TW201101998A - Substance for destructing virus/bacteria to suppress viral/bacterial infection and proliferation and method of making the same - Google Patents

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Rong-Sin Wu
Shu-Fang Chu
Yu-Ting Chang
Wen-Ching Ko
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Description

201101998 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：
OH
六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 201101998 本發明關於一種廣效性崩解抑制病毒細菌感染增殖之物質及 其相關方法，特別是抑制有套膜者諸如流感病毒H1N1, H5N1， H5N1亞型及無套膜者諸如腸病毒71型，與其他如葡萄球菌等之 增殖感染之物質及其相關方法。 0 【先前技術】 造成全世界100多餘國疫情、並引起國際間高度重視的新型 流感H1N1亞型在歐美已經造成千分之二到四的死亡率，及近幾 年來世界各地仍頻傳局部性或全球性的禽流感H5N1亞型，或是 一直持續存在於人類生活環境，分佈於全球各地，在可預見的未 來尚不可能將之滅絕的重症腸病毒71型，都正在威脅著人類生 命。並且，所有專家都對於已經產生抗藥性的新型流感（H1N1) 即將為全球帶來的疫情隱憂，各國的衛生單位僅能進行消極的防 堵，卻對如何更有效的第一線阻抗該病毒束手無策。在某些情況 下，人可感染流感病毒但、不顯示症狀，卻仍可將病毒傳播給其他 人。因此，在體外防止病毒入侵被認為是預防抑制病毒感染增殖 的第一線。因此，提出有效性且廣效性的體外防止病毒或細菌感 染增殖的方法，對台灣亞洲及世界公共衛生具有重大的貢獻。 體外防止病毒或細菌感染的方法，大致可區分為物理性及化學性的 201101998 破壞抑制病毒或細菌感染增殖(消毒法)β物理性消毒法一般分⑴放射線(2) 過獻3)加熱⑷冷;東(5)乾燥等，物理性消毒法受到使用上空間範圍之限制； 相對而言化學消毒法之應用較為廣泛。通常被使用當成化學消毒劑 (disinfectant)者基本上包括酸，、鹼、酒精、甲醚、表面活性齡恤以咖）、 齒化物(halogen)、氧化物、重金屬、與染料等。基本上，這些消毒劑藉由 以下四種機制來達到抑制病毒細菌的感染增殖：⑴破壞病毒衣殼㈣邮 • 或套膜(envel叩e)或細菌細胞壁/膜(2)解垮其輸送(3)使病毒細菌蛋白質變性 (4)抑制酵素活性及/或接受器親和性。 化學消毒劑(disinfectant)的有效性與廣效性與否，基本上越有效則有 可能對人類越危險，消毒劑的選用則依賴以下幾個參數做決定：包括⑴針 對何種微生物？(2) 消毒狀魅職柄？⑶赫爾需求等等。 -般而s 個理想的化學消細（disinfeetam)麟符合下列的特質: φ 對廣泛性種類的傳染性微生物（infectant microbes)具有效性 (effectiveness);對有機化合物不敏感或可忽略；對微生物表面穿透能 力奇佳；不具腐餘性；不具毒性；對人類不具刺激性；具有持續性消毒效 能的化學穩定性；高水溶性；待消毒物體表面好的吸附力與持續的抑制增 殖感染作用；並且量產的價格合理。 然而，目前對於具有上列特質，且可有效性及廣效性破壞有/ 無套膜病毒及細菌、降低感染率以及對人體無害的抑制病私細菌 201101998 感染增殖之方法，仍有需求。 中華民國專利公告號1304338揭露一種破壞冠狀病毒致病性 之活性劑，活性成份為8-氫氧基辛烷酸(HO(CH2)7COOH)。該化 合物破壞冠狀病毒的外膜，使冠狀病毒無法黏附宿主細胞而失去 致病能力。 美國專利申請案US20090035339A1揭露一種使病毒喪失活 性的方法，包括局部投與有機酸、短鏈烷基的陰離子界面活性劑 混合物、鈣離子螯合劑及減泡劑的組合物。利用有機酸使病毒吸 附於該陰離子界面活性劑上，再經由該陰離子界面活性劑與病毒 磷脂質套膜或外殼作用，破壞病毒。 近數十年來，世界各地仍頻傳局部性或全球性的禽流感或近 年的新型流感病毒H1N1亞型流行，威脅人類生命。而流感病毒 也開始對已知藥物產生抗藥性。因此，提出（1)有效性且（2)廣效性 具實用性的體外防止病毒/細菌感染增殖的方法，特別是抑制（1) 有套膜的流感病毒H1N1，H5N1, H5N1亞型及(2)無套膜的腸病毒 71型與（3)細菌增殖感染之方法，對世界公共衛生具有重大貢獻。 【發明内容】 本發明關於一種廣效性崩解抑制病毒細菌感染增殖之物質及 201101998 其相關方法，包括使用2-(10-氫硫基癸基）丙二酸 (2-(10-mercaptodecyl)malonic acid)或其鹽類，特別是抑制（1)有套 膜的流感病毒H1N1，H5N1，H5N1亞型及(2)無套膜的腸病毒71型 與(3)金黃色葡萄球菌增殖感染之方法。 本發明亦提供一種2-(10-氫硫基癸基）丙二酸之製造方法，包 括使 2-(10-溴癸基）丙二酸乙 a旨（ethyl 2-(10-bromo-decyl)malonate) 與硫脲(thiourea)及乙醇反應後，再與NaOH水溶液反應。 本發明之具體實施詳細說明如下，然而以下的實施例僅用於 進一步揭露本發明之技術内容，不應藉以限制本案的發明範疇。 【實施方式】 本發明提供一種廣效性抑制病毒細菌感染增殖之方法，包括 使用 2-(10-氫硫基癸基）丙二酸(2-(10-mercaptodecyl)malonic acid) 或其鹽類。 化合物2-(10-氫硫基癸基）丙二酸之製造，如第1圖所示，先 使 2-(10-漠癸基）丙二酸乙酿（ethyl 2-(10-bromo-decyl)malonate)與 硫脲(thiourea)及95%乙醇反應後，該反應物再與NaOH水溶液反 應。