WO2016104966A1 - 녹차 추출물을 유효성분으로 포함하여 항바이러스 활성을 가지는 세정 또는 소독용 조성물 - Google Patents

녹차 추출물을 유효성분으로 포함하여 항바이러스 활성을 가지는 세정 또는 소독용 조성물 Download PDF

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WO2016104966A1
WO2016104966A1 PCT/KR2015/012800 KR2015012800W WO2016104966A1 WO 2016104966 A1 WO2016104966 A1 WO 2016104966A1 KR 2015012800 W KR2015012800 W KR 2015012800W WO 2016104966 A1 WO2016104966 A1 WO 2016104966A1
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green tea
cleaning
composition
disinfecting
virus
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PCT/KR2015/012800
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신우진
강한철
Original Assignee
(주)피치켐
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/48—Medical, disinfecting agents, disinfecting, antibacterial, germicidal or antimicrobial compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/382—Vegetable products, e.g. soya meal, wood flour, sawdust

Definitions

  • the present invention relates to a cleaning or disinfecting composition having antiviral activity and long-term storage stability.
  • Influenza is a type of respiratory disease virus that is widespread not only in humans but also in livestock such as pigs, chickens, ducks, or horses, as well as many other types of animals.
  • pandemic highly pathogenic viruses such as the novel swine-origin influenza A (H1N1), emerged, causing massive economic losses along with numerous casualties.
  • H1N1 novel swine-origin influenza A
  • the influenza virus belongs to the family Orthomyxoviridae and has eight negative stranded RNA fragments of PB2, PB1, PA, HA, NP, NA, M and NS.
  • HA is a gene encoding hemagglutinin (hereinafter referred to as "HA"), which is a coat protein to be transcribed, and an antigen on the surface of a virus involved in attaching to cells of an influenza virus mammal.
  • NA is a gene encoding neuraminidase (hereinafter referred to as "NA”), which plays an important role when a virus enters or exits a host cell, and is a mutation in the virus.
  • the flu-induced influenza virus has various symptoms and severity depending on the subtypes that are commonly found in winter, and it ranges from non-pathogenic to high pathogenicity with a mortality rate of 60%. Because of the high mortality rate caused by complications of pneumonia and cardiopulmonary diseases, highly pathogenic avian influenza virus is the first type of infectious disease in Korea and is classified as List A epidemic by the International Water Bureau (OIE).
  • OIE International Water Bureau
  • H1N1 strain of H1N1 flu was lower than that of avian influenza, but was highly infectious and economically and socially problematic.
  • the avian influenza virus is a common infectious virus, the most important propagation factor is contaminated feces, and can also be transmitted by splash, air or water.
  • avian influenza virus may be infected by humans through intermediate hosts such as pigs and chickens. In the intermediate host body, avian influenza virus causes genetic mutations or recombination with other viruses, resulting in a mutated virus. It can spread to people through infections of the respiratory tract and cause flu.
  • ion-channel inhibitors such as Amantadine, Rimantadine, and neuraminidase (NA) inhibitor Oseltamivir, which are previously developed flu virus drugs, Janamivir (Zanamivir et al.) Has already been reported to develop a strain that is resistant to mutations and development of new antiviral intervention (urgent) is urgent.
  • pandemic influenza virus such as pandemic influenza because it can be quickly and easily blocked. Can be.
  • General hand sanitizers currently on the market are manufactured using ethanol, isopropanol, benzalkonium chloride, cresol, or hydrogen peroxide as the main ingredient, and propylene glycol, glycerin, and tocopherol as moisturizers to protect skin damage caused by alcohol. And gel forms containing 60 to 70% of alcohol are the most common hand sanitizers without water.
  • the hand cleaner is used as a cosmetic aid in hand washing, hand soap, hand wash, solid hand washing soap and the like.
  • the above hand cleaners and hand sanitizers usually have a shelf life of 2 to 3 years, but are not recommended for use within 6 months of opening, and are not easy to be stored.
  • synthetic chemicals such as hydrogen peroxide, such as allergies, skin problems such as skin problems are a problem.
  • the detergent and disinfectant using the green tea extract it is made of natural materials, and due to difficulty in shelf life and distribution, the shelf life is not easy due to the short shelf life during mass production, and the synthetic detergent is used to increase the shelf life.
  • the synthetic detergent is used to increase the shelf life.
  • the skin and allergic to the synthetic chemicals included in the prepared detergent and disinfectant there is a problem that the use is limited.
  • the present invention has been made to solve the problems of the prior art as described above, by treating the green tea extract with an antioxidant and a stabilizer to improve the stability and shelf life of the green tea extract to improve the antiviral efficacy and It is to provide a cleaning or disinfecting composition having increased durability.
  • Another object of the present invention is to provide a technique for preventing the spread of viruses and bacteria by using for the purpose of disinfection and multi-purpose cleaning using a cleaning or disinfecting composition with improved quality life.
  • Another object of the present invention by using natural ingredients such as green tea extract as an active ingredient of the cleaning or disinfecting composition shows the same or better antiviral activity and antimicrobial activity than the existing hand cleaners and multi-purpose cleaners and the amount of chemicals as a main component To reduce and to provide a cleaning or disinfecting composition that is environmentally friendly and less harmful to human health.
  • natural ingredients such as green tea extract
  • the present invention proposes a cleaning or disinfecting composition, characterized in that it has antiviral activity, including green tea extract.
  • the cleaning or disinfecting composition is characterized in that it comprises the green tea extract in 20% or less based on the total weight of the composition.
  • the cleaning or disinfecting composition is characterized by having an antiviral activity against the enveloped virus (enveloped virus).
  • the envelope virus is characterized in that the influenza virus (influenza virus), retrovirus (retrovirus), Epstein-barr virus (herstein simplex virus) or (herpes simplex virus).
  • the green tea extract is catechin (catechin), epicatechin (epicatechin), epigallocatechin (epigallocatechin, EGC), epicatechin gallate (epicatechin gallate, ECG), epigallocatechin gallate (EGCG) and flavonoids (flavonoid) derivatives, characterized in that at least one member selected from the group consisting of.
  • the cleaning or disinfecting composition is characterized by excellent long-term storage stability further comprises an antioxidant and a stabilizer.
  • the antioxidant is at least one compound selected from the group consisting of tocopherol, ascorbic acid, ascorbic acid derivatives, gallic acid, quercetin, flavonol, flavonoids, catechol, ethoxyquine and lignan glycosides, based on the total weight of the composition As characterized in that it is included in less than 1.5%.
  • the stabilizer is ⁇ -cyclodextrin, citric acid, magnesium chloride (magnesium chloride, MgCl 2 ), ethylenediaminetertraacetic acid (EDTA salt), and dibutyl hydroxy toluene (BHT) At least one compound selected from the group consisting of, characterized in that it comprises less than 1% based on the total weight of the composition.
