TW200489B - - Google Patents

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200489 五、發明説明（1 ) Λ (ί |{ fj 本發明為有關下式I及I之新穎化合物， Η 90 1809

Η 90 1809Η Λ ^

II (請先闓讀背而之注总事項孙蜞窩木頁) 經濟部屮央榀準，^β工消扑合作社印製 及其籍肋於鍵徽菌種（S t r e ρ t ο e s s p e. c i e s )培養物编 號 Η I L Y - 9 0，3 1 6 6 5 ( S t r . s p . Y - 9 0，3 1 6 6 5 )之製法。此 徼生物已於1 9 9 1年2月2 5日依布達佩斯條約（t h e T「e a t y of Budapest)以 DSM 6 389號寄存之。 str. sp. Y-90，3 1655由取自印度 Rajasthan Bharatpur G a m e R e s e r v e之土壤土單離得之。培養物編號Η I L Y - 3 -本紙5艮尺度边用中S Η家標iMCNS)甲4規IM210X29V公龙） 200489 Λ (ί Η 0 五、發明説明（2.) 法 方 知 己 依 可 sm: 種 變 突 和-N 基 異硝 愛，-之-N 65基 16甲 劑 變 突 用 使 光 外 紫 或 胍 硝 亞 此 ο 之 得 獲 而 r 和 sis 物激 生鐽 撤 ， 屬 0 目徽 菌鏈 線及 放 . 於e) 屬ea 上 nE 理 生 和 養 培 態 形 在 於 由 稱 文 本 生 産 會 於 由 又 同 不 株 菌 知 已 與 徵 待 些 某 之

至 ο 5 株6 菌PH 穎用 新使 為 ， 視法 被方 而知 因已 ，依 物可 、 5 合 6 匕 6 /1 11 3 穎’ 新90 述 Y 後 . - P 之 S 之 尋 /f 离 單 中 壊 土 自 基 養 培 之 之糖 述萄 下¾ 由為 佳可 較源 基磺 養 。 培成 之組 用劑 所化 物固 生及 徹鹽 此養 出培 離機 單無 中 ， 壤源 土氮 自和 m ,如 腺酸 白基 蛋胺 為或 可 ， 源白 氮蛋 。酷 蜜 ， 糖膏 或浸 糖穿 蔗麥 油膏 甘肉 ，牛 精 ， 糊物 ，出 粉.浸 殿母 ，酵 鹽。絲 養鹽菌 培之生 機硫氣 無或色 。磷無 脂，出 瓊銅長 為.延 如錳絲 例，a 可鋅質 劑，基 化鐵歧 固，分 〇 鈣自 胺，物 醯镁生 欠、、'^ 天鉀之 或，明 酸納發 胺為本 精可 β. *口 旋 螺 如 於 子 孢 C e 頭 x 絲 菌 生 氣 之 (請先間讀背而之注意事項洱塡寫本頁) 經濟部屮央榀準工消讣合作社印製 子生 孢徹 囊此 子於 有基 未 〇 也上 旋以態 迴個形 成 ΓΟ 和 未子養 0 孢培 _ 有之 直含得 成键獲 由 及 以 »ηΛ 缜 持 上 各基二 ，養L-錬-培 L 子脂得 孢瓊析 之種分 熟各壁 成由胞 。物細 上 如 於 限 未 並 明 0 發 種本 菌 ， 徽解 鏈瞭 為然 0 必 確 士 而人 ，之 在術 存技 酸項 二此 庚悉 基熟 胺 通 度 尺 紙 :本 毕 家 腿 公 I297 200489 ΛΒ 五、發明説明（3) 述之特定微生物，而是亦包含由此徹生物衍生且能産生 新化合物M901809之自生或人造之突變種和變異種。 化合物Μ 9 0 1 8 0 9之化學構造已由二維之N M R光譜術獲得 之數據而說明之。此Μ901809由三糖單位連接至含有糖 t配基（aglycone)之多環‘酮（xanthone)構成。於酸性 條件下，此M901809可水解産生亦是新穎抗生素之糖苜 配基M901809H。此M901809及M901809H均代表新穎之天 然産物。 下列為數個已知抗生素，均有相同之磺骨架，但在F 環，以内醯胺官能基代替内酯官能基，而成十分不同之 取代型： 溶血脂質I f L y s ο 1 i p i r 鹿撇素 I ) (請先間讀背而之注念事項#填寫木π) 經濟部中央櫺準而只工消费合作社印奴 (Cervinomycin) 放線平謂A-G (Actinoplanones 西毛黴素 (Sirnaoraicins) LL-E 1 9 08 5 西崔徽素 (Citreamicins) M. Dobler and W. Keller-Schierlein; Helv. Chim. Acta 60 (1977), 178. S. Omura, A. Nakagawa, K. Kushida and Q. Lukacs; J. Amer. Chem. Soc. 108 (1986), 6088. K. Kobayashi, C. Nishino, J. Ohja, S. Sato, T. Mikawa, G) Y. Shiobara and M. Kodama; J. Antibiotics XLI (1988, 741. T. M. Lee, G.t. Carter and D.B. Borders; J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1989), 1771. W.M. Maiese, M.P. Lechevalier, H.A. Lechevalier, J. Korshala, J. Goddmann, M.J. Wildey, N. Kuck and M. Greenstein; J. Antibiotics XUI (1989), 846. G.T. Carter, J.A. Nietsche, D.R. Williams and D.B. Borders; J. Antibiotics XUII (1990, 504. -5- 本紙5良尺度边用中a困家標芈（CNS) ΤΜ規格（210x297公龙） 200489 ,o o An

