TW200426155A - Activated polyethylene glycol esters - Google Patents

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Description

200426155 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於可用於將生物活性及醫藥用胜肽和蛋白質 PEG化之聚乙二醇碳酸鹽活化酯類之製備。本發明涉及使 用經活化之碳酸和草酸^旨類以組成聚乙二醇混合性碳酸鹽 活化醋類’其可再與—種連接子或直接與標的胜肽或蛋: 質反應。 【先前技術】 許多胜肽類和蛋白質類已廣泛藉由基U程技術開發成 有用之藥物。然而，其醫療潛力通常因其為胜肽或蛋白質 之本質特性而嚴重受限。此等分子可快速被蛋白酶代謝並 快速經腎臟過濾而排出。再者，即使其序列只是類似人類 蛋白質亦有可能誘發免疫反應。因此頃需藉由化學修飾開 發生物安定性較高且長效之胜肽_或蛋白質基底性藥物。 聚乙二醇（PEG)係一種親水性、生物相容性且無毒之水溶 性聚合物，其通式為H-(〇CH2CH2)n-〇H，其中n>4。其分子 量為300至40,〇〇〇道耳頓。 將PEG結合至蛋白質及/或胜肽上經證實可顯著提高其生 物活性期限。PEG提供一種較安定之構形並增加分子大 小，因此減少其代謝性降解及腎臟清除。再者，peg化可 降低免疫原性並改善胜肽或蛋白質之安定性。 已知多種PEG-蛋白質共軛物可避免蛋白質分解及/或具 有降低之免疫原性[Monfardini等人，Biocon. Chem·，6，62_69 (1995);和 Yamsuki 等人，Agric· Biol· Chem·，52, 2185-2196 9l383.doc 200426155 (1988)] 〇 PEG結合為一種已藉由Davis和Abuchowski之研究 [Abuchowski，A.等人，J· Biol· Chem·，252, 3571 (1977)和 J· Biol. Chem·，252, 3 5 82 (1977)]為先驅而建立之用以修飾胜 肽和蛋白質之方法。將PEG結合至胜肽或蛋白質通常涉及 PEG之活化並將活化之PEG-中間產物直接與標的蛋白質/ 胜肽或偶合，或與一種連接子偶合，再隨後將之活化並偶 合於標的蛋白質/胜肽。該結合之一關鍵課題係為用以活化 PEG和PEG-連接子之化學藥品，其可因而決定偶合效率和 經活化PEG或PEG-連接子對其標的物之專一性。 舉例言之，已知經三氯三嗪活化之PEG具毒性並無專一 性，其後來被各種可與標的胜肽或蛋白質之胺基[Bencham C.O.等人，Anal. Biochem·，131，25 (1983) ; Veronese，F.M.等 人，Appl· Biochem·，11，141 (1985); Zalipsky，S.等人，Polymeric
Drugs and Drug Delivery Systems, adrs 9-110 ACS Symposium. Series 469 (1999) ； Zalipsky, S.f A ^ Europ. Polym. J., 19, 1177-1183 (1983) ; Delgado，C-等人，Biotechnology and Applied Biochemistry，12，119-128 (1990)]，硫氫基[Sartore，L·等人， Appl· Biochem. Biotechnol·，27，45 (1991);和 Morpurgo 等人， Biocon· Chem·，7, 363-368 (1996)]或胍基[Pande，C.S·等人， Proc.Nat.Acad.Sci·，77，895-899 (1980)]專一性反應之經活 化PEG所取代。蛋白質PEG化之另一技術難題係因一種蛋白 質或胜肽通常不僅含有不同之官能基，例如：胺基、胍基 羥基或硫氩基，且其數量亦為一個以上。結果，產物中會 91383.doc -6- 200426155 含有具不同PEG-蛋白質化學計量之共軛物混合物。將PEG 結合於生長何爾蒙（GH)代表此等問題之一種典型實例 [Clark，R·等人，J. Biol· Chem·，36, 21969-21977 (1996)]。 經證實GH之Lys殘基於隨機位置被Peg化。蛋白質之定位 PEG化仍為一種化學上之挑戰。 要提南PEG對蛋白質或胜肽之偶合專一性而不顯著降低 其偶合效率，常使用PEG之碳酸酯類以生成peg-胜肽或 PEG-蛋白質共軛物。N，N，-二琥珀醯亞胺基碳酸酯（DSC)可 用以與PEG反應以生成活化之混合性peg·號珀醯亞胺基碳 酸S旨，隨後使之與連接子之親核性基團或標的蛋白質/胜肽 之胺基反應（美國專利第5，2 8 1，6 9 8號和美國專利第 5,932,462號）。以類似型式之反應，可將1，1，-(二苯并三唑基） 碳酸酯和二-(2-吡啶基）碳酸酯與PEG反應以分別生成pEG- 本并二σ坐基和PEG- °比咬基混合性碳酸g旨（美國專利第 5,382,657號）° — 然而，碳酸酯類並不易製備。