TARFNAME Kanser immunoterapisinde biyolojik ve immunoterapotik ajan olarak bakteriyosin orjinli antikanser peptidlerin kanser asisi olarak ve enfeksiyon immunoterapisinde peptid antibiyotikleri olarak gelistirilmesi ve üretilmesi Teknik Alan Bulus, akciger, meme, kolon, mide, karaciger kanserleri gibi en sik görülen kanser türlerinin yani sira, pankreas, over, endometrium, uterus, böbrek, Ienfoma ve lösemi kanserlerinin tedavisinde kullanilmak üzere üzere biyolojik ve immunoterapötik ajan olarak gelistirilen anti- idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli immunoterapötik kanser asisi ile ilgilidir. Bulus özellikle, etken madde olarak, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconoctoc, Carnobacterium, Pediococcus, Entrococcus, Propionibacterium, Brevibacterium, Bacillus, Staphylococcus, Pseudomonas genusu ve Escherichia coli tarafindan üretilen bakteriyosin (AMP) orijinli peptid antibiyotikler, immunoterapötik antikanser peptidler (ACP) ve bahsedilen antikanser peptidlere (ACP) karsi olusturulan ve immunizan olarak kullanilan ani-idiyotipik monoklonal ACP antikorlariçeren anti-idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli immunoterapötik asi ile ilgilidir. Teknigin Bilinen Durumu Immünoterapi, bagisiklik sisteminin kanserle savasmasina yardimci olan bir kanser tedavisi türüdür. Bagisiklik sistemi, vücudumuzun enfeksiyonlarla ve diger hastaliklarla savasmasina yardimci olan, beyaz kan hücreleri ile lenf sisteminin organ ve dokularindan olusmaktadir. Immünoterapi bir tür biyolojik tedavi, biyolojik terapi ise, kanseri tedavi etmek için canli organizmalardan yapilan maddeleri kullanan bir tedavi türüdür. Bilinen teknikte kanseri tedavi etmek için, bagisiklik kontrol noktalarini bloke eden ilaçlar olan bagisiklik kontrol noktasi inhibitörleri, T hücrelerinin kanserle savasma konusundaki dogal yetenegini artiran bir tedavi olan T hücre transfer tedavisi, vücudun kansere karsi bagisiklik tepkisini artiran bagisiklik sistemi modülatörleri, kanser hücreleri üzerindeki belirli hedeflere baglanmak üzere tasarlanmis, laboratuvarda olusturulan bagisiklik sistemi proteinleri olan monoklonal antikorlar, bagisiklik sisteminizin kanser hücrelerine tepkisini güçlendirerek kansere karsi çalisan tedavi asilari gibi çesitli immünoterapi türleri kullanilmaktadir. Bagisiklik kontrol noktalarini bloke eden ilaçlar olan bagisiklik kontrol noktasi inhibitörleri: Bu kontrol noktalari, bagisiklik sisteminin normal bir parçasidir ve bagisiklik tepkilerinin çok güçlü olmasini engellemektedir. Bu ilaçlar onlari bloke ederek, bagisiklik hücrelerinin kansere daha güçlü tepki vermesini saglamaktadir. Bagisiklik kontrol noktasi inhibitörlerinin yaygin yan etkileri döküntü, ishal, tükenmislik, nadiren yaygin Inflamasyonu Içerebilmektedir. Vücudun etkilenen organina bagli olarak, iltihaplanma cilt iltihabinin neden oldugu cilt rengindeki degisiklikler, kizariklik ve kasinti hissi, akcigerlerdeki iltihaplanmanin neden oldugu öksürük ve gögüs agrilari, kolondaki iltihaplanmanin neden oldugu karin agrisi ve ishal, pankreas iltihabinin neden oldugu diyabet, hepatit (karaciger iltihabi), hipofizit (hipofiz bezi iltihabi), miyokardit (kalp kasi iltihabi), nefrit (böbrek iltihabi) ve bozulmus böbrek fonksiyonu, asiri aktif veya az aktif tiroid, kas zayifligi, uyusukluk ve nefes almada zorluk gibi sinir sistemi sorunlaridir. T hücrelerinizin kanserle savasma konusundaki dogal yetenegini artiran bir tedavi olan T hücre transfer tedavisi: Bu tedavide, tümörden bagisiklik hücreleri alinarak kansere karsi en aktif olanlar, kanser hücrelerine daha iyi saldirmak için laboratuvarda seçilmekte veya degistirilmekte, büyük gruplar halinde büyütülmekte ve bir damardan bir igne ile vücuda geri verilmektedir. T-hücre transfer tedavisi, adoptif hücre tedavisi, adoptif