Η

3 Η 2 c R

l^sH, NH2， N=C(CH3)2， N=C(CH3)C0CH3 2=H, Cl放線平酮 A-G

(請先Mlifr背而之.注意事項孙填窍本頁) 裝· 訂 線_ rtL Ki J -uv t- > f» l - - ^TJ · »K .cr Lu 7 ot

ReC0CH2CH(CH3)2LL-E19085〇t R*H, CO-烷基 西崔徽素· 本紙5fc尺度边用中as家找準（CNS)>P4規格（210X297公: 200489

Λ (i Η G 經濟部中央櫺準而Α工消扑合作社印3i 五、發明説明（5 ) 本發明亦提供6造含有新穎糖IT配基Μ 9 0 1 8 0 9 Η之 Μ901809之方法，包括：於20〜40°C溫度之需氣條件下， PH6.0至8.0之含有磺源和氮源，無機培養鹽，及徹量元 素之培養基中，醱酵培養Str. sp. Y-90,31665,然後 依本文所述之已知方式，自培養液單離出此化合物。 製造此新穎化合物所用培養基中之磺源可為，例如， 澱粉，糊精，甘油，蔗糖，糖蜜或油。製造此新穎抗生 素所用培養基中之氮源可為，例如，大豆粉，酵母浸出 物，牛肉《，麥芽浸裔，玉米漿，蛋白陳，明膠，或酪 蛋白。而製造此新穎抗生素所用培養基中之無機培養鹽 /無機鹽可為，例如，氣化納，硫酸鎂，硫酸銨，或碳 酸鈣。徹量元素可用，例如，鐵，錳，銅，鋅，或鈷。 此S t「. s ρ . Υ - 9 0 , 3 1 6 6 5最好於;2 7 Ό和ρ Η 7 . 2下培養之 。最好於6 6至7 2小時之後，化合物獲得最大量時，停止 酿酵。而醱酵可為深層醱酵。醱酵形成新穎化合物之過 程，可由於瓊脂培養基中培養液和菌絲體對金黃色葡萄 球 _ 209P(Staphylococcus anreus 209P)之抗菌活性， 及由以乙酸乙酯做展開溶劑之於矽膠板上進行之薄層層 析監測之。 醱酵培養期間，需要的話，培養基中可加防泡劑，例 如，帝靳摩芬（D e s m 〇 p h e η < I > ，多醇類，西德，貝爾A G , Leverkusen) 〇 化合物Μ 9 0 1 8 0 9發現主要存於菌絲體中，並且可以有 -7 - (請先閱-背而之注愈事項#艰寫木頁) 裝- 線- 本紙5艮尺度通用中a困家榣毕（CNS) f Ί規怙（210父297公放） 200489