一般而言，欲達良好之產 率’常於製備中使用光氣。此試劑於大規模合成中可能難 以處理且危險。因此，使用其他類似之活化酯類，例如製 備自草醯氯之N，Nf-二琥珀醯亞胺基草酸酯和^，-雙[6_(三 氟甲基）苯并-三唑基]草酸酯可能較佳且於PEG混合性活化 碳酸酯類之製備中較安全。再者，草酸活化酯類之製備可 能較碳酸活化酯類更為經濟。 【發明内容】 本發明說明一種用以製備一種活化聚合物酯類之方法， 91383 doc 200426155 該s旨類係用以連接至有或無連接子之生物活性親核物。更 特定言之，本發明係關於一種用以製造一種經活化之聚乙 二醇（PEG)酯之方法’其包含使至少具有一個游離經基之聚 乙一醇（PEG)於適當之反應條件下與草酸g旨反應以生成一 種PEG活化酯類。使用於本發明之草酸酯類係為N，N，_二珑 珀醯亞胺基草酸酯和1，1’-雙[6-(三氟甲基）苯并三唑基]草酸 酯。 經證實，產生之PEG活化酯可於適當條件下以特定方式 與生物活性親核物反應（美國專利第5,281，698號，美國專利 第5,650,234號和美國專利第5,932,462號）。更特定言之，其 可與胜肽或蛋白質之胺基而生成聚合物和胜肽或蛋白質之 間之胺基甲酸酯鍵。 本發明之另一具體實施例係為藉由說明於本發明中之方 法所製備之PEG混合性碳酸活化酯類。較佳者，該pEG混合 性石反酸活化醋類包括例如：PEG-琥ίό醯亞胺基和peg_6-(二 氟甲基）苯并三唑基混合性碳酸酯類。 本發明之另一具體實施例係為藉由說明於本發明中之方 法所製備之具或不具連接子之PEG-生物活性親核物共輛 物。較佳者，該PEG-生物活性親核物共軛物包括具或不具 連接子之PEG-胜肽和PEG-蛋白質共扼物。 本發明之另一具體實施例中，該PEG-生物活性親核物較 佳為一種胜肽或一種蛋白質。本發明涵括之較佳蛋白質為 揭示於美國專利第4,658,021號和美國專利第5,633,352號之 人類GH與抗體或其片段，例如··抗TNFa抗體、抗人類〇Η 9l383.doc 200426155 受體抗體、抗C-Met抗體和抗IGF-1受體抗體。 較佳之TNFj^體係為CDR-接枝性、hTNF40-基底性經修 飾Fab，如先前揭示於美國專利申請案2⑽2/151682 A1者。 於本發明之另一具體實施例中，peg活化酯係先與一種 連接子反應，再偶合至一種生物活性親核物。更特定者， 舉例言之，該PEG活化酯係與過量之丨，3_二胺基丙烷反應。 再將產生之（PEG)-0-C(0)-NH-(CH2)3-NH2共軛物與N-羧甲
基蘋果醯亞胺偶合。再將此等PEG-連接子共扼物與一種生 物活性親核物，更特定者，與一種抗體或抗體片段之Cys 殘基，例如··與一種抗-TNFa之經修飾Fab偶合以生成CDP 870。CDP 870, —種經peg化、抗-TNFa2經修飾Fab，係為 一種有效之抗風濕性關節炎抗體。 另一具體實施例係為一種治療需要之患者之方法，其藉 由投予醫療有效量之以揭示於本發明之方法製備之PEG — 胜 肽或PEG-蛋白質共辆物。 -r* · 本發明之草酸酯類可為市售或可簡易且低成本製備者。 其製備涉及使用草醯氣取代光氣。於大規模合成中，草醯 氣車父光氣容易操作且較安全。由於起始原料之較低成本和 較局之總產率’故草酸酯類之製備會比對應之碳酸酯類更 為經濟。此外，草酸酯類通常較碳酸酯類更安定且可於室 溫下維持一段長時期。再者，如上述討論，PEG活化酯類 具有專一性提高之優點。
因此’此等試劑應可對於日漸重要之用於各種疾病之治 療之PEG化胜肽和蛋白質之製備提供額外之改善。此等pEG 9l383.doc -9- 200426155 化方法可改善胜肽或蛋白質之溶解度，降低其免疫原性和 提南其代謝安定性。 發明之詳細說明 化學 類似於碳酸酯類[Takeda，K.等人，Tetrahed. Lett.，24, 4569- 45 72 (1983)] ’草酸酯類，例如·· N，N’-二琥珀酿亞胺 基草酸§旨（I，DSO)和1，1’ -雙[6-(三氟甲基）笨并三α坐基]草酸 酯（II)已被成功地應用於胺基甲酸酯衍生物之製備和胜肽 之合成[Takeda，K·等人，Tetrahed lett·，24，4451-4454 (1983) ; J· 〇rg· Chem·，50, 273-275 (1985) ; Ghosh，Α·Κ·，
Tetrahed· Lett·，33, 2781-2784 (1992)]。然而，將此等試劑 與PEG反應以生成碳酸活化酯類尚未被發表。
本發明係關於使用此等試劑於經活化之PEG碳酸酷（Ιπ 和IV)之製備中，該酯類可用以合成PEG化生物活性親核 物，更特定言之，為PEG化胜肽或蛋白質。此等方法可改 善胜肽或蛋白質之溶解度，降低其免疫原性和提高其代謝 安定性。 9l383.doc -10- 200426155
ill IV 於本發明之一具體實施例中，該方法係由一種PEG與 N，N’-二琥珀醯亞胺基草酸酯（I)於一種鹼性觸媒存在下生 成化合物III之反應所構成，如流程圖I之說明。適用於此且 均與草酸或碳酸活化酯類一同進行反應之鹼性觸媒包括： 有機鹼類，例如：吡啶和N，N’-4-二曱基胺基吡啶（DMAP)。