該反應物經調整pH值為約2之後，以乙醚萃取。移除萃取 物中的溶劑之後，獲得2-(10-氫硫基癸基）丙二酸 201101998 (2-( 10-mercaptodecyl)malonic acid)。該製造方法中，2-( 10-漠癸基） 丙二酸乙酯與硫脲的莫耳比為1:1.2，反應溫度較佳為乙醇沸點， 約 78〜79〇C。 本發明之2-(10-氫硫基癸基）丙二酸的鹽類沒有特別限制，例 如鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、硝酸鹽、鹽酸鹽或碳酸氫鹽等。上述2-(10-氫硫基癸基）丙二酸本身或其鹽類可將病毒表面的套膜（envelope) 或外殼（coat)部份或全部分解，喪失對宿主細胞親和性結合的感染 能力。 本發明之2-(10-氫硫基癸基）丙二酸或其鹽類較佳以溶液型 態存在，可溶於水、CrCs醇類'、四氫呋喃（THF)、二曱基亞砜 (DMSO)、或這些的混合溶劑中，但不限於此。較佳溶於乙醇及水 的混合液。 本發明中，2-(10-氫碌基癸基）丙二酸或其鹽類的濃度較佳為 溶液總重的大於20ppm至小於lOOOppm ，不包含20ppm及 lOOOppm。更佳為溶液總重的45-750ppm。當2-(10-氫硫基癸基) 丙二酸或其鹽類的濃度低於20ppm時，無法產生抑制病毒感染功 效；超過1 OOOppm時，則對宿主細胞產生細胞毒性。 本發明所述之「病毒」係生物學上定義之病毒，由核酸分子與 蛋白質外殼所構成，根據外型及感染的表面組成結構基本上可區- 201101998 分為兩種類（1)有套膜（envelope)的病毒與（2)無套膜（envei〇pe)的 病毒。本發明之抑制病毒細菌感染增殖之方法較佳，可使有套膜 的流行性感冒病毒喪失活性，該流感病毒包括H1N1、H1N2、 H2N2、H3N2、H3N8、Η5ΝΠ、H5N3、H5N8、H5N9、H7N 卜 H7N2、 H7N3、H7N4、H7N7、H9N2及H10N7亞型，但不限於此。該流 感病毒尚包括通常稱為"西班牙（Spanish)流行性感冒”、"亞洲 (Asian)流行性感冒"、"香港(Hong Kong)流行性感冒"、"禽類流行 性感冒"(avian influenza)、"豬流行性感冒"(swine influenza)、"馬 流行性感冒"及"犬流行性感冒"之亞型等。本發明之實施例中， 2-(10-氫硫基癸基）丙二酸或其鹽類可有效使具有套膜（envelope) 的人流感病毒H1N1亞型及禽流感病毒（avian influenza virus)H5Nl亞型、H5N2亞型喪失活性，並且不產生使宿主細胞 變形、溶解（lysis)或死亡（apotosis)等的細胞毒性（cytotoxic)。 本發明之抑制病毒細菌感染增殖之方法較佳’更可使無套膜 的腸病毒（enterovirus)喪失活性。腸病毒屬於小RNA病毒科 (Picornaviridae )，為一群病毒的總稱，該腸病毒依據基因序列 分析結果，歸類分為人類腸病毒A、0、C、D (Human enterovirus A、B、C、D)型，其中腸病毒71型（enterovirus type 71)被歸類 於人類腸病毒A型。在所有腸病毒中，除了小兒麻痒病毒之外’ 201101998 以腸病毒71型（Enterovirus Type 71 )最容易引起神經系統的併 發症。本發明之實施例中，2-(10-氫硫基癸基）丙二酸或其鹽類可 有效使無套膜（envelope)的腸病毒包括71型崩解喪失活性，並且 不產生使宿主細胞變形、溶解（lysis)或死亡（ap〇t〇sis)等的細胞毒 性（cytotoxic)。 本發明之抑制病毒細菌感染增殖之方法較佳更可使葡萄球菌 喪失活性失去感染能力，於葡萄球菌屬中包含有二十六種葡 萄球菌。其中分別以金黃色葡萄球菌(汾ajp_c〇ccus⑽阳㈣、表皮葡萄球 phyheoeeus epidennidis)、膦^_荀萄珠菌(Staphylococcus saprophyticus~) 為最常見且可致病之葡萄球菌，但不限於此。金黃色葡萄球菌除了是食品 工業㈣的主要簡菌外，亦是狀巾造紐性院域㈣致病菌，常造 成手術。P位感染或其他全身性感染。本發明之實施例中，2_(1〇_氮硫基癸基) 或其孤類可有效使金黃色葡萄球菌(及^awreMS)喪失活性 失去致病能力。 本發明所述之「宿主細胞」包括人類細胞，但不限於此。該宿 主A胞也可來自非人的動物，例如鳥類，包括家禽或野生候鳥； 甫乳類動物’包括鼠、羊、牛、豬、或馬；非人靈長類動物，包 括猴、猿、或黑猩猩；或其他動物。 本發明之抑制病毒細菌感染增殖之方法，包括使2-(10-氫硫 201101998 基癸基）丙二酸（2-( 10-mercaptodecyl)malonic acid)或其鹽類在活 體外與病毒接觸。 本發明所述之「活體」包括人體，但不限於此。該活體也可包 括非人的動物，例如鳥類，包括家禽或野生候鳥；哺乳類動物， 包括鼠、羊、牛、豬、或馬；非人靈長類動物，包括猴、猿、或 黑猩猩；或其他動物。 φ 本發明所述之「活體外與病毒細菌接觸」包括使2-(10-氫硫基 癸基）丙二酸或其鹽類與病毒或細菌在含有活性的人或非人的動 物組織或細胞之試管或培養孤等的動物體外接觸。 本發明之抑制病毒細菌感染增殖之方法，更包括將2-(10-氫 硫基癸基）丙二酸（2-( 10-mercaptodecyl)malonic acid)或其鹽類添 加於空氣清淨用品、個人衛生用品、或纖維材料中。 本發明之2-(10-氫硫基癸基）丙二酸或其鹽類可添加於個人 衛生用品或空氣清淨用品，例如洗手乳、沐浴乳、洗髮精、乳液、 或空氣清淨喷劑。當應用於個人衛生用品或空氣清淨用品時，可 根據該用途所屬技術領域中慣用的調配方法，與其他添加劑適當 混合。 本發明之2-(10-氫硫基癸基）丙二酸或其鹽類亦可添加於纖 維材料中。該纖維材料可包括高分子不織布、天然纖維材料、或 11 201101998 此等之混織物，但不限於此。該纖維材料可應用於口罩、隔離衣 或空氣濾網等用途。而且，該纖維材料可視需要設置於口罩、隔 離衣或空氣濾網的最外層或内層。 [實施例1] 2-(10-氫硫基癸基）丙二酸製程 將 2-( 10-溴癸基）丙二酸乙酯（ethyl 2-( 10-bromo-decyl)malonate) (5.5 mmole)、硫腺（thiourea) .(6.6 mmole)及 95%的乙醇（25. mL) 放置於50mL圓底瓶中，加熱迴流5小時。再加入2.0M NaOH水 溶液（25 mL)繼續加熱迴流約15小時。反應完成後，加入2MHC1 水溶液，使溶液pH值約為2。該溶液以乙醚萃取三次，收集有機 層，以飽和食鹽水清洗。再用無水硫酸鎂除去有機層中的水分， 濃縮後於真空系統乾燥，移除有機溶劑，獲得2-(10-氩硫基癸基） 丙二酸（2-(10-mercaptodecyl)malonic acid)(圖 1)。 [實施例2]抑制流感病毒株H1N1亞型感染增殖試驗 將狗腎（Madin-Darby canine kidney; MDCK) (ATCC CCL-34) 細胞（數目約5xl05)培養於6孔微量細胞培養盤（Nunc)中，直到細 胞培養完全，留待以下使用。 之後，選取流感病毒株H1N1亞型（A/WSN/33)(購自美國 201101998 ATCC)’該病毒株為具有病毒力價105PFU/mL (定義為每1 mL含 有10萬個病毒’使5〇%細胞感染的力價）。將此種病毒加入500 μΐ 的.2 倍/農度的細胞培養液(Eagieis minimum essential medium (MEM) ’含有胎牛血清、非必須胺基酸、l-麵酿胺酸（glutamine)， 盤林西林(penicillin)/鏈黴素（streptomycin))。 另外，將實施例1製造的2-(10-氫硫基癸基）丙二酸分別以濃 • 度 Oppm， 6ppm， 20ppm， 60ppm， 200ppm， 600ppm， 2000ppm，及 6000ppm濃度溶於乙醇水溶液（乙醇：水= 1:10)中。將此溶液分別 與上述含有病毒之細胞培養液1:1等量混合，室溫（約25°C)下靜 置30分鐘。此為病毒處理組。總溶液中的細胞培養液和2-(10- ’氫硫基癸基）丙二酸的濃度均減半。 另外，以扁同的2-(10-氫硫基癸基）丙二酸濃度，與等量未添 加病毒的2倍濃度的細胞培養液進行如上述相同的作用，作為對 • · 照組。總溶液中的細胞培養液和2-(10-氫硫基癸基）丙二酸的濃度 均減半。 於上述混合病毒及2-(10-氫硫基癸基）丙二酸之混合液以及 作為對照的混合液，分別加入上述具有MDCK細胞的培養盤上。 37°C恆溫感染2小時，使病毒吸附於感染細胞上。 抽出上述培養盤中的作用液，以PBS (磷酸緩衝生理鹽水； 13 201101998 phosphate buffered saline)(Invitrogen)清洗細胞一次。同時也洗掉 未感染、吸附細胞的病毒。 培養盤上各孔再分別加入2 mL的上述的1倍濃度的細胞培 養液（不含胎牛血清（fetal bovine serum))。於37°C怪溫培養36小 時後，於倒立顯微鏡(Zeiss)下觀察各孔的細胞病變效應（cytopathic effect; CPE)。產生細胞病變效應的細胞呈現圓形化、脫落及壞死 現象（如圖2)。三重覆結果歸納如表1所示。 [表1] 2-(10-氫硫基癸基）丙二酸的抑制病毒感染效應
2·(10·氫硫基癸基)丙二酸濃度(ppm) 0 3 10 30 100 300 1000 3000 人流感病毒H1N1亞 型添加2-(10-氫硫基 癸基)丙二酸 CPE + V + +/- CTX CTX 僅2-(10-風破基癸基） 丙二酸（細胞毒性測 試） 士 — /, ^ CPE CTX CTX *CPE表示細胞病變效應；+ :產生細胞病變（陽性）；-:無細胞病 變（陰性）；CTX表示具有細胞毒性。 結果顯示’在添加流感病毒H1N1型與2-(10-氫硫基癸基）丙 二酸的病毒處理組中，當2-(10-氫硫基癸基）丙 二酸添加量超過 14 201101998 3Oppm時，細胞未發生病變（呈陰性）。此現象的形成可解釋為病 毒與2-(10-氫硫基癸基）丙二酸作用而喪失活性失去致病力所造 成，因此細胞未出現病變。 另外，在未添加上述流感病毒H1N1塑的對照組中，低濃度 的2-(10-氫硫基癸基）丙二酸（S300ppm)未使細胞呈現病變（CPE 呈陰性）。此可解釋為在低於300ppm的濃度下’ 2-(10·氫硫基癸 基）丙二酸不會傷害細胞。當2-(10_氫硫基癸基）丙二酸添加量超過 lOOOppm，才出現細胞毒性。 [實施例3]抑制具克流感（Tamiflu™)抗藥性的流感病毒株H1N1 亞型感染增殖試驗 將狗腎（Madin_Darby canine kidney; MDCK) (ATCC CCL-34) 細胞（數目約5xl05)培養於6孔微量細胞培養盤(Nunc)中，直到細 胞培養完全，留待以下使用。 之後，選取具克流感（TamifluTM)抗藥性的流感病毒株H1N.1 亞型(A/TW/066/09)(購自美國ATCC)，該病毒株為具有病毒力價 7xl05PFU/mL (定義為每1 mL含有10萬個病毒，使50%細胞感 染的力價）。 將前述兩種病毒分別加入500 μΐ的2倍濃度的細胞培養液 15 201101998 (Eagle’s minimum essential medium (MEM)，含有胎牛血清、非必 須胺基酸、L-麩酿胺酸（glutamine)，盤林西林(penicillin)/鍵徽素 (streptomycin))。 另外，將實施例1製造的2-(10-氫硫基癸基）丙二酸分別以