Λ () |{ G 經濟部屮央標準而A工消"合作社印製 五、發明説明（.6)機溶劑（如，甲醇，丙酮，乙腈，氣仿，或乙酸乙酯）萃 取出。所用有機溶劑以丙酮最好。菌絲體萃取物經濃縮 後，濃縮液以水稀釋後，以與水不溶混之溶劑（如，丁 醇，乙酸乙酯，或氮仿）萃取。此與水不溶混之溶劑中 以乙酸乙酯最好。抗生素^<901809亦可於調？(^6.8〜7.2 後，以與水不溶混之溶劑自培養濾液中萃取得之。此時 與水不溶混之溶劑可為乙酸乙酯或氣仿，以乙酸乙酯最 好，而P Η最好為7 . 0。g絲體之溶劑萃取液和培養濾液 均經濃縮以移除溶劑，然後進一步層析之。化合物 M901809亦可獲自培養液直接吸附於合宜之吸附體上， 此吸附體例如安柏賴\ X A D - 4或7型（A m b e r 1 i t e (R ) X A D - 4 i R ) 或7 ,美國羅門哈斯公司裂品），或戴恩 Η P - 2 0 ( D i a ί ο n Η P - 2 0 ,日本三菱化成工業公司製品），以戴恩（R } Η P - 2 0 最好。依本發明之化合物以合宜之移動相，例如甲醇或 丙酮，單獨，互相混合，或與水混合，自吸附體中溶提 出。然後，溶提液經蒸發至乾。溶提液以甲醇最好，所 得之活性溶提液經收集後濃縮之。 前述經濃縮之含有化合物Μ 9 0 1 8 0 9之溶提液或萃取液， 可依下列數個方法純化之：例如，用活性磺，安桕賴 (R) X A D - 4及7或戴恩 Η Ρ - 2 0之再吸附和溶提方法；用西法 (Ρ ) (ρ ) 德斯 L Η - 2 0 膠（S e p h a d e X L 1卜 2 0 s e 丨，瑞典， Pharmacia Fine Cheisicals AB)及其相等物之凝膠過膝 法；用氣化鋁及矽凝膠之吸附層析；亦可組合使用以作 (請先間-背而之注意本項#堪窍本頁) 線- 本紙5民尺度边用中a S家從準（CNS)lM規tM210x297公;《：) 200489 Λ ίί Π 6 經濟部屮央標準局员工消赀合作社印製 五、發明説明（7) 進一步純化。此外，可使用以合宜吸附劑如矽膠和改良 矽膠-C 1S ,用合宜溶劑条統之薄層層析，中壓和高壓液 相靥析。再則，用持殊雙相溶劑条統之逆流層析亦可達 此目的。較佳使用以二氣甲烷和乙酸乙酯作溶提溶劑之 矽膠層析。另一單獨使用或與上述純化程序組合使用之 純化方法，為基於化合物Μ 9 0 1 8 0 9溶於有機溶劑之溶解 度差異之方法。上述經濃縮之含有化合物Μ901809之萃 取液或溶提液，可依已知方法，用己烷或石油醚重覆沈 濺之。 化合物Μ901809亦可以甲醇：水（99:1)及甲醇：乙酸 乙酯（1 : 1 )洗滌以移除不純物。最後，化合物Η 9 0 1 8 0 9可 於合宜溶劑或混合溶劑中结晶之。 化合物Μ 9 0 1 8 0 9於酸性條件下水解産生酸性水解産物 Μ901809Η。所用之酸可為乙酸，硫酸，鹽酸，硝酸或磷 酸。水解可直接於各種強度之酸，或與有機溶劑如甲醇 -丙酮或乙腈組合，加熱或不加熱下進行。較佳之方法 包含Μ 9 0 1 8 0 9用甲醇：鹽酸（1 : 1 )回流之方法。 糖Ε配基Μ 9 0 1 8 0 9 Η可自反應混合液中減壓蒸餾移除溶 劑而回收之。殘物用水洗並經與水不溶混之溶劑如二氣 甲烷萃取。經濃縮之二氮甲烷萃取液用二氮甲烷對乙酸 乙酯梯度液進行矽膠層析，獲得純質Μ 9 0 1 8 0 9 Η。 -9 - 本紙尺度边用中S國宋橒準（CNS) Ή規怙（210x297公龙） (請先間讀背而之注意事項洱填窍木頁) 裝· 訂 線- 200489 Λ (i 15 fi 五、發明説明（8) 表I -化合物Μ 9 0 1 8 0 9及其酸性水解産物Μ 9 0 1 8 0 9 Η之理 化性質 Μ 9 0 1 8 0 9 Μ 9 0 1 8 0 9 Η 外觀 黃色粉末 溶解度 不溶於水，己烷和石 油醚（4 0〜6 0°C ) 難至中等溶於甲醇， 乙腈和乙酸乙酯 極易溶於二甲亞鸱， 黃色粉末 不溶於水，己烷和石 油醚（4 0〜6 0 °C ) 極易溶於甲醇，乙請 ,二甲亞踽，二氣甲 烷，乙酸乙酯和氛仿 二氯甲烷和氯仿 熔點 > 2 5 0 υ 薄層層析条統（T L C ): T L C板：預塗矽膠板：西德，達木斯塔特市， 品號5 5 5 4。