  • the cleaning or disinfecting composition further comprises one or more selected from the group consisting of isopropyl alcohol, ethanol, n-propanol, t-butanol, 2-butanol, pentanol, hexanol and povidone-ioda It is characterized by.
  • the cleaning or disinfecting composition is characterized in that it further comprises a porous bead, natural fragrance or natural additives.
  • the cleaning or disinfecting composition according to the present invention includes a green tea extract having antiviral activity as an active ingredient, and not only increases personal hygiene easily and quickly for various existing respiratory diseases with high vaccine dependency and limited therapeutic effect, It can greatly reduce the spread of viral diseases, so it can be used for the purpose of disinfection and cleaning for personal, business, hospital or livestock use, especially for direct disinfection of animals, farmers, barns and livestock farms. Do.
  • the cleaning or disinfecting composition according to the present invention is treated with an antioxidant and a stabilizer in the green tea component, and shelf life is increased, thereby making it easy to commercialize.
  • green tea which is an environmentally friendly material, people with skin diseases can easily use it, and can promote the domestic green tea industry that has already reached the internationalization level.
  • Figure 1 shows the results confirmed the antiviral activity of EGCG, the main component of the green tea extract through plaque inhibition experiment.
  • Figure 2 is a graph showing the plaque formation experiment results of Experimental Example 2.
  • the cleaning or disinfecting composition according to the present invention is characterized by having green tea extract as an active ingredient and having antiviral activity.
  • green tea is steamed or steamed using unfermented green tea leaves, green tea stems, and green tea seeds to destroy oxidases and extracted to produce green tea extracts. It is preferable to comprise so that a component may remain.
  • green tea leaves, green tea stems and green tea seeds are collected and steamed with steam, heated to 100 to 300 ° C. to increase the content of green tea active ingredients, steamed and dried, and finely ground into green tea powder.
  • green tea extract may be prepared.
  • the green tea powder may be prepared by fermenting raw materials such as molasses grains or sweet potato, and then extracting the fermented alcohol prepared by distillation as an extraction solvent, followed by concentration.
  • Green tea extract can be prepared by various known methods such as.
  • Green tea extract prepared as described above includes catechin (catechin), epicatechin (epicatechin), epigallocatechin (EGC), epicatechin gallate (ECG), epigallocatechin gallate (epigallocatechin gallate, EGCG), including flavonoid derivatives, such as anti-viral active ingredient exhibits the effect of removing more than 90% of the virus to maintain a clean state when using the cleaning or disinfecting composition according to the present invention.
  • the antiviral active ingredient included in the green tea extract is an influenza virus (influenza virus), a retrovirus (retrovirus), Epstein-barr virus (epstein-barr virus) or herpes virus (herpes simplex virus), such as (enveloped virus) exhibits antiviral activity, which can effectively block the virus-induced disease by blocking the path of infection of the virus, and for this purpose, it has the most desirable physical properties when green tea extract is included in 20% or less of the total weight of the composition.
  • a disinfectant composition may be prepared.
  • the natural water is sodium (Na), calcium (Ca), magnesium (Mg), which has the effect of promoting osmotic pressure control and physiological action, Potassium (K), strontium (Sr), lithium (Li), chlorine ion (C1), zinc (Zn), manganese (Mn), etc., containing a large amount of minerals to further improve the physical properties of the cleaning or disinfecting composition
  • K potassium
  • strontium Sr
  • lithium lithium
  • C1 zinc
  • Zn zinc
  • Mn manganese
  • the cleaning or disinfecting composition according to the present invention may be prepared by mixing natural preservatives for the purpose of improving long-term storage stability.
  • an antioxidant is a representative example.
  • the antioxidant is an active ingredient of green tea extract, which is an active ingredient included in a cleaning or disinfecting composition, in contact with oxygen in the air, thereby naturally occurring in the air. Absorption results in physical and chemical changes due to the chain reaction of free radicals, resulting in oxidation, oxidation by complex reactions due to temperature changes, or homolytic cleavage of water molecules by irradiation of light. Oxidation may be caused by a very strong active radical complex reaction formed by the reaction, and the antioxidant is required to undergo very rapid oxidation due to its chemical structure.
  • antioxidants it is preferable to use tocopherol, ascorbic acid, ascorbyl palmitate, gallic acid, quercetin, flavonol, flavonoids, ethoxyquine, lignan glycosides and mixtures thereof.
  • a stabilizer may be further included to increase the antiviral activity and persistence of the green tea extract, and may be configured to further improve long-term storage stability of the composition to be prepared.
  • the stabilizer may be discolored of the antioxidant. And by preventing odor, consequently, serves to improve the stability of the disinfecting or cleaning composition according to the present invention.
  • Such stabilizers include beta-cyclodextrin, citric acid, magnesium chloride (MgCl 2 ), ethylene diamine tertraacetic acid (EDTA salt), and dibutyl hydroxy toluene (BHT). ) Is a representative example.
  • the antioxidant is 1.5% by weight or less based on the total weight of the disinfecting or cleaning composition according to the present invention
  • the stabilizer is preferably included in an amount of 1% by weight or less based on the total weight of the disinfecting or cleaning composition according to the present invention.
  • the antioxidant and other natural preservatives may be configured to further include a herb or herbal extract with antimicrobial activity, a bellflower containing inulin (insulin), ginseng including a saponin (saponin) as a representative example
  • such natural preservatives can be configured to inhibit the growth of microorganisms in the composition to further increase the shelf life of the cleaning or disinfecting composition produced.
  • the disinfecting or cleaning composition according to the present invention is an isopropyl alcohol, ethanol, n-propanol, t-butanol, 2-butanol, pentanol, hexa It may further comprise one or more selected from the group consisting of knoll and povidone-ioda.
  • the disinfecting or cleaning composition according to the present invention may further include a porous bead may further improve the physical properties of the composition.
  • the above-mentioned porous beads may be chitosan as a representative example, and the low molecular weight chitosan is a natural material, which has antibacterial and antifungal activity, and thus, may act as a preservative in the manufactured composition to further increase shelf life, and is non-toxic to the skin. It exhibits extreme properties and has excellent biocompatibility to maintain skin moisturization.
  • the disinfecting or cleaning composition according to the present invention may be given a fragrance (fragrance) by further including a natural fragrance as necessary.
  • fragrances examples include rosemary, lavender, rose, lavandin, lemon, rosewood, mandarin, jasmine, and basil.
  • Natural sands from plants such as sandalwood, bergamot, citronella, orange, eucalyptus, chamomile, palmarosa or majoram Extracts or essential oils may be used.
  • Such natural fragrances have antimicrobial ability to specific microorganisms, and when added for imparting odor during antiviral cleaning or disinfecting composition preparation, the natural fragrance may increase the antibacterial ability at the same time.
