TW200304822A - Substituted benzoxazoles as estrogenic agents - Google Patents

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200304822 玖、發明說明 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前技術、內容、實施方式及圖式簡單說明） (一） 發明所屬之技術領域 (二） 先前技術 背景 本發明係關於可作爲雌激素劑（estrogenic agents)之經取 代苯并噚唑類。 雌激素於哺乳動物組織之多效性已多所證明，且現已知 雌激素可影響許多器官系統[Mendelsohn and Karas, New England Journal of Medicine 340: 1801-1811 (1999)，

Epperson, et al., Psychosomatic Medicine 6 1: 676-697 ( 1 999) j Crandall, Journal of Womens Health & Gender Based Medicine 8: 1155-1166 (1999) » Monk and Brodaty, Dementia & Geriatric Cognitive Disorders 1 1: 1 - 1 0 (2000)，Hurn and Macrae, Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism 20. 63 1 -652 (2000)，Calvin，Maturitas 34: 1 95-2 1 0 (2000)， Finking, et al., Zeitschrift fur Kardiologie 89: 442-45 3 (2000)， Brincat, Maturitas 35: 1 07- 1 1 7 (2000)5 AI-Azzawi， Postgraduate Medical Journal 77: 292-304 (2001)]。雌激素 可以數種方式作用於組織，且最具特性之作用機制爲其與 雌激素受體（esuogen receptors)交互作用導致基因轉錄改 變。雌激素受體爲經配體活化之轉錄因子（ligand-activated t r a n s c r i p t i ο n f a c t o r s)且屬於細胞核激素受體超級家族。此 200304822 家族之其他成員包括黃體酮（progestrone)、雄激素 (androgen)、糖皮質激素（glucocorticoid)、以及礦物皮質 激素（mineralocorticoid)受體。隨著配體之結合，這些受體 二體化並可經由直接結合DNA上專一序列（所謂反應要素） 或經由與其他轉錄因子（例如 AP 1，可轉向直接結合專一 DNA序列）交互作用而活化基因轉錄[Moggs and Orphanides，

EMBO Reports 2: 775 -7 8 1 (200 1 )，Hall et al·，Journal of Biological Chemistry 276: 3 6869-3 687 2 (200 1 )，McDonnell， Principles of Molecular Regulation. p351-361 (2000)]。 “共 調節”蛋白質類亦可與已結合配體之受體交互作用並進一 步調節其轉錄活性[Mckenna，et al·，Endocrine Reviews 20: 3 2 1 -344 ( 1 999)]。亦已顯示雌激素受體可以配體依賴性及 非依賴性方式壓抑NF^B仲介之轉錄作用[Quaedackers，et al.，Endocrinology 1 42: 1 1 5 6- 1 1 66 (200 1 )，Bhat，et al.，

Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology 67: 23 3 -240 ( 1 99 8)，Pelzer，et al·，Biochemical & Biophysical Research Communications 286: 1 1 5 3-7 (200 1)]。 雌激素受體亦可經由磷酸化作用被活化。此磷酸化作用 是經由生長因子如EGF仲介並於沒有配體下導致基因轉 錄改變[Moggs and Orphanides，EMBO Reports 2: 775-781 (2001)，Hall et al·，Journal of Biological Chemistry 276: 36869-36872 (2001)]。 較未特性化方法爲雌激素是透過所謂的膜受體影響細 胞。存在此類受體是有爭議的，但已充分證實雌激素能從 200304822 細胞引出非常快速的非基因體反應。轉導這些效果之分子 本質反應之原因尙未被明確單離，但有證據提出至少與細 胞核形式之雌激素受體有關[Levin，Journal of Applied Physiology 9 1: 1860-1867 (200 1 ) ， Levin, Trends in

Endocrinology & Metabolism 1 0: 374-377 ( 1 999)]。 至今已發現兩個雌激素受體。第1個雌激素受體約在15 年前已被選殖且現在稱爲ERa[Green，et al·，Nature 320: 1 3 4-9 ( 1 98 6)]。第2種形式之雌激素受體在最近被發現並 稱爲 ER 冷[Kuiper，et al·，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 93: 5925 -5930 ( 1 996)]。對於ER；8的早期硏究重點在界定其對 各種配體的親和力，並發現的確與ERa有些不同。ERyS 在曬齒動物的組織分佈已有完善圖譜，且與ER α不符。 組織如老鼠及大鼠子宮顯著表現ER α，然而老鼠及大鼠 肺臟顯著表現 ERyS[Couse，et al.，Endocrinology 138: 4 6 1 3 -462 1 ( 1 997)，Kuiper，et al·，Endocrinology 1 3 8: 863 -870 (1997)]。即使在相同器官，ERa及ER/3的分佈可有所 區分。舉例而言，在老鼠卵巢，ER /3高度表現於粒層細胞， 而 ER a被侷限於卵囊膜及基質細胞[Sar and Welsch， Endocrinology 1 40: 963 -97 1 ( 1 999)，Fitzpatrick，et al·，

Endocrinology 140: 2581-2591 (1999)]。但有一例爲受體共 表現，並有來自活體外硏究之證據指出ERa及ERA能形 成異二體[Cowley et al·，Journal of Biological Chemist ry 272: 19858-19862 (1997)]。 200304822 已指出有許多化合物可模擬或阻斷1 7 0 -雌二醇（1 7冷-estradiol)的活性。具有大體上相同生物功效於17/3-雌二 醇之化合物（最有效能的內生性雌激素），稱爲“雌激素受 體激動劑”。而與1 7 /5 -雌二醇組合會阻礙1 7 /3 -雌二醇功 效之化合物稱爲“雌激素受體拮抗劑”。事實上雌激素受 體激動劑與雌激素受體拮抗劑活性之間有連續性 (continuum)，的確某些化合物在某些組織中作用爲雌激素 受體激動劑，而於其他組織作用爲雌激素受體拮抗劑。這 些具有混合活性之化合物稱爲選擇性雌激素受體調節子 馨 (SERMS)，且爲治療用試劑（例如 EVISTA)[McDonnell， Journal of the Society for Gynecologic Investigation 7: S10-S 1 5 (2000)，Goldstein，et al·，Human Reproduction Update 6: 2 1 2-224 (2000)]。爲何同一化合物可具有細胞專 一性功效之確切理由尙未被闡明，但受體構形之差異及/ 或周圍共調節蛋白曾被提出。 已知某些時候雌激素受體與配體結合時採取不同構形。 | 然而這些變化結果與細微的差別僅於最近被揭示。ER α及 ER /3的三度空間結構經由與各種配體共結晶已被解答，並 淸楚顯示螺旋1 2之位置變化出現在雌激素受體拮抗劑， 而在空間上阻礙受體-共調節性蛋白質交互作用所需之蛋 白質序列[Pike，et al·，Embo 18: 4608-4618 (1999)，Shiau，et al·, Cell 95: 927 -9 37 ( 1 99 8)]。此外，噬菌體表現技術已 被用在不同配體存在下，確認與雌激素受體交互作用之胜 肽[Paige，et al·，Proceedings of the National Academy of -10- 200304822

Sciences of the United States of America 96· 3 999-4004 ( 1 999)]。舉例而言，可確認一胜肽其於ER α結合到完全 雌激素受體激動劑 17 Θ -雌二醇與己烯雌酚 (diethylstilbesterol)之間是有區別的。不同胜肽在克羅蜜 酚（clomiphene)結合到ERa與ERA之間呈現差異。這些數 據指出每一配體具有潛力將受體置於獨特且無法預測的構 形而可能賦予不同的生物活性。 如上所述，雌激素影響諸多生物過程。此外，已指出有 性別差異（例如疾病頻率，對挑釁之反應等等），可能的解 鲁 釋爲涉及男性與女性間雌激素含量程度不同。 (三）發明內容 發明之說明 本發明提供式I之雌激素性化合物，具有結構

其中

Ri爲氫，羥基，鹵素，C「C6烷基，CVC6三氟烷基，C3-C8 環烷基，Ci-C6烷氧基，（VC6三氟烷氧基，CVC6硫烷基， CVC6磺氧烷基，（VC6磺醯烷基，c6-c10芳基，含有1-4 個選自0、N或S雜原子之5或6-員雜環，-N02，-NR5R6, -N(R5)C〇R6，-CN，-CHFCN，-CF2CN，C2-C7 炔基，或 C2-C7烯基；其中烷基或烯基部分可經羥基、-CN、鹵素、Cl_ -11- 200304822 C6三氟烷基、CVC6三氟烷氧基、-cor5、-co2r5、-no2、 c〇nr5r6、nr5r6 或 n(r5)cor6 選擇性取代； 尺2及R2a各自獨立爲氫，羥基，鹵素，Κ6烷基，CV C4烷氧基，C2-C7烯基，C2-C7炔基，CVC6三氟烷基，或 CVC6三氟烷氧基；其中烷基或烯基部分可經羥基、-CN、 鹵素、cvc6三氟烷基、cvc6三氟烷氧基、-cor5、-c〇2r5、 -N〇2、CONR5R6、NR5R6 或 N(R5)COR6 選擇性取代； R3、R3a& R4各自獨立爲氫，CVC6烷基，C2-C7烯基’ C2-C7炔基，鹵素，CVC4烷氧基，CrG三氟烷基，或c「 · C6三氟烷氧基；其中烷基或烯基部分可經羥基、-CN、鹵 素、CVC6三氟烷基、CVC6三氟烷氧基、-cor5、-co2r5、 -n〇2、c〇nr5r6、nr5r6或n(r5)c〇r6選擇性取代； R5、R_6各自獨aa爲氣’ C^-C^院基、C6-C1()芳基； X 爲 Ο，S 或 NR7 ; R7 爲氫，CVC6 烷基，C6-C10 芳基，-C〇R5，-C02R5 或-S〇2R5 ; 或其醫藥可接受鹽。 本發明之化合物含有鹼性部分時，醫藥可接受鹽可形成 自有機及無機酸類，譬如醋酸，丙酸，乳酸，檸檬酸，酒 石酸，琥珀酸，延胡索酸，順-丁烯二酸，丙二酸，扁桃 酸，蘋果酸，酞酸，氫氯酸，氫溴酸，’磷酸，硝酸，硫酸， 甲磺酸，萘磺酸，苯磺酸，甲苯磺酸，樟腦磺酸，以及類 似的已知可接受酸類。本發明之化合物含有酸性部分時， 鹽類亦可形成自有機及無機鹼類，例如鹼金屬鹽類（例如 -12- 200304822 鈉、鋰或鉀），鹼土金屬鹽類，銨鹽類，含有1-6碳原子 之烷基銨鹽類或含有1-6碳原子於每一烷基之三烷基銨鹽 術語烷基、烯基及炔基包括支鏈及直鏈部分。例如包括 甲基，乙基，丙基，丁基，異丙基，第二丁基，第三丁基， 乙烯基，烯丙基，1-甲基乙烯基等等。烷基或烯基部分爲 經取代時，他們通常爲單-、二-、三-或全取代。鹵素取 代基例如包括1-溴乙烯基，1-氟乙烯基，1，2-二氟乙烯基， 2,2-二氟乙嫌基，1，2,2-三氟乙嫌基，1，2-一溴乙院’ 1，2-二氟乙烷，1-氟-2-溴-乙烷，CF2CF3，CF2CF2CF3等等。術 語鹵素包括溴，氯，氟及碘。較佳之5-6員雜環包括咲喃， 噻吩，吡咯，異吡咯，吡唑，咪唑，三唑，二噻環，噚噻 環，異噚唑，噚唑，噻唑，異噻唑，噚二唑，呋吖（furazan)， 噚三唑，二噚唑，噚噻唑，四唑，吡喃，吡啶，嗒畊，嘧 啶，吡畊，三吖哄，噚畊，噚噻畊，或噚二吖畊。較佳的 雜環爲呋喃或塵吩。 較佳之本發明化合物爲式I之化合物具有結構

其中 L爲C2-C7烯基；其中烯基部分可經羥基、-CN、鹵素、 CVC6三氟烷基、CVC6三氟烷氧基、-cor5、-c〇2r5、-n〇2、 200304822 C〇NR5R6、NR5R6或N(R5)C〇R6選擇性取代； 尺2及R2a各自獨立爲氫’羥基，鹵素，CVC6烷基，CV c4烷氧基，c2-c7烯基，c2-c7炔基，CVC6三氟烷基’或 CVC6三氟烷氧基；其中烷基、烯基或炔基部分可經羥基、 -CN、鹵素、（^-〔6三氟院基、三贏院氧基、-C〇R5、 -c〇2r5、_n〇2、C〇NR5R6、nr5r6 或 N(R5)C〇R6 選擇性取 代； 及R3a各自獨立爲氫，C1_C6烷基，C2-C7烯基’ C2-C7 炔基，鹵素，Cl-C4烷氧基，（^-06三氟烷基，或CVC6H _ 氟烷氧基；其中烷基、烯基或炔基部分可經羥基、-CN、 鹵素、cvc6三氟烷基、CrC6三氟烷氧基、-COR5、-C〇2R5、 -N02 > CONR5R6 ' NR5R6^ N(R5)CORemmi±MiX ^ R5、116各自獨立爲氫，C1-C6烷基、C6-C!。芳基； X爲〇，S或ΝΚ·7 ; R7 爲氫，CVC6 烷基，C6-C10 芳基，-COR5，-C〇2R5 或-S〇2R5 ; φ 或其醫藥可接受鹽。 更佳爲X爲〇，又更佳爲X爲〇以及Ri爲可經羥基、-CN、鹵素、Cl-C6三氟烷基、CVC6三氟烷氧基、-匚〇115、-c〇2r5、-N〇2、c〇nr5r6、NR5R6或N(R5)C〇R6選擇1生取代 之C2-C3儲基。 根據本發明之使用，術語“提供”意指提供本發明函蓋 之化合物或物質，直接投與此等化合物或物質，或投與前 藥、衍生物、或類似物而能於體內形成有效量化合物或物 -14 - 200304822 質。 根據本發明之使用，術語“ ER /3選擇性配體”意指在標 準藥理測試程序測量配體對E R α及E R Θ之結合親和力下 (以IC5。測量，其中17 0 -雌二醇的IC5Q未超過3倍差異於 ER α及ER卢之間），配體對ER Θ之結合親和力至少大於對 ER α之結合親和力約10倍。較佳爲ER 0選擇性配體對ER 冷的結合親和力至少大於對ER α之結合親和力約20倍。 更佳爲ER /3選擇性配體對ER /3的結合親和力至少大於對 ER α之結合親和力約5 0倍。又更佳爲ER 0選擇性配體爲 非子宮促進性或非乳房促進性。 根據本發明之使用，術語“非子宮促進性”意指在標準 藥理測試程序測量中產生子宮溼重的增加，少於相同程序 中最有效劑量之17占-雌二醇或17 α -乙炔基-17 Θ -雌二醇 所觀察到之子宮溼重增加的約50%。較佳爲子宮溼重的增 加少於雌二醇所觀察到的約25 %，以及更佳爲子宮溼重的 增加約少於雌二醇所觀察到的1 0%。最佳爲非子宮促進性 ER 0選擇性配體與缺乏子宮促進活性之對照組（例如賦形 劑）比較時，顯著不增加子宮溼重（P>〇.05)。 根據本發明之使用，術語“非乳房促進性”意指在標準 藥理測試程序測量中產生酪蛋白激酶II mRNA的增加， 少於相同程序中最有效劑量之17々-雌二醇或17 α-乙炔基 -17 /3-雌二醇所觀察到之酪蛋白激酶π mRNA增加的約 50%。較佳爲酪蛋白激酶Π mRNA的增加少於雌二醇所觀 察到的約25%，以及更佳爲酪蛋白激酶π mRNA的增加少 200304822 於雌二醇所觀察到的約1 〇%。最佳爲非乳房促進性ER石 選擇性配體與缺乏非乳房促進活性之對照組（例如賦形劑） 比較時，顯著不增加酪蛋白激酶II mRNA(p〉0.05)。 本發明也提供使用 ER /3選擇性配體於治療或抑制關節 炎、發炎性腸疾病及子宮內膜組織異位形成。尤其ER /3 選擇性配體可用於治療或抑制類風溼性關節炎、脊椎關節 炎或骨關節炎；以及克隆氏病（Crohn’s disease)、潰瘍性 結腸炎、不確定性結腸炎、感染性結腸炎或潰瘍性直腸炎。 本發明進一步提供使用ER ^選擇性配體於治療或抑制關 · 節腫脹或糜；或治療或抑制關節鏡檢或手術過程續發之關 節損傷。較佳爲ER Θ選擇性配體爲非子宮促進性或非乳 房促進性。 用於製備本發明化合物之試劑可購買獲得或經由文獻所 述標準程序製備。 另一方面，本發明係關於本發明化合物之製備方法，包 括下列之一： 0 a)下式化合物

與下式化合物反應 -16- 200304822

F

R3 (其中R3及R3a如上述之定_，Y爲鹵素、_〇H、或Ci_C6 烷氧基）；或 b) 轉換如上定義之式Π化合物爲其醫藥可接受鹽；或 c) 分離式II化合物之異構混合物以單離式π化合物之 鏡像異構物或其醫藥可接受鹽。 鲁 本發明之化合物例如可根據下列合成流程圖（I-VIII)製 流程圖Ϊ

流程圖I中，購買之二甲氧基苯胺1於三乙基胺存在下 處以購買之苯甲醯氯2以製造醯胺3。所需之苯甲醯氯2 亦可從購買的苯甲酸4與亞硫醯氯回流製備。醯胺3在高 溫（2 00°C)處以吡啶氯化氫轉換爲酚苯并噚唑5。 -17- 200304822 流程圖π ch3〇

2 Br2, NaOAc -- AcOH

6

流程圖Π中，購買之硝基酚6經Br2/Na〇Ac於乙酸中 溴化以製造溴酚7。以Ra_Ni於EtOAc中催化氫化作用以 產生苯胺8。在吡啶存在下偶合8與苯甲醯氯9(購買，或 製備自對應之苯甲酸及亞硫醯氯）產生醯胺-酯10。於酸性 條件下（對-甲苯磺酸）在高溫（1 5 0 °C )轉換1 0爲苯并噚唑 1 1。以三溴化硼於二氯甲烷將1 1去甲基化產生酚苯并噚 唑12。 -18- 200304822 流程圖m

BB「3 ch2ci2 流程圖III中，苯胺8在高溫（150°C)處以苯甲酸13及 _ 硼酸於對-二甲苯而轉換爲苯并噚唑1 4。以三溴化硼於二 氯甲烷將14去甲基化產生酚苯并噚唑15。

流程圖IV

16 hno3，r ch3co2h

17 18

(R^R2 =h, f, ch3, CF3)

流程圖IV中，以硝酸於乙酸將16硝化產生17，然後 於Ra-Ni存在下以氫還原產生苯胺18。以流程圖II所述 之類似方法將苯胺1 8轉換爲苯并噚唑19，但於高溫 (2 00°C )以吡啶氯化氫完成去甲基化步驟。 -19- 200304822 流程圖v

Me3C(CH3)2SiCI 咪嗤~~, DMAP (R = H) 20 R3 = Me3C(CH3)2Si,

Ac2〇, DMAP，CH2CI2 (R = H) f CH3C〇， 1) 三丁基(R4)錫，對-二甲苯 (R4=乙烯基，烯丙基等等）或 2) R5-B(OH)2 (R5=Ph，呋喃基等等）或 3) R6-ZnCI (R6=丙基，環戊基等等）， [P(o4olyl)3]2PdCI2 或[PPh3]4Pd(0)

24 流程圖V中，苯并噚哇2 0的羥基經第三丁基二甲基矽 烷氯/咪唑/4-二甲胺基吡啶於N，N-二甲基甲醯胺保護爲矽 烷醚類21(R3 = Me3C(CH3)2Si)，或經乙酸酐/4-二甲胺基吡 啶於二氯甲烷保護爲酯類21(R3 = CH3CO)。苯并噚唑20及 21在20°C至15(TC之溫度範圍偶合各種錫試劑（亦即三丁

-20- 200304822 基（乙烯基）錫，三丁基（烯丙基）錫，三丁基（2-呋喃基）錫）， 於對-二甲苯、甲苯、四氫呋喃、二甲氧基甲烷、或丨，2-二甲氧基乙烷之鈀催化劑[亦即二氯貳（三-鄰-甲苯基膦）鈀 (II)或肆（三苯基膦）鈀（〇)]存在下之硼酸類或氯化鋅類，以 及鹼（亦即Na2C03)存在下進行硼酸偶合反應產生苯并噚唑 類22及23 。 以氫氟酸（48%重量於水）或氟化四丁基銨去保護 22(R3 = Me3C(CH3)2Si)的矽烷醚類產生苯并噚唑24。以碳酸 鉀於二噚烷皂化22(R3 = CH3CO)產生苯并噚唑24。在高溫 ® (2 00 °C )以三溴化硼於二氯甲烷或吡啶氯化氫將苯并噚唑 23(R = CH3)去甲基化產生苯并噚唑24。

-21 - 200304822 流程圖νϊ R〇 n-BuLi，THF， Ph(CH3)NCHO 或 Etl

Br 24 OR或CNC02Et或丙酮 < 25 R = CH3, Me3(CH3)2Si

R2 = CHO, Et, C02Et, C(CH3)2OH

HO

ChU 27

HO R2 吡啶HCl [R2 = C(CH3)2〇H]

Ri

OH BBr3 (R = CH3)

W

Bu4NF [R = Me3(CH3)2Si] 26 R2 = CHO, C02Et,

Et, C(CH3)2OH 流程圖 VI中，苯并噚唑24在低溫（-78°C)處以正-丁基 鋰，隨後添加親電子物（亦即CNC02Et，Ph(CH3)NCHO，Etl 等等）以產生化合物25。以三溴化硼（R = CH3)或氟化四丁基 銨（R = Me3C(CH3)2Si)將 25 去保護產生苯并噚唑 26[R = CH〇，C〇2Et， CH2CH3， C(CH3)2〇H]。 三級醇 25(R = C(CH3)2OH)在高溫（200°C)處以吡啶氯化氫 產生1-甲基-乙烯基苯并噚唑27。以H2/Pd-C還原27產生 異丙基類似物28。 -22- 200304822

