ES2535436T3

ES2535436T3 - Compuesto amídico o sal del mismo, e inhibidor de la formación de biopelícula, eliminador de biopelícula, y bactericida, utilizando cada uno el compuesto amídico o la sal del mismo

Info

Publication number: ES2535436T3
Application number: ES07830633.9T
Authority: ES
Inventors: Hiroaki Suga; Jun Igarashi
Original assignee: Otsuka Chemical Co Ltd; University of Tokyo NUC
Current assignee: Otsuka Chemical Co Ltd; University of Tokyo NUC
Priority date: 2006-10-27
Filing date: 2007-10-26
Publication date: 2015-05-11
Anticipated expiration: 2027-10-26
Also published as: JPWO2008050857A1; TW200825050A; EP2077260A4; ZA200902208B; RU2009120043A; BRPI0718014A2; AU2007310007A1; WO2008050857A1; CN101528686A; MX2009004558A; JP5247459B2; EP2077260B1; EP2077260A1

Abstract

Compuesto amídico representado por la fórmula general (1) o sal del mismo:**Fórmula** en la que R1 es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxilo, R2 es un grupo alquilo de C7-11, y Q es un sustituyente representado por la fórmula (Q1) o (Q2),**Fórmula** en las que n y m son 0 o 1, en las que, si Q es un sustituyente representado por la fórmula (Q2) en la que n es 0, R2 es un grupo alquilo de C7-10.

Description

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DESCRIPCIÓN

Compuesto amídico o sal del mismo, e inhibidor de la formación de biopelícula, eliminador de biopelícula, y bactericida, utilizando cada uno el compuesto amídico o la sal del mismo

Campo técnico

La presente invención se refiere a un nuevo compuesto amídico y a una sal del mismo que puede inhibir la formación de biopelícula, arrancar o eliminar biopelículas depositadas, o desinfectar. La presente invención se refiere además a un inhibidor de la formación de biopelícula, a un eliminador de la biopelícula (agente de extracción de biopelícula) y a un desinfectante que contienen el compuesto amídico o la sal del mismo como principio activo, y a la utilización de los mismos.

Antecedentes de la técnica

Un cierto tipo de microorganismo, tal como las bacterias u hongos, se adhiere a una superficie portadora y forma una colonia sobre ella. Cuando la colonia contiene un cierto número de células de bacterias, forma/segrega una sustancia orgánica tal como polisacárido o glicoproteína que se transforma en una biopelícula. Una biopelícula es parecida a un medio que permite que otros microorganismos entren y formen un grupo complicado de microorganismos en el interior. Tales depósitos de biopelícula se pueden encontrar en cualquier parte en el entorno natural, en áreas industriales, y en seres humanos. Tales depósitos de biopelícula provocan numerosos problemas, incluyendo aquellos en instalaciones industriales tales como la erosión de la tubería metálica en tuberías de drenaje de factorías, o fallos durante operaciones de las válvulas, la generación de bacterias de Legionella en bañeras de tipo circulante, así como diversas infecciones humanas que incluyen enfermedades de la piel tales como espinillas o inflamación de la piel, infecciones oculares tales como queratitis microbiana vía lentes de contacto, enfermedades intraorales tales como caries o periodontitis, u otras enfermedades tales como otitis media, prostatitis bacteriana, o neumonía por fibrosis quística.

Muchas de estas infecciones provocadas por biopelículas (infección por biopelícula), por ejemplo periodontitis, son intratables, y una razón para la intratabilidad es que los microorganismos en una biopelícula están cubiertos por una película (una matriz extracelular), y por lo tanto no entrarán directamente en contacto con células del sistema inmunitario o con sustancias antibacterianas. Otra razón es que las bacterias en una biopelícula tienen metabolismos muy lentos, que se piensa que también interfieren con los antibióticos, que muestran el efecto más grande en células que se dividen de forma activa. Por las razones anteriores, a fin de curar completamente infecciones por biopelícula, es necesario asegurar tanto la prevención de depósitos de biopelículas por microorganismos así como la eliminación de las biopelículas depositadas.

Las biopelículas se eliminan generalmente de forma física, por ejemplo eliminándolas mediante raspado con un cepillo, etc. Sin embargo, debido a que las biopelículas se adhieren generalmente firmemente a una superficie portadora, esto no es particularmente eficaz, incluso con muchísimo esfuerzo.

Debido a tales problemas existentes, los compuestos que pueden controlar el depósito de biopelículas atraen la atención. Por ejemplo, los documentos 1, 2 y 3 de patente describen la invención de un compuesto que tiene una cierta estructura amídica eficaz en el control de la deposición de biopelícula.

Documento 1 de patente: WO2004/016213

Documento 2 de patente: WO2002/088298

Documento 3 de patente: WO 2004/099175

Descripción de la invención

Sin embargo, los compuestos descritos en los Documentos 1 y 2 de patente no pueden arrancar o eliminar biopelículas ya formadas. La supresión o inhibición de la formación o deposición de biopelículas puede reducir en cierto grado el grosor de las biopelículas formadas o depositadas, o incluso puede destruir la película si los compuestos muestran efecto deseado. Sin embargo, puesto que los microorganismos en la película están todavía vivos, existe la posibilidad de que los microorganismos puedan formar nuevamente una biopelícula cuando disminuya o desaparezca el efecto del agente antibacteriano. Debido a esto, esta tecnología no es una solución final para diversos defectos de biopelículas tales como infecciones. Por lo tanto, tal fármaco para inhibir la formación o deposición de biopelícula no es suficiente para corregir los diversos defectos provocados por las biopelículas, o para curar completamente las infecciones por biopelícula. Por esta razón, ha existido una demanda de un fármaco que pueda arrancar o eliminar una biopelícula depositada.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un compuesto que sirva para arrancar o eliminar biopelículas depositadas, particularmente un nuevo compuesto que sirva tanto para inhibir la formación de biopelícula por

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microorganismos como para arrancar o eliminar biopelículas depositadas. La presente invención también proporciona un eliminador de biopelícula (incluyendo un agente de extracción) y un inhibidor de la formación de biopelícula que contienen como principio activo el compuesto, particularmente un eliminador de biopelícula y un inhibidor de la formación de biopelícula que tienen un cierto efecto sobre biopelículas formadas por bacterias tales

5 como Pseudomonas aeruginosa o bacterias patógenas de la periodontitis. La presente invención proporciona además un desinfectante que contiene el compuesto como principio activo. La presente invención proporciona además un producto que contiene el eliminador de biopelícula, el inhibidor de la formación de biopelícula, o el desinfectante, tal como una composición oral para prevenir o tratar enfermedades intraorales tales como periodontitis relacionadas con bacterias patógenas de la periodontitis.

10 Como resultado de intensos estudios, en el contexto de la presente invención se ha descubierto que un compuesto que presenta una cierta estructura amídica tiene el efecto de arrancar o eliminar biopelículas depositadas e inhibir la formación de biopelícula por microorganismos. También se ha descubierto que el compuesto amídico tiene actividad desinfectante en comparación con la de los antibióticos existentes. Debido a esta característica del compuesto, se

15 pudo completar la presente invención.

Los siguientes (I) a (V) están incluidos en el alcance de la presente invención.

(I) Nuevo compuesto amídico o sal del mismo

20 (I-1). Un compuesto amídico representado por la Fórmula General (1) o una sal del mismo:

imagen1

en la que R1 es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxilo, R2 es un grupo alquilo de C7-11, y Q es un sustituyente representado por la Fórmula (Q1) o (Q2),

imagen2

en las que n ym son 0ó 1,

en las que, si Q es un sustituyente representado por la Fórmula (Q2) en la que n es 0, R2 es un grupo alquilo 35 de C7-10.

(I-2). Un compuesto amídico o una sal del mismo según (I-1), en la que, en la Fórmula General (1), Q es un sustituyente representado por la Fórmula (Q1) en la que m es 0.

40 (I-3). Un compuesto amídico o una sal del mismo según (I-1), en la que, en la Fórmula General (1), Q es un sustituyente representado por la Fórmula (Q1) en la que m es 1.

(I-4). Un compuesto amídico o una sal del mismo según (I-1), en la que, en la Fórmula General (1), Q es un sustituyente representado por la Fórmula (Q2) en la que n es 0. 45 (I-5). Un compuesto amídico o una sal del mismo según (I-1), en la que, en la Fórmula General (1), Q es un sustituyente representado por la Fórmula (Q2) en la que n es 1.

(I-6). Un compuesto amídico o una sal del mismo según (I-1), en la que el compuesto amídico representado por 50 la Fórmula General (1) es al menos un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

N-(pirrolidin-3-il)decanoilamida, N-(pirrolidin-3-il)dodecanoilamida,

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N-(piperidin-4-il)decanoilamida, N-(piperidin-4-il)dodecanoilamida, N-(pirrolidin-1-il)dodecanoilamida, N-(pirrolidin-1-il)-3-hidroxidodecanoilamida,

5 N-(piperidin-1-il)dodecanoilamida.

(II) Eliminador de biopelícula (agente de extracción de biopelícula)

(II-1). Un eliminador de biopelícula, que contiene el compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera 10 de (I-1) a (I-6), como principio activo.

(II-2). Un eliminador de biopelícula según (II-1), en el que el eliminador de biopelícula elimina biopelículas formadas por Pseudomonas aeruginosa o bacterias patógenas de la periodontitis.

15 (II-3). Uso del compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6) como eliminador de biopelícula.

(II-4). Uso del compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6) para la preparación de un eliminador de biopelícula. 20 (II-5). Un compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6), usado como principio activo de un eliminador de biopelícula.

(III) Inhibidor de la formación de biopelícula 25

(III-1). Un inhibidor de la formación de biopelícula, que contiene el compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6), como principio activo.

(III-2). Un inhibidor de la formación de biopelícula según (III-1), en el que el inhibidor de la formación de 30 biopelícula inhibe la formación de biopelículas formadas por Pseudomonas aeruginosa o bacterias patógenas de la periodontitis.

(III-3). Uso del compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6), como un inhibidor de la formación de biopelícula. 35 (III-4). Uso del compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6), para la preparación de un inhibidor de la formación de biopelícula.

(III-5). Un compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6), usado como principio activo 40 de un inhibidor de la formación de biopelícula.

(IV) Desinfectante

(IV-1). Un desinfectante, que contiene el compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I45 6), como principio activo.

(IV-2). Un desinfectante, que contiene el compuesto amídico o sal del mismo según (I-2) o (I-3), como principio activo.

