TW200825050A

TW200825050A - Amide compound or salt thereof, and biofilm formation inhibitor, biofilm remover and bactericide each using the amide compound or salt thereof

Info

Publication number: TW200825050A
Application number: TW096140580A
Authority: TW
Inventors: Hiroaki Suga; Jun Igarashi
Original assignee: Univ Tokyo; Otsuka Chemical Co Ltd
Priority date: 2006-10-27
Filing date: 2007-10-26
Publication date: 2008-06-16
Also published as: ES2535436T3; JPWO2008050857A1; EP2077260A4; ZA200902208B; RU2009120043A; BRPI0718014A2; AU2007310007A1; WO2008050857A1; CN101528686A; MX2009004558A; JP5247459B2; EP2077260B1; EP2077260A1

Description

200825050 九、發明說明：【發明所屬技彳椅領域】技術領域本發明關於一種新穎醯胺化合物及其鹽，該化合物具 5有生物膜形成抑制作用、剝離去除業已形成之生物膜的作用或是殺菌作用。此外，本發明關於一種以該醯胺化合物或其鹽作為有效成分之生物膜形成抑制劑、生物膜剝離劑或殺菌劑以及其用途。 10背景技術已知細菌、真菌等特定種類之微生物會附著於載體表面形成菌落，一旦達到一定之菌細胞數，即會產生及分泌多醣類或糖蛋白質等有機物質而形成生物膜(Bi〇film)，其他微生物會進入該生物膜而形成複雜之微生物集團。生物 15膜可於各種自然界環境中或產業領域，甚或是人體内外發現其形成，例如，成為工廠排水管内等之管線金屬腐餘或閥操作障礙等對產業設備造成損害的成因，於循環式浴槽中造成退伍軍人菌（Legionella Bacteria)產生之問題，以及成為人類皮膚上挫瘡及發炎等皮膚疾病、透過隱形眼鏡等而 20引起之細1ί性角膜炎等眼部感染症、口腔内麵钱及牙周病等口腔内疾病、其他如中耳炎、細菌性前列腺炎、囊腫纖維化肺炎等人體感染症的成因。包含牙周病等，肇因於該等生物膜之感染症（生物膜感染症）大多係難治性者。其原因可列舉如：生物膜内之微生 5 200825050 物被膜（細胞外基質）所包覆，因而妨礙其與免疫細胞或抗菌物質等作直接接觸；此外，抗生物質之抗菌效果係在細菌分裂活潑時發揮而抑制細菌之增殖，相對地，生物膜中之細菌代謝非常緩慢，這亦被認為是抗生物質難以發揮效用 5的原因之-。因此，若欲完全根治生物膜感染症，除了抑制微生物形成生物膜之預防性處置外，亦須有除去已形成之生物膜的處置。 / 基本上’生物膜之去除可採取以刷子摩擦等之物理手 10 生物膜會強固地附著於載體表面，相對於付出極卻热法獲得可令人期待之效果。化人2前述狀況，近年來具有抑射物_成之作用的二，到矚目，舉例來說，已有報告指構之化合物可調整等）。之$成（翏照專利文獻！及2 15【專利文獻1】W02004/016213 【專利文獻2】W02002/088298 【韻^明内容^】發明之揭示赞叨欲解決之課題 20 然而’專利文獻1及2所記载之化合除業已形成之生物膜的作用者。雖然可期待^有_去膜之形成顿錄叙_變薄甚切^ 抑制生物生物膜内部之微生物仍有殘活者。叫讀，但因存於弱或消失之時’有可能再度形成生物膜效力減 /无成為包含 200825050 生物膜感染症之各種損害的根本解決方法。因此，為了除該等因生物膜而引起之各種損害以及徹底治療生物_ 染症’僅靠具有生物膜形成抑制作用之藥劑是不夠的厂熱切地需要開發出具有可去除、剥離業已形成之生物與 5 作用的藥劑。 ' 本發明之目的在於提供一種具有剝離去除既已形成之生物膜之作用的化合物，特別是一種在具有抑制财物= 成生物膜之作用，同時具有剝離該生物膜之作用的新穎化合物。此外，本發明之目的在於提供一種含有前述化合物 10作為有效成分之生物膜剝離劑或生物膜形成抑制劑，=別是一種對於綠膿桿菌或牙周病原性細菌等細菌所形成之生物膜可有效作用之生物膜剝離劑或生物膜形成抑制劑。此外，本發明之目的在於提供一種以該化合物作為有效成分之殺菌劑。再者，本發明之目的在於提供一種含有該等生 15物膜剝離劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑之製品，如目的係預防或治療牙周病原性細菌相關之牙周病等口腔内疾病之口腔用組成物。解決課題之手段本案發明人反覆精心研討之結果，發現具有特定種類 20之醯胺構造的特定化合物具有微生物之生物膜形成抑制作用同日守具有剝離去除既已形成之生物膜的作用，以及具有不遜於既存抗生物質之殺菌作用，進而完成本發明。本發明包含具有下述態樣者。合物或其鹽 7 200825050 (1-1) 一種通式（1)所示醯胺化合物或其鹽：【化1】

Ο R1 Q 一 NH—C

(1) 式中，R1為氫原子或氫氧基，R2為C5_12烷基；Q為下式 5 (Q1)或Q2)所示之取代基。【化2】

式中，η及m為0或1。 (1-2)如(1-1)之醯胺化合物或其鹽，其中該通式（1)中之Q 10 為式(Q1)所示取代基(但，m為0)。 (1-3)如（1-1)之醯胺化合物或其鹽，其中該通式（1)中之Q 為式(Q1)所示取代基(但，m為1)。 (1-4)如（1-1)之醯胺化合物或其鹽，其中該通式（1)中之Q 為式(Q2)所示取代基(但，η為0)。