流程I PEG-OH +
9l383.doc -11 - 200426155 N，N’-二琥珀醯亞胺基草酸酯（I)可根據K. Takeda所說明 之程序[Tetrahed· Lett.，24，4451-4454 (1983)]於吡啶存之 下自N-羥基琥珀醯亞胺和草醯氯製備，如流程圖II。
流程II 〇 Λ Ν—〇Η 〇
Cl 丫〇 CI^〇
咸知吾人縱然僅提及聚乙二醇（PEG)，但其他所有列舉於 本發明中之PEG均可使用。一般而言，PEG之聚合物各端點 均具有一個游離羥基基團。較佳者，使用於本發明之PEG 至少具有一個端點羥基基團。此羥基經活化可與蛋白質或 連接子之一個游離胺基基團反應。於此例中，於N，N’-4-二 甲基胺基吡啶或吡啶存在之下，使PEG與N，N、二琥珀醯亞 胺基草酸酯反應以生成一種相對安定且活化之N-琥珀醯亞 胺基碳酸酯。此等PEG活化酯可再專一性與胜肽或蛋白質 之胺基基團反應以生成安定之胺基甲酸藓鍵。 或者，PEG活化酯可與一種連接子，例如：ω，ω-胺基烷或 胺基烷醯酸之胺基反應。隨後，將PEG-連接子共軛物活化 或與另一經活化部分反應，並再與胜肽或蛋白質之胺基基 團偶合。 於本發明之另一具體實施例中，將PEG於一種鹼存在之 9l383.doc -12- 200426155 下與l，lf-雙[6-(三氟甲基）苯并三唑基]草酸酯（II)反應以生 成化合物IV，如流程圖III之說明。
流程III
類似於PEG與N，N、二琥珀醯亞胺基草酸酯（I)之反應，此 反應係由一種有機驗催化，例如：°比σ定或DMAP。起始原料： l，lf-雙[6-(三氟甲基）苯并三唑基]草酸酯之可藉由K· Takeda所說明之兩步驟程序[J· Org. Chem·，50，273-275 (1985)]自4-氣-3-硝基-α，α，α-三氟甲苯製備，如流程圖IV顯 示。 91383 doc -13 - 200426155
流程ιν n2h4.h2o
隨後，將此等PEG活化s旨中間物經由胺基甲酸賴共價 性偶合至標的胜肽或蛋白質之胺基基團。或者，將此等中 間物先偶合至一或多種連接子，例如：…胺基烷、N-護 基烧基頻果酿亞胺或胺基烧酿酸，並再經或不經進一步活 化，偶合至一種胜肽或一種蛋白質之胺基或硫醇基團，如 下列流程圖V、VI和VII之說明。 -14- 91383 doc 200426155 流程v
GEP—〇 PEG-0
GEP—〇 l.TFA/CH2Cl2 2· DSC，°比咬 蛋白質， GEP—Ο 鹼 ）=0 ο
PEG-0
N——蛋白質
91383 doc -15 - 200426155 流程νι
PEG-0
GEP—〇 離胺酸-〇tBu -_
〇c(ch3)3 σ比淀 1. tfa/ch2ci2 2. DSC，吡啶
PEG-0
N-蛋白質
91383.doc -16- 200426155
流程VII
PEG-0、乂、八
Y 、、N hci.h2n〜^nh2
F3c
吡啶 ， 鹼 PEG-0 HN、^NH2
〇 〇 PEG-O^^Hfsr
〇 〇 / PEG-CT^ HN 〜^ N N、 H 『、(Cys)-蛋白質 〇 91383.doc -17 - 200426155 蛋白質合成和純化 用於結合之胜肽和蛋白質之製備可利用此項技藝中已完 正建立之技術’包括合成技術（例如：重組技術和胜肽合成 或此等技術之組合）或可分離自胜肽或蛋白質之内生性來 · 源。使用之胜肽合成法包括固相胜肽合成和典型之溶液胜 · 肽合成技術。於本發明之某些具體實施例中，選用之蛋白 質係為一種抗體。用以生產抗體之技術如下： 多株抗體：多株抗體一般係藉由多重皮下（sc)或腹膜内 (ip)注射相關抗原和一種辅劑於動物體内生產。可利用一種 鲁 雙官能基連接子，例如··磺酸琥珀醯亞胺蘋果醯亞胺苄基 酯、戊二醛或丁二酸酐將相關抗原結合於一種對於欲免疫 之物種具免疫原性之載體蛋白質，例如：鑰孔蟲血藍蛋白 (keyhole limpet hemocyanin)、牛甲狀腺素球蛋白、血清白 蛋白或大豆胰蛋白質酶抑制劑上。 單株抗體：單株抗體可自一種實質相同之抗體族群取· 得，即：該族群包含之個別抗體均相同，除了可能存在之 · 少i自然發生性突變之外。舉例言之，單株抗體之製備可 利用由Koehler等人首度說明於Nature 256, 495 (1975)之融 合瘤技術，或可藉由重組DNA法（美國專利第4,816,567號） · 製造。 於融合瘤法中，將老鼠或其他適合之動物，例如··倉鼠 予以免疫以誘發生產或可生產會專一性結合於免疫用蛋白 質之抗體之淋巴細胞。或者，可於活體外將淋巴細胞免疫。 再使用適當之融合劑，例如··聚乙二醇，將淋巴細胞與骨 91383.doc -18 - 200426155 知瘤細胞融合以生成融合瘤細胞（Goding，Monoclonal Antibodies: Principle and Practice, pp. 59-103 (Academic Press，1986) 〇 將製得之融合瘤細胞接種並生長於適當之培養基中，其 較佳為含一或多種可抑制未融合之母骨趙瘤細胞之生長或 存活之物質。