  • the disinfecting or cleaning composition according to the present invention may be configured to further improve the physical properties of the cleaning or disinfecting composition prepared by adding a natural additive including a natural thickener, natural pH adjusting substances and the like.
  • the natural thickener may be used as a thickener for stabilization and stability of the foam for cleaning or disinfecting composition prepared by using natural polymers such as starch, xanthan gum, locust bean gum, carrageenan, pectin gelatin, etc., based on the total weight of the composition It is preferred to be contained in an amount of 0.0001 to 10% by weight, because less than 0.0001% by weight of the thickening effect is insignificant, and more than 10% by weight of the thickener is unstable in dispersion in the solution.
  • natural polymers such as starch, xanthan gum, locust bean gum, carrageenan, pectin gelatin, etc.
  • the disinfecting or cleaning composition according to the present invention uses a fruit acid such as grape seed extract, lemon juice, vinegar, malic acid, citric acid or the like to adjust the pH so that the pH can be manufactured according to the use. You can lower the pH using, can be configured to increase the pH using potassium hydroxide or sodium hydroxide.
  • a fruit acid such as grape seed extract, lemon juice, vinegar, malic acid, citric acid or the like
  • the natural pH adjusting material it is preferable to configure the amount to adjust the pH, including 0.01 to 0.5% by weight based on the total weight of the composition, if less than 0.01% by weight will not be able to adjust the pH properly On the contrary, when it is used in excess of 0.5% by weight, the acidity or basicity becomes excessively high, so that the function of the disinfecting or cleaning composition is reduced, so it is limitedly used, and the total pH of the disinfecting or cleaning composition according to the present invention is prepared. It is desirable to configure to have a weak acidity of more than 5 and less than 7 so that it can maintain healthy skin.
  • Disinfecting or cleaning composition according to the present invention having the above composition can be prepared by formulating in the form of a liquid, gel, emulsion, aerosol, in the solid state, such as soap commercially available by further mixing the natural additives for the saponification reaction It may also be prepared, for this purpose, by further adding a natural fats and oils and reacted with potassium hydroxide may be configured to induce a saponification reaction to form a soap and natural glycerin to form a solid form.
  • the disinfecting or cleaning composition according to the present invention comprises the steps of (a) preparing a green tea extract using green tea leaves, green tea stems and green tea seeds, (b) a natural preservative, a natural fragrance composition comprising an antioxidant in the green tea extract and Preparing a natural detergent composition by mixing natural additives; and (c) adjusting the pH of the natural detergent composition to prepare a cleaning or disinfecting composition.
  • the composition can be prepared.
  • Disinfecting the wards of hospitals treating patients with viruses and disinfecting hands, human bodies, clothes, and medical devices is not simple. Generally, strong acid, strong base or chlorine disinfectants are used to disinfect, which disinfects the virus effectively, but is limited to practical use.
  • the disinfecting or cleaning composition according to the present invention as a disinfectant, animal disinfection or barn disinfection, livestock farmers and farmers can directly disinfect.
  • the disinfecting or cleaning composition according to the present invention when using the disinfecting or cleaning composition according to the present invention, it can be used for direct disinfection or cleaning as it is not harmful or harmful to human health or the environment, and can remove more than 90% of the infectious coating virus present on the skin. It exhibits antimicrobial activity, effectively removes bacteria and harmful substances, and has an antiviral activity even after a long time after preparation including an antioxidant, and thus may be applied to various types of natural cleaners and disinfectants.
  • green tea extract was prepared using green tea leaves, green tea stems and green tea seeds.
  • Hot water extraction was used to prepare green tea extract, and the green tea leaves, green tea stems and green tea seeds were steamed and cooled by steam, and the steamed green tea was steamed in a container heated to 200 to 300 ° C., dried, and dried. Powdered with a grinder, the green tea powder 1 to 4% (w / v) is immersed in water of 70 to 90 °C, left for 12 to 24 hours, the green tea extract was filtered and concentrated under reduced pressure An extract was prepared.
  • Ascorbic acid was added to the green tea extract as an antioxidant to 1 to 10 parts by weight to prepare a cleaning or disinfecting composition.
  • MDCK Mesarby, canine kidney, ATCC, MET
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • influenza viruses A / Korea / 01/09 (H1N1) and A / Aquatic Bird / w81 / 05 (H5N2), were grown on an MDCK cell line grown on the bottom of a petri dish.
  • the infection was treated at a concentration of) / ml.
  • PBS Photassium Phosphate Buffered Saline
  • the green tea extract was serially diluted twice in a final concentration from 100 ⁇ g / mL to 6.25 ⁇ g / mL and then DMEM (Dulbecco's containing trypsin enzyme at a concentration of 1% agarose, 10 ⁇ g / mL) was added to overlay media.
  • Overlaid medium was added to Modified Eagle's Medium: GIBCO Invitrogen Coporation, USA) medium and plated onto cells for plaque formation and nothing added as a control.
  • the overlay medium was plated by 3 ml / well of influenza virus infected cells, and after 15 minutes, the overlay medium was solidified and incubated for 72 hours in an incubator maintained at 37 ° C. 5% CO 2 concentration.
  • FIG. 1 is a photograph showing a plaque inhibition test result according to Experimental Example 1, when treated with EGCG, the main component of green tea extract, it was confirmed that plaque formation of the flu virus was suppressed. As the concentration of EGCG used was increased, plaque formation was suppressed. However, it was confirmed that plaque formation was not suppressed in the control group.
  • the plaque formation inhibition ability of the flu virus by the green tea extract was quantified by the ratio of the number of plaques in the control group and the number of plaques in the experimental group.
  • MEM media was added according to the manufacturer's protocol using Neoderm ® E (TegoScience, Korea), an artificial skin cell, to confirm the virus removal ability of the green tea extract, followed by 24 hours in a 37 ° C CO 2 incubator.
  • cold adaptive X-31 virus was inoculated by 5 ⁇ 10 4 PFU, washed with green tea extract, and the virus removal / inactivation effect by this washing effect was verified by plaque assay in MDCK cell line. More specifically, the cells were cultured and washed with phosphate buffer saline (PBS) and the virus was dropped by 5 ⁇ 10 4 PFU.
  • PBS phosphate buffer saline
  • Figure 2 is a graph showing the plaque formation experiment results of Experimental Example 2.
  • the plaque was not formed in the virus-infected artificial cells in the medium washed with green tea extract, it was confirmed that the green tea extract has an excellent effect on virus removal.
  • stabilizers were added to green tea extracts containing ascorbic acid at various concentrations and stored at room temperature for 2 months.
  • plaque formation inhibition experiments were carried out at 200 PFU A / Korea / 01/09 (H1N1) virus every 5 days to confirm the change in the shelf life of green tea extracts by antioxidants and stabilizers.

