TW201018685A - Pyridopyrimidinone inhibitors of PI3Kα and mTOR - Google Patents

Description

201018685 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明涉及蛋白激酶及其抑制劑的領域。具體地說，本 發明涉及磷脂醯肌醇3-激酶（PI3K)信號傳導途徑的抑制劑 以及它們使用的方法。 【先前技術】 PI3K途徑調節細胞生長、增殖和存活，並且在人腫瘤中 經常被異常調節。腫瘤中出現PI3K途徑啟動是經多種機 制，包括户/欠3(^4基因（其編碼Pl3Ka的pllO次單元）的普遍 突變和擴增’或脂質磷酸酶PTEN的調低。PI3K的下游， mTOR通過它的兩個不同信號傳導複合體mTORC 1和 mTORC2 ’控制細胞生長和增殖。考慮到PI3K信號傳導對 主要的細胞功能的作用，靶向ΡΙ3Κ和mTOR兩者的抑制劑 可對腫瘤患者群體提供治療效益，所述患者群體具有啟動 的或Ras的突變、PTEN_缺失或其中調高腫瘤的生 長因子信號傳導。 磷脂醯肌醇3-激酶（ΡΙ3Κα)是一種雙特異性蛋白激酶， 主要由85 kDa調節次單元和丨1() kDa催化次單元組成。由 這一基因編碼的蛋白質代表催化次單元，其使用Ατρ磷酸 化 Ptdlns、PtdIns4P和 PtdIns(4,5)P2。PTEN是一種經由多 種機制抑制細胞生長的腫瘤抑制劑，可使PIP3(piK3CA的 主要產物）去磷酸化。轉而，PIP3是蛋白激酶B(AKT1， PKB)易位至細胞膜所需要的，在所述細胞膜處，上游激酶 使其填酸化並活化。pTEN對細胞死亡的效應經由 143396.doc 201018685 PIK3CA/AKT1途徑介導。 ΡΙ3Κα已經參與控制細胞骨架的重構、凋亡、囊泡運 輸、增殖和分化過程^ PIK3CA的增加的拷貝數量和表現 與大量的惡性Μ瘤相關，所述惡性腫瘤諸如卵巢癌 (Campbell等人，Cancer Res 2004, 64, 7678-7681; Levine 等人，2005，11, 2875-2878; Wang等人， Hum Mutat 2005, 25, 322; Lee^A * Gynecol Oncol 2005, 97, 26-34) ' 子宮頸癌、乳癌（Bachman,等人 Cawcer 5ζ·ο/ Ther 2004, 3, 772-775; Levine,等人，如上；Li 等人，

Cawcer 2006，91-95; Saal 等人，

Ctmcer 2005，65，2554-2559; Samuels 和 Velculescu，

Ce// 2004, 3, 1221-1224)、結腸直腸癌（Samuels,等人

Science 2004, 304, 554; Velho^ J Cancer 2005, 41, 1649-1654)、子宮内膜癌（Oda 等人 Cancer 2005，65, 10669-10673)、胃癌（Byun等人，Cawcer 2003，104, 3 18-327; Li等人，如上；Velho等人，如上；Lee等人， Oncogewe 2005, 1477-1480)、肝細胞癌（Lee等人， ζ·ί/)、小和非小細胞肺癌（Tang等人，Cawcer 2006，51， 181-191; Massion等人，Jw «/ Cr" Care Mec/ 2004, 1 70, 1088-1094)、曱狀腺癌（Wu等人，·/ C7i« 五《docrz_«o/ MekZ) 2005，P0, 4688-4693)、急性粒細胞性白血病 (AML)(Sujobert等人，B/ood 1997，106，1063-1066)、慢性 粒細胞性白血病（CML)(Hickey和 Cotter ·/ C/zew 2006, 28 1, 2441 -2450)多發性神經膠母細胞瘤（Hartmann等人4cia 201018685

Neuropathol (Berl) 2005, 109, 639-642; Samuels等人，士口 上） 鑒於ΡΙ3Κα在生物過程和疾病狀態中的重要作用，這種 蛋白激酶的抑制劑是期望的。 雷怕黴素的哺乳動物乾mTOR是整合細胞生長、增殖和 生存的胞外和胞内信號的蛋白激酶》從細胞表面受體發出 信號的胞外有絲分裂生長因子和傳送缺氧應激、能量和營 養狀態的胞内途徑都彙聚於mTOR。mTOR以兩種不同的複 合體存在：mTOR複合體l(mTORCl)和mTOR複合體 2(mTORC2)。mTORCl是轉錄和細胞生長的關鍵媒介（經其 受質p70S6激酶和4E-BP1) ’並經血清和糖皮質素活化激酶 SGK促進細胞存活，而mTORC2促進促存活（pro-survival) 激酶AKT的活化。考慮到其在細胞生長、增殖和生存中的 主要作用，可能不會驚訝，在癌症和其他疾病中，mTOR 信號傳導經常被異常調節（Bjornsti和Houghton Cancer 2004， 4(5)，335-48; Houghton^o Huang Microbiol Immunol 2004, 279, 339-59; Inoki, Corradetti # Genet 2005, 37(7), 19-24)。 mTOR是包括ATM、ATR和DNAPK的非典型激酶的 PIKK(PI3K相關激酶）家族的成員，且其催化結構域與PI3K 的催化結構域同源。ΡΙ3Κ信號傳導的異常調節是腫瘤細胞 的常見功能。一般來說，在其中牽涉ΡΙ3Κ信號傳導的許多 腫瘤類梨（諸如下文討論的那些）中，mTOR抑制可認為是 一種策略。 143396.doc 201018685 在治療乳癌中，PI3K信號傳導的抑制是EGFR家族抑制 劑，諸如抗HER2抗體曲妥珠單抗（trastuzumab)的活性的關 鍵（Nagata，Lan等人，Cawcer Ce// 2004, 6(^2入 117-27)，且 PTEN的缺失與曲妥珠單抗耐受性相關（Pandolfi #五《g/ ·/ Med 2004，357(^22入 2337-8; Nahta，Yu等人iVai Owco/ 2006，30入269-280)。因此，PI3K信號傳導的抑制 劑可特別地用於HER2陽性腫瘤，其不能響應曲妥珠單 抗，或對曲妥珠單抗耐受。 套細胞淋巴瘤（MCL)通常以細胞週期蛋白D的超活化和 隨後細胞週期的異常調節為特徵。細胞週期蛋白D的轉錄 很大程度上由mTOR信號傳導介導，且已報導，雷怕黴素 (一種mTOR激酶活性的別構抑制劑）體外調低MCL細胞系 的細胞週期蛋白D的水準（Dal Col，Zancai等人2008, ""70入 5142-51)。 在腎細胞癌中，mTOR促進的缺氧誘導轉錄因子（HIFla) 的翻譯和導致的血管生長因子的表現的增強在具有von Hippel-Lindau(VHL)蛋白的功能缺失突變的腫瘤病例中可 能特別相關。這種蛋白用於阻斷蛋白酶體介導的HIF的損 壞，並因此引起血管新生（proangiogenic)生長因子的組成 型表現（Thomas，Tran等人iVai Med 2006, 72"人 122-7)。這 種突變在腎細胞癌中特別普遍，且可作為在這一疾病中從 mTOR抑制劑觀察到的有前景的臨床活性的基礎（Atkins， Hidalgo 等人·/ 2004，22(5)，909-18; Motzer，

Hudes^ Clin Oncol 2007, 25(25), 3958-64) ° 201018685 PI3K在來自急性粒細胞性白血病（AML)患者的胚細胞中 被活化，且不僅可導致疾病的病理生理學，還導致化療耐 受性。AML細胞始終表現ρΙΙΟδ同種型，且ΡΙ3Κδ的抑制減 少AML細胞的增殖和生存，且沒有影響正常定向造血幹細 胞（Sujobert，Bardet 等人 2005，川1063-6;

Billottet, Grandage 等人 Owcogewe 2006，25(50), 6648- 6659)。另一方面’ PI3K途徑活化與新診斷的AML患者的 改善的總體的且無復發的存活相關（Tamburini，Elie等人 2007, 人 1025-8)。 在慢性粒細胞性白血病（CML)中，BCR-ABL致癌基因通 過ΡΙ3Κ的ρ85次單元發出信號，介導白血病生成、細胞生 長和細胞生存（Skorski，Bellacosa等人五/ 1997, /(5(20入 61 5 1 -61)。一個相似機制可能涉及NPM/ALK轉化的間變性 大細胞淋巴瘤細胞的生長和存活（Bai，Ouyang等人 2000，外「7力，4319-27)。此外，BCR-ABL在轉錄方面可調 高ρΙΙΟγ次單元，且如這種ΡΙ3Κγ，其優先在造血幹細胞中 表現，可能是抗藥CML的重要靶（Hickey和Cotter別<?/ C/zem 2006, 2441-50) ° 還發現PI3K途徑在彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL)細胞 系和腫瘤樣品中被活化，且PI3K抑制導致幾種DLBCL細胞 系的凋亡（Uddin，Hussain等人2006，7⑽(73)，4178-86)。 IGF1R受體和下游PI3K-mTOR途徑信號傳導的活化牵涉 肉瘤的幾種亞型的發生和發展（Hernando，Charytonowicz等 143396.doc 201018685 人 Met/ 2007，/3「6人 748-53;.Wan 和 Helman <9«co/o 容 ζ·5ί 2007, 72⑻，1007-18) ° 已報導，最常見的兒童肉瘤之一橫紋肌肉瘤沉溺於胰島 素樣生長因子I受體信號傳導，如藉由升高的ΑΚΤ信號傳 導所測量（Cao, Yu 等人 Cawcer 2008，8039- 8048)。胰島素樣生長因子II在這些癌症中過度表現，且已 經評價了雷怕黴素（一種mTORCl抑制劑）的抗腫瘤效應， 且報導其抑制橫紋肌肉瘤異種移植物生長（Wan，Shen等人 2006,外从 394-401) 〇 卵巢癌中PIK3CA的擴增是ΡΙ3Κα起人致癌基因作用的第 ^^-(Shayesteh, KNat Genet, 1999, 21(1), 99- 102)。PI3K擴增和PTEN的缺失都與卵巢腫瘤中對順鉑的 而才受性有關（Lee, Choi 等人⑶ / 2005，97(7) 26-34) ° PTEN缺失和PI3K突變或擴增都常見於子宮内膜腫瘤， 且在至多80%的子宮内膜癌的子宮内膜樣亞型中發現PTEN 突變（Obata，Morland 等人 Cancer Λα 1998，55(7 0)，2095-7)。mTOR活化十分常見於子宮内膜腫瘤，其由LKB1和/或 TSC2腫瘤阻抑蛋白的調低來促進，且PI3K和mTOR axes兩 者的雙抑制可能是特別有用的策略（Lu, Wu等人C/M Cancer 及ei 2008, /彳(9)，2543-50) ° PI3K信號傳導可在許多肺腫瘤中起關鍵作用；最近的研 究在41%和46%的非小細胞肺癌（NSCLC)樣品中分別發現 AKT的過度表現和PTEN的缺失（Tang，He等人Zwng Cawcer 143396.doc 201018685 2006，57(2人181-91)。另一個最近的分析發現74%的 NSCLC腫瘤具有降低的或缺少PTEN表現（Marsit, Zheng等 人丑wm Ραί/ζο/ 2005，768-76)。PIK3CA的頻繁擴增 也在各種亞型的肺癌中證實，包括小細胞（67%)、鱗狀 (70%)、大細胞（38%)和腺癌（19%)(Massion，TaHan等人dm «/及eipir CWi Care Med 2004，1088-94)。明顯地， 對EGFR抑制劑吉非替尼（gefitinib)的耐受性與不能調低 AKT信號傳導和PTEN的缺失有關（Kokubo，Gemma等人 J Cancer 2005, 92(9), 1711-9)，且 KRAS 狀態在確定對 EGFR抑制劑的反應中也可起重要作用（Pao, Wang等人尸Μό Library of Science Med 2QQ5, 2(1)，el7)。 PI3K在13 - 32%的結腸直腸腫瘤中發生突變（Velho, Oliveira^ KEur J Cancer 2005, 41(11), 1649-54; Foukas, Claret等人iVWwre, 2006，以7(7097人 366-370)，且在大比例 的直腸結腸腫瘤，特別是在表現出微衛星不穩性的結腸直 腸腫瘤中觀察到PTEN的缺失（Goel，Arnold等人Cawcer Λα 2004，64(9), 3014-21; Nassif，Lobo # A Oncogene 2004, 23⑺，617-28)。此外，KRAS(其可導致PI3K信號傳導的調 高）是結腸直腸腫瘤中最常見的突變致癌基因（Bos Res 1989. 49(17), 4682-9; Fearon Ann N Y Acad Sci 1995, 765，101-10)。PI3K途徑的異常調節還牵涉受損的對抗 EGFR抗體西妥昔單抗（cetuximab)的反應，且還可用於增 強對化療的反應（Perrone, Lampis 等人 (9«co/ 2009, 20(7人 84-90)。 143396.doc 201018685 在3 6%的胃癌中發現PTEN的表現異常地低，且發現相似 比例的腫瘤具有PIK3CA的基因組擴增（Byun, Cho等人 Cancer 2003, 104(3), 318-27) 0 已報導在肝細胞腫瘤中高頻率地發現PI3K活化突變 (Lee, Soung 等人 2005，以「5入 1477-80)。此外’ 在至多40%的肝腫瘤中，PTEN蛋白水準降低，並且與病理 程度和疾病進展負相關（Hu, Huang等人Career 2003, 入 1929-40; Wan，Jiang 等人 Cawcer Owco/ 2003, ⑺，100-6)。 ΡΊΈΝ蛋白表現的缺失出現在18-19%的原發性黑素瘤和 29-3 8%的黑素瘤細胞系中，並且伴隨增加的腫瘤厚度 (Guldberg, thor Straten^ A Career Res 1997, 57(17), 3660-3; Tsao, Zhang 等人 及以 2000，入 1800-4;

