TW200536549A - Enhancement of anti-androgenic activity by a combination of inhibitors targeting different steps of a steroid-dependent gene activation pathway and uses thereof - Google Patents

Description

200536549 ^ 九、發明說明： 本申請案主張2陶年。i月2S曰提申的美國第 6〇/539, 753號暫時中請案之優先權，該暫時中請案之名稱 為「以標的雄激素誘於会 ^ X之4激素接党器活化路徑之不同步 驟的抑制物組合增進叔 曰進抗雄激素活性以及其應用」，其内容 在此作為本案的參考文獻。 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關於治療類固醇（ster〇⑷相關之醫學狀 況的-般性方法及組合物。尤其是，本發明包含一種藉由 施用至少兩種以上類固醇受器（recept〇r)基因活化路徑中 不同步驟為標的之化合物，而能抑制或降低類固醇依存 (steroid-dependent)基因活化之新穎方法及組成物。 【先前技術】 雄激素受器（androgen receptor，AR)為類固醇受器超 家族（superfamiiy)之一員。當類固醇受器與其同源激素配 體（cognate hormone 1 igand)結合時，類固醇受器具有轉 錄因子的作用。類固醇受器通常包含一配體結合功能區 (ligand binding domain, LBD)、一 鉸鍊區（hinge region)，以及一 ΜΑ 結合功能區（DNA binding dournin， DBD)。 雄激素藉由進入標的細胞内並與特定之雄激素受器結 合以產生作用，導致雄激素所調控之基因活化。雄性的循 0883-6823-PF；Chiumeow 5 200536549 環雄性激素，例如睪固啸如⑽^隱），在末端組織 (penpherai tissues)細胞中經過 5—alpha 還原酶 (5-alpha reductase enzyrae)的作用，會轉變為主要的細 胞内雄激素，二氳睪固酮（dihydr〇test〇ster〇ne，mt)。 西藥a司已經開發的藥物，不是能抑制睪固酮轉換為二氫 睪固酮’就是能干擾雄激素與雄激素受器之間的結合。例 如，5-alpha還原酶抑制劑，柔沛（finasteride，即化⑽⑶ 與Propecia) ’以及雄激素—雄激素受器結合抑制劑，氟他 胺（fIutamide)與比卡魯胺（biCalutamide，即

Casodex) ’為非類固醇之抗雄激素，並用來治療良性前列 腺 θ 生（benign prostate hyperplasia)、禿髮 (dness)如列腺癌（prostate cancer )以及其他雄激素 疾病然而，k些抗雄激素藥物可能引起副作用，例如某 t接X冶療的男性會陽疼。這主要導因於這些抗雄激素對 於雄激素活性的無差別性(_-discriminatory)抑制作 用。 雄激素引發之雄激素受器活性路徑是一種多步驟的過 程（例如，Lee and Chang (2〇〇3) j. cun· Εη — Γίη〇ι Μ^.，88: 4043 —4〇54，其内容在此作為本案的參考文 獻）並非僅為簡單的雄激素與雄激素受器的結合。雄激素 活性路徑可由以下步驟摘要說明： ’、 1 ·雄激素又裔之表現：雄激素標的細胞（對雄激素有反 應）’在其細胞核中帶右 ☆。 V有雄激素受器基因，藉由轉錄雄激素 又的基因（DNA)為雄激素受器信使RNA(mRNA)，來表現雄激 -6823-PF；chiumeow 200536549 素受器蛋白。雄激素受器信使驗轉移到細胞質，在此合 成雄激素受器。合成之雄激素受器蛋白與伴隨蛋白 (chaper_prQtein)形成複合體，其中伴隨蛋白係指熱休 克蛋白（heat Sh〇ck protein’ hsP)，如 hsP70 與 hsP90， 可以穩定雄激素受器蛋白，並協助維持與雄激素受器蛋白 配體（雄激素）的親和性。 2.細胞内雄激素之轉換：來自體循環的睪固酮進入標 的細胞後，經由酵素5_alpha還原酶工與丑的作用轉變: 鲁主要細胞内雄激素’：氫睪固_ (仙加㈣㈣打咖 DHT)。 ， —3·雄激素受器之活化、二聚化（Dimerizati〇n)、以及 定位（Lc^alization) ··細胞質的雄激素（二氫睪固酮）會與 雄激素受器結合，這些雄激素受器與伴隨蛋白分離，形成 雄激素一雄激素受器複合體，1隨後轉移至細胞核。在結合 ”轉移的過私中，雄激素—雄激素受器複合體會經蛋白質激 鲁酶（protein kinasO磷酸化，並進行二聚化。 4·與雄激素受器共同調節子（c〇 —Reguiat〇r^交互作 用：二聚化之雄激素受器蛋白亦可能與其他調節蛋白交互 作用，也就是說，雄激素受器共同調節子或是雄激素受器 相關蛋白（ARA)，可以正調節或負調節雄激素受器活性。 人5·雄激素反應單元（Androgen Response Element)之結 。·在細胞核内，雄激素-雄激素受器-ARA複合體作用為 轉錄因子’會與雄激素調節基因之啟動子區域上的雄激素 …單元（ARE)、、O a，並補充其他與一般轉錄機制有關之調 0883-6823-PF；Chiumeow 7 200536549 郎 蛋白’以引發雄激素反應標的基因的活化(表現或抑制 )。 【發明内容】 本發明包含能抑制或降低類固醇依存基因活化之 方法及組成物，包含施用至少兩種化合物。這些化合^ 對生物樣本施用’例如真核細胞或個體如人類。第：化： 類固醇受器引起之=，：弟二化合物可抑制或降低 活化。弟二化合物可在類固醇 =口活化路仅之不同步驟作用。第二化合物可 與類固醇受器之結合，類固醇受器與類固醇反應單元= 類口醇又益與類固醇受器相關蛋白或辅因子“““。。 之結合，類固醇受器之細胞核移轉（nuclear transfer)， :固醇受器之轉錄’或是類固醇受器之轉譯。當 時施用至少兩種化合物時，相較於只施用-種化合物的情 形’類固醇依存基因活化可以被更強烈地降低或抑制。 本卷月之另—型態係揭露-種組合物，包括可誘導類 固，受器降解之第—化合物與可抑制類固醇受器活化基因 之弟二化合物。第—與第二化合物作用在類固醇受器路徑 之不同處或步驟。 本另-型態係揭露一種醫藥組合物，包括能誘 類固醇又盗降解之第一化合物或其藥學上可接受之睡 類，可抑制類固醇依存基因活化之第二化合物或其藥學I 可接受之鹽類，以及藥學上可接受之稀釋劑(diluent)、佐 劑Udwt)或載體（carrier)。第一與第二化合物作用在 〇883-6823-PF；Chiume〇w 8 200536549 嘴類固醇受器路徑之不同步驟，以及當組合施用時，提供治 療的有效劑量。當類固醇受器為雄激素受器時，可能的化 曰物例子包括，但不限於，薑黃素（curcumin)衍生物或 類似物（例如但不限於，ascj__9以及ASCJ —15)、比卡魯胺 (bicalutamicie)、輕基氟他胺（hydroxyflutamide)、二十 一石反六烯酸（Decosahexanoid acid， DHA)、水飛薊素 (silibinin， SB)、槲黃素（qUerce1：in)、柔沛 (f inasteride)、度他雄胺（dutasteride)、或是其功能性 φ 衍生物。 本發明之另一型態係為揭露一種預防或治療人類由雄 激素調節之醫學狀況的方法，包括提供一疑似患有雄激素 調節之醫學狀況之個體，以及施用治療有效劑量的至少一 種揭露的醫藥組合物。醫藥組合物包括至少兩種可以降低 或抑制類固醇依存基因活化，並作用於類固醇受器活化路 徑不同步驟之化合物。較佳地，前述之至少兩種化合物組 a或同呀施用時，相較於獨自施用，較大程度地降低或抑 制類固醇依存基因活化。可由本發明獲得好處之醫學狀 況，包括，但不限於，痤瘡（acne)、多毛症（hirsutism)、 雄性遺傳脫髮（androgenetic ai〇pecia)、良性前列腺增 生、前列腺癌、膀胱癌、肺癌、肝癌、乳癌以及子宮頸癌。 本發明之另一型態係揭露治療創傷或發炎反應之方法 與組合物，該方法包括讓需要治療創傷或發炎之個體，局 部地施用一或多種揭露之化合物、醫藥品或是化妝品。 本發明之另一型態，提供於人體施用揭露之組合物或 0883-6823-PF;Chiumeow 9 200536549 醫藥品之方法’作為治療、 活化有關之醫學狀況。本方 覆於脂質體（liposome)中， 組合物或醫藥品。 抑制或降低與類固醇依存基因 法亦包括將組合物或醫藥品包 並對需要之個體施用經包覆之 【實施方式】