15 (1-5)如（1-1)之醯胺化合物或其鹽，其中該通式（1)中之Q 為式(Q2)所示取代基(但，η為1)。 (1-6)如（1-1)之醯胺化合物或其鹽，其中該通式（1)所示 200825050 以化合物係選自 N-(吼心η 構成群中之任意至少一者： (各疋士基)癸醯基醯胺、 Ν (比料·3_基)十二酿基酿胺、 Ν-(旅κ基)癸酿基酿胺、 5 10 15 20 Ν (底定-4-基)十二醯基醯胺、 Ν々比略σ定小基) + 基_、 N十比口各口定小基)〜3老基十二醯基_、及 N-(哌啶-1-基）十二醯基醯胺。 (II)生物膜劍 (IM)種生物臈剝離劑，係以(1-1)至(1-6)中任一項之 _化合物或其鹽作為有效成分。 f菌=::)之生物膜剝離劑’其中該生物臈係由綠膿才干囷或牙周病原性細菌所形成之生物膜。 (Π-3)-獅胺化合物或其鹽之料餐如㈣至㈣中任-項德胺化合物或其鹽用作生物膜_劑者。 (H-4)-龍胺化合物或其鹽之時係將如㈣至中任-項之_化合物或其鹽用以調製生物_離劑者。 (II-5)如（1-1)至(Ι·6)中任—項之酿胺化合物或其睡复係被用作生物膜剝離劑之有效成分者。 /、 (IID生物膜形成抑制劑 ση-υ-種生物膜形成抑制劑，係以㈣至㈣中任— 項之醯胺化合物或其鹽作為有效成分。 (m-2)如(m-D之生物_成抑_，其㈣_ 由綠腹桿囷或牙周病原性細菌所形成之生物膜 ' 9 200825050 购)-種醯胺化合物或， 5 者中任-項之酿胺化合物一—③’係將(1])至(1-6) m令種_化合物:用作生物_成抑制劑者。中任一項之醯胺化合物^一之用攻，係將(Ι'υ至(1-6) 者。 3、翻以生物卿成抑制劑 (H5)如(叫至仏 ω合物或其鹽作為二:’)至(1·任-項之醯胺化 (IV-2)—種殺菌劑，係以(1_2)或(1_3)之醯胺化合物或其鹽作為有效成分。 (IV-3)如（IV-1)之殺菌劑，其中該醯胺化合物係選自下述者所構成群組中之任意至少一種： 15 吡咯啶-3-基)癸醯基醯胺、吡咯啶-3-基）十二醯基醯胺、 Ν'(派淀-4-基)癸醯基隨胺、 Ν-(哌啶-4-基）十二醯基醯胺。 (IV-4) —種醯胺化合物或其鹽之用途，係將(1-1)至(1-6) 20 φ 乂工 T任—項（較佳為（1-2)或(1-3))之醯胺化合物或其鹽用作殺菌劑者。 (IV-5) —種醯胺化合物或其鹽之用途，係將(1-1)至(1_6) 中4壬一項（較佳為（1-2)或（1-3))之醯胺化合物或其鹽用以調製殺菌劑者。 200825050 (IV-6)如（I-1)至(ι_6)中任一項（較佳為（ι 2)或(13》之醯胺化合物或其鹽，其係用作殺菌劑之有效成分。 (Y)生物膜Jj離劑、制劍成殺絲剑之用狳 OM)-種口腔用組成物，含有··如(11_2)之生物膜剝離 5劑，其係針對牙周病原性細菌所形成之生物膜者；或，如 (ΙΠ-2)之生物獅成抑侧，其係針對牙周病原性細菌所形成之生物膜；或如（IV-1)之殺菌劑。 (V-2)如（V-1)之口腔用組成物，其係用以預防或改善成因係牙周病原性細菌之口腔内疾病或口臭者。 1〇 (V_3)一種用途，係將如(II.2)之針對牙周病原性細菌所形成之生物膜的生物膜剝離劑、如(ΙΠ-2)之針對牙周病原性細菌所形成之生物膜的生物膜形成抑制劑、或是如(1叫之殺菌劑用以調製口腔用組成物者。 (V-4)如(V-3)之用途，其中該口腔用組成物係用以預防 15或改善成因係牙周病原性細菌之口腔内疾病或口臭者。 (V-5)如(Π-2)之生物膜剝離劑、叫取生物膜形成抑制劑或(IV-1)之殺菌齊j，其係針對牙周病原性細菌所形成之生物膜者，且被用作口腔用組成物之有效成分。 (ν·6)如(V-5)之生物膜剝_、生物膜形成抑制劑或殺 20菌劑，其中該口腔用組成物係用以預防或改善成因係牙周病原性細菌之口腔内疾病或口臭者。發明之效果依據本發明之化合物，可藉由抑制生物膜之形成或進 -步去除業已形成之生㈣’解決微生㈣成之生物膜所 11 200825050 產生之各種損害。特別是’本發明之化合物具有抑制綠膿桿菌或牙周病原II細菌形成生物膜及進一步剝離去除業已形成之生物膜的特有作用。因此’本發明之化合物可使用在廣泛之範缚。 5再者’本發明之化合物即便是對難治性之生物膜感染症亦可有效使用，進而可期待其在根治該等感染症上帶來極大貢獻。例如，綠膿桿菌經常存在於自然環境中，僅須有些微之有機物及水分即會增殖而形成生物膜，而成為引起院内 10感染及菌取代症、伺機性感染（opportunistic infection)之原因’或是成為水管等配管及儲水槽内等衛生環境之惡化原因。此外，牙周病原性細菌所形成之溶菌斑(plaque)係採生物膜形態，而成為牙周病及齒槽膿漏等口腔内疾病及口臭 15等之病因。迄今，幂所週知，去除該溶菌斑在口腔衛生及治療該等口腔内病病上係甚重要者。但是，如前所述，生物膜具有殺菌劑等藥劑難以致效的問題。依據本發明之生物膜剝離劑或生物膜形成抑制劑，可 2〇於醫院設施或家庭、工廠等配管及儲水槽内等抑制綠膿桿 ®形成生物膜，成是促進去除醫既已形成之生物膜，進而可整備衛生環境，有效預防或改善院内感染及各種損害。此外，依據本發明之生物膜剝離劑，可抑制牙齒、牙齦或口腔内之牙科材科等因牙周病原性細菌而在表面附著形成 12 200825050 =或是促進去除業已附著形成於表面之生物膜而 ^效地預防或治療牙周炎及齒槽膿漏等牙周疾病與口内火專之口腔内疾病等，或是預防或改善口臭。此外，本發明之化合物，特、 5 10 15 20 寻疋通式（1)中Q具有式（Q1) 化合物或其鹽’對於綠膿桿菌、大腸桿菌及金貫色葡萄球菌等多種細菌具有優異之殺菌作用，可適宜地用作殺菌劑。 I：實施方式3 本發明之最佳實施型態 ⑴新穎醯胺化」合物或其鹽本發明提供-種新穎酿胺化合物及其鹽，物膜剝離除去仙或生物_成抑制仙，且生物膜剝_或生制形成抑·之有效成右= ::成==種具有_用且作為後_劑二效成勿甚有用之新穎醯胺化合物及其鹽。 π 於此，「生物膜」（亦稱為「Bi〇film」泌產生之黏液質膜，其中有多種微生物共存^二=分 (群生），附著於固體表面之狀態。換言之，「生=硬5體種微生物之集合體，其被微生倾分泌⑽ 著。此種生物骐所附著之固體除了不具自動力戈自者’如聚合物、塑膠，、金屬、玻璃、== 外，亦可不受限制地列舉如皮膚、骨路、牙齒 ^ 織等活體。牙‘或、、且該醯胺化合物可以下述通式（1)表示： 13 (1)200825050 【化3】 Q 一 NH—

式中，R1為氫原子或氫氧基，R2為Cm烧基；q為下式 (Q1)或(Q2)所示之取代基。【化4】 /

(Q 1)

(Η2〇)η Ν (Q2) 式中，η及m為0或1。通式（1)中’ R2所示之C5_12烷基可列舉如：正戊基、b 甲基-正丁基、2_曱基-正丁基、3-甲基-正丁基、1，1-二甲基 1〇 _正丙基、L 2-二甲基'正丙基、2, 2-二甲基-正丙基、乙基 -正丙基、正己基、；U甲基_正戊基、2_甲基正戊基、3曱基正戊基、4-曱基-正戊基、1，1-二甲基正丁基、1，2-二曱基正丁基、1，3-二甲基-正丁基、2, 2-二甲基-正丁基、2, 3-一曱基-正丁基、3，3-二甲基_正丁基、乙基_正丁基、2_ 15乙基-正丁基、L L 2_三甲基-正丙基、1，2, 2-三甲基-正丙基1-乙基-1-甲基-正丙基、丨乙基_2_曱基正丙基、卜曱基乙基-正戊基、正庚基、2-庚基、1-乙基2—二曱基-正丙土 1乙基-2，2-—甲基-正丙基、正辛基、3-辛基、4-曱 14 200825050 基-3-正庚基、6_甲基·2_正庚基、2，基小正庚基、2 4 4_ 三曱基-1-正戊基、正壬基、2-壬基、2, 6_二甲基_4正庚基、 3_乙基-2, 2_二甲基_3_正戊基、3, 5, 5_三甲基小正己基、正癸基、2-癸基、4_癸基、3, 7_二甲基小正辛基、3, 7_ -3-正辛基、正十—基及正十二鱗碳原子數μ之直魏或分枝狀烷基。宜為碳原子數7~n(更宜碳原子數7，之直鍵狀或分枝狀，具體來說，較佳之基可列舉如正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十一基等直鏈狀烷基。 10 通式⑴中，r2為氫原子或氫氧基均可，但較宜為氫原子。通式（1)中，作為Q之式(Q1)所示取代基可列舉如111為〇之取代基(3-吡咯啶基)及爪為丨之取代基(4_哌啶基）。此外，作為Q之式（Q2)所示取代基可列舉如之取代基（1吨略 15 啶基)及η為1之取代基（1-哌啶基）。具體而言，式（1)所示本發明醯胺化合物可以下式 (la)〜(ld)所示醯胺化合物表示。【化5】

2〇式中，R1及R2與前述者相同。 15 200825050 即’式（la)所示化合物相當於通式⑴中取代基(^為以且該Q1中之m為〇的化合物，此外，式（lb)所示化合物相當於通式（1)中取代基(^為口丨且該Q1中之的化合物。相同地’式（lc)所示化合物相當於通式⑴中取代基卩為以且該 5 Q2中之η&〇之化合物，另，式（id)所示化合物相當於通式（1) 中取代基Q為Q2且該Q2中之n為1之化合物。本發明請求標的之醯胺化合物宜為前述（la)〜(ld)所示之醯胺化合物，且R1為氫原子、R2為直鏈狀碳原子數 5〜12(較宜為7〜11，更宜為碳原子數7〜10)之烷基者。於前 10 述情況中，更宜為R2為正庚基、正辛基、正壬基或正癸基等直鏈狀烷基之化合物。此外，式（la)所示之醯胺化合物亦包含下式（la，）或（la，，）所示異構物。亦即，該等異構物（la’）或（la”）中之任一者或是組合兩者，均可用作生物膜剝離劑、生物膜形成抑制劑 !5 或殺菌劑之有效成分。【化6】

式中，R1及R2與前述者相同。本發明之式（1)所示醯胺化合物玎與酸形成鹽。可與醯 20胺化合物（1)形成鹽之酸並未特別受限’可列舉如：鹽酸、 200825050 硝酸、硫酸、磷酸等無機酸；以及甲酸、乙酸、涵石緣、馬來酸'蘋果酸、檸檬酸、水楊酸、苯甲酸及抗瓌血酸等有機酸。宜為藥理學上可使用之鹽。舉例來說，本發明之醯胺化合物（1)可依照下述説明之 5 反應式-1所示方法而製得。【化7】反應式_ 1 (1) Q^NH +H〇-^r2 —- (2) ⑶ 式中，Q、R1或R2與前述者相同„ 10 15 依據反應式-1，可藉由使式⑵所示胺化合物與式(3)所示減化合物仙，而製造出本發明之_化合物⑴。 /該反應可於適當之縮合劑存在下，於不活性溶劑中進 7。所使帛之縮合籠未_受限，料鱗如：三氯化 % 一肩化碎、五氯化磷、氧氣化碟、亞硫酿氣等酸鹵化物生成劑;氯甲酸乙酷、甲磺醯氣等二環己基碳二亞胺^ 取4 1 :㈣基紅亞胺、土女土基碳二亞胺等碳二亞劑，如N，N，基 Ί、他細口卿 f 笨、烴類；己烷、枣Pb 、一氣苯等_化芳香族、烷、石油喊等月旨肪族烴類；二氯甲燒、 17 20 200825050 1，2-氯乙烧、氣仿、四氣化碳等脂肪族_化烴類；二乙醚、二異丙基醚、二魏、四氫σ夫喃、乙二醇二甲醚、乙二醇一曱醚等賴，丙酮、2·τ_、甲基異了細等酮類；乙腈、丙腈、腈苯等腈類；Ν，Ν二甲基甲醯胺、六甲基石舞酿 5三胺（ΗΜΡΑ)#醯胺類；二甲基亞石風等亞石風類或是該等之混合溶劑。此外，本發明之醯胺化合物（1)亦可如下述反應式_2所示’使式(2)所示胺化合物與式⑷所讀酸^化物於適當溶劑中，依需要而在鹼存在下反應而製得。 10 【化8】反應式_2