Oppm，6ppm，20ppm，200ppm, 600ppm，2000ppm,及 60〇〇ppm 的濃 度溶於乙醇水溶液（乙醇：水= 1:10)中。將此溶液分別與上述含有 病毒之細胞培養液等量混合，室溫（約25。〇下靜置30分鐘°此為 病毒處理組。總溶液中的細胞培養液和2-(10-氫硫基癸基）丙二酸 的濃度均減半。 另外，以相同的2-(10-氮硫基癸基）丙二酸濃度’與等量未添 加病毒的2倍濃度的細胞培養液進行如上述相同的作用’作為對 / 照。總溶液中的細胞培養液和2-(10-氫硫基癸基）丙二酸的濃度均 減半。 於上述混合病毒及2-(10-氫硫基癸基）丙二酸之浪合液以及 作為對照的混合液，分別加入上述具有MDCK細胞的培養盤上 37°C恆溫感染2小時，使病毒吸附於感染細胞上° 抽出上述培養盤中的作用液，以PBS (磷酸緩衡生理藥水 同時也洗掉 phosphate buffered saline)(Invitrogen)清洗細胞一次。 未感染、吸附細胞的病毒。 201101998 培養盤上各孔再分別加入2 mL的上述的1倍濃度的細胞培 養液（不含胎牛血清（fetal bovine serum))。於37°C恒溫培養36小 時後’於倒立顯微鏡(Zeiss)下觀察各孔的細胞病變效應（cytopathic effect; CPE)。產生細胞病變效應的細胞呈現圓形化、脫落及壞死 現象。三重覆結果歸納如表2所示。 [表2]2-(10-氫硫基癸基）丙二酸抑制克流感抗藥株H1N1感染效應
2-(10-氫硫基癸基)丙二酸濃度加的 10 30 100 300 1000 3000
流感病毒H1N1(克流 感抗藥株）亞型添加 2-(10-氮琉基癸基)丙 二酸 僅2-(10-氫硫基癸基) 丙二酸（細胞毒性測 試）
CPE
CPE + +/-
CTX
CTX
CTX
CTX ;-:無細胞病變（陰性）； *CPE表示細胞病變效應；+ :產^ CTX表示具有細胞毒性。 結果顯示，在添加上述具克流感抗藥株流感病毒腦型與 2_(10_氫硫基癸基）丙二酸的病毒處理組中當2.氫硫基癸基） 丙二酸添加量超過3Gppm時，細胞未發生病變（呈陰性）。此現象 201101998 的形成可解釋為克流感抗藥株的流感病毒H1N1與2-(10-氫硫基癸 基）丙二酸作用而喪失活性失去致病力所造成，因此細胞未出現病 變。 另外’在未添加上述克流感抗藥株的流感病毒HiNl型的對照 組中，低濃度的2-(10-氫硫基癸基）丙二酸（$3〇〇ppm)未使細胞呈 現病變（CPE呈陰性）。此可解釋為在低於3〇〇ppm的濃度下，2-( 1 〇_ 氫硫基癸基）丙二酸不會傷害細胞。當2-(10-氫硫基癸基）丙二酸添 加量超過1 OOOppm，才出現細胞毒性。 [實施例4]崩解具克流感（Tamiflu™)抗藥性的流感病毒株H1N1 亞型斌驗 具克流感（TamifluTM)抗藥性的流感病毒株H1N1亞型（簡稱克 流感抗藥株H1N1 )(A/TW/066/09)(購自美國ATCC)，該病毒株為 具有病毒力價7xl05PFU/mL (定義為每1 mL含有10萬個病毒， 使50%細胞感染的力價）。 接著’克流感抗藥株H1N1檢體透過靜電作用力方式，固定於已修飾 元成並帶正電L-聚離胺酸溴化氫(poly-L-lysine hydrobromide)之雲母片 上’進行原子力顯微技術之探討，比較未經2-(10-氫硫基癸基)丙二酸處理 别與經2'(10_氫硫基癸基)丙二酸處理後之H1N1病毒影像，證明H1N1病 201101998 毒在經2-(ιο-氫硫基癸基)丙二酸處理後病毒表面產生崩解而喪失對宿主親 合結合失去致病力的現象。 經過甲醇以及去離子水清潔的雲母片後，將含有謹％ (wt/vQl) L_聚離 胺酸、/臭化氫溶液滴於#母片上並反應3G分鐘之後，用去離子水清洗雲母片 表面數次。再將克流感抗藥;^ H1N1於室溫下加入至雲母片上5分鐘，之 後迅速進行原子力顯微術實驗。 # 透過多重模式中掃描式探針顯微鏡中的原子力顯微鏡進行研究，所使 用的是輕敲式原子力顯微鏡(SPI300 HV，SeikQ Instruments ^
Japan)，其中並結合光學顯微鏡(Mlt〇t〇y〇,坤如)觀察樣本。原子力顯微鏡 使用的探針其頻率為140 kHz。透過標準衍射光柵(sdk〇㈣㈣咖 Chiba，Japan)進行AFM探針之校正。輕敲式原子力顯微技術是透過維持 懸臂樑振幅之高低進行掃描。掃描先從2〇 μπι χ 2〇 μηι區域大小開始，控 φ 制其中包含上百個克流感抗藥株Η1Ν1病毒顆粒，之後逐漸將掃描影像大 小，縮減至單一病毒區域大小(3〇〇⑽χ 3〇〇當未掃描至單一病毒顆 粒影像時，會先來回掃描克流感抗藥株Η1Ν1樣本，確認探針掃描不會出 現加工影像，例如遲滯現象。第3圖Α為克流感抗藥株Η1Ν1病毒之原子 力顯微術三度空間影像，可清楚看到單一克流感抗藥株H1N1病毒顆粒。 第3圖A’為其側面剖析圖。 接者處理經過2-(10-氫硫基癸基)丙二酸作用過的克流感抗藥株ΗΐΝι 201101998 病毒。經過甲醇以及去離子水清潔的雲母片後，將含有〇.〇1% (Wt/v〇l) l 聚離胺酸溴化氫溶液滴於雲母片上並反應30分鐘之後，用去離子水清洗雲 母片表面數次。再將克流感抗藥株H1N1於室溫下加入至已修飾之雲母片 上5分鐘’接著將2-(1〇_氫硫基癸基)丙二酸(3〇 ppm)加入至雲母基材上的 病毒樣本上反應5分鐘，之後迅速進行原子力顯微術實驗^掃描結果如第 3圖B三度空間影像所示。第3圖B，為其側面剖析圖。 另外使用2-(10-氫硫基癸基)丙二酸(1〇〇〇 ppm)，以相同方式加入雲母 片上的病毒樣本上反應5分鐘，之後迅速進行原子力顯微術實驗。掃描結 果如第3圖C所示’第3圖C為三度空間影像’第3圖C，為側面剖析圖。 第3圖中的A’ B及C圖可清楚看到，經2-(1〇_氫硫基癸基）丙二酸處 理之克流感抗藥株H1N1病毒已有崩解之現象。由第3圖之側面剖析圖a, 分析得知’未處理的克流感抗藥株H1N1病毒高度為約54奈米，在經2屮〇_ 氫硫基癸基)丙二酸(3G ppm)處理後，扁平化成為約7奈米的高度在經過 2-(10-氫硫基癸基)丙二酸(1000ppm)處理後，扁平化成為約$奈米的高度。 而且，比較第3圖之側面剖析圖B’與C’後得知，經較高濃度(麵ppm) 處理者(第3 _，H1N1病毒高度較低，顯㈣解裎度較高。此兩現象的 形成可了解是因為病毒與2-(1〇•氫硫基癸基)丙二酸作用病毒外部套膜遭受 破壞，内容物流失而扁平化所造成。 201101998 [實施例5]抑制禽流感病毒株H5N1亞型感染增殖試驗 將狗腎（Madin-Darby canine kidney; MDCK) (ATCC CCL-34) 細胞培養於96孔微量細胞培養盤（Nunc)中，直到細胞培養完全， 留待以下使用。 