本發明包括調控類固醇依存基因活化之方法與組合 物。本發明所陳述之方法舆組合物，包括使用至少兩種化 合物，分別能調節（mCKiulatlng)、抑制（inhib⑴ng)、壓 抑（suppressing)或降低（reduci 效果或活化。利用兩種化合物作 ng)與類固醇受器相關之 用於類固醇受器活化路徑 之不同步驟，可允許額外的調節或抑制類固醇受器之效果 或活性。相較於獨立地使用或是單獨施用―種化合物，利 用兩種化合物’可提供增強之抑制、調控或調節。 I .使用#制物組合以抑制或降低类員固醇依存基因活化之 方法 本發明包括使用抑制物組合以調節或降低類固醇受器 效果之方法。類固醇受器，例如雄激素受器、黃體素受器 (progesterone receptor, PR)、糖皮質素受器 (glucocorticoid receptor，GR)、甲狀腺受器（thyr〇id receptor)、過氧化物酶增殖體活化受器（per〇xis〇me proliferator-activated receptor，PPAR)、類視色素 χ 受器（retinoid X receptor，RXR)、以及孤生類固醇受器 (orphan steroid receptor)、與類似物，藉由—系列事件 0883-6823-PF;Chiumeow 10 200536549 螬 來調節基因轉錄，從類固醇與 妳南麵同^ / 、頰固醇受器結合為起點，並 、.二由類□ S子文器與對應之類 、醇反應單元（steroid response element，SRE)之交万从 且駚沾—* 用，導致基因活化。更 具體的祝，類固醇受器基因調 叙箱㈤^ ^ %〉舌化路徑可包括類固醇 與類固％文為結合，類固醇受哭 ^ 、、 、J〜聚化（選擇性地形成同 銶一汆體（homodimer))，類固醇A _ 醢#哭钍入石祕 又态移轉至細胞核，類固 知又裔結合至辅因子（如ara)， δί反；碩固醇受器與適當之類固 知反應早兀之結合，以及其他轉錄 出#㈤$丨 、子選擇性地活化。藉 由施用至父兩種作用於類固醇受哭？ 提供一籀斟τ rru 扣路徑之化合物，本發明 挺i、種對不同狀況具有潛力之治 Λ鍤仆人从从 蜃方式。較佳地，至少 兩種化合物作用於類固醇受器路栌 Β 士 田々 Λ 二I不同步驟’例如當同 寸把用或以協力方式施用時，化合 受哭t β I 、^ D々可在兩處調節類固醇 又益之效果。這可提供較強之 因之喟鲔 * η 制次疋抑制類固醇依存基 因之調即，並因此可提供 點。 Μ或類固醇相關狀況之優 前述之方法可應用於生物樣本， Λ噠鹼日沾工舰， 匕括分離之細胞，如 為4驗目的而體外培養之真核 適合的個體包括，研究用哺乳動物，個體。 益的’例如餐齒動物、兔形目、犬科有經濟利 及非人靈長類動物。個體可包括任何年齡、、’，、牛以 況之人類個體。特別有興趣之研究個體/勺別或生理狀 士门 暇包括經診斷且有， 或疋有風險會發生疾病或醫學狀況者： 醇或類固醇受器活性影響者。這些例 :Ρ刀又類口 受雄激素或雄激音、<,包括，但不限於， 激素叉湖、黃體素或黃體素受器(PR)、 0883-6823-PP;chiume〇w ^ 200536549 雕激素或雕激素受器（EF)， 乂及，、他類似情形所影響之狀 況。可由前述方法或化合物治 展之疾病或醫學狀況，包括， 但不限於，癌症，例如前列腺癌、肝癌、膀耽癌、子宮頸 癌、肺癌、以及乳癌，以及其他牵涉雄激素受器活化路徑 之癌症；神經或神經肌肉異常 一吊 a栝，但不限於，甘乃迪 症（Kennedy disease);皮膚症、忘，加丄—士 反〜疾病例如痤瘡，其係由於皮 月曰腺經雄激素誘導雄激辛受哭 I又斋活化而造成的；毛髮疾病例 如多毛症以及雄性遺傳脫髮，戋稱 交 4聃雖性禿（male pattern baldness)，其中脫髮是由毛量盥H、喜 及疋田七襄舁周邊細胞中的雄激素受器 所引起；以及創傷復原或是發炎反應的治療。 在許多胚胎與成年人類組織中，有兩種雄激素受器的 異構物以免疫學可檢測的形式表現，分別為全長之a rβ型 與 Ν 端剪接之 AR-A 型（Wils〇n and Mcphaui，ΐ 996)。在雄 性與雌性胚胎之生殖組織中均可發現高量雄激素受哭，而 在非生瘦之胚胎組織中有不同含量。成人生殖組織中亦發 現高量雄激素受器，例如前列腺、子宮内膜、卵巢、子宮、 輸印管、睪丸、精囊、子宮肌層、以及射精管；而在成人 乳房、結腸、肺以及腎上腺組織中含量較低。對發育以及 雄性生殖器官的適當功能，雄激素受器路徑特別重要，如 同在非生殖器官（包括肌肉、毛囊、以及腦部）—般。這與 數種疾病或狀況的病理學有關，包括前列腺癌、雄性不孕\ 以及甘乃迪症。 前列腺癌是就發生率以及普及率而言，美國男性最常 見的惡性腫瘤。它是美國最常檢驗到的腫瘤，也是美國男 0883 -6823-PF;Chiume〇w 12 200536549 "性癌症相關死因的第二名（Boring等人，1 992)。每年超過 18萬名男性得到前列腺癌’約與得到乳癌的女性人數相 當。1 999年造成31，900名美國男性死亡，僅次於肺癌。 前列腺癌每年發生率的增加，與美國男性人口的老化相關。 前列腺癌細胞依靠雄激素受器的雄激素誘導活化而生 長。當第一次診斷時，大部分前列腺癌與雄激素相關 (lieinlein and Chang，2〇〇4)，因而可以抗雄激素治療。 一種轉移性前列腺癌（metastatic pr〇state cancer)的有 •效療法是雄激素阻斷療法（androgen blockage therapy)， 利用手術或化學去勢（castrati〇n)，搭配抗雄激素治療， 以抑制雄激素的生物活性（Crawford等人，1 989)。然而， 腫瘤對反應類固醇消耗的中數期間（median duration)僅 有1 8至36個月，而癌症幾乎總是會復發，並變成對雄激 素不反應。在這類例子中，病患面對較不欲使用的療法， 例如化學療法。某些例子中，抗雄激素的變化延遲了再發 鲁性前列腺癌的進程（Dupont等人，；[993 ; Tapi in等人， 1 9 9 9 )’顯示經特定抗雄激素療法復發的前列腺癌，可能會 對不同的抗雄激素有反應。 甘乃迪症’又稱甘乃迪氏症（Kennedy ’ s disease)、 脊知延髓肌肉萎縮症（spinal bulbar muscular atrophy， spinobulbar muscular atrophy, SBMA)、或甘乃迪症候群 (Kennedy s Syndrome)，參照 Paul Ε· Barkhaus (2003)， 線上 電子文 獻 : ht.tp //www. emedicine. com/neuro/t〇Dic421. htm(存取日 0883-6823-PF；Chiumeow 13 200536549 期 2004 年 〇4 月 ις \ θ 曰），疋一種罕見的、隱性性聯遺傳 麵肉性疾病，估計全世…萬人中有1人。甘乃迪症 係認^由於雄激素受器突變所引起，在雄激素受器基因 ^ 有異常的聚穀醯胺（PQlygiutamine)延展；此為持 6 /而且目别無法醫治之疾病。脊髓與延髓的神經元都 受到影響，造成肌肉無力與全身性萎縮，大部分在四肢盘 臉部以及喉部非常明顯。甘乃迪症造成說話與吞儀困難、 主要肌肉瘦攣，以及其他症狀。此為好發於成人之疾病， 症狀通吊^生在3〇至5()歲之間，雖然曾有較早發病之紀 錄。只有帶有此遺傳基因之男性會發生本病的全部表型 (phenotype)，反之，帶有基因的女性異質接合子 (heterozygous)通常為無症狀之載體。有些例子中，甘乃 迪症的女性異質接合子會顯現亞臨床（subcl inical)的表 形表現。期望哥命通常不會受影響。 將π有延展之聚穀醯胺片段之突變的AR以實驗轉染 至細胞中，例如質體p6RARQ49與p6RARQ77，顯示與降低 之轉錄活化（transactivati〇nai)功能，以及在某些例子 中’與細胞内未折疊之AR蛋白質内含體相關（Chamberlain 等人 ’ 1 994 ’ Nucleic Acid Res·，22 _· 3181 -3186，其内 容在此作為本案的參考文獻）。細胞内不正常的AR累積是 具有細胞毒性的’會引發神經元細胞死亡，與甘乃迪症臨 床病理結果一致。 誘發類固醇受器之降解 本發明包括抑制或降低類固醇依存基因活化之方法， 0883-6823-PF;Chiumeow 14 200536549 包括施用可誘發類固醇 可抑制或降低由類固醇受哭/器降解之化合物，並與 協力或同時施用，較佳者為。化…^ 不同處或步驟上。當丑间：用在頰固醇受器活化路徑之 ^ ^ ^ 用時’化合物的組合可能提供 支曰效的（synergistic) b焚仏 用。第二化入物了 成的（addltwe)或增強的抑制作 能千叫° "J類固醇轉換為其較有活性的型 :，干擾或抑制類固醇與類固醇受 類固醇受器與對應之反靡I_ 卞摱次抑制 ,, …凡之結合’干擾類固醇受哭盥 辅，或類固醇受器相關蛋白（如選自 用，降低或預防類固醇受器之細胞核移轉，降低戈 抑制類固醇受器之榦鉻+ θ 抒得降低或 釋。 〜或疋干擾或抑制類固醇受器之轉 田本發明之方法應用於降低或抑制雄激素依存基因活 化，車父佳者為至少—種所施用的化合物可誘發雄激 ^降解。能誘發雄激素受器降解之化合物，包括不同之蕃 黃素衍生物或類必％ 1 ~ 似物，例如，但不限於，ascj-9 AS仏15。本發明所包含之衍生物或類似物，包括變化、簡 化或添加結構特點之薑黃素化合物，可導致類固 素受器之降解。 又 經基雙―（3,4-二甲氧基—苯基）—U，6 —庚三婦—3嘴 one)(5 hydroxy^i5 7>Bis-(3,4-dimethyoxy~pheny1)-ι5 4 ，6-heptatriem —〇ne))，其結構如下所示·· 0883-6823-PF；Chiume〇w 15 200536549 〇