Whiteman, Zhou^ /^Int J Cancer2002y 99(1), 63-7; Goel, Lazar等人//«veWDerwaio/ 726(7), 2006，154-60)。 胰腺腫瘤具有非常高的KRAS突變發生率，其引出PI3K 途徑的下游活性。此外，已在胰腺癌細胞系和腫瘤樣本中 報導了降低的PTEN功能，其使得NFkB活化和MYC穩定 (Asano，Yao 等人 Owcogewe 2004，人 8571-80) 0

前列腺癌的特徵為頻繁的PTEN功能缺失（Cairns, Okami 等人 Cancer 1997，57(^22), 4997-5000; Gray，Stewart等 KBr J Cancer 1998, 78(10), 1296-300; Wang，Parsons 等人 C/ίπ Cawcrer 及以 1998，入 811-5; Whang, Wu 等人Proc Natl Acad Sci USA 1998, 95(9), 5246-50) » J.PI3K# p] #J 143396.doc -10- 201018685

在這一疾病中可能具有特別應用（Majumder和Sellers 2005，以（50 7465-74)。最新的資料表明 PTEN缺 失可能在腫瘤乾細胞樣群體的擴張中起主要作用（Wang， Garcia^ AProc Natl Acad Sci USA 2006, 103(5), 1480-5)。雄激素受體（AR)和PI3K途徑信號傳導之間存在廣泛的 串擾（extensive crosstalk)，且 PI3K/AKT或 mTOR抑制已經 在雄激素依賴性和非依賴性前列腺癌臨床前模型兩者中顯 示出前景（Lu，Ren 等人/«ί 2006，25(7人 245-51;

Mulholland，Dedhar 等人 25(3人 2006，329-37;

Xin，Teitell等人/Voc dcai/ 5cz· t/ 5 乂 72006，入 7789-94; Mikhailova, Wang 等人 Jdv Med 5ζ·ο/ 2008, 617, 397-405; Wang, Mikhailova 等人 2008, 27⑽，7106-7117)。 在甲狀腺癌，特別在間變性亞型中，PI3K頻繁突變 (Garcia-Rostan, Costal A Cancer Res 2005, 65(22), 10199-207)。在單獨的研究中，已發現PI3K突變在甲狀腺癌 (thyroid arcinomas)中相對稀少，但在渡泡性曱狀腺癌中頻 繁發現 PI3K擴增（Wu, Mambo 等人《/ C/z·«五《i/ocrho/ 2005, P啊，4688-93) ° 間變性大細胞淋巴瘤（ALCL)患者表現活化形式的ALK激 酶，這是因為核磷蛋白基因與ALK激酶基因的融合。因 此，產生的融合蛋白（protine)NPM-ALK與ALCL因果相 關，並產生升高的mTOR信號傳導。 錯構瘤（Hamaratomas)、血管肌脂瘤（Angiomyelolipomas)、 143396.doc 201018685 TSC-相關和偶發淋巴管肌瘤病：Cowden病（多發性錯構瘤 症候群）主要是因為PTEN功能的遺傳性缺失。患者主要發 展皮膚和甲狀腺的錯構瘤贅瘤（hamaratomous neoplasms)。 結節性硬化患者由於TSC1或TSC2的突變，在肺、腦、 腎、皮膚和心臟中發展良性錯構瘤。較大比例的這些患者 還發展血管肌脂瘤（Bissler，McCormack等人ΛΓ五叹/ «/ Mei/ 2008，140-151)。許多女性TSC患者還發展進行性 肺病、淋巴管肌瘤病，這是因為平滑肌細胞滲入肺部 (Bissler，等人同上）。儘管這些腫瘤是良性的，但由於這些 腫瘤和滲入物（infiltrates)的生長，可能產生嚴重的併發 症。 最近的研究發現，具有硬化性血管瘤（一種少見的肺腫 瘤）的患者具有84%的STK11/LKB1表現降低，且mTOR磷 酸化和信號傳導升高（Randa M. S. Amin Ραί/ϊο/ο幻; International 2008, 58(1), 38-44)。LKB 1/STK1 的基因種系 突變是引起Peutz-Jeghers症候群（PJS，一種常染色體顯性 疾病）的原因性潛在突變。 治療頭頸癌的主要形式是手術和/或放射。有證據顯示 耐放射性可能經PI3K/mTOR途徑的調高而出現（Gupta， McKenna 等人 Career 及 es 2002，5广3), 885-892)。在患 者中測量到降低的AKT磷酸化與癌症的較好局部控制相 關。 除了以上的腫瘤類型，mTOR還特別牽涉其他疾病。例 如，雷怕黴素處於用於治療性治療神經纖維瘤病的臨床研 143396.doc -12- 201018685 究中。神經纖維瘤病中的神經纖維瘤病-ι基因的突變導致 mTOR途徑的活化（Ferner jEwr Gewei 2006， 131-138; Sabatini Nat Rev Cancer 2006, 6(9), 729-734; Johannessen，Johnson等人 Cwrrewi 5z_c»/og_y 2008, 56- 62)。此外，雷怕黴素處於黃斑變性、黃斑水腫和骨髓性 白血病的臨床研究中。雷怕黴素還在具有全身性狼瘡和自 身免疫性淋巴增殖症候群（ALPS)的患者中進行臨床研究。 【發明内容】 以下僅概述了本發明的某些方面，並且無意限制其性 質。這些方面和其他方面和實施方案在下文中更加全面地 描述。本說明書引用的所有參考文獻在此通過引用其全部 内容併入。在本說明書的表達公開内容與通過引用併入的 參考文獻之間矛盾的情況下，應該以本說明書的表達公開 内容為准。 本發明提供了抑制、調節和/或調整PI3K和mTOR的化合 物，其用於治療人的過度增殖疾病，諸如癌症。本發明還 提供製備化合物的方法、使用這些化合物治療人的過度增 殖疾病的方法，並涉及含有這種化合物的藥物組合物。 本發明的第一方面提供了式I的化合物：

143396.doc 13· 201018685 任選地為其單一立體異構物或立體異構物的混合物，且 額外地任選地為其藥學上可接受的鹽，其中 R是四氫呋喃基或四氫》比喃基； R2是氫或烧基； R3 是-NR4R4a ;且 R4和尺4&獨立地選自氫和烷基。 在第二方面中，本發明涉及包含式I的化合物和藥學上 可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物，所述式！ 的化合物任選地為其單—立體異構物或立體異構物的混合 物，且額外地任選地為其藥學上可接受的鹽。 在第一方面^ ’本發明提供了治療疾病、病症或症候群 的方法，所述方法包括向患者施用治療有效量的式工的化 合物，該化合物為其單—立體異構物或立體異構物的混合 物，且額外地任選地為其藥學上可接受的鹽，或包含治療 有效量的式1的化合物和藥學上可接受的載體、賦形劑或 稀釋劑的藥物組合物，所述式I的化合物任選地為其單一 立體異構物或立體異構物的混合物，且額外地任選地為其 藥學上可接受的鹽。 在第四方面中，本發明提供了製備式〗的化合物的方 法，其包括： (a)使式9的中間體：

143396.doc 201018685 其中R1和R3如發明内容中對式ι的化合物的定義；與式 R NH2的中間體（其中R2如發明内容中對式I的化合物的定 義）反應以產生式I的化合物；< (b)使式7的中間體：

7

其中R丨如發明内容中對式I的化合物的定義;與式8的中間 渡·

其中R如發明内容中的定義，反應·，以產生式的化合 物：

R3 1(f);且 (C)曰R疋_NH2或_NHR4a，且尺“是烷基時，任選地烷基化 R3 ;且 (d)任選地進—步拆分單—異構物。 縮窝和定義 以下縮寫和術語始終具有所指的含義： 143396.doc 15 201018685 缩寫 含義 °c 攝氏度 D 雙舉 Dd 雙重疊峰(doublet of doublet) Dt 雙重三重峰(doublet of triplet) DBU 二氮雜(1，3)二環[5A0]十一烷 DCM 二氣甲烷 DMF A/；iV-二甲基甲醯胺 DMSO 二甲基亞碾 DTT 二硫蘇糖醇 El 電子撞擊離子化 Equiv 當量 EtOH 乙醇 G 克 h或hr 小時 HPLC 南效液相層析 L 升 LC/MS 液相層析/質譜分析 M 多重峰 MeOH 甲醇 Mg 毫克 MHz 兆赫茲(頻率） Min 分鐘 tnL 毫升 pL 微升 Mmol 毫莫耳 Mol 莫耳 N 正常或正常狀態 nM 奈莫耳 NMR 核磁共振色譜 q 四重峰 RT 或 rt 室溫 s 單峰 t或tr 三重命 符號「-」指單鍵’「=」指雙鍵’「=」指三鍵，「二=」 指單鍵或雙鍵。符號「〜W」指出現在該符號所連接的雙 143396.doc • 16 - 201018685 鍵末端上的任一位置的雙鍵上的基團；即，雙鍵的幾何構 型（E-或Z-)是不明確的。當描述基團從其母式被去除時， 「〜」符號將用在理論上被切割以使所述基團從其母結構 式分離的鍵的末端。 ’ 當描繪或描述化學結構時，除非另外明確.地陳述，假定 • 所有的碳具有符合四價的氫取代。例如，在以下圖示的左 側的結構中，具有九個隱含的氫。九個氫描繪於右側的結 φ 射。有時，結構中的特定原子描述為具有取代氫(清楚 限定的氫）的文本式，例如。本領域中具有通常 知識者應理解，以上提出的描述性方法常見於化學領域以 提供對其他複雜結構描述的簡潔和簡單。 CC、:後 涉及本發明的化合物的「施用（Administrati⑽）」及其變 ❹體(例如「施用(a—tedng)」化合物)指將化合物或該化 合物的前驅藥導入需要治療的動物的身體中。當本發明的 . <匕合物或其前驅藥與一種或多種其他活性劍(例如手術、 放射和化療等等）組合提供時，「施用」及其變體各自理解 為^括同時和順序地導入化合物或其前驅藥和其他劑。 烷基」指一至六個碳原子的直鏈飽和單價烴基，或三 至六個碳原子的支鏈飽和單價烴基，例如甲基、乙基、丙 基、2-丙基、丁基（包括所有的異構形式）或戊基（包括所有 的異構形式）以及類似基團。 143396.doc 17· 201018685 乳基」指-NH2。 「激酶依賴性疾病或疾患」指依賴於—種或多種蛋白激 酶的活性的病理情況。激酶直接或間接參與了多種細胞活 ，（包括增殖、黏附、遷移、分化和侵人）的信號轉導途 徑。與激酶活性相關的疾病包括踵瘤生長，支援實體踵瘤 生長且與其中涉及過度的局部新血管形成的其他疾病諸如 眼病（糖尿病性視_病、老年黃斑變性以及類似的眼病） 和炎症（牛皮癬’類風濕性關節炎以及類似疾病）相關的病 理新血管形成。 不希望受到理論的束缚，作為激酶的同源物，磷酸酶也 可在「激酶依賴性疾病或疾患」中起作用；即，激酶使例 如蛋白質受質磷酸化，而磷酸酶使其去磷酸化。因此，本 發明的化合物在如本文描述地調節激酶活性的同時，還可 直接或間接地調節磷酸酶活性。這種額外的調節如果存 在，可以協同（或不協同）於本發明的化合物對相關或其他 相互依賴性激酶或激酶家族的活性。在任何情況下，如先 岫所陳述，本發明的化合物用於治療部分特徵如下的疾 病：異常水準的細胞增殖（即腫瘤生長）、程式化細胞死亡 (凋亡）、細胞遷移和侵入，以及腫瘤生長相關的血管生 成。 「代謝產物」指由動物或人體内的代謝或生物轉化產生 的化合物或其鹽的分解產物或終產物；例如，諸如經由氧 化、還原或水解生物轉化為極性更大的分子，或生物轉化 為複合物（參見 Goodman和 Gilman，「The Pharmacol〇gical 143396.doc -18- 201018685

Basis 〇f Therapeutics(治療藥理學基礎）」增刊第8版， Pergamon press，Gilman等人（編），1990對於生物轉化的討 确）如本文所用，本發明的化合物或其鹽的代謝物可以 疋化合物在體内的生物活性形式。在一個實例中，可使用 前驅藥，以致在體内釋放生物活性形式，一種代謝物。在 另一個實例中’偶然地發現了生物活性代謝物，即本身未 經過則驅藥設計。根據本公開，本領域中具有通常知識者 知曉用於本發明的化合物的代謝物活性的測定。 根據本發明的目的，「患者」包括人和其他動物，特別 疋哺乳動物’以及其他生物體。因此，本方法可應用於人 的治療和獸醫應用。在一個較佳的實施方案中，患者是哺 乳動物’在一個更加較佳的實施方案中，患者是人。 化合物的「藥學上可接受的鹽」指藥學上可接受的且擁 有所需母體化合物的藥理學活性的鹽。應理解，藥學上可 接受的鹽是無毒的。關於合適的藥學上可接受的鹽的額外 負訊可參見及ew/wgiow’s (雷明頓藥 學）’第 17 版，Mack Publishing Company, Easton, PA， 1985 ’其通過引用在此併入，或s μ. Berge，等人， 「Pharmaceutical Salts(藥物鹽）」j. Pharm. sci·, 1977; 66:1-19 ’這兩者通過引用在此併入。 藥學上可接受的酸加成鹽的實例包括用無機酸以及有機 酸形成的鹽’所述無機酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、瑞 酸、磷酸以及類似的酸；有機酸諸如乙酸、三氟乙酸、丙 酸、己酸、環戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、草酸、 143396.doc -19· 201018685 馬來酸、丙二酸、破珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯 甲酸、肉桂酸、3-(4-羥基苯甲醯）苯曱酸、扁桃酸、甲磺 酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氣苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、葡庚糖 酸、4,4，-亞甲基雙-(3-羥基-2-烯-卜羧酸）、3·苯基丙酸、三 甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨 酸、羥基萘曱酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸、對曱苯磺酸 和水楊酸以及類似的酸。 藥學上可接受的鹼加成鹽的實例包括當母體化合物中存 在的酸性質子被金屬離子取代時形成的鹽，諸如鈉、鉀、 鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、鎂、鋁鹽以及類似的鹽。 較佳的鹽是銨、鉀、鈉、鈣和鎂鹽。衍生自藥學上可接受 的無毒有機鹼的鹽包括但不限於以下的鹽：伯、仲和叔 胺’取代胺（包括天然存在的取代胺），環形胺和鹼性離子 交換樹脂。有機鹼的實例包括異丙胺、三甲胺、二乙胺、 三乙胺、三丙基胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙 基氣基乙醇、二環己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡 因、普魯卡因、海巴胺（hydrabamine)、膽驗、甜菜驗、乙 一胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可哥驗、嗓吟、<1瓜嗓、B瓜 咬、乙基略咬、氨丁三醇、烙曱基葡糖胺、聚胺樹脂以 及類似的鹼。示例性有機鹼是異丙胺、二乙胺、乙醇胺、 二乙胺、一環己胺、膽驗和咖啡因。 「前驅藥」指，例如通過在血液中水解體内轉化（通常 疋迅速地）以產生以式的母體化合物的化合物。常見實例 143396.doc -20· 201018685 包括但不限於含有羧酸部分的具有活性形式的化合物的酯 和醯胺形式。本發明的化合物的藥學上可接受的酯的實例 包括但不限於烷基酯（例如具有約一至約六個之間的碳）， 所述烷基是直鏈或支鏈。可接受的酯還包括環烷基酯和芳 基烧基酯，諸如但不限於苄基，本發明的化合物的藥學上 可接受的醯胺的實例包括但不限於伯醯胺，以及仲和叔烷 基醯胺（例如具有約一至約六個之間的碳）。本發明的化合 物的醯胺和酯可根據常規方法製備。前驅藥的詳盡討論在 T. Higuchi 和 V. Stella,「Pro-drugs as Novel Delivery Systems(作為新型給藥系統的前驅藥）」美國化學會出版會 議系列叢書的第 14 卷，和 Bioreversible Carriers in Drug

