」）及存在於習知4鏈抗 體中之輕鏈可變域（其在本文中稱為「VL域」）進行區分。 與通常將不以單一抗原結合域形式結合抗原決定基之VH 或VL域相反，VHH域可在無另一抗原結合域情況下特異 性結合抗原決定基。VHH域為由單一免疫球蛋白域形成之 小型穩定及高效之抗原識別單元。 在本發明之情形下，術語VHH域、VHH、VhH域、VHH 抗體片段、VHH抗體以及「Nanobody⑧j及「Nanobody® 域」（「Nanobody」為 Ablynx N.V.公司；Ghent; Belgium之 商標）可互換使用且表示免疫球蛋白單一可變域（具有一般 結構：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4且無需第二 免疫球蛋白可變域存在即可特異性結合抗原決定基），且 其經由如例如WO 2009/109635圖1中定義之所謂「印記殘 基（hallmark residue)」與 VH區分。 150859.doc -]0- 201124532 源自4鏈抗體，特定言之源自人類抗體之分別「VH域」 及「VL域」（或簡稱為「VH」或「VL」）為「單域抗體」， 亦稱為已描述於例如以下中之「域抗體（domain antibodies， Domain Antibodies)」、「Dab」及「dAb」（術語「域抗體 (Domain Antibodies)」及「dAbs」被GlaxoSmithKline公司 集團用作商標）：Ward, E.S.，等人：「Binding activities of a repertoire of single immunoglobulin variable domains secreted from Escherichia coli」；Nature 341: 544-546 (1989) ; Holt，L.J.等人：「Domain antibodies: proteins for therapy」；TRENDS in Biotechnology 21(1 1): 484-490 (2003);及 WO 2003/002609。 單域抗體對應於非駱駝科哺乳動物（特定言之人類）抗體 之重鏈或輕鏈之可變域。為了以單一抗原結合域形式，亦 即在不分別與VL域或VH域配對的情況下結合抗原決定 基，需要例如藉由使用人類單一 VH或VL域序列之文庫對 此等抗原結合性質進行特定選擇。 如同VHH之單域抗體之分子量為約13至約16 kDa，且若 源自完全人類序列，則不需要進行人類化以供例如人類治 療使用。如同在VHH域之情況下，單域抗體亦在原核表現 系統中良好表現，從而顯著降低總製造成本。 如例如於 Riechmann及 Muyldermans, J· Immunol. Methods 231，25-38 (1999)之圖2中所示，如對駱駝科之VHH域所應 用，免疫球蛋白單一可變重域之胺基酸殘基係根據Kabat 等人（「Sequence of proteins of immunological interest」， g, 150859.doc 201124532 US Public Health Services, NIH Bethesda, MD，公開案第 91號）給出之VH域的一般編號法來編號。根據此編號法， 舉例而言 -FR1包含在位置1-30處之胺基酸殘基， -CDR1包含在位置31-35處之胺基酸殘基， -FR2包含在位置36-49處之胺基酸， -CDR2包含在位置50·65處之胺基酸殘基， -FR3包含在位置66-94處之胺基酸殘基， -CDR3包含在位置95-102處之胺基酸殘基，且 -FR4包含在位置103-113處之胺基酸殘基。 如例如 WO 2006/040153 及 WO 2006/122786 中所詳述， VHH域視構架區内胺基酸之某些組合而定可具體分為三個 群組，亦即（a)「GLEW組」，亦包括「GLEW樣」序列； (b)「KERE 組」，亦包括KQRE序列；及（c)「103 P，R，S 組」，且可進一步由特定「印記殘基」表徵。 「親和力成熟D114結合分子」在一或多個CDR中具有一 或多個變化，該等變化導致對D114之親和力相較於各別親 本D114結合分子經改良。本發明之親和力成熟D114結合分 子可經由例如如由以下所述之此項技術中已知的方法來製 備：Marks 等人，1992, Biotechnology 10:779-783 或 Barbas，等人，1994，Proc. Nat. Acad. Sci, USA 91: 3 809-3813· ; Shier 等人，1995，Gene 169:147-155 ; Yelton 等 人，1995, Immunol. 15 5: 1994-2004 ； Jackson等人，1995, J. Immunol. 154(7):3310-9 ;及 Hawkins 等人，1992, J. 150859.doc -12- 201124532
Mol. Biol. 226(3): 889 -896 ; KS Johnson及 RE Hawkins, Affinity maturation of antibodies .using phage display」， Oxford University Press 1996。 對於本發明，若未另有說明，則關於相關序列，例如完 全免疫球蛋白單一可變域序列或CDR序列之「SEQ ID NO: x之胺基酸序列」包括 a) 與各別SEQ ID NO: X中所示序列i〇〇〇/0一致的胺基酸 序列； b) 與各別SEQ ID NO: X中所示序列具有至少go%胺基 酸一致性的胺基酸序列； c) 與各別SEQ ID NO: X中所示序列具有3個、2個或1個 胺基酸差異的胺基酸序列。 可互換使用之術語「犮及房定差」及「犮及淤龙子」係 才曰諸如多肽之巨分子之一部分，其由諸如習知抗體或本發 明免疫球蛋白單一可變域之抗原結合分子，且更特定言之 由該等分子之抗原結合位點識別。抗原決定基定義免疫球 蛋白之最小結合位點且因此對免疫球蛋白傳遞特異性。 如本文所用之術語「燮互袴位⑼户以加叩⑷D//#结合分 子△载^雙互補位免疫球蛋白單一可變域Λ塔兔％汔令如 本文定義之第一免疫球蛋白單一可變域及第二免疫球蛋白 單一可變域之D114結合分子，其中該等分子能夠結合DU4 杬原之兩個不同抗原決定基。本發日月雙互補位多肽由具有 不同特異性之免疫球蛋白單一可變域構成。抗原結合分子 (諸如抗肢或本發明多肽）識別抗原決定基之部分稱為互被 150859.doc -13- 201124532 位。 可「潜合」m…」某一抗原決定基、抗原或 蛋白貝（或其至卜部分' 片段或抗原決定基）、對其「真 才歲和力」及/或之多肽（諸如免疫球蛋 白抗體、本發明免疫球蛋白單—可變域或含有本發明免 疫球蛋白單一可變域之多肽'或一般而言抗原結合分子或 其片段）據說係指「考摩」該抗原決定基、抗原或蛋白質 或為關於此抗原決定基、抗原或蛋白質之「潜合」分子。 -般而言’術語「㈣」係指特定抗原結合分子或抗 原結合蛋白質（諸如本發明免疫球蛋白單一可變域）分子可 結合之不同類型抗原或抗原決定基的數目。可基於抗原結 合分子之親和力及/或結合性（avidity)確定其特異性。由抗 原與抗原結合蛋白質之解離平衡常數⑽）表示之親和力為 抗原決定基與抗原結合蛋白質上抗原，吉合位點之間結合強 度的量度：KD值越小，抗原決定基與抗原結合分子之間 的結合強度越強（或者，親和力亦可表示為親和力常數 (KA)，其為1/KD)。如熟習此項技術者將瞭解（例如基於本 文其他揭示内容）’親和力可視相關特定抗原而定以本身 已知方式加以測定。結合性為抗原結合分子（諸如免疫球 蛋白、抗體、免疫球蛋白單一可變域或含有其之多肽）與 相關抗原之間結合強度的量度。結合性與抗原決定基與抗 原結合分子上其抗原結合位點之間的親和力及存在於抗原 結合分子上之相關結合位點的數目兩者有關。 胺基酸殘基將根據如此項技術中一般已知且達成一致之 150859.doc 201124532 標準二字母或一字母胺基酸碼加以指示。在比較兩個胺基 酸序列時’術語「蜃差鑀差荐」指相較於第二序列，在參 考序列某一位置處指定數目胺基酸殘基的插入、缺失或取 代。在取代情況下’此（此等）取代將較佳為保守胺基酸取 代’此意謂胺基酸殘基經化學結構類似之另一胺基酸殘基 置換且此對多肽之功能'活性或其他生物性質影響較小或 本質上無影響。此等保守胺基酸取代在此項技術中為熟知 的，例如根據WO 98/49185，其中保守胺基酸取代較佳為 以下群組（i)-(v)内之一個胺基酸經同一群組内之另一胺基 酸殘基取代之取代：⑴較小脂族非極性或弱極性殘基： Ala、Ser、Thr、Pro及Gly ; (ii)極性帶負電殘基及其（不帶 電）醯胺：Asp、Asn、Glu及Gin ; (iii)極性帶正電殘基： His、Arg及Lys ; (iv)較大脂族非極性殘基：Met、Leu、 lie、Val及Cys ;及（v)芳族殘基：Phe、Tyr及Trp。特定較 佳保守胺基酸取代如下：
Ala成為Gly或成為Ser ;
Arg成為 Lys ;
Asn成為Gin或成為His ;
Asp成為 Glu ;
Cys成為 Ser ;
Gin成為 Asn ;
Glu成為 Asp ;
Gly成為Ala或成為Pro ;
His成為Asn或成為Gin ; 150859.doc 201124532 lie成為Leu或成為Val ;
Leu成為lie或成為Val ;
Lys成為Arg、成為Gin或成為Glu ;
Met成為Leu、成為Tyr或成為lie ;
Phe成為Met、成為Leu或成為Tyr ;
Ser成為 Thr ;
Thr成為 Ser ;
Trp 成為 Tyr ;
Tyr成為Trp或成為Phe ;
Val成為lie或成為Leu® 核酸或多肽分子視為經分參〔形式）」_例 如’在比較其天然生物來源及/或獲得該多肽或核酸分子 之反應貝或培養基時-在其已與至少一種在該來源或介 質（培養基）中其通常與之相關的其他組分分離時，該其他 組分諸如另—核酸、另一蛋白質/多肽、另一生物組分或 巨分子或至少一種污染物、雜質或微量組分。特定言之， 核酸或多肽分子在其已純化至少2倍、肖定言之至少1〇 倍、更特定言之至少100倍且多達1〇〇〇倍或1〇〇〇倍以上時 被視為本貝上經分離」。「呈本質上經分離形式」之核 或夕肽刀子較佳在本質上為均質的此如使用適合技 :’諸如適合層析技術’諸如聚丙烯醯胺凝膠電泳所測 術語「癌症」及「癌性」 不受調控細胞生長/增殖為 係指或描述哺乳動物中通常以 特徵之生理病狀。欲用本發明 150859.doc 201124532 D114結合分子治療之癌症之實例包括（但不限於）癌瘤、淋 巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病。如us 2008/0014196中 表明用DU4拮抗劑治療之此等癌症之更特定實例包括鱗狀 細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細 胞癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰腺癌、膠質母細胞 瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌（liver cancer)、膀胱癌、肝 癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜或子宮癌、唾 液腺癌、腎臟癌、肝癌（Hver cancer)、前列腺癌、陰門 癌、甲狀腺癌、肝癌（hepatic carcinoma)、胃癌 '黑素 瘤、及各種類型之頭頸癌。血管生成之調控異常可導致許 多可由本發明组合物及方法治療之病症。此等病症包括非 贅生性及贅生性病狀兩者。贅生性病症包括（但不限於）上 述彼等者。非贅生性病症包括（但不限於）如us 2008/0014196中表明用DU4拮抗劑治療之不合需要或異常 肥大、關節炎、類風濕性關節炎（RA)、牛皮癖、牛皮癬斑 塊、類肉瘤病（sarc〇idosis)、動脈粥樣硬化、動脈粥樣硬 化斑塊、糖尿病性及其他增生性視網膜病（包括早產兒視 網膜病、晶狀體後纖維組織增生（retr〇lental fibr〇plasia)、 新生血官性青光眼、年齡相關之黃斑部變性、糖尿病性黃 斑口f5 水腫、角膜新企管生成（c〇rneal ne〇vascuiarizati〇n)、 角膜移植新血管生成、角膜移植排斥、視網膜/脈絡膜新 血官生成、隅角新血管生成（虹膜紅變（rube〇sis))、眼新血 官病（ocular neovascular disease))、血管再狹窄 reStenosis)、動靜脈畸形（arteriovenous malformations， 150859.doc 201124532 AVM)、脊膜瘤（meningioma)、血管瘤、血管纖維瘤 (angiofibroma)、曱狀腺增生（包括格雷氏病（Grave's disease))、角膜及其他組織移植、慢性炎症、肺炎症、急 性肺損傷/ARDS、敗血症、原發性肺循環血壓過高 (primary pulmonary hypertension)、惡性肺積液（malignant pulmonary effusion)、腦水腫（例如與急性中風/閉鎖性頭部 損傷（closed head injury)/外傷相關）、滑液炎症、RA中之 血管翳形成（pannus formation)、骨化性肌炎（my0Sitis ossificans)、肥大性骨形成（hypertropic bone formation)、 骨關節炎（OA)、難治癒之腹水症、多囊性卵巢疾病 (polycystic ovarian disease)、子宮内膜異位症（endometriosis)、 第3間隔體液疾病（3rd spacing of fluid disease)(胰腺炎、隔 室症候群（compartment syndrome)、灼傷、腸病）、子宮纖 維瘤、早產、諸如IBD(克羅恩氏病（Crohn's disease)及潰瘍 性結腸炎）之慢性炎症、腎同種異體移植排斥、發炎性腸 病、腎病症候群、不合需要或異常組織大量生長（非癌）、 嗜血性關卽（hemophilic joint)、肥厚性薇痕（hypertrophic scar)、頭髮生長抑制、奥斯勒-韋伯症候群（Osier-Weber syndrome)、化膿性肉芽腫晶狀體後纖維組織增生 (pyogenic granuloma retrolental fibroplasias)、硬皮病 (scleroderma)、沙眼、血管黏附（vascular adhesion)、滑膜 炎（synovitis)、皮炎、子癇前症（preeclampsia)、腹水症、 心包積液（pericardial effusion)(諸如與心包炎（pericarditis) 相關者）、及肋膜積液（pleural effusion)。 150859.doc -18· 201124532 【實施方式】 在第一態樣中’本發明係關於一種包含至少一個具有四 個構架區及三個分別為CDR1 ' CDR2及CDR3之互補決定 區之可變域的D114結合分子，其中該CDR3具有選自如下 所示之胺基酸序列的胺基酸序列 a) SEQ ID NO: 1 至 166及 458 , b) SEQ ID NO: 333 至 353，或 c) SEQ ID NO: 375 至 395。 選自第一組SEQ ID NO: 1至ία及45 8之胺基酸序列勾以 部分序列形式含於選自表5及SEQ ID NO: 167至332及459 中所示之第二組序列的相應胺基酸序列中。 選自第一組SEQ ID NO: 333至3 53之胺基酸序列b)以部 分序列形式含於選自表16· A及SEQ ID NO: 3 54至374中所 示之第二組序列的相應序列中。 選自第一組SEQ ID NO: 375至395之胺基酸序列c)以部 分序列形式含於選自表16-B及SEQ ID NO: 396至416中所 示之第二組序列的相應序列中。 在第二態樣中’該D114結合分子為一種經分離免疫球蛋 白單一可變域或含有一或多個該等免疫球蛋白單一可變域 之多肽，其中該免疫球蛋白單一可變域由四個構架區及二 個分別為CDR1、CDR2及CDR3之互補決定區組成，且其 中該CDR3具有選自如下所示之胺基酸序列的胺基酸序列 a) SEQ ID NO: 1 至 166及 458， b) SEQ ID NO: 333至 353，或 -19- 150859.doc 201124532 c) SEQ ID NO: 375至 395。 在另一態樣中’該免疫球蛋白單一可變域含有 a)胺基酸序列選自SEQ ID NO: 1至166及458中所示之 第一組胺基酸序列的CDR3 ; b) 胺基酸序列如表5中所指示以部分序列形式含於選自 SEQ ID NO: 167至332及459中所示之第二植胺基酸 序列之序列中的CDR1及CDR2 ; 其中該第一組之SEQ ID NO: X對於SEq ID N〇 而 5對應於β亥第·一組之SEQ ID ΝΟ: y，其中y=x+166 在另一態樣中’該免疫球蛋白單一可變域含有 a) 胺基酸序列選自SEQ ID NO: 333至3 53中 一組胺基酸序列的CDR3 ; 所示之該第 b)胺基酸序列如表1 6-A中所指示以部分序列形式含於 選自SEQ ID NO: 3S4至374中所示之第二組序列之序 列中的CDR1及CDR2 ; 其中該第一組之SEQ ID NO: X對應於該第二組之seq出 NO: y ’ 其中 y=x+21。 在另一態樣中，該免疫球蛋白單一可變域具有 a) 胺基酸序列選自SEQ ID NO: 375至3 95中 一組胺基酸序列的CDR3 ; 所示之該第 b)胺基酸序列如表16-B中所指示以部分序列形式含於 選自SEQ ID NO: 396至416中所示之坌_ 2 — 罘一組序列之序 列中的CDR1及CDR2 ; 其中該第一組之SEQ ID NO: X對應於該第二組之seq出 150859.doc -20- 201124532 NO: y ’ 其中 y=x+21。 在一較佳貫施例中’免疫球蛋白單一可變域為vhh。 在另一態樣中，VHH的胺基酸序列選自表5及SEQ m NO: 167至332及459中所示之胺基酸序列。 具有由治療應用看來改良之性質，例如增強之親和力或 減少之免疫原性的D114結合分子可經由諸如以丁之技術而 自本發明之個別D114結合分子獲得：親和力成熟（例如自合 成、機或天然存在免疫球蛋白序列起始）、.Cdr接枝、 人類化、合併源自不同免疫球蛋白序列之片段、使用重疊 .引子之PCR組裝、及熟習此項技術者熟知之用於工程改造 免疫球蛋白序列之類似技術的技術；或任何上述者之任何 適合組合。例如參考標準手冊以及其他描述及實例。 較佳地’親和力增加之本發明DU4結合分子可藉由使另 一D114結合分子親和力成熟來獲得，該另一DU4結合分子 表示就親和力成熟分子而言的r親本」DU4結合分子。 因此’在另一較佳實施例中’本發明DU4結合分子為已 藉由使以上定義之親本免疫球蛋白單一可變域親和力成熟 而獲得的免疫球蛋白單一可變域。 在另一較佳實施例中，本發明係關於藉由使VHH親和力 成熟而獲得的免疫球蛋白單一可變。 用於親和力成熟之適合親本DU4結合分子為例如胺基酸 序列展示於SEQ ID NO: 167至332及459中之上述VHH。 在另一較佳實施例中，本發明係關於已藉由使胺基酸序 列展不於SEQ ID NO: 197中之vHH親和力成熟而獲得的免 150859.doc -21 - 201124532 疫球蛋白單一可變域。 在另一實施例中，源自胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 197中之VHH之該免疫球蛋白單一可變域係選自胺基酸序 列展示於SEQ ID NO: 354至374中之免疫球蛋白單一可變 域。 在一較佳實施例中，免疫球蛋白單一可變域為胺基酸序 列展示於8£卩10!^0:3 5 8中之¥1111。 在一甚至更佳實施例中，免疫球蛋白單一可變域已藉由 使胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 358中之VHH人類化而獲 得。 在另一較佳實施例中，免疫球蛋白單一可變域為胺基酸 序列展示於8£卩1〇1^0:3 5 6中之¥1^11。 在一甚至更佳實施例中，本發明係關於已藉由使胺基酸 序列展示於SEQ ID NO·· 356中之VHH人類化而獲得的免疫 球蛋白单一可變域。 在另一較佳實施例中，本發明係關於已藉由使胺基酸序 列展示於SEQ ID NO·· 224中之VHH親和力成熟而獲得的免 疫球蛋白单一可變域。 在另一實施例中，源自胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 224中之VHH之該免疫球蛋白單一可變域係選自胺基酸序 列展示於SEQ ID NO: 396至416中之免疫球蛋白單一可變 域。 在另一較佳實施例中，免疫球蛋白單一可變域為胺基酸 序列展示於SEQ ID NO: 402中之VHH。 150859.doc -22- 201124532 在一甚至更佳實施例中，免疫球蛋白單一可變域已藉由 使胺基酸序列展示於SEQ ID N0:術中之vhh人類化而獲 得。 在另一較佳實施例中，免疫球蛋白單—可變域為胺基酸 序列展示於SEQ ID NO: 416中之VHH。 在一甚至更佳實施例中，免疫球蛋白單一可變域已藉由
使胺基酸序列展示於SEq ID N〇: 416中之免疫球蛋白單一 可變域人類化而獲得。 較佳實施例中’免疫球蛋白單 隹另一 變域為胺基酸 序列展示於SEQ ID NO: 407中之VHH。 在-甚至更佳實施例中，免疫球蛋白單一可變域已藉由 使胺基酸序列展示於SEQ ID N〇: 413中之免疫球蛋白單一 可變域人類化而獲得。 根據本發明較佳實施例之免疫球蛋白單一可變域(例如 VH及VHH)具有大量使其極為有利作為功能性抗原結合分 子用於>1療中的獨特結構特徵及功能性質。特p之且不 對其進行限制，VHH域（其已本質上經「設計」^在不愈 輕鏈可變域配對情況下功能性結合抗原）可充當單— 對較小、功能性抗原結合結構單元。 由於其獨特性質’如本文定義之免疫球蛋白單一可變 域’如刪wVHs(或VLs)，單獨或作為較大 互補位分子）之-部分，提供許多顯著優點： 又 •僅需要單一域以高親和力及高選擇性結合抗原，因而 無需存在兩個各別域’亦無需保證此等兩個域係以正 150859.doc
-23 - S 201124532 確工間構形及組態存在（亦即經由使用特別設計之連 接子，如同scFv之連接子）； 免求蛋白單一可變域可自單一核酸分子表現且不需 要任何轉譯後修飾（如糖基化）； 免疫東蛋白單-可變域可輕易經工程改造成多價及多 特異性形式（如本文進-步論述）·’ 免疫球蛋白單-可變域對其標乾具有高特異性及親和 力具有低固有毒性，可經由輸注或注射以外之替代 途徑投與； 春 免疫球蛋白單-可變域對熱、pH '蛋白酶及其他變 陡A丨或條件而度穩定，因此可在不使用冷凍設備情況 下製備、儲存或運輸； 免疫球蛋白單-可變域以小規模及製造規模製備均容 易且相當廉價。舉例而言，免疫球蛋白單一可變域及 3有免疫球蛋白單一可變域之多肽可使用微生物醱酵 (例如下文進一步所述）產生，不需要使用哺乳動物表 現系統’例如習知抗體之情況； 擊 相較於習知4鏈抗體及其抗原結合片段，免疫球蛋白 單可變域相當小（約15 kDa，或為習知1§(；}的1/1〇)， 因此顯示高（更高）穿透入組織（包括（但不限於）實體腫 瘤及其他緻密組織），且可以高於此等習知4鏈抗體及 其抗原結合片段之劑量投與； VHH具有特定之所謂「空穴結合性質」（尤其歸因於 相較於4鏈抗體之VH域，其CDR3環經延伸），因此亦 150859.doc -24- 201124532 可進入習知4鏈抗體及其抗原結合片段不可進入之標 靶及抗原決定基； • VHH具有高度可溶及極其穩定且不具有凝集趨勢的特 定優勢（正如由Ward等人，Nature 341: 544-546 (1989)所述之小鼠源性抗原結合域的情況一樣）。 不在以下方面限制本發明免疫球蛋白單一可變域：獲得 該等免疫球蛋白單一可變域之特定生物來源、或特定製備 方法。舉例而言，獲得VHH可包括以下步驟： (1) 分離天然存在之重鏈抗體之VHH域；或篩檢包含重鏈 抗體或VHH之文庫且自其分離VHH ; (2) 表現編碼具有天然存在序列之VHH的核酸分子； (3) 視情況在親和力成熟之後使具有天然存在序列之VHH 「人類化」（如本文所述），或表現編碼此人類化VHH之核 酸； (4) 使動物物種（特定言之哺乳動物物種，諸如人類）之天然 存在抗體的免疫球蛋白單一可變重域「駱駝化」（如下所 述），或表現編碼此等駱駝化域的核酸分子； (5) 使VH「駱駝化」，或表現編碼此類駱駝化VH的核酸分 子； (6) 使用以合成方式或半合成方式製備蛋白質、多肽或其他 胺基酸序列之技術； (7) 使用核酸合成技術製備編碼VHH域之核酸分子，隨後 表現由此獲得之核酸； (8) 使重鏈抗體或VHH經受親和力成熟、突變誘發（例如隨
I 150859.doc -25- 201124532 機犬變誘發或定點突變續發） 犬支透發）及/或任何其他技術以增加 VHH之親和力及/或特異性；及/或 (9)組合或選擇上述步驟。 、於進行上述步驟之方法及技術在此項技術中為已知的 且將為熟習此項技術者所瞭解。 根據-特定實施例，本發明免疫球蛋白單一可變域或存 在:本發明多肽中之免疫球蛋白單一可變域為胺基酸序列 本貝上對應於天然存在VHH域之胺基酸序列之vhh域，但 八已絰人類化」（視情況在親和力成熟之後），亦即藉由 以人颂之習知4鏈抗體可變重域中相應位置處存在的一或 多個胺基酸殘基置換該天然存在VHH序列之胺基酸序列中 的一或多個胺基酸殘基。此可使用此項技術中已知之方法 進行，該等方法可由熟習此項技術者以常規方式使用。 人類化VHH域可含有一或多個完全人類構架區序列，且 在一甚至更特定實施例中，可含有源自人類生殖系Vh3序 列DP-29、DP_47、01>_51或其部分，或與此高度同源的人 類構架區序列◊因此，人類化方案可包含單獨或組合使用 生殖系VH基因（諸如DP 47、DP 29及DP 51)之相應構架i、 2及3(FR1、FR2及FR3)殘基來置換任何Vhh殘基。本發明 免疫球蛋白單一可變域之適合構架區（FR)可選自彼等如例 如於WO 2006/004678中所述者且特定言之包括所謂 「KERE」及「GLEW」種類。在約位置44至47處具有胺基 酸序列G-L-E-W之免疫球蛋白單一可變域及其各別人類化 對應物特定較佳。 150859.doc •26· 201124532 屬於103 P,R,S組及/或GLEW組（如下文所定義）之VHH域 的較佳但非限制性人類化取代為108Q至108L。使免疫球 蛋白單一可變域人類化之方法在此項技術中為已知的。 根據另一實施例，免疫球蛋白單一可變域為如本文所定 義之VH域。 在另一實施例中，代表性種類的本發明DU4結合免疫球 蛋白單一可變域或存在於本發明多肽中之D114結合免疫球 蛋白單一可變域的胺基酸序列對應於天然存在VH域已經 「駱駝化」之胺基酸序列，亦即藉由以一或多個存在於重 鏈抗體VHH域中相應位置處之胺基酸殘基置換習知4鏈抗 體之天然存在可變重鏈胺基酸序列中的一或多個胺基酸殘 基。此可以熟習此項技術者所瞭解之本身已知的方式進 行，且另外參考WO 94/04678。此駱駝化可優先發生在存 在於VH-VL界面及所謂駱駝科印記殘基處的胺基酸位置處 (亦例如參見WO 94/04678)。此等「人類化」及「駱駝 化」技術及與此相符之較佳構架區序列之詳述可另外自例 如 WO 2006/040153 之第 46 頁及第 98 頁及 WO 2006/122786 之第107頁獲得。 本發明D114結合分子，例如免疫球蛋白單一可變域及或 含有其之多肽對D114具有特異性，因為其包含一或多個特 異性結合DU4分子内一或多個抗原決定基之免疫球蛋白單 一可變域。 D114結合分子對其抗原D114之特異性結合可以本身已知 之任何適合方式來測定，包括例如本文所述之檢定、史卡 150859.doc -27- 201124532 查（Scatchard)分析及/或競爭性結合檢定（諸如放射免疫檢 定（RIA)、酶免疫檢定（EIA及ELISA)及夾心式競爭檢定）及 此項技術中本身已知之其不同變化形式。 關於抗原D114，本發明D114結合分子，例如免疫球蛋白 單一可變域關於物種不加限制。因此，若意欲用於人類治 療目的’則本發明免疫球蛋白單一可變域或含有其之多狀 較佳結合人類D114。然而，結合另一哺乳動物物種之 之免疫球蛋白單一可變域、或含有其之多肽亦在本發明範 疇内。結合一個物種形式之D114之本發明免疫球蛋白單一 可變域可與一或多個其他物種之Dl14交叉反應。舉例而 言，結合人類D114之本發明免疫球蛋白單一可變域可展現 與一或多個其他靈長類物種之Dn4及/或與用於疾病動物模 型（且特疋吕之用於與Dll4對血管生成之介導效應相關之疾 病及病症之動物模型）中之一或多個動物物種（例如猴（特定 言之獮猴（cyn〇m〇igUS)或恆河猴（Rhesus))、小鼠大鼠、 兔、豬、犬或）（諸如本文提及之物種及動物模型）之D114的 交叉反應性°展示此交又反應性之本發明免疫球蛋白單一 可變域在研究及/或藥物研發中為有利的，因為其允許在 公認疾病模型(諸如猴(特定言之獼猴或恆河猴）' 或小鼠及 大鼠）中對本發明免疫球蛋白單—可變域進行測試。 此外’本發明D114結合分子不限於其所針對之腦之特 定域或抗原決定子或不由立& ^ ^ 欠不由其所針對之〇114之特定域或抗原 決定子限定。較佳地， 馨於與除人類以外之物種（其意欲 在治療性D114拮抗劑之研發期 間用作動物模型）之一或多種 150859.doc -28· 201124532 D114分子的交又反應性，DU4結合分子識別與人類aw具 有高度一致性之相關D114之區域中的抗原決定基。舉例= 言，鑒於使用小鼠模型，本發明免疫球蛋白單一可變域識 別完全或部分位於EGF_2域内的抗原決定基，該egf_2域 在人類與小鼠之間展示較高一致性。 因此，根據一較佳實施例，本發明係關於一種〇1丨4結合 分子，特定言之免疫球蛋白單一可變域或含有該免疫球蛋 白單一可變域之多肽，其中該免疫球蛋白單一可變域係選 自結合於完全或部分含於EGF_2内之抗原決定基之群組， 該EGF-2域對應於SEQ m N〇: 417之胺基酸殘基252_282。 若本發明多肽為如本文定義之含有一個以上本發明免疫 求蛋白單可變域之雙互補位分子，則至少一個免疫球蛋 白單一可變域組分結合如上文定義2EGF_2域内的抗原決 定基。 較佳地’本發明免疫球蛋白單一可變域以小於500 nM、 較佳小於200 nM、更佳小於1〇 nM，諸如小於500 pM(如經 由表面電聚子共振分析（如實例5.7中所述）測定）之親和力 結合D114。 車父佳地’本發明免疫球蛋白單一可變域如競爭ELISA檢 疋（如貫例5.1.中所述）中測得之IC5〇值在1〇-6至1〇.10莫耳/公 升或10莫耳/公升以下之範圍内，更佳在10-8至1〇-ι〇莫耳/ 公升或10 10莫耳/公升以下之範圍内、且甚至更佳在1〇_9至 1〇莫耳/公升或10_1()莫耳/公升以下之範圍内。 根據本發明之一非限制性但較佳實施例，本發明DU4結 δ 150859.doc -29- 201124532 合免疫球蛋白單—可變域或含有其之多肽以1〇-5至1〇-12莫 耳/a升（M)或1〇莫耳/公升以下、且較佳1〇-7至1〇-丨2莫耳/ 公升（M)或1〇-丨2莫耳/公升以下、且更佳1〇.8至1〇_〗2莫耳/公 升（M)或10·〗2莫耳/公升以下之解離常數（κ〇)，及/或以至少 ΙΟ7 Μ·1、較佳至少1〇8 M·〗、更佳至少l〇9 ，諸如至少 10 Μ之締合常數（κΑ);且特定言之以小於5〇〇 nM、較 佳J於200 nM、更佳小於10 nM，諸如小於5〇〇 之結 合D114。可測定本發明免疫球蛋白單一可變域針對dim之 K〇及Ka值。 在另-實施例中’本發明係關於包含兩個或兩個以上在 不同非重叠抗原決定基處結合抗原DU4之免疫球蛋白單一 可變域的DU4結合分子。更特定言之，本發明之此多狀本 質上由以下各者組成或包含以下各者：⑴特異性結合蠢 之第一抗原決定基之第一免疫球蛋白單一可變域及特 異性結合DIM之第二抗原決定基之第二免疫球蛋白單一可 變域，其中D114之該第一技眉本々M ^ ^柷原决叱基及D114之該第二抗原 決定基不為同-抗原衫基。換言之，本發明之此多肽包 含以下各者或本質上由以下各者組成：兩個或兩個以上針 對至少兩個存在於·中之不同抗原決定基的免疫球蛋白 単-可變域…該等免疫球蛋白單一可變域以能夠同時 結合DU4之方式彼此連接。在此意義中，本發明多狀亦可 視為「二價”戈「多價」免疫球蛋白構築體，且尤其視為 「多價免疫球蛋白單-可變域構築體」，因為該多肽含有 至少兩個D114結合位點。 150859.doc •30- 201124532 本發明之此D114 έ士人八1 , ^、，° σ刀子匕括（至少）兩個抗D114免疫球 早σ文域，其中（該）兩個免疫球蛋白單一可變域争 針對剛分子内之不同抗原決定基。因此，此等_ = 球蛋白單-可變域將具有不同抗原特異性且因此不同⑽ 序列。為此，本發明之此等多肽在本文中亦分別稱為「雙 互補位多肽」、或「雙互補位單域抗體構築體」（若免疫 球蛋白單-可變域由或本f上由單域抗體組成）或「雙互
補位VHH構築體」（若免疫球蛋白單—可變域由或本質上 由VHH組成）’當兩個免疫球蛋白單一可變域包括兩個不 同互補位時。
根據本發明之-特定實施例，若本發明多肽包括兩個以 上抗D114免疫球蛋白單一可變域，亦即三個、四個或甚至 四個以上抗D114免疫ί求蛋白單一可㈣，則i少兩個抗 D114免疫球蛋白單一可變域係針對DU4分子内之不同抗原 決定基，其中任何另一免疫球蛋白單一可變域可結合存在 於D114刀子中之任何此等兩個不同抗原決定基及/或另一抗 原決定基。 根據本發明，兩個或兩個以上免疫球蛋白單—可變域可 彼此獨立地為VH或VHH，及/或如本文定義之任何其他種 類之免疫球蛋白單一可變域，諸如VL域，只要此等免疫 球蛋白單—可變域將結合抗原（亦即D114)即可。 根據一較佳實施例’第一及第二免疫球蛋白單—可變域 本質上由以如本文定義之VH序列或VHH序列組成。根據 一特定較佳實施例’第一及第二免疫球蛋白單—可變域本 g· 150859.doc -31 - 201124532 質上由VHH序列組成。 根據本發明之某些貫施例，存在於本發明Diμ結合分子 中之至少兩個免疫球蛋白單一可變域可彼此直接（亦即不 使用連接子）或經由連接子連接，連接子較佳為連接肽且 將經選擇以允許至少兩個不同免疫球蛋白單一可變域各結 合同一個D114分子内或兩個不同分子内之DU4之至少兩個 不同抗原決定基。 連接子之選擇將尤其取決於抗原決定基且特定言之免疫 球蛋白單一可變域所結合D丨14上之抗原決定基之間的距 離，且熟習此項技術者基於本文揭示内容，視情況在某些 有限程度之常規實驗之後將瞭解此選擇。可通常假定存在 於本發明之此類多肽中之兩個免疫球蛋白單一可變域之n_ 末端與c-末端間的距離較佳為至少5(H^Angstr〇m)、且更 佳約55-200埃、且特定言之約65_15〇埃作為此實驗之起 點’其中距離上限不太關鍵且出於例如考慮蛋白質表現/ 產生之便利性加以選擇。 此外’當結合D114之兩個或兩個以上免疫球蛋白單一可 變域為VH或VHH時，其可經由分別第三VH4VHH而彼此 連接（在此等D114結合分子中，兩個或兩個以上免疫球蛋白 單一可變域可直接或經由適合連接子連接至該第三免疫球 蛋白單一可變域）。此類第三VH* VHH可例如為提供增加 之半衰期的VH或VHH。舉例而言，後一 VH*VHH可^能 夠結合（人類）血清蛋白（諸如（人類）血清白蛋白）或（人類）轉 鐵蛋白（transferrin)之 VH或 VHH。 150859.doc -32- 201124532 或者，結合DU4之兩個或兩個以上免疫球蛋白單—可變 域可串聯連接（直接或經由適合連接子）且第二VH戋 VHH(其可提供增加之半衰期）可直接或經由連接子連接至 此等兩個或兩個以上上述免疫球蛋白序列之一。 適合連接子可例如且不加限制地包含長度較佳為9個或9 個以上胺基酸、更佳為17個以上胺基酸，例如約2〇肩個 胺基酸殘基的胺基酸序列。然而，上限不關鍵但出於便利 • 產生例如此等多肽之生物醫藥的原因加以選擇。 連接序列可為天然存在序列或非天然存在序列。若用於 /σ療目的，則連接子在投與本發明多肽之個體中較佳為非 免疫原性的。 組適用連接序列為如w〇 96/34103及WO 94/04678中 所述源自重鏈抗體鉸鏈區之連接子。 其他實例為聚丙胺酸連接序列，諸如 若本發明多肽係藉由連接聚合物，例如聚乙二醇PEG(聚
乙二醇）部分而經修飾’則連接序列較佳包括允許連接區 或中之此修飾(例如聚乙二醇化)之胺基酸殘基，諸如半胱 胺酸或離胺酸。 此夕卜，遠技工+ ,
安于亦可為例如於WO 04/081026中所示之聚 (乙二醇）部分。 A 只施例中，本發明多肽之至少兩個D114結合免疫 球蛋白早一可變技姑丄0 域、、^由另一部分（視情況經由一或兩個連 接子）’諸如另—客 夕肽而彼此連接，該另一多肽在一較佳 但非限制性實μ A，丄 貫苑例中可為如上所述之另一免疫球蛋白單— 150859.doc -33· 201124532 可變域。此部分可為本質上非活性的或可具有諸如改良多 肽之所要性質之生物效應或可以多肽一或多種其他所要 性質。舉例而言且不加限制，該部分可改良蛋白質或多肽 之半衰期’及/或可降低其免疫原性或改良任何盆他所要 很骡本發明 孕父佳貫施例，本發明D114結合分子，鑒 於其用作治療劑，包括延長本發明多肽在患者 :液中之半衰期的部分。術語「半衰期」定義為(經修飾) 肽之血清濃度例如由於天然機制所致之多肽降解及/或 清除及/或螯合而活體内降低5G%所花費之時間。 ^特U之，此半衰期延長部分可共價連接至或融合至 该夕肽且可為（不加限制）Fe部分、白蛋白部分、 段部分、白蛋白結合部分(諸如抗白蛋白免疫球蛋白單一 :變域)、轉鐵蛋白結合部分(諸如抗轉鐵蛋白免疫球蛋白 早可變域）、聚環氧烧分子（諸如聚乙二醇分子）、 結合肽或羥乙基澱粉（HES)衍生物。 ^較佳實施射，本發明多肽包含結合存在於企液 =抗原的部分，諸如血清白蛋白、血清免疫球蛋白、甲 合蛋白、血纖維蛋白原（fibHn°gen)或轉鐵蛋白， 所得本發明多肽增加之活體内半衰期。根據—特 疋車父佳貫施例，此部分為白蛋白結合免疫球蛋白且尤 佳為白蛋白結合免疫球蛋白單一 ，、乂 VHH域。 又“如白蛋白結合 若意欲在人類中使用’則此白蛋白結合免疫球蛋白單一 150859.d〇c -34- 201124532 可變域較佳結合人類血清白蛋白且較佳為人類化白蛋白結 合VHH域。 結合人類血清白蛋白之免疫球蛋白單一可變域在此項技 術中為已知的且進一步詳述於例如WO 2006/122786中。特 定言之，適用白蛋白結合VHH為ALB 1及其人類化對應物 ALB 8(WO 2009/095489)。然而，亦可使用在以上專利公 開案中提及之其他白蛋白結合VHH域。 ^ 根據本發明之另一實施例，免疫球蛋白單一可變域可融 合至諸如例如貿001/79271及賈003/59934中所述之血清白 蛋白分子。如例如於WOO 1/79271中所述，融合蛋白可經 由以下習知重組技術獲得：將編碼血清白蛋白或其片段之 DNA分子接合至編碼Dii4結合分子之DNA，將所得構築體 插入適於在所選宿主細胞（例如酵母細胞（如巴斯德畢赤酵 母（Pichia pastoris))或細菌細胞）中表現之質體中，接著用 融合核苷酸序列轉染宿主細胞且在合適條件下培養。 φ 根據另一實施例，本發明多肽之半衰期延長修飾（此修 飾亦降低多肽之免疫原性）包含連接適合藥理學上可接受 之聚合物，諸如直鏈或分支鏈聚（乙二醇）(PEG)或其衍生 物（諸如曱氧基聚（乙二醇）或mPEG)。一般而言，可使用任 何適合形式之聚乙二醇化，諸如此項技術中使用之針對抗 體及抗體片段的聚乙二醇化（包括（但不限於）單域抗體及 scFv聚乙二醇化）；參考例如：chapman，Nat. Biotechnol·， 54，53 1-545 (2002) ; Veronese及 Harris，Adv. Drug Deliv. Rev. 54，453-456 (2003) ; Harris及 Chess, Nat. Rev. Drug. 150859.doc •35- 201124532
Discov. 2 (2003);及 WO 04/060965。用於使多肽聚乙二醇 化之各種試劑亦為市售的，例如自Nektar Therapeutics, USA或NOF Corporation，Japan講得，該等試劑諸如 Sunbright® EA系列、SH系列、ΜΑ系列、CA系列及ME系 歹1J，諸如 Sunbright® ME-1 00ΜΑ、Sunbright® ME-200MA 及 Sunbright® ME-400MA。 較佳使用特定言之經由半胱胺酸殘基之定點聚乙二醇化 (參見例如 Yang 等人，Protein Engineering 16，761-770 (2003))。舉例而言，出於此目的，PEG可連接至天然存在 於本發明多肽中之半胱胺酸殘基，本發明多肽可經修飾以 便適當引入一或多個用於連接PEG之半胱胺酸殘基，或包 含一或多個用於連接PEG之半胱胺酸殘基之胺基酸序列可 融合至本發明多肽之N-末端及/或C-末端，均使用對熟習 此項技術者而言本身已知之蛋白質工程之技術。 較佳地，對於本發明多肽，使用分子量在5 kDa以上， 諸如1 0 kDa以上且小於200 kDa，諸如小於1 00 kDa，例如 20 kDa至80 kDa範圍内之PEG。 關於聚乙二醇化，應注意一般而言，本發明亦涵蓋較佳 以如下方式已在一或多個胺基酸位置處經聚乙二醇化之任 何雙互補位D114結合分子：該聚乙二醇化（1)增加活體内半 衰期；（2)降低免疫原性；（3)提供為聚乙二醇化本身已知 之一或多種其他有益性質；（4)不本質上影響多肽對D114之 親和力（例如不使該親和力降低50%以上、且更佳不降低 1 0%以上），如經由此項技術中所述之適合檢定所測定；及 150859.doc -36- 201124532 /或（5)不影響本發明D114結合分子之任何其他所要性質。 適合PEG基及用於特異性或非特異性連接其之方法將為熟 習此項技術者所瞭解。適用於此聚乙二醇化之套組及試劑 可例如自Nektar(CA，USA)獲得。 在另一恶樣中，本發明係關於編碼本發明Di 14結合分子 之核酸分子。此等核酸分子在本文中亦將稱為「本發明核 酸」且亦可呈如本文定義之遺傳構築體形式。本發明核酸 φ 可為基因組DNA、cDNA或合成DNA(諸如具有已使特定適 於在預定宿主細胞或宿主有機體中表現之密碼子使用 (codon usage)的DNA)。根據本發明之一實施例，本發明核 酸呈如上定義之本質上經分離形式。 本發明核酸亦可呈載體形式、可存在於載體中及/或可 為載體之一部分，該載體諸如質體、黏質體或YAC ^載體 可尤其為表現載體，亦即可提供Dll4結合分子活體外及/或 活體内（亦即在適合宿主細胞、宿主有機體及/或表現系統 • 中）表現之載體。此表現載體通常包含至少一種本發明核 酸，其可刼作地連接至一或多個適合調控元件（諸如啟動 子、增強子、終止子及其類似物）。此等元件及其鑒於特 定序列在特定宿主中之表現的選擇為熟習此項技術者之常 識。適用於表現本發明D114結合分子或為表現本發明dU4 結合分子必需之調控元件及其他元件之特定實例，諸如啟 動子、增強子、終止子、整合因子（integmi〇n fact〇r)、選 擇標記物、前導序列、報導基因（reporter gene)及其類似 物係揭示於例如WO 2006/0401 53之第131至133頁。 150859.doc 37- 201124532 本發明核酸可基於關於本文給出之本發明多肽之胺基酸 序列的資訊以本身已知之方式（例如經由自動DNA合成及/ 或重組DNA技術）製備或獲得，及/或可自適合天然來源加 以分離。 在另一態樣中，本發明係關於表現或能夠表現一或多種 本發明D114結合分子及/或含有本發明核酸的宿主細胞。根 據一特定較佳貫施例’該等宿主細胞為細菌細胞；其他適 用細胞為酵母細胞、真菌細胞或哺乳動物細胞。 適合細菌細胞包括革蘭氏陰性細菌菌株（諸如大腸桿.菌 菌株、變形桿菌屬菌株及假單 胞菌屬菌株）及革蘭氏陽性細菌菌株（諸如芽 孢桿菌屬（5acz7/M*s)菌株、鏈黴菌屬菌株、 葡萄球菌屬（&叩吵/wcw)菌株及乳球菌屬 痛株）之細胞。適合真囷細胞包括木徽屬（JWe/zot/erwa)、 紅黴菌屬（iVeMrowora)及麴菌屬（hpergH/w)之物種的細 胞。適合酵母細胞包括酵母屬（iSacc/mromycesX例如釀酒酵 母（Saccharomyces cerevisiae))、裂殖酵母屬 QSchizosaccharomyces ，例如粟酒裂殖酵母（iSc/n’zo^acc/mromyce·? 、畢赤 酵母屬（Pi’c/n‘a)(例如巴斯德畢赤酵母（ΡίΆία 及嗜 甲醇畢赤酵母（ΡζΆζ'α methanolica))反漢森酵母屬 (i/awseww/a)之物種的細胞。 適合哺乳動物細胞包括例如CHO細胞、BHK細胞、海拉 細胞（HeLa cell)、COS細胞及其類似細胞。然而，亦可使 用兩栖類細胞、昆蟲細胞、植物細胞及此項技術中用於表 150859.doc -38- 201124532
現異源蛋白質之任何其他細胞Q 本發明另外提供製造本發明D114結合分子之方法，此等 方法通常包含以下步驟： -在允許表現本發明D114結合分子之條件下培養包含能夠 編碼D114結合分子之核酸的宿主細胞；及 -自培養物回收或分離由宿主細胞表現之多肽；及 -視情況進一步純化及/或修飾及/或調配本發明D114結合分 籲子。 對於工業規模生產而言，較佳宿主有機體包括適於大規 模表現、生產及醱酵，且特定言之適於大規模醫藥表現、 生產及醱酵之大腸桿菌菌株、巴斯德畢赤酵母菌株及釀酒 酵母菌株。 特定表現系統之選擇部分取決於某些轉譯後修飾，更特 定言之糖基化之要求。需要或要求糖基化之本發明〇114結 合分子的產生必需使用能夠使所表現蛋白質糖基化之哺乳 # 動物表現宿主。就此而言，熟習此項技術者將瞭解所獲得 之糖基化樣式（亦即所連接殘基之種類、數目及位置）將取 決於用於表現之細胞或細胞株。 本發明D114結合分子可在如上所述細胞中以細胞内方式 (例如在細胞溶質中 '在胞外質（periplasma)中或在包涵體 (inclusion body)中）產生，接著自宿主細胞分離且視情況進 一步純化；或其可以細胞外方式（例如在培養宿主細胞之 培養基中）產生，接著自培養基分離且視情況進一步純 化°
S 150859.doc •39- 201124532 用於重組產生多肽之方法及試劑， 體、轉型或轉染方法、選擇標記物、 諸如特定適合表現載 誘導蛋白質表現之方 法、培養條件及其類似物在此項技術中為已知的。類似
技術為熟習此項技術者所熟知。 在另一態樣中，本發明係關於胺基酸序列選自分別展示 於 SEQ ID NO: 1 至 166及 458、SEQ ID NO: 333至 353、或 SEQ ID NO: 375至395中之胺基酸序列的肽，及編碼該肽 之核酸分子。 此等肽對應於源自本發明VHH之CDR3。其，特定言之 編碼其之核酸分子，適用於CDR接枝以置換免疫球蛋白鏈 中之CDR3 ’或適用於插入非免疫球蛋白骨架，例如蛋白 酶抑制劑、DNA結合蛋白、細胞色素b562、螺旋束蛋白
白（lipocalin)或抗運載蛋白（anticalin)中，從而賦予此骨架 乾結合性質。CDR接枝方法在此項技術中為熟知的且已廣 泛使用’例如用於使抗體人類化（此通常包含將齧齒動物 抗體之CDR接枝在人類抗體之fv構架上）。 為了獲得含有本發明CDR3之免疫球蛋白或非免疫球蛋 白骨架’可根據如例如由Daugherty等人，1991, Nucleic Acids Research，第19卷，9，2471-2476所述之分子生物學 標準方法，例如藉由基因合成、藉由寡核苷酸黏接或藉助 於重疊PCR片段▲獲得編碼此分子之DNA。將VHH CDR3 插入非免疫球蛋白骨架中之方法已由Nicaise等人，2004, 150859.doc -40· 201124532
Protein Science，13，1882-1891 描述。 本發明另外係關於—種產物或組合物，其含有或勹入至 少一種本發日讚4結合分子及視情況可㈣此#組=之 本身已知的-或多種其他組分，亦即視組合物 而定。 』月疋用速 對於醫藥用途而言，本發明_結合分子或含有本發明 D114結合分子之多狀可調配成醫藥製劑或組合物，其包含 _ 1少-種本發明Dll4結合分子及至少—種f藥學上;二 之載劑、稀釋劑或賦形劑及/或佐劑及4見情況可選之一或 夕種其他醫藥活性多肽及/或化合物。藉助於非限制性實 例:此類調配物可呈適於口服投藥、非經腸投藥（諸如藉 =靜脈内、肌肉内或皮下注射或靜脈内輸注）、局部投 樂、错由吸入、皮膚貼片、植入物、栓劑等投藥的形式。 視投藥方式而定可為固體、半固體或液體之此等適合投藥 形式以及用於制備其之方法及載劑將為熟f此項技術者所 φ 瞭解且進一步在本文中加以描述。 因此，在另一態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物含 有^少-種DU4結合分子，特定言之一種本發明免疫球蛋 白單一可變域或含有該本發明免疫球蛋白單一可變域之多 肽及至J 一種適合載劑、稀釋劑或賦形劑（亦即適於醫 藥用途）及視情況一或多種其他活性物質。 本發明DU4結合分子可以本身已知之任何適合方式調配 及投與：特定言之對於免疫球蛋白單一可變域，例如參考 W0 04/041862、W0 04/041863、w〇 〇4/〇4i865、w〇 150859.doc -41 - 201124532 04/041867及WO 08/020079，以及標準手冊，諸如 Remington's Pharmaceutical Sciences,第 18 版·，Mack Publishing Company, USA (1990) ； Remington, the Science and Practice of Pharmacy,第 21 版，Lippincott Williams and Wilkins (2005);或 the Handbook of Therapeutic Antibodies (S_ Dubel編），Wiley，Weinheim，2007(參見例如第 252-255 頁）。
舉例而δ ’本發明免疫球蛋白單一可變域可以用於習^ 抗體及抗體片段（包括ScFv片段及微型雙功能抗體）及其小 醫藥活性蛋白質之本身已知的任何方式調配及投與。此^ 調配物及製備此等調配物之方法將為熟習此項技術者所串 解，且例如包括適於非經腸投藥（例如靜脈内、腹膜内、 皮下、肌肉内、腔内（lntraluminal)、動脈内或鞠户 (iHaD投藥）或局部（亦即經皮或皮内）投藥之製劑。
用於非經腸投藥之製劑可例如為適於輸注或注射之 溶液、懸浮液、分散液或乳液。適用於此等製劑之載㈣ 稀釋劑，例如包括(不加限制)滅菌水及醫藥學 =緩衝液及溶液，諸如w㈣鹽水、林格^
? :ng「SS〇lu—、右旋糖溶液及漢*氏溶 —含水油；甘油；〔醇；諸如丙二醇处 及礦物油、動物油及植物油 知或U 其適合混合物。水性溶液或懸：：較:豆油，以及 因此’本發明Dll4結合分子可組合醫藥學上可 劑（諸如惰性稀釋劑或可吸收 接叉之错 收艮用載劑)而全身投與(例如經 150859.doc •42- 201124532 口、投與）。對於口服治療性投藥而言，可將本發明刪結合 分子與-或多種賦形劑組合且以可攝取鍵劑、口腔旋、片 劑、踢囊劑、酏劑、懸浮液、糖聚、粉片及其類似物之形 式使用此等組合物及製劑應含有至少之本發明仙4 結合分子。其在組合物及製劑中之百分比當然可變化且宜 介於既定單位劑型重量的約2%與約6〇%之間。本發明趣 結合分子在此等治療上適用之組合物中之量為將獲得有效 劑量濃度的量。 鍵劑、丸劑、膠囊劑及其類似物亦可含有黏合劑、賦形 劑、崩解劑、潤滑劑及甜味劑或調味劑，例如彻〇8/ 隨m之第⑷-144頁提及者。當單位劑型為膠囊劑時， 除以上類型之物質外，其亦可含有液體載劑，諸如植物油 或丰乙—醇。可存在各種其他物質作為包衣或另外修飾固 體單位劑型之外形。舉例而·r，錠劑、丸劑或㈣劑可經 明膠、虫鼠、蟲膠（Shellac)或糖及其類似物包覆。糖聚或酏 劑可含有本發_結合分子，簾糖或果糖作為甜味劑， 對經基苯甲酸甲3旨及對㈣苯f酸丙g旨作為防腐劑，色 素，及調味劑，諸如櫻桃或撥味。當然，在製備任何單位 劑型中使用之任何物質皆應為醫藥學上可接受且在所用量 實質上無毒。此外’本發明侧結合分子可併入持續釋放 製劑及裝置中^ 用於口服投藥之製劑及調配物亦可具有腸溶包衣，將使 本發明構築體抵抗胃環境且進入腸中。更—般而古，用於 口服投藥之製劑及調配物可經適當調配以傳遞進入胃腸道 150859.doc -43- 201124532 之任何所要部分中。此外，適合栓劑可用於傳遞進入胃腸 道中。 本發明D114結合分子亦可藉由輸注或注射而經靜脈内或 腹膜内投與，如WO 08/020079第144及145頁所進一步描 述。 對於本發明D114結合分子之局部投藥而言，一般需要將 其與皮膚學上可接受之載劑（其可為固體或液體）組合之組 合物或調配物投與皮膚，如W〇 〇8/〇2〇〇79第145頁所進一 步描述。 一般而言，本發明D114結合分子在液體組合物（諸如洗 劑）中之濃度將為約0.1-25重量％、較佳約on〇重量％。在 半固體或固體組合物（諸如凝膠或粉末）中之濃度將為約 〇.1-5重量％、較佳約〇5_25重量％。 本發明D114結合分子的治療使用所需量將不僅隨所選特 定DU4結合分子，而且亦隨投藥途徑、所治療病狀特性及 患者年齡及狀況而變化且將最終任憑巡診醫師或臨床醫師 處里此外，本發明DH4結合分子之劑量視靶細胞、腫 瘤、組織、移植物或器官而變化。 ^所要劑I宜呈現為單次劑量或在適當間隔下投與之分次 劑量’例如呈每天兩次、三次、四次或四次以上之次^ :式、欠劑量自身可經進一步劃分，例如分成大量個別鬆 散間隔之投藥；諸如來自吹藥器（insufflat〇r)之多個吸入劑 或藉由對眼中施用複數個滴劑。 " 才又樂方案可包括長期每日治療。「長期」意謂持續時間 150859.doc 201124532 至少兩週且較佳數週、數月或數年。此劑量範圍之必要修 改可由一般技術者僅使用本文教示中給出之常規實驗來確 定。參見 Remington’s Pharmaceutical Sciences (Martin， E.W.第 4版），Mack Publishing Co_，Easton，PA。倘若發生 任何併發症，則劑量亦可由個別醫師來調整。 根據另一實施例’本發明係關於本發明DH4結合分子， 例如免疫球蛋白單一可變域或含有其之多肽之用途，其用 於治療目的，諸如 -用於預防、治療及/或減輕尤其人類中與DU4對血管生成 之介導效應相關或可藉由以D114結合分子調節洛奇信號 傳V路徑來預防、治療或減輕之病症、疾病或病狀， -在一治療需要此治療之患者的方法中，此方法包含投與 有需要之個體醫藥活性量之至少一種本發明DU4結合分 子（例如免疫球蛋白單一可變域）或含有該本發明〇丨14結 合分子之醫藥組合物； -用於製備預防、治療或減輕與DU4對血管生成之介導效 應相關之病症、疾病或病狀的藥劑； 作為用於以上目的之醫藥組合物或藥劑中之活性成分。 。根據一特定態樣’該病症、疾病或病狀為如本文定義之 癌症或癌性疾病。 象另 態樣’疾病為與D114對血管生成之介導效應相 關或可藉由以DU4結合分子調節洛奇信號傳導路徑來治療 或減輕的眼病。 視奴治療之癌性疾病而定，本發明〇丨14結合分子可單獨 150859.doc -45- 201124532 或組合一或多種特定言之選自以下之其他治療劑加以使 用：化學治療劑（如DNA損傷劑）或抑制血管生成、癌細胞 中信號轉導路徑或有絲分裂檢查點（mitotic checkpoint)之 治療活性化合物。 另一治療劑可視情況作為同一醫藥製劑之組分與D114結 合分子之投藥同時投與、或在D114結合分子之投藥之前或 之後投與。 在某些實施例中，另一治療劑可為（不加限制）一或多種 選自以下之抑制劑之群的抑制劑：EGFR、VEGFR、 HER2-neu、Her3、AuroraA、AuroraB、PLK及 PI3 激酶、 FGFR、PDGFR、Raf、KSP、PDK1、PTK2、IGF-R或 IR。 其他治療劑之其他實例為CDK、Akt、src/bcr abl、 cKit、cMet/HGF、c-Myc、Flt3、HSP90之抑制劑；刺蜎拮 抗劑（hedgehog antagonist) ; JAK/STAT、Mek、mTor、 NFkappaB、蛋白酶體（proteasome)、Rho之抑制劑；wnt信 號傳導之抑制劑或泛素化（ubiquitination)路徑之抑制劑或 洛奇信號傳導路徑之另一抑制劑。 極光抑制劑之實例為（不加限制）PHA-739358、AZD-1152、AT 9283、CYC-116、R-763、VX-680、VX-667、 MLN-8045、PF-3814735。 PLK抑制劑之一實例為GSK-461364。 raf抑制劑之實例為BAY-73-4506(亦為VEGFR抑制劑）、 PLX 4032、RAF-265(此外亦為VEGFR抑制劑）、索拉非尼 (sorafenib)(此外亦為VEGFR抑制劑）及XL 28 1。 150859.doc 46 · 201124532 KSP抑制劑之實例為伊斯平斯（ispinesib)、ARRY-520、 AZD-4877、CK-1 122697、GSK 246053A、GSK-923295、 MK-073 1 及 SB-743921。 src及/或bcr-abl抑制劑之實例為達沙替尼（dasatinib)、 AZD-0530、博舒替尼（bosutinib)、XL 228(亦為 IGF-1R抑 制劑）、尼洛替尼（nilotinib)(亦為PDGFR及cKit抑制劑）、 伊馬替尼（imatinib)(亦為cKit抑制劑）及NS -1 87。 PDK1抑制劑之一實例為BX-5 17。