R2 式中’ Q、R1及R2與前述者相同。乂為_素原子。於該反應中使用之溶劑可列舉如與前述反應式^可使 15 用之不活性溶劑相同者。該反應係如前述，可依需要而在驗存在下進行。於此，所使用之驗可列料：氫氧化鈉、氫氧化鉀錢氧化解驗金屬或驗土族金屬之氫氧化物；碳酸鈉、錢钾、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀等鹼金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽·，乙酽鈉、乙酸鉀或乙酸鈣等鹼金屬或鹼土族金屬之乙酸鹽；气化鈉、氫化鉀或氫化鈣等鹼金屬或鹼土族金屬之氫化物里氡氧化銨、碳酸銨或乙酸銨等銨鹽；或是三甲胺、二至一二乙胺、Ν，Ν- 18 20 200825050 二甲苯胺、吡啶、4_(二甲基胺基）吡啶、二氮雜二環辛烷 (DABCO)、二氣雜二環壬烯(DBN)、二氣雜二環十一稀(dbu) 等三級胺類。供予該等反應之試劑量並未特別受限，但相對於羧酸 5化合物(3)或羧酸_化物(4)1莫耳，一般來說，於〇·8〜5莫耳 (較佳為1〜3莫耳)之範圍内使用胺化合物(2)即可。此外，於反應式-1之情況下，縮合劑之使用比例可列舉如··相對於羧酸化合物⑶i莫耳，使用〇·8〜5莫耳(較佳為㈠莫耳)之範圍内。此外，於反應式_2的情況下使用驗時，同樣地，該 10鹼之使用比例為：相對於魏酸函化物⑷i莫耳，為⑽〜5莫耳(較佳為1〜3莫耳）之範圍内。反應溫度並未特別受限，但通常可為-lot至所用溶劑之彿點溫度以下之範圍内。此外，反應時間係依前述濃度及溫度等而變化，但通常可在5〜10小時之範圍内作適當調 15 整。此外’用作前述反應原料之胺化合物⑶及缓酸化合物 ( 了商業上可容易取得者之外，亦包含依照習知方法可容易製造者。此外，於前述反應中用作原料之胺化合物(2)、驗化合物⑶及繞_化物⑷均是商業上料取得或是 2〇可依照習知方法而製得者。如此製付之醯胺化合物（1)可藉一般之分離手段，如管柱層析法、再結晶法等而容易地從反應混合物單離純化出。迈^物膜剝唬劑心^物膜形成抑制劑、殺蘭料月述本毛明之醯胺化合物（丨）及其鹽係如後述之試驗例 19 200825050 所示般，具有生物膜去除作用、生物膜形成抑制作用或是殺菌作用。因此，前述本發明之醯胺化合物（1)及其鹽在用作目的是剝離去除或抑制形成生物膜之組成物（生物膜剝離劑或生物膜形成抑制劑）的有效成分，或是用作殺菌目的 5之組成物（殺菌劑）的有效成分上均甚有用。本發明醯胺化合物（1)及其鹽作為生物膜剝離劑或生物膜形成抑制劑，對於具有生物膜形成能力之細菌及該細菌所形成之生物膜甚有效。前述細菌可不受限地列舉如綠膿桿菌aerugiriosa)、牙周病原性細菌、大腸桿 10菌及金黃色葡萄球菌等細菌，但本發明之醯胺化合物（1)及其鹽特別是對於綠膿桿菌（£geud〇m〇nas gerugin〇—菸于同病原性細菌以及該等細菌所形成之生物膜可發揮優異之生物膜剝離效果及生物膜形成抑制效果。此外，本發明之醯胺化合物（i)及其鹽作為殺菌劑，較 15佳地，對於綠膿桿菌大腸桿菌及金黃色葡萄球菌可發揮優異之殺菌效果。因此，本發明提供一種以前述醯胺化合物（1)或其鹽作為有效成分之生物膜剝離劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑 (以下，亦將該等生物膜剝離劑、生物膜形成抑制劑或殺菌 20 劑總稱為「製劑」）。本發明之製劑可為僅由醯胺化合物（1)或其鹽構成者，或是與任意載體或添加劑組合，以習用公知方法調製成適合所需用途之劑形的組成物。本發明之製劑形態並未受限，可舉例如錠劑、粉末劑、顆粒劑、丸劑、粉末糖裝劑 20 200825050 ^膠囊劑(硬膠囊及軟膠囊）等固態製劑；乳霜、軟膏及凝膠等糊狀或凝膠狀製劑；液劑、懸濁劑、乳液劑、糖漿、酏 ^喷務劑及氣溶膠(aerosol)等液體狀製劑。 η、、加於本發明製劑之前述醯胺化合物⑴或其鹽之比例 5僅需為最終之剝離劑可發揮生物膜剝離去除效果、生物臈 ^成抑制效果或殺菌效果者即可，並未特別受限。舉例來說’可在製劑100重量％中佔0·001〜99重量％(宜為001〜5〇重昼％ ’更宜為0·05〜1〇重量％)範圍内加以適當設定調製。前述製劑僅需含有該醯胺化合物（1)或其鹽達可發揮生 10物膜剝離去除效果、生物膜形成抑制效果或殺菌效果之比例即可’亦可在不妨礙該效果之範圍内配合其他成分。其他成分可依照生物膜剝離劑之使用目的及使用對象之種類而適當選擇之。此等其他成分可依生物膜剝離劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑之使用目的及使用對象之種類來適當 15 選擇。此等其他成份雖不受限，但舉例來說，包含：賦形劑、結合劑、分散劑、增黏劑、滑澤劑、pH調整劑及可溶化劑等通常被用在製造製劑之載體；此外，包含抗生物質、抗菌劑、殺菌劑、防腐劑、填充劑(builder)、漂白劑、酵素、螯合劑、消泡劑、著色劑（染料、顏料等）、柔軟劑、保濕劑、 20 界面活性劑、抗氧化劑、香料、矯味劑、矯臭劑及溶劑等。本發明之製劑除了前述醯胺化合物（1)或其鹽之外，舉例來說，亦可含有如鹽酸米諾環素（minocycline hydrochloride)等四環素糸殺菌劑；三氯沙、氯化十六烧基吡啶鑌（cetylpyridinium chloride)、氣化苯胺松寧 21 200825050 (benzethonium chloride)等陽離子性殺菌劑；巨環内酯系抗生物質等抗菌或殺菌劑。此外’本發明之生物膜剝離劑更可倂用及配合可使其殺菌作用或是使該等抗菌或殺菌劑之活性提高的化合物， 5例如精胺酸、離胺酸、組胺酸等驗性胺基酸；綠菌稀醇 (famesol)、反葡萄糖苷酶(trans_gluc〇sidase)、cGTase等澱粉改質酶及α-澱粉酶等澱粉水解酶。本發明之製劑可廣泛應用在形成有生物膜且因該生物膜之形成而產生損害之處、或是需要殺菌之處。 1〇至於使用方法，針對產業用設備及循環式浴槽等之生物膜，可考慮使用下述方法：使本發明之製劑以懸濁劑、水合劑或水溶劑之形態於配管等中循環，或噴霧至局部之方法；及，於槽内或浴槽等中投入本發明製劑之高濃度液或錠劑、粉劑、粒劑等固態劑，以槽内等之水使其稀釋或 /谷解再行施用之方法等。此外，本發明之製劑可調製成適合經口、非經口或局部投藥之藥學製劑形態使用。再者，如後述，可調製成牙膏劑、口中清涼劑、洗口劑、牙齦用製劑、口香膠、漱口藥或義齒及牙科材料用洗淨劑等口腔用製劑之形態來使用。 20 本發明製劑之用量係依使用處及劑形（特別是徐放製 W)專之情況而異，無法一概而論’但舉例來說，將本發明之製劑用在預防或治療生物膜感染症之目的時，就適當之i 曰投藥量而言，換算成前述本發明之醯胺化合物（1)或其鹽的4又藥量，通常可在1 ng/mL〜100mg/mL(較佳為 22 200825050 10ng/mL〜10mg/mL程度）之範圍内，作為絕對量則通常可在 lng〜500mg之範圍内加以適當設定調整（例如，就人類而言，總量約為300mg)。 (ΙΠ) 口腔用組洛兔 5 本發明提供一種含有前述生物膜剝離劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑之口腔用組成物。此發明係基於，前述本發明之醯胺化合物⑴或其鹽作為有效成分之生物膜剝離劑或生物膜形成抑制劑特別對於牙周病原性細菌所形成之生物膜具有優異之生物膜剝離作用及生物膜形成抑制作用， 10且，以本發明之醯胺化合物（1)或其鹽作為有效成分之殺菌劑對於各種細菌具有特別優異之殺菌作用進而完成者。此外，具生物膜形成性之牙周病原性細菌並未特別受限’可列舉如：牙齦卟啉單胞菌(P〇rphvromonas gmgivalis)、福塞斯坦那菌(Tannerella forsvthensis^、伴放線 15 放線桿菌(Actinobacillusactinomyceterricomitans^、中間普氏菌(Prevotella intermedia)、艾肯菌(EikenellacorroHenO、直知言曲囷(Campyrobacter rectus) 、 Fusobacterium necleatum、Treponemadenticola 等〇於此，本發明請求標的之口腔用組成物係一種目的在 2〇於預防或治療牙周病原性細菌相關之牙周病等口腔疾病的組成物，可列舉如專門用於口腔内部者。具體來說，包含黏狀牙膏、牙粉、液狀牙膏、潤製牙膏等牙膏劑；喉錠狀、錠劑狀、液狀、口香膠狀、彈性軟膠狀及薄膜狀等口中清涼劑及洗口劑；具有霜狀、軟膏狀或凝膠狀形態之牙齦用 23 200825050 製劑等。此外，本發明請求標的之口腔用組成物亦包含，目的在於預防前述口腔内疾病且專門用在處理口腔内部使用之義齒及牙科材料的組成物。此種口腔用組成物可例示如義齒及牙科材料用洗淨劑等。 5 口腔用組成物之生物膜剝離劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑之配合比例可適當設定而調製成：使該等有效成分之前述本發明之醯胺化合物（1)或其鹽的含量（總量）於組成物100重量％中佔0·001〜99重量％，且較佳為001〜50重量 %，更佳為0.05〜10重量％之範圍内。 