TW200530267A - Antibodies - Google Patents

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TW200530267A TW093136755A TW93136755A TW200530267A TW 200530267 A TW200530267 A TW 200530267A TW 093136755 A TW093136755 A TW 093136755A TW 93136755 A TW93136755 A TW 93136755A TW 200530267 A TW200530267 A TW 200530267A
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Christer Nordstedt
Tom Goldschmidt
Maria Henderikx
Rene Hoet
Henricus Hoogenboom
Simon Hufton
Christin V Andersson
Johanna Lindquist
Dan Sunnemark
Sergy Leonov
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Astrazeneca Ab
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Description

200530267 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於專一地結合脫輔基脂蛋白Ε(Αρ〇Ε)之C終 端片段的抗體。本發明亦提供獲得這類多狀的方法，以及 這員夕肽在斷和治療阿兹海默氏症、系統性殿粉樣變性 和其他澱粉樣蛋白病症上的用途。 【先前技術】 又籾樣又性疋一種未知原因之進行性、不可醫治的代謝 2病，其特徵為在—或多個器官或身體系、统中的異常蛋白 f沉積。澱粉樣蛋白由例如功能不良的骨髓製造。澱粉樣 艾I*生在已堆積的澱粉樣沉積物傷害正常身體功能時發 生可月b引起為官衰竭或死亡。這是很罕見的疾病，每一 I萬人中大約出現人個。其均等地影響男性和女性，且通 兩在40歲以後發展。已經確認出至少15種類型的殿粉樣變 性。每-種均與不同種類的蛋白質沉積物有關。 φ "、又叙樣艾性的主要形式是原發性系統性、繼發性或家族 性或遺傳性的殿粉樣變性。亦有其他形式的殿粉樣變性， /、阿鉍海默氏症有關。原發性系統性澱粉樣變性通常在5〇 到60歲之間發展。每年診斷出大約細〇個新病例，原發性 系統性殿粉樣變性在美國是該疾病最常見的形式。亦稱為 與輕鏈有關的殿粉樣變性，其亦與多發性骨趙瘤（骨趙癌症） -起出現。繼發性澱粉樣變性是慢性感染或炎症性疾病的 結果。通常與家族性地中海熱（一種細菌感染，特徵為寒 戰 '虛弱、頭痛和復發性發燒）、肉芽腫性迴腸炎（小腸的炎 97784A.doc 200530267 ί 症）、何杰金氏症、麻風、骨髓炎和風濕性關節炎。 家族性或遺傳性澱粉樣變性是該疾病唯一的遺傳形式。 其發生在最多人種的成員中’且每個家族具有不同的症狀 特徵和器官牽涉。認為遺傳性殿粉樣變性是體染色體顯性 的，其意指引起該疾病僅需要一個缺陷基因的副本。有家 族性澱粉樣變性之雙親的小孩，有5G_5G的機會發展出該疾 病。 澱粉樣變性可能涉及體内的任何器官或f、統。最常影響 心臟、腎臟、胃腸系統和神經系統。其他常見的澱粉樣蛋 白堆積之部位包括腦、關節、肝臟、脾臟、騰臟、呼吸系 統和皮膚。 阿兹海默氏症(AD)是最常見的痴呆形式，一種特徵為喪 失心智能力嚴重到足以干擾日常生活之正常活動的神經學 疾病，持續至少6個月’且不會從一出生就出現。ad通常 發生在老年，藉著認知功能的衰退來表示，如記憶、推理 和計畫。 有二至四百萬的美國人患有AD;預期在21世紀的中期， 按當時各年齡層的人口，該數字將成長至丨千四百萬之多。 雖然有少數人在四五十歲時便發展出該疾病，但ad主要影 響老年人。AD影響大約3%年齡在65至74歲之間的所有人， 大約2〇%在75至84歲的那些人，以及大約5〇%以歲以上的 那些人。受AD影響的女性略多於男性，即使此時考慮到女 性活的較久’故在最受影響的年齡群中有較高的女性比例。 已經有數個基因涉及AD，包括澱粉樣前驅蛋白質或 97784A.doc 200530267 APP，負責產生澱粉樣蛋白。在該基因中的突變與一些相 對上較不常見的AD之早發形式的案例相關聯。其他早發AD 的案例則是由在早老素（presenilin)基因ps_丨和pSj中的突 變引起。類似AD的痴呆最後幾乎影響每—個患有唐氏症的 人’其由染色體21的外複製引起。在其他染色體上的其他 突變’已經與其他的早發案例相關聯。 在1990年早期，在染色體19上發現可能是最重要的遺傳 • 連％。在該染色體上的一個基因，ap〇E，編碼涉及將脂質 運送至神經元内的蛋白質。 脫辅基月曰蛋白E(ApoE)是34 kDa的糖基化蛋白質。Ap〇E 產生的主要位置是肝臟和腦。八1^〇]£是具有極低密度脂蛋白 (VLDL)的成分，南密度脂蛋白和乳糜微粒的亞類。脂質複 合物的細胞攝取，係藉著ApoE與低密度脂蛋白（ldl)受體 和其他相關受體的結合來調解。 在人類中有二種主要的Ap〇E同功型，邛〇E2、和 φ aP〇E4，其為二個對偶基因ε2、ε3*ε4的產物。在一般的族 群中，ε3對偶基因是最常見的，佔所有邛成對偶基因的 78 /〇。在遲發偶發性和家族性阿茲海默氏症（ad)患者的族 群中，明顯地增加ε4對偶基因的頻率。
ApoE含有藉著隨機-盤捲區連接的c_終端功能部位 (ApoE-CTD)和N-終端功能部位（Ap〇E-NTD)。終端功能部 位包括脂質結合位置，而N-終端功能部位與脂蛋白受體結 合。CTD胺基酸序列在所有三種Ap〇E的同功型中都是相同 的。可藉著以凝血酶切開，分離Ctd和NTD。 97784A.doc 200530267 已經在活體外證實在ApoE和澱粉樣蛋白β(Αβ)之間的直 接交互作用。ApoE亦出現在AD斑中。已經報告了 ApoE的 N-終端功能部位（ApoE-NTD)調解apoE與Αβ的結合 (Golabek等人，（2000) Biophysical Journal 79:1008-1015)。 然而，已經顯示含有ApoE的AD斑，在斑塊中心包括全長的 ApoE，並在斑塊周圍有ApoE的C-終端功能部位片段 (ApoE-CTD)(Cho等人，（2001) J. Neuropathology and Expt· Neurology 60:342-3 49)。已經顯示Αβϊ-42沉積在斑塊中，在 ApoE沉積之前，但沉積在ApoE沉積在斑塊中成熟之 後（Terai等人，（2001)，Brain Research 900:48-56)。 不認為ApoE在腦中的功能是對AD專一的。ApoE似乎在 從急性腦損傷中的修改復原上扮演重要的角色。特定而 言，從臨床和動物實驗兩者中有證據暗示ApoE4同功型的 出現與從各種急性腦損傷中不良的神經學恢復有關聯。 【發明内容】 本發明者發展出針對脫輔基脂蛋白E(ApoE)之區域的治 療性抗體，使其暴露在在澱粉樣蛋白沉積物，包括阿茲海 默氏斑中發現之蛋白質凝集物下，但它是不可接近的，或 僅能有限度地接近，以ApoE的其他形式，如在血液中在脂 蛋白顆粒中的ApoE。 因此，本發明提供： -人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (i) 與具有在脫輔基脂蛋白E之C-終端功能部位 (ApoE-CTD)的序列第1號中出示之胺基酸序列，或其部分 97784A.doc 200530267 之胺基酸序列的多肽結合；並 (π) 與人類斑塊結合； -人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (i) 與具有在ApoE-CTD之序列第1號中出示的胺基酸 序列，或其部分之胺基酸序列的多肽結合；並 (ii) 包括重鏈CDR3區，包括在序列第20號、序列第512 號、序列第513號、序列第514號、序列第515號、序列第516 號或序列第5 16號中出示之序列； -人類抗體或抗體片段’該抗體或片段· (i) 與具有在ApoE-CTD之序列第1號中出示的胺基酸 序列，或其部分之胺基酸序列的多肽結合；並 (ii) 包括重鏈CDR3區，包括選自在序列第29號、序列 第47號、序列第50號、序列第53號、序列第56號、序列第 59號、序列第62號、序列第65號、序列第68號、序列第71 號、序列第74號、序列第77號、序列第80號、序列第83號、 序列第86號和序列第89號中出示之序列的胺基酸序列； -人類抗體或抗體片段，該抗體或片段在VLDL的存在下與 具有在序列第1號中出示之ΑροΕ-CTD胺基酸序列’或其部 分之胺基酸序列的多肽結合； -人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (i) 與人類斑塊結合；並 (ii) 包括重鏈CDR3區，包括在序列第20號、序列第512 號、序列第513號、序列第514號、序列第515號、序列第516 號或序列第5 17號中出示之序列； 97784A.doc -10- 200530267 -人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (i) 與人類斑塊結合；並 (ϋ)包括重鏈CDR3區，包括選自在序列第29號、序列 第47號、序列第50號、序列第53號、序列第56號、序列第 59號、序列第62號、序列第65號、序列第68號、序列第71 號、序列第74號、序列第77號、序列第80號、序列第83號、 序列第86號和序列第89號中出示之序列的胺基酸序列； -人類抗體或抗體片段，其包括在序列第136號中出示的重 鏈序列，以及在序列第521和522號中出示的輕鏈序列； -人類抗體或抗體片段，其包括在序列第142號中出示的重 鏈序列，以及在序列第523號中出示的輕鏈序列； -人類抗體或抗體片段，其包括在序列第40號中出示的重 鏈序列，以及在序列第517及/或51 8號中出示的輕鏈序列； -人類抗體或抗體片段，其包括在序列第40號中出示的重 鏈序列，以及在序列第519及/或520號中出示的輕鏈序列； -人類抗體或抗體片段，其包括在序列第24號中出示的重 鏈CDR1序列，在序列第25號中出示的重鏈CDR2序列，以 及在序列第207、209和210號任一個中出示的重鏈CDR3序 列； -人類抗體或抗體片段，其包括在序列第48號中出示的重 鏈CDR1序列，在序列第49號中出示的重鏈CDR2序列，以 及在序列第320、322和323號任一個中出示的重鏈CDR3序 列； 97784A.doc -11 - 200530267 人類抗體或抗體片段，其包括在序列第6 6號中出示的重 鏈CDR1序列，在序列第67號中出示的重鏈cdR2序列，以 及在序列第373號中出示的重鏈CDR3序列； -根據先前宣稱之任一個的抗體或抗體片段，其為單株抗 體； -根據本發明之抗體或抗體片段，係用在治療人類或動物 體的方法中，或是實行在人類或動物體上的診斷方法中； | -根據本發明之抗體或抗體片段，在製造治療或預防澱粉 樣蛋白疾病之醫藥品上的用途； -包括根據本發明之人類抗體或抗體片段的醫藥組合物， 以及在藥學上可接受之載劑或稀釋劑； -一種治療患有澱粉樣蛋白病症之個體的方法，包括對該 個體投與在治療上有效含量的根據本發明之抗體或抗體片 段； -一種在個體中診斷澱粉樣蛋白病症的方法，包括·· | (i)對該個體投與根據本發明之抗體或抗體片段；並 (ii)判火该抗體或抗體片段是否與在該個體中的斑塊 結合’其中該抗體或抗體片段與斑塊結合，則代表澱粉樣 蛋白病症， 藉此判定該患者是否患有殿粉樣蛋白病症； -編碼根據本發明之抗體或抗體片段的多核苷酸； -包括根據本發明之多核苷酸的載體； -表現根據本發明之多肽的宿主細胞 -編碼根據本發明之多核苷酸的病毒； 97784A.doc -12- 200530267 * •檢測ap〇e-ctd的套組，該套組包括根據本發明之抗體或 抗體片段，以及檢測該抗體或抗體片段的工具；以及 才双測出現在得自患者之試樣中的ApoE_CTD的方法，該方 法包括： (0使得自個體的試樣與根據本發明之抗體或抗體片 段，在容許該抗體或抗體片段與Ap〇E_CTEM#合的條件下接 觸；並 (H)判疋a亥抗體或抗體片段是否與該試樣結合，藉此檢 測任何出現在該試樣中的ap〇e_ctd。 【實施方式】 A.多肽 本發明提供與在脫輔基脂蛋白E (Ap〇E)上之區域結合的 抗體’遠脫輔基脂蛋白E暴露在在澱粉樣蛋白沉積物，如阿 茲海默斑中發現的蛋白質凝集物上，但在其他形式的ap〇e 中並未出現或可以接近，如在血液中的脂蛋白顆粒。 為了本發明，除非相反地指定，”抗體”一詞包括抗體片 段。 通常，本發明之抗體與脫輔基脂蛋白E的c_終端功能部位 (ApoE-CTD)結合，即與ApoE-CTD起反應。本發明之抗體 不與脫辅基脂蛋白E的N-終端功能部位（ApoE-NTD)結合。 抗體通常與出現在人類斑塊中之Ap〇E形式結合，優先於出 現在VLDL中之ApoE形式。出現在人類斑塊中之ap〇e的形 式通常是ApoE_CTD。本發明之抗體在極低密度脂蛋白 (VLDL)的存在下，優先與Ap〇E-CTD結合。本發明之抗體 97784A.doc -13- 200530267 可能是與在ApoE-CTD中之抗原決定位結合的抗體，該抗原 決定位並未出現在與VLDL有關的ApoE中。例如，當Ap〇E 與VLDL結合時’該抗原決定位可能是該抗體不能接近的， 或未暴露在該抗體下的。與抗體結合的抗原決定位通常可 能是隱藏在出現在VLDL中之全長ApoE中的，因此抗體對 ApoE的親和力小於其對ApoE-CTD的親和力。與抗體結合 的抗原決定位僅出現在ApoE-CTD中，未出現在Ap〇E-NTD 中，所以抗體通常不與ApoE-NTD結合。抗體與Ap〇E-NTD 的任何結合通常是非-專一的結合，具有實質上比抗體與 ApoE-CTD之專一性結合更低的親和力。實質上較低的親和 力通常是至少更低兩倍、三倍、五倍、10倍、50倍或1〇〇 倍的親和力。
因此本發明之抗體優先結合或專一地結合ApoE-CTD。抗 體’’優先結合’’或’’專一地結合’’ApoE-CTD，此時它以優勢或 高親和力與ApoE-CTD結合，但不結合或僅以低親和力與其 他多肽結合。判定抗體之專一結合能力的結合、競爭性結 合或免疫放射計量測定的各種草案，均為此項技藝中以熟 知的（參見，例如 Maddox等人，J· Exp· Med· 158, 1211-1226, 1993)。 這類免疫測定通常涉及在特定蛋白質與其抗體之間形成複 合物，並測量該複合物的形成。本發明之抗體通常能夠以 至少107m·1，較佳的是至少lOSNr1、109Μβ1或ΙΟ^Μ·1的親和 力常數，與具有在序列第1號中出示之序列的ApoE-CTD結 合。本發明之抗體，最好能夠以其與非-專一性多肽，如 BSA、酪蛋白、VLDL、ApoE-NTD或出現在VLDL中之ApoE 97784A.doc -14- 200530267 結合之親和力常數的至少兩倍、10倍、5〇倍、ι〇〇倍或更高 的親和力常數，優先與Ap〇E_CTD結合。 專一地結合ΑροΕ-CTD的抗體，通常在£1^8八中，在已經 固定之ΑροΕ-CTD上，展現出至少以背景結合，但與對照組 蛋白質，如AP〇E-NTD或鏈黴菌抗生物素蛋白，低於^背 景，通常是1X背景。
本發明之抗體通常與人類斑塊結合。”人類斑塊"一古司企 圖涵蓋任何澱粉樣蛋白沉積物，包括至少—種具有由人類 基因編碼之胺基酸序列的蛋白質。較佳的是，人類斑塊^ 現在或衍生自人類組織。更佳的是，人類斑塊出現在已經 獲自人類個體的試樣中。人類個體可患有澱粉樣蛋白病 症’如系統性殿粉樣變性或阿兹海默氏症。試樣可取自任 何含有殿粉樣蛋白斑塊的組織或器官。適當的組織和器官 包括腦、舌、小腸、骨取浙 亚、、典 月如肌千滑肌、神經、皮膚、韌帶、 心臟、肝臟、脾臟和腎臟。在患者患有阿兹海默氏症之處， 該試㈣常是腦切片°腦切片通常是在死後獲得。從任何 這類試樣來製備的原纖維亦納人"人類斑塊”一詞内。 人類斑塊亦可出現在或衍生自非_人類動物，其被基因轉 殖一或多個’例如二或三個人類蛋白質’在殿粉樣蛋白沉 積物中找到該人類蛋白皙Η同1 貝贫白貝（們）。人類蛋白質最好是Αρ〇Ε， 但可以是澱粉樣蛋白兪目％ 則驅物蛋白質（ΑΡΡ)(通常包括瑞业 (Swedish)突變）或早老素。 栝而典 可藉著任何適當的方法，判定舆人類斑塊的結合。例如 在IHC測疋中，當在首先測試的兩個救粉樣蛋白沉積物試樣 97784A.doc •15- 200530267 中，以<20微克/毫升抗體染色之後，獲得陽性的盲計分氓〔 信號時，可以說發生了抗體與人類斑塊的結合，或者若是 在初步測試中一個試樣是陰性的，接著測試三個試樣令的 至少兩個，表示抗體與人類斑塊結合。試樣最好衍生自不 同的個體，並從帶有在組織學上經過證實之澱粉樣蛋白沉 積物的組織試樣中切片，其對於澱粉樣蛋白標記，如八^是 IHC陽性的。 可藉著使用阿茲海默氏症或系統性澱粉樣變性的老氣或 其他非-人類動物模式，如嚅齒類或靈長類，在活體内判定 抗體與人類斑塊結合的能力。 在這類測定中，可使用me判定抗體與斑塊的結合。可在 測試之前先標示抗體。可將與斑塊結合定義為在以單一或 多個劑量，注射si毫克抗體之後，在三隻受試老鼠的至少 兩隻中，澱粉樣蛋白的陽性盲計分me染色。通常將該信號 與得自注射陰性同型物相配之對照組抗體的老鼠之在解剖 學上染色、性別和年齡相配之組織的信號相比較。 當在本文中使用”抗原決定位” 一詞時，意指與特定結合 多肽聯絡的分子部分。抗原決定位可以是直線的，包括得 自抗原之基本上直線狀的胺基酸序列，或構形的，包括藉 著其他序列分離的序列，但在結構上一起形成多肽的結合 位置。 在從全長的ApoE中切開之後，在ApoE-CTD中與抗體結 合的抗原決定位可出現在ApoE-CTD上。或者，在ApoE-CTD 與澱粉樣蛋白斑交互作用之後，例如由於ApoE-CTD與Αβ 97784A.doc •16- 200530267 結合的結果，可顯現出抗原決定位。ApoE的切開及/或 ApoE-CTD與澱粉樣蛋白斑的結合，可能導致暴露出新的直 線（肽）抗原決疋位及/或暴露或形成新穎構形的抗原決定 位。與本發明之多肽結合的抗原決定位可隱藏在與VLDIJi 合的ApoE中，歸因於ApoE與VLDL之其他組份的交互作 用。多肽可專一地結合在ApoE-CTD與Αβ之間形成的複合 物0 在序列第1號中出示ApoE-CTD的胺基酸序列。因此，可 藉著如同在序列第1號中出示之ApoE-CTD序列内的直線或 構形序列’形成ApoE-CTD抗原決定位。與Ap〇E-CTD結合 的抗體通常與具有在序列第1號中出示之整個序列的 ApoE-CTD多肽結合，但可能亦與序列第1號之胺基酸序列 的一部分結合，如具有如在序列第2至19號之任一個中所示 的胺基酸序列的肽。較佳的是，抗體與一或多個在序列第2 號、序列第5號、序列第7號、序列第9號、序列第1〇號、序 列第12號、序列第13號、序列第14號、序列第15號、序列 弟16號或序列第17號中出不的狀結合。與抗體結合之 ApoE-CTD的部分，是序列第1號的至少3個胺基酸片段，較 佳的是至少5、6、7或8個胺基酸片段，更佳的是10、12或 16個胺基酸片段。 與抗體結合的多肽（或肽）可以是重組的多肽。多肽可以 是在溶液中的，或更佳的是，可與固體表面附接。例如， 可將多肽附接在小珠上，如磁性小珠。 多肽可以是生物素化的。可使用與肽共幸厄的生物素分 97784A.doc -17- 200530267
I 子藉耆使生物素與在固體表面上的鍵徽菌抗生物素蛋白 偶聯，將多肽固定在固體表面上。 1適合用來治療或預防阿兹海默氏症即/或系統性殿粉樣 艾陳的本舍明之抗體，在活體外的吞嗟細胞測定中通常是 :試陽性的。將陽性呑嗟細胞測定定義為吞嗟細胞的陽性 目什分共焦顯微鏡檢測，該吞噬細胞在施用微克/毫升 抗體之後，在三個接受測試之培養物的至少兩個中，在盥 澱粉樣組織共同培養之後含㈣粉樣蛋白。通常將該信號 與得自含有相同濃度之陰性對照組抗體的相同共同_培養 物之信號相比較。陽性呑噬細胞測定通常亦導致澱粉樣蛋 白的降解，例如如同由®方墨點所示，與得自含有相同濃 度之陰性對照組抗體的相同共同·培養物的墨點相比較，低 於以Αβ為基礎在高達三天共同·培養之後剩下密度的三分 ---- 具有治療用途之抗體及其他的肽，通常對入1)〇£_(：_11；)具有 高親和力，較㈣是具有<lnM的親#力，使它們能夠發揮 最大的功能，即使是在系統性注射之後，將在腦中建立的 低濃度下。 抗體"一岡意指包括至少一個，最好兩個重鏈可變區（VH) 及/或至少一個，最好兩個輕鏈可變區（VL)的蛋白質。可將 VH和VL區進一步細分成高變區，稱為，，互補性決定區 (CDR)n，點綴有較具保留性的區域，稱為，，架構區。 已經精確地定義FR和CDRs的範圍（參見Kabat等人（1991)免疫 學感興趣之蛋白質的序列（SeqUences of PlOteins Qf Immund()gieal 97784a. doc -18- 200530267 k
Interest)，第 5 版，U.S. Department of Health and Human Services，NIH 公開案第 91-3242 號；Chothia等人（1987) J· Mol. Biol· 196:901-917， 全部以引用的方式併入本文中）。VH和VL分別由三個CDRs 和四個FRs所組成，以下列的順序從N-終端排列至C-終端： FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3，CDR3，FR4 〇 抗體的VH或VL鏈可進一步包括所有或部分的重或輕鏈 恒定區，藉此分別形成重或輕免疫球蛋白鏈。在一個具體 實施例中，抗體是兩個重和兩個輕鏈的四聚體，其中重和 輕-鏈藉著例如二硫鍵互相連接。重鏈恆定區包括三個功能 部位CHI、CH2和CH3。輕鏈恆定區包括一個功能部位CL。 重和輕鏈的可變區含有與抗原產生交互作用的結合功能部 位。抗體的恆定區通常調解抗體與宿主組織和因子的結 合，包括免疫系統的各種細胞，以及補體系統的第一個組 份。π抗體” 一詞包括類型IgA、IgG、IgE、IgD、IgM的完整 免疫球蛋白，及其亞型。較佳的免疫球蛋白是IgG。 當在本文中使用時，”免疫球蛋白” 一詞意指由一或多個 實質上由免疫球蛋白基因編碼之多肽組成的蛋白質。承認 的人類免疫球蛋白基因包括κ、λ、α (IgAl和IgA2)、y(IgGl、 IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε和μ恆定區基因，以及無數的免 疫球蛋白可變區基因。藉著可變區基因在Ν-終端（大約110 個胺基酸）編碼全長的免疫球蛋白輕鏈（大約25 kD或214個 胺基酸），以及在C-終端的κ和λ恆定區。藉著可變區基因在 Ν-終端（大約116個胺基酸）編碼全長的免疫球蛋白重鍵（大 約50 kD或446個胺基酸），以及在C-終端的其他上文提及之 97784a.doc -19· 200530267 恆定區基因之一，例如γ(編碼大約330個胺基酸）。 本發明之抗體片段通常是抗原-結合片段。”抗原-結合片 段π —詞意指全長抗體的一或多個片段，其能夠專一地結合 ApoE-CTD。結合片段的實例包括⑴Fab片段（單價片段，由 VL、VH、CL和CH1功能部位組成”（ii)F(ab，）2>^段（二價片 段，由兩個Fab片段組成，在絞鏈區藉著二硫橋連接）；（iii)Fd 片段（由VH和CH1功能部位組成）；（iv)Fv片段（由抗體之單 臂的VH和VL功能部位組成）；（v)ciAb片段（由VH功能部位組 成）；（vi)經過分離的CDR ; (vii)單鏈Fv(scfv)(由抗體之單 臂的VH和VL功能部位組成，使用重組方法經由合成的交聯 劑連接，使得VH和VL功能部位對形成單價分子）；卜叫微 型雙功能抗體（diabodies)(由兩個scFvs組成，其中連接VH 和VL功能部位使其不配對形成單價分子；每一個 均與另一個scFv的VL功能部位配對，形成二價分子）；（ιχ) 雙-專一性抗體（由至少兩個抗原結合區組成，每區分別與不 同的抗原決定位結合）。抗體片段最好是pab片段或單鏈抗 體（scFv) 〇 在序列第 21、24、27、30、33、36、45、48、51、54、 57、60、63、66、69、72、75、78、81、84、87、93、111、 117和123號中出示較佳CDR1功能部位的序列。其他較佳的 CDR1功能部位是這些序列的變體，其中已經刪除或更佳的 是取代在該序列中的一或多個胺基酸。其他較佳的cDR1功 能部位是在序列第 21、24、27、30、33、36、45、48、51、 54、57、60、63、66、69、72、75、78、81、84、87、93、 97784a.doc -20- 200530267 111、 117和123號之任一個中出示之序列的變體，其中已經 插入一或多個胺基酸。較佳的是，變體CDR1功能部位包括 一或多個，例如二、三、四或五個取代，最好是保留性置 換。這類CDR1變體序列的實例為在表38、39 ' 4〇、41和42 中確認的LV-CDR1序列。較佳的CDR1序列包括序列第33、 219、226、218、326、93、325、391 和 394號。 在序列第 22、25、28、31、34、37、46、49、52、55、
58、 61、64、67、70、73、76、79、82、85、88、94、112、 118和124號中出示較佳CDR2功能部位的序列。其他較佳的 CDR2功能部位是這些序列的變體，其中已經刪除或更佳的 是取代在該序列中的一或多個胺基酸。其他較佳的CDR2功 能部位是在序列第 22、25、28、31、34、37、46、49、52、 55 、 58 、 61 、 64 、 67 、 70 、 73 、 76 、 79 、 82 、 85 、 88 、 94 、 112、 118和124號之一中出示之序列的變體，其中已經插入 一或多個胺基酸。較佳的是，變體CDR2功能部位包括一或 多個，例如二、三、四或五個取代，最好是保留性置換。 這類CDR2變體序列的實例為在表38、39、40、41和42中確 認的LV-CDR2序列。較佳的CDR2序列包括序列第382、 386 、 333 、 334 、 34 、 247和252號。 在序列第 23、26、29、32、35、38、47、50、53、56、 59、 62、65、68、71、74、77、80、83 λ 86、89 ' 95、113、 11 9和125號中出示較佳CDR3功能部位的序列。其他較佳的 CDR3功能部位是這些序列的變體，其中已經刪除或更佳的 是取代在該序列中的一或多個胺基酸。其他較佳的CDR3功 97784A.doc -21 · 200530267 能部位是在序列第23、26、29、32、35、38、47、5G、53、 56、59、62、65、68、71、74、77、80、83、86、89、95、 113、119和125號之—中出示之序列的變體，其巾已經插入 -或多個胺基酸。較佳的是，變體CDR3功能部位包括一或 多個’例如二或三個保留性置換。 在下表中出示保留性置換。在第二攔中之相同區塊中， 且取好是在第三攔中之相同行中的胺基酸，可以彼此取代。
脂肪族的 非-極性的 GAP ILV 極性-不帶電荷的 CSTM NQ 才虽性-帶電荷的 DE KR 芳香族的 HFWY 變體CDR3序列的實例是在表38、39、40、41和42中確認 的 HV-CDR3和 LV-CDR3序列。在序列第 207、209、210、35、 269、252、34、322、323、320、341、373和 378號中出示 較佳的變體CDR3序列。 較佳的抗體包括⑴在序列第39號中出示的Vh序列或其 變體，以及在序列第42號中出示的VL序列或其變體；（π) 在序列第40號中出示的VH序列或其變體，以及在序列第43 號中出示的VL序列或其變體；（iii)在序列第41號中出示的 VH序列或其變體，以及在序列第44號中出示的VL序列或其 變體。 其他較佳的抗體包括選自在序列第317、318、319、369、 370、371、372和397號中出示之序列的重鏈序列序列，並 97784A.doc -22- 200530267 可視需要包括選自在第43、295、294、304、347、348、357、 3 62、406和4 18號中出示之序列的輕鏈。更佳的抗體包括具 有下列組合之重和輕鏈序列的抗體：序列第3 19和43號、序 列第318和295號、序列第318和294號、序列第317和304號、 序列第370和347號、序列第370和348號、序列第371和348 號、序列第372和348號、序列第369和357號、序列第370 和362號、序列第397和406號、序列第397和418號。 可藉著任何適當的方法獲得變體抗體。通常，藉著親和 力成熟來選擇具有改良結合特徵的變體。 在較佳的具體實施例中，抗體是重組的或經過修改的抗 ApoE-CTD抗體’例如喪合的、人類化的、去免疫的 (deimmunised)或在活體外產製的抗體。當在本文中使用，， 重組的”或f’經過修改的π抗體一詞時，企圖包括所有藉著重 組方法製備、表現、創造或分離的抗體，如⑴使用轉移感 染至宿主細胞内之重組表現載體表現的抗體；（Π)從重組綜 合抗體庫中分離的抗體；（iii)從以人類免疫球蛋白基因基因 轉殖之動物（例如老鼠）中分離的抗體；或（iv)藉著任何其他 涉及使人類免疫球蛋白基因序列與其他DNA序列接合之方 法製備、表現、創造或分離的抗體。這類重組抗體包括人 類化的、CDR移植的、嵌合的、去免疫的、在活體外產製 的抗體，並可視需要包括衍生自人類生殖種系免疫球蛋白 序列的恆定區。 根據本發明之抗體是人類抗體。抗體可以是嵌合的抗 體、重組的抗體、人類化的抗體、單株抗體或多株抗體。 97784A. doc -23- 200530267 抗體最好是單株的。 可檢測部分或 可將抗體與有功能的部分共軛，如藥物、 固體支撐物。 包括二或多個與ApoE_CTD之不同抗原決定位結合的抗 體之組合物亦在本發明的範圍内。在組合物中的抗體可結 合重疊的抗原決定位。結合重疊之抗原決定位的抗體競= 性地抑制了彼此對Ap〇E-CTD的結合。 抗體最好是單專-性的，例如單株抗體或其抗原-結合片 段。亦提供雙專一性和多價的抗體，該雙專一性或多價抗 體與ApoE-CTD的二或多個不同的抗原決定位結合。 本發明之抗體可連接結合部分，如生物素。例如，可藉 著與硫代琥珀醯亞胺基_2-(生物素醯胺基）乙基_丨，3_二硫丙 酸酯一起培養，將抗體，最好是IgG生物素基化。生物素基 化的IgG最好包括從1到5個，如2、3或4個生物素基團。 本發明之抗體可以是實質上經過分離的形式。可將其與 載劑或稀釋劑混合，其將不干擾它們想要的用途，並仍將 被視為實質上是經過分離的。它們實質上亦可以是經過純 化的形式，在該情況下它們通常將包括至少9〇%，例如至 少95。/。、98%或99%製備之多肽或無水團塊。 B· 確認抗體的方法 本發明亦提供確認根據本發明之抗體的方法。該方法通 常包括確認與具有在序列第1號中出示之胺基酸序列，或其 部分的胺基酸序列之多肽結合，並與人類斑塊結合的抗 體。可在VLDL的存在下進行任一或兩種結合測定。該方法 97784A.doc -24- 200530267 通常包括提供展示庫，並篩選該庫，確認編碼與ApoE-CTD 或其片段及/或人類斑塊結合之抗體的成員，最好是在 VLDL的存在下。展示庫是實體的集合；每個實體包括可接 近的抗體組份和能恢復的組份，其編碼或確認抗體組份。 抗體組份可具有任何長度，例如從三個胺基酸到超過300 個胺基酸，例如30、100或200個胺基酸，且抗體片段通常 最好是Fab片段。在選擇時，以ApoE-CTD探測庫中每個成 員的抗體組份，且若抗體組份與ApoE-CTD或其片段結合， 便確認該展示庫成員，通常藉著保留在支撐物上。通常亦 可測試與ApoE-CTD結合之展示庫成員與ApoE-NTD的結合 (陰性選擇）。 從支撐物上回收保留的展示庫成員，並分析之。分析可 包括擴大和後續在類似或不同條件下的選擇。例如，可交 替使用陽性和陰性的選擇。分析亦可包括判定抗體組份的 胺基酸序列，以及為了定出詳細的特徵，純化抗體組份。 可使用各種格式的展示庫，並可在本發明之方法中使用 任何適當的格式。較佳的格式是噬菌體展示和以細胞為基 礎的展示，如酵母菌展示。
在噬菌體展示中，候選的抗體通常被共價連接到噬菌體 外殼蛋白上。該鍵結起因於編碼與外殼蛋白質融合之候選 抗體的核酸的轉譯。該鍵結可包括柔韌的蛋白質交聯劑、 蛋白酶位置，或由於抑制中止密碼子的結果而併入的胺基 酸。在例如Ladner等人，美國專利第5,223,409號；Smith (1985) Science 228:1315-1317; WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/20791; WO 97784A.doc -25- 200530267
92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/02809; WO 90/09690 ； de Haard 等人（1999) J· Biol· Chem. 274:18218-30 ; Hoogenboom 等人（1998) Immunotechnology 4:1-20 ; Hoogenboom 等人（2000) Immunol· Today 2:371-8; Fuchs 等人（1991) Bio/Technology9:1370-1372;Hay 等人（1992) Hum· Antibod· Hybridomas 3:81-85 ; Huse等人（1989) Science 246:1275-1281 ; Griffiths 等人（1993) EMBOJ. 12:725-734 ; Hawkins等人（1992) J. Mol· Biol· 226:889-896 ; Clackson 等人（1991) Nature 352:624-628 ; Gram 等人（1992) Proc. Natl· Acad· Sci· USA 89:3576-3580 ; Garrard等人（1991) Bio/Technology 9:1373-1377 ; Rebar 等人（1996) Methods Enzymol. 267:129-49 ; Hoogenboom 等人（1991) Nuc. Acids Res· 19:4133-4137 ; Barbas 等人（1991) Proc· Natl. Acad Sci. USA 88:7978-7982 ;以及 Lee 等人（2003) Trends In Biotechnology 21:45-52 中描述了 嗤菌體展示。 已經為了絲狀噬菌體（噬菌體fl、fd和Ml 3)及其他噬菌體 (例如T7噬菌體和類λ噬菌體；參見，例如Santini (1998) J· Mol. BioL 282:125-135 ; Rosenberg等人（1996) Innovations 6:1-6 ; Houshmet 等人（1999) Anal. Biochem. 268:363-370發展出噬菌體展示系統。 絲狀噬菌體展示系統通常使用與較小外殼蛋白質的融合， 如基因III蛋白質和基因VIII蛋白質，亦可使用較大的外殼 蛋白質，但與其他外殼蛋白質融合，如基因VI蛋白質、基 因VII蛋白質、基因IX蛋白質或其功能部位（參見，例如WO 0G/71694)。在較佳的具體實施例中，是與基因III蛋白質的 功能部位融合，例如錨定功能部位或”殘肢π(參見，例如美 國專利第5,658,727號，關於基因III蛋白質錨定功能部位的 說明）。 97784A.doc -26- 200530267 亦可控制候選多肽的價數。將編碼多肽組份之序列選殖 完整嗤菌體基因組内，導致多變體展示，因為基因m蛋白 貝的所有複製物均與多肽組份融合。至於降低價數，可利 用嗟菌體質體系統。在該系統中，在質體上提供與基因m 融口之編碼多肽組份的核酸，通常長度小於個核苷酸。 質體包括噬菌體複製起點，使得當以協助者噬菌體，例如
Ml 3K07感染攜帶該質體之細菌細胞時，該質體得以倂入噬 φ 菌體顆粒内。協助者噬菌體提供基因III的完整副本，而其 他的噬菌體基因為噬菌體複製和組裝所需要的。協助者噬 菌體具有有缺陷的起點，使得該協助者噬菌體基因組，相 對於具有野外型起點的質體，不能有效地併入嗟菌體顆粒 中。 可使用標準噬菌體準備方法，例如從生長培養基中進行 peg沉殿’使展現候選抗體的噬菌體生長並收穫之。 在選擇個別的展示噬菌體之後，藉著使用所選出之噬菌 • 體感染細胞，獲得編碼所選出之候選抗體的核酸。可挑選 個別的純種系或溶菌斑，分離並定序核酸。 在獲得根據本發明之ApoE-CTD結合劑的篩選程序中，使 展示庫與通常被固定在固體支撐物上的標靶ap〇e_ctD分 子接觸，並容許與其結合。從結合劑中分離非-結合劑。以 各種方式，從ApoE-CTD中釋放出已經結合的噬菌體，收集 並擴大之。因為可經由細菌細胞的感染來擴大噬菌體，即 使很少的結合噬菌體便足以顯示編碼結合實體的基因序 列。使用這些技術，可能恢復結合噬菌體，在2千萬族群中 97784A.doc -27- 200530267 大約1個。可重複筛選-或多個庫，分別展示!千至兩千萬 或更多可能的結合多肽，發現高親和力的Ap〇e_ctd結合 劑。當選擇過程運轉時，各種族群落在每一回合中，直到 僅留下好的結合劑為止，即過程集中。通常，嗟菌體展示 庫將含有數個密切相關的結合劑(一千萬中的1〇至5〇個結 合劑）。集中的指標包括增加結合（藉著嗟菌體力價來測 量）’並回收密切相關的序列。 • 在細胞-展不庫中，在細胞表面上展示候選的抗體，例如 真核生物或原核生物細胞。代表性的原核生物細胞包括大 腸桿菌細胞、枯草桿菌細胞和孢子（參見，例如LU等人㈣习 Biotechnology 13.366)。代表性的真核生物細胞包括酵母菌（例 士酒酵母囟粟/酉裂殖酵母（Schizosaccharmyces pombe)、漢遜 酵母屬（Hanseulla)或巴斯德畢赤酵母past〇ris))。在例如 Boder和 Wittrup (1997) Nature Bi〇tech· 中描述了酵母菌表 面展示。可使用酵母菌展示系統來展示免疫球蛋白蛋白 • 質，如Fab片段，並可使用酵母接合來產製重和輕鏈之組合。 當應用抗胃ΑροΕ-CTD抗體的親和力成熟時，酵母菌展示 有勝過噬菌體展示的明顯優點。最重要的優點是可使用 FACS遥擇，針對其抗原結合，定量地挑選每個酵母菌細 胞。亦可能進行標準化選擇，而得以修正在展示層面的變 化，因此避免了以抗體親抗原性為基礎的選擇。這在使用 多價標靶抗原時是特別重要的。 展示庫可以是核糖體展示庫。在核糖體展示庫中，可藉 著使轉譯Mrna並具有仍附接之新生多肽的核糖體穩定，以 97784A.doc -28- 200530267 物理方式聯合mRNA和由RNA編碼的候選抗體。通常，使用 高二價Mg2+濃度和低溫。參見例如Mattheakis等人（1994) Proc. Natl. Acad· Sci· USA 91:9022 和 Hanes 等人（2000) Nature Biotech· 18:1287-92 ; Hans 等人（2000) Methods Enzymol· 328:404-30和 Schaffitzel 等人（1999) J. Immunol. Methods 231:119-35。 其他的展示庫格式利用肽-核酸融合。可藉著包括共價附 接之σ票羅黴素（puromycin)基團的mRNA的活體外轉譯，產生 多狀-核酸融合，例如，如同在Roberts和Szostak (1997) Proc· Natl. Acad· Sci· USA 94:12297-12302，以及美國專利第 6,207,446號中 描述的。然後可將mRNA逆轉錄成DNA，並與多肽交聯。 其他可使用的展示格式是非-生物展示，其中將抗體組份 附接在用來確認抗體的非-核酸標籤上。例如，標籤可以是 附接在小珠上的化學標籤，其展示抗體或射頻標籤（參見， 例如美國專利第5,874,214號）。 選擇親代結合功能部位，作為候選抗體的結構模板。結 合功能部位可以是天然存在的或合成的蛋白質，或蛋白 質，如免疫球蛋白的區域或功能部位。可以在親代結合功 能部位與ΑροΕ-CTD之間的已知交互作用的知識為基礎，來 選擇親代結合功能部位，但這不是決定性的。事實上，親 代結合功能部位不一定對ApoE-CTD具有任何親和力；其 目的是提供可從其中產生庫的結構，該庫將包括一或多個 專一地與ΑροΕ-CTD結合的候選抗體。 候選抗體可以是Fab片段、單鏈Fv分子（scFV)、單一功能 部位抗體、駱駝類抗體和駱駝化的抗體。 97784A.doc -29- 200530267 在較佳的具體實施例中，親代結合部位包括具有抗原-結 合活性的免疫球蛋白功能部位，如scFv、Fab或IgG。一個 展示候選多肽的典型展示庫，包括VH功能部位和VL功能部 位。如同在F ab及其他格式的案例中，被展示之抗體可包括 恆定區，成為輕或重鏈的一部分。在一個具體實施例中， 每個鏈包括一個恆定區，例如像是在Fab的案例中。在其他 的具體實施例中，展示額外的恒定區。 展示庫是特別有用的，例如為了確認認得人類抗原的人 類或”人類化’’抗體。在活體外的展示選擇程序克服了正常 人類免疫系統不能產生對抗自己-抗原的抗體。 可藉著各種過程（參見，例如deHaard等人（1999)J.BioLChem· 274:18218-30 ; Hoogenboom 等人（1998) Immunotechnology 4:1-20，以 及 Hoogenboom 等人（2000) Immunol. Today 21:371-8)，建構抗體庫。 此外，每個過程的元件可與其他過程的那些組合。可使用 該過程，以便將變化導入單一的免疫球蛋白功能部位（例如 VH或VL)内，或導入多個免疫球蛋白功能部位（例如VH或 VL)内。在提及任一及/或重和輕鍵可變功能部位兩者的這 類區域時，可將變化導入免疫球蛋白可變功能部位内，例 如在一或多個 CDIU、CDR2、CDR3、FIU、FR2、FR3和 FR4 的區域内。在一個具體實施例中，將變化導入特定可變功 能部位的全部三個CDRs内。在另一個較佳的具體實施例 中，將變化導入例如重鏈可變功能部位的CDR1和CDR2 内。任何組合均是可行的。 在較佳的具體實施例中，親代功能部位包括在序列第 97784A.doc -30- 200530267 23、26、29、32、35、38、47、50、53、56、59、62、65、 68、71、74、77、80、83、86、89、95、113、119和 125號 的任一個中出示之CDR3序列。在序列第23或26號之位置2 和3之一或兩者的胺基酸取代，是在候選抗體中較佳的變 化。在表38、39、40、41和42中確認藉著抗體增強標定而 產生之變體VH-CDR3序列的實例。在序列第207、209、210、 320、322、323和373號中出示較佳的CDR3序列。在序列第 512、513、514、515、516、5 17和 20號中出示較佳 CDR3 序 列的一致序列。 亦在表38、39、40、41和42中出示藉著輕鏈洗牌而產生 之變體VL-CDR3序列的實例。在序列第35、269、275、268、 341和378號中出示較佳的VL-CDR3序列。 親代功能部位最好亦包括VH鏈的其他組份，並可視需要 包括VL鏈，或VL鏈的其他組份，並可視需要包括Vh鏈。 第二佳的親代功能部位包括CDR1及/或CDR2功能部位， 具有在序列第 21、24、27、30、33、36、45、48、51、54、 57、60、63、66、69、72、75、78、81、84、87、93、111、 117和123號的任一個中，或在序列第22、25、28、3 1、34、 37、46、49、52、55、58、61、64、67、70、73、76、79、 82、85、88、94、112、118和124號中出示之序列。可藉著 CDR1及/或CDR2功能部位的DNA洗牌，產生候選的多肽。 在表38、39、40、41和42中確認變體VL-CDR1和VL-CDR2 序列的貫例。在序列第33、219、226、218、93、325、326、 391和394號中出示較佳的cdri序列。在序列第34、247、 97784A.doc -31 - 200530267 252、333、334、3 82和3 86號中出示較佳的CDR2序列。 第三佳的親代功能部位包括在序列第42、43、44、1 5 1、 157、159和161號之任一個中出示的VL序列。通常藉著完 整VL序列的DNA洗牌，產製候選多肽。在表38、39、4〇、 41和42中確認洗牌之輕鏈序列的實例。在序列第43、295、 294、304、348、357、362、406和418號中出示較佳的洗牌 輕鏈序列。 在一種方法中，藉著將各種編碼CDRs之寡核苷酸插入核 酸的相對應區域内，建構抗體庫。可使用單體的核苷酸或 二核苷酸’合成募核苷酸。例如Knappik等人（(2000) J. Mol. Biol. 296:57-86)描述使用三核苷酸合成，以及具有經過設計可接受 該募核苷酸之限制位置的模板，建構編碼募核苷酸的方法。 在其他的方法中，以ApoE_CTD免疫動物，例如嚙齒動 物。可視需要以抗原補強動物，更近一步刺激反應。然後 從動物中分離脾臟細胞，並擴大編碼VH及/或VL功能部位 的核酸’並為了在展現庫中表現而選殖。 在另外的方法中，從擴大自無經驗之生殖種系免疫球蛋 白基因的核酸來建構抗體庫。經過擴大的核酸包括編碼VH 及/或VL功能部位的核酸。在下文描述編碼免疫球蛋白之核 酸的起源。擴大作用可包括PCR，例如利用粘接保留恆定 區的引子，或其他的擴大方法。 可k例如人類、靈長類、老鼠、兔子、駱駝或嚅齒動物 的免疫細胞獲得編碼免疫球蛋白功能部位的核酸。在一個 貝例中，針對特殊特性來選擇細胞。可選擇在各種成熟階 97784A.doc -32- 200530267 段的B細胞。在另一個實例中，B細胞是無經驗的。 在-個具體實施例中，使用螢光”數活細胞分類（FACS) 來挑選表現表面-結合IgM、IgD或IgG分子的B細胞。此外， 亦可分離表現IgG之不同同型物的B細胞。在其他較佳的具 體實施例中，在活體外培養8或丁細胞。可在活體外刺激細 胞，例如藉著與飼養細胞一起培養，或藉著添加促細胞分 裂劑或其他調節試劑，如對CD4〇、CD4〇配體或CD2〇的抗 體、佛波醇肉莖蔻酸乙酸鹽、細菌脂多糖、洋刀豆血球凝 集素A、植物血球凝集素或美洲商陸有絲分裂原， 在另一個具體實施例申，從患有免疫學病症，例如系統 性紅斑性狼瘡（SLE)、風濕性關節炎、脈管炎、修葛瑞 (Sjogren)徵候群、系統性硬化症或抗_磷脂徵候群之個體中 为離細胞。個體可以是人類或動物，例如人類疾病之動物 模式，或患有類似病症的動物。在另一個具體實施例中， 從包括人類免疫球蛋白位點之基因轉殖的非_人類動物中 分離細胞。 在一個較佳的具體實施例中，細胞已經激活體細胞過度 犬麦的私式。可刺激細胞經歷免疫球蛋白基因的體細胞突 變生成’例如，藉著以抗-免疫球蛋白、抗-CD40和抗_CD38 抗體處理（參見，例如Bergthorsdottir 等人（2001) J· Immunol· 166· 2228)。在其他的具體實施例中，該細胞是無經驗的。 可藉著下列代表性的方法，從天然節目中分離編碼免疫 球蛋白可㉙功能部位的核酸。首先，從免疫細胞中分離 RNA。为離全長的（即加帽的）mRNAs(例如，藉著以牛小腸 97784A.doc -33- 200530267 磷酸酶降解未加帽的RNAs)。然後以菸草酸性焦磷酸酶移 除帽’並使用逆轉錄作用產生cDNAs。 可以任何方式，利用任何適當的引子，進行第一（反義） 月又的逆轉錄作用。參見，例如de Haard等人（1999) J. Biol.