50 (IV-3). Un desinfectante según (IV-1), en el que el compuesto amídico es al menos un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

N-(pirrolidin-3-il)decanoilamida,

55 N-(pirrolidin-3-il)dodecanoilamida,

N-(piperidin-4-il)decanoilamida, y

N-(piperidin-4-il)dodecanoilamida. 60 (IV-4). Uso del compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6), preferiblemente (I-2) o (I-3), como desinfectante.

(IV-5). Uso del compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6), preferiblemente (I-2) o 65 (I-3), para la preparación de un desinfectante.

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(IV-6). Un compuesto amídico o sal del mismo según uno cualquiera de (I-1) a (I-6), preferiblemente (I-2) o (I-3), usado como principio activo de un desinfectante.

(V) Uso de un eliminador de biopelícula, un inhibidor de la formación de biopelícula, o un desinfectante 5

(V-1). Una composición oral que contiene el eliminador de biopelícula según (II-2) para arrancar o eliminar biopelículas formadas por bacterias patógenas de la periodontitis, el inhibidor de la formación de biopelícula según (III-2) para inhibir biopelículas formadas por bacterias patógenas de la periodontitis, o el desinfectante según (IV-1).

10 (V-2). Una composición oral según (V-1), para prevenir o aliviar enfermedades intraorales u olor oral provocados por bacterias patógenas de la periodontitis.

(V-3). Uso del eliminador de biopelícula según (II-2) para arrancar o eliminar biopelícula formada por bacterias

15 patógenas de la periodontitis, el inhibidor de la formación de biopelícula según (III-2) para inhibir la formación de biopelículas formadas por bacterias patógenas de la periodontitis, o el desinfectante según (IV-1), para la preparación de una composición oral.

(V-4). Uso según (V-3), en el que la composición oral evita o alivia enfermedades intraorales u olor oral 20 provocados por bacterias patógenas de la periodontitis.

(V-5). Un eliminador de biopelículas según (II-2) para arrancar o eliminar biopelículas formadas por bacterias patógenas de la periodontitis, un inhibidor de la formación de biopelícula según (III-2) para inhibir la formación de biopelículas formadas por bacterias patógenas de la periodontitis, o el desinfectante según

25 (IV-1), usado como principio activo de una composición oral.

(V-6). Un eliminador de biopelículas según (V-5), en el que la composición oral es una composición oral para prevenir o aliviar enfermedades intraorales u olor oral provocados por bacterias patógenas de la periodontitis.

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Breve descripción de los dibujos

La figura 1 muestra un sistema de celdas de circulación. 1: Botella de medio de cultivo (producto de Nunc), 2: Bomba (bomba peristáltica de 4 canales ISM935: producto de ISMATEC), 3: Sección de eliminación del aire (una

35 columna de vidrio con tapón modificada), 4: Celda de vidrio (capilar de vidrio de observación FC91 (1 mm x 1 mm x 14 mm): producto de BioSurface Technology), 5: Botella de fluido de desecho (producto de Nunc), 6: Tubo de silicio (ϕ 1,5 mm), 7a, 7b: Grifo de llave de tres vías (producto de Termo), 8a, 8b: Filtro de membrana (0,44 µm: producto de Millipore), 9: Medio de cultivo, 10: Fluido de desecho.

40 La figura 2 muestra una comparación entre el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo (Compuesto 1a-1, 250 µM) y el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (control) (Ejemplo 1 del Experimento).

La figura 3 muestra una comparación entre el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de

45 ensayo (Compuesto 1b-1, 250 µM) y el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (control) (Ejemplo 1 del Experimento).

La figura 4 muestra una comparación entre el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo (Compuesto 1c-1, 100 µM) y el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo

50 de control (control) (Ejemplo 1 del Experimento).

La figura 5 muestra una comparación entre el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo (Compuesto 1c-2, 100 µM) y el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (control) (Ejemplo 1 del Experimento).

55 La figura 6 muestra una comparación entre el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo (Compuesto 1d-1, 100 µM) y el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (control) (Ejemplo 1 del Experimento).

60 La figura 7 muestra una comparación entre el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo (Compuestos 1 y 2 Comparativos, 100 µM) y el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (control) (Ejemplo 1 del Experimento).

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La figura 8 muestra una comparación entre el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo (Compuesto 3 Comparativo, 100 µM) y el estado de la formación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (control) (Ejemplo 1 del Experimento).

5 La figura 9 muestra el estado de eliminación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (Ejemplo 3 del Experimento).

La figura 10 muestra el estado de eliminación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (Compuesto 1a-1 100 µM) (Ejemplo 3 del Experimento).

10 La figura 11 muestra el estado de eliminación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (Compuesto 1b-1 100 µM) (Ejemplo 3 del Experimento).

La figura 12 muestra el estado de eliminación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control 15 (Compuesto 1c-1 100 µM) (Ejemplo 3 del Experimento).

La figura 13 muestra el estado de eliminación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (Compuesto 1c-2 100 µM) (Ejemplo 3 del Experimento).

20 La figura 14 muestra el estado de eliminación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (Compuesto 1 Comparativo 100 µM) (Ejemplo 3 del Experimento).

La figura 15 muestra el estado de eliminación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (Compuesto 2 Comparativo 100 µM) (Ejemplo 3 del Experimento).

25 La figura 16 muestra el estado de eliminación de biopelícula cuando se usa un líquido de ensayo de control (Compuesto 3 Comparativo 100 µM) (Ejemplo 3 del Experimento).

Mejor modo de poner en práctica la invención

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(I) Un nuevo compuesto amídico o sal del mismo

La presente invención proporciona un nuevo compuesto amídico que sirve para arrancar o eliminar películas depositadas, o para inhibir la formación de biopelícula. El compuesto amídico o sal del mismo es útil para un

35 principio activo del eliminador de biopelícula o inhibidor de la formación de biopelícula descrito más tarde. La presente invención también proporciona un nuevo compuesto amídico y sal del mismo que tiene actividad desinfectante. El compuesto amídico o sal del mismo es útil para un principio activo del desinfectante descrito a continuación.

40 La “biopelícula” de la presente invención se refiere a una secreción semejante a una película mucosa, formada por microorganismos, que se adhiere a las superficies de sólidos. En la biopelícula, muchos tipos de microorganismos coexistentes forman un complejo (colonia). La “biopelícula” también se puede describir como una agregación de microorganismos, rodeada por excremento semejante a cieno generado por el microorganismo. La biopelícula se puede adherir a sólidos inertes, o a sólidos tales como polímeros, plásticos, materiales cerámicos, metales, vidrio, o

45 hidroxiapatitas que carecen de una capacidad de autogobierno. Adicionalmente, por supuesto, el sólido puede ser piel, huesos, dientes, encía, tejidos o cualesquiera otras partes de organismos vivos.

El compuesto amídico se expresa mediante la siguiente Fórmula General (1).

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en las que n ym son 0ó 1.

5 En la Fórmula (1), R2 significa un grupo alquilo de C7-11 que incluye un grupo alquilo de C7-11 de cadena lineal o cadena ramificada, tal como 1-metil-1-etil-n-pentilo, n-heptilo, 2-heptilo, 1-etil-1,2-dimetil-n-propilo, 1-etil-2,2-dimetiln-propilo, n-octilo, 3-octilo, 4-metil-3-n-heptilo, 6-metil-2-n-heptilo, 2-propil-1-n-heptilo, 2,4,4-trimetil-1-n-pentilo, nnonilo, 2-nonilo, 2,6-dimetil-4-n-heptilo, 3-etil-2,2-dimetil-3-n-pentilo, 3,5,5-trimetil-1-n-hexilo, n-decilo, 2-decilo, 4decilo, 3,7-dimetil-1-n-octilo, 3,7-dimetil-3-n-octilo, n-undecilo, o n-dodecilo.

10 El grupo alquilo de C7-11 de cadena lineal o cadena ramificada es preferiblemente un grupo alquilo de C7-10. Los ejemplos del grupo alquilo particularmente preferido incluyen un grupo n-heptilo, un grupo n-octilo, un grupo n-nonilo, un grupo n-decilo, y un grupo n-undecilico, de cadena lineal.

15 En la Fórmula General (1), R1 puede ser un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxilo; sin embargo, se prefiere un átomo de hidrógeno.

En la Fórmula General (1), el sustituyente expresado como Q puede ser un sustituyente expresado como Q1 en el que m = 0 (grupo 3-pirrolidinilo) o en el que m = 1 (grupo 4-piperidilo). El sustituyente expresado como Q puede ser 20 un sustituyente expresado como Q2 en el que n = 0 (grupo 1-pirrolidinilo) o en el que n = 1 (grupo 1-piperidilo).

Más específicamente, el compuesto amídico de la presente invención representado por la Fórmula (1) se puede expresar específicamente como un compuesto amídico representado por las siguientes fórmulas (1a) a (1d).

imagen6

en las que R1 y R2 son iguales a los anteriores.

30 Más específicamente, el compuesto representado por la Fórmula (1a) corresponde al compuesto representado por la Fórmula General (1) en la que el sustituyente Q es Q1, en el que m = 0. El compuesto representado por la Fórmula (1b) corresponde a un compuesto representado por la Fórmula General (1) en la que el sustituyente Q es Q1, en el que m = 1. De manera similar, el compuesto representado por la Fórmula (1c) corresponde a un compuesto

35 representado por la Fórmula General (1) en la que el sustituyente Q es Q2, en el que n = 0. El compuesto representado por la Fórmula (1d) corresponde a un compuesto representado por la Fórmula General (1) en la que el sustituyente Q es Q2, en el que n = 1.

El compuesto amídico según la presente invención es preferiblemente un compuesto amídico representado por las

40 Fórmulas (1a) a (1d) en las que R1 es un átomo de hidrógeno, R2 es un grupo alquilo de C7-11, preferiblemente un grupo alquilo de C7-10. En este compuesto, R2 es preferiblemente un grupo alquilo de cadena lineal, tal como un grupo n-heptilo, un grupo n-octilo, un grupo n-nonilo, o un grupo n-decilo.

Obsérvese que el compuesto amídico representado por la Fórmula (1a) incluye un isómero representado por la

45 siguiente fórmula (1a’) o (1a”). Más específicamente, los isómeros 1a’ y 1a” pueden usarse solos o en combinación, como un principio activo de un eliminador de biopelícula, un inhibidor de la formación de biopelícula, o un desinfectante.

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en las que R1 y R2 son iguales a los anteriores.

5 El compuesto representado por la Fórmula (1) de la presente invención forma sal con un ácido. El ácido que forma sal con el compuesto amídico (1) no está particularmente limitado, pero se prefiere un ácido para uso farmacéutico. Los ejemplos del ácido incluyen ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, o ácido fosfórico; y ácidos orgánicos tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido tartárico, ácido maleico, ácido málico, ácido cítrico, ácido salicílico, ácido benzoico o ácido ascórbico.