immünoterapi veya immün hücre tedavisi olarak da adlandirilabilmektedir. Bu tedavinin bazi dezavantajlari bulunmaktadir. Laboratuvarda T hücrelerini büyütme süreci 2 ila 8 hafta sürebilmekte olup, bu süre zarfinda, diger bagisiklik hücrelerinden kurtulmak için kemoterapi ve radyasyon tedavisi gerekli olabilmektedir. Bagisiklik hücrelerini azaltmak, aktarilan T hücrelerinin daha etkili olmasina yardimci olmaktadir. Bu tedavilerden sonra laboratuvarda yetistirilen T hücreleri damardan bir igne ile geri verilmektedir. TIL tedavisi, tümörde bulunan tümör infiltre edici Ienfositler adi verilen T hücrelerini kullanmaktadir. Doktorlar, tümör hücrelerini en iyi hangilerinin tanidigini bulmak için laboratuvarda bu lenfositleri test etmektedir. Daha sonra bu seçilmis Ienfositler, hizla çogalmalarini saglayan maddelerle tedavi edilmektedir. Bu yaklasimin arkasindaki fikir, tümörün içinde veya yakininda bulunan Ienfositlerin, tümör hücrelerini tanima yetenegini zaten göstermis olmasidir. Ancak, tümörü öldürmeye veya tümörün bagisiklik sistemini baskilamak için saldigi sinyallerin üstesinden gelmeye yeterli olmayabilmektedir. Tümörle en iyi reaksiyona giren çok sayida lenfosit vermek, bu engellerin üstesinden gelmeye yardimci olabilmektedir. CAR T-hücresi tedavisi, TIL tedavisine benzer, ancak T hücreleri, büyütülmeden ve hastaya geri verilmeden önce CAR olarak bilinen bir tür protein yapacak sekilde laboratuvarda degistirilmektedir. CAR, kimerik antijen reseptörü anlamina gelmektedir. CAR'lar, T hücrelerinin kanser hücrelerinin yüzeyindeki spesifik proteinlere baglanmasina izin vererek, kanser hücrelerine saldirma yeteneklerini gelistirecek sekilde tasarlanmistir. Vücudun kansere karsi bagisiklik tepkisini artiran bagisiklik sistemi modülatörleri: Bu ajanlardan bazilari bagisiklik sisteminin belirli kisimlarini etkilerken, digerleri bagisiklik sistemini daha genel bir sekilde etkilemektedir. Beyaz kan hücreleri tarafindan yapilan proteinler olan sitokinler, vücudun normal bagisiklik tepkilerinde ve bagisiklik sisteminin kansere tepki verme yeteneginde önemli roller oynamaktadir. Bazen kanseri tedavi etmek için kullanilan sitokinler; interferonlar (lNF'ler), interlökinler (IL'Ier), hematopoetik büyüme faktörleridir. Bagisiklik düzenleyici ajanlar grip benzeri ates, titreme, zayiflik, bas dönmesi, mide bulantisi ya da kusma, kas veya eklem agrilari, tükenmislik, bas agrisi gibi semptomlara neden olabilmektedir. Sitokinler ayrica nefes almada zorluk, düsük veya yüksek tansiyon, siddetli alerjik reaksiyonlar, düsük kan sayimi, enfeksiyon riskini artim^ia ve kanama sorunlari, kan pihtilari, ruh hali, davranis, düsünme ve hafiza ile ilgili sorunlar, döküntü, enjeksiyon bölgesinde yanma ve ülser gibi cilt problemleri, organ hasari gibi birçok ciddi yan etkiye neden olabilmektedir. Kanser hücreleri üzerindeki belirli hedeflere baglanmak üzere tasarlanmis, laboratuvarda olusturulan bagisiklik sistemi proteinleri olan monoklonal antikorlar: Bazi monoklonal antikorlar, kanser hücrelerini, bagisiklik sistemi tarafindan daha iyi görülüp yok edilmeleri için isaretlemektedir. Bu tür monoklonal antikorlar, bir tür immünoterapidir. Monoklonal antikorlar ayrica terapötik antikorlar olarak da adlandirilabilmektedir. Monoklonal antikorlar, laboratuvarda olusturulan bagisiklik sistemi proteinleridir. Antikorlar vücut tarafindan dogal olarak üretilmekte ve bagisiklik sisteminin bakteri ve virüs gibi hastaliklara neden olan mikroplari tanimasina ve yok edilmek üzere isaretlemesine yardimci olmaktadir. Vücudun kendi antikorlari gibi, monoklonal antikorlar da belirli hedefleri tanimaktadir. Kanser tedavisinde birçok monoklonal antikor kullanilmaktadir. Bir tür hedefe yönelik kanser tedavisidir, yani belirli hedeflerle etkilesime girecek sekilde tasarlanmistir. Bazi monoklonal antikorlar ayni