Chem· 274:18218-30。引子結合區在不同的免疫球蛋白中可 能是固定的，例如以便逆轉錄免疫球蛋白的不同同型物。 引子結合區亦可以是對免疫球蛋白之特殊同型物專一的。 通常，引子是對編碼至少一個CDRi序列的3,區專一的。在 另-個具體實施例中，可使用聚.dT引子（且可能對重鍵基 因是較佳的）。 可將合成.的序列與逆轉錄股的3,末端連接。可使用合成 的序列作為引子結合部位，在逆轉錄之後，在pcR擴大作 用期間與前進引子結合。合成序列的使用可排除使用不同 前進引子池的需要，以便完全捕捉可利用的多樣性。 然後擴大編碼可變功能部位的基因，例如使用一或多個 回合。若使用多個回合，可使用巢式引子增加忠實性。然 後將經過擴大的核酸選殖到展示庫載體内。 可使用任何擴大核酸序列的方法來進行擴大作用。使多 樣性達到最大但不偏心的方法是較佳的。核酸擴大的適當 技術包括聚合酶連鎖反應（PCR)、以轉錄為基礎的方法，其 利用疆合成，藉著RNA聚合酶擴大核酸咖如等人（测)
Science 244:331-34)、NASBA(美國專利第 5，13〇,238 號·， 5,4〇M職和5,554,517號），其利用以轉錄循環、逆㈣和 RNA酶Η為基礎之降解作用，擴大職試樣、滾環擴大作用 97784a.doc -34- 200530267 (RCA;美國專利第6，143,495號）和股置換擴大（SDA;美國 專利第5,624,825號）。 在確認第一組結合抗體之後，可使用序列資訊來設計其
他偏重具有額外想要特性之成員的庫，例如區別Ap〇E-CTD 與全長的ApoE，最好是與VLDL結合的ApoE。這類技術不 僅使篩選大量有潛力之結合抗體成為可能的，亦實現重複 結合/洗脫循環，並建立第二個偏重的庫，以便篩選符合最 初基準的展示類似物之包裝。使用這些技術，可篩選偏重 的庫’揭露在篩選條件下緊密結合的成員（即具有高親和 力）。 因此，在一個較佳的具體實施例中，可以反覆的模式使 用展示庫技術。使用第一個展示庫確認一或多個與 ApoE-CTD及/或人類斑塊結合的抗體。然後使用突變生成 方法改變這些經過確認的抗體，形成第二個展示庫。然後 從第二個庫中選出較高親和力的多肽，例如使用較高嚴格 度或較具競爭性的結合與沖洗條件。 在親和力成熟草案中，最好藉著胺基酸取代產生變化， 但亦可起因於胺基酸的刪除或添加。 月女基酸取代可以是預期改變功能部位之結合特性，但不 明顯改變其結構的那些，至少對大多數的取代而言。選擇 改變的胺基酸位置（可變的胺基酸位置）最好是表面的胺基 酉欠位置即在功能部位之胺基酸序列中的位置，當該功能 口 P位為其最穩定之構形日夺，出現在該功能部纟❺外側表面 上（即與溶液接觸的表面）。欲改變的胺基酸位置最好是相鄰 97784A.doc ，35 - 200530267 或靠在一起的，以便使取代的影響達到最大。此外，亦可 將額外的胺基酸加至親代結合功能部位的結構内。 在一些實施例中，突變生成係瞄準已知或可能是在結合 界面的區域。如同在本文中描述的，突變生成可針對重或 輕鏈的CDR區域。此外，突變生成亦可指向接近或與CDRs 相鄰的架構區。亦可將突變生成限制在一或數個CDRs内， 例如，製造精確的逐步改善。 有效的親和力成熟需要4個組份⑴前導抗體基因的再分 散，（Π)展示在噬菌體或酵母菌上，（iii)親和力選擇，（iv) 針對改善的親和力來篩選純種系。
Fabs的直線排列顯示所需的結合特性，例如，可使用 BLAST 演算法（例如 Kadin 和 Altschul(1993) PNAS USA 90:5 873-5787)，確認在CDR功能部位中的保留殘基。在CDR 環中的序列類似性，可容許預言直接涉及抗體親和力或專 一性的任何胺基酸。 例如，抗體 807A-M0028-B02 和 807A_M0027-E11(序列第 23和26號）的VH-CDR3環顯示出顯著的類似性，並顯示超過 4/6胺基酸是一致的（序列第20號）。這暗示VH-CDR3在抗體 親和力和專一性上扮演某種角色。 最佳的抗體突變生成策略將最少數目的突變導入功能相 關位置内。這可藉著瞄準和未-瞄準的突變生成程序達成。 未-瞄準的突變生成程序包括鏈的洗牌，其藉著使完整VL 基因或VH CDR1-2片段再分散，在抗體中導入大塊的改 變。通常，VH-CDR3環保留不動，因為它可能對結合親和 97784A.doc -36- 200530267 力及專一性有重大的貢獻。在下列的文獻中描述了鏈洗牌 的實例·· Marks等人，（1992) Nature Biotech 10:779-783，Schier 等人，（1996) J· Mol· Biol· 255, 28-43，Park等人，（2000) BBRC· 275:553-557，以及Chames等人，（2002)J.Immunol· 11KM118。雖 然鏈洗牌是完全-核准的技術（特別是對於具有低起始親和 力的抗體），但一個可能的缺點是藉著在抗體分子中製造這 類的大塊改變，可能增加使多個有利接觸瓦解的機會。然 而，這可藉著喪失不利接觸或產生新接觸而得到補償。 其他代表性的非-瞄準突變生成技術包括：錯誤-導向PCR (Leung等人（1989) Technique 1:11-15)、重組作用、使用隨機切開 的 DNA洗牌（Stemmei* (1994) Nature 389-391 ;稱為’’核酸洗牌 π)、 RACHITT™ (Coco 等人(2001) Nature Biotech· 19:354)、指定位置之 突變生成（Zooler 等人（1987) Nucl· Acids Res· 10:6487-6504)、卡匣 突變生成（Reidhaar-Olson (1991) Methods Enzymol. 208:564-586)，以及 降解寡核苷酸的併入(Griffiths等人（1994) EMBO J. 13:3245)。 瞄準的突變生成程序包括熱點突變生成、吝嗇的突變生 成、飽和突變生成、功能部位隨機和功能部位步行。可以 逐步的方式進行瞄準CDR1的CDR突變生成，選擇最佳的 環，並接著瞄準CDR2等等。單一最天然多樣的環是 VH-CDR3，且廣為接受將該環置於抗體組合位置的中央， 其為抗體專一性和親和力的關鍵性決定因素。這意味著有 專一瞄準該環的強有力情況。 在反覆選擇的一個實例中，使用在本文中描述的方法， 首先確認得自展示庫的抗體，其以至少對標靶之最小結合 97784A.doc -37- 200530267 專一性，或最小活性，例如超過1 nM、10 nM或1 00 nM之 結合的平衡解離常數與ApoE-CTD結合，且其與人類斑塊結 合，並/或在VLDL-結合之ApoE的存在下保留結合活性。可 使用編碼最初確認之抗體的核酸序列作為模板核酸，導入 變化，例如用來確認相對於最初之抗體，具有增強特性（例 如結合親和力、動力學或穩定性）的第二個多肽。 可使用展示技術，分離根據本發明之抗體，在某種意義 上確認展現出特殊預先選擇之結合及釋放特性的 ApoE_CTD結合抗體。根據該方法學，可預先選擇兩個溶液 條件，即結合條件和釋放條件。結合條件是一組溶液條件， 希望在該條件下發現與標靶ApoE-CTD結合的抗體；釋放條 件是一組溶液條件，希望在該條件下發現不與ApoE-CTD結 合的抗體（即從ApoE-CTD中解離）。可選擇兩個條件，滿足 任何醫生的標準，如達到條件的容易度、與其他純化步驟 的可相容性、與其他親和力介質相比較，降低在條件之間 轉變的成本等等。較佳的是，選擇兩個溶液條件，以便對 標靶蛋白質ApoE-CTD之穩定性或活性沒有不利的影響，且 得以對至少一種溶液參數是顯著不同的。例如，在進行本 文中描述之適當結合肽的篩選時，選擇結合劑，其在含有 乙二醇之緩衝溶液的存在下，或降低pH值的條件（即pH 2)，或這些條件的組合下，從標靶中解離，其與用來結合 的條件不同。可有利地改變的其他參數是在結合及洗脫缓 衝溶液中的鹽濃度，例如NaCl。 與ApoE-CTD結合的抗體通常對ApoE-CTD具有最低結合 97784a.doc -38- 200530267 專一性，例如超過^、心河或⑽瘦的結合平衡常數。 因為低解離村能是高親和力的㈣，特別是對於在抗 體與其標乾之間較互作用’故可使用解離率選擇的方 法’對於與ap‘ctd之結合交互作用，分離具有想要之動 力學解離率（即降低）的抗體。
欲從展示庫中選擇緩慢解離的抗體，使該庫與已經固定 ㈣無’最好是AP〇E_CTD接觸。然後以第—個溶液沖洗固 疋的抗體’移除非-專一地結合或結合很弱的抗體。然後以 第二個溶液洗脫已經固定的標靶，其包括飽和量的自由標 靶，即並未與顆粒附接之標靶的複製。自由的標靶與從標 靶中解離之抗體結合。相對於過低濃度的固定標靶，藉著 飽和量的自由標靶有效地阻止了再度結合。 第二個溶液可具有溶液條件，其實質上是生理學的或是 嚴格的。通常，第二個溶液的溶液條件是與第一個溶液的 溶液條件相同的。按時間順序收集第二個溶液的溶離份， 區別早和晚的溶離份。較晚的溶離份包括以比在早期溶離 份中之生物分子更慢的速率，從標靶中解離的生物分子。 此外，亦可能回收仍與標靶結合的展示庫成員，即使在 延長的培養之後。可使用促溶條件解離，或在附接標靶時 擴大這些。例如，可使與標革巴結合的噬菌體與細菌細胞接 觸0 在本發明方法中使用的ApoE-CTD可以是任何適當的形 式。ΑροΕ-CTD通常具有在序列第1號中陳述的胺基酸序 列’或其片段的胺基酸序列。ApoE-CTD之片段通常是至少 97784A.doc -39- 200530267 3個胺基g夂長’較佳的是至少5、6、7或請胺基酸長，且更 佳的是至少1〇、12或16個胺基酸長。在序列第2至19號中陳 述適當片段的實例。較佳的片段是具有在序列第2、5、7、 13 14、U、1 6和1 7號任一個中出示之序列的 那些。在本發明之篩選測定令可使用一或多個八岭⑽ 肽。 通常藉著重組方法產製Ap〇匕CTD多肽。可在本發明之方 法中使用已經以重組方式或天然產製的脲·變性之 ApoE-CTD。可針對與聚合形式之CTD(與原纖維結合的 AP〇E-CTD)的結合，額外或另行篩選候選多肽。亦可監視 ApoE-CTD和A /3複合物的結合。 可從重組或天然存在的Ap〇E中切開Ap〇E_CTD，例如藉 著凝血酶的作用。 了將ApoE-CTD多肽或肽固定在支撐物上。通常可藉著將 多肽貼上標籤或生物素基化，以便捕捉在表面上，完成固 定作用。例如，ApoE_CTD可包括s-s生物素基團，以便附 接鏈黴菌抗生物素蛋白（例如，在、塗覆鏈徽菌抗生物素蛋白 的磁性小珠上）。或者，Ap〇E_CTD亦可包括半胱胺酸殘基， 與BSA載劑偶聯，以供固定（例如在塑料上）。這樣，可產生 ” CTD-塗覆的晶片”。可藉著則八〇〇11£分析，分析候選多肽 與CTD-塗覆之晶片的結合。 亦可針對與人類斑塊的結合，篩選展示庫成員。 在本文中彳田述之展示庫篩選方法，最好包括選擇和篩選 方法，其拋棄與非-標靶分子結合的展示庫成員。非-標靶分 97784A.doc -40- 200530267 子的實例包括：鏈黴菌抗生物素蛋白和（ii)ApoE-NTD。 在一個實施例中，使用所謂的’’陰性選擇”步驟，來區別 標靶和相對的非-標靶分子，以及相對的，但不同的非-標靶 分子。使展示庫或其集合與非-標靶分子接觸。收集不與非-標靶結合的試樣成員，並用在後續與標靶分子結合的選擇 上，或甚至是後續的陰性選擇。陰性選擇步驟可在選擇與 標靶分子結合的庫成員之前或之後。 在其他的實施例中，使用篩選步驟。在分離與標靶分子 結合的展示庫成員之後，測試每個經過分離之庫成員與非-標靶分子（例如上文列舉的非-標靶）結合的能力。例如，可 使用高輸貫量的ELISA篩選獲得該數據。亦可使用ELIS A篩 選獲得每個庫成員與標靶結合的定量數據。比較非-標靶和 標靶結合數據（例如，使用電腦和軟體），確認專一地結合標 靶MHC-肽複合物的庫成員。 本發明之抗體或抗體片段可在VLDL或其他脂蛋白顆粒 的存在下與ApoE-CTD結合。本發明之抗體通常以 ApoE-CTD的最低結合專一性，例如，在VLDL的存在下， 超過1 nM或100 nM的結合平衡常數，與ApoE結合。VLDL 可以任何適當的形式存在。例如，可在結合測定中加入人 類血漿。可將高達50%的人類血漿加至測定中，例如可納 入高達10%、高達20%、高達30%或高達40%的人類血漿。 亦可針對與ApoE-NTD的結合，篩選候選多肽。可以重組 方式產生ApoE-NTD，或可從重組或天然存在的ApoE中切 開，例如藉著凝血酶的作用。 97784A.doc -41 - 200530267 在一個具體實施例中，針對與星形細胞的結合來篩選候 選多肽。最好但不一定，選出之多肽不與星形細胞結合5 或以比ApoE-CTD低很多的親和力與星形細胞結合，例如低 2-倍、5-倍、10-倍、20-倍或50-倍的親和力。 在選擇與ApoE-CTD結合的候選展示庫成員之後，可進一 步分析每個候選展示庫成員，例如進一步定出其對標革巴之 結合特性的特徵。可使每個候選展示庫成員經歷一或多個 二級篩選測定。該測定可針對結合特性、催化特性、生理 學特性（例如細胞毒性、腎清除、免疫原性）、結構特性（例 如穩定性、構形、低聚狀態）或其他功能特性。可重複使用 相同的測定，但改變條件，例如判定pH值、離子或熱敏感 性。 在適當時，測定可直接使用展示庫成員、從編碼展示抗 體之核酸中產生的重組抗體，或以展示抗體之序列為基礎 合成的合成抗體。該測定最好包括判定抗體是否與 ApoE-CTD結合，亦與人類斑塊結合，或是否在VLDL的存 在下與ApoE-CTD結合。結合特性的代表性測定包括 ELISA、均質結合測定.，如螢光共振能量轉移（FRET)和α 篩選、表面等離子體激光共振（SPR)、蛋白質測定和細胞測 定。 亦可使用ELIS Α篩選由展示庫編碼之抗體的結合特性。 例如，使每個與ApoE-CTD結合的候選抗體與其底面已經塗 覆有ApoE-CTD、VLDL或ApoE-NTD的微量滴定盤接觸。以 緩衝溶液沖洗該盤，移除未-專一結合的多肽。然後藉著以 97784a.doc -42- 200530267 可認出該多肽，例如標籤或多肽之恆定部分的抗體探測該 盤，判定與該盤結合之多肽的量。將抗體與酵素連接，如 鹼性磷酸酶，當提供適當的受質時，其產生比色產物。可 從細胞中純化多肽，或以展示庫格式測定之，例如與絲狀 噬菌體外殼融合。在ELISA的其他版本中，使用各種股庫 的每個多肽塗覆微量滴定盤不同的孔。然後進行ELISA， 使用不變的標靶分子來詢問每個孔。若其在ApoE-CTD上展 現至少2x背景，但在陰性對照組蛋白質，如ApoE-NTD或鏈 黴菌抗生物素蛋白上展現低於lx背景，則該多肽在ELISA 中專一地結合ApoE-CTD。 均質結合測定是其中可在加入測定的所有組份之後，分 析候選抗體與標靶之結合交互作用的測定，不需額外的流 體操縱。例如，可使用螢光共振能量轉移（FRET)作為均質 測定（參見，例如Lakowicz等人，美國專利第5,631，169號）。 均質測定的其他實例是α篩選（Packard Bioscience, Meriden，Connecticut，USA) 〇 當使候選多肽附接至展示庫媒介，例如噬菌體時，可執 行均質測定。 可使用表面等離子體激光共振（SPR)分析分離自展示庫 之分子與標靶之間的結合交互作用。SPR或生物分子交互作 用分析（BIA)，即時檢測生物專一的交互作用，不需標示任 何的交互作用物（interactants)。在BIA晶片之結合表面上的 質量變化（代表結合事件），導致光靠近表面之折光指數的改 變（表面等離子體激光共振（SPR)的光學現象））。在折射性上 97784A.doc -43- 200530267 的改寬產生可檢測之信號，測量該信號，代表在生物分子 之間的即時反應。在例如Szabo等人（1995) Curr 〇pin struct. Bid 5:699-705中描述了使用SPR的方法，並由mA晴intemati〇nalAB (Uppsala，Sweden)提供線上支援。 可使用得自SPR之資訊，為生物分子與標靶的結合，提 供平衡解離常數（KD)及動力學參數，包括尺⑽和κ⑽正確和 定量的測量。可使用這類數據比較不同的生物分子。例如， 可比較由選自各種股之庫的核酸編碼之蛋白質，確認對標 靶具有高親和力或低KQff的個體。亦可使用該資訊來發展結 構-活性關係（SAR)。例如，可比較親代蛋白質之成熟版本 的動力學和平衡結合參數與親代蛋白質之參數。可確認在 特定位置處的變體胺基酸，並與特殊的結合參數發生關 聯，例如高親和力和低Koff。該資訊可與結構塑型（例如使 用同種性塑型、能量最小化，或藉著結晶術或NMR判定結 構）。結果，了解可策定在蛋白質與其標靶之間的物理交互 作用，並用來引導其他的設計過程。 可將從展示庫中確認的抗體固定在固體支撐物上，例如 在小珠或陣列上。關於蛋白質陣列，將每個多肽固定在支 撐物上的獨特位址。通常，位址是二次元的位址。下文描 述蛋白質陣列（參見，例如”診斷"）。 可藉著將編碼抗體之載體核酸序列轉化至宿主細胞内， 而得以在細胞内產生抗體，從細胞中分泌，或附接在細胞 表面，來篩選確認與ApoE-CTD結合的候選抗體。可針對與 ApoE_CTD結合的抗體來篩選細胞，例如藉著檢測在細胞表 97784A. doc -44 - 200530267 現型或細胞-調解之活性上的改變。例如，該活性可以是細 胞或補體-調解的細胞毒性。 在其他的具體實施例中，細胞庫是細胞陣列形式的。同 樣可對任何適當的可檢測活性，篩選細胞陣列。 c. 產生抗體 可使用標準重組核酸方法來表現本發明之抗體。通常， 將編碼抗體的核酸序列選殖到核酸表現載體内。當然，若 抗體包括多個多肽鏈，則必須將每個鏈選殖到表現載體 内，例如相同或不同的載體，在相同或不同的細胞中表現。 若抗體片段是非常小的，即具有少於50個胺基酸，則可使 用自動有機合成方法來合成它。下文亦提供產生抗體的方 法。 表現抗體配體之表現載體，除了編碼多肽配體或其片段 的斷片之外，可包括調節序列，包括例如啟動基因，以可 操作之方式與感興趣的核酸（們）連接。大量的適當載體和啟 動基因為熟諳此藝者已知的，且為市售的，用來產製本發 明之重組構築體。提供下列的載體來舉例說明。細菌的： pBs，phagescript，PsiX174，pBluescript SK，pBs KS，pNH8a，pNH16a， pNH18a? pNH46a (Stratagene, La Jolla, California, USA); pTrc99A, pKK223-3，pKK23 3-3, pDR540 和 pRIT5 (Pharmacia，Uppsala，Sweden) 〇 真核生物的：pWLneo, pSV2cat，pOG44, PXTI，pSG(Stratagene)，pSVK3, pBPV，pMSG和pSVL (Pharmacia)。一種較佳類別的庫是展示庫， 在下文中描述之。 可使用熟諳此藝者已熟知的方法來建構含有本發明之抗 97784a.doc -45- 200530267 體和適當轉錄/轉譯控制信號的載體。這些方法包括在活體 外的重組DNA技術、合成技術，以及在活體内的重組/遺傳 重組。參見，例如在Sambrook & Russell，分子選瘦··實驗室 手冊（Molecular Cloning: A Laboratory Manual)，第三版，Cold Spring Harbor Laboratory，NY (2001)和Ausubel等人，分子生物學的最新 草案（Current Protocols in Molecular Biology) (Greene Publishing Associates and Wiley Interscience，NY (1989))中描述的技術。可使用 CAT(氣黴素轉移酶）載體或其他具有可選擇標記的載體，從 任何想要的基因中選擇啟動基因區。兩個適當的載體是 pKK232-8和pCM7 〇特別提名的細菌啟動基因包括lacZ、 T3、T7、gpt、λΡ和trc。真核生物啟動基因包括CMV速早、 胸腺核苷激酶、早和晚SV40、得自逆轉錄病毒的LTRs、老 鼠金屬硫肽-I，以及各種此項技藝中已知的組織專一性啟動 基因。 通常，重組表現載體將包括容許宿主細胞轉化的複製起 點和可選擇標記，例如大腸桿菌的氨苄青黴素抗藥性基 因，以及酒酵母菌營養缺陷標記（如URA3、LEI2、HIS3和 TRP1基因），以及衍生自高度表現基因之啟動基因，以便指 揮下游結構序列的轉錄。這類啟動基因可衍生自編碼糖原 酵解酵素的操縱子，如3-磷酸甘油酸激酶（PGK)、a-因子、 酸性磷酸酶或熱休克蛋白質等等。在適當的階段，利用轉 譯起始和中止序列，最好還有能夠指揮轉譯之蛋白質分泌 至近膜間隙或細胞外介質内的前導序列，來裝配本發明之 多核苷酸。本發明之核酸，可視需要編碼包括N-終端確認 97784A.doc -46- 200530267 給予想要特徵之肽的融合蛋白質，例如使所表現之重組產 物穩定化，或簡化的純化作用。可藉著插入本發明之多核 苷酸連同適當的轉譯起始和中止信號，可視需要以可操作 之編閱相與具有功能之啟動基因一起，來建構有用的細菌 表現載體。載體將包括一或多個表現型的可選擇標記和複 製起點，確保載體的維持，且若需要提供在宿主中的擴大 作用。適合轉化的原核生物宿主包括大腸桿菌、枯草桿菌、 鼠傷寒沙門氏桿菌，以及在假單孢菌屬、鏈黴菌屬和葡萄 球菌屬中的各種物種，雖然亦可使用其他的，只是選擇的 問題。 作為代表性但非限制性的實例，供細菌使用的表現載體 可包括可選擇標記和衍生自市售質體之細菌複製起點，包 括已熟知之選殖載體pBR322 (ATCC 37017)的遺傳元件。這類 市售載體包括例如 pKK223-3 (Pharmacia Fine Chemicals，Uppsala， Sweden)和 pGEMl (Promega，Madison，Wisconsin, USA) o 本發明更提供含有本發明之載體的宿主細胞，其中已經 使用已知的轉化、轉移感染或感染方法，將核酸導入宿主 細胞内。例如，宿主細胞可包括從各種股中建構之庫的成 員。宿主細胞可以是真核生物宿主細胞，如哺乳動物細胞、 低等真核生物宿主細胞，如酵母菌細胞，或宿主細胞可以 是原核生物細胞，如細菌細胞。可藉著例如罐酸#5轉移感 染、DEAE、葡聚糖調解之轉移感染或電穿透作用，完成將 重組構築體導入宿主細胞内（D a v i s等人，分子生物學的基礎 方法（Basic Methods in Molecular Biology) (1986))。 97784A.doc -47- 200530267 可使用任何宿主/載體系統，確認本發明的一或多個標靶 元件。這些包括，但不限於真核生物宿主，如HeLa細胞、 CV-1細胞、COS細胞、Sf9細胞和HEK293T細胞，以及原核 生物宿主，如大腸桿菌和枯草桿菌。最佳的細胞是正常不 表現特殊報告者多肽或蛋白質，或以低天然水準表現報告 者多肽或蛋白質的那些。 本發明之宿主亦可以是酵母菌或其他真菌。在酵母菌 中，可使用各種含有組成上的或可誘導之啟動基因的載 體。關於回顧，參見分子生物學的最新草案（Current Protocols in Molecular Biology)，第 2冊，編輯 Ausubel等人，GreenePublish· Assoc· & Wiley Interscience，第 13 章（1988); Grant 等人（1987) ’’酵母菌 的表現和分泌載體（Expression and Secretion Vectors for Yeast)"， Methods Enzymol· 153:516_544 (1987);以及酒酵母菌的分子生物 學（The Molecular Biology of the Yeast Saccharomyces)，編輯 Strathern 等人，Cold Spring Harbor Press，第 I和 II冊（1982)。 本發明之宿主亦可以是原核生物細胞，如大腸桿菌、其 他的腸桿菌科，如黏質沙雷菌（Serratia marescan)、桿菌、 各種曱單孢菌，或其他可被轉化、轉移感染及/或感染的原 核生物。 本發明更進一步包括經過遺傳設計而含有本發明之抗體 的宿主細胞。例如，這類宿主細胞可含有使用已知的轉化、 轉移感染及/或感染方法，導入宿主細胞内的本發明之核 酸。本發明更提供經過遺傳設計而表現本發明之多核苷酸 的宿主細胞，其中這類多核苷酸是以可操作之方式與對宿 97784A doc -48- 200530267 主細胞而言為異種的調節序列連接，其駕馭抗體在細胞中 的表現。 宿主細胞可以是高等真核生物細胞，如哺乳動物細胞、 低等真核生物細胞，如酵母菌細胞，或宿主細胞可以是原 核生物細胞，如細菌細胞。 可藉著磷酸鈣轉移感染、DEAE、葡聚糖調解之轉移感染 或電穿透作用（David等人（1986)分子生物學的基礎方法 籲 （Basic Methods in Molecular Biology))。可以傳統的方式，使用含 有一個本發明之多核苷酸的宿主細胞，產生由經過分離之 片段編碼的基因產物（在ORF的案例中）。 可使用任何適當的宿主/載體系統，來表現一或多個本發 明的各種抗體。亦可使用各種哺乳動物細胞培養系統來表 現重組抗體。 可在細&細胞’例如大腸桿菌細胞中產生抗體，例如 Fabs。例如，若Fab係由在噬菌體展示載體中的序列來編 • 碼，其在展示實體與噬菌體蛋白質（或其片段）之間包括可校 正中止密碼子，可將該載體核酸洗牌到不能壓抑中止密碼 子的細菌細胞内。在該情況下，Fab不與基因Η〗蛋白質融 合，而被分泌到介質中。 亦可在真核生物細胞中產生抗體。在一個具體實施例 中，在酵母菌細胞，如畢赤酵母菌屬（參見，例如p〇w^s等 人（2001) J· Immun〇l· Methods. 251:123-35)、漢遜酵母屬或酵母菌屬 中表現抗體（例如scFvs)。 在一個較佳的具體實施例中，在哺乳動物細胞中產生抗 97784A.doc -49- 200530267 體。表現純種系抗體或其抗原-結合片段的較佳哺乳動物宿 主細胞，包括中國倉鼠卵巢（CHO)細胞（包括dhfr-CHO細 胞，在 Urlaub和 Chasin ((1980) Proc· Natl· Acad· Sci. USA 77:4216-4220) 中描述，使用DHFR可選擇標記，例如像是在Kaufman和Sharp ((1982) Mol· Biol· 159:601-621)中描述的）、淋巴細胞之細胞株， 例如NS0骨髓瘤細胞和SP2細胞、COS細胞，以及得自基因 轉殖動物的細胞，例如基因轉殖的哺乳動物。例如，該細 胞是續乳動物的上皮細胞。 除了編碼多樣化之免疫球蛋白功能部位的核酸序列之 外，重組表現載體亦可攜帶額外的序列，如在宿主細胞中 調節載體複製的序列（例如複製起點）和可選擇標記基因。可 選擇標記基因有助於選擇其中已經導入載體的宿主細胞 (參見，例如美國專利第4,399,216號、4,634,665號和 5,179,017號）。例如，可選擇標記通常對其中已經導入載體 的宿主細胞賦予藥物抵抗力，如G41 8、潮黴素或胺甲碟呤。 較佳的可選擇標記基因包括二氫葉酸還原酶（DHFR)基因 (用在dhfr-宿主細胞上，以胺甲碟呤選擇/擴大）和neo基因 (用於G418選擇）。 在本發明之抗體或其抗原-結合部分之重組表現的代表 性系統中，藉著填酸鈣-調解之轉移感染，將編碼抗體重和 抗體輕鏈兩者的重組表現載體導入dhfrXHO細胞内。在重 組表現載體内，以玎操作之方式分別將抗體重和輕鏈基因 連接促進子/啟動基因調節元件（例如衍生自SV40、CMV、 腺病毒及其類似者，如CMV促進子/AdMLP啟動基因調節元 97784A.doc 〇0- 200530267 件或S V40促進子/AdMLp啟動基因調節元件），驅動基因的 南程度轉錄。重組表現載體亦攜帶DHFR基因，其容許選擇 已經使用胺甲碟呤選擇/擴大之利用載體轉移感染的CHO 細胞。培養選出之轉化宿主細胞，容許表現抗體重和輕鏈， 亚從培養基中回收完整的抗體。使用標準分子生物學技術 製備重組表現載體，轉移感染宿主細胞，選擇轉化物，培 養佰主細胞，並從培養基中回收抗體。例如，可藉著親和 φ 力層析法，以蛋白質A或蛋白質G分離一些抗體。 至於包括Fc功能部位的抗體，抗體生產系統最好合成其 中FC區為糖基化的抗體。例如，IgG分子的Fc功能部位在 CH2功能部位中天冬醯胺297處被糖基化。該天冬醯胺是以 雙觸（biantennary)_型寡醣修改的位置。已經證實該糖基化 作用是藉著Fc受體和補體Clq調解之效應物功能所必需的 (Burton 和 Woof (1992) Adv· Immunol· 51:1-84 ; Jefferis 等人（1998)
Immunol· Rev· 163··59_76)。在一個較佳的具體實施例中，在哺乳 • 自物表現系統中產生卜功能部位，其適當地糖基化符合天 冬醯胺297的殘基。 譯後修改。
Fc功能部位亦可包括其他真核生物的轉 亦可猎著基因轉殖的動物產生抗體。例如，美國專利第
抗體。亦可從乳汁中純化抗體， 孔汁，其中包括感興趣的 或對於某些應用，可直接 97784A.doc -51 - 200530267 使用。 可從展示庫中分離本發明之ΑροΕ-CTD抗體，並可分析其 序列及/或結構。可使用已知的方法，以任何想要的量生產 抗體。例如’可藉著化學合成，接著在適合獲得天然構形， 即正確二硫鍵結的氧化條件下處理，有利地生產抗體。可 藉著熟諳此藝者已熟知的方法來進行合成（參見Kelley等 人’在遺傳工程之原理與方法（Genetic Engineering Principles and Methods)，（Setlow，J.K·編輯），Plenum Press，NY，（1990)第 12 冊，第 1 -19 頁中；Stewart 等人，固相肽合成（Solid-Phase Peptide Synthesis) (1989)，W.H. Freeman Co·，San Francisco)。亦可由提供多肽合成之 公司提供服務，在商業上製備根據本發明之多肽（例如 BACHEM Bioscience, Inc., King of Prissia, Pa. ； Quality Controlled Biochemicals，Inc·，Hopkinton，Mass) o D· 診斷方法 與ΑροΕ-CTD結合，並藉著在本文中描述及/或在本文中 詳述之方法確認的抗體，具有在活體外和在活體内的診 斷、治療及預防用途。 本發明一方面提供檢測在活體外（例如生物試樣，如生檢） 或在活體内（例如在個體中的活體内攝影）存在之 ΑροΕ-CTD的診斷方法。 該方法包括：⑴使試樣與本發明之抗體接觸；並（ii)檢測 在抗體與該試樣之間的複合物形成。該方法亦包括使參考 試樣（例如對照組試樣）與抗體接觸，並判定相對於參考試樣 的複合物形成，在抗體與該試樣之間複合物形成的程度。 97784A.doc -52- 200530267 相對於對知級試樣或個體，在試樣或個體中之複合物形成 上的改又例如在統計學上顯著的改變，可代表 出現在試樣中。 其他的方法包括··⑴對個體投與本發明之抗體；並（Π) 核測在抗體與該個體之間的複合物形成。檢測步驟可包括 判定複合物形成的場所及時間。 可利用可檢測物質，直接或間接標示抗體配體，有助於 • &測已結合或未結合之抗體。適當的可檢測物質包括各種 酵素、辅基、螢光材料、發光材料和放射性材料。 可藉著測量或肉眼檢查與ApoE-CTD結合之抗體或未結 口的抗體，檢測在本發明之抗體與Ap〇E_CTD之間的複合物 7成了使用傳統的檢測測定，例如酵素-連結免疫吸附測 定（ELISA)、放射性免疫測定（RIA)或組織免疫組織化學 法。附帶說標示抗體，可藉著競爭免疫測定，利用以可檢 /貝J物貝‘示之標準物和未標示之抗體，測定試樣中 Φ ApoE-CTI)的存在。在該測定的一個實例中，混合已標示之 祆準物和抗體，並判定與未標示之配體結合的已標示之標 準物的量。在試樣中之ApoE_CTD的量與與抗體結合之已標 示之標準物的量成反比。 可製備螢光團和發色團標示之抗體。因為抗體吸收具有 波長问達大約3 1 0毫微米的光，故應該選擇在波長3丨〇以 上，且最好在400毫微米以上具有實際吸收的螢光部分。由
Stryer (1968) Science 162:526 和 Brand，L·等人（1972) Annual Review of
Biochemistry 41:843-868描述了各種適當的螢光和發色團。可藉 97784A.doc -53- 200530267 著傳統的程序，如在美國專利第3,940,475號、4,289,747號 和4,376,110號中揭示的那些，利用螢光發色團基團標示抗 體。一群具有各種上述之想要特性的螢光劑，是黃嘌呤素 染料，其包括螢光素和若丹明。其他群的螢光化合物是萘 胺。一旦以螢光團或發色團標示，便可使用抗體來檢測 ApoE-CTD在試樣中的存在或定位，例如使用螢光顯微鏡 (如共焦或重疊顯微鏡）。 可使用在本文中描述之抗體進行免疫組織化學法。例 如，可合成帶有標籤（如純化或抗原決定位標籤）的抗體，或 可以可檢測方式標示，例如藉著與標記或標記-結合基團共 軛。例如，可將螯合劑附接至抗體。然後使抗體與組織學 製備物接觸，例如在顯微鏡玻片上的組織固定切片。在為 了結合培養之後，沖洗製備物，以便移除未結合的抗體。 然後分析製備物，例如使用顯微鏡，確認抗體是否與製備 物結合。 當然，抗體在結合時可能是未經標示的。在結合及沖洗 之後，標示抗體使其成為可檢測的。 亦可將抗體固定在蛋白質陣列上。可使用蛋白質陣列作 為診斷工具，例如篩選醫學試樣（如經過分離的細胞、血 液、血清、生檢及其類似物）。當然，蛋白質陣列亦可包括 其他配體，例如與ApoE-CTD結合的配體。 在例如 De Wildt 等人（2000) Nature Biotech· 18:989-994 ; Lueking 等 人（1999) Anal. Biochem· 270:103-111 ; Ge (2000) Nuc· Acids Res. 28:e3 ; MacBeath和 Schreiber (2000) Science 289:1760-1763 ; WO 01/40803 和 97784A.doc -54 - 200530267 W〇99/51773A1中描述產生纽陣列的方法。以高速點上多肽 的陣列，例如使用市售的機器裝置，例如得自Genetic Μ则SyStems and Affymetrix (Santa Clara，Ca^ (Cambridge，UK)。陣列受質可以是例如硝基纖維素、塑料、 玻璃，例如表面經過修改的玻璃。陣列亦可包括多孔基質， 例如丙烯酸胺、瓊脂糖或其他聚合物。 例如陣列可以疋抗體的陣列，例如如同在〇e Wiidt，在 φ 幻中描述的。亦可使產生多肽配體之細胞，以排成陣列的 袼式生長在濾紙上。誘導多肽產製，並將所表現之多肽固 定在渡紙的細胞位置上。 可使抗體陣列與經過標示之標靶接觸，判定標靶對每個 得自各種股庫的已經固定之抗體的結合程度。若標靶是未 經私不的，則可使用三明治法，例如使用經過標示的探針， 檢測未標示之標靶的結合。 可按照輪廓，例如在電腦資料庫中，儲存在陣列中每個 • 位址處關於結合程度的資訊。可重複產生抗體陣列，並用 來比較例如標靶和非-標靶的結合輪廓。因此，可使用抗體 陣列確認各種股庫中與一或多個分子具有想要之結合特性 的個別成員。 在另個具體貫施例中，本發明提供在活體内檢測含有 ΑροΕ-CTD之斑塊存在的方法。該方法包括⑴對個體（例如 患有阿茲海默氏症或系統性澱粉樣變性之患者）投與與可 檢測標記共軛的本發明之抗體；（ii)使該個體暴露在檢測與 含有ΑροΕ-CTD之斑塊結合的該可檢測標記的方法下。例如 97784A.doc -55- 200530267 使個體成像，例如NMR或其他的斷層攝影。 可用在根據本發明之診斷成像之標記的實例，包括放射 性標記，如 131I、ulIn、123I、99mTc、32P、125I、3H、14C和 188Rh、螢光標記，如螢光素和若丹明，核磁共振活性標記、 可藉著正電子發射斷層攝影（”PET，，）掃描器檢測的正電子 發射同位素、化學發光劑，如蟲螢光素，以及酵素標記， 如過氧化酶或磷酸酶。亦可使用短程輻射發射體，如可藉 著短程檢測器探針檢測的同位素。可使用已知的技術，利 用這類試劑標示多肽配體。例如，參見Wensel和Meares (1983) 放射性免疫成像和放射性免疫治療（Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy)，Elsevier, New York，關於與抗體之放射性標 記有關的技術，以及 D. Colcher 等人（1986) Methods Enzymol· 121:802-816。 本發明之放射性標記配體亦可用在活體外的診斷測試 上。以同位素·標示之配體的比活性依據半衰期、放射性標 記的同位素純度，以及如何將標記併入抗體内而定。 利用放射性同位素（如14031^358、1251、32?、1311)標示 多肽的程序通常是已知的。例如，在美國專利第4,3 02,43 8 號中描述了氚標示程序。例如，由Goding，J.W.(單株抗體： 原理與實行：單株抗體在細胞生物學、生物化學及免疫學 上的產製與應用（Monoclonal Antibodies: Principles And Practice: Production And Application Of Monoclonal Antibodies In Cell Biology, Biochemistry，And Immunology)，第二版，London, Orlando, Academic Press (1986) polypeptide· 124-126)及其提及之參考文獻，描述了蛾 97784A.doc -56- 200530267
化、氚標示和35s標示的程序，例如為了老鼠單株抗體而改 編的。由 Hunter和 Greenwood (1962) Nature 144:945，David 等人（1974) Biochemistry 13:1014-1021，以及美國專利第 3，867,517 號和 4,376,110號描述了碘化多肽，如抗體的其他程序。可用在 成像上的放射性標示元件，包括例如125I、mI、luIn和 99mTc。由 Greenwood，F·等人（1963) Biochem· J. 89:114-123; Marchalonis， J. (1969) Biochem. J. 113:299-305 ;和 Morrison, M·等人（1971) Immunochemistry 8:289-297描述了埃化抗體的程序。由 Rhodes，B. 等人，在Burchiel，S等人（編輯），腫瘤成像：癌症的放射性 免疫化學檢測（Tumor Imaging:The Radioimmunichemical Detection of Cancer，New York: Masson 111-123 (1982)及其中提及的參考文獻， 描述了 99mTc-標示的程序。由 Hnatowich，D.J.等人（1983) J· Immun. Methods 65:147-157，Hnatowich，D·等人（1984) J· Applied Radiation 35:554-557和 Buckley, R.G·等人（1984) F.E.B.S· Lett. 66:202-204描述了 適合mIn-標示抗體的程序。 在放射性標示之抗體的案例中，投與患者的抗體被局限 在斑塊處，其與抗體反應，並在活體内使用已知的技術， 如放射性同位素（radionuclear)掃描，使用例如γ攝影機或發 射斷層攝影來檢測或”使其成像’’。或者，亦可使用位置發 射斷層橫向攝影掃描器（position emission transaxial tomography scanner)，如位在 Brookhaven National Laboratory，命名為 Pet VI， 在那裏放射性標記發射正電子（例如uc、18F、150和13N)。 磁共振造影（MRI)使用NMR，將活個體的内部特徵視覺 化，並可用在預後、診斷、治療和手術上。為了明顯的益 97784A.doc -57- 200530267
銳的高解析影像。 處， 洲專 常， 關的 可藉著造影劑增強在這些相對時間常數中的差異。這類 造影劑的實例包括各種磁性製劑順磁製劑（其主要改變T i) 和鐵磁的或超磁的（superaramagnetic)(其主要改變η反 應）。可使用省合劑（例如EDTA、DTPA和NTS螯合劑）附接 一些順磁物質（例如Fe+3、Mn+2 、Gd 3)。其他製劑可以是顆 粒的形式，例如直徑小於10微米至大約10毫微米。顆粒可 具有鐵磁性、反鐵磁性或超磁性的特性。顆粒可包括例如 磁性的（Fe3〇4)、-Fe2〇3、鐵酸鹽，以及過渡元素的其他磁 性無機化合物。磁性顆粒可包括一或多個磁性結晶，有或 無非磁性材料。非磁性材料可包括合成的或天然的聚合 物，如瓊脂糖、葡聚糖、糊精、澱粉及其類似物。 亦可利用含有NMR-活性19F原子或多個這類原子的指示 基團來標示本發明之抗體，因為⑴實質上所有天然豐富的 氟原子均是19F同位素，並因此實質上所有的含氟化合物均 是NMR-活性的；（π)可以相對上較低的成本，購得任何具 有化學活性之多氟化化合物，如三氟乙酸酐，且（iii)已經在 醫學上發現，許多氟化了的化合物對於人類應用是可接受 的’如用來攜帶氧的全氟化聚醚類，成為血紅素的替代品。 在允許這樣的培養時間之後，使用如由Pykett (1982) Scientific 97784A.doc -58- 200530267
American 246:78-88描述的那些裝置之一，進行MRI掃描。 包括本發明之抗體和診斷用途之說明書的套組，亦在本 發明之範圍内，例如在活體外，例如在試樣中，例如得自 患有系統性澱粉樣變性之患者的生檢，或在活體内，例如 藉著使個體成像，使用抗體來檢測ApoE-CTD。套組可進_ 步含有至少一個額外的試劑，如標記或額外的診斷劑。關 於在活體内的用途，可將抗體調配成醫藥組合物。 E·治療方法 與ΑροΕ-CTD結合並藉著在本文中描述及/或在本文中詳 述之方法確認的多肽，具有治療和預防用途。例如，可將 這些配體投與在培養令的，例如在活體外或在活體内，或 在個體中，例如在活體内的細胞，來治療、預防及/或診斷 各種病症，如阿茲海默氏症或系統性澱粉樣變性。 當在本文中使用時，將”治療”一詞定義為單獨或與第二 種製劑一起將抗-ApoE-CTD抗體應用或投與個體，例如患 者，其患有病症（例如如同在本文中描述的病症”病症之徵 候或易患病症的傾向，為了治療、治癒、減輕、緩和、改 變、醫治、改良、改善或影響病症、病症之徵候或易患病 症之傾向。 田在本文中使用時，有效治療病症之抗_Ap〇E_CTD多肽 的量，或”在治療上有效之含量”意指當以單一或多次劍量 才又與個體％，该配體的量是有效的，或在延長的治療、減 幸二緩和或改善患有如同在本文中描述之病症的個體時， 超過對缺乏這類治療時所預期到的。 97784A.doc -59· 200530267 ^在本文中使用時，有效預防病症之抗_Ap〇e_ctd多肽 的s，或多肽"在預防上有效之含量，’意指當以單一或多^ 劑量投與《時，該抗_ApoE_CTD多肽，例如在本文= 述之抗-ap〇E-CTD抗體的量，在預防或延遲病症，例如戶; 兹海默氏症之發作或復發上是有效的。 "誘導，，、"抑制”、"使有效"、"升高”、"增加”、"降低 其類似者，例如其代表在兩個狀態之間的定量差異，意指 差異，例如在兩個狀態之間，在統計學上顯著的差異。〜日 當在本文中使用時，"個體"一詞企圖包括人類和非_人類 動物。較佳的人類動物包括患有其特徵為異常細胞增殖或 細胞分化之病症的人類患者。本發明之”非-人類動物”―詞 包括所有的脊椎動物，例如非·哺乳動物（如雞、兩棲類、攸 蟲類）和哺乳動物，如非·人類靈長動物、綿羊 等等。 丁雜 "殿粉樣蛋白病症"一詞企圖包括’但不限於阿兹海默氏 症、原發性糸統性澱粉樣變性、繼發㈣統性殿粉樣變性、 老年系統性澱粉樣變性、家族性澱粉樣蛋白多神卜 族性澱粉樣蛋白多神經病m、家: 1王非-狎經病性殿粉樣變 性、遺傳性腦澱粉樣蛋白血管病、家族性英國痴呆㈣⑺、 與血液透析有關的澱粉樣變性、家族性澱粉樣變性(芬蘭 型）、家族性上皮下角酿粉樣蛋自、如型糖尿病、遣傳 性腎臟澱粉樣變性、腦下垂體澱粉樣變性、注射局部的殿 粉樣變性、甲狀腺的髓質癌、心房的澱粉樣變性、家族性 丹麥痴呆（FDD)和唐氏症。其中檢測到殿粉樣原纖維的相關 97784A.doc -60· 200530267 版粉樣蛋白疾病，包括但不限於海绵樣腦病、散發性亞急 性海綿狀腦病、家族性亞急性海綿狀腦病、醫源性朊病毒 (prion)病症、變種的亞急性海綿狀腦病、慢性小腦型海綿 狀腦病（GSS)、庫魯病、帕金森氏症、亨丁頓氏舞蹈症、家 族性肌萎縮性側索硬化（ALS)和慢性阻塞性肺病。
此外，可將澱粉樣蛋白病況定義為在腦部、髓質或其他 器官中有澱粉樣蛋白沉積的病症。這類病症的實例是阿茲 海默氏症。其他特徵為殿粉樣蛋白沉積之痴呆病症為散發 性亞急性海緯狀腦病、家族性亞急性海錦狀腦病、醫源性 朊病毋病症、變種的亞急性海綿狀腦病、慢性小腦型海綿 狀腦病（GSS)、庫魯病、帕金森氏症、亨丁頓氏舞蹈症、家 族性英國疾呆、家族性丹麥痴呆、唐氏症、原發性系統性 澱粕樣、艾性，如與免疫球蛋白-輕鏈有關的澱粉樣變性、繼 發性系統性澱粉樣變性，如與澱粉樣蛋白A =性、家族性系統性殿粉樣變性，如家族性= 結合別自蛋白（transthyretin)相關的殿粉樣變性、家族性脫 輔基脂蛋白A.1相關的澱粉樣H家族性溶膠蛋白 (gelsolm)相關的澱粉樣變性、家族性血纖維蛋白原A “相關 的殿粉樣變性、家族性溶酶體殿粉樣變性、老年系統性殿 粉^變性、家族性殿粉樣蛋白多神經病工、家族性;殿粉樣蛋 白夕神、1病III、家族性非-神經病性殿粉樣變性、遺傳性腦 殺粉樣蛋白Α管病、與錢透析㈣的㈣樣變性 性澱粉樣變性(芬蘭型)、家族性上皮下角膜澱粉樣蛋白、第 1 jc病㉟傳性腎臟澱粉樣變性、腦下垂體澱粉樣變 97784A.doc -61 - 200530267 性、注射局部的澱粉樣變性、甲狀腺的髓質癌、心房的澱 粉樣變性、慢性阻塞性肺病，以及家族性肌萎縮性側索硬 化-ALS。可在 James C. Sacchettini和 Jeffery W. Kelly: Nature Reviews， Drug Discovery，第1冊，2002年4月，267-275中找到詳細的參 考文獻。 在一個具體實施例中，該個體為人類個體。或者，該個 體可以是表現與本發明之多肽產生交叉反應的類 ApoE-CTD抗原的哺乳動物。可為了治療之目的，將本發明 之多肽投與人類個體（下文詳述）。而且，可為了獸醫之目 的，或作為人類疾病的動物模式，將抗-ApoE-CTD多肽投 與表現與該多肽結合之類ApoE-CTD抗原的非-人類哺乳動 物（例如靈長類、豬或老鼠）。關於後者，可使用這類動物模 式來評估該多肽的治療效力（例如，測試投藥的劑量和時間 經過）。 關於在活體内的具體實施例，在個體中完成接觸的步 驟’並包括在有效容許配體與斑塊結合並治療，例如破壞 該斑塊兩者的條件下，將抗- ApoE-CTD多肽投與個體。 在π醫藥組合物π中描述了投與抗-ApoE-CTD多肽的方 法。使用該分子的適量劑量將視個體的年齡和體重，以及 所使用之特殊藥物而定。 可直接在活體内使用抗ApoE-CTD配體，以便經由天然的 補體-依賴性細胞毒性（CDC)或抗體-依賴性細胞之細胞毒 性（ADCC)，排除含有ApoE-CTD的斑塊。本發明之多肽包 括補體結合效應物功能部位，如得自IgGl、-2或-3的Fc部 97784A.doc -62- 200530267 分，或與補體結合的IgM之相對應部分。可藉著加入補體或 含有補體的血清來補充治療。此外，可藉著與補體蛋白質 結合，改善以本發明之多肽塗覆之斑塊的呑噬作用。 可藉著小神經膠質，經由A型清除者受體，將抗體-瞄準 之殿粉樣蛋白斑内化（Melanie I. Brazil，Haeyong Chung 和 Frederick R.Maxfield·免疫球蛋白G和補體組份Clq的併入，對藉著小神 經膠質的阿茲海默氏症澱粉樣蛋白原纖維之攝取和降解的
影響（Effects of Incorporation of Immunoglobulin G and Complement Component Clq on Uptake and Degradation of Alzheimer's Disease Amyloid Fibrils by Microglia) J· Biol. Chem·，2000 年 5 月；275:16941-16947)。 或者，其他與小神經膠質Fc受體無關的機制，可能在清除 分散的3D6-免疫反應性的硫代-S-陰性斑塊和可溶性Αβ部 分上扮演某種角色（Wilcock DM，DiCarlo G，Henderson D，Jackson J， Clarke K，Ugen KE，Gordon MN，Morgan D :顱内投與抗-Αβ抗體， 藉著不依賴及與小神經膠質激活作用有關聯的兩種機制，降 低 β _ 殿粉樣蛋白沉積（Intracranially administered anti-Abeta antibodies reduce beta-amyloid deposition by mechanisms both independent of and associated with microglial activation) J Neurosci 2003, 23:3745-3751)。與 該假設一致，Fc-基因剔除老鼠亦顯示在Αβ免疫治療之後降 低斑點的負荷（Das Ρ，Howard V，Loosbrock Ν，Dickson D，Murphy ΜΡ， GoldeTE :澱粉樣蛋白-β免疫有效地降低在FcRY-/-基因剔除 老鼠中的澱粉樣蛋白沉積（Amyloid-beta immunization effectively reduces amyloid deposition in FcRgamma-/-knock-out mice.) J Neurosci 2003, 23:8532-8)。 97784a;doc -63- 200530267 广^了㈣’殺死或㈣涉及使用 體的方法。例如’可使用這些材料來預防 ^ 了幻每默氏症、系統性澱粉樣變性或其他澱粉樣蛋 白病症的發展或進行。 本裔明之治療性方法的❹，對於㈣海默氏症或系統 殿粉樣變性有許多益處。因為該多肽專一地認出 Ap:E CTD’故使其他組織得以免除，而直接將高量的製劑 遞送至需要治療之處。可利用臨床參數有效地監視根據本 發明之治療。或者’可使用這些參數指出何時應該使用這 類治療。 F ·醫藥組合物 另一方面，本發明提供組合物，例如在藥學上可接受之 組合物包括與在藥學上可接受之載劑調配在一起的根 據本發明之抗體。當在本文中使用時，，，醫藥組合物”一詞 包括經過標示之配體，以便在活體内成像，以及治療組合 物0 當在本文中使用時，”在藥學上可接受之載劑”一詞包括 任何在生理學上可相容之溶劑、分散介質、塗料及其類似 物。載劑最好是適合靜脈内、肌肉内、皮下、非經腸、脊 髓或表皮投藥的（例如藉著注射或輸液）。依據投藥的路徑， 可利用保護化合物免於酸和其他可能使該化合物失活之天 然條件作用的材料來塗覆活性化合物，即多肽。 本發明之組合物可以是各種形式的。這些包括，例如液 體、半-固體和固體劑量形式，液態溶液（例如注射用和輸液 97784A.doc -64- 200530267 用的浴液）、分散體或懸浮液、錠劑、藥丸、粉末、微脂粒 和检劑。較佳的形式視想要的投藥模式和治療應用而定。 代表性的較佳組合物是注射用或輸液用溶液之形式，如類 似那些用來將抗體投與人類的組合物。較佳的投藥模式是 非經腸的（例如靜脈内、皮下、腹腔内、肌肉内）。在較佳的
具體貫施例中，藉著靜脈内輸液或注射投與抗-ApoE-CTD
多肽。在另一個較佳的具體實施例中，藉著肌肉内或皮下 注射投與抗-ApoE-CTD配體。 當在本文中使用時，片語"非經腸投藥”和"以非經腸之方 ^投藥”意指以與經腸和局部投藥不同的方式投藥，通常是 藉著注射，且包括但不限於靜脈内、肌肉内、動脈内、鞘 内囊内、眼框内、心内、皮内、腹腔内、經氣管、皮下、 表皮下、μ節内、囊下、蜘蛛膜下、脊椎内、硬膜上和胸 骨内注射和輸液。 醫藥組合物通常必須是無g的，且在製造和儲存的條件 下是穩定的。 可以溶液、微乳齊！、分散體、微脂粒或其他適合高藥 濃度之有順序的結構來職組合物。可藉著以需要的量 將活性化合物（即多肽）倂人適當的溶劑中，按照需要帶有 種上文列舉之成分或其組合，接著過濾滅菌，來f備無 注二用的溶液。通常’藉著將活性化合物倂人㈣媒介中 其含有基本的分散介f，以及得自上文列舉那些的所需 其他成份，製備分散體。在用來製備無菌注射用溶液： 困粉末的案例中，較佳的製備方法是真空和冷;東乾# 97784A.doc -65- 200530267 5 :活性成分加上任何得自其先前經過無菌-過濾溶液之 想要成份的粉末。可維持溶液的適當滿度，例如藉著 使用塗料，如卵磷脂，在分散體的案例中，則藉著保持所 需的顆粒尺寸，並藉著使用界面活性劑。可藉著在組合物 、 乙遲吸收之製劑，例如單硬脂酸鹽類和明膠，達成 注射用組合物的延長吸收。 可藉著此項技藝中已知的各種方法，投與本發明之抗 φ Μ _然對峰多應用而言，較佳的投藥路徑/模式是靜脈内 注射或輸液。例如’為了治療胸，可藉著以低於3〇、2〇、 或1¾克/刀知之速率靜脈内輸液來投與抗體，達到大 約1至100毫克/平方公尺，如7至25毫克/平方公尺之劑量。 投藥的路徑及/或模式將依據想要的結果而改變。 可利用此項技藝令已知的醫學裝置投與醫藥組合物。例 如，在較佳的具體實施例中，可利用無針頭的皮下注射裝 置，如在美國專利第5,399，163號、5,383,851號、5,312,335 _ 號、5,064,413 號、4,941，880 號、4,790,824 號或 4,596,556號 中揭示的裝置，投與本發明之醫藥組合物。可用在本發明 中之已热知的植入物和模組的實例，包括：美國專利第 4,487,603號，其揭示可植入之顯微_輸液幫浦，以精確的輸 液速率來分送醫藥品；美國專利第4,447,224號，其揭示適 合連續藥物遞送的可變流量之可植入的輸液裝置；美國專 利第4,439,196號，其揭示具有多室隔間的滲透藥物遞送系 統；以及美國專利第4,475，196號，其揭示滲透藥物遞送系 統。當然，許多其他的這類植入物、遞送系統和模組亦是 97784A.doc -66- 200530267 已知的。 在某些具體實施例中，可調配本發明之組合物以確保在 活體内適當地分布。例如，血腦障礙（BBB)排除許多高度親 水性的化合物。欲確保本發明之治療化合物跨越bbb，可 在例如微脂粒中調配它們。至於製造微脂粒的方法，參見， 例如美國專利第4,522,811號、5,374,548號和5,399,331號。 微脂粒可包括一或多個部分，其被選擇性地運送至特定細 胞或器g内’因此提咼了標革巴藥物遞送（參見，例如ν·ν·
Ranade (1989) J: Clin· Pharmacol· 29:685)。 調整劑量攝生法，提供最佳的想要反應（例如治療反 應）。例如，可投與單次的積儲注射、可在一段時間内投與 數個分開的劑量，或可藉著治療狀況的迫切需要，指示按 比例降低或增加劑量。特別有利的是，為了每次投藥和劑 ΐ的均一性，以劑量單位形式來調配非經腸組合物。當在 本文中使用時，劑量單位形式意指在物理學上分開的單 位，適合對待治療之個體單一次給藥；每個單位含有預定 含量的活性化合物，經過計算可產生想要的治療效果，連 同所需之藥學載劑。藉著並直接依據活性化合物的獨特 特欲和欲達成的特殊治療效果，以及（b)在調配這類活性化 合物的技藝上，關於在個體中之治療感受性上的先天限 制，來私疋本發明之劑量單位形式的說明書。 在治療上或在預防上有效含量之本發明抗體的代表性， 但非限制性之範圍是O.UO毫克/公斤，更佳的是丨_1〇毫克/ 公斤。可藉著以低於30、2〇、1〇、5或1毫克/分鐘之速率靜 97784A.doc -67· 200530267 脈内輸液來投與抗體，達到大約1至100毫克/平方公尺或大 約5至30毫克/平方公尺。至於具有比IgG更低之分子量的抗 體片段，可按比例減去適當的量。注意到劑量值可隨著欲 減輕之病況的類型和嚴重性而改變。更明瞭對任何特定的 個體，應在一段時間内根據個別的需求，以及給予或監督 組合物投藥之人的專業判斷，且在本文中陳述之劑量範圍 僅用來舉例說明，並非企圖限制提出申請之組合物的範圍 或實行。 . _ 本發明之醫藥組合物可包括"在治療上有效之含量或，, 在預防上有效之含量，，的本發明之抗體。想#的治療結果通 常是減少或改善待治療之個體受其所苦之疾病或病症的一 或多個症狀。本發明之抗體的治療用量可以是可供 中錢粉樣蛋白沉積的產生、排除現存之殿㈣蛋白、、減 輕隱藏在下面之病症（其引起繼發性澱粉樣變性）並解除由 心或腎臟損傷所引起之症狀的量。”在治療上有效之含量” • f指按所需之劑量和時間，有效地達成想要之治療結果的 $。在治療上有效之含量的組合物，可才艮據諸如個體的疾 病狀態、年齡、性別和體重，以及多肽配體在個體中誘發 想要反應的能力之類的因素而改變。在治療上有效之含量 亦為，治療上有利之影響勝過組合物之任何毒性或不利影 響的量m有效之劑量π最好相對於未經處理的個 體抑制可測里到的參數，例如斑塊形成$ u $ _ i > 大約2〇%，更佳的是至少大約40%，在更佳的是至少大約 60/。且更{土的疋至少大約8〇%。可在預告在人類中之效力 97784A.doc 200530267 的動物模式系統中，評估化合物抑制可測量之參數的能 力。或者，可藉著熟諳此藝者已知的測定，藉著檢查化合 物抑制在活體外的這類抑制作用的能力，來評估組合物的 該特性。