10 本發明之口腔用組成物可因應其種類及形態，除了前述成分外，依需要而在一般使用量之範圍内配合以下成分。 <研磨劑〉如二氧化矽凝膠、沉澱性二氧化矽、火成性二氧化矽、含水石夕酸、然水石夕酸、石夕酸鈦、沸石、Alminosilicate、 15 zire⑽0以以咖等二氧化矽系研磨劑；磷酸二氫鈣(calcium primary phosphate)、磷酸氫鈣（dibasic calcium phosphate)二水合物、磷酸氫鈣無水物、焦磷酸鈣（calcillm pyiopliosphate)、石粦酸二鎮（Trimagnesium Phosphate)、鱗酸 #5(tribasic caicium ph〇sphate)、氯氧化！呂、氧化 |呂、輕質碳 20酸約、重質碳酸鈣、碳酸鎂、填酸三鎂、矽酸锆(zirconium silicate)、不溶性甲代磷酸鈉、不溶性曱代磷酸鈣、氧化鈦及合成樹脂系研磨劑等。該等可單獨使用1種或倂用2種以上。配合前述研磨劑時(例如，牙膏劑等），配合量並未特別受限’可例示如：於口腔用組成物1〇〇重量％中佔3〜80重量 24 200825050 %(較宜為10〜50重量％)之範圍。 <濕潤劑或黏稠劑> 甘油、濃甘油、二甘油、乙二醇、二丙二醇、聚乙二醇、丙二醇、聚丙二醇及1，3-丁二醇等多元醇；以及木糖 5 醇、麥芽糖醇及内半縮酸(lactol)等糖醇等。該等可單獨使用1種或倂用2種以上。 <黏結劑> 褐藻酸、褐藻酸納、褐藻酸丙二醇酯、含約褐藻酸鈉、褐藻酸鉀、褐藻酸妈、褐藻酸銨等褐藻酸鹽及其衍生物；鹿角采膠（canageenan，i、λ、κ)、二仙膠（xanthan gum)、黃蓍樹膠、刺梧桐樹膠(karayagum)、阿拉伯膠、刺槐豆膠 (locust bean gum)、古亞膠(guar gum)等膠類；羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、乙酸纖維素、羥乙基纖維素納等纖維素類；明膠、洋菜、聚乙烯醇、聚丙烯酸納、 15 綾乙烯基聚合物、聚乙烯吡洛烧酮、卡波姆(Carbopol)、二氧化矽凝膠、鋁二氧化矽膠、增黏性二氧化矽等。該等可使用1種或是倂用2種以上。配合前述黏結劑時(如牙膏等），配合量並未特別受限，但可例示如：於口腔用組成物1〇〇重量％中佔0.1〜1〇重量％程度之範圍。 20 <發泡劑> 月桂基硫酸鈉、月桂醯基肌胺酸鈉、烷基磺酸化丁二酸鈉、椰子油脂肪酸單甘油續酸鈉、α-烯烴確酸鈉、N—醯基麵胺酸鹽類等N-醯基胺基酸鹽、2-烷基-N-羧甲基-N-經乙基咪ϋ坐鏽甜菜鹼、麥芽糖醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚 25 200825050 甘油脂肪酸酯、脂肪酸二乙醇醯胺、聚環氧乙烯山梨糠醇單硬脂酸酯、聚環氧乙烯硬化篦麻油、聚環氧乙烯脂肪酸酯等。該等可使用i種或是併用2種以上。〈界面活性劑> 5 界面活性劑可使用陰離子界面活性劑、陽離子界面活性劑、非離子性界面活性劑、兩性離子界面活性劑中之任一種。陰離子界面活性劑可列舉如··月桂基硫酸鈉、肉莖蔻基石瓜酸鈉、N-月桂醯基肌胺酸鈉、队肉苴蔻醯基肌胺酸鈉、 10十二基苯磺酸鈉、加氫椰子脂肪酸單甘油酯單硫酸鈉、月桂基磺乙酸鈉、α-烯烴磺酸鈉、^棕櫚醯基麩胺酸鈉等之 Ν-醯基麵胺酸鹽、Ν-甲基醯基牛磺酸鈉等沁醯基牛磺酸鹽等。非離子界面活性劑可列舉如：蔗糖脂肪酸酯、麥芽糖月曰肪酸酯等蔗糖脂肪酸酯；麥芽糖醇脂肪酸酯、内半縮酸脂肪酸酉旨等之糖醇脂肪酸醋；垸醇酿胺；聚環氧乙稀山梨糖醇單硬脂酸醋等之聚環氧乙烯山梨糖醇脂肪酸醋·，聚氧乙烯硬化篦麻油等之聚環氧乙烯脂肪酸酯、月桂酸單或二乙醇醯胺等之脂肪酸二乙醇酿胺；山梨糖醇脂肪酸驗、 ?灵壞氧乙稀南級醇醚、聚環氧乙稀聚環氧丙稀共聚合物、 20聚環氧乙稀聚環氧丙稀脂肪酸醋、聚甘油脂肪酸酷、 Pluronic等。此外，兩性離子界.面活性劑可列舉如2_烷基七、魏曱基-N-經乙基t坐鏽甜菜驗、队月桂基二胺基乙基甘胺酸、N-肉莖葱基二胺基乙基甘胺酸等之队烧基二胺基乙基甘胺酸或N-烷基-1-羥乙基咪唑鏽甜菜鹼鈉等。該等界面活 26 200825050 性劑可單獨使用’亦可併用2種以上。 <甜味劑> 糖精鈉、阿斯巴甜、甜菊糖酐⑼evi〇side)、甜菊萃取、對甲氣基桂皮駿、新撥皮普二氫查爾g同（ne〇heSperidine . 5 dihydrochalc⑽e)、紫蘇糖（perillartine)、甘草素 (G1ycyrrhizin)、索馬甜(Thaumatin)等。該等可使用1種或是併用2種以上。 <防腐劑> 對~苯甲酸甲醋（methylparaben)、對經苯甲酸乙酉旨、對 10經苯甲酸丙酯、對羥苯甲酸丁酯等對羥苯甲酸酯類；苯甲酸鈉、苯氧基乙醇、鹽酸烷基二胺基乙基甘胺酸等。該等可使用1種或是併用2種以上。 <香料成分> 1-薄荷腦、茴香腦（anethole)、薄荷酮(menthone)、白千 15 層腦(cii^〇le)、檸檬烯、碳、水楊酸甲酯、丁酸乙酯、丁香酚(eugenoi)、百里酚(thymol)、正癸醇、香茅醇(citr〇nell〇1)、 α-terepineol、乙酸香茅 g旨（Citronellylacetate)、沉香醇 (11職1〇〇1)、乙基沉香醇、香草盤(vanillin)、百里紛、胡椒薄荷、桂皮酸、反-2-己烯酸(trans-2-hexenal)等。該等可使用1 20 種或併用2種以上。此外，該等成分可使用純品（純化物），但並不限於此，亦可以粗純化物（含有該等成分之精油等）之狀態來配合(例如，檸檬油、柑橘油、鼠尾草油、迷迭香油、桂皮油、多香果油、桂葉油、紫蘇油、冬綠油、丁香油、尤加利油等）。 27 200825050 再者，除了前述香料成分外，亦可在不妨礙本發明效果之犯圍内配合脂肪族醇及其酯、萜烯(terpene)系烴、苯酚醚、醛、s同、内酯等香料成分或精油。配合香料成分時，其配合量可例示如：於口腔用組成物全體100重量％中佔 5 〇·〇2〜2重量％之範圍。 <抗菌成分> 銀、銅及辞等抗菌性金屬或其水難溶性金屬鹽(如氧化銀氯化銀奴I銀、構酸銀、氫氧化銅、葡糖酸銅、氧化鋅、榉檬酸鋅、硬脂酸鋅、十一烯酸辞、氫氧化辞、草 10酸鋅、磷酸辞等）；鋼葉綠素、氯化十六烷基吼啶鑌、羥基氣本胺（benzalkonium chloride)、三氯沙、搶木醇 (Hinokitiol)、氯化溶菌酶等。 <防腐成分> 各種對羥苯甲酸酯、苯甲酸鈉及三氣沙等非離子性抗 15菌劑，氯化苯胺松寧、氯化十六烷基吡啶鏽等陽離子性抗菌劑等。 <口腔用有效成分> 氯化溶菌酶、氟化鈉、氟化鉀、單氟磷酸鈉、聚乙二醇、聚乙烯π比洛烧酮、檜木醇、抗壞血酸、抗壞血酸鹽類、 20 chk)rhexidine鹽類、氯化十六烷基吡啶鑌、羥基氯苯胺、氯化苯胺松寧、甜沒藥醇(bisabolol)、三氯沙、異丙基曱基苯酚、乙酸生育醇、ε-胺基己酸、傳明酸(tranexamic acid)、羥基尿囊素鋁、乳酸鋁、二氫膽固醇(Dihydrocholesterol)、甘草酸(Glycyrrhetinic acid)、甘草酸鹽類、銅葉綠素鹽、氯 28 200825050 化納、愈創木奠（Guaiazillene)績酸鹽、葡聚糖酶 (dextranase)、鹽酸。比哆醇(pyrid〇xine HC1)、傳明酸、氯化鈉、維生素C及E、各種酵素(如葡聚糖酶、澱粉酶、蛋白酶、 mutanase、果膠酶等）、奠、聚磷酸鹽等之牙結石預防劑、 5聚乙二醇及聚乙烯吡咯烷酮等尼古丁去除劑、乳酸鋁及硝酸鉀等過敏預防劑等。該等可使用丨種或併用2種以上。 <其他> 藍色1號等色素、氧化鈦等顏料、二丁基羥基甲苯等抗氧化劑、命乾餾液、麵胺酸鈉等矯味劑等。 10 此外，本發明之口腔用組成物可依照常法而製得，其製造方法並未特別受限。另，所得黏狀牙膏等口腔用組成物<以填充於銘管、層積管、玻璃蒸錢管、塑膠管、塑膠瓶、喷霧容器等之形態來製造或販賣，使用時再從其中取出使用。八 15 20 依據本發明之口腔用組成物，可抑制牙周病原性細菌在口腔内形成生物膜，或是去除業已形成之生物膜，因此可有效防止菌叢之產生。此外，同時配合有抗菌劑時，該抗菌效果更為提高，而可提供溶菌斑形成抑制效果及抗菌效果更優異之π腔用組成物。因此，本發日月之口腔用組成物π有效用於預m療牙齦炎及牙齦疾病（如齒槽腺漏）等口腔疾病。再者，本發明之σ腔用組成物可有效地用在預防或去除因牙齦炎或牙齦疾病（如齒槽膿漏等）而引起之口臭0 實施例 29 200825050 茲列舉本發明醯胺化合物（1)之製造例及試驗例如下，以使本發明更為明確，但本發明並不侷限於此等内容。製造例1 製造N-(吡咯啶-3-基）十二醯基醯胺（la-1) 使十二烧酸氯〇.22g(lmmol)與3-胺基吼略〇定 5 〇.18g(2.1mmol)溶解於二氯甲烷i〇mi中，冰冷下攪拌約12 小時。減壓濃縮反應液，再以乙酸乙酯抽提所得殘渣。以稀鹽酸及飽和食鹽水洗淨所得乙酸乙酯層，以硫酸鐫乾燥後，減壓濃縮之。使所得殘渣以二氧化矽凝膠層析法(展開溶劑：己烷/乙酸乙酯=3/7)純化，而製得下式所示N-(吡嘻 10 唆-3-基）十二醯基驢胺（化合物ia_i)。【化9】