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Abstract

본 발명은 녹차 추출물을 포함하는 세정 또는 소독용 조성물에 대한 것으로서, 본 발명에 따른 세정 또는 소독용 조성물은 녹차 추출물을 유효 성분으로 포함함으로써 항바이러스 활성을 가지며, 항산화제 및 안정화제를 포함하여 녹차 추출물의 항바이러스 활성 및 지속성이 향상되어 유통기한(shelf life)이 증가해 제품화가 용이하고, 각종 천연 첨가제 및 다공성 비드를 포함하여 항바이러스 활성 및 항균 활성이 높아 바이러스의 확산 및 전파를 억제하는 손 소독제, 인체용 세정제, 병실용 소독제 또는 동물용 소독제로 이용이 가능해, 백신의존도가 높고 기존 치료제 효과가 제한된 여러 호흡기 질병에 대해 간편하고 신속하게 사용할 수 있는 다목적 조성물이다.

Description

녹차 추출물을 유효성분으로 포함하여 항바이러스 활성을 가지는 세정 또는 소독용 조성물
본 발명은 항바이러스 활성 및 장기 저장 안정성을 가지는 세정 또는 소독용 조성물에 관한 것이다.
인플루엔자는 호흡기 질환 바이러스의 일종으로 사람뿐만 아니라 돼지, 닭, 오리 또는 말 등의 가축뿐만 아니라 여러 종류의 동물들에 널리 퍼져 있다.
특히, 2009년에는 신종 인플루엔자(novel swine-origin influenza A, H1N1)와 같은 팬데믹(pandemic) 고병원성 바이러스가 출현하여 수많은 인명피해와 함께 막대한 경제적 손실을 야기하였다.
상기한 인플루엔자 바이러스는 오르토믹소바이러스과(Orthomyxoviridae)에 속하며 PB2, PB1, PA, HA, NP, NA, M 및 NS의 여덟 개의 음성가닥 RNA 단편을 가진다.
상기한 음성가닥 RNA 단편 중 HA는 전사되는 외피 단백질인 헤마글루티닌(hemagglutinin: 이하 "HA"라 함)을 코드하는 유전자로서, 인플루엔자 바이러스 포유동물의 세포에 부착하는 데 관여하는 바이러스 표면의 항원성 돌기를 제조하는 역할을 하며, NA는 뉴라미니다아제 (neuraminidase: 이하 "NA"라 함)를 코드하는 유전자로서, 바이러스가 숙주의 세포로 침입하거나 빠져나올 때 중요한 역할을 하며, 바이러스에 변이를 유도하는 뉴라민 분해 효소를 제조하는 역할을 하여 이들의 항원대변이 또는 항원소변이 과정을 통해 바이러스가 변형되는 특징을 가지고 있어 치료가 용이하지 않다.
상기한 바이러스에 의한 독감은 보통 겨울철에 발병하는데 유행되는 아형 (subtype)에 따라 다양한 증상과 중증도를 나타내며, 병원성이 없는 것에서부터 치사율이 60%인 고병원성까지 다양하게 존재하는데, 일반적으로는 전염력이 강하고 폐렴 및 심폐질환의 합병증을 일으켜 높은 치사율을 보일 수 있어, 고병원성 조류 인플루엔자 바이러스는 국내에서 제 1종 법정 전염병으로 국제 수역 사무국(OIE)에서 List A 전염병으로 분류하고 있다.
그리고, 2009년 신종인플루엔자 H1N1형의 경우, 치사율은 조류 인플루엔자에 비해 낮았지만 전염성이 높아 경제적, 사회적으로 문제가 되었다.
상기한 조류 인플루엔자 바이러스는 인수 공통감염 바이러스로 가장 주요 전파 요인은 오염된 분변이고, 비말, 공기, 물 등에 의하여도 전파가 가능하다. 또한, 조류 인플루엔자 바이러스가 돼지, 닭 등의 중간 숙주를 거쳐 사람에게 감염되는 경우가 있는데, 중간 숙주의 체내에서 조류 인플루엔자 바이러스가 유전자 변이를 일으키거나 다른 바이러스와의 재조합이 일어나 변이된 형태의 바이러스가 호흡기 감염 등을 통해 사람들에게 전파되어 독감을 발병시키기도 한다.
하지만, 현재 새로이 나타나는 인플루엔자 바이러스들에 대한 효과적인 예방백신들의 개발이 미흡하고 현재 사용되고 있는 치료제의 한계가 문제점으로 남아있다.
일례로, 기존에 개발된 독감 바이러스 치료제인 아만타딘(Amantadine), 리만타딘(Rimantadine)등의 이온 채널(ion-channel) 저해제와 뉴라미니다아제(neuraminidase, NA) 저해제인 오셀타미비르 (Oseltamivir), 자나미비르 (Zanamivir) 등은 이미 돌연변이가 발생하여 내성을 갖는 균주가 발생에 관한 연구가 보고되고 있어 새로운 항바이러스 조절제(antiviral intervention)의 개발이 시급하다.
최근에 마스크 착용, 손세정과 같은 개인적인 위생습관에 의해서도 바이러스의 전파를 상당부분 억제할 수 있다는 연구결과가 보고되고 있으며, 바이러스의 전파를 빠르고 손쉽게 차단하므로 팬데믹 인플루엔자와 같은 바이러스 대유행시 효과적인 방법이라 할 수 있다.
그에 따라, 신종 플루가 유행한 후 각종 손 소독제 및 손 세정제가 봇물처럼 시장에 나왔고 현재 식약청에서는 손 소독제를 의약외품으로, 손 세정제는 화장품으로 분류해서 관리하고 있다.
현재 시판되는 일반적인 손 소독제는 에탄올, 이소프로판올, 염화벤잘코늄, 크레졸, 과산화수소수 중 하나를 주성분으로 사용하고 알코올로 인한 피부 손상을 보호하기 위한 보습제로 프로필렌그리콜, 글리세린, 토코페롤 등이 사용하여 제조되고 있으며, 알코올을 60 내지 70%의 비율로 포함하는 젤 형태가 물을 사용치 않는 손 소독제로 가장 일반적이다. 그리고, 손 세정제는 화장품으로써 손 세정에 보조적으로 사용되는 것으로 손 전용물비누, 핸드워시, 고체용 손 세정 비누 등이 일반적이다.
상기한 손 세정제 및 손 소독제는 보통 2 내지 3년의 유통기한을 가지나 보통 개봉한 지 6개월 이내 사용하기를 권장하여 보존이 용이하지 않으며, 주원료로 사용되는 에탄올, 이소프로판올, 염화벤잘코늄, 크레졸 또는 과산화수소수 등과 같은 합성 화학물질을 사용함에 따라 알러지, 피부 트러블 등과 같은 피부질환이 문제되고 있다.