分析融合瘤細胞生長之培養基中生產之抗該 抗原之單株抗體。於確認融合瘤細胞可生產具所欲專一 性、親和力’及/或活性之抗體之後’將藉由限制性稀釋步 驟該選殖株次選殖並以標準方法使之生長（G〇ding， Monoclonal Antibodies: Principle and Practice, pp. 59-103 (Academic Press，1986)。將次選殖株分泌之單株抗體自培 養基、腹水液或血清中適當分離出來，其可藉由慣用之免 疫球純化技術，例如：蛋白質A-Sepharose、經碟灰石色層 分析、膠體電泳、透析或親和性層析。 人類化和人類抗體：用以將非人類抗體人類化之方法係 為此項技藝中已被熟知者。一般而言，人類化之抗體具有 一或多個由其來源導入之非人類胺基酸殘基。此等非人類| 胺基酸殘基常被稱為”外來”殘基，其典型係來自”外來”變異 功能區域。人類化之進行必需依循下列Winter和其伙伴之 方法[Jones等人，Nature，321，522-525 (1986) ; Riechmann 等人 ’ Nature，332，323-327 (1988); Verhoeyen等人，Science， 239，1534-1536 (1988)]，藉由將嗡齒動物之CDRs或CDR序 列取代為人類抗體之相對應序列。據此，此等，，人類化，，抗 體為嵌合抗體（美國專利第4,816,567號），其中實質上少於 91383.doc -19- 200426155 個元整的人類變異功能區域被來自非人類物種之相對應 序列所取代。 或者，現今可生產轉基因動物（例如：小鼠），其可經免疫 而生產全套人類抗體而不生產其内生性免疫球蛋白。參見 例如：Jakobovits等人，Proc. Natl. Acad. Sci· USA，90, 2551 (1993) ; Jakobovits等人，Nature，362，255-258 (1993); Brueggermann等人，Year in Immuno, 7, 33 (1993)。人類抗 體亦可自嗟菌體展示庫取得[Hoogeboom等人，j. M〇l
Biol· 227, 381 (1991) ; Marks等人，J. Mol· Biol·，222, 581_597 (1991)] 〇 調配物 如上述說明製備出所欲胜肽或蛋白質之後，製備一種預 凍乾調配物。存在於預凍乾調配物中之蛋白質量取決於其 所欲之最終劑量體劑，投予之模式等。蛋白質通常呈溶液 型式。 於預；東乾5周配物中加入冷;東保護劑。於較佳之呈體實施 例中’預/東乾調配物中之冷束保護劑含量一般為可使其於 復水時，所得之調配物呈等張狀態。然而，高張性復水調 配物亦適用。當冷凍保護劑為一種糖且蛋白質為一種抗體 時，預凍乾調配物中之冷凍保護劑示例性濃度為約5 mM至 約50〇mM，且較佳為約2〇mM至約300 mM，且最佳為約4〇mM 至約100 mM。 蛋白質與冷凍保護劑之比例係依各種蛋白 劑加以選定。於以-種抗體為蛋白質且以一種糖 9l383.doc -20- 200426155 護劑以產生一種具有高蛋白質濃度之等張性復水調配物之 例中’冷凍保護劑與抗體之莫耳濃度比可為約50至約丨5〇〇 莫耳對1莫耳抗體，且較佳為約200至約1000莫耳對1莫耳抗 體。 於本發明之另一具體實施例中，發現較佳於預凍乾調配 物中加入一種界面活性劑。或者，或此外，界面活性劑可 加至經凍乾之調配物及/或經復水之調配物中。界面活性劑 之示例包括：等張性界面活性劑，例如：聚山梨醇酯、屈 同（triton)、泊洛沙姆（P〇1〇xamer)、硫酸十二酯鈉、硫酸月 桂S曰鈉水乙一醇、聚丙二醇等。界面活性劑之添加量係 可減少經|水蛋白質之聚集且使復水後之調配物粒狀物減 至最少。 +於本發明之另-具體實施财，使用冷滚保護劑（例如·· 葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖或海藻糖）和一種膨化劑（例如： 甘露醇或甘油）之混合物於預凍乾調配物之製備中。
其他醫藥上可接受之載體、賦形劑或安定劑，例如彼等 說明於Remingt〇n，S Pharmaceutical Sciences 16th 咖〇 〇W，A· Ed· (i 980)中者，可包含於職乾調配物中，^ 其對於所欲之調配物特性無不良影響。 右 本文中之調配物亦可視需要含有一種以上之蛋白質1 療特定之病徵，其較佳為具有對其他蛋白不良^ 互補活性。用於活體内之調配物需經滅菌。其可於2j 復水之前或之後通過無菌膜過遽來達成。或者，混 體之滅菌亦可藉由殺菌爸將蛋白質以外之成份於約 9l383.doc -21 - 200426155 之下滅菌約3 0分鐘。 將蛋白質、冷;東保護劑和其他視需要之成份混合之後， 將調配物凍乾。市售許多不同之 _ 丄 7术钇‘态可達此目的。 一般而言，以團塊型式將蛋白f調配物;東乾。於—此實例 中，可將蛋白質調配物於容器μ乾，再直接於㈣q 進行蛋白質之復水以免除轉移步驟。 