10 El compuesto amídico (1) usado para la presente invención se puede fabricar mediante un método representado por la Fórmula 1 de Reacción, por ejemplo.

Formula 1 de Reacción 15

imagen9

en la que Q, R1 y R2 son los mismos que aquellos anteriormente.

20 Según la Fórmula 1 de Reacción, el compuesto amídico (1) de la presente invención se puede producir haciendo reaccionar el compuesto amínico representado por la Fórmula (2) y el compuesto de ácido carboxílico representado por la Fórmula (3).

Esta reacción se lleva a cabo en un disolvente inactivo en presencia de un agente de condensación apropiado. Los

25 ejemplos del agente de condensación incluyen un agente formador de haluro de ácido, tal como tricloruro de fósforo, tribromuro de fósforo, pentacloruro de fósforo, oxicloruro de fósforo, cloruro de tionilo; un agente formador de anhídrido de ácido mixto, tal como cloroformiato de etilo, o metanosulfonilo clorado; carbodiimidas tales como N,N’diciclohexilcarbodiimida (DCC), diisopropilcarbodiimida, o 1-etil-3-dimetilaminopropilcarbodiimida. También se pueden usar otros agentes de condensación tales como N,N-carbonildiimidazol, 2-etoxi-N-etoxicarbonil-1,2

30 dihidroquinolina (EEDQ), o trifenilfosfina-tetracloruro de carbono (complejo).

El disolvente inactivo no está particularmente limitado. Los ejemplos del disolvente inactivo incluyen hidrocarburos aromáticos tales como benceno, tolueno, o xileno; hidrocarburos aromáticos halogenados tales como clorobenceno,

o diclorobenceno; hidrocarburos alifáticos tales como hexano, ciclohexano, o éter de petróleo; hidrocarburos

35 alifáticos halogenados tales como diclorometano, 1,2-dicloroetano, cloroformo, o tetracloruro de carbono; éteres tales como éter dietílico, éter diisopropílico, dioxano, tetrahidrofurano, éter dimetílico de etilenglicol, o éter dietílico de etilenglicol; cetonas tales como acetona, 2-butanona, o metilisobutilcetona; nitrilos tales como acetonitrilo, propionitrilo, o benzonitrilo; amidas tales como N,N-dimetilformamida, o triamida hexametilfosfórica (HMPA); sulfóxidos tales como dimetilsulfóxido; y mezclas de aquellos.

40 Según la fórmula 2 de reacción, el compuesto amídico (1) de la presente invención también se puede producir haciendo reaccionar el compuesto amínico representado por la Fórmula (2) y el halogenuro de ácido carboxílico representado por la Fórmula (4) en un disolvente apropiado, y si es necesario, en presencia de una base.

45 Fórmula 2 de reacción

imagen10

en la que Q, R1 y R2 son los mismos que aquellos anteriormente, y X representa un átomo de halógeno. 10

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En esta reacción se puede usar un disolvente inactivo similar al usado en la reacción representada por la Fórmula 1 de reacción.

Como se menciona anteriormente, la reacción se puede llevar a cabo en presencia de una base según sea necesario. Los ejemplos de la base incluyen hidróxidos de metales alcalinos o de metales alcalino-térreos, tales como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio o hidróxido de calcio; carbonato o hidrogenocarbonatos de metales alcalinos tales como carbonato de sodio, carbonato de potasio, hidrogenocarbonato de sodio, o hidrogenocarbonato de potasio; acetatos de metales alcalinos o de metales alcalino-térreos, tales como acetato de sodio, acetato de potasio, o acetato de calcio; hidruros de metales alcalinos o de metales alcalino-térreos, tales como hidruro de sodio, hidruro de potasio o hidruro de calcio; sales de amonio tales como hidróxido de amonio, bicarbonato de amonio o acetato de amonio; y aminas terciarias tales como trimetilamina, trietilamina, N,N-dimetilanilina, piridina, 4(dimetilamino)piridina, diaza-biciclo-octano (DABCO), diaza-biciclononeno (DBN), o diaza-bicicloundeceno (DBU).

Las cantidades de reactivos usadas en la reacción no están particularmente limitadas, pero la cantidad del compuesto amínico (2) oscila preferiblemente de 0,8 a 5 moles, más preferiblemente 1 a 3 moles, por mol del compuesto (3) de ácido carboxílico o el halogenuro (4) de ácido carboxílico. En la reacción representada por la Fórmula 1 de reacción, la cantidad del agente de condensación oscila típicamente de 0,8 a 5 moles, más preferiblemente 1 a 3 moles, por mol del compuesto (3) de ácido carboxílico. Cuando se usa una base en la reacción representada por la Fórmula 2 de Reacción, la cantidad de la base oscila típicamente de 0,8 a 5 moles, más preferiblemente 1 a 3 moles, por mol del halogenuro (4) de ácido carboxílico.

La temperatura de reacción no está particularmente limitada, pero típicamente se ajusta en un intervalo de -10ºC hasta el punto de ebullición del disolvente. El tiempo de reacción varía dependiendo de la cantidad o temperatura mencionada anteriormente, pero se controla típicamente entre 5 y 10 horas. Obsérvese que el compuesto amínico (2), el compuesto (3) de ácido carboxílico y el halogenuro (4) de ácido carboxílico usados en las reacciones anteriores están todos comercialmente disponibles o se pueden fabricar fácilmente mediante un método conocido.

El compuesto amídico diana (1) así obtenido se puede refinar fácilmente aislándolo de la mezcla de reacción vía aislamiento general, tal como cromatografía en columna o recristalización.

(II) Eliminador de biopelícula (agente de extracción de biopelícula), inhibidor de la formación de biopelícula, desinfectante

Como se muestra en el ejemplo del experimento descrito más tarde, el compuesto amídico (1) y la sal del mismo según la presente invención es capaz de arrancar o eliminar biopelículas, inhibir la formación de biopelículas, y de actividad desinfectante. Con estas propiedades, el compuesto amídico (1) y la sal del mismo según la presente invención es útil para un principio activo de una composición para arrancar o eliminar biopelículas, o prevenir la formación de biopelículas (eliminador de biopelícula o inhibidor de la formación de biopelícula), o un principio activo de una composición para una composición bactericida (bactericida).

El compuesto amídico (1) y la sal del mismo según la presente invención sirve como un eliminador de biopelícula o inhibidor de formación de biopelícula eficaz, y es eficaz frente a diversas bacterias que forman biopelículas y biopelículas formadas por las bacterias. El intervalo de bacterias es ilimitado, e incluye Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), bacterias patógenas de la periodontitis, E. coli, y Staphylococcus aureus. El compuesto amídico (1) y la sal del mismo de la presente invención es particularmente eficaz frente a Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), bacterias patógenas de la periodontitis, y biopelículas formadas por estas bacterias.

El compuesto amídico (1) y la sal del mismo según la presente invención sirve como un desinfectante particularmente eficaz frente a Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), E. coli, y Staphylococcus aureus.

La presente invención proporciona así un eliminador de biopelícula, inhibidor de la formación de biopelícula, o desinfectante que contiene el compuesto amídico (1) o la sal del mismo como principio activo (el eliminador de biopelícula, el inhibidor de la formación de biopelícula o el desinfectante se pueden denominar en adelante como “formulación”).

La formulación de la presente invención puede ser propiamente el compuesto amídico (1) o la sal del mismo, o una composición obtenida mezclando un vehículo o aditivo arbitrario con el compuesto amídico (1) o una sal del mismo y procesando la mezcla en una forma deseada con un método conocido según el uso. Aunque no está particularmente limitada, la forma de la presente invención incluye productos sólidos tales como comprimidos, polvos, gránulos, pastillas, jarabes en polvo, o cápsulas (cápsulas duras, cápsulas blandas); productos en pasta o en gel tales como cremas, ungüentos o geles; y productos líquidos tales como disoluciones, suspensiones o emulsiones, jarabes, elixires, pulverizaciones o aerosoles.

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El contenido del compuesto amídico (1) o sal del mismo en la formación de la presente invención no está limitado en tanto que la formulación resultante asegure el efecto suficiente de eliminación de la biopelícula, el efecto inhibidor frente a la formación de biopelícula, o la actividad desinfectante. En otras palabras, para asegurar el efecto de eliminación de biopelícula deseado, el contenido del compuesto amídico (1) o sal del mismo se debería ajustar en un intervalo de 0,001 a 99% en peso, preferiblemente 0,01 a 50% en peso, o 0,05 a 10% en peso, por 100% en peso de la formulación.

La formulación de la presente invención contiene así el compuesto amídico (1) o sal del mismo en una relación para asegurar el efecto de eliminación de la biopelícula, los efectos inhibidores frente a la formación de biopelícula, o la actividad desinfectante, y puede contener otros componentes según el uso o fin de la formulación en tanto que no se vea alterado el efecto de eliminación de la biopelícula, el efecto inhibidor frente a la formación de biopelícula, o la actividad desinfectante. Aunque no están particularmente limitados, los ejemplos posibles de los otros componentes incluyen vehículos generales para la formulación de fármacos, tales como bases de diluyentes, aglutinantes, dispersantes, mejoradores de la viscosidad, lubricantes, agentes para ajustar el pH, agentes solubilizantes; y otros agentes tales como antibióticos, agentes antimicrobianos, desinfectantes, antisépticos, reforzantes, blanqueadores, enzimas, agentes quelantes, agentes antiespumantes, colorantes (tintes, pigmentos, etc.), agentes suavizantes, humectantes, tensioactivos, antioxidantes, perfumes, sustancias correctoras, agentes que enmascaran el olor, y disolventes.

Además del compuesto amídico (1) o sal del mismo, la formulación en la presente invención puede contener un agente antimicrobiano o un desinfectante, por ejemplo, un desinfectante tetraciclínico tal como hidrocloruro de monociclina; desinfectantes catiónicos tales como triclosán, cloruro de cetilpiridinio, o cloruro de bencetonio; o antibiótico macrólido.

La formulación de la presente invención también puede contener compuestos para mejorar el efecto desinfectante o la actividad del agente antimicrobiano o desinfectante. Los ejemplos del compuesto incluyen aminoácidos básicos tales como arginina, lisina, o histidina; diversas enzimas, incluyendo enzimas modificadoras del almidón tales como farnesol, transglucosidasa, o CGTasa; e hidrolasas del almidón tales como α-amilasa.

La formulación de la presente invención es aplicable allí donde una biopelícula se ha desarrollado hasta un efecto perjudicial, o allí donde se requiera desinfección.