Design(藥物設計中的生物可逆載體），Edward B. R〇che編 輯 ’ American Pharmaceutical Association and Pergamon

Press，19 87中提供’這兩者為所有目的通過引用併入本 文。 「立體異構物」指含有以相同的方式相互鍵結的相同原 子，但原子或原子團的空間排列彼此不同的兩個或更多個 異構物中的任何一個。「立體異構物」包括例如對映體、 幾何異構物、非對映體、旋轉異構物、順式異構物、反式 異構物和構象異構物。 四氫咬喃基」包括四氫呋喃-2-基和四氫呋喃-3-基， 及其任何的立體異構物和立體異構物的混合物。 四氫吡喃基」包括四氫吡喃-2-基、四氫吡喃_3_基和 四氫吡喃-4-基、及其任何的立體異構物和立體異構物的混 143396.doc •21- 201018685 合物。 「治療有效量」是本發明的化合物當施用於患者時，改 善疾病的症狀的量。構成「治療有效量」的本發明的化合 物的量將根據化合物、疾病狀態及其嚴重性、所治療的患 者的年齡以及類似因素而變化。本領域中具有通常知識者 按照他們的知識和本公開，可常規地確定治療有效量。 參

如本文所用，「治療（Treating)」或「治療（treatment)」 疾病、病症或症候群包括⑴預防出現在人中的疾病、病症 或症候群，即使得該疾病、病症或症候群的臨床症狀不在 可I接觸或易患該疾病、病症或症候群但還沒有經受或表 現出該疾病、病症或症候群的症狀的動物中發展；(Η)抑 制該疾病、病症或症候群，即，阻止其發展；且（出）緩解 該疾病、病症或症候群，即，使得該疾病、病症或症候群 消退。如在本領域中所知，因全身給藥對局部給藥、年 齡、體重、-般健康、性別、飲食、施用時間、藥物相互 作用和疾患的嚴重性而調整可能是必要的，且可由本領域 中具有通常知識者通過常規實驗確定。 本文描述的每個反應的「產率」表達為理論 比。 刀 【實施方式】 以下各段提出了許多本發明的化合物的實施方案。在 個實例中，實施方案包括列舉的化合物，以及里單一立 異構物或立體異構物的混合物，以及其藥學上、可接典 鹽。 又 143396.doc -22· 201018685 〃本發明的另—個實施方案涉及幻的化合物，其中以 虱，且所有其他的基團如發明内容中對式工的化合物的定 義。 本發明的另-個實施方案涉及式I的化合物，其中R2是 燒基，且所有其他的基圓如發明内容中對式I的化合物的 . 定義。在另—個實施方案中，R2在式J的化合物中是甲基 或乙基，且所有其他的基團如發明内容令對式I的化合物 的定義。· *本發明的另一個實施方案涉及式j的化合物其中“和 R疋氫，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 的定義。 本發明的另一個實施方案涉及式I的化合物，其中R4是 氫，且尺43是烷基；且所有其他的基團如發明内容中對 的化合物的定義。 在另一個實施方案中，式1的化合物是其中R3是曱基氨 ^ 基、乙基氨基、正丙基氨基或異丙基氨基的化合物；且所 有其他的基團如發明内容中對式J的化合物的定義。 在另一個貫施方案中，式J的化合物是其中厌3是曱基氨 基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對的化 • 合物的定義。 本發明的另一個實施方案涉及式1的化合物，其中R4和 1^^是烷基；且所有其他的基團如發明内容中對式〗的化合 物的定義。 在另一個實施方案中，式I的化合物是其中R3是二甲基 143396.doc •23- 201018685 二乙基氨基、二正丙基氨基或二異丙基氨基的化合 物，且所有其他的基團如發明内容中對式j的化合物的定 義。 在另一個實施方案中，式I的化合物是其中R3是二甲基 氨基的化5物，且所有其他的基團如發明内容中對式I的 化合物的定義。 在另-個實施方案中，本發明涉及幻的化合物其中 R2、R4和^是氯；且^如發明内容中對式〗的化合物的定 義。 ❹ 一個實施方案中’本發明涉及式工的化合物，其中 疋氫R和R疋烧基，且r1如發明内容中對式j的化合 物的定義。 2,^—個實施方案中，本發明涉及的化合物其中 疋氫R和R疋甲基，且R1如發明内容中對式I的化合 物的定義》 2在另4 一個實施方案中，本發明涉及式〗的化合物，其中 疋氫，R疋烧基，且R丨如發明内容中對式丨的化合 物的定義。 if本發明的一個實施方案（A1)中，式〗的化合物是其中 . R丨是四氫呋喃-2-基或四氫呋喃_3·基的化合物；且所有丨 他的基團如發明内容中對式工的化合物的定義。在另一個 實施方案中，式1的化合物是其中R1是四氫呋喃-2-基或四 氫夫喃3基，且R疋氫的化合物；且所有其他的基團如發 月内谷中對式1的化合物的定義。在另一個實施方案中， 143396.doc -24- 201018685 式1的化合物是其中R丨是四氫呋喃-2-基或四氫呋喃-3-基， 且R疋燒基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對 式I的化合物的定義。 在本發明的另一個實施方案（A2)中，式I的化合物是其 中R疋四氫呋喃_3_基的化合物；且所有其他的基團如發明 内容中對式I的化合物的定義。 在本發明的另一個實施方案（B1)中，式I的化合物依據 式la

其中R2和R3如發明内容中對式T的化合物的定義。 ^發明的另—個實施方案（B2)涉及式㈣化合物，其中 R疋氫，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 .的定義® ^發明的另一個實施方案(B3)涉及式_化合物，其中 疋烧基，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合 物較義。在另一個實施方案中，r2在式Ia的化合物中是 甲土或乙基，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化 合物的定義。 3，發明的另—個實施方案（B4)涉及式la的化合物，其中 R疋-NRW且R4#nR4a是氫；且所有其他的基團如發明 143396.doc •25· 201018685 内容中對式i的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（B5)涉及式la的化合物，其中 R3是-NR4R4a，且R4是氫，且是烷基；且所有其他的基 團如發明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（B6)中，式la的化合物是其中尺3是甲 基氨基、乙基氨基、正丙基氨基或異丙基氨基的化合物； 且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（B7)中，式la的化合物是其中r3是甲 基氨基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對 的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（B8)涉及式1&的化合物，其中 R3是-NR4R4a’且R4和R “是烷基；且所有其他的基團如發 明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（B9)中，式la的化合物是其中R3是二 甲基氨基、二乙基氨基、二正丙基氨基或二異丙基氨基的 化合物，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 的定義。 在另一個實施方案（B 10)中，式la的化合物是其中r3是二 甲基氨基的化合物；且所有其他的基團如發明内容十對式 I的化合物的定義。 在另一個實施方案（B11)中，本發明涉及式。的化合物， 其中R2是氫’且R3是-NR4R4a，其中R4和R4a是氫。 在另一個實施方案（B12)中，本發明涉及式1&的化合物， 其中R2是氫’且R3是-NR4R4a，其中R4和R4a是烧基。 143396.doc •26_ 201018685 在另~~個實施方案（B13)中， 其中R2是氫，且R3是_NR4R4a， 在另〜個實施方案（B14)中， 其中R是氫，且R3是_NR4R4a 基。 本發明涉及式la的化合物， 其中R4和R4a是甲基。 本發明涉及式la的化合物， ’其中R4是氫，且是烷 :另2〜個實施方案（B15)中，本發明涉及式u的化合物， 基。

式Ϊ的化合物依據 在本發明的另一個實施方案（C1)中 式lb

lb 其中R2和R3如發明内容中對式χ的化合物的定義。 2本,明的另-個實施方案(C2)涉及式lb的化合物，其中 Κ疋氫，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 的定義。 2本發明的另一個實施方案（C3)涉及式lb的化合物，其中 R疋烷基，且所有其他的基團如發明内容中對式ί的化合 物的疋義。在另—個實施方案中，r2在式lb的化合物中是 甲土或乙基，且所有其他的基團如發明内容中對式ϊ的化 合物的定義。 I43396.doc •27- 201018685 本發明的另一個實施方案（C4)涉及式lb的化合物，其中 R是·NR4R4a，且R4和R4a是氫；且所有其他的基團如發明 内容中對式I的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（C5)涉及式lb的化合物，其中 R疋-NR4R4a，且R4是氫，且是烷基；且所有其他的基 團如發明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（C6)中，式lb的化合物是其中R3是曱 基截1基、乙基氨基、正丙基氨基或異丙基氨基的化合物； 且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（C7)中，式lb的化合物是其中R3是曱 基氨基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對式工 的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（C8)涉及式化的化合物，其中 R3是-NR4R4a，且R4和是烷基；且所有其他的基團如發 明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（C9)中’式lb的化合物是其中R3是二 甲基氨基、二乙基氨基、二正丙基氨基或二異丙基氨基的 化合物；且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 的定義。 在另一個實施方案（C10)中，式lb的化合物是其中R3是 二曱基氨基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對 式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（C11)中，本發明涉及式比的化合物， 其中R2是氫，且R3是-NR4R4a，其中R4和是氫。 143396.doc •28· 201018685 在另一個實施方案（Cl2)中，本發明涉及式Ib的化合 物’其中R2是氫’且R3是-NR4R4a，其中R4和R4a是烷基。 在另一個實施方案（C13)中’本發明涉及式Ib的化合 物，其中R2是氫’且R3是-NR4R4a，其中R4和R“是甲基。 在另一個實施方案（C14)中，本發明涉及式Ib的化合 . 物’其中R2是氫，且R3是-NR4R4a，其中R4是氫，且R4a是 烷基。 ❷ 在另一個實施方案（C15)中，本發明涉及式ib的化合 物，其中R2是氫，且R3是_NR4R4a，其中R4是氫，且R4a是 甲基。 在本發明的另一個實施方案（D1)中，式j的化合物是其 中R是四氫吡喃_2基、四氫吡喃_3_基或四氫吡喃_4_基的 化σ物’且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 的定義。 在本發明的另一個實施方案（D2)中，式χ的化合物是其 • 中R疋四氫吡喃_3_基的化合物；且所有其他的基團如發明 内谷中對式I的化合物的定義。 . 在本發明的另一個實施方案（Ε1)中，式I的化合物依據式

143396.doc -29- 201018685 其中R和R3如發明内容中對式1的化合物的定義。 2本發明的另一個實施方案（E2)涉及式Ic的化合物，其中 R疋氫，且所有其他的基團如發明内容中對式〖的化合物 的定義。 2本發明的另一個實施方案（E3)涉及式Ic的化合物，其中 疋燒基，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合 物的定義。在另一個實施方案中，R2在式Ic的化合物中是 甲基或乙基，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化 合物的定義。 本發明的另一個實施方案（E4)涉及式Ic的化合物，其中 R疋-NR4R4a，且R4和R4a是氫；且所有其他的基團如發明 内容中對式I的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（E5)涉及式Ic的化合物，其中 R3是-NR4Rh，且R4是氫，且是烷基；且所有其他的基 團如發明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（E6)中，式Ic的化合物是其中尺3是甲 基氨基、乙基氨基、正丙基氨基或異丙基氨基的化合物； 且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（E7)中’式Ic的化合物是其中R3是曱 基氣基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對式工 的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（E8)涉及式Ic的化合物，其中 R3是-NR4R4a ’且R4和R4a是烷基；且所有其他的基團如發 明内容中對式ί的化合物的定義。’ 在另一個實施方案（Ε9)中，式Ic的化合物是其中R3是二 143396.doc -30- 201018685 甲基氨基、二乙基氨基、二正丙基氨基或二異丙基氨基的 化合物，且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 的定義^ 在另一個實施方案（E10)中，式1(；的化合物是其十r3是二 甲基氨基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對式 I的化合物的定義。