이에 따라, 천연 물질을 이용한 천연 세정제 또는 소독제에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 특히, 항바이러스 활성을 가진 녹차의 다양한 생리활성에 대한 연구 논문의 숫자가 급격하게 증가하고 있으며, 특히, 인플루엔자 바이러스, 레트로 바이러스, 에프스타인바 바이러스, 헤르페스 바이러스 등의 피박 바이러스에 항바이러스 활성을 가진 녹차 추출물을 이용하여 세정제 및 소독제로 제조하는 방법에 대한 다양한 연구가 진행되고 있다.
그러나, 상기한 녹차 추출물을 이용한 세정제 및 소독제의 경우 천연 물질로 이루어져, 저장성 및 유통에 어려움이 따라 대량 제조시 유통기한이 짧아 유통이 용이하지 않고, 유통기한을 증가시키기 위해서 합성 첨가제를 사용하여 세정제를 제조하는 경우 제조된 세정제 및 소독제에 포함된 합성 화학성분에 의해 피부 알러지가 있는 사람에게는 사용이 제한적이라는 문제점이 있다.
본 발명은 상기한 바와 같은 종래기술의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 녹차 추출물에 항산화제 및 안정제를 처리하여 녹차 추출물의 안정성 및 유통기한(shelf life)의 품질수명을 향상시켜 항바이러스 효능과 지속성을 증대시킨 세정 또는 소독용 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 품질수명이 향상된 세정 또는 소독용 조성물을 이용하여 소독 및 다목적 세정의 용도로 사용하여 바이러스 및 세균의 확산을 방지하는 기술을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 세정 또는 소독용 조성물의 유효 성분으로 녹차 추출물 등의 천연성분을 활용함으로써 기존 손 세정제 및 다목적 세정제와 동일하거나 더욱 우수한 항바이러스 활성 및 항균 능력을 보이며 주성분인 화학물질의 양을 줄여 환경친화적이고 인체건강에 덜 해로운 세정 또는 소독용 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
상기한 바와 같은 기술적 과제를 달성하기 위해 본 발명은, 녹차 추출물을 포함하여 항바이러스 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물을 제안한다.
또한, 상기 세정 또는 소독용 조성물은 조성물 총 중량 기준으로 20% 이하로 상기 녹차 추출물을 포함되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 세정 또는 소독용 조성물은 피막 바이러스(enveloped virus)에 대해 항바이러스 활성을 가지는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 피막 바이러스는, 인플루엔자 바이러스(influenza virus), 레트로 바이러스(retrovirus), 에프스타인바 바이러스(epstein-barr virus) 또는 헤르페스 바이러스(herpes simplex virus)인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 녹차 추출물은 카테킨(catechin), 에피카테킨(epicatechin), 에피갈로카테킨(epigallocatechin, EGC), 에피카테킨 갈레이트(epicatechin gallate, ECG), 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate, EGCG) 및 플라보노이드(flavonoid) 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 세정 또는 소독용 조성물은 항산화제 및 안정제를 더 포함하여 장기 저장 안정성이 우수한 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 항산화제는 토코페롤, 아스코르브산, 아스코르브산 유도체, 갈산, 쿼르세틴, 플라보놀, 플라보노이드, 카테콜, 에톡시퀸 및 리그난 배당체로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물이고, 조성물 총 중량 기준으로 1.5% 이하로 포함되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 안정제는 베타싸이클로덱스트린(β-cyclodextrin), 구연산, 염화마그네슘(magnesium chloride, MgCl2), 이디티에이염(ethylenediaminetertraacetic acid, EDTA salt), 및 디부틸히이드로톨루엔(dibutyl hydroxy toluene, BHT)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물이고, 조성물 총 중량 기준으로 1% 이하로 포함되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 세정 또는 소독용 조성물은 아이소프로필 알코올, 에탄올, n-프로판올, t-부탄올, 2-부탄올, 펜타놀, 헥사놀 및 포비돈-아이오다로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 세정 또는 소독용 조성물은 다공성 비드, 천연 방향제 또는 천연 첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 세정 또는 소독용 조성물은, 항바이러스 활성을 가지는 녹차 추출물을 유효성분으로 포함하여 백신의존도가 높고 치료 효과가 제한된 기존의 여러 호흡기 질병에 대해 간편하고 신속하게 개인 위생을 증가시킬 뿐만 아니라 이러한 바이러스성 질환의 감염 확산을 크게 줄일 수 있어 개인용, 업소용, 병원용 또는 축사용 소독 및 세정의 용도로 다목적으로 이용할 수 있으며, 특히, 동물, 농부, 축사 및 축산 농가의 직접 소독하기 위해서도 사용이 가능하다.
그리고, 본 발명에 따른 세정 또는 소독용 조성물은 녹차 성분에 항산화제 및 안정제를 처리하여 유통기한(shelf life)이 증가되어 제품화가 용이하다. 또한, 친환경 재료인 녹차를 사용함으로써 피부 질환이 있는 사람도 간편하게 사용이 가능하며, 이미 국제화 수준에 이른 국내 녹차 산업의 활성화를 도모할 수 있다.
도 1은 녹차 추출물의 주성분인 EGCG의 항바이러스 활성을 플라크 저해실험을 통해 확인한 결과이다.
도 2는 실험예 2의 플라크 형성 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명하도록 한다.
본 발명에 따른 세정 또는 소독용 조성물은, 녹차 추출물을 유효 성분으로 포함하여 항바이러스 활성을 가지는 것을 특징으로 한다.
상기한 녹차 추출물을 제조하기 위해서 녹차(Green Tea)는 발효시키지 않은 녹차잎과 녹차 줄기 및 녹차씨를 사용해서 찌거나 덖어서 가열하여 산화효소를 파괴시키고, 추출하여 녹차 추출물을 제조함으로써, 녹차의 유효 성분을 그대로 유지하도록 구성하는 것이 바람직하다.
이를 위해서, 녹차잎, 녹차 줄기 및 녹차씨를 채취하여 증기로 증숙하고, 녹차 유효성분의 함량을 증가시킬 수 있도록 100 내지 300 ℃로 가열하여 덖은 후 건조하고, 미세분말로 미세분쇄하여 녹차분말을 제조하고, 열수 추출한 후 농축하여 녹차 추출물을 제조할 수 있다.
그리고, 이에 한정하지 않고 상기 녹차 분말을 당밀 곡류 또는 고구마 등의 원료를 발효한 후 증류하여 제조한 발효 주정을 추출 용매로 이용해 추출한 후 농축하여 제조한 녹차 추출물을 제조할 수도 있으며, 이 밖에도 증류 추출법 등의 공지된 다양한 방법으로 녹차 추출물을 제조할 수 있다.