在預防上有效之含量"意指按所需之劑量和時間，有效 地達到想要之預防結果的量。想要的預防結果是抑制或延 «企圖在待治療之患者中預防的疾病有關之症狀的開始 或前通常’因為在錢之前或早期就在個財使用預 防劑量，故在預防上有效之含量將比在治療上有效 更低。 t包括本發明之抗體和使用說日月t，例如治療、預防或診 斷用途的套組’亦在本發明的範圍内。在_個具體實施例 中’診斷應用的說明書包括使用抗體，檢測在活體外，例 如在試樣中’例如得自患有阿茲海默氏症或系、統性殿粉樣 變性之患者的生㈣細胞，或在活體㈣成之與斑塊結合 的ΑροΕ-CTD。在另-個具體實施财，治療應用的說明書 包括在患有阿茲海默氏症或系統性澱粉樣變性之患者中， 建議的投藥劑量及/或模式。套組可更進一步含有：少一個 額外的試劑，如診斷或治療劑。 藉著下歹]的貝例進一步解釋下列的發明，不應將其解釋 為更多的限制。在本中請案中提及的所有參考文獻、未定 之專利中請案和已經公開之專利的内容，特別以引用的方 式併入本文中。 雖然已經精著參考其較佳的具體實施例，特別顯示並描 97784A.doc -69- 200530267 述了本發明，但熟諳此藝者應了解可在形式和細節上進行 各種改變，其中不違背由附錄之申請專利範圍所包含的發 明範圍。 實例 實例1 :抗體庫組成 與在殿粉樣蛋白病症中發現之ApoE結合，但不與VLDL 結合的抗體，係選自在Dyax噬菌體質體庫Fab300中之人類 噬菌體抗體。使用出現在庫中的抗體多樣性，對CTD進行 選擇，在輕和重鏈中的多樣性如下組成： 重鏈 重鏈由一個重鏈基因斷片（V3-23或DP-47)所組成，其中 使用合成的寡核苷酸，在HCDR1和HCDR2中的某些位置創 造多樣性。分布圖案是以天然序列的多樣性分析為基礎。 附錄的HCDR3多樣性係衍生自得自一系列自體免疫捐贈者 之B-細胞的IgM-池之天然存在的序列。 輕鍵 輕鏈節目係衍生自天然重排之輕鏈序列的集合，得自與 H-CDR3多樣性相同的來源。這意指我們可預期Vk和νλ基 因，以生殖種系斷片的多種範圍為基礎，並在CDRs中或外 側有體細胞突變。 對照組抗體 使用下列的抗- ApoE抗體作為對照組： 3D12,老鼠抗體，其與CTD、VLDL、LDL、ApoE2、ApoE3 和 ApoE4結合（Colabek 等人，Biophysical J·，79:1008-1015); 97784A.doc -70- 200530267 E19 ’ 針對CTD的山羊抗體（Weisgraber (1986), j Bi〇1 chem·， 261:2068_2076);以及 6C5 ’ 針對 NTD 的老鼠抗體（Castano 1995) J. Biol· Chem·， 270:17610-17615 〇 實例2 ··原纖維的製備和預先測試 從脾臟和腎臟中萃取原纖維。從人類組織中萃取不溶的 殿粉樣蛋白原纖維，藉著在冰冷的〇15MNaCl，0.1%NaN3 中’重複機械均質化作用的循環，接著離心，以便解救在 小球中的澱粉樣蛋白。最後，將澱粉樣蛋白溶解/懸浮於水 令’並儲存之。藉著懸浮液抹片的剛果紅染色，證實澱粉 樣蛋白的内含量。該萃取原纖維的方法是此項技藝中已知 的’參見’例如 Skinner 等人，Prep· Biochem· 1982; 12(5):461_476。 可藉著以5 Marvel-PBS-吐溫（0.1%)沖洗液、2 PBS-吐溫沖 洗液和1 PBS沖洗液沖洗，分離已結合和未-結合的噬菌體。 實例3:生物素基化之CTD(bCTD)的製備和預先測試 使用具有在序列第1號中出示之胺基酸序列的CTD。利用 硫-NHS-SS-生物素，根據由Pierce描述的方法，使用1/2和 1/10之CTD/生物素的莫耳比例，來進行生物素基化作用。 SDS PAGE顯示100%的材料都經過標示。在1/10之比例的質 譜分析中，以生物素標示五個可能生物素基化位置中的3 至5個。在1/2 bCTD的比例下，顯示每個分子一或兩個生物 素，有利於保持該分子之結構。利用相同的草案，以比例 1/2來標示所有使用的CTD和NTD，並在SDS-PAGE中測試。 藉著塗覆帶有生物素之BSA，沖洗，加入鏈黴菌抗生物 97784A.doc -71 - 200530267 素蛋白，並在沖洗之後加入b-CTD，來製備塗覆的bCTD。 欲產生變性的bCTD，以脲處理bCTD，並在沖洗之後， 與在生物素基化之BSA上的鏈黴菌抗生物素蛋白結合。欲 確保bCTD結合，並在脲處理期間留在小珠上，我們在脲處 理及與小珠結合之前和之後測量bCTD的量。未看到bCTD 的喪失。 實例4 :在原纖維和ur-bCTD上的選擇 在選擇策略中，目標是選擇與在澱粉樣蛋白原纖維中之 CTD結合形成複合物的抗體。在得自腎臟之原纖維上進行 第一回合的選擇，在得自脾臟之原纖維上進行第二回合的 選擇，並在ur-bCTD上進行第三和第四回合的選擇。在二和 三回合中並未發現增強，但在第四回合中有1379的增強。 在第二個策略中，在bCTD上進行三回合選擇。 然後進行預先篩選，以便決定選擇哪一回合的選擇，進 行高輸貫量的篩選，以及應該使用哪一個抗原。在bCTD和 ur-bCTD上的篩選之間，並未看到顯著差異。因此，決定在 利用鏈黴菌抗生物素蛋白塗覆的ur-bCTD選擇上，進行高輸 貫量的篩選。使用鏈黴菌抗生物素蛋白塗覆的培養盤作為 陰性對照組bBSA。 實例5 :序列和結合分析 在經過塗覆的bCTD上進行2000個以上純種系的篩選。以 自動系統執行ELISA。使用相同的方法篩選NTD結合劑。進 一步分析與bCTD結合但不與bNTD結合的純種系。 針對在高輸貫量bCTD噬菌體ELISA中之陽性純種系的重 97784A.doc -72- 200530267 和輕鏈基因，進行定序。使用Dyaxfs專利的fWebphage’軟體 來分析純種系的序列。 在第3回合之後篩選752個純種系（23個陽性的），並在原 纖維和ur-bCTD上選擇的第4回合之後篩選216個純種系。在 bCTD上選擇的第2回合之後，篩選940個純種系。在使用 bCTD之ELISA中，陽性純種系的數目為463。所獲得之正確 序列的數目為163。 欲分析序列數據，進行在差異層面的序列比較，包括下 列： (1) 整體多樣性=不同序列的數目，若發現一個胺基酸 差異，將確認純種系是不同的（授與VH+VL多樣性）=163 (2) 重鏈多樣性=帶有不同重鏈之純種系的數目，忽略 輕鏈序列==15 2 (3) HCDR3多樣性=帶有不同重鏈CDR3之純種系的數 目=54(+2個帶有安伯（ambe〇HCDR3的純種系）。 為了兩個理由進行該三種-層面的分析： 首先，通常接受重鏈，且在功能部位中，其HCDR3區域 對於抗體的抗原決定位認知，具有較大的重要性。集合具 有相同H-CDR3序列的所有抗體。 其次，庫之多樣性的設計，得以預期具有相同的HCDR3， 但在重鏈的其他CDRs中帶有突變，以及有時相同，有時不 同之輕鏈的抗體變體。 實例6 :抗體與bCTD和VLDL的結合 欲監視對VLDL的結合，將VLDL塗覆在微量滴定盤上， 97784A.doc -73- 200530267 並與受試抗體一起培養。使用二級抗體_HRP檢測方法，來 檢測已結合之抗體。利用四甲基聯苯胺（TMB)和H202進行 染色。僅沖洗掉未結合的抗體。在ELISA中與VLDL結合將 得到高的信號。 我們使用對抗ApoE的單株抗體作為陽性對照組。兩個抗 體（3D12，E19)與 CTD 牙口 VLDL 結合，在 bCTD ELISA(圖 1A) 中和在VLDL ELISA(圖1B)中是陽性的。另一個抗體（6C5) 與NTD結合，不與bCTD結合，但與VLDL良好地結合。該 NTD位置未被VLDL覆蓋，而能提供ApoE本身塗覆品質的 測量。因為該抗體信號很高，故我們可認定塗覆足夠的 ApoE，以便進行像它一樣的VLDL ELIS A。 至於噬菌體抗體（圖2)，我們分類為三組：總是陽性的抗 體（超過陰性噬菌體結合的3倍），有時是陽性有時是陰性的 抗體（有時兩倍陰性噬菌體結合，有時陰性），以及陰性的抗 體。至於不確定的抗體，ELIS A可能不是足夠敏感的，或 抗體恰好沒有結合，或親和力或許不是高得足以看到高的 信號，或可能與VLDL有交叉-反應（抗原決定位部分在 VLDL上，部分在遮蓋的CTD上）等等。 實例7 ·· VLDL測定的發展和自動化 對全部的203個bCTD陽性噬菌體純種系進行VLDL ELISA。發現6個純種系總是陽性的（超過背景的3倍）。其他 的純種系產生比2倍背景更高的信號（圖3)。在此階段，並未 從進一步測試中排除這些純種系。僅有6個純種系對VLDL 是陽性的，具有高的信號。進行測試3次，獲得相同的結果。 97784A.doc -74- 200530267 同時測試抗體對bNTD的結合。沒有抗體與bNTD結合。不 進一步測試與VLDL結合的純種系。 實例8 :對Fab之嗔菌體的再選殖，專一性測試 因為在塗覆VLDL ELISA中低量的VLDL結合劑，並因為 VLDL競爭ELISA的可變結果，我們分批同時再選殖得自在 噬菌體上之Fab的所有不同的157個純種系，至可溶的Fab 内。預期許多Fabs將不與bCTD結合，因為他們的單價性質 對多價之噬菌體，因此能夠藉著在bCTD上之Fab ELISA信 號的方法’排除低親和力結合劑。 在再選殖之後，85個抗體專一地結合bCTD。沒有發現新 的VLDL或NTD結合劑。在表9和10中出示這些抗體的VH和 VL鏈之CDR區的胺基酸序列。 實例9 :抗原決定位作圖 藉著監視在Fab和噬菌體抗體之間的競爭，測試與相同抗 原決定位的結合。將有限量的噬菌體和最大量的Fab加至以 bCTD塗覆的ELISA孔中。在結合步驟之後，在與抗-M13 HRP抗體一起培養之後，藉著過氧化酶反應檢測噬菌體。 因為加入高濃度的Fab，噬菌體指向與將被競爭掉之Fab相 同的抗原決定位，並將降低Fab信號。 得自相同VH-CDR3群的抗體認出重疊的抗原決定位。使 用該基準，就免疫組織化學（IHC)排除純種系：僅測試帶有 最高/最慢解離率的純種系。以IHC測試不屬於大VH-CDR3 群的所有純種系。 抗體 807A-M0026-F05 和 807A-M0027-E11彼此不產生交 97784a.doc -75- 200530267 互作用。然而，兩者均與抗體807A-M0028-A07產生父互作 用，表示這兩個抗體認得類似但不相同的抗原決定位。 抗體 807A-M0028-B02 可能認得抗體 807A-M0026-F05 和 抗體807A-M0027_E11以外的抗原決定位。 實例10 :解離率測量 欲使Biacore測量發揮最大效用’我們使用以鍵徽素抗生 物素蛋白塗覆之Biacore晶片與bCTD結合。首先，我們分析 抗體3D 12和E19與晶片的結合。我們亦再選殖我們從預先_ 篩選之中發現的Fab(不與VLDL結合，在Fab ELISA中是陽 性的）。Mab 3D 12在Biacore中未結合’或許是因為低親和 力。Ab E19和未經純化之Fab 1F7(透析的胞漿周圍部分）與 bCTD晶片結合。我們使用以bBSA塗覆的通道作為對照 組；沒有任一抗體與該表面結合。 利用該bCTD晶片，使用胞漿周圍萃取物，判定選出之 Fabs的解離率階級（對於高級純種系很重要，現在以及在親 和力成熟研究期間）。表1顯示解離-率的代表性一覽表。 在晶片上，使用經過純化的Fab片段，對低密度的bCTD 判定親和力判定。 實例11 :免疫組織化學法 對抗體的免疫組織化學法（IHC)，相同的VH-CDR3群具有 最慢解離率’並在對冷康組織切片進行的IHC中，測試具有 不同VH-CDR3的所有抗體（單一純種系）。
關於IHC和親和力測量，使用經過純化的Fabs。在細菌中 表現抗體片段（Fabs)(通常在4〇〇_毫升培養物中，4小時IPTG 97784a.doc -76- 200530267 誘導），並藉著固定金屬親和力層析法（IMAC)從胞漿周圍的 萃取物中純化。藉著”滲透休克”處理細菌，製備胞漿周圍 萃取物。將試樣裝載到1毫升Co-IDA管柱中，並以〇-150mM 咪唑的直線梯度洗脫。對PBS透析蛋白質製備物，並藉著非 -還原SDS_PAGE分析。 只有3個抗體像Fab結合在AD斑塊上：807A-M0027-E11、 807A-M0028-B02和 807A-M0026-F05 ° 抗體807A-M0027-E11檢測在IHC中的阿茲海默氏症（AD) 班塊。重要的是抗體專一地認出在組織中的班塊，但不認 得暴露在血清中的脫輔基脂蛋白E。通常，本發明之抗體與 至少兩個患有AD之患者，以及可能亦患有系統性澱粉樣蛋 白變性之患者的斑塊結合。因此，在新鮮血漿的存在下進 行IHC。在以807A-M0027-E11染色的IHC中，像噬菌體且像 Fab，在甚至50%血漿的存在下，亦未中止信號。亦在溶液 中加入VLDL，不改變染色。這與對NTD之6C5對照組抗體 相反，藉著新鮮的血漿或VLDL溶液中止它的信號。在AD 斑塊以及在星形細胞上，SFab抗體807A-M0028-B02是染色 陽性的。SFab抗體807A-M0026-F05對AD斑塊是弱染色的。 該抗體之染色形式不是很強的，因為該抗體的低親和力。 抗體在1個以上之患者的組織中是陽性的。 其他 sFab抗體·· 807A-M0039-C10、807A-M0037-D01、 807A-M0046-A06 和 807A-M003 9-C10在 AD腦組織中僅檢測 星形細胞。 實例12 :在IHC中與斑塊結合之sFabs的親和力測量 97784a.doc -77- 200530267 在Biacore分析中廣泛地研究三個Fabs 807A-M0027-E11、 807A-M002 8-B02* 807A-M0026-F05〇 首先將bCTD塗覆在 鏈黴菌抗生物素蛋白晶片上，然後在晶片上以不同的濃度 跑sFabs，並測量結合共振單位（RU)。以生物素-BSA使晶片 的通道飽和，作為陰性對照組。圖4A顯示sFab抗體 807A_M0027_E11在bCTD上的分析，結果親和力為47.8 nM。 sFab抗體807A-M0028-B02的親和力顯示類似的形式，具有 179 nM之親和力（圖4B)。抗體807A-M0026_F05具有低至不 易_測量的低親和力（在μΜ範圍内）（圖4C)。 相反的，當sFabs經由抗-Fc抗體與CM5晶片偶聯時，對抗 體807A-M0027-E11未觀察到結合（參見圖4D)，對抗體 807A-M0028-B02亦未觀察到。 不同的結果使塗料與分析物逆轉，在兩個不同的Biacore 測量中，暗示抗體807A-M0027-E11和807A_M0028-B02兩者 僅與塗覆的bCTD結合，不與在溶液中的bCTD結合。 實例13 : IgGs的抗體重定格式、表現和純化 對IgGl(批式）重定抗體格式 以85個對CTD顯示專一結合的純種系作為可溶性Fab。已 經選出其中的30個候選者進行IHC研究，將其重定格式完成 人類IgGl抗體。 同時使用1 57個CTD-專一的Fabs，其含有全部85個”可溶 性Fab結合劑π，以一批-重定格式為基礎進行限制消化至人 類IgG表現載體pBhl内， 批式-重定格式策略涉及兩個選殖步驟，並在圖5中解 97784a.doc -78- 200530267 釋。在第一個步驟中，將完成的Fab片段插入沖^内。在第 二個步驟中，交換内部/調節序列。 欲”再度·確認”最初的Fabs，藉著DNA-定序分析大約300 個個別的純種系。回頭發現85個”可溶性Fab結合劑，，中的72 個。值得注意的是，藉著批式重定袼式，以“⑴構築體之 形式，獲得為了 IHC選出之30個優先候選者中的29個。 13個中有11個仍是，，可溶性Fab結合劑，，，可分別在人類 φ IgG1表現載體1^111中重定格式。藉著定序證實重定格式之 抗體對其Fab相對物的同一性。不管完成Fab-插入的最初 PCR-擴大作用，選殖方法與在圖5中敘述之批式-重定格式 策略是相同的。
IgGl抗體的表現和純化 在暫時轉移感染的HEK293T細胞中表現重定格式之 IgGl-抗體。從大約5 X 106個轉移感染細胞（每個燒瓶）之培 養物上清液中純化抗體，保持培養大約丨週。藉著以蛋白質 參 _A為基礎的親和力層析進行純化。對pBS透析經過純化的 抗體’並在還原和非-還原條件下，在Sds-凝膠上分析。
IgG抗體的生物素基化作用 在PBS中進行抗體的生物素基化作用，與ι5_倍莫耳過量 的硫代琥轴酿亞胺基-2-(生物素醯胺基）乙基-丨，3_二硫丙酸 酉旨一起培養經過純化的抗體2小時。使用HABA [2-(4，-羥基 偶氮笨）苯曱酸]法（Pierce)，判定生物素_併入的程度（即每 個抗體分子之生物素基團的平均數目）。使用該方法，我們 發現所有生物素基化的抗體，每個分子含有3至4個生物素 97784A.doc -79- 200530267 基團。 實例14 :與IgGl抗體的專一性測試 IgGl抗體對其他物種的結合 -測試人類抗體對這些物種之bCTD的交叉反應性，以便試 著確認可在老鼠和靈長類模式中研究的抗體。 與在AD組織中之斑塊結合的抗體（807A-M0028-B02、 807A-M0027-E11、807A-M0026-F05)像 Fabs，將其重定格 式成hlgGl，並測試其對重組老鼠CTD(mbCTD)、重組靈長 類CTD(pbCTD)，以及已經生物素基化之重組人類 CTD(hbCTD)的結合能力。 抗體 807A-M0028-B02和 807A-M0027-E11(圖 6A和 6C)與 三種不同物種之CTD結合。兩個抗體皆結合至相同的程 度-，暗示在這些物種中被抗體認出的抗原決定位是相同的。 抗體807A-M0026-F05(圖6B)與pCTD和hCTD結合，但不 與老鼠CTD結合，暗示抗體所對抗之抗原決定位並沒有出 現在老鼠中，或所使用的濃度不夠高。可藉著該抗體之低 親和力解釋在本ELISA中的低O.D.值。
IgGl抗體對bNTD的結合 807A-M0027-E11 和 807A-M0026-F05 不與 bNTD結合。抗 體807A-M0028-B02以極高的濃度（1〇和5微克/毫升）結合。 欲檢查這是否與專一結合有關，我們試著以在溶液中更高 1000倍的bNTD來競爭（在溶液中540微克/毫升，〇.5微克/毫 升塗覆）（圖7)。在競爭中並未降低非-專一的信號。信號最 有可能歸因於加入高量的抗體，因為亦在抗-MUCI抗體PH1 97784a.doc -80· 200530267 中看到（圖7)。
IgGl抗體對VLDL的結合 以ELIS A測試抗體對塗覆之VLDL的結合。不像噬菌體和 斑塊結合劑之Fabs，抗體807A-M0028-B02(圖8)和 807A-M0027-E11與VLDL結合至相同的程度。當與非-CTD 結合劑（PH1，其為MUC1結合劑）的結合相比較時，該結合 似乎是專一的。 因為VLDL是由ApoE和脂質所組成的，塗覆的VLDL可在 以ELISA處理期間改變其構形，且它可能是CTD不再被脂質 遮蓋的。因此，我們以在溶液中之抗體、與培養盤結合的 bCTD和在溶液中的過量CTD或VLDL進行競爭性測試（圖 9)。在該測定中，我們不能看到VLDL對人類抗體的抑制作 用（圖9A和B)，以及CTD對抗體807A-M0028-B02的少許抑 制（圖9B)。相反的，對抗CTD的市售抗體3D 12和E19明顯地 被VLDL和CTD抑制。在本測定中，不結合對抗NTD的6C5 φ 單株。 這些結果暗示人類抗體（807A-M0028-B02、807A-M0027-E11) 不與在溶液中的VLDL結合，且以比塗覆之bCTD更低的程 度，認出在溶液中的CTD。 結論 在與在AD中之斑塊結合的三個抗體中，有兩個（807Α·Μ0028-Β02、807Α-Μ0027-Ε11)與pCTD和mCTD產生交叉作用。第三 個抗體（807A-M0026-F05)不與mCTD產生交互作用，但與 pCTD結合。感興趣的抗體不與NTD結合。兩個抗體 97784A.doc •81 - 200530267 (807A-M0028-B02、807A-M0027-E11)與塗覆的 VLDL 結 合，此時使用高抗體濃度。抗體807A-M0026-F05未顯示這 些特性，但這可能與抗體的親和力有關。 實例15 : Biaeore分析 欲比較Fab與IgGl結合，並研究人類抗體對在溶液中之 CTD結合的性質，廣泛地使用Biacore。 在Biacore中比較Fabs和IgGs 圖 10、11、12和 13 概述 CTD-專一之純種系 807A-M0026-F05、 807A-M0027-E11 和 807A-M0028-B02 之 Biacore 分析的、結 果。與其原始的Fab格式相比較，預期所有三個斑塊結合劑 像IgGl—樣，與在晶片上的bCTD結合得更好。IgGl抗體 807A-M0027-E11 結合比抗體 807A-M0028-B02 更好 3倍，而 抗體807A_M0026-F05以極低微莫耳濃度的抗體親抗原性 與晶片結合。 與在中止注射之後立刻測量的抗體親抗原性相比較，當 在中止注射抗體之後50秒測量時，測量到抗體親抗原性是 較高的（表2)。該差異或許是因為當在晶片上有可利用的自 由bCTD時，抗體與晶片的再結合。 抗體對捕捉CTD的結合 因為VLDL ELISA的不一致，其中人類IgGl抗體與塗覆的 bCTD/VLDL結合，但不與在溶液中的CTD/VLDL結合，故 進行額外的Biacore實驗（亦參見對Fabs的Biacore)。在這些 實驗中，捕捉bCTD或ApoE。首先將抗-hFc抗體與晶片偶 聯，接著結合專一的抗體，然後注射bCTD或ApoE。 97784A.doc -82- 200530267 圖12顯示間接與晶片偶聯的Fab抗體807A-M0027-E11， 不與Bctd (280 nM)結合。藉著使用Fab抗體807A_M0028-B02， 獲得相同的曲線（數據未顯示），且此時使用兩種抗體的 IgG 1。利用起源於人類血清之ApoE，進行測試。只有極少 量的ApoE (17 RU，<1%)與抗體結合（圖13)。 結論 在 Biacore 中，IgGl 抗體 807A-M0027-E11 和 807A-M0028-B2 以 按nM計之抗體親抗原性，與塗覆的bCTD結合，而IgGl抗 體807A-M0026-F05則以按μΜ計之抗體親抗原性結合。對在 溶液中之抗原的親和力測量，顯示抗體807Α-Μ0027-Ε11和 807Α-Μ0028-Β02兩者都不會有效地捕捉bCTD，也不捕捉 ApoE。這些結果證實藉著VLDL/CTD競爭性ELISA所看到 的結果··抗體807A-M0027-E11和807A-M0028-B02對塗覆之 bCTD比對在溶液中之CTD結合得更好。 實例16 ··額外測試以便研究抗體對天然的CTD，對肽的結合 經過純化之hApoE的SDS-PAGE分析 藉著還原SDS-PAGE分析經過純化的hApoE，接著進行考 馬斯藍染色。如同預期的，蛋白質移動成為一個大約35 kDa 的主要譜帶，但在大約70 kDa處亦有寬譜帶，並在從70 kDa 到大約200 kDa處有模糊的痕跡。藉著西方墨點法顯示35 kDa 譜帶和較高分子量的物種兩者都含有hApoE。 經過純化之hApoE的免疫沉澱作用 利用 807A-M0028-B02、807A-M0027-E11 和 807A-M0026-F05 使經過純化的hApoE免疫沉澱。我們使用E19，山羊抗 97784a.doc •83- 200530267 -hApoE抗體，作為陽性對照組。我們使用PHI抗體作為陰 性對照組。亦包括未經處理、經過純化之hApoE作為參考。 藉著SDS-凝膠分析試樣，將蛋白質移至硝基纖維素膜，並 藉著西方墨點法檢測hApoE。 如同預期，E19、807A-M0028-B02和 807A-M0027-E11 抗 體能夠專一地使hApoE免疫沉澱，雖然不是非常有效的。 有趣的是，E19抗體似乎對35 kDa譜帶式專一的，而 807A-M0028-B02和807A-M0027-E11抗體則對高分子量之 物種是較專一的。相對之下，807A-M0026-F05不能使hApoE 免疫沉澱，或許是因為抗體的低親和力。 細胞之溶胞產物的免疫沉澱 使用 807A-M0028-B02、807A-M0027-E11 和 807A-M0026-F05，以 及E19(陽性對照組）和M43G5、M43F8、PHI、A2、贺癌平 (Herceptin)和人類IgGlK骨髓瘤抗體（陰性對照組），對PBMC 之細胞溶胞產物進行免疫沉澱。在還原條件下藉著 SDS-PAGE分析試樣，接著是鍍銀染色或西方墨點法。 僅有E19使預期尺寸（即大約35 kDa)的譜帶免疫沉澱。與 E19免疫沉澱的材料亦在西方-墨點法中得到非常模糊的信 號。這暗示在細胞溶胞產物中有一些hApoE被E19捕捉，雖 然必須小心地看待該發現，因為（1)807A-M0028-B02和 807Α-Μ0027-E11不使任何得自細胞溶胞產物的hApoE免疫 沉澱，（2)807A-M06-F05，顯示其不能使hApoE免疫沉澱， 亦在西方墨點法中得到弱信號，且（3)A2和807A-M0043-F08， 兩個無關的抗體，在西方墨點法中得到強信號。 97784A.doc •84- 200530267 重要的是，在此調查的三個抗體（807A-M0028-B02、 807A-M0027-E11和807A-M0026-F05)似乎不使細胞溶胞產 物的任何主要組份免疫沉澱。807A-M0027-E11的背景是較 高一點點，但沒有比例如PH1更高。這些結果代表抗體 807A-M0028-B02、807A-M0026-F05 和 807A-M0027-E11 的 整體專一性係歸因於與CTD結合。 VLDL的免疫沉澱 亦藉著免疫沉澱法測試抗體對VLDL的結合。在這些測試 中使用10% VLDL。使用6C5作為檢測抗體。在利用ECL法 展開西方墨點5分鐘之後，關於感興趣的人類抗體，未檢測 到ApoE。在過夜展開之後，檢測到抗體807A-M0027-E11 和807A-M0028-B02，當與VLDL對照組（非-免疫沉澱的 VLDL，免疫沉澱使用10%的量）相比較時，為模糊的譜帶。 利用6C5抗體的免疫沉澱法，顯示比利用人類抗體者更廣泛 的譜帶。 討論 807A-M0028-B02 和 807A-M0027-E11，但非 807A-M0026-F05 優先 使得自從血漿中純化之hApoE的高分子量免疫沉澱。這些 物種的性質仍不清楚，雖然清楚它們含有hApoE，且必然 形成極穩定的複合物。這些抗體與多數的細胞成分都不產 生明顯的交互作用。VLDL與抗體的免疫沉澱是可能的，雖 然量可能極低。 實例17 :在活體内的研究 繁殖老鼠，以便在腦中表現澱粉樣蛋白前驅物蛋白質 97784A.doc •85- 200530267 (APP)之人類基因：瑞典突變K670N，M671L，APP株2576， 由倉鼠朊病毒啟動基因駕馭（Hsia等人Science 1996, 274:99-102)，單獨或與突變的人類早老素1 (PS1):M146L併用， 其由血小板衍生之生長因子駕馭（Duff等人，Nature 1996, 383 (6602):710-3，Holcomb 等人，Nature Med 1998, 4:97-100)。 為了研究，繁殖需要表現人類ApoE的老鼠，其表現由神 經膠質微纖維酸性蛋白質（GFAP)啟動基因駕馭的人類 ΑροΕ4，有或無老鼠ApoE基因剔除（Sun等人，JNeurosci，1998, 18:3261-3272)，與 humAPP:Swe 和 humPSl:M146L 併用，或僅有 humApp:Swe 〇 以例如10毫克/公斤之濃度，將對脫輔基脂蛋白E(ApoE) 之C-終端功能部位（CTD)的人類免疫球蛋白Gl(hlgGl)同型 物之單株抗體（mAb)腹腔内注射到非基因轉殖或基因轉殖 的老鼠中。一些老鼠被注射一次，並在注射後2天犧牲，而 有些老鼠注射兩次，在2天之後注射重複的劑量，然後在額 外的2天之後，也就是在最初注射後4天犧牲。藉著對與hlgG 結合之CTD的ELISA，監視注射抗體的濃度。以得自以鏈黴 菌抗生物素專一之單株抗體注射之老鼠的腦作為陰性對照 組。立刻將採樣的腦冷凍至-70°C，然後將其冷凍切片。 對出現在腦切片中之人類IgG的染色，顯示均勻染色的斑 塊，均等地散佈在皮質和海馬中。在活體内暴露之後，沒 有其他的腦結構顯示染色。相反的，在活體外的暴露之後， 數個沿著澱粉樣蛋白斑的結構被染上顏色。70%的斑塊在 活體外染色中可被抗-ApoE CTD抗體接近，或在2-天（n=3) 97784A.doc -86 - 200530267 或4-天（n=3)在活體内與抗-ApoE CTD抗體接觸之後，在活 體外以對Ab之mAb染色。在活體内以特定的劑量暴露2或4 天，不會使可利用的結合位置飽和，藉著在在活體外加入 更多抗-CTD抗體之後獲得額外的染色強度來表示。 抗體，通常是大分子，不會自由地穿過血腦障礙（BBB)。 認為IgG的通過是非常有限的，且已經報告了在CSF中的濃 度低於 0· 5 % 的血漿濃度（Elovaara 等人，1987 Eur Neurol 26:229-34, Ganrot & Laurell 1974, Clinical Chemistry 20:571-3)。對於出現在腦切 片中之腹腔内注射的人類IgG進行染色，顯示ApoE CTD專 一性抗體到達大腦斑塊，在這些基因轉殖的老鼠中，均等 地遍及不同的腦區域，表示藉著免疫組織化學法（IHC)技術 染色充分的BBB通道。阿茲海默氏症（AD)斑是複雜的結 構，在尺寸和密度上是多變的。認為在這些基因轉殖之老 鼠中發現的大腦澱粉樣蛋白斑代表在AD中發現的小的、散 布的和中等尺寸的斑塊。被均勻染色的斑塊表示mAb不僅 到達斑塊的外層，亦貫穿整個斑塊結構。在活體内暴露之 後，70%可被染色的斑塊在活體外被染上顏色。認為腹腔 内投與10毫克/公斤的劑量，未使可利用的斑塊-結合位置飽 和，非-飽和含量的抗體仍藉著攜帶FcR的吞噬細胞，導致 抗體調解之斑塊瓦解。 實例18 :對老鼠IgG2a之抗趙的重定格式 為了在活體内測試抗體的可變區，將807A-M0028-B02、 807A-M0027-E11、807A-M0026-F05 和對照組抗體（抗-鏈黴 菌抗生物素蛋白純種系A2)再度選殖到含有老鼠重鏈之 97784a.doc -87- 200530267
IgG2a恆定區和老鼠Ck，以及抗體之可變區的載體内。 從人類IgGl表現載體（pBhl)中將這些純種系轉移至老鼠 IgG2a抗體之表現構築體（pRmk2a)，它除了恆定的重鏈區之 外，還含有老鼠恆定κ輕鏈基因。經由PCR，從人類IgGl表 現質體中抬起VL和VH區，並接著選殖到pRmk2a内。以 ApaLl/BsiWl片段之形式插入VL，抗體前導的3’和恆定κ基 因。在VH區的案例中，亦將Y相鄰之IRES基序納入PCR擴 大產物中；將Ascl/Nhel片段插入pRmk2a中。藉著DNA定 ^ 序證實構築體的完整。在圖14中敘述選殖策略。 實例19 :肽的製備 合成涵蓋全部ApoE CTD的10個肽（長度為16個胺基酸）。 這些肽在彼此之間含有8個胺基酸重疊，如在圖15中所 示。含有S - S生物素基團的肽能夠與鏈黴菌抗生物素蛋白結 合（磁性小珠選擇）。此外，每個肽均含有半胱氨酸，其可與 載劑蛋白質（BSA)偶聯。 ^ 使肽溶解於二甲基甲醯胺（DMF)中，接著以水稀釋。除 了肽4之外，所有的肽以低於10%的濃度均可溶於DMF中。 在10% DMF中對所有的肽進行偶聯，除了肽4在30% DMF 中偶聯之外。使用過量的順丁烯二醯亞胺-激活之BSA與肽 結合。在培養之後，使用過量的半胱胺酸偶聯可能游離的 半胱胺酸。使用BSA偶聯的肽（b肽-BSA)進行選擇。 實例20 :抗體與重疊肽的結合 測試在實例5中確認的抗體807A-M0026-F05、 807八-?40028-]302和807八-?^0027411，其與重疊肽的結合。 97784a.doc -88- 200530267 首先進行的是測試哪一個肽可優先應用在進一步的選擇 中：b肽-BS A或b肽，第二是看看在實例5中選出之抗體是否 與重疊的肽結合，如果這樣，便看它們所認出之抗原決定 位是否不同，並支持藉著在實例9中進行之競爭結果的抗原 決定位作圖。以此方式比較兩個人類抗體和老鼠抗體。 關於人類抗體，利用IgGl和噬菌體展示Fab進行肽作圖。 例如，純種系807A-M0026-F05認出b肽-BSA4和8是噬菌體 Fab片段以及完整的IgGl。ELIS A並非敏感得足以顯示b肽4 和8對該抗體的結合。因此，我們決定對b肽-BSA開始選擇 將是最好的，捕捉大多數的肽結合劑，然後若需要，在稍 後的選擇回合中使用b肽。令人驚異的是，與老鼠單株抗體 相比較，抗體807A-M0026-F05對CTD比對肽結合得更好。 抗體 807A-M0028-B02 與肽 4 結合。抗體 807A-M0027-E11 並 未顯著地與任何重疊的肽結合。 在實例9中，我們發現被抗體807A-M0026-F05和抗體 807A-M0027-E11認出之抗原決定位被一大群抗體遮蓋。這 兩個抗體不彼此競爭。因為CTD對抗體807A-M0026-F05的 親和力，與抗體807A-M0027-E11相比較是極低的，將可預 期若它們認得相同的抗原決定位，抗體807A-M0027-E11將 與肽4和8結合得比抗體807A_M0026-F05更強。因此，可推 論兩個抗體認得相關但不相同的抗原決定位。抗體 807A-M0028-B02與肽4結合，且在競爭性抗原決定位作圖 中與另外兩個抗體的抗體群不同，並可認得不同的抗原決 定位。 97784A.doc -89- 200530267 我們亦對重疊肽測試對照組老鼠抗體。抗體3H1、12D1 〇 和Ε19分別與肽3、10和5 + 1〇結合。與人類抗體相反，所有 對知、組抗體均以大約相同的程度與肽和bCTD結合。 實例21 :對肽的選擇及篩選 對10個重®的、生物素基化，並與BSa偶聯的肽（b-肽 -BSA)進行3回合的選擇，並對相對應之生物素基化的肽（b_ 肽）進行一回合的選擇。使用鏈黴菌抗生物素蛋白_磁性小 珠，對10個個別的肽進行選擇。欲在選擇回合之間操作該馨 高數目的選擇，不執行輸入/輸出的滴定（液態擴大）。 在圖16中陳述所使用的程序。首先，使用自動Kingfisher 系統，針對與b肽-BS A之結合進行3回合的選擇。利用在嗟 菌體上展示之Fab的第2和第3回合之預先-篩選，顯示陽性 純種系的頻率在第2回合中很低，且許多純種系在第3回合 中與BSA結合，不管在BSA上廣泛的耗盡和扣除。結合劑最 有可能指向在BSA上我們用來偶聯肽的交聯劑分子。因 此，進行在b肽上的另一個第3回合的選擇。對該選擇而言， 可忽略背景結合。 欲減少定序的努力，對噬菌體-Fab純種系進行批式重定 格式，產生sFabs ’並在sFabs層面進行純種系的大規模|帛選 (ELISA和定序）。在ELISA中發現307個抗體是陽性的，藉 者在表11和12中出示的定序’判定其中4 6個是獨特的。 實例22 :對原纖維和肽進行選擇與篩選 對起源於有澱粉樣蛋白斑之器官的原纖維進行兩回合# 選擇，對10個相對應的b-BSA-肽進行2回合，並對1〇個相對 97784a.doc -90- 200530267 應的b-肽進行1回合。
在圖17中概述所使用之程序。對個別的b肽-BSA進行第3 和第4回合。在預先·篩選之後，發現數個陽性的純種系。 因此，使用b肽進行第5回合的選擇。在預先-篩選中，發現 肽4和8的陽性純種系。關於這兩個選擇，我們在批式重定 格式之後’篩選5卩&13。在總共篩選的390個3卩&65中，在£1^18八 中有109個是陽性的，並有4個純種系是獨特的。在表丨丨和 12中出示這些獨特純種系之vh和VL鏈的胺基酸序列。在這 些策略中’大多數的純種系顯示特有的Vh_cDR3s(表12)， 並發現高度增強：一個純種系增強148倍，且在策略B1和在 策略B2中發現。這與實例5的選擇顯然不同。 數個純種系（表13)與bCTD結合，這使得它們與在實例2〇 中之結果相比較更為獨特，纟中奶⑽合劑與肽微弱地結 合，或完全不結合。在實例21和22的選擇活動中，沒有Fabs 與VLDL或NTD結合。 在IHC中發現⑽恤是陽性的，這些他中有1〇個起源 自實例11#㈣活動H個起源自實例21和22兩者的 選擇活動。 實例23 ··對nr-bCTD和肽進行選擇與薛選 對脲處理之生物素基化的CTD(ur_bCTD)進行兩回合的 選擇，接著對起源自有殿粉樣蛋白斑之器官的原纖維進行 兩回合的選擇。在圖18中概述所使用之程序。 對脲-CTD抗原進行兩回合的選擇，接著料自⑯患者的 原纖維1進行2選擇回合。在該策略中， r 在弟3和弟4回合選 97784A.doc •91 - 200530267 擇之後，進行預先-篩選。頻率分別為82/95和83/95。在預 先-篩選期間，我們使用ur-bCTD和bCTD，且在兩類抗原之 間並未發現差異。在第三回合選擇之後，許多純種系保持 與bCTD結合，但不與原纖維結合，而在對原纖維的2回合 選擇之後（第4回合的選擇），保持這些結合劑的機會便降 低。因此，對第4回合選擇進行大規模的篩選。對ur-bCTD 篩選950個sFabs。在ELISA中233個純種系是陽性的，為可 溶性Fab，83個是獨特的。在表14和15中出示這些獨特Fabs 之VH和VL鏈的胺基酸序列。在VLDL ELISA中，5個Fabs 結合是陽性的，或有可疑的結合。 沒有Fabs與bNTD結合。 許多Fabs屬於相同VH-CDR3群的大家族；一個個別的抗 體增強247倍。對個別的純種系（不屬於大VH-CDR3群）進行 在IHC中的測試，並針對緩慢的解離率選擇屬於大 VH-CDR3群的純種系。 在第一個IHC篩選中，6個Fabs與AD患者的斑塊結合。在 表17中概述bCTD結合劑的特性。 實例24:以可供進行IHC之可溶性Fabs的形式產製候選的純種系 為了進一步分析，產製Fabs。對100微升培養物之胞漿周 圍的溶離份進行ELISAs。對在表中找到，具有Biacore結果 之所有純種系的50毫升培養物之胞漿周圍溶離份，測量 Biacore解離率 為了在IHC中測試，產生大約90個可溶性Fab蛋白質。最 初的分析需要至少1〇微克。因為在可溶性Fab表現層面上的 97784A.doc -92- 200530267 廣泛變化，必須從50毫升細菌培養基的周圍萃取物，或從 400毫升培養物的周圍萃取物中，藉著IMAC層析法，使用 96-孔過濾盤和真空歧管，純化蛋白質。產量範圍主要在 10-100微克之間。 IHC陽性可溶性Fab的大規模產生 做出15個在對斑塊組織之IHC中為陽性/可能為陽性的候 選Fabs。在這些純種系中，製備較可溶的Fab蛋白質，以供 額外的測試。 從400毫升細菌培養物的胞漿周圍萃取物來製備可溶性 Fab蛋白質。 實例25 :抗原決定位作圖，與初步的IHC結果比較 對被選出的肽進行高輸貫量Fab篩選，亦使用非-重疊肽 作為對照組。在抗原決定位作圖中，針對其對所有其他肽 之結合反應性，篩選所有的肽陽性抗體。表13含有詳細的 結果。 認為兩個與所有肽（最有可能是對BSA-交聯劑）結合的 Fabs是非-專一的。 沒有確認出對肽5和10專一的Fabs(雖然在噬菌體上預先 篩選的F ab顯示一些陽性的結合劑）。 49個不同的Fabs專一地與肽結合。專一的Fabs中有39個 僅與其選上的肽結合。一個選上肽1的Fab亦認得肽6。3個 Fabs起源自肽4選擇的Fab亦與肽9結合，而3個起源自肽9選 擇的F ab s認得肽4。此外，選上肽8的3個肽亦與肽4結合。 只有9個Fabs亦與bCTD結合。這暗示在這些Fabs中，大多數 97784A.doc -93- 200530267 與未出現在重組bCTD中的抗原決定位結合，I認知其他 、了 月 (可能是延伸的）有可能亦在斑塊中發現的結構。認出/㈡ 3和肽4的區域是’’選擇優勢抗原決定位”’在全α卩* 9们專 之Fabs中的39個，以及在9個bCTD結合劑中的8個含有。有 趣的是，認為ApoE的該區域涉及與VLDL顆粒的姑合。 考慮IHC篩選的假設 49個專〆之Fabs中的39個與肽結合但不與bCTD結合。以 暗示這些Fabs不可能認出在例如VLDL顆粒中所含有的天 然Apo-E。若這類Fab在IHC中將結合，可能表示這類抗原 決定位是獨特的，並僅在斑塊上找到，且這些1^^對於引 導進一步的調查將是很重要的。 確實，初步的IHC數據顯示在這些Fabs中有四個可能與在 AD患者中的組織結合。這四個Fabs均與肽4結合’但不與 重疊的肽結合，暗示它們認得類似的（重疊的）抗原決定位 (第1組），或許含有LVEDMQRQ之胺基酸序列或二級結構的 抗原決定位僅出現在肽4和斑塊中。 另外2個Fabs，在IHC中是陽性的且選擇肽4，與肽4和9 結合，並與未出現或在bCTD中不普遍的構形結合。這兩個 抗體的抗原決定位可能包括序列MQRQWAGL(第2組）。 其他在IHC中可能為陽性的Fab，選擇肽9，僅認得肽9， 不認得重疊的肽或bCTD，但能夠認出抗原決定位 WAGLVEKV或僅出現在肽9和斑塊中的構形（第3組）。 在49個專一的Fabs中有10個與肽和bCTD結合，暗示這些 抗體認得更多構形的抗原決定位。 97784A.doc -94- 200530267 一個Fab與肽1、6和bCTD結合。並未預測該抗原決定位 (RTRDRLDE)在VLDL之結合位置的内部（第4組）° 兩個獲自對肽4和9之選擇的抗體’認得狀（抗原決定位 MQRQWAGL)和CTD兩者，並因此與第2組之FabS不同（第5 組）。 一個肽8選出的抗體，與肽4、8(抗原決定位WFEPLVED) 和bCTD結合（第6組）。 因此，根據該假設，可將在實例21和22中確認的〜以分 成6組不同的Fabs，分別認得不同的抗原決定位° 實例26 :在實例21和22之策略中確認之解離 率分析 對全部10個肽進行可溶性Fabs的解離率分析。從實例21 和22之所有獨特的Fab來製造胞槳周圍溶離份’並測試之。 結果證實藉著ELISA作圖的抗原決定位。 與較多肽及/或bCTD結合的Fabs，大多數經#對那些刀子 顯示出大約相同的解離率。相反的，RU，s(測量到抗體結合 的量）對於Fabs所選擇的肽，經常是最高的。 實例21和22的策略，結果並未確認出屬於相同VH-CDR3s 之大家族的抗體。因此，不使用解離率測量作為1HC的判斷 標準。 實例27:實例23之抗體的抗原決定位作圖，並與初步的IHC 結果作比較 在自動篩選中，針對其對ur-bCTD的結合反應來篩選 Fabs，並使用鏈黴菌抗生物素蛋白BSA作為陰性對照組。 97784a.doc -95· 200530267 沒有抗體與NTD結合。表16含有詳細的結果。 在總共81個不同的抗體中，發現對ur-bCTD和CTD的結 合。這些抗體中有5個與塗覆的VLDL結合。沒有任一個與 bNTD結合。20個抗體亦與肽結合。因為在實例21和22的策 略中，我們發現選擇優勢抗原決定位在肽3和4的周圍。 81個中有5個抗體在IHC中結合。這些抗體中只有一個與 肽結合。該抗體以低RU(Biacore)與肽4結合，以及高RU。 有趣的是，使用實例21和22的策略亦發現該抗體。其他4 個抗體可與實例5的抗體807A-M0028-B02和 807A-M0027-E11 相比較。 實例28 :候選Fabs對人類IgGl的重定格式 大多數上述的IHC陽性純種系，可以兩個以核酸限制内切 酶為基礎（π切和黏π)的選殖步驟（參見圖5)，個別地對Dyax hlgGl表現構築體pBhl重定格式。 除了含有安柏-中止的純種系之外，807B-M0079-D10 (807B-M0027-D08)和 807B-M0081-A11 (807B-M0081-F12)，以及純種 系807B-M0009-C03，進行Fab對IgG的重定格式，並在 Hek293T細胞中暫時表現IgGs。 在使用上文概述的程序重定純種系之格式之前，在’’噬菌 體質體的層面π，校正在807B-M0079-D10之CDR2中的安柏-中止突變。 在807Β-Μ0081-Α11之5’-末端的安柏-突變，需要使用不 同的重定格式策略/”以PCR為基礎，對hlgGl表現構築體 pRhl重定格式’’。因為安柏·中止突變位在我們的”CJ- /c -抬 97784A.doc -96- 200530267 高引子’’之序列内的事實，故在Fab片段之PCR擴大作用期間 修正中止突變。PCR/Fab片段對pRhl之選殖策略，是與接 近pBhl之’’切與黏π相同的。 實例29 :結論 從具有Dyax’人類Fab3 00庫的各種選擇程序中，分離出與 CTD結合的229個候選Fabs。兩個程序包括對肽的選擇（實例 21和22)。在實例23的選擇程序中，藉著首先對ur-bCTD的 選擇，然後是對原纖維的選擇，逆轉實例5的成功選擇。亦 與實例5相反，我們不篩選噬菌體，但首先進行從噬菌體Fab 到Fab的批式再選殖。
Fab抗體對塗覆之VLDL有極少（五）的反應。沒有Fab對 bNTD是陽性的。 在實例21和22的策略中，有些純種系被增強了，我們觀 察到VH-CDR3群有少數個別的純種系。 得自實例21和22之策略的Fab抗體認得在肽3和4周圍的 選擇優勢抗原決定位。在實例23的策略中，發現相同的優 勢抗原決定位。 在IHC篩選中，發現在第一次篩選中有15個抗體對與在 IHC中之斑塊的結合是陽性的。在表17中出示在第一次IHC 篩選中，陽性之Fab純種系的特徵總論。 實例30 :在IHC中15個Fabs陽性之IgGl的特性 使在Fab-IHC中的15個陽性Fabs，對IgGl進行重定格式。 在這些抗體中，發現有9個在IgGl-IHC中是陽性的。 幾乎所有的IgG抗體均在肽抗原決定位作圖時與肽結 97784A.doc -97- 200530267 合。這或許是因為與Fab相比較，IgGl較高的抗體親抗原 性。至於對肽4選出的抗體，其像Fab—樣僅與肽4結合，有 些-亦像IgG —樣與肽9結合。至於起源自在實例23中描述之 篩選的抗體，IgG抗體與肽4和8、肽9或肽7結合，僅有一個 抗體807A-M0083-E11不與任何肽結合。 互相比較人類CTD、老鼠CTD和靈長類CTD。數個IgG抗 體與這三個物種中每一個的bCTD結合。 φ 雖然在Fab ELISA中，沒有與塗覆之VLDL的結合，但在
IgGl ELISA中，有數個但並非全部的抗體與VLDL結合。 當將bCTD塗覆在晶片上時，與在Biacore分析中之Fabs 相比較，所有的IgG抗體均顯示出改善的結合。 在表18中概述IgGl的結果。 實例31 : VLDL對807A-M0028_B02與在澱粉樣蛋白沉積物 中之CTD的結合作用的影響 欲分析在脂蛋白顆粒的存在下，807A-M0028-B02與在澱 φ 粉樣蛋白沉積物中之CTD的結合，在VLDL的存在或缺乏下 進行免疫組織化學法，看看VLDL的存在是否將導致斑塊之 染色強度的降低。 連續稀釋807A-M0028-B02抗體，並在APP/PS1和人類AD 腦切片兩者的培養之前，先與VLDL混合。未觀察到信號的 中止，即使是在最低的抗體濃度（〇·〇4微克/毫升）。相對的’ 在高濃度的抗體（5微克/毫升）處，業已完全中止市售抗體對 CTD(3H1)的信號（圖 20)。 97784a.doc -98- 200530267 實例32: 807A-M0028-B02抗體對小神經膠質/巨噬細胞之呑 噬細胞活性的影響 欲評估807A-M0028-B02對吞噬作用活性的影響，發展出 固定在抗生物素蛋白塗覆之FluoSphere螢光中心體 (Molecular Probes)上之CTD的呑嗟作用測定。 利用以補充有1 °/〇 B S A(組織培養測試，Invitrogen AB，Sweden) 和 2% ITS-X (Gibco, Invitrogen AB，Sweden)血清添加物（CM)的 OPTI-MEM培養基稀釋之不同濃度的IgG改造純種系 807A-M0028-B02，使固定在 1·2微米黃綠膠乳 FluoSpheres® Neutr Αν id in™標示之中心體（Molecular Probes Europe BV，Leiden， The Netherlands)上的生物素基化之CTD再懸浮，並在+4°C下培 養3 0分鐘。以1:1 〇 〇 (細胞：小珠）之比例，加入在帶有或沒 有2.0%NaN3，呑噬作用的抑制劑之CM中的THP-1細胞（106 個細胞毫升-1)。欲容許與F受體結合，在+4°C下將細胞同 步化20分鐘，並藉著低速離心（200 g，10分鐘，+4t：)移除 不含細胞的小珠。將細胞小球再懸浮於CM中，並在37°C 下，在C02-恆溫箱中培養40分鐘。在以胰蛋白酶消化之後， 將細胞懸浮液引導至無菌的條件，在7.5%牛血清白蛋白 (BSA)墼上分離出層次，並在+4t：下以150xg離心10分鐘， 移除未-内化的小珠。將細胞小球再懸浮於0.3毫升在PBS中 之2% PFA中。以對照組之百分比來表示結果，即在抗體存 在對缺乏之下，二或多個小珠中所含有之呑噬細胞的量， 藉著流動細胞計數來判定。使用帶有氣-冷氬雷射的 FACScan™(Becton Dickinson，San Jose，CA)，提供 488毫微 97784a.doc -99- 200530267 米處的激發。每個試樣獲得總共1 0000個事件’並以列表模 式數據格式儲存。關於呑噬作用’在520毫微米（FL1)處收 集螢光發射。利用Consort 30系統和LYSIS-II程式進行數據 收集和分析。分析數據，一旦展現兩個-參數的複雜性’和 在門控之製程中的細胞尺寸’以及螢光（FL1)頻率分布柱狀 圖，便分析呑噬作用。使用以吞噬作用活性之百分比對濃 度範圍（0.01-5微克/毫升）建立的劑量-反應曲線，判定每個 受試抗體的EC50，即引起呑噬活性增加50%的濃度。然後’ 從這些曲線推測出EC5 0，並用來比較抗體刺激吞嗤細胞的 相對效力。IgG改造純種系807Α-Μ0028·Β02證實刺激THP-1 細胞的高效力（EC50=34士15毫微克/毫升）。因此’結果表示 807Α-Μ0028-Β02以濃度-依賴性之方式，專一地指揮攜帶 CTD之小珠，在活體外被人類巨噬細胞/類小神經膠質細胞 呑噬攝入的作用。 實例33 :在實例4、實例21和實例22中描述之選擇中發現的 純種系之生殖種系修正 在表1 8中描述的抗體之中，已經進一步調查其中的五個 (807Α-Μ0028-Β02、807Β-Μ0004-Η03、807B-M0009-F06、 807Β-Μ0004-Α03和 807B-M0079-D10)。已經在所有的純種 系中，在這些抗體之輕鏈的可變部分中發現體細胞突變。 有些純種系亦在輕鏈的恆定部分含有突變（表2 1 )。已經進行 基因組和已知生殖種系序列的序列排列，並已經破認出正 確的胺基酸（在表19和表2 0中以粗體表示。在表1 9中描述修 正過之純種系的VL鏈，並在表20中描述IgG的怪定部分。 97784A.doc -100- 200530267 欲確保IgG分子是生殖種系，在五個抗體中，在DNA的層 面修正體細胞突變，並（暫時在HEK 293T細胞中）表現所有 五個生殖種系_修正的IgGls。以Biacore(實例34)、 CTD-ELISA和IHC進行比較結合分析，以便確保生殖種系-修正之抗體仍具有功能。在表23中概述結果。 實例34:生殖種系修正之IgGs的Biacore分析 以Biacore分析在表19和20中描述的生殖種系-修正之純 種系。藉著以不同的濃度在塗覆bCTD的表面上跑IgGs，進 行分析。使用帶有生物素基化之對照組IgG的表面作為陰性 表面。 純種系 807A-M0028-B02、807A-M0028-B02.1 和 807A-M0028-B02.2 的Biacore分析顯示三個IgG分子以類似的動力學與bCTD結 合（類似的結合率和解離率）。IgG的親和力未明顯改變。當 比較 807B-M0004-A03 與 807B-M0004-A03.1 時，獲得相同的 結果。 807B-M0004-H03和 807B-M0004-H03.1 的 Biacore分析，指 出807B-M0004-H03.1以與親代純種系不同的動力學結合。 然而，這並不明顯地影響親和力值。在CTD_ELIS A，以及