ΟNH-C

(la-1) 收量：0.18g(〇.69mmol) 收率：69% 15 ^-NMR^DCls, 500MHz) ：0.90ppm(t, 3H), 1.28ppm(m, 16H)，1.64ppm(t，2H)，1.76ppm(m，1H)，2.00ppm(br，1H)， 2.13ppm(m，1H)，2.27ppm(t，2H)，3.24ppm(m，1H)， 3.51ppm(m，1H)，3.67ppm(m，3H)。製造例2_製造N_(吡咯啶-3-基)癸醯基醯胺(化合物la-2) 20 使用癸烷酸氣取代十二烷酸氯，與製造例1同樣地進行操作，而製得下式所示之N-(吡咯啶-3-基)癸醯基醯胺（化合物la-2)。 30 200825050 【化10】

Ο Ν Η— (la-2) 收量：0.15g(0.62mmol) 收率：62% 5 1H-NMR(CDCl3, 500MHz) ： 0.88ppm(t, 3H), 1.29ppm(m, 12H)，1.65ppm(m，2H)，1.88ppm(m，1H)，2.10ppm(m，1H)， 2.26ppm(m, 2H), 3.21ppm(m，1H) , 3.49ppm(m，1H)， 3.65ppm(m，3H)，8.59ppm(br，1H)。製造例3 製造N-(哌啶基）十二醯基醯胺（lb-1) 1〇使用4·胺基哌啶取代3-胺基吡咯啶，與製造例1同樣地進行操作，而製得下式所示之Ν-(哌啶-4-基）十二醯基醯胺 (lb-Ι) 〇【化11】

Ο

II (lb-1) 15 收量：0.16g(0.56mmol) 收率：56% i-NMRXCDCh，500MHz) :0.88ppm(t，3H)，1.27ppm(m， 18H)，l.59ppin(m，2H)，1.86ppm(m，2H)，2.30ppm(t，2H)， 2.68ppm(t, 1H)，2.89ppm(m，1H)，3.05ppm(t, 1H)， 20 3.71ppm(d，1H)，4.51ppm(d，1H)。製造魁i 製造N-(哌啶-4_基)癸醯基醯胺（lb-2) 31 200825050 使用4-胺基派咬取代3-胺基比洛咬，並使用癸烧酸氯取代十二烧酸氣，與製造例1同樣地進行操作，而製得下式所示之N-(哌啶-4-基)癸醯基醯胺（lb-2)。【化12】〇 5 (lb-2) 收量：0.16g(0.64mmol) 收率：64% H-NMR(CDCl3, 500MHz). 0.87ppm(t, 3H), 1.25ppm(m, 14H)，1.59ppm(m，2H)，1.82ppm(m，2H), 2.31ppm(m, 2H)， 2.67ppm(t，1H)，2.90ppm(m，1H)，3.06ppm(m，1H)， 3-8lppm(m，1H)，4.50ppm(m，1H)，8.00ppm(br，1H)。复益金II製造N-(吡咯啶-1-基）十二醯基醯胺(化合物1C_1) 使用1-胺基吡咯啶取代3-胺基吡咯啶，與製造例1同樣地進行操作，而製得下式所示之N-(吼洛咬_ι_基）十二酷基 15 酸胺（化合物lc-Ι)。【化13】 (lc-l) 收量·· 0.21g(0.78mmol) 收率：78% ^-NMRCCDCls, 500MHz) ：0.88ppm(t, 3H), 1.28ppm(m, 32 200825050 16H)，1.62ppm(m，2H), 1.88ppm(m，5H)，2.06ppm(m，1H)， 2.47ppm(m，2H)，2.91ppm(t，2H)，6.11ppm(br，1H)。製造例6 製造N-(吡咯啶-1-基)-3-羥基十二醯基醯胺（化合物lc-2) 5 (1)合成3-羥基癸酸乙酯於裝設有Dienstag裝置之回流裝置中裝入業已藉鹽酸作活性化處理之鋅7.8g(120mmol)與苯25ml並加熱回流。直接滴定加入癸醇15.6g(100mmol)與溴乙酸乙醋18.4g (11 Ommol)之混合液，約6小時後冷卻至室溫，加入50% (w/w) 10 硫酸後分液。採取有機層並以硫酸鎂乾燥後，減壓濃縮之。使所得殘渣以二氧化矽凝膠層析法(展開溶劑：己烷/乙酸乙酯二2/8)純化，而製得3-羥基癸酸乙酯。收量：30.6g(93mmol) 收率：93% 15 H-NMR(CDC13, 500MHz): 0.91ppm(t，3H)，1.28ppm(m， 17H)，1.44ppm(m，2H)，2.43ppm(m，2H)，4.02ppm(m，1H), 4.18ppm(q，2H)。 (2)製造3-羥基癸酸使鈾述⑴所得3-經基癸酸乙g旨i6.5g(50mmol)與氳氧 20化經10.〇g(250mm〇l)溶解於四氫呋喃50ml與水100ml之混合液’並以室溫攪拌約12小時。於反應液中加入稀鹽酸中和後，於減壓下濃縮，再以乙酸乙酯抽提所得殘渣。以飽和食鹽水洗淨乙酸乙酯層後，再以硫酸鎂乾燥並減壓濃縮之。使所得殘渣以二氧化矽凝膠層析法(展開溶劑：乙酸乙 33 200825050 酯/甲醇= 4/6)純化，而製得3-經基癸醯基酸(收率=90%)。收量：12.2g(45mmol) 收率：90% H-NMR(CDCl3, 500MHz):0.86ppm(t，3H)，1.25ppm(m， 5 14H)，1.33ppm(m，2H)，2.31ppm(m，2H)，3.79ppm(m，1H)。 (3)製造Ν-(σ比洛咬-1-基)-3-經基十二酿基驢胺使前述(2)所得3-羥基十二酸〇.24g(l.lmmol)與1-胺基吡咯啶0.09g(lmmol)溶解於二氣甲烷l〇ml，並加入二甲基胺基吡啶〇.13g(l.lmmol)及二異丙基乙基胺〇.l5g(1.2mmol) ίο 後，加入1-乙基-3-二曱基胺基丙基碳二亞胺〇.21g(l.lmmol)。以室溫攪拌約12小時，減壓濃縮後，以乙酸乙酯抽提所得殘渣。再以飽和食鹽水洗淨乙酸乙酯層，以硫酸鎂乾燥後，減壓濃縮之。使所得殘渣以二氧化矽凝膠層析法(展開溶劑：乙酸乙酯/曱醇= 8/2)純化，製得下式所示N-(吡咯啶-1-基)-3-羥基十二醯基醯胺(化合物lc-2)。【化14】