La formulación de la presente invención se puede usar, por ejemplo, de la siguiente manera para eliminar biopelículas depositadas en áreas industriales, bañeras de tipo circulante, o similares. La formulación de la presente invención, que se ha procesado en un líquido en suspensión, polvo dispersable en agua, o polvo soluble en agua, se hace circular en las tuberías del equipo diana, o se pulveriza sobre la porción diana del equipo. La formulación de la presente invención también puede tomar la forma de un líquido de concentración elevada, o una preparación sólida tal como comprimido, polvo, o un agente de grano suministrado a un tanque de agua de manera que el eliminador diluido o disuelto en el agua se aplique a la porción diana. Además, la formulación de la presente invención se puede procesar en preparaciones medicinales adecuadas para administración oral, administración parenteral, o administración local. Además, como se describe a continuación, la formulación de la presente invención se puede procesar en diversos productos de higiene oral tales como agentes para el cepillado de dientes, desodorantes bucales, colutorios, medicinas para las encías, gomas de mascar, gárgaras, dientes artificiales, o agentes de limpieza para materiales dentales.

La cantidad de uso apropiada de la formulación de la presente invención varía dependiendo del objeto diana o de la forma de dosificación (difiere particularmente para formulación de liberación sostenida), y por lo tanto no se puede definir claramente. Sin embargo, cuando se usa para prevenir o tratar infección por biopelícula, por ejemplo, una cantidad de dosificación por día apropiada de la formulación de la presente invención es típicamente 1 ng/ml a 100 mg/ml, preferiblemente 10 ng/ml a 10 mg/ml, en una cantidad absoluta, típicamente 1 ng a 500 mg, sobre la base de la dosis del compuesto amídico (1) o sal del mismo de la presente invención (por ejemplo, la cantidad total para seres humanos es 300 mg).

(III) Composición oral

La presente invención proporciona una composición oral que contiene el eliminador de película, el inhibidor de la formación de biopelícula, o el desinfectante. La presente invención se obtuvo basándose en que el eliminador de película o el inhibidor de la formación de biopelícula de la presente invención que contiene el compuesto amídico (1)

o sal del mismo como principio activo tiene un efecto particularmente notable eliminando/inhibiendo una película formada por bacterias patógenas de la periodontitis, y sobre la base de que el desinfectante de la presente invención que contiene el compuesto amídico (1) o sal del mismo como principio activo tiene actividad desinfectante particularmente notable con respecto a bacterias.

Los ejemplos de bacterias patógenas de la periodontitis que forman biopelículas incluyen Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythensis, Actinobacillusactinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Eikenellacorrodens, Campylobacter rectus, Fusobacterium necleatum, y Treponemadenticola.

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La composición oral según la presente invención es típicamente una composición usada especialmente para tratamientos orales para prevenir o tratar enfermedades orales tales como periodontitis relacionada con bacterias patógenas. Los ejemplos de tales composiciones incluyen agentes para el cepillado de dientes tales como pastas de 5 dientes, polvos para el cepillado de dientes, líquidos para el cepillado de dientes, o agentes para el cepillado de dientes infiltrantes; desodorantes bucales y colutorios en forma de trociscos, comprimidos, líquidos, gomas de mascar, oleastros o películas; y medicinas para las encías en forma de cremas, ungüentos, o geles. La composición oral según la presente invención también puede ser una composición usada especialmente para el cuidado de materiales orales médicos, tales como dientes artificiales u otros materiales dentales, para prevenir enfermedades

10 orales. Los ejemplos de tales composiciones incluyen agentes de limpieza para dientes artificiales o materiales dentales.

La proporción del eliminador de biopelícula, del inhibidor de la formación de biopelícula, o del desinfectante en la composición oral se ajusta preferiblemente de manera que el contenido (cantidad total) del compuesto amídico (1) o

15 sal del mismo, que es un principio activo del eliminador, inhibidor o desinfectante, cae en un intervalo de 0,001 a 99% en peso, preferentemente 0,01 a 50% en peso, más preferentemente 0,05 a 10% en peso, por 100% en peso de las composiciones.

Según el tipo o forma de la composición, según se necesite, la composición oral de la presente invención puede 20 contener los siguientes componentes en un intervalo de uso general, además de los componentes anteriores.

Abrasivo

Abrasivos de sílice tales como gel de sílice, sílice precipitada, sílice pirolizada, ácido silícico hidratado, ácido silícico

25 anhidro, silicato de titanio, zeolita, aluminosilicato y circonosilicato; y fosfato cálcico monobásico, fosfato cálcico dibásico dihidratado, fosfato cálcico dibásico anhidro, pirofosfato cálcico, fosfato magnésico tribásico, fosfato cálcico tribásico, hidróxido de aluminio, alúmina, carbonato de calcio ligero, carbonato de calcio pesado, carbonato de magnesio, fosfato de magnesio tribásico, silicato de circonio, metafosfato de sodio insoluble, metafosfato de calcio insoluble, óxido de titanio, y abrasivo de resina sintética. Estos abrasivos se pueden usar solos o en combinación.

30 Cuando se incorporan tales abrasivos (por ejemplo, en dentífricos), la cantidad no está particularmente limitada, pero preferiblemente es 3 a 80% en peso, más preferiblemente 10 a 50% en peso, por 100% en peso de composición oral.

Agente humectante y viscoso

35 Alcoholes polihidroxilados tales como glicerina, glicerina concentrada, diglicerina, etilenglicol, dipropilenglicol, polietilenglicol, propilenglicol, polipropilenglicol, o 1,3-butilenglicol; y alcoholes de azúcar tales como xilitol, maltitol, o lactol. Estos humectantes y agentes viscosos se pueden usar solos o en combinación.

40 Aglutinante

Alginatos y sus derivados tales como ácido algínico, alginato de sodio, éster de alginato con propilenglicol, alginato de sodio que contiene calcio, alginato de potasio, alginato de calcio, alginato de amonio; gomas tales como carrageenano (principalmente iota; lambda; y kappa), goma de xantana, tragacanto, goma de karaya, goma arábiga, 45 goma de algarrobillo, o goma guar; celulosas tales como carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, etilcelulosa, acetato de celulosa, o hidroxietilcelulosa sódica; gelatina, agar, polialcohol vinílico, poliacrilato de sodio, polímero carboxivinílico, polivinilpirrolidona, carbopol, gel de sílice, gel de sílice y aluminio, y sílice natural espesante. Estos aglutinantes se pueden usar solos o en combinación. Cuando se incorporan tales aglutinantes (por ejemplo, en dentífricos), la cantidad no está particularmente limitada, pero preferiblemente es 0,1 a 10% en peso, por 100% en

50 peso de composición oral.

Agente espumante

Laurilsulfato de sodio, lauroilsarcosinato de sodio, alquilsulfosuccinato monosódico, monoglicérido sulfonato sódico

55 de ácido graso de aceite de palma, α-olefinsulfonato sódico, sal de N-acilaminoácido tal como N-acilglutamato, betaína de 2-alquil-N-carboximetil-N-hidroxietil imidazolinio, éster de ácido graso con maltitol, éster de ácido graso con sacarosa, éster de ácido graso con poliglicerilo, dietanolamida de ácido graso, monoestearato de polioxietilensorbitán, aceite de ricino hidrogenado polioxietilenado, o éster de ácido graso con polioxietileno. Estos agentes espumantes se pueden usar solos o en combinación.

60 Tensioactivo

Como el tensioactivo, son aplicables todos los tensioactivos aniónicos, tensioactivos catiónicos, tensioactivos no iónicos, y tensioactivos anfóteros.

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Los ejemplos de tensioactivos aniónicos incluyen laurilsulfato de sodio, miristilsulfato de sodio, sal sódica del ácido N-lauroilsarcosínico, sal sódica del ácido N-miristoilsarcosínico, dodecilbencenosulfonato de sodio, monoglicérido sulfato monosódico de ácido graso de coco hidrogenado, lauroilsulfosulfato de sodio, α-olefinsulfonato de sodio, Nacilglutamatos tales como N-palmitoilglutamato de sodio, y N-aciltauratos tales como N-metil-N-aciltaurina sódica. Los ejemplos de tensioactivos no iónicos incluyen ésteres de ácidos grasos con sacarosa tales como éster de ácido graso con sacarosa o éster de ácido graso con maltosa, ésteres de ácidos grasos con alcoholes de azúcar tales como éster de ácido graso con maltitol y éster de ácido graso con lactol, alquilolamida, ésteres de ácidos grasos con polioxietilensorbitán tales como monoestearato de polioxietilensorbitán, ésteres de ácidos grasos con polioxietileno tales como aceite de ricino hidrogenado polioxietilenado, etanolamidas de ácidos grasos tales como mono-o dietanolamida de ácido láurico, éster de ácido graso con sorbitán, éter de alcohol superior con polioxietileno, copolímero de polioxietileno con polioxipropileno, éster de ácido graso con polioxietileno polioxipropileno, éster de ácido graso con poliglicerilo, y Pluronic. Los ejemplos de tensioactivos anfóteros incluyen betaína de 2-alquil-Ncarboximetil-N-hidroxietil imidazolio, N-alquildiaminoetil glicina tal como N-lauril diaminoetil glicina o N-miristil diaminoetil glicina, y N-alquil-1-hidroxietilimidazolin betaína sódica. Estos tensioactivos se pueden usar solos o en combinación.

Agente edulcorante

Sacarina sódica, aspartamo, esteviósido, extracto de estevia, aldehído parametoxicinámico, neohesperidil

dihidrocalcona, perillartina, glicirricina, y combinación.: taumatina. Estos agentes edulcorantes se pueden usar solos o en

Antiséptico

Parabenos: tales como metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno o butilparabeno; benzoato de sodio,

fenoxietanol, e hidrocloruro de alquildiaminoetilglicina. Estos antisépticos se pueden usar solos o en combinación.

Componente aromático

1-mentol, anetol, mentona, cineol, limoneno, carvona, salicilato de metilo, butirato de etilo, eugenol, timol, alcohol ndecílico, citronelol, α-terpineol, acetato de citronelilo, linalool, etil linalool, vainillina, menta piperita, aldehído cinámico, y trans-2-hexenal. Esos componentes aromáticos se pueden usar solos o en combinación. Obsérvese que estos componentes pueden ser productos purificados, o pueden ser productos brutos de aceites esenciales que contienen estos componentes (por ejemplo, aceite de limón, aceite de naranja, aceite de salvia, aceite de romero, aceite de casia y de canela, aceite de pimentón, aceite de hoja de canela, aceite de shiso, aceite de gaulteria, aceite de clavos, o aceite de eucalipto).

Todavía, además de los componentes aromáticos anteriores, se pueden usar otros componentes o aceites esenciales tales como alcohol alifático o sus ésteres, hidrocarburos terpénicos, éter de fenol, aldehído, cetona, o lactona, en tanto que no se vean alterados los efectos de la presente invención. La cantidad de estos componentes aromáticos es preferiblemente 0,02 a 2% en peso, por 100% en peso de toda la composición oral.