Biacore 分析和 CTD-ELISE 中顯示。純種系 807B-M0009-F06.1 已經喪失其對bCTD的結合能力。 實例35 :藉著ELISA，抗體對ApoE-CTD的結合 使用塗覆之ApoE-CTD ELISA，篩選抗體的ΑροΕ-CTD結 合能力。將人類、絨猴或老鼠ApoE-CTD塗覆在微量培養盤 上，接著與受試抗體一起培養。之後，藉著以二級HRP-抗 97784A.doc -101 - 200530267 體和四甲基聯苯胺（TMB)受質檢測，判定抗體結合的量。 ApoE-CTD結合在ELISA中提供按光密度（〇D)計之高信號 測量。在圖 22 中舉例說明了 807A-M0028-B02、807A-M0028-B02.1 和807A-M0028-B02.2。在表22中揭示結果。 實例36 :抗體對人類脂蛋白的結合 使用塗覆之VLDL ELISA，篩選抗體的脂蛋白結合能力。 將人類VLDL塗覆在微量滴定盤上，接著與受試抗體一起培 養。之後，藉著以二級HRP-抗體和四甲基聯苯胺（TMB)受 質檢測，判定抗體結合的量。VLDL結合在ELISA中提供按 光密度（OD)計之高信號測量。在圖23中舉例說明了 807A-M0028-B02、807A-M0028-B02.1、807A-M0028-B02.2、 807B-M0004-H03.0、807B-M0004-H03.1、807B-M0004-A03 和807B-M0004-A03.1。在表22中揭示結果。 實例 37 : 807A-M0028-B02、807B-M0004-H03、807B-M0004-A03、 807B-M0079-D10、807B_M0009-F06在活體内對老鼠大腦斑塊的 結合，以及Fab純種系在活體外對人類AD大腦斑塊的結合 藉著腹腔内或靜脈内注射至APP/PS 1基因轉殖老鼠内，證 實 807A-M0028-B02、807B-M0004-H03、807B-M0004-A03、 807A-M0079-D10和807B-M0009-F06在活體内對大腦斑塊 的結合（免疫裝飾）（圖24和25)。在10毫克/公斤之 807A-M0028-B02的單次投藥之後2天，業已觀察到免疫裝 飾。僅在斑塊上觀察到 807A_M0028_B02、807B-M0004-H03、 807B-M0004-A03、807B_M0079-D 10和 807B-M0009-F06 的 結合，並未檢測到星形細胞或任何其他腦結構的染色（圖24 97784a.doc -102- 200530267 和25)。藉著與在每隻老鼠中裝載的總斑塊相比較，證實以 個別的純種系免疫裝飾大量的斑塊，前者可藉著在相鄰之 切片上以對Αβ (6E 10)的單株抗體染色來判定之。 亦藉著免疫組織化學法證實親和力成熟之純種系在活體 外對在人類AD腦切片中之澱粉樣蛋白斑的結合（圖25)。 在圖26中可見在人類AD斑塊之不同野外型純種系的活 體外結合。 實例 38 :藉著 VH-CDR3 示蹤之 807Α_Μ0028-Β02、 807Β-Μ0004-Η03 > 807Β-Μ0004-Α03 - 807B-M0079-D10 ' 807B_M0009-F06的親和力成熟 使用示蹤突變生成作用，在原始野外型殘基的前後，在 每個 807A-M0028-B02、807B-M0004-H03、807B-M0004-A03、 807B-M0079-D10 和 807B-M0009-F06 的 VH-CDR3上，導入 低程度的突變（參見圖29)。使用在每個抗體之VH-CDR3序 列的長度中攜帶示蹤多樣性區域的募核苷酸進行PCR，其 被與在FR3和FR4區中之標靶V基因同種的區域，連同與能 夠黏接標靶V基因之5f末端的FR1區域同種的專一引子撐 住。 至於抗體 807A-M0028-B02 、 807B-M0009-F06 和 807B-M0004_H03，經由一個步驟的PCR擴大了解VH-CDR3 的多樣化。使用與輕鏈恆定區互補的y引子和3’專一的示蹤 寡核苷酸，進行該PCR。然後使用優勢2 PCR酵素系統 (Clontech)和每種引子各10微微莫耳，以50微升之體積進行 PCRs，持續25個循環（95°C 1分鐘，60°C 1分鐘，以及68°C2 97784A.doc -103 - 200530267 分鐘）。選擇1 〇〇 nM之引子濃度，以便涵蓋示蹤寡核苷酸所 帶有的完整多樣性。需要10〇至2〇〇個反應，以便獲得大約6 微-克的PCR產物。使用GFX純化套組（Amersham)純化所有 的產物。 所得的730個鹼基對的PCR產物含有併入寡核苷酸中的 内部Xbal位置和BstEII位置。使用這些位置，將產物選殖到 展示載體内。 以兩個步驟了解 8 0 7 B - Μ 0004-A03 和 807B - M 0079-Dl〇 的 VH CDR3之多樣化：在按照上述的初級擴大作用之後，利 用與Sfil位置附接之5’巢式前進引子和附貼有:T末端Nhel標 籤之CH1逆向引子的組合，再度-擴大730個驗基對的所得之 PCR產物。然後使用優勢2 pCR酵素系統（Clontech)和每種 引子各10微微莫耳，以5〇微升之體積進行PCRs，持續20個 循環（95°C 1分鐘，68°C 3分鐘）；需要100至200個反應，以便 獲得大約6微克的PCR產物。使循環的次數保持相當低（2〇 個循環），以便維持最大的多樣性，導入第一個PCR步驟中。 欲再度確保最大的多樣性，每個反應使用50毫微克的第一 個PCR產物作為模板，發動第二個PCR反應。使用GFX純化 套組（Amersham)純化所有的產物。 使用 50單位/微克DNA的Xbal和 BstEII (為了 807A-M0028-B02、 807B-M0009-F06 和 807B-M0004-H03)或 SHI 和 Nhel(為了 807B-M0004-A03 和 807B-M0079-D10)，消化PCR產物和載 體主鏈。 以凝膠純化所得的切開產物（載體和PCR片段兩者），使用 97784a.doc -104- 200530267 T4 DNA連接酶（NEB)將每個DNA片段各1.6微克連接到10微 克以類似方式切開的噬菌體質體載體主鏈内，並藉著電穿 透作用，將每個示蹤庫的連接混合物導入大腸桿菌T G1細 胞内。 使用協助者噬菌體Ml3-K07，從庫中解救噬菌體質體顆 粒（Marks 等人，（J· Mol. Biol. 222, 581 (1991))，使用得自每個庫 的足夠細菌來接種，以便代表每個純種系至少一次。 藉著定序評估在每個庫之VH-CDR3中的多樣性。每個庫 隨機挑選96個分離株，並定序VH-CDR3區域，再與參考野 外型VH-CDR3序列相比較。 關於 807B-M0079-D10和 807B-M0004-A03，判定全長的 VH序列，並與VH-CDR3外側的VH參考區相比較。 使用由兩回合選擇所組成的選擇程序，優先增強在庫中 勝過較低親和力純種系的較高親和力純種系。使用相對於 選擇野外型抗體所使用之濃度，更為降低之抗原濃度進行 第一回合的親和力選擇。使用野外型抗體和對照組抗體， 憑經驗判定最佳降低之抗體濃度。在競爭可溶性Fab或IgG 的存在下，以更低的抗原濃度進行第二回合。在表3中詳述 所使用之選擇條件。 欲判定是否已經發生抗原陽性純種系的增強，在抗原 ELISA中測試在第一回合選擇之前和之後，對每個欲成熟 之抗體中隨機挑選出的46個純種系。在所有的案例中，正 好在一回合選擇之後，觀察到抗原陽性純種系的增強。 在選擇之後，從載體中移除基因III殘肢，容許可溶性Fab 97784a.doc -105- 200530267 表現。隨機挑選出200個純種系，藉著ELISA篩選，並定出 其重鏈序列。使用DyaxWEBPHAGE資料庫，連接EUSA資 料和個別的序列。進一步分析在篩選測定中發現是陽性之 純種系VH-CDR3序列（OD信號=3x背景）。 至於807B-M0079-D10和 807B-M0004-A03,擴大並選殖全 長的VH區域，如此獲得全長的VH序列，並比較VH參考序 列，以便檢查任何在VH CDR3外側的突變。抛棄在架構區 中含有突變的純種系，但保留在VH-CDR1-CDR2中有突變 的純種系。_ 在表24至30中提供選出之純種系的胺基酸頻率分析的結 果。在VH-CDR3中，一些胺基酸位置極度地受到保留，但 其他的卻經常突變。 使用Biacore篩選，以解離率或KD為基礎，選出五個CDR3-突變的Fabs。在細菌中表現CDR3-突變之Fabs。製備胞漿周 圍萃取物，並以Biacore篩選。以與hCTD或在表4中出示之 肽的結合之解離率或KD為基礎，選出最佳的純種系。 將生物素基化的肽或人類CTD塗覆在鏈黴菌抗生物素蛋 白晶片上。以HBS + 0.1% BSA將得自10毫升培養物之胞漿周 圍萃取物稀釋成％。以30微升/分鐘，使用kinject程式注射 試樣3分鐘。在3分鐘解離之後，從晶片表面汽提任何剩下 的試樣。在1分鐘（在10-70秒之間）的時間窗上測量解離率。 在表31至35中提供這些資料。 如果已知K〇ff和Fab濃度，可從Biacore曲線計算·出結合 率。在完全的質傳限制（MLT)之條件下，就像在以極高密度 97784a.doc •106- 200530267 晶片和低流速進行工作時所遇到的，Biacore信號僅依賴在 晶片表面上跑的分析物的濃度。可從藉著在高密度蛋白質A 晶片上跑不同濃度的經過純化之Fab所獲得的標準曲線，判 定在粗製試樣中的Fab濃度。使用Fab濃度獲得做法和koff 值，我們從Biacore曲線計算kQn數據。從kQff/kQn獲得平衡解 離常數KD。在表3 1至35中提供這些數據。注意到 807B-M0079-D10不與蛋白質A結合。因此，僅為這些純種 系提供koff值。 為 807B-M0004-A03、807B-M0004-H03、807B-M0009-F06 和807A-M0028-B02成功地選出五個變體。在表36中確認選 出的變體。對於807B-M0079-D10,未發現具有明顯改善K〇ff 值的純種系（該純種系無可利用的尺!)數據）。 在大腸桿菌中生產所選出之Fabs，並藉著經過固定之金 屬親和力層析法，從胞漿周圍萃取物中純化。在還原和非 還原SDS-PAGE上檢查製備物的品質。 使用經過純化的Fabs，精確地判定平衡解離常數KD。 將生物素基化的肽或人類CTD塗覆在鏈黴菌抗生物素蛋 白晶片上。在HBS執行緩衝溶液中進行實驗。將經過純化 的Fabs稀釋至200 nM，並進行連續的％稀釋至12.5 nM，並 以一式兩份執行。關於締合，以30-40微升/分鐘，使用kinject 程式注射試樣。在3分鐘解離之後，從晶片表面汽提任何剩 下的試樣。使用在BIA評估軟體3.1中的同時ka/kd吻合程 式，分析感應譜（sensorgram)。在表36中概述數據。從Biacore 篩選中選出的最佳純種系，顯示出比807B-M0004-A03、 97784A.doc -107- 200530267 807B-M0009-F06和807A-M0028-B02之原始純種系更高2至 3倍的親和力。在807B-M0004-H03的案例中，Biacore信號 不容許不同純種系的精確比較。 亦藉著免疫組織化學法測試經過純化的Fabs。表37顯示 所選出之純種系的名稱，以及野外型純種系，並指出在免 疫組織化學法中它們是否染色斑塊。 實例39 ··選自實例38之抗體變體之輕鏈洗牌 作為輕鏈洗牌的開始點（在圖29中的循環2)，使用與得自 實例38之VH-CDR3改善變體一致的重鏈（在圖29中的循環 1)，連同野外型（WT)純種系。 不包括WT純種系807B-M0009-F06，因為與從循環1中選 出的變體相比較，該純種系之親和力明顯較低。至於抗體 807B-M0079-D10，作為在循環1中發現的無改善親和力之 變體，單獨在WT純種系上進行LC洗牌。 在本實例中，已經將非-親和力成熟的抗體稱為野外型 (WT)純種系，並從循環1中選出變體作為親代純種系。 將從循環1中選出的重鏈變體選殖到含有5至6個重鏈（HC) 與大約108個輕鏈（LC)洗牌之節目的FAB310載體主鏈内，創 造出綜合的多樣性。 至於每個純種系，在TG1培養物上進行Qiagen DNA製 備。然後，使用Sfil和Notl限制酵素切開10微克的DNA，產 生650個鹼基對的重鏈片段。以類似方式切開FAB3 10載體 主鏈。 以凝膠純化所得的切開產物（載體和片段兩者的），並對 97784A.doc -108- 200530267 每個庫，以相等的量集合不同的重鏈變體片段，並使用丁4 DNA連接酶（NEB)，將3微克集合的片段與6微克切開的噬菌 體質體載體主鏈連接。藉著電穿透作用，將每個庫的脫鹽 連接混合物導入大腸桿菌TG1細胞内。 所達到之庫尺寸，使得每個重鏈變體與輕鏈節目之每個 成員的至少一個副本混合。 對50個從每個庫中隨機挑選的分離株判定重鏈序列。 從807Α-Μ0028_Β02·衍生之未經選擇的庫中隨機挑選48 個分離株之輕鏈序列，並從8〇7B_M〇〇〇9_F〇6_衍生之未經選 擇的庫中隨機挑選48個。獲得63個具有獨特功能的輕鏈。 利用協助者噬菌體M13_K07解救噬菌體質體顆粒（Marks 等人，J· Mol· Biol· 222, 581 (1991))，使用得自每個庫的足夠細 菌來接種，以便代表每個純種系至少一次。 針對改善的親和力變體，選擇5個輕鏈洗牌的庫。在選擇 之刖，藉著在1毫升2% MPBS中，將庫與1〇〇微升鏈黴菌抗 生物素蛋白順磁性小珠預先-培養，耗盡庫中的鏈黴菌抗生 物素蛋白結合抗體。對於每個庫，使用三種抗原濃度，以 便判定第二回合選擇的最佳濃度（表5)。將噬菌體與小珠-寺示IM复合物的培養時間降至〇·5小時，並在Kingfisher裝置中 使用11次循環的程式化沖洗。在選擇之後，洗脫已經結合 的嗟菌體’並感染大腸桿菌（0.5之TGI OD)，並在30°C下液 態擴大過夜，在25毫升2χΤγ/氨苄青黴素（1〇〇微克/毫升）葡 萄糖（2%重量/體積）中以250 rpm搖動。濃縮細胞，並製造甘 油母液’以便進行第2回合的選擇。 97784A. doc 200530267 滴定未經選擇的庫和輸出，得到可供挑選和篩選的單一 囷洛。從未經選擇的庫和輸出庫中，挑選出47個菌落，並 在嗟菌體ELISA中篩選（關於所有的抗原，經由㈡从加鏈 黴菌抗生物素蛋白，塗覆抗原〇·5微克/毫升）。 所有的選擇力導致抗原結合純種系的增強。以這些結果 為基礎，選出進行第二回合選擇的抗原濃度。 更嚴袼的選擇第2回合選擇的條件，並將其設計成用來選 • 擇改良的（更快的）k〇n和改良的（更慢的“。使用在表6中概 述的三種策略：策略更降低抗原濃度；策略π_更降低抗 原濃度，並減少與抗原的培養時間（k〇n選擇）；策略ΙΠ_更降 低抗原濃度，並增加沖洗嚴格度以他選擇）。 自動裝置中進行選擇，並使用大約1〇U噬菌體的輸入。在選 擇之4，按照上述耗盡庫中的鏈黴菌抗生物素蛋白結合抗 體。在選擇之後，洗脫已經結合的噬菌體，並按照先前的 描述，用來感染大腸桿菌。濃縮細胞並製造甘油母液。 • 在ELISA中預先—篩選第二回合的輸出，判定抗原結合純 種系的百分比。進行有限數目純種系的序列分析，判定是 否優先選擇任何特殊的純種系，或是否在選出之純種系中 有任何優勢的輕鏈家族。 以批式再度-選殖每個第2回合的輸出（總共丨5個），以便產 生可溶性Fab。這可經由從載體中移除基因m殘肢而達成。 隨機挑選200個純種系，並藉著ELISA針對它們對其個別 心原的結合來篩選。僅對陽性的命中，判定抗體序列。儲 存並經由Dyax WEBPHAGE資料庫進行最初的序列分析。 97784A.doc -110- 200530267 關於庫 807B_M0004-A03、807B-M0079-D10和 807A-M0004-H03， 選擇增強2至8倍的抗體。至於庫807A-M0028-B02和 807B-M0009-F06，採用所有的純種系，因為獨特純種系的 數目不高。在表38至42中出示得自所有ELIS A陽性和獨特 命中的輕和重鏈序列。 在可能的親和力成熟結合劑的Biacore分析之後，發現少 數具有較高的親和力。只有庫807B-M0004-A03、 8 07A-M0028-B02和 807B-M0004-H03提供具有比 WT和親代 純種系更高之親和力的親和力成熟抗體。將那些選出之純 種系的輕鏈序列與生殖種系排成一直線。有趣的是，在所 有選出屬於相同生殖種系的純種系中，相同的胺基酸位置 似乎是多樣化的。 關於庫807B-M0004-A03 ，雖然純種系M148E08和 Ml 50E03正確地具有相同的重鏈序列，以及差異僅有兩個 胺基酸的輕鏈，純種系M150E03與M148E08相比較，具有 3·2χ改善的親和力，暗示僅有位在FR1中的兩個胺基酸負責 該改善。
至於庫 807Β-Μ002 8-Β02和 8.7Β-Μ0004-Α03，在 CDR和 FR 中觀察到大部分的多樣化，與野外型相比較，退回至生殖 種系序列。 在807Α-Μ0028-Β02庫衍生之純種系的FR3中，僅觀察到 少數保留的變化。 關於Biacore分析，使所有的純種系變體生長在小培養物 上（通常10毫升），製備胞漿周圍萃取物（PE)，並藉著在蛋白 97784A.doc -Ill - 200530267 質A/G晶片上跑試樣，測量在PEs中的Fab濃度。然後稀釋 PEs至相同的Fab濃度（25-50 nM)，並在標靶-塗覆的晶片（肽 4、8、9或CTD)上跑。以締合與解離噬菌體的放大率 (807A-M0028-B02、807B-M0004-A03、807B-M0009-F06) 或以在平衡時Biacore信號的值（807B-M0004-H03)為基 礎，確認最佳的純種系。衍生自807B-M0079-D10的純種 系，不與蛋白質A/G晶片結合，並因此僅以其解離率為基礎 排列。 以在平衡時Biacore信號的值為基礎，排列衍生自 807B-M0004-H03的純種系，其反映平衡解離常數KD :在平 衡時Biacore信號越高，親和力就越佳。 僅以koff為基礎排列衍生自807B-M0079-D10的純種系。 分別從 807A-M0028-B02和 807B-M0004-A03 中選出四和 五個變體。經過分離的807B-M0009-F06變體，似乎沒有任 一個顯示出比從CDR3示蹤中獲得的最佳變體更高的親和 力。至於807B-M0004-H03，以在平衡時Biacore信號的值為 基礎選出兩個變體。以解離率分析為基礎，沒有選出任何 807B-M0079-D10 變體。 在大腸桿菌中產製選出的純種系，並從胞漿周圍萃取物 中純化。使用該材料以Biacore精確地測量平衡解離常數 KD。在表7十概述數據。從輕鏈洗牌中分離出的最佳純種 系，顯示出比相對應之原始野外型純種系，或分離自CDR3 示蹤之最佳純種系更佳大約5倍的親和力。 在表43和44中出不在輕鍵洗牌之後選出的純種系。 97784a.doc -112- 200530267 表1 :起源自對原纖維和ur-bCTD之選擇的sFABs的解離率測量
開始的名稱 HCDR3 koffi^s1) RU 807A-M0027-C11 AVGYGDYGDY 13,30 79,2 807A-M0027-H05 DFFTSYFDH 16,90 182,0 807A-M0026-F11 DLWFGEWDY 28,10 165,8 807A-M0026-H09 DLWFGEWDY 25,10 138,0 807A-M0027-E12 DLWFGEWDY 8,95 419,9 807A-M0028-B12 DLWFGEWDY 18,80 335,5 807A-M0029-G10 DLWFGEWDY 23,80 212,0 807A-M0027-G01 DRGVSLLGAFDI 30,00 231,3 807A-M0028-A07 ESIAVAGVDY 53,60 367,0 807A-M0026-F05 GRGNYDFWSAGYYYYYMDV > 158,0 807A-M0028-G07 QEVWQWPAQFDS 35,30 , 131,7 807A-M0027-E11 SLDLDY 40,50 412,3 807A-M0026-G08 SSGIYYGYYMDV 38,80 594,1 807A-M0028-B02 SVLLDY 28,00 454,6 807A-M0028-B06 DRGVSLLGAFDI 13,50 100,3 807A-M0027-D05 EPIWGYYYYGMDV 9,16 377,8
97784A.doc 113- 200530267 表2 ··針對候選純種系 807A_M0026-F05(26F5)、807A-M0027-E11 (27E11)和807A_M0028-B02(28B2)，比較Fab和IgG對CTD-塗 覆之晶片的結合 純種系 格式 表面 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM) e5 e-3 27E11 Fab HD 9.5 45.5 47.8 士 8.1 IgG HD 7.5 7.4* 9.9 土 4,1 8.1 2.1# 2.6 ± 1.1 LD 10.1 7.7* 7.6 ±3.2 11.1 2.1^ 1.9 ±0.8 28B2 Fab HD 2.5 44.2 179 土 5·7 IgG HD 3.7 4.0 10.8 ±2.4 LD 5.2 6.4 12.3 ±3.7 26F5 Fab HD n.f. n.f. n.d. IgG HD 0.2 42 2103 ±785 LD n.f· n.f. n.d·
* kd在注射中止後直接測量 # kd在注射中止後大約50秒測量 n.f.未吻合 n.d.未判定 表3 抗體 第1回合選擇 第2回合選擇 807A-M0028-B02 3nMbCTD 或 1試管原纖維 0.3ηΜ bCTD + 5μΜ wt Fab or 0.3nM IgGl 807B-M0004-A03 5.7nM p4 0·057ηΜ p4 + 5μΜ wt Fab or 0.0 lnM IgGl 807B-M0004-H03 5.7πΜ ρ4 0.57nM p4 + 5μΜ wt Fab or 0.3nM IgGl 807B-M0009-F06 5·7ηΜρ9 0.057nM p9 + 5μΜ wt Fab or 0.3nM IgGl 807B-M0079-D10 5·7πΜρ8 0.057nM p8 + 5μΜ wt Fab or 0.3nM IgGl 97784A.doc •114- 200530267 表4 原始的純種系 Κ〇(ηΜ) 篩選純種系 的數目 807A-M0028-B02 150 (對 hCDT) 72 807B-M0004-A03 98 (對 p4) 39 807B-M0004-H03 200 (對 p4) 54 807B-M0009-F06 172(對 p9) 24 807B-M0079-D10 26(對 p8) 33 表5 :在降低抗原濃度下，從第1回合選擇中取回之抗原結合純種系的百 分比
庫 回合_ 抗原 抗原濃度 A03 1 Ρ4 57ηΜ，5·7ηΜ， 0.57ηΜ 命中率％ 輸入 輸出 2% 2% 2% 62% 51% 83% H03 1 Ρ4 570ηΜ, 57ηΜ, 5.7ηΜ 命中率％ 輸入 輸出 2% 0% 0% 72% 72% 81% F06 1 Ρ9 57ηΜ, 5.7ηΜ, 0.57ηΜ 命中率％ 輪入 輸出 0% 0% 0% 6% 4% 2% D10 1 Ρ8 57πΜ, 5,7ηΜ, 0.57ηΜ 命中率％ 輸入 輸出 0% 0% 0% 34% 45% 38% B2 ί CTD 300ηΜ, 30ηΜ, 3ηΜ 命中率％ 輸入 輸出 2% 2% 2% 28% 21% 17% 97784A.doc 115- 200530267 表6 :可供第二回合選擇策略使用的條件 沖洗 11x5分鐘 1 lx 5分鐘 11x5分鐘 11x5分鐘 11x5分鐘
策略 庫 回合 抗原 抗原 濃度 (nM) I A3 2 Pep-4 0.057 I H3 2 Pep-4 5.7 I D10 2 Pep-8 0.057 I B2 2 b-CTD 10 I F6 2 Pep-9 5.7 養間鐘 培時分 ο ο ο ο ο 3 3 3 3 3 II A3 2 Pep-4 0.57 3 11x5分鐘 II H3 2 Pep-4 5.7 3 11x5分鐘 II DIO 2 Pep-8 0.57 3 11x5分鐘 II B2 2 b-CTD 30 3 11x5分鐘 II F6 2 Pep-9 5.7 3 .11x5分鐘 III A3. 2 Pep-4 0.57 30 3 X 5分鐘+ 3 X 45分鐘+3x5分鐘 III H3 2 Pep-4 5.7 30 3 X 5分鐘+ 3 X 45分鐘+3x5分鐘 III DIO 2 Pep-8 0.57 30 3 X 5分鐘+ 3 X 45分鐘*K3x5分鐘 III B2 2 b-CTD 30 30 3 X 5分鐘+ 3 X 45分鐘+3x5分鐘 III F6 2 Pep-9 5.7 30 3 X 5分鐘+ 3 X 45分鐘—3x5分鐘
97784A.doc 116- 200530267 表7 純種系名稱 k〇n (1/Ms) k〇ff(l/s) KD (nM) M0004A03 WT 4J9E+05 3,31E-02 79 ★ M0004A03-M0148-E08 9,51E+05 4,85E-02 51 k M0004A03-M0149-F02 6,51E+05 2,41E-02 37 * M0004A03-M0149-G11 4，12E+05 1，73Ε·02 42 ie M0004A03-M0150-E03 6,08E+05 9,89E-03 16 ie M0004A03-M0151-D09 5,35E+05 l，61E-02 30 * M0028B02-M0168-D10 6,97E+04 2,97E-03 43 ★ M0028B02-M0169-F03 l，73E+05 l，78E-03 10 ic M0028B02-M0171-E03 l,02E+05 2,61E-03 26 M0028B02-M0171-G02 8,99E+04 4,55E-03 51
*動力學分析，1:1模式
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97784A.doc
807B-M0083-E11 807Β-Μ0081-Η03 1 _1 807B-M0081-F12 807B-M0079-DI0 807B-M0013-AI2 807B-M0009-F06 807B-M0009-C03 807B-M0004-H03 807B-M0004-F10 807B-M0004-F06 807B-M0004-C05 807B-M0004-C04 807B-M0004-A05 807B-M0004-A03 807B-M0001-B07 807A-M0026-F05 807A-M0028-B02 807A-M0027-E11 雖 翁 CO m /Ο θ 2 Ο Ο θ § m 3 § s /O Θ § 〇 Θ § o Θ § w tn Ο Θ 2 〇 CO m 〇 a z o m 〇 Θ z o s 0 Θ 1 ζΛ S Θ z o ζΛ m B z o cn /3 θ z o 0Λ m 〇 B 2； 〇 00 s 3 2： 〇 oo tn o 5 z o cn m 〇 s z o 〇 Θ z o 2 00 Μ 90 D! S s S s U* U\ 5: S ο θ § m θ § S Θ § S /O Θ § s 〇 Θ 2 〇 θ § C/3 m 〇 Θ 2： 〇 S o Θ § S o Θ z o s /O Θ § C/3 m Ο Θ 2： 〇 CO m 〇 Θ 'Z o 00 m /O Θ § 00 m 〇 θ 2： 〇 S /O Θ 2： 〇 CO m 〇 θ 2； 〇 CO θ 'Z o S o Θ 2： 〇 VHCDR2 0〇 VI oo v〇 Os 〇\ S OS L/i OO b；; ffi ο θ § cn S θ 2 Ο CO s Θ s CO S Θ § Θ 2： o m Θ § cn m θ 2： 〇 m B § CO s 5 § ίΛ S Θ z O ⑺ B B z o 00 Θ 2： 〇 CO m s 2： 〇 C/> m θ z o C/5 B θ 2： 〇 C/D s Θ 2： 〇 Θ § Kfi Θ § h σ δ 8 S s w Si s s ΰ SEQIDN0: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: 00 m 〇 Θ 2： 〇 CO Θ 'Z o 00 s Θ 2： o ή Λ ft UJ UJ 09 Ui Ul Ui % SEQIDNO OM010HS SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO: CO m 〇 Θ 2： 〇 SEQIDNO: 96 SEQIDNO: 93 SEQIDNO: 90 [SEQIDNO: 36 SEQIDNO: 33 I 0C ONCH0aS VL-CDRl OJ Μ S H- 二 s S s SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQ ID NO: SEQIDNO: /S Θ § Θ § ζΛ Θ g LO B θ § S θ z O {/) m Θ 2： o VL-CDR2 SJ JO OO 5 s S s § VO S v〇 Ul Ul u> SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: CO s Θ 2： 〇 c/> Θ z o s o Θ § m Θ § s Θ 2： 〇 OO m Θ 2： o VL-CDR3 Ui u» KJ Ul cs S； i o o o 汶 s Ul OO Ut C/) Β Β ζ ο m Θ Z o ζ/i m 〇 Θ 〇 00 S θ 2： 〇 Θ § c/> S B § C/5 s Θ § s Θ Z o CO s Θ § w m s 〇 ⑺ m 〇 Θ z o CO tn 〇 Θ § CO Θ •z o o Θ z o s o 5 •z o S O Θ z o S O Θ § CO m Θ z o £ δ S S g v〇 KJt 00 ϋ% 〇\ \J9 C^i s ui N) s 6 δ ζΛ Β θ § 思 Θ § GO cn 〇 Θ Z o oo m /O Θ z o SEQIDNO SEQIDNO: SEQIDNO SEQIDNO; SEQIDNO SEQIDNO SEQ ID NO SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO SEQ ΓΟΝΟ 琛S ο 私 ro s § M 〇 S s 00 00 M s (Λ S β 2 Ο S /O S § GO m θ "Z o SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQIDNO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO SEQIDNO SEQIDNO SEQ ID NO SEQIDNO SEQIDNO SEQIDNO 簿S Ln) KM s s v〇 s QO OO KJi s OO a Di UJ :如湟铖 2r164t171-206辣S猝涩
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807A-M0042-C03 807A-M0043-H05 〇 > k O o Kl M fO 0 1 s (O 6 cn 807A-M0039-H09 807A-M0037-C08 807A-M0038-A09 |807A-M0044-E08 |807A-M0044-G07 807A-M0040-A03 807A-M0039-E06 |807A-M0028-B02 〇 > 1 o 令 g o J! k 0 S 1 O 807A-M0046-A11 〇 J k O s -4 m •a 807A-M0043-E07 (807A-M0037-D06 | 807A-M0046-G03 807A-M0029-G10 (807A-M0042-D05 | o k 0 § 1 〇 09 807A-M0041-F03 ssr 1 t o s 03 2 CJI (807A-M0028-B06 | 807A-M0037-F10 o > o § 6 807A-M0039-E07 [807A-M0043-F08 | 807A-M0027-C11 s QDIQMTQSPATLSLSPGERATLSC QSELTQPASVSGSPGQSITISC QSELTQPPSASGTPGQRVTISC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLPASVGDSVTVTC QDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC QSALTQPPSVSVAPGQTARITC QSPSSVSTSVGDRVTITCRASQ QDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC QSELTQPPSVSVSPGQTATITC QDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPGILSLSPGERATLSC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC | QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPATLSVSPGDRVTLSC | QYELTQPPSASGSPGQSVTISC QDIQMTQSPSTLSASVGDRVAITC QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC bDIQMTQSPDTLSLSPGDRATLSC QSALTQPPSASGTPGQRVTISC § D 3 0> s 0) s δ α 1 QSELTQPPSASGSPGQSVTISC PDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC | PDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC | LV-FR1 RASQSVSSSYLA TGTNTDVGGYNWA SGGYSNMGSNYAH RASQDIRDDLG RTSQSISDYVN RASQGISSWLA GGNNIGTKIVN LD1QMTDISTWLA RASQVISTWLS SGDKLGDKYAS ； RASQGISSWLA RTSQDIRNHLG RASQNLIFNFLA δ Ο Ο > < Ο) ^ASQSISSYLN | (rasqrirknlh I ^RASQNVNTFLN RTSQDVRNWVA | RASQGITNWVA RASQSISSYLN RASQSVGSTUV | TGTSSDVGAYNWS RASQGWRWLA RASQSVSSSYLA RASQSVSSNYIA SGRSSNIGSNSVN ό j〇 3 2 Z TGTSSDVGGYNYVS RASQGISSWLA | RASQSVSSWLA L— .............- LV-CDR1 WYQQKPGQAPRLLIY WYQQHPGKAPKLMIY WYQQLPGTAPKLLIY ； WYQQKPGKAPKRLIY WYQQKPGKAPNLLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQRPGQAPWWY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPKLL1Y , WYQQRPGQSPVLVIY WYQQKPGKAPKLLIY 卜 FQQKPGKAPQRLIR ^VYQHKPGQAPRLLIY |WYQQKPGKAPKLLIY ^VYQQKPGKAPKLLIY | yVYQQKPGKAPNLLIY yVYQHKAGKAPKLLIY | T 〇 o s η < ^VYQQKPGKAPKLLIY | ^VYQQKPGKAPKLLIY ^VYQQKPGQAPRLLIY| ^VYQQHPGKAPKLIIY ] yVYQQKPGKAPKLLIY | ^VYQQKPGQTPRLLlYl yVYHQKPGOAPRLVIY \ ^YQQLPGTAPKLLIY | ^VYQQKPGKAPKLLIN ] ^YQQHPGKAPKLMIY | yVYQQKPGKAPKLLIY | ^Λ/YQQKPGAAPRLLIY | ^.V-FR2 GASSRAT 丨 DVSNRPS NNNQRPS (AASSLQS , |aastlqg |aasslqs |dnsdrps (AASTLES j [TASTLQS |qdtkrps| |aasslqs |easilqs GSSTRAT pAFNLET ^VASSLQS | 卜SSNER | | SD1SSW| 卜STLQS I 0ASRLQS | ^ASSLQS | ^AVTRAT | PVNKRPS KASALES GASSRAT ^TSRRAT | pNNQRPS | DASNLEP EVSKRPS I_ ^VASSLQS | KASSLQT LV-CDR2 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFASYFC GVSTRFSGSKSGDTASLTISGLQTEDEADYYC GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSASGTNFSLTIDDLQPEDFATYY^ GVPSRFSGSASGADFTLTISSLQPEDFATYYC GIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYC ! GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC _1 GVPARFSGSGSGTDFTLTINNLQPEDFATYYC GIPERFSGSNSGNTA丁 LTISGTQTMDEADYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYFC GVPSTFYGSGYGReFTLTISSLQPEDFATYYC GIPDRFSGSGSGTDFTLTINRLEPEDFAVYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGRGSGTEFTLTISSLQPEDLATYYC GVPSRFSGTGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFC | PVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLIISDLQPEDFATYYC GVPARFSASASGPDFTLTISSLQSEDFAVYYC | GVPDRFSASKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYC GVPSRFSGSVSGTQFTLinSSLQPDDFATYYC GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC ^IPDRFSGSGSGTDFTLTISRLDPEDFGVYYC GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYC GVPSRFRGSGYGTDFSFSISSLQSEDIATYYC ^VPDRFSGSKSVTSASLAITGLQAEDEADYYC pVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGGGSGTEFTLTISSLQPDDFATYVC LV-FR3 QQSYSSPGIT |SSFTSRSTHV ] AAWDDSLNGWV QQHNNYPSFT |QQTFFSPPT |qqtydtpft I QLWDSSSPHPI _ ； QQAYSFPIT QQANSFPIT QAWGSSPW QQSYSSPGIT LQYDSFPYT QQYHTSSFT QQFEDLFSLT |qqsystplt I |qqsfsspwt I QQSYSDPLT ^QADTFPWT | QQSYSSLFT QQSYTTPFT QQYGGSPWYT I NSYAGSNSLI QHYYTYPYA QQYGSSPYT QQYAYGRSPGYP |aawddslsgw QQYDSVPIT bSYDSSLSGW bQANSFPPT 1 QQSYSTPT LV-CDR3 FGPGTKVEIK [fgtgtkvtvl I FGGGTKLTVL |fgpgtrldik I [fgqgtrveik I [FGPGTTVDLK I FGTGTKVTVL pGQGTRLEIK | FGGGTKVEIN |FGGGTRLTVL j FGPGTKVEIK [fgqgtkleik I FGPGTKVDIK |fgpgtrvdlk I ^GGGTKVEIK | ^GQGTKVEIK | FGGGTKVEIK ^FGQGTKVDIK | FGPGTKVDIK | —GPGTTVDIK 卜GQGTKLEIK | FGGGTKLTVL FGQGTKLEIK FGQGTKLEIR FGQGTRLEIK I FGGGTKLTVL FGQGTRVEIK | FGSGTKVTVL |fgqgtkveiq I FGGGTKVEIK LV-FR4
枷9 ··淬进畸宝鄱麻琳赉枭鹚贫雜~VL寐s麻；S^^AJ 97784A.doc -119- 200530267
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807B-M0050-H10 807B-M0050-H05 807B-M0050-G05 807B-M0050-G01 807B-M0050-E04 807B-M0050-B09 807B-M0050-A04 807B-M0046-E03 807B-M0042-B05 807B-M0042-A05 807B-M0027-E08 807B-M0025-B05 807B-M0024-H08 807B-M0023-G05 |807B-M0023-C03 807B-M0009-G03 |807B-M0009-F06 807B-M0009-C03 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQUIESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 1 画 X 1 〇 5 m < 7J cn S S z o s I i $ 1 i σ X 0 1 z m z CO i 5 z Ό I cn g i I WVRQAPGKGLEWVsl WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS |WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS VISSSGGYTQYADSVKG SIGPSGGGTEYADSVKG VISSSGGTTYYADSVKG VISSSGGTTFYADSVKG GISPSGGPTSYADSVKG VISSSGGYTFYADSVKG GISSSGGPTVYADSVKG YISPSGGKTQYADSVKG SISPSGGITKYADSVKG SIGSSGGSTSYADSVKG SIWSSGGLTKqADSVKG SIVPSGGFTLYADSVKG SIYPSGGHTNYADSVKG SISPSGGFTMYADSVKG YIYPSGGWTYYADSVKG SISPSGGHTGYADSVKG GIVSSGGMTGYADSVKG VISSSGGDTAYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS RFTISRDNTKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEOTAVYYCAK 丨 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTSVYYCAG j RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR | RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAED1AVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR MRVOYGDNYGMDV DRGYCSGNTCYIDAFDI VGMSTYAFDI GGDNWNYLSV ENIEYSSSFPNMGRPHYY YYYGMDV VGATGPFOI FRCTSTSCFSDY DQQTDYFDY GVGATAGI 〇 HGSSWTFDY GKRIAARGGYYFDY 〇 ζ 73 GRSWGRYFQH ESDGTTSAYFDY VGMSTYAFDI DRGYCSGNTCYIDAFDI WGQGTTVTVSS WGQGTMVTVSS WGQGTMVTVSS WGQGTTVTVSS WGQGTTVTVSS WGQGTMVTVSS WGQGTLViySS WGQGTLVTVSS WGQGTMVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS 1 WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTMVTVSS WGQGTMVTVSS 97784A.doc -129- 200530267 表13
分離株名稱 肽 增強 ) Fab IHC 組 VH CDR3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 bCTD 807B-M0001-A09 E22-P1 6 8 + 807B-M0001-B07 E22-P1 2 2 + + + +/- 4 807B-M0001-C10 E22-P1 1 1 807B-M0001-G03 E22-P1 2 8 807B-M0042-A05 E22-P2 1 1 + 807B-M0042-B05 E22-P2 7 7 + 807B-M0050-A04 E22-P3 19 19 + 807B-M0050-B07 E22-P3 20 20 + + 807B-M0050-B09 E22-P3 4 4 + 807B-M0050-E04 E22-P3 1 1 + 807B-M0050-G01 E22-P3 2 2 + 807B-M0050-G05 E22-P3 2 3 + 807B-M0050-H05 E22-P3 1 8 + 807B-M0050-H10 E22-P3 1 1 + 807B-M0004-A03 E22-P4 5 5 + + + + 5 807B-M0004-A05 E22-P4 2 3 +/- 1 807B-M0004-B10 E22-P4 3 3 + 807B-M0004-C01 E22-P4 2 2 + 807B-M0004-C04 E22-P4 1 1 + +/- 1 807B-M0004-C05 E22-P4 1 1 +/- 1 807B-M0004-D10 E22-P4 1 1 -*» 807B-M0004-F06 E22-P4 2 2 + +/- 1 ' 807B-M0004-F07 E22-P4 1 4 807B-M0004-F10 E22-P4 1 3 + + +/- 2 807B-M0004-G08 E22-P4 1 1 + 807B-M0004-H03 E22-P4 1 1 + + + 2 807B-M0023-C03 E23-P4 1 1 + 807B-M0023-G05 E23-P4 1 149 + 807B-M0024-H08 E23-P4 4 4 + 807B-M0046-E03 E22-P7 3 3 + 807B-M0008-A03 E22-P8 2 3 + 807B-M0008-A08 E22-P8 1 1 + 807B-M0008-B04 E22-P8 2 2 + 807B-M0008-B08 E22-P8 1 1 + 807B-M0008-D02 E22-P8 5 .5 + 807B-M0008-D05 E22-P8 2 2 + 807B-M0008-E01 E22-P8 2 2 + 807B-M0008-E06 E22-P8 1 1 + 807B-M0008-G11 E22-P8 1 3 + 807B-M0008-G12 E22-P8 1 1 + 807B-M0025-B05 E23-P8 1 1 + + 807B-M0027-E08 E23-P8 148 149 + + + + 6 807B-M0009-A06 E22-P9 5 8 + 807B-M0009-A09 E22-P9 15 15 + 807B-M0009-B07 E22-P9 4 5 + + +/- + + + + + + 807B-M0009-C02 E22-P9 13 13 + 807B-M0009-C03 E22-P9 2 8 ：+ + +/- 5 807B-M0009-F06 E22-P9 1 3 + +/- 3 807B-M0009-G03 E22-P9 1 1 + + 97784A.doc 130- 200530267
807B-M0019-A04 807B-M0018-G02 〇 3 ί ο 9 m § 807B-M0018-C12 807B-M0017-E05 807B-M0017-B06 o •Nl Ό3 k 〇 -Nl tb s 807B-M0016-F08 807B-M0016-F05 807B-M0016-F04 807B-M0016-E01 807B-M0016-D08 807B-M0016-D01 807B.M0016-C06 807B-M0014-F07 807B-M0014-E08 807B-M0014-D09 807B-M0014-007 807B-M0013-G05 807B-M0013-F06 807B-M0013-C03 807B-M0013-B04 807B-M0013-A12 807B-M0012-G05 807B-M0012-F12 807B-M0012-F10 807B-M0012-D09 807B-M0012-C09 807B-M0011-C07 镖 莽 QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC QDIQMTQSPSSLSASIGORVTITC QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC QSELTQPPSASGSPGQTVTISC QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC i QYELTQPPSASGSPGQSVTISC QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC QSALTQPRSVSGSPGQSVTISC QDIQMTQSPSSLSASVGDSVTITC I QDIQMTQSPATLSASVGDRVTFTC ! QDIOMTQSPSSLSASVGDRITITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVAITC QD1QMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVAITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QD1QMTQSPSSFSASTGDRVTITC QOIQMTQSPATLSLSPGESTTLSC QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC QYELTQPPSASGTPGQRVTISC QD1QMTQSPDSLSASVGDRVT1TC QDIQMTQSPSSLPASVGDRVTITC QDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC QDIQMTQSPATLSVSPGERATLSC QDIQMTQSPSFLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPATLSLSPGERATLSC QSELTQPPSASGTPGQRVTISC QYELTQPPSASGSPGQSVTISC •A RASQSVSSSYLA RASQDIRDDLG RASQSVSSSYLA TGSSRDIGNYNWS RASQSVTSSYLA TGTSSDVGAYNYVS RASQSVHSSYIA TGTSSDVGGYNWS RASQSISTYLN RASQSVNNWVA RASQSIGRYLN RASQSISSFLN RASQSIDNYLN 丨 RASQSINTYLN RASQSIDTYLN RASQDIRDDLG RASQGVGSYLA RASQSVSRWA RASQSLSSSYLA SGSGSNIGSNLVY RASQS1SSYLN RASQNIVTYLN RASQSISRWLA RASRSLFSTYLA RASQSVSSNLA RASQGISNYLA RASQSVSSYLA SGTLSNIGTNIVS TGTSSDVGTYKYVS 〇 σ _jb WYQQKPGQAPRLLIY WYQQKPGKAPKRLIY WYQQKPGQAPRLLIY WYQQFPGKAPKLIIY WYQQKPGQAPRLLIY WYKIHPGKAPKLMIY WYQQKPGQAPRLLIY WYQQHPGKAPKLMIV WYQQKPGKAPKLLIS WYQQKPGGAPEGLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPNLUY ' WYQQKPGIAPKLLIY I WYQQKPGQAPKLLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPKRLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGQSPRLVIY WYQQKPGQPPRLLIY WYQQLPGTAPKLLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGQPPRLLIY Uyqqkpgqaprlliy WYQQKPGKAPKLLIY ^A/YQQKPGQAPRLUY WFQQLPGTAPKLUY WYQQHPDKAPRUIY N> GASSRAT AASSLQS GASSRAT DVRKRPS GASSRAT DVNNRPS GTSSRAT OVSKRPS APSRLQS KASHLQS TASSLQS I GASSLQS TASSLQS ASSTLQR AASKLED AASSLQS GAYTLQS DASNRAT GASRRAT RNTORPS AASSLQS AASSLQS AASSLQS GASTRAT ksSLQS VASALQS DASNRAT NDHRRPS EVNRRPS o 刀 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC GVSDRFSGSKSGNTAFLTVSGLQTEDEADYFC | GIPDRFSGSGSGADFTLTISRLEPEDFAVYYC GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC i GIPDRFSGNGFGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC GVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC GVPSRFSDSGSGTDFTLAISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGGGSG7VFTLTITSLQPDDFA7YYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQLEDFATYFC GVPSRFSGSGTGTDFTLTIRSLQPEDFASYFC GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDmilSGLQSEDFATYYC 〇 7i 55 S S O σ 2j 5 3 s s o s o GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC GVPDRFSASKSGTSASLAISGLRSEDEADYHC 1 s s s s 0 -n P -c 1 o s 0 1 o GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC 〇 σ 5 o cn 〇 ω O 3 *n H W s rn s > GVPSRFSGSGSGTDFTLTVSSLQPEDFATYYC i s; o s s m T1 己 Th cn s ? o GIPARFSGSGSGTDFTLT1SSLEPEDFAVYYC GVPDRFSGSKSATSASLAISGLQSEDEADYYC GVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC OJ QQYGSSSIT LQHNTFPSFT QQYGSSRVT GSYTGTNNV QQYGTSPYT CSYAGSSTQV QQYGSSPIT CSYAGNYSW QQSYSTPVT QQYQTYPYT QQSFTTPHT OQSYSTPYT QQSYTTPHT QQSYSPPLYT QQSYSSPGIT QQHNNYPSFT QQYYSYPFT LQRSNWPFT QHYGRSPLFT ATWDDSLGGW QQSYSTPPYT QQSYSMSSWT QQSYSTPLT QQYVSSQLT QQTYSTPWT QQYYSYSA QQRSNWPRYT I AAWODSLNGW YSHATGNNW 0 Ό 01 FGQGTRLEIK FGPGTKVDIK FGGGTKVEIK FGPGTSVTVL FGQGTKLEIK FGTGTKVTVL FGQGTRLEIK FGGGAKLSVL FGQGTKLEIK FGQGTRLDMK FGLGTKLEIE FGQGTKLEIK FGQGTKLEIR FGQGTKLDLK FGPGTKVEIK FGPGTRLDIK FGPGTKVDIK FGPGTKVEIK FGPGTTVDIK FGGGTKLTVL FGQGTKLEIK FGQGTNLEIK FGGGTKVEIK FGGGTKVEIK FGQGTKLEIK FGQGTRVEIK FGQGTKLEIK FGGGTKLTVL I- IrGTGTKVTVL 揪14 :淬a碕室23~玀麻鰣赉枭ls^lt4LVL寐S铕猓如渔 97784A.doc -131 - 200530267