Rho抑制劑之一實例為BA-210。 PI3激酶抑制劑之實例為PX-866、BEZ-235(亦為mTor抑 制劑）、乂1^418(亦為八1^抑制劑）、乂1^147及\[ 765(亦為 m T 〇 r抑制劑）。 cMet或HGF之抑制劑之實例為XL-184(亦為VEGFR、 cKit、Flt3之抑制劑）、PF-2341066、N1K_2461、XL-880(亦 為 VEGFR之抑制劑）、MGCD-265(亦為 VEGFR、Ron、Tie2 之抑制劑）、SU-1 1274、PHA-665752、AMG-102 及 AV-299 ° c-Myc抑制劑之一實例為CX-3543。 FU3抑制劑之實例為AC-220(亦為cKit及PDGFR之抑制 劑）、KW 2449、來妥替尼（lestaurtinib)(亦為 VEGFR、 PDGFR、PKC之抑制劑）、TG-101348(亦為JAK2之抑制 劑）、XL-999(亦為 cKit、FGFR、PDGFR及 VEGFR 之抑制 劑）、舒尼替尼（sunitinib)(亦為PDGFR、VEGFR及cKit之抑 制劑）及坦度替尼（tandutinib)(亦為PDGFR及cKit之抑制 g -47· 150859.doc . 201124532 劑）。 HSP90抑制劑之實例為坦螺旋黴素（tanespimycin)、阿螺 旋徽素（alvespimycin)、IPI-504及 CNF 2024。 JAK/STAT抑制劑之實例為CYT-997(亦與微管蛋白相互 作用）、TG 101348(亦為Flt3之抑制劑）及XL-019。
Mek抑制劑之實例為 ARRY-142886、PD-325901、AZD-8330及 XL 518。 mTor抑制劑之實例為特癌適（temsirolimus)、AP-23 573(其亦充當\^0卩抑制劑）、依維莫司（6乂61'〇11111113)(此 外亦為VEGF抑制劑）、XL-765(亦為PI3激酶抑制劑）及 BEZ-235(亦為PI3激酶抑制劑）。
Akt抑制劑之實例為派瑞福松（perifosine) ' GSK-690693、RX-0201及曲西立濱（triciribine) ° cKit抑制劑之實例為AB-1010、OSI-930(亦充當VEGFR 抑制劑）、AC-220(亦為Flt3及PDGFR之抑制劑）' 坦度替尼 (亦為Flt3及PDGFR之抑制劑）、阿西替尼（亦為VEGFR及 PDGFR之抑制劑）、XL-999(亦為 Flt3、PDGFR、VEGFR、 FGFR之抑制劑）、舒尼替尼（亦為Flt3、PDGFR ' VEGFR之 抑制劑）、及XL-820(亦充當VEGFR及PDGFR抑制劑）、伊 馬替尼（亦為bcr-abl抑制劑）、尼洛替尼（亦為bcr-abl及 PDGFR之·^制劑）。 刺蜎拮抗劑之實例為IPI-609及CUR-61414。 CDK抑制劑之實例為塞來昔布（seliciclib)、AT-7519、P-276、ZK-CDK(亦扣p 制 VEGFR2及 PDGFR)、PD-332991、R- 150859.doc -48- 201124532 547、SNS-032、PHA-690509及 AG 024322 ° 蛋白酶體抑制劑之實例為硼替佐米（bortezomib)、卡菲 佐米（carfilzomib)及 NPI-0052(亦為 NFkappaB之抑制劑）。 NFkappaB路徑抑制劑之一實例為NPI-0052。 泛素化路徑抑制劑之一實例為HBX-41108。 在較佳實施例中，另一治療劑可為抗血管生成劑。
抗血管生成劑之實例為FGFR、PDGFR及VEGFR或各別 配位體之抑制劑（例如VEGF抑制劑，如哌加他尼 (pegaptanib)或抗VEGF抗體貝伐單抗（bevacizumab))及沙立 度胺（thalidomide)，此等藥劑係選自（不加限制）貝伐單 抗、莫替沙尼（motesanib)、CDP-791、SU-14813、替拉替 尼（telatinib)、KRN-95 1、ZK-CDK(亦為 CDK之抑制劑）、 ABT-869 > BMS-6905 14 ' RAF-265 > IMC-KDR ' IMC-18F1、IMiD(免疫調節藥物）、沙立度胺衍生物CC-4047、 來那度胺（lenalidomide)、ENMD 0995、IMC-D11、Ki 23057、布里瓦尼（brivanib)、西地尼布（cediranib)、XL-999(亦為 cKit 及 Flt3 之抑制劑）、1B3、CP 868596、IMC 3G3、R-1530(亦為Flt3之抑制劑）、舒尼替尼（亦為cKit及 Flt3之抑制劑）、阿西替尼（亦為cKit之抑制劑）、來妥替尼 (亦為Flt3及PKC之抑制劑）、凡塔藍尼（vatalanib)、坦度替 尼（亦為Flt3及cKit之抑制劑）、帕峻帕尼（pazopanib)、GW 786034 ' PF-337210 > IMC-1121B ' AVE-0005 ' AG- 13736、E-7080、CHIR 258、曱苯石黃酸索拉非尼（sorafenib tosylate)(亦為Raf之抑制劑）、RAF-265(亦為Raf之抑制 150859.doc •49- 201124532 劑）、範得它尼（vandetanib)、CP-547632、OSI-930、AEE-788(亦為EGFR及Her2之抑制劑）、BAY-57-9352(亦為Raf之 抑制劑）、BAY-73-4506(亦為Raf之抑制劑）' XL 880(亦為 cMet之抑制劑）、XL-647(亦為EGFR及EphB4之抑制劑）、 XL 820(亦為cKit之抑制劑）及尼洛替尼（亦為cKit及brc-abl 之抑制劑）。 另一治療劑亦可選自EGFR抑制劑，其可為小分子EGFR 抑制劑或抗EGFR抗體。抗EGFR抗體之實例（不加限制）為 西妥昔單抗（cetuximab)、盤尼圖單抗（panitumumab)、馬妥 珠單抗（matuzumab);小分子EGFR抑制劑之一實例為吉非 替尼（gefltinib)。EGFR調節劑之另一實例為EGF融合毒 素。 尤其適用於與本發明D114結合分子組合之EGFR及Her2 抑制劑為拉帕替尼（lapatinib)、吉非替尼、埃羅替尼 (erlotinib)、西妥昔單抗（cetuximab)、曲妥珠單抗 (trastuzumab)、尼妥珠單抗（nimotuzumab)、紮魯木單抗 (zalutumumab)、範得它尼（亦為VEGFR之抑制劑）、帕妥珠 單抗（pertuzumab)、XL-647、HKI-272、BMS-599626、 ARRY-334543、AV 412 ' mAB-806、BMS-690514、JNJ-26483327、AEE-788(亦為 VEGFR 之抑制劑）、人11尺丫-333786、IMC-11F8 ' Zemab。 宜在治療中與本發明D114結合分子組合之其他藥劑為替 坦托西莫單抗（tositumumab tiuxetan)及替坦異貝莫單抗 (ibritumomab tiuxetan)(兩種放射性標記抗CD20抗體）、阿 150859.doc -50- 201124532 萊珠單抗（alemtuzumab)( —種抗CD52抗體）、狄諾塞單抗 (denosumab)( —種破骨細胞分化因子配位體抑制劑）、加利 昔單抗（galiximab)(—種CD80拮抗劑）、奥法木單抗 (ofatumumab)(—種 CD20抑制劑）、紮木單抗（zanolimumab) (一種CD4拮抗劑）、SGN40( —種CD40配位體受體調節 劑）、利妥昔單抗（rituximab)(—種CD20抑制劑）或馬帕木單 抗（mapatumumab)(—種 TRAIL-1 受體促效劑）。
可與本發明D114結合分子組合使用之其他化學治療藥物 選自（但不限於）激素、激素類似物及抗激素藥（例如他莫昔 芬（tamoxifen)、托瑞米芬（toremifene)、雷謹昔紛 (raloxifene)、氟維司群（fulvestrant)、乙酸甲地孕酮 (megestrol acetate)、氟他胺（flutamide)、尼魯胺（nilutamide)、 比卡魯胺（bicalutamide)、 乙酸環杜酮（cyproterone acetate)、非那雄安（finasteride)、.乙酸布舍瑞林（buserelin acetate)、氣氫可的松（fludrocortisone)、氟曱睾酮 (fluoxymesterone)、甲經助孕酮（medroxyprogesterone)、奥 曲肽（octreotide)、阿佐昔芬（arzoxifene)、帕瑞肽 (pasireotide)、伐普肽（vapreotide));芳香酶抑制劑（例如安 美達鍵（anastrozole)、來曲0坐（letrozole)、利阿。坐（liarozole)、 依西美坦（exemestane)、阿他美坦（atamestane)、福美司坦 (formestane)) ; LHRH促效劑及拮抗劑（例如乙酸戈舍瑞林 (goserelin acetate)、亮丙立德（leuprolide)、阿巴瑞克 (abarelix)、西曲瑞克（cetrorelix)、地洛瑞林（deslorelin)、 組胺瑞林（histrelin)、曲普瑞林（triptorelin));抗代謝物（例 150859.doc -51 - 201124532 如抗葉酸物（如甲胺嗓呤（methotrexate)、培美曲β坐 (pemetrexed))、嘧啶類似物（如5_氟尿嘧啶、卡培他濱 (capecitabine)、地西他濱（decitabine)、奈拉濱（nelarabine)、 及吉西他濱（gemcitabine))、嘌呤及腺苷類似物（諸如疏基 嘌呤、硫鳥嘌呤、克拉屈濱（cladribine)及噴司他；丁 (pentostatin)、阿糖胞苷（cytarabine)、氟達拉濱（fludaraMne))) ，抗腫瘤抗生素（例如蒽環黴素（anthracycline)(如小紅莓 (doxorubicin)、道諸黴素（daunorubicin)、表柔比星 (epimbicin)及黃膽素（idarubicin))、絲裂黴素-C(mitomycin_ C)、博東黴素（bleomycin)、放線菌素 D(dactinomycin)、普 卡徽素（plicamycin)、米托蒽g昆（mitoxantrone)、匹克生瓊 (pixantrone)、鏈佐星（streptozocin));鉑衍生物（例如順鉑 (cisplatin)、奥赛力銘（oxaliplatin)、卡銘（carboplatin)、洛 鉑（lobaplatin)、撒塔鉑（satraplatin));烷基化劑（例如雌莫 司 >丁（estramustine)、氣芥（meclorethamine)、美法侖 (melphalan)、笨丁酸氮芥（chlorambucil)、馬利蘭（busulphan) 、達卡巴嗪（dacarbazine)、環磷醯胺（cyclophosphamide)、 異環礦·酿胺（ifosfamide)、經基脲（hydroxyurea)、替莫唾胺 (temozolomide)、亞硝基脲（nitrosourea)(諸如卡莫司汀 (carmustine)及洛莫司汀（l〇mustine))、塞替派（thiotepa)); 抗有絲分裂劑（例如長春花驗（vinca alkaloids)，如長春驗 (vinblastine)、長春地辛（vindesine)、長春瑞賓（vinorelbine)、 長春氟寧（vinflunine)及長春新驗（vincristine);及紫杉烧 (taxane)，如太平洋紫杉醇（paclitaxel)、歐洲紫杉醇 150859.doc -52- 201124532 (docetaxel)及其調配物、拉諾紫杉醇（larotaxel)、司莫紫杉 醇（simotaxel);及埃坡徽素（epothilone)，如伊沙匹隆 (ixabepilone)、帕 土匹隆（patupilone)、ZK-EPO);拓撲異 構酶抑制劑（例如表龙臼素（epipodophyllotoxin)(如依託泊 皆（etoposide)及凡畢複（etopophos)、替尼泊苦（teniposide))、 安。丫 °定（amsacrine)、拓朴替康（topotecan)、伊立替康 (irinotecan))及雜項化學治療藥物，諸如胺填汀 (amifostine)、阿那格雷（anagrelide) '干擾素α、丙卡巴肼 (procarbazine)、米托坦（mitotane)、及外吩姆（porfimer)、 貝瑟羅 '汀（bexarotene)、塞内昔布（celecoxib)。 可視相關特定疾病或病症而定使用本身已知之任何適合 活體外檢定、基於細胞之檢定、活體内檢定及/或動物模 型或其任何組合來測試本發明D114結合分子或含有其之多 肽、及包含本發明D114結合分子之組合物的功效。適合檢 定及動物模型將為熟習此項技術者所瞭解且例如包括本文 所述且用於以下實例中之檢定，例如增殖檢定。 如可例如自圖10之ELISA資料瞭解，本發明實驗中獲得 之資料證實本發明D114結合分子具有優於先前技術之D114 結合分子的性質，圖10之ELISA資料展示親和力成熟VHH 以完全方式阻斷hDLL4/hNotchl-Fc相互作用、以及親和力 成熟 VHH 在 hDLL4/hNotchl-Fc 競爭 ELISA 中的 IC50(nM) 值、及純化之親和力成熟VHH對重組人類DLL4及小鼠 DLL4的親和力KD(nM)。此指示本發明D114結合分子為對 與DU4對血管生成之介導效應相關之疾病及病症（諸如癌 150859.doc -53- 201124532 症）具有治療功效的有希望候選者。 根據本發明之另一實施例，提供一種藉由以下來診斷疾 病之方法： a) 使樣品與如上文定義之本發明D114結合分子接觸，及 b) 偵測該D114結合分子對該樣品之結合，及 c) 將步驟（b)中偵測到之結合與標準物進行比較，其中相 對於該樣品之結合差異可診斷出與D114對血管生成之介導 效應相關之疾病或病症。 對於此用途及其他用途，諸如藉由引入作為特異性結合 對（諸如生物素-(鏈菌素）抗生蛋白結合對）之一部分的官能 基來進一步修飾本發明D114結合分子可為有用的。此類官 能基可用於將本發明D114結合分子與結合至結合對另一半 的另一蛋白質、多肽或化合物進行連接，亦即藉由形成結 合對而連接。舉例而言，本發明D114結合分子可接合至生 物素並連接至與抗生蛋白或抗生蛋白鏈菌素接合之另一蛋 白質、多肽、化合物或載體。舉例而言，此類本發明經接 合D114結合分子可用作例如可偵測信號產生劑接合至抗生 蛋白或抗生蛋白鏈菌素之診斷系統中的報導體。 材料及方法 a)過度表現人類、小鼠及獼猴D114之CHO及HEK293細胞 株之產生 使用按照相應序列之5'及3' UTR設計之寡核苷酸（參見表 1 ; SEQ ID NO: 421至426)分別自人類成人正常組織心臟 cDNA文庫（BioChain，Hayward，CA, USA)及小鼠心臟組織 150859.doc -54- 201124532 cDNA文庫（分離自C57/B16品系）擴增編碼人類（SEQ ID NO: 417 ; NM_019074.2)及小鼠 D114(NM_019454.3)之 cDNA。 用途擴增子選殖入哺乳動物表現載體？0〇\八3.1(+)-neo(Invitrogen，Carlsbad, CA, USA)中。 表1 :用於擴增DLL4基因全長直系同源物（orthologue)之寡 核苷酸序列。
人類DLL4 小鼠DLL4 獼猴DLL4 >Fwd_hDLL4 >Fwd_mDLL4 >Fwd_cDLL4 GCGAACAGAGCCAGAT GAGCGACATCCCTAA GCGAACAGAGCCAGA TGAGG CAAGC TTCAGG >Rev_hDLL4 >Rev_mDLL4 >Rev_cDLL4 GGATGTCCAGGTAGGC CCTCAACTCTGTTCCC CCAGACAGACACCCA TCCTG TTGG AAGGT 使用針對密切相關物種恆河猴（恆河獼猴（Macaca mulatta)D114，SEQ ID NO: 418 ; XM 001099250.1)之D114 編碼序列之5’及3’ UTR設計的引子，自獼猴正常組織心臟 cDNA 文庫（BioChain，Hayward, CA, US A)擴增獼猴 D114
cDNA(參見表1) 〇最終擴增子選殖於哺乳動物表現載體 pCDNA3.1(+)-neo(Invitrogen，Carlsbad, CA，USA)中。顯 示獼猴DU4之胺基酸序列經證明與恆河猴100%—致且與人 類99%—致（參見圖1 ;與人類序列之差異經指示為粗體加 下劃線）。 為了產生過度表現人類D114、小鼠D114或獼猴D114之中 國倉鼠卵巢（CHO)細胞，分別用pCDNA3.1(+)-neo-hD114、 pcDNA3.1(+)-neo-mD114 或 pcDNA3.1(+)-neo-cD114 對親本 150859.doc •55 - 201124532 CHO細胞進行電穿孔。過度表現人類D114及小鼠D114之人 類胎腎（HEK293)細胞係藉由分別使用pCDNA3.1(+)-neo-hD114 質體或 pC〇NA3. l(+)-neo-mD114 質體之 Fugene(Roche) 於HEK293親本細胞株中進行脂質介導之轉染來產生。對 於所有條件，轉染子皆係藉由添加1 mg/mL遺傳黴素 (geneticin)(Invitrogen，Carlsbad CA，USA)來選擇。 b)單株抗DU4 IgG及Fab片段之產生 在 US 2008/0014196(Genentech)中，描述 了人類/小鼠交 叉反應性〇114 111八13，其由1^<^\¥&丫等人（2006)使用以展示 大量異種移植模型中VEGF mAb及D114 mAb對腫瘤生長之 累加效應。將此抗D114 mAb及其相應Fab純化以在生物化 學/細胞檢定及異種移植模型中針對噬菌體選擇期間之特 異性溶離來評估此抗體（片段）性質。將D114 mAb之公開之 可變重鏈及輕鏈序列選殖入hIgG2aic構架中’在HEK293細 胞中短暫表現且使用蛋白A層析法自上清液純化。純化 D114 mAb在 ELISA及 FACS(使用 CHO-mD114及 CHO-hD114細 胞）中展示對人類D114及小鼠D114之結合，在Biacore中展示 對兩種生長因子直系同源物之低於奈莫耳的親和力。 相應DU4 Fab片段係經由基於迴轉譯（back-translation)及 使用Leto's基因最佳化軟體Oww.entechelon.com)針對大腸 桿菌中之表現之密碼子最佳化的基因組裝來構築。設計用 於組裝可變輕鏈（VL)、可變重鏈（Vh)、恆定輕鏈（CL)及重 鏈（CH1)之恆定域1之寡核苷酸引子且進行組裝PCR^分別 使用限制位點3/"及及限制位點尺尸…及將編碼 150859.doc -56- 201124532
Vl+Cl及VH+CH1之cDNA區段選殖入源自pUCl 19之載體 中，該載體含有LacZ啟動子、康黴素（kanamycin)抗性基 因、多重選殖位點及雜交glll-pelB前導序列。表現載體編 碼與Fab編碼序列同框之C-末端HA及His6標籤。Fab片段 在大腸桿菌中表現為標記His6之蛋白質，隨後經由固定金 屬親和力層析法（IMAC)及尺寸排阻層析法（SEC)自培養基 純化。描述了可變重鏈及可變輕鏈之相關胺基酸序列（分 別為1：8 2008/0014196之8£(^1〇]^0:1及8£(^10 1^0:2); 完全重鏈及輕鏈之胺基酸序列分別展示於SEQ ID NO: 419 及420中。 c)用於抗原決定基定位之D114突變體之產生 為了鑑別D114之細胞外域（ECD)中包含可由抗D114 VHH 識別之抗原決定基的區域，產生D114 ECD之漸進缺失突變 體。使用標準重組DNA技術產生包含CMV啟動子的哺乳動 物表現載體 pSecTag2/Hygro(Invitrogen，Carlsbad, CA, USA)，該啟動子位於編碼融合至聚His標籤之D114 ECD之 一系列巢式缺失片段的聚核苷酸上游（參見圖2 ;上標中為 胺基酸域邊界）。使用Freestyle 293表現系統（Invitrogen， Carlsbad，CA, USA)(可自其收集條件培養基）在經短暫轉染 之HEK293細胞中表現此等重組蛋白質且經由IMAC純化。 僅有缺乏EGF2樣域之D114突變體展示對上述人類化人類/ 小鼠交叉反應性抗D114 mAb(經由捕捉型抗人類IgG塗佈的 Biacore感測器晶片來固定）之減弱結合。已知此IgG在此 D114域中具有特異性結合抗原決定基（專利申請案 s- 150859.doc -57- 201124532
Genentech，US 2008/0014196A1)。 d) D114報導檢定質體之產生 基本上如 Struhl 及 Adachi, Cell. 1998年 5 月 15; 93(4):649-60所述，基於Notchl之γ分泌酵素介導之裂解及D114刺激後 Notchl細胞内域（NICD)之核易位來開發禮事檢定。 GaM/VP16編碼序列插入NICD編碼序列中。由融合至單純 疱疹病毒轉錄活化域VP16之酵母GAL4 DNA結合片段組成 之有效雜交轉錄活化劑GAL4-VP16插入Notchl跨膜域之羧 基末端。γ分泌酵素裂解此構築體會釋放Gal4/VP16 NICD 融合蛋白，其將易位至核，在核中該融合蛋白將結合至且 以轉錄方式活化含有強力GAL4 -UAS啟動子序列之共轉染 的螢光素酶報導質體（Struhl，G.及Adachi，A.，Cell,第93 卷，649-660, 1998)。人類 Notchl-Gal4/VP16 表現卡匣選殖 於 pcDNA3.1 (+)-neo(Invitrogen，Carlsbad, CA, USA)中。 pGL4.3 1 [Luc2P/Gal4UAS/Hygro]載體（Promega，Madison, WI，USA)用作螢光素酶報導質體。 實例1 用來自不同物種之D114免疫來誘導美洲乾（llama)中之體液 免疫反應 1.1.免疫處理 在獸醫學學院之倫理委員會（the Ethical Committee of the faculty of Veterinary Medicine > University Ghent, Belgium)核准之後，以6次肌肉内注射（在每週一次間隔下 每次給藥100或50 gg)重組人類D114(R&D Systems, 150859.doc • 58 · 201124532
Minneapolis, MN，US)來使 4 隻美洲,f£(命名為第 208 ' 209 ' 230 ' 231 號）免疫。用 Stimune(Cedi Diagnostics BV， Lelystad, The Netherlands)調配D114抗原。根據標準方案以 4次交替皮下注射如上所述產生之過度表現人類D114之 CHO細胞及過度表現小鼠D114之CHO細胞來使另外三隻美 洲駝（命名為第127b、260、261號）免疫。細胞再懸浮於D-PBS中且在注射之前保存在冰上。此外，根據標準方案以4 次交替肌肉内注射（在兩週一次間隔下每次給藥100或50 pg)重組人類D114及小鼠D114(R&D Systems, Minneapolis, MN, US)來使另外三隻美洲駝（命名為第282、283、284號） 免疫。第〇天含有人類D114之首次注射液係用完全弗氏佐 劑（Complete Freund’s Adjuvant，Difco，Detroit, MI, USA) 調配，而隨後含有人類及小鼠D114之注射液係用不完全弗 氏佐劑（Incomplete Freund's Adjuvant ’ Difco，Detroit，MI， USA)調配。 1.2.美洲駝中經誘導免疫反應之評估 為了經由ELISA評估動物中對抗人類D114之免疫反應的 誘導，在第0天（免疫前）、第21天及第43天（收集末梢血液 淋巴細胞[PBL]之時間）自美洲駝208、209、230及231 ;在 第0天及第51天自美洲駝127b、260及261 ;且在第0天、第 28天及第50天自美洲駝282、283及284收集血清。簡言 之，2 pg/mL 重組人類 D114 或小鼠 D114(R&D Systems, Minneapolis, MN，USA)在 4°C 下於 96 孔 MaxiSorp 培養盤 (Nunc，Wiesbaden，Germany)中固定隔夜。用酷蛋白溶液 150859.doc -59- 201124532 (1%)阻斷各孔。在添加血清稀釋液之後，使用辣根過氧化 酶（HRP)接合之山羊抗美洲駝免疫球蛋白（Bethyl Laboratories Inc., Montgomery，TX, USA)及隨後在受質 TMB( 3,3·,5,5'-四曱基聯苯胺）(Pierce，Rockford, IL，USA) 存在下之酶促反應來偵測經特異性結合之免疫球蛋白，從 而顯示誘導對抗D114之顯著抗體依賴性免疫反應。抗體反 應係由表現習知抗體之B細胞謹系（repertoires)及表現僅有 重鏈之抗體之B細胞譜系來發動，因為經特異性結合之免 疫球蛋白可用特異性識別習知美洲駝IgGl抗體或僅有重鏈 之美洲駝IgG2或IgG3抗體的抗體來偵測（表2-A)。在所有 注射小鼠D114之美洲駝中，特異性針對小鼠D114之抗體反 應皆由表現習知抗體及僅有重鏈之抗體的B細胞發動。另 外，經細胞免疫之動物的血清效價係經由對過度表現人類 及小鼠D114之HEK293細胞進行FACS分析來確認（表2-B)。 各美洲駝之D114血清效價反應描述於表2中。 表2 :抗體介導之對抗DLL4之特異性友清反應。 A) ELISA(重組蛋白質，固相塗佈）
重組人類DLL4 重組小鼠DLL4 美洲駝 免疫原 總 ISG IgGl IgG2 IgG3 總 IgG IgGl IgG2 IgG3 208 重組人類DLL4 + + +/- +/- ND ND ND ND 209 重組人類DLL4 + + +/ +/- ND ND ND ND 230 重組人類DLL4 -Η- +/- +/， ND ND ND ND 231 重組人類DLL4 ++ -Η- -Η- ND ND ND ND 150859.doc •60- 201124532
127b CHO-hDLL4+CHO- mDLL4 ++ ++ +/- +/- + ++ +/- 260 CHO-hDLL4+CHO- mDLL4 ++ ++ + + ++ ++ + ++ 261 CHO-hDLL4+CHO- mDLL4 ++ +/- +/- + + +/- +/- 282 重組人類DLL4+小鼠 DLL4 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + 283 重組人類DLL4+小鼠 DLL4 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ 284 重組人類DLL4+小鼠 DLL4 + + + + + -H- + ++ ND :未測定 B) FACS(HEK293細胞上之天然表現蛋白質）
人類DLL4 小鼠DLL4 美洲駝 免疫原 總 IgG IgGl IgG2 IgG3 總 IgG IgGl IgG2 IgG3 208 重組人類DLL4 ND ND ND ND ND ND ND ND 209 重組人類DLL4 ND ND ND ND ND ND ND ND 230 重組人類DLL4 ND ND ND ND ND ND ND ND 231 重組人類DLL4 ND ND ND ND ND ND ND ND 127b CHO-hDLL4+CHO- mDLL4 + ND ND ND + ND ND ND 260 CHO-hDLL4+CHO- mDLL4 ++ ND ND ND ++ ND ND ND 261 CHO-hDLL4+CHO- mDLL4 + ND ND ND + ND ND ND 282 重組人類DLL4+小鼠 DLL4 ND ND ND ND ND ND ND ND 150859.doc -61 · 2 201124532 283 重組人類DLL4+小鼠 DLL4 ND ND ND ND ND ND ND ND 284 重組人類DLL4+小鼠 DLL4 ND ND ND ND ND ND ND ND ND :未測定 實例2 僅有重鏈之抗體片段譜系之選殖及噬菌體之製備 在末次免疫原注射之後，自經免疫美洲駝收集作為產生 重鏈抗體之B細胞之來源的免疫組織。通常，收集每隻動 | 物在末次抗原注射後4天及8天收集之兩個150 ml血液樣 品，及在末次抗原注射之後4天收集之一個淋巴結生檢。 根據製造商說明書（Amersham Biosciences，Piscataway，NJ， USA)，使用聚嚴糖-泛影葡胺（Ficol 1-Hypaque)由血液樣品 製備末梢血液單核細胞（PBMC)。如WO 05/044858中所 述，自PBMC及淋巴結生檢提取總RNA，其用作擴增編碼 VHH之DNA區段之RT-PCR的起始物質。對於各經免疫美 洲駝，藉由匯合自彼動物收集之所有免疫組織分離的總 φ RNA來構築文庫。簡言之，經PCR擴增之VHH譜系經由特 定限制位點選殖入經設計以便於噬菌體呈現VHH文庫的載 體中。該載體源自pUC 119且含有LacZ啟動子、Ml 3噬菌體 gill蛋白編碼序列、安比西林（ampicillin)或卡本西林 (carbenicillin)抗性基因、多重選殖位點及雜交glll-pelB前 導序列（PAX050)。載體編碼與VHH編碼序列同框之C-末端 c-myc標籤及His6標籤。噬菌體係根據標準方案製備且在 過濾滅菌後儲存在4°C下以供進一步使用。 150859.doc •62- 201124532 實例3
經由噬菌體呈現選擇D114特異性VHH 自所有美洲駝獲得且選殖為噬菌體文庫之VHH譜系用於 應用許多選擇條件之不同選擇策略中。變數包括i)D114蛋 白質形式（人類 D114(Metl-Pro524)及小鼠 D114(Metl-Pro525) 之C末端標記His之重組表現細胞外域（R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)、或存在於過度表現D114之CHO或 HEK293細胞上之全長人類D114及小鼠DIM)，ii)抗原呈現 方法（直接塗佈D114之培養盤或經由生物素標籤塗佈D114之 中性鏈親和素（Neutravidin)培養盤；溶液相：在溶液中培 育，隨後在中性鏈親和素塗佈培養盤上捕捉），iii)抗原濃 度及iv)不同溶離方法（經由胰蛋白酶之非特異性方法或經 由同源受體Notchl/Fc嵌合體或抗D114 IgG/Fab之特異性方 法）。所有選擇皆在Maxisorp 96孔培養盤（Nunc，Wiesbaden, Germany)中進行0 如下進行選擇：用於固相及溶液相選擇形式之D114抗原 製備物係如上所述以多個濃度呈現。在與噬菌體文庫一起 培育2 h、隨後澈底洗滌之後，用胰蛋白酶（1 mg/mL)溶離 結合噬菌體30分鐘。倘若胰蛋白酶用於噬菌體溶離，則施 用0.8 mM蛋白酶抑制劑ABSF即刻中和蛋白酶活性。同時 進行無抗原選擇作為對照。將展示超過背景值（無抗原對 照）之增濃的嗤菌體輸出（Phage output)用於感染大腸桿 菌。經感染大腸桿菌細胞用於製備下一輪選擇之噬菌體 (噬菌體補救）或塗佈於瓊脂培養盤（LB + amp+葡萄糖2%)上 150859.doc -63- 201124532 用於分析個別VHH純系。為了篩檢特異性結合物之選擇輸 出，自瓊脂培養盤挑取單一群落且在1 mL 96深孔培養盤 中培養。藉由在葡萄糖存在下添加IPTG(終濃度為0.1-1 mM)來誘導受LacZ控制之VHH表現。根據標準方案製備周 質（Periplasmic)提取物（體積約80 μί)。 實例4 D114-Notchl AlphaScreen及FMAT競爭檢定中周質提取物 之篩檢 在人類D114/人類Notchl AlphaScreen檢定中篩檢周質提 取物以評估表現之VHH的阻斷能力。使用生物素（Sigma， St Louis, MO, USA)及生物素醯胺基己酸3-硫代-N-經基破 珀醯亞胺酯鈉鹽（Sigma，St Louis, MO, USA)對人類D114進 行生物素標記。根據製造商說明書（Perkin Elmer， Waltham, MA，US)，使用偶合至受者珠粒之抗Fc VHH來捕 捉 Notchl/Fc 欲合體（R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)。為了評估VHH之中和能力，使一系列周質提取物 稀釋液與經生物素標記人類D114 —起預培育。將受者珠粒 及抗生蛋白鏈菌素（streptavidin)供者珠粒添加至此混合物 中且進一步在室溫下培育1小時。藉由使用680 nm激發波 長及520 nm發射波長在Envision多標記培養盤讀取器 (Perkin Elmer, Waltham，MA，USA)上讀取培養盤來量測螢 光。螢光信號減少指示經生物素標記人類D114對人類 Notchl/Fc受體之結合由表現於周質提取物中之VHH阻 斷。 150859.doc -64- 201124532 或者，在人類Notchl/Fc FMAT(螢光微量容量檢定技術） 競爭檢定中使用CHO-hD114及CHO-mD114細胞。用Alexa-647(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)隨機標記重組人類 Notchl/Fc嵌合體（R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)。 簡言之，將5 μι周質物質連同7,500個分別過度表現CHO-hD114或CHO-mD114之細胞一起添加至100 pM或175 pM經 標記人類Notchl/Fc中，且在培育2小時後進行讀數。為了 設定無競爭基線，用人類Notchl/Fc〜Alexa647至少30次重 複測定細胞且由此基線計算抑制百分比。所有計算皆係基 於包含每孔螢光之平均值乘以每孔計數數目的FL1總信 號。 自此篩檢來選擇抑制性VHH且定序。序列分析揭示了屬 於40個不同B細胞系（lineages)之167個獨特VHH。各B細胞 系取得之所得變異體的總數描述於表3中。周質篩檢資料 之概述在表4中給出。所有獲得之獨特VHH之胺基酸序列 皆展示於序列表（SEQ ID NO: 167-33 2及459)及表5(指示了 CDR及構架區）中。 表3 :用於鑑別DLL4特異性VHH B細胞系之選擇參數。 B細胞 譜系 VHHID 變異體 數目 文庫 選擇形式 噬菌體溶離 選擇 輪數 1 DLLBII8A09 31 231 rhDLL4(3 nM) 胰蛋白酶 1 2 DLLBII5B11 1 231 rhDLL4(3 nM) 膜蛋白酶 1 3 DLLBII7B5 21 231 RI : biot-rhDLL4(3 nM) RII ： biot-rhDLL4(0.03 nM) 姨蛋白酶 2 4 DLLBII6B11 13 231 biot-rhDLL4(3 M) 胰蛋白酶 1 150859.doc •65· 201124532 5 DLLBII8C11 5 231 RI : biot- rhDLL4(3 nM) RII ： biot-rhDLL4(3 nM) 胰蛋白酶 2 6 DLLBII19D10 1 231 biot-rhDLL4(3 nM) 胰蛋白酶 1 7 DLLBII33C5 2 231 CHO- hDLL4(2E6/mL) 胰蛋白酶 1 8 DLLBII28B6 2 231 rmDLL4(0.5 pg/mL) 胰蛋白酶 1 9 DLLBII17G10 1 231 biot-rhDLL4(3 nM) 胰蛋白酶 1 10 DLLBII17C1 8 231 biot-rhDLL4(3 nM) 胰蛋白酶 1 11 DLLBII19F4 1 231 biot-rhDLL4(3 nM) 胰蛋白酶 1 12 DLLBII17F10 1 231 biot-rhDLL4(3 nM) 胰蛋白酶 1 13 DLLBII17B3 5 231 biot-rhDLL4(3 nM) 胰蛋白酶 1 14 DLLBII19F12 2 231 biot-rhDLL4(3 nM) 姨蛋白酶 1 15 DLLBII42B7 1 231 RI : biot-rhDLL4(3 nM) RII ： biot-rhDLL4(3 nM) rhNotchl/Fc 2 16 DLLBII47D1 1 230 RI : biot-rhDLL4(3 nM) RII ： biot-rhDLL4(3 nM) rhNotchl/Fc 2 17 DLLBII56A09 15 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) rhNotchl/Fc 2 18 DLLBII95F2 5 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) 胰蛋白酶 2 150859.doc -66- 201124532
19 DLLBII96C3 20 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) 胰蛋白酶 2 20 DLLBII104G1 1 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot-rhDLL4(+rhDLL4) rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (RIII) 3 21 DLLBII102F8 3 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot-rhDLL4(0.01 nM) rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (RIII) 3 22 DLLBII112A3 1 209 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) 胰蛋白酶 2 23 DLLBII102G4 2 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot-rhDLL4(0.01 nM) rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (RIII) 3 24 DLLBII101G8 1 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot-rhDLL4(0.1 nM) rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (RIII) 3 25 DLLBII112A4 1 209 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) 胰蛋白酶 2 s 150859.doc -67- 201124532 26 DLLBII101H9 1 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot-rhDLL4(0.1 nM) rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (Rin) 3 27 DLLBII101H5 1 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot-rhDLL4(l nM) rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (RIII) 3 28 DLLBII112E7 1 209 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) 膜蛋白酶 2 29 DLLBII101F1 1 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot-rhDLL4(l nM) rhNotchl/Fc (RI-RII) 騰蛋白酶 (RIII) 3 30 DLLBII104A3 1 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII : biot- rhDLL4(l nM)+rhDLL4 rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (RIII) 3 31 DLLBII104C4 1 230 RI ： CHO- mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO- mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot- rhDLL4(l nM)+rhDLL4 rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (Rin) 3 150859.doc -68- 201124532
32 DLLBII104B5 1 230 RI ： CHO- mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO- mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot- rhDLL4(l nM)+rhDLL4 rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (RIII) 3 33 DLLBII107C3 1 208 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) rhNotchl/Fc 2 34 DLLBII58A11 4 260 RI : biot-rhDLL4(3 nM) RII ： biot-rmDLL4(3 nM) rhNotchl/Fc 2 35 DLLBII61F5 1 260 RI ： HEK293H-hDLL4(2E6/mL) RII ： HEK293H-hDLL4(2E6/mL) 騰蛋白麵 2 36 DLLBII61F7 1 260 RI ： HEK293H-hDLL4(2E6/mL) RII ： HEK293H-hDLL4(2E6/mL) 膜蛋白s# 2 37 DLLBII62C11 1 260 RI ： HEK293H-hDLL4(2E6/mL) RII ： HEK293H-mDLL4(2E6/mL) 胰蛋白酶 2 38 DLLBII115A5 1 230 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RII ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RIII ： biot-rhDLL4(l nM) RIV ： CHO-mDLL4(2E6/mL) rhNotchl/Fc (RI-RII) 胰蛋白酶 (RIII) 胰蛋白酶 (Riv) 4 39 DLLBII83G1 4 284 RI ： CHO-mDLL4(2E6/mL) RI ： CHO-hDLL4(2E6/mL) DLL4 IgG 2 S- 150859.doc •69- 201124532 RI ： CHO- 40 DLLBII80E8 1 283 hDLL4(2E6/mL) RI ： CHO-hDLL4(2E6/mL) DLL4 IgG 2 表4 :含有表現之抗DLL4 VHH之周質提取物之篩檢
150859.doc •70- 201124532
17 DLLBII56A09 15 - - - - UE-03 (9.5e-03-1.1E-03) 18 DLLBII95F02 5 - - 81 71 6.7e'04 19 DLLBII96C03 20 - - 75 83 20 DLLBII104G01 1 - - 94 86 1.2e-03 (1.4e·03- 9.4e'04) 21 DLLBII102F08 3 - - 85 75 - 22 DLLBII112A03 1 - - 72 97 祕 23 DLLBII102G04 2 - - 86 82 _ 24 DLLBII101G08 1 - - 91 92 2·1ε_03 25 DLLBII112A04 1 - - 75 90 - 26 DLLBII101H09 1 - - 87 75 - 27 DLLBII101H05 1 - - 85 83 . 28 DLLBII112E07 1 - - 80 85 - 29 DLLBII101F01 1 - - 85 78 2.0e·02 30 DLLBII104A03 1 - 86 83 _ 31 DLLBII104C04 1 - - 87 83 1〇E-〇3 32 DLLBII104B05 1 - 86 78 33 DLLBII107C03 1 - - 75 80 - 34 DLLBII58A11 4 - - 95 73 16e-〇3 (i. 7e'03-1.6e-03) 35 DLLBII61F05 1 - - 74 76 - 36 DLLBII61F07 1 - - 79 77 37 DLLBII62C11 1 - - 74 71 . 38 DLLBII115A05 1 - - 74 84 3.1e-03 39 DLLBII83G01 4 - - 87 93 41e-〇4 40 DLLBII80E08 1 - - 71 82 - (a) 若B細胞系内多個獨特變異體經鑑別，則細胞系成員之解離速率範圍(最大值-最小 值)或解離速率係在括號之間以斜體字給出。 (b) 異質擬合(heterogeneous fit):測出之快速及缓慢解離速率。
S 150859.doc 71 - 201124532 150859.doc 構架4 WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS CDR 3 > 〇 u a in >H >H >H Q C > Du 〇 〇( s > 〇 CO >H >H >H Q ω ：m Plj CD a. s > Ο Ο 口 CO CO >Η >Η >Η Q (Ό >Η ω cu s 2 ϋ Μ Ο Ο >Η C0 >Η Q Q S >Η Q > Ο ο ι-q Q CO >H >H n: Q 1~1 ^>-i Cx-I 〇 CM s cn w Q LD >H ⑺> >H < cj ω 2； 〇. X CO M >H Ol >H Q >H > 〇 o 口 D ω >H >H DC Q < >H Dl, 〇 Cm s ac > Q Η Οι >Η >Η >Η >Η CO Q Ο >Η C0 Ν 構架3 U ^ >H > >H Eh > 2 < ^ H < Q s ω Q 〇4 PC ^ CO h-q M ^ ^ < PC 〇i ^ ^ o >H >H > >H Eh M S < C Q s ω Q CU PC CO h^} m m H 2 t- s c 〇l < υ >Η >Η > >Η Η > S < W Η < Q S CJ Q CU VC ^ CO ^ Μ (Λ Η S < CC 〇i <, ^ Ο >Η >Η > >-< Η > 2 < ^ Η < Q s ω Q CU CC； ^ ω Η=1 Μ ίη Η S S ^ DC： Ο < Θ CJ >H >H > >H H > S <c 父卜1 C Q ω Q CU a： ^ co i-q 1—1 c〇 H S Pm艺$ pc cy fi, U >H >« > >H H > S < < Q s ω Q Οι CC CO i-q M CO HZ S < cc： 〇* < ^ u >H >H > >H H > S C Eh C Q s ω Q Ο. PC ^ CO .h=I M W Eh ^ Pm S f< iX 〇 < θ υ >Η >Η > >Η Η > s c ^ Η s ω Q CU α: ^ co i-q Μ C0 Η ^ ^ S ίϊ：〇Ι Uj CDR 2 Q C </) >H 〇 00 S CO H > M W CO O LD Q Q H ω >-* c^i CO >-< ^: iz; H > H CO CO U O Q Q C C0 >H 〇 co C M cn h > h co ζη υ ϋ Q Q < C0 >π 〇 C/} >η W cn Η > Μ CO C0 α ο α S卜l CO >h 〇 o e? ^ CC > M C〇 c/i O U Q 〇 > Di： >-t CD ⑺>» M CO H > M CO CO U O Q ^ H CO >h 〇 CO >-f Η H > H⑺⑺ Ο O Q Ο S {3 α. 2 >η Ο co S Μ Μ E-i > > Μ W 構架2 窆 ω VC ω μ ο 〇4 < ο Ct4 U) 芎> CJ pc： ω 〇 〇4 < o .a Dli⑺ ^ > 宕 ω ίΧ ω ο Cu < ο Clj (/) s > ω 0^ Μ ο CU C 〇ί Ο： μ^Ι CO 萁> 艺 w a： ω ◦ 〇A < 〇 ct Cu CO 艺> 〇 ω Pi CJ 父 o 〇i a： Dl, CO ^ > 萁 CJ ίΧ Ο CM C Ο 江 ^ > ω Ρύ ο 父 ο Οι C ο >Η C ^ > CDR 1 ο Μ s Η o H 2 >H ο Μ >Η >Η Ο Μ > X o M 2 O M < >H ο Μ 2 >Η ο < >-> ίΠ 構架1 > < h^l < ο ο Ο C0 e) θ 10 QC ω h^l Q > CO Hq ι-^ Ο Η Ο Ο Dm > CM Ο ω ο ω > f=C ^ < 〇 u ◦⑴ O CO CC ω ^ a > ω 口 ^ Ο Η Ο 〇 Cu > (^ ο ω Ο ω > < ^ C Ο ο ο cn Ο μι ω α： ω θ Q > C0 ^ θ Ο Η 〇Ι Ο Du > CM Ο ω ο ω > Μ < Ο ο Ο CO Ο Η^]. cn cc ω闫Q > co μι Ο Η 〇ί (D Cu > l=u ο CJ O CO ^ f5 O CJ ο ω O ^ co a: ω e Q >⑺闫 hJ e) h o e) > a. o ω o c〇 > f=c h^l < LD O O CO o ^ ⑴a ω θ Q > CO O EH 〇 〇 > C CD DJ 〇 W > < ι-^ < Ο Ο ο cn ο cn CC ω ο > ω ^ θ Ο Η 〇 〇 Ci4 > ο ω ο cn > < h^l < ο ο ο cn ω ^ ω α： ω θ⑴ > CO Uj h-q Ο Η ο ο co > C ο ω cn co VHH ID SEQ ID NO Μ Μ <Χ) 0Q Ο 闫0Q卜 t-q ίο VO Q Ο H Μ Μ 00 PQ Ο ^ dq ω ι-q m νο Q Ο Η Μ μ cn 0Q ο ^ 0Q μι LO νο Q Ο Η Μ Μ τΗ CQ tH CQ Ο ^ in r* Q Ο rH M 1—1 *—1 CQ r-H 闫Q rH LT) ΓΟΟ lH M M CM CQ O h^l C CM Γ- Q O rH Μ Μ LT) CQ Ο ^ < γο ^ r- Q Ο Η Μ Μ t-H CQ「Η Θ CQ寸 闫①卜 Q Ο Η -72- 201124532