在另一個實施方案（E11)中 其中R2是氫，且R3是-NR4R4a 在另一個實施方案（E12)中 其中R2是氫，且R3是_NR4R4a 在另一個實施方案（El3)中 其中R2是氫，且R3是_NR4R4a 在另一個實施方案（E14)中 其中R2是氫’且R3是_NR4R; 基。 本發明涉及式Ic的化合物， 其中R4和R4a是氫。 本發明涉及式Ic的化合物， 其中R4和尺“是烷基。 本發明涉及式Ic的化合物， 其中R4和R4a是甲基。 本發明涉及式Ic的化合物， ’其中R4是氫，且R4a是烷

在另一個實施方案⑻5)中，本發明涉及式卜的化合物， 其中R是氫…3是视#，其中r4是氫，且R4a是甲 基 ，式I的化合物依據式 在本發明的另一個實施方案（F1)中 Id

143396.doc •31· 201018685 其中R2和R3如發明内容中對式I的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（F2)涉及式1(}的化合物，其中 R是氫；且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 的定義。 本發明的另一個實施方案（F3)涉及式1〇1的化合物，其中 R是烷基；且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合 物的定義《在另一個實施方案中，R2在式Id的化合物中是 甲基或乙基；且所有其他的基團如發明内容中對式I的化 合物的定義。 瘳 本發明的另一個實施方案（F4)涉及式Id的化合物，其中 R是-NR4R4a ’且R4和R4a是氫；且所有其他的基團如發明 内容中對式I的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（F5)涉及式Id的化合物，其中 R疋-NR R a ’且R4是氫，且R4a是烷基；且所有其他的基 團如發明内容中對式I的化合物的定義。 在另—個實施方案（F6)中，式Id的化合物是其是甲 基氨基、乙基氨基、正丙基氨基或異丙基氨基的化合物；〇 且所有其他的基團如發明内容中對式〗的化合物的定義。 在另—個實施方案（F7)十，式Id的化合物是其_R3是曱 基氨基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對式工 的化合物的定義。 ， ^發明的另一個實施方案（F8)涉及式Η的化合物其中 R疋-NR R，且R4和R4a是烧基；且所有其他的基團如發 明内容中對式1的化合物的定義。 在另-個實施方案㈣中，式Id的化合物是其_r3是二 143396.doc -32- 201018685 甲基氨基、二乙基氨基、二正丙基氨基或二異丙基氨基的 化合物；且所有其他的基團如發明内容中對式I的化合物 的定義。 在另一個實施方案（F10)令，式id的化合物是其中R3是二 甲基氨基的化合物；且所有其他的基團如發明内容中對式 I的化合物的定義。

本發明涉及式I d的化合物， 其中R4和R4a是氫。 本發明涉及式Id的化合物， 其中R4和尺“是烷基。 本發明涉及式Id的化合物， 其中R4和R4a是甲基。 本發明涉及式Id的化合物， ’其中R4是氫，且R4a是烷 在另一個實施方案（F11)中 其中R2是氫，且R3是-NR4R4a 在另一個實施方案（F12)中 其中R2是氫，且R3是-NR4R4a 在另一個實施方案（F13)中 其中R2是氫，且R3是-NR4R4a 在另一個實施方案（F14)中 其中R2是氫，且r3是_NR4r‘ 基。 在另一個實施方案（F15)中， 其中R2是氫，且R3是-NR4R4a 基。 本發明涉及式Id的化合物， ’其中R4是氫，且R4a是甲 在本發明的另一個實施方案（G1)中，式j的化合物依據 式Ie 143396.doc

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Ie -33- 201018685 其中R·2和R3如發明内容中對式I的化合物的定義。 在本發明的另一個實施方案（G2)中，式I的化合物依據 式le ’其中R2是氫；且所有其他的基團如發明内容中對式工 的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（G3)涉及依據式Ie的式〗的化合 物，其中R2是烷基；且所有其他的基團如發明内容中對 式I的化合物的定義。在另一個實施方案中，式。的化合物 疋其中R是甲基或乙基的化合物；且所有其他的基團如發 明内谷中對式I的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（G4)涉及依據式le的式丨的化合 物，其中R3是-NR4R4a ’且R4和R“是氫；且所有其他的基 團如發明内容中對式Ϊ的化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（G5)涉及依據式le的式I的化合 物，其中R3是_NR4R4a，且Μ是氫，且是烷基；且所有 其他的基團如發明内容中對式I的化合物的定義。 在另一個實施方案（G6)中，式I的化合物依據式le，其中 R疋甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基或異丙基氨基；且 所有其他的基團如發明内容中對式j的化合物的定義。 3在另—個實施方案（G7)中，式I的化合物依據式Ie，其中 疋甲基氨基’且所有其他的基團如發明内容中對式I的 化合物的定義。 本發明的另一個實施方案（G8)涉及依據式Ie的式I的化合 物，其中R3是_NR4R4a，且Μ和是烷基·，且所有其他的 基團如發明内容中對式I的化合物的定義。 143396.doc 201018685 在另一個實施方案（G9)中，式j的化合物依據式卜，其中 R3是二曱基氨基、二乙基氨基、二正丙基氨基或二異丙基 氨基；且所有其他的基團如發明内容中對的化合物的 定義。 在另一個實施方案（G10)中，式j的化合物依據式。，其 中R3是二甲基氨基；且所有其他的基團如發明内容中對式 I的化合物的定義。 在另一個實施方案（G11)中，本發明涉及依據式Ie的式工 的化合物，其中R2是氫，且R3是_NR4R4a，其中r4和^^是 氫。 在另一個實施方案（G12)中，本發明涉及依據式&的式工 的化合物，其中R2是氫，且R3是_NR4R4a，其中R4和是 烷基。 在另一個實施方案（G13)中，本發明涉及依據式&的式工 的化合物，其中R2是氫，且R3是_NR4R4a，其中R4和是 甲基。 ' 在另一個實施方案（G14)中，本發明涉及依據式k的式ι 的化合物，其中R2是氫，且R3是-NR4R4a，其中R4是氫， 且尺43是烷基。 、 在另一個實施方案（G15)中，本發明涉及依據式^的式工 的化合物，其中R2是氫，且R3是-NR4R4a，其中R4是氫， 且尺43是甲基。 ，本發明的另一個實施方案（κ)涉及包括式Σ的化合物和藥 學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物，所述 143396.doc -35· 201018685 化合物任選地為其單一立體異構物或立體異構物的混合 物，且額外任選地為其藥學上可接受的鹽。在另一個實施 方案中’式I的化合物依據以上實施方案中的任何一個。 以下實施方案中的任何—個可用以上實施方案中的任何 一個實踐。各實施方案的所有這種組合心本發明的範 圍。 本發明的另-個實施方案（H)是治療其中疾病與未受控' 制的、異常的和/或不期望的細胞活性相關的疾病、病症 或症候群的方法，所述細翁性由ρΐ3Κα和/或μ⑽直接❹ 或間接影響，所述方法包括向需要其的人施用治療有效量 的式I的化合物，所述化合物任選地為其單一立體異構物 或立體異構物的混合物，額外任選地為其藥學上可接受的 鹽或其藥物組合物。在另—個實施方案中，式⑼化合物 依據式ia。在另_個實施方案中，式W化合物依據式化。 在另一個實施方案中，式Ϊ的化合物依據α。在另一個實 施方案中，式I的化合物依據式1(1。在另一個實施方案中， 式I的化合物依據式Ie。在另一個實施方案中式工的化合粵 物選自表2。 ° 本發明的另—個實施方案⑺涉及治療疾病、病症或症候 群的方法’所述方法包括向患者施用治療有效量的式^ 化合物，該化合物任選為其單一立體異構物或立體異構物 的混s物，且額外地任選地為其藥學上可接受的鹽丨或包 3⑺療有效量的式j的化合物和藥學上可接受的載體、賦 形劑或稀釋劑的藥物組合物，所述式Z的化合物任選地為 143396.doc -36 - 201018685 ”單立體異構物或立體異構物的混合物，且額外地任選 地為其藥學上可接受的鹽。在實施方案（J)的另一個實施方 案（Ji)中，該疾病是癌症。在實施方案（J1)的另一個實施 方案（J2)中，該癌症是乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜 癌、胃癌、成膠質細胞瘤、肝細胞癌、小細胞肺癌、非小 細胞肺癌、黑素瘤、卵巢癌、子宮頸癌、胰腺癌、前列腺 癌、急性粒細胞性白血病（AML)、慢性粒細胞性白血病 (CML)、多發性骨髓瘤或甲狀腺癌。在實施方案（j2)的另 一個實施方案（j3)中，該癌症是卵巢癌 '子宮頸癌、子宮 内膜癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、前列腺 癌或成膠質細胞瘤。在實施方案（J)、（J1)、（J2)或（J3)的另 一個實施方案（J4)中’式I的化合物依據式1&。在實施方案 (J)、（Jl)、（J2)或（J3)的另一個實施方案（J5)中，式I的化合 物依據式lb。在實施方案（J)、（ji)、（J2).或（j3)的另一個實 施方案（J6)中’式I的化合物依據式Ic。在實施方案（j)、 (Π)、（J2)或（J3)的另一個實施方案（J7)中，式I的化合物依 據式Id。在實施方案（J)、（Ji)、（j2)或（J3)的另一個實施方 案（J8)中’式I的化合物依據式le。在實施方案⑺、（η)、 (J2)或（J3)的另一個實施方案（J9)中，式I的化合物選自表 2 ° 表1中的化合物根據由國際理論和應用化學聯合會 (IUPAC)、國際生物化學與分子生物學聯盟（IUBMB)和化 學文摘社（CAS)商定的命名規則的系統應用命名。使用 ACD/Labs命名軟體8·00發佈（產品8.08版）產生命名。 143396.doc •37- 201018685 表1

143396.doc 38- 201018685

表1 編號 結構 命名 6 h2n n n o ά 2-氨基-6-[6-(二曱基氨基)吼啶-3-基]-4-甲 基-8 _(四鼠-2//·11比喃-3 -基户比π定並[2，3 喷 啶-7(8/^)-酮 7 H2N人N N人。 ά 2-氨基-6-[6-(二曱基氨基)吡啶-3-基]-4-曱 基-8·[(35)-四風-基]〇比咬_亚[2,3-4喊咬-7(8//)-洞 8 h2n n NO 6〇 2-氨基-6-(6-甲氧σ比咬-3-基)-4-曱基·8-(四 風-2·//-11比痛-3 -基)σ比並[2,3 嘴 7(叫酮 表2 表2:..本f 卜明的化合物 1 ΡΙ3Κ- α，β (ηΜ) mTOR (ηΜ) pS6 (S240/S244) PC-3細胞系 (ηΜ) MCF-7 的2-天 增殖 (ηΜ) PC-3 的 2- 天增殖 (ηΜ) 小鼠肝微 粒«氧化 (%) 化合物1 iVx0^ η2ν^ν^ν^ο 0 5.5, 52.1 2.6 15.8 97.8 150.4 15.2 143396.doc 39- 201018685 表2:本苦 卜明的化合物 1 ΡΙ3Κ-α，p (ηΜ) mTOR (ηΜ) pS6 (S240/S244) PC-3細胞系 (ηΜ) MCF-7 的2-天 增殖 (ηΜ) PC-3 的 2- 天增殖 (ηΜ) 小鼠肝微 粒《氧化 (%) 化合物2 H2N N N O 0〇 7.3， 60.8 3 25.6 150.8 297.2 6.6 化合物3 h2n n n o ό 9, 19.8 3.2 25 152.1 279.5 -7.8 化合物4 η2ν ν ν ο ό 15.5, 16.7 5.5 36.6 376.7 400.8 1.7 化合物5 ι^ΛΝΗ2 η2ν ν n o 6 <9.1, 34 2.5 18.5 217.3 497.2 -8.2 礬 143396.doc 40- 201018685

表3 表3:對 tb化合物 ΡΙ3Κ-α,β (ηΜ) mTOR (ηΜ) pS6 (S240/S244) PC-3細胞 系(ηΜ) MCF-7 的2-天增 3&(ηΜ) PC-3 的 2-天增殖 (ηΜ) 小鼠肝 微粒艘 氧化 (%) 化合物6 Η2Ν人/ Ν人0 0〇 13.5, 204.9 6.1 96.2 151.1 740.9 31.2 化合物7 H2N人N〆N人。 ά 9.2,470.9 5.8 71.7 247 1330 41.3 化合物8 W。、 h2n>vn^n^o 6 28, 6.8 6.8 40.8 217.9 468.6 45.6 在生物化學測定（參見生物學實施例1和2)中，在其中活 化PI3K信號傳導的基於細胞的測定（參見生物學實施例3) 中，和在細胞增殖測定（參見生物學實施例4)中，表2和3中 的化合物是PI3K和mTOR兩者的十分強效的抑制劑。除了 十分強效之外，當在小鼠微粒體氧化測定（參見生物學實 施例5)中測試時，相對於表3中的化合物，表2中的化合物 表現出意外的結果。這一測定中的活性是代謝不穩定性的 指標，且該測定作為確定化合物的成藥性（druggability)的 143396.doc -41 - 201018685 工具使用。該測定中代謝比例越高，由肝微粒體分解的化 合物越乡m亥化合物當施用於動物3戈人時可能被大量 代謝的風險越大。當與表3中的化合物對比時，表2中描述 的本發明的化合物顯示出在小鼠肝微粒體中無代謝傾向， 或明顯較低。 一般施用 ^在-個方面’本發明提供了包含根據本發明的化合物和 藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。在 某些其他具體的實施方案中’施用是通過口服途徑。以純 形式或合適的藥物組合物的纟發明的化合&或它們藥學上 可接受的鹽的施用可經由公認的施用形式或用於相似應用 的劑t的任何-種來執行。因此’例如，施用可以固體、 半固體、來乾粉末或液體劑型（諸如例如片劑、检劑、丸 劑、彈性軟膠囊和明膠硬膠囊、粉末、溶液、懸浮液或氣 溶膠或類似劑型）的形式，特別以適合於簡單施用精確劑 量的單位劑型，口服、鼻、腸胃外(靜脈内、肌内或皮 下）、局冑、經皮、陰道内、膀胱内、腦池内或直腸内施 用0 該組合物將包括常規的藥物載體或賦形劑和作為活性劑 的本發明的化合物，並且此外可包括載體和佐劑等等。 佐劑包括防腐劑、潤濕劑、懸浮劑、甜味劑、調味劑、 增香劑、乳化劑和分散劑。可通過各種抗菌劑和抗真菌劑 (*例如對經基苯甲酸g旨類、氣丁醇、苯紛、山梨酸以及類 樂劑）確保防止微生物的作用。還可期望包括等滲劑，例 143396.doc -42· 201018685 如糖、氣化鈉以及類似的藥劑。可經由使用延遲吸收劑 (例如單硬脂酸鋁和明膠）引起可注射藥物形式的吸收的延 長。 必要時，本發明的藥物組合物還可含有少量的辅助物 質，諸如潤濕劑或乳化劑，pH緩衝劑、抗氧化劑以及類似 的辅助物質，諸如例如檸檬酸、失水山梨醇單月桂酸酯、 油酸二乙醇胺、叔丁基經基甲苯等等。