Componente antimicrobiano

Metales antibacterianos tales como plata, cobre, cinc, o sus sales metálicas con poca solubilidad en agua (por ejemplo, óxido de plata, cloruro de plata, carbonato de plata, fosfato de plata, hidróxido de cobre, gluconato de cobre, óxido de cinc, citrato de cinc, estearato de cinc, y triclorofenato de cinc, hidróxido de cinc, oxalato de cinc, fosfato de cinc), clorofila de cobre, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio, triclosán, hinoki tiol, cloruro de lisozima.

Componente antiséptico

Agentes antimicrobianos no iónicos tales como parabenos, benzoato de sodio o triclosán; agentes antisépticos catiónicos tales como cloruro de bencetonio o cloruro de cetilpiridinio.

Principio activo oral

Cloruro de lisozima, fluoruro de sodio, fluoruro de potasio, monofluorofosfato de sodio, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, hinoki tiol, ácido ascórbico, sales de ácido ascórbico, sales de clorhexidina, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, bisabolol, triclosán, hidroxipropilmetilfenol, acetato de tocoferol, ácido épsilon (ε)-aminocaproico, ácido tranexámico, hidroxil alantoína de aluminio, lactato de aluminio, dihidrocolesterol, ácido glicirretínico, glicirricinatos, sal de cobre de clorofilina, cloruro de sodio, sulfonato de guayazuleno, dextranasa, hidrocloruro de piridoxina, ácido tranexámico, cloruro de sodio, vitaminas C y E, diversas enzimas (por ejemplo, dextranasa, amilasa, proteasa, mutanasa, o pectinasa), agentes de control del sarro tales como azuleno o polifosfato, eliminadores de la nicotina tales como polietilenglicol o polivinilpirrolidona, y agentes

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profilácticos de hiperestesia tales como lactato de aluminio o nitrato de potasio. Estos principios activos orales se pueden usar solos o en combinación.

Otros aditivos

5 Pigmentos tales como Food Blue nº 1, óxido de titanio, antioxidantes tales como dibutilhidroxitolueno, y sustancias aromatizantes tales como disolución destilada seca de hoja de té o glutamato de sodio.

La composición oral de la presente invención se puede fabricar mediante un procedimiento habitual. La producción

10 de la composición oral en forma de, por ejemplo, pasta de dientes, se termina envasándola en un tubo de aluminio, tubo laminado, tubo de evaporación de vidrio, tubo de plástico, botella de plástico, recipiente de aerosol, o similar, antes de ser comercializada para permitir que el consumidor la aplique a la porción diana.

La composición oral de la presente invención evita la formación de biopelículas mediante bacterias patógenas de la

15 periodontitis en la boca, y elimina las biopelículas intraorales formadas, evitando eficazmente de ese modo la generación de flora bacteriana. Además, al incorporar un agente antimicrobiano en el eliminador, el efecto antimicrobiano mejorado aumentará además la calidad de la composición oral. Por lo tanto, la composición oral de la presente invención es eficaz para la prevención o tratamiento de periodontosis o enfermedades periodontales (por ejemplo, gingivitis). Además, la composición oral de la presente invención es eficaz para la prevención o eliminación

20 del olor oral debido a periodontosis o a enfermedades periodontales (por ejemplo, gingivitis).

Ejemplos

Lo siguiente describe ejemplos de producción y ejemplos del experimento del compuesto amídico (1) según la

25 presente invención para explicar con mayor detalle la presente invención. Sin embargo, la presente invención no está limitada a estos ejemplos.

Ejemplo 1 de Producción

30 Producción de N-(pirrolidin-3-il)dodecanoilamida (1a-1)

Se disolvieron 0,22 g (1 mmol) de cloruro de dodecanoílo y 0,18 g (2,1 mmoles) de 3-aminopirrolidina en 10 ml de diclorometano. La disolución se agitó, mientras se enfriaba con hielo, durante 12 horas. El líquido de la reacción se concentró a presión reducida. El residuo resultante se sometió a extracción con acetato de etilo. La capa de acetato

35 de etilo obtenida se lavó con ácido clorhídrico diluido y con disolución salina saturada, se secó con sulfato de magnesio, y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo = 3/7) para obtener a N-(pirrolidin-3-il)dodecanoilamida (Compuesto 1a-1) representada mediante la siguiente fórmula.

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Rendimiento cuantitativo: 0,18 g (0,69 mmoles)

Porcentaje de rendimiento: 69%

45 RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,90 ppm (t, 3H), 1,28 ppm (m, 16H), 1,64 ppm (t, 2H), 1,76 ppm (m, 1H), 2,00 ppm (br, 1H), 2,13 ppm (m, 1H), 2,27 ppm (t, 2H), 3,24 ppm (m, 1H), 3,51 ppm (m, 1H), 3,67 ppm (m, 3H).

Ejemplo 2 de producción

50 Producción de N-(pirrolidin-3-il)decanoilamida (Compuesto 1a-2)

Se llevó a cabo el mismo procedimiento como en el Ejemplo 1 de producción, excepto que se usó cloruro de decanoílo en lugar de cloruro de dodecanoílo, para obtener N-(pirrolidin-3-il)decanoilamida (Compuesto 1a-2) 55 representada mediante la siguiente fórmula.

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Rendimiento cuantitativo: 0,15 g (0,62 mmoles) Porcentaje de rendimiento: 62% 5 RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,88 ppm (t, 3H), 1,29 ppm (m, 12H), 1,65 ppm (m, 2H), 1,88 ppm (m, 1H), 2,10 ppm (m, 1H), 2,26 ppm (m, 2H), 3,21 ppm (m, 1H), 3,49 ppm (m, 1H), 3,65 ppm (m, 3H), 8,59 ppm (br, 1H).

Ejemplo 3 de producción

Producción de N-(piperidin-4-il)dodecanoilamida (1b-1)

Se llevó a cabo el mismo procedimiento como en el Ejemplo 1 de producción, excepto que se usó 4-aminopiperidina en lugar de 3-aminopirrolidina, para obtener N-(piperidin-4-il)dodecanoilamida (1b-1) representada mediante la siguiente fórmula.

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Rendimiento cuantitativo: 0,16 g (0,56 mmoles) Porcentaje de rendimiento: 56% RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,88 ppm (t, 3H), 1,27 ppm (m, 18H), 1,59 ppm (m, 2H), 1,86 ppm (m, 2H), 2,30 ppm (t,

2H), 2,68 ppm (t, 1H), 2,89 ppm (m, 1H), 3,05 ppm (t, 1H), 3,71 ppm (d, 1H), 4,51 ppm (d, 1H). 25 Ejemplo 4 de producción

Producción de N-(piperidin-4-il)decanoilamida (1b-2)

Se llevó a cabo el mismo procedimiento como en el Ejemplo 1 de producción, excepto que se usó 4-aminopiperidina

en lugar de 3-aminopirrolidina, y se usó cloruro de decanoílo en lugar de cloruro de dodecanoílo, para obtener N

(piperidin-4-il)decanoilamida(1b-2) representada mediante la siguiente fórmula.

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35 Rendimiento cuantitativo: 0,16 g (0,64 mmoles) Porcentaje de rendimiento: 64% RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,87 ppm (t, 3H), 1,25 ppm (m, 14H), 1,59 ppm (m, 2H), 1,82 ppm (m, 2H), 2,31 ppm (m,

2H), 2,67 ppm (t, 1H), 2,90 ppm (m, 1H), 3,06 ppm (m, 1H), 3,81 ppm (m, 1H), 4,50 ppm (m, 1H), 8,00 ppm (br, 1H).

Ejemplo 5 de producción

Producción de N-(pirrolidin-1-il)dodecanoilamida (Compuesto 1c-11

45 Se llevó a cabo el mismo procedimiento como en el Ejemplo 1 de producción, excepto que se usó 1-aminopirrolidina en lugar de 3-aminopirrolidina, para obtener N-(pirrolidin-1-il)dodecanoilamida (Compuesto 1c-1) representada mediante la siguiente fórmula.

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Rendimiento cuantitativo: 0,21 g (0,78 mmoles) Porcentaje de rendimiento: 78%

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RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,88 ppm (t, 3H), 1,28 ppm (m, 16H), 1,62 ppm (m, 2H), 1,88 ppm (m, 5H), 2,06 ppm (m, 1H), 2,47 ppm (m, 2H), 2,91 ppm (t, 2H), 6,11 ppm (br, 1H).

Ejemplo 6 de producción

5 Producción de N-(pirrolidin-1-il)-3-hidroxidodecanoilamida (Compuesto 1c-2)

(1) Síntesis de éster etílico del ácido 3-hidroxidecanoico

10 Se colocaron 7,8 g de cinc activado mediante ácido clorhídrico y 25 ml de benceno en un dispositivo de circulación que incorpora el dispositivo Dean y Stark. La disolución se hizo circular mientras se calentaba. A la disolución resultante, se añadió en gotas una disolución mixta de 15,6 g (100 mmoles) de decanal y 18,4 g (110 mmoles) de éster etílico del ácido bromoacético. Después de seis horas, la disolución se enfrió hasta la temperatura ambiente. Se añadió ácido sulfúrico al 50% (p/p) para dividir el disolvente, y la capa orgánica se separó. La capa orgánica se

15 secó con sulfato de magnesio, y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (disolvente de desarrollo: hexano/acetato de etilo = 2/8). Como resultado, se obtuvo éster etílico del ácido 3-hidroxidecanoico.

Rendimiento cuantitativo: 30,6 g (93 mmoles)

20 Porcentaje de rendimiento: 93%

RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,91 ppm (t, 3H), 1,28 ppm (m, 17H), 1,44 ppm (m, 2H), 2,43 ppm (m, 2H), 4,02 ppm (m, 1H), 4,18 ppm (q, 2H).

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(2) Producción de ácido 3-hidroxidecanoico

Se disolvieron 16,5 g (50 moles) de éster etílico del ácido 3-hidroxidecanoico obtenido en el procedimiento (1) y 10,0 g (250 mmoles) de hidróxido de litio en una disolución mixta de 50 ml de tetrahidrofurano y 100 ml de agua, y la 30 disolución se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. El líquido de la reacción se neutralizó mediante ácido clorhídrico diluido, y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a extracción con acetato de etilo. La capa de acetato de etilo obtenida se lavó con disolución salina saturada, se secó con sulfato de magnesio, y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol = 4/6) para obtener ácido 3-hidroxidecanoico (porcentaje de rendimiento = 90%).

