TW201118098A - Processes for preparing pemetrexed - Google Patents

Description

201118098 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關於赞僅_ +立M &金· a廿 方法 1備培美曲塞及其鹽類白勺 【先前技術】 藥物化合物“培暴Α &，， 美曲塞的化學名稱為2-[4-[2-(4- 胺 _2_ 氧—3’5,7-三氮雜二環[4.3.G]九~3,8，1()_trien —9_ N-[4-[2-(2-胺-4,7-二氫—4_ 氧 ^肜吡咯[2,3_d] 基）乙基]苯甲醯]-鈉鹽，如式丨結構所示。 基=塞笨-甲Γ”]胺—戊二酸。此藥物化合物的法定名稱為 培吳曲塞一納，其化學名稱亦稱為卜麵胺酸，七水 -5-

培美曲塞為一抗葉酸抗腫瘤劑，其抑制細胞複製中非 常重要的葉酸依賴性代謝程序。目前已知其可抑制嘌呤和 嘧啶生合成中所需的3種酵素’胸苷酸合成酶（TS)、二氮 葉酸還原酶（DHFR)及甘氨胺核苷酸甲醯轉移酶（GARFT)。禮 來公司販售之ALIMTA®即為以培美曲塞二鈉（pemetrexed disodium heptahydrate)為活性成份，用於靜脈注射之束 乾粉。

Taylor etal.，美國第5, 344, 932號專利揭示培美曲 201118098 塞’其相關化合物’及藥學上可接受之陽離子。 美國第5, 416, 211號專利揭示一種培美曲塞之製備方 法，如合成流程1所示。

合成流程1 C. J. Barnett et a 1. , MA Practical Synthesis of Multi targeted Antifolate LY231514," Organic Process

Research & Development, Volume 3 (3), pages 184-188, 1 9 99揭示一種培美曲塞二鈉的製備方法。此方法如合成流 程2所示。

p-Toluene sulfonic acid monohydrate/ethanol

Formula II

water/ethanol Pemetrexed disodium 合成流程2 201118098

Che 1ius et a 1. , in International Application Publ icat ion No. WO 01/14379 A2,揭示式 I 之培美曲塞二 鈉結晶水合物’及其製備程序。此程序如合成流程3及4

NaOH solution pH adjustment Water/ethanol 60-70 °C 所示

合成流程3

ch3

NaOH solution HCI ^ water/Acetone 45-50 °C

合成流程4 目前發現，當式II之4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-iH-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯甲酸及卜二烷基麩氨酸鹽 酸進行縮合反應時，若以醯胺作為溶劑，會導致式A雜質 的產生’在後續的去醋化反應後，會導致式B雜質及其鹽 類的產生（這些化合物的結構揭示於後文）。此種使用醯胺 溶劑（N，N-二甲基甲醯胺）之方法如合成流程5所示。 201118098

CDMT/NMM/ DMF_„ L-diatkyl glutamate HCL PTSA Formula H

Formula III R> alkyl

NaOH 1NHCI

合成流程5 此外，在去酯化的反應中，即在室溫下或更高的溫度 (如>30C )下’培美曲塞之二甲基醋或其鹽類在·一驗性介質 中水解’會產生一手性雜質，如式C所示。

在任何活性藥物成份（API)中，雜質的存在是不合適 地，且在極端的情況下，有可能會對病患造成傷害。此外， 不需要的雜質亦可能會降低API在藥學組成物中的活 性’且會降低藥學劑型的穩定性。因&，業界亟需一種新 穎之培美曲塞二鈉的製備方法其具有經濟效益，產業利 用!·生’且可提供實質上不含雜質的培美曲塞二鈉。 【發明内容】 6 201118098 在一實施例中，本發明提供製備如下式所示之 N-[4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶- 5-基）乙基]苯曱醯]-L-麩氨酸二甲基酯對曱苯磺酸鹽的方 法

包括： a)在N-曱基吡咯烷酮（NMP)的存在下，將式II之 4-[2-(2 -胺-4，7 -二氮-4 -氧- 各[2，3-d]° 密咬-5_ 基） 乙基]苯甲酸

式II 與L-二烷基麩氨酸鹽酸反應，以獲得Ν-[4-[2-(2-胺 _4，7-二氫-4 -氧-1Η-。比洛[2，3-(1]°¾咬-5-基）乙基]苯甲 醯]-L-麩氨酸二曱基酯；以及 b)於一有機溶劑中，將N-[4-[2-(2-胺-4,7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯甲醯]-L-麩氨酸二 甲基酯與對甲苯磺酸反應。 在一實施例中，本發明提供製備式III之N-[4-[2-(2-胺-4, 7-二氩-4-氧-1 Η-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯曱 醯]-L-麵氨酸二曱基酯對甲苯磺酸鹽的方法， 7 201118098

式III ’、實質上不含有如式A之雜質，實施例包括： a)在N甲基0比0各院酮存在下，將式u所示之4-[2-(2-胺_4, 7_一氣氧HH —吡咯[2, 3-d]嘧啶_5-yl)乙基]苯曱

與L-麩氨酸二甲基酯鹽酸反應以獲得1[4_[2_(2_胺 _4, 7_二氫—4~氧_1H_吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-yl)乙基]苯甲 醯]-L-麵氨酸二曱基酯；以及 浴劑 氧鲁料[2,3_d]p密咬_5_yl)乙基]苯甲醯]七楚氨飞酸 甲基酯與對甲笨磺酸反應。 C雜 在一實施例中，本發明提供製備實質 質之培美曲塞二鈉的方法，包括 上不含式A、B及 下，將式Π所示之 咯[2, 3-d]。密啶 _5_y j) 1) 在 N-甲基吡咯烷酮存在 4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-1Η~η比 乙基]笨甲酸與 201118098