製劑的選擇依賴於各種因素’諸如藥物施用形式（例如 對於口服施用，為片劑、丸劑或膠囊形式的製劑）和藥物 物質的生物利用度。最近’根據生物利用度可經由增加表 面積（即降低粒度）來增加的原理，已經開發了特別針對表 現出差生物利用度的藥物的藥物製劑。例如，纟國專利第 4，1〇7,288號描述了具有範圍從贿⑽⑽的顆粒大小的 藥物製劑’其中活性材料被支援在高分子的交聯基質上。 美國專利第5，145,684號描述了 -種藥物製劑的生產，其中 藥物物質在表面改性劑存在下被分散成奈米顆粒(平：粒 度_㈣，然後分散到液體基質以獲得表現出非常高的 生物利用度的藥物製劑。 適合於腸胃外注射的組合物可包括生理學可接受的無崖 水或非水溶液、分散體、懸浮液或乳劑，和用於重新構讀 成無菌注射溶液或分散體的無菌粉末。合適 體、稀釋劑、溶劑或媒介物的實例包括水、乙醇、多元摩 (丙二醇、聚乙二醇、甘油以及類似的醇）、其合適 物、植物油(諸如撖欖油)和可注射有機醋，諸如油酸2 143396.doc -43- 201018685 酯。例如，可經由使用諸如印磷月旨的琪衣，在分散體的實 例中經由維持所需的粒度，並使用表面活性劑維持合適的 流動。 一個具體的施用途徑是口服，其使用可根據所治療的疾 病狀態的嚴重程度調整的方便的日常劑量方案。 用於口服施用的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉末 和粒劑。在所述固體劑型中，活性化合物與以下混合：至 少一種惰性常規賦形劑（或載體），諸如檸檬酸鈉或磷酸二 轉，或（a)填充劑或增充劑，如例如，殿粉、乳糖、蔗糖、 葡萄糖、甘露醇和矽酸，（b)粘合劑，如例如，纖維素衍生 物、澱粉、藻酸酯（alignates)、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、 蔗糖和阿拉伯樹膠，（c)濕潤劑，如例如，甘油，（d)崩解 劑，如例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯澱粉或木薯澱粉、褐 藻酸、交聯羧甲纖維素鈉、複合矽酸酯和碳酸鈉，（幻溶液 阻滞劑，如例如石蟻，（f)吸收加速劑，如例如，季錢化合 物（g)潤濕劑，如例如，錄躐醇和單硬脂酸甘油酯、硬脂 酸鎂以及類似潤濕劑，（h)吸附劑，如例如，高嶺土和膨潤 土，以及（1)潤滑劑，如例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸 鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉或其混合物。在膠 囊、片劑和丸劑的情況下，劑型還可包含緩衝劑。 如上所述的固體劑型可用膜衣和包殼製備，所述膜衣和 包殼諸如腸溶衣和本領域公知的其他膜衣和包殼。它們可 含有不透明劑（pacifying agents)，且還可以是這種組合 物’該組合物以延遲的方式在腸道的某一部分釋放活性化 143396.doc -44 - 201018685 。物。可使用的包埋的組合物的實例是聚合物和蟻。活性 還可以是微膠囊形式，必要時，具有以上提到的 形劑中的一種或多種。 用於口服施用的液體劑型包括藥學上可接受的乳劑、溶 液、懸浮液、糖漿和醜劑。此類劑型例如通過將本發明的 .&合物或其藥學上可接受的鹽和任選的藥物佐劑溶解'分 散（等等）到載體以從而形成溶液或懸浮液來製備，: • ?諸如例如水、鹽水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇以及類 讀，增溶劑和乳化劑，如例如，乙醇、異丙醇、碳酸乙 酯、乙酸乙酯、节醇、苯甲酸节酯、丙二醇、丁二 【:二甲基甲酿胺；油’特別是棉子油、花生油、玉米： 油、撖欖油、蓖麻油和麻油、甘油、四氫糠醇、聚乙二 2和山梨聚糖的脂肪酸醋；或這些物質的混合物以及類似 物質。 除了活性化合物之外，懸浮液還可包含懸浮劑，如例 .如’乙氧基異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨聚糖醋、微 晶纖維素、偏氫氧化銘、膨濁土、環脂和黃民膠，或這些 物質的混合物，以及類似物質。 用於直腸施用的組合物是，例如栓劑，其可經由將本發 日二的化合物與例如合適的無刺激性的賦形劑或載體混合物 備’所述賦形劑或載體諸如可哥油、聚乙二醇或栓劑 壞’其在常溫下是固體’但在體溫下是液體，並因而當在 合適的體腔巾時融化，並在其中釋放活性成分。 用於本發明的化合物的局部施用的劑型包括軟膏、粉 I43396.doc -45- 201018685 末、喷霧劑和吸入劑。如可能需要的，活性成分在無菌條 件下與生理學上可接受的載體和任何防腐劑、緩衝劑或推 進劑混合。眼部製劑、眼膏、粉末和溶液也涵蓋在本發明 的範圍内。 壓縮氣體可用於分散氣溶膠形式的本發明的化合物。適 合於這一目的的惰性氣體是氮氣、二氧化碳等等。 一般來說，根據預期施用形式，藥學上可接受的組合物 將含有按重量計約1 °/。至約9 9 %的本發明的化合物或其藥學 上可接受的鹽’和按重量計99%至1%的合適的藥物賦形 劑。在一個實例中，該組合物將含有按重量計在約5%和 約75%之間的本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽且 剩餘部分是合適的藥物賦形劑。 對本領域中具有通常知識者而言，製備這種劑型的實際 方法是已知的，或將是明顯的；例如，參見Remingt〇n,s Pharmaceutical Sciences(雷明頓藥學），第 18 版，（Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990)。在任何情況下， 施用的組合物將含有治療有效量的本發明的化合物或其藥 學上可接受的鹽’以治療根據本發明的教導的疾病狀態。 本發明的化合物或它們的藥學上可接受的鹽或溶劑化物 以治療有效量施用’所述治療有效量將根據多種因素變 化’包括具體使用的化合物的活性、化合物的代謝穩定性 和作用時長（length of action)、年齡、體重、一般健康、 性別、飲食、施用的形式和時間、排泄速率、藥物組合、 具體疾病狀態的嚴重性和經受治療的宿主。本發明的化合 143396.doc -46- 201018685 物可以每天約(^至約U00叫的範圍的劑量水準施用於患 者。對於具有約70公斤的體重的正常成年人而言在一個 實例中，劑量範圍是每天每公斤體重約〇〇1至約1〇〇 mg。 然而，使用的具體劑量可變。例如，劑量可依賴於許多因 素，包括患者的需要、治療的疾患的嚴重性和使用的化合 物的藥理學活性》對於具體患者，最佳劑量的確定為本領 域中具有通常知識者所公知。 如果配製成固定劑量，這種組合產物使用在以上描述的 劑量範圍内的本發明的化合物和在其批准的劑量範圍内的 其他藥學活性劑。當組合製劑不合適時，可任選地按順序 使用本發明的化合物和已知的藥學上可接受的劑。 含有式I的化合物的代表性藥物製劑在以下藥物組合物 的實施例中描述。 一般合成 本發明的化合物可通過以下描述的合成方案來製備。在 φ 製備這些化合物中使用的起始材料和試劑可從商業供應 商’諸如 Aldrich Chemical Co.(Milwaukee，Wis.)或 BaChem(T〇rranCe，Calif.)處獲得，或通過本領域中具有通 常知識者已知的方法按照參考文獻中列出的方案來製備， ，所述參考文獻諸如 Fieser 和 Fieser 的 Reagents 〇rganic Synthesis有機合成試劑），第 1-17卷（j〇hn wiley and Sons， 1991) ’ Rodd的 Chemistry of Carbon Compounds(碳化合物 化學）’第 1-5 卷和增刊（Elsevier Science Publishers， 1989) ; Organic Reactions(有機反應）。第 1-40 卷（John •47· 143396.doc 201018685

Wiley和 Sons，1991)，March的 Advanced Organic Chemistry (高等有機化學），（John Wiley和Sons，第四版）和Larock的 Comprehensive Organic Trans formations (系統有機轉 化）(VCH Publishers Inc.，1989)。這些方案僅示例可合成本 發明的化合物的一些方法，且本領域中具有通常知識者參 考本公開可進行並將提出對這些方案的各種改良。必要 時，可使用常規技術分離並純化反應的起始材料和中間 體，所述技術包括但不限於過濾、蒸餾、結晶、層析以及 類似技術。可使用常規方法表徵這些材料，包括物理常數 和層析資料。 除非指出相反，否則本文描述的反應發生在大氣壓和從 約-78°C到約150°C的溫度範圍内，更加具體地從約0°C至 約125°C，且更加具體地在約室溫（或環境溫度），例如約 20°C下。除非另外陳述（如在氫化的情況下），所有的反應 在氮氣氛下進行。 可通過本領域中具有通常知識者所知的技術製備前驅 藥。這些技術一般修飾給定化合物中的合適的官能團。這 些被修飾的官能團通過常規操作或在體内重新產生起始的 官能團。可根據常規方法，製備本發明的化合物的醯胺和 醋。前驅藥的詳盡討論在T. Higuchi和V. Stella, 「Prodrugs as Novel Delivery Systems(作為 新型給 藥系統 的前驅 藥）」美國化學會出版會議系列叢書的第14卷，和 Bioreversible Carriers in Drug Design(藥物設計中的生物 可逆載體），Edward B. Roche編輯，American Pharmaceutical 143396.doc -48- 201018685 ASS〇ClatlonandPergam〇nPress，1987_提供這兩者為所 有目的通過引用併入本文。 本發明的化合物或它們的藥學上可接受的鹽在它們的結 構中可具有不對稱碳肩子或季錢化氮原子。可通過本文描 . 述的合成製備的式1的化合物可作為單一立體異構物、.外 . 消旋體、對映體的混合物以及非對映體的混合物存在。所 有這些單一立體異構物和混合物預期屬於本發明的範圍。 φ 本發明的化合物中的一些可作為互變異構物存在。例 如，如果出現酮或醛，分子可以烯醇形式存在；如果出現 醯胺，分子可作為亞胺酸存在；且如果出現烯胺，分子可 作為亞胺存在。所有這些互變異構物屬於本發明的範圍。 特別的，咪唑-5-基和吡唑_5_基每個還可以它們各自的互 變異構物形式蛛。坐·4_基和吼峻_3_基存在。不論使用的結 構或術語為何，每個互變異構物包含在本發明的範圍中。 本發明還包括式I的化合物的Ν_氧化物衍生物和被保護 ❿ 的衍生物。例如，當式1的化合物含有可氧化的氮原子 時，該氮原子可通過本領域公知的方法轉化為Ν_氧化物。 當式I的化合物含有諸如羥基、羧基、硫醇或含有氮原子 的任何基團的基團時，這些基團可用合適的「保護基 • (pr〇tecting grouP)」或「保護基（protective group)」保護。 合適的保護基的系統列表可參見T w Greene，g 〇⑽ρ 办价；有機合成中的保護基），了❶^

Wiley & Sons，Inc· 1991，其公開内容通過引用其整體在此 併入。式I的化合物的被保護的衍生物可通過本領域公知 143396.doc -49- 201018685 的方法製備β 用於從外消旋混合物或立體異構物的非外消旋混合物製 2和/或分開和分離單一立體異構物的方法在本領域中是 、例如，％光的（R)_和（s)_異構物可使用手性合成 組凡或手性試劑製備’或使用常規技術拆分。對映體（R_ 參 和^異構物）可經由本領域中具有通常知識者所知的方法 2刀，例如經由：可例如通過結晶分離的非對映體鹽或複 ,、v成，經可例如經由結晶分離的非對映體衍生物的 —成個對映體與對映體特異性試劑選擇性反應(例如 辦促氧化或還原）’隨後分離㈣的和未修㈣對映體； 或在手性環境中，例如在手性支援體（諸如具有束缚的手 ❹ 上或存在手性溶劑時的氣-液或液相層析。 應理解’如果所需的對映體經由以上描述的分離方案之一 轉化為另-個化學實趙’則可能需要進一步的步驟以釋放 映體形式。可選地，可經由不對稱合成使用旋光 ::劑、物質、催化劑或溶劑，或經由不對稱轉化將對映 轉化為其他物質，來合成具體的對映體。對於富含一種 特定對映體的對映體的混合物，可經由重結晶進―步 (且伴隨著產率的損失）主要成分的對映體。 〃 此外，本發明的化合物可以未溶劑化形式存在以及用藥 接受的溶劑（諸如水、乙醇以及類似溶劑）溶劑化的 二=。一般來說，就本發明的目的而言，溶劑化形式 被 < 為等同於未溶劑化的形式。 製備本發明的化合物的化學為本領域中具有通常知識者 143396.doc -50- 201018685 所知。事實上，可能有多於一種方法製備本發明的化合 物。以下的實施例闡釋但不限制本發明❶使用本文描述的 方案，以及本領域中具有通常知識者所知的方案，包括描 述於WO 2007/044813和WO 2008/127712(這兩者通過引用 在此併入）的方案，可製備在下文中沒有特別描述的本發 明的化合物。本文引用的所有參考文獻通過引用整體併 可如方案1中所描述，製備式1的化合物，其中R2是氫， 且R1和R3如發明内容中對式〗的化合物的定義。 方案1