OH H3CO^^^ ASCJ-15(7-（4-經基-3 -甲氧基-苯基）-4一[3一（4-經基 -3-甲氧基-苯基）-丙烯醯]-5-酮基-庚—6-烯酸乙酯 (7-(4-Hydroxy-3-methoxy-phenyl)-4-[3-(4-hydroxy-3-methoxy-pheny1)-acryloy1]-5-oxo-hept-6-enoic acid

ethyl ester))，其結構如下所示： 〇 〇

第1圖與第2圖描述藉由施用薑黃素衍生物ascj_15 後，雄激素受器的降解。化合物ascj_9與ascj_i5具有相 似的降解能力。其他可能具有特定用途之薑黃素衍生物及 類似物化合物，記載於美國專利第6,79〇,979號，其内容 在此作為本案的參考文獻。 一或多種類固醇受器降解的機制可藉由本發明之方法 或化合物而受利用或誘導。輕祛 ' 乃守早又佳地，化合物的施用導致標 的類固醇受器的專一性降解，士駚^ ^ f I幸解大體上並無變化其他非椤 類固醇受器之含量或活性。 π 在標的組織或細胞種類t，可能希望誘導標的類固醇 0883-6823-PF；Chiumeow 16 200536549 受器的降解為不同的劣口存 ,. 、 丨]的耘度。例如，若不同組織或細胞種類 對於所給予之不同程度類固醇有反應，會希望能誘導某一 種組織或細胞種類中適當的類固醇受器降解，而非其它的 種類組織或細胞；或者可能依照組織或細胞種類的不同， 能降低標的類固醇受器的量至不同閥值（thresholds)或程 度。在某些例子中，本發明之方法可能包括施用含量能有 效降解所給予之組織或細胞種類中標的類固醇受器的化合 物，因而降低類固醇受器的效果至預期的程度。例如，告 前述類固醇受器為雄激素受器時，期望之雄激素受器的= 量可能為大體上不會對循環中雄激素有反應的程度。 本發明之方法可使用一或多種適當機制來誘導類固醇 受器的降解。這些機制，包括，但不限於，干擾類固醇受 器移轉至細胞核中或是維持類固醇受器停留在細胞質中； 暴露類固醇受器的單元(mot⑴會誘導蛋白質酶的活性；蛋 白質酶的增強活性可降解類固醇受器；抑制類固醇受器的 穩定度；降低類固醇受器的可溶性；活化能降解類固醇受 器的反應路徑；增強.類固醇受器的輔酶q作用 (ubiquination);藉由適當的激贿f^ 、 、田曰h敦_Uinase)增加類固醇受 器的鱗酸化作用（ph〇Sphc)ry】at iQn)，例如，以雄激素受器 為例’藉由活A Akt激酶，其至少在某些案例中會磷酸化 雄激素受器’將導致受器的辅酶Q作用與後續蛋白酵體 (咖的讀）的降解作用，例子可參照：⑽心⑽

Chang (2004) and Lin t Λ (2002) EMB〇 J., 21:4037-4048,其内容在此作為本案的參考文獻；誘導細 0883-6823-PF;Chiumeow 200536549 胞洞亡（ap〇pt〇Si S);或是降低類固醇受器與能穩定類固醇 受器之輔因子，如ARA，之交互作用。 予 在某些實施例中，本發明之方法包括藉由干擾_ ϋ 受器移轉至細胞核，以誘導類固醇受器之降解。例如，雄 激素受器與許多其他類固醇一樣，會從細胞質轉移到細胞 核，並在核中用鋅指單元（zinc_f零r motif)調節基因。 當阻斷核移轉或是保持雄激素受器位於細胞質中，雄激素

受器會經歷蛋白質分解作用，並因此無法影響細胞核驗 或調節基因。 在其他的實施例中，本發明之方法與組合物誘導類固 醇受器的降解，係藉由暴露類固醇受器的内部位置，或稱 早TLUcmf)，而在蛋白質酶存在下能誘導蛋白質水解作 用。此類的暴露可能係經由誘導類固醇受器内部功能區的 構形改變而發生，例如類固醇受器與化合物的結合，或是 類固醇受器功能區的磷酸化作用。一般相^，雄激素受器 可藉由輔酶Q(ubiquitin)依存蛋白酵體路徑，或是選擇性 地，藉由獨立地獨亡酶（caspase)-3 —依存路徑而降解（[Μ and Chang (2003))。證據顯示，辅酶Q依存蛋白酵體路徑 包括在雄激素受器鉸鍊區有大量保守性的ρΕ§τ(脯胺酸 (prollne，P)、麩胺酸酯（glu忭㈣忱，E)、絲胺酸（％rine， S)、息寧胺酸（threonine，T))序歹,j的存在，其被認為是輔 酶Q作用的標的蛋白質；且發現蛋白酶體抑制作用會導致 雄激素叉裔濃度升高（Lin等人（2〇〇幻j·， 21:4037-4048)。雄激素受器是一種磷酸蛋白，並可經Au 0883-6823-PF；chiumeow 18 200536549 ‘進行磷酸化。Akt的組成性表現（c〇nstitutive⑽） 會增強雄激素受器輔酶Q作用，且在雄激素二氫睪固酮 (DHT)存在或缺乏下皆會顯著地降低雄激素受器含量；dkt 的效果可以被蛋白酶體抑制劑MGi 32所阻斷等人， 2 0 0 2年）。另夕卜，Ak十ϋ曰/p—Γ .

Γ ΛΚΐ被相^可以磷酸化Mdm2，一種輔酶Q 接合酶（ubiqui tin 1 igase Μ 1 i , 上 Mdse，ligase);Mdni 與 Akt 以及 雄激素受器形成複合體，忐A 紅主/ , 般成為對雄激素受器作用之E3接合 酶，並促進雄激素受器輔_ n从 補K Q作用，之後將被蛋白酶體降 φ 解。 阔亡酶（CaSpase)-3-依存路#(Lee _ ㈤叫（2〇〇3)) 係相信為獨立於辅酉每q_蛋白酶體路徑。一種腫瘤抑制子 (tUm〇r SUPPreSS〇r)，嶙酸酶與張力蛋白同源物 (Phosphatase and tensin h〇_gue，ρτΕΝ)的表現，會 干擾L N C a Ρ細胞中雄激夸參哭、絲必 ^ 歲京又益轉移至細胞核，並促成雄激 素受器蛋白降解。PTEN可飴叙祕、紅主/ 』此與雄激素受器之DNA結合功能 區產生交互作用，導致雄激辛夸 京又為、准持於細胞質中以及雄 激素受器的降解。 誇 —4 口符阳丨刀正我丨兮低 類固醇受器的穩定度來誘導類固醇受器的降解。防止 低穩定度’可能藉由抑制二或多個類固醇受器之間的交互 作用’或是藉由防止或降低類固醇受器與辅因子之間的交 互作用來達成。在-個例子中，雄激素受器係相信為會* 弟二個相同的分子經二聚化形成同源二聚體，而增加受哭 的穩定度。二聚化可經由受器胺基端的交互作用而產生： 0883-6823-PF；Chiumeow 19 200536549 =’藉施用化合物來防止二聚化’可降低或消除 '化了月匕誘導雄激素雙器的降解 抑制雄激素受器活化路徑。在另一實施例中， 二 ，辅因子之間的交互作用可以被中斷，從而誘導類固= .的降解。例如，熱休克蛋白(HSP)是—種輔因子，二 並穩定雄激素受器（如同伴隨蛋白對其他蛋白質㈣用^ 一般相信HSP結合至雄激素受器的胺基端功能區 籍由施用化合物，特別地降低㈣子結合與穩定 斯 >卿與胺基端功能區的結合（不影響_盘 F斷 蛋白的結合），可續導# #I > 、八蛋白及伴隨 本/ 了誘導雄激素受器的降解，並因此抑制心 素u活化路徑。在這些不限制的例子中 以借在類固醇受器上任何位置的交互作用，物可 是輔因子的結合。 中斷一t化或 在另一實施例中，本發明之方 物，能干擾或抑制類固醇受 ^ ^用-化合 固醇受器，如雄激素受器，可提供穩定度，:::；至類 醇受器引起之基因活化之專_ 及決疋類固 可以辅助決定何種基因合 y即，ARA蛋白的結合 白已經鑑定出來，並可預見未;響。多種繼蛋 現。ARA蛋白可結合在雄激素总Λ ^ ARA蛋白被發 可為本發明標的之似蛋白：:：基端或幾基端區域。 ARA24、A以54、ARA70、AR c括，但不限於， 物，以及相似物。 267H^街生物、ARA類似 0883'6823-pF^Chiume〇v 200536549 貝知例中’本發明之方法包括藉由類固醇受器 功能區之不穩定性，誘導類固醇受器的降解。例如，有些 研九’4不雄激素文益的AF_2功能區穩定受器的整體結 構’讓胺基端功能區與共同調節子交互作用。能使Ή功 能區不穩定之化合物，與、 牛例來說，藉由交互作用或結合至 ㈣功能區’或是本身具有一能與功能區交互作用 力月區可降低月女基端功能區的穩定度，降低與共同調

節子的交互：用，並增加雄激素受器的降解率。 在另只細例中’本發明之方法藉由活化能降解類固 醇受器之路徑來誘導類固醇受器之降解。例如，祠亡酶—3 路徑顯示能誘導雄激素受器的降解。計酶-3路徑的活 化’可藉由PTEN的存在而產生，例如藉由_與腫填 酸酶功能區的交互作用。因此，能誘導計酶_3路徑的化 合物’可誘導雄激素受器的降解。另一例子中，能鱗酸化 雄激素受器之Akt激酶可被活化，並導致輔酶9作用以及 後續由蛋白_作用之雄激素受器的降解（mkn _