zamanda immünoterapidir çünkü bagisiklik sistemini kansere karsi döndürmeye yardimci olmaktadir. Örnegin, bazi monoklonal antikorlar kanser hücrelerini isaretlemekte ve böylece bagisiklik sistemi onlari daha iyi taniyarak yok etmektedir. Bir örnek vermek gerekirse, B hücreleri ve bazi kanser hücreleri üzerindeki CD20 adli bir proteine baglanarak bagisiklik sisteminin onlari öldürmesine neden olan rituximab'dir. B hücreleri bir tür beyaz kan hücresidir. Diger monoklonal antikorlar, T hücrelerini kanser hücrelerine yaklastirrnakta ve bagisiklik hücrelerinin kanser hücrelerini öldürrnesine yardimci olmaktadir. Örnek olarak hem lösemi hücrelerinin yüzeyinde bulunan bir protein olan CD19'a hem de T hücrelerinin yüzeyinde bulunan bir protein olan CD3'e baglanan blinatumomab (Blincyto®) verilebilmektedir. Bu süreç, T hücrelerinin lösemi hücrelerine yanit vermesine ve onlari öldürecek kadar yakinlasmasina yardimci olmaktadir. Çogu immünoterapi türü gibi, monoklonal antikorlar da igne bölgesinde cilt reaksiyonlarina ve grip benzeri semptomlara neden olabilmektedir. Bagisiklik sisteminizin kanser hücrelerine tepkisini güçlendirerek kansere karsi çalisan tedavi asilari: Tedavi asilari, hastaliklari önlemeye yardimci olanlardan farklidir. Kanser tedavisi asilari, vücudun kansere karsi dogal savunmasini güçlendirerek kanseri tedavi eden bir tür immünoterapidir. Kanser önleme asilarinin aksine, kanser tedavisi asilari zaten kanser olan kisilerde kullanilmak üzere tasarlanmis olup, kansere neden olan bir seye karsi degil, kanser hücrelerine karsi çalismaktadir. Tedavi asilarinin arkasindaki fikir, kanser hücrelerinin, tümörle iliskili antijenler adi verilen ve normal hücrelerde bulunmayan veya varsa daha düsük seviyelerde bulunan maddeler içermesidir. Tedavi asilari, bagisiklik sisteminin bu antijenleri tanimayi ve bunlara tepki vermeyi ögrenmesine ve onlari içeren kanser hücrelerini yok etmesine yardimci olabilmektedir. Kanser tedavisi asilari, ates, titreme, zayiflik, bas dönmesi, mide bulantisi ya da kusma, kas veya eklem agrilari, tükenmislik, bas agrisi, nefes almada zorluk, düsük veya yüksek tansiyon gibi grip benzeri semptomlara neden olabilmektedir. Kanser tedavisi asilari alti ana yolla yapilabilmektedir. Bunlardan biri tümör hücresi asilaridir. Hastanin kendi tümör hücrelerinden yapilabilmektedir. Bu, hastanin kanserine özgü özelliklere karsi bir bagisiklik tepkisine neden olacak sekilde özel olarak üretildikleri anlamina gelmektedir. Belirli kanser türüne sahip birçok insanin kanser hücrelerinde bulunan tümörle iliskili antijen yapilabilmektedir. Böyle bir asi, kanseri bu antijeni üreten herhangi bir hastada bir bagisiklik tepkisine neden olabilmektedir. Bu tip asilar hala deneysel asamadadir. Bir digeri olan dendritik hücre asilari, bir tür bagisiklik hücresi olan hastanin kendi dendritik hücrelerinden yapilabilmektedir. Dendritik hücre asilari, bagisiklik sistemini tümör hücreleri üzerindeki bir antijene yanit vermesi için uyarmaktadir. ilerlemis prostat kanseri olan bazi erkekleri tedavi etmek için kullanilan sipuleuceI-T adli bir dendritik hücre asisi onaylanmis olup, hali hazirda kullanimi bilinmektedir. Onkolitik virüs asilari, onkolitik virüs tedavisi adi verilen farkli bir kanser tedavi türü olup, bazen bir kanser tedavisi asisi türü olarak tanimlanmaktadir. Kanser hücrelerini enfekte edip, parçalarken normal hücrelere zarar vermeyen bir virüs olan onkolitik bir virüs kullanilmaktadir. Antijen asilari, immun sistemi stimüle etmek için tümör yüzeyinde bulunan proteinleri tümör spesifik antijen olarak kullanmaktadir. Kanserli bölgeye bu antijenlerin sunulmasiyla antikor sayisinin artmasina kanserli hücre ile savasmasina neden olmaktadir. DNA asilarinda, hastanin hücrelerinden alinan DNA örnekleri kullanilmaktadir. Anti-idiyotip asilarinda ise, idiyotipik