1 3 6 - 1 3 9°C .黙克， (請先間-背而之注意事項#填寫木頁) 裝. 線- 值： Η 9 0 1 8 0 9 Μ 9 0 1 8 0 9 Η 經："'部屮央標準而CX工消仲合作社印51 乙酸乙酯 0.15 二氯甲烷：甲醇 0.62 (9:1) 0.44 0.58 10 本紙ifc尺度逍用中围Η家榀準（CNS)規格（210x297公设） 議489 Λ (i Π fi 五、發明説明（9 ) 5 .高壓液相層析（Η P L C ): 裝填管柱：ODS-HyPe「s i 1 流速 ：l.Oml/min 偵測波長：2 2 0 n m或2 7 0 n m 溶劑 ：乙腈：水（3 : 7 ) M901809之 RT : 4.2 分 -10 u , 4 x ( 3 0 + 1 0 0 )

6 . U V max (甲醇）：228, 272, 360及 420nm; Μ 901809及 Μ901809Η於0.1Ν氫氣化納-甲醇或0.1Ν 鹽酸-甲醇，未移。UV吸收光譜用Uvikon 8 ] 0分光光度計於2 0 0至8 0 0 n Hi範圍測量。 Μ 9 0 1 8 0 9之U V光譜示於第1圖。 7. 1 H-NMR光譜 用 400MHz Bruker AM-400WB 8 · 13 C - fl M R 光譜 用 B r u k e r AM-400-WB儀 用寬帶去偶合 9 .分子式 見第2圖 見第3圖 (請先間1?背而之注意事項#堝寫木页) 見第4圖 經濟部中央#準灼Α工消合作社印ft'14 C47C56 °20 C, 28 ^4 °11 用V G Z A B 3 F儀，高解析-快速原子撞擊（H R - F A B )型， 於正離子游離型。 上述數據經C A S (化學文摘操作）聯機檢索，證明化合 物Μ 9 0 1 8 0 9及Μ 9 0 1 8 0 9 Η為新顆化合物。 11- 本紙尺度边用中國國家標準（CNS) ΤΊ規格（210X29V公使) 200489 Λ fiη ο 五、發明説明（10) {匕合物Μ 9 0 1 8 0 9及其酸性水解産物Μ 9 0 1 8 0 9 H對格蘭氏 (陽括細®有抗菌活性。此二化合物之最少抑制濃度（Μ I C ) ,丨衣谨脂-稀釋方法，用Mueller-Hinton瓊脂，決定如 表II所示。 表I -化合物M901809之生物活性MIC-ϋ g/ml 號碼 受試生物

M901809 M901809H (請先間-背而之注意事項洱蜞寫本頁) 2 . 3 . 4 . 5 . 6 . 7 . 8 . 9 . 10. 11. 12. 13. 14. 1 5 . 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 金黃色 葡萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 «5萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 葡萄球 菌 2 0 9 P 菌 3 0 6 6 菌 20424 a Μ 20240 b ® 789 ® E 88 m E 121 菌 0 1 1 ϋ C 5 ® 690 U 694 菌706 菌710 ® 7 1 2 菌722 菌72 5 裝· 訂< 線· 本紙5fc尺度边用中國®家標iMCNS)TM規格（210X297公:《：) 200489