另外，選取禽流感病毒株 H5N1 亞型 (TW1209/03(H5N2)AIV)(家畜衛生試驗所分離台灣野外株），該病 毒株為具有病毒力價10 EID5〇/0. lmL(定義為每〇· lmL含有1〇〇〇 萬個病毒，使50%雞胚感染的力價）或者血球凝集單位力價 64HAU/25#L(定義為每25yL含有64個血球凝集單位的力價） 者.。 將此病毒株以PBS(Sigma)稀釋1 : 1〇〇後，與溶於乙醇水溶 液（乙醇：水= 1:10)之濃度為 Oppm，6ppm，20ppm，200ppm，6〇〇ppm， 2000ppm，及6000ppm的2-(10-氧硫基癸基）丙二酸，分別等量混 合，室溫（約25°C)下靜置30分鐘。此為病毒處理組。總溶液中 2-(10-氫硫基癸基）丙二酸的濃度減半。 另外以相同的2-(10-氫硫基癸基）丙二酸濃度’與等量未添加 病毒的PBS溶液進行相同的作用，作為對照。總溶液中2_(1〇_氣 硫基癸基）丙二酸的濃度減半。 於上述混合病毒及2-( 10-氫硫基癸基）丙二酸之混合液以及 21 201101998 作為對照的混合液中，各自加入100" L的MEM (minimum essential medium)培養液（GIBCO)，再分別加入上述具有MDCK細 胞的培養盤上。37°C恆溫感染2小時，使病毒吸附於感染細胞上。 抽出上述培養盤中的作用液，以MEM培養液清洗細胞。同 時也洗掉未感染、吸附細胞的病毒。 培養盤上各孔再分別加入100#L的MEM培養液，於37°C 恆溫培養7天後，於倒立顯微鏡(Nikon)下觀察各孔的細胞病變效 應（cytopathic effect; CPE)。產生細胞病變效應的細胞呈現圓形 化、脫落及壞死現象。同時檢測各孔培養液的血球凝集活性 (hemagglutination activity)。取各孔培養液5〇"L放在96孔微量 V底盤(Nunc)，加入25//L的1%雞紅血球懸浮液（雞紅血球懸 浮於PBS，自行配製）。混合均勻後置於室溫3〇分鐘判讀是否產 生血球凝集現象，血球均勻分布於試驗盤底部表示為陽性，血球 沉降於試驗盤底部呈現日本國旗樣表示為陰性。三重覆結果歸納 如表3所示。 [表3] 2-(10-氫硫基癸基）丙二酸抑制禽流感病毒H5N1感染效應 氫硫基癸基)丙二酸濃度(ppm) 0 3 10 30 100 300 1000 3000 CPE + + + + - CT CT 22 201101998 禽流感病毒H5N2 CPE + + + + 亞型添加2-(10- HA + + + + 氫硫基癸基)丙二 酸 僅2-(10-氫硫基 癸基)丙二酸 * ΟΤϊΤ-' .. . CPE — • *CPE :細胞病變效應；HA :血球凝集活性；cT:具有細胞毒
CT
CT CTcT" + 性，+ .陽性，表對病毒感染增殖無抑制作用；_ :陰性，表抑制病毒 感染增殖。 在添加禽流感病毒H5N1型與2-(10-氫硫基癸基）丙二酸的病 毒處、且中’當2-( 10-氫硫基癸基）丙二酸添加量超過1 〇〇ppm時， 細胞未發生病變（呈陰性此現象的形成可了解是因為病毒與 φ 2-(1〇_氫硫基癸基）丙二酸作用而喪失活性，失去致病力所造成。 因此細胞未出現病變及血球凝集的現象。 另外’在未添加禽流感病毒H5N1型的對照組中，低濃度的 2_(1〇_氣琉基癸基）丙二酸（S3〇〇ppm)未使細胞呈現病變（CPE呈 陰性）。此可解釋為在低於300ppm的濃度下，2-(10-氫硫基癸基) 丙 不會傷害細胞。當2-(10-氫硫基癸基）丙二酸添加量超過 lOOOppm，才出現細胞毒性(CpE呈陽性）。 23 201101998 從血球凝集力價（HA)的結果來看，濃度在lOOppm以上時， 血球未出現凝集（HA呈陰性亦可說明為’當2-(10-氫硫基癸基) 丙二酸的濃度在lOOppm以上時，有效使禽流感病毒H5N2型喪 失活性’因此病毒未增殖，血球凝集呈現陰性。 [實施例6]抑制禽流感病毒株H5N2亞型感染增殖試驗 將狗腎（Madin-Darby canine kidney; MDCK) (ATCC CCL-34) 細胞培養於96孔微量細胞培養盤（Nunc)中，直到細胞培養完全， 留待以下使用。 選取禽流感病毒H5N2亞型株(TW1209/03(H5N2)AIV ;家畜 衛生試驗所分離台灣野外株），該病毒株為具有病毒力價 1〇7EID5〇/0.lmL(定義為每O.lmL含有1000萬個病毒，使50%雞胚 感染的力價）或者血球凝集單位力價64HAU/25 μ L(定義為每 25 yL含有64個血球凝集單位的力價）者。 將此病毒株以PBS(Sigma)稀釋1 : 100後，與溶於乙醇水溶 液（乙醇·水-1: 1〇)之濃度為 〇ppm，6ppm，2〇ppm, 2〇〇ppm，600ppm， 2〇〇〇Ppm，及6000Ppm的2-(10-氫硫基癸基）丙二酸，分別等量混 合’室溫（約25。〇下靜置30分鐘《此為病毒處理組。總溶液中 2-(10-氫硫基癸基）丙二酸的濃度減半。 24 201101998 另外以相同的2-(10-氫硫基癸基）丙二酸濃度，與等量未添加 病毒的PBS溶液進行相同的作用，作為對照。總溶液申2_(1〇_氫 硫基癸基）丙二酸的濃度減半。 於上述混合病毒及2-(10-氫硫基癸基）丙二酸之混合液以及 作為對照的混合液中’各自加入1〇〇 " L的MEM (minimum essential medium)培養液(GIBCO)，再分別加入上述具有MDCK細 胞的培養盤上。37°C恆溫感染2小時，使病毒吸附於感染細胞上。 抽出上述培養盤中的作用液，以MEM培養液清洗細胞。同 時也洗掉未感染、吸附細胞的病毒。 培養盤上各孔再分別加入100yL的MEM培養液，於37°C 恆溫培養7天後，於倒立顯微鏡(Nikon)下觀察各孔的細胞病變效 應（cytopathic effect; CPE)。產生細胞病變效應的細胞呈現圓形 化、脫落及壞死現象。同時檢測各孔培養液的血球凝集活性 (hemagglutination activity)。取各孔培養液 50//L 放在 96 孔微量 V底盤(Nunc)，加入25//L的1%雞紅血球懸浮液(雞紅血球懸 浮於PBS，自行配製）。