antikorlar olarak bilinen bazi antikorlar, immun yaniti tetikleyici antijenler olarak kullanilmaktadir. Teknigin bilinen durumunda konu ile ilgili olarak yapilan bazi çalismalar bulunmaktadir. Bunlardan biri olan EFT/'1407181 numarali patent dokümani, bir hastanin tümörüne spesifik olan ve primer tümörün ayni zamanda tümör metastazlarin Immünoterapisi Için potansiyel olarak kullanisli olan asilarin saglanmasi ile ilgilidir. Bir yönünde, mevcut bulus bir kisisellestirilmis kanser asisi saglamak için asagidaki adimlari içeren bir yöntem ile ilgilidir: (a) hastanin bir kanser mutasyon imzasini saglamak için bir kanser hastasinin bir tümör numunesinde kanser spesifik somatik mutasyonlari tanimlama ve (b) adim (a)'da elde edilen kanser mutasyon imzasi özelligini gösteren bir asi saglama. Bir ilave yönü nde, mevcut bulus söz konusu yöntem ile elde edilebilen asilar ile ilgilidir. EP T-hücresi stimülatör kapasitesini aitirrnaya iliskin yeni yöntemler ve kanser asisinda bunlarin kullanimi sunulmaktadir. Yöntem farkli moleküler adjuvanlarin insan DC'lerine CD40L, CDTO, yapisal olarak aktif TLR4 (caTLR4), IL-12p70, EL-selectin, CCR? ve/veya 4-1 BBL grubundan seçilen markörleri kodlayan en az iki mRNA veya DNA molekülü ile transfeksiyonu araciligiyla veya örnegin siRNA transfeksiyonu araciligiyla SOCS, A20, PD-L1 vei'veya STAT3 ekspresyonu inhibisyonu ile kombinasyon halinde verilmesini içerir. Bu sekilde elde edilen DC'lerin immünostimülatör kapasitesinde açik bir artis gösterilmektedir, bu da bunlarin in vitro beklenmedik derecede yüksek bir T-hücresi tepkisi ortaya çikartmasini saglar. Yukarida bahsedilen en az iki molekülün, tümöre özgü antijenle birlikte verilmesi, tümör antijenine karsi belirgin konak-aracili in vivo T-hücre immün tepkisinin DC'ler tarafindan meydana çikarilmasina izin verir ve böylece bunlarin anti-kanser asilarinda kullanimi çok çekici hale gelmistir. TR 2017 06714 numarali patent basvurusu ise, laktik asit bakterisi olan Lactobacillus acidophilus LA-SZ susuna ait dogal antimikrobiyal madde olan bakteriyosinin antijen yani asi materyali olarak kullanim imkanini kanitlayarak sonrasinda bu antijenlerden tekrar antikor eldesi ile Anti-idiyotipik asilarin gelistirilerek kanser tedavilerinde ve özellikle kolon kanserinde immunoterapi tedavi yönteminde kullanilabilmesi ile ilgilidir. Mevcut kanser tedavisi uygulamalarinda, immunoterapi amaciyla ticari olarak piyasada bulunan kanser asilari arasinda en yaygin kullanimi olan asilar monoklonal antikor ve anti- idiyotipik antikor asilar olup. genellikle tümör hücrelerine karsi gelistirilmis olan antikorlardan ibarettir. DNA bazli asilar, mRNA tekniginin kanser çalismalarinda kullanimiyla baslanmasiyla bilimsel açidan degerini kaybetmistir. Gerek mRNA asilari gerekse HER2 gibi peptid-protein bazli kanser asilar ise su anda, dogru, güvenilir ve klinik olarak anlamli test sonuçlari saglamak için prosedürlerin standardizasyonuna, iç ve dis kalite kontrol degerlendirmesine ve halihazirda mevcut yöntemlerin yetkinlik degerlendirmesine, yeni gelistirme ve dogru teshis testlerine ihtiyaç duymaktadir. Ek olarak, anti-HER2 ilaçlara olumlu bir yaniti en güvenilir sekilde öngören teknigi belirlemek Için büyük klinik denemeler yapilmasi gerekmektedir. Sonuç olarak yukarida bahsedilen olumsuzluklardan ve eksikliklerden dolayi, ilgili teknik alanda bir yenilik yapma ihtiyaci ortaya çikmistir. Bulusun Amaci Mevcut bulus, yukarida bahsedilen gereksinimleri karsilayan, tüm dezavantajlari ortadan kaldiran ve ilave bazi avantajlar getiren, kanser immunoterapisinde biyolojik ve immunoterapötik ajan olarak bakteriyosin orjinli antikanser peptidlerin kanser asisi olarak ve enfeksiyon immunoterapisinde peptid antibiyotikleri olarak gelistirilmesi ve üretilmesi ile Bulusun ana amaci, kanser immunoterapisine yönelik