流程圖VII CH3〇、a ·· Ri CH30

NaBH4

CHO 29 och3 MeOH ΒΒΓ3，CH2CI2 1 h R1 〇CH3 OH 30 BBr3, CH2CI2 18h

HO OH 31

R1 OH

HO

R1 OH

Br 32

KCN 18( - 6 DMF

HO R1

OH CN 33 流程圖VII中，以硼氫化鈉於甲醇還原苯并噚唑29產 生醇30。以三溴化硼於CH2C12處理30達1小時完成苯并 噚唑31，而延長處理（18小時）產生溴化物32。溴化物32 處以氰化鉀及18-冠-6-醚於N，N-二甲基甲醯胺轉換爲乙腈 -23- 200304822

流程圖VIII

1) CuCN 2) BBr3 (R = ch3)

1) Zn(CN)2，Pd[P(Ph3)]4(R = CH3) 2) BBr3 ~

Br

39

CuBr, MeONa DMF (R = H)

V HC)N-溴琥珀醯亞胺 och3 37 流程圖VIII中，溴·苯并噚唑35(R = CH3)首先處以氰化 銅（I)於DMF以產生對應之芳基-腈，隨後處以三溴化硼產 生苯并噚唑36。苯并噚唑36亦可從第二合成路徑製備， 其中溴-苯并噚唑35在鈀催化劑[亦即肆（三苯基膦）鈀（0)] 存在下處以氰化鉀產生對應之芳基-腈，隨後處以三溴化 硼去甲基化產生苯并噚唑36。苯并噚唑35 (R = H)處以溴化 銅（I)及剛製備之甲氧基鈉於DMF以產生甲氧基·苯并噚唑 37。以N-溴琥珀醯亞胺於乙腈將37溴化產生單溴苯并噚 唑3 8(主要產物）及二溴苯并噚唑39(次要產物）。 (四）實施方式 標準藥理測試程序爲易於取得，可測定所給受試化合物 -24- 200304822 之活性槪況。下列簡單槪述數種代表性測試程序及可能包 括本發明代表性化合物之數據。除放射線配體結合分析之 外，全部分析可用於偵測化合物的雌激素受體激動劑或拮 抗劑活性。通常雌激素受體激動劑活性是經由比較化合物 與參考雌激素（例如1 7 /3 -雌二醇，1 7 α -乙炔基，1 7 /5 -雌二 醇，雌酮，己烯雌酚等等）的活性測量之。雌激素受體拮 抗劑活性通常測量自共處理受試化合物與參考雌激素後， 比較所獲結果與單獨處以參考雌激素之結果。SERM所用 之標準藥理測試程序亦提供於美國專利4,4 1 8,068及 5,998,402，其於此倂入參考。 ER α及ER Θ結合親和力之評估 本發明之代表性實施例是評估他們與1 7 0 -雌二醇於慣 用放射線配體結合分析中對於ERa及ER/3之競爭能力。 此測試程序提供對ER α或ER Θ受體之相對結合親和力之 測定方法。所用程序簡單說明如下。 用於結合選擇性分析之受體萃取物之製備。配馥結合區 域在本文適宜地定義爲DNA結合區域下游所有序列，其 係使用全長cDNA爲模板以及含有適當限制位置以次選殖 而維持適當譯讀架以表現之引子經由PCR獲得。這些模 板含有人類 ERa 的 M25Q-V 5 9 5 胺基酸[Green，et al.，Nature 320:134-9 (198 6)]以及人類ER々的M214-Q530 胺基酸[〇gawa， e t al., Biochemical & Biophysical Research Communications 243: 1 22-6 ( 1 99 8)]。人類ER /3以含有C-終端Flag標籤之 Ncol-BamHl 片段選殖到 p ET 1 5 b (N o v ag e η，M adi s ο n WI)。 200304822 除了添加N-終端His標籤之外，人類ER α如同人類ER冷 般選殖。所用之全部構築之序列經兩股完整的定序核對證 實。 使用BL21(DE3)細胞來表現人類蛋白質。通常使用10mL 隔夜培養接種到1L之含有100/zg/mL安比西林（ampicillin) 的LB培養基中。在37°C培育隔夜之後，添加IPTG至終 濃度爲ImM並繼續在25°C培育2小時。經由離心（ 1 500 X g) 採集細胞，以 100mL 之 50 mM Tris.HCl(pH 7.4)及 150mM NaCl洗滌並再懸浮小片（pellet)。將細胞通過法式壓破 鲁 (French press，12000 psi)兩次以分解之。溶菌產物在12,000 X g於4°C離心30分鐘淨化並貯存在-70°C。 用於專一 [3H]-雌二醇結合之萃取物之評估。便甩補充 以 ImM EDTA之杜比可氏（Dulbecco ’ s)磷酸鹽緩衝鹽水 (Gibco，lx終濃度）作爲分析緩衝液。爲使得用於分析之 受體量最有效，添加[3H]-17 /3 -雌二醇（New England Nuclear;終濃度=2 nM)±0.6#M己嫌雌酣及100//L大腸 @ 桿菌（E. coli)溶菌產物之各種稀釋液到高結合防護微滴定 平板（EG&G Wallac)之每一井。最終分析體積爲120 β L 且DMSO濃度S 1%。在室溫培育5-18小時之後，吸出未 結合物質，並以約3 00 // L分析緩衝液洗滌平板3次。洗 滌後，添加 135//L 閃爍雞尾酒（Optiphate Supermix，EG&G Wallac)到各井，然後封閉平板並攪動至少5分鐘以混合 閃燥液與殘餘的洗滌緩衝液。已結合之放射線活性經由液 體閃爍計數評估（EG&G Wallac Microbeta Plus)。 -26- 200304822 提供最大專一結合用之每一受體製備物之稀釋液經測定 後，使用受體製備物之各種稀釋液經由估計未標記之17 Θ -雌二醇的1C 50進一步將分析最有效化。每一受體製備 物之最終作用稀釋液之選擇係爲未標記之1 7 ^ -雌二醇的 IC5。爲 2-4 nM ° 配體結合競爭之測試程序。最初將受試化合物、溶解於 DMSO且DMSO於結合分析之終濃度^ 1%。使用每一受試 化合物之8稀釋液作爲[3H]-17 ^ -雌二醇之未標記競爭者。 通常化合物稀釋組是在人類ER α及ER3被同時測試。所 春 得結果以測量之DPM對受試化合物濃度作圖。爲相稱於 劑量-反應曲線，轉形爲四參數符號模式，經衡量之數據 可適用且IC5Q定義爲減少50%最大[3Η]-雌二醇結合之化 合物濃度。

本發明代表性實施例於ER α及ER /3之結合親和力（以 ICS()測量）示於表（1)。 -_表1:本發明代表性化合物之ER結合親和力 _ 實施例 ER- β IC5〇(nM) ER- a IC,〇(nM) 1 140 720 2 963 5 110 3 66 1570 4 239 5 2 80 5 59 139 6 39 843 7 1600 5000 -27- 200304822 8 181 2 3 5 3 9 440 1500 10 105 2040 11 703 >5000 12 49 1227 13 25 190 14 50 902 15 3 82 16 64 1813 17 42 1210 18 16 464 19 157 2765 20 2 155 21 3 260 22 1 47 23 3 113 24 6 1217 25 2 227 26 4 474 27 4 409 28 25 1036 29 155 803 30 134 3080 31 31 352 32 16 196

-28- 200304822 33 3 1 352 34 14 1101 35 15 481 36 11 390 37 79 498 38 102 1010 39 190 7 827 40 235 1300 41 6 41 1 42 95 9620 43 59 25 57 44 13 537 45 84 655 46 59 263 8 47 1340 未測定 48 40 2975 49 1042 5 23 0 50 399 >5000 5 1 142 775 52 82 1200 53 166 1870 54 135 809 55 313 1980 56 97 1030 57 366 1340 200304822 58 26 1435 59 52 2668 60 64 559 61 93 1180 62 201 >10000 63 1 44 64 3 376

上述標準藥理測試程序所得結果證明本發明之化合物可 結合雌激素受體之兩次型。對於ER0之IC5()S通常較低， 表示這些化合物爲較佳的ER Θ選擇性配體’但仍視爲對ER α具有活性。本發明之化合物依據他們的親和力選擇性槪 況（至少部分）展現出活性範圍。由於本發明化合物以高於 ER-α之親和力與ER-/3結合，因此可用於治療或抑制ER-冷所調節之疾病。此外，由於每一受體配體複合物是獨特 的，因此與各種共調節性蛋白質交互作用是獨特的，因而 本發明之化合物將視細胞背景展現不同且無法預測的活 性。舉例而言，在某些細胞種類中，一化合物可能表現爲 馨 雌激素受體激動劑，而於其他組織中表現爲雌激素受體拮 抗劑。具有此等活性之化合物有時稱爲SERMs (選擇性雌 激素受體調節子）。然而不同於許多雌激素，SERMs不引 起子宮溼重增加。這些化合物在子宮爲抗雌激素性且能完 全拮抗雌激素受體激動劑於子宮組織的促進作用。但這些 化合物於骨、心血管、及中樞神經系統表現爲雌激素受體 激動劑。由於這些化合物的組織選擇特性，於哺乳動物中 -30- 200304822 可用於治療或抑制雌激素缺乏（於特定組織如骨或心血管） 或雌激素過多（於子宮或乳腺）所引起或相關之疾病狀況或 症候群。此外，本發明之化合物亦可在某一受體種類有效 作用爲雌激素受體激動劑，而於其他作用爲雌激素受體拮 抗劑。例如已證明化合物能透過ER /3拮抗1 7 /3 -雌二醇的 作用，然而於ER α卻表現爲雌激素受體激動劑活性[Sun, et al·，Endocrinology 140: 800-804 (1999)]。此等 ERSAA(雌 激素受體選擇性激動劑掊抗劑）活性提供此系列化合物藥 理上具有差異的雌激素活性。 金屬硫肽II mRNA之調節 雌激素透過ER/3但非ERa作用而能於Saos-2細胞向上 調節金屬硫肽IlmRNA程度，如Harris所述[Endocrinology 1 42: 645 -65 2 (200 1 )]。此測試程序所得結果可與下述測試 程序所得結果（ERE受體測試程序）組合，以產生本發明化 合物之選擇性槪況（亦參閱 W0 00/3768 1 )。本發明代表性 化合物之數據示於表（2)。 表2 :金屬硫肽II mRN [A於Saos-2細胞之調節作用 化合物 折疊調節作用 實施例1 2 9.6 實施例1 4 12.4 實施例1 3 9.7 使用ERE-受體測試程序於MCF-7乳癌細胞之夸試化合物 200304822 之評估 於DMSO中製備受試化合物之庫存液（通常爲0.1 Μ)，然 後以DMSO稀釋10至100倍以製造1或10mM之作用液。 DMSO庫存貯存在4°C(0.1M)或-20°C(<0.1M)。每週以生長 培養基[含有10%(v/v)經加熱去活性之胎牛血淸、1%(ν/ν) 青黴素-鏈黴素、以及mM glutaMax-1之D-MEM/F-12培養 基]繼代MCF-7細胞兩次。細胞置於排氣燒瓶，保持在37 °C內含5%C02/95 %溼化空氣培育器中。處理前一天，將細 胞與生長培養基以25,000細胞/井置入96井平板，然後在 鲁 3 7 °C培育隔夜。 在37°C以50/zl/井之1:10稀釋之腺病毒5-ERE-tk-蟲螢 光素酶於實驗培養基中[含有10% (v/v)經加熱去活性去除 焦炭之胎牛血淸、1%(ν/ν)青黴素-鏈黴素、2mM glutaMax-1、ImM丙酮酸鈉之無酚紅D-MEM/F-12培養基]感染細胞 2小時。然後以1 50 // 1實驗培養基洗滌各井一次。最後， 細胞處以150//1/井之賦形劑（S0.1% v/v DMSO)或化合物 _ (於實驗培養基中經-1000倍稀釋），於複製之8井在37 °C 處理24小時。 受試化合物之初篩選以1 // Μ單一劑之單獨測試進行（雌 激素受體激動劑模式），或與0 · 1 ηΜ之1 7 Θ -雌二醇組合 CECw ;雌激素受體拮抗劑模式）。每一 90井平板也包括 賦形劑對照組（0.1% v/v DMSO)及雌激素受體激動劑對照 組（0.1或InM之17 A-雌二醇）。劑量-反應實驗於雌激素 受體激動劑及/或雌激素受體拮抗劑模式中，在活性化合 -32- 200304822 物以對數從1〇_14增加至1〇_5Μ中進行。從這些劑量-反應 曲線分別產生EC5Q及IC5Q値。每一處理組別之最終井中 含有5//1之3xl0·5 ICI- 1 82,7 80( 1 (T6M終濃度）作爲雌激素 受體拮抗劑對照組。 處理之後，於搖動器上以25//L/井之IX細胞培養分解 劑（Promega Corporation)分解細胞15分鐘。轉移溶菌產物 (20//L)到96井光度儀平板，然後在MicroLumat LB 96 P 光度儀（EG & G Berthold)，使用以 100//L/井之蟲螢光素 酶受質（P r 〇 m e g a C 〇 r ρ 〇 r a t i ο η)測量蟲螢光素酶活性。注射 受質之前，製造每一井的1秒背景測量。注射受質後，延 遲1秒之後測量蟲螢光素酶活性1 0秒。從光度儀將數據 轉移到Macintosh個人電腦並使用JMP軟體（SAS Institute) 分析，此程式減去每一井蟲螢光素酶測量之背景讀値，然 後測定每一處理的平均値及標準偏差。 將蟲螢光素酶數據轉換爲對數，並使用 Huber M-estimatoi*向下加重遠離中心之轉換觀察値。使用〗MP軟 體分析一方 AN〇VA(one-way ANQVA，Dunnett’s test)用之 經轉換及加重數據。在雌激素受體激動劑模式中比較化合 物處理與賦形劑對照組之結果，或在雌激素受體拮抗劑模 式中比較化合物處理與正雌激素受體激動劑對照組之結果 (O.lnM之17 0 -雌二醇）。至於最初單劑實驗，若化合物處 理結果爲顯著不同於適當對照組（p<〇.〇5)，則結果以相對 於17 Θ -雌二醇對照組的百分比記述[亦即（（化合物-賦形劑 對照組）/(17 Θ -雌二醇對照組-賦形劑對照組））xl 00]。亦使 200304822 用JMP軟體測定非線性劑量-反應曲線的EC5。及/或IC5Q 値。 促淮子宮活性之評佔 受試化合物之促進子宮活性可根據下列標準藥理測試程 序測量。 程序1:獲自Taconic之未性成熟（18天齡）Sprague-Dawley 大鼠，供給未限制其攝取之酪蛋白爲基礎的食物（Purina Mils 5K96C)及水。在第19、20、及21天，對大鼠皮下投 與17 α-乙炔基-17/3-雌二醇（0.06//g/大鼠/天）、受試化合 物、或賦形劑（50%DMS〇/50% Dulbecco’s PBS)。爲確定雌 激素受體拮抗劑，化合物與17 α-乙炔基-17 Θ-雌二醇（0.06 //g/大鼠/天）共投與。6隻大鼠/組，在最後一次注射後約 24小時，經由C02窒息及氣胸將其安樂死。剪下聯繫之 脂肪及擠出任何內部液體後，移除子宮並稱重。組織樣品 亦可被快速冷凍用於基因表現分析（例如補體因子 3 mRNA)。本發明代表性化合物獲得之結果示於表（3)。 表3 :經選擇之化合物於老鼠之促進子宮測試程序之評估 化合物 平均子宮重（mg)± SEM 賦形劑 21.4± 1.59 17 α -乙炔基，17 /3 -雌二醇（0.06 // g/大鼠） 85.5± 3.1 貫施例12(2mg /大鼠）+ 17 α 乙快基，17冷_ 60.2± 4.0 雌二醇（0.06//g/大鼠） 實施例41(2mg/大鼠） 30.3± 1.5 實施例41(2mg/大鼠）+17α-乙炔基，17/3- 76.6± 3.0 200304822 雌一醇（0.06# g/大鼠） - 實施例 24(2mg/大鼠） _. 14.18± 1.1 實施例24(2mg/大鼠）+ 17^-乙炔基，17/3- 80.7± 5.3 雌二醇（〇.06//s/大鼠） 賦形劑 30.5± 3.2 17 α-乙炔基，17/3-雌二醇（〇 〇6# g/大鼠） 104.7± 5_4 實施例20(2mg/大鼠） 39.2± 0.7 實施例20(2mg/大鼠）+Π α -乙炔基-17 Θ - 95.9± 5.5 雌二醇（〇.〇6//g/大鼠） 實施例21(2mg/大鼠） 38·8± 1.7 實施例21(2mg/大鼠）+ 17α-乙炔基-173- 93·9± 5.9 雌二醇（〇.〇6/ig/大鼠） 程序2:獲自Taconic之未性成熟（18天齢）129SvE小鼠 供給未限制其攝取之酪蛋白爲基礎的食物（Purina Mils 5K96C)及水。在第22、23、24及25天，對小鼠皮下投與 化合物或賦形劑（玉米油）。6隻小鼠/組，在最後一次注射 鲁 後約6小時，經由C02窒息及氣胸將其安樂死。剪下聯繫 之脂肪及擠出任何內部液體後，移除子宮並稱重。下列結 果（表（4))係獲自本發明之代表性化合物。 -35- 200304822 表4 ·經選擇之化合物於小鼠之促進子宮測試程序之評估 化合物 平均子宮重（mg)± SEM 賦形劑 10·2± 2.1 17 冷-雌二醇（50mg/kg) 41·7± 3·6 實施例 21(20mg/kg) 12.1± 1.7 賦形劑 11.7± 0.5 17 冷-雌二醇（50mg/kg) 41·9± 2.9 實施例 24(50mg/kg) 10.7± 0.9 賦形劑 9·6± 0.4 17^-雌二醇（50mg/kg) 40.0± 2.0 實施例 34(50mg/kg) 10·3± 0.7 賦形劑 9·4± 0.4 17 /3 -雌二醇（50mg/kg) 35·6± 4·4 實施例 25(50mg/kg) 9·7± 1.0 賦形劑 13·7± 2.0 17/3-雌二醇（50mg/kg) 40.5± 5.84 實施例 12(50mg/kg) 13·7± 0.82 實施例 20(50mg/kg) 13.1± 0.86 賦形劑 9.6± 0.36 200304822 17/3-雌二醇（50mg/kg) 40.0± 2.0 實施例 34(50mg/kg) 10.3± 0.69 賦形劑 9.8± 1.2 17/3-雌二醇（50mg/kg) 42.9± 4.8 實施例 26(50mg/kg) 9.0± 0.3 實施例 42(50mg/kg) 9.5± 0.6 實施例 64(50 mg/kg) 9.8± 0.7 骨質疏鬆症及脂肪調節作用（保護心臟）之評估 已切除卵巢或經虛擬手術之Sprague-Dawley雌大鼠，是 在手術1天後獲自Taconic農場（體重範圍240-275g)。將 他們收容在3或4大鼠/籠之房間中遵照12-12(光/暗）時間 表及自由供給食物（P u r i n a M i 1 s 5 K 9 6 C)及水。到達後第1 天開始全部硏究之處理，每週對大鼠投藥7天達如指定之 6週。年齡相配之經虛擬手術大鼠組未接受任何處理以作 爲每一硏究之完整充滿雌激素之對照組。 全部受試化合物以界定之濃度製備於50%DMSO賦形劑 (JB Baker，Phillipsburg，NJ)/lx 杜比可氏磷酸鹽水 (GibcoBRL，Grand Island，NY)中，以至於處理體積爲 0.1mL/100g體重。將17冷-雌二醇溶解於玉米油（20/zg/mL) 並以0.1 mL/大鼠皮下運送。根據每組平均體重測量値在3 週時調整全部劑量，然後皮下給予。 處理開始後5週及結束硏究前1週，評估每一隻大鼠骨 礦物質密度（BMD)。於已麻醉之大鼠使用 XCT- 200304822 960M(pQCT ; S tratec Medizintechnik，Pforzheim，Germany) 評估全部及近側脛骨之分隔帶密度。進行測量如下：掃瞄 前15分鐘，以腹膜內注射45mg/kg的K他命（ketamine)、 8.5mg/kg艾克司拉寧（xylazine)及1.5mg/kg的阿塞普瑪寧 (acepromazine)將每一大鼠麻醉。 右後肢通過25mm直徑之聚碳酸酯管，然後在踝關節以 90°角度及膝關節以180°角度黏牢在丙烯酸架。聚碳酸酯 管被固定在滑動平臺上以維持垂直於pQCT的孔徑。調整 平臺以使股骨末端及脛骨近側端位於掃瞄視野內。進行長 ® 度10mm及0.2mm線解析之二度空間搜索觀察。在螢幕上 顯示搜索觀察後，定位脛骨近側端。從此點開始3.4mm 末端pQCT掃猫。pQCT掃猫爲lmm厚，具有0.140mm之 圖素（voxel，三度空間映像點）尺寸，並由透過薄片構成145 投影。 pQCT掃瞄完全後，在螢幕上顯示影像。劃出關注的區 域包括脛骨但排除腓骨。使用反覆對數計算移除軟骨組 φ 織。剩下的骨路密度（全部密度）以mg/cm3記述。遠離中 心5 5 %的骨骼於同中心螺旋中計算性的剝離。剩下的骨骼 密度（分隔帶密度）以mg/cm3記述。 BMD評估1週後，經由C02窒息及氣胸將大鼠安樂死， 並收集血液以測定膽固醇。剪下聯繫之脂肪及擠出任何內 部液體後，移除子宮並稱重。使用 Boehringer-Mannheim Hitachi 911臨床分析儀以Cholesterol/HP套組測定全部膽 固醇。使用變異數的一方分析及D u η n e 11 ’ s測試比較統計 -38 - 200304822 値。 下列結果係獲自本發明之代表性化合物（表（5))。 表5 ·於切除卵巢之大鼠投與本發明經選擇之化合物後的骨礦物質密度評估 化合物 全部骨礦物質密度 分隔帶骨礦物質密度 (平均 mg/cm3土 SEM) (平均 mg/cm3土 SEM) 賦形劑 543.49+ 14.24 353.96± 13 46 17石-雌二醇(2//g/大鼠） 639.49± 14.47 453.28± 24.93 實施例 24(10mg/kg) 517.56± 9.67 321.16± 9.04 實施例 21(10mg/kg) 501.40± 11.97 312.34± 19.73 實施例 20(10mg/kg) 525.51± 7.93 287.56+ 17.56 實施例 20(10mg/kg)+17/3-雌二 682.41± 24.01 491.43± 36.43 醇(2//g/大鼠 虛擬手術(未操作） 685.28+ 15.68 510.96± 16.99 抗氧化劑活件之評估 取自屠宰場的豬主動脈，洗滌並轉移到冰冷p B S中， 然後採集主動脈內皮細胞。爲採集細胞，包紮主動脈的肋 間血管並鉗住主動脈的一端。將新鮮經過濾之無菌〇 . 2 % 膠原酶（Sigma Type I)置入血管，然後鉗住血管另一端以 形成封閉系統。在37 °C培育主動脈15-20分鐘，之後收集 膠原酶溶液並在2,000 X g離心5分鐘。每一小片懸浮於 7mL內皮細胞培養基[由補充去除焦炭之fbS(5%)、 NuSerum(5%)、L-麩胺酸（4 mM)、青黴素-鏈黴素（1〇〇〇 -39- 200304822 U/ml，100/zg/ml)及正大黴素（gentamycin，75 /zg/ml)之無 酚紅DMEM/Ham’s F12培養基所組成]，播種於100 mm培 養皿並在37°C於5%(：〇2中培育。20分鐘之後，以PBS輕 洗細胞並添加新鮮培養基，每24小時重覆一次。約1週 後細胞群集。每週例行餵食內皮細胞兩次，一旦群集時’ 胰蛋白酶作用並以1:7比例播種。細胞仲介之12.5//g/ml LDL的氧化作用於欲評估之化合物（5 // Μ)存在下於37 °C進 行4小時。經由TBARS (硫巴比妥酸反應物質）法分析游離 醛類測量氧化過程，以抑制百分比表示結果[Yagi， Biochemical Medicine 1 5: 2 1 2-6 ( 1 976)] 〇 黃體酮受體mRNA調節之標準藥理測試程序 此測試程序可用於評估本發明化合物之雌激素性或抗雌 激素活性[Shughrue，et al.，Endocrinology 1 3 8: 5476_5484 ( 1 997)]。本發明代表性化合物之數據示於表（6)。 表6 :本發明之代表性化合物調節大鼠腦部視葉前區域之黃體酮mRNA之 功效 化合物 黃體酮受體mRNA (10mg/kg) (自訂單位；平均± stdev) 賦形劑 22·0± 10.1 實施例21 110.5± 19.3 實施例20 238.6± 36.3 實施例12 256.2± 42.3 賦形劑 189.2± 27.2 200304822 實施例34 511 5± 23.7 實施例25 447.0± 60.7 實施例26 467.8± 66.7 實施例64 431.3± 65.6 大鼠熱潮紅測辱fg φ 受試化合物於熱潮紅之功效可以標準藥理測試程序評 估’其係測量受試化合物從嗎啡癮大鼠急性戒除使用奈羅 梭酮（naloxone)藥物所產生之尾巴皮膚溫度增加的減弱能 力[Merchenthaler，et al·，Maturitas 30: 3 07- 1 6 ( 1 998)]。亦 可經由共投與受試化合物與參考雌激素以偵測雌激素受體 掊抗劑活性。下列數據係獲自本發明之代表性化合物（表 ⑺）。 表7 :本發明經選擇之化合物於熱潮紅之大鼠模式評估 化合物 奈羅梭酮注射後15分鐘溫 度變化 (平均± SEM) 賦形劑 4.63± 0.79 17 α-乙炔基，17/3-雌二醇（0.31112/1^) 2.12± 1.14 實施例 20(15mg/kg) 5.28± 0.71 實施例 41(15mg/kg) 5.25± 0.72 罝離之大鼠主動脈環中血管舒縮功能之評佐 Sprague-Dawley 大鼠（240-260g)分爲 4 組· 1. 正常未切除卵巢（完整的） 2. 已切除卵巢（〇vex)處以賦形劑 -41 - 200304822 3.已切除卵巢者處以17/S_雌二醇（lmg/kg/天） 4·已切除卵巢之動物處以受試化合物（各種劑量） 處理前約3週時將動物切除卵巢。每一動物經由胃部強 飼接受17 /3 -雌二醇硫酸鹽（lmg/kg/天）或受試化合物（懸浮 於蒸餾、去離子水及1 % tween_80)。處以賦形劑之動物接 受適當體積之用於藥物處理組之賦形劑。 經由吸入C02將動物安樂死並除血。迅速移除胸主動脈 並置於37°C含有下列成分（mM)之生理溶液：NaCl(54.7)， KC1(5.0)，NaHC〇3(25.0)，MgCl2.H2〇（2.5)，D-葡萄糖（11.8) 以及CaCl2(0.2)，含氣體C〇2_〇2，95%/5%至終pH 7.4。從 外表面移除動脈外膜並切割血管爲2-3mm寬環狀。環狀 物懸浮於1 OmL組織浴中且一端附著於浴盆底部，另一端 附著於力轉換器。1克的靜止張力置於環狀物上。環狀物 平衡1小時，取得訊號並分析。 平衡後，暴露環狀物以增加苯基艾福啉（phenylephrine) 濃度（10·8至10·4Μ)並記錄張力。然後浴盆以新鮮緩衝劑 輕洗3次。沖刷後添力卩200mM L-NAME到組織浴並平衡30 分鐘。然後重複苯基艾福啉濃度反應曲線。 保護心臟活件之評估 脫輔基脂蛋白 E(apolipoprotein E)缺陷 C57/BlJ(apo E KO) 小鼠是獲自Taconic農場。所有動物程序皆嚴格遵照IACUC 準則進行。4-7週齢已切除卵巢之apo E KO雌小鼠’收容 在鞋盒式籠內並使其可自由獲取食物及水。依據體重隨機 分組動物（n= 12-15小鼠/組）。使用精確投與法對動物投與 200304822 受試化合物或雌激素（17 A -雌二醇硫酸鹽，lmg/kg/天）於 飮食中，每週測量飮食消耗量，並根據動物體重調整劑量。 所用飮食爲西式飮食（57 U5)，由Purina製備且含0.50 %膽 固醇、20%豬油及25 IU/KG維生素E。使用此準則投與/ 餵食動物1 2週。對照組動物餵食西式飮食且未接受化合 物。硏究期結束後，將動物安樂死並取得血漿樣品。首先 以鹽水定位注入心臟，然後注入1 0%福馬林中和性緩衝 液。 對於血漿脂質及脂蛋白之測定，分別使用 Boehringer-Mannheim及Wako Biochemicals市售套組之酵素法測定全 部膽固醇及三酸甘油脂，並使用 Boehringer-Mannheim Hitachi 911分析儀分析。使用FPLC尺寸分層進行血漿脂 蛋白的分開及定量。簡言之，過濾50-1 OOmL血淸並注射 到一系列連接之Superose 12及Superose 6管柱，並以固 定流速之ImM鈉EDTA及0.15M NaCl離析。使用Water MillenniumTM軟體整合代表VLDL、LDL及HDL之每一曲 線面積，並經由全部膽固醇値乘各別色層分析峰之相對百 分比面積來定量每一脂蛋白部分。 對於主動脈粥樣硬化之定量，處理之前小心單離主動脈 並置於福馬林固定4 8 - 7 2小時。使用0 i 1 R e d〇染色確認 粥樣硬化性損害。血管經簡單脫去染色，然後使用Nikon SMU800顯微鏡且安裝Sony 3CCD錄影照像系統協調IMAQ Configuration Utility (National Instrument)爲造像捕捉軟 體來造像。使用訂製閾實用套裝軟體（Coleman Technologies) 200304822 延著主動脈弓定量損害面。使用程式的閾函數在血管進行 自動化損害估計，特別於包含主動脈弓的區域，從臂-頭 幹近側邊緣到左鎖骨下動脈遠側邊緣。主動脈粥樣硬化數 據是以完全於此定義之管腔區域中的損害百分比表示。 認知增強之評估 切除卵巢的大鼠（n = 50)使其習慣8-桿放射狀桿迷宮連續 5天每次1 0分鐘。使動物習慣及測試前不供給水。1 〇〇 # L 分裝水置於每一桿末端提供強化作用。在放射狀桿迷宮中 得到獲勝所轉換之任務是讓動物接近已置誘餌的桿。喝水 鲁 之後，動物離開此桿並再進入中心隔間，此時可接近先前 已來過的桿或接近另一新桿。當動物選擇進入新桿時記錄 爲正確反應。每一動物每天給予5次試驗達3天。最後一 次獲取試驗之後，將動物分配爲下列4組： 1. 負對照組：每天注射10%DMSO/芝麻油賦形劑一次達 6 天（lmL/kg，SC) 2. 正對照組：注射17 Θ -雌二醇苯甲酸鹽2天並於第二 0 次注射後測試4天（17/3-雌二醇苯甲酸鹽l〇#g/〇.l ml/大 鼠） 3. 雌二醇：每天注射170-雌二醇達6天（20/zg/kg，SC) 4. 受試化合物：每天注射達6天（各種劑量） 最後獲取測試日之後開始所有注射。第1、3、及4組 之最後一次注射是在活動記憶測試之前2小時進行。 記憶測試是一種運用延遲1 5、30、或60秒的非配對樣 品任務（DNMS)。此任務爲獲取任務之變化形，其係將大 -44- 200304822 鼠置於中央競技場並使其進入如前述的一桿。一旦大鼠向 下越過第一桿中途點，則打開第二桿，而大鼠必須再次選 擇此桿。當大鼠向下越過第二桿中途點，則兩門皆關閉而 造成延遲。一旦延遲期滿，原始兩門及第三個新門皆同時 打開。當動物向下經過第三新桿中途點時記錄爲正確反 應。當動物向下經過第一或二桿中途點時記錄爲不正確反 應。每一動物將接受這三種延遲期間各5次試驗，每一受 試者共1 5次試驗。胸膜炎功效之評估 可根據Cuzzocrea程序評估在大鼠減少實驗引發之胸膜 炎症狀之能力[Endocrinology 141: 1455-63 (2000)]。 對抗麩胺酸所引發細朐毒件之保護作用之評估 本發明化合物之保護神經活性可於活體外標準藥理測試 程序使用麩胺酸挑釁來評估[Zaulanov，et al.，Cellular & Molecular Neurobiology 1 9: 705 - 1 8 ( 1 999); Prokai, et al., Journal of Medical Chemistry 44; 1 10-4 (2001 )] o 乳房尾芽測試程序之評估 雌激素爲完整導管延長及乳房導管分支，以及黃體酮影 響下小葉-腺泡尾芽之後續發展所必需。於此測試程序中， 本發明所選化合物之乳房促進活性可根據下列標準藥理測 試程序評估。28天齢Sprague-Dawley大鼠（Taconic農場， Germantown，NY)經切除卵巢並休養9天。將動物收容在 12-小時光/暗循環室內，餵食酪蛋白爲基礎之飮食Purina L a b 〇 r a t 〇 r y R 〇 d e n t D i e t 5 K 9 6 (P u r i n a ’ R i c h m 〇 n d ’ IN)並讓