807B-M0084-C11 807B-M0084-C03 807B-M0083-E11 807B-M0083-E10 807B-M0083-B10 807B-M0082-H06 807B-M0082-E08 807B-M0082-E01 807B-M0082-B07 807B-M0081-H07 807B-M0081-H03 807B-M0081-G11 807B-M0081-G04 807B-M0081-F12 807B-M0081-E08 807B-M0081-D08 807B-M0081-C05 807B-M0081-C03 807B-M0080-F10 807B-M0080-C04 807B-M0080-A02 807B-M0079-H05 807B-M0079-H01 807B-M0079-D10 807B-M0079-B09 807B-M0020-G01 807B-M0020-F12 807B-M0020-F06 807B-M0020-D01 807B-M0019-G07 807B-M0019-F06 807B-M0019-C01 807B-M0019-A10 § δ ο CO s C/J i cn 系 s s 〇 m § $ s o 8 QSALTQPPSVSVAPGQTARITC QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC QDIQMTQSPSSVSASVGDRVTIIC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTVTC QDIQMTQSPSSLSASIGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVAITC QSALTQPASVSGSPGQSITISC I QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QYELTQPPSASGSPGQSVTISC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVAITC QDIQMTQSPDTLSLSPGERATLSC 8 δ cq l Ϊ 01 g σ I QDIQMTQSPSSLPASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC QSALTQPPSVSGAPGQRVTISC QDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC D 〇 δ 51 l 5 Ό i QSALTQPPSASGTPGQWAISC QDIQMTQSPLSLSASVGDR\mPC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QSALTQPPSVSVSPGQTASITC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QSELTQPASVSGSPGQSITISC bDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC QDIQMTQSPGTLSLSPGERATLSC QDIQMTQSPSSLSASVGDRVSIT. QDIQMTQSPATLSASVGDRVTITC QSELTQPASVSGSPGQSITISC QSALTQPASVSGSPGQPITISC 〇 δ 8 〇 5； C δ δ Ό 1 I RASQSIATFLN ; GGSNIGSKSVH GGNNIGTKIVN RASQSISSRYLA RASQDIHTWUV RASQGIRNNLA ! RASQSISSVLN RASQSIDTYLlM TGTSSDVGGYNWS RASQSISSYLN TGTSSDVGGYNWS RASQSIDTYLN RASQSISTSLA RASQSISSYLN RASRNIGKYLN RASQG1SSWLA TGSSSNIGAPYDVH RASQSINRWLA RASQGISiWLA SGSTSNiGSNNVN RASQSISTYLN RASQGINSWLA RASQSISSYLN AGDELGNKYAS RASQSISSYLN TGTSSDVGSYNLVS Irasqdirnyla RASQSISYNYLA RASQTIRDYLH RASQGLASWLA TGTSSDVGSYNLVS SGTSSDVGGYNWS ! RASQDIRSDLG WYQQKPGKAPNLLIS ! WVQQKSGQAPVLWY WYQQRPGQAPWVW WYQQKAGQAPRLLMY WYQQKPGKAPKLLIY I WYQQRPGKAPKRLIY WYQQKQGKAPKLLMF WYQQKPGKAPKLLIY WYQQHPGKAPKLM1Y WYQQKPGKAPKLLIY WYQQHPGKAPKFMIY WYQQKPGKAPKLLIY WYHQRPGQAPRLLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQIRGRAPRLLVY WYQQKPGKAPKLLIY I WYQQVPGTAPKVLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPKLLIY WYQQLPGTAPKLLMY WYQQKPGKAPKILIY 蠢 〇 i 5 WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGQSPVLVIY WYQQKPGNAPRLLtY WYQQHPGKAPKLMIY kFQQKPGKAPKSLIY Wyqqkpgqaprlliy WYQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPNLLIY WYQQHPGKAPKLMIY Wqqhpgkapklviy WYQQKPGKAPKLLIY GAFNLQS DDSDRPS DNSDRPS GASRAT AASSLQS GASNLHS AASSLKS AASSLQS DVSNRPS AASSLQS EVNKRPS AASKLEO I DASNRAT AASSLQS LASSVQT AASSLQS GNNHRPS | KASNLES GASSLQS 2 73 5 AASSLQS 套 z o AASSLQS QDRKRPS SASTLNS EGSKRPS GASSLQG DASNRAT kASSLQV KASNLKS EGSKRPS DVSNRPS GASTLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATVYC GIPERFFGSNSGRTATLTISGVEVGDEADYYC GIPERF5GSNSGNTATLTI5RVEAGDEADYYC GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC IGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISNLQPEOFATYYC GVPSRFSGSGSGTOFTLTVSSLQPEDFATYYC GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLIISDLQPEDFATYYC GVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYC GVPSRFSGSGTGTDFTLTIRSLQPEDFASYFC < ? 7) 0? 〇 0 1 s s ! GVPSRFSGSGSGTEFSLSISSLQPEDFATYYC GVPPRFSGSGSGTDFSLIISSLQPEDFATYYC 1 cn Ϊ Q s 3 S q % ? 5 1 o GVPDRFSGSKSGTSASUISGLQAEDEAHYYC o > s w o 8 S m τι 5 cn tn s σ o o GAPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFA1TYYC GVPARFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFC GVPSRFSGSGSGTLFTLTINNLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC 〇 m s 〇 d O $ S δ GVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFGIYYC GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYVC § Q in 〇 Ui 〇 H H ω Q S S I o GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDLATYYC GVPSRFSGSESGTEFTLTISSLQPDDFATYFC GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC o 05 55 <· 震 口 0 5 m 1 GVPSRFSGSGSGADFTLIISNLQPEDFATYYC QHSYGTPT QVWDSSSDDYV QLWDSSSDHPI QQSYEYPLT QQSYSTPRT LQHNNYPYS QQTYSSPWT LQSNTFPFT SSYTSRSTYV QQSYTTPFT ! SSYAGRNFW QQSYSSPGIT QQRSNWPYT QQANSFPLT QQSYAAPLT QOANSFPPT QSYDSSLSGPI QQYHSYPWT QQANSFPLT AAWDDSLNGPNW QQSYTTPLT QQYQNYPYT QQSYSTPFT QSWDSSSVI QQANSLPFT i CSYAGSSTYV QQYNSYPLT QQRSNWPPGLT QQTYSTLIT HQYYSNSWT CSYAGSSTLV ： SSYTSNSTLV LQDYNYPRT FGQGTKVEIK FAAGTKLSVL FGTGTKVTVL FGQGTKLEIK FGQGTKVEIK FGQGTKLEIK FGQGTKVEIR FGPGTKVDIT FGTGTKVTVL FGPGTTVD1K FGGGTKLTVL FGPGTKVEIK FGQGTKLEIK FGGGTKVEIK FGGGTKVEIK FGQGTKVEIQ FGGGTTLTS/L FGQGTKVDVK FGGGTKVEIK FGGGTKLTVL FGGGTKVEIK FGQGTKLDIE FGPGTKVDIK FGGGTKVTVL FGQGTKLEIK FGTGTKVTVL FGGGTKVEVK FGGGTKVEIK FGQGTRLEIK FGQGTKVEIK FGGGTKLTVL FGGGTQADRP FGQGTKVEIK 97784A.doc -132- 200530267
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807B-M0086-G03 |807B-M0086-E08 807B-M0086-D03 807B-M0086-C06 807B-M0085-G08 807B-M0085-G07 807B-M0085-G03 807B-M0085-E10 807B-M0085-C01 807B-M0085-B12 807B-M0084-H05 807B-M0084-F08 807B-M0084-F03 B07B-M0084-E07 807B-M0084-C11 807B-M0084-C03 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS GVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTrS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 3 2 Z 5 i X i 〇 1 CO i I I 〇 1 I i O i O < 1 m 1 〇 i i Ό 1 70 i i i WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS i g s § 疆 CO i § 0 s 1 WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS 歷 0 S 1 (Λ WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS WVRQAPGKGLEWVS I o s § ? cn YIYPSGGFTHYADSVKG 1 WIVPSGGITEYADSVKG SIVSSGGYTPYADSVKG WISSSGGFTKYADSVKG RIRPSGGMTSYADSVKG SIVPSGGRTLYADSVKG SIVPSGGGTGYADSVKG GISSSGGSTQYADSVKG GISPSGGYTTYADSVKG SISPSGGQTFYADSVKG GIYSSGGTTTYADSVKG YISPSGGGTSYADSVKG SISPSGGGTLYADSVKG SISSSGGDTQYADSVKG VISPSGGHTYYADSVKG YIYSSGGSTRYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEOTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR j RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RmSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKNTLVLQMNSLRAEDTAVYYCAR RmSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR RFTISRDNSKKTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SWGWGLDY QEVWQWPAQFDS EPIWGYYYYGMDV DLWFGEWDY DLWFGEWDY EPIWGYYYYGMDV ENYGPDY DLWFGEWDY GTVLLWFGESGGHFOV EPIWGYYYYGMDV EPIWGYYYYGMDV DLWFGEWDY DLHYGSVLDF DLWFGEWDY DFFTSYFDY EPIWGYYYYGMDV WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTTVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTTVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTPVTVSS WGQGTTVTVSS WGQGTTVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTLVTVSS WGQGTTVTVSS 97784A.doc -136- 200530267 表16 分離株名稱 增強 ΗΡΤΠ VLDL 肽作圖 koff RU Fab IHC VH CDR3 Dw丨U 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (e-3) 807B-M0011-C07 3 20 + 11.6 325 807B-M0012-C09 12 12 11.7 156 807B-M0012-D09 1 299 + 14.8 159 807B-M0012-F10 1 1 + 5.5 50.5 807B-M0012-F12 2 20 + 3.0 246 807B-M0012-G05 15 299 7.9 157 807B-M0013-A12 3 3 + 6.8 63.9 + 807B-M0013-B04 1 4 + 12.5 101 807B-M0013-C03 1 299 + + 38.4 177 807B-M0013-F06 1 1 + + + 9.3 162 807B-M0013-G05 1 20 + +/· + 17.5 136 807B-M0014-D07 10 10 + + 8.1 206 807B-M0014-D09 13 13 + + 5.2 80.4 807B-M0014-E08 2 2 + + 18.6 151 807B-M0014-F07 1 2 + 8.6 205 807B-M0016-C06 5 299 + 7.2 74.2 807B-M0016-D01 1 299 + 8.5 74 θ07Β-Μ0016-008 1 299 + 12.4 80.3 807Β-Μ0016-Ε01 1 20 + 8.0 465 807B-M0016-F04 1 2 + 13.5 58.9 807B-M0016-F05 15 299 + , 9.0 69 807B-M0016-F08 1 299 + 18.5 113 807Β-Μ0017-Β05 1 1 + +/· 26.1 248 807Β-Μ0017-Β06 1 299 + 8.8 120 807Β-Μ0017-Ε05 1 299 + 4.7 71.1 807B-M0018-C12 2 299 + 11.0 107 807Β-Μ0018-Ε09 3 299 + 10.5 66.8 807B-M0018-G02 1 1 十 + 21.1 98.9 807Β-Μ0019-Α04 1 1 + 5.4 31.1 807Β-Μ0019-Α10 1 1 + 7.1 51 807B-M0019-C01 1 299 + 10.6 80.1 807B-M0019-F06 1 299 + 7.7 99.4 807B-M0019-G07 1 299 + 5.2 31.2 807B-M0020-D01 1 299 + 3.9 51.2 807B-M0020-F06 1 1 + 4.9 53.2 807B-M0020-F12 1 1 + 9.9 67.4 807B-M0020-G01 1 299 + 12.7 68 807Β-Μ0079-Β09 1 2 + +/+ + 8.3 438 807B-M0079-D10 + + + + 4.3 100 + 807Β-Μ0079-Η01 1 20 + + + + 2.5 256 807Β-Μ0079-Η05 1 1 + 2.0 99.3 807Β-Μ0080-Α02 1 299 + 2.5 86.8 807B-M0080-C04 1 20 + 2.5 162 807B-M0080-D06 1 1 + + 2.4 72.7 807B-M0080-F10 1 2 + + 2.7 49.2 807B-M0081-C03 1 1 + + 2.2 84.6 807B-M0081-C05 1 20 + 2.6 158 807B-M0081-D08 1 1 + + 4.0 55.1 807Β-Μ0081-Ε08 1 20 + 5.7 65.1
-137- 97784a.doc 200530267
807B-M0081-F12 249 299 + 6.1 128 + 807B-M0081-G04 1 299 + 2.6 64.1 807B-M0081-G11 1 1 + 3.6 83.6 807B-M0081-H03 1 1 + 9.7 346 +/- 807B-M0081-H07 1- 299 + 2.3 56.4 807B-M0082-B07 1 299 + +/· 2.8 46.4 807B-M0082-C11 1 1 + 4.0 244 807B-M0082-E01 2 299 + + + 4.7 68.8 807B-M0082-E08 1 20 + 3.0 154 807B-M0082-F04 1 20 + 3.1 136 807B-M0082-F11 1 299 + 6.1 32.5 807B-M0082-H06 2 299 + + 5.1 103 807B-M0083-B10 1 299 + + 2.9 45 807B-M0083-E10 1 299 + + 3.7 47.9 807B-M0083-E11 3 4 + 5.1 34.6 + 807B-M0084-C03 1 20 + 2.0 53.9 807B-M0084-C11 1 2 + 3.7 52.5 807B-M0084-E07 1 299 + + + 4.4 46.7 807B-M0084-F03 1 1 + 3.6 49.6 807B-M0084-F08 3 299 + 5.8 51.5 807B-M0084-H05 2 20 + + 2.4 118 807B-M0085-B12 1 20 + + 7.9 95.3 807B-M0085-C01 1 1 + 5.5 69.7 807B-M0085-E01 1 20 + 2.8 49.5 807B-M0085-E10 1 299 + + + + + + 5:8 47.5 807B-M0085-G03 1 1 + 2.2 52.8 807B-M0085-G07 1 20 + 4.2 83.7 807B-M0085-G08 1 299 + 3.8 42.2 807B-M0086-C06 1 299 + 4.8 59.5 807B-M0086-D03 1 20 + 3.7 159 807B-M0086-E08 1 2 + 2.6 73 807B-M0086-G03 2 2 + 3.7 43.8 138- 97784A.doc 200530267
*^Ru " Rus^^二^撕复*^^^ **澌RU : >犛辨里雒命 807A-M0027-E11 807A-M0026-F05 807A-M0028-B02 1 807B-M0083-E11 | 807B-M0081-H03 807B-M0081-F12 807B-M0079-D10 807B-M0013-A12 807B-M0009-F06 807B-M0009-C03 807B-M0004-H03 807B-M0004-F10 807B-M0004-F06 807B-M0004-C05 807B-M0004-C04 807B-M0004-A05 807B-M0004-A03 | 807B-M0001-B07 分離株名稱 m CJl m CJl m cn E24 E24 E24 m ro ro Q〇 m ro CaJ 2 m E24 m fO N) 2 m IO "D Ca) m N) ho Tl CO m Ί3 CO E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P1 + + + +十 + Τ' + ++ ++ 之 之 ++ 之 之 之 之 之 ++ 之 IHC + + + + + + + + < + 1 1 • K 1 1 + + ELISA CTD z Ό Ϊ T3 CD 〇 Ϊ z 〇 Ϊ 〇 〇 〇 "Ό i o^ .穿 CD 00 〇 Ca) cn ro |NJ —k cn 隹 s 低RU* -JL o | 低 RU* | | 59.17Π | 無RU“l 無 RU** 丨無RU**| 1 無 RU** | | 無 RU** | | 無 RU**| | 無 RU** | 無Rir 無 RU** 低RU* 1 CTD 1 & W 55* 〇 〇 i LM5l u | 低 RU* | L 728 1 | 200 | L 104 I L— 361 | L225 I 509 208 〇 396 I 25.79 I I .172 I L 163 I 低rlt 低RU* 低RU* 1 1 1 1 ! 1 t c 1 t 1 1 1 1 1 1 Γ 1 ELISA | VLDL 洳17 :雄CTD^芽SFab狳命^蘇 97784a.doc -139- 200530267 • · 807B-M0079- D10 807B-M0013- A12 807B-M0009- F06 807B-M0009- C03 807B-M0004- H03 807B-M0004- F10 807B-M0004- F06 807B-M0004- C05 807B-M0004- C04 807B-M0004- A05 807B-M0004- A03 807B-M0001- B07 分離株名稱 E22&E23 P9, E24 E24 E22P9, E24P3 E22 P9, E24P3 E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P1 +++丨 _I + + + 1 1 秦 1 十++ + IHC + + 1 + + + 1 之 + + + CTD ELISA p4, p8 (P3, P9), p4, p8 p4, p9 I p4,p9 p4，p9, (P8) J P4, p8, _P9_J ρ4· p9 p4, p9 p4, p9 (P1.P6) p4, p8, P9 p1,p6 JVJ 03 fO Ol 無 RU** 無 RU** 無 RU；* 167 CJ Ol [hCTD I 親和力 Biac〇re (nM) ro Ca> 234 無 RU“ 無 RU** 無 RU** 無 RU** 無 RU** 無 RU** 無 RU** <h,RCT D | mCTD | -Jb ro σ> 無 RU** 無 RU** 無 RLT* 無 RU** Ca> σ> pCTD 8.04 D 43.64 無 RU** 1.00 11.55 1.00 6.72 0.97 8.68 17.42 0.17 Ό -b 10.6 0.27 ! 刀 13.74 73 o ho 0.462 1.202 2.528 0.309 1.11 0.248 0.233 0.242 0.214 0.273 2.14 I VLDL ELISA (〇.D)t +++ ++ 之 +++ +十 ++ 之 之 之 + > + +++ hCTD ELISA +++ 之 之 +++ + + 之 + > 之 之 + ++ mCTD +++ 之 之 +++ ++ + 之 之 之 ++ +++ pCTD -140- >18 :雄 CTD^宑SIgGsi:命烊钵 97784A.doc 200530267 • · M&RU : §条贫二.一姊复t粦含b **澌RU :>犛瓣里雒呤 t VLDLELISA :^i:VLDL ‘0>5_^/咖半 it#shIgG2xtfrspp^s20 807A-M0027- E11 807A-M0026- F05 807A-M0028- B02 807B-M0083- E11 807B-M0081- H03 807B-M0081- F12 m αι m αι m cn E24 E24 E24 + + + 1 + + + + (D CD CQ 2 cn N3 Ol ο 無 RU** 無 RU** 無 RU** 2.679 0.221 2.88 0.285 + +++ ++ 1 +++ + 1 1 1 +++ + 97784a.doc 141 · 200530267
807B-M0079-D10.1 807B-M0004-A03.1 807B-M0009-F06.1 807B-M0004-H03.1 807A-M0028-B02.2 | 807A-M0028-B02.1 I抗體 SEQIDNO: 526 SEQIDNO:522 SEQIDNO: 525 SHQIDNO: 524 SEQIDNO: 520 SEQIDNO:518. < SEQIDNO:527 SEQIDNO; 523 1 SEQIDNO: 521 SEQIDNO:519 o r 蘇 枷21 :刼湼铖539-548澳S:弊涩
807B-M0079-D10.1 807B-M0004-A03.1 807A-M0028-B02.2 807A-M0028-B02.1 Lambda Lambda Kappa I Kappa I pop 糸、 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLA/CLISDFYPGAVWAWKADSSPVKAGVEmPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS RTVAAPSVRFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC RTVAAPSVFlFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPReAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKWACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 徵 脔 Μ (PI 807B-M0079-D10.1 807B-M0004-A03.1 807B-M0009-F06.1 807B-M0004-H03.1 807A-M0028-B02.2 807A-M0028-B02.1 s 尜 袭 SYELTQPPSVSVSPGQTASJTC QSVLTQPPSASGTPGQRVTISC IDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC piQMTQSPSSLSASVGDRVTITC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC < AGDELGNKYAS SGSSSNIGSNTVN KSSQSLLHSNGYNYLD QASQNIDNYLN RTSQDIRNHLG RTSQDIRNHLG LV-CDR1 WYQQKPGQSPVLVIY WYQQLPGTAPKLLIY WYLQKPGQSPQLLIY WVQQKPGKAPKLLIY WYQQKPGKAPKRtlY WFQQKPGKAPQRLIR 卜V-FR2 QDRKRPS NNNQRPS LGSNRAS AASSLQS EASILQS EASILQS LV-CDR2 GIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYC GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC GVPSRFSGSGSGTDFTL 了丨 SSLQPEDFATYYC GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC GVPSTFYGSGYGREFTLTISSLQPEDFATYYC Lv-FR3 QSWDSSSVI AAWHDGLNGPV MQALQTIT QQSYSTPRT LQYDSFPYT LQYDSFPYT 6 o u FGGGTKLTVL FGGGTKLTVL FGQGTRLEIK FGQGTKVEIK FGQGTKLEIK FGQGTKLEIK LV-FR4 _19 :忤澍雔 漆雜SVL膝S铕&踝如湮 97784A.doc -142- 200530267 • · 807B-M0079- D10 807B-M0013- A12 807B-M0009- F06 807B-M0009- C03 807B-M0004- H03 807B-M0004- F10 807B-M0004- F06 807B-M0004- C05 807B-M0004- C04 807B-M0004· A05 807B-M0004- A03 807B-M0001- B07 分離株名稱 E22&E23 P9, E24 E24 E22 P9, E24 P3 E22 P9, E24P3 E22 P4 E22 P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22P4 E22 P4 E22P1 5 +++ + + 3 + f 1 1 1 +++ + IHC2 + + 1 + + 十 曾 十 + + CTD ELISA p4，p8 (p3,p9), 1 一P4，P-8」 p4，p9 p4，p9 P4，p9，, M) p4, p8, p9 p4,p9 p4,p9 p4,p9 (pl,p6) p4，p8，p9 pl，p6 斧 1—^ to UJ 無RU3 無RU3 無RU3 1—A 3 u> hCTD 1 親和力 Biacore (W) to Κ) u> 234 | _1 無RU3 -1 無 RU3 j 無RU3 無RU3 無RU3 無RU3 無RU3 <h,PCT D mCTD Η- ro 〇\ 無RU3 無RU3 無RU3 無RU3 On 1 pCTD I 8.04 43.64 無RU3 1.00 11.55 1.00 6.72 0.97 8.68 17.42 0.17 1.05 T3 00 10.6 0.27 13.74 v〇 +++ t Ϊ ί ++ + 1 1 1 t ++ i VLDL ELISA5 L +++ 1 科1 +++ ! _1 + + > :之 +++ +++ hCTD w E C/i K +++ + 1 之 1 ++ i mCTD +++ + 1 •去 + +++ Ipctdj _22 :雄CTD^萍SIgo雒命烊舞 97784A.doc -143 - 200530267 • · ?d· :>鸾 WIHC :淬迹茹耻 AIIAD^^s^^;&a>l_^/»^^#shIgG。W^RU :>犛鄉溲據命。%*RU : RUS4M& 二一妍Mi^^b。 <LDL ELISA :^1: A 織 VLDL ‘I沴雒命复粦00003-100^^/州半sit#h!gG。 W^LISA :/ 枨淠辩一咖織 CTD -¾琴雒命二适箕00003-100_^/»半sit 峰 hlgG。 807A-M0027- E11 807A-M0026- F05 807A-M0028- B02 807B-M0083- Ell 807B-M0081- H03 807B-M0081- F12 W u\ m Lh E24 E24 E24 + 5 + 1 3 p一 CL + + + + 2 ο 〇 VO to <1 00 5； Lf\ to Ux 無RU3 無RU3 無RU3 ί 拼丨 +++ 1 土 + ΐ +++ +++ + - + + tT D- 口一 CL T 1 +++ + tT CL· 3一 b. 4·++ 1 +++ + 97784a.doc -144- 200530267
pd:>奔<rLDLELISA :^i:A纈 VLDUi琴雒命 i-moo003-loo_^/4 半S嵐峰 hlgG。JHC :淬 ^gp/psl^濟 S 巖聆第豸乂 ia>1.5IL8_^/» 半s^#EgG^*tiQDs:^>i、l±rrb^hcTD£ 贫。dTDELISA :^¾^¾'^?©洚$咖繳 CTD 二 | 琴雒呤 ijl§ooo;MOO®^/»fhs:itthIgG。 807B-M0079-D10.1 807B-M0079-D10 807B-M0004-A03.1 807B-M0004-A03 807B-M0009-F06.1 807B-M0009-F06 807B-M0004-H03.1 807B-M0004-H03 807A-M0028-B02.2 807A-M0028-B02.1 807A-M0028-B02 分離株名稱 n.d.1 Ό n.d. (p1，p6)p4, _PSiP?_ n.d.1 n.d. a Ϊ 00 3 Q. n.d. 2 穿 3 CL 13 Q. 24.4 12.2 非常低 的結合 L14；8 —Jk GO | 10.8 I 親和力 (Biacore (nM)) ++ +++ 1 ++ 1 +++ 1 ++ +++ + + +++ VLDL ELISA2 ++ ++ +w ++ + ++ +++ ++ ++ ++ ++ IHC3 (組減） +++ +++ +++ +++ 1 +++ +++ + + 屮++ +++ hCTD ELISA4 +++ +++ + + 1 + 1 1 + +++ +++ mCTD +++ +++ + ++ 1 ++ ++ + + ++ +++ pCTD 19+/-15 7 +/-1.4 78 +/- 43 205 +/- 81 42 +/- 17 23+/-9 22+/-16 53 +/- 25 27+/-7 67+/-38 34+/-15 m ^ » g雜 _丨丨+ $ m s 系it Hi (Q 二 aa‘ >23 :忤澉離 >^JL~IgG^CTDt荦笫s雒命 97784a.doc -145- 200530267
< < Η C/3 5« o Z 2 r K 〇 W σ > |胺基酸| to I 91% 1 U\ to ? Ϋ 98% N> t to U\ 88% U> ? > U\ to 容 14% to 65% II > 19% ! -------- -—i v〇 60% in | > 16% 84% a\ 1 o I 79% I K) 10% NJ to H to 98% 00 O 70% Lti K) 21% K> H A 枷24 : 807B-M0004,A03=^TFab^_麻E&39 侖箅雔> 97784A.doc -- 200530267
K； < Η ζη 〇 2 r K 〇 W 〇 |胺基酸| 95% K) H-* ? Η A 18% | 73% 1 K) κ> ? Ϋ ο to -Ρχ 75% 1 NJ u\ μ VO Ν) 82% 4^ 1 38% 46% to ' Ό υ\ ? V ο 66% to VO 客 to as ? Η 3 | 77% 1 Κ) VO <ϊ to •^ι ? Ϋ to to to 84% 00 b Ό 11% 73% κ> 1 Ο K) 77% U\ μ Ln — 1 3 >25 : 807BiM0004-H03H^TFab^i!w麻任54 龠答雜> :铖一墙今 97784A.doc -147- 200530267
K： < Η (Λ 〇 2 § r N-( a Ο W σ Ο > 1胺基酸ι 4^ KJ\ N) N> U\ 容 to * 73% Η-Α > 83% 1 K) S) * -fx Ki * Κ) ? ΐ Β 88% N) to s> ? 1 92% | ν-Α 4^ 1 & 85% i * <χ 1 93% Κ) — 1 82% N> s? κ> — ? Η A 93% to >-* 00 II K) to to to 77% 1-^ ο 71% K) • Ό <1 to KJ\ κ> ί 3 >26 : 807B-M0004,H03=^7Fablfr^麻EE-54 畲答雜 > :铖2座今 97784A.doc -148- 200530267 表27 : 807B-M0079-D01=為了Fab生產選出33個純種系 -胺基—紅 1(WT=G) 2(WT=L) 3(WT=Y) 4(WT=R) A 11% 6% D 3% F 9% G 69% 3% H 11% 9% I 3% K 3% L 86% 3% 17% M 6% N 6% P 3% 0 3% 9% R - 43% S 14% 6% 3% T 3% V 3% 3% w 3% Y 57% 6% Stop 2% 表28 ·· 807A-M0028_B02_CTD=為了Fab生產選出60個純種系 胺基酸_ 1(WT=S) 2CWT=V) 3(WT=L) 4(WT=L) 5(WT=D) 6(WT=Y) A 18% 2% 2% 2% D 2% 92% E 2% 2% F 2% 19% 3% G 19% 3% Η 3% 23% 2% 11% I 23% 2% 2% 2% K 16% L 2% 87% 52% 2% Μ 3% Ν 2% 11% Ρ 2% 2% 3% 3% 0 2% 3% R 2% 3% S 57% 8% τ 2% 2% 2% 3% V 66.50% Υ 2% 2% 29% 97784A.doc -149- 200530267 表29 : 807A-M0028-B02-原纖維=為了Fab生產選出12個純種系 胺基酸 1(WT=S) 2(WT=V) 3(WT-L) 4(WT=L) 5(WT=D) 6(WT=Y) A 33% D 100% F 25% G Η 8% 17% 17% I K 8% L 92% 58% Ν 17% 0 8% R 8% S 67% 17% V 92% Y 33% 97784A.doc 150- 200530267
C Η 05 2 2 r HH ffl 〇 W 〇 > |胺基酸| 100% ! ΐ < 92% 〇〇 Ϋ 〇 60% | 12% 1 20% 1 II § 12% 60% 〇〇 00 •U 1 GT) 76% 00 | 12% | -u (Μ Η Η 100% σ\ 16% 60% 24% ? Η > 4^ 96% 00 96% Ό Η δ 〇〇 〇〇 4^ | 16% | 14% 1 56% η 1 Η A >30 : 807BIM0009-F06=^TFablfrN麻E&24 兪答雜 > 97784A.doc 151 - 200530267 表31 : 807A-M0004-A04，原始純種系和變體的Biacore分析
純種系 HV-CDR3 Biacore koff kon KD 排序 排序 nM 1/s 1/Ms nM koff KD * 807B-M0004-A03/WT SIAAAGTDY 234 0.0294 3.18E+05 9.26E-08 27 13 807B-M0004-A03/WT SIAAAGTDY 232 0.0275 2.54E+05 1.08E-07 23 16 807B-M0004-A03/M0117-A04 SIAADGIDY 181 0.0341 ND 3.07E+03 33 41 807B-M0004-A03/MO117-A12 SIAATRTDY 239 0.0215 1.47E+05 1.46E-07 10 28 807B-M0004-A03/M0117-B03 SIAAARTEY 192 0.0262 3.29E+04 7.97E-07 21 36 807B-M0004-A03/M0117-B04 SIAPSGTDY 210 0.132 6.22E-04 212 43 40 807B-M0004-A03/M0117-B05 SIAPAGTDH 224 0.0297 2.45E+05 1.21E-07 28 22 •807B-M0004-A03/M0117-B11 SIAEAGTDY 245 0.0464 3.02E+05 1.54E-07 35 29 807B-M0004-A03/M0117-C04 SIAVAGTDY 193 0.0902 1.25 0.072 41 38 807B-M0004-A03/M0117-C07 SIAGAGNDY 186 0.0306 2.40E+05 1.28E-07 30 23 807B-M0004-A03/M0117-C09 SIAAAGTDH 280 0.0188 2.53E+05 7.44E-08 6 10 807B-M0004-A03/M0117-C11 SIGAAGTDY 263 0.0767 0.0967 0.788 39 39 807B-M0004-A03/M0117-C12 SIAASGTDY 134 0.0284 3.95E+05 7.22E-08 26 8 * 807B-M0004-A03/M0I17-D03 SIAAARTDY 199 0.0128 9.45E+04 1.34E-07 3 25 807B-M0004-A03/M0117-E06 SIOAAGTDH 123 0.0247 1.96E-05 4.21E+03 15 42 807B-M0004-A03/M0117-E12 SIASPGTDY 228 0.0266 1.95E+05 1.37E-07 22 .27 * 807B-M0004-A03/M0117-F05 SIASAGTDH 290 0.0139 2.22E+05 6.13E-08 4 4 807B-M0004-A03/M0117-F11 GISTSGTDD 284 0.0243 2.08E+05 1.15E-07 14 19 807B-M0004-A03/M0117-F12 SIAVAGTDY 235 0.0906 1.82E-05 4.96E+03 42 43 * 807B-M0Q04-A03/M0117-G01 SIASARTDS 256 0.0103 1.66E+05 6.07E-08 1 3 807B-M0004-A03/M0117-G03 SIAAPGTDY 220 0.011 1.92E+04 4.84E-07 2 35 -807B-M0004-A03/M0117-G04 RIAASGTDY 92 0.049 4.42E+05 1.20E-07 36 21 807B-M0004-A03/M0117-G05 SIAATGKDH 280 0.0815 9.94E+04 8.24E-07 40 37 807B-M0004-A03/M0117-G07 SIAAAGSDS 471 0.0283 1.35E+05 2.23E-07 25 33 807B-M0004-A03/M0117-H06 SIGASRTDY 336 0.0502 3.42E+05 1.68E-07 37 31 807B-M0004-A03/M0117-H11 SIASAGTDL 217 0.0205 2.87E+05 6.97E-08 8 6 807B-M0004-A03/M0118-A03 SIAAAGNDY 167 0.0254 3.51E+05 7.12E-08 17 7 * 807B-M0004-A03/M0118-B09 SIAADRTDY 252 0.0231 4.78E 十 05 4.70E-08 11 1 807B-M0004-A03/MO118-B11 SIAESGTDY 203 0.0298 3.34E+05 9.06E-08 29 12 807B-M0004-A03/M0118-C04 SIASSGTDH 213 0.0205 3.64E+05 5.47E-08 9 2 -807B-M0004-A03/M0118-D02 RMAAAGTDY 225 0.0235 9.81E+04 2.42E-07 12 34 807B-M0004-A03/M0118-D03 SIAAAGKDY 281 0.0306 2.90E+05 1.33E-07 31 24 807B-M0004-A03/M0118-D07 SIAATGTDI 263 0.028 2.54E+05 1.19E-07 24 20 807B-M0004-A03/M0118-E10 SIAAAGNDH 179 0.0236 3.19E+05 7.41E-08 13 9 807B-M0004-A03/M0118-E12 SIASAGTDY 267 0.0312 2.52E十 05 1.55E-07 32 30 * 807B-M0004-A03/M0118-F03 SIAASRTDY 230 0.0158 2.36E+05 6.56E-08 5 5 807B-M0004-A03/M0118-F06 SIAAAGTDH 372 0.0194 2.38E+05 7.97E-08 7 11 807B-M0004-A03/M0118-F09 SIAEAGTDY 245 0.0456 2.92E+05 1.78E-07 34 32 807B-M0004-A03/M0118-F12 SISAAGTDY 278 0.0249 1.78E+05 1.37E-07 16 26 807B-M0004-A03/M0118-G03 SIAADGTDY 208 0.0669 6.16E+05 1.14E-07 38 18 807B-M0004-A03/MO118-G05 TIAAAGTDY 267 0.0259 2.42E+05 1.13E-07 20 17 807B-M0004-A03/M0118-G08 SIAAAGHDH 336 0.0256 2.70E+05 1.00E-07 18 14 807B-M0004-A03/M0118-H01 SIAAAGNDY 276 0.0258 2.69E+05 1.00E-07 19 15
*=選出的純種系 97784a.doc 152- 200530267
807B-M0004-H03/M0119-H11 ♦ 807B-M0004-H03/M0119.H09 807B-M0004-H03/M0119-H08 807B-M0004-H03/M0119-H03 807B-M0004-H03/M0119-H01 807B-M0004-H03/M0119-G12 807B-M0004-H03/M0119-G10 807B-M0004-H03/M0119-G08 807B-M0004-H03/M0119-F12 807B-M0004-H03/M0119-F11 807B-M0004-H03/M0119-F10 807B-M0004-H03/M0119-F09 807B-M0004-H03/M0119-F05 ♦ 807B-M0004-H03/M0119-F04 807B-M0004-H03/M0119-F01 807B-M0004-H03/M0119-El 1 807B-M0004-H03/M0119-E07 807B-M0004-H03/M0119-E04 807B-M0004-H03/M0119-EO! 807B-M0004-H03/M0119-C11 807B-M0004-H03/M0119-C08 * 807B-M0004-H03/M0119-C05 807B-M0004-H03/M0119-B07 807B-M0004-H03/M0119-B06 * 807B-M0004-H03/M0119-B05 807B-M0004-H03/M0119-A08 807B-M0004-H03/M0119-A07 * 807B-M0004-H03AVT ERPAGLVKGPARYYSYYMDV DGSARVVKGPRRYYYYYIDV EGMAGVVKFPARHNYHYMDV EGSARMLKGPARCYYYYMDV 〇 I 〇 目 ERSAGVVKGPSRNYYYYMDV EGSAGLVKGPARYYYYYMDV m > 7i < > < < < % Ό < EVSGGWKGPARYYYYYMAL EGSSRAVKGAPRYYYYYMDV ESSARVVNGPAWYYYYYMDA 丨 EGPAGVVKGRARYYSYNMSV ERSVGWIGHARYFYYYMDV EGSAR.VIKGPARYYYYEMDV EGSAGVIKGPARYYYFYMGV EVSARWKCPARYYYYYMDV | ERPSRWKGPTRYYYYYMDV ESSARVVKGLARYYNYYMHV 0 CO < 1 § < EGSAAWKAPAKYYYYYMEV EGSAGVDIGPARYYYYYMNV EFLSVAVFKARPRHYYYYMDV EGSAGVFKGPARYYYYYMDV EGSVGAVKGRARYYYYYMNV EGSSGWKGPARYYYYYMDA EGSAAPVKGPARYYYYDMDI ERSAGVLKGPAWYYYYYMDV EGSAGWKGPARYYYYYMDV l δ !〇 S K> z 〇 〇〇 〇\ to 1 2 ON N> 〇\ OJ 00 VO 〇\ 1 3 5； OJ OS SO 〇\ 00 σ\ «^1 Ni N) σ\ N> s s s Biacore 2.21E-03 1.40E-03 | 4.58E-02 | 7.36E-03 | I 1.06E-02 3.73E-03 1.76E-03 3.33E-03 1 | 2.57E-02 | 3.41E-03 | 5.71E-03 ! 1 1.13E-01 | f 1.72E-03 3.99E-03 1 1.85E-01 Γ 9.69E-03 | | 5.51E-03 I 5.34E-03 | | 3.03E-03 | 7.39E-03 | 7.24E-03 | 1.69E-03 | I7.20E-03 | 2.62E-03| ΓΤ.53Ε-03 1 1 2.66E-01 | 5.94Ε-03Π 1.18E-03 HA 6.55E+03 丨 7.92E+03 8.86E+04 | 1.55E+04 | | 3.66E+04 | 1.56E+04 4.94E+03 to \〇 ?? s 6.16E+03 1.52E+03 8.52E+03 | 8.96E+05 | 8.05E+03 | N> b\ 00 ? o | 1.38E+04 | 7.74E-06 I 4.33E-03 | 1 5.43E+03 | VO s 1.47E+04 | 1.46E+04 | 1.09E+04 | u> 〇\ o 5； Ϊ U» 6.03E+03 | 1.24E+04 | 1.48E+04 | 4.37E+03 i CM g* S3 3.11E-07 1.50E-07 5.76E-07 4.38E-07 ! 2.84E-07 2.36H-07 2.95E-07 σ\ 00 Ψ g 3.93E-06 90-Η89Ί 6.47E-07 | 1.10E-07 | 1.99E-07 1.44E-07 ! | 7.14E-07 | 1.19E+03 7.70E-01 | 6.00E-07 | 3.29E-07 4.70E-07 4.72E-07 | 1.46E-07 3.98E-07 | 4.00E-07 | 1.59E-07 | 4.64E-07 | 1.67E-07 | 2.56E-07 | s 2 S κί to δ 6 to a U> Ln U· ro to VO δ; OJ to KjJ s〇 t — o\ LA U» σ\ g* -πτ- 00 - -4 5; Ui VO 一 00 K) οι KJ% NJ 00 U> 一 U) to u> N) ON o\ § tit 夺V _32 ： 807B-M0004-H03 -^B^^^>^>€»s:Biacore^^ 97784A.doc 153- 200530267