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WGQGTQVTVSS RGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS HGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS TGQGTQVTVSS TGQGTQVTVSS KPNLKYGSDWP PRGYDY 1 RTSRSPRP | SNYYSVYDDRP VMDY GSGSWGV NEGYCSGYGCY EDSGQYDY NEGYCSGYGCY EDSGQYDY GGRSFLPFVPA Y NEGYCSGYGCY EDSGQYDY NGGYCSGYGCY EDSGQYDY PGIAACRGIHY PGIAACRGIHY hJ u h^l >H > SC ^ H H Q s ω Q Oj cc ^ ⑺闫 m in h β cc cy < RFTISRDNAKNTMYL QMNSLKPEDTAVYFC ET RFTISRDNAKNTVYL QMNSLKPEDTAVYDC AA H^i O >h ^ >H Eh > S < < <C Q s ω Cj) O) C/)闫 M 〇 Eh Eh h W CT： O rf： RFTISRDNVKNTVYL RMNSLKPDDTAVYYC ΔΑ RFTISRDNVKNTVYL RMNSLKPDDTAVYYC AA RFTISRDNTANTLKL RMNSLKADDTAVYYC ΑΆ RFTISRDNVKNTVYL RMNSLKPDDTAVYYC AA RFTISRDSVKNTVYL' RMNSLKPDDTAVYYC AA ^ O > >H ^ > c Q 2 PJ Q cu ¥ co ^ M O) Η 2 h S Eh cc cy < ^ O > >H Eh > s ω Q山 (X ^ CO H CO ^ s H a: a <c TISWSG DSTYYA DSVKG FINKDG SDTGYA DSVKG AINWSG GSTYYA DSVKG VISPDG SNTYYA DTVKG GISRYG DYTAYA DSVKG GISRYG DYTYYA DSVKG AVSRFG VSWDYA DSVKG GISRYA DYTGYA DSVKG GISRYG DITYAA DSVKG CISSSG GITYYA DSVKG CISSSG GITYYA DSVKG WFRQAPGKEREA VA WVRQAPGKGLEW VS WFRQAPGKEREF VA WVRQAPGKGLEW VS WFRQAPGKEREF VA WFRQAPGKEREF VA WFRQAPGKEREF VA WFRQAPGKEREF VA WYRQAPGKEREF VA WFRQAPGKEPEG IS WFRQAPGKEPEE IS e) S o QC ω < >H oc CO >H >H 〇 M >H 2 〇 M >H 〇 < >H 〇 M 2 S M o M < >H Q CD M c >H Q EVQLVKSGGGLV 1 QAGGSLRLSCTT SERTVS EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCTA SGFTFS EVQLVESGGGLV QAGGSLRLSCAA SGRTFS EVQLMESGGGLV QPGGSLRLSCVA AGFTFS EVQLVESGGGLV QAGGSLRLSCAA SGRTFS· EVQLVESGGGLV QAGGSLRLSCAA SGRTFS EVQLVESGGGLV QAGGSLTLSCAA SGGTFT EVQLVESGGGLV QAGGSLRLSCAA SGRTFS EVQLVESGGGLV KPGGSLRLSCAA SGRTLY EVQLVESGGGLV QAGGSLRLSCAA SGFTFD EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA :SGFTFD DLLBII 59B11 306 M L〇 CQ 〇 〇 o kd cn DLLBII 61F07 308 M Μ tH CQ »~1 ^ CM O Q CO DLLBII 78B03 310 DLLBII ； 78B04 1 311 j DLLBII 80E08 312 _1 DLLBII 83G01 313 DLLBII 83G04 314 DLLBII 87B06 315 DLLBII 89B04 t!316 150859.doc •85- 201124532
TGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS PGIAACRGIHY PRGWGPTGPIE YAY PRGWGPTGPIE YGY PRGWGPTGPHE YGY PRGWGPTGPHE YAY PAPGSSGYEYD Y PGIAACRGIHY PRGWGPTGPHE YAY PRGWGPTGPLE YGY PRGWGPTGPHE YGY PRGWGPTGPHE YGY RFTISRDNAKNTVYL QMNSLKPEDTAVYYC AT RFTISRDNAKNTLYL QMNSLKPEDTAVYYC AI h^l u >H >H Eh > 2 < 乂 H c Q 2 ω Q Ot PC ^ cn m in HZ tij 2 M pc (y < h^l 〇 ^ (/) ^ >H H > 2； o < Q S C£J Q Οι ⑺门 M C/} H S h艺H pc cy <, RFTISRDNAKNTLYL QMNSLKPEDTAVYYC AI RFTISRDNAKNTVYL QMNSLKPEDTAVYYC AA >H >H > >h H > 2； < Eh a co ω Q cu oc ^ CO M CO h S H θ u >H >H l-q >H H > 2 < 乂 H < Q 艺ω Q Οι VC ^ CO M CO Eh S Uj Σ： m a： 〇» < ^ u >h J >H H > 艺< ΜΗ < Q s ω Q CLi (X ^ (n i-q 1—1 CO H 2； S M Pi a < hJ u >H >H ㈠> z <： a H C Q z ω a a» a a ω H CO HZ h S H 〇t C o >H hJ >n H > ㈠c H c Q s ω Q Oi QC 〇 CO 1-q M s C 2 h S H Pi o c CISSSG GITYYA DSVKG AINSGG GSTYYA DSVKG AINSGG GSTYYA DSVKG AINSGG GSTYYA DSVKG AINSGG GSTYYA DSVKG AINWSG GYTYYA DSVRG CISSSG SITYYA i DSVKG ；AINSGG ：GSTYYT 'DSVKG AINSGG GTTYYA DSVKG AINSGG GDTYYA DSVKG AINSGG GITYYA DSVKG WFRQAPGKEPEG IS WVRQAPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS WFRQAPGKEREF VA 1_ .. WFRQAPGKEPEG IS WVRHAPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS 〇 M c >-· Q ω S Q >H CO cn S Q cn cn S Q >H CO cn Q >H CO o < 〇 M < >H > ω Q >H 3 cn S Q >H cn co 2： Q 12 CO S Q >H EVQLVESGGGLV QAGGSLRLSCAV SGFSFD EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA SGFTFG EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA 1 SGFTFG ! EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA ,SGFTFG ! EVQLVESGGGLV QSGGSLRLSCAA SGFTFG EVQLVESGGGSV QAGGSLRLSCAA SGRTFS EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCTA SGFTFD EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA SGFTFG EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA SGFTFG EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA SGFTFG EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA SGFTFG DLLBII 90E10 317 M M CQ O h^i C ω LD H q cn n DLLBII 95B03 319 M m cn CQ O 〇 o LT) CM Q Γ0 DLLBII 95D02 321 DLLBII 95F02 322 M r, CQ O Γ0 β m oj Q CTi r〇 DLLBII 95H02 324 DLLBII 96C02 325 M M 00 CO 〇 ^ u vo ^ CNI Q cn ro M Μ (N QQ O κΐ Ctj r^· Θ。CM Q CT» Γ0 150859.doc -86- 201124532
WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVS S PRGWGPTGPHE YGY PRGWGPTGPHE YGY PRGWGPTGPHE YAY PRGWGPTGPHE YGY PRGWGPTGPHE YAY PGIAACRGIH Y ^ o >H >H > S c M H < Q 艺ω Q CLi Ρύ ^ cn μι M CO H s S m O < RFTISRDNAKNTLYL QMNSLKPEDTAVYYC AT RFTISRDNAKNTLYL QMNSLTPEDTAVYYC AI 〇 H > 2： c ^ H < Q S W Q Oi VC ^ cn M CO H 2 ^ S Fn O < μι 〇 ^ in ^ >1 H > !2 < C Q s ω Q 0< CX M ⑴Θ M S H S S M 〇 C RFTISRDNAKNTVYLQ MNSLKPEDTAVYYCAT AINSGG GITYYA DLVKG AINSGG GITYYA DSVKG AINSGG GSTYYA DSVKG AINSGG GSTYYA ； DSVKG AINSGG 丨 GSTYYA | DSVKG CISSSG SITYDA DSVKG WVRQAPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS WVRRPPGKGPEW VS WVRQAPGKGPEW VS WFRQAPGKEPEG IS CO Q CO CO 艺 Q >H IS CO 艺 Q >H cn CO Q >H IS ω Q >-< CO M Q EVQLVESGGGLV QAGGSLRLSCAA SGFTFG EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA SGFTFG ,EVQLVESGGGLV 'QPGGSLRLSCAA SGFTFG EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCTA SGFTFG EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAA SGFTFG EVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCTA SGFTFD DLLBII 96H02 328 DLLBII 97B02 329 DLLBII 97D01 330 DLLBII 97E01 331 DLLBII 97E02 332 DLLBII 57C11 459 150859.doc -87- 201124532 實例5 純化VHH之表徵 對選自實例4中所述篩檢之抑制性抗D114 VHH進行進一 步純化且加以表徵。所選VHH在大腸桿菌TG1中表現為標 記c-myc、His6之蛋白質。藉由添加1 mM IPTG來誘導表現 且使其在37°C下繼續4小時。在旋轉細胞培養物之後，藉 由凍融集結粒來製備周質提取物。此等提取物用作起始物 質且經由IMAC及尺寸排阻層析法（SEC)純化VHH，獲得如 經由SDS-PAGE評估為95%之純度。 5.1. ELISA中阻斷D114之VHH的評估 在人類D114-人類Notchl/Fc阻斷£1^18八中評估乂1111之阻 斷能力。簡言之，將1 pg/mL人類Notchl/Fc嵌合體（R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)塗佈於 96 孔 MaxiSorp 培養 盤（Nunc，Wiesbaden, Germany)中。使 15 nM固定濃度之經 生物素標記人類D114與一系列VHH稀釋液一起預培育1小 時，此後將混合物在經塗佈Notchl受體上再培育1小時。 使用辣根過氧化酶（HRP)接合之extravidin(Sigma，St. Louis, MO，USA)偵測經生物素標記人類D114之剩餘結合 (圖3)。如上所述對人類D114進行生物素標記。阻斷人類 D114-人類Notchl/Fc相互作用之VHH的IC5〇值描述於表6 中〇 150859.doc -88- 201124532 表6 : hDLL4/hNotchl-Fc 競爭 ELISA 中 VHH 之 IC50(nM)值 VHHID IC5〇(nM) 6Β11 1.5 55D12 12.3 56Α09 4.9 56C04 33.9 56Η08 6.9 57C11 17.3 62C11 72.0 96C03 38.4 101G08 9.5 104G01 1.1 115Α05 9.1 抗DLL4 Fab 0.7 5.2. AlphaSereen 中阻斷Dll4之 VHH的評估
簡言之，在抗生蛋白鏈菌素塗佈之供者珠粒（20 pg/mL) 上捕捉1 nM經生物素標記人類D114，而0.4 nM受體人類 Notchl (呈Fc融合蛋白形式）係在抗人類Fc VHH塗佈之受者 珠粒（20 pg/mL)上捕捉。兩種負載珠粒均與一定稀釋度範 圍之競爭VHH —起培育（圖4)。阻斷人類D114-人類 Notchl/Fc相互作用之VHH的IC50值描述於表7中。 150859.doc 89· 201124532 表7 : hDLL4/hNotchl 競爭 AlphaScreen 中 VHH 之 IC50(nM)值 VHHID ICsoCnM) 5B11 0.7 6B11 0.3 7A02 0.4 7B05 1.1 8A09 0.4 8C11 0.71 19F04 0.05⑻ 55D12 2.3 56A09 1.2 56C04 5.4 56H08 1.6 57C11 2.2 62C11 24.1 115A05 5.0 抗DLL4 Fab 0.3 150859.doc 90- 1 部分抑制劑 5.3.抗D114 VHH對人類Notchl/Fc結合表現在CHO細胞上 之人類或小鼠D114之抑制 在如實例4中概述之人類及小鼠D114-人類Notchl/Fc競爭 性FMAT檢定（圖5)中來評估VHH的阻斷能力。阻斷人類 Notchl/Fc與表現在CHO細胞上之人類或小鼠D114之相互作 用之VHH的IC50值描述於表8中。 201124532 表8 :卩且斷人類Notchl/Fc與表現在CHO細胞上之人類或小 鼠DLL4之相互作用之純化VHH的（平均）IC50值（nM)(FMAT) hDLL4 mDLL4 VHH ID IC5〇(nM) IC5〇(nM) 6B11 8.9 8A09 5.5 _ 19F04 33.0 _ 55D12 39.1 41.0 56A09 10.6 15.0 56C04 28.7 49.6 56H08 22.0 33.7 57C11 53.9 49.5 62C11 172.2 106.3 96C03 160.8 28.8 101G08 24.6 92.1 104G01 2.5 _ 115A05 22.0 43.0 抗DLL4 Fab 5.4 2.3 5.4.報導檢定中阻斷D114之VHH的評估
為了評估所選VHH之效能，建立基於Notchl之γ分泌酵 素介導之裂解及D114刺激後Notchl細胞内域（NICD)之釋放 的報導檢定。將Notchl-GAL4/VP16構築體與pGL4.31 [Luc2P/Gal4UAS/Hygro]報導質體一起共轉染於HEK細胞 中，使融合蛋白短暫表現。藉由與HEK293-hD114穩定細胞 株共培養來刺激此等經短暫轉染細胞24小時。轉染後48小 時進行讀數。VHH在開始共培養之前與HEK293-hD114細胞 一起預培育1小時且包括在共培養期間（圖6)。阻斷Notchl 之DU4介導之裂解及隨後其NICD易位至受體細胞核之VHH 150859.doc -91 · 201124532 的IC50值描述於表9中。 表9 : DLL4/Notchl報導檢定中純化VHH之（平均）IC50值 (nM) VHHID ic5„ 56A09 540 62C11 4663 96C03 5156 101G08 2760 104G01 964 115A05 1740 抗 DLL4 Fab 133 5.抗原決定基重新分級 為了確定VHH在例如基準抗體經結合時是否可同時結合 DIM，（經由Biacore T100儀器上之表面電漿子共振（SPR)) 進行抗原決定基重新分級實驗。抗-D114 Fab片段以不可逆 方式固定在CM5感測器晶片之參考及活性流量槽上。對於 各樣品（循環），將人類D114注射在活性及參考流量槽上且 由抗D114 Fab以可逆方式捕捉。另一VHH結合係藉由注射 在固定表面上加以評估。所有VHH及抗D114 Fab皆以100 nM注射，表面接觸時間120秒，且流速10微升/分鐘。使用 10 mM甘胺酸（pH 1.5)再生表面。用Biacore T100評估軟體 來評估經處理之曲線。表10-A表示所分析VHH及對照之依 序注射/再生路線。展示VHH DLLBII56A09(SEQ ID NO: 300)、DLLBII96C03(SEQ ID NO: 326)、DLLBII101G08 (SEQ ID NO: 197)及 DLLBII115A05(SEQ ID NO : 224)不另 外結合由D114 Fab捕捉到之人類D114。注射D114 Fab亦未能 150859.doc -92- 201124532 另外結合人類D114，從而指示所有抗原決定基皆已飽和.。 因此，可斷定此等VHH識別與用於結合人類D114之D114 Fab重疊的抗原決定基。僅有人類VHH DLLBII6B11(SEQ ID NO: 174)及 DLLBII104G01(SEQ ID NO: 215)展示對捕 捉D114 Fab之人類D114的額外結合，從而指示對人類D114 具有特異性之此等VHH識別與人類/小鼠交叉反應性VHH 不同的抗原決定基。
表10-A :抗DLL4 VHH之抗原決定基重新分級-同時以 DLL4 Fab進行結合 注射步驟 铸合1再生 [樣品】 結合程度 (RU) 1 hDLL4 100 nM 1727 2 DLL4 Fab 100 nM .無結合 3 59A9 100 nM 無結合 4 6B11 100 nM 405 5 甘胺酸(pm.5) 10 mM 90 6 hDLL4 100 nM 1349 7 104G1 100 nM 276 8 甘胺酸(pH1.5) 10 mM 87 9 hDLL4 100 nM 1336 10 甘胺酸(pHl.5) 10 mM 70 11 hDLL4 100 nM 1333 12 96C3 100 nM 無結合 13 101G8 100 nM 無結合 14 115A05 100 nM 無結合 15 甘胺酸(pH1.5> 10 mM 70 5.6.使用D114缺失突變體之抗原決定基定位 在Biacore中評估VHH對此等D114突變體之結合。簡言 之，將VHH DLLBII101G08(SEQ ID NO: 197)及DLLBII115A5 150859.doc -93- 201124532 (SEQ ID NO: 224)塗佈於CM4感測器晶片上且橫跨晶片注 射200 nM之各缺失突變體。對結合進行定性評估》未觀測 到 DLLBII56A09(SEQ ID NO: 300)、DLLBII101G08(SEQ ID NO: 197)及 DLLBII115A05(SEQ ID NO: 224)分別對缺 乏EGF樣2域之人類及小鼠D114突變體hD114.1及mD114.8的 結合（表10-8)。使用11〇114/〇114 1§〇競爭性£1^15八之間接證 據已表明了此觀測結果。簡言之，將1 pg/mL D114 IgG塗 佈於 96孔 MaxiSorp培養盤（Nunc, Wiesbaden, Germany)中。 使6 nM固定濃度之經生物素標記人類D114與一系列VHH稀 釋液一起預培育1小時，此後將混合物在經塗佈IgG上再培 育1小時。使用辣根過氧化酶接合之extravidin(Sigma，St. Louis，MO，USA)偵測經生物素標記人類D114之剩餘結合 (資料未示）。如上所述對人類D114進行生物素標記。自專 利文獻得知單株抗D114 IgG(Genentech，US 2008/0014196A1) 結合D114之EGF樣2域内之抗原決定基。 表10-B :抗DLL4 VHH之抗原決定基定位-結合DLL4缺失 突變體. DLLBII56A9 DLLBII101G8 DLLBII115A5 — 樣品 結合(RU) kd(l/s) 結合(RU) kd(l/s) 結合 剛 kd(l/s) hDLL4 281 9.5E-04 373 2.0E-03 324 3·5Ε-〇Γ~· mDLL4 389 1.9E-03 502 6.0E-03 344 6.5E-03 hDLL4.1 無結合 無結合 無結合 hDLL4.3 125 7.4E-04 198 4.65E-03 137 3.5Ε-〇Γ~· hDLL4.5 143 1.2E-03 266 2.19E-03 162 4.2Ε-03 hDLL4.6 136 1.1E-03 229 2.20E-03 152 4_1Ε-〇Γ~ mDLL4.8 無結合 無結合 無結合 mDLL4.10 141 1.1E-03 189 5.14E-03 121 3.8Ε-03 mDLL4.ll 132 1.6E-03 210 6.16E-03 121 6.6Ε-03 mDLL4.12 161 1.3E-03 244 4.52E-03 152 3·1Ε-〇Τ~ 150859.doc • 94- 201124532 5.7.測定hDll4-VHH相互作用之親和力
測定D114-VHH相互作用之親和力的動力學分析係經由 Biacore T100儀器上之表面電漿子共振（SPR)來進行。使用 EDC及NHS經由胺偶合將重組人類D114固定在CM5晶片上 或在S A晶片（抗生蛋白鏈菌素表面）上捕捉經生物素標記人 類D114。將純化VHH或Fab片段在不同濃度（介於10與300 nM之間）下注射2分鐘且使其在45 μΐ/min之流速下解離20分 鐘。在樣品注射之間，用10 mM甘胺酸（pH 1.5)及100 mM HC1再生表面。HBS-N(Hepes緩衝液，pH 7·4)用作操作緩 衝液。若有可能，則藉由將1:1相互作用模型（朗繆爾 (Langmuir)結合）擬合在結合曲線上來評估資料。親和力常 數KD係由所得締合及解離速率常數（ka)及（kd)來計算。抗 D114 VHH之親和力描述於表11中。 表11 :純化VHH對重組人類DLL4之親和力KD(nM) rhDLL4 VHH ID kaCM'-s1) kais1) KD(_ 56A09 1.7E+05 9.3E-04 5.6 56C04 1.1E+05 4.9E-03 45 56H08 1.2E+05 1.1E-03 9.4 62C11 1.2E+06 1.3E-01 120 96C03 1.6E+05 4.8E-02 310 101G08 4.3E+04 2.2E-03 52 104G01 ⑻ 1.2E+05-1.5E+05 3E-03-6E-04 4-24 115A05 1.5E+05 3.9E-03 25 抗DLL4 Fab 2.3E+05 3.4E-04 1.5 (a)導致非1:1擬合之異質結合曲線 5.8.結合直系同源物（mDll4，cDll4)及家族成員（hJagged- 150859.doc -95- 201124532 1，hDLLl) 為了測定對小鼠DIM之交叉反應性，進行結合ELISA。 簡言之’重組小鼠 D114(R&D Systems，Minneapolis，MS， USA)在 4°C 下以 1 pg/mL 於 96 孑L MaxiSorp 培養盤（Nunc, Wiesbaden，Germany)中塗佈隔夜。用酪蛋白溶液（1%於 PBS中）阻斷各孔。VHH係以系列稀釋液形式加以施用且使 用小鼠抗myc(Roche)及抗小鼠AP接合物（Sigma, St Louis, MO, USA)來偵測結合（圖7)。量測對人類D114之結合作為 參考。EC50值概述於表I2中。 表12 :重組人類DLL4及小鼠DLL4結合ELISA中VHH的 EC50(nM)值 rhDLL4 rmDLL4 VHHID EC5〇(nM) ECs〇(nM) 5B11 1.8 - 6B11 1.4 - 7A02 1.4 - 7B05 7.2 - 8A09 0.9 - 8C11 1.1 - 17F10 0.9 - 19F04 0.9 0.8 55D12 13.1 30.0 56A09 3.6 6.3 56C04 44.3 244.0 56H08 4.1 8.7 57C11 7.9 83.4 62C11 137.0 13.1 96C03 86.5 8.7 101G08 8.9 53.9 104G01 8.4 - 115A05 5.0 33.4 抗DLL4 Fab 3.0 3.0 150859.doc -96- 201124532 為了確定VHH之獼猴交叉反應性，進行FACS結合實 驗。將表現獼猴D114之HEK293細胞（短暫或穩定轉染）用於 VHH之滴定結合實驗。在冰上培育30分鐘後，洗滌所有樣 品且藉由施用抗c-myc 〜Alexa647(Santa Cruz Biotechnology
Santa Cruz，CA, USA)來進行偵測。過度表現人類及小鼠 D114之HEK293細胞被用作參考。在FACS陣列（facs Array)上測定平均MCF值且用於計算EC50值（參見圖9)。 經由固相結合檢定（ELISA)評估不存在對同源配位體人 類DLL1及人類Jagged-Ι之結合。簡言之’人類DLL1 (Alexis，San Diego，CA，USA)及人類 Jagged-l(Alexis, San
Diego, CA, USA)在4°C下以 1 pg/mL 於 96 孔 MaxiSorp 培養盤 (Nunc, Wiesbaden, Germany)中塗佈隔夜。用酿蛋白溶液 (1%於PBS中）阻斷各孔。VHH係以系列稀釋液形式加以施 用且使用小鼠抗myc(Roche)及抗小鼠AP接合物（Sigma, St. Louis, MO, US A)來僧測結合。所有抗D114 VHH皆視為對 此等同源配位體無交叉反應性（圖8)。 5.9. VHH阻斷D114介導之HUVEC增殖之評估 在如 Ridgway 等人，Nature. 2006年 12月 21 日；444(7122): 1083-7所述之增殖檢定（以經修改形式）中評估所選VHH之 效能。簡言之，96孔組織培養盤經塗佈缓衝液（PBS，0.1% BSA)中之純化D114-His(RnD Systems; C-末端標記His之人 類D114，胺基酸27-524，0·75毫升/孔，1〇 ng/ml)塗佈。用 PBS洗滌各孔，隨後一式四份每孔接種4000個HUVE細 .胞。在第4天藉由併入[3H]-胸苷來量測細胞增殖。圖15中 150859,doc -97- 201124532 所示之結果說明 DLL4 VHH DLLBII101G08、DLLBII104G01 、DLLBII115A05、DLLBII56A09 及 DLL4 Fab以劑量依賴 性方式抑制對HUVEC增殖之DLL4依賴性效應，IC5G值概 述於表13中。所測試VHH在10 μιη下完全抑制DLL4依賴性 效應。 表13 : DLL4增殖檢定中獲得之IC50值 VHH/Fab Fab 56A9 104G1 101G8 115A5 IC50(nM)(實驗 1) 4.9 11.0 103 401 10002 IC50(nM)(實驗 2) 5.6 6.8 32 112 N.D. η 2 2 2 2 1 實例6 所選VHH之親和力成熟 使VHH DLLBII101G08及DLLBII115A05經受兩個循環之 親和力成熟。 在第一循環中，使用易出錯PCR方法在構架（FW)及互補 決定區（CDR)兩者中隨機引入胺基酸取代。突變誘發係以 兩輪基於PCR之方法（自Stratagene，La Jolla, CA，USA獲得 之Genemorph II隨機突變誘發套組）來進行，該方法使用1 ng DLLBII101G08 或 DLLBII115A05 cDNA 模板，隨後使用 0.1 ng之第1輪產物進行第二易出錯PCR。在精製步驟之 後，將PCR產物經由獨特限制位點插入經設計以便於噬菌 體呈現VHH文庫的載體中。使用遞減濃度之經生物素標記 重組人類DLL4(biot-rhDLL4)及胰蛋白酶溶離來進行連續 多輪之溶液中選擇（in-solution selection)。亦於第三輪中 使用冷rhDLL4(至少比biot-rhDLL4過量100倍）進行親和力 150859.doc -98- 201124532 驅動選擇。關於鼠類DLL4之選擇不包括在内，因為交叉 反應性（之保留）係在筛檢層次上加以評估。使用源自 pUCl 19之表現載體產生呈重組蛋白質形式之個別突變 體，該表現載體含有LacZ啟動子、安比西林抗性基因、多 重選殖位點及ompA前導序列（pAX50)。大腸桿菌TG1細胞 經表現載體文庫轉型且塗佈於瓊脂培養盤（LB+Amp + 2%葡 萄糖）上。自瓊脂培養盤挑取單一群落且在1 mL 96深孔培 養盤中培養。藉由添加IPTG(1 mM)來誘導VHH表現。根 據標準方法製備周質提取物（體積約80 pL)且在 ProteOn(BioRad，Hercules, CA, USA)解離速率檢定中針對 對重組人類及小鼠D114之結合加以篩檢。簡言之，GLC ProteOn感測器晶片在「配位體通道」L2及L4(L1/L3作為 參考通道）上經重組人類D114塗佈，而「配位體通道」L3 及L6經小鼠D114塗佈。將親和力成熟純系之周質提取物稀 釋10倍且橫跨「分析物通道」A1-A6加以注射。計算存在 於培養盤中之野生型純系之平均解離速率且充當計算解離 速率改良之參考。 在第二循環中，藉由同時隨機化在第一循環中鑑別之敏 *
感位置來產生組合文庫。為此，使用在隨機化位置處經簡 併（NNS)之寡核苷酸經由重疊PCR來合成全長DLLBII101G8 或DLLBII115A05 cDNA且進行補救PCR。用於產生組合文 庫之一列引子可見於表14及SEQ ID NO: 427至457中。如 上（實例2)所述，使用特定限制位點將隨機化VHH基因插 入噬菌體呈現載體（pAX50)中。如先前所述製備個別VHH g 150859.doc -99- 201124532 純系之周質提取物。表14:寡核苷酸親和力成熟文庫 101G08組合文庫寡核苷酸 115A5組合文庫寡核苷酸 >115A05CL fwd 1
>10lG08CL—fwdl-bis gaggtgcaattggtggagtctgggGGTGGTCTGGTTCAGGCTGGT >101G08CL_fwd_2 TCCTGCGCAGCTTCTGGTCGTACCTTCTCCAGCTACGCGATGGCT >101G08CL_fwd_3 CCAGGCAAAGAACGCGAGTWCGTAGCCGCAATCCGTTGGAGCGGT >101G08CL—fwd—4 CTGATTCCGTTCAGGGTCGTTTCACCATCTCTCGTGACAACGCG >101G08CL_fwd_5 CTGCAGATGAACTCTCTGAAACCGGAAGATACGGCAGTCTACTAC >101G08CIi—fwd_6-4 GACACTCGTCTGcgtCCGTACctgTACGACYATTGGGGTCAGGGTA >101G08CL_fwd_6-3 GACACTCGTCTGGvACCGTACctgTACGACYATTGGGGTCAGGGTA >101G08CL_fwd_6-2 GACACTCGTCTGcgtCCGTACGAGTACGACYATTGGGGTCAGGGTA >101G08CL_fwd_6-l GACACTCGTCTGGVACCGTACGAGTACGACYATTGGGGTCAGGGTA >101G08CL_rev_2-2 CAGACGAGTGTCcggCGCACGGTTTGCACAGTAGTAGACTGCCGT >101G08CL_rev_2-l CAGACGAGTGTCTRCCGCACGGTTTGCACAGTAGTAGACTGCCGT >10lG08CL_rev_3 AGAGTTCATCTGCAGATAGACGGTGTTTTTCGCGTTGTCACGAGA >101G08CL_rev_4 CTGAACGGAATCAGSGTAATACGCAGTTYCACCGCTCCAACGGAT >101G〇8CL_rev_5 GCGTTCTTTGCCTGGAGCCTGACGAWACCAAGCCATCGCGTAGCT >101G08CL—rev—6 AGAAGCTGCGCAGGACAGACGGAGAGAGCCACCAGCCTGAACCAG >101G08CL_revl-bis TGAGGAGACGGTGACCTGGGTCCCCTGACCCCAAT
gaggtgcaattggtggagtctgggGGTGGTCTGGTTCAGCCAGGT >115A5CL_revX-bis TGAGGAGACGGTGACCTGGGTCCCCTGACCCC >115A05CL_fwd_2 GTGCAGCTTCCGGCTTTACGWTCGGCTCCTACGACATGTCTTGGG >115A05CLl_rev_2 ACGCACCCCAGTATTCACCCTGACGCGCCCAAATGTAGCGATCTGCAGC >115A05CL_fwd_3 AGGTCCGGAATGGGTGTCCKCTATCAACTCTGGTGGTGGTAGCAC >115A05CL_rev_3 TCTTCCGGTTTCAGGCTGTTCATCTGCAGGTACAGCGTGTTTTTG >115A05CL_fwd_4 AAAGGTCGTTTCACCATCTCTCGTGACAACGCCAAAAACACGCTG >115A05CL__rev_4 TGAAACGACCTTTTWCGWAGTCGGYGTAGWAGGTGCTACCACCAC >115A〇5CL_fwd_5 TGAAACCGGAAGATACCGCGGTATACTACTGCGCTGCAGATCGCT >115A〇5CL_rev_5 CCATTCCGGACCTTTACCCGGAGAACGACGAACCCAAGACATGTC >115A05CL_fwd_6-l TACTGGGGTGCGTACGHATACGACTACTGGGGTCAGGGTAC >115A05CL_fwd_6-2 TACTGGGGTGCGTACcagTACGACTACTGGGGTCAGGGTAC >115A〇5CL_rev_6 CCGGAAGCTGCACAGCTCAGACGCAGAGAACCACCTGGCTGAACC >115A05CL2_rev_2-2 ACGCACCCCAGTAGTAACCCTGACGCGCCCRAATGTAGCGATCTGCAGC >115A05CL2_rev—2-1 ACGCACCCCAGTAKTCACCCTGACGCGCCCRAATGTAGCGATCTGCAGC
ProteOn解離速率檢定中針對結合於重組人類D114進行的 篩檢鑑別出解離速率改良多達38倍（DLLBII101G08)及11倍 (DLLBII115A05)的純系（表 15)。 150859.doc 100- 201124532 表15 : DLLBII101G08及DLLBII115A05親和力成熟純系的 解離速率篩檢
^LK4倍數 kd(s ) ™ 倍數 kd(s ) DLLBII101G08 2.2E-03 1 6.7E-03 1 DLLBII129D08 5.9E-05 38 1.9E-04 35 DLLBII129H04 6.8E-05 33 2.5E-04 27 DLLBII129G10 7.3E-05 31 2.6E-04 26 DLLBII129H07 7.4E-05 30 2.5E-04 27 DLLBII129B02 7.6E-05 30 2.6E-04 26 DLLBII129E11 8.0E-05 28 2.5E-04 26 DLLBII130F06 6.5E-05 27 2.6E-04 19 DLLBII130B03 6.7E-05 27 2.4E-04 20 DLLBII129D01 8.5E-05 26 2.6E-04 26 DLLBII130D06 6.9E-05 26 3.1E-04 16 DLLBII129G09 8.8E-05 26 3.4E-04 20 DLLBII129B05 9.3E-05 24 3.4E-04 20 DLLBII130E03 7.5E-05 24 2.7E-04 18 DLLBII129H05 9.4E-05 24 3.5E-04 19 DLLBII130A05 7.5E-05 24 3.0E-04 17 DLLBII130B02 7.8E-05 23 2.9E-04 17 DLLBII129H02 9.9E-05 23 3.4E-04 19 DLLBII130B04 8.3E-05 22 2.9E-04 17 DLLBII129E07 1.1E-04 21 2.8E-04 24 DLLBII129E03 1.1E-04 20 3.6E-04 18 DLLBII129A03 1.2E-04 19 3.8E-04 18 將最佳DLLBII101G08變異體及DLLBII115A05變異體以 與C-末端c-myc標籤及（His) 6標籤同框之方式選殖入表現 載體ρΑΧΙΟΟ中。關於重組小鼠D114之解離速率亦得以改 良。VHH係以標記His6之蛋白質形式在大腸桿菌中產生且 經由IMAC及SEC來純化。序列分別呈現在表16-A(DLLBII101G08)及表 16-B(DLLBII115A05)中。
S 150859.doc 101 - 201124532 V-9I 啭 150859.doc FR4 WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS CDR3 >H Oi PC cc H Q CU Q (X >H cu ω 口 ai H a ac CU Q <d cd ω >H cu C 1-q cc; H Q X Dj q <ς >h vc ω CM ω cc H q rc Oj Q rf； >H d2 ^ >H ω 一 {X Η Q CU Q od e >H Qj < 口 CC H Q >H Oj Q < ：h (X ^ >H Oi 忒 i-q cc： H Q X 〇4 Q ri； >h cx ω >H cu a； DC； H Q >h Oj Q FCC >H IX ^ >-< a. ω EH Q X CU Q ίί >H 〇2 1-q >Η Οι ω 一 a Η Q X Οι Q 咤>« cc ω FR3 CO S o >H > S H < S 〇 ^ >H < >-* 2 > 〇 < VC H CO Q μ ω Η Oi ha： cn 〇i > s Eh < S U < >-· 2 > Q C CC H W Q μ ω Eh (Xi h4 Pi U) 2 a >H > s Eh C S U ^ x <1 >h S > 9 < CC H W Q μ ω Eh C^< [L4 ^ Pi Θ O) S a >H > s H < s u ^ >H f< >H z > 9 < CC Em H Q M W Η Οι ^ CO z o >H > s S U ^ >h < >n 2: > 〇 < CC H CO Q M t〇 H Oa Dq ^ Dd ^ CO S 艺 a >H > s H f=C S 〇 β >H < >H 2 > Q C PC E-t CO Q η ω H CU Pi i-q (/) § >H > S H C S 〇 2 > Q C a： h CO Q μ ω H h CO 〇i >H > s H < S 〇 ^ >H < >-· s > Q C tt： H CO Q μ ω H CU VC ^ CO 2 S >-t >13 H C S 〇 ^ >H <；>H s > Q < Di H CO O μ ω h a» Pi ^ in 2 艺 Ο >-« > s Η < S Ο 乂：Μ f< >* s > Q C CC； H CO Q μ ω H CL. Pi “1 CDR2 Eh 〇 〇 o a CO > ^ CO Q M (< >-* >h < H o 〇 o a cn > S co QC Q M fiC < >-· >H < H o 〇 o a CO > IS CO a； q M <c < >-< >H < H O C〇 o a CO > ^ CO a Q M fit! < >H >H < H 〇 〇 ϋ 〇 CO > IS CO Ρί Q M <； <C >-i >H < H 〇 〇 C9 〇i CO > S cn ^ Q M < <； H 〇 〇 o <y CO > ^ CO P M CU < >-· >H < H 〇 〇 ϋ 〇 CO > S CO ^ Q M <； Fi! >-< >* < H ω 〇 〇 cv CO > ^ CO CX： Q M C f< >H >H c H O CO 〇 〇 CO > S CO Pi Q M <； < >H FR2 ω ω ϋ cu a cc < Pm > ω 江 ω ο CU < ο pc； C >H > ^ >H ω 江 ο cu c a VC c >H > ^ >H ω 江 ω ¥ ο 1¾ rf： Ο pc^ C h > ω Di ω o cu <C 〇 DC： C N > S >H ω PC o o Cm (=C 〇i a r< ^ > S >H ω ω ◦ Οί < a PC < >H > 萁>H ω 江 ω o Ot rf: 〇 cc < > 芎>H ω a ω o 〇4 <c o cc： c >H > S >H ω Pi ω O CM < a cc； < >H > 3 >-* CDRl < < >H CO < S rf： >H CO rf： s < >-♦ CO 震 CO < >H C/5 < 国 >H CO < , CO < 国 >H CO < >H CO < >H CO FR1 O CO < Pu O Eh > a： Θ 〇 O co Or? iO 〇 ω cn > e a ^ > CO WO a c〇 < Du Ο H ι-q LD O CO O < O fi m o ω co > ^ CO O 口 > cn tJ O O CO < a h > a »-q o o to O rt； o < CO U ω c〇 > q θ (X Ο Θ > cn ω 〇 O cn < h O Eh > β e> O CO CD吒 O fi CO 〇 ω c〇 > q ft： O hP > c〇 ω e) O (/1 OH > cd hJ 〇 O CO ◦咩 〇 f< cn CJ Ci3 CO > hJ O ^ > CO ω o O co »< U. OH > ^ ϋ Ο σ) (3 <； ϋ < W u ω c〇 > ^ ^ cc Ο Θ > CO ω ◦ O CO c u. O £h > CC： ^ 〇 O co ◦ < O CO ω u ω co > ^ cc 〇 ^ > cn ω o a c〇 C OH > a： t-P o 〇 cn O p£ o < cn u ω co > ^ cc； 〇l Θ > cn CJ o O⑺ < Ο H > a； »-q o O CO a <; 〇 <, m u ω co > .-q 〇 口 > cn ω ο 〇 cn < Ο H > 〇C o 〇 co ο ίς o < c〇 a ω c〇 > e »-^ cc 〇 i-q > CO ω 〇 VHH ID SEQ ID NO CM t—I M M CQ ΓΟ Θ O呦 ^ < tn q m CM t-1 M M DQ CM h^i 〇 m h-3 oq in q rn Cs] t-H M M 0Q ID ^ O KD y-Ά CQ IT) Q a> CO CM ϊ~1 M M 〇Q tH θ 〇 r-q m q <Tt m CN] t—1 M M CQ 00 β 〇 00 q tn Q Γ0 CM r—1 M M DQ r〇 h^l Ο Λ ^ ω in Q cr> CO CN3 rH M M ω r-^ 〇 o ^ ω ω ο σι co CNJ i—1 M M CQ t-H t-H «-♦ κί ω vo Q σ> co CNJ »—1 Μ Μ CQ σ> θ Ο CM μ^Ι ο νο Q σ'» γο CN] rH M M DQ O rH C〇 f-ί O VO Q σί n •102- 201124532
WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS 1 j 1 WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS ：WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS RAPDTRLRPY EYDY RAPDTRLEPY LYDH RAPDTRLGPY LYDY RAPDTRLEPY EYDY RAPDTRLGPY LYDH RAPDTRLAPY LYDH RAPDTRLAPY LYDY RAPDTRLRPY LYDH !- ! RAPDTRLEPY LYDH 1 1 RAPDTRLEPY EYDH RAPDTRLAPY EYDY RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMYS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN RFTISRDNAKNTVYLQMNS LKPEDTAVYYCAN AIRWSGGTAY YADSVQG ! AIRWSGGTAY YADSVQG AIRWSGGTAY YADSVQG AIRWSGGTAY YADSVQG AIRWSGGTAY YADSVQG AIRWSGGTAY YADSVQG AIRWSGGTAY YADSVQG AIRWSGGTAY YADSVQG AIRWSGETAY YADSVQG AIRWSGGTAY YADSVQG AIRWSGGTAY YADSVQG WYRQAPGKERE YVA WFRQAPGKERE YVA WYRLAPGKERE YVA WYRQAPGKERE YVA WYRQAPGKERE YVA WFRQAPGKERE YVA WYRQAPGKERE YVA WFRQAPGKERE YVA :WYRQAPGKERE ；YVA WYRQAPGKERE YVA WYRQAPGKERE YVA < 国 >-» CO < < co < < >H cn < < >H iO < < CO < CO < >H CO < 2 < >H cn C >-· cn < < >H co < § co EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESRGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCSASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS EVQLVESGGGLVQAG GSLRLSCAASGRTFS DLLBII12 9H02 364 DLLBII12 9H04 365 DLLBII12 9H05 366 DLLBII12 9H07 367 00 t—1 1—1 M PQ to ^ 〇 00 < VO q ο n DLLBI工13 0B02 369 00 i~! M M PQ rn ►^ 〇 〇 闫CQ卜 Q O CO DLLBII13 0B04 371 DLLBII13 0D06 372 DLLBI 113 0E03 373 DLLBII13 0F06 374 150859.doc -103- s 201124532 a-9I^ 150859.doc α； U4 WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS CDR3 Ο Ν W ο ο α; S Q Μ >Η ^ ο 0^ >Η Q c O >-» ω ο a DC： s Q M >H cr； >* Q C >H W 〇 a DC： < >H S Q M >H >t > CC； >H Q < 〇 3 >H Ci3 〇 o VC S Q M >H >h a a； >h Q < >H CJ o o <! >H S Q M >1 >H > CC >H Q rf： 〇 >H ω o ο CX < ^ ^ Q M >H >H 〇 CC >H Q C >H ω o o a： C >H ^ Q M >H >H < QC >H Q C e) 艺 ω ◦ a a <| >H & Q M >-· >· < VC >H Q < O >· ω ο ο (X <C >Η ^ Q Μ >Η >Η < β ：Μ Q < >H ω o o a； <C ^ Q M >H >H < Dd >H Q C ΓΟ U* Ο f=c Hq <C >Η U 闷>-Η >h 之> C H Z Q ο ω a; cu CO ^ M f^l H cn as 〇i Pi >H (J H 艺> c < H Z Q Q ω oc： Oj M H co h S VC S O f=c ^ fi >H U ι-q ^ H >H S > 乂 < < H 2 Q Q ω ^ cu W ^ 1—1 H⑺ h S 〇i $ >H 〇 H >♦ s > ^ c C H S Q Q ω CC： CU cn M ^ H CO tj z as Ο F=i >H U ι-q >h Eh >h S > < H S Q a ω VC Ou CO H ^ H cn oi S O i=C >H U H >♦ s > ^ < C H 2 Q q ω cc a« CO ^ m hq H CO t4 2； Pi S： O 1=¾ h=\ <, >H O >-· H >H S > < < H z a q ω (X Oj ⑴乂 M H-^l H cn Du s DC； s a f=c >H 〇 H >♦ S > a c C H S Q Q ω VC Pu <n ^ M t^\ H c〇 ^ s as Ο iC ^ < >Η U θ & Εη >η S > ^ < < Η S Q Q ω cC cu CO a M hq H cn h s as O < >» U h^l >h H >H s > ^ c < H S Q Q ω CC CU cn ^ 1 H cn h S CDR2 >H 卜 CO e> e> o e> ¥ CO > S >H M Q < H >· cn 〇 a o o ^ ⑺> M Q < < >h >H 〇 ο a o ^ cn > S >H M Q < H >n >i m O 〇 o o cn > s >h HQ < < >H >H Eh ω o o o e? ^ C/5 > S >H HQ < eh >H >H H m 〇 o o CO > 2 >H M Q C H >n H 00 〇 Ο ϋ ⑺> S >H M Q < H Eh CO ◦ e) e> 〇 a CO > S >H M Q < H >H H in e? O CD ⑴> IS h M Q < H >H H cn O e> o 〇 ^ CO > S >H M Q U1 H 04 ΡΕ： b cu 〇 CU CO QC； CO a； > >萁 is ω 〇4 o 〇 Dj . CO cC m cC > >萁 萁ω CU 〇 o CU CO Ct CO pci > > ^ 3 ω 〇4 〇 〇 cu CO cr： co cc： > >3 宕ω Oa 〇 〇 CU CO Di O) a； > > S S ω CU o o cu CO CX CO Cti > >萁 ^ ω Cu 〇 〇 CU ⑺ CC CO > > S s ω CU e? 乂 o 〇4 CO DC； CO o^i > > S 宕w 〇A 〇 ¥ o cu CO DC： CO a； > >萁 S ω Oj o o Clj CO a CO ffi > >萁 芎ω CDR1 CO S Q >H CO cn S Q >H m 2 Q >h CO cn 艺 Q 10 CO S Q >-* cn CO S Q cn CO s Q cn CO Q >h CO in S Q >« CO CO s Q >H (Ω Γ-ί ΟΕ； Ρμ LD 〇 Oj h OH > h 口 ϋ ϋ CO 〇 p£ o f5 CO CJ ω c〇 > ^ ^ VC O hP > CO ω 〇 O (J CU Ua a h > h o O co o e> r< cn u ω c〇 > ^ θ a： O yA > CO ω o C3 O Cm Ej4 Ο H > O o w u 4 〇 < CO U ω cn > ^ i-i a； 〇 ^ > m ω o o a Ο» M OH > hJ o o cn o <c o < CO o ω c〇 > h=\ 1-^ Ct 〇t t-q > cn CJ O O (J Ch M cy ^ > Pm u cn ο <i u < w u ω co > θ θ a ο μι > cn ω o u 〇 ¢1( Pz-i Ο H > ^ 〇 e? c〇 ◦ <; CO 〇 ω cn > i^l cc； O ^ > CO ω o 〇 〇 a. ^ O Eh > h h^l o o cn 〇 < ω ο [J CO > ^ VC Ο Θ > cn CJ O e? 〇 Cl, m OH > Pm JO O CO O sC ID < c〇 〇 ω c〇 > g o ^ > CO ω o ο 〇 Οι M OH > h ^ 〇 O CO O o < CO CJ ω cn > q i-^ CC o 口 > CO t3 O o 〇 Οι M OH > ^ 〇 O CO o <c 〇 < CO 〇 ω co > ^ ct： Ο Θ > CO ω o Q Q Μ Η Κ Ο X u\ ο > W Ζ m in HO CQ < ^ v〇 i-P Γ0 Q tH c〇 M CTl HO OQ <, ^ m cn 〇\ Q μ cn M CsJ M iH CQ C ^ n co ^ cn σ\ q γη n M UD HO CQ Q ι-q Γ0 ^ m <y\ q d cn M i-H Μ O CQ Pu Θ 00 〇 hP 〇〇 O Q tH ^ M HO PQ Ct4 h^l ΓΟ H h^l ro 〇 Q 1-H m m HO CQ O h^l r〇 CM Θ 〇〇 〇 Q rH M 00 Μ O cq a: hq ro cn Θ 〇〇 〇 Q rH订 M I-H M i-H PQ CQ Θ XT Γ0 o Q rH ^5* Μ O Μ I—1 CQ Q in 口 Γ0 o CD i~1 句* •104· 201124532
WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS 1- WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS 1 WGQGTQVTVSS WGQGTQVTVSS DRYIWARQGEYWG AYQYDY DRYIWARQGEYWG AYEYDY DRYIWARQGEYWG AYAYDY DRYIWARQGDYWG AYVYDY DRYIWARQGDYWG AYAYDY DRYIRARQGEYWG AYAYDY DRYIWARQGEYWG AYAYDY DRYIWARQGEYWG AYEYDY DRYIWARQGEYWG AYAYDY DRYIWARQGEYWG AYQYDY DRYIWARQGEYWG AYAYDY RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA RFTISRDNAKNTLYLQ MNS LKPE DTAVYYCAA RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA 1 ! RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA RFTISRNNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA RFTISRDNAKNTLYLQ MNSLKPEDTAVYYCAA AINSGGGSTYY ADYVKG SINSGGGSTYY ADYVKG AINSGGDSTFY ADYVKG AINSGGGSTYY ADYVKG AINSGGGSTYY TDYVKG AINSGGGSTYY TDYVKG SINSGGGSTYY TDFVKG AINSGGGSTYY TDYVKG SINSGGGSTFY TDFVKG AINSGGGSTYY TDYVKG AINSGGGSTYY ADYVKG WVRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS WLRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS WVRRSPGKGP EWVS CO Q >H CO CO S Q >H CO cn S a CO CO S a >-* in ω S Q >H CO cn S Q CO ω S Q >-< CO CO S Q >h CO ω S Q CO cn S Q >H CO cn S Q >-» CO EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTIG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTFG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTIG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTFG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTFG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTFG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTIG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTIG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTIG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTFG EVQLVESGGGLVQPG GSLRLSCAASGFTIG DLLBII 135H04 406 DLLBII 136C07 407 M Μ O PQ Q ^ CO q CO O Q 切 DLLBII 136H03 409 DLLBII 137A04 410 DLLBII 137Ά06 411 DLLBII 137B06 412 DLLBII 137C04 413 DLLBII ! 137F04 414 DLLBII 138F12 415 DLLBII 015 416 150859.doc - 105- 201124532 實例7 親和力成熟純化VHH之表徵 如上（實例6)所述表現且純化VHH DLLBII101G08及 DLLBII115A05之親和力成熟變異體。在以下中對VHH進 行表徵：rhDLLl/rhJAGl 結合 ELISA 及 hD114/mD114/獼猴 D114 FACS(實例 5.8 ;表 20 ;圖 12及 13)、rhD114-rhNotchl 競爭£!^18八（實例5.1;表17;圖10)、競爭1*11>1〇化111-(：110-hD114 FMAT(實例 5.3 ;表 18 ;圖 11)。 表徵資料概述於表21中。總之，親和力成熟VHH展示親 和力及效能之明確改良，同時維持其對mD114及獼猴D114 之結合且未觀測到對hDLLl或hJAGl之結合。 表17 : hDLL4/hNotchl-Fc競爭ELISA中親和力成熟VHH的 IC50(nM)值 VHHID IC5〇(nM) 101G08 10.0 129A03 1.8 129B05 0.9 129D08 1.2 129E11 1.3 129H07 1.0 130B03 1.5 130F06 1.3 抗DLL4 Fab 1.5 150859.doc -106- 201124532 VHH ID ICso(nM) 115A05 7.5 133A05 2.1 133A09 1.5 133G05 2.0 134D10 1.3 136C07 1.4 015 0.9 抗DLL4 Fab 1.2
表18 :阻斷人類Notchl/Fc與表現在CHO細胞上之人類或 小鼠DLL4之相互作用之純化親和力成熟VHH的IC50值 (nM)(FMAT)
hDLL4 mDLL4 VHH ID ICso(nM) ICso(nM) 101G08 69.3 140.5 129B05 7.4 14.4 129D08 7.8 11.0 129E11 8.1 12.3 抗DLL4 Fab 5.5 3.0 hDLL4 mDLL4 VHH ID IC5〇 IC5〇 (nM) (nM) 115A05 106.7 348.9 133A09 6.6 18.6 133G05 5.9 12.0 136C07 8.0 31.2 015 5.7 21.2 抗DLL4 Fab 3.4 1.6 150859.doc •107· 201124532 表19 :純化親和力成熟VHH對重組人類DLL4及小鼠DLL4 之親和力KD(nM) rhDLL4 rmDLL4 VHHID kaOVTV1) kdis1) KD(nM) kaOVlY1) kd(s·') KD(n M) 101G08(wt) 4.8E+04 2.3E-03 48.0 9.4E+04 5.6E-03 60.0 129A03 2.1E+05 1.2E-04 0.5 129B05 2.3E+05 7.9E-05 0.3 2.7E+05 3.1E-04 1.1 129D08 1.8E+05 6.4E-05 0.4 2.7E+05 2.0E-04 0.8 129E11 1.9E+05 9.0E-05 0.5 2.5E+05 2.9E-04 1.2 129H07 1.6E+05 7.3E-05 0.5 130B03 2.2E+05 6.8E-05 0.3 130F06 2.0E+05 8.0E-05 0.4 抗DLL4 Fab 2.3E+05 3.4E-04 1.5 rhDLL4 rmDLL4 VHHID ιαΜ-ν1) Ms·1) Κ〇ίπΜ) kaCM^S-1) W1) KDinM) 115A05(wt) 2.5E+05 4.0E-03 16.0 J.7E+05 9.1E-03 53.0 133A09 4.4E+05 9.0E-04 2.1 3.5E+05 2.7E-03 7.8 133G05 5.9E+05 4.7E-04 0.8 4.7E+05 1.6E-03 3.4 136C07 6.2E+05 3.9E-04 0.6 5.0E+05 1.3E-03 2.6 015 4.5E+05 4.7E-04 1.0 3.5E+05 1.5E-03 4.3 抗 DLL4 Fab 2.3E+05 3.4E-04 1.5
表 20 :結合 CHOhDLL4、CHO-mDLL4及 CHO_cDLL4 之親 和力成熟VHH的EC50(nM)值 hDLL4 mDLL4 cDLL4 VHHID ECs〇(nM) EC5〇(nM) EC5〇(nM) 101G08(wt) 17.5 11.2 129B05 9.7 3.9 3.9 129D08 9.6 3.7 3.8 129E11 1.4 4.1 4.2 抗DLL4 Fab 5.6 2.1 2.5 150859.doc •108· 201124532 hDLL4 mDLL4 cDLL4 VHHID ECs〇(nM) ECs〇(nM) EC5〇(nM) 115A05(wt) 11.3 13.8 133A09 1.2 1.7 2.3 133G05 8.5 2.8 2.7 136C07 10.9 8.3 3.5 015 14.8 7.0 5.1 抗DLL4 Fab 5.6 2.1 2.5 表21 :源自DLLBII101G0 8及DLLBII115A05之親和力成熟 VHH的特徵
ELISA FMAT hDLL4 FMAT mDLL4 FACS FACS FACS ELISA ELISA KD (nM) hDLL4 KD (nM) mDLL4 IC5〇 (nM) IC50 (nM) IC50 (nM) EC50 (nM) EC50 (nM) EC50 (nM) hDLLl hJag-1 101G08 48.0 60.0 10.0 69.3 140.5 17.5 NF 11.2 nb nb 129A03 0.5 1.8 129B05 0.3 1.1 0.9 7.4 14.4 9.7 3.9 3.9 nb nb 129D08 0.4 0.8 1.2 7.8 11.0 9.6 3.7 3.8 nb nb 129E11 0.5 1.2 1.3 8.1 12.3 10.4 4.1 4.2 nb nb 129H07 0.5 1.0 130B03 0.3 1.5 130F06 0.4 1.3 DLL4 Fab 1.5 1.5 5.5 3.0 5.6 2.1 2.5 S- 150859.doc 109· 201124532 ELISA FMAT hDLL4 FMAT mDLL4 FACS FACS FACS ELISA ELISA (nM) hDLL4 KD (nM) mDLL4 IC5〇 (_ ICs〇 (nM) IC5〇 (nM) ec5〇 (nM) EC50 (nM) EC5O (nM) hDLLl hJag-1 115A05 16.0 53.0 7.5 106.7 348.9 11.3 NF IS.8 nb nb 133A05 2.1 133A09 2.1 7.8 1.5 6.6 18.6 7.2 1.7 2.3 nb nb 133G05 0.8 3.4 2.0 5.9 12.0 8.5 2.8 2.7 nb nb 134D10 1.3 136C07 0.6 2.6 1.4 8.0 31.2 10.9 8.3 3.5 nb nb 015 1.0 4.3 0.9 5.7 21.2 14.8 7.0 5.1 nb nb DLL4 Fab 1.5 1.2 3.4 1.6 5.6 2.1 2.5 nb :無結合； 【圖式簡單說明】 圖1 :人類、恆河猴及獼猴DLL4之胺基酸序列比對。 圖2 :人類及小鼠DLL4缺失突變體（上標中為胺基酸域 邊界）。 圖3-1至3-3 :阻斷hDLL4/hNotchl-Fc相互作用之純化 VHH(ELISA)。 圖4-1至4-5 :阻斷hDLL4/hNotchl-Fc相互作用之純化 VHH(AlphaScreen)。 圖 5-1 至 5-10 :阻斷 CHO-hDLL4/hNotchl-Fc 及 CHO-mDLL4/hNotchl-Fc相互作用之純化VHH(FMAT)。 圖6-1至6-4 :阻斷DLL4介導之Notchl裂解之純化 VHH(報導體）。 -110- 150859.doc 201124532 圖7-1至7-4 :純化VHH對重組人類及小鼠DLL4之結合 (ELISA)。 圖8_1至8-3 :純化VHH對重組人類DLL1及人類Jagged-1 之結合（ELISA)。 圖9-1至9-4 :純化VHH對人類/小鼠/獼猴DLL4之結合 (FACS)。 圖10-1至10-2 :阻斷hDLL4/hNotchl-Fc相互作用之親和 力成熟 VHH(ELISA)。 圖 11-1 至 11-4 :阻斷 CHO-hDLL4/hNotchl-Fc 及 CHO-mDLL4/hNotchl-Fc相互作用之親和力成熟純化VHH (FMAT)。 圖12-1至12-4 :純化VHH對人類/小鼠DLL4之結合 (ELISA)。 圖13-1至13-4 :親和力成熟純化VHH對重組人類DLL 1及 人類 Jagged-Ι 之結合（ELISA)。 圖14-1至14-6 :純化VHH對人類/小鼠/獼猴DLL4之結合 (FACS)。 圖15 : VHH對D114介導之HUVEC增殖抑制效應的評估。 s 150859.doc -111 - 201124532 序列表 <110>德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 <120> DLL4結合分子 <130> 12-0307-ff <140> 099133558 <141> 2010-10-01 <150> 09172132.4 <151> 2009-10-02
<160> 459 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> 智人 <400> 1 Pro Phe Ala Tyr Tyr Ser Asp Leu
Cys Gly Val Asn Gly Val Asp Tyr 10 15 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 2
Pro Phe Ser Tyr Tyr ser His Leu Cys
Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 10 15 <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 3
Pro Phe Ser Tyr Tyr Ser ser Leu Cys 1 5
Gly Val Asn Glu Tyr Asp Tyr 10 15 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 4 Pro Trp Asp Ser Trp Tyr cys Gly lie
Gly Asn Asp Tyr Asp Tyr 10 15 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 5 Pro Phe lie His Tyr ser Asp Leu cys 1 5
Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 10 15 <210> 6 <211> 22 150859-序列表.doc 201124532 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 6
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Ser Ser Tyr Tyr Tyr Ser Pro 15 10 15
Glu Ala Val Tyr Asp Tyr 20 <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 7 Pro Phe Ala His Tyr ser Asp Leu cys Gly val Asn Gly Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 8
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 9 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 9
Pro Phe Glu Tyr Tyr ser Asp Leu cys Gly val Asn Gly Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 10 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 10
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ser Pro Glu 15 10 15
Ala Val Tyr Glu Tyr 20 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 11
Pro Phe Ser His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Ala lie Asp Tyr -2- 150859-序列表.doc 201124532 15 10 <210> 12 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 12
Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 13 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 13
Ser Gly ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val Phe Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 14 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 14 is Pro Leu Gin Asn Cys Cys Gly Gly Ser Ala Tyr Ala ser Pro Glu 5 10 15
Ala Val Tyr Glu Tyr 20 <210> 15 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 15
Pro Phe Ala Tyr Tyr Ser Asn Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 16 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 16
Asp Pro lie His Asn Cys. Tyr ser Gly Asn Tyr Tyr Ala Ser Pro Glu 15 10 15
Ala Val Tyr Asp Tyr 20 <210> 17 <211> 15
<212> PRT 150859-序列表.doc
I 201124532 <213>美洲駝 <400> 17
Asp Pro Leu Val Cys Gly Tyr Asn Asp Pro Arg Leu Ala Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 18 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 18
Pro Phe Ala His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 19 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 19
Pro Phe Thr His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Glu Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 20
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10 <210> 21 <211> 11 <212> PRT <213>美洲乾 <400> 21
His Tyr 10
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie <210> 22 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 22
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 1 5 10 <210> 23 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲敢 <400> 23 -4- 150859-序列表.doc 201124532
Ser Phe Gin Ser Gly Ala Ala Pro Gly Ala Asn Phe Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 24 <211> 12 <212> PRT <213> 美洲欺 <400> 24
Pro Ala Pro Gly Ser Ser Gly Tyr Glu 1 5 <210> 25 <211> 12 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 25
Tyr Asp Tyr 10
Pro ser Pro Gly ser ser Gly Tyr Glu
Tyr Asp Tyr 10 <210> 26 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 26
Ser Leu Arg Gly Trp Asp Thr Thr Arg lie Asp Tyr Glu Tyr 1 5 10 <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 27
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10
Pro
Hi s 10
Pro Arg Gly Trp
Gly Pro Thr Gly
Glu Tyr Gly Tyr <210> 28 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 28 <210> 29 <211> 12 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 29
Pro Ala Pro Gly Ser Ser Gly Tyr Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 150859-序列表.doc 201124532 <210> <211> <212> <213> 30 12 PRT 美洲駝 <400> 30
Pro Ser Pro Gly Ser Ser Gly Tyr Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 31 14 PRT 美洲駝 <400> 31
Arg Ala Ala Asp Thr Arg Leu Gly Pro Tyr Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 32 14 PRT 美洲駝 <400> 32
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 33 11 PRT 美洲駝 <400> 33
Pro Gly lie Ala Ala cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 34 13 PRT 美洲駝 <400> 34
Gly Arg Gly Phe Tyr His Asp Tyr Ser Ser Tyr Glu Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 35 9 PRT 美洲駝 <400> 35
Gly Pro Asp Cys Ser Ser Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 36 150859·序列表.doc 201124532 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 36
Ser Leu Arg Gly Trp Asp Thr Thr Arg lie Asp Tyr Glu Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 37 13 PRT 美洲駝 <400> 37
Ala Arg Gly Asp lie Asp Val Tyr Thr Leu Ser Asp Ser 1 5 10 <210> 38 <211> 13 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 38
Ala Arg Gly Asp lie Asp Val Tyr Thr Leu Ser Asp Ser 1 5 10 <210> 39 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 39 Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His 1 5 10 <210> 40 <211> 20 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 40
Arg Leu Phe Ser Gly Gly Cys Ala Val Val Ala Gly Thr Ser Trp Ala 15 10 15
Asp Phe Gly Ser 20
Arg Leu Phe Lys
Gly Gly Cys Ala Val val Ala Gly Thr Ser Trp Ala 10 15 <210> 41 <211> 20 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 41 150859·序列表.doc 201124532
Asp Phe Gly ser 20 <210> 42 <211> 12 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 42
Leu Ala Thr Thr val Thr Pro Ser Trp Val Asn Tyr 1 5 10 <210> 43 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲·!它 <400> 43
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 44 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 44
Ser Leu Arg Gly Trp Asp Thr Thr Trp lie Asp Tyr Glu Tyr 1 5 10 <210> 45 <211> 13 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 45
Asp Ser Arg Arg Gly Gly Val Gly Asn Phe Phe Arg ser 1 5 10 <210> 46 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 46
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro lie Glu Tyr Ala Tyr 1 5 10 <210> 47 <211> 8 <212> PRT <213> 美洲敢 <400> 47
Arg Arg Asn Phe Leu Ser Asn Tyr 150859-序列表.doc 201124532
Pro Gly lie Ala
Ala Cys Arg Gly lie
His Tyr 10 <210> 48 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 48 <210> 49 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲它 <400> 49
Phe Val Gly Tyr
Ala Trp Cys Asp Ser Ser Trp Tyr Arg Ser 1 5 10 <210> 50 <211> 20 <212> PRT <21B> 美洲駝 <400> 50
Arg Leu Phe Ser Gly Gly Cys Ala Val Val Ala Arg Thr Ser Trp Ala 15 10 15
Asp Phe Gly Ser 20
<210> 51 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 51 Pro Gly lie Ala 1
Ala cys Arg Gly lie His 10
Tyr <210> 52 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 52 Pro Arg Gly Trp
Gly Pro Thr Gly
Pro His 10
Glu Tyr Gly Tyr <210> 53 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲写它 <400> 53
Pro Val Lys Val Ala Gly Leu Glu Tyr Ala Tyr 1 5 10 150859-序列表.doc raj 201124532 <210> 54 <211〉 13 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 54
Asp Val Gin His Ser Ala Trp Leu Lys Pro Leu Thr Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <21B> 55 3 PRT 美洲駝 <400> 55
Asp lie Tyr <210> 56 <211> <212> <213> 15 PRT 美洲駝 <400> 56
Pro Tyr Tyr Ser Asp Phe Glu Gly Thr Thr Thr Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 57 <211> <212> <21B> 16 PRT 美洲駝 <400> 57
Thr Thr Arg Gly Arg Tyr ser Ala Leu ser Ala Ser Ala Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> <211> <212> <213> 58 19 PRT 美洲駝 <400> 58
Asp Arg Tyr lie Arg Ala Arg Gin Gly Asp Tyr Trp Gly Ala Tyr Glu 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 59 <211> <212> <213> 21 PRT 美洲駝 <400> 59
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Arg Tyr Tyr Ala Ser Pro Asp -10- 150859-序列表.doc 201124532 10 15
Ala Val Tyr Asp Tyr 20 <210> 60 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 60 Asp Pro 1 • Leu Val cys 5 Gly Tyr Asn Asp <210> 61 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 61 Pro Phe ：Asn His Tyr Ser Asp Leu cys 10 15 10 15 <210> 62 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 62
Pro Phe Ser Tyr Tyr Ser Ser Leu Cys Gly Val Asn Glu Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 63 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 63
Pro Phe Ser Tyr Tyr Asn Asn Leu Cys Gly Val Asn Gly Val Asp Tyr 15 10 15 <210> 64 <211> 20 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 64
Arg Leu Phe Ser Gly Gly Cys Ala Val Val Ala Gly Thr Ser Trp Ala 15 10 15
Asp Phe Gly ser 20 <210> 65
<211> 16 <212> PRT 11 - 150859-序列表.doc 5 201124532 <213>美洲駝 <400> 65
Pro Phe Ala His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 66 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 66
Pro Phe Ala Tyr Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Glu Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 67 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 67
Pro His Ser Asp Tyr Asp Glu Glu Ala Pro Ser Asp Phe Gly ser 15 10 15 <210> 68 <211> 20 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 68
Arg Leu Phe Ser Gly Gly Cys Ala Val Val Val Gly Thr Ser Trp Ala 15 10 15
Asp Phe Gly ser 20 <210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 69
Ser Leu Gly Ser Ser Trp Cys Ala Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 70 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 70
Asp Pro Leu Val cys Gly Tyr Asn Asp Pro Arg Leu Ala Asp Tyr 15 10 15 <210> 71 <211> 20 12-
150859-序列表.doc 201124532 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 71
Arg Leu Phe Ser Gly Gly Cys Ala Val Val Ala Gly Thr Ser Trp Ala 15 10 15
Asp Phe Gly Ser 20 <210> 72 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 72
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Ala Tyr 15 10 15
<210> 73 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲秘 <400> 73
Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Ala Tyr Cys Gly Val Asn Arg Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 74 <2U> 18 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 74 Ala His Asp Asn Tyr Trp Phe Thr Asp Asp Ser 1 5 10
Leu
Gly Arg
Gly Leu 15
Lys Tyr 駝 T州 5 1 R *7、 7 1 p美 <210> <211> <212> <213> <400> 75
Lys Thr Phe Gly Ser Asn Trp Tyr Asp Asp Tyr 1 5 10 <210> <2U> <212> <213> 76 21 PRT 美洲駝 <400> 76
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Arg Tyr
Tyr
Ala Ser
Pro Glu
S 150859-序列表.doc -13- 201124532 15 10 15
Ala Val Tyr Asp Tyr 20 <210> 77 <211> 21 <212> PRT <213>美洲乾 <400> 77
Asp Pro Phe His Asn Cys Tyr ser Gly ser His Tyr Ser Ser Pro Glu 15 10 15
Ala Val Tyr Glu Tyr 20 <210> 78 <211> 16 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 78
Pro Phe Glu Tyr Tyr ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 79 <211> 16 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 79
Pro Phe Asn Tyr Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Val Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 80 <211> 15 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 80
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Ala Tyr 15 10 15 <210> 81 <211> 16 <212> PRT <213>美洲駐 <400> 81
Pro Phe Ala His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr
1 5 10 15 <210> 82 <211> 8 <212> PRT -14 - 150859-序列表.doc 201124532 <213> 美洲乾 <400> 82 1 5 <210> <211> <212> <213> 83 9 PRT 美洲駝 <400> 83
Glu Met Asp Gly Ser Arg Tyr Val
Val His Pro Ser Thr Gly Phe Gly Ser 1 5 <210> <211> <212> φ <213> 84 15 PRT 美洲 <400> 84
Pro His Ser Asp Tyr Asp Glu Glu Ala Pro Ser Asp Phe Gly Ser 15 10 15 <210> 85 <211> <212> <213> 20 PRT 美洲駝 <400> 85
Arg Leu Phe Ser Gly Gly Cys Ala Val Val Ala Ser Thr Ser Trp Ala 15 10 15
Asp Phe Gly Ser 20 癱 <210> 零 <211> <212> <213> 86 20 PRT 美洲駝 <400> 86
Arg Leu Phe Arg Gly Gly Cys Ala Val Val Ala Gly Thr Ser Trp Ala 15 10 15
Asp Phe Gly Ser 20 <210> <211> <212> <213> 87 15 PRT 美洲駝 <400> 87
Asp Pro Leu Val Cys Gly Tyr Asn Asp Pro Arg Leu Ala Asp Tyr 15 10 15 150859-序列表.doc -15- & 201124532 <210> 88 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 88 Asp Pro lie His Asn cys Tyr Ser 1 5 Ala val Tyr Glu Tyr 20 <210> 89 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 89 Asp Pro lie His Asn cys Tyr Ser 1 5 Ala Val Tyr Asp Tyr 20 <210> 90 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 90 Asp ΡΓ0 丨 Phe His Asn cys Tyr Ser 1 5 Ala Val Tyr Glu Tyr 20 <210> 91 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 91 Pro val 1 Lys Val Ala Gly Leu Glu 1 5 <210> 92 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 92 Ser Va_ 1 Gly Ser Ser Trp Cys Ala 1 5
Gly Arg Tyr Tyr Ala Ser Pro Asp 10 15
Gly Asn Gly Tyr Asp Ser Pro Glu 10 15
Ser Ala Tyr Ser Ser Pro Glu 10 15
Asp Tyr 10
Asp Tyr 10 150859-序列表.doc 16- 201124532 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 93
Ser Leu Gly Ser Ser Trp cys Ala Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 94 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 94
Asp ser Leu Pro cys Tyr Tyr Asp Lys Met Val Tyr 1 5 i〇 y 'yr <210> 95 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 95
Asp ser phe Ala Cys Asp Tyr Gly Lys Met He Tyr Asp Tvr 1 5 l〇 y <210> 96 <211> 11 <212> PRT <213>美洲點 <400> 96 ser Leu Gly Ser ser Trp cys Ala Tyr Asp Tyr 1 5 l〇 <210> 97 <211> 15 <212> PRT <213>美洲乾 <400> 97
Asp Pro Leu Val Cys Gly Tyr Asn Asp Pro Arg Leu Ala Asp Tyr 15 10 15 <210> <211> <212> <213> 98 15 PRT 美洲駝 <400> 98 ser Gly ser Tyr Tyr Tyr pro Thr Asp Val His Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 99 <211> 16 <212> prt -17· 150859-序列表.doc 201124532 <213> 美洲駝 <400> 99
Pro Phe Asn Tyr Tyr Ser Asn Leu Cys Gly Val Asn Gly Val Asp Tyr 15 10 15 <210> 100 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 100
Asp Pro lie His Asn cys Tyr Ser Gly Ser His Tyr Tyr Ser Pro Glu 1 5 10 15
Ala val Tyr Glu Tyr 20 <210> 101 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 101
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Ser Asp Tyr Ala Ser Pro Glu 15 10 15
Ala val Tyr Glu Tyr 20 <210> 102 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 102
Pro Phe lie His Tyr ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Asn Asp Tyr 15 10 15 <210> 103 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 103 ser Gly ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 104 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 104
Ala Pro lie Phe Glu cys Pro ser Gly Glu lie Tyr Asp Tyr 1 5 10 -18- 150859-序列表.doc 201124532 <210> 105 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 105 ASp ΡΓΟ 丨lie 1 Ala Val Tyr
Asn cys Tyr Ser Gly Thr Tyr 5 10
Tyr Ala Ser Pro Glu 15
Tyr <210> 106 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 106
Asp
Pro
lie His
Asn Cys Tyr Ser Gly Ser Tyr 5 10
Tyr Ala Ser Pro Glu 15
Ala Val Tyr Asp Tyr 20 <210> 107 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 107
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val 1 5 10
His Glu Tyr Ala Tyr 15
<210> 108 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 108
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val 1 5 10
His Glu Tyr Ala Tyr 15 <210> 109 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 109
Pro Phe Ala Tyr Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 110 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 】50859-序列表.doc -19- 201124532 <400> 110
Pro Phe Asn His Tyr Ser Phe Leu Cys Gly Val Asn Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 111 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 111
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Glu Val Tyr Glu Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 112 <211> 15 <212> PRT <213>美洲欺 <400> 112
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> <211> <212> <213> 113 16 PRT 美洲駝 <400> 113
Pro Phe Glu Tyr Tyr ser Asp Leu cys Gly val Asn Gly Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 114 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 114
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Gly Gly Ser Tyr Tyr Ala ser Pro Glu 15 10 15
Ala Val Tyr Glu Tyr 20 <210> 115 <211> 12 <212> PRT <213> 美洲轮 <400> 115
Ala Gly Ala Ser ser Trp Cys Phe Pro Pro Gly Tyr 1 5 10 6 T 11 R 1 2 p <210> <211> <212> 20- 150859-序列表.doc 201124532 <213> 美洲駝 <400> 116
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly lie Tyr Tyr Ala Ser Pro Glu 15 10 15
Ala Val Tyr Asp Tyr 20 7 T州 7 I 5 R、:i1 II p 美 1 駝 <210> <211> <212> <21B> <400>
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 118 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 118
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Arg Tyr Tyr Ala Ser Pro Asp 15 10 15
Ala Val Tyr Asp Tyr 20 <210> 119 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 119
Pro Phe Ser Tyr Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 120 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 120
Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Ser Asp Val His Glu Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 121 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 121 pro Phe ser Tyr Tyr ser Gly Leu Cys Gly Val Asn Gly Val Asp Tyr 1 5 10 15 •21 - 150859-序列表.doc 201124532 <210> 122 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 122 ser Leu Gly ser ser Trp Cys Ala Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 123 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 123
Asp Pro Val His Asn Cys Tyr Ser Gly Arg Tyr Tyr Ala Ser Pro Asp 15 10 15
Ala Val Tyr Glu Tyr 20 <210> 124 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 124 ser Gly ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Ala Tyr 15 10 15 <210> 125 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 125
Pro Phe Ser His Tyr Asn Asp Leu Cys Gly Val Asn Ala lie Asp Tyr 15 10 15 <210> 126 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 126
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Asn Gly Tyr Asp Ser Pro Glu 15 10 15
Ala Val Tyr Asp Tyr 20 <210> 127 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲敢 22-