olarak farkli kanser türlerine karsi kanser asilarinin ve yeni nesil peptid antibiyotiklerinin gelistirilmesine iliskin yöntem ortaya koymaktir. Bulusun amaci, peptid yapisindaki dogal biyolojik koruyucu ajanlar olarak bilinen mikrobiyal orijinli antimikrobiyal peptid olan bakteriyosinlerin, bilinen dogal antimikrobiyal peptid özelliklerinin yani sira yeni nesil peptid antibiyotikler ve antikanser peptidler olarak tanimlanabilmelerini saglamaktir. Bulusun amaci, uluslararasi farmakopelere uygun olarak peptid antibiyotikler, immunoterapötik antikanser peptidler (ACP) ve anti-idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli immunoterapötik kanser asilarinin üretimine iliskin bir yöntem sunmaktir. Yukarida anlatilan amaçlarin yerine getirilmesi için bulus, akciger, meme, kolon, mide, karaciger kanserleri gibi en sik görülen kanser türlerinin yani sira, pankreas, over, endometrium, uterus, böbrek, Ienfoma ve lösemi kanserlerinin tedavisinde kullanilmak üzere gelistirilen anti-idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli immunoterapötik asi olup, özelligi; etken madde olarak, - Lactobacillus, Lactococcus, Leuconoctoc, Carnobacterium, Pediococcus, Entrococcus, Propionibacterium, Brevibacterium, Bacillus, Staphylococcus, Pseudomonas genusu ve Escheri'chia coli tarafindan üretilen bakteriyosin (AMP) orijinli peptid antibiyotikler, . immunoterapötik antikanser peptidler (ACP), - bahsedilen antikanser peptidlere (ACP) karsi olusturulan ve immunizan olarak kullanilan ani-idiyotipik monoklonal ACP antikorlar, içerm ektedir. Bulusun yapisal ve karakteristik özellikleri ve tüm avantajlari asagida verilen detayli açiklama sayesinde daha net olarak anlasilacaktir ve bu nedenle degerlendirmenin de bu detayli açiklama göz önüne alinarak yapilmasi gerekmektedir. Bulusun Detayli Açiklamasi Bu detayli açiklamada, bulus konusu kanser immunoterapisinde biyolojik ve immunoterapotik ajan olarak bakteriyosin orjinli antikanser peptidlerin kanser asisi olarak ve enfeksiyon immunoterapisinde peptid antibiyotikleri olarak gelistirilmesi ve üretilmesi, sadece konunun daha iyi anlasilmasina yönelik olarak ve hiçbir sinirlayici etki olusturmayacak sekilde açi klanm aktad i r. Bulus, farkli tür kanserlerin tedavisinde kullanilmak üzere biyolojik ve immunoterapötik ajan olarak gelistirilen anti-idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli immunoterapötik kanser asisi ile ilgilidir. Bulus özellikle, enfeksiyonal immunoterapi tedavisinde kullanilmak üzere gelistirilen bakteriyosin orijinli peptid antibiyotikler, kanser tedavisinde etken madde (farmakofor) biyomolekül olarak kullanilmak üzere gelistirilen bakteriyosin orijinli immunoterapötik antikanser peptidler (ACP) ve bahsedilen antikanser peptidlere (ACP) karsi olusturulan ve immunizan olarak kullanilan ani-idiyotipik monoklonal ACP antikorlari içeren anti-idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli immunoterapötik asi ile ilgilidir. Bulus kapsaminda gelistirilen anti-idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli immunoterapötik asinin içeriginde kullanilan bakteriyosin orijinli peptid antibiyotikler ayni zamanda, enfeksiyonal immunoterapi için enfeksiyonal hastaliklara karsi oral yoldan kullanilabilmekte olup, tablet veya kapsül formunda üretilebilmektedir. Antikanser peptidler (ACP) de, kanser immunoterapisi için kanser tedavisinde oral yoldan kullanilabilmekte olup, tablet veya kapsül formunda üretilebilmektedir. Bulus kapsaminda. mikrobiyal orijinli antimikrobiyal peptid olan bakteriyosinler materyal olarak kullanilmistir ancak bu bakteriyosinler, çesitli kanser türlerinde ve bu kanser türlerinin görüldügü organ ve dokularda enfeksiyona neden olan patojenler üzerinde yapilan in vitro, in vivo çalismalar, hayvan modeli çalismalari ve klinik çalismalar sonucunda bakteriyosin (antimikrobiyal peptid/madde) yerine bakteriyosin orijinli yeni nesil antikanser peptid ve peptid antibiyotigi olarak 2 farkli sekilde tanimlanmistir. Ayrica bakteriyosin üretici mikrobiyal suslar da bulus kapsaminda ayni denemelerde kullanilmis ve üretici sus - bakteriyosin (antimikrobiyal peptid), ACP ve peptid antibiyotikleri iliskisi antikanserojenik etki bazinda incelenmistir. Bu tanimlanmayi takiben özellikle antikanser peptid (ACP) olarak tanimlanan peptidler asi materyali (immunizan) olarak kullanilarak her bir ACP'in etkili oldugu kanser türü belirlenerek anti-idiyotipik monoklonal ACP antikorlari bu kanser türlerine karsi gelistirilmis ve kanser asisi formülasyonlari hazirlanmistir. Yeni ilaç kesif çalismalarina (Investigational New Drug- IND) uygun ADME (absorption, distribution, metabolism, and excretion) ve/veya immün tepkinin gösterimi, toksikoloji çalismalari, farmakokinetik ve farmakodinamik testleri gerçeklestirilmistir. Klinik arastirmalar sonucunda güvenlilik/tolerans, farmakokinetik, biyoyararlanim ve konsantrasyon-etki verileri, terapötik endikasyondaki etkinlik, optimal doz araligi, BY/BE (Biyoyararlanim ve Biyoesdegerlik), yan etki profili ve güvenlik verileri, ilaç- hastalik etkilesimi, ilaç-ilaç etkilesimi, doz araliklari, risk-yarar bilgisi, alt gruplarda etkililik (eficacy) ve beklenmeyen (advers) yan etkilere iliskin veriler elde edilmistir. Standartlara uyumlu (GLP ve GCP) sekilde gerçeklestirilen denemeler ile teknik, biyokimyasal ve klinik özellikleri uluslararasi geçerliligi olan yöntem ve tekniklerle belirlenen peptid antibiyotikleri, antikanser peptidler ve anti-idiyotipik monoklonal ACP antikor kanser asilari için GMP uyumlu ölçeklendirilebilir ve tekrarlanabilir bir üretim sistemi kullanilarak laboratuvar, pilot ve ticari seri üretim için formüle edilip uygulanmis ve her 3 seri üretim için bitmis ürün analiz ve proses validasyonlari yapilmistir. Bulus kapsaminda, uluslararasi farmakopelere uygun olarak peptid antibiyotikler, immunoterapötik antikanser peptidler (ACP) ve anti-idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli immunoterapötik kanser asilarinin üretimi için; a) Tedaviye iliskin bilesiklerin ilk versiyonu için hedef/aday belirlenmesi ve karakterizasyonu kapsaminda kanser ve ilgili kanserli doku ve/veya organda enfeksiyona neden olan mikroorganizmalar belirlenerek bunlara karsi mikrobiyal orijinli antimikrobiyal peptid olan bakteriyosinlerin peptid antibiyotik ve antikanser peptid olarak bilesik dizileri olusturulmus, b) Farmakofor özellikleri için saflastirma, karakterizayon, moleküler yapi ve etki sekli mekanizmasi belirlenmis, c) Klinik öncesi çalismalar için biyolojik bariyer dirençlilikleri, stres toleranslari, toksikoloji ve güvenlik degerlendirmeleri, farmokokinetik ve farmokodinamik, immun yanit testleri GLP (Good Laboratory Practice) düzeyinde in vitro simülasyon denemeleri tamamlanarak aktiflik ve etkinlikleri optimize edilmis, Klinik ve klinik olmayan çalismalarda kullanilmak üzere markörler, tetkikler ve sonlanim noktalari (endpoints) belirlenmis, Her bir ACP'din farkli kanser türleri ve ilgili kanserli doku ve/veya organda enfeksiyona neden olan mikroorganizmalar üzerindeki etkinligin belirlenmesi için adhezyon faktörleri ve insan hücrelerine adhezyonu, hidrofobisite dereceleri, pihtilasma ve otoagregasyon testleri, enfeksiyon etkeni mikroorganizmalarin kanser hücrelerine adhezyonu ve invazyonuna karsi inhibitör etkileri, antiproliferatif aktiviteleri, kanser ve normal hücrelerin membran bütünlügü üzerindeki etkinlikleri, hücre ölümü formlari (apoptosis, primer ve sekonder necrosis), kanser hücre membranlarindaki degisimleri, kanser hücreleri membran permeabilitesinin belirlenmesi amaciyla kanser hücreleri ile affiniteleri, sitotoksisite dereceleri, caspase aktiviteleri ve