* 卩麻Efrs^»> 807B-M0Q04-H03/M0120-H10 807B-M0004-H03/M0120-H06 807B-M0004-H03/M0120-H04 807B-M0004-H03/M0120-H03 807B-M0004-H03/M0120-G12 807B-M0004-H03/M0120-G 10 807B-M0004-H03/M0120-G04 807B-M0004-H03/M0120-G03 807B-M0004-H03/M0120-G02 807B-M0004-H03/MO120-F07 807B-M0004-H03/M0120-F06 807B-M0004.H03/M0120-F04 807B-M0004-H03/M0120-F03 807B-M0004-H03/M0120-E06 807B-M0004-H03/MQ120-E04 807B-M0004-H03^i0120-E02 807B-M0004-H03/M0120-D05 807B-M0004-H03/M0120-D04 807B-M0004-H03/M0120-C12 807B-M0004-H03/M0120-C07 807B-M0004-H03/M0120-C06 807B-M0004-H03/M0120-C02 807B-M0004-H03/M0120-B11 807B-M0004-H03/M0120-B09 807B-M0004-H03/M0120-B06 | * 807B-M0004-H03/M0120-B05 807B-M0004-H03/M0120-A07 807B-M0004-H03/M0120-A03 EGLAGVIPRAARYYYYYMDL I EGAARAVRRPAGYYHYYMDL EAAAGWKGPARYYYFNMEV 〇 > s o o 5 o EGSAGVVKGPARHYYYYMDI EGSARVVKGPARYYYYYMDV HGSAGVLKGPAKYYYYYMDI 〇 ί Q 達 I ERSAAVVKWPVRYYYYYMDL EGSARVVKGPARYYYYSMW § cn 義 i S EGLAGWKRPARFYYYYMDV ERAARAVKGPSRYYYYYMHV ERSARLLKGPLRYYYYYMDV EGSAVWKRSARYYYYYMNF EGSAGWKGPTRYYYYSMDV EGSSVEVKGPARYYHYYMDV EGSAGWNRSSRYNYYYLDV ERSAGVMKGPTLYYYYYMDV EGSSRLVQWPARYYYYSMDV EGSARFVKGPARYYYYYMDI EGRARVLKGLARYYHYYMDF EGSAGKVIGPAPHYYYYMDV EGSARVVKGPDRYYYYYMAP EGSARVVKGPARYFYYYMDL EGSAGTIKWLVRYYNFYMDV ] EGSARMVKGAARYYYYYMDV o 〇\ N> v〇 as δ 〇\ oo •M* OO oo to Ό S) 〇\ N) v〇 VO Os K) 00 v〇 o s 6.12E-03 [5.71E-03 | 3.22E-03 to w S 1 7.80E-02 1 2.28E-03 1 1.81E-03 | 1.77E-03 1 3.19E-01 1 4.92E-03 ] | 2.94E-03 [3.53E-03 | 3.26E-03 1 1.15E-01 | 1 1.86E-03 1 6.72E-03 | I 2.28E-03 | 1.85E-03 | 4.94E-02 | 1 8.85E-03 | I 3.67E-03I 3.74E-03I 1 eo-Hio*e § s [5.62E-03 | 1 1.40E-03I [3.24E-03 1 E s 1.06E+04 § | 1.46E+04 办 όο m S | 7.72E+04 | 9.65E+03 | 1.09E+04 | 6.24E+03 | 4.67E+02 s | 4.44E+03 5.48E+03 1.09E+04 1 3.93E-03 | 2.35E+03 6.74E+03 | 3.84E+03 | 6.71E+03 § 6.51E+03 5.96E+03 5.68E+02 | 3.50E+02 | 2.05E+04 8.84E-03 4.70E+03 6.77E+03 6.25E+04 | 5.45E-07 | § | 2.16E-07 U> v〇 VO tfl r o | 1.02E-06 | 2.30E-07 | 1.64E-07 | 2.33E-07 | 2.80E-05 | 2.41E-06 | 4.17E-07 | 4.89E-07 | 2.80E-07 | 3.76E+00 | I 3.70E-07 | 8.20E-07 | I 4.81E-07 | 2.07E-07 | § 1.17E-06 | 5.18E-07 1 4.10E-06 | 5.42E-06 3.34E-07 | 4.82E-01 | 2.34E-07 4.48E-07 2.50E-07 OJ VO 00 σ\ to U» 二 Ul 00 CO o On N> OO OO Ui VO U> UJ JO u» 〇\ 1 5 N> 6 二 〇\ to N) - Ln Ul ΰ δ U> u» VD 1 to to 97784A.doc 154- 200530267
807B-M0009-F06/M0128-H11 807B-M0009-F06/M0128-H07 * 807B-M0009-F06/M0128-HO1 807B-M0009-F06/M0128-G09 807B-M0009-F06/M0128-F08 I 807B-M0009-F06/M0128-F02 807B-M0009-F06/M0128-D12 ' 807B-M0009-F06/M0128-D09 807B-M0009-F06/M0128-CO1 807B-M0009-F06/M0127-H05 807B-M0009-F06/M0127-H04 807B-M0009-F06/M0127-G02 807B-M0009-F06/M0127-F11 *807B-M0009-F06/M0127-F09 807B-M0009-F06/M0127-F07 807B-M0009-F06/M0127-E11 807B-M0009-F06/M0127-E10 807B-M0009-F06/M0127-E03 * 807B-M0009-F06/MQ127-D05 807B-M0009-F06/M0127-D01 *807B-M0009-F06/M0127-C10 807B-M0009-F06/M0127-B08 *807B-M0009-F06/M0127-B07 807B-M0009-F06/M0127-AO1 807B-M0009-F06/WT 雜 > VGLSTYGFDI VGMSTYAFDM VGMSNYGFDF VGLPSYSFDI VGMLTYAFDI VGMTHYAFDI VAMSNYGFDL VGISSYGFDI VAMTTYGFDL VGKSTYGFDI VGMFTYAFDT VGVSTYGFDI VGMSTYSFDT VGMYNYGFDI VGLATYSFDL VGIPTYSFDI VGMSTYGFDI VGISTYGFDV VGMATYGFDI VGISTYGFDI VGISTYGFDL VGMTTYAFDV VGMSTYGFDK VGMSTYGLEI VGMSTYAFDI HV-CDR3 to to 1—^ 1—* ON Η-* 1—A § 一 00 s 〇\ N) Ln u> H-* U) v〇 JO to s H—A K) 00 v〇 to o U) U) to UJ OO ►—a to 6 Biacore] |l.31E-02| |8.98E-02j 7.78E-03： |8.98E-02| 7.71E-02I 1.98E-02 2.38E-02 |1.46E-02| |2·41Ε-02| |1.79E-02| I7.87E-02] |1.59E-02| ll.OlE-01] |l.02E-02| |1.02Ε·01| to to w s [l.05E-0^ •念 ψ o to |9.45E-03l |l.45E-02| |l.53E-02| [8.59E-0^ I8.83E-03I to v〇 W S |9.70E-02| §- 8.09E+04 〇 o oo 1.62E+05I 1.24E+05 0.0765 7.91E+04 1.13E+05 7.76E+04 3.70E+04； |8·37Ε+04| Γ0.0435 1 1.47E+05 Γ0.0453 | |l.09E+05| | 0.0628 | |2·61Ε+04| P.43E+04| H-k s ? &97E+04| I5.56E+04] |L74E+05| | 0.0434 | Vi On 〇 1—* w i μ 0.043 i g- |l.62E-07| bo I4.79E-08] 1.72E-07 o |2.50E-07| to W ό 1.88E-07 |6.52E-07j |2.14E-07| — oo ►—a |1.08E-07| to U) I9.38E-08I ON N) |8.57E^07| |1.40E-07| |l.35E-07| |l.34E-07| |2.57E-07| (8.68E-08| μ»a OO U\ as ψ ό H-A to On m to to On ΰ 2 g Os K) H—A K> K) oo U) Lit 00 Q\ to to to Ln U) o ro o K) H-A r〇 Ό UJ H—a — UJ ts> ►—A U> 〇 -4 OS LTi to ts) K> 00 — 00 to g >33 ： 807B-M0009-F06 > 細张答雜^^滞雜sBiacore^^c
97784A.doc 155- 200530267 表34 : 807B-M0079-D10，原始純種系和變體的Biacore分析
純種系 HV- CDR3 koff 1/s * 807B-M0079-D10/WT GLYR 6.02E-03 807B-M0079-D10/M0121-A01 GLHR 1.29E-02 807B-M0079-D10/M0121-A02 GLYG 1.95E-02 807B-M0079-D10/M0121 - A06 GLYH 1.47E-02 807B-M0079-D10/M0121-A08 GLHL 2.14E-02 807B-M0079-D10/M0121 - A11 GIYR 1.43E-02 807B-M0079-D10/M0121-A12 ALAR 1.65E-02 807B-M0079-D10/M0121-B04 GLFR 1.07E-02 807B-M0079-D10/M0121-B05 SLYQ 2.31E-02 807B -M0079-D10/M0121-B12 GLLL 1.71E-02 807B-M0079-D10/M0121 -CO 1 GQYR 1.93E-02 807B-M0079-D10/M0121-C03 GLAR 2.24E-02 807B-M0079-D10/M0121 -DO 1 GLYQ 1.34E-02 807B-M0079-D10/M0121-D05 GLYP 5.93E-03 807B-M0079-D10/M0121-D06 GMYR 1.62E-02 807B-M0079-D10/M0121-E02 ALYS 5.34E-03 807B-M0079-D10/M0121-F02 GLSR 8.02E-03 807B-M0079-D10/M0121-F05 SLYL 1.84E-02 807B-M0079-D10/MO121-F06 GLYL 1.11E-02 807B-M0079-D10/MO121 -F11 GMYV 5.92E-03 807B-M0079-D10/MO121-G03 SLYR 1.22E-02 807B-M0079-D10/MO121 -G10 ALYR 1.03E-02 807B-M0079-D10/MO121-H04 SLYH . 2.03E-02 807B-M0079-D10/MO121-H05 GLYY 1.70E-02 807BrM0079-D 10/MO122-AO1 DLYR 1.65E-02 807B-M0079-D10/M0122-B03 TLHR 2.58E-02 807B-M0079-D10/MO122-DO1 GLHH 2.11E-02 807B-M0079-D10/MO122-D03 GLNR 1.29E-02 807B-M0079-D10/MO122-D05 GLSQ 1.43E-02 807B-M0079-D10/M0122-E06 GLqR 2.59E-02 807B-M0079-D10/M0122-F09 GLFY 8.76E-03 807B-M0079-D10/M0122-F11 GLNL 1.21E-02 807B-M0079-D10/MO122-G07 SLFK 2.17E-02 807B-M0079-D10/MO122-G12 ALYW 6.1 IE-03 807B-M0079-D10/MO122-H11 GVYL 1.32E-02 *=選出的純種系 200530267 表35 : 807A-M0028-B02，原始純種系和變體的Biacore分析
純種系 HV- CDR3 Biacore koff kon KD 排序. 排序 nM 1/s 1/Ms nM koff KD ♦ 807A-M0028-B02/WT SVLLDY 592 1.48E-02 1.73E-K)4 869 72 61 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123·Α04 SVQLYP 120 5.05E-02 0.0776 660000000 74 73 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123-Α05 SVLFIDK 958 8.85E-03 1.16E+04 768 18 57 807Α-Μ0028-Β02ΜΟ123-Α06 FALLDY 247 7.82E-03 2.20E+04 358 13 28 807Α-Μ0028-Β02Μ0123-Α07 SVLFDK 548 6.97E-03 1.96E+04 358 10 27 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123·Α09 TLLLDs 345 1.47E-02 5.85E-03 2530000000 71 74 807Α-Μ0028-Β02/Μ0123·Α10 GVLLDL 385 9.74E-03 2.13E+04 462 27 40 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123·Α11 SVLFDY 398 1.30E-02 1.29E+04 1020 66 67 807Α-Μ0028-Β02/Μ0123-Α12 S.ILFDY 449 I.02E-02 1.36E+04 757 33 56 807Α-Μ0028·Β02/Μ0123·Β01 SVLLDQ 711 9.49E-03 8.59E+03 1110 · 25 70 807Α·Μ0028_Β02/Μ0123·Β03 SNLHDQ 199 1.21E-02 1.12E+04 1080 55 69 _ 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123-Β06 AILLNY 207 7.43E-03 2.89E+04 257 12 15 807Α-Μ0028-Β02/Μ0123-Β08 AVLLDH 471 1.03E-02 1.38E+04 745 34 54 -807Α-Ν40028-Β02/Μ0123-Β10 AVMHDK 858 3.64E-03 1.80E+04 202 1 8 807A-M0028-B02/M0123-C07 SVLFDS 706 1.25E-02 1.32E+04 945 61 63 807A-M0028-B02^0i23-Cl 1 GVLLD! 345 9.78E-03 3.11E+04 31: 29 20 * 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123-D01 CrVLLDK 578 5.62E-03 2.65H+04 212 6 9 807Α-Μ0028-Β02/Μ0123-D03 SVLLDN 710 1.I2E-02 1.09E+04 1030 45 68 ， 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123-D04 SVLHDY 592 1.41E-02 1.22E+04 1160 70 71 807Α-Μ0028·Β02/Μ0123-D06 SVLFDR 510 9.07E-03 2.13E+04 427 20 35 807A-M0028-B02^<0123-D08 SVLLDfC 1013 9.26E-03 1.08E+04 862 23 60 807Α-Μ0028-Β02^10Ι23-Ε05 GGLLDY S84 I.06E-02 1.10E+04 976 37 65 807Α-Μ0028-Β02Μ0123-Ε12 SVMFDY 646 1.I3E-02 1.14E+04 1000 46 66 807A-M0021B02/M0123-F01 SILHDY 1049 1.21E-02 7.34E+03 1660 56 72 ♦807A-M0028-B02/M0123-F04 GILUDY 718 4.82E-03 2.07E+04 233 5 13 807Α-Μ0028·Β02/Μ0123·Π 1 SVIFDY 522 1.26E-02 1.72E+04 739 62 53 807A-M0028-B02/M0123-F12 S1LFDN 737 9.08E-03 L45E+04 630 21 49 807Α-Μ0028-Β02Λν10123-G02 AILLDY 190 1.55E-02 2.09E+04 747 73 55 807Α-Μ0028-Β02/Μ0123-G03 AILLDH 394 1.25E-02 1.76E+04 717 60 52 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123-G12 SILFDT 628 8.17E-03 2.01 E+04 409 15 34 807Α-Μ0028-Β02Λ40123-Η02 AVLLDY 276 l.UE-02 2.77H+04 404 42 33 807Α-Μ0028-Β02/ΜΟ123-Η09 SVLPDN 685 8.78E-03 2.04E+04 434 16 36 807Α·Μ0028·Β02/Μ0123·Η 10 GILLDK 591 6.36E-03 2.85E+04 224 8 10 807Α-Μ0028-Β02/Μ0123-Η11 SVLFDN 619 1.15E-02 1.95E+04 596 48 47 807Α-Μ0028-Β02/Μ0124-Α01 SVLLDS 738 6.01E-03 1.75E+04 344 7 23 807Α-Μ0028-Β02/Μ0124·Α 10 SDLRAE 815 9.75E-03 1.15H+04 855 28 59 807Α·Μ0028-Β02/Μ0124-Α11 GVLLDY 452 8.85E-03 3.47E+04 257 17 16 * 807Α-Μ0028-Β02/Μ0124-Β02 GVLHDY 649 4.40E-03 2.66E+04 166 3 5 807Α-Μ0028-Β02/Μ0124-Β03 SVLLDR 201 1.25E-02 4.88E+04 258 59 17 807Α-Μ0028-Β02/ΜΟ124-Β08 SILHDK. 590 6.37E-03 3.20E+04 200 9 7 *807Α-Μ0028·Β02/Μ0124-Β11 SILFDK 389 4.49E-03 3.82E+04 118 4 2 807Α-Μ0028-Β02/Μ0124-C01 SILLDM 517 1.17E-02 2.00E+04 590 49 46 807Α-Μ0028-Β02/Μ0124-C02 SVPIDH 243 1.24E-02 3.63E+04 344 58 .24 -157- 97784a.doc 200530267 807A-M0028-B02/MO124-C03 PVLLIiF 269 8.87E-03 3.87E+04 231 19 li 807A-M0028.B02/M0124-C04 GVLLEP 509 9.99E-03 2.05E+04 494 31 41 ♦807A-M0028-B02/M0124-C05 GVLFDN 230 3.93E-03 7.01E+04 56 2 1 807A-M0028-B02/M0124-C06 AiLLDK 272 8.08E-03 5.04E+04 162 14 4 807A-M0028-B02/M0124-D02 STLLDH 445 U1E»02 2.07E+04 541 43 43 807A-M0028-B02/MO124-D06 SIHLDY 470 U3E-02 1.40E+04 888 57 62 807A-M0028-B02/M0124-D08 SVTLDA 446 1.20E-02 223E+04 543 53 45 807Α-Μ0028-Β02Λ40 L24-D09 SVLHDF 378 1.30E-02 2.87E+04 459 65 39 807Α-Μ0028-Β02Λ40124-D10 SVLHDS 390 I.39E-02 2.22E+04 634 69 51 807Α-Μ0028-Β02Λ40124-D12 GGLLDK 853 7.07E-03 2.16E+04 328 11 22 807A-M0028-B02/M0124-E02 AVLLDT 459 1.04E-02 2.74E+04 383 35 30 807A-M0028-B02/M0124-E03 AVLHDY 490 1.00E-02 2.21E+04 456 32 38 807A-M0028-B02/M0124-E04 SVLHDQ 272 1.21H-02 3.06E+04 399 54 32 807A-M0028-B02^M0124-E10 GVLLDN 493 9.68E-03 2.74E+04 357 26 26 807A-M0028-B02/M0124-F03 SVLLDH 513 9.24E-03 2.87E+04 325 22 21 807A-M0028-B02^!0i24-F05 AVLHDS 2il 1.19H-02 2.66E+04 451 52 37 807Α·Μ0028·Β02/Μ0124-(303 YVHPDY 655 1.32E-02 1.37E+04 971 68 64 807A-M0028-B02/M0124^307 SVLHDH 516 9.81E-03 2.61E+04 380 30 29 807A-M0028-B02/M0124-G10 AVLLDN 316 1.08E-02 3.87E+04 282 38 18 807A-M0028-B02^10125-C03 SVLLDR 473 1.18E-02 3.12E+04 385 50 31 807A-M0028-B02/M0125-D03 SVLFDY 295 1.11E-02 4.41E+04 254 40 14 807A-M0028-B02/M0125-D06 SVHLDY 161 1.12E-02 8.30E+04 136 44 3 807Α-Μ0028-Β02Λ40 i 25-D09 AVLHDS 639 1.06E-02 1.97E+04 542 36 44 · 807A-M0028-B02/M0125-F07 SVLLDQ 607 1.29E-02 2.06E+04 631 64 50 * 807A-M0028-B02/M0125-F11 SVLPDS 621 1.18E-02 2.39E+04 498 51 42 807A-M0028-B02/M0125-G02 SVLLDH 511 1.32E-02 2.21E+04 607 67 48 807A-M0028-B02/M0126-C09 AVLLDY 329 1.10E-02 3.I8E-KJ4 350 39 25 807A-M0028-B02M0126-E03 AVLLDN 257 1.11E-02 3.86E+04 290 41 19 807A-M0028-B02/M0126-F08 SILFDY 335 9.35E-03 4.07E+04 232 24 12 807A-M0028-B02/M0126-G03 SVLHDN 627 I.28E-02 I.53E+04 846 63 58 807A-MO028-B02/M0126-G07 AVLLDH 221 1.15E-02 5.4IE+04 194 47 6 *==選出的純種系 97784A.doc 158- 200530267 表36 : 807B-M0004-A03、807B-M0009-F06、807A-M0028-B02和變體的 詳細Biacore分析
純種系名稱 kon(1/Ms) koff(1/s) KD (nM) CDR3 807B-M004-A03/WT 1.82E+05 2.34E-02 128 SIAAAGTDY 807B-M004-A03/M0118-B09 3.12E+05 1.96E-02 63 SIAADRTDY 807B-M004-A03/M0117-G01 1.39E+05 7,72E-03 56 SIASARTDS 807B-M004-A03/M0117-D03 2.75E+04 8,36E-03 304 SIAAARTDY 807B-M004-A03/M0117-F05 1.89E+05 1.05E-02 56 SIASAGTDH 807B-M004-A03/M0118-F03 1,35Ε+05 1.16E-02 86 SIAASRTDY
純種系名稱 kon (1/Ms) koff(1/s) KD (nM) CDR3 807B-M0009F06/WT 1.31E+05 4.45E-02 340 VGMSTYAFDI 807B-M0009F06-M0128-H01 8.72E+04 7,99E-03 92 VGMSNYGFDF 807B-M0009F06-M0127-B07 1.00E+05 8.60E-03 86 VGMSTYGFDK 807B-M0009F06-M0127-D05 1.02E+05 9.39E-03 92 VGMATYGFDI 807B-M0009F06-M0127-F09 1.18E+05 1.10E-02 93 VGMYNYGFDI 807B-M0009F06-M0127-C10 1.13E+05 1.62E-02 144 VGISTYGFDL 純種系名稱 kon (1/Ms) koff (1/s) KD (nM) CDR3 807A-M0028-B02 / WT 9,31 E+04 1.58 E-02 807A-M0028-B02/M0124-C05 2J6E+04 5,12E-03 807A-M0028-B02/M0124-B02 6.07E+04 6,77E-03 807A-M0028-B02/M0124-B11 5,23E+04 5.72E-03 807A-M0028-B02/M0123-F04 5,07E+04 7,56E-03 807A-M0028-B02/M0123-D01 9,25E+04 7,85E-03
169 SVLLDY 185 GVLFDN 112 GVLHDY 109 SILFDK 149 GILHDY 85 GVLLDK 純種系名稱 kon (1/Ms) koff (1/s) KD (nM) CDR3 · 807B-M0004-H03/WT 807B-M0004-H03/M0119-B05 807B-M0004-H03/M0119-C05 807B-M0004-H03/M0119-F04 807B-M0004-H03/M0119-H09 807B-M0004-H03/M0120-B05
200 EGSAGWKGPARYYYYYMDV • EGSSGWKGPARYYYYYMDA - ERSVAVFKARPRHYYYYMDV • EGSARVIKGPARYYYYEMDV - DGSARWKGPRRYYYYYIDV - EGSARWKGPARYFYYYMDL
97784a.doc 159- 200530267 表37 :從Biacore篩選中選出之純種系的免疫組織化學法 純種系 807B-M0004-A03 IHC .原始純種系 +/- 807B-M0004-A03/M0117-D03 + 807B-M0004-A03/M0117-F05 + 807B-M0004-A03/M0117-G01 +/- 807B-M0004-A03/M0118-B09 +(+) 807B-M0004-A03/M0118-F03 +/- 純種系 807B-M0004-H03 原始純種系 +/- 807B-M0004-H03/M0119-B05 ++(+) 807B-M0004-H03/M0119-C05 ++(+) 807B-M0004-H03/M0119-F04 ++(+) 807B-M0004-H03/M0119-H09 ++(+) 807B-M0004-H03/M0120-B05 ++ 純種系 807A-M0028-B02 原始純種系 ++ 807B-M0028-B02/M0123-D01 ++ 807B-M0028-B02/M0123-F04 十+ 807B-M0028-B02/M0124-B02 ++ 807B-M0028-B02/M0124-B11 ++ 807B-M0028-B02/M0124-C05 ++ 純種系 807B-M0009-F06 原始純種系 +/- 807B-M0009-F06/M0127-B07 +/- 807B-M0009-F06/M0127-C10 + 807B-M0009-F06/M0127-D05 - 807B-M0009-F06/M0127-F09 +/- 807B-M0009-F06/M0128-H01 +
160- 97784A.doc 200530267 97784a.doc -161 - 200530267
97784A.doc 807B-M0004-A03/M0153-F07 | 807B-M0004-A03/M0153-D03 | | 807B-M0004-A03/M0151-H05 | 807B-M0004-A03/M0151 -FI 2 | 1 807B-M0004-A03/MO151-D09 J 1 807B-M0004-A03/M0151-C05 | 1 807B-M0004-A03/M0151 -B12 ] 1 807B-M0004-A03/M0151-A06 1 807B-M0004-A03/M0150-GO 1 1 807B-M0004-A03/M0150-E12 1 807B-M0004-A03/MQ150-E04 | 1 807B-M0004-A03/M0150-E03 | 807B-M0004-A03/M0150-E01 1 807B-M0004-A03/M0150-D12 ] 1 807B-M0004-A03/M0150-A12 | 1 807B-M0004-A03/MQ150-A07 | 1 807B-M0004-A03/M0150-A04 | 1 807B-M0004-A03/M0149-H09 | 1 807B-M0004-A03/M0149-H07 | 1 807B«M0004-A03/M0149-G11 | 807B-M0004-A03/M0149-F02 807B-M0004-A03/M0149-D04 1 807B-M0004-A03/M0148-E08 ] 807B-M0004-A03/M0148-E05 | 1 開始的名稱 00 m Ο θ 之 Ο CO m 〇 Θ § in S Θ 2： 〇 3 § Θ § C/5 S Θ s c/> S θ § C/5 B B z o s o Θ § C/5 /S Θ 2： 〇 m Θ § 05 m 〇 5 2： 〇 cn S θ 2： 〇 00 m 〇 Θ 2； 〇 m Θ § C/5 S Θ 2： 〇 C/5 s Θ z o oo rrl 〇 Θ g XA B 5 z o in 55 o Θ 2： 〇 C/3 m 〇 3 § m 〇 Θ Z o CO m 〇 6 7L 〇 C/5 m 〇 Θ § HVCDR3_1 1 U> S 〇 UI y o s s s Ui o UJ o U) s y o S K> UJ w UJ to y SEQ1DN0: 327 f SEQIDNO:93 | SEQIDNO:331 1 SEQff)NO:93 1 SEQroNO:325 ] 1 SEQIDNO:328 | 1 SEQIDNO:325 | 1 SEQIDNO:330 | | SEQIDNO:329 | 1 SEQIDNO:328 ] [SEQIDNO:327 | 1 SEQIDNO:325 | SEQff)NO:93 | SEQDONO:325 | 1 SEQIDNO:93 | 1 SEQIDNO:93 | 1 SEQIDNO:93 | | SEQBDNO:327 | | SEQBDNO:326 | 1 SEQIDNO:93 | SEQIDNO:93 | SEQE)N0: 326 1 SEQIDNO:325 | 1 SEQIDNO:93 | LV-CDR1 | SEQIDNO: 333 1 SEQIDNO:94 CO Ξ θ 2： 〇 CO s Θ 2： 〇 Θ § Θ 2： 〇 m Θ o m 〇 Θ 'Z o CO m θ 2： 〇 m Θ § C/5 s Θ 2： 〇 CO m Θ 之 〇 CO s Θ 〇 s o S § CO m s z O CO m a z o CO s Θ 2： o ΚΛ Θ § (Λ B B § m Θ s c/} m § m Θ Z o 05 m 〇 Θ 2： 〇 00 m θ z O LV-CDR2 | Ό u> a u> 〇\ K UJ a oo Ul Ui •^1 a 〇\ u» a Ui w U) a u> S Ui a Ui w a a a u> Ul a u» u» UJ Ui SEQIDNO: 341 1 SEQIDNO:95 | CO s Θ g c/> S θ § C/5 B θ § C/5 Θ 2； o S o Θ § cn m 〇 Θ 之 o 00 m Θ §. CO m θ § CO B 6 § (Λ m θ z o CO ffl Θ § ⑺ θ § m Θ § ⑺ s Θ z： o c/> s Θ g CO B θ 2： 〇 C/3 Θ 2： 〇 m Θ § S o Θ z o CA B B o CO 忽 Θ o CO m 〇 Θ § | LV-CDR3 | w w L»i w UJ Ul UJ Ui ή W w UJ U) Ui u> w Ui — 03 S Θ 2： 〇 CO B θ z o 00 Θ s CO s Θ § S o 5 2； 〇 C/) 〇 θ % O m Θ Z o m θ S GO S Θ 2； 〇 ⑺ Θ § CO s Θ § CO m θ 2： 〇 CO Θ 2； o CO 名 Θ § S o Θ z o CO Θ z o s /O Θ "Z o s o Θ z o CO s Θ 2； o 〇 Θ § o S § 00 S Θ X o CO m θ 2： 〇 00 m 〇 Θ z o 1 HV-CDR1 I oo s S 会 s 会 S s S 会 w 尝 会 会 & OO & s M cn S θ § CO S Θ z o CO s Θ § s o Θ 2： o m Θ § S 0 Θ 1 00 S Θ § 05 m 〇 Θ 2 〇 OO Θ 2 o C/3 B 5 2： 〇 s Θ % o CO Θ § in S θ z o c/> s Θ 2： o S Θ z o B z o Θ § S o Θ g m 3 2： 〇 /O Θ 2： 〇 ζΛ s Θ s CO B θ z o C/5 m θ z o C/3 tfl 〇 1 HV-CDR2 I s δ s s δ s s δ s s s s VO S 念 s s δ S s 念 s s 〇 Θ 2： 〇 w a 之 O s o 3 2； 〇 s o § m Θ 〇 s /O Θ o m Θ § GO Θ z o s Θ 2： o S ο Θ 2： 〇 s 〇 Θ z o m θ O S o Θ § s Θ "Z o S o Θ § m Θ 2： 〇 o Θ § m Θ 2； 〇 m S 2 〇 C/5 S θ § O Θ 乂 o m s z o C/3 m θ 2： 〇 CO m Θ 2： 〇 i LV·完整胺基酸1 u> ON OO L/l U) s oo U> s Ui s s 豸 o Ul s U) KJi oo u> Ul Ul 〇\ U) Ul u> Ul Ui oo Ul NJ u> u» w 给 Ui 00 Ui oo w Os u> u· S o Θ § m Θ § s o Θ § S o Θ § m Θ § a O Θ § ffi o Θ z o S o Θ § m Θ 2： 〇 m Θ § S Θ § C/3 m o Θ 2： o CO m 〇 Θ § Ο Θ § 舊 Θ § m S 2 〇 m Θ 2： 〇 m Θ 2： 〇 Θ g S o Θ 2： 〇 S Θ 之 O (/» >s Θ z o CO Θ S CO iS θ § v〇 U> $ Ui $ S Ui 〇 UI s 次 Ό Ul S v〇 v〇 NO Ui $ v〇 ίο NO v〇 Ul Ui w o Ul Ui S Ό _39 : 807BIM0004-A03S 靼含Λ^:#答雜铷
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807B-M0004-H03/M0l 57-F04 807Β-Μ0004-Η03/Μ0159-Η07 1 807B-M0004-H03/MQI59-Η03 | 807B-M0004-H03/M0159-A09 j 807B-M0004-H03/M0157-G11 | 807B-M0004-H03/M0157-G08 I 807B-M0004-H03/M0157-D10 | 1 807B-M0004-H03/M0157-A08 | 1 807B-M0004-H03/M0156-G08 ] 1 807B-M0004-H03/M0156-DO 1 | 1 807B-M0004-H03/M0155-H08 | 1 807B*M0004-H03/M0155-H06 | 1 807B-M0004-H03/M0155-F08 | 1 807B-M0004-H03/M0155-El 0 807B-M0004-H03/M0155-C08 1 807B-M0004-H03/M0154-H06 | j 807B-M0004-H03/M0154-H03 1 807B-M0004-H03/M0154-G11 | j 807B-M0004-H03/M0154-G08 1 807B-M0004-H03/M0154-G05 1 807B-M0004-H03/M0154-D08 1 807B-M0004-H03/M0154-C07 | 開始的名稱 SEQIDNO: 68 00 θ 2： Ο ΕΛ § in z o GO s z o KA B l GO S i 6 z o c/> E θ § GO S 2： 〇 (Λ m 〇 〇 00 S i CO § § 00 § s o 5 2： 〇 s o o s 0 1 oo 〇 s o z o 00 e z o m 2： 〇 s o z o HV-CDR3 UI a a w a w 认 u> w u> 〇i KjJ ur a w Ui UI ON u> ui u» a Ui Ui a w a w Ui OJ a w u> U> w w 0〇 B § CO θ ζ ο GO Β θ § 00 B l co S Θ S S O 3 § CO § M S 5 2： 〇 S o 5 § cn § W S 2 〇 S O S g S o B 之 o CO S S ΚΛ l GO B O C/5 E s 2： 〇 CO Θ 2： o CO § oo 5 § 00 s 5 § GO E -z o LV-CDR1 〇\ UJ S ν〇 s s w v〇 w S S 〇J $ $ NO UJ S Ui S s Ni v〇 Ui NO UI 00 NO VD w S Ui S u> 00 00 [Λ B θ 2： 〇 ο ζ ο θ 2： Ο y) B Ό 2： 〇 CO 9 § C/3 E θ § cn Θ § w m B z o ? 〇 C/5 3 l C/5 Θ Z o Θ § CO Θ § or> S I ΪΛ Θ 2 〇 C/5 S s 2： o 00 S Θ Z o 00 S 2； 〇 C/5 S B § 0Λ a § CO Θ § CO 1 LV-CDR2 〇〇 u> οο 茭 〇\ u» s UJ s K> W N> Ui 5 Ui oo NJ Ni Ui SI W s OJ 00 K> ro 00 Ul $ Ui 00 cn B 5 g ζ/i θ § C/5 tn /Ο θ 2； Ο m 3 z o m Θ g C/3 Θ g 00 5 i 00 s z o C/5 S z O 0Λ B B z o 00 S % o c/> B z O m Θ g CO S 3 § CO 3 § Z o CO S i 00 Θ Z 〇 GO E l 00 s z o C/5 ? z o 00 ? i LV-CDR3 UJ 00 ο W 00 00 y 00 Ui 00 Ui 00 00 Ui 00 Ui 00 W 00 U> 00 OJ § U) 00 OJ OO w 00 W 00 Uj 00 Ui Ui 00 UJ CO θ Ζ Ο CO 污 θ § ιη 口 ζ ο s i CO s z o C/3 Θ z o CO 日 z o CO Θ 2 〇 CO 5 § S 〇 2： 〇 00 g 2； 〇 CO s s § CO 3 § &0 2： 〇 C/5 m 〇 I cn 日 2： 〇 c/a S 3 § C/5 s 3 z o CO § 00 s 3 z o Vi B z o Vi B s § HV-CDR1 S δ S s 冢 s 裘 冢 a § οο θ § &〇 θ § 00 Θ g CO s s l C/5 Θ § CO E Θ 2 o GO S 3 2 〇 00 s s g CO >S 3 X o 00 男 Θ z o s Θ z o m Θ 〇 00 s 3 g S o Θ X o CO s Θ 2： o CO s Θ z o CO m 〇 § 00 s g 2； o 00 ? 2： 〇 M 1 2 〇 c/> 1 § HV-CDR2 〇\ 2 3 3 3 3 ON 3 〇\ 3 3 〇\ 〇\ 3 On 〇\ 3 3 2 3 Os 3 C/5 3 2 Ο CO 5 § s ο Β 2： Ο C/3 B B s &0 S Θ B CO i w ? § s 5 § GO s B z o CO >§ 2： 〇 CO B Z 〇 CO s Θ 2： o ra Θ 2； 〇 C/3 B θ 之 O CO S 5 2 〇 00 Θ § 00 s Θ § CO Θ 2： 〇 CO s Θ 2： o C/5 B z o 00 B g CO s Θ § LV-完整胺基酸 ft ίδ ο 00 Os LA 厶 NJ •u o S oo 1 u> N) g 8 Ο S S CO 1 § CO m § w S s 2； o C/5 5 21 o m Θ § V) B Θ § m Θ Z o ΧΛ s Θ 2 〇 00 Θ § 00 s 3 Z 〇 m B 2 O y> B B g GO S σ 2： 〇 3 § CO m O Θ s GO s § 00 5 Z 〇 CO ? § 00 3 § CO s 2 o C/3 B g g HV-完整胺基酸j 5 Ul s 5 w s W 5 u> OJ UI 5 u» S OJ 3 Ui VO v〇 5 U) 5 00 UI v〇 U> v〇 >40 : 807B-M0004.H03S:粦含^麸:#答雜>
97784A.doc -163- 200530267
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97784A.doc -164- 200530267
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97784A.doc -165- 200530267 807W丨ΜΟΟΟΛ丨Α03 /M0149-D04 807W丨ΜΟΟΟ么丨Α03 /M0149-F02 807Β-Μ0004-Α03 /Μ0150ΙΑ07 807Ο31Μ000 厶 ΙΑ03 /Μ0150-Ε03 807Β1Μ002-Α03 /M0151-S9 807Α-Μ0028-Β02 /M01691F03 807Α丨Μ0028丨Β02 /Μ0171-Ε03 807Α-Μ0028-Β02 /M0171-S2 807Α-Μ0028ΙΒ02 /M0172-S7 807Β-Μ0004-Η03 /Μ0154-Η06 807W丨 ΜΟΟΟΛ丨ac03 /M0159i09 807A-M002si02 /M0168-D10 807B丨M0004-A03 /MG149-G11
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af CDR3 SIASAGTDH SIASAGTDH SIAASRTDY SIAADPOTDY SIASAGTDH GVLLDK GVLLDiC GILHDY GVIIE^DZ MRSVAV^KA RPRHYYYYS DV EPOSVAVFWA RPRHYYYYS DV GVLFDZ
HV—FR4 WGQGTLVTVWS WGQGTLVTVSS SJGQGTLVTVSS «GQGTLVTVSS WGQGTLVTVScn sGoGT;LVTVcnw WGQGTLVTVSS SGQGTLVTVSS iGQGTLVTVSS WGTiGTTVTVSS sGicGTTVTVWS ViGQGTLVTVSS «GOGTLVTVWW 97784a.doc -167- 200530267 【圖式簡單說明】 圖1顯示在ELISA中，已知單株抗體與生物素基化之 CTD(bCTD)和 VLDL的結合。 圖2顯示噬菌體對bCTD(背景=0.05)和VLDL(背景=0.1)的 結合。 圖3顯示在203噬菌體純種系上bCTD(A)和VLDL(B) ELISA的實例。 _ 圖 4 顯示 bCTD 塗覆之 sFab抗體 M27E11(A)、M28B02(B) 和M26F05(C)的Biacore親和力分析，以及Fab M27E11塗覆 在晶片上（D)的Biacore親和力分析。 圖5為顯示將Fab轉移至pBhl之策略的圖表。 圖 6 顯示抗體 807A-M0028-B02 (M28B02) (A)、807A-M0026-F05 (M26F05) (B)和 807Α·Μ0027-Ε11 (M27E11) (C)對人類 CTD、老鼠 CTD和靈長類CTD的結合。 圖 7顯示對照組抗體PH1(A)和 807A_M0028-B02(M28B02) $ (B)對bCTD和bNTD的結合。 圖 8顯示對照組抗體PH1(A)和 807A-M0028-B02(M28B02) (B)對塗覆之VLDL的結合。 圖9顯示在塗覆之bCTD(0.05微克/毫升）與過量VLDL或 在溶液中之CTD之間的競爭ELISA中之抗體結合的結果。 圖10顯示在CTD -塗覆的晶片上，作為Fab (上方）和IgG(下 方）之 807A-M0026-F05(M26F05)的 Biacore分析。 圖11顯示在CTD-塗覆的晶片上，作為Fab(上方）和IgG(下 *)2 807A-M0027-Ell(A)* 807A-M0028-B02(BM々Biacore 97784a.doc •168- 200530267 分析。 圖12和13顯示在溶液中之bCTD與間接與Biacore晶片偶 連之Fab 807A_M0027-E11(M27E11)的結合。 圖14為顯示用來將V-區從pBhl轉移至pRmk2ai策略的 圖表。 圖15顯示CTD肽的序列。 圖16顯不貫例21的選擇活動。 圖17顯示實例22的選擇活動。 圖18顯示實例23的選擇活動。 圖19顯示π切和黏”抗體的重定格式策略。 圖20顯示在VLDL的存在下，未阻斷在人類AD腦切片中 807A_M0028-B02與斑塊的結合。807A-M0028-B02在活體外 對人類澱粉樣蛋白斑的結合，不受VLDL存在的影響，表示 相對於在斑塊中的CTD，抗體對於在VLDL中的CTD具有極 低的親和力。 圖21顯示sFab抗體純種系在人類AD腦切片上，在活體外 之免疫組織化學（IHC)篩選的結果。藉著免疫組織化學確認 與AD斑結合的數個得自不同選擇的抗體（Fab純種系）。注意 到個別的純種系可能具有相同的短名字，即E11，但卻是得 自不同選擇且不相同的。（C11=807B-M0004-H03 ;(選擇 Α)Ε1 1=807Α·Μ0027-Ε11 ; B2 = 807A-M0028-B02 ;(選擇 B)E1 1=807B-M0083-E11 ； D1 0 = 807B-M0079D 1 0 ； A3 = 807B-M0004-A03 ; A12 = 807B-M0013-A12) ° 圖 22 顯示 807A-M0028-B02 、 807A-M0028-B02.1 和 97784a. doc -169- 200530267 807A-M0028-B02.2對人類、靈長類和老鼠ApoE-CTD之濃度 依賴性結合作用的代表性結果（一式兩份試樣）。 圖 23 顯示 807A-M0028-B02 、 807A-M0028-B02.1 、 807A-M0028-B02.2、807B-M0004-H03、807B-M0004-H03.1、 8G7B-M0004-A03和 807B-M0004-A03.1對人類 VLDL之濃度 依賴性結合作用的代表性結果（一式兩份試樣）。
圖24顯示在得自APP/PS1老鼠之腦組織切片中， 807A-M0028-B02斑結合的檢測： a) 在注射之後4天，807A_M0028-B02的活體内結合； b) 在注射之後7天，807A-M0028-B02的活體内結合。 圖 25顯示在活體内 807B-M0004-H03、807B-M0004-A03、 807B-M0079-D10和807B-M0009-F06之斑結合能力的篩選 結果。顯示在活體内投藥之後，抗-CTD hlgG純種系 B807B-M0004-H03 > 807B-M0004-A03 、807B-M0079-D10 和807B-M0009-F06在APP/PS1老鼠腦切片中的免疫組織化 學表現模式。 圖26顯示在活體外親和力成熟之Fab-純種系在人類AD 腦切片中之斑結合能力的篩選結果。比較野外型純種系 807B-M0004-A03 (wt A03)與親和力成熟的純種系 807A_M0118_B09 (B09)、807B-M0117-F05(F05)、807B-M0117-G01(G01)和 807B-M0118-F03(F03)。在人類AD腦切片上，藉著抗-CTD 結合抗體（Fab純種系）使澱粉樣蛋白斑顯影。 .圖 27 顯示用在 807A-M0028-B02、807B-M0004-H03、 807B-M004-A03、807B-M0079-D10和 807B-M0009-F06之親 97784a.doc -170- 200530267 和力成熟上的策略。 [序列簡單說明] 序列第1號是ApoE-CTD的胺基酸序列。 序列第2號是肽1的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸1至 16)。 序列第3號是肽2的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸17至 32)。 序列第4號是肽3的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸33至 48) 〇 序列第5號是肽4的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸49至 64)。 序列第6號是肽5的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸65至 80)。 序列第7號是肽6的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸9至 24) 〇 序列第8號是肽7的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸25至 40)。 序列第9號是狀8的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸41至 56)。 序列第10號是肽9的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸57 至 72)。 序列第11號是肽10的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸73 至 84)。 序列第12號是在狀4中之抗原決定位的胺基酸序列 97784a.doc -171 - 200530267 (ApoE-CTD的胺基酸53至60)。 序列第1 3號是在肽4和9中之抗原決定位的胺基酸序列 (ApoE-CTD的胺基酸57至64)。 序列第14號是在肽9中之抗原決定位的胺基酸序列 (ApoE-CTD的胺基酸61至68)。 序列第1 5號是在肽1和6中之抗原決定位的胺基酸序列 (ApoE-CTD的胺基酸9至16)。 序列第16號是在肽4和8中之抗原決定位的胺基酸序列 (ApoE-CTD的胺基酸49至56)。 序列第17號是在肽3和8中之抗原決定位的胺基酸序列 (ApoE-CTD的胺基酸41至48)。 序列第18號是肽1和6的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸 1 至 24)。 序列第19號是肽8和9的胺基酸序列（ApoE-CTD的胺基酸 41 至 72) 〇 序列第20號是得自抗體807A-M0027-E11和 807A-M0028-B02之一致CDR3序列的胺基酸序列。 在表8中描述序列第21至164號。 序列第165號是人類ApoE4的胺基酸序列。 序列第166號是人類ApoE3的胺基酸序列。 序列第167號是人類ApoE2的胺基酸序列。 序列第168號是人類ApoE4之成熟形式的胺基酸序列。 序列第169號是人類ApoE3之成熟形式的胺基酸序列。 序列第170號是人類ApoE2之成熟形式的胺基酸序列。 97784a.doc -172- 200530267 在表8中描述序列第171至206號。 在表38至42中描述序列第207至511號。 序列第512號是807A-M0028-B02之親和力成熟純種系之 CDR3區的一致胺基酸序列。 序列第513號是807B-M0004-A03之親和力成熟純種系之 CDR3區的一致胺基酸序列。 序列第514號是807B-M0004-H03之親和力成熟純種系之 CDR3區的一致胺基酸序列。 序列第515號是807B_M0009-F06之親和力成熟純種系之 CDR3區的一致胺基酸序列。 序列第516號是807A-M0028-B02之選擇親和力成熟純種 系之CDR3區的一致胺基酸序列。 序列第517號是807B-M0004-A03之選擇親和力成熟純種 系之CDR3區的一致胺基酸序列。 在表21中定義序列第518至527號。
97784a.doc 173 - 200530267 序列一覽表
<110> ASTRAZENCA AB
DYAX CORPORATION <120>抗體·
<130> N.9071A GCW/PT <140〉 093136755 <141〉2004-11-29 <150> US 60/525,174 <151> 2003-11-28 · <160> 527
<170> Patentln version 3.2 <210> 1 <211> 84 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 1
Ala Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu 15 10 15
Val Lys Glu Gin Val Ala Glu Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala 20 25 30
Gin Gin 工le Arg Leu Gin Ala Glu Ala Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser 35 40 45
Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu 50 55 60
Val Glu Lys Val Gin Ala Ala Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro 65 70 75 80
Ser Asp Asn His <210〉 2 <211> 16 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 2.