150859-序列表.doc 201 124532 <400> 127 pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asp Leu Cys Gly val Asn Gly Tyr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 128 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 128
Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asn Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 129 <211> 21 <212> PRT <213> 美洲馬它 <400> 129
Asp Pro Leu His Asn Cys Tyr Ser Gly Arg Gly Tyr Tyr Ser Pro Glu 15 10 15
Ala Val Tyr Glu Tyr 20
駝 13021S <210> <211> <212> <213> <400> 130
Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Ser Pro Glu 1 5 10 15
Ala Val Tyr Glu Tyr 20 <210> 131 <211> 16 <212> PRT <213> 美洲·!它 <400> 131
Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asn Leu Cys Gly val Asn Gly Tyr Asp Tyr 15 10 15 <210> 132 <211> 11 <212> PRT <213>美洲乾 <400> 132
Pro Gly lie Ala Ala cys Arg Gly lie His Tyr 15 10 g. 150859-序列表.doc -23- 201124532 <210> 133 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 133
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <21B>
13411PRTI 駝 <400> 134 Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <213〉 35lRTf 1 1 p美 駝 <400> 135 Pro Gly lie Ala Ala cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10 <210> 136 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 136
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 15 10 <210> 137 <211> 17 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 137
Lys Pro Asn Leu Lys Tyr Gly Ser Tyr Trp Pro Pro Arg Gly Tyr Asp 1 5 10 15
Tyr <210> 138 <211> 17 <212> PRT <213> 美洲ΊΕ <400> 138
Lys Pro Asn Leu Lys Tyr Gly Ser Thr Trp Pro Pro Arg Gly Tyr Asp 15 10 15 150859-序列表.doc -24- 201124532
Tyr <210> 139 <211> 17 <212> PRT <213> 美洲駝 <4〇〇> 139
Lys Pro Asn Leu Lys Tyr Gly ser Tyr Trp Pro Pro Arg Gly Tyr Asp 15 10 15
Tyr <210> 140 <211> 17
<212> PRT <213> 美洲駝 <400> 140
Lys Pro Asn Leu Lys Tyr Gly ser Asp Trp Pro Pro Arg Gly Tyr Asp 15 10 15
Tyr <210> 141 <211> 8 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 141
Arg Thr Ser Arg Ser Pro Arg Pro <210> 142 <211> 15 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 142
Ser Asn Tyr Tyr Ser Val Tyr Asp Asp Arg Pro Val Met Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 143 <211> 7 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 143
Gly Ser Gly Ser Trp Gly Val 150859-序列表.doc 25- s 201124532 <210> 144 <211> 19 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 144
Asn Glu Gly Tyr Cys Ser Gly Tyr Gly Cys Tyr Glu Asp Ser Gly Gin 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 145 <211> 19 <212> PRT <213>美洲乾 <400> 145
Asn Glu Gly Tyr Cys Ser Gly Tyr Gly Cys Tyr Glu Asp Ser Gly Gin 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 146 <211> 12 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 146
Gly Gly Arg Ser Phe Leu Pro phe val Pro Ala Tyr 1 5 10 <210> 147 <211> 19 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 147
Asn Glu Gly Tyr Cys ser Gly Tyr Gly Cys Tyr Glu Asp Ser Gly Gin 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 148 <211> 19 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 148
Asn Gly Gly Tyr Cys Ser Gly Tyr Gly Cys Tyr Glu Asp Ser Gly Gin 1 5 Tyr Asp Tyr 10 15 150859-序列表.doc -26- 201124532 <210> 149 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 149
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10 <210> 150 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 150
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10
<210> 151 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 151
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10 <210> 152 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 152
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro lie Glu Tyr Ala Tyr 10
<210> 153 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 153
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly
Pro lie Glu Tyr Gly Tyr 10 <210> 154 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 154
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly
Pro His Glu Tyr Gly Tyr 10 <210> 155 150859-序列表.doc -27- 201124532 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 155
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Ala Tyr 1 5 10 <210> 156 <211> 12 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 156
Pro Ala Pro Gly Ser Ser Gly Tyr Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 157
<211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 157
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 <210> 158 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 158 10
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Ala Tyr 15 10 <210> 159 <211> 14
<212> PRT <213> 美洲轮 <400> 159
Leu Glu Tyr Gly Tyr 10
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro <210> 160 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲敢 <400> 160
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 1 5 10 <210> 161 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 150859·序列表.doc -28- 201124532
<400> 161 Pro Arg Gly Trp 1
Gly Pro Thr Gly
Pro
His Glu Tyr Gly Tyr 10 <210> 162 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 162
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro
His Glu Tyr Gly Tyr 10 <210> 163 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 163
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly
Pro His Glu Tyr Gly Tyr 10 <210> 164 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 164
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His 15 10
Glu Tyr Ala Tyr <210> 165 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 165
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His 1 5 10
Glu Tyr Gly Tyr <210> 166 <211> 14 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 166
Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His 1 5 10
Glu Tyr Ala Tyr <210> 167 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 167
S 150859-序列表.doc -29- 201124532
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly
Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 10 15 ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala 20 ser Gly Phe Thr Leu Asp Thr Tyr 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala 35 40
Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 45 ser cys lie ser ser ser Asp Glv 50 55
Ser Thr Asn Tyr Ala Asp ser val 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ara 65 70 a ASP Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
Leu Gin Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Pro Phe Ala Tyr Tyr ser Asd Leu Cys Gly Val Asn Gly Val 100 i〇5 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 168 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 168
Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Glv Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45
Ser Cys lie Asn Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala lie Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe ser Tyr Tyr ser His Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val Ser Ser 115 120 125 150859-序列表.doc -30- 201124532 <210> 169 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 169
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45 ser Cys lie Ser Ser ser Asp Gly ser Thr Ala Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Ser Tyr Tyr Ser Ser Leu Cys Gly Val Asn Glu Tyr 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 170 <211> 124 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 170
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala lie Ser Gly Phe Thr Leu Asp Leu His 20 25 30
Val lie Gly Trp Leu Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys -31 - 150859-序列表.doc 201124532 85 90 95
Ala Ala Pro Trp Asp Ser Trp Tyr Cys Gly lie Gly Asn Asp Tyr Asp 100 105 110
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser ser 115 120 <210> 171 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 171
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45
Ser Cys lie Arg Gly Ser Asn Gly Ser Thr Gly Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe lie His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 172 <211> 131 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 172
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Leu Asp Lys Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 45 -32- 150859-序列表.doc 201124532
Ser Cys lie Ser Ser Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Val Asp ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Ser Ser Tyr Tyr Tyr 100 105 110
Ser Pro Glu Ala Val Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr 115 120 125
Val Ser Ser 130
<210> 173 <211> 125 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 173
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45
Ser Cys lie Thr Ser Ser Asn Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Ala His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 174 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 174 150859-序列表.doc 33·
S 201124532
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Glu Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg 4U Ser cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ser Tyr 2〇 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Leu val 35 40 45
Ala Val lie Se「 Asn Gly Gly lie Thr Asn Tyr Pro Asn Ser Val Lys 5〇 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys Phe 85 90 95
Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp val His Glu Tyr Asp Tyr 100 105 no
Trp Cly Cln Gly Thr cln val Thr Val Ser Ser <210> 175 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 175
Glu Val
Gin Leu Val
Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45
Ser cys lie Asn ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asp Leu cys Gly val Asn Gly Tyr 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser -34- 150859-序列表.doc 201124532 115 120 125 <210> 176 <211> 130 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 176
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly lie 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser Arg Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ser 100 105 110
Pro Glu Ala Val Tyr Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val 115 120 125
Ser Ser 130 <210> 177 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 177
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr His 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 150859-序列表,doc -35-
S 201124532
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Ser His Tyr ser Asp Leu cys Gly val Asn Ala lie 100 105 HO
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val Ser Ser 115 120 125 <210> 178 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲驼 <400> 178
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp val 35 40 45
Ser Cys lie Asn ser ser Asp Gly ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 HO
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser ser 115 120 125 <210> 179 <211> 123 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 179
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15 ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Asn ser Tyr 20 25 30 •36- 150859-序列表.doc 201124532
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Trp Val
Ala Phe Ser Thr Gly f y Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser val Lys 3U 55 60 gly Arg Phe Thr lie ger Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tvr Leu
65 70 75 y gQ
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Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val Phe Glu Tyr asd Tvr 100 105 no μ yr
Trp Gly r Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 180 <211> 130 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 180 Glu Val 1 Gin Leu val 5 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu val Gin Ala Gly 15 Gly Ser Leu i Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Ala val Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly val 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser Arg Gly Gly ser Thr Phe Tyr Ala Asp ser Val
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asn Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tvr rv*； 85 90 95 Y
Ala Ala His Pro Leu Gin Asn Cys Cys Gly Gly Ser Ala Tyr Ala ser 100 105 110
Pro Glu Ala Val Tyr Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val 115 120 125
Ser ser 130 <210> 181 ]5〇859-序列表.doc •37- 201124532 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 181
Glu val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Glv Glv 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tvr Tvr 20 25 3〇
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ttd val 35 40 45
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Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Ala Tyr Tyr Ser Asn Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly T.hr 空)g Val Thr Val Ser 駝 20 T硎 83 R ,7, 1 1 p美 <210> <211> <212> <213> <400> 182
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly 1 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 20
Ala Val Gly Trp Phe Arg Gin Ala 35 40
Ser cys lie ser ser Arg Gly Gly 50 55
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro 85
Gly Gly 10 Leu val Gin Ala Gly 15 Gly Ser 25 Giy Phe Ala Leu Asp 30 Tyr Tyr Pro civ Lys Gl u Arg 45 Glu Gly Val ser Thr Tyr Tyr 60 val Asp Ser val Asp Asn Ala 75 Lys Asn Thr Val Tyr 80 Glu ASP Thr Ala val Tyr Tyr Cys 90 95 150859·序列表 d〇c -38- 201124532
Ala Ala Asp ile His Asn cys 丁Ser Gly Asn Tyr Ty「Ala se「 105 110
Pro Glu Val Tyr Asp Tyr 丁〔p Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val 120 125
Ser Ser 130 <210> 183 <211> 124 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 183
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp asp Tvr 2〇 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Glv Val 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser His Asp Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tvr cvs 85 90 95
Ala Ala Asp Pro Leu Val Cys Gly Tyr Asn Asp Pro Arg Leu Ala Asd 100 105 110 K
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser ser 115 120 <210> 184 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 184
Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Glv Glv 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tvr 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45 -39- 150859-序列表.doc 201124532 ser cys He Thr Ser Ser Tyr Gly ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser val
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro clu Asp Thr Ala Val Tyr Cys
Ala Ala Pro Phe Ala His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly val Asn τ',” 100 105 110 Y yr
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser Ser 115 120 125 <210> 185 <211> 125 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 185
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr His 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arq Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp val 35 40 45 ser cys lie ser ser Ser Asp Gly Arg Thr Ala Tyr Ala Asp Ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Thr His Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Glu Tyr 100 105 110 ASP Tyr Trp cly Gin Cly Thr cln val Thr Val Ser ser <210> 186 <211> 120 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 186
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 l〇 15 150859-序列表.doc -40- 201124532 ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly phe Thr phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Gly lie 35 40 45
Gly cys lie ser ser ser Gly Gly ser Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Thr Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly ile His Tvr TrD Glv Gin 100 105 y no y
Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 187 <211> 120 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 187
Lys Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Glv Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 3〇
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly lvs Glu Pro Glu Glv Ile 35 40 45
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 95
Ala Thr Pro Gly Ile Ala Ala Cys Arg Gly ile His Tyr Thr Gly Gin 100 105 no
Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 150859-序列表.doc -41 - 201124532 <210> 188 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 188
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Glv gIv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asn Tvr 20 25 30 y
Asp Met ser Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu TrD val 35 40 45 ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cvs 85 90 95
Ala Thr Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Glv Tvr 100 105 110 y
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 189 <211> 124 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 189
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tvr 20 25 30 y
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu phe Val 35 40 45
Ala Ala lie Ser Trp ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60
Lys Gly Arq Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Cvs 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cvs 85 90 95 -42- 150859-序列表.doc 201124532
Ala Ala Ser Phe Gin Ser Gly Ala Ala Pro Gly Ala Asn Phe Tyr Asp 100 105 110
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 190 <211> 121 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 190
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Glu Gly Gly ser Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45
Ala Ala lie Asn Trp Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Ala Pro Gly Ser Ser Gly Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 191 <211> 121 <212> PRT <213> 美洲駝. <400> 191
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45
Ala Ala lie Phe Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60 -43 - 150859-序列表.doc 201124532
Arg Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp lie Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tvr Tvr cvs 85 90 95
Ala Ala Pro ser Pro Gly Ser Ser Gly Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Glv 100 105 lio y
Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 192 <211> 123 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 192
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Thr Gly Asp 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
Arg Met Gly Trp Phe Arg Gin Gly Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe val 35 40 45
Ala Ala lie Gly Arg Asn Gly Gin Asn Thr Tyr Tyr Thr Asp ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr val Thr Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Met Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Thr cys
Ala Ala ser Leu Arg cly Trp Asp Thr Thr Arg He Asp Tyr clu Tyr
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Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly riV Phe Thr Phe Asp Val Tyr Ser Leu Arg Leu ser Cys Thr Ala ser ^ y 150859·序列表.doc -44- 201124532 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro gIu Glv Πρ 35 40 45 y ser Cys lie ser ser Ser Gly Ser lie Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tvr cvs 85 90 95
Ala Thr Pro Gly lie Ala Ala cys Arg Gly lie Hi's Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Gin Val Thr val ser Ser 115 120 <210> 194 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 194
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asn Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Asp Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe 十hr lie ser Arg Asp Asn A]a Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys
Ala Thr Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 100 105 no
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val ser ser
115 120 <210> 195 <211> 121 <212> PRT 150859-序列表.doc -45- s 201124532 <213> 美洲駝 <400> 195
Glu Val Gin Leu val Glu ser Arg Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly IS 10 15
Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala ser Gly Arg Thr Phe Asn ser Tyr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45
Ala Thr lie Asn Trp Ser Gly Gly ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ala Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tvr Tvr Cvs 85 90 95
Ala Ala Pro Ala Pro Gly Ser Ser Gly Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly 100 105 no
Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser Ser 115 120 <210> 196
<211> 121 <212> PRT <213>美洲駝 ‘ <400> 196
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly ser val Gin Ala Gly Gly 15 10 is ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tvr 20 25 3〇 y
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe val 35 40 45
Ala 化 val Tyr Trp ser gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Aia Asp Ser val 55 60 gg Gly Arg Phe Thr ser Arg Asp Asn a Lys Asn Thr val Tyr 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tvr Tvr rv«； 85 90 J H y
Ala Ala p「〇 I品 pr〇 Gly ser se「Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly • 46-
150859·序列表.doc 201124532
Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 197 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 197 Glu val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tvr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp ser val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Asn Arg Ala Ala Asp Thr Arg Leu Gly Pro Tyr Glu Tyr Asp Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 198 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 198
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asn Tyr 20 25 30
Asp Met ser Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45 ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly lie Thr Tyr Tyr Ala Asp Phe Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 150859-序列表.doc -47-
S 201124532 65 70 75
Leu Gin Met ser ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tvr tw 产 85 90 yr l\r CVS
Ala Thr Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tvrt、， 100 105 li〇 y Ty「
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 199 <211> 120 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 199
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 B0
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Gly He 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser Ser Gly Gly lie Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Thr Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr Thr Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 200 <211> 122 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 200
Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly ser Ala Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Ser Ser Thr Tyr 20 25 30 -48- 150859-序列表.doc 201124532
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu His Glu Phe val 35 40 45
Ser Ala lie Gly Arg Gly Gly Ala Thr ser Tyr Gly Asp ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe.Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lvs Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Gin Leu Glu Asp Thr Glv Asp Tyr Tyr Cys 85 90 J 95
Val Ala Gly Arg Gly Phe Tyr His Asp Tyr ser ser Tyr Glu Tyr Arg 100 l〇5 110
115 120 <210> 201 <211> 118 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 201 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin 10
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Gly Tyr Tyr 20 25 30
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ser cys He sen Ser Arg Asp cly Ser Arg Tyr Tyr Ma Asp ser Val
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 80
Leu Arg Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tvr Tvr cvs 85 90 95
Ala Ala Gly Pro Asp Cys Ser Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Glv Thr 100 105 no
Gin Val Thr val ser Ser 115 <210> 202 <211> 123 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 202 d
Of. 150859-序列表.doc - 49 - 201124532
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Thr Glv Asd 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala Ser Gly ser Thr Phe Ser Asn Tvr 20 25 30
Arg Met Gly Trp Phe Arg Gin Gly Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe val 35 40 45