康乾調配物之復水 於適當時機，典型係於將蛋白f投予患者時，可以稀釋 劑將束乾調配物復水，使復水調配物之蛋白質濃度至少為 3〇毫克/毫升，例如：為約3〇毫克/毫升至約5〇〇毫二毫升。 復水通常於約25t之溫度τ進行以確保完全水合，雖缺 其他溫度亦可能適用。復水所需之時間取決於例如：稀釋 劑之型式、賦形劑和蛋白質之含量。示例性稀釋劑包括無 滅水、注射用之靜菌水、一種經ΡΗ緩衝之溶液、無菌生理 鹽水、Rniger’s溶液或葡萄糖溶液。稀釋劑可視需要含有卞 種防腐劑’例如：节醇或紛。防腐劑之用量係藉由蛋白質 對於不同防腐劑》農度之相容性評估和防腐效力測試來決 定。 復水調配物之投予 根據已知之方法，例如：散裝靜脈内投予或藉由於一段 日寸期内連、’·貝/主射’ II由腹膜内、肌内、腦脊髓内、皮下、 關節腔内/月膜内、椎管内、經口局部或吸入途徑將復水 調配物投予需要胜肽或蛋白質治療之哺乳動物，較佳為人 類0 91383 doc •22 - 200426155 於一較佳之具體實施例中，復水調配物係藉由皮下投予 哺乳動物。針對此目的，可利用注射筒注射該調配物。然 而，亦可使用其他用以投予調配物之裝置，例如：注射裝 置、注射筆、不打針裝置，和皮下貼片傳送系統。 蛋白貝之適§劑置係取決於，例如：欲治療之病症、病 症嚴重度和時程、蛋白質之投予是否有預防或治療目的、 先刖之治#、患者之臨床病史和對蛋白質之反應、使用之 蛋白貝里式，和主治醫師之判斷。蛋白質可一次或於一系 列/口療期間適度投^患者並可於經診斷後之任意時間投予 患者。蛋白質可單獨投予或連同其他可用以治療待治病症 =藥物或療法-起施予。若選用之蛋白質為―種抗體，其 投予患者之初始劑量較佳為狀1-25毫克/公斤，無論為例 或夕-人刀開投予。然而，其他劑量亦可使用。此治 療之進展可藉由慣用之技術簡易地追蹤。 以下列出本文中使用之各種辭彙之定義。 一 本文所使用之"PEG”係指任意之數種乙二醇之縮合聚合 物，其具有由下列構造所代表之通式
H〇-(CH2CH2〇）n-H 其中η可為約5至約11〇〇。pEG之平均分子量介於至 6〇,〇〇〇道耳頓之間。使用於本發明中之PEG之平均分子量較 佳為介於2，_至40，_道耳頓之間。更佳為介於5,〇〇〇至 20,000道耳頓之間。 "pEG"亦稱為聚氧乙婦、聚乙二醇和聚乙二賴。該聚人 物可為同質聚合物或錢共聚物（blQek e。-pQlymer)、錢 91383 doc -23 - 200426155 或具支鏈者、未經取代或經取代，較佳為具低碳數烷基、 低碳數羥烷基和低碳數烷氧基基團。 "PEG”亦指包括水溶性聚氧乙烯化聚乙二醇類，例如：聚 氧乙烯化山梨醇、聚氧乙烯化葡萄糖、聚氧乙烯化甘油等。 本文所使用之，，mPEG”係指一種PEG，其一端具有甲基基 團。mPEG之代表性構造為 CH30-(CH2CH2〇Vh 本文所使用之’’連接子”一辭係指將peg連接至生物活性 親核物之分子片段。該片段典型具有兩個官能基團，其可 偶合至或經活化而與另一連接子或直接與生物活性親核物 反應。舉例言之，ω-胺基烷醯酸，例如：離胺酸係普遍使 用者。於本發明中，亦使用多重連接子將PEG連接於標的 胜肽或蛋白質，即：
本文所使用之”胺基烷醯酸”一辭係指於分子骨架中具 有一或多個胺基之羧酸。該胺基可位於端點或位於内部或 二者，例如：離胺酸。 本文所使用之，，生物活性親核物”係指一種化合物，其至 少含有一個親核性部分，更特定者，係指生物活性胜肽類 和蛋白質類。 91383 doc -24- 200426155 本文所使用之，’胜肽"一辭係指一種約2至約5 〇個天然胺 基酸短鏈之短分子。該胺基酸亦可包括非天然胺基酸，例 如：/3-胺基酸或D-胺基酸。 本文所使用之”蛋白質’’ 一辭係指長鏈之胺基酸基底性聚 合物（聚胜肽），其足以產生較高級層次之三級和四級構造。 蛋白質可由單一或多條聚胜肽鏈所組成，可為線狀或環 狀’並可進一步經取代，例如：磷酸酯化或糖苷化。蛋白 質之大小涵蓋相當廣泛之範圍，其自約50至1 〇〇〇個以上之 胺基酸。 涵括於本文之定義中之胜肽和蛋白質包括：哺乳動物之 胜肽和蛋白質，例如··胰島素、昇糖素、血管加壓素、降 鈣素、血管活性腸肽（Vip)、黑素細胞刺激素、 分泌素、膽囊收縮素（CCK)、内皮素、生長抑制素、ρ物質 (substance Ρ)、副甲狀腺激素（ΡΤΗ)、催產素、強啡肽、促 腎上腺皮質激素（ACTH)、抗體、生長荷爾蒙（GH)，包括」 人類和牛生長荷爾蒙、生長荷爾蒙受體拮抗劑、生長荷爾 蒙釋放因子（GRF)、上皮生長因子（EGf)、轉形生長因子 (TGF)a和/3、類胰島素生長因子（IGF) ”口 π、間白素、干擾 素以、/5和γ、腫瘤壞死因子（tnf)c^^/5、血小板衍化生長因 子、粒細胞集落刺激因數、粒細胞巨噬細胞集落刺激因數、 、、工血球生成素、血小板生長刺激素、FLT_3、超氧歧化酶 (SOD)、免疫毒素、調節性蛋白質、運送蛋白質和生物活性 片段或上列聚胜肽之任意變體。 