metastasis durumu incelenerek elde edilen verilerle uygun ACP- kanser ve peptid antibiyotik-patojen spektrumu eslesmesi yapilmis, Immünolojik testlerle immun sistem ile interaksiyonlarinda immunomodulatör, immunostimulator ve immunoregulatör etkileri incelenmis, Potansiyeli en yüksek ACP ve peptid antibiyotiklerin (Iead compounds) toksikoloji, farmakodinamik ve farmakokinetik testleri ile immün tepkisinin belirlenmesine iliskin testler uygun in vivo hayvan modellerde denenmis, Biyolojik ve immünoterapötik özellikleri ile etki sekli mekanizamasi detayli bir sekilde tanimlanmis olan bakteriyosin orijinli ACP'Ierin asi materyali-immunizan olarak kullanim potansiyellerinin belirlenmesi için önce monoklonal sonra anti-idiyoitpik monoklonal ACP antikorlar immunizasyon, hibridoma ve monoklonal antikor teknikleri kullanilarak elde edilmis, Elde edilen anti-idiyoitpik monoklonal ACP antikorlar antikanserojenik etkilerinin belirlenmesi için "e" adimindaki testler tekrar edilmis, Tedavinin uygulama yollarina iliskin uygun formülasyonlar gelistirmek amaciyla pre- formulasyonlar hazirlanacak ve pre-formülasyonlarda fiziksel, kimyasal ve mikrobiyolojik analizler, geçimlilik testleri yapilacaktir. Ayrica primer ve sekonder ambalaj materyalleri belirlenerek bu materyallerin fiziko-kimayasal ve mikrobiyolojik yöntem ve tekniklerle spesifikasyonlari belirlenip kalite kontrolleri yapilacaktir. Laboratuvar ölçekli form ülasyon ve proses gelistirme çalismalari yapilarak uygun doz ve konsantrasyonlar belirlenerek uygulama sekli ve doz için kombinasyonlar belirlenmistir. Laboratuvar ölçekli deneme üretimleri yapilarak bu üretimlerde fiziksel, kimyasal ve mikrobiyolojik analizler ile potansi, satlik, özdeslik, sterilite, toksikoloji, stabilite vb parametreler incelenerek bitmis ürün karakterizasyon ve spesifikasyonlari tamamlanmistir. l) Anti-idiyotipik monoklonal ACP antikorlari kanser asisi olarak uygulanmak için; 0 in vivo angiogenesis hayvan modeli 0 in vivo metastasis hayvan modeli 0 in vivo anti-inflammatuar ve anti-enfeksiyöz hayvan modeli . in vivo immunomodulator etki hayvan modeli çalismalari yapilmistir. Yeni ilaç kesif çalismalarina (Investigational New Drug- IND) uygun toksikoloji çalismalari ve uygun ADME (absorption, distribution, metabolism, and excretion) ve/veya immün tepkinin gösterimi için GLP uyumlu hayvan denemeleri in vivo ortamda gösterilmistir. Pilot ölçek üretim için ölçek büyütme çalismalari yapilarak pilot üretim denemeleri gerçeklestirilmis ve optimum üretim parametreleri belirlenmistir. GMP (Good Manufacturing Practices) ile uyumlu, ölçeklendirilebilir ve tekrarlanabilir bir üretim süreci gelistirilmesi amaciyla pilot ölçekli üretimler 3 seri olarak uygulanmis ve her bir üretim için bitmis ürün analizleri ve pilot ölçekli üretimlerin proses validasyonlari tamamlanmistir. GMP (Good Manufacturing Practice) ile uyumlu "pilot Iot"lar ve Faz 1 klinik arastirmalarin yapilacagi saglikli gönüllüler ve arastirma ürününün niteligine göre (onkoloji) hasta gönüllülerden olusan örneklem (<100 kisi) hazirlanmistir. Klinik arastirmalar iyi klinik uygulamalar (GCP- Good Clinical Practice) ile uyumlu sekilde gerçeklestirilerek Faz 1 klinik arastirmalar sonucunda güvenlilik/tolerans, farmakokinetik, biyoyararlanim ve konsantrasyon-etki verileri elde edilmistir. Güvenli terapötik doz sinirlarinin ve etkinliginin arastirilmasi amaciyla Faz 2 klinik arastirmalarin yapilacagi hedef hastaliga sahip gönüllülerden olusan örneklem hazirlanarak Faz 2 klinik arastirmalar iyi klinik uygulamalar (GCP- Good Clinical Practice) ile uyumlu sekilde gerçeklestirilmis ve Faz 2 klinik arastirmalar sonucunda terapötik endikasyondaki etkinlik, optimal doz araligi, BY/BE (Biyoyararlanim ve Biyoesdegerlik), yan etki profili ve güvenlik verileri elde edilmistir. GMP (Good Manufacturing