Chang 2004)。 干擾類固醇轉換為其活性型態 t月之另只細*例包括施用能誘導類固醇受器降解 之化合物，配合能抑制或壓抑類固醇轉換為其活性型能或 變化型態。例如，㈣酮藉由酵素一還原酶 (5 - alPha-reductase，5AR)作用，轉變為二氫睪固酮。施 用可以抑制或壓抑酵素5AR活性的化合物，可以降低dht 的存量，並因此壓抑或降低類固醇依存的基因活化。合適 0883-6823-pp；chiume〇w 21 200536549 的抑制子的例子， 施用能抑制墨门 &他雄胺、柔沛，以及類似物。因此， :抑制睪固綱轉換為 物或類似物，可接徂士丄 初如。里K素订生 與雄激专相 ’、放的抗雄激素效果，並可作為各式 素相關疾病之有效療法。 干擾類固醇與類固醇受器之結合 同時施用藉由干降解類固醇之化合物，並聯合或 抑制或降低類固二=固醇與類固醇受器結合，而能 _ 依存基因活化之化合物。 則述兩化合物可 化妝品，或0叮 乂早-組合物方式施用’如醫藥品或 提供作為相：醫二:成分的方式施用。這兩種化合物係 予狀况之療法。 可干擾類固醇與類 類固醇、類固醇受…合之化合物，可能影響 完全貼附，…站/兩者都有。例如，化合物可能 而防止舞门 在類固醇受器之類固醇結合位置， 而防止類固醇與類固醇受位置 物可結合在類固醇受哭 9…。選擇性地’化合 外側。化合物貼附或:;人至±固醇結合位置的外側或是部分 受器構形上的變化員固醇受器，可能造成類固醇 ▲力。可干擾類固醇與 互、， 子，包括，但不限於，比之化合物之例 之衍生物或相似物。 -氟他胺、以及其功能上 干擾類固醇與類固醇 s 醇相關疾病或醫學狀況的療二二’：目前對各式類固 胺以及比卡魯胺為非類固:L如敫辛樂商所開發之氧他 醉之抗雄激素，可用來治療前列 0883-6823-PF；chiumeow 200536549 腺癌。然而，腫瘤香告入 ㊉吊會设發，並變成對激素不反應 (ref actory) 〇 H a 、 … 、^ 一或多種前述化合物的施用，並 聯合或同時施用能誘霉纯 ， 此磚導雄激素受器降解之化合物，例如 不限於，薑黃素衍生物弋 、 物次類似物。本發明可提供雄激素 導之基因活化較強之如生丨 ^ P制，並可提供較單獨使用比卡魯胺 或氟他胺更有效率的療法。 干擾類固醇欠器結合至類固醇反應單元 本發明亦包括施用能誘導雄激素受器降解的化合物以 及能降低、抑制或干擾類固醇受器與類固醇反應單元之結 5的化5⑯#中的類固醇反應單元又稱為類固醇受器反 應單元或是對應反應單元（c〇rresp〇nding⑽啊 element)。 類固醇反應單元（SRE)為内在的遍序列，通常位於標 的基因的啟動子區域，是類固醇受器的結合標的。當通常 具有鋅指單元之類固醇受器結合至對應反應單元，類固醇 受器會啟動轉錄作用。可作為本發明之方法與組合物標的 之類固醇反應單7C的非限制性例子，包括雄激素反應單元 (androgen response element， ARE)、黃體素反應單元 (progesterone response element，PRE)、雌激素反應單 元（estrogen response element, ERE)、糖皮質素反應單 元（glucocorticoid response element, GRE)，以及其類 似物。 本發明之化合物，可干擾或抑制類固醇受器與對應反 應單元之間的結合，包括，但不限於，二十二破六稀酸 0883-6823-PF;Chiumeow 23 200536549 (DHA)、DHA的功能性衍生物，以及其他相似物。dha於雄 激素調節之基因活化的功能已經人研究（Chung等人，

Effects of docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid on androgen-mediated cell growth and gene expression in LNCap prostate cancer cells

CarCin〇genesis 22: 120卜1 206, 200 1 )。本發明顯示 DHA 抑制雄激素受器結合至雄激素反應單元的能力，以及與能 誘導雄激素受器降解之化合物的合併使用。利用實施例丄 揭露之雄激素受器轉錄活化方法以及進—步揭冑於實施例 3舆第4圖的結果，當遍與薑黃切生物贿_15合併 使用時’在體外試驗中發現有抑制前列腺癌細胞生長的增 效性效果。 抑制類固醇受器之核移轉 法盘^明亦㈣可抑制或降低類固醇依存基因活化之方 ’精利用可誘導類固醇受器降解之化合物，再 知^或同時使用至少在某種程度上 移轉之化合物。 b抑制或降低類固醇核 類固醇受器自細胞質轉移 單，結合。因此本發明可降並 核移轉之化合物與方法，會給予p:固醇受器細胞 :或抑制。因而’若搭配施用能降解類固醇:基，活化之降 如量黃素衍生物或類似物，能 U之化合物， 某種程度上能降低或抑制類固二制作用的效果。 物，當位於細胞質中時，合 又益之核移轉的化合 曰作用在類固醇受器複合體上。 0883 '6 8 2 3 ~ PF；Chiumeow 200536549 化合物可能指定或引起類固醇受器的構形變化，可能防止 類固醇受器之二聚化，可能干擾辅因子與類固醇受器之結 合，以及其他類似的作用。本發明提及之化合物的特定例 子，包括，但不限於’水飛薊素（SB)或其功能性衍生物。 ，前已證實水飛萄素可防止雄激素受器之核移轉，如— 等人（Silymaru lnhibits functi〇n 〇f 丨“

receptor by reducing nuclear localization of the receptor in the human prostate cancer cell line LNCaP

CarCin〇genesis 22: 1 399_14〇3, 2〇〇1)。實施例 5 以及第 6圖顯示水飛萄素與勝15，一種薑黃素衍生物，能以加 成方式作用於雄激素引發之基因活化的抑制作用。水飛薊 素與ASCJ-15亦顯示以加成方式抑制前列腺癌細胞生長， 這表示水飛莉素與廳]5可能在治療類固醇相關醫學狀 況方面，具有重要的醫療用途。 降低或抑制類固醇受器之轉錄或轉譯 本發明亦包括能抑制或降低類固醇依存基因活化之方 法與組合物’包括施用能誘導類固醇受器降解之化合物， 以及施用能降低或抑制類固醇受器信使腿（刚幻轉錄的 化合物。 如同分子生物學領域所普遍知道的，觀或顧轉錄 為禮\，再轉譯或表現為蛋白質。因此，類固醇受器的表 =適:地顯不需要類固醇受器基因序列適當地轉 應類固醇受器蛋白的=叫基因序列的轉錄可能降低對 表見，以及允許類固醇受器依存基因 0883-6823-PF;Chiume〇w 200536549 活化的部分抑制。類固醇受器轉錄的抑制可能利用分子生 物學中不同的習知抑制技術。已顯示槲黃素（quercetin QU)在LNUP細胞中會經由雄激素受器而抑制基因活化。如 ^等人所示，在LNCaP前列腺癌細胞t QU力制雄激素 又印的表現與功能（Carcin〇genesis 圓）。本發明所使用的技術，包括，但不限於，抑制或降 低啟動子活性，轉錄因子的活化或刺激能抑制類固醇受哭 的轉錄’干擾聚合酶活性，利用小干擾謝（small

inwring，sim)，利用反意腿（ant卜奸崎繼）技 術’以及相似技術。能抑制雄激素受器轉錄的化合物例子， 包括，但不限於，槲黃素⑽、維生素e號㈣(vitaininE succinate，VES)、及其功能性衍生物。 另外，本發明之方法與組合物包括那些降低或抑制類 固知丈盗的轉譯。揭露的化合物與方法可能利用任何抑制 類固^盗轉譯的習知方法’例如但不限於’影響與類固 :一現相關之調控化合物或序列，或是反意技術的應 η ·能抑制或降低類固醇依存基因活化之組合物 本發明亦包括能抑制或降低類固醇依存基因活化之电 合物，係利用至少兩種化人士 ^ ^ 、、 醇依存基因活化。在有此;:例：個都能抑制或降低類固 固醇受器的降解，而第中’一種化合物能誘導類 活化，藉由作用在類固降Τ醇依存基因 醇依存基因活化的二.=同處或步驟， ^ 帝了此藉搭配或同時施用至少 0883-6823>PF；Chiumeow 200536549 兩種化合物而增加，相 平父僅方也用一猶化私7。哲—/丨人 物可抑f|f相m ^ ®化口物。弟二化合 於，抑二受器路…或多峨，例如但不限 或降2=類固醇與對應之類固醇受器之結合’抑制 民類固醇党器與類固醇反廡 受器與輔因子或類 二之―，干擾類固醇 用U知又态相關蛋白（如ARA)之交互作 受哭的：或降低類固醇受器之核移轉，降低或防止類固醇 作用。的轉錄’降低或抑制類固醇受器之轉譯，以及類似的 » :抑制或降低雄激素依存基因活化時，較佳地組合物 寸^化合物’能誘導雄激素受器的降解，更較佳地 】^、、且"物為量黃素衍生物，例如ASCJ-9、ASCJ-15、以 及類似物。能抑制睪固酮轉換為二氫睪固酮(DHT)化合物的 :限制性例子，包括5-度他雄 柔沛以及功旎性衍生物或類似物。能抑制雄激素鱼雄 ，比卡魯胺、羥基氟他胺、以及功能性衍生物及類似物。能 抑制雄激素受器肖雄激素反應單元（ARE)結纟之化合物的 _限制f生例子’包括二十二碳六烯酸⑽A)、以及功能性衍 生物及類似物。能抑制雄激素受器核移轉之化合物的非限 制丨生例子，包括水飛薊素（SB)、以及功能性衍生物及類似 物。此抑制雄激素受器轉錄之化合物的非限制性例子，包 括維生素E琥珀酸（VES)、槲黃素（qu)、以及功能性衍生物 及類似物。 本發明之组合物可包括至少某種程度上能治療與類固 0883-6823-PF；Chiumeow 27 200536549 :存基口活化，關之醫學狀況之醫藥組合物或化妝品組 的特別有興趣之類固醇受器，包括，但不限於，雄激 素::（AR)、頁體素受器（PR)、雌激素受器（ER)、糖皮質 素叉= ^R)、過氧化物酶增殖體活化受器（PPAR)、類視色 、又的（RXR)、以及孤生類固醇激素受器。醫學狀況可能 包括’但不限，、皮 、 ^ 癌症，例如，但不限於，前列腺癌、肝 癌2胱癌、子宮頸癌、肺癌、以及乳癌，·神經或神經肌