其自由喝水。然後對大鼠皮下投與賦形劑（50%DMS〇(JB -45- 200304822

Baker，Phillipsburg，NJ)/50% lx 杜比可氏磷酸鹽水 (GibcoBRL，Grand Island，NY))、17/3·雌二醇（0·1 mg/kg)、 或受試化合物（20mg/kg)。於最終3天，亦對大鼠皮下投 與黃體酮（30mg/kg)。在第7天將大鼠安樂死並割除乳房 脂肪墊。由於酪蛋白激酶II mRNA爲尾芽增殖標記，故 分析此脂肪墊。經由即時 RT-PCR分析酪蛋白激酶II mRNA。簡言之，依照 Trizol(GibcoBRL，Gfandlsland，NY) 手冊指引單離RNA，使用DNA-free套組（Ambion)以DNAse I處理樣品，然後以即時RT-PCR利用Taqman Gold程序（PE Applied Bio systems)測量酪蛋白激酶II mRNA程度。全部 50 ng的RNA —式三份，使用酪蛋白激酶II專一性引子 對（5’ 弓丨子：CACACGGATGGCGCATACT ; 3，弓丨子： CTCGGGATGCACCATGAAG)及訂製探針(TAMRA-CGGCACTGGTTTCCCTCACATGCT-FAM)分析之。使用 PE Applied Biosystems提供的引子及探針將酪蛋白激酶II mRNA程度經每一樣品反應內含之18s核糖體RNA標準 化。下列結果係獲自本發明之實施例（表（8))。 表8 :化合物於大鼠乳房彳 [足進性分析之評估 化合物 酪蛋白激酶II mRNA/Ι8S rRNA (平均土 SEM) 賦形劑+黃體酮（30mg/kg) 1.61± 0.36 17/S-雌二醇（〇.img/kg) + 黃體酮（30mg/kg) 39.0± 5.36 實施例 24(20mg/kg) + 黃體酮（30mg/kg) 3.98± 0 79 HLA大鼠發炎件腸症之標準藥理測試程序之評估 200304822 於模擬人類發炎性腸症之HLA大鼠標準藥理測試程序; 中評估本發明之代表性化合物。以下簡單說明所用程序及 所得結果。雄H L A - B 2 7獲自T a c ο n i c且未限制其得到食物 (PMI Lab飮食5 00 1 )及水。每天觀察糞便特質並根據下列 等級評分：腹瀉=3 ;軟便=2 ;正常便=1。硏究結束時，收 集血淸並貯存在-7 0 °C。製備大腸切片用於組織學分析及 額外節段用於髓過氧化酶活性（myeloperoxidase activity) 分析。 硏究 A，大鼠（22-26週齡）每天皮下投與下列療法之一 者一次達7天。每組5隻大鼠且最後一次劑量在安樂死前 兩小時投與。 •載齊!i (50%DMS〇/50%杜比可氏PBS) •實施例 24(5 0mg/kg) 硏究A之結果示於表（9)。投與賦形劑的大鼠在硏究過 程中持續腹瀉。處以實施例24之大鼠糞便品質有改善。 表9 : HLA大鼠皮下處以化合物5天之糞便特質評估。記錄之數値 天 賦形劑 實施例 24(50ms/ks) _ 1 3 2.8 2 3 2 3 3 1.8 4 3 1.6 5 3 1.6 6 3 1.4 3=腹瀉；2=軟便；1=正常便 200304822 硏究B，大鼠（8-10週齢）每天如下口服投與26天： •載劑（2% tween-80/0.5%甲基纖維素） •實施例25(1-14天爲l〇mg/kg ;然後在第15天增加爲 20mg/kg) •實施例 34(10mg/kg) 下列爲所得結果（表（1 〇))，並顯示處以本發明代表性化 合物之大鼠糞便品質有改善。 表10 : HLA大鼠口服處以賦形劑或本發明代表性化合物之糞便特質 評估。記錄之數値爲組平均計分 天 賦形劑 實施例25 實施例34 1 1 1 1 2 1 1 1 3 1 1.25 1 4 1.25 1.25 1.25 5 2.5 1.75 2 6 2.75 1.5 1.75 7 2.75 2 1.75 8 2.75 2 1.5 9 3 1.75 1.5 10 3 1.5 1.25 11 2.75 2 1.5 12 2.75 1.75 1.5 13 2.75 2.25 1.25 14 2.75 2 1.25 200304822 15 2.75 2 1 25 16 3 1.5 1 17 2.75 1.5 1 18 2.75 1.5 1.25 19 2.75 1.25 1 20 ND ND ND 21 ND ND ND 22 3 1.25 1 23 3 1.25 1 24 3 1.25 1 25 3 1.25 1 26 3 1.25 1 ND 未測定 3 =腹瀉；2=軟便；1 =正常便

硏究C，大鼠（8-10週齡）每天口服投與下列配方之一者 一次達46天。每組4隻大鼠且最後一次劑量在安樂死前 兩小時投與。 •載劑（2% tween-8 0/0.5%甲基纖維素） •實施例21(1-18天爲10mg/kg;然後在第19天增加爲 20mg/kg) •實施例24(1-24天爲10mg/kg;然後在第25天增加爲 20mg/kg) 下列爲所得結果（表（Π))，並顯示全部ER；S選擇性化合 物投與之糞便品質有改善。 -49- 200304822 表11 HLA大鼠口服處以賦形劑或本發明代表性化合物之糞便計分。 記錄之數値爲組平均計分 天 賦形劑 實施例24 實施例21 1 2.75 2.75 2.75 2 3 2.75 3 3 3 2.75 2.75 4 3 2.5 2.75 5 3 2 2.75 6 3 2.5 2.5 7 3 2.25 2.5 8 3 2.25 2.75 9 3 2.25 2.5 10 3 2.25 2.75 11 3 2.25 2.5 12 3 1.75 2.5 13 3 2.25 2.5 14 3 2 2.5 15 3 1.75 2.5 16 3 1.75 2.5 17 3 1.75 2.5 18 3 1.75 2.5 19 3 1.75 2.75 20 3 1.75 2.5 21 3 1.75 2.75 22 3 1.75 2.5 23 3 1.75 2.25

-50- 200304822 24 3 2 1.75 25 3 2 2 26 2.75 2.25 2 27 3 1 75 2 28 3 1.75 2 29 3 1.5 2 30 2.75 1.5 2.25 31 3 1.5 2.25 32 3 1.5 2 33 3 1.75 1.5 34 3 1.75 1.75 35 3 1.5 1.5 36 3 1.5 1.75 37 3 1.25 1.5 38 3 1.75 1.5 39 3 1.75 2 40 3 1.5 1.75 41 3 1.75 2 42 3 1.5 2 43 3 1.5 2 44 3 1.5 2 45 3 1.25 2 46 3 1.25 2 ND:未測定 3=腹瀉；2=軟便；U正常便

-51 - 200304822 組織學分析:大腸組織浸沒於1 〇 %福馬林中和性緩衝 液。每一大腸試品分爲四個樣品用於評估。於τ i s s u e T e k 真空滲透加工器（Miles, Inc; West Haven，Connecticut)處 理經福馬林固定之組織以利石蠟包埋。將樣品切片爲5 # m，然後以蘇木素及伊紅（Η & E)染色以用於使用 Boughton-Smith改良等級之盲目性組織評估。計分完成 後，將樣品去盲目，將數據列表並以複平均比較經由 AN0VA線性模擬分析。評估大腸組織切片作爲數種疾病 指標及給予相對計分。如表（1 2)所示（兩皮下投與硏究之 組成物，包括硏究A)，實施例24在降低組織傷害之數種 測量値是有功效的。

表12 HLA-B27大鼠模式之疾病嚴重度組織學計分：使用皮下投與兩 硏究組成物5天 組 潰瘍(0-2) 發炎(0-3) 損害深度(0-2) 纖維化(0-2) 全部計分 賦形劑 1.38 2.69 1.19 0.88 6.13 實施例 24(50mg/kg) 0.25# 1.05# 0.2# 0* 1.5*# 實施例 24(10mg/kg)a 0.81* 1.63* 0.69* 0.50* 3.6* 實施例 24(lmg/kg)a 1.25 1.63* 0.88* 0.75 4.4* a來自第二硏究之數據 *sig<賦形劑或EE+ICI #sig<EE -52- 200304822 硏究B (參閱前文）之腸組織亦進行組織學檢驗。如下所 示（表（13))，兩化合物皆顯著降低全部疾病計分。 表13 口服處以本發明代表性化合物4週之大腸疾病嚴重度之組織學計 分。平均± SD 組 潰瘍（0-2) 發炎（0-3) 損害深度（0-2) 纖維化（0-2) 全部計分 賦形劑 1·44± 0.66 2 88± 0.14 1.56± 0.63 1·〇6± 0.32 6.94± 1.51 實施例25 0.44土 1.50土 〇·44± 0.24* 〇.31± 0.13* 2.69± 0.52* 0.24* 0.35* 實施例34 0.75土 1.81土 0.63土 0.32* 〇.31± 0.32* 3.50± 1.10* 0.46* 0.13* * s i g <賦形劑 硏究C (參閱前文）之腸組織亦進行組織學檢驗。如下所 示（表（14))，實施例24顯著降低全部疾病計分。實施例21 於全部疾病參數之計分雖無統計的顯著性，但低於賦形劑 處理大鼠之對應計分。 表14 口服處以本發明代表性化合物7週之大腸疾病嚴重度之組織學計 ______分。平均土 SD_ 組 潰瘍（0-2) 發炎（0-3) 損害深度（0-2) 纖維化（0-2) 全部計分 賦形劑 1.19± 0.69 2.38± 0.32 1.0土 0.54 〇.94± 0.75 5.50± 2.1 實施例21 〇.81± 0.47 2.06± 0.43 0.75± 0.50 〇.56± 0.32 4·19± 1.74 實施例24 0* 0.69土 0* 0* 〇.69± 0.24* 0.24* *sig<賦形劑 於兩模式之關節洛評估 佐劑-誘發關節炎之Lewis大鼠分析。依據標準設備橾 -53- 200304822 作程序收容6隻1 2週齢雌L e w i s大鼠。他們自由接受標 準療程的食物及水。每一動物以鼠籠卡確認以指示項目組 別及動物編號。每一大鼠編號以持久型墨水標記標示於尾 巴。硏究前至少10-21天將他們麻醉並以標準無菌外科技 術切除卵巢。 使用 Freund’s 完全佐劑（Sigma Immuno Chemicals，St. Louise，MO)誘發關節炎，其每mL含有lmg經熱殺死並 乾燥之結核桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、0.85mL 礦 物油、及0.15mL孟奈德單油酸（mannide monooleate)批號 084H8800 。 下列爲兩測試程序之實施例。抑制作用測試程序：皮內 注射0 · 1 m L F r e u n d ’ s完全佐劑於3 0隻大鼠尾巴底部。隨 機將動物分爲4組，每一組含有6隻大鼠。每天各組接受 賦形劑（50%DMSO(JB Baker，Phillipsburg，NJ)/lx 杜比可 氏磷酸鹽水（GibcoBRL，Grand Island，NY))或受試化合物 (皮下投與）。全部大鼠從第1天開始處理。本發明之代表 性化合物之數據示於表（15)。 治療測試程序：皮內注射O.lmL Freund’s完全佐劑於30 隻大鼠尾巴底部。隨機將動物分爲4組，每一組含有6隻 大鼠。每天各組接受賦形劑（50%DMS〇（JB Baker， Phillipsburg，NJ)/lx 杜比可氏磷酸鹽水（GibcoBRL，Grand Island，NY))或受試化合物（10mg/kg，皮下投與）。全部大 鼠在佐劑注射後第8天開始治療。本發明之代表性化合物 之數據示於表（16)、（17)及（18)。 200304822 使用 Abacus Concepts Super AN〇VA(Abacus Concepts， I n c ·，B e r k e 1 e y，C A)進行統計分析。對關注之所有參數以 Duncan’s新多樣範圍進行各組間測試之變異數分析。數據 以平均±標準偏差（SD)表示，若p<0.05視爲不同。 關節炎嚴重度之等級是以下列疾病指數每日偵測：後腳 爪紅斑，後腳爪腫脹，關節柔軟性，以及運動和姿勢。使 用〇至3之整數等級定量紅斑程度（〇 =正常腳爪，1=輕微 紅斑，2 =中度紅斑，3 =嚴重紅斑）及腫脹程度（0 =正常腳爪， 1 =輕微腫脹，2=中度腫脹，3 =後腳爪嚴重腫脹）。每日之 最大計分爲1 2。 硏究期結束後，以C02將大鼠安樂死，驗屍時移除後肢 並固定於1 0 %福馬林緩衝液，除去跗骨關節鈣質並包埋於 石蠟。以蘇木素及伊紅或Saffranin 0-Fast Green染色組 織切片。 編密碼於載玻片以使檢驗員肓目處理各組。取自跗骨關 節之滑膜組織根據如下槪述之滑膜增生、發炎細胞滲透、 以及血管翳形成鑑定之[P〇〇le and Coombs, International Archives of Allergy & Applied Immunology 54: 97- 1 1 3 ( 1 977)]。 200304822 類型 1.滑膜內襯細胞 a.無變化 η b.細胞擴大，些微增厚 1 C.細胞擴大，數目增加，適度增厚。未出現絨毛 丄 〇 d.細胞擴大，增厚。出現絨毛 Z 2.纖維組織增生 j a.無變化 η b.內襯細胞下出現纖維組織增生 \j 1 C.蜂窩組織之小部分面積被纖維組織置換 2 d.纖維組織置換蜂窩組織 3 3.發炎性細胞 a.偶爾看到，分散於切片 0 b·僅出現少數細胞於內襯細胞層內或下，及/或血管周園 1 C.可能出現少數細胞病灶聚集 2 d.許多細胞出現於囊中及於內襯細胞層內或下。常見大病 3 灶 4.血管翳 a.未偵測到 0 b.可偵測到 1 此外，使用Mankin’s組織分級系統鑑定關節軟骨及骨 豁，如下槪述[Mankin，et al·，Journal of Bone & Joint