步驟A .商業上可獲得的中間體1，在諸如甲醇的溶劑 中，在約0°C下用碘化劑，諸如一氯化碘或一溴化碘處 理，並使得其根據反應完成以生成2的需要而在室溫下反 應大約過仪或更短時間。完成後，殘留物可用丙酮研磨。 可選地’完成後’反應混合物可傾入〇.2 N硫代硫酸鈉中 143396.doc •51- 201018685 以驟冷額外的碘。可選地，可通過在諸如乙腈和/或甲醇 的溶劑中，用碘代琥珀醯亞胺加熱處理來製備中間體 2 ° 步驟B :通過在諸如水和諸如水/乙醇混合物的溶劑中， 在諸如TEA的驗存在下，並通過加熱反應，使式2的中間 體與商業上可獲得的伯胺RiNH2(為游離胺或其鹽，諸如鹽 酸鹽）反應，製備式4的中間體。 可選地’可逆序進行步驟A和B以產生式4的中間體。 步驟C :然後’在諸如DMA或DMF的溶劑中，在諸如三 乙胺的驗存在下’並存在催化劑（諸如存在（+)binap的 Pd(OAc)2或諸如（Pd(PPh3)4的催化劑）時，中間體4與丙烯 酸乙酯反應。將反應加熱至約95-100。(：，並使得其根據反 應元成以生成5的需要而反應大約過夜或更短時間。然後 經由管柱層析任選地純化5。 通過任選地在諸如DIEA的驗存在下，在約室溫下，用 DBU處理5，製備6。然後將反應混合物加熱至回流或約 17 0 C ’並使之進行直到完成，約5 -1 5 h。蒸發溶劑後，殘 留物用丙酮研磨，並經由過濾收集以產生6。可選地，使 反應冷卻至室溫，然後經由管柱層析直接純化。 在諸如DCM的溶劑中，在約室溫下，使6與溴化劑（諸如 Βι*2)反應，製備中間體7 ^然後，將反應混合物攪拌約三小 時至過夜。過濾產生的產物，然後將其懸浮於諸如DcM的 溶劑中，並用諸如三乙胺的鹼處理。有機層用水洗滌，並 用諸如NazSCU的乾燥劑乾燥以產生7。可選地，完成後， 143396.doc •52· 201018685 將反應混合物部分地濃縮，並加入丙酮，隨後濃縮，並在 諸如乙酸乙酯的溶劑中沉澱，然後沉澱可經由過濾收集以 產生7。 在/谷劑（諸如DME-H2〇混合物或諸如二氧六環_jj2〇混合 物）十’在催化劑（諸如Pd(dpppf)2或Pd(pph3)4)存在下，且 在鹼（諸如三乙胺或κπ〇3)存在下，可使用式8的硼酸（或 酯）對7進行Suzuki複合，所述式8的硼酸（或酯）是商業上可 獲得的，或可使用本領域中具有通常知識者所知的技術製 備。將反應混合物加熱至回流或約95_丨〇〇〇c，持續約3 h。 冷卻至至溫後’反應混合物用水和乙酸乙酯分配。分離 後’有機層用諸如NasSO4的乾燥劑乾燥以產生式Rf)的化 合物。 可選地，在溶劑（諸如曱苯）中，在催化劑（例如 Pd(PPh3)4)存在下，且任選地在鹼（諸如乙基二異丙基胺 . Vi (Hunig驗）的二乙胺）存在下，可使用式 Sn(n-Bu)3的錫 δ式劑對7(為游離鹼或為鹽，諸如鹽）進行Stille偶聯。將 反應在約80-11 〇。〇下加熱約4小時。冷卻至室溫後，反應 混合物可通過管柱層析純化以產生式I(f)的化合物。可選 地’冷卻至室溫後’加入在氧化鋁上的4〇% KF。然後， 將混合物通過矽藻土過濾以除去氧化鋁，然後用溶劑（諸 如乙酸乙酯）洗滌矽藻土。然後，產生的濾液可用丨M KF 水溶液和鹽水洗滌。有機層用諸如MgS04的乾燥劑乾燥， 過遽’並真空濃縮。然後，可用二氯甲烷和己烷研磨殘留 143396.doc •53- 201018685 物以產生式1(f)的化合物。 可選地’可如方案2所描述，製備式I的化合物，其中 R1、R2和R3如發明内容中對式〗的化合物的定義。 方案2

在諸如二氧六環的溶劑中，用商業上可獲得的式r2nh2 的中間體處理中間體9(其可使用WO 2007/044813中描述的 方案製備），並在室溫下攪拌大約過夜以產生式I的化合 物。 合成實施例 實施例1(化合物3) 2_氨基-6-(6-氨基吡啶-3-基）-4-甲基-M四氩 基）吡啶並[2,3-rf]嘧啶-7(8K)-酮

方案A

143396.doc -54- 201018685 室温下，將蛾代琥珀醯亞胺（24.0g, 105.0 mmol)加入 到2-氨基-4-氯-6-甲基嘧啶（10.0 g，70.0 mmol)的乙腈（1〇〇 mL)和MeOH (140 mL)的懸浮液中。在氮氣下，將反應加 熱至60°C，並攪拌5 h，然後冷卻至室溫《減壓蒸發約80% 的溶劑，然後用乙醚（200 mL)稀釋混合物以獲得精細晶體 4-氣-5-碘-6-曱基嘧啶-2-胺（產率：15.70g，83.2%)。 LC/MS : C5H5C1IN3 的計算值（270.47);實測值：272.65 (M+2)。HPLC分析純度：97.3%

方案B

1 H2N N

CH3 α

NHoHCI H2〇/EtOH/TEA 卣流，72 hr

將三乙胺（30.0 mL，207.5 mmol)和4-氨基四氫吡喃鹽酸 鹽（9.75g，71.2 mmol)順序地加入到4-氣-5-峨-6-甲基嘴咬-2-胺（16.0 g，59.3 mmol)的 EtOH (200 mL)和 H2O(250 mL)的 懸浮液中。將反應加熱至回流，攪拌72 h，然後冷卻至室 溫。減壓蒸發約80%的溶劑。混合物在乙酸乙酯和h20之 間分配。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並真空濃縮以獲得粗 產物。該產物經由快速層析（50%乙酸乙酯/己烷至1 〇〇%乙 酸乙酯）純化以獲得淡黃色晶體5-碘-6·曱基(四氫-2if-吡喃-4-基）嘧啶-2,4-二胺（產率：l〇.23g，51.7%)。LC/MS : Ci0Hi5IN4O的計算值（334.03);實測值：335.08 (MH+)。 HPLC分析純度：>99.0% 143396.doc -55- 201018685 方案c

Pd(PPh3)4，TEA

DMF, 95 °C 過夜 室溫下，將三乙胺（12.50 mL, 90.0 mmol)和丙浠酸乙S旨 (9.80 mL, 90.0 mmol)順序地加入到5-峨-6-曱基-TV4-(四氫-27/-吡喃-4-基）嘧啶-2,4-二胺（10.0 g，30.0 mmol)的 DMF (200 mL)溶液中。反應用氮氣吹洗5分鐘，並加入 Pd(PPh3)4 (10 mol%，3.50g)。將反應加熱至95°C，在氮氣 下攪拌過夜，然後冷卻至室溫。減壓蒸發幾乎所有的 DMF。將反應傾入乙酸乙酯（500 mL)和H20 (300 mL)。收 集有機層，並用無水硫酸鈉乾燥，並真空濃縮以獲得粗產 物。該產物經由快速層析（70°/。乙酸乙酯/己烷至10% EtOH/ 乙酸乙酯）純化以獲得淡黃色半結晶（五)-3-(2-氨基-4-甲基-6-(四鼠-2n比喃-4-基氣基）嘴咬-5 -基）丙稀酸乙S旨（產率· 6.85g，75.0°/〇)°LC/MS: C15H22N403 的計算值（306_17);實 測值：307_2 (MH+)。HPLC分析純度：>97.0%。

143396.doc -56- 201018685 將 DBU (40 mL，267.0 mmol )加入到（五)_3-(2-氨基-4_ 甲 基-6-(四氫-2i/-吡喃-4-基氨基）嘧啶-5·基）丙烯酸乙酯（6.85 g，22.4 mmol)。將反應加熱至170°C，並授拌24hr。將其冷 卻至70°C ’並且隨後加入H2O(100 mL)以沉澱出晶體。將 混合物在3 h内緩慢冷卻至室溫。收集棕色晶體，並用h20 洗滌，產生所需產物2-氨基-4-甲基-8-(四氫-2i/-吡喃-4-基） 0比啶並[2,3-ί/]嘧啶-7(8//)-酮（產率：3.0 g，51.5%)。LC/ MS: C13H16N402 的計算值（260.13);實測值：261.2 (MH+)。HPLC分析純度：>95%。

方案E

將溴（0.71 mL，13.9 mmol)滴加於2-氨基-4-曱基·8-(四氫-φ 吡喃 _3_ 基）吡啶並[2,3-闳嘧啶-7(8//)-酮（3.0 g, 11.5 mmol)的二氯甲烧（1〇〇 mL)懸浮液。將這一反應在室溫下 攪拌3 h。減壓蒸發溶劑，直到已經除去約go%的溶劑。然 後加入乙酸乙酯（100 mL)以獲得產物，淡黃色晶體的2_氨 •基-6-溴-4-曱基-8-(四氫-2F_吡喃-4-基）。比啶並[2,3·ί/]嘧咬- 7(8丑)-酮 HBr 鹽（產率：4.50 g，92.7%)。LC/MS : C13H15BrN402的計算值（339.04)。實測值：341.1 (M+2)。 HPLC分析純度：>97%。 143396.doc -57- 201018685

方案F

將2-氨基吡啶_5·硼酸頻哪醇酯（3 55 g, 16〇6 mm〇i^〇 K2CO3(4.50 g，32.1 mm〇l)加入到 2_ 氨基 _6_ 溴 _4_ 曱基 _8_(四 氫-2丑比味-4-基）吼咬並[2,3-d]嘧咬_7(8/f)_酮HBr鹽（4.50 g，10.7 mmol)的二氧六環（100 mLe〇H2〇(35 mL)的懸浮液 中。反應用氮氣吹洗5分鐘，並加入pd(PPh3h(1 24 g，1() mol%)。在氮氣下，將其加熱至95^，並授拌3 h。3 h 後’ HPLC分析顯示沒有殘留起始材料。停止授拌，並將 這一反應混合物傾入乙酸乙酯（200 H2〇(1〇〇 mL) 中。有機層被蒸發大約至其體積的50%，並在約3 h内緩慢 冷卻至室溫以沉澱粗產物。經由過濾收集固體，並用水 (50 mL)和乙酸乙酯（50 mL)洗滌以產生2.5 g的黃色固體粗 產品。 將1，4-二氧六環（380 mL)和去離子水（91 mL)加入到固體 粗產品（3.0 g)中’並加熱到70°C以上以溶解該游離鹼。將 146 mg的 Si-SPM3清除樹脂（按重量計 8%，PhosphonicS Ltd， Oxford，UK)加入到該熱溶液中，並加熱至85-9(TC，持續1 h。趁熱過濾反應混合物，並用1，4-二氧六環（20 mL)洗滌 燒瓶和濾器。減壓濃縮濾液，直到已經除去約70%的溶 143396.doc -58- 201018685 劑。在約4 h内，將懸浮液冷卻至室溫，並經由真空過濾 收集沉澱的固體，用乙酸乙酯（30 mL)洗滌，並在高真空 中乾燥過夜以獲得產物淡黃色晶體2-氨基-6-(6-氨基吡咬_ 基）-4-曱基-8-(四氫-2//·0比喊-4-基）n比咬.並[2,3-<af]喷〇定_ 7(8/〇-酮（產率：1.50 g，39.8%)°LC/MS: C 丨 8H2〇N602 的計 算值（352.4);實測值：353.04 (MH+)。HPLC分析純度： >99%。NMR (DMSO-A，400 ΜΗζ) ; δ 8.21 (s，1H)， 7.83 (s, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.10 (s, 2H), 6.41 (d, 1H), 6.02 (s, 2H), 5.70 (m, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.40 (m, 3H), 2.95 (m, 2H)，2.57 (s，3H)，1.50 (m，2H)。 實施例2 (化合物5) 氣基-6-(6-氣基《Λ唆-3-基）-4-甲基_8-[(3及)四氩决味_ 3-基]吡啶並[2,3-ί/]嘧啶-7(8丑)-酮

方案G

室溫下’將W碘代琥珀醯亞胺（Aldrich, 24 g，105 mmol) 加入到2-氨基-4-氣-6-曱基嘴咬（Aldrich, 10 g，70mmol)的 乙腈（100 mL)和MeOH (140 mL)溶液中。氮氣氣氛下，將 反應混合物加熱至60°C，持續5 h。通過監測lc/MS，反應 143396.doc -59· 201018685 完成後，使其冷卻至室溫。將反應混合物放置於旋轉蒸發 器，並將溶液蒸發至其初始體積的一半。加入乙醚（200 mL)，形成沉澱。真空過濾收集沉澱以獲得4-氯-5-碘-6-曱 基嘧啶-2-胺（15.7 g，83% 產率）；C5H5C1IN3 的 MS (ΕΙ)(272·65, M+2):分析 HPLC 純度 >97%。 方案Η