^例如甘乃迪症；皮膚疾病，例如痤瘡；毛髮疾病 ，隹连遺傳脫冑’其脫髮是由於雄激素在濾、泡及周邊細 胞的雄激素受器作用所引起的；多毛症以及創傷治療與發 炎反應。 ^本發明之組合物可包括二或多種活性化合物或其於適 2之載體中之有效類似物、變化物或衍生物。可用任何適 田的活性化合物，如果他們能抑制或降低類固醇依存基因 活化。當針對雄激素相關醫學狀況時，較佳地至少一化合 _物在生理上可接受之程度為有效地誘導雄激素受器的降 解，例如在不會引起不想要之副作用或毒性之程度。活性 化合物可選擇性地包括一或多種元件可提供額外的效果， 例如促進穩定度、溶解度、或是傳送的專一性。這類的元 件可包括胜肽、聚胜肽、蛋白質、碳水化合物、核酸、親 脂性部分（lipophilic moieties)、親水性部分 (hydrophilic m〇ieties)、微粒體（particula1：es)、基質 (matrices)、或其組合。例如，活性化合物可為共價地或 非共k地連結（1 i n k e d )至一親水性部分，例如填酸根或硫 0883-6823-PF；chiumeow 28 200536549 酉义根％碳水化合物或螯合性分子m〇ieciUe)， 以促進在水溶液或體液中的溶解度。另一例子中，活性化 二物可為共伤地或非共價地連結至胜肽或其他部分，以保 蔓&丨生化合物不會未成熟降解（premature degradation)，或是連結至特別標的目標組織或細胞種類 抗體或，、他專性結合物質，而因此促進活性化合物傳 迗至特定組織或細胞類型。另一例子中，活性化合物可包 裹或包埋於脂質體、微粒體、基質、凝膠（gel)、聚合物， # 或其他類似物，以促進穩定度或增強傳送。 用於本發明組合物之適當的載體，包括稀釋劑、賦形 劑（expiclent)、或載體物質，依照所需的施用方式選用， 並符合傳統之醫學或化妝品實務。適當的載體的例子，包 括，但不限於，水、生理食鹽水、磷酸緩衝食鹽水 (phosphate-buffered sal ine)、生理相容緩衝液、生理相 谷鹽類的緩衝食鹽水、水-油乳劑、與油—水乳劑、酒精、 二曱基氧化硫（Dimethylsulf oxide)、葡萄糖（dextrose)、 甘露醇（mannitol)、乳糖、甘油、丙乙醇（propylene glycol)、聚乙二醇（polyethylene glycol)、聚乙烯卩比烧 酮（polyvinylpyrrolidone)、印磷脂（lecithin)、蛋白素 (albumin)、穀氨酸鈉（sodium glutamate)、鹽酸半胱氨酸 (cysteine hydrochloride)、以及類似物、或其混合物。 適當的載體亦可包括合適的醫療可接受之抗氧化劑或還原 劑、防腐劑、懸浮劑、助溶劑、穩定劑、螯合劑、混合劑、 黏度調節劑（viscomodulator)、分散劑（disintegrating 0883-6823~PF;Chiumeow 29 200536549 • agent)、結合劑（binder)、芳香劑、及其混合物，並與符 合傳統醫療實務（Remingt〇n: The Science and practice of Pharmacy, 2〇- edtion, Gennsro (ed. ) and Gennaro,

Lippincott， Williams & Wilkins， 2000)。 為了在分離的細胞使用，例如培養之細胞或是生物檢 定（bioassay)使用，本發明之組合物可以方便的方式配製 並提供。在非限制的例子中，組合物可以配製為不可溶之 固體、溶液、懸浮液、脂質體配製品（preparati〇n)、以及 _ 相似物’並以手動或自動方式供給細胞，例如以吸量管 (pipettes)、注射器、幫浦、自動吸取器、以及類似物。 為了在活著、完整個體上使用，例如人體，本發明之 組合物可依據施用的方式為任何形式的配製，並與符合傳 統醫療貫務（Remington: The Science and Practice of

Pharmacy, 20th edtion, Gennsro (ed. ) and Gennaro, Lippincott，Wi 11 iams & Wi lkins，2000 )。適當配製的例 _子’包括旋劑、膠囊、糖漿、驰劑（e 1 i x i r s )、軟膏、乳霜、 乳液、喷霧劑（sprays)、煙霧劑（aeros〇is)、吸劑 (inhalants)、固體、粉末、微粒體、凝膠、栓劑 (suppositories)、濃縮液、乳劑、脂質體、微球體 (microspheres)、不可溶基質、無菌溶液、懸浮液、或注 射液（injectable)，以及類似物。注射液可製備為傳統形 式，如溶液或濃縮液或懸浮液，適用於注射前溶為溶液或 懸浮液之濃縮液或固體，或是乳劑。 為了在活著、完整個體上使用，例如人體，以及依照 0883-6823-PF;Chiumeow 30 200536549 治療的特定狀況，本發明之醫藥組合物可以配製，並系統 性或局部性地施用。配製與施用之技巧，請參照：Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 20th edtion， Gennsro (ed.) and Gennaro, Lippincott, Williams &