Λ ί； Η G 五、發明説明（11) 經沭部屮央#準而只工消许合作杜印製 16. 金黃色葡萄球菌Co. 1 0.1 17. 金黃色葡萄球31153 0.1 18. 表皮葡萄球@823c 0.4 19. 表皮蒱萄球菌825c 0.8 20. 表皮葡萄球菌109 0,4 21. 表皮β萄球菌607 0.4 22. 表皮》萄球菌178 0.2 23. 表皮《萄球菌291 0.2 24. 表皮«萄球®2Tub 0.2 25. 溶血Μ萄球菌809 0.4 2 6. 溶血葡萄球菌7 12 0.2 27. 尿腸桿菌 vanRicd 1,6 2 8. 糞腸桿 0 E d e r 0.4 29. 糞腸捍 ϋ21777 0.4 3 0, 糞腸桿菌D 6 5 0.6 31. 糞腸桿菌734 0.4 3 2. 糞腸捍菌7 8 2 0'. 4 3 3. 糞腸捍菌2 6 7 7 7 0.4 34. 糞腸桿 ®3903 0.4 35. 糞腸桿菌UD8b 0.8 3.2 (請先閲-背而之注意氺項洱堝寫木頁) 訂 線· a =紅徽素抗性 b =召-内醯胺抗性 13 本紙5艮尺度边用中國國家標準（CNS) Ή規格（210X297公龙） 00489 ΛΠ _IU)_ 五、發明説明（12) c =泰可拉尼（Teicoplanin)抗性 d =萬古（Vanco)徽素抗性 菌株5至26為甲氧西林（methicil丨in)抗性葡萄球_ 此外，亦發現化合物Μ 9 01 8 0 9用以治療受葡萄球_ (staphyococci)和鍵球菌（streptococci)感染之試驗動 物有效。 本發明進一步由較佳實施例和申請專利範圍加以説明 〇 審旆例1 由土壤中單離出_徹菌種Y-90, 31665 (a )單離培養基之製備 培養基：殺粉 酪蛋白 KNO a NaC 1 K 2 Η P0 4 MgSO 4 · Ca CO a FeSO 4 · 7H 2 7 H 2 0 - 1 0 . Og 0 . 3 g 2 . 0 g 2 . 0 g 2 . 0 g 0 . 0 5 g 0 . 0 2 g 0 . 0 1 g (請先閲請背而之注*肀項#填窍本'|1) 裝· 訂 線_ 經濟部屮央#準而员工消许合作杜印51 瓊脂 1 5 . 0 g 蒸IS水 --- 1升 pH —— 7.2-7.5 此培養基於1 2 1 °C滅® 3 0分鐘。經滅®之培養基均冷 14 本紙汝尺度遑用中國國家榀準（CNS)T 4規岱（210x297公犮） 200489 A fi Π () 五、發明説明（ 至 卻 上 後 降 沈 壤 土 〇 待 化 。 固 勻 之 均 使 盪 。 , 搖基 板備後養種 氏製水 替之餾 陪液蒸 入浮於 倒懸浮 ,壊懸 p 土壤 5 ▲ 4 }. 土 培接 離之 單基 述養 上培 至離 種單 接} 液(C 澄 有 含 至 tf 1 種 接 液 浮 懸 壤 土 陪 之 基 養 培 單 述 上 生 徹 長 生 ΌΠ 曰 ο IX 育 離培 。 單°cco 之3016 5 $ 3 6 S , 6 0 1 ffl 9 3 i -* ΐ γ 90培種 Υ-氏 ® 種替徽 。 菌陪鍵 皿徽之出 養 _ 種離 培} 接單例 氏(d經中施 替 物莒 物 合 化 生 産 酵 醱 以養徽浸 用培鏈 ί牙 之 麥 I 種 0 徽 鏈 之 (請先IVJ請背而之注意事項再堝寫木頁) 裝- 訂_ 經濟部屮央榀準局is工消作合作社印3i 物 出 浸 母 酵 之 下 如 s s g s S 域 ο ο ο ο 升 0 4 4 5'—_ 於 1 1 ^ ..... 3Κ. -----ί I I I i 5 6 6 J -—ί 物 3 ， 音出 90浸浸糖 水 Y-.. 芽母萄脂餾 種中麥酵：葡瓊蒸 菌蕾 -12面 I 於斜 匕ra 管瓊 試備 於製 配以 PH分卻 基冷. 養之 培使 置