상기한 바와 같이 하여 제조된 녹차 추출물에는 카테킨(catechin), 에피카테킨(epicatechin), 에피갈로카테킨(epigallocatechin, EGC), 에피카테킨 갈레이트(epicatechin gallate, ECG), 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate, EGCG), 플라보노이드(flavonoid) 유도체 등의 항바이러스 활성성분을 포함하여 본 발명에 따른 세정 또는 소독용 조성물 이용시 청결한 상태를 유지하도록 90 %이상의 바이러스를 제거하는 효과를 나타낸다.
또한, 상기 상기한 녹차 추출물에 포함된 항바이러스 활성성분은 인플루엔자 바이러스(influenza virus), 레트로 바이러스(retrovirus), 에프스타인바 바이러스(epstein-barr virus) 또는 헤르페스 바이러스(herpes simplex virus) 등의 피막 바이러스(enveloped virus)에 항바이러스 활성을 나타내 바이러스의 감염경로를 차단하여 바이러스에 의해 발생되는 질병을 효과적으로 예방할 수 있으며, 이를 위해 조성물 총 중량의 20% 이하로 녹차 추출물을 포함될 때 가장 바람직한 물성을 가지는 세정 또는 소독용 조성물을 제조할 수 있다.
그리고, 상기한 열수 추출을 위해서는 천연수를 가열하여 열수 추출하는 것이 바람직하며, 상기 천연수는 삼투압조절 및 생리작용을 촉진시키는 효과가 있는 나트륨(Na), 칼슘(Ca), 마그네슘(Mg), 칼륨(K), 스트론륨(Sr), 리듐(Li), 염소이온(C1), 아연(Zn), 망간(Mn)등의 미네랄 성분을 다량 포함하여 세정 또는 소독용 조성물의 물성을 더욱 향상시키도록 구성할 수 있다.
본 발명에 따른 세정 또는 소독용 조성물은, 장기 보관 안정성을 향상시키기 위한 목적으로 천연 방부제를 혼합하여 제조될 수 있다.
이와 같은 천연 방부제로는 항산화제를 그 대표적인 예로 들 수 있는데, 본 발명에 있어서 상기 항산화제는 세정 또는 소독용 조성물에 포함된 유효성분인 녹차 추출물이 공기 중 산소와 접촉하여 자연발생적으로 공기 중의 산소를 흡수함으로써 라디칼(free radical)의 연쇄반응으로 물리·화학적 변화가 초래되어 산화가 발생하거나, 온도 변화에 의한 복합 반응에 의해 산화가 발생되거나, 빛의 조사에 의해 물분자의 균일 분열(homolytic cleavage)이 발생하여 이에 의해 형성되는 매우 강력한 활성 라디칼 복합 반응에 의해 산화가 발생될 수 있는데, 상기 항산화제는 화학구조상 매우 빠른 산화가 발생되도록 되어있어 몇 가지 산화가 가능한 물질이 함께 존재할 때, 항산화제가 다른 물질보다 먼저 산화됨으로써 다른 물질의 산화를 방지하는 역할을 하여 여러 종류의 알코올류, 알데히드류, 케톤류 등의 산화생성물들이 발생하지 않도록 하여 본 발명에 따른 세정 또는 소독용 조성물의 품질을 유지하고 유통기한을 늘리는 효과를 나타낸다.
이와 같은 항산화제로는 토코페롤, 아스코르브산, 아스코르빌 팔미테이트, 갈산, 쿼르세틴, 플라보놀, 플라보노이드, 에톡시퀸, 리그난 배당체과 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다.
그리고, 상기 항산화제 이외에 안정제를 추가로 포함하여 녹차 추출물의 항바이러스 활성 및 지속성을 증가시키고, 제조되는 조성물의 장기 보관 안정성을 더욱 향상시키도록 구성할 수 있는데, 특히, 상기 안정제는 항산화제의 변색 및 변취를 방지함으로써 결과적으로 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물의 안정성을 향상시키는 역할을 한다.
이러한 안정제로서는, 베타싸이클로덱스트린(β-cyclodextrin), 구연산, 염화마그네슘(magnesium chloride, MgCl2), 이디티에이염(ethylene diamine tertraacetic acid, EDTA salt), 및 디부틸히이드로톨루엔(dibutyl hydroxy toluene, BHT)을 대표적인 예로 들 수 있다.
한편, 상기 항산화제는 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물 전체 중량 대비 1.5 중량% 이하로, 상기 안정제는 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물 전체 중량 대비 1 중량% 이하의 함량으로 포함되는 것이 바람직하다.
그리고, 상기 항산화제와 다른 천연 방부제로서 항균 활성을 가진 허브 또는 생약재 추출물을 더 포함하도록 구성할 수 있으며, 이눌린(inulin) 성분을 포함하는 도라지, 사포닌(saponin) 성분을 포함하는 인삼 등을 대표적인 예로 들 수 있고, 이러한 천연 방부제는 조성물 내에서 미생물의 생육을 억제할 수 있어 제조되는 세정 또는 소독용 조성물의 유통기한을 더욱 증가시킬 수 있도록 구성할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물은 주 세정 성분인 전술한 녹차 추출물에 더해 추가적인 살균 및 세정 성분으로서 아이소프로필 알코올, 에탄올, n-프로판올, t-부탄올, 2-부탄올, 펜타놀, 헥사놀 및 포비돈-아이오다로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 더 포함할 수 있다.
그리고, 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물은 다공성 비드를 더 포함하여 조성물의 물성이 더욱 향상될 수 있다.
상기한 다공성 비드는 키토산을 대표적인 예로 들 수 있으며, 저분자량의 키토산은 천연 소재로서 항균 및 항곰팡이 활성을 가지기 때문에 제조되는 조성물에서 방부제 역할을 하여 저장성을 더욱 증가시킬 수 있고, 무독성이어서 피부에 저자극인 특성을 나타내며 피부 보습을 유지하도록 생체 친화성이 우수한 특성을 가진다.
또한, 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물은 필요에 따라 천연 방향제를 더 포함하여 향취(fragrance)가 부여될 수 있다.
상기 천연 방향제로서는, 로즈마리(rosemary), 라벤더(lavender), 장미(rose), 라반딘(lavandin), 레몬(lemon), 로즈 우드(rosewood), 만다린(mandarin), 쟈스민(jasmine), 바실(basil), 백단향(sandalwood), 베르가모트(bergamot), 시트로넬라(citronella), 오렌지(orange), 유칼립투스(eucalyptus), 캐모마일(chamomile), 팔마로사(palmarosa) 또는 마조람(majoram) 등의 식물로부터 수득한 천연 추출물 또는 정유(essential oil)를 사용할 수 있다.
이와 같은 천연 방향제는 각각 특이적인 미생물에 항균 능력을 가져, 항바이러스 세정 또는 소독용 조성물 제조시 향취 부여를 위해 첨가하면, 항균 능력을 동시에 상승시키는 효과를 나타내어 바람직하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물은 천연 점증제, 천연 pH 조절 물질 등을 포함하는 천연 첨가제를 첨가하여 제조되는 세정 또는 소독용 조성물의 물성을 더욱 향상시킬 수 있도록 구성할 수 있다.