Wilkins，2000。施用的適當路徑可包括口 (intestinal)、非經腸道的（parenteral)、經黏膜的 (transmucosal)、經皮膚的（transdermal)、肌内的 (intramuscular)、皮下的（subcutaneous)、直腸的 (rectal)、體内的（intramedullary)、脊髏腔内的 (intrathecal)、靜脈内的（intravenous)、室内的 (intranemtricular)、心房内的（intraatrial)、大動脈内 的（intraaortal)、動脈内的（intraarterial)、或是腹膜 内的（intraperitoneal)施用。本發明之醫藥組合物可藉由 醫療器材，例如但不限制，楂入性器材、生物可分解之植 入物、膏藥（patches)、以及幫浦，施用至個體。使用前述 器材時，組合物可配製為包括不可溶或非不可溶之基質或 介質，例如塗料（coating)、薄膜（membrane)、膜（mm)、 飽和的基質（impregnated matrix)、聚合物、海綿 (sponge)、凝膠、或醫療器材表面或内部之孔狀層，以在 特定的時間週期釋放活性化合物。 Π ·預防或治療類固醇調節之醫學狀況之方法 本發明亦包括治療或預防類固醇調節之狀況之方、、 爾揭露之方法治療的狀況例子，包括，但不限於癌t j列腺癌、肝癌、膀胱癌、子宮頸癌、肺癌與乳癌、 31 〇883>6823-PF；Chiume〇w 200536549 以及其他牽涉雄激素受器活化 肉1k > 杬之癌症；神經及神經肌 肉異泰，包括，但不限於甘乃 ^ , ^ , ^ 、症，皮膚疾病，例如痤瘡， 其係由於皮脂腺受雄激素誘 工彩广广乂丨， 乃g雄激素受器活化而造成的； 。交疾病例如雄性遺傳脫髮，α η U m ^ , ^ /、脫犮疋由於雄激素在濾泡 ^ ^ ^ ^ 斤引起的；多毛症以及創傷 ，口療與發炎反應的治療。 預防或治療類固醇調節 一 Μ & ϋ π w & w予狀況之方法，包括提供 疑似或有風險患有類固醇 酉學狀況之個體，例如 人類，轭用有療效之劑量之醫 西+叩，包括至少兩種化合物， 選擇性置於載體中，i中畚 士 A /、中母一種都能抑制或壓抑類固醇依 仔基因活化。醫華品可台b p 4 細人队 揭露於任何前述提供之方法或 組合物。較佳地，至少兩猶人 _ 口物作用於類固醇受器基因 、/化路徑之不同階段或不同處。 处田類固知凋節之醫學狀況 為雄激素调節之醫學狀況時，較 掩“ > 孕乂仫地至少一化合物能誘導 雄激素受器的降解，以及更較佳 該化合物為薑黃素衍 生物或類似物，例如但不限制，ASCJ_9或A%㈠。 本發明亦包括治療創傷或發炎之方法’包括提供一且 ^傷處或發炎處之個體，以及局部地在_傷處或Μ …組合物。組合物可包括至少兩種化合物，每個能抑 制類固醇依存基因活化。如前面 ^ 儿σ物可作用在類 固醇受器基因活化路徑之不同處。 本發明亦包括抑制或降低人體類固醇依存基因活化之 方法’包括提供至少-種前述之組合物，包㈣醫藥組合 物於脂質體中，以及施用該包覆之醫藥組合物至一人體。 -e823-PF；chiumeow 32 200536549 • 實施例 貝％例1利用雄激素文器轉錄活化試驗、細胞增生試 驗與西方點墨分析偵測類固醇依存基因活化之變化 以下實施例提供關於化合物的組合施用㈣果的代表 [生的研九，其中包含至少兩種化合物，並能影響類固醇依 存基因活化路徑之不同步驟。提供之實施例包括雄激素受 器（AR)轉錄活化試驗，以研究不同化合物組合的效果，其 中該化合物在前列腺癌之野生型（wild — type)或突變之雄 鲁激素受器均有活性；MTT細胞增生試驗用來測試化合物組 合抑制前列腺癌細胞生長的能力。較佳的試驗所利用的人 類前列腺癌細胞LNCaP，其為熟悉本項技術人士所接受的 細胞，所表現之臨床相關突變雄激素受器會對雄激素有反 應。在提供的實施例中，將原生的睪固酮代謝物產物，二 氫睪固酮（DHT)，施用至LNCap細胞，以誘導雄激素受器轉 錄活化試驗中雄激素受器之活性，並刺激MTT細胞增生試 _驗之癌細胞生長。當所揭露之試驗合併提供時，可提供不 同類固醇依存醫學狀況之可能療法發展的指引。 雄激素受器轉錄活化試驗 選擇雄激素受器（AR)轉錄活化試驗作為評估ASCj化 合物（薑黃素衍生物），搭配二十二碳六烯酸（DHA)、水飛薊 素（SB)、槲黃素（qu)以及羥基氟他胺（HF)之效果的最初工 具雄激素受器轉錄活化試驗測量雄激素受器路徑之終 點’標的基因表現，藉由價測螢光酵素（luciferase)報導 基因。已有研究指出積測抗雄激素活性之方法：tsu等 0883 6823-PF;chiumeow 33 200536549 ^ 人 Synthesis and Ant i-androgen Activity of New Diarylheptanoids. Bioorg Med Chem 11: 5083-90, 2003 ； 以及 Curcumin Analogues as Novel Androgen Receptor Antagonists with Potential as Anti-prostate Cancer Angets. J Med Chem 45，5037-5042，2002。螢光酵素報 導系統先前已證明過·· Sherf等人（1 996 ) Dual-Luci f erase reporter assay: an advanced co-reporter technology integrating firefly Reni 1 la luvi ferase assays. # PromeSa Notes 57，2。從試驗得到的資料，可以反應待測 化合物在阻斷、壓抑或抑制雄激素受器活化路徑的合作程 度。 雄激素受益轉活化試驗包括一細胞族群或細胞株，如 LNCaP細胞，轉染一質體，該質體包括在啟動子内或附近 插入一雄激素反應元件，以及在啟動子下游插入一螢光酵 素報導系統。在待測化合物存在下，偵測或量測螢光酵素 的含置的變化，與待測化合物調節、壓抑或抑制基因表現 相關。 具體而言，人類前列腺癌細胞LNCaP(ATCC，美國菌種 保存中心）培養於RPIM-1 640培養液中，並添加1〇%熱去活 化之月σ 牛血，月（FBS)、L-麵酿胺（L-giutamine，3〇〇mg/L)、 以及青黴素（penicillin， 1〇〇units/mL penicUUn g s〇dlum)與鏈黴素（strept⑽ycin， i〇〇 a 2/虹 streptomycin sulfate)。為進行試驗，細胞以每袼 (well)lxlO5個細胞的濃度培養於24孔細胞培養盤中，並 0883-6823-PF/Chiumeow 34 200536549 • 在培養箱中以37°C、5% C〇2的條件培養。兩天後，將細胞 以 SuperFect Transfection Reagent(Qiagen)與 MA 混合 物’包含啟動子區域帶有雄激素反應單元（ARE)之mmtv-螢 光酵素質體（0· 5 // g/格），以及受SV40啟動子控制之PRL 水母（Reni 1 la)質體（5ng/格）進行轉染。轉染後，細胞餵以 包含經木炭/葡萄聚糖（charcoal /dextran)處理之FBS之 培養液，並以一或兩種實驗化合物之組合物處理，依實驗 設計’選擇性地添加DHT。處理後20小時，將細胞裂解， φ 並以 DuU—Luf icerase Reporter Assay System(Promega) 來分析細胞溶解物（lysate)中之螢光酵素的活性。 MTT細胞增生試驗 本發明使用MTT細胞增生試驗來檢測不同化合物組合 調節、壓抑、或抑制癌細胞生長之能力。使用的細胞是臨 床相關之LNCaP細胞。細胞生長經二氳睪固酮（DHT)的添加 而刺激。因此，MTT細胞增生試驗可提供何種化合物組合 可能有助於抑制或壓抑前列腺癌細胞生長之指引。 MTT試驗’係依據所有的活細胞中粒腺體去氫酶 (mitochondrial dehydrogenase)者[5將無色白勺基質轉換為 還原的四唑（tetarzolium)，用來評估LNCaP細胞的生長 (Su專人’ 1 999 )。間吕之’將LNCaP細胞以每格1 x 1 〇3個 細胞的濃度，培養於96孔microtest Π tissue culture plates中（Falcon, NJ)。兩天後，將培養液置換為含有1〇% 經木炭/葡萄聚糖剝奪（deprived)之FBS之RPMI培養液。 將一或多種待測化合物，分別在含或不含〇· lnM二氫睪固 0883-6823-PF;Chiumeow 35 200536549 • 嗣下，以標定濃度添加培養5天。MTT溶液（5mg/ml，溶於 PBS)以1 /1 0的比例添加至細胞培養37°C、2小時。離心培 養盤（1 0分鐘，轉速為1，0 0 0 r pm )，並小心地移除每一样的 上清液（supernatant)。將 100// 1 的裂解液（lysis buffer， 50% dimethyl formamide, 5% sodium dedecyl sulphate 0.35M acetic acid and 50Mm HC1)添加至每一格中，以裂 解每格中的四唑。活細胞的數目由相對於每袼中酵素活性 的含量而測量（以 Bio-RAD BenchMark microplate reader # 讀取波長595nm的吸收值）。由MTT試驗得到的資料，亦經 由實際的細胞計量與型態學的驗證。 正常與飛前列腺癌細胞亦用於增生試驗。人類内表皮 (endothelial)細胞取自Clonetics公司（MD)，並維持於添 加人類上皮生長因子（epithelial growth factor)、氯皮 質酮（hydrocortisone)、健他黴素（gentamycin)、雙性黴 素（amphotericin)、以及2% FBS之EGM培養液。為了建立 春試驗，細胞以每格5x1 03個細胞的密度種於96孔組織培養 盤中。24小時後，細胞餵以添加1 0%經剝奪木炭/葡萄聚糖 之FBS之相同培養液。TCHM以不同濃度（〇. i至1〇// g/ml) 加入細胞，並培養5天。隨後加入MTT溶液，並量測上一 段所述之細胞增生活性。再一次，由MTT試驗得到的資料， 亦經由實際的細胞計量與型態學的驗證。 西方點墨分析 採用西方點墨分析量測雄激素受器的表現。先前已發 表過西方點墨法（Su等人，1 999)。簡言之，細胞收集自 0883-6823-PF；Chiumeow 3β 200536549 - SDS載入緩衝液（loading buffer)或添加苯甲酰胺 (benzamidine， 10 // g/ml )之 RIPA 裂解緩衝液（lysis buff er)、胰蛋白抑制劑（trypsin inhibitor, 1 0 // g/ml )、 以及苯甲基石黃醜氟（phenylmethylsulfonyl fluride， lmM)。將取自細胞裂解物之總體蛋白（每樣本40 // g)以 SDS-PAGE凝膠分離。分離後，蛋白質依照標準流程自膠體 轉移至硝化纖維膜（ni trocel lulose membrane)。將膜以 10%脫脂牛奶隔夜培養於添加〇·1% Tween —2〇(PBST)之磷酸 # 緩衝生理食鹽水。專一於人類雄激素受器（AR， BD-PharMingen)之初級抗體（primary antibody)添加至 膜’於4 C隔夜，或是室溫2小時。膜以PBST緩衝液潤洗 3次、每次1 〇分鐘後，再加入帶有山葵過氧化酶之合適的 一級抗體（horseradish peroxide-conjugated secondary antibody) ’於室溫培養！小時。再次以pBST潤洗後，使 用增強之化學螢光基質，可看到膜上的雄激素受器的訊 φ號。為了確保樣本之間的載入量相同，依照製造商的建議 脫洗膜，並重新以沒-肌動蛋白（石一actin，Sigma)專一之 抗體培養。 汽施例2 ·由細用量黃素衍生物來誘導雄激素受器之降解 當LNCaP細胞培養於存在有稱為ASC了化合物之薑黃素 行生物的％ i兄下時，採用LNCap細胞裂解物之西方點墨分 析雄激素受器的減量存在情形。發現雄激素受器含量的降 低係在於，當ASCJ化合物用於單獨培養LNCaP細胞時，當 ASC J “雄激素DHT用於共同培養時，以及當A% j與環六 0883-6823-PF;Chiumeow 37 200536549 射）用於共同培養 胺（cyclohex amide，一種蛋白暂人丄 貝s成抑制 時。 具體而言，LNCaP細胞培養於 脣於l〇%CD/RPMI培養液中， 並經過ASCJ-15(：U Μ，一種菫龙主 Τ 裡里汽素衍生物）處理，或 養於有、…2爾在之對照組賦形劑二二 ―㈤24小時。每個細胞樣本中雄激素受器的表現均由 如實施例1所述之西方點墨進行公 卜 w 仃刀析。每個實驗均進行4 次’以確保資料的再現性。取自1 卜 — /、中一二人貫驗的代表性數 據如第1圖所示。藉由標準化雄激辛 肌動蛋白之 訊號而得到之雄激素受器之相對宓庐 、 一 7山度，亦顯示於第1圖。 為了顯示雄激素受器含量的降低是由於 於雄激素受器的轉錄或轉譯的調控，疋 时LNCaP細胞暴露於 環六胺卜種蛋白合成抑制劑）之下。參照第2圖up 細胞培養於含賦形劑對照組之10% cd/rpmi培養液（第工、 4、7、10 行），經 ASCJ-15C1 # M)處理（第 2、5、8、u 行）， 或是經維生素E琥珀酸（VES’ 10#M)處理（第3、6、9、w 行）’培養2G小時。繼續地，環六胺，—種蛋白合成抑制 劑依照設定的時間（2、3、及4小時），添加至全部培養的 細胞中（15 # g/ml)。每個細胞樣本的雄激素受器表現均由 如實施例1所述之西方點墨分析進行分析。資料由〇小時 對照組的雄激素受器密度進行相對性比較。單一實驗的代 表性資料如第2圖所示。 實施例3:由施用能單獨降解類固醇受器之化合物或搭配 能阻斷類固醇受器與對應之類固醇反應單元（sre )之化合 0883-6823-PF；Chiumeow 38 200536549 物來抑制類固醇誘導之基因活化 將月b降解雄激素党器之化合物的效果單獨施用，以及 與阻斷或干擾雄激素受器與對應之雄激素反應單元（ARE) 之化a物、、且δ使用。如實施例2所示之薑黃素衍生物， ASCJ，為能誘導雄激素受器（AR)的降解之化合物。將化合 物ASCJ-15單獨施用，以及與二十二碳六烯酸（DHA)組合施 用，其中DHA是一種⑽ega-3脂肪酸，能阻斷或干擾雄激 I文裔與雄激素反應單元之結合。DHA在雄激素調節之基 因活化中的效果已經研究·· Chung等人，£ffects 0f docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid on androgen-mediated cell growth and gene expression in LNCaP prostate cancer cells. Carcinogenesis 22: 12 01 -1 2 0 6，2 0 0 1。在本實施例中，作用在雄激素受器路徑 不同處之化合物的組合，係以如實施例1中所述之雄激素 受器轉錄活化試驗以及MTT細胞增生試驗加以測試。 將A SC J -1 5以〇、〇 · 5以及1 · 0 /z Μ施用在如實施例j 所述，使用LNCaP細胞之雄激素受器轉錄活化試驗。包括 0· 5// Μ的次佳劑量係用以確保能偵測由ASCJ-15與DHA所 為雄激素受器活性之任何調節，而不論該活性增加或降 低。DHA依照前述報導，施用最小活性劑量的1 5 〇 # Μ。 更具體的說，將如前述實施例1所述之雄激素受器轉 錄活化試驗用於轉染之LNCaP細胞。細胞在有或無ASCJ-1 5 或DHA的存在下，於InM的DHT培養24小時。第3圖描述 實驗的結果。DHT培養升高MMTV-螢光酵素表現量，比基本 0883-6823-PF;Chiumeow 39 200536549 值问了 10倍。施用150/z M的DHA或1· 0" Μ的ASCJ-15至 ' 刀刎抑制DHT誘導之報導基因表現30%或45%。150 // Μ的DHA與1β 〇// M的ASCJ —15的伴隨添加，降低誘導的 圆、螢光酵素達歐其效果大於每-化合物單獨添加時 所此達到者。ASCJ —15次佳劑量（〇· 5 #们的處理，與