35 Rendimiento cuantitativo: 12,2 g (45 mmoles)

Porcentaje de rendimiento: 90%

40 RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,86 ppm (t, 3H), 1,25 ppm (m, 14H), 1,33 ppm (m, 2H), 2,31 ppm (m, 2H), 3,79 ppm (m, 1H).

(3) Producción de N-(pirrolidin-1-il)-3-hidroxidodecanoilamida

45 Se disolvieron 0,24 g (1,1 mmoles) de ácido 3-hidroxidodecanoico obtenido en el procedimiento (2) y 0,09 g (1 mmoles) de 1-aminopirrolidina en 10 ml de diclorometano. Se añadieron 0,13 g (1,1 mmoles) de dimetilaminopiridina y 0,15 g (1,2 mmoles) de diisopropiletilamina a la disolución. Además, se añadieron 0,21 g (1,1 mmoles) de 1-etil-3dimetilaminopropilcarbodiimida. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se sometió a extracción con acetato de etilo. La capa de acetato de etilo

50 obtenida se lavó con disolución salina saturada, se secó con sulfato de magnesio, y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (disolvente de desarrollo: acetato de etilo/metanol = 8/2) para obtener N-(pirrolidin-1-il)-3-hidroxidodecanoilamida (Compuesto 1c-2) representada mediante la siguiente fórmula.

imagen16

Rendimiento cuantitativo: 0,01 g (0,35 mmoles) Porcentaje de rendimiento: 35% RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,88 ppm (t, 3H), 1,26 ppm (m, 14H), 1,43 ppm (m, 2H), 1,58 ppm (m, 1H), 2,24 ppm (m,

3H), 2.,55 ppm (m, 2H), 3,81 ppm (m, 2H), 3,86 ppm (m, 2H), 4,04 ppm (m, 1H)

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Ejemplo 7 de producción

Producción de N-(piperidin-1-il)dodecanoilamida (Compuesto 1d-1)

Se llevó a cabo el mismo procedimiento como en el Ejemplo 1 de producción, excepto que se usó 1-aminopiperidina en lugar de 3-aminopirrolidina para obtener N-(piperidin-1-il)decanoilamida (1d-1) representada mediante la siguiente fórmula.

imagen17

10 Rendimiento cuantitativo: 0,24 g (0,84 mmoles)

Porcentaje de rendimiento: 84%

15 RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 0,87 ppm (t, 3H), 1,31 ppm (m, 17H), 1,55 ppm (m, 7H), 2,06 ppm (dt, d=440Hz, 2H), 2,48 ppm (dm, d=440Hz, 2H), 2,67 ppm (dm, d=400Hz, 2H), 6,32 ppm (br, 1H).

Ejemplo 1 del experimento

20 Ensayo de evaluación para el efecto de inhibición de la formación de biopelícula frente a Pseudomonas aeruginosa

Con el sistema de celdas de circulación mostrado en la figura 1, se evaluó un efecto inhibidor frente a la formación de biopelícula por Pseudomonas aeruginosa para cada uno de los compuestos amídicos producidos en los Ejemplos 1, 3, 5, 6 y 7 de Producción (Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, 1c-2, 1d-1), y para cada uno de los Compuestos

25 Comparativos (Ejemplo Comparativo) 1 a 3 representados por las siguientes fórmulas.

imagen18

30 Sistema de celdas de circulación (figura 1)

Una botella (1) de medio de cultivo, una bomba peristáltica (2), una celda (4) de vidrio y una botella (5) de fluido de desecho se conectan vía un tubo (6) de silicio de manera que se suministra medio (9) de cultivo a la celda (4) de

35 vidrio desde la botella (1) de medio de cultivo usando la bomba peristáltica (2). El sistema incluye una sección (3) de eliminación del aire entre la bomba peristáltica (2) y un grifo de llave (7a), para eliminar el aire arrastrado. Todos los instrumentos en el sistema de celdas de circulación se esterilizan usando rayos gamma o un autoclave.

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Como se describe con mayor detalle a continuación, el efecto inhibidor frente a la formación de biopelícula de cada uno de los compuestos amídicos se examina de la siguiente manera. Las bacterias se cultivan en una celda (4) de vidrio para hacer crecer una biopelícula en la pared interior de la celda, y se aplica a la biopelícula un líquido de ensayo que contiene uno de los compuestos amídicos. Después, se observa el estado de la biopelícula para evaluar el efecto inhibidor frente a la formación de biopelícula del compuesto usando microscopía confocal de fluorescencia (Leica TCS SP2: producto de Leica).

Materiales

Bacterias

Las bacterias se prepararon insertando un plásmido pTdk-LVAgfp en una cepa PA01 de Pseudomonas aeruginosa usando el método de electroporación de manera que la cepa PAO1 de Pseudomonas aeruginosa se transforma para expresar Proteína Fluorescente Verde (en lo sucesivo denominada aquí “cepa PAO1 de expresión de gfp”) (véase Teresa R. et al., Applied and Environmental Microbiology, abril de 2001, p. 1865-1873).

Medio de cultivo

Para la preincubación se usó un medio de cultivo FAB que contiene glucosa 30 mM, y para el cultivo principal se usó un medio de cultivo FAB que contiene glucosa 0,3 mM.

Medio de cultivo FAB que contiene glucosa

El medio de cultivo FAB que contiene glucosa se preparó añadiendo 200 µg/ml de carbenicilina a una disolución acuosa que contiene 30 mM de glucosa o 0,3 mM de glucosa, 15 mM de sulfato de amonio, 33,7 mM de hidrogenofosfato disódico dihidratado, 22,1 mM de dihidrogenofosfato potásico, 51,7 mM de cloruro de sodio, 0,47 mM de cloruro de magnesio, 0,08 mM de cloruro de calcio y la siguiente disolución de metal en trazas al 0,1%.

Disolución de metal en trazas

Una disolución acuosa que contiene 1,16 mM de sulfato de calcio dihidratado, 0,72 mM de sulfato de hierro heptahidratado, 0,08 mM de sulfato manganoso monohidratado, 0,08 mM de sulfato de cobre pentahidratado, 0,07 mM de sulfato de cinc heptahidratado, 0,04 mM de sulfato de cobalto heptahidratado, 0,04 mM de permanganato sódico monohidratado, y 0,08 mM de ácido bórico.

Suspensión bacteriana

Se inoculó una cepa PAO1 de expresión de gfp en un medio de cultivo FAB que contiene glucosa 30 mM, y se sometió a cultivo de agitación a 37ºC toda la noche en un tanque isotérmico. El líquido del cultivo obtenido de toda la noche se diluyó mediante un medio de cultivo FAB que contiene glucosa 30 mM hasta OD590 = 0,1.

Líquido de ensayo y líquido de ensayo de control

Líquido de ensayo

El líquido de ensayo se preparó disolviendo 100-250 µM de cada uno de los Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, 1c-2, o 1d-1 según los Ejemplos 1, 3 y 5 a 7 de Producción, y 100-250 µM de Compuestos Comparativos 1 a 3 como ejemplos comparativos en dimetilsulfóxido (DMSO), y suministrando las disoluciones de DMSO resultantes a un medio de cultivo FAB que contiene glucosa 0,3 mM de manera que la concentración de cada compuesto es 0,1% (v/v).

Líquido de ensayo de control

Como líquido de ensayo de control se usó un DMSO que no contiene el compuesto.

Método de ensayo

El sistema de celdas de circulación se llenó con etanol acuoso de 70% en volumen, y se dejó reposar durante al menos 12 horas para esterilizar el sistema. Después, se suministró aire, que se había filtrado mediante un filtro (8a) de membrana, al sistema de celdas de circulación usando la bomba peristáltica (2) para secar el sistema. Después, el sistema se llenó con un medio de cultivo FAB que contiene glucosa 0,3 mM. Se inyectaron 500 µl de una suspensión bacteriana a la celda (4) de vidrio desde la superficie superior, y la celda de vidrio se cerró herméticamente cerrando el grifo de llave de tres vías (7a, 7b). La celda como tal se dejó reposar durante 1 hora a temperatura ambiente.

Después del cultivo estático, se abrieron dos de los grifos de llave de tres vías (7a, 7b), para suministrar cada líquido

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de ensayo y líquido de ensayo de control a un caudal de 200 µl por minuto. Con un microscopio confocal de fluorescencia, el proceso de formación (deposición) de biopelícula por la Pseudomonas aeruginosa (cepa PAO1 de expresión de gfp) adherida a la pared interior de la celda de vidrio se observó tridimensionalmente desde arriba para observar cambios a lo largo del tiempo (después de 1 hora, 48 horas, 60 horas, 72 horas, y 84 horas). Obsérvese que el líquido de ensayo y el líquido de ensayo de control se sustituyeron con líquidos recientes cada 36 horas.

Las figuras 2 a 8 muestran los resultados de comparación entre el estado de la biopelícula en los experimentos para el líquido de ensayo de control (ensayo de control) y el estado de la biopelícula en los experimentos para los líquidos de ensayo (Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, 1c-2, 1d-1, o Compuestos Comparativos 1 a 3). Las figuras 2 a 8 muestran condiciones tridimensionales de Pseudomonas aeruginosa (cepa PAO1 de expresión de gfp) adherida a la pared interior de la celda de vidrio en los experimentos respectivos, con las vistas frontales de la pared interior de la celda de vidrio y las vistas de sección transversal (vertical y horizontal) de las celdas de vidrio.

Según esos resultados, en el ensayo de control que usa líquido de ensayo de control, se observó que Pseudomonas aeruginosa (cepa PAO1 de expresión de gfp) formó una enorme biopelícula gruesa; sin embargo, en el ensayo que usa un líquido de ensayo que contiene los Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, 1c-2, o 1d-1, no se observó tal formación de biopelícula. Mientras tanto, en el ensayo que usa un líquido de ensayo que contiene Compuestos Comparativos 1, 2 ó 3, se observó la gran biopelícula gruesa como en el ensayo de control. Esto mostró que los Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, 1c-2, y 1d-1 obtenidos en los Ejemplos 1, 3 y 5 a 7 de Producción son capaces de inhibir la formación de biopelícula por Pseudomonas aeruginosa.

Ejemplo 2 del experimento

Ensayo de evaluación para el efecto de inhibición de la formación de biopelícula frente a bacterias patógenas de la periodontitis

Al igual que con el Ejemplo 1 del experimento, que usa el sistema de celdas de circulación de la figura 1, se evaluó un efecto inhibidor frente a la formación de biopelícula por bacterias patógenas de la periodontitis para cada uno de los compuestos amídicos producidos en los Ejemplos 1, 3, 5, 6 y de producción (Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, 1c-2).

Materiales

Bacterias

Se usaron bacterias patógenas de la periodontitis cepa 381 de Porphyromonas gingivalis (cepa clínica).

Medio de cultivo

Se usó un medio de cultivo GAM que contiene hemina 5 µg/l y menadiona 1 µg/l.