Ala Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu 1 5 10 15 97784b.doc 200530267 <210> 3 <211> 16 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 3 Val Lys ；Glu Gin Val Ala Glu Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala 1 5 10 15 <210> 4 <211〉 16 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 4
Gin Gin lie Arg Leu Gin Ala Glu Ala Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser 1 5 10 .15 <210> 5 <211> 16 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 5
Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu 15 10 15 <210> β <211> 16 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 6
Val Glu Lys Val Gin Ala Ala Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro 15 10 15 <210> 7 <211> 16 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 7
Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gin Val Ala Glu Val 1 5 10 15 <21〇> 8 <211> 16 <212>蛋白質 <213〉人類 2- 97784b.doc 200530267 <400> 8 Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala Gin Gin lie Arg Leu Gin Ala Glu 15 10 15 <210> 9 <211> 16 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 9 Ala Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp 15 10 15 <210〉 <211> <212> <213> 質 白類 1016蛋人 <400> 10 Met Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gin Ala Ala Val 15 10 15 <210> <211〉 <212〉 <213〉 質白類 1112蛋人 <400> 11 Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His 5 10 1
<210> <211> <212> <213> <400> 12 8蛋白質 人類 12 Leu Val Glu Asp Met Gin Arg Gin 1 5 <210> 13<211> 8 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 13 Met Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu 97784b.doc 200530267 1 5 <210> 14 <211> 8 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 14 Trp Ala Gly 'Leu Val Glu Lys Val 5 15 8蛋白質 人類 15 Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu 1 5 <210> <211> <212> <213> <400> <210> <211> <212> <213> 1 8蛋人 質 白類 <400> 16 Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp 1 5 <210> 17 <211> 8 <212>蛋白質 <213> Homo sapiens <4〇〇> 17
Ala Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser 1 5 <210> <211〉 <212〉 <213〉 質白類 1824蛋人 <4〇〇> 18 Ala Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu 15 10 15 Val Lys Glu Gin Val Ala Glu Val 97784b.doc -4- 20 200530267 <210> 19 <211> 32 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 19 Ala Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu 15 10
Pro Leu Val
Glu 15
Asp
Met Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys 20 25
Val Gin Ala 30
Ala
Val <210> 20 <211> 6 <212> 蛋白質 <213> 人類 <220> <221> 1^工5(：_特徵 <222> (2):(3) <223> X =任何胺基酸 <400> 20
Ser Xaa Xaa Leu Asp Tyr 1 5 <210> 21 <211〉 5 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 21
Lys Tyr Ser Met His 1 5 質 白類 2217蛋厂 <210〉 <211> <212〉 <213〉 <400> 22 Gly lie Tyr Ser Ser Gly Gly Lys Thr lie Tyr 15 10 Gly
Ala Asp Ser
Val 15
Lys 97784b.doc 200530267 <210> 23 <211> 6 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 23
Ser Leu Asp Leu Asp Tyr 1 5
<210〉 24 <211> 5 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 24 Met Tyr Met Met Asp 1 5 <210> <211〉 <212〉 <213> 質 白類 2517蛋人 <400> 25
Ser He Trp Pro Ser Gly Gly Gin Thr Trp Tyr Ala Asp
Gly <210> 26 <211> 6 <212> 蛋白質 <213〉人類、 <400> 26 Ser Val. Leu Leu Asp Tyr 1 5 10
Ser Val Lys 15 <210> 2Ί <211> 5 <212>蛋白質 <213> 人類 <400〉 27
Tyr Tyr Ala Met Gin 1 5 -6 - 97784b.doc 200530267 質 白類 2817蛋人 <210> <211〉 <212〉 <21·3> <400> 28
Ser Leu Tyr Pro Ser Gly Gly Asn Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 29 <211> 19 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 29
Gly Arg Gly Asn Tyr Asp Phe Trp Ser Ala Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr 10 15
Met Asp Val <210> 30 <211> 11 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 30
Arg Ala Ser Gin Arg lie Arg Lys Asn Leu His 1 5 l〇 質 L白類 3 7蛋人 <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 <400> 31
Asp Ala Ser Ser Asn Glu Arg 1 5 <210> 32 <211> 9 <212〉 蛋白質 <213〉人類 97784b.doc 200530267 <400> 32
Gin Gin Ser Phe Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <21〇> <211> <212> <213> 33 11 蛋白質 人類 <400> 33
Arg Thr Ser Gin Asp lie Arg Asn His Leu Gly 1 5 10 <210> <211> 34 7 <212> <213> 蛋白質-人類 <400> 34
Glu Ala Ser lie Leu Gin Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 35 9 蛋白質 人類 <400> 35
Leu Gin Tyr Asp Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210〉 <211> <212> <213> 36 12 蛋白質 人類 <400> 36
Arg Ala Ser Gin Ser lie Gly Ser Arg Tyr Leu Ala 1 5 l〇 <210> <211> 37 <212> <213> 蛋白質 人類 <400> 37
Asp Ala Ser Lys Arg Ala Thr 1 5 97784b.doc 200530267 質 白類 3810蛋人 <210> <211〉 <212〉 <213〉 <400> 38
Gin Gin Gly Tyr Asn Trp Pro Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 39 <211> 115 <212> 蛋白質 <213>人類 <400> 39
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Tyr Ser Ser Gly Gly Lys Thr lie Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Leu Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 115 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 40 -9- 97784b.doc 200530267
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Tyr 20 25 30
Met Met Asp Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 3：5 40 45
Ser Ser lie Trp Pro Ser Gly Gly Gin Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Val Leu Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser 115 <210> 41 <211> 128 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 41
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr 20 25 30
Ala Met Gin Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser Leu Tyr Pro Ser Gly Gly Asn Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 -10- 97784b.doc 200530267
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala 85
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95
Ala Arg Gly Arg Gly Asn Tyr Asp Phe Trp Ser Ala Gly Tyr Tyr Tyr 100 105 110
Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 42 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類
<400> 42
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala *Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Arg lie Arg Lys 20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Asp Ala Ser Ser Asa Glu Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Arg Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Phe Ser Ser Pro 85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 43 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類、 <400> 43
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Gin Asp 工le Arg Asn -11 - 97784b.doc 200530267 20 25 30
His Leu Gly Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gin Arg Leu 35 40 45 工le Arg Glu Ala Ser lie Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Thr Phe Tyr 50 55 60
Gly Ser Gly Tyr Gly Arg Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr Asp Ser Phe Pro 85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 44 <211> 110 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 44
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro 15 10 15
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie G丄y Ser 20 25 30
Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu 35 40 45
Leu lie Tyr Asp Ala Ser Lys Arg Ala Thr Gly Val Pro Val Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu 65 70 75 80
Gly Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Tyr Asn Trp 85 90 95
Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 <210> 45 12- 97784b.doc 200530267 <211〉 5 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 45
Phe Tyr Gly Met Val 1 5 <210> 46 <211> 17 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 46
Ser lie Ser Pro Ser Gly Gly Tyr Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 47 <211> 14 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 47
Asp Gly Arg Arg Pro His Tyr Gly Ser Gly Arg Trp Ala Tyr 1 5 l〇 <210> 48 <211〉 5 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 48
Arg Tyr Leu Met Met 1 5 <210> 49 <211> 17 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 49
Val lie Ser Pro Ser Gly Gly Arg Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 l〇 15
Gly 13- 97784b.doc 200530267 <210> 50 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉 人類 <400> 50
Ser 工le Ala Ala Ala Gly Thr Asp Tyr 1 5 <210> 51 <211> 5 <212> 蛋白質 <213〉 人類 <4 00> 51 Asn Tyr Phe Met lie 1 5
質 白類 5217蛋人 <210〉 <211> <212〉 <213> <400>
Trp lie Ser Pro Ser Gly Gly Thr Thr Gin Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210〉 53 <211> 4 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 53
Glu Ala Gly Tyr 1 <210> 54 <211> 5 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 54
Ala Tyr Tyr Met Gly -14- 97784b.doc 200530267 <210> 55 <211> 17 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 55 Val lie Arg Pro Ser Gly Gly Lys Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 56 <211> 10 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 56 Gly Pro His Gly Gin Gly Gly Val Asp Ser 15 l〇 <210> 57 <211> 5 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 57
Glu Tyr Phe Met Thr 1 5 <210> <211> <212〉 <213〉 質白類 5817蛋人 <400> 58 Ser He Arg Pro Ser Gly Gly Lys Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15 Gly <210> <211〉 <212〉 <213> 質 白類 5917蛋1 97784b.doc -15- 200530267 <400〉 59
Val Ser Arg Tyr Tyr Asn Asm Gly Ala Tyr Arg Leu Asp Ala Phe Asp 15 10 15
He <210〉 60 <211> 5 <212> 蛋白質 <213>人類 <400〉 60
Ala Tyr Arg Met Ala 1 5 質 白類 6117蛋人 <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 <400> 61
Tyr lie Ser Ser Ser Gly Gly Val Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 62 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 62
Gly Thr His Leu Pro Gly Val Asp Tyr 1 5 <210> 63 <211> 5 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 63 Gly Tyr He Met Ala 1 5 -16- 97784b.doc 200530267 質 白類 6417蛋人 <210〉 <211> <212〉 <213> <400> 64
Gly He Gly Ser Ser Gly Gly Leu Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys 10 15
Gly <210> <211> <212> <213> 65 4蛋白質人類 <400> 65
Glu Ala Gly Tyr 1 <210> <211> <212> <213> 66 5蛋白質人類 <400> 66
Ser Tyr Pro Met Val 1 5 <210〉 <211〉 <212> <213〉 質 白類 6717蛋人 <400> 67 Gly 工le Trp Ser Ser Gly Gly Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15 Gly <210> <211> <212> <213> <400> 質 白類 6820蛋厂 8 6 97784b.doc 200530267
Glu Gly Ser Ala Gly Va'l Val Lys Gly Pro Ala Arg Tyr Tyr Tyr Tyr 15 10 15
Tyr Met Asp Val 20 <210> 69 <211> 5 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 69
Lys Tyr Gin Met Thr 1 5 <210〉 70 <211> 17 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 70
Val lie Ser Ser Ser Gly Gly Asp Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 71 <211> 17 <212>蛋白質 <213〉人類
<400> 71
Asp Arg Gly Tyr Cys Ser Gly Asn Thr Cys Tyr lie Asp Ala Phe Asp 15 10 15 lie <210> 72 <211> 5 <212>蛋白質 <213〉人類 <4〇0> 72
Pro Tyr Trp Met Phe 1 5 18 · 97784b.doc 200530267
>>>> 0 12 3 1111 2 2 2 2 V V < V 質 3 7赢 7 1 蛋·^ <400〉 73
Gly lie Val Ser Ser Gly Gly Met Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15
Gly 質 白類 7410蛋 1 <210> <211> <212〉 <213〉 <400> 74
Val Gly Met Ser Thr Tyr Ala Phe Asp lie 15 10 <210> 75 <211> 5 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 75
His Tyr Gly Met Ser 1 5 <210> 76 <211> 17 <212> 蛋白質 <213>人類、 <400> 76
Ser lie Arg Ser Ser Gly Gly Arg Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 77 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 77 19- 97784b.doc 200530267
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Trp Asp Tyr 1 5
7777 0 12 3 IX <—I -—I i—I 2 2 2 2 V < V V 質白類 5蛋人 <400> 78
Ser He Trp Ser Ser Gly Gly Leu Thr Lys Gin Ala Asp Ser Val Lys 10 15
Asn Tyr Arg Met Glu 5 1 <210〉 79 <211> 17 <212〉 蛋白質 <213> 人類 <400> 79
Gly <210> <211> <212> <213> 80 4 蛋白質 人類 <400> 80
Gly Leu Tyr Arg 1
> > > > 0 12 3 1—I i—I i—I I—I 2 2 2 2 < < < V 81 5 蛋白質 人類 <400> 81 Trp Tyr Leu Met His 1 5 <210> <211> <212> <213> <400> 質白類 8217蛋A;82 97784b.doc -20- 200530267
Ser lie Val Pro Ser Gly Gly Thr Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 83 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 83
Asp Leu Trp Phe Gly Glu Trp Asp.Tyr
<210> 84 <211> 5 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 84
Trp Tyr Ser Met Val 1 5 <210> 85 <211> 17 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 85
Ser lie Gly Pro Ser Gly Gly Met Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 86 <211> 13 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 86
Asp Gin Gly lie Thr Met Val Gin Gly Ala Met Gly Tyr 15 10 <210> 87 <211> 5 -21 - 97784b.doc 200530267 <212>蛋白質 <213〉人類 <40〇> 87
Val Tyr Ser Met Ala 1 5 質 白類 8817蛋人 <210> <211〉 <212> <213〉 <400> 88
Gly lie Trp Pro Ser Gly Gly Pro Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15
Gly <210> 89 <211> 10 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 89-
Glu Asp Phe Trp Ser Gly Leu Glu Asp Val 1 5 10 <210> 90 <211> 13 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 90
Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ser Glu Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 91 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 91
Arg Asn Asp Gin Arg Pro Ser 1 5 <21〇> 92 <211> 11 22- 97784b.doc 200530267 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 92 Ala Ala Trp Asp Asp 1 5 Ser Leu Pro Gly Trp Cys 10 <210> <211〉 <212> <213> 93 13 蛋白質 人類 <400> 93
Ser Gly Ser Ser Ser Asn He Gly Ser Asn Thr Val Asn 1 5 l〇
<210> 94 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 94
Asn Asn Asn Gin Arg Pro Ser 1 5 質 白類 9511蛋人 <210> <211〉 <212> <213> <400> 95
Ala Ala Trp His Asp Gly Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 96 <211> 11 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 96
Lys Ala Ser Gin Ser Val Arg Ala Phe He Ala 1 5 l〇 <210> 97 <211〉 Ί <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 97 23- 97784b.doc 200530267
Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 98 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 98
Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Arg Tyr Thr 1 5 <210> 99 <211> 16 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 99 Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 100 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 100 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 101 <211> 8 <212> 蛋白質 <213〉 人類 <400> 101
Met Gin Ala Leu Gin Thr Pro Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 質 2 白類 ο 1 <4〇〇> 102 Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala 1 5 10 97784b.doc -24- 200530267 <210> 103 '<211〉 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 103
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 104 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類
<400> 104
Gin Gin Tyr Ala Gly His Pro lie Thr 1 5 <210> 105 <211> 8 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 105
Thr Gly Ala Thr Arg Asp Val Ser 1 5 <210> 106 <211> 8 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 106
Tyr Glu Val Ser Ser Arg Pro Ser 1 <210〉 107 <211> 11 <212> 蛋白質 <213〉 人類 <400> 107
Ser Ser Thr Thr Ser Arg Ala Pro Arg Val Val 1 5 l〇 <210> <211> <212> 108 16 蛋白質 -25- 97784b.doc 200530267 <213〉人類 <400〉 108
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Met His Arg Asn Gly His His Phe Phe Asp 15 10 15 <210> 109 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 109
Trp Ala Ser Asn Arg Ala Pro 1 5 <210> 110 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 110
Met Gin Ala Leu Gin Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210〉 111 <211> 11 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 111
Gin Ala Ser Gin Asn He Asp Asn Tyr Leu Asn
<210> 112 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 112
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> 113 <211> 9 <212> 蛋白質 <213> 人類 <40〇> 113 26- 97784b.doc 200530267
Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 1 5 <21〇> 114 <211> 13 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 114
Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ser Asn Tyr Val Tyr 15 10 <210> 115 <211> 7
<212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 115
Arg Asn Asn Gin Arg Pro Ser 1 5 <210> 116 <211> 11 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 116
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Ala Trp Val 15 10 <210> 117 <211> 16 <212> 蛋白質 <213> 人類' <400> 117
Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 118 <211> Ί <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 118
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 -27- 97784b.doc 200530267 <210> 119 <211> 8 <212>蛋白質 <213〉人類 <4〇0> 119
Met Gin Ala Leu Gin Thr lie Thr 1 5 <210> 120 <211> 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 120
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Arg Trp Leu Ala 1 5 l〇 <210> 121 <211〉 7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 121
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210〉 122 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 122
Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 123 <211> 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 123
Ala Gly Asp Glu Leu Gly Asn Lys Tyr Ala Ser 1 5 l〇 <210〉 124 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 -28 - 97784b.doc 200530267 <400〉 124
Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 125 <211> 9 <212> <213> 蛋白質 人類 <400> 125 Gin Ser Trp Asp Ser
質 6 白類 1211蛋人 <210> <211〉 <212> <213〉 <400> 126
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 127 <211〉 7 <212> 蛋白質 <213〉人類、 <400〉 127
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> <211〉 <212> <213> <400> 8 2 質白類蛋人 8 2
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 質 9 白類 1214蛋人 <210〉 <211> <212> <213〉 <400> 129
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser 4 200530267 1 5 ίο <210〉 130 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 130
Glu Val Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 131
<211> 10 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 131
Ser Ser Tyr Ala Gly Arg Asn Phe Val Val 1 5 l〇 <210> 132 <211> 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 132
Gly Gly Asn Asn lie Gly Thr Lys 工le Val Asn 15 l〇 <210> 133 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 133
Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser 1 5 <21〇> 134 <211> 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 134
Gin Leu Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Pro lie 15 l〇 <210> 135 -30- 97784b.doc 200530267 <211> 123 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 135
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Phe Tyr •20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Ser Pro Ser Gly Gly Tyr Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg, Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Lys Asp Gly Arg Arg Pro His Tyr Gly Ser Gly Arg Trp Ala Tyr 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 136 <211> 118 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 136
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30
Leu Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Ser Pro Ser Gly Gly Arg Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 -31- 97784b.doc 200530267
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 7 0 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg. Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 . 95
Val Arg Ser 工le Ala Ala Ala Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr * 100 . 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 137 <211〉 113 <212>蛋白質 <213> 人類 <400〉 137
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
Phe Met lie Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Trp lie Ser Pro Ser Gly Gly Thr Thr Gin Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Ala Gly Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 138 <211> 119 -32- 97784b.doc 200530267 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 138
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 · 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30
Tyr Met Gly Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val 工le Arg Pro Ser Gly Gly Lys Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Pro His Gly Gin Gly Gly Val Asp Ser Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 139 <211> 126 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 139
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Glu Tyr 20 25 30
Phe Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Arg Pro Ser Gly Gly Lys Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 97784b.doc -33- 200530267
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val S'er Arg Tyr Tyr Asn Asn Gly Ala Tyr Arg Leu Asp Ala 100 105 110
Phe Asp lie Trp Gly Pro Gly Thr Val Val Thr Val Ser Ser 115 120 125
<210> 140 <211> 118 <212〉蛋白質 <213〉人類 <400> 140
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30
Arg Met Ala Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Gly Val Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Thr His Leu Pro Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> <211> <212> 141 113 蛋白質 34- 97784b.doc 200530267 <213〉人類 <400> 141
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 lie Met Ala Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Gly Ser Ser Gly Gly Leu Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Ala Gly Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110
Ser <210> 142 <211> 129 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 142
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Pro Met Val Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Trp Ser Ser Gly Gly Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 -35- 97784b.doc 200530267
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Gly Ser Ala Gly Val Val Lys Gly Pro Ala Arg Tyr Tyr 100 105 110
Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125
Ser
<210> 143 <211> 126 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 143
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 20 25 30
Gin Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Ser Ser Ser Gly Gly Asp Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 - 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Tyr Cys Ser Gly Asn Thr Cys Tyr lie Asp Ala 100 105 110
Phe Asp lie Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 -36 97784b.doc 200530267 <210〉 144 <211> 119 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 144
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr 20 25 30
Trp Met Phe Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Val Ser Ser Gly Gly Met Thr Gly Tyr Ala Asp 'Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val Gly Met Ser Thr Tyr Ala Phe Asp lie Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 質 5 8白類 1411蛋人 <210> <211〉 <212> <213> <400> 145
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Leu Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Arg Ser Ser Gly Gly Arg Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val -37- 97784b.doc 200530267 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65· 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu.Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 '90 95
Ala Lys Gly Ser Leu Ser Ser Gly Trp Asp Tyr Trp Gly Gin Gly.Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 146 <211> 113 <212> 蛋白質 <213〉人類、 <400> 146
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
Arg Met Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Trp Ser Ser Gly·Gly Leu Thr Lys Glu Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 ^ 95
Ala Arg Gly Leu Tyr Arg Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110
Ser <210〉 147 -38 - 97784b.doc 200530267 <211> 118 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 147
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys. Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr 20 25 30
Leu Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Val Pro Ser Gly Gly Thr Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Leu Trp Phe Gly Glu Trp Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 148 <211〉 122 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 148
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr 20 25 30
Ser Met Val Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Gly Pro Ser Gly Gly Met Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 -39- 97784b.doc 200530267
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asπ Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr.Tyr Cys 85 90 · 95
Ala Arg Asp Gin Gly lie Thr Met Val Gin Gly Ala Met Gly Tyr Trp 100 105 110
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 149 <211〉 119 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 149
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Val Tyr 20 25 30
Ser Met Ala Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Trp Pro Ser Gly Gly Pro Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Asp Phe Trp Ser Gly Leu Glu Asp Val Trp Gly Lys Gly • 100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 150 <211〉 110 40- 97784b.doc 200530267 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 150
Gin Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gin 1 5 10 . 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ser Glu 20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Phe Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
lie Tyr Arg Asn Asp Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Gin 65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95
Pro Gly Trp Cys Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210〉 151 <211〉 110 <212>蛋白質 <213> 人類 <400〉 151
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ser Asn 20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Asn Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Gin 65 70 75 80 •41 97784b.doc 200530267
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp His Asp Gly Leu 85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 152 <211> 108 <212〉蛋白質 <213〉人類 <400> 152
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro 15 10 15
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gin Ser Val Arg Ala 20 25 30
Phe lie Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Ser Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Arg 85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 153 <211〉 112 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 153
Gin Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30 42- 97784b.doc 200530267
Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 35 40
Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 110 <210> 154 <211> 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 154
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro 1.5 10 15
Gly Glu Arg Ala Thr Leu 'Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser 20 25 30
Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ala Gly His Pro 85 90 95 lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 155 <211> 105 <212>蛋白質 <213>人類 • 43- 97784b.doc 200530267 <400> ' 155
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Ala Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Ser lie Thr Leu Ser Cys Thr Gly Ala Thr Arg Asp Val Ser Trp Tyr 20 25 30
Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Val Leu Tyr Glu Val Ser 35 40 45
Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Met Ser Gly 50 55 60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala 65 70 75 80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Thr Thr Ser Arg Ala Pro Arg Val Val Phe 85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 156 <211〉 113 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 156
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Met His 20 25 30
Arg Asn Gly His His Phe Phe Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly lie Tyr Tyr Cys Met Gin -44 - 97784b.doc 200530267 85 90 95
Ala Leu Gin Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie 100 105 110
Lys <210〉 157 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類、 <400> 157
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser lie 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Gin Ala Ser Gin Asn lie Asp Asn 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 質 8 O白類 8 5 1昏、 5 1 1 ay /y 1 <210〉 <211> <212> <213〉 <400〉
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 1 ' 5 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ser Asn 20 25 30 97784b.doc -45- 200530267
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Arg Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Gin £5 ,/ 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95
Asn Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 159 <211> 112 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 159
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Ser Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 160 <211> 108 97784b.doc -46- 200530267 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 160
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Arg 20 25 30
Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45
lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 161 <211> 106 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 161
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ala Gly Asp Glu Leu Gly Asn Lys Tyr Ala 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val 工le Tyr 35 40 45
Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Leu 65 Ί0 75 80 -47- 97784b.doc 200530267
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 162 <211〉 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 162
Gin Asp 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Ser lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 163 <211> 110 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 163
Gin Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Ser Val Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 48- 97784b.doc 200530267
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin 35 40
His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe 45
Met 工le Tyr Glu Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Arg 85 90 95
Asn Phe Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 164 <211> 108 <212>蛋白質 <213>人類 <400〉 164
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Arg 工le Thr Cys Gly Gly Asn Asn lie Gly Thr Lys lie Val 20 25 30
Asn Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ala Pro Val Val Val Val Tyr 35 40 45
Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Leu Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 85 90 95
Pro lie Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 165 <211> 317 <212>蛋白質 <213>人類 -49- 97784b.doc 200530267 <400> 165
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Arg Ala Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gin Pro Leu Gin Glu Arg 210 215 220 -50 97784b.doc 200530267
Ala Gin Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly 225 230 235 240
Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gin Val Ala Glu 245 250 255
Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala Gin Gin lie Arg Leu Gin Ala 260 265 270
Glu Ala Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu 275 280 285
Asp Met Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gin Ala Ala 290 295 300
Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His 305 310 315 <210> 166 <211〉 317 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 166
Met Lys Val Leu Trp Ala Ala Leu Leu Val Thr Phe Leu Ala Gly Cys 15 10 15
Gin Ala Lys Val Glu Gin Ala Val Glu Thr Glu Pro Glu Pro Glu Leu 20 25 30
Arg Gin Gin Thr Glu Trp Gin Ser Gly Gin Arg Trp Glu Leu Ala Leu 35 40 45
Gly Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gin Thr Leu Ser Glu Gin 50 55 60
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Leu Met Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu 85 90 95
Glu Glu Gin Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Ser 100 105 110 -51 - 97784b.doc 200530267
Lys Glu Leu Gin Ala Ala Gin Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp 115 120 125
Val Cys Gly Arg Leu Val Gin Tyr Arg Gly Glu Val Gin Ala Met Leu 130 135 140 -Gly Gin Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg 145 150 155 160
Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gin Lys Arg 165 170 175
Leu Ala Val Tyr Gin Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu 180 185 190
Ser Ala lie Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gin Gly Arg Val 195 200 205
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Ala Gin Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly 225 230 235 240
Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu G丄n Val Ala Glu 245 250 255
Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala Gin Gin lie Arg Leu Gin Ala 260 265 270
Glu Ala Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu 275 280 285
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Met Lys Val Leu Trp Ala Ala Leu Leu Val Thr Phe Leu Ala Gly Cys 15 10 15
Gin Ala Lys Val Glu Gin Ala Val Glu Thr Glu Pro Glu Pro Glu Leu 20 25 30
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Leu Met Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu 85 90 95
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Lys Glu Leu Gin Ala Ala Gin Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp 115 120 125
Val Cys Gly Arg Leu Val Gin Tyr Arg Gly Glu Val Gin Ala Met Leu 130 135 140
Gly Gin Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg 145 150 155 160
Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gin Lys Cys 165 170 175
Leu Ala Val Tyr Gin Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu 180 185 190
Ser Ala lie Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gin Gly Arg Val 195 200 205
Arg Ala Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gin Pro Leu Gin Glu Arg 210 215 220
Ala Gin Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly 225 230 235 240 -53- 97784b.doc 200530267
Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gin Val Ala Glu 245 250 255
Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala Gin Gin 工le Arg Leu Gin Ala 260 265 270
Glu Ala Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu 275 280 285
Asp Met Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gin Ala Ala 290 295 300
Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His 305 310 315 <210> 168 <211> 299 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 168
Lys Val Glu Gin Ala Val Glu Thr Glu Pro Glu Pro Glu Leu Arg Gin 15 10 15
Gin Thr Glu Trp Gin Ser Gly Gin Arg Trp Glu Leu Ala Leu Gly Arg 20 25 30
Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gin Thr Leu Ser Glu Gin Val Gin 35 40 45
Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gin Val Thr Gin Glu Leu Arg Ala Leu Met 50 55 60
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Leu Gin Ala Ala Gin Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp Val Arg 100 105 110
Gly Arg Leu Val Gin Tyr Arg Gly Glu Val Gin Ala Met Leu Gly Gin 115 120 125 -54 97784b.doc 200530267
Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg Lys Leu 130 135 140
Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gin Lys Arg Leu Ala 145 150 155 160
Val Tyr Gin Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu Ser Ala 165 170 175 工le Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gin. Gly Arg Val Arg Ala 180 185 190
Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gin Pro Leu Gin Glu Arg Ala Gin 195 200 205
Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg 210 215 220
Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gin Val Ala Glu Val Arg 225 230 235 240
Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala Gin Gin lie Arg Leu Gin Ala Glu Ala 245 250 255
Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met 260 265 270 參
Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gin Ala Ala Val Gly 275 280 285
Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His 290 295
0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < V 質 9 9白姨 1629蛋Ai <400> 169
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Gin Thr Glu Trp Gin Ser Gly Gin Arg Trp Glu Leu Ala Leu Gly Arg 20 25 30 97784b.doc -55- 200530267
Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gin Thr Leu Ser Glu Gin Val Gin 35 40 45
Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gin Val Thr Gin Glu Leu Arg Ala Leu Met 50 55 60
Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu Glu Glu 65 70 75 80
Gin Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Ser Lys Glu 85 -90 95
Leu Gin Ala Ala Gin Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp Val Cys 100 105 110
Gly Arg Leu Val Gin Tyr Arg Gly Glu Val Gin Ala Met Leu Gly Gin 115 120 125
Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg Lys Leu 130 135 140
Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gin Lys Arg Leu Ala 145 150 155 160
Val Tyr Gin Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu Ser Ala 165 170 175 lie Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gin Gly Arg Val Arg Ala 180 185 190
Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gin Pro Leu Gin Glu Arg Ala Gin 195 200 205
Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg 210 215 220
Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gin Val Ala Glu Val Arg 225 230 235 240
Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala Gin Gin lie Arg Leu Gin Ala Glu Ala 245 250 255
Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met 260 265 270 56- 97784b.doc 200530267
Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gin Ala Ala Val Gly 275 280 285
Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His 290 295 <210> 170 · <211> 299 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 170
Lys Val Glu Gin Ala Val Glu Thr Glu Pro Glu Pro Glu Leu Arg Gin 15 10 15
Gin Thr Glu Trp Gin Ser Gly Gin Arg Trp Glu Leu Ala Leu Gly Arg 20 25 30
Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gin Thr Leu Ser Glu Gin Val Gin 35 40 45
Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gin Val Thr Gin Glu Leu Arg Ala Leu Met 50 55 60
Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu Glu Glu 65 70 75 80
Gin Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Ser Lys Glu 85 90 95
Leu Gin Ala Ala Gin Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp Val Cys 100 105 110
Gly Arg Leu Val Gin Tyr Arg Gly Glu Val Gin Ala Met Leu Gly Gin 115 120 125
Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg Lys Leu 130 135 140
Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gin Lys Cys Leu Ala 145 150 155 160
Val Tyr Gin Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu Ser Ala 165 170 175 57- 97784b.doc 200530267 工le Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gin Gly Arg Val Arg Ala 180 185 190
Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gin Pro Leu Gin Glu Arg Ala Gin 195 200 205
Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg •210 215 220
Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gin Val Ala Glu Val Arg 225. 230 235 240
Ala Lys Leu Glu Glu Gin Ala Gin Gin lie Arg Leu Gin Ala Glu Ala 245 250 255
Phe Gin Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met 260 265 270
Gin Arg Gin Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gin Ala Ala Val Gly 275 280 285
Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His 290 295 <210> 171 <211> 330 <212> DNA <213> 人類 <400> 171 caagacatcc agatgaccca gtctccaggc accctgtctt tgtctccagg ggaaagagcc 60 accctctcct gcagggccag tcagagtatt ggcagccgct acttagcctg gtaccagcag 120 aaacctggcc aggctcccag gctcctcatc tatgatgcat ccaagagggc cactggcgtc 180 ccagtcaggt tcagcggcag tggatctggg acagacttca ctctcaccat cagcagcctg 240 gggcctgaag attttgcagt ttattactgc caacagggct acaactggcc tccgtggacg 300 ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa 330 58- 97784b.doc 200530267 <210> 172 <211> 384 <212> DNA <213〉人類 <400> 172 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct tattacgcta tgcagtgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttct ctctatcctt ctggtggcaa tacttcttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagaggtcgc 300 gggaattacg atttttggag tgcgggctac tactactact acatggacgt ctggggcaaa 360 gggaccacgg tcaccgtctc aagc 384 <210> 17 3 <211> 324 <212> DNA <213> 人類 <400> 173 caagacatcc agatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60 accatcactt gccgggcaag tcagcgcata agaaagaatt tacattggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag cccctaacct cctgatctat gatgcatcca gtaacgaacg tggggtccca 180 tcaaggttca gtggcagagg atctgggaca gagttcactc tcaccatcag cagtctacaa 240 cctgaagatc ttgcaactta ctactgtcaa cagagtttca gtagcccctg gacgttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaa 324 >>>> 0 12 3 1111 2 2 2 2 4 5^A類 7 4n> 1 3 D Λ <400〉 174 97784b.doc -59- 200530267 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct aagtactcta tgcattgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttctggt atctattctt ctggtggcaa gactatttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca accctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac a-ctgcagtct actattgtgc gagatcgctt 300 gatcttgact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct caagc 345 <210〉 175 <211〉 324 <212> DNA <213> 人類 <400> 17 5 caagacatcc agatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 60 accatcactt gccggacaag tcaggacatt agaaatcatt taggctggtt tcagcagaaa 120 ccagggaaag cccctcagcg cctgattcgt gaagcatcca ttttacaaag tggggtccca 180 tcaacatttt acggcagtgg atatgggaga gaattcactc tcacaatcag cagcctgcag 240 cctgaggatt ttgcaaccta ttattgtcta caatatgatt ctttcccata cacctttggc 300 caggggacca agctggagat caaa 324 0 12 3 I—I 1—I I—I I—I 2 2 2 2 < < < < <400> 176 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct atgtacatga tggattgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttct atctggcctt ctggtggcca gacttggtat 180 60- 97784b.doc 200530267 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagatccgtc 300 ctccttgact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct caagc 345 <210> 177 <211> 330 <212> DNA <213> 人類 <400> 177 cagtacgaat tgactcagcc accctcagtg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc
tcttgttctg ga.agcagttc caacatcgga agtgagtatg tgtactggtt ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccagact cctcatctat aggaatgatc agcggccctc aggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggcctccag 240 tctgaggatg aggctgatta t.tactgtgca gcatgggatg acagcctgcc tggttggtgt 300 tccggcggcg 330 ggaccaagct gaccgtccta <210> 178 <211> 369 <212> DNA <213>人類 <400> 178 gaagttcaat 60 tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt tcttgcgctg 120 cttccggatt cactttctct ttttacggta tggtttgggt tcgccaagct cctggtaaag 180 gtttggagtg ggtttcttct atctctcctt ctggtggcta tactctttat gctgactccg 240 ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac ttgcagatga 300 acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gaaagatggg agacggcccc actatggttc ggggaggtgg gcctactggg gccagggaac cctggtcacc 360 61- 97784b.doc 369 200530267 gtctcaagc <210〉 17 9 <211> 330 <212> DNA <213〉 人類 <400> 17 9 cagagcgaat tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aataataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatggcatg acggcctgaa tggtccggtg 300 ttcggcggag 330 ggaccaagct gaccgtccta <210> 180 <211> 354 <212> DNA <213〉 人類 <400> 180 gaagttcaat 60 tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt tcttgcgctg 120 cttccggatt cactttctct cgttacctta tgatgtgggt tcgccaagct cctggtaaag 180 gtttggagtg ggtttctgtt atctctcctt ctggtggccg tacttggtat gctgactccg 240 ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac ttgcagatga 300 acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgt gaggagtata gcagcagctg gaactgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc aagc 354 <210> 181 <211> 321 <212> DNA <213〉人類 <400> 181 62· 97784b.doc 200530267 gacatccaga tgacccagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcttgta aggccagtca gagtgttcgc gccttcatag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctctggt gcatccaaca gggccactgg catcccagac 180 aggttcagtg gcggtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 240 gaagattttg cagtgtatta ctgtcagcag tacggtagtt cacggtacac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210〉 182 <211> 339 <212> DNA <213>人類 <400> 182 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct aattacttta tgatttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttgg atctctcctt ctggtggcac tactcagtat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagagaagcc 300 339 <210> 183 <211> 333 <212> DNA <213> 人類 <400> 183 ggctactggg gccagggaac cctggtcacc gtctcaagc gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctccta catagtagtg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccaggaca gtctccacaa ctcctgattt atttgggttc taatcgggcc 180 63- 97784b.doc 200530267 tccggggtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaaccccc 300 actttcggcg gagggaccaa ggtggacatc aaa 333 <210> 184 <211> 357 <212〉 DNA <213> 人類 <400> 184 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60
tcttgcgctg cttccggatt cactttctct gcttactata tgggttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttctgtt atccgtcctt ctggtggcaa gactaagtat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagaggcccg 300 catggtcagg ggggtgttga ctcgtggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcaagc
357 <210> 185 <211> 321 <212> DNA <213> 人類 <400> 185 gacatccaga tgacccagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgta gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg cgtcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctct ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagactttg caacttatta ctgtcaacag tatgctggtc accccatcac cttcggccaa 300 gggacccgac tggagattaa a 321 64- 97784b.doc 200530267
6 8JA類 8 7 N J 1 3 D Λ >>>> 0 12 3 1 1 IX IX 2 2 2 2 V < V V <400> 186 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct gagtacttta tgacttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttct atccgtcctt ctggtggcaa gactcgttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc g'agagttagt 300 cgctactata ataatggtgc ttatcgcctt gatgcatttg atatctgggg cccagggaca 360 gtggtcaccg tctcaagc 378 <210> 187 <211> 315 <212> DNA <213〉人類 <400> 187 cagagcgaat tgactcaggc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccctc 60 tcctgcactg gagccaccag ggacgtctcc tggtaccagc aacacccagg caaggccccc 120 aaactcgtcc tttatgaagt cagtagtcgc ccctcaggcg tttccgatcg cttctctggc 180 tccatgtctg gcaacacggc ctccctgacc atctctggac tccaggctga ggacgaggct 240 gattattact gctcctcaac cacaagtcgc gcccctcgcg tggttttcgg cggagggacc 300 aaactgaccg tecta 315 <210> 188 <211> 354 <212> DNA <213〉人類 65· 97784b.doc 200530267 <400> 188 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct gcttaccgta tggcttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttat atctcttctt ctggtggcgt tacttcttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga agagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagaggcacg 300 cacctcccgg gggttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc aagc 354 <210> 189 <211> 336 <212> DNA <213> 人類 <400> 189
gacatccaga tgacccagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca gatctagtca gagcctcatg cataggaatg gacaccactt cttcgattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct attgggcttc taatcgggcc 180 cccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagactttac actaaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttgggatt tattactgca tgcaagctct acaaaccccg 300 tacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaa 336 <210> 190 <211〉 339 <212〉 DNA <213> 人類 <400> 190 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct ggttacatta tggcttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttctggt atcggttctt ctggtggcct tactgcttat 180 -66- 97784b.doc 200530267 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagagaagcc 300 ggctactggg gccagggaac cctggtcacc gtctcaagc 339 <210> 191 <211> 321 <212> DNA <213> 人類 <400> 191 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctataggaga cagagtcacc 60 atctcttgcc aggcgagtca aaacattgac aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctcgaac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 192 <211> 387 <212> DNA <213> 人類 <400> 192 gaagttcaat tgttagagtc 60 tcttgcgctg cttccggatt 120 tggtggcggt cttgttcagc cactttctct tcttacccta cctggtaaag gtttggagtg ggtttctggt atctggtctt 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca ctggtggttc tggtttgggt ctggtggcct actctaagaa 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc 300 tcggccggag tggttaaagg gccggcccgg tactactact actacatgga 360 tttacgtctt tcgccaagct tacttattat tactctctac gagagagggc cgtctggggc -67- 97784b.doc 200530267
aaagggacca 387 cggtcaccgt ctcaagc <210> 193 <211> 330 <212> DNA <213〉人類 <400> 193 cagagcgaat 60 tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc tcttgttctg 120 gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc ccaggaacgg 180 cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct gaccgattct 240 ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag tctgaggatg 300 aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tgcctgggtg ttcggcggag 330 ggaccaagct gaccgtccta <210> 194 <211> 378 <212> DNA <213〉人類 <400> 194 gaagttcaat 60 tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt tcttgcgctg 120 cttccggatt cactttctct aagtaccaga tgacttgggt tcgccaagct cctggtaaag 180 gtttggagtg ggtttctgtt atctcttctt ctggtggcga tactgcttat gctgactccg 240 ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac ttgcagatga 300 acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagagatcgg ggttattgta gtggtaatac ttgctatatt gatgcttttg atatctgggg ccaagggaca 360 atggtcaccg tctcaagc 378 <210> 195 -68- 97784b.doc 200530267 <211> 333 <212> DNA <213> 人類 <400> 195 gacatccaga tgacccagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 -·;： atctcctgca agtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttagattgg 120 tacctgcaga.^aaccagggca gtctccacag ctcctgatct ctttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgccaggtt cagtggcagt ggctcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggagtt tactactgca tgcaagctct acaaactatc
accttcggcc aagggacacg actggagatt aaa 333 <210> 196 <211> 357 <212> DNA <213> 人類 <400> 196 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct ccttactgga tgttttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttctggt atcgtttctt ctggtggcat gactggttat 180
gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactc.tctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagagtgggg 300 atgtccacct atgcttttga tatctggggc caagggacaa tggtcaccgt ctcaagc 357 <210> 197 <211> 321 <212> DNA <213> 人類 <400> 197 gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 69- 97784b.doc 200530267 atcacttgcc gggccagtca gagtattagt aggtggttgg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta ccccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 198 <211> 354 <212〉 DMA <213> 人類 <400〉 198 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ttggtggttc tttacgtctt 60
tcttgcgctg cttccggatt cactttctct cattacggta tgtcttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttct atccgttctt ctggtggccg tacttggtat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagttt actattgtgc gaaaggctcc 300 cttagcagtg gctgggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc aagc 354 <210> 199 <211> 318 <212〉 DNA <213> 人類 <400> 199 cagagcgctt tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc ctggacagac agccagcatc 60 acctgcgctg gagatgaatt gggtaataaa tatgcttcct ggtatcagca gaagccaggc 120 cagtcccctg tgctggtcat ctatcaagat aggaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct cccactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctctc 240 70- 97784b.doc 200530267 gatgaggctg actattactg tcagtcgtgg gacagcagct ctgtgatatt cggcggcggg 300 accaaggtga ccgtccta 318 <210〉 200 <211> 339 <212> DNA <213> 人類 <400> 200
gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct aattaccgta tggagtgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gt-ttggagtg ggtttcttct atctggtctt ctggtggcct tactaaggag 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagaggcctg 300 taccggtggg gccagggaac cctggtcacc gtctcaagc 339 <210〉 201 <211> 330 <212> DNA <213> 人類 <400> 201
cagtacgaat tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag 120 catccaggca aagcccccaa 180 cctgatcgct tctctggctc 240 caggctgagg atgaggctga 300 ttcggcggag ggaccaagct 330 tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag attcatgatt tatgaggtca ataagcggcc ctcaggggtc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc ttattactgc agctcatatg caggcaggaa ctttgtggta gaccgtccta <210> 202 <211> 366 97784b.doc -71 - 200530267 <212> DNA <213〉人類 <400> 202 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct tggtactcta tggtttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttct atcggtcctt ctggtggcat gactcgttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240
ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagagatcaa 300 gggattacta tggttcaggg agctatgggc tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcaagc 366 <210> 203 <211> 324 <212> DNA <213> 人類 <400> 203 cagagcgctt tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggtactaaa attgtaaact ggtaccagca gaggccaggc 120 caggcccctg tggtggtcgt ctatgataat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcagctgtgg gatagtagta gtgaccatcc gatcttcgga 300 actgggacca aggtcaccgt ccta 324 <210> 204 <211> 357 <212> DNA <213〉人類 <400> 204 cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt 60 -72- 97784b.doc 200530267 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct gtttactcta tggcttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttctggt atctggcctt ctggtggccc tactgcttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagagaagat 300 ttttggagtg gtttggagga cgtctggggc aaagggacca cggtcaccgt ctcaagc 357 <210> 205 <211〉 321 <212> DNA <213> 人類 <400> 205 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagaa ttctctctct ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 6 4A類 o 5 N」 2 3d/ > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 <<<< <400〉 206 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct tggtacctta tgcattgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttct atcgttcctt ctggtggcac tactgtttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 -73- 97784b.doc 200530267 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac actgcagtct actattgtgc gagagaccta 300 tggttcgggg agtgggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc aagc 354 <210> <211> <212> <213> 207 6蛋白質人類 <400> 207
Gly Val Leu Asp His Tyr 1 5 <210> <211> <212> <213> 208 6蛋白質人類 <400> 208
Gly lie Leu His Asp Tyr 1 5 <210> <211> <212> <213> 209蛋白質人類 <400> 209
Gly Val Leu Leu Asp Lys 1 5 <210> <211> <212> <213> 210 6蛋白質人類 <400> 210
Gly Val Leu Phe Asp Asn 1 5 <210> <211> <212> <213> 211 11蛋白質人類 <400> 211 97784b.doc -74- 200530267
Arg Ala Ser Gin Asn lie His Thr Trp Leu Ala 15 10 質 2 白類 1 6 , j2 1蛋人 > > > > 0 12 3 1—I I—I I—I i—I 2 2 2 2 <<<<
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Ala Ser Ser Asp Gly Asn Met Tyr Leu Asn 15 l〇 15 <210> 213 <211> 11 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 213
Arg Thr Ser Gin Gly lie Arg Asn His Leu Gly 15 10 <210> 214 <211> 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 214
Arg Ala Ser Gin Thr lie Ser Arg Tyr Leu Asn 1 5 10 質 5白類 2 1 J / <210〉 <211> <212> <213〉 <400>
Arg Ser Ser Arg Asn Leu Leu His Arg Asn Gly Asn Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 216 <211> 11 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 216
Arg Ala Ser His Gly lie Asn Gly Tyr Leu Ala 1 5 l〇 75- 97784b.doc 200530267 <210> 217 <211> 142 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 217
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 '30
Pro Met Val Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Trp Ser Ser Gly Gly Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ser Ala Arg Val Val Lys Gly Pro Arg Arg Tyr Tyr 100 105 110
Tyr Tyr Tyr 工le Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 130 135 140 <210> 218 <211> 11 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 218
Arg Thr Ser Gin Asp lie Gly Asa His Leu Ala 15 10 <210> 219 <211> 11 <212> 蛋白質 <213>人類、 -76- 97784b.doc 200530267 <400> 219
Gin Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 220 <211> 11 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 220 Arg Ala Ser Gin Asp lie Tyr Arg Trp Leu Val 1 5 10 <210> 221 <211> 11 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 221 Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 222 <211> 11 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 222 Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 223 <211〉 11 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 223
Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser lie His Leu Ala 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 224 11 蛋白質 人類 <400> 224 Arg Ala Ser Lys 1 Ser Val 5 Ala Ser Tyr Val Ala 10 97784b.doc 77- 200530267 <210> 225 <211> 16 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 225
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 226 <211> 11 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 226
Arg Ala Ser Arg Gly lie Arg Asn Asn Leu Ala 15 10 質 7 2白類7 2211蛋人22 <210> <211〉 <212〉 <213〉 <400>
Gin Asp 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Thr Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly lie Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr Pro Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 78- 97784b.doc 200530267 <210> <211〉 <212> <213> <400> 質 8 白類 2211蛋人 8 2
Arg Ala Ser Gin Gly He Thr Asn Tyr Leu Ala 1 5 l〇 <210> <211> <212> <213> <400> 質 9 白類 9 2 1 rv 2 2 1 / 2
Arg Ala Ser Gin Val lie Gly Asn Tyr Leu Ala 1 - 5 l〇 <210> 230 <211> 11 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 230 Arg Ala Ser Gin Ser Val Lys Met Asn Leu Ala 15 l〇 <210> 231 <211> 11 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 231 Arg Ala Ser Gin Thr lie Asn Asn Trp Leu Ala 15 l〇 <210> 232 <211> 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 232 Arg Ala Ser Gin Asp lie Glu Asn Tyr Leu Ala 1 5 l〇 <210> 233 <211> 11 <212> 蛋白質 <213〉人類 97784b.doc 79- 200530267 <400> 233
Arg Ala Ser Gin Asp lie His Thr Trp Leu Ala 15 10
f 4 白·類 2 1蛋人 7777, 0 12 3 X 1 1 1 2 2 2 2 < < < V
Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp Leu Ala 15 10 <210> 235 <211〉 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 235
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Arg Tyr Leu Ala 15 10 <210> 236 <211> 11 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 236
Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Asn Ala Leu Gly 15 10 <210> 237 <211> 112 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 237
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Gly Asn Gly Asn Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45 -80 97784b.doc 200530267
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Met 50 55
Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie S.e：r Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 <210> 238
<211〉 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 238
Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Asn Asp Leu Gly 15 10 <210〉 239 <211〉 11 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 239
Arg Ala Ser Gin Ser Val Asp Ser Trp Leu Ala 15 10 <210> 240 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 240
Gly Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210〉 241 <211〉 7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 241
Lys Val Ser Asp Arg Asp Ser 1 5 -81 - 97784b.doc 200530267 質 2 2白類 2 2411蛋人24 <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 <400>
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val'Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser His Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 243 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉 人類 <400> 243
Ala Thr Ser Thr Leu His Ser 1 5 <210> 244 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 244
Met Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 245 -82- 97784b.doc 200530267 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 245
Ala Ala Ser Lys Leu Gin Ser 1 5 質6 2白類 2411蛋人 > > > > 0 12 3 I—I t—I I—I I 2 2 2 2 < < < < <400> 246
Gin Asp He Val Met Thr Gin Thr Pro Pro Ser Leu Pro Val Asn Pro
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Thr Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80
lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly lie Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr Pro Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu 工le Lys 100 105 110 <210> 247 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉 人類 <400> 247 Gly Ala Ser Thr Val Gin Ser 1 5 <210> 248 <211> 7 <212> 蛋白質 83- 97784b.doc 200530267
<213> 人類 <400> 248 Ala Ala Ser Ser Leu Gin Asn 1 5 <210> 249 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 249 Ala Ala Phe Asn Leu Gin Ser 1 5 <210> 250 <211〉 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400〉 250 Ala Ala Ser Thr Leu Gin Thr 1 5 <210> 251 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <4〇0> 251 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 252 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 252 His Ala Ser Thr Leu Gin Ser 1 5 <210> 253 <211> <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 253 97784b.doc -84- 200530267
Gly Ala Tyr Lys Leu Gin Tyr 1 5 <210> 254 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉 人類 <400> 254 Gly Ala Ser His Leu Gin Ser 1 5 <210> 255 <211> 7 <212〉 蛋白質 <213〉 人類 <400> 255 Gly Ala l Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 256 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 256 Lys Thr Ser Asn Leu Gin Ser 1 5 <210> 257 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 257 Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210〉 258 <211〉 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 258 Val Ala Ser Ser Leu Gin Asp 1 5
85 97784b.doc 200530267 >>>> 0 12 3 t—I I—I f—I Tx 2 2 2 2 < < < < 質D9白類 2 7 蛋Λ3 <400> 259
Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser 1 5 >>>> 0 12 3 i—一 i—I i—I 1 2 2 2 2 V < < < 260 7 蛋白質 人類 <400> 260
Thr Ala Ser Arg Leu Gin Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 261蛋白質人類 <400> 261
Lys Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 262 9蛋白質人類 <400> 262
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe Ala 1 5 <210> <211> <212> <213> 263 9蛋白質人類 <400> 263
Met Gin Gly Thr His Trp Pro Pro Thr 1 5 質 4 2白類 2611蛋人 -86· <210> <211〉 <212> <213〉 97784b.doc 200530267 <400> 264
Gin Asp lie Val Met Thr Gin Thr Pro Pro Ser Leu Pro Val Asn Pro 1 5 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His • 20 25 30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser His Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr ’Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu 工le Lys 100 105 110 <210> 265 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 265
Leu Gin Tyr Asn Asn Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210〉 266 <211> 8 <212> 蛋白質 <213>人類 <400> 266
Met Gin Ala Leu Gin Ala Trp Thr 1 5 <210> 267 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類、 <400> 257 87- 97784b.doc 200530267
Gin Gin Tyr Asp Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 268 <211> 9 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 268
Gin Gin Tyr Asp Ala Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 269 <211> 9
<212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 269
Gin Gin Tyr Lys Thr Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 270 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 270
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210〉 271 <211> 9 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 271
Leu Gin Phe Asn Thr Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 272 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 272
Leu Gin His Asp Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 -88- 97784b.doc 200530267 <210〉 <211> <212〉 <213> 273 9 蛋白質 人類 <400> 273
Gin Gin Tyr Glu Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> <211> 274 8 <212> <213> 蛋白質 人類 <400> 27 4
Gin Gin Tyr Tyr Asn Pro Tyr Thr 1 5 <210> <211〉 <212> <213> 27 5 9 蛋白質 人類 <400> 275
Leu Gin Pro Glu Thr Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 27 6 9 蛋白質 人類 <400> 276
Leu Gin Tyr Gin Thr Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> <211> 277 9 <212> <213> 蛋白質 人類 <400〉 277
Gin Gin Ser Ser Ser lie Pro Tyr Thr 1 . 5 <210> 278 <211> 9 <212>蛋白質 89- 97784b.doc 200530267 <213〉人類 <400> 278
Gin Gin Tyr Ala Asn Trp Pro Phe His 1 5 >>>> 0 12 3 t—I _—II 1—I 2 2 2 2 < < < < 279 蛋白質 人類 <400> 279
Gin Gin Tyr Lys Ala Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 280 <211> 9 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 280
Gin Gin Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 281 <211> 9 <212> 蛋白質 <213>人類 <400> 281
Leu Gin His Asn Thr Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 282 <211> 9 <212> 蛋白質 <213>人類 <400> 282
u e L
G
r h T u e L 0 r p r y T r e s 5 n s A s 1 H >>>> 0 12 3 i—11 -—I i—_ 2 2 2 2 < < < < 質 3 白類 8 昏、 2 9 ay y <400> 283 97784b.doc -90- 200530267
Thr
Gin Gin Tyr Ala Thr Leu Pro Arg 1 5 <210> 284 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 284
Leu Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 285 <211> 9 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 285
Leu Gin Gin Lys Asn Tyr Pro Leu Thr 1 5 質 B7D8白類 2810蛋人 > > > > 0 12 3 I~1111 2 2 2 2 <<<< <210> 286 <211> 9 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 286 Gin Gin l Tyr Lys Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <400> 287