斜 經 管 試 ο 鐘 分 ο 3 :固 滅 P 於 I 種 接 液 養 咅 fj 以 面 斜 此 線· 本紙張尺度边用中S困家楳準（CNS)IM規格（210x297公犮） 200489 Λ β Π (5 五、發明説明（14) 2 8 °C培育1 0至1 5天，發現生長良好且形成孢子。於一斜 面上，孢子於蒸餾水中之懸浮液用以接種至各含有1 〇 〇 m 1 種子培養液之500ml愛倫美氏燒瓶5値。 種子培養基之組成 蕕萄糖 1 5 . 0 g 大 3·粉 1 5 . 0 g 玉米漿 5 . Og C a C 0 3 2 . 0 g N a C 1 5 . 0 g 蒸餾水 1升pH 6.5 上述培養基3 Jl每100ml量分配於500ml愛倫美氏燒瓶 ，於1 2 1 °C滅® 3 0分。燒瓶經冷卻後，接種以孢子懸浮 液或_絲镇料，於2 7 °C ( + 1 C )用1 . 5吋轉之旋轉搖盪器 以2 4 0 r . p . m ·搖盪7 2小時。所得生長物接種至含有8 5 L培 養基3%(v/v)之100LSI酵瓶中。 産物培養基之組成 (請先閲請背而之注意事項孙填寫木I) 裝_ *?!> 線. 經濟部屮央標準而3工消价合作杜印51 糖粉 萄豆 葡大

2 水 o H C 蒸PI ο 2 升 本紙尺度逍用中S Η家«Uf (CNS)T4規tM2丨0x29/公设） Λ () Η 0 〇00489 五、發明説明（15) 35 ml帝斯摩芬（R)作防泡劑加至含85L産物培養基之 1 0 0 L醱酵瓶。培養基於1 2 1 °C經直接和間接蒸汽滅菌2 0 分。醱酵瓶經冷卻後，接種以種子培養液（3 % V / v )。於 271C (±11C), lOOr.p.m.ji拌條件及每分鐘60升通氣率 下，進行醱酵。醱酵在最後66小時中斷時，培養液之pH 值為6 . 7。至於抑制區之直徑，欣瓊脂小凹洞方法，金 黃色葡萄球® 209P及藤黃擻球® (Micrococcus luteus) ，以培養濾液測定分別為1 1和1 5 m m ,以菌絲萃取物測定 分別為1 4和1 6 m in。装填細胞體積為1 8 % U / v )。培養液依 實施例Μ進行。

奮旆例I 化合物M901809之單離和純化。 如實施例IT醱酵得之培養濾液（7 5升），以4 5升乙酸乙 Λ -ρ Λ 酯（ΡΗ7.0),用Westphalia 逆流萃取器予萃取之。乙 酸乙酯萃取胶經濃縮至乾得3 5 g粗萃取物。菌絲（3 . 5 k g 溼重）以20升丙酮各萃取2次。丙酮萃取液經濃縮移除 有機溶劑，然後以蒸餾水稀釋至2 5升，接著以1 5升乙酸 乙酯各萃取2次。第二次萃取得到1 6 5 g粗菌絲萃取物。 粗萃取物經收集後，溶於最少量二氮甲烷，裝至矽膠 (2 0 0〜3 0 0篩目）之4 . 5 X 4 0 c m玻璃管柱。此管柱以二氣 甲烷對乙酸乙酯之梯度液溶提之。於二氛甲烷：乙酸乙 酯=7 0 : 3 0時，單離出未確認之中性大環内酯抗生素。 若比例為5 0 : 5 0至4 0 : 6 0 ,則獲得已知之大環内酯抗生素 -1 7 - 本畝尺度边用中S Η家標準（CNS)TM規格（210X297公;《：) (請先閱-背而之注意事項孙填艿木页) 裝. 線· 經濟部中央榀準而β工消价合作社印製 200489