Surgery-American Volume 5 3: 5 23 -37 ( 1 97 1 )] 0 200304822 類型 等級 1.結構 a.正常 0 b.表面不規則 1 C.血管翳及表面不規則 2 d.裂縫至轉變區 3 e.裂縫至放射狀區 4 f.裂縫至鈣化區 5 g.完全組織破壞 6 2.細胞 a.正常 0 b.散佈的高細胞結構 1 C.群聚 2 d.低細胞結構 3 3. Saffranin-Ο 染色 a.正常 0 b.輕微還原 1 c.適度速原 2 d.嚴重還原 3 e.無染色記錄 4 4.潮標完整性 a.完整 0 b.經血管穿越 1 -57- 200304822 表15 : Lewis大鼠關節發炎之評估：抑制作用 天 賦形劑 實施例24 1 0.00 0.00 2 0.00 1.00 3 4.50 4.50 4 5.50 4.83 5 9.33 5.83 6 10.50 6.16 7 10.60 6.16 8 11.00 5.33 9 11.50 5.66 10 11.33 4.33 11 10.83 3.16 12 10.83 3.16 13 11.00 2.16 14 11.00 3.33 15 11.00 3.00 16 11.00 1.66 17 10.50 1.50 200304822 表16 : Lewis大鼠關節發炎之評估：治療作用 天 賦形劑 實施例24 實施例27 實施例32 1 10.83 11.33 11 33 11 33 2 11.00 11.15 11.15 10.83 3 10.83 11.33 11.33 9 33 4 11.33 9.50 9.83 8.00 5 11.50 8.00 8.83 5.83 6 11.50 7.00 7.83 3.33 7 11.50 5.83 6.16 3.00 8 11.50 4.83 5.00 2.50 9 11.00 3.50 4.33 2.50 10 11.00 3.83 2.66 2.50 11 10.66 3.83 1.83 2.50 12 10.66 3.83 1.83 2.50 13 10.50 3.16 2.66 2.50 14 9.83 3.16 2.66 2.50 15 8.10 2.83 2.00 2.00 16 7.35 2.83 2.00 1.33 17 6.50 2.00 1.50 1.00 200304822 表17 : Lewis大鼠跗骨關節滑膜炎之組織學計分（平均土 SD):治療作用 組 滑膜結構 纖維組織增生 發炎性細胞 血管翳 全部滑膜炎計 (0-3) (0-3) (0-3) (0-1) 分 (0-10) 賦形劑 2.58土 1.75± 0.42 2.92± 0.20 1.00士 8.25± 1.57 0.38 0.89 實施例24 1.42土 0.42± 0.80* 1.33± 0.41* 0.08土 3.25± 1.54* (50mg/kg) 0.49* 0.20* *sig<賦形劑 表18 : Lewis大鼠跗骨關節軟骨變化(Mankin計分)之組織學計分 (平均± SD):治療作用 組 軟骨結構 軟骨細胞 Saffranin 潮標完整性 全部Mankin計分 (0-6) (0-3) O/Fast (0-1) (0-14) Green染色 (0-4) 賦形劑 2.83土 2.58土 2.50± 0.32 0 7.92± 0.74 0.26 0.38 實施例24 1.58土 0.83土 1.25± 0.69* 0 3.67± 1.86* (50mg/kg) 0.49* 0.75* . -............. *sig<賦形劑 HLA-B27大鼠模式之關節炎評估。於模擬人類驅節炎之 HLA-B 27大鼠標準藥理測試程序中評估本發明之代表性化 合物。以下簡單說明所用程序及所得結果。雄HLA-B27 200304822 大鼠獲自Taconic且未限制其得到食物（PMI Lab飮食500 1 ) 及水。如上述佐劑-誘發關節炎之Lewis大鼠模式評估關 節計分及組織學分析。 硏究1，大鼠（8-10週齢）每天口服投與下列配方之一者 一次達46天。每組4隻大鼠且最後一次劑量在安樂死前 兩小時投與。 •載劑（2% tween-8 0/0.5%甲基纖維素） •實施例21(1-18天爲10mg/kg ;然後在第μ天增加爲 20mg/kg) •實施例24(1-24天爲i〇mg/kg ;然後在第25天增加爲 20mg/kg) 下歹請# # mjx袠性化合物所得結果（表（19)及（2〇))。 表19硏究1之關節發炎評估 天 _賦形劑 2.5 實施例24 實施例21 ---. 29 1.5 0.75 30 6 0.5 1.75 31 5 0.5 1.25 32 6 75 1.25 0.75 33 _ 8 2 1 -----〜 34 2.25 1.25 35 8 2 2.25 36 6 2.25 1 37 7.5 2 4 38 6.5 2.75 1.5 200304822 39 7.5 2.25 1.5 40 7.5 1.75 2.25 41 6.5 2 2.25 42 6.5 2.5 1.5 43 6 4.75 1.25 44 6.75 3 1 45 5.5 2.75 2.5 46 6 3.25 2 妾？0 :硏究1之關節組織學評估 化合物 滑膜炎計分（平均± SD) __ Mankin計分（平均土 SD) 賦形劑 7.75± 2.6 6.75± 1.0 實施例24 3.17± 0.3* 3.5 土 1.8** 實施例21 6·1± 0.75 4.6± 0.9 *sig〈賦形劑，Ρ<〇.〇7 **sig〈賦形劑，Ρ<〇·〇5 硏究2，大鼠（8-10週齡）每天口服投與下列配方之一者 鲁 一次達26天。每組4隻大鼠且最後一次劑量在安樂死前 兩小時投與。 •載劑（2% tween-80/0.5%甲基纖維素） •實施例25(1-14天爲l〇mg/kg ;然後在第15天增加爲 20mg/kg) •實施例 34(l〇mg/kg) 下列爲本發明代袠性化合物所得結果（表（2 1))。 -62- 200304822 表21硏究2之HLA大鼠關節發炎評估 天 賦形劑 實施例25 實施例34 1 0 0 0 2 0 0 0 3 0 0 0 4 0 0 0 5 0 0 0 6 0 0 0 7 0 0 0 8 2.5 1 0.25 9 3.75 2 0.75 10 2.75 2.25 0.5 11 3.5 2.25 0.5 12 1.25 2 2.25 13 1.25 2 0.5 14 1.25 2 0 15 5.25 3.75 0.5 16 4.5 3 0.5 17 3.5 2.75 0.25 18 3.75 2 0.75 19 5.5 15 1 22 3.25 1.25 1 23 6.5 2.5 1.75 24 6.5 2 1.75 25 6.25 2 2 26 7 1.75 3 200304822 致癌作用活體內樽式之評估 本發明之化合物治療及抑制各種惡性或高增殖疾病之能 力，可從文獻易於取得之標準藥理測試程序評估，包括下 列兩程序。 乳癌：切除胸腺nu/nu(裸鼠）小鼠係已切除卵巢，獲自 Charles River Laboratories(Wilmington，MA)。腫瘤細胞注 射前一天，將含有0.36-1.7mg 17Θ-雌二醇（60或90天釋 放，Innovative Research of American，Sarasota，FL)或安 慰劑之逐漸釋放小片植入動物。使用1 〇 口徑精細套管由 皮下將小片導入肩甲骨內區域。之後，將lxl〇7 MCF-7細 胞或1 X 1 07 BG-1細胞皮下注射到乳房組織。此細胞混與 等體積的基質膠（matrige卜一種基底膜基質製備物）以增 強腫瘤建立。化合物可於1% tween-80於鹽水之賦形劑中 經由腹膜內或口服每日投與。每3天或7天評估腫瘤大小。 大腸癌：治療或抑制大腸癌之能力可以Smirnoff之測 試程序評估[Oncology Research 11: 2550-64 (1999)]。 於兩活體內測試程序之保護神經評估 蒙古種沙鼠（Mongolian gerbil)暫時性總體絕血。受U化 合物在預防或治療大腦損傷對於氧缺乏/再灌流反應之功 效可使用下列測試程序測量。 雌蒙古種沙鼠（60-80g，Charles River Laboratories， Kingston，NY)收容於 Wyeth-Ayerst 動物養護中心（AAALAC 認證），給予12-小時光/12-小時暗之光期及自由取得自來 水與低雌激素酪蛋白飮食（Purina，Richmond，IN)。適應 200304822 環境（3-5天）後，以異福瑞烷（isoflurane，2-3%混與02)麻 醉沙鼠，切除卵巢（第0天）。以下早晨（第1天）開始，每 天對沙鼠皮下處以賦形劑（10% ET0H/玉米油）、17/3-雌二 醇（lmg/kg，皮下）或實驗化合物。第6天以異福瑞烷麻醉 沙鼠（11 = 4-5/組），可見到的一般頸動脈透過中線切口，並 以非外傷用顯微動脈瘤夾同時將兩動脈封閉5分鐘。閉塞 之後，移除夾子使腦部再灌流並以創傷夾子封閉頸切口。 總體絕血手術之前全部動物禁食隔夜，此步驟可促進一致 性的傷害。第12天將沙鼠暴露於致命劑量C02，以乾冰 鲁 冷凍大腦並保存在-80 °C。這些硏究使用的動物流程可經 位於 Wyeth-Ayerst 硏究所之 Radnor/Collegeville Animal Care 及 Use Committee(RACUC/CACUC)檢閱及認可。 保護神經之程度可以神經顆粒素（neurogranin) mRNA之 在原位雜化作用（in situ hybridization)分析評估。簡言之， 將20/zm冠狀冷凍切片機切片收集在塗覆動物膠之載玻片 上’乾燥後保存在-80°C。處理之時，將乾燥的載玻片盒 | 回溫至室溫，載玻片固定於4 %多聚甲醛，處以乙酸酐然 後以氯仿及乙醇去脂及脫水。然後以200 //l(6xl06 DPM/ 載玻片）之神經顆粒素反意義或意義（對照組）核糖探針 (35S-UTP-標記NG-241，鹼基 99-340)，於50%曱醛雜化混 合液及不含蓋玻片之溼化載玻片室中在55t培育隔夜以雜 化經處理固定切片之載玻片。隔日早上將載玻片收於架 上，浸泡於 2xSSC(0.3M NaCl，0.03M檸檬酸鈉；pH 7.0)/10mM DTT，處以 RNase A(20 // g/ml)並在 67 °C 於 -65- 200304822 O.lxS SC洗滌（2x30分鐘）以移除非專一性標記。脫水之後 將載玻片面對BioMax(BMR-l ; Kodak) X-射線軟片隔夜。 使用神經顆粒素雜化作用訊號程度來定量評定受傷後 CA1區域的神經損失，並評估17/3-雌二醇及實驗化合物 之功效。這些硏究選擇神經顆粒素mRNA係因其高度表現 在包括C A 1之海馬神經元，但不存在於神經膠質及此大 腦區域之其他型細胞中。因此測量神經顆粒素mRNA量之 存在代表神經元的存活。神經顆粒素雜化訊號之相對光學 密度測量可獲自電腦基本影像分析系統之軟片放射能照相 儀（C-Imaging Inc·，Pittsburgh，PA)。每一動物得到之 6 切 片結果（40/zm間隔）經平均並統計評估。數値以平均± SEM 表示。變異數之一方分析用於測試神經顆粒素mRNA程度 差異及全部陳述意味p>0.05之結果無差異切片。 下列結果係獲自本發明之代表性化合物（表（2 2))。 表22本發明代表性化合物於沙鼠海馬體維持神經元之功效 化合物 神經顆粒素mRNA (自訂單位；平均± stdev) 賦形劑 0.0 實施例24 0.0 實施例41 43.0± 21.8 小扁中麝動廉0塞。保護神經作用可根據Dubai所述測 試程序評估[參閱 Dubai，et al·，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 98: 1952-1957 (2001)，Dubai，et al·，Journal of Neuroscience 19: 200304822 6385-6393 (1999)] 0 抑制排卵之標準藥理測試程序 此測試程序用於測定受試化合物是否可抑制或改變排卵 時間。其亦可用於測定排出的卵細胞數目[Lundeen，et al·，J. Steroid Biochem Mol Biol 78: 137-143 (2001)]。下列數據 得自本發明之代表性化合物（表（23))。 表23本發明代表性1 七合物抑制排卵之功效 化合物 神經顆粒素mRNA (自訂單位；平均± stdev) 賦形劑 13.00± 0.72 實施例 20(50mg/kg) 14.13± 0.79 實施例 24(50mg/kg) 13.86± 0.77 子宮內膜組織異位形成標準藥理測試程序之評估 此程序是從已發表之方法經些許改良[Bruner-Tran，et al.， Journal of Clinical Investigation 99: 2851-2857 (1997)]。 簡言之，正常人類子宮內膜組織（循環天〜12)在活體外處 以10nM之17/3-雌二醇隔夜，然後植入已切除卵巢之無 胸腺裸鼠。爲達此硏究之目標，如文獻所述小鼠不接受雌 激素/安慰劑植入物。讓損害造成至少1 0天，然後開始並 持續口服投與至少1 5天。需注意全部小鼠在開始投與時 可見到損害。驗屍時測定具有損害之小鼠的數目及每一小 鼠的損害。 實施例24之化合物於此程序中以l〇mg/kg之劑量評估 三次。每一測試程序中，投與實施例24化合物之小鼠在 -67- 200304822 驗屍時損害較投與賦形劑的小鼠少。例如在硏究1中，賦 形劑組之四隻小鼠每一隻至少有一損害且此組共有1 〇處 損害。相較之下，處以實施例24之六隻小鼠只有兩隻有 損害，且每隻只發現1處損害。由於全部小鼠在開始治療 時皆有損害，因此實施例24之化合物導致六隻小鼠中有 四隻的損害復原。 根據標準藥理測試程序所得結果，本發明之化合物爲雌 激素受體調節子，可用於治療或抑制至少部分由雌激素缺 乏或過多所仲介之狀況、失調或疾病狀態，或可透過雌激 鲁 素劑之使用來治療或抑制。本發明之化合物尤其可用於治 療停經前、停經、或停經後之內生性雌激素製造已大大減 少的病患。停經通常定義爲最後的自然月經週期，並有卵 巢功能停止之特徵，導致血液循環中的雌激素大量減少。 至於本文所用的停經亦包括可能因手術、化學性、或因疾 病狀態導致過早降低或停止卵巢功能而減少雌激素製造之 情形。 籲 本發明之化合物亦可用於抑制或治療其他受雌激素損失 影響者，包括熱潮紅、陰道或女陰萎縮、萎縮性陰道炎、 陰道乾燥、搔癢症、性交困難、排尿困難、頻尿、小便失 禁、尿道感染。其他生殖道用途包括治療或抑制官能障礙 性子宮出血。此化合物亦可用於治療或抑制子宮內膜組織 異位形成。 本發明之化合物在大腦亦有活性，因此可用於抑制或治 療阿兹海默症（Alzheimer’s disease)、認知衰退、性慾降低、 -68- 200304822 老人癡呆、神經退化性病症、憂鬱、焦慮、失眠症、精神 分裂症、以及不孕。本發明化合物可用於治療或抑制良性 或惡性不正常組織生長包括血管球硬化、攝護腺肥大、子 宮平滑肌瘤、乳癌、皮硬化症、纖維瘤、子宮內膜癌、多 囊性卵巢症候群、內膜息肉、良性乳房疾病、子宮內膜組 織異位形成、卵巢癌、黑色素瘤、攝護腺癌、大腸癌、CNS 癌如神經膠瘤或星母細胞瘤。 本發明之化合物具心臟保護性及爲抗氧化劑，可用於降 低膽固醇、三酸甘油脂、Lp(a)、以及LDL程度；抑制或 治療高膽固醇血症、高脂血症、心血管疾病、動脈粥樣硬 化、周邊血管疾病、血管再狹窄、以及血管痙攣；以及抑 制血管壁因細胞性事件導致免疫仲介引發之血管傷害。 本發明之化合物亦可用於治療與發炎作用或自體免疫疾 病有關聯之疾病，包括發炎性腸疾病（克隆氏病（Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、不確定性結腸炎）、關節炎（類 風溼性關節炎、脊椎關節炎、骨關節炎）、胸膜炎、絕血/ 再灌流傷害（例如中風、移植排斥、心肌梗塞等等）、氣喘、 巨細胞動脈炎、攝護腺炎、組織間質性膀胱炎、葡萄膜炎、 牛皮癖、多發性硬化、全身紅斑性狼瘡以及敗血症。 本發明之化合物亦可用於治療或抑制眼疾，包括白內 障、葡萄膜炎、以及斑點性退化，以及治療皮膚疾病如老 化、禿髮、及痤瘡。 本發明之化合物亦可用於治療或抑制代謝性疾病，例如 第II型糖尿病、脂肪代謝疾病、食慾失調（例如神精性厭 200304822 食症及貪食症）。 本發明之化合物亦可用於治療或抑制出血性疾病，例如 遺傳出血性毛細管擴張、官能障礙性子宮出血、戰鬥性出 血休克。 本發明之化合物可用於因疾病狀態之不良停經，例如白 血病、內膜脫落、慢性腎病或肝病、或凝血疾病或失調。 本發明之化合物可使用作爲避孕劑，特別是與黃體製劑 組合使用。 投與以治療或抑制特定疾病狀態或疾病時，應瞭解有效 鲁 劑量可視所用之特殊化合物、投與模式、狀況、及欲治療 之疾病狀況的嚴重度、以及被治療病患有關之各種身體因 子而異。本發明化合物之有效投與可爲約〇.lmg/天至約 1，000mg/天之口服劑量。較佳投與可從約10mg/天至約 600mg/天，更佳爲從約50mg /天至約600mg/天，以單劑或 分割爲兩劑或更多劑投與。計畫之每劑量預期將視投與路 徑而異。 此等劑量可使用任何方式將文中之活性化合物直接投與 到接受者血液，包括口服，透過植入物，非經腸（包括靜 脈內，腹膜內，關節內及皮下注射），直腸，鼻內，局部， 眼部（經由眼藥水），陰道，以及經皮投與。 含有本發明活性化合物之口服配方可包括任何慣用口服 形式，包括錠劑，膠囊，頰式，糖錠，喉片及口服液，懸 浮液或溶液。膠囊可含有活性化合物與惰性塡充劑及/或 稀釋劑如醫藥可接受澱粉（例如玉米，馬鈴薯或樹薯澱 -70- 200304822 粉）、糖、人工甜味劑、纖維素粉末如結晶及微晶纖維素、 香料、明膠、樹膠等等之混合物。實用錠劑配方之製造可 以慣用壓縮，濕顆粒化或乾顆粒化等方法，並運用醫藥可 接受稀釋劑，結合劑，潤滑劑，崩散劑，界面修飾劑（包 括界面活性劑），懸浮劑或穩定劑，包括但不限制爲硬脂 酸鎂、硬脂酸、滑石、月桂基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲 基纖維素鈣、聚乙烯吡咯酮、明膠、藻酸、阿拉伯樹膠、 黃原膠、檸檬酸鈉、錯合矽酸鹽、碳酸鈣、甘胺酸、糊精、 蔗糖、山梨糖醇、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、高林（kaolin)、 甘露醇、氯化鈉、滑石、乾澱粉以及粉狀糖。較佳界面修 飾劑包括非離子及陰離子界面修飾劑。界面修飾劑的代表 性實例包括但不限制爲普羅賽瑪188 (poloxamei* 188)、殺 藻胺（benzalkonium chloride)、硬脂酸錦、十八醇十六醇混 合物（cetostearl alcohol)、聚乙二醇單醋醚乳化臘、山梨 糖酯、二氧化矽膠體、磷酸鹽、十二烷基硫酸鈉、矽酸鎂 鋁、以及三乙醇胺。文中口服配方可運用標準徐放或定時 釋放配方以改變活性化合物吸收。口服配方亦可由投與活 性成分於水或果汁構成，若需要可含有適當的助溶劑或乳 化劑。 於某些情況可能需以氣溶膠形式直接以投與化合物至空 氣中。 本發明之化合物亦可經由非經腸或腹膜內投與。這些活 性化合物的溶液或懸浮液爲自由鹼或醫藥可接受鹽，可製 備於水中適當混與界面活性劑如羥基-丙基纖維素。分散 71 200304822 液也能製備於甘油，液體聚乙二醇及其油混合物。於一般 條件保存及使用下，這些製備物含有防腐劑防止微生物生 長。 適合注射使用之醫藥形式包括無菌水溶液或分散液，以 及用於臨時製備無菌注射液或分散液之無菌粉末。全部形 式必需無菌且需能輕易擴展爲液體存在於針筒中。在製造 及保存狀況下必需穩定，且必需維持對抗微生物汙染，例 如細菌及真菌。載劑可爲溶劑分散培養液，包括例如水、 乙醇、聚醇（例如甘油，聚乙二醇以及液體聚乙二醇）、其 修 適當混合物、以及植物油。 至於本案揭示之目的，可理解經皮投與包括所有越過身 體表面及身體通道內襯，包括上皮及黏膜組織。此等投與 之進行可使用本化合物或其醫藥可接受鹽於外用藥水、乳 霜、泡沬、貼布、懸浮液、溶液、以及栓劑（直腸及陰道）。 經皮投與可透過經皮貼布之使用來達成，該經皮貼布含 有活性化合物及對化合物不活性、對皮膚無毒性之載劑， φ 且能透過皮膚由全身性吸收輸送試劑至血流內。載劑可爲 任何形式，例如乳霜及軟膏，糊劑，凝膠，以及閉合裝置。 乳霜及軟膏可爲黏液或半固體乳液之水包油或油包水形 式。糊劑含有吸收性粉末分散於石油或親水性石油（含有 活性成分亦適合）。各種閉合裝置可用於釋放活性成分至 血流中，例如覆蓋貯器（含有活性成分及含/不含載劑）之 半滲透膜，或含有活性成分之基質。其他閉合裝置爲文獻 已知。 -72- 200304822 栓劑配方可製自傳統材料，包括可可醬，含或不含加成 臘以改變栓劑熔點，以及甘油。水溶性栓劑鹽類，例如各 種分子量的聚乙二醇亦可使用。 本發明代表性實施例之製備說明如下。 實施例1 2-(5-羥基-1,3-苯并曙晔-9-甚）苯-1.4-二醇 步驟a) N-(2,5 - 一甲氧基苯基）-2,5 -二甲氧基苯_胺 2,5-二甲氧基苯甲酸（5.〇£，27.51!1111〇1)及亞硫酶氯（15社） 之混合物回流1小時。真空下移除揮發物。殘留物溶解於 鲁 THF(2 0mL)並添加到 2,5-二甲氧基苯胺（4.6g，30.2mmol)、 三乙基胺（5mL，35.9mmol)及THF(40mL)之冷溶液（〇。〇。攪 拌混合物30分鐘，倒入水中，以HC1(2N)酸化並以EtOAc萃 取。有機萃取物經MgS〇4乾燥。蒸發並經快速色層分析純 化（己垸/EtOAc 2/1)得到白色固體（8.1g，93 %產量， m.p.l21-123°C); MS 仞/e 3 18(M + H)+。 C17H19N〇5之分析： · 計算値：c，64.34; Η，6.03; Ν, 4.41 實測値：C，64·29 ; Η, 5.95 ； Ν, 4.44 步驟b) 2-(5-羥基-1，3-苯并噚唑-2-基）苯-1，4-二醇 在20(TC攪拌iV-(2,5-二甲氧基苯基）-2,5-二甲氧基苯醯胺 (l.Og，3.1mmol)及吡啶氯化氫（2.0g，17.3mmol)之混合物1 小時。混合物冷卻至室溫並添加HCl(10mL，2N)。然後以