^/一麩氨酸二甲醋鹽酸鹽，以獲得N-[4-[2_(2 一胺_4,7_ -虱-4-氧-1H-吡咯[2’ 3-d]嘧啶_5_yl)乙基]笨甲醯卜l_ 麩氨酸二甲醋； ⑴將 N-[4-[2-(2-胺-4,7、：[4j_1Hi^[23_d] 嘴°疋-5巧1)乙基]苯甲醯]-L-麵氧酸二曱醋與對甲苯績酸 反應，以提供一如式ΙΠ所示之N_[4_[2_(2、胺—4卜二氫 酸二甲酯對甲苯磺酸鹽；以及

式III

Xll)在低於20°c下，以氫氧化鈉水溶液將式！〗丨化 合物轉換為培美曲塞二鈉。 在另一實施例中，本發明提供製備實質上不含式c的 手性雜貝之培美曲塞一鈉的方法’包括在低於20。〇下，將 式1II所示之N-[4-[2-(2-胺-4,7-二氫-4-氧-1H-吡咯 [2’ 3 d ]碟。定-5-y 1)乙基]本甲醯]_l-麵氨酸二甲酯對甲苯 磺酸鹽與氫氧化鈉水溶液反應。 在另一實施例甲，本發明提供實質上不含有式Α、β及 201118098 c雜質之培美曲塞二鈉。 為了讓本發明之上述和其他目的、特徵、和優點能更 明顯易懂，下文特舉較佳實施例，並配合所附圖示，作詳 細說明如下： 【實施方式】 在一實施例中，本發明提供製.備如下式所示之 N_[4-[2-(2_ 胺 _4，7 -二氮 _4_ 氧比 °各[2，3_d] °密咬-5-基）乙基]苯甲醯]-L-麩氨酸二甲基酯對甲苯磺酸鹽的方 法，

其中R =烧基 包括 a)在 N -甲基吡咯烷酮（NMP)存在下，將式II之 4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基） 乙基]苯曱酸

式II 與L-二烷基麩氨酸鹽酸反應，以獲得N-[4-[2-(2-胺 _4，7 -二氫-4 -氧_1Η_α比0各[2, 3_d]°密σ定_5-基）乙基]苯曱 醯]-L-鞑氨酸二甲基酯；以及 10 201118098 b)於一有機溶劑中，將N-[4-[2-(2 -胺-4,7 -二氫_4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯曱醯]-L-麩氨酸二 曱基酯與對甲苯磺酸反應。 在另一實施例中，本發明提供製備如式11 I所示之 1^-[4_[2-(2-胺-4,7-二氩-4-氧-111-吡咯[2,3-(1]嘧啶-5-基）乙基]苯曱醯]-L-麩氨酸二甲基酯對甲苯磺酸鹽的方 法，

式III 實質上不含有如式A之雜質，此製備方法包括： a)在N-甲基吡咯烷酮存在下，將式11所示之4-[2-(2-胺_4，7 -二氫-4-氧-1H-。比σ各[2，3-d]°密。定- 5- yl)乙基]苯曱 酸

式II 與L-麵氨酸二甲酯鹽酸反應，以獲得N-[4-[2-(2-胺 -4，7_ 二氮-4- 氧-1H-0 比 σ各[2，3_d]°密 σ定-5-yl)乙基]苯曱 醯]-L-麩氨酸二甲基酯；以及 b) 在一有機溶機中，將N-[4-[2-(2 -胺-4, 7 -二氫- 4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶- 5-y 1)乙基]苯曱醯]-L-麵氨酸二 201118098 甲基酯與對甲苯磺酸反應。 步驟a)包括在N-甲基吡咯烷酮存在下，將式η所示 之 4-[2-(2-胺-4,7-二氫-4-氧-111-吡咯[2,3-(1]嘧啶_5-基） 乙基]苯甲酸與L-麵氨酸鹽酸反應，以獲得一 胺-4, 7-二氫-4-氧-1 Η-吡咯[2, 3-d]嘧啶_5-基）乙基]苯甲 酿]-L -麵夜酸二甲醋。 此反應在一偶聯劑的存在下進行，偶聯劑例如為2_氣 -4, 6-二甲氧基-1，3, 5-三嗪（CDMT)、異丁基氣甲酸 (IBCf)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺（EDC)或 EDC鹽酸鹽及HOBt、二環己碳二亞胺（DCC)與卜羥基苯三 唑（HOBt) ’且此反應選擇性有鹼的存在。 在一實施例中’可在鹼的存在下（例如，N_甲基嗎啉 (NMM)、二乙胺及其類似物），利用複數個偶聯劑，例如2_ 氣-4’ 6-二甲氧基_1，3, 5-三嗪（CDMT)或氣甲酸異丁酯 (I BCf)進行此反應。 在一具體實施例中，可在N—甲基嗎啉（NMM)的存在下， 利用2-氣-4, 6-二甲氧基3, 5_三嗪（CDMT)進行此反應。 此縮合反應較佳在〇-5〇下進行。此縮合反應可在任 何的溫度下進行任何一段時間，以獲得所欲的產量及純 度。較佳地’在30-4(TC下進行此反應可將雜質（如式G 及J)的形成，降到最低。 本發明之發明人發現在上述反應中，以N_甲基吡咯烷 酉同（NMP)作為溶劑可避免式a雜質形成於式π I之 1[4-[2-(2-胺-4,7-二氫_4-氧-111-吡咯[2,3-(1]嘧啶-5_ 12 201118098 ，且 基）乙基]苯甲醢]-L -麵氨g曼 實質上避免式B雜質或其鹽