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie His Thr 20 25 30
Trp Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 . -91- 97784b.doc 200530267
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 7 0 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro . 85 90 95
Phe Ala Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 288 <211> 113 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 288
Gin Asp lie Val Met Thr Gin Thr Pro Pro Ser Leu Pro Val Asn Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Ala Ser 20 25 30
Ser Asp Gly Asn Met Tyr Leu Asn Trp Phe His Gin Arg Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Arg Arg Leu lie Tyr Lys Val Ser Asp Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 Ί5 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Gly Thr His Trp Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie 100 105 110
Lys 質 9 OO白類 2810蛋人 -92- <210> <211> <212> <213> <400> 97784b.doc 200530267
Gin Asp lie Gin Met Th'r Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Gin Gly 工le Arg Asn 20 25 30
His Leu Gly Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gin Arg Leu 35 40 45 lie Arg Glu Ala Ser lie Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Thr Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 . 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr Asp Ser Phe Pro 85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu 工le Lys 100 105 <210> 290 <211> 108 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 290
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Thr lie Ser Arg 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Thr Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr Asn Asn Tyr Pro 85 90 95 93- 97784b.doc 200530267
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 291 <211> 112 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 291
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Arg Asn Leu Leu His 20 25 30
Arg Asn Gly Asn Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro ’Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Met Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Ala Trp Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp lie Lys 100 105 110 <210> 292 <211> 108 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 292
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser His Gly lie Asn Gly 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Ser Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Lys Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser -94- 97784b.doc 200530267 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Asn Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Ser Tyr Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys ..... 100 105 <210> 293 <211> 112 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 293
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 >>>> 0 12 3 1111 2 2 2 2 <<<< 質 4 00白類 2910蛋人 <400> 294
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15 95- 97784b.doc 200530267
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Gin Asp lie Gly Asn 20 25 30
His Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gin Arg Leu 35 40 45 lie Arg Glu Ala Ser lie Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Thr Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Ala Phe Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 295 <211> 108 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 295
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gin Arg Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Thr Val Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Lys Thr Tyr Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Asp lie Lys 100 105 96- 97784b.doc 200530267 <210> 296 <211> 108 <212>蛋白質 <213>人類 <400〉 296
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Tyr Arg 20 25 30
Trp Leu Val Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Thr Pro Glu Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro 85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 297 <211> 108 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 297
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Phe Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 -97- 97784b.doc 200530267
Gly Gly Arg Ser Glu Ala Asp Phe Thr Leu Ala lie Thr Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Phe Asn Thr Tyr Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys 100 105 <210> 298 <211> 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 298
Gin Asp lie. CJln Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Thr 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Ser 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asp Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu· Gin His Asp Ser Tyr Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Ser Lys Val Asp lie Lys 100 105 0 12 3 一—l i—I 1—- IX 2 2 2 2 < < < < 質 9 8白類 2910蛋人
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15 98- 97784b.doc 200530267
Gly Asp Arg Val Thr 20
His Leu Ala Trp Phe 35 lie Tyr Gly Ala Ser 50
Gly Ser Gly Ser Gly 65
Pro Glu Asp Phe Ala 85
Phe Thr Phe Gly Pro 100 0 12 3 1 1 1 -—一 2 2 2 2 < < < < 質 D0D7白類 3 1蛋人
Gin Asn lie Gin Met 1 5
Gly Glu Arg Ala Thr 20
Tyr Val Ala Trp Tyr 35
Met Tyr Asp Ala Ser 50
Gly Ser Gly Ser Gly 65
Pro Glu Asp Phe Ala 85
Thr Phe Gly Gin Gly 100 97784b.doc lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser lie 25 30
Gin Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu 40 45
Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser 55 60
Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 70 75 80
Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Glu Ser Tyr Pro 90 95
Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 105
Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro 10 15
Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ala Ser 25 30
Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro Arg Leu Leu 40 45
Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser 55 60
Ala Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu 70 75 80
Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Tyr Asn Pro Tyr 90 95
Thr Lys Leu Glu lie Lys 105 99- 200530267 <210> 301 <211> 112 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 301
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Pro Val Thr Pro 1 5 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 302 <211> 108 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 302
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly 工le Arg Asn 20 25 30
Asn Leu Ala Trp Tyr Gin His His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu 35 40 45 lie Tyr His Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin -100- 97784b.doc 200530267 65 70_ 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Pro Glu Thr Tyr Pro 85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 303 <211> 112 <212> 蛋白質 <213>人類 <400> 303
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 1 - 5 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Ser Gly Tyr His Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly lie Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 <210> 304 <211〉 108 <2：L2>蛋白質 <213>人類 <400> 304
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Thr Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Thr Asn 20 25 30 -101 97784b.doc 200530267
Tyr Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu 35 40 45
Met Tyr Gly Ala Tyr Lys Leu Gin Tyr Gly Val Pro Thr Lys Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 工le Arg Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr Gin Thr Tyr Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Leu Lys 100 105 <210> 305 <211> 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <40〇> 305
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Ser 工le Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val 工le Gly Asn 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Lys Arg Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser His Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Ser Ser lie Pro 85 . 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 306 <211> 108 97784b.doc _ 102 · 200530267 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 306
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Met Ser Pro 1 5 '10 15：-
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Lys Met 20 25 30
Asn Leu Ala Trp Tyr Gin His Lys Leu Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ala Asn Trp Pro 85 90 95
Phe His Phe Gly Pro Gly Thr Thr Val Asp lie Lys 100 105 <210> 307 <211> 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 307
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser lie 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Thr lie Asn Asn 20 25 30
Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Gin Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Lys Thr Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80 -103 97784b.doc 200530267
Val Asp Asp Phe Ala Thr Tyr His Cys Gin Gin Tyr Lys Ala Phe Pro 85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ser Lys 100 105 <210> 308 <211> 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 308
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ala Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp 工le Glu Asn 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Pro Lys Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ser Ser Tyr Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 309 <211> 108 <212> 蛋白質 <213>人類、 <400> 309
Gin Asp 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie lie Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie His Thr 20 25 30 104- 97784b.doc 200530267
Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45
He Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Thr Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105
質 ο 8白類 3110蛋人 <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 <400>
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser 20 25 30
Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu 35 40 45 lie Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gin Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 311 <211〉 108 <212>蛋白質 <213〉人類 105- 97784b.doc 200530267 <400〉 311
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro 15 10 15
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Arg 20 25 30 ·；
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Phe 35 40 45 lie Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Arg Gly Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Gin Gin Tyr Ala Thr Leu Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 312 <211> 108 <212>蛋白質 <213>人類 <400〉 312
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp 工le Arg Asn 20 25 30
Ala Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 Ί5 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro -106- 97784b.doc 200530267 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Thr Val Asp lie Lys 100 105 <210> 313 、 <211> 112 <212> 蛋白質 <213>人類 <400> 313
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Gin Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn 20 25 30 · lie Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Phe Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Arg Ala lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 314 <211> 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <4〇0> 314
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Asn 20 25 30
Asp Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Lys Arg Leu 35 40 45 -107 97784b.doc 200530267 lie Tyr Thr Ala Ser Arg Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys. Leu Gin Gin Lys Asn Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105
<210〉 315 <211> 108 · . <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 315
Gin Asp 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Tyr Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Asn lie Pro Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Asp Ser 20 25 30
Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ser Val Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Asp Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Lys Ser Phe Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 316 <211> 128 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 316 -108- 97784b.doc 200530267
質 7 5白類 3111蛋A* > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < V <
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Tyr 20 25 30 Met Met Asp Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser lie Trp Pro Ser Gly Gly Gin Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Val Leu His Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 <400> 317
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Tyr 20 25 30
Met Met Asp Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Trp Pro Ser Gly Gly Gin Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asa Thr Leu Tyr 65 70 75 80 -109- 97784b.doc 200530267
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly lie Leu His Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser 115 •<210> 318 <211〉 115 <212>蛋白質 <213>人類
<400> 318
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Tyr 20 25 30
Met Met Asp Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Trp Pro Ser Gly Gly Gin Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Val Leu Leu Asp Lys Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser 115 <210> 319 <211> 115 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 319 •110- 97784b.doc 200530267
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Tyr 20 25 30
Met Met Asp Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser lie Trp Pro Ser Gly Gly Gin Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Val Leu Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser 115 <210> 320 <211> 9 <212> 蛋白質 <213>人類 <400〉 320
Ser lie Ala Ala Asp Arg Thr Asp Tyr 1 5 <210> 321 <211> 9 <212>，蛋白質 <213〉人類 <400> 321
Ser lie Ala Ala Ser Arg Thr Asp Tyr 1 5 > > > > 0 12 3 ΊΜ I—I t—I Tx 2 2 2 2 < < < < 322 9 蛋白質 人類 -Ill 97784b.doc 200530267 <400> 322
Ser 工le Ala Ser Ala Gly Thr Asp His 1 5 <210> 323 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 323
Ser lie Ala Ser Ala Arg Thr Asp Ser 1 5 <210> 324 <211> 112 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 324
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Gly Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr Pro Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 質 5 白類蛋 5 >>>> 0 12 3 I—f 1—I f—I 1—I 2 2 2 2 -112- 97784b.doc 200530267
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Gin Asp lie Val Met Thr Gin Thr Pro Pro Ser Leu Pro Val Asn Pro 1 5 10 .15
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Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Ser Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210〉 333 <211> 7. <212> 蛋白質 <213〉 人類 <400> 333 Ser Asn Asn Gin Arg Pro Ser 1 5 <210> 334 <211> 7 -114- 97784b.doc 200530267 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400〉 33.4 Ser Asn Thr Gin Arg Pro Ser 1 5 <210> 335 <211> 7 . <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 335 Ser Asp Asp Gin Arg Pro Ser 1 5 <210> 336 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 336 Asn Ser Ser Gin Arg Pro Ser 1 5 <210> 337 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 337 Asn Asn lie Gin Arg Pro Ser 1 5 <210〉 338 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 338 Met Asn Tyr Glu Arg Pro Ser 1 5 <210〉 339 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <4〇〇> 339 97784b.doc -115 200530267
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Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
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Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Leu -116- 97784b.doc 200530267
o 1—I 0 12 3 1—I -—I I—I 5—I 2 2 2 2 < < < < 質 3 白頟 3411蛋Al
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Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
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Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110
質 5 o白類 3411蛋A* >>>> 0 12 3 I—一 1—I 1—I I—I 2 2 2 2 < < < V <400> 345
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lie Tyr Ser Asn Thr Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
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lie Tyr Ser Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
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Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 -122- 97784b.doc 200530267 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu 工le Lys 100 105 110 <210> 354 <211> 110 <212> 蛋白質 <213>人類 <400〉 354
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Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
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Gin Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
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Leu Ala lie Ser Gly Leu Gin Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr 100 105 110
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Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly lie Asn 20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ser Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Gin 65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 358 <211> 110 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 358
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Glu Thr Asn 20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ser Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 -125- 97784b.doc 200530267
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Gin 65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95
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Ala lie Ser Gly Leu Gin Ser Gin Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100 105 110
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Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin -126- 97784b.doc 200530267 15 10
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質 rH O白類 3611蛋M <400> 361
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Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
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Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ala Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
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Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
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Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
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lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Ser Pro Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 0 12 3 Tx t—I 1—I I—I 2 2 2 2 < < < < 質 6 o白賴 3611蛋 5
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Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
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Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn 工le Glu Thr Asn 20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ser Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 -131 - 97784b.doc 200530267
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Gin 65 70 75 80
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Val Arg Ser lie Ala Ala Asp Arg Thr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro 130 <210> 370 <211> 131 <212> 蛋白質 <213〉人類 -132- 97784b.doc 200530267 <40〇> 370
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30
Leu Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 ·
Ser Val lie Ser Pro Ser Gly Gly Arg Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr *Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Val Arg Ser lie Ala Ser Ala Gly Thr Asp His Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro 130 <210> 371 <211> 131 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 371
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30
Leu Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Ser Pro Ser Gly Gly Arg Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val -133 - 97784b.doc 200530267 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Val Arg Ser lie Ala Ser Ala Arg Thr Asp Ser Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro 130 <210> 372 <211> 131 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 372
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30
Leu Met Met Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Val lie Ser Pro Ser Gly Gly Arg Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 Ί5 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Val Arg Ser lie Ala Ala Ser Arg Thr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 134- 97784b.doc 200530267 115 120 125
Leu Ala Pro 130 <210> 373 <211> 20 <212>蛋白質 d3>人類 <400> 373
Glu Arg Ser Val Ala Val Phe Lys Ala Arg Pro Arg His Tyr Tyr Tyr 15 10 15
Tyr Met Asp Val 20 <210> 374 <211> 20 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 374
Asp Gly Ser Ala Arg Val Val Lys Gly Pro Arg Arg Tyr Tyr Tyr Tyr 10 15
Tyr lie Asp Val 20 參 <210> 375 <211> 20 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 375 Glu Gly Ser Ala Arg Val Val Lys Gly Pro Ala Arg Tyr Phe Tyr Tyr 10 15
Tyr Met Asp Leu 20 質 VD 白類 6 7 o /V 7 3 2 ^ xy 3 5 3 <210〉 <211> <212> <213> <400> 97784b.doc 200530267
Glu Gly Ser Ser Gly Val Val Lys Gly Pro Ala Arg Tyr Tyr Tyr Tyr 15 10 15
Tyr Met Asp Ala 20 <210> 377 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 377
Gin Gin Thr Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 1 5
<210> 378 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 378
Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 1 5 <210> 379 <211> 9 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 379
Gin Gin Ser Asn Ser lie Pro Arg Thr
<210> 380 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 380
Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Arg Thr 1 5 <210> 381 <211> 7 <212〉 蛋白質 <213〉人類 <400> 381 136- 97784b.doc 200530267
Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 382 7蛋白質人類 <400> 382
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 5 1 <210> <211> <212> <213> 383 7蛋白質人類 <400> 383
Ala Ala Tyr Thr Leu Gin Ser 1 5 m <210> <211> <212> <213> 384 7蛋白質人類 <400> 384 Ser Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 385k白質 人類 <400> 385
Asp Ala Ser Thr Leu Gin Asn 1 5 > > > >> 0 12 3 o I—I -—I i—ί I—to 2 2 2 2 4 < < < < < 質 6 白類 6 387 蛋A738 A. a _—I A*- r h T r e s u e L 5
G r e s 97784b.doc 137- 200530267
>>>> 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < V 387 7 蛋白質 人類 <400> 387
Gly Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 質 8白類 3811蛋人 <210〉 <211> <212〉 <213〉 <400>
Arg Ala Ser Gin Thr lie Lys Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 質 9 白類9 8 1 8 3 1 福 / 3 <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 <400>
Arg Ala Ser Gin Ser He Ser Ser Tyr Leu Asn 15 l〇 質 ο白類 9 1 L· 3 1 J / <210> <211〉 <212> <213> <400> 390
Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Arg Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> <211> <212〉 <213〉 質 1 白類 3911蛋人 <400〉 391 Arg Ala Ser Arg Gly Val Ser Thr Ser Leu Asn 1 5 l〇 <210> <211> <212〉 <213〉 質 2 白類 3911蛋人 97784b.doc 138- 200530267 <400> 392
Arg Ala Ser Gin Thr lie Ser Lys Asn Leu Asn 1 5 10 <210> 393 <211> 11 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 393
Arg Ala Ser Arg Arg lie Gly Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 質 4 白類3911蛋人 <400> 394 Arg Ala Ser Gin Ser lie Arg Ser Tyr Leu Asn 15 l〇 <210〉 <211> <212〉 <213〉 質 5白類3911蛋人
<400> 395 Arg Ala Ser Gin Thr lie Asn. Ser Tyr Leu Asn 15 l〇 <210> <211〉 <212〉 <213> 質6 白類 9 1昏、 3 1 wjn / <40〇> 396 Arg Ala Ser Gin Ser lie Asa Arg Trp Leu Ala 1 5 l〇 <210> 397 <211> 142 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 397 Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 97784b.doc -139· 200530267 15 10
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Pro Met Val Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Trp Ser Ser Gly Gly Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Arg Ser Val Ala Val Phe Lys Ala Arg Pro Arg His Tyr 100 105 110
Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 130 135 140 <210> 398 <211> 142
<212>蛋白質 <213〉人類 <40〇> 398
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 _ 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Pro Met Val Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Trp Ser Ser Gly Gly Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr -140- 97784b.doc 200530267 質9 2白類 3914蛋人 65 70- 75 80 Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Ser Ala.Arg Val Val Lys Gly Pro Arg Arg Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Tyr lie Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 130 135 140 <210〉 <211〉 <212〉 <213> <400> 399
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Pro Met Val Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Trp Ser Ser Gly Gly Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 _ 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Gly Ser Ser Gly Val Val Lys Gly Pro Ala Arg Tyr Tyr 100 105 110
Tyr Tyr Tyr Met Asp Ala Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro -141 - 97784b.doc 200530267 130 135 140 <210〉 400 <211> 108 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 400
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val lie lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Thr lie Lys Asn 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 質 1 8白類 ο ο & rv 4 1 J Λ <210> <211〉 <212> <213〉 <400〉 401
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 -142- 97784b.doc 200530267
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 8Ό
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 402
<211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 402
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Arg 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Tyr Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 工le Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Arg Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Ser lie Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Thr Val Glu 工le Arg 100 105 <210> 403 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 403
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15 -143 - 97784b.doc 200530267
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 質 48白類 4010蛋人 <210〉 <211〉 <212〉 <213> <400>
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 144- 97784b.doc 200530267 <210> <211〉 <212> <213〉 <400〉 質 5 8白類5 o o PC ο 4 1 4
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45
lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> <211〉 <212〉 <213〉 <400> 質 6 OO白類6 ο o ο 4 1 4
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Val Ser Thr 20 25 30
Ser Leu Asn Trp Tyr Gin lie Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 97784b.doc 145- 200530267
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ala lie Thr Ser Leu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 407 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 407
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 'Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe- Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 <21〇> 408 <211〉 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 408
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Thr lie Ser Lys -146- 97784b.doc 200530267 20 25 30 Asn Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Ser Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 He Tyr Ser Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Gly Leu Gin 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro 85 90 95 Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Glu 100 105
質 9 8白類 9 o otvk、 ο 4 1 ay y 4 <210> <211> <212〉 <213〉 <400>
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys -Leu Leu 35 _ 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 410 147· 97784b.doc 200530267 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 410
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asa Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45
lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 411 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 411
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr A.la Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80 -148 97784b.doc 200530267
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 412 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 412
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 ··質 3 OO白類 3 4110蛋、41 <210〉 <211〉 <212〉 <213> <40〇>
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30 149- 97784b.doc 200530267
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 414 <211> 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 414
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 415 <211> 108 <212>蛋白質 -150- 97784b.doc 200530267 <213〉人類 <400> 415
Gin Asp 工le Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin .65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 質 6 8白類 4110蛋人 <210〉 <211〉 <212> <213> <400> 416
Gin Asp lie Gin.Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 . 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 Ί5 80
-151 - 97784b.doc 200530267
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 質 7 8白類 4110蛋人 <210> <211〉 <212> <213> <400>
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Thr Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Arg Arg lie Gly Thr 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Ala Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gin Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Thr Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 418 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 418
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Arg Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu -152- 97784b.doc 200530267 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105
<210> 419 <211> 108 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 419
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45
lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 420 <211〉 108 <212> 蛋白質 <213>人類、 153- 97784b.doc 200530267 <400> 420
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Thr lie Asn Ser 20 25 30
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asp Leu Leu 35 40 45 lie Phe Gly Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Thr Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro 85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 421 <211> 108 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 421
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val 15 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Asn Arg 20 25 30
Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95 -154- 97784b.doc 200530267
Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 422 <211> 11 <212〉 蛋白質 <213〉 人類 <400〉 422 Ala Gly Asp Glu Leu Gly Asn Lys Tyr Ala Ser 1 5 10
<210> 423 <211> 11 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 423
Ser Gly Asp lie Leu Gly Asn Lys Tyr Ser Ser 1 5 l〇 <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 <400> 質 4白類 4211蛋人
Ser Gly Asp Lys Leu Arg Asn Lys Tyr Ala Ser 1 5 l〇 <210> 425 <211> 11 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 425
Ser Gly Asn Lys Leu Gly Asn Thr Tyr lie Ser 1 5 l〇 <210> <211> <212> <213> <400> 質 6 白類 6 4214蛋人42
Thr Gly Thr Gly Ser Asp Val Gly Arg Tyr Ser His Val Ser 1 5 l〇 97784b.doc -155- 200530267 <210> 427 <211> 13 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 427
Ser Gly Gly Ser Ser Asn lie Gly Leu Asn Pro Val Asn 1 5 l〇 質〇〇白類 4211蛋人 >>>> 0 12 3 -—-IX IX 1—I 2 2 2 2 < < < < <400> 428
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Lys Tyr Thr Ser 1 5 10 <210> 429 <211> 11 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 429
Ser Gly Gin lie Leu Gly Glu Arg Ser Ala Ser 1 5 l〇 > > > >> 0 12 3 ο t—I 1—I 1—I <—I Au 2 2 2 2 4 < < < < < 質ο白類 4314蛋人 ο 3 4
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Arg Tyr Asn Arg Val Ser 1 5 l〇 質 1白類 4311蛋人 <210> <211〉 <212> <213> <400> 431
Ser Gly Asp Thr Leu Arg Asn Lys Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 432 <211> 13 156- 97784b.doc 200530267 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 432
Ser Gly Ser Ser Ser Asn He Gly Gly Asn Thr Val Asn 1 5 l〇 質 3白類 4311蛋人 <210〉 <211> <212> <213〉 <400> 433
Ser Gly Asp Lys Leu Arg Asn Lys Tyr Gly Ser 1 5 l〇 <210> <211> <212> <213> 434 7 蛋白寶 人類 <400> 434
Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 435 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 435
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 436 <211> 7 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 436
Ala Val Thr Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 437 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 437 157- 97784b.doc 200530267
Ser Asn Asn Gin Arg Pro Ser 1 5 <210> 438 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 438 Gin Asn .Arg Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 439
<211> 112 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 439
Gin Asp 工le Val Met Thr Gin Thr Pro Pro Ser Leu Pro Val Asn Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Arg His 20 25 30
Asn Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp'Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Ala lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 440 <211> Ί <212>蛋白質 <213>人類 <400> 440
Gin Ser Ser Gin Arg Pro Ser -158 - 97784b.doc 200530267 1 5 <210> 441 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 441
Glu Val Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 442
<211> 112 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 442
Gin Asp lie Val Met Thr Gin Thr Pro Pro Ser Leu Pro Val Asn Pro 1 5 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn 20 25 30 lie Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Phe Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Arg Ala lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 443 <211> 7 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 443
Arg Asn Asn Gin Arg Pro Ser 1 5 •159- 97784b.doc 200530267 <210> 444 <211> <212> <213> 9 蛋白質 人類 <400> 444
Gin Ser Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 1 5 <210〉 <211> 445 9 <212> <213> 蛋白質 人類 <400> 445
Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 1 5 <210> <211> 446 9 <212> <213> 蛋白質 人類 <400> 446
Gin Thr Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 1 5 <210> <211> <212> <213> 447 9 蛋白質 人類 <400> 447
Gin Thr Trp Asp Arg Ser Ser Val Val 1 5 <210> <211> <212> <213> 448 10 蛋白質 人類 <400> 448 GLn Ser Tyr Thr Thr Thr Gly Thr Leu lie 1 5 10 <210> <211> 449 9 <212> 蛋白質 97784b.doc -160- 200530267 <213>人類 <400> 449 Ser Ser Tyr Thr Asn Ser Ser Val lie 1 5 <210> 450 <211> 9 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 450
Gin Ala Trp Asp Asn Ser Ala Val lie 1 5 <210> 451 <211> 8 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 451
Gin Thr Trp Asp Thr Ser lie Leu 1 5 <210> 452 <211> 9 <212> 蛋白質 <213> 人類 <4〇0> 452 Ser Ser Tyr Arg Asn Thr Gly Pro Leu 1 5 <210> <211〉 <212〉 <213> 質 3白類 4517蛋人 <400> 453 Ser lie Trp Ser Ser Gly Gly Leu Thr Lys Glu Ala Asp Ser Val Lys 15 l〇 15
Gly <210> <211> <212> 質 4 白 5 ο昏 4 1受 97784b.doc -161 - 200530267 <213> 人類 <400> 454
Asn Ser Tyr Thr Asn Ser Ala Thr Leu Val 15 10 <210> 455 <211> 119 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400〉 455
Phe Tyr Ser His Ser Ala Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val 15 10 15
Ser Val Ser Pro Gly Gin Thr Ala Ser lie Thr Cys Ala Gly Asp Glu 20 25 30
Leu Gly Asn Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Val Leu Val lie Tyr Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro 50 55 60
Glu Arg Phe Ser Gly Ser His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie 65 70 75 80
Ser Gly Thr Gin Ala Leu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Trp 85 90 95
Asp Ser Ser Ser Val lie Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110
Ser Gin Pro Lys Ala Ala Pro 115 質 6 6白類 β 5 0^^ 5 4 1 4 <210> <211> <212〉 <213〉 <400〉
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr A.la Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp lie Leu Gly Asn Lys Tyr Ser -162- 97784b.doc 200530267 20 25 30 Ser Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45 Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val He 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105
質 r- 6白類 4510蛋人 <210〉 <211> <212> <213〉 <400〉
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Arg Asn Lys Tyr Ala 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val 工le Tyr 35 40 45
Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Glu lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 458 -163 - 97784b.doc 200530267 <211> 106 <212> 蛋白質 <213> . 人類 <400> 458 Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 1 5 10 15 Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp lie Leu Gly Asn Lys Tyr Ser 20 . 25 30 Ser Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45 Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> <211〉 <212〉 <213>
質 9 VD白類 5 OFT 4 1 J / <400> 459
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asn Lys Leu Gly Asn Thr Tyr lie 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Lys Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Thr Gly Thr Gin Ser Leu 65 70 75 80 -164- 97784b.doc 200530267
Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Arg Ser Ser Val Val 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 460 <211> 119 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 460
Phe Tyr Ser His Ser Ala Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val 15 10 15
Ser Val Ser Pro Gly Gin Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys 20 25 30
Leu Arg Asn Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45 ·
Pro Val Leu Val lie Tyr Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Glu lie Pro 50 55 60
Glu Arg Phe Ser Gly Ser His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie 65 70 75 80
Ser Gly Thr Gin Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp 85 90 95
Asp Ser Ser Ser Val lie Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110
Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro 115 <210> 461 <211> 109 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 461
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15 165- 97784b.doc 200530267
Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Gly Ser Asp Val Gly Arg Tyr 20 25 30
Ser His Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 lie lie Tyr Ala Val Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Ala Arg Phe 5.0 55 60
Ser Gly Ser Arg Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr His Cys Gin Ser Tyr Thr Thr Thr 85 90 95
Gly Thr Leu lie Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Thr Val 100 105 <210> 462 <211> 106 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 462
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala lie lie Thr Cys Ser Gly Asp lie Leu Gly Asn Lys Tyr Ser 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Phe 35 40 45
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 166- 97784b.doc 200530267 <210〉 463 <211> 106 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 463
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 1.5 10 15
Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asn Lys Leu Gly Asn Thr Tyr lie 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Lys Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Thr Gly Thr Gin Ser Leu 65 70 75 80
Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Arg Ser Ser Val Val 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 464 <211> 106 <212> 蛋白質 <213>人類、 <400> 464
Gin Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asn Lys Leu Gly Asn Thr Tyr lie 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Lys Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 -167- 97784b.doc 200530267
Asa Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Thr Gly Thr Gin Ser Leu 65 70 75 80
Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Arg Ser Ser Val Val 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 465 <211〉 107 <212> 蛋白質 <213〉人類
<400> 465
Gin Ser Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin Arg 15 10 15
Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn lie Gly Leu Asn Pro 20 25 30
Val Ash Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser. Leu Ala lie Ser Gly Leu Gin Ala 65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Asn Ser Ser Val 85 90 95 lie Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210〉 466 <211> 106 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 466
Gin Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Lys Tyr Thr -168- 97784b.doc 200530267 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45
Gin Asn Arg Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Val Ser Gly Thr Gin Ala lie 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Asn Ser Ala Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 467 <211〉 106 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 467
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Arg Asn Lys Tyr Ala 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45
Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Glu lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 468 97784b.doc -169- 200530267 <211> 105 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 468
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly His 1 5 10 15
Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Gin lie Leu Gly Glu Arg Ser Ala 20 25 30.
Ser Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val Leu Tyr 35 40 45
Gin Ser Ser Gin Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 lie Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Ala Gin Ser lie 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Thr Ser lie Leu Phe 85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 469 <211> 109 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 469
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Arg Tyr 20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gin Gin Ser Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 lie lie Phe Glu Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Arg Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 Ί5 80 -170- 97784b.doc 200530267
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Arg Asn Thr 85 90 95
Gly Pro Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 0 12 3 t—一 i—II .—I 2 2 2 2 < < < < 質 o 6白賴 4710蛋Ai <400> 470
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp lie Leu Gly Asn Lys Tyr Ser 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105
質 1 6白類 7 o ^ L 4 1 A <210> <211> <212〉 <213> <400> 471
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Lys Tyr Thr 20 25 30 171 - 97784b.doc 200530267
Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45
Gin Asn Arg Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Val Ser Gly Thr Gin Ala lie 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Asn Ser Ala Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu <210> 472 <211> 106 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 472
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 1 5 10 15 Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Arg Asn Lys Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45
Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Asn lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Val Met 65 70 7 5 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 473 <211> 106 <212>蛋白質 172· 97784b.doc 200530267 <213〉人類 <400> 473
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 1 5 10 15
Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Lys Tyr Thr 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45
Gin Asn Arg Lys Arg Pro Ser Gly 工le Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Val Ser Gly Thr Gin Ala lie 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Asn Ser Ala Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105
質 4 6 白 4710蛋人 <210〉 <211〉 <212> <213〉 <400> 474 Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 1 5 10 15 Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Lys Tyr Thr 20 25 30 Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45 Gin Asn Arg Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Val Ser Gly Thr Gin Ala lie 65 70 75 80 97784b.doc -173- 200530267
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin 85
Ala Trp Asp Asn Ser Ala Val lie 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 質 5 o白類 5 4711蛋人47 <210> <211〉· <212> <213> <400〉
Gin Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Gly Ser Asp Val Gly Arg Tyr 20 25 30
Ser His Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 lie lie Tyr Ala Val Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Ala Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Arg Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr His Cys Gin Ser Tyr Thr Thr Thr 85 90 95
Gly Thr Leu lie Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Thr Val Leu 100 105 110 >>>> 0 12 3 t—11 t—_ t—I 2 2 2 2 < < < < 質6 5白類 4710蛋人 <400> 476 Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly His 1 5 10 15 Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Gin He Leu Gly Glu Arg Ser Ala 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val Leu Tyr 97784b.doc -174- 200530267 35 40 45
Gin Ser Ser Gin Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 lie Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Ala Gin Ser lie 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Thr Ser lie Leu Phe 85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105
<210〉 477 <211〉 106 <212>蛋白質 <213>人類 <400〉 477
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Arg Asn Lys Tyr Ala 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45
Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Glu lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <21〇> <211> <212> <213> 478 106 蛋白質 人類 -175- 97784b.doc 200530267 <400> 478
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 1 5 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp lie Leu Gly Asn Lys Tyr Ser 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val 工le Tyr 35 40 45
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 479 <211> 109 <212> 蛋白質 <213>人類 <400〉 479
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Arg Tyr 20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gin Gin Ser Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 lie lie Phe Glu Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Arg Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Arg Asn Thr 85 90 95 -176- 97784b.doc 200530267
Gly Pro Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 10-0 105 <210> 480 <211> 109 <212>蛋白質 <213〉人類 <400〉 480
Gin Ser Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Gly Asn 20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 工le Tyr Arg Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin 65 70 75 80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Tyr Thr Asn Ser Ala 85 90 95
Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <21〇> 481 <211〉 106 . <212>蛋白質 <213〉 人類 <400> 481
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp lie Leu Gly Asn Lys Tyr Ser 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro Leu Leu Val lie Tyr 35 40 45 -177 97784b.doc 200530267
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105
<210〉 482 <211> 106 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 482
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asn Lys Leu Gly Asn Thr Tyr lie 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Lys Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45
Gin Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Thr Gly Thr Gin Ser Leu 65 70 75 80
Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Arg Ser Ser Val Val 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210〉 483 <211> 106 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 483 -178- 97784b.doc 200530267 質 4 6白 8 o昏、 4 1 3/ > > > > 0 12 3 11 1—f I—I 2 2 2 2 V < < <
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 1 5 10 15 Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Arg Asn Lys Tyr Gly 20 25 30 Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45 Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Glu He Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <400> 484
Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Arg Asn Lys Tyr Ala 20 25 30
Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45
Gin Asp Arg Lys Arg Pro Ser Glu lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
His Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Thr Met 65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Trp Asp Ser Ser Ser Val lie 85 90 95 179- 97784b.doc 200530267
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 485 <211> 10 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 485
Val Gly lie Ser Thr Tyr Gly Phe Asp Leu 1 5 l〇 <210> <211> <212> <213> 486 10 蛋白質 人類 <400> 486
Val Gly Met Ala Thr Tyr Gly Phe Asp lie 15 l〇 <210> 487 <211> 10 <212>蛋白質 <213〉 人類 <400> 487
Val Gly Met Ser Asn Tyr Gly Phe Asp Phe 15 l〇 <210> 488 <211> 10 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 488
Val Gly Met Ser Thr Tyr Gly Phe Asp Lys 1 5 l〇 質 9 白類 9 4810蛋人48 <210> <211> <212〉 <213> <400〉
Val Gly Met Tyr Asn Tyr Gly Phe Asp He 1 5 l〇 180- 97784b.doc 200530267 質 903234 1蛋人 >>>> 0 12 3 1 t—111 2 2 2 2
0 12 3 i—I i—t 1—I i—I 2 2 2 2 < V < < <400> 490
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr 20 25 30
Trp Met Phe Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Val Ser Ser Gly Gly Met Thr Gly Tyr Ala Asp 'Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val Gly Met Ala Thr Tyr Gly Phe Asp lie Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro 130 491 132 蛋白質 人類 491
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr 20 25 30
Trp Met Phe Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 97784b.doc * 181 - 200530267 35 40 45
Ser Gly lie Val Ser Ser Gly Gly Met Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val Gly Met Ser Asn Tyr Gly Phe Asp Phe Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro 130 <210> 492 <211> 8 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 492
Met Gin Ala Leu Gin Thr Leu Thr 1 5 <210> 493 <211> 8 <212> 蛋白質 <213〉人類 <40〇> 493
Met Gin Ala Leu Arg Ala lie Thr 1 5 <210> 494 <211> 8 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 494
Met Gin Ala Leu Gin Ala lie Thr 1 5 -182- 97784b.doc 200530267 質 95白類4 8蛋一厂 > > > > 0 12 3 I—I I—I -—I -—I 2 2 2 2 <400> 495
Met Gin Ala Leu Gin Ser Pro Thr 1 5 <210> 496 <211> 8 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 496 Met Gin Ala Leu Gin 1 5 <210> 497 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 497 Met Gly Ser Asn Arg 1 5 <210> 498 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 498 Leu Gly Ser His Arg 1 5 . <210> 499 <211> 7 <212> 蛋白質 <213> 人類 <400> 499 Phe Gly Ser Asn Arg 1 5 <210> 500 <211> 132 <212> 蛋白質 -183 97784b.doc 200530267 <213〉人類 <400> 500
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr 20 25 30
Trp Met Phe Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly 工le Val Ser Ser Gly Gly Met Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val Gly lie Ser Thr Tyr Gly Phe Asp Leu Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro 130 質 1白類 5016蛋人 <210> <211〉 <212> <213〉 <400> 501
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Thr Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 502 <211> 16 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 502
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Gly Asn Gly Asn Asn Tyr Leu Asp -184 - 97784b.doc 200530267
ο I—I 5 1 >>>> 0 12 3 一—一 1—I *—I 1—I 2 2 2 2 < < < < 質 3 白類 5016蛋人 <400> 503
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 504 <211> 16 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 504
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Tyr His Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 505 <211> 16 <212>蛋白質 <213>人類 <400> 505
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn 工le Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 質 365白類 5016蛋人 <210> <211> <212> <213> <400> 506
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Arg Asn Gly Tyr Asn Phe Leu Asp 15 10 15 <210〉 507 <211〉 16 <212>蛋白質 <213> 人類 <400> 507
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Arg His Asn Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 508 185- 97784b.doc 200530267 <211> 112 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 508
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu His .20 25 . 30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Ser Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80
He Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 509 <211> 132 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 509
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr 20 25 30
Trp Met Phe Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Val Ser Ser Gly Gly Met Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 Ί5 80 -186- 97784b.doc 200530267
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val Gly Met Ser Thr Tyr Gly Phe Asp Lys Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro 130
<210> 510 <211〉 132 <212> 蛋白質 <213〉人類 <400> 510
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr 20 25 30
Trp Met Phe Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly lie Val Ser Ser Gly Gly Met Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val Gly Met Tyr Asn Tyr Gly Phe Asp lie Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125
Pro Leu Ala Pro 130 -187- 97784b.doc 200530267 <210> 511 <211> 112 <212>蛋白質 <213〉人類 <400> 511
Gin Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro 15 10 15
Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu His 20 25 30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Ser Pro Gin Leu Leu lie Ser Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin 85 90 95
Ala Leu Gin Thr lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 512 <211〉 6 <212>蛋白質 <213>人造的序列 <22〇> <223> 807A-M0028-B02之親和力成熟純種系的CDR3區之一致胺基酸序列 <220> <221〉MISC—特徵 <222> (1).7(1) <223> X = S ^ 〇 <220> <221> MISC_ 特徵 <222> (2).7(2)
<223> X = V ^ X <220> <221〉MISC—特徵 -188- 97784b.doc 200530267
<222> (4) ·· (4)、 <223> X = L, Η 或 F >>>> 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 MISC_特徵(β) .7(6) X = Υ, Ν 或 Κ <400> 512
Xaa Xaa Leu Xaa Asp Xaa 1 5 <210> <211> <212> <213> 513 9 蛋白質 人造岛序列 <220〉<2 2 3 > 807B-M0004-A03之親和力成熟純種系的CDR3區之一致胺基酸序列 <220> <221> <222> <223>
MISC__特徵 (4) .7(4) X = A 或 S <220> <221> <222> <223>
MISC_特徵 (5) · · (5) X = D, S 或 A <220> <221> <222> <223>
MISC_特徵(6) .7(6) X = R 或 G <220> <221> <222> <223>
MISC_特徵 (9) .7(9) X = Y, Η 或 S <400> .513 . Ser lie Ala Xaa Xaa Xaa Thr Asp Xaa 1 5 <210> <211> <212> <213> 514 20 蛋白質 人造6¾序列
<220><223〉 807B-M0004-H03之親和力成熟純種系的CDR3區之一致胺基酸序歹>J 97784b.doc -189- 200530267 <220> <221> 1«3(：_特徵 <222> (1).7(1)
<223〉 X = E 或 D <220> <221> MISCj寺徵. <222> (2).7(2)
<223> X = G ic R <220> <221> <222> (4).7(4)
<223〉 X = A, S 或 V <220>
<221> MISC_ 特徵 <222> (5).7(5)、
<223> X = G, R 或 A <220> <221> MISC 一特徵 <222> (7).7(7)
<223> X = V 或 F <220> <221〉MISC_ 特徵 <222> (9).7(9)
<223> X = G 或 A <220> <221> MISC__ 特徵 <222> (10)7. (10)
<223> X = P ^ R <220> <221> M1!SC_ 特徵 <222> (11)7.(11)
<223> X = A, P 或 R <220〉 <221> MISC—特徵 <222〉 (13)7.(13) <223> X = Y 或 Η <220> <221〉MISC_ 特徵 <222> (14)7.(14)
<223〉 X = Y 或 F <220> <221> 1(1：15(：_特徵 <222> (18)7.(18) <223> Xaa可以是任何天然存在的胺基酸 <220> <221> b4ISC_ 特徵 <222> (20)7.(20) 97784b.doc 190- 200530267 <223〉 X = Vr L 或 A <400〉 514
Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Val Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Arg. Xaa Xaa Tyr Tyr 15 10 15
Tyr Xaa Asp Xaa 20 <210> 515 <211> 10 <212>蛋白質 <213>人造的序列
<220> <2 2 3> 807B-M0009-F06之親和力成熟純種系的CDR3區之一致胺基酸序列 <220〉 <221〉MISC—特徵 <222> (3).7(3) <223〉 X = Μ 或工 <220> <221> M：ESC_ 特徵 <222> (4).7(4)
<223〉 X = S 或 A <220> <221> MISC—特徵 <222> (5).7(5)
<223> X = T 或 N <220> <221> MISC 一特徵 <222> (7).7(7)
<223> X = A 或 G <220〉 <221> MISC_ 特徵 <222> (10)7.(10)
<223〉 X = I, L, F 或 K <400> 515
Val Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Phe Asp Xaa 1 5 10 <210> 516 <211> 6 <212> 蛋白質 <213> 人造的序列 <220> -191 - 97784b.doc 200530267 <223〉 807B-M0004-H03之親和力成熟純種系的CDR3區之一致胺基酸序列 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 <<<< MISC_F特徵(2).7(2) X = V或工 <220> <221> <222> <223>
MISC_特徵 (4) .7(4) X = L, Η 或 F <220> <221> <222> <223>
MISC_特徵(6) .7(6) X = K, Y 或 N <400> 516
Gly Xaa Leu Xaa Asp Xaa 1 5 <210> <211> <212> <213> 517 9姜白質 人造4序列 <220>< 2 2 3 > 807A-M0004-A03之親和力成熟純種系的CDR3區之一致胺基酸序列 <220> <221> <222> <223> <22〇> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223>
MISC_特徵 (4) .7(4) X = S 或 A MISC_特徵 (5) .7(5) X = S 或 A MISC_特徵(6) .7(6) X = R 或 G MISC_特徵 (9) .7(9) X = Η 或 Y <400> 517
Ser lie Ala Xaa Xaa Xaa Thr Asp Xaa 97784b.doc -192- 200530267 1 5 <210> 518 <211> 10 <212> 蛋白質 <213>人造“序列 <220> <223>生殖種系-修正抗體之VL鏈的胺基酸序列 <400> 518
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 15 10
<210> 519 . <211> 107 <212> 蛋白質 <213>人造^序列 <220> < 2 2 3 > 生殖種系-修正抗體之CL鏈的胺基酸序列 <400> 519
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 15 10 15
Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 193- 97784b.doc 200530267
0 12 3 i—I I—一 *—I 1 2 2 2 2 < < V V 520 10 蛋白質 人造的序列 <220> <223> 生殖種系-修正抗體之VL鏈的胺基酸序列 <400> 520
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 15 10 <210> 521 <211> 107 <212> 蛋白質 <213> 人造的序列 <220> <223> 生殖種系-修正抗體之CL鏈的胺基酸序列 <400> 521
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 15 10 15
Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 522 <211〉 10 <212>蛋白質 194- 97784b.doc 200530267 <213> 人造的序列 <220> <223> 生殖種系-修正抗體之VL鏈的胺基酸序列 <400> 522 •Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 15 10 <210> 523 <211> 106 <212> 蛋白質 <213> 人造的序列
<220> <223>生殖種系-修正抗體之CL鏈的胺基酸序列 <400> 523
Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 15 10 15
Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp 20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 65 70 75 80
Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105 <210> 524 <211> 10 <212>蛋白質 <213> 人造的序列 <220> -195- 97784b.doc 200530267 <223> 生殖種系-修正抗體之VL鍵的胺基酸序列 <400> 524
Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 15 10 >>>> 0 12 3 1—I -—I ·—I ·—I 2 2 2 2 525 10 蛋白質 人造的序列 <220> <223> 生殖種系-修正抗體之VL鏈的胺基酸序列 <400> 525 Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 15 10 <210> 526 <211> 10 <212> 蛋白質 <213>人造的序列 <220> <223>生殖種系-修正抗體之VL鏈的胺基酸序列 <400> 526
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 1 5 10 0 12 3 i—i -—I I—I -—I 2 2 2 2 <<<< 527 106 蛋白質 人造的序列 <220> <2 2 3 >生殖種系-修正抗體之CL鏈的胺基酸序列 <400> 527 Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 15 10 Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie
Ser Ser 15 Ser Asp 97784b.doc -196- 200530267 20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105
197- 97784b.doc

Claims (1)

  1. 200530267 十、申請專利範圍： 1. 一種人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (i) 與具有在脫輔基脂蛋白E之C-終端功能部位 (ApoE-CTD)的序列第1號所示之胺基酸序列，或其一部分 胺基酸序列的多肽結合；且 (ii) 與人類斑塊結合。 2. 如請求項1之抗體或抗體片段’其包括重鏈CDR3區，包 括序列第512號、序列第513號、序列第514號、序列第515 > 號、序列第5 16號或序列第5 17號所示的序列。 3. 如請求項1或2之抗體或抗體片段’其包括重鏈CDR3區， 包括序列第20號所示的序列。 4. 如請求項3之抗體或抗體片段’其中該CDR3區包括序列 第23號或序列第26號所示的序列。 5. 如請求項1或2之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序 列第207號、序列第208號、序列第209號、序列第210號、 _ 序列第320號、序列第321號、序列第322號、序列第323 號、序列第373號、序列第374號、序列第375號、序列第 376號、序列第485號、序列第486號、序列第487號、序 列第488號或序列第489號所示的序列。 6·如請求項5之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第·207號、序列第208號、序列第209號、序列第320號、 序列第321號、序列第322號或序列第373號所示的序列。 7·如請求項1之抗體或抗體片段，其包括重鏈CDR3區，包 括選自序列第29號、序列第47號、序列第50號、序列第 97784b.doc 200530267 53號、序列第56號、序列第59號、序列第62號、序列第 65號、序列第68號、序列第71號、序列第74號、序列第 77號、序列第80號、序列第83號、序列第86號和序列第 89號所示之序列的胺基酸序列。 8·如請求項7之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第50號、序列第68號、序列第74號或序列第80號。 9.如請求項1至8中任一項之抗體或抗體片段’其中該多肽 具有部分第1號的胺基酸序列，包括序列第2號、序列第5 號、序列第7號、序列第9號、序列第10號、序列第12號、 序列第13號、序列第14號、序列第15號、序列第16號或 序列第17號所示的序列。 10·如請求項1至8中任一項之抗體或抗體片段，其中該多肽 具有部分第1號的胺基酸序列，包括序列第1 8號或序列第 19號所示的序列。 11 ·如請求項1至8中任一項之抗體或抗體片段，其與具有序 列第1號所示之胺基酸序列的該多肽結合。 12· —種人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (0 與具有ApoE-CTD的如序列第1號中所示之胺基酸序 列，或其部分之胺基酸序列的多肽結合；且 (Π)包括重鏈CDR3區，其包括序列第512號、序列第513 號、序列第514號、序列第515號、序列第516號或序列第 5 17號所示的序列。 13·如請求項12之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第20號所示的序列。 97784b.doc 200530267 14. 如請求項13之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第23號或序列第26號所示的序列。 15. 如請求項12之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第207號、序列第208號、序列第209號、序列第210號、 序列第320號、序列第321號、序列第322號、序列第323 號、序列第373號、序列第374號、序列第375號、序列第 376號、序列第485號、序列第486號、序列第487號、序 列第488號或序列第489號所示的序列。 16. 如請求項15之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第207號、序列第208號、序列第209號、序列第320號、 序列第321號、序列第322號或序列第373號所示的序列。 17. —種人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (i) 與具有ApoE-CTD的如序列第1號所示之胺基酸序 列，或其部分之胺基酸序列的多肽結合；且 (ii) 包括重鏈CDR3區，其包括選自序列第29號、序列第 47號、序列第50號、序列第53號、序列第56號、序列第 59號、序列第62號、序列第65號、序列第68號、序列第 71號、序列第74號、序列第77號、序列第80號、序列第 S3號、序列第86號和序列第89號所示序列的胺基酸序列。 1 8·如先前請求項中任一項之抗體或抗體片段，其在極低密 度脂蛋白（VLDL)的存在下與該多肽結合。 19· 一種人類抗體或抗體片段，該抗體或片段在VLDL的存在 下，與具有序列第1號所示之ΑροΕ-CTD胺基酸序列，或 其部分之胺基序列的多肽結合。 97784b.doc 200530267 20.如先前請求項中任一項之抗體或抗體片段，其中該多肽 是重組的多肽。 2 1β如請求項14之抗體或抗體片段，其中該重組多肽是生物 素基化的。 22· —種人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (i) 與人類斑塊結合；且 (ϋ)包括重鏈CDR3區，其包括序列第512號、序列第513 號、序列第514號、序列第5 15號、序列第5 16號或序列第 5 17號所示的序列。 23·如請求項22之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第20號所示的序列。 24. 如請求項23之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第23號或序列第26號所示的序列。 25. 如請求項22之抗體或抗體片段，其中該CDR3區包括序列 第207號、序列第208號、序列第209號、序列第210號、 序列第320號、序列第321號、序列第322號、序列第323 號、序列第373號、序列第374號、序列第375號、序列第 376號、序列第485號、序列第486號、序列第487號、序 列第488號或序列第489號所示的序列。 26·如請求項25之抗體或抗體片段’其中該CDR3區包括序列 第207號、序列第208號、序列第209號、序列第320號、 序列第321號、序列第322號或序列第373號所示的序列。 27· —種人類抗體或抗體片段，該抗體或片段： (i) 與人類斑塊結合；且 97784b.doc 200530267 (ii)包括重鏈CDR3區，其包括選自序列第29號、序列第 47號、序列第50號、序列第53號、序列第56號、序列第 59號、序列第62號、序列第65號、序列第68號、序列第 71號、序列第74號、序列第77號、序列第80號、序列第 83號、序列第86號和序列第89號所示序列的胺基酸序列。 28·如先前請求項中任一項之抗體或抗體片段，其在VLDL的 存在下與該斑塊結合。 29·如請求項18、19和28中任一項之抗體或抗體片段，其中 該VLDL出現在人類的血漿中。 3 0·如請求項29之抗體或抗體片段，其在25%血漿的存在下與 該斑塊結合。 31.如請求項30之抗體或抗體片段，其在從25%到50%血漿的 存在下與該斑塊結合。 3 2.如請求項31之抗體或抗體片段，其在50%血漿的存在下與 該斑塊結合。 φ 33· —種抗體或抗體片段，其包括序列第136號所示的重鏈序 列，以及序列第521和522號所示的輕鏈序列。 3 4. —種抗體或抗體片段，其包括序列第142號所示的重鏈序 列，以及序列第523號所示的輕鏈序列。 35· —種抗體或抗體片段，其包括序列第40號中出示的重鍵 序列’以及序列第5 17及/或5 1 8號所示的輕鍵序列。 36· —種抗體或抗體片段，其包括序列第4〇號所示的重鏈序 列，以及序列第5 19及/或5 2 0號所示的輕鏈序列。 97784b.doc 200530267 3 7. —種抗體或抗體片段，其包括序列第24號所示的重鏈 CDR1序歹丨J，序歹ij第25號所示的重鏈CDR2序列，以及序列 第207、209和210號所示的重鏈CDR3序列。 38·如請求項37之抗體或抗體片段，其包括序列第33、34和 35號、序列第219、247和269號、序列第226、252和275 號，或序列第218、34和268號所示的輕鏈CDR1、CDR2 和CDR3序列。 _ 39·如請求項38之抗體或抗體片段，其中該重鏈包括序列第 210號所示的序列，且該輕鏈包括序列第33、34和35號所 示的序列，該重鏈包括序列第209號所示的序列，且該輕 鏈包括序列第219、247和269號或序列第218、34和268號 所示的序列，或該重鏈包括序列第207號所示的序列，且 該輕鏈包括序列第226、252和275號所示的序列。 40.如請求項37至39中任一項之抗體或抗體片段，其中該重 鏈包括序列第3 17、3 1 8或3 19號之任一個所示的序列。 φ 41·如請求項38至40中任一項之抗體或抗體片段，其中該輕 鏈包括序列第43、295、294或304號所示的序列。 42· —種抗體或抗體片段，其包括序列第48號所示的重鏈 CDR1序歹ij，序列第49號所示的重鏈CDR2序列，以及序歹ij 第320、322和323號之任一個所示的重鏈CDR3序列。 4 3 ·如請求項4 2之抗體或抗體片段，其包括序列第3 2 6、3 3 4 和341號、序列第93、333和341號或序列第325和333號所 示的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列。 97784b.doc 200530267 44·如請求項43之抗體或抗體片段，其中該重鏈包括序列第 320號所示的序列，且該輕鏈包括序列第93、333和341號 或序列第325、333和341號所示的序列，該重鏈包括序列 第322號所示的序列，且該輕鏈包括序列第326、334和341 號、序列第93、333和341號或序列第325、333和341號所 示的序列，或該重鏈包括序列第323號所示的序列，且該 輕鏈包括序列第93、333和341號所示的序列。 45·如請求項42至44中任一項之抗體或抗體片段，其中該重 鏈序列包括序列第369、370、371或372號所示的序列。 46. 如請求項43至45中任一項之抗體或抗體片段，其中該輕 鏈包括序列第347、348、357或362號所示的序列。 47. —種抗體或抗體片段，其包括序列第66號所示的重鏈 CDR1序列，序列第67號所示的重鏈CDR2序歹4，和序歹第 373號所示的重鏈CDR3序列。 48·如請求項47之抗體或抗體片段，其包括序列第391、382 和378號或序列第394、386和378號所示的輕鏈CDR1、 CDR2和 CDR3 序歹。 49·如請求項47或48之抗體或抗體片段，其中該重鏈包括序 列第397號所示的序列。 50·如請求項48或49之抗體或抗體片段，其中該輕鏈序列如 序列第406或418號所示。 5 1 ·如先前請求項中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體 為 IgG。 97784b.doc 200530267 52·如凊求項1至5〇中任一項之抗體或抗體片段，其中該抗體 片段為Fab片段或scFv。 53·如先前請求項中任一項之抗體或抗體片段，其為單株抗 體。 54·如先前請求項中任一項之抗體或抗體片段，其為人類化 的抗體。 55·如先耵請求項中任一項之抗體或抗體片段，其為嵌合型 的。 56· —種組合物，其係用來治療或預防澱粉樣蛋白病症，包 括作為活性成分的如請求項1至50中任一項之抗體或抗 體片段。 57·如請求項56之組合物，其中該澱粉樣蛋白病症係選自阿 故海默氏症、原發性系統性澱粉樣變性、繼發性系統性 贏耗樣薆性、老年系統性澱粉樣變性、家族性澱粉樣蛋 白多神經病I、家族性澱粉樣蛋白多神經病瓜、家族性 非-神經病性澱粉樣變性、遺傳性腦澱粉樣蛋白血管病、 家族性英國痴呆（FBD)、與血液透析有關的殿粉樣變性、 豕私（1 又私樣’菱性（分蘭型）、家族性上皮下角膜澱粉樣蛋 白、第Π型糖尿病、遺傳性腎臟澱粉樣變性 '腦下垂體 又籾樣又|± /主射局部的;殿粉樣變性、甲狀腺的髓質癌、 心房的殿粉樣變性、家族性丹麥痴呆（觸）、唐氏症、海 綿樣腦病、散發性亞急性海綿狀腦病、家族性亞急性海 綿狀腦病、醫源性朊病毒病症、變種的亞急性海綿狀腦 病、慢性小腦型海綿狀腦病（GSS)、庫魯病、帕金森氏症、 97784b.doc 200530267 亨i頓氏舞蹈症、家族性肌萎縮性側索硬化（als)和慢性 阻基性肺病。 58· 一種醫藥組合物，其包括如請求们至55中任-項之抗體 或抗體片段，以及在藥學上可接受之载劑或稀釋劑。 59. -種多核苷酸’其編碼如請求項a”中任一項之抗體或 抗體片段。 60·種載體，其包括如請求項59之多核苷酸。 61 · —種宿主細胞，其表現如請求項j至55中任一項之多肽。 62· —種病毒，其編碼如請求項59之多核苷酸。 63· —種檢測ApoE_CTD的套組，該套組包括如請求項工至“ 中任項之抗體或抗體片段，以及檢測該抗體或抗體片 段的工具。 64. —種檢測出現在得自個體之試樣中之Ap〇E_cTD的方 法，該方法包括： (i) 使取自個體之試樣與如請求項1至55中任一項之抗 體或抗體片段’在容許抗體或抗體片段與ap〇e_ctd結合 的條件下接觸；並 (ii) 判疋该抗體或抗體片段是否與該試樣結合，藉此檢 測任何出現在試樣中的Ap〇E-CTD。 97784b.doc
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