EtOAc萃取混合物，有機萃取物經MgS04乾燥。蒸發並經 快速色層分析純化（己烷/EtOAc 2/1)得到白色固體（〇.8g， -73- 200304822 76%產量，111邛.309-311 °(：);1^8岱/己 24 2(^1-11)+。 C13H9N〇4之分析： 計算値：C，64.20; H, 3.73; N, 5.76 實測J 値：C，6 3.9 8 ; Η，3.7 1 ; Ν，5 · 6 2 實施例2 得到黃褐色固 3-(5 -羥基-1,3 -苯并曙唑-2-基）苯-1,2 -二醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,5-二甲氧基苯 胺及2,3-二甲氧基苯甲酸製備標題化合物。 體產物，m.p.23 9-24 1 °C ; MS π/e 244(M + H) + C13H9N〇4之分析： 計算値：C，64.20 ; H，3.73 ; N，5.76 實測値：C，6 3.8 6 ; Η，3.9 0 ; Ν，5 · 7 4 實施例3 2-Π-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并曙唑-5-醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,5-二甲氧基苯 胺及3-氟-4-甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到白色固 體，m.p.262-268 °C ; MS 仞/e 244(M_H)+。 C13H8FN〇3之分析： 計算値：C，63.68; Η，3.29; Ν, 5.71 實測値：C，64.01 ; Η, 3.25 ； N，5.63 實施例4 2-(3-氯-4-羥苯基）-1,3-苯并噂唑-5 ·醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,5-二甲氧基苯 胺及3-氯-4-甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到白色固 -74- 200304822 體，m.p.254-25 6 °C ; MS 仞/e 260(M_H)+。 C13H8C1N〇3之分析： 計算値：C，59.67; Η, 3.08; N, 5.35 實測値：C，5 9 · 5 9 ; Η, 3.02 ； N, 5.25 實施例5 2-(2-氯-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,5-二甲氧基苯 胺及2-氯-4-甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到白色固 體，m.p.25 3 -25 5 °C ; MS 仞/e 262(M + H)+。 β C13H8C1N〇3之分析： 計算値1 :C， 59.67 ； H, 3.08 ； N， 5.35 實測値： :C， 59.79 ； H, 2.87 ； N, 5.36 實施例6 2-(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并曙唑-6-醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,4-二甲氧基苯 胺及3-氟-4-甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到白色固 體，m.p.269-27 1 °C ; MS i22/e 244(M-H)+。 C17H17N〇3之分析： 計算値：C，63.68; Η, 3.29 ； Ν ,5.71 實測値：C，63.5 3 ; Η, 3.71 ； Ν, 5.38 實施例7 2-(3-第三丁基-4-羥苯基）-1,3-苯并曙唑-6-醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,4-二甲氧基苯 胺及3-第三丁基-4-甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到 -75- 200304822 白色固體，m.p.220-222 °C ; MS 仞/e 284(M + H)+。 C17H17N〇3之分析： 計算値I :C， 72.07 ； H, 6.05 ; N, 4.94 實測値： :C， 72.03 ； H, 6.43 ； N， 4.72 實施例8 2- (6 -羥基-1,3-苯并曙唑-2-基）苯-1,4 -二醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,4-二甲氧基苯 胺及2,5-二甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到黃褐色固 體，m.p.27 8 -28(TC ; MS 仞/e 244(M + H)+。 _ C13H9N〇4之分析： 計算値：C，64.20 ; H，3.73 ; N, 5.76 實測値：C，6 4 · 0 9 ; H, 3 · 1 4 ; N, 5.65 實施例9 3- (6 -羥基-1，3 -苯并曙唑-2-基）苯-1,2 -二醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,4-二甲氧基苯 胺及2,3-二甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到黃褐色固 φ 體，m.p.25 6-25 8 °C ; MS 仞/e 244(M + H)+。 C13H9N〇4之分析： 計算値：C，64.20; Η，3.73; N, 5.76 實測値：C，6 3 · 9 1 ; Η，3.9 8 ; N, 5.72 實施例1 0 4- (6-羥基-1,3-苯并嚀唑-2-某）苯-1，2-二醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,4-二甲氧基苯 胺及3,4-二甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到白色固 -76- 200304822 體，m.p.28 2-284 °C ; MS 忉/e 242(M-H)+。 C13H9N〇4之分析： 計算値：C, 64.20 ; H，3.73 ; N，5.76 實測値：C，6 3 · 5 7 ; H, 3.68 ； N, 5.63 實施例1 1 2-(3-氯-4-羥苯基）-1,3-苯并嚀唑-6-醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,4-二甲氧基苯 胺及3-氯-4-甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到灰白色 固體，m.p.254-25 6 °C ; MS 仞/e 262(M + H)+。 籲 C13H9N〇3之分析： 計算値：C，64.20 ; H，3.73 ; N, 5.76 實測値：C，6 3 · 5 7 ; Η，3 · 6 8 ; Ν，5 · 6 3 實施例1 2 2-(4-羥苯基）-1,3-苯并曙唑-5-醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,5-二甲氧基苯 胺及4-甲氧基苯甲醯氯製備標題化合物，得到淺黃色固 $ 體，m.p.264-267°C ; MS 仞/e 228 (M + H)+。 C13H9N〇3之分析： 計算値：C，68.72; Η, 3.99; Ν, 6.16 實測値·· C，67.87 ; Η，4.05 ; Ν，6.23 實施例1 3 4-(5-羥某-1,3-苯并曙唑-2-某）苯-1,3-二醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,5-二甲氧基苯 胺及2,4-二甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到白色固 -77- 200304822 體，m.p.〉30(TC ; MS 仞/e 242(M-H)+。 C13H9N〇4之分析： 計算値1 :C， 64.20 ； H， 3.73 ; N, 5.76 實測値： :C， 63.92 ； H， 3.74 ; N, 5.56 實施例1 4 2-(4-羥苯基1,3-苯并曙唑-6-醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2,4-二甲氧基苯 胺及4-甲氧基苯甲醯氯製備標題化合物，得到白色固體， m.p. >300°C ; MS 仞/e 226(M-H)+。 C13H9N〇3之分析： 計算値：c，68.72; Η，3·99; N, 6.16 實測値：C , 6 8.0 9 ; Η，4 · 0 1 ; N, 6.05 實施例1 5 4-(6-羥某-1,3-苯并曙唑-2-某）苯-1,3-二醇 本質上如實施例1所述之相同方法，從2，4 -二甲氧基苯 胺及2,4-二甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到白色固 體，m.p.293 -296 °C ; MS 切/e 242(M-H)+。 C13H9N〇4之分析： 計算値：C，64.20 ; H, 3.73 ； N，5.76 實測値：C , 6 3 · 4 3 ; Η，3 · 7 7 ; Ν, 5.7 4 實施例1 6 6-氯- 2-(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇 步驟a) iV-(4-氯-2,5-二甲氧基苯基）-3-氟-4-甲氧基苯醯 200304822 本質上如實施例1步驟a所述之相同方法，從4 _氯-2，5 -二 甲氧基苯胺及3-氟-4_甲氧基苯甲酸製備標題化合物’得 到白色固體，m.p.l 97- 1 99°C ; MS 切/e 340(M + H)+。 C16H15C1FN04 之分析： 計算値：C，56.56; Η，4.45; Ν，4.12 實測値：C, 5 6.3 3 ; Η, 4.35 ； Ν, 4.05 步驟b) Κ4-氯-2,5-二羥苯基）-3-氟-4-羥基苯醯胺 將三氟化硼二甲硫複合物（70mL)添加到"-(4_氯-2,5-二 甲氧基苯基）-3-氟-4 -甲氧基苯醯胺（1.75g，5.15mmol)及 CH2Cl2(3 5mL)之混合物。攪拌20小時後，於有罩操作檯（hood) 中氮氣流下蒸發溶劑及過多試劑。殘留物溶於冰及HC1( IN) 的混合物中並以Et〇Ac萃取。以HC1( IN)洗滌有機層並經 MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分析純化（CH2C12/己烷 /EtOAc 5/3/2，以及每公升離析溶劑含Ac〇H 10mL)得到白 色固體（1.42,91%產量，！11卬.254-266^：);以3切/^ 296(^1-11)+。 C13H9C1FN〇4之分析： 計算値：c，52.46; Η, 3.05; N,4.71 實測値：C，5 1 · 9 8 ; Η，2 · 9 8 ; Ν, 4.56 步驟c) 6-氯-2-(3-氟·4-羥苯基）-1，3-苯并噂唑-5-醇 本質上如實施例1步驟b所述之相同方法，從iV-(4-氯-2,5-二羥苯基）-3_氟-4-羥基苯醯胺及吡啶氯化氫製備標題化合 物，得到白色固體，m.p.25 8-260°C ; MS 切/e 27 8 (M-H)+。 C13H17C1FN〇3 之分析·· 計算値：C，55.83; Η，2.52; Ν, 5.01 200304822 實測値：C，5 5.3 5 ; Η, 2.59 ； Ν, 4.91 實施例1 7 6 -溴-2 - (3 -氟-4 -羥苯基）-1, 3 -苯并曙唑-5 -醇 本質上如實施例16所述之相同方法，從4-溴-2,5-二甲氧 基苯胺及3-氟-4-甲氧基苯甲酸製備標題化合物，得到白 色固體，m.p.224-226 °C ; MS 仞/e 322(Μ-Η)+。 C13H17BrFN〇3之分析： 計算値：C，48.18; Η, 2.18 ； Ν, 4.32 實測値：C，4 8.6 9 ; Η，2 · 3 6 ; Ν, 4.59 實施例1 8 6-氯- 2-(4-羥苯基）-1,3-苯并曙唑-5-醇 本質上如實施例16所述之相同方法，從4-氯-2,5-二甲氧 基苯胺及4-甲氧基苯甲醯氯製備標題化合物，得到灰白色 固體，m.p.260-262°C ; MS 仞/e 260(M-H)+。 C13H8C1N03 之分析： 計算値：C，59.67; Η, 3.08 ； Ν, 5.35 實測値：C，5 9 · 0 9 ; Η，3 · 0 6 ; Ν, 5.11 實施例1 9 5 ·氯·2-(4-羥苯基）-1.3-苯并曙唑-6-醇 本質上如實施例16所述之相同方法，從5-氯-2,4-二甲氧 基苯胺及4-甲氧基苯甲醯氯製備標題化合物，得到灰白色 固體，m.p.254-25 6°C ; MS 仞/e 262(M + H)+。 C13H8C1N03 之分析： 計算値：C, 59.67; Η, 3.08 ； Ν, 5.35 200304822 實測値：C，59.40 ; H，2.97 ; N，5.22 實施例2 0 7-溴- 2-(4-羥苯基）-1. 3-苯并噂唑-5-醇 步驟a) 2 -溴-4-甲氧基-6-硝酸 溴（16.0g，lOOmmol)於乙酸（20mL)添加到4·甲氧基-2-硝 酸（16.9g，lOOmmol)、醋酸鈉（16.4g，200mmol)及醋酸（l〇〇mL) 之混合物。在室溫攪拌混合物30分鐘，然後在7(TC 2小時 並倒入含有濃硫酸（10mL)的水（1.5L)中。過濾沉澱的固體 並從（氯仿/己院）結晶得到褐色固體’ m.p.ll6-118°C; MS m/e _ 246(M-H)+。 C7H8BrN04 之分析： 計算値：C，33.90; Η, 2.44 ； Ν, 5.65 實測値：C，34.64 ; Η, 2.16 ； Ν, 5.43 步驟b) 2-胺基-6_溴-4-甲氧基酚

Raney/Ni(2.5g)添加到 2-溴-4-甲氧基-6 -硝酣（8.8g， 35.5mmol)於EtOAc(lOOmL)之溶液。混合物在Parr儀中於氫 ^ 下在25psi搖動2.5小時。反應混合物透過賽力特矽藻土 (celite)過濾並於真空下濃縮得到灰色固體（7.4g，96%產 量，m.p.95-97°C) ; MS 仞/e 218(M + H)+。 C7H8BrN04 之分析： 計算値：C，3 8.5 6 ; H，3.70 ; N, 6.42 實測値：C，3 8 · 3 2 ; Η，3 · 7 7 ; Ν，6 · 24 步驟c) 2-溴-4-甲氧基-6-[(4-甲氧基苯甲醯基）胺基]苯 基-4-甲氧基苯甲酸酯 -81 - 200304822 無水吡啶（37.〇mL，468.5mmol)逐滴添加到2 -胺基-6-溴-4-甲氧基酚（20.〇g，9 1.7 mmol)、4-甲氧基苯甲醯氯（38.9g， 229.0mmol)及 CH2Cl2(250mL)之冷混合物（〇°C，機械性攪 拌）。添加吡啶期間形成沉澱。濾除沉澱的固體並以乙酸 乙酯洗滌。將固體溶於水中並攪拌2 0分鐘。然後濾除固 體並乾燥得到灰白色固體，（42.5g，95%產量，m.p.73-7 5〇C) ； MS We 484(M-H)+。 C23H20BrN〇6之分析： 計算値：C ,56.80; Η，4.15; N，2.88 ® 實測値：C，56.50 ; Η，3.78 ; Ν, 2.83 步驟d) 7-溴-5-甲氧基- 2-(4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑 路徑a) 2-溴-4-甲氧基- 6-[ (4-甲氧基苯甲醯基）胺基]苯基-4-甲氧 基苯甲酸酯（42.0g，86.4mmol)，對-甲苯磺酸單水合物 (3 2.82，172.81!1111〇1)及無水對-二甲苯（80〇111：1)之懸浮液於 持續移除水之下（Dean-Stark Trap)回流1小時。在回流溫度 _ 初始懸浮液轉爲棕色溶液。冷卻混合物至室溫並以 Na〇H(2N)洗滌。有機層經MgS04乾燥。蒸發並從丙酮/乙 酸乙酯結晶得到灰白色固體（23.5g，82%產量，111.?.1；39-141〇C) ; MS 仞/e 3 34(M + H)+。 C15H12BrN03 之分析： 計算値：C，53.91 ; H, 3.62 ； N, 4.19 實測値·· C，5 3.8 3 ; H, 3.37 ； N，4.01 路徑b) -82- 200304822 使用Dean-Stark水分開器回流2-胺基-6-溴-甲氧基酚 (100mg，0.46mmol)，4-甲氧基-苯甲酸（77mg，0.5mmol)’ 硼酸（31mg，0.5mmol)於對-二甲苯（9mL)之混合物24小時。 冷卻混合物至室溫，並在真空下濃縮。殘留產物經快速色 層分析純化（3 0%EtO Ac/石油醚）得到淺粉紅色固體（99mg， 65%產量，111.0.136-138 °〇);]\/13；22/己 334(]\1 + 11)+〇 C15H12BrN03 之分析： 計算値：C，53.91 ; H，3.62 ; N，4.19 實測値：C，5 3 · 7 8 ; Η，3 · 5 5 ; Ν，4 · 0 1 步驟e) 7·溴-2-(4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇 路徑a) 將三溴化硼（1M，89.9mL，89.8mmol)逐滴添加到7-溴-5-甲氧基-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑（10.〇2，29.94111111〇1)及 CH2Cl2(5 0mL)之冷懸浮液（-70°C )。讓混合物回溫至室溫。 回溫期間懸浮液轉爲暗色溶液。在室溫攪拌混合物2小時， 然後緩慢倒入冷（〇°C )乙醚中（lOOOmL)。緩慢添加甲基醇 (200mL)到新混合物中達20分鐘。然後將混合物倒水（1.5L) 中。以水洗滌有機層三次，經MgS04乾燥。蒸發並從丙酮/ 乙酸乙酯/己烷結晶得到灰白色固體（8.4g，92%產量， m.p.29 8 -299 °C) ; MS ii7/e 306(M + H)+。 C13H8BrN03 之分析： 計算値·· C，51.01 ; H，2.63 ; Ν, 4.58 實測値：C，50.96; Η, 2.30 ； Ν, 4.42 路徑b) -83- 200304822 將三溴化硼（〇.25mL，2.7mmol)逐滴添加到7-溴-5 -甲氧 基-2-(4-羥苯基）-1，3_苯并嗜π坐（i30mg，0.39mmol)及二氯 甲烷（1.5 mL)之冷混合物（-78 °C )。讓反應混合物漸漸回溫 至室溫並攪拌1小時。將混合物倒入冰中並以EtOAc萃取。 以鹽水洗滌有機萃取物並經MgS04乾燥。蒸發並經快速色 層分析（30%-40%EtOAc/石油醚）得到淺粉紅色固體產物 (102mg，86%產量），111.?.295-298 °(：;^13仞/已 3 04(以-11)+。 C13H8BrN03 之分析： 計算値：C，51.01; Η，2.63; Ν, 4.58 實測値：C，51.06 ; Η，2.77 ; Ν，4.36 實施例2 1 7-溴-2-(3-氬-4-獲苯基）-1.3-苯并喈唑-5-醇 步驟a) 2-溴-6-K3-氟-4-羥苯基）胺基]-4-甲氧苯基3·氟-4-甲氧基苯甲酸酯 3-氟-4-甲氧基苯甲酸（39.0g，229mmol)、亞硫醯氯（100mL) 及N，N-二甲基甲醯胺（0.5mL)之混合物回流1小時。真空 下移除揮發物。固體溶於苯中（兩次）並在真空下移除揮發 物。殘留物溶解於CH2Cl2(100mL)並添加到2-胺基-6-溴-4-甲氧基酚（20.0g，91.7mmol)及 CH2C12( 1 50mL)之冷溶液 (0°C，機械性攪拌）。將無水吡啶（37.0mL，468_5111111〇1)逐 滴添加到新混合物中。添加吡啶期間形成沉澱。攪拌混合 物30分鐘，然後添加乙酸乙酯（250mL)。濾除沉澱之固體 並以乙酸乙酯洗滌。將固體溶於水中並攪拌20分鐘。然 後濾除固體並乾燥得到灰白色固體（46.5g ’ 97%產量’ 200304822 m.p.l 84- 1 86t：) ; MS m/e 520(M-H)+。 C23H18BrF2N06 之分析： 計算値：C，52.89; H，3.47; N, 2.68 實測値：C，52.79; H，3.23; N, 2.63 步驟b) 7溴- 2-(3-氟-4·羥苯基）-5-甲氧基-1，3-苯并噚唑 2-溴- 6-[(3-氟-4-羥苯基）胺基]-4-甲氧苯基3-氟-4-甲氧基 苯甲酸酯（46.0g，88.1mmol)，對-甲苯磺酸單水合物（33.5g， 177.2mmol)及無水對-二甲苯（1L)之懸浮液於持續移除水之 下（Dean-Stark Trap)回流3小時。在回流溫度初始懸浮液轉 鲁 爲棕色溶液。濾除固體並以乙酸乙酯洗滌。固體懸浮於乙 酸乙酯（200mL)，攪拌10分鐘，濾除並乾燥得到黃褐色固 體（25.1g，m.p.l 75- 1 77°C)。濃縮乙酸乙酯層至20mL然後得 到2.5g額外產物（90%全部產量）；MS 35 2(M + H)+。