// Μ的DHA的同時施用，向下調節誘導之報導基因的表現 5 5/。，此抑4作用顯著地高於dm單獨處理所產生的 (30%)。這些資料暗示結合DHA與ascj_i5可能在抑制μ 活性上產生協同效果。

亦將ASCJ-1 5與DHA單獨或是組合測試其在控制人類 前列腺癌細胞生長方面的效果。如實施例丨所述，使用 LNCaP細胞進行ΜΤΤ試驗。結果如第4圖所示。dht顯著地 刺激LNCaP細胞生長達150%。添加15〇//M的dha至dht 處理過之細胞，緩和生長至3〇%。以i # M的ASCJ —丨5處理 細胞降低誘導之生長至22%。當組合施用ascj_15與DHa 時，DHT促進之生長受抑制64%，這大約相等或大於ascj^5 與DHA分別造成效果之總和。這些結果與雄激素受器轉錄 活化試驗一致，換句話說，結合ASCJ化合物與DHA在抑制 前列腺癌細胞生長有協同效果。 實施例4 :藉由施用能降低類固醇與對應之類固醇受器之 間的結合之化合物與合併施用能降低類固醇受器與類固醇 反應單元之間的結合之化合物以抑制類固醇誘導之基因活 化 將能降低雄激素與雄激素受器（AR)之結合之化合物單 0883-6823-PF;Chiumeow 40 200536549 獨施用5以及與能阻斷或干擾雄激素受器與雄激素反應單 凡（are)結合之化合物合併施用。羥基氟他胺（HF)，氟他胺 的代謝產物’係相信可阻斷雄激素與雄激素受器之間的結 a 一十一石厌六烯酸（DHA)，一種⑽ega —3脂肪酸，係相信 月b阻斷或干擾雄激素受器與雄激素反應單元之間的結合。 將化兩種化合物單獨或合併施用於LNCap細胞，如實施例 1所述之雄激素受器轉錄活化試驗。 如貫施例3所述，在雄激素受器轉錄活化試驗中dha 係以最小有效劑量（！ 5 〇 # M)使用。服則以〇、〇 · 5、或j, 〇 “的量提供。聰以1χ1〇ι的量提供。結果如第5圖所 不不_單獨或合併施用，DHA與HF均能抑制DHT誘導之 雄激素活性。當合併施用灿人與肿會導致dht誘導之活性 較強之抑制’可觀察到協同之抗雄激素效果。 貝轭例5 ·藉由施用能誘導類固醇受器降解之化合物與合 併施用能阻斷類固醇受器核轉移之化合物以抑制類固醇誘 導之基因活化 將月匕誘導雄激素受器（AR)的降解之化合物單獨施用或 與，阻斷或干擾雄激素受器之核移轉之化合物合併施用。 士只把例2所不之ASCJ-15，能降解雄激素受器。純化型 之水飛15素⑽’ -種普遍大量存在於消費的苦苣菜（⑷^ 让is叫的多紛黃酮mp〇lyphen〇Uc fi_〇id)，相信 能干擾雄激素受器之核移轉。 W 將母種化合物分別單獨或合 併使用於如貫施例1中新、^ 中所述之雄激素受器轉錄活化試驗與 MTT細胞增生試驗。 0883-6823-PP；chiumeow 41 200536549 ‘ ASC J一1 5係以0、0 · 5、或1 · 0 /ζ Μ的濃度，施用於如實 施例1所述之雄激素受器（AR)轉錄活化試驗。Zhu等人先 前已證實使用SB濃度低至50 # μ，仍能抑制轉錄活性。在 本發明中，提供SB為〇或20 // Μ。參照·· Zhu等人，Silymarin inhibits function of the androgen receptor by reducing nuclear localization of the receptor in the human prostate cancer cell line LNCaP. Carcinogenesis 22: 1 399-1 403，200 1。參考第 6 圖，ASCJ — 15 與 SB，單獨 • 或合併施用，能壓抑DHT誘導之LNCaP細胞雄激素受器活 性。當合併施用時，ASCJ-15與SB以加成的方式壓抑7〇% 的DHT誘導之雄激素受器活性。當結合單獨施用之2〇 # μ 的SB與1/ζ Μ的ASCJ-15的效果，亦可計算得到Μτ誘導 之活性7 0 %的抑制。 ASCJ- i 5與SB亦獨自或合併測試控制人類前列腺癌細 胞生長之效果。LNCaP細胞係用於如實施例i所示.之 春試驗’其結果如第7圖所示。ASCJ_15與SB可獨自或合併 抑制癌細胞增生。當以合併方式施用，^以-15與SB加成 地抑制癌細胞增生。 實施例6··藉施用能誘導類固醇受器降解之化合物虚 能抑制類固醇受器雜轉錄之化合物以抑制類固醇料 能抑=素受器的降解之化合物單獨施用以及與 =雄激素Η的轉錄之化合物合併施用。如 所…SCJ-15,能降解雄激素受器。純化型的辦黃素 〇883^823-PP;chiume〇w 42 200536549 (QU)，-種發現於蘋果、洋蔥與綠茶中的黃酉同類，係相信 能抑制雄激素受器之轉錄作用。參考：Xing等人，Quercetin inhibits the expression and the function of the androgen receptor in LNCaP prostate cancer cells,

Carcinogenesis 22: 4〇9_4u, 2〇〇1。將每種化合物分別 單獨或合併使用於如實施例i中所述之雄激素受器轉錄活 化試驗。 將簡]5以〇、0.125、0.25、〇.5或um的濃度， 籲施用於如實施例i所述之雄激素受器（AR)轉錄活化試驗。 槲黃素（QU)係以〇、5或7.5/^之量施用。參照第8圖， ASCJ-15與QU均能抑制DHT誘導之雄激素受器活性。當以 合併方式施用，兩種待測化合物協同地抑制Μτ誘導之活 性。 實施例7:藉由施用能誘導類固醇受器降解之化合物與合 併能抑制類固醇結合至類固醇受器之化合物以抑制類固醇 誘導之基因活化 將能誘導雄激素受器的降解之化合物單獨施用以及與 能抑制雄激素與對應之雄激素受器之間的結合之化合物合 併施用。如實施例2所示之ASCJ_15，能降解雄激素受器 (AR)。羥基氟他胺（HF)，氟他胺之代謝產物，相信能阻斷 雄激素與雄激素受器之間的結合。HF係單獨或與ascj_15 合併測試於如實施例1所述之雄激素受器轉錄活化試驗。 使用LNCaP癌細胞’測試每個化合物壓抑野生型雄激素受 器與突變之雄激素受器活性的能力。HF與ASCJ-1 5單獨戈 0883-6823 - PF ； Chiumeow 43 200536549 名併抑制野生型雄激素受器的活性。當合併施用時，抑制 作用是加成的，如第9圖所示。 所有標題皆係為了讀者的方便，除非特別指明，不應 將之作為限制標題下本文的意義之用。所有參考或引用的 文章其内容在此作為本案的參考文獻。 【圖式簡單說明】 第1圖為人類前列腺癌細胞LNCaP裂解物之西方膠體 〜仏’經考馬斯藍（coomassie blue)染色後顯示，當施用 1 A Μ稱為ASCJ-1 5的薑黃素衍生物後，雄激素受器内生程 度降低情形。將睪固酮的產物激素，二氫睪固酮（DHT)，或