Cn -

〇 NH-C

OH

(lc-2) 收量：0.01g(0.35mmol) 收率：35% 20 W-NMR^CDCls，500MHz): 0.88ppm(t，3H)，1.26ppm(m， 14H)，1.43ppm(m，2H)，1.58ppm(m，1H)，2.24ppm(m，3H)， 2.55ppm(m，2H)，3.81ppm(m，2H)，3.86ppm(m，2H)， 4.04ppm(m，1H)。 34 200825050 製造例7 製造N-(娘咬-1-基）十二醯基酸胺（化合物ld-1) 使用1-胺基哌啶取代3_胺基°比咯啶，與製造例1相同地進行操作，製得下式所示N-(哌啶-1·基）十二醯基醯胺(化合物ld-Ι)。 5【化15】 (ld-1) \_^Ν-ΝΗ - 收量：0.24g(0.84mmol) 收率：84% iH-NMR^CDCh，500MHz) :0.87ppm(t，3H)，1.3lppm(m， 10 17H)，1.55ppm(m，7H)，2.06ppm(dt，d=440Hz，2H)， 2.48ppm(dm，d=440Hz，2H)，2.67ppm(dm，d=400Hz，2H), 6.32ppm(br，1H)。 15 試驗例1 對綠膿桿菌之生物膜形成抑制效果的評估試驗使用第1圖所示流動腔系統，就前述製造、如巧所製造之各酿胺化合物[化合物1、1 1 以及作為比較例之下式所示各比較化合物i 膿桿菌之生物膜形成抑制作用。 ld-l] ’言平估對於綠【化16】 <比較化合物1>

35 200825050 <比較化合物2〉

N <比較化合物3>

5 〈流動腔系統(flowcell system)〉以石夕管⑹連結培養瓶⑴、螺動泵（peristaltic pump)Q)、玻璃腔(幻及廢液瓶Q)，使培養瓶(jj中之培養基 (呈)可透過蠕動泵(幻而可送至玻璃腔(生)内。蠕動泵(之)與活栓(也)之間設有空氣去除部Q)以去除混入之空氣。用於本 10 流動腔系統之器具係使用預先經γ射線滅菌或加熱釜滅菌者0 如後述，於玻璃腔(生)内培養細菌，使腔室内壁形成生物膜’使含有前述各醯胺化合物之試驗液流動其中，並觀察此時之生物膜狀態，即可評估該化合物之生物膜形成抑 15 制作用。此外，生物膜之狀態可以螢光共焦點顯微鏡(Leica TCSSP2，萊卡社製)觀察之。 <材料〉 :細圔·以電穿孔(electropomtion)法將pTdk-LVAgfp質粒導入綠膿桿菌PAQ1株中，使Green Fluorescent Protein表 20 現，使用此種經轉形之綠膿桿菌PA01株（以下，稱為「gfp 36 200825050 表現 PA01 株」，參照 Teresa R. et al·，Applied and Environmental Microbiology，Apr. 2001，ρ·1865-1873) o 培養基：預培養係使用含有30mM葡萄糖之FAB培養基，正式培養則使用含0.3Mm葡萄糖之FAB培養基。 5 含葡萄糖之FAB培養基:於由30mM葡萄糖或〇.3mM葡萄糖、15mM硫酸銨、33.7mM構酸氫二納二水合物、22.1mM 磷酸二氫鉀、51.7mM氣化鈉、〇.47mM氣化鎂、〇.〇8mM氯化鈣及下述0.1%追蹤金屬溶液構成之水溶液中，加入 200pg/mL之卡苯尼西林(Carbenicillin)來進行調製。

10 ii縱金屬溶液:含有1.16mM硫酸鈣二水合物、〇.72mM 硫酸鐵七水合物、0.08mM硫酸猛單水合物、〇.〇8mM硫酸銅五水合物、0.07mM硫酸鋅七水合物、〇.〇4mM硫酸録七水合物、0.04mM過锰酸鈉單水合物及〇.〇8Mm侧酸之水溶液。 1 液··於含有30mM葡萄糖之FAB培養基中植入gfp表 15 現PA01株，於37°C恒溫槽中振盪培養一夜，將所得隔夜培養液以含30Mm葡萄糖之FAB培養基稀釋至〇D590=(U而調製出。遂驗液及對照試驗液: 里驗液：使製造例1、3及5〜7所製造之化合物ia-i、 20 lb-1、lc-1、1〇2或ld-1以及比較化合物1〜3各自溶解於二曱基亞石風(DMSO)而製成1〇〇〜250μΜ之DMSO溶液，接著將各DMSO溶液加入含有〇.3mM葡萄糖之FAB培養基製成試驗液，使各化合物之濃度為〇·1%(ν/ν)。對照試驗液:使用不含前述化合物之DMSO，並與試 37 200825050 驗液同樣地進行調製，而製成對照試驗液。 <試驗方法> 以70容量％乙醇裝滿流動腔系統内，並靜置12小時以上使系統内部滅菌。接著，以蠕動泵(2)使業已通過膜式過 5濾為'(赵)之空氣送至流動腔系統内，再使系統内部乾燥後，以含有0.3mM葡萄糖2FAB培養基裝滿之。使用注射器將菌液500μί從上面注入玻璃腔(£)内，關閉3方活栓後密栓玻璃腔，並以室溫靜置培養丨小時。靜置培養後，打開2處之3方活栓处），使各試驗液 10或對照試驗液以流速200μί/分流通，再從玻璃腔上方ρ螢光共焦點顯微鏡立體地經時觀察（1小時後、48小時後、60 小時後、72小時後、84小時後）附著在玻璃腔内壁之綠膿桿囷（gfp表現ΡΑ01株)形成生物膜之狀態。此外，每36小時替換新鮮之試驗液及對照試驗液。 15 將使用试驗液(化合物la-1、lb-1、lc-1、lc-2、ld-Ι或比較化合物1〜3)時之生物膜狀況與使用對照試驗液時之生物膜狀況(control試驗)作對比，並將結果示於第2〜8圖。此外’第2〜7圖係依據玻璃腔内壁表面圖與截面圖（橫截面與縱截面），將附著於玻璃腔内壁之綠膿桿菌（gfp表現^(^株) 2〇的狀態作立體顯示者。從鈾述結果可知，使用對照試驗液之contr〇l試驗中，綠膿桿菌（gfp表現PAOl株)形成具厚度之巨大生物膜，而使用含有化合物la-1、lb-1、1〇1、lc-2或ld-Ι之試驗液時，均未見到此種生物膜。另一方面，使用含有比較化合物1〜3 38 200825050 膜之作用之試驗液時，與control試驗相同，均可見生物膜之步由此一事實可確認，前述製造例1、3及5〜7所調製之化八 la-1、lb-1、lc-1、lc-2及ld-Ι具有抑制綠膿桿菌形成二斗达验例2對牙周病原性細菌之生物膜形成抑制效估試驗 f 與試驗例1相同，使用第1圖之流動腔系統，評估々乂製造例1、3、5及6所製造之各醯胺化合物[化合物丨 a lb-1、lc-1、lc-2]對於牙周病原性細菌之生物膜形成和帝 10 作用 <材料> !田菌:使用牙周病原性細菌之牙酿卟琳單月包* (Porphvromonas gingivalis)381棟（臨庆株)。培氧基：使用含有氣化血紅素(hemin)5pg/L及鉀蔡酉昆 15 (menadione) 1 pg/L 之 GAM培養基。菌液：於前述GAM培養基中殖入該菌株，培養至呈固定相（OD550= 1.8)，並以該GAM培養基稀釋至約20倍。試驗液及掛照試驗液：試驗液:使實施例1、3、5及6所製造之化合物uq、 20 lb-1、lc-1、lc-2以及作為比較例之比較化合物1、2各自溶解於二甲基亞砜(DMSO)成為1〇〇μΜ以製成DMSO溶液，接著將各DMSO溶液加入前述菌液而製成試驗液，使各化合物之濃度為0·1%(ν/ν)。對照試驗液••使用不含前述化合物之DMSO，與試驗 39 200825050 液相同地調製成對照試驗液。 <试驗方法> 將流動腔系統（參照第1圖）之玻璃腔(4)換為不鏽鋼腔 (3x7x120mm)，於該腔内設置1〇個羥磷灰石（HA)盤（直經 5 6mm，厚lmm)。HA盤使用經一夜唾液處理者。使各試驗液或對照試驗液以流速8mL/分流動14天。此外，每2日更換新鮮之試驗液及對照試驗液。培養結束後，將HA盤浸潰於滅菌蒸餾水300μΙ^中，並以4 C進行30分鐘超音波處理，剝除已形成於ha盤之生物 10 膜’並使其懸濁於蒸餾水中。取該懸濁液ΙΟΟμί，並以吸光度计（型式C〇75〇〇 colorimeter，FUNAKOSHI社製）測定（測定波長·· 550nm)濁度。