混合均勻後置於室溫30分鐘判讀是否產 生血球凝集現象，血球均勻分布於試驗盤底部表示為陽性，血球 沉降於試驗盤底部呈現日本國旗樣表示為陰性。三重覆結果歸納 如表4所示。 25 201101998 [表4] 2-(10-氫硫基癸基）丙二酸抑制禽流感病毒H5N2感染效應 2-( 10-氫硫基癸基)丙二酸濃度(ppm) 0 3 10 30 100 300 1000 3000 禽流感病毒H5N2 CPE + + + + - CT CT 亞型添加2-(10-氫硫基癸基)丙二 酸 HA + + + + CT CT 僅2-(10-氫硫基 癸基)丙二酸 CPE + + *CPE :細胞病變效應；HA :血球凝集活性；CT:具有細胞毒 性；+:表對病毒感染增殖無抑制作用；表抑制病毒感染增殖。 在添加禽流感病毒H5N2型與2-(10-氫硫基癸基）丙二酸的病 毒處理組中，當2-(10-氫硫基癸基）丙二酸添加量超過100ppm時， 細胞未發生病變（呈陰性）。此現象的形成可了解是因為病毒與 2_(1〇_氫硫基癸基）丙二酸作用而喪失活性，失去致病力所造成。 因此細胞未出現病變及血球凝集的現象。 另外，在未添加禽流感病毒H5N2型的對照組中，低濃度的 2 (1〇氫硕·基癸基）丙二酸（$300ppm)未使細胞呈現病變（cpe呈 陰性）。此可解釋為在低於3〇〇ppm的濃度下，2-(l〇-氩硫基癸基) 26 201101998 丙二酸不會傷害細胞，當2_(1〇氫硫基癸基）丙二酸添加量超過 lOOOppm，才出現細胞毒性（cpE呈陽性）。 從血球凝集力價（HA)的結果來看，濃度在i〇〇ppm以上時， 血球未出現凝集（HA呈陰性）。亦可說明為，當2-(10-氫硫基癸基） 丙二酸的濃度在lOOppm以上時，有效使禽流感病毒H5N2型喪 失活性，因此病毒未增殖，血球凝集呈現陰性。 [實施例7]崩解禽流感病毒株H5N2亞型試驗 選取禽流感病毒株H5N2亞型（TW1209/03(H5N2)AIV)(家畜 衛生試驗所分離台灣野外株），該病毒株為具有病毒力價 107EID5〇/0.1mL(定義為每〇.lmL含有1〇〇〇萬個病毒，使5〇%雞胚 感染的力價）或者血球凝集單位力價64HAU/25 // L(定義為每 25 yL·含有64個血球凝集單位的力價）者^接著，禽流感病毒H5N2 檢體透過靜電作用力方式，固定於已修飾完成並帶正電L_聚離胺 酸邊化氫（poly-L-lysine hydrobromide)之雲母片上，進行原子力顯 微技術之探討，比較未經2-(10-氫硫基癸基）丙二酸處理前與經 2·(10-氫硫基癸基）丙二酸處理後之H1N1病毒影像，證明H1N1 病毒在經2-(10-氫硫基癸基）丙二酸處理後病毒表面產生崩解而喪 失對宿主親合結合失去致病力的現象。 27 201101998 經過曱醇以及去離子水清潔的雲母片後，將含有〇 〇ι%㈣㈣l•聚離 、氫'谷液/商於雲母片上並反應30分鐘之後，用去離子水清洗雲母片 表面數-人。再將禽流感病毒Η·亞型於室溫下加人至雲母片上5分鐘， 之後迅速進行原子力顯微術實驗。 透過多重模式中掃描式探針顯微鏡中的原子力臟鏡進行研究，所使 、疋輕敲式原子力顯微鏡(SPI3〇〇 hv，seik〇 Instruments Inc” Chiba， JaPan) ’其十並結合光學顯微鏡(Mitotoyo, Japan)觀察樣本。原子力顯微鏡籲 使用的探針其鮮為MG此。透過鮮衍射光柵(驗。in__^nc， a，Japan)進行AFM探針之校正。輕敲式原子力顯微技術是透過維持 懸臂標振幅之高低進行掃描。掃描先從20 μιη X 20 μπι區域大小開始，控 制其中包含上百個禽流感腕2亞型病毒顆粒，之後逐漸將掃描影像大 小’縮減至單一病毒區域大小(3〇〇⑽χ 3〇〇㈣。當未掃描至單一病毒顆 粒〜像時，會先來回掃描禽流感病毒η5ν2亞型樣本，確認探針掃描不會 出現加工影像，例如遲滯現象。第4圖Α為禽流感Η5Ν2亞型病毒之原子_ 力顯微術三度帥影像，可清楚相單__禽域腦2亞型病毒顆粒。第 4圖Α’為其側面剖析圖。 接者處理經過2-(10-氫硫基癸基)丙二酸作用過的禽流感Η5Ν2亞型病 毒。經過曱醇以及去離子水清潔的雲母片後，將含有〇 〇1%(wt/v〇l)L_聚離 胺酸漠化氫溶液滴於雲母片上並反應3G分鐘之後，用去離子水清洗雲母片 28 201101998 表面數次。再將禽流感病毒H5N2亞型於室溫下加入至已修飾之雲母片上 5刀鐘，接著將2-(10-氫硫基癸基)丙二酸(1〇〇 ppm)加入至雲母基材上的病 毒樣本上反應5分鐘，之後迅速進行原子力顯微術實驗。掃描結果如第7 ^圖B三度空間影像所示。第4圖B’為其側面剖析圖。 另外使用2-(10-氫硫基癸基)丙二酸(1〇〇〇 ppm)，以相同方式加入雲母 片上的病毒樣本上反應5分鐘，之後迅速進行原子力顯微術實驗。掃描結 • 果如第4圖C所示，第4圖C為三度空間影像，第4圖C‘為側面剖析圖。 第4圖t的A，B及C圖可清楚看到，經2-(1〇·氫硫基癸基）丙二酸處 理之禽流感H5N2亞型病毒已有崩解之現象。由第4圖之側面剖析圖八， 分析得知，未處理的禽流感H5N2亞型病毒高度為約32奈米，在經2_(1〇· 氫硫基癸基)丙二酸(30 ppm)處理後，扁平化成為約14奈米的高度，在經 2-(10-氫硫基癸基)丙二酸(1〇〇〇ppm)處理後，扁平化成為約6奈米的高度。 φ 而且，比較B及C圖之侧面剖析圖B’及C’可知，經較高濃度(丨〇〇〇ppm) 處理者(C圖）’ H1N1病毒顆粒高度較低’顯示崩解程度較高。此現象的 ) 形成可了解是因為病毒與2-(10-氫硫基癸基)丙二酸作用套膜受破壞内容物 流失而扁平化所造成。 此兩現象的形成可了解是因為病毒與2-(1〇_氫硫基癸基)丙二酸作用病 毒遭受破壞，内容物流失而扁平化所造成》 29 201101998 [實施例8]崩解無套膜腸病毒71型試驗 選取人腸病毒病毒株71型，該病毒株為具有病毒力價約106PFU/mL (定義為每1 mL含有π)萬個病毒，使5〇%細胞感染的力價）。接著，腸病 毒71型檢體透過靜電作用力方式，固定於已修钟完成並帶正電l_聚離胺 酸溴化氩(poly-L-lysinehydrobrom丨de)之雲母片上，進行原子力顯微技術之 探討，比較未經2-(10-氫硫基癸基)丙二酸處理前與經2·〇〇_氫硫基癸基)丙 二酸處理後之Η1Ν1病毒影像，證明Η1Ν1病毒在經2供氫硫基癸基)丙 二酸處理後病毒表φ產生祕而喪失職域合結合失去致病力的現象。 經過甲醇以及去離子水清潔的雲母片後，將含有Q篇㈣㈣L_聚離 胺酸演化氫溶液滴於雲母片上並反應3G分鐘之後，用去離子水清洗雲母片 表面數次。再將腸病毒71型於室溫下加入至雲母片上5分鐘，之後迅速 進行原子力顯微術實驗。 透過夕重模式中掃描式探針顯微鏡中的原子力顯微鏡進行研究，所使 用的是輕敲式原子力顯微鏡(SPI300 HV, Seiko lnstruments Ine.，