Formula A 二曱基酯對甲笨磺酸鹽中 類形成於培美曲塞二納中

此外，在N-甲基吡咯烷酮（NMp)的存在下，可使此縮 合反應更符合經濟效益以及促進產業的利用。 在縮合步驟a)中使用N_曱基吡咯烷酮（NMp)的優點包 括： ’’ 1)提供實質上不含有式A之製程雜質的式⑴化合 物，並避免於培美曲塞二鈉中形成式B雜質； ii)可貫質上使式II中間產物轉變為式Η〗化合物， 以移除或減少培美曲实_ τ τ , 、典塞一鈉中式Π化合物（即雜質）的存 在；以及 ill) N~甲基吡咯烷酮（NMP)在使用上非常容易，且 非危險化學品。 步驟幻包括在—有機溶機中’將N-[ 4-[2-(2-胺-4, 7~ 氮4氧1比洛[2,3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯甲酸L-麵 氨酸二甲酿與對甲苯確酸反應。 將由步驟a)中所獲得的N-[4-[2-(2-胺-4,7-二氫-4- 氧1H比略[2,3-d]嘧啶-5_基）乙基]苯曱酸L_麩氨酸二甲 基酯與對甲茉供_ c & 本《 k反應’以產生與式111對應的對甲笨確 酸鈉鹽。 ' 13 201118098 在一實施例，將步驟a)中所 獲件的產物原位（insitu) (未與反應介質分離）與子笨磺 、鈉在兩達溶劑沸點的溫度 下進行反應，以產生與式ΙΠ對應的對甲笨4酸納鹽。 步驟b)中所使用的溶劑包括醇類，例如，甲醇、乙醇、 異丙醇及其類似物。 在另-範嘴中’本發明提供複數個製備式πι化合物 的方法’其實施例包括： a) 在Ν_甲基吡咯烷酮（ΝΜρ)的存在下將式Η之 6基]苯甲酸與L-麩氨酸二甲基酯鹽酸鹽與2_氣_4,6 一二 甲氧基-1，3,5-三嘻（CDMT)與N-甲基嗎琳（_)反應； b) 加入水及一有機溶劑，且萃取產物使其進入機溶 劑中； c)在一醇類中，與PTSA反應以獲得式m之化合物。 步驟a)包括在N-曱基吡咯烷_(NMP)的存在下，反應 式 II 之 4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶 -5-基）乙基]笨曱酸與CDMT及NMM及L-麩氨酸二甲基酯鹽 酸鹽反應。 此反應在一適當的溫度下，例如25。(：至40。(：，進行任 何一段時間以獲得所欲化合物。 在&合反應中’每莫耳當量的式11化合物，使用約 0. 9至約2莫耳當量的CDMT。 在細合反應中’每莫耳當量的式11化合物，使用約1 至約5莫耳當量的N-曱基嗎琳。 201118098 在縮合反應中，各莖且米且 母旲耳當量的式II化 至約1. 5莫耳當量白勺L一麵氨酸二甲基酯。 ★劑的使用量並無特別限制。，然而，通常儘量使用最 低量以避免產物的損失。在-實施例中，每克的式II化 合物，使用約5至約15 mL的溶劑。 步驟b)包括添加水及—有機溶齊J，以及萃取產物使其 進入有機溶劑中。 在反應完全後’將水及有機溶劑加至此反應混合物。 可使用於步驟b)的有機溶劑包括，但不限於，鹵化烴， 例如，一氯曱烷、一氣乙烷、氯仿與四氣化碳；以及酯類， 例如，乙酸乙酯 '醋酸曱酯與其類似物。 於約25-35^的溫度下，攪拌此反應混合物一合適的 時間，使此反應產物被萃取至有機溶劑中，且與水層分離。 此有機層可以碳酸氫鈉溶液清洗。最後的有機溶液可直接 進行於下個步驟或完全集中濃縮以形成一殘留物。 步驟c)包括在一醇類中與對甲苯磺酸反應。 使用於步驟c)的醇類溶劑可擇自於甲醇、乙醇 '異丙 醇及其類似物。 〜〜/工-I"六判τ丰嘈酸 及醇類溶劑反應，並將此混合物加熱至更高的溫度。 在一實施例中，在室溫下’將步驟b)的反應：合物逛 對甲笨績酸及甲醇混合’再將此混合物加熱至更高的溫 度’例如’約5(TC至約7〇t’且維持一足夠的時間，例如 卜2小時或更長，接著將此混合物冷卻至較低的溫度以片 15 201118098 加固體的沉澱。 可利用技術，如以番+ ―，s丄 重力或吸力過滤、離心、你 (decantation)及其 _ 仞古.+ 1貝析 來。 類似方法，將此固體由懸浮液分離出 選擇性地’所獲得的固體可以任何適 ’約35t：至約 1至1〇小時或更久，在適當的溫度下，例如 例如， 50°C下進行乾燥。 由本發明之方法所媒 ★所獲侍的Α⑴〖合物實質上不含右 式A雜質，且以HPT Γ八k ◊ 3有 c刀析，發現其純度大於約98% 大於99. 0%。 圭

在許多貫施例中以HP 以HPLC分析，式IU化合物含有 於約0. 1 %的式A雜質。 以上述方法所製備的式ΠΙ化合物可進一步以一適當 =方法利用一適當的溶劑進行純化。適當的方法包括結 晶、重結晶’溶劑抗-溶劑法及其類似方法。適當的溶劑^ 括，但不限於，C|{醇類、ν_甲基料烧嗣（贈）、 基亞砜（DMS0)、及其任何組合。 一全反應步驟之例子如合成流程6所示。

Formula III

CDMT, ΝΜΜ, ΝΜΡ 0H L-dimethyl glutamate HCI PTSA Formula II 合成流程6

I —範4中’本發明提供多個製備實質上不具有式A 16 201118098 B及C雜質之培美曲塞二納的方法。實施例包括： i) 在N -甲基吡咯烷酮存在下，將式丨〖之4_[2_(2_ 胺_4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯曱 酸