Ala Ala lie Gly Arg Asn Gly Gin Asn Thr Tyr Tyr Thr Asd Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Thr Arg Asp Asn Ala Lvs Asn Met Val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp ser Ala val Tvr Thr cvs 85 90 95
Ala Ala ser Leu Arg Gly Trp Asp Thr Thr Arg lie Asp Tyr Glu Tyr 100 105 no
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 203 <211> 121 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 203
Glu Val Gin Leu Met Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Glv Glv 1 5 10
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly phe Thr phe Ser Ser Tyr 20 25 3〇
Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp val 35 40 45
Ser Arg lie Thr ser Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Arg Asp ser val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tvr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tvr Tvr Cvs Ala 85 90 95
Lys Ala Arg Cly Asp He Asp Val Tyr Thr Leu Ser Asp Ser Arg Gly
Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 150859-序列表.d〇c -50- 201124532 115 120 <210> 204 <211> 121 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 204 Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
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150859-序列表.doc 201124532
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150859-序列表.doc 201124532
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Ala Thr Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 219 <211> 119 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 219
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
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Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Leu Val 35 40 45 val Gly lie ser Ser Asp Gly ser Thr His Tyr Ala Asp ser Ala Lys 50 55 60 -59- 150859-序列表.doc 201124532 cly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr val Tyr Leu
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Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala ser Gly lie Arg Phe ser lie Asn -60 - 150859-序列表.doc 201124532 20 25 30
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Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 223 <211> 128 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 223 150859-序列表.doc -61 - ί=· 201124532
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tvr τ', 2〇 ·>ς 'yr -64- 150859-序列表.doc 30 201124532
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Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val Ser ser 115 120 125 <210> 229 <211> 125 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 229
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Glv 15 10 15 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tvr 20 25 30
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Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser Ser 115 120 125 <210> 230 <211> 129 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 230 -65- 150859-序列表.doc 201124532
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp asd Tvr 20 25 30
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Asp Tyr Trp .Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 233 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 233
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Gly Glv 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala ser Gly ser Thr Phe Thr ser Tyr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Leu val 35 40 45
Ala Ala lie Ser Ser Asp Asp ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Cys val Lys 50 55 60
S 150859-序列表.doc -67- 201124532
Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Tyr Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80
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Ala Ala lie Ser Asn Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys -85- 150859-序列表.doc 201124532 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Phe 85 90 95
Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr asd Tvr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 265 <211> 125
<212> PRT <213>美洲駝 <400> 265
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp val 35 40 45
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Asn Tyr Tyr Ser Asn Leu Cys Gly Val Asn Gly Val 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 266 <211> 130 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 266 Glu Val 1 Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 1 5 10 15 150859-序列表.doc -86- 201124532 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala Ser Gly Phe ser Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly lie 35 40 45
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Pro lie His Asn cys Tyr Ser Gly ser His Tyr Tyr Ser 100 105 110
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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Asp IS 10 15
Ser Leu Arg Leu Ala Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Ala Val Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 45 ser Cys lie Ser Ser Arg Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Leu 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Ser Asp Tyr Ala Ser 100 105 110
Pro Glu Ala Val Tyr Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val 115 120 125 -87- 150859·序列表.doc 201124532 ser Ser 130 <210> 268 <211> 125 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 268
Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Asp
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp val
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Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asn Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 g〇
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tvr Tvr rvc 85 90 y 95
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Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 269 <211> 123 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 269
Glu Val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Glv Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Asn Ser Tvr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Leu val 35 40 45
Ala Val lie Ser Ser Gly Ser val Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val lvs 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Ser Leu 88 - 150859-序列表.doc 201124532 65 70 75 go 95
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Tyr ser Gly ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp val His Glu Tyr Αςη τχ/r y 100 105 ixo Asp Tyr
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Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin pr〇 Gly Glv 1 5 10 ις y ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Sen Gly Phe Arg Leu Asp Tyr Tyr
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala 35 40 pro Gly Lys Glu Arg g!u Trp val ser cys Met Gly ser ser val Arg 50 55 ser Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly phe Thr Leu Asp Tyr Tvr 20 25 30 y 150859-序列表.doc 89-
S 201124532
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Glv Vai 35 40 45 3 αι
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Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly val Tyr Tvr cve 85 90 95 Υ
Ala Ala Asp Pro lie His Asn Cys Tyr Ser Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser 100 105 110
Pro Glu Ala Val Tyr Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val 115 120 125
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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Phe Ala Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Ala Val Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 45
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Leu Glu Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp pro lie His Asn cys Tyr Ser Gly ser Tyr Tyr Ala ser 100 10S 110
Pro Glu Ala Val Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val 115 120 125
Ser Ser 130 -90- 150859-序列表.doc 201124532 <210> 273 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 273
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Cly Ser Thr Phe s〇er ser Tyr
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arq gim . 35 40 453 Leu νΛ,
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Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Gly Gly 1 5 10 icy
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Ser Ser Phe ser Tvr 20 25 3〇 y
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Leu Val 35 40 45
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Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys Phe -91- 150859-序列表.doc 85201124532 90 95
Tyr ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr
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Trp Gly Gly Thr· Gin val Thr val ser Ser 丄丄》 120 <210> 275 <211> 125 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 275
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
Ser Leu A「g j^u Ser cys Ala Ala se「Gly Phe Ala Leu Asp Tvr Tvr 20 25 30 y
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cvs 85 90 95 3
Ala Ala Pro Phe Ala Tyr Tyr Ser Asp Leu Cys Gly Val Asn Glu Tvr 100 105 110 y
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 276 <211> 125 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 276
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Glv gIv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala ser Gly Phe Ala Leu Asp Gly His 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp val 35 40 45 -92- 150859-序列表.doc 201124532
Ser Cys lie Asn Ser Gly Asp Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
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Leu Gin Met Asn Arg Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Asn His Tyr ser Phe Leu cys Gly val Asn Glu Tyr 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val Ser Ser 115 120 125 <210> 277
<211> 123 <212> PRT <213>美洲敢 <400> 277
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Gly Glv 1 5 l〇 15 V
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala Ser Gly ser Thr Phe ser Ser Tvr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Leu Ala
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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Glv Glv 1 5 10 isy y -93- 150859·序列表,doc 201124532
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin val Pro Gly Asn Gin Arg Glu Leu val 35 40 45
Ala lie Ser ser Gly Asp ser Ala Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 5〇 55 60
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Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Phe 85 90 95
Tyr Ser Gly ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Asp Tyr 100 105 110
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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
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Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asp Leu cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 280 -94- 150859-序列表,d〇c 201124532 <211> 130 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 280
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Glv Gly G"ly Leu val Gin Ala Gly G"*y 1 5 l〇 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Phe ser Leu Asp Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly 35 40 45
Ser Cys lie Ser Gly Arg Gly ser Asn Thr Tyr Tyr Leu Asp ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ara Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val jyr 65 70 75 8U
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr T^r cys
Ala Ala Asp Pro lie His Asn cys Tyr Gly Gly ser Tyr Tyr Ala ser 100 105 110
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Pro Glu Ala Val Tyr Glu Tyr Tro Gly Gin Gly Thr Gin Val 115 120 125
Ser ser 130 <210> 281 <211> 120 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 281
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly 1 5 l〇 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 45 ser Cys lie Ser Ser Ser Gly ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 -95- 150859-序列表.doc 201124532
Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tvr Cvs Ala 85 90 95 lie Ala Gly Ala Ser Ser Trp cys Phe Pro Pro Gly Tyr Tro Glv Gin 100 105 no ^
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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Glv Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Leu Asd Tvr Tvr 20 25 30 y
Ala Val Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Glv val 35 40 45 y
Ser Cys lie Ser Ser Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala asd ser val 50 55 60 1
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tvr rvc 85 an «.i 90 95
Ala Ala Asp Pro lie His Asn cys Tyr Ser Gly lie Tyr Tyr Ala ςρρ 100 105 110
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Ser ser 130 <210> 283 <211> 123 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 283
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Glv 1 5 10 15 y ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Ser Thr Phe Ser ser Tvr 20 25 30 y -96- 150859-序列表.doc 201124532
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Val Lys Gin Arg Glu Leu val 35 40 45
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Gly Arg Phe Thr He ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr Leu 65 70 75 80 Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys Phe 85 90 95 Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Asd Tvr 100 105 li〇 P y Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 284 <211> 130 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 284 Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 15
ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tvr Tvr 20 25 30 y Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly val ser cys He Ser Ser Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Glu Asp ser val
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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Leu Asp His Tyr 20 25 30
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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Ser Thr Phe Ser ser Tyr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Leu val 35 40 45
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Gly Arg phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Phe 85 90 95 -98- 150859-序列表.doc 201124532
Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr pro ser Asp Val His Glu Tyr Asp Tvr 100 105 110 y
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 287 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 287
Glu Val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly gIv 1 5 i〇 15 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tvr 20 25 30
Asn lie Gly Trp phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 4Q 45
Ser lie Ser Ser Ser Asp Gly ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cvs 85 90 95 y
Ala Ala Pro Phe ser Tyr Tyr sen cly LeU Cys Cly val Asn cly val
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 288 <211> 120 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 288
Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 ser Leu Arg， Leu sen cys Ala Ala Ser cly Phe Thn Leu cly val Tyr
Ala Thr gly Trp Phe Arg Gin Pro Giy Lys Glu Arg Glu Trp val ser 泣s lie ser Gly ser A|p Gly ser Thr Trp Tyr Ala Asp Ser val jU ϋ 60 150859-序列表.doc -99- 201124532
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Leu Gin Met Asn Ser Pro Lys Ser Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Leu Ser Leu Gly Ser Ser Trp Cys Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Gin Val Thr val Ser ser 115 120 <210> 289 <211> 130 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 289
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 45 .
Ser Cys lie Ser Gly Arg Gly Gly Se「Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val 80
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Ala Ala Asp Pro Val His Asn cys Tyr ser Gly Arg Tyr Tyr δι, 100 l〇5 110 U Ser Pro ASP Ala Val Tyr Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Τ^Γ Val
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Glu Val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro r；!.. 1 5 10 i5y G'y •100- 150859-序列表.d〇c 201124532
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Sen Gly Ser Thr Phe ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gin Arg Glu Leu val 35 40 45
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Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr lie Cys Phe 85 90 95
Tyr ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Thr Asp Val His Glu Tyr Ala Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 291 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 291
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr His 20 25 30
Asn lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Ser His Tyr Asn Asp Leu Cys Gly Val Asn Ala lie 100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 -101 - 150859-序列表.doc 201124532 <210> 292 <211> 1B0 <2X2> PRT <213>美洲駝 <400> 292
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Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Glv Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu His Tyr Tyr 20 25 B0
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Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr 65 70 75 80 -102- 】50859-序列表.doc 201124532
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Pro Phe Glu Tyr Tyr ser Asp Leu cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 n〇 Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val ser Ser 115 120 125 <210> 294 <211> 125 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 294 Lys Val Gin Leu Val Glu 1 5
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
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Ser cys lie Asn ser ser Asp Gly ser Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys
Ala Ala Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asn Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 110 Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser ϋ 115 120 125 <210> 295 <211> 130 <212> prt <213>美洲乾 <400> 295 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly IS l〇 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 20 25
Phe Thr Leu Asp Lys Tyr ser lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 4b 150859-序列表.doc -103- 201124532 ser Cys lie Ser Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr val Asp ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp AS〇 Ala Lys Asn Thr Val 65 70 75
Leu Gin Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu ASP Thr Ala val Tyr Tyr cys
Ala Ala Asp Pro Leu His Asn Cys Tyr ser Gly Arg Gly Tyr Tyr ser 100 105 110 pro Glu Ala val Tyr Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val 115 120 125
ser Ser 130 <210> 296 <211> 130 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 296
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu Va"* G"*n Ala Gly 1 5 l〇 15
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Ala Ala Asp Pro ile His Asn Cys Tyr ser Gly ser Tyr Ty, Ala Ser
Pro Glu Ala Val Tyr Glu Tyr Trp Gly cln Gly Thr Gin Val Thr Val ser ser 130 •104- 150859-序列表.doc 201124532 <210> 297 <211> 125 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 297
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr 20 25 30
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Asn Leu Cys Gly Val Asn Gly Tyr 100 105 110
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Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tvr 20 25 30
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Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cv«： 85 90 95 -105- 150859-序列表.doc 201124532
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Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 299 <211> 120 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 299 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 1 5 10
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Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr 20 25
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Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu 35 40
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Ala Asp Ser Val 150859-序列表.doc -106- 201124532
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Ala Thr Pro Gly He Ala Ala Cys Arg Gly Ile His Tyr Thr Gly Gln
Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 301 <211> 120 <212> PRT <213>美洲敢
<400> 301
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Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Gly ne
Ser gs Ile Ser ser ser gly ser Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp ser val
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 90 95
Ala Thr Pro Gly Ile Ala Ala cys Arg Gly lie His Tyr Trp Gly Gin
Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 302 <211> 120 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 302
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Glv 1 5 10 15 y
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
150859-序列表.doc -107- 201124532
20 25 BO
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Glu ile 35 40 45 ser cys Ile Ser Ser ser Gly Gly He Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tvr Tvr Cvc 85 90 95 ys
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Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Gly Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Thr Ser Glu Arg Thr Val Ser Arg Tvr 20 25 30
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Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 304
<211> 126 <212> PRT -108- 150859-序列表.doc 201124532 <213> 美洲駝 <400> 304
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Thr Thr Ser Glu Arg Thr Val Ser Arg Tyr 20 25 30
Ser Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val 35 40 45
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Val Ala Lys Pro Asn Leu Lys Tyr Gly Ser Thr Trp Pro Pro Ara Glv 100 105 HO
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 125 <210> 305 <211> 126 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 305
Glu val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 l〇 15
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Ala Ala Lys Pro Asn Leu Lys Tyr Gly ser Tyr Trp Pro Pro Arg Gly -109- 150859-序列表.doc 5 201124532
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 306 <211> 126 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 306
Glu val Gin Leu Val Lys Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 1 5 l〇 15 ser Leu Arg Leu ser cys Thr Thr Ser Glu Arg Thr val ser Arg Tyr 20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe A「g Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val
35 40 4S
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Lys Pro Asn Leu Lys Tyr Gly Ser Asp Trp Pro Pro Arg Gly 100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 125 <210> 307 <211> 117 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 307
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
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Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
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150859-序列表.doc 201124532 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tvr Phe Cvs 85 90 95
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Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe ser Ara Tvr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45
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Ala Ala ser Asn Tyr Tyr ser val Tyr Asp Asp Arg Pro val Met Asd 100 105 110
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Glu Val Gin Leu Met Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Glv 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu ser Cys Val Ala Ala Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tvr 20 25 30 -Ill - 150859-序列表.doc 201124532
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Ser Val lie Ser Pro Asp Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Gly Asn A1a Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80
Leu Gin Met Thr Gly Leu Lys Ser Glu Asp Ala Ala val Tyr Tvr cvs 85 90 95
Ala Arg Gly Ser Gly Ser Trp Gly Val His Gly Gin Gly Thr Gin Val !〇〇 105 no