賦形劑對照組依照實施1，以2ηΜ之量添加至培養之LNCaP 、、’田胞培養2 4小時。雄激素受器的相對密度亦顯示培養於 DHT或對照組者，且其係衍生自標準化雄激素受器之訊號 與肌動蛋白之訊號。 苐2圖為人類前列腺癌細胞LNCaP裂解物之西方朦體 影像，經考馬斯藍（co⑽assie Mue)染色後顯示，在 ^為ASCJ-15的薑黃素衍生物存在下，雄激素受器降解情 ^具體而言，第卜4、7與W行對應培養的LNCaP細胞； 第2 5、8與π行，對應以1//M的ASCJ —15(薑黃素衍生 物）處理之培養的LNCap細胞，·以及第HUM行對 應以負對照組維生素E處理之培養的遺aP細胞。各行前 立了門週期對應以環六胺’一種蛋白質合成抑制劑，加 養後的&間’ A -肌動蛋白作為整體蛋白質未被降解之 °883^6823-pP;chiume〇w ^ 200536549 對照組。 第3圖為薑黃素衍生物ASCJ-15與DHA對人類前列腺 癌細胞LNCaP之雄激素誘導之基因活化的抑制作用之圖 示。雄激素受器轉錄活化試驗依照實施例1進行，所使用 的抑制劑濃度如圖所示。儘管DHA與ASCJ-15單獨即可抑 誘導之轉錄活化，DHA與ASC J-1 5之合併施用顯示 對DHT誘導之雄激素受器活性具有最強的抑制效果。 第4圖為ASCJ-15與DHA對雄激素誘導之人類前列腺 癌細胞生長之抑制效果之圖示。DHA與ASCJ-15單獨抑制 LNCaP、、、田胞生長之效果較賦形劑對照組強。然而，LKap細 胞生長的最強抑制效果發生在1){^與ASCJ-15合併施用。 第5圖為氟他胺之代謝產物羥基氟他胺（hf)以及二十 二碳六稀酸（_單獨及合併使用在人類前列腺癌細胞 LNCaP ’對雄激素誘導之基因活化之抑制效果之圖示。儘管 HF與DHA能抑制DHT誘導之雄激素受器活性，當與難 合併:吏用時，可觀察到對DHT誘導之活性最強的抑制作用。 第6圖為八心一15以及水飛莉素（仰）單獨及合併使用 在人類前列腺癌細胞LNCaP，對雄激素誘導之基因活化之 抑制效果之圖示。ASCJ —15與SB能顯著地抑制dht誘導之 雄激素受器活性。當同時施用，ASCJ-15盥” a Λ、人 丄3興SB以加成的效 果抑制DHT誘導之基因活化。 第7圖為ASCΗ 5以及SB對雄激素誘導之LNCap細胞 Μ之抑制效果之圖示ϋΤ-15_單獨施用時，能 觀察到對DHT誘導之細胞生長的顯著的永 可的抑制作用。當同時 45 0883-6823-PF；Chiumeow 200536549 施用時，“〇-15與邡領 胞生長的加成效果。 丨抑制謝誘導之黯細 人類奶—15以及槲黃素⑽）單獨及合併使用在 人頰刖歹J腺癌細胞LNCap， 制4 >同- 灯隹激素誘導之基因活化之抑 制效果之圖不。當ASCJ —15盥 MT誘導之雄激素受+早獨把科，可觀察到對 、， ’、之颁著的抑制作用。當ASC J-15 契QU合併施用時，可觀察到協同的關係。 第。圖為氟他胺之代謝產物羥基氟他胺（HF)以及 ASCJ-15皁獨與合併使用對野生型雄激素受器誘導之基因 活化之抑制效果之圖示。體心與肝能顯著地壓抑野生 型MT誘導之雄激素受器活性。當同時施用，ASCJ-15盘 HF對抑制DHT誘導之基因活化有加成的效果。 主要元件符號說明】 無0

0883-6823~PF；Chiumeow 46

Claims (1)

1. 200536549 十、申請專利範圍： 種抑制或降低_醇依存基因活化之方 a)提供-包括類固醇受器之生物樣本； b )施用一第_ >人^ 物 ^ 5物至該生物樣本，其中該第一化合 物可誘導該_醇受器之降解；以及 必C)施用—第二化合物至該生物樣本，其中該第二化合 物可抑制該類固醇受器活化一基因；

   其中該第-化合物與該第二化合物作用在該類固醇受 器之基因活化路徑中之不同步驟； 更/、中該類固醇依存基因活化較單獨施用該第一化合 物或該第二化合物更強烈地受降低或抑制。 2 ·如申明專利範圍第丨項所述之方法，其中該類固醇 受器為雄激素受器（andr〇gen recept〇〇。 3·如申請專利範圍第丨項所述之方法，其中該第一化 。物包括一薑黃素（curcumin)衍生物或類似物。 4·如申請專利範圍第3項所述之方法，其中該薑黃素 衍生物係選自由ASCJ_9，ASCJ-15，以及其功能性衍生物 所組成之群組。 5 ·如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該第二化 合物可部分抑制類固醇結合至該類固醇受器。 6_如申請專利範圍第5項所述之方法，其中該第二化 合物係選自由比卡魯胺（bicaiutamide)，羥基氟他胺 (hydroxyflutamide)，以及其功能性衍生物所組成之群組。 7 ·如申請專利範圍第丨項所述之方法，其中該第二化 0883-6823-PF；Chiumeow 47 200536549 合物可部分抑制類固醇受器結合至類固醇反應單元 (steroid response element) 〇 8·如申請專利範圍第7項所述之方法，其中該第二化 合物為二十二碳六烯酸（DecoSahexanoid acid, DHA)或其 功能性衍生物。 9 ·如申請專利範圍第7項所述之方法，其中該類固醇 反應單元為雄激素反應單元（androgen response element， ARE)。 10·如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該第二化 合物可部分抑制該類固醇受器之細胞核移轉（nuclear transfer) ° 11.如申請專利範圍第1 0項所述之方法，其中該第二 化合物為水飛薊素（silibinin，SB)或其功能性衍生物。 12·如申請專利範圍第丨項所述之方法，其中該第二化 合物可部分抑制該類固醇受器之轉錄。 1 3 ·如申明專利範圍第1 2項所述之方法，其中該第二 化合物為槲黃素（quercetin，QU)或其功能性衍生物。 1 4.如申請專利範圍第丨項所述之方法，其中該第一化 a物與該第二化合物為一起施用。 1 5. —種組合物，包括： 第一化合物’能誘導類固醇受器之降解；以及 = 弟二化合物，能抑制該類固醇受器活化基因，其中 該第一化合物並無顯著地誘導該類固醇受器降解。 16· 一種醫藥組合物，包括； 0883 -6823 ~PP；Chiumeow 48 200536549 心-第-化合物或其藥學上可接受之鹽類 固醇受器之降解； V頰 b)-第二化合物或其藥學上可接受之鹽類， 類固醇受器活化基因；以及 j ^ C) -藥學上可接受之稀釋劑、佐劑或載體；以及 /、中X第化s物與該第二化合物，於組合施用時， 係以治療有效劑量提供。 、 — 17.如申請專利範圍第16項所述之醫藥組合物，其中 該第一化合物為薑黃素衍生物或類似物。 18.如申請專利範圍第16項所述之醫藥組合物，复中 該第二化合物或其藥學上可接受之鹽類係選自由比:魯 胺事工基氣他胺，—十二碳六稀酸，水飛Μ素，維生素£ 琥站酸uitamin E succinate，m)，槲黃素，柔沛 (finasteride) ’度他雄胺（dutasteride)，或其功能性衍 生物所組成之群組。 19·如申請專利範圍f 16項所述之醫藥組合物，其中 該第'一化合物血該镜—y /、 弟一化合物係包覆於一脂質體 (1iposome)中 ° 20. -種預防或治療人體類固醇所調節之醫學狀況之 方法，包括： a) 提供一疑似患有_ 奕員固醇所調節之醫學狀況之個體； 以及 b) ^用/口療有效劑量之申請專利範圍帛工6項所述之 醫藥組合物至該個體。 0883-6823 -PF; Chiurneow 200536549 • 21 ·如申請專利範圍第20項所述之方法，其中該類固 醇調節之醫學狀況係選自由痤瘡（acne)，多毛症 (hirsutism)，雄性遺傳脫髮（androgenetic alopecia)， 前列腺癌，良性前列腺增生（benign prostate hyperplasia)，膀胱癌，肝癌，乳癌，子宮頸癌，以及肺 癌所組成之群組。 22· —種治療創傷或發炎反應之方法，包括·· a )提供一具有創傷處或發炎處之個體；以及 • b)局部地施用申請專利範圍第16項所述之醫藥組合 物至創傷處或發炎處。 23· —種抑制或降低人體類固醇依存基因活化之方 法’包括： a )提供申請專利範圍第1 6項所述之醫藥組合物； b) 包覆該醫藥組合物於脂質體中；以及 c) 施用該包覆之醫藥組合物至一人體。

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