Japan) ’其中並結合光學顯微鏡(Mit〇t〇y〇, Japan)觀察樣本。原子力顯微鏡 使用的探針其頻率為140 kHz。透過標準衍射光栅(Seik〇 Instru_s㈤.，
Chiba’ japan)進行AFM探針之校正。輕敲式原子力顯微技術是透過維持 懸臂樑振幅之高低進行掃描。掃描先從2〇 μηι χ 2G μ〇ι區域大小開始，控 制其中包含上百個腸病毒71型病毒顆粒，之後逐漸將掃描影像大小，縮 201101998 減至單-病毒區域大小(3〇0 nm x 3〇〇麵）。當未掃描至單一病毒顆粒影像 時，會先來回掃描腸病毒71型樣本，確認探針掃描不會出現加工影像， 例如遲滯現象。第5圖Α為腸病# 71型病毒之原子力顯微術三度空間影 像’可清楚看到單-腸病毒71型病毒顆粒。第5圖A，為其側面剖析圖。 接者處理經過2-(10氫硫基癸基)丙二酸作用過的腸病毒71型病毒。 經過曱醇以及去離子水清潔的雲母片後，將含有〇 〇1% (wW〇i) ^聚離胺酸 鲁 舰氫溶液滴於雲母片上並反應3G分鐘之後，用去離子水清洗雲母片表面 數次。再將腸病毒71型於室溫下加入至已修飾之雲母片上5分鐘，接著 將2-(10-氫硫基癸基)丙二酸(30 _)加入至雲母基材上的病毒樣本上反應 5分鐘，之後迅速進行原子力顯微術實驗。掃赌果如第5圖B三度空間 影像所示。第5圖B’為其側面剖析圖。 ， 另外使用2·(1〇1硫基癸基)丙二酸⑽〇 ppm) ’以相同方式加入雲母 _ 片上的病毒樣本上反應5分鐘，之後迅速進行原子力顯微術實驗。掃描結 果如第5圖C所示，第5圖C為三度空間影像，第5圖c，為側面剖析圖。 第5圖中的A，B及C圖可清楚看到，經2 (1〇-氫硫基癸基)丙二酸處 理之腸病毒71型病毒已有崩解之現象。由第5圖之侧面剖析圖A，分析 付知，未處理的腸病毒Ή類毒高度為約75奈米，在經2_(1〇氮硫基癸 基)丙二酸(30ppm)處理後’扁平化成為約1〇奈来的高度，在經2 (1〇•氮疏 基癸基)丙二酸(1000 ppm)處理後，扁平化成為約8奈米的高度。而且，比 31 201101998 較第5圖之側面剖析圖b，與σ 〜 後侍知，經2-(10-氫硫基癸基)丙二酸 (30ppm與l〇〇〇ppm)處理後腸病毒 I病毒其朋解高度已經相差不多（兩 者高度均約請奈米)，顯示崩解程度相同。此兩現象的形成可了解是因 為病毒與2·(Η)·祕鶴丙二_㈣毒遭受魏嶋流失而扁平 化所造成。 [實施例9]抑制金黃色葡萄球菌增殖試驗 選取金κ色葡萄球菌標準菌株及巧 (ATCC-25923)(簡稱os.⑽簡）’接種於LB培養液中，置人抓培養箱培 養達到生長對數峨12〜1M、時），透過分絲度計進行，並使用固定波 長620 nm控制s.⑽賺·靡3吸光值於αι。計算溶液中總生菌數至1〇⑻〇 CFU ’以提供之後生物感受性(susceptibility)測試時使用。 將此<S. ⑽葡萄球菌於LB培養液中取出5〇〇吣與溶於乙醇水溶液籲 (1.10)做為/谷劑的2_(ι〇_風硫基癸基)丙二酸以等體積量混合，做為& aMreMiS 葡萄球菌實驗組。總溶液中2-(10-氫硫基癸基)丙二酸的濃度減半。實驗組 完成反應後’分別取100 反應後之$混合液滴入含有Lb洋菜膠 培養基中進行塗盤，再置放於37t培養箱中進行0/Ν培養(約12〜18小 時）’觀察2-(10-氫硫基癸基)丙二酸是否對$娜咖產生抑制效果。三重覆 結果歸納如表5所示。 32 201101998 [表5] 2-(10-氪硫基癸基）丙二酸的抑制金黃色葡萄球菌（s ^心⑽幻增殖效應 2-(1〇-氫硫基癸基)丙二酸最終濃度(ppm) 0 5 10 20 50 100 200 金黃色葡萄球菌添加 2-(10-氮琉基癸基)丙二酸 + + + 僅2·(10-氮破基癸基)丙二酸 - :表抑制金黃色葡萄球菌(5·⑽靡)增殖；+ :表對金黃色葡萄球菌^麵㈣増殖 抑制作用。 由表5得知’在上述叉awre⑽葡萄球菌與添加2·(ι〇-氩硫基癸基) 丙二酸實驗組的數據中發現，當2-(10-氫硫基癸基）丙二酸添加量最 、’’；濃度超過20ppm時’ 2-( 1 〇-氫硫基癸基）丙二酸使& awrews葡萄 球菌失去活性抑制增殖，致使其喪失致病能力所得到之結果。 雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本 發明’任何熟悉此項技藝者’在不脫離本發明之精神和範圍内， 當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請 專利範圍所界定者為準。 33 201101998 【圖式簡單說明】 亞型感染細胞病變效應後細胞呈現_化 第1圖顯示製造2-(ΐ0-Α硫基癸基)丙二酸之方法。 第2圓顯示流感病毒H1N1 落及壞死現象。 第3圆_未轉_克域抗雜麵丨財雌 微圖一析圖(A，)。— 氫硫基癸基）丙二猶奴歧魏_ mNl絲縣之奈米結 構原子力顯微圖(B與C)及其側面剖析圖(β，與^ )。 第4圖顯示未轉_纽《迎病毒雛之奈錄_子力顯微圖⑷ 及其側面剖析圖(Α，）β分別經30ppm與屬卿的2供氮硫基 癸基）丙二_理之禽韻職財難之奈米結構軒力顯微 圖(B與C)及其側面剖析圖(B，與C )。 第5圖鮮未經處理的翻毒71麵毒驗之奈米結構原子力紐圖⑷ 及其侧面剖析圖(A，）。分別經30ppm與1〇〇〇_的2 (ι〇氯硫基 癸基）丙二魏理之赫毒7丨辦切•奈総_子力臓圖 (B與C)及其侧面剖析圖(B’與C’）。 【主要元件符號說明】 〇 *、、、 34