式II 與L-麩氨酸二曱基酯鹽酸鹽反應，以獲得 N-[4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5- 基）乙基]苯曱醯]-L-麩氨酸二甲基酯； 11)在一有機溶劑中，將N—[ 4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-1H-吼咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]笨曱醯]_L_麩氨酸二 甲基酯與對曱苯磺酸反應，以產生式m之N_[4_[2_(2_ 胺-4, 7-二氫-4-氧-1H_吡咯[2, 3_d]嘧啶_5_基）乙基]苯曱 酿]-L-楚氨酸二曱基酯對甲苯磺酸鹽；以及

式III 111)在低於約20°c的溫度下，以氫氧化鈉水溶液使 式III化合物轉換為培美曲塞二鈉。 步驟丨）匕括在曱基°比咯院酮的存在下，將式η之

17 201118098 基）乙基]苯甲酸與L —麩 [[4-[2-(2-胺-4,7—:氫二甲基醋鹽酸反應’以獲得 基)乙基]苯甲酿Μ-麵氨駿二1…[2,3,〜 〒暴醋。 此縮合反應可在一鸽 改μ田龙 聯劑（例如，CDMT)、Ν-甲其 與Ν-甲基吡咯烷酮（ 基嗎啉 的存在下進行， Ν-[4-[2-(2-胺 _4, 7-二氫〜4 备 乂製備 乳[氧-1Η-吡咯[2,3-dl喻 基）乙基]笨甲醯]-L-麵氨酸二甲基醋。 」达'交〜5、 步驟⑴包括在-有機溶劑的存曰在下，將n_ 胺_4,7_二氫+氧_1H，各[2, Η]終5-基)乙…， 醯]-L-麩氨酸二甲基酯與對 土」笨甲 、玎f本％酸反應，以形成〜

化合物。 々III 使用於步驟i i)之有機、，交游丨π & ^ 甲醇、 氫氣化 氣 '1H~ 曱基酷 /沙機洛劑可為一醇類，例如 乙醇、異丙醇及其類似物。 步驟iii)包括在溫度低於2〇。〇的情況下，利用 鈉水溶液將式III之N-[4-[2-(2-胺-4,7-二氯-4 °比咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯甲醯卜l —麩氨暖二 對甲苯磺酸鹽轉換為培美曲塞二鈉。 ’以避免式C之 此溫度可為約0 此反應較佳於低於2 0s C的溫度下進行 手性雜質（chiral impurity)產生。例如， °C至約20°C，或約0°C至約5°C。 %，高 ’因此 但不限 本發明之發明人發現當此反應在較高的溫度（{列 於約25°C )下進行，會增加式C之手性雜質的生成 最好使用較低鈞溫度。 可在一適當的溶劑下進行此反應’溶劑包括， 201118098 於，水及水溶性溶劑。水溶性溶劑包括：酮類，例如，丙 酮、甲基乙基酮及其類似物；以及醇類，例如，曱醇、乙 醇、異丙醇及其類似物。 在反應完全後，利用酸將此反應混合物的pIJ詞整至 7. 0-8. 5,接著利用一適當的有機溶劑來形成一固體。所使 用的酸包括鹽酸、氫溴酸、醋酸及其類似物。適當的有機 溶劑包括酮類、醇類、四氫呋喃、乙腈或其類似物。

0-20 °C

NaOH solution 1NHCI Acetone

合成流程7 在本發明一範疇中’本發明提供複數個實質上不含有 式C手性雜質之培美曲塞二鈉的製備方法。在實施例中， 包括在低於20°C的溫度下，將N—[4_[2_(2_胺-4,7-二氫 -4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯甲醯]—L-麩氨 酸二甲基酯對甲笨磺酸鹽與氫氧化鈉水溶液反應。 在實施例中，以手性HPLC分析發現，以本發明之製備 19 201118098 方法所獲得之培美曲塞二鈉，其式c手性雜質的含量少於 約 0.lwt% 〇 以手性HPLC分析發現，當在室溫或更高的溫度下（例 如，高於約30°C )，培美曲塞二酯或其鹽類，以及氫氧化 鈉進行此反應時，會增加式C雜質的產生。在25-30 °C及 30-35°C溫度下進行此反應時，會產生約0.15至0.2 wt% 或更高之式C雜質，雜質的相對滞流時間（RRT)在1. 4，（培 美曲塞=1 )。 在低於20C下，由N-[4-[2_(2 -胺- 4,7 -二氮-4-氧 -1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯曱醯]-L-麵氨酸二甲 基酯對甲苯續酸鹽所獲得之培美曲塞二鈉，其實質上不含 有式C之手性雜質。 以HPLC分析發現，利用本發明之方法所獲得之培美曲 塞二鈉，實質上不含有式A、B及C之雜質，且其純度大於 約99 wt%，較佳大於約99.95 wt%。 此外，以本發明之方法所製備之培美曲塞二鈉，其實 質上不含有式A及式B雜質。 在實質例中，以HPLC分析發現，本發明提供式a雜質 小於約0. 1 %的培美曲塞二鈉。 在實施例中，以HPLC分析發現，本發明提供式b雜 質小於約0. 1 %的培美曲塞二鈉。 在實施例中’本發明提供實質上不含有式 雜質的培美曲塞二鈉。 之 本發明中所述之“實質上不含有”係指培美曲塞二納 20 201118098 含量小於約〇. 15 wt%。 含量或藥物總雜質含量 或其式111中間產物中的各個雜質 在實施例中，每個獨立的雜質 小於或等於約〇. lwt%。 示 利用咼效液相層析法分析培美 曲塞二鈉的例子如下所 面效液相層析法倍伟田__ 糸使用 Bl)s HYPERSIL C18 (150x4· 6 隱’ 3"m)管柱及一波長23〇⑽的紫外光偵測器。流速為 K °心分鐘。流動相包括2種沖提液(Eluent)(A及B)。 沖提液A為-緩衝液（將136 “碟酸二氫鉀溶解於國 mL的mi 11! q纟，並利用稀釋_麟酸$ pH i ^ & 3.4±0.05’接者以〇45_孔徑的濾膜過遽沖提液b為 一過遽的乙猜。將培美曲塞二鈉樣本溶於沖提液A中，且 利用虱乳化鉀將溶液的pH值調整至7±〇。5。樣本的注射 量為約1〇ML，且管柱的溫度為3〇饥。在下列的條件下， 樣本通過管柱進行梯度沖洗。 ------ 分鐘 沖提液A 沖提液B ----- _ (% v/v) (% v/v) 0 95 5 20 80 20 30 ------- — 50 50 35 〜 一 _ 80 -----—-- 20 40 95 5 45 _ 95 5 依先引方法所產生之式B雜質的相對滯流時間（RRT ) 201118098 為約1. 23 RRT(培美曲塞=1)，其中以DMF作為溶劑。 培美曲塞二鈉相關物質的相對滯流時間（RRT)(培美曲 塞=1)如下所示：