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Glu val Gin Leu Val Glu ser Gly cly Gly Leu val Gin Ala Glv Glv 丄 b 10 15 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Arg Thr Phe ser Asn Tvr
25 3〇 J
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Gly Gin Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser ser US 120 125 <210> 311 <211> 128 <212> PRT <213>美洲乾 <400> 311 -112-
150859-序列表.doc 201124532
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly
Ser Leu Arg Leu ser cvs Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 lie Met Gly Trp Phe Ara Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45
Ala Gly lie ser Arg Tyr Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Arg Met Asn ser Leu Lys pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys
Ala Ala Asn Glu Gly Tyr cys ser Gly Tyr Gly Cys Tyr Glu Asp ser 100 10S 110
Gly Gin Tyr Asp Tyr Tro Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser Ser 115 120 125 <210> 312 <211> 121 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 312
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Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser ser -113- 150859-序列表.doc 201124532 115 120 <210> 313 <211> 128 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 313
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Glv 1 5 l〇 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Arg Thr Phe ser Asn Tvr
20 25 BO lie Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45
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Leu Arg Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tvr Tvr Cvs 85 90 95
Ala Ala Asn Glu Gly Tyr Cys Ser Gly Tyr Gly Cys Tyr Glu Asd Ser 100 105 no
Gly Gin Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 125 <210> 314 <211> 126 <212> PRT <213> 美洲駝
<400> B14
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Glv Glv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Leu Tyr lie Met 20 25 30
Gly Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly 35 40 45 lie Ser Arg Tyr Gly Asp lie Thr Tyr Ala Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60
Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Ser Val Lys Asn Thr Val Tyr Leu Arg 65 70 75 80 150859-序列表.doc -114- 201124532
Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr A】a Val 丁丁Cys Ala 85 H 90 95
Asn Gly Gly Tyr cys ser Gly Tyr Gly cys Ty「Glu Asp Gly Gln 100 105 i±u
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val 丁hr val Ser 115 120 ±Zb <210> 315 <211> 120 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 315
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly p^e Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala He Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Gly lie ser cys He Ser ser ser Gly Gly He Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val
Lys Gly Arg phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Thr Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr Thr Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 316 <211> 120 <212> PRT <213>美洲乾 <400> 316
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala ser Gly phe Thr Phe Asd Asp Tyr 20 25 3〇
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Glu 工1e 35 40 45 -115- 150859-序列表.doc 201124532 ser cys lie Ser Ser Ser Gly Gly lie Thr Tyr Tyr Ala asd spt 50 55 60 va| ll
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val 65 70 75
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tvr Tvr rwc· 85 90 g? V
Ala Thr Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr Thr Glv Gin 100 Ϊ05 110 Q\y Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 317 <211> 120 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 317
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Gly Gly 15 l〇 15
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Phe 20 25
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Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr T^r Cys
Ala Thr Pro Gly He Ala Ala Cys Arg Gly He His Tyr Thr Gly cln
Gly Thr Gin Val Thr Val ser Ser 115 120 <210> 318 <211> 123 <212 > PRT <213> 美洲駝 <400> 318 Ί /*"1
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Giy 15 l〇 15 150859-序列表.doc -116· 201124532
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro lie Glu Tyr Ala Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 319 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 319
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro lie Glu Tyr Gly Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 -117- 150859-序列表.doc
I 201124532 <210> 320 <211> 123 <212> prt <213> 美洲駝 <400> B20
Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pr〇 Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser ΤΥΓ 20 25 30
Asp Met Ser Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Giv pro Glu Trp val 35 40 45 ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly ser Thr Tyr Tyr Ala Asp ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lvs Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Glv val Tyr ser cys 85 90 95
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 321 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 321
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin ser Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95 -118- 150859·序列表.doc 201124532
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Ala Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser ser 115 120 <210> 322 <211> 121 <212> PRT <213>美洲駝 <400> 322
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe ser ser Tyr 20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45
Ala Ala lie Asn Trp ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp ser val 50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Pro Ala Pro Gly Ser Ser Gly Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 323 <211> 120 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 323
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Val Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Gly lie 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser ser Gly Ser lie Thr Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60 150859-序列表.doc -119-
S 201124532
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp ser Ala Lys Asn Thr val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Thr Pro Gly lie Ala Ala cys Arg Gly lie His Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 324 <211> 123 <212> PRT <213>美洲敢 <400> 324
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asn Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg His Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Val
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr TV 85 Qn 95 90 r cys
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Ala Tyr 100 105 HO
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 325 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 325
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro ^]y 1 5 10 15
Tyr
Ser Leu A「g Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly se「 -120· 150859-序列表.doc 201124532 20 25 30
Asp Met Ser Trp val Arg Gin Ala Pro Lys Gly pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Thr 丁ΤΥΓ Tyr Ala Asp Ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp A5n Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80
Leu Cln Met Asn Ser Leu Lys Pro Clu MP Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro Leu Glu 乂 Gly Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser 115 120 <210> 326 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 326
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gln Pr0 15 10 丄5 ser Leu Arg Leu Se「 cys Ala Ala ser Gly phe Thr phe 封y Asn Tyr 20 25 川
Asp Met Ser Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Glu TrP Val 35 40 4i ser Ala lie Asn ser Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lvs Glv Ara Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Thr Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 100 l〇5 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 327 <211> 123
<212> PRT -121 - 150859-序列表.doc 201124532 <213> 美洲駝 <400> 327
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asn Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly lie Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Asn Leu Gin Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Thr Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser Ser 115 120 <210> 328 <211〉 123 <212> PRT <213> 美洲乾 <400> 328
Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn ser Gly Gly Gly lie Thr Tyr Tyr Ala Asp Leu val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 100 105 110 -122- 150859-序列表.doc 201124532
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser Ser 115 120 <210> 329 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 329
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asn Tyr 20 25 30
Asp Met ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly lie Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val .50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Thr Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 330 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 330
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp ser val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 150859-序列表.doc -123 - S- 201124532 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Ala Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser Ser 115 120 <210> 331 <211〉 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 331
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 . 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asn Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Pro Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Thr Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Gly Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser ser 115 120 <210> 332 <211> 123 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 332
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30 124 150859-序列表.doc 201124532
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ser Cys 85 90 95
Ala lie Pro Arg Gly Trp Gly Pro Thr Gly Pro His Glu Tyr Ala Tyr 100 10S 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser Ser 115 120 <210> 333 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 333
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Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tyr Asp His 1 5 10 <210> 337 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 337
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 338 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 338
Arg Ala Pro Asp Thr A「g Leu Ala Pro Ty「Leu Tyr Asp Tyr 1 5 10
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Ala Pro Tyr Glu Tyr Asp His 1 5 <210> 340 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 340 10
<210> 339 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 339
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Arg Pro Tyr Leu Tyr Asp Tyr 15 10 <210> 341 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 341
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tyr Asp His 15 10 -126- 150859-序列表.doc 201124532 <210> 342 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 342
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Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Arg Pro Tyr Glu Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 344 <211> 14 <212> PRT <213> <220> 人工 <223> 突變之美洲駝序列 <400> 344 Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tyr Asp His 1 5 10 <210> 345 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 345 Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Gly Pro Tyr Leu Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 346 <211> 14 <212> PRT <213> <220> 人工 <223> 突變之美洲駝序列 <400> 346 <210> 343 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 343
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Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Gly Pro Tyr Leu Tyr Asp His 1 5 10
Arg Ala pro Asp Thr Arg Leu Ala Pro Tyr 1 5 10
Leu Tyr Asp His
<210> 348 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 348 <210> B49 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3> 突變之美洲駝序列 <400> 349
Leu Tyr Asp Tyr
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Ala Pro Tyr 15 10 <210> 350 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> B50
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Arg Pro Tyr Leu Tyr Asp His 1 5 10 <210> 351 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 351
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tyr Asp His 1 5 10 <210> 352 <211> 14 <212> PRT <213> 人工 <220> <2 2 3>突變之美洲駝序列 128- 150859-序列表.doc 201124532 <400> 352
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Glu Tyr Asp His <210> 353 <211> 14 <212> FRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲fg序列 <400> 353
Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Ala Pro Tyr Glu Tyr Asp Tyr <210> 354 <211> 123
<212> PRT <213> 人工 <220> <22 3>突變之美洲駝序列 <400> 354
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val G1n Ala Glv Gly 1 5 10 *1
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr phe sen ςρρ Tvr 20 25 3〇 y
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tvr Val 35 40 45 y
Tyr Ala Asp ser Val
Ala Ala lie Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tyr 50 55
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala 65 70 75
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Tyr 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala val Tvr 85 90 y
Tyr 95
Cys
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Arg Pro Tyr Leu Tvr 100 105 iiq ASP TVr
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val ser ser 115 120 <210> 355 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3>突變之美洲駝序列 <400> 355 150859-序列表.doc -129- 201124532
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala 15 10
Gly ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu …Ί 35 40 4B yr Val Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asd τ 50 55 60 μ ber Val
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr 65 70 75 Val jyr
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90
Tyr Tyr cys
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Glu Tvr 100 105 iIq
Asp His
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 356 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 356 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin δί= ， 1 5 10 Ala Gly Gly
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe ^ 20 25 誌r Ser Tyr
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg clu Tyr val
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala a〇 50 55 60 α ASP Ser val
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val 65 7〇 75 8〇Γ Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val -p, 85 90 αι Tyr Tyr cys 95 Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Ala Pro Tvr Kin 100 105 So ASP His 150859-序列表.doc •130- 201124532
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 357 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <2 2 3>突變之美洲駝序列 <400> 357
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Gin ser Arg Phe Thr lie Thr Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Asn Arg Ala pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tyr Asp His 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 358 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 358
Glu val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp ser Val 50 55 60 -131 - 150859-序列表.doc 201124532
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tvr Cvs 85 90 95
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tvr asd Tvr 100 105 Χίο μ y
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser Ser 115 120 <210> 359 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <2 2 3>突變之美洲駝序列 <400> B59
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Glv nlv 1 5 10 i5y y
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser ser Tvr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Asp Arg Glu Tvr val 35 40 45 y
Ala Ala lie Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asd Ser val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tvr Tvr rvc 85 90 9ξ eys
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Ala Pro Tyr Leu Tyr asd Tvr 100 105 lio μ y
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 360 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3>突變之美洲駝序列 <400> 360
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 150859-序列表.doc -132- 201124532 5 10 15
Ser Leu Arg Leu ser Cys Ser Ala ser Gly Arg Thr Phe Ser ser T\/r 20 25 30 y
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Pro Asp ser val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr 65 70 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu ASP Thr Ala Val Tyr Tvr rv<； 85 9〇 95 yS
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Ala Pr〇 Tyr Glu Tyr asd His 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser Ser 115 120 <210> 361 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲乾序列 <400> 361
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Glv Glv 1 5 10 IS Υ
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Ar9 Thr phe Ser Ser Tvr 20 25 30 7
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tvr Val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asd ser vsl 50 55 60 μ val
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tvr 65 70 75 gj'
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tvr Twr 85 qn cys 90 95
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Arg Pro Tyr Leu Tyr Asp Tyr
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val Ser Ser 150859-序列表.doc -133- S. 110 201124532 115 120 <210> 362 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 362
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe ser ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Glu Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ty「 Cys 85 90 95
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tyr Asp His 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 363 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3>突變之美洲駝序列 <400> 363
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 BO
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 -134- 150859-序列表.doc 201124532
Gin ser Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr 65 70 7ζ ΠΓ Val lyr 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Cys 90 95
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Glu Tvr l,· 100 105 ii〇 Asp Hls
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 364 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 364
Gl u val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser ser Tyr 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val
Ala Ala lie Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asn ςρη \/=,τ 50 55 60 μ ber val
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val 65 70 75 vai 〇Xr
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tvr Twr 95 85 on 上iys
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Arg Pro Tyr Glu Tvr Acn100 ιης 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 365 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 365
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Arg Gly Gly Leu Val Gin Ala riw 15 10 i5y ^ly 150859-序列表.doc -135 · §_ 201124532
Ser Leu Arg Leu Se「 cys Ala Ala ser Gly Arn L T 20 25 g Thr phe ser ser Tyr 30
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly iv^： m -, „ n 35 4〇 y Lys Glu Arg Glu Tyr Val 45
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Ala Ala lie Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tvr 50 55 y
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Uys Asn Jhr Val Tyr ^ /5 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys yu 95
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tvr· , - * u“
100 i〇5 rr〇 ~yr Leu Tyr Asp His
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 366 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 366
Glu val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly b 10 is
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Leu Ala Pro Gly Lys Glu 35 40
Arg Glu Tyr
Val
Ala Ala He Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp ser val
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tvr Tvr rwc 85 90 'yr ^yr cys
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Gly Pro Tyr Leu Tvr Δςη Tvr 100 105 no P y
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 -136· 150859-序列表.doc 201124532 <210> 367 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> B67
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Gly Gly 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala ser Gly Arg Thr Phe ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Glu Tyr Asp Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser ser 115 120 <210> 368 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 368
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Se「 Val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 150859-序列表.doc -137- 201124532
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cvs 85 90 95 y
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Gly Pro Tyr Leu Tyr Asp His
100 105 HO
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser Ser 115 120 <210> B69 <211> 123 <212> PRT <213；►人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 369
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly civ 1 5 l〇 15 ser Leu A「g Leu se「 Cys Ala Ala Se「 Gly A「g Th「 Phe Ser se「 Tvr 20 25 30 y
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp ser val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg 65 70
Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 75 80
Leu Gin Met Tyr ser Leu Lys Pro 85
Glu Asp Thr Ala val Tyr Tvr 90 qq Lys
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg 100
Leu Ala Pro Tyr Leu Tyr asd Hie 105 no μ nis
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 <210> 370 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲轮序列 <400^ 370
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Ala Glv gIv 1 5 10 ις y
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr -138- 150859-序列表.doc 30201124532 25 20
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg clu Tyr Val 45
Ala Ala lie Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tvr Tvr δί=> 50 ζς y Ala AsP sen val
Gin Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Tyr
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95 y
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Ala Pro Tvr i pij * 100 105 So P Tyr
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser Ser 115 120 <210> 371 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 371
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 1 5 10 IS / 30
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val 40 45
Ala Ala lie Arg Trp ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asd val
50 55 60 K
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr val Twr 65 70 75 go
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Arg Pro Tyr Leu Tyr Asp His 100 105 no
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 372 3 150859-序列表.doc -139- 201124532 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 372
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ser Ala ser Gly Arg Thr Phe ser ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Glu Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Asn Arq Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Leu Tyr Asp His 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 373 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 373
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val 35 40 45
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser val 50 55 60
Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 -140- 150859-序列表.doc 201124532
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val 了'一 T 85 90 lyr Tyr Cys
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Glu Pro Tyr Glu τ如 Λ .