本文所使用之”抗體” 一辭係採其最廣義並指多株抗體、 91383.doc 200426155 單株抗體、人類化抗體，和其片段，例如.F F 和任何具有抗原結合功能之片段或母抗體，（一 V’ 本文所使用之I，單株抗體，，一辭係指 之抗體組合物。該名辭涵括：有同貝抗體群 例mb F 4 質整體和其片段， ⑽)2、FV，和任何具有抗原結合功能之 母抗體。再者，該名辭亦包括％合"抗體，1 又或 重鏈及/或輕鏈係與衍生自特定物種或屬於特定種^之 之抗體之相對應序列相同或 宜 3亞種 衍生自另一物㈣屬於而鏈之其他部分則與 义屬於另一種或亞種之抗體之相對應序列 相同或同質，和此等抗體之片 活性。 u有所欲之生物 本文所使用之”人類化抗體”―辭係指_免疫球蛋白中之 至少一部分框架區衍生自人類免疫球蛋白序列。 本文所使用之"PEG化”或”經PEG化"胜肽/蛋白質係指一 種將一或多個PEG分子共價性連接至一種胜狀或蛋白質以 生成PEG化胜肽/蛋白質之方法。 本文中列舉之所有專利和參考文獻均整體併列為本文之 參考。 本I明提供利用Ν，Ν’-二琥珀醯亞胺基草酸酯或丨，卜雙 [6-(二氟f基>苯并三唑基〗草酸酯來製備活化碳酸酯 』之方法。產生之PEG活化酯類再用以製備胜肽或 PEG-蛋白質共軛物。N，N’_二琥珀醯亞胺基草酸酯可由市售 購侍且1，1’_雙[6_(三氟甲基）笨并三唑基]_草酸酯可根據已 公開之步驟製備之。 9I383.doc -26- 200426155 4田述於流程圖ι_νιι之一般合成順序僅用以說明本發明， 且不能用以限制其範圍或精神。熟習此項技藝者明白其可 將描述於流程圖和實例中之條件和方法之已知變化應用於 本發明中。 【實施方式】 實例1
至溫下，將N，N，-二琥珀醯亞胺基草酸酯（5.7公克，20毫 莫耳）和單甲基聚乙二醇（mPEG，分子量6,〇〇〇 ; 6公克，i 毫莫耳）於吼啶（2毫升）存在之下，於二氣甲烷（5〇毫升）中攪 掉過仪。將固體過濾並以乙醚（6〇〇毫升）處理濾液。將白色 >儿殿物濾出並以乙醚徹底洗滌。將該沉澱再溶於二氣甲烧 (40毫升）並以乙醚（5〇〇毫升）處理。將此程序重複一次以得 到呈白色固態物質之標題化合物（5.85公克）。 實例2
Η
Ν一hGH 於PH 8.5之〇·2 Μ硼酸緩衝液中製備濃度為2毫克/毫升之 人類生長荷爾蒙（hGH)溶液。將實例1之化合物以小量加入 遠蛋白質溶液中使其蛋白質：mPEG活化酯之莫耳濃度比約 為5:1。將該反應混合物攪拌約2至3小時。mPEG吨gh共軏 9l383.doc -27- 200426155 物之純化係藉由在Amicon系統中以PM 10濾膜（分子量截止 值為10,000)超濃縮並過濾去除反應產生之羥基琥珀醯亞 胺。於Pharmacia Superose 12管柱中進行膠體過濾以進一步 將共輛物從過量之未反應mPEG中純化出來。將濾液凍乾可 传白色固態產物。 實例3 1 -經基-6 -(二氣甲基）苯并三σ坐 in CF3 根據 Κ· Takeda [J· Org· Chem·，50, 273,（1985)]描述之步 驟製備標題化合物。將溶於無水酒精（75毫升）之4_氣_3_硝 基-〇ί，α;，α-三氟曱苯（50.0公克，〇·22莫耳）和聯胺水合物（33 〇 公克，0.33莫耳）迴流24小時。於減壓下去除溶劑之後，將 殘留物溶於1〇%碳酸納水溶液中。以乙醚洗滌該溶液以去 除起始物質並以濃HC1酸化以使產物沉澱，再以水加以洗滌 亚乾燥得到40.0公克之標題化合物。將此產物從乙趟中再 、结晶 ° 實例4 1，1’-雙[6-(二氟甲基）苯并三唑基]草酸酯（βτβ〇)
200426155 根據Κ· Takeda [J. Org· Chem·，50, 273,（1985)]描述之步驟 製備標題化合物。將溶於無水乙醚（6〇〇毫升）之實例3(40 6公 克，0.2莫耳）之溶液以機械頭攪拌器劇烈攪拌，此時於室溫 下kk加入草醯氯（5〇·〇公克，0·4莫耳）。擾拌3小時之後，將 白色沉澱物濾出並以無水乙醚及少量無水丙酮洗滌之。不需 進一步再結晶即可得到標題化合物（35 〇公克）。 實例5 mPEG-0、/〇\ /Ν r 。0 f3c 至紙下，將1，1’-雙[6气三氟甲基）苯并三唑基]草酸酯（9.2 公克，2〇毫莫耳）和單甲基聚乙二醇（mPEG，分子量6,000; 6·0:克’ L〇宅莫耳）於°比咬（5毫升）存在之下，於二氣甲烷 (7〇宅升）中攪拌過夜。將固體過濾並以7GG毫升乙醚處理遽. ^色/儿焱物濾出並以乙醚徹底洗滌。將該沉澱再溶 氣甲燒（6G毫升）並以乙醚（6⑽毫升）處理。將此程序重 ，一次以得到呈白色固態物質之標題化合物（5.9公克）。
mPEG—〇 HN
>=〇 9l383.doc -29- 200426155 於室溫下，將實例5之標題化合物（5·9公克，1〇毫莫耳卜 離胺酸第三丁基酯HCl(〇.53公克，2·〇毫莫耳）和二異丙基乙 胺（0.26公克，2毫莫耳）於DMF/吡啶（1:1 ; 5〇毫升）中攪拌過 夜。於反應混合物中加入乙醚（6〇〇毫升）並將沉澱過濾。將 沉澱於真空乾燥器中乾燥並以溶於二氣曱烷之三氟醋酸 (200毫升）處理30分鐘。於溶液中加入乙醚（5〇〇毫升）並將沉 澱過濾。將該固體再溶於二氣甲烷（75毫升）並加入乙醚（5〇〇 毫升）。將沉澱過濾並以乙醚徹底洗滌。乾燥之沉澱物不需 任何進一步純化即可使用。 實例7 mPEG—«*〇