Λ (ί Η G 五、發明説明（1弓 杳耳徽素（c h a 1 c o m y c i η )。化合物Μ 9 0 1 8 0 9於溶劑比例為 10:90時開始溶離出，並且以100¾乙酸乙酯完金溶離出 。所得之黃色粉末（4 . 2 g ),首先以2份1 0 0 m 1量石油_ (40〜6010)洗滌，然後以2份50ml量甲醇洗滌，最後以 乙酸乙酯：甲醇（1 : 1 )混合液5 0 m 1洗滌，得到2 . 0 g純化 合物M901809。此M901809依表I和表I所述之理化性質 和生物活性確認之。 宮掄例IV 酸性水解産物M901809H之製備 M901809(2g)溶於甲醇（50nil),又加入50ral濃鹽酸。 反應混合物於水浴上回流3小時，然後，混合溶劑經減 壓蒸餾以移除所有溶劑。殘物以2 X 2 5 m 1蒸餾水洗，隨 後以2m]二氮甲烷萃取。二氮甲烷層予以分離，真空濃 縮後乾燥之。濃縮物裝填至含有5 0 g矽膠（2 0 0〜3 0 0篩 目）於二氣甲烷中之2x3〇Cm玻璃管柱。此管柱以二氣甲 院：乙酸乙酯而漸增乙酸乙酯之梯度液溶離，而於二氯 甲烷：乙酸乙酯=50:50時溶離出M901809H,獲得600rag 純化合物。此M 901809H依表I和表I所述之理化性質和 之 認 確 性 活 物 生 (請先閲讀背而之注意事項再塡寫本頁) 裝. 訂' 線 經濟部屮央榣準灼员工消作合作社印製 本紙5艮尺度边用中a國家ii準（CNS) TM規格（210x297公没） DAP、 DiaminopH-3elinic acH-d Menachinone: 9/4、 g-f)·-·s fe, MK丨 9 (u0·)；~f MK 丨(H-;-、®··sK—9 (11-, . 勺olar lipias··^H， p-ospllatzidyleilllanolamin'·°HIPE, IlydroxylPE·-·set: PES posphatlidymetllly letihanolamin ; Phosphat i ay lc-ο i in···=p°'prosp-atiaylglucosElmin'·PI, pllosphailidyiinosi tol'·^IM, phosphatzidylinosit-olmannoside; πο、^-owp-Q^+ayl glycerol; DPG、 Dip-osphaailylcjlycerol; GL, Glykolipide· ^atl^y acids 1-5^、 ( + )*·5115%,·; 15 — 39%, +十；V 〕0'INes 丄-+''*(<J in izraces; iso-16'w-wol Hexadecan l^Methy llpenradecanalcids···IGlsell®、 Hutierliulos^e^rin acid·-·2 丨 Oli 丨 16, 2—Hydroxyl palm^-tiniuc acid 、

sr· streptiyces ID 91IS phofiphol.ipiiie oil丨 lyso 5rot PE PK-K PRPCSPG PI -'V I I I 丨 -+ nortested

Golour colour colour Air 丨 sulDS^rate— di£f· sr, 3ycel 3ycel Pigxnentis Slzrepi: omyces ID 91—94 gK-ey reddisii none brovm

PIM 勹Ώ DPG GL spore ch-ains Morphology. 卬pirals

II

Typ

I*ormati〇n of 3elanoid pigments ' LL· 十/丨 LL I'atztiywo卜as Ho Iko iso anteisoMecH J6 15 17 15 17 17 15 ++ 1'+,工.+{ V) V -丨---♦ 丄· ·"·· —一· 丄· #1

SM SM -Typ + 十十+ *·-十' 土‘ _'十

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Identification of the Streptomyces Isolate 91-94 by morphology, physiology and cheitaxoly. Isolate2? Y 90 31665

Claims (1)

1. 200489 枕充 -A3- B7^ of 六'申請專利範面 專利申請案第80109359號 ROC Patent Appln. No 80109359 修正之申請專利範圍中；5：本-附件一 Amended Claims i n Chinese ~ Enel. I (民國81年11月X斗日送呈> (Submitted on November 1992) 1·下式（I)及（II)之化合物：

   CD (請先Klif背面之注意事項再瑱寫本頁) •襄· 經濟部十央標準局A工消费合作社印製 ο

   II Η 90 1809Η 2.—種製備如申請專利範圍第1項之式（II)化合物的方 法，係酸性處理如申請專利範圍第1項之式（I)化合物 者。 19 - 本紙張尺度速用中Β画家標準（CNS)甲4規格（210x297公#) 200489 at B7 C7 ' ----------D7 六、申請專利範团 3. —種製備如申請專利範圍第1項之式（1)化合物的方法 ，其係包括於需氧條件，6至8之pH及20至40 t：之溫度 下’於含有碳源，気源，無機營養源及微量元素的水 性培養介質中培養寄存编號為DSM 6389之Str. sp Y-90,31665,然後由培養液中單離出上述之化合物。 4. 如申謓專利範圍第3項的方法，其中培養係於“約為 7.2和溫度约為27 °C下進行之。 5·如申請專利範圍第3或4項的方法，其中培養係於66至 72小時後停止之。 6.—種做為抗菌劑之第學組成物，其係含有有效量之如 申請專利範圍第1項之式（I)及/或式（II)化合物。 (請先wlis?背面之注意事項再填荈本頁) k. 經濟部屮央樣準局貝工消贽合作社印製 •線 本紙》尺度適用中國B家搮準(CNS)甲4規格(210x297公嫠)