이때, 천연 점증제는 제조되는 세정 또는 소독용 조성물 기포의 안정화와 안정성을 위한 점증제로서 천연 고분자인 전분, 잔탄검, 로커스트빈검, 카라기난, 펙틴 젤라틴 등을 이용할 수 있으며, 조성물 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 10중량%의 양으로 함유되는 것이 바람직한데, 이는 0.0001중량% 미만이면 점증 효과가 미미하고, 10중량%를 초과하면 점증제가 용액 내에서 분산이 불안정하기 때문이다.
그리고, 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물은 용도에 따라 pH를 달리하여 제조할 수 있도록 pH 조절을 위하여 천연 pH 조절 물질인 포도씨 추출물, 레몬주스, 식초, 사과산 등과 같은 과일산을 이용하거나 구연산 등을 이용해 pH를 낮출 수 있으며, 수산화칼륨 또는 수산화나트륨 등을 이용해 pH를 높이도록 구성할 수 있다.
아울러, 천연 pH 조절 물질은, 그 사용량을 조성물 총 중량을 기준으로 0.01 내지 0.5중량％을 포함하여 pH를 조절하도록 구성하는 것이 바람직한데, 만일 0.01중량％ 미만으로 사용할 경우에는 pH를 제대로 조절하지 못하게 되고, 반대로 0.5중량％를 초과하여 사용할 경우에는 산성도 또는 염기성도가 과다하게 높아지게 되어 소독 또는 세정용 조성물의 기능이 떨어지게 되므로 제한적으로 사용하며, 제조되는 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물의 전체 pH가 건강한 피부를 유지할 수 있도록 5 초과 7 미만의 약산성을 띄도록 구성하는 것이 바람직하다.
상기한 조성을 가지는 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물은 액체, 젤, 에멀젼, 에어로졸 형태로 제형화하여 제조할 수 있으며, 비누화 반응을 하는 천연 첨가물을 추가로 혼합하여 시판되는 비누와 같은 고체 상태로도 제조할 수 있으며, 이를 위해, 천연 유지류를 추가로 더 첨가하여 수산화칼륨과 반응시켜 비누와 천연글리세린이 형성되도록 비누화 반응을 유도하여 고체 형태로 제조하도록 구성할 수 있다.
그리고, 액체, 젤 또는 에멀젼 형태로 제조하는 경우, 실제 사용 가능한 농도로 개발하되 묽혀서 사용할 수 있도록 농축한 농축 타입으로 제조할 수 있으며, 장기간의 보관이 요구되는 경우를 위해 사용직전 적정농도로 물에 풀어 사용할 수 있도록 고체 분말 타입으로 제형화하여 제조할 수 있다.
상기한 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물은 (a) 녹차잎, 녹차 줄기 및 녹차씨를 이용해 녹차 추출물을 제조하는 단계, (b) 상기 녹차 추출물에 항산화제를 포함하는 천연 방부제, 천연 방향제 조성물 및 천연 첨가제를 혼합하여 천연 세정제 조성물을 제조하는 단계 및 (c) 상기 천연 세정제 조성물의 pH를 조절하여 세정 또는 소독용 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 소독 또는 세정용 조성물 제조방법에 의해 소독 또는 세정용 조성물을 제조할 수 있다.
바이러스로 인한 질병을 갖는 환자를 치료하고 있는 병원의 병실 소독 및 의료종사자의 손, 인체, 옷과 의료기기를 소독하는 문제는 간단치 않다. 일반적으로, 강산, 강염기 또는 염소계 소독제를 사용하여 소독하는데, 상기한 소독제는 바이러스를 효과적으로 사멸시키지만, 실제로 사용하는 데는 제한적이다.
본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물을 소독제로 이용하면, 동물 소독이나 축사 소독, 축산 농가 및 농부의 직접 소독을 가능케 한다.
그리고, 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물을 사용하면, 인체 건강이나 환경적으로 유해성이 없거나 약하므로 직접 소독이나 세정에 사용할 수 있고, 피부에 존재하는 전염성 피막 바이러스를 90% 이상 제거할 수 있으며, 항균 활성을 나타내 세균 및 유해물질을 효과적으로 제거할 수 있고, 항산화제를 포함하여 제조 후 장시간이 경과하여도 항바이러스 활성을 그대로 가지고 있어 다양한 형태의 천연 세정제 및 소독제 제조에 응용될 수 있다.
이하, 바람직한 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세히 설명하도록 한다.
제시된 실시예는 본 발명의 구체적인 예시일 뿐이며, 본 발명의 범위를 제한하기 위한 목적으로 제공되는 것이 아니다.
<실시예 1>
실시예 1의 본 발명에 따른 소독 또는 세정용 조성물을 제조하기 위해서, 녹차잎, 녹차 줄기 및 녹차씨를 이용해 녹차 추출물을 제조하였다.
녹차 추출물을 제조하기 위해서 열수 추출법을 사용하였으며, 녹차잎, 녹차 줄기 및 녹차씨를 증기로 증숙하여 식히고, 상기 증숙된 녹차를 200∼300℃로 가열된 용기에서 덖은 후 건조하고, 상기 건조된 녹차를 분쇄기로 분말화하며, 상기 녹차분말 1 내지 4%(w/v)를 70 내지 90℃의 물에 침지시키고, 12 내지 24시간동안 정치한 다음, 상기 녹차 추출물을 여과한 후 감압 농축하여 녹차 추출물을 제조하였다.
상기한 녹차 추출물에 항산화제로 아스코르브산을 1 내지 10 중량 첨가하여 세정 또는 소독용 조성물을 제조하였다.
<실험예 1>
본 실험예 1에서는 녹차 추출물이 독감 바이러스의 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 플라크 형성 저해 실험을 수행하였다.
이를 위해, 실험 하루 전 소태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS : GIBCO Invitrogen Coporation, USA)을 함유하는 MEM(Menimum Essencial Medium: GIBCO Invitrogen Coporation, USA) 배지에 MDCK(Madin-Darby, canine kidney, ATCC, USA) 세포주를 1.5× 105 세포/㎖의 농도로 접종한 후 6-웰 플레이트(well plate)에서 37℃, 5% CO2 농도의 배양기로 배양하였다.
24시간 배양 후 배양 접시 바닥에 가득 자란 MDCK 세포주에 두 가지 아형의 독감 바이러스 즉, A/Korea/01/09(H1N1)와 A/Aquatic Bird/w81/05(H5N2)을 200 PFU(Plaque Forming Unit)/㎖의 농도로 감염 처리하였다.