於所得OD值中去除最大值與最小值，求出平均〇D

值。此外，以使用對照試驗液之試驗所得濁度作為對照〇D 15值，同樣地求出平均值（對照平均OD值），並依下式求出生物膜形成抑制率(抑制率）。【數式1】生物跡成抑制率(％)={(平均平均對照⑽值))x勘茲將結果示於表1。

40 200825050 從此結果可知，進行試驗之化合物la-1、11ν1、1(n1及 lc-2均具有抑制牙周病原性細菌形成生物膜之作用。莖盤ϋΐ綠膿桿菌生物膜剝離去除效果之評估試驗使用第1圖所示流動腔系统，評估前述製造例製造例 5 1、3及5〜6所製造之各醯胺化合物（化合物以丨、k j 或1〇2)以及作為比較例之比較化合物u的生物膜剝離去除作用。具體來說，於玻璃腔(公内培養細菌而讓腔室内壁形成生物膜，並使含有前述各醯胺化合物之試驗液流動其中， 10觀察此時之生物膜狀態，即可評估該化合物之生物膜剝離去除作用。此外，生物膜之狀態可以螢光共焦點顯微鏡 (LeicaTCS SP2,萊卡社製)觀察之。 <材料> —^ ·與試驗例1相同，使用gfp表現PAOl株。 15 培氧基、含葡萄糖之fab培養基、追蹤金屬溶液以及菌液均使用相同於試驗例1之方法所調製者。及對照試驗液: :使製造例1、3及5〜6所製造之化合物以巧、 lb-1、lc-i、1(>2以及比較化合物ι〜3各自溶解於二甲基亞 2〇砜(DMSO)成為1〇〇μΜ以製成dMSO溶液，接著將各DMs〇溶液加入含〇·3πιΜ之FAB培養基而製成試驗液，使各化合物之》辰度為0 1%(ν/ν)。對里鼓驗液:以不含前述化合物之DMSO作為對照試驗液。 41 200825050 <試驗方法> 以70容量％乙醇裝滿流動腔系統内，並靜置12小時以上使系統内部滅菌。接著，以蠕動泵(2)使業已通過膜式過滤器（M)之空氣送至流動腔系統内，再使系統内部乾燥後， 5以含有0.3mM葡萄糖之FAB培養基裝滿之。使用注射器將菌液500μί從上面注入玻璃腔(£)内，關閉3方活栓(2^，边)後密栓玻璃腔，並以室溫靜置培養1小時。靜置培養後，打開2處之3方活栓(h，处），使各試驗液或對照試驗液以流速200μί/分流通，再從玻璃腔上方以螢 10光共焦點顯微鏡立體地經時觀察(3日後、4日後、5日後、ό 曰後、7日後及1〇日後）附著在玻璃腔内壁之綠膿桿菌仏邙表現PA01株)形成生物膜之狀態。此外，每36小時替換新鮮之试驗液及對照試驗液。茲將使用對照試驗液時之生物膜狀M(c〇ntr〇1試驗）示 15於第9圖。此外，第9圖中之各影像係依據玻璃腔内壁表面圖與截面圖（橫截面與縱截面），將附著於玻璃腔内壁之綠膿桿菌（gfp表現PA01株）的狀態作立體顯示者。此外，各自將使用含化合物la-1、lb-1、lc-l或lc-2之試驗液時的生物膜狀態顯示於第10〜13圖，以及將使用含有比較化合物丨〜3之 20試驗液時的生物膜狀態顯示於第14〜16圖。從前述結果可知，使用對照試驗液之c〇mr〇;u<驗中，綠膿桿菌（gfp表現PAOl株)形成具厚度之巨大生物膜，其於培養第10天更加發達而巨大化。相對於此，使用含有化合物化合物la-1、lb-1、lc_；utlc_2之試驗液時，觀察到所形 42 200825050 成之生物膜隨著時間消失（第10〜13圖）。此外，透過目測觀察’觀察到已形成之生物膜徐徐剝離，生物膜的小碎片從腔内流出。另’含有化合物lc-Ι或lc-2之試驗液則可見生物膜暫時減少後再增加(培養6日後），之後再次消失（第12及13 5圖被涊為是反覆進行剝離與形成。另一方面，使用含有比較化合物1〜3之試驗液時，並未發現生物膜消失（図 14〜16)。由該等事實可知，前述製造例1、3及5〜6所調製之化合物la-1、lb-1、ic-1&lc__2具有剝離去除業已形成之生物膜 10 的作用。琶唐例1殺菌效果之評估試驗依照 CLSI(M7-A7)2006」（Clinical and Laboratory Standards Institute、M7-A7、Methods for Dilution

Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow 15 Aerobically; Approved Standard-Seventh Edition，2006)所制定之液體稀釋法，測定及評估後述各被驗化合物對綠膿桿囟、大腸桿菌及金黃色葡萄球菌之殺菌作用。被驗化合物 (1)卡本西林(Carbenicillin，CBPC)、 20 (2)頭孢他啶(Ceftazidime，CAZ)、 (3) 泰百黴素(Tobramycin，TOB)、 (4) 阿齊黴素(Azithromycin，AZM)、 (5) 化合物la-l(製造例1)之鹽酸鹽 (6) 化合物la-2(製造例2)之鹽酸鹽 43 200825050 (7) 化合物lb-l(製造例3)之鹽酸鹽 (8) 化合物lb-2(製造例4)之鹽酸鹽此外’（1)〜(4)為習知之抗生物質。 m細菌J：分讓自日本國東京大學尖端科学技術中心 5 营教授）綠腹桿菌：Pseudomonas aeruginosa PAOl 綠版桿菌：Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 大腸桿菌：Escherichia coli ATCC 25922 金黃色葡萄球菌：Staphylococcus aureus ATCC 29213 0 金黃色葡萄球菌：Staphylococcus aureus Methicillin resistant (MRSA) ATCC 43300 <試驗方法> 將前述各評估細菌接種於TSB培養基(BD社製： Bacto TSB Broth) ’以3：7°C培養一夜。將培養液塗佈於TSB洋菜 5皿，培養約20小時，使其形成菌落。從洋菜皿取出3〜5個菌落，將業經平均化者接種於於TSB培養基4mL中，以35°C培養至菌數達1〜2xl〇8CFU/mL。於此，菌數之計算如下：經時測定培養液於59〇11111之吸光度，以達到與標準液（〇·5 McFadand液）同等濁度為準，判斷菌數為1〜2xl〇8CFU/mL。〇將别述方法所得之菌培養液於15分鐘内稀釋到1〇倍，再接種至評估用96井皿，各井耻。於此，評估用％井孤係使用已滅菌完成之口底96井皿(BD社製：falC0n35-3918)，且每井已預先分注有10(^L之MH培養基(BD社製· BBL MH Broth)者。接種菌培養液後，於15分鐘内添加各被驗化合物 44 200825050 至成為2倍稀釋系列，並以37°C靜培養18小時。 MIC之判定如下：以目測觀察，與未加入被驗化合物時相較下’形成於各井底部之沉澱凝集物的直徑減少8〇% 以上日守之〉辰度判定為S(Susceptible)。另一方面，直徑減少 5不足80%者則判定為R (Resistant)，難以藉目測判定之濃度則為【(Intermediate)。 <試驗結果> 茲將習知化合物（1)〜(4)(CBPC，CΑΖ,ΤΟΒ，AZM)用作殺菌劑之結果顯示於表2。表2中，右欄為依照 10 「CLSI(M100_S 16)2006」（Clinical and Laboratory Standards