將 4-氣-5-碘-6-曱基嘧啶-2-胺（7.03 g，26.08 mmol)、鹽 酸（i?)-四氫0夫 0南-3-胺（Milestone PharmTech, 3.90 g, 31.3 mmol)和三乙胺（9.236 g，91.3 mmol)在 EtOH(150mL)和水 (50mL)中的混合物回流2-3天。以LC/MS監測反應。完成 後，將反應混合物冷卻至環境溫度，並在150 mL乙酸乙酯 和200 mL水之間分配。水層用乙酸乙S旨萃取3次。乾燥 (MgS04)合併的有機層並減壓濃縮。將殘留物在乙酸乙酯 中重新結晶獲得（及)-5-碘-6-甲基(四氫呋喃-3-基）嘧啶-2,4-二胺（4.53 g，54%產率）°C9H13IN40 的MS (ΕΙ):321·0 (ΜΗ+)。

方案J

143396.doc -60- 201018685 在氮氣和室溫下，將Pd(PPh3)4 (1.635 g，l〇 mo丨加入 到（及）-5-換-6-曱基-#-(四氫0夫喃-3-基）嘴π定_2,4-二月安（4 53 g, 14.2 mmol)、丙稀酸乙醋（4.25 g，42.5 mmol)和三乙胺 (4.30 g，42.5 mmol)的DMF(150 mL)溶液中。在氮氣氣氛 下，將產生的混合物加熱至95°C，持續18 h。根據LC/ S， 反應完成後’將產生的混合物減壓濃縮，並直接進行管柱 層析純化以獲得（/?,五)-3-(2-氨基-4-曱基-6-(四氫吱喃某 氨基）嘧啶-5-基）丙烯酸乙酯（產率3.90g，94%)。（：14ϋ2()Μ40 的 MS (El) : 293.2 (ΜΗ+)。

方案K

將 DBU(20 mL)和（i?,£)-3-(2-氨基-4-甲基- 6-(四氮 η夫喃 _3· 基氣基）鳴°定-5-基）丙稀酸乙g旨（3.9 g, 13.4 mmol)加入到燒 瓶中。氮氣下’將反應混合物在1 70°C下授拌24 h。使混 合物冷卻至室溫’並用水稀釋。水層用乙酸乙酯（1 〇〇 mLX 3)萃取。合併的有機層用鹽水洗滌，分離並用MgS04乾 燥。混合物通過層析純化以獲得氨基-4-甲基-8-(四 氫呋喃-3-基）吡啶並[2,3-ί/]嘧啶-7(8//)-酮（1.59 g, 48%產 率）；C12H14N4〇2的 MS (El) : 247.1 (MH+)。 143396.doc -61 - 201018685

方案L

室溫下，將溴（0.4 mL，7.74 mmol)加入到（及）-2-氨基-4-甲基-8-(四氫呋喃-3-基）吡啶並[2,3-c/]嘧啶-7(8丑)-酮（1.59 g，6.45 mmol)的二氣甲烷（50 mL)溶液。將這一反應在室溫 下攪拌2 h ’並以LC/MS監測。真空除去溶劑，然後將乙酸 乙酯加入到產生的粗材料以沉澱出黃色沉澱氫溴酸0)_2_ 氨基-6-溴-4-曱基-8-(四氫吱喃-3-基）。比咬並[2,3-d]鳴咬-7(8//)-酮（2.60 g定量）。這一溴化氫鹽用於下一反應，且不 用進一步純化；C12H13BrN402 的 MS (EI) : 325.0 (M+)， 327·0 (M+2) ° 方案Μ

在氮氣氣氛下，將2-氨基》比咬-5-硼酸頻哪醇酯（2.43 g， 11.0 mmol)、K2C03(3.05 g，22.1 mmol)和 Pd(PPh3)4( 170 mg, 2 mol%)加入到氫溴酸（及）-2-氨基-6-溴-4-曱基-8-(四氫 0夫喃-3-基）° 比咬並[2,3-d]^ 咬-7(87/)-酮（2.97 g，7.36 mmol) 的1,4-二氧六環（100 mL)和水（25 mL)的溶液中。將反應混 143396.doc •62· 201018685 合物在95 C下加熱3小時。根據LC/MS，反應完成後，將 反應混合物用乙酸乙s旨（2GG社）分配。水層中的沉殿經由 過滤收集。同時’水層用乙酸乙酯（100 mLx3)洗滌，有機 層用鹽水洗務。收集有機層，並用MgS〇4乾燥，並過滤混 合物。真空除去溶劑以獲得黃色固體。合併的固體用乙酸 乙醋和水洗務以獲得所需的產物（196 g，79%產率，>98〇/〇 HPLC純度）。

向固體產物加入1,4-二氧六環（i5〇 mL)和去離子水（50 mL) ’並加熱至80°C。向均勻的熱溶液加入98 mg的Si-SPM3清除樹脂（5% w/w，Ph〇sph〇nicS Ltd，〇xf〇rd，υκ)， 並加熱至80°C ’持續2 h。將反應混合物趁熱在矽藻土上 過濾、’並用1，4-二氧六環淋洗。減壓濃縮濾液’直到已經 除去約70%的溶劑。在約2 h内，將懸浮液冷卻至室溫，且 經由過濾收集沉澱的固體，用乙酸乙酯洗滌，並在高真空 下乾燥過夜以獲得2-氨基-6-(6-氨基吼啶-3·基）-4-甲基-8-[(3及）_四氫呋喃-3-基]吡啶並[2,3-ί/]嘧啶-7(8/〇-酮（927 mg， 37%產率，>99%純度）。將濾液濃縮，並重結晶以獲得額 外的化合物（35 5 mg，14%產率，>96%純度）；4 NMR (400 MHz, DMSO-d6) ； δ 8.20 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.69 (dd, 1H), 7.12 (s, 2H), 6.45 (d, 1H), 6.20 (m, 1H), 6.03 (s, 2H), 4.22 (qr, 1H), 3.87 (m, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.37 (m, iH), 2.03 (m，1H) 〇 實施例3-5使用與本文描述的方案相似的方案製備。 143396.doc •63- 201018685 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) MS (El) 化合物1 δ 8.20 (s, 1Η), 7.84 (s, 1Η), 7.70 (dd, C18H20N6〇2： /N^NH2 1Η), 7.15 (s, 2H), 6.46 (d, 1H), 6.04 353.2 [MH]+ 1 Γ T (s, 2H), 5.06 (bs, 1H), 4.47 (bs, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.64 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.69 H2N N N 0 6〇 (m, 3H) 化合物2 δ 8.40 (s, 2H), 8.30 (m, 3H), 8.20 (s, Ci8H2〇N6〇2： ^NH〇 2H), 7.55 (d, 1H), 5.50 (brs, 1H), 353.1 [MH]+ 1 rr 2 4.48 (brs, 1H), 3.83 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.43 (m, 1H), 2.81 (m, η2νΛν^ν人ο HCI όο 1H), 2.70 (s, 3H), 1.71 (m3H) 化合物4 δ 8.20 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.68 (dd, C17H18N6〇2： 1H), 7.12 (s, 2H), 6.43 (d, 1H), 6.20 339.2 [MH]+ 1 Γ τ (m, 2H), 6.03 (s, 1H), 4.22 (q, 1H), λ JL Λ η2ν ν ν ο ό 3.87 (m, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.36 (m, 1H), 2.03 (m, 1H) 效用 合適的用於測量PI3K和mTOR活性以及化合物對其的抑 制的體外測定為本領域所知。使用生物學實施例1和2描述 的測定，已經測試了本發明的化合物，並已確定其為PI3K 和mTOR的抑制劑。測量治療癌症的體外功效的測定為本 領域所知。此外，基於細胞的腫瘤模型描述於生物學實施 例，下文的實施例3中。用於測量增殖的測定描述於下文 的生物學實施例4中。測量本發明的化合物的小鼠微粒體 氧化的測定描述於下文的生物學實施例5中。本領域中具 有通常知識者知道合適的癌症的體内模型，。對於乳腺癌、 -64- 143396.doc 201018685 結腸腺癌和前列腺癌的體内模型的更多細節，參見下文的 生物學實施例6、7和8。按照本文公開的以及本領域公開 的實施例’本領域中具有通常知識者可確定本發明的化合 物的抑制活性。 作為PI3K和mTOR的抑制劑，本發明的化合物用於治療 疾病’特別是其中PI3K和/或mTOR活性引起疾病的病理 和/或症狀學的癌症。例如，其中pI3K和/或mTOR活性引 起其病理和/或症狀學的癌症包括乳癌、結腸癌、直腸 癌、子宮内膜癌、胃癌、成膠質細胞瘤、肝細胞癌、小細 胞肺癌、非小細胞肺癌、黑素瘤、卵巢癌、子宮頸癌、胰 腺癌、前列腺癌、急性粒細胞性白血病（AML)、慢性粒細 胞性白血病（CML)、多發性骨髓瘤或曱狀腺癌。 生物學實施例 生物學實施例1 PI3K螢光素酶複合化學發光測定方案

ΡΙ3Κα活性被測定為使用螢光素酶_螢光素複合化學發光 的激酶反應後，消耗的ΑΤΡ的百分比。反應在384孔白色培 養基結合微量滴定盤（Greiner)上進行。在20 pL體積的緩 衝液中結合測試化合物、ATP、受質（PIP2)和激酶啟動激 酶反應。標準的ΡΙ3Κα測定緩衝液主要由50 mM Tris，pH 7.5、1 mM EGTA、10 mM MgCl2、1 mM DTT和 0.03% CHAPS組成。酶、ATP和受質的標準測定濃度分別是15 nM、1 μΜ和10 μΜ。反應混合物在環境溫度下溫育約2 h。 激酶反應後’加入10 μ!^小份螢光素酶·螢光素混合物 143396.doc -65- 201018685 (Promega Kinase-Glo)，並且使用Victor2反應盤判讀器 (Perkin Elmer)測量化學發光信號。總ATP消耗限制於40-60%，且對照化合物的IC50值與文獻參考較好地相關。 ΡΙ3Κα可用ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κδ或ΡΙ3Κγ代替以確定化合物對 ΡΙ3Κ的其他同種型的活性。 生物學實施例2 inTOR/GbL/Raptor (mTORCl) ELISA測定 4E-BP1蛋白磷酸化之後，以ELISA測定格式（format)進 行mTORCl酶活性的測量。所有的實驗以384孔格式進行。 一般來說，含有變化濃度的測試化合物的0.5 pL DMSO與 15 μι酶溶液混合。加入15 pL含有受質的溶液啟動激酶反 應。測定條件如下：0.2 nM mTORCl、10 μΜ ATP和 50 nM NHis標記的 4E-BP1 於 20 mM Hepes 中，pH 7.2，1 mM DTT、50 mM NaCl、10 mM MnCl2、0.02 mg/mL BSA、 0·01 % CHAPS、50 mM β-甘油磷酸酯。在環境溫度下溫育 120分鐘後，將20 μΐ^反應體積轉移到Ni-螯合物塗層的384 孔反應盤中。4E-BP1蛋白的結合步驟進行60分鐘，隨後每 個用50 pLTris-緩衝鹽溶液（TBS)洗滌4次。加入在5% BSA-TBST (0.2% Tween-20 於 TBS 中）中的抗磷酸-4E_BP1*-IgG(20 pL，1:5000)，並進一步溫育60分鐘。洗掉一級抗體 (50 μι洗滌4次）後，相似地執行與二級HRP-標記的抗IgG 的溫育。用TBST的最終洗滌步驟之後，加入20 μί SuperSignal ELISA Femto(Pierce Biotechnology)，並使用 EnVision反應盤判讀器測量螢光。 143396.doc -66- 201018685 生物學實施例3 pS6 (S240/244) ELISA 測定 mTOR pS6 (S240/S244) PC-3 End w/ DMSO and p-RPS6 (S240/S244) MCF-7 End

CELL_ELISA w/ DMSO

PC-3 和 MCF-7 細胞（都來自 ATCC)在 DMEM(Cellgro)中以 每孔8x103個細胞接種於96孔反應盤（Corning，3904)， DMEM其含有 10% FBS(Cellgro)、1% NEAA (Cellgro)和 1% 青黴素-鏈黴素（Cellgro)。為細胞固定ELISA準備兩塊反應 盤，一塊用於pS6 (S240/244)，且一塊用於總S6。細胞在 3 7°C，5% C02下溫育48 h，且生長培養基用無血清DMEM 代替。將測試化合物在0·3% DMSO(媒介物）中的連續稀釋 物加入到細胞中，並溫育3 h。為了固定細胞，除去培養 基，並在室溫下，將100 μι/孔的4%曱醛（Sigma Aldrich， F8775)的 TBS(20 mM Tris，500 mM NaCl)溶液加入到每個 孔中，持續30分鐘。細胞用200 pL含有0.1% Tween-20 (Bio-Rad，目錄# 170-6351)的 TBS(TBST)洗滌3 次，並在室 溫下，用 100 pL 0.6% H202 (VWR International,目錄# VW3742-1)的TBST溶液驟冷，持續30分鐘。反應盤用200 pL TBST洗滌3次，並在室溫下，用100 pL 5% BSA (Jackson ImmunoResearch，001-000-173)的 TBST 溶液封 閉，持續1 h。在5% BSA的TBST溶液中，1/500稀釋抗pS6 (S240/244)抗體（Cell Signaling Technology, 2215)和抗總 S6 抗體（Cell Signaling Technology, 2217)，且將50 谷1^的任一 一級抗體溶液加入到一個反應盤中以檢測pS6或總S6。4°C 143396.doc -67- 201018685 下溫育過夜後，反應盤用200 pL TBST洗滌4次。在5% BSA的TBST溶液中，1/15000稀釋羊抗兔二級抗體（Jackson ImmunoResearch，目錄# 111-035-003)。將 100 μίν抗體溶液 加入到每個孔中，並在室溫下溫育1 h。反應盤用200 pL TBST洗滌3次，並用200 pL TBS洗滌2次。室溫下製備化 學發光受質（Super Signal Elisa Femto Chemiluminescent Substrate(超級信號Elisa Femto化學發光受質）；Pierce, 37075)。加入每孔100 pL的化學發光受質，然後將反應盤 振盪1分鐘。在Wallac反應盤判讀器上立即讀出螢光。根 據化合物處理孔的pS6比總S6信號的比值，標準化於 DMSO處理的對照孔，確定IC50值。 生物學實施例4 MCF-7和 PC-3的 2天BrdUJe 胞增殖測定MCF-7 2day 10%serum Proliferation (IC50) and PC-3 2day 10%serum