22 201118098

在一實施例中，以HPLC分析發現，本發明所提供之培 美曲塞二納’其中的式D、E、F及B雜質含量皆少於〇 1%。 利用手性HPLC分析培美曲塞二納的例子，包括一 CHIRALPAK AD-H (250x4.6 mm，5 m)管柱及-波長 230 nm 之紫外光彳貞測器。流速為1.0 mL/分鐘。以稀釋液作為流 動相’其為含5%水的乙醇。樣本的注射量為約1 〇 ，且 管柱的溫度為35±2°C。 層析結果如第1圖所示。L-培美曲塞的滯流時間為約 6. 8分鐘。D-培美曲塞（式C之手性雜質）的相對滞流時 間（RRT)為約1.4 (培美曲塞=1)。 利用HPLC分析式111 ’包括使用一 BDS HYPERS IL C18 (150x4· 6 mm，3 m)管柱以及一波長230 nm的紫外光賴測 器。流速為1. 0 mL/分鐘。流動相包括2種沖提液（Eluent 及B)。沖提液a為一緩衝液（將1.36 g的鱗酸二氫斜溶於 lOOOmL的milli - Q-水’並利用稀釋的填酸將pH值調整至 3· 4±0. 〇5，接著以〇. 45 um孔徑的濾膜過濾此溶液）。沖提 液B為一過濾的乙腈。將培美曲塞二鈉樣本溶於甲醇及沖 提液A之混合液（體積比1: 4)中。樣本的注射量為約丄〇 23 201118098

uL，且管柱的溫度為3〇±2χ：。在下 管柱進行梯片..士 a 』的條件下 ^ 冲洗。在下列的條件 梯度沖洗。 、牛下，樣本通封 式III

，樣本通過 i管柱進行 示（式 下戶

24 201118098

25 201118098

在一實施例中’本發明提供一式Iu化合物，以肝】 分析發現’其中式A、。及J雜質的含量小於0.15%。

本發明包括藥學組成物，其中包括實質上不含；式A B及C雜質之培美曲塞二鈉，以及至少—藥學上可接^ 賦形劑。 又 本發明包括藥學組成物，其中包括實質上不含有式β 雜質之培美曲塞二鈉’以及至少一藥學上可接受之賦形劑。 本發明更包括藥學組成物，其中包括實質上不含有式 c手陡雜質之培美曲塞二鈉，以及至少一藥學上可接受之 賦形劑。 適合的藥學組成物可製成：口服之液態組成物，例如， ’合液、懸浮液、糖漿、藥液及乳液；腸外給予組成物，例 如’懸净液，乳液或水或非水相消毒溶液；以及口服固態 开ν式’例如’填充硬膠囊、壓縮片劑及凝膠，其中培美曲 塞一鈉為懸浮、溶解、分散或乳化於一載體中，且被一軟 26 201118098 膠材料所包覆。 本發明中所使用之藥學上可接受的賦形劑包括，作不 限於，稀釋劑，如搬粉、糊化殿粉、乳糖、粉狀纖維素、 微晶纖維素、構酸氫舞、填酸三辦、甘露醇、山梨醇、糖 及其類似物；黏結劑，如洋槐、瓜爾豆膠、謂'明膠、 聚乙稀基料酮、經丙基纖維素、經丙基甲基纖維素、預 糊化澱粉及其類㈣；崩解劑，如澱粉、澱粉鈉乙醇、預 糊化澱粉、cr〇spovidones、交聯羧甲基纖維素鈉、二氧化 石夕膠體及其類似H㈣，如硬脂酸、硬脂制、硬脂 酸鋅及其類似物；顆粒劑，如膠體二氧切及其類似物； 溶解或潮濕促進劑，如陰離子，陽離子，中性表面活性劑， 複合成型齊卜如各種等級的環糊精；以及釋放率控制劑， 如經丙基纖維素、經甲基纖維素、幾丙基甲基纖維素、乙 基纖維素、曱基纖維素、各種等級的甲基丙稀酸曱醋、蠛 及其類似物。其他適合的藥學上可接受之賦形劑包括，但 不限於’任-或複數個成膜劑、增塑劑、著色劑、調味劑、 甜味劑、㈣促進劑、防腐劑、抗氧化劑及其類似物。 【實施例】 比較例：N-[4-[2-(2-胺-4,7-ϋι1Η_Μ[2,3_ά] 嘧啶-5 —基）乙基]笨甲醯]_L_麩氨酸二曱基酯對曱苯磺酸 鈉鹽（使用二曱基甲醯胺溶劑）的製備 .於一錐形瓶中，在室溫下混合授拌二甲基甲醒胺（210 mL)、4 [2-(2-胺-4’ 7-二氫-4-氧—ιΗ_ 吡 $ [2, 3_d]嘧啶—5_ 27 201118098 基）乙基]笨曱酸（30 g)與 N-甲基嗎琳（31.2 mL)。將溫度