HN
將實例6之標題化合物（3公克）和N，N，-二琥珀醯亞胺基碳 酸醋（DSC ; 2.5公克，10毫莫耳）溶於DMF(30毫升）中。加入 σ比咬（5毫升）之後，將反應混合物於室溫下攪拌過夜。將固 组過/慮並以乙驗（400耄升）處理濾液。濾出白色沉殿物並以 無水乙鱗徹底洗務。將該沉殿物再溶解於二氣甲烧（4〇毫升） 中並以乙醚（400毫升）處理。此程序重複兩次以得到呈白色 物質之標題化合物（2·9公克）。另外，於ΡΗ 8·5之〇·2 Μ硼酸 緩衝液中製備濃度為2毫克/毫升之人類生長荷爾蒙（hGH) 溶液。再將經DSC活化之實例6化合物以小量加入該蛋白質 9l383.doc -30- 200426155 浴液中使其蛋白質·· mPEG活化酯之莫耳濃度比約為。 將該反應混合物攪拌約2至3小時。mPEG-hGH共軛物之純化 係藉由在Amiccm系統中以PM 1〇濾膜（分子量截止值為 10,000)超濃縮並過濾去除反應產生之沁羥基琥珀醯亞胺。 於Pharmacia Superose 12管柱中進行膠體過濾以進一步將 共軛物從過量之未反應mPEG中純化出來。將濾液凍乾並將 產物置於冷房中。 實例8
將實例5之標題化合物（5·9公克，1〇毫莫耳）和丨，3_二胺基 丙烧（0.74公克，1〇耄莫耳）於通氮氣之下，於吼唆（5〇毫升） 中攪拌過夜。將乙醚（5〇〇毫升）加至反應混合物中並過濾沉 澱物。將該固體再溶解於二氣甲烷（5〇毫升）中並加入乙醚 (500毫升）。過濾生集固體並於真空中乾燥以得到5·8公克之 白色物質。 實例9
將實例8之標題化合物（5·8公克，0 095毫莫耳）加至溶於 DMF/。比咬（1:1 ; 5〇毫升）之ν-(2-羧乙基）蘋果醯亞胺（〇3ι公 克’ 2.0毫莫耳）和Ν，Ν、二琥珀醯亞胺基碳酸酯（〇·52公克，2 宅莫耳）之混合物中。 將該反應混合物於室溫下攪拌過夜。 QI383.doc -31 - 200426155 於混合物中加入乙醚（600毫升）並再過濾沉澱物。將此程序 重複一次並將固體濾出。將產物於真空中乾燥並不經任何 進純化而直接使用。 實例10 〇 mPEG-O 人 Η
(Cys)胜肽 Ο
於室溫下，將實例9之標題化合物（5.7公克，0.9毫莫耳） 與弱化之CDP 870 Fabf(0.6毫莫耳）於pH 4.5之醋酸鈉（20 mM， 60毫升）中攪拌2小時。將反應混合物靜置過夜並使用10 Kda 之膜，以pH 5·5之醋酸鈉（50 mM)和NaCl(125 mM)透析。將 最終產物貯存於-70°C之下。
9l383.doc -32-

Claims (1)

  1. ^00426155 拾、申請專利範圍： L 一種生產經活化之聚乙二醇（PEG)酯之方法，其包含在適 當之條件之下，以n，n，-二琥珀醯亞胺基草酸酯或1，1，-雙 [6-(三氟甲基）苯并三唑基]草酸酯將Peg活化之步驟。 2·如申請專利範圍第1項之方法，其中該N，N’-二琥珀醯亞胺 基草酸酯或1，1’-雙[6-(三氟甲基）苯并三唑基]草酸酯與 PEG之比例為30:1或更低。 3·如申請專利範圍第2項之生產經活化聚乙二醇（peg)酯之 方法，其中使用一種有機鹼作為觸媒。 4.如申請專利範圍第3項之生產經活化聚乙二醇（peg)酯之 方法’其中該鹼性觸媒係選自由吡啶和ν，ν，_心二甲基胺 基吡啶所組成之群組。 種生產P E G -親核物共輕物之方法，其包含使如申請專 利範圍第2項之PEG活化g旨在適當條件之下與一種生物活 性親核物反應以生成一種PEG-親核物共軛物。 一 種生產PEG-連接子-親核物共輛物之方法，其包含步 驟： (a) 使如申請專利範圍第2項之PEG活化酯與一種連接子 反應；和 (b) 使產生之PEG-連接子在適當條件之下與—種生物活 性親核物反應以生成一種PEG_連接子_親核物共輛 物。 7·如中請專利範圍第5或6項之方法，其中該生物活性親核 物係為一種胜肽或一種蛋白質。 9l383.doc 200426155 &如申請專利範圍第7項之方法，其中該PEG活化酉旨係以介 於1至30莫耳活化醋比i莫耳蛋白質之莫耳比與該胜狀或 蛋白質反應或以1莫耳活化醋比i至10莫耳連接子莫耳比 與連接子反應。 ' 9.如申請專利範圍第6項之方法，其中該PEG•連接子共輛物 係以N，N,-二琥珀醯亞胺基草酸酯或I，1雙[6_(三氟f基） 本开二唑基]草酸酯活化’並隨後以介於i至3 0莫耳活化酯 比1莫耳胜肽或蛋白質之莫耳比與一種胜肽或蛋白質反 應以生成PEG-連接子胜肽或蛋白質共輛物。 H). -種經如申請專利範圍第5,6,7,8或9項所製備之咖_ 親核物或PEG-連接子親核物共輕物，其中該親核物係為 一種hGH拮抗劑或一種TNFa抗體。 11. 如申請專利範圍第10項之共輛物，其中該丁％抗體係一 種CDR-接枝性，hTNF4〇_基底性之經改質以卜 12. —種組合物，其含有一種有或無連接子之pEG-親核物共 辆物，其製備係如申請專利範圍第9，…或丨丨項。 13. 一種如中請專利範圍第9, H)或U項之PEG餘物於製造 一種供治療生長疾病或炎症相關性疾病之藥物之用途。 91383.doc -2 - 200426155 柒、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無）。 (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明： 捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無）