Institute 、M100-S16 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Sixteenth Informational Supplement，2006)制定之液體稀釋法所測得殺菌作用之習知資訊。 15 45 200825050 表2 <試驗結果> 〈習知資訊> P- aerug/nosa PA01 MIC ίυα/mL) R I S CBPC <64 >128 CAZ <0.5 1 >2 TOB <0.25 0.5 >1 AZM <32 64 >128 R aeruginosa ATCC 27853 MIC {yg/mU R I S CBPC <64 128 >256 CAZ <1 2 >4 TOB <0,25 0.5 >1 AZM S32 64 >128 £co« ATCC 25922 MIC mimu R 1 S CBPC <8 16 >32 CAZ <0.063 0.125 >0.25 TOB ^0,25 0,5 AZM <2 4 >8 ；S, aureus ATCC 29213 MIC iua/mLi R i S CBPC <8 >16 CAZ <2 4 TOB mi25 0.25 之0.5 AZM <0,5 1 >2 MRSA ATCC 43300 MIC (mlmL) R I S CBPC S16 32 >64 CAZ <4 8 >16 TOB <64 128 >256 AZM $1024 mmm I P. aeruginosa ATCC 278S3 1 MIC iuq/mU from M100-S1 $ CBPC none CAZ 1-4 TOB 0.25-1 I AZM none | £ coil ATCC 25922 i MIC iua/mU from M100-S16 ! CBPC none CAZ 0,06-0.5 TOB 0.25-1 AZM none S.aumus fiCTCC 29213 I MIC Imlml) from M100*S16 CBPC none CAZ 4-16 TOB 0.12*1 AZM 0.5-2 由此結果可知，化合物（1)〜(4)顯示出與習知資訊相同 5 之殺菌作用，而可確認本試驗之方法可正確地評估出被驗化合物之殺菌作用。茲將本發明化合物la-1、la-2、lb-Ι及lb-2之各鹽酸鹽的結果不於表3。 46 200825050 表3 化合物la-1之鹽酸鹽 MIC (Mg/mL) R I S P, aeruginosa PAOl <32 64 >128 P. aeruginosa ATCC 27853 <32 64 >128 E col! ATCC 25922 8 >16 S. aureus ATCC 29213 <4 8 >16 MRSA ATCC 43300 <4 8 >16 化合物la-2之鹽酸鹽 M(C (Mg/mL) R I S P. aeruginosa PAOl mn 一 >1024 R aeri/ginosa ATCC 27853 <512 —>1024 £ coti ATCC 2S922 <128 ™ >256 S. aumiis ATCC 29213 <128 ··_ >256 MRSA ATCC 43300 <128 — >256 化合物lb-1之鹽酸鹽 MIC (pg/mL) R ! S P. aeruginosa PAOl <32 64 >128 R aeruginosa ATCC 27853 <32 64 >128 E coii ATCC 25922 m matmamwrn >16 S：aumusfiJCC 29213 <4 8 >16 MRSA ATCC 43300 <4 8 >16 化合物lb-2之鹽酸鹽 MIC (Mg/mL) R 1 S R aBruginosa PAOl <512 _ >1024 R aBtugmosa ATCC 27853 <512 —>1024 £ c〇!i ATCC 25922 <128 — >256 S. aureus ATCC 2^213 i128 — >256 MRSA ATCC 43300 ^128 一 >256 上述結果明確顯示，該等化合物對於各細菌均具有不遜於既有抗生物質之抗菌活性。 47 200825050 【囷式簡單說明】第1圖顯示流動腔系統。第2圖顯示使賴驗液(化合物1&_卜膜形成狀況與使麟照試驗液時之生物膜形成狀 25〇μΜ)時之生物況（control) 對比的結果(試驗例1)。第_示使用試驗液(化合物⑹、況（control) 膜形成狀況與使用對照試驗液時之生物膜形成狀）代生物對比的結果(試驗例η。第4圖顯示使用試驗液(化合物^、刚_時之生物膜形成狀況與使射《試驗_之生物獅錢況(⑽㈣) 對比的結果(試驗例1)。第5圖顯示使用試驗液(化合物1(>2、1〇〇_時之生物膜形成狀況錢關照試驗液時之生祕形絲況(e_〇i) 對比的結果(試驗例1)。 15 第6圖顯示使用試驗液(化合物ld-1、10〇μΜ)時之生物膜形成狀況與使用對照試驗液時之生物膜形成I兄(co咖^ 對比的結果(試驗例1)。弟7圖顯示使用試驗液（比較化合物1及2、1〇〇μΜ)時之生物膜形成狀況與使用對照試驗液時之生物膜形成狀況 20 (contro1)對比的結果(試驗例1)。弟8圖顯不使用試驗液（比較化合物3、ΙΟΟμΜ)時之生物膜形成狀況與使用對照試驗液時之生物膜形成狀況(c〇ntr〇1) 對比的結果(試驗例1)。第9圖顯示使用對照試驗液時之生物膜剝離除去狀況 48 200825050 (試驗例3)。第ίο圖顯示使用試驗液(化合物以」、1〇〇μΜ)時之生物膜剝離狀況(試驗例3)。第11圖顯示使用試驗液(化合物比―丨、1〇〇μΜ)時之生物 5 膜剝離狀況(試驗例3)。弟12圖顯示使用试驗液(化合物ic-i、時之生物膜剝離狀況(試驗例3)。弟13圖顯示使用试驗液(化合物ic-2、時之生物膜剝離狀況(試驗例3)。〇弟14圖顯示使用试驗液（比較化合物1、1⑻^μ)時之生物膜剝離狀況(試驗例3)。弟15圖顯示使用试驗液（比較化合物2、1⑻μΜ)時之生物膜剝離狀況(試驗例3)。第16圖顯示使用試驗液（比較化合物3、ι〇〇μΜ)時之生 15 物膜剝離狀況(試驗例3)。

I：主要元件符號說明；J 1 :培養瓶(Nunc社製品） 2:泵(4頻蠕動泵、ISMATEC社製品 ISM935) 2 :空氣去除部(轉用附有軟木塞之玻璃管柱者）全：玻璃腔(觀察用玻璃毛細管 lmmxlmmxj4mm 5 BioSurface

Technology社製品 FC91) 5 :廢液槽(Nunc社製品） 6 :石夕管((pl.5mm) 、丑：三方活栓(德爾莫社製品) 抱、选··膜式過遽器(〇·44μιη，密理波雅社製品） 2 :培養基 49 200825050 IQ:廢液 50

Claims

200825050 十、申請專利fe圍： 1. 一種通式（1)所示醯胺化合物或其鹽：【化1】 Ο R1 q-nh-c^Ar2 ⑴ 式中，R1為氫原子或氫氧基，R2為c5_12烷基；Q為下式（Q1)或(Q2)所示之取代基；【化2】

式中，η及m為0或1。 10 2.如申請專利範圍第1項之醯胺化合物或其鹽，其中該通式（1)中之Q為式(Q1)所示之取代基(但，m為0)。 3. 如申請專利範圍第1項之醯胺化合物或其鹽，其中該通式（1)中之Q為式(Q1)所示之取代基(但，m為1)。 4. 如申請專利範圍第1項之醯胺化合物或其鹽，其中該通 15 式（1)中之Q為式(Q2)所示之取代基(但，η為0)。 5. 如申請專利範圍第1項之醯胺化合物或其鹽，其中該通式（1)中之Q為式(Q2)所示之取代基(但，η為1)。 6. 如申請專利範圍第1項之醯胺化合物或其鹽，其中該通 51 200825050 式（i)所示之醯胺化合物係選自下迷者之至少一種化合物： N-卜比咯啶_3_基)癸醯基醯胺、 N-(n比咯啶_3_基）十二醯基醯胺、 (哌啶-4-基）癸醯基醯胺、 N-(哌啶基）十二醯基醯胺、 N十比略。定_1_基）十二醯基醯胺、 Ν-(°比咯啶-1-基)-3-經基十二醯基醯胺、 N-(哌啶基）十二醯基醯胺。 20 所構成之群組中 •-種生物膜剝離劑，係以如申請專利範圍第工至6項中任一項之醯胺化合物或其鹽作為有效成分者。 8·如申請專利範圍第7項之生物膜剝離劑，其中該生物膜係由綠膿桿菌或牙周病原性細菌所形成之生物膜。 9· 一種生物膜形成抑制劑，係以如申請專利範圍第〗至6 項中任一項之醯胺化合物或其鹽作為有效成分者。 1〇·如申請專利範圍第9項之生物膜形成抑制劑，其中該生二膜係由綠膿桿誠牙周病祕細菌卿成之生物膜。 Π·-種殺菌劑，係以如申請專利範圍第㈤項中任一項之騃胺化合物或其鹽作為有效成分者。 12.=請專利範圍第η項之殺菌劑，其中該醯胺化合物係二所示<取代基_或1)者。選自;利範圍第11項之殺菌劑，其中該醯胺化合物係卜述者所構成之群組中之 ^ N^(〇tb^ ^ 至夕一種化合物：各°疋_3-基)癸醯基醯胺、 52 200825050 N-(吡咯啶-3-基）十二醯基醯胺、 N-(哌啶-4-基)癸醯基醯胺、及 N-(哌啶-4-基）十二醯基醯胺。 14. 一種口腔用組成物，含有：如申請專利範圍第8項之生 5 物膜剝離劑，其係針對牙周病原性細菌所形成之生物膜者；或，如申請專利範圍第10項之生物膜形成抑制劑，其係針對牙周病原性細菌所形成之生物膜者；或是如申請專利範圍第11項之殺菌劑。 53 200825050 七、指定代表圖： (一）本案指定代表圖為：第（2 )圖。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： (無) 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： Ο R1 o-m-c^XR2 (1)