Claims (1)

  1. 201101998 七、申請專利範圍： 1. 一種崩解抑制病毒細菌感染增殖之方法，包括使用2-(10-氫硫 . » 基癸基）丙二酸(2-(10-mercaptodecyl)malonic acid)或其鹽類。 2. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該病毒包括有套膜 (with envelope)的病毒。 3. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該病毒包括無套膜(without envelope)的病毒0 4. 如申請專利範圍第2項之方法，其中有套膜病毒包括人流感病 毒（human influenza virus) ° 5. 如申請專利範圍第2項之方法，其中有套膜病毒包括禽流感病 毒（avian influenza virus)。 6. 如申請專利範圍第2項之方法，其中有套膜病毒包括豬流感病 毒（swine influenza virus)° 7. 如申請專利範圍第2項之方法，其中有套膜病毒包括人豬或人 禽基因重組流感病毒（swine influenza virus)。 8. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該病毒包括無套膜的腸病 毒（enterovirus) ° 9. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該細菌包括金黃色葡萄球 35 201101998 ^ {Staphylococcus aureus) 10. 如申請專利範圍第i項之方法，其中該2 (10•氫硫基癸基）丙 二酸或其鹽類溶於溶劑申。 11. 如申請專利範圍第10項之方法，其中該溶劑包括水、 醇類、四氫呋喃（THF)、二甲基亞砜（DMS〇)、或前述之混合。 12. 如巾請專利範圍第1G項之方法，其中該2供氫硫基癸基） 丙—酸或其鹽類的濃度為大於3〇ppm、小於1〇〇〇卯⑺，但不包 含30Ppm及1000ppm，以2_〇〇氣硫基癸基）丙二酸或其鹽類 及溶劑的總重為基礎。 13. 如中請專利範圍第丨項之方法，其係抑制人或非人的動物受 病毒或細菌感染。 14. 如申請專利範圍第1項之方法 ’包括2-(10-氫硫基癸基）丙二 酸或其鹽類在活體外與病毒接觸。 15. 如申請專利範圍第丨項之古1 ^ 項之方法，更包括將2_(1〇_氫硫基癸基) 丙二酸或其鹽添加於個人種 〇 紅生用〇口、空氣清淨用品或纖維材 料。 16. 如申請專利範圍第10項 $之方法，其中該個人衛生用 手乳、沐浴乳、或乳液。 如申請專利範圍第10項 . $ ^方法，其中該空氣清淨用 品包括洗 品包括空 36 17. 201101998 氣清淨喷劑。 18. 如申請專利範圍第1〇項之方法，其中該纖維材料包括口罩、 隔離衣、或空氣濾網。 19. 一種2-(10-氩硫基癸基）丙二酸之製造方法，·包括使2-(10-溴 癸基）丙二酸乙醋（ethyl 2-( 10-bromo-decyl)malonate)與硫腺 (thiourea)及乙酵反應後，再與NaOH水溶液反應。 20. 如申請專利範圍第19項之方法，更包括在與NaOH水溶液反 應之後，調整該反應的pH值為2。 21. 如申請專利範圍第19項之方法，其中該反應在乙醇沸點之溫 度下進行。 22. —種崩解抑制病毒細菌感染增殖之物質，包括2-(10-氫硫基 癸基）丙二酸(2-(10-mercaptodecyl)malonic acid)或其鹽類。 23. 如f請專利範圍第22項之物質，其中該病毒包括有套膜(with envelope)的病毒。 24. 如申請專利範圍第22項之物質，其中該病毒包括無套膜 (without envelope)的病毒。 25. 如申請專利範圍第23項之物質，其中有套膜病毒包括人流感 病毒(human inf luenza virus) ° 26. 如申請專利範圍第23項之物質，其中有套膜病毒包括禽流感 37 201101998 病毒（avian influenza virus) 〇 27. 如申請專利範圍第23項之物質，其中有套膜病毒包¥豬流感 病毒（swine influenza virus)0 28. 如申請專利範圍第23項之物質，其中有套膜病毒包括人豬或 人禽基因重組流感病毒（swine influenza virus)。 29. 如申請專利範圍第22項之物質，其中該病毒包括無套膜的腸 病毒（enterovirus) 〇 30. 如申請專利範圍第22項之物質，其中該細菌包括金黃色葡萄 朱菌[Staphylococcus aureus)。 31. 如申請專利範圍第22項之物質，其中該2-(10-氫硫基癸基) 丙二酸或其鹽類溶於溶劑中。 32. 如申請專利範圍第31項之物質，其中該溶劑包括水、CrQ 醇類、四氫呋喃（THF)、二甲基亞砜(DMSO)、或前述之混合。 33. 如申請專利範圍第31項之物質，其中該2-(10-氫硫基癸基) 丙二酸或其鹽類的濃度為大於30ppm、小於lOOOppm，但不包 含30ppm及lOOOppm，以2-(10-氫硫基癸基）丙二酸或其鹽類 及溶劑的總重為基礎。 34. 如申請專利範圍第22項之物質，其係抑制人或非人的動物受 病毒或細菌感染。 38 201101998 35. 如申請專利範圍第22項之物質，包括2_(1〇_氫硫基癸基）丙二 酸或其鹽類在活體外與病毒接觸。 36. 如申請專利範圍第22項之物質，更包括將2_(1〇氫硫基癸基) 丙二酸或其鹽添加於個人衛生用品、空氣清淨用品或纖維材 料。 37. 如申請專利範圍第31項之物質，其中該個人衛生用品包括洗 手乳、沐浴乳、或乳液。 38. 如申請專利範圍第31項之物質，其中該空氣清淨用品包括空 氣清淨喷劑。 如申請导利範圍第31項之物質，其中該纖維材料包括口罩、 隔離衣、或空氣濾網。 39 201101998
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