CuHnBrFNC^ 之分析： 計算値：C , 5 1.1 6 ; H, 3.15 ； N，3 · 9 8 實測値：C, 51.10 ; H, 2.92 ； N, 3.89 · 步驟c) 7-溴-2-(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇 本質上如實施例20步驟e所述之相同方法製備標題化合 物，得到白色固體，m.p.265 -267 °C ; MS i27/e 3 32(M-H)+。 C13H7Bi:FN03 之分析： 計算値：C，4 8 · 1 8 ; Η，2.1 8 ; Ν, 4.32 實測値：C，48.19 ; Η, 2.29 ； Ν, 4.19 實施例22 7-溴- 2-(2-氟-4-羥苯某）-1,3-苯并曙唑-5-醇 -85- 200304822 步驟a) 2 -赢-4-甲氧基苯甲酸 對 Ag2〇（13.5g，58.4mmol)、Na〇H(19.5g，487mmol)及 水（200mL)之溫（55°C)混合物添加2 -氟-4 -甲氧基苯甲醛 (15g，97.4mmol)。攪拌混合物i小時，濾除並以熱水（10mL) 洗滌沉澱固體。劇烈攪拌下將濾液緩慢添加到冷（〇 °C )HC1(5N)。過濾沉澱之固體，以水洗滌並乾燥得到白色 固體（13.6g，82%產量，m.p.l94-196t：); MS 瓜/e 169(M-H) +。 C8H7F03之分析： 計算値：C，56.48 ; H，4.15 實測値：C，56.12 ; H，4.12 步驟b) 7 -溴- 2·(2 -氟-4-羥苯基）-1，3 -苯并噚唑-5-醇 本質上如實施例21所述之相同方法，從2-氟-4-甲氧基苯 甲酸製備標題化合物，得到白色固體，m.p.248-250 °C ; MS 仞/e 3 24(M + H)+。 C13H7BrFN〇3之分析： 計算値：C，48.18 ; Η, 2.18 ； N，4.32 實測値：C，47.89 ; H，1.95 ; N, 4.18 實施例2 3 7-溴- 2-(2,3-二氟-4·羥苯基）-1,3-苯并曙唑-5-醇 步驟a) 2,3-二氟-4-甲氧基苯甲酸甲酯 將碘甲烷（10.7mL，172.5mmol)添加到2,3-二氟-4-羥苯甲 酸（lO.Og，57.5mmol)、碳酸鋰（12.7g，172.5mmol)及 N，N-二甲基甲醯胺（100mL)之混合物。在40 °C攪拌混合物12小 時，然後倒入水中並以EtOAc萃取。有機萃取物經MgS〇4 200304822 乾燥。蒸發並經快速色層分析（己烷/EtOAc 5/1)得到白色 固體（10.2g，88% 產量，m.p.66-68°C); MSin/e 203 (M + H)+。 C9H8F203之分析： 計算値：C，53.47; Η, 3.99 實測値：C，5 3 .1 5 ; Η, 3.83 步驟b) 2,3-二氟-4-甲氧基苯甲酸 將氫氧化鈉（2N，50mL)添加到2,3-二氟-4-甲氧基苯甲 酸甲酯（lO.Og，49.5mmol)、THF(lOOmL)及 Me〇H(100mL)之 混合物中。在室溫攪拌混合物6小時，以HC1(2N)酸化。 濾除沉澱之固體，以水洗滌並乾燥得到白色固體（8.9g，96% 產量，ιη·ρ·194·196°〇; MS 仞/e 187(M-H)+。 C8H6F2 0 3之分析： 計算値：C，5 1.0 8 ; Η，3 · 2 1 實測値：C，5 0.8 3 ; Η，2.9 2 步驟c) 7-溴-2-(2,3·二氟-4·羥苯基）-13-苯并噚唑-5-醇 本質上如實施例21所述之相同方法，從2,3-二氟-4-甲氧 基苯甲酸製備標題化合物，得到白色固體，m.p.25 8-260°C ; MS m/e 342(M + H)+。 C13H6BrF2N〇3之分析： 計算値：C，45.64 ; Η, 1.77 ； Ν，4.09 實測値：C，45.3 3 ; H，1.62 ； N，4.02 實施例24 2-(3-氟-4-羥苯基）-7-乙烯某-1·夂苹砰曙哗-5-醇 路徑a) -87- 200304822 步驟a) 7-溴-5·{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基卜2-(4-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基卜3-氟苯基）-1，3-苯并噚 唑 將第三丁基（氯）二甲基砂院（23.2g，154mmol)逐份添加 到7 -溴-2 - (3 -氟-4 -羥苯基）-1，3 -苯并噚唑-5 -醇（1 6 · 6 g， 51.4mmol)、咪唑（17.5g，257mmol)、Ν,Ν-二甲基吡啶-4-胺 (l.Og，8.1mmol)及DMF(300mL)之混合物。攪拌混合物3小 時，倒入水中並以乙酸乙酯萃取。有機萃取物經Mg 304乾 燥。蒸發並經快速色層分析（己烷/EtOAc 50/1)得到白色固 修 體（27.5§，97%產量，111邛.98-99 °〇);以3瓜/己 5 5 2(以 + ：«)+。 C25H35BrFN〇3Si2 之分析： 計算値：C，54.34; Η，6.38; Ν, 2.53 實測値：C, 54.06 ; Η, 6.52 ; Ν, 2.24 步驟b) 5-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}-2-(4-{[第三 丁基（二甲基）矽烷基]氧基卜3-氟苯基）_7_乙烯基-1,3-苯并 噚唑 φ 將二氯貳（三-鄰-甲苯基膦）鈀（II)(〇.63g，0.79mmol)添加 到7-溴·5·{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基[第三丁 基（二甲基）矽烷基]氧基}-3-氟苯基）-1，3-苯并噚唑（14.7g， 26.6mmol)、三丁基（乙烯基）錫（10.5g，33.25mmol)、及對-二甲苯（85mL)之混合物。在90°C攪拌反應混合物24小時， 冷卻到室溫，以乙酸乙酯（100mL)稀釋並處以活性碳。透 過MgS04過濾混合物並濃縮。經快速色層分析純化（己烷 化1〇八〇5 0/1)得到白色固體（11.8£，89%產量，111.?.93 -95 °(：); -88- 200304822 MS 仞/e 500(M + H)+。 C27H38FN〇3Si2 之分析： 計算値：C，64.89 ; Η, 7.66 ； N, 2.80 實測値：C，64.5 9 ; Η, 7·70 ; Ν, 2.73 步驟c) 2-(3-氟-4-羥苯基）-7-乙烯基-1，3-苯并噚唑-5-醇 將氫氟酸（4 8 w t. %於水，1 m L)添加到5 - {[第三丁基（二甲 基）矽烷基]氧基[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基卜 3 -氟苯基）-7 -乙烯基-1,3 -苯并噚唑（1.5g，3.0mmol)、 THF(6mL)及乙腈（3mL)之溶液。在65°C攪拌反應混合物8小 時，然後倒入水中。濾除沉澱固體並乾燥。產物從丙酮/ 乙酸乙酯結晶得到白色固體（〇.72g，81%產量，m.p.249-2 5Γ〇 ； MS 仞/e 272(M + H)+。 C15H10FN〇3之分析： 計算値：C，66.42 ; H, 3.72 ; N, 5.16 實測値：C，6 6 · 3 1 ; Η, 3 · 8 5 ; Ν，4 · 9 6 路徑b) 2-(3-氟-4-羥苯基）-7-乙烯基-1，3-苯并噚唑-5-醇 將二氯貳（三-鄰-甲苯基膦）鈀（II)(0,87g，l.lmmol)添加 到7-溴-2_(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇（7.16g， 22.1mmol)、三丁基（乙烯基）錫（10.5g，3 3.25mmol)、及乙 二醇二乙基醚（65mL)之混合物。在115°C攪拌反應混合物48 小時，冷卻到室溫並處以活性碳。透過MgS04過濾混合物 並濃縮。於酸性矽膠經快速色層分析純化（己烷 /Et〇Ac/CH2Cl2 1/1/1)得到白色固體（4.35g，72% 產量， m.p.250-25 2 °C) ; MS 瓜/e 272(M + H)+。 200304822 C15H10FN〇3之分析： 計算値：C，66.42 ; H，3.72 ; N，5.16 實測値：C，66.03 ; H，3·68 ; N，5.09 路徑c) 步驟 a) 4-[5·(乙醯氧基）-7-溴-1，3-苯并噚唑-2-基]-2-氟 苯基乙酸酯 將乙酸酐（l.OmL，9.95 mmol)添加到7-溴-2-(3-氟-4-羥苯 基）-1，3-苯并噚唑-5-醇（1.24g，3.8mmol)、N，N-二甲基吡啶 -4-胺（l.lg，9.18mmol)及 1，4_二噚烷（13mL)之冷溶液（〇°C)。 讓反應混合物回溫至室溫並攪拌20小時。添加水（5 OmL)到 以EtOAc萃取之反應混合物並經MgS04乾燥。蒸發並從 Et〇Ac/己烷結晶得到灰白色固體（0.87g，56%產量）；MS瓜/e 408(M + H)+。 UHBrFNOs之分析： 計算値：C，50.02; Η，2.72; Ν，3.43 實測値：C，4 9 · 5 8 ; Η，2 · 5 9 ; Ν，3 · 3 7 步驟 b) 2-[4·(乙醯氧基）-3-氟苯基]-7-乙烯基-1,3-苯并 噚唑-5-基乙酸酯 將二氯貳（三-鄰-甲苯基膦）鈀（II)(46mg，0.06mmol)添加 到4-[5-(乙醯氧基）-7-溴-1，3-苯并噚唑-2-基]-2-氟苯基乙酸 酯（0.8g，1.98mmol)、三丁基（乙烯基）錫（0.9g，2.8mmol)、 及對-二甲苯（95mL)之混合物。在130t攪拌反應混合物5 小時，冷卻到室溫，以乙酸乙酯（1 OmL)稀釋並處以活性碳。 透過MgS04過濾混合物並濃縮。經快速色層分析純化（己 200304822 火兀/Et〇 Ac 5/1)得到白色固體（〇.4g，56%產量，m.p.154-156 °C) ; MS ϋί/e 356(M + H)+。 C19H14FN〇5之分析： 5十算値· C，64.23 ; H，3.97 ; N, 3.94 實測値：C，63.94 ; H，3.78 ; N，3.76 步驟c) 2_(3 -氟-4-羥苯基）-7 -乙烯基-1，3 -苯并噚唑-5-醇 將碳酸鉀（55mg)添加到2-[4-(乙醯氧基）-3-氟苯基]-7-乙 烯基-1,3-苯并噚唑-5·基乙酸酯（〇.i4g，0.39 mmol)及1,4-二 噚烷（3mL)之溶液。在9(TC攪拌混合物1小時，倒入水中， 以HC1(2N)酸化並以EtOAc萃取。有機萃取物經MgSOjg 燥。蒸發並從EtOAc/己烷結晶得到白色固體（〇.〇6g，46% 產量，m.ρ·250·252 °C); MS 仞/e 27 2 (M + H)+。 C15H10FN〇3之分析： 計算値：C，66.42; Η, 3.72 ； N, 5.16 實測値：C，66.32 ; H，3.47 ; N, 5.18 實施例2 5 2-(2-氟-4-羥苯基）-7-乙燏某-1,3-苯并噂唑-5-醇 本質上如實施例24，路徑a)所述之相同方法，從7-溴-2-(2 _氟-4 -羥苯基）-1，3 -苯并噚唑-5 -醇製備標題化合物，得 到白色固體，m.p.274-275 °C ; MS 切/e 272(M + H)+。 C15H10FN〇3之分析： 計算値：C，66.42 ; H，3.72 ; N, 5.16 實測値：C，66·18 ; H，3.47 ; N, 4.97 實施例2 6 -91 - 200304822 2-(2,3 - —-4 -經本基）-7-乙嫌基-1，3-本幷曙[J坐-5-醇 本質上如實施例2 4，路徑b)所述之相同方法，從7 -溴-2 -(2,3-二氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇製備標題化合物， 得到灰白色固體，m.p.276-278°C ; MS 290(M + H)+。 C15H9F2N03 之分析： 計算値：C，62.29 ; Η, 3.14 ； Ν, 4.84 實測値：C, 61.90 ; H，3.05 ; N, 4.52 實施例27 2-(4-羥苯某）-7-乙烯某-1 .3-苯并噂唑-5-醇 · 本質上如實施例24，路徑a)所述之相同方法，從7-溴-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇製備標題化合物，得到白色 固體，m.p.249-250°C ; MS 仞/e 254(M + H)+。 之分析： 計算値：C，70.99; Η，4.39; Ν, 5.52 實測値·· C，7 0.7 5 ; Η，4 · 3 4 ; Ν, 5.46 實施例28及29__ · 4-漳- 2-(3-氟-4-羥茏某）-7-乙烯基-1,3-苯并曙晔_5-醇（實 施例2 8)及4,6 -二溴-2 - Π -氟-4 ·羥苯基）-7 _乙烯基-1, 3 -苯并_ 曙晔-5 -醇（實施例2 9) 將Ν-溴琥珀醯亞胺（0.49g ’ 2.77mmol)添加到2-(3·氟-4- 羥苯基）-7-乙烯基-1,3-苯并噚唑_5_醇（0.75g，2.77mmol)及 乙腈（3 OmL)之混合物。在室溫攪拌反應混合物16小時，倒 入水中並以EtOAc萃取。有機萃取物經MgS04乾燥。蒸發 並經快速色層分析純化（己烷/EtOAc/CH2Cl2 2/1/1)得到白 -92- 200304822 色固體（0.45g，m.p.226-228 °C) ; MS 仍/e 349(M + H)+。 C15H9BrN03 之分析： 計算値：C，51.45 ; H，2.59 ; N, 4.00 實測値：C，5 1 · 0 8 ; H，2 · 4 0 ; N, 3.90 以及（b)爲白色固體（0.18g，m.p.272-274 °C ) ; MS in/e 42 8 (M + H)+。 C15H8Br2N03 之分析： 計算値：C, 41.99; H, 1.88 ； N, 3.26 實測値：C，4 2 · 2 5 ; H, 1.90； N, 3.14 實施例3 0 7-(1.2-二溴乙基）-2-(4-羥茏某）-1,3-苯并曙唑-5-醇 步驟a) 5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-7-乙烯基-1,3-苯并 噚唑 本質上如實施例24，路徑c)之步驟b)所述之相同方法， 從7-溴-5-甲氧基- 2-(4-甲氧基苯基）-1，3-苯并噚唑製備標題 化合物，得到白色固體，MS i22/e 282(M + H)+。 C17H15N〇3之分析： 計算値：C，72.58; Η，5.37; Ν，4.98 實測値：C，72.3 3 ; Η，5.26 ; Ν，4.72 步驟b) 7-(1，2-二溴乙基）-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇 將三溴化硼（〇.85mL，8.95mmol)逐滴添加到5 -甲氧基- 2-(4-甲氧基苯基）-7-乙烯基-1,3-苯并噚唑（〇.31g，1.12 mm 〇1) 及CH2Cl2(4mL)之冷混合物（-78°C)。讓混合物回溫至室溫。 200304822 在室溫攪拌1 8小時，將混合物緩慢倒入冷（(TC )乙酸乙酯中 (2 0mL)。然後緩慢添加甲基醇（10mL)到混合物中。以水洗 滌新混合物（三次）並經MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分 析純化（己烷/EtOAc/ 3/1)得到淺黃色固體（〇.27g，59%產 量，m.p.l 7 5 - 1 77 °C) ; MS 仞/e 412(M + H)+。 C 15 Η !! B r 2N〇 3之分析 ·· 計算値： c， 43.62 ； H， 2.68 ； N, 3.39 實測値： c， 43.85 ； H， 2.44 ； N， 3.33 實施例3 1 7-(1-溴乙烯基）-2-(4-羥苯基）-1·3-茏并曙唑-5-醇 將 1,8-二吖環[5·4·0]十一 -7-烯（0.25g，1.65mmol)添加到 7-(l，2-二溴乙基）-2-(4-羥苯基）-l，3-苯并噚唑-5-醇（0.4g， 0.96mmol)及乙膪（4mL)之冷溶液（0°C)。攪拌反應混合物24 小時，倒入冷HCU1N，10mL，0°C)中並以EtOAc萃取。有 機萃取物經MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分析純化 (CH2C12/己烷/異丙醇 15/5/1)得到白色固體（I85mg，58% 產量，m.p.228-230°C); MS 仞/e 3 3 2(M + H)+。 C15H10BrN〇3之分析： 計算値：C，54.24 ; Η, 3.03 ； Ν，4.22 實測値：C, 54.27 ; Η, 2.94 ； Ν, 4.20 實施例3 2 7-(1-溴乙烯某）-2-(2-氟-4-羥苯基）-1.夂苯并曙唑-5-醇 本質上如實施例29-30所述之相同方法，從7-溴-2-(2-氟- 4-甲氧基苯基）-5-甲氧基-1,3-苯并噚唑製備標題化合物， -94- 200304822 得 到 灰 白色 固體，m.p. 235 -2 3 7 °C ； ：MS m/e 3 50(M + H)+。 Ci 5h 9BrFN〇3之分析 ： 計 算 値： C， 51.45 ; H， 2.59 ; N， 4.00 實 測 値： C, 51.63 ； H， 2.38 ； N, 3.98 實 施 例 33 7- (1- 烯某）-2-(2 ，3-二 -每-4 經苹 基）- 1，3 -苯并曙唑 本質上如實施例2 9 - 3 0所述之相同方法，從7 -溴-2 - (2，3 -二氟-4-甲氧基苯基）-5-甲氧基-1,3-苯并噚唑製備標題化合 · 物，得到灰白色固體，m.p.240-242°C ; MS 瓜/e 366(M-H)+。 C15H8BrF2N〇3之分析： 計算値：C，48.94; Η, 2.19; Ν, 3.80 實測値：C，49.63 ; Η, 2.33 ； N, 3.61 實施例3 4 7-铳丙某-2-(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并嘌唑-5-醇 本質上如實施例24，路徑c步驟b所述之相同方法，從7- ^ 溴-2-(3-氟-4-甲氧基苯基）-5-甲氧基-1,3-苯并噚唑、烯丙 基丁基錫以及二氯貳（三苯基膦）-鈀，隨後根據實施例2 0 步驟e去甲基化製備標題化合物。得到所欲產物淺粉紅色 固體，m.p.169-171 °C ; MS 仞/e 284(M-H)+。 C16H12FN〇3之分析： 計算値：C，67.37 ; H，4·24 ; N, 4.91 實測値：C，67.37 ; H，4.16 ; N, 4.66 眚施例3 5 -95- 200304822 7-乙炔基- 2-(4-羥苯基）-1,3-茏并曙唑-5-醇 將肆（三苯基膦）鈀（0)(5 2111§，0.04 5111111〇1)添加到7-溴-5-甲氧基- 2-(4-甲氧基苯基）-1，3_苯并噚唑（〇.3g，0.9mmol)、 碘化銅（1)(17.lmg，0.09mmol)、乙炔基（三甲基）石夕院（〇.2g， 2mmol)及三乙基胺（12mL)之混合物。在ll〇°C攪拌混合物4 小時，倒入氯化銨水溶液並以EtOAc/THF(l/l)萃取。有機 萃取物經MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分析純化（己烷 /EtOAc 6/1)得到灰白色固體（0.27g，85%產量）。產物溶於 CH2Cl2(2mL)，冷卻到-78°C並逐滴添力口三溴化硼（〇.6mL)。 讓混合物回溫至室溫。在室溫攪拌1 8小時後，混合物緩慢 倒入冷（0°C)乙酸乙酯中（10mL)。然後緩慢添加甲基醇（3mL) 到混合物中。以水洗滌新混合物（三次）並經MgS04乾燥。 蒸發並經快速色層分析純化（己烷/EtOAc/ 3/1)得到黃色固 體（86mg，38% 產量，m.p.229-23 1 °C) ; MS 仞/e 252(M + H)+。 C15H9N03之分析： 計算値：C，71.71; Η，3.61; Ν, 5.58 實測値：C，7 1 · 3 9 ; Η，3 · 4 9 ; Ν, 5.32 實羞例3 6 h(4-羥苯某）-7-丙基-1,3-苯并曙唑-5-醇 將肆（三苯基膦）鈀（0)(70mg，0.06mmol)添加到7-溴-5-甲 氧基-2-(4-甲氧基苯基）-1，3-苯并噚唑（0.4g，1.2mmol)、溴 (丙基）鋅（〇·5Μ 於 THF，3.6mL，1.8mmol)、及 THF(4mL)之 混合物。在室溫攪拌混合物48小時，倒入HC1( IN)並以EtOAc 萃取。有機萃取物經MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分析 200304822 純化（己烷/EtOAc 6/1)得到灰白色固體（0.14g)。產物溶於 CH2Cl2(2mL)，冷卻到- 78°C並逐滴添力口三溴化硼（0.35mL)。 讓混合物回溫至室溫。在室溫攪拌1 8小時後，混合物緩慢 倒入冷（0°C)乙酸乙酯中（10mL)。然後緩慢添加甲基醇（3mL) 到混合物中。以水洗滌新混合物（三次）並經MgS04乾燥。 蒸發並經快速色層分析純化（己烷/EtOAc/ 4/1)得到白色固 體（90mg，27% 產量，m.p.llO-112°C); MSin/e 270(M + H)+。 C16H15N〇3之分析： 計算値：C，71.36; Η，5.61; N ,5.20 實測値：C，71.02 ; H，5.58 ; N，4.94 實施例3 7 7-丁基- 2-(4-羥苯基）-1.3-苯并曙唑-5-醇 本質上如實施例35所述之相同方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-1，3-苯并噚唑及溴（丁基）鋅製備標題化 合物。得到所欲產物白色固體，m.p.l 25 - 1 27 °C ; MS iii/e 282(M_H)+。 c17H17N〇3之分析： 計算値：c，72.07 ; Η, 6.05 ； Ν, 4.94 實測値：C，72.78; Η，5.87; Ν，4.69 實施例3 8 7-環戊某- 2-(4-羥苯基1,3-苯并曙唑-5-醇 本質上如實施例35所述之相同方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-1，3-苯并噚唑及溴（環戊基）鋅製備標題 化合物。得到所欲產物白色固體，m.p.220-222°C ; MS瓜/e 200304822 296(M + H)+。 C18H17N〇3之分析： 計算値：C，73.20; Η，5.80; Ν, 4.74 實測値：C，7 3.05 ; Η, 5.74 ； Ν, 4.59 實施例3 9 5 _羥基-2-(4-羥苯某）-1.3-苯并曙唑-7-碳酸乙酯 步驟a) 7_溴-5-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}-2-(4-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}苯基）-1,3-苯并噚唑 本質上如實施例24，路徑a步驟a所述之相同方法，從7-溴-5_甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-1，3-苯并噚唑及第三丁基 (氯）二甲基矽烷製備標題化合物。得到所欲產物白色固 體，m.p.90_91°C ; MS 仞/e 5 34(M + H)+。 C25H36BrN03Si2 之分析： 計算値：C，56.16 ; H，6.79 ; N, 2.62 實測値：C，5 5.66 ; H，6.86 ; N, 2.68 步驟b) 5-羥基-2-(4-羥苯基）_ 1,3-苯并噚唑-7-碳酸乙酯 將正-丁基鋰（2.5M，0.3mL，0.75mmol)逐滴添加到7-溴-5-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧基}-2_(4-{[第三丁基（二甲 基）矽烷基]氧基}苯基）-1，3-苯并噚唑（0.4g，0.75 mmol)及 THF(4mL)之冷溶液（0°C)。讓混合物回溫至40°C，然後攪拌 2小時。將[(氰羰基）氧基]乙烷（84mg)於THF(lmL)添加到反 應混合物，讓反應混合物回溫至0°C並攪拌1小時。以氯化 銨水溶液淬熄反應，以EtOAc萃取並經MgS04乾燥。蒸發 並經快速色層分析純化（己烷/CH2C12/異丙醇 18/2/1)得到 200304822 無色油狀物（340mg)。產物溶於THF(3.5mL)並處以氟化四 丁基銨（1M於THF，1.4mL)。攪拌混合物30分鐘，倒入HCl(lN) 並以EtOAc萃取。有機萃取物經MgS04乾燥。蒸發並經快 速色層分析純化（己烷/CH2C12/異丙醇 5/2/1)得到白色固 體（119£，53%產量，111.?.305-307 °〇;1^3仞/亡 3 00(以 + ：^)+。 C16H13N〇5之分析·· 計算値：c，64.21 ; H，4.38 ; N，4.68 實測値：C，64.04 ; H，4.43 ; N，4.40 實施例40 · 2-(4-羥苯基）-7-苯基-1,3-苯并曙唑-5-醇 步驟a) 5 -甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）_7•苯基-1,3-苯并噚 唑 7-溴-5-甲氧基- 2-(4-甲氧基苯基）-1，3-苯并噚唑（200mg， 0.60111111〇1)及肆（三苯基膦）鈀（0)(6；311^，0.03111111〇1)溶解於甲 苯（5mL)，並在室溫於氮氣下攪拌10分鐘。添加苯硼酸 (llOmg，0.90mmol)，隨後碳酸鈉水溶液（2M，1.5mL)及乙 φ 醇（2mL)。回流混合物12小時，以水稀釋並以EtOAc萃取。 有機萃取物經MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分析純化 (20%-40%Et〇Ac/石油醚）得到淺粉紅色固體標題化合物， m.p.92°C ; MS 忉/e 3 3 2(M + H)+。 C21H17N〇3之分析： 計算値： :C， 7 6.12 ； Η， 5.17 ; Ν， 4.23 實測値： :C， 75.86 ； Η, 5.08 ； Ν， 4.07 步驟b) 2-(4-羥苯基）-7-苯基-1，3·苯并噚唑-5-醇 -99- 200304822 本質上如實施例20步驟e(路徑㈣㈣ 逼化合物’彳守到糸色固體，m.p 25 5 _25 8。^ ; MS切/e 302(Μ·Η)+。 C19H13N〇3x0.25H2〇之分析： 計算値：C，74.14 ; h，4.42 ; & (Η 實測値：C，73.81 ; h，4.40 ; Nm 35 實施例4 1 5 -键某- 2- (4-經本基）-1 苯并哪—挫_ 7 -礙腈 步驟a) 5 -甲氧基- 2- (4 -甲氧基苯基）4,3 -苯并噚唑-7-碳 腈 攪拌7 -溴-5-甲氧基-2-(4 -甲氧基苯基）_1，3-苯并噚唑 (200mg，0.60mm 〇1)於無水n，N-二甲基甲醯胺（1.5 mL)之溶 液，並於乾燥氮及氰化銅（I)(80mg，〇.90mmol)下加熱至回 流4小時。冷卻混合物並倒入過多的乙烯二胺四乙酸中從 (30%Et〇Ac/石油醚）單離粗產物得到黃褐色針狀腈 (1641^，98%產量）；111』.180_183°〇^13仞/己28 1(以 + 11)+。 C16H12N2〇3x0.2H2O 之分析： 計算値：C，66.84 ; H，4.48 ; N，9.74 實測値：C，66.63 ; H, 4.33 ； N, 9.60 步驟b) 5-羥基-2_(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-7-碳腈 本質上如實施例2 0步驟e (路徑b)所述之相问方法製備標 題化合物，得到淺粉紅色固體，m · p · 2 9 7 - 3 0 3 °C ; M S ；22/e 25 3 (M + H)+。 C14H8N2O3x0.5H2O 之分析： -100- 200304822 計算値：C，64.3 7 ; H，3.47 ; N，10.72 實測値：C，64.44 ; H，3.49 ; N，9.92 實施例42 5_羥基- 2-(4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-7-碳醯胺 標題化合物是從實施例40步驟b之反應單離之次要產 物，爲淺黃褐色固體，m.p.325 °C ; MS瓜/e 271(M + H)+。 C14H1()N2〇4X〇.5H20 之分析： 計算値：C，60.22; Η，3.97; N, 10.03 實測値：C，5 9 · 7 1 ; Η，3 · 9 1 ; N, 9.84 實施例43 2-(4-羥苯基）-7-甲氧基-1,3-苯并噚唑-5-醇 7-溴- 2_(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇（100mg，0.33mmol) 及溴化銅（I)(56mg，0.39mmol)於無水N，N-二甲基甲醯胺 (1.5mL)之混合物攪拌與剛製備之甲氧基鈉（15wt%於甲 醇，lmL)，並加熱至120 °C達4小時。冷卻混合物並以 HC1(1N，5ml)稀釋。以乙酸乙酯單離粗產物，隨後經快速 色層分析純化（40%-50% EtOAc/石油醚）得到灰白色固體標 題化合物（50mg，60% 產量）；m.p.225-228 °CMS in/e 25 8 (M + H)+。 CMHUNO4X0.75H2O 之分析： 計算値：C，6 2 · 1 1 ; Η，4 · 6 5 ; Ν，5 · 1 7 實測値：C，62.5 3 ; Η，4.73 ; Ν，5.02 實施例44 7-乙某- 2-(4-羥苯某）-1,3-苯并瞟唑-5-醇 200304822 步驟a) 7-乙基-5-甲氧基_2-(4_甲氧基苯基）-1,3-苯并噚 唑 將正-丁基鋰（2 · 5 N，〇 · 4 3 m L，1 · 0 8 m m ο 1)逐滴添加到7 -溴 -5 -甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）_丨，3-苯并噚唑（3〇〇mg， 0.9〇111111〇1)及1^?(2111：1)之冷混合物（-7 8°〇。攪拌混合物半 小時。讓反應混合物回溫至室溫並攪拌2小時。以氯化銨 水溶液淬熄反應，倒入水中並以EtOAc萃取。以鹽水洗滌 有機萃取物並經MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分析純化 (20 %Et〇Ac/石油醚）得到淺棕色固體產物（2 31 mg，91 %產 量）；m.p.85°C ; MS 瓜/e 284(M + H)+。 C17H17N〇3 Χ〇·2Η20 之分析： 計算値：C，70.28 ; H，6.17 ; N，4.94 實測値·· C，7 0 · 1 2 ; Η，5 · 7 4 ; Ν, 4.82 步驟b) 7-乙基-2-(4·羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇 根據實施例20步驟e(路徑b)所述之程序製備標題化合 物，得到淺棕色固體（98%產量），m.p.l 10-1 15°C ; MS瓜/e 25 6(M + H)+。 實施例4 \ _7二乙基- 9,-(9.-7，某-4-羥苯基）-1,3-苯并曙哔-5-醇 步驟a) 7-乙基-5-甲氧基-2-(2-乙基-4-甲氧基苯基）·1，3-苯并噚唑 根據實施例43步驟a所述程序，運用兩當量正-丁基鋰 製備標題化合物，所得粗產物直接用於下一步驟。 步驟b) 7-乙基-2-(2-乙基-4·羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇 -102- 200304822 根據實施例20步驟e(路徑b)之程序從7_乙基-5-甲氧基ία-乙基 ·4-甲氧 基苯基 ）-1,3-苯并 噚唑製 備標題 化合物 ，得 到灰色固體（87%產鼍）；1^瓜々284(^1 +幻+。 實施例4 6 ^羥基二I· (4 —釋· 1, 3 -苯并曙晔-7 -碳醛 步驟a) 5-甲氧基-2_(扣甲氧基苯基）4,3-苯并噚唑-7_碳 醛 根據實施例43步驟a之程序，運用N_甲基苯甲醯胺爲 親電子物製備標題化合物，得到淺橘色固體（94%產量， m.p.l 5 3 - 1 5 5 °C) ; MS 切々 2 84(M + H)+。 步驟b) 5-羥基-2-(4-羥苯基）-l，3-苯并噚唑-7-碳醛 根據實施例20步驟e(路徑…之程序從5_甲氧基- 2-(4-甲氧 基苯基）-1，3-苯并噚唑-7-碳醛製備標題化合物，得到暗黃 色固體（99%產量，111.?.273-275。(：）；“3；23/^ 25 6(“ + 11)+。 C14H9N〇4x0.25H2〇之分析： 計算値：C，64.74; Η，3.69; Ν，5.39 實測値：C，64.3 2 ; Η，3.59 ; Ν，5.18 實施例47 7-(禪甲某）-2·(4-羥苯基）-1,3-苯并曙哔-5-醇 步驟a) 5-甲氧基-7-(羥甲基）-2-(4-甲氧基苯基）-1,3-苯 并噚唑 在0°C將硼氫化鈉（66.8mg，1.76mmol)添加到5 -甲氧基- 2-(4 -甲氧基苯基）-1,3-苯并噚唑-7-碳醛（250mg，0.88 mmol) 於MeOH(8mL)之溶液。攪拌反應混合物30分鐘，然後於真 200304822 空蒸發。殘留物溶解於乙酸乙酯並以水及鹽水洗滌’經 MgS04乾燥並過濾。蒸發並經快速色層分析純化 (5 0 % E10 A c /石油醚）得到產物（2 1 0 m g，8 3 %產量），可直接 用於下一步驟。 步驟b) 7-(羥甲基）-2-(4 -羥苯基）_1，3 -苯并噚哩-5-醇 根據實施例20步驟e(路徑b)之程序從5-甲氧基-7-(羥 甲基）-2-(4 -甲氧基苯基）-1,3 -苯并噚唑製備標題化合物， 得到淺棕固體，m.p.282°C (dec) ; MS ii2/e 25 8 (M + H)+。 (：14^〇41〇.51120 之分析·· 計算値：C，63.16 ; H，4.54 ; N，5.26 實測値：C，63.3 3 ; H, 4.36 ； N，5.04 實施例4 8 7-(溴甲基）-2-(4-羥苯基）-1. 3-苯并曙唑-5-醇 根據實施例2 0步驟e (路徑b)之程序從5 -甲氧基-7 -(羥 甲基）-2-(4-甲氧基苯基）-1，3-苯并噚唑及於三溴化硼存在 下延長攪拌製備標題化合物，得到淺棕色固體，111^.250-260°C(dec) ; MS in/e 321(M + H)+。 C14H1QBrN03 之分析： 計算値：C，52.5 2 ; Η, 3.15 ； Ν, 4.38 實測値：C，52·26 ; Η, 3.17 ； Ν, 4.07 實施例49 镡某- 2-(4-羥苯基.3-苯并曙唑-7-基Ί乙腈 對7-(溴甲基）-2-(4-羥苯基）-1,3 -苯并噚唑-5-醇（122mg ’ 0.40mmol)於N，N-二甲基甲醯胺（1.5mL)之溶液添加18-冠- 6- -104- 200304822 醚（202mg，0.80mmol)及氰化鉀（I31mg，2mmol)。攪拌反 應混合物2小時，然後倒入水中並以EtOAc萃取。以鹽水 洗滌有機萃取物經Mg S04乾燥。蒸發並經快速色層分析 (50-60%丑1〇八(：/石油醚）得到灰色固體產物，111.?.1 70- 1 80 °(：; MS 忉/e 265 (M-H)+。 C15H1QN2〇3xl.5H20 之分析： 計算値I :C， 61.43 ； H, 4.47 ； N， 9.55 實測値： :C， 61.41 ； H， 4.21 ; N， 9.19 實施例5 0 7-Π—羥基-1-甲基乙某）-2-(4-羥苯某）-1,3-苯并曙哔-5-醇 步驟a) 2-[5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-1，3-苯并噚唑-7-基]丙-2 -醇 根據實施例43步驟a之程序從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲 氧基苯基）-1，3-苯并噚唑，運用丙酮爲親電子物製備標題 化合物，得到白色固體（78%產量，m.p.l49°C ) ; MS仍/e 314(M + H)+〇 C18H19N04 之分析： 計算値：C，68.99 ; H，6· 1 1 ; N, 4.47 實測値：C，6 8 · 7 8 ; H，6.1 3 ; N, 4.35 步驟b) 7-(1-羥基-1-甲基乙基）-2-(4-羥苯基）-1, 3-苯并噚 唑-5-醇 根據實施例20步驟e(路徑b)之程序從2-[5 -甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-1,3-苯并噚唑-7-基]丙-2-醇製備標題化合 物，得到暗棕色固體（90%產量，m_p.l 80- 1 85 °C ) ; MS瓜/e 200304822 286(M + H)+。 C16H15N〇4x0.5H2〇之分析： 計算値：C , 6 5 . 3 0 ; Η, 5.48 ； Ν, 4.76 實測値：C，65.03 ; Η，5.20 ; Ν，4.72 實施例5 1 2-(4-羥苯某）-7-異丙烯某-1,3-苯并瞟唑-5-醇 加熱吡啶氯化氫（400mg)至190°C。對此熔化物添加2-[5-甲氧基-2-(4 -甲氧基苯基）-1,3 -苯并噚唑-7-基]丙-2 -醇 (1 1 4 m g，0.3 6 m m ο 1)，並攪拌反應混合物2小時。冷卻混合 · 物至室溫，溶於水中並以EtOAc萃取。合倂有機層並以 HC1(1N)、7JC然後鹽水洗滌，然後經MgS04乾燥。蒸發並 經快速色層分析純化（50-60%Et〇Ac/石油醚）得到淺紅棕色 固體產物（40mg，41% 產量），m.p.225 -228 °C ; MS i23/e 268(M + H)+。 C16H13N〇3x0.5H2O 之分析： 計算値：C，69.56; Η，5·11; Ν, 5.06 · 實測値：C，6 9 · 4 6 ; Η，5 · 2 2 ; N, 4.56 實施例5 2 2-(4·羥苯某）-7-異丙基-1.3-苯并曙唑-5-醇 將2-(4-羥苯基）-7-異丙烯基-1，3-苯并噚唑-5-醇（64mg， 0.24mmol)溶解於Et〇Ac(5mL)及絕對酒精（5mL)之混合物， 並置於惰性氬氣下。對此混合物添加10%Pd-C(25mg)。此 溶液在Parr儀於25psi氫化3小時。透過賽力特矽藻土過濾 溶液並以乙醇漱洗。濃縮濾液且殘留物經快速色層分析純 -106- 200304822 化（5 0%EtOAc/石油醚）得到黃褐色固體產物（58mg，9〇%產 量），m.p.20(TC ; MS 仞/e 2 7 0(M + H)+。 實施例5 3 7-溴-2-(4-羥基- 3-(三氟甲基）苯基）·1· 并曙卩坐_5_醇 步驟a) 2-溴-4-甲氧基-6-{[4-甲氧基-3-(三氣甲基）苯甲 基]胺基}苯基4-甲氧基- 3-(三氟甲基）苯甲酸酉旨 本質上如實施例2 0步驟c所述之相同方法，從2 -胺基_ 6 -溴-4 -甲氧基酚及4 -甲氧基-3-三氟甲基苯甲醯氯製備標 題化合物。得到灰白色固體產物，m.p.205-208 °C ; MS τΏ/e 622(M + H)+。 C25H18BrF6N〇6 之分析： 計算値：C，48.25; Η, 2.92 ； Ν, 2.25 實測値：C，4 8 · 47 ; Η，2 · 76 ; Ν, 2.16 步驟b) 7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲基）苯基]-1,3-苯并噂唑 本質上如實施例20步驟d(路徑a)所述之相同方法’從 2-溴-4-甲氧基- 6-{[4-甲氧基- 3-(三氟甲基）苯甲基]胺基}苯 基4-甲氧基-3 ·(三氟甲基）苯甲酸酯及對-甲苯磺酸單水合 物製備標題化合物。得到灰白色固體產物’ m.p·183-1 85 °C ; MS 仞/e 402(M + H)+。 C^HnBrFAC^ 之分析： 計算値：C，47.79 ; H，2.76 ; N, 3.48 實測値：C，47.60 ; H，2.50 ; N，3.37 步驟c) 7-溴-2-(4-羥基-3-(三氟甲基）苯基）-1，3-苯并喂 -107- 200304822 唑-5 -醇 根據實施例2 0步驟e (路徑b)之程序從7 -溴-5 _甲氧基-2 -(4 -甲氧基- 3- (三氟甲基）苯基]-1，3 -苯并噚唑製備標題化合 物，得到淺黃色固體（50%產量，m.p.200-2 1 0 °C) ; MS切/e 3 7 2(M-H)+。 C14H7BrF3N〇3x0.5H2O 之分析： 計算値：C，43.89; Η，2.10; Ν, 3.65 實測値：C，43.5 9 ; Η, 2.04 ； Ν, 3.6 實施例5 4 · 7-(2 -眹喃基）-2-(4 -羥苯某）-1,3 -苯并噚唑-5-醇 步驟a) 7-(2-呋喃基）-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-1，3_苯 并噚唑 將7 -溴-5 -曱氧基-2-(4-甲氧基苯基）-1，3 -苯并噚唑 (300mg，0.90mmol)及二氯戴（三鄰-甲苯基膦）銷 (II)(71mg，0.09mmol)溶解於對-二甲苯（3mL)，並在室溫 氮氣下攪拌10分鐘。添加2-(三丁基錫）呋喃（449mg， ^ 1.26mmol)並回流混合物4小時。冷卻混合物至室溫，以氯 化銨飽和溶液稀釋並以EtOAc萃取。以水然後鹽水洗滌有 機萃取物，經MgS04乾燥並濃縮。經快速色層分析純化 (20%-30%Et〇Ac/石油醚）得到白色固體標題化合物（99%產 量，m.p.l20-121t：) ; MS m/e 3 22(M + H)+。 C19H15N〇4之分析： 計算値： C， 71.02 ； H, 4.71 ； Ν， 4.36 實測値： C， 70.23 ； Η， 4·7 ; Ν， 4.19 -108- 200304822 步驟b) 7-(2-呋喃基）-2-(4-羥苯基）-l，3-苯幷噚唑醇 根據實施例50之程序製備標題化合物，得到淺粉，紅色@ 體（64%產量，111.?.283-287 °(：);“3切々 2 94(^1 + 11)+。