Suspensión bacteriana

La cepa 381 se inoculó en el medio de cultivo GAM, y se cultivó hasta la fase estacionaria (OD550 = 1,8). Después, el medio de cultivo se diluyó 20 veces mediante un medio de cultivo GAM reciente que contiene las sustancias mencionadas anteriormente.

Líquido de ensayo y líquido de ensayo de control

Líquido de ensayo

El líquido de ensayo se preparó disolviendo 100 µM de cada uno de los Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, o 1c-2 según los Ejemplos 1, 3, 5 y 6 de Producción y 100 µM de los Compuestos Comparativos 1 y 2 como ejemplos comparativos en dimetilsulfóxido (DMSO), y suministrando las disoluciones de DMSO resultantes a las suspensiones bacterianas mencionadas anteriormente de manera que la concentración de cada compuesto es 0,1% (v/v).

Líquido de ensayo de control

Método de ensayo

La celda (4) de vidrio del sistema de celdas de circulación (véase la figura 1) se sustituyó por una celda de acero (3 x 7 x 120 mm), y se colocaron en la celda 10 discos de hidroxiapatita (HA) (6 mm de diámetro, 1 mm de grosor). Los discos de HA se habían sometido a tratamiento salival toda la noche. Cada uno de los líquidos de ensayo y líquidos de ensayo de control se hizo circular en el sistema a un caudal de 8 ml/min. durante 14 días. Obsérvese que los líquidos de ensayo y los líquidos de ensayo de control se sustituyeron por líquidos recientes cada dos días.

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Tras el cultivo, los discos de HA se sumergieron en 300 µl de agua destilada estéril, y se trataron mediante onda supersónica durante 30 minutos a 4ºC. Las biopelículas formadas en los discos de HA se separaron por pelado y se suspendieron en agua destilada. Después, se midieron 100 µl del líquido de la suspensión para determinar la 5 turbidez con un absorciómetro (colorímetro C07500, producto de Funakoshi) (longitud de onda de medida = 550 nm).

Se encontró una OD media en base a los valores de OD resultantes, excluyendo los valores mínimo y máximo. También, se encontró un valor medio de las turbideces para los líquidos de ensayo de control de la misma manera que el valor medio de OD de control. Se encontró una tasa de inhibición de la formación de biopelícula (tasa de

10 inhibición) mediante la siguiente fórmula.

Tasa de inhibición de la formación de biopelícula (%) = {(valor medio de OD)/(valor medio de OD de comparación)} x 100

15 La Tabla 1 muestra los valores.

Tabla 1

Compuesto: Valor medio de OD Valor medio de OD de comparación Tasa de inhibición de la formación de biopelícula (%)

1a-1: 0,49 0,79 37,4

1b-1: 0,32 0,39 19,1

1c-1: 0,522 0,585 11,0

1c-2: 0,041 0,34 87,8

Compuesto Comparativo 1: 0,629 0,464 -36,0

Compuesto Comparativo 2: 0,719 0,483 -49,0

20 Según los resultados, los Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1 y 1c-2 examinados pueden inhibir la formación de biopelícula provocada por bacterias patógenas de la periodontitis.

Ejemplo 3 del experimento

25 Ensayo de evaluación para el efecto de eliminación de la biopelícula con respecto a Pseudomonas aeruginosa

Con el sistema de celdas de circulación de la figura 1, se evaluó un efecto de eliminación frente a biopelículas formadas por Pseudomonas aeruginosa para cada uno de los compuestos amídicos producidos en los ejemplos 1, 3, 5, y 6 de Producción (Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, 1c-2), y para los compuestos comparativos 1 a 3 como

30 ejemplos comparativos.

La evaluación del efecto de eliminación de la biopelícula se llevó a cabo según lo siguiente. Tras cultivar las bacterias en la celda (4) de vidrio del sistema de celdas de circulación hasta hacer crecer una biopelícula en la pared interior de la celda, se aplicó a la biopelícula un líquido de ensayo que contiene uno de los compuestos amídicos.

35 Después, se observó el estado de la biopelícula con un microscopio confocal de fluorescencia (Leica TCS SP2).

Materiales

Bacterias

40 Al igual que con el Ejemplo 1 del experimento, se usó una cepa PAO1 de expresión de gfp.

En cuanto al medio de cultivo, se usó el medio de cultivo FAB que contiene glucosa, la disolución de metal en trazas, y la suspensión bacteriana como los del Ejemplo 1 del experimento.

45 Líquido de ensayo y líquido de ensayo de control

Líquido de ensayo

50 El líquido de ensayo se preparó disolviendo 100 µM de cada uno de los compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1 y 1c-2 según los Ejemplos 1, 3, 5 y 6 de producción y 100 µM de los compuestos comparativos 1 a 3 como ejemplos comparativos representados mediante la siguiente fórmula en dimetilsulfóxido (DMSO), y suministrando las disoluciones de DMSO resultantes a un medio de cultivo FAB que contiene glucosa 0,3 mM de manera que la concentración de cada compuesto es 0,1% (v/v).

55 Líquido de ensayo de control

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Método de ensayo

5 El sistema de celdas de circulación se llenó con etanol acuoso (70% en volumen) y se dejó reposar durante al menos 12 horas para esterilizar el sistema. Después, se suministró aire, que se había filtrado mediante un filtro (8a) de membrana, al sistema de celdas de circulación usando la bomba peristáltica (2) para secar el sistema. Después, el sistema se llenó con un medio de cultivo FAB que contiene glucosa 0,3 mM. Se inyectaron 500 µl de una

10 suspensión bacteriana a la celda (4) de vidrio desde la superficie superior, y la celda de vidrio se cerró herméticamente cerrando el grifo de llave de tres vías (7a, 7b). La celda como tal se dejó reposar durante una hora a temperatura ambiente.

15 de ensayo y líquido de ensayo de control a un caudal de 200 µl por minuto. Con un microscopio confocal de fluorescencia, el proceso de formación (deposición) de biopelícula por la Pseudomonas aeruginosa (cepa PAO1 de expresión de gfp) adherida a la pared interior de la celda de vidrio se observó tridimensionalmente desde arriba para observar cambios a lo largo del tiempo (después de 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, y 10 días). Obsérvese que el líquido de ensayo y el líquido de ensayo de control se sustituyeron con líquidos recientes cada 36 horas.

20 La figura 9 muestra un estado de la biopelícula en el experimento para el líquido de ensayo de control (ensayo de control). Cada imagen de la foto en la figura 9 muestra los estados tridimensionales de las biopelículas formadas por Pseudomonas aeruginosa (cepa PAO1 de expresión de gfp) adheridas a la pared interior de la celda de vidrio, con las vistas frontales de la pared interior de la celda de vidrio y las vistas de sección transversal (vertical y horizontal)

25 de las celdas de vidrio. Las figuras 10 a 13 muestran los estados de las biopelículas en los experimentos para diferentes líquidos de ensayo: Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1 y 1c-2, respectivamente. Las figuras 14 a 16 muestran los estados de las biopelículas en los experimentos para los líquidos de ensayo que contienen Compuestos Comparativos 1 a 3, respectivamente.

30 Según esos resultados, en el ensayo de control que usa el líquido de ensayo de control, se observó que Pseudomonas aeruginosa (cepa PAO1 de expresión de gfp) formó una gran biopelícula gruesa que creció adicionalmente incluso más tras un cultivo de diez días. Por el contrario, en el ensayo que usa el líquido de ensayo que contiene Compuesto 1a-1, 1b-1, 1c-1 o 1c-2, se observó la desaparición gradual con el tiempo de la biopelícula depositada (figuras 10 a 13). También, se observó visualmente la exfoliación gradual de la biopelícula depositada

35 desde la pared de la celda, y los copos circulantes de la exfoliación de la biopelícula en la celda. En los líquidos de ensayo que contienen los Compuestos 1c-1 y 1c-2, la biopelícula se redujo en primer lugar y después aumentó nuevamente tras un cultivo de seis días, antes de reducirse nuevamente hasta su desaparición (figuras 12 y 13). Esto muestra que la formación de la biopelícula y la eliminación se producen de forma alterna. Mientras tanto, en el ensayo que usa los líquidos de ensayo que contienen Compuestos Comparativos 1 a 3, no se observó tal

40 desaparición de la biopelícula (figuras 14 a 16). Este resultado mostró que los Compuestos 1a-1, 1b-1, 1c-1, y 1c-2, preparados en los Ejemplos 1, 3, 5 y 6 de Producción son eficaces arrancando o eliminando biopelículas depositadas.

Ejemplo 4 del experimento

45 Ensayo de evaluación para el efecto desinfectante

Se examinaron los siguientes compuestos de ensayo para las actividades desinfectantes frente a Pseudomonas aeruginosa, E. coli y Staphylococcus aureus, según un método de dilución de caldo de “CLSI(M7-A7)2006” (Clinical

50 and Laboratory Standards Institute, M7-A7, Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard-Seventh Edition, 2006).

Compuesto de ensayo

55 (1) Carbenicilina (CBPC),

(2) Ceftazidima (CAZ),

(3) Tobramicina (TOB), 60

(4): Azitromicina (AZM),

(5): Sal de hidrocloruro de Compuesto 1a-1 (Ejemplo 1 de Producción)

65 (6) Sal de hidrocloruro de Compuesto 1a-2 (Ejemplo 2 de Producción)

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(7): Sal de hidrocloruro de Compuesto 1b-1 (Ejemplo 3 de Producción)

(8): Sal de hidrocloruro de Compuesto 1b-2 (Ejemplo 4 de Producción)

5 Obsérvese que, (1) a (4) son antibióticos conocidos.

Bacterias evaluadas (proporcionadas por el Profesor Dr. Suga del Tokyo University Research Center for Advanced Science and Technology)

10 Pseudomonas aeruginosa PAO1

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Escherichia coli ATCC 25922

15 Staphylococcus aureus ATCC 29213

Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) ATCC 43300

20 Método de ensayo

Cada una de las bacterias mencionadas anteriormente se inoculó en un medio de cultivo TSB (Bacto TSB Broth, producto de BD) para el cultivo durante toda la noche a 37ºC. La disolución de cultivo se aplicó a una placa de agar TSB para el cultivo de alrededor de 20 horas para formar colonias. Se tomaron tres a cinco colonias de la placa de

25 agar, y se inoculó una colonia promedio de ellas en 4 ml de medio de cultivo TSB. La colonia se cultivó a 35ºC hasta que el número de microorganismos alcanzó 1 x 108 a 2 x 108 CFU/ml. El número de microorganismos con el tiempo se encontró midiendo cambios en la absorbancia a 590 nm de disolución de cultivo con el tiempo. Cuando la turbidez se hizo equivalente a 0,5 del patrón McFarland, se determinó que el número de microorganismos alcanzó el nivel diana = 1 x 108 a 2 x 108 CFU/ml.