合液中並攪拌1小時。加入水（3〇〇 mL)及二氣甲烷（3〇〇 mL) 後，持續攪拌15分鐘’以形成分層。以二氣曱烷（丨5〇 mL) 提洗水溶液層°合併二氣曱烷層後，以7%的碳酸氫鈉溶液 (150 mL)清洗’接著完全濃縮，可獲得油性殘留物。在室 溫下’合併曱醇（1. 2 L)、對曱苯磺酸（28. 5 g)及油性殘留 物後’加熱至60-65。(：，並維持2-3小時。將懸浮液冷卻 至25-30°C後過濾。以甲醇（90 mL)清洗所獲得的固體，並 於45°C下乾燥2-3小時後，可獲得1 5 g的該標的化合物。 純度：98. 9% (HPLC 分析）。 式 A 雜質：〇. 29%，於約 1. 06 RRT。 實施例14-[4-[2-(2-胺-4,7-二氫-4-氧-111-吡咯[2,3-(1] 嘧啶-5-基）乙基]笨甲醯]-L-麩氨酸二曱基酯對甲苯磺酸 鈉鹽（式III)的製備

在氮氣環境下，將N-曱基-2-吡咯烷酮（10 mL)與 4-[2-(2-胺-4,7-二氫_4-氧-111-吡咯[2,3-3]嘧啶-5-基） 28 201118098 乙基]苯甲酸（i g)加至一圓底錐形瓶中，並於室溫攪拌。 將N-甲基嗎啉（1.06 mL)及2'氣-4, 6_二曱氧基4,3,5-三 嗪（0.65g)添加至上述反應混合物中，加熱至3〇_35它後， 維持1小時。加入L-麩氨酸二甲基酯鹽酸鹽（〇_ 78 g)並攪 拌1小時。加入水（10 mL)及二氯甲烷（1〇 mL)後，攪拌1〇_2〇 分鐘，以形成二氣曱烷層。以二氣曱烷（1() mL)萃取此水溶 性層。合併二氣甲烷層後，以飽和的碳酸氫鈉溶液（1 〇出[) 清洗，並完全濃縮以獲得一油性殘留物。將此殘留物溶於 曱醇（20 mL)中。於室溫下，添加對甲苯磺酸（159 g)至甲 醇（20 mL)後’加熱至60-65°C ’並維持1 -2小時。將此懸 浮液冷卻至25-30°C，並進行過濾。以曱醇（1 〇 mL)清洗所 獲得的固體’並於4 5 °C下乾燥5小時後，可獲得1. 〇 8 g 的標的化合物。 產率：51%. 純度：98. 36%，於 36. 63 RT. 式A雜質：未偵測到 不明雜質：0· 03°/。’ 於〜1. 〇4 RRT; 0. 02%，於〜1. 09 RRT ; 〇· 11%，於-1. 1 RRT; 0. 29%，於〜〇· 607 RRT; 0. 42%，於~0· 637 RRT。 N-[4-[2-(2-胺 _4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶 -5-基）乙基]苯甲酸甲酯雜質：〇. 17%，於〜1· 1 RRT。 實施例2 :培美曲塞二鈉的製備 於0-5 °C及氮氣的環境下，將實施例1所製備的 29 201118098 N [4 [2 (2 胺~4,7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5_ 基)乙基]苯曱醯]、L_麩氨酸二曱基酯對曱苯磺酸鈉鹽(5 g) 溶於氮敦化納溶液中（將1·91 g的氫氧化鈉溶於95.6 L的 水），並攪拌45分鐘。以1N HC1溶液（15 ‘彡將pH值調整 至7. 81。在氮氣的環境下，將混合物加至丙酮（300 mL)中， 持續授拌1小時，並過渡。以丙嗣（i 5此）清洗所獲得固體， 並於3 0 - 3 5 °C下乾燥e拉始，可從, 祀务5小時後，可獲得4· 1 g的該標的化 合物。 純度：99. 69% ; 式B雜質：未偵測到（HPLC分析） 手性雜質："·96%;式C之手性雜質：0.04%，於].39 RRT。 實施例3 : 式Α雜質的y備，其中R為曱基

於至溫下，將 卜[4-[2-(2-胺-4,7-二氫_4_氧—111_吡 嘻[2,3-d]…-基)乙基]苯甲酿]i麩氨酸二甲基醋對 甲苯績酸鈉鹽（20 g)懸浮於二甲基甲醯胺二甲基縮藤 (DMF_DMA) (15G 對甲笨確酸⑴0.3 g)， 將此混合物加熱至6Wc’並於此溫度下授拌Η小時。 將此溶液冷卻至室溫°加人二氣甲院（_…及水（200 201118098 mL) ’並攪拌15分鐘。產生分層，並以二氣曱烷（200 mL) 提洗水溶液層。在45-501：下，真空完全濃縮該合併的有 機層以獲知一濃縮液體。將水（5 0 0 mL)加入此濃縮液體 中，並於室溫下攪拌4小時。過濾懸浮液，以二異丙醚（1 〇〇 mL)清洗所獲得的固體，並在45_5〇t下，真空乾燥4小時。 將此固體溶於甲醇（48 mL) ’並缓慢地添加二異丙醚（4〇〇 mL)，添加過程持續超過45_6〇分鐘，接著在室溫下攪拌此 Jttj 5物1小時。將所獲得的懸浮液過渡，並以二異丙趟（5 〇 m L)清洗所獲得的固體。在4 5 _ 5 0 C下，真空乾燥4小時， 以獲得12. 5 g的該標的化合物。 純度：93. 4%。 MASS 分析：M-1 波峰：509. 3。 1H NMR (DMS0-d6，400MHz): (5 2. 0-2. 2 (m, 2H); 2. 45 (t, J = 7.2, 2H); 2.89-3.04 (m, 4H); 3. 〇i (s> 3H); 3 n (s，3H); 3.58 (s，3H); 3.64 (s，3H); 4.46 (m, 1H); 6.47 (s, 1H); 7.31 (d, J = 8.0, 2H); 7.78 (d，J = 8.〇，2H); 8.48 (s, 1H); 8.69 (d, J = 7.6,1H); 10.74 (br, s)； 10.82 (br 實施例4 :式B雜質的製備