UhNCU之分析： 計算値：C，69.62; Η，3.78; Ν，4.78 實測値：C, 69.11 ; Η, 3.6 ； Ν, 4.64 實施例5 5 2-(3 -氟-4-羥苯某）-7-(2 -呋喃基）-1,3 -苯并曙卩坐- , 步驟a) 2-(3-氟-4-甲氧基苯基）-7-(2_呋喃基）-5-甲氧基-1，3 _苯并噚唑 根據實施例53步驟a之程序從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲 氧基-3_(三氟甲基）苯基]-1,3 -苯并噚唑製備標題化合物， 得到號拍色結晶（73%產量，m.p.155 °C ) ; MS ii!/e 340(M + H)+。 C19H14FN〇4之分析： 計算値：C，67.25 ; H，4.16 ; N, 4.13 實測値：C，66.8 8 ; H，3.97 ; N, 4.04 步驟b) 2-(3-氟-4-羥苯基）-7-(2-呋喃基）-1，3-苯并噚唑- 5-醇 根據實施例50之程序從2-(3-氟-4_甲氧基苯基）-7-(2-呋 喃基）-5-甲氧基-1，3-苯并噚唑製備標題化合物，得到灰色 固體（81%產量，111』_245_250°〇;%3切々312(皿 + 11)+。 C17H1QFN〇4x0.7C3H6O 之分析： 計算値：C，65·04 ; Η，4·37 ; N，3.79 -109- 200304822 實測値：C，64.84 ; H，4.29 ; N，3.70 實施例5 6 2-(4-羥苯基）-7-噻吩-2-基-1 .3-苯并噂唑-5-醇 步驟a) 5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-7_噻吩-2-基-1,3-苯 并噚唑 根據實施例53步驟a之程序從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲 氧基苯基）-1,3-苯并噚唑及2-(三丁基錫）噻吩製備標題化 合物。得到白色固體產物（95%產量），111.?.95- 1 00°0：;^^切/己 3 3 8 (M + H)+。 # 步驟b) 2-(4-羥苯基）-7-噻吩-2-基-1,3-苯并噚唑-5-醇 根據實施例50之程序從5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-7-噻 吩-2-基-1，3-苯并噚唑製備標題化合物，得到灰色固體（80% 產量，m.p.278-280°C); MS 切/e 310(M + H)+。