30 La disolución de cultivo de bacilo así obtenida se diluyó 10 veces en 15 minutos, y se inoculó una porción de 5 µl en cada pocillo de una microplaca de 96 pocillos de evaluación. Esta microplaca de 96 pocillos fue una microplaca de 96 pocillos esterilizada con fondos con forma en U (Falcon 35-3918: producto de BD), y cada pocillo se llenó con una porción de 100 µl de medio de cultivo MH (BBL MH Broth: producto de BD). En 15 minutos tras la inoculación de las

35 disoluciones de cultivo de bacilo, los compuestos de ensayo se suministraron al pocillo en una dilución graduada de 2 veces. El cultivo se llevó a cabo entonces a 37ºC durante 18 horas.

La MIC se determinó según lo siguiente. “S (susceptible)” indica una concentración que provocó una reducción del 80% o más en el diámetro de la agregación depositada en el fondo del pocillo, en comparación cuando no se usa el

40 líquido de ensayo. “R (resistente)” indica una concentración que provocó una reducción menor que 80% en el diámetro. La reducción se midió visualmente. “I (intermedia)” indica una concentración que no se puede medir visualmente.

Resultados del ensayo

45 La Tabla 2 muestra las medidas de las propiedades desinfectantes de los compuestos conocidos (1) a (4) (CBPC, CAZ, TOB, AZM). La columna derecha de la Tabla 2 muestra medidas publicadas de sus actividades desinfectantes, según el método de dilución de líquido “CLSI(M100-S16)2006” (Clinical and Laboratory Standards Institute, M100-S16, Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Sixteenth Informational Supplement, 2006).

50 Tabla 2

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E. coli ATCC 25922 MIC (µg/ml) R I: S E. coli ATCC 25922 MIC (µg/ml) de M100-S16

CBPC ≤8 16 CAZ ≤0,063 0,125 TOB ≤0,25 0,5 AZM ≤2 4: ≥32 ≥0,25 ≥1 ≥8 CBPC CAZ TOB AZM ninguno 0,06 -0,5 0,25 -1 ninguno

S. aureus ATCC 29213 MIC (µg/ml) R I: S S. aureus ATCC 29213 MIC (µg/ml) de M100-S16

CBPC ≤8 ---CAZ ≤2 4 TOB ≤0,125 0,25 AZM ≤0,5 1: ≥16 ≥8 ≥0,5 ≥2 CBPC CAZ TOB AZM ninguno 4 -16 0,12 -1 0,5-2

MRSA ATCC 43300 MIC (µg/ml) R I: S

CBPC ≤16 32 CAZ ≤4 8 TOB ≤64 128 AZM ≤1024 --: ≥64 ≥16 ≥256 ---

Debido a que este dato es consistente con el dato dado por el ensayo anterior, se confirmó que el ensayo anterior evaluó apropiadamente las actividades desinfectantes de los Compuestos (1) a (4).

La Tabla 3 muestra el resultado para cada hidrocloruro de los Compuestos 1a-1, 1a-2, 1b-1 y 1b-2 de la presente invención.

Sal de hidrocloruro del Compuesto 1a-1

MIC (µg/ml) R: I S

P. aeruginosa PAO1 ≤32 P. aeruginosa ATCC 27853 ≤32 E. coli ATCC 25922 ≤4 S. aureus ATCC 29213 ≤4 MRSA ATCC 43300 ≤4: 64 64 8 8 8 ≥128 ≥128 ≥16 ≥16 ≥16

Sal de hidrocloruro del Compuesto 1a-2

MIC (µg/ml) R: I S

P. aeruginosa PAO1 ≤512 P. aeruginosa ATCC 27853 ≤512 E. coli ATCC 25922 ≤128 S. aureus ATCC 29213 ≤128 MRSA ATCC 43300 ≤128: ---------- ≥1024 ≥1024 ≥256 ≥256 ≥256

Sal de hidrocloruro del Compuesto 1b-1

MIC (µg/ml) R: I S

P. aeruginosa PAO1 ≤32 P. aeruginosa ATCC27853 ≤32 E. coli ATCC 25922 ≤8 S. aureus ATCC 29213 ≤4 MRSA ATCC 43300 ≤4: 64 64 --8 8 ≥128 ≥128 ≥16 ≥16 ≥16

Sal de hidrocloruro del Compuesto 1b-2

MIC (µg/ml) R: I S

Según la Tabla 3, esos compuestos tienen actividades desinfectantes comparables a la de los antibióticos 10 existentes.

Efecto de la invención

El compuesto de la presente invención es capaz de inhibir la formación de biopelícula y eliminar biopelículas

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formadas, resolviendo de ese modo diversos defectos provocados por biopelículas formadas por microorganismos.

Con la característica particular de inhibir la formación de biopelícula por bacterias patógenas de la periodontitis o Pseudomonas aeruginosa y también de arrancar o eliminar las biopelículas ya formadas, el compuesto de la

5 presente invención es útil para diversos fines. El compuesto de la presente invención es también eficaz para tratar infecciones por biopelícula intratables. Con esta característica, el compuesto de la presente invención contribuirá enormemente a una cura completa de las infecciones por biopelícula.

Por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa, que existe en cualquier parte en el entorno natural, requiere una pequeña

10 cantidad de materia orgánica y humedad para reproducirse y crecer en una biopelícula. Por lo tanto, Pseudomonas aeruginosa provoca a menudo infecciones intrahospitalarias, microbismo sustituido, infección oportunista, y defectos sanitarios en tuberías de agua o tanques de almacenamiento de agua.

Además, las bacterias patógenas de la periodontitis forman una biopelícula denominada placa, que provoca olor oral

15 o enfermedades intraorales tales como periodontitis o piorrea alveolar. Se ha conocido públicamente que la eliminación de la placa es importante en la higiene intraoral o para el tratamiento de enfermedades intraorales. Sin embargo, como se describe anteriormente, las biopelículas son resistentes hasta cierto grado a fármacos tales como desinfectantes.

20 A partir de este problema, el eliminador de biopelícula o el inhibidor de la formación de biopelícula de la presente invención inhibe la formación de biopelículas por Pseudomonas aeruginosa en tuberías o tanques de almacenamiento de agua en instalaciones hospitalarias o residencias privadas, y también facilita la eliminación de biopelículas depositadas, evitando de ese modo infecciones intrahospitalarias u otros diversos defectos provocados por biopelículas y mejorando la limpieza medioambiental. El eliminador de biopelícula o el inhibidor de la formación

25 de biopelícula de la presente invención también es capaz de inhibir la formación de biopelícula por bacterias patógenas de la periodontitis y eliminar biopelículas formadas por bacterias patógenas de la periodontitis, encontradas en dientes, encías o materiales dentales intraorales, evitando o tratando de ese modo eficazmente la enfermedad gingival tal como periodontitis o piorrea alveolar, enfermedades intraorales tales como estomatitis, así como reduciendo el olor oral.

30 El compuesto de la presente invención, particularmente un compuesto representado por la Fórmula General (1) que contiene un sustituyente Q representado por la Fórmula (Q1), o una sal del mismo, tiene excelente actividad desinfectante con respecto a muchos tipos de bacterias, incluyendo Pseudomonas aeruginosa, E. coli, y Staphylococcus aureus. Por lo tanto, el compuesto es útil para desinfectantes.

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Compuesto amídico representado por la fórmula general (1) o sal del mismo:

imagen1

en la que R1 es un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxilo, R2 es un grupo alquilo de C7-11, y Q es un sustituyente representado por la fórmula (Q1) o (Q2),

imagen2

en las que n ym son 0o 1,

15 en las que, si Q es un sustituyente representado por la fórmula (Q2) en la que n es 0, R2 es un grupo alquilo de C7-10.
2. Compuesto amídico o sal del mismo según la reivindicación 1, en el que, en la fórmula general (1), Q es un

sustituyente representado por la fórmula (Q1) en la que m es 0. 20
3. Compuesto amídico o sal del mismo según la reivindicación 1, en el que, en la fórmula general (1), Q es un sustituyente representado por la fórmula (Q1) en la que m es 1.
4. Compuesto amídico o sal del mismo según la reivindicación 1, en el que, en la fórmula general (1), Q es un 25 sustituyente representado por la fórmula (Q2) en la que n es 0.
5. Compuesto amídico o sal del mismo según la reivindicación 1, en el que, en la fórmula general (1), Q es un sustituyente representado por la fórmula (Q2) en la que n es 1.

30 6. Compuesto amídico o sal del mismo según la reivindicación 1, en el que el compuesto amídico representado por la fórmula general (1) es al menos un compuesto seleccionado de entre:

N-(pirrolidin-3-il)decanoilamida, N-(pirrolidin-3-il)dodecanoilamida,

35 N-(piperidin-4-il)decanoilamida, N-(piperidin-4-il)dodecanoilamida, N-(pirrolidin-1-il)dodecanoilamida, N-(pirrolidin-1-il)-3-hidroxidodecanoilamida, N-(piperidin-1-il)dodecanoilamida.

40
7. Eliminador de biopelícula que contiene el compuesto amídico o sal del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, como principio activo.
8. Eliminador de biopelícula según la reivindicación 7, en el que la biopelícula es una película formada por 45 Pseudomonas aeruginosa o bacterias patógenas de la periodontitis.
9. Inhibidor de la formación de biopelícula que contiene el compuesto amídico o sal del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, como principio activo.

50 10. Inhibidor de la formación de biopelícula según la reivindicación 9, en el que la biopelícula es una película formada por Pseudomonas aeruginosa o bacterias patógenas de la periodontitis.

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11. Desinfectante que contiene el compuesto amídico o sal del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, como prinpicio activo.
12. Desinfectante según la reivindicación 11, en el que el compuesto amídico está representado por la fórmula 5 general (1) en la que Q es un sustituyente representado por la Fórmula (Q1) en la que m es 0 o 1.
13. Desinfectante según la reivindicación 11, en el que el compuesto amídico es al menos un compuesto seleccionado de entre:

10 N-(pirrolidin-3-il)decanoilamida, N-(pirrolidin-3-il)dodecanoilamida, N-(piperidin-4-il)decanoilamida, y N-(piperidin-4-il)dodecanoilamida.

15 14. Composición oral que contiene el eliminador de biopelícula según la reivindicación 8 para eliminar biopelículas formadas por bacterias patógenas de la periodontitis, el inhibidor de la formación de biopelícula según la reivindicación 10 para inhibir biopelículas formadas por bacterias patógenas de la periodontitis, o el desinfectante según la reivindicación 11.

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