감염 처리 한 시간 후 세포에 처리한 바이러스 용액을 제거하였고, 세포주를 PBS(Photassium Phosphate Bufferd Saline) 완충용액 1 ㎖/웰을 이용하여 세척하였다.
녹차 추출물을 최종농도가 100 ㎍/mL 부터 6.25 ㎍/mL 까지가 되도록 2배 연속 희석한 후 이것을 오버레이 배지[overlay media: 1% 아가로즈, 10 ㎍/mL 농도로 트립신효소가 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium: GIBCO Invitrogen Coporation, USA) 배지로 플라크 형성을 위해 세포 위에 도말하는 배지]에 첨가하였고 대조군으로 아무것도 첨가되지 않은 오버레이 배지를 사용하였다. 오버레이 배지를 독감 바이러스가 감염된 세포에 3 ㎖/웰씩 도말하고 15분 뒤 오버레이 배지가 굳은 후 37℃ 5% CO2 농도를 유지하는 배양기에서 72 시간 동안 배양하였다.
그 결과, 상기 72 시간 동안 독감 바이러스가 플라크를 형성하였으며 녹차 추출물이 첨가된 실험군의 경우 플라크의 형성이 저해되었다. 구체적으로, 본 실험예 1에 따른 플라크 저해 실험 결과를 나타내는 사진인 도 1을 참조하면, 녹차 추출물의 주성분인 EGCG로 처리한 경우, 독감 바이러스의 플라크 형성이 억제되는 것을 확인할 수 있었으며, 처리를 위해 사용된 EGCG의 농도가 높아질수록 플라크 형성이 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 그러나, 대조군의 경우에는 플라크 형성이 억제되지 않는 것을 확인할 수 있었다.
그리고, 플라크 저해 실험별로 각각의 플라크 수를 개수한 후 대조군의 플라크 수와 실험군의 플라크 수의 비로 녹차 추출물에 의한 독감 바이러스의 플라크 형성 저해 능력을 정량하였다.
<실험예 2>
본 실험예 2에서는 녹차 추출물의 바이러스 제거 능력을 확인하기 위하여 인공 피부세포인 네오덤® E(테고사이언스, 한국)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 MEM 미디어를 첨가하고 37℃ CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양한 후, 저온 적응형 X-31 바이러스를 5 x 104 PFU 만큼 점적한 후 녹차 추출물로 세척하고 이러한 세척효과에 의한 바이러스 제거/불활성화 효과를 MDCK 세포주에서 플라크 분석법을 통해 검증하였다. 더욱 자세하게는, 세포를 배양 후 인산완충식염수(phosphate buffer saline, PBS)으로 세척하고 바이러스를 5 × 104 PFU 만큼 점적하였다. 이후 37℃ CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고 100 ㎍/mL 그리고 200 ㎍/mL 농도의 녹차 추출물 혹은 PBS로 바이러스가 감염된 인공세포를 각각 세척하였다. 참고로, 녹차 추출물의 바이러스 제거 능력을 확인하기 위하여 세척액을 상기 실시예 1에서 시행하였던 플라크 형성 실험으로 바이러스 역가를 확인하였다.
도 2는 실험예 2의 플라크 형성 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2에 나타난 바와 같이, 녹차 추출물로 세정한 배지에는 바이러스가 감염된 인공세포에 플라크가 형성되지 않아, 바이러스 제거에 녹차 추출물이 탁월한 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.
<실험예 3>
본 실험예 3에서는 녹차 추출물의 손 세정제 또는 소독제로의 사용을 위한 유통 기한(shelf life)의 증가를 확인하기 위해서, 녹차 추출물의 유통 기한 증가를 위해 항산화제인 아스코르브산을 녹차 추출물에 첨가하여 시간이 지남에 따라 녹차 추출물의 항바이러스 활성의 증감을 확인하였다.
이를 위해, 녹차 추출물 100 ㎍/mL에 다양한 농도의 아스코르브산을 첨가하고 2달 동안 실온에서 보관하였다. 이때, 5일에 한번 씩 200 PFU의 A/Korea/01/09 (H1N1)바이러스에 플라크 형성 저해 실험을 진행하여 항산화제에 의한 녹차 추출물의 유통 기한 증감변화를 확인하였다.
그리고, 항산화제 및 안정제의 유통 기한 증가를 확인하기 위해, 아스코르브산이 포함된 녹차 추출물에 다양한 농도로 안정제를 참가하여 2달 동안 실온에서 보관하였다. 그리고, 5일에 한번 씩 200 PFU의 A/Korea/01/09 (H1N1)바이러스에 플라크 형성 저해 실험을 진행하여 항산화제 및 안정제에 의한 녹차 추출물의 유통 기한 증감변화를 확인하였다.
녹차 추출물의 유통 기한 증감변화를 측정한 결과 녹차 추출물의 유통 기한이 상승하여 2달 이상이 지나도 녹차 추출물의 항바이러스 활성이 유지되는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (10)

  1. 녹차 추출물을 포함하여 항바이러스 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    조성물 총 중량 기준으로 20% 이하로 상기 녹차 추출물을 포함되는 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    피막 바이러스(enveloped virus)에 대해 항바이러스 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  4. 제 3항에 있어서,
    상기 피막 바이러스는, 인플루엔자 바이러스(influenza virus), 레트로 바이러스(retrovirus) , 에프스타인바 바이러스(epstein-barr virus) 또는 헤르페스 바이러스(herpes simplex virus)인 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 녹차 추출물은 카테킨(catechin), 에피카테킨(epicatechin), 에피갈로카테킨(epigallocatechin, EGC), 에피카테킨 갈레이트(epicatechin gallate, ECG), 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate, EGCG) 및 플라보노이드(flavonoid) 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    항산화제 및 안정제를 더 포함하여 장기 저장 안정성이 우수한 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  7. 제 6항에 있어서,
    상기 항산화제는 토코페롤, 아스코르브산, 아스코르브산 유도체, 갈산, 쿼르세틴, 플라보놀, 플라보노이드, 카테콜, 에톡시퀸 및 리그난 배당체로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물이고, 조성물 총 중량 기준으로 1.5% 이하로 포함되는 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  8. 제 6항에 있어서,
    상기 안정제는 베타싸이클로덱스트린(β-cyclodextrin), 구연산, 염화마그네슘(magnesium chloride, MgCl2), 이디티에이염(ethylenediaminetertraacetic acid, EDTA salt), 및 디부틸히이드로톨루엔(dibutyl hydroxy toluene, BHT)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물이고, 조성물 총 중량 기준으로 1% 이하로 포함되는 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    아이소프로필 알코올, 에탄올, n-프로판올, t-부탄올, 2-부탄올, 펜타놀, 헥사놀 및 포비돈-아이오다로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
  10. 제1항에 있어서,
    다공성 비드, 천연 방향제 또는 천연 첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 세정 또는 소독용 조성물.
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