CivHnNC^SxOJSI^O 之分析： 計算値：C，65.06 ; H，3.69 ; N，4.46 實測値：C，64.93; Η，3.84; Ν, 4.21 · 實施例5 7 2-(4-羥苯基）-7-(1.3-睫唑-2-某）-1,3-苯并曙唑-5-醇 步驟a) 5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基）-7-(1,3-噻唑-2-基）-1，3-苯并噚唑 根據實施例53步驟a之程序從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲 氧基苯基）-1,3-苯并噚唑及2-(三丁基錫）噻唑製備標題化 合物。得到白色固體產物（93 %產量，m.p· 1 32- 1 36°C); MS ii2/e 3 39(M + H)+。 -110- 200304822 c18h i4N 2〇3S 之分析： 計 算 値 ·· C， 63.89 ； Η， 4.17 ;Ν, 8.28 實 測 値 :C， 63.53 ; Η, 3.94 ;Ν， 8.15 步 驟 b) 2-(4-羥苯基）-7-(1，3-噻唑-2-基）_1，3- 苯并噚 唑 -5- 醇 根 據 實 施例 5 0之程序從5 -甲 氧基- 2-(4 -甲氧基本基） -7- (1 ，3- 曙 唑 2-基 )-1,3- 苯并噚唑製備標 題化合物 ，得到 黃 色 固 體 (5 5 % j 奎量 5 m . ρ . 245 -25 5 〇C ) ;MS 忉/e 31 1(Μ + Η)+。 6h ι〇Ν 2〇3S: x0.15H :2〇之分析 計 算 値 ·· C， 56.97 ；H，3.88 ;Ν， 8.30 實 測 値 ·· C， 57.24 ;H, 3.95 ;Ν， 7.50 實 施 例 58 2- (3- .氟 •4-羥 苯基） -5-羥某-1.3 -苯并 噚唑-7-碳 :腈 根 據 實 施例 3 5之程序從7 -溴 -2-(3- 氟-4 -羥苯基）-5 - 甲 氧 基 -1 ，3· 苯 并噚 唑及氰化鋅製備 標題' ί匕合物， 得到白 色 固 體 m. p.3 08 -3 10°C ； MS 仞/e 269(M-H)+。 Ci 4h 7FN2 0 3 x 1 . 5 Η 2〇之分析： 計 算 値 ·· C， 61.01 ;Η, 2.77 ;Ν, 10.16 實 測 値 :C， 60.68 ;Η, 2.46 ;Ν， 9.77 實施例59及60 4 -海-2 - (4 -羥苯基）-7 -甲氧基-1. 3 -苯并瞟晔-5 -醇（實施例 59)及 4,6-二海-2-(4_羥苯某）-7-甲氯基-1·3-苯并嘌唑-5-醇 (實施例6 0) 根據實施例28之程序從2-(4-羥苯基）-7-甲氧基-1,3-苯并 200304822 噚唑-5-醇及N-溴琥珀醯亞胺製備標題化合物。得到白色 固體產物（a)，m.p.246,248 °C ; MS 336(M + H)+。 C14H1{)BrN04x.lH2〇之分析： 計算値：C，49.49 ; H，3.08 ; N, 4.12 實測値：C，49.28 ; H, 2.89 ； N, 3.87 得到白色固體產物（b)，m.p.260-262 °C ; MS 切/e 414(M + H)+。 C14H9Bi*2N04 之分析： 計算値：C，40.5 2 ; H，2.19 ; N, 3.37 實測値：C，40.21 實施例6 1 H， 2.00 ; N, 3.3 7 _溴-2 - (3.5 •二氟-4 _羥苯基）-1，3 -苯并噚唑-5 -醇 本質上如實施例21所述之相同方法，從3,5-二氟-4-甲 氧基苯甲酸及2-胺基-6_溴-4-甲氧基酚製備標題化合物。 得到白色固體，m.p.270-272°C ; MS 瓜/e 340(M-H)+。 C13H6BrF2N03 之分析： 計算値：C，45.64 ; H，1.77 ； N，4.09 實測値：C，4 5 · 8 1 ; Η，1 · 7 3 ; Ν，3 · 8 9 實施例62 2-(3,5-二氟-4-羥苯某）-7-乙烯基-1.3-茉并瞟晔-5-醇 本質上如實施例24路徑 b所述之相同方法，從7-溴- 2-(3,5-二氟-4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇製備標題化合 物。得到白色固體，m.p.l 60- 1 62°C ; MS 如/e 2 8 8 (M-H)+。 C15H9F2N〇3x0.1H2〇之分析： -112- 200304822 計算値：C，61.52 ; H，3.23 ; N, 4.78 實測値：C，6 1 · 5 3 ; Η，3 · 1 0 ; Ν, 4.7 2 實施例6 3 7 -溴-2 - (4 -釋某-2 -甲基苯基）-1 · 3 -苯并噚D坐-5 -醇 本質上如實施例2 1所述之相同方法，從4 -甲氧基-2 -甲 基苯甲酸及2-胺基-6-溴-4-甲氧基酚製備標題化合物，得 到淺紫色固體，m.p.l 20- 1 3 5 °C ; MS 320(Μ + Η)+。 C14H10BrN〇3之分析： 計算値：C，52.52; Η, 3.15; N,4.38 實測値：C，5 2.24 ; Η, 2.97 ； Ν, 4.15 實施例64 2-(3 -氟-4-羥苯某）-7_(1-氟乙烯甚）-ΐ,3 -苯并噂唑-5-醇 將氫氟酸吡啶（1.14mL)逐滴添加到2-[4-(乙醯氧基）_3_氟 苯基]-7-乙烯基-1,3-苯并噚唑-5-基乙酸酯（〇.25g，0.7 mmol) 於環楓院（3 m L)之冷溶液（0 °C )。攪拌反應混合物5分鐘，然 後添加一部分1，3 -二溴-5，5 -二甲基咪唑啶-2，4 -二酮 (120mg)。在室溫攪拌混合物24小時，以HC1(1N)稀釋並以 Et〇Ac萃取。有機層經MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分 析純化（CH2C12/異丙醇0.3%)得到7-(2-溴-1-氟乙基）-2-(3-氟-4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5·醇白色固體（0.25g， m.p.l85-186 °C)。產物溶於乙腈（2mL)並添加1，8 -二吖環 [5·4·0]十一 -7 -烯（150mg)。攪拌反應混合物24小時，倒入 冷HC1中（0°C，IN，10mL)並以EtOAc萃取。有機萃取物經 MgS04乾燥。蒸發並經快速色層分析純化（20%EtOAc/己烷） -113- 200304822 得到白色固體（160mg，m.p.213-214 °C); MS π/e 29 0(Μ + Η) +。 C15H9BrF2N03 x0.3H2〇之分析： 計算値：C，61.15; H, 3.28 ； N ,4.75 實測値：C，6 0 · 8 4 ; H，3 · 4 1 ; N, 4.57 (五）圖式簡單說明：無

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Claims (1)

1. 200304822 拾、申請專利範圍 1. 一種式I之化合物，具有結構

   其中 L爲C2-C7烯基；其中烯基部分可經羥基、-CN、鹵素、 CVC6三氟烷基、CVQ三氟烷m«、_C〇R5、-C〇2R5、-N〇2、C〇NR5R6、NR5R6或N(R5)C〇R6選擇性取代； 尺2及R2a各自獨立爲氫，羥基，鹵素，CVC6烷基，CVC4 烷氧基，C2-C7烯基，C2-C7炔基，〔「匕三氟烷基，或cvc6 三氟烷氧基；其中烷基、烯基或炔基部分可經羥基、-CN、 鹵素、Ci-Q三氟烷基、C「C6三氟烷氧基、- COR5、-C〇2R5、 -N〇2、C〇NR5R6、nr5r6或n(r5)c〇r6選擇性取代； 尺3及R3a各自獨立爲氫，CVC6烷基，C2-C7烯基，C2-C7 炔基，鹵素，cvc4烷氧基，CVC6三氟烷基，或CVC6 三氟烷氧基；其中烷基、烯基或炔基部分可經羥基、-CN、 鹵素、cvc6三氟烷基、CVC6三氟烷氧基、-c〇r5、-c〇2r5、 -n〇2、c〇nr5r6、nr5r6或n(r5)c〇r6選擇性取代； r5、尺6各自獨立爲氫，cvc6烷基、c6-c1()芳基； X爲〇，S或NR7 ; R7爲氫，CVC6烷基，c6-c10芳基，-C〇R5，-C〇2R5或- 200304822 s〇2r5 ; 或其醫藥可接受鹽。 2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中X爲〇。 3. 如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中h爲可經 羥基、-CN、鹵素、CVC6三氟烷基、CVC6三氟烷氧基、 -C〇R5、 -C〇2R5、 -N〇2、 C〇NR5R6、 nr5r6 或 n(r5)c〇r6 選擇性取代之c2-c3烯基。 4. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲2-(3-氟-4-羥苯 基）-7-乙烯基-1,3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接受鹽。 5. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲2-(2-氟-4-羥苯 基）-7-乙烯基-1，3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接受鹽。 6. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲2-(2,3-二氟-4-羥苯基）-7-乙烯基-1,3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接受 鹽。 7. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲4-溴-2-(3-氟-4-羥苯基）-7-乙烯基-1，3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接受 鹽。 8. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲4,6-二溴-2-(3-氟-4-羥苯基）-7-乙烯基-1,3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可 接受鹽。 9. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲7-(1-溴乙烯基）-2-(2-氟-4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接受 鹽。 10.如申請專利範圍第1項之化合物，其爲7-(1-溴乙烯基）- -116- 200304822 2-(2,3-二氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接 受鹽。 11. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲7-烯丙基-2-(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接受鹽。 12. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲2-(3,5-二氟-4-羥苯基）-7-乙烯基-1,3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接受 鹽。 13. 如申請專利範圍第1項之化合物，其爲2-(3-氟-4-羥苯 基）-7-(1-氟乙烯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇或其醫藥可接受 鹽〇 1 4 . 一種化合物，其爲 a) 2-(5-羥基-1,3-苯并噚唑-2-基）苯-1，4_二醇； b) 3_(5-羥基-1,3-苯并噚唑-2-基）苯-1，2·二醇； c) 2-(3-氟-4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇； d) 2-(3-氯-4·羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇； e) 2-(2-氯-4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇； f) 2-(3-氟-4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-6-醇； g) 2-(3-第三丁基-4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-6-醇； h) 2-(6-羥基-1,3-苯并噚唑-2-基）苯-1,4-二醇； i) 3-(6-羥基-1,3-苯并噚唑-2-基）苯-1,2-二醇； j) 4-(6-羥基-1,3-苯并噚唑-2-基）苯-1，2-二醇； k) 2-(3-氯-4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-6-醇； l) 4-(5·羥基-1,3 -苯并噚唑-2-基）苯-1，3-二醇； m) 4-(6-羥基-1,3-苯并噚唑-2-基）苯-1,3-二醇； 117- 200304822 η) 6-氯-2-(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇； 〇) 6-溴-2-(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇； P) 6-氯-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇； q) 5-氯-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-6-醇； r) 7-溴-2-(3-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇； s) 7-溴-2-(2-氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇； t) 7-溴-2-(2,3-二氟-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇； u) 2-(4-羥苯基）-7-乙烯基-1，3_苯并噚唑-5-醇； v) 7-(1,2-二溴乙基）-2-(4-羥苯基）·1，3-苯并噚唑-5·醇； w) 7-(1-溴乙烯基）-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇； 乂）7-乙炔基-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5_醇； y) 2-(4-羥苯基）-7·丙基-1，3_苯并噚唑-5-醇； z) 7-丁基-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇； aa) 7-環戊基-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇； bb) 5-羥基-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-7-碳酸乙酯； cc) 2-(4-羥苯基）-7-苯基-1,3-苯并噚唑-5-醇； dd) 2-(4-羥苯基）-7-甲氧基-1,3-苯并噚唑-5-醇； ee) 7-乙基-2-(4-羥苯基）_1，3_苯并噚唑-5-醇； ff) 7·乙基-2-(2-乙基-4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇； gg) 5-羥基-2-(4-羥苯基）-1,3-苯并噚哇-7-碳醛； hh) 7-(羥甲基）-2-(4-羥苯基）-1,3-苯并噚唑-5-醇； ii) 7-(溴甲基）-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噂唑-5-醇； jj) [5-羥基-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-7-基]乙腈； kk) 7-(1-羥基-1-甲基乙基）-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇； 200304822 11) 2-(4-羥苯基）-7-異丙烯基-1，3-苯并噚唑-5-醇； mm) 2-(4-羥苯基）-7-異丙基-l，3-苯并噂唑-5-醇； nn) 7-溴-2-(4-羥基-3-(三氟甲基）苯基）-1，3-苯并噚唑-5·醇； 〇〇) 7-(2-呋喃基）-2-(4-羥苯基）-1，3-苯并噚唑-5-醇； ρρ) 2-(3·氟-4-羥苯基）-7-(2-呋喃基）_1，3-苯并噚唑-5-醇； qq) 2-(4-羥苯基）-7-噻吩-2-基-1,3-苯并噚唑-5-醇； rr) 2-(4-經苯基）-7-(1，3-__-2-基）-1，3-苯并曙哩-5-醇； ss) 2-(3-氟-4-羥苯基）-5-羥基-1,3-苯并噚唑-7-碳腈 tt) 4-溴-2-(4-羥苯基）_7-甲氧基-1,3-苯并噚唑-5-醇； uu) 4,6-二溴-2-(4-羥苯基）-7-甲氧基-1，3-苯并噚唑-5-醇； vv) 7-溴-2-(3,5-二氟-4-羥苯基）·1，3-苯并噚唑-5-醇； 或其醫藥可接受鹽。 1 5 · —種於有其需要之哺乳動物治療或抑制攝護腺炎或組織 間質性膀胱炎之方法，其包括對該哺乳動物提供有效量 之如申請專利範圍第1至丨3項中任一項之化合物。 16·—種於有其需要之哺乳動物治療或抑制發炎性腸疾病、 克隆氏病（Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、或結腸炎 之方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如申請專利 範圍第1至1 3項中任一項之化合物。 1 7. —種於有其需要之哺乳動物治療或抑制攝護腺肥大、子 宮平滑肌瘤、乳癌、子宮內膜癌、多囊性卵巢症候群、 內膜息肉、良性乳房疾病、子宮內膜組織異位形成、卵 巢癌、黑色素瘤、攝護腺癌、大腸癌、神經膠瘤或星母 細胞瘤之方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如申 -119- 200304822 請專利範圍第1至1 3項中任一項之化合物。 1 8 · —種於有其需要之哺乳動物降低膽固醇、三酸甘油脂、 Lp(a)、或LDL程度、抑制或治療高膽固醇血症、高脂 血症、心血管疾病、動脈粥樣硬化、高血壓、周邊血管 疾病、血管再狹窄、或血管痙攣、或抑制血管壁因細胞 性事件導致免疫仲介引發之血管傷害之方法，其包括對 該哺乳動物提供有效量之如申請專利範圍第1至1 3項 中任一項之化合物。 1 9 · 一種於有其需要之哺乳動物提供增強認知或保護神經、 或治療或抑制老人癡呆、阿茲海默症（Alzheimer’s disease)、認知衰退、中風、焦慮或神經退化性病症之 方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如申請專利範 圍第1至1 3項中任一項之化合物。 20.—種於有其需要之哺乳動物治療或抑制自由基誘發之疾 病狀態之方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如申 請專利範圍第1至1 3項中任一項之化合物。 2 1. —種於有其需要之哺乳動物治療或抑制陰道或女陰萎 縮、萎縮性陰道炎、陰道乾燥、搔癢症、性交困難、排 尿困難、頻尿、小便失禁、尿道感染之方法，其包括對 該哺乳動物提供有效量之如申請專利範圍第1至1 3項 中任一項之化合物。 22.—種於有其需要之哺乳動物治療或抑制血管舒縮症狀之 方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如申請專利範 圍第1至1 3項中任一項之化合物。 -120- 200304822 2 3 . —種於有其需要之哺乳動物抑制受孕之方法，其包括對 該哺乳動物提供有效量之如申請專利範圍第1至1 3項 中任一項之化合物。 24. —種於有其需要之哺乳動物治療或抑制關節炎之方法’ 其包括對該哺乳動物提供有效量之如申請專利範圍第1 至1 3項中任一項之化合物。 25. 如申請專利範圍第24項之方法，其中關節炎爲類風溼 性關節炎、脊椎關節炎、或骨關節炎。 2 6. —種於有其需要之哺乳動物治療或抑制關節腫脹或糜 ® 爛、或治療或抑制關節鏡檢或手術過程續發關節損傷之 方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如申請專利範 圍第1至1 3項中任一項之化合物。 2 7.—種於有其需要之哺乳動物治療或抑制牛皮癬或皮膚炎 之方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如申請專利 範圍第1至1 3項中任一項之化合物。 2 8 . —種於有其需要之哺乳動物治療或抑制絕血、再灌流傷 · 害、氣喘、胸膜炎、多發性硬化、全身紅斑性狼瘡、葡 萄膜炎、敗血症、出血性休克、斑點性退化、或第11 型糖尿病之方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如 申請專利範圍第1至1 3項中任一項之化合物。 29.—種於有其需要之哺乳動物治療或抑制子宮內膜組織異 位形成之方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之如申 請專利範圍第1至1 3項中任一項之化合物。 3 0 . —種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至1 3項 -121 - 200304822 中任一項之化合物以及醫藥載劑。 3 1. —種於有其需要之哺乳動物治療或抑制發炎性腸疾病之 方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之ER- Θ選擇性 配體，其中ER- /3選擇性配體對ER- Θ的結合親和力至 少大於對ER α之結合親和力約20倍。 3 2.如申請專利範圍第31項之方法，其中之發炎性腸疾病 爲克隆氏病（Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、不確定 性結腸炎、感染性結腸炎、或潰瘍性直腸炎。 33. 如申請專利範圍第32項之方法，其中ER-冷選擇性配體 對ER-0的結合親和力至少大於對ERa之結合親和力約 50倍。 34. 如申請專利範圍第33項之方法，其中ER-/3選擇性配體 引起子宮溼重的增加少於最有效劑量之1 7 0 -雌二醇所 觀察到的約10%(其係以標準藥理測試程序測量子宮促 進活性），以及ER- /3選擇性配體引起酪蛋白激酶II mRNA 的增加少於最有效劑量之1 7 /5 -雌二醇所觀察到的約 10% (其係以標準藥理測試程序測量乳房促進活性）。 35. 如申請專利範圍第34項之方法，其中ER-/3選擇性配體 與缺乏子宮促進活性之對照組比較時，顯著不增加子宮 溼重（ρ>0· 05)，以及與缺乏非乳房促進活性之對照組比 較時，顯著不增加酪蛋白激酶IImRNA(p>0.05)。 3 6 · —種於有其需要之哺乳動物治療或抑制關節炎之方法， 其包括對該哺乳動物提供有效量之非子宮促進性、非乳 房促進性之ER/3選擇性配體，其中ER-卢選擇性配體對 -122- 200304822 E R - /3的結合親和力至少大於對E R α之結合親和力約2 〇 倍。 37·如申請專利範圍第36項之方法，其中之關節炎爲類風 溼性關節炎、脊椎關節炎、或骨關節炎。 3 8 ·如申請專利範圍第3 7項之方法，其中ER Θ選擇性配體 對ER/S的結合親和力至少大於對ERa之結合親和力約 50倍。 3 9 ·如申請專利範圍第3 8項之方法，其中ER /3選擇性配體 引起子宮溼重的增加少於最有效劑量之1 7 0 -雌二醇所 觀察到的約10%(其係以標準藥理測試程序測量子宮促 進活性），以及ER-点選擇性配體引起酪蛋白激酶II mRNA 的增加少於最有效劑量之1 7 /3 -雌二醇所觀察到的約 10% (其係以標準藥理測試程序測量乳房促進活性）。 4 0.如申請專利範圍第39項之方法，其中ER-石選擇性配體 與缺乏子宮促進活性之對照組比較時，顯著不增加子宮 溼重（ρ>0·05)，以及與缺乏非乳房促進活性之對照組比 較時，顯著不增加酪蛋白激酶II mRNA(ρ>0.05)。 4 1 · 一種於有其需要之哺乳動物治療或抑制關節腫脹或糜 爛、或治療或抑制關節鏡檢或手術過程續發關節損傷之 方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之非子宮促進 性、非乳房促進性之ER 0選擇性配體，其中ER-/3選擇 性配體對E R -点的結合親和力至少大於對E R α之結合親 和力約20倍。 4 2 ·如申請專利範圍第4 1項之方法，其中E R /3選擇性配體 -123- 200304822 笑寸ER 的結合親和力至少大於對er α之結合親和力約 50倍。 43·—種於有其需要之哺乳動物治療或抑制子宮內膜組織異 位形成之方法，其包括對該哺乳動物提供有效量之ER-冷選擇性配體，其中ER-冷選擇性配體對ER-/3的結合親 和力至少大於對ER α之結合親和力約20倍。 44.如申請專利範圍第43項之方法，其中ER Θ選擇性配體 對ER/3的結合親和力至少大於對ERa之結合親和力約 50倍。 45·如申請專利範圍第44項之方法，其中ER々選擇性配體 引起子宮溼重的增加少於最有效劑量之1 7 /3 -雌二醇所 觀察到的約1 0% (其係以標準藥理測試程序測量子宮促 進活性），以及ER- /3選擇性配體引起酪蛋白激酶II mRNA 的增加少於最有效劑量之1 7 Θ -雌二醇所觀察到的約 10% (其係以標準藥理測試程序測量乳房促進活性）。 46. 如申請專利範圍第45項之方法，其中ER-0選擇性配體 與缺乏子宮促進活性之對照組比較時，顯著不增加子宮 溼重（p>0.05)，以及與缺乏非乳房促進活性之對照組比 較時，顯著不增加酪蛋白激酶II mRNA (p>0.05)。 47. —種如申請專利範圍第1至13項中任一項之化合物之 製備方法，包括下列之一： a)下式化合物 -124- 200304822

   (其中R i、R 2、R 2 a及X如申請專利範圍第1項之定義） 與下式化合物反應

   V .入R tt3a r3 (其中尺3及R3a如上述之定義，Y爲鹵素、-OH、或CV C6烷氧基）；或 b) 轉換如申請專利範圍第1項定義之式II化合物爲其 醫藥可接受鹽；或

   c) 分離式II化合物之異構混合物以單離式II化合物之 鏡像異構物或其醫藥可接受鹽。 -125- 200304822 陸、（一）、本案指定代表圖爲：第_圖 (二）、本代表圖之元件代表符號簡單說明：

   柒、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化 學式：

   I