Practice) ile uyumlu üretim sürecinin konsistansi/tutarliligi (Lot-to- Lot Consistency) dogrulanarak Faz 3 klinik arastirmalarin yapilacagi gerçek hastalardan olusan örneklem hazirlanmistir. Faz 3 klinik arastirmalar iyi klinik uygulamalar (GCP- Good Clinical Practice) ile uyumlu sekilde gerçeklestirilerek etkinlik kanitlanmistir. Faz 3 klinik arastirmalar sonucunda ilaç-hastalik etkilesimi, ilaç-ilaç etkilesimi, doz araliklari, risk-yarar bilgisi, alt gruplarda etkililik (eficacy) ve beklenmeyen (advers) yan etkilere iliskin veriler elde edilmistir. Ruhsat basvurusunun gerektirdigi tüm testler Avrupa Farmakopesine uygun olarak tamamlanmistir. Faz denemeleri sonrasi anti-Idiyotipik monoklonal ACP antikor bazli kanser asisi üretim hatti için hazir hale getirilmistir. Buiusa konu asinin qenel Üretim yöntemi' Su sekildedir; Bulusa konu asinin üretiminde normal asi üretim hatti kullanilmakta olup, sadece asi materyali olarak kullanilan materyale uygun olarak farklilik gösterebilmektedir. Bakteriyosin orijinli antikanser peptidlere karsi olusturulan anti-idiyotipik monoklonal ACP antikorlari elde etmek üzere, öncelikle mikrobiyal sus gelistirilir sonra bu suslari ürettigi bakteriyosin orijinli antikanser peptidlerin (ACP) üretici sustan toplanmasi için alt akim islemleri ve saflastirma prosesleri gerçeklestirilir. Proses süresince gerekli testler tamamlanarak saf olarak elde edilen ACP'Iere karsi anti-idiyotipik monoklonal ACP antikorlar elde edilir. Bunlar uygun adjuvantlar ve farmokopelere uygun yardimci maddeler ile üretim kapasitesi ve doz miktarina göre yapilan hesaplamalar ile birlestirilerek formulasyon tamamlanir. Kontrolleri yapildiktan sonra dolum yapilir ve Iiyofilize edilir, ambalajlanarak soguk zincir ile transferi saglanir. Bilindigi üzere, farkli immünoterapi biçimleri farkli sekillerde uygulanabilmektedir. Bahsedilen uygulama biçimleri, intravenöz (IV) (immünoterapi, dogrudan damar yoluyla uygulanir ki kanser asilari bu sekildedir) ve oral (immünoterapi, tablet veya kapsüller halinde uygulanir) seklindedir. Bulus kapsaminda elde edilecek asi (son ürün), iki formda üretilmistir. Bunlardan birincisi GMP kurallarina uygun olarak üretilmis steril IV infüzyonluk çözelti içeren flakon içerisindedir. Farmasötik formu, infüzyonluk çözelti içeren konsantre formda, renksiz ile açik sari arasi renkte berrak veya hafifçe opalesan çözelti seklindedir. Test edilmis uygun primer ve sekonder ambalaj materyalleri ile ambalaj ve paketleme islemleri tamamlanmistir. Tasinmasi ve depolanmasinda soguk zincir gereklidir. Ikincisi ise diger kanser asilarindan farkli olarak; GMP kurallarina uygun Iiyofilize edilmis konsantre toz formda olup kullanimi sirasinda çözelti forma getirilmeye uygun flakonlar içerisinde hazirlanmis yenilebilir asi formundadir. Test edilmis uygun primer ve sekonder ambalaj materyalleri ile ambalaj ve paketleme islemleri tamamlanmistir. Tasinmasi ve depolanmasinda soguk zincir ile gereklidir. Tüm üretim prosesi ve kontrol analizleri HVAC üniteleri olan temiz oda kosullarinda gerçeklestirilir. Bulusa konu asinin üretilmesinde, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconoctoc, Carnobacterium, Pediococcus, Entrococcus, Propionibacterium, Brevibacterium, Bacillus, Staphylococcus, Pseudomonas genusu ve Escherichia coli tarafindan üretilen bakteriyosin (AMP) orjinli antikanser peptidler kullanilarak elde edilen anti-idiyotipik monoklonal ACP antikorlar kullanilmaktadir. Bulusa konu asi, meme, kolon, akciger, karaciger, mide kanserleri gibi en sik görülen kanser türlerinin yani sira, pankreas, over, endometrium, uterus, böbrek, Ienfoma ve lösemi kanserlerine karsi denenmis ve elde edilen veriler sonucunda en uygun AGP-kanser türü belirlenerek her bir kanser türü için uygun formülasyonlar hazirlanarak kullanilabilir hale getirilmistir. TR TR TR