31 201118098 於〇-5°C的溫度下’將實施例3所製備的式A雜質(5g) 添加至氫氧化納溶液（1.6 g的氫氧化鈉溶於8g此的水） 中，搜摔10分鐘。於0-5t的溫度下，添加乙醇（8〇以） 至此溶液中，授拌i小時。利用1N的ΗΠ (15此）將pH 值凋1至7-8。在氮氣的環境下，加入乙醇（22〇爪⑺並攪 拌30为鐘。在45-50°C的溫度下，真空濃縮此溶液以獲得 黏性物質。將曱醇（丨〇〇 mL)加至此黏性物質中以獲得一 固體’並收集。 於0-5°C的溫度下’將所獲得的固體懸浮於甲醇（25 mL) 中’並搜拌60小時》過濾此懸浮液，並以甲醇（5 mL)清洗 所獲得的固體。於45-50°c的溫度乾燥以獲得3. 0 g的該 ^的化合物。 重覆曱醇純化步驟’並於3〇_35°c的溫度下’真空乾 燥4小時以獲得2·。g純化的標的化合物。 純度：93. 79°/°，於 18. 5 52 RT (1. 21 〜RRT);培美曲 塞二鈉：2.38%，於 15.324 RT (HPLC 分析）。 MASS : M-1 : 481.3 。 1H NMR (DMS0-d6, 40〇ΜΗΖ)： δ 1.95-2.11 (m, 2H); 45 (t, J = 7.6, 2H)； 2.89-3.1 (m, 4H); 3.0 (s, 3H); 1 (S’ 3H); 4·2 (m，1H); 6.45 (s, 1H); 7.26 (d，J = 7.6, 2H); 7.74 (d，J = 7.6，2H); 8.12 (d，j =7.6，1H); 8.48 (ΜΗ); ΠΚ74 (br，s); 1Q.82 加，s)。 貫施例5 :培美曲塞二鈉的製備 32 201118098 於0-5°C的溫度下，將比較例所製備之n_[4_[2_(2_ 胺-4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶_5_基）乙基]苯曱

醯]-L-麩氨酸二甲基酷對甲笨磺酸鈉鹽（5 〇 §)(純度·· 98.9%，HPLC分析）溶於氫氧化鈉溶液（1.91 g的氫氧:鈉 溶於96 mL的水）中，並於氮氣泡（nitr〇gen bubbUng)T 攪拌。將此反應溶液於室溫下攪拌45分鐘後，過濾。利用 1N的HC1溶液（17 mL)將濾液的pH調整至7. 5 —8。在一⑽ 七下，將丙酮（300 mL)添加至此溶液中，攪拌i小時並 過濾懸浮液。以丙酮（15 roL)清洗所獲得之此固體，並於 3〇-35t；下’真空乾燥2小時’以獲得4々的該標的化 合物。 產率：88. 4 %. 純度：98. 91 % (HPLC 分析）

式B之雜質：〇. 17%，於].23 RRT 式C之手性雜質：〇_ 04%，於〜丨.4 RRT 實施例6:於30-35t的溫度下製備培美曲塞二納 於30-35°C的溫度下，將比較例所製備之N_[4_[2 —(2_ 胺4,7 —氫-4-氧-1H-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯曱 醯]L-麩氨酸二甲基酯對甲苯磺酸鈉鹽（丨〇〇以（純度： ^8. 9/。’ HPLC分析）溶於氫氧化納溶液（28. 7 g的氫氧化納 ^ 4 3 L的水），並於氮氣泡下攪拌。將此溶液於相同 的溫度攪拌45分鐘並過濾❶利用1N的ΗΠ溶液（172以） 將濾液的pH值調整至75_8。於25 3〇5>(：的溫度下，加入 33 201118098 乙醇（6 L) ’攪拌1小時，並過濾懸浮液。以乙醇（120 mL) 清洗所獲得的固體，並於35°c 真空乾燥3小時，以獲得 8 4. 6 g的該標的化合物。 純度：99. 74% ;式 B 雜質：〇4 %，於 1. 23 RRT (HPLC 分析）。 手性雜質：99. 86% ;式C之手性雜質：0. 14%，手性 HPLC分析。 實施例7 :式111化合物的製備 於室溫下，將N-[4-[2-(2-胺-4,7-二氫-4_氧-1!1-0比 咯[2, 3-d]嘧啶—5-基）乙基]苯曱醯;|_l-麩氨酸二甲基酯對 甲苯磺酸鈉鹽（ 205 g)溶於N-甲基吡咯烷酮（300 mL)中。 於60-65°C的溫度下，加入甲醇（6 L)，並維持1小時。將 此混合物冷卻至室溫，過濾，並以甲醇（3 niL)清洗所獲得 的固體’以及於40-45。(：下真空乾燥4小時以獲得170 g 的純化的標的化合物。 純度：99. 39%，HPLC 分析。 雜質：0. 25%，於 〇. 64 RRT; 〇. 11%，於 〇· 65 RRT; 〇. 〇6〇/0， 於 1.048 RRT ; 〇.03%，於 1.03 RRT。 揮發性雜質：NMP含量：170 ppm(氣相層析儀分析）。 濕度：0.5%(Karl Fisher 分析法）。 雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以 限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神 和範圍内’當可作些許之更動與潤飾，因此本發明之保護 34 201118098 範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。 【圖式簡單說明】 第 1 圖為 N-[4-[2-(2 -胺-4，7 -二氫 ~·4 -氧-1Η-° 比 口各 [2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯甲醯]-L-麩氨酸二鈉鹽鏡像異 構物之層析結果。 【主要元件符號說明】 無 35