100 105 ΐϊ〇 P H1S
Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser ser 115 120 <210> 374 <211> 123 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3> 突變之美洲駝序列 <400> 374
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser -rw, >γ\ Tyr
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Tyr Val
Ala Ala lie Arg Trp Ser Gly Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala asd spt val 50 55 60 μ vai
Gin Gly Arg phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tvr 65 70 75 g5r
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tvr Tvr rvc 85 90 95 y
Ala Asn Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Ala Pro Tyr Glu Tyr asd Tvr 100 105 110 7
Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val Ser ser 115 120 <210> 375 <211> 19 <212> PRT <213>人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 375
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Gin 15 10 15
Tyr Asp Tyr 141 - 150859-序列表.d〇i 201124532 <210> 376 <211> 19 <212> PRT<213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 376
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Ala 15 10 15
Tyr Asp i Tyr <210> 377 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 377 Asp Arg Tyr 1 lie Trp > 5 Tyr Asp Tyr <210> 378 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 378 Asp Arg Tyr lie Trp - 10 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 379 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <2 2 3>突變之美洲載序列 <400> 379
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Val 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 380 150859-序列表.doc -142 - 201124532 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 380
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Gin 1 5 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 381 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220>
<22 3>突變之美洲駝序列 <400> 381
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Ala 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 382 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3> 突變之美洲駝序列 <400> 382
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Ala 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 383 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3> 突變之美洲駝序列 <400> 383
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Ala 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 384 <211> 19
S 150859-序列表.doc - 143 - 201124532 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 384
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Ala 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 385 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 385
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Gin 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 386 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 386
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Glu 1 5 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 387 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 387 Asp Arg i Tyr lie Trp , 1 5 Tyr Asp i Tyr <210> 388 <211> 19 <212> PRT 10 15 -144- 150859-序列表.doc 201124532 <213> 人工 <220> <22 3> 突變之美洲駝序列 <400> 388
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Asp Tyr Trp Gly Ala Tyr Val 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 389 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 389 Asp Arg 1 Tyr lie Trp 1 5 Tyr Asp i Tyr <210> 390 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 390 Asp Arg 1 Tyr lie Arg , 10 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 391 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3>突變之美洲駝序列 <400> 391
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Ala 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 392 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 -145 - 150859-序列表.doc 201124532 <220> <22 3>突變之美洲駝序列 <400> 392
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Glu 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 393 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 393
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Ala 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 394 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 394
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Gin 15 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 395 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <2 2 3> 突變之美洲駝序列 <400> 395
Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala Tyr Ala 1 5 10 15
Tyr Asp Tyr <210> 396 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> -146- 150859·序列表.doc 201124532 <223> 突變之美洲駝序列 <400> 396
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Glv ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Thr Asp Tyr val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 no
Tyr Gin Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser Ser 115 120 125 <210> 397 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 397
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Glv Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Glv ser Tvr 20 25 B〇
Asp Met ser Trp Val Arg Arg ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45 ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Tvr val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95 150859-序列表.doc -147-
S 201124532
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> <211> <212> <213> <220> <223> 十工 9 2 R j 3 1 p Λ
88 I 突變之美洲駝序列 <400> 398
Glu val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 .Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Tyr val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Val Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 399 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3> 突變之美洲駝序列 <400> 399
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr lie Gly ser Tyr 20 25 30
Asp Met ser Trp val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45 •148· 150859-序列表.doc 201124532 ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Tvr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tvr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cvs 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Gin Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 400 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 400
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Glv Glv 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala ser Gly phe Thr He Glv Ser Tvr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 45
Ser ga lie Asn Ser Gly gy Gly Ser Thr Tyr Tyr Th「ASp Tyr 55 60
Val
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn A]a Lys Asn Thr Leu Tvr 65 7r* 7 s -i 70 75
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 90 95
Ala Ala Asp yg Tyr lie Trp Ala Gin Gly giu Tyr T|^p Giy Aia 100 110
Tyr val 丁Asp Tyr Trp Gly gg Gly Thr Gin val Thr Val Ser ser 115 125 <210> 401 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 150859·序列表.doc -149- 201124532 <400> 401
Glu Val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro GTy Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Tyr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Gin Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val Ser Ser 115 120 125 <210> 402 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲乾序列 <400> 402
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Gly ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp val Arg Arg ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Tyr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 HO -150- 150859-序列表.doc 201124532
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser H5 120 125 <210> 403 <211> 128 <212 > PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲16序列 <400> 403
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Glv Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr lie Gly ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp val Arg Arg ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45 ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Tyr val 5〇 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tvr ft ζ 7 Λ "n r· _ ^ 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95 e 1 I Γ Ty go r o A1 p s A a Al a Al
Ty u Gl y Gl n Gl 95 ΓΟ A1 a Al p a A1 y G1 po Γ 1
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val ser Ser 115 120 125 <210> 404 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3>突變之美洲乾序列 <400> 404
Glu val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 ser Leu Arg gu ser cys Ala Ala 含|r Gly Phe Thr ile g]y Ser Tyr 25 30
Asp Met ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pr〇 Glu Trp Val 40 45
Ser Ala lie Asn ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Phe Val • 151 - 150859-序列表.doc 201124532 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 405 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3> 突變之美洲駝序列 <400> 405
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr lie Gly ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser ser lie Asn ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Tyr Val 50 55
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyn Cys
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser ser 115 120 !25 <210> 406 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲乾序列 <400> 406 -152-
150859-序列表.doc 201124532
Gly ciy l〇 Leu Val Gin Pro Gly 15 Gly Ser ciy Phe Thr lie Gly ser Tyr 25 30 Pro ciy Lys Gly Pro 45 Glu Trp Val ser Thr Tyr Tyr 60 Ala Asp Tyr Val Asp ASH Ala 75 Lys Asn Thr Leu Tyr 80 Glu ASP 9〇 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys Arg g1 n Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 105 110 Gly Thr Gin Val Thr 125 val Ser Ser
Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly l〇 15
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala 20
Asp Met ser Trp val Arg Arg 35
Ser Ala lie Asn ser Gly Gly 50 55
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser 65 70
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp 100
Tyr Gin Tyr Asp Tyr Trp Gly 115 <210> 407 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 407
Glu val Gin Leu val Glu ser 1 5
20 ser Gly phe Thr Phe Gly ser Tyr 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg
Pro Gly Lys Gly Pr〇 gIu Trp Val 45 ser Ser lie Asn ser Gly Gly 50 55 ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Tyr val
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser 65 70
Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu jyr
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys 85
Glu ASP Thr Ala Val Tyr Tyr cys 9〇 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp 100
Arg Gln G^y Glu Tyr Trp Gly Ala 105 110 -153- 150859-序列表.doc 201124532
Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> <211> <212> <213> <220> <223〉 88 T工 02 R } 41 p Λ 突變之美洲駝序列 <400> 408 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr lie Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Asp Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Tyr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 409 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3>突變之美洲駝序列 <400> 409 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Tyr Val 50 55 60 150859·序列表.doc -154· 201124532
Lys Gly Arg phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Asp Tyr Trp Gly Ala 100 105
Tyr val Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val ser Ser 115 120 125 <210> 410 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 410
Glu Val Gin Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 1 5 l〇 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Gly ser Tyr
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45
ser Ala lie Asn ser Gly Gly Gly Ser Thr 丁Rr Thr Asp Tyr val -- -- bU 50 55
Lys Gly Arg phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu 65 70 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Asp Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val Ser ser 115 120 125 <210> 411 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3>突變之美洲駝序列 <400> 411
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 -155- 150859-序列表.doc 201124532
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Se「 Ty「 20 25 3〇
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg ser Pro Gly Lys Glv Pro G"*u Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly ser Thr Tyr Tvr Thr ASP Tyr val 5〇 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Arg Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Ala T.yr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val Ser ser 115 120 125 <210> 412 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 412
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala ser Gly Phe Thr lie Gly ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg ser Pro Gly Lys Gly pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Phe Val 50 55 60
Lys Gly Arg phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tvr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 no
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin val Thr val ser ser 115 120 125 -156-
150859-序列表.doc 201124532
<210> 41B <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <22 3> 突變之美洲駝序列 <400> 413
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin pro Gly Gly 1 5 10 /
Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr ile Gly ser Tyr 20 25 3〇
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly pr〇 Glu Trp Val
ser Ala lie Asn ser Gly Gly Gly Ser Thr 50 55 ΤΥΓ Rr Thr Asp Tyr Val
Lys Gly Arg Phe Thr Ile ser Arg Asp Asn Ala Lvs Αςη Thr 65 70 75
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90
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Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 ii〇
Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val Ser Ser 115 120 125
<210> 414 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <2 2 3>突變之美洲駝序列 <400> 414
Glu Val Gin Leu Val
Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Glv 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly phe Thr Ile Gly Ser Tyr 20 25 3〇 Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45 Ser Ser Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Thr Asp Phe val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 150859-序列表.doc -157- 201124532 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 415 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 突變之美洲駝序列 <400> 415
Glu val Gin Leu val Glu ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Tyr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asn Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Gin Gly Glu Tyr Trp Gly Ala 100 105 110
Tyr Gin Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr val Ser ser 115 120 125 <210> 416 <211> 128 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>突變之美洲駝序列 <400> 416
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 -158- 150859-序列表.doc 201124532
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr lie Gly ser Tvr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Arg ser Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp val 35 40 45 ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Tyr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys 85 90 95
Ala Ala Asp Arg Tyr lie Trp Ala Arg Cln Cly Clu Ty, Trp cly Ala
Tvr Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser ser 115 120 125 <210> 417 <211> 687 <212> PRT <213> 智人 <400> 417
His Met Met Ala Ala Ala Ser Arg ser Ala Ser cly Trp Ala Leu Leu
Leu Leu Val Ala Leu Trp Gin Gin Arg Ala Ala Gly ser Gly Val Phe 20 25 30
Gin Leu Gin Leu Gin Glu Phe lie Asn Glu Arg Gly Val Leu Ala Ser 35 40 45
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Lys His Phe Cln Ala Val Val Sen Pro dy Pro Cys Thr Phe Cly Thr val ser Thr Pro val Leu Gly Thr Asn ser Phe Ala val Arg Asp Asp 85 90 95
Ser ser Gly Gly Gly Arg Asn Pro Leu Gin Leu Pro Phe Asn Phe Thr 100 105 110
Trp Pro Gly Th「 Phe Ser Leu lie Ile Glu Ala Trp His Ala Pro Gly 115 120 125
Asp Asp Leu Arg Pro Glu Ala Leu Pro Pro Asp Ala Leu lie Ser Lys 13〇 135 140 -159- 150859-序列表.doc 201124532 lie Ala lie Gin Gly ser Leu Ala val Gly Gin Asn Trp Leu Leu asd 145 150 155 160
Glu Gin Thr Ser Thr Leu Thr Arg Leu Arg Tyr Ser Tyr Ara val lie 165 170 175
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Leu ser Gly cys His Glu Gin Asn Gly Tyr Cys ser Lys Pro Ala Glu 225 230 235 240
Cys Leu cys Arg Pro Gly Trp Gin Gly Arg Leu cys Asn Glu cys lie 245 250 255
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Ser Gly Gin Arg Ser Tyr Thr cys Thr Cys Arg Pro Gly Tyr Thr Gly 305 B10 315 320
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Ala Asp Ser Pro cys Phe Asn Gly Gly ser Cys Arg Glu Arg Asn Gin 370 375 380
Gly Ala Asn Tyr Ala Cys Glu Cys Pro Pro Asn Phe Thr Gly Ser Asn 385 390 395 400
Cys Glu Lys Lys val Asp Arg Cys Thr Se「 Asn Pro Cys Ala Asn Gly 405 410 415 -160- 150859-序列表.doc 201124532
Gly Gin cys Leu Asn Arg Gly Pro Ser Arg Met cys Arg Cys Arg Pro 420 430
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Gin lvs Asd Asn Leu lie Pro Ala Ala Gin Leu Lys Asn Thr Asn Gin 580 585 590
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Lys Gin Gin Asn His Thr Leu Asp Tyr Asn Leu Ala Pro Gly Pro Leu 610 615 620
Gly Arq Glv Thr Met Pro Gly Lys Phe Pro His Ser Asp Lys Ser Leu 625 630 635 640
Glv Glu Lvs Ala Pro Leu Arg Leu His Ser Glu Lys Pro Glu Cys Arg 645 650 655 lie ser Ala lie Cys Ser Pro Arg Asp Ser Met Tyr Gin Ser Val cys 660 665 670
Leu lie Ser Glu Glu Arg Asn Glu Cys Val lie Ala Thr Glu Val 675 680 685 -161 - 150859-序列表.doc 201124532 <210> 418 <211> 707 <212> PRT <213> 恆河獼猴 <400> 418
Met Ala Cys Ala cys Ala Met Leu Ala Thr Thr Ala Arg Hi5 ?]u Ser 1 5 10
Ser Met Asn Lvs Glu Tyr Met Ala Ala Ala Ser T「p Ser Se「G"*y 20 25 3〇 Trp Ala Leu Leu Leu Leu Val Ala Leu Trp Gin Gin Arg Ala A^a G^y 35 40 45
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Val Arg Asp Asp ser Ser Gly Gly Gly Arg Asn Pro Gin Leu Pro 115 120 125 Phe Asn Phe Thr Trp Pro Gly Thr Phe Ser Leu lie lie Glu Ala Trp 130 135 14〇 His Ala Pro Gly Asp Asp Leu Arg Pro Glu A]I Leu Pro AsP 兮g 145 150 155
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Gin Pro lie Cys Leu ser Gly cys H"is Gin Asn Gly Tyr ser 245 250 -162- 150859-序列表.doc 201124532
Lys Pro Ala Glu cys Leu cys Arg Pro Gly Trp dn cly Arg Leu cys
Asn Glu cys lie Pro His Asn Gly Cys Arg His Gly Thr Cys Ser Thr 275 280 285
Pro Trp Gin Cys Thr Cys Asp Glu Gly Trp Gly Gly Leu Phe Cys Asp 290 295 300
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Cys Ala Asn Gly Gly Gin cys Leu Asn Arg Gly Pro Ser Arg Met Cys 435 440 445
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Asn cys Pro Tyr Gly Phe Val Gly ser Arg 530 535 cys Glu Phe Pro val Gly 540
Leu pro Pro Ser Phe Pro Trp Val Ala val 545 550
Ser Leu Gly val Gly Leu 555 560
Ala val Leu Leu Val Leu Leu Gly Met Val 565 570
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Leu Ser Asp Phe Gin Lys Asp Asn Leu lie 595 600
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<210> 419 <211> 472 <212> PRT <213> 智人 <400> 419 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 ser Leu Arg Leu ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Asn 20 25 30
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Leu Gin Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala val Tyr Tvr cvs 85 90 95
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Leu Cys Pro Thr Pro Arg Ser His Gly Thr Thr ser Leu Ala Ala ser 130 135 140
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Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr phe Pro 165 170 175
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Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg val Val Ser val Leu Thr Val Leu His Gin 325 330 B35 -165- 150859-序列表.doc 201124532
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys val ser 340 345
Asn Lys Ala 350
Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala 355 360
Gly Gin Pro
Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu 370 375 380
Glu Met Thr
Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 385 390
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 405 410 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 420 425 430
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Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 420 <211> 115 <212> PRT <213> 智人 <400> 420 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10
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<210> 435 <211> 46 <212> DNA <213> 人工 <220> <22B> 引子 <400> 435 gacactcgtc tggvaccgta cgagtacgac yattggggtc agggta 46 <210> 436 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <22 3> 引子 <400> 436 45 cagacgagtg tccggcgcac ggtttgcaca gtagtagact gccgt
<210> 437 <211> 45 <212> DNA <21B> 人工 <220> <223> 引子 <400> 437 cagacgagtg tctrccgcac ggtttgcaca gtagtagact gccgt 45 <210> 438 <211〉 45 <212> DNA <21B> 人工 <220> <223> 引子 <400> 438 45 agagttcatc tgcagataga cggtgttttt cgcgttgtca cgaga <210> 439 150859-序列表.doc -169- g 201124532 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 439 ctgaacggaa tcagsgtaat acgcagttyc accgctccaa cggat <210> 440 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 440 gcgttctttg cctggagcct gacgawacca agccatcgcg tagct <210> 441 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 441 agaagctgcg caggacagac ggagagagcc accagcctga accag 3 4 5 4 4 子 弓 <210> 442 <211> 35 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 442 tgaggagacg gtgacctggg tcccctgacc ccaat <210> <211> <212> <213> <220> <223> <400> 443 gaggtgcaat tggtggagtc tgggggtggt ctggttcagc caggt <210> 444 <211> 32 <212> DNA <213> 人工 <220> <223>引子 <400> 444 tgaggagacg gtgacctggg tcccctgacc cc <210> 445 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 170- 150859-序列表.doc 45 201124532 <220> <223>引子 <400> 445 gtgcagcttc cggctttacg wtcggctcct acgacatgtc ttggg <210> 446 <211> 49 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 446 49 acgcacccca gtattcaccc tgacgcgccc aaatgtagcg atctgcagc
<210> 447 <211> 45 <212> DNA <21B> 人工 <220> <223> 引子 <400> 447 aggtccggaa tgggtgtcck ctatcaactc tggtggtggt agcac 45 <210> 448 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 448 45 tcttccggtt tcaggctgtt catctgcagg tacagcgtgt ttttg
<210> 449 <211> 45 <212> DNA <21B> 人工 <220> <223> 引子 <400> 449 aaaggtcgtt tcaccatctc tcgtgacaac gccaaaaaca cgctg 45 <210> 450 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <22 3> 引子 <400> 450 45 tgaaacgacc ttttwcgwag tcggygtagw aggtgctacc accac <210> 451 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 150859-序列表.doc -171 -
S 45 201124532 <400> 451 tgaaaccgga agataccgcg gtatactact gcgctgcaga tcgct <210> 452 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <22B> 引子 <400> 452 45 ccattccgga cctttacccg gagaacgacg aacccaagac atgtc <210> 453 <211> 41 <212> DNA <21B> 人工 <220> <223> 引子 <400> 453 tactggggtg cgtacghata cgactactgg ggtcagggta c 41 <210> 454 <211> 41 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 454 tactggggtg cgtaccagta cgactactgg ggtcagggta c 41 <210> 455 <211> 45 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 455 ccggaagctg cacagctcag acgcagagaa ccacctggct gaacc 45 <210> 456 <211> 49 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 456 49 acgcacccca gtagtaaccc tgacgcgccc raatgtagcg atctgcagc <210> 457 <211> 49 <212> DNA <213> 人工 <220> <223> 引子 <400> 457 acgcacccca gtaktcaccc tgacgcgccc raatgtagcg atctgcagc 49 172- 150859·序列表.doc 201124532 <210> 458 <211> 11 <212> PRT <213> 美洲駝 <400> 458
Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr 1 5 10 <210> 459 <211> 120 <212 > PRT <213> 美洲駝 <400> 459
Glu Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu ser Cys Thr Ala ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30
Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Gly lie 35 40 45
Ser Cys lie Ser Ser Ser Gly Ser lie Thr Tyr Asp Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Thr Pro Gly lie Ala Ala Cys Arg Gly lie His Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 173- 150859-序列表.doc

Claims (1)

  1. 201124532 七、申請專利範圍： 1. 一種D114結合分子，其包含至少一個可變域具有四個構 架區及三個分別為CDR1、CDR2及CDR3之互補決定區， 其中該CDR3具有胺基酸序列選自如下所示之胺基酸序列 a. SEQ ID NO: 1 至 166及 458， b. SEQ ID NO: 333 至 353，或 c. SEQ ID NO: 375 至 395 ° 2. 如請求項1之D114結合分子，其為經分離之免疫球蛋白單 一可變域，或含有一或多個該等免疫球蛋白單一可變域 之多肽，其中該免疫球蛋白單一可變域由四個構架區及 三個分別為CDR1、CDR2及CDR3之互補決定區組成，且 其中該CDR3具有胺基酸序列選自如下所示之胺基酸序列 a. SEQ ID NO: 1 至 166及 45 8， b. SEQ ID NO: 333 至 353，或 c. SEQ ID NO: 375至 395。 I 3.如請求項2之D114結合分子，其中該一或多個免疫球蛋白 單一可變域含有 a. CDR3，具有胺基酸序列選自SEQ ID NO: 1至166中所 示之第一組胺基酸序列； b. CDR1及CDR2，具有胺基酸序列如表5中所示以部分 序列形式含於選自SEQ ID NO: 167至33 2及459中所示 之第二組胺基酸序列之一個序列中； 其中該SEQ ID NO: 1至166之第一組之SEQ ID NO: X對應 於該第二組之SEQ ID NO: y，其中y=x+166。 150859.doc 201124532 4·如請求項2之D114結合分子，其中該一或多個免疫球蛋白 單一可變域含有 &.0〇113，具有胺基酸序列選自8£(^1〇]^0:3 33至3 53中 所示之該第一組胺基酸序列； b. CDR1及CDR2，具有胺基酸序列如表16-Α中所示以部 分序列形式含於選自SEQ ID NO: 354至374中所示之 第二組序列之一個序列中； 其中該第一組之SEQ ID NO: X對應於該第二組之seq id NO: y，其中 y=x+21。 5.如凊求項2之D114結合分子，其中該一或多個免疫球蛋白 單一可變域含有 a· CDR3，具有胺基酸序列選自SEQ m no: 375至395中 所示之該第一組胺基酸序列； b. CDR1及CDR2，具有胺基酸序列如表16_B中所示以部 分序列形式含於選自SEQ ID NO: 396至410中所示之 第二組序列之一個序列中； 其中該第一組之SEQ IDNO: χ對應於該第二組之seq⑴ NO: y ’ 其中 γ=χ + 21。 6.如请求項2至5中任一項之Du4結合分子其中該 加 A、古，±> — 個免疫球蛋白單一可變域為vHH u 如請求項6之D114結合分子，& 立缺产 刀丁再中該或多個VHH具有 土夂序列選自SEQ ID NO: 167至332乃4ς〇丄 酸 至332及459巾所示之胺 8. 如請求項6之Dll4結合分子， 其中該一或多個VHH具有胺 150859.doc 201124532 基酸序列選自SEQ ID NO: 3 54至3 74中所示之胺基酸序 列。 9. 如請求項6之D114結合分子’其中該一或多個VHH具有胺 基酸序列選自SEQ ID ΝΟ_· 396至416中所示之胺基酸序 列。 10. —種免疫球蛋白單一可變域，其已藉由使如請求項3中 定義之免疫球蛋白單一可變域之親和力成熟而獲得。 • 11. 一種VHH ’其已藉由使如請求項7中定義之VHH之親和力 成熟而獲得。 12. —種¥1111，其具有胺基酸序列選自8叫1〇]^0:356及 3 5 8中所示之胺基酸序列。 13. —種免疫球蛋白單一可變域，其已藉由使如請求項12之 VHH人類化而獲得。 14· 一種VHH ’其具有胺基酸序列選自SEq id NO: 402、 4〇7及416中所示之序列。 φ 15. 一種免疫球蛋白單一可變域，其已藉由使如請求項14之 VHH人類化而獲得。 16. —種免疫球蛋白單一可變域，其已藉由使如請求項3中 定義之免疫球蛋白單一可變域人類化而獲得。 17. —種免疫球蛋白單一可變域，其已藉由使如請求項1〇之 免疫球蛋白單一可變域人類化而獲得。 18. 如請求項1之D114結合分子，其結合DU4之抗原決定基完 全或部分含於EGF-2域内，該EGF-2域對應於SEQ ID >10:417之胺基酸殘基252_282。 & 150859.doc ^ 201124532 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 如請求項18之DU4結合八名 ， 刀’其為免疫球蛋白單一可變 域或έ有該免疫球蛋白單一 干可變域之多肽。 一種核酸分子，其編 〇月求項1至9、18及19中任一頊 之D114結合分子、如請 甲任項 月衣項10、13及15至17中任一項 免疫球蛋白單一可變域、 、 4如岣求項11、12及14中任一 項之VHH’或含有該核酸分子之載體。 種信主細胞’其含有如請求項2〇之核酸分子。 一種醫藥組合物，苴合古 有至〉、一種如請求項1至9、18及 19中任一項之0114結合 刀子如§月求項10、13及15至17 中任一項之免疫球蛋白單一 早可變域、或如請求項11、12 及14中任一項之VHH作為活性成分。 如咕求項22之醫藥組合物’其用於治療與趣介導血管 生成作用相關的疾病。 如。月求項22之醫藥組合物，㈣於治療癌症及癌性疾 病0 如叫求項22之醫藥組合物，其用於治療眼病。 一種肽，其包含胺基酸序列選自如下所示之胺基酸序列 的序列 a· SEQ IDNO: 1 至 166及 458， b. SEQ ID NO: 333至 353，或 c· SEQ id NO: 375至 395。 種核酸分子’其編碼如請求項26之肽。 150859.doc
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