    91383.doc
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2070968A3 (en) * 1999-12-22 2013-07-24 Nektar Therapeutics Method for the Preparation of 1-Benzotriazolyl Carbonate Esters of Poly(ethylene glycol)
ATE371680T1 (de) * 2002-01-16 2007-09-15 Biocompatibles Uk Ltd Polymerkonjugate
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
ITPD20040159A1 (it) * 2004-06-21 2004-09-21 Univ Degli Studi Trieste Derivati bifunzionali del polietilenglicole loro preparazione e uso.
US8133707B2 (en) * 2006-01-17 2012-03-13 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Methods of preparing activated polymers having alpha nitrogen groups
JP2007209543A (ja) * 2006-02-09 2007-08-23 Hidetoshi Tsuchida 表面修飾アルブミンからなる固相膜および酸素吸着膜
WO2007117685A2 (en) 2006-04-07 2007-10-18 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an anti-tnf-alpha antibody

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4342832A (en) 1979-07-05 1982-08-03 Genentech, Inc. Method of constructing a replicable cloning vehicle having quasi-synthetic genes
US5618697A (en) 1982-12-10 1997-04-08 Novo Nordisk A/S Process for preparing a desired protein
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
AU662155B2 (en) * 1991-05-10 1995-08-24 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Targeted delivery of bone growth factors
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
US5382657A (en) 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5650234A (en) 1994-09-09 1997-07-22 Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces
US5932462A (en) * 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US6180095B1 (en) * 1997-12-17 2001-01-30 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
GB0013810D0 (en) * 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products

Also Published As

Publication number Publication date
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