Claims (1)

1. 201118098 七、申請專利範圍： 1. 一種製備如下式所示之N-[4-[2-(2 -胺- 4,7 -二氫 -4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯曱醯]-L-麩氨 酸二曱基酯對曱苯磺酸鹽的方法，

   其中R =烧基 包括： a)在N-曱基吡咯烷酮（NMP)存在下，將式II之 4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基） 乙基]苯甲酸

   式II 與L-二烷基麩氨酸鹽酸反應，以獲得N-[4-[2-(2-胺 -4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯甲 醯]-L-麩氨酸二甲基酯；以及 1))於一有機溶劑中，將1[4-[2-(2-胺-4,7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯甲醢]-L-麩氨酸二 甲基酯與對甲苯磺酸反應。 2. 一種製備如式III所不之N_[4-[2_(2 -胺- 4,7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-基）乙基]苯曱醯]-L-麩氨酸二甲基酯對曱苯磺酸鹽的方法， 36 201118098

   式III 其實質上不含有式A之雜質，

   Formula A 包括： a)在N-甲基吡咯烷酮存在下，將式11所示之4-[2-(2-胺 - 4，7 -二氮-4-氧-1H-11 比 11 各[2，3-d] °密。定- 5- yl)乙基]苯 甲酸

   與L-麩氨酸二甲基酯鹽酸反應以獲得N-[4-[2-(2-胺 -4，7_ 二氫-4 -氧[2，3-d]°密0定-5-yl)乙基]苯甲 酿]-麵氨酸二曱基酯；以及 b)在一有機溶機中，將N-[4-[2-(2 -胺_4,7_二氫- 4-氧-1Η-°比σ各[2,3-d]°密咬- 5- yl)乙基]苯曱酸]-L -麩氨酸二 甲基酯與對曱苯磺酸反應。 3.如申請專利範圍第1及2項所述之方法，其中步驟 37 201118098 a)在一偶聯劑及一驗的存在下進行。 4.如申請專利範圍第3項所述之方法 為2-氣-4 6--甲氧其〗q q - * ，、干-亥偶聯劑 nRfn 氧基]，3,5 —二嗪（G贿）、異丁基氣甲酸 )、二環己碳二亞胺（D⑹與Hi基苯並三氣唾 (HOBt)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙某 其鹽酸鹽及卜經基苯三唾（_).基）碳二亞胺⑽C)或 請專利範圍第3項所述之方法，其中該驗為 N甲基馬琳或二乙基胺。 為^如申請專利範圍第3項所述之方法，其中該偶聯劑 .、，、虱，一甲氧基—I 3, 5_三嗪（CDMT)，且兮驗A N 甲基嗎啉。 J且。玄鹼為N — 7. 如申請專利範圍第項所述之方法，其中 驟a)之反應在約〇sC至約50eC下進行。 、μ , 8. 如中請專利範圍第2項所述之方法，包括： a)在Ν-甲基_㈣存在τ 1 ::;(…，7-二氣一叫 U 彻 Ι:Γ) 土本曱酸與L__麩氨酸二甲基酯鹽酸鹽及卜 曱氧基—U 3’ 5~三嗪（CDMT\及N-曱基嗎啉反應；

   類下與對甲苯績酸反應，接著對該反應混 物進入有機層 中’以及 c) 在一醇 38 201118098 合物加熱。 9.一種如式111所不之]^-[4_[2-(2_胺-4，7-二氮 -4 -氧-1H-0比0各[2, 3-(1]〇密。定-5-丫1)乙基]苯曱醯]-L -楚氨 酸二曱基酯對甲苯磺酸鹽，其具有少於約0. 1 %之式A雜質。

   Formula A 10. 一種製備實質上不含式A、B及C雜質之培美曲塞 二鈉的方法，包括

   i) 在N-曱基吡咯烷酮存在下，將式11 所示之 4-[2-(2-胺-4,7-二氫-4-氧-111-吡咯[2,3-(1]嘧啶-511) 乙基]苯曱酸與

   L-麩氨酸二曱基酯鹽酸鹽反應，以獲得N-[4-[2-(2- 39 201118098 胺-4’ 7-二氫-4-氧-1H_吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-yl)乙基]苯曱 醯]- L-麵氨酸二甲基醋； 11)在一有機溶劑中，將N-[ 4-[2-(2-胺_4, 7-二氫_4_ 氧_1Η-°比》各[2, 3~d]嘧啶- 5-y 1)乙基]笨甲醯]-L-麩氨酸二 甲基醋與對甲笨磺酸反應’以提供一如式111所示之 N-[4-[2-(2-胺-4, 7-二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]。密咬 5 yl)乙基]本曱酿]麵氣酸二曱基自旨對甲本確酸鹽；以 及

   式III Ui) 在低於20°C下’以氫氧化鈉水溶液將式ΠΙ 化合物轉換為培美曲塞二鈉。 11 · 一種製備實質上不含式c手性雜質之培美曲塞二 納的方法，

   包括在低於2(TC下，將式III所示之 -4’ 7—二氫-4-氧-1H-吡咯[2, 3-d]嘧啶-5-yi)乙基]苯曱 酿]-趑氨酸二甲基醋對甲笨磺酸鹽與氫氧化納^溶液反 應0 40 201118098 ο 式III 12. 雜質。

   ch3 一種培美曲塞二鈉，其具有少於約（K lwt%之式A

   Formula A 13. 雜質。 一種培美曲塞二納，其具有少於約O.lwt%之式B

   Formula B

   14. 雜質。 一種培美曲塞二鈉，其具有少於約0. lwt %之式C

   15. 之雜質。 一種培美曲塞二鈉，其實質上不含有式A、B及C 41 201118098

   16. 一種培美曲塞二鈉，其實質上不含有式D、E及F 之雜質。 42