Proliferation (IC50) 在MCF-7(ATCC)和PC-3(ATCC)細胞的生長培養基' DMEM (Cellgro, # 10-014-CV)+10%熱鈍化的 FBS (Invitrogen) + 1% Pen/Strep (Cellgro, # 30-002-CI)+l% NEAA (Cellgro, # 25-025-CI)中，MCF-7(ATCC)和PC-3(ATCC)細胞分別以 15000和8000個細胞/孔的接種密度接種到96孔反應盤 (Corning，# 3904)。細胞在37°C，5% C02下溫育過夜。然 後，次日用化合物在細胞的生長培養基的連續稀釋物（含 有最終濃度0.3°/。的DMSO)處理細胞。每個化合物濃度使用 三個重複的孔。對照孔獲得0.3%在生長培養基中的 143396.doc -68- 201018685 DMSO。反應盤在37°C，5% C02下温育額外的48 hr。細胞 用 BrdU (Roche，# 10280879001，20 μΜ)標記 2-4 hr，然後 在室溫下，用70% EtOH+O.l M NaOH固定30分鐘。將抗 BrdU-過氧化物酶（Roche，# 11585860001， 1/2000 於

PBS+1% BSA中）複合物加入到細胞中，此後，反應盤用lx PBS洗滌3次。加入化學發光受質溶液（Pierce, # 3707A/B)，且使用Wallac Victor反應盤判讀器讀取螢光0.1 秒。根據化合物處理的細胞增殖對比0.3% DMSO媒介物對 照，確定IC5G值。 生物學實施例5 小鼠微粒饉氧化測定 在小鼠肝微粒體部分存在下，測試化合物的微粒體氧化 在96孔微量滴定盤中進行。肝微粒體製品從BD Gentest (目錄#452701)處購買。在肝微粒體和NADPH存在下，測 試化合物在37°C下一式二份溫育30分鐘。反應混合物（75 pL)含有在100 mM峨酸釺緩衝液，pH 7.4中的最終濃度15 μΜ的測試化合物、0.15% DMSO、0.5 mg/mL微粒體蛋白 和1 mM NADPH。對照溫育物含有酶和受質的全部補體， 但未加入NADPH。所有的測試設定（test-sets)包括參考 CYP450受質以證實測定的性能。加入150 μι含有0.1%甲 酸的乙腈終止反應。殘留的測試化合物的濃度以 LC/MS/MS分析在Sciex API-3000儀器上確定。經由測試化 合物（+/- NADPH)的峰積分相對於連同樣品注射的内標的 峰積分的變化確定％氧化： 143396.doc -69- 201018685 %氧化=[((峰積分化合物，*nadph/峰積分*準）_(峰積分化合物， NADPH〆峰積分株準））/1〇〇] 使用.Phenomenex Synergi Hydro-RP柱（Torrance, CA)和 由0.1%甲酸的乙腈溶液和0.1%甲酸的水溶液組成的流動相 實現分析物的層析分離。使用2-98%乙腈的線性梯度從 HPLC管柱洗脫化合物。給定樣品測量（例如相同樣品的多 次注射）中觀察到的典型變化（即精度）為約10%，因此可認 為+/- 10%的實驗值等同於較少氧化或未氧化。較大的負 實驗值（負值>10%)可表明化合物的潛在NADPH依賴性代 謝。 生物學實施例6-8 藥效學外移植腫瘤模型 以下模型使用年齡5-8週和重量約20-25 g的雌性和雄性 無胸腺裸小鼠（NCr)。開始研究前，使動物適應至少48 h。 在這些研究期間，任意地為動物提供食物和水，並飼養於 條件為70-75°F和60%相對濕度的房間中。用自動計時器維 持12 h光亮和12 h黑暗的週期。每天檢查所有動物的化合 物誘導的或腫瘤相關的死亡。 MCF-7乳腺癌模型 37°C加濕的5% C02氣氛中，在增補了 10%胎牛血清 (Cellgro)、青黴素-鏈黴素和非必需氨基酸的DMEM (Cellgro)中體外培養MCF7人乳腺癌細胞。第0天，通過胰 蛋白酶化收穫細胞，並將在100 pL溶液中的5χ1 06個細胞 皮下植入雌性裸小鼠的後脅，所述溶液由50%冷Hanks平 143396.doc -70- 201018685 衡鹽溶液和50%減少生長因子的基質膠（Bect〇n Diekins()n) 組成。將轉應器（transponder)植入每個小鼠，用於鑑定和 資料追縱，且每天監測動物的臨床症狀和存活。 在雌性無胸腺裸小鼠中建立腫瘤，且當平均腫瘤重量達 到100-200 mg時分期。本發明的化合物作為水溶液/均勻的 水懸浮液（具有與1 N HCL的1:1的莫耳比）以1〇、25、5〇和 l〇〇mg/kg每天一次（qd)或每天兩次（bid)口服施用14天。 在14-19天的給藥期内，每週兩次確定腫瘤重量且每天 記錄體重。

Colo-205結勝模型 37 C加濕的5% C〇2氣氛中，在增補了 1〇0/〇胎牛血清 (Hyclone)、青黴素-鏈黴素和非必需氨基酸的dmem (Mediatech)中體外培養Colo-205人結腸直腸癌細胞。第〇 天’通過胰蛋白酶化收穫細胞’並將在0.1 mL冰冷Hank平 衡鹽溶液中的3xl06個細胞（第1〇_15代，>95%生存力）皮内 植入5 - 8週鼠齡的雌性無胸腺裸小鼠的後脅。將轉應器植 入母個小既用於鑑疋’且每天監測動物的臨床症狀和存 活。 在雌性無胸腺裸小鼠中建立腫瘤，且當平均腫瘤重量達 到100-200 mg時分期。本發明的化合物作為水溶液/均勻的 水懸浮液（具有與1 N HCL的1:1的莫耳比）以1〇、25、50和 100 mg/kg每天一次（qd)或每天兩次（bid)口服施用14天。 在14天的給藥期内’每週兩次確定腫瘤重量，且每天記錄 體重。 143396.doc •71- 201018685 PC-3前列腺癌模型 37°C加濕的5% C〇2氣氛中，在增補了 2〇〇/。胎牛血清 (Hyclone)、青黴素-鏈黴素和非必需氨基酸的DMEM (Mediatech)中體外培養pc-3人前列腺癌細胞。第〇天，經 由胰蛋白酶化收穫細胞，並將在〇·1 mL冰冷Hank平衡鹽溶 液中的3x106個細胞（第1〇_ 14代，>95%生存力）皮下植入5_8 週鼠齡的雄性裸小鼠的後脅。將轉應器植入每個小鼠用於 鑑定，且每天監測動物的臨床症狀和存活。 在雄性無胸腺裸小鼠中建立腫瘤，且當平均腫瘤重量達 到100-200 mg時分期。本發明的化合物作為水溶液/均勻的 水懸浮液（具有與1 N HC1的1:1的莫耳比）以1〇、25、50或 100 mg/kg每天一次（qd)或每天兩次（bid) 口服施用19天。 在14-19天的給藥期内，每週兩次確定腫瘤重量，且每天 記錄體重。 對於皮下或皮内腫瘤’在各自對照和處理組中的每個動 物的平均腫瘤重量在研究期間每週確定兩次。腫瘤重量 (TW)通過用測徑器測量垂直直徑，使用以下公式確定： 腫瘤重量（mg)=[腫瘤體積=長（nm)x寬2 (mm2)]/2 記錄這些資料，並繪製在腫瘤重量與植入後天數的線圖 上，並圖解地提供為腫瘤生長速率的指示。腫瘤生長的百 分比抑制（TGI)用以下公式確定： 广 (Xf - x〇) (Yf—X〇) 1433%.doc •72· 100 201018685

八中X〇=成組日的所有腫瘤的平均TW

Xf=處理組第f天的TW

Yf=媒介物對照組第f天的TW 如果腫瘤消退到低於它們的起始大小，則 比用以下公式計算： 的百刀 ❹ (X〇-Xf) X〇 * 100 早獨计算每個腫瘤的腫瘤大小以獲得每個實驗組的平均 土SEM值。使用2尾8加心加t檢驗確定統計顯著性（顯著 義為Ρ<〇.〇5；) » 义 * 5楚和理解，通過示例說明和實施例在一些細節上 描述了 Μ上提及的發明。參考各種具體的實施方案和技 術已七田述了本發明。然而，應理解，可進行許多變化和 改良且仍然屬於本發明的精神和範圍。可在附加的申杜 專利範圍的範圍内實踐變化和改良，這對本領域令具有= 常知識者將是明顯的。因此，應理解以上描述意在示例， 而㈣制。因&，本發明的範圍不應該參考以上的描述來 確疋而疋代替的，應該參考下料請專利範圍連同這些 申請專利範圍等同替代的全部範圍來確^本中請引用= 專利專利中睛和出版物為所有目的經由51用整體併

Hi，其程度如同每個專利、專利申請或出版物被如此 早獨指明。 143396.doc -73-

Claims (1)

1. 201018685 七、申請專利範園： 1. 一種式I的化合物：

   任選地為其單一立體異構物或立體異構物的混合物， 且額外地任選地為其藥學上可接受的鹽，其中 ❿ Rl是四氫呋喃基或四氫吡喃基； r2是氫或炫基； R3 是-NR4R4a ;且 R4和R4a是氫。 2. 如申請專利範圍第1項所述的 構物或立體異構物的混合物， 藥學上可接受的鹽。 化合物，或其單一立體異 其中R2是氫；任選地為其 3. ”請專利範圍第工項所述的化合物，或其單— 構物或立體異構物的混合物，其中r2是烧基 其藥學上可接受的鹽。 選地> 4. 如申請專利範圍第卜2或3項所述的化合物，或 立體異構物或立體異構物的混合物-、 基;任選地為其藥學上可接受的鹽。、中〜四氣〜 5· ^請專利範圍第卜2或3項所述的化合物 立體異構物或立體異構物的混合物 早- 基；任選地為其藥學上可接受的_。、中。比喃 143396.doc 201018685 6.如申請專利範圍第1、2或3項所述的化合物，其中所述 式I的化合物依據式la

   任選地為其藥學上可接受的鹽。 如申a青專利範圍第1、2或3項所述的化合物，其中所述 式I的化合物依據式lb

   任選地為其藥學上可接受的鹽。 8.如申請專利範圍第1、2或3項所述的化合物，其中所述 式I的化合物依據式,

   R3 Ic ； 任選地為其藥學上可接受的鹽。 143396.doc 201018685 9. 如申請專利範圍第1、2或3項戶 式I的化合物依據式1(1 斤逮的化合物，其中所述

   R3

   任選地為其藥學上可接受的鹽。 化合物，其中所述 10.如申請專利範圍第i、2或3項所述的 式I的化合物依據式Ie

   Ie 任選地為其藥學上可接受的鹽。 11 如申請專利範圍第1項所述的化合物，其選自 甲基-8-[(36> 四氫-2从吡鳴 -基)_4-甲基-8-(四氫-2//·-吡喃-4-基 L^g-7(叫酮； L， 143396.doc 201018685 12.如申請專利範圍第⑽所述的化合物，其指定為2氨基_ 6_(6_氣基Μ·3·基）-4-甲基七（四H比喃_4_基）吼咬 並[2,3呐嘧啶_7(叫酮’任選地為其藥學上可接受的 鹽。 A如申請專利範圍第6項所述的化合物，其指定為2·氨基_ 6·(6·氨基°比咬_3_基)-4曱基-H叫四氫咬喃-3_奸比咬 並[2’3-内嘧啶_7(叫酮，任選地為其藥學上 受的 鹽。 14· 一種藥物組合物，其包括中請專利範圍第卜2、3、4、 6 7、8、9、10或11項所述的化合物和藥學上可接 :的載體、賦形劑或稀釋劑，所述化合物任選地為其單 4心㈣或立體異構物的混合物，且額外地任選地 為其藥學上可接受的鹽。 15· -種藥物組合物，其包括申請專利範圍第㈣所述的 化口物和藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑，所述 化合物任選地為其藥學上可接受的鹽。 % 一種藥物組合物’其包括中請專利範圍第叫所述的 化合物和藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑，所述 化合物任選地為其藥學上可接受的鹽。 17.「種如申請專利範圍第卜2、3、4、5 6、7、8 9、 2或13項所述的化合物，所述化合物任選地做 〜、早立體異構物或立體異構物的混合物，額外地任 ，地為其藥學上可接受的鹽，並且額外地任選地含有藥 予上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑之用途，其係用以 143396.doc 201018685 * 製備用於治療疾病、病症或症候群的藥物。 申μ專利範圍第17項所述的用途，其中所述疾病是癌 症。 19·如申請專利範圍第18項所述的用途，其中所述癌症是乳 癌結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、胃癌、成膠質細胞 • 瘤、肝細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、黑素瘤、 卵巢癌、子宮頸癌、胰腺癌、前列腺癌、急性粒細胞性 ❹ 白血病、慢性粒細胞性白血病、多發性骨髓瘤或甲狀腺 癌。 20. 如申明專利範圍第丨9項所述的用途，其中所述癌症是卵 巢癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、乳癌、結腸癌、直腸 癌、非小細胞肺癌、前列腺癌或成膠質細胞瘤。 21. —種用於製備中請專利範圍第j、2、3、4、5、6、7、 8、9、10、11、12和13項中的任何一項所述的化合物的 方法’其包括： a (a)使式9的中間體：

   與式R2NH2的中間體反應以產生申請專利範圍第工、 2' 3'4'5'6'7'8、9、1〇、u、12或13項所述的化 合物；或 (b)使式7的中間體： 143396.doc 4

   201018685 與式8的中間體

   反應以產生申請專利範圍第1、2、4、5、6、 10、11、12或13項所述的化合物，其中是R2氫 (d)任選地進一步拆分單一異構物。 7、